KR20010102960A - Compositions and Methods for The Treatment of Tumor - Google Patents

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KR20010102960A
KR20010102960A KR1020017007877A KR20017007877A KR20010102960A KR 20010102960 A KR20010102960 A KR 20010102960A KR 1020017007877 A KR1020017007877 A KR 1020017007877A KR 20017007877 A KR20017007877 A KR 20017007877A KR 20010102960 A KR20010102960 A KR 20010102960A
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데이비드 보트스타인
오드리 고다드
오스틴 엘. 거니
케네쓰 힐란
데이비드 에이. 로렌스
마가레트 앤 로이
윌리암 아이. 우드
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제넨테크, 인크.
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Abstract

본 발명은 인간을 비롯한 포유동물에서 신생물 세포의 생장 및 증식의 진단 및 치료용 조성물, 및 진단 및 치료 방법에 관한 것이다. 본 발명은 종양 세포의게놈에서 증폭된 유전자의 확인을 기초로 한다. 그러한 유전자 증폭은 동일한 조직 유형의 정상 세포에 비해 유전자 생성물이 과다 발현된 것과 관련되어 있으며, 종양발생의 원인이 되는 것으로 여겨진다. 따라서, 증폭된 유전자에 의해 코딩되는 단백질은 특정 암의 진단 및(또는) 치료(예방을 비롯하여)에 유용한 표적이며, 종양 치료의 예후의 예시자로서 작용할 수 있는 것으로 여겨진다. 또한, 본원에서는 그러한 핵산 서열을 포함하는 벡터와 숙주세포, 본 발명의 폴리펩티드를 이종 폴리펩티드 서열과 융합된 상태로 포함하는 키메라 폴리펩티드 분자, 본 발명의 폴리펩티드에 결합하는 항체, 및 본 발명의 폴리펩티드를 제조하는 방법이 제공된다.The present invention relates to compositions for the diagnosis and treatment of growth and proliferation of neoplastic cells in mammals, including humans, and methods of diagnosis and treatment. The present invention is based on the identification of genes amplified in the genome of tumor cells. Such gene amplification is associated with overexpression of the gene product relative to normal cells of the same tissue type and is believed to be responsible for tumorigenesis. Thus, the protein encoded by the amplified gene is believed to be a useful target for the diagnosis and / or treatment (including prevention) of certain cancers and to serve as an example of the prognosis of tumor treatment. In addition, the present invention provides a vector comprising a nucleic acid sequence and a host cell, a chimeric polypeptide molecule comprising the polypeptide of the present invention in fusion with a heterologous polypeptide sequence, an antibody binding to the polypeptide of the present invention, and the polypeptide of the present invention. A method is provided.

Description

종양 치료용 조성물 및 방법{Compositions and Methods for The Treatment of Tumor}Compositions and Methods for Treatment of Tumors

악성 종양(암)은 심장 질환에 이어 두 번째로 높은 사망 원인이다(Boring et al., CA Cancer J. Clin., 43:7 [1993]).Malignant tumors (cancer) are the second leading cause of death after heart disease (Boring et al., CA Cancer J. Clin., 43: 7 [1993]).

암은 정상 조직으로부터 유래된 비정상적이거나 신생물성인 세포(증식하여 종양 덩어리를 형성함) 수의 증가, 이 신생물성 종양 세포에 의한 인접 조직으로의 침입, 및 결국 혈액 또는 림프계를 통해 국부적 림프절 및 원격 부위로 퍼지는 (전이) 악성 세포의 발생을 특징으로 한다. 암 상태에서, 세포는 정상 세포가 생장하지 않는 상태에서 증식한다. 암은 침입성 및 침습성의 상이한 정도를 특징으로 하는 각종 형태로 그 자체로 확장된다.Cancer increases the number of abnormal or neoplastic cells (proliferating to form tumor masses) derived from normal tissue, invading adjacent tissues by these neoplastic tumor cells, and eventually local lymph nodes and distant through the blood or lymph system. It is characterized by the development of malignant cells that spread to the site. In the cancerous state, the cells proliferate without the growth of normal cells. Cancer extends to itself in various forms characterized by different degrees of invasiveness and invasiveness.

유전자 발현의 이상은 모든 암의 통상적인 특징인 조절되지 않은 세포 생장 및 탈분화와 밀접하게 관련되어 있다. 잘 연구되어 있는 특정 종양의 게놈에서는 통상 종양 억제유전자로 불리며 정상적으로는 악성 세포 생장을 억제하는 기능을 하는 열성유전자의 발현이 감소되어 있고(거나), 악성 생장을 촉진시키는 기능을 하는 특정 우성유전자, 예를 들어, 종양유전자가 과다발현되어 있는 것으로 밝혀졌다. 이러한 각 유전적 변화는 총체적으로 완전한 신생물성 표현형을 나타내는 몇가지 중요한 형질의 원인이 되는 것으로 여겨진다(Hunter, Cell, 64:1129 [1991] 및 Bishop, Cell, 64:235-248 [1991]).Abnormalities in gene expression are closely related to unregulated cell growth and dedifferentiation, a common feature of all cancers. In certain genomes of well-studied tumors, certain dominant genes, commonly referred to as tumor suppressor genes, normally have reduced expression of recessive genes that function to inhibit malignant cell growth, and / or promote malignant growth, For example, it has been found that the oncogene is overexpressed. Each of these genetic changes is believed to be responsible for several important traits that collectively represent a complete neoplastic phenotype (Hunter, Cell, 64: 1129 [1991] and Bishop, Cell, 64: 235-248 [1991]).

암 세포에서의 유전자(예를 들어, 종양유전자) 과다발현의 잘 공지된 메카니즘은 유전자 증폭이다. 이는 조상 세포의 염색체에서 특정 유전자의 조상 세포 다수 복제본이 생성되는 과정이다. 이 과정은 유전자를 포함하는 염색체 영역의 예정되지 않은 복제에 이어, 복제된 세그먼트가 재조합되어 염색체로 통합되는 과정을 포함한다(Alitalo et al., Adv. Cancer Res., 47:235-281 [1986]). 유전자의 과다발현은 유전자 증폭과 평행 관계가 되는, 즉 생성되는 복제본 수에 비례하는 것으로 여겨진다.A well known mechanism of gene (eg, oncogene) overexpression in cancer cells is gene amplification. This is the process by which multiple copies of progenitor cells of a particular gene are produced in the chromosomes of progenitor cells. This process involves unscheduled replication of the chromosomal region containing the gene followed by recombination of the replicated segment into the chromosome (Alitalo et al., Adv. Cancer Res., 47: 235-281 [1986] ]). Overexpression of genes is believed to be parallel to gene amplification, ie proportional to the number of copies produced.

생장 인자 및 생장 인자 수용체를 코딩하는 원시 종양유전자(proto-oncogene)는 유방암을 비롯한 각종 인간 악성 질환의 병인에 있어 중요한 역할을 하는 것으로 확인되었다. 예를 들어, 상피 생장 인자 수용체 EGFR과 관련된 185 kd의 막횡단 당단백질 수용체(p185HER2; HER2)를 코딩하는 인간 ErbB2 유전자(또한 her2 또는 c-erbB-2로도 공지된 erbB2)는 인간 유방암의 약 25% 내지 약 30%에서 과다발현된 것으로 밝혀졌다(Slamon et al., Science, 235:177-182[1987]; Slamon et al., Science, 244:707-712[1989]).Proto-oncogenes that encode growth factors and growth factor receptors have been shown to play an important role in the pathogenesis of various human malignant diseases, including breast cancer. For example, the human ErbB2 gene (erbB2, also known as her2 or c-erbB-2), encoding the 185 kd transmembrane glycoprotein receptor (p185 HER2 ; HER2) associated with epidermal growth factor receptor EGFR is a drug of human breast cancer. Overexpression in 25% to about 30% (Slamon et al., Science, 235: 177-182 [1987]; Slamon et al., Science, 244: 707-712 [1989]).

원시 종양유전자의 유전자 증폭은 전형적으로 보다 악성인 형태의 암과 관련된 사건이며, 임상 결과의 예시자로서 작용할 수 있는 것으로 보고되었다(Schwabet al., Genes Chromosomes Cancer, 1:181-193[1990]; Alitalo et al.의 상기 문헌). 따라서, erbB2 과다발현은 특히 엽액 림프절과 관련된 원발성 질환의 환자에서 통상 불량한 예후의 예시자로 여겨지며(Slamon et al.,[1987] 및 [1989]의 상기 문헌; Ravdin and Chamness, Gene, 159:19-27[1995]; 및 Hynes and Stern, Biochim. Biophys. Acta. 1198:165-184[1994]), 호르몬 치료 및 CMF(시클로포스파미드, 메토트렉세이트 및 플루오르우라실) 및 안트라시클린을 비롯한 화학요법 섭생에 대한 감수성 및(또는) 내성과 결부되어 있는 것으로 여겨진다(Baselge et al., Oncology, 11(3 Suppl 1):43-48[1997]). 그러나, 불량한 예후를 보이는 erbB2 과다발현과 관련되어 있지만, 탁산(taxane)을 사용한 치료에 임상적으로 반응하는 HER2-양성 환자의 이상 증상은 HER2-음성 환자보다 3 배 더 높다. 재조합 인간화 항-ErB2(항-HER2) 모노클로날 항체(쥐 항-ErbB2 항체 4D5의 인간화 형태는 rhuMAb Her2 또는 상표명 헤르셉틴(Herceptin)으로 언급됨)는 항암 치료전에 광범위하게 수용된 ErbB2-과다발현 전이 유방암 환자에서 임상적으로 활성적이었다(Baselga et al., J. Clin. Oncol., 14:737-744 [1996]).Gene amplification of primitive oncogenes is typically an event associated with a more malignant form of cancer and has been reported to act as an example of clinical outcome (Schwabet al., Genes Chromosomes Cancer, 1: 181-193 [1990]; Alitalo et al., Supra. Thus, erbB2 overexpression is generally considered an example of poor prognosis, especially in patients with primary disease associated with mesenchymal lymph nodes (Slamon et al., [1987] and [1989]; Ravdin and Chamness, Gene, 159: 19- 27 [1995]; and Hynes and Stern, Biochim. Biophys. Acta. 1198: 165-184 [1994], hormonal therapy and chemotherapy regimens including CMF (cyclophosphamide, methotrexate and fluorouracil) and anthracycline It is believed to be associated with susceptibility and / or resistance to (Baselge et al., Oncology, 11 (3 Suppl 1): 43-48 [1997]). However, aberrant symptoms of HER2-positive patients clinically responding to treatment with taxane, although associated with erbB2 overexpression with a poor prognosis, are three times higher than HER2-negative patients. Recombinant humanized anti-ErB2 (anti-HER2) monoclonal antibodies (humanized forms of murine anti-ErbB2 antibody 4D5 are referred to as rhuMAb Her2 or trade name Herceptin) are widely accepted ErbB2-overexpression metastases prior to anticancer treatment Clinically active in breast cancer patients (Baselga et al., J. Clin. Oncol., 14: 737-744 [1996]).

상기 기재된 바에 비추어, 명백하게도 유전자 증폭과 관련되어 있는 종양의 신규 진단 및 치료용 조성물과 진단 및 치료 방법을 확인하는데 흥미가 있게 되었다.In view of the above, it has become interesting to identify new diagnostic and therapeutic compositions and methods of diagnosis and treatment of tumors that are apparently involved in gene amplification.

<발명의 요약>Summary of the Invention

A. 실시양태A. Embodiments

본 발명은 인간을 포함하는 포유동물에서 신생물성 세포의 생장 및 증식의진단 및 치료용 조성물과 그 방법에 관한 것이다. 본 발명은 종양 세포의 게놈에서 증폭되는 유전자를 확인하는 것을 기초로 한다. 그러한 유전자 증폭은 유전자 생성물의 과다발현과 관련되어 있으며, 종양형성의 원인이 되는 것으로 생각된다. 따라서, 증폭된 유전자에 의해 코딩된 단백질은 특정 암의 진단 및(또는) 치료(예방을 포함하여)에 있어 유용한 표적인 것으로 여겨지며, 종양 치료의 예후에 있어서 예시자로 작용할 수 있다.The present invention relates to compositions and methods for diagnosing and treating growth and proliferation of neoplastic cells in mammals, including humans. The present invention is based on identifying genes that are amplified in the genome of tumor cells. Such gene amplification is associated with overexpression of gene products and is thought to be responsible for tumorigenesis. Thus, proteins encoded by amplified genes are believed to be useful targets in the diagnosis and / or treatment (including prevention) of certain cancers and may serve as exemplars in the prognosis of tumor treatment.

한 실시양태에서, 본 발명은 본원에서 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드로 지칭되는 폴리펩티드에 결합하는 단리된 항체에 관한 것이다. 한 측면에서, 단리된 항체는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다. 다른 측면에서, 항체는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 발현하는 세포의 사멸을 유도한다. 종종, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 과다발현하는 세포는 동일한 조직 유형의 정상 세포에 비해 상기 폴리펩티드를 과다발현하는 종양 세포이다. 또다른 측면에서, 항체는 바람직하게는 비-인간 상보성 결정 영역(complementarity determining region, CDR) 잔기 및 인간 프레임워크(framework) 영역(FR) 잔기를 갖는 모노클로날 항체이다. 항체는 표지화될 수 있으며, 고형 지지체상에 고정될 수 있다. 또다른 측면에서, 항체는 바람직하게는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체 단편, 단일쇄 항체 또는 인간화 항체이다.In one embodiment, the invention relates to an isolated antibody that binds to a polypeptide referred to herein as PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptide. will be. In one aspect, the isolated antibody specifically binds to a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. In another aspect, the antibody induces death of cells expressing PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. Often, cells that overexpress PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptides overexpress the polypeptide compared to normal cells of the same tissue type. Tumor cells. In another aspect, the antibody is preferably a monoclonal antibody having non-human complementarity determining region (CDR) residues and human framework region (FR) residues. Antibodies can be labeled and immobilized on a solid support. In another aspect, the antibody is preferably an antibody fragment, single-chain antibody that specifically binds to a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide Or humanized antibodies.

다른 실시양태에서, 본 발명은 바람직하게는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체를 약제학상 허용되는 담체와 혼합된 형태로 포함하는 물질의 조성물에 관한 것이다. 한 측면에서, 물질의 조성물은 치료 유효량의 항체를 포함한다. 다른 측면에서, 상기 조성물은 예를 들어, 추가의 항체 또는 세포독성제 또는 화학요법제일 수 있는 추가의 활성 성분을 포함한다. 조성물은 멸균된 것이 바람직하다.In another embodiment, the invention preferably provides a pharmaceutically acceptable antibody that specifically binds to a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. It relates to a composition of matter comprising a form in admixture with the carrier. In one aspect, the composition of matter comprises a therapeutically effective amount of the antibody. In another aspect, the composition comprises additional active ingredients which may be, for example, additional antibodies or cytotoxic or chemotherapeutic agents. The composition is preferably sterile.

추가의 실시양태에서, 본 발명은 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체를 코딩하는 단리된 핵산 분자, 및 그러한 핵산 분자를 포함하는 벡터 및 재조합 숙주세포에 관한 것이다.In a further embodiment, the invention provides anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti Isolated nucleic acid molecules encoding -PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibodies, and vectors and recombinant host cells comprising such nucleic acid molecules.

다른 추가의 실시양태에서, 본 발명은 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체를 코딩하는 핵산으로 형질전환된 숙주세포를 항체의 발현에 충분한 조건하에 배양시키고, 세포 배양액으로부터 항체를 회수하는 것을 포함하는, 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327,항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체의 제조 방법에 관한 것이다.In still further embodiments, the invention provides anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, Anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibody, comprising: culturing the host cell transformed with a nucleic acid encoding the antibody under conditions sufficient for the expression of the antibody, and recovering the antibody from the cell culture PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or A method for preparing an anti-PRO882 antibody.

본 발명은 추가로 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 하나 이상의 생물학적 및(또는) 면역학적 기능 또는 활성을 억제하는, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 길항제에 관한 것이다.The invention further inhibits one or more biological and / or immunological functions or activities of the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides, An antagonist of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide.

추가의 측면에서, 본 발명은 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 분자 또는 그의 상보체에 혼성화되는 단리된 핵산 분자에 관한 것이다. 단리된 핵산분자는 DNA가 바람직하고, 혼성화는 엄격한 혼성화 및 세척 조건에서 일어나는 것이 바람직하다. 상기 핵산 분자는 본원에서 확인된 증폭된 유전자의 안티센스 분자로 작용할 수 있으며, 이는 또한 각 증폭된 유전자의 전사 및(또는) 번역의 조절에 사용되거나 증폭 반응의 안티센스 프라이머로서 유용할 수 있다. 또한, 그러한 서열은 리보자임 및(또는) 삼중 나선 서열의 일부로 사용할 수 있고, 또한 증폭된 유전자의 조절에 사용할 수 있다.In a further aspect, the invention provides an isolated hybridized to nucleic acid molecule or complement thereof encoding PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. It relates to a nucleic acid molecule. Isolated nucleic acid molecules are preferably DNA, and hybridization preferably takes place under stringent hybridization and washing conditions. The nucleic acid molecule can act as an antisense molecule of the amplified genes identified herein, which can also be used in the regulation of transcription and / or translation of each amplified gene or useful as an antisense primer of an amplification reaction. In addition, such sequences may be used as part of ribozymes and / or triple helix sequences, and may also be used for the regulation of amplified genes.

다른 실시양태에서, 본 발명은 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882폴리펩티드를 함유할 것으로 의심되는 샘플을 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체에 노출시키고, 상기 샘플에서 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 상기 항체가 결합하는 것을 측정하는 단계를 포함하는, 상기 샘플에서 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 존재를 측정하는 방법을 제공한다. 다른 실시양태에서, 본 발명은 세포를 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체에 노출시키고, 항체가 세포에 결합하는 것을 측정하는 단계를 포함하는, 세포에서 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 존재를 측정하는 방법을 제공한다.In another embodiment, the invention provides a sample suspected to contain PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides. PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibody Exposing to and measuring the binding of said antibody to PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides in said sample. Provided are methods for measuring the presence of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides in a sample. In other embodiments, the present invention provides anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, Exposing to an anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibody, and determining that the antibody binds to the cell, wherein the cell comprises PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, Provides a way to measure the presence of PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 (a) 포유동물로부터 얻은 조직 세포의 시험 샘플 및 (b) 동일한 세포 유형의 공지된 정상 조직 세포인 대조용 샘플에서 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 검출하는 것을 포함하는, 포유동물에서의 종양의 진단 방법에 관한 것이며, 이 방법에서 대조용 샘플에 비해 시험 샘플의 발현 수준이 더 높으면, 이는시험 조직 세포를 얻은 포유동물에 종양이 존재함을 지시하는 것이다.In another embodiment, the present invention is directed to PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343 in (a) a test sample of tissue cells obtained from a mammal and (b) a control sample that is a known normal tissue cell of the same cell type. And a method for diagnosing tumors in a mammal, the method comprising detecting the expression level of a gene encoding a polypeptide of a PRO347, PRO357, PRO715, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. If the test sample has a higher expression level, this indicates that the tumor is present in the mammal from which the test tissue cells were obtained.

다른 실시양태에서, 본 발명은 (a) 시험 샘플을 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체를 포유동물로부터 얻은 조직 세포와 접촉시키는 단계, 및 (b) 시험 샘플에서 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체와 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드와의 결합체 형성을 측정하는 단계를 포함하는, 포유동물에서 종양의 진단 방법에 관한 것이며, 이 방법에서 결합체의 형성은 상기 포유동물에 종양이 존재함을 지시하는 것이다. 검출은 정성 또는 정량적일 수 있으며, 동일한 세포 유형의 공지된 정상 조직 세포인 대조용 샘플에서의 결합체 형성을 모니터링한 결과를 비교하여 수행할 수 있다. 시험 샘플에 보다 다량의 결합체가 형성되었다는 것은 시험 조직 세포를 얻은 포유동물에 종양이 존재함을 지시하는 것이다. 항체는 검출가능한 표지를 포함하는 것이 바람직하다. 결합체 형성은 예를 들어, 광학현미경, 유동 세포계측법(flow cytometry), 형광측정법 또는 당업계에 공지된 다른 기술로 모니터링할 수 있다.In another embodiment, the present invention provides an anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, Contacting an anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibody with tissue cells obtained from a mammal, and (b) anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327 in a test sample Anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibodies and PRO201, PRO292, A method of diagnosing a tumor in a mammal, comprising measuring conjugate formation with a PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptide, wherein Formation of the conjugate is indicative of the presence of a tumor in the mammal. Detection can be qualitative or quantitative and can be performed by comparing the results of monitoring conjugate formation in a control sample that is a known normal tissue cell of the same cell type. The formation of larger amounts of conjugates in the test sample indicates the presence of tumors in the mammals from which the test tissue cells were obtained. The antibody preferably comprises a detectable label. Binder formation can be monitored, for example, by light microscopy, flow cytometry, fluorometry or other techniques known in the art.

시험 샘플은 통상 신생물성 세포 생장 또는 증식으로 의심되는 환자의 세포(예를 들어, 암 세포)로부터 얻는다.Test samples are usually obtained from cells of a patient suspected of neoplastic cell growth or proliferation (eg cancer cells).

다른 실시양태에서, 본 발명은 적합한 용기내에 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체 및 담체(예를 들어, 완충제)를 포함하는 암 진단용 키트에 관한 것이다. 키트는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 함유할 것으로 의심되는 샘플에서 상기 폴리펩티드의 존재를 검출하기 위해 항체를 사용하는 지침서를 포함하는 것이 바람직하다.In another embodiment, the invention provides an anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017 And anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibodies and a carrier (eg, a buffer). The kit uses an antibody to detect the presence of the polypeptide in a sample suspected of containing a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. It is desirable to include a tutorial.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 발현하는 종양 세포를 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 생물학적 및(또는) 면역적 활성 및(또는) 발현을 억제하는 유효량의 제제에 노출시켜 종양 세포의 생장을 억제시키는 것을 포함하는, 종양 세포의 생장 억제 방법에 관한 것이다. 상기 제제는 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체, 작은 유기 및 무기 분자, 펩티드, 포스포펩티드, 안티센스 또는 리보자임 분자, 또는 삼중 나선 분자가 바람직하다. 구체적인 측면에서, 상기 제제, 예를 들어, 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체는 세포 사멸을 유도한다. 추가의 측면에서, 종양 세포는 방사선 치료 및(또는) 세포독성제 또는 화학요법제에 추가로 노출시킬 수 있다.In another embodiment, the present invention provides a tumor cell expressing PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides. Inhibit the growth of tumor cells by exposure to an effective amount of an agent that inhibits the biological and / or immunological activity and / or expression of a polypeptide, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 It relates to a method of inhibiting the growth of tumor cells, including. The formulation is anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509 Preferred are anti-PRO853 or anti-PRO882 antibodies, small organic and inorganic molecules, peptides, phosphopeptides, antisense or ribozyme molecules, or triple helix molecules. In specific aspects, such agents, for example, anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017 Anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibodies induce cell death. In a further aspect, tumor cells may be further exposed to radiation therapy and / or cytotoxic or chemotherapeutic agents.

추가의 실시양태에서, 본 발명은In a further embodiment, the present invention

용기,Vessel,

용기상의 라벨, 및Label on the container, and

상기 용기중에 함유된 활성 제제를 포함하는 조성물을 포함하며, 상기 조성물은 종양 세포의 생장을 억제하는데 효과적이며, 상기 용기상의 라벨은 상기 조성물이 동일한 조직 유형의 정상 세포에 비해 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드가 과다발현되는 것을 특징으로 하는 증상을 치료하는데 사용할 수 있음을 가리키는 것인 제품에 관한 것이다. 특정 측면에서, 상기 조성물 중의 활성 제제는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 활성 및(또는) 발현을 억제하는 것이다. 바람직한 측면에서, 활성 제제는 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체 또는 안티센스 올리고뉴클레오티드이다.A composition comprising the active agent contained in the container, wherein the composition is effective to inhibit the growth of tumor cells, wherein the label on the container indicates that the composition is PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides indicate that the product can be used to treat a condition characterized by overexpression. In certain aspects, the active agent in the composition is one that inhibits the activity and / or expression of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. In a preferred aspect, the active agent is anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112 , Anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibody or antisense oligonucleotide.

본 발명은 또한 후보 화합물을 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드와 이들 두 성분이 상호작용할 수 있는 충분한 시간 및 조건하에 접촉시키고, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 생물학적 및(또는) 면역적 활성이 억제되는지의 여부를 측정하는 것을 포함하는, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 활성을 억제하는 화합물을 확인하는 방법에 관한 것이다. 구체적인 측면에서, 후보 화합물 또는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드는 고형 지지체상에 고정된다. 다른 측면에서, 고정되지 않은 성분은 검출가능한 표지를 갖는다. 바람직한 측면에서, 이 방법은 (a) 세포와 스크리닝될 후보 화합물을 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 존재하에 상기 폴리펩티드에 의해 정상적으로 유도되는 세포 반응을 유도하기에 적합한 조건하에서 접촉시키는 단계, 및 (b) 시험 화합물이 효과적인 길항제인지의 여부를 결정하기 위해 상기 세포 반응이 유도되는 것을 측정하는 단계를 포함한다.The present invention also provides a method of contacting a candidate compound with sufficient time and conditions to allow these two components to interact with the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides. And determining whether the biological and / or immunological activity of the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides is inhibited. , PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 to identify a compound that inhibits the activity of a polypeptide. In specific aspects, the candidate compound or PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide is immobilized on a solid support. In another aspect, the unfixed component has a detectable label. In a preferred aspect, the method comprises: (a) the candidate compound to be screened for the cells in the presence of the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides Contacting under conditions suitable to induce a cellular response normally induced by, and (b) determining that the cellular response is induced to determine whether the test compound is an effective antagonist.

다른 실시양태에서, 본 발명은 세포를 후보 화합물과 접촉시키고, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 발현이 억제되는지의 여부를 측정하는 것을 포함하는, 상기 폴리펩티드를 발현하는 세포에서 상기 폴리펩티드의 발현을 억제하는 화합물을 확인하는 방법을 제공한다. 바람직한 측면에서, 이 방법은 (a) 세포와 스크리닝될 후보 화합물을 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 발현에 적합한 조건하에서 접촉시키는 단계, 및 (b) 상기 폴리펩티드의 발현이 억제되는 것을 측정하는 단계를 포함한다.In another embodiment, the invention provides a method of contacting a cell with a candidate compound and determining whether the expression of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide is inhibited. Provided are methods for identifying a compound that inhibits expression of the polypeptide in a cell expressing the polypeptide, including determining whether the polypeptide is present. In a preferred aspect, the method comprises (a) conditions suitable for the expression of the cells and candidate compounds to be screened for PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides. Contacting under, and (b) determining that expression of said polypeptide is inhibited.

B. 추가의 실시양태B. Additional Embodiments

본 발명의 다른 실시양태에서, 본 발명은 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 핵산 분자를 제공한다.In another embodiment of the invention, the invention provides an isolated nucleic acid comprising a nucleotide sequence encoding a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. Provide a molecule.

한 측면에서, 단리된 핵산 분자는 (a) 본원에 개시된 바와 같은 전장의 아미노산 서열, 본원에 개시된 바와 같이 신호 펩티드가 결여된 아미노산 서열, 본원에 개시된 바와 같이 신호 펩티드가 포함되거나 포함되지 않은 세포외 도메인, 또는 본원에 개시된 바와 같은 전장 아미노산 서열의 구체적으로 한정된 임의의 기타 단편을 갖는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 DNA 분자, 또는 (b) 상기 (a) DNA 분자의 상보체와 약 80% 이상의 서열 동일성, 바람직하게는 약 81% 이상의 서열 동일성, 더욱 바람직하게는 약 82% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 83% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 84% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 85% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 86% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 87% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 88% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 89% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 90% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 91% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 92% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 93% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 94% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 95% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 96% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 97% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 98% 이상의 서열 동일성 및 보다 바람직하게는 약 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.In one aspect, an isolated nucleic acid molecule comprises (a) a full length amino acid sequence as disclosed herein, an amino acid sequence lacking a signal peptide as disclosed herein, or an extracellular with or without a signal peptide as disclosed herein. A PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide having a domain or any other specifically defined fragment of the full length amino acid sequence as disclosed herein At least about 80% sequence identity, preferably at least about 81% sequence identity, more preferably at least about 82% sequence identity, more preferably, to the DNA molecule encoding, or (b) the complement of (a) the DNA molecule Is at least about 83% sequence identity, more preferably at least about 84% sequence identity, more preferably at least about 85% sequence identity, Preferably at least about 86% sequence identity, more preferably at least about 87% sequence identity, more preferably at least about 88% sequence identity, more preferably at least about 89% sequence identity, more preferably about 90% Or more sequence identity, more preferably at least about 91% sequence identity, more preferably at least about 92% sequence identity, more preferably at least about 93% sequence identity, more preferably at least about 94% sequence identity, more preferably Preferably at least about 95% sequence identity, more preferably at least about 96% sequence identity, more preferably at least about 97% sequence identity, more preferably at least about 98% sequence identity and more preferably at least about 99% Nucleotide sequences having sequence identity.

다른 측면에서, 단리된 핵산 분자는 (a) 본원에 개시된 바와 같은 전장 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 cDNA의 코딩 서열을 포함하는 DNA 분자, 본원에 개시된 바와 같이 신호 펩티드가 결여된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1Ol7, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 코딩 서열,본원에 기재된 바와 같이 신호 펩티드를 포함하거나 포함하지 않는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 막횡단 세포외 도메인의 코딩 서열, 또는 본원에 개시된 바와 같은 전장 아미노산 서열의 구체적으로 한정된 임의의 기타 단편의 코딩 서열, 또는 (b) 상기 (a) DNA 분자의 상보체와 약 80% 이상의 서열 동일성, 바람직하게는 약 81% 이상의 서열 동일성, 더욱 바람직하게는 약 82% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 83% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 84% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 85% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 86% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 87% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 88% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 89% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 90% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 91% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 92% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 93% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 94% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 95% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 96% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 97% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 98% 이상의 서열 동일성 및 보다 바람직하게는 약 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.In another aspect, an isolated nucleic acid molecule is (a) the coding sequence of the full length PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide cDNA. DNA molecule comprising a coding sequence of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1Ol7, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide lacking a signal peptide as disclosed herein Coding sequence of the transmembrane extracellular domain of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide as described, or Coding sequence of any other specifically defined fragment of the full-length amino acid sequence as disclosed herein, or (b) at least about 80% sequence identity with (a) the complement of the DNA molecule, f. Preferably at least about 81% sequence identity, more preferably at least about 82% sequence identity, more preferably at least 83% sequence identity, more preferably at least about 84% sequence identity, more preferably at least about 85% Sequence identity, more preferably at least about 86% sequence identity, more preferably at least about 87% sequence identity, more preferably at least about 88% sequence identity, more preferably at least about 89% sequence identity, more preferably Is at least about 90% sequence identity, more preferably at least about 91% sequence identity, more preferably at least about 92% sequence identity, more preferably at least about 93% sequence identity, more preferably at least about 94% sequence Identity, more preferably at least about 95% sequence identity, more preferably at least about 96% sequence identity, more preferably Comprises a nucleotide sequence having at least about 97% sequence identity, more preferably at least about 98% sequence identity and more preferably at least about 99% sequence identity.

추가의 측면에서, 본 발명은 (a) 본원에 개시된 바와 같이 ATCC에 기탁된 임의의 인간 단백질 cDNA에 의해 코딩되는 동일한 성숙 폴리펩티드를 코딩하는 DNA 분자, 또는 (b) 상기 (a) DNA 분자의 상보체와 약 80% 이상의 서열 동일성, 바람직하게는 약 81% 이상의 서열 동일성, 더욱 바람직하게는 약 82% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 83% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 84% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 85% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 86% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 87% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 88% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 89% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 90% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는약 91% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 92% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 93% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 94% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 95% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 96% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 97% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 98% 이상의 서열 동일성 및 보다 바람직하게는 약 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 핵산 분자에 관한 것이다.In a further aspect, the invention provides a DNA molecule encoding (a) the same mature polypeptide encoded by any human protein cDNA deposited with the ATCC as disclosed herein, or (b) the complement of (a) the DNA molecule. At least about 80% sequence identity with a sieve, preferably at least about 81% sequence identity, more preferably at least about 82% sequence identity, more preferably at least about 83% sequence identity, more preferably at least about 84% sequence Identity, more preferably at least about 85% sequence identity, more preferably at least about 86% sequence identity, more preferably at least about 87% sequence identity, more preferably at least about 88% sequence identity, more preferably At least about 89% sequence identity, more preferably at least about 90% sequence identity, more preferably at least about 91% sequence identity, more preferably about 9 At least 2% sequence identity, more preferably at least about 93% sequence identity, more preferably at least about 94% sequence identity, more preferably at least about 95% sequence identity, more preferably at least about 96% sequence identity, More preferably, it relates to an isolated nucleic acid molecule comprising a nucleotide sequence having at least about 97% sequence identity, more preferably at least about 98% sequence identity and more preferably at least about 99% sequence identity.

본 발명의 또다른 측면은 본원에 개시된 바와 같은 막횡단 도메인이 결실된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는 상기 뉴클레오티드 서열과의 상보체를 포함하는 단리된 핵산 분자를 제공한다. 따라서, 본원에 기재된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 가용성 세포외 도메인이 고려된다.Another aspect of the invention is a nucleotide encoding a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide deleted with a transmembrane domain as disclosed herein. An isolated nucleic acid molecule is provided comprising a sequence, or a complement to said nucleotide sequence. Thus, soluble extracellular domains of the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides described herein are contemplated.

또다른 실시양태는, 예를 들면 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체에 대한 결합 부위를 포함하는 폴리펩티드를 임의로 코딩할 수 있는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 코딩 단편에 대한 혼성화 프로브 또는 안티센스 올리고뉴클레오티드 프로브로서 사용할 수 있는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344,PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 코딩 서열의 단편 또는 그의 상보체에 관한 것이다. 그러한 핵산 단편은 통상 길이가 약 20 뉴클레오티드 이상, 바람직하게는 길이가 약 30 뉴클레오티드 이상, 더욱 바람직하게는 길이가 약 40 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 50 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 60 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 70 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 80 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 90 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 100 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 110 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 120 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 130 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 140 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 150 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 160 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 170 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 180 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 190 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 200 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 250 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 300 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 350 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 400 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 450 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 500 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 600 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 700 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 800 뉴클레오티드 이상, 보다 바람직하게는 길이가 약 900 뉴클레오티드 이상 및 보다 바람직하게는 길이가 약 1000 뉴클레오티드 이상이며, 이 때 "약"이란 용어는 해당 뉴클레오티드 길이의 10%를 가하거나 감한 길이를 의미한다. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레티드 서열의 신규 단편은, 임의의 다수의 잘 공지된 서열 정렬 프로그램을 이용하여 상기 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 다른 공지된 뉴클레오티드 서열과 정렬하여 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레티드 서열의 단편이 신규한지 측정함으로써 종래의 방식으로 결정될 수 있음을 알아야 한다. 그러한 모든 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1Ol7, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 본원에서 고려된다. 또한, 고려되는 것은 이들 뉴클레오티드 서열 단편에 의해 코딩되는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 단편, 바람직하게는 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체에 대한 결합 부위를 포함하는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 단편이다.Another embodiment is, for example, anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, which can optionally encode a polypeptide comprising a binding site for an -PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibody PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882, which can be used as hybridization probes or antisense oligonucleotide probes for coding fragments of PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptides A fragment of a polypeptide coding sequence or its complement. Such nucleic acid fragments are usually at least about 20 nucleotides in length, preferably at least about 30 nucleotides in length, more preferably at least about 40 nucleotides in length, more preferably at least about 50 nucleotides in length, more preferably at least At least about 60 nucleotides, more preferably at least about 70 nucleotides in length, more preferably at least about 80 nucleotides in length, more preferably at least about 90 nucleotides in length, more preferably at least about 100 nucleotides in length, more Preferably at least about 110 nucleotides in length, more preferably at least about 120 nucleotides in length, more preferably at least about 130 nucleotides in length, more preferably at least about 140 nucleotides in length, and more preferably about More than 150 nucleotides Preferably at least about 160 nucleotides in length, more preferably at least about 170 nucleotides in length, more preferably at least about 180 nucleotides in length, more preferably at least about 190 nucleotides in length, more preferably about At least 200 nucleotides, more preferably at least about 250 nucleotides in length, more preferably at least about 300 nucleotides in length, more preferably at least about 350 nucleotides in length, more preferably at least about 400 nucleotides in length, more preferably Preferably at least about 450 nucleotides in length, more preferably at least about 500 nucleotides in length, more preferably at least about 600 nucleotides in length, more preferably at least about 700 nucleotides in length, more preferably about 800 nucleotides in length More than nucleotides, more preferably The crab is at least about 900 nucleotides in length and more preferably at least about 1000 nucleotides in length, wherein the term "about" refers to the length added or subtracted from 10% of the length of that nucleotide. Novel fragments of nucleotide sequences encoding PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides can be any of a number of well known sequence alignment programs. The nucleotide sequence encoding the polypeptide with another known nucleotide sequence to encode a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide It should be appreciated that by determining if a fragment of the nucleotide sequence is novel, it can be determined in a conventional manner. Nucleotide sequences encoding all such PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1O7, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides are contemplated herein. Also contemplated are PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide fragments encoded by these nucleotide sequence fragments, preferably anti-PRO201, Anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti- PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide fragments comprising binding sites for PRO882 antibodies.

또다른 실시양태에서, 본원의 상기에 확인된 임의의 단리된 핵산 서열에 의해 코딩되는 단리된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 제공한다.In another embodiment, isolated PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or encoded by any isolated nucleic acid sequence identified herein above Provides a PRO882 polypeptide.

특정 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같은 전장의 아미노산 서열, 본원에 개시된 바와 같은 신호 펩티드가 결여된 아미노산 서열, 본원에 개시된 바와 같이 신호 펩티드가 포함되거나 포함되지 않은 막횡단 단백질의 세포외 도메인, 또는 본원에 개시된 바와 같은 전장 아미노산 서열의 구체적으로 한정된 임의의 기타 단편을 갖는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드와 약 80% 이상의 서열 동일성, 바람직하게는 약 81% 이상의 서열 동일성, 더욱 바람직하게는 약 82% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 83% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 84% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 85% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 86% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 87% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 88% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 89% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 90% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 91% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 92% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 93% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 94% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 95% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 96% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 97% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 98% 이상의 서열 동일성 및 보다 바람직하게는 약 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 단리된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 관한 것이다.In certain aspects, the invention provides an extracellular domain of a transmembrane protein with or without a full length amino acid sequence as disclosed herein, an amino acid sequence lacking a signal peptide as disclosed herein, or a signal peptide as disclosed herein. Or about PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides with any other specifically defined fragment of the full-length amino acid sequence as disclosed herein. At least 80% sequence identity, preferably at least about 81% sequence identity, more preferably at least about 82% sequence identity, more preferably at least about 83% sequence identity, more preferably at least about 84% sequence identity, more Preferably at least about 85% sequence identity, more preferably at least about 86% sequence identity, Preferably at least about 87% sequence identity, more preferably at least about 88% sequence identity, more preferably at least about 89% sequence identity, more preferably at least about 90% sequence identity, more preferably about 91% Or more sequence identity, more preferably at least about 92% sequence identity, more preferably at least about 93% sequence identity, more preferably at least about 94% sequence identity, more preferably at least about 95% sequence identity, more preferably Preferably an amino acid sequence comprising at least about 96% sequence identity, more preferably at least about 97% sequence identity, more preferably at least about 98% sequence identity and more preferably at least about 99% sequence identity For polypeptides PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 will be.

추가의 측면에서, 본 발명은 본원에 개시된 바와 같이 ATCC에 기탁된 임의의 인간 단백질 cDNA에 의해 코딩되는 아미노산 서열과 약 80% 이상의 서열 동일성, 바람직하게는 약 81% 이상의 서열 동일성, 더욱 바람직하게는 약 82% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 83% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 84% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 85% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 86% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 87% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 88% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 89% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 90% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 91% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 92% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 93% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 94% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 95% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 96% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 97% 이상의 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 98% 이상의 서열 동일성 및 보다 바람직하게는 약 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 단리된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 관한 것이다.In a further aspect, the present invention provides at least about 80% sequence identity, preferably at least about 81% sequence identity, more preferably at least about 80% amino acid sequence encoded by any human protein cDNA deposited with the ATCC as disclosed herein At least about 82% sequence identity, more preferably at least about 83% sequence identity, more preferably at least about 84% sequence identity, more preferably at least about 85% sequence identity, more preferably at least about 86% sequence identity , More preferably at least about 87% sequence identity, more preferably at least about 88% sequence identity, more preferably at least about 89% sequence identity, more preferably at least about 90% sequence identity, more preferably about At least 91% sequence identity, more preferably at least about 92% sequence identity, more preferably at least about 93% sequence identity , More preferably at least about 94% sequence identity, more preferably at least about 95% sequence identity, more preferably at least about 96% sequence identity, more preferably at least about 97% sequence identity, more preferably about Isolated PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 comprising at least 98% sequence identity and more preferably at least about 99% sequence identity Or to a PRO882 polypeptide.

추가의 측면에서, 본 발명은 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드와 비교했을 때 본원에 개시된 바와 같은 전장의 아미노산 서열, 본원에 개시된 바와 같은 신호 펩티드가 결여된 아미노산 서열, 본원에 개시된 바와 같이 신호 펩티드가 포함되거나 포함되지 않은 막횡단 단백질의 세포외 도메인, 또는 본원에 개시된 바와 같은 전장 아미노산 서열의 구체적으로 한정된 임의의 기타 단편을 갖는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드와 약 80% 이상의 양성, 바람직하게는 약 81% 이상의 양성, 더욱 바람직하게는 약 82% 이상의 양성, 보다 바람직하게는 약 83% 이상의 양성, 보다 바람직하게는 약 84% 이상의 양성, 보다 바람직하게는 약 85% 이상의 양성, 보다 바람직하게는 약 86% 이상의 양성, 보다 바람직하게는 약 87% 이상의 양성, 보다 바람직하게는 약 88% 이상의 양성, 보다 바람직하게는 약 89% 이상의 양성, 보다 바람직하게는 약 90% 이상의 양성, 보다 바람직하게는 약 91% 이상의 양성, 보다 바람직하게는 약 92% 이상의 양성, 보다 바람직하게는 약 93% 이상의 양성, 보다 바람직하게는 약 94% 이상의 양성, 보다 바람직하게는 약 95% 이상의 양성, 보다 바람직하게는 약 96% 이상의 양성, 보다 바람직하게는 약 97% 이상의 양성, 보다 바람직하게는 약 98% 이상의 양성 및 보다 바람직하게는 약 99% 이상의 양성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 단리된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 관한 것이다.In a further aspect, the invention provides a full-length amino acid sequence as disclosed herein when compared to a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide, An amino acid sequence lacking a signal peptide as disclosed herein, an extracellular domain of a transmembrane protein with or without a signal peptide as disclosed herein, or any other defined specifically of the full length amino acid sequence as disclosed herein At least about 80% positive, preferably at least about 81% positive, more preferably PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides having fragments Is at least about 82% positive, more preferably at least about 83% positive, more preferably at least about 84% positive, more preferably At least about 85% positive, more preferably at least about 86% positive, more preferably at least about 87% positive, more preferably at least about 88% positive, more preferably at least about 89% positive, more preferably At least about 90% positive, more preferably at least about 91% positive, more preferably at least about 92% positive, more preferably at least about 93% positive, more preferably at least about 94% positive, more preferably An amino acid sequence that displays at least about 95% positive, more preferably at least about 96% positive, more preferably at least about 97% positive, more preferably at least about 98% positive and more preferably at least about 99% positive To isolated PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides.

구체적인 측면에서, 본 발명은 N-말단 신호 서열 및(또는) 개시 메티오닌이 없으며 본원의 상기에 기재된 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 단리된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 제공한다. 또한, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 발현에 적합한 조건하에서 적합한 코딩 핵산 분자를 포함하는 벡터가 포함된 숙주세포를 배양하여, 그 세포 배양액으로부터 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 회수하는 것을 포함하는, 상기 폴리펩티드의 제조 방법이 본원에 기재되어 있다.In a specific aspect, the invention provides isolated PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, N-terminal signal sequence and / or initiating methionine and encoded by a nucleotide sequence encoding the amino acid sequence described herein above. PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides. In addition, a host cell comprising a vector comprising a coding nucleic acid molecule suitable under conditions suitable for expression of a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide can be obtained. Provided herein is a method for producing the polypeptide comprising culturing and recovering the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide from the cell culture. It is described.

본 발명의 또다른 측면은 막횡단 도메인이 결실되거나 불활성화된, 단리된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 제공한다. 또한, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 발현에 적합한 조건하에서 적합한 코딩 핵산 분자를 포함하는 벡터가 포함된 숙주세포를 배양하여, 그 세포 배양액으로부터 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 회수하는 것을 포함하는, 상기 폴리펩티드의 제조 방법이 본원에 기재되어 있다.Another aspect of the invention provides an isolated PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides, in which the transmembrane domain is deleted or inactivated. . In addition, a host cell comprising a vector comprising a coding nucleic acid molecule suitable under conditions suitable for expression of a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide can be obtained. Provided herein is a method for producing the polypeptide comprising culturing and recovering the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide from the cell culture. It is described.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 본원에 정의된 천연 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 길항제에 관한 것이다. 특정 실시양태에서, 상기 길항제는 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체 또는 작은 분자이다.In another embodiment, the invention relates to an antagonist of a native PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides as defined herein. In certain embodiments, the antagonist is anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti- PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibody or small molecule.

추가의 실시양태에서, 본 발명은 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 후보 화합물과 접촉시켜 상기 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드(바람직하게는 상기 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드가 천연 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드임)에 의해 매개되는 생물학적 활성을 모니터링하는 것을 포함하는, 상기 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 대한 길항제를 확인하는 방법에 관한 것이다.In a further embodiment, the present invention provides a process comprising contacting a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptide with a candidate compound to provide the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 Polypeptides (preferably above PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509 , Monitoring the biological activity mediated by a native PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptide. The present invention relates to a method for identifying an antagonist for the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide.

추가의 실시양태에서, 본 발명은 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344,PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드, 본원에 기재된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 길항제, 또는 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체를 담체와 배합된 상태로 포함하는 물질의 조성물에 관한 것이다. 임의로 담체는 약제학상 허용되는 담체이다.In a further embodiment, the present invention provides PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide, PRO201, PRO292, PRO3272, PRO1265, PRO344 described herein. Antagonist of a, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide, or anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347 A composition of matter comprising an anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibody in combination with a carrier. Optionally, the carrier is a pharmaceutically acceptable carrier.

본 발명의 또다른 실시양태는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드, 그의 길항제, 또는 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체와 관련된 증상의 치료에 유용한 의약 제조에 있어서, 상기 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드, 또는 본원에 기재된 바와 같은 그의 길항제, 또는 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체의 용도에 관한 것이다.Another embodiment of the invention is PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide, antagonists thereof, or anti-PRO201, anti-PRO292, anti Symptoms associated with -PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibodies In the manufacture of a medicament useful for the treatment of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide, or an antagonist thereof as described herein, or an anti -PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 Or anti-PRO882 antibodies.

본 발명의 다른 실시양태에서, 본 발명은 본원에 기재된 임의의 폴리펩티드를 코딩하는 DNA를 포함하는 벡터를 제공한다. 또한, 임의의 그러한 벡터를 포함하는 숙주세포도 제공된다. 예를 들면, 숙주세포는 CHO 세포, 대장균(E. coli), 효모 또는 배큘로바이러스-감염 곤충 세포일 수 있다. 본원에 기재된 임의의 폴리펩티드를 제조하는 방법이 추가로 제공되며, 상기 방법은 원하는 폴리펩티드의 ㅂ라현에 적합한 조건하에서 숙주세포를 배양하여, 그 세포 배양액으로부터 원하는 폴리펩티드를 회수하는 것을 포함한다.In another embodiment of the invention, the invention provides a vector comprising a DNA encoding any of the polypeptides described herein. Also provided are host cells comprising any such vector. For example, the host cell can be a CHO cell, E. coli , yeast or baculovirus-infected insect cell. Further provided are methods of making any of the polypeptides described herein, wherein the method comprises culturing the host cell under conditions suitable for the chora expression of the desired polypeptide and recovering the desired polypeptide from the cell culture.

다른 실시양태에서, 본 발명은 이종 폴리펩티드 또는 아미노산 서열에 융합된, 본원에 기재된 임의의 폴리펩티드를 포함하는 키메라 분자를 제공한다. 그러한 키메라 분자의 예에는 에피토프 태그 서열 또는 면역글로불린의 Fc 영역에 융합된, 본원에 기재된 임의의 폴리펩티드가 포함된다.In other embodiments, the invention provides chimeric molecules comprising any polypeptide described herein fused to a heterologous polypeptide or amino acid sequence. Examples of such chimeric molecules include any polypeptide described herein fused to an epitope tag sequence or an Fc region of an immunoglobulin.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 임의의 상기 또는 하기에 기재된 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체를 제공한다. 임의로, 상기 항체는 모노클로날 항체, 인간화 항체, 항체 단편 또는 단일쇄 항체이다.In another embodiment, the present invention provides antibodies that specifically bind to any of the polypeptides described above or below. Optionally, the antibody is a monoclonal antibody, humanized antibody, antibody fragment or single chain antibody.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 상기 또는 하기에 기재된 임의의 뉴클레오티드 서열로부터 유도된, 게놈 및 cDNA 뉴클레오티드 서열의 단리에 유용하거나 안티센스 프로브로서 유용한 올리고뉴클레오티드 프로브를 제공한다.In another embodiment, the present invention provides oligonucleotide probes useful for isolation of genomic and cDNA nucleotide sequences or useful as antisense probes derived from any of the nucleotide sequences described above or below.

본 발명은 종양의 진단 및 치료용 조성물 및 그 방법에 관한 것이다.The present invention relates to compositions and methods for diagnosing and treating tumors.

도 1은 본원에서 DNA30676-1223이라 명명된 클론인, 천연 서열 PRO201을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유하는 cDNA의 뉴클레오티드 서열(서열번호 1)을 나타낸다. 또한, 두꺼운 글씨 및 밑줄로 표시된 부분은 개개의 개시 코돈 및 정지 코돈의 위치이다.1 shows the nucleotide sequence of the cDNA (SEQ ID NO: 1) containing the nucleotide sequence encoding native sequence PRO201, a clone designated herein as DNA30676-1223. In addition, the thick and underlined portions are the positions of the individual start codon and stop codon.

도 2는 도 1에 나타낸 서열번호 1의 코딩 서열로부터 유도된 천연 서열 PRO201 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호 2)을 나타낸다.FIG. 2 shows the amino acid sequence of the native sequence PRO201 polypeptide derived from the coding sequence of SEQ ID NO: 1 shown in FIG. 1 (SEQ ID NO: 2).

도 3은 본원에서 DNA35617이라 명명된 클론인, 천연 서열 PRO292를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유하는 cDNA의 뉴클레오티드 서열(서열번호 5)을 나타낸다. 또한, 두꺼운 글씨 및 밑줄로 표시된 부분은 각각의 개시 코돈 및 정지 코돈의 위치이다.3 shows the nucleotide sequence of the cDNA (SEQ ID NO: 5) containing the nucleotide sequence encoding native sequence PRO292, which is a clone designated herein as DNA35617. In addition, the thick and underlined portions are the positions of the respective start codon and stop codon.

도 4는 도 3에 나타낸 서열번호 5의 코딩 서열로부터 유도된 천연 서열 PRO292 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호 6)을 나타낸다.4 shows the amino acid sequence (SEQ ID NO: 6) of the native sequence PRO292 polypeptide derived from the coding sequence of SEQ ID NO: 5 shown in FIG.

도 5는 본원에서 DNA38113-1230이라 명명된 클론인, 천연 서열 PRO327을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유하는 cDNA의 뉴클레오티드 서열(서열번호 7)을 나타낸다. 또한, 두꺼운 글씨 및 밑줄로 표시된 부분은 각각의 개시 코돈 및 정지 코돈의 위치이다.Figure 5 shows the nucleotide sequence of the cDNA (SEQ ID NO: 7) containing the nucleotide sequence encoding native sequence PRO327, a clone designated herein as DNA38113-1230. In addition, the thick and underlined portions are the positions of the respective start codon and stop codon.

도 6은 도 5에 나타낸 서열번호 7의 코딩 서열로부터 유도된 천연 서열 PRO327 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호 8)을 나타낸다.FIG. 6 shows the amino acid sequence (SEQ ID NO: 8) of the native sequence PRO327 polypeptide derived from the coding sequence of SEQ ID NO: 7 shown in FIG.

도 7은 본원에서 DNA60764-1533이라 명명된 클론인, 천연 서열 PRO1265를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유하는 cDNA의 뉴클레오티드 서열(서열번호 12)을 나타낸다. 또한, 두꺼운 글씨 및 밑줄로 표시된 부분은 각각의 개시 코돈 및 정지 코돈의 위치이다.FIG. 7 shows the nucleotide sequence of the cDNA (SEQ ID NO: 12) containing the nucleotide sequence encoding native sequence PRO1265, a clone designated herein as DNA60764-1533. In addition, the thick and underlined portions are the positions of the respective start codon and stop codon.

도 8은 도 7에 나타낸 서열번호 12의 코딩 서열로부터 유도된 천연 서열 PRO1265 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호 13)을 나타낸다.FIG. 8 shows the amino acid sequence of the native sequence PRO1265 polypeptide derived from the coding sequence of SEQ ID NO: 12 shown in FIG. 7 (SEQ ID NO: 13).

도 9는 본원에서 DNA40592-1242라 명명된 클론인, 천연 서열 PRO344를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유하는 cDNA의 뉴클레오티드 서열(서열번호 14)을 나타낸다. 또한, 두꺼운 글씨 및 밑줄로 표시된 부분은 각각의 개시 코돈 및 정지 코돈의 위치이다.9 shows the nucleotide sequence of the cDNA (SEQ ID NO: 14) containing the nucleotide sequence encoding native sequence PRO344, which is a clone designated herein as DNA40592-1242. In addition, the thick and underlined portions are the positions of the respective start codon and stop codon.

도 10은 도 9에 나타낸 서열번호 14의 코딩 서열로부터 유도된 천연 서열 PRO344 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호 15)을 나타낸다.FIG. 10 shows the amino acid sequence of the native sequence PRO344 polypeptide (SEQ ID NO: 15) derived from the coding sequence of SEQ ID NO: 14 shown in FIG.

도 11은 본원에서 DNA43318-1217이라 명명된 클론인, 천연 서열 PRO343을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유하는 cDNA의 뉴클레오티드 서열(서열번호 22)을 나타낸다. 또한, 두꺼운 글씨 및 밑줄로 표시된 부분은 각각의 개시 코돈 및 정지 코돈의 위치이다.FIG. 11 shows the nucleotide sequence of the cDNA (SEQ ID NO: 22) containing the nucleotide sequence encoding native sequence PRO343, a clone designated herein as DNA43318-1217. In addition, the thick and underlined portions are the positions of the respective start codon and stop codon.

도 12는 도 11에 나타낸 서열번호 22의 코딩 서열로부터 유도된 천연 서열 PRO343 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호 23)을 나타낸다.FIG. 12 shows the amino acid sequence of the native sequence PRO343 polypeptide derived from the coding sequence of SEQ ID NO: 22 shown in FIG. 11 (SEQ ID NO: 23).

도 13은 본원에서 DNA44176-1244라 명명된 클론인, 천연 서열 PRO347을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유하는 cDNA의 뉴클레오티드 서열(서열번호 27)을 나타낸다. 또한, 두꺼운 글씨 및 밑줄로 표시된 부분은 각각의 개시 코돈 및 정지 코돈의 위치이다.FIG. 13 shows the nucleotide sequence of a cDNA (SEQ ID NO: 27) containing a nucleotide sequence encoding native sequence PRO347, a clone designated herein as DNA44176-1244. In addition, the thick and underlined portions are the positions of the respective start codon and stop codon.

도 14는 도 13에 나타낸 서열번호 27의 코딩 서열로부터 유도된 천연 서열 PRO347 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호 28)을 나타낸다.FIG. 14 shows the amino acid sequence of the native sequence PRO347 polypeptide derived from the coding sequence of SEQ ID NO: 27 shown in FIG. 13 (SEQ ID NO: 28).

도 15는 본원에서 DNA44804-1248이라 명명된 클론인, 천연 서열 PRO357을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유하는 cDNA의 뉴클레오티드 서열(서열번호 32)을나타낸다. 또한, 두꺼운 글씨 및 밑줄로 표시된 부분은 각각의 개시 코돈 및 정지 코돈의 위치이다.15 shows the nucleotide sequence of a cDNA (SEQ ID NO: 32) containing a nucleotide sequence encoding native sequence PRO357, a clone designated herein as DNA44804-1248. In addition, the thick and underlined portions are the positions of the respective start codon and stop codon.

도 16은 도 15에 나타낸 서열번호 32의 코딩 서열로부터 유도된 천연 서열 PRO357 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호 33)을 나타낸다.FIG. 16 shows the amino acid sequence of the native sequence PRO357 polypeptide derived from the coding sequence of SEQ ID NO: 32 shown in FIG. 15 (SEQ ID NO: 33).

도 17은 본원에서 DNA52722-1229라 명명된 클론인, 천연 서열 PRO715를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유하는 cDNA의 뉴클레오티드 서열(서열번호 39)을 나타낸다. 또한, 두꺼운 글씨 및 밑줄로 표시된 부분은 각각의 개시 코돈 및 정지 코돈의 위치이다.FIG. 17 shows the nucleotide sequence of a cDNA (SEQ ID NO: 39) containing a nucleotide sequence encoding native sequence PRO715, a clone designated herein as DNA52722-1229. In addition, the thick and underlined portions are the positions of the respective start codon and stop codon.

도 18은 도 17에 나타낸 서열번호 39의 코딩 서열로부터 유도된 천연 서열 PRO715 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호 40)을 나타낸다.FIG. 18 shows the amino acid sequence of the native sequence PRO715 polypeptide derived from the coding sequence of SEQ ID NO: 39 shown in FIG. 17 (SEQ ID NO: 40).

도 19는 본원에서 DNA56112-1379라 명명된 클론인, 천연 서열 PRO1017을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유하는 cDNA의 뉴클레오티드 서열(서열번호 41)을 나타낸다. 또한, 두꺼운 글씨 및 밑줄로 표시된 부분은 각각의 개시 코돈 및 정지 코돈의 위치이다.FIG. 19 shows the nucleotide sequence of a cDNA (SEQ ID NO: 41) containing a nucleotide sequence encoding native sequence PRO1017, a clone designated herein as DNA56112-1379. In addition, the thick and underlined portions are the positions of the respective start codon and stop codon.

도 20은 도 19에 나타낸 서열번호 41의 코딩 서열로부터 유도된 천연 서열 PRO1017 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호 42)을 나타낸다.FIG. 20 shows the amino acid sequence of the native sequence PRO1017 polypeptide derived from the coding sequence of SEQ ID 41 shown in FIG. 19 (SEQ ID NO: 42).

도 21 본원에서 DNA57702-1476이라 명명된 클론인, 천연 서열 PRO1112를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유하는 cDNA의 뉴클레오티드 서열(서열번호 43)을 나타낸다. 또한, 두꺼운 글씨 및 밑줄로 표시된 부분은 각각의 개시 코돈 및 정지 코돈의 위치이다.21 shows the nucleotide sequence of the cDNA (SEQ ID NO: 43) containing the nucleotide sequence encoding native sequence PRO1112, which is a clone designated herein as DNA57702-1476. In addition, the thick and underlined portions are the positions of the respective start codon and stop codon.

도 22는 도 21에 나타낸 서열번호 43의 코딩 서열로부터 유도된 천연 서열 PRO1112 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호 44)을 나타낸다.FIG. 22 shows the amino acid sequence of the native sequence PRO1112 polypeptide (SEQ ID NO: 44) derived from the coding sequence of SEQ ID NO: 43 shown in FIG.

도 23은 본원에서 DNA50148이라 명명된 클론인, 천연 서열 PRO509를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유하는 cDNA의 뉴클레오티드 서열(서열번호 45)을 나타낸다. 또한, 두꺼운 글씨 및 밑줄로 표시된 부분은 각각의 개시 코돈 및 정지 코돈의 위치이다.FIG. 23 shows the nucleotide sequence of a cDNA containing a nucleotide sequence encoding native sequence PRO509, a clone designated herein as DNA50148 (SEQ ID NO: 45). In addition, the thick and underlined portions are the positions of the respective start codon and stop codon.

도 24는 도 23에 나타낸 서열번호 45의 코딩 서열로부터 유도된 천연 서열 PRO509 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호 46)을 나타낸다.FIG. 24 shows the amino acid sequence of the native sequence PRO509 polypeptide derived from the coding sequence of SEQ ID NO: 45 shown in FIG. 23 (SEQ ID NO: 46).

도 25는 본원에서 DNA48227-1350이라 명명된 클론인, 천연 서열 PRO853을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유하는 cDNA의 뉴클레오티드 서열(서열번호 47)을 나타낸다. 또한, 두꺼운 글씨 및 밑줄로 표시된 부분은 각각의 개시 코돈 및 정지 코돈의 위치이다.FIG. 25 shows the nucleotide sequence of a cDNA (SEQ ID NO: 47) containing a nucleotide sequence encoding native sequence PRO853, a clone designated herein as DNA48227-1350. In addition, the thick and underlined portions are the positions of the respective start codon and stop codon.

도 26은 도 25에 나타낸 서열번호 47의 코딩 서열로부터 유도된 천연 서열 PRO853 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호 48)을 나타낸다.FIG. 26 shows the amino acid sequence of the native sequence PRO853 polypeptide derived from the coding sequence of SEQ ID NO: 47 shown in FIG. 25 (SEQ ID NO: 48).

도 27은 본원에서 DNA58125라 명명된 클론인, 천연 서열 PRO882를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 함유하는 cDNA의 뉴클레오티드 서열(서열번호 52)을 나타낸다. 또한, 두꺼운 글씨 및 밑줄로 표시된 부분은 각각의 개시 코돈 및 정지 코돈의 위치이다.FIG. 27 shows the nucleotide sequence of a cDNA (SEQ ID NO: 52) containing a nucleotide sequence encoding native sequence PRO882, a clone designated herein as DNA58125. In addition, the thick and underlined portions are the positions of the respective start codon and stop codon.

도 28은 도 27에 나타낸 서열번호 52의 코딩 서열로부터 유도된 천연 서열 PRO882 폴리펩티드의 아미노산 서열(서열번호 53)을 나타낸다.FIG. 28 shows the amino acid sequence of the native sequence PRO882 polypeptide (SEQ ID NO: 53) derived from the coding sequence of SEQ ID NO: 52 shown in FIG.

도 29는 DNA30676-1223, DNA38113-1230 및 DNA60764-1533의 매핑(mapping) 영역을 보여주는 19번 염색체의 맵이다.FIG. 29 is a map of chromosome 19 showing mapping regions of DNA30676-1223, DNA38113-1230 and DNA60764-1533.

도 30은 DNA35617의 매핑 영역을 보여주는 11번 염색체의 맵이다.30 is a map of chromosome 11 showing the mapping region of DNA35617.

도 31은 DNA43318-1217 및 DNA58125의 매핑 영역을 보여주는 16번 염색체의 맵이다.FIG. 31 is a map of chromosome 16 showing mapping regions of DNA43318-1217 and DNA58125. FIG.

도 32는 DNA56112-1379의 매핑 영역을 보여주는 7번 염색체의 맵이다.32 is a map of chromosome 7 showing the mapping regions of DNA56112-1379.

도 33a는 DNA52722-1229의 매핑 영역을 보여주는 17번 염색체의 맵이다.33A is a map of chromosome 17 showing the mapping region of DNA52722-1229.

도 33b는 DNA48227-1350의 매핑 영역을 보여주는 17번 염색체의 맵이다.33B is a map of chromosome 17 showing the mapping region of DNA48227-1350.

도 34는 DNA44804-1248의 매핑 영역을 보여주는 16번 염색체의 맵이다.34 is a map of chromosome 16 showing the mapping region of DNA44804-1248.

Ⅰ. 정의I. Justice

"유전자 증폭" 및 "유전자 복제"라는 어구는 서로 바꿔 사용할 수 있고, 특정 세포 또는 세포주에서 유전자 또는 유전자 단편의 다수 복제본이 형성되는 과정을 말한다. 복제된 영역(증폭된 DNA 스트레치)는 종종 "앰플리콘(amplicon)"으로 불린다. 통상, 생성되는 mRNA의 양, 즉 유전자 발현량은 발현되는 특정 유전자의 복제본 수에 비례하여 증가한다.The phrases “gene amplification” and “gene replication” are used interchangeably and refer to the process by which multiple copies of a gene or gene fragment are formed in a particular cell or cell line. Replicated regions (amplified DNA stretch) are often called “amplicons”. Typically, the amount of mRNA produced, ie the amount of gene expression, increases in proportion to the number of copies of the particular gene being expressed.

본원에 사용된 "종양"은 악성이든 양성이든 모든 신생물 세포 생장 및 증식, 및 모든 예비암성 및 암성 세포 및 조직을 말한다.As used herein, "tumor" refers to all neoplastic cell growth and proliferation, and all precancerous and cancerous cells and tissues, whether malignant or benign.

"암" 및 "암성"이란 용어는 비조절된 세포 증식이라는 전형적 특징을 갖는 포유동물의 생리 상태를 의미하거나 규정한다. 암의 예로는 암종, 림프종, 아세포종, 육종 및 백혈병이 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다. 상기 암의 보다 구체적인 예로는 유방암, 전립선암, 결장암, 편평세포암, 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 위장암, 췌장암, 신경교아종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 결장직장암, 자궁내막암, 침샘 암종, 신장암, 외음부암, 갑상선암, 간암종 및 여러 종류의 두부 및 경부암이 포함된다.The terms "cancer" and "cancerous" mean or define the physiological state of a mammal having the typical characteristic of unregulated cell proliferation. Examples of cancer include, but are not limited to, carcinoma, lymphoma, blastoma, sarcoma, and leukemia. More specific examples of the cancer include breast cancer, prostate cancer, colon cancer, squamous cell cancer, small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, gastrointestinal cancer, pancreatic cancer, glioblastoma, cervical cancer, ovarian cancer, liver cancer, bladder cancer, liver tumor, colorectal cancer, uterus Endometrial cancer, salivary gland carcinoma, kidney cancer, vulvar cancer, thyroid cancer, liver carcinoma and various types of head and neck cancers.

"치료"란 질병의 병리 상태의 발병 또는 변화를 예방하기 위해 수행하는 대책을 의미한다. 따라서, "치료"는 치료제를 사용한 치료 및 억제 또는 예방 조치모두를 가리킨다. 치료를 필요로 하는 인간에는 이미 질병에 걸린 인간 뿐만 아니라 질병을 예방해야하는 인간도 포함된다. 종양(예를 들어, 암) 치료에서, 치료제는 종양 세포의 병리를 직접 감소시킬 수 있거나, 종양 세포를 다른 치료제, 예를 들어, 방사선 및(또는) 화학요법제에 의한 처리에 보다 감응성이도록 할 수 있다."Treatment" means measures taken to prevent the onset or change of the pathological condition of a disease. Thus, "treatment" refers to both treatment with a therapeutic agent and inhibition or prophylaxis. Humans in need of treatment include those already in need, as well as those in need of preventing the disease. In the treatment of tumors (eg cancer), the therapeutic agent may directly reduce the pathology of the tumor cells or render the tumor cells more sensitive to treatment with other therapeutic agents, such as radiation and / or chemotherapeutic agents. Can be.

암의 "병리"에는 환자의 건강에 손상을 주는 모든 현상이 포함된다. 이러한 것으로는 비정상 또는 조절될 수 없는 세포 생장, 전이, 인접 세포의 정상적인 기능 방해, 싸이토카인 또는 다른 분비물의 비정상적 수준에서의 분비, 염증 또는 면역 반응의 억제 또는 악화 등이 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다.The "pathology" of cancer includes any phenomenon that damages the health of the patient. These include, but are not limited to, abnormal or uncontrollable cell growth, metastasis, normal functioning of adjacent cells, secretion at abnormal levels of cytokines or other secretions, inhibition or exacerbation of inflammatory or immune responses, and the like. .

치료 목적의 "포유동물"은 인간, 가축 및 사육 동물, 및 동물원용, 경기용 또는 애완용 동물, 예를 들어, 개, 말, 고양이, 소, 돼지, 양, 염소 등을 비롯하여 포유동물로 분류되는 모든 동물을 말한다. 바람직한 포유동물은 인간이다.“Mammals” for therapeutic purposes are classified as mammals, including humans, livestock and breeding animals, and zoos, competitions, or pets such as dogs, horses, cats, cattle, pigs, sheep, goats, and the like. Says all the animals. Preferred mammals are humans.

본원에서 사용된 "담체"는 사용되는 투여량 및 농도에서 노출되는 세포 또는 포유동물에 무독성인 약제학상 허용되는 담체, 부형제, 또는 안정화제가 포함된다.생리학상 허용되는 담체는 종종 pH 완충 수용액이다. 생리학상 허용되는 담체의 예로는 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산과 같은 완충액; 아스코르브산을 비롯한 산화방지제; 저분자량 (약 10 잔기 미만) 폴리펩티드; 단백질, 예를 들어 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예를 들어 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예를 들어 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 리신; 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 비롯한 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물; 킬레이트화제, 예를 들어 EDTA; 당 알콜, 예를 들어 만니톨 또는 소르비톨; 염 형성 카운터 이온, 예를 들어 나트륨; 및(또는) 비이온계 계면활성제, 예를 들어 트윈(TWEEN, 상표명), 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및 플루로닉스(PLURONICS, 상표명)가 포함된다.As used herein, “carrier” includes pharmaceutically acceptable carriers, excipients, or stabilizers that are nontoxic to the cells or mammals that are exposed at the dosages and concentrations employed. The physiologically acceptable carriers are often aqueous pH buffered solutions. Examples of physiologically acceptable carriers include buffers such as phosphate, citrate and other organic acids; Antioxidants including ascorbic acid; Low molecular weight (less than about 10 residues) polypeptides; Proteins such as serum albumin, gelatin or immunoglobulins; Hydrophilic polymers such as polyvinylpyrrolidone; Amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, arginine or lysine; Monosaccharides, disaccharides, and other carbohydrates including glucose, mannose, or dextrins; Chelating agents such as EDTA; Sugar alcohols such as mannitol or sorbitol; Salt-forming counter ions such as sodium; And / or nonionic surfactants such as TWEEN (trade name), polyethylene glycol (PEG) and PLURONICS (trade name).

하나 이상의 다른 치료제와 "배합하여" 투여한다는 것은 동시에 (동시다발적으로) 투여하거나 어떤 순서로든 연속하여 투여하는 것이 포함된다."Combined" administration with one or more other therapeutic agents includes administration at the same time (simultaneously) or sequentially in any order.

본원에 사용된 "세포독성제"는 세포의 기능을 저해하거나 억제하고(하거나) 세포를 파괴시키는 물질을 말한다. 이 용어는 방사성 동위원소 (예를 들어 I131, I125, Y90및 Re186), 화학요법제 및 독소, 예를 들어 세균, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성을 갖는 독소 또는 그의 단편을 포함하는 것을 말한다.As used herein, "cytotoxic agent" refers to a substance that inhibits or inhibits the function of a cell and / or destroys a cell. The term refers to radioisotopes (eg I 131 , I 125 , Y 90 and Re 186 ), chemotherapeutic agents and toxins such as toxins or fragments thereof having enzymatic activity of bacterial, fungal, plant or animal origin. It is said to include.

"화학요법제"는 암 치료에 유용한 화합물이다. 그의 예에는 아드리아마이신, 독소루비신, 에피루비신, 5-플루오로우라실, 시토신 아라비노시드 ("Ara-C"), 시클로포스파미드, 티오테파, 부술판, 시톡신, 탁소이드, 예를 들어 파클리탁셀 (상표명 탁솔(Taxol), 미국 뉴저지주 프린스톤 소재 브리스톨마이어스 스켑 오콜로지사 제품) 및 독세탁셀 (상표명 탁소테레(Taxotere), 프랑스 안토니 소재 롱플랑 로레아사 제품), 톡소테레, 메토트렉세이트, 시스플라틴, 멜팔란, 빈블라스틴, 블레오마이신, 에토포시드, 이포스파미드, 미토마이신 C, 미톡산트론, 빈크리스틴, 비노렐빈, 카르보플라틴, 테니포시드, 다우노마이신, 카르미노마이신, 아미노프테린, 닥티노마이신, 미토마이신, 에스페라미신 (미국 특허 제4,675,187호 참조), 5-FU, 6-티오구아닌, 악티노마이신 D, VP-16, 클로람부실, 멜팔란 및 다른 관련 질소 머스타드가 포함된다. 또한, 타목시펜 및 오나프리스톤과 같은 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제하는 호르몬 제제도 상기 화학요법제의 정의에 포함된다.A "chemotherapeutic agent" is a compound useful for treating cancer. Examples thereof include adriamycin, doxorubicin, epirubicin, 5-fluorouracil, cytosine arabinoside ("Ara-C"), cyclophosphamide, thiotepa, busulfan, cytoxins, taxoids, for example Paclitaxel (trade name Taxol, manufactured by Bristol Myers Squirk Okoloji, Princeton, NJ) and docetaxel (trade name Taxotere, Long Plan Lorea Corporation, Antony, France), toxotere, methotrexate, cisplatin , Melphalan, vinblastine, bleomycin, etoposide, phosphamide, mitomycin C, mitoxantrone, vincristine, vinorelbine, carboplatin, teniposide, daunomycin, carminomycin, ami Nofterin, dactinomycin, mitomycin, esperamicin (see US Pat. No. 4,675,187), 5-FU, 6-thioguanine, actinomycin D, VP-16, chlorambucil, melphalan and other related nitrogens mustard It is included. Also included in the definition of chemotherapeutic agents are hormonal agents that modulate or inhibit hormonal action on tumors such as tamoxifen and onapriston.

본원에 사용된 "생장 억제제"는 특히 본원에서 확인된 어떠한 유전자이든지 그를 과다발현하는 암세포의 시험관내 또는 생체내 생장을 억제하는 화합물 또는 조성물을 말한다. 따라서, 생장 억제제는 S기에 그러한 유전자를 과다발현하는 세포의 비율을 크게 감소시키는 물질이다. 생장 억제제의 예에는 세포 주기 진행을 (S기 이외의 시기에서)차단하는 물질, 예를 들어 G1기 정지 및 M기 정지를 유도하는 물질이 포함된다. 전형적인 M기 차단제로는 빈카스 (빈크리스틴 및 빈블라스틴), 탁솔, 및 토포 II 억제제, 예를 들어 독소루비신, 에피루비신, 다우노루비신, 에토포시드 및 블레오마이신이 포함된다. 또한, G1을 정지시키는 물질, 예를 들어 DNA 알킬화제, 예를 들어 타목시펜, 프레드니손, 다카르바진, 메클로레타민, 시스플라틴, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라실 및 ara-C는 S기 정지에도 작용한다.추가 정보는 문헌(Murakami et al., The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn and Israel, eds., "Cell cycle regulation, oncogens, and antineoplastic drugs" (WB Saunders: Philadelphia, 1995), Chapter 1, 특히 13페이지)에 기재되어 있다.As used herein, “growth inhibitor” specifically refers to a compound or composition that inhibits in vitro or in vivo growth of cancer cells overexpressing any gene identified herein. Thus, growth inhibitors are substances that greatly reduce the proportion of cells that overexpress such genes in the S phase. Examples of growth inhibitory agents include substances that block cell cycle progression (at periods other than S phase), such as those that induce G1 arrest and M STOP. Typical M blockers include vincas (vincristine and vinblastine), taxol, and topo II inhibitors such as doxorubicin, epirubicin, daunorubicin, etoposide and bleomycin. In addition, substances that stop G1, such as DNA alkylating agents such as tamoxifen, prednisone, dacarbazine, mechlorethamine, cisplatin, methotrexate, 5-fluorouracil and ara-C also act on S phase arrest. For further information, see Murakami et al., The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn and Israel, eds., "Cell cycle regulation, oncogens, and antineoplastic drugs" (WB Saunders: Philadelphia, 1995), Chapter 1, in particular page 13. It is described in.

"독소루비신"은 안트라시클린 항생제이다. 독소루비신의 완전한 화학명은 (8S-시스)-10-[(3-아미노-2,3,6-트리데옥시-α-L-릭소-헥사피라노실)옥시]-7,8,9,10-테트라히드로-6,8,11-트리히드록시-8-(히드록시아세틸)-1-메톡시-5,12-나프타센디온이다."Doxorubicin" is an anthracycline antibiotic. The full chemical name of doxorubicin is (8S-cis) -10-[(3-amino-2,3,6-trideoxy-α-L-lyxo-hexapyranosyl) oxy] -7,8,9,10- Tetrahydro-6,8,11-trihydroxy-8- (hydroxyacetyl) -1-methoxy-5,12-naphthacedione.

"싸이토카인"이란 하나의 세포 군집에 의해 방출되는, 세포간 매개제로서 다른 세포에 대해 작용하는 단백질의 포괄적인 용어이다. 이러한 싸이토카인의 예로는 림포카인, 모노카인 및 전형적인 폴리펩티드 호르몬이 있다. 싸이토카인에는 생장 호르몬, 예를 들어, 인간 생장 호르몬, N-메티오닐 인간 생장 호르몬 및 소 생장 호르몬; 부갑상선 호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 릴랙신; 프로릴랙신; 여포 자극 호르몬(FSH), 갑상선 자극 호르몬(TSH) 및 황체 호르몬(LH) 등의 당단백질 호르몬; 간 생장 인자; 섬유아세포 생장 인자; 프로락틴; 태반 락토젠; 종양 괴사 인자-α및 -β; 뮬러리안 억제 물질; 생쥐 고나도트로핀 관련 펩티드; 인히빈; 액티빈; 혈관 내피 생장 인자; 인테그린; 트롬보포이에틴(TPO); 신경 생장 인자, 예를 들어, NGF-β; 혈소판 생장 인자; 형질전환 세포 생장 인자(TGF), 예를 들어, TGF-α및 -β; 인슐린 유사 생장 인자-Ⅰ 및 -Π; 에리트로포이에틴(EPO); 골유도 인자(osteoinductive factor); 인터페론, 예를 들어, 인터페론-α, -β및 -γ;콜로니 자극 인자(CSF), 예를 들어, 대식세포-CSF(M-CSF); 과립세포-대식세포-CSF(GM-CSF); 및 과립세포-CSF(G-CSF); 인터루킨(IL), 예를 들어, IL-1, IL-1a, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12; 종양 괴사 인자, 예를 들어, TNF-α또는 TNF-β; 및 LIF-및 키트 리간드(KL)를 비롯한 다른 폴리펩티드 인자가 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 싸이토카인이란 용어에는 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질 및 천연 서열 싸이토카인의 생물학적 활성 등가물이 포함된다."Cytokine" is a generic term for a protein that acts on another cell as an intercellular mediator, released by one cell population. Examples of such cytokines are lymphokine, monocaine and typical polypeptide hormones. Cytokines include growth hormones such as human growth hormone, N-methionyl human growth hormone and bovine growth hormone; Parathyroid hormone; Thyroxine; insulin; Proinsulin; Relaxin; Prolylacin; Glycoprotein hormones such as follicle stimulating hormone (FSH), thyroid stimulating hormone (TSH) and progesterone (LH); Liver growth factor; Fibroblast growth factor; Prolactin; Placental lactogen; Tumor necrosis factor-α and -β; Mullerian inhibitors; Mouse gonadotropin related peptide; Inhibin; Activin; Vascular endothelial growth factor; Integrin; Thrombopoietin (TPO); Nerve growth factors such as NGF-β; Platelet growth factor; Transformed cell growth factors (TGFs) such as TGF-α and -β; Insulin-like growth factor-I and -Π; Erythropoietin (EPO); Osteoinductive factor; Interferons such as interferon-α, -β and -γ; colony stimulating factors (CSFs) such as macrophage-CSF (M-CSF); Granulocyte-macrophage-CSF (GM-CSF); And granulocyte-CSF (G-CSF); Interleukin (IL), for example IL-1, IL-1a, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL -11, IL-12; Tumor necrosis factors such as TNF-α or TNF-β; And other polypeptide factors including LIF- and kit ligands (KL). As used herein, the term cytokine includes biologically active equivalents of native sequence cytokines and proteins from natural sources or recombinant cell culture.

본원에서 사용된 "전구약물"이란 모약물에 비해 종양 세포에 대한 세포독성이 덜하며 효소적으로 활성이거나 보다 활성인 모형태로 전환될 수 있는 약제학상 활성 물질의 전구체 또는 유도체 형태를 말한다(문헌[Wilman, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy", Biochemical Society Transactions, 14:375-382, 615th Meeting, Belfast (1986)] 및 [Stella et al., "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery", Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), pp. 147-276, Humana Press (1985)] 참조). 본 발명의 전구약물로는 보다 활성인 무세포독성 약물로 전환될 수 있는 포스페이트 함유 전구약물, 티오포스페이트 함유 전구약물, 술페이트 함유 전구약물, 펩티드 함유 전구약물, D-아미노산 개질 전구약물, 글리코실화된 전구약물, β-락탐 함유 전구약물, 임의로 치환된 페녹시아세트아미드 함유 전구약물 또는 임의로 치환된 페닐아세트아미드 함유 전구약물, 5-플루오로시토신 및 다른 5-플루오로유리딘 전구약물이 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명에 사용하기 위한 전구약물로 유도체화될 수 있는 세포독성 약물로는 상기 기재된 화학요법제가 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다.As used herein, “prodrug” refers to a precursor or derivative form of a pharmaceutically active substance that is less cytotoxic to tumor cells than the parent drug and can be converted into an enzymatically active or more active parent form (see literature). Wilman, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy", Biochemical Society Transactions, 14: 375-382, 615th Meeting, Belfast (1986) and Stella et al., "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery", Directed Drug Delivery , Borchardt et al., (Ed.), Pp. 147-276, Humana Press (1985)). Prodrugs of the present invention include phosphate-containing prodrugs, thiophosphate-containing prodrugs, sulfate-containing prodrugs, peptide-containing prodrugs, D-amino acid modified prodrugs, glycosylation, which can be converted to more active acytotoxic drugs Prodrugs, β-lactam containing prodrugs, optionally substituted phenoxyacetamide containing prodrugs or optionally substituted phenylacetamide containing prodrugs, 5-fluorocytosine and other 5-fluorouridine prodrugs, However, the present invention is not limited thereto. Cytotoxic drugs that may be derivatized with prodrugs for use in the present invention include, but are not limited to, the chemotherapeutic agents described above.

신생물 세포 생장, 종양 생장 또는 암 세포과 관련하여 본원에 개시된 폴리펩티드 또는 그의 길항제의 "유효량"은 표적 세포의 생장을 어느 정도까지 억제시킬 수 있는 양을 의미한다. 이 용어에는 표적 세포의 생장 억제, 세포 증식 억제성 및(또는) 세포 독성 효과 및(또는) 아팝토시스가 포함된다. 신생물 세포 생장, 종양 생장 또는 암 세포 생장을 억제하기 위한 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 길항제의 "유효량"은 경험적으로 및 통상의 방식으로 결정할 수 있다.By "effective amount" of a polypeptide disclosed herein or an antagonist thereof in connection with neoplastic cell growth, tumor growth or cancer cells is meant an amount capable of inhibiting to some extent the growth of the target cell. The term includes growth inhibition, cell proliferation and / or cytotoxic effects and / or apoptosis of target cells. The "effective amount" of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptide antagonists to inhibit neoplastic cell growth, tumor growth or cancer cell growth is empirical. And in a conventional manner.

종양의 치료와 관련하여 "치료 유효량"이란 하나 이상의 다음 효과, 즉 (1) 종양 생장의 지연 및 완전한 생장 정지를 비롯하여 종양 생장의 어느 정도까지의 억제, (2) 종양 세포 수의 감소; (3) 종양 크기의 감소; (4) 주위 기관으로의 종양 세포 침윤의 억제(즉, 감소, 지연 또는 완전한 정지); (5) 전이의 억제(즉, 감소, 지연 또는 완전한 정지); (6) 종양의 퇴행 또는 거부를 일으킬 수 있는(반드시 일으켜야 하는 것은 아님) 항종양 면역 반응의 증진; 및(또는) (7) 질환과 관련된 하나 이상의 증상의 어느 정도까지의 경감을 일으킬 수 있는 양을 가리킨다. 종양 치료를 위한 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 길항제의 "치료 유효량"은 경험적으로 및 통상의 방식으로 결정할 수 있다.A “therapeutically effective amount” in connection with the treatment of a tumor means one or more of the following effects: (1) inhibition of tumor growth to some extent, including delayed tumor growth and complete growth arrest, (2) reduction of tumor cell number; (3) reduction in tumor size; (4) inhibition (ie, reduction, slowing down or complete stopping) of tumor cell infiltration into surrounding organs; (5) inhibition (ie, reduction, delay or complete stop) of metastasis; (6) enhancement of anti-tumor immune response that may (but not necessarily) cause tumor regression or rejection; And / or (7) an amount capable of causing relief to some extent of one or more symptoms associated with the disease. The "therapeutically effective amount" of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide antagonists for tumor treatment can be determined empirically and conventionally.

PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 길항제의 "생장 억제량"은세포, 특히 종양 세포, 예를 들어, 암세포의 생장을 시험관내 또는 생체내에서 억제할 수 있는 양이다. 신생물 세포 생장을 억제하기 위한 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 길항제의 "생장 억제량"은 경험적으로 및 통상의 방식으로 결정할 수 있다.The "growth inhibitory amount" of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 antagonist tests the growth of cells, in particular tumor cells, eg cancer cells. It is an amount which can be suppressed in vitro or in vivo. The "growth inhibition" of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 antagonists to inhibit neoplastic cell growth are empirically and conventionally You can decide.

PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 길항제의 "세포독성량"은 세포, 특히 종양, 예를 들어, 암세포의 파괴를 시험관내 또는 생체내에서 일으킬 수 있는 양이다. 신생물 세포 생장을 억제하기 위한 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 길항제의 "세포독성량"은 경험적으로 및 통상의 방식으로 결정할 수 있다.The "cytotoxic amount" of the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 antagonist is responsible for the destruction of cells, especially tumors, eg cancer cells in vitro. Or an amount that can be produced in vivo. The "cytotoxic amount" of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 antagonists to inhibit neoplastic cell growth is empirically and in a conventional manner. You can decide.

본원에 사용된 "PRO201", "PRO292", "PRO327", "PRO1265", "PRO344", "PRO343", 'PRO347", "PRO357", "PRO715", "PRO1017", "PRO1112", "PRO509", "PRO853" 또는 "PRO882" 폴리펩티드 또는 단백질이란 용어는 천연 서열 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 및 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 변이체(본원에 추가로 정의된 바와 같음)를 포함한다. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715,PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드는 인간 조직 유형 등의 각종 공급원 또는 또다른 공급원으로부터 단리할 수 있거나, 또는 재조합 및(또는) 합성 방법으로 제조할 수 있다.As used herein, "PRO201", "PRO292", "PRO327", "PRO1265", "PRO344", "PRO343", "PRO347", "PRO357", "PRO715", "PRO1017", "PRO1112", "PRO509 The term "," PRO853 "or" PRO882 "polypeptide or protein refers to the native sequences PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides and PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide variants (as further defined herein) PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343 The, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides can be isolated from various sources or other sources, such as human tissue types, or can be prepared by recombinant and / or synthetic methods.

"천연 서열 PRO201", "천연 서열 PRO292", "천연 서열 PRO327", "천연 서열 PRO1265", "천연 서열 PRO344", "천연 서열 PRO343", "천연 서열 PRO347", "천연 서열 PRO357", "천연 서열 PRO715", "천연 서열 PRO1017", "천연 서열 PRO1112", "천연 서열 PRO509", "천연 서열 PRO853" 또는 "천연 서열 PRO882"는 자연으로부터 유래된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드와 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 그러한 천연 서열 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드는 자연으로부터 단리할 수 있거나, 재조합 및(또는) 합성 수단으로 제조할 수 있다. "천연 서열" PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드란 용어는 구체적으로 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882 폴리펩티드의 자연 발생 말단 절단형 또는 분비형(예를 들어, 세포외 도메인 서열), 자연 발생 변이체형(예를 들어, 스플라이싱된 형태) 및 자연 발생 대립유전자적 변이체를 포함한다. 본 발명의 한 실시양태에서, 천연 서열 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715,PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드는 각각 도 2(서열번호 2), 도 4(서열번호 6), 도 6(서열번호 8), 도 8(서열번호 13), 도 10(서열번호 15), 도 12(서열번호 23), 도 14(서열번호 28), 도 16(서열번호 33), 도 18(서열번호 40), 도 20(서열번호 42), 도 22(서열번호 44), 도 24(서열번호 46), 도 26(서열번호 48) 또는 도 28(서열번호 53)에 기재된 아미노산 서열 각각을 포함하는 성숙 또는 전장 천연 서열 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드이다. 또한, 각각 도 2(서열번호 2), 도 4(서열번호 6), 도 6(서열번호 8), 도 8(서열번호 13), 도 10(서열번호 15), 도 12(서열번호 23), 도 14(서열번호 28), 도 16(서열번호 33), 도 18(서열번호 40), 도 20(서열번호 42), 도 22(서열번호 44), 도 24(서열번호 46), 도 26(서열번호 48) 또는 도 28(서열번호 53)에 기재된 PR0201, PR0292, PR0327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882 폴리펩티드는 아미노산 위치 1로서 지칭되는 메티오닌 잔기에서 시작하는 반면, 각각 도 2(서열번호 2), 도 4(서열번호 6), 도 6(서열번호 8), 도 8(서열번호 13), 도 10(서열번호 15), 도 12(서열번호 23), 도 14(서열번호 28), 도 16(서열번호 33), 도 18(서열번호 40), 도 20(서열번호 42), 도 22(서열번호 44), 도 24(서열번호 46), 도 26(서열번호 48) 또는 도 28(서열번호 53)에서 아미노산 위치 1로부터 상류 또는 하류에 위치하는 다른 아미노산 잔기가 PR0201, PR0292, PR0327, PRO1265, PR0344, PR0343, PR0347, PR0357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PR0509, PRO853 또는 PR0882 폴리펩티드에 대한 개시 아미노산 잔기로서 사용될 수 있다."Natural sequence PRO201", "natural sequence PRO292", "natural sequence PRO327", "natural sequence PRO1265", "natural sequence PRO344", "natural sequence PRO343", "natural sequence PRO347", "natural sequence PRO357", "natural sequence The sequence PRO715 "," natural sequence PRO1017 "," natural sequence PRO1112 "," natural sequence PRO509 "," natural sequence PRO853 "or" natural sequence PRO882 "are PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, Polypeptides having the same amino acid sequence as the PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptide. Such native sequences PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides can be isolated from nature or prepared by recombinant and / or synthetic means. have. The term "natural sequence" PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides specifically refers to PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347 , Naturally occurring terminal truncated or secreted forms (eg, extracellular domain sequences), naturally occurring variants (eg, spliced forms) of the PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, and PRO882 polypeptides And naturally occurring allelic variants. In one embodiment of the invention, the native sequences PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides are shown in Figure 2 (SEQ ID NO: 2), Figure 4, respectively. (SEQ ID NO: 6), FIG. 6 (SEQ ID NO: 8), FIG. 8 (SEQ ID NO: 13), FIG. 10 (SEQ ID NO: 15), FIG. 12 (SEQ ID NO: 23), FIG. 14 (SEQ ID NO: 28), and FIG. No. 33), Fig. 18 (SEQ ID NO: 40), Fig. 20 (SEQ ID NO: 42), Fig. 22 (SEQ ID NO: 44), Fig. 24 (SEQ ID NO: 46), Fig. 26 (SEQ ID NO: 48), or Fig. 28 (SEQ ID NO: 53). Or a mature or full-length native sequence PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. 2 (SEQ ID NO: 2), 4 (SEQ ID NO: 6), 6 (SEQ ID NO: 8), 8 (SEQ ID NO: 13), 10 (SEQ ID NO: 15), and 12 (SEQ ID NO: 23). 14 (SEQ ID NO: 28), FIG. 16 (SEQ ID NO: 33), FIG. 18 (SEQ ID NO: 40), FIG. 20 (SEQ ID NO: 42), FIG. 22 (SEQ ID NO: 44), FIG. 24 (SEQ ID NO: 46), FIG. The PR0201, PR0292, PR0327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 and PRO882 polypeptides described in 26 (SEQ ID NO: 48) or FIG. 28 (SEQ ID NO: 53) are referred to as amino acid position 1 Starting with methionine residues, respectively, FIG. 2 (SEQ ID NO: 2), FIG. 4 (SEQ ID NO: 6), FIG. 6 (SEQ ID NO: 8), FIG. 8 (SEQ ID NO: 13), FIG. 10 (SEQ ID NO: 15), and FIG. 12 (SEQ ID NO: 23), FIG. 14 (SEQ ID NO: 28), FIG. 16 (SEQ ID NO: 33), FIG. 18 (SEQ ID NO: 40), FIG. 20 (SEQ ID NO: 42), FIG. 22 (SEQ ID NO: 44), and FIG. 24 ( SEQ ID NO: 46), upstream from amino acid position 1 in Figure 26 (SEQ ID NO: 48) or Figure 28 (SEQ ID NO: 53) Has a different amino acid residue which is located in the downstream may be used as the starting amino acid residue for the PR0201, PR0292, PR0327, PRO1265, PR0344, PR0343, PR0347, PR0357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PR0509, PRO853, or PR0882 polypeptide.

PRO 폴리펩티드 "세포외 도메인" 또는 "ECD"란 본질적으로 막횡단 및 세포질 도메인이 없는 PRO 폴리펩티드 형태를 의미한다. 통상적으로 PRO 폴리펩티드 ECD는 막횡단 및(또는) 세포질 도메인을 1 % 미만으로 포함할 것이며, 바람직하게는 상기 도메인들을 0.5 % 미만으로 포함할 것이다. 본 발명의 PRO 폴리펩티드에서 확인된 모든 막횡단 도메인은 당업계에서 소수성 도메인 유형을 밝히는데 통상적으로 사용되는 기준에 따라 확인된 것임을 이해해야 할 것이다. 막횡단 도메인의 정확한 경계선은 달라질 수 있지만, 대부분은 본원에서 처음 확인된 바와 같이 막횡단 도메인의 어느쪽 말단이든지 약 5 개 아미노산 범위 내에 존재한다. 따라서, PRO 폴리펩티드의 세포외 도메인은 경우에 따라 실시예 또는 상세한 설명에서 확인된 막횡단 도메인/세포외 도메인의 어느쪽 경계면이든지 약 5 개 이하의 아미노산을 포함할 수 있고, 수반되는 신호 펩티드가 있거나 없는 이러한 폴리펩티드, 및 이들을 코딩하는 핵산은 본 발명에 포함된다.PRO polypeptide "extradomain" or "ECD" refers to a form of PRO polypeptide that is essentially free of transmembrane and cytoplasmic domains. Typically the PRO polypeptide ECD will comprise less than 1% of the transmembrane and / or cytoplasmic domains, preferably less than 0.5% of these domains. It will be understood that all transmembrane domains identified in the PRO polypeptides of the invention have been identified according to criteria commonly used to identify hydrophobic domain types in the art. The exact boundaries of the transmembrane domain may vary, but most are within the range of about 5 amino acids either end of the transmembrane domain, as initially identified herein. Thus, the extracellular domain of the PRO polypeptide may optionally comprise up to about 5 amino acids at either interface of the transmembrane domain / extracellular domain identified in the Examples or the description, with the accompanying signal peptide Such polypeptides that are absent, and nucleic acids encoding them, are included in the present invention.

본원에 기재된 다양한 PRO 폴리펩티드의 "신호 펩티드"의 대략적인 위치는 본원 및(또는) 첨부된 도면에 나타나 있다. 그러나 염두에 두어야 할 것은, 신호 펩티드의 C-말단 경계가 달라질 수 있지만, 대부분은 본원에서 처음 확인된 신호 펩티드 C-말단의 어느쪽 경계면이든지 아미노산은 약 5 개 이하라는 점이며, 여기서 신호 펩티드의 C-말단 경계는 당업계에서 아미노산 서열 요소의 타입을 확인하는데 통상적으로 이용되는 기준에 따라 확인될 수 있다 (예를 들어, Nielsen et al., Prot. Eng. 10: 1-6 (1997) 및 von Heinje et al., Nucl. Acids. Res. 14:4683-4690 (1986)). 게다가, 일부 경우에는 분비 폴리펩티드의 신호 서열의 절단이 전체적으로 동일하지 않아 1종 이상의 분비된 폴리펩티드를 생성시킨다는 것을 인지해야 한다. 본원에서 확인된 신호 펩티드의 C-말단의 어느쪽 경계면이든지에 있는 약 5 개 이하의 아미노산 범위 내에서 신호 펩티드가 절단된 이들 성숙 폴리펩티드, 및 이들을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 본 발명에 포함된다.Approximate positions of "signal peptides" of the various PRO polypeptides described herein are shown herein and / or in the accompanying drawings. However, it should be borne in mind that although the C-terminal boundary of the signal peptide may vary, most are about 5 amino acids in either interface of the signal peptide C-terminal first identified herein, wherein C-terminal boundaries can be identified according to criteria commonly used to identify the type of amino acid sequence element in the art (eg, Nielsen et al., Prot. Eng. 10: 1-6 (1997) and von Heinje et al., Nucl.Acids.Res. 14: 4683-4690 (1986)). In addition, it should be appreciated that in some cases the cleavage of the signal sequence of the secreting polypeptides is not entirely identical resulting in one or more secreted polypeptides. Those mature polypeptides in which the signal peptide is cleaved within the range of about 5 or less amino acids at either interface of the C-terminus of the signal peptide identified herein, and polynucleotides encoding them, are included in the present invention.

