KR102652494B1 - 전장 t-세포 수용체 오픈 리딩 프레임의 신속한 조립 및 다양화를 위한 2-성분 벡터 라이브러리 시스템 - Google Patents
전장 t-세포 수용체 오픈 리딩 프레임의 신속한 조립 및 다양화를 위한 2-성분 벡터 라이브러리 시스템 Download PDFInfo
- Publication number
- KR102652494B1 KR102652494B1 KR1020207003522A KR20207003522A KR102652494B1 KR 102652494 B1 KR102652494 B1 KR 102652494B1 KR 1020207003522 A KR1020207003522 A KR 1020207003522A KR 20207003522 A KR20207003522 A KR 20207003522A KR 102652494 B1 KR102652494 B1 KR 102652494B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- vector
- tcr
- sequence
- type iis
- tra
- Prior art date
Links
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims abstract description 1031
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 title claims abstract description 708
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 title claims abstract description 651
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 title claims description 257
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 299
- 230000008676 import Effects 0.000 claims abstract description 261
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 111
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims abstract description 70
- 230000002457 bidirectional effect Effects 0.000 claims abstract description 48
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 claims description 175
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 146
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 127
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 118
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 118
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 111
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 110
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 95
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 64
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 59
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 57
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 56
- 101100207408 Homo sapiens TRA gene Proteins 0.000 claims description 46
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 45
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 45
- 101100482127 Homo sapiens TRB gene Proteins 0.000 claims description 43
- 230000004941 influx Effects 0.000 claims description 38
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 claims description 34
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 32
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 claims description 30
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 claims description 30
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 29
- 230000010076 replication Effects 0.000 claims description 25
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 23
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 claims description 15
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 claims description 15
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 14
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 13
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims description 12
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims description 10
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 8
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 8
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 claims description 6
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 claims description 6
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 claims description 6
- 239000012212 insulator Substances 0.000 claims description 6
- 108020005067 RNA Splice Sites Proteins 0.000 claims description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 5
- 238000005304 joining Methods 0.000 claims description 5
- 230000001973 epigenetic effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 claims 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 317
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 148
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 140
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 117
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 101
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 86
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 83
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 description 75
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 75
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 75
- 101150008942 J gene Proteins 0.000 description 53
- 101150111062 C gene Proteins 0.000 description 49
- 238000013461 design Methods 0.000 description 48
- 230000009258 tissue cross reactivity Effects 0.000 description 45
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 43
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 41
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 41
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 38
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 36
- 230000009471 action Effects 0.000 description 35
- 101150117115 V gene Proteins 0.000 description 34
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 30
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 30
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 29
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 28
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 28
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 27
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 27
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 27
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 24
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 23
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 23
- 230000008569 process Effects 0.000 description 23
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 22
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 22
- 239000007806 chemical reaction intermediate Substances 0.000 description 21
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 20
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 19
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 18
- 230000006870 function Effects 0.000 description 18
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 17
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 17
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 17
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 16
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 15
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 15
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 15
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 14
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 13
- 230000004044 response Effects 0.000 description 13
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 13
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 12
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 12
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 12
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 11
- 238000007834 ligase chain reaction Methods 0.000 description 11
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 11
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 11
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 11
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 10
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 10
- 238000011161 development Methods 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 9
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 9
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 9
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 9
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 9
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 9
- 108010008553 HLA-B*07 antigen Proteins 0.000 description 8
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 7
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 7
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N adenyl group Chemical group N1=CN=C2N=CNC2=C1N GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 7
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 7
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 6
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 6
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 6
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 6
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 6
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical group NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 6
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 6
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 6
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 6
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 6
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 6
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 5
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 5
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 5
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 5
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 5
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 5
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 5
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 5
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 5
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 5
- 210000004986 primary T-cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 5
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 5
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 5
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 241000251728 Gnathostomata <vertebrate> Species 0.000 description 4
- 102000011786 HLA-A Antigens Human genes 0.000 description 4
- 102210009883 HLA-B*07:02 Human genes 0.000 description 4
- GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 4
- 101800000795 Proadrenomedullin N-20 terminal peptide Proteins 0.000 description 4
- 102400001018 Proadrenomedullin N-20 terminal peptide Human genes 0.000 description 4
- 101001010097 Shigella phage SfV Bactoprenol-linked glucose translocase Proteins 0.000 description 4
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 4
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 108091005948 blue fluorescent proteins Proteins 0.000 description 4
- FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N carbenicillin Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)C(C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FPPNZSSZRUTDAP-UWFZAAFLSA-N 0.000 description 4
- 229960003669 carbenicillin Drugs 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 4
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 4
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 238000007857 nested PCR Methods 0.000 description 4
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 4
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 230000003334 potential effect Effects 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 4
- 238000007480 sanger sequencing Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 3
- 241000203069 Archaea Species 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 102000000440 Melanoma-associated antigen Human genes 0.000 description 3
- 108050008953 Melanoma-associated antigen Proteins 0.000 description 3
- MIDZLCFIAINOQN-WPRPVWTQSA-N Phe-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 MIDZLCFIAINOQN-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 3
- UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N Trp-Gly Chemical group C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 3
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000037451 immune surveillance Effects 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 3
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 3
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 3
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 238000007169 ligase reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 108010024607 phenylalanylalanine Proteins 0.000 description 3
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 3
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 3
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 3
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 3
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 3
- 102100034540 Adenomatous polyposis coli protein Human genes 0.000 description 2
- 108091062157 Cis-regulatory element Proteins 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 2
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 2
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 2
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 2
- 102100028976 HLA class I histocompatibility antigen, B alpha chain Human genes 0.000 description 2
- 102100028971 HLA class I histocompatibility antigen, C alpha chain Human genes 0.000 description 2
- 108010058607 HLA-B Antigens Proteins 0.000 description 2
- 108010052199 HLA-C Antigens Proteins 0.000 description 2
- 108010034791 Heterochromatin Proteins 0.000 description 2
- 101000924577 Homo sapiens Adenomatous polyposis coli protein Proteins 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 2
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 2
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 2
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 2
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- 229940126575 aminoglycoside Drugs 0.000 description 2
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 2
- 238000012350 deep sequencing Methods 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000007847 digital PCR Methods 0.000 description 2
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 2
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 2
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 2
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 210000004458 heterochromatin Anatomy 0.000 description 2
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000008450 motivation Effects 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 238000011176 pooling Methods 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 2
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- VQFKFAKEUMHBLV-BYSUZVQFSA-N 1-O-(alpha-D-galactosyl)-N-hexacosanoylphytosphingosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H]([C@H](O)[C@H](O)CCCCCCCCCCCCCC)CO[C@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQFKFAKEUMHBLV-BYSUZVQFSA-N 0.000 description 1
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 102210047218 B*07:02 Human genes 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 102100027314 Beta-2-microglobulin Human genes 0.000 description 1
- 108020004256 Beta-lactamase Proteins 0.000 description 1
- 108091028026 C-DNA Proteins 0.000 description 1
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 101150107439 CDR3 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000020446 Cardiac disease Diseases 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108010002947 Connectin Proteins 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 102100036263 Glutamyl-tRNA(Gln) amidotransferase subunit C, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- 102100029966 HLA class II histocompatibility antigen, DP alpha 1 chain Human genes 0.000 description 1
- 102100031618 HLA class II histocompatibility antigen, DP beta 1 chain Human genes 0.000 description 1
- 102100036242 HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 2 chain Human genes 0.000 description 1
- 102100036241 HLA class II histocompatibility antigen, DQ beta 1 chain Human genes 0.000 description 1
- 102100040505 HLA class II histocompatibility antigen, DR alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 102100040485 HLA class II histocompatibility antigen, DRB1 beta chain Human genes 0.000 description 1
- 108010093061 HLA-DPA1 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010045483 HLA-DPB1 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010086786 HLA-DQA1 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010065026 HLA-DQB1 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010067802 HLA-DR alpha-Chains Proteins 0.000 description 1
- 108010039343 HLA-DRB1 Chains Proteins 0.000 description 1
- 101001001786 Homo sapiens Glutamyl-tRNA(Gln) amidotransferase subunit C, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101000772138 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 1-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000662909 Homo sapiens T cell receptor beta constant 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000662902 Homo sapiens T cell receptor beta constant 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000946860 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 229930194542 Keto Natural products 0.000 description 1
- 125000003412 L-alanyl group Chemical group [H]N([H])[C@@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102100026964 M1-specific T cell receptor beta chain Human genes 0.000 description 1
- 108700005089 MHC Class I Genes Proteins 0.000 description 1
- 108700005092 MHC Class II Genes Proteins 0.000 description 1
- 101100405118 Mus musculus Nr4a1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000012064 NLR Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005686 NOD-like receptors Proteins 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 108091092724 Noncoding DNA Proteins 0.000 description 1
- 102100022679 Nuclear receptor subfamily 4 group A member 1 Human genes 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical group N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 101100271190 Plasmodium falciparum (isolate 3D7) ATAT gene Proteins 0.000 description 1
- 102000009572 RNA Polymerase II Human genes 0.000 description 1
- 108010009460 RNA Polymerase II Proteins 0.000 description 1
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 102100029308 T cell receptor alpha variable 1-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100037272 T cell receptor beta constant 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100037298 T cell receptor beta constant 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100035794 T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain Human genes 0.000 description 1
- 102100026260 Titin Human genes 0.000 description 1
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 1
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 102000008579 Transposases Human genes 0.000 description 1
- 108010020764 Transposases Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 101100405120 Xenopus laevis nr4a1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000007624 ZAP-70 Protein-Tyrosine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010046882 ZAP-70 Protein-Tyrosine Kinase Proteins 0.000 description 1
- -1 aMino Chemical group 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 125000002015 acyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 101150087698 alpha gene Proteins 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000014102 antigen processing and presentation of exogenous peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000010310 bacterial transformation Effects 0.000 description 1
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 1
- 239000003782 beta lactam antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000008568 cell cell communication Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 230000004637 cellular stress Effects 0.000 description 1
- 108700010039 chimeric receptor Proteins 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000011143 downstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 230000008571 general function Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 1
- 244000052637 human pathogen Species 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008073 immune recognition Effects 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 1
- 238000009126 molecular therapy Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 230000009437 off-target effect Effects 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000003836 peripheral circulation Effects 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000002818 protein evolution Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 108010054624 red fluorescent protein Proteins 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000009394 selective breeding Methods 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 101150075675 tatC gene Proteins 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000002132 β-lactam antibiotic Substances 0.000 description 1
- 229940124586 β-lactam antibiotics Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
- C12N15/1093—General methods of preparing gene libraries, not provided for in other subgroups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
- C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
- C40B40/00—Libraries per se, e.g. arrays, mixtures
- C40B40/04—Libraries containing only organic compounds
- C40B40/06—Libraries containing nucleotides or polynucleotides, or derivatives thereof
- C40B40/08—Libraries containing RNA or DNA which encodes proteins, e.g. gene libraries
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
- C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
- C40B50/00—Methods of creating libraries, e.g. combinatorial synthesis
- C40B50/06—Biochemical methods, e.g. using enzymes or whole viable microorganisms
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
조합 시스템으로서, 2개의 개별 성분을 포함하되, 여기서 제1 성분은 가변 및 불변(V-C) T-세포 수용체(T-cell receptor: TCR) 유전자 분절을 보유하는 벡터이고, 그리고 제2 성분은 결합(J) TCR 유전자 분절을 보유하는 벡터이다. 조합 시스템은, 상기 제1 성분이 제1 TCR 쇄를 암호화하는 변형된 V-C 유입 벡터이도록 변형될 수 있고, 상기 시스템은 제4 성분 및 제5 성분을 더 포함하고, 여기서 상기 제4 성분은 양방향 종결인자(BiT) 공여자 벡터를 포함하고, 그리고 상기 제5 성분은 상기 제1 TCR 쇄에 상보성인 제2 TCR 쇄를 암호화하는 변형된 V-C 유입 벡터를 포함한다.
Description
이종이량체 T-세포 수용체(heterodimeric T-cell receptor: TCR)는 획득 면역(adaptive immunity)에 중요하다. 고유한 TCR은 T-세포 발생 동안 계속적으로 생성되고, 이에 의해서 유전자 분절의 어레이가 단일의 인접한 TCR 오픈 리딩 프레임(open reading frame: ORF)으로 재조합된다. 이러한 재조합 과정에서 생성된 상당한 다양성으로 인해서, 단일 세포에서 발현되는 TCR 쌍으로부터 서열 데이터를 포획하는 것은 도전적이다. 더욱이, 이러한 다양성은 또한 TCR 기능의 시험 및 조작을 위해서 고처리율 기반(high-throughput basis)으로 유전학적 작제물 내에 이러한 TCR 오픈 리딩 프레임(ORF)을 제공하는 것을 도전적으로 만든다. 본 발명은 제1 양상에서 TCR 유전자 분절의 부분을 포함하는 결합 공여자(Joining donor)(J 공여자) 벡터 및 가변-불변 유입 벡터(Variable-Constant entry vector)(V-C 유입(entry))로 이루어진 사전 조립된 2-성분 벡터 라이브러리 시스템을 제공한다. 2 성분 시스템은, V-C 유입 벡터 라이브러리로부터 선택된 V-C 유입 벡터가 제한 효소 소화/리가제 연쇄 반응(ligase cycle reaction)에서 TCR 상보성 결정 영역 3을 암호화하는 합성 DNA 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스(synthetic DNA oligonucleotide duplex encoding TCR complementarity determining region 3)(odeCDR3)와 함께, J 공여자 벡터 라이브러리로부터 선택된 J 공여자 벡터와 조합되는 경우, 단일 벡터가 생성되어 전장 TCR ORF를 재구성하도록 하는 방식으로 설계된다. 이러한 벡터 라이브러리 시스템은 선택된 벡터 컨텍스트(context) 내에서 TCR ORF을 신속하고 비용 효율적으로 생성하기 위한 PCR-독립적인 방법을 가능하게 한다. 또한, 이러한 시스템은 친화성 및/또는 기능성 성숙 작업 흐름을 위한 합성 TCR 서열을 생성시키기 위한 신규한 작업 흐름을 허용한다. 따라서 이러한 TCR ORF 재구성 및 조작 시스템(TCR ORF Reconstitution and Engineering System: TORES)은 TCR 기능성 분석 및 조작을 위한 강력한 툴이다. 제2 양상에서, 변형된 V-C 유입 벡터를 갖는 TORES는, 제2 단계가 2개의 TCR ORF 쇄 쌍을 역평행 암호 센스로, 단일 생성물 벡터 내에서 결합하는 것을 가능하게 하도록 제3 성분 양방향 종결인자 공여자 벡터(bidirectional terminator donor vector)(BiT 공여자)와 함께 제공된다. 이러한 양방향 TORES2 시스템은 TCR 조작 및 특징규명을 위한 짝지워진 TCR ORF 작제물을 전달하기 위한 대안적인 작업 흐름을 가능하게 한다.
T 림프구(T-세포)에 의한 면역 감시는 모든 턱이 있는 척추동물의 획득 면역에서의 핵심적인 기능이다. T-세포에 의한 면역 감시는 T-세포 하위유형 전체에서 풍부한 기능적인 다양성을 통해서 달성되는데, 이것은 병원체-감염된 세포 및 신생물 세포를 제거하고, 침입한 병원체, 공생 미생물, 공생 비자가 인자, 예컨대, 식품의 분자 성분에 대한 획득 면역 반응을 조직하고, 심지어는 자신의 면역 관용을 유지시키기 위해서 제공된다. 다양한 외부 인자 및 자가 인자에 반응하기 위해서, T-세포는 이러한 외부 인자 및 자가 인자의 분자 구성요소를 특이적으로 검출할 수 있어야 한다. 따라서 T-세포는, 병원성 유기체 및 병이 걸린 자신에 대해서는 효율적인 반응을 시작하지만, 건강한 자신에 대해서는 이러한 반응을 시작하는 것을 회피하기에 충분한 특이성으로, 개체가 접하는 자가 분자 및 비-자가 분자의 큰 단면을 검출할 수 있어야 한다. 이러한 작업의 상당히 복잡한 본성은, 외부 분자 및 자가 분자 둘 모두의 실질적으로 비제한된 다양성을 고려하고, 병원성 유기체가 진화 압력 하에 존재하여 T-세포에 의한 검출을 회피한다는 것을 고려할 때 명백해진다.
T-세포 수용체(TCR)
T-세포는 T-세포 수용체(TCR)의 발현에 의해서 주로 정의된다. TCR은 T-세포 획득 면역의 표적과 상호작용하여, 이를 감지하는 책임이 있는 T-세포의 성분이다. 일반적인 용어에서, TCR은 세포 표면 상에 제시된 이종이량체 단백질 복합체로 구성된다. 2개의 TCR 쇄 각각은 2개의 세포외 도메인으로 구성되는데, 이것은 가변(V)-영역 및 불변(C)-영역이고, 면역글로불린 슈퍼패밀리(IgSF) 도메인 둘 모두는 역평행 β-시트를 형성한다. 이들은 타입-I 막관통 도메인에 의해서 세포막에 고정되고, 이것은 짧은 세포질 꼬리에 결합한다. 다양한 분자 구성요소를 획득 및 검출하는 T-세포의 품질은 T-세포 발생 동안 생성된 TCR 쇄에서의 변화로부터 초래한다. 이러한 변화는 B-세포에서 항체 발생과 유사한 방식으로 체세포 재조합에 의해서 발생된다.
TCR 쇄 다양성
T 세포 풀(T cell pool)은 기능적으로 그리고 표현형적으로 이종인 몇몇 하위집단으로 이루어진다. 그러나, T 세포는, 그것이 표면에서 발현하는 체세포적으로 재배열된 TCR에 따라서 αβ 또는 γδ로 광범위하게 분류될 수 있다. 2개의 TCR 쇄 쌍 형태; TCR 알파(TRA) 및 TCR 베타(TRB) 쌍; 및 TRC 감마(TRG) 및 TCR 델타(TRD) 쌍이 존재한다. TRA:TRB 쌍을 발현하는 T-세포는 αβ T-세포라 지칭되는 반면, TRG:TRD 쌍을 발현하는 T-세포는 종종 γδ T-세포라 지칭된다.
αβ 형태 및 γδ 형태 둘 모두의 TCR은 다양한 리간드 또는 '항원'의 인식에 대한 책임이 있고, 각각의 T-세포는 T-세포 성숙 동안 αβ 또는 γδ 수용체 쇄를 신규(de novo)로 생성한다. 이러한 신규 TCR 쇄 쌍은 체세포 V(D)J 재조합이라고 불리는 과정에서 수용체 서열 다양성의 생성을 통해서 인식의 다양성을 달성하고, 그 후 각각의 T-세포는 단일의 명백하게 재배열된 TCR의 카피를 발현한다. TRA 및 TRG 유전자좌, 다수의 개별 가변(V) 및 기능성(J) 유전자 분절은 재조합에 사용 가능하고, 불변(C) 유전자 분절에 병치되어, VJ 재조합이라 지칭된다. TRB 및 TRD 유전자좌에서의 재조합은 추가로 다양성(D) 유전자 분절을 포함하고, 이것은 VDJ 재조합이라 지칭된다.
각각의 재조합된 TCR은, αβ T-세포의 경우에는 α 쇄 및 β 쇄에 의해서 또는 γδ T-세포의 경우에는 γ 쇄 및 δ 쇄에 의해서 형성된 리간드-결합 부위의 구조에 의해서 결정되는, 고유한 리간드 특이성에 대한 가능성을 보유한다. TCR의 구조적 다양성은 상보성-결정 영역(CDR)이라 불리는, 각각의 쇄 상의 3개의 짧은 헤어핀 루프에 상당히 국한된다. 3개의 CDR은 수용체 쇄 쌍의 각각의 쇄로부터 기여되고, 총괄적으로 이러한 6개의 CDR 루프는 TCR 세포외 도메인의 막-윈위 단부에 위치하여 항원-결합 부위를 형성한다.
각각의 TCR 쇄에서의 서열 다양성은 두 방식으로 달성된다. 첫 번째로, 재조합을 위한 유전자 분절의 무작위 선택이 기본적인 서열 다양성을 제공한다. 예를 들어, TRB 재조합은 47 고유 V, 2 고유 D 및 13 고유 J 생식계열 유전자 분절 사이에서 일어난다. 일반적으로, V 유전자 분절은 CDR1 및 CDR2 루프 둘 모두에 기여하고, 따라서 암호화된 생식계열이다. 서열 다양성을 생성시키는 두 번째 모드는 초가변 CDR3 루프 내에서 일어나는데, 이것은 재조합 V, (D) 및 J 유전자 분절 사이의 접합부에서, 주형 뉴클레오타이드의 무작위 결실 및 비-주형 뉴클레오타이드의 첨가에 의해서 생성된다.
TCR:CD3 복합체
성숙 αβ 및 γδ TCR 쇄 쌍은 ε, γ, δ 및 ζ라 지칭되는 다수의 액세서리 CD3 소단위를 갖는 복합체로 세포 표면에 제시된다. 이러한 소단위는 αβ 또는 γδ TCR과 3종의 이량체(εγ, εδ, ζζ)로서 회합한다. 이러한 TCR:CD3 복합체는 αβ 또는 γδ TCR과 동족 항원의 맞물림 시에 세포 신호전달 반응의 개시를 위한 단위를 형성한다. TCR:CD3 복합체로서 회합된 CD3 액세서리는 면역수용체 타이로신-기반 활성화 모티프(ITAM)라고 불리는 신호전달 모티프에 기여한다. CD3ε, CD3γ 및 CD3δ 각각은 단일 ITAM에 기여하는 반면, CD3ζ 동종이량체는 3개의 ITAM을 함유한다. 따라서 TCR과 조립되는 3개의 CD3 이량체(εγ, εδ, ζζ)는 10개의 ITAM에 기여한다. 동족 항원과의 TCR 결찰 시, 탠덤 타이로신 잔기의 인산화는 Src 상동 2(Src homology 2: SH2) 도메인, 예컨대, 중요한 70kDa의ζ-쇄-연관된 단백질(ZAP-70)을 함유하는 단백질을 위한 짝지워진 도킹(docking) 부위를 생성한다. 이러한 단백질의 모집은 T-세포 활성화 및 분화에 궁극적인 책임이 있는 TCR:CD3 신호전달 복합체의 형성을 개시한다.
