KR102658416B1 - Method for analyzing AGE in blood of patients with acute myocardial infarction and method for predicting prognosis of acute myocardial infarction using the same - Google Patents
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Abstract
본 발명은 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법 및 이를 이용한 급성심근경색의 예후 예측방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법은, 적은 혈액 시료와 간단한 시약만으로 혈중 AGE의 농도를 신속하고 민감하게 측정할 수 있고, 이를 통해 환자는 편리하게 본인의 혈중 AGE 농도 변화를 관찰할 수 있으며, 또한 측정된 혈중 AGE 농도 변화 양상(패턴)을 분석하는 것으로부터 급성심근경색 환자의 예후를 예측할 수 있는 바, 조속한 시점에 환자에게 적절한 의료 조치가 제공될 수 있도록 하여 궁극적으로 환자의 생명 연장과 함께 삶의 질을 향상시킬 수 있는 유용한 효과가 있다.The present invention relates to a method for analyzing AGE in the blood of patients with acute myocardial infarction and a method for predicting the prognosis of acute myocardial infarction using the same. The method for analyzing AGE in the blood of patients with acute myocardial infarction according to the present invention is a method for analyzing AGE in the blood of patients with acute myocardial infarction using only a small blood sample and a simple reagent. The concentration can be measured quickly and sensitively, and through this, patients can conveniently observe changes in their blood AGE concentration. Additionally, by analyzing the pattern (pattern) of change in the measured blood AGE concentration, patients with acute myocardial infarction can Since the prognosis can be predicted, it has the useful effect of ensuring that appropriate medical treatment is provided to the patient at an early stage, ultimately prolonging the patient's life and improving the quality of life.
Description
본 발명은 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법 및 이를 이용한 급성심근경색의 예후 예측방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for analyzing AGE in the blood of patients with acute myocardial infarction and a method for predicting the prognosis of acute myocardial infarction using the same.
심장 마비라고도 알려진 급성심근경색(Acute myocardial infarction, AMI)은 전 세계적인 사망의 주요 원인이다. AMI는 특히 60세 이상의 사람들에게 사회 경제적 부담이 크다. 급성심근경색은 심장의 근육에 혈액을 공급하는 관상동맥이 여러 가지 원인에 의해 갑자기 막혀서 심근에 괴사가 일어나는 질환으로, 초기 사망률은 약 30%에 달하며, 최근 심혈관 재형성술(cardiac revascularization therapy)의 발전으로 인해 급성심근경색으로 인한 사망률은 줄었지만, 급성심근경색에 대한 응급처치를 받고 퇴원한 환자 중 예후가 좋지 못한 경우 심장 리모델링(cardiac remodeling)과 심부전이 발생하는 환자가 계속하여 증가하고 있으며, 이를 초기에 검진받지 못한 경우 적절한 의료 조치를 받지 못하여 퇴원 후 1년 이내에 사망하는 것으로 알려져 있다. 2011년 발표된 한 연구에 따르면 국내 급성심근경색 환자 10명 중 1명(12.7%)은 1년 이내 사망했으며, 2명(21.8%)은 1년 이내에 심장질환이 다시 발생한 것으로 나타났다. 미국, 유럽과 비교해봐도 더 높은 비율인 점을 고려하면 국내 급성심근경색 환자의 재발 수준은 결코 무시할 수 없는 상황이다.Acute myocardial infarction (AMI), also known as heart attack, is a leading cause of death worldwide. AMI has a significant socioeconomic burden, especially for people over 60 years of age. Acute myocardial infarction is a disease in which necrosis of the myocardium occurs due to sudden blockage of the coronary artery that supplies blood to the heart muscle due to various causes. The initial mortality rate is approximately 30%, and recent developments in cardiovascular revascularization therapy As a result, the mortality rate due to acute myocardial infarction has decreased, but among patients discharged after receiving emergency treatment for acute myocardial infarction, the number of patients who develop cardiac remodeling and heart failure in cases with a poor prognosis continues to increase. It is known that if the patient is not screened early, he or she may not receive appropriate medical treatment and die within a year after discharge. According to a study published in 2011, 1 in 10 (12.7%) domestic patients with acute myocardial infarction died within 1 year, and 2 (21.8%) developed heart disease again within 1 year. Considering that the rate is higher even compared to the United States and Europe, the level of recurrence among domestic acute myocardial infarction patients cannot be ignored.
따라서, 급성심근경색을 겪었던 환자라면 처음 3개월 내지 길게는 1년 동안 병의 예후를 실시간으로 관찰하고 관리하는 것이 매우 중요하다.Therefore, for patients who have experienced acute myocardial infarction, it is very important to observe and manage the prognosis of the disease in real time for the first 3 months to up to 1 year.
지난 연구(등록특허 10-2121410)에서 본 발명자들은 급성심근경색 유도로부터 활성화된 대식세포가 허혈 영역으로 이동 및 분비됨을 확인하였고, AGE가 허혈 지역 및 혈액 내에 배출되어 축적됨을 확인하였다. 또한, AGE의 수용체(Receptor-AGEs; RAGE)가 허혈 지역의 심근/근육세포의 막에서 주로 발현되고 이로부터 세포가 사멸되어 심장 리모델링(cardiac remodeling)과 같은 병리학적 양태가 나타난다는 것을 확인하여, 혈액 내 RAGE와 AGE의 변화가 급성심근경색의 병변 위치에서 세포 사멸의 상태를 잘 나타내 주는 예후 지표임을 확인한 바 있다(등록특허 제10-2121410호).In a previous study (Patent No. 10-2121410), the present inventors confirmed that macrophages activated from the induction of acute myocardial infarction migrate and are secreted into the ischemic area, and that AGEs are discharged and accumulated in the ischemic area and blood. In addition, it was confirmed that AGE receptors (Receptor-AGEs; RAGE) are mainly expressed in the membrane of myocardial/muscle cells in ischemic areas, which leads to cell death and pathological conditions such as cardiac remodeling. It has been confirmed that changes in RAGE and AGE in the blood are prognostic indicators that well indicate the state of cell death at the lesion site of acute myocardial infarction (Patent No. 10-2121410).
그러나, 이전 연구에서는 급성심근경색 이후에 AGE가 증가하는 양상을 확인한 정도일 뿐, 혈중 AGE를 신속하고 민감하게 측정하는 방법에 대해서는 밝히지 못하였다. 본 발명자들의 이전 연구에서는 1차 AGE 항체와 2차 항체를 이용하고 ELISA 키트를 이용한 판독으로 AGE를 검출하는 방법을 개시하고 있으나, 이 방법은 다량의 혈액 시료가 필요하며 숙련된 시험자와 실험실 수준의 검출 기기가 필요한 AGE 분석 방법으로서, 급성심근경색 환자와 같이 반복적으로 혈중 AGE 변화 양상을 추적할 필요가 있는 경우에는 적용이 어려워 효과적인 분석 방법이 아니다.However, previous studies only confirmed that AGE increases after acute myocardial infarction, but did not reveal a method to quickly and sensitively measure AGE in the blood. Previous research by the present inventors has disclosed a method for detecting AGE using primary AGE antibodies and secondary antibodies and reading using an ELISA kit. However, this method requires a large amount of blood samples and requires skilled testers and laboratory-level equipment. As an AGE analysis method that requires a detection device, it is not an effective analysis method because it is difficult to apply in cases where it is necessary to repeatedly track changes in blood AGEs, such as in patients with acute myocardial infarction.
따라서, 급성심근경색 환자와 같이 수시로 병의 예후 관찰이 필요한 경우를 위해서는 적은 혈액 시료로 간단하게 사용할 수 있으며, 또한 혈중 AGE의 농도를 민감하고 신속하게 측정하는 방법이 필요하다.Therefore, for cases where frequent disease prognosis is required, such as patients with acute myocardial infarction, a method that can be easily used with a small blood sample and also sensitively and quickly measures the concentration of AGE in the blood is needed.
상기한 배경하에, 본 발명자들은 급성심근경색 환자에게 적용할 수 있는 간편하고 신속한 혈중 AGE 분석 방법을 개발하기 위해 노력하던 중, 본 발명에 따른 방법이 적은 혈액 시료와 간단한 시약만으로도 혈중 AGE를 신속하고 민감하게 측정할 수 있음을 확인하였으며, 실제 급성심근경색 환자 27명을 대상으로 3개월 동안 본 발명의 방법을 적용한 결과, 환자의 혈중 AGE를 민감하게 분석할 수 있고, 또한 급성심근경색 발생 후 경과 시간에 따른 혈중 AGE 변화 양상(패턴)을 분석하여 급성심근경색 환자의 예후를 예측할 수 있음을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.Against the above background, while the present inventors were trying to develop a simple and rapid method for analyzing blood AGEs that can be applied to patients with acute myocardial infarction, the method according to the present invention was able to rapidly and rapidly analyze blood AGEs using only a small blood sample and simple reagents. It was confirmed that it can be measured sensitively, and as a result of applying the method of the present invention to 27 actual patients with acute myocardial infarction for 3 months, it was possible to sensitively analyze the patient's blood AGE and also measure the progress after the occurrence of acute myocardial infarction. The present invention was completed by confirming that the prognosis of patients with acute myocardial infarction can be predicted by analyzing the pattern (pattern) of changes in blood AGE over time.
본 발명의 목적은 급성심근경색 환자와 같이 반복적으로 혈중 AGE 변화 양상을 추적할 필요가 있는 경우에 적용할 수 있는 간편하고 신속한 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법을 제공하는 것이며, 나아가 이를 통해 급성심근경색의 예후 예측방법을 제공하고, 이를 통해 궁극적으로 조속한 시점에 환자에게 적절한 의료 조치가 제공될 수 있도록 하여 궁극적으로 환자의 생명 연장과 함께 삶의 질을 향상시키는 유용한 효과를 달성하는 것이다.The purpose of the present invention is to provide a simple and rapid method for analyzing blood AGE in patients with acute myocardial infarction that can be applied in cases where it is necessary to repeatedly track changes in blood AGE, such as in patients with acute myocardial infarction. It provides a method for predicting the prognosis of myocardial infarction, and ultimately achieves the useful effect of prolonging the patient's life and improving the quality of life by ensuring that appropriate medical treatment is provided to the patient at an early stage.
상기 목적을 달성하기 위하여,In order to achieve the above purpose,
본 발명은 This invention
1) 급성심근경색이 발생한 환자의 혈액을 채취하는 단계; 및1) Collecting blood from a patient who has suffered an acute myocardial infarction; and
2) 구리 환원 반응 시약을 이용하여 채취된 혈액의 단위 부피당 AGE에 대한 광신호를 분석하는 단계;를 포함하는 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법을 제공한다.2) analyzing optical signals for AGE per unit volume of blood collected using a copper reduction reagent; providing a method for analyzing AGE in the blood of a patient with acute myocardial infarction, including the step.
또한, 본 발명은 In addition, the present invention
1) 급성심근경색이 발생한 환자의 혈액을 채취하는 단계;1) Collecting blood from a patient who has suffered an acute myocardial infarction;
2) 구리 환원 반응 시약을 이용하여 채취된 혈액의 단위 부피당 AGE에 대한 광신호를 분석하는 단계;2) analyzing the optical signal for AGE per unit volume of collected blood using a copper reduction reaction reagent;
3) 소정의 시간 간격을 두고 상기 단계 1)과 2)를 적어도 2번 이상 반복하는 단계; 및3) repeating steps 1) and 2) at least twice at predetermined time intervals; and
4) 측정된 AGE에 대한 광신호를 시간 차례로 관찰하여 패턴을 분석하는 단계;를 포함하는, 급성심근경색의 예후 예측방법을 제공한다.4) providing a method for predicting the prognosis of acute myocardial infarction, including the step of observing the optical signal for the measured AGE in chronological order and analyzing the pattern.
또한, 본 발명은 구리 환원 반응 시약을 포함하는 급성심근경색의 예후 예측을 위한 키트를 제공한다.Additionally, the present invention provides a kit for predicting the prognosis of acute myocardial infarction, including a copper reduction reagent.