"PRO201 폴리펩티드 변이체","PRO292 폴리펩티드 변이체","PRO327 폴리펩티드 변이체","PRO1265 폴리펩티드 변이체", "PRO344 폴리펩티드 변이체", "PRO343 폴리펩티드 변이체", "PRO347 폴리펩티드 변이체", "PRO357 폴리펩티드 변이체", "PRO715 폴리펩티드 변이체", "PRO1017 폴리펩티드 변이체", "PRO1112 폴리펩티드 변이체", "PRO509 폴리펩티드 변이체", "PRO853 폴리펩티드 변이체" 또는 "PRO882 폴리펩티드 변이체"는 본원에 정의된 전장의 천연 서열 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO883 폴리펩티드 서열, 본원에 정의된 바와 같은 신호 펩티드가 결여된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드, 본원에 정의된 바와 같이 신호 펩티드가 포함되거나 포함되지 않는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 세포외 도메인, 또는 본원에 정의된 바와 같은 전장 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 서열의 임의의 기타 단편과 약80% 이상의 아미노산 서열 동일성을 갖는, 상기 또는 하기에 정의된 바와 같은 활성 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 의미한다. 그러한 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 변이체에는, 예를 들면 전장의 천연 아미노산 서열의 N- 또는 C-말단에서 1개 이상의 아미노산 잔기가 부가되거나 결실된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드가 포함된다. 통상, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 변이체는 본원에 개시된 바와 같은 전장의 천연 서열 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 서열, 본원에 개시된 바와 같은 신호 펩티드가 결여된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 서열, 본원에 개시된 바와 같이 신호 펩티드가 포함되거나 포함되지 않은 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 세포외 도메인, 또는 본원에 개시된 바와 같은 전장 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 임의의 단편과 약80% 이상의 아미노산 서열 동일성, 바람직하게는 약 81% 이상의 아미노산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 82% 이상의 아미노산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 83% 이상의 아미노산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 84% 이상의 아미노산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 85% 이상의 아미노산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 86% 이상의 아미노산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 87% 이상의 아미노산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 88% 이상의 아미노산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 89% 이상의 아미노산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 90% 이상의 아미노산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 91% 이상의 아미노산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 92% 이상의 아미노산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 93% 이상의 아미노산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 94% 이상의 아미노산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 95% 이상의 아미노산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 96% 이상의 아미노산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 97% 이상의 아미노산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 98% 이상의 아미노산 서열 동일성 및 가장 바람직하게는 약 99% 이상의 아미노산 서열 동일성을 가질 것이다. 통상, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 변이체 폴리펩티드는 약 10개 이상의 아미노산 길이, 통상적으로 약 20개 이상의 아미노산 길이, 보다 통상적으로 약 30개 이상의 아미노산 길이, 보다 통상적으로 약 40개 이상의 아미노산 길이, 보다 통상적으로 약 50개 이상의 아미노산 길이, 보다 통상적으로 약 60개 이상의 아미노산 길이, 보다 통상적으로 약 70개 이상의 아미노산 길이, 보다 통상적으로 약 80개 이상의 아미노산 길이, 보다 통상적으로 약 90개 이상의 아미노산 길이, 보다 통상적으로 약 100개 이상의 아미노산 길이, 보다 통상적으로 약 150개 이상의 아미노산 길이, 보다 통상적으로 약 200개 이상의 아미노산 길이, 보다 통상적으로 약 300개 이상의 아미노산 길이, 또는 이를 초과하는 아미노산 길이로 이루어진다."PRO201 Polypeptide Variants", "PRO292 Polypeptide Variants", "PRO327 Polypeptide Variants", "PRO1265 Polypeptide Variants", "PRO344 Polypeptide Variants", "PRO343 Polypeptide Variants", "PRO347 Polypeptide Variants", "PRO357 Polypeptide Variants", "PRO715 Polypeptide variant "," PRO1017 polypeptide variant "," PRO1112 polypeptide variant "," PRO509 polypeptide variant "," PRO853 polypeptide variant "or" PRO882 polypeptide variant "refers to the full-length native sequence PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715 lacking the PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO883 polypeptide sequence, signal peptide as defined herein , PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide, PRO201, P with or without signal peptide as defined herein Extracellular domain of RO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide, or full-length PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343 as defined herein Active PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, as defined above or below, having at least about 80% amino acid sequence identity with any other fragment of a PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptide sequence , PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. Such PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide variants include, for example, one at the N- or C-terminus of the full-length natural amino acid sequence. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides having added or deleted amino acid residues above. Typically, the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide variants have the full-length native sequence PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344 as disclosed herein. , PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide sequence, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017 lacking a signal peptide as disclosed herein , PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide sequence, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or with or without a signal peptide as disclosed herein The extracellular domain of the PRO882 polypeptide, or the full-length PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide as disclosed herein At least about 80% amino acid sequence identity, preferably at least about 81% amino acid sequence identity, more preferably at least about 82% amino acid sequence identity, more preferably at least about 83% amino acid sequence identity, more preferably, to any fragment of Preferably at least about 84% amino acid sequence identity, more preferably at least about 85% amino acid sequence identity, more preferably at least about 86% amino acid sequence identity, more preferably at least about 87% amino acid sequence identity, more preferably At least about 88% amino acid sequence identity, more preferably at least about 89% amino acid sequence identity, more preferably at least about 90% amino acid sequence identity, more preferably at least about 91% amino acid sequence identity, more preferably about 92 At least% amino acid sequence identity, more preferably about 93% Amino acid sequence identity, more preferably at least about 94% amino acid sequence identity, more preferably at least about 95% amino acid sequence identity, more preferably at least about 96% amino acid sequence identity, more preferably at least about 97% amino acid It will have sequence identity, more preferably at least about 98% amino acid sequence identity and most preferably at least about 99% amino acid sequence identity. Typically, the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 variant polypeptides are at least about 10 amino acids in length, typically at least about 20 amino acids in length, more conventional At least about 30 amino acids in length, more typically at least about 40 amino acids in length, more typically at least about 50 amino acids in length, more typically at least about 60 amino acids in length, more typically at least about 70 amino acids in length, and more typically At least about 80 amino acids in length, more typically at least about 90 amino acids in length, more typically at least about 100 amino acids in length, more typically at least about 150 amino acids in length, more typically at least about 200 amino acids in length, and more typically Amino acids that are at least about 300 amino acids in length, or greater than Composed of length.

하기에 나타낸 바와 같이, 표 1은 ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램을 위한 완전한 원시 코드를 제공한다. 이 원시 코드는 ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램을 제공하기 위해 통상 UNIX 운용 체계에서 사용하기 위한 다른 부호로 번역될 수 있다.As shown below, Table 1 provides the complete source code for the ALIGN-2 sequence comparison computer program. This source code can be translated into other symbols for use in a typical UNIX operating system to provide an ALIGN-2 sequence comparison computer program.

또한, 표 2a 내지 2d는 ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램을 이용하여 아미노산 서열 동일성 %(표 2a-2b) 및 핵산 서열 동일성 %(표 2c-2d)을 측정하기 위해 하기 기재된 방법을 이론상으로 예시한 것이다. 이 때, "PRO"는 이론상의 해당 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 아미노산 서열을 나타내고, "비교 단백질"은 해당 "PRO" 폴리펩티드가 비교되는 폴리펩티드의 아미노산 서열을 나타내며, "PRO-DNA"는 이론상의 해당 PRO201-, PRO292-, PRO327-, PRO1265-, PRO344-, PRO343-, PRO347-, PRO357-, PRO715-, PRO1017-, PRO1112-, PRO509-, PRO853- 또는 PRO882-코딩 핵산 서열을 나타내고, "비교 DNA"는 해당 "PRO-DNA" 핵산 분자가 비교되는 핵산 분자의 뉴클레오티드 서열을 나타내며, "X", "Y" 및 "Z"는 각각 상이한 이론상의 아미노산 잔기를 나타내고, "N", "L" 및 "V"는각각 상이한 이론상의 뉴클레오티드를 나타낸다.In addition, Tables 2A-2D theoretically illustrate the methods described below to determine percent amino acid sequence identity (Table 2a-2b) and percent nucleic acid sequence identity (Table 2c-2d) using the ALIGN-2 sequence comparison computer program. will be. At this time, "PRO" represents the amino acid sequence of the corresponding PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptide in theory, and "Compare protein" The "PRO" polypeptide represents the amino acid sequence of the compared polypeptide, and "PRO-DNA" refers to the corresponding PRO201-, PRO292-, PRO327-, PRO1265-, PRO344-, PRO343-, PRO347-, PRO357-, PRO715-, Represents a PRO1017-, PRO1112-, PRO509-, PRO853-, or PRO882-encoding nucleic acid sequence, and “comparative DNA” refers to the nucleotide sequence of the nucleic acid molecule to which the corresponding “PRO-DNA” nucleic acid molecule is compared, and “X”, “Y "And" Z "each represent a different theoretical amino acid residue, and" N "," L "and" V "each represent a different theoretical nucleotide.

본원에서 확인된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 서열에 대한 "아미노산 서열 동일성 퍼센트(%)"는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 서열과 후보 서열을 정렬하고, 필요한 경우 서열 동일성 퍼센트의 최대치를 얻기 위해 갭을 도입한 후 어떠한 보존적 치환도 서열 동일성의 일부로서 간주하지 않은 상태에서 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 서열의 아미노산 잔기와 동일한, 후보 서열의 아미노산 잔기의 비율로서 정의된다. 아미노산 서열 동일성을 측정하기 위한 정렬법은 당업계에 공지된 다양한 방법, 예를 들어 BLAST, BLAST-2, ALIGN, ALIGN-2 또는 Megalign (DNASTAR) 소프트웨어와 같은 쉽게 구할 수 있는 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 달성할 수 있다. 당업자는 비교되는 서열들의 전체 길이에 걸쳐 최대로 정렬시키기 위해 필요한 임의의 연산법을 비롯하여 정렬을 측정하기에 적합한 파라미터를 정할 수 있다. 그러나, 본 발명의 목적상 아미노산 서열 동일성 값(%)은 하기에 기재된 바와 같이 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 이용하여 얻을 수 있는데, 상기 ALIGN-2 프로그램에 대한 완전한 원시 코드는 표 1에 기재되어 있다. ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 제넨테크, 인크사가 개발하였으며, 표 1에 나타낸 원시 코드는 미국 저작권청 (미국 20559 워싱톤 D.C.에 소재)의 사용자 문서로 보관되어 있는데, 상기 코드는 미국 저작권 등록 제TXU510087호 하에 등록되어 있다. ALIGN-2 프로그램은 제넨테크, 인크사 (캘리포니아주 사우스 샌 프란시스코 소재)를 통해 쉽게 구할 수 있거나, 표 1에 기재된 원시 코드로부터 편집될 수 있다. ALIGN-2 프로그램은 UNIX 운용 체계, 바람직하게는 디지탈 UNIX V4.0D에서 편집되어 이용될 수 있다. 모든 서열 비교 파라미터는 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되며, 다양하지 않다.The “percent amino acid sequence identity (%)” for the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide sequences identified herein is PRO201, PRO292, PRO327 Any conservative substitution after aligning the candidate sequence with the polypeptide sequence of PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882, and obtaining a maximum of percent sequence identity if necessary. Amino acid residues of the candidate sequences that are identical to amino acid residues of the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 sequences, even when not considered as part of sequence identity. It is defined as the ratio of. Alignment methods for determining amino acid sequence identity can be accomplished using various methods known in the art, such as readily available computer software such as BLAST, BLAST-2, ALIGN, ALIGN-2 or Megalign (DNASTAR) software. Can be. One skilled in the art can determine suitable parameters for measuring alignment, including any algorithms needed to maximally align over the entire length of the sequences being compared. However, for purposes of the present invention,% amino acid sequence identity values can be obtained using the sequence comparison computer program ALIGN-2 as described below, the complete source code for which the ALIGN-2 program is described in Table 1 have. The ALIGN-2 sequence comparison computer program was developed by Genentech, Inc., and the source code shown in Table 1 is kept as a user document of the United States Copyright Office (20559 Washington, DC, USA), which is registered under US Copyright TXU510087. It is registered under the arc. The ALIGN-2 program is readily available through Genentech, Inc. (South San Francisco, Calif.) Or can be edited from the source code listed in Table 1. The ALIGN-2 program can be edited and used on a UNIX operating system, preferably digital UNIX V4.0D. All sequence comparison parameters are set by the ALIGN-2 program and do not vary.

본 발명에 이용하기 위해, 주어진 아미노산 서열 B에, B와, 또는 B에 대한 주어진 아미노산 서열 A의 아미노산 서열 동일성 (%)(주어진 아미노산 서열 B에, B와, 또는 B에 대한 일정한 아미노산 서열 동일성 (%)을 갖거나 포함하는 주어진 아미노산 서열 A로 달리 표현할 수 있음)은 하기와 같이 계산한다:For use in the present invention, a given amino acid sequence identity (%) of a given amino acid sequence B to B, or a given amino acid sequence A to B (for a given amino acid sequence B, a constant amino acid sequence identity to B, or to B ( Can be expressed differently with a given amino acid sequence A having or including%).

X/Y ×100X / Y × 100

여기서, X는 A와 B의 프로그램 정렬에서 서열 정렬 프로그램 ALIGN-2에 의해 동일하게 매치되는 것으로 기록되는 아미노산 잔기의 수이고, Y는 B에서 아미노산 잔기의 총 수이다. 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 같지 않은 경우, B에 대한 A의 아미노산 서열 동일성(%)은 A에 대한 B의 아미노산 서열 동일성(%)과 같지 않음을 인지해야 할 것이다. 이 방법을 이용한 아미노산 서열 동일성 계산의 예로서, 표 2a 내지 2b는 "PRO"로 지칭되는 아미노산 서열에 대한 "비교 단백질"로 지칭되는 아미노산 서열의 아미노산 서열 동일성(%)을 계산하는 방법을 나타낸다.Where X is the number of amino acid residues recorded as equally matched by the sequence alignment program ALIGN-2 in the program alignment of A and B, and Y is the total number of amino acid residues in B. If the length of amino acid sequence A is not equal to the length of amino acid sequence B, it will be appreciated that the amino acid sequence identity (A) of A to B is not equal to the amino acid sequence identity (B) of B to A. As an example of calculating amino acid sequence identity using this method, Tables 2A-2B show a method for calculating the amino acid sequence identity (%) of an amino acid sequence called "comparative protein" to an amino acid sequence called "PRO".

달리 언급하지 않는 한, 본원에 사용된 모든 아미노산 서열 동일성 값(%)은 상기 ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램을 이용하여 얻었다. 그러나, 아미노산 서열 동일성(%)은 서열 비교 프로그램 NCBI-BLAST2를 이용하여 계산할 수도 있다 (Altschul et al., Nucleic Acids Res., 25:3389-3402 (1997)). NCBI-BLAST2 서열 비교 프로그램은 웹 사이트(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)로부터 다운로드 받을 수 있다. NCBI-BLAST2는 여러 가지 검색 파라미터를 이용하는데, 이러한 모든 검색 파라미터는 예를 들어, 언마스크 = 예, 가닥 = 모두, 기대 발생 = 10, 최소 저복합성 길이 = 15/5, 다중-통과 e-값 = 0.01, 다중-통과에 대한 상수 = 25, 최종 갭 정렬에 대한 드롭오프 = 25 및 점수 매트릭스 = BLOSUM62를 포함하는 디폴트값으로 설정되어 있다.Unless stated otherwise, all% amino acid sequence identity values used herein were obtained using the above ALIGN-2 sequence comparison computer program. However,% amino acid sequence identity can also be calculated using the sequence comparison program NCBI-BLAST2 (Altschul et al., Nucleic Acids Res., 25: 3389-3402 (1997)). The NCBI-BLAST2 sequence comparison program can be downloaded from the website (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). NCBI-BLAST2 uses several search parameters, all of which are, for example, unmask = yes, strand = all, expected occurrence = 10, minimum low complexity length = 15/5, multi-pass e-value = 0.01, constant for multi-pass = 25, dropoff for final gap alignment = 25 and score matrix = BLOSUM62.

NCBI-BLAST2가 아미노산 서열 비교에 사용되는 경우, 주어진 아미노산 서열 B에, B와, 또는 B에 대한 주어진 아미노산 서열 A의 아미노산 서열 동일성(%)(주어진 아미노산 서열 B에, B와, 또는 B에 대한 일정한 아미노산 서열 동일성(%)을 갖거나 포함하는 주어진 아미노산 서열 A로 달리 표현할 수 있음)은 하기와 같이 계산한다:When NCBI-BLAST2 is used for amino acid sequence comparison, the amino acid sequence identity (%) of a given amino acid sequence A to B, or B to a given amino acid sequence B (for a given amino acid sequence B, to B, or to B Or alternatively represented by a given amino acid sequence A having or including a certain percentage of amino acid sequence identity, is calculated as follows:

X/Y ×100X / Y × 100

여기서, X는 NCBI-BLAST2 프로그램 정렬에서 서열 정렬 프로그램 NCBI-BLAST2에 의해 동일하게 매치되는 것으로 기록되는 아미노산 잔기의 수이고, Y는 B에서 아미노산 잔기의 총 수이다. 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 같지 않는 경우, B에 대한 A의 아미노산 서열 동일성(%)은 A에 대한 B의 아미노산 서열 동일성(%)과 같지 않음을 인지해야 할 것이다.Where X is the number of amino acid residues that are reported to be matched identically by the sequence alignment program NCBI-BLAST2 in the NCBI-BLAST2 program alignment, and Y is the total number of amino acid residues in B. It will be appreciated that if the length of amino acid sequence A is not equal to the length of amino acid sequence B, the amino acid sequence identity (A) of A to B is not equal to the amino acid sequence identity (B) of B to A.

또한, 본원에 사용된 동일성 값(%)은 WU-BLAST-2 컴퓨터 프로그램(Altschul et al., Methods in Enzymology 266:460-80 (1996))을 이용하여 얻을 수 있다. WU-BLAST-2 검색 파라미터 대부분은 디폴트값으로 설정했다. 디폴트 값으로 설정하지 않은 것들, 즉 조정가능한 파라미터는 다음 값으로 설정하였다. 오버랩 스팬 = 1, 오버랩 분획 = 0.125, 워드 한계 (T) = 11, 점수 매트릭스 = BLOSUM62. 본 발명의 목적상, 아미노산 서열 동일성 값(%)은 (a) 천연 PRO 폴리펩티드로부터 유도된 서열을 갖는 관심있는 PRO 폴리펩티드의 아미노산 서열과 비교되는 관심있는 아미노산 서열(즉, 관심있는 PRO 폴리펩티드와 비교되는 서열로서 PRO 변이체 폴리펩티드일 수 있음)과의 사이에 매치되는 동일한 아미노산 잔기의 수를 WU-BLAST-2로 결정하여 얻고, (b) 이를 관심있는 PRO 폴리펩티드의 아미노산 총 잔기수로 나누어 측정한다. 예를 들어, 아미노산 서열 B와 80% 이상의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 A를 포함하는 폴리펩티드"라는 말에서, 아미노산 서열 A는 비교하는 관심있는 아미노산 서열이고, 아미노산 서열 B는 관심있는 PRO 폴리펩티드의 아미노산 서열이다.In addition, the percent identity values used herein can be obtained using the WU-BLAST-2 computer program (Altschul et al., Methods in Enzymology 266: 460-80 (1996)). Most of the WU-BLAST-2 search parameters are set to their default values. Those not set to the default values, ie adjustable parameters, were set to the following values. Overlap Span = 1, Overlap Fraction = 0.125, Word Limit (T) = 11, Score Matrix = BLOSUM62. For purposes of the present invention,% amino acid sequence identity values are compared to (a) the amino acid sequence of interest compared to the amino acid sequence of the PRO polypeptide of interest with the sequence derived from the native PRO polypeptide (ie, compared to the PRO polypeptide of interest). The number of identical amino acid residues matched with the sequence, which may be a PRO variant polypeptide), is determined by determining WU-BLAST-2, and (b) divided by the total amino acid residues of the PRO polypeptide of interest. For example, "polypeptide comprising amino acid sequence A having at least 80% amino acid sequence identity with amino acid sequence B", amino acid sequence A is the amino acid sequence of interest to be compared and amino acid sequence B is the amino acid of the PRO polypeptide of interest Sequence.

"PRO201 변이체 폴리펩티드", "PRO292 변이체 폴리펩티드", "PRO327 변이체폴리펩티드", "PRO1265 변이체 폴리펩티드", "PRO344 변이체 폴리펩티드", "PRO343 변이체 폴리펩티드", "PRO347 변이체 폴리펩티드", "PRO357 변이체 폴리펩티드", "PRO715 변이체 폴리펩티드", "PRO1017 변이체 폴리펩티드", "PRO1112 변이체 폴리펩티드", "PRO509 변이체 폴리펩티드", "PRO853 변이체 폴리펩티드" 및 "PRO882 변이체 폴리펩티드", 또는 "PRO201 변이체 핵산 서열","PRO292 변이체 핵산 서열", "PRO327 변이체 핵산 서열", "PRO1265 변이체 핵산 서열", "PRO344 변이체 핵산 서열", "PRO343 변이체 핵산 서열", "PRO347 변이체 핵산 서열", "PRO357 변이체 핵산 서열", "PRO715 변이체 핵산 서열", "PRO1017 변이체 핵산 서열", "PRO1112 변이체 핵산 서열", "PRO509 변이체 핵산 서열", "PRO853 변이체 핵산 서열" 및 "PRO882 변이체 핵산 서열"은, 본원에 개시된 바와 같은 전장 천연 서열 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882 폴리펩티드 서열, 본원에 개시된 바와 같은 신호 펩티드가 결여된 전장 천연 서열 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882 폴리펩티드 서열, 본원에 개시된 바와 같이 신호 펩티드를 포함하거나 포함하지 않는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882 폴리펩티드의 세포외 도메인, 또는 본원에 개시된 바와 같은 전장 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882 폴리펩티드 서열의 임의의 기타 단편을 코딩하는 뉴클레오티드 서열과 80% 이상의 핵산 서열동일성을 갖는, 하기 정의된 바와 같은 활성 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 분자를 의미한다."PRO201 variant polypeptide", "PRO292 variant polypeptide", "PRO327 variant polypeptide", "PRO1265 variant polypeptide", "PRO344 variant polypeptide", "PRO343 variant polypeptide", "PRO347 variant polypeptide", "PRO357 variant polypeptide", "PRO715 Variant polypeptide "," PRO1017 variant polypeptide "," PRO1112 variant polypeptide "," PRO509 variant polypeptide "," PRO853 variant polypeptide "and" PRO882 variant polypeptide ", or" PRO201 variant nucleic acid sequence "," PRO292 variant nucleic acid sequence "," PRO327 variant nucleic acid sequence "," PRO1265 variant nucleic acid sequence "," PRO344 variant nucleic acid sequence "," PRO343 variant nucleic acid sequence "," PRO347 variant nucleic acid sequence "," PRO357 variant nucleic acid sequence "," PRO357 variant nucleic acid sequence "," PRO1017 " Variant nucleic acid sequences "," PRO1112 variant nucleic acid sequences "," PRO509 variant nucleic acid sequences "," PRO853 variant nucleic acid sequences "and" PRO882 variant nucleic acid sequences ", Full length native sequence as disclosed herein PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 and PRO882 polypeptide sequences, full length native lacking signal peptide as disclosed herein SEQ ID NO: PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, and PRO882 polypeptide sequences, PRO201, PRO292, PRO327, with or without signal peptide as disclosed herein Extracellular domains of PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 and PRO882 polypeptides, or the full-length PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, As defined below, having at least 80% nucleic acid sequence identity with the nucleotide sequence encoding the PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, and any other fragment of the PRO882 polypeptide sequence By nucleic acid molecules encoding the same active PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 and PRO882 polypeptides.

통상, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882 변이체 폴리뉴클레오티드는 본원에 개시된 바와 같은 전장 천연 서열 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882 폴리펩티드 서열, 본원에 개시된 바와 같은 신호 펩티드가 결여된 전장 천연 서열 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882 폴리펩티드 서열, 본원에 개시된 바와 같이 신호 펩티드가 포함되거나 포함되지 않은 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882 폴리펩티드의 세포외 도메인, 또는 본원에 개시된 바와 같은 전장 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882 폴리펩티드 서열의 임의의 기타 단편을 코딩하는 핵산 서열과 약 80% 이상의 핵산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 81% 이상의 핵산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 82% 이상의 핵산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 83% 이상의 핵산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 84% 이상의 핵산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 85% 이상의 핵산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 86% 이상의 핵산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약87% 이상의 핵산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 88% 이상의 핵산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 89% 이상의 핵산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 90% 이상의 핵산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 91% 이상의 핵산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 92% 이상의 핵산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 93% 이상의 핵산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 94% 이상의 핵산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 95% 이상의 핵산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 96% 이상의 핵산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 97% 이상의 핵산 서열 동일성, 보다 바람직하게는 약 98% 이상의 핵산 서열 동일성 및 보다 바람직하게는 약 99% 이상의 핵산 서열 동일성을 가질 것이다. 변이체는 천연 뉴클레오티드 서열을 포함하지 않는다.Typically, the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 and PRO882 variant polynucleotides have the full length native sequence PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344 as disclosed herein. , PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, and PRO882 polypeptide sequences, full-length native sequences PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, lacking a signal peptide as disclosed herein PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 and PRO882 polypeptide sequences, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509 with or without signal peptide as disclosed herein , Extracellular domains of PRO853 and PRO882 polypeptides, or full-length PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 and PRO882 poles as disclosed herein At least about 80% nucleic acid sequence identity, more preferably at least about 81% nucleic acid sequence identity, more preferably at least about 82% nucleic acid sequence identity, and more preferably, to a nucleic acid sequence encoding any other fragment of the polypeptide sequence At least about 83% nucleic acid sequence identity, more preferably at least about 84% nucleic acid sequence identity, more preferably at least about 85% nucleic acid sequence identity, more preferably at least about 86% nucleic acid sequence identity, more preferably about 87% At least% nucleic acid sequence identity, more preferably at least about 88% nucleic acid sequence identity, more preferably at least about 89% nucleic acid sequence identity, more preferably at least about 90% nucleic acid sequence identity, more preferably at least about 91% Nucleic acid sequence identity, more preferably at least about 92% nucleic acid sequence identity, more preferably at least about 93% nucleic acid Sequence identity, more preferably at least about 94% nucleic acid sequence identity, more preferably at least about 95% nucleic acid sequence identity, more preferably at least about 96% nucleic acid sequence identity, more preferably at least about 97% nucleic acid sequence identity , More preferably at least about 98% nucleic acid sequence identity and more preferably at least about 99% nucleic acid sequence identity. Variants do not include native nucleotide sequences.

통상, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882 변이체 폴리펩티드는 약 30개 이상의 뉴클레오티드 길이, 통상적으로 약 60개 이상의 뉴클레오티드 길이, 보다 통상적으로 약 90개 이상의 뉴클레오티드 길이, 보다 통상적으로 약 120개 이상의 뉴클레오티드 길이, 보다 통상적으로 약 150개 이상의 뉴클레오티드 길이, 보다 통상적으로 약 180개 이상의 뉴클레오티드 길이, 보다 통상적으로 약 210개 이상의 뉴클레오티드 길이, 보다 통상적으로 약 240개 이상의 뉴클레오티드 길이, 보다 통상적으로 약 270개 이상의 뉴클레오티드 길이, 보다 통상적으로 약 300개 이상의 뉴클레오티드 길이, 보다 통상적으로 약 450개 이상의 뉴클레오티드 길이, 보다 통상적으로 약 600개 이상의 뉴클레오티드 길이, 보다 통상적으로 약 900개 이상의뉴클레오티드 길이, 또는 이를 초과하는 뉴클레오티드 길이로 이루어진다.Typically, the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 and PRO882 variant polypeptides are at least about 30 nucleotides in length, typically at least about 60 nucleotides in length, more commonly At least about 90 nucleotides in length, more typically at least about 120 nucleotides in length, more typically at least about 150 nucleotides in length, more typically at least about 180 nucleotides in length, more typically at least about 210 nucleotides in length, and more typically At least about 240 nucleotides in length, more typically at least about 270 nucleotides in length, more typically at least about 300 nucleotides in length, more typically at least about 450 nucleotides in length, more typically at least about 600 nucleotides in length, and more typically As about At least 900 nucleotides in length, or more than nucleotides in length.

본원에서 확인된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882 폴리펩티드 코딩 핵산 서열에 대한 "핵산 서열 동일성 퍼센트(%)"는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 코딩 핵산 서열과 후보 서열을 정렬하고, 필요한 경우 서열 동일성 퍼센트의 최대치를 얻기 위해 갭을 도입한 후 어떠한 보존적 치환도 서열 동일성의 일부로서 간주하지 않은 상태에서 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 코딩 핵산 서열의 뉴클레오티드와 동일한, 후보 서열의 뉴클레오티드의 비율로서 정의된다. 핵산 서열 동일성을 측정하기 위한 정렬법은 당업계에 공지된 다양한 방법, 예를 들어 BLAST, BLAST-2, ALIGN, ALIGN-2 또는 Megalign (DNASTAR) 소프트웨어와 같은 쉽게 구할 수 있는 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 달성할 수 있다. 당업자는 비교되는 서열들의 전체 길이에 걸쳐 최대로 정렬시키기 위해 필요한 임의의 연산법을 비롯하여 정렬을 측정하기에 적합한 파라미터를 정할 수 있다. 그러나, 본원의 목적상 핵산 서열 동일성 값(%)은 하기에 기재된 바와 같이 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 이용하여 얻을 수 있는데, 상기 ALIGN-2 프로그램에 대한 완전한 원시 코드는 표 1에 기재되어 있다. ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램은 제넨테크, 인크사가 개발하였으며, 표 1에 나타낸 원시 코드는 미국 저작권청 (미국 20559 워싱톤 D.C.에 소재)의 사용자 문서로 보관되어 있는데, 상기 코드는 미국 저작권 등록 제TXU510087호 하에 등록되어 있다. ALIGN-2 프로그램은 제넨테크, 인크사 (캘리포니아주 사우스 샌 프란시스코 소재)를 통해 쉽게 구할 수 있거나, 표 1에 기재된 원시 코드로부터 편집할 수 있다. ALIGN-2 프로그램은 UNIX 운용 체계, 바람직하게는 디지탈 UNIX V4.0D에서 편집하여 이용할 수 있다. 모든 서열 비교 파라미터는 ALIGN-2 프로그램에 의해 설정되며, 다양하지 않다.The “percent nucleic acid sequence identity (%)” for the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 and PRO882 polypeptide coding nucleic acid sequences identified herein is PRO201, PRO292 , Align the PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptide coding nucleic acid sequences with candidate sequences and, if necessary, introduce a gap to obtain a maximum of percent sequence identity. No conservative substitutions identical to the nucleotides of the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide-encoding nucleic acid sequences without regard as part of sequence identity It is defined as the ratio of nucleotides of a candidate sequence. Alignment methods for determining nucleic acid sequence identity can be achieved using various methods known in the art, such as readily available computer software such as BLAST, BLAST-2, ALIGN, ALIGN-2 or Megalign (DNASTAR) software. Can be. One skilled in the art can determine suitable parameters for measuring alignment, including any algorithms needed to maximally align over the entire length of the sequences being compared. However, for purposes herein,% nucleic acid sequence identity values can be obtained using the sequence comparison computer program ALIGN-2 as described below, the complete source code for which the ALIGN-2 program is described in Table 1. . The ALIGN-2 sequence comparison computer program was developed by Genentech, Inc., and the source code shown in Table 1 is kept as a user document of the United States Copyright Office (20559 Washington, DC, USA), which is registered under US Copyright TXU510087. It is registered under the arc. The ALIGN-2 program is readily available through Genentech, Inc. (South San Francisco, Calif.) Or can be edited from the source code listed in Table 1. The ALIGN-2 program is available for editing on UNIX operating systems, preferably digital UNIX V4.0D. All sequence comparison parameters are set by the ALIGN-2 program and do not vary.

본 발명의 목적상, 주어진 핵산 서열 D에, D와, 또는 D에 대한 주어진 핵산 서열 C의 핵산 서열 동일성 (%)(주어진 핵산 서열 D에, D와, 또는 D에 대한 일정한 핵산 서열 동일성 (%)을 갖거나 포함하는 주어진 핵산 서열 C로 달리 표현할 수 있음)은 하기와 같이 계산한다:For the purposes of the present invention, a given nucleic acid sequence identity (%) of a given nucleic acid sequence C to D, or a given nucleic acid sequence D (for a given nucleic acid sequence D, a constant nucleic acid sequence identity (%) to a D or D for a given nucleic acid sequence D Can be expressed differently with a given nucleic acid sequence C with or including

W/Z ×100W / Z × 100

여기서, W는 C와 D의 프로그램 정렬에서 서열 정렬 프로그램 ALIGN-2에 의해 동일하게 매치되는 것으로 기록되는 뉴클레오티드의 수이고, Z는 D에서 뉴클레오티드의 총 수이다. 핵산 서열 C의 길이가 핵산 서열 D의 길이와 같지 않는 경우, D에 대한 C의 핵산 서열 동일성(%)은 C에 대한 D의 핵산 서열 동일성(%)과 같지 않음을 인지해야 할 것이다. 이 방법을 이용한 핵산 서열 동일성 계산의 예로서, 표 2c 내지 2d는 "PRO-DNA"로 지칭되는 핵산 서열에 대한 "비교 DNA"로 지칭되는 핵산 서열의 핵산 서열 동일성(%)을 계산하는 방법을 나타낸다.Where W is the number of nucleotides recorded as equally matched by the sequence alignment program ALIGN-2 in the program alignment of C and D, and Z is the total number of nucleotides in D. It will be appreciated that if the length of nucleic acid sequence C is not equal to the length of nucleic acid sequence D, the nucleic acid sequence identity of C for D is not equal to the nucleic acid sequence identity of D for C. As an example of nucleic acid sequence identity calculations using this method, Tables 2c to 2d describe methods for calculating nucleic acid sequence identity (%) of nucleic acid sequences referred to as "comparative DNA" to nucleic acid sequences referred to as "PRO-DNA." Indicates.

달리 언급하지 않는 한, 본원에 사용된 모든 핵산 서열 동일성 값(%)은 상기 ALIGN-2 서열 비교 컴퓨터 프로그램을 이용하여 얻었다. 그러나, 핵산 서열 동일성(%)은 서열 비교 프로그램 NCBI-BLAST2를 이용하여 계산할 수도 있다 (Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 (1997)). NCBI-BLAST2 서열 비교 프로그램은 웹 사이트 (http://www.ncbi.nlm.nih.gov)로부터 다운로드 받을 수 있다. NCBI-BLAST2는 여러 가지 검색 파라미터를 이용하는데, 이러한 모든 검색 파라미터는 예를 들어, 언마스크 = 예, 가닥 = 모두, 기대 발생 = 10, 최소 저복합성 길이 = 15/5, 다중-통과 e-값 = 0.01, 다중-통과에 대한 상수 = 25, 최종 갭 정렬에 대한 드롭오프 = 25 및 점수 매트릭스 = BLOSUM62를 포함하는 디폴트값으로 설정되어 있다.Unless stated otherwise, all% nucleic acid sequence identity values used herein were obtained using the above ALIGN-2 sequence comparison computer program. However,% nucleic acid sequence identity can also be calculated using the sequence comparison program NCBI-BLAST2 (Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402 (1997)). The NCBI-BLAST2 sequence comparison program can be downloaded from the website (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). NCBI-BLAST2 uses several search parameters, all of which are, for example, unmask = yes, strand = all, expected occurrence = 10, minimum low complexity length = 15/5, multi-pass e-value = 0.01, constant for multi-pass = 25, dropoff for final gap alignment = 25 and score matrix = BLOSUM62.

NCBI-BLAST2가 서열 비교에 사용되는 경우, 주어진 핵산 서열 D에, D와, 또는 D에 대한 주어진 핵산 서열 C의 핵산 서열 동일성(%)(주어진 핵산 서열 D에, D와, 또는 D에 대한 일정한 핵산 서열 동일성(%)을 갖거나 포함하는 주어진 핵산 서열 C로 달리 표현할 수 있음)은 하기와 같이 계산한다:When NCBI-BLAST2 is used for sequence comparison, the nucleic acid sequence identity (%) of a given nucleic acid sequence C to D, or to D (for a given nucleic acid sequence D, to D, or to D, for a given nucleic acid sequence D) Can be expressed differently with a given nucleic acid sequence C having or including nucleic acid sequence identity (%), as follows:

W/Z ×100W / Z × 100

여기서, W는 C 및 D의 프로그램 정렬에서 서열 프로그램 NCBI-BLAST2에 의해 동일하게 매치되는 것으로 기록되는 뉴클레오티드의 수이고, Z는 D에서 뉴클레오티드의 총 수이다. 핵산 서열 C의 길이가 핵산 서열 D의 길이와 같지 않는 경우, D에 대한 C의 핵산 서열 동일성(%)은 C에 대한 D의 핵산 서열 동일성(%)과 같지 않음을 인지해야 할 것이다.Where W is the number of nucleotides recorded as equally matched by the sequence program NCBI-BLAST2 in the program alignment of C and D, and Z is the total number of nucleotides in D. It will be appreciated that if the length of nucleic acid sequence C is not equal to the length of nucleic acid sequence D, the nucleic acid sequence identity of C for D is not equal to the nucleic acid sequence identity of D for C.

또한, 본원에 사용된 동일성 값(%)은 WU-BLAST-2 컴퓨터 프로그램 (Altschul et al., Methods in Enzymology 266:460-480 (1996))을 이용하여 얻을 수 있다.WU-BLAST-2 검색 파라미터 대부분은 디폴트값으로 설정했다. 디폴트값으로 설정되지 않은, 즉 조정가능한 파라미터는 다음 값으로 설정하였다. 오버랩 스팬 = 1, 오버랩 분획 = 0.125, 워드 한계 (T) = 11, 점수 매트릭스 = BLOSUM62. 본 발명의 목적상, 핵산 서열 동일성 값(%)은 (a) 천연 PRO 폴리펩티드로부터 유도된 서열을 갖는 관심있는 PRO 폴리펩티드 코딩 핵산 분자와 비교되는 관심있는 핵산 서열 (즉, 관심있는 PRO 폴리펩티드 코딩 핵산 분자와 비교되는 서열로서 변이체 PRO 폴리뉴클레오티드일 수 있음)과의 사이에 매치되는 동일한 뉴클레오티드의 수를 WU-BLAST-2로 측정하여 얻고, (b) 이를 관심있는 PRO 폴리펩티드 코딩 핵산 분자의 총 뉴클레오티드 수로 나누어 측정한다. 예를 들어, 핵산 서열 B와 80% 이상의 핵산 서열 동일성을 갖는 핵산 서열 A를 포함하는 단리된 핵산 분자"라는 말에서, 핵산 서열 A는 비교하는 관심있는 핵산 분자이고 핵산 서열 B는 관심있는 PRO 폴리펩티드 코딩 핵산 분자의 핵산 서열이다.In addition, the percent identity values used herein can be obtained using the WU-BLAST-2 computer program (Altschul et al., Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)). Most of the parameters are set to their default values. Parameters not set to default values, ie adjustable parameters, were set to the following values. Overlap Span = 1, Overlap Fraction = 0.125, Word Limit (T) = 11, Score Matrix = BLOSUM62. For purposes of the present invention, the percent nucleic acid sequence identity value is (a) a nucleic acid sequence of interest (ie, a PRO polypeptide encoding nucleic acid molecule of interest) compared to a PRO polypeptide coding nucleic acid molecule of interest having a sequence derived from a native PRO polypeptide. Obtained by measuring WU-BLAST-2, and (b) dividing by the total number of nucleotides of the PRO polypeptide encoding nucleic acid molecule of interest Measure For example, isolated nucleic acid molecule comprising nucleic acid sequence A having at least 80% nucleic acid sequence identity with nucleic acid sequence B, wherein nucleic acid sequence A is the nucleic acid molecule of interest to be compared and nucleic acid sequence B is the PRO polypeptide of interest. Nucleic acid sequence of a coding nucleic acid molecule.

다른 실시양태에서, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882 변이체 폴리뉴클레오티드는 바람직하게는 엄격한 혼성화 및 세척 조건하에서 도 2(서열번호 2), 도 4(서열번호 6), 도 6(서열번호 8), 도 8(서열번호 13), 도 10(서열번호 15), 도 12(서열번호 23), 도 14(서열번호 28), 도 16(서열번호 33), 도 18(서열번호 40), 도 20(서열번호 42), 도 22(서열번호 44), 도 24(서열번호 46), 도 26(서열번호 48) 또는 도 28(서열번호 53)에 기재된 전장의 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509,PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 각각 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 혼성화될 수 있는 활성 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 분자이다. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 변이체 폴리펩티드는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 변이체 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 것들일 수 있다.In other embodiments, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 and PRO882 variant polynucleotides are preferably shown in Figure 2 (SEQ ID NO.) Under stringent hybridization and wash conditions: 2), Figure 4 (SEQ ID NO: 6), Figure 6 (SEQ ID NO: 8), Figure 8 (SEQ ID NO: 13), Figure 10 (SEQ ID NO: 15), Figure 12 (SEQ ID NO: 23), Figure 14 (SEQ ID NO: 28) 16 (SEQ ID NO: 33), FIG. 18 (SEQ ID NO: 40), FIG. 20 (SEQ ID NO: 42), FIG. 22 (SEQ ID NO: 44), FIG. 24 (SEQ ID NO: 46), FIG. 26 (SEQ ID NO: 48), or FIG. Activity capable of hybridizing to the nucleotide sequence encoding the full-length PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides described in 28 (SEQ ID NO: 53), respectively. Nucleic acid encoding a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide A. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 variant polypeptides are PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, It may be those encoded by PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 variant polynucleotides.

상기한 바와 같이 수행되는 아미노산 서열 동일성 서열 비교와 관련하여 "양성"이란 용어는 동일하지는 않으나 성질이 유사한, 비교되는 서열의 아미노산 잔기를 포함한다. 관심있는 아미노산 잔기에 대해 양성값을 나타내는 아미노산 잔기는 관심있는 아미노산 잔기와 동일한 것이거나 관심있는 아미노산 잔기의 바람직한 치환 (하기 표 3에 기재되어 있음)이다.The term “positive” with reference to amino acid sequence identity sequence comparisons performed as described above includes amino acid residues of the sequences being compared that are not identical but similar in nature. Amino acid residues that display a positive value for an amino acid residue of interest are the same as the amino acid residue of interest or a preferred substitution of the amino acid residue of interest (as described in Table 3 below).

본 발명의 목적상, 주어진 아미노산 서열 B에, B와, 또는 B에 대한 주어진 아미노산 서열 A의 양성값 (%)(주어진 아미노산 서열 B에, B와, 또는 B에 대한 일정한 양성값 (%)을 갖거나 포함하는 주어진 아미노산 서열 A로 달리 표현할 수 있음)은 하기와 같이 계산한다:For the purposes of the present invention, a given positive value (%) of a given amino acid sequence A for B and B or B for a given amino acid sequence B (a given positive percentage (%) for B and B for a given amino acid sequence B) Can be expressed differently with a given amino acid sequence A having or including);

X/Y ×100X / Y × 100

여기서, X는 A 및 B의 프로그램 정렬에서 서열 정렬 프로그램 ALIGN-2에 의해 상기에서 정의된 양성값을 나타내는 아미노산 잔기의 수이고, Y는 B에서 아미노산 잔기의 총 수이다. 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 같지 않는 경우, B에 대한 A의 양성값 (%)은 A에 대한 B의 양성값 (%)과 같지 않음을 인지해야 할 것이다.Wherein X is the number of amino acid residues exhibiting the positive value defined above by the sequence alignment program ALIGN-2 in the program alignment of A and B, and Y is the total number of amino acid residues in B. If the length of amino acid sequence A is not equal to the length of amino acid sequence B, it will be appreciated that the positive value (%) of A for B is not equal to the positive value (%) of B for A.

본원에 개시된 다양한 폴리펩티드를 기술하기 위해 사용된 "단리된"은 폴리펩티드가 확인되고, 그 자연 환경 성분으로부터 분리 및(또는) 회수되었음을 의미한다. 바람직하게는, 단리된 폴리펩티드는 자연적으로 결합되는 모든 성분과 결합되어 있지 않다. 폴리펩티드의 자연 환경의 오염 성분은 이 폴리펩티드의 진단 또는 치료적 사용을 일반적으로 방해하는 물질로서, 효소, 호르몬 및 다른 단백질성 또는 비단백질성 용질 등이 있을 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 폴리펩티드는 (1) 스피닝컵 서열분석기를 사용하여 N 말단 또는 내부 아미노산 서열의 15개 이상의 잔기를 얻기에 충분한 정도로 정제되거나, 또는 (2) 쿠마시 블루 또는 바람직하게는 은 염색을 사용하여 비환원 또는 환원 조건 하에 SDS-PAGE에서 하나의 밴드만 나타날 정도로 정제될 수 있다. 단리된 폴리펩티드는 1 종 이상의 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 천연 환경 성분이 존재하지 않을 것이기 때문에 단리된 폴리펩티드는 재조합 세포 내의 원래 위치에 존재하는 폴리펩티드를 포함한다. 그러나, 통상 단리된 폴리펩티드는 하나 이상의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.“Isolated,” as used to describe the various polypeptides disclosed herein, means that the polypeptide has been identified, isolated and / or recovered from its natural environmental components. Preferably, the isolated polypeptide is not associated with all components to which it is naturally bound. Contaminant components of the polypeptide's natural environment generally interfere with the diagnostic or therapeutic use of the polypeptide, and may include enzymes, hormones, and other proteinaceous or nonproteinaceous solutes. In a preferred embodiment, the polypeptide is purified to (1) sufficient to obtain at least 15 residues of the N terminal or internal amino acid sequence using a spinning cup sequencer, or (2) Coomassie blue or preferably silver staining. Can be purified to show only one band in SDS-PAGE under non-reducing or reducing conditions. An isolated polypeptide may not be present in one or more of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 natural environmental components. Include polypeptides that are present at the original location. Ordinarily, however, isolated polypeptide will be prepared by one or more purification steps.

PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 "단리된" 핵산 분자 또는 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체를 코딩하는 "단리된" 핵산은 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 코딩 핵산 또는 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 코딩 핵산의 천연 공급원에서 통상적으로 결합되어 있는 1종 이상의 오염 핵산 분자로부터 확인 및 분리된 핵산 분자라는 의미이다. 바람직하게는, 단리된 핵산은 자연적으로 결합되는 모든 성분과 결합되어 있지 않아야 한다. 단리된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 코딩 핵산 분자 또는 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 코딩 핵산 분자는 자연에서 발견되는 형태 또는 상태와 다르게 존재한다. 따라서, 단리된 핵산 분자는 천연 세포에 존재하는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 코딩 핵산 분자 또는 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 코딩 핵산 분자와 구별된다. 그러나, 예를 들어, PRO201, PRO292,PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 또는 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체를 코딩하는 단리된 핵산 분자는 천연 세포와 상이한 염색체 위치에 존재하며 통상적으로 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 또는 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체를 발현하는 세포에 함유된, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 코딩 핵산 분자 또는 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체 코딩 핵산 분자를 포함된다.“Isolated” nucleic acid molecule or anti-PRO201, anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, which encodes a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide "Isolated encoding an anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibody "Nucleic acid is PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 coding nucleic acid or anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti 1 commonly associated with natural sources of -PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 coding nucleic acids. A nucleic acid molecule identified and isolated from at least one contaminating nucleic acid molecule. Preferably, the isolated nucleic acid should not be associated with all components to which it is naturally bound. Isolated PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 coding nucleic acid molecule or anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti -PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853, or anti-PRO882 encoding nucleic acid molecules are characterized by the form or condition found in nature. Exists differently. Thus, an isolated nucleic acid molecule is a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 coding nucleic acid molecule or anti-PRO201, anti-PRO292 present in natural cells. , Anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 coding nucleic acid It is distinguished from molecules. However, for example, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide or anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265 Isolated nucleic acid molecules encoding the anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibodies It exists at a different chromosome location from the cell and is typically PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide or anti-PRO201, anti-PRO2012, anti-PRO327 To cells expressing anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibodies PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide-encoding nucleic acid molecule or anti -PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 Or anti-PRO882 antibody coding nucleic acid molecules.

"조절 서열"이란 용어는 특정 숙주 유기체에서 작동가능하게 연결된 코딩 서열의 발현에 필요한 DNA 서열을 지칭한다. 원핵생물에 적합한 조절 서열로는 예컨데 프로모터, 경우에 따라 오퍼레이터 서열, 및 리보솜 결합 부위를 들 수 있다. 진핵세포는 프로모터, 폴리아데닐화 신호 및 인핸서를 이용하는 것으로 알려져 있다.The term "regulatory sequence" refers to a DNA sequence necessary for the expression of a coding sequence operably linked in a particular host organism. Suitable control sequences for prokaryotes include, for example, promoters, optionally operator sequences, and ribosomal binding sites. Eukaryotic cells are known to utilize promoters, polyadenylation signals, and enhancers.

핵산은 다른 핵산 서열과 기능적 관계로 배치될 때 "작동가능하게 연결"된다. 예를 들어, 프리서열 또는 분비 리더 (leader)의 DNA는 해당 폴리펩티드의 분비에 관혀하는 프리단백질로서 발현되는 경우 그 폴리펩티드의 DNA에 작동가능하게 연결되고, 프로모터 또는 인핸서는 폴리펩티드 서열의 전사에 영향을 끼치는 경우 코딩 서열에 작동가능하게 연결되며, 리보솜 결합 부위는 번역을 촉진하도록 배치되는 경우 코딩 서열에 작동가능하게 연결된다. 일반적으로 "작동가능하게 연결된"다는 것은 연결될 DNA 서열들이 인접하여 위치함을 의미하며, 분비 리더의 경우 인접하여 위치할 뿐만 아니라 동일한 리딩 프레임 내에 존재하는 것을 의미한다. 그러나 인핸서는 반드시 인접하여 위치할 필요가 없다. 연결은 편리한 제한 효소 부위에서 라이게이션에 의해 달성된다. 이러한 부위가 존재하지 않는 경우, 합성 올리고뉴클레오티드 어댑터 또는 링커를 종래의 방법에 따라 사용한다.Nucleic acids are “operably linked” when placed in a functional relationship with other nucleic acid sequences. For example, the DNA of a presequence or secretion leader is operably linked to the DNA of that polypeptide when expressed as a preprotein that is responsible for secretion of that polypeptide, and the promoter or enhancer affects transcription of the polypeptide sequence. When interposed, the ribosome binding site is operably linked to the coding sequence when positioned to facilitate translation. In general, "operably linked" means that the DNA sequences to be linked are located contiguously, and in the case of a secretory leader, not only are located contiguous, but also exist within the same reading frame. However, enhancers do not necessarily have to be contiguous. Linking is accomplished by ligation at convenient restriction enzyme sites. If such sites do not exist, the synthetic oligonucleotide adapters or linkers are used according to conventional methods.

"항체"라는 용어는 가장 넓은 의미로 사용되며, 구체적으로는 하나의 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 모노클로날 항체 (길항제 및 중화 항체 포함), 폴리에피토프 특이성이 있는 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체 조성물, 단일쇄 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체 및 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체의 단편 (하기 참조) 등을 통칭한다. 본원에서 사용된 "모노클로날 항체"라는 용어는 실질적으로 동종 항체들의 집단으로부터 얻은 항체, 즉, 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연발생적 돌연변이를 제외한, 한 집단을 이루는 동일한 개별 항체를 의미한다.The term "antibody" is used in its broadest sense, specifically one anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, Anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 monoclonal antibodies (including antagonists and neutralizing antibodies), anti-PRO201, anti-PRO292, anti- with polyepitope specificity PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibody composition, single chain Anti-PRO201, Anti-PRO292, Anti-PRO327, Anti-PRO1265, Anti-PRO344, Anti-PRO343, Anti-PRO347, Anti-PRO357, Anti-PRO715, Anti-PRO1017, Anti-PRO1112, Anti-PRO509, Anti- PRO853 or anti-PRO882 antibody and anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112 , Fragments of anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibodies (see below) and the like. As used herein, the term “monoclonal antibody” means substantially the same individual antibodies that make up a population except for antibodies obtained from a population of homologous antibodies, ie, possible naturally occurring mutations that may be present in small amounts.

혼성화 반응의 "엄격도"는 당업자가 용이하게 결정할 수 있으며, 일반적으로 프로브 길이, 세척 온도 및 염 농도에 따라 달라지는 실험적 계산값이다. 일반적으로 보다 긴 프로브일수록 적합한 어닐링에 보다 높은 온도를 필요로 하며, 보다 짧은 프로브일수록 보다 낮은 온도를 필요로 한다. 혼성화는 일반적으로 상보적 가닥이 용융 온도보다 낮은 환경에 존재할 때 재어닐링되는 변성된 DNA의 능력에 따라 달라진다. 프로브와 혼성화가능한 서열 사이의 목적하는 상동성의 정도가 높을수록, 사용할 수 있는 상대적인 온도가 높아진다. 따라서, 상대적 온도보다 높아질수록 반응 조건은 더욱 엄격해지는 반면, 상대적 온도가 낮을수록 반응조건은 덜 엄격해진다. 혼성화 반응의 엄격도와 관련한 더 자세한 정보 및 설명은 문헌 (Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience Publishers (1995))을 참조한다.The "stringency" of the hybridization reaction can be readily determined by one skilled in the art and is an experimental calculation that generally depends on probe length, wash temperature and salt concentration. In general, longer probes require higher temperatures for proper annealing, while shorter probes require lower temperatures. Hybridization generally depends on the ability of denatured DNA to reanneal when complementary strands are present in an environment below the melting temperature. The higher the degree of desired homology between the probe and the hybridizable sequence, the higher the relative temperature that can be used. Therefore, the higher the relative temperature, the more stringent the reaction conditions, while the lower the relative temperature, the less stringent the reaction conditions. For further information and explanation regarding the stringency of the hybridization reaction, see Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience Publishers (1995).

본원에서 정의된 "엄격 조건" 또는 "고도의 엄격 조건"이란 (1) 세척시 이온 강도가 낮고 온도가 높은 조건, 예를 들어 50℃에서 0.015M 염화나트륨/0.0015M 시트르산 나트륨/0.1% 소듐 도데실 술페이트를 사용하는 조건, (2) 혼성화시에 포름아미드, 예를 들어 42℃, 750mM 염화나트륨, 75mM 시트르산 나트륨이 함유된 50mM 인산나트륨 완충액 (pH 6.5)/0.1% 소혈청 알부민/0.1% 피콜/0.1% 폴리비닐피롤리돈으로 제조한 50%(부피/부피) 포름아미드와 같은 변성제를 사용하는 조건, 또는 (3) 50% 포름아미드, 5x SSC (0.75M NaCl, 0.075M 시트르산나트륨), 50mM 인산나트륨 (pH 6.8), 0.1% 피로인산 나트륨, 5x 덴하르트(Denhardt) 용액, 초음파처리된 연어 정자 DNA (50㎍/ml), 0.1% SDS, 및 10% 덱스트란 술페이트를 42℃에서 사용하고, 42℃에서 0.2x SSC (염화나트륨/시트르산나트륨), 그리고 55℃에서 50% 포름아미드로 세척하며, 55℃에서 EDTA가 함유된 0.1x SSC를 이용한 고도로 엄격한 세척을 수행하는 것이다.As defined herein, "strict conditions" or "high stringency conditions" means (1) 0.015 M sodium chloride / 0.0015 M sodium citrate / 0.1% sodium dodecyl at low ionic strength and high temperature, e.g., at washing. Conditions using sulphate, (2) 50 mM sodium phosphate buffer (pH 6.5) /0.1% bovine albumin / 0.1% picol / with formamide, e.g. 42 ° C., 750 mM sodium chloride, 75 mM sodium citrate, upon hybridization Conditions using a modifier such as 50% (volume / volume) formamide made from 0.1% polyvinylpyrrolidone, or (3) 50% formamide, 5x SSC (0.75M NaCl, 0.075M sodium citrate), 50mM Sodium phosphate (pH 6.8), 0.1% sodium pyrophosphate, 5x Denhardt solution, sonicated salmon sperm DNA (50 μg / ml), 0.1% SDS, and 10% dextran sulfate were used at 42 ° C. 0.2 × SSC (sodium chloride / sodium citrate) at 42 ° C., and 50% forma at 55 ° C. Wash with mid and perform a highly stringent wash with 0.1x SSC with EDTA at 55 ° C.

"적당한 엄격 조건"이란 문헌(Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press 1989)에 기재된 바와 같고, 상기한 것보다 엄격성이 낮은 혼성화 조건 (예를 들어 온도, 이온 강도 및 SDS %)의 이용을 말한다. 적당한 엄격 조건의 예는 20% 포름아미드, 5x SSC (150mM 염화나트륨, 15mM 시트르산삼나트륨), 50mM 인산나트륨 (pH 7.6), 5x 덴하르트 용액, 10% 덱스트란 술페이트 및 20mg/ml의 잘린 연어 정자 변성 DNA를 포함하는 용액 중에서 37℃로 밤새 인큐베이션한 후 필터를 약 37 내지 50℃에서 1x SSC로 세척하는 조건이다. 당업자는 프로브 길이 등과 같은 인자에 맞추기 위해 필요한 온도, 이온 강도 등을 조절하는 방법을 잘 알 것이다."Moderate stringency conditions" are those described in Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press 1989, and are less stringent than hybridization conditions (e.g., temperature, Ionic strength and SDS%). Examples of suitable stringent conditions include 20% formamide, 5x SSC (150mM sodium chloride, 15mM trisodium citrate), 50mM sodium phosphate (pH 7.6), 5x Denhardt's solution, 10% dextran sulfate and 20mg / ml truncated salmon sperm After incubating at 37 ° C. overnight in a solution containing denatured DNA, the filter is washed with 1 × SSC at about 37-50 ° C. Those skilled in the art will know how to adjust the temperature, ionic strength, and the like necessary to match factors such as probe length and the like.

본원에 사용된 "에피토프 태그가 부착된"이란 "태그 폴리펩티드"에 융합된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 포함하는 키메라 폴리펩티드를 지칭한다. 태그 폴리펩티드는 항체가 만들어질 수 있을 정도의 에피토프를 제공하기에 충분한 잔기를 갖지만 융합되는 폴리펩티드의 활성을 방해하지 않을 정도로 충분히 짧다. 태그 폴리펩티드는 매우 독특해서 자신에 대한 항체가 다른 에피토프와는 실질적으로 교차반응하지 않는 것이 바람직하다. 적합한 태그 폴리펩티드는 일반적으로 6개 이상의 아미노산 잔기를 가지며, 통상 약 8 내지 50개의 아미노산 잔기를 갖는다(약 10 내지 20개의 잔기가 바람직함).As used herein, “epitope tagged” includes PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptides fused to a “tag polypeptide”. Refers to a chimeric polypeptide. The tag polypeptide has enough residues to provide an epitope enough for the antibody to be made but short enough to not interfere with the activity of the fused polypeptide. It is desirable for the tag polypeptide to be so unique that the antibody against itself does not substantially cross react with other epitopes. Suitable tag polypeptides generally have 6 or more amino acid residues and usually have about 8-50 amino acid residues (preferably about 10-20 residues).

본원에서 사용된 "활성의" 또는 "활성"은 천연 또는 자연 발생 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 생물학적 및(또는) 면역적 활성을 보유하는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 형태(들)을 말하는데, 여기서 "생물학적" 활성이란 천연 또는 자연 발생 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 있는 항원성 에피토프에 대한 항체 생성을 유도하는 능력이라기 보다는 천연 또는 자연 발생 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 의한 생물학적 기능 (억제 또는 촉진 능력)을 말하며, "면역학적" 활성이란 천연 또는 자연 발생 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 있는 항원성 에피토프에 대한 항체 생성을 유도하는 능력을 말한다.As used herein, "active" or "active" refers to the biological and / or nature of a naturally occurring or naturally occurring PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides. ) PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptides possessing immunological activity, wherein "biological" activity refers to natural Or naturally or naturally occurring rather than the ability to induce antibody production against antigenic epitopes in the naturally occurring PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides Refers to a biological function (capability of inhibiting or promoting) by a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide, and "immunological" Activity refers to the ability to induce antibody production against antigenic epitopes in naturally or naturally occurring PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides.

본원에 개시된 스크리닝 분석에 의해 확인될 수 있는 항체 또는 다른 길항제(예를 들어, 유기 또는 무기 소분자, 펩티드 등)와 관련된 "생물학적 활성"은 상기 분자가 본원에서 확인된 증폭된 유전자에 의해 코딩되는 폴리펩티드와 결합하거나 결합체를 이루는 능력을 말하는데 이용하거나, 다르게는 코딩된 폴리펩티드와 다른 세포 단백질과의 상호작용을 방해하거나 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 전사 또는 번역을 방해하는 능력을 말한다. 바람직한 생물학적 활성은 표적 종양 세포의 생장을 억제하는 것이다. 생물학적 활성으로서 다른 바람직한 것은 표적 종양 세포의 사멸을 일으키는 세포독성 활성이다.A “biological activity” associated with an antibody or other antagonist (eg, organic or inorganic small molecule, peptide, etc.) that can be identified by the screening assays disclosed herein is a polypeptide in which the molecule is encoded by an amplified gene identified herein. Used to refer to the ability to bind to or form a conjugate, or otherwise interfere with the interaction of the encoded polypeptide with other cellular proteins, or PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, Refers to the ability to interfere with the transcription or translation of a PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. Preferred biological activity is to inhibit the growth of target tumor cells. Another preferred biological activity is cytotoxic activity that causes the death of target tumor cells.

본원에서 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드와 관련하여 "생물학적 활성"이란 용어는 신생물 세포 생장 또는 비조절된 세포 생장을 유도하는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 능력을 의미한다.As used herein, the term "biologically active" in connection with a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide refers to neoplastic cell growth or unregulated cell growth. Refers to the ability of a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide to induce.

"면역적 활성"이란 어구는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 하나 이상의 에피토프와의 면역학적 교차 반응성을 의미한다.The phrase "immune activity" refers to immunological cross-reactivity with one or more epitopes of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides.

본원에서 "면역학적 교차 반응성"은 후보 폴리펩티드가 공지된 활성 PRO201,PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 대해 생성된 모노클로날 항혈청에 대한 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 정성적인 생물학적 활성을 경쟁적으로 억제할 수 있음을 의미한다. 그러한 항혈청은 염소 또는 토끼에, 예를 들어 완전 프로인트 보조제 중의 공지된 활성 유사체로 피하 주사한 후 불완전 프로인트 보조제 중의 것을 복강내 또는 피하 주사하여 면역화시키는 통상적인 방식으로 제조할 수 있다. 면역적 교차 반응성은 특이적인것이 바람직한데, 이는 확인된 면역적 교차 반응성 분자 (예를 들어, 항체)의 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 대한 결합 친화성이 다른 어떠한 공지된 천연 폴리펩티드의 결합 친화성 보다도 훨씬 (바람직하게는 약 2 배 이상, 더 바람직하게는 약 4 배 이상, 훨씬 더 바람직하게는 약 8배 이상, 가장 바람직하게는 약 10배 이상) 크다는 것을 의미한다.“Immunocrosslinking reactivity” herein refers to monoclonals in which candidate polypeptides are generated for known active PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides. It means competitively inhibiting the qualitative biological activity of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides against antiserum. Such antiserum may be prepared in a conventional manner by immunization with goats or rabbits, for example, by subcutaneous injection with known active analogues in a complete Freund's adjuvant followed by intraperitoneal or subcutaneous injection with an incomplete Freund's adjuvant. Immune cross-reactivity is preferred to be specific, which is PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509 of the identified immunocross-reactive molecules (e.g., antibodies). , Preferably at least about 2 times, more preferably at least about 4 times, and even more preferably at least about 8 times the binding affinity of any other known natural polypeptide, to a PRO853 or PRO882 polypeptide. Most preferably about 10 times or more).

"길항제"라는 용어는 가장 넓은 의미로 사용되며, 본원에 개시된 천연 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 생물학적 활성, 또는 그의 전사 또는 번역을 부분적으로 또는 완전히 차단, 억제 또는 중화시키는 모든 분자를 통칭한다. 적합한 길항제 분자로는 구체적으로 길항제 항체 또는 항체의 단편, 펩티드, 작은 유기 분자, 안티센스 핵산 등이 포함된다. 후보 길항제를 확인하는 방법은 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 후보 길항제 분자와 접촉시키고, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드와 정상적으로 관련된 하나 이상의 생물학적 활성에서의 검출가능한 변화를 측정하는 방법을 포함한다.The term “antagonist” is used in its broadest sense and refers to the biological activity of the native PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides disclosed herein, or Collectively all molecules that partially, completely block, inhibit or neutralize their transcription or translation. Suitable antagonist molecules specifically include antagonist antibodies or fragments of antibodies, peptides, small organic molecules, antisense nucleic acids, and the like. Methods for identifying candidate antagonists include contacting a candidate antagonist molecule with PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptide, and PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265 And measuring detectable changes in one or more biological activities normally associated with a PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide.

"소분자 (작은 분자)"는 본원에서 분자량이 약 500 달톤 미만인 것으로 정의된다."Small molecule (small molecule)" is defined herein as having a molecular weight of less than about 500 Daltons.

"항체(Ab)" 및 "면역글로불린(Ig)"은 동일한 구조 특성을 갖는 당단백질이다. 항체는 특이 항원에 특이적으로 결합하는 반면, 면역글로불린은 항체 및 항원 특이성이 없는 다른 항체 유사 분자 둘 다를 포함한다. 면역글로불린 등의 폴리펩티드는 예를 들어, 림프계에 의해 낮은 농도로 생성되며 골수종에 의해 농도가 증가한다. "항체"라는 용어는 넓은 의미로, 구체적으로는 온전한 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 2개 이상의 온전한 항체에 의해 형성되는 다중특이성 항체(예를 들어, 이중특이성 항체) 및 목적하는 생물학적 활성을 가진다면 항체 단편까지 통칭하지만, 이에 제한되지는 않는다."Antibodies (Ab)" and "immunoglobulins (Ig)" are glycoproteins with the same structural properties. Antibodies specifically bind to specific antigens, while immunoglobulins include both antibodies and other antibody like molecules without antigen specificity. Polypeptides such as immunoglobulins are produced at low concentrations by, for example, the lymphatic system and are increased by myeloma. The term "antibody" is used in a broad sense, specifically, intact monoclonal antibodies, polyclonal antibodies, multispecific antibodies (eg, bispecific antibodies) formed by two or more intact antibodies and the desired biological activity. The antibody fragment may be collectively referred to as, but not limited thereto.

"천연 항체" 및 "천연 면역글로불린"은 일반적으로 2개의 동일한 경쇄(L) 및 2개의 동일한 중쇄(H)로 구성되는 약 150,000 달톤의 헤테로테트라머의 당단백질이다. 각각의 경쇄는 하나의 디술피드 공유결합에 의해 중쇄에 연결되고, 디술피드 결합의 개수는 상이한 면역글로불린 이소형의 중쇄 사이에서 변한다. 또한, 각각의 중쇄 및 경쇄는 규칙적 간격으로 쇄 내부의 디술피드 결합을 갖는다. 각각의 중쇄는 한 말단에 가변 도메인(VH) 및 이 도메인에 후속하는 많은 불변 도메인을 갖는다. 각각의 경쇄는 한 말단에 가변 도메인(VL) 및 다른 말단에 불변 도메인을 갖고, 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인과 나란히 배열되고, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 나란히 배열된다. 특정 아미노산 잔기들이 경쇄 와 중쇄 가변 도메인 사이의 경계면을 형성하는 것으로 생각된다."Natural antibodies" and "natural immunoglobulins" are generally glycoproteins of about 150,000 daltons of heterotetramers consisting of two identical light chains (L) and two identical heavy chains (H). Each light chain is linked to the heavy chain by one disulfide covalent bond, and the number of disulfide bonds varies between the heavy chains of different immunoglobulin isotypes. In addition, each heavy and light chain has disulfide bonds within the chain at regular intervals. Each heavy chain has at one end a variable domain (V H ) and a number of constant domains following this domain. Each light chain has a variable domain (V L ) at one end and a constant domain at the other end, the constant domain of the light chain is arranged side by side with the first constant domain of the heavy chain, and the light chain variable domain is arranged side by side with the variable domain of the heavy chain. . Particular amino acid residues are believed to form an interface between the light and heavy chain variable domains.

"가변"이란 용어는 항체들 간에 가변 도메인의 특정 영역의 서열이 크게 상이하고 그 특정 항원에 대한 각각의 특정 항체의 결합 및 특이성에 사용된다는 사실을 말한다. 그러나, 가변성은 항체의 가변 도메인 전체에 걸쳐 균일하게 분포되지 않는다. 가변성은 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 모두의 상보성 결정 영역 (CDR) 또는 고도 가변 영역으로 불리는 3개의 세그먼트에 집중된다. 가변 도메인에서 보존도가 보다 높은 부분은 프레임워크 영역(FR)이라 불린다. 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 루프 연결을 형성하며 어떤 경우에는 β-시트 구조의 일부를 이루는 3개의 CDR에 의해 연결되는, 주로 β-시트의 입체형태인 프레임워크 영역 4개를 포함한다. 각 쇄 내의 CDR은 FR 영역에 의해 서로 매우 근접하게 유지되고, 다른 쇄의 CDR과 함께 항체의 항원 결합 부위의 형성에 기여한다 (Kabat et al., NIH Publ. No. 91-3242, Vol. I, pages 647-669 (1991) 참조). 불변 도메인은 항체의 항원 결합시에 직접 관여하지 않지만, 항체 의존적 세포의 세포독성에서 항체의 관여와 같은 다양한 작용기 기능을 보인다.The term "variable" refers to the fact that the sequences of specific regions of the variable domains differ greatly between antibodies and are used for the binding and specificity of each particular antibody to that particular antigen. However, the variability is not evenly distributed throughout the variable domains of antibodies. Variability is concentrated in three segments called complementarity determining regions (CDRs) or highly variable regions of both light and heavy chain variable domains. The higher conserved portion of the variable domain is called the framework region (FR). The variable domains of natural heavy and light chains comprise four framework regions, mainly conformation of β-sheets, which form loop linkages and in some cases are linked by three CDRs that form part of the β-sheet structure. The CDRs in each chain are kept in close proximity to each other by the FR region and contribute to the formation of the antigen binding site of the antibody with the CDRs of the other chain (Kabat et al., NIH Publ. No. 91-3242, Vol. I). , pages 647-669 (1991). The constant domains are not directly involved in antigen binding of the antibody, but exhibit various functional groups such as the involvement of the antibody in the cytotoxicity of antibody dependent cells.

본원에 사용된 "고도 가변 영역"이란 항원 결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 말한다. 고도 가변 영역은 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"(경쇄 가변 도메인의 잔기 24 내지 34(L1), 50 내지 56(L2) 및 89 내지 97(L3) 및 중쇄 가변 도메인의 잔기 31 내지 35(H1), 50 내지 65(H2) 및 95 내지 102(H3); Kabar et al., Sequences of Proteins of Immunological Interests, 5th Ed. Public Health Services, National Institute of Health, Bethesda, MD. [1990])로부터의 아미노산 잔기 및(또는) "고도 가변 루프"(경쇄 가변 도메인의 잔기 26 내지 32(L1), 50 내지 52(L2) 및 91 내지 96(L3) 및 중쇄 가변 영역에서의 잔기 26 내지 32(H1), 53 내지 55(H2) 및 96 내지 101(H3); Clothia and Lesk, J. Mol. Biol., 196:901-917[1987])로부터의 아미노산 잔기를 포함한다. "프레임워크" 또는 "FR" 잔기는 상기의 정의된 고도 가변 영역 잔기라기보다는 가변 도메인의 잔기이다.As used herein, "highly variable region" refers to the amino acid residue of an antibody that is responsible for antigen binding. The highly variable regions are referred to as "complementarity determining regions" or "CDRs" (residues 24-34 (L1), 50-56 (L2) and 89-97 (L3) and residues 31-35 (H1) of the heavy chain variable domain ), 50-65 (H2) and 95-102 (H3); Kabar et al., Sequences of Proteins of Immunological Interests, 5th Ed.Public Health Services, National Institute of Health, Bethesda, MD. [1990] Amino acid residues and / or “highly variable loops” (residues 26 to 32 (L1), 50 to 52 (L2) and 91 to 96 (L3) and residues 26 to 32 (H1) in the heavy chain variable region of the light chain variable domain , 53-55 (H2) and 96-101 (H3); amino acid residues from Clothia and Lesk, J. Mol. Biol., 196: 901-917 [1987]. "Framework" or "FR" residues are residues of the variable domain rather than the highly variable region residues defined above.

"항체 단편"은 온전한 항체의 일부, 바람직하게는 온전한 항체의 항원 결합 영역 또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')2및 Fv 단편; 디아바디(diabody); 선형 항체 (Zapata et al., Protein Eng. 8(10):1057-1062 (1995); 단일쇄 항체 분자; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이성 항체 등이 포함된다.An “antibody fragment” comprises a portion of an intact antibody, preferably the antigen binding region or variable region of the intact antibody. Examples of antibody fragments include Fab, Fab ', F (ab') 2 and Fv fragments; Diabody; Linear antibodies (Zapata et al., Protein Eng. 8 (10): 1057-1062 (1995); single-chain antibody molecules; multispecific antibodies formed from antibody fragments, and the like).

항체를 파파인(papain)으로 분해하면 2개의 동일한 항원 결합 단편, 즉 단일 항원 결합 부위가 있는 각 "Fab" 단편, 및 쉽게 결정화되는 능력을 반영하여 이름 붙여진 나머지 "Fc" 단편이 생성된다. 펩신을 처리하면, 2개의 항원 결합 부위가있으며 여전히 항원에 교차결합할 수 있는 F(ab')2단편이 생성된다.Digestion of the antibody with papain results in two identical antigen binding fragments, each "Fab" fragment with a single antigen binding site, and the remaining "Fc" fragment, which reflects its ability to readily crystallize. Treatment of pepsin results in an F (ab ') 2 fragment that has two antigen binding sites and still can cross-link antigen.

"Fv"는 완전한 항원 인식 및 항원 결합 부위를 포함하는 최소 항체 단편이다. 이 영역은 단단하게 비공유결합된 하나의 중쇄 가변 도메인과 하나의 경쇄 가변 도메인으로 이루어진 이량체로 구성된다. 이 구조에서는 각 가변 도메인의 CDR 3개가 상호작용하여 VH-VL이량체의 표면에 항원 결합 부위를 형성한다. 결론적으로 보면, 6개의 CDR이 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다. 그러나, 단일 가변 도메인 (또는 항원에 특이적인 단지 3개의 CDR만을 포함하는 Fv의 절반) 조차도 전체 결합 부위보다 친화성은 낮지만 항원을 인식하여 항원에 결합하는 능력을 갖는다."Fv" is the minimum antibody fragment that contains a complete antigen recognition and antigen binding site. This region consists of a dimer consisting of one heavy chain variable domain and one light chain variable domain that are tightly covalently bonded. In this structure, three CDRs of each variable domain interact to form an antigen binding site on the surface of the V H -V L dimer. In conclusion, six CDRs confer antigen binding specificity to the antibody. However, even a single variable domain (or half of the Fv containing only three CDRs specific for the antigen) has affinity than the entire binding site but has the ability to recognize and bind the antigen.

또한, Fab 단편은 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)을 함유한다. Fab 단편은 항체 힌지(hinge) 영역으로부터 유래한 하나 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인의 카르복시 말단에 몇 개의 잔기가 첨가되었다는 점에서 Fab' 단편과 상이하다. 본원에서 Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)이 유리 티올기를 보유하는 Fab'을 지칭한다. F(ab')2항체 단편은 본래 그들 사이에 힌지 시스테인이 있는 Fab' 단편의 쌍으로 생성되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링도 공지되어 있다.The Fab fragment also contains the constant domain of the light chain and the first constant domain of the heavy chain (CH1). Fab fragments differ from Fab 'fragments in that several residues have been added to the carboxy terminus of the heavy chain CH1 domain comprising one or more cysteines derived from the antibody hinge region. Fab'-SH herein refers to Fab 'in which the cysteine residue (s) of the constant domains bear a free thiol group. F (ab ') 2 antibody fragments originally were produced as pairs of Fab' fragments with hinge cysteines between them. Other chemical couplings of antibody fragments are also known.

임의의 척추동물종으로부터 유래한 항체(면역글로불린)의 "경쇄"는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열을 기초로 하여 카파(κ) 및 람다(λ)로 불리는 2개의 명백하게 상이한 유형 중의 하나로 분류될 수 있다.The "light chain" of an antibody (immunoglobulin) derived from any vertebrate species can be classified into one of two distinctly different types called kappa (κ) and lambda (λ) based on the amino acid sequences of its constant domains. .

면역글로불린은 중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라 상이한 클래스로 분류될 수 있다. 면역글로불린에는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM의 5개 주요 클래스가 있고, 이들 중 몇 개는 서브클래스(이소형), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA 및 IgA2로 더 분류될 수 있다. 상이한 클래스의 면역글로불린에 상응하는 중새 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ라 불리운다. 상이한 클래스의 면역글로불린에 대한 서브유닛 구조와 3차원 구조는 잘 공지되어 있다.Immunoglobulins can be classified into different classes depending on the amino acid sequence of the constant domain of the heavy chain. There are five main classes of immunoglobulins: IgA, IgD, IgE, IgG and IgM, some of which may be further classified into subclasses (isotypes), for example IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA and IgA2. Can be. Pneumococcal constant domains corresponding to different classes of immunoglobulins are called α, δ, ε, γ, and μ, respectively. Subunit structures and three-dimensional structures for different classes of immunoglobulins are well known.

본원에서 사용된 "모노클로날 항체"라는 용어는 실질적으로 동종 항체들의 집단으로부터 얻은 항체, 즉, 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연발생적 돌연변이를 제외한, 한 집단을 이루는 동일한 개별 항체를 의미한다. 모노클로날 항체는 단일 항원 부위에 대해 유도된 매우 특이적인 항체이다. 또한, 전형적으로 상이한 결정군(에피토프)에 대한 상이한 항체를 포함하는 통상의 (폴리클로날) 항체 제제와 달리, 각 모노클로날 항체는 항원상의 단일 결정군에 대한 것이다. 모노클로날 항체는 그 특이성 이외에 다른 면역글로불린에 의해 오염되지 않은 하이브리도마 배양액으로 합성할 수 있다는 장점이 있다. 수식어 "모노클로날"은 실질적으로 동종인 항체 집단으로부터 얻었다는 항체 특성을 가리키는 것이며, 임의의 특별한 방법으로 항체를 제조하는데 요구되는 것으로 여겨지지 않는다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용될 모노클로날 항체는 먼저 문헌(Kohler et al., Nature, 256:495[1975])에 기재된 하이브리도마 방법으로 제조할 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법(예를 들어, 미국 특허 제4,816,576호 참조)으로 제조할 수 있다. "모노클로날 항체"는 또한 예를 들어, 문헌(Clackson et al., Nature, 352:624-628[1991]및 Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597(1991))에 기재된 기술을 이용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리할 수 있다.As used herein, the term “monoclonal antibody” means substantially the same individual antibodies that make up a population except for antibodies obtained from a population of homologous antibodies, ie, possible naturally occurring mutations that may be present in small amounts. Monoclonal antibodies are highly specific antibodies directed against a single antigenic site. In addition, unlike conventional (polyclonal) antibody preparations that typically include different antibodies against different determinants (epitopes), each monoclonal antibody is directed against a single determinant on an antigen. In addition to its specificity, monoclonal antibodies have the advantage that they can be synthesized in hybridoma cultures that are not contaminated with other immunoglobulins. The modifier “monoclonal” refers to antibody properties obtained from a substantially homogeneous antibody population and is not considered to be required for the production of antibodies in any particular manner. For example, monoclonal antibodies to be used in accordance with the present invention may first be prepared by the hybridoma method described in Kohler et al., Nature, 256: 495 [1975], or recombinant DNA methods (eg For example, US Pat. No. 4,816,576. "Monoclonal antibodies" are also described, eg, in Clackson et al., Nature, 352: 624-628 [1991] and Marks et al., J. Mol. Biol., 222: 581-597 (1991). Can be isolated from phage antibody libraries using the techniques described in.

본원에서의 모노클로날 항체는 구체적으로, 목적하는 활성을 발휘한다면 중쇄 및(또는) 경쇄의 일부분이 특정 종으로부터 유래된 항체 또는 특정 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성이 있지만, 쇄(들)의 나머지는 다른 종으로부터 유래된 항체 또는 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체 또는 그러한 항체의 단편과 동일하거나 상동성이 있는 "키메라" 항체(면역글로불린)를 포함한다(미국 특허 제4,816,567호; Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855[1984]).Monoclonal antibodies herein are specifically identical to or different from the corresponding sequences of antibodies from a particular species or antibodies belonging to a particular antibody class or subclass, provided that a portion of the heavy and / or light chains exhibits the desired activity. Although homologous, the rest of the chain (s) includes "chimeric" antibodies (immunoglobulins) that are identical or homologous to antibodies from other species or antibodies belonging to different antibody classes or subclasses or fragments of such antibodies. (US Pat. No. 4,816,567; Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855 [1984]).

비-인간(예를 들어, 쥐과 동물) 항체의 "인간화" 형태는 비-인간 면역글로불린으로부터 유도된 최소 서열을 포함하는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 쇄 또는 그의 단편 (예를 들어, Fv, Fab, Fab', F(ab')2또는 항체의 다른 항원 결합 서열)이다. 대부분의 경우 인간화 항체는 수용자의 상보성 결정 영역 (CDR)의 잔기를 원하는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 생쥐, 쥐 또는 토끼와 같은 인간 이외의 종 (공여자 항체)의 CDR로부터의 잔기로 치환시킨 인간 면역글로불린 (수용자 항체)을 포함한다. 몇몇 경우에, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 잔기는 상응하는 비-인간 잔기에 의해 치환된다. 또한, 인간화 항체는 수용 항체에서도 또는 도입되는 CDR 또는 프레임워크 서열에서도 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 하나 이상, 일반적으로 둘 이상의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역은 비-인간 면역글로불린의 영역에 대응하며, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 면역글로불린 서열의 영역에 해당한다. 또한, 인간화 항체는 면역글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 일부, 일반적으로 인간 면역글로불린 영역의 일부를 포함할 것이다 (Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332: 323-329 (1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)). 인간화 항체는, 항체의 항원 결합 영역이 짧은 꼬리 원숭이를 목적 항원으로 면역화시켜 제조한 항체에서 유래한 PRIMATIZED(상표명) 항체를 포함한다.A “humanized” form of a non-human (eg murine) antibody is a chimeric immunoglobulin, an immunoglobulin chain or fragment thereof comprising a minimal sequence derived from a non-human immunoglobulin (eg, Fv, Fab, Fab ', F (ab') 2 or other antigen binding sequence of the antibody). In most cases humanized antibodies are humans in which residues of the complementarity determining regions (CDRs) of the recipient are replaced with residues from CDRs of species other than the human (donor antibody) such as mice, rats or rabbits with the desired specificity, affinity and ability. Immunoglobulins (receptor antibodies). In some cases, Fv framework residues of human immunoglobulins are replaced by corresponding non-human residues. Humanized antibodies may also comprise residues that are not found in the recipient antibody or in the CDR or framework sequences to be introduced. In general, a humanized antibody will comprise substantially all of one or more, generally two or more variable domains, where all or substantially all CDR regions correspond to regions of non-human immunoglobulin and all or substantially all FR regions Corresponds to the region of the human immunoglobulin sequence. Humanized antibodies will also comprise at least a portion of an immunoglobulin constant region (Fc), generally a portion of a human immunoglobulin region (Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature, 332: 323-329 (1988); and Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2: 593-596 (1992)). Humanized antibodies include PRIMATIZED antibodies derived from antibodies prepared by immunizing a macaque with an antigen-binding region of the antibody to a target antigen.

"단일쇄 Fv" 또는 "sFv" 항체 단편은 단일 폴리펩티드 쇄에 존재하는 항체의 VH및 VL도메인을 포함한다. 바람직하게는, Fv 폴리펩티드는 sFv가 항원 결합에 필요한 구조를 형성하도록 하는 VH및 VL도메인 사이에 폴리펩티드 링커도 포함한다(sFv에 관해서는 문헌 (Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg 및 Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)) 참조)."Single-chain Fv" or "sFv" antibody fragments comprise the V H and V L domains of an antibody present in a single polypeptide chain. Preferably, the Fv polypeptide also comprises a polypeptide linker between the V H and V L domains that allow the sFv to form the structure necessary for antigen binding (see sFv in Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)).

"디아바디(diabody)"라는 용어는 동일한 폴리펩티드 쇄 내에 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (VH)을 포함(VH-VL)하는, 2개의 항원 결합 부위가 있는 작은 항체 단편을 말한다. 동일한 쇄에 있는 2개의 도메인을 결합시키기에는 너무 짧은 링커를 사용함으로써, 도메인을 다른 쇄의 상보성 도메인과 강제로 결합시켜 2개의 항원 결합 부위를 생성시킨다. 디아바디는 예를 들어, 유럽 특허제404,097호, 국제 공개 제93/11611호 및 문헌 (Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993))에 보다 상세하게 기재되어 있다.The term "diabody" refers to a small antibody with two antigen binding sites, comprising a heavy chain variable domain (V H ) linked to a light chain variable domain (V L ) within the same polypeptide chain (V H -V L ). Say a short story. By using a linker that is too short to join two domains in the same chain, the domain is forcibly bound with the complementary domains of the other chain to create two antigen binding sites. Diabodies are described, for example, in more detail in European Patent No. 404,097, International Publication No. 93/11611 and in Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993). It is described.

"단리된" 항체는 자신의 자연 환경 성분으로부터 확인 및 분리 및(또는) 회수된 항체이다. 그의 자연 환경 성분은 항체의 진단 또는 치료적 사용을 방해하는 물질로서, 효소, 호르몬 및 다른 단백질성 또는 비단백질성 용질이 있을 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 항체는 (1) 로우리(Lowry) 방법에 의해 측정시 95 중량% 초과, 가장 바람직하게는 99 중량% 초과의 항체로, (2) 스피닝 컵(spinning cup) 서열분석기를 사용하여 N 말단 또는 내부 아미노산의 잔기 15개 이상을 수득하기에 충분한 정도로, 또는 (3) 쿠마시 블루, 또는 바람직하게는 은 염색을 사용하여 환원 또는 비환원 조건하에서 SDS-PAGE에 의해 하나의 밴드로 정제될 것이다. 단리된 항체는 그 항체의 천연 환경의 하나 이상의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문에, 재조합 세포 내의 원래 위치에 존재하는 항체를 포함한다. 그러나, 단리된 항체는 일반적으로 하나 이상의 정제 단계에 의해 정제될 것이다.An "isolated" antibody is one that has been identified and separated and / or recovered from its natural environmental components. Its natural environmental components are substances that interfere with diagnostic or therapeutic use of antibodies, and may include enzymes, hormones, and other proteinaceous or nonproteinaceous solutes. In a preferred embodiment, the antibody is (1) greater than 95% by weight, most preferably greater than 99% by weight of the antibody as measured by the Lowry method, and (2) using a spinning cup sequencer. Sufficient to obtain at least 15 residues of the N-terminal or internal amino acid, or (3) Coomassie blue, or preferably purified in one band by SDS-PAGE under reducing or non-reducing conditions using silver staining. Will be. Isolated antibody includes the antibody present in situ within recombinant cells since at least one component of the antibody's natural environment will not be present. However, isolated antibodies will generally be purified by one or more purification steps.

"표지(label)"는 이 명세서에 사용될 때, 항체에 직간접적으로 접합되어 "표지된" 항체를 생성시키는 검출가능한 화합물 또는 조성물을 말한다. 표지는 그 자체로 (방사성 동위원소 표지 또는 형광 표지) 검출될 수 있거나, 효소 표지인 경우에는 검출가능한 기질 화합물 또는 조성물의 화학적 변화를 촉매할 수 있다. 검출가능한 표지로 작용할 수 있는 방사성핵종으로는 예를 들어, I-131, I-123, I-125, Y-90, Re-188, Re-186, At-211, Cu-67, Bi-212 및 Pd-109가 있다."Label" as used herein refers to a detectable compound or composition that is conjugated directly or indirectly to an antibody to produce a "labeled" antibody. The label can be detected by itself (radioisotope label or fluorescent label) or, in the case of an enzyme label, can catalyze the chemical change of the detectable substrate compound or composition. Radionuclides that can act as detectable labels include, for example, I-131, I-123, I-125, Y-90, Re-188, Re-186, At-211, Cu-67, Bi-212 And Pd-109.

"고상(solid phase)"은 본 발명의 항체가 부착될 수 있는 비수성 매트릭스를의미한다. 고상의 예에는 부분적으로 또는 완전하게 형성된 유리 (예를 들어, 세공 조절된 유리), 폴리사카라이드 (예를 들어, 아가로스), 폴리아크릴아미드, 폴리스티렌, 폴리비닐 알콜 및 실리콘 등이 포함된다. 특정 실시양태에서, 내용에 따라 고상은 분석 플레이트의 웰을 포함할 수 있으며, 다른 실시양태에서 고상은 정제 컬럼 (예를 들어, 친화 크로마토그래피 컬럼)이다. 이 용어는 또한 미국 특허 제4,275,149호에 기재된 것과 같은 별개 입자의 비연속적 고상도 포함한다."Solid phase" means a non-aqueous matrix to which an antibody of the invention may be attached. Examples of solid phases include partially or completely formed glass (eg pore controlled glass), polysaccharides (eg agarose), polyacrylamide, polystyrene, polyvinyl alcohol, silicone, and the like. In certain embodiments, depending on the content, the solid phase may comprise the wells of an assay plate, and in other embodiments the solid phase is a purification column (eg, an affinity chromatography column). The term also encompasses discrete solid phases of discrete particles, such as those described in US Pat. No. 4,275,149.

"리포좀"은 약물 (예를 들어, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 또는 이에 대한 항체)을 포유동물에게 전달하는데 유용한 여러 형태의 지질, 인지질 및(또는) 계면활성제로 이루어진 소낭(小囊)이다. 리포좀의 성분들은 통상적으로 생체막의 지질 배열과 유사하게 이중층 형태로 배열되어 있다."Liposomes" are useful for delivering drugs (eg, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptide or antibodies thereto) to a mammal. It is a vesicle consisting of several forms of lipids, phospholipids and / or surfactants. The components of the liposomes are typically arranged in bilayer form similar to the lipid arrangement of the biofilm.

본원에 사용된 "이뮤노어드헤신"이란 면역글로불린 불변 도메인의 작용기 기능과 이종 단백질(어드헤신)의 결합 특이성을 겸비한 항체 유사 분자를 지칭한다. 구조적으로 보면 이뮤노어드헤신은 항체의 항원 인식 및 결합 부위가 아닌(즉, "이종"임), 원하는 결합 특이성을 갖는 아미노산 서열과 면역글로불린 불변 도메인 서열의 융합체를 포함한다. 이뮤노어드헤신 분자의 어드헤신 부분은 전형적으로 적어도 수용체 또는 리간드의 결합 부위를 포함하는 인접 아미노산 서열이다. 이뮤노어드헤신 중의 면역글로불린 불변 도메인 서열은 IgG-1, IgG-2, IgG-3, IgG-4 아형, IgA(IgA-1 및 IgA-2 포함), IgE, IgD 또는 IgM 등 어떠한 면역글로불린으로부터든지 얻을 수 있다.As used herein, "immunoadhesin" refers to an antibody-like molecule that combines the functionalities of the immunoglobulin constant domains with the binding specificity of a heterologous protein (adhesin). Structurally, immunoadhesin includes a fusion of an immunoglobulin constant domain sequence with an amino acid sequence having the desired binding specificity that is not the antigen recognition and binding site of the antibody (ie, “heterologous”). The adhesin portion of an immunoadhesin molecule is typically a contiguous amino acid sequence comprising at least the binding site of a receptor or ligand. Immunoglobulin constant domain sequences in immunoadhesin are from any immunoglobulin such as IgG-1, IgG-2, IgG-3, IgG-4 subtypes, IgA (including IgA-1 and IgA-2), IgE, IgD or IgM You can get any.

II. 본 발명의 조성물 및 방법II. Compositions and Methods of the Invention

A. 전장 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882 폴리펩티드A. Full length PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 and PRO882 polypeptides

본 발명은 본원에서 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882로 언급된 폴리펩티드를 코딩하는 새로이 확인되고 단리된 뉴클레오티드 서열을 제공한다. 특히, 하기 실시예에 보다 상세히 기재된 바와 같이, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 cDNA를 확인하고 단리하였다. 별도의 발현 주기에서 생성된 단백질은 그의 PRO 숫자는 다를 수 있지만 UNQ 숫자는 임의의 주어진 DNA 및 코딩된 단백질 특유의 것이며 변하지 않을 것임을 알아야 한다. 그러나, 본원에서는 명료성을 위해, 본원에 개시된 전장의 천연 핵산 분자에 의해 코딩된 단백질, 및 상기 정의에 포함된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882의 다른 천연 동족체 및 변이체를 이들의 출처 및 제조 방식과 상관없이 "PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882"로 언급할 것이다.The present invention provides newly identified and isolated nucleotide sequences encoding polypeptides referred to herein as PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 and PRO882. In particular, cDNAs encoding PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 and PRO882 polypeptides were identified and isolated as described in more detail in the Examples below. It is to be understood that proteins produced in separate expression cycles may differ in their PRO numbers but UNQ numbers are specific to any given DNA and encoded protein and will not change. However, for the sake of clarity herein, a protein encoded by the full-length natural nucleic acid molecule disclosed herein, and PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, Other natural homologs and variants of the PRO509, PRO853, and PRO882 are "PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882" Will be referred to.

하기 실시예에 기재된 바와 같이, 여러가지 cDNA 클론을 ATCC에 기탁하였다. 당업자라면 당업계의 일반적인 방법을 이용하여 기탁된 클론의 서열을 분석함으로써 상기 클론의 실제 뉴클레오티드 서열을 쉽게 결정할 수 있다. 일반적인 기술을사용하여 뉴클레오티드 서열로부터 예상된 아미노산 서열을 결정할 수 있다. 본원에 기재된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 및 이를 코딩하는 핵산의 경우, 본 발명자들은 당시 이용할 수 있었던 서열 정보를 사용하여 가장 잘 확인할 수 있는 리딩 프레임으로 여겨지는 것을 확인하였다.As described in the Examples below, various cDNA clones were deposited with the ATCC. One skilled in the art can readily determine the actual nucleotide sequence of the clone by analyzing the sequence of the deposited clone using conventional methods in the art. General techniques can be used to determine the expected amino acid sequence from the nucleotide sequence. For the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides described herein and the nucleic acids encoding them, the inventors used the sequence information available at the time. It was confirmed that it is considered as the leading frame that can be confirmed best.

B. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 변이체B. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 variants

본원에서 설명되는 전장 천연 서열 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 이외에, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 변이체를 제조할 수 있는 것으로 생각된다. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882 변이체는 적합한 뉴클레오티드 변화를 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 DNA에 도입하고(하거나) 원하는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 합성함으로써 제조할 수 있다. 당업자라면 글리코실화 부위의 수 또는 위치의 변경 또는 세포막 부착 특성의 변화와 같은 아미노산 변화가 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715,PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 번역후 프로세싱을 변화시킬 수 있다는 것을 이해할 것이다.Full-length native sequences PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides described herein, in addition to the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347 It is believed that the PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 variants can be prepared. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, and PRO882 variants provide suitable nucleotide changes for the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715 By introducing into the DNA, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide and / or synthesizing the desired PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides It can manufacture. Those skilled in the art will appreciate that amino acid changes, such as changes in the number or position of glycosylation sites or changes in cell membrane adhesion properties, can be achieved by using PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptides. It will be appreciated that it may change post-translational processing.

본원에서 설명된 전장 천연 서열 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 또는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 다양한 도메인에서의 변이는 예를 들어 미국 특허 제5,364,934호에 개시된 보존적 및 비보존적 돌연변이 기술 및 지침을 사용하여 제조할 수 있다. 변이는 천연 서열 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882와 비교했을 때, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 아미노산 서열 변화를 초래하는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 코딩하는 하나 이상의 코돈의 치환, 결실 또는 삽입일 수 있다. 임의로, 변이는 하나 이상의 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 도메인에서 하나 이상의 아미노산을 임의의 다른 아미노산으로 치환함으로써 생성된다. 목적 활성에 유해한 효과를 주지 않으면서 삽입, 치환 또는 결실될 수 있는 아미노산 잔기는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 서열을 공지의 상동 단백질 분자의서열과 비교하고 상동성이 높은 영역에서 생성된 아미노산 서열 변화의 수를 최소화함으로써 결정할 수 있다. 아미노산 치환은 하나의 아미노산을 유사한 구조 및(또는) 화학적 특성을 갖는 다른 아미노산으로 치환(예를 들어, 루이신의 세린으로의 치환), 즉 아미노산의 보존적 치환의 결과일 수 있다. 삽입 또는 결실은 임의로 약 1 내지 5개의 아미노산에서 발생할 수 있다. 허용되는 변이는 서열 내에 아미노산을 체계적으로 삽입, 결실 또는 치환시키고, 전장 또는 성숙 천연 서열에 의해 나타나는 생성된 변이체의 활성을 시험함으로써 정할 수 있다.Full length natural sequence described herein PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 or PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357 Variations in the various domains of, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 can be prepared using, for example, the conservative and non-conservative mutation techniques and instructions disclosed in US Pat. No. 5,364,934. The mutation is compared to the native sequences PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 when compared to PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, Which encodes PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 resulting in amino acid sequence changes of PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 It may be a substitution, deletion or insertion of one or more codons. Optionally, the mutation is created by substituting any other amino acid for one or more amino acids in one or more of the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 domains. Amino acid residues that may be inserted, substituted or deleted without adversely affecting the desired activity are known sequences of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882. This can be determined by comparing the sequence of homologous protein molecules with and minimizing the number of amino acid sequence changes generated in regions of high homology. Amino acid substitutions may be the result of substitution of one amino acid with another amino acid having similar structural and / or chemical properties (eg, substitution of leucine with serine), ie, conservative substitution of amino acids. Insertion or deletion may optionally occur at about 1-5 amino acids. Acceptable variations can be determined by systematically inserting, deleting or replacing amino acids in the sequence and testing the activity of the resulting variants represented by the full length or mature native sequence.

본원은 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 단편들을 제공한다. 예를 들어 전장 천연 단백질과 비교하는 경우, 이 단편들은 N-말단 또는 C-말단이 잘릴 수 있으며 내부 잔기가 결손될 수 있다. 몇몇 단편은 본 발명의 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 목적 생물학적 활성에 필수적이지 않은 아미노산 잔기가 결손되어 있다.The application provides PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide fragments. For example, when compared to full-length natural proteins, these fragments may be truncated at the N- or C-terminus and missing internal residues. Some fragments lack amino acid residues that are not essential for the desired biological activity of the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides of the invention.

PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 단편은 많은 통상의 기술 중 임의의 기술에 의해 제조할 수 있다. 목적 펩티드 단편은 화학적으로 합성할 수 있다. 다른 방법으로는 효소적 분해 방법, 예를 들어 이 단백질을 특정 아미노산 잔기에 의해 정해진 부위에서 단백질을 자르는 것으로 알려진 효소로 처리하거나 또는 이 DNA를 적합한 제한 효소로 잘라냄으로써 PRO201, PRO292, PRO327,PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 단편을 생성하고 이 목적 단편을 단리하는 것이 포함된다. 그러나, 또다른 적합한 기술은 중합효소 연쇄 반응(PCR)에 의해 목적 폴리펩티드 단편을 코딩하는 DNA 단편을 증폭하고 단리하는 것을 포함한다. DNA 단편의 목적 말단부를 정하는 올리고뉴클레오티드는 PCR에서 5' 및 3' 프라이머로 사용된다. 바람직하게는, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 단편은 본원에서 개시된 천연 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드와 한가지 이상의 생물학적 및(또는) 면역학적 활성을 공유한다.PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 fragments can be prepared by any of a number of conventional techniques. Peptide fragments of interest can be synthesized chemically. Other methods include enzymatic digestion methods, for example PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, by treating this protein with an enzyme known to cut the protein at sites defined by specific amino acid residues, or by cutting this DNA with a suitable restriction enzyme. Producing the PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 fragments and isolating the desired fragments. However, another suitable technique involves amplifying and isolating DNA fragments encoding the desired polypeptide fragments by polymerase chain reaction (PCR). Oligonucleotides that define the desired termini of the DNA fragment are used as 5 'and 3' primers in PCR. Preferably, the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptide fragments comprise the native PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, Shares one or more biological and / or immunological activities with a PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide.

구체적인 실시양태에서, 목적물의 보존적 치환은 바람직한 치환이라는 표제로 표 3에 나타내었다. 이러한 치환에 의해 생물학적 활성이 변화하는 경우, 하기 표 3에서 치환예로서 명명되거나 아미노산 종류에 대해서 하기에서 보다 상세하게 설명된 보다 실질적인 변화를 도입하고 생성물을 스크리닝하였다.In specific embodiments, conservative substitutions of the target are shown in Table 3 under the heading of preferred substitutions. When the biological activity is changed by such substitutions, more substantial changes, which are named as substitutions in Table 3 below or described in more detail below with respect to amino acid species, were introduced and the products were screened.

원래 잔기Original residues 치환체의 예Examples of substituents 바람직한 치환체Preferred Substituents Ala(A)Arg(R)Asn(N)Asp(D)Cys(C)Gln(Q)Glu(E)Gly(G)His(H)Ile(I)Leu(L)Lys(K)Met(M)Phe(F)Pro(P)Ser(S)Thr(T)Trp(W)Tyr(Y)Val(V)Ala (A) Arg (R) Asn (N) Asp (D) Cys (C) Gln (Q) Glu (E) Gly (G) His (H) Ile (I) Leu (L) Lys (K) Met ( M) Phe (F) Pro (P) Ser (S) Thr (T) Trp (W) Tyr (Y) Val (V) val, leu, ilelys, gln, asngln, his, lys, arggluserasnasppro, alaasn, gln, lys, argleu, val, met, ala, phe, 노르루이신노르루이신, ile, val, met, ala, phearg, gln, asnleu, phe, ileleu, val, ile, ala, tyralathrsertyr, phetrp, phe, thr, serile, leu, met, phe, ala, 노르루이신val, leu, ilelys, gln, asngln, his, lys, arggluserasnasppro, alaasn, gln, lys, argleu, val, met, ala, phe, norleucine norleucine, ile, val, met, ala, phearg, gln, asnleu, phe, ileleu, val, ile, ala, tyralathrsertyr, phetrp, phe, thr, serile, leu, met, phe, ala, norleucine vallysglngluserasnaspalaargleuileargleuleualathrsertyrpheleuvallysglngluserasnaspalaargleuileargleuleualathrsertyrpheleu

폴리펩티드의 기능 또는 면역학적 동일성의 실질적인 변형은 (a) 치환 영역에서의 폴리펩티드 골격의 구조를, 예를 들어 시트 또는 나선 형태로서 유지하거나, (b) 표적 부위에서의 분자의 전하 또는 소수성을 유지하거나, 또는 (c) 대부분의 측쇄를 유지하는 그의 효과를 상당히 변화시키는 치환을 선택함으로써 수행된다. 자연 발생 잔기는 공통적인 측쇄 특성에 따라 다음과 같은 군으로 구분된다:Substantial modifications of the function or immunological identity of the polypeptide may include (a) maintaining the structure of the polypeptide backbone at the substitution region, for example in sheet or helical form, (b) maintaining the charge or hydrophobicity of the molecule at the target site, or Or (c) selecting a substitution that significantly changes its effect of retaining most of the side chains. Naturally occurring residues are divided into the following groups according to common side chain properties:

(1) 소수성: 노르류신, met, ala, val, leu, ile;(1) hydrophobic: norleucine, met, ala, val, leu, ile;

(2) 중성 친수성: cys, ser, thr;(2) neutral hydrophilic: cys, ser, thr;

(3) 산성: asp, glu;(3) acidic: asp, glu;

(4) 염기성: asn, gln, his, lys, arg;(4) basic: asn, gln, his, lys, arg;

(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: gly, pro; 및(5) residues affecting chain orientation: gly, pro; And

(6) 방향족; trp, tyr, phe.(6) aromatic; trp, tyr, phe.

비보존적 치환은 상기 한 종류의 구성 성분을 다른 종류의 것으로 교환하는 것이다. 또한, 이렇게 치환되는 잔기는 보존적 치환 부위에 도입될 수 있거나 또는 보다 바람직하게는 나머지(비보존) 부위에 도입될 수 있다.Non-conservative substitutions are those in which one component is exchanged for another. In addition, such substituted moieties may be introduced at conservative substitution sites or more preferably at the remaining (non-conserved) sites.

변이는 올리고뉴클레오티드 매개(위치 지정) 돌연변이 유발법, 알라닌 스캐닝법 및 PCR 돌연변이 유발법과 같은 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제조할 수있다. 위치 지정 돌연변이 유발법(Carter et al., Nucl. Acids Res.,13:4331 (1986); Zoller et al., Nucl. Acids Res.,10:6487 (1987)), 카세트 돌연변이 유발법(Wells et al., Gene,34:315 (1985)), 제한 선택 돌연변이 유발법(Wells et al., Philos. Trans. R. Soc. London SerA,317:415 (1986)) 또는 다른 공지 기술을 클로닝된 DNA에 실시하여 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 변이체 DNA를 제조할 수 있다.Mutations can be made using methods known in the art such as oligonucleotide mediated (positioning) mutagenesis, alanine scanning and PCR mutagenesis. Positional mutagenesis (Carter et al., Nucl.Acids Res., 13: 4331 (1986); Zoller et al., Nucl.Acids Res., 10: 6487 (1987)), cassette mutagenesis (Wells et. al., Gene, 34: 315 (1985)), restriction selection mutagenesis (Wells et al., Philos. Trans. R. Soc. London SerA, 317: 415 (1986)) or other known techniques cloned DNA PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 variant DNA can be prepared.

또한, 스캐닝 아미노산 분석법을 사용하여 인접 서열을 따라 하나 이상의 아미노산을 확인할 수 있다. 바람직한 스캐닝 아미노산은 비교적 작은 중성 아미노산이다. 이러한 아미노산에는 알라닌, 글리신, 세린 및 시스테인이 포함된다. 통상, 알라닌은 베타-탄소 밖의 측쇄를 제거하고 변이체의 주쇄 배열을 변화시킬 가능성이 적기 때문에 바람직한 스캐닝 아미노산이다(Cunningham and Wells, Science, 244: 1081-1085 (1989)). 또한, 알라닌은 통상 가장 흔한 아미노산이기 때문에 바람직하다. 또한, 알라닌은 파묻힌 위치 및 노출된 위치 모두에서 빈번하게 발견된다(Creighton, The Proteins, (W.H. Freeman & Co., N.Y.); Chothia, J.Mol. Biol., 150:1 (1976)). 알라닌 치환이 적당한 양의 변이체를 생성시키지 않으면, 동배체(isoteric) 아미노산을 사용할 수 있다.Scanning amino acid assays can also be used to identify one or more amino acids along adjacent sequences. Preferred scanning amino acids are relatively small neutral amino acids. Such amino acids include alanine, glycine, serine and cysteine. Generally, alanine is a preferred scanning amino acid because it is less likely to remove side chains outside the beta-carbon and change the backbone arrangement of the variants (Cunningham and Wells, Science, 244: 1081-1085 (1989)). Alanine is also preferred because it is usually the most common amino acid. In addition, alanine is frequently found both in buried and exposed locations (Creighton, The Proteins, (W.H. Freeman & Co., N.Y.); Chothia, J. Mol. Biol., 150: 1 (1976)). If alanine substitutions do not produce adequate amounts of variants, isotopic amino acids can be used.

C. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882의 변형C. Variants of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 and PRO882

PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882의 공유결합 변형은 본 발명의 범위에 포함된다. 공유결합 변형의 한 형태는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 선택된 측쇄 또는 N 말단 또는 C 말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체화제와 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 표적 아미노산 잔기를 반응시키는 것을 포함한다. 이관능성 작용제를 사용한 유도체화는, 예를 들어 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체 정제 방법에 사용하기 위한 수불용성 지지체 매트릭스 또는 표면에 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 가교결합시키거나 그 반대로 가교결합시키는데 유용하다. 통상 사용되는 가교결합제에는, 예를 들어 1,1-비스(디아조아세틸)-2-페닐에탄, 글루타르알데히드, N-히드록시숙신이미드 에스테르, 예를 들어 4-아지도살리실산과의 에스테르, 3,3'-디티오비스(숙신이미딜프로피오네이트)와 같은 디숙신이미딜 에스테르를 포함하는 동종이관능성 이미도에스테르, 비스-N-말레이미도-1,8-옥탄과 같은 이관능성 말레이미드, 및 메틸-3-[(p-아지도페닐)디티오]프로피오이미데이트와 같은 물질이 포함된다.Covalent modifications of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 and PRO882 are within the scope of the present invention. One form of covalent modification is capable of reacting with selected side chain or N-terminal or C-terminal residues of a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. Reacting an organic derivatizing agent with a target amino acid residue of a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. Derivatizations with bifunctional agents include, for example, anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti- PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017 on a water-insoluble support matrix or surface for use in PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibody purification methods It is useful to crosslink, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 or vice versa. Commonly used crosslinkers include, for example, 1,1-bis (diazoacetyl) -2-phenylethane, glutaraldehyde, N-hydroxysuccinimide esters, for example esters with 4-azidosalicylic acid. , Bifunctional imidoesters, including disuccinimidyl esters, such as 3,3'-dithiobis (succinimidylpropionate), difunctional maleimides such as bis-N-maleimido-1,8-octane And substances such as methyl-3-[(p-azidophenyl) dithio] propioimidate.

다른 변형은 글루타미닐 및 아스파라기닐 잔기의 각각 대응하는 글루타밀 및 아스파르틸 잔기로의 탈아미드화, 프롤린 및 리신의 히드록실화, 세릴 또는 트레오닐 잔기의 히드록실기의 인산화, 리신, 아르기닌 및 히스티딘 측쇄의 α-아미노기의 메틸화(T.E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86(1983)), N-말단 아민의 아세틸화 및 C-말단 카르복실기의 아미드화를 포함한다.Other modifications include deamidation of glutaminyl and asparaginyl residues to the corresponding glutamyl and aspartyl residues, hydroxylation of proline and lysine, phosphorylation of hydroxyl groups of seryl or threonyl residues, lysine, Methylation of α-amino groups of arginine and histidine side chains (TE Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, WH Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86 (1983)), acetylation of N-terminal amines and C- Amidation of terminal carboxyl groups.

본 발명의 범위 내에 포함되는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 공유결합 변형의 다른 유형은 폴리펩티드의 천연 글리코실화 패턴의 변화를 포함한다. 본원에서 "천연 글리코실화 패턴의 변화"는 천연 서열 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882에서 발견되는 하나 이상의 탄수화물 잔기의 결실(잠재성 있는 글리코실화 부위를 제거하거나 화학적 및(또는) 효소적 방법에 의해 글리코실화를 결실시킴으로써) 및(또는) 천연 서열 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882에 존재하지 않는 하나 이상의 글리코실화 부위의 부가를 의미한다. 또한, 이 용어는 존재하는 다양한 탄수화물 잔기의 특성 및 비율의 변화를 비롯한 천연 단백질의 글리코실화에 있어 질적 변화를 포함한다.Other types of covalent modifications of the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides within the scope of the present invention are those of the natural glycosylation pattern of the polypeptide. Include a change. “Changes in the natural glycosylation pattern” herein refers to the deletion of one or more carbohydrate residues found in the native sequences PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 ( By removing potential glycosylation sites or deleting glycosylation by chemical and / or enzymatic methods) and / or the native sequences PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017 , Addition of one or more glycosylation sites that are not present in PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882. The term also encompasses qualitative changes in glycosylation of natural proteins, including changes in the properties and proportions of the various carbohydrate residues present.

PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 대한 글리코실화 부위의 부가는 아미노산 서열의 변화에 의해 달성될 수 있다. 변화는, 예를 들어 천연 서열 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882에 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기의 부가 또는 치환에 의해 이루어질 수 있다 (O-결합 글리코실화 부위의 경우). PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 아미노산 서열은 특히 목적 아미노산으로 번역되는 코돈을 생성시키도록 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 DNA를 미리 선택된 염기에서 돌연변이시킴으로써 DNA 수준에서의 변화를 통하여 임의로 변화시킬 수 있다.The addition of glycosylation sites to the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides can be achieved by changing the amino acid sequence. The change can be made, for example, by the addition or substitution of one or more serine or threonine residues in the native sequence PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882. (For O-linked glycosylation sites). The PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 amino acid sequences specifically produce PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344 to produce codons translated into the target amino acid. DNA encoding a, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide can be altered arbitrarily through a change in DNA level by mutating at a preselected base.

PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 상의 탄수화물 잔기의 수를 증가시키는 다른 수단은 글리코시드를 폴리펩티드에 화학적으로 또는 효소에 의해 결합시키는 것이다. 이러한 방법은, 예를 들어 1987년 9월 11일 공개된 국제 공개 제87/05330호 및 문헌(Aplin and Wriston, CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306 (1981))에 기재되어 있다.Another means of increasing the number of carbohydrate moieties on a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptides can result in glycosides chemically or enzymatically To combine. Such methods are described, for example, in International Publication No. 87/05330 published September 11, 1987 and in Aplin and Wriston, CRC Crit. Rev. Biochem., Pp. 259-306 (1981). .

PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 존재하는 탄수화물 잔기의 제거는 화학적으로 또는 효소에 의해 또는 글리코실화 표적으로 기능하는 아미노산 잔기를 코딩하는 코돈의 돌연변이에 의한 치환에 의해 달성될 수 있다. 화학적 탈글리코실화 기술은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어 문헌(Hakimuddin, et al., Arch. Biochem. Biophys., 259:52(1987) 및 Edge et al., Anal. Biochem., 118:131(1981))에 기재되어 있다. 폴리펩티드 상의 탄수화물 잔기의 효소에 의한 절단은 다양한 엔도글리코시다제 및 엑소글리코시다제를 사용하여 달성할 수 있다(Thotakura et al., Meth. Enzymol., 138:350(1987)).Removal of carbohydrate residues present in the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides is an amino acid that functions chemically or by enzymes or as a glycosylation target. It can be achieved by substitution by mutation of a codon encoding a residue. Chemical deglycosylation techniques are known in the art and are described, for example, in Hakimuddin, et al., Arch. Biochem. Biophys., 259: 52 (1987) and Edge et al., Anal. Biochem., 118: 131 (1981). Enzymatic cleavage of carbohydrate residues on the polypeptide can be accomplished using various endoglycosidases and exoglycosidases (Thotakura et al., Meth. Enzymol., 138: 350 (1987)).

PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 공유결합 변형의 다른 유형은 미국 특허 제4,640,835호, 동 제4,496,689호, 동 제4,301,144호, 동 제4,670,417호, 동 제4,791,192호 또는 동 제4,179,337호에 기재된 방식으로 다양한 비단백질성 중합체, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리프로필렌 글리콜 또는 폴리옥시알킬렌 중의 하나에 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 연결시키는 것을 포함한다.Other types of covalent modifications of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 are described in U.S. Patents 4,640,835, 4,496,689 and 4,301,144. PRO201, PRO292, PRO327 to one of a variety of nonproteinaceous polymers, such as polyethylene glycol (PEG), polypropylene glycol or polyoxyalkylene, in the manner described in US Pat. Nos. 4,670,417, 4,791,192 or 4,179,337. , Linking a PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide.

또한, 본 발명의 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882는 다른 이종 폴리펩티드 또는 아미노산 서열에 융합된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265,PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 포함하는 키메라 분자를 형성하는 방식으로 변형될 수 있다.In addition, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 of the present invention are PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, which are fused to other heterologous polypeptide or amino acid sequences. And may be modified in such a way as to form chimeric molecules including PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882.

본 발명의 한 실시양태에서, 이러한 키메라 분자는 항-태그 항체가 선택적으로 결합할 수 있는 에피토프를 제공하는 태그 폴리펩티드와 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 융합체를 포함한다. 에피토프 태그는 일반적으로 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 아미노 또는 카르복실 말단에 위치한다. 상기 에피토프 태그가 부착된 형태의 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 존재는 태그 폴리펩티드에 대한 항체를 사용하여 검출할 수 있다. 또한, 에피토프 태그를 도입하면 항-태그 항체 또는 에피토프 태그에 결합하는 다른 종류의 친화성 매트릭스를 사용한 친화성 정제에 의해 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 용이하게 정제할 수 있다. 다양한 태그 폴리펩티드 및 이들 각각의 항체는 당업계에 공지되어 있다. 그 예로는 폴리-히스티딘(poly-his) 또는 폴리-히스티딘-글리신 (poly-his-gly) 태그, flu HA 태그 폴리펩티드 및 그의 항체 12CA5 (Field et al., Mol. Cell. Biol., 8:2159-2165 (1988)), c-myc 태그 및 이에 대한 8F9, 3C7, 6E10, G4, B7 및 9E10 항체 (Evan et al., Molecular and Cellular Biology, 5:3610-3636 (1985)), 및 허피스 심플렉스 바이러스 당단백질 D(gD) 태그 및 그의 항체 (Paborsky et al., Protein Engineering, 3(6):547-553 (1990))를 들 수 있다. 다른 태그 폴리펩티드에는 Flag-펩티드 (Hopp et al., BioTechnology, 6:1204-1210 (1988)), KT3 에피토프 펩티드 (Martin et al., Science, 255:192-194 (1992)), α-튜불린 에피토프 펩티드 (Skinner et al., J. Biol. Chem., 266:15163-15166 (1991)) 및 T7 유전자 10 단백질 태그 (Lutz-Freyermuth et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87:6393-6397 (1990))가 포함된다.In one embodiment of the invention, such chimeric molecules comprise a tagged polypeptide that provides an epitope to which an anti-tag antibody can selectively bind, and a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, Fusions of PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882. Epitope tags are generally located at the amino or carboxyl termini of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882. The presence of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 in the epitope tagged form can be detected using an antibody against a tagged polypeptide. . In addition, the introduction of epitope tags allows for affinity purification using anti-tag antibodies or other types of affinity matrices that bind to the epitope tags, such as PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 can be purified easily. Various tag polypeptides and their respective antibodies are known in the art. Examples include poly-histidine or poly-histidine-glycine tags, flu HA tag polypeptides and their antibodies 12CA5 (Field et al., Mol. Cell. Biol., 8: 2159). -2165 (1988)), c-myc tag and 8F9, 3C7, 6E10, G4, B7 and 9E10 antibodies thereto (Evan et al., Molecular and Cellular Biology, 5: 3610-3636 (1985)), and herpes simplex Rex virus glycoprotein D (gD) tag and its antibodies (Paborsky et al., Protein Engineering, 3 (6): 547-553 (1990)). Other tag polypeptides include Flag-peptide (Hopp et al., BioTechnology, 6: 1204-1210 (1988)), KT3 epitope peptide (Martin et al., Science, 255: 192-194 (1992)), α-tubulin Epitope peptides (Skinner et al., J. Biol. Chem., 266: 15163-15166 (1991)) and T7 gene 10 protein tag (Lutz-Freyermuth et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87: 6393-6397 (1990)).

다른 한 실시양태에서, 키메라 분자는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882와 면역글로불린 또는 면역글로불린의 특정 영역의 융합체를 포함할 수 있다. 키메라 분자의 2가 형태("이뮤노어드헤신"으로 언급하기도 함)의 경우, 융합체는 IgG 분자의 Fc 영역일 수 있다. 이 Ig 융합체는 바람직하게는 Ig 분자내 가변 영역의 적어도 일부를 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 가용성(막횡단 도메인이 결실 또는 불활성화됨) 형태로 치환한 것을 포함한다. 특히 바람직한 실시양태에서, 면역글로불린 융합체는 IgG1 분자의 힌지, CH2 및 CH3, 또는 힌지, CH1, CH2 및 CH3 영역을 포함한다. 면역글로불린 융합체를 생산하는 방법으로는, 1995년 6월 27일 간행된 미국 특허 제5,428,130호를 참조한다.In another embodiment, the chimeric molecule will comprise a fusion of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 with a specific region of an immunoglobulin or immunoglobulin. Can be. For the divalent form of the chimeric molecule (also referred to as "immunoadhesin"), the fusion may be the Fc region of an IgG molecule. This Ig fusion preferably contains at least a portion of the variable region of the Ig molecule in terms of the solubility (transmembrane domain) Substituted or inactivated). In particularly preferred embodiments, the immunoglobulin fusions comprise the hinge, CH2 and CH3, or the hinge, CH1, CH2 and CH3 regions of the IgG1 molecule. For methods of producing immunoglobulin fusions, see US Pat. No. 5,428,130, published June 27, 1995.

D. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 및 PRO882의 폴리펩티드의 제조D. Preparation of Polypeptides of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 and PRO882

이하에 설명되는 내용은 주로 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 핵산을 함유하는 벡터로 형질전환 또는 형질감염된 세포를 배양함으로써 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 제조하는 방법에 관한 것이다. 물론, 당업계에 공지된 다른 방법을 사용하여 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 제조할 수 있다. 예를 들어, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 서열 또는 그의 단편은 고상 기술을 사용하는 직접 펩티드 합성법에 의해 제조할 수 있다(Stewart et al., Solid -Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co., San Francisco, CA (1969); Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85:2149-2154 (1963)). 시험관내 단백질 합성은 수동 방법 또는 자동 방법에 의해 수행될 수 있다. 자동 합성법은 예를 들어 어플라이드 바이오시스템즈 펩티드 합성기(Applied Biosystems Peptide Synthesizer)(미국 캘리포니아주 포스터시티 소재)를 제조사의 지시에 따라 사용하여 수행할 수 있다. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 상이한 단편을 별도로 화학적으로 합성하고 화학적 또는 효소적 방법을 사용하여 조합함으로써 전장 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 제조할 수 있다.The contents described below are mainly described by culturing PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 nucleic acids transformed or transfected with the vector. , PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882. Of course, other methods known in the art can be used to produce PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882. For example, the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 sequences or fragments thereof can be prepared by direct peptide synthesis using solid phase techniques. Stewart et al., Solid-Phase Peptide Synthesis, WH Freeman Co., San Francisco, CA (1969); Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85: 2149-2154 (1963). In vitro protein synthesis can be performed by manual or automated methods. Automated synthesis can be performed using, for example, an Applied Biosystems Peptide Synthesizer (Foster City, CA) according to the manufacturer's instructions. Different lengths of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 are chemically synthesized separately and combined using chemical or enzymatic methods , PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882.

a. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 코딩하는 DNA의 단리a. Isolation of DNA encoding PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882

PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 코딩하는 DNA는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 mRNA를 보유하여 그를 검출가능한 수준으로 발현할 것으로 생각되는 조직으로부터 제조한 cDNA 라이브러리로부터 수득할 수 있다. 따라서, 인간 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 DNA는 실시예에서 설명되는 바와 같이 인체 조직으로부터 제조된 cDNA 라이브러리로부터 편리하게 수득할 수 있다. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 코딩 유전자는 또한 게놈 라이브러리로부터 수득하거나 또는 올리고뉴클레오티드 합성법에 의해 수득할 수 있다.DNA encoding PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 can be used for PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, Can be obtained from a cDNA library prepared from tissues that possess the PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 mRNA and are thought to express it at detectable levels. Thus, human PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 DNA are conveniently obtained from cDNA libraries prepared from human tissue as described in the Examples. can do. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 coding genes can also be obtained from genomic libraries or by oligonucleotide synthesis.

라이브러리는 목적 유전자 또는 이 유전자에 의해 코딩되는 단백질을 확인하기 위해 고안된 프로브 (예를 들어, 목적하는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882에 대한 항체 또는 약 20 내지 80개 이상의 염기로 구성된 올리고뉴클레오티드)를 사용하여 스크리닝할 수 있다. 선택된 프로브를 사용한 cDNA 또는 게놈 라이브러리의 스크리닝은 예를 들어 문헌 (Sambrook et al., Molecular Cloning: ALaboratory Manual (New York: Cold Spring Haror Laboratory Press, 1989))에 기재된 바와 같은 표준 방법을 사용하여 수행할 수 있다. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 코딩하는 유전자를 단리하는 다른 수단은 PCR 방법을 사용하는 것이다 (Sambrook et al., 상기 문헌; Dieffenbach et al., PCR Primer: A Laboratory Manual (Cold Spring Haror Laboratory Press, 1995)).The library may be a probe designed to identify a target gene or a protein encoded by the gene (e.g., a desired PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 Or an antibody against PRO882 or an oligonucleotide consisting of about 20 to 80 or more bases). Screening of cDNAs or genomic libraries using selected probes can be performed using standard methods as described, for example, in Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (New York: Cold Spring Haror Laboratory Press, 1989). Can be. Another means of isolating genes encoding PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 is by using the PCR method (Sambrook et al., Supra Dieffenbach et al., PCR Primer: A Laboratory Manual (Cold Spring Haror Laboratory Press, 1995).

하기 실시예는 cDNA 라이브러리를 스크리닝하는 기술을 설명한다. 프로브로서 선택된 올리고뉴클레오티드 서열은 가양성 결과를 최소화하기 위해서 충분한 길이를 갖고 충분히 분명한 서열이어야 한다. 올리고뉴클레오티드는 스크리닝되는 라이브러리에서 DNA에 혼성화시에 검출될 수 있도록 표지되는 것이 바람직하다. 표지 방법은 당업계에 공지되어 있고,32P-표지된 ATP와 같은 방사성 표지, 비오티닐화 또는 효소 표지의 사용을 포함한다. 적당한 엄격성 및 고도의 엄격성을 포함하는 혼성화 조건은 문헌(Sambrook et al., 상기 문헌)에 제공된다.The following examples illustrate techniques for screening cDNA libraries. Oligonucleotide sequences selected as probes should be sufficiently long and sufficiently clear to minimize false positive results. Oligonucleotides are preferably labeled so that they can be detected upon hybridization to DNA in the library being screened. Labeling methods are known in the art and include the use of radiolabels, biotinylation or enzyme labels, such as 32 P-labeled ATP. Hybridization conditions, including moderate stringency and high stringency, are provided in Sambrook et al., Supra.

상기 라이브러리 스크리닝 방법에서 확인된 서열은 GenBank와 같은 공개 데이타베이스 또는 다른 비공개 서열 데이타베이스에 기탁되고 입수될 수 있는 다른 공지의 서열과 비교하여 정렬시킬 수 있다. 분자의 한정된 영역 내 또는 전장 서열에 걸친 서열 동일성 (아미노산 또는 뉴클레오티드 수준에서)은 선행 기술 공지된 방법 및 본원에서 설명된 방법을 이용하여 결정할 수 있다.The sequences identified in the library screening method can be aligned in comparison to other known sequences that can be deposited and obtained in public databases such as GenBank or other private sequence databases. Sequence identity (at the amino acid or nucleotide level) within a defined region of the molecule or across the full length sequence can be determined using methods known in the art and the methods described herein.

단백질 코딩 서열을 갖는 핵산은 먼저 본원에서 개시된 추정 아미노산 서열을 사용하고 필요하다면 전구체를 검출하기 위해 문헌 (Sambrook et al., 상기 문헌)에 기재된 통상의 프라이머 신장 방법을 사용하여, 선택된 cDNA 또는 게놈 라이브러리를 스크리닝하고, cDNA로 역전사되지 않은 mRNA의 중간체를 프로세싱함으로써 수득할 수 있다.Nucleic acids with protein coding sequences are first selected cDNA or genomic libraries using the putative amino acid sequences disclosed herein and using conventional primer extension methods described in Sambrook et al., Supra, to detect precursors, if necessary. Can be obtained by screening and processing intermediates of mRNA that are not reverse transcribed into cDNA.

b. 숙주세포의 선택 및 형질전환b. Selection and transformation of host cells

숙주세포는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 생성을 위해 본원에서 설명한 발현 또는 클로닝 벡터로 형질감염 또는 형질전환되고 프로모터 유도, 형질전환체 선별 또는 목적 서열을 코딩하는 유전자 증폭에 적합하게끔 개질된 통상의 영양 배지 중에서 배양된다. 당업자라면 불필요한 실험을 수행하지 않고서도 배지, 온도, pH 등과 같은 배양 조건을 선택할 수 있다. 일반적으로, 세포 배양물의 생산성을 최대화하기 위한 원칙, 프로토콜 및 실시되는 기술은 문헌(Mammalian Cell Biotechnology: a Practical Approach, M. Butler, ed. (IRL Press, 1991) 및 Sambrook et al., 상기 문헌)에서 찾을 수 있다.Host cells are transfected or transformed with the expression or cloning vectors described herein for the production of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 and the promoter induction, Cultured in conventional nutrient medium modified to be suitable for transformant selection or gene amplification encoding the desired sequence. Those skilled in the art can select culture conditions such as medium, temperature, pH, etc. without performing unnecessary experiments. In general, principles, protocols, and techniques employed to maximize the productivity of cell cultures are described in Mammalian Cell Biotechnology: a Practical Approach, M. Butler, ed. (IRL Press, 1991) and Sambrook et al., Supra. You can find it at

진핵세포 형질감염 방법 및 원핵세포 형질전환 방법, 예를 들어 CaCl2, CaPO4, 리포솜-매개 방법 및 전기천공법(electroporation)은 당업자에게 공지되어 있다. 사용되는 숙주세포에 따라, 형질전환은 상기 세포에 적합한 표준 기술을 사용하여 수행된다. 문헌(상기 Sambrook et al.,)에 기재된 염화칼슘법을 이용하는 칼슘 처리, 또는 전기천공법은 일반적으로 원핵세포에 대해 사용된다. 아그로박테리움 투메파시엔스(Agrobacterium tumefaciens)를 사용한 감염은 문헌(Shaw et al.,Gene,23:315(1983) 및 1989년 6월 29일 공개된 국제 공개 제89/05859호)에 기재된 바와 같이 특정 식물 세포의 형질전환에 사용된다. 세포벽이 없는 포유동물 세포의 경우, 문헌(Graham and van der Eb, Virology, 52:456-457 (1978))의 인산칼슘 침전법을 사용할 수 있다. 포유동물 세포 숙주 시스템 형질감염의 일반적인 특징은 미국 특허 제4,399,216호에 기재되어 있다. 효모 내로의 형질전환은 일반적으로 문헌(Van Solingen et al., J. Bact., 130:949(1977) 및 Hsiao et al., Proc. Natl. Acad. Sci.(USA), 76:3829(1979))의 방법에 따라 수행된다. 그러나, 세포 내로 DNA를 도입하는 다른 방법, 예를 들어 핵내 미세주입, 전기천공법, 원형 세포와 세균 원형질체 융합, 또는 다가양이온, 예를 들어 폴리브렌, 폴리오르니틴도 사용할 수 있다. 포유동물 세포의 형질전환을 위한 여러 기술에 대해서는 문헌(Keown et al., Methods in Enzymology, 185:527-537 (1990) 및 Mansour et al., Nature, 336:348-352 (1988))을 참조한다.Eukaryotic transfection methods and prokaryotic transformation methods such as CaCl 2 , CaPO 4 , liposome-mediated methods and electroporation are known to those skilled in the art. Depending on the host cell used, transformation is carried out using standard techniques suitable for the cell. Calcium treatment, or electroporation, using the calcium chloride method described in Sambrook et al., Supra, is generally used for prokaryotic cells. Infection with Agrobacterium tumefaciens is described in Shaw et al., Gene , 23 : 315 (1983) and International Publication No. 89/05859 published June 29, 1989). Used for transformation of certain plant cells. For mammalian cells without cell walls, the calcium phosphate precipitation method of Graham and van der Eb, Virology, 52: 456-457 (1978) can be used. General characteristics of mammalian cell host system transfections are described in US Pat. No. 4,399,216. Transformation into yeast is generally described by Van Solingen et al., J. Bact., 130: 949 (1977) and Hsiao et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA), 76: 3829 (1979). It is performed according to the method of)). However, other methods of introducing DNA into cells may also be used, such as intranuclear microinjection, electroporation, fusion of circular cells with bacterial protoplasts, or polycationics such as polybrene, polyornithine. For several techniques for transformation of mammalian cells, see Keown et al., Methods in Enzymology, 185: 527-537 (1990) and Mansour et al., Nature, 336: 348-352 (1988). do.

본원에서 벡터 내의 DNA를 클로닝 또는 발현하기에 적합한 숙주세포에는 원핵세포, 효모 또는 고등 진핵세포가 포함된다. 적합한 원핵세포는 진정세균, 예를 들어 그람 음성 또는 그람 양성 생물, 예를 들어 엔테로박테리아세애(Enterobacteriaceae), 예를 들어 대장균(E. coli)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 다양한 대장균 균주, 예를 들어 대장균 K12 균주 MM294 (ATCC 31,446), 대장균 X1776(ATCC 31,537), 대장균 균주 W3110(ATCC 27,325) 및 대장균 균주 K5 772(ATCC 53,635)는 용이하게 입수할 수 있다. 다른 적합한 원핵생물 숙주세포는 에셔리키아(Eshcerichia), 예를 들어 대장균, 엔테로박터(Enterobacter), 에르위니아(Erwinia), 클렙시엘라(Klebsiella), 프로테우스(Proteus), 살모넬라(Salmonella), 예를 들어 살모넬라 티피무리움(Salmonella typhimurium), 세라티아(Serratia), 예를 들어 세라티아 마르세스칸스(Serratia marcescans) 및 시겔라(Shigella) 등의 장내세균과(Enterobacteriaceae), 및 바실러스(Bacillus), 예를 들어 비. 서브틸리스 (B. subtilis) 및 비. 리체니포르미스(B. licheniformis) (예를 들어, 1989년 4월 12일자로 공고된 DD 266,710호에 기재된 비. 리체니포르미스(B. licheniformis) 41P), 슈도모나스 (Pseudomonas), 예를 들어 피. 아에루기노사(P. aeruginosa) 및 스트렙토마이세스 (Streptomyces)를 포함한다. 이러한 예는 단지 예시적인 것으로서 이에 제한되는 것은 아니다. 균주 W3110은 재조합 DNA 산물 발효에 공통적인 숙주 균주이기 때문에 특히 바람직한 숙주 또는 모 숙주이다. 바람직하게는, 숙주세포는 최소량의 단백질 분해 효소를 분비한다. 예를 들어, 균주 W3110은 숙주의 내생 단백질을 코딩하는 유전자의 돌연변이를 초래하도록 변형될 수 있고, 이러한 숙주의 예는 완전한 유전자형tonA를 갖는 대장균 W3110 균주 1A2, 완전한 유전자형tonA ptr3을 갖는 대장균 W3110 균주 9E4, 완전한 유전자형tonA ptr3 phoA E15(argF-lac)169 degP ompT kan r 를 갖는 대장균 W3110 균주 27C7(ATCC 55,244), 완전한 유전자형tonA ptr3 phoA E15 (argF-lac)169 degP ompT rbs7 ilvG kan r 를 갖는 대장균 W3110 균주 37D6, 비-카나마이신 내성degP결실 돌연변이를 갖는 균주 37D6인 대장균 W3110균주 40B4 및 1990년 8월 7일 공포된 미국 특허 제4,946,783호에 개시된 페리플라즘 프로테아제 변이체를 갖는 대장균 균주를 포함한다. 별법으로, 시험관내 클로닝 방법, 예를 들어 PCR 또는 다른 핵산 중합효소 반응이 적합하다.Suitable host cells for cloning or expressing the DNA in the vectors herein include prokaryotic, yeast or higher eukaryotic cells. Suitable prokaryotic cells include, but are not limited to, sedative bacteria, for example Gram negative or Gram positive organisms, for example Enterobacteriaceae, for example E. coli . Various E. coli strains, such as E. coli K12 strain MM294 (ATCC 31,446), E. coli X1776 (ATCC 31,537), E. coli strain W3110 (ATCC 27,325) and E. coli strain K5 772 (ATCC 53,635) are readily available. Other suitable prokaryotic host cells include Escher Escherichia (Eshcerichia), for example, E. coli, Enterobacter (Enterobacter), El Winiah (Erwinia), keulrep when Ella (Klebsiella), Proteus (Proteus), Salmonella (Salmonella), e. g Salmonella typhimurium (Salmonella typhimurium), Serratia marcescens (Serratia), for example Serratia dry process kanseu Enterobacteriaceae and (Enterobacteriaceae), such as (Serratia marcescans) and Shigella (Shigella), and Bacillus (Bacillus), for example, For rain. B. subtilis and b. Needle piece formate miss (B. licheniformis) (e.g., as described in the notification No. DD 266,710 dated April 12, 1989 Non. Piece you miss formate (B. licheniformis) 41P), for Pseudomonas (Pseudomonas), for example, blood. Rugi ah include labor (P. aeruginosa), and Streptomyces (Streptomyces). This example is illustrative only and is not limited thereto. Strain W3110 is a particularly preferred host or parent host because it is a common host strain for recombinant DNA product fermentation. Preferably, the host cell secretes minimal amounts of proteolytic enzymes. For example, strain W3110 may be modified to cause a mutation in the gene encoding the endogenous protein in a host, examples of such hosts include E. coli having the complete genotype tonA W3110 strain 1A2, E. coli having the complete genotype tonA ptr3 W3110 strain 9E4 , the complete genotype tonA ptr3 phoA E15 (argF-lac ) 169 degP ompT E. coli W3110 strains with the kan r 27C7 (ATCC 55,244), the complete genotype tonA ptr3 phoA E15 (argF-lac ) 169 degP ompT rbs7 ilvG of E. coli having the kan r W3110 Strain 37D6, Escherichia coli W3110 strain 40B4, strain 37D6 having a non-kanamycin resistant degP deletion mutation, and E. coli strain having the periplasmic protease variant disclosed in US Pat. No. 4,946,783, issued August 7, 1990. Alternatively, in vitro cloning methods such as PCR or other nucleic acid polymerase reactions are suitable.

원핵세포 외에, 섬유상 진균 또는 효모와 같은 진핵 미생물이 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 코딩 벡터의 클로닝 또는 발현 숙주로서 적합하다. 사카로마이세스 세레비지애 (Saccharomyces cerevisiae)가 일반적으로 사용되는 하등 진핵 숙주 미생물이다. 다른 미생물에는 시조사카로마이세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe) (Beach and Nurse, Nature, 290: 140 [1981]; 1985년 5월 2일 공고된 EP 139,383); 클루이베로마이세스(Kluyveromyces) 숙주(미국 특허 제4,943,529호; Fleer et al., Bio/Technology, 9:968-975 (1991)), 예를 들어 케이. 락티스(K. lactis) (MW98-8C, CBS683, CBS4574; Louvencourt et al., J. Bacteriol., 737 [1983]), 케이. 프라길리스 (K. fragilis)(ATCC 12,424), 케이. 불가리쿠스(K. bulgaricus)(ATCC 16,045), 케이. 위케라미 (K. wickeramii)(ATCC 24,178), 케이. 왈티이 (K. waltii)(ATCC 56,500), 케이. 드로소필라룸 (K. drosophilarum)(ATCC 36,906; Van den Berg et al., Bio/Technology, 8:135(1990)), 케이. 써모톨레란스 (K. thermotolerans) 및 케이. 막시아누스 (K. marxianus); 야로위아 (yarrowia)(유럽 특허 402,226); 피치아 파스토리스 (Pichia pastoris) (유럽 특허 183,070; Sreekrishna et al., J. Basic Microbiol., 28:265-278 [1988]); 칸디다(Candida); 트리코데르마 레에시아(Trichodermareesia)(유럽 특허 244,234); 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa; Case et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76:5259-5263 [1979]); 시와니오마이세스(Schwanniomyces), 예를 들어 시와니오마이세스 옥시덴탈리스 (Schwanniomyces occidentalis)(1990년 10월 31일 공고된 유럽 특허 394,538); 및 섬유상 진균, 예를 들어 뉴로스포라(Neurospora), 페니실리움(Penicillium), 톨리포클라디움(Tolypocladium) (1991년 1월 10일 공고된 국제 공개 제91/00357호) 및 아스퍼길러스(Aspergillus) 숙주, 예를 들어 에이. 니둘란스 (A. nidulans)(Ballance et al,, Biochem. Biophys. Res. Commun., 112:284-289 [1983]; Tilburn et al., Gene, 26:205-221 [1983]; Yelton et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 1470-1474 [1984]) 및 에이. 니게르 (A. niger) (Kelly and Hynes, EMBO J., 4: 475-479 [1985])가 포함된다. 메틸 영양 요구성 효모가 적합하고, 한세눌라(Hansenula), 칸디다(Candida), 클로엑케라 (Kloeckera), 피치아(Pichia), 사카로마이세스(Saccharomyces), 토룰롭시스(Torulopsis) 및 로도토룰라(Rhodotorula)로 이루어지는 속으로부터 선택된, 메탄올 상에서 생장할 수 있는 효모를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 이들 종류의 효모의 예인 구체적인 종의 목록은 문헌(C. Anthony, The Biochemistry of Methylotrophs, 269 (1982))에 기재되어 있다.In addition to prokaryotic cells, eukaryotic microorganisms such as fibrous fungi or yeast are suitable as cloning or expression hosts for PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 coding vectors. . Saccharomyces cerevisiae is a commonly used lower eukaryotic host microorganism. Other microorganisms include Schizosaccharomyces pombe (Beach and Nurse, Nature, 290: 140 [1981]; EP 139,383, published May 2, 1985); Kluyveromyces hosts (US Pat. No. 4,943,529; Fleer et al., Bio / Technology, 9: 968-975 (1991)), for example K. K. lactis (MW98-8C, CBS683, CBS4574; Louvencourt et al., J. Bacteriol., 737 [1983]), K. K. fragilis (ATCC 12,424), K. B. bulgaricus (ATCC 16,045), K. K. wickeramii (ATCC 24,178), K. K. waltii (ATCC 56,500), K. K. drosophilarum (ATCC 36,906; Van den Berg et al., Bio / Technology, 8: 135 (1990)), K. Thermotolerans and K. Maxianus ( K. marxianus ); Yarrowia (European Patent 402,226); Pichia pastoris (European patent 183,070; Sreekrishna et al., J. Basic Microbiol., 28: 265-278 [1988]); Candida (Candida); Trichodermareesia (European Patent 244,234); Neurospora crassa (Case et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76: 5259-5263 [1979]); Schwanniomyces , for example Schwanniomyces occidentalis (European Patent 394,538, published October 31, 1990); And fibrous fungi such as Neurospora , Penicillium , Tolypocladium (International Publication No. 91/00357, published January 10, 1991) and Aspergillus ( Aspergillus ) hosts, for example A. A. nidulans (Ballance et al, Biochem. Biophys. Res. Commun., 112: 284-289 [1983]; Tilburn et al., Gene, 26: 205-221 [1983]; Yelton et al , Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 1470-1474 [1984]) and A. Needle germanium (A. niger): it includes (Kelly and Hynes, EMBO J., 4 475-479 [1985]). Methyl auxotrophic yeast are suitable and, a century Cronulla (Hansenula), Candida (Candida), the claw exciter Mosquera (Kloeckera), blood teeth (Pichia), saccharose in my process (Saccharomyces), sat rulrop sheath (Torulopsis) and also torulra ( Rhodotorula ), including, but not limited to, yeasts that can grow on methanol. A list of specific species that are examples of these types of yeast is described in C. Anthony, The Biochemistry of Methylotrophs, 269 (1982).

글리코실화 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 발현에 적합한 숙주세포는 다세포 생물로부터 유래한다. 무척추동물 세포의 예에는 드로소필라S2 및 스포도프테라 Sf9와 같은 곤충 세포 및 식물 세포가 포함된다. 유용한 포유동물 숙주세포주의 예에는 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포 및 COS 세포가 포함된다. 보다 구체적인 예에는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 라인(COS-7, ATCC CRL 1651), 인간 배아 신장 라인 (293 세포 또는 현탁 배양액 중의 생장을 위해 서브클로닝된 293 세포, Graham et al., J. Gen Virol., 36:59(1997)), 차이니즈 햄스터 난소 세포/-DHFR (CHO, Urlaub and Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216(1980)), 생쥐 세르톨리 세포 (TM4, Mather, Biol. Reprod., 23:243-251(1980)), 인간 폐 세포(W138, ATCC CCL 75), 인간 간세포(Hep G2, HB 8065) 및 생쥐 유방 종양(MMT 060562, ATCC CCL51)이 포함된다. 당업자라면 적합한 숙주세포를 선택할 수 있다.Suitable host cells for the expression of glycosylated PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 are derived from multicellular organisms. Examples of invertebrate cells include insect cells and plant cells, such as Drosophila S2 and Spodofterra Sf9. Examples of useful mammalian host cell lines include Chinese hamster ovary (CHO) cells and COS cells. More specific examples include monkey kidney CV1 line (COS-7, ATCC CRL 1651) transformed by SV40, human embryonic kidney line (293 cells or 293 cells subcloned for growth in suspension culture, Graham et al., J Gen Virol., 36:59 (1997)), Chinese Hamster Ovary Cells / -DHFR (CHO, Urlaub and Chasin, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 4216 (1980)), Mouse Sertoli Cells ( TM4, Mather, Biol. Reprod., 23: 243-251 (1980)), human lung cells (W138, ATCC CCL 75), human hepatocytes (Hep G2, HB 8065) and mouse breast tumors (MMT 060562, ATCC CCL51) This includes. Those skilled in the art can select suitable host cells.

c. 복제가능 벡터의 선택 및 사용c. Selection and use of replicable vectors

PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 코딩하는 핵산(예를 들어, cDNA 또는 게놈 DNA)은 클로닝 (DNA의 증폭) 또는 발현을 위한 복제가능 벡터에 삽입할 수 있다. 다양한 벡터를 용이하게 구할 수 있다. 예를 들어, 벡터는 플라스미드, 코스미드, 바이러스 입자 또는 파지의 형태일 수 있다. 적합한 핵산 서열은 다양한 방법에 의해 벡터 내에 삽입될 수 있다. 일반적으로, 당업계에 공지된 기술을 사용하여 DNA를 적합한 제한 엔도뉴클레아제 부위(들) 내에 삽입한다. 벡터 성분은 일반적으로 신호 서열, 복제 개시점, 하나 이상의 마커 유전자, 인핸서 성분, 프로모터 및 전사 종결 서열을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 상기성분을 하나 이상 포함하는 적합한 벡터의 제조는 당업자에게 공지된 표준 라이게이션 기술을 사용한다.Nucleic acids (e.g. cDNA or genomic DNA) encoding PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 can be cloned (amplified of DNA) or expressed. Can be inserted into a replicable vector for Various vectors can be easily obtained. For example, the vector may be in the form of a plasmid, cosmid, viral particles or phage. Suitable nucleic acid sequences can be inserted into the vector by various methods. In general, DNA is inserted into suitable restriction endonuclease site (s) using techniques known in the art. Vector components generally include, but are not limited to, signal sequences, origins of replication, one or more marker genes, enhancer components, promoters, and transcription termination sequences. The preparation of suitable vectors comprising one or more of these components uses standard ligation techniques known to those skilled in the art.

PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882는 직접 재조합 방법에 의해 생산될 수 있을 뿐만 아니라 성숙 단백질 또는 폴리펩티드의 N-말단에서 특이적 절단 부위를 갖는 다른 폴리펩티드 또는 신호 서열일 수 있는 이종 폴리펩티드와의 융합 폴리펩티드로서 생산될 수 있다. 일반적으로, 신호 서열은 벡터의 성분일 수 있거나 또는 벡터 내로 삽입된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 코딩 DNA의 일부일 수 있다. 신호 서열은 예를 들어 알칼리 포스파타제, 페니실리나제, lpp 또는 열안정성 엔테로톡신 II 리더의 군으로부터 선택된 원핵생물 신호 서열일 수 있다. 효모에서의 분비를 위해, 신호 서열은 예를 들어 효모 인버타제 리더, α 인자 리더(사카로마이세스 (Saccharomyces) 및 클루이베로마이세스 (Kluyveromyces) α-인자 리더(미국 특허 제5,010,182호)를 포함함) 또는 산 포스파타제 리더, 씨. 알비칸스(C. albicans) 글루코아밀라제 리더(1990년 4월 4일 공고된 유럽 특허 362,179) 또는 1990년 11월 15일 공개된 국제 공개 제90/13646호에 기재된 신호 서열일 수 있다. 포유동물 세포 발현에서, 포유동물 신호 서열, 예를 들어 동일하거나 관련된 종의 분비 폴리펩티드로부터의 신호 서열 및 바이러스 분비 리더를 사용하여 단백질의 분비를 유도할 수 있다.PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 can be produced by direct recombination methods as well as specific at the N-terminus of the mature protein or polypeptide. It can be produced as a fusion polypeptide with a heterologous polypeptide, which can be another polypeptide or signal sequence having a cleavage site. In general, the signal sequence may be a component of the vector or may be part of a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 coding DNA inserted into the vector. . The signal sequence can be, for example, a prokaryotic signal sequence selected from the group of alkaline phosphatase, penicillinase, lpp or thermostable enterotoxin II leader. For secretion in yeast, signal sequences include, for example, yeast invertase leader, α factor leader ( Saccharomyces and Kluyveromyces α-factor leader (US Pat. No. 5,010,182)). Or acid phosphatase leader, seed. C. albicans glucoamylase leader (European Patent 362,179, published April 4, 1990) or signal sequence described in International Publication No. 90/13646, published November 15, 1990. In mammalian cell expression, mammalian signal sequences, such as signal sequences from secretory polypeptides of the same or related species, and viral secretion leaders can be used to induce the secretion of proteins.

발현 및 클로닝 벡터 모두는 벡터가 선택된 1 종 이상의 숙주세포에서 복제할 수 있도록 만드는 핵산 서열을 함유한다. 이러한 서열은 다양한 세균, 효모 및 바이러스에 대해 공지되어 있다. 플라스미드 pBR322로부터의 복제 개시점은 대부분의 그람 음성 세균에 적합하고, 2μ 플라스미드 복제 개시점은 효모에 적합하고, 다양한 바이러스 복제 개시점(SV40, 폴리오마, 아데노바이러스, VSV 또는 BPV)은 포유동물 세포에서 벡터를 클로닝하는데 유용하다.Both expression and cloning vectors contain nucleic acid sequences that allow the vector to replicate in one or more selected host cells. Such sequences are known for various bacteria, yeasts and viruses. The origin of replication from plasmid pBR322 is suitable for most Gram-negative bacteria, the 2μ plasmid replication initiation is suitable for yeast, and various viral replication initiation points (SV40, polyoma, adenovirus, VSV or BPV) are used for mammalian cells. Useful for cloning vectors in.

발현 및 클로닝 벡터는 통상적으로 선별가능한 마커로도 불리우는 선별 유전자를 함유할 것이다. 대표적인 선별 유전자, 예를 들어 바실러스의 경우 D-알라닌 라세마제를 코딩하는 유전자는 (a) 항생제 또는 다른 독소, 예를 들어 앰피실린, 네오마이신, 메토트렉세이트 또는 테트라싸이클린에 내성을 부여하는 단백질, (b) 영양요구성 결함을 보완하는 단백질 또는 (c) 복합 배지로부터 이용할 수 없는 중요한 영양물질을 공급하는 단백질을 코딩한다.Expression and cloning vectors will typically contain a selection gene, also called a selectable marker. Representative selection genes, eg, genes encoding D-alanine racemases for Bacillus, may be (a) proteins that confer resistance to antibiotics or other toxins such as ampicillin, neomycin, methotrexate or tetracycline, (b) Encode proteins that supplement nutritional deficiencies or (c) proteins that provide important nutrients that are not available from the complex medium.

포유동물 세포에 적합한 선별가능한 마커의 예에는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 코딩 핵산을 수용할 수 있는 세포를 확인할 수 있게 하는 것, 예를 들어 DHFR 또는 티미딘 키나아제가 있다. 야생형 DHFR이 이용될 경우, 적합한 숙주세포는 DHFR 활성이 결여된 CHO 세포주이고, 문헌(Urlaub et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:4216(1980))에 기재된 바와 같이 제조 및 증식된다. 효모에 사용하는데 적합한 선별 유전자는 효모 플라스미드 YRp7에 존재하는trp1유전자이다(Stinchcomb et al., Nature, 282:39(1979); Kingsman et al., Gene, 7:141(1979); Tschemper et al., Gene, 10:157(1980)).trp1유전자는 트립토판으로의 생장능이 결여된 효모의 변이주(예를 들어, ATCC 44076 또는 PEP4-1)에 대한 선별 마커를 제공한다(Jones, Genetics, 85: 12 (1977)).Examples of selectable markers suitable for mammalian cells include those that can identify PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 coding nucleic acids. One such as DHFR or thymidine kinase. When wild type DHFR is used, a suitable host cell is a CHO cell line lacking DHFR activity and is prepared and propagated as described in Urlaub et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 4216 (1980). do. Suitable selection genes for use in yeast are the trp1 gene present in yeast plasmid YRp7 (Stinchcomb et al., Nature, 282: 39 (1979); Kingsman et al., Gene, 7: 141 (1979); Tschemper et al. Gene, 10: 157 (1980). The trp1 gene provides a selection marker for mutant strains of yeast lacking growth ability to tryptophan (eg ATCC 44076 or PEP4-1) (Jones, Genetics, 85: 12 (1977)).

발현 및 클로닝 벡터는 일반적으로 mRNA 합성을 유도하는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 코딩 핵산 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터를 함유한다. 다양한 잠재성 있는 숙주세포에 의해 인식되는 프로모터는 공지되어 있다. 원핵생물 숙주에 사용하기에 적합한 프로모터에는 β-락타마제 및 락토스 프로모터 시스템(Chang et al., Nature, 275:615 (1978); Goeddel et al., Nature, 281:544 (1979)), 알칼리 포스파타제, 트립토판 (trp) 프로모터 시스템(Goeddel, Nucleic acid Res., 8:4057 (1980); EP 제36,776호), 및 하이브리드 프로모터, 예를 들어 tac 프로모터(deBoer et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80:21-25 (1983))를 포함한다. 또한, 세균 시스템에서 사용되는 프로모터는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 코딩하는 DNA에 작동가능하게 연결된 샤인-달가노(S.D.) 서열을 함유할 것이다.Expression and cloning vectors generally contain a promoter operably linked to the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 coding nucleic acid sequences that induce mRNA synthesis. do. Promoters recognized by various potential host cells are known. Suitable promoters for use in prokaryotic hosts include β-lactamase and lactose promoter systems (Chang et al., Nature, 275: 615 (1978); Goeddel et al., Nature, 281: 544 (1979)), alkaline phosphatase , Tryptophan (trp) promoter system (Goeddel, Nucleic acid Res., 8: 4057 (1980); EP 36,776), and hybrid promoters such as the tac promoter (deBoer et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA, 80: 21-25 (1983). In addition, promoters used in bacterial systems include Shine-Dalgano, which is operably linked to DNA encoding PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882. SD) will contain the sequence.

효모 숙주에 사용하기 적합한 프로모터 서열의 예에는 3-포스포글리세레이트 키나아제(Hitzeman et al., J. Biol. Chem., 255:2073 (1980)) 또는 다른 당분해 효소(Hess et al., J. Adv. Enzyme Reg., 7:149(1968); Holland, Biochemistry, 17:4900 (1978)), 예를 들어 에놀라제, 글리세르알데히드-3-포스페이트 데히드로게나제, 헥소키나아제, 피루베이트 디카르복실라제, 포스포프럭토키나아제,글루코스-6-포스페이트 이소머라제, 3-포스포글리세레이트 뮤타아제, 피루베이트 키나아제, 트리오스포스페이트 이소머라제, 포스포글루코스 이소머라제 및 글루코키나아제에 대한 프로모터가 포함된다.Examples of promoter sequences suitable for use in yeast hosts include 3-phosphoglycerate kinase (Hitzeman et al., J. Biol. Chem., 255: 2073 (1980)) or other glycolytic enzymes (Hess et al., J). Adv.Enzyme Reg., 7: 149 (1968); Holland, Biochemistry, 17: 4900 (1978)), for example enolase, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, hexokinase, pyruvate For decarboxylase, phosphofructokinase, glucose-6-phosphate isomerase, 3-phosphoglycerate mutase, pyruvate kinase, triosphosphate isomerase, phosphoglucose isomerase and glucokinase Promoter is included.

생장 조건에 의해 조절되는 전사의 추가의 이점을 갖는 유도가능한 프로모터인 다른 효모 프로모터로는 알코올 데히드로게나제 2, 이소시토크롬 C, 산 포스파타제, 질소 대사에 관련된 분해 효소, 메탈로티오네인, 글리세르알데히드-3-포스페이트 데히드로게나제, 및 말토스 및 갈락토스 이용에 작용하는 효소에 대한 프로모터 영역이 있다. 효모 발현에 사용하기에 적합한 벡터 및 프로모터는 추가로 EP 제73,657호에 기재되어 있다.Other yeast promoters, which are inducible promoters with the added advantage of transcription controlled by growth conditions, include alcohol dehydrogenase 2, isocytochrome C, acid phosphatase, degrading enzymes involved in nitrogen metabolism, metallothionein, glycer There is a promoter region for aldehyde-3-phosphate dehydrogenase, and enzymes that act on maltose and galactose use. Suitable vectors and promoters for use in yeast expression are further described in EP 73,657.

포유동물 숙주세포내의 벡터로부터의 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 전사는 바이러스, 예를 들어 폴리오마 바이러스, 포울폭스 바이러스 (1989년 7월 5일 공고된 UK 제2,211,504호), 아데노바이러스(예를 들어, 아데노바이러스 2), 소 파필로마 바이러스, 조류 육종 바이러스, 싸이토메갈로바이러스, 레트로바이러스, B형 간염 바이러스 및 원숭이 바이러스 40 (SV40)의 게놈으로부터 얻어진 프로모터, 이종 포유동물 프로모터, 예를 들어 액틴 프로모터 또는 면역글로불린 프로모터 및 열-충격 프로모터로부터 얻어진, 숙주세포 시스템에 적합한 프로모터에 의해 조절된다.PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 transcription from a vector in a mammalian host cell is a virus such as polyoma virus, Fopox virus ( UK No. 2,211,504), adenovirus (eg, adenovirus 2), published July 5, 1989, bovine papilloma virus, avian sarcoma virus, cytomegalovirus, retrovirus, hepatitis B virus and monkey virus A promoter obtained from a genome of 40 (SV40), a heterologous mammalian promoter such as an actin promoter or an immunoglobulin promoter and a promoter obtained from a heat-shock promoter, are regulated by a suitable promoter.

고등 진핵세포에 의한 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 코딩하는 DNA의 전사는 인핸서 서열을 벡터에 삽입함으로써 증가될 수 있다. 인핸서는 일반적으로 전사를 증가시키기 위해 프로모터에 대해 작용하는, 약 10 내지 300 bp의 DNA의 시스-액팅 성분이다. 많은 인핸서 서열은 포유동물 유전자(글로빈, 엘라스타제, 알부민, α-페토단백질 및 인슐린)로부터 유래하는 것으로 알려져 있다. 그러나, 통상적으로 진핵세포 바이러스로부터 유래한 인핸서를 사용할 것이다. 그 예에는 복제 개시점의 뒷부분 상의 SV40 인핸서(bp 100-270), 싸이토메갈로바이러스 초기 프로모터 인핸서, 복제 개시점의 뒷부분 상의 폴리오마 인핸서, 및 아데노바이러스 인핸서가 포함된다. 인핸서는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 코딩 서열의 5' 또는 3' 위치에서 벡터에 스플라이싱될 수 있지만, 프로모터로부터 5' 부위에 위치하는 것이 바람직하다.Transcription of DNA encoding PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 by higher eukaryotic cells can be increased by inserting an enhancer sequence into the vector. . Enhancers are generally cis-acting components of about 10 to 300 bp of DNA, which act on the promoter to increase transcription. Many enhancer sequences are known to be derived from mammalian genes (globin, elastase, albumin, α-fetoprotein and insulin). Typically, however, one will use an enhancer derived from a eukaryotic virus. Examples include the SV40 enhancer (bp 100-270) on the back of the start of replication, the cytomegalovirus early promoter enhancer, the polyoma enhancer on the back of the start of replication, and the adenovirus enhancer. Enhancers can be spliced into vectors at the 5 'or 3' positions of the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 coding sequences, but from the promoter It is preferably located at the 5 'site.

또한, 진핵생물 숙주세포(효모, 진균, 곤충, 식물, 동물, 인간 또는 다른 다세포 생물로부터 유래한 다핵 세포)에 사용되는 발현 벡터는 전사 종결 및 mRNA 안정화에 필요한 서열을 포함할 수 있을 것이다. 그러한 서열은 통상적으로 진핵세포 또는 바이러스 DNA 또는 cDNA의 5' 및 때로는 3' 비번역 영역으로부터 확보된다. 이들 영역은 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 코딩하는 mRNA의 비번역 부분에서 폴리아데닐화 단편으로서 전사되는 뉴클레오티드 단편을 포함한다.In addition, expression vectors used in eukaryotic host cells (multinuclear cells derived from yeast, fungi, insects, plants, animals, humans or other multicellular organisms) may comprise sequences necessary for transcription termination and mRNA stabilization. Such sequences are typically obtained from the 5 'and sometimes 3' untranslated regions of eukaryotic or viral DNAs or cDNAs. These regions include nucleotide fragments that are transcribed as polyadenylation fragments in the untranslated portion of mRNA encoding PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882. do.

재조합 척추동물 세포 배양에서 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344,PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 합성에 적용하는데 적합한 다른 방법, 벡터 및 숙주세포는 문헌(Gething et al., Nature, 293:620-625 (1981); Mantei et al., Nature, 281:40-46 (1979); 유럽 특허 제117,060호 및 동 제117,058호)에 기재되어 있다.Other methods, vectors, and host cells suitable for application to the synthesis of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 in recombinant vertebrate cell culture are described in Gething. et al., Nature, 293: 620-625 (1981); Mantei et al., Nature, 281: 40-46 (1979); European Patent Nos. 117,060 and 117,058).

d. 유전자 증폭 및 발현의 검출d. Detection of gene amplification and expression

유전자 증폭 및(또는) 발현은 예를 들어 통상의 서던 블롯팅, mRNA의 전사를 정량하기 위한 노던 블롯팅(Thomas, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77:5201-5205 (1980)), 도트 블롯팅(DNA 분석) 또는 본원에서 제공된 서열을 기초로 하여 적절하게 표지된 프로브를 사용한 원래 위치에서의(in situ) 혼성화에 의해 시료에서 직접 측정할 수 있다. 별법으로, DNA 이중체(duplex), RNA 이중체 및 DNA-RNA 하이브리드 이중체 또는 DNA-단백질 이중체를 비롯한 특정 이중체를 인식할 수 있는 항체를 사용할 수 있다. 바꾸어 말하면, 항체를 표지하고, 상기 이중체를 표면에 결합시켜, 표면 상에 결합체가 형성될 때 이중체에 결합한 항체의 존재를 검출할 수 있는 분석을 수행할 수 있다.Gene amplification and / or expression may be, for example, conventional Southern blotting, Northern blotting to quantify transcription of mRNA (Thomas, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 5201-5205 (1980)), Measurements can be made directly in the sample by dot blotting (DNA analysis) or hybridization in situ using appropriately labeled probes based on the sequences provided herein. Alternatively, antibodies can be used that can recognize specific duplexes, including DNA duplexes, RNA duplexes, and DNA-RNA hybrid duplexes or DNA-protein duplexes. In other words, an antibody can be labeled and the duplex bound to the surface to perform an assay that can detect the presence of the antibody bound to the duplex when a conjugate is formed on the surface.

별법으로, 유전자 발현은 세포 또는 조직 단면의 면역조직화학적 염색과 같은 면역학적 방법 및 유전자 생성물의 발현을 직접 정량하기 위한 세포 배양액 또는 체액의 분석에 의해 측정할 수 있다. 면역조직화학적 염색 및(또는) 시료 유체의 분석에 유용한 항체는 모노클로날 또는 폴리클로날 항체일 수 있고, 이들은 임의의 포유동물에서 제조할 수 있다. 편리하게는, 천연 서열 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112,PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드, 본원에서 제공되는 DNA 서열 기재의 합성 펩티드 또는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 DNA에 융합된 특정 항체 에피토프를 코딩하는 외생성 서열에 대한 항체를 제조할 수 있다.Alternatively, gene expression can be measured by immunological methods such as immunohistochemical staining of cell or tissue sections and analysis of cell culture or body fluids for direct quantification of expression of gene products. Antibodies useful for immunohistochemical staining and / or analysis of sample fluids may be monoclonal or polyclonal antibodies, which may be prepared in any mammal. Conveniently, the natural sequences PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides, synthetic peptides based on the DNA sequences provided herein or PRO201, PRO292, Antibodies to exogenous sequences encoding specific antibody epitopes fused to PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 DNA can be prepared.

e. 폴리펩티드의 정제e. Purification of Polypeptides

PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 형태는 배양 배지 또는 숙주세포 용해액으로부터 회수될 수 있다. 세포막에 결합하는 경우, 적합한 세제 용액 (예를 들어, Triton-X 100)을 사용하거나 효소의 절단에 의해 세포막으로부터 방출될 수 있다. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 발현에 사용된 세포는 동결-해동 싸이클, 초음파 처리, 기계적 분쇄 또는 세포 용해제와 같은 다양한 물리적 또는 화학적 수단에 의해 분쇄시킬 수 있다.The form of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 can be recovered from the culture medium or host cell lysate. When bound to the cell membrane, it may be released from the cell membrane using a suitable detergent solution (eg Triton-X 100) or by cleavage of the enzyme. The cells used for the expression of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 can be used in a variety of applications such as freeze-thaw cycles, sonication, mechanical grinding or cell lysis. It may be ground by physical or chemical means.

재조합 세포 단백질 또는 폴리펩티드로부터 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 정제하는 것이 바람직할 수 있다. 적합한 정제 방법의 예로는 이온 교환 컬럼 상에서의 분획화, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카 또는 양이온 교환 수지, 예를 들어 DEAE 상에서의 크로마토그래피, 크로마토포커싱, SDS-PAGE, 황산암모늄 침전, Sephadex G-75를 사용한 겔 여과, IgG와 같은 오염물질을 제거하기 위한 단백질 A 세파로스 컬럼, 및 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344,PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 에피토프 태그 형태를 결합시키기 위한 금속 킬레이팅 컬럼이 있다. 다양한 단백질 정제 방법을 사용할 수 있고, 이러한 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 문헌(Deutscher, Methods in Enzymology, 182 (1990); Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, Springer-Verlag, New York (1982))에 기재되어 있다. 선택되는 정제 단계(들)은 예를 들어 사용되는 생산 방법 및 생산되는 특정 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 특성에 따라 결정될 것이다.It may be desirable to purify PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 from recombinant cell proteins or polypeptides. Examples of suitable purification methods include fractionation on ion exchange columns, ethanol precipitation, reverse phase HPLC, silica or cation exchange resins, for example chromatography on DEAE, chromatographic focusing, SDS-PAGE, ammonium sulfate precipitation, Sephadex G-75 Filtration using gel, protein A Sepharose column to remove contaminants such as IgG, and epitopes of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 There is a metal chelating column for joining tag forms. Various protein purification methods can be used and such methods are known in the art and are described, for example, in Deutscher, Methods in Enzymology, 182 (1990); Scopes, Protein Purification: Principles and Practice, Springer-Verlag, New York (1982). The purification step (s) selected is, for example, depending on the production method used and the specific PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 properties. Will be decided.

E. 종양 조직 및 세포주에서 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 증폭E. Amplification of genes encoding PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptides in tumor tissues and cell lines

본 발명은 특정 암 세포에서 증폭된 유전자의 확인 및 특성 분류를 기초로 한 것이다.The present invention is based on the identification and characterization of genes amplified in specific cancer cells.

원핵생물 및 진핵생물의 게놈은 표면상 모순되는 두 요구조건하에 놓인다. 하나는 여러 세대를 거치면서 안정한 유전성이 보존되도록 유전 정보인 DNA를 원형대로 보존 및 증식시켜야 한다는 것이며, 다른 하나는 세포 또는 유기체가 환경 변화를 견딜 수 있어야 한다는 것이다. 환경 변화를 견디는 메카니즘으로는 유전 물질의 정성 또는 정량적 변화가 있다. 정성적 변화로는 코딩 서열이 변형되어 구조적 및(또는) 기능적으로 상이한 단백질을 생성시키는 DNA 돌연변이가 있다. 유전자 증폭은 완전한 코딩 서열, 예를 들어 유전자의 실질적인 수가 증가하여 전사에 이용될 수 있는 주형의 수가 증가하고, 변역가능한 전사물 수의 증가 및 결국에는 증폭된 유전자에 의해 코딩되는 단백질이 풍부해진다.The genomes of prokaryotes and eukaryotes are subject to two seemingly contradictory requirements. One is to preserve and propagate DNA, the genetic information intact, to preserve stable genetics over generations. The other is that cells or organisms must be able to withstand environmental changes. Mechanisms that withstand environmental changes include qualitative or quantitative changes in genetic material. Qualitative changes include DNA mutations in which the coding sequence is modified to produce structurally and / or functionally different proteins. Gene amplification results in an increase in the number of complete coding sequences, e.g., the substantial number of genes available for transcription, an increase in the number of translatable transcripts and, ultimately, a protein encoded by the amplified gene.

유전자 증폭의 현상 및 그의 주요 메카니즘은 다수 원핵생물 및 진핵생물 배양 시스템에서 생체내 연구하였다. 유전자의 증폭의 가장 전형적인 예로는 세포독성 약물인 메토트렉세이트(MTX)의 농도를 달리하여 함유하는 배지중 진핵세포의 배양액이 포함된다. MTX는 폴산 유사체이며, 효소 디히드로폴레이트 리덕타제(DHFR)를 블록킹하여 DNA 합성을 방해하는 물질이다. 낮은 농도의 MTX에 초기 노출되는 동안, 대부분의 세포(99.9%를 넘음)가 사멸된다. 소수의 세포만이 살아남고, 이들은 다량의 DFHR-RNA 및 단백질을 생성하여 증가되는 MTX 농도에서 생장할 수 있다. 이러한 과생성은 단일 DHFR 유전자의 증폭을 기초로 한다. 추가의 유전자 복제본은 작은 형태의 세포외염색체 복제본, 과잉 염색체(이중 음성 가닥) 또는 통합된 염색체 복제본으로 발견된다.The phenomenon of gene amplification and its main mechanism have been studied in vivo in many prokaryotic and eukaryotic culture systems. The most typical example of gene amplification includes a culture of eukaryotic cells in a medium containing different concentrations of the cytotoxic drug methotrexate (MTX). MTX is a folic acid analog and a substance that blocks DNA synthesis by blocking the enzyme dihydrofolate reductase (DHFR). During the initial exposure to low concentrations of MTX, most cells (> 99.9%) die. Only a few cells survive and they can produce large amounts of DFHR-RNA and protein to grow at increasing MTX concentrations. This overproduction is based on the amplification of a single DHFR gene. Additional gene copies are found as small forms of extrachromosomal copies, excess chromosomes (double negative strands) or integrated chromosomal copies.

유전자 증폭은 거의 대부분 세포독성 약물(세균의 경우에는 항생제이고, 원핵세포의 경우에는 화학요법제)에 대한 내성을 발현 및 신생물 형질전환 중에 일어난다. 자발적인 사건으로서 또는 바이러스 또는 화학 및 환경적 손상으로 인한 원핵세포의 형질전환은 통상 그 세포의 유전 물질의 변화와 관련되어 있다. 인간 악성질환에서 관찰되는 가장 통상적인 유전적 변화중 하나는 p53 단백질의 돌연변이이다. p53은 세포가 정지기(G1)에서 복제기(S)로 전이되는 것을 조절하며, DNA가 손상된 상태에서는 이러한 전이가 저해된다. 즉, p53 돌연변이를 무력하게한 결과로 주요한 것은 DNA 손상의 축적 및 증가, 즉 유전적 변화이다. 점 돌연변이외에, 신생물 세포에서 유전적 변화의 통상적인 유형은 증폭 및 전체적 구조 변형, 예를 들어 전좌이다.Gene amplification occurs almost exclusively during expression and neoplastic transformation of cytotoxic drugs (antibiotics in bacteria and chemotherapy in prokaryotic cells). Prokaryotic transformation, either as a spontaneous event or due to a virus or chemical and environmental damage, is usually associated with changes in the genetic material of the cell. One of the most common genetic changes observed in human malignancy is mutation of the p53 protein. p53 regulates the metastasis of cells from stationary phase (G1) to replicator (S), which is inhibited in the state of DNA damage. In other words, the main result of the inability to p53 mutation is the accumulation and increase of DNA damage, ie genetic changes. In addition to point mutations, common types of genetic changes in neoplastic cells are amplification and global structural modifications such as translocations.

DNA 서열의 증폭은 DHFR 실험계에서 예시된 바와 같이 특정 기능적 요구조건을 가리킬 수 있다. 따라서, 악성에서의 특정 종양유전자의 증폭은 악성 형질전환 및 형질전환된 표현형의 유지 과정에서 원인이 되는 상기 유전자의 역할에 대한 것이다. 이 이론은 최근 연구에 의해 지지되고 있다. 예를 들어,bcl-2단백질은 특정 유형의 비-호지킨 림프종에서 증폭되는 것으로 밝혀졌다. 이 단잭질은 아팝토시스를 억제하고, 신생물 세포를 점차적으로 축적시킨다. 생장 인자 수용체의 유전자 족에 속하는 부류는 각종 유형의 암에서 증폭되는 것을 밝혀졌는데, 이는 상기 수용체의 과다 발현이 이용가능한 생장 인자의 양을 제한하는데에 신생물 세포를 덜 민감게 하는 것임을 시사하는 것이다. 예로 들 수 있는 것으로는 안드로겐 제거 요법 도중 재발된 전립선암에서 안드로겐의 증폭 및 유방암에서 ERB2와 유사한 생장 인자 수용체의 증폭이 있다. 최근, 세포 주기 진행의 세포내 신호 및 조절에 관련된 유전자가 악성 형질전환 도중 증폭될 수 있는 것으로 밝혀졌다. 이러한 것은 각종 상피 및 임파 신생물에서의bcl-1및ras유전자에 의해 예시된다.Amplification of the DNA sequence may indicate specific functional requirements as exemplified in the DHFR experiment. Thus, amplification of certain oncogenes in malignancy is directed to the role of these genes in the malignant transformation and maintenance of the transformed phenotype. This theory is supported by recent research. For example, bcl-2 protein has been found to be amplified in certain types of non-Hodgkin's lymphoma. This protein inhibits apoptosis and gradually accumulates neoplastic cells. Classes belonging to the gene family of growth factor receptors have been found to be amplified in various types of cancer, suggesting that overexpression of these receptors is less sensitive to neoplastic cells in limiting the amount of growth factor available. . Examples include the amplification of androgen in recurrent prostate cancer during androgen ablation therapy and the amplification of growth factor receptors similar to ERB2 in breast cancer. Recently, it has been found that genes involved in intracellular signaling and regulation of cell cycle progression can be amplified during malignant transformation. This is exemplified by the bcl-1 and ras genes in various epithelial and lymphoid neoplasms.

초기 연구에서는 그러한 연구를 통해 악성 형질전환에 중요한 유전자를 확인할 수 있기 때문에 신생물에서 증폭된 DNA 서열의 확인 가능성을 예시하였다. ERB2의 경우에는 형질전환 단백질이 신규하며 종양 치료 요법에 대한 특이적 표적이기 때문에 치료요법 견지에서의 실행가능성도 보여준다.Early studies have demonstrated the possibility of identifying amplified DNA sequences in neoplasms because such studies can identify genes important for malignant transformation. In the case of ERB2, it is also viable in terms of therapy since the transforming protein is novel and is a specific target for tumor therapy.

증폭된 게놈 서열을 증명하는데 다수의 상이한 기술을 이용할 수 있다. 암 세포로부터 제조된 염색체 스프레드의 고전적인 세포유전적 분석은 전체적 구조 변형, 예를 들어, 전좌, 결실 및 전위를 확인하는데 적합하다. 증폭된 게놈 영역은 많은 복제본 수를 가지거나 염색체외 물질로 존재하는 경우에만 가시화될 수 있다. 세포유전학은 특정 신생물과 특이적 염색체 변화가 일정한 관계에 있음을 보여준 최초의 기술이지만, 취급이 용이한 DNA 서열의 확인 및 단리에 부적합한다. 비교 게놈 혼성화(GGH)라는 보다 근래 개발된 기술은 신생물에서 게놈 증폭의 만연된 현상을 예시하고 있다. 종양 및 정상 DNA는 분열 중기의 정상 세포에 동시에 혼성화되고, 전체 게놈은 종양에 높은 빈도수로 존재하는 DNA 서열을 영상 분석하여 스크리닝할 수 있다(국제 공개 93/1,186호; Gray et al., Radiation Res., 137:275-289[1994]). 스크리닝 방법으로서, 이러한 유형의 분석은 각종 인간 신생물에 존재하는 많은 수의 재발생 앰플리콘(복제된 DNA 스트레치)을 밝혀낸다. CGH는 증폭된 DNA 스트레치를 확인하는데 있어 전형적인 세포유전적 분석보다 더 민감하지만, 표준 분자 유전적 분석으로 앰플리콘 내의 코딩 서열을 신속하게 확인 및 단리할 수는 없다.Many different techniques can be used to demonstrate amplified genomic sequences. Classical cytogenetic analysis of chromosomal spreads made from cancer cells is suitable for identifying global structural modifications, eg, translocations, deletions and translocations. Amplified genomic regions can only be visualized if they have a large number of copies or exist as extrachromosomal material. Cytogenetics is the first technique to show a certain relationship between specific neoplasms and specific chromosomal changes, but is unsuitable for the identification and isolation of easy-to-handle DNA sequences. A more recently developed technique called comparative genome hybridization (GGH) illustrates the prevalent phenomenon of genomic amplification in neoplasms. Tumors and normal DNA hybridize simultaneously to normal cells in the mid-dividing phase, and the entire genome can be screened by image analysis of high frequency DNA sequences present in tumors (International Publication No. 93 / 1,186; Gray et al., Radiation Res) , 137: 275-289 [1994]. As a screening method, this type of analysis reveals a large number of reoccurring amplicons (replicated DNA stretch) present in various human neoplasms. CGH is more sensitive than typical cytogenetic assays in identifying amplified DNA stretch, but standard molecular genetic assays do not allow rapid identification and isolation of coding sequences in amplicons.

유전자 앰플리콘을 검출하는 가장 민감한 방법은 중합효소 연쇄 반응(polymerase chain reaction; PCR) 분석이다. 이 분석법은 매우 소량의 종양 DNA를 출발 물질로 사용하며, 매우 민감하고, 서열분석 등 추가로 분석할 수 있는 DNA를 제공하며, 고-처리량 분석에 적합하다.The most sensitive method of detecting gene amplicons is polymerase chain reaction (PCR) analysis. This assay uses a very small amount of tumor DNA as a starting material, provides very sensitive DNA for further analysis, such as sequencing, and is suitable for high-throughput analysis.

상술한 분석법은 상호 배타적이지만, 종종 신생물내 증폭을 확인하는데 조합하여 사용하기도 한다. 세포유전적 분석 및 CGH는 증폭된 영역을 위해 전체 게놈을 조사하는 방법을 대표하지만, PCR을 기초한 분석은 증폭된 영역내 코딩 서열, 즉 유전자의 최종 확인을 위해서는 가장 적합하다.The assays described above are mutually exclusive, but are often used in combination to identify amplification in neoplasia. Cytogenetic analysis and CGH represent a method of examining the entire genome for amplified regions, but PCR-based analyzes are best suited for final identification of coding sequences in amplified regions, ie genes.

본 발명에 따라, 상기 유전자는 유방암, 폐암, 결장암, 전립선암, 뇌암, 간암, 신장암, 췌장암, 비장암, 흉선암, 고환암, 난소암, 자궁암 등을 비롯한 원발성 암, 종양 또는 종양 세포주로부터의 DNA와 건강한 공여자로부터의 모아진 DNA를 비교하여 정량적 PCR(S. Gelmini et al., Clin. Chem., 43:752[1997])로 확인하였다. 정량적 PCR은 TaqMan 장치(ABI)를 이용하여 수행하였다. 유전자 특이적 프라이머 및 형광 프로브는 DNA의 코딩 서열을 기초로 설계하였다.According to the present invention, the gene is derived from primary cancer, tumor or tumor cell line, including breast cancer, lung cancer, colon cancer, prostate cancer, brain cancer, liver cancer, kidney cancer, pancreatic cancer, spleen cancer, thymic cancer, testicular cancer, ovarian cancer, uterine cancer, etc. DNA and collected DNA from healthy donors were compared and confirmed by quantitative PCR (S. Gelmini et al., Clin. Chem., 43: 752 [1997]). Quantitative PCR was performed using TaqMan apparatus (ABI). Gene specific primers and fluorescent probes were designed based on the coding sequence of the DNA.

인간 폐 암종 세포주로는 모두 ARCC로 부터 입수할 수 있는 A549(SRCC768), Calu-1(SRCC769), Calu-6(SRCC770), H157(SRCC771), H441(SRCC772), H460(SRCC773), SKMES-1(SRC774), SW900(SRCC775), H522(SRCC832) 및 H810(SRCC833)이 있다. 원발성 인간 폐 종양 세포는 통상 선암종, 편평세포 암종, 대세포 암종, 비세포 암종, 소세포 암종 및 기관지 폐포 암종으로부터 유래되며, 그의 예로는 SRCC724(선암종, 약어 "AdenoCa")(LT1), SRCC725(편평세포 암종, 약어 "SqCCa")(LT1a), SRCC726(선암종)(LT2), SRCC727(선암종)(LT3), SRCC728(선암종)(LT4), SRCC729(편평세포 암종)(LT6), SRCC730(선암종/편평세포 암종)(LT7), SRCC825(선암종)(LT8), SRCC731(선암종)(LT9), SRCC732(편평세포 암종(LT10), SRCC733(편평세포 암종)(LT11), SRCC734(선암종)(LT12), SRCC735(선암종/편평세포 암종)(LT13), SRCC736(편평세포 암종)(LT15), SRCC737(편평세포암종)(LT16), SRCC738(편평세포 암종)(LT17), SRCC739(편평세포 암종)(LT-18), SRCC740(편평세포 암종)(LT19), SRCC741(폐세포 암종, 약어 "LCCa")(LT21), SRCC811(선암종)(LT22), SRCC887(편평세포 암종)(LT26), SRCC888(선-BAC 암종)(LT27), SRCC889(편평세포 암종)(LT28), SRCC890(편평세포 암종)(LT29), SRCC891(선암종)(LT30), SRCC892(편평세포 암종((LT31), SRCC894(선암종)(LT33)이 있다. 또한, SRCC1125 [HF-000631], SRCC1127 [HF-000641], SRCC1129 [HF-000643], SRCC1133 [HF-000840], SRCC1135 [HF-000842], SRCC 1227 [HF-001291], SRCC 1229 [HF-001293], SRCC 1230 [HF-001294], SRCC 1231 [HF-001295], SRCC1232 [HF-001296], SRCC1233 [HF-001297], SRCC1235 [HF-001299] 및 SRCC1236 [HF-001300]로 표시되는 인간 폐 종양도 있다.Human lung carcinoma cell lines are all available from ARCC: A549 (SRCC768), Calu-1 (SRCC769), Calu-6 (SRCC770), H157 (SRCC771), H441 (SRCC772), H460 (SRCC773), SKMES- 1 (SRC774), SW900 (SRCC775), H522 (SRCC832) and H810 (SRCC833). Primary human lung tumor cells are usually derived from adenocarcinoma, squamous cell carcinoma, large cell carcinoma, non-cell carcinoma, small cell carcinoma and bronchial alveolar carcinoma, examples of which include SRCC724 (adenocarcinoma, abbreviation "AdenoCa") (LT1), SRCC725 (squamous). Cell carcinoma, abbreviation "SqCCa" (LT1a), SRCC726 (adenocarcinoma) (LT2), SRCC727 (adenocarcinoma) (LT3), SRCC728 (adenocarcinoma) (LT4), SRCC729 (squamous cell carcinoma) (LT6), SRCC730 (adenocarcinoma / Squamous Cell Carcinoma) (LT7), SRCC825 (Adenocarcinoma) (LT8), SRCC731 (Adenocarcinoma) (LT9), SRCC732 (Squamous Cell Carcinoma (LT10), SRCC733 (Squamous Cell Carcinoma) (LT11), SRCC734 (Adenocarcinoma) (LT12) , SRCC735 (adenocarcinoma / squamous cell carcinoma) (LT13), SRCC736 (squamous cell carcinoma) (LT15), SRCC737 (squamous cell carcinoma) (LT16), SRCC738 (squamous cell carcinoma) (LT17), SRCC739 (squamous cell carcinoma) ( LT-18), SRCC740 (squamous cell carcinoma) (LT19), SRCC741 (lung cell carcinoma, abbreviation "LCCa") (LT21), SRCC811 (adenocarcinoma) (LT22), SRCC887 (squamous cell carcinoma) (LT26), SRCC888 ( Pre-BAC carcinoma) (LT27), SRCC889 (squamous cell carcinoma) (LT28), SRCC890 (squamous cell carcinoma) (LT29), SRCC891 (adenocarcinoma) (LT30), SRCC892 (squamous cell carcinoma ((LT31), SRCC894 (adenocarcinoma) (LT33)). SRCC1125 [HF-000631], SRCC1127 [HF -000641], SRCC1129 [HF-000643], SRCC1133 [HF-000840], SRCC1135 [HF-000842], SRCC 1227 [HF-001291], SRCC 1229 [HF-001293], SRCC 1230 [HF-001294], SRCC There are also human lung tumors represented by 1231 [HF-001295], SRCC1232 [HF-001296], SRCC1233 [HF-001297], SRCC1235 [HF-001299] and SRCC1236 [HF-001300].

결장 암 세포주로는 예를 들어, ATCC 세포주 SW480(선암종, SRCC776), SW620(결장 선암종의 림프절 전이, SRCC777), Colo320(암종, SRCC778), HT29(선암종, SRCC779), HM7(UCSF 로버트 워렌으로부터 얻은 ATCC 결장 선암종 세포주의 뮤신 다생성 변이체, SRCC780), CaWiDr(선암종, SRCC781), HCT116(선암종, SRCC782), SKCO1(선암종, SRCC783), SW403(선암종, SRCC 784), LS174T(선암종, SRCC785), Colo205(선암종, SRCC828), HCT15(선암종, SRCC829), HCC2998(선암종, SRCC830) 및 KM12(선암종, SRCC831)가 있다. 원발성 결장 종양으로는 CT2(SRCC742), CT3(SRCC743), CT8(SRCC744), CT10(SRCC745), CT12(SRCC746), CT14(SRCC747), CT15(SRCC748), CT16(SRCC749), CT17(SRCC750), CT1(SRCC751), CT4(SRCC752), CT5(SRCC753), CT6(SRCC754), CT7(SRCC755), CT9(SRCC756), CT11(SRCC757),CT18(SRCC758), CUT19(선암종, SRCC906), CT20(선암종, SRCC907), CT21(선암종, SRCC908), CT22(선암종, SRCC909), CT23(선암종, SRCC910), CT24(선암종, SRCC911), CT25(선암종, SRCC912), CT26(선암종, SRCC913), CT27(선암종, SRCC914), CT28(선암종, SRCC915), CT29(선암종, SRCC916), CT30(선암종, SRCC917), CT31(선암종, SRCC918), CT32(선암종, SRCC919), CT33(선암종, SRCC920), CT35(선암종, SRCC921) 및 CT36 (선암종, SRCC922)로 표시되는 결장 선암종이 있다. 또한, SRCC1051 [HF-000499], SRCC1052 [HF-000539], SRCC1053 [HF-000575], SRCC1054 [HF-000698], SRCC1142 [HF-000762], SRCC1144 [HF-000789], SRCC1146 [HF-000795] 및 SRCC1148 [HF-000811]로 표시되는 인간 결장암 중심부가 있다.Colon cancer cell lines include, for example, ATCC cell lines SW480 (adenocarcinoma, SRCC776), SW620 (lymph node metastasis of colon adenocarcinoma, SRCC777), Colo320 (carcinoma, SRCC778), HT29 (adenocarcinoma, SRCC779), HM7 (UCSF Robert Warren) Mucin multigenic variant of ATCC colon adenocarcinoma cell line, SRCC780), CaWiDr (adenocarcinoma, SRCC781), HCT116 (adenocarcinoma, SRCC782), SKCO1 (adenocarcinoma, SRCC783), SW403 (adenocarcinoma, SRCC 784), LS174T (adenocarcinoma, SRCC785), Colo205 (Adenocarcinoma, SRCC828), HCT15 (adenocarcinoma, SRCC829), HCC2998 (adenocarcinoma, SRCC830) and KM12 (adenocarcinoma, SRCC831). Primary colon tumors include CT2 (SRCC742), CT3 (SRCC743), CT8 (SRCC744), CT10 (SRCC745), CT12 (SRCC746), CT14 (SRCC747), CT15 (SRCC748), CT16 (SRCC749), CT17 (SRCC750), CT1 (SRCC751), CT4 (SRCC752), CT5 (SRCC753), CT6 (SRCC754), CT7 (SRCC755), CT9 (SRCC756), CT11 (SRCC757), CT18 (SRCC758), CUT19 (Adenocarcinoma, SRCC906), CT20 (Adenocarcinoma) , SRCC907), CT21 (Adenocarcinoma, SRCC908), CT22 (Adenocarcinoma, SRCC909), CT23 (Adenocarcinoma, SRCC910), CT24 (Adenocarcinoma, SRCC911), CT25 (Adenocarcinoma, SRCC912), CT26 (Adenocarcinoma, SRCC913), CT27 (Adenocarcinoma, SRCC914), CT28 (Adenocarcinoma, SRCC915), CT29 (Adenocarcinoma, SRCC916), CT30 (Adenocarcinoma, SRCC917), CT31 (Adenocarcinoma, SRCC918), CT32 (Adenocarcinoma, SRCC919), CT33 (Adenocarcinoma, SRCC920), CT35 (Adenocarcinoma, SRCC921) ) And CT36 (adenocarcinoma, SRCC922). Furthermore, SRCC1051 [HF-000499], SRCC1052 [HF-000539], SRCC1053 [HF-000575], SRCC1054 [HF-000698], SRCC1142 [HF-000762], SRCC1144 [HF-000789], SRCC1146 [HF-000795] And the center of human colon cancer represented by SRCC1148 [HF-000811].

인간 유방암 암종 세포주로는 예를 들어, HBL100(SRCC759), MB435s(SRCC760), T47D(SRC761), MB468(SRCC763), MB361(SRCC764), BT20(SRCC765), MCF7(SRCC766) 및 SKBR3(SRCC767) 및 SRCC1057[HF-000545]로 표시되는 인간 유방 종양 중심부도 있다. 또한, SRCC1094, SRCC1095, SRCC1096, SRCC1097, SRCC1098, SRCC1099, SRCC1100 및 SRCC1101로 표시되는 인간 유방 종양, 및 SRCC893[LT32]으로 표시되는 인간 유방-전이-폐-NS 종양이 있다.Human breast cancer carcinoma cell lines include, for example, HBL100 (SRCC759), MB435s (SRCC760), T47D (SRC761), MB468 (SRCC763), MB361 (SRCC764), BT20 (SRCC765), MCF7 (SRCC766) and SKBR3 (SRCC767) and There is also a center of human breast tumor represented by SRCC1057 [HF-000545]. There are also human breast tumors represented by SRCC1094, SRCC1095, SRCC1096, SRCC1097, SRCC1098, SRCC1099, SRCC1100 and SRCC1101, and human breast-metastatic-lung-NS tumors represented by SRCC893 [LT32].

인간 신장 종양 중심부로는 SRCC989[HF-000611] 및 SRCC1014[HF-000613]이 있다.Human kidney tumor centers include SRCC989 [HF-000611] and SRCC1014 [HF-000613].

정소 종양 중심부로는 SRCC1001[HF-000733], 고환 종양 주변부로는 SRCC999[HF-000716]이 있다.The center of the testis tumor is SRCC1001 [HF-000733] and the testicular tumor periphery is SRCC999 [HF-000716].

인간 부갑상선 종양으로는 SRCC1002[HF-00831] 및 SRCC1003[HF-000832]가 있다.Human parathyroid tumors include SRCC1002 [HF-00831] and SRCC1003 [HF-000832].

F. 조직 분포F. Tissue Distribution

본원의 유전자 증폭 분석 결과는 추가의 연구, 예를 들어, 각종 인간 조직에서의 mRNA 발현을 측정하여 입증할 수 있다.The gene amplification assays herein can be verified by further studies, eg, by measuring mRNA expression in various human tissues.

상기한 바와 같이, 각종 조직에서의 유전자 증폭 및(또는) 유전자 발현은 본원에 제공된 서열을 기초로 하여 적절히 표지된 프로브를 사용하여 통상의 서던 블롯팅, 노던 블롯팅(Thomas, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 77:5201-5205[1980]), 도트 블롯팅(DNA 분석), 또는 원래 위치에서의 혼성화로 측정하여 mRNA의 전사를 정량적으로 측정할 수 있다. 또한, DNA 이중체, RNA 이중체 및 DNA-RNA 하이브리드 이중체 또는 DNA-단백질 이중체를 비롯한 특이적 이중체를 인식할 수 있는 항체를 사용할 수 있다.As noted above, gene amplification and / or gene expression in various tissues can be determined using conventional Southern blotting, Northern blotting (Thomas, Proc. Natl. Acad) using appropriately labeled probes based on the sequences provided herein. Sci., USA, 77: 5201-5205 [1980]), dot blotting (DNA analysis), or hybridization in situ, to quantitatively determine transcription of mRNA. It is also possible to use antibodies that can recognize specific duplexes, including DNA duplexes, RNA duplexes, and DNA-RNA hybrid duplexes or DNA-protein duplexes.

별법으로, 유전자 발현은 세포 또는 조직 단면의 면역조직화학적 염색과 같은 면역학적 방법 및 유전자 생성물의 발현을 직접 정량하기 위한 세포 배양액 또는 체액의 분석에 의해 측정할 수 있다. 면역조직화학적 염색 및(또는) 시료 유체의 분석에 유용한 항체는 모노클로날 또는 폴리클로날 항체일 수 있고, 이들은 임의의 포유동물에서 제조할 수 있다. 편리하게는, 천연 서열 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드, 본원에서 제공되는 DNA 서열 기재의 합성 펩티드 또는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357,PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 DNA에 융합된 특정 항체 에피토프를 코딩하는 외생성 서열에 대한 항체를 제조할 수 있다. 항체를 제조하는 일반 기술 및 노던 블롯팅 및 원래 위치에서의 혼성화에 대한 특정 프로토콜은 하기에 제시하였다.Alternatively, gene expression can be measured by immunological methods such as immunohistochemical staining of cell or tissue sections and analysis of cell culture or body fluids for direct quantification of expression of gene products. Antibodies useful for immunohistochemical staining and / or analysis of sample fluids may be monoclonal or polyclonal antibodies, which may be prepared in any mammal. Conveniently, the natural sequences PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides, synthetic peptides based on the DNA sequences provided herein or PRO201, PRO292, Antibodies to exogenous sequences encoding specific antibody epitopes fused to PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 DNA can be prepared. General techniques for making antibodies and specific protocols for northern blotting and hybridization in situ are presented below.

G. 염색체 지도화G. Chromosomal Mapping

소정의 유전자의 증폭이 기능적으로 관련되어 있는 경우, 그 유전자는 종양 생존에 중요하지 않은 인접 게놈 영역보다 더 증폭된다. 이를 시험하기 위해, 유전자는 예를 들어, 방사선-하이브리드 분석으로 특정 염색체에 지도화할 수 있다. 이어서, 증폭 정도는 확인된 지역 및 인접 게놈 영역에서 측정한다. 유전자가 지도화된 게놈 영역에서의 선택적 또는 우선적 증폭은 관찰된 유전자 증폭이 종양 생장 또는 생존을 촉진시킬 수 있다. 염색체 지도화로는 프레임워크 및 에피센터 지도화가 있다. 추가의 상세한 설명은 예를 들어, 문헌(Stewart et al., Genome Research, 7:422-433 (1997))을 참조한다.When amplification of a given gene is functionally related, that gene is amplified more than adjacent genomic regions that are not critical for tumor survival. To test this, the gene can be mapped to a specific chromosome, for example by radio-hybrid analysis. The degree of amplification is then measured in the identified region and adjacent genomic regions. Selective or preferential amplification in the genomic region to which the gene is mapped allows the observed gene amplification to promote tumor growth or survival. Chromosome mapping includes framework and epicenter mapping. For further details see, e.g., Stewart et al., Genome Research, 7: 422-433 (1997).

H. 항체 결합 연구H. Antibody Binding Studies

유전자 증폭 연구 결과는 종양(암) 세포상의 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체가 결합하는 능력을 시험하는 항체 결합 연구로 더 입증할 수 있다. 항체의 예로는 폴리클로날, 모노클로날, 인간화, 이중특이적 및 이종접합 항체가 있으며, 그 제조 방법은 하기와 같다.Gene amplification studies show anti-PRO201, anti-PRO292, and anti-PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptides on tumor (cancer) cells. Ability of the PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibodies to bind This can be further demonstrated by antibody binding studies that test for. Examples of antibodies include polyclonal, monoclonal, humanized, bispecific and heterozygous antibodies, the preparation methods of which are as follows.

항체 결합 연구는 임의의 공지된 분석 방법, 예를 들어, 경쟁 결합 분석, 직접 및 간접 샌드위치 분석 및 면역침전 분석으로 수행할 수 있다(Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp.. 147-158(CRS Press, Inc., 1987)).Antibody binding studies can be performed by any known assay method, eg, competitive binding assays, direct and indirect sandwich assays and immunoprecipitation assays (Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRS Press, Inc., 1987)).