αβ T-세포
αβ T-세포는 일반적으로 γδ T-세포 반대부분보다 인간에서 더 풍부하다. 대부분의 αβ T-세포는 세포 표면 상에서 HLA 복합체에 의해서 제시된 펩타이드 항원과 상호작용한다. 이들 펩타이드-HLA(pHLA)-인식 T-세포는 처음으로 기술되었고, 가장 양호하게 특징규명되어 있다. αβ T-세포의 보다 희귀한 형태가 또한 기술되어 있다. 점막-연관된 불변요소 T(Mucosal-associated invariant T: MAIT) 세포는 비교적 제한된 α 및 β 쇄 다양성을 갖는 것으로 보이며, 단백질 단편이 아닌 박테리아 대사산물을 인식한다. 불변 자연 살해 T-세포(iNK T-세포) 및 생식계열-암호화된 마이콜릴-반응성 T-세포(GEM T-세포)는 비-HLA 분자에 의해서 교차 제시되는 당지질의 인식에 제한된다. iNK T-세포는 CD1d-제시된 당지질과 상호작용하는 것으로 광범위하게 간주되는 반면, GEM T-세포는 CD1b-제시된 당지질과 상호작용한다. T-세포의 추가 형태는 CD1a 및 CD1c의 맥락에서 당지질과 상호작용한다고 생각되지만, 이러한 세포는 아직 상당히 상세하게 특징규명되어 있지 않다.
종래의 αβ T-세포
대부분의 αβ T-세포의 주요 특징은 HLA 분자의 맥락에서 펩타이드 항원의 인식이다. 이것은 종종 '종래의' αβ T-세포라 지칭된다. 개체 내에서, 자가-HLA 분자는 자가 단백질 및 외부 단백질로부터의 펩타이드를 T-세포에 제공하여, 악성종양 및 외부 병원체에 대항하는 획득 면역, 공생 유기체, 식품 및 자신에 대한 획득 관용에 대한 본질적인 기준을 제공한다. HLA 단백질을 암호화하는 HLA 유전자좌는 인간 게놈의 가장 유전자 조밀하고, 다형성인 영역이며, 인간에서 기술된 12,000개 초과의 대립유전자가 존재한다. HLA 유전자좌에서의 고도의 다형성은 개체들 간의 펩타이드 항원 제시의 다양성을 보장하며, 이것은 집단 수준에서 면역에 중요하다.
HLA 클래스 I 및 II
전통적인 HLA 복합체의 2가지 형태가 존재한다: HLA 클래스 I(HLAI) 및 HLA 클래스 II(HLAII). 3종의 전통적인 HLAI 유전자가 존재한다: HLA-A, HLA-B, HLA-C. 이러한 유전자는 불변 β2-마이크로글로불린(β2M) 쇄와 회합된 막-연장 α-쇄를 암호화한다. HLAI α-쇄는 면역글로불린 폴드: α1, α2 및 α3를 갖는 3개의 도메인으로 구성된다. α3 도메인은 막-근위이고, 상당히 불변성인 반면, α1 도메인 및 α2 도메인은 함께 다형성 막-윈위 항원-결합 틈(cleft)을 형성한다. 6종의 전통적인 HLAII 유전자가 존재한다: HLA-DPA1, HLA-DPB1, HLA-DQA1, HLA-DQB1, HLA-DRA 및 HLA-DRB1. 이러한 유전자는 α-쇄 및 β-쇄를 포함하는 짝지워진 DP, DQ 및 DR 이종이량체 HLA 복합체를 암호화한다. 각각의 쇄는 면역글로불린 폴드를 갖는 2개의 주요 구조 도메인을 가지며, 여기서 α2 및 β2 도메인은 HLAI α3 도메인의 것과 유사한 막-근위이고, 상당히 불변인 모듈을 포함한다. HLAII α2 도메인 및 β2 도메인은 함께 막-윈위 항원-결합 틈을 형성하며, 이것은 고도로 다형성인 영역이다.
HLAI 및 HLAII의 항원-결합 틈은 8개의 역평행 β-시트의 플랫폼 상에 2개의 역평행 α-헬릭스를 포함한다. 이러한 틈에서 펩타이드 항원은 연장된 입체배좌 내에 결합되고, 제시된다. HLAI 및 HLAII 내의 펩타이드-접촉 잔기는 대부분의 서열 다형성의 위치이며, 이것은 상이한 HLA 대립유전자에 의해서 제시된 다양한 펩타이드 레퍼토리의 분자 기준을 구성한다. 이러한 펩타이드는 항원-결합 틈과의 광범위한 접촉을 만들고, 그 결과, 각각의 HLA 대립유전자는 제시된 펩타이드에 대한 별개의 서열 제약 및 선호를 부여한다. 따라서 주어진 펩타이드는 제한된 수의 HLA에만 결합할 것이고, 상반되게 각각의 대립유전자는 주어진 단백질로부터의 펩타이드 수집물의 특정 분율 만을 수용한다. 각각의 개체에 제시된 HLAI 및 HLAII 대립유전자의 세트는 HLA 일배체형이라 지칭된다. HLAI 및 HLAII 유전자의 다형성 및 유전된 대립유전자의 공우성(co-dominant) 발현은 인간 집단 전체에서 HLA 일배체형의 매우 높은 다양성을 유도하는데, 이것은 αβ TCR의 막대한 서열 다양성과 커플링되는 경우, 이러한 HLA-항원-TCR 상호작용의 분석의 표준화에 대한 상당한 장애를 제공한다.
HLAI 및 HLAII의 αβ TCR 맞물림
αβ TCR은 HLA 및 펩타이드 항원(변경된 자가) 둘 모두의 잔기에 의해 형성된 혼합된 pHLA 결합 계면의 부분으로서 펩타이드를 인식한다. HLAI 복합체는 거의 모든 유핵 세포의 표면 상에 제시되며, 일반적으로 내인성 단백질로부터 유래된 펩타이드를 제공하는 것으로 간주된다. 따라서 T-세포는, 상호작용 세포의 pHLAI 복합체를 샘플링함으로써 HLAI-제시 세포의 내인성 세포 프로테옴에서 정보를 얻을 수 있다. HLAI의 맞물림은, 상호작용 T-세포에 의한 TCR 공동수용체 CD8의 발현을 요구하고, 따라서, HLAI 샘플링은 CD8+ αβ T-세포에 제한된다. 이에 반해서, HLAII 복합체의 표면 제시는 전문적인 APC에 상당히 제한되고, 일반적으로 제시 세포에 외인성인 단백질로부터 유래된 펩타이드를 제공한다고 간주된다. 따라서 상호작용 T-세포는, 제시 세포가 존재하는 세포외 미세환경의 프로테옴에서 정보를 얻을 수 있다. HLAII의 맞물림은, 상호작용 T-세포에 의한 TCR 공동수용체 CD4의 발현을 요구하고, 따라서 HLAII 샘플링은 CD4+ αβ T-세포에 제한된다.
αβ TCR의 흉선 선택
상기에 기술된 바와 같은 αβ TCR의 역할은 pHLA 복합체의 검출이어서, TCR-제시 T-세포는 면역의 확립에서 T-세포의 역할과 밀접한 관련이 있는 반응을 증가시킬 수 있다. 개체 내에서 생성된 αβ TCR 레퍼토리는, 특이적 일배체형의 맥락에서 그리고 이의 실제 발생 이전에 마주할 가능성이 있는 모든 외부 항원의 상당하고 예측하지 못한 다양성을 처리해야 한다고 고려될 것이다. 이러한 결과는, 매우 다양하고, 상당한 수의 αβ TCR이 비특이적 pHLA 복합체를 인식할 가능성을 가지면서 유사-무작위화된 방식으로 생성되고, 자가 pHLA와의 강한 상호작용을 회피하도록 단지 특이적으로 지시된다는 배경으로 달성된다. 이것은 프로세스 호출 흉선 선택에서 T-세포 성숙 동안 신중하게 조직된다.
흉선에서 T-세포 성숙의 제1 단계 동안, 충분한 친화성으로 자가-pHLA 복합체와 상호작용할 수 없는 αβ TCR을 보유한 T-세포는 생존 신호가 박탈되고, 제거된다. 이러한 양성 선택이라고 불리는 단계는, 살아남은 T-세포가 적절한 HLA 컨텍스트에 제공된 외부 또는 변경된 펩타이드를 적어도 잠재적으로 인식할 수 있는 TCR 레퍼토리를 보유하는 것을 보장한다. 그 다음, 자가-pHLA와 강하게 상호작용하고, 따라서 자가면역을 유도할 가능성을 갖는 αβ TCR은 음성 선택의 과정을 통해서 능동적으로 제거된다. 양성 선택과 음성 선택의 이러한 조합은, 주변에 존재하는 자가-pHLA에 대해서 낮은 친화성을 갖는 αβ TCR을 보유하는 T-세포만 생성시킨다. 이것은 자가-제한적이지만, 자가-반응성이 아닌 αβ T-세포 레퍼토리를 확립한다. HLA 일배체형에 대한 T-세포 발생의 이러한 고도로 개별화된 특성은 αβ TCR-항원-HLA 상호작용의 표준화된 분석에서의 도전을 강조한다. 더욱이, 그것은 이식 거부 및 이식편대숙주병 둘 모두, 및 하나의 개체에서 식별된 αβ TCR이 제2 개체에서 완전히 상이한 효과를 가질 수 있다는 일반적인 원리(이것은 임상 실험에서 나타나는 TCR-기반 및 T-세포 기반 치료 및 진단 전략에 대한 명백한 영향을 가짐)의 이유가 된다.
비종래의 αβ T-세포
αβ T-세포의 비-HLA-제한된, 또는 '비종래의' 형태는 매우 상이한 분자 항원 표적을 갖는다. 이러한 비종래의 αβ T-세포는 전통적인 HLA 복합체와 맞물리지 않지만, 보존된 HLA-유사 단백질, 예컨대, CD1 패밀리 또는 MR1과 맞물린다. CD1 패밀리는 항원 교차-제시에 관여된 4종의 형태(CD1a, b, c 및 d)를 포함한다. 이러한 세포 표면 복합체는 α-쇄 유사 HLAI를 갖는데, 이것은 β2-M과 이종이량체를 형성한다. α-쇄의 막 윈위 표면에 제공된 작은 소수성 포켓은 병원체-유래된 지질-기반 항원에 대한 결합 부위를 형성한다. 선천적 유사 NK T-세포(iNK T-세포)는 또 다른 중요한 예를 나타내는 GEM T-세포와 함께 지질/CD1 패밀리 인식의 가장 잘 이해되는 예를 형성한다. '타입 I' iNK T-세포는 CD1d의 맥락에서 지질 α-GalCer과 강하게 상호작용하는 것으로 공지되어 있다. 이러한 iNK T-세포는 고정된 TCR α-쇄(Vα10/Jα18) 및 제한된 수의 β-쇄(제한된 vβ 사용)로 매우 제한된 TCR 다양성을 나타내고, 이것은 선천적 병원체-연관된 분자 패턴(PAMPS) 인식 수용체, 예컨대, Toll-유사 및 Nod-유사 수용체에 비유되어 왔다. 이에 반해서, '타입 II' NK T-세포는 보다 다양한 TCR 레퍼토리를 제공하고, CD1d-지질 복합체 맞물림의 보다 다양한 모드를 갖는 것으로 보인다. GEM T-세포는 CD1b에 의해서 제공된 마이코박테리아-유래된 당지질을 인식하지만, CD1a, b 및 c에 의한 항원 제시의 분자 상세사항뿐만 아니라 이의 T-세포 인식은 단지 이해되는 초기 단계이다.
MAIT 세포는 불변 TCR α-쇄(TRAJ33, TRAJ20 또는 TRAJ12에 결찰된 TRAV1-2)를 과량으로 발현하는데, 이것은 TCR β-쇄의 어레이와 짝을 이룰 수 있다. 펩타이드 또는 지질 대신에 MAIT TCR은 HLAI-유사 분자, MR1에 의해서 제공된 병원체-유래된 엽산(folate)- 및 리보플라빈-기반 대사산물에 결합할 수 있다. MAIT TCR 상에서 관찰되는 TCR에서의 제한적이지만 상당한 다양성은 보존된 MR1의 맥락에서 다양하지만 관련된 대사산물의 인식을 가능하게 하는 것으로 보인다.
비-전통적인 HLA-제한된 αβ T-세포 TCR이 성숙 동안 흉선에서 선택되는 방법은 양호하게 이해되어 있지 않다. 그러나, 상기에 제시된 음성 선택 및 양성 선택의 기본적인 과정이 여전히 적용되고, 일부 증거는 이것이 흉선 내에서의 특화된 틈새(niche)에서 일어난다는 것을 시사한다.
γδ T-세포
αβ TCR 발생 및 pHLA 맞물림의 상세한 기전적 이해에 비해서, 항원 표적 및 이의 γδ T-세포 반대부분의 내용에 대해서는 비교적 적게 공지되어 있다. 이것은 부분적으로는 순환하는 T-세포 구획에서의 이의 비교적 낮은 풍부도로 인한 것이다. 그러나, γδ T-세포는 엄격히 HLA 제한되지 않는다고 광범위하게 간주되며, 항체와 다르지 않게 표면 항원을 더 자유롭게 인식하는 것으로 보인다. 추가로, 보다 최근에, γδ T-세포는 외부 항원과 면역계의 주요 상호작용부위인, 상피 조직의 존재하는 T-세포 구획에 우세하게 존재할 수 있다는 것이 인식되었다. 또한, γδ T-세포 종양 면역감시 및 이상조절된-자가의 다른 형태의 감시에 대한 다양한 기전이 문헌에 출현하기 시작하고 있다. 선천적-유사 및 획득 γδ T-세포 둘 모두의 특이적 항원 표적은, 저조하게 정의되어 있지만, PAMP의 조직 분포 및 신속한 인식은 외부 항원에 대한 반응 초기에서 뿐만 아니라 획득 면역계가 여전히 성숙하고 있는 삶의 초기 둘 모두에 γδ T-세포에 대한 근본적인 역할을 시사한다.
γδ T-세포의 다양한 기능은 상이한 Vγ Vδ 유전자 분절 사용을 기반으로 하는 것으로 보이며, 상당한 불변 TCR을 갖는 γδ T-세포가 감염 동안 매우 초기에 PAMP의 선천적-유사 인식을 매개한다는 2개의 주요 카테고리로 광범위하게 이해될 수 있다. PAMP을 넘어서서, 이러한 유형의 γδ T-세포는 세포 스트레스, 감염 및 잠재적인 신생물 발달의 매우 초기 특징을 제공할 수 있는 인항원을 비롯한, 자가-분자를 인식한다고 추가로 여겨진다. PAMP의 인식 및 이러한 소위 위험 연관된 분자 패턴(danger associated molecular patterns: DAMPS)뿐만 아니라 다수의 조직-제한된 선천적-유사 γδ T-세포는, 이러한 세포가 이전 활성화, 귀소 및 클론성 확장에 대한 필요성 없이 항원 시험감염에 신속하게 반응하기에 적합하다는 것을 강하게 시사한다.
γδ T-세포의 제2 형태는 본래 형태보다 획득성이라고 간주되며, 상당히 다양한 γδ TCR 레퍼토리 및 림프 조직 주변을 순환하고, 림프 조직에 직접 접근하는 능력을 갖는다. 공통 인간 병원체 예컨대, CMV에 대한 이러한 항원-특이적 γδ T-세포가 기술되어 있고, 그것은 기억 반응을 형성하는 것으로 보인다. 그러나, γδ T-세포는 활성화 후 단지 비교적 제한된 클론성 증식을 나타낸다는 것이 관찰되어 있고, 말초 순환 또는 조직에서 TCR 다양성 및 γδ T-세포의 특이적 반응의 정도에 대한 데이터는 거의 입수 가능하지 않다. 추가로, γδ TCR은 pHLA 복합체와 상호작용하지 않고, 따라서 이와 관련하여 펩타이드 항원과 맞물리지 않는 것으로 일반적으로 간주되지만, γδ T-세포의 단지 소수의 항원 표적이 특징규명되어 있고, 기본적인 분자 프레임워크는 단지 저조하게 이해된다.
인간에서 말초 γδ T-세포의 낮은 빈도 및 조직-존재 T-세포의 연구 어려움으로 인해서, T-세포의 이러한 중요하고 다양한 유형이 획득 면역 반응에 어떻게 참여하는지에 대한 지식은 제한적이다. 이러한 최근 연구 분야는 희귀한 γδ T-세포를 포획 및 특징규명하고, 이의 TCR 쌍을 단리하고, 이의 동족 항원을 식별하는 매우 신뢰할 만한 기술을 필요로 한다.
항원 및 항원-제시 세포
T-세포 및 TCR의 맥락에서, 항원은 TCR에 의해서 맞물려서, T-세포 내에서 변환될 신호를 생성할 수 있는 임의의 분자로서 정의될 수 있다. 가장 잘 특징규명된 T-세포 항원은 HLAI 및 HLAII 복합체에서 제시되고, 종래의 αβ T-세포에 의해서 맞물리는 펩타이드이다. 그러나, 최근에, 비-종래의 αβ T-세포 및 γδ T-세포가 지질, 지질펩타이드, 당펩타이드, 당지질 및 다양한 대사산물 및 이화산물(catabolite)을 비롯한, 항원으로서 광범위한 생물분자와 맞물릴 수 있다는 것이 명백해졌다. 또한, γδ T-세포가 완전히 폴딩된 단백질을 항체-유사 방식으로 직접 맞물릴 수 있다는 것이 밝혀졌다. 따라서, HLA-제시된 펩타이드에 대해 상당히 제한될 T-세포 항원의 관점은 지난 이십년에 걸쳐서 대부분의 임의의 생물분자를 포함하도록 확장되었다. 이러한 개념을 염두하여, 그것은 항원-제시 세포(APC)로 간주될 수 있는 것을 정의하는 것에 관련된다.
상기 섹션에 정의된 바와 같이, HLAI 및 HLAII는 세포 유형에 걸쳐서 이질적인 발현 프로파일을 갖는다. 거의 모든 유핵 세포는 세포 표면 상에 HLAI 복합체를 제시하고, 따라서 T-세포 샘플링을 위한 펩타이드 항원을 제시하기에 유능하다고 널리 허용된다. 이에 반해서, HLAII는 제한된 발현 프로파일을 갖고, 적어도 정상 상태에서의 조건은 수지상 세포(DC), 대식세포 및 B-세포를 비롯한, 항원 제시에서 전문가 역할을 갖는 세포의 표면 상에서만 발현된다. 이러한 전문가 세포 유형을 종종 전문적인 APC라 지칭한다. 이러한 내용의 목적을 위해서, 용어 APC는 αβ 또는 γδ T-세포에 의한 샘플링을 위해서 항원을 제시할 수 있는 임의의 유핵 세포를 기술하는 데 사용된다. 이러한 항원은 특이적 항원-제시 복합체, 예컨대, HLA 및 HLA-유사 분자에서 '카고(cargo)'로서 제시된 것에 제한되지 않고, αβ 또는 γδ TCR-보유 세포와 맞물릴 수 있는 임의의 세포-표면 제시된 모이어티를 또한 포함할 수 있다.
TCR의 치료 용도
일차 T-세포의 입양 전달이 1990년대 초기에 임상 실험에서 먼저 시도되었고, 면역손상된 환자에서 바이러스 면역을 부여하기 위해서 바이러스 항원에 대해서 분극화된 생체외에서 확장된 T-세포에서 시작되었다. 특이적 암 항원에 대해서 생체외에서 확장된 일차 T-세포를 사용한 유사한 접근은 곧 악성종양의 치료에 시도되었다. 현재 도전으로 남아있는 이러한 초기 접근법에서의 하나의 제한은, 치료 제품에서 조성을 정밀하게 최적화할 필요성과 충돌하는, T-세포의 특성 및 다양성의 이해 부족이다. 현재, 생체외에서 확장된 일차 T-세포의 사용은, 바이러스 항원에 대해서 특이성을 갖는 일차 T-세포를 사용하는 소수의 계획을 제외하고는, 약제학적 분야에서 상당히 포기되었다.
