KR20020008436A - A method of transmitting plasmid, DNA or DNA vaccination - Google Patents

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KR20020008436A
KR20020008436A KR1020000041565A KR20000041565A KR20020008436A KR 20020008436 A KR20020008436 A KR 20020008436A KR 1020000041565 A KR1020000041565 A KR 1020000041565A KR 20000041565 A KR20000041565 A KR 20000041565A KR 20020008436 A KR20020008436 A KR 20020008436A
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김학용
이호근
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김문경
이상욱
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서만석
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서만석,이호근
진비컨 주식회사
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    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
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Abstract

PURPOSE: Provided is a method of transmitting plasmid, DNA or DNA vaccination into cells or tissues by using a biodegradable polymeric particle of 2 micrometer in its length and diameter as a carrier. CONSTITUTION: A gene or a gene vaccine is transferred into a cell or a tissue by using a carrier which is a biodegradable polymeric particle of 2 micrometer, preferably 0.3-1.5 micrometer, in its diameter and length. The gene or gene vaccine are coated on the biodegradable particles which are selected from the group consisting of polyglycolide, polylactide, polycaprolactone, polydioxanon, polyglycolate, polytrimethylenecarbonate, polylactate, poly(ortho ester), poly(anhydro), poly(phosphagen), poly(amino acid), chitosan, cellulose derivatives, poly(hydroxy butylate) and poly(saccharide).

Description

유전자 또는 유전자 백신의 전달방법 {A method of transmitting plasmid, DNA or DNA vaccination}A method of transmitting plasmid, DNA or DNA vaccination}

본 발명은 동·식물의 세포/조직내로 유전자 또는 유전자 백신을 보다 효율적으로 전달하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for more efficiently delivering genes or gene vaccines into cells / tissues of animals and plants.

현재까지는 미생물이나 바이러스를 사멸시키거나 독소를 제거한 미생물 또는 바이러스 백신이 널리 사용되었다. 그러나, 이들 미생물 또는 바이러스 백신은 부작용이 많이 나타나고 있다. 백신의 개발은 여러 세대를 걸쳐서 새롭게 개발되어 왔으며, 급기야 분자생물의 발전으로 플라스미드(plasmid) 혹은 DNA 백신으로발전하게 되었다.To date, microorganisms or virus vaccines that have killed or detoxified microorganisms or viruses have been widely used. However, these microorganisms or viral vaccines have many side effects. The development of vaccines has been newly developed for generations, and the development of molecular organisms has led to the development of plasmid or DNA vaccines.

유전자 백신이란 인체나 동물이 면역력을 갖을 수 있는 항원 영역을 유전자로 코드화하여 이를 인체나 동물에서 발현시켜 숙주가 면역력을 갖게하는 것이다. 예를들면, 바이러스의 외부 단백질인 gp120 영역의 유전자를 클로닝(cloning; 일정한 부위만의 유존자를 취하는 작업)하여 인체에서 발현 할 수 있는 시스템을 구축한다.Genetic vaccines encode an antigenic region that can be immunized by a human body or an animal with a gene and express it in the human body or an animal so that the host has immunity. For example, by cloning the gene of the gp120 region, which is an external protein of the virus, a system that can be expressed in the human body is constructed.

이렇게 발현되는 시스템을 gp120이 발현되는 플라스미드라고 하며, 이를 인체에 주입한다. 주로 주입부분은 피부의 상피세포, 근육세포, 그리고 피부에 산재하는 항원제시세포 (natural killer cell, dendritic cell, macrophage 등)에 주입한다. 이러한 주입은 인위적으로 조절되지 않지만, 이느 세포에 주입되어도 무방하며, 플라스미드가 도입된 세포는 gp120을 발현하여 외부로 분비된다. 이렇게 분비되는 gp120이란 단백질을 면역세포는 항원으로 인식하게 되어 우리몸에 기억되고, 면역력을 나타나게 된다.The expressed system is called plasmid expressing gp120, which is injected into the human body. Mainly, the injection part is injected into epithelial cells, muscle cells, and antigen-presenting cells scattered on the skin (natural killer cells, dendritic cells, macrophage, etc.). This injection is not artificially regulated, but may be injected into any cell, and the cells into which the plasmid is introduced are secreted outward by expressing gp120. The secreted protein gp120 is recognized as an antigen by immune cells, and it is remembered in our body and shows immunity.