본 발명에 따른 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법은, 적은 혈액 시료와 간단한 시약만으로 혈중 AGE의 농도를 신속하고 민감하게 측정할 수 있고, 이를 통해 환자는 편리하게 본인의 혈중 AGE 농도 변화를 관찰할 수 있으며, 또한 측정된 혈중 AGE 농도 변화 양상(패턴)을 분석하는 것으로부터 급성심근경색 환자의 예후를 예측할 수 있는 바, 조속한 시점에 환자에게 적절한 의료 조치가 제공될 수 있도록 하여 궁극적으로 환자의 생명 연장과 함께 삶의 질을 향상시킬 수 있는 유용한 효과가 있다.The method for analyzing blood AGEs in patients with acute myocardial infarction according to the present invention can quickly and sensitively measure the concentration of AGEs in the blood using only a small blood sample and simple reagents, and through this, patients can conveniently observe changes in the concentration of AGEs in their blood. In addition, the prognosis of patients with acute myocardial infarction can be predicted by analyzing the pattern (pattern) of change in the measured blood AGE concentration, allowing appropriate medical treatment to be provided to the patient at an early stage, ultimately improving the patient's health. It has useful effects that can improve the quality of life along with extending life.
도 1은 본 발명 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법의 개략도를 나타낸 것이다.
도 2는 다른 배양 온도 조건(25
도 3은 본 발명 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법의 당화 알부민(BSA-AGE)에 대한 검정 곡선(Calibration curve)이다.
도 4는 다른 농도의 BSA(2-10 mg/mL)와 일정한 양의 글루코스(0.1M)을 포함하는 튜브에서 당화 기간(50일 까지)에 따른 본 발명 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법으로 검출된 AGE 생성 신호를 측정한 결과를 나타낸 도면이다.
도 5는 다른 농도의 BSA(2-10 mg/mL)와 동일한 양의 글루코스 (0.1M)을 포함하는 튜브에서 당화 경과 시점(15, 30 및 50일 시점)에서 BSA 서로 다른 농도에 따른 본 발명 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법으로 검출된 AGE 생성 신호를 측정한 결과를 나타낸 도면이다.
도 6은 단백질 농도는 3 mg/mL로 유지하면서 글루코스 농도를 0.1M에서 0.5M로 다르게 하여 튜브에서 당화 기간(50일 까지)에 따른 본 발명 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법으로 검출된 AGE 생성 신호를 측정한 결과를 나타낸 도면이다.
도 7은 단백질 농도는 3 mg/mL로 유지하면서 글루코스 농도를 0.1M에서 0.5M로 다르게 하여 튜브에서 당화 경과 시점(5, 10, 30 및 50일 시점)에서 글루코스의 서로 다른 농도에 따른 본 발명 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법으로 검출된 AGE 생성 신호를 측정한 결과를 나타낸 도면이다.
도 8은 단백질(3 mg/mL BSA)과 글루코스(0.1M 또는 0.5M)로 구성된 반응혼합물에 다양한 양의 아스코르브산(5Х10-4 내지 5Х10-3 M)을 첨가한 튜브에서 본 발명 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법으로 검출된 AGE 생성 신호를 측정한 결과를 나타낸 도면 및 각 조건에서 산출된 회귀식을 나타낸 표이다.
도 9는 급성심근경색 발생 후 경과일(0, 2, 14, 30, 50)에 따른 환자의 본 발명 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법으로 검출된 AGE 생성 신호를 측정하여 나타낸 것으로, 환자들이 나타내는 패턴(일정하게 유지)을 확인한 도면이다.
도 10은 급성심근경색 발생 후 경과일(0, 2, 14, 30, 50)에 따른 환자의 본 발명 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법으로 검출된 AGE 생성 신호를 측정하여 나타낸 것으로, 환자들이 나타내는 패턴(지속적으로 증가)을 확인한 도면이다.
도 11은 급성심근경색 발생 후 경과일(0, 2, 14, 30, 50)에 따른 환자의 본 발명 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법으로 검출된 AGE 생성 신호를 측정하여 나타낸 것으로, 환자들이 나타내는 패턴(단일 피크 양상)을 확인한 도면이다.
도 12는 급성심근경색 발생 후 경과일(0, 2, 14, 30, 50)에 따른 환자의 본 발명 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법으로 검출된 AGE 생성 신호를 측정하여 나타낸 것으로, 환자들이 나타내는 패턴(다중 피크 양상)을 확인한 도면이다.
도 13은 본 발명 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법으로 검출된 AGE 생성 신호 패턴과 이의 그룹 분류를 통한 급성심근경색의 예후 예측방법의 개략도를 나타낸 것이다.Figure 1 shows a schematic diagram of the present invention's method for analyzing blood AGE in patients with acute myocardial infarction.
Figure 2 shows different culture temperature conditions (25
Figure 3 is a calibration curve for glycated albumin (BSA-AGE) of the present invention's method for analyzing blood AGE in patients with acute myocardial infarction.
Figure 4 shows the blood AGE analysis method of acute myocardial infarction patients according to the present invention according to the glycation period (up to 50 days) in tubes containing different concentrations of BSA (2-10 mg/mL) and a constant amount of glucose (0.1M). This diagram shows the results of measuring the detected AGE production signal.
Figure 5 shows the invention according to different concentrations of BSA at the time points of saccharification (15, 30 and 50 days) in tubes containing different concentrations of BSA (2-10 mg/mL) and the same amount of glucose (0.1M). This diagram shows the results of measuring the AGE production signal detected by the blood AGE analysis method in patients with acute myocardial infarction.
Figure 6 shows AGEs detected by the blood AGE analysis method of acute myocardial infarction patients according to the present invention according to the glycation period (up to 50 days) in the tube by varying the glucose concentration from 0.1M to 0.5M while maintaining the protein concentration at 3 mg/mL. This diagram shows the results of measuring the generated signal.
Figure 7 shows the present invention according to different concentrations of glucose at the time of saccharification in the tube (5, 10, 30, and 50 days) by varying the glucose concentration from 0.1M to 0.5M while maintaining the protein concentration at 3 mg/mL. This diagram shows the results of measuring the AGE production signal detected by the blood AGE analysis method in patients with acute myocardial infarction.
Figure 8 shows the acute myocardial infarction of the present invention in a tube in which various amounts of ascorbic acid (5Х10-4 to 5Х10-3 M) were added to a reaction mixture consisting of protein (3 mg/mL BSA) and glucose (0.1M or 0.5M). This is a diagram showing the results of measuring the AGE production signal detected by the AGE analysis method in the patient's blood and a table showing the regression equation calculated under each condition.
Figure 9 shows the measured AGE production signal detected by the blood AGE analysis method of patients with acute myocardial infarction of the present invention according to the number of days (0, 2, 14, 30, 50) after the occurrence of acute myocardial infarction. This is a drawing confirming the pattern shown (kept constant).
Figure 10 shows the measured AGE production signal detected by the blood AGE analysis method of patients with acute myocardial infarction of the present invention according to the number of days (0, 2, 14, 30, 50) after the occurrence of acute myocardial infarction. This is a drawing confirming the pattern (continuous increase) shown.
Figure 11 shows the measured AGE production signal detected by the blood AGE analysis method of patients with acute myocardial infarction of the present invention according to the number of days (0, 2, 14, 30, 50) after the occurrence of acute myocardial infarction. This is a diagram confirming the pattern (single peak pattern) shown.
Figure 12 shows the measured AGE production signal detected by the blood AGE analysis method of patients with acute myocardial infarction of the present invention according to the number of days (0, 2, 14, 30, 50) after the occurrence of acute myocardial infarction. This is a diagram confirming the pattern (multiple peak pattern) shown.
Figure 13 shows a schematic diagram of the method for predicting the prognosis of acute myocardial infarction through the AGE production signal pattern detected by the blood AGE analysis method of patients with acute myocardial infarction of the present invention and its group classification.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명은 This invention
1) 급성심근경색이 발생한 환자의 혈액을 채취하는 단계; 및1) Collecting blood from a patient who has suffered an acute myocardial infarction; and
2) 구리 환원 반응 시약을 이용하여 채취된 혈액의 단위 부피당 AGE에 대한 광신호를 분석하는 단계;를 포함하는 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법을 제공한다.2) analyzing optical signals for AGE per unit volume of blood collected using a copper reduction reagent; providing a method for analyzing AGE in the blood of a patient with acute myocardial infarction, including the step.
본 발명에 따른 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법은 환자에게서 채취한 소량의 혈액 시료와 간단한 구리 환원 반응 시약만으로 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 농도를 신속하고 민감하게 측정할 수 있다.The method for analyzing blood AGEs in patients with acute myocardial infarction according to the present invention can quickly and sensitively measure the concentration of AGEs in the blood of patients with acute myocardial infarction using only a small amount of blood sample collected from the patient and a simple copper reduction reaction reagent.
예후가 좋지 못한 급성심근경색 환자는 발병 이후 허혈 지역의 심근과 같은 조직과 세포에서 RAGE 발현량이 증가하고 AGE 생성과 축적이 증가하며, 이는 허혈 지역의 AGE 생성과 축적은 허혈 지역의 조직과 세포의 사멸을 야기하고 심장 리모델링(cardiac remodeling)과 같은 병변과 심부전을 발생시켜 결국에 환자를 사망에 이르게 한다. 따라서 급성심근경색 환자의 혈중 AGE는 환자의 예후를 나타내는 지표가 될 수 있다.In patients with acute myocardial infarction with a poor prognosis, the expression of RAGE increases in tissues and cells such as the myocardium in the ischemic area, and the production and accumulation of AGE increases. This means that the production and accumulation of AGE in the ischemic area increases in the tissues and cells of the ischemic area. It causes death and causes lesions such as cardiac remodeling and heart failure, ultimately leading to the patient's death. Therefore, AGE in the blood of patients with acute myocardial infarction can be an indicator of the patient's prognosis.
한편, 급성심근경색 발병 후 AGE 생성과 축적과 함께 나타나는 병의 진행과 악화는 급성심근경색 발병 후 처음 50일 이내에 또는 3개월 이내에 가장 빈번하고 급격하게 나타날 수 있다. 따라서, 급성심근경색 환자는 특히 발병 후 처음 3개월까지 병의 예후를 나타내는 혈중 AGE를 민감하게 살필 수 있어야 하고, 또한 환자가 편리하고 간단하게 반복적으로 혈중 AGE를 측정할 수 있어야 한다.Meanwhile, the progression and worsening of the disease that occurs with the production and accumulation of AGEs after the onset of acute myocardial infarction can occur most frequently and rapidly within the first 50 days or within 3 months after the onset of acute myocardial infarction. Therefore, patients with acute myocardial infarction must be able to sensitively monitor blood AGE, which indicates the prognosis of the disease, especially up to the first three months after onset, and patients must also be able to conveniently and simply measure blood AGE repeatedly.
본 발명의 방법은 환자의 혈액 중 AGE(최종당화산물)의 농도를 구리 환원 반응 시약을 이용하여 1가로 환원되는 구리 복합체에 의한 광신호를 측정하는 것으로서, 혈중 AGE의 생성과 증가를 민감하게 측정할 수 있다.The method of the present invention measures the concentration of AGEs (advanced glycation end products) in the patient's blood using a copper reduction reagent to measure the optical signal caused by a copper complex that is reduced to monovalent value, and sensitively measures the production and increase of AGEs in the blood. can do.
본 발명의 구체예에서, AGE 검출 민감도를 확인하기 위하여 BSA-AGE(소혈청알부민 + 글루코스) 표준용액을 만들어 흡광도를 측정하였고, 그 결과 μL 단위의 적은 시료로도 당화되지 않은 BSA 단백질의 신호 대비 당화된 BSA(BSA-AGE)의 신호가 확연히 구분되는 것을 확인하여 민감한 검사법임을 확인하였다(도 2 참조).In an embodiment of the present invention, in order to confirm the sensitivity of AGE detection, a standard solution of BSA-AGE (bovine serum albumin + glucose) was prepared and the absorbance was measured, and as a result, the signal of the unglycosylated BSA protein was compared with a small sample in μL. It was confirmed that the signal of glycated BSA (BSA-AGE) was clearly distinguished, confirming that it was a sensitive test method (see Figure 2).