최근, 일차 인간 세포에 유전 물질을 신뢰할 수 있게 도입하는 능력이 다양한 실험적인 유전적으로 변형된 T-세포 치료제에서 인지되었다. 이러한 치료 세포 생성물은, T-세포 반응의 능력을 견고하게 하고, 질환-연관된 항원 표적, 예를 들어, 악성 세포에 의해서 고유하게 발현되는 항원에 대해서 T-특이성을 재지향시키는 것을 목표로 한다. 이것은, 실제 TCR 쇄 쌍이 아니라 키메라 항원 수용체(CAR)의 수령자 T-세포의 전달에 상당히 좌우된다. CAR은 CD3-TCR 기능을 모방하는 합성 키메라 수용체를 생산하기 위해서, 신호 수용체 요소, 예컨대, CD3 복합체의 ζ-쇄에 그래프팅된 표적화 모이어티(가장 자주는 악성 세포의 표면 발현된 단백질을 표적화 하는 단일-쇄 항체 요소)를 나타낸다. 이러한 소위 CAR T-세포(CAR-T) 생성물은 지금까지 임상 시험에서 혼합된 성공을 거뒀지만, 그럼에도 불구하고 이러한 가능성은 내재하는 고유한 분자 표적을 갖는 종양, 예컨대, B-세포 악성종양을 능가하는 것으로 해석되기에 용이하지 않다. 대안적으로, 전장 TCR 쇄 쌍 ORF의 T-세포 내로의 전달이 관심 대상이다. 이러한 TCR-조작된 T-세포 치료제는 현재 제조 공정의 문제점, CAR-T 생성물과 유사하게, 검증된 항원 표적 및 표적화 작제물의 부족에 의해서 제한된다. 지금까지, 악성 세포 상의 HLAI에 의해서 제시된 펩타이드 항원의 인식을 위해서 αβ TCR을 사용하는 것에 초점이 맞춰져 있었고, 이러한 접근법의 기본적인 문제점은 악성 세포에 특이적인 항원에 대한 필요성이다.
TCR-pHLA 상호작용은 비교적 낮은-친화성을 갖기 때문에, 네이티브 TCR은 TCR-조작된 T-세포 치료제를 위한 최선이 아닌 것으로 간주되어 왔다. 몇몇 접근법은 단일-쇄 항체 친화성 성숙과 상당히 유사한 방식으로, 생체내에서 친화성-성숙 TCR을 고안하였다. 이러한 TCR 친화성 성숙 접근법은 일반적으로 또한 단일-쇄 포맷을 활용하는데, 여기서 하나의 쇄의 V-영역이 또 다른 쇄의 V-영역에 융합되어 단일 폴리펩타이드 작제물을 제조한다. 이어서 이러한 단일 폴리펩타이드가, 항체 조작 작업 흐름으로부터 개작되고, 표적 결합을 기준으로 몇몇 라운드의 선택을 통과한 파지- 또는 효모- 디스플레이 시스템에 사용될 수 있다. 2개의 내재하는 제한이, 기능성 TCR 쇄 쌍을 산출하는 것과 관련하여 이러한 단일-쇄 TCR 접근법에 존재한다. 먼저, 선택은 표적에 대한 결합 친화성을 기초로 한다. 그러나, TCR 친화성은 TCR 신호전달 산출물의 강도 또는 역량과 항상 상관관계가 있는 것은 아니라는 것이 양호하게 문헌화되어 있다. 두 번째로, 친화성을 기초로 하는 단일-쇄 작제물의 선택은 전장 수용체로서 재구성된 후 항상 동등한 친화성으로 번역되는 것은 아니다.
치료 맥락에서, 친화성-성숙된 TCR 쌍에서의 추가적인 제한이 존재한다. 즉, 이의 서열이 변경되었음을 고려하면, 정의에 의해서 생성된 작제물은 흉선 선택에 더 이상 지배를 받지 않는데, 여기서 자가-항원에 강하게 반응하는 TCR은 레퍼토리로부터 결실된다. 따라서, 이러한 변형된 TCR은, 현재 방법을 사용하여 시험관내에서 제외시키기에 매우 어려운 자가-반응성인 내재하는 위험을 보유한다. 동일한 이유로 인해서, 치료 응용을 위한 임의의 선택된 또는 조작된 TCR은 개별화될 필요가 있다. TCR이 개체 전체에 적용되는 인공적으로 조작된 TCR 또는 네이티브 TCR인 경우, 교차 반응성은 잠재적으로 파국적인 자가면역을 회피하기 위해서, 각각의 특정 개체의 HLA 일배체형 및 제시된 펩타이드 레퍼토리를 기초로 제외되어야 한다. 이는, 흉선 선택이 주어진 개체의 것에만 특이적인 모든 사용 가능한 HLA 분자의 배경 상에서 수행된다는 사실로 인한 것이다. 이러한 교차 반응의 가능성은 불명확하다. 그러나, 동일한 종의 다른 개체의 pHLA 복합체를 외부물질로서 인식하는 TCR 레퍼토리의 능력은 획득 면역의 기본적인 특성이고, 이식 거부 및 이식편대숙주병을 뒷받침한다. 암-특이적 흑색종 연관된 항원(MAGE)에 대항하여 성숙된 TCR 쇄 쌍을 사용한 최근 임상 시험은 흉선 선택을 우회하는 잠재적인 문제를 강조하였다. 성숙된 TCR을 보유하는 자가유래 T-세포를 2명의 암 환자에게 다시 주입하였을 때, 이 환자는 치명적인 심장 질환이 신속하게 발달하였다. 후속 연구는, MAGE-특이적인 성숙된 TCR이 심장 단백질 티틴으로부터의 HLAI-제시된 펩타이드와 교차 작용성이었다고 결정하였다. 이는, 교차 작용성이 TCR의 치료 용도에서 구별되는 가능성이라는 것을 강하게 시사한다.
치료 목적을 위해서 TCR을 활용하는 별개의 방안은, 항체 치료 물질과 상당히 동일한 방식으로 친화성 시약으로서 이를 사용하는 것이다. 단일-쇄 TCR 분자를, 접합된 약물 물질의 특이적 HLA-항원 발현 세포 집단에 대한 전달에 대해서 시험하였다. 이러한 접근법은 일반적으로 CAR-T 또는 TCR 조작된 T-세포 치료제보다 안전한 것으로 간주되었는데, 그 이유는 약물 물질의 투여가 단순히 중단될 수 있기 때문이다. 그러나, 예측하기 어려운 교차 반응성 및 오프 타깃 효과에 대한 가능성이 이러한 설정에서 잠재적인 제한으로 존재한다.
임상 진단에서의 TCR 레퍼토리 검출
관련된 양상에서, 임상 진단 목적을 위해서 특이적 TCR 서열의 풍부도의 검출을 사용하는 것이 흥미로워지고 있다. 특히 심층-서열결정(deep-sequencing)의 발달로 인해서, 특이적 컨텍스트에서 개체 내에서의 완전 TCR 다양성을 광범위하게 그리고 매칭된 αβ 쌍에 대해서 이해하는 것이 가능하다. 이는, 환자에서 질환-연관된 항원에 대한 확립된 면역 반응에 대한 대용 판독물로서, 확장된 T-세포 클론의 풍부도를 단순히 검출함으로써, 특정 병태 및 질환 상태를 진단하기 위한 수단을 잠재적으로 나타낸다. 그러나, 이러한 포괄적인 접근법은 확립된 임상 시점에서 현재 매우 강한 면역 반응으로 제한되며, 서열결정을 통해서 식별된 임의의 특정 TCR의 특이적 항원 표적을 식별하는 데 있어서 근본적인 어려움을 겪는다.
T-세포 항원의 치료 및 진단 용도
획득 면역 반응을 사용한 근본적인 영향력은, TCR-항원 상호작용의 정교한 특이성이 각각의 병원체, 암 세포 또는 자가면역 질환과 특이적으로 연관된 항원의 상세한 지식을 필요로 한다는 점에서, 중추적인 기술적 도전으로 번역된다. 추가로, 각각의 항원은 특이적 항원 제시 복합체, 또는 이의 대립유전자에 의해서 제시될 수 있어서, 항원 발견이 각각의 관련된 HLA 유전자 및 대립유전자에 대해서 수행되었다. 강한 획득 면역 반응과 연관되고, 일반적으로 보존된 에피토프 반응 체계를 나타내는 몇몇 감염성 질환, 예컨대, HIV, 인플루엔자 및 CMV의 경우, 대부분의 중요한 에피토프는 일부 공통 HLA과 관련하여 맵핑되었다. 유사하게, 암, 알레르기 및 자가면역 분야는 연관된 T-세포 항원을 맵핑하기 위한 증가되고 조직적인 노력이 인지되었다. 그러나, 이것은 도전적인 절차이며, 상이한 임상 맥락과 연관된 T-세포 항원을 체계적으로 기술하기 위한 노력은 효율적이고, 강력하고, 신속하고 규모 확장 가능한 프로토콜의 부재에 의해서 방해된다.
구체적으로, 암 세포는 도전적이고 중요한 양상을 나타내는데, 그 이유는 악성 세포의 표면 상에 제시된 펩타이드 대부분이 자가 항원 또는 자가 항원과 매우 유사하기 때문이다. 따라서, 흉선 선택은 이러한 펩타이드를 강하게 인식할 수 있는 결실된 TCR을 가질 것이며, 동시에 종양은 면역 인식을 회피하도록 발달되었다. 이는, 확립된 종양에 대한 강력한 면역 반응은 비교적 희귀하고, 표적을 예측 또는 발견하기가 어렵다는 것을 의미한다. 그러나, 이러한 반응은 존재하고, 중요하게는 더 양호한 결과와 일반적으로 연관된다. 이러한 반응의 표적, 종양-연관된-항원(TAA)은 대부분의 경우 자가로부터 구별되는 특징을 가질 것이고, 암 발달 동안 과발현되는 단백질로부터 유래되며, 그렇지 않았으면 이것은 이러한 발달 단계에서 세포 유형으로부터 존재하지 않았거나 유전자 돌연변이 또는 번역후 변형, 예컨대, 인산화를 통해 특이적으로 변경되었을 것이다.
입수 가능한 경우, 이러한 에피토프의 지식은 기본적인 발견, 진단 목적을 위해서 그리고 예를 들어 백신 효능의 시험으로서 연관된 T-세포 반응에서 정보를 얻는 것을 가능하게 한다. 중요하게는, 이것은 또한 알레르기 및 자가면역에서, 그리고 중요하게는, 특이적 면역요법에 대한 유용한 표적에 대한 지점에서 그리고 악성 세포에 대해서 T-세포 관용 유도(tolerization)를 위한 고도로 특이적인 표적을 제공한다. 악성종양은 세포 면역요법의 가능성으로서 특히 가치있는 표적을 나타내고, T-세포 조작에서의 진전은 암의 유형에 대한 특이적 마커를 이용할 수 있는 몇몇 경우를 넘어선 검증된 표적 TAA의 부족으로 인해서 느려진다.
세포 요법의 가능성 및 검증된 표적의 결핍에 비추어, 특히 암을 치료하려는 노력에서, TCR-기반 면역요법의 가장 시급한 장애 중 하나는 유망한 TCR 항원의 식별이다.
전장 TCR ORF의 획득
주로 자연 발생 TCR 내의 V 유전자 분절에서의 사용 다양성으로 인해서, T-세포의 풀로부터 짝지워진 TCR 쇄의 서열 데이터를 포획하는 것은 도전적이다. 일반적으로, 높은 신뢰도로 서열을 실현 가능하게 포획하기 위해서, 표적 풀의 완전 V 영역 다양성을 포괄하는 프라이머의 풀을 사용하여, 역전사 및/또는 PCR 방법을 사용하여 TCR을 증폭시키는 것이 필요하다. 이러한 과정은 서열 데이터가 획득될 수 있는 ORF 단편을 생성시키지만, 전장 TCR ORF를 용이하게 클로닝하기에 적합하지 않은 출발 물질을 만든다. 따라서, T-세포의 풀로부터 짝지워진 서열 데이터를 얻기 위한 고효율 전략은 하류 응용을 위한 전장 TCR ORF의 클로닝과 일반적으로 비상용성이다. 따라서 서열결정된 TCR 쌍의 임의의 기능성 시험 또는 응용을 위해서 TCR ORF의 시간 소모적이고 고비용인 합성이 필요하다.
전장 TCR ORF의 다양화
TCR의 새로운 치료 용도는 규정된 특이성 및 기능의 합성 TCR 쌍을 유도하기 위해서 친화성 및/또는 기능적 성숙 작업 흐름 내에서 TCR 서열을 다양화하는 것에 대한 관심을 증가시켰다. 일반적으로, 이것은 파지-디스플레이 방법을 위해서 단일-쇄 작제물 내에서 TCR 쇄 쌍을 연결하고, 이러한 단일 쇄 작제물 내에 서열 다양성을 도입함으로써 달성되었다. 단일 TCR ORF를 체계적인 방식으로 신속하게 다양화할 수 있는 기술이 현재 부족하고, 이러한 전장 TCR ORF는 생존 가능한 포유동물 세포 상의 표면 발현의 맥락에서 즉시 시험 및/또는 선택에 적용 가능하다. 이러한 기술은 치료 용도를 위해서, 고도로 규정된 특이성 및 신호전달 능력을 갖는 TCR 쌍의 성숙에서 매우 가치가 있을 것이다.
TCR 및 T-세포 항원 분석의 기술적 양상
총괄적으로, TCR-기반 요법의 발달은 여전히 초기 단계이며, 성공은 제한적이었다. 진단 접근법은 엄청난 가능성을 갖지만, 환자 질환 상태 또는 치료에 대한 반응을 평가하는 것을 목표로 하는 제어된 임상 연구에 거의 적용되지 않는다. 네이티브 TCR 쇄 쌍의 믿을 수 있는 포획 및 높은 처리량 및 세포-세포 소통의 기능성 컨텍스트에서의 TCR-항원 상호작용의 체계적인 분석을 위한 부족하게 개발된 기술은 TCR-기반 요법 및 진단법의 발달에 대한 주요 장애였다.
심층 서열결정 접근법은 건강한 상태 및 질환 상태에서 T-세포 수용체 다양성의 개선된 이해로 이어졌다. 그러나, 이러한 접근법은 일반적으로 주로 TCR β-쇄의 CDR3 영역에 연장된 짧은 스트레치에 초점을 맞추고 있다. 대부분의 연구는 TCR α-쇄의 기여를 무시하였으며, 몇몇이 짝지워진 αβ 쇄뿐만 아니라 흥미로울 것으로 결정된 TCR의 항원 특이성을 분석하려고 하였다. 단일 세포 캡슐화 및 유전자 바코딩을 사용한 최근 작업 흐름은 네이티브 TCR αβ 또는 γδ 쇄 쌍의 짝지움 및 전장 서열의 분석을 가능하게 하였지만, 이러한 작업 흐름은 실험적인 것으로 남아있다.
단리된 TCR 쇄 쌍은 항원 특이성의 관점에서 생물물리학 또는 기능성 모드로 분석될 수 있다. 생물물리학 분석은 TCR뿐만 아니라 분석물 항원 둘 모두의 재조합 생산을 가용성 형태로 필요로 한다. HLA-제한된 TCR의 경우에, 따라서 이것은 모든 개별 TCR뿐만 아니라 동족 pHLA 복합체의 생성을 요구한다. 이것은 기술적으로 매우 도전적이고, 느리고 매우 낮은-처리량이다. 추가로, 이러한 분석은 상호작용 친화성을 단지 제공할 것인데, 이것은 기능성 특징과 예측 가능한 방식으로 양호하게 관련되지 않는다.
최근까지, 세포 컨텍스트에서 단리된 TCR 서열의 상세한 기능성 분석은 분석물 TCR 쇄 쌍을 일차 T-세포 또는 불멸 T-세포주 내로 형질주입하는 실험적 프로토콜, 및 세포 활성화의 전통적인 유세포 분석에 의한 세포 반응의 검출 또는 항원 시험감염 시 형질주입된 세포로부터의 분비된 인자의 검출로 제한되었다. 구오(Guo) 등에 의한 최근 간행물에서, 단일-세포로부터의 짝지워진 TCR 쇄의 신속한 클로닝, 발현 및 기능성 특징규명이 보고되었다(Molecular Therapy - Methods and clinical development (2016) 3:15054). 이러한 연구에서, 분석물 인간 αβ TCR 쌍은 αβ TCR 발현이 결핍되고, TCR 자극 시 활성화되는 Nur77 프로모터에 연결된 녹색 형광 단백질(GFP) 리포터 시스템을 함유한 리포터 세포주에서 발현되었다. 이러한 시스템은 리포터 세포주 게놈 내에서의 표준화된 TCR 통합의 결핍으로 인해서 비효율적이며, APC 요소에 의한 세포-결합된 항원 시험감염을 위한 체계적인 방식을 제공하지 않는다.
공지된 T-세포 항원에 대한 TCR의 식별을 위한 작업 흐름과 유사하게, 건강한 상태 및 질환 상태에서 신규 T-세포 항원의 신규 발견은 매우 도전적이다. 대부분의 접근법은 본래 생물물리학적이며, 면역화 프로토콜로 또는 상기에 다룬 바와 같은 동족 TCR의 식별을 통해서 시험될 수 있는 후보물질 항원을 생산하는 것을 목적으로 한다. T-세포 항원 발견 분야에는 표준화가 거의 또는 전혀 존재하지 않으며, 이 분야는 학문적 연구로 상당히 제한된다.
치료 및 진단 용도 둘 모두에서 TCR 및 이의 동족 항원에서의 축적된 관심 및 상당한 수의 네이티브 TCR αβ 및 γδ 쇄 쌍을 포획하는 수단의 출현으로, TCR-항원 상호작용의 체계적인 분석을 위한 신뢰할 만한 고처리율 및 표준화된 기술이 부족하다. 중요하게는, 전장 TCR ORF의 신속한 재구성 및/또는 체계적인 다양화를 위한 표준화된 시스템이 부족하여, 이러한 ORF는 본래 컨텍스트에서 생존 가능한 세포의 표면 상에 제시될 분석물 TCR의 네이티브 컨텍스트에서 TCR 쇄 쌍의 기능성 분석에 직접 적용될 수 있다. 이러한 능력은 네이티브 TCR 쇄 쌍의 고처리율 분석을 달성하는 데 중요할 뿐만 아니라, 치료 및 진단 용도를 위해서, TCR 쇄 쌍의 친화성 및/또는 기능성 성숙을 달성하는 데 중요하다.
정보학 및 시약 기반의 TCR 진단 및 또한 개인 맞춤 TCR-기반 면역요법의 사용을 가능하게 할 고처리율 방법으로 TCR 쇄 재구성, 및 이의 체계적인 다양화를 위한 신속하고 체계적인 방법에 대한 명확한 필요성이 존재한다.
본 발명은 상기에 언급된 요구를 다룬다. 본 발명은 제1 양상에서 TCR 쇄에 대한 가변(V), 결합(J) 및 불변(C) 서열을 보유하는 벡터로 이루어진 사전 조립된 라이브러리를 포함하는 2-성분 벡터 시스템을 제공한다. 이러한 시스템의 제1 성분은 V 서열 및 C 서열을 함유하는 V-C 유입 벡터를 포함한다. 시스템의 제2 성분은 J 서열을 함유하는 J 공여자 벡터를 포함한다. 2-성분 벡터 시스템은 각각 모든 바람직한 V-C 서열 조합물 및 J 서열을 갖는 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터의 라이브러리로 사전 조립된다. 2-성분 벡터 시스템은 목적하는 서열을 갖는 단일 V-C 유입 벡터 및 단일 J 공여자 벡터가 CDR3을 암호화하는 짧은 DNA 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스(odeCDR3) 서열과 조합되어 생체내에서, 단일-튜브 반응으로, 제한 효소 및 리가제 의존적인 방식으로 그리고 PCR 독립적인 방식으로 전장 TCR ORF를 재구성하도록 하는 방식으로 설계된다. 또한 모듈식 2-성분 시스템은 친화성 또는 기능성 성숙 작업 흐름에 대한 합성 또는 돌연변이체 전장 TCR ORF의 큰 라이브러리를 신속하게 생성시키기에 이상적으로 적절하다. 제2 양상에서, TCR 쇄의 상호(reciprocal) 쌍(즉, TRA/TRB 또는 TRD/TRG)에 대한 변형된 V-C 유입 벡터는 5-성분 벡터 시스템으로 컴파일되어 재구성된 TCR 쇄 쌍이 단일 벡터 내에서 결합될 수 있는 시스템을 제공한다. 이러한 제2 시스템은 최종 작제물 내에서 역평행 센스 배향으로 암호화된 결합된 TCR 쇄 쌍을 달성하도록 변형된, V-C 유입 벡터 둘 다, 즉, 제1 시스템과 동일한 J 공여자 벡터 및 또한 양방향 종결인자 공여자 벡터(BiT 공여자)를 활용하며, 각각의 TCR 쇄는 '양방향 종결인자' 요소 사이에 존재한다.
TCR ORF 재구성 및 조작 시스템(TORES)
본 발명은 먼저 상기에 언급된 용도에 적합한 고유한 특징을 갖는 2-성분 벡터 시스템을 제공한다. 이러한 TCR ORF 재구성 및 조작 시스템(TORES)은 제3 성분인 CDR3을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스(odeCDR3)와 함께 사용되어, 규정된 벡터 컨텍스트 내에서 전장 TCR ORF를 신규로 조립하고/하거나 주어진 TCR ORF 내에서 정형화된 서열 다양성을 생성시킨다.
본 발명을 도 1A에 요약한다. 표적 전장 TCR ORF에 요구되는 V 및 C TCR 유전자 분절을 함유하는 선택된 V-C 유입 벡터는 요구되는 J TCR 유전자 분절을 함유하는 J 공여자 벡터와 조합된다. 전장 TCR ORF는, V(D)J 재조합 동안 생성된 비고정된 비-생식계열 서열을 설명하는 CDR3을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스(odeCDR3)의 첨가에 의해서 완성되고, 각각 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터에 의해서 암호화된 고정된 생식계열 암호화된 V 및 J 서열이 개재되어 있다. 2-성분 벡터 시스템, 및 제3 odeCDR3 성분은, 제한 효소 및 리가제 연쇄 반응으로 조합되는 경우, 완전 V-CDR3-J-C TCR ORF가 재구성되도록 설계된다. 이는 유전 요소의 '무흔적(scarless)' 조립을 표준화된 방식으로 수행하기 위해서 사용되는 타입 IIS 제한 효소(들)를 통해서 달성된다.