유전자 백신의 장점은 매우 많다. 예를들면 기존의 단백질 백신, 바이러스 백신 및 미생물 백신에 비교하여 부작용이 없고, 생산비가 월등히 저렴하다. 이에 반해 기존의 미생물 백신이나 바이러스 백신을 제조하는데는 오랜 기간이 소요되고 생산비도 매우 비싸다. 그러나, 유전자는 원하는 영역만 클로닝 후에 이를 값싼 대장균에서 증폭하기만 한다. 이때의 경비는 매우 저렴한데 기존의 백신에 비교하여 10% 이하면 충분하다. 또한 백신의 제조기간이 매우 매력적인데 한 번 클로닝된 유전자는 대장균에서 계속 증폭하기만 하면 되고, 배양에서 분리까지 이틀이면 가능하다.The benefits of gene vaccines are numerous. For example, compared to conventional protein vaccines, viral vaccines and microbial vaccines, there are no side effects and the production cost is much lower. On the other hand, it takes a long time to manufacture a conventional microbial vaccine or a virus vaccine and the production cost is very expensive. However, the gene only amplifies it in cheap E. coli after cloning the desired region. The cost is very low, less than 10% of the cost of a conventional vaccine. In addition, the vaccine production period is very attractive. Once cloned, the gene is simply amplified in E. coli, and can be separated from culture to two days.

유전자 백신은 애줘밴트(adjuvant; 단백질 하나만을 인식하지 못하여 결핵균 등을 넣어줌)가 필요없다. 기존의 방법인 백신의 경우에는 면역력을 높이는 애줘밴트를 항원과 함께 투여하였다. 그러나, 유전자에는 CpG 사이트가 있어서 이부분이 애줘밴트 역할을 대신하여 면역력을 높인다.Genetic vaccines do not require adjuvant (a bacterium that does not recognize only one protein and contains tuberculosis bacteria). In the conventional method of vaccine, adjuvants that boost immunity were administered together with antigen. However, the gene has a CpG site, and this part takes on the role of adjuvants to increase immunity.

면역담당세포를 조절하여 면역력의 조절이 가능하다. 면역을 조절하는 세포는 크게 B 세포와 T 세포로 나누어 진다. 미생물 등의 면역은 B 세포가 생산하는 항체에 의해서 조절되고, 암이나 바이러스 등은 T 세포에 의해서 인식되고 조절된다. 유전자백신은 이러한 B 세포와 T 세포의 면역 형태를 조절한다.It is possible to regulate the immune power by controlling the immune cells. The cells that regulate immunity are largely divided into B cells and T cells. Immunity such as microorganisms is regulated by antibodies produced by B cells, and cancer and viruses are recognized and regulated by T cells. Gene vaccines regulate the immune forms of these B and T cells.

예를들어, 암의 면역을 획득시키기위해서 항원 영역의 유전자를 주사할 때, T 세포의 활력을 높이는 면역조절물질(일명, lymphokine 또는 cytokine)의 유전자와 함께 투여하여 효과적인 면역력을 조절할 수 있다. 기존의 면역법에 비교하여 기억할 수 기간도 길고 한 번 면역된 면역력은 장시간 기억되는 특징이 있다.For example, when injecting a gene of the antigenic region to obtain cancer immunity, it may be administered with a gene of an immunomodulatory substance (aka, lymphokine or cytokine) that enhances T cell vitality, thereby controlling effective immunity. Compared with the existing immunization method, the memory can be remembered for a long time, and once immunized, the immunity is long-lasting.

유전자 백신의 응용분야는 기존의 모든 백신을 대치 할 수 있다. 따라서, 미생물이나 바이러스의 항원 영역이 정확히 밝혀지고, 이 부분이 단백질만 코드화 되는 영역이라면 가능하다. 이렇게 되면 영아, 유아, 소아에서부터 성인에 이르기까지 모든이에게 가능하고, 동물에게도 응용될 것이다.Genetic vaccine applications can replace all existing vaccines. Therefore, it is possible if the antigen region of a microorganism or a virus is correctly identified, and this portion is a region in which only a protein is encoded. This will be possible for everyone, from infants, toddlers, children to adults, and will be applied to animals.