본 발명의 방법은 바람직하게 환자의 혈액 시료와 구리 환원 반응 시약을 20 내지 60
본 발명의 구체예에서, 25
본 발명의 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법에 있어서, 단계 1)은 급성심근경색이 발생한 환자의 혈액을 채취하는 단계이다. 혈액 채취는 통상 알려진 방법으로 실시하는 것으로 이해될 수 있고, 채취한 혈액은 그대로 이용할 수 있고, 또는 본 발명의 분석 대상 물질인 AGE는 주로 혈청에 함유되는 바 채취된 혈액에서 혈청 시료만을 분리하여 사용할 수 있다. 또는 채취한 혈액으로부터 혈청 단백질을 분리하여 얻고 이를 별도의 용액에 용해시킨 후 구리 환원 반응 시약과 반응시키는 것일 수 있다.In the method of analyzing AGE in the blood of a patient with acute myocardial infarction of the present invention, step 1) is a step of collecting blood from a patient who has suffered an acute myocardial infarction. Blood collection can be understood as being carried out by a commonly known method, and the collected blood can be used as is, or since AGE, which is the analyte of the present invention, is mainly contained in serum, it can be used by separating only the serum sample from the collected blood. You can. Alternatively, serum proteins may be separated from collected blood, dissolved in a separate solution, and then reacted with a copper reduction reagent.
상기 용액은 혈청 단백질을 분산시킬 수 있는 용액이라면 사용 가능하고, AGE에 의한 구리 환원 반응과 신호 검출에 방해가 되지 않는 용액이라면 사용 가능하고, 예를 들어 완충액을 사용할 수 있다.Any solution that can disperse serum proteins can be used, and any solution that does not interfere with the copper reduction reaction and signal detection by AGE can be used. For example, a buffer solution can be used.
상기 완충액은 암모늄 아세테이트, Tris-HCl, 3-(시클로헥실아미노)-1-프로판술폰산 (CAPS), 붕산염, 탄산염-중탄산염, 4-(시클로헥실아미노)-1-부탄술폰산 (CABS), 3-(시클로헥실아미노)-2-히드록시-1-프로판술폰산 (CAPSO), N-트리스(히드록시메틸)메틸-4-아미노부탄술폰산 (TABS), 4-(N-모르폴리노)부탄술폰산 (MOBS), 2-(시클로헥실아미노)에탄술폰산 (CHES), N-(1,1-디메틸2-히드록시에틸)-3-아미노-2-히드록시프로판술폰산 (AMPSO), 피페라진-1,4-비스(2-히드록시프로판술폰산) 2수화물 및 피페라진-N,N'-비스(2-히드록시프로판술폰산) (POPSO)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 완충액이 사용될 수 있다.The buffer solution includes ammonium acetate, Tris-HCl, 3-(cyclohexylamino)-1-propanesulfonic acid (CAPS), borate, carbonate-bicarbonate, 4-(cyclohexylamino)-1-butanesulfonic acid (CABS), 3- (cyclohexylamino)-2-hydroxy-1-propanesulfonic acid (CAPSO), N-tris(hydroxymethyl)methyl-4-aminobutanesulfonic acid (TABS), 4-(N-morpholino)butanesulfonic acid ( MOBS), 2-(cyclohexylamino)ethanesulfonic acid (CHES), N-(1,1-dimethyl2-hydroxyethyl)-3-amino-2-hydroxypropanesulfonic acid (AMPSO), piperazine-1, One or more buffers selected from the group consisting of 4-bis(2-hydroxypropanesulfonic acid) dihydrate and piperazine-N,N'-bis(2-hydroxypropanesulfonic acid) (POPSO) can be used.
본 발명의 구체예에서, 혈액 시료를 환자에서 채취하고 혈청 시료만을 분리한 뒤 혈청 시료에 함유되는 단백질을 침전시켜 분리하고 이를 별도의 완충액에 다시 용해시킨 후 얻은 시료를 분석에 사용하였다(도 1 참조).In an embodiment of the present invention, a blood sample was collected from a patient, only the serum sample was separated, the protein contained in the serum sample was separated by precipitation, and the sample was dissolved again in a separate buffer and used for analysis (Figure 1 reference).
본 발명의 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법에 있어서, 단계 2)는 구리 환원 반응 시약을 이용하여 채취된 혈액의 단위 부피당 구리 환원 반응성 AGE에 대한 광신호를 분석하는 단계이다. 본 발명의 방법은 AGE에 대하여 구리 환원 반응 시약의 구리가 1가로 환원되면서 나타내는 흡광신호를 측정하는 것이다. In the method for analyzing blood AGEs in patients with acute myocardial infarction of the present invention, step 2) is a step of analyzing optical signals for copper reduction-reactive AGEs per unit volume of blood collected using a copper reduction reagent. The method of the present invention measures the absorption signal displayed as copper in the copper reduction reagent is reduced to monovalent for AGE.
상기 단계 2)는 채취된 혈액 샘플을 구리 환원 반응 시약과 혼합하여 혼합물을 형성하고, 이를 배양한 후 단위 부피당 구리 환원 반응성 AGE에 대한 광신호를 분석하는 단계로서, 상기 구리 환원 반응 시약은 구리 및 하기 화학식 1의 화합물 또는 이의 염을 포함하는 시약이다.Step 2) is a step of mixing the collected blood sample with a copper reduction reagent to form a mixture, culturing it, and then analyzing the optical signal for copper reduction reactive AGE per unit volume, wherein the copper reduction reagent contains copper and It is a reagent containing a compound of the following formula (1) or a salt thereof.
[화학식 1][Formula 1]
(상기 화학식 1에서,(In Formula 1 above,
R1, R2, R3, R4, R5 및 R6은, 각각 독립적으로 C1-3의 직쇄 또는 분지쇄 알킬이다).R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6 are each independently C 1-3 straight or branched alkyl).
상기 구리 환원 반응 시약은 통상적으로 시판되는 것을 사용할 수 있다.The copper reduction reaction reagent may be a commercially available reagent.
상기 구리는 바람직하게는 Cu2+ 이온의 공급원을 제공하는 형태이다. 예를 들어 구리는 황산구리(II), 브롬화구리(II), 염화구리(II), 불화구리(II), 과염소산구리(II), 몰리브덴산구리(II), 질산구리(II), 수산화구리(II) 및 사불화붕산구리(II)와 같이 2가 형태의 구리 공급원일 수 있다.The copper is preferably in a form that provides a source of Cu 2+ ions. For example, copper is copper(II) sulfate, copper(II) bromide, copper(II) chloride, copper(II) fluoride, copper(II) perchlorate, copper(II) molybdate, copper(II) nitrate, and copper hydroxide ( II) and copper(II) tetrafluoroborate.
상기 화학식 1의 화합물은 상기 구리와 복합체를 형성할 수 있는 킬레이트 화합물로서, 본 발명 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법과 같이 AGE에 의하여 1가로 환원되면서 일정한 흡광 패턴을 신호 값으로 갖는 것이라면 사용 가능하고,The compound of Formula 1 is a chelating compound that can form a complex with the copper, and can be used as long as it is reduced to a monovalent state by AGE and has a constant absorption pattern as a signal value, as in the method of analyzing blood AGE in patients with acute myocardial infarction of the present invention. do,
예를 들어 화학식 1의 화합물은 또는 이의 염이다.For example, the compound of formula 1 is or a salt thereof.
다른 예로서, 상기 화학식 1의 화합물은 일 수 있다.As another example, the compound of Formula 1 is It can be.
상기 화학식 1 화합물은 수화물의 형태 또는 비수화물의 형태일 수 있다.The compound of Formula 1 may be in the form of a hydrate or a non-hydrate form.
본 발명의 구체예에서, 구리 환원 반응 시약은 염화 구리 2수화물(CuCl2 Х 2H2O)와 네오쿠프로인 하이드로클로라이드 모노하이드레이트(C14H12N2 Х HCl Х H2O)을 포함하는 시약을 사용하였다.In an embodiment of the invention, the copper reduction reaction reagent comprises copper chloride dihydrate (CuCl 2 Х 2H 2 O) and neocuproin hydrochloride monohydrate (C 14 H 12 N 2 Х HCl Х H 2 O). reagent was used.
상기 구리 환원 반응 시약은 완충액을 더 포함할 수 있고, 예를 들어 상기 완충액은 암모늄 아세테이트, Tris-HCl, 3-(시클로헥실아미노)-1-프로판술폰산 (CAPS), 붕산염, 탄산염-중탄산염, 4-(시클로헥실아미노)-1-부탄술폰산 (CABS), 3-(시클로헥실아미노)-2-히드록시-1-프로판술폰산 (CAPSO), N-트리스(히드록시메틸)메틸-4-아미노부탄술폰산 (TABS), 4-(N-모르폴리노)부탄술폰산 (MOBS), 2-(시클로헥실아미노)에탄술폰산 (CHES), N-(1,1-디메틸2-히드록시에틸)-3-아미노-2-히드록시프로판술폰산 (AMPSO), 피페라진-1,4-비스(2-히드록시프로판술폰산) 2수화물 및 피페라진-N,N'-비스(2-히드록시프로판술폰산) (POPSO)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 완충액이다.The copper reduction reaction reagent may further include a buffer, for example, the buffer includes ammonium acetate, Tris-HCl, 3-(cyclohexylamino)-1-propanesulfonic acid (CAPS), borate, carbonate-bicarbonate, 4 -(cyclohexylamino)-1-butanesulfonic acid (CABS), 3-(cyclohexylamino)-2-hydroxy-1-propanesulfonic acid (CAPSO), N-tris(hydroxymethyl)methyl-4-aminobutane Sulfonic acid (TABS), 4-(N-morpholino)butanesulfonic acid (MOBS), 2-(cyclohexylamino)ethanesulfonic acid (CHES), N-(1,1-dimethyl2-hydroxyethyl)-3- Amino-2-hydroxypropanesulfonic acid (AMPSO), piperazine-1,4-bis(2-hydroxypropanesulfonic acid) dihydrate and piperazine-N,N'-bis(2-hydroxypropanesulfonic acid) (POPSO) ) is one or more buffers selected from the group consisting of.
상기 단계 2는 상기 구리 환원 반응성 AGE에 대한 광신호는 채취된 혈액의 AGE로부터 구리 환원 반응 시약의 착물이 환원됨으로써 구리 1가의 복합체로부터 나타나는 광신호, 예를 들어 400 내지 500 nm, 410 내지 490 nm, 420 내지 480 nm, 430 내지 470 nm, 440 내지 460 nm, 또는 약 450nm의 흡광신호를 분석하는 단계이다.In step 2, the optical signal for the copper reduction-reactive AGE is an optical signal that appears from a copper monovalent complex due to the reduction of the complex of the copper reduction reagent from the AGE of the collected blood, for example, 400 to 500 nm, 410 to 490 nm. , 420 to 480 nm, 430 to 470 nm, 440 to 460 nm, or about 450 nm.
상기 구리 환원 반응성 AGE에 대한 광신호는 구리 환원 반응 시약의 구리가 1가로 환원되면서 나타나는 신호로서, 특정 이론에 제한되지 않지만, AGE의 생성 과정 중에 산화나 또는 AGE 자체에 의하여 구리가 1가로 환원됨으로써 나타나는 신호로 이해될 수 있다. 혈중 AGE의 생성은 체내 알부민과 같은 단백질 또는 지방에 글루코스와 같은 단당류가 비효소적 당화 반응을 나타냄으로써 야기되는 것일 수 있다. 상기 당화 반응은 세포외 또는 세포내에서 발생하는 것일 수 있고, 시프트 염기를 형성하고 아마도리 생성물로 전환되고 최종적으로 AGE가 생성되는 과정 중의 반응에 의한 것이거나 또는 AGE 자체에 의한 구리의 1가로의 환원에 의해서 측정되는 신호로 이해될 수 있다.The optical signal for the copper reduction reactive AGE is a signal that appears when the copper in the copper reduction reagent is reduced to a monovalent state. It is not limited to a specific theory, but is caused by copper being reduced to a monovalent state by oxidation or by the AGE itself during the production process of AGE. It can be understood as a signal that appears. The production of AGEs in the blood may be caused by the non-enzymatic glycation reaction of proteins such as albumin or monosaccharides such as glucose in the body. The glycation reaction may occur extracellularly or intracellularly, and may be due to a reaction during the process of forming a shift base, being converted to an Amadori product, and finally generating AGE, or the monovalent conversion of copper by AGE itself. It can be understood as a signal measured by reduction.