2-성분 벡터 시스템은 표적 전장 TCR ORF의 재구성을 위한 모든 요구되는 V, C 및 J 유전자 분절을 함유하는 라이브러리로 조립된다(도 1B). 예를 들어, 라이브러리는 실시예 1 및 2에 기재된 바와 같은 인간 TRA 레퍼토리 및 실시예 3에 기재된 바와 같은 인간 TRB 레퍼토리의 네이티브 단백질 서열을 암호화하는 모든 유전자 분절을 함유하도록 작제될 수 있다.
고정된 V 분절 및 J 분절이 개재된 비고정된 CDR3 서열과 함께, V, J 및 C 유전자 분절 사용을 정의하기에 충분한 서열 정보로부터 전장 TCR ORF를 재구성하기 위해서, 표적 TCR ORF의 V/C 및 J 사용에 상응하는 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터가 먼저 선택된다. 전장 TCR ORF를 완성하는 데 필요한 비고정된 CDR3 서열에 상응하는 odeCDR3이 또한 생성된다. 이러한 3개의 성분이 도 4 및 실시예 7에 기재된 바와 같은, 표적 전장 TCR ORF를 생성시키기 위해서 연쇄 반응에서 타입 IIS 제한 효소 및 DNA 리가제 효소와 조합된다. 생성된 재구성된 전장 TCR은 V-C 유입 벡터 골격 내에 함유되고, 따라서 이러한 모 작제물 내에 함유된 모든 벡터 특징부를 함유한다.
제한 효소/리가제 연쇄 반응 내에서의 3종의 조합된 성분의 타입 IIS 제한 효소의 작용(도 4a, b, c)은 2종의 반응 부산물 및 2종의 반응 중간체를 초래한다. V-C 유입 벡터 유래된 반응 부산물은 절제된 네이티브 선택 마커 및 타입 IIS 결합 부위이다(도 4d). J 분절 부분이 절단된 J 공여자 벡터 골격은 제2 반응 부산물을 나타낸다(도 4e). J 공여자 벡터로부터의 절제된 J 분절 부분은 반응 중간체를 나타내고, J 분절 부분, C 분절로부터의 작은 C 부분, 및 결찰에 요구되는 단일 가닥 오버행 모두를 함유한다(도 4f). 제2 반은 중간체는 V 분절 및 C 분절, 및 결찰에 요구되는 단일 가닥 오버행을 함유하는 모체 V-C 유입 골격이다(도 4g). 반응의 최종 생성물은 odeCDR3(도 4c), 절제된 J 분절 부분(도 4f) 및 V 및 C 유전자 분절을 보유하는 V-C 유입 골격(도 4g)의 결찰로 이루어진, 모체 V-C 유입 벡터 골격 내에 재구성된 전장 TCR ORF를 나타낸다.
V-C 유입벡터 및 J 공여자 벡터 성분
본 문맥에서, 조합된 2-성분 시스템은 하기를 함유하는 하나 이상의 V-C 유입 벡터/들을 포함한다:
a. 복제 기점,
b. 제1 양성 선택 마커,
c. 5' 유전 요소 또는 요소들,
d. 코작 서열,
e. TCR 가변 유전자 분절,
f. 타입 IIS 제한 효소에 의한 부위 특이적 인식 및 절단을 위한 제1 타입 IIS 서열,
g. 음성 선택 마커,
h. 제2 타입 IIS 서열,
i. TCR 불변 유전자 분절 및
j. 3' 유전 요소 또는 요소들,
여기서, a) 및 b)는 박테리아 숙주에서 모체 V-C 유입 벡터 및 재구성된 TCR-함유 벡터 둘 다의 증식 및 선택을 위해서 사용되고; c) 및 j)는 재구성된 전장 TCR ORF의 하류 적용을 정의하기 위해서 사용되고; d)는 대안적으로 원핵생물 및 고세균에서 전사 조절을 위한 샤인-달가노(Shine-Dalgarno) 서열을 나타낼 수 있는, 진핵 세포에서 번역의 효율적인 개시를 보장하고; e)는 주어진 2-성분 벡터 시스템에서 모든 V 분절 전체에 보존된 CDR3 영역의 5' 에지(edge)에서의 모티프에 대한 시작 코돈으로부터의 가변(V) 유전자 분절을 나타내고; f)는 V 유전자 분절의 3' 단부에 표준화된 단일 가닥 오버행을 생성시키기 위해서 5' 방향으로 절단하도록 타입 IIS 제한 효소를 지시하는 타입 IIS 인식 서열을 나타내고; g)는 전장 TCR ORF를 재구성하기 위한 시스템의 작동 중에 모체 V-C 유입 벡터를 제거하기 위한 음성 선택 마커를 나타내고; h)는 C 유전자 분절의 5' 단부에 표준화된 단일 가닥 오버행을 생성시키기 위해서 3' 방향으로 절단하도록 타입 IIS 제한 효소를 지시하는 타입 IIS 인식 서열을 나타내고; i)는 주어진 2-성분 벡터 시스템 내의 모든 C 분절 전체에서 보존된 C 유전자 분절의 5' 단부에서 모티프로부터의 불변(C) 유전자 분절을 나타내고, 이것은 J 분절을 갖는 경계를 획정한다(도 2 및 도 4 참고).
예를 들어, 분자 생물학 작업 흐름을 위한 주형으로서 사용될, 하류 생물학적 응용에 대한 필요성 없이 전장 TCR ORF의 유전자 재구성을 위해서 사용되는 V-C 유입 벡터인, 최소 V-C 유입 벡터는 조절 요소가 결핍된, 요소 a), b), e), f), h) 및 i)를 포함할 것이다.
V-C 유입 벡터는 또한 하류 응용에 적합한 추가 ORF의 발현을 위한 1종 이상의 전사 단위, 예를 들어, 포유동물 항생제 내성 유전자 또는 리포터 작제물을 함유할 수 있다.
조합된 2-성분 시스템은 하기를 함유하는 하나 이상의 J-공여자 벡터를 포함한다:
a. 복제 기점,
b. 제2 양성 선택 마커,
c. 제3 타입 IIS 서열,
d. TCR 결합 유전자 분절,
e. 불변 유전자 분절의 작은 5' 부분에 상응하는, C 부분 및
f. 제4 타입 IIS 서열,
여기서, a) 및 b)는 J 공여자 벡터의 증식 및 선택을 위해서 사용되고; c)는 J 유전자 분절의 5' 단부에 표준화된 단일 가닥 오버행을 생성하도록 3' 방향으로 절단하기 위해서 타입 IIS 제한 효소를 지시하는 타입 IIS 인식 서열을 나타내고; d)는 주어진 2-성분 벡터 시스템에서의 모든 J 분절 전체에서 보존된 CDR3 영역의 3' 에지를 획정하는 모티프로부터의 5'로부터 시작하여, 2-성분 시스템 내에 함유된 V-C 유입 벡터(들)에 의해서 암호화된 C 분절의 5' 부분을 나타내는, C 부분을 혼입한 3' 서열까지의 결합(J) 유전자 분절을 나타내고; J 유전자 분절의 3' 단부에 표준화된 단일 가닥 오버행을 생성시키기 위해서 5' 방향으로 절단하도록 타입 IIS 제한 효소를 안내하고, 서열의 C 부분 일부 내에 함유된 타입 IIS 인식 서열을 나타낸다(도 3 및 도 4 참고).
J-공여자 벡터는 C 유전자 분절의 작은 5' 부분을 암호화하는, C 부분 서열을 반드시 보유할 필요는 없다. 이러한 C 부분은 TORES의 작동 동안 재구성 반응을 위해서 오버행을 최적화 및 표준화하는 데 사용된다. 이는 J 유전자 분절의 3' 단부에서 발견되는 더 큰 서열 변이로 인한 것이어서, C 부분의 포함은 덜 다양한 C 유전자 분절 내의 오버행의 생성에 의한 표준화를 가능하게 한다. 3' J 분절 다양성을 갖는 않는 다른 유기체로부터 또는 합성 J 유전자 분절을 사용하여 TCR 유전자좌를 위한 TORES를 작제하는 예에서, 이러한 C-부분은 상기 J 분절 내에서의 오버행의 표준화의 선호로 누락될 수 있다. 이것은 J 공여자 라이브러리 작제의 복잡성을 감소시킬 것이다.
제1, 제2, 제3 및 제4 타입 IIS 서열 각각은 동일하거나 또는 상이할 수 있다. 바람직하게는, 이들은 동일하다. 이는, 2-성분 벡터 시스템 내의 제한 부위 각각이 동일한 타입 IIS 효소와 상용성이고, 이러한 시스템을 사용한 전장 TCR ORF의 재구성 동안 제한 효소/리가제 연쇄 반응을 위해서 단지 단일 효소가 필요함을 보장한다. 타입 IIS 효소는 이의 인식 서열 내를 절단하지 않고, 따라서 단일-가닥 오버행은 인식 서열에 대해서 외인성으로 생성된다. 따라서, 타입 IIS 제한 효소 작용 시 생성된 오버행의 특성은 인식 서열 및 사실 인접한 서열의 배향 둘 모두에 의존적이다(실시예 1 내지 실시예 4 참고).
대안적으로, 타입 IIS 제한 서열 각각은 서로와 상이할 수 있다. 그러나, 각각의 고유한 인식 서열의 첨가와 함께, 추가적인 타입 IIS 효소가 제한 효소/리가제 연쇄 반응에 혼입되어야 한다. 이는 전장 TCR ORF를 조립하기 위한 재구성 반응의 복잡성 및 비용을 증가시킬 것이다.
각각 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 내의 제1 및 제2 양성 선택 마커는 일반적으로는 상이하다. 이는 최종 전장 TCR ORF 생성물의 골격을 제공하는 V-C 유입 벡터가 J 공여자 벡터와 독립적으로 선택될 수 있고, 따라서 소화되지 않거나 또는 재순환된 J 공여자 벡터를 보유하는 형질전환체(이것은 그렇지 않았다면 재구성 반응에 대한 배경에 기여했을 것임)를 제거하는 것을 보장하는 것이다(도 2 및 도 3, 및 실시예 7 참고).
양성 선택 마커는 하기로부터 선택될 수 있고:
a. 항생제 내성 유전자,
b. 영양요구체 보완 유전자(auxotroph complementing gene),
c. 리포터 유전자,
여기서 이러한 양성 선택 마커의 선택, 포맷팅 및 응용은 관련 기술 분야의 당업자에게 널리 공지되어 있다.
V-C 유입 벡터에 혼입된 5' 유전 요소는 하기로부터 선택된 1종 이상의 요소를 포함한다:
a. 유전자 시스/작용 요소,
b. 리콤비나제 효소에 대한 이종특이적 인식 부위,
c. 관심대상 게놈 부위에 대한 5' 상동 재조합 아암,
d. mRNA 스플라이스 수용자 부위,
e. 내부 리보솜 유입 부위 및
f. 후성적 인설레이터 서열,
여기서, a)는 V-C 유입 벡터 골격 내에 재구성된 전장 TCR ORF 생성물에 의해서 암호화된 전사물의 발현을 유도하고; b)는 V-C 유입 벡터 골격 내의 전장 TCR ORF 생성물 재구성물을 특이적 유전자 컨텍스트 내에 삽입하기 위해서 리콤비나제 효소의 존재 하에서 부위-지향된 재조합을 유도하는 서열을 나타내고; c)는 V-C 유입 벡터 골격 내에 재구성된 전장 TCR ORF 생성물을 특이적 유전자 컨텍스트 내에 삽입하기 위해서 부위-지향된 상동 재조합을 유도하는 서열을 나타내고; d)는 V-C 유입 벡터 골격에 재구성된 전장 TCR ORF로부터 발현된 단백질의 형태를 조작하기 위한 조작된 도메인-융합 접근법을 허용하고, e)는 V-C 유입 벡터 골격에 재구성된 전장 TCR ORF로부터 발현된 mRNA의 번역의 캡-독립적인 번역을 허용하고, f)는 V-C 유입 벡터 골격에 재구성된 전장 TCR ORF가 삽입될 수 있는 게놈 맥락에서 인핸서 요소에 의해서 달리 영향을 받은 전사 활성도의 격리를 허용한다.
재구성된 TCR ORF를 함유하는 상기 벡터가 포유동물 세포 내에 형질주입되는 경우, 시스/작용 요소가 실시예 1 및 실시예 3에 제공된 V-C 유입 벡터 골격 내에 재구성된 TCR의 일시적인 발현을 유도하기 위해서 사용될 수 있다.
재구성된 TCR ORF를 함유하는 상기 벡터가 적절한 리콤비나제 효소의 존재 하에서 포유동물 세포 내에 형질주입되는 경우, 리콤비나제 효소에 대한 이종특이적 인식 부위를 사용하여 실시예 4에 제공된 V-C 유입 벡터 골격 내에 재구성된 TCR의 리콤비나제 매개된 카세트 교환(recombinase mediated cassette exchange)을 허용할 수 있다.
V-C 유입 벡터에 포함된 제1 타입 IIS 인식 서열은, 상기 인식 서열의 5'를 절단하도록 배향되고, TCR 가변 유전자 분절 내에 존재하여(도 4a) 합성된 odeCDR3(도 4c)의 5' 단부에서의 것에 상보성인 가변 유전자 분절의 3' 단부에 단일-가닥 DNA 오버행을 생산한다(도 4g). 이러한 제1 타입 IIS 인식 서열이 설계되는 방법의 상세 사항에 대해서는 실시예 1, 3, 5 및 6을 참고하기 바란다,
V-C 유입 벡터는 제1 타입 IIS 인식 서열과 제2 타입 IIS 인식 서열 사이에 음성 선택 마커를 함유한다(하기 참고, 도 2). 이러한 음성 선택 마커는 하기로부터 선택되고:
a. 제1 성분에 또는 TCR 결합 유전자 분절 내의 다른 곳에는 함유되지 않은 제한 효소 인식 부위,
b. 박테리아 자살 유전자(bacterial suicide gene), 및
c. 리포터 요소,
여기서, 음성 선택 마커는 모체 V-C 유입 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 제거하여, V-C 유입 벡터 골격 내의 표적 TCR ORF를 함유하는 형질전환체를 선택하기 위해서 제1 양성 마커를 사용하는 경우 재구성 반응의 배경을 감소시키는 데 사용된다(실시예 7 참고).
음성 선택 마커 자체를 제외하고, 2-부분 시스템에서 모든 다른 서열은 시스템 내의 다른 곳에 이러한 서열을 포함시키는 것에 기초하여 과도한 음성 선택을 부여하지 않도록 상기 서열이 없어야 한다.
본 발명에서, V-C 유입 벡터에 포함된 제2 타입 IIS 인식 서열은 상기 인식 서열의 3'를 절단하도록 배향되고, TCR 불변 유전자 분절 내에 존재하여(도 4a) J 공여자 단편 반응 중간체(도 4f)의 3' 단부에서의 것에 상보성인 불변 유전자 분절의 5' 단부에 단일-가닥 DNA 오버행을 생산한다(도 4g). 이러한 제2 타입 IIS 인식 서열이 설계되는 방법의 상세 사항에 대해서는 실시예 1, 2, 3 및 5를 참고하기 바란다.
V-C 유입 벡터에 혼입된 3' 유전 요소는 하기로부터 선택된 1종 이상의 요소를 포함하고:
a. 종결인자 요소,
b. 리콤비나제 효소에 대한 이종특이적 인식 부위,
c. 관심대상 게놈 부위에 대한 3' 상동 재조합 아암,
d. mRNA 스플라이스 공여자 부위,
e. 내부 리보솜 유입 부위 및
f. 후성적 인설레이터 서열,
여기서, a)는 동소(in situ)에서 TCR ORF의 효과적인 mRNA 생산을 위한 전사 종결을 유도하는 서열을 나타내고, 폴리-A 신호를 암호화할 수 있고; b)는 V-C 유입 벡터 골격 내에 재구성된 전장 TCR ORF 생성물을 특이적 유전자 컨텍스트 내에 삽입하기 위해서 부위-지향된 상동 재조합을 유도하는 서열을 나타내고; c)는 V-C 유입 벡터 골격에 재구성된 전장 TCR ORF로부터 발현된 단백질의 형태 또는 TCR 발현 수준의 강도를 조작하기 위한 하류 mRNA 스플라이스 수용자 부위를 암호화하는 게놈 유전자좌 내로의 통합 이후에 전사 단위에 TCR ORF를 융합하는 것을 허용하고, e)는 V-C 유입 벡터 골격에 재구성된 전장 TCR ORF로부터 발현된 mRNA의 번역의 캡-독립적인 번역을 허용하고, f)는 인접한 염색질 도메인 간의 적절한 상호작용을 예방하고, 따라서 V-C 유입 벡터 골격 내의 재구성된 TCR ORF가 삽입될 수 있는 게놈 컨텍스트에서 이질염색질의 확산 또는 인접한 전사 조절로부터 전장 TCR ORF를 격리시킨다.
재구성된 TCR ORF를 함유하는 상기 벡터가 포유동물 세포 내에 형질주입되는 경우, 종결인자 요소가 실시예 1 및 실시예 3에 제공된 V-C 유입 벡터 골격 내에 재구성된 TCR의 발현 동안 전사 종결을 보장하기 위해서 사용된다.
재구성된 TCR ORF를 함유하는 상기 벡터가 적절한 리콤비나제 효소의 존재 하에서 포유동물 세포 내에 형질주입되는 경우, 리콤비나제 효소에 대한 이종특이적 인식 부위를 사용하여 실시예 4에 제공된 V-C 유입 벡터 골격 내에 재구성된 TCR의 리콤비나제 매개된 카세트 교환을 허용한다.
J 공여자 벡터는 J 유전자 분절의 3'에, C 유전자 분절의 5' 단편을 나타내는, C-부분 서열을 갖는 J 유전자 분절을 함유한다(도 3).
C-부분 서열은 J 공여자 벡터-유래된 J 단편 반응 중간체(도 4f)의 3' 단부에서의 타입 IIS 효소 작용 및 타입 IIS 소화된 개방 V-C 유입 벡터 반응 중간체(도 4g) 내의 C 유전자 분절의 5' 단부에서 것에 의해서 생성된 단일 가닥 오버행을 표준화하도록 설계된다.
J 공여자 벡터에 포함된 제3 타입 IIS 인식 서열은, 상기 인식 서열의 3'를 절단하도록 배향되고, TCR 결합 유전자 분절 내에 존재하여(도 4b) 합성된 odeCDR3(도 4c)의 5' 단부에서의 것에 상보성인 결합 유전자 분절의 5' 단부에 단일-가닥 DNA 오버행을 생산한다(도 4f). 이러한 제3 타입 IIS 인식 서열이 설계되는 방법의 상세 사항에 대해서는 실시예 2, 3, 5 및 6을 참고하기 바란다.
J 공여자 벡터에 포함된 제4 타입 IIS 인식 서열은 상기 인식 서열의 5' 및 TCR C-부분(도 4b) 내를 절단하도록 배향되어 5' 타입 IIS 소화된 개방 V-C 유입 벡터 반응 중간체(도 4g)에서의 것에 상보성인 C-부분의 3' 단부(도 4f)에서 단일-가닥 DNA 오버행을 생산한다. 이러한 제3 타입 IIS 인식 서열이 설계되는 방법에 대한 상세 사항은 실시예 1, 2, 3, 5 및 6을 참고하기 바란다.
모든 암호화된 TCR 유전자 분절 및 부분인 2-부분 벡터 시스템은 V-C 유입 벡터 또는 J 공여자 벡터의 작동 또는 조립을 위해서 사용되는 타입 IIS 인식 서열을 함유하지 않아야 한다. 이러한 서열의 포함은 암호화된 유전자 분절 또는 부분 내에서 타입 IIS 제한 효소 작용을 초래할 것이고, TCR 재구성 과정의 파괴를 초래한다. 유사하게, 타입 IIS 인식 서열은 이러한 벡터 내의 벡터 골격 또는 임의의 5' 유전 요소 및 3' 유전 요소에 포함되지 않아야 하고, 2-부분 벡터 시스템을 조립하는 데 사용되는 클로닝 단편에 포함되지 않아야 하고, 제3 시스템 성분을 나타내는 odeCDR3에 포함되지 않아야 한다(하기 참고).
TORES의 2-성분 벡터 시스템은 TCR 쇄의 임의의 수집물을 위해서 작제될 수 있다. 하기 실시예 1 내지 4에서, 2-성분 벡터 시스템은 각각 인간 TCR 알파 및 베타 쇄를 암호화하는, 인간 TRA 및 TRB 유전자좌를 위해서 작제된다. 이러한 TORES의 작제는 각각 TCR 델타 및 감마 쇄 쌍을 암호화하는, TRD 및 TRG 유전자좌 또는 실제로 턱이 있는 척추동물에서 발견되는 임의의TRA/TRB, TRD/TRG 또는 변이체 TCR 쇄 쌍 시스템의 맥락에서 동등하게 적용 가능하다.
제3 odeCDR3 성분
임의의 주어진 TORES를 사용하여 전장 TCR ORF를 재구성하기 위해서, 2-성분 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 시스템에 의해서 암호화되지 않는 작은 ORF 단편이 제3 성분으로서 요구된다. 이러한 제3 성분은 CDR3을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스(odeCDR3)의 형태를 갖는다.