경쟁 결합 분석은 제한된 양의 항체와 결합하는데 있어 시험 샘플 분석물과과 경쟁하는 표지된 표준 물질의 능력에 좌우된다. 시험 샘플중 표적 단백질(종양 세포에서 증폭된 유전자에 의해 코딩됨)의 양은 항체에 결합하게 되는 표준 물질의 양에 반비례한다. 결합하게 되는 표준 물질의 양 측정을 촉진시키기 위해, 항체는 경쟁전 또는 후에 불용화시켜, 항체에 결합하는 표준 물질 및 분석물이 결합되지 않은 채로 남아있는 표준 물질 및 분석물로부터 쉽게 분리될 수 있도록 하는 것이 바람직하다.Competition binding assays depend on the ability of the labeled standard to compete with the test sample analyte in binding a limited amount of antibody. The amount of target protein (coded by the gene amplified in the tumor cell) in the test sample is inversely proportional to the amount of standard substance that will bind to the antibody. To facilitate determination of the amount of standard to be bound, the antibody is insolubilized either before or after competition so that the standard and analyte that binds to the antibody can be easily separated from the remaining unbound standard and analyte. It is desirable to.

샌드위치 분석은 각각 검출할 단백질의 상이한 면역원 부분 또는 에피토프에 결합할 수 있는 두 항체를 사용하는 방법을 포함한다. 샌드위치 분석에서, 시험 샘플 분석물은 고상 지지체상에 고정되는 제1 항체에 의해 결합되고, 그후 분석물에 제2 항체가 결합됨에 따라, 불용성 3부 결합체를 형성한다. 예를 들어, 미국 특허 제4,376,110호를 참조한다. 제2 항체는 그 자체로 검출가능한 잔기로 표지(직접 샌드위치 분석)할 수 있거나, 또는 검출가능한 부분에 의해 표지된 항-면역글로불린 항체를 사용하여 (간접 샌드위치 분석) 측정할 수 있다. 예를 들어, 샌드위치 분석의 한 유형은 ELISA 분석이며, 이 경우 검출가능한 잔기는 효소이다.Sandwich assays include methods using two antibodies, each capable of binding to different immunogen portions or epitopes of the protein to be detected. In the sandwich assay, the test sample analyte is bound by a first antibody immobilized on a solid support, and then the second antibody is bound to the analyte, thereby forming an insoluble three part conjugate. See, for example, US Pat. No. 4,376,110. The second antibody can itself be labeled with a detectable moiety (direct sandwich assay) or can be measured using an anti-immunoglobulin antibody labeled by the detectable moiety (indirect sandwich assay). For example, one type of sandwich assay is an ELISA assay, in which case the detectable residue is an enzyme.

면역조직화학에서, 종양 샘플은 신선한 상태이거나 또는 냉동시킬 수 있으며, 또는 파라핀에 매몰시키거나 포르말린과 같은 방부제로 고정시킬 수 있다.In immunohistochemistry, tumor samples may be fresh or frozen, or they may be embedded in paraffin or fixed with a preservative such as formalin.

I. 세포 기재의 종양 분석I. Cell-Based Tumor Analysis

세포 기재 분석및 동물 모델은 유전자 증폭 분석에서 발견된 사항을 입증하며, 본원에서 확인된 유전자와 신생물 세포 생장의 발달 및 병인 사이의 관계를 더 이해하는데 이용할 수 있다. 종양 세포 또는 암의 발생 및 병인에 있어 본원에서 확인된 유전자 생성물의 역할은 본원에서 유전자를 증폭하기 위해 확인된 원발성 종양 세포 또는 세포를 사용하여 시험할 수 있다. 그러한 세포로는 예를 들어, 유방, 결장 및 폐 암세포 세포주 및 상기 열거된 세포주가 있다.Cell based assays and animal models demonstrate the findings found in gene amplification assays and can be used to better understand the relationship between genes identified herein and the development and pathogenesis of neoplastic cell growth. The role of gene products identified herein in the development and pathogenesis of tumor cells or cancer can be tested using the primary tumor cells or cells identified herein for amplifying the genes. Such cells include, for example, breast, colon and lung cancer cell lines and the cell lines listed above.

또다른 연구에서, 특정 종양에 관련된 것으로 공지된 세포 유형의 세포는 본원에서의 cDNA로 형질감염시키고, cDNA가 과도한 생장을 유도해내는 능력을 분석한다. 적합한 세포로는 예를 들어, B104-1 세포주(neu원시 종양유전자로 형질감염된 안정한 NIH-3T3 세포주) 및ras로 형질감염된 NIH-3T3 세포가 있으며, 이들은 목적하는 유전자로 형질감염될 수 있고, 종양원성 생장을 모니터링할 수 있다. 이어서, 상기 형질감염된 세포주는 형질전환되 세포의 생장에 세포정지 또는 세포독성 활성을 발휘하거나, 또는 항체 의존성 세포의 세포독성(ADCC)을 발휘하는 폴리- 또는 모노클로날 항체 또는 항체 조성물의 능력을 시험하는데 사용할 수 있다. 본원에서 확인된 코딩 서열로 형질감염된 세포는 추가로 암 치료를 위한 후보 약물을 확인하는데 사용할 수 있다.In another study, cells of a cell type known to be involved in a particular tumor are transfected with cDNA herein and analyzed for the ability of the cDNA to induce excessive growth. Suitable cells include, for example, the B104-1 cell line (stable NIH-3T3 cell line transfected with the neu primitive oncogene) and NIH-3T3 cells transfected with ras , which can be transfected with the gene of interest and the tumor Original growth can be monitored. The transfected cell line then exerts the ability of the poly- or monoclonal antibody or antibody composition to exert cytostatic or cytotoxic activity on the growth of the transformed cells or to exert cytotoxicity (ADCC) of antibody dependent cells. Can be used for testing. Cells transfected with the coding sequences identified herein can further be used to identify candidate drugs for cancer treatment.

또한, 트랜스제닉 동물(transgenic animal, 하기 기재된 바와 같음)의 종양으로부터 유래된 1차 배양액이 세포 기재의 분석에서 사용될 수 있지만, 안정한 세포주가 바람직하다. 트랜스제닉 동물로부터 연속성 세포주를 유도해내는 기술은 당업계에 잘 공지되어 있다(예를 들어, 문헌 (Small et al., Mol. Cell. Biol., 5:642-648 (1985)) 참조).In addition, although primary cultures derived from tumors of transgenic animals (as described below) can be used in cell based assays, stable cell lines are preferred. Techniques for deriving continuous cell lines from transgenic animals are well known in the art (see, eg, Small et al., Mol. Cell. Biol., 5: 642-648 (1985)).

J. 동물 모델J. Animal Model

잘 공지되어 있는 각종 동물 모델은 종양의 발생 및 변인에 있어서 본원에서 확인된 유전자의 역할을 더 이해하고, 항체를 비롯한 후보 치료제 및 소분자 길항제를 비롯한 천연 폴리펩티드의 다른 길항제의 효능을 시험하는데 사용할 수 있다. 상기 분자의 생체내 특성으로 인해 특히 인간 환자에서의 반응을 예측할 수 있다. 종양 및 암(예를 들어, 유방암, 결장암, 전립선암, 폐암 등)의 동물 모델로는 비-재조합 및 재조합 (트랜스제닉) 동물이 있다. 비-재조합 동물로는 설치류 모델, 예를 들어 쥐 모델이 있다. 상기 모델은 표준 기술, 예를 들어 피하 주사, 꼬리 정맥 주사, 비장 이식, 복강내 이식, 신장 캡슐의 이식, 또는 오르토핀(orhtopin) 이식, 예를 들어, 결장 조직에 이식된 결장 암 세포를 사용하여 종양 세포를 순계 생쥐에 도입하여 제조한다(예를 들어, 1997년 9월 18일에 공개된 PCT 국제 출원 국제 공개 제97/33551호 참조).Various well known animal models can be used to further understand the role of genes identified herein in the development and variables of tumors and to test the efficacy of other therapeutic agents including natural polypeptides, including candidate therapeutics including antibodies and small molecule antagonists. . The in vivo nature of these molecules makes it possible to predict responses in particular in human patients. Animal models of tumors and cancers (eg, breast cancer, colon cancer, prostate cancer, lung cancer, etc.) include non-recombinant and recombinant (transgenic) animals. Non-recombinant animals include rodent models, for example rat models. The model uses standard techniques such as subcutaneous injection, tail vein injection, spleen transplant, intraperitoneal transplantation, transplantation of kidney capsules, or orhtopin implantation, eg colon cancer cells transplanted into colon tissue. Tumor cells are prepared by introducing them into murine mice (see, eg, PCT International Application No. 97/33551, published September 18, 1997).

종양유전자 연구에 가장 흔하게 연구되는 동물은 면역결핍된 생쥐, 특히 누드 생쥐(nude mouse)일 것이다. 인간 종양 이종이식에 대한 숙주로 성공적으로 작용하는 과다증 및 결여증이 있는 누드 생쥐를 관찰한 결과 본 발명의 목적을 위해 광범위하게 사용할 수 있다. 상염색체 열성nu유전자는 많은 수의 누드 생쥐의 각 친화종(예를 들어, ASW, A/He, AKB, BALB/c, B10, LP, C17, C3H, C57BL, C57,CBA, DDD, I/st, NC, NFR, NFS, NFS/N, NZB, NAC, NZW, P, RIII 및 SJL)으로 도입하였다. 또한, 누드 생쥐이외에 유전적으로 면역적 결합이 있는 광범한 범위의 다른 동물을 번식시켜 이종 이식의 수용체로 사용하였다. 더 상세한 사항은 예를 들어,문헌(The Nude Mouse in Oncology Research, E. Boven and B. Winograd, eds., CRC Press, Inc. 1991)을 참조한다.The animals most commonly studied for oncogene studies will be immunodeficient mice, especially nude mice. Nude mice with hyperactivity and deficiency successfully acting as hosts for human tumor xenografts have been observed and can be used extensively for the purposes of the present invention. The autosomal recessive nu gene is associated with each affinity of a large number of nude mice (e.g. ASW, A / He, AKB, BALB / c, B10, LP, C17, C3H, C57BL, C57, CBA, DDD, I / st, NC, NFR, NFS, NFS / N, NZB, NAC, NZW, P, RIII and SJL). In addition, a wide range of other animals with genetically immunological binding in addition to nude mice have been used as receptors for xenotransplantation. See, for example, The Nude Mouse in Oncology Research, E. Boven and B. Winograd, eds., CRC Press, Inc. 1991.

상기 동물로 도입된 세포는 공지된 종양 또는 암 세포, 예를 들어 상기 열거된 종양 세포주라면 어떠한 것이든지, 예를 들어, B104-1 세포주(neu원시 종양유전자로 형질감염된 안정한 NIH-3T3 세포주);ras로 형질감염된 NIH-3T3 세포; Caco-2(ATCC HTB-37); 적당히 잘 분화된 등급 II 인간 결장 선암종 세포주, HT-29(ATCCHTB-38), 또는 종양 및 암으로부터 유래될 수 있다 . 종양 또는 암 세포의 샘플은 수술중인 환자로부터 얻고, 이를 냉동시켜 액체 질소중에 저장하는 방법을 포함하는 표준 조건으로 얻을 수 있다(Karmali et al, Br. J. Cancer, 48:689-696[1983]).The cells introduced into the animal can be any known tumor or cancer cell, for example any of the tumor cell lines listed above, eg, the B104-1 cell line (stable NIH-3T3 cell line transfected with the neu primitive oncogene); NIH-3T3 cells transfected with ras ; Caco-2 (ATCC HTB-37); Moderately well differentiated grade II human colon adenocarcinoma cell line, HT-29 (ATCCHTB-38), or tumors and cancers. Samples of tumor or cancer cells can be obtained from standard patients, including standard methods of obtaining them from frozen patients and freezing them and storing them in liquid nitrogen (Karmali et al, Br. J. Cancer, 48: 689-696 [1983]). ).

종양 세포는 각종 방법을 이용하여 동물, 예를 들어 누드 생쥐로 도입할 수 있다. 생쥐에서의 피하 공간은 종양 이식에 매우 적합한다. 종양은 고상 블록으로서, 투관침을 사용한 침상 생체검사로, 세포 현탁액으로서 이식할 수 있다. 고상 블록 또는 투관침 이식의 경우, 적합한 크기의 종양 조직 단편을 피하 공간으로 도입한다. 세포 현탁액은 원발성 종양 또는 안정한 종양 세포주로부터 새로 제조하고, 피하 주사한다. 종양 세포는 또한 경피하 이식체로서 주사할 수 있다. 이 영역에서, 접종물은 경피 연결 조직과 피하 조직의 하부 사이에 침착된다. 상기문헌(Boven and Winograd(1991))을 참조한다.Tumor cells can be introduced into animals, such as nude mice, using a variety of methods. Subcutaneous space in mice is well suited for tumor transplantation. Tumors can be implanted as cell suspensions as solid blocks, by needle biopsy using trocars. For solid block or trocar implants, tumor tissue fragments of suitable size are introduced into the subcutaneous space. Cell suspensions are freshly prepared from primary or stable tumor cell lines and injected subcutaneously. Tumor cells can also be injected as a subcutaneous implant. In this area, the inoculum is deposited between the percutaneous connective tissue and the lower part of the subcutaneous tissue. See, above, Boven and Winograd (1991).

유방암의 동물 모델은 근복적으로는 문헌(Drebin et al., PNAS USA, 83:9129-9133 (1986))에 기재된 바와 같이, 예를 들어 (neu종양유전자가 최초로 단리된) 쥐 신경모세포종 세포 또는neu로 형질전환된 NIH-3T3 세포를 누드 생쥐로 이식하여 제조할 수 있다.Animal models of breast cancer are, for example, murine neuroblastoma cells (first isolated of the neu oncogene) or as described in Drebin et al., PNAS USA, 83: 9129-9133 (1986) or NIH-3T3 cells transformed with neu can be prepared by transplantation into nude mice.

이와 유사하게, 결장 암의 동물 모델은 결장 암 세포를 동물, 예를 들어 누드 생쥐에 유입시켜 동물에 종양 형상을 일으킨다. 누드 생쥐내 사람 결장암의 동소이식 이식체 모델은, 예를 들어 문헌(Wang et al., Cancer Research, 54:4726-4728(1994) 및 Too et al., Cabcer Research, 55:681-684(1995))에 기재되어 있다. 이 모델은 AntiCancer Inc.(미국 캘리포니아주 샌디에고 소재) 제품의 소위 메타마우스(METAMOUSE)를 기초로 한 것이다.Similarly, animal models of colon cancer introduce colon cancer cells into animals, such as nude mice, to cause tumor shape in the animal. Allograft transplant models of human colon cancer in nude mice are described, for example, in Wang et al., Cancer Research, 54: 4726-4728 (1994) and Too et al., Cabcer Research, 55: 681-684 (1995). )). This model is based on the so-called METAMOUSE from AntiCancer Inc. (San Diego, Calif.).

동물 모델에서 유도된 종양은 제거할 수 있으며 시험관내 배양할 수 있다. 이어서, 시험관내 배양액으로부터의 세포는 동물로 유입시킨다. 상기 종양은 추가의 시험 또는 약물 스크리닝을 위한 표적으로 이용될 수 있다. 또한, 그와 같은 유입으로부터 유도된 종양은 단리할 수 있고, 예비 유입 세포로부터의 RNA 및 1 주기 이상의 유입 전후에 단리된 세포는 관심있는 유전자의 차등적 발현을 분석한다. 상기 유입 기술은 공지된 어떠한 종양 또는 암 세포에서든지 수행할 수 있다.Tumors derived from animal models can be removed and cultured in vitro. The cells from the in vitro culture are then introduced into the animal. The tumor can be used as a target for further testing or drug screening. In addition, tumors derived from such influx can be isolated, and RNA from preliminary influx cells and cells isolated before and after at least one cycle of influx analyze differential expression of genes of interest. The influx technique can be performed in any known tumor or cancer cell.

예를 들어, Meth A, CMS4, CMS5, CMS21 및 WEHI-164는 BALB/c 암컷 생쥐(DeLeo et al., J. Exp. Med., 146:720[1997])의 화학적으로 유도된 섬유육종이며, 이는 각종 물질의 항-종양 활성을 연구하는데 고도로 조절가능한 모델 시스템을 제공한다(Palladino et al., J. Immunol., 138L4023-4032 [1987]). 간단히, 종양 세포는 세포 배양액에서 시험관내 증식한다. 동물로 주사하기전에 세포주를 세척하고, 완충액에 약 10x106내지 10x107세포/㎖의 세포 밀도로 현탁시킨다. 이어서, 동물 모델은 세포 현탁액 10 내지 100 ㎕로 피하 주사하여 종양이 1 내지 3 주 후에 나타나도록 한다.For example, Meth A, CMS4, CMS5, CMS21 and WEHI-164 are chemically induced fibrosarcomas in BALB / c female mice (DeLeo et al., J. Exp. Med., 146: 720 [1997]). This provides a highly controllable model system for studying the anti-tumor activity of various substances (Palladino et al., J. Immunol., 138L4023-4032 [1987]). Briefly, tumor cells proliferate in vitro in cell culture. Cell lines are washed before injection into animals and suspended in buffer at a cell density of about 10 × 10 6 to 10 × 10 7 cells / mL. The animal model is then subcutaneously injected with 10-100 μl of cell suspension so that the tumors appear after 1-3 weeks.

또한, 가장 완전한 수준으로 연구된 것중 하나인 생쥐의 루이스 폐(3 LL) 암종은 연구용 종양 모델로 사용할 수 있다. 종양 모델에서의 효능은 폐의 소세포 암종(SCCL)인 것으로 진단된 인간 환자의 치료에 있어서의 유익한 효과와 상관관계가 있다. 이 종양은 병에 걸린 생쥐로부터의 종양 단편 또는 배양액중에 유지된 세포를 주사할 때 정상 생쥐에 도입(Zupi et al., Br. J. Cancer, 41:suppl. 4:309 [1980])할 수 있고, 그와 같은 사실은 종양이 단일 세포를 주사하는 것으로부터도 시작할 수 있으며, 상당한 높은 비율의 감염 종양 세포가 생존할 수 있음을 입증하는 것이다.In addition, Lewis lung (3 LL) carcinoma of mice, one of the most studied at the fullest level, can be used as a study tumor model. Efficacy in tumor models correlates with beneficial effects in the treatment of human patients diagnosed as being small cell carcinoma of the lung (SCCL). This tumor can be introduced into normal mice (Zupi et al., Br. J. Cancer, 41: suppl. 4: 309 [1980]) when injected with tumor fragments from diseased mice or cells maintained in culture. And such facts demonstrate that tumors can also begin by injecting single cells and that a significant high percentage of infected tumor cells can survive.

종양이 이식된 동물 모델에서 시험 화합물의 효능을 평가하는 한 방식은 처치전 및 후의 종양의 크기를 측정하는 것이다. 전형적으로, 이식된 종양의 크기는 슬라이드 캘리퍼스를 사용하여 2 내지 3 차원으로 측정하였다. 2 차원으로 제한된 측정값은 종양의 크기를 정확히 반영하기 때문에, 통상 수학식을 이용하여 상응하는 체적으로 환산한다. 그러나, 종양 크기의 측정값은 매우 부정확하다. 후보 약물의 치료 효과는 처치로 유도된 생장의 지연 및 특이적 생장의 지연으로 더 양호하게 설명할 수 있다. 종양 생장의 설명에 있어서의 중요한 다른 변수는 종양이 2 배 체적으로 되기까지 소요되는 시간이다. 종양 생장의 계산 및 설명을 위해 문헌(Rygaard and Spang-Thomsen, Proc. 6th Int. Workshop on Immune-Deficient Animals, Wu and Sheng eds., Basel, 1989, 301)에 보고된 바와 같이 컴퓨터 프로그램을 이용할 수 있다. 그러나, 처치후의 괴사 및 염증 반응은 적어도 초기에 실제적으로 종양 크기를 증가시킬 수 있음을 주의해야 한다. 따라서, 이러한 변화는 형태측정법 및 유동 세포계수법으로 조심스럽게 모니터링할 필요가 있다.One way of evaluating the efficacy of test compounds in animal models implanted with tumors is to measure tumor size before and after treatment. Typically, the size of the implanted tumor was measured in two to three dimensions using slide calipers. Since the measurement limited to two dimensions accurately reflects the size of the tumor, it is usually converted to the corresponding volume using an equation. However, the measurement of tumor size is very inaccurate. The therapeutic effect of the candidate drug can be better explained by the delay in growth induced by treatment and the delay in specific growth. Another important variable in the description of tumor growth is the time it takes for tumors to double volume. Computer programs can be used as reported in Rygaard and Spang-Thomsen, Proc. 6th Int. Workshop on Immune-Deficient Animals, Wu and Sheng eds., Basel, 1989, 301 for calculation and description of tumor growth. have. However, it should be noted that necrosis and inflammatory responses after treatment can increase tumor size at least initially substantially. Therefore, such changes need to be carefully monitored by morphometrics and flow cytometry.

재조합(트랜스제닉) 동물 모델은 트랜스제닉 동물을 제조하기 위한 표준 기술을 이용하여 본원에서 확인된 유전자의 코딩부를 관심있는 동물의 게놈으로 유전공학적으로 도입할 수 있다. 트랜즈제닉 조작을 위한 표적으로 이용될 수 있는 동물로는 생쥐, 쥐, 토끼, 기니아 피그, 양, 염소, 돼지 및 인간을 제외한 영장류, 예를 들어, 비비, 침팬지, 원숭이가 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 트랜스 유전자(transge)를 상기와 같은 동물로 도입하는 당업계에 공지된 기술로는 전핵 미세주입(microinjection)(Hoppe 및 Wanger, 미국 특허 제4,873,191호); 생식세포주로의 레트로바이러스 매개된 유전자 전달(예를 들어, Van Putten et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:6148-615[1985]); 배의 간세포로의 유전자 표적화(hompson et al., Cell, 56:313-321[1989]); 배의 전기천공법(Lo, Mol. Cell Biol., 3:1803-1814[1983]); 정자 매개된 유전자 전달(Lavitrano et al., Cell, 57:717-73[1989])이 있다. 검토를 위해서는, 예를 들어 미국 특허 제4,736,866호를 참조한다Recombinant (transgenic) animal models can be genetically introduced into the genome of the animal of interest using standard techniques for making transgenic animals. Animals that can be used as targets for transgenic manipulation include, but are not limited to, primates, except for mice, rats, rabbits, guinea pigs, sheep, goats, pigs, and humans, such as baboons, chimpanzees, and monkeys. Does not. Techniques known in the art for introducing trans genes into such animals include, but are not limited to, prokaryotic microinjection (Hoppe and Wanger, US Pat. No. 4,873,191); Retroviral mediated gene transfer into germ cell lines (eg, Van Putten et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 6148-615 [1985]); Gene targeting to embryonic hepatocytes (hompson et al., Cell, 56: 313-321 [1989]); Electroporation of embryos (Lo, Mol. Cell Biol., 3: 1803-1814 [1983]); Sperm mediated gene delivery (Lavitrano et al., Cell, 57: 717-73 [1989]). For a review, see for example US Pat. No. 4,736,866.

본 발명의 목적상, 트랜스제닉 동물은 트랜스 유전자를 그 세포에만 갖는 동물("모자이크 동물")이 포함된다. 트랜스 유전자는 단일 트랜스 유전자로서 또는 연쇄체(concatamer)로, 예를 들어 헤드-투-헤드(head-to-head) 또는 헤드-투-테일(head-to-tail) 텐덤으로 통합될 수 있다. 특정 세포 유형으로의 트랜스 유전자의 선택적 도입은 또한, 예를 들어 문헌(Lasko et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:6232-6236[1992])의 기술로 수행할 수 있다.For the purposes of the present invention, transgenic animals include animals that have a trans gene only in their cells (“mosaic animals”). The trans gene may be integrated as a single trans gene or in a concatamer, for example head-to-head or head-to-tail tandem. Selective introduction of trans genes into specific cell types can also be performed, for example, by the techniques of Lasko et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 6232-6236 [1992].

트랜스제닉 동물에서의 트랜스 유전자의 발현은 표준 기술로 모니터링할 수 있다. 예를 들어, 서던 블롯 분석 또는 PCR 증폭은 트랜스 유전자를 입증하는데 사용할 수 있다. 이어서, mRNA 발현 정도는 원래 위치에서의 혼성화, 노던 블롯 분석, PCR 또는 면역세포화학 등의 기술을 이용하여 분석할 수 있다. 동물을 종양 또는 암 발생의 징후에 대해 더 조사할 수 있다.Expression of trans genes in transgenic animals can be monitored by standard techniques. For example, Southern blot analysis or PCR amplification can be used to verify trans genes. The mRNA expression level can then be analyzed using techniques such as hybridization in situ, Northern blot analysis, PCR or immunocytochemistry. Animals may be further investigated for signs of tumor or cancer development.

또한, 본원에서 확인된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 내생성 유전자와 동물의 배세포로 도입된 상기 폴리펩티드를 코딩하는 게놈 DNA사이의 동형 재조합 결과 상기 폴리펩티드를 코딩하는 유전자에 결함이 있거나 변형된 "낙 아웃(knock out)" 동물을 만들 수 있다. 예를 들어, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 cDNA는 확립된 기술에 따라 상기 폴리펩티드를 코딩하는 게놈 DNA를 클로닝하는데 사용할 수 있다. 특정 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715,PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 코딩하는 게놈 DNA의 일부를 결실시키거나 다른 유전자, 예를 들어 통합을 모니터링하는데 사용될 수 있는 선별가능한 마커를 코딩하는 유전자로 치환할 수 있다. 전형적으로, 수 킬로베이스(kb)의 비변형된 플랭킹(flanking) DNA(5' 및 3' 말단 모두에서)가 벡터에 포함되어 있다(동형 재조합 벡터의 설명의 경우, 예를 들어 문헌(Thomas and Capecchi, Cell, 51:503 (1987)) 참조). 벡터를 배세포 세포주로(예를 들어, 전기천공법) 도입하고, 도입된 DNA가 내생성 DNA와 함께 동형 재조합된 세포를 선별한다(예를 들어, 문헌(Li et al., Cell, 69:915(1992)). 이어서, 선별된 세포는 동물(예를 들어, 생쥐 또는 쥐)의 포배로 주사하여 집합체 키메라를 형성한다(예를 들어, 문헌(Bradley, in Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells: A Practical Approach, E. J. Robertson, ed.(IRL, Oxford, 1987), pp. 113-152) 참조). 이어서, 키메라 배는 적합한 가임신 암컷 대리모 동물 및 배로 이식하여 "낙 아웃" 동물을 유도하였다. 생식 세포에 동형 재조합 DNA를 함유하는 자손은 표준 기술로 확인할 수 있고, 동물의 모든 세포가 동형 재조합 DNA를 함유하는 동물을 번식시키는데 사용할 수 있다. 낙 아웃 동물은, 예를 들어 특정 병인적 증상을 방어하는 능력 및 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 부재로 인한 변인적 증상의 발생을 특징으로 한다.In addition, the polypeptide introduced into animal germ cells and endogenous genes encoding PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides identified herein. Homologous recombination between genomic DNAs encoding the resultant genes can result in "knock out" animals that are defective or modified in the genes encoding the polypeptides. For example, a cDNA encoding a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide can encode genomic DNA encoding the polypeptide according to established techniques. Can be used for cloning. It can be used to delete portions of genomic DNA encoding specific PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 or to monitor other genes, eg integration. Can be substituted with a gene encoding a selectable marker. Typically, several kilobases (kb) of unmodified flanking DNA (both at the 5 'and 3' ends) are included in the vector (for description of homologous recombinant vectors, see, for example, Thomas and Capecchi, Cell, 51: 503 (1987)). The vector is introduced into a germ cell cell line (e.g., electroporation), and the introduced DNA selects cells that have been homologously recombined with the endogenous DNA (e.g. Li et al., Cell, 69: 915 (1992) .The selected cells are then injected into the blastocyst of an animal (eg, a mouse or a rat) to form an aggregate chimera (eg, Bradley, in Teratocarcinomas and Embryonic Stem Cells: A Practical). (See Approach, EJ Robertson, ed. (IRL, Oxford, 1987), pp. 113-152).) Chimeric embryos were then transplanted into suitable fertility female surrogate animals and embryos to induce "knockout" animals. Progeny containing homologous recombinant DNA can be identified by standard techniques and all cells of the animal can be used to breed an animal containing homologous recombinant DNA A knockout animal can, for example, defend against certain etiological symptoms. Ability and PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, P It is characterized by the development of variable symptoms due to the absence of the RO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide.

본워에서 확인된 폴리펩티드 및 다른 후보 약물에 특이적으로 결합하는 항체의 효능은 특발성 동물 종양의 치료에서도 시험할 수 있다. 그러한 연구에 적한한표적은 고양이과 경구 편평세포 암종(SCC)이다. 고양이과 경구 SCC는 고양이종에서 보고된 경구 종양의 60% 이상을 차지하는 것으로서 가장 흔한 고양이 경구 악성인 매우 침입성이 강한 악성 종양이다. 원발 부위로 거의 전이되지 않지만, 이러한 전이의 낮은 발생률은 상기 종양이 있는 고양이의 생존 시간이 짧다는 것을 반영한다. 이 종양은 통상 수술받지 못하는데, 그 주된 이유는 고양이과 구강의 해부학적 구조 때문이다. 현재 이 종양에 대한 효과적인 치료는 없다. 연구에 들어가지 전에 각 고양이를 완전히 임상 조사(생체검사)하고, 컴퓨터 X선 단층 촬영(computed tomography, CT)으로 검사한다. 설하 경구 평판세포 종양이 있는 것으로 진단된 고양이는 이 연구에서 제외한다. 이러한 종양의 결과 혀가 마비될 수 있고, 치료를 하여 종양을 사멸시킬지라도, 동물은 음식을 섭취할 수 없다. 각 고양이를 장시간에 걸쳐 반복 처치한다. 처리 기간 동안 종양을 촬영하고, 각 수반 현상을 다시 점검한다. 처치후, 8 주 마다 각 고양이는 추가로 CT 촬영을 한다. CT 촬영 및 흉부 방사선 투과 사진으로 평가한다. 그 데이타는 대조군과 비교한 생존율, 반응 및 독성의 차이를 평가한 것이다. 양성 반응은 종양 퇴행과, 바람직하게는 삶의 질이 개선 및(또는) 수명의 연장을 요한다.The efficacy of antibodies specifically binding to polypeptides identified in the field and other candidate drugs can also be tested in the treatment of idiopathic animal tumors. A suitable target for such studies is feline oral squamous cell carcinoma (SCC). Feline oral SCC accounts for more than 60% of oral tumors reported in feline species and is the most common feline oral malignant, highly invasive malignant tumor. Although rarely metastasize to the primary site, the low incidence of such metastasis reflects the short survival time of the cat with the tumor. These tumors are usually not surgically operated, mainly because of the anatomy of the feline oral cavity. There is currently no effective treatment for this tumor. Before entering the study, each cat is thoroughly clinically examined (biopsy) and examined by computed tomography (CT). Cats diagnosed with sublingual oral flat cell tumors are excluded from this study. As a result of these tumors, the tongue may become paralyzed, and even if treated to kill the tumor, the animal cannot eat food. Each cat is repeated for a long time. Tumors are photographed during the treatment period and each accompanying phenomenon is checked again. After treatment, every 8 weeks, each cat has an additional CT scan. It is evaluated by CT and chest radiographs. The data assesses differences in survival, response and toxicity compared to the control. Positive reactions require tumor regression, and preferably quality of life and / or prolongation of lifespan.

또한, 다른 특발성 동물 종양, 예를 들어 개, 고양이 및 비비의 섬유육종, 선암종, 림프종, 연골종, 평활근육종도 시험할 수 있다. 이들 포유류중 개 및 고양이의 선암종은 그 외양 및 행동이 인간과 매우 유사하기 때문에 연구 모델로 바람직하다. 그러나, 동물에서 상기 유형의 종양이 드물게 발생하기 때문에 그 모델을 사용하는 것이 제한을 받는다.Other idiopathic animal tumors can also be tested, such as fibrosarcomas, adenocarcinomas, lymphomas, chondromas, and leiomyosarcomas in dogs, cats and baboons. Adenocarcinomas of dogs and cats of these mammals are preferred as research models because their appearance and behavior are very similar to humans. However, the use of this model is limited because of the rare occurrence of this type of tumor in animals.

K. 후보 약물의 스크리닝 분석K. Screening Analysis of Candidate Drugs

후보 약물에 대한 스크리닝 분석은 본원에서 확인된 유전자에 의해 코딩되는 폴리펩티드에 결합하거나 그와 결합체를 이루거나, 또는 코딩된 폴리펩티드와 다른 세포 단백질의 상호작용을 방해하는 화합물을 확인하도록 고안되었다. 그러한 스크리닝 분석은 키메라 라이브러리의 스크리닝을 고도로 처리하여 특히 소분자 후보 약물을 확인하는데 적합할 수 있는 분석을 포함한다. 예상되는 소분자로는 펩티드, 바람직하게는 가용성 펩티드, (폴리)펩티드-면역글로불린 융합체와, 특히 폴리- 및 모노클로날 항체를 비롯한 항체 및 항체 단편, 단일쇄 항체, 항-유전형 항체 및 상기 항체 또는 항체 단편의 키메라 또는 인간화 형태와 또한 인간 항체 및 항체 단편을 비롯한 항체를 비롯한 합성 유기 또는 무기 화합물이 있다. 분석은 당업계에 잘 특성화되어 있는 단백질-단백질 결합 분석, 생화학적 스크리닝 분석, 면역 분석 및 세포 기재의 분석을 비롯한 각종 형식으로 수행할 수 있다.Screening assays for candidate drugs are designed to identify compounds that bind to or conjugate with the polypeptides encoded by the genes identified herein, or interfere with the interaction of the encoded polypeptide with other cellular proteins. Such screening assays include assays that may be highly processed to screen screening chimeric libraries, particularly for identifying small molecule candidate drugs. Anticipated small molecules include peptides, preferably soluble peptides, (poly) peptide-immunoglobulin fusions, and antibodies and antibody fragments, in particular poly- and monoclonal antibodies, single chain antibodies, anti-genetic antibodies and such antibodies or Synthetic organic or inorganic compounds, including chimeric or humanized forms of antibody fragments, and also antibodies, including human antibodies and antibody fragments. Assays can be performed in a variety of formats including protein-protein binding assays, biochemical screening assays, immunoassays and cell-based assays that are well characterized in the art.

모든 분석법은 본원에서 확인된 핵산에 의해 코딩되는 폴리펩티드와 후보 약물이 이들 두 성분이 상호작용할 수 있는 충분한 시간 및 조건하에 접촉시키는 것을 필요로한다는 점에서 공통적이다.All assays are common in that the polypeptide encoded by the nucleic acid identified herein and the candidate drug require contact under sufficient time and conditions for these two components to interact.

결합 분석에서, 상호작용은 결합하는 것이며, 형성된 결합체는 반응 혼합물에서 단리 또는 검출할 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에서 확인된 유전자에 의해 코딩되는 폴리펩티드 또는 후보 약물은 고상 지지체, 예를 들어, 마이크로타이터 플레이트상에 비공유결합적 부착으로 고정시킨다. 비공유결합적 부착은 일반적으로 고상 표면을 폴리펩티드의 용액으로 코딩하고 건조시켜 달성한다. 또한,고정될 폴리펩티드에 특이적인 고정화 항체, 예를 들어 모노클로날 항체는 고상 표면에 폴리펩티드를 고정시키는데 사용할 수 있다. 이 분석은 검출가능한 표지로 표지될 수 있는 고정되지 않은 성분을 고정된 성분, 예를 들어 고정된 성분을 갖는 코팅 표면에 가하여 수행한다. 반응이 완료되면, 비반응성 성분은 예를 들어, 세척하여 제거하고, 고상 지지체상에 고정된 결합체를 검출한다. 원래의 고정되지 않은 성분은 검출가능한 표지를 갖기 때문에, 표면상에 고정된 표지가 검출되면 이는 결합체가 형성되었음을 가리키는 것이다. 원래의 고정되지 않은 성분은 표지를 갖지 않기 때문에, 예를 들어 고정된 결합체에 특이적으로 결합하는 고정화 항체를 사용하여 결합체 형성을 검출할 수는 없다.In binding assays, the interaction is binding, and the binder formed can be isolated or detected in the reaction mixture. In certain embodiments, a polypeptide or candidate drug encoded by a gene identified herein is immobilized by noncovalent attachment on a solid support, eg, a microtiter plate. Non-covalent attachment is generally achieved by coding and drying the solid surface with a solution of the polypeptide. In addition, immobilized antibodies specific to the polypeptide to be immobilized, such as monoclonal antibodies, can be used to immobilize the polypeptide on a solid surface. This assay is performed by adding an unfixed component that can be labeled with a detectable label to a coating surface having a fixed component, for example a fixed component. Once the reaction is complete, the non-reactive components are removed, for example by washing, to detect the conjugate immobilized on the solid support. Since the original, unimmobilized component has a detectable label, detection of the immobilized label on the surface indicates that a conjugate has been formed. Since the original, unimmobilized component does not have a label, it is not possible to detect binder formation, for example, using immobilized antibodies that specifically bind to immobilized conjugates.

후보 화합물이 본원에서 확인된 유전자에 의해 코딩되는 특정 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드와 상호작용하거나 그에 결합하는 경우, 그 폴리펩티드와의 결합은 단백질-단백질 상호작용을 검출하는데 있어 잘 공지된 방법으로 분석할 수 있다. 그러한 분석법으로는, 전통적인 연구법, 예를 들어 가교결합, 동시-면역침전, 및 구배 또는 크로마토그래피 컬럼을 통한 동시 정제법이 있다. 또한, 단백질-단백질 상호작용은 문헌(Chevary and Nathans, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:9578-95828(1991))에 개시된 바와 같은 필드(Field)와 그의 공동 연구자의 문헌(Fields and Song, Nature, 340:245-246(1989); Chien et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 88:9578-9582(1991))에 기재된 효모 기재의 유전자 시스템을 사용하여 모니터링할 수 있다. 많은 전사 활성화 인자, 예를 들어 효모 GAL4는 두 개의 물질적으로 독특한 조절 도메인으로 이루어져 있는데, 그 중 하나는 DNA 결합 도메인으로 작용하고, 다른 하나는 전사 활성 도메인으로 작용한다. 상기 문헌에 기재된 효모 발현 시스템(일반적으로, "투-하이브리드 시스템 (two-hybrid system)"으로 불림)은 그러한 특성을 이용하며, 2 종의 하이브리드 단백질, 즉 하나는 표적 단백질이 GAL4의 DNA 결합 도메인에 융합되어 있는 단백질, 다른 하나는 후보 활성화 단백질이 활성 도메인에 융합되어 있는 단백질을 사용한다. GAL4-활성화 프로모터에 의한 조절하에 있는 GAL1-lacZ 리포터 유전자의 발현은 단백질-단백질 상호작용을 통한 GAL4 활성의 재구성에 좌우된다. 상호작용하는 폴리펩티드를 함유하는 콜로니는 β-갈락토시다제에 대한 발색 기질로 검출할 수 있다. 투 하이브리드 기술을 이용하여 두 특이적 단백질 사이의 단백질-단백질 상호작용을 확인하기 위한 완전 키트(매치마커(MATCHMAKER), 상표명)는 Clontech로부터 구입할 수 있다. 이 시스템은 또한 특이적 단백질 상호작용에 관련된 단백질 도메인을 지도화하는 것은 물론 그러한 상호작용에 결정적으로 중요한 아미노산 잔기를 정확하게 나타내는데까지 확장하여 사용할 수 있다. 본원에서 확인된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 코딩 유전자와 다른 세포내- 및 세포외 성분사이의 상호작용을 방해하는 화합물은 다음과 같이 시험할 수 있다. 통상, 반응 혼합물은 증폭된 유전자의 생성물 및 세포간- 또는 세포외 성분을 이들 생성물이 상호작용하고 결합할 수 있는 충분한 시간 및 조건하에 접촉시켜 제조한다. 결합을 억제하는 시험 화합물의 능력을 시험하기 위해, 반응을 시험 화합물의존재 및 부재하에 실행한다. 또한, 제3 반응 혼합물에 위약을 가하여 양성 대조용으로 이용한다. 혼합물중에 존재하는 시험 화합물과 세포간- 또는 세포외 성분 사이의 결합(결합체 형성)은 상기한 바와 같이 모니터링한다. 시험 화합물을 함유하지 않는 반응 혼합물이 아닌 대조 반응물(들)에서 결합체가 형성되면, 이는 시험 화합물과 그의 반응 파트너 사이의 상호작용을 방해하는 것을 가리키는 것이다.When a candidate compound interacts with or binds to a particular PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide encoded by a gene identified herein, Binding with the polypeptide can be analyzed by well known methods for detecting protein-protein interactions. Such assays include traditional research methods such as crosslinking, co-immunoprecipitation, and simultaneous purification via gradient or chromatographic columns. In addition, protein-protein interactions are described by Field and its co-investigators, as described in Chevary and Nathans, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 9578-95828 (1991). Can be monitored using a yeast based genetic system described in Song, Nature, 340: 245-246 (1989); Chien et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 9578-9582 (1991). have. Many transcription activators, such as yeast GAL4, consist of two materially distinct regulatory domains, one acting as the DNA binding domain and the other acting as the transcriptional activation domain. The yeast expression system described in this document (generally called "two-hybrid system") takes advantage of such properties, and two hybrid proteins, one of which target DNA is the DNA binding domain of GAL4. The protein is fused to, and the other uses a protein in which the candidate activating protein is fused to the active domain. Expression of the GAL1-lacZ reporter gene under control by the GAL4-activating promoter depends on the reconstitution of GAL4 activity through protein-protein interactions. Colonies containing interacting polypeptides can be detected as a chromogenic substrate for β-galactosidase. A complete kit (MATCHMAKER, trade name) for identifying protein-protein interactions between two specific proteins using two hybrid technology can be purchased from Clontech. The system can also be used to map protein domains involved in specific protein interactions, as well as to pinpoint amino acid residues critically important for such interactions. Compounds that interfere with the interaction between the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 coding genes identified herein and other intracellular and extracellular components Can be tested as follows. Typically, reaction mixtures are prepared by contacting products of amplified genes and intercellular- or extracellular components under sufficient time and conditions for these products to interact and bind. To test the ability of the test compound to inhibit binding, the reaction is run in the presence and absence of the test compound. In addition, placebo was added to the third reaction mixture and used as a positive control. The binding (conjugate formation) between the test compound and the intercellular or extracellular component present in the mixture is monitored as described above. If a conjugate is formed in the control reactant (s) but not in the reaction mixture that does not contain the test compound, this indicates an interference between the test compound and its reaction partner.

길항제를 시험하기 위해, 특정 활성 및 화합물이 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 대한 길항제임을 가리키는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 존재하에 관심있는 활성을 억제하는 화합물의 능력에 대해 스크리닝할 화합물과 함께 세포에 가할 수 있다. 또한, 길항제는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 및 잠재성 있는 길항제를 막 결합된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 수용체와 경쟁적 억제 분석 조건하에 조합하여 검출할 수 있다. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드는 방사능 등으로 표지하여 수용체에 결합된 상기 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 분자의 수로 잠재성 있는 길항제의 유효성을 결정하는데 사용할 수 있다. 수용체를 코딩하는 유전자는 당업계에 공지된 많은 방법, 예를 들어 리간드 패닝 및 FACS 소팅(Coligan et al., Current Protocols in Immune., 1(2); Chapter 5(1991))으로 입증할 수 있다. 바람직하게는, 발현 클로닝은 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드로부터 폴리아데닐화 RNA가 제조되고, 이 RNA로부터 생성된 cDNA 라이브러리가 풀로 분배되고, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 반응하지 않은 COS 세포 또는 다른 세포를 형질감염시키는데 사용하는 경우에 이용한다. 유리 슬라이드상에서 생장한 형질감염된 세포를 표지된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 노출시킨다. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드는 요오드화 또는 부위 특이적 단백질 키나아제에 대한 인식 부위를 포함시키는 등 각종 수단으로 표지시킬 수 있다. 고정화 및 배양 후, 슬라이드는 방사능자동사진 분석을 한다. 양성 풀을 확인하여 서브풀을 제조한 후, 상호작용성 서브풀 제조 및 재스크리닝 방법을 이용하여 재형질감염시킴으로써 결국에는 추정 수용체를 코딩하는 단일 클론을 수득한다.To test antagonists, PRO201, PRO292, PRO327, indicating that the specific activity and compound is an antagonist for PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptides. The cells can be added with the compound to be screened for the ability of the compound to inhibit the activity of interest in the presence of a PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. In addition, the antagonist is PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, which combines PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides and potential antagonists , PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide receptors can be detected in combination under competitive inhibition assay conditions. The PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides are labeled with radioactivity or the like to bind to the receptors. The number of polypeptide molecules, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 can be used to determine the effectiveness of a potential antagonist. Genes encoding receptors can be demonstrated by many methods known in the art, for example ligand panning and FACS sorting (Coligan et al., Current Protocols in Immune., 1 (2); Chapter 5 (1991)). . Preferably, the expression cloning is a polyDenylated RNA prepared from PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide, and the cDNA produced from the RNA The library is distributed to the pool and used to transfect COS cells or other cells that do not respond to the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptides. We use for. Transfected cells grown on glass slides are exposed to labeled PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. The PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptides can be labeled by a variety of means, including recognition sites for iodide or site specific protein kinases. have. After immobilization and incubation, the slides are subjected to radiophotographic analysis. Subpools are identified by identifying the positive pools and then retransfected using interactive subpool preparation and rescreening methods to eventually yield a single clone encoding the putative receptor.

수용체 확인을 위한 또다른 연구법으로서, 표지된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509,PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드는 수용체 분자를 발현하는 세포막 또는 추출물 제제와 광친화성-결합될 수 있다. 가교결합된 물질은 PAGE로 해상하고, X-선 필름에 노출시킨다. 수용체를 함유하는 표지된 결합체는 절단하여 펩티드 단편으로 분해할 수 있고, 단백질 미량 서열분석(micro-sequencing)을 할 수 있다. 미량 서열분석으로부터 얻은 아미노산 서열은 추정의 수용체를 코딩하는 유전자를 입증하기 위해 cDNA 라이브러리를 스크리닝하기 위해 변형(degenerate) 올리고뉴클레오티드 프로브 세트를 설계하는데 사용할 수 있다.As another method for receptor identification, labeled PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptides can be prepared with cell membrane or extract preparations expressing receptor molecules. Photo-affinity-bonded. The crosslinked material is resolved by PAGE and exposed to X-ray film. Labeled conjugates containing receptors can be cleaved and digested into peptide fragments and subjected to protein micro-sequencing. Amino acid sequences obtained from trace sequencing can be used to design a set of degenerate oligonucleotide probes to screen cDNA libraries to demonstrate genes encoding putative receptors.

길항제에 대한 다른 분석법에서, 수용체를 발현하는 포유동물 세포 또는 막 제제를 표지된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드와 후보 화합물 존재하에 인큐베이션시킨다. 이이서, 이러한 상호작용을 증진시키거나 차단하는 화합물의 능력을 측정할 수 있다.In other assays for antagonists, mammalian cell or membrane preparations expressing receptors are labeled with labeled PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides. Incubate in the presence of compound. In turn, the ability of a compound to enhance or block this interaction can be measured.

잠재성 있는 길항제의 보다 특이적인 예로는 면역글로불린과 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드와의 융합체에 결합하는 올리고뉴클레오티드와, 구체적으로는 폴리- 및 모노클로날 항체 및 항체 단편, 단일쇄 항체, 항-유전형 항체를 비롯한 항체, 또는 그러한 항체의 키메라 형태 또는 인간화 형태 또는 단편은 물론 인간 항체 및 항체 단편이 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 잠재성 있는 길항제는 단백질, 예를 들어 수용체를 인식하지만 효과를 부여하지 않아 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347,PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 결합을 경쟁적으로 억제하는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 돌연변이형과 밀접하게 관련되어 있다.More specific examples of potential antagonists include oligonucleotides that bind to fusions of immunoglobulins with PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides. Include, but are not limited to, poly- and monoclonal antibodies and antibody fragments, antibodies, including single-chain antibodies, anti-genetic antibodies, or chimeric or humanized forms or fragments of such antibodies, as well as human antibodies and antibody fragments. It is not limited. In addition, potential antagonists recognize proteins, such as receptors, but do not confer effects, such as those of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptides. It is closely related to the mutant forms of the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides that competitively inhibit binding.

잠재성 있는 다른 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 길항제는 안티센스 기술을 이용하여 제조된 안티센스 RNA 또는 DNA 작제물이며, 여기서 안티센스 RNA 또는 DNA는 표적화된 mRNA에 혼성화됨으로써 mRNA의 번역을 직접 차단하고, 단백질 번역을 억제한다. 안티센스 기술은 삼중 나선 형성 또는 안티센스 RNA 또는 DNA를 통한 유전자 발현을 억제하는데 사용할 수 있으며, 이들 두 방법은 폴리뉴클레오티드의 DNA 또는 RNA에 대한 결합을 기초로 한다. 예를 들어, 본원에서의 성숙 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열의 5' 코딩부는 길이가 약 10 내지 40 bp인 안티센스 RNA 올리고뉴클레오티드를 설계하는데 사용된다. DNA 뉴클레오티드는 전사에 관련된 유전자 영역에 상보적이도록 설계(삼중 나선에 대해서는 문헌[Lee et al., Nucl. Acids Res., 6:3073(1979); Cooney et al., Science, 241:456(1988); Dervan et al., Science, 251:1360(1991))하여, 전사 및 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 생성을 억제시킨다. 안티센스 RNA 올리고뉴클레오티드는 생체내에서 mRNA에 혼성화되고, mRNA 분자가 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드로 번역되는 것을 억제한다(안티센에 대해서는 문헌[Ojano, Neuochem., 56:560(1991); Oligodeoxynucleotides as Antisense Inhibitors of Gene Expression(CRC Press: Boca Raton, FL, 1988)] 참조). 상기된 올리고뉴클레오티드는 또한 세포로 전달되어 안티센스 RNA 또는 DNA가 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 생성을 억제하도록 생체내 발현될 수 있게 된다. 안티센스 DNA를 사용하는 경우, 번역 개시 부위로부터 유도된 올리고데옥시리보뉴클레오티드, 예를 들어 표적 유전자 뉴클레오티드 서열의 약 -10에서 +10 위치 사이가 바람직하다.Other potential PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide antagonists are antisense RNA or DNA constructs prepared using antisense technology, wherein Antisense RNA or DNA hybridizes to the targeted mRNA to directly block translation of the mRNA and inhibit protein translation. Antisense techniques can be used to inhibit triple helix formation or gene expression through antisense RNA or DNA, both methods based on binding of polynucleotides to DNA or RNA. For example, the 5 'coding portion of a polynucleotide sequence encoding a mature PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide herein is approximately It is used to design antisense RNA oligonucleotides of 10 to 40 bp. DNA nucleotides are designed to be complementary to gene regions involved in transcription (for triple helices see Lee et al., Nucl. Acids Res., 6: 3073 (1979); Cooney et al., Science, 241: 456 (1988). Dervan et al., Science, 251: 1360 (1991)) for transcription and production of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides. Suppress it. Antisense RNA oligonucleotides hybridize to mRNA in vivo and inhibit the translation of mRNA molecules into PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides. (For antisene, see Ojano, Neuochem., 56: 560 (1991); Oligodeoxynucleotides as Antisense Inhibitors of Gene Expression (CRC Press: Boca Raton, FL, 1988)). The oligonucleotides described above are also delivered to cells such that antisense RNA or DNA inhibits the production of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides. Can be expressed. When using antisense DNA, oligodeoxyribonucleotides derived from the translation initiation site, eg, between about −10 and +10 positions of the target gene nucleotide sequence, are preferred.

안티센스 DNA 또는 RNA 분자는 일반적으로 길이가 약 5 base 이상, 약 10 base 이상, 약 15 base 이상, 약 20 base 이상, 약 25 base 이상, 약 30 base 이상, 약 35 base 이상, 약 40 base 이상, 약 45 base 이상, 약 50 base 이상, 약 55 base 이상, 약 60 base 이상, 약 65 base 이상, 약 70 base 이상, 약 75 base 이상, 약 80 base 이상, 약 85 base 이상, 약 90 base 이상, 약 95 base 이상, 약 100 base 이상이다.Antisense DNA or RNA molecules are generally at least about 5 bases, at least about 10 bases, at least about 15 bases, at least about 20 bases, at least about 25 bases, at least about 30 bases, at least about 35 bases, at least about 40 bases, About 45 base or more, about 50 base or more, about 55 base or more, about 60 base or more, about 65 base or more, about 70 base or more, about 75 base or more, about 80 base or more, about 85 base or more, about 90 base or more, At least about 95 bases, at least about 100 bases.

잠재성 있는 길항제로는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 활성 부위, 수용체 결합 부위, 또는 생장 인자 또는 관련 결합 부위에 결합하여 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 정상적인 생물학적 활성을 차단하는 소분자가 포함된다. 소분자의 예로는 작은 펩티드 또는 펩티드 유사 분자, 바람직하게는 가용성 펩티드 및 합성 비-펩티딜 유기 또는 무기 화합물이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다.Potential antagonists include the active site, receptor binding site, or growth factor or related binding site of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides. Small molecules that bind to block the normal biological activity of the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides are included. Examples of small molecules include, but are not limited to, small peptides or peptide like molecules, preferably soluble peptides and synthetic non-peptidyl organic or inorganic compounds.

리보자임은 RNA의 특이적 절단을 촉매화할 수 있는 효소적 RNA 분자이다. 리보자임은 그와 상보적인 표적 RNA와 서열-특이적 혼성화한 다음, 엔도뉴클레아제에 의해 절단함으로써 작용한다. 공지된 기술로 잠재성 있는 RNA 표적내의 특이적인 리보자임 절단 부위를 확인할 수 있었다. 보다 자세한 사항은, 예를 들어 문헌 (Rossi, Current Biology, 4:469-471 (1994) 및 1997년 9월에 공개된 국제 공개 제97/33551호)을 참조한다.Ribozymes are enzymatic RNA molecules capable of catalyzing the specific cleavage of RNA. Ribozymes act by sequence-specific hybridization with complementary target RNAs followed by cleavage by endonucleases. Known techniques have been able to identify specific ribozyme cleavage sites in potential RNA targets. For further details, see, eg, Rossi, Current Biology, 4: 469-471 (1994) and International Publication No. 97/33551, published in September 1997.

전사를 억제하는데 사용되는 삼중나선 형태의 핵산 분자는 단일 가닥이어야하며, 데옥시뉴클레오티드로 이루어져야 한다. 이러한 올리고뉴클레오티드의 염기 조성은 그가 호그스틴(Hoogsteen) 염기쌍 규칙을 통해 삼중나선 형성을 촉진하게끔 설계되어 있는데, 삼중나선 형성에는 일반적으로 이중쇄 중 한 가닥에 상당한 크기의 퓨린 또는 피리미딘 스트레치가 있어야 한다. 보다 자세한 사항은, 예를 들어 문헌(상기 국제 공개 제97/33551호)을 참조한다.Triple-stranded nucleic acid molecules used to inhibit transcription must be single stranded and consist of deoxynucleotides. The base composition of such oligonucleotides is designed to facilitate triple helix formation through the Hogsteen base pair rule, which typically requires a significant amount of purine or pyrimidine stretch on one strand of the double chain. . For further details, see, for example, International Publication No. 97/33551, supra.

상기 작은 분자들은 상기 기재된 임의 한가지 이상의 스크리닝 분석법 및(또는) 당업자에게 잘 알려진 임의 다른 스크리닝 기술에 의해 확인할 수 있다.The small molecules can be identified by any one or more of the screening assays described above and / or by any other screening technique well known to those skilled in the art.

L. 종양의 치료용 조성물 및 치료 방법L. Compositions and Methods of Treatment for Tumors

본원에서 확인된 유전자의 증폭과 관련된 종양의 치료에 유용한 조성물로는 표적 유전자 생성물의 발현 및(또는) 활성을 억제하는 항체, 작은 유기 및 무기 분자, 펩티드, 포스포펩티드 안티센스 및 리보자임 분자, 삼중 나선 등이 포함되나, 이에 제한되지는 않는다.Compositions useful for the treatment of tumors associated with amplification of genes identified herein include antibodies, small organic and inorganic molecules, peptides, phosphopeptide antisense and ribozyme molecules, triples that inhibit the expression and / or activity of target gene products. Spirals and the like, but is not limited thereto.

예를 들어, 안티센스 RNA 또는 DNA 분자는 표적 mRNA에 혼성화되어 mRNA의 번역을 직접 차단하고, 단백질로의 번역을 저해한다. 안티센스 DNA가 사용되는 경우, 올리고데옥시리보뉴클레오티드는 번역 개시 부위, 예를 들어 표적 유전자 뉴클레오티드 서열의 약 -10에서 +10 위치 사이로부터 유래된다.For example, antisense RNA or DNA molecules hybridize to target mRNAs to directly block translation of the mRNA and inhibit translation into protein. If antisense DNA is used, the oligodeoxyribonucleotide is derived from a translation initiation site, eg, between about −10 and +10 positions of the target gene nucleotide sequence.

리보자임은 RNA의 특이적 절단을 촉매화할 수 있는 효소적 RNA 분자이다. 리보자임은 그와 상보적인 표적 RNA와 서열-특이적 혼성화한 다음, 엔도누클레아제에 의해 절단됨으로써 작용한다. 공지된 기술로 잠재성 있는 RNA 표적내의 특이적인 리보자임 절단 부위를 확인할 수 있었다. 보다 자세한 사항은 예를 들어 문헌 (Rossi, Current Biology, 4:469-471 (1994) 및 1997년 9월 18일에 공개된 국제 공개 제97/33551호)을 참조한다.Ribozymes are enzymatic RNA molecules capable of catalyzing the specific cleavage of RNA. Ribozymes act by sequence-specific hybridization with complementary target RNAs followed by cleavage by endonucleases. Known techniques have been able to identify specific ribozyme cleavage sites in potential RNA targets. See, for example, Rossi, Current Biology, 4: 469-471 (1994) and International Publication No. 97/33551, published September 18, 1997.

전사를 억제하는데 사용되는 삼중나선 형태의 핵산 분자는 단일쇄가어야하며, 데옥시뉴클레오티드로 이루어져야 한다. 이러한 올리고뉴클레오티드의 염기 조성은 그가 호그스틴 염기쌍 규칙을 통해 삼중나선 형성을 촉진하게끔 설계되어 있는데, 삼중나선 형성에는 일반적으로 이중쇄 중 한 쇄에 상당한 크기의 퓨린 또는 피리미딘 스트레치가 있어야 한다. 보다 자세한 사항은 예를 들어 문헌(상기 국제 공개 제97/33551호)을 참조한다.Triple-stranded nucleic acid molecules used to inhibit transcription must be single-stranded and consist of deoxynucleotides. The base composition of such oligonucleotides is designed to facilitate triple helix formation through the Hogstein base pair rule, which typically requires significant size purine or pyrimidine stretch in one of the double chains. For further details see, for example, International Publication No. 97/33551, supra.

M. 항체M. Antibodies

본 발명에 따라 몇가지 후보 약물로 가장 유망한 것은 본원에서 확인된 증폭된 유전자의 생성물 또는 유전자 생성물의 생성을 억제하고(하거나) 유전자 생성물의 활성을 감소시키는 항체 또는 항체 단편이다.The most promising of several candidate drugs in accordance with the present invention are antibodies or antibody fragments which inhibit the production of amplified genes or gene products and / or reduce the activity of gene products identified herein.

1.폴리클로날 항체 1. Polyclonal Antibodies

폴리클로날 항체의 제조 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 폴리클로날 항체는 포유동물에 1회 이상 면역화제를 주입, 필요한 경우 면역보강제와 함께 주입하여 제조할 수 있다. 통상, 면역화제 및(또는) 면역보강제는 포유동물에 피하 주사 또는 복강내 주사로 수회 주입될 것이다. 면역화제는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 또는 그의 융합 단백질을 포함할 수 있다. 면역화되는 포유동물에 면역원성이 있는 것으로 공지된 단백질과 함께 면역화제를 주사하는 것이 효과적일 수 있다. 상기 면역원성 단백질의 예에는 키홀 림펫(keyhole limpet) 헤모시아닌, 혈청 알부민, 소의 티로글로불린 및 대두 트립신 억제제가 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다. 사용할 수 있는 면역보강제에는 프로인트 완전 면역보강제 (Freund's complete adjuvant) 및 MPL-TDM 면역보강제(모노포스포릴 지질 A(monophosphoryl Lipid A), 합성 트레할로오스 디코리노미콜레이트)가 포함된다. 면역화 방법은 불필요한 실험없이 당업자가 선택할 수 있다.Methods of making polyclonal antibodies are known to those skilled in the art. Polyclonal antibodies can be prepared by injecting the mammal with one or more immunizing agents, if necessary, with an adjuvant. Typically, an immunizing agent and / or adjuvant will be injected into the mammal several times by subcutaneous injection or intraperitoneal injection. Immunizing agents can include PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides or fusion proteins thereof. Injecting an immunizing agent with a protein known to be immunogenic in the mammal being immunized can be effective. Examples of such immunogenic proteins include, but are not limited to, keyhole limpet hemocyanin, serum albumin, bovine tyroglobulin and soybean trypsin inhibitor. Adjuvants that may be used include Freund's complete adjuvant and MPL-TDM adjuvant (monophosphoryl Lipid A, synthetic trehalose decolinomycolate). Immunization methods can be chosen by those skilled in the art without unnecessary experimentation.

2.모노클로날 항체 2. Monoclonal Antibodies

다른 방법으로, 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344,항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체는 모노클로날 항체일 수 있다. 모노클로날 항체는 문헌 (Kohler and Milstein, Nature, 256:495 (1975))에 기재된 바와 같은 하이브리도마(hybridoma) 방법을 사용하여 제조한다. 하이브리도마 방법에서, 면역화제에 특이적으로 결합하는 항체를 만들거나 만들 수 있는 림프구를 유도하기 위해, 상기 면역화제로 생쥐, 햄스터 또는 다른 적합한 숙주 동물을 면역화시킨다. 다른 방법으로, 림프구는 시험관내에서 면역화될 수 있다.Alternatively, anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti- The PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibody may be a monoclonal antibody. Monoclonal antibodies are prepared using the hybridoma method as described in Kohler and Milstein, Nature, 256: 495 (1975). In the hybridoma method, mice, hamsters or other suitable host animals are immunized with the immunizing agent to induce lymphocytes that can make or produce antibodies that specifically bind to the immunizing agent. Alternatively, lymphocytes can be immunized in vitro.

면역화제는 통상 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드, 이들의 단편, 또는 이러한 단백질들이나 이들 단편의 융합 단백질을 포함한다. 통상, 인간에서 유래한 세포가 요구되는 경우에는 말초 혈관 림프구(peripheral blood lymphocyte: "PBL")를 사용하고, 인간이 아닌 포유동물에서 유래한 세포가 요구되는 경우에는 비장 세포 또는 림프절 세포를 이용한다. 이어서, 상기 림프구를 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적합한 융합제를 사용하여 무한증식 세포주와 융합시켜 하이브리도마 세포를 형성한다(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, (1986) pp. 59-103). 무한증식 세포주는 통상 형질전환된 포유동물 세포, 특히 설치류, 소 및 인간에서 유래한 골수종 세포이다. 통상, 쥐 또는 생쥐의 골수종 세포를 사용한다. 하이브리도마 세포는 융합되지 않은 무한증식 세포의 생장 또는 생존을 억제하는 1 종 이상의 물질을 포함하는 적합한 배지에서 배양할 수 있다. 예를 들어, 모세포에 히포크산틴 구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제(HGPRT 또는 HPRT)라는 효소가 결핍되어 있으면, 하이브리도마의 배지는 통상 HGPRT-결핍 세포의 생장을 방해하는 물질인 히포크산틴, 아미노프테린 및 티미딘을 포함("HAT 배지")할 것이다.Immunizing agents typically include PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides, fragments thereof, or fusion proteins of these proteins or these fragments. Usually, peripheral blood lymphocytes ("PBL") are used when cells derived from humans are required, and spleen cells or lymph node cells are used when cells derived from non-human mammals are required. The lymphocytes are then fused with infinite growth cell lines using a suitable fusing agent such as polyethylene glycol to form hybridoma cells (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press, (1986) pp. 59-103). . Infinite proliferation cell lines are usually transformed mammalian cells, especially myeloma cells derived from rodents, bovine and human. Typically, myeloma cells of rats or mice are used. Hybridoma cells can be cultured in a suitable medium comprising one or more substances that inhibit the growth or survival of unfused, endogenous proliferating cells. For example, if a parent cell lacks an enzyme called hypoxanthine guanine phosphoribosyltransferase (HGPRT or HPRT), the hybridoma's medium is usually hypoxanthine, ami, which interferes with the growth of HGPRT-deficient cells. Will include nofterin and thymidine (“HAT medium”).

바람직한 무한증식 세포주는 효과적으로 융합되고, 선별된 항체-생성 세포에 의해 높은 수준의 항체를 안정하게 만들어내며, HAT 배지와 같은 배지에 감응성이 높은 것이다. 더욱 바람직한 무한증식 세포주는 캘리포니아주 샌디에고 소재의 솔크 인스티튜트 셀 디스트리뷰션 센터(Salk Institute Cell Distribution Center) 및 버지니아주 매나서스 소재의 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection)으로부터 입수가능한 쥐과 골수종 세포이다. 또한, 인간의 골수종 세포 및 생쥐-인간 이종골수종 세포도 인간 모노클로날 항체 생성에 사용되었다 (Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984)) 및 Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, Marcel Dekker, Inc., New York, (1987) pp. 51-63).Preferred endogenous cell lines are those that are effectively fused, stably produce high levels of antibody by selected antibody-producing cells, and are highly sensitive to media such as HAT medium. More preferred endogenous cell lines are murine myeloma cells available from the Salk Institute Cell Distribution Center in San Diego, California, and the American Type Culture Collection, Manassas, Virginia. In addition, human myeloma cells and mouse-human heteromyeloma cells have also been used to generate human monoclonal antibodies (Kozbor, J. Immunol., 133: 3001 (1984)) and Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications , Marcel Dekker, Inc., New York, (1987) pp. 51-63).

하이브리도마 세포가 배양된 배지를 사용하여 원하는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 의해 유도된 모노클로날 항체의 존재 여부를 분석할 수 있다. 바람직하게는 하이브리도마 세포에서 생성된 모노클로날 항체의 결합 특이성이 면역 침강이나, 방사성면역분석(radioimmunoassay: RIA)이나 효소-결합 면역흡수 분석(enzyme-linked immunoabsorbent assay: ELISA)과 같은 시험관내 결합 분석으로 측정할 수 있다. 상기 기술 및 분석법은 당업계에 공지되어있다. 모노클로날 항체의 결합 친화도는 문헌 (Munson and Pollard, Anal. Biochem. 107:220 (1980))에 기재된 스캐쳐드(Scatchard) 분석법에 의해 측정할 수 있다.Presence of monoclonal antibodies induced by the desired PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides using a culture cultured hybridoma cells Can be analyzed. Preferably, the binding specificity of monoclonal antibodies produced in hybridoma cells is characterized by immunoprecipitation, in vitro, such as radioimmunoassay (RIA) or enzyme-linked immunoabsorbent assay (ELISA). It can be measured by binding assays. Such techniques and assays are known in the art. The binding affinity of monoclonal antibodies can be measured by the Scatchard assay described in Munson and Pollard, Anal. Biochem. 107: 220 (1980).

원하는 하이브리도마 세포를 찾아낸 후, 그 클론을 한계 희석 방법으로 서브클로닝하여 표준 방법(Goding, 상기 문헌)으로 배양한다. 이러한 목적에 적합한 배지에는 둘벨코 변형 이글 배지(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 및 RPMI-1640 배지가 포함된다. 다른 방법으로, 하이브리도마 세포는 포유동물의 복수종양으로서 생체내에서 배양할 수 있다.After finding the desired hybridoma cells, the clones are subcloned in a limiting dilution method and cultured in the standard method (Goding, supra). Suitable media for this purpose include Dulbecco's Modified Eagle's Medium and RPMI-1640 medium. Alternatively, the hybridoma cells can be cultured in vivo as ascites tumors in mammals.

서브클론에 의해 분비된 모노클로날 항체는 종래의 면역글로불린 정제 방법(예를 들어, 단백질 A-세파로스, 히드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 또는 친화 크로마토그래피)에 의해 배지나 복수액으로부터 단리 또는 정제할 수 있다.The monoclonal antibodies secreted by the subclones are media or ascites fluid by conventional immunoglobulin purification methods (e.g., protein A-Sepharose, hydroxylapatite chromatography, gel electrophoresis, dialysis or affinity chromatography). Can be isolated or purified from.

모노클로날 항체는 미국 특허 제4,816,567호에 기재된 바와 같은 재조합 DNA 방법으로 만들어질 수 있다. 본 발명의 모노클로날 항체를 코딩하는 DNA는 종래의 방법(쥐과 동물 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브 사용)을 사용하여 쉽게 단리하고 서열 분석할 수 있다. 본 발명의 하이브리도마 세포는 그러한 DNA의 바람직한 출처로 사용된다. 일단 분리된 DNA를 발현 벡터로 클로닝하고, 이를 원숭이 COS 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포 또는 골수종 세포(평상시에는 면역글로불린 단백질을 생성하지 않음)에 형질감염시킨 후, 재조합 세포에서 합성된 모노클로날 항체를 수득할 수 있다. 쥐과 동물의 중쇄 및 경쇄의 불변 도메인을 이와 상동성 있는 인간의 중쇄 및 경쇄에 대한 코딩 서열로 치환(미국 특허 제4,816,567호 및 모리슨(Morrison) 등의 상기 문헌 참조)하거나, 또는 비-면역글로불린 코딩 서열의 전체 또는 일부분을 면역글로불린 코딩 서열과 공유결합시키는 등의 방법에 의해 상기 DNA를 변화시킬 수 있다. 이러한 비-면역글로불린 폴리펩티드는 본 발명 항체의 불변 도메인으로 치환하거나, 또는 2가 키메라 항체의 생성을 위해 본 발명 항체의 한 항원-결합 부위의 가변 도메인으로 치환할 수 있다.Monoclonal antibodies can be made by recombinant DNA methods as described in US Pat. No. 4,816,567. The DNA encoding the monoclonal antibodies of the invention can be easily isolated and sequenced using conventional methods (using oligonucleotide probes that can specifically bind to the genes encoding the heavy and light chains of murine antibodies). have. Hybridoma cells of the invention are used as a preferred source of such DNA. Once isolated, the DNA is cloned into an expression vector and transfected into monkey COS cells, Chinese hamster ovary (CHO) cells or myeloma cells (which normally do not produce immunoglobulin proteins), followed by monoclonal synthesis from recombinant cells. Raw antibodies can be obtained. The constant domains of the heavy and light chains of murine animals with the coding sequences for human heavy and light chains homologous thereto (see US Pat. No. 4,816,567 and Morrison et al., Supra), or non-immunoglobulin coding The DNA can be altered by methods such as covalently linking all or a portion of the sequence with an immunoglobulin coding sequence. Such non-immunoglobulin polypeptides can be substituted with the constant domains of the antibodies of the invention, or with the variable domains of one antigen-binding site of the antibodies of the invention for the production of bivalent chimeric antibodies.

상기 항체는 1가 항체일 수 있다. 1가 항체의 제조 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다. 예를 들어, 한 가지 방법은 면역글로불린의 경쇄 및 변형된 중쇄의 재조합 발현을 포함한다. 중쇄의 가교결합을 방지하기 위해 통상 Fc 영역의 임의의 지점에서 중쇄의 말단이 절단된다. 다른 방법으로, 관련 시스테인 잔기를 다른 아미노산 잔기로 치환하거나 제거하여 가교결합을 방지한다.The antibody may be a monovalent antibody. Methods of making monovalent antibodies are well known in the art. For example, one method involves recombinant expression of the light and modified heavy chains of immunoglobulins. The end of the heavy chain is usually cleaved at any point in the Fc region to prevent crosslinking of the heavy chain. Alternatively, the related cysteine residues are replaced or eliminated with other amino acid residues to prevent crosslinking.

또한, 시험관내 방법도 1가 항체의 제조에 적합하다. 항체를 분해하여 그 단편, 특히 Fab 단편을 제조하는 것은 당업계에 공지된 흔한 기술을 이용하여 수행할 수 있다.In vitro methods are also suitable for the preparation of monovalent antibodies. Degrading the antibody to produce its fragments, particularly Fab fragments, can be carried out using common techniques known in the art.

3.인간 및 인간화 항체 3. Human and Humanized Antibodies

본 발명의 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체는 추가로 인간화 항체 또는 인간 항체를 포함할 수 있다. 인간이외의 생물(예를 들어, 쥐과 동물)에서 제조한 항체의 인간화 형태는상기 생물의 면역글로불린으로부터 유래한 최소 서열을 포함하는, 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 쇄 또는 그의 단편(Fv, Fab, Fab', F(ab')2또는 항체의 다른 항원-결합 서열)이다. 인간화 항체는 수용체의 상보성 결정 영역(complementary determining region: CDR)의 잔기가, 원하는 특이성, 친화도 및 용량을 갖는 생쥐, 쥐 또는 토끼와 같은 인간이 아닌 종(공여 항체)의 CDR 잔기로 대체된 인간 면역글로불린(수용 항체)를 포함한다. 어떤 경우에는, 인간 면역글로불린의 Fv 골격 잔기가 상응하는 인간이 아닌 종의 잔기로 대체된다. 또한, 인간화 항체는 수용 항체 및 수용된 CDR 또는 골격 서열 어디에도 나타나지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 인간화 항체는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역이 인간이 아닌 종의 면역글로불린과 일치하거나, 또는 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역이 인간 면역글로불린 서열인, 하나 이상(통상, 두 개)의 가변 도메인을 실질적으로 포함한다. 또한, 최적의 인간화 항체는 인간의 면역글로불린 불변부(Fc)를 일부분 이상 포함한다(Jones et al, Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann et al, Nature, 332:323-329 (1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2:593-596 (1992)).Anti-PRO201, Anti-PRO292, Anti-PRO327, Anti-PRO1265, Anti-PRO344, Anti-PRO343, Anti-PRO347, Anti-PRO357, Anti-PRO715, Anti-PRO1017, Anti-PRO1112, Anti-PRO509 , Anti-PRO853 or anti-PRO882 antibodies may further comprise humanized antibodies or human antibodies. Humanized forms of antibodies made from organisms other than humans (eg, murine) include chimeric immunoglobulins, immunoglobulin chains or fragments thereof (Fv, Fab, Fab) comprising a minimal sequence derived from the immunoglobulin of the organism. ', F (ab') 2 or other antigen-binding sequence of the antibody). Humanized antibodies are humans in which residues of the complementary determining region (CDR) of a receptor are replaced by CDR residues of a non-human species (donating antibody) such as a mouse, rat or rabbit having the desired specificity, affinity and dose. Immunoglobulins (receptive antibodies). In some cases, the Fv framework residues of human immunoglobulins are replaced by residues of the corresponding non-human species. Humanized antibodies may also include residues that appear neither in the recipient antibody nor in the received CDR or framework sequences. Humanized antibodies may comprise one or more (typically, two) variable domains in which all or substantially all CDR regions coincide with immunoglobulins of a non-human species, or all or substantially all FR regions are human immunoglobulin sequences. Include as. In addition, optimal humanized antibodies comprise at least a portion of human immunoglobulin constant regions (Fc) (Jones et al, Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann et al, Nature, 332: 323-329 (1988) And Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2: 593-596 (1992)).

인간이 아닌 생물에서 제조한 항체를 인간화시키는 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다. 통상, 인간화 항체는 인간이 아닌 생물에서 제조한 항체에서 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 가지고 있다. 이들 아미노산 잔기는 통상 "임포트(import)" 잔기라 불리우며, "임포트" 가변 도메인에서 유래된 것이다. 인간화 과정은 윈터(Winter) 및 그 동료들의 방법(Jones et al, Nature, 321: 522-525 (1986); Riechmann et al, Nature, 332:323-327 (1988); 및 Verhoeyen et al, Science 239:1534-1536 (1988))에 따라 설치류의 CDR 또는 인간 항체에서 이에 상응하는 CDR 서열을 치환하여 수행한다. 따라서, "인간화" 항체는 인간 항체의 가변 도메인이 인간이 아닌 종에서 유래한 상응하는 서열에 의해 실질적으로 치환된 키메라 항체(미국 특허 제4,816,567호)이다. 사실상, 인간화 항체는 특정 CDR 잔기 및 어쩌면 FR 잔기가 설치류 항체의 유사한 부위에서 유래한 잔기로 치환된 인간 항체이다.Methods of humanizing antibodies made from non-human organisms are well known in the art. Typically, humanized antibodies have one or more amino acid residues introduced in an antibody produced in a non-human organism. These amino acid residues are commonly referred to as "import" residues and are derived from an "import" variable domain. The humanization process is described by Winter and his colleagues (Jones et al, Nature, 321: 522-525 (1986); Riechmann et al, Nature, 332: 323-327 (1988); and Verhoeyen et al, Science 239). : 1534-1536 (1988)) to replace the corresponding CDR sequences in a rodent CDR or human antibody. Thus, a “humanized” antibody is a chimeric antibody (US Pat. No. 4,816,567) in which the variable domain of a human antibody is substantially substituted by a corresponding sequence derived from a non-human species. Indeed, humanized antibodies are human antibodies in which certain CDR residues and possibly FR residues are substituted with residues derived from analogous sites of rodent antibodies.

또한, 인간 항체는 파지 디스플레이(phage display) 라이브러리(Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381(1991); 및 Marks et al, J. Mol. Biol., 222:581(1991))를 포함하는, 당업계에 공지된 여러 가지 기술을 이용하여 제조할 수 있다. 또한, 콜(Cole) 등의 기술 및 뵈르너(Boerner) 등의 기술도 인간 모노클로날 항체의 제조에 유용하다(Cole et al, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); 및 Boerner et al, J. Immunol., 147(1):86-95 (1991)). 마찬가지로, 내생성 면역글로불린 유전자 전체 또는 그 일부가 불활성화된 생쥐와 같은 트랜스제닉 동물에 인간 면역글로불린 유전자좌를 도입함으로써 인간 항체를 제조할 수 있다. 항원투여 후에, 인간 항체 생산이 관찰되었는데, 이는 유전자 재배열, 어셈블리 및 항체 목록을 비롯한 모든 점에서 인간에서 관찰되는 항체와 매우 유사하였다. 이러한 접근법은 예를 들어 문헌 (미국 특허 제5,545,807호, 동 제5,545,806호, 동 제5,569,825호, 동 제5,625,126호, 동 제5,633,425호, 동 5,661,016호) 및 과학 간행물 (Marks et al., Bio/Technology10, 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368, 856-859 (1994), Morrison, Nature 368, 812-13 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology 14, 845-51 (1996); Neuberger, Nature Biotechnology 14, 826 (1996); Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13 65-93 (1995))에 기재되어 있다.Human antibodies also include phage display libraries (Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381 (1991); and Marks et al, J. Mol. Biol., 222: 581 (1991)). It can be prepared using a variety of techniques known in the art, including. In addition, techniques such as Cole and others such as Boerner are also useful for the preparation of human monoclonal antibodies (Cole et al, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985). And Boerner et al, J. Immunol., 147 (1): 86-95 (1991)). Similarly, human antibodies can be prepared by introducing human immunoglobulin loci into transgenic animals such as mice in which all or part of the endogenous immunoglobulin gene has been inactivated. After challenge, human antibody production was observed, which was very similar to the antibodies observed in humans in all respects, including gene rearrangements, assemblies and antibody lists. This approach is described, for example, in US Pat. Nos. 5,545,807, 5,545,806, 5,569,825, 5,625,126, 5,633,425, 5,661,016 and in scientific publications (Marks et al., Bio / Technology 10). , 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368, 856-859 (1994), Morrison, Nature 368, 812-13 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnology 14, 845-51 (1996) Neuberger, Nature Biotechnology 14, 826 (1996); Lonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13 65-93 (1995).

4.항체 의존성 효소 매개 전구약 치료법 (ADEPT) 4. Antibody-Dependent Enzyme-Mediated Prodrug Therapy (ADEPT)

또한, 전구약(예들 들면, 펩티딜 화학요법제, 국제 공개 제81/01145호 참조)을 활성 항암제로 전환시키는 전구약-활성화 효소에 이 항체를 접합시킴으로써 본 발명의 항체를 ADEPT에 사용할 수 있다 (국제 공개 제88/07378호 및 미국 특허 제4,975,278호 참조).The antibody of the invention can also be used in ADEPT by conjugating the antibody to a prodrug-activating enzyme that converts a prodrug (eg, peptidyl chemotherapeutic agent, see International Publication No. 81/01145) into an active anticancer agent. (See International Publication No. 88/07378 and US Pat. No. 4,975,278).

ADEPT에 유용한 면역접합체의 효소 성분에는 전구약을 더 활성적이고 세포독성인 형태로 전환시킬 수 있는 임의의 효소가 포함된다.Enzyme components of immunoconjugates useful for ADEPT include any enzyme capable of converting prodrugs into more active and cytotoxic forms.

본 발명의 방법에 유용한 효소에는 글리코시다제, 글루코스 옥시다제, 인간 리소자임, 인간 글루쿠로니다제, 포스페이트-함유 전구약을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 알칼리 포스파타제; 술페이트-함유 전구약을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 아릴술파타제; 무독성 5-플루오로시토신을 항암제 5-플루오로우라실로 전환시키는데 유용한 시토신 데아미나제; 펩티드-함유 전구약을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 세라티아 프로테아제, 써모리신, 서브틸리신, 카르복시펩티다제(예를 들어, 카르복시펩티다제 G2 및 카르복시펩티다제 A) 및 카텝신(예를 들어, 카텝신 B 및 L)과 같은 프로테아제; D-아미노산 치환체를 함유하는 전구약의 전환에 유용한 D-알라닐카르복시펩티다제; 글리코실화된 전구약을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 β-갈락토시다제 및 뉴라미니다제와 같은 탄수화물-절단 효소; β-락탐으로 유도체화된 약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 β-락타마제; 및 아민 질소 위치에서 각각 페녹시아세틸 또는 페닐아세틸기로 유도체화된 약물을 유리 약물로 전환시키는데 유용한 페니실린 V 아미다제 또는 페니실린 G 아미다제와 같은 페니실린 아미다제가 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다. 다른 방법으로, 당업계에 "아브자임(abzyme)"이라 공지된, 효소 활성이 있는 항체는 본 발명의 전구약을 유리 활성 약물로 전환시키는데 사용될 수 있다 (Massey, Nature, 328:457-458 (1987)). 항체-아브자임 접합체는 종양 세포 군집으로 아브자임의 전달을 위해 본원에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다.Enzymes useful in the methods of the present invention include alkaline phosphatase useful for converting glycosidase, glucose oxidase, human lysozyme, human glucuronidase, phosphate-containing prodrugs into free drugs; Arylsulfatase useful for converting sulfate-containing prodrugs into free drugs; Cytosine deaminase useful for converting non-toxic 5-fluorocytosine into anticancer agent 5-fluorouracil; Serratia protease, thermolysine, subtilisin, carboxypeptidase (eg, carboxypeptidase G2 and carboxypeptidase A) and cathepsin useful for converting peptide-containing prodrugs into free drugs Proteases, such as cathepsin B and L); D-alanylcarboxypeptidase useful for the conversion of prodrugs containing D-amino acid substituents; Carbohydrate-cleaving enzymes such as β-galactosidase and neuraminidase, which are useful for converting glycosylated prodrugs into free drugs; β-lactamase useful for converting drugs derivatized with β-lactams into free drugs; And penicillin amidases such as penicillin V amidase or penicillin G amidase, which are useful for converting drugs derivatized with phenoxyacetyl or phenylacetyl groups at the amine nitrogen positions to free drugs, respectively. Alternatively, enzymatically active antibodies, known in the art as "abzyme", can be used to convert the prodrugs of the invention to free active drugs (Massey, Nature, 328: 457-458 ( 1987)). Antibody-abzyme conjugates can be prepared as described herein for the delivery of abzyme to tumor cell populations.

본 발명의 효소는 상기 논의된 헤테로-이관능성 가교결합제의 이용과 같이 당업계에 공지된 기술에 의해 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882에 공유결합 될 수 있다. 다른 방법으로, 본 발명 효소의 적어도 기능적 활성 부분에 결합된, 본 발명 항체의 적어도 항원 결합 영역을 포함하는 융합 단백질은 당업계에 잘 공지된 재조합 DNA 기술을 이용하여 제조할 수 있다 (Neuberger et al., Nature, 312:604-608(1984)).Enzymes of the present invention may be prepared by anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, by techniques known in the art such as the use of the hetero-bifunctional crosslinkers discussed above. It can be covalently bound to anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882. Alternatively, a fusion protein comprising at least the antigen binding region of an antibody of the invention, bound to at least the functionally active portion of the enzyme of the invention, can be prepared using recombinant DNA techniques well known in the art (Neuberger et al. , Nature, 312: 604-608 (1984)).

5.이중특이적 항체 5. Bispecific Antibodies

이중특이적 항체는 상이한 두 가지 이상의 항원에 대해 결합 특이성을 갖는 모노클로날 항체, 바람직하게는 인간 또는 인간화 항체이다. 이 경우에, 결합 특이성 중 하나는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347,PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882에 대한 것이고, 다른 하나는 임의의 다른 항원, 바람직하게는 세포-표면 단백질, 수용체 또는 수용체 서브유닛에 대한 것이다.Bispecific antibodies are monoclonal antibodies, preferably human or humanized antibodies, having binding specificities for two or more different antigens. In this case, one of the binding specificities is for PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 and the other is any other antigen, preferably Is for a cell-surface protein, receptor or receptor subunit.

이중특이적 항체를 제조하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 통상적으로, 이중 특이적 항체의 재조합 생산은 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄/경쇄-중쇄 쌍의 동시발현에 기초하며, 여기에서, 2개의 중쇄는 상이한 특이성을 갖는다 (Millstein and Cuello, Nature, 305: 537-539 (1983)). 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위 배열로 인해, 이들 하이브리도마 (쿼드로마)는 10개의 상이한 항체 분자의 가능한 혼합물을 생산하며, 이중 하나만이 정확한 이중특이적 구조를 갖는다. 정확한 분자의 정제는 일반적으로 친화 크로마토그래피 단계로 수행된다. 유사한 절차가 국제 공개 제93/08829호(1993년 5월 13일에 공개됨) 및 문헌(Traunecker et al., EMBO J., 10: 3655-3659 (1991))에 기재되어 있다.Methods of making bispecific antibodies are known in the art. Typically, recombinant production of bispecific antibodies is based on the co-expression of two immunoglobulin heavy chain-light chain / light chain-heavy chain pairs, where the two heavy chains have different specificities (Millstein and Cuello, Nature, 305: 537-539 (1983). Due to the random arrangement of immunoglobulin heavy and light chains, these hybridomas (quadromas) produce a possible mixture of 10 different antibody molecules, only one of which has the correct bispecific structure. Purification of the correct molecule is usually carried out by an affinity chromatography step. Similar procedures are described in International Publication No. 93/08829 (published May 13, 1993) and in Traunecker et al., EMBO J., 10: 3655-3659 (1991).

원하는 결합 특이성을 갖는 항체의 가변 도메인(항체-항원 결합 부위)을 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합시킨다. 이 융합은 바람직하게는 힌지, CH2 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함하는 면역글로불린 중쇄 불변 도메인 내에서 이루어진다. 경쇄 결합을 위해 필요한 부위를 포함하는 제1 중쇄 불변 영역 (CH1)이 융합체의 적어도 하나에 존재하는 것이 바람직하다. 면역글로불린 중쇄 융합체, 및 원한다면 면역글로불린 경쇄를 코딩하는 DNA를 별개의 발현 벡터에 삽입하고, 적당한 숙주 유기체로 동시 형질감염시킨다. 이중특이적 항체를 생산하기 위한 보다 상세한 내용은 예를 들어, 문헌(Suresh et al., Methods in Enzymmology, 121:210(1986))을 참조한다.The variable domain (antibody-antigen binding site) of the antibody with the desired binding specificity is fused to an immunoglobulin constant domain sequence. This fusion is preferably done in an immunoglobulin heavy chain constant domain comprising at least a portion of the hinge, CH2 and CH3 regions. It is preferred that a first heavy chain constant region (CH1) comprising a site necessary for light chain binding is present in at least one of the fusions. The immunoglobulin heavy chain fusion, and, if desired, the DNA encoding the immunoglobulin light chain, are inserted into separate expression vectors and cotransfected with the appropriate host organism. For more details on producing bispecific antibodies, see, eg, Suresh et al., Methods in Enzymmology, 121: 210 (1986).

국제 공개 제96/27011호에 개시된 다른 방법에 따르면, 한쌍의 항체 분자사이의 인터페이스를 조작하여 재조합 세포 배양으로부터 회수되는 이종 이량체의 비율을 최대화할 수 있다. 바람직한 인터페이스는 항체 불변 도메인의 CH3 영역의 적어도 일부를 포함한다. 이 방법에서, 제1 항체 분자의 인터페이스로부터 1개 이상의 작은 아미노산 측쇄를 보다 큰 측쇄(예를 들어, 티로신 또는 트립토판)로 대체하였다. 큰 아미노산 측쇄를 작은 아미노산 측쇄(예를 들어, 알라닌 또는 트레오닌)로 대체함으로써 큰 측쇄에 대해 동일하거나 유사한 크기의 보충 "공동(cavity)"를 제2 항체 분자의 인터페이스에 생성시켰다. 이는 이종 이량체의 수율을 동종 이량체와 같은 다른 원치 않는 최종-생성물보다 높게 증가시키는 메카니즘을 제공한다.According to another method disclosed in WO 96/27011, the interface between a pair of antibody molecules can be engineered to maximize the proportion of heterodimers recovered from recombinant cell culture. Preferred interfaces comprise at least a portion of the CH3 region of an antibody constant domain. In this method, one or more small amino acid side chains from the interface of the first antibody molecule were replaced with larger side chains (eg tyrosine or tryptophan). Replacement of large amino acid side chains with small amino acid side chains (eg, alanine or threonine) created a supplemental "cavity" of the same or similar size for the large side chains at the interface of the second antibody molecule. This provides a mechanism to increase the yield of heterodimers higher than other unwanted end-products such as homodimers.

이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편(예를 들어, F(ab')2이중특이적 항체)으로 제조할 수 있다. 항체 단편으로부터 이중특이적 항체를 생성하는 기술은 문헌에 기재되어 있다. 예를 들어, 화학 결합을 사용하여 이중특이적 항체를 제조할 수 있다. 문헌 (Brennan et al., Science 229:81 (1985))에는 온전한 항체를 단백질 가수분해로 잘라서 F(ab')2단편을 생성하는 방법이 기재되어 있다. 이러한 단편은 디티올 복합 물질인 소듐 아르세니트의 존재하에 환원되어 근처 디티올을 안정화하고 분자간 디술피드 결합의 형성을 방지한다. 그 후에, 생성된 Fab' 단편을 티오니트로벤조에이트(TNB) 유도체로 전환시켰다. 그 후에, Fab'-TNB 유도체 중 하나를 머캅토에틸아민을 사용하여 환원시킴으로써 Fab'-티올로 재전환시키고 등몰량의 다른 Fab'-TNB 유도체와 혼합하여 이중특이적 항체를 형성시켰다. 생성된 이중특이적 항체는 효소의 선택적 고정화를 위한 물질로 사용할 수 있다.Bispecific antibodies can be prepared as full length antibodies or antibody fragments (eg, F (ab ') 2 bispecific antibodies). Techniques for generating bispecific antibodies from antibody fragments are described in the literature. For example, bispecific antibodies can be prepared using chemical bonds. Brennan et al., Science 229: 81 (1985) describe a method of cleaving intact antibodies by proteolysis to generate F (ab ') 2 fragments. These fragments are reduced in the presence of the dithiol composite material sodium arsenite to stabilize nearby dithiols and prevent the formation of intermolecular disulfide bonds. The Fab 'fragments generated were then converted to thionitrobenzoate (TNB) derivatives. Thereafter, one of the Fab'-TNB derivatives was reconverted to Fab'-thiol by reduction with mercaptoethylamine and mixed with equimolar amounts of other Fab'-TNB derivatives to form bispecific antibodies. The resulting bispecific antibodies can be used as substances for the selective immobilization of enzymes.

대장균으로부터 Fab' 단편을 직접 회수하여 화학적으로 연결시킴으로써 이중특이적 항체를 형성시켰다. 문헌 (Shalaby et al., J. Exp. Med. 175:217-225 (1992))에는 완전한 인간화 이중특이적 항체 F(ab')2분자가 기재되어 있다. 각각의 Fab' 단편은 대장균으로부터 별도로 분비되었으며 시험관내에서 지시된 화학적 방법으로 연결하여 이중특이적 항체를 형성시켰다. 이와 같이 형성된 이중특이적 항체는 ErbB2 수용체를 과다 발현시키는 세포 및 정상적인 인간 T 세포와 결합할 수 있을뿐 아니라, 인간 유방암 표적에 대한 인간 세포독성 림프구의 용균 활성을 개시할 수 있었다.Bispecific antibodies were formed by directly recovering Fab 'fragments from E. coli and chemically linking them. Shalaby et al., J. Exp. Med. 175: 217-225 (1992) describe fully humanized bispecific antibody F (ab ') 2 molecules. Each Fab 'fragment was secreted separately from Escherichia coli and linked by the chemical method indicated in vitro to form a bispecific antibody. The bispecific antibody thus formed was able to bind cells overexpressing the ErbB2 receptor and normal human T cells, as well as initiate the lytic activity of human cytotoxic lymphocytes against human breast cancer targets.

또한, 재조합 세포 배양으로부터 직접 이중특이적 항체 단편을 제조하고 단리하는 여러 기술이 기재되어 있다. 예를 들어, 루이신 지퍼를 사용하여 이중 특이적 항체를 제조하였다(Kostelny et al., J. Immunol. 148(5):1547-1553 (1992)). 유전자 융합에 의해, Fos 및 Jun 단백질로부터의 루이신 지퍼 펩티드를 2종의 상이한 항체의 Fab' 부분에 연결하였다. 항체 동종 이량체의 힌지 영역을 환원시켜 단량체를 형성한 다음, 재산화시켜 항체 이종 이량체를 형성시켰다. 또한, 이 방법은 항체 동종 이량체를 생산하기 위한 방법으로 이용할 수 있다. 문헌 (Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993))에 기재된"디아바디(diabody)" 기술은 이중특이적 항체 단편을 만드는 다른 메카니즘을 제공한다. 이 단편은 링커에 의해 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하는데, 이 링커는 너무 짧아서 상기 두 도메인을 동일 쇄로 짝지을 수 없다. 따라서, 한 단편의 VH및 VL도메인은 다른 단편의 상보적인 VL및 VH도메인과 쌍을 이루게 되며, 그 결과 2개의 항원 결합 부위를 형성한다. 단일쇄 Fv(sFv) 이량체를 사용하여 이중특이적 항체 단편을 만드는 또다른 전략이 보고되었다(문헌 (Gruber et al., J. Immunol. 152:5368 (1994)) 참조).In addition, several techniques have been described for preparing and isolating bispecific antibody fragments directly from recombinant cell culture. For example, bispecific antibodies were prepared using leucine zippers (Kostelny et al., J. Immunol. 148 (5): 1547-1553 (1992)). By gene fusion, leucine zipper peptides from Fos and Jun proteins were linked to the Fab 'portion of two different antibodies. The hinge region of the antibody homodimer was reduced to form monomers, and then reoxidized to form antibody heterodimers. This method can also be used as a method for producing antibody homodimers. The "diabody" technique described by Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993) provides another mechanism for making bispecific antibody fragments. This fragment comprises a heavy chain variable domain (V H ) linked by a linker to the light chain variable domain (V L ), which is too short to pair the two domains with the same chain. Thus, the V H and V L domains of one fragment are paired with the complementary V L and V H domains of the other fragment, resulting in two antigen binding sites. Another strategy for making bispecific antibody fragments using single chain Fv (sFv) dimers has been reported (see Gruber et al., J. Immunol. 152: 5368 (1994)).

2가 이상의 결합가를 갖는 항체도 고려 대상이다. 예를 들어, 삼중특이적 항체를 만들 수 있다(Tutt et al., J. Immunol. 147:60 (1991)).Antibodies having a bivalent or higher valency are also considered. For example, trispecific antibodies can be made (Tutt et al., J. Immunol. 147: 60 (1991)).

전형적인 이중특이적 항체는 본원에 기재된 폴리펩티드의 두 가지 상이한 에피토프와 결합할 수 있다. 또는, 특정 폴리펩티드를 발현시키는 세포에 대한 세포내 방어 메카니즘에 초점을 맞추기 위해, 항-폴리펩티드 팔 영역(arm)을 백혈구 상 개시 분자, 예를 들어 T-세포 수용체 분자(예를 들어, CD2, CD3, CD28 또는 B7), 또는 IgG의 Fc 수용체(FcγR), 예를 들어 FcγRI(CD64), FcγRII(CD32) 및 FcγRIII(CD16)와 결합하는 팔 영역과 연결할 수 있다. 또한, 이중특이적 항체를 사용하여 특정 폴리펩티드를 발현시키는 세포에 세포독성 물질을 국소화할 수 있다. 이러한 항체는 폴리펩티드-결합 팔 영역과 세포독성 물질 또는 방사성핵종 킬레이트제, 예를 들어 EOTUBE, DPTA, DOTA 또는 TETA와 결합하는 팔 영역을 가지고 있다. 목적하는 또다른 이중특이적 항체는 폴리펩티드와 결합하며 추가로 조직 인자(TF)와 결합한다.Typical bispecific antibodies may bind to two different epitopes of the polypeptides described herein. Alternatively, in order to focus on intracellular defense mechanisms against cells expressing a particular polypeptide, an anti-polypeptide arm region may be defined as a starting molecule on leukocytes, such as a T-cell receptor molecule (eg, CD2, CD3). , CD28 or B7), or an arm region that binds to an Fc receptor (FcγR) of IgG, for example FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) and FcγRIII (CD16). In addition, bispecific antibodies can be used to localize cytotoxic agents to cells that express particular polypeptides. Such antibodies have a polypeptide-binding arm region and an arm region that binds to a cytotoxic or radionuclide chelating agent such as EOTUBE, DPTA, DOTA or TETA. Another bispecific antibody of interest binds to the polypeptide and further binds to tissue factor (TF).