암에 응용성이 가능하다. 암은 면역조절중에서 특히 T 세포에 의해서 조절되어야 한다. 그러나 단백질이나 미생물의 면역은 T 세포 보다는 B 세포 면역력으로 나타난다. 유전자백신은 이미 T 세포를 조절할 수 있는 단계에 있다.그렇기 때문에 향후에 밝혀지는 암의 항원이 밝혀지면 이는 효과적으로 응용될 것이다.Applicability to cancer is possible. Cancer should be regulated during immunoregulation, in particular by T cells. However, immunity of proteins or microorganisms is expressed by B cell immunity rather than T cell. Gene vaccines are already in the process of regulating T cells, so if the antigens of cancers that are found in the future are identified, they will be effectively applied.

예를들어, 자궁경부암은 약 90% 이상이 파필로마 바이러스(papilloma virus)에 의해서 유발된다. 이 바이러스의 E5 와 E7 영역은 이미 항원으로 인식되고 효과가 나타나고 있어서 이 부분의 유전자를 코드화하여 임상에 응용하고 있다. 다음은 이 유전자와 T 세포를 조절하는 사이토킨(cytokine)인 IL-2나 IL-4등과 함께 투여할 경우 효과가 월등하다.For example, about 90% of cervical cancers are caused by papilloma virus. The E5 and E7 regions of the virus have already been recognized and shown to be effective, and the genes of this region have been encoded for clinical applications. Next, the effect is superior when administered with IL-2 or IL-4, a cytokine that regulates this gene and T cells.

유전자 치료란 질병을 일으키는 유전자를 밝혀내고 이 유전자를 제거하거나 훼손된 유전자를 대체하는 방법으로, 이는 많은 질병과 관련 된 유전자를 회복시키는데 매우 유용한 수단이다. 유전적 요인에 의하거나 환경의 요인에 의한 각종 암이나 에이즈, 알레르기 등의 질병을 사전에 예방하기 위한 방법으로 사전에 유전자 백신을 투여하는 방벙은 매우 효과적인 방법이다.Gene therapy is a method of identifying genes that cause disease, removing them, or replacing damaged genes, which is a very useful means to repair genes associated with many diseases. In order to prevent diseases such as cancer, AIDS, and allergies caused by genetic factors or environmental factors, a method of administering a gene vaccine in advance is a very effective method.

따라서 이와 같은 유전자 백신을 투여하기 위한 방법으로 생체분해성 전달체 마이크로 입자에 필요한 유전자 및 유전자 백신을 코팅하여 모든 식물 및 동물의 조직이나 세포에 전달하는 것을 목적으로 한다.Therefore, a method for administering such a gene vaccine is intended to coat the genes and gene vaccines required for the biodegradable carrier microparticles and deliver them to tissues or cells of all plants and animals.

최근 유전자 지도가 밝혀짐에 따라 유전자 치료의 응용분야는 현재까지 불치의 병으로 알려진 암이나 에이즈 등의 유전자 및 유전자 백신을 치료 가능하므로 산업적인 응용분야는 매우 광범위 할 것으로 기대된다. 특히 항암제 투여에서 나타나는 부작용을 모두 제거할 수 있는 유전자 백신 분야는 매우 경제적일 것이다.Recently, as the genetic map is revealed, the application field of gene therapy can treat genes and gene vaccines such as cancer or AIDS, which are known to be incurable diseases until now, and thus the industrial application field is expected to be very broad. In particular, the field of gene vaccines that can eliminate all the side effects of anticancer drugs will be very economical.

유전자치료의 매력으로는 약한 항원의 두 개 이상을 유전자로 변형하여 항원력을 높일 수 있다는데 있다. 이는 유전자공학의 우수한 점이며, 새로운 백신개발에 가장 매력적인 연구로 보여지고 있다. 앞에서 언급하였듯이 우선 많은 항원이 개발되어야 한다.The appeal of gene therapy is that it is possible to increase antigenic power by transforming two or more of the weaker antigens into genes. This is an excellent aspect of genetic engineering and is seen as the most attractive study for new vaccine development. As mentioned earlier, many antigens must first be developed.

지금까지 유전자 또는 유전자 백신을 동·식물의 세포나 조직 내로 전달하는 방법으로는 유전자 등을 금 또는 텅스텐(전달체)에 코팅하여 투여하는 방법이 알려져 있다.Until now, as a method of delivering a gene or gene vaccine into cells or tissues of animals and plants, a method of coating a gene or the like on gold or tungsten (carrier) has been known.