상기 구리 환원 반응성 AGE는 체내 발생하는 AGE라면 제한 없이 포함하고, 예를 들어 CML(carboxymethyl-lysine), CEL(carboxyethyl-lysine), 피랄린(pyrraline), 펜토시딘(pentosidine), 이미다졸론(imidazolone), 3DG H1(3-deoxyglucosone-hydroimidazolone 1), G-H1(glyoxal hydroimidazolone-1), MG-H1(methylglyoxal hydroimidazolone-1), MOLD(methylglyoxal-derived lysine dimer), 아르기피리미딘(argpyrimidine) 및 펜토시딘(pentosidine)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상이다.The copper reduction-reactive AGE includes without limitation any AGE that occurs in the body, for example, CML (carboxymethyl-lysine), CEL (carboxyethyl-lysine), pyrraline, pentosidine, imidazolone ( imidazolone), 3DG H1 (3-deoxyglucosone-hydroimidazolone 1), G-H1 (glyoxal hydroimidazolone-1), MG-H1 (methylglyoxal hydroimidazolone-1), MOLD (methylglyoxal-derived lysine dimer), argpyrimidine and at least one selected from the group consisting of pentosidine.
상기 구리 환원 반응성 AGE에 대한 광신호를 측정하는 것은 구리 환원 반응 분석으로 측정되는 흡광신호를 얻는 것일 수 있으나, 또는 이 흡광신호를 검정 곡선에 적용하여 AGE 농도 값으로 변환하여 값을 얻는 것일 수 있다. 또는 표준 검정 곡선 분석법을 이용하여 측정된 구리 환원 반응성 AGE에 대한 광신호 값을 AGE 농도 값으로 전환하고, 전체 혈중 단백질 중 AGE의 비율로 전환하여 이용할 수 있다.Measuring the optical signal for the copper reduction-reactive AGE may be to obtain an absorption signal measured by copper reduction reaction analysis, or may be to obtain a value by applying this absorption signal to a calibration curve and converting it to an AGE concentration value. . Alternatively, the optical signal value for copper reduction-reactive AGE measured using a standard calibration curve analysis method can be converted into an AGE concentration value and converted into a ratio of AGE among total blood proteins.
본 발명의 구체예에서, 본 발명자들은 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법을 급성심근경색 환자에 적용하기에 앞서 먼저 이의 AGE 검출 민감도와 유효성을 검증하기 위하여 표준 검정 곡선법(Standard calibration curve method)을 실험하였다. BSA-AGE(소혈청알부민 + 글루코스) 표준용액을 만들어 흡광도를 측정하여 검정 곡선을 만든 후, 이를 이용하여 미지시료의 흡광도를 읽어 검정 곡선에 해당하는 농도를 결정하는 방법을 이용하였다(도 3 참조).In an embodiment of the present invention, the present inventors first used the standard calibration curve method to verify the sensitivity and effectiveness of AGE detection before applying the method for analyzing blood AGE in patients with acute myocardial infarction to patients with acute myocardial infarction. was tested. A standard solution of BSA-AGE (bovine serum albumin + glucose) was prepared, the absorbance was measured to create a calibration curve, and then the absorbance of the unknown sample was read using this to determine the concentration corresponding to the calibration curve (see Figure 3). ).
또한, 본 발명은 In addition, the present invention
1) 급성심근경색이 발생한 환자의 혈액을 채취하는 단계;1) Collecting blood from a patient who has suffered an acute myocardial infarction;
2) 구리 환원 반응 시약을 이용하여 채취된 혈액의 단위 부피당 AGE에 대한 광신호를 분석하는 단계;2) analyzing the optical signal for AGE per unit volume of collected blood using a copper reduction reaction reagent;
3) 소정의 시간 간격을 두고 상기 단계 1)과 2)를 적어도 2번 이상 반복하는 단계; 및3) repeating steps 1) and 2) at least twice at predetermined time intervals; and
4) 측정된 AGE에 대한 광신호를 시간 차례로 관찰하여 패턴을 분석하는 단계;를 포함하는, 급성심근경색의 예후 예측방법을 제공한다.4) providing a method for predicting the prognosis of acute myocardial infarction, including the step of observing the optical signal for the measured AGE in chronological order and analyzing the pattern.
본 발명의 급성심근경색의 예후 예측방법에 있어서, 단계 3)은 소정의 시간 간격을 두고 상기 단계 1)과 2)를 적어도 2번 이상 반복하는 단계이다. 본 발명의 방법은 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법으로 적어도 2회, 3회, 4회 또는 그 이상의 횟수로 측정하고, 이를 분석하여 시간 경과에 따른 측정값의 변화 양상(패턴)을 분석하는 것이다.In the method for predicting the prognosis of acute myocardial infarction of the present invention, step 3) is a step of repeating steps 1) and 2) at least twice at predetermined time intervals. The method of the present invention is a method of analyzing AGE in the blood of patients with acute myocardial infarction, measuring at least 2, 3, 4 or more times and analyzing the change pattern (pattern) of the measured value over time. will be.
상기 소정의 시간 간격은 특별히 제한되지 않으나, 바람직하게 일정한 시간 간격을 두고 구리 환원 반응성 AGE 신호를 측정하는 것일 수 있고, 6시간, 12시간, 1일, 2일, 3일 또는 그 이상의 시간 간격을 두고 측정하는 것일 수 있고, 바람직하게 매일 측정하는 것이다.The predetermined time interval is not particularly limited, but preferably, the copper reduction reactive AGE signal is measured at regular time intervals, and the time interval is 6 hours, 12 hours, 1 day, 2 days, 3 days, or more. It can be measured over time, preferably every day.
상기 단계 3)은 단계 2)에서 측정한 구리 환원 반응성 AGE에 대한 광신호 값, 또는 광신호와 표준 검정 곡선으로부터 얻은 회귀 방정식으로 산출된 AGE 농도, 또는 전체 혈액 단백질 중 AGE의 비율을 산출한 값에 추가적으로 RSD(상대표준편차) 값을 이용하는 것일 수 있다.Step 3) is the optical signal value for copper reduction-reactive AGE measured in step 2), or the AGE concentration calculated by a regression equation obtained from the optical signal and the standard calibration curve, or the ratio of AGE to total blood proteins. In addition, the RSD (relative standard deviation) value may be used.
예를 들어 상기 RSD 값이 5% 이하인 경우에는 소정의 시간 간격으로 측정된 값의 차이가 큰 폭을 나타내지 않는 것으로서 일정하게 유지되는 양상의 패턴인 것으로 판단될 수 있고, 상기 RSD 값이 5% 초과인 경우에, 측정된 값의 차이가 큰 폭을 나타내고 패턴이 일정하게 유지되지 않는 것으로 판단할 수 있고, 나타난 패턴이 감소가 아닌, 증가, 단일 피크 또는 다중 피크(지그재그) 양상이라면 급성심근경색 환자의 재발과 사망의 위험이 높은 것으로 판단할 수 있다.For example, if the RSD value is 5% or less, the difference between the values measured at predetermined time intervals does not show a large range, so it can be judged to be a pattern that remains constant, and if the RSD value exceeds 5% In this case, it can be determined that the difference in measured values is large and the pattern is not maintained consistently, and if the pattern shown is an increase, single peak, or multiple peak (zigzag) pattern rather than a decrease, it can be determined that the patient has acute myocardial infarction. It can be judged that the risk of recurrence and death is high.
또한, 상기 단계 3은 상기 RSD 값이 외에도 측정된 AGE 신호 값들의 변화 폭을 판단함에 있어서, 초기 측정된 신호를 기준으로 5% 이상, 7% 이상, 10% 이상, 20% 이상 또는 30% 이상의 증가 또는 감소의 폭을 나타내는 경우 유의미한 변화로 판단하는 방법을 더 이용할 수 있다.In addition, step 3 determines the change range of the measured AGE signal values in addition to the RSD value by more than 5%, more than 7%, more than 10%, more than 20%, or more than 30% based on the initially measured signal. If the range of increase or decrease is indicated, a further method of judging it as a significant change can be used.
본 발명의 구체예에서, 본 발명자들은 급성심근경색 환자 27명을 대상으로 3개월 동안 구리 환원 반응성 AGE 신호를 측정하였고, 각 환자 개인의 3개월 동안 얻어진 AGE 신호 값들의 RSD(%)를 산출하였다. 그 결과, RSD 5% 이하, 5% 내지 10% 이하, 10% 초과 3개의 그룹으로 분류할 수 있었으며, RSD 5% 이하 그룹의 환자의 경우 3개월 동안 측정된 AGE 신호 값이 일정하게 유지되는 양상을 나타내고, 5% 내지 10% 이하 또는 10% 초과의 두 그룹의 환자에서는 3개월 동안 측정된 AGE 신호 값에 유의미한 변화가 감지되었고 증가, 단일 피크 또는 둘 이상의 다중 피크 패턴을 나타내는 것을 확인하였다(표 3 참조).In an embodiment of the present invention, the present inventors measured copper reduction-reactive AGE signals for 3 months in 27 patients with acute myocardial infarction, and calculated the RSD (%) of the AGE signal values obtained for 3 months for each patient. . As a result, it could be classified into three groups: RSD 5% or less, 5% to 10% or less, and more than 10%. For patients in the RSD 5% or less group, the AGE signal value measured for 3 months remained constant. In the two groups of patients with 5% to 10% or less or more than 10%, significant changes were detected in the AGE signal value measured over 3 months and it was confirmed that it showed an increase, single peak, or two or more multi-peak patterns (Table 3).
본 발명의 급성심근경색의 예후 예측방법에 있어서, 상기 단계 4)의 패턴 분석 후, 급성심근경색 환자의 AGE에 대한 광신호가 시간 차례로 관찰하였을 때 지속적으로 증가, 단일 피크 패턴, 또는 둘 이상의 피크 패턴을 나타내는 경우, 급성심근경색의 예후가 좋지 않은 것으로 판단한다.In the method for predicting the prognosis of acute myocardial infarction of the present invention, after the pattern analysis in step 4), the optical signal for AGE of the acute myocardial infarction patient continues to increase when observed sequentially over time, a single peak pattern, or two or more peak patterns. If it shows, the prognosis of acute myocardial infarction is judged to be poor.
본 발명의 구체예에서, 급성심근경색 발생 환자 27명을 대상으로 3개월 동안 그들의 혈중 AGE 변화 양상(패턴)을 측정하였고, 그 결과 총 4개의 대표적인 패턴으로 나타남을 확인하였다(도 13 참조). 혈중 AGE 변화 양상(패턴)이 일정하게 유지되거나 감소하는 경우에 환자들은 병의 재발이나 사망의 위험이 낮고 병의 예후가 좋은 반면(도 9 참조), 혈중 AGE 변화 양상(패턴)이 증가, 단일 피크 또는 다중 피크(지그재그)의 양상이 나타난 환자들은 병의 재발이나 사망 위험이 높고 병의 예후가 좋지 못한 것을 확인하였다(도 10 내지 12 참조).In an embodiment of the present invention, AGE change patterns (patterns) in the blood of 27 patients with acute myocardial infarction were measured for 3 months, and as a result, it was confirmed that a total of 4 representative patterns appeared (see FIG. 13). When the AGE change pattern (pattern) in the blood remains constant or decreases, patients have a low risk of disease recurrence or death and a good prognosis (see Figure 9), while the blood AGE change pattern (pattern) increases, single It was confirmed that patients showing peak or multiple peak (zigzag) patterns had a high risk of disease recurrence or death and a poor disease prognosis (see FIGS. 10 to 12).
따라서, 본 발명의 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법을 이용한 급성심근경색의 예후 예측방법은, 환자의 적은 혈액 시료만으로 편리하게 혈중 AGE 농도 변화를 민감하게 관찰할 수 있고, 또한 측정된 혈중 AGE 농도 변화 양상(패턴)을 분석하는 것으로부터 급성심근경색 발생 후 환자의 재발 또는 사망의 위험과 같은 예후 예측을 위한 정보를 제공할 수 있는 바, 조속한 시점에 환자에게 적절한 의료 조치가 제공될 수 있으며 궁극적으로 환자의 생명 연장과 함께 삶의 질을 향상시킬 수 있다.Therefore, the method for predicting the prognosis of acute myocardial infarction using the method for analyzing blood AGEs in patients with acute myocardial infarction of the present invention can conveniently and sensitively observe changes in blood AGE concentration with only a small blood sample from the patient, and can also measure the measured blood AGEs. By analyzing the concentration change pattern (pattern), information can be provided to predict prognosis, such as the patient's risk of recurrence or death after an acute myocardial infarction, and appropriate medical treatment can be provided to the patient as soon as possible. Ultimately, it can prolong the patient's life and improve the quality of life.