6.이종접합 항체 6. Heteroconjugate Antibodies

이종접합 항체는 2개의 공유결합된 항체로 구성된다. 이러한 항체는 예를 들어 면역계 세포를 원하지 않는 세포에 표적화시키기고 (미국 특허 제4,676,980호), HIV 감염을 치료(국제 공개 제91/00360호, 동 제92/200373호, 및 EP 제03089호)하기 위해 제안되었다. 이종접합 항체는 가교결합제를 사용하는 방법을 포함하여 합성 단백질 화학에 공지된 방법을 이용하여 제조할 수 있는 것으로 생각된다. 예를 들어, 면역독소는 디술피드 교환 반응에 의해 또는 티오에테르 결합을 형성함으로써 제조할 수 있다. 상기 목적에 적합한 시약에는 이미노티올레이트 및 메틸-4-머캅토부티르이미데이트 및 미국 특허 제4,676,980호에 개시된 시약이 포함된다.Heteroconjugate antibodies consist of two covalently bound antibodies. Such antibodies target, for example, immune system cells to unwanted cells (US Pat. No. 4,676,980) and treat HIV infections (WO 91/00360, US 92/200373, and EP 03089). It was proposed to. It is contemplated that heterozygous antibodies can be prepared using methods known in synthetic protein chemistry, including methods using crosslinkers. For example, immunotoxins can be prepared by disulfide exchange reactions or by forming thioether bonds. Suitable reagents for this purpose include iminothiolates and methyl-4-mercaptobutyrimidate and the reagents disclosed in US Pat. No. 4,676,980.

7.작용기 기능 조작 7. Function of functional group

작용기 기능에 대해 본 발명의 항체를 변형하여, 예를 들어 암치료에 있어 항체의 효과를 증대하는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 시스테인 잔기를 Fc 영역에 도입하여 이 영역내 쇄간 디술피드 결합을 형성시킬 수 있다. 이와 같이 생성된 동종 이량체 항체는 내부화 능력이 향상되고(되거나) 보체-매개 세포 사멸 및 항체-의존성 세포내 세포독성(ADCC)이 증대된다 (문헌 (Caron et al., J. Exp Med., 176:1191-1195 (1992) 및 Shopes, J. Immunol., 148:2918-2922 (1992)) 참조). 또한, 문헌 (Wolff et al. Cancer Research, 53: 2560-2565 (1993))에 기재된 헤테로이관능성 가교결합제를 사용하여 증대된 항암 활성을 지닌 동종 이량체 항체를 제조할 수 있다. 또는, 이중의 Fc 영역을 갖는 항체를 조작하여 보체 용균성 및 ADCC 능력을 증대시킬 수 있다(문헌 (Stevenson et al.,Anti-Cancer Drug Design, 3:219-230 (1989)) 참조).It may be desirable to modify the antibodies of the present invention to functional group function to, for example, enhance the effect of the antibody in the treatment of cancer. For example, cysteine residues can be introduced into the Fc region to form interchain disulfide bonds in this region. Homodimeric antibodies thus produced have enhanced internalization capacity and / or enhanced complement-mediated cell death and antibody-dependent intracellular cytotoxicity (ADCC) (Caron et al., J. Exp Med., 176: 1191-1195 (1992) and Shopes, J. Immunol., 148: 2918-2922 (1992)). In addition, the heterodifunctional crosslinkers described by Wolfff et al. Cancer Research, 53: 2560-2565 (1993) can be used to prepare homodimeric antibodies with enhanced anticancer activity. Alternatively, antibodies with double Fc regions can be engineered to enhance complement lytic and ADCC ability (see Stevenson et al., Anti-Cancer Drug Design , 3: 219-230 (1989)).

8.면역결합체 8. Immunoconjugates

또한, 본 발명은 세포독성 물질, 예를 들어 화학요법제, 독소(예를 들어, 효소적으로 활성인 박테리아, 진균, 식물 또는 동물성 독소, 또는 그의 단편) 또는 방사활성 동위원소(즉, 방사성결합체)와 결합된 항체를 포함하는 면역결합체에 관한 것이다.The invention also relates to cytotoxic substances such as chemotherapeutic agents, toxins (eg, enzymatically active bacteria, fungi, plant or animal toxins, or fragments thereof) or radioactive isotopes (ie, radioconjugates). It relates to an immunoconjugate comprising an antibody bound to).

상기 면역결합체의 생성에 유용한 화학요법제는 상기에 기재되어 있다. 사용될 수 있는 효소적으로 활성인 독소 및 그의 단편에는 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 콜레라 독소, 보툴리누스 독소, 외독소 A 쇄(슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 유래), 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 피톨라카 아메리카나(Phytolaca americana) 단백질(PAPI, PAPII 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아(Momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(sapaonaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 사포린, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 및 트리코테세네스가 포함된다. 여러 방사성핵종을 방사결합체 항체의 제조에 이용할 수 있다. 예에는212Bi,131I,131In,90Y 및186Re가 포함된다.Chemotherapeutic agents useful for the production of such immunoconjugates are described above. Enzymatically active toxins and fragments thereof that can be used include diphtheria A chain, unbound active fragment of diphtheria toxin, cholera toxin, botulinum toxin, exotoxin A chain (from Pseudomonas aeruginosa ), lysine A chain, Abrin A chain, Modesin A chain, Alpha- sarsine , Aleurites fordii protein, Dianthine protein, Phytolaca americana protein (PAPI, PAPII and PAP-S), Momor Dicaran Charantia Inhibitor, Cursin, Crotin, Sapaonaria officinalis Inhibitor, Geronine, Saporin, Mitogeline, Restrictocin, Phenomycin, Enomycin, and Trico Tessenes is included. Several radionuclides can be used to prepare radioconjugate antibodies. Examples include 212 Bi, 131 I, 131 In, 90 Y and 186 Re.

다양한 이관능성 단백질 결합 물질, 예를 들어 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티올)프로피오네이트(SPDP), 이미노티올란(IT), 이미도에스테르의 이관능성 유도체(예를 들어, 디메틸 아디프이미데이트 HCL), 활성 에스테르(예를 들어, 디숙신이미딜 수베레이트), 알데히드(예를 들어, 글루타르알데히드), 비스-아지도 화합물(예를 들어, 비스(p-아지도벤조일)헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체(예를 들어, 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트(예를 들어, 톨리엔 2,6-디이소시아네이트), 및 비스-활성 플루오르 화합물(예를 들어, 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)을 사용하여 항체와 세포독성 물질의 결합체를 만들 수 있다. 예를 들어, 문헌 (Vitetta et al., Science, 238:1098 (1987))에 기재된 바와 같이 리신 면역독소를 제조할 수 있다. 탄소-14로 표지된 1-이소티오시아네이토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산(MX-DTPA)은 방사성뉴클레오디드를 항체에 결합시키는 전형적인 킬레이트제이다(국제 공개 제94/11026호 참조).Difunctional derivatives of various difunctional protein binding agents, such as N-succinimidyl-3- (2-pyridyldithiol) propionate (SPDP), iminothiolane (IT), imidoesters (e.g. , Dimethyl adipimidate HCL), active esters (e.g. disuccinimidyl suverate), aldehydes (e.g. glutaraldehyde), bis-azido compounds (e.g. bis (p-a) Zidobenzoyl) hexanediamine), bis-diazonium derivatives (eg bis- (p-diazoniumbenzoyl) -ethylenediamine), diisocyanates (eg tolyene 2,6-diisocyanate), and bis Active fluorine compounds (eg 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzene) can be used to make combinations of antibodies and cytotoxic substances. For example, lysine immunotoxins can be prepared as described in Vitetta et al., Science, 238: 1098 (1987). 1-isothiocyanatobenzyl-3-methyldiethylene triaminepentaacetic acid (MX-DTPA) labeled with carbon-14 is a typical chelating agent that binds radionucleotides to antibodies (International Publication No. 94/11026). Reference).

또다른 실시양태로, 항체를 종양 예비표적화에 이용되는 "수용체"(예를 들어, 스트렙타비딘)에 결합시킬 수 있는데, 여기서 항체-수용체 결합체를 환자에게 투여한 다음, 킬레이트제를 사용하여 순환계로부터 결합하지 않은 결합체를 제거하고 세포독성 물질(예를 들어, 방사성뉴클레오티드)에 접합된 "리간드"(예를 들어, 아비딘)를 투여한다.In another embodiment, the antibody can be bound to a "receptor" (eg, streptavidin), which is used for tumor pretargeting, wherein the antibody-receptor conjugate is administered to the patient and then circulated using a chelating agent. Unbound conjugates are removed from and the "ligand" (eg avidin) conjugated to a cytotoxic substance (eg radionucleotide) is administered.

9.면역리포좀 9. Immunoliposomes

본원에서 개시된 항체를 면역리포좀으로 제제화할 수도 있다. 이 항체를 포함하는 리포좀은 당업계에 공지된 방법, 예를 들어 문헌 (Epstein et al., Proc.Natl. Acad. Sci. USA, 82:3688 (1985); Hwang et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 77:4030 (1980); 및 미국 특허 제4,485,045호 및 동 제4,544,545호)에 기재된 방법으로 제조할 수 있다. 순환 시간이 증대된 리포좀은 미국 특허 제5,013,556호에 개시되어 있다.The antibodies disclosed herein may also be formulated with immunoliposomes. Liposomes comprising this antibody can be prepared using methods known in the art, for example, Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 3688 (1985); Hwang et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 77: 4030 (1980); and US Pat. Nos. 4,485,045 and 4,544,545). Liposomes with increased circulation time are disclosed in US Pat. No. 5,013,556.

특히 유용한 리포좀은 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 PEG-유도체화 포스파티딜에탄올아민(PEG-PE)을 함유하는 지질 조성물을 사용하여 역상 증발법에 의해 생성할 수 있다. 정해진 공극 크기의 필터를 통해 리포좀을 밀어내어 소정의 직경을 갖는 리포좀을 수득하였다. 문헌 (Martin et al., J. Biol. Chem., 257:286-288 (1982))에 기재된 바와 같이 디술피드-상호교환 반응을 통해 본 발명 항체의 Fab' 단편을 리포좀에 접합시킬 수 있다. 화학요법제(예를 들어, 독소루비신 (Doxorubicin))은 임의로 리포좀내에 포함된다(문헌 (Gabizon et al., J. National Cancer Inst., 81(19):1484 (1989)) 참조).Particularly useful liposomes can be produced by reverse phase evaporation using lipid compositions containing phosphatidylcholine, cholesterol and PEG-derivatized phosphatidylethanolamine (PEG-PE). Liposomes were pushed through filters of defined pore size to yield liposomes with the desired diameter. Fab 'fragments of the antibodies of the invention can be conjugated to liposomes via disulfide-interchange reactions as described in Martin et al., J. Biol. Chem., 257: 286-288 (1982). Chemotherapeutic agents (eg, Doxorubicin) are optionally included in liposomes (see Gabriel et al., J. National Cancer Inst., 81 (19): 1484 (1989)).

N.제약 조성물 N. Pharmaceutical Composition

암을 포함하는 각종 질환을 치료하기 위해, 본원에서 확인되어 증폭된 유전자에 특이적으로 결합하는 항체 및 상기 기재된 스크리닝 분석에 의해 확인된 다른 분자를 제약 조성물 형태로 투여할 수 있다.To treat a variety of diseases, including cancer, antibodies identified specifically herein for binding to amplified genes and other molecules identified by the screening assays described above can be administered in the form of pharmaceutical compositions.

증폭된 유전자에 의해 코딩되는 단백질이 세포내에 있고 항체 전부가 억제제로 사용되는 경우, 내부화 항체가 바람직하다. 그러나, 또한 리포펙션 또는 리포좀을 사용하여 항체 또는 항체 단편을 세포내에 전달할 수 있다. 항체 단편이 사용되는 경우, 표적 단백질의 결합 도메인에 특이적으로 결합하는 최소 억제성 단편이 바람직하다. 예를 들어, 항체의 가변-영역 서열을 기초로 하여, 표적 단백질 서열과 결합하는 능력을 지닌 펩티드 분자를 설계할 수 있다. 이러한 펩티드는 화학적으로 합성하고(하거나) 재조합 DNA 기술에 의해 제조할 수 있다(예를 들어, 문헌 (Marasco et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:7889-7893 (1993)) 참조).Internalized antibodies are preferred if the protein encoded by the amplified gene is intracellular and all of the antibody is used as an inhibitor. However, lipofection or liposomes can also be used to deliver the antibody or antibody fragment intracellularly. If antibody fragments are used, the smallest inhibitory fragment that specifically binds to the binding domain of the target protein is preferred. For example, based on the variable-region sequences of an antibody, peptide molecules can be designed that have the ability to bind target protein sequences. Such peptides can be chemically synthesized and / or prepared by recombinant DNA techniques (eg, Marasco et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 7889-7893 (1993)). Reference).

항체의 치료 제제는 저장을 위해, 소정의 순도를 갖는 항체를 임의의 약제학상 허용되는 담체, 부형체 또는 안정화제(Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. ed. (1980))와 혼합하여 동결건조 제제 또는 수용액의 형태로 제조하였다. 제약상 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제는 투여된 투여량 및 농도가 환자에 무독성이어야하며, 인산, 시트르산 및 기타 유기산의 완충액과 같은 완충액; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 산화방지제; 방부제(예를 들어, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레소시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸), 저분자량(약 10 잔기 미만) 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 소수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신과 같은 아미노산; 일당류, 이당류, 및 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함하는 기타 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 솔비톨과 같은 당; 나트륨과 같은 염-형성 카운터 이온; 금속 착물(예를 들어, Zn-단백질 착물); 및(또는) TWEEN(상표명), PLURONICS(상표명) 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온성 계면활성제가 포함된다.Therapeutic formulations of the antibody may be mixed with an antibody of predetermined purity with any pharmaceutically acceptable carrier, excipient or stabilizer (Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. ed. (1980)) for storage. Prepared in the form of lyophilized formulations or aqueous solutions. Pharmaceutically acceptable carriers, excipients or stabilizers should be nontoxic to patients at the dosages and concentrations administered, and include buffers such as buffers of phosphoric acid, citric acid and other organic acids; Antioxidants including ascorbic acid and methionine; Preservatives (e.g. octadecyldimethylbenzyl ammonium chloride; hexamethonium chloride; benzalkonium chloride, benzethium chloride; phenol, butyl or benzyl alcohol; alkyl parabens such as methyl or propyl paraben; catechol; resorcinol Cyclohexanol, 3-pentanol, and m-cresol), low molecular weight (less than about 10 residues) polypeptides; Proteins such as serum albumin, gelatin or immunoglobulins; Hydrophobic polymers such as polyvinylpyrrolidone; Amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, histidine, arginine or lysine; Monosaccharides, disaccharides, and other carbohydrates including glucose, mannose, or dextrins; Chelating agents such as EDTA; Sugars such as sucrose, mannitol, trehalose or sorbitol; Salt-forming counter ions such as sodium; Metal complexes (eg, Zn-protein complexes); And / or nonionic surfactants such as TWEEN ™, PLURONICS ™ or polyethylene glycol (PEG).

본 발명의 스크리닝 분석에 의해 확인된 비항체 화합물도 당업계에 공지된 표준 기술을 이용하여 유사한 방법으로 제제화될 수 있다.Non-antibody compounds identified by the screening assays of the present invention can also be formulated in a similar manner using standard techniques known in the art.

또한, 본원의 제제는 치료할 특정 증상에 있어 필요에 따라 1 종 이상의 활성 화합물, 바람직하게는 서로 악영향을 주지 않는 상보적인 활성을 지닌 화합물을 포함할 수 있다. 별법으로, 또는 추가로, 이 조성물은 세포독성 물질, 싸이토카인 또는 생장 억제제를 포함할 수 있다. 이러한 분자는 적합하게는 의도된 목적에 효과적인 양으로 배합된다.In addition, the formulations herein may comprise one or more active compounds, preferably compounds with complementary activities that do not adversely affect each other, as needed for the particular condition to be treated. Alternatively, or in addition, the composition may comprise a cytotoxic substance, cytokine or growth inhibitor. Such molecules are suitably formulated in amounts that are effective for the purpose intended.

활성 성분은 예를 들어 각각 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들어 리포솜, 알부민 마이크로스피어, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐) 또는 마크로에멀젼 중에, 예를 들어 코아세르베이션(coacervation) 기술 또는 계면 중합, 예를 들어 히드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐에 의해 제조된 마이크로캡슐에 봉입될 수 있다. 상기 기술은 문헌 (Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. ed. (1980))에 개시되어 있다.The active ingredient is for example in a colloidal drug delivery system (e.g. liposomes, albumin microspheres, microemulsions, nanoparticles and nanocapsules) or macroemulsions, for example coacervation techniques or interfacial polymerization, For example, it can be enclosed in microcapsules prepared by hydroxymethylcellulose or gelatin-microcapsules and poly- (methylmethacrylate) microcapsules. This technique is disclosed in Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. ed. (1980).

체내 투여에 사용되는 제제는 멸균처리되어야 한다. 이것은 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 용이하게 수행된다.The formulations used for in vivo administration should be sterile. This is readily accomplished by filtration through sterile filtration membranes.

서방형 제제도 제조될 수 있다. 서방형 제제의 적합한 예에는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스가 포함되며, 이 매트릭스는 필름 또는 마이크로캡슐과 같은 성형품 형태이다. 서방형 매트릭스의 예에는 폴리에스테르, 히드로겔(예를 들어, 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐알콜)), 폴리락티드 (미국 특허 제3,773,919호), L-글루탐산과 에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 예를 들어 LUPRON DEPOT(상표명)(락트산-글리콜산 공중합체 및 루프롤라이드 아세테이트로 이루어진 주입가능한 마이크로스피어), 및 폴리-D-(-)-3-히드록시부티르산이 포함된다. 에틸렌-비닐 아세테이트 및 락트산-글리콜산과 같은 중합체는 100일 이상 동안 분자를 방출시키지만, 어떤 히드로겔은 보다 짧은 기간 동안 단백질을 방출시킨다. 캡슐화된 항체가 오랫 동안 체내에 남아있는 경우, 그는 37 ℃에서 습기에 노출된 결과, 변성 또는 응집되어 생물 활성을 감소시키고 면역원성을 변화시킬 수 있다. 안정화를 위해 관련된 메카니즘에 따라 합리적인 전략을 설계할 수 있다. 예를 들어, 응집 메카니즘이 티오-디술피드 상호교환을 통한 분자내 S-S 결합 형성인 것으로 밝혀진다면, 술프히드릴 잔기의 변형, 산성 용액으로부터의 동결건조, 수분 함량 조절, 적절한 첨가제 사용 및 특이적인 중합체 매트릭스 조성물의 개발에 의해 안정화시킬 수 있다.Sustained release formulations may also be prepared. Suitable examples of sustained-release preparations include semipermeable matrices of solid hydrophobic polymers containing the antibody, which matrices are in the form of shaped articles, such as films or microcapsules. Examples of sustained release matrices include polyesters, hydrogels (eg, poly (2-hydroxyethyl-methacrylate) or poly (vinyl alcohol)), polylactide (US Pat. No. 3,773,919), L-glutamic acid Injectable microparticles consisting of a copolymer of ethyl-L-glutamate, a non-degradable ethylene-vinyl acetate, a degradable lactic acid-glycolic acid copolymer, for example LUPRON DEPOT ™ (lactic acid-glycolic acid copolymer and leuprolide acetate) Spear), and poly-D-(-)-3-hydroxybutyric acid. Polymers such as ethylene-vinyl acetate and lactic acid-glycolic acid release molecules for more than 100 days, while some hydrogels release proteins for shorter periods of time. If the encapsulated antibody remains in the body for a long time, it may be denatured or aggregated as a result of exposure to moisture at 37 ° C. to reduce biological activity and change immunogenicity. For stabilization, rational strategies can be designed according to the mechanism involved. For example, if the aggregation mechanism is found to be intramolecular SS bond formation through thio-disulfide interchange, modification of sulfhydryl residues, lyophilization from acidic solutions, control of moisture content, use of appropriate additives and specific polymers It can be stabilized by the development of the matrix composition.

O.치료 방법 O. Treatment Methods

본 발명의 항체 및 기타 항암 화합물을, 본원에서 확인되어 증폭된 유전자의 과다 발현 및(또는) 활성화에 의해 특성화된 증상을 포함하는 다양한 증상의 치료에 사용할 수 있음을 고려할 수 있다. 이러한 항체 및 기타 화합물(작은 유기 및 무기 분자, 펩티드, 안티센스 분자 등을 포함하나 이에 제한되지 않음)로 치료되는 대표적인 증상 또는 질환에는 양성 또는 악성 종양(예를 들어, 신세포암, 간암, 신장암, 방광암, 유방암, 위암, 난소암, 결직장암, 전립선암, 췌장암, 폐암, 자궁암, 갑상선암, 간암; 육종; 교모세포종; 및 다양한 머리 및 목 종양); 백혈병 및 림프 전이; 신경 질환, 신경교 질환, 성상세포 질환, 시상하부 질환, 및 기타 분비선 질환, 대식세포성 질환, 상피성 질환, 간질성(stromal) 질환 및 포배강성 질환; 및 면역성 질환, 혈관성 질환 및 면역성 질환이 포함된다.It is contemplated that the antibodies and other anticancer compounds of the present invention may be used for the treatment of various conditions, including those identified herein by overexpression and / or activation of the amplified genes. Representative symptoms or diseases treated with such antibodies and other compounds (including but not limited to small organic and inorganic molecules, peptides, antisense molecules, etc.) include benign or malignant tumors (eg renal cell cancer, liver cancer, kidney cancer). Bladder cancer, breast cancer, stomach cancer, ovarian cancer, colorectal cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, lung cancer, uterine cancer, thyroid cancer, liver cancer; sarcoma; glioblastoma; and various head and neck tumors); Leukemia and lymphatic metastasis; Neurological diseases, glial diseases, astrocytic diseases, hypothalamic diseases, and other secretory gland diseases, macrophage disease, epithelial disease, stromal disease and blastocyst disease; And immune diseases, vascular diseases and immune diseases.

본 발명의 항암제(예를 들어, 항체)는 볼루스로서의 정맥내 투여, 또는 근육내, 복강내, 뇌척수내, 피하내, 관절내, 활액내, 수막강내, 경구, 국소 또는 흡입 경로에 의한 장기간의 연속 관주와 같은 공지된 방법 의해 포유동물, 바람직하게는 인간에게 투여될 수 있다. 항체의 정맥내 투여가 바람직하다.Anticancer agents (eg, antibodies) of the invention may be administered intravenously as bolus or by intramuscular, intraperitoneal, cerebrospinal, subcutaneous, intraarticular, synovial, intramedullary, oral, topical or inhalation routes. It can be administered to a mammal, preferably a human, by known methods such as long term continuous irrigation. Intravenous administration of the antibody is preferred.

다른 치료법이 본 발명의 항체와 같은 항암제의 투여와 병행될 수 있다. 예를 들어, 이러한 항암제로 치료되는 환자는 또한 방사선 치료를 받을 수 있다. 별법으로, 또는 추가로, 환자에게 화학요법제를 투여할 수 있다. 이러한 화학요법제의 제조 및 투여 일정은 제조자의 지시를 따르거나 당업계 전문 숙련인에 의해 경험적으로 결정될 수 있다. 또한, 이러한 화학요법제의 제조 및 투여 일정은 문헌 (Chemotherapy Service Ed., M.C.Perry, Williams&Wilkins, Baltimore, MD(1992))에 기재되어 있다. 화학요법제는 항체와 같은 항암제의 투여 전 또는 후에 투여되거나, 동시에 투여될 수 있다. 타목시펜과 같은 항-에스트로겐 화합물 또는 오나프리스톤과 같은 항-프로게스테론 화합물(EP 제616812호 참조)에 대해 공지된 투여량의 상기 분자와 항체를 배합하여 투여할 수 있다.Other therapies may be combined with the administration of an anticancer agent such as the antibody of the invention. For example, patients treated with such anticancer agents may also receive radiation therapy. Alternatively, or in addition, the patient may be administered a chemotherapeutic agent. Preparation and dosing schedules for such chemotherapeutic agents can be determined empirically by following the manufacturer's instructions or by one of ordinary skill in the art. In addition, the schedule for the preparation and administration of such chemotherapeutic agents is described in Chemotherapy Service Ed., M. C. Perry, Williams & Wilkins, Baltimore, MD (1992). Chemotherapeutic agents may be administered before or after administration of an anticancer agent, such as an antibody, or simultaneously. Antibodies can be combined with antibodies and known doses of anti-estrogen compounds such as tamoxifen or anti-progesterone compounds such as onapristone (see EP 616812).

또한, ErbB2, EGFR, ErbB3, ErbB4 또는 혈관 내피 인자(VEGF)에 결합하는 항체와 같은 기타 종양 관련 항체를 투여하는 것도 바람직하다. 별법으로, 또는 추가로, 본원에 개시된 동일하거나 2종 이상의 상이한 항원에 결합하는 2종 이상의 항체를 환자에 동시 투여할 수 있다. 때로는, 환자에 1 종 이상의 싸이토카인을 투여하는 것도 유익할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 본원의 항체를 생장 억제제와 동시에 투여할 수 있다. 예를 들어, 우선 생장 억제제를 투여한 후에 본 발명의 항체를 투여할 수 있다. 그러나, 동시 투여나 본 발명의 항체를 먼저 투여하는 것도 고려할 수 있다. 생장 억제제의 적합한 투여량은 현재 사용되는 투여량이며, 생장 억제제와 본원 항체의 복합 작용(상승)으로 인하여 투여량을 저하시킬 수 있다.It is also desirable to administer other tumor-associated antibodies such as ErbB2, EGFR, ErbB3, ErbB4 or antibodies that bind to vascular endothelial factor (VEGF). Alternatively, or in addition, two or more antibodies that bind to the same or two or more different antigens disclosed herein may be administered to a patient simultaneously. Sometimes, it may also be beneficial to administer one or more cytokines to the patient. In a preferred embodiment, the antibodies herein can be administered simultaneously with the growth inhibitor. For example, an antibody of the invention may be administered first followed by administration of a growth inhibitory agent. However, simultaneous administration or administration of the antibody of the present invention may also be considered. Suitable dosages of growth inhibitory agents are those currently used and may be lowered due to the combined action (rise) of the growth inhibitory agent and the antibodies of the present application.

질환의 예방 또는 치료를 위해, 본원의 항체와 같은 항암제의 적합한 투여량은 상기 정의한 바와 같이 치료되는 질환의 유형, 심각성 및 질환의 진행 과정, 투여되는 항암제가 예방 목적인지 치료 목적인지, 이전의 치료법, 환자의 임상 병력 및 약제에 대한 반응, 및 재량 및 주치의에 따라 달라질 것이다. 이 약제는 일시에 또는 일련의 치료를 통해 환자에 적합하게 투여된다.For the prevention or treatment of a disease, a suitable dosage of an anticancer agent, such as an antibody herein, may be determined by the type, severity and course of the disease being treated as defined above, whether the anticancer agent being administered is for prophylactic or therapeutic purposes, as previously described. , The patient's clinical history and response to the medication, and discretion and the attending physician. This agent is suitably administered to the patient at one time or through a series of treatments.

예를 들어, 질환의 유형 및 심각성에 따라, 약 1㎍/kg 내지 15mg/kg(예를 들어, 0.1 내지 20mg/kg)의 항체가 1회 이상의 분리된 투여 또는 연속 관주에 의한 환자에의 투여에 대한 초기 후보 투여량이다. 통상적인 일일 투여량은 상기 언급한 인자에 의존하여 약 1㎍/kg 내지 100mg/kg 이상이다. 증상에 따라 며칠 이상에 걸친 반복 투여의 경우, 치료는 원하는 질환 징후가 억제될 때까지 지속된다. 그러나, 다른 투여량이 효과적일 수도 있다. 이 치료법의 진행은 종래의 기술 및 분석에 의해 쉽게 모니터링될 수 있다.For example, depending on the type and severity of the disease, about 1 μg / kg to 15 mg / kg (eg 0.1 to 20 mg / kg) of the antibody is administered to a patient by one or more separate or continuous irrigation Initial candidate dose for. Typical daily dosages are about 1 μg / kg to 100 mg / kg or more, depending on the factors mentioned above. For repeated administrations over several days, depending on the condition, treatment continues until the desired signs of disease are suppressed. However, other dosages may be effective. The progress of this therapy can be easily monitored by conventional techniques and assays.

P.제품 P. Products

본 발명의 또다른 실시양태에서, 질환의 진단 또는 치료에 유용한 물질을 함유하는 제품이 제공된다. 이 제품은 용기 및 라벨을 포함한다. 적합한 용기에는, 예를 들어 병, 바이알, 주사기 및 시험관이 포함된다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 이 용기에는 증상의 진단 또는 치료에 효과적인 조성물이 들어 있으며, 멸균 채취구(access port) (예를 들어, 이 용기는 정맥 주사용액 백(bag)이거나, 피하 주사기 바늘이 뚫을 수 있는 마개가 달린 바이알일 수 있음)가 있을 수 있다. 상기 조성물의 활성 성분은 통상 본원에서 확인된 유전자 생성물의 활성을 방해할 수 있는 항암제, 예를 들어 항체이다. 용기 위에 있거나 용기에 부착되어 있는 라벨은 조성물이 선택된 증상의 진단 또는 치료에 사용된다는 것을 알려준다. 이 제품은 또한 인산염-완충 식염수, 링거액 및 덱스트로스 용액과 같은 약제학적으로 허용가능한 완충액을 포함하는 제2의 용기를 더 포함할 수 있다. 이 제품은 다른 완충액, 희석액, 필터, 바늘, 주사기, 및 사용 지침이 들어있는 패키지 삽입물을 포함하는, 상업적 관점 및 사용자 관점에서 바람직한 기타 재료를 추가로 포함할 수 있다.In another embodiment of the present invention, an article containing a substance useful for the diagnosis or treatment of a disease is provided. This product includes a container and a label. Suitable containers include, for example, bottles, vials, syringes and test tubes. The container may be formed from various materials such as glass or plastic. This container contains a composition that is effective for diagnosing or treating symptoms, and includes a sterile access port (eg, a container for intravenous solution, or a vial with a stopper for a hypodermic syringe needle to pierce). May be). The active ingredient of the composition is usually an anticancer agent, such as an antibody, which may interfere with the activity of the gene product identified herein. The label on or attached to the container indicates that the composition is used for the diagnosis or treatment of the selected condition. The product may also further comprise a second container containing a pharmaceutically acceptable buffer such as phosphate-buffered saline, Ringer's solution and dextrose solution. The product may further comprise other materials desirable from a commercial and user standpoint, including other buffers, diluents, filters, needles, syringes, and package inserts containing instructions for use.

Q.종양의 진단 및 예후 Q. Diagnosis and Prognosis of Tumors

특정 종양에서 과다 발현되는 생장 수용체와 같은 세포 표면 단백질이 약물 후보 또는 종양(예를 들어, 암) 치료에 대한 훌륭한 표적인 반면, 상기 단백질은 종양 세포에서 증폭된 유전자에 의해 코딩되는 분비 단백질과 함께 종양의 진단 및예후에 부가적인 용도를 나타낸다. 예를 들어, 종양 세포에서 증폭된 유전자의 단백질 생성물에 대해 유도된 항체는 종양 진단제 또는 예후제로서 사용할 수 있다.While cell surface proteins such as growth receptors that are overexpressed in certain tumors are excellent targets for treating drug candidates or tumors (eg cancer), the proteins, along with secreted proteins encoded by genes amplified in tumor cells Additional use in the diagnosis and prognosis of tumors. For example, antibodies directed against protein products of genes amplified in tumor cells can be used as tumor diagnostics or prognostic agents.

예를 들어, 항체 단편을 포함하는 항체는 증폭된 유전자에 의해 코딩되는 단백질("마커 유전자 생성물")의 발현을 정성 또는 정량 검출하는데 사용할 수 있다. 항체는 형광 표지와 같이 검출 가능한 표지물이 부착되어 있는 것이 바람직하며, 항체의 결합은 광학현미경법, 유세포 분석법, 형광법, 또는 당업계에 공지된 다른 기술에 의해 모니터링될 수 있다. 이 기술은, 증폭된 유전자가 생장 인자와 같은 세포 표면 단백질을 코딩하는 경우에 특히 적합하다. 이러한 결합 분석법은 상기 5단락에 기재된 바와 같이 수행된다.For example, antibodies comprising antibody fragments can be used to qualitatively or quantitatively detect the expression of a protein encoded by the amplified gene (“marker gene product”). The antibody preferably has a detectable label attached, such as a fluorescent label, and the binding of the antibody can be monitored by light microscopy, flow cytometry, fluorescence, or other techniques known in the art. This technique is particularly suitable when the amplified gene encodes cell surface proteins such as growth factors. This binding assay is performed as described in paragraph 5 above.

원래 위치에서(in situ) 마커 유전자 생성물에 대한 항체 결합의 검출은, 예를 들어 면역형광현미경법 또는 면역전자현미경법에 의해 수행될 수 있다. 이러한 목적을 위해, 환자로부터 조직학적 시료를 분리하여, 바람직하게는 상기 생물학적 샘플에 항체를 올려놓음으로써 표지된 항체를 반응시킨다. 또한, 이 절차는 조사된 조직에서 마커 유전자 생성물이 어떻게 분포하는지 결정하게 해준다. 원래 위치에서의 검출에 다양한 조직학적 방법을 쉽게 사용할 수 있음이 당업자들에게 명백할 것이다.Detection of antibody binding to the marker gene product in situ can be performed, for example, by immunofluorescence microscopy or immunoelectron microscopy. For this purpose, the labeled antibody is reacted by separating the histological sample from the patient, preferably by placing the antibody on the biological sample. This procedure also allows for the determination of how marker gene products are distributed in the tissues examined. It will be apparent to those skilled in the art that various histological methods can readily be used for detection in situ.

하기 실시예는 단지 예시적인 목적으로 제공되며, 어떤 방식으로든 본 발명의 범위를 제한하려는 것은 아니다.The following examples are provided for illustrative purposes only and are not intended to limit the scope of the invention in any way.

본 명세서에 인용된 모든 특허 및 문헌은 그 전문이 본원에 참고문헌으로 포함된다.All patents and documents cited herein are hereby incorporated by reference in their entirety.

본 실시예에 언급되는 상업적 시판 시약은 다른 지시가 없는 한 제조자의 지시에 따라 사용하였다. ATCC(American Type Culture Collection, 10801 University Blvd., Manassas, VA 20110-2209)의 수탁번호에 의해 하기 실시예 및 본 명세서 중의 세포의 출처를 확인하였다. 본 출원에 대한 모든 원기탁은 특허 절차상 미생물 기탁의 국제적 승인에 관한 부다페스트 조약 및 그의 규칙(부다페스트 조약 (Budapest Treaty))의 규정하에 이루어졌다. 이는 기탁일로부터 30년 동안 기탁물의 생존 배양물의 유지를 보장한다. 기탁물은 부다페스트 조약의 협약 하에 ATCC로부터 제넨테크 인크와 ATCC 사이 협정에 따라 분양될 것이며, 이는 관련 미국 특허의 허여시 또는 미국 또는 외국 특허 출원의 공개시(이 중 먼저인 때) 공공에 대한 기탁물의 배양 프로제니의 영구적이고 비제한적인 분양을 보장하고, 미국 특허 및 상표청장에 의해 35 USC §122 및 그에 따른 미국 특허 및 상표청장의 규칙(37 CFR §1.14 포함, 특히 886 OG 638 참조)에 따라 권리가 있는 것으로 결정한 이에게 프로제니의 분양을 보장한다.Commercially available reagents mentioned in this example were used according to the manufacturer's instructions unless otherwise indicated. The origin of the cells in the following examples and the specification was confirmed by accession numbers of the American Type Culture Collection, 10801 University Blvd., Manassas, VA 20110-2209 (ATCC). All original deposits for this application have been made under the provisions of the Budapest Treaty and its rules (Budapest Treaty) on the international approval of microbial deposits under the patent procedure. This ensures maintenance of the viable culture of the deposit for 30 years from the date of deposit. The deposits will be distributed from ATCC under the Convention of the Budapest Treaty in accordance with the agreement between Genentech Inc and ATCC, which shall be deposited with the public upon the granting of the relevant US patent or upon publication of the US or foreign patent application, whichever comes first. To ensure the permanent and non-limiting distribution of water culture progeny, and to the US Patent and Trademark Commissioner in 35 USC §122 and the rules of the US Patent and Trademark Commissioner (including 37 CFR §1.14, in particular see 886 OG 638). Progenie's sale is assured to those who have the right to do so.

달리 언급이 없는 한, 본 발명은 상기 및 문헌(Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press N.Y., 1989; Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y., 1989; Innis et al., PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Academic Press, Inc., Y.Y., 1990; Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold SpringHarbor, 1988; Gait, Oligonucleotide Synthesis, IRL Press, Oxford, 1984; R. I. Freshney, Animal Cell Culture, 1987; 및 Coligan et al., Current Protocols in Immunology, 1991)에 기재된 바와 같은 재조합 DNA 기술의 표준 절차를 이용한다.Unless stated otherwise, the invention is described above and in Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press NY, 1989; Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing Associates and Wiley Interscience , NY, 1989; Innis et al., PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Academic Press, Inc., YY, 1990; Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, 1988 Standard procedures of recombinant DNA technology as described in Gait, Oligonucleotide Synthesis, IRL Press, Oxford, 1984; RI Freshney, Animal Cell Culture, 1987; and Coligan et al., Current Protocols in Immunology, 1991).

실시예 1: 신규 폴리펩티드 및 이를 코딩하는 cDNA를 확인하기 위한 세포외 도메인 상동성 스크리닝Example 1 Extracellular Domain Homology Screening to Identify Novel Polypeptides and cDNAs Encoding It

스위스-프롯 (Swiss-Prot) 공개 데이타베이스로부터 약 950 개의 공지된 분비 단백질로부터의 세포외 도메인 (ECD) 서열 (분비 신호 서열이 존재하는 경우에는 이를 포함함)을 사용하여 EST 데이타베이스를 검색했다. EST 데이타베이스에는 공개 데이타베이스 (예를 들면, 데이호프 (Dayhoff), 진뱅크)와 비공개 데이타베이스 (예를 들면, LIFESEQ™, 미국 캘리포니아주 팔로 알토 소재의 인사이트 파마슈티컬즈 (Incyte Pharmaceuticals))가 포함되었다. EST 서열의 6 개 프레임 번역에 대한 ECD 단백질 서열의 비교로서 컴퓨터 프로그램 BLAST 또는 BLAST-2 (Altschul et al.,Methods in Enzymology266: 460-480 (1996))를 이용하여 검색을 수행했다. 공지된 단백질을 코딩하지 않는 70 (또는 몇몇 경우 90) 또는 그 이상의 BLAST 스코어를 갖는 비교물을 클러스터시키고, 프로그램 "phrap" (Phil Green, University of Washington, Seattle Washington)을 사용하여 컨센서스 DNA 서열로 어셈블리했다.The EST database was searched using an extracellular domain (ECD) sequence from about 950 known secretory proteins from the Swiss-Prot published database, including secretory signal sequences, if present . The EST database includes public databases (e.g. Dayhoff, Ginbank) and private databases (e.g. LIFESEQ ™, Incyte Pharmaceuticals, Palo Alto, CA). Included. A search was performed using the computer program BLAST or BLAST-2 (Altschul et al., Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)) as a comparison of the ECD protein sequences to six frame translations of the EST sequence. Comparators with BLAST scores of 70 (or in some cases 90) or greater that do not encode known proteins are clustered and assembled into consensus DNA sequences using the program “phrap” (Phil Green, University of Washington, Seattle Washington) did.

상기 세포외 도메인 상동성 스크리닝을 이용하여, 컨센서스 DNA 서열을 phrap을 사용하여 확인된 다른 EST 서열에 대해 어셈블리했다. 또한, 수득된 컨센서스 DNA 서열을 종종 (항상은 아니지만) 상기 논의한 EST 서열의 공급원을 사용하여 가능한 한 컨센서스 서열을 신장시키기 위해 BLAST 또는 BLAST-2와 phrap의 반복 사이클을 이용하여 이 컨센서스 서열을 신장시켰다.Using this extracellular domain homology screening, consensus DNA sequences were assembled against other EST sequences identified using phrap. In addition, consensus DNA sequences obtained are often (but not always) stretched using a repeat cycle of BLAST or BLAST-2 and phrap to stretch the consensus sequence as much as possible using the sources of EST sequences discussed above. .

그 후, 상기한 바와 같이 수득된 컨센서스 서열을 기준으로 올리고뉴클레오티드를 합성하여, PCR에 의해 관심있는 서열을 포함하는 cDNA 라이브러리를 확인하기 위해 사용하고 PRO 폴리펩티드에 대한 전장 코딩 서열의 클론을 단리하기 위한 프로브로서 사용하였다. 정방향 및 역방향 PCR 프라이머는 일반적으로 20 내지 30 개 뉴클레오티드 범위이고, 종종 약 100 내지 1000 bp 길이의 PCR 산물을 제공하도록 고안된다. 프로브 서열의 길이는 통상적으로 40 내지 55 bp이다. 몇몇 경우, 컨센서스 서열이 약 1 내지 1.5 kbp보다 큰 경우 추가의 올리고뉴클레오티드가 합성된다. 전장 클론을 위한 몇 개의 라이브러리를 스크리닝하기 위해, 이들 라이브러리로부터의 DNA를 PCR 프라이머 쌍을 사용하여 문헌 (Ausubel et al.,Current Protocols in Molecular Biology)에 따라 PCR 증폭에 의해 스크리닝했다. 그 후, 양성 라이브러리를 사용함으로써 프로브 올리고뉴클레오티드 및 프라이머 쌍들 중 하나를 이용하여 관심있는 유전자를 코딩하는 클론을 단리했다.The oligonucleotides are then synthesized based on the consensus sequence obtained as described above, used to identify cDNA libraries containing sequences of interest by PCR and for isolating clones of full-length coding sequences for PRO polypeptides. Used as a probe. Forward and reverse PCR primers generally range from 20 to 30 nucleotides and are often designed to provide PCR products of about 100 to 1000 bp in length. The length of the probe sequence is typically 40 to 55 bp. In some cases, additional oligonucleotides are synthesized when the consensus sequence is greater than about 1 to 1.5 kbp. To screen several libraries for full-length clones, DNA from these libraries was screened by PCR amplification using PCR primer pairs according to Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology . Then, clones encoding genes of interest were isolated using one of the probe oligonucleotide and primer pairs by using a positive library.

cDNA 클론을 단리하기 위해 사용되는 cDNA 라이브러리는 인비트로젠 (Invitrogen, San Diego, CA)사에서 상업적으로 시판하는 것과 같은 시약을 이용하여 표준 방법에 의해 제작하였다. cDNA를 NotI 부위를 갖는 올리고 dT로 프라이밍시키고, 헤미키나제 처리된 SalI 어댑터에 평활 말단으로 연결시키고, NotI로 절단하고, 겔 전기영동으로 크기에 따라 적절하게 분류하고, 적당한 클로닝 벡터 (예를 들면, pRKB 또는 pRKD; pRK5B는 SfiI 부위를 포함하지 않는 pRK5D의 전구체임; 문헌 (Holmes et al.,Science,253: 1278-1280 (1991)) 참조)내의 유일한 XhoI 및 NotI 부위에 정해진 방향으로 클로닝했다.The cDNA library used to isolate cDNA clones was prepared by standard methods using reagents such as those commercially available from Invitrogen (San Diego, Calif.). The cDNA is primed with oligo dT with a NotI site, ligated to the hemikinase treated SalI adapter, cleaved with NotI, appropriately sized by gel electrophoresis, and appropriate cloning vector (e.g., pRKB or pRKD; pRK5B is a precursor of pRK5D without the SfiI site; see Holmes et al., Science , 253 : 1278-1280 (1991) and cloned in a defined direction to the only XhoI and NotI sites.

실시예 2: 신호 연산법 분석을 이용한 cDNA 클론의 단리Example 2: Isolation of cDNA Clone Using Signal Computation Analysis

제넨테크, 인크(Genentech, Inc., South San Franscisco, CA)사에서 개발한 독점적인 신호 서열 검색 연산법을 사용하여, 공개(예를 들어, Genbank) 및(또는) 비공개(LIFESEQ(등록상표), Incyte Pharmaceuticals, Inc., Palo Alto, CA) 데이타베이스로부터의 EST 및 클러스터되고 어셈블리된 EST 단편에서 다양한 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 확인하였다. 신호 서열 연산법은 고려 대상의 서열 또는 서열 단편의 5'-말단에서 첫번째 및 임의로 두번째 메티오닌 코돈(ATG) 주변의 DNA 뉴클레오티드의 특성을 토대로 분비 신호 점수를 계산하였다. 첫번째 ATG 다음의 뉴클레오티드는 어떠한 정지 코돈도 없이 35개 이상의 분명한 아미노산을 코딩해야 한다. 첫번째 ATG가 필요한 아미노산을 갖는 경우, 두번째 ATG는 조사하지 않았다. 상기 두가지 요건을 모두 충족시키지 못하는 경우, 후보 서열의 점수는 계산하지 않았다. EST 서열이 분명한 신호 서열을 포함하는지를 결정하기 위해, 분비 신호와 관련된 것으로 알려진 7개의 센서(평가 파라미터) 한 세트를 사용하여 이 DNA 및 ATG 코돈 주변의 아미노산 서열의 점수를 매겼다. 이 연산법을 사용하여 많은 폴리펩티드-코딩 핵산 서열을 확인하였다.Using proprietary signal sequence retrieval algorithms developed by Genentech, Inc., South San Franscisco, CA, public (eg Genbank) and / or private (LIFESEQ®) Nucleic acid sequences encoding various polypeptides were identified in the EST from the Incyte Pharmaceuticals, Inc., Palo Alto, CA) database and in clustered and assembled EST fragments. Signal sequencing calculated secretion signal scores based on the properties of the DNA nucleotides around the first and optionally second methionine codons (ATG) at the 5'-end of the sequence or sequence fragment under consideration. The nucleotide following the first ATG must encode at least 35 distinct amino acids without any stop codons. If the first ATG had the necessary amino acid, the second ATG was not investigated. If neither of these requirements were met, the score of the candidate sequence was not calculated. To determine if the EST sequence contained a clear signal sequence, a set of seven sensors (evaluation parameters) known to be associated with the secretion signal was used to score the amino acid sequences around this DNA and ATG codons. This algorithm was used to identify many polypeptide-encoding nucleic acid sequences.

실시예 3: 인간 PRO201을 코딩하는 cDNA의 단리Example 3: Isolation of cDNA Encoding Human PRO201

발현 서열 태그(EST) DNA 데이타베이스(LIFESEQ(상표명), Incyte Pharmaceuticals, Palo Alto, CA)를 검색하여, 태아 췌장 라이브러리에 존재하며어댑터 단백질인 Shc와 상당한 상동성을 갖는 EST(1328938, 또한 DNA28710이라 지칭됨)를 찾아내었다.An expression sequence tag (EST) DNA database (LIFESEQ ™, Incyte Pharmaceuticals, Palo Alto, Calif.) Was searched for EST (1328938, also known as DNA28710), which is present in the fetal pancreatic library and has significant homology with the adapter protein Shc. Referred to).

단리된 EST에 상응하는 전장 cDNA를 pRK5에서의 생체내 클로닝 기술을 이용하여 인간 태아 신장 라이브러리로부터 클로닝하였다. 인간 PRO201을 코딩하는 cDNA 클론을 단리하는데 사용된 cDNA 라이브러리는, 인비트로젠(Invitrogen, San Diego, CA)사에서 상업적으로 시판하는 것과 같은 시약을 이용하여 표준 방법에 의해 제조하였다. NotⅠ 부위를 함유하는 올리고 dT로 cDNA를 프라이밍시키고, 평활말단화하여 SalⅠ 헤미키나아제 처리된 어댑터를 결합시킨 후, NotⅠ으로 절단하고, 겔 전기영동에 의해 대략의 크기를 분류한 다음, 적합한 클로닝 벡터(예를 들어, pRKB 또는 pRKD; pRKB5는 SfiⅠ부위가 없는 pRK5D의 전구체임; Homles et al., Science, 253:1278-1280 (1991) 참조)의 단일 XhoⅠ 및 NotⅠ 부위에 정해진 방향으로 클로닝하였다.Full length cDNA corresponding to the isolated EST was cloned from the human fetal kidney library using the in vivo cloning technique in pRK5. The cDNA library used to isolate cDNA clones encoding human PRO201 was prepared by standard methods using reagents such as those commercially available from Invitrogen (San Diego, Calif.). The cDNA was primed with oligo dT containing the NotI site, blunt-terminated to bind SalI hemikinase treated adapters, cleaved with NotI, sorted to approximate size by gel electrophoresis, and then subjected to a suitable cloning vector ( For example, pRKB or pRKD; pRKB5 is a precursor of pRK5D without the SfiI site; cloned in a direction determined to a single XhoI and NotI site of Homles et al., Science, 253: 1278-1280 (1991).

Incyte EST 제1328938호 기재의 프로브를 사용하여 인간 태아 신장 라이브러리로부터 유도된 cDNA 라이브러리를 스크리닝하였다:CDNA libraries derived from the human fetal kidney library were screened using the probes described in Incyte EST No. 1332338:

클로닝 프라이머:Cloning Primer:

5'-ACTGAGGCCTGTTGAAAGTGCAGAGCTCAG-3' (서열번호 3)5'-ACTGAGGCCTGTTGAAAGTGCAGAGCTCAG-3 '(SEQ ID NO: 3)

증폭용 프라이머:Amplification primers:

5'-GCTGAAGAAGAGCTTCAG-3' (서열번호 4)5'-GCTGAAGAAGAGCTTCAG-3 '(SEQ ID NO: 4)

전장의 클론[DNA30676-1223]이 뉴클레오티드 위치 152 내지 154의 분명한 번역 개시 부위 및 뉴클레오티드 위치 1880 내지 1882의 정지 신호를 갖는 단일 오픈리딩 프레임을 포함함을 확인하였다(도 1, 서열번호 1). 예상된 폴리펩티드 전구체는 아미노산 576개 길이이고, 계산된 분자량은 약 63,094 달톤이며, 추정 pI는 약 7.26이다. 도 2(서열번호 2)에 나타낸 전장 PRO201 서열의 분석은 그 위치가 대략 상기 기재된 바와 같은, 도 2에 나타낸 중요한 폴리펩티드 도메인의 존재를 입증한다. 도 2에 나타낸 전장 PRO201 폴리펩티드의 분석은 약 아미노산 142 내지 약 아미노산 146의 cAMP- 및 cGMP-의존성 단백질 키나아제 인산화 부위, 약 아미노산 41 내지 약 아미노산 47, 약 아미노산 107 내지 약 아미노산 111, 약 아미노산 164 내지 약 아미노산 170, 약 아미노산 203 내지 약 아미노산 209, 약 아미노산 243 내지 약 아미노산 249, 약 아미노산 343 내지 약 아미노산 349, 약 아미노산 460 내지 약 아미노산 466, 약 아미노산 546 내지 약 아미노산 552 및 약 아미노산 551 내지 약 아미노산 557의 N-미리스토일화 부위, 약 아미노산 97 내지 약 아미노산 101의 아미드화 부위, 약 아미노산 371 내지 약 아미노산 382의 원핵생물 세포막 지질단백질 지질 부착 부위, 및 약 아미노산 184 내지 약 아미노산 206의 루이신 지퍼 패턴이 존재하는 것을 입증한다. 클론 DNA30676-1223을 1997년 9월 23일에 ATCC에 기탁하여 ATCC 기탁번호 209576을 배정받았다.It was confirmed that the full length clone [DNA30676-1223] contained a single open reading frame with a clear translation initiation site at nucleotide positions 152 to 154 and a stop signal at nucleotide positions 1880 to 1882 (FIG. 1, SEQ ID NO: 1). The expected polypeptide precursor is 576 amino acids in length, the calculated molecular weight is about 63,094 Daltons and the estimated pi is about 7.26. Analysis of the full length PRO201 sequence shown in FIG. 2 (SEQ ID NO: 2) demonstrates the presence of the important polypeptide domains shown in FIG. 2, whose positions are approximately as described above. Analysis of the full-length PRO201 polypeptide shown in FIG. 2 shows cAMP- and cGMP-dependent protein kinase phosphorylation sites of about amino acids 142 to about amino acids 146, about amino acids 41 to about amino acids 47, about amino acids 107 to about amino acids 111, about amino acids 164 to about Amino acid 170, about amino acid 203 to about amino acid 209, about amino acid 243 to about amino acid 249, about amino acid 343 to about amino acid 349, about amino acid 460 to about amino acid 466, about amino acid 546 to about amino acid 552, and about amino acid 551 to about amino acid 557 N-myristoylation sites of about, amino acid 97 to about amino acid 101, prokaryotic cell membrane lipoprotein lipid attachment sites of about amino acids 371 to about amino acids 382, and leucine zipper patterns of about amino acids 184 to about amino acids 206 Prove that this exists. The clone DNA30676-1223 was deposited with the ATCC on September 23, 1997 to be assigned the ATCC accession number 209576.

도 2(서열번호 2)에 나타낸 전장 서열의 BLAST 및 FastA 서열 정렬 분석을 기초로, PRO201은 Sck 및 Shc 단백질과 아미노산 서열 동일성을 나타내었다.Based on the BLAST and FastA sequence alignment analysis of the full length sequence shown in FIG. 2 (SEQ ID NO: 2), PRO201 showed amino acid sequence identity with the Sck and Shc proteins.

실시예 4: 인간 PRO292를 코딩하는 cDNA의 단리Example 4: Isolation of cDNA Encoding Human PRO292

PRO292는 카텝신(cathepsin) D라고도 불리우는 인간 사망 관련 단백질인 DAP-7과 동일하다. 상기 412 아미노산 단백질의 아미노산 서열은 공개 데이호프데이타베이스에 고유번호 CATD_HUMAN 및 P_R74207로 존재하며, 이는 도 4(서열번호 6)에 기재되어 있다. PRO292를 코딩하는 DNA의 뉴클레오티드 서열은 도 3(서열번호 5)에 나타나 있다.PRO292 is identical to DAP-7, a human death related protein also called cathepsin D. The amino acid sequence of the 412 amino acid protein is present in the published data bases under the unique numbers CATD_HUMAN and P_R74207, which is described in FIG. 4 (SEQ ID NO: 6). The nucleotide sequence of the DNA encoding PRO292 is shown in FIG. 3 (SEQ ID NO: 5).

도 4(서열번호 6)에 나타낸 전장 PRO292 서열의 분석은 그 위치가 대략 상기 기재된 바와 같은, 도 4에 나타낸 중요한 폴리펩티드 도메인의 존재를 입증한다. 도 4에 나타낸 전장 PRO292 폴리펩티드의 분석은 약 아미노산 1 내지 약 아미노산 20의 신호 펩티드, 약 아미노산 34 내지 약 아미노산 138 및 약 아미노산 263 내지 약 아미노산 267의 N-글리코실화 부위, 약 아미노산 72 내지 약 아미노산 81의 티로신 키나아제 인산화 부위, 약 아미노산 145 내지 약 아미노산 151, 약 아미노산 248 내지 약 아미노산 254 및 약 아미노산 282 내지 약 아미노산 288의 N-미리스토일화 부위, 및 약 아미노산 335 내지 약 아미노산 357의 루이신 지퍼 패턴이 존재하는 것을 입증한다.Analysis of the full length PRO292 sequence shown in FIG. 4 (SEQ ID NO: 6) demonstrates the presence of the important polypeptide domains shown in FIG. 4, whose positions are approximately as described above. Analysis of the full length PRO292 polypeptide shown in FIG. 4 shows a signal peptide of about amino acids 1 to about amino acid 20, an N-glycosylation site of about amino acids 34 to about amino acids 138 and about amino acids 263 to about amino acids 267, about amino acids 72 to about amino acids 81 Tyrosine kinase phosphorylation sites, N-myristoylation sites of about amino acids 145 to about amino acids 151, about amino acids 248 to about amino acids 254 and about amino acids 282 to about amino acids 288, and leucine zipper patterns of about amino acids 335 to about amino acids 357 Prove that this exists.

또한, DAP-7은 1995년 4월 20일 공개된 국제 공개 제95/10630호, 및 문헌 (Faust et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:4910-4914 (1985))에 개시되어 있다.DAP-7 is also described in International Publication No. 95/10630, published April 20, 1995, and Faust et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 4910-4914 (1985). Is disclosed.

실시예 5: 인간 PRO327을 코딩하는 cDNA의 단리Example 5: Isolation of cDNA Encoding Human PRO327

발현 서열 태그(EST) DNA 데이타베이스(LIFESEQ(상표명), Incyte Pharmaceuticals, Palo Alto, CA)를 검색하여, 인간 프로락틴 수용체 단백질에 어느정도 상동성을 나타내는 다양한 EST 서열을 찾아내었다.The expression sequence tag (EST) DNA database (LIFESEQ ™, Incyte Pharmaceuticals, Palo Alto, Calif.) Was searched to find various EST sequences that showed some homology to human prolactin receptor proteins.

상기 실시예 1에 기재된 바와 같이 phrap을 이용하여 컨센서스 DNA 서열을다른 EST 서열에 대해 어셈블리하였다. 이 컨센서스 서열은 본원에서 DNA38110으로 지칭된다. DNA38110 컨센서스 서열을 기초로 하여, 1) 관심 서열을 포함하는 cDNA 라이브러리를 PCR에 의해 확인하고, 2) PRO327의 전장 코딩 서열의 클론을 단리하기 위한 프로브로서 사용하기 위해 올리고뉴클레오티드를 합성하였다.Consensus DNA sequences were assembled for other EST sequences using phraps as described in Example 1 above. This consensus sequence is referred to herein as DNA38110. Based on the DNA38110 consensus sequence, oligonucleotides were synthesized for use as 1) a cDNA library comprising the sequence of interest by PCR and 2) as a probe to isolate a clone of the full-length coding sequence of PRO327.

1쌍의 PCR 프라이머(정방향 및 역방향)를 합성하였다:One pair of PCR primers (forward and reverse) were synthesized:

정방향 PCR 프라이머Forward PCR Primer

5'-CCCGCCCGACGTGCACGTGAGCC-3' (서열번호 9)5'-CCCGCCCGACGTGCACGTGAGCC-3 '(SEQ ID NO: 9)

역방향 PCR 프라이머Reverse PCR primers

5'-TGAGCCAGCCCAGGAACTGCTTG-3' (서열번호 10)5'-TGAGCCAGCCCAGGAACTGCTTG-3 '(SEQ ID NO: 10)

추가로 하기의 뉴클레오티드 서열을 갖는 합성 올리고뉴클레오티드 혼성화 프로브를 DNA38110 컨센서스 서열로부터 제조하였다.In addition, synthetic oligonucleotide hybridization probes having the following nucleotide sequences were prepared from the DNA38110 consensus sequence.

혼성화 프로브Hybridization probe

5'-CAAGTGCGCTGCAACCCCTTTGGCATCTATGGCTCCAAGAAAGCCGGGAT-3' (서열번호 11)5'-CAAGTGCGCTGCAACCCCTTTGGCATCTATGGCTCCAAGAAAGCCGGGAT-3 '(SEQ ID NO: 11)

전장 클론의 공급원을 찾을 목적으로 몇 개의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 상기 확인한 PCR 프라이머쌍을 사용한 PCR 증폭에 의해 라이브러리의 DNA를 스크리닝하였다. 그 후, 양성 라이브러리를 사용함으로써 프로브 올리고뉴클레오티드 및 PCR 프라이머들 중 하나로 PRO327 유전자를 코딩하는 클론을 단리하였다. cDNA 라이브러리 제조용 RNA는 인간 태아의 폐 조직(LIB26)으로부터 단리하였다.The DNA of the library was screened by PCR amplification using the PCR primer pairs identified above to screen several libraries for the purpose of finding a source of full length clones. Then, clones encoding the PRO327 gene with one of the probe oligonucleotides and PCR primers were isolated by using a positive library. RNA for preparing cDNA library was isolated from lung tissue (LIB26) of human fetus.

상기한 바와 같이 단리된 클론의 DNA 서열 분석을 통하여 DNA38113-1230 (도 5, 서열번호 7) 및 이로부터 유도된 PRO327의 단백질 서열을 수득하였다.DNA sequence analysis of the clones isolated as described above yielded the protein sequence of DNA38113-1230 (FIG. 5, SEQ ID NO: 7) and PRO327 derived therefrom.

DNA38113-1230의 전체 코딩 서열은 도 5 (서열번호 7)에 포함되어 있다. 클론 DNA38113-1230은 뉴클레오티드 위치 131 내지 133의 분명한 번역 개시 부위 및 뉴클레오티드 위치 1397 내지 1399의 분명한 정지 코돈을 갖는 단일 오픈 리딩 프레임을 포함한다. 예상되는 폴리펩티드 전구체는 아미노산 422개 길이이다. 도 6 (서열번호 8)에 나타낸 전장 PRO327 서열의 분석은 그 위치가 대략 상기 기재된 바와 같은, 도 6에 나타낸 중요한 폴리펩티드 도메인의 존재를 입증한다. 도 6에 나타낸 전장 PRO327 폴리펩티드의 분석은 약 아미노산 1 내지 약 아미노산 30의 신호 펩티드, 약 아미노산 92 내지 약 아미노산 96, 약 아미노산 104 내지 약 아미노산 108, 약 아미노산 140 내지 약 아미노산 144, 약 아미노산 168 내지 약 아미노산 172, 약 아미노산 292 내지 약 아미노산 296 및 약 아미노산 382 내지 약 아미노산 386의 N-글리코실화 부위, 약 아미노산 413 내지 약 아미노산 417의 cAMP- 및 cGMP-의존성 단백질 키나아제 인산화 부위, 약 아미노산 44 내지 약 아미노산 48, 약 아미노산 183 내지 약 아미노산 187 및 약 아미노산 205 내지 약 아미노산 209의 카제인 키나아제 II 인산화 부위, 약 아미노산 30 내지 약 아미노산 36, 약 아미노산 37 내지 약 아미노산 43, 약 아미노산 73 내지 약 아미노산 79, 약 아미노산 121 내지 약 아미노산 127, 약 아미노산 179 내지 약 아미노산 185, 약 아미노산 218 내지 약 아미노산 224, 약 아미노산 300 내지 약 아미노산 306, 약 아미노산 317 내지 약 아미노산 323, 약 아미노산 320 내지 약 아미노산 326, 약 아미노산 347 내지 약 아미노산 353, 약 아미노산 355 내지 약 아미노산 361 및 약 아미노산 407 내지 약 아미노산 413의 N-미리스토일화 부위, 약 아미노산 3 내지 약 아미노산 7, 약 아미노산 79 내지 약 아미노산 83 및 약 아미노산 411 내지 약 아미노산 415의 아미드화 부위, 및 약 아미노산 325 내지 약 아미노산 332의 생장 인자 및 싸이토카인 수용체 족 시그너처 2가 존재하는 것을 입증한다. 클론 DNA38113-1230을 1997년 9월 10일에 ATCC에 기탁하여 ATCC 기탁번호 209530을 배정받았다. 도 6에 나타낸 전장 PRO327 단백질의 추정 분자량은 약 46,302 달톤이며, pI는 약 9.42이다.The entire coding sequence of DNA38113-1230 is included in FIG. 5 (SEQ ID NO: 7). Clone DNA38113-1230 contains a single open reading frame with an explicit translation initiation site at nucleotide positions 131 to 133 and an apparent stop codon at nucleotide positions 1397 to 1399. The expected polypeptide precursor is 422 amino acids long. Analysis of the full length PRO327 sequence shown in FIG. 6 (SEQ ID NO: 8) demonstrates the presence of the important polypeptide domains shown in FIG. 6, whose positions are approximately as described above. Analysis of the full length PRO327 polypeptide shown in FIG. 6 includes a signal peptide of about amino acids 1 to about amino acid 30, about amino acid 92 to about amino acid 96, about amino acid 104 to about amino acid 108, about amino acid 140 to about amino acid 144, about amino acid 168 to about N-glycosylation sites of amino acids 172, about amino acids 292 to about amino acids 296 and about amino acids 382 to about amino acids 386, cAMP- and cGMP-dependent protein kinase phosphorylation sites of about amino acids 413 to about amino acids 417, about amino acids 44 to about amino acids 48, casein kinase II phosphorylation site of about amino acid 183 to about amino acid 187 and about amino acid 205 to about amino acid 209, about amino acid 30 to about amino acid 36, about amino acid 37 to about amino acid 43, about amino acid 73 to about amino acid 79, about amino acid 121 to about amino acid 127, about amino acid 179 to about Minosan 185, about amino acid 218 to about amino acid 224, about amino acid 300 to about amino acid 306, about amino acid 317 to about amino acid 323, about amino acid 320 to about amino acid 326, about amino acid 347 to about amino acid 353, about amino acid 355 to about amino acid 361 And an N-myristoylation site of about amino acids 407 to about amino acid 413, about amino acid 3 to about amino acid 7, about amino acid 79 to about amino acid 83, and an amidation site of about amino acid 411 to about amino acid 415, and about amino acid 325 to about The growth factor of amino acid 332 and the cytokine receptor family signature 2 demonstrate the presence. The clone DNA38113-1230 was deposited with ATCC on September 10, 1997 to be assigned ATCC accession number 209530. The estimated molecular weight of the full-length PRO327 protein shown in FIG. 6 is about 46,302 daltons and the pi is about 9.42.

도 6 (서열 번호 8)에 나타낸 전장 PRO327 서열의 분석은 상기 폴리펩티드가 인간 프로락틴 수용체 결합 단백질에 상당한 상동성이 있음을 시사하며, 이는 PRO327이 신규 프로락틴 결합 단백질일 수 있음을 의미한다.Analysis of the full length PRO327 sequence shown in FIG. 6 (SEQ ID NO: 8) suggests that the polypeptide has significant homology to human prolactin receptor binding protein, which means that PRO327 may be a novel prolactin binding protein.

실시예 6: 인간 PRO1265를 코딩하는 cDNA의 단리Example 6: Isolation of cDNA Encoding Human PRO1265

상기 실시예 3에 기재된 독점적인 신호 서열 검색 연산법을 사용하여 DNA60764-1533을 찾아내었다. 상기 기재된 신호 서열 검색 연산법을 이용하여 LIFESEQ(등록상표) 데이타베이스로부터 Incyte EST 클러스터 제86995호라 지칭되는 EST 클러스터 서열을 확인하였다. 이후에 존재하는 상동성을 확인하기 위해, 이 클러스터 서열을 공개(예를 들어, Genbank) EST 데이타베이스 및(또는) 비공개(LIFESEQ(등록상표), Incyte Pharmaceuticals, Inc., Palo Alto, CA) EST 데이타베이스를 포함하는 발현 서열 태그(EST) 데이타베이스와 비교하였다. 상동성 검색은 컴퓨터 프로그램 BLAST 또는 BLAST2(Altschul et al., Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996))를 이용하여 수행하였다. 공지된 단백질을 코딩하지 않는 70 (또는 몇몇 경우 90) 또는 그 이상의 BLAST 스코어를 갖는 비교물을클러스터시키고, 프로그램 "phrap" (Phil Green, University of Washington, Seattle Washington)을 사용하여 컨센서스 DNA 서열로 어셈블리하였다. 이로부터 얻은 컨센서스 서열을 본원에서 DNA55717이라 명명하였다.DNA60764-1533 was found using the proprietary signal sequence search algorithm described in Example 3 above. The signal sequence retrieval algorithm described above was used to identify the EST cluster sequence referred to as Incyte EST Cluster 86995 from the LIFESEQ® database. In order to identify homology that subsequently exists, this cluster sequence is disclosed in a public (eg Genbank) EST database and / or in a private (LIFESEQ®, Incyte Pharmaceuticals, Inc., Palo Alto, CA) EST. Comparison was made with an expression sequence tag (EST) database comprising a database. Homology searches were performed using the computer programs BLAST or BLAST2 (Altschul et al., Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)). Comparators with BLAST scores of 70 (or 90 in some cases) or higher that do not encode known proteins are clustered and assembled into consensus DNA sequences using the program “phrap” (Phil Green, University of Washington, Seattle Washington) It was. The consensus sequence obtained from this was named DNA55717 herein.

DNA55717 서열과 Incyte EST 제20965호 사이의 서열 상동성을 고려하여, Incyte EST 제20965호를 구입하고, cDNA 삽입체를 수득하여 서열 분석하였다. 이 cDNA 삽입체의 서열은 도 7 (서열번호 12)에 나타내었고 본원에서 DNA60764-1533이라 명명하였다.In view of sequence homology between the DNA55717 sequence and Incyte EST No. 20965, Incyte EST No. 20965 was purchased and cDNA inserts were obtained and sequenced. The sequence of this cDNA insert is shown in FIG. 7 (SEQ ID NO: 12) and named DNA60764-1533 herein.

DNA60764-1533의 전체 코딩 서열은 도 7 (서열번호 12)에 포함되어 있다. 클론 DNA60764-1533은 뉴클레오티드 위치 79 내지 81의 분명한 번역 개시 부위 및 뉴클레오티드 위치 1780 내지 1782의 정지 코돈에서 종결되는 단일 오픈 리딩 프레임을 포함한다 (도 7). 예상되는 폴리펩티드 전구체는 아미노산 567개 길이이다 (도 8, 서열번호 13). 도 8에 나타낸 전장 PRO1265 단백질의 추정 분자량은 약 62,881 달톤이며, pI는 약 8.97이다. 도 8 (서열번호 13)에 나타낸 전장 PRO1265 서열의 분석은 그 위치가 대략 상기 기재된 바와 같은 중요한 폴리펩티드 도메인의 존재를 입증한다. 도 8에 나타낸 전장 PRO1265 폴리펩티드의 분석은 약 아미노산 1 내지 약 아미노산 21의 신호 펩티드, 약 아미노산 59 내지 약 아미노산 75의 막횡단 도메인, 약 아미노산 54 내지 약 아미노산 58, 약 아미노산 134 내지 약 아미노산 138, 약 아미노산 220 내지 약 아미노산 224 및 약 아미노산 559 내지 약 아미노산 563의 N-글리코실화 부위, 약 아미노산 35 내지 약 아미노산 43 및 약 아미노산 161 내지 약 아미노산 169의 티로신 키나아제 인산화 부위, 및 약 아미노산61 내지 약 아미노산 81의 D-아미노산 옥시다제 단백질 부위가 존재하는 것을 입증한다. 클론 DNA60764-1533을 1998년 11월 10일에 ATCC에 기탁하여 ATCC 기탁번호 203452를 배정받았다.The entire coding sequence of DNA60764-1533 is included in FIG. 7 (SEQ ID NO: 12). Clone DNA60764-1533 contains a single open reading frame terminating at a clear translation initiation site at nucleotide positions 79 to 81 and a stop codon at nucleotide positions 1780 to 1782 (FIG. 7). The expected polypeptide precursor is 567 amino acids long (FIG. 8, SEQ ID NO: 13). The estimated molecular weight of the full-length PRO1265 protein shown in FIG. 8 is about 62,881 Daltons and the pi is about 8.97. Analysis of the full length PRO1265 sequence shown in FIG. 8 (SEQ ID NO: 13) demonstrates the presence of an important polypeptide domain whose position is approximately as described above. Analysis of the full length PRO1265 polypeptide shown in FIG. 8 includes a signal peptide of about amino acids 1 to about amino acid 21, a transmembrane domain of about amino acids 59 to about amino acids 75, about amino acids 54 to about amino acids 58, about amino acids 134 to about amino acids 138, about N-glycosylation sites of amino acids 220 to about amino acids 224 and about amino acids 559 to about amino acids 563, tyrosine kinase phosphorylation sites of about amino acids 35 to about amino acids 43 and about amino acids 161 to about amino acids 169, and about amino acids 61 to about amino acids 81 Demonstrates the presence of the D-amino acid oxidase protein site. The clone DNA60764-1533 was deposited with ATCC on November 10, 1998 and assigned ATCC accession no. 203452.

도 8 (서열번호 13)에 나타낸 전장 서열의 WU-BLAST2 서열 정렬 분석을 이용하는 데이호프 데이타베이스 (버전 35.45 SwissProt 35)의 분석은 PRO1265 아미노산 서열과 데이호프 서열 MMU70429_1 사이에 상당한 서열 동일성이 있음을 입증하였다. 또한, 도 8 (서열번호 13)에 나타낸 전장 서열과 데이호프 서열 BC542A_1, E69899, S76290, MTV014_14, AOFB_HUMAN, ZMJ002204_1, S45812_1, DBRNAPD_1 및 CRT1_SOYBN 사이에 상당한 상동성이 존재함을 보여주었다.Analysis of the Dayhof database (version 35.45 SwissProt 35) using the WU-BLAST2 sequence alignment analysis of the full length sequence shown in FIG. 8 (SEQ ID NO: 13) demonstrates significant sequence identity between the PRO1265 amino acid sequence and the Dayhof sequence MMU70429_1. It was. It was also shown that there is considerable homology between the full length sequence shown in FIG. 8 (SEQ ID NO: 13) and the dayhof sequences BC542A_1, E69899, S76290, MTV014_14, AOFB_HUMAN, ZMJ002204_1, S45812_1, DBRNAPD_1 and CRT1_SOYBN.

실시예 7: 인간 PRO344를 코딩하는 cDNA의 단리Example 7: Isolation of cDNA Encoding Human PRO344

상기 실시예 1에 기재된 바와 같이 phrap을 이용하여 컨센서스 DNA 서열을 다른 EST 서열에 대해 어셈블리하였다. 어셈블리된 컨센서스 서열은 본원에서 DNA34398로 지칭된다. DNA34398 컨센서스 서열을 기초로 하여, 1) 관심 서열을 포함하는 cDNA 라이브러리를 PCR에 의해 확인하고, 2) PRO344의 전장 코딩 서열의 클론을 단리하기 위한 프로브로서 사용하기 위해 올리고뉴클레오티드를 합성하였다.Consensus DNA sequences were assembled for other EST sequences using phraps as described in Example 1 above. The assembled consensus sequence is referred to herein as DNA34398. Based on the DNA34398 consensus sequence, oligonucleotides were synthesized for use as 1) a cDNA library containing the sequence of interest by PCR and 2) as a probe to isolate a clone of the full-length coding sequence of PRO344.

PCR 프라이머(정방향 및 역방향)를 합성하였다:PCR primers (forward and reverse) were synthesized:

정방향 PCR 프라이머(34398.f1)Forward PCR Primer (34398.f1)

5'-TACAGCCCAGTCAGGACCAGGGG-3' (서열번호 16)5'-TACAGCCCAGTCAGGACCAGGGG-3 '(SEQ ID NO: 16)

정방향 PCR 프라이머(34398.f2)Forward PCR Primer (34398.f2)

5'-AGCCAGCCTCGCTCTCGG-3' (서열번호 17)5'-AGCCAGCCTCGCTCTCGG-3 '(SEQ ID NO: 17)

정방향 PCR 프라이머(34398.f3)Forward PCR Primer (34398.f3)

5'-GTCTGCGATCAGGTCTGG-3' (서열번호 18)5'-GTCTGCGATCAGGTCTGG-3 '(SEQ ID NO: 18)

역방향 PCR 프라이머(34398.r1)Reverse PCR Primer (34398.r1)

5'-GAAAGAGGCAATGGATTCGC-3' (서열번호 19)5'-GAAAGAGGCAATGGATTCGC-3 '(SEQ ID NO: 19)

역방향 PCR 프라이머(34398.r2)Reverse PCR Primer (34398.r2)

5'-GACTTACACTTGCCAGCACAGCAC-3' (서열번호 20)5'-GACTTACACTTGCCAGCACAGCAC-3 '(SEQ ID NO: 20)

추가로 하기의 뉴클레오티드 서열을 갖는 합성 올리고뉴클레오티드 혼성화 프로브를 DNA34398 컨센서스 서열로부터 제조하였다.In addition, synthetic oligonucleotide hybridization probes having the following nucleotide sequences were prepared from the DNA34398 consensus sequence.

혼성화 프로브(34398.p1)Hybridization Probe (34398.p1)

5'-GGAGCACCACCAACTGGAGGGTCCGGAGTAGCGAGCGCCCCGAAG-3' (서열번호 21)5'-GGAGCACCACCAACTGGAGGGTCCGGAGTAGCGAGCGCCCCGAAG-3 '(SEQ ID NO: 21)

전장 클론의 공급원을 찾을 목적으로 몇 개의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 상기 확인한 PCR 프라이머쌍을 사용한 PCR 증폭에 의해 라이브러리의 DNA를 스크리닝하였다. 그 후, 양성 라이브러리를 사용함으로써 프로브 올리고뉴클레오티드 및 PCR 프라이머들 중 하나로 PRO344 유전자를 코딩하는 클론을 단리하였다. cDNA 라이브러리 제조용 RNA는 인간 태아의 신장 조직으로부터 단리하였다.The DNA of the library was screened by PCR amplification using the PCR primer pairs identified above to screen several libraries for the purpose of finding a source of full length clones. Then, clones encoding the PRO344 gene with one of the probe oligonucleotides and PCR primers were isolated by using a positive library. RNA for preparing cDNA library was isolated from kidney tissue of human fetus.

상기한 바와 같이 단리된 클론의 DNA 서열 분석을 통하여 DNA40592-1242 (도 9, 서열번호 14) 및 이로부터 유도된 PRO344의 단백질 서열을 수득하였다.DNA sequence analysis of clones isolated as described above yielded the protein sequence of DNA40592-1242 (FIG. 9, SEQ ID NO: 14) and PRO344 derived therefrom.

DNA40592-1242의 전체 코딩 서열은 도 9 (서열번호 14)에 포함되어 있다. 클론 DNA40592-1242는 뉴클레오티드 위치 227 내지 229의 분명한 번역 개시 부위 및 뉴클레오티드 위치 956 내지 958의 분명한 정지 코돈을 갖는 단일 오픈 리딩 프레임을 포함한다. 예상되는 폴리펩티드 전구체는 아미노산 243개 길이이다. 도 10 (서열번호 15)에 나타낸 전장 PRO344 서열의 분석은 그 위치가 대략 상기 기재된 바와 같은 중요한 폴리펩티드 도메인의 존재를 입증한다. 도 10에 나타낸 전장 PRO344 폴리펩티드의 분석은 약 아미노산 1 내지 약 아미노산 15의 신호 펩티드, 약 아미노산 11 내지 약 아미노산 17, 약 아미노산 68 내지 약 아미노산 74 및 약 아미노산 216 내지 약 아미노산 222의 N-미리스토일화 부위, 및 약 아미노산 77 내지 약 아미노산 80의 세포 부착 서열이 존재하는 것을 입증한다. 클론 DNA40592-1242를 1997년 11월 21일에 ATCC에 기탁하여 ATCC 기탁번호 209492를 배정받았다. 도 10에 나타낸 전장 PRO344 단백질의 추정 분자량은 약 25,298 달톤이며, pI는 약 6.44이다.The entire coding sequence of DNA40592-1242 is included in FIG. 9 (SEQ ID NO: 14). Clone DNA40592-1242 contains a single open reading frame with an explicit translation initiation site at nucleotide positions 227 to 229 and an apparent stop codon at nucleotide positions 956 to 958. The expected polypeptide precursor is 243 amino acids in length. Analysis of the full length PRO344 sequence shown in FIG. 10 (SEQ ID NO: 15) demonstrates the presence of an important polypeptide domain whose position is approximately as described above. Analysis of the full length PRO344 polypeptide shown in FIG. 10 shows N-myristoylation of a signal peptide of about amino acids 1 to about amino acid 15, about amino acids 11 to about amino acids 17, about amino acids 68 to about amino acids 74, and about amino acids 216 to about amino acids 222. Site, and the cell attachment sequence of about amino acid 77 to about amino acid 80 is present. The clone DNA40592-1242 was deposited with ATCC on November 21, 1997 to be assigned ATCC accession no. 209492. The estimated molecular weight of the full-length PRO344 protein shown in FIG. 10 is about 25,298 Daltons and the pi is about 6.44.

도 10 (서열 번호 15)에 나타낸 전장 PRO344 서열의 분석은 상기 폴리펩티드가 인간 및 쥐과 보체 단백질에 상당한 상동성이 있음을 시사하며, 이는 PRO344가 신규 보체 단백질일 수 있음을 의미한다.Analysis of the full length PRO344 sequence shown in FIG. 10 (SEQ ID NO: 15) suggests that the polypeptide has significant homology to human and murine complement proteins, which means that PRO344 can be a novel complement protein.

실시예 8: 인간 PRO343을 코딩하는 cDNA의 단리Example 8: Isolation of cDNA Encoding Human PRO343

상기 실시예 1에 기재된 바와 같이 phrap을 이용하여 컨센서스 DNA 서열을 다른 EST 서열에 대해 어셈블리하였다. 어셈블리된 컨센서스 서열은 본원에서 DNA30895로 지칭된다. DNA30895 컨센서스 서열을 기초로 하여, 1) 관심 서열을 포함하는 cDNA 라이브러리를 PCR에 의해 확인하고, 2) PRO343의 전장 코딩 서열의 클론을 단리하기 위한 프로브로서 사용하기 위해 올리고뉴클레오티드를 합성하였다.Consensus DNA sequences were assembled for other EST sequences using phraps as described in Example 1 above. The assembled consensus sequence is referred to herein as DNA30895. Based on the DNA30895 consensus sequence, oligonucleotides were synthesized for use as 1) a cDNA library comprising the sequence of interest by PCR and 2) as a probe to isolate a clone of the full-length coding sequence of PRO343.

1쌍의 PCR 프라이머(정방향 및 역방향)를 합성하였다:One pair of PCR primers (forward and reverse) were synthesized:

정방향 PCR 프라이머Forward PCR Primer

5'-CGTCTCGAGCGCTCCATACAGTTCCCTTGCCCCA-3' (서열번호 24)5'-CGTCTCGAGCGCTCCATACAGTTCCCTTGCCCCA-3 '(SEQ ID NO: 24)

역방향 PCR 프라이머Reverse PCR primers

5'-TGGAGGGGGAGCGGGATGCTTGTCTGGGCGACTCCGGGGGCCCCCTCATGTGCCAGGTGGA-3' (서열번호 25)5'-TGGAGGGGGAGCGGGATGCTTGTCTGGGCGACTCCGGGGGCCCCCTCATGTGCCAGGTGGA-3 '(SEQ ID NO: 25)

추가로 하기의 뉴클레오티드 서열을 갖는 합성 올리고뉴클레오티드 혼성화 프로브를 DNA30895 컨센서스 서열로부터 제조하였다.In addition, synthetic oligonucleotide hybridization probes having the following nucleotide sequences were prepared from the DNA30895 consensus sequence.

혼성화 프로브Hybridization probe

5'-CCCTCAGACCCTGCAGAAGCTGAAGGTTCCTATCATCGACTCGGAAGTCTGCAGCCATCTGTACTGGC GGGGAGCAGGACAGGGACCCATCACTGAGGACATGCTGTGTGCCGGCTACT-3' (서열번호 26)5'-CCCTCAGACCCTGCAGAAGCTGAAGGTTCCTATCATCGACTCGGAAGTCTGCAGCCATCTGTACTGGC GGGGAGCAGGACAGGGACCCATCACTGAGGACATGCTGTGTGCCGGCTACT-3 '(SEQ ID NO: 26)

전장 클론의 공급원을 찾을 목적으로 몇 개의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 상기 확인한 PCR 프라이머쌍을 사용한 PCR 증폭에 의해 라이브러리의 DNA를 스크리닝하였다. 그 후, 양성 라이브러리를 사용함으로써 프로브 올리고뉴클레오티드 및 PCR 프라이머들 중 하나로 PRO343 유전자를 코딩하는 클론을 단리하였다. cDNA 라이브러리 제조용 RNA는 인간 태아의 폐 조직(LIB26)으로부터 단리하였다.The DNA of the library was screened by PCR amplification using the PCR primer pairs identified above to screen several libraries for the purpose of finding a source of full length clones. Then, clones encoding the PRO343 gene with one of the probe oligonucleotides and PCR primers were isolated by using a positive library. RNA for preparing cDNA library was isolated from lung tissue (LIB26) of human fetus.

상기한 바와 같이 단리된 클론의 DNA 서열 분석을 통하여 DNA43318-1217 (도 11, 서열번호 22) 및 이로부터 유도된 PRO343의 단백질 서열을 수득하였다.DNA sequence analysis of clones isolated as described above yielded the protein sequence of DNA43318-1217 (FIG. 11, SEQ ID NO: 22) and PRO343 derived therefrom.

DNA43318-1217의 전체 코딩 서열은 도 11 (서열번호 22)에 포함되어 있다. 클론 DNA43318-1217은 뉴클레오티드 위치 53 내지 55의 분명한 번역 개시 부위 및 뉴클레오티드 위치 1004 내지 1006의 분명한 정지 코돈을 갖는 단일 오픈 리딩 프레임을 포함한다. 예상되는 폴리펩티드 전구체는 아미노산 317개 길이이다. 도 12 (서열번호 23)에 나타낸 전장 PRO343 서열의 분석은 그 위치가 대략 상기 기재된 바와 같은 중요한 폴리펩티드 도메인의 존재를 입증한다. 도 12에 나타낸 전장 PRO343 폴리펩티드의 분석은 약 아미노산 1 내지 약 아미노산 32의 신호 펩티드, 약 아미노산 70 내지 약 아미노산 74의 N-글리코실화 부위, 약 아미노산 178 내지 약 아미노산 182의 글리코사미노글리칸 부착 부위, 약 아미노산 5 내지 약 아미노산 11, 약 아미노산 12 내지 약 아미노산 18, 약 아미노산 13 내지 약 아미노산 19, 약 아미노산 16 내지 약 아미노산 22, 약 아미노산 52 내지 약 아미노산 58, 약 아미노산 71 내지 약 아미노산 77, 약 아미노산 77 내지 약 아미노산 83, 약 아미노산 112 내지 약 아미노산 118, 약 아미노산 273 내지 약 아미노산 279 및 약 아미노산 310 내지 약 아미노산 316의 N-미리스토일화 부위, 약 아미노산 4 내지 약 아미노산 15의 원핵생물 세포막 지질단백질 지질 부착 부위, 및 약 아미노산 86 내지 약 아미노산 92의 세린 프로테아제, 트립신 족, 히스티딘 활성 부위가 존재하는 것을 입증한다. 클론 DNA43318-1217을 1997년 11월 21일에 ATCC에 기탁하여 ATCC 기탁번호 209481을 배정받았다. 도 12에 나타낸 전장 PRO343 단백질의 추정 분자량은 약 33,732 달톤이며, pI는 약 7.90이다.The entire coding sequence of DNA43318-1217 is included in FIG. 11 (SEQ ID NO: 22). Clone DNA43318-1217 contains a single open reading frame with an explicit translation initiation site at nucleotide positions 53 to 55 and an apparent stop codon at nucleotide positions 1004 to 1006. The expected polypeptide precursor is 317 amino acids long. Analysis of the full length PRO343 sequence shown in FIG. 12 (SEQ ID NO: 23) demonstrates the presence of an important polypeptide domain whose position is approximately as described above. Analysis of the full-length PRO343 polypeptide shown in FIG. 12 includes a signal peptide of about amino acids 1 to about amino acid 32, an N-glycosylation site of about amino acids 70 to about amino acid 74, and a glycosaminoglycan attachment site of about amino acids 178 to about amino acid 182 , About amino acid 5 to about amino acid 11, about amino acid 12 to about amino acid 18, about amino acid 13 to about amino acid 19, about amino acid 16 to about amino acid 22, about amino acid 52 to about amino acid 58, about amino acid 71 to about amino acid 77, about Prokaryotic cell membrane lipids of amino acids 77 to about amino acids 83, about amino acids 112 to about amino acids 118, about amino acids 273 to about amino acids 279 and about amino acids 310 to about amino acids 316, about amino acids 4 to about amino acids 15 Protein lipid attachment site, and serine protein of about amino acid 86 to about amino acid 92 It demonstrates the presence of an azede, trypsin family, histidine active site. Clone DNA43318-1217 was deposited with ATCC on November 21, 1997 and assigned ATCC accession no. 209481. The estimated molecular weight of the full-length PRO343 protein shown in FIG. 12 is about 33,732 Daltons and the pi is about 7.90.

실시예 9: 인간 PRO347을 코딩하는 cDNA의 단리Example 9: Isolation of cDNA Encoding Human PRO347

상기 실시예 1에 기재된 바와 같이 phrap을 이용하여 컨센서스 DNA 서열을 다른 EST 서열에 대해 어셈블리하였다. 상기 어셈블리된 컨센서스 서열은 본원에서 "<consen01>" 및 DNA39499로 지칭된다. "<consen01>" 및 DNA39499 컨센서스 서열을 기초로 하여, 1) 관심 서열을 포함하는 cDNA 라이브러리를 PCR에 의해 확인하고, 2) PRO347의 전장 코딩 서열의 클론을 단리하기 위한 프로브로서 사용하기 위해 올리고뉴클레오티드를 합성하였다.Consensus DNA sequences were assembled for other EST sequences using phraps as described in Example 1 above. The assembled consensus sequence is referred to herein as "<consen01>" and DNA39499. Based on “<consen01>” and DNA39499 consensus sequences, 1) a cDNA library comprising the sequence of interest is identified by PCR, and 2) an oligonucleotide for use as a probe to isolate a clone of the full-length coding sequence of PRO347. Was synthesized.

1쌍의 PCR 프라이머(정방향 및 역방향)를 합성하였다:One pair of PCR primers (forward and reverse) were synthesized:

정방향 PCR 프라이머Forward PCR Primer

5'-AGGAACTTCTGGATCGGGCTCACC-3' (서열번호 29)5'-AGGAACTTCTGGATCGGGCTCACC-3 '(SEQ ID NO: 29)

역방향 PCR 프라이머Reverse PCR primers

5'-GGGTCTGGGCCAGGTGGAAGAGAG-3' (서열번호 30)5'-GGGTCTGGGCCAGGTGGAAGAGAG-3 '(SEQ ID NO: 30)

추가로 하기의 뉴클레오티드 서열을 갖는 합성 올리고뉴클레오티드 혼성화 프로브를 DNA39499 컨센서스 서열로부터 제조하였다.In addition, synthetic oligonucleotide hybridization probes having the following nucleotide sequences were prepared from the DNA39499 consensus sequence.

혼성화 프로브Hybridization probe

5'-GCCAAGGACTCCTTCCGCTGGGCCACAGGGGAGCACCAGGCCTTC-3' (서열번호 31)5'-GCCAAGGACTCCTTCCGCTGGGCCACAGGGGAGCACCAGGCCTTC-3 '(SEQ ID NO: 31)

전장 클론의 공급원을 찾을 목적으로 몇 개의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 상기 확인한 PCR 프라이머쌍을 사용한 PCR 증폭에 의해 라이브러리의 DNA를 스크리닝하였다. 그 후, 양성 라이브러리를 사용함으로써 프로브 올리고뉴클레오티드 및 PCR 프라이머들 중 하나로 PRO347 유전자를 코딩하는 클론을 단리하였다. cDNA 라이브러리 제조용 RNA는 인간 태아의 신장 조직(LIB228)으로부터 단리하였다.The DNA of the library was screened by PCR amplification using the PCR primer pairs identified above to screen several libraries for the purpose of finding a source of full length clones. Then, clones encoding the PRO347 gene with one of the probe oligonucleotides and PCR primers were isolated by using a positive library. RNA for preparing cDNA library was isolated from kidney tissue of human fetus (LIB228).

상기한 바와 같이 단리된 클론의 DNA 서열 분석을 통하여 DNA44176-1244 (도 13, 서열번호 27) 및 이로부터 유도된 PRO347의 단백질 서열을 수득하였다.DNA sequence analysis of clones isolated as described above yielded the protein sequence of DNA44176-1244 (FIG. 13, SEQ ID NO: 27) and PRO347 derived therefrom.

DNA44176-1244의 전체 코딩 서열은 도 13 (서열번호 27)에 포함되어 있다. 클론 DNA44176-1244는 뉴클레오티드 위치 123 내지 125의 분명한 번역 개시 부위 및 뉴클레오티드 위치 1488 내지 1490의 분명한 정지 코돈을 갖는 단일 오픈 리딩 프레임을 포함한다. 예상되는 폴리펩티드 전구체는 아미노산 455개 길이이다. 도 14 (서열번호 28)에 나타낸 전장 PRO347 서열의 분석은 그 위치가 대략 상기 기재된 바와 같은 중요한 폴리펩티드 도메인의 존재를 입증한다. 도 14에 나타낸 전장 PRO347 폴리펩티드의 분석은 약 아미노산 1 내지 약 아미노산 26의 신호 펩티드, 약 아미노산 144 내지 약 아미노산 148 및 약 아미노산 243 내지 약 아미노산 247의 N-글리코실화 부위, 약 아미노산 45 내지 약 아미노산 49의 cAMP- 및 cGMP-의존성 단백질 키나아제 인산화 부위, 약 아미노산 22 내지 약 아미노산 28, 약 아미노산 99 내지 약 아미노산 105, 약 아미노산 131 내지 약 아미노산 137, 약 아미노산 201 내지 약 아미노산 207, 약 아미노산 213 내지 약 아미노산 219, 약 아미노산 287 내지 약 아미노산 293, 약 아미노산 288 내지 약 아미노산 294, 약 아미노산 331 내지 약 아미노산 337 및 약 아미노산 398 내지 약 아미노산 404의 N-미리스토일화 부위, 약 아미노산 204 내지 약 아미노산 215의 원핵생물 세포막 지질단백질 지질 부착 부위, 약 아미노산 249 내지 약 아미노산 261 및 약 아미노산 280 내지 약 아미노산 292의 EGF-유사 도메인 시스테인 패턴 시그너처 및 약 아미노산 417 내지 약 아미노산 442의 C-형 렉틴 도메인 시그너처가 존재하는 것을 입증한다. 클론 DNA44176-1244를 1997년 12월 10일에 ATCC에 기탁하여 ATCC 기탁번호 209532를 배정받았다. 도 14에 나타낸 전장 PRO347 단백질의 추정 분자량은 약 50,478 달톤이며, pI는 약 8.44이다.The entire coding sequence of DNA44176-1244 is included in FIG. 13 (SEQ ID NO: 27). Clone DNA44176-1244 includes a single open reading frame with an apparent translation initiation site at nucleotide positions 123-125 and an apparent stop codon at nucleotide positions 1488-1490. The expected polypeptide precursor is 455 amino acids long. Analysis of the full length PRO347 sequence shown in FIG. 14 (SEQ ID NO: 28) demonstrates the presence of an important polypeptide domain whose position is approximately as described above. Analysis of the full length PRO347 polypeptide shown in FIG. 14 shows a signal peptide of about amino acids 1 to about amino acid 26, an N-glycosylation site of about amino acids 144 to about amino acid 148 and about amino acids 243 to about amino acid 247, about amino acids 45 to about amino acid 49 CAMP- and cGMP-dependent protein kinase phosphorylation sites of about amino acid 22 to about amino acid 28, about amino acid 99 to about amino acid 105, about amino acid 131 to about amino acid 137, about amino acid 201 to about amino acid 207, about amino acid 213 to about amino acid 219, about amino acid 287 to about amino acid 293, about amino acid 288 to about amino acid 294, about amino acid 331 to about amino acid 337 and about amino acid 398 to about amino acid 404, the N-myristoylation site of about amino acid 204 to about amino acid 215 Biological cell membrane lipoprotein lipid attachment site, about amino acid 249 to Amino acid 261 and from about amino acid 280 to about amino acid 292 EGF- like domain cysteine pattern signature from about amino acid 417 and from about amino acid 442 to C- type lectin domain signature proves that presence. The clone DNA44176-1244 was deposited with ATCC on Dec. 10, 1997 to be assigned ATCC accession number 209532. The estimated molecular weight of the full-length PRO347 protein shown in FIG. 14 is about 50,478 Daltons and the pI is about 8.44.

전장 PRO347 폴리펩티드의 아미노산 서열 분석은 상기 폴리펩티드의 일부가 다양한 시스테인-풍부 분비 단백질에 상당한 상동성이 있음을 시사하며, 이는 PRO347이 신규 시스테인-풍부 분비 단백질일 수 있음을 의미한다.Amino acid sequence analysis of the full-length PRO347 polypeptide suggests that some of the polypeptides have significant homology to various cysteine-rich secreted proteins, which means that PRO347 can be a novel cysteine-rich secreted protein.

실시예 10: 인간 PRO357을 코딩하는 cDNA의 단리Example 10 Isolation of cDNA Encoding Human PRO357

인사이트 파마슈티칼즈(Incyte Pharmaceuticals, palo Alto, CA)에 의한 서열 발현 태그 "2452972"를 사용하여 "2452972"의 일부분과 중첩되는 EST에 대한 데이타베이스 검색을 시작하였다. 상기 실시예 1에 기재된 바와 같이 phrap을 이용하여 컨센서스 DNA 서열을 다른 EST 서열에 대해 어셈블리하였다. 상기 어셈블리된 컨센서스 서열은 본원에서 DNA37162로 지칭된다. DNA37162 컨센서스 서열을 기초로 하여, 1) 관심 서열을 포함하는 cDNA 라이브러리를 PCR에 의해 확인하고, 2) PRO357의 전장 코딩 서열의 클론을 단리하기 위한 프로브로서 사용하기 위해 올리고뉴클레오티드를 합성하였다.The sequence expression tag "2452972" by Incyte Pharmaceuticals (palo Alto, Calif.) Was used to initiate a database search for ESTs that overlap with portions of "2452972". Consensus DNA sequences were assembled for other EST sequences using phraps as described in Example 1 above. The assembled consensus sequence is referred to herein as DNA37162. Based on the DNA37162 consensus sequence, oligonucleotides were synthesized for use as 1) a cDNA library containing the sequence of interest by PCR and 2) as a probe to isolate a clone of the full-length coding sequence of PRO357.

PCR 프라이머(정방향 및 역방향)를 합성하였다:PCR primers (forward and reverse) were synthesized:

정방향 PCR 프라이머 1:Forward PCR Primer 1:

5'-CCCTCCACTGCCCCACCGACTG-3' (서열번호 34)5'-CCCTCCACTGCCCCACCGACTG-3 '(SEQ ID NO: 34)

역방향 PCR 프라이머 1:Reverse PCR Primer 1:

5'-CGGTTCTGGGGACGTTAGGGCTCG-3' (서열번호 35)5'-CGGTTCTGGGGACGTTAGGGCTCG-3 '(SEQ ID NO: 35)

정방향 PCR 프라이머 2:Forward PCR Primer 2:

5'-CTGCCCACCGTCCACCTGCCTCAAT-3' (서열번호 36)5'-CTGCCCACCGTCCACCTGCCTCAAT-3 '(SEQ ID NO: 36)

추가로 하기의 뉴클레오티드 서열을 갖는 2개의 합성 올리고뉴클레오티드 혼성화 프로브를 DNA37162 컨센서스 서열로부터 제조하였다.In addition, two synthetic oligonucleotide hybridization probes having the following nucleotide sequences were prepared from the DNA37162 consensus sequence.