구체적으로 미국특허번호 6,087,124호에는 금 입자(전달체)에 DNA를 코팅하여 유전자를 섬모 세포에 전달하는 방법을 제시하고 있으며, 미국특허 5,976,880호 및 5,877,023호에서는 금 입자(전달체)에 DNA를 코팅하여 세포에 유전자를 전달하는 장치 및 공정을 제안하고 있다.Specifically, US Patent No. 6,087,124 discloses a method of transferring DNA to cilia cells by coating DNA on gold particles (carriers), while US Patent Nos. 5,976,880 and 5,877,023 coat DNA on gold particles (carriers). It proposes a device and process for delivering genes.

또한 미국특허 5,865,796호, 5,506,125호, 5,584,807호 등에서는 불활성 고압가스를 이용하여 금 입자(전달체)에 코팅된 유전자를 세포나 조직에 전달하는 기구를 제안하고 있다. 즉 DNA가 포함된 스퍼미딘(spermidine)과 금 입자(전달체)를 혼합하고 에탄올 용액에 분산하여 이 액을 고압가스로 조직이나 세포에 전달하는 방법을 제안하고 있다.In addition, U.S. Patent Nos. 5,865,796, 5,506,125, 5,584,807, etc. propose a mechanism for delivering genes coated on gold particles (carriers) to cells or tissues using inert high pressure gas. In other words, spermidine containing DNA and gold particles (carriers) are mixed and dispersed in ethanol solution, and this solution is proposed to be delivered to tissues or cells as a high-pressure gas.

이와 같이 유전자를 조직이나 세포에 전달하는 방법은 현재까지는 유전자를 금이나 텅스텐에 코팅하여 조직이나 세포에 전달하는 방법이 유일하다. 그러나 이들 방법은 전달체인 금이나 텅스텐이 고가이며, 인체내에서 자연분해되지 않아 유해하며, 표면이 매끄러워 유전자의 부착효율이 떨어지는 문제가 있다. 더욱상기 종래 전달 방법은 동일한(균일한) 양의 유전자 백신을 투여하는 방법으로 부적합 하다.As such, the only method of transferring genes to tissues or cells is to coat the genes with gold or tungsten and deliver them to tissues or cells. However, these methods have a problem in that gold or tungsten, which is a carrier, is expensive and harmful because it does not naturally decompose in the human body, and the surface is smooth and the adhesion efficiency of genes is lowered. Moreover, the conventional delivery method is inadequate for administering the same (uniform) amount of the gene vaccine.

본 발명은 이와 같은 종래기술의 문제점들을 해결하기 위하여 유전자 또는 유전자 백신의 전달체로서 금이나 텅스텐 대신에 생체 내에서 자연적으로 분해되기 때문에 인체이 무해하며, 표면적이 넓어 유전자 등의 부착효율이 높고, 가격도 저렴하며, 균일한(동일한) 유전자 량을 전달 할 수 있는 생체분해성 고분자 입자를 사용하는 방법을 제공하고자 한다. 아울러 본 발명은 상기 생체분해성 고분자 입자(전달체)를 효율적으로 제조하는 방법도 제공하고자 한다.The present invention is harmless to the human body because it is naturally degraded in vivo instead of gold or tungsten as a carrier of a gene or gene vaccine to solve the problems of the prior art, the surface area is high, the adhesion efficiency of genes, etc. It is an object of the present invention to provide a method of using biodegradable polymer particles which are inexpensive and can deliver a uniform (equal) gene amount. In addition, the present invention is to provide a method for efficiently preparing the biodegradable polymer particles (carrier).

도 1은 본 발명에서 유전자 또는 유전자 백신이 코팅된 생체분해성 고분자 입자(전달체)를 제조하는 공정 개략도 이다.1 is a process schematic diagram of preparing a biodegradable polymer particle (carrier) coated with a gene or gene vaccine in the present invention.

도 2는 본 발명의 생체분해성 고분자 입자(전달체)의 사시도 일예 이다.Figure 2 is an example of a perspective view of the biodegradable polymer particles (carrier) of the present invention.