또한, 본 발명은 구리 환원 반응 시약을 포함하는 급성심근경색의 예후 예측을 위한 키트를 제공한다.Additionally, the present invention provides a kit for predicting the prognosis of acute myocardial infarction, including a copper reduction reagent.
본 발명에 따른 급성심근경색의 예후 예측을 위한 키트는 환자의 혈중 AGE에 의한 구리 환원 반응을 이용하여 급성심근경색 환자의 적은 혈액 시료에서 단위 부피당 AGE를 신속하고 민감하게 측정하기 위한 것으로서, 혈중 AGE에 의한 구리 환원 반응 신호 값을 측정하여 급성심근경색 발생 후 환자의 혈중 AGE 변화와 이의 패턴을 분석함으로써 급성심근경색의 예후 예측을 위한 정보를 제공할 수 있다.The kit for predicting the prognosis of acute myocardial infarction according to the present invention is for quickly and sensitively measuring AGE per unit volume in a small blood sample of a patient with acute myocardial infarction using the copper reduction reaction caused by AGE in the patient's blood. It is possible to provide information for predicting the prognosis of acute myocardial infarction by measuring the copper reduction reaction signal value and analyzing the change in AGE in the patient's blood and its pattern after the occurrence of acute myocardial infarction.
상기 구리 환원 반응 시약은 구리 및 하기 화학식 1의 화합물 또는 이의 염을 포함하는 시약이다.The copper reduction reaction reagent is a reagent containing copper and a compound of the following formula (1) or a salt thereof.
[화학식 1][Formula 1]
(상기 화학식 1에서,(In Formula 1 above,
R1, R2, R3, R4, R5 및 R6은, 각각 독립적으로 C1-3의 직쇄 또는 분지쇄 알킬이다).R 1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6 are each independently C 1-3 straight or branched alkyl).
상기 키트의 구리 환원 반응 시약은 구리를 포함하는 부분과 상기 화학식 1 화합물 또는 이의 염을 포함하는 부분이 한 공간에 같이 포함되거나 또는 분리된 공간에 별도로 구비되는 것일 수 있다.The copper reduction reaction reagent of the kit may include a part containing copper and a part containing the compound of Formula 1 or a salt thereof together in one space, or may be provided separately in a separate space.
상기 키트는 또한 완충액을 더 포함하는 키트일 수 있고, 완충액은 별도의 공간에 분리하여 구비되거나 또는 같이 한공간으로 구비되는 것일 수 있고, 상기 완충액은 암모늄 아세테이트, Tris-HCl, 3-(시클로헥실아미노)-1-프로판술폰산 (CAPS), 붕산염, 탄산염-중탄산염, 4-(시클로헥실아미노)-1-부탄술폰산 (CABS), 3-(시클로헥실아미노)-2-히드록시-1-프로판술폰산 (CAPSO), N-트리스(히드록시메틸)메틸-4-아미노부탄술폰산 (TABS), 4-(N-모르폴리노)부탄술폰산 (MOBS), 2-(시클로헥실아미노)에탄술폰산 (CHES), N-(1,1-디메틸2-히드록시에틸)-3-아미노-2-히드록시프로판술폰산 (AMPSO), 피페라진-1,4-비스(2-히드록시프로판술폰산) 2수화물 및 피페라진-N,N'-비스(2-히드록시프로판술폰산) (POPSO)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 완충액이다.The kit may also be a kit that further includes a buffer solution, and the buffer solution may be provided separately in a separate space or provided in one space, and the buffer solution may be ammonium acetate, Tris-HCl, 3-(cyclohexyl Amino)-1-propanesulfonic acid (CAPS), borate, carbonate-bicarbonate, 4-(cyclohexylamino)-1-butanesulfonic acid (CABS), 3-(cyclohexylamino)-2-hydroxy-1-propanesulfonic acid (CAPSO), N-tris(hydroxymethyl)methyl-4-aminobutanesulfonic acid (TABS), 4-(N-morpholino)butanesulfonic acid (MOBS), 2-(cyclohexylamino)ethanesulfonic acid (CHES) , N-(1,1-dimethyl2-hydroxyethyl)-3-amino-2-hydroxypropanesulfonic acid (AMPSO), piperazine-1,4-bis(2-hydroxypropanesulfonic acid) dihydrate and piperazine. It is one or more buffers selected from the group consisting of razine-N,N'-bis(2-hydroxypropanesulfonic acid) (POPSO).
상기 키트는 형광신호 (또는 비색 신호)가 검출 가능한 신호 수준을 초과하는 것을 정지시키기 위한, 아세트산, 시트르산, 아스코르브산, 포름산, 염산 또는 황산을 포함하는 하나 이상의 정지액을 더 포함할 수 있다. 정지액은 키트에서 별도의 용기에 패키징될 것이다.The kit may further include one or more stop solutions containing acetic acid, citric acid, ascorbic acid, formic acid, hydrochloric acid, or sulfuric acid to stop the fluorescent signal (or colorimetric signal) from exceeding a detectable signal level. The suspension solution will be packaged in a separate container in the kit.
상기 키트는 형광 방출을 증강시키기 위한 하나 이상의 작용제를 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어 신호 증강제는 EDTA, IDA, NTA 및 TED와 같은 하나 이상의 금속 킬레이트제가 포함되는 것일 수 있고, 신호 증강이 요구되는 경우 사용을 위해 증강제는 키트에서 별도의 용기에 패키징될 것이다.The kit may further include one or more agents to enhance fluorescence emission. For example, the signal enhancer may include one or more metal chelating agents such as EDTA, IDA, NTA and TED, and the enhancer will be packaged in a separate container in the kit for use when signal enhancement is desired.
이하, 본 발명을 실험예에 의해 상세히 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail through experimental examples.
단, 하기 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실험예에 한정되는 것은 아니다. However, the following experimental examples only illustrate the present invention, and the content of the present invention is not limited to the following experimental examples.
<실험 프로토콜><Experimental Protocol>
1. 화학 물질 및 기기1. Chemicals and devices
사용된 모든 화학 물질은 분석 등급(analytical grade)의 화학 물질을 사용하였다. 글루코스(C6H12O6), 수크로즈(C12H2O11), 소듐 디하이드로겐 포스페이트(NaH2PO4 Υ 2H2O), 디소듐 하이드로겐 포스페이트(Na2HPO4 Υ 22H2O), 소듐 아자이드(NaN3), 염화 구리 2수화물(CuCl2 Υ 2H2O), 네오쿠프로인 하이드로클로라이드 모노하이드레이트(C14H12N2 Υ HCl Υ H2O), 아스코르브산(C6H8O6), 암모늄 아세테이트(NH4Ac), 및 트리클로로아세트산(C2HCl3O2)을 포함하는 시약은 모두 Sigma Aldrich에서 구입하여 사용하였다. 소혈청알부민(Fraction V; BSA)은 MP Biomedical로부터 구매하여 사용하였다. All chemicals used were of analytical grade. Glucose (C 6 H 12 O 6 ), sucrose (C 12 H 2 O 11 ), sodium dihydrogen phosphate (NaH 2 PO 4 Υ 2H 2 O), disodium hydrogen phosphate (Na 2 HPO 4 Υ 22H 2 O), sodium azide (NaN 3 ), copper chloride dihydrate (CuCl 2 Υ 2H 2 O), neocuproin hydrochloride monohydrate (C 14 H 12 N 2 Υ HCl Υ H 2 O), ascorbic acid ( Reagents including C 6 H 8 O 6 ), ammonium acetate (NH 4 Ac), and trichloroacetic acid (C 2 HCl 3 O 2 ) were all purchased from Sigma Aldrich. Bovine serum albumin (Fraction V; BSA) was purchased from MP Biomedical.
2. 시험관내(in vitro) 알부민 당화2. In vitro albumin glycation
AGE 알부민은 37
한편, 단백질 당화에 대한 아스코르브산(AA) 촉진 활성을 분석하기 위해 고안된 하기 실험예에서는, 0.05 M의 아스코르브산 표준원액을 준비하고, 이 표준원액의 50, 100, 250 및 500 μL 분취량을 반응 혼합물에 첨가하였다. 혼합물의 최종 부피는 5.0 mL였다.Meanwhile, in the following experimental example designed to analyze the promoting activity of ascorbic acid (AA) on protein glycation, a 0.05 M ascorbic acid standard stock solution was prepared, and 50, 100, 250, and 500 μL aliquots of this standard stock solution were reacted. was added to the mixture. The final volume of the mixture was 5.0 mL.
3. 인간 혈청 샘플링과 준비3. Human serum sampling and preparation
인간 혈청 샘플은 대한민국 길병원에서 급성심근경색(AMI) 발병으로 입원한 27명의 환자로부터 수집되었다. 본 발명 실험은 길병원 내부 검토위원회의 승인을 받았다(No: GDIRB 2018-046). 혈액 채취는 피험자가 급성심근경색(AMI) 발생 후 0일, 2일, 2주, 1개월 및 3개월에 수행되었다. 혈액 채취 후 고속 원심 분리로 혈장과 혈청을 분리하여, 분석 전까지 -80
인간 혈청에서 구리 환원 반응을 이용한 AGE 측정은 제조업체의 지침에 따라 BCA 키트를 사용하여 혈청 샘플의 단백질 농도를 분석하였다. 그런 다음 모든 혈청 샘플을 고압멸균된 증류수로 얼음 상에서 희석하여 단백질 2 mg/mL의 최종 농도를 갖는 100μL 용액으로 준비하였다. 희석된 혈청을 이용하여 구리 환원 반응으로 직접 단위 부피당 AGE 농도를 측정하였다. 모든 실험은 3회 반복되었고 평균값을 추가 분석에 사용하였다.For AGE measurement using copper reduction reaction in human serum, the protein concentration of serum samples was analyzed using the BCA kit according to the manufacturer's instructions. All serum samples were then diluted on ice with autoclaved distilled water to prepare 100 μL solutions with a final concentration of 2 mg/mL protein. AGE concentration per unit volume was measured directly by copper reduction reaction using diluted serum. All experiments were repeated three times and the average value was used for further analysis.
4. 단백질 샘플에서 AGE의 구리 환원 반응에 의한 광신호 측정4. Measurement of optical signals by copper reduction reaction of AGE in protein samples
구리 환원 반응은 약간의 수정과 함께 관련 논문(Bayarsaikhan G, Avan AN, Cekic SD, Apak R. Talanta. 2019, 204:613-625.)에 따라 수행되었다. 간략하게, 배양된 혼합물에서 100 μL의 샘플을 취하고, BSA에 형성된 AGE를 분석하기 위하여 단백질 성분을 40 μL의 0.6 M 트리클로로아세트산 용액으로 침전시켰고, 용액의 상청액은 12,000rpm에서 1.5분 동안 원심분리한 후 마이크로 피펫을 사용하여 침전 된 단백질로부터 완전히 분리하였다. 다음 단계로, 350 μL의 1M Tris HCl 완충액 (pH = 7.0)에 단백질 펠렛을 용해하고 교반시켰다. 펠렛이 완전히 녹았을 때 125 μL의 10 mM 황산구리와 125 μL의 NC를 단백질 튜브에 첨가하고 50
5. 통계 분석5. Statistical analysis
기술 분석 및 Student's t-test 분석은 Microsoft Excel Software를 사용하여 수행되었고, Spearman 상관 계수는 급성심근경색(AMI) 후 환자에서 형성된 AGE의 양상(pattern) 유형을 분석하기 위해 다음 방정식을 사용하여 계산되었다:Descriptive analysis and Student's t-test analysis were performed using Microsoft Excel Software, and Spearman correlation coefficient was calculated using the following equation to analyze the pattern type of AGE formed in patients after acute myocardial infarction (AMI). :
여기서 rs는 Spearman의 순위 상관 계수, di는 두계열 간의 차이, n은 샘플링 일의 수를 나타낸다.Here, r s is Spearman's rank correlation coefficient, d i is the difference between the two series, and n represents the number of sampling days.