혼성화 프로브 1:Hybridization Probe 1:

5'-AGGACTGCCCACCGTCCACCTGCCTCAATGGGGGCACATGCCACC-3' (서열번호 37)5'-AGGACTGCCCACCGTCCACCTGCCTCAATGGGGGCACATGCCACC-3 '(SEQ ID NO: 37)

혼성화 프로브 2:Hybridization Probe 2:

5'-ACGCAAAGCCCTACATCTAAGCCAGAGAGAGACAGGGCAGCTGGG-3' (서열번호 38)5'-ACGCAAAGCCCTACATCTAAGCCAGAGAGAGACAGGGCAGCTGGG-3 '(SEQ ID NO: 38)

전장 클론의 공급원을 찾을 목적으로 몇 개의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 상기 확인한 PCR 프라이머쌍을 사용한 PCR 증폭에 의해 라이브러리의 DNA를 스크리닝하였다. 그 후, 양성 라이브러리를 사용함으로써 프로브 올리고뉴클레오티드 및 PCR 프라이머들 중 하나로 PRO357 유전자를 코딩하는 클론을 단리하였다. cDNA 라이브러리 제조용 RNA는 인간 태아의 간 조직으로부터 단리하였다.The DNA of the library was screened by PCR amplification using the PCR primer pairs identified above to screen several libraries for the purpose of finding a source of full length clones. Thereafter, clones encoding the PRO357 gene with one of the probe oligonucleotides and PCR primers were isolated by using a positive library. RNA for preparing cDNA library was isolated from liver tissue of human fetus.

상기한 바와 같이 단리된 클론의 DNA 서열 분석을 통하여 DNA44804-1248 (도 15, 서열번호 32) 및 이로부터 유도된 PRO357의 단백질 서열을 수득하였다.DNA sequence analysis of clones isolated as described above yielded the protein sequence of DNA44804-1248 (FIG. 15, SEQ ID NO: 32) and PRO357 derived therefrom.

DNA44804-1248의 전체 코딩 서열은 도 15 (서열번호 32)에 포함되어 있다. 클론 DNA44804-1248은 뉴클레오티드 위치 137 내지 139의 분명한 번역 개시 부위 및 뉴클레오티드 위치 1931 내지 1933의 분명한 정지 코돈을 갖는 단일 오픈 리딩 프레임을 포함한다. 예상되는 폴리펩티드 전구체는 아미노산 598개 길이이다. 도 16 (서열번호 33)에 나타낸 전장 PRO357 서열의 분석은 그 위치가 대략 상기 기재된 바와 같은 중요한 폴리펩티드 도메인의 존재를 입증한다. 도 16에 나타낸 전장 PRO357 폴리펩티드의 분석은 약 아미노산 1 내지 약 아미노산 23의 신호 펩티드,약 아미노산 501 내지 약 아미노산 520의 막횡단 도메인, 약 아미노산 198 내지 약 아미노산 202, 약 아미노산 425 내지 약 아미노산 429 및 약 아미노산 453 내지 약 아미노산 457의 N-글리코실화 부위, 약 아미노산 262 내지 약 아미노산 270의 티로신 키나아제 인산화 부위, 약 아미노산 23 내지 약 아미노산 29, 약 아미노산 27 내지 약 아미노산 33, 약 아미노산 112 내지 약 아미노산 118, 약 아미노산 273 내지 약 아미노산 279, 약 아미노산 519 내지 약 아미노산 525 및 약 아미노산 565 내지 약 아미노산 571의 N-미리스토일화 부위, 약 아미노산 14 내지 약 아미노산 25의 원핵생물 세포막 지질단백질 지질 부착 부위, 약 아미노산 355 내지 약 아미노산 367의 EGF-유사 도메인 시스테인 패턴 시그너처, 및 약 아미노산 122 내지 약 아미노산 144 및 약 아미노산 194 내지 약 아미노산 216의 루이신 지퍼 패턴이 존재하는 것을 입증한다. 클론 DNA44804-1248을 1997년 12월 10일에 ATCC에 기탁하여 ATCC 기탁번호 209527을 배정받았다. 도 16에 나타낸 전장 PRO357 단백질의 추정 분자량은 약 60,030 달톤이며, pI는 약 7.24이다.The entire coding sequence of DNA44804-1248 is included in FIG. 15 (SEQ ID NO: 32). Clone DNA44804-1248 contains a single open reading frame with an explicit translation initiation site at nucleotide positions 137-139 and an apparent stop codon at nucleotide positions 1931-1933. The expected polypeptide precursor is 598 amino acids long. Analysis of the full length PRO357 sequence shown in FIG. 16 (SEQ ID NO: 33) demonstrates the presence of an important polypeptide domain whose position is approximately as described above. Analysis of the full length PRO357 polypeptide shown in FIG. 16 includes a signal peptide of about amino acids 1 to about amino acid 23, a transmembrane domain of about amino acids 501 to about amino acid 520, about amino acids 198 to about amino acids 202, about amino acids 425 to about amino acids 429, and about An N-glycosylation site of amino acids 453 to about amino acid 457, a tyrosine kinase phosphorylation site of about amino acids 262 to about amino acid 270, about amino acids 23 to about amino acids 29, about amino acids 27 to about amino acids 33, about amino acids 112 to about amino acids 118, N-myristoylation sites of about amino acids 273 to about amino acids 279, about amino acids 519 to about amino acids 525, and about amino acids 565 to about amino acids 571, prokaryotic cell membrane lipoprotein lipid attachment sites of about amino acids 14 to about amino acids 25, about amino acids 355 to about amino acid 367 EGF-like domain cyste It demonstrates that the pattern signature, and from about amino acid 122 to about amino acid 144 and a leucine zipper pattern from about amino acid 194 to about amino acid 216 is present. The clone DNA44804-1248 was deposited with the ATCC on December 10, 1997 to be assigned the ATCC accession number 209527. The estimated molecular weight of the full-length PRO357 protein shown in FIG. 16 is about 60,030 Daltons and the pI is about 7.24.

전장 PRO357 폴리펩티드의 아미노산 서열 분석은 상기 폴리펩티드의 일부가 ALS에 상당한 상동성이 있음을 시사하며, 이는 PRO357이 ALS에 관련된 신규 루이신 풍부 반복 단백질일 수 있음을 의미한다.Amino acid sequence analysis of the full length PRO357 polypeptide suggests that some of the polypeptides have significant homology to ALS, which means that PRO357 may be a novel leucine rich repeat protein related to ALS.

실시예 11: 인간 PRO715를 코딩하는 cDNA의 단리Example 11: Isolation of cDNA Encoding Human PRO715

발현 서열 태그(EST) DNA 데이타베이스(LIFESEQ(등록상표), Incyte Pharmaceuticals, palo Alto, CA)를 검색하여, 인간 TNF-α에 상동성을 나타내는 다양한 EST 서열을 찾아내었다. 이 검색 결과, Incyte EST 제5099855호를 찾아내었다.The expression sequence tag (EST) DNA database (LIFESEQ®, Incyte Pharmaceuticals, palo Alto, Calif.) Was searched to find various EST sequences showing homology to human TNF-α. As a result of this search, Incyte EST 5099855 was found.

상기 실시예 1에 기재된 바와 같이 phrap을 이용하여 컨센서스 DNA 서열을 다른 EST 서열에 대해 어셈블리하였다. 상기 어셈블리된 컨센서스 서열은 본원에서 DNA52092로 지칭된다. 상기 기재된 다양한 EST 클론의 정렬을 기초로 하여, 단일 클론(725887, 고유번호 제AA292358호)을 찾아내어 서열 분석하였다.Consensus DNA sequences were assembled for other EST sequences using phraps as described in Example 1 above. The assembled consensus sequence is referred to herein as DNA52092. Based on the alignment of the various EST clones described above, a single clone (725887, ID No. AA292358) was found and sequenced.

상기한 바와 같이 단리된 클론의 DNA 서열 분석을 통하여 DNA52722-1229 (도 17, 서열번호 39) 및 이로부터 유도된 PRO715의 단백질 서열을 수득하였다.DNA sequence analysis of clones isolated as described above yielded the protein sequence of DNA52722-1229 (FIG. 17, SEQ ID NO: 39) and PRO715 derived therefrom.

DNA52722-1229의 전체 코딩 서열은 도 17 (서열번호 39)에 포함되어 있다. 클론 DNA52722-1229는 뉴클레오티드 위치 114 내지 116의 분명한 번역 개시 부위 및 뉴클레오티드 위치 864 내지 866의 분명한 정지 코돈을 갖는 단일 오픈 리딩 프레임을 포함한다. 예상되는 폴리펩티드 전구체는 아미노산 250개 길이이다. 도 18 (서열번호 40)에 나타낸 전장 PRO715 서열의 분석은 그 위치가 대략 상기 기재된 바와 같은 중요한 폴리펩티드 도메인의 존재를 입증한다. 도 18에 나타낸 전장 PRO715 폴리펩티드의 분석은 약 아미노산 1 내지 약 아미노산 40의 신호 펩티드, 약 아미노산 124 내지 약 아미노산 128의 N-글리코실화 부위, 약 아미노산 156 내지 약 아미노산 164의 티로신 키나아제 인산화 부위, 약 아미노산 36 내지 약 아미노산 42, 약 아미노산 40 내지 약 아미노산 46, 약 아미노산 179 내지 약 아미노산 185 및 약 아미노산 242 내지 약 아미노산 248의 N-미리스토일화 부위, 및 약 아미노산 34 내지 약 아미노산 45의 원핵생물 세포막 지질단백질 지질 부착 부위가 존재하는 것을 입증한다. 클론 DNA52722-1229를 1998년 1월 7일에 ATCC에 기탁하여ATCC 기탁번호 209883을 배정받았다. 도 18에 나타낸 전장 PRO715 단백질의 추정 분자량은 약 27,433 달톤이며, pI는 약 9.85이다.The entire coding sequence of DNA52722-1229 is included in FIG. 17 (SEQ ID NO: 39). Clone DNA52722-1229 comprises a single open reading frame with an explicit translation initiation site at nucleotide positions 114-116 and an apparent stop codon at nucleotide positions 864-866. The expected polypeptide precursor is 250 amino acids long. Analysis of the full length PRO715 sequence shown in FIG. 18 (SEQ ID NO: 40) demonstrates the presence of an important polypeptide domain whose position is approximately as described above. Analysis of the full-length PRO715 polypeptide shown in FIG. 18 includes a signal peptide of about amino acids 1 to about amino acid 40, an N-glycosylation site of about amino acids 124 to about amino acid 128, a tyrosine kinase phosphorylation site of about amino acids 156 to about amino acid 164, about amino acids N-myristoylation sites of 36 to about amino acid 42, about amino acid 40 to about amino acid 46, about amino acid 179 to about amino acid 185, and about amino acid 242 to about amino acid 248, and prokaryotic cell membrane lipids of about amino acid 34 to about amino acid 45 It demonstrates the presence of protein lipid attachment sites. The clone DNA52722-1229 was deposited with the ATCC on January 7, 1998 to be assigned the ATCC accession number 209883. The estimated molecular weight of the full-length PRO715 protein shown in FIG. 18 is about 27,433 Daltons and the pi is about 9.85.

도 18 (서열번호 40)에 나타낸 전장 PRO715 서열의 분석은 상기 폴리펩티드가 종양 괴사 인자 족 단백질의 구성원에 상당한 상동성이 있음을 시사하며, 이는 PRO715가 신규 종양 괴사 인자 단백질일 수 있음을 의미한다.Analysis of the full length PRO715 sequence shown in FIG. 18 (SEQ ID NO: 40) suggests that the polypeptide has significant homology to members of the tumor necrosis factor family protein, meaning that PRO715 may be a novel tumor necrosis factor protein.

실시예 12: 인간 PRO1017을 코딩하는 cDNA의 단리Example 12 Isolation of cDNA Encoding Human PRO1017

상기 실시예 1에 기재된 바와 같이 phrap을 이용하여 컨센서스 DNA 서열을 다른 EST 서열에 대해 어셈블리하였다. 상기 어셈블리된 컨센서스 서열은 본원에서 "<consen01>"로 지칭되며, 종종 DNA53235라 불리운다. 본원에 기재된 어셈블리 및 컨센서스 서열을 기초로 하여, EST AA243086(Merck 클론 664402)을 추가로 조사 및 서열 분석하였다.Consensus DNA sequences were assembled for other EST sequences using phraps as described in Example 1 above. The assembled consensus sequence is referred to herein as "<consen01>" and is often called DNA53235. Based on the assembly and consensus sequences described herein, EST AA243086 (Merck clone 664402) was further investigated and sequenced.

상기한 바와 같이 단리된 클론의 DNA 서열 분석을 통하여 DNA56112-1379 (도 19, 서열번호 41) 및 이로부터 유도된 PRO1017의 단백질 서열을 수득하였다.DNA sequence analysis of clones isolated as described above yielded the protein sequence of DNA56112-1379 (FIG. 19, SEQ ID NO: 41) and PRO1017 derived therefrom.

DNA56112-1379의 전체 코딩 서열은 도 19 (서열번호 41)에 포함되어 있다. 클론 DNA56112-1379는 뉴클레오티드 위치 128 내지 130의 분명한 번역 개시 부위 및 뉴클레오티드 위치 1370 내지 1372의 분명한 정지 코돈을 갖는 단일 오픈 리딩 프레임을 포함한다. 예상되는 폴리펩티드 전구체는 아미노산 414개 길이이다. 도 20 (서열번호 42)에 나타낸 전장 PRO1017 서열의 분석은 그 위치가 대략 상기 기재된 바와 같은 중요한 폴리펩티드 도메인의 존재를 입증한다. 도 20에 나타낸 전장 PRO1017 폴리펩티드의 분석은 약 아미노산 1 내지 약 아미노산 31의 신호 펩티드,약 아미노산 134 내지 약 아미노산 138, 약 아미노산 209 내지 약 아미노산 213, 약 아미노산 280 내지 약 아미노산 284 및 약 아미노산 370 내지 약 아미노산 374의 N-글리코실화 부위, 약 아미노산 85 내지 약 아미노산 89 및 약 아미노산 236 내지 약 아미노산 240의 cAMP- 및 cGMP-의존성 단백질 키나아제 인산화 부위, 및 약 아미노산 77 내지 약 아미노산 83, 약 아미노산 164 내지 약 아미노산 170 및 약 아미노산 295 내지 약 아미노산 301의 N-미리스토일화 부위가 존재하는 것을 입증한다. 클론 DNA56112-1379를 1998년 5월 20일에 ATCC에 기탁하여 ATCC 기탁번호 209883을 배정받았다. 도 20에 나타낸 전장 PRO1017 단백질의 추정 분자량은 약 48,414 달톤이며, pI는 약 9.54이다.The entire coding sequence of DNA56112-1379 is included in FIG. 19 (SEQ ID NO: 41). Clones DNA56112-1379 comprise a single open reading frame with an explicit translation initiation site at nucleotide positions 128-130 and an apparent stop codon at nucleotide positions 1370-1372. The expected polypeptide precursor is 414 amino acids long. Analysis of the full length PRO1017 sequence shown in FIG. 20 (SEQ ID NO: 42) demonstrates the presence of an important polypeptide domain whose position is approximately as described above. Analysis of the full length PRO1017 polypeptide shown in FIG. 20 is a signal peptide of about amino acid 1 to about amino acid 31, about amino acid 134 to about amino acid 138, about amino acid 209 to about amino acid 213, about amino acid 280 to about amino acid 284 and about amino acid 370 to about N-glycosylation sites of amino acids 374, cAMP- and cGMP-dependent protein kinase phosphorylation sites of about amino acids 85 to about amino acids 89 and about amino acids 236 to about amino acids 240, and about amino acids 77 to about amino acids 83, about amino acids 164 to about It is demonstrated that there is an N-myristoylation site of amino acids 170 and about amino acids 295 to about amino acid 301. The clone DNA56112-1379 was deposited with the ATCC on May 20, 1998 to be assigned the ATCC accession number 209883. The estimated molecular weight of the full-length PRO1017 protein shown in FIG. 20 is about 48,414 Daltons and the pi is about 9.54.

전장 PRO1017 서열의 분석은 상기 폴리펩티드의 일부가 HNK-1 술포트랜스퍼라제와 서열 동일성이 있음을 시사하며, 이는 PRO1017이 신규 술포트랜스퍼라제일 수 있음을 의미한다.Analysis of the full length PRO1017 sequence suggests that some of the polypeptides have sequence identity with HNK-1 sulfotransferase, which means that PRO1017 may be a new sulfotransferase.

실시예 13: 인간 PRO1112를 코딩하는 cDNA의 단리Example 13: Isolation of cDNA Encoding Human PRO1112

상기 실시예 3에 기재된 독점적인 신호 서열 검색 연산법을 사용하여 DNA57702-1476을 찾아내었다. 상기 기재된 신호 서열 검색 연산법을 이용하여, 공개(예를 들어, Genbank) 및(또는) 비공개(LIFESEQ(등록상표), Incyte Pharmaceuticals, Inc., Palo Alto, CA) 데이타베이스로부터 EST 클러스터 서열을 확인할 수 있었다. 후보 서열을 생성하기 위해, 컴퓨터 프로그램 phrap(Phil Green, University of Washington, Seattle Washington)의 반복 주기를 이용하여 상기 공개 및 비공개 EST를 클러스터시키고 하나 이상의 컨센서스 서열로 어셈블리하였다. 충분한 스코어를 갖는 후보 서열을 추가로 조사하였다. 상동성 검색은 컴퓨터 프로그램 BLAST 또는 BLAST2(Altschul et al., Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996))를 이용하여 수행하였다. 공지된 단백질을 코딩하지 않는 70 (또는 몇몇 경우 90) 또는 그 이상의 BLAST 스코어를 갖는 비교물을 클러스터시키고 컨센서스 DNA 서열로 어셈블리하였다. 이로부터 얻은 컨센서스 서열을 본원에서 DNA56108이라 명명하였다.DNA57702-1476 was found using the proprietary signal sequence search algorithm described in Example 3 above. Using the signal sequence retrieval algorithm described above, EST cluster sequences are identified from public (eg Genbank) and / or private (LIFESEQ®, Incyte Pharmaceuticals, Inc., Palo Alto, CA) databases. Could. To generate candidate sequences, the public and private ESTs were clustered and assembled into one or more consensus sequences using repeat cycles from the computer program phrap (Phil Green, University of Washington, Seattle Washington). Candidate sequences with sufficient scores were further investigated. Homology searches were performed using the computer programs BLAST or BLAST2 (Altschul et al., Methods in Enzymology 266: 460-480 (1996)). Comparatives with BLAST scores of 70 (or in some cases 90) or greater that do not encode known proteins were clustered and assembled into consensus DNA sequences. The consensus sequence obtained from this was named DNA56108 herein.

본원에 제공된 발견 및 정보를 기초로 하여, 인간 신경상피 조직 라이브러리인 318 라이브러리로부터 Merck EST AA442646인 클론 650953을 추가로 조사하였다. DNA 서열 분석을 통해, PRO1112의 전장 DNA 서열을 포함하는 DNA57702-1476 (도 21, 서열번호 43)을 수득하였다.Based on the findings and information provided herein, clone 650953, Merck EST AA442646, was further investigated from the 318 library, a human neuroepithelial tissue library. DNA sequence analysis yielded DNA57702-1476 (FIG. 21, SEQ ID NO: 43) comprising the full length DNA sequence of PRO1112.

DNA57702-1476의 전체 코딩 서열은 도 21 (서열번호 43)에 포함되어 있다. 클론 DNA57702-1476은 뉴클레오티드 위치 20 내지 22의 분명한 번역 개시 부위 및 뉴클레오티드 위치 806 내지 808의 정지 코돈에서 종결되는 단일 오픈 리딩 프레임을 포함한다 (도 21). 예상되는 폴리펩티드 전구체는 아미노산 262개 길이이다 (도 22, 서열번호 44). 도 22에 나타낸 전장 PRO1112 단백질의 추정 분자량은 약 29,379 달톤이며, pI는 약 8.93이다. 도 22 (서열번호 44)에 나타낸 전장 PRO1112 서열의 분석은 그 위치가 대략 상기 기재된 바와 같은 중요한 폴리펩티드 도메인의 존재를 입증한다. 도 22에 나타낸 전장 PRO1112 폴리펩티드의 분석은 약 아미노산 1 내지 약 아미노산 13의 신호 펩티드, 약 아미노산 58 내지 약 아미노산 76, 약 아미노산 99 내지 약 아미노산 113, 약 아미노산 141 내지 약 아미노산 159 및 약아미노산 203 내지 약 아미노산 222의 막횡단 도메인, 및 약 아미노산 37 내지 약 아미노산 43, 약 아미노산 42 내지 약 아미노산 48 및 약 아미노산 229 내지 약 아미노산 235의 N-미리스토일화 부위가 존재하는 것을 입증한다. 클론 DNA57702-1476을 1998년 6월 9일에 ATCC에 기탁하여 ATCC 기탁번호 209951을 배정받았다.The entire coding sequence of DNA57702-1476 is included in FIG. 21 (SEQ ID NO: 43). Clone DNA57702-1476 contains a single open reading frame terminating at the clear translation initiation site at nucleotide positions 20-22 and at the stop codon at nucleotide positions 806-808 (FIG. 21). The expected polypeptide precursor is 262 amino acids long (FIG. 22, SEQ ID NO: 44). The estimated molecular weight of the full-length PRO1112 protein shown in FIG. 22 is about 29,379 Daltons and the pI is about 8.93. Analysis of the full length PRO1112 sequence shown in FIG. 22 (SEQ ID NO: 44) demonstrates the presence of an important polypeptide domain whose position is approximately as described above. Analysis of the full length PRO1112 polypeptide shown in FIG. 22 includes signal peptides from about amino acids 1 to about amino acid 13, about amino acids 58 to about amino acids 76, about amino acids 99 to about amino acids 113, about amino acids 141 to about amino acids 159, and about amino acids 203 to about The transmembrane domain of amino acid 222, and the N-myristoylation site of about amino acid 37 to about amino acid 43, about amino acid 42 to about amino acid 48, and about amino acid 229 to about amino acid 235. The clone DNA57702-1476 was deposited with the ATCC on June 9, 1998 and assigned the ATCC accession number 209951.

도 22 (서열번호 44)에 나타낸 전장 서열의 WU-BLAST2 서열 정렬 분석을 이용하는 데이호프 데이타베이스 (버전 35.45 SwissProt 35)의 분석은 PRO1112 아미노산 서열과 데이호프 서열 MTY20B11_13 (미코박테리움 튜베르쿨로시스 페티드), F64471, AE000690_6, XLU16364_1, E43259 (H+-수송 ATP 합성효소) 및 PIGSLADRXE_1 (MHC 클래스 II 조직상용성 항원) 사이에 상당한 서열 동일성이 있음을 입증하였다.Analysis of the Dayhof database (version 35.45 SwissProt 35) using the WU-BLAST2 sequence alignment analysis of the full length sequence shown in FIG. 22 (SEQ ID NO: 44) shows that the PRO1112 amino acid sequence and the Dayhof sequence MTY20B11_13 (Mycobacterium tuberculosis petti) D), F64471, AE000690_6, XLU16364_1, E43259 (H + -transporting ATP synthase) and PIGSLADRXE_1 (MHC class II histocompatibility antigens) demonstrated significant sequence identity.

실시예 14: 인간 PRO509를 코딩하는 cDNA의 단리Example 14 Isolation of cDNA Encoding Human PRO509

PRO509에 대한 cDNA(또한, HVEM이라 불리움)를 단리하기 위해, TNFR 족의 구성원과 어느정도 상동성을 나타내는 EST 서열(진뱅크 좌위 AA021617) 기재의 합성 올리고뉴클레오티드 프로브로 혼성화하여 인간 망막 cDNA의 박테리오파지 라이브러리(Clontech로부터 상업적으로 입수가능)를 스크리닝하였다. 5개의 양성 클론(1.8 내지 1.9kb의 cDNA 삽입체 포함)을 cDNA 라이브러리에서 찾아내고, 상기 혼성화 프로브를 PCR 프라이머로 이용하는 PCR에 의해 상기 양성 클론이 특이적인 것임을 확인하였다. 각각의 상기 5개 양성 클론을 포함하는 단일 파지 플라크를 제한 희석법으로 단리하고, 위자드 람다 프렙(Wizard Lambda prep) DNA 정제 키트(Promega로부터 상업적으로 입수 가능)를 이용하여 DNA를 정제하였다.To isolate the cDNA for PRO509 (also called HVEM), it synthesizes with a synthetic oligonucleotide probe based on an EST sequence (Genbank locus AA021617) that exhibits some homology with members of the TNFR family to produce a bacteriophage library of human retinal cDNA ( Commercially available from Clontech). Five positive clones (including cDNA inserts of 1.8 to 1.9 kb) were found in the cDNA library and the positive clones were confirmed to be specific by PCR using the hybridization probe as a PCR primer. Single phage plaques containing each of these five positive clones were isolated by limiting dilution and DNA was purified using the Wizard Lambda prep DNA purification kit (commercially available from Promega).

박테리오파지 클론 5개 중 3개의 cDNA 삽입체를 EcoRI으로 절단하여 벡터로부터 잘라내고, 겔-정제한 후, pRK5 벡터에 서브클로닝하여 양쪽 가닥 모두를 서열 분석하였다. 상기 3개의 클론은 동일한 오픈 리딩 프레임(클론 중 1개에서 나타나는 인트론 제외)을 함유하였다.Three cDNA inserts out of five bacteriophage clones were digested with EcoRI, cut out of the vector, gel-purified and subcloned into the pRK5 vector to sequence both strands. The three clones contained the same open reading frame (except introns appearing in one of the clones).

DNA50148(HVEM)의 전체 서열은 도 23 (서열번호 45)에 기재되어 있다. 상기 cDNA는 뉴클레오티드 위치 82 내지 84의 ATG 코돈에 번역 개시 부위가 존재하는 오픈 리딩 프레임을 함유하였다. 이 오픈 리딩 프레임은 뉴클레오티드 위치 931 내지 933의 TGA 종결 코돈에서 끝난다.The full sequence of DNA50148 (HVEM) is described in FIG. 23 (SEQ ID NO: 45). The cDNA contained an open reading frame with a translation initiation site in the ATG codon at nucleotide positions 82-84. This open reading frame ends at the TGA termination codon at nucleotide positions 931-933.

전장 PRO509(HVEM)의 예상되는 아미노산 서열은 도 24 (서열번호 46)에 나타낸 바와 같이 283개의 아미노산을 함유한다. 도 24에 나타낸 전장 PRO509 단백질의 추정 분자량은 약 30,420 달톤이며, pI는 약 7.34이다. 도 24 (서열번호 46)에 나타낸 전장 PRO509 서열의 분석은 그 위치가 대략 상기 기재된 바와 같은 중요한 폴리펩티드 도메인의 존재를 입증한다. 도 24에 나타낸 전장 PRO509 폴리펩티드의 분석은 약 아미노산 1 내지 약 아미노산 36의 신호 펩티드, 약 아미노산 203 내지 약 아미노산 222의 막횡단 도메인, 약 아미노산 110 내지 약 아미노산 114 및 약 아미노산 173 내지 약 아미노산 177의 N-글리코실화 부위, 및 약 아미노산 81 내지 약 아미노산 87, 약 아미노산 89 내지 약 아미노산 95, 약 아미노산 104 내지 약 아미노산 110, 약 아미노산 120 내지 약 아미노산 126, 약 아미노산 153 내지 약 아미노산 159, 약 아미노산 193 내지 약 아미노산 199, 약 아미노산 195 내지 약 아미노산 201 및 약 아미노산 220 내지 약 아미노산 226의 N-미리스토일화 부위가존재하는 것을 입증한다.The expected amino acid sequence of full length PRO509 (HVEM) contains 283 amino acids as shown in FIG. 24 (SEQ ID NO: 46). The estimated molecular weight of the full-length PRO509 protein shown in FIG. 24 is about 30,420 Daltons and the pI is about 7.34. Analysis of the full length PRO509 sequence shown in FIG. 24 (SEQ ID NO: 46) demonstrates the presence of an important polypeptide domain whose position is approximately as described above. Analysis of the full-length PRO509 polypeptide shown in FIG. 24 shows a signal peptide of about amino acid 1 to about amino acid 36, a transmembrane domain of about amino acid 203 to about amino acid 222, N of about amino acid 110 to about amino acid 114 and about amino acid 173 to about amino acid 177. A glycosylation site, and about amino acids 81 to about amino acids 87, about amino acids 89 to about amino acids 95, about amino acids 104 to about amino acids 110, about amino acids 120 to about amino acids 126, about amino acids 153 to about amino acids 159, about amino acids 193 to N-myristoylation sites of about amino acid 199, about amino acid 195 to about amino acid 201 and about amino acid 220 to about amino acid 226 are present.

이 서열은 상기 문헌(Montgomery et al.)에 보고된 PRO509(HVEM) 서열과 적어도 2개의 아미노산이 다르다(코돈 108은 세린을 코딩하고 코돈 140은 알라닌을 코딩함). PRO509(HVEM)의 세포질 영역 58개의 아미노산과 기타 인간 TNF 수용체 족으로 공지된 구성원과의 정렬(ALIGN 프로그램을 이용함) 결과도 어느정도 유사성을 나타내었며, 특히 CD40(12개의 동일한 잔기) 및 LT-베타 수용체(11개의 동일한 잔기)에 대해 유사성을 나타내었다.This sequence differs from the PRO509 (HVEM) sequence reported in Montgomery et al. At least two amino acids (codon 108 encodes serine and codon 140 encodes alanine). The alignment of the 58 amino acids of the cytoplasmic region of PRO509 (HVEM) with members known to other human TNF receptor families (using the ALIGN program) also showed some similarities, especially CD40 (12 identical residues) and LT-beta receptors. Similarity was shown for (11 identical residues).

실시예 15: 인간 PRO853을 코딩하는 cDNA의 단리Example 15 Isolation of cDNA Encoding Human PRO853

상기 실시예 1에 기재된 바와 같이 phrap을 이용하여 컨센서스 DNA 서열을 다른 EST 서열에 대해 어셈블리하였다. 분석자는 단일 Incyte EST 클론 제2645134호를 찾아내었다. Incyte 2645134 서열을 상기 논의한 EST 서열의 공급원을 사용하여 가능한 한 컨센서스 서열을 신장시키기 위해 BLAST와 phrap의 반복 사이클을 이용하여 이 컨센서스 서열을 신장시켰다. 신장 및 어셈블리된 컨센서스 서열은 본원에서 "<consen01>" 또는 DNA43050이라 불리운다. DNA43050 컨센서스 서열을 기초로 하여, 1) 관심 서열을 포함하는 cDNA 라이브러리를 PCR에 의해 확인하고, 2) PRO853의 전장 코딩 서열의 클론을 단리하기 위한 프로브로서 사용하기 위해 올리고뉴클레오티드를 합성하였다.Consensus DNA sequences were assembled for other EST sequences using phraps as described in Example 1 above. The analyst found a single Incyte EST clone No. 2645134. This consensus sequence was stretched using a repeat cycle of BLAST and phrap to stretch the Incyte 2645134 sequence as far as possible using the source of EST sequences discussed above. Renal and assembled consensus sequences are referred to herein as "<consen01>" or DNA43050. Based on the DNA43050 consensus sequence, oligonucleotides were synthesized for use as 1) a cDNA library containing the sequence of interest by PCR and 2) as a probe to isolate a clone of the full-length coding sequence of PRO853.

1쌍의 PCR 프라이머(정방향 및 역방향)를 합성하였다:One pair of PCR primers (forward and reverse) were synthesized:

정방향 PCR 프라이머(43050.f1)Forward PCR Primer (43050.f1)

5'-CTTCATGGCCTTGGACTTGGCCAG-3' (서열번호 49)5'-CTTCATGGCCTTGGACTTGGCCAG-3 '(SEQ ID NO: 49)

역방향 PCR 프라이머(43050.r1)Reverse PCR Primer (43050.r1)

5'-ACGCCAGTGGCCTCAAGCTGGTTG-3' (서열번호 50)5'-ACGCCAGTGGCCTCAAGCTGGTTG-3 '(SEQ ID NO: 50)

추가로 하기의 뉴클레오티드 서열을 갖는 합성 올리고뉴클레오티드 혼성화 프로브를 DNA43050 컨센서스 서열로부터 제조하였다.In addition, synthetic oligonucleotide hybridization probes having the following nucleotide sequences were prepared from the DNA43050 consensus sequence.

혼성화 프로브Hybridization probe

5'-CTTTCTGAGCTCTGAGCCACGGTTGGACATCCTCATCCACAATGC-3' (서열번호 51)5'-CTTTCTGAGCTCTGAGCCACGGTTGGACATCCTCATCCACAATGC-3 '(SEQ ID NO: 51)

전장 클론의 공급원을 찾을 목적으로 몇 개의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 상기 확인한 PCR 프라이머쌍을 사용한 PCR 증폭에 의해 라이브러리의 DNA를 스크리닝하였다. 그 후, 양성 라이브러리를 사용함으로써 프로브 올리고뉴클레오티드 및 PCR 프라이머들 중 하나로 PRO853 유전자를 코딩하는 클론을 단리하였다. cDNA 라이브러리 제조용 RNA는 인간 태아의 신장 조직(LIB228)으로부터 단리하였다.The DNA of the library was screened by PCR amplification using the PCR primer pairs identified above to screen several libraries for the purpose of finding a source of full length clones. Then, clones encoding the PRO853 gene with one of the probe oligonucleotides and PCR primers were isolated by using a positive library. RNA for preparing cDNA library was isolated from kidney tissue of human fetus (LIB228).

상기한 바와 같이 단리된 클론의 DNA 서열 분석을 통하여 DNA48227-1350 (도 25, 서열번호 47) 및 이로부터 유도된 PRO853의 단백질 서열을 수득하였다.DNA sequence analysis of clones isolated as described above yielded the protein sequence of DNA48227-1350 (FIG. 25, SEQ ID NO: 47) and PRO853 derived therefrom.

DNA48227-1350의 전체 코딩 서열은 도 25 (서열번호 47)에 포함되어 있다. 클론 DNA48227-1350은 뉴클레오티드 위치 128 내지 130의 분명한 번역 개시 부위 및 뉴클레오티드 위치 1259 내지 1261의 분명한 정지 코돈을 갖는 단일 오픈 리딩 프레임을 포함한다. 예상되는 폴리펩티드 전구체는 아미노산 377개 길이이다. 도 26 (서열번호 48)에 나타낸 전장 PRO853 서열의 분석은 그 위치가 대략 상기 기재된 바와 같은 중요한 폴리펩티드 도메인의 존재를 입증한다. 도 26에 나타낸 전장PRO853 폴리펩티드의 분석은 약 아미노산 1 내지 약 아미노산 16의 신호 펩티드, 약 아미노산 46 내지 약 아미노산 50의 글리코사미노글리칸 부착 부위, 약 아미노산 9 내지 약 아미노산 15, 약 아미노산 29 내지 약 아미노산 35, 약 아미노산 32 내지 약 아미노산 38, 약 아미노산 43 내지 약 아미노산 49, 약 아미노산 124 내지 약 아미노산 130 및 약 아미노산 312 내지 약 아미노산 318의 N-미리스토일화 부위, 약 아미노산 118 내지 약 아미노산 129의 원핵생물 세포막 지질단백질 지질 부착 부위, 및 약 아미노산 37 내지 약 아미노산 50 및 약 아미노산 114 내지 약 아미노산 125의 단쇄 알콜 데히드로게나제 족 부위가 존재하는 것을 입증한다. 클론 DNA48227-1350을 1998년 4월 28일에 ATCC에 기탁하여 ATCC 기탁번호 209812를 배정받았다. 도 26에 나타낸 전장 PRO853 단백질의 추정 분자량은 약 40,849 달톤이며, pI는 약 7.98이다.The entire coding sequence of DNA48227-1350 is included in FIG. 25 (SEQ ID NO: 47). Clone DNA48227-1350 contains a single open reading frame with an explicit translation initiation site at nucleotide positions 128-130 and an apparent stop codon at nucleotide positions 1259-1261. The expected polypeptide precursor is 377 amino acids long. Analysis of the full length PRO853 sequence shown in FIG. 26 (SEQ ID NO: 48) demonstrates the presence of an important polypeptide domain whose position is approximately as described above. Analysis of the full length PRO853 polypeptide shown in FIG. 26 includes a signal peptide of about amino acids 1 to about amino acid 16, a glycosaminoglycan attachment site of about amino acids 46 to about amino acids 50, about amino acids 9 to about amino acids 15, about amino acids 29 to about N-myristoylation sites of amino acids 35, about amino acids 32 to about amino acids 38, about amino acids 43 to about amino acids 49, about amino acids 124 to about amino acids 130, and about amino acids 312 to about amino acids 318, about amino acids 118 to about amino acids 129 Prokaryotic cell membrane lipoprotein lipid attachment sites and short chain alcohol dehydrogenase family sites of about amino acids 37 to about amino acid 50 and about amino acids 114 to about amino acid 125 are demonstrated. The clone DNA48227-1350 was deposited with the ATCC on April 28, 1998 to be assigned the ATCC accession number 209812. The estimated molecular weight of the full-length PRO853 protein shown in FIG. 26 is about 40,849 Daltons and the pI is about 7.98.

실시예 16: 인간 PRO882를 코딩하는 cDNA의 단리Example 16: Isolation of cDNA Encoding Human PRO882

PRO882(DNA58125)는 카디오트로핀-1과 동일하다. 상기 201 아미노산 단백질의 아미노산 서열은 공개 데이호프 데이타베이스에 고유번호 P_R83967, P_W29238 및 CTF1-HUMAN으로 존재한다. PRO882를 코딩하는 DNA58125의 뉴클레오티드 서열은 도 27 (서열번호 52)에 나타나 있다.PRO882 (DNA58125) is identical to Cardiotropin-1. The amino acid sequence of the 201 amino acid protein is present in the public Dayhof database under the identification numbers P_R83967, P_W29238 and CTF1-HUMAN. The nucleotide sequence of DNA58125 encoding PRO882 is shown in FIG. 27 (SEQ ID NO: 52).

도 28(서열번호 53)에 나타낸 전장 PRO882 서열의 분석은 그 위치가 대략 상기 기재된 바와 같은 중요한 폴리펩티드 도메인의 존재를 입증한다. 도 28에 나타낸 전장 PRO882 폴리펩티드의 분석은 약 아미노산 166 내지 약 아미노산 172 및 약 아미노산 174 내지 약 아미노산 180의 N-미리스토일화 부위, 및 약 아미노산 37 내지 약 아미노산 59의 루이신 지퍼 패턴이 존재하는 것을 입증한다. 도 28에 나타낸 전장 PRO882의 추정 분자량은 약 21,227 달톤이며, pI는 약 9.30이다. 카디오트로핀-1은 1997년 8월 21일 공개된 국제 공개 제97/30146호 및 1995년 11월 2일 공개된 국제 공개 제95/29237호에 개시되어 있다.Analysis of the full length PRO882 sequence shown in FIG. 28 (SEQ ID NO: 53) demonstrates the presence of an important polypeptide domain whose position is approximately as described above. Analysis of the full length PRO882 polypeptide shown in FIG. 28 shows that there is an N-myristoylation site of about amino acids 166 to about amino acid 172 and about amino acids 174 to about amino acid 180, and a leucine zipper pattern of about amino acids 37 to about amino acid 59. Prove it. The estimated molecular weight of the full-length PRO882 shown in FIG. 28 is about 21,227 Daltons and the pI is about 9.30. Cardiotropin-1 is disclosed in International Publication No. 97/30146 published August 21, 1997 and International Publication No. 95/29237 published November 2, 1995.

실시예 17: 유전자 증폭Example 17 Gene Amplification

본 실시예는 인간의 특정 폐암, 결장암 및(또는) 유방암의 게놈, 및(또는) 세포주에서 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 코딩하는 유전자가 증폭된다는 것을 보여준다. 이 유전자의 증폭은 유전자 생성물의 과다 발현과 관련되어 있으며, 이로써 상기 폴리펩티드들이 결장암, 폐암, 유방암 및 기타 암과 같은 특정 암의 치료에 있어서 유용한 표적임을 알 수 있다. 치료제는, 예를 들어 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 대한 쥐-인간 키메라 항체, 인간화 항체 또는 인간 항체와 같은, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 대한 길항제의 형태로 얻을 수 있다.This example is directed to PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or the genome of certain lung cancers, colon cancers, and / or breast cancers in humans. It shows that the gene encoding PRO882 is amplified. Amplification of this gene is associated with overexpression of the gene product, indicating that the polypeptides are useful targets for the treatment of certain cancers such as colon cancer, lung cancer, breast cancer and other cancers. The therapeutic agent may be, for example, a murine-human chimeric antibody, humanized antibody or human antibody against a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide, It can be obtained in the form of an antagonist against PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide.

스크리닝을 위한 출발 물질은 다양한 암으로부터 단리된 게놈 DNA였다. DNA는 형광법과 같은 방법으로 정확하게 정량하였다. 음성 대조용으로서, 10명의 건강한 정상 개체로부터 DNA를 단리하여 이를 모은 후, 건강한 개체의 유전자 복제본에 대한 분석 대조용으로 사용하였다(나타내지 않음). 5' 뉴클레아제 분석(예를들어, TaqMan™) 및 실시간 정량 PCR(예를 들어, ABI 프리즘(Prizm) 7700 서열 검출 시스템(상표명, Perkin Elmer, Applied Biosystems Division, Foster City, CA))을 이용하여 특정 암에서 잠재적으로 증폭되는 유전자를 찾아냈다. 이 결과를 이용하여, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 코딩하는 DNA가 스크리닝된 원발성 폐암 또는 결장암이나 암세포주 또는 유방암 세포주에서 과다 발현되는지 여부를 결정하였다. 표 4에 그 유형 및 단계가 기재된 종양이 있는 개체로부터 원발성 폐암을 수득하였다. 표 4에 기재된 원발성 종양을 지칭하기 위해 사용되는 약어, 및 본 실시예 전체에 걸쳐 언급되는 원발성 종양 및 세포주에 대한 설명은 본원의 상기에 기재되었다.The starting material for screening was genomic DNA isolated from various cancers. DNA was accurately quantified by the same method as fluorescence. As a negative control, DNA was isolated and collected from 10 healthy normal individuals and used as analytical control for gene copies of healthy individuals (not shown). Using 5 ′ nuclease assay (eg, TaqMan ™) and real-time quantitative PCR (eg, ABI Prism 7700 sequence detection system (tradename, Perkin Elmer, Applied Biosystems Division, Foster City, Calif.) The gene was found to be potentially amplified in certain cancers. Using these results, primary lung or colon or cancer cell lines or breast cancer cell lines screened with DNA encoding PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882. It was determined whether overexpressed at. Primary lung cancers were obtained from individuals with tumors whose types and stages are described in Table 4. The abbreviations used to refer to the primary tumors listed in Table 4, and the descriptions of the primary tumors and cell lines referred to throughout this Example, are described above herein.

택맨(TaqMan)(상표명)의 결과는 델타(Δ)Ct 단위로 기록된다. 1 단위는 1 PCR 싸이클 또는 정상에 비해 2배 증폭된 것에 상응하며, 2 단위는 4배, 3단위는 8배가 증폭된 것에 상응한다. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 코딩하는 유전자로부터 유도된 프라이머 및 택맨(상표명) 형광 프로브를 사용하여 정량화하였다. 독특한 핵산 서열을 가지며 스플라이싱으로 제거되는 인트론이 아닐 것 같은 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 영역(예를 들어, 3'-비번역 영역)이 프라이머 및 프로브를 유도하는데 바람직하다. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509,PRO853 또는 PRO882 유전자 증폭 분석에 사용된 프라이머 및 프로브(정방향, 역방향 및 프로브)는 하기와 같다:The results of TaqMan ™ are reported in delta Ct units. One unit corresponds to two-fold amplification compared to one PCR cycle or normal, two units correspond to four-fold amplification and three units to eight-fold amplification. Quantification was made using primers derived from genes encoding PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 and a Taqman fluorescent probe. Areas of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 that have a unique nucleic acid sequence and are unlikely to be spliced out 3'-untranslated region) is preferred for inducing primers and probes. The primers and probes (forward, reverse and probe) used for the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 gene amplification assays are as follows:

PRO201 (DNA30676-1223):PRO201 (DNA30676-1223):

30676.tm.f30676.tm.f

5'-CGCAGACACCCTTCTTCACA-3' (서열번호 54)5'-CGCAGACACCCTTCTTCACA-3 '(SEQ ID NO: 54)

30676.tm.r30676.tm.r

5'-CGACTCCTTTGGTCTCTTCTGG-3' (서열번호 55)5'-CGACTCCTTTGGTCTCTTCTGG-3 '(SEQ ID NO: 55)

30676.tm.p30676.tm.p

5'-CCGGGACCCCCAGGTTTTTGC-3' (서열번호 56)5'-CCGGGACCCCCAGGTTTTTGC-3 '(SEQ ID NO: 56)

PRO292 (DNA35617):PRO292 (DNA35617):

35617.tm.f35617.tm.f

5'-GATCCTGGGCGACGTCTTC-3' (서열번호 57)5'-GATCCTGGGCGACGTCTTC-3 '(SEQ ID NO: 57)

35617.tm.p35617.tm.p

5'-TCGGCCGCTACTACACTGTGTTTGACC-3' (서열번호 58)5'-TCGGCCGCTACTACACTGTGTTTGACC-3 '(SEQ ID NO: 58)

35617.tm.r35617.tm.r

5'-GCCCACCCTGTTGTTGTCA-3' (서열번호 59)5'-GCCCACCCTGTTGTTGTCA-3 '(SEQ ID NO: 59)

PRO327 (DNA38113-1230):PRO327 (DNA38113-1230):

38113.tm.f38113.tm.f

5'-CTCAAGAAGCACGCGTACTGC-3' (서열번호 60)5'-CTCAAGAAGCACGCGTACTGC-3 '(SEQ ID NO: 60)

38113.tm.p38113.tm.p

5'-CCAACCTCAGCTTCCGCCTCTACGA-3' (서열번호 61)5'-CCAACCTCAGCTTCCGCCTCTACGA-3 '(SEQ ID NO: 61)

38113.tm.r38113.tm.r

5'-CATCCAGGCTCGCCACTG-3' (서열번호 62)5'-CATCCAGGCTCGCCACTG-3 '(SEQ ID NO: 62)

PRO1265 (DNA60764-1533):PRO1265 (DNA60764-1533):

60764.tm.f160764.tm.f1

5'-TGACCTGGCAAAGGAAGAA-3' (서열번호 63)5'-TGACCTGGCAAAGGAAGAA-3 '(SEQ ID NO: 63)

60764.tm.p160764.tm.p1

5'-CAGCCACCCTCCAGTCCAAGG-3' (서열번호 64)5'-CAGCCACCCTCCAGTCCAAGG-3 '(SEQ ID NO: 64)

60764.tm.r160764.tm.r1

5'-GGGTCGTGTTTTGGAGAGA-3' (서열번호 65)5'-GGGTCGTGTTTTGGAGAGA-3 '(SEQ ID NO: 65)

PRO344 (DNA40592-1242):PRO344 (DNA40592-1242):

40592.tm.f140592.tm.f1

5'-TGGCAAGGAATGGGAACAGT-3' (서열번호 66)5'-TGGCAAGGAATGGGAACAGT-3 '(SEQ ID NO: 66)

40592.tm.p140592.tm.p1

5'-ATGCTGC CAGACCTGATCGCAGACA-3' (서열번호 67)5'-ATGCTGC CAGACCTGATCGCAGACA-3 '(SEQ ID NO: 67)

40592.tm.r140592.tm.r1

5'-G GGCAGAAATCCAGCCACT-3' (서열번호 68)5'-G GGCAGAAATCCAGCCACT-3 '(SEQ ID NO: 68)

PRO343 (DNA43318-1217):PRO343 (DNA43318-1217):

43318.tm.f143318.tm.f1

5'-TCTACATCAGCCTCTCTGCGC-3' (서열번호 69)5'-TCTACATCAGCCTCTCTGCGC-3 '(SEQ ID NO: 69)

43318.tm.p143318.tm.p1

5'-CGATCTTCTCCACCCAGGAGCGG-3' (서열번호 70)5'-CGATCTTCTCCACCCAGGAGCGG-3 '(SEQ ID NO: 70)

43318.tm.r143318.tm.r1

5'-GGAGCTGCACCCCTTGC-3' (서열번호 71)5'-GGAGCTGCACCCCTTGC-3 '(SEQ ID NO: 71)

PRO347 (DNA44176-1244):PRO347 (DNA44176-1244):

44176.tm.f144176.tm.f1

5'-CCCTTCGCCTGCTTTTGA-3' (서열번호 72)5'-CCCTTCGCCTGCTTTTGA-3 '(SEQ ID NO: 72)

44176.tm.p144176.tm.p1

5'-GCCATCTAATTGAAGCCCATCTTCCCA-3' (서열번호 73)5'-GCCATCTAATTGAAGCCCATCTTCCCA-3 '(SEQ ID NO: 73)

44176.tm.r144176.tm.r1

5'-CTGGCGGTGTCCTCTCCTT-3' (서열번호 74)5'-CTGGCGGTGTCCTCTCCTT-3 '(SEQ ID NO: 74)

PRO357 (DNA44804-1248):PRO357 (DNA44804-1248):

44804.tm.f144804.tm.f1

5'-CCTCGGTCTCCTCATCTGTGA-3' (서열번호 75)5'-CCTCGGTCTCCTCATCTGTGA-3 '(SEQ ID NO: 75)

44804.tm.p144804.tm.p1

5'-TGGCCCAGCTGACGAGCCCT-3' (서열번호 76)5'-TGGCCCAGCTGACGAGCCCT-3 '(SEQ ID NO: 76)

44804.tm.r144804.tm.r1

5'-CTCATAGGCACTCGGTTCTGG-3' (서열번호 77)5'-CTCATAGGCACTCGGTTCTGG-3 '(SEQ ID NO: 77)

PRO715 (DNA52722-1229):PRO715 (DNA52722-1229):

52722.tm.f152722.tm.f1

5'-TGGCTCCCAGCTTGGAAGA-3' (서열번호 78)5'-TGGCTCCCAGCTTGGAAGA-3 '(SEQ ID NO: 78)

52722.tm.p152722.tm.p1

5'-CAGCTCTTGGCTGTCTCCAGTATGTACCCA-3' (서열번호 79)5'-CAGCTCTTGGCTGTCTCCAGTATGTACCCA-3 '(SEQ ID NO: 79)

52722.tm.r152722.tm.r1

5'-GATGCCTCTGTTCCTGCACAT-3' (서열번호 80)5'-GATGCCTCTGTTCCTGCACAT-3 '(SEQ ID NO: 80)

PRO1017 (DNA56112-1379):PRO1017 (DNA56112-1379):

56112.tm.f156112.tm.f1

5'-CCTCCTCCGAGACTGAAAGCT-3' (서열번호 81)5'-CCTCCTCCGAGACTGAAAGCT-3 '(SEQ ID NO: 81)

56112.tm.p156112.tm.p1

5'-TCGCGTTGCTTTTTCTCGCGTG-3' (서열번호 82)5'-TCGCGTTGCTTTTTCTCGCGTG-3 '(SEQ ID NO: 82)

56112.tm.r156112.tm.r1

5'-GCGTGCGTCAGGTTCCA-3' (서열번호 83)5'-GCGTGCGTCAGGTTCCA-3 '(SEQ ID NO: 83)

PRO1112 (DNA57702-1476):PRO1112 (DNA57702-1476):

57702.tm.f157702.tm.f1

5'-GTCCCTTCACTGTTTAGAGCATGA-3' (서열번호 84)5'-GTCCCTTCACTGTTTAGAGCATGA-3 '(SEQ ID NO: 84)

57702.tm.p157702.tm.p1

5'-ACTCTCCCCCTCAACAGCCTCCTGAG-3' (서열번호 85)5'-ACTCTCCCCCTCAACAGCCTCCTGAG-3 '(SEQ ID NO: 85)

57702.tm.r157702.tm.r1

5'-GTGG TCAGGGCAGA TCCTTT-3' (서열번호 86)5'-GTGG TCAGGGCAGA TCCTTT-3 '(SEQ ID NO: 86)

PRO509 (DNA50148):PRO509 (DNA50148):

50148.tm.f150148.tm.f1

5'-GGAGGAGACAATACCCTCATTCA-3' (서열번호 87)5'-GGAGGAGACAATACCCTCATTCA-3 '(SEQ ID NO: 87)

50148.tm.p150148.tm.p1

5'-AGCAGCCGTCGCTCCAGGTATCTC-3' (서열번호 88)5'-AGCAGCCGTCGCTCCAGGTATCTC-3 '(SEQ ID NO: 88)

50148.tm.r150148.tm.r1

5'-CCA GGTGGACAGCCTCTTTC-3' (서열번호 89)5'-CCA GGTGGACAGCCTCTTTC-3 '(SEQ ID NO: 89)

PRO853 (DNA48227-1350):PRO853 (DNA48227-1350):

48227.tm.f148227.tm.f1

5'-GGCACTTCATGGTCCTTGAAA-3' (서열번호 90)5'-GGCACTTCATGGTCCTTGAAA-3 '(SEQ ID NO: 90)

48227.tm.p148227.tm.p1

5'-CGGATGTGTGTGAGGCCATGCC-3' (서열번호 91)5'-CGGATGTGTGTGAGGCCATGCC-3 '(SEQ ID NO: 91)

48227.tm.r148227.tm.r1

5'-GAAAGTAACCACGGAGGTCAAGAT-3' (서열번호 92)5'-GAAAGTAACCACGGAGGTCAAGAT-3 '(SEQ ID NO: 92)

PRO882 (DNA58125):PRO882 (DNA58125):

58125.tm.f158125.tm.f1

5'-TTCCCAGCCTCTCTTTGCTTT-3' (서열번호 93)5'-TTCCCAGCCTCTCTTTGCTTT-3 '(SEQ ID NO: 93)

58125.tm.p158125.tm.p1

5'-TGCCCCGTTCTCTTAACTCTTGGACCC-3' (서열번호 94)5'-TGCCCCGTTCTCTTAACTCTTGGACCC-3 '(SEQ ID NO: 94)

58125.tm.r158125.tm.r1

5'-TCAGACGGAGTTACCATGCAGA-3' (서열번호 95)5'-TCAGACGGAGTTACCATGCAGA-3 '(SEQ ID NO: 95)

5' 뉴클레아제 분석 반응은 실시간으로 증폭을 모니터하기 위해 Taq DNA 중합효소의 5' 엑소뉴클레아제 활성을 이용하는, 형광 PCR-기재의 기술이다. PCR 반응을 대표하는 앰플리콘을 생성하기 위해 2개의 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용한다. 3번째 올리고뉴클레오티드, 즉 프로브는 상기 2개의 PCR 프라이머 사이에 위치한 뉴클레오티드 서열을 검출하도록 고안된다. 이 프로브는 Taq DNA 중합효소에 의해 확장될 수 없으며, 리포터 형광 염료 및 켄처(quencher) 형광 염료로 표지되어 있다. 리포터 염료로부터의 어떤 레이저-유도 방출은, 이 리포터 염료와 켄칭 염료가 매우 가깝게 위치할 경우에 프로브에 있는 켄칭 염료에 의해 형광 신호가 약해진다. 증폭 반응시, Taq DNA 중합효소는 주형에 의존적인 방식으로 프로브를 절단한다. 결과의 프로브 단편은 용액 중에서 해리되어, 방출된 리포터 염료로부터의 신호에는 제2 형광체(fluorophore)의 켄칭 효과가 나타나지 않는다. 리포터 염료 1 분자는 합성된 새로운 분자 각각에 대해 유리되고, 켄칭되지 않은 염료의 검출은 데이타의 정량적 조절에 대한 기초를 제공한다.The 5 'nuclease assay reaction is a fluorescent PCR-based technique that uses the 5' exonuclease activity of Taq DNA polymerase to monitor amplification in real time. Two oligonucleotide primers are used to generate amplicons representative of the PCR reaction. The third oligonucleotide, or probe, is designed to detect the nucleotide sequence located between the two PCR primers. This probe cannot be extended by Taq DNA polymerase and is labeled with a reporter fluorescent dye and a quencher fluorescent dye. Any laser-induced emission from the reporter dye weakens the fluorescence signal by the quench dye in the probe when the reporter dye and the quench dye are located very close together. In the amplification reaction, Taq DNA polymerase cleaves the probe in a template dependent manner. The resulting probe fragment is dissociated in solution so that the signal from the released reporter dye does not show a quenching effect of the second fluorophore. Reporter dye 1 molecule is released for each new molecule synthesized, and the detection of the unquenched dye provides the basis for quantitative control of the data.

5' 뉴클레아제 분석의 절차는 ABI 프리즘 7700TM 서열 검출기와 같은 실시간 정량 PCR 장치에서 수행된다. 이 시스템은 열순환기(thermocycler), 레이저, 전하 결합 소자(CCD) 카메라 및 컴퓨터로 이루어져 있다. 이 시스템은 열순환기 상의 96-웰 포맷에서 샘플을 증폭시킨다. 증폭시 레이저-유도 형광 신호는 모든 96 웰에 대해 섬유 광학 케이블을 통해 실시간으로 수집되어 CCD에서 검출된다. 이 시스템에는 장치 구동 및 데이타 분석을 위한 소프트웨어가 포함되어 있다.The procedure for 5 'nuclease analysis is performed on a real time quantitative PCR device such as an ABI Prism 7700TM sequence detector. The system consists of a thermocycler, a laser, a charge coupled device (CCD) camera and a computer. This system amplifies the samples in a 96-well format on a thermocycler. Upon amplification, the laser-induced fluorescence signal is collected in real time via fiber optic cable for all 96 wells and detected in the CCD. The system includes software for device operation and data analysis.

5' 뉴클레아제 분석 데이타는 최초에 Ct, 즉 역치 싸이클(threshold cycle)로 표현된다. 이는 리포터 신호가 배경 수준의 형광을 초과하여 측정되는 경우의 싸이클로서 정의된다. ΔCt 값은, 암 DNA의 결과를 정상 인간 DNA의 결과와 비교할 때, 핵산 샘플에서 특정 표적 서열의 출발 복제본 수에 대한 상대적인 정량 측정값으로 사용된다.5 'nuclease assay data is initially expressed in Ct, the threshold cycle. This is defined as the cycle when the reporter signal is measured above the background level of fluorescence. The ΔCt value is used as a relative quantitative measure of the number of starting copies of a particular target sequence in a nucleic acid sample when comparing the results of cancer DNA with the results of normal human DNA.

표 4에는 본 발명의 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 화합물을 스크리닝하는데 사용된 다양한 원발성 종양의 단계, T 단계 및 N 단계가 기재되어 있다.Table 4 shows the stages, T stages, and N stages of the various primary tumors used to screen the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 compounds of the present invention. Is described.

원발성 폐 및 결장 종양 프로파일Primary Lung and Colon Tumor Profile 원발성 종양Primary tumor 단계step 기타 단계Other steps 듀크 단계Duke Steps T 단계T step N 단계N step 인간 폐 종양 AdenoCa(SRCC724)[LT1]인간 폐 종양 SqCCa(SRCC724)[LT1a]인간 폐 종양 AdenoCa(SRCC726)[LT2]인간 폐 종양 AdenoCa(SRCC727)[LT3]인간 폐 종양 AdenoCa(SRCC728)[LT4]인간 폐 종양 AdenoCa(SRCC729)[LT6]인간 폐 종양 Aden/SqCCa(SRCC730)[LT7]인간 폐 종양 AdenoCa(SRCC731)[LT9]인간 폐 종양 SqCCa(SRCC732)[LT10]인간 폐 종양 SqCCa(SRCC733)[LT11]인간 폐 종양 AdenoCa(SRCC734)[LT12]인간 폐 종양 AdenoSqCCa(SRCC735)[LT13]인간 폐 종양 SqCCa(SRCC736)[LT15]인간 폐 종양 SqCCa(SRCC737)[LT16]인간 폐 종양 SqCCa(SRCC738)[LT17]인간 폐 종양 SqCCa(SRCC739)[LT18]인간 폐 종양 SqCCa(SRCC740)[LT19]인간 폐 종양 LCCa(SRCC741)[LT21]인간 폐 AdenoCa(SRCC811)[LT22]인간 결장 AdenoCa(SRCC742)[CT2]인간 결장 AdenoCa(SRCC743)[CT3]인간 결장 AdenoCa(SRCC744)[CT8]인간 결장 AdenoCa(SRCC745)[CT10]인간 결장 AdenoCa(SRCC746)[CT12]인간 결장 AdenoCa(SRCC747)[CT14]인간 결장 AdenoCa(SRCC748)[CT15]인간 결장 AdenoCa(SRCC749)[CT16]인간 결장 AdenoCa(SRCC750)[CT17]인간 결장 AdenoCa(SRCC751)[CT1]인간 결장 AdenoCa(SRCC752)[CT4]인간 결장 AdenoCa(SRCC753)[CT5]인간 결장 AdenoCa(SRCC754)[CT6]인간 결장 AdenoCa(SRCC755)[CT7]인간 결장 AdenoCa(SRCC756)[CT9]인간 결장 AdenoCa(SRCC757)[CT11]인간 결장 AdenoCa(SRCC758)[CT18]Human Lung Tumor AdenoCa (SRCC724) [LT1] Human Lung Tumor SqCCa (SRCC724) [LT1a] Human Lung Tumor AdenoCa (SRCC726) [LT2] Human Lung Tumor AdenoCa (SRCC727) [LT3] Human Lung Tumor AdenoCa (SRCC728) [LT4] Human Lung Tumor AdenoCa (SRCC729) [LT6] Human Lung Tumor Aden / SqCCa (SRCC730) [LT7] Human Lung Tumor AdenoCa (SRCC731) [LT9] Human Lung Tumor SqCCa (SRCC732) [LT10] Human Lung Tumor SqCCa (SRCC733) [ LT11] Human Lung Tumor AdenoCa (SRCC734) [LT12] Human Lung Tumor AdenoSqCCa (SRCC735) [LT13] Human Lung Tumor SqCCa (SRCC736) [LT15] Human Lung Tumor SqCCa (SRCC737) [LT16] Human Lung Tumor SqCCa (SRCC738) [ LT17] Human Lung Tumor SqCCa (SRCC739) [LT18] Human Lung Tumor SqCCa (SRCC740) [LT19] Human Lung Tumor LCCa (SRCC741) [LT21] Human Lung AdenoCa (SRCC811) [LT22] Human Colon AdenoCa (SRCC742) [CT2] Human Colon AdenoCa (SRCC743) [CT3] Human Colon AdenoCa (SRCC744) [CT8] Human Colon AdenoCa (SRCC745) [CT10] Human Colon AdenoCa (SRCC746) [CT12] Human Colon AdenoCa (SRCC747) [CT14] Human Colon AdenoCa (SRCC748 ) [CT15] Human Colon Aden oCa (SRCC749) [CT16] Human Colon AdenoCa (SRCC750) [CT17] Human Colon AdenoCa (SRCC751) [CT1] Human Colon AdenoCa (SRCC752) [CT4] Human Colon AdenoCa (SRCC753) [CT5] Human Colon AdenoCa (SRCC754) CT6] Human Colon AdenoCa (SRCC755) [CT7] Human Colon AdenoCa (SRCC756) [CT9] Human Colon AdenoCa (SRCC757) [CT11] Human Colon AdenoCa (SRCC758) [CT18] ⅡAⅡBⅠBⅢAⅠBⅠBⅠAⅠBⅡBⅡAⅠVⅠBⅠBⅠBⅡBⅠBⅠBⅡB1AⅡAⅡBⅠBIIIAⅠBⅠBⅠAⅠBⅡBⅡAⅠVⅠBⅠBⅠBⅡBⅠBⅠBⅡB1A M1MO, R1pMO, ROM1, R2pMOMO, R1G2pMO, ROG1G3MO, ROM1MO, R1pMO, ROM1, R2pMOMO, R1G2pMO, ROG1G3MO, RO DBBABBDBC1BBC1BADBBDBBABBDBC1BBC1BADBB T1T3T2T1T2T2T1T2T2T1T2T2T2T2T2T2T2T3T1pT4pT3T3pT2T3pT3T4pT3pT3pT3pT3pT3pT3pT2pT4T3pT3T1T3T2T1T2T2T1T2T2T1T2T2T2T2T2T2T2T3T1pT4pT3T3pT2T3pT3T4pT3pT3pT3pT3pT3pT3pT2pT4T3pT3 N1N0N0N2N0N0N0N0N1N1N0N0N0N0N1N0N0N1N0N0N0N0N0N0pN0N2pN0pN1N0M0pN0pN0pN0pN2N0pN0N1N0N0N2N0N0N0N0N1N1N0N0N0N0N1N0N0N1N0N0N0N0N0N0pN0N2pN0pN1N0M0pN0pN0pN0pN2N0pN0

DNA 제조: DNA preparation :

배양된 세포주, 원발성 종양 및 정상 인간의 혈액으로부터 DNA를 제조하였다. 퀴아젠(Qiagen)사의 정제 키트, 완충액 세트 및 프로테아제를 이용하여, 제조자의 지시 및 하기 기재된 내용에 따라 DNA를 단리하였다.DNA was prepared from cultured cell lines, primary tumors and normal human blood. Using Qiagen's purification kit, buffer set and protease, DNA was isolated according to the manufacturer's instructions and as described below.

세포 배양물의 용해:Lysis of Cell Cultures:

세포를 세척하고 각 팁(tip)당 7.5×108의 농도로 트립신을 처리한 후, 4℃에서 1000rpm으로 5분 동안 원심분리하고, 1/2 부피의 PBS로 세척한 다음 다시 원심분리하였다. 펠릿을 세번째로 세척하고, 현탁된 세포를 수집하여 PBS로 2회 세척하였다. 이후에 세포를 PBS 10ml에 현탁하였다. 4℃에서 C1 완충액으로 평형화시켰다. 퀴아젠 프로테아제 #19155를 차가운 ddH2O 6.25ml로 희석하여 최종 농도를 20mg/ml로 맞춘 후, 4℃에서 평형화시켰다. 퀴아젠 RNase A 원액(100mg/ml)을 최종 농도 200㎍/ml로 희석하여 G2 완충액 10ml을 제조하였다.Cells were washed and trypsinized at a concentration of 7.5 × 10 8 per tip, then centrifuged at 1000 rpm for 5 minutes at 4 ° C., washed with 1/2 volume of PBS and then centrifuged again. The pellet was washed third, and suspended cells were collected and washed twice with PBS. Cells were then suspended in 10 ml of PBS. Equilibrate with C1 buffer at 4 ° C. Qiagen Protease # 19155 was diluted with 6.25 ml of cold ddH 2 O to bring the final concentration to 20 mg / ml and then equilibrated at 4 ° C. 10 ml of G2 buffer was prepared by diluting the Qiagen RNase A stock solution (100 mg / ml) to a final concentration of 200 μg / ml.

세포 현탁액 10ml에 C1 완충액(10ml, 4℃) 및 ddH2O(40ml, 4℃)를 가하고, 거꾸로 세워 이들을 혼합한 후, 얼음상에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 4℃의 베크만 스윙 버킷(Beckman swing bucket) 로터에서 2500rpm으로 15분 동안 원심분리하여 세포 핵을 펠릿화시켰다. 상층액을 버리고, C1 완충액(4℃) 2ml 및 ddH2O 6ml 중에서 볼텍싱하여 핵을 현탁한 후, 4℃에서 2500rpm으로 15분 동안 두번째로 원심분리하였다. 이후에 200㎕ 팁을 이용하여 잔류 완충액에 핵을 재현탁하였다. 부드럽게 볼텍싱하면서 현탁된 핵에 G2 완충액(10ml)을 가하였다. 완충액을 모두 가한 후에 30초 동안 철저히 볼텍싱하였다. 퀴아젠 프로테아제(200㎕, 상기와 같이 제조함)를 가하고, 50℃에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 세포 용해물이 투명해질 때까지 인큐베이션 및 원심분리를 반복하였다(예를 들어, 추가의 30 내지 60분 동안 인큐베이션 후, 4℃에서 3000xg로 10분동안 펠릿화시킴).C1 buffer (10 ml, 4 ° C.) and ddH 2 O (40 ml, 4 ° C.) were added to 10 ml of the cell suspension, inverted and mixed, and then incubated on ice for 10 minutes. Cell nuclei were pelleted by centrifugation at 2500 rpm for 15 minutes in a Beckman swing bucket rotor at 4 ° C. The supernatant was discarded and the nuclei were suspended by vortexing in 2 ml C1 buffer (4 ° C.) and 6 ml ddH 2 O, followed by second centrifugation at 2500 rpm for 15 minutes at 4 ° C. The nuclei were then resuspended in residual buffer using a 200 μl tip. G2 buffer (10 ml) was added to the suspended nuclei while gently vortexing. After all the buffer was added, it was thoroughly vortexed for 30 seconds. Qiagen protease (200 μl, prepared as above) was added and incubated at 50 ° C. for 60 minutes. Incubation and centrifugation were repeated until the cell lysate became clear (eg after incubation for an additional 30-60 minutes, pelleted at 3000 × g for 10 minutes at 4 ° C.).

인간 충실성 종양 샘플 준비 및 용해:Human Fidelity Tumor Sample Preparation and Lysis:

종양 샘플을 계량하고, 50ml 코니컬 튜브에 넣어 얼음에 보관하였다. 공정은 각 제조당 조직 250mg으로 제한되었다(1 팁/제조). 차가운 ddH2O 6.25ml에 희석하여 최종 농도를 20mg/ml로 함으로써 프로테아제 용액을 새로이 제조하여, 이를 4℃에 보관하였다. DNase A를 최종 농도 200㎍/ml(100mg/ml 원액)로 희석하여 G2 완충액(20ml)을 제조하였다. 에어로졸을 흡입하지 않기 위해 라미나-플로우 (laminar-flow) TC 후드에서 폴리트론의 큰 팁을 이용하여, G2 완충액 19ml 중에서 종양 조직을 균질화시켜 상온에서 보관하였다. 샘플들 사이에서, ddH2O 2L 중에서 30초씩 2회 가라앉히고, G2 완충액(50ml) 중에서 가라앉혀 폴리트론을 깨끗하게 하였다. 팁에 조직이 여전히 존재하는 경우에는 장치를 분해하여 깨끗하게 하였다.Tumor samples were weighed and stored in ice in 50 ml conical tubes. The process was limited to 250 mg of tissue per preparation (1 tip / manufacture). By diluting in 6.25 ml of cold ddH 2 O to a final concentration of 20 mg / ml, a new protease solution was prepared and stored at 4 ° C. Gasea buffer (20 ml) was prepared by diluting DNase A to a final concentration of 200 μg / ml (100 mg / ml stock). Tumor tissue was homogenized and stored at room temperature in 19 ml of G2 buffer using a large tip of polytron in a laminar-flow TC hood to avoid inhalation of the aerosol. Between samples, it was allowed to settle twice in 30 seconds in ddH 2 O 2 L and in G2 buffer (50 ml) to clear polytron. If tissue was still present at the tip, the device was disassembled and cleaned.

퀴아젠 프로테아제(상기와 같이 제조함, 1.0ml)를 가한 후, 볼텍싱하고 50℃에서 3시간 동안 인큐베이션하였다. 세포 용해물이 투명해질 때까지 인큐베이션 및 원심분리를 반복하였다(예를 들어, 추가의 30 내지 60분 동안 인큐베이션 후, 4℃에서 3000xg로 10분동안 펠릿화시킴).Qiagen protease (prepared as above, 1.0 ml) was added, followed by vortexing and incubation at 50 ° C. for 3 hours. Incubation and centrifugation were repeated until the cell lysate became clear (eg after incubation for an additional 30-60 minutes, pelleted at 3000 × g for 10 minutes at 4 ° C.).

인간 혈액 준비 및 용해:Human Blood Preparation and Dissolution:

표준 감염제 프로토콜을 이용하여 건강한 지원자로부터 혈액을 채취하여 시트르산염 용액 10ml에 넣었다. 차가운 ddH2O 6.25ml에 희석하여 최종 농도를 20mg/ml로 함으로써 프로테아제 용액을 새로이 제조하여, 이를 4℃에 보관하였다. DNase A를 100mg/ml 원액으로부터 최종 농도 200㎍/ml로 희석하여 G2 완충액을 제조하였다. 혈액(10ml)을 50ml 코니컬 튜브에 넣고, C1 완충액 10ml 및 ddH2O 30ml(모두 4℃로 미리 평형화시킴)을 가한 후, 거꾸로 세워 성분을 혼합하여 얼음상에서 10분 동안 방치하였다. 4℃의 베크만 스윙 버킷 로터에서 2500rpm으로 15분 동안 원심분리하여 핵을 펠릿화시킨 후, 상층액을 버렸다. C1 완충액(4℃) 2ml 및 ddH2O 6ml(4℃) 중에서 볼텍싱하여 핵을 현탁하였다. 펠릿이 하얗게 될 때까지 볼텍싱을 반복하였다. 이후에 200㎕ 팁을 이용하여 잔류 완충액에 핵을 재현탁하였다. 부드럽게 볼텍싱하면서 현탁된 핵에 G2 완충액(10ml)을 가한 후, 30초 동안 철저히 볼텍싱하였다. 퀴아젠 프로테아제(200㎕)를 가하고, 50℃에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 세포 용해물이 투명해질 때까지 인큐베이션 및 원심분리를 반복하였다(예를 들어, 추가의 30 내지 60분 동안 인큐베이션 후, 4℃에서 3000xg로 10분동안 펠릿화시킴).Blood was collected from healthy volunteers using standard infectious agent protocols and placed in 10 ml of citrate solution. By diluting in 6.25 ml of cold ddH 2 O to a final concentration of 20 mg / ml, a new protease solution was prepared and stored at 4 ° C. G2 buffer was prepared by diluting DNase A from 100 mg / ml stock to a final concentration of 200 μg / ml. Blood (10 ml) was placed in a 50 ml conical tube, 10 ml of C1 buffer and 30 ml of ddH 2 O (both pre-equilibrated to 4 ° C.) were added upside down, the components were mixed upside down and left on ice for 10 minutes. After pelleting the nuclei by centrifugation at 2500 rpm for 15 minutes in a Beckman swing bucket rotor at 4 ° C, the supernatant was discarded. The nuclei were suspended by vortexing in 2 ml C1 buffer (4 ° C.) and 6 ml ddH 2 O (4 ° C.). The vortexing was repeated until the pellets became white. The nuclei were then resuspended in residual buffer using a 200 μl tip. G2 buffer (10 ml) was added to the suspended nuclei with gentle vortexing and then vortexed thoroughly for 30 seconds. Qiagen protease (200 μl) was added and incubated at 50 ° C. for 60 minutes. Incubation and centrifugation were repeated until the cell lysate became clear (eg after incubation for an additional 30-60 minutes, pelleted at 3000 × g for 10 minutes at 4 ° C.).

투명한 용해물의 정제:Purification of Transparent Melt:

(1)게놈 DNA의 단리: (1) Isolation of Genomic DNA:

게놈 DNA를 QBT 완충액 10ml에 평형화시켰다(맥시 팁(maxi tip) 당 샘플 1개). QF 용출 완충액을 50℃에서 평형화시켰다. 샘플을 30초 동안 볼텍스한 후, 평형화된 팁에 로딩하여 중력의 힘으로 흐르게 하였다. 팁을 QC 완충액 15ml로 2회 세척하였다. QF 완충액 15ml을 이용하여(50℃), 실란화 및 살균된 30ml 코렉스(Corex) 튜브에 DNA를 용출시켰다. 이소프로판올(10.5ml)을 각 샘플에 가하고, 튜브를 파라핀으로 덮은 후, DNA가 침전될 때까지 거꾸로 세우는 과정을 계속반복하여 혼합하였다. 4℃의 SS-34 로터에서 15,000rpm으로 10분 동안 원심분리하여 샘플을 펠릿화시켰다. 펠릿 위치를 표시하고, 상층액을 버린 후, 70% 에탄올 10ml(4℃)을 가하였다. 4℃의 SS-34 로터에서 10,000rpm으로 10분 동안 다시 원심분리하여 샘플을 펠릿화시켰다. 펠릿의 위치를 표시하고, 상층액을 버렸다. 이후에 샘플이 과도하게 건조되지 않도록 주의하면서 튜브를 건조대에 넣고 37℃에서 10분 동안 건조시켰다.Genomic DNA was equilibrated in 10 ml of QBT buffer (1 sample per maxi tip). QF elution buffer was equilibrated at 50 ° C. The sample was vortexed for 30 seconds and then loaded into the equilibrated tip to run under gravity force. The tip was washed twice with 15 ml QC buffer. DNA was eluted into silanized and sterile 30 ml Corex tubes using 15 ml of QF buffer (50 ° C.). Isopropanol (10.5 ml) was added to each sample, the tubes were covered with paraffin, and the mixture was mixed over and over again until the DNA precipitated. Samples were pelleted by centrifugation at 15,000 rpm for 10 minutes in an SS-34 rotor at 4 ° C. The pellet position was indicated, and the supernatant was discarded and 10 ml (4 ° C.) of 70% ethanol was added. The sample was pelleted by centrifugation again at 10,000 rpm for 10 minutes in an SS-34 rotor at 4 ° C. The location of the pellets was indicated and the supernatant was discarded. The tube was then placed in a drying rack, taking care not to overdry the sample and dried at 37 ° C. for 10 minutes.

건조 후, 펠릿을 TE(pH 8.5) 1.0ml 에 용해시키고, 50℃에 1 내지 2시간 동안 방치하였다. 계속 용해되도록 샘플을 4℃에 밤새 방치하였다. 이후에, 투베르쿨린(tuberculin) 주사기의 26 게이지 바늘을 이용하여 DNA 용액을 1.5ml 튜브에 옮겼다. DNA를 절단하기 위해 상기와 같이 옮기는 과정을 5회 반복하였다. 이후에 샘플을 50℃에 1 내지 2시간 동안 방치하였다.After drying, the pellet was dissolved in 1.0 ml of TE (pH 8.5) and left at 50 ° C. for 1-2 hours. Samples were left overnight at 4 ° C. to continue dissolution. The DNA solution was then transferred to a 1.5 ml tube using a 26 gauge needle of a tuberculin syringe. The transfer process was repeated five times to cut the DNA. The sample was then left at 50 ° C. for 1-2 hours.

(2)게놈 DNA의 정량 분석 및 유전자 증폭 분석용 제제: (2) Preparations for quantitative analysis and gene amplification analysis of genomic DNA:

베크만 DU640 분광기에서 0.1ml 석영 큐벳을 이용하여, 1:20 희석(5㎕ DNA + 95㎕ ddH2O) 샘플의 표준 A260, A280분광법에 의해 각 튜브의 DNA 양을 정량하였다. A260/A280의 비율은 1.8 내지 1.9 사이였다. 이후에 각 DNA 샘플을 TE(pH 8.5)중에 추가로 희석하여 약 200ng/ml이 되게하였다. 원래의 재료가 매우 고농도(약 700ng/㎕)인 경우에는 DNA가 현탁될 때까지 50℃에 몇 시간 동안 방치하였다.The amount of DNA in each tube was quantified by standard A 260 , A 280 spectroscopy of a 1:20 dilution (5 μl DNA + 95 μl ddH 2 O) sample using 0.1 ml quartz cuvettes in a Beckman DU640 spectrometer. The ratio of A 260 / A 280 was between 1.8 and 1.9. Each DNA sample was then further diluted in TE (pH 8.5) to about 200 ng / ml. If the original material was very high (about 700 ng / μl), it was left at 50 ° C. for several hours until the DNA was suspended.

하기와 같이 변형된 제조자의 안내서를 이용하여, 희석된 재료(20 내지 600ng/ml)의 형광 DNA 정량법을 수행하였다. 이는 호퍼(Hoeffer) DyNA퀀트(Quant) 200 형광계를 약 15분 동안 예열한 후 수행하였다. 획스트(Hoechst) 염료 활성 용액(#H33258, 10㎕, 사용 12시간 내에 제조)을 1x TNE 완충액 100ml로 희석하였다. 2ml 큐벳을 형광계 용액으로 채우고 기계에 넣은 후, 기계의 영점을 잡았다. pGEM2Zf(+)(2㎕, 로트번호 360851026)을 형광계 용액 2ml에 가하여 200 단위로 조정하였다. 추가의 pGEM2Zf(+) DNA 2㎕를 시험하여 값이 400±10 단위인지 확인하였다. 이후에 각 샘플의 값을 3회 이상 측정하였다. 3회의 샘플 측정값이 서로 10% 이내의 범위일 때, 이들의 평균을 취하여 정량치로 사용하였다.Fluorescent DNA quantitation of the diluted material (20-600 ng / ml) was performed using the manufacturer's instructions modified as follows. This was done after preheating the Hopper DyNAQuant 200 fluorometer for about 15 minutes. Hoechst dye active solution (# H33258, 10 μl, prepared within 12 hours of use) was diluted with 100 ml of 1 × TNE buffer. 2 ml cuvettes were filled with a fluorometer solution and placed in the machine, then the machine was zeroed. pGEM2Zf (+) (2 μl, lot number 360851026) was added to 2 ml of the fluorometer solution and adjusted to 200 units. Additional 2 μl of pGEM2Zf (+) DNA was tested to determine if the value was 400 ± 10 units. Thereafter, the value of each sample was measured three or more times. When three sample measurements were within 10% of each other, their averages were taken and used as quantitative values.

형광계에 의해 측정된 농도를 이용하여 각 샘플의 농도가 10ng/㎕가 되도록 ddH2O로 희석하였다. 단일 택맨 플레이트 분석용 주형의 모든 샘플에 대해 동시에 이를 수행하였으며, 500 내지 1000회 분석할 수 있는 충분한 재료로 수행하였다. 단일 플레이트상에서 택맨(상표명) 프라이머 및 B-액틴과 GAPDH 프로브를 이용하여, 정상 인간 DNA 및 주형이 없는 대조용과 함께 시험을 3회 수행하였다.Diluted with ddH 2 O so that the concentration of each sample was 10 ng / μl using the concentration measured by the fluorometer. This was done simultaneously for all samples of a single Taqman plate analysis template, with sufficient material to be analyzed 500 to 1000 times. The test was performed three times with normal human DNA and template-free controls, using Taqman® primers and B-actin and GAPDH probes on a single plate.

시험 DNA로부터 감해진 정상 인간 DNA의 Ct 값이 ±1 Ct인 경우에 희석된 샘플을 사용하였다. 희석된 고품질의 게놈 DNA를 1.0ml씩 분취하여 -80℃에 보관하였다. 이후에 유전자 증폭 분석에 사용될 분취액은 4℃에 보관하였다. 각 1ml의 분취액은 8 내지 9 플레이트 또는 64회 시험에 충분하였다.Diluted samples were used when the Ct value of normal human DNA subtracted from the test DNA was ± 1 Ct. 1.0 ml of diluted high quality genomic DNA was aliquoted and stored at -80 ° C. Aliquots to be used later for gene amplification analysis were stored at 4 ° C. Each 1 ml aliquot was sufficient for 8-9 plates or 64 trials.

유전자 증폭 분석:Gene Amplification Assay:

하기의 원발성 종양에 대해 본 발명의 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는PRO882 화합물을 스크리닝하여, 결과의 ΔCt 값을 표 5에 기록하였다.The following primary tumors were screened for PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 compounds of the present invention and the resulting ΔCt values are reported in Table 5. It was.

PRO201, PRO327 및 PRO1265:PRO201, PRO327, and PRO1265:

프레임워크 지도화(framework mapping)를 이용하여 상기 최초 스크리닝으로부터 선택된 종양과 함께 PRO201(DNA30676-1223), PRO327(DNA38113-1230) 및 PRO1265(DNA60764-1533)를 다시 조사하였다. 도 29 및 표 6은 본 실시예에 사용된 프레임워크 마커(framework marker)의 염색체 지도를 나타낸다. 프레임워크 마커는 매 20 메가염기(megabase)마다 위치해 있으며, 염색체의 이수성(異數性)을 제어하기 위해 사용되었다.Framework mapping was again used to examine PRO201 (DNA30676-1223), PRO327 (DNA38113-1230) and PRO1265 (DNA60764-1533) with tumors selected from the initial screening. 29 and Table 6 show chromosome maps of framework markers used in this example. Framework markers are located every 20 megabases and were used to control the chromosomal aneuploidies.

또한, 에피센터 지도화(epicenter mapping)를 이용하여 PRO201(DNA30676-1223), PRO327(DNA38113-1230) 및 PRO1265(DNA60764-1533)를 다시 조사하였다. 표 7a, 7b 및 7c에 기재된 마커는 각각 (게놈에서) DNA30676, DNA38113 및 DNA60764 부근에 가깝게 위치해 있으며, 각각의 분자가 위치하는 19번 염색체의 바로 근접한 위치에서의 상대적 증폭을 평가하는데 사용되었다. 개개의 마커들 사이의 거리는 두 마커 사이에 나타나는 방사선 붕괴의 약 1% 변화에 상응하는 붕괴 단위인 센티레이(cR)로 측정하였다. 1 cR은 대략 20 킬로염기(kilobase)에 해당한다. SHGC-35441 마커는 19번 염색체 상에서 DNA30676이 지도화되는 위치에 가장 가까운 것으로 밝혀졌으며, SHGC-33698은 DNA60764가 지도화되는 위치에 가장 가까운 것으로 밝혀졌다.In addition, PRO201 (DNA30676-1223), PRO327 (DNA38113-1230) and PRO1265 (DNA60764-1533) were again investigated using epicenter mapping. The markers described in Tables 7a, 7b and 7c were located close to DNA30676, DNA38113 and DNA60764 (in the genome), respectively, and were used to assess the relative amplification at the immediate vicinity of chromosome 19 where each molecule is located. The distance between individual markers was measured in centiray (cR), which is a unit of decay, corresponding to about a 1% change in radiation decay between two markers. 1 cR is approximately 20 kilobases. The SHGC-35441 marker was found to be closest to the location where DNA30676 is mapped on chromosome 19, and SHGC-33698 was found to be closest to the location where DNA60764 is mapped.

19번 염색체 상의 프레임워크 마커Framework Markers on Chromosome 19 19번 염색체 상의 맵 위치Map location on chromosome 19 스탠포드 인간 게놈 센터 마커 명칭Stanford Human Genome Center Marker Designation S12S12 AFMa107xc9AFMa107xc9 S50S50 SHGC-31335SHGC-31335 S105S105 SHGC-34102SHGC-34102 S155S155 SHGC-16175SHGC-16175

DNA30676을 위해 사용된 19번 염색체의 에피센터 마커Epicenter Marker of Chromosome 19 Used for DNA30676 19번 염색체 상의 맵 위치Map location on chromosome 19 스탠포드 인간 게놈 센터 마커 명칭Stanford Human Genome Center Marker Designation 다음 마커까지의 거리(cR)Distance to next marker (cR) S12S12 AFMa107xc9AFMa107xc9 2222 S16S16 SHGC-1261SHGC-1261 5353 S17S17 SHGC-2897SHGC-2897 77 S18S18 SHGC-35441SHGC-35441 5959 S19S19 SHGC-6150SHGC-6150 3333 S21S21 AFM224ye9AFM224ye9 2121 S23S23 SHGC-31478SHGC-31478 2525 S24S24 SHGC-3921SHGC-3921 2525

DNA38113을 위해 사용된 19번 염색체의 에피센터 마커Epicenter Marker of Chromosome 19 Used for DNA38113 19번 염색체 상의 맵 위치Map location on chromosome 19 스탠포드 인간 게놈 센터 마커 명칭Stanford Human Genome Center Marker Designation 다음 마커까지의 거리(cR)Distance to next marker (cR) S42S42 WI-7289WI-7289 55 S43S43 SHGC-32638SHGC-32638 2828 S44S44 SHGC-11573SHGC-11573 77 DNA38113DNA38113 -- -- S45S45 SHGC-14810SHGC-14810 3737 S46S46 AFM214YF6AFM214YF6 1515 S48S48 SHGC-36583SHGC-36583 --

DNA60764를 위해 사용된 19번 염색체의 에피센터 마커Epicenter Marker of Chromosome 19 Used for DNA60764 19번 염색체 상의 맵 위치Map location on chromosome 19 스탠포드 인간 게놈 센터 마커 명칭Stanford Human Genome Center Marker Designation 다음 마커까지의 거리(cR)Distance to next marker (cR) DNA34353DNA34353 -- S158에 지도화Map to S158 DNA40620DNA40620 -- S160에 지도화Map to S160 DNA54002DNA54002 -- S160에 지도화Map to S160 S160S160 SHGC-34723SHGC-34723 2121 DNA60764DNA60764 -- -- S161S161 SHGC-30929SHGC-30929 1515 S162S162 SHGC-10328SHGC-10328 1717 S163S163 AFMa115wg5AFMa115wg5 --

상기 기재된 PRO201, PRO327 및 PRO1265에 대한 19번 염색체상 프레임워크 마커의 ΔCt값은 선택된 종양에 대해 각각 표 8a, 8b 및 8c에 나타나 있다.The ΔCt values of the 19 chromosomal framework markers for PRO201, PRO327 and PRO1265 described above are shown in Tables 8a, 8b and 8c for selected tumors, respectively.

표 9a, 9b 및 9c는 각각 DNA30676, DNA38113 및 DNA60764에 대한 에피센터 지도화의 결과로 나타난 ΔCt값을 기재한 것이며, 이는 19번 염색체를 따라 DNA30676, DNA38113 및 DNA60764의 실제 위치에 더욱 근접한 영역에서의 상대적인 증폭을 의미한다.Tables 9a, 9b and 9c describe the ΔCt values resulting from epicenter mapping for DNA30676, DNA38113 and DNA60764, respectively, in areas closer to the actual positions of DNA30676, DNA38113 and DNA60764 along chromosome 19. Means relative amplification.

표 9c는 DNA60764에 대한 에피센터 지도화의 결과로 나타난 ΔCt값을 기재한 것이며, 이는 19번 염색체를 따라 DNA60764의 실제 위치에 더욱 근접한 영역에서의 상대적인 증폭을 의미한다. DNA34353, DNA40620 및 DNA54002는 19번 염색체에서 DNA60764와 동일한 영역으로의 지도화가 관찰되는 기타 독립적으로 확인된 분자이다.Table 9c lists the ΔCt values resulting from epicenter mapping for DNA60764, which means relative amplification in the region closer to the actual position of DNA60764 along chromosome 19. DNA34353, DNA40620 and DNA54002 are other independently identified molecules where mapping from chromosome 19 to the same region as DNA60764 is observed.

PRO292:PRO292:

또한 PRO292(DNA35617)를 프레임워크 지도화로 조사하였다. 도 30 및 표 10은 본 분석에 사용된 프레임워크 마커의 염색체 지도를 나타낸다. 프레임워크 마커는 대략 매 20 메가염기마다 위치해 있으며, 염색체의 이수성을 제어하기 위해 사용되었다.PRO292 (DNA35617) was also investigated by framework mapping. 30 and Table 10 show chromosome maps of framework markers used in this analysis. Framework markers are located approximately every 20 megabases and were used to control the chromosome aneuploidity.

DNA35617을 위해 11번 염색체 상에 사용된 프레임워크 마커Framework markers used on chromosome 11 for DNA35617 11번 염색체 상의 맵 위치Map location on chromosome 11 스탠포드 인간 게놈 센터 마커 명칭Stanford Human Genome Center Marker Designation K7K7 SHGC-14668SHGC-14668 K62K62 SHGC-31021SHGC-31021 K113K113 SHGC-6028SHGC-6028 K162K162 SHGC-11920SHGC-11920 K226K226 SHGC-6023SHGC-6023 K282K282 SHGC-9000SHGC-9000 K326K326 SHGC-12291SHGC-12291 K365K365 SHGC-10796SHGC-10796 K412K412 SHGC-6005SHGC-6005

상기 기재된 PRO292에 대한 11번 염색체 상 프레임워크 마커의 ΔCt값은 선택된 종양에 대해 표 11에 나타나 있다.The ΔCt values of the framework marker on chromosome 11 for PRO292 described above are shown in Table 11 for selected tumors.

PRO343 및 PRO882:PRO343 and PRO882:

또한, 프레임워크 지도화 및 에피센터 지도화를 이용하여 PRO343(DNA43318-1217) 및 PRO882(DNA58125)를 다시 조사하였다. 도 31 및 표 12는 본 분석에 사용된 프레임워크 마커의 염색체 지도를 나타낸다. 프레임워크 마커는 매 20 메가염기마다 위치해 있으며, 염색체의 이수성을 제어하기 위해 사용되었다. 표 13a 및 13b는 DNA43318 및 DNA58125의 지도화에 사용된 에피센터 마커를 나타낸다. 표 13a 및 13b에 나타낸 마커들은 (게놈에서) DNA43318 및 DNA58125 부근에 가깝게 위치해 있으며, 16번 염색체에서 각각의 분자가 지도화되는 곳과 바로 근접한 위치에서의 상대적 증폭을 평가하는데 사용되었다. 개개의 마커들 사이의 거리는 센티레이(cR)로 측정되었으며, 이는 대략 20 킬로염기에 해당한다. AFMa061yb5 및 SHGC-36123 마커는 각각 16번 염색체 상에서 DNA43318 및 DNA58125가 지도화되는 위치에 가장 가까운 것으로 밝혀졌다.In addition, PRO343 (DNA43318-1217) and PRO882 (DNA58125) were again investigated using framework mapping and epicenter mapping. 31 and Table 12 show the chromosomal maps of the framework markers used in this analysis. Framework markers are located every 20 megabases and were used to control the chromosome aneuploidity. Tables 13a and 13b show epicenter markers used for mapping of DNA43318 and DNA58125. The markers shown in Tables 13a and 13b are located close to DNA43318 and DNA58125 (in the genome) and were used to assess the relative amplification at positions immediately adjacent to where each molecule was mapped on chromosome 16. The distance between individual markers was measured in centirays (cR), which corresponds to approximately 20 kilobases. The AFMa061yb5 and SHGC-36123 markers were found to be closest to the locations where DNA43318 and DNA58125 are mapped on chromosome 16, respectively.

DNA43318 및 DNA58125를 위해 16번 염색체 상에 사용된 프레임워크 마커Framework markers used on chromosome 16 for DNA43318 and DNA58125 16번 염색체 상의 맵 위치Map location on chromosome 16 스탠포드 인간 게놈 센터 마커 명칭Stanford Human Genome Center Marker Designation P7P7 SHGC-2835SHGC-2835 P55P55 SHGC-9643SHGC-9643 P99P99 GATA7B02GATA7B02 P154P154 SHGC-33727SHGC-33727 P208P208 SHGC-13574SHGC-13574

DNA43318을 위해 사용된 16번 염색체의 에피센터 마커Epicenter Marker of Chromosome 16 Used for DNA43318 16번 염색체 상의 맵 위치Map location on chromosome 16 스탠포드 인간 게놈 센터 마커 명칭Stanford Human Genome Center Marker Designation 다음 마커까지의 거리(cR)Distance to next marker (cR) P106P106 AFM210yg3AFM210yg3 1515 P107P107 CHLC.GATA81B12CHLC.GATA81B12 1717 P108P108 WI-1256WI-1256 1717 DNA43318DNA43318 -- -- P109P109 AFMa061yb5AFMa061yb5 2020 P110P110 CHLC.GGAA23C09CHLC.GGAA23C09 3131 P111P111 AFMa183wd9AFMa183wd9 1212 P112P112 WI-7078WI-7078 --

DNA58125를 위해 사용된 16번 염색체의 에피센터 마커Epicenter marker of chromosome 16 used for DNA58125 16번 염색체 상의 맵 위치Map location on chromosome 16 스탠포드 인간 게놈 센터 마커 명칭Stanford Human Genome Center Marker Designation 다음 마커까지의 거리(cR)Distance to next marker (cR) P89P89 SHGC-11302SHGC-11302 2727 P90P90 EST00087EST00087 88 P92P92 SHGC-2726SHGC-2726 2323 DNA58125DNA58125 -- -- P93P93 SHGC-36123SHGC-36123 4242 P94P94 SHGC-35326SHGC-35326 2323 P95P95 IB391IB391 --

표 12에 기재된 PRO343 및 PRO882에 대한 16번 염색체 상 프레임워크 마커의 ΔCt값은 선택된 종양에 대해 표 14에 나타나 있다.The ΔCt values of the framework marker on chromosome 16 for PRO343 and PRO882 described in Table 12 are shown in Table 14 for the selected tumors.

표 15a 및 15b는 각각 DNA43318 및 DNA58125에 대한 에피센터 지도화로부터의 ΔCt값을 기재한 것이며, 이는 16번 염색체를 따라 개개 분자의 실제 위치에 더욱 근접한 영역에서의 상대적인 증폭을 의미한다.Tables 15a and 15b describe the ΔCt values from epicenter mapping for DNA43318 and DNA58125, respectively, meaning relative amplification in regions closer to the actual position of the individual molecules along chromosome 16.

PRO1017:PRO1017:

또한, 프레임워크 지도화로 PRO1017(DNA56112-1379)을 다시 조사하였다. 도 32 및 표 16은 본 분석에 사용된 프레임워크 마커의 염색체 지도를 나타낸다. 프레임워크 마커는 매 20 메가염기마다 위치해 있으며, 염색체의 이수성을 제어하기 위해 사용되었다.In addition, PRO1017 (DNA56112-1379) was again investigated by framework mapping. 32 and Table 16 show the chromosomal maps of the framework markers used in this analysis. Framework markers are located every 20 megabases and were used to control the chromosome aneuploidity.

또한, 에피센터 지도화로 PRO1017(DNA56112-1379)을 다시 조사하였다. 표 17은 DNA56112에 근접하여 위치하는 에피센터 마커를 나타낸 것이며, 이는 DNA56112가 위치하는 7번 염색체의 바로 근접한 위치에서의 상대적인 증폭을 평가하기 위해 사용되었다. 개개의 마커들 사이의 거리는 7번 염색체에서 DNA56112가 지도화되는 곳과 가장 가까운 것으로 알려진 마커의 방사선 붕괴의 약 1% 변화에 상응하는 붕괴 단위인 센티레이(cR)로 측정하였다.The epicenter mapping also examined PRO1017 (DNA56112-1379) again. Table 17 shows the epicenter markers located in close proximity to DNA56112, which was used to assess the relative amplification at the immediate vicinity of chromosome 7 where DNA56112 is located. The distance between individual markers was measured in centiray (cR), a unit of decay that corresponds to a change of about 1% of the radiation decay of the marker known to be closest to where DNA56112 is mapped on chromosome 7.