이러한 제3 성분, odeCDR3는 하기를 포함한다:
a. 인식 서열의 5'를 절단하도록 배향되고, V-C 유입 벡터의 TCR 가변 유전자 분절 내에 존재하는 제1 타입 IIS 제한 효소 인식 및 절단 부위에 상보성인 제1 단일 가닥 오버행 서열,
b. TCR CDR3 영역을 암호화하고, 음성 선택 요소(음성 선택 요소는 항목 10에 정의된 바와 같고, 또한 제1 부분 또는 제2 부분의 임의의 타입 IIS 제한 서열이 없음)가 없는 이중 가닥 분절,
c. 인식 서열의 3'를 절단하도록 배향되고, J 공여자 벡터의 TCR 결합 유전자 분절 내에 존재하는 제3 타입 IIS 제한 효소 인식 및 절단 부위에 상보성인 제2 단일 가닥 오버행 서열.
대안적으로, odeCDR3은, 소화되는 경우 상기에 기술된 a, b 및 c로 구성된 생성물이 생성되도록 배향된, 제1(V-C 유입 벡터) 또는 제2(J 공여자 벡터) 성분과 일치하는 2종의 타입 IIS 효소에 의해서 측접된 CDR3을 암호화하는 dsDNA 분자, 및 타입 IIS 부위가 측접된 짧은 dsDNA 단편을 암호화하는 2종의 부산물로 구성될 수 있다. 이러한 대안적인 dsDNA odeCDR3은 제한 효소/리가제 반응과 상용성이지만, 사전 소화 또는 가공이 반드시 필요한 것은 아니다.
TORES에서의 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 구성에 대한 대안으로서, 동일한 개념적 프레임워크를 적용함으로써 J-C 유입 벡터 및 V 공여자 벡터 구성이 또한 사용될 수 있다.
전장 TCR ORF를 재구성하기 위해서 TORES를 사용하는 방법
실시예 7에서 인간 TRA/TRB 쇄 쌍에 대해서 제공된 바와 같이, TORES를 사용하여 서열 정보로부터, 유전자 벡터 컨텍스트 내에서 전장 TCR ORF를 재구성할 수 있다.
TORES를 작동시켜 서열 정보로부터의 전장 TCR ORF를 재구성하기 위해서, 주어진 TCR 쇄에 대한 2-성분 벡터 시스템의 자원을 고려하여, 방법은 하기 단계를 포함하며:
a. V-C 유입 벡터를 선택하는 단계,
b. J 공여자 벡터를 선택하는 단계,
c. odeCDR3을 선택하는 단계,
d. a, b 및 c를 조합하여 i) V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 내에 존재하는 모든 타입 IIS 제한 효소 인식 및 절단 부위를 절단하기 위한 타입 IIS 제한 효소(들) 및 ii) DNA 리가제 효소와 반응시키고, iii) 조합된 믹스를 열순환 반응(thermocycling reaction)에 적용하는 단계,
e. 단계 d로부터 획득된 반응 생성물을 DNA 벡터 증식에 대해서 수용성인 선택 가능한 숙주 유기체에 대해서 형질전환시키는 단계, 및
f. 숙주 유기체의 선택을 수행하여 V-C 유입 벡터 골격 내에 전장의 재구성된 TCR 오픈 리딩 프레임을 수득하는 단계,
여기서, a) 및 b)는 표적 전장 TCR ORF 내의 V, J 및 C 유전자 분절을 암호화하는 선택된 벡터를 기초로 선택되고; c)는 a) 및 b)에서 선택된 V-C 유입 또는 J 공여자 벡터에 의해서 암호화되지 않고, 그 내의 암호화된 가변 및 결합 분절에 의해서 결합되지 않은 전장 TCR ORF 서열의 완성을 기초로 선택되고; d)는 3종 선택된 성분을, V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 내의 제1, 제2, 제3 및 제4 타입 IIS 제한 효소 인식 서열을 절단할 제한 효소와 함께 반응 혼합물로 조합하고; e)는 일반적으로 형질전환-수용성 박테리아를 나타내고; f) 숙주의 선택은 V-C 유입 벡터 골격에 의해서 제공된 제1 양성 선택 마커를 기초로 한다.
일반적으로, 재구성을 위해서 전장 TCR ORF의 유전 요소를 선택 및 정의하기 위한 작업 흐름은 표적 유기체 조직으로부터의 TCR 쇄의 신규 서열결정을 동반한다. 하기 실시예 8은 HLA-B*07:02 제한된 컨텍스트에서 HCMV 항원에 특이적인 TRA/TRB 쇄 쌍의 세트의 신규 식별을 제공한다. 도 13에 기재된 작업 흐름은, 분류된 단일 세포로부터의 TCR 쇄 쌍의 역전사 및 PCR 기반 증폭과 후속 생어(Sanger) 서열결정을 포함한다. 사용된 특이적 서열결정 접근법(들)을 설명하는, TCR ORF의 V, CDR3, J 및 C 분절에 연장된 고품질 서열 정보에 대한 요건이 존재한다.
따라서 TCR 오픈 리딩 프레임을 선택 및 재구성하는 방법은 하기 단계를 포함하며:
a. TCR 오픈 리딩 프레임 서열을 획득하는 단계로서, 상기 서열 정보는 i) 가변 유전자 분절 사용 ii) 불변 유전자 분절 사용 iii) 결합 유전자 분절 사용 iv) 가변 유전자 분절 가장자리를 결합 유전자 분절 가장자리에 연장하는 완전 CDR3 서열을 식별하기에 충분한, 상기 획득하는 단계,
b. 각각 단계 a. i) 및 a. ii)에서 식별된 가변 유전자 분절 및 유전자 분절에 상응하는 V-C 유입 벡터를 선택하는 단계, 및
c. 단계 a, iii)에서 식별된 결합 유전자 분절에 상응하는 J 공여자 벡터를 선택하는 단계, 및
d. 단계 a. iv)에서 식별된 CDR3 서열에 상응하는 odeCDR3을 생성시키는 단계, 및
e. b, c 및 d를 조합하여 i) V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 내에 존재하는 모든 타입 IIS 제한 효소 인식 및 절단 부위를 절단하기 위한 타입 IIS 제한 효소(들) 및 ii) DNA 리가제 효소와 반응시키고, iii) 조합된 믹스를 열순환 반응에 적용하는 단계, 및
f. 단계 e로부터 획득된 반응 생성물을 플라스미드 복제에 대해서 수용성인 선택 가능한 숙주 유기체에 대해서 형질전환시키는 단계, 및
g. 숙주 유기체의 선택을 수행하여 V-C 유입 벡터 골격 내에 전장의 재구성된 TCR 오픈 리딩 프레임을 획득하는 단계,
여기서, a)는 모든 4종의 요구되는 유전 요소를 식별하기에 충분한 서열 길이 및 품질을 획득할 수 있는, 관련 기술 분야의 당업자에게 널리 공지된 서열결정 방법에 의해서 수행되고; b) 및 c)는 요구된 벡터를 함유하는 TORES 라이브러리로부터 선택되고; d)는 신규로 합성되거나 또는 odeCDR3 라이브러리로부터 선택되고; e)는 단일 반응 용기에서 수행된다.
적절한 V-C 유입 벡터, J 공여자 벡터 및 odeCDR3을 선택하기 위해서, 표적 TCR 서열을 상응하는 TCR 쇄를 위한 V, C 및 J 유전자 분절의 라이브러리에 대해서 정렬하여 표적 쇄의 V, C 및 J 분절 사용을 결정하였다. 이러한 서열 정렬 및 분석 단계는 또한 CDR3 암호 서열의 정의 및 이에 따라서 odeCDR3 서열의 정의를 허용해야 한다. 따라서, 전체 이러한 서열 분석은 TCR 쇄 재구성을 위한 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터의 선택을 허용한다. 분석은 또한 각각의 쇄 재구성 반응을 위한 odeCDR3의 합성을 허용한다. 이러한 과정은 실시예 8에 양호하게 기재되며, 도 13의 부분으로서 요약된다.
타입 IIS 소화 및 DNA 리가제-의존적 결찰(단계 e)을 단일 연쇄 반응으로 수행하는 것이 바람직하다. 이것은 가공 단계를 최소화하고, 이의 인식 서열 외부를 절단하는 타입 IIS 제한 효소를 사용하여, 시스템의 설계가 가능해져서, 고유한 오버행이 단일 효소를 사용하여 생성되어, V-C 유입 벡터 골격 내에서의 J 공여자 벡터 반응 중간체 및 odeCDR3의 효율적인 지향성 클로닝을 유지시킬 수 있다.
대안적으로, 타입 IIS 제한 소화 및 DNA 결찰은 순차적인 절차로 수행될 수 있다.
실시예 8에서, TORES의 일반적인 응용은, TRA/TRB TCR 쇄 쌍의 역전사 및 PCR 기반 증폭, 그 다음 생어 서열결정을 위한, 인간 말초 혈액으로부터의 항원-특이적 CD8 T-세포의 단일-세포 형광-활성화 세포 분류(FACS)의 맥락에서 예시되어 있다. 이것은 일반적으로 응용 가능한 작업 흐름이며, 여기서 임의의 조직은 임의의 턱이 있는 척추동물로부터의 T-세포의 공급원일 수 있고, 세포는 임의의 표현형 특징을 기반으로 분류될 수 있다. 중요하게는, 단일-분류된 세포는 HLA-다량체 시약을 사용하여 항원 특이성에 대해서 염색될 필요가 없다.
사용되는 TCR 서열결정 접근법은 임의의 특정 방법 또는 기술로 제한되지 않되, 단 충분한 고품질 서열 정보가 획득되어 TCR ORF(들)의 상기에 정의된 유전학적 특징은 상기 서열 정보를 기초로 정의될 수 있어야 한다.
네이티브 TCR 쇄 쌍이 서열결정 및 식별될 수 있도록 단일 세포를 분할하기 위한 FACS의 사용은 다중-특이성 항체 패널을 사용하여 수집될 수 있는 정확하고 풍부한 표현형 정보로 인해서 강력한 방법이다. 그러나, 에멀션 PCR; 마이크로유체 세포 캡슐화를 사용하는 디지털 PCR 접근법, 물리학적 분할 기질을 사용하는 디지털 PCR을 비롯한, 세포를 분할하기 위한 다른 방법이 존재한다.
공급 물질로부터의 네이티브 TCR 쌍을 획득하는 것이 일반적으로 바람직한데, 그 이유는 TCR 쌍의 두 쇄가 HLA-항원 맞물림 및 인식에 기여하기 때문이다. 그러나, 단지 단일 쇄의 회수가 바람직한 예, 예컨대, 세트 특이성에 대한 단일 쇄의 고처리율 스크리닝이 존재한다. 이러한 경우에, TCR은 비분할된 세포로부터 증폭 및/또는 서열결정될 수 있다.
다양화된 서열을 갖는 전장 TCR ORF를 생성시키기 위해서 TORES를 사용하는 방법
TORES 시스템은 몇몇 체계적인 모드로 다양화된 전장 TCR ORF를 생성시키기에 이상적으로 적합하다. 이러한 체계적인 다양화는 TCR 쇄에 대한 친화성 및/또는 기능성 성숙 작업 흐름에 적용될 수 있다. 표적 TCR 쇄 서열의 이러한 다양화를 실시예 9 및 10에 기술한다.
이러한 TCR ORF 서열 다양화 방법은 재구성 반응과 동일한 일반적인 반응을 따른다. 다양화는 다수의 동시 재구성 반응으로 수행될 수 있는데, 이에 의해서 반응당 단일 변이체 TCR ORF가 생성된다. 그러나, 대부분의 시나리오에서, 변이체 TCR ORF의 풀을 단일 반응으로 생성시키는 것이 바람직하다. 이러한 접근법 각각은 각각의 유전 성분(들)(V-C 유입 벡터, J 공여자 벡터, odeCDR3) 중 하나 이상의 다수의 변이체를 재구성 반응에 제공함으로써 달성된다.
실시예 9에 기술된 바와 같이, TCR ORF는, 정의된 위치적인 서열 다양성을 갖는 odeCDR3의 풀을 첨가함으로써 CDR3 영역에서 체계적으로 다양화될 수 있다.
따라서 TCR 오픈 리딩 프레임을 선택 및 재구성하여 CDR3 영역에서 TCR ORF 다양성을 달성하는 방법은 하기 단계를 포함하며:
a. TCR 오픈 리딩 프레임 서열을 획득하는 단계로서, 상기 서열 정보는 i) 가변 유전자 분절 사용 ii) 불변 유전자 분절 사용 iii) 결합 유전자 분절 사용 iv) 가변 유전자 분절 가장자리를 결합 유전자 분절 가장자리에 연장하는 완전 CDR3 서열을 식별하기에 충분한, 상기 획득하는 단계,
b. 각각 단계 a. i) 및 a. ii)에서 식별된 가변 유전자 분절 및 유전자 분절에 상응하는 V-C 유입 벡터를 선택하는 단계, 및
c. 단계 a, iii)에서 식별된 결합 유전자 분절에 상응하는 J 공여자 벡터를 선택하는 단계, 및
d. 변이체 서열 조성물을 사용하여, 단계 a. iv)에서 식별된 CDR3 서열에 상응하는 2개 이상의 odeCDR3을 생성시키는 단계, 및
e. b, c 및 d를 조합하여 i) V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 내에 존재하는 모든 타입 IIS 제한 효소 인식 및 절단 부위를 절단하기 위한 타입 IIS 제한 효소(들) 및 ii) DNA 리가제 효소와 반응시키고, iii) 조합된 믹스를 열순환 반응에 적용하는 단계, 및
f. 단계 e로부터 획득된 반응 생성물을 플라스미드 복제에 대해서 수용성인 선택 가능한 숙주 유기체에 대해서 형질전환시키는 단계, 및
g. 숙주 유기체의 선택을 수행하여 V-C 유입 벡터 골격 내에 전장의 재구성된 TCR 오픈 리딩 프레임을 획득하는 단계,
여기서, a)는 모든 4종의 요구되는 유전 요소를 식별하기에 충분한 서열 길이 및 품질을 획득할 수 있는, 관련 기술 분야의 당업자에게 널리 공지된 서열결정 방법에 의해서 수행되고; b) 및 c)는 요구된 벡터를 함유하는 TORES 라이브러리로부터 선택되고; d)는 신규로 합성되거나 또는 odeCDR3 라이브러리로부터 선택되고; e)는 단일 반응 용기에서 수행된다.
이러한 방법은 모든 odeCDR3 변이체를 단일 반응에 대해서 풀링시켜 서열-다양화된 풀을 생성시킴으로써 달성될 수 있지만, 각각의 odeCDR3 변이체를 동시 반응에 제공함으로써 동등하게 달성될 수 있다.
변이체 odeCDR3은 관련 기술 분야의 당업자에게 널리 공지된 다양한 방법을 통해서 생성될 수 있다. odeCDR3 축중/다양성의 위치 및 정도의 선택은 단일 위치에서의 단일 자기 변화에서, odeCDR3의 길이에 대해서 서열을 완전히 축중시키는 것까지의 범위일 수 있다.
실시에 10에 기재된 바와 같이, TCR ORF는 odeCDR3의 제공을 통해서 CDR3 영역을 유지시킴으로써, 그러나 V-C 유입 벡터 및/또는 J 공여자 벡터 중 둘 이상을 재구성 반응에 제공함으로써 V, C 및 J 분절 사용을 다양화함으로써 체계적으로 다양화될 수 있다.
따라서 다양화된 V, C 및/또는 J 분절을 사용하여 TCR 오픈 리딩 프레임을 선택 및 재구성하는 방법은 하기 단계를 포함하며:
a. TCR 오픈 리딩 프레임 서열을 획득하는 단계로서, 상기 서열 정보는 i) 가변 유전자 분절 사용 ii) 불변 유전자 분절 사용 iii) 결합 유전자 분절 사용 iv) 가변 유전자 분절 가장자리를 결합 유전자 분절 가장자리에 연장하는 완전 CDR3 서열을 식별하기에 충분한, 상기 획득하는 단계,
b. 각각 단계 a. i) 및 a. ii)에서 식별된 가변 유전자 분절 및 유전자 분절에 상응하지 않는 2종 이상의 V-C 유입 벡터를 선택하는 단계, 및
c. 단계 a, iii)에서 식별된 결합 유전자 분절에 상응하지 않는 2종 이상의 J 공여자 벡터를 선택하는 단계, 및
d. 단계 a. iv)에서 식별된 CDR3 서열에 상응하는 odeCDR3을 생성시키는 단계, 및
e. b, c 및 d를 조합하여 i) V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 내에 존재하는 모든 타입 IIS 제한 효소 인식 및 절단 부위를 절단하기 위한 타입 IIS 제한 효소(들) 및 ii) DNA 리가제 효소와 반응시키고, iii) 조합된 믹스를 열순환 반응에 적용하는 단계, 및
f. 단계 e로부터 획득된 반응 생성물을 플라스미드 복제에 대해서 수용성인 선택 가능한 숙주 유기체에 대해서 형질전환시키는 단계, 및
g. 숙주 유기체의 선택을 수행하여 V-C 유입 벡터 골격 내에 전장의 재구성된 TCR 오픈 리딩 프레임을 획득하는 단계,
여기서, a)는 모든 4종의 요구되는 유전 요소를 식별하기에 충분한 서열 길이 및 품질을 획득할 수 있는, 관련 기술 분야의 당업자에게 널리 공지된 서열결정 방법에 의해서 수행되고; b) 및 c)는 요구된 벡터를 함유하는 TORES 라이브러리로부터 선택되고; d)는 신규로 합성되거나 또는 odeCDR3 라이브러리로부터 선택되고; e)는 단일 반응 용기에서 수행된다.
이러한 방법은 모든 V-C 유입 벡터 및/또는 J 공여자 벡터 변이체를 단일 반응에 대해서 풀링시켜 서열-다양화된 풀을 생성시킴으로써 달성될 수 있지만, 각각의 벡터 변이체를 동시 반응에 제공함으로써 동등하게 달성될 수 있다.
주어진 라이브러리로부터의 각각의 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터는 V, C 및 J 유전자 분절의 완전 커버리지를 제공하도록 선택될 수 있다.
상기에 기술된 CDR3 및 V, C 및 J 다양화의 임의의 조합을 사용하여 다양화된 TCR ORF의 풀 또는 라이브러리를 생성시킬 수 있다.
이러한 시스템을 사용하여 네이티브 V, C 및 J 유전자 분절 사용의 완전 커버리지 및 정의된 CDR3 특징을 갖는 TCR ORF의 합성 라이브러리를 전적으로 생성시킬 수 있다.
재구성 및 다양화 방법과 관련된 TORES의 특징부
상기에 언급된 바와 같이, 단일 타입 IIS 제한 효소를 사용하여 조립 연쇄 반응을 수행하는 것이 바람직하다. 이것은 제한 효소의 사용을 절약하고, 2-성분 벡터 시스템 및 odeCDR3에서 고유한 단일 가닥 오버행의 설계 및 타입 IIS 작용의 특징에 의해서 가능해진다.
대안적으로, V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터의 4종의 타입 IIS 인식 부위에 걸쳐서 최대 4종의 타입 IIS 제한 효소 인식 서열이 존재한다.
TCR ORF 생성물의 효율적인 클로닝을 위해서, TORES를 사용하는 전장 TCR ORF의 조립 동안, 하기 단계로부터 선택된, 음성 선택 중 적어도 하나의 단계가 수행되며:
a. 반응 생성물의 제한 효소 소화를 수행하여 모체 V-C 유입 벡터를 제거하는 단계,
b. 자살 유전자 선택을 수행하여 모체 V-C 유입 벡터로 형질전환된 수용성 숙주를 제거하는 단계, 및/또는
c. 리포터 식별의 방식에 의해서 모체 V-C 유입 벡터로 형질전환된 숙주 세포의 선택을 수행하는 단계,
여기서 음성 선택을 사용하여 타입 IIS 효소(들)에 의해서 소화되지 않고 남아있거나 또는 소화 후에 모체 형태로 재결찰된 모체 V-C 유입 벡터를 제거한다.
V-C 유입 벡터 골격, 및 이에 따라서 이러한 골격에 보유된 양성 선택 마커가 전장 TCR ORF 반응 생성물을 함유하는 양성 선택을 위해서 사용된다는 것을 고려할 때, 모체 V-C 유입 벡터의 제거가 중요하다.
본 발명에서, 음성 선택은 V-C 유입 벡터로부터 절제된 반응 부산물(도 4d) 내에 설계된 제한 효소 부위를 사용하여 수행된다. 이러한 음성 선택 절차를 실시예 7 및 8에 기술한다.
상기에 언급된 음성 선택 방법 중 임의의 하나 또는 조합을 사용하여 최종 클로닝된 생성물로부터 모체 V-C 유입 벡터를 제거할 수 있다. 이러한 음성 선택 절차는, 클로닝 효율이 클로닝된 반응 생성물의 효율적인 회수를 위해서 충분히 높은 경우에는, 생략될 수 있다.
최종 클로닝된 생성물을 획득하기 위해서 형질전환된 숙주 유기체 내에 벡터를 함유하는 클로닝된 전장 TCR ORF의 선택이 요구된다. 이러한 선택은 관련 기술 분야의 당업자에게 공지되어 있다.
숙주 유기체는 형질전환 수용성 박테리아를 나타내고, V-C 유입 벡터 골격 내에 함유된 전장 TCR ORF를 함유하는 형질전환체의 선택은 항생제 선택을 포함한다. 이것은 항생제를, 형질전환된 세포가 존재하는 배양계에 첨가하는 것을 포함하고, 이러한 항생제에 대한 내성은 V-C 유입 벡터 골격에서 제1 양성 선택 마커로서 표현되는 유전자에 의해서 암호화된다.
대안적으로, 형질전환체가 위치된 배양계의 영양요구성(auxotrophic) 인자는 양성 선택의 형태일 수 있고, 여기서 영양요구성 상보성은 V-C 유입 벡터 골격에 암호화된 유전자 산물에 의해서 부여된다. 상기에 기술된 양성 선택의 조합이 사용될 수 있다.