도 3은 본 발명의 생체분해성 고분자 입자(전달체)의 측면도 일예 이다.Figure 3 is an example of a side view of the biodegradable polymer particles (carrier) of the present invention.

이와 같은 기술적 과제를 달성하기 위하여 본 발명은 동·식물의 세포/조직 내로 유전자 또는 유전자 백신을 전달함에 있어서, 유전자 또는 유전자 백신의 전달체로서 직경 및 길이가 2㎛ 이하인 생체분해성 고분자 입자를 사용하는 것을 특징으로 한다.In order to achieve the above technical problem, the present invention uses a biodegradable polymer particle having a diameter and a length of 2 μm or less as a carrier of a gene or gene vaccine in delivering a gene or gene vaccine into cells / tissues of animals and plants. It features.

이하 본 발명을 상세하게 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

먼저, 본 발명에서 유전자 또는 유전자 백신의 전달체로 사용되는 생체분해성 고분자 입자는 (ⅰ) 2종 이상의 생체분해성 고분자를 해도형 또는 스프리트 타입으로 복합방사 하거나 혼합(블랜딩) 방사하여 섬유를 제조한 다음, (ⅱ) 섬유를구성하는 한성분을 용매로 용출, 제거하여 마이크로 섬유를 제조하고, (ⅲ) 이를 분쇄하는 공정에 의해 제조 된다.First, the biodegradable polymer particles used as carriers of genes or gene vaccines in the present invention are (i) complex spinning or blending (blending) two or more biodegradable polymers in an island-in-water or split type, and then preparing fibers. (Ii) eluting and removing one component constituting the fiber with a solvent to prepare a microfiber, and (i) it is prepared by the process of grinding it.

이때 혼합(블랜딩) 방사인 경우에는 2성분을 2축으로 이루어진 컴파운딩기를 이용하여 균일하게 혼합하여 1축 압출기를 사용하여 방사하는 것이 바람직 하다. 균일한 생체분해성 고분자 입자를 제조하고자 하는 경우에는 복합방사 방법보다 혼합(블랜딩) 방사 방법이 유리하다.In this case, in the case of mixing (blending) spinning, it is preferable to uniformly mix two components using a compounding machine consisting of two axes and to spin using a single screw extruder. In the case of preparing uniform biodegradable polymer particles, a mixed (blended) spinning method is more advantageous than a complex spinning method.

생체분해성 고분자 입자의 길이 및 직경은 2㎛ 이하, 더욱 바람직 하기로는 0.3∼1.5㎛가 되도록 분쇄조건을 설정한다. 또한 상기 분쇄공정 전에 마이크로 섬유를 건조하고, 분쇄는 액체 질소 하에서 섬유 길이방향으로 절단하는 방식이 바람직 하다.The grinding conditions are set such that the length and diameter of the biodegradable polymer particles are 2 μm or less, more preferably 0.3 to 1.5 μm. In addition, the microfibers are dried before the grinding step, and the grinding is preferably performed by cutting in the fiber length direction under liquid nitrogen.

생체분해성 고분자로는 폴리글리콜리드, 폴리락티드, 폴리카프로락톤, 폴리디옥산원, 폴리글리콜산, 폴리트리메틸렌카보네이트, 폴리젖산, 폴리(올소 에스테르), 폴리(안하이드로), 폴리(포스파겐), 폴리(아미노산), 키토산, 셀룰로오스 유도체, 폴리(하이드록시 부틸레이트) 및 폴리(싸카라이드) 등으로 구성되는 그룹 중에서 선택된 1종의 고분자, 2종 이상의 블랜드 또는 2종 이상의 공중합체를 사용한다.Biodegradable polymers include polyglycolide, polylactide, polycaprolactone, polydioxane source, polyglycolic acid, polytrimethylene carbonate, polylactic acid, poly (ortho ester), poly (anhydro), poly (phosphagen ), One polymer, two or more blends, or two or more copolymers selected from the group consisting of poly (amino acid), chitosan, cellulose derivatives, poly (hydroxy butylate), poly (saccharide), and the like. .