DNA56112를 위해 7번 염색체 상에 사용된 프레임워크 마커Framework markers used on chromosome 7 for DNA56112 7번 염색체 상의 맵 위치Map location on chromosome 7 스탠포드 인간 게놈 센터 마커 명칭Stanford Human Genome Center Marker Designation G11G11 xAFM210xc7xAFM210xc7 G54G54 Z38558Z38558 G113G113 WI-7675WI-7675 G164G164 SHGC-33722SHGC-33722 G205G205 WI-1004WI-1004 G254G254 AFM036XG5AFM036XG5 G302G302 WI-1841WI-1841 G358G358 SHGC-35064SHGC-35064 G419G419 Cda16c10Cda16c10

DNA56112를 위해 사용된 7번 염색체의 에피센터 마커Epicenter Marker of Chromosome 7 Used for DNA56112 7번 염색체 상의 맵 위치Map location on chromosome 7 스탠포드 인간 게놈 센터 마커 명칭Stanford Human Genome Center Marker Designation 다음 마커까지의 거리(cR)Distance to next marker (cR) G5G5 SHGC-32510SHGC-32510 4848 G6G6 sWSS918sWSS918 1919 G7G7 AFMc027xb5AFMc027xb5 1818 G8G8 SHGC-33698SHGC-33698 2323 DNA56112DNA56112 -- -- G9G9 EST00439EST00439 6363 G12G12 SHGC-30897SHGC-30897 --

표 18은 DNA56112에 대한 에피센터 지도화의 결과로 나타난 ΔCt값을 기재한 것이며, 이는 7번 염색체를 따라 DNA56112의 실제 위치에 더욱 근접한 영역에서의 상대적인 증폭을 의미한다.Table 18 lists the ΔCt values resulting from epicenter mapping for DNA56112, indicating relative amplification in regions closer to the actual location of DNA56112 along chromosome 7.

상기 기재된 DNA56112에 대한 7번 염색체의 프레임워크 마커의 ΔCt값은 선택된 종양에 대해 표 19에 나타나 있다.The ΔCt value of the framework marker of chromosome 7 for DNA56112 described above is shown in Table 19 for selected tumors.

PRO715 및 PRO853:PRO715 and PRO853:

또한, 프레임워크 지도화 및 에피센터 지도화로 PRO715(DNA52722-1229) 및 PRO853(DNA18227-1350)을 다시 조사하였다. 도 33a와 33b 및 표 20은 상기 절차에 사용된 프레임워크 마커의 염색체 위치를 나타낸다. 프레임워크 마커는 매 20 메가염기마다 위치해 있으며, 염색체의 이수성을 제어하기 위해 사용되었다. 표 21a 및 21b는 상기 절차에 사용된 에피센터 지도화 마커를 나타낸다. 에피센터 마커들은 각각 DNA52722 및 DNA48226 부근에 가깝게 위치해 있으며, DNA52722 및DNA48226의 바로 근접한 위치에서의 상대적 DNA 증폭을 측정하는데 사용되었다. 마커들 사이의 거리는 두 마커 사이에 나타나는 방사선 붕괴의 약 1% 변화에 상응하는 붕괴 단위인 센티레이로 측정하였다. 1 cR은 대략 20 킬로염기에 해당한다. 표 21a 및 21b에서, "BAC"은 세균 인공 염색체(bacterial artificial chromosome)를 의미한다. 관심 유전자를 포함하는 BAC 클론의 말단을 서열 분석하였다. 택맨(상표명, TaqMan) 프라이머와 프로브를 상기 서열로부터 제조하였으며, 이는 각각 표에 기재되어 있다. BAC 클론은 통상 100 내지 150Kb이며, 따라서 이들 프라이머 및 프로브는 종양에 대한 DNA를 조사하기 위한 가까운 마커로서 사용될 수 있다. 도 33a에서, SHGC-31370 마커는 17번 염색체에서 DNA52722가 지도화되는 곳과 가장 가까운 곳에 위치하는 것으로 밝혀졌다. 도 33b에서, SHGC-37126 마커는 17번 염색체에서 DNA48227이 지도화되는 곳과 가장 가까운 곳에 위치하는 것으로 밝혀졌다.In addition, PRO715 (DNA52722-1229) and PRO853 (DNA18227-1350) were again examined by framework mapping and epicenter mapping. 33A and 33B and Table 20 show the chromosomal location of framework markers used in the procedure. Framework markers are located every 20 megabases and were used to control the chromosome aneuploidity. Tables 21a and 21b show the epicenter mapping markers used in the procedure. Epicenter markers were located close to DNA52722 and DNA48226, respectively, and were used to measure relative DNA amplification in the immediate vicinity of DNA52722 and DNA48226. The distance between the markers was measured in centiray, the unit of decay, corresponding to about a 1% change in radiation decay between the two markers. 1 cR corresponds to approximately 20 kilobases. In Tables 21A and 21B, "BAC" refers to bacterial artificial chromosomes. The ends of the BAC clones containing the gene of interest were sequenced. Taqman ™ and TaqMan primers and probes were prepared from the sequences, each listed in the table. BAC clones are typically between 100 and 150 Kb, so these primers and probes can be used as close markers for examining DNA for tumors. In FIG. 33A, the SHGC-31370 marker was found to be located closest to where DNA52722 was mapped on chromosome 17. In FIG. 33B, the SHGC-37126 marker was found to be located closest to where DNA48227 was mapped on chromosome 17.

DNA52722 및 DNA48227을 위해 사용된 17번 염색체의 프레임워크 마커Framework marker of chromosome 17 used for DNA52722 and DNA48227 17번 염색체 상의 맵 위치Map location on chromosome 17 스탠포드 인간 게놈 센터 마커 명칭Stanford Human Genome Center Marker Designation Q4Q4 SHGC-31242SHGC-31242 Q52Q52 SHGC-35988SHGC-35988 Q110Q110 AFM200zf4AFM200zf4 Q169Q169 SHGC-32689SHGC-32689 Q206Q206 SHGC-11717SHGC-11717 Q232Q232 SHGC-32338SHGC-32338

DNA52722에 근접하여 17번 염색체에 사용된 에피센터 마커Epicenter markers used on chromosome 17 in proximity to DNA52722 17번 염색체 상의 맵 위치Map location on chromosome 17 스탠포드 인간 게놈 센터 마커 명칭Stanford Human Genome Center Marker Designation 다음 마커까지의거리(cR)Distance to next marker (cR) Q33Q33 SHGC-35547SHGC-35547 Q34까지 18 cR18 cR up to Q34 120F17FOR1120F17FOR1 BAC 서열 정방향 말단으로부터의 마커Marker from BAC Sequence Forward End 120F17FOR2120F17FOR2 BAC 서열 정방향 말단으로부터의 마커Marker from BAC Sequence Forward End DNA52722DNA52722 -- 120F17REV1120F17REV1 BAC 서열 역방향 말단으로부터의 마커Marker from BAC Sequence Reverse End 120F17REV2120F17REV2 BAC 서열 역방향 말단으로부터의 마커Marker from BAC Sequence Reverse End Q34Q34 SHGC-31370SHGC-31370

DNA48227에 근접하여 17번 염색체에 사용된 에피센터 마커Epicenter Markers Used on Chromosome 17 in Proximity to DNA48227 17번 염색체 상의 맵 위치Map location on chromosome 17 스탠포드 인간 게놈 센터 마커 명칭Stanford Human Genome Center Marker Designation 다음 마커까지의거리(cR)Distance to next marker (cR) Q74Q74 AFM238yb10AFM238yb10 33 Q73Q73 SHGC-33634SHGC-33634 33 203J20FOR1203J20FOR1 BAC 서열 정방향 말단으로부터의 마커Marker from BAC Sequence Forward End 203J20FOR2203J20FOR2 BAC 서열 정방향 말단으로부터의 마커Marker from BAC Sequence Forward End Q72Q72 SHGC-37126SHGC-37126 DNA48227DNA48227 -------- 203J20REV1203J20REV1 BAC 서열 역방향 말단으로부터의 마커Marker from BAC Sequence Reverse End 203J20REV2203J20REV2 BAC 서열 역방향 말단으로부터의 마커Marker from BAC Sequence Reverse End

표 22는 상기 기재된 DNA52722 및 DNA48227에 대한 17번 염색체의 ΔCt값을 선택된 종양에 대해 나타낸 것이다. 나타내지는 않았지만, DNA48227의 분석시 프레임워크 마커에 대한 유사한 ΔCt값이 기록되었다.Table 22 shows the ΔCt values of chromosome 17 for DNA52722 and DNA48227 described above for selected tumors. Although not shown, similar ΔCt values for framework markers were recorded in the analysis of DNA48227.

표 23은 지정된 에피센터 마커에 대한 ΔCt값을 나타낸 것이며, 이는 17번 염색체를 따라 DNA52722에 바로 근접한 위치에서의 상대적인 증폭을 의미한다.Table 23 shows the ΔCt values for the designated epicenter markers, which means relative amplification at positions immediately adjacent to DNA52722 along chromosome 17.

표 24a 및 24b는 지정된 에피센터 마커에 대한 ΔCt값을 나타낸 것이며, 이는 17번 염색체를 따라 DNA48227에 바로 근접한 위치에서 선택된 폐 종양 및 결장 종양의 상대적인 증폭을 의미한다.Tables 24a and 24b show the ΔCt values for the designated epicenter markers, which indicate the relative amplification of selected lung and colon tumors in the immediate vicinity of DNA48227 along chromosome 17.

PRO357:PRO357:

프레임워크 지도화로 상기 최초 스크리닝으로부터 선택된 종양과 함께PRO357(DNA44804-1248)을 다시 조사하였다. 도 34 및 표 25는 본 실시예에 사용된 프레임워크 마커의 염색체 지도를 나타낸다. 프레임워크 마커는 매 20 메가염기마다 위치해 있으며, 염색체의 이수성을 제어하기 위해 사용되었다.Framework mapping was again examined for PRO357 (DNA44804-1248) with tumors selected from the initial screening. 34 and Table 25 show the chromosomal maps of the framework markers used in this example. Framework markers are located every 20 megabases and were used to control the chromosome aneuploidity.

또한, 에피센터 지도화를 이용하여 PRO357(DNA44804-1248)을 다시 조사하였다. 표 26에 기재된 마커는 각각 (게놈에서) DNA44804 부근에 가깝게 위치해 있으며, 16번 염색체에서 DNA44804가 위치하는 곳과 바로 근접한 위치에서의 상대적 증폭을 평가하는데 사용되었다. 개개의 마커들 사이의 거리는 두 마커 사이에 나타나는 방사선 붕괴의 약 1% 변화에 상응하는 붕괴 단위인 센티레이(cR)로 측정하였다. 1 cR은 대략 20 킬로염기에 해당한다. SHGC-6154 마커는 16번 염색체 상에서 DNA44804가 지도화되는 위치에 가장 가까운 것으로 밝혀졌다.In addition, PRO357 (DNA44804-1248) was again investigated using epicenter mapping. The markers listed in Table 26 were each located close to DNA44804 (in the genome) and were used to assess the relative amplification at the location immediately adjacent to where the DNA44804 is located on chromosome 16. The distance between individual markers was measured in centiray (cR), which is a unit of decay, corresponding to about a 1% change in radiation decay between two markers. 1 cR corresponds to approximately 20 kilobases. The SHGC-6154 marker was found to be closest to the position where DNA44804 is mapped on chromosome 16.

DNA44804를 위한 프레임워크 마커Framework Markers for DNA44804 16번 염색체 상의 맵 위치Map location on chromosome 16 스탠포드 인간 게놈 센터 마커 명칭Stanford Human Genome Center Marker Designation P7P7 SHGC-2835SHGC-2835 P55P55 SHGC-9643SHGC-9643 P99P99 GATA7B02GATA7B02 P154P154 SHGC-33727SHGC-33727 P208P208 SHGC-13577SHGC-13577

16번 염색체의 DNA44804를 위한 에피센터 마커Epicenter Marker for DNA44804 on Chromosome 16 16번 염색체 상의 맵 위치Map location on chromosome 16 스탠포드 인간 게놈 센터 마커 명칭Stanford Human Genome Center Marker Designation 다음 마커까지의 거리(cR)Distance to next marker (cR) P1P1 AFMA139WG1AFMA139WG1 66 P3P3 SHGC-32420SHGC-32420 170 (GAP)170 (GAP) P4P4 SHGC-14817SHGC-14817 4040 P5P5 SHGC-12265SHGC-12265 44 P6P6 SHGC-6154SHGC-6154 3333 DNA44804DNA44804 -- -- P7P7 SHGC-2835SHGC-2835 1010 P8P8 SHGC-2850SHGC-2850 99 P9P9 AFM297yg5AFM297yg5 6767 P15P15 CHLC.GATA70B04CHLC.GATA70B04 --

상기 기재된 DNA44804에 대한 16번 염색체 상 프레임워크 마커의 ΔCt값은 표 27에 기재되어 있다.The ΔCt value of the framework marker on chromosome 16 for DNA44804 described above is described in Table 27.

표 28은 DNA44804에 대한 에피센터 지도화의 결과로 나타난 ΔCt값을 기재한 것이며, 이는 16번 염색체를 따라 DNA44804의 실제 위치에 더욱 근접한 영역에서의 상대적인 증폭을 의미한다.Table 28 lists the ΔCt values resulting from epicenter mapping for DNA44804, which means relative amplification in the region closer to the actual position of DNA44804 along chromosome 16.

논의 및 결론:Discussion and conclusion:

PRO201(DNA30676-1223):PRO201 (DNA30676-1223):

다양한 종양에서의 DNA30676-1223에 대한 ΔCt 값이 표 5에 기록되어 있다. 통상, 유전자 복제본 수가 2배가 되는 것을 의미하는 값인 1을 초과하는 ΔCt 값을 증폭 점수의 역치값으로 사용하였다. 표 5에는 (1) 원발성 폐 종양인 LT1a, LT3, LT6, LT7, LT9, LT10, LT11, LT13, LT15, LT16, LT17, LT18, LT19 및 LT21, (2) 원발성 결장 종양인 CT2, CT3, CT8, CT10, CT12, CT14, CT15, CT16, CT17, CT1, CT4, CT5, CT6, CT7, CT9, CT11 및 CT18, (3) 폐 종양 세포주인 Calu-1, Calu-6, H157, H441, SKMES-1, H522 및 H810, 및 (4) 결장 종양 세포주인 Colo320 및 Colo205에서, PRO201을 코딩하는 핵산 DNA30676-1223이 상당히 증폭되었음이 나타나 있다.ΔCt values for DNA30676-1223 in various tumors are reported in Table 5. Usually, ΔCt values exceeding 1, which means that the number of gene copies were doubled, were used as threshold values for amplification scores. Table 5 shows (1) primary lung tumors LT1a, LT3, LT6, LT7, LT9, LT10, LT11, LT13, LT15, LT16, LT17, LT18, LT19 and LT21, and (2) primary colon tumors CT2, CT3, CT8 , CT10, CT12, CT14, CT15, CT16, CT17, CT1, CT4, CT5, CT6, CT7, CT9, CT11 and CT18, (3) lung tumor cell lines Calu-1, Calu-6, H157, H441, SKMES- In 1, H522 and H810, and (4) colon tumor cell lines Colo320 and Colo205, the nucleic acid DNA30676-1223 encoding PRO201 is shown to be significantly amplified.

(1) 원발성 폐 종양인 LT3, LT15, LT16, LT17 및 LT18, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT2, CT3, CT8, CT10, CT12, CT14, CT15, CT16 및 CT17에서 DNA30676-1223에 대한 프레임워크 지도화에 의해 증폭이 확인되었다. DNA30676-1223에 대한 에피센터 지도화의 결과, (1) 원발성 폐 종양인 LT3, LT13, LT15, LT16 및 LT18, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT1, CT3, CT4, CT5, CT6, CT7, CT8, CT9, CT10, CT11, CT12, CT14, CT15, CT16, CT17 및 CT18에서 상당한 증폭을 확인하였다.Framework for DNA30676-1223 in (1) primary lung tumors LT3, LT15, LT16, LT17 and LT18, and (2) primary colon tumors CT2, CT3, CT8, CT10, CT12, CT14, CT15, CT16 and CT17 Amplification was confirmed by mapping. As a result of epicenter mapping for DNA30676-1223, (1) primary lung tumors LT3, LT13, LT15, LT16 and LT18, and (2) primary colon tumors CT1, CT3, CT4, CT5, CT6, CT7, CT8 Significant amplification was observed in CT9, CT10, CT11, CT12, CT14, CT15, CT16, CT17 and CT18.

반대로, 가장 가깝게 위치하는 공지된 프레임워크 마커(S50 제외)(표 8a) 또는 에피센터 마커(표 9a)의 증폭은 DNA30676-1223의 증폭에 비해 더 적게 일어났다. 이는 DNA30676-1223이 19번 염색체 상에서 특정 영역을 증폭시키는 유전자임을 강력히 시사한다.In contrast, amplification of the nearest known framework marker (except S50) (Table 8a) or epicenter marker (Table 9a) occurred less than that of DNA30676-1223. This strongly suggests that DNA30676-1223 is a gene that amplifies specific regions on chromosome 19.

DNA30676-1223의 증폭은 다양한 종양에서 나타나기 때문에, DNA30676-1223은 종양의 형성 및 생장에 중요한 역할을 할 것이다. 결국, DNA30676-1223에 의해 코딩되는 단백질(PRO201)에 대한 길항제(예를 들어, 항체)가 암의 치료에 이용될 것으로 기대된다.Since amplification of DNA30676-1223 occurs in various tumors, DNA30676-1223 will play an important role in tumor formation and growth. Eventually, it is expected that antagonists (eg, antibodies) against the protein (PRO201) encoded by DNA30676-1223 will be used in the treatment of cancer.

PRO292(DNA35617):PRO292 (DNA35617):

다양한 종양에서의 DNA35617에 대한 ΔCt 값이 표 5에 기록되어 있다. 통상, 유전자 복제본 수가 2배가 되는 것을 의미하는 값인 1을 초과하는 ΔCt 값을 증폭 점수의 역치값으로 사용하였다. 표 5에는 (1) 원발성 폐 종양인 LT1, LT1a, LT11, LT12, LT13, LT15, LT17, LT19 및 LT21, (2) 원발성 결장 종양인 CT2, CT8, CT10 및 CT14, (3) 폐 종양 세포주인 H441 및 H810, 및 (4) 결장 종양 세포주인 SW620, Colo320, HT29 및 LS174T에서, PRO292를 코딩하는 핵산 DNA35617이 상당히 증폭되었음이 나타나 있다.ΔCt values for DNA35617 in various tumors are reported in Table 5. Usually, ΔCt values exceeding 1, which means that the number of gene copies were doubled, were used as threshold values for amplification scores. Table 5 shows (1) primary lung tumors LT1, LT1a, LT11, LT12, LT13, LT15, LT17, LT19 and LT21, (2) primary colon tumors CT2, CT8, CT10 and CT14, (3) lung tumor cell lines It has been shown that in H441 and H810, and (4) colon tumor cell lines SW620, Colo320, HT29 and LS174T, nucleic acid DNA35617 encoding PRO292 was significantly amplified.

(1) 원발성 폐 종양인 LT12, LT13 및 LT16, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT2, CT8, CT10 및 CT14에서 DNA35617에 대한 프레임워크 지도화에 의해 증폭이 확인되었다. 반대로, 가장 가깝게 위치하는 공지된 프레임워크 마커(표 11)의 증폭은 DNA35617의 증폭에 비해 더 적게 일어났다. 이는 DNA35617이 11번 염색체 상에서 특정 영역을 증폭시키는 유전자임을 강력히 시사한다.Amplification was confirmed by framework mapping for DNA35617 in (1) primary lung tumors LT12, LT13 and LT16, and (2) primary colon tumors CT2, CT8, CT10 and CT14. In contrast, amplification of the closest known framework marker (Table 11) occurred less than amplification of DNA35617. This strongly suggests that DNA35617 is a gene that amplifies specific regions on chromosome 11.

DNA35617의 증폭은 다양한 종양에서 나타나기 때문에, DNA35617은 종양의 형성 및 생장에 중요한 역할을 할 것이다. 결국, DNA65617에 의해 코딩되는 단백질(PRO292)에 대한 길항제(예를 들어, 항체)가 암의 치료에 이용될 것으로 기대된다.Since amplification of DNA35617 occurs in a variety of tumors, DNA35617 will play an important role in tumor formation and growth. Eventually, it is expected that antagonists (eg, antibodies) against the protein encoded by DNA65617 (eg, antibodies) will be used for the treatment of cancer.

PRO327(DNA38113-1230):PRO327 (DNA38113-1230):

다양한 종양에서의 DNA38113-1230에 대한 ΔCt 값이 표 5에 기록되어 있다. 통상, 유전자 복제본 수가 2배가 되는 것을 의미하는 값인 1을 초과하는 ΔCt 값을 증폭 점수의 역치값으로 사용하였다. 표 5에는 (1) 원발성 폐 종양인 LT1a, LT3, LT6, LT10, LT11, LT12, LT13, LT15, LT16, LT17 및 LT19, (2) 원발성 결장 종양인 CT2, CT3, CT8, CT10, CT12, CT14, CT15, CT16, CT17, CT1, CT4, CT5, CT6, CT9, CT11 및 CT18, (3) 폐 종양 세포주인 H157, H441, H460 및 SKMES-1, 및 (4) 결장 종양 세포주인 SW620, Colo320, HCC2998 및 KM12에서, PRO327을 코딩하는 핵산 DNA38113-1230이 상당히 증폭되었음이 나타나 있다.ΔCt values for DNA38113-1230 in various tumors are reported in Table 5. Usually, ΔCt values exceeding 1, which means that the number of gene copies were doubled, were used as threshold values for amplification scores. Table 5 shows (1) primary lung tumors LT1a, LT3, LT6, LT10, LT11, LT12, LT13, LT15, LT16, LT17 and LT19, and (2) primary colon tumors CT2, CT3, CT8, CT10, CT12, CT14. , CT15, CT16, CT17, CT1, CT4, CT5, CT6, CT9, CT11 and CT18, (3) lung tumor cell lines H157, H441, H460 and SKMES-1, and (4) colon tumor cell lines SW620, Colo320, In HCC2998 and KM12, the nucleic acid DNA38113-1230 encoding PRO327 has been shown to be significantly amplified.

(1) 원발성 폐 종양인 LT10, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT2, CT3, CT8, CT10, CT12, CT14 및 CT16에서 DNA38113-1230에 대한 프레임워크 지도화에 의해 증폭이 확인되었다 (표 8b). DNA38113-1230에 대한 에피센터 지도화의 결과, (1) 원발성 폐 종양인 LT12, LT13, LT15, LT16 및 LT17, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT1, CT2, CT3, CT4, CT5, CT6, CT8, CT9, CT10, CT11, CT12, CT14, CT16 및 CT18에서 상당한 증폭을 확인하였다 (표 9b).Amplification was confirmed by framework mapping for DNA38113-1230 in (1) LT10, the primary lung tumor, and (2) CT2, CT3, CT8, CT10, CT12, CT14, and CT16, the primary colon tumors (Table 8b). . As a result of epicenter mapping for DNA38113-1230, (1) primary lung tumors LT12, LT13, LT15, LT16 and LT17, and (2) primary colon tumors CT1, CT2, CT3, CT4, CT5, CT6, CT8 Significant amplification was observed in, CT9, CT10, CT11, CT12, CT14, CT16 and CT18 (Table 9b).

S41을 제외하고, DNA38113-1230에 가장 가까운 마커의 증폭은 DNA38113-1230 그 자체의 증폭에 비해 더 적게 일어났다. 이는 DNA38113이 19번 염색체 상에서 특정 영역의 증폭을 유도하는 유전자라는 생각을 지지한다. 그러나, S41 마커(DNA38113에 근접하게 지도화되지 않음)의 증폭은 독립적인 증폭 사건이었으며, 심시어 마커 정리시의 오차일 수 있었다.Except for S41, amplification of the marker closest to DNA38113-1230 occurred less than amplification of DNA38113-1230 itself. This supports the idea that DNA38113 is a gene that induces amplification of specific regions on chromosome 19. However, amplification of the S41 marker (not mapped close to DNA38113) was an independent amplification event and could be an error in the symptom marker theorem.

DNA38113-1230의 증폭은 다양한 종양에서 나타나기 때문에, DNA38113-1230은종양의 형성 및 생장에 중요한 역할을 할 것이다. 결국, DNA38113-1230에 의해 코딩되는 단백질(PRO327)에 대한 길항제(예를 들어, 항체)가 암의 치료에 이용될 것으로 기대된다.Since amplification of DNA38113-1230 occurs in various tumors, DNA38113-1230 will play an important role in tumor formation and growth. Eventually, it is expected that antagonists (eg, antibodies) against the protein (PRO327) encoded by DNA38113-1230 will be used in the treatment of cancer.

PRO1265(DNA60764-1533):PRO1265 (DNA60764-1533):

다양한 종양에서의 DNA60764-1533에 대한 ΔCt 값이 표 5에 기록되어 있다. 통상, 유전자 복제본 수가 2배가 되는 것을 의미하는 값인 1을 초과하는 ΔCt 값을 증폭 점수의 역치값으로 사용하였다. 표 5에는 원발성 폐 종양인 LT3, LT12, LT13, LT15, LT16 및 LT17에서 PRO1265를 코딩하는 핵산 DNA60764-1533이 상당히 증폭되었음이 나타나 있다.ΔCt values for DNA60764-1533 in various tumors are reported in Table 5. Usually, ΔCt values exceeding 1, which means that the number of gene copies were doubled, were used as threshold values for amplification scores. Table 5 shows that the nucleic acid DNA60764-1533 encoding PRO1265 was significantly amplified in the primary lung tumors LT3, LT12, LT13, LT15, LT16 and LT17.

원발성 폐 종양인 LT16에서 DNA60764-1533에 대한 프레임워크 지도화에 의해 증폭이 확인되었다 (표 8c). 또한, DNA60764-1533에 대한 에피센터 지도화의 결과, (1) 원발성 폐 종양인 LT12, LT13, LT15 및 LT16, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT1, CT4, CT5, CT7 및 CT11에서 상당한 증폭을 확인하였다 (표 9b). 반대로, 가장 가깝게 위치하는 공지된 프레임워크 마커, 에피센터 마커 및 비교 서열의 증폭은 DNA60764-1533의 증폭에 비해 더 적게 일어났다. 이는 DNA60764-1533이 19번 염색체 상에서 특정 영역을 증폭시키는 유전자임을 강력히 시사한다.Amplification was confirmed by framework mapping for DNA60764-1533 in LT16, the primary lung tumor (Table 8c). In addition, epicenter mapping of DNA60764-1533 resulted in significant amplification in (1) primary lung tumors LT12, LT13, LT15 and LT16, and (2) primary colon tumors CT1, CT4, CT5, CT7 and CT11. It was confirmed (Table 9b). In contrast, amplification of the nearest known framework marker, epicenter marker and comparative sequence occurred less than amplification of DNA60764-1533. This strongly suggests that DNA60764-1533 is a gene that amplifies specific regions on chromosome 19.

DNA60764-1533의 증폭은 다양한 종양에서 나타나기 때문에, DNA60764-1533은 종양의 형성 및 생장에 중요한 역할을 할 것이다. 결국, DNA60764-1533에 의해 코딩되는 단백질(PRO1265)에 대한 길항제(예를 들어, 항체)가 암의 치료에 이용될 것으로 기대된다.Since amplification of DNA60764-1533 occurs in various tumors, DNA60764-1533 will play an important role in tumor formation and growth. Eventually, it is expected that antagonists (eg, antibodies) against the protein encoded by DNA60764-1533 (eg, antibodies) will be used for the treatment of cancer.

PRO344(DNA40592-1242):PRO344 (DNA40592-1242):

다양한 종양에서의 DNA60764-1533에 대한 ΔCt 값이 표 5에 기록되어 있다. 통상, 유전자 복제본 수가 2배가 되는 것을 의미하는 값인 1을 초과하는 ΔCt 값을 증폭 점수의 역치값으로 사용하였다. 표 5에는 (1) 원발성 폐 종양인 LT11, LT12, LT13, LT15, LT16, LT17, LT19 및 LT21, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT2, CT14, CT15, CT1, CT4, CT5 및 CT11에서 PRO344를 코딩하는 핵산 DNA40592-1242가 상당히 증폭되었음이 나타나 있다.ΔCt values for DNA60764-1533 in various tumors are reported in Table 5. Usually, ΔCt values exceeding 1, which means that the number of gene copies were doubled, were used as threshold values for amplification scores. Table 5 shows PRO344 for (1) primary lung tumors LT11, LT12, LT13, LT15, LT16, LT17, LT19 and LT21, and (2) primary colon tumors CT2, CT14, CT15, CT1, CT4, CT5 and CT11. It is shown that the nucleic acid DNA40592-1242 encoding is significantly amplified.

DNA40592-1242의 증폭은 다양한 종양에서 나타나기 때문에, 이는 종양의 형성 및 생장에 중요한 역할을 할 것이다. 결국, DNA40592-1242에 의해 코딩되는 단백질(PRO344)에 대한 길항제(예를 들어, 항체)가 암의 치료에 이용될 것으로 기대된다.Since amplification of DNA40592-1242 occurs in various tumors, it will play an important role in tumor formation and growth. As a result, it is expected that antagonists (eg, antibodies) against the protein (PRO344) encoded by DNA40592-1242 will be used in the treatment of cancer.

PRO343(DNA43318-1217):PRO343 (DNA43318-1217):

다양한 종양에서의 DNA43318-1217에 대한 ΔCt 값이 표 5에 기록되어 있다. 통상, 유전자 복제본 수가 2배가 되는 것을 의미하는 값인 1을 초과하는 ΔCt 값을 증폭 점수의 역치값으로 사용하였다. 표 5에는 (1) 원발성 폐 종양인 LT11, LT12, LT13, LT15, LT16, LT17, LT18 및 LT19, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT2, CT3, CT8, CT1O, CT12, CT14, CT15, CT16, CT17, CT4, CT5, CT7 및 CT11에서 PRO343을 코딩하는 핵산 DNA43318-1217이 상당히 증폭되었음이 나타나 있다.ΔCt values for DNA43318-1217 in various tumors are reported in Table 5. Usually, ΔCt values exceeding 1, which means that the number of gene copies were doubled, were used as threshold values for amplification scores. Table 5 shows (1) primary lung tumors LT11, LT12, LT13, LT15, LT16, LT17, LT18 and LT19, and (2) primary colon tumors CT2, CT3, CT8, CT1O, CT12, CT14, CT15, CT16, It is shown that the nucleic acid DNA43318-1217 encoding PRO343 was significantly amplified at CT17, CT4, CT5, CT7 and CT11.

(1) 원발성 폐 종양인 LT12, LT13, LT15, LT16 및 LT18, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT2, CT4, CT5, CT8, CT1O, CT14, CT15 및 CT16에서 DNA43318-1217에 대한프레임워크 지도화에 의해 증폭이 확인되었다 (표 4). 또한, DNA43318-1217에 대한 에피센터 지도화의 결과, (1) 원발성 폐 종양인 LT12, LT13, LT15 및 LT16, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT4, CT5, CT6, CT11 및 CT2에서 상당한 증폭을 확인하였다 (표 15a). 반대로, 가장 가깝게 위치하는 공지된 프레임워크 마커 및 에피센터 마커(P107 제외)의 증폭은 DNA43318-1217의 증폭에 비해 더 적게 일어났다. 이는 DNA43318-1217이 16번 염색체 상에서 특정 영역을 증폭시키는 유전자임을 강력히 시사한다.Mapping the framework for DNA43318-1217 in (1) primary lung tumors LT12, LT13, LT15, LT16 and LT18, and (2) primary colon tumors CT2, CT4, CT5, CT8, CT10, CT14, CT15 and CT16 Amplification was confirmed by (Table 4). In addition, epicenter mapping of DNA43318-1217 resulted in significant amplification in (1) primary lung tumors LT12, LT13, LT15 and LT16, and (2) primary colon tumors CT4, CT5, CT6, CT11 and CT2. It was confirmed (Table 15a). In contrast, amplification of the closest known framework marker and epicenter marker (except P107) occurred less than that of DNA43318-1217. This strongly suggests that DNA43318-1217 is a gene that amplifies specific regions on chromosome 16.

DNA43318-1217의 증폭은 다양한 종양에서 나타나기 때문에, 이는 종양의 형성 및 생장에 중요한 역할을 할 것이다. 결국, DNA43318-1217에 의해 코딩되는 단백질(PRO343)에 대한 길항제(예를 들어, 항체)가 암의 치료에 이용될 것으로 기대된다.Since amplification of DNA43318-1217 occurs in various tumors, it will play an important role in tumor formation and growth. Eventually, it is expected that antagonists (eg, antibodies) against the protein encoded by DNA43318-1217 (eg, antibodies) will be used for the treatment of cancer.

PRO347(DNA44176-1244):PRO347 (DNA44176-1244):

다양한 종양에서의 DNA44176-1244에 대한 ΔCt 값이 표 5에 기록되어 있다. 통상, 유전자 복제본 수가 2배가 되는 것을 의미하는 값인 1을 초과하는 ΔCt 값을 증폭 점수의 역치값으로 사용하였다. 표 5에는 (1) 원발성 폐 종양인 LT1, LT1a, LT3, LT6, LT9, LT10, LT11, LT12, LT13, LT15, LT17, LT19 및 LT21, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT1, CT2, CT3, CT5, CT8, CT11, CT14, CT15 및 CT16에서 PRO347을 코딩하는 핵산 DNA44176-1244가 상당히 증폭되었음이 나타나 있다. DNA44176-1244의 증폭은 다양한 종양에서 나타나기 때문에, 이는 종양의 형성 및 생장에 중요한 역할을 할 것이다. 결국, DNA44176-1244에 의해 코딩되는 단백질(PRO347)에 대한길항제(예를 들어, 항체)가 암의 치료에 이용될 것으로 기대된다.ΔCt values for DNA44176-1244 in various tumors are reported in Table 5. Usually, ΔCt values exceeding 1, which means that the number of gene copies were doubled, were used as threshold values for amplification scores. Table 5 shows (1) primary lung tumors LT1, LT1a, LT3, LT6, LT9, LT10, LT11, LT12, LT13, LT15, LT17, LT19 and LT21, and (2) primary colon tumors CT1, CT2, CT3, It is shown that the nucleic acid DNA44176-1244 encoding PRO347 was significantly amplified at CT5, CT8, CT11, CT14, CT15 and CT16. Since amplification of DNA44176-1244 occurs in various tumors, it will play an important role in tumor formation and growth. As a result, it is expected that antagonists (eg, antibodies) against the protein (PRO347) encoded by DNA44176-1244 will be used in the treatment of cancer.

PRO357(DNA44804-1248):PRO357 (DNA44804-1248):

다양한 종양에서의 DNA44804-1248에 대한 ΔCt 값이 표 5에 기록되어 있다. 통상, 유전자 복제본 수가 2배가 되는 것을 의미하는 값인 1을 초과하는 ΔCt 값을 증폭 점수의 역치값으로 사용하였다. 표 5에는 (1) 원발성 폐 종양인 LT1a, LT3, LT6, LT9, LT1O, LT11, LT12. LT13, LT15, LT16, LT17, LT18, LT19 및 LT21, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT2, CT8, CT10, CT14, CT15, CT16, CT1, CT4, CT5, CT6, CT7 및 CT11에서 PRO357을 코딩하는 핵산 DNA44804-1248이 상당히 증폭되었음이 나타나 있다.ΔCt values for DNA44804-1248 in various tumors are reported in Table 5. Usually, ΔCt values exceeding 1, which means that the number of gene copies were doubled, were used as threshold values for amplification scores. Table 5 shows (1) primary lung tumors: LT1a, LT3, LT6, LT9, LT10, LT11, LT12. Which encodes PRO357 in LT13, LT15, LT16, LT17, LT18, LT19 and LT21, and (2) primary colon tumors CT2, CT8, CT10, CT14, CT15, CT16, CT1, CT4, CT5, CT6, CT7 and CT11 Nucleic acid DNA44804-1248 is shown to be significantly amplified.

원발성 폐 종양인 LT3, LT10, LT11, LT12, LT13, LT15, LT17, LT19 및 LT21에서 DNA44804-1248에 대한 프레임워크 지도화에 의해 증폭이 확인되었다 (표 27). 또한, DNA44804-1248에 대한 에피센터 지도화의 결과, 원발성 폐 종양인 LT11, LT12, LT13, LT15, LT17 및 LT19에서 상당한 증폭을 확인하였다 (표 28). 반대로, 가장 가깝게 위치하는 공지된 프레임워크 마커 및 에피센터 마커의 증폭은 DNA44804-1248의 증폭에 비해 더 적게 일어났다. 이는 DNA44804-1248이 16번 염색체 상에서 특정 영역을 증폭시키는 유전자임을 강력히 시사한다.Amplification was confirmed by framework mapping for DNA44804-1248 in primary lung tumors LT3, LT10, LT11, LT12, LT13, LT15, LT17, LT19 and LT21 (Table 27). In addition, epicenter mapping of DNA44804-1248 confirmed significant amplification in primary lung tumors, LT11, LT12, LT13, LT15, LT17 and LT19 (Table 28). In contrast, amplification of the closest known framework marker and epicenter marker occurred less than that of DNA44804-1248. This strongly suggests that DNA44804-1248 is a gene that amplifies specific regions on chromosome 16.

DNA44804-1248의 증폭은 다양한 종양에서 나타나기 때문에, 이는 종양의 형성 및 생장에 중요한 역할을 할 것이다. 결국, DNA44804-1248에 의해 코딩되는 단백질(PRO357)에 대한 길항제(예를 들어, 항체)가 암의 치료에 이용될 것으로 기대된다.Since amplification of DNA44804-1248 occurs in various tumors, it will play an important role in tumor formation and growth. Eventually, it is expected that antagonists (eg, antibodies) against the protein (PRO357) encoded by DNA44804-1248 will be used in the treatment of cancer.

PRO715(DNA52722-1229):PRO715 (DNA52722-1229):

다양한 종양에서의 DNA52711-1229에 대한 ΔCt 값이 표 5에 기록되어 있다. 통상, 유전자 복제본 수가 2배가 되는 것을 의미하는 값인 1을 초과하는 ΔCt 값을 증폭 점수의 역치값으로 사용하였다. 표 5에는 (1) 원발성 폐 종양인 LT1, LT1a, LT9, LT10, LT11, LT12, LT13, LT15, LT16, LT17, LT18 및 LT19, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT2, CT3, CT8, CT10, CT14, CT15, CT16, CT17, CT1, CT4, CT5, CT6, CT7, CT11 및 CT18에서 PRO715를 코딩하는 핵산 DNA52711-1229가 상당히 증폭되었음이 나타나 있다.ΔCt values for DNA52711-1229 in various tumors are reported in Table 5. Usually, ΔCt values exceeding 1, which means that the number of gene copies were doubled, were used as threshold values for amplification scores. Table 5 shows (1) primary lung tumors LT1, LT1a, LT9, LT10, LT11, LT12, LT13, LT15, LT16, LT17, LT18 and LT19, and (2) primary colon tumors CT2, CT3, CT8, CT10, Nucleic acid DNA52711-1229 encoding PRO715 was significantly amplified at CT14, CT15, CT16, CT17, CT1, CT4, CT5, CT6, CT7, CT11 and CT18.

(1) 원발성 폐 종양인 LT11, LT13, LT15, LT16, LT17 및 LT18, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT2, CT3, CT8, CT10, CT14, CT15, CT16 및 CT17에서 DNA52711-1229에 대한 프레임워크 지도화에 의해 증폭이 확인되었다 (표 22). 또한, DNA52711-1229에 대한 에피센터 지도화의 결과, (1) 원발성 폐 종양인 LT11, LT13, LT15, LT16, LT17 및 LT18, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT1, CT3, CT4, CT5, CT6, CT7, CT10, CT11, CT14, CT15, CT16 및 CT18에서 상당한 증폭을 확인하였다 (표 23). 반대로, 가장 가깝게 위치하는 공지된 프레임워크 마커 및 에피센터 마커의 증폭은 DNA52711-1229의 증폭에 비해 더 적게 일어났다. 이는 DNA52711-1229가 17번 염색체 상에서 특정 영역을 증폭시키는 유전자임을 강력히 시사한다.Framework for DNA52711-1229 in (1) primary lung tumors LT11, LT13, LT15, LT16, LT17 and LT18, and (2) primary colon tumors CT2, CT3, CT8, CT10, CT14, CT15, CT16 and CT17 Amplification was confirmed by mapping (Table 22). As a result of epicenter mapping for DNA52711-1229, (1) primary lung tumors LT11, LT13, LT15, LT16, LT17 and LT18, and (2) primary colon tumors CT1, CT3, CT4, CT5, CT6 Significant amplification was observed in, CT7, CT10, CT11, CT14, CT15, CT16 and CT18 (Table 23). In contrast, amplification of the closest known framework marker and epicenter marker occurred less than that of DNA52711-1229. This strongly suggests that DNA52711-1229 is a gene that amplifies specific regions on chromosome 17.

DNA52711-1229의 증폭은 다양한 종양에서 나타나기 때문에, 이는 종양의 형성 및 생장에 중요한 역할을 할 것이다. 결국, DNA52711-1229에 의해 코딩되는 단백질(PRO715)에 대한 길항제(예를 들어, 항체)가 암의 치료에 이용될 것으로 기대된다.Since amplification of DNA52711-1229 occurs in various tumors, it will play an important role in tumor formation and growth. Eventually, it is expected that antagonists (eg, antibodies) against the protein (PRO715) encoded by DNA52711-1229 will be used in the treatment of cancer.

PRO1017(DNA56112-1379):PRO1017 (DNA56112-1379):

다양한 종양에서의 DNA56112-1379에 대한 ΔCt 값이 표 5에 기록되어 있다. 통상, 유전자 복제본 수가 2배가 되는 것을 의미하는 값인 1을 초과하는 ΔCt 값을 증폭 점수의 역치값으로 사용하였다. 표 5에는 (1) 원발성 폐 종양인 LT1a, LT3, LT6, LT7, LT9, LT10, LT11, LT12, LT13, LT15, LT16, LT17, LT18, LT19 및 LT21, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT2, CT3, CT8, CT10, CT12, CT14, CT15, CT16, CT17, CT4, CT5, CT6, CT9 및 CT11에서 PRO1017을 코딩하는 핵산 DNA56112-1379가 상당히 증폭되었음이 나타나 있다.ΔCt values for DNA56112-1379 in various tumors are reported in Table 5. Usually, ΔCt values exceeding 1, which means that the number of gene copies were doubled, were used as threshold values for amplification scores. Table 5 shows (1) primary lung tumors LT1a, LT3, LT6, LT7, LT9, LT10, LT11, LT12, LT13, LT15, LT16, LT17, LT18, LT19 and LT21, and (2) primary colon tumor CT2, It is shown that nucleic acids DNA56112-1379 encoding PRO1017 were significantly amplified in CT3, CT8, CT10, CT12, CT14, CT15, CT16, CT17, CT4, CT5, CT6, CT9 and CT11.

원발성 폐 종양인 LT3, LT4, LT7, LT9, LT10, LT11, LT13, LT15, LT16, LT18 및 LT22에서 DNA56112-1379에 대한 프레임워크 지도화에 의해 증폭이 확인되었다 (표 19). 또한, DNA56112-1379에 대한 에피센터 지도화의 결과, (1) 원발성 폐 종양인 LT12, LT13, LT15, LT16 및 LT18, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT5, CT8, CT10, CT12, CT14, CT16 및 CT17에서 상당한 증폭을 확인하였다 (표 18). 반대로, 가장 가깝게 위치하는 공지된 프레임워크 마커 및 에피센터 마커의 증폭은 DNA56112-1379의 증폭에 비해 더 적게 일어났다. 이는 DNA56112-1379가 7번 염색체 상에서 특정 영역을 증폭시키는 유전자임을 강력히 시사한다.Amplification was confirmed by framework mapping for DNA56112-1379 in primary lung tumors LT3, LT4, LT7, LT9, LT10, LT11, LT13, LT15, LT16, LT18 and LT22 (Table 19). As a result of epicenter mapping of DNA56112-1379, (1) primary lung tumors LT12, LT13, LT15, LT16 and LT18, and (2) primary colon tumors CT5, CT8, CT10, CT12, CT14, CT16 And significant amplification in CT17 (Table 18). In contrast, amplification of the closest known framework marker and epicenter marker occurred less than that of DNA56112-1379. This strongly suggests that DNA56112-1379 is a gene that amplifies a specific region on chromosome 7.

DNA56112-1379의 증폭은 다양한 종양에서 나타나기 때문에, 이는 종양의 형성 및 생장에 중요한 역할을 할 것이다. 결국, DNA56112-1379에 의해 코딩되는 단백질(PRO1017)에 대한 길항제(예를 들어, 항체)가 암의 치료에 이용될 것으로 기대된다.Since amplification of DNA56112-1379 occurs in various tumors, it will play an important role in tumor formation and growth. As a result, it is expected that antagonists (eg, antibodies) against the protein (PRO1017) encoded by DNA56112-1379 will be used in the treatment of cancer.

PRO1112(DNA57702-1476):PRO1112 (DNA57702-1476):

다양한 종양에서의 DNA57702-1476에 대한 ΔCt 값이 표 5에 기록되어 있다. 통상, 유전자 복제본 수가 2배가 되는 것을 의미하는 값인 1을 초과하는 ΔCt 값을 증폭 점수의 역치값으로 사용하였다. 표 5에는 (1) 원발성 폐 종양인 LT10, LT11, LT12, LT13, LT15, LT17 및 LT18, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT2, CT8, CT10, CT12, CT14, CT15, CT16, CT1, CT4, CT5, CT6 및 CT11에서 PRO1112를 코딩하는 핵산 DNA57702-1476이 상당히 증폭되었음이 나타나 있다. DNA57702-1476의 증폭은 다양한 종양에서 나타나기 때문에, 이는 종양의 형성 및 생장에 중요한 역할을 할 것이다. 결국, DNA57702-1476에 의해 코딩되는 단백질(PRO1112)에 대한 길항제(예를 들어, 항체)가 암의 치료에 이용될 것으로 기대된다.ΔCt values for DNA57702-1476 in various tumors are reported in Table 5. Usually, ΔCt values exceeding 1, which means that the number of gene copies were doubled, were used as threshold values for amplification scores. Table 5 shows (1) primary lung tumors LT10, LT11, LT12, LT13, LT15, LT17 and LT18, and (2) primary colon tumors CT2, CT8, CT10, CT12, CT14, CT15, CT16, CT1, CT4, It is shown that the nucleic acids DNA57702-1476 encoding PRO1112 were significantly amplified at CT5, CT6 and CT11. Since amplification of DNA57702-1476 occurs in a variety of tumors, it will play an important role in tumor formation and growth. As a result, it is expected that antagonists (eg, antibodies) against the protein (PRO1112) encoded by DNA57702-1476 will be used in the treatment of cancer.

PRO509(DNA50148):PRO509 (DNA50148):

다양한 종양에서의 DNA50148에 대한 ΔCt 값이 표 5에 기록되어 있다. 통상, 유전자 복제본 수가 2배가 되는 것을 의미하는 값인 1을 초과하는 ΔCt 값을 증폭 점수의 역치값으로 사용하였다. 표 5에는 (1) 원발성 폐 종양인 LT1, LT1a, LT3, LT4, LT9, LT12, LT13, LT15, LT16, LT17 및 LT19, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT15, CT17, CT6, CT11 및 CT18에서 PRO509를 코딩하는 핵산 DNA50148이 상당히 증폭되었음이 나타나 있다. DNA50148의 증폭은 다양한 종양에서 나타나기 때문에, 이는 종양의 형성 및 생장에 중요한 역할을 할 것이다. 결국, DNA50148에 의해 코딩되는 단백질(PRO509)에 대한 길항제(예를 들어, 항체)가 암의 치료에 이용될 것으로 기대된다.ΔCt values for DNA50148 in various tumors are reported in Table 5. Usually, ΔCt values exceeding 1, which means that the number of gene copies were doubled, were used as threshold values for amplification scores. Table 5 shows (1) primary lung tumors LT1, LT1a, LT3, LT4, LT9, LT12, LT13, LT15, LT16, LT17 and LT19, and (2) primary colon tumors CT15, CT17, CT6, CT11 and CT18. It has been shown that the nucleic acid DNA50148 encoding PRO509 has been significantly amplified. Since amplification of DNA50148 occurs in various tumors, it will play an important role in tumor formation and growth. Eventually, it is expected that antagonists (eg, antibodies) against the protein (PRO509) encoded by DNA50148 will be used in the treatment of cancer.

PRO853(DNA48227-1350):PRO853 (DNA48227-1350):

다양한 종양에서의 DNA48227-1350에 대한 ΔCt 값이 표 5에 기록되어 있다. 통상, 유전자 복제본 수가 2배가 되는 것을 의미하는 값인 1을 초과하는 ΔCt 값을 증폭 점수의 역치값으로 사용하였다. 표 5에는 (1) 원발성 폐 종양인 LT11, LT12, LT13, LT15 및 LT16, (2) 원발성 결장 종양인 CT2, CT3, CT8, CT10, CT12, CT14, CT15, CT16, CT17, CT1, CT4, CT5, CT7 및 CT11, 및 (3) 폐 종양 세포주인 H441 및 H522에서 PRO853을 코딩하는 핵산 DNA48227-1350이 상당히 증폭되었음이 나타나 있다.ΔCt values for DNA48227-1350 in various tumors are reported in Table 5. Usually, ΔCt values exceeding 1, which means that the number of gene copies were doubled, were used as threshold values for amplification scores. Table 5 shows (1) primary lung tumors LT11, LT12, LT13, LT15 and LT16, and (2) primary colon tumors CT2, CT3, CT8, CT10, CT12, CT14, CT15, CT16, CT17, CT1, CT4, CT5 , CT7 and CT11, and (3) the lung tumor cell lines H441 and H522 show that the nucleic acid DNA48227-1350 encoding PRO853 was significantly amplified.

원발성 폐 종양에 대한 DNA48227의 에피센터 지도화에서 증폭이 확인되지는 않았지만, 원발성 결장 종양인 CT1, CT2, CT3, CT4, CT5, CT6, CT8, CT9, CT10, CT11, CT12, CT14, CT15 및 CT17에서는 확인되었다 (표 24b). 반대로, 가장 가깝게 위치하는 공지된 에피센터 마커의 증폭은 DNA48227의 증폭에 비해 더 적게 일어났다. 이는 DNA48227이 17번 염색체 상에서 특정 영역을 증폭시키는 유전자임을 강력히 시사한다.Epicenter mapping of DNA48227 to primary lung tumors did not confirm amplification, but primary colon tumors CT1, CT2, CT3, CT4, CT5, CT6, CT8, CT9, CT10, CT11, CT12, CT14, CT15, and CT17 Was identified (Table 24b). In contrast, amplification of the closest known epicenter marker occurred less than amplification of DNA48227. This strongly suggests that DNA48227 is a gene that amplifies a specific region on chromosome 17.

DNA48227-1350의 증폭은 다양한 종양에서 나타나기 때문에, 이는 종양의 형성 및 생장에 중요한 역할을 할 것이다. 결국, DNA48227-1350에 의해 코딩되는 단백질(PRO853)에 대한 길항제(예를 들어, 항체)가 암의 치료에 이용될 것으로 기대된다.Since amplification of DNA48227-1350 occurs in various tumors, it will play an important role in tumor formation and growth. As a result, it is expected that antagonists (eg, antibodies) against the protein (PRO853) encoded by DNA48227-1350 will be used in the treatment of cancer.

PRO882(DNA58125):PRO882 (DNA58125):

다양한 종양에서의 DNA58125에 대한 ΔCt 값이 표 5에 기록되어 있다. 통상, 유전자 복제본 수가 2배가 되는 것을 의미하는 값인 1을 초과하는 ΔCt 값을 증폭 점수의 역치값으로 사용하였다. 표 5에는 (1) 원발성 폐 종양인 LT1a, LT3, LT6, LT7, LT9, LT10, LT11, LT12, LT13, LT15, LT16, LT17, LT18, LT19 및 LT21, (2) 원발성 결장 종양인 CT2, CT3, CT8, CT10, CT12, CT14, CT15, CT16, CT1, CT4, CT5 및 CT11, (3) 폐 종양 세포주인 H441, 및 (4) 결장 종양 세포주인 SW620, Colo320, HT29, SKCO1, SW403, LS174T, Colo205, HCT15, HCC2998 및 KM12에서 PRO882를 코딩하는 핵산 DNA58125가 상당히 증폭되었음이 나타나 있다.ΔCt values for DNA58125 in various tumors are reported in Table 5. Usually, ΔCt values exceeding 1, which means that the number of gene copies were doubled, were used as threshold values for amplification scores. Table 5 shows (1) primary lung tumors LT1a, LT3, LT6, LT7, LT9, LT10, LT11, LT12, LT13, LT15, LT16, LT17, LT18, LT19 and LT21, and (2) primary colon tumors CT2, CT3 , CT8, CT10, CT12, CT14, CT15, CT16, CT1, CT4, CT5 and CT11, (3) lung tumor cell lines H441, and (4) colon tumor cell lines SW620, Colo320, HT29, SKCO1, SW403, LS174T, It has been shown that the nucleic acid DNA58125 encoding PRO882 in Colo205, HCT15, HCC2998 and KM12 was significantly amplified.

(1) 원발성 폐 종양인 LT3, LT12, LT13, LT15, LT17 및 LT18, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT1, CT2, CT3, CT4, CT5, CT6, CT8, CT10, CT12, CT14, CT15 및 CT18에서 DNA58125에 대한 프레임워크 지도화에 의해 증폭이 확인되었다 (표 14). 또한, DNA58125에 대한 에피센터 지도화의 결과, (1) 원발성 폐 종양인 LT12, LT13, LT15, LT16 및 LT17, 및 (2) 원발성 결장 종양인 CT1, CT4, CT6, CT7, CT9, CT11, CT12, CT2, CT8, CT10 및 CT16에서 상당한 증폭을 확인하였다 (표 15b). 반대로, 가장 가깝게 위치하는 공지된 프레임워크 마커 및 에피센터 마커의 증폭은 DNA58125의 증폭에 비해 더 적게 일어났다. 이는 DNA58125가 16번 염색체 상에서 특정 영역을 증폭시키는 유전자임을 강력히 시사한다.(1) primary lung tumors LT3, LT12, LT13, LT15, LT17 and LT18, and (2) primary colon tumors CT1, CT2, CT3, CT4, CT5, CT6, CT8, CT10, CT12, CT14, CT15, and CT18 Amplification was confirmed by framework mapping for DNA58125 in (Table 14). As a result of epicenter mapping for DNA58125, (1) primary lung tumors LT12, LT13, LT15, LT16 and LT17, and (2) primary colon tumors CT1, CT4, CT6, CT7, CT9, CT11, CT12 Significant amplification was confirmed in, CT2, CT8, CT10 and CT16 (Table 15b). In contrast, amplification of the closest known framework marker and epicenter marker occurred less than that of DNA58125. This strongly suggests that DNA58125 is a gene that amplifies a specific region on chromosome 16.

DNA58125의 증폭은 다양한 종양에서 나타나기 때문에, 이는 종양의 형성 및 생장에 중요한 역할을 할 것이다. 결국, DNA58125에 의해 코딩되는 단백질(PRO882)에 대한 길항제(예를 들어, 항체)가 암의 치료에 이용될 것으로 기대된다.Since amplification of DNA58125 occurs in various tumors, it will play an important role in tumor formation and growth. Eventually, it is expected that antagonists (eg, antibodies) against the protein (PRO882) encoded by DNA58125 will be used for the treatment of cancer.

실시예 18: 원래 위치에서의 혼성화Example 18 Hybridization in situ

원래 위치에서의 혼성화는 세포 및 조직 표본 내의 핵산 서열을 검출하고 위치를 파악하게 하는 강력한 다용도 기술이다. 예를 들어, 유전자 발현 부위의 확인, 전사되는 조직의 분포, 바이러스 감염 확인 및 그 위치 파악, 특정 mRNA 합성에 따른 변화, 및 염색체 지도화의 보조에 유용할 수 있다.Hybridization in situ is a powerful and versatile technique that allows for the detection and localization of nucleic acid sequences in cell and tissue samples. For example, it may be useful in identifying gene expression sites, distribution of tissue to be transcribed, identification and location of viral infections, changes following specific mRNA synthesis, and assistance in chromosomal mapping.

PCR-생성33P-표지 리보프로브를 이용하여 문헌(Lu and Gillett, Cell Vision 1:169-176 (1994))의 최적 버전 프로토콜로 원래 위치에서의 혼성화를 수행하였다. 요컨대, 포르말린으로 고정되어 파라핀에 매몰된 인간 조직을 절단하고, 탈파라핀화한 후, 37℃에서 15분 동안 단백질 분해효소 K로 탈단백질화하고, 상기 문헌(Lu and Gillett)에 기재된 바와 같이 원래 위치에서의 혼성화로 추가 처리하였다. PCR 생성물로부터 (33P)-UTP로 표지된 안티센스 리보프로브를 생성하고 55℃에서 밤새 혼성화하였다. 상기 슬라이드를 코닥(Kodak) NTB2(상표명) 핵 트랙 에멀젼(nuclear track emulsion) 중에 담그고 4주 동안 노출시켰다.Hybridization in situ was performed using the PCR-generated 33 P-labeled riboprobe with the optimal version protocol of Lu and Gillett, Cell Vision 1: 169-176 (1994). In short, human tissues immobilized in formalin and buried in paraffin were cleaved, deparaffinized, and then deproteinated with protease K at 37 ° C. for 15 minutes, as originally described in Lu and Gillett, supra. Further processing was by hybridization at the site. Produce an anti-sense ribonucleic probe labeled with (33 P) -UTP from the PCR product, which was hybridized overnight at 55 ℃. The slides were immersed in Kodak NTB2 ™ nuclear track emulsion and exposed for 4 weeks.

3333 P-리보프로브 합성P-riboprobe synthesis

33P-UTP(Amersham BF 1002, SA < 2000Ci/mmol) 6.0㎕(125mCi)를 고속 진공기(speed vac)에서 건조시켰다. 건조된33P-UTP를 포함하는 각 튜브에 하기 성분을 가하였다.6.0 μl (125 mCi) of 33 P-UTP (Amersham BF 1002, SA <2000 Ci / mmol) was dried in a speed vac. The following components were added to each tube containing dried 33 P-UTP.

2.0㎕ 5x 전사 완충액2.0 μl 5x transcription buffer

1.0㎕ DTT (100mM)1.0 μl DTT (100 mM)

2.0㎕ NTP 혼합물 (2.5mM: 각각 10mM인 GTP, CTP 및 ATP 10㎕ + 10㎕ H2O)2.0 μl NTP mixture (2.5 mM: 10 μl GTP, CTP and ATP 10 μm each + 10 μl H 2 O)

1.0㎕ UTP (50μM)1.0 μL UTP (50 μM)

1.0㎕ Rnasin1.0 μl Rnasin

1.0㎕ DNA 주형 (1㎍)1.0 μl DNA template (1 μg)

1.0㎕ H201.0 μL H 2 0

1.0㎕ RNA 중합효소 (PCR 생성물의 경우에 통상 T3 = AS, T7 = S)1.0 μL RNA polymerase (typically T3 = AS, T7 = S for PCR product)

37℃에서 1시간 동안 상기 튜브를 인큐베이션하였다. RQ1 DNase 총 1.0㎕를 가한 후에 37℃에서 15분 동안 인큐베이션하였다. TE(10mM Tris(pH 7.6) 및 1mM EDTA(pH 8.0)) 총 90㎕를 가하고, 피펫으로 상기 혼합물을 DE81 페이퍼에 가하였다. 마이크로콘(MICROCON)-50(상표명) 초미세여과 유닛에 잔류 용액을 로딩하고 프로그램 10을 이용하여 6분 동안 회전시켰다. 제2 튜브 위에 여과 유닛을 거꾸로 올려놓고 프로그램 2를 이용하여 3분 동안 회전시켰다. 최종 회수하기 전에, TE 100㎕를 가한 후, DE81 페이퍼 상에 최종 생성물 1㎕를 피펫으로 가하고 6ml의 바이오플라워(Bioflour) Ⅱ(상표명)로 계수하였다.The tube was incubated at 37 ° C. for 1 hour. A total of 1.0 μl of RQ1 DNase was added and then incubated at 37 ° C. for 15 minutes. A total of 90 μl of TE (10 mM Tris (pH 7.6) and 1 mM EDTA (pH 8.0)) was added and the mixture was added to the DE81 paper by pipette. The residual solution was loaded into a MICROCON-50 ultrafiltration unit and spun for 6 minutes using program 10. The filtration unit was placed upside down on the second tube and spun for 3 minutes using program 2. Prior to final recovery, 100 μl of TE was added, then 1 μl of final product was pipetted onto DE81 paper and counted with 6 ml Bioflour II ™.

TBE 및 요소 겔 상에 프로브를 전기영동하였다. 3㎕의 로딩 완충액에 1 내지 3㎕의 프로브 또는 5㎕의 RNA Mrk Ⅲ를 가하였다. 37℃ 가열 블록(heat block)에서 3분 동안 가열한 후에, 즉시 겔을 얼음에 놓았다. 겔의 웰을 세척한 후, 샘플을 로딩하고 180 내지 250볼트에서 45분 동안 전기영동하였다. 플라스틱 랩(SARAN(상표명) 브랜드)으로 겔을 싸고, 이를 -70℃ 냉동고에서 1시간 내지 밤새의 시간 동안 신호 증강 스크린 상에서 XAR 필름에 노출시켰다.Probes were electrophoresed on TBE and urea gels. To 3 μl of loading buffer was added 1-3 μl of probe or 5 μl of RNA Mrk III. After heating for 3 minutes in a 37 ° C. heat block, the gel was immediately placed on ice. After washing the wells of the gel, the samples were loaded and electrophoresed for 45 minutes at 180-250 volts. The gel was wrapped in a plastic wrap (SARAN ™ brand) and exposed to XAR film on a signal enhancing screen for 1 hour to overnight in a -70 ° C. freezer.

3333 P-혼성화P-hybridization

A.동결 단편의 예비처리: 냉동고로부터 슬라이드를 꺼내 알루미늄 트레이에 놓고 상온에서 5분 동안 해동시켰다. 응축 감소를 위해, 트레이를 55℃ 배양기에 5분 동안 놓아 두었다. 발연 후드(fume hood) 내의 얼음 상 4% 파라포름알데히드 중에서 10분 동안 슬라이드를 고정시키고, 상온에서 0.5x SSC(25ml 20x SSC + 975ml SQ H2O)로 5분 동안 세척하였다. 단백질 분해효소 K 0.5㎍/ml로 37℃에서 10분 동안 탈단백질화 후에(예열된, RNAse가 없는 RNAse 완충액 250ml 중의 10mg/ml 원액 12.5㎕), 상온에서 10분 동안 0.5x SSC로 단편을 세척하였다. 70%, 95%, 100% 에탄올 중에서 각각 2분 동안 단편을 탈수화하였다.A. Pretreatment of frozen fragments : The slides were removed from the freezer and placed in an aluminum tray and thawed at room temperature for 5 minutes. To reduce condensation, the trays were left in the 55 ° C. incubator for 5 minutes. The slides were fixed for 10 minutes in 4% paraformaldehyde on ice in a fume hood and washed for 5 minutes at 0.5x SSC (25ml 20x SSC + 975ml SQ H 2 O) at room temperature. After deproteinization for 10 minutes at 37 ° C. with 0.5 μg / ml of protease K (12.5 μl of 10 mg / ml stock solution in 250 ml of pre-warmed RNAse buffer), wash fragments with 0.5 × SSC for 10 minutes at room temperature. It was. The fragments were dehydrated in 70%, 95% and 100% ethanol for 2 minutes each.

B.파라핀에 매몰된 단편의 예비처리: 슬라이드를 탈파라핀화하고 SQ H2O 중에 놓고 상온에서 2x SSC로 5분씩 2회 세척하였다. 인간 배(embryo)의 경우 단백질분해효소 K(RNase가 없는 RNase 완충액 250ml 중의 10mg/ml 용액 500㎕, 37℃, 15분) 20㎕/ml 중에서, 또는 포르말린 조직의 경우 8x 단백질분해효소 K(RNase 완충액 250ml 중의 100㎕, 37℃, 30분) 중에서 단편을 탈단백질화하였다. 그 후에, 상기 기재된 바와 같이 0.5x SSC로 세척하고 탈단백질화를 수행하였다.B. Pretreatment of fragments embedded in paraffin : Slides were deparaffinized and placed in SQ H 2 O and washed twice with 2 × SSC for 5 minutes at room temperature. Protease K for human embryos (500 μl of 10 mg / ml solution in 250 ml of RNase buffer without RNase, 37 ° C., 15 min) in 20 μl / ml, or 8 × protease K (RNase for formalin tissue) The fragment was deproteinized in 100 μl in 250 ml of buffer, 37 ° C., 30 minutes). Thereafter, washing with 0.5 × SSC and deproteination were performed as described above.

C.예비혼성화: 박스(Box) 완충액(4x SSC, 50% 포름아미드)으로 포화된 여과지에 의해 구획이 나뉜 플라스틱 상자에 슬라이드를 놓았다. 50㎕ 혼성화 완충액(덱스트란 술페이트 3.75g + SQ H2O 6ml)을 조직 시료에 넣고 볼텍싱 후, 뚜껑을 느슨하게 한 상태로 2분 동안 극초단파로 가열하였다. 얼음에서 냉각한 후에, 포름아미드 18.75ml, 20x SSC 3.75ml 및 SQ H2O 9ml를 가하고 조직을 잘 볼텍싱한 후, 42℃에서 1내지 4시간 동안 인큐베이션하였다.C. Prehybridization : The slides were placed in plastic boxes partitioned by filter paper saturated with Box buffer (4 × SSC, 50% formamide). 50 μl hybridization buffer (3.75 g of dextran sulfate + 6 ml of SQ H 2 O) was added to the tissue sample and vortexed, and then heated in microwave for 2 minutes with the lid loosened. After cooling on ice, 18.75 ml of formamide, 3.75 ml of 20 × SSC and 9 ml of SQ H 2 O were added and the tissues well vortexed and then incubated at 42 ° C. for 1-4 hours.

D.혼성화: 슬라이드 당 1.0 x 106cpm의 프로브 및 tRNA(50mg/ml 원액) 1.0㎕를 95℃에서 3분 동안 가열하였다. 얼음에서 상기 슬라이드를 냉각하고, 슬라이드 당 혼성화 완충액 48㎕를 가하였다. 볼텍싱한 후에, 슬라이드 상의 예비혼성화 시료 50㎕에33P 혼합물 50㎕를 가하였다. 55℃에서 밤새 이 슬라이드를 인큐베이션하였다.D. Hybridization : 1.0 μl of probe and tRNA (50 mg / ml stock) at 1.0 × 10 6 cpm per slide were heated at 95 ° C. for 3 minutes. The slides were cooled on ice and 48 μl of hybridization buffer added per slide. After vortexing, 50 μl of the 33 P mixture was added to 50 μl of the prehybridization sample on the slide. This slide was incubated overnight at 55 ° C.

E.세척: 상온에서 2x SSC, EDTA로 10분씩 2회 세척한 후에(20x SSC 400ml + 0.25M EDTA 16ml, 최종 부피=4L), 37℃에서 30분 동안 RNAse A로 처리하였다(Rnase 완충액 250ml 중 10mg/ml 농도의 RNase 500㎕ = 20㎍/ml). 상온에서 2x SSC, EDTA로 10분씩 2회 슬라이드를 세척하였다. 엄격한 세척 조건은 하기와 같다: 55℃, 0.1x SSC 및 EDTA에서 2시간(20x SSC 20ml + EDTA 16ml, 최종 부피 = 4L).E. Washing : 2x SSC at room temperature, twice with EDTA twice for 10 minutes (20x SSC 400ml + 0.25M EDTA 16ml, final volume = 4L), then treated with RNAse A for 30 minutes at 37 ° C (in 250ml of RNA buffer) 500 μl of RNase at a concentration of 10 mg / ml). The slides were washed twice at 10 ° C. with 2 × SSC, EDTA at room temperature. Stringent washing conditions are as follows: 2 hours at 55 ° C., 0.1 × SSC and EDTA (20 × SSC 20ml + EDTA 16ml, final volume = 4L).

F.올리고뉴클레오티드 F. Oligonucleotides

본원에 개시된 2개의 DNA 서열 상에서 원래 위치에서의 분석을 수행하였다.이 분석에 사용된 올리고뉴클레오티드는 하기와 같다:Analysis in situ was performed on the two DNA sequences disclosed herein. The oligonucleotides used in this analysis are as follows:

(1)PRO292(DNA35616) (카텝신 D) (1) PRO292 (DNA35616) (cathepsin D)

DNA35616-p1:DNA35616-p1:

5'-GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGCTCTTCGACACGGGCTCCTCCAA-3' (서열번호 96)5'-GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGCTCTTCGACACGGGCTCCTCCAA-3 '(SEQ ID NO: 96)

DNA35616-p2:DNA35616-p2:

5'-CTATGAAATTAACCCTCACTAAAGGGACAGCTCGCGCACCTCATCCAC-3' (서열번호 97)5'-CTATGAAATTAACCCTCACTAAAGGGACAGCTCGCGCACCTCATCCAC-3 '(SEQ ID NO: 97)

에스트로겐에 의해 유도되는 리소좀에 존재하는 아스파티딜 프로테아제인 DNA35616(카텝신 D)은 다양한 조직에서 발현된다. 이 발현은 유방암 및 폐암에서의 발달과 관련된 것으로 보고되었다. 정상 조직에서는 대식세포와 대식세포 계통의 세포, 특히 파골세포에서 널리 발현되는 것으로 관찰되었다. 또한, 폐, 간, 쓸개, 위(기저샘), 신장, 방광 및 전립선의 상피세포에서 발현이 관찰되었다. 또한, 성인의 심장 근세포, 연골 및 대뇌 뉴런에서도 발현이 관찰되었다. 태아의 경우에는 파골세포에서 강력하게 발현되었으며, 또한 흉선, 비장 적수(splenic red pulp), 태아 간(간세포 및 쿠퍼(Kupffer) 세포), 기관지 상피, 맥락막총(choroid plexus), 뉴런 및 척수 신경절에서도 발현되었다.DNA35616 (cathepsin D), an aspatidyl protease present in lysosomes induced by estrogen, is expressed in various tissues. This expression has been reported to be related to development in breast and lung cancer. In normal tissues, they were widely expressed in macrophages and cells of the macrophage lineage, especially osteoclasts. In addition, expression was observed in epithelial cells of lung, liver, gallbladder, stomach (basal gland), kidney, bladder and prostate. Expression was also observed in adult cardiomyocytes, cartilage and cerebral neurons. In fetuses, they are strongly expressed in osteoclasts, but also in the thymus, splenic red pulp, fetal liver (hepatocytes and Kupffer cells), bronchial epithelium, choroid plexus, neurons and spinal ganglions. Expressed.

주목할만한 부가의 발현은 질병 조직에서 관찰되었다. 즉, DNA35617은 상처 부위의 대식세포에서 널리 발현되었고, 종양 조직에서는 모든 중류의 폐암 악성 상피에서 다양한 수준으로 발현되었다. 15개 종양 중 9개의 종양에서, 양성 상피에서의 발현에 비해 악성 상피에서의 발현이 더 높았으며, 이는 증폭에서의 결과와 일치한다. 악성 상피에서의 발현 및 다핵거세포에서 나타나는 발현보다 종양 관련대식세포에서의 발현이 항상 더 높았다.Notable additional expression was observed in diseased tissue. In other words, DNA35617 was widely expressed in macrophages in the wound and various levels in malignant epithelium of all lung cancers in tumor tissues. In 9 of 15 tumors, expression in malignant epithelium was higher than expression in benign epithelium, consistent with the results in amplification. Expression in tumor-associated macrophages was always higher than expression in malignant epithelium and expression in multinucleated giant cells.

(2)PRO327(DNA38113-1230) (프로락틴 수용체 동족체) (2) PRO327 (DNA38113-1230) (prolactin receptor homologue)

DNA38113-p1:DNA38113-p1:

5'-GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGCCCCCCTGAGCTCTCCCGTGTA-3' (서열번호 98)5'-GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGCCCCCCTGAGCTCTCCCGTGTA-3 '(SEQ ID NO: 98)

DNA38113-p2:DNA38113-p2:

5'-CTATGAAATTAACCCTCACTAAAGGGAAGGCTCGCCACTGGTCGTAGA-3' (서열번호 99)5'-CTATGAAATTAACCCTCACTAAAGGGAAGGCTCGCCACTGGTCGTAGA-3 '(SEQ ID NO: 99)

발생중인 생쥐 및 인간 태아 폐에서 높은 수준의 발현이 관찰된 반면, 기관지 상피를 포함하는 정상 성인 폐에서는 발현이 관찰되지 않았다. 또한, 인간 태아의 기관(높은 가능성) 및 평활근 세포에서도 발현이 관찰되었다. 또한, 인간 태반의 비-영양막 세포에서도 발현이 관찰되었다. 이들 데이타는 기관지 발생에서의 잠재적인 역할과 일관되는 것이다.High levels of expression were observed in developing mouse and human fetal lungs, whereas no expression was observed in normal adult lungs including bronchial epithelium. In addition, expression was observed in organs (high likelihood) and smooth muscle cells of the human fetus. In addition, expression was observed in non-nutrient membrane cells of the human placenta. These data are consistent with the potential role in bronchial development.

또한, DNA38113은 일련의 폐암에서 증폭되는 것으로 확인되었다. 따라서, 일련의 폐암에서 발현 여부를 조사하였다: 8개의 편평세포 암종 및 8개의 선암종을 조사하였다. 방사선 필름상에서 관찰된 강력한 발현을 기초로 하여, 2주 동안 노출시킨 후에 3개의 종양을 조사하고, 4주 동안 노출시킨 후에 다른 모든 단편을 조사하였다. DNA38113은 8개의 선암종 중 3개의 선암종에서 높은 수준으로 발현되었다. 다른 4개의 선암종에서는 적당한, 더 집중적인 발현이 관찰되었다. 편평세포 암종의 경우에는 악성 상피에서 상당한 수준의 발현이 관찰되지는 않았지만, 낮은 수준의 발현은 검출되었다.In addition, DNA38113 was found to be amplified in a series of lung cancers. Therefore, expression was examined in a series of lung cancers: eight squamous cell carcinomas and eight adenocarcinomas were examined. Based on the potent expression observed on the radiation film, three tumors were irradiated after exposure for two weeks and all other fragments were examined after exposure for four weeks. DNA38113 was expressed at high levels in three of eight adenocarcinomas. In the other four adenocarcinomas, more intensive expression was observed. In the case of squamous cell carcinoma, no significant level of expression was observed in malignant epithelium, but low level of expression was detected.

발현은 악성 상피로만 제한되지는 않았다. 발현되는 추가의 부위로는 양성세기관지 상피, 기질성 방추형 세포, 동맥의 평활근(어떤 한 시료에서는 혈관벽의 외부 3번째에서 발현됨), 및 기관지 및 소신경이 포함된다.Expression was not limited to malignant epithelium. Additional sites to be expressed include benign bronchiolemal epithelium, stromal spindle cells, smooth muscles of the arteries (in some samples, expressed outside the vascular wall third), and bronchial and bovine nerves.

DNA38113의 발현은 증폭 데이타(상기 기재됨)와 일치되었다. 특히, 발현은 연구된 3개의 종양에서 주로 관찰되었다. 발현 데이타를 기초로 하여, DNA38113은 폐 선암종의 치료 표적이 될 수 있다.Expression of DNA38113 was consistent with amplification data (described above). In particular, expression was mainly observed in the three tumors studied. Based on expression data, DNA38113 can be a therapeutic target for lung adenocarcinoma.

태아 폐에서의 발현 패턴은 폐의 생장 및 회복에서의 가능한 역할을 제시한다.Expression patterns in fetal lungs suggest a possible role in lung growth and recovery.

(3)PRO1265(DNA60764-1533) (Fig-1 동족체) (3) PRO1265 (DNA60764-1533) (Fig-1 homologue)

DNA60764-p1:DNA60764-p1:

5'-GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGCCGCGCTGTCCTGCTGTCACCA-3' (서열번호 100)5'-GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGCCGCGCTGTCCTGCTGTCACCA-3 '(SEQ ID NO: 100)

DNA60764-p2:DNA60764-p2:

5'-CTATGAAATTAACCCTCACTAAAGGGAGTTCCCCTCCCCGAGAAGATA-3' (서열번호 101)5'-CTATGAAATTAACCCTCACTAAAGGGAGTTCCCCTCCCCGAGAAGATA-3 '(SEQ ID NO: 101)

조사된 16개의 폐 종양 중 15개가 분석에 적합하였다 (8개의 선암종 및 7개의 편평세포 암종). 대부분의 종양에서 DNA60764가 약간 발현되었다. 발현은 주로 침윤성 종양에 인접한 단핵 세포로 한정되었다. 한 편평세포 암종에서는 악성 상피에 의해 발현이 관찰되었다.Of the 16 lung tumors investigated, 15 were suitable for analysis (8 adenocarcinomas and 7 squamous cell carcinomas). DNA60764 was slightly expressed in most tumors. Expression was mainly limited to mononuclear cells adjacent to invasive tumors. In one squamous cell carcinoma, expression was observed by malignant epithelium.

또한, 발현은 불특정 조직 형성시의 태아 흉선 골수에서 관찰되었다. 또한, 생식세포 중심에서 발현이 관찰되었으며, 이는 대부분의 Fig-1 양성반응 세포의 기원이 염증일 것이라는 사실과 일관된다.In addition, expression was observed in fetal thymic bone marrow at unspecific tissue formation. In addition, expression was observed in the germ cell center, consistent with the fact that the origin of most Fig-1 positive cells would be inflammation.

(4)PRO343(DNA43318-1217) (인간 프로스타신 동족체) (4) PRO343 (DNA43318-1217) (human prostacin homologue)

DNA43318-p1:DNA43318-p1:

5'-GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGCGCGGCGAGGACAGCACTGACAG-3' (서열번호 102)5'-GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGCGCGGCGAGGACAGCACTGACAG-3 '(SEQ ID NO: 102)

DNA43318-p2:DNA43318-p2:

5'-CTATGAAATTAACCCTCACTAAAGGGACCGGGCCCCCAGAGGTAGAGG-3' (서열번호 103)5'-CTATGAAATTAACCCTCACTAAAGGGACCGGGCCCCCAGAGGTAGAGG-3 '(SEQ ID NO: 103)

발현은 양성 정상 태아 및 성인 조직에서 뿐만 아니라 폐 암종에서도 관찰되었다. 발현은 8개의 선암종 중 5개에서, 및 7개의 편평세포 암종 중 3개에서 관찰되었다. 발현은 악성 상피 전체에 걸쳐 관찰되었다. 발현은 괴사 영역에 인접한 세포에서 두드러지게 관찰되었으며, 이는 상기 유전자가 저산소증에 의해 상향 조절되고(거나) 상기 유전자가 세포 사멸 또는 세포 변태와 관련되어 있을 수 있음을 제시한다. 또한, 발현은 2개의 육종 및 신장 세포 암종에서 관찰되었다.Expression has been observed in lung carcinomas as well as in benign normal fetal and adult tissues. Expression was observed in 5 of 8 adenocarcinomas and in 3 of 7 squamous cell carcinomas. Expression was observed throughout malignant epithelium. Expression was prominently observed in cells adjacent to the necrotic region, suggesting that the gene may be upregulated by hypoxia and / or the gene may be associated with cell death or cell transformation. In addition, expression was observed in two sarcomas and renal cell carcinomas.

양성 조직의 경우, 발생중인 식도 상피 및 위 상피에서는 발현이 관찰되지 않았지만, 침팬치 위의 기저샘에서는 발현이 관찰되었다. 태아 및 성인 기관지 상피, 및 기관지 연골에서 낮은 수준의 발현이 관찰되었다. 태아의 사지에서는 뼈 형성 부위의 주변에서 발현이 관찰되었다. 또한, 발현은 태반에서도 관찰되었다. 붉은털 원숭이 성기의 벽에 있는 기질성 세포에서 발현이 관찰되었으며, 원숭이 대뇌의 뉴런 전체에서 지역 편중적인 발현이 관찰되었다.In benign tissues, no expression was observed in developing esophageal or gastric epithelium, but expression was observed in basal glands on chimpanzees. Low levels of expression have been observed in fetal and adult bronchial epithelium, and bronchial cartilage. In fetal limbs, expression was observed around the bone formation site. Expression was also observed in the placenta. Expression in stromal cells in the walls of the rhesus macaque genitals was observed, and regional biased expression was observed throughout the neurons of the monkey cerebrum.

(5)PRO357(DNA44804-1248) (ALS 동족체) (5) PRO357 (DNA44804-1248) (ALS homologue)

DNA44804-p1:DNA44804-p1:

5'-GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGCTGCCCGCAACCCCTTCAACTG-3' (서열번호 104)5'-GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGCTGCCCGCAACCCCTTCAACTG-3 '(SEQ ID NO: 104)

DNA44804-p2:DNA44804-p2:

5'-CTATGAAATTAACCCTCACTAAAGGGACCGCAGCTGGGTGACCGTGTA-3' (서열번호 105)5'-CTATGAAATTAACCCTCACTAAAGGGACCGCAGCTGGGTGACCGTGTA-3 '(SEQ ID NO: 105)

태아 조직 및 골육종의 악성 세포에 있는 뼈 형성 부위에서 낮은 수준 내지 적당한 수준의 발현이 관찰되었다. 또한, 태반 및 탯줄 도관에서도 낮은 수준의 발현이 관찰되었다.Low to moderate levels of expression were observed at the site of bone formation in fetal tissue and malignant cells of osteosarcoma. Low levels of expression were also observed in placental and umbilical cord conduits.

(6)PRO715(DNA52722-1229) (TNF 동족체) (6) PRO715 (DNA52722-1229) (TNF homologue)

DNA52722-p1:DNA52722-p1:

5'-GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGCCGCCCCGCCACCTCCT-3' (서열번호 106)5'-GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGCCGCCCCGCCACCTCCT-3 '(SEQ ID NO: 106)

DNA52722-p2:DNA52722-p2:

5'-CTATGAAATTAACCCTCACTAAAGGGACTCGAGACACCACCTGACCCA-3' (서열번호 107)5'-CTATGAAATTAACCCTCACTAAAGGGACTCGAGACACCACCTGACCCA-3 '(SEQ ID NO: 107)

DNA52722-p3:DNA52722-p3:

5'-GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGCCCAAGGAAGGCAGGAGACTCT-3' (서열번호 108)5'-GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGCCCAAGGAAGGCAGGAGACTCT-3 '(SEQ ID NO: 108)

DNA52722-p4:DNA52722-p4:

5'-CTATGAAATTAACCCTCACTAAAGGGACTAGGGGGTGGGAATGAAAAG-3' (서열번호 109)5'-CTATGAAATTAACCCTCACTAAAGGGACTAGGGGGTGGGAATGAAAAG-3 '(SEQ ID NO: 109)

많은 조직에서 일반적으로 높은 수준의 발현이 관찰되었다. 태반, 골모세포, 손상된 신세뇨관, 손상된 간, 결직장 간 전이물 및 쓸개에서 가장 높은 발현 신호가 나타났다. 시험된 샘플은 아세토미노펜(acetominophen) 유도 간 손상 및 간경화 상태였다.In general, high levels of expression have been observed in many tissues. The highest expression signals were found in placenta, osteoblasts, damaged renal tubules, damaged liver, colorectal liver metastases, and gallbladder. The samples tested were acetominophen induced liver damage and cirrhosis.

또한, 조사된 조직에는 폐의 8개의 선암종 및 8개의 편평세포 암종이 포함된다. 조사된 모든 종양의 대식세포 전체에서 강력한 발현이 관찰되었다. 한 경우에는 양성 기관지 상피 전체에서 발현이 약한 수준 내지 적당한 수준이었다. 또한, 적당한 염증성 변화를 수반하는 비-종양 함유 폐 샘플에서도 발현이 관찰되었다.The tissues examined also included eight adenocarcinomas and eight squamous cell carcinomas of the lung. Robust expression was observed throughout macrophages of all tumors examined. In one case, the expression was mild to moderate throughout the benign bronchial epithelium. In addition, expression was observed in non-tumor containing lung samples with moderate inflammatory changes.

(7)PRO1017(DNA56112-1379) (술포트랜스퍼라제 동족체) (7) PRO1017 (DNA56112-1379) (sulfotransferase homologue)

DNA56112-p1:DNA56112-p1:

5'-GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGCGCAGCAGGCGGAGCGGAGGAG-3' (서열번호 110)5'-GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGCGCAGCAGGCGGAGCGGAGGAG-3 '(SEQ ID NO: 110)

DNA56112-p2:DNA56112-p2:

5'-CTATGAAATTAACCCTCACTAAAGGGACACGGCGAACTTGCGGTAGAA-3' (서열번호 111)5'-CTATGAAATTAACCCTCACTAAAGGGACACGGCGAACTTGCGGTAGAA-3 '(SEQ ID NO: 111)

다중 종양 블록(multi-tumor block)에서 양성반응 신호가 나타났다. 발현은 편평세포 아종, 육종 및 간암에서 관찰되었다. 폐암의 경우, 8개의 선암종 중 2개 및 7개의 편평세포 암종 중 2개에서 악성 상피 전체에 걸쳐 양성반응 신호가 나타났다. 또한, 붉은털 원숭이 성체의 뇌에서는 피질 뉴런 및 해마상 융기 뉴런에서 양성반응 신호가 나타났다.A positive signal was seen in the multi-tumor block. Expression has been observed in squamous cell subspecies, sarcoma and liver cancer. In lung cancer, two out of eight adenocarcinomas and two out of seven squamous cell carcinomas showed positive signals throughout the malignant epithelium. In the brain of adult Rhesus macaques, positive signals were observed in cortical neurons and hippocampal neurons.

(8)PRO853(DNA48227-1350) (리덕타제 동족체) (8) PRO853 (DNA48227-1350) (reductase homologue)

DNA48227-p1:DNA48227-p1:

5'-GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGCCCAACAGCGGCATCGGAAAGA-3' (서열번호 112)5'-GGATTCTAATACGACTCACTATAGGGCCCAACAGCGGCATCGGAAAGA-3 '(SEQ ID NO: 112)

DNA48227-p2:DNA48227-p2:

5'-CTATGAAATTAACCCTCACTAAAGGGAGGAGCACCAGCCAAGCCAATG-3' (서열번호 113)5'-CTATGAAATTAACCCTCACTAAAGGGAGGAGCACCAGCCAAGCCAATG-3 '(SEQ ID NO: 113)

침팬치 위의 점막에서 상승된 발현이 관찰되었다.Elevated expression was observed in the mucosa over chimpanzees.

실시예 19: 혼성화 프로브로서 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 용도Example 19 Use of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 as Hybridization Probe

하기 방법은 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열의 혼성화 프로브로서의 용도를 기술한다.The following method describes the use of a nucleotide sequence encoding a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide as a hybridization probe.

본원에 기술한 바와 같이 전장 또는 성숙 "PRO201", "PRO292", "PRO327", "PRO1265", "PRO344", "PRO343", "PRO347", "PRO357", "PRO715", "PRO1017", "PRO1112", "PRO509", "PRO853" 또는 "PRO882" 폴리펩티드의 코딩 서열을 포함하는 DNA 및(또는) 그의 단편을 인간 조직 cDNA 라이브러리 또는 인간 조직 게놈 라이브러리에서 상동성 DNA (예를 들어, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 자연 발생 변이체를 코딩하는 것)를 스크리닝하는데 프로브로서 사용할 수 있다.Full length or mature "PRO201", "PRO292", "PRO327", "PRO1265", "PRO344", "PRO343", "PRO347", "PRO357", "PRO715", "PRO1017", "as described herein." DNA comprising the coding sequence of the PRO1112 "," PRO509 "," PRO853 "or" PRO882 "polypeptide, and / or fragments thereof are homologous DNA (e.g., PRO201, PRO292) in the human tissue cDNA library or human tissue genome library. , Coding for naturally occurring variants of PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882).

이들 라이브러리 DNA를 포함하는 필터의 혼성화 및 세척을 하기 고도의 엄격 조건 하에 수행하였다. 방사선 표지된 PRO201-, PRO292-, PRO327-, PRO1265-, PRO344-, PRO343-, PRO347-, PRO357-, PRO715-, PRO1017-, PRO1112-, PRO509-, PRO853- 또는 PRO882-유도 프로브를 50% 포름아미드, 5×SSC, 0.1% SDS, 0.1% 피로인산나트륨, 50 mM 인산나트륨, pH 6.8, 2×덴하르트(Denhardt's) 용액 및 10% 덱스트란 술페이트 용액 중에서 42℃로 20시간 동안 혼성화시켰다. 필터를 0.1×SSC 및 0.1% SDS의 수용액 중에서 42℃로 세척하였다.Hybridization and washing of filters comprising these library DNAs were performed under the following high stringency conditions. 50% form a radiolabeled PRO201-, PRO292-, PRO327-, PRO1265-, PRO344-, PRO343-, PRO347-, PRO357-, PRO715-, PRO1017-, PRO1112-, PRO509-, PRO853- or PRO882-induced probes Hybridized at 42 ° C. for 20 hours in amide, 5 × SSC, 0.1% SDS, 0.1% sodium pyrophosphate, 50 mM sodium phosphate, pH 6.8, 2 × Denhardt's solution and 10% dextran sulfate solution. The filter was washed at 42 ° C. in an aqueous solution of 0.1 × SSC and 0.1% SDS.

이어서, 전장 천연 서열 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 코딩하는 DNA와 원하는 서열 동일성을 갖는 DNA를 당업계에 공지된 표준 방법으로 찾아내었다.The DNA encoding the full-length native sequence PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 with DNA having the desired sequence identity is a standard known in the art. Found in the way.

실시예 20: 대장균(Example 20: Escherichia coli E. coliE. coli )에서 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 발현Expression of a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide

본 실시예는 대장균(E. coli) 내의 재조합 발현에 의해 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 비글리코실화된 형태를 제조하는 방법을 예시한다.This example shows aglycosylated forms of the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides by recombinant expression in E. coli . The manufacturing method is illustrated.

처음에 원하는 PRO 폴리펩티드를 코딩하는 DNA 서열을 선택된 PCR 프라이머를 사용하여 증폭시켰다. 프라이머는 선택된 발현 벡터 상의 제한 효소 부위에 해당하는 제한 효소 부위를 포함해야만 한다. 다양한 발현 벡터가 사용될 수 있다. 적합한 벡터의 예에는 앰피실린 및 테트라싸이클린 내성 유전자를 포함하는 pBR322 (대장균에서 유래; Bolivar et al., Gene 2:95(1977) 참조)가 있다. 벡터를 제한 효소로 절단하고 탈인산화시켰다. 이어서, PCR 증폭된 서열을 벡터에 라이게이션하였다. 벡터는 바람직하게는 항생제 내성 유전자, trp 프로모터, 폴리-His 리더(처음 6개의 STII 코돈, 폴리-His 서열 및 엔테로키나제 절단 부위를 포함), PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 코딩 부위, 람다 전사 종결부 및 argU 유전자를 코딩하는 서열을 포함할 것이다.Initially, the DNA sequence encoding the desired PRO polypeptide was amplified using selected PCR primers. The primer must include a restriction enzyme site corresponding to the restriction enzyme site on the selected expression vector. Various expression vectors can be used. Examples of suitable vectors are pBR322 (derived from E. coli; see Bolivar et al., Gene 2:95 (1977)) comprising ampicillin and tetracycline resistance genes. The vector was digested with restriction enzymes and dephosphorylated. PCR amplified sequences were then ligated to the vector. The vector is preferably an antibiotic resistance gene, trp promoter, poly-His leader (including the first six STII codons, poly-His sequences and enterokinase cleavage sites), PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, Sequences encoding the PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 coding sites, lambda transcription ends and the argU gene.

이어서, 상기 문헌(Sambrook et al.)에 기재된 방법을 이용하여 선택된 대장균(E. coli) 균주를 형질전환시키는데 라이게이션 혼합물을 사용하였다. LB 평판 배지에서 생장할 수 있는 형질전환체를 확인하고 항생제 내성을 갖는 콜로니를 선별하였다. 플라스미드 DNA를 단리하여, 제한 분석법 및 DNA 서열 분석에 의해 확인하였다.The ligation mixture was then used to transform selected E. coli strains using the method described by Sambrook et al., Supra. Transformants that could grow in LB plate medium were identified and colonies with antibiotic resistance were selected. Plasmid DNA was isolated and confirmed by restriction analysis and DNA sequence analysis.

항생제가 포함된 LB 브로쓰와 같은 액체 배양 배지에서 선별된 클론을 밤새 배양하였다. 이 배양액을 더 큰 규모의 배양액 접종에 사용하였다. 이어서, 세포를 원하는 광학 밀도까지 배양한 후, 발현 프로모터를 작동시켰다.Selected clones were incubated overnight in liquid culture medium such as LB broth with antibiotics. This culture was used to inoculate larger cultures. The cells were then incubated to the desired optical density and then the expression promoter was run.

수시간 이상 동안 세포를 더 배양한 후에 원심분리로 세포를 수획하였다. 원심분리로 얻어진 세포 펠릿을 당업계에 공지된 여러가지 시약을 이용하여 용해시키고, 단백질이 강하게 결합하는 조건 하에서 금속 킬레이팅 컬럼을 이용하여 용해된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 단백질을 정제하였다.Cells were harvested by centrifugation after further incubation for several hours or more. Cell pellets obtained by centrifugation were lysed using various reagents known in the art, and PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, which were lysed using a metal chelating column under conditions of strong binding of proteins. PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 protein was purified.

PRO327은 하기 과정을 이용하여 대장균(E. coli)에서 폴리-His 태그가 부착된 형태로 성공적으로 발현되었다. 선택된 프라이머를 사용하여 PRO327을 코딩하는 DNA를 처음에 증폭하였다. 프라이머는 선택된 발현 벡터 상의 제한효소 부위에 해당하는 제한 효소 부위와 효율적이고 신뢰할 만한 번역 개시, 금속 킬레이트 컬럼에서 빠른 정제, 및 엔테로키나아제를 사용한 단백질 분해 제거를 제공하는 다른 유용한 서열을 포함하였다. 이어서 PCR 증폭된, 폴리-His 태그가 부착된 서열을 발현 벡터에 라이게이션시킨 후, 균주 52(W3110fuhA(tonA)longalErpoHts(htpRts)clpP(lacIq)) 기재의 대장균 숙주를 형질전환시키는데 사용하였다. 우선 형질전환체를 50 ㎎/㎖의 카르베니실린 (carbenicillin)을 포함하는 LB 배지에서 O.D.600이 3 내지 5에 도달할 때까지 30℃에서 진탕 배양하였다. 이어서, 배양액을 CRAP 배지(물 500 ㎖ 중에 3.57 g (NH4)2SO4, 0.71 g 시트르산나트륨·2H2O, 1.07 g KCl, 5.36 g 디프코(Difco) 효모 추출물, 5.36 g 쉐필드 히카아제(Sheffield hycase) SF, 및 110 mM MPOS, pH 7.3, 0.55% (w/v) 글루코스 및 7 mM MgSO4를 혼합하여 제조)에 50 내지 100배로 희석하고, 약 20 내지 30시간 동안 30℃에서 진탕 배양하였다. 샘플을 분리하여 SDS-PAGE 분석법으로 발현을 확인하고 대량 배양액을 원심분리하여 세포를 펠릿으로 만들었다. 세포 펠릿을 정제 및 리폴딩시킬 때까지 냉동보관하였다.PRO327 was successfully expressed in poly-His tagged form in E. coli using the following procedure. DNA selected for PRO327 was initially amplified using the selected primers. Primers included restriction enzyme sites corresponding to restriction enzyme sites on selected expression vectors and other useful sequences that provide efficient and reliable translation initiation, rapid purification on metal chelate columns, and proteolytic removal with enterokinase. PCR amplified, poly-His tagged sequences were then ligated to the expression vector and used to transform E. coli hosts based on strain 52 (W3110 fuhA (tonA) longal ErpoHts (htpRts) clpP (lacIq)). The transformants were first shaken at 30 ° C. until OD 600 reached 3 to 5 in LB medium containing 50 mg / ml carbenicillin. The culture was then cultured with CRAP medium (3.57 g (NH 4 ) 2 SO 4 , 0.71 g sodium citrate.2H 2 O, 1.07 g KCl, 5.36 g Difco yeast extract, 5.36 g Sheffield Hicaase in 500 mL water. (Sheffield hycase) SF and prepared by mixing 110 mM MPOS, pH 7.3, 0.55% (w / v) glucose and 7 mM MgSO 4 ) 50 to 100-fold and shake at 30 ° C. for about 20 to 30 hours. Incubated. Samples were separated and their expression was confirmed by SDS-PAGE analysis and the cells were pelleted by centrifugation of the bulk culture. Cell pellets were cryopreserved until purified and refolded.

0.5 내지 1L의 대장균(E. coli) 페이스트 발효액(6 내지 10 g 펠릿)을 10배 부피(w/v)의 7 M 구아니딘, 20 mM Tris, pH 8 완충액에 재현탁시켰다. 고체 아황산나트륨 및 사티온산나트륨을 각각 최종 농도 0.1 M과 0.02 M이 되도록 가하고 용액을 4℃에서 밤새 교반하였다. 이 단계에서 아황산염화에 의해 모든 시스테인 잔기가 차단된 변성 단백질이 생성되었다. 이 용액을 베크만(Beckman) 초강력 원심분리기에서 40,000 rpm으로 30분간 원심분리하였다. 상층액을 3 내지 5 배 부피의 금속 킬레이트 컬럼 완충액(6 M 구아니딘, 20 mM Tris, pH 7.4)으로 희석하고 0.22 ㎛ 필터로 여과하여 투명하게하였다. 투명한 추출물을 금속 킬레이트 컬럼 완충액으로 평형화된 퀴아젠(Qiagen) Ni-NTA 금속 킬레이트 컬럼 5 ㎖에 로딩하였다. 50mM 이미다졸(Calbiochem, Utrol grade)을 함유하는 추가의 완충액(pH 7.4)으로 컬럼을 세척하였다. 250 mM 이미다졸을 함유하는 완충액으로 단백질을 용출시키고, 원하는 단백질을 포함하는 분획을 모아 4℃에 보관하였다. 아미노산 서열에 따라 계산된 흡광 계수를 이용하여 280 nm에서의 흡광도로 단백질 농도를 측정하였다.0.5-1 L E. coli paste fermentation broth (6-10 g pellets) was resuspended in 10-fold volume (w / v) of 7 M guanidine, 20 mM Tris, pH 8 buffer. Solid sodium sulfite and sodium sationate were added to final concentrations of 0.1 M and 0.02 M, respectively, and the solution was stirred at 4 ° C. overnight. At this stage, sulfite produced a denatured protein that blocked all cysteine residues. This solution was centrifuged for 30 minutes at 40,000 rpm in a Beckman super centrifuge. The supernatant was diluted with 3 to 5 volumes of metal chelate column buffer (6 M guanidine, 20 mM Tris, pH 7.4) and filtered through a 0.22 μm filter to make clear. The clear extract was loaded into 5 ml of Qiagen Ni-NTA metal chelate column equilibrated with metal chelate column buffer. The column was washed with additional buffer (pH 7.4) containing 50 mM imidazole (Calbiochem, Utrol grade). Proteins were eluted with a buffer containing 250 mM imidazole, and fractions containing the desired protein were collected and stored at 4 ° C. Protein concentration was measured by absorbance at 280 nm using the extinction coefficient calculated according to the amino acid sequence.