상기 실험프로토콜을 토대로 아래와 같이 실험을 실시하였다.Based on the above experimental protocol, the experiment was conducted as follows.
<실험예 1> AGE 검출을 위한 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법의 최적화<Experimental Example 1> Optimization of blood AGE analysis method for acute myocardial infarction patients to detect AGE
<1-1> 최적 AGE 검출을 위한 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법의 최적 배양온도 조건<1-1> Optimal incubation temperature conditions for the blood AGE analysis method of acute myocardial infarction patients for optimal AGE detection
구리 환원 반응을 이용한 혈중 AGE 분석은 450nm의 파장을 사용하여 Cu(II)-Nc의 환원 반응에 의해 생성된 Cu(I)-Nc 복합체의 흡광도를 측정하는 것으로서, 본 발명자들은 알부민(BSA)과 글루코스 반응에 의해 생성된 구리 환원 반응성 AGE가 단백질의 침전물에 포함됨을 발견하여, 단백질 침전물 분석을 통해 당화 알부민(BSA-AGE)의 농도를 분석할 수 있음을 알 수 있었다. 다만, 보다 민감하게 AGE을 분석하기 위한 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법을 규명하기 위하여 각각의 다른 온도(25
도 2에서 확인되는 바와 같이, 25
<1-2> 최적화된 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법을 이용한 표준 AGE의 광학 밀도 측정<1-2> Measurement of optical density of standard AGE using optimized blood AGE analysis method of acute myocardial infarction patients
상기 <1-1>에서 밝힌 50
도 3에서 확인되는 바와 같이, 표준 당화 알부민(BSA-AGE)의 농도에 따른 광학 밀도(신호)는 강한 상관 관계를 나타낸다.As confirmed in Figure 3, the optical density (signal) depending on the concentration of standard glycated albumin (BSA-AGE) shows a strong correlation.
따라서, 본 발명의 구리 환원 반응을 이용한 혈중 AGE 분석은 단일 판독에 적은 양의 200μl (최종 부피)의 샘플만이 필요하므로 비용적으로 보다 효율적이고, 적은 양의 샘플을 이용하더라도 본 발명의 구리 환원 반응을 이용한 혈중 AGE 분석은 신속하고 민감하게 AGE 측정이 가능하며, 특히 급성심근경색 환자와 같이 매일 모니터링이 필요한 환자의 예후 관찰에 유용하다.Therefore, blood AGE analysis using the copper reduction reaction of the present invention is more cost-effective because only a small amount of 200 μl (final volume) of sample is required for a single reading, and even if a small amount of sample is used, the copper reduction reaction of the present invention Blood AGE analysis using reaction can measure AGE quickly and sensitively, and is especially useful for observing the prognosis of patients who require daily monitoring, such as patients with acute myocardial infarction.
<실험예 2> 일차적 요인에 따른 AGE 생성과 구리 환원 반응을 이용한 혈중 AGE 분석의 변화<Experimental Example 2> Changes in blood AGE analysis using AGE production and copper reduction reaction according to primary factors
비-효소적 당화 반응에서 AGE의 생성은 일차적 요인과 이차적 요인에 의하여 조절되는데, 먼저, 본 발명자들은 단백질(BSA) 또는 당 분자를 포함한 일차적 요인이 본 발명 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법을 이용한 AGE 측정에 미치는 영향을 확인하기 위하여 아래와 같이 실험하였다.The production of AGEs in non-enzymatic glycation reactions is regulated by primary and secondary factors. First, the present inventors found that the primary factors, including proteins (BSA) or sugar molecules, were analyzed using the present invention's method for analyzing blood AGEs in patients with acute myocardial infarction. To check the effect on the AGE measurement used, the following experiment was performed.
<2-1> 혈중 알부민 농도에 따른 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법의 AGE 측정 변화<2-1> Changes in AGE measurement in the blood AGE analysis method of acute myocardial infarction patients according to blood albumin concentration
일차적 요인 중 하나인 혈중 단백질 농도는 환자 개인마다 차이가 있다. 따라서, 혈중 단백질 농도가 AGE 생성과 본 발명 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법을 이용한 AGE 측정 결과에 어떤 영향을 주는지 알아보기 위하여 다음과 같이 실험하였다.Blood protein concentration, one of the primary factors, varies from individual patient to patient. Therefore, the following experiment was conducted to determine how blood protein concentration affects AGE production and AGE measurement results using the blood AGE analysis method of acute myocardial infarction patients of the present invention.
구체적으로, 알부민은 세포내 및 세포외 단백질 모두에서 발견되며, 건강한 사람의 혈청 농도는 35-50 g/L 범위이다. 또한 혈청 알부민 수치의 변화는 다양한 질환과 관련되는데, 예를 들어 당뇨 전단계 병의 진행, 혈액투석 및 특정 유형의 약물 투여와 관련이 있는 반면, 급성심부전, 패혈증 및 저알부민 혈증 환자에서는 감소한다. 이처럼 개인의 건강 상태 등에 따라 혈중 알부민의 양은 차이가 있을 수 있다.Specifically, albumin is found as both an intracellular and extracellular protein, and its serum concentration in healthy humans ranges from 35-50 g/L. Changes in serum albumin levels are also associated with a variety of diseases, such as the progression of pre-diabetes, hemodialysis, and the administration of certain types of medications, while they are decreased in patients with acute heart failure, sepsis, and hypoalbuminemia. As such, the amount of albumin in the blood may vary depending on the individual's health condition.
이에, 본 발명자들은 인산염 완충액 환경 (pH = 7.4)에서 다른 농도의 BSA(2-10 mg/mL)와 동일한 양의 글루코스 (0.1M)을 포함하는 튜브에서 발생하는 당화 반응에 대한 분석 민감도를 확인하였다. 당화 기간(50일 까지)에 따른 AGE 생성 신호를 측정한 결과를 도 4에 나타내었고, 당화 경과 시점(15, 30 및 50일 시점)에서 BSA 서로 다른 농도에 따른 AGE 생성 신호를 측정한 결과를 도 5에 나타내었다.Accordingly, the present inventors confirmed the sensitivity of the analysis for the glycation reaction occurring in tubes containing different concentrations of BSA (2-10 mg/mL) and the same amount of glucose (0.1M) in a phosphate buffer environment (pH = 7.4). did. The results of measuring the AGE production signal according to the saccharification period (up to 50 days) are shown in Figure 4, and the results of measuring the AGE production signal according to different concentrations of BSA at the time of saccharification (15, 30, and 50 days) are shown in Figure 4. It is shown in Figure 5.
도 4에서 확인되는 바와 같이, 글루코스 농도를 유지하면서 BSA 농도를 2 에서 10 mg/mL로 증가시켰을 때, 당화 반응 기간에 따른 회귀 방정식의 기울기는 0.012 에서 0.037로 증가됨을 확인하였다. 이처럼 회귀분석은 비효소적 당화 시스템에서 BSA의 농도 증가에 따라 보다 높은 수준의 AGE 생성이 나타난다는 것을 보여주었다.As seen in Figure 4, when the BSA concentration was increased from 2 to 10 mg/mL while maintaining the glucose concentration, the slope of the regression equation according to the glycation reaction period was confirmed to increase from 0.012 to 0.037. In this way, regression analysis showed that higher levels of AGE were produced as the concentration of BSA increased in the non-enzymatic saccharification system.
도 5에서 확인되는 바와 같이, 15, 30 및 50일 시점에서 모두 알부민 농도와 구리 환원 반응성 AGE 생성 사이에 강한 선형성이 확인되었다.As shown in Figure 5, strong linearity was confirmed between albumin concentration and copper reduction-reactive AGE production at all time points of 15, 30, and 50 days.
도 4와 도 5를 보면, 당화 시간에 대한 선형성(R2 = 0.93~0.97)에 비해 BSA 농도에 대한 일측정의 선형성이 상대적으로 강했다(R2 = 0.98~0.99).Looking at Figures 4 and 5, the linearity of the daily measurement for BSA concentration was relatively strong (R 2 = 0.98 to 0.99) compared to the linearity for saccharification time (R 2 = 0.93 to 0.97).
<2-2> 혈중 당 농도에 따른 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법의 AGE 측정 변화<2-2> Changes in AGE measurement in the blood AGE analysis method of acute myocardial infarction patients according to blood sugar concentration
비효소적 당화 반응을 조절하는 또 다른 일차적 요인은 당분자인 바, 이번 실험에서는 단백질 농도는 3 mg/mL로 유지하면서 글루코스 농도를 0.1M에서 0.5M로 다르게 하여 튜브에서 발생하는 당화 반응에 대한 분석의 민감도를 확인하였다. 당화 기간(50일 까지)에 따른 AGE 생성 신호를 측정한 결과를 도 6에 나타내었고, 당화 경과 시점(5, 10, 30 및 50일 시점)에서 글루코스의 서로 다른 농도에 따른 AGE 생성 신호를 측정한 결과를 도 7에 나타내었다.Another primary factor controlling the non-enzymatic glycation reaction is the sugar molecule. In this experiment, the protein concentration was maintained at 3 mg/mL and the glucose concentration was varied from 0.1M to 0.5M to analyze the glycation reaction that occurred in the tube. The sensitivity was confirmed. The results of measuring the AGE production signal according to the glycation period (up to 50 days) are shown in Figure 6, and the AGE production signal was measured according to different concentrations of glucose at the glycation time point (5, 10, 30, and 50 days). The results are shown in Figure 7.
도 6에서 확인되는 바와 같이, 회귀 방정식의 기울기는 당화 시간과 관련하여 0.015 ~ 0.044 범위로 확인되며, 도 4에서 확인한 BSA 농도 의존적 당화 반응에서 얻은 결과와 유사한 것으로 확인된다. 이는 당화 시간과 관련된 AGE 생성에 있어서 단백질(알부민)과 글루코스(당)의 기여가 유사한 수준임을 나타낸다.As seen in Figure 6, the slope of the regression equation is found to be in the range of 0.015 to 0.044 in relation to the saccharification time, and is confirmed to be similar to the results obtained from the BSA concentration-dependent saccharification reaction shown in Figure 4. This indicates that the contributions of protein (albumin) and glucose (sugar) in AGE production related to glycation time are similar.
도 7에서 확인되는 바와 같이, 글루코스 양이 다른 각각의 당화 튜브에서 수행된 측정은 강한 선형성을 보여준다.As can be seen in Figure 7, measurements performed in each saccharification tube with different amounts of glucose show strong linearity.
도 6 및 도 7을 보면, 구리 환원 반응성 AGE의 기울기 계수는 글루코스 농도의 증가와 함께 극적으로 증가하는 바, 이는 혈중 존재하는 당 분자의 양에 따라 AGE가 생성됨을 보여준다.6 and 7, the slope coefficient of copper reduction-reactive AGE increases dramatically with an increase in glucose concentration, showing that AGE is produced depending on the amount of sugar molecules present in the blood.
<2-3> 혈중 당 종류에 따른 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법의 AGE 측정 변화<2-3> Changes in AGE measurement in the blood AGE analysis method of acute myocardial infarction patients depending on the type of blood sugar
인간 알부민의 비효소적 당화는 초기 환원당과 단백질의 1차 아민기의 반응으로 시작하여 가역적 시프트 염기를 형성하는 반응을 거쳐, 형성된 시프트 염기는 화학적으로 불안정하여 보다 안정적인 형태의 아마도리(Amadori) 생성물로 쉽게 전환된다.Non-enzymatic glycation of human albumin begins with the reaction of the initial reducing sugar with the primary amine group of the protein and goes through a reaction to form a reversible shift base. The formed shift base is chemically unstable, producing a more stable form of the Amadori product. It is easily converted to
이에, 본 발명자들은 당 분자의 구조와 반응성은 AGE의 형성 속도에 중요한 역할을 할 것이라는 가설하에, 본 발명의 구리 환원 반응을 이용한 혈중 AGE 분석을 사용하여 단당류(글루코스)와 다당류(수크로즈) 사이의 당화능을 비교 분석하였다.Accordingly, the present inventors, under the hypothesis that the structure and reactivity of sugar molecules will play an important role in the formation rate of AGEs, used the blood AGE analysis using the copper reduction reaction of the present invention to determine the difference between monosaccharides (glucose) and polysaccharides (sucrose). The saccharification ability was compared and analyzed.