TORES를 포함하는 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 라이브러리
선택된 TCR ORF의 재구성 또는 다양화를 수행하기 위한 TORES의 효율적인 작동을 위해서, V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 라이브러리의 사전 작제가 요구된다. 그것은, 각각의 TCR 쇄 형태에 특이적인 이러한 라이브러리로부터 유래하는데, 선택이 수행되어 odeCDR3 서열과 상보성인 경우, 표적 TCR ORF 서열의 V/J/C 사용을 충족시킨다.
V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 라이브러리는 이러한 TCR을 갖는 유기체의 모든 생식계열 TCR 가변, 불변 및 결합 유전자 분절을 함유하도록 작제될 수 있다. 이러한 라이브러리는 또한 실시예 3에 제공된 TRB 유전자좌 특이적 TORES에 대해서, V-C 유입 벡터 내에 모든 V-C 조합을 포함할 수 있고, 여기서 라이브러리는 각각의 가변 분절에 대해서 불변 유전자 분절 둘 모두를 사용하여 복제된다.
V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터의 라이브러리는 V/J/C 유전자 분절을 함유하여, 암호화된 단백질의 번역된 아미노산 서열은 생식 계열 유전자 분절에 의해서 암호화된 단백질 서열과 관련하여 비변형될 수 있다.
이러한 라이브러리는, 라이브러리를 생성시키도록 근본적인 핵산 서열에서 변화를 허용한다(그렇지 않았으면 원치 않은 타입 IIS 인식 서열, 또는 양성 및 음성 선택 요소가 없을 것임). 근본적인 핵산 서열의 변화는 또한 상이한 숙주 유기체로부터의 세포 내의 재구성된 TCR 쇄의 발현을 위한, 코돈 최적화를 위해서 사용될 수 있다.
대안적으로, V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터의 라이브러리는 V/J/C 유전자 분절을 함유하여, 암호화된 단백질의 번역된 아미노산 서열은 생식 계열 유전자 분절에 의해서 암호화된 단백질 서열과 관련하여 변형될 수 있다.
이러한 라이브러리를 사용하여 상이한 진단 또는 치료 용도를 위해서 최적화된 특징을 갖는 TCR을 작제할 수 있다. V/J/C 유전자 분절 내의 프레임워크 잔기 또는 영역에서의 변화를 사용하여 다양한 시나리오, 예컨대 가용성 시약으로서의 TCR의 발현에서 발현 또는 안정성을 증가시킬 수 있다. 유사하게, 직접 HLA-항원 접촉부에 관련되지 않은 프레임워크 영역에서의 변경을 사용하여 TORES에 의해서 생산된 재구성된 TCR의 신호전달 능력을 변경시킬 수 있다. 친화성 태그 또는 면역원성 서열은 또한 하류 응용에서 재구성된 TCR의 정제 및/또는 검출에 도움을 주기 위해서 프레임영역 내에 암호화될 수 있다.
V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 라이브러리는 하기의 조합물을 포함하는 키트 내에 조립될 수 있고:
a. 가변 유전자 분절 및 불변 유전자 분절의 조합물을 암호화하는 1종 이상의 V-C 유입 벡터, 및
b. J 유전자 분절을 암호화하는 1종 이상의 J 공여자 벡터, 및 선택적으로
c. 양성 대조군 odeCDR3으로서 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 단일 가닥 오버행에 매칭된 단일 가닥 오버행을 갖는 1종 이상의 표준화된 odeCDR3, 및 선택적으로
d. 참조군으로서의 사전 조립된 전장,
여기서, a) 및 b)는 의도된 응용에 상응하는 비변형된 또는 변형된 아미노산 서열을 갖는, 표적 유기체로부터의 유전자 분절의 요구되는 유전학적 다양성을 포함하고; c)는 재구성 반응에서 양성 대조군으로서 사용되고, d)는 상기 키트에 제공된 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 라이브러리로 구성된 전장 TCR ORF의 하류 응용에서 양성 대조군으로서 사용된다.
V-C 유입 벡터의 작제 방법
V-C 유입 벡터 라이브러리와 J 공여자 벡터 라이브러리의 조립은 요구되는 벡터의 직접 DNA 합성을 비롯한, 당업자에게 널리 공지된 다양한 분자 생물학 방법에 의해서 달성될 수 있다. 그러나, 작은 유전자 분절-함유 단편을 사용하는 신속하고 비용 효과적인 조합 접근법이 바람직하다. 이러한 방법은 TCR 조작 작업 흐름에 중요한 V-C 유입 벡터 형태 및 J 공여자 벡터 형태의 신속한 순환을 허용한다. 유사하게, 주어진 V-C 유입 벡터 및/또는 J 공여자 벡터 라이브러리의 신속한 확장을 사용하여 단일 뉴클레오타이드 다형성(single nucleotide polymorphism) 및 주어진 집단의 개체 간의 TCR 유전자 분절의 다른 대립유전자 차이를 설명할 수 있는데, 이것은 유사-동종이계(pseudo-allogeneic) 치료 맥락에서 기능적 중요성을 갖거나 또는 TCR 서열의 면역원성에 영향을 미칠 수 있다. V-C 유입 벡터와 J 공여자 벡터 라이브러리의 체계적인 조립 방법을 실시예 1, 2 및 3에 적절하게 기재한다.
V-C 유입의 작제 방법은 하기로부터 선택된 3개의 DNA 성분을 조합하는 것을 포함하며:
a. 가변 유전자 분절 클로닝 단편
b. 불변 유전자 분절 클로닝 단편
c. V-C 유입 벡터 골격,
여기서, a)는 가변 유전자 분절을 함유하고; b)는 불변 유전자 분절을 함유하고; c)는 가변 유전자 단편과 불변 유전자 단편이 조립되는 V-C 유입 벡터 골격을 나타낸다.
본 발명에서, 가변 유전자 분절 클로닝 단편은 하기를 포함하며:
a. 단편의 중합효소 연쇄 반응 의존적 증식을 위한 5' 프라이머 결합 서열
b. 3' 방향으로 절단하도록 배향된 제5 타입 IIS 서열
c. b.의 제5 타입 IIs 서열에 대한 타입 IIs 효소 작용 시 정의된 단일 가닥 오버행을 암호화하는 제1 오버행 서열
d. 코작 서열
e. TCR 가변 유전자 분절
f. 제1 타입 IIS 서열
g. 음성 선택 마커의 5' 서열 분절
h. 단일 가닥 오버행이 g.의 음성 선택 마커의 5' 서열 분절 내에 생성되도록 5' 방향으로 절단하도록 배향된 제6 타입 IIS 서열
i. 단편의 중합효소 연쇄 반응 의존적 증식에 대한 3' 프라이머 결합 서열,
여기서, b) 및 h)는 V-C 유입 벡터의 조립에 사용되는 타입 IIS 서열을 암호화하고; f)는 재구성 반응의 작동에 사용되는 타입 IIS 서열을 암호화하고; g)는 불변 유전자 분절 클로닝 단편에 제공된 상보성 단편에 의해서 완성된 음성 선택 마커 서열의 단편을 나타낸다.
가변 유전자 분절 클로닝 단편의 개략적인 표현을 도 5에 제공한다. 실시예 1 및 실시예 3은 각각 인간 TRA 및 TRB 유전자좌에 대한 V-C 유입 벡터를 조립하기 위한 이러한 클로닝 단편의 포맷 및 사용을 기재한다.
이들 실시예는 인간 TRA 가변 유전자 분절 클로닝 단편을 SEQ0001 내지 SEQ0046으로서, 그리고 인간 TRB 가변 유전자 분절 클로닝 단편을 SEQ0435 내지 SEQ0481로서 정의한다.
V-C 유입 벡터를 조립하기 위해서, 가변 유전자 분절 클로닝 단편은 불변 유전자 분절 클로닝 단편과 조합되어야 한다.
불변 유전자 분절 클로닝 단편은 하기를 포함하며:
a. 단편의 중합효소 연쇄 반응 의존적 증식을 위한 5' 프라이머 결합 서열
b. 단일 가닥 오버행이 c.의 음성 선택 마커의 3' 서열 분절 내에 생성되도록 3' 방향으로 절단하도록 배향된 제7 타입 IIS 서열
c. 음성 선택 마커의 3' 서열 분절
d. 제2 타입 IIS 서열
e. TCR 불변 유전자 분절
f. g.의 제8 타입 IIs 서열에 대한 타입 IIs 효소 작용 시 정의된 단일 가닥 오버행을 암호화하는 제2 오버행 서열
g. 단일 가닥 오버행이 f.의 오버행에 생성되도록 5' 방향으로 절단하도록 배향된 제8 타입 IIS 서열
h. 단편의 중합효소 연쇄 반응 의존적 증식에 대한 3' 프라이머 결합 서열,
여기서, b) 및 g)는 V-C 유입 벡터의 조립에 사용되는 타입 IIS 서열을 암호화하고; g)는 재구성 반응의 작동에 사용되는 타입 IIS 서열을 암호화하고; c)는 가변 유전자 분절 클로닝 단편에 제공된 상보성 단편에 의해서 완성된 음성 선택 마커 서열의 단편을 나타낸다.
가변 유전자 분절 클로닝 단편의 개략적인 표현을 도 6에 제공한다. 실시예 1 및 실시예 3은 각각 인간 TRA 및 TRB 유전자좌에 대한 V-C 유입 벡터를 조립하기 위한 이러한 클로닝 단편의 포맷 및 사용을 기재한다.
이들 실시예는 인간 TRB 불변 유전자 분절 클로닝 단편을 SEQ0047로서, 그리고 인간 TRB 불변 유전자 분절 클로닝 단편을 SEQ0482 및 SEQ0483으로서 정의한다.
가변 유전자 분절 및 불변 유전자 분절 클로닝 단편은 V-C 유입 벡터 골격 내에 조합되어 V-C 유입 벡터를 조립한다.
V-C 유입 벡터 골격은 하기를 포함하며:
a. 복제 기점
b. 제1 양성 선택 마커
c. 5' 유전 요소
d. 조립 반응 동안 타입 IIS 작용에 의해서 가변 유전자 분절 클로닝 단편 내에 생성된 오버행과 상보성인 단일 가닥 오버행을 생성시키기 위한 골격의 소화를 허용하는 제1 제한 효소 인식 서열
e. 조립 반응 동안 타입 IIS 작용에 의해서 불변 유전자 분절 클로닝 단편을 생성시키기 위한 골격의 소화를 허용하는 제2 제한 효소 인식 서열
f. 3' 유전 요소,
여기서, c) 및 f)는 상기에 언급된 바와 같은 상이한 생물학적 시스템에서 재구성된 TCR ORF의 응용을 위해서 사용되는 유전 요소를 나타낸다.
V-C 유입 벡터 골격의 개략적인 표현을 도 7에 제공한다. 실시예 1, 3 및 4는 각각 TRA 및 TRB 유전자좌에 대한 V-C 유입 벡터를 조립하기 위한 상이한 V-C 유입 벡터 골격 형태의 포맷 및 사용을 기재한다.
포유동물 세포에서 재구성된 TCR ORF의 하류의 일시적인 발현을 위해서 사용되는 V-C 유입 벡터 골격은 SEQ0048로 정의되는 반면, 재구성된 TCR ORF의 리콤비나제 매개된 카세트 교환을 위해서 사용되는 한 쌍의 V-C 유입 벡터 골격은 SEQ0688 및 SEQ0689로 정의된다.
가변 및 불변 유전자 클로닝 단편의 상이한 V-C 유입 벡터 골격으로의 신속한 순환은 주어진 V/J/C 조합물로부터 재구성된 TCR ORF의 벡터 컨텍스트의 특징을 변경시키기 위한 비용 효과적인 접근법이다. 이것은 네이티브 또는 합성 TCR 유전자 분절 라이브러리의 재작업(re-tasking)을 상이한 생물학적 응용으로 신속하게 복제하게 한다.
본 명세서에 언급된 가변 유전자 분절 및 불변 유전자 분절 클로닝 단편 및 V-C 유입 벡터 골격의 예에서, 벡터 조립을 위해서 사용되는 타입 IIS 효소는 BbsI인 반면, TCR ORF 재구성을 위해서 사용되는 타입 IIS 효소는 BsaI이다. V-C 유입 벡터 골격은 BbsI 작용에 의해서, 각각 가변 및 불변 유전자 클로닝 단편에 생성된 5' 오버행 및 3' 오버행을 갖는 상용성 오버행을 생성시키기 위해서, Acc65I 및 XbaI에 대한 제한 효소 인식 부위를 함유한다.
제한 효소의 임의의 다른 조합물이 조립 및 재구성 반응을 위해서 사용될 수 있되, 단 이것은 상기에 기재된 기준을 충족해야 한다.
바람직하게는, 상기 제5, 제6, 제7 및 제8 타입 IIS 서열로 지정된, V-C 유입 벡터의 조립에 사용되는 타입 IIS 서열은 동일하다.
대안적으로, 최대 4종의 상이한 타입 IIS 인식 서열이 이러한 절차를 위해서 사용될 수 있다.
상기 제5, 제6, 제7 및 제8 타입 IIS 서열로 지정된, V-C 유입 벡터의 조립에 사용되는 타입 IIS 서열은 상기 제1, 제2 제3 및 제4 타입 IIS 서열로 지정된 재구성 반응을 위해서 사용되는 것과 상이해야 한다.
가변 유전자 분절 및 불변 유전자 분절 클로닝 단편과 V-C 유입 벡터 골격을 조합하여 V-C 유입 벡터를 조립하는 방법은 실시예 1 및 3에 양호하게 기재되어 있다.
V-C 유입 벡터의 조립 방법은,
a. V-C 유입 벡터 골격을 V-C 유입 벡터 골격 내에 함유된 인식 서열에 대해서 특이적인 2종의 제한 효소로 소화시키는 단계
b. 소화된 V-C 유입 벡터 골격을, 제5, 제6, 제7 및 제8 타입 IIS 서열을 인식하는 1종 이상의 타입 IIS 제한 효소(들) 및 DNA 리가제 효소와 함께, V 클로닝 단편 및 C 클로닝 단편과 조합하고, 조합된 믹스를 열순환 반응에 적용하는 단계, 및
c. 생성된 반응 생성물을 수용성 숙주 유기체 내에서 형질전환시키고, 상기 제1 양성 선택 마커를 사용하여 양성 선택하여 완성된 V-C 유입 벡터를 획득하는 단계를 포함하며,
여기서 a)는 b)에서 타입 IIS 효소 작용에 의해서 가변 및 불변 클로닝 단편에 생성된 것과 상보성인 단일 가닥 오버행을 생성하고; b)는 가변 및 불변 단편을 소화시켜 a)에서 생성된 오버행에 결찰할 오버행을 생성시키고, 음성 선택 마커 단편 내에 생성된 상보성 오버행의 결찰을 허용하여 가변 및 불변 단편을 결찰시키는 것을 나타내고; c)는 V-C 유입 벡터 생성물의 선택 및 증식을 나타낸다.
V-C 유입 벡터 및 작제 요소의 포괄적인 특징
상기 설명은 실시예 1 내지 4에 또한 요약된 바와 같이, TORES 시스템의 정의에 대한 주형으로서 인간 HLA TRA 및 TRB 유전자좌를 사용한다. 그러나, 임의의 TCR 유전자좌로부터의 유전자 분절 패밀리는 TORES 내에 조립될 수 있다. 상기 설명에서, TORES 시스템의 설계, 인간 TRA/TRB 유전자좌 둘 다, 뿐만 아니라 임의의 유기체로부터의 임의의 다른 유전자좌의 적용에 대한 유연성에 대한 가이드라인이 제공된다. 본 섹션에서, 시스템의 포괄적인 특징은 주형으로서 실시예 1 내지 4에 제공된 TRA/TRB 설계를 사용하여 기재된다.
임의의 주어진 TCR 유전자좌에 대한 TORES를 달성하기 위해서, 상기 TCR 유전자좌에 의해서 암호화된 TCR 쇄에 특이적인 4종의 서열 요소가 필요하다:
X - 가변(V) 유전자 분절 단편
Y - 불변(C) 유전자 분절 단편
Y'- 불변 (C) 유전자 분절 부분
Z - 결합(J) 유전자 분절 단편.
상기 설명 및 하기 실시예에 따라서, 이러한 4종의 형태의 TCR 서열 요소가 다양한 백터 컨텍스트 내에서 조립되어 임의의 주어진 TCR 쇄에 대한 임의의 주어진 V-J-C 조합물을 위한 TORES를 작제 및 배치할 수 있다. 예를 들어, 네이티브 인간 TRG 및 TRD 유전자좌, 변이체 및/또는 합성 TCR 쇄 형태 또는 인간 이외의 유기체의 네이티브 TCR 쇄 형태용 시스템.
V 및 C 유전자 분절 단편은 각각 V 클로닝 단편 및 C 클로닝 단편을 통해서 V-C 유입 벡터 내에 조립되는 것이다. 이러한 과정은 실시예 1 및 3에 양호하게 기재되어 있다.
제너릭 가변 유전자 분절 클로닝 단편, 여기서 제1 타입 IIS 서열은 효소 BsaI에 대한 인식을 암호화하고, 제5 및 제6 타입 IIS 서열은 효소 BbsI에 대한 인식을 암호화하고, 따라서 가변 유전자 분절 클로닝 단편은 서열 SEQ0690으로 표현된다. 암호화된 가변 유전자 분절 단편은 XNn으로 나타내고, 식 중, X는 가변 유전자 분절에 대한 명칭이고, N은 임의의 뉴클레오타이드를 나타내고, n은 상기 서열 내의 뉴클레오타이드의 수를 나타낸다.
제너릭 불변 유전자 분절 클로닝 단편, 여기서 제1 타입 IIS 서열은 효소 BsaI에 대한 인식을 암호화하고, 제7 및 제8 타입 IIS 서열은 효소 BbsI에 대한 인식을 암호화하고, 따라서 불변 유전자 분절 클로닝 단편은 서열 SEQ0691로 표현된다. 암호화된 불변 유전자 분절 단편은 YNn으로 나타내고, 식 중, Y는 불변 유전자 분절에 대한 명칭이고, N은 임의의 뉴클레오타이드를 나타내고, n은 상기 서열 내의 뉴클레오타이드의 수를 나타낸다.
서열 SEQ0048로 표현되는 V-C 유입 벡터 골격을 사용하여 포유동물 숙주 세포에서 일시적인 발현 또는 재구성된 전장 TCR 오픈 리딩 프레임에 적합한 V-C 유입 벡터를 작제하는데, 여기서 제1 오버행 및 제2 오버행은 각각 골격의 Acc65I 및 XbaI 효소 작용에 의해서 생성되고, 5' 유전 요소 및 3' 유전 요소는 각각 구성적 프로모터 및 폴리아데닐화 신호로 표현된다.
서열 SEQ0688로 표현되는 V-C 유입 벡터 골격을 사용하여 적합한 이종특이적 리콤비나제 서열을 갖는 매칭된 유전자 표적과의 리콤비나제 매개된 카세트 교환에 적합한 V-C 유입 벡터를 작제하는데, 여기서 제1 오버행 및 제2 오버행은 각각 골격의 Acc65I 및 XbaI 효소 작용에 의해서 생성되고, 5' 유전 요소 및 3' 유전 요소는 각각 플립파제 활성(flippase activity)을 지시하는 F14 및 F15 이종특이적 리콤비나제 서열로 표현된다.
서열 SEQ0689로 표현되는 V-C 유입 벡터 골격을 사용하여 매칭된 이종특이적 리콤비나제 서열을 갖는 유전자 표적과의 리콤비나제 매개된 카세트 교환에 적합한 V-C 유입 벡터를 작제하는데, 여기서 제1 오버행 및 제2 오버행은 각각 골격의 Acc65I 및 XbaI 효소 작용에 의해서 생성되고, 5' 유전 요소 및 3' 유전 요소는 각각 플립파제 활성을 지시하는 FRT 및 F3 이종특이적 리콤비나제 서열로 표현된다.
상기에 기재된 제너릭 V 클로닝 단편, C 클로닝 단편과 선택된 V-C 유입 벡터 골격을 조합함으로써, 이러한 다양한 벡터 컨텍스트 내에서 재구성된 TCR ORF의 상이한 하류 응용을 위해서 변이체 V-C 유입 벡터를 작제할 수 있다.
서열 SEQ0048을 갖는 V-C 유입 벡터 골격을 사용하여 작제되는 제너릭 V-C 유입 벡터는 서열 SEQ0692로 표현된다. 이러한 생성된 V-C 유입 벡터는 포유동물 숙주 세포에서 재구성된 전장 TCR 오픈 리딩 프레임의 일시적인 발현에 적합하고, 여기서 제1 및 제2 타입 IIS 서열은 효소 BsaI에 대한 인식을 암호화하고, 가변 유전자 분절 단편은 XNn으로 나타내고, 불변 유전자 분절 단편은 YNn으로 나타내고, 식 중, X 및 Y는 상기 서열에 대한 명칭이고, N은 임의의 뉴클레오타이드를 나타내고, n은 각각의 서열에서의 뉴클레오타이드의 수를 나타낸다.
서열 SEQ0688을 갖는 V-C 유입 벡터 골격을 사용하여 작제된 제너릭 V-C 유입 벡터는 서열 SEQ0693으로 표현되고, 이것은 매칭된 이종특이적 리콤비나제 서열을 갖는 유전자 표적과의 리콤비나제 매개된 카세트 교환에 적합한 F14 및 F15 서열을 함유하며, 여기서 제1 및 제2 타입 IIS 서열은 효소 BsaI에 대한 인식을 암호화하고, 가변 유전자 분절 단편은 XNn으로 나타내고, 불변 유전자 분절 단편은 YNn으로 나타내고, 식 중, X 및 Y는 상기 서열에 대한 명칭이고, N은 임의의 뉴클레오타이드를나타내고, n은 각각의 서열에서의 뉴클레오타이드의 수를 나타낸다.