다음으로는 이와 같이 제조된 생체분해성 고분자 입자(전달체)와 유전자/유전자 백신을 CaCl2하에서 혼합하여 유전자/유전자 백신을 상기 전달체에 코팅한다. 계속해서 에탄올로 세척하고 에탄올이 들어있는 바이엘에 밀폐 보관하면서 필요시동·식물에 투여, 사용한다.Next, the biodegradable polymer particles (carrier) thus prepared and the gene / gene vaccine are mixed under CaCl 2 to coat the gene / gene vaccine on the carrier. Subsequently, wash with ethanol, store in a sealed container containing ethanol, administer to necessary start-up and plants.

본 발명은 유전자 등의 전달체로서 생체분해성인 고분자 입자를 사용하기 때문에 인체에 무해하며 가격도 저렴하다. 아울러 상기 전달체의 표면적이 넓어 유전자나 유전자 백신의 부착효율도 향상시킬 수 있다.The present invention is harmless to the human body because of the use of biodegradable polymer particles as carriers for genes and the like and is inexpensive. In addition, the surface area of the carrier is wide, and thus, the adhesion efficiency of the gene or gene vaccine can be improved.

이하 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 구체적으로 살펴본다. 그러나 본 발명이 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the following examples. However, the present invention is not limited only to the following examples.

실시예 1Example 1

고유점도가 2.7㎗/g인 (ⅰ) 폴리(p-디옥산온)을 도성분으로 하고, (ⅱ) 글리콜라이드(glycolide)와 L-락티드 몰비가 70:30인 폴리글리콜리드-락티드 공중합체를 해성분으로 이용하여, 이들을 통상의 복합방사기로 방사하여 해도형(sea-island)복합 필라멘트를 제조한다. 이때 도성분은 연신후 섬유직경이 1.0㎛이 되도록 한다. 계속해서 상기 해도형 복합섬유 중 해성분인 폴리글리콜리드-락티드 공중합체를 메틸렌 클로라이드 용매로 용해하여 제거한다. 도성분만이 남은 섬유집합체를 건조하여 완전히 메틸렌 클로라이드를 제거한다. 제거된 섬유상을 액체질소하에서 일차로 분쇄한다. 일차 분쇄한 후의 길이는 평균 5㎛이고 이를 고속의 공기를 이용하여 한번 더 분쇄하여 길이를 1㎛로 한다. 제조된 입자를 유전자 및 유전자 백신의 전달체로 사용한다. 이 전달체 30mg과 25μg의 DNA가 들어 있는 0.1M 스퍼미딘(spermidine) 300μL에 혼합한다. 그런다음에 2.6MCaCl2용액 200μL를 이 혼합물에 첨가하고 저어준다. 약 10분정도 인큐베이터 속에서 체류하여 DNA가 생체분해성 전달체 입자 표면에 부착되도록 한다. DNA가 부착된 마이크로 원심분리기를 이용하여 DNA부착된 생체분해성 전달체 입자를 원심 분리한다. 에탄올 3mL을 다시 첨가하여 DNA가 부착된 전달체의 분산이 잘 되도록한다. 그런다음에 바이엘에 밀봉하여 보관하고 이를 조직이나 세포에 전달한다. 실시예 1은 종래 DNA 전달체로 금을 사용하는 방법과 비교시 DNA 부착효율이 월등하게 높았고, 상기 전달체가 인체 내에서 자연 분해되는 장점이 있었다.Polyglycolide-lactide with (i) poly (p-dioxone) having an intrinsic viscosity of 2.7 dl / g and (ii) a glycolide and a L-lactide molar ratio of 70:30 Using a copolymer as a sea component, these are spun with a conventional composite spinning machine to produce a sea-island composite filament. At this time, the island component is drawn so that the fiber diameter is 1.0㎛. Subsequently, the polyglycolide-lactide copolymer as a sea component in the island-in-the-sea composite fiber is dissolved and removed with a methylene chloride solvent. Dry the remaining fiber aggregates only the island component to remove methylene chloride completely. The removed fibrous phase is first ground under liquid nitrogen. The average length after the first grinding is 5 µm on average, and the length is pulverized once more using high speed air to make the length 1 µm. The prepared particles are used as carriers of genes and gene vaccines. 30 mg of this carrier and 300 μL of 0.1 M spermidine containing 25 μg of DNA are mixed. Then add 200 μL of 2.6MCaCl 2 solution to this mixture and stir. It stays in the incubator for about 10 minutes to allow DNA to adhere to the surface of the biodegradable carrier particles. DNA-attached biodegradable carrier particles are centrifuged using a micro centrifuge with DNA attached. Add 3 mL of ethanol again to ensure good dispersion of the DNA-attached carrier. It is then sealed and stored in a bayer and delivered to tissues or cells. Example 1 has a significantly higher DNA adhesion efficiency compared to the method using gold as a conventional DNA carrier, there was an advantage that the carrier is naturally degraded in the human body.