그 결과, 단당류 대비 다당류는 상대적으로 느린 속도로 AGE를 생성하는 경향이 있다. 이는 수크로즈 분자의 증가된 안정성에 의한 결과이거나 또는 알부민과 다당류 사이의 반응에 의해 생성된 AGE가 구리 환원 반응을 활성화 하지 못하는 것으로부터 나타나는 결과로 해석될 수 있다.As a result, polysaccharides tend to generate AGEs at a relatively slow rate compared to monosaccharides. This may be interpreted as a result of the increased stability of the sucrose molecule or as a result of the inability of AGE generated by the reaction between albumin and polysaccharide to activate the copper reduction reaction.
<2-4> 최적화된 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법으로 측정된 AGE 농도<2-4> AGE concentration measured using the optimized blood AGE analysis method of acute myocardial infarction patients
도 3과 같이 구리 환원 반응을 이용한 혈중 AGE 분석은 강한 상관 관계와 수용 가능한 회귀 선형성을 나타내며 표준(상용) AGE와 반응했기 때문에, 검정 곡선(calibration curve)에서 얻은 회귀 방정식으로부터 생성된 AGE의 양을 추정할 수 있고, BSA 당화 정도는 AGEs 대 BSA의 비율로 표시할 수 있다. 본 발명의 글루코스의 다양한 농도 범위에서 수행된 실험으로 추정된 AGE 양과 이의 BSA에 대한 비율을 표 1에 나타내었다. As shown in Figure 3, blood AGE analysis using the copper reduction reaction showed a strong correlation and acceptable regression linearity, and since it reacted with standard (commercial) AGE, the amount of AGE generated was calculated from the regression equation obtained from the calibration curve. It can be estimated, and the degree of BSA glycation can be expressed as the ratio of AGEs to BSA. Table 1 shows the amount of AGE and its ratio to BSA estimated from experiments conducted in various concentration ranges of glucose according to the present invention.
표 1을 보면, 글루코스 분자의 농도 증가에 따라 BSA에 대한 AGE의 비율이 50일 기준 1.11에서 5.04으로 증가한 것을 확인할 수 있다. 이러한 증가는 알부민의 많은 당화 부위와 관련 될 수 있으며 동시에 생성된 AGE의 놀라운 안정성을 나타낸다.Looking at Table 1, it can be seen that the ratio of AGE to BSA increased from 1.11 to 5.04 at 50 days as the concentration of glucose molecules increased. This increase may be related to the large number of glycosylation sites on albumin and simultaneously indicates the remarkable stability of the produced AGEs.
<실험예 3> 이차적 요인에 따른 AGE 생성과 구리 환원 반응을 이용한 혈중 AGE 분석의 변화<Experimental Example 3> Changes in blood AGE analysis using AGE production and copper reduction reaction according to secondary factors
다음으로 아스코르브산과 같은 이차적 요인의 존재에 의해서 AGE 생성과 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법을 이용한 AGE 측정 결과가 어떻게 변하는지 확인하기 위하여 아래와 같은 순서로 실험하였다.Next, an experiment was conducted in the following order to determine how AGE production and AGE measurement results using the blood AGE analysis method of patients with acute myocardial infarction change due to the presence of secondary factors such as ascorbic acid.
단백질 당화 반응에서 아스코르브산 및 이의 분해산물이 AGE 생성을 가속하는 것으로 입증된 바 있어, 본 실험에서는 알부민의 비효소적 당화에 있어서 외부 요인의 영향을 조사하기 위해 단백질(3 mg/mL BSA)과 글루코스(0.1M 내지 0.5M)로 구성된 반응혼합물에 다양한 양의 아스코르브산(5Х10-4 내지 5Х10-3 M)을 첨가하여 암조건에서 50일 동안 멸균배양하였고, 그 결과를 도 8에 나타내었다.It has been proven that ascorbic acid and its breakdown products accelerate the generation of AGEs in protein glycation reactions, so in this experiment, protein (3 mg/mL BSA) and Various amounts of ascorbic acid (5Х10-4 to 5Х10-3 M) were added to the reaction mixture consisting of glucose (0.1M to 0.5M) and sterilized and cultured in dark conditions for 50 days, and the results are shown in Figure 8.
도 8에서 확인되는 바와 같이, 아스코르브산 첨가에 의해 AGE 생성 반응이 가속되어 AGE 생성이 증가했음을 보여주었다. 생성된 AGE와 아스코르브산 농도 사이에는 양의 상관 관계가 확인된다. 아스코르브산의 농도와 관련하여, 아스코르브산과 글루코스의 농도에 대한 용량 의존적 반응의 차이는 낮은 농도의 글루코스에 관련한 결과에서 확인된다. 즉, 높은 농도의 글루코스와 아스코르브산이 존재하면 단기간에 AGE의 형성이 가속화된다는 것이 시사된다. 대조적으로, 낮은 농도에서는 보다 느린 속도로 AGE를 생성하고, 독성 AGE에 의한 스트레스에 보다 적게 노출되도록 한다.As confirmed in Figure 8, the addition of ascorbic acid accelerated the AGE production reaction, showing that AGE production increased. A positive correlation is confirmed between generated AGEs and ascorbic acid concentration. Regarding the concentration of ascorbic acid, differences in the dose-dependent response to the concentrations of ascorbic acid and glucose are confirmed in the results related to low concentrations of glucose. In other words, it is suggested that the presence of high concentrations of glucose and ascorbic acid accelerates the formation of AGEs in a short period of time. In contrast, lower concentrations produce AGEs at a slower rate and result in less exposure to the stress caused by toxic AGEs.
한편, 표 2와 같이 본 발명 구리 환원 반응을 이용한 혈중 AGE 분석에서 BSA의 당화에 대하여 아스코르브산 단독에 의한 영향은 무시할 수준이거나 거의 없는 것으로 확인되었다.Meanwhile, as shown in Table 2, in the blood AGE analysis using the copper reduction reaction of the present invention, it was confirmed that the effect of ascorbic acid alone on the glycation of BSA was negligible or almost non-existent.
<실험예 4> 급성심근경색 환자의 예후 관찰<Experimental Example 4> Observation of prognosis of patients with acute myocardial infarction
AMI 환자는 심장 조직에 AGE가 축적될 위험이 있고, 후속적인 세포사멸은 병의 진행에 주요 요소이다. AGE는 RAGE에 결합하고 AGE-RAGE 결합의 발달은 산화 스트레스, 세포사멸 및 섬유증을 유발한다. 이에, 본 발명자들은 급성심근경색(AMI) 발생 후 3개월(90일 동안) 구리 환원 반응을 이용한 혈중 AGE 분석을 사용하여 급성심근경색(AMI) 환자로부터 수집한 인간 혈청 샘플의 AGE를 측정하여, 급성심근경색 환자의 예후를 추적 관찰하였다.AMI patients are at risk for AGE accumulation in cardiac tissue, and subsequent apoptosis is a major factor in the progression of the disease. AGEs bind to RAGE, and the development of AGE-RAGE bonds causes oxidative stress, apoptosis, and fibrosis. Accordingly, the present inventors measured AGE in human serum samples collected from acute myocardial infarction (AMI) patients using a blood AGE analysis using a copper reduction reaction 3 months (90 days) after the occurrence of acute myocardial infarction (AMI), The prognosis of patients with acute myocardial infarction was followed up.
본 실험에서, 인간 혈청 샘플의 경우 암모늄 아세테이트 완충액은 상당한 침전을 나타내어, 1M Tris-HCl 완충액(pH = 7.0)으로 대체되었다(AGE 표준 검정에서 암모늄 아세테이트 완충액과 Tris-HCl 완충액은 유의한 흡광도 차이가 없었다). 한편, 실험예 1의 결과(도 2)에서 확인되는 바와 같이, BSA 분자는 자체적으로 백그라운드 노이즈를 나타내는 바, 이를 고려하여 인간 혈청 샘플의 단백질 함량은 상용 키트(BCA)를 사용하여 결정하되 모든 샘플은 정확히 단백질 2 mg/mL의 최종농도에 도달하도록 약40배 희석되었다.In this experiment, for human serum samples, ammonium acetate buffer showed significant precipitation, so it was replaced with 1M Tris-HCl buffer (pH = 7.0) (in the AGE standard assay, ammonium acetate buffer and Tris-HCl buffer showed no significant difference in absorbance). There was none). Meanwhile, as confirmed in the results of Experimental Example 1 (FIG. 2), BSA molecules themselves exhibit background noise. Considering this, the protein content of human serum samples was determined using a commercial kit (BCA), but all samples was diluted approximately 40 times to reach a final concentration of exactly 2 mg/mL protein.
각각 0, 2, 14, 30 및 90일 시점에서 측정된 구리 환원 반응성 AGE의 광학 밀도를 관측하였고, 값은 3회 측정의 평균값을 사용하였으며, 환자들이 나타내는 시간에 따른 신호 변화의 패턴에 따라 4개의 그룹으로 분류하여 각각 도 9 내지 12에 나타내었다.The optical density of copper reduction-reactive AGE was observed at 0, 2, 14, 30, and 90 days, respectively. The average value of three measurements was used, and the value was calculated as 4 according to the pattern of signal change over time shown by the patients. They were classified into groups and shown in Figures 9 to 12, respectively.
그룹 1(n = 3): 유의한 변화 없이 일정한 수준으로 유지됨Group 1 (n = 3): maintained at constant level without significant change
그룹 2(n = 2): 시간 경과에 따라 지속적으로 증가됨Group 2 (n = 2): continued to increase over time
그룹 3(n = 12): 단일 피크 패턴을 나타냄Group 3 (n = 12): shows a single peak pattern
그룹 4(n = 10): 2개 이상의 다중 피크를 나타냄Group 4 (n = 10): shows two or more multiple peaks
한편, 구리 환원 반응성 AGE의 광학 밀도 신호를 도 3의 표준 검정 곡선을 이용하여 구리 환원 반응성 AGE를 mg/ml의 단위의 값으로 산출하고, 전체 혈청 시료 단백질의 양(2 mg/mL)에 대한 비율(AGE/total serum protein)로 나타내어, 표 3에 도시하였으며, RSD 값을 기준으로 나누어 표시하였다.Meanwhile, the optical density signal of copper reduction-reactive AGE was calculated as a value in units of mg/ml using the standard calibration curve in Figure 3, and was calculated as a value in units of mg/ml for the amount of protein in the total serum sample (2 mg/mL). Expressed as a ratio (AGE/total serum protein), it is shown in Table 3 and divided based on the RSD value.
상기 표 3에서 각 환자의 피크에 이르는 시간과 농도를 토대로 환자들 사이의 Spearman의 상관 관계를 분석하였고, 그 결과 Spearman의 상관 계수와 도 9-12의 당화 패턴을 토대로 급성심근경색 환자의 AGE 양상(패턴)은 (i) 안정적인 AGE 수준 (피크가 없는 직선), (ii) 지속적인 증가, (iii) 단일 피크 패턴 및 (iv) 지그재그 양상(두 개 이상의 피크)로 총 4 가지 주요 패턴으로 분류할 수 있음을 알 수 있다.In Table 3 above, Spearman's correlation between patients was analyzed based on the peak time and concentration for each patient, and as a result, the AGE pattern of acute myocardial infarction patients was determined based on the Spearman's correlation coefficient and the glycation pattern in Figures 9-12. (Patterns) can be categorized into four main patterns: (i) stable AGE level (straight line without peaks), (ii) continuous increase, (iii) single peak pattern and (iv) zigzag pattern (two or more peaks). You can see that it is possible.