20 mM Tris, pH 8.6, 0.3 M NaCl, 2.5 M 우레아, 5 mM 시스테인, 20 mM 글리신 및 1 mM EDTA로 이루어진, 새로이 제조한 리폴딩 완충액에 샘플을 천천히 희석하여 단백질을 리폴딩시켰다. 리폴딩 부피는 최종 단백질 농도가 50 내지 100 ㎍/㎖가 되도록 정하였다. 리폴딩 용액을 4℃에서 12 내지 36시간 가량 서서히 교반하였다. 최종농도가 0.4% (약 pH 3)가 되도록 TFA를 가하여 리폴딩 반응을 정지시켰다. 추가로 단백질을 정제하기 전에, 용액을 0.22 ㎛ 필터로 여과하고 아세토니트릴을 최종 농도 2 내지 10%가 되도록 가하였다. 10 내지 80%의 아세토니트릴 농도 구배로 용출시키코 0.1% TFA의 이동 완충액을 이용하는 포로스(Poros) R1/H 역상 컬럼 크로마토그래피에서 리폴딩된 단백질을 분석하였다. A280흡광도가 나타나는 분획의 분취액을 SDS 폴리아크릴아미드 겔에서 분석하여 균질하게 리폴딩된 단백질을 포함하는 분획을 모았다. 통상, 적절하게 리폴딩된 단백질은 역상 수지와의 상호작용으로부터 보호되는 소수성의 내부 부분으로 가장 밀착되기 때문에, 대부분의 단백질에서 적절하게 리폴딩된 단백질 형태는 아세토니트릴의 가장 낮은 농도에서 용출된다. 응집된 단백질은 대개 높은 아세토니트릴 농도에서 용출된다. 역상 단계는 바람직한 형태의 단백질로부터 잘못 폴딩된 형태의 단백질을 분리할뿐 아니라, 샘플로부터 내독소를 제거한다.The protein was refolded by slow dilution of the sample in freshly prepared refolding buffer consisting of 20 mM Tris, pH 8.6, 0.3 M NaCl, 2.5 M urea, 5 mM cysteine, 20 mM glycine and 1 mM EDTA. The refolding volume was set to a final protein concentration of 50-100 μg / ml. The refolding solution was slowly stirred at 4 ° C. for 12-36 hours. The refolding reaction was stopped by adding TFA to a final concentration of 0.4% (about pH 3). Before further purification of the protein, the solution was filtered through a 0.22 μm filter and acetonitrile was added to a final concentration of 2-10%. Refolded proteins were analyzed in Poros R1 / H reversed phase column chromatography using a 0.1% TFA transfer buffer eluting with an acetonitrile concentration gradient of 10-80%. Aliquots of fractions showing A 280 absorbance were analyzed on SDS polyacrylamide gels to collect fractions containing homogeneously refolded proteins. In general, properly refolded proteins form most tightly to the hydrophobic inner portion that is protected from interaction with the reverse phase resin, so in most proteins the properly refolded protein form elutes at the lowest concentration of acetonitrile. Aggregated proteins are usually eluted at high acetonitrile concentrations. The reverse phase step not only separates the misfolded form of protein from the desired form of protein but also removes endotoxins from the sample.

바람직하게 폴딩된 PRO327 단백질을 포함하는 각각의 분획을 회수하여, 용액에 부드러운 질소 기류를 사용하여 아세토니트릴을 제거하였다. 투석법이나 제제화 완충액으로 평형화되고 멸균 여과된 G25 슈퍼파인 (Superfine, Pharmacia) 수지를 이용한 겔 여과법으로 0.14 M 염화나트륨 및 4% 만니톨이 함유된 20 mM Hepes, pH 6.8로 단백질을 제제화하였다.Each fraction, preferably containing folded PRO327 protein, was recovered and acetonitrile was removed using a gentle nitrogen stream in the solution. Proteins were formulated with 20 mM Hepes, pH 6.8, containing 0.14 M sodium chloride and 4% mannitol by gel filtration using dialysis or sterile filtered G25 Superfine, Pharmacia resin equilibrated with formulation buffer.

실시예 21: 포유동물 세포에서 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 발현Example 21 Expression of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 in Mammalian Cells

본 실시예는 포유동물 세포에서 재조합 발현에 의해 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 가능한 글리코실화된 형태를 제조하는 방법을 예시한다.This example provides a method for producing possible glycosylated forms of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 by recombinant expression in mammalian cells. To illustrate.

pRK5 벡터(1989년 3월 15일 공개된 EP 제307,247호 참조)를 발현 벡터로 사용하였다. 임의로, 상기 문헌(Sambrook et al.)에 기재된 라이게이션 방법을 이용하여 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 DNA를 선택된 제한 효소로 pRK5에 라이게이션시켜, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드 DNA를 삽입하였다. 결과의 벡터를 pRK5-PRO201, pRK5-PRO292, pRK5-PRO327, pRK5-PRO1265, pRK5-PRO344, pRK5-PRO343, pRK5-PRO347, pRK5-PRO357, pRK5-PRO715,pRK5-PRO1017, pRK5-PRO1112, pRK5-PRO509, pRK5-PRO853 또는 pRK5-PRO882라 명명하였다.The pRK5 vector (see EP 307,247 published March 15, 1989) was used as the expression vector. Optionally, the restriction enzymes selected for PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 DNA were selected using the ligation methods described in Sambrook et al. PRK5 was used to insert PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide DNA. The vector of the result is pRK5-PRO201, pRK5-PRO292, pRK5-PRO327, pRK5-PRO1265, pRK5-PRO344, pRK5-PRO343, pRK5-PRO347, pRK5-PRO357, pRK5-PRO715, pRK5-PRO1017, pRK5-PRO1112, pRK5- It was named PRO509, pRK5-PRO853 or pRK5-PRO882.

한 실시양태에서, 숙주 세포로서 293 세포를 선택할 수 있다. 인간 293 세포(ATCC CCL 1573)를 송아지 태 혈청(fetal calf serum) 및 임의로 영양소 및(또는) 항생제가 포함된 DMEM와 같은 배지에서 조직 배양 플레이트에 가득 차도록(confluent) 배양하였다. pRK5-PRO201, pRK5-PRO292, pRK5-PRO327, pRK5-PRO1265, pRK5-PRO344, pRK5-PRO343, pRK5-PRO347, pRK5-PRO357, pRK5-PRO715, pRK5-PRO1017, pRK5-PRO1112, pRK5-PRO509, pRK5-PRO853 또는 pRK5-PRO882 DNA 약 10 ㎍을 VA RNA 유전자를 코딩하는 DNA(Thimmappaya et al., Cell, 31: 543(1982)) 약 1 ㎍과 혼합하여, 1 mM Tris-HCl, 0.1 mM EDTA 및 0.227 M CaCl2500 ㎕에 용해시켰다. 이 혼합물에 50 mM HEPES(pH 7.35), 280 mM NaCl, 1.5 mM NaPO4500 ㎕를 적가하여 25℃에서 10분간 침전물을 형성시켰다. 침전물을 현탁시키고 293 세포에 가하여 37℃에서 4시간 가량을 정치시켰다. 배지를 흡입 제거하고 PBS 중의 20% 글리세롤 2 ㎖를 30초 동안 가하였다. 이어서, 293세포를 무혈청 배지로 세척하고 새로운 배지를 가하여 5일간 세포를 배양하였다.In an embodiment, 293 cells can be selected as host cells. Human 293 cells (ATCC CCL 1573) were incubated confluent into tissue culture plates in medium such as fetal calf serum and optionally DMEM containing nutrients and / or antibiotics. pRK5-PRO201, pRK5-PRO292, pRK5-PRO327, pRK5-PRO1265, pRK5-PRO344, pRK5-PRO343, pRK5-PRO347, pRK5-PRO357, pRK5-PRO715, pRK5-PRO1017, pRK5-PRO1112, pRK5-PRO509, pRK5- About 10 μg of PRO853 or pRK5-PRO882 DNA is mixed with about 1 μg of DNA encoding the VA RNA gene (Thimmappaya et al., Cell, 31: 543 (1982)), 1 mM Tris-HCl, 0.1 mM EDTA and 0.227 It was dissolved in 500 μl M CaCl 2 . To this mixture, 500 µl of 50 mM HEPES (pH 7.35), 280 mM NaCl, 1.5 mM NaPO 4 was added dropwise to form a precipitate at 25 ° C for 10 minutes. The precipitate was suspended and added to 293 cells and left standing at 37 ° C. for about 4 hours. The medium was aspirated off and 2 ml of 20% glycerol in PBS was added for 30 seconds. Subsequently, 293 cells were washed with serum-free medium and fresh medium was added to incubate the cells for 5 days.

형질감염 약 24시간 후에 배지를 제거하고 배지(만으로) 또는 200 μCi/㎖35S-시스테인 및 200 μCi/㎖35S-메티오닌을 포함하는 배지로 교체하였다. 12시간 배양 후, 조건화된 배지를 수집하고 회전 필터에서 농축시켜 15% SDS 겔에 로딩하였다. 처리된 겔을 건조시키고 일정 기간동안 필름에 노출시켜 PRO201, PRO292,PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 존재를 확인하였다. 형질감염된 세포를 포함하는 배양액을 추가로 배양시키고(무혈청 배지에서), 이를 선택된 생물분석법으로 시험하였다.About 24 hours after transfection, the medium was removed and replaced with medium (only) or with medium containing 200 μCi / ml 35 S-cysteine and 200 μCi / ml 35 S-methionine. After 12 hours of incubation, the conditioned medium was collected, concentrated in a rotary filter and loaded onto a 15% SDS gel. The treated gel was dried and exposed to film for a period of time to confirm the presence of the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides. Cultures containing the transfected cells were further cultured (in serum-free medium) and tested by selected bioassays.

별법으로, 문헌(Somparyrac et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 12:7575(1981))에 기재된 덱스트란 술페이트 방법을 이용하여 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 DNA를 293 세포에 일시적으로 도입시킬 수 있었다. 293 세포를 회전 플라스크에서 최대 밀도가 되도록 배양하고 pRK5-PRO201, pRK5-PRO292, pRK5-PRO327, pRK5-PRO1265, pRK5-PRO344, pRK5-PRO343, pRK5-PRO347, pRK5-PRO357, pRK5-PRO715, pRK5-PRO1017, pRK5-PRO1112, pRK5-PRO509, pRK5-PRO853 또는 pRK5-PRO882 DNA 700 ㎍을 가하였다. 세포를 우선 원심분리하여 회전 플라스크로부터 농축하고 PBS로 세척하였다. DNA-덱스트란 침전물을 세포 펠릿 상에서 4시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 20% 글리세롤로 90초간 처리하고 조직 배양 배지로 세척한 후, 조직 배양 배지, 5 ㎍/㎖ 소의 인슐린 및 0.1 ㎍/㎖ 소의 트랜스페린을 포함하는 회전 플라스크에 다시 넣었다. 약 4일 후에 조건화된 배지를 원심분리하고 여과시켜 세포와 파쇄물을 제거하였다. 발현된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 포함하는 샘플을 농축시키고, 투석 및(또는) 컬럼 크로마토그래피와 같은 선택된 방법으로 정제하였다.Alternatively, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, using the dextran sulfate method described in Somparyrac et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 12: 7575 (1981). PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 DNA could be transiently introduced into 293 cells. 293 cells were cultured to maximum density in a rotating flask and pRK5-PRO201, pRK5-PRO292, pRK5-PRO327, pRK5-PRO1265, pRK5-PRO344, pRK5-PRO343, pRK5-PRO347, pRK5-PRO357, pRK5-PRO715, pRK5- 700 μg of PRO1017, pRK5-PRO1112, pRK5-PRO509, pRK5-PRO853 or pRK5-PRO882 DNA was added. Cells were first centrifuged, concentrated from a rotary flask and washed with PBS. DNA-dextran precipitates were incubated for 4 hours on cell pellets. Cells were treated with 20% glycerol for 90 seconds and washed with tissue culture medium and then placed back into a rotating flask containing tissue culture medium, 5 μg / ml bovine insulin and 0.1 μg / ml bovine transferrin. After about 4 days the conditioned media was centrifuged and filtered to remove cells and debris. Concentrate the sample containing the expressed PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 and, in selected methods, such as dialysis and / or column chromatography. Purified.

다른 실시양태로, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 CHO 세포에 발현시킬 수 있다. pRK5-PRO201, pRK5-PRO292, pRK5-PRO327, pRK5-PRO1265, pRK5-PRO344, pRK5-PRO343, pRK5-PRO347, pRK5-PRO357, pRK5-PRO715, pRK5-PRO1017, pRK5-PRO1112, pRK5-PRO509, pRK5-PRO853 또는 pRK5-PRO882 벡터를 공지된 시약, 예를 들어 CaPO4또는 DEAE 덱스트란을 이용하여 CHO 세포에 형질감염시킬 수 있다. 상기 언급한 바와 같이, 세포를 배양하고 배지(만으로) 또는35S-메티오닌과 같은 방사선 표지를 포함하는 배지로 배양액을 교체하였다. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 존재를 확인한 후, 배양 배지를 무혈청 배지로 교체하였다. 바람직하게는 6일 가량 배양물을 배양한 후에 조건화된 배지를 회수한다. 발현된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 포함하는 배지를 농축시켜 선택된 방법으로 정제하였다.In other embodiments, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 can be expressed in CHO cells. pRK5-PRO201, pRK5-PRO292, pRK5-PRO327, pRK5-PRO1265, pRK5-PRO344, pRK5-PRO343, pRK5-PRO347, pRK5-PRO357, pRK5-PRO715, pRK5-PRO1017, pRK5-PRO1112, pRK5-PRO509, pRK5- PRO853 or pRK5-PRO882 vectors can be transfected into CHO cells using known reagents such as CaPO 4 or DEAE dextran. As mentioned above, the cells were cultured and the cultures were replaced with medium (only) or medium containing radiolabels such as 35 S-methionine. After confirming the presence of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides, the culture medium was replaced with serum-free medium. Preferably, after culturing the culture for about 6 days, the conditioned medium is recovered. The medium containing the expressed PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 was concentrated and purified by the selected method.

또한, 에피토프 태그가 부착된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882는 CHO 숙주세포에서 발현될 수 있다. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882는 pRK5 벡터로부터 서브클로닝될 수 있다. 서브클론의 삽입체는 PCR을 통해폴리-His 태그와 같은 선택된 에피토프 태그가 부착된 형태로 번역 프레임에 맞게 배큘로바이러스 발현 벡터에 융합될 수 있다. 폴리-His 태그가 부착된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 삽입체는 안정한 클론의 선별을 위한 DHFR과 같은 선별 마커를 포함하는 SV40 유도 벡터로 서브클로닝될 수 있다. 최종적으로, CHO 세포는 (상기에서와 같이) SV40 유도 벡터로 형질감염될 수 있다. 발현을 확인하기 위해서 상기와 같은 방법으로 표지시킬 수 있다. 이어서, 폴리-His 태그가 부착되어 발현된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 포함하는 배양 배지를 농축시켜 Ni2+-킬레이트 친화 크로마토그래피와 같이 선택된 방법으로 정제할 수 있다. 또한, CHO 및(또는) COS 세포에서도 일시적 발현 과정에 의해 발현시킬 수 있다.In addition, epitope tagged PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 can be expressed in CHO host cells. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 can be subcloned from the pRK5 vector. Inserts of subclones can be fused to baculovirus expression vectors to fit the translation frame in the form of a selected epitope tag, such as a poly-His tag, via PCR. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 inserts with poly-His tags include a screening marker such as DHFR for screening stable clones Can be subcloned into an SV40 derived vector. Finally, CHO cells can be transfected with SV40 induction vectors (as above). Labeling can be performed in the same manner as above to confirm expression. Subsequently, the culture medium containing PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 expressed with poly-His tag was concentrated to provide Ni 2+ − Purification may be by a selected method such as chelate affinity chromatography. CHO and / or COS cells can also be expressed by transient expression processes.

PRO1265, PRO1017 및 PRO509를 일시적 발현 과정에 의해 CHO 세포에서 발현시켰다. 또한, PRO1265, PRO1017 및 PRO509를 안정한 발현 과정에 의해 CHO 세포에서 발현시켰다. 하기 실험 과정을 이용하여 CHO 세포 내에서 안정하게 발현시켰다. 각 단백질의 가용성 형태의 코딩 서열이 힌지, CH2 및 CH2 도메인을 포함하는 IgG1 불변 영역 서열에 융합된 IgG 구조체 (이뮤노어드헤신)로서 발현 및(또는) 폴리-His 태그가 부착된 형태로 단백질이 발현되었다.PRO1265, PRO1017 and PRO509 were expressed in CHO cells by transient expression process. In addition, PRO1265, PRO1017 and PRO509 were expressed in CHO cells by a stable expression process. The following experimental procedure was used to stably express in CHO cells. The protein is expressed in a poly-His-tagged form and expressed as an IgG construct (immunoadhesine) in which the coding sequence of the soluble form of each protein is fused to an IgG1 constant region sequence comprising a hinge, CH2 and CH2 domains. Expressed.

PCR 증폭에 이어 문헌 (Ausubel et al., Current Protocols of MolecularBiology, Unit 3.16, Johnn Wiley and Sons(1997))에 기재된 표준 방법을 이용하여 각 DNA를 CHO 발현 벡터에 서브클로닝하였다. CHO 발현 벡터는 목적하는 DNA의 5' 및 3'에 적합한 제한 부위를 갖도록 제조되어 cDNA의 제한 부위가 편리하게 셔틀링될 수 있게 된다. CHO 세포에서의 발현에 사용되는 벡터는 문헌(Lucas et al., Nucl. Acids Res. 24:9 1774-1779(1996))에 기재된 바와 같으며, 목적하는 cDNA와 디히드로폴레이트 리덕타제(DHFR)를 발현시키기 위해 SV40 초기 프로모터/인핸서를 사용하였다. DHFR 발현으로 형질감염 후에 플라스미드의 안정하게 유지되는 세포를 선별할 수 있다.Following PCR amplification, each DNA was subcloned into a CHO expression vector using standard methods described in Ausubel et al., Current Protocols of Molecular Biology, Unit 3.16, Johnn Wiley and Sons (1997). CHO expression vectors are prepared to have restriction sites suitable for 5 'and 3' of the desired DNA so that the restriction sites of the cDNA can be conveniently shuttled. Vectors used for expression in CHO cells are as described in Lucas et al., Nucl.Acids Res. 24: 9 1774-1779 (1996), and the desired cDNA and dihydrofolate reductase (DHFR) SV40 early promoter / enhancer was used to express. DHFR expression allows selection of cells that remain stable in the plasmid after transfection.

시판되는 형질감염 시약인 슈퍼펙트(상표명)(Superfect, Qiagen), 도스퍼(상표명)(Dosper) 또는 퓨진(상표명)(Fugene, Boehringer Mannheim)을 이용하여, 원하는 플라스미드 DNA 12 ㎍을 약 1000만개의 CHO 세포에 도입하였다. 상기 문헌(Lucas et al.)에 기재된 방법에 따라 세포를 배양하였다. 추후에 세포를 배양 및 생산하기 위해 약 3 x 10-7세포를 하기 기재된 방법에 따라 앰플에 동결시켰다.Using commercially available transfection reagents such as Superfect, Qiagen, Dosper or Fugene, Boehringer Mannheim, 12 μg of the desired plasmid DNA was added to approximately 10 million pieces. Introduced to CHO cells. Cells were cultured according to the method described by Lucas et al., Supra. About 3 × 10 −7 cells were frozen in ampoules according to the method described below for later culturing and producing cells.

플라스미드 DNA를 포함하는 앰플을 수조에 넣어 녹인 후 볼텍싱하여 혼합하였다. 배지 10 ㎖를 포함하는 원심분리 튜브에 피펫으로 내용물을 넣고 1000 rpm으로 5분간 원심분리하였다. 상층액을 흡입 제거하고 세포를 10 ㎖ 선택 배지(0.2 ㎛ 투석 여과된 5% 송아지 태 혈청을 포함하는, 0.2 ㎛ 여과지를 통해 여과된 PS20)에 재현탁시켰다. 선택 배지 90 ㎖를 포함하는 100 ㎖ 회전 플라스크에 세포를 분주하였다. 1 내지 2일 후, 선택 배지 150 ㎖로 채워진 250 ㎖ 회전 플라스크로 세포를 옮겨 37℃에서 배양하였다. 2 내지 3일 후에 250 ㎖, 500 ㎖ 및 2000 ㎖ 회전 플라스크에 ㎖당 3 x 105개의 세포를 접종하였다. 세포 배양액을 원심 분리하여 신선한 배지로 교환하고 생산 배지에 재현탁하였다. 임의의 적합한 CHO 배지를 사용할 수 있으나, 미국 특허 제5,122,469호 (1992년 6월 16일)에 기재된 생산 배지를 실제로 사용하였다. 3 L 생산 회전 플라스크에 1.2 x 106세포/㎖가 되도록 접종하였다. 제0일에 세포 수와 pH를 측정하였다. 제1일에 회전 플라스크에서 샘플을 취해 여과된 공기의 살포를 개시하였다. 제2일에 회전 플라스크에서 샘플을 취해 온도를 33℃로 바꾸고 500 g/L-글루코스 30 ㎖ 및 10% 소포제 0.6 ㎖(예를 들어, 35% 폴리디메틸 실록산 유상액, Dow Corning 365 의약 등급 유상액)을 가하였다. 전체 생산기 동안, 필요에 따라 pH를 약 7.2가 유지되도록 조절하였다. 10일 후 또는 생존률이 70% 미만으로 떨어질 즈음 세포 배양액을 원심분리로 회수하고 0.22 ㎛ 필터에 여과시켰다. 여과액을 4℃에 보관하거나 정제용 컬럼에 즉시 로딩하였다.Ampoules containing the plasmid DNA were dissolved in a water bath and vortexed and mixed. The contents were pipetted into a centrifuge tube containing 10 ml of medium and centrifuged at 1000 rpm for 5 minutes. The supernatant was aspirated off and cells were resuspended in 10 ml selection medium (PS20 filtered through 0.2 μm filter paper containing 0.2 μm diafiltration filtered 5% calf serum). Cells were aliquoted into a 100 ml rotating flask containing 90 ml of selection medium. After 1-2 days, cells were transferred to a 250 ml rotating flask filled with 150 ml of selection medium and incubated at 37 ° C. After 2-3 days 250 ml, 500 ml and 2000 ml rotating flasks were seeded with 3 × 10 5 cells per ml. Cell cultures were centrifuged, exchanged with fresh medium and resuspended in production medium. Any suitable CHO medium may be used, but the production medium described in US Pat. No. 5,122,469 (June 16, 1992) was actually used. 3 L production rotary flasks were seeded at 1.2 × 10 6 cells / ml. On day 0, cell number and pH were measured. On day 1 samples were taken from a rotating flask to initiate sparging of filtered air. On day 2, take a sample from a rotating flask and change the temperature to 33 ° C. and 30 ml of 500 g / L-glucose and 0.6 ml of 10% defoamer (eg 35% polydimethyl siloxane emulsion, Dow Corning 365 medicinal grade emulsion) ) Was added. During the entire production period, the pH was adjusted to maintain about 7.2 as needed. Cell cultures were recovered by centrifugation after 10 days or when viability dropped below 70% and filtered through a 0.22 μm filter. The filtrate was stored at 4 ° C. or immediately loaded onto a preparative column.

폴리-His 태그가 부착된 구조물의 경우, Ni-NTA 컬럼(Qiagen)을 이용하여 단백질을 정제하였다. 정제하기 전에 이미다졸을 5 mM 농도로 조건화된 배지에 가하였다. 0.3 M NaCl 및 5 mM 이미다졸을 포함하는 20 mM Hepes, pH 7.4 완충액으로 평형화된 Ni-NTA 컬럼 6 ㎖에 4℃에서 4 내지 5 ㎖/분의 유속으로 조건화된 배지를 주입하였다. 로딩 후에 컬럼을 추가의 평형 완충액으로 세척하고, 0.25 M 이미다졸을 포함하는 평형 완충액으로 단백질을 용출하였다. 이어서, 고도로 정제된 단백질을 25 ㎖의 G25 슈퍼파인(Pharmacia) 컬럼을 통해 10 mM Hepes, 0.14 M NaCl 및 4% 만니톨을 함유하는 저장 완충액(pH 6.8)중으로 염을 제거하고 -80℃에서 보관하였다.For poly-His tagged structures, proteins were purified using Ni-NTA columns (Qiagen). Imidazole was added to the conditioned medium at 5 mM concentration before purification. 6 ml of Ni-NTA column equilibrated with 20 mM Hepes, pH 7.4 buffer containing 0.3 M NaCl and 5 mM imidazole was injected with conditioned medium at a flow rate of 4-5 ml / min at 4 ° C. After loading the column was washed with additional equilibration buffer and the protein was eluted with equilibration buffer containing 0.25 M imidazole. The highly purified protein was then desalted through 25 ml G25 Superfine (Pharmacia) column in storage buffer (pH 6.8) containing 10 mM Hepes, 0.14 M NaCl and 4% mannitol and stored at -80 ° C. .

조건화된 배지로부터 이뮤노어드헤신(Fc 포함) 구조물을 하기와 같이 정제하였다. 조건화된 배지를 20 mM 인산 나트륨 완충액(pH 6.8)으로 평형화된 단백질 A 컬럼(Pharmacia) 5 ㎖에 주입하였다. 로딩 후, 컬럼을 평형 완충액으로 세척하고 100 mM 시트르산(pH 3.5)으로 용출하였다. 용출된 단백질을 275 ㎕의 1 M Tris 완충액(pH 9)을 포함하는 튜브에 1 ㎖ 분획으로 회수하여 즉시 중화시켰다. 이어서, 고도로 정제된 단백질을 폴리-His 태그가 부착된 단백질의 경우에 대해 상기 기재된 바와 같이 저장 완충액(pH6.8) 중으로 염을 제거하였다. SDS-PAGE와 에드만 분해법으로 수행되는 N-말단 아미노산 서열 분석으로 단백질의 균일함을 확인하였다.The immunoadhesin (including Fc) constructs from the conditioned media were purified as follows. Conditioned media was injected into 5 ml of Protein A column (Pharmacia) equilibrated with 20 mM sodium phosphate buffer (pH 6.8). After loading, the column was washed with equilibration buffer and eluted with 100 mM citric acid, pH 3.5. The eluted protein was recovered in 1 ml fractions in a tube containing 275 μl of 1 M Tris buffer (pH 9) and immediately neutralized. The highly purified protein was then desalted into storage buffer (pH6.8) as described above for the poly-His tagged protein. Protein uniformity was confirmed by N-terminal amino acid sequence analysis performed by SDS-PAGE and Edman digestion.

또한, PRO292, PRO327, PRO344, PRO347, PRO357 및 PRO853을 COS 세포에서의 일시적 발현에 의해 제조하였다.In addition, PRO292, PRO327, PRO344, PRO347, PRO357 and PRO853 were prepared by transient expression in COS cells.

실시예 22: 효모에서 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 발현Example 22 Expression of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 Polypeptides in Yeast

다음 방법은 효모에서 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 재조합 발현을 기재하고 있다.The following method describes recombinant expression of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 in yeast.

우선, ADH2/GAPDH 프로모터로부터 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 세포내 생산 또는 분비를 위한 효모 발현 벡터를 제조하였다. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 코딩하는 DNA 및 프로모터를 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 세포내 발현을 위해 선택된 플라스미드의 적합한 제한 효소 부위에 삽입하였다. 분비의 경우에는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 발현을 위해, ADH2/GAPDH 프로모터, 천연 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 신호 펩티드 및 다른 포유동물의 신호 펩티드(예를 들어, 효모 알파-인자 또는 인버타제 분비 신호/리더 서열)를 코딩하는 DNA, 및 링커 서열(필요한 경우)과 함께 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 코딩하는 DNA를 선택된 플라스미드에 클로닝할 수 있다.First, yeast expression vectors for intracellular production or secretion of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides were prepared from the ADH2 / GAPDH promoter. DNAs and promoters encoding PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882, and PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, The appropriate restriction enzyme site of the selected plasmid was inserted for intracellular expression of the PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. In the case of secretion, for the expression of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882, the ADH2 / GAPDH promoter, natural PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, DNA encoding PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 signal peptide and other mammalian signal peptides (e.g., yeast alpha-factor or invertase secretion signal / leader sequence) DNA encoding PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 with the, and linker sequences (if necessary) can be cloned into the selected plasmid.

이어서, 효모 세포, 예를 들어 효모 균주 AB110을 상기 기재된 발현 플라스미드로 형질전환시키고 선택된 발효 배지에서 배양할 수 있다. 형질전환된 효모 상층액을 10% 트리클로로아세트산으로 침전시키고 SDS-PAGE로 분리한 후 겔을 쿠마시 블루로 염색하여 분석할 수 있다.Yeast cells, such as yeast strain AB110, can then be transformed with the expression plasmids described above and cultured in selected fermentation medium. Transformed yeast supernatants can be precipitated with 10% trichloroacetic acid and separated by SDS-PAGE followed by staining the gel with Coomassie Blue.

계속해서, 원심분리에 의해 발효 배지로부터 효모 세포를 회수하고 선택된 카트리지 필터를 이용하여 배지를 농축시켜 재조합 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 단리하고 정제할 수 있다. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 함유하는 농축액을 선택된 컬럼 크로마토그래피 수지를 이용하여 추가로 정제할 수 있다.Subsequently, the yeast cells are recovered from the fermentation medium by centrifugation, and the medium is concentrated using a selected cartridge filter, and the recombinant PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, The PRO853 or PRO882 can be isolated and purified. Concentrates containing PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 can be further purified using selected column chromatography resins.

실시예 23: 배큘로바이러스 감염 곤충 세포에서 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 발현Example 23 Expression of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 in Baculovirus Infected Insect Cells

다음 방법은 배큘로바이러스로 감염된 곤충 세포 내에서의 재조합 발현에 대하여 기재하고 있다.The following method describes recombinant expression in insect cells infected with baculovirus.

PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 코딩하는 서열을 배큘로바이러스 발현 벡터에 포함된 에피토프 태그의 상류에 융합시켰다. 이러한 에피토프 태그에는 폴리-His 태그 및 면역글로블린 태그(IgG의 Fc 영역과 같이)가 포함된다. 시판되는 플라스미드, 예를 들어 pVL1393(Novagen)에서 유도된 플라스미드를 포함하는 다양한 플라스미드를 사용할 수 있다. 요컨데, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 코딩하는 서열이나 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265,PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 코딩하는 서열의 원하는 부분(예를 들어, 막횡단 단백질의 세포외 도메인, 또는 세포외 단백질의 경우에 성숙 단백질 코딩하는 서열)을 5' 및 3' 영역에 상보적인 프라이머를 이용하여 PCR로 증폭하였다. 5' 프라이머는 인접한 (선택된) 제한 효소 부위를 포함할 수 있다. 이어서, 생성물을 선택된 제한 효소로 절단하여 발현 벡터에 서브클로닝하였다.Sequences encoding PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 were fused upstream of the epitope tag included in the baculovirus expression vector. Such epitope tags include poly-His tags and immunoglobulin tags (such as the Fc region of IgG). Various plasmids can be used, including commercially available plasmids, for example plasmids derived from pVL1393 (Novagen). In short, sequences coding for PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 or PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, 5 'and 3' the desired portion of the sequence encoding PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 (e.g., the extracellular domain of the transmembrane protein, or the mature protein coding sequence in the case of extracellular protein). PCR was amplified using primers complementary to the region. The 5 'primer may comprise contiguous (selected) restriction enzyme sites. The product was then cleaved with the selected restriction enzymes and subcloned into the expression vector.

리포펙틴(GIBCO-BRL로부터 구입)을 이용하여, 상기 플라스미드 및 배큘로골드 (상표명) (BaculoGold™) 바이러스 DNA (Phamingen)를 스포도프테라 프루기페르다 (Spodoptera frugiperda, "Sf9") 세포 (ATCC CRL 1711)에 동시 형질감염시켜 재조합 배큘로바이러스를 생성하였다. 28℃에서 4 내지 5일 배양 후에, 방출된 바이러스를 회수하여 이후의 증폭에 사용한다. 바이러스 감염 및 단백질 발현은 문헌(O'Reilley et al., Baculovirus Expression vectors: A laboratory Manual, Oxford: Oxford University Press (1994))에 따라 수행하였다.Using lipofectin (purchased from GIBCO-BRL), the plasmid and BaculoGold ™ virus DNA (Phamingen) were transferred to Spodoptera frugiperda ("Sf9") cells (ATCC). And co-transfected with CRL 1711) to generate recombinant baculovirus. After 4-5 days of incubation at 28 ° C., the released virus is recovered and used for subsequent amplification. Viral infection and protein expression were performed according to O'Reilley et al., Baculovirus Expression vectors: A laboratory Manual, Oxford: Oxford University Press (1994).

이어서, 폴리-His 태그가 부착되어 발현된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882는, 예를 들어 Ni2+-킬레이트 친화 크로마토그래피로 하기와 같이 정제될 수 있다. 문헌(Rupert et al., Nature, 362: 175-179(1993))에 따라 재조합 바이러스-감염된 Sf9 세포로부터 추출액을 제조한다. 요컨데, Sf9 세포를 세척하여 초음파 처리 완충액 (25 ㎖ Hepes, pH 7.9; 12.5 mM MgCl2; 0.1 mM EDTA;10% 글리세롤; 0.1% NP-40; 0.4 M KCl)에 재현탁시키고 얼음에서 20초간 2회 초음파 처리하였다. 초음파 처리물을 원심분리로 투명하게하고, 상층액을 로딩 완충액(50 mM 인산, 300 mM NaCl, 10% 글리세롤, pH 7.8)에 50배 희석하여 0.45 ㎛ 필터로 여과시켰다. Ni2+-NTA 아가로스 컬럼(Qiagen으로부터 구입)을 5 ㎖ 충진 부피로 제조하여 물 25 ㎖로 세척하고 로딩 완충액 25 ㎖로 평형화시켰다. 여과된 세포 추출물을 분당 0.5 ㎖로 컬럼에 로딩하였다. 로딩 완충액으로 A280기준선까지 컬럼을 세척하고, 이 시점에서 분획을 회수하기 시작하였다. 다음으로, 2차 세척 완충액(50 mM 인산; 300 mM NaCl, 10% 글리세롤, pH 6.0)으로 컬럼을 세척하여 비특이적으로 결합된 단백질을 용출시켰다. A280이 기준선에 다시 도달하면, 컬럼을 2차 세척 완충액 중의 0 내지 500 mM 이미다졸 구배로 전개시켰다. 1 ㎖ 분획을 회수하여 SDS-PAGE 및 은 염색하거나 알카리 포스파타제에 결합된 Ni2+-NTA(Qiagen)로 웨스턴 블롯팅하여 분석하였다. 용출된 His10-태그가 부착된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 포함하는 분획을 모아 로딩 완충액에 대해 투석하였다.Subsequently, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882, expressed with a poly-His tag, are, for example, Ni 2+ -chelated affinity chromatography. It can be purified as follows. Extracts are prepared from recombinant virus-infected Sf9 cells according to Rupert et al., Nature, 362: 175-179 (1993). In short, Sf9 cells were washed and resuspended in sonication buffer (25 mL Hepes, pH 7.9; 12.5 mM MgCl 2 ; 0.1 mM EDTA; 10% glycerol; 0.1% NP-40; 0.4 M KCl) and washed for 20 seconds on ice. Ultrasonicated twice. The sonication was cleared by centrifugation and the supernatant diluted 50-fold in loading buffer (50 mM phosphoric acid, 300 mM NaCl, 10% glycerol, pH 7.8) and filtered through a 0.45 μm filter. A Ni 2+ -NTA agarose column (purchased from Qiagen) was prepared in a 5 ml fill volume, washed with 25 ml of water and equilibrated with 25 ml of loading buffer. The filtered cell extracts were loaded into the column at 0.5 ml per minute. The column was washed up to A 280 baseline with loading buffer and at this point the recovery was started. Next, the column was washed with secondary wash buffer (50 mM phosphoric acid; 300 mM NaCl, 10% glycerol, pH 6.0) to elute nonspecifically bound proteins. Once A 280 reached baseline again, the column was developed with a 0 to 500 mM imidazole gradient in secondary wash buffer. 1 ml fractions were recovered and analyzed by SDS-PAGE and silver staining or Western blotting with Ni 2+ -NTA (Qiagen) bound to alkaline phosphatase. Fractions containing eluted His 10 -tagged PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 were collected and dialyzed against loading buffer.

별법으로, IgG 태그가 부착된 (또는 Fc 태그가 부착된) PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882의 정제는 공지된 크로마토그래피 기술, 예를 들어 단백질 A 또는 단백질 G 컬럼 크로마토그래피를 이용하여 수행할 수 있다.Alternatively, purification of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 tagged with IgG is known chromatography. Techniques, such as Protein A or Protein G column chromatography.

발현은 실제로 0.5 내지 2 L 규모로 수행되기는 했지만, 더 큰 제조 규모(예를 들어, 8 L)로 용이하게 규모를 키울 수 있다. 이들 단백질은, 단백질의 세포외 영역이 힌지, CH2 및 CH2 도메인을 포함하는 IgG1 불변 영역 서열에 융합된 IgG 구조체 (이뮤노어드헤신)로서 발현 및(또는) 폴리-His 태그가 부착된 형태로 발현되었다.Expression was actually performed on a 0.5 to 2 L scale, but can be easily scaled up to larger manufacturing scales (eg 8 L). These proteins are expressed as an IgG construct (immunoadhesine) in which the extracellular region of the protein is fused to an IgG1 constant region sequence comprising a hinge, CH2 and CH2 domains and / or in a poly-His tagged form. It became.

PCR 증폭 후에, 각각의 코딩 서열을 배큘로바이러스 발현 벡터(IgG 융합 단백질의 경우 pb.PH.IgG, 폴리-His 태그가 부착된 단백질의 경우 pb.PH.His.c)에 서브클로닝한 후, 리포펙틴(Gibco BRL)을 이용하여 이 벡터 및 배큘로골드(상표명) 배큘로바이러스 DNA(Pharmingen)를 105 스포도프테라 프루기페르다("Sf9") 세포(ATCC CRL 1711)에 동시 형질감염시켰다. pb.PH.IgG 및 pb.PH.His.c는 상업적으로 시판되는 pVL1393 배큘로바이러스 발현 벡터(Pharmingen)를 His 또는 Fc 태그 영역이 포함되도록 변형시킨 벡터이다. 10% FBS가 포함된 힝크(Hink's) TNM-FH 배지(Hyclone)에서 세포를 배양하였다. 세포를 28℃에서 5일 동안 배양하였다. 상층액을 회수하여, 감염 다중성(multiplicity of infection; MOI)이 약 10이 되도록 10% FBS가 포함된 힝크 TNM-FH 배지에서 Sf9 세포를 감염시킴으로써 수행되는 1차 바이러스 증폭에 이를 사용하였다. 세포를 28℃에서 3일 동안 배양하였다. 상층액을 회수하고, 히스티딘 태그가 부착된 단백질의 경우 Ni2+-NTA 비드(QIAGEN) 또는 IgG 태그가 부착된 단백질의 경우 단백질-A 세파로스 CL-4B 비드(Pharmacia) 25 ㎖에 상층액 1 ㎖을 배치 결합시킨 후에 쿠마시 블루 염색에 의해 알려진 농도의 단백질 표준과 비교하는 SDS-PAGE 분석에 의해 배큘로바이러스 발현 벡터 내 구조물의 발현을 확인하였다.After PCR amplification, each coding sequence was subcloned into a baculovirus expression vector (pb.PH.IgG for IgG fusion proteins, pb.PH.His.c for poly-His tagged proteins), Lipofectin (Gibco BRL) was used to co-transfect this vector and baculogold® baculovirus DNA (Pharmingen) into 105 Spodoptera prugiferda (“Sf9”) cells (ATCC CRL 1711). . pb.PH.IgG and pb.PH.His.c are vectors in which the commercially available pVL1393 baculovirus expression vector (Pharmingen) is modified to include His or Fc tag regions. Cells were cultured in Hink's TNM-FH medium (Hyclone) containing 10% FBS. Cells were incubated at 28 ° C. for 5 days. The supernatant was recovered and used for primary virus amplification carried out by infecting Sf9 cells in hink TNM-FH medium containing 10% FBS so that the multiplicity of infection (MOI) was about 10. Cells were incubated at 28 ° C. for 3 days. Recover the supernatant and place the supernatant in 25 ml of protein-A Sepharose CL-4B beads (Pharmacia) for histidine tagged proteins or Ni 2+ -NTA beads (QIAGEN) for IgG tagged proteins. Expression of the constructs in the baculovirus expression vectors was confirmed by SDS-PAGE analysis comparing batches of ml and comparing them to protein standards of known concentration by Coomassie blue staining.

1차 바이러스 증폭 상층액을 사용하여, ESF-921 배지(Expression Systems LLC)가 들어있는 회전 플라스크 중의 Sf9 세포 배양액(500 ㎖)을 MOI 약 0.1로 감염시켰다. 세포를 28℃에서 3일 동안 배양하였다. 상층액을 회수하여 여과하였다. 필요한 경우, 회전 플라스크 배양액의 발현이 확인될 때까지 배치 결합 및 SDS-PAGE 분석을 반복하였다.The primary virus amplified supernatant was used to infect Sf9 cell culture (500 mL) in a rotating flask containing ESF-921 medium (Expression Systems LLC) with about 0.1 MOI. Cells were incubated at 28 ° C. for 3 days. The supernatant was recovered and filtered. If necessary, batch binding and SDS-PAGE analysis was repeated until expression of the rotating flask culture was confirmed.

형질감염된 세포로부터의 조건화된 배지(0.5 내지 3 L)를 원심분리에 의해 회수하여 세포를 제거한 후, 0.22 ㎛ 필터로 여과하였다. 폴리-His 태그가 부착된 구조물의 경우, Ni2+-NTA 컬럼(Qiagen)을 이용하여 단백질을 정제하였다. 정제하기 전에 이미다졸을 5 mM 농도로 조건화된 배지에 가하였다. 0.3 M NaCl 및 5 mM 이미다졸을 포함하는 20 mM Hepes, pH 7.4 완충액으로 평형화된 Ni-NTA 컬럼 6 ㎖에 4℃에서 4 내지 5 ㎖/분의 유속으로 조건화된 배지를 주입하였다. 로딩 후에 컬럼을 추가의 평형 완충액으로 세척하고, 0.25 M 이미다졸을 포함하는 평형 완충액으로 단백질을 용출하였다. 이어서, 고도로 정제된 단백질을 25 ㎖의 G25 슈퍼파인(Pharmacia) 컬럼을 통해 10 mM Hepes, 0.14 M NaCl 및 4% 만니톨을 함유하는 저장 완충액(pH 6.8)중으로 염을 제거하고 -80℃에서 보관하였다.Conditioned medium (0.5-3 L) from the transfected cells was recovered by centrifugation to remove cells and then filtered through a 0.22 μm filter. For poly-His tagged structures, proteins were purified using Ni 2+ -NTA columns (Qiagen). Imidazole was added to the conditioned medium at 5 mM concentration before purification. 6 ml of Ni-NTA column equilibrated with 20 mM Hepes, pH 7.4 buffer containing 0.3 M NaCl and 5 mM imidazole was injected with conditioned medium at a flow rate of 4-5 ml / min at 4 ° C. After loading the column was washed with additional equilibration buffer and the protein was eluted with equilibration buffer containing 0.25 M imidazole. The highly purified protein was then desalted through 25 ml G25 Superfine (Pharmacia) column in storage buffer (pH 6.8) containing 10 mM Hepes, 0.14 M NaCl and 4% mannitol and stored at -80 ° C. .

조건화된 배지로부터 이뮤노어드헤신(Fc 포함) 구조물을 하기와 같이 정제하였다. 조건화된 배지를 20 mM 인산 나트륨 완충액(pH 6.8)으로 평형화된 단백질 A 컬럼(Pharmacia) 5 ㎖에 주입하였다. 로딩 후, 컬럼을 평형 완충액으로 세척하고 100 mM 시트르산(pH 3.5)으로 용출하였다. 용출된 단백질을 275 ㎕의 1 M Tris 완충액(pH 9)을 포함하는 튜브에 1 ㎖ 분획으로 회수하여 즉시 중화시켰다. 이어서, 고도로 정제된 단백질을 폴리-His 태그가 부착된 단백질의 경우에 대해 상기 기재된 바와 같이 저장 완충액(pH6.8) 중으로 염을 제거하였다. SDS 폴리아크릴아미드 겔(PAG) 전기영동과 에드만 분해법으로 수행되는 N-말단 아미노산 서열 분석으로 단백질의 균일함을 확인하였다.The immunoadhesin (including Fc) constructs from the conditioned media were purified as follows. Conditioned media was injected into 5 ml of Protein A column (Pharmacia) equilibrated with 20 mM sodium phosphate buffer (pH 6.8). After loading, the column was washed with equilibration buffer and eluted with 100 mM citric acid, pH 3.5. The eluted protein was recovered in 1 ml fractions in a tube containing 275 μl of 1 M Tris buffer (pH 9) and immediately neutralized. The highly purified protein was then desalted into storage buffer (pH6.8) as described above for the poly-His tagged protein. Protein uniformity was confirmed by N-terminal amino acid sequence analysis performed by SDS polyacrylamide gel (PAG) electrophoresis and Edman digestion.

상기 기재된 방법에 의해 PRO327, PRO344 및 PRO509를 배큘로바이러스 감염된 Sf9 곤충세포에서 발현시켰다.PRO327, PRO344 and PRO509 were expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells by the method described above.

별법으로, 하이 5(high 5) 세포에 혼입시키는 변형된 배큘로바이러스 방법을 이용할 수 있다. 이 방법에서는 원하는 서열을 코딩하는 DNA를 Pfu(Stratagene)과 같은 적합한 시스템으로 증폭시키거나, 배큘로바이러스 발현 벡터에 포함된 에피토프 태그의 (5') 상류에 융합시켰다. 이러한 에피토프 태그에는 폴리-His 태그 및 면역글로불린 태그(예를 들어, IgG의 Fc 영역)가 포함된다. pIE1-1(Novagen)과 같이 상업적으로 시판되는 플라스미드에서 유도된 것을 포함하는 다양한 벡터가 사용될 수 있다. pIE1-1및 pIE1-2 벡터는 안정하게 형질전환된 곤충 세포에서 배큘로바이러스 ie1 프로모터로부터 재조합 단백질이 구성적으로 발현되도록 고안된 것이다. 이 플라스미드는 단지 다중 클로닝 부위의 방향만 다르고, 비감염 곤충 세포에서 ie1-매개 유전자 발현에 중요한 것으로 알려진 모든 프로모터 서열 및 hr5 인핸서를 포함하고 있다. pIE1-1및 pIE1-2는 번역 개시 부위를 포함하기 때문에 융합 단백질의 제조에 사용될 수 있다. 요컨데, 원하는 서열 또는 원하는 서열의 부분(예를 들어, 막횡단 단백질의 세포외 도메인을 코딩하는 서열)을 5' 및 3' 영역에 상보적인 프라이머를 이용하여 PCR로 증폭하였다. 5' 프라이머는 인접한 (선택된) 제한 효소 부위를 포함할 수 있다. 이어서, 생성물을 선택된 제한 효소로 절단하여 발현 벡터에 서브클로닝하였다. 예를 들어, pIE1-1의 유도체는 원하는 서열의 (3') 하류에 인간 IgG의 Fc 영역(pb.PH.IgG) 또는 8개의 히스티딘(pb.PH.His) 태그를 포함할 수 있다.Alternatively, a modified baculovirus method can be employed that incorporates high 5 cells. In this method, DNA encoding the desired sequence was amplified with a suitable system such as Pfu (Stratagene) or fused upstream (5 ') of the epitope tag included in the baculovirus expression vector. Such epitope tags include poly-His tags and immunoglobulin tags (eg, the Fc region of IgG). Various vectors can be used, including those derived from commercially available plasmids such as pIE1-1 (Novagen). The pIE1-1 and pIE1-2 vectors are designed to constitutively express recombinant proteins from baculovirus ie1 promoters in stably transformed insect cells. This plasmid only differs in the direction of the multiple cloning site and contains all promoter sequences and hr5 enhancers known to be important for ie1-mediated gene expression in uninfected insect cells. pIE1-1 and pIE1-2 can be used in the preparation of fusion proteins because they contain a translation initiation site. In short, the desired sequence or portion of the desired sequence (eg, the sequence encoding the extracellular domain of the transmembrane protein) was amplified by PCR using primers complementary to the 5 'and 3' regions. The 5 'primer may comprise contiguous (selected) restriction enzyme sites. The product was then cleaved with the selected restriction enzymes and subcloned into the expression vector. For example, a derivative of pIE1-1 may comprise an Fc region (pb.PH.IgG) or eight histidine (pb.PH.His) tags of human IgG downstream (3 ') of the desired sequence.

하이 5 세포를 CO2, 페니실린 및 스트렙토마이신이 없는 27℃의 조건하에서 50%가 채워지도록 배양하였다. 각각의 150 mm 플레이트에 사용하기 위해, 원하는 서열을 포함하는 pIE 기재의 벡터 30㎍을 Ex-세포 배지(배지: Ex-Cell 401 + 1/100 L-Glu, JHR Biosciences #14401-78P, 주의: 이 배지는 빛에 민감함) 1 ㎖과 혼합하고, 별도의 튜브에 셀펙틴(CellFECTIN, Gibco BRL #10362-010) 100㎕를 Ex-세포 배지 1 ㎖과 혼합(볼텍싱으로 혼합)하였다. 상기 2가지 용액을 혼합하여 상온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. Ex-세포 배지 8 ㎖을 DNA와 셀펙틴의 혼합물 2 ㎖에 가하고, 이를 미리 Ex-세포 배지로 1회 세척된 하이 5 세포에 가하였다. 이어서, 플레이트를 어두운 상온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. DNA와 셀펙틴의 혼합물을 흡입 제거하고, 세포를 Ex-세포 배지로 1회 세척하여 과량의 셀펙틱을 제거한 후, 신선한 Ex-세포 배지 30 ㎖을 가하고 세포를 28℃에서 3일 동안 배양하였다.상층액을 회수하고, 히스티딘 태그가 부착된 단백질의 경우 Ni2+-NTA 비드(QIAGEN) 또는 IgG 태그가 부착된 단백질의 경우 단백질-A 세파로스 CL-4B 비드(Pharmacia) 25 ㎖에 상층액 1 ㎖을 배치 결합시킨 후에 쿠마시 블루 염색에 의해 알려진 농도의 단백질 표준과 비교하는 SDS-PAGE 분석에 의해 배큘로바이러스 발현 벡터 내 서열의 발현을 측정하였다.High 5 cells were cultured to fill 50% under 27 ° C. free of CO 2 , penicillin and streptomycin. For use on each 150 mm plate, 30 μg of a pIE based vector containing the desired sequence was transferred to Ex-cell medium (medium: Ex-Cell 401 + 1/100 L-Glu, JHR Biosciences # 14401-78P, note: This medium was mixed with 1 ml of light, and 100 µl of Cellfectin (CellFECTIN, Gibco BRL # 10362-010) was mixed with 1 ml of Ex-cell medium (mixed by vortexing) in a separate tube. The two solutions were mixed and incubated at room temperature for 15 minutes. 8 ml of Ex-cell medium was added to 2 ml of a mixture of DNA and cefectin and it was added to high 5 cells which had been washed once with Ex-cell medium. The plates were then incubated for 1 hour at dark room temperature. The mixture of DNA and cefectin was aspirated off, the cells were washed once with Ex-cell medium to remove excess Celfect, and then 30 ml of fresh Ex-cell medium was added and the cells were incubated at 28 ° C. for 3 days. Recover the supernatant and place the supernatant in 25 ml of protein-A Sepharose CL-4B beads (Pharmacia) for histidine tagged proteins or Ni 2+ -NTA beads (QIAGEN) for IgG tagged proteins. The expression of the sequences in the baculovirus expression vectors was determined by SDS-PAGE analysis after batch binding of ml and comparing with protein standards of known concentration by Coomassie blue staining.

형질감염된 세포로부터의 조건화된 배지(0.5 내지 3 L)를 원심분리에 의해 회수하여 세포를 제거한 후, 0.22 ㎛ 필터로 여과하였다. 폴리-His 태그가 부착된 구조물의 경우, Ni2+-NTA 컬럼(Qiagen)을 이용하여 단백질을 정제하였다. 정제하기 전에 이미다졸을 5 mM 농도로 조건화된 배지에 가하였다. 0.3 M NaCl 및 5 mM 이미다졸을 포함하는 20 mM Hepes, pH 7.4 완충액으로 평형화된 Ni-NTA 컬럼 6 ㎖에 4℃에서 4 내지 5 ㎖/분의 유속으로 조건화된 배지를 주입하였다. 로딩 후에 컬럼을 추가의 평형 완충액으로 세척하고, 0.25 M 이미다졸을 포함하는 평형 완충액으로 단백질을 용출하였다. 이어서, 고도로 정제된 단백질을 25 ㎖의 G25 슈퍼파인(Pharmacia) 컬럼을 통해 10 mM Hepes, 0.14 M NaCl 및 4% 만니톨을 함유하는 저장 완충액(pH 6.8)중으로 염을 제거하고 -80℃에서 보관하였다.Conditioned medium (0.5-3 L) from the transfected cells was recovered by centrifugation to remove cells and then filtered through a 0.22 μm filter. For poly-His tagged structures, proteins were purified using Ni 2+ -NTA columns (Qiagen). Imidazole was added to the conditioned medium at 5 mM concentration before purification. 6 ml of Ni-NTA column equilibrated with 20 mM Hepes, pH 7.4 buffer containing 0.3 M NaCl and 5 mM imidazole was injected with conditioned medium at a flow rate of 4-5 ml / min at 4 ° C. After loading the column was washed with additional equilibration buffer and the protein was eluted with equilibration buffer containing 0.25 M imidazole. The highly purified protein was then desalted through 25 ml G25 Superfine (Pharmacia) column in storage buffer (pH 6.8) containing 10 mM Hepes, 0.14 M NaCl and 4% mannitol and stored at -80 ° C. .

조건화된 배지로부터 이뮤노어드헤신(Fc 포함) 구조물을 하기와 같이 정제하였다. 조건화된 배지를 20 mM 인산 나트륨 완충액(pH 6.8)으로 평형화된 단백질 A 컬럼(Pharmacia) 5 ㎖에 주입하였다. 로딩 후, 컬럼을 평형 완충액으로 세척하고 100 mM 시트르산(pH 3.5)으로 용출하였다. 용출된 단백질을 275 ㎕의 1 M Tris 완충액(pH 9)을 포함하는 튜브에 1 ㎖ 분획으로 회수하여 즉시 중화시켰다. 이어서, 고도로 정제된 단백질을 폴리-His 태그가 부착된 단백질의 경우에 대해 상기 기재된 바와 같이 저장 완충액 중으로 염을 제거하였다. SDS 폴리아크릴아미드 겔, 에드만 분해법으로 수행되는 N-말단 아미노산 서열 분석, 및 원하거나 필요한 경우 기타 분석 방법으로 단백질의 균일함을 확인하였다.The immunoadhesin (including Fc) constructs from the conditioned media were purified as follows. Conditioned media was injected into 5 ml of Protein A column (Pharmacia) equilibrated with 20 mM sodium phosphate buffer (pH 6.8). After loading, the column was washed with equilibration buffer and eluted with 100 mM citric acid, pH 3.5. The eluted protein was recovered in 1 ml fractions in a tube containing 275 μl of 1 M Tris buffer (pH 9) and immediately neutralized. The highly purified protein was then removed to salt in storage buffer as described above for the case of poly-His tagged proteins. Protein uniformity was confirmed by SDS polyacrylamide gels, N-terminal amino acid sequencing performed by Edman digestion, and other analytical methods if desired or necessary.

하이 5 세포를 포함하는 상기 변형된 배큘로바이러스 방법에 의해 PRO327, PRO1265, PRO344 및 PRO882를 성공적으로 발현하였다.PRO327, PRO1265, PRO344 and PRO882 were successfully expressed by the modified baculovirus method comprising high 5 cells.

실시예 24: PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882에 결합하는 항체의 제조Example 24 Preparation of Antibody Binding to PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882

본 실시예는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882에 특이적으로 결합할 수 있는 모노클로날 항체를 제조하는 방법을 예시한다.This example illustrates a method of making a monoclonal antibody that can specifically bind to PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882. .

모노클로날 항체를 제조하는 기술은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 상기의 문헌(Goding)에 기재되어 있다. 이용될 수 있는 면역원에는 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 포함하는 본 발명의 정제된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 융합 단백질, 및 세포 표면에 재조합 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 발현하는 세포가 포함된다. 당업자는 불필요한 실험없이도 면역원을 선택할 수 있다.Techniques for producing monoclonal antibodies are known in the art and are described, for example, in Goding, supra. Immunogens that can be used include purified PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344 of the present invention, including PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882. , PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 fusion proteins, and recombinant PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, Cells expressing PRO853 or PRO882 are included. One skilled in the art can select immunogens without unnecessary experimentation.

생쥐, 예를 들어 Balb/c를 프로인트 완전 면역보강제에 유화된 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 면역원 1 내지 100 ㎍을 피하 또는 복강내 주사하여 면역화시켰다. 별법으로, 면역원을 MPL-TDM 면역보강제(Ribi Immunochemical Research, Hamilton, MT)에 유화시켜 동물의 뒷발바닥에 주사하여 면역화시켰다. 이어서, 면역화된 생쥐를 10 내지 12일 후에 선택된 면역보강제 내에 유화된 추가의 면역원으로 부스팅하였다. 그 이후, 수주 동안 생쥐를 추가 면역 주사로 부스팅할 수 있다. 역회전 출혈법(retro-orbital bleeding)으로 생쥐에서 혈청 샘플을 주기적으로 채취하여, ELISA 분석법을 시험하여 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체를 검출하였다.Mice, for example, Balb / c, contain 1-100 μg of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 immunogens emulsified in Freund's complete adjuvant. Immunization by subcutaneous or intraperitoneal injection. Alternatively, the immunogens were emulsified by injection into the hind paws of animals emulsified in MPL-TDM adjuvant (Ribi Immunochemical Research, Hamilton, MT). Immunized mice were then boosted with additional immunogen emulsified in selected adjuvant after 10-12 days. Thereafter, mice can be boosted with additional immunization for several weeks. Serum samples were taken periodically from mice by retro-orbital bleeding and tested by ELISA assays to determine anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, Anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibodies were detected.

적합한 항체 역가가 검출되면, 항체에 대해 "양성"인 동물에게 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882를 최종 정맥주사하였다. 3 내지 4일 후에 생쥐를 희생시켜 비장 세포를 회수하였다. 이어서, 비장 세포를 선택된 쥐의 골수종 세포주, 예를 들어 ATCC CRL 1597로부터 입수가능한 P3X63AgU.1과 융합시켰다(35% 폴리에틸렌 글리콜 이용). 융합체는 비-융합세포, 골수종 하이브리드 및 비장세포 하이브리드의 증식을 억제하는 HAT(하이포크산틴, 아미노프테린및 티미딘) 배지를 포함하는 96 웰 조직 배양 플레이트에 플레이팅될 수 있는 하이브리도마 세포를 생성하였다.Once a suitable antibody titer was detected, the animals that were "positive" to the antibody were given a final intravenous injection of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882. After 3-4 days, the mice were sacrificed to recover spleen cells. The spleen cells were then fused (using 35% polyethylene glycol) to selected rat myeloma cell lines, for example P3X63AgU.1 available from ATCC CRL 1597. The fusions are hybridoma cells that can be plated in 96 well tissue culture plates containing HAT (hypoxanthine, aminopterin and thymidine) media that inhibit the proliferation of non-fusion cells, myeloma hybrids and splenocyte hybrids. Generated.

PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882에 대한 반응성을 위해 하이브리도마 세포를 ELISA로 스크리닝할 수 있다. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 대한 목적하는 모노클로날 항체를 분비하는 "양성" 하이브리도마 세포를 결정하는 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다.Hybridoma cells can be screened by ELISA for responsiveness to PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882. How to determine “positive” hybridoma cells that secrete the desired monoclonal antibody against the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides Is well known to those skilled in the art.

양성 하이브리도마 세포는 순계의 Balb/c 생쥐가 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 모노클로날 항체를 포함하는 복수를 생산하도록 복강 내에 주사될 수 있다. 별법으로, 하이브리도마 세포는 조직 배양 플라스크 또는 롤러 병에서 배양될 수 있다. 복수 내에서 생성된 모노클로날 항체는 황산암모늄 침전에 이은 겔 배제 크로마토그래피를 이용하여 정제될 수 있다. 별법으로, 항체의 단백질 A 또는 단백질 G 결합을 기초로 하는 친화 크로마토그래피를 이용할 수도 있다.Positive hybridoma cells are purely Balb / c mice with anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti It can be injected intraperitoneally to produce ascites comprising -PRO1017, anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 monoclonal antibodies. Alternatively, the hybridoma cells can be cultured in tissue culture flasks or roller bottles. Monoclonal antibodies generated in the ascites can be purified using ammonium sulfate precipitation followed by gel exclusion chromatography. Alternatively, affinity chromatography based on protein A or protein G binding of the antibody may be used.

물질의 기탁:Deposit of Substances:

다음 물질들은 미국 버지니아주 20110-2209 매나서스 유니버시티 불러버드 10801에 소재하는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(ATCC)에 기탁되었다.The following materials have been deposited with the American Type Culture Collection (ATCC), Mannars University Boulevard 10801, Virginia, 20110-2209.

물질matter ATCC 기탁번호ATCC Deposit Number 기탁일Deposit date

DNA30676-1223 209567 1997년 12월 23일DNA30676-1223 209567 Dec 23, 1997

DNA38113-1230 209530 1997년 12월 10일DNA38113-1230 209530 Dec 10, 1997

DNA60764-1533 203452 1998년 11월 10일DNA60764-1533 203452 November 10, 1998

DNA40592-1242 209492 1997년 11월 21일DNA40592-1242 209492 November 21, 1997

DNA43318-1217 209481 1997년 11월 21일DNA43318-1217 209481 November 21, 1997

DNA44176-1244 209532 1997년 12월 10일DNA44176-1244 209532 Dec 10, 1997

DNA44804-1248 209527 1997년 12월 10일DNA44804-1248 209527 Dec 10, 1997

DNA52722-1229 209570 1998년 1월 7일DNA52722-1229 209570 Jan 7, 1998

DNA56112-1379 209883 1998년 5월 20일DNA56112-1379 209883 May 20, 1998

DNA57702-1476 209951 1998년 6월 9일DNA57702-1476 209951 June 9, 1998

DNA48227-1350 209812 1998년 4월 28일DNA48227-1350 209812 April 28, 1998

기탁은 특허 절차상 미생물 기탁의 국제적 승인에 관한 부다페스트 조약 및 그의 규칙(부다페스트 조약 (Budapest Treaty))의 규정하에 이루어졌다. 이는 기탁일로부터 30년 동안 기탁물의 생존 배양물의 유지를 보장한다. 기탁물은 부다페스트 조약의 협약 하에 ATCC로부터 제넨테크 인크와 ATCC 사이 협정에 따라 분양될 것이며, 이는 관련 미국 특허의 허여시 또는 미국 또는 외국 특허 출원의 공개시(이 중 먼저인 때) 공공에 대한 기탁물의 배양 프로제니의 영구적이고 비제한적인 분양을 보장하고, 미국 특허 및 상표청장에 의해 35 USC §122 및 그에 따른 미국 특허 및 상표청장의 규칙(37 CFR §1.14 포함, 특히 886 OG 638 참조)에 따라 권리가 있는 것으로 결정한 이에게 프로제니의 분양을 보장한다.The deposit was made under the provisions of the Budapest Treaty and its rules (Budapest Treaty) on the international approval of microbial deposits under the patent procedure. This ensures maintenance of the viable culture of the deposit for 30 years from the date of deposit. The deposits will be distributed from ATCC under the Convention of the Budapest Treaty in accordance with the agreement between Genentech Inc and ATCC, which shall be deposited with the public upon the granting of the relevant US patent or upon publication of the US or foreign patent application, whichever comes first. To ensure the permanent and non-limiting distribution of water culture progeny, and to the US Patent and Trademark Commissioner in 35 USC §122 and the rules of the US Patent and Trademark Commissioner (including 37 CFR §1.14, in particular see 886 OG 638). Progenie's sale is assured to those who have the right to do so.

본 출원의 양수인은 적합한 조건하에서 배양시 기탁 물질의 배양물이 사멸하거나 손실되거나 파손된 경우, 이를 통지하면 물질을 다른 동일한 물질로 즉시 교체할 것임을 동의하였다. 기탁 물질의 분양은 각국 정부의 권한으로 그 특허법에 따라 승인된 권리에 위배하여 본 발명을 실시하도록 허가하는 것으로서 해석되어서는 안된다.The assignee of the present application agrees that upon incubation under appropriate conditions, if the culture of the deposited material is killed, lost or damaged, the notification will promptly replace the material with another identical material. The sale of deposited materials should not be construed as an authorization of the governments to carry out the invention in violation of the rights granted under the patent law.

앞서 기술한 명세서는 당업계의 숙련인이 본 발명을 실시할 수 있도록 하기에 충분한 것으로 생각된다. 기탁된 실시양태가 본 발명의 특정 측면의 한 예시로서 의도되는 것이므로 본 발명은 기탁된 구조물의 범위에 제한되지 않고, 기능적으로 동등한 임의의 구조물은 본 발명의 범위 내에 있다. 본원에서 물질의 기탁은 본원에 포함된 기재 내용이 본 발명의 최선의 양식을 포함한 임의의 측면을 실시하기에 부적절하다는 것을 의미하지는 않으며, 특허 청구 범위의 범위를 명세서에서 나타내는 구체적인 설명에 제한하려는 것으로 해석되어서는 안된다. 실제로, 앞서의 상세한 설명으로부터 본원에 나타내고 기술된 것 이외에 본 발명의 다양한 변형이 당업자에게는 명백하고, 이는 첨부된 특허 청구의 범위 내에 있을 것이다.The foregoing description is considered to be sufficient to enable one skilled in the art to practice the invention. Since the deposited embodiments are intended as an illustration of certain aspects of the invention, the invention is not limited to the scope of the deposited structures, and any functionally equivalent structure is within the scope of the invention. The deposit of a substance herein does not mean that the disclosure contained herein is inappropriate for carrying out any aspect, including the best mode of the invention, and is intended to limit the scope of the claims to the specific description set forth in the specification. It should not be interpreted. Indeed, various modifications of the invention in addition to those shown and described herein above are apparent to those skilled in the art, which will be within the scope of the appended claims.

Claims (70)

PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 결합하는 단리된 항체.An isolated antibody that binds to a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. 제1항에 있어서, 상기 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체.The antibody of claim 1, wherein the antibody specifically binds to the polypeptide. 제1항에 있어서, 상기 폴리펩티드를 발현하는 세포의 사멸을 유도하는 항체.The antibody of claim 1 which induces death of a cell expressing said polypeptide. 제3항에 있어서, 상기 세포가 동일한 조직 유형의 정상 세포에 비해 상기 폴리펩티드를 과다발현시키는 암세포인 항체.4. The antibody of claim 3, wherein said cell is a cancer cell that overexpresses said polypeptide as compared to normal cells of the same tissue type. 제1항에 있어서, 모노클로날 항체.The monoclonal antibody of claim 1. 제5항에 있어서, 비-인간 상보성 결정 영역(CDR) 또는 인간 프레임워크 영역(FR)을 포함하는 항체.The antibody of claim 5 comprising a non-human complementarity determining region (CDR) or a human framework region (FR). 제1항에 있어서, 표지된 항체.The antibody of claim 1, wherein the antibody is labeled. 제1항에 있어서, 항체 단편 또는 단일쇄 항체.The antibody fragment or single chain antibody of claim 1. 약제학상 허용되는 담체와 혼합된 제1항의 항체를 포함하는 물질의 조성물.A composition of matter comprising the antibody of claim 1 in admixture with a pharmaceutically acceptable carrier. 제9항에 있어서, 치료 유효량의 상기 항체를 포함하는 조성물.The composition of claim 9 comprising a therapeutically effective amount of said antibody. 제9항에 있어서, 세포독성제 또는 화학요법제를 추가로 포함하는 조성물.The composition of claim 9 further comprising a cytotoxic or chemotherapeutic agent. 제1항의 항체를 코딩하는 단리된 핵산 분자.An isolated nucleic acid molecule encoding the antibody of claim 1. 제12항의 핵산 분자를 포함하는 벡터.A vector comprising the nucleic acid molecule of claim 12. 제13항의 벡터를 포함하는 숙주세포.A host cell comprising the vector of claim 13. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드에 결합하는 항체가 발현되기에 충분한 조건하에서 제14항의 숙주세포를 배양하여 세포 배양물로부터 상기 항체를 회수하는 것을 포함하는 상기 항체의 제조 방법.Cell culture by culturing the host cell of claim 14 under conditions sufficient to express an antibody that binds to a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptide. A method for producing the antibody comprising recovering the antibody from the. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357,PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 길항제.Antagonist of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. 제16항에 있어서, 종양 세포의 생장을 억제하는 길항제.The antagonist of claim 16, wherein the antagonist inhibits the growth of tumor cells. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열에 혼성화되는 단리된 핵산 분자 또는 그의 상보체.Isolated nucleic acid molecule or complement thereof that hybridizes to a nucleic acid sequence encoding a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. 제18항에 있어서, 혼성화가 엄격한 혼성화 및 세척 조건에서 수행되는 것인 단리된 핵산 분자.The isolated nucleic acid molecule of claim 18, wherein the hybridization is performed under stringent hybridization and wash conditions. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 함유할 것으로 의심되는 샘플을 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체와 접촉시켜 샘플에서 상기 항체와 폴리펩티드의 결합 여부를 결정하는 것을 포함하는, 상기 샘플에서 상기 폴리펩티드의 존재를 결정하는 방법.Samples suspected of containing PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptides are anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti- PRO1265, Anti-PRO344, Anti-PRO343, Anti-PRO347, Anti-PRO357, Anti-PRO715, Anti-PRO1017, Anti-PRO1112, Anti-PRO509, Anti-PRO853 or Anti-PRO882 Anti-PRO509, Anti-PRO853 or Anti -Determining the presence of said polypeptide in said sample comprising contacting with a PRO882 antibody to determine whether said antibody binds said polypeptide in said sample. 제20항에 있어서, 상기 샘플이 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344,PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 함유할 것으로 의심되는 세포를 포함하는 것인 방법.The method of claim 20, wherein the sample comprises cells suspected to contain PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. . 제21항에 있어서, 상기 세포가 암세포인 방법.The method of claim 21, wherein said cell is a cancer cell. (a) 포유동물로부터 얻은 조직 세포의 시험 샘플, 및 (b) 동일한 세포 유형의 공지된 정상 조직 세포인 대조용 샘플에서 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 검출하는 것을 포함하며, 이 때 대조용 샘플에 비해 시험 샘플에서 발현 수준이 더 높으면 시험 조직 세포를 얻은 포유동물에 종양이 존재함을 알 수 있는, 포유동물의 종양 진단 방법.(a) a test sample of tissue cells obtained from a mammal, and (b) a control sample that is a known normal tissue cell of the same cell type. Detecting the expression level of a gene encoding a polypeptide, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882, wherein the tumor is present in the mammal from which the test tissue cell is obtained if the expression level is higher in the test sample than in the control sample. Known, a method for diagnosing tumors in a mammal. (a) 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체를 포유동물로부터 얻은 시험 샘플과 접촉시키는 단계, 및 (b) 시험 샘플에서 상기 항체와 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 결합체를 검출하는 단계를 포함하며, 이 때 결합체가 형성되면 상기 포유동물에 종양이 존재함을 알 수 있는, 포유동물의 종양 진단 방법.(a) Anti-PRO201, Anti-PRO292, Anti-PRO327, Anti-PRO1265, Anti-PRO344, Anti-PRO343, Anti-PRO347, Anti-PRO357, Anti-PRO715, Anti-PRO1017, Anti-PRO1112, Anti-PRO509 Contacting an anti-PRO853 or anti-PRO882 anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibody with a test sample obtained from a mammal, and (b) PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, Detecting a conjugate of a PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptide, wherein when the conjugate is formed it is possible to know that a tumor is present in the mammal. How to diagnose tumors in animals. 제24항에 있어서, 상기 항체가 검출가능하게 표지된 것인 방법.The method of claim 24, wherein said antibody is detectably labeled. 제24항에 있어서, 조직 세포의 상기 시험 샘플이 신생물성 세포 생장 또는 증식이 의심되는 개체로부터 얻은 것인 방법.The method of claim 24, wherein said test sample of tissue cells is from an individual suspected of neoplastic cell growth or proliferation. 적합한 포장 내에 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체, 및 담체를 포함하는 암 진단 키트.Anti-PRO201, Anti-PRO292, Anti-PRO327, Anti-PRO1265, Anti-PRO344, Anti-PRO343, Anti-PRO347, Anti-PRO357, Anti-PRO715, Anti-PRO1017, Anti-PRO1112, Anti-PRO509 A cancer diagnostic kit comprising an anti-PRO853 or anti-PRO882 anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibody, and a carrier. 제27항에 있어서, PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 함유할 것으로 의심되는 샘플에서 상기 폴리펩티드의 존재를 검출하기 위한 상기 항체의 사용 지침서를 추가로 포함하는 키트.The method of claim 27, for detecting the presence of said polypeptide in a sample suspected of containing a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide. The kit further comprises instructions for using the antibody. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 발현하는 종양 세포를, 상기 폴리펩티드의 생물학적 활성을 억제하는 유효량의 제제에 노출시켜 상기 종양 세포를 억제하는 것을 포함하는, 종양 세포의 생장 억제 방법.Tumor cells expressing a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide are exposed to an effective amount of an agent that inhibits the biological activity of the polypeptide. A method of inhibiting growth of tumor cells, comprising inhibiting tumor cells. 제29항에 있어서, 상기 종양 세포가 동일한 조직 유형의 정상 세포에 비해 상기 폴리펩티드를 과다발현시키는 것인 방법.The method of claim 29, wherein said tumor cells overexpress said polypeptide relative to normal cells of the same tissue type. 제29항에 있어서, 상기 제제가 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체인 방법.The formulation of claim 29, wherein the formulation is anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti -PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibody. 제31항에 있어서, 상기 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체가 세포 사멸을 유도하는 것인 방법.32. The method of claim 31, wherein the anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, anti-PRO1112 , Wherein the anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibody induces cell death. 제29항에 있어서, 상기 종양 세포를 방사선 치료, 세포독성제 또는 화화요법제에 추가로 노출시키는 방법.The method of claim 29, wherein said tumor cells are further exposed to radiation therapy, cytotoxicity, or chemotherapy. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 발현하는 종양 세포를, 상기 폴리펩티드의 발현을 억제하는 유효량의 제제에 노출시켜 종양 세포의 생장을 억제하는 것을 포함하는, 종양 세포의 생장 억제 방법.Tumor cells by exposing tumor cells expressing PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide to an effective amount of an agent that inhibits the expression of the polypeptide. A method for inhibiting growth of tumor cells, comprising inhibiting the growth of cells. 제34항에 있어서, 상기 종양 세포가 동일한 조직 유형의 정상 세포에 비해 상기 폴리펩티드를 과다발현시키는 것인 방법.The method of claim 34, wherein said tumor cell overexpresses said polypeptide relative to normal cells of the same tissue type. 제34항에 있어서, 상기 제제가 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 코딩하는 핵산에 혼성화되는 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 그의 상보체인 방법.The antisense oligonucleotide of claim 34 or a complement thereof, wherein the agent hybridizes to a nucleic acid encoding a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptide. Chain way. 제36항에 있어서, 상기 종양 세포를 방사선 치료, 세포독성제 또는 화화요법제에 추가로 노출시키는 방법.The method of claim 36, wherein said tumor cells are further exposed to radiation therapy, cytotoxicity, or chemotherapy. 1) 용기,1) containers; 2) PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드가 동일한 조직 유형의 정상 세포에 비해 종양 세포에서 과다발현되는 특징이 있는 증상의 치료에 용기 내의 조성물이 효과적임을 표시하는 용기상의 라벨, 및2) Symptoms in which PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides are overexpressed in tumor cells compared to normal cells of the same tissue type. A label on the container indicating that the composition in the container is effective for treatment, and 3) 상기 용기 내에 함유된, 종양 세포의 생장 억제에 효과적인 활성 제제를 포함하는 조성물을 포함하는 제품.3) A product comprising a composition contained in said container, said composition comprising an active agent effective for inhibiting the growth of tumor cells. 제38항에 있어서, 상기 활성 제제가 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 생물학적 활성 및(또는) 발현을 억제하는 것인 제품.The method of claim 38, wherein the active agent inhibits the biological activity and / or expression of PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptide. Product. 제39항에 있어서, 상기 활성 제제가 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항체인 제품.40. The method of claim 39, wherein the active agent is anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, An anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibody. 제39항에 있어서, 상기 활성 제제가 안티센스 올리고뉴클레오티드인 제품.40. The product of claim 39, wherein said active agent is an antisense oligonucleotide. 후보 화합물을 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드와 이들 두 성분이 상호작용하기에 충분한 시간 및 조건하에서 접촉시켜 상기 폴리펩티드의 생물학적 또는 면역학적 활성이 억제되는지 측정하는 것을 포함하는, 상기 폴리펩티드의 생물학적 또는 면역학적 활성을 억제하는 화합물을 확인하는 방법.Candidate compounds are contacted with the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptides under sufficient time and conditions to allow these two components to interact. A method of identifying a compound that inhibits the biological or immunological activity of the polypeptide, comprising determining whether the biological or immunological activity is inhibited. 제42항에 있어서, 상기 후보 화합물이 항-PRO201, 항-PRO292, 항-PRO327, 항-PRO1265, 항-PRO344, 항-PRO343, 항-PRO347, 항-PRO357, 항-PRO715, 항-PRO1017, 항-PRO1112, 항-PRO509, 항-PRO853 또는 항-PRO882 항-PRO509, 항-PRO853또는 항-PRO882 항체인 방법.The method of claim 42, wherein the candidate compound is anti-PRO201, anti-PRO292, anti-PRO327, anti-PRO1265, anti-PRO344, anti-PRO343, anti-PRO347, anti-PRO357, anti-PRO715, anti-PRO1017, Anti-PRO1112, anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 anti-PRO509, anti-PRO853 or anti-PRO882 antibody. 제42항에 있어서, 상기 PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드, 또는 상기 후보 화합물이 고형 지지체에 고정된 것인 방법.The method of claim 42, wherein the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide, or the candidate compound is immobilized on a solid support. 제44항에 있어서, 고정되지 않은 성분이 검출가능하게 표지된 것인 방법.45. The method of claim 44, wherein the unfixed component is detectably labeled. (a) PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 존재하에 상기 폴리펩티드에 의해 정상적으로 유도되는 세포 반응의 유도에 적합한 조건에서 스크리닝될 후보 화합물 및 세포를 접촉시키는 단계, 및(a) Screening under conditions suitable for induction of cellular responses normally induced by said polypeptide in the presence of a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide Contacting the candidate compound and the cell to be, and (b) 시험 화합물이 효과적인 길항제인지 측정하기 위해 상기 세포 반응의 유도를 측정하는 단계(b) measuring the induction of said cellular response to determine if the test compound is an effective antagonist 를 포함하며, 이 때 상기 세포 반응의 유도가 결여되면 상기 화합물이 효과적인 길항제임을 알 수 있는, 상기 폴리펩티드의 활성을 억제하는 화합물을 확인하는 방법.A method of identifying a compound that inhibits the activity of the polypeptide, wherein the compound is known to be an effective antagonist if it lacks induction of the cellular response. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드를 발현하는 세포를 후보 화합물과 접촉시켜 상기 폴리펩티드의 발현이 억제되는지 측정하는 것을 포함하는, 상기 폴리펩티드의 발현을 억제하는 화합물을 확인하는 방법.Contacting a cell expressing a PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 or PRO882 polypeptide with a candidate compound to determine whether the expression of the polypeptide is inhibited. , A method for identifying a compound that inhibits the expression of the polypeptide. 제47항에 있어서, 상기 후보 화합물이 안티센스 올리고뉴클레오티드인 방법.48. The method of claim 47, wherein said candidate compound is an antisense oligonucleotide. 도 2 (서열번호 2), 도 4 (서열번호 6), 도 6 (서열번호 8), 도 8 (서열번호 13), 도 10 (서열번호 15), 도 12 (서열번호 23), 도 14 (서열번호 28), 도 16 (서열번호 33), 도 18 (서열번호 40), 도 20 (서열번호 42), 도 22 (서열번호 44), 도 24 (서열번호 46), 도 26 (서열번호 48) 및 도 28 (서열번호 53)에 기재된 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열과 80% 이상의 핵산 서열 동일성을 갖는 단리된 핵산.Figure 2 (SEQ ID NO: 2), Figure 4 (SEQ ID NO: 6), Figure 6 (SEQ ID NO: 8), Figure 8 (SEQ ID NO: 13), Figure 10 (SEQ ID NO: 15), Figure 12 (SEQ ID NO: 23), Figure 14 (SEQ ID NO 28), FIG. 16 (SEQ ID NO: 33), FIG. 18 (SEQ ID NO: 40), FIG. 20 (SEQ ID NO: 42), FIG. 22 (SEQ ID NO: 44), FIG. 24 (SEQ ID NO: 46), FIG. No. 48) and an isolated nucleic acid having at least 80% nucleic acid sequence identity with a nucleotide sequence encoding an amino acid sequence selected from the group consisting of the amino acid sequences set forth in FIG. 28 (SEQ ID NO: 53). 도 1 (서열번호 1), 도 3 (서열번호 5), 도 5 (서열번호 7), 도 7 (서열번호 12), 도 9 (서열번호 14), 도 11 (서열번호 22), 도 13 (서열번호 27), 도 15 (서열번호 32), 도 17 (서열번호 39), 도 19 (서열번호 41), 도 21 (서열번호 43), 도 23 (서열번호 45), 도 25 (서열번호 47) 및 도 27 (서열번호 52)에 기재된 뉴클레오티드 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열과 80% 이상의 핵산 서열 동일성을 갖는 단리된 핵산.Figure 1 (SEQ ID NO: 1), Figure 3 (SEQ ID NO: 5), Figure 5 (SEQ ID NO: 7), Figure 7 (SEQ ID NO: 12), Figure 9 (SEQ ID NO: 14), Figure 11 (SEQ ID NO: 22), Figure 13 (SEQ ID NO: 27), FIG. 15 (SEQ ID NO: 32), FIG. 17 (SEQ ID NO: 39), FIG. 19 (SEQ ID NO: 41), FIG. 21 (SEQ ID NO: 43), FIG. 23 (SEQ ID NO: 45), FIG. No. 47) and an isolated nucleic acid having at least 80% nucleic acid sequence identity with a nucleotide sequence selected from the group consisting of nucleotide sequences set forth in FIG. 27 (SEQ ID NO: 52). 도 1 (서열번호 1), 도 3 (서열번호 5), 도 5 (서열번호 7), 도 7 (서열번호12), 도 9 (서열번호 14), 도 11 (서열번호 22), 도 13 (서열번호 27), 도 15 (서열번호 32), 도 17 (서열번호 39), 도 19 (서열번호 41), 도 21 (서열번호 43), 도 23 (서열번호 45), 도 25 (서열번호 47) 및 도 27 (서열번호 52)에 기재된 뉴클레오티드 서열의 전장 코딩 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열과 80% 이상의 핵산 서열 동일성을 갖는 단리된 핵산.Figure 1 (SEQ ID NO: 1), Figure 3 (SEQ ID NO: 5), Figure 5 (SEQ ID NO: 7), Figure 7 (SEQ ID NO: 12), Figure 9 (SEQ ID NO: 14), Figure 11 (SEQ ID NO: 22), Figure 13 (SEQ ID NO: 27), FIG. 15 (SEQ ID NO: 32), FIG. 17 (SEQ ID NO: 39), FIG. 19 (SEQ ID NO: 41), FIG. 21 (SEQ ID NO: 43), FIG. 23 (SEQ ID NO: 45), FIG. No. 47) and an isolated nucleic acid having at least 80% nucleic acid sequence identity with a nucleotide sequence selected from the group consisting of full length coding sequences of the nucleotide sequences set forth in FIG. 27 (SEQ ID NO: 52). ATCC 기탁번호 209567, 209530, 203452, 209492, 209481, 209532, 209527, 209570, 209883, 209951 또는 209812로 DNA의 전장 코딩 서열과 80% 이상의 핵산 서열 동일성을 갖는 단리된 핵산.An isolated nucleic acid having at least 80% nucleic acid sequence identity with the full-length coding sequence of DNA with ATCC accession numbers 209567, 209530, 203452, 209492, 209481, 209532, 209527, 209570, 209883, 209951 or 209812. 제49항 내지 제52항 중 어느 한 항의 핵산을 포함하는 벡터.A vector comprising the nucleic acid of any one of claims 49-52. 제53항에 있어서, 상기 벡터로 형질전환된 숙주세포에 의해 인식되는 조절 서열에 작동가능하게 연결된 벡터.The vector of claim 53, operably linked to a regulatory sequence recognized by the host cell transformed with the vector. 제53항의 벡터를 포함하는 숙주세포.A host cell comprising the vector of claim 53. 제55항에 있어서, CHO 세포인 숙주세포.The host cell according to claim 55, which is a CHO cell. 제55항에 있어서, 대장균(E. coli)인 숙주세포.The host cell according to claim 55, which is E. coli . 제55항에 있어서, 효모 세포인 숙주세포.The host cell according to claim 55, which is a yeast cell. 제55항에 있어서, 배큘로바이러스-감염된 곤충 세포인 숙주세포.The host cell of claim 55, wherein the host cell is a baculovirus-infected insect cell. PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853 또는 PRO882 폴리펩티드의 발현에 적합한 조건하에서 제55항의 숙주세포를 배양하고, 그 세포 배양물로부터 상기 폴리펩티드를 회수하는 것을 포함하는 상기 폴리펩티드의 제조 방법.The host cell of claim 55 is cultured under conditions suitable for expression of the PRO201, PRO292, PRO327, PRO1265, PRO344, PRO343, PRO347, PRO357, PRO715, PRO1017, PRO1112, PRO509, PRO853, or PRO882 polypeptide, and the polypeptide is obtained from the cell culture. Method for producing the polypeptide comprising recovering. 도 2 (서열번호 2), 도 4 (서열번호 6), 도 6 (서열번호 8), 도 8 (서열번호 13), 도 10 (서열번호 15), 도 12 (서열번호 23), 도 14 (서열번호 28), 도 16 (서열번호 33), 도 18 (서열번호 40), 도 20 (서열번호 42), 도 22 (서열번호 44), 도 24 (서열번호 46), 도 26 (서열번호 48) 및 도 28 (서열번호 53)에 기재된 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 80% 이상의 아미노산 서열 동일성을 갖는 단리된 폴리펩티드.Figure 2 (SEQ ID NO: 2), Figure 4 (SEQ ID NO: 6), Figure 6 (SEQ ID NO: 8), Figure 8 (SEQ ID NO: 13), Figure 10 (SEQ ID NO: 15), Figure 12 (SEQ ID NO: 23), Figure 14 (SEQ ID NO 28), FIG. 16 (SEQ ID NO: 33), FIG. 18 (SEQ ID NO: 40), FIG. 20 (SEQ ID NO: 42), FIG. 22 (SEQ ID NO: 44), FIG. 24 (SEQ ID NO: 46), FIG. No. 48) and an isolated polypeptide having at least 80% amino acid sequence identity with an amino acid sequence selected from the group consisting of the amino acid sequences set forth in FIG. 28 (SEQ ID NO: 53). 도 2 (서열번호 2), 도 4 (서열번호 6), 도 6 (서열번호 8), 도 8 (서열번호 13), 도 10 (서열번호 15), 도 12 (서열번호 23), 도 14 (서열번호 28), 도 16 (서열번호 33), 도 18 (서열번호 40), 도 20 (서열번호 42), 도 22 (서열번호 44), 도24 (서열번호 46), 도 26 (서열번호 48) 및 도 28 (서열번호 53)에 기재된 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열과 비교했을 때, 80% 이상의 양성 스코어를 나타내는 단리된 폴리펩티드.Figure 2 (SEQ ID NO: 2), Figure 4 (SEQ ID NO: 6), Figure 6 (SEQ ID NO: 8), Figure 8 (SEQ ID NO: 13), Figure 10 (SEQ ID NO: 15), Figure 12 (SEQ ID NO: 23), Figure 14 (SEQ ID NO: 28), FIG. 16 (SEQ ID NO: 33), FIG. 18 (SEQ ID NO: 40), FIG. 20 (SEQ ID NO: 42), FIG. 22 (SEQ ID NO: 44), FIG. 24 (SEQ ID NO: 46), FIG. No. 48) and an isolated polypeptide exhibiting a positive score of at least 80% as compared to an amino acid sequence selected from the group consisting of the amino acid sequences set forth in FIG. 28 (SEQ ID NO: 53). ATCC 기탁번호 209567, 209530, 203452, 209492, 209481, 209532, 209527, 209570, 209883, 209951 또는 209812로 기탁된 DNA의 전장 코딩 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열과 80% 이상의 아미노산 서열 동일성을 갖는 단리된 폴리펩티드.Isolated polypeptide having at least 80% amino acid sequence identity with an amino acid sequence encoded by the full length coding sequence of a DNA deposited with ATCC accession numbers 209567, 209530, 203452, 209492, 209481, 209532, 209527, 209570, 209883, 209951 or 209812 . 이종 아미노산 서열과 융합된, 제61항 내지 제63항 중 어느 한 항의 폴리펩티드를 포함하는 키메라 분자.66. A chimeric molecule comprising the polypeptide of any one of claims 61-63 fused with a heterologous amino acid sequence. 제64항에 있어서, 상기 이종 아미노산 서열이 에피토프 태그 서열인 키메라 분자.The chimeric molecule of claim 64, wherein the heterologous amino acid sequence is an epitope tag sequence. 제64항에 있어서, 상기 이종 아미노산 서열이 면역글로불린의 Fc 영역인 키메라 분자.The chimeric molecule of claim 64, wherein the heterologous amino acid sequence is an Fc region of an immunoglobulin. 제61항 내지 제63항 중 어느 한 항의 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체.64. An antibody that specifically binds to a polypeptide of any one of claims 61-63. 제67항에 있어서, 모노클로날 항체, 인간화 항체 또는 단일쇄 항체.The monoclonal antibody, humanized antibody or single chain antibody of claim 67. (a) 신호 펩티드가 결합되어 있지 않은, 도 2 (서열번호 2), 도 4 (서열번호 6), 도 6 (서열번호 8), 도 8 (서열번호 13), 도 10 (서열번호 15), 도 12 (서열번호 23), 도 14 (서열번호 28), 도 16 (서열번호 33), 도 18 (서열번호 40), 도 20 (서열번호 42), 도 22 (서열번호 44), 도 24 (서열번호 46), 도 26 (서열번호 48) 또는 도 28 (서열번호 53)에 기재된 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열,(a) Figure 2 (SEQ ID NO: 2), Figure 4 (SEQ ID NO: 6), Figure 6 (SEQ ID NO: 8), Figure 8 (SEQ ID NO: 13), Figure 10 (SEQ ID NO: 15) to which the signal peptide is not bound 12 (SEQ ID NO: 23), FIG. 14 (SEQ ID NO: 28), FIG. 16 (SEQ ID NO: 33), FIG. 18 (SEQ ID NO: 40), FIG. 20 (SEQ ID NO: 42), FIG. 22 (SEQ ID NO: 44), FIG. Nucleotide sequence encoding the polypeptide as set forth in SEQ ID NO: 24 (SEQ ID NO: 46), FIG. 26 (SEQ ID NO: 48), or FIG. 28 (SEQ ID NO: 53), (b) 신호 펩티드가 결합되어 있는, 도 2 (서열번호 2), 도 4 (서열번호 6), 도 6 (서열번호 8), 도 8 (서열번호 13), 도 10 (서열번호 15), 도 12 (서열번호 23), 도 14 (서열번호 28), 도 16 (서열번호 33), 도 18 (서열번호 40), 도 20 (서열번호 42), 도 22 (서열번호 44), 도 24 (서열번호 46), 도 26 (서열번호 48) 또는 도 28 (서열번호 53)에 기재된 폴리펩티드의 세포외 도메인을 코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는(b) Figure 2 (SEQ ID NO: 2), Figure 4 (SEQ ID NO: 6), Figure 6 (SEQ ID NO: 8), Figure 8 (SEQ ID NO: 13), Figure 10 (SEQ ID NO: 15), to which the signal peptide is bound, Figure 12 (SEQ ID NO: 23), Figure 14 (SEQ ID NO: 28), Figure 16 (SEQ ID NO: 33), Figure 18 (SEQ ID NO: 40), Figure 20 (SEQ ID NO: 42), Figure 22 (SEQ ID NO: 44), Figure 24 (SEQ ID NO: 46), nucleotide sequence encoding the extracellular domain of the polypeptide described in FIG. 26 (SEQ ID NO: 48) or 28 (SEQ ID NO: 53), or (c) 신호 펩티드가 결합되어 있지 않은, 도 2 (서열번호 2), 도 4 (서열번호 6), 도 6 (서열번호 8), 도 8 (서열번호 13), 도 10 (서열번호 15), 도 12 (서열번호 23), 도 14 (서열번호 28), 도 16 (서열번호 33), 도 18 (서열번호 40), 도 20 (서열번호 42), 도 22 (서열번호 44), 도 24 (서열번호 46), 도 26 (서열번호 48) 또는 도 28 (서열번호 53)에 기재된 폴리펩티드의 세포외 도메인을 코딩하는 뉴클레오티드 서열(c) Figure 2 (SEQ ID NO: 2), Figure 4 (SEQ ID NO: 6), Figure 6 (SEQ ID NO: 8), Figure 8 (SEQ ID NO: 13), Figure 10 (SEQ ID NO: 15) to which the signal peptide is not bound 12 (SEQ ID NO: 23), FIG. 14 (SEQ ID NO: 28), FIG. 16 (SEQ ID NO: 33), FIG. 18 (SEQ ID NO: 40), FIG. 20 (SEQ ID NO: 42), FIG. 22 (SEQ ID NO: 44), FIG. Nucleotide sequence encoding the extracellular domain of the polypeptide set forth in SEQ ID NO: 24 (SEQ ID NO: 46), FIG. 26 (SEQ ID NO: 48), or FIG. 28 (SEQ ID NO: 53). 과 80% 이상의 핵산 서열 동일성을 갖는 단리된 핵산.And an isolated nucleic acid having at least 80% nucleic acid sequence identity with the. (a) 신호 펩티드가 결합되어 있지 않은, 도 2 (서열번호 2), 도 4 (서열번호 6), 도 6 (서열번호 8), 도 8 (서열번호 13). 도 10 (서열번호 15), 도 12 (서열번호 23), 도 14 (서열번호 28), 도 16 (서열번호 33), 도 18 (서열번호 40), 도 20 (서열번호 42), 도 22 (서열번호 44), 도 24 (서열번호 46), 도 26 (서열번호 48) 또는 도 28 (서열번호 53)에 기재된 폴리펩티드,(a) Figure 2 (SEQ ID NO: 2), Figure 4 (SEQ ID NO: 6), Figure 6 (SEQ ID NO: 8), Figure 8 (SEQ ID NO: 13), to which the signal peptide is not bound. Figure 10 (SEQ ID NO: 15), Figure 12 (SEQ ID NO: 23), Figure 14 (SEQ ID NO: 28), Figure 16 (SEQ ID NO: 33), Figure 18 (SEQ ID NO: 40), Figure 20 (SEQ ID NO: 42), Figure 22 The polypeptide set forth in (SEQ ID NO: 44), FIG. 24 (SEQ ID NO: 46), FIG. 26 (SEQ ID NO: 48), or FIG. 28 (SEQ ID NO: 53), (b) 신호 펩티드가 결합되어 있는, 도 2 (서열번호 2), 도 4 (서열번호 6), 도 6 (서열번호 8), 도 8 (서열번호 13), 도 10 (서열번호 15), 도 12 (서열번호 23), 도 14 (서열번호 28), 도 16 (서열번호 33), 도 18 (서열번호 40), 도 20 (서열번호 42), 도 22 (서열번호 44), 도 24 (서열번호 46), 도 26 (서열번호 48) 또는 도 28 (서열번호 53)에 기재된 폴리펩티드의 세포외 도메인, 또는(b) Figure 2 (SEQ ID NO: 2), Figure 4 (SEQ ID NO: 6), Figure 6 (SEQ ID NO: 8), Figure 8 (SEQ ID NO: 13), Figure 10 (SEQ ID NO: 15), to which the signal peptide is bound, Figure 12 (SEQ ID NO: 23), Figure 14 (SEQ ID NO: 28), Figure 16 (SEQ ID NO: 33), Figure 18 (SEQ ID NO: 40), Figure 20 (SEQ ID NO: 42), Figure 22 (SEQ ID NO: 44), Figure 24 (SEQ ID NO: 46), the extracellular domain of the polypeptide described in FIG. 26 (SEQ ID NO: 48) or 28 (SEQ ID NO: 53), or (c) 신호 펩티드가 결합되어 있지 않은, 도 2 (서열번호 2), 도 4 (서열번호 6), 도 6 (서열번호 8), 도 8 (서열번호 13), 도 10 (서열번호 15), 도 12 (서열번호 23), 도 14 (서열번호 28), 도 16 (서열번호 33), 도 18 (서열번호 40), 도 20 (서열번호 42), 도 22 (서열번호 44), 도 24 (서열번호 46), 도 26 (서열번호 48) 또는 도 28 (서열번호 53)에 기재된 폴리펩티드의 세포외 도메인(c) Figure 2 (SEQ ID NO: 2), Figure 4 (SEQ ID NO: 6), Figure 6 (SEQ ID NO: 8), Figure 8 (SEQ ID NO: 13), Figure 10 (SEQ ID NO: 15) to which the signal peptide is not bound 12 (SEQ ID NO: 23), FIG. 14 (SEQ ID NO: 28), FIG. 16 (SEQ ID NO: 33), FIG. 18 (SEQ ID NO: 40), FIG. 20 (SEQ ID NO: 42), FIG. 22 (SEQ ID NO: 44), FIG. The extracellular domain of the polypeptide described in 24 (SEQ ID NO: 46), FIG. 26 (SEQ ID NO: 48) or FIG. 28 (SEQ ID NO: 53) 과 80% 이상의 아미노산 서열 동일성을 갖는 단리된 폴리펩티드.And an isolated polypeptide having at least 80% amino acid sequence identity with.
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