서열 SEQ0689를 갖는 V-C 유입 벡터 골격을 사용하여 작제된 제너릭 V-C 유입 벡터는 서열 SEQ0694로 표현되고, 이것은 매칭된 이종특이적 리콤비나제 서열을 갖는 유전자 표적과의 리콤비나제 매개된 카세트 교환에 적합한 FRT 및 F3 서열을 함유하며, 여기서 제1 및 제2 타입 IIS 서열은 효소 BsaI에 대한 인식을 암호화하고, 가변 유전자 분절 단편은 XNn으로 나타내고, 불변 유전자 분절 단편은 YNn으로 나타내고, 식 중, X 및 Y는 상기 서열에 대한 명칭이고, N은 임의의 뉴클레오타이드를나타내고, n은 각각의 서열에서의 뉴클레오타이드의 수를 나타낸다.
상이한 이종특이적 리콤비나제 부위를 갖는 V-C 유입 벡터의 쌍의 사용은 인간 TRA 및 TRB 쇄 쌍에 대해서 실시예 4에 제공된 바와 같은, TCR 쇄 쌍의 각각의 쇄를 위해서 사용될 수 있다. 이는, 이러한 짝지워진 TORES 시스템에 재구성된 TCR 쇄의 하류 응용에서, 이중 이종특이적 리콤비나제 수신자 부위를 갖는 유전자 컨텍스트에 전달될 수 있다는 것을 의미한다. 예를 들어, TCR 쇄 쌍의 게놈 통합을 위한 이러한 이중 이종특이적 리콤비나제 수신자 부위를 함유하는 세포주.
V-C 유입 벡터, 및 이들이 조립되는 성분의 상기 설명은 각각 작제 및 작동에 대해서 타입 IIS 효소 BbsI 및 BsaI의 사용을 기반으로 한다. 상기에 제공된 가이던스에 기초하여, 1종 이상의 대안적인 타입 IIS 효소가 이러한 작업 각각을 위해서 사용될 수 있다.
J 공여자 벡터의 작제 방법
V-C 유입 벡터의 작제를 위한 상기에 기재된 조합 방법과 관련하여, 조합 방법을 사용하여 J 공여자 벡터를 작제할 수 있다. 본 방법에서, J 공여자 벡터는, 제1 단계에서 중간체 J 수용 카세트 벡터를 작제하고, 제2 단계에서 J 분절 부분을 삽입하여 J 공여자 벡터를 형성하는 것을 포함하는 2-단계 공정으로 작제된다. 이와 관련하여, 그것으로부터 유래된 J 공여자 벡터로서의 J 수용 카세트 벡터는 C 부분이라고 지칭되는, 불변 유전자 분절의 작은 단편을 함유한다. 따라서 신속한 조합 방법 또는 작제는 불변 유전자 분절의 차별적 사용을 요구하는 상이한 J 공여자 벡터 형태를 반복하는 것이 바람직하다. 이러한 방법은 실시예 2 및 3에 실제로 양호하게 기재되어 있다.
J 공여자 벡터의 작제 방법은 하기로부터 선택된 4종의 DNA 성분을 조합하는 것을 포함하며:
a. J 수용 카세트 단편
b. J 공여자 벡터 골격
c. J 수용 카세트 벡터
d. J 분절 부분,
여기서, a)는 상기에 언급된 C-부분 및 벡터 조립 및 재구성 반응 작업을 위한 4종의 구별되는 타입 IIS 클로닝 부위를 함유하고; b)는 삽입되어 c)를 생성시키는 벡터 골격이고; d)는 c)와 조합되어 J 공여자 벡터를 생성시키는 J 유전자 분절 부분이다.
J 수용 카세트 단편은 하기를 포함하고:
a. J 공여자 벡터 골격에 생성된 오버행 서열에 상보성인 5' 단부에서의 제1 단일 가닥 오버행
b. c.에 언급된 제9 타입 IIS 서열에 의해서 지시되는 효소에 의한 작용 시에 단일 가닥 오버행을 형성하는 서열과 결합되는, 3' 방향으로 절단하도록 배향된 제3 타입 IIS 서열
c. 5' 방향으로 절단하고, b.에 언급된 단일 가닥 오버행을 생성시키도록 배향된 제9 타입 IIs 서열
d. 음성 선택 마커
e. 3' 방향으로 절단하고, f.에 기재된 서열의 5'에 단일 가닥 오버행을 생성시키도록 배향된 제10 타입 IIS 서열
f. 제10 타입 IIS 서열에 의해서 지시된 효소 작용에 의해서 생성된 5' 단부에 오버행 서열을 갖고, g.에서 언급된 제4 타입 IIS 서열에 의해서 지시된 효소 작용에 의해서 생성된 3' 단부에 오버행 서열을 갖는, 불변 유전자 단편의 5' 부분을 나타내는 C-부분
g. 단일 가닥 오버행이 g에 언급된 C-부분을 함유하는 5' 서열 내에 생성되도록 5' 방향으로 절단하도록 배향된 제4 타입 IIS 서열
h. J 공여자 벡터 골격에 생성된 오버행 서열에 상보성인 3' 단부에서의 제2 단일 가닥 오버행,
여기서; a) 및 h)는 J 공여자 벡터 골격 내에서의 방향성 클로닝을 위해서 사용되고; b) 및 g)는 재구성 반응의 작동 시에 사용되는 타입 IIS 서열을 암호화하고; c) 및 e)는 J 공여자 벡터의 조립에 사용되는 타입 IIS 서열을 암호화하고; d)는 J 공여자 벡터의 조립 동안 모체 J 수용 카세트 벡터의 제거를 위한 음성 선택 마커를 나타내고; f)는 J 공여자 벡터에 의해서 보유된 불변 유전자 분절의 단편을 나타낸다.
J 수용 카세트 단편의 개략적인 표현을 도 8에 제공한다. 실시예 2 및 실시예 3은 각각 인간 TRA 및 TRB 유전자좌에 대한 J 수용 카세트 벡터를 조립하기 위한 J 수용 카세트 단편의 포맷 및 사용을 기재한다.
본 발명에서, J 수용 카세트 단편은, 부분적으로 상보성인 단일 가닥 올리고뉴클레오타이드를 어닐링하여, 각각의 말단에 단일 가닥 오버행을 갖는 DNA 듀플렉스를 생성시킴으로써 형성된다.
TRA 유전자좌에 대한 J 수용 카세트 단편은 SEQ0098 및 SEQ0099라고 기재된다.
TRB 유전자좌에 대한 J 수용 카세트 단편은 SEQ0578 및 SEQ0581이라고 기재되며, 여기서 2개의 형태는 인간 TRB 유전자좌에서 사용되는 2개의 불변 유전자 분절을 설명하기 위해서 존재한다.
제공된 실시예에서, J 수용 카세트 단편, J 공여자 벡터 조립을 위해서 사용되는 타입 IIS 효소는 BbsI인 반면, TCR ORF 재구성을 위해서 사용되는 타입 IIS 효소는 BsaI이다.
J 공여자 벡터 골격은 하기를 포함하고:
a. 복제 기점
b. 제2 양성 선택 마커
c. J 수용 카세트 단편 내의 오버행과 상보성인 단일 가닥 오버행을 생성시키기 위한 골격의 소화를 허용하는 제1 제한 효소 인식 서열
d. J 수용 카세트 단편 내의 오버행과 상보성인 단일 가닥 오버행을 생성시키기 위한 골격의 소화를 허용하는 제2 제한 효소 인식 서열,
여기서 c) 및 d)는 고유한 상보성 오버행 서열의 사용을 통해서 J 수용 카세트 단편의 방향성 클로닝을 허용한다.
J 공여자 벡터 골격은 도 9에 개략적으로 도시되고, 실시예 2 및 3에 상세하게 기재된다. J 공여자 벡터 골격 서열은 SEQ0097로 표현된다.
J 공여자 벡터 골격은 J 수용 카세트 유전자 클로닝 단편에 제공된 5' 오버행 및 3' 오버행을 갖는 상용성 오버행을 생성시키기 위해서 EcoRI 및 XhoI에 대한 제한 효소 인식 부위를 함유한다.
한 효소의 임의의 다른 조합물이 조립 및 재구성 반응을 위해서 사용될 수 있되, 단 이것은 상기에 기재된 기준을 충족해야 한다.
J 수용 카세트 단편 및 J 공여자 벡터 골격을 조합함으로써 J 수용 카세트 벡터를 생성하는 방법은 실시예 2 및 3에 양호하게 기재되어 있다.
J 수용 카세트 벡터는, TRAJ 수용 카세트 단편과 TRAJ J 공여자 벡터 골격을 조합함으로써 작제되며, 여기서 이 방법은,
a. J 공여자 벡터를 J 공여자 벡터 골격 내에 함유된 인식 서열에 대해서 특이적인 2종의 제한 효소로 소화시키는 단계
b. 소화된 J 공여자 벡터 골격을 DNA 리가제 효소와 함께 J 수용 카세트 단편과 조합하는 단계
c. 생성된 반응 생성물을 수용성 숙주 유기체 내에서 형질전환시키고, 상기 제2 양성 선택 마커를 사용하여 양성 선택하여 완성된 J 수용 카세트 벡터를 획득하는 단계를 포함하며,
여기서, a)는 J 수용 카세트 단편 내에 함유된 것과 상보성인 단일 가닥 오버행을 생성시키고; b)는 상보성 오버행의 결찰을 나타내어 J 수용 카세트 벡터를 형성하고; c)는 J 수용 카세트 벡터 생성물의 선택 및 증식을 나타낸다.
J 수용 카세트 벡터의 개략적인 표현을 도 10에 제공한다. 실시예 2 및 실시예 3은 각각 인간 TRA 및 TRB 유전자좌에 대한 J 수용 카세트 벡터의 작제를 기재한다.
TRA 유전자좌에 대한 J 수용 카세트 벡터는 SEQ0098로 기재되며, TRB 유전자좌는 SEQ0582 및 SEQ0583으로 기재된다. TRB 유전자좌는 2개의 불변 유전자 분절을 사용하고, 따라서 복제품(replica) TRB J 수용 카세트 벡터는 각각의 불변 유전자 분절에 특이적인 C 부분 서열을 함유한다.
J 수용 카세트 벡터는 J 분절 부분과 조합되어 J 공여자 벡터를 생성시킨다. J 분절 부분은 J 유전자 분절의 벌크를 암호화한다.
상기 J 분절 부분은 하기를 포함하며:
a. 제9 타입 IIS 서열에 의해서 지시된 효소에 의한 작용 시에, J 수용 카세트 벡터에 생성되는 오버행과 상보성인 5' 단부에서의 제1 단일 가닥 오버행 서열
b. 결합 유전자 분절 부분
c. 제10 타입 IIS 서열에 의해서 지시된 효소에 의한 작용 시에, J 수용 카세트 벡터에 생성되는 오버행과 상보성인 3' 단부에서의 제2 단일 가닥 오버행 서열,
여기서, a) 및 c)는 조립 반응에 제공된 타입 IIS 효소(들)에 의해서 소화된 J 수용 카세트 벡터 내에서 J 분절 부분의 방향성 클로닝을 지시하고; b)는 J 공여자 벡터 생성물에 의해서 보유될 결합 유전자 분절을 암호화한다.
J 분절 부분의 개략적인 표현을 도 11에 제공한다. 실시예 2 및 실시예 3은 각각 인간 TRA 및 TRB 유전자좌에 대한 J 공여자 벡터를 작제하는 데 사용되는 J 분절 부분을 기재한다.
인간 TRA 유전자좌의 J 유전자 분절 사용에 연장된 짧은 J 분절 부분이 SEQ0099 내지 SEQ0210로 기재되어 있고, 여기서 J 분절 부분은, 부분적으로 상보성인 단일 가닥 올리고뉴클레오타이드를 어닐링하여, 각각의 말단에 단일 가닥 오버행을 갖는 DNA 듀플렉스를 생성시킴으로써 형성된다.
짧은 J 분절 부분을 사용하여 실시예 2 및 3에 제공된 바와 같은, 최소 길이의 표준화된 J 분절 부분을 갖는 J 공여자 벡터를 생성시킬 수 있다.
긴 J 분절 부분을 사용하여, TCR 재구성 반응에 사용되는 odeCDR3의 크기를 최소화하기 위해서 J 유전자 분절의 연장된 커버리지를 갖는 J 공여자 벡터를 생성시킬 수 있다. odeCDR3 요소의 단축은 상기 요소의 합성 비용을 절약하고, 또한 이러한 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스 내의 돌연변이 하중을 최소화한다.
인간 TRA 유전자좌의 J 유전자 분절 사용에 연장된 긴 J 분절 부분은 SEQ0211 내지 SEQ0322로 기재되어 있고, 여기서 J 분절 부분은, 부분적으로 상보성인 단일 가닥 올리고뉴클레오타이드를 어닐링하여, 각각의 말단에 단일 가닥 오버행을 갖는 DNA 듀플렉스를 생성시킴으로써 형성된다.
인간 TRB 유전자좌의 J 유전자 분절 사용에 연장된 짧은 J 분절 부분이 SEQ0584 내지 SEQ0609로 기재되어 있고, 여기서 J 분절 부분은, 부분적으로 상보성인 단일 가닥 올리고뉴클레오타이드를 어닐링하여, 각각의 말단에 단일 가닥 오버행을 갖는 DNA 듀플렉스를 생성시킴으로써 형성된다.
인간 TRB 유전자좌의 J 유전자 분절 사용에 연장된 긴 J 분절 부분은 SEQ0610 내지 SEQ0635로 기재되어 있고, 여기서 J 분절 부분은, 부분적으로 상보성인 단일 가닥 올리고뉴클레오타이드를 어닐링하여, 각각의 말단에 단일 가닥 오버행을 갖는 DNA 듀플렉스를 생성시킴으로써 형성된다.
본 발명에서, 상기 제9 및 제10 타입 IIS 서열로 지정된, J 공여자 벡터의 조립에 사용되는 타입 IIS 서열은 동일하다.
대안적으로, 2종의 상이한 타입 IIS 인식 서열이 이러한 절차를 위해서 사용될 수 있다.
상기 제9 및 제10 타입 IIS 서열로 지정된, J 공여자 벡터의 조립에 사용되는 타입 IIS 서열은 상기 제1, 제2 제3 및 제4 타입 IIS 서열로 지정된 재구성 반응을 위해서 사용되는 것과 상이해야 한다.
상기 제9, 및 제10 타입 IIS 서열로 지정된, J 공여자 벡터의 조립에 사용되는 타입 IIS 서열은, 상기 제5, 제6, 제7 및 제8 타입 IIS 서열로 지정된 V-C 유입 벡터를 조립하는 데 사용되는 것과 동일하다.
V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터를 조립하는 데 사용되는 이러한 타입 IIS 서열은 동일하거나 상이할 필요는 없는데, 그 이유는 그들이 독립적으로 처리되기 때문이다.
J 분절 부분은 매칭된 C 부분을 함유하는 J 수용 카세트 벡터와 조합되어 J 공여자 벡터를 생성시킨다.
J 공여자 벡터는 J 공여자 벡터 골격과 J 분절 부분을 조합함으로써 작제되는데, 여기서 이 방법은,
a. J 수용 카세트 벡터를, DNA 리가제 효소 및 제9 및 제10 타입 IIS 서열을 인식하는 1종 이상의 타입 IIS 제한 효소(들)와 함께, J 분절 부분과 조합하고, 조합된 믹스를 열순환 반응에 적용하는 단계, 및
b. 생성된 반응 생성물을 수용성 숙주 유기체 내에서 형질전환시키고, 상기 제2 양성 선택 마커를 사용하여 양성 선택하여 완성된 J 공여자 벡터를 획득하는 단계를 포함하며,
여기서, 단계 a)에서의 제9 및 제10 타입 IIS 서열에 대한 타입 IIS 효소 작용은, 음성 선택 마커 서열의 절제를 통해서, J 수용 카세트 벡터 내에 단일 가닥 오버행을 생성시킨다.
생성된 J 공여자 벡터의 개략적인 표현을 도 3에 제공한다. 실시예 2 및 실시예 3은 각각 인간 TRA 및 TRB 유전자좌에 대한 J 공여자 벡터를 작제하기 위한 J 분절 부분 및 J 수용 카세트 벡터의 사용을 기재한다.
인간 TRA 유전자좌에 대한 짧은 J 분절을 함유하는 J 공여자 벡터는 SEQ0323 내지 SEQ0378로 기재되는 반면, 인간 TRA 유전자좌에 대한 긴 J 분절을 함유하는 J 공여자 벡터는 SEQ0379 내지 SEQ0434라고 기재된다.
C1 불변 유전자 분절과 짝지워진 인간 TRB 유전자좌에 대한 짧은 J 분절을 함유하는 J 공여자 벡터는 SEQ0636 내지 SEQ0648로 기재되는 반면, 인간 TRA 유전자좌에 대한 긴 J 분절을 함유하는 J 공여자 벡터는 SEQ0662 내지 SEQ0674로 기재된다.
C2 불변 유전자 분절과 짝지워진 인간 TRB 유전자좌에 대한 짧은 J 분절을 함유하는 J 공여자 벡터는 SEQ0649 내지 SEQ0661로 기재되는 반면, 인간 TRA 유전자좌에 대한 긴 J 분절을 함유하는 J 공여자 벡터는 SEQ0675 내지 SEQ0687로 기재된다.
제공된 실시예에서, J 공여자 벡터를 조립하는 데 사용되는 타입 IIS 효소는 BbsI인 반면, TCR의 재구성 내에서 사용되는 타입 IIS 효소는 BsaI이다. 음성 선택 마커는 NotI 제한 효소 서열이다.
J 공여자 벡터의 작제 방법은 또한 형질전환 및 선택 이전에 모체 J 수용 카세트 벡터를 제거하기 위한 음성 선택 단계를 수반한다.
제공된 실시예에서, 이러한 음성 선택은 형질전환 및 선택 이전에 모체 J 수용 카세트 벡터를 제거하기 위한 NotI 소화를 수반한다.
J 공여자 벡터 및 작제 요소의 포괄적인 특징
상기 및 하기 실시예 5에 기재된 바와 같이, TCR 유전자 분절 요소가 제너릭 컨텍스트로 작제되어 TORES 시스템을 달성한다는 것을 고려할 때, V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 라이브러리의 몇몇 특징은 포괄적일 수 있다.
임의의 주어진 TCR 유전자좌에 대한 TORES를 달성하기 위해서, 상기 TCR 유전자좌에 의해서 암호화된 TCR 쇄에 특이적인 4종의 서열 요소가 필요하다:
X - 가변(V) 유전자 분절 단편
Y - 불변(C) 유전자 분절 단편
Y'- 불변 (C) 유전자 분절 부분
Z - 결합(J) 유전자 분절 단편.
상기 설명 및 하기 실시예에 따라서, 이러한 4종의 형태의 TCR 서열 요소가 다양한 백터 컨텍스트 내에서 조립되어 임의의 주어진 TCR 쇄에 대한 임의의 주어진 V-J-C 조합물을 위한 TORES를 작제 및 배치할 수 있다. 예를 들어, 네이티브 인간 TRG 및 TRD 유전자좌, 변이체 및/또는 합성 TCR 쇄 형태 또는 인간 이외의 유기체의 네이티브 TCR 쇄 형태용 시스템.
C 유전자 분절 부분 및 J 유전자 분절 단편은 각각 J 수용 카세트 단편 및 J 클로닝 단편을 통해서 J 공여자 벡터 내에 조립되는 것이다. 이러한 과정은 실시예 2 및 3에 양호하게 기재되어 있다.
서열 SEQ0695 및 SEQ0696로 표현되는 제너릭 J 수용 카세트 단편, 여기서 제3 및 제4 타입 IIS 서열은 효소 BsaI에 대한 인식을 암호화하고, 제9 및 제10 타입 IIS 서열은 효소 BbsI에 대한 인식을 암호화하고, 음성 선택 마커는 NotI 제한 효소 인식 서열을 나타낸다. 이러한 서열 내에서, 암호화된 C-부분은 Y'Nn으로 나타내고, 식 중, Y'는 C-부분에 대한 명칭이고, N은 임의의 뉴클레오타이드를 나타내고, n은 상기 서열 내의 뉴클레오타이드의 수를 나타낸다.
J 수용 카세트 단편은, 부분적으로 상보성인 서열을 갖는 서열의 쌍으로 표현되는 단일 가닥 올리고뉴클레오타이드를 어닐링함으로써 생성된다.
상기 제너릭 J 수용 카세트 단편을 갖는 J 수용 카세트 벡터를 작제하기 위한 J 공여자 벡터 골격은 SEQ0097로 표현되고, 여기서 제한 효소 EcoRI 및 XhoI는 J 수용 카세트 단편 서열의 삽입에 필요한 단일 가닥 DNA 오버행을 생성시키기 위해서 사용된다.
따라서, 서열 SEQ0695 및 SEQ0696로 표현되는 J 수용 카세트 단편으로부터 생성된 J 수용 카세트 단편과 서열 SEQ0097로 표현되는 J 공여자 벡터 골격의 조합에 의해서 작제된 J 수용 카세트 벡터는 SEQ0697로 표현된다. 이러한 생성된 J 수용 카세트 벡터 내에서, 제3 및 제4 타입 IIS 서열은 효소 BsaI에 대한 인식을 암호화하고, 제9 및 제10 타입 IIS 서열은 효소 BbsI에 대한 인식을 암호화하고, 음성 선택 마커는 NotI 제한 효소 인식 서열을 나타낸다. J 수용 카세트 단편으로부터 유래되기 때문에, 암호화된 C-부분은 Y'Nn으로 나타내고, 식 중, Y'는 C-부분에 대한 명칭이고, N은 임의의 뉴클레오타이드를 나타내고, n은 상기 서열 내의 뉴클레오타이드의 수를 나타낸다.