구체적으로 도 9를 보면, 7번, 8번 및 24번 환자는 0일부터 90일까지 유의미한 UPRAC 반응성 AGE의 광학 밀도 신호 변화는 없으며 일정하게 유지되는 것을 확인할 수 있고, 도 10을 보면, 16번 및 22번 환자는 경색 후 경과일에 따라 3월까지 계속적으로 구리 환원 반응성 AGE의 광학 밀도 신호가 증가되고, 도 11을 보면, 4, 5, 10, 11, 12, 15, 17, 18, 20, 23, 26 및 27번 환자는 90일 동안 하나의 최대 구리 환원 반응성 AGE의 광학 밀도 신호가 관측되어 단일 피크 패턴이 확인되며, 도 12를 보면, 1, 3, 6, 9, 13, 14, 19, 21, 25 및 28번 환자는 90일 동안 2개의 피크를 갖는 패턴이 확인된다.Specifically, looking at Figure 9, it can be seen that for patients 7, 8, and 24, there is no significant change in the optical density signal of UPRAC-reactive AGE from day 0 to day 90 and remains constant, and looking at Figure 10, it can be seen that patient number 16 And in patient No. 22, the optical density signal of copper reduction-reactive AGE continued to increase until March depending on the number of days after infarction. Referring to Figure 11, 4, 5, 10, 11, 12, 15, 17, 18, and 20. , Patients 23, 26, and 27 observed one maximum optical density signal of copper reduction-reactive AGE over 90 days, confirming a single peak pattern, as shown in Figure 12, 1, 3, 6, 9, 13, 14, Patients 19, 21, 25, and 28 have a pattern of two peaks over 90 days.
상기한 바와 같이, 본 발명의 구리 환원 반응을 이용한 혈중 AGE 분석을 이용하여 급성심근경색(AMI) 발생 후 경과일에 따른 구리 환원 반응성 AGE의 광학 밀도 신호의 패턴을 분석함으로써, 환자의 병 재발과 사망에 대한 위험을 사전에 예측할 수 있는 바, 이를 통해 조속한 시점에 환자에게 적절한 의료 조치가 이루어질 수 있고, 궁극적으로 환자의 생명 연장과 함께 삶의 질을 향상시킬 수 있는 유용한 효과가 달성된다.As described above, by analyzing the pattern of the optical density signal of copper reduction-reactive AGE according to the number of days after the occurrence of acute myocardial infarction (AMI) using the blood AGE analysis using the copper reduction reaction of the present invention, the patient's disease recurrence and The risk of death can be predicted in advance, so that appropriate medical treatment can be provided to the patient at an early stage, ultimately achieving the useful effect of extending the patient's life and improving the quality of life.
Claims (15)
상기 AGE는 AGE-알부민(AGE-albumin) 단백질인 것이고,
상기 구리 환원 반응 시약은 구리(Ⅱ); 및 네오쿠프로인 또는 이의 염;을 포함하는 시약인 것인, 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법.
A method for analyzing AGE in the blood of a patient with acute myocardial infarction, comprising: analyzing an optical signal for AGEs per unit volume of blood isolated from a patient with acute myocardial infarction using a copper reduction reagent,
The AGE is an AGE-albumin protein,
The copper reduction reaction reagent includes copper(Ⅱ); A method for analyzing AGE in the blood of a patient with acute myocardial infarction, which is a reagent comprising neocuproin or a salt thereof.
상기 분석 단계는 상기 분리된 혈액에서 혈청 단백질을 분리하고, 상기 혈청 단백질이 분리된 혈액에 포함된 단백질이 2 mg/mL의 최종농도에 도달하도록, 상기 혈청 단백질이 분리된 혈액을 희석한 후, 희석된 시료의 단위 부피당 AGE에 대한 광신호를 분석하는 단계인 것을 특징으로 하는, 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법.
According to paragraph 1,
The analysis step involves separating serum proteins from the separated blood, diluting the blood from which the serum proteins were separated so that the proteins contained in the blood from which the serum proteins were separated reach a final concentration of 2 mg/mL, A method for analyzing AGE in the blood of a patient with acute myocardial infarction, characterized in that the step is to analyze the optical signal for AGE per unit volume of the diluted sample.
상기 분석 단계는 상기 분리된 혈액 샘플을 구리 환원 반응 시약과 혼합하여 혼합물을 형성하고, 이를 배양한 후 혈액의 단위 부피당 AGE에 대한 광신호를 분석하는 단계인 것인, 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법.
According to paragraph 1,
The analysis step is a step of mixing the separated blood sample with a copper reduction reaction reagent to form a mixture, culturing the mixture, and then analyzing the optical signal for AGE per unit volume of blood. Analysis method.
상기 AGE에 대한 광신호는 상기 분리된 혈액의 AGE로부터 구리 환원 반응 시약의 착물이 환원됨으로써 구리 1가의 복합체로부터 나타나는 400 내지 500 nm 구간의 광신호인 것을 특징으로 하는, 급성심근경색 환자의 혈중 AGE 분석 방법.
According to paragraph 3,
The optical signal for the AGE is an optical signal in the range of 400 to 500 nm that appears from the copper monovalent complex due to reduction of the complex of the copper reduction reagent from the AGE of the separated blood. AGE in the blood of a patient with acute myocardial infarction Analysis method.
2) 소정의 시간 간격을 두고 상기 단계 1)을 적어도 2번 이상 반복하는 단계; 및
3) 측정된 AGE에 대한 광신호를 시간 차례로 관찰하여 패턴을 분석하는 단계;를 포함하는, 급성심근경색의 예후 예측을 위한 정보를 제공하는 방법으로서,
상기 AGE는 AGE-알부민(AGE-albumin) 단백질인 것이고,
상기 구리 환원 반응 시약은 구리(Ⅱ); 및 네오쿠프로인 또는 이의 염;을 포함하는 시약인 것인, 급성심근경색의 예후 예측을 위한 정보를 제공하는 방법.
1) Analyzing the optical signal for AGE per unit volume of blood isolated from a patient with acute myocardial infarction using a copper reduction reagent;
2) repeating step 1) at least twice at predetermined time intervals; and
3) A method of providing information for predicting the prognosis of acute myocardial infarction, including the step of analyzing the pattern by observing the optical signal for the measured AGE in chronological order,
The AGE is an AGE-albumin protein,
The copper reduction reaction reagent includes copper(Ⅱ); A method of providing information for predicting the prognosis of acute myocardial infarction, which is a reagent containing neocuproin or a salt thereof.
상기 단계 2)에 있어서 단계 1) 의 반복 수행은 매일 또는 1일 이상의 시간 간격을 두고 실시하는 것을 특징으로 하는, 급성심근경색의 예후 예측을 위한 정보를 제공하는 방법.
According to clause 5,
A method of providing information for predicting the prognosis of acute myocardial infarction, characterized in that the repetition of step 1) in step 2) is performed every day or at intervals of 1 day or more.
상기 단계 3)의 패턴 분석은 측정된 AGE에 대한 광신호 또는 이 신호 값과 표준 검정 곡선으로부터 얻은 회귀 방정식으로 산출된 AGE 농도에 있어서, RSD(상대표준편차) 값이 5% 초과인 경우에, 급성심근경색의 예후가 좋지 않은 것으로 판단하는 것을 특징으로 하는, 급성심근경색의 예후 예측을 위한 정보를 제공하는 방법.
According to clause 5,
The pattern analysis in step 3) is performed when the RSD (relative standard deviation) value is greater than 5% in the measured optical signal for AGE or the AGE concentration calculated by the regression equation obtained from this signal value and the standard calibration curve, A method of providing information for predicting the prognosis of acute myocardial infarction, characterized in that the prognosis of acute myocardial infarction is judged to be poor.
상기 단계 3)의 패턴 분석 후, 급성심근경색 환자의 AGE에 대한 광신호가 시간 차례로 관찰하였을 때 지속적으로 증가, 단일 피크 패턴, 또는 둘 이상의 피크 패턴을 나타내는 경우, 급성심근경색의 예후가 좋지 않은 것으로 판단하는 것을 특징으로 하는, 급성심근경색의 예후 예측을 위한 정보를 제공하는 방법.
According to clause 5,
After the pattern analysis in step 3), if the optical signal for AGE of a patient with acute myocardial infarction continues to increase when observed over time, shows a single peak pattern, or two or more peak patterns, the prognosis of acute myocardial infarction is considered poor. A method of providing information for predicting the prognosis of acute myocardial infarction, characterized by determining.
상기 키트는 AGE-알부민(AGE-albumin)에 대한 광신호를 측정하기 위한 것이고,
상기 구리 환원 반응 시약은 구리(Ⅱ); 및 네오쿠프로인 또는 이의 염;을 포함하는 시약인 것인, 급성심근경색의 예후 예측을 위한 키트.
A kit for predicting the prognosis of acute myocardial infarction containing a copper reduction reaction reagent,
The kit is for measuring the optical signal for AGE-albumin,
The copper reduction reaction reagent includes copper(Ⅱ); A kit for predicting the prognosis of acute myocardial infarction, which is a reagent containing neocuproin or a salt thereof.
상기 키트는 암모늄 아세테이트, Tris-HCl, 3-(시클로헥실아미노)-1-프로판술폰산 (CAPS), 붕산염, 탄산염-중탄산염, 4-(시클로헥실아미노)-1-부탄술폰산 (CABS), 3-(시클로헥실아미노)-2-히드록시-1-프로판술폰산 (CAPSO), N-트리스(히드록시메틸)메틸-4-아미노부탄술폰산 (TABS), 4-(N-모르폴리노)부탄술폰산 (MOBS), 2-(시클로헥실아미노)에탄술폰산 (CHES), N-(1,1-디메틸2-히드록시에틸)-3-아미노-2-히드록시프로판술폰산 (AMPSO), 피페라진-1,4-비스(2-히드록시프로판술폰산) 2수화물 및 피페라진-N,N'-비스(2-히드록시프로판술폰산) (POPSO)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 완충액을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 급성심근경색의 예후 예측을 위한 키트.
According to clause 10,
The kit includes ammonium acetate, Tris-HCl, 3-(cyclohexylamino)-1-propanesulfonic acid (CAPS), borate, carbonate-bicarbonate, 4-(cyclohexylamino)-1-butanesulfonic acid (CABS), 3- (cyclohexylamino)-2-hydroxy-1-propanesulfonic acid (CAPSO), N-tris(hydroxymethyl)methyl-4-aminobutanesulfonic acid (TABS), 4-(N-morpholino)butanesulfonic acid ( MOBS), 2-(cyclohexylamino)ethanesulfonic acid (CHES), N-(1,1-dimethyl2-hydroxyethyl)-3-amino-2-hydroxypropanesulfonic acid (AMPSO), piperazine-1, Characterized in that it further comprises one or more buffers selected from the group consisting of 4-bis(2-hydroxypropanesulfonic acid) dihydrate and piperazine-N,N'-bis(2-hydroxypropanesulfonic acid) (POPSO). A kit for predicting the prognosis of acute myocardial infarction.
상기 키트는 소정의 시간 간격을 두고 적어도 2번 이상 광신호를 계측하는 것이되, 측정된 AGE에 대한 광신호가 시간 차례로 관찰하였을 때 지속적으로 증가, 단일 피크 패턴, 또는 둘 이상의 피크 패턴을 나타내는 경우, 급성심근경색의 예후가 좋지 않은 것으로 판단하는 것을 특징으로 하는, 급성심근경색의 예후 예측을 위한 키트.
According to clause 10,
The kit measures the optical signal at least twice at predetermined time intervals, and if the optical signal for the measured AGE shows a continuous increase, a single peak pattern, or two or more peak patterns when observed sequentially over time, A kit for predicting the prognosis of acute myocardial infarction, characterized in that the prognosis of acute myocardial infarction is poor.
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Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018236188A1 (en) * | 2017-06-23 | 2018-12-27 | 한국기초과학지원연구원 | Method for diagnosing myocardial infarction or predicting prognosis of same |
| KR102121410B1 (en) * | 2018-10-25 | 2020-06-11 | 가천대학교 산학협력단 | Methods for predicting prognosis of ischemic disease |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7139598B2 (en) * | 2002-04-04 | 2006-11-21 | Veralight, Inc. | Determination of a measure of a glycation end-product or disease state using tissue fluorescence |
| US20200232993A1 (en) * | 2017-07-14 | 2020-07-23 | Pierce Biotechnology, Inc. | Methods and compositions for fluorescent and colorimetric protein quantitation |
-
2021
- 2021-06-21 KR KR1020210080148A patent/KR102658416B1/en active IP Right Grant
-
2022
- 2022-06-21 WO PCT/KR2022/008813 patent/WO2022270882A1/en unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018236188A1 (en) * | 2017-06-23 | 2018-12-27 | 한국기초과학지원연구원 | Method for diagnosing myocardial infarction or predicting prognosis of same |
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