본 발명은 유전자 또는 유전자 백신의 전달체로서 생체분해성 고분자 입자를 사용하기 때문에 가격이 저렴하고, 인체에 무해하며, 표면적이 넓어 유전자 등의 부착효율이 높다. 아울러 동일한(균일한) 량의 유전자 등을 세포/조직 내로 전달 할 수 있다.Since the present invention uses biodegradable polymer particles as carriers of genes or gene vaccines, they are inexpensive, harmless to the human body, and have a large surface area, and thus, high adhesion efficiency of genes and the like. In addition, the same (uniform) amount of genes, etc. can be delivered into the cell / tissue.

Claims (5)

동·식물의 세포/조직 내로 유전자 또는 유전자 백신을 전달함에 있어서, 유전자 또는 유전자 백신의 전달체로서 직경 및 길이가 2㎛ 이하인 생체분해성 고분자 입자를 사용하는 것을 특징으로 하는 유전자 또는 유전자 백신의 전달방법.A method of delivering a gene or a gene vaccine, characterized in that a biodegradable polymer particle having a diameter and a length of 2 μm or less is used as a carrier of a gene or gene vaccine in delivering a gene or gene vaccine into a cell or tissue of an animal or plant. 1항에 있어서, 유전자 또는 유전자 백신이 이들의 전달체인 생체분해성 고분자 입자 상에 코팅된 것을 특징으로 하는 유전자 또는 유전자 백신의 전달방법.The method of claim 1, wherein the gene or gene vaccine is coated on biodegradable polymer particles, which are carriers thereof. 1항에 있어서, 생체분해성 고분자 입자의 직경 및 길이가 0.3∼1.5㎛인 것을 특징으로 하는 유전자 또는 유전자 백신의 전달방법.The method of claim 1, wherein the diameter and length of the biodegradable polymer particles are 0.3 to 1.5 μm. 1항에 있어서, 생체분해성 고분자가 폴리글리콜리드, 폴리락티드, 폴리카프로락톤, 폴리디옥산원, 폴리글리콜산, 폴리트리메틸렌카보네이트, 폴리젖산, 폴리(올소 에스테르), 폴리(안하이드로), 폴리(포스파겐), 폴리(아미노산), 키토산, 셀룰로오스 유도체, 폴리(하이드록시 부틸레이트) 및 폴리(싸카라이드)로 구성되는그룹 중에서 선택된 1종의 고분자, 2종 이상의 블랜드 또는 2종 이상의 공중합체인 것을 특징으로 하는 유전자 또는 유전자 백신의 전달방법.The method according to claim 1, wherein the biodegradable polymer is selected from polyglycolide, polylactide, polycaprolactone, polydioxane source, polyglycolic acid, polytrimethylenecarbonate, polylactic acid, poly (ortho ester), poly (anhydro), One polymer, two or more blends, or two or more copolymers selected from the group consisting of poly (phosphagen), poly (amino acid), chitosan, cellulose derivatives, poly (hydroxy butylate) and poly (saccharide) A method of delivering a gene or gene vaccine, characterized in that. 1항에 있어서, 생체분해성 고분자 입자가 (ⅰ) 2종 이상의 생체분해성 고분자를 해도형 또는 스프리트 타입으로 복합방사 하거나 혼합(블랜딩) 방사하여 섬유를 제조한 다음, (ⅱ) 섬유를 구성하는 한성분을 용매로 용출, 제거하여 마이크로 섬유를 제조하고, (ⅲ) 이를 분쇄하는 공정에 의해 제조됨을 특징으로 하는 유전자 또는 유전자 백신의 전달방법.The method according to claim 1, wherein the biodegradable polymer particles (i) complex spinning or blending (blended) spinning two or more biodegradable polymers in an island-in-water or split type, and then (ii) one component constituting the fibers. A method of delivering a gene or gene vaccine, characterized in that it is prepared by the step of eluting and removing the solvent in a microfiber, and (iii) grinding the same.
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