J 수용 카세트 벡터는 J 공여자 벡터를 획득하기 위해서 삽입된 J 분절 부분을 갖는다.
따라서, SEQ0697로 표현되는 제너릭 J 수용 카세트 벡터 내에 삽입하기 위해서 사용되는 제너릭 J 분절 부분은 상보성 서열 SEQ0698 및 SEQ0699로 표현되며, 여기서 J 유전자 분절 부분은 ZNn으로 표현되고, 식 중, Z는 J 유전자 분절의 명칭이고, N은 임의의 뉴클레오타이드를 나타내고, n은 상기 서열 내의 뉴클레오타이드의 수를 나타낸다.
J 분절 부분은, SEQ0698 및 SEQ0699로 표현되는 2개의 단일 가닥 올리고뉴클레오타이드를 어닐링함으로써 생성된다.
SEQ0697로 표현되는 J 수용 카세트 벡터와 상보성 서열 SEQ0698 및 SEQ0699로 표현되는 J 분절 부분의 조합으로부터 조립된 제너릭 J 공여자 벡터는 서열 SEQ0700으로 표현된다. 따라서 이러한 생성된 J 공여자 벡터는 ZNn 및 Y'Nn의 2개의 명명된 서열 삽입물을 함유하며, 식 중, Z는 J 유전자 분절에 대한 명칭이고, Y'는 C 분절 부분의 명칭이고, N은 임의의 뉴클레오타이드를 나타내고, n은 상기 서열 내의 뉴클레오타이드의 수를 나타낸다.
V-C 유입 벡터, 및 이들이 조립되는 성분의 상기 설명은 각각 작제 및 작동에 대해서 타입 IIS 효소 BbsI 및 BsaI의 사용을 기반으로 한다. 상기에 제공된 가이던스에 기초하여, 1종 이상의 대안적인 타입 IIS 효소가 이러한 작업 각각을 위해서 사용될 수 있다.
진단 및 치료를 위한 정의된 벡터 컨텍스트에서의 전장 TCR ORF의 사용
질환의 치료를 위해서 T-세포 면역을 이용하는 것에 있어서의 주요 도전은, TCR 레퍼토리의 광범위한 개체내 내용물과 함께, HLA 및 TCR 시스템의 개체간 다양성이다. 이는, TCR의 평가 및/또는 제공에 의존하는 의약 및 치료 전략이 진실된 생물학적 맥락에서 TCR 기능의 강력한 평가를 필요로 한다는 것을 의미한다.
네이티브 TCR 쇄 쌍의 정확한 평가를 달성하기 위해서, 정의된 벡터 컨텍스트에서 포획된 TCR ORF를 전달하기 위한 실현 가능하고 비용 효율적인 고처리율 방법이 필요하다. 임의의 제공된 쇄 쌍을 위한 TORES가 이러한 TCR ORF를 전달하기 위한 수단이다.
TCR ORF를 위한 정의된 벡터 컨텍스트는 예를 들어, 일시적인 발현 벡터일 수 있고, 예컨대, 이에 의해서, TCR은 실시예 8에 기재된 바와 같은 인간 세포의 표면 상에서 신속히 특징규명될 수 있다. 이러한 실시예에서, TCR은 예상된 특이성을 확인하기 위해서 서열결정 및 재발현될 수 있다. 이것은 개인 맞춤을 기반으로 하는 면역요법 개입 동안 진단 절차를 위한 서열 또는 증폭-또는 프로브-기반 검정에 의해서 그 다음 TCR 클로노타입 빈도를 위한 검증된 TCR 서열의 사용을 허용한다. 유사하게, TCR 쇄 쌍의 신속한 포획 및 검증은, 상기 TCR 쌍이 개인 맞춤 의약 - 예컨대, 의약 화합물로서의 가용성 TCR 작제물의 전달 또는 세포 치료제로서 효과기 세포에서의 TCR의 제공으로 제공될 수 있다는 것을 의미한다.
유사한 접근법에서, TORES 시스템은 실시예 9 및 10에 요약된 바와 같이, 특이성 및/또는 기능을 변화시키기 위해서 TCR ORF를 조작하기에 이상적으로 적절하다. 이러한 조작을 사용하여 신호전달 강도를 향상 또는 감소시킬 수 있고/있거나 특정 질환 항원에 대한 TCR 쇄 쌍의 특이성을 변화 또는 재지향시킬 수 있다. 이러한 조작된 TCR 서열은 네이티브 TCR 쇄 쌍 대신에 개인 맞춤 면역요법 전략으로 제공될 수 있다.
양방향 TCR ORF 재구성 및 조작 시스템(TORES2)
상기에 기재된 TORES 시스템은 각각의 TCR 쇄를 독립적인 2-부분 벡터 라이브러리 시스템 내에서 처리한다. 따라서, TORES 작동의 생성물은 재구성된 TCR ORF를 암호화하는 별개의 벡터이다. 개별 양상에서, 본 발명은 2-단계 방법을 사용하여 상호 TCR 쇄 쌍을 단일 생성물 벡터 내에서 결합시키기 위한 대안적인 시스템을 제공한다. 이는 5-성분 벡터 라이브러리 시스템으로 달성되는데, 여기서 변형된 V-C 유입 벡터는 TORES 시스템의 J-공여자 벡터 및 odeCDR3과 조합되어 별개의 반응으로 TCR 쇄 쌍의 재구성을 달성한다. 이어서, 변형된 V-C 유입 벡터는 재구성 TCR ORF가 제2 단계에서 제5 벡터 성분의 첨가에 의해서, 양방향 종결인자 공여자 벡터(BiT 공여자)를 결합하는 것을 허용하여, 2개의 TCR OFR 쌍을 역평행 암호 센스로 암호화하는 벡터를 달성한다.
이러한 양방향 TORES(TORES2)는 조합된 5-성분 벡터 시스템을 나타내는데, 그 이유는 상호 쇄 쌍의 요소를 암호화하는 V-C 유입 벡터에 대한 변형이 비대칭적이기 때문이다. 이는 V-C 유입 벡터가 구별되는 배열을 포함한다는 것을 의미한다. 즉, 하나의 쇄의 재구성된 ORF는 제1 단계의 생성물 벡터로부터 절제되고, 안티센스 배향으로 제1 단계의 상호 생성물 벡터 내에 결찰된다. 따라서, V-C 유입 벡터의 짝지움이 중요한데, 그 이유는 TORES2 시스템의 본래 V-C 유입 벡터 중 하나가 최종 생성물 골격을 나타내고, 따라서 재구성되고 결합된 TCR 쇄의 하류 응용을 위한 목적하는 3' 유전 요소 및 5' 유전 요소를 암호화하기 때문이다. 명확성을 위해서, 하기에 제공된 설명 및 실시예는 TRA 쇄를 최종 생성물 골격(예를 들어, V-Cα 유입 벡터)으로 고정시키고, TRB를 이러한 최종 생성물 골격(예를 들어, V-Cβ 유입 벡터)에 통합되는 쇄로서 고정시킨다. 상호 배열은 상호 TCR 쇄 쌍의 임의의 다른 조합에서와 같이 동등하게 유효하다.
TORES2의 V-C 유입 벡터 성분
상기에 언급된 바와 같이, TORES2를 포함하는 5-성분 벡터 라이브러리 시스템은 변형된 V-C 유입 벡터 컨텍스트의 제공에 있어서 TORES 시스템과 상이하다. 이러한 변형은, 제2 단계에서 단일 벡터 내에 이러한 재구성된 ORF를 결합시키는 것을 지시하기 위해서, 제1 단계에서 TCR ORF 재구성을 위해서 사용되는 것과 구별되는 타입 IIS 부위(타입 IIS #2로 표지됨) 및 음성 선택 요소(-ve 선택 #2로 표지됨)를 혼입한다. 사실, TORES2 시스템은 새로운 V-C 유입 벡터 컨텍스트 내에 TORES 시스템을 혼입한다. 하기 설명은 TRA 쇄를 최종 생성물의 골격으로 취급하고, TRB 쇄를 안티센스 배향으로 재구성된 TRA 쇄 골격 내에 결찰된 것으로서 취급한다. 동일한 프레임워크가 TCR 쇄의 임의의 쇄에 대해서 적용되며, TCR 쇄 중 기재된 벡터 배열 중 하나 또는 나머지 것에 존재하는 것이 필요한 이유에 대해서는 특별한 이유가 없다.
V-Cα 유입 벡터는 하기를 함유한다:
a. 복제 기점,
b. 제1 양성 선택 마커,
c. 5' 유전 요소 또는 요소들,
d. 코작 서열,
e. TCR 알파 가변 유전자 분절,
f. (타입 IIS 효소 #1의 경우) 타입 IIS 제한 효소에 의한 부위 특이적 인식 및 절단을 위한 제1 타입 IIS 서열,
g. 제1 음성 선택 마커,
h. (타입 IIS 효소 #1의 경우) 제2 타입 IIS 서열,
i. TCR 불변 유전자 분절,
j. (타입 IIS 제한 효소 #2의 경우) 제3 타입 IIS 서열,
k. 제2 음성 선택 마커,
l. (타입 IIS 제한 효소 #2의 경우) 제4 타입 IIS 서열, 및
m. 3' 유전 요소 또는 요소들,
여기서, a) 및 b)는 박테리아 숙주에서 모체 V-C 유입 벡터 및 재구성된 TCR-함유 벡터 둘 다의 증식 및 선택을 위해서 사용되고; c) 및 m)은 재구성되고 결합된 전장 TCR ORF의 하류 적용을 정의하기 위해서 사용되고, TORES에 대해서 상기에 기재된 바와 같은 요소를 포함할 수 있고; d)는 대안적으로 원핵생물 및 고세균에서 전사 조절을 위한 샤인-달가노 서열을 나타낼 수 있는, 진핵 세포에서 번역의 효율적인 개시를 보장하고; e)는 주어진 2-성분 벡터 시스템에서 모든 V 분절 전체에 보존된 CDR3 영역의 5' 에지에서의 모티프에 대한 시작 코돈으로부터의 가변(V) 알파 유전자 분절을 나타내고; f)는 V 유전자 분절의 3' 단부에 표준화된 단일 가닥 오버행을 생성시키기 위해서 5' 방향으로 절단하도록 타입 IIS 제한 효소를 지시하는 타입 IIS #1 인식 서열을 나타내고; g)는 전장 TCR ORF를 재구성하기 위한 시스템의 작동 중에 모체 V-C 유입 벡터를 제거하기 위한 음성 선택 마커 #1을 나타내고; h)는 C 유전자 분절의 5' 단부에 표준화된 단일 가닥 오버행을 생성시키기 위해서 3' 방향으로 절단하도록 타입 IIS 제한 효소를 지시하는 타입 IIS #1 인식 서열을 나타내고; i)는 주어진 2-성분 벡터 시스템 내의 모든 C 분절 전체에서 보존된 C 유전자 분절의 5' 단부에서의 모티프로부터의 불변(C) 유전자 분절을 나타내고, 이것은 J 분절을 갖는 경계를 정의하고(도 2 및 도 4 참고); j)는 C 유전자 분절 뒤에 3' 단부에 표준화된 단일 가닥 오버행을 생성시키기 위해서 5' 방향으로 절단하도록 타입 IIS 제한 효소를 지시하는 타입 IIS #2 인식 서열을 나타내고, 이러한 타입 IIS 효소는 제1 및 제2 타입 IIS #1 효소와 상이하고; k)는 양방향 벡터 작제물을 생성하는 작동 동안 모체 TRA ORF 벡터를 제거하기 위한 음성 선택 마커 #2를 나타내며, 이것은 제1 음성 선택 마커와 구별되고; l)은 3' 유전 요소 앞에 표준화된 단일 가닥 오버행을 생성시키기 위해서 3' 방향으로 전달하도록 타입 IIS 제한 효소를 지시하는 타입 IIS #2 인식 서열을 나타내고, 이러한 타입 IIS 효소는 제1 및 제2 타입 IIS #1 효소와 상이하고; m)은 3' 유전 요소 또는 요소들을 나타낸다.
상기에 기재된 V-Cα 유입 벡터의 배열을 도 20a에 도시한다.
일반적으로, 제1 타입 IIS 효소와 제2 타입 IIS 효소(타입 IIS #1로 지정됨)는 동일하지만, 상이할 수도 있다. 유사하게, 제3 타입 IIS 효소와 제4 타입 IIS 효소(타입 IIS #2로 지정됨)는 일반적으로 동일하지만, 상이할 수도 있다. 결정적으로, 제1 및 제2 타입 IIS(타입 IIS #1) 부위에 사용되는 타입 IIS 효소(들)는 제3 및 제4 타입 IIS(타입 IIS #2) 부위에 사용되는 효소(들)와 상이해야 한다.
V-Cα 유입 벡터 골격은 실시예 11에 제공되는 바와 같이, SEQ0756으로 표현된다.
하기 실시예 11은 인간 TRA 유전자좌(SEQ0756)에 대한 TORES2의 V-Cα 유입 벡터를 제공하고, 여기서 V/C 서열의 일부는 제3 및 제4 부위(SEQ0757 내지 SEQ0763)에 사용되는 타입 IIS 효소가 없도록 TORES 시스템 내에 혼입되는 것과 비교하여 변형되어 있다.
V-Cβ 유입 벡터는 하기를 함유한다:
a. 복제 기점,
b. 제1 양성 선택 마커,
c. 5' 유전 요소 또는 요소들,
d. 타입 IIS #2 제한 효소에 의한 부위 특이적 인식 및 절단을 위한 제1 타입 IIS 서열,
e. 코작 서열,
f. TCR 베타 가변 유전자 분절,
g. 타입 IIS 제한 효소(타입 IIS #1)에 의한 부위 특이적 인식 및 절단을 위한 제2 타입 IIS 서열,
h. 제1 음성 선택 마커,
i. 제3 타입 IIS 서열(타입 IIS #1),
j. TCR 불변 유전자 분절,
k. 제4 타입 IIS 서열(타입 IIS #2),
l. 제2 음성 선택 마커, 및
m. 3' 유전 요소 또는 요소들,
여기서, a) 및 b)는 박테리아 숙주에서 모체 V-C 유입 벡터 및 재구성된 TCR-함유 벡터 둘 다의 증식 및 선택을 위해서 사용되고; c) 및 m)은 TORES 시스템에 대해서 상기에 기재된 바와 같은 재구성된 전장 TCR ORF의 하류 적용을 선택적으로 정의하고; d)는 5' 유전 요소 뒤에 그리고 코작 서열 앞에 표준화된 단일 가닥 오버행을 생성하도록 3' 방향으로 절단하도록 타입 IIS 제한 효소를 지시하는 타입 IIS #2 인식 서열을 나타내고, 이러한 타입 IIS 효소는 제2 및 제3 타입 IIS #1 효소와 상이하고; e)는 대안적으로 원핵생물 및 고세균에서 전사 조절을 위한 샤인-달가노 서열을 나타낼 수 있는, 진핵 세포에서 번역의 효율적인 개시를 보장하고; f)는 주어진 2-성분 벡터 시스템에서 모든 V 분절 전체에 보존된 CDR3 영역의 5' 에지에서의 모티프에 대한 시작 코돈으로부터의 가변(V) 유전자 분절을 나타내고; g)는 V 유전자 분절의 3' 단부에 표준화된 단일 가닥 오버행을 생성시키기 위해서 5' 방향으로 절단하도록 타입 IIS 제한 효소를 지시하는 타입 IIS #1 인식 서열을 나타내고; h)는 전장 TCR ORF를 재구성하기 위한 시스템의 작동 중에 모체 V-C 유입 벡터를 제거하기 위한 음성 선택 마커를 나타내고; i)는 C 유전자 분절의 5' 단부에 표준화된 단일 가닥 오버행을 생성시키기 위해서 3' 방향으로 절단하도록 타입 IIS 제한 효소를 지시하는 타입 IIS #1 인식 서열을 나타내고; j)는 주어진 2-성분 벡터 시스템 내의 모든 C 분절 전체에서 보존된 C 유전자 분절의 5' 단부에서 모티프로부터의 불변(C) 유전자 분절을 나타내고, 이것은 J 분절을 갖는 경계를 정하고(도 2 및 도 4 참고); k)는 C 분절 뒤에 그러나 3' 유전 요소 앞에 표준화된 단일 가닥 오버행을 생성시키기 위해서 5' 방향으로 절단하도록 타입 IIS 제한 효소를 지시하는 타입 IIS #2 인식 서열을 나타내고, 이러한 타입 IIS 효소는 제2 및 제3 타입 IIS #1 효소와 상이하고; m)은 제1 -음성 선택 마커와 상이한 제2 음성 선택 마커를 나타내고, l)은 3' 유전 요소 또는 요소들을 나타낸다.
상기에 기재된 V-Cβ 유입 벡터의 배열을 도 20b에 도시한다.
3' 유전 요소 및 5' 유전 요소는 V-Cβ 유입 벡터 컨텍스트에서 선택적인데, 그 이유는 이러한 벡터 내에 재구성된 ORF는 추후에 절제되고, V-Cα 유입 벡터 골격 컨텍스트 내에 결찰되기 때문이다. 즉, V-Cα 유입 벡터 골격.
일반적으로, 제2 타입 IIS 효소와 제3 타입 IIS 효소(타입 IIS #1로 지정됨)는 동일하지만, 상이할 수도 있다. 유사하게, 제1 타입 IIS 효소와 제4 타입 IIS 효소(타입 IIS #2로 지정됨)는 일반적으로 동일하지만, 상이할 수도 있다. 결정적으로, 제2 및 제3 타입 IIS 부위(타입 IIS #1)에 사용되는 타입 IIS 효소(들)는 제1 및 제4 타입 IIS 부위(타입 IIS #2에 사용되는 효소(들)와 상이해야 한다.
일반적으로, V-Cα 유입 벡터의 제1 및 제2 타입 IIS 부위(타입 IIS #1)는 V-Cβ 유입 벡터의 제2 및 제3과 동일하지만, 필요한 것은 아닌데, 그 이유는 이들 반응은 독립적으로 조작될 수 있기 때문이다. 기재된 시스템에서의 TRA 쇄와 TRB 쇄의 재구성은, V-Cα 유입 벡터의 제1 및 제2 타입 IIS 부위가 V-Cβ 유입 벡터의 제2 및 제3 타입 IIS 부위의 것과 구별되는 경우, 단일 반응으로 수행될 수 있다.
일반적으로, 단일 타입 IIS 효소(타입 IIS #2)를 제2 반응 결합 반응에 첨가하는 것 만이 필요하도록, V-Cα 유입 벡터의 제3 및 제4 타입 IIS 부위(타입 IIS #2)는 V-Cβ 유입 벡터의 제1 및 제4 부위와 동일하다.
일반적으로, 각각의 V-Cα 및 V-Cβ 유입 벡터의 제2 음성 선택 마커(-ve 선택 #2)는 TORES2 작동의 결합 단계에서 모체 벡터의 효율적인 음성 선택을 용이하게 하도록 동일하지만, 또한 상이할 수도 있다.
V-Cβ 유입 벡터 골격은 실시예 11에 제공되는 바와 같이, SEQ0764로 표현된다.
하기 실시예 11은 인간 TRB 유전자좌(SEQ0764)에 대한 TORES2의 V-Cβ 유입 벡터를 제공하고, 여기서 V/C 서열의 일부는 제1 및 제4 부위(SEQ0765 내지 SEQ0776)에 사용되는 타입 IIS 효소가 없도록 TORES 시스템 내에 혼입되는 것과 비교하여 변형되어 있다.
TORES2의 J 공여자 및 odeCDR3 성분
J 공여자 벡터 및 CDR3을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스는 상기 종래의 TORES에 대해서 이미 기재된 것과 동일하다. 둘 다는 TORES에 대해서 상기에 기재된 것과 동일한 절차로 지정된 V-C 유입 벡터 골격 컨텍스트 내에서 상호 TCR 쇄 쌍을 재구성하기 위해서 제1 단계 반응(들)에 사용된다.
TORES
2
의 양방향 종결인자 공여자 벡터(BiT 공여자)
TORES2의 제1의 4종의 벡터 라이브러리 성분은 TRA/TRB에 초점을 맞춘 설명에서 TRA 및 TRB 쇄 각각에 대한 J 공여자 벡터와 함께, V-Cα 및 V-Cβ 유입 벡터를 나타낸다. 다시, 임의의 TCR 쇄는 기재된 설계 원칙에 따라서 이러한 시스템에 혼입될 수 있고, 특이적 TRA 및 TRB 구성은 명확성을 위해서 고정된다는 것을 주목하기 바란다.
제5 성분은 양방향 종결인자 공여자 벡터(BiT 공여자)를 나타내는데, 이것은 제1 단계 반응에서 재구성된 역평행 센스 TRA 및 TRB 쇄가 개재된 양방향 종결인자 요소를 제공하고, 제2 단계 반응에서 이러한 양방향 종결인자 요소에 의해서 결합된다.
양방향 종결인자는 일반적으로 벡터로서 제공되고, 또한 2종의 타입 IIS 제한 효소(타입 IIS #2)에 의해서 둘러싸인다. 이러한 타입 IIS 부위를 갖거나, 또는 타입 IIS 부위가 없는 표적 단일 가닥 DNA 오버행을 갖는 선형 dsDNA 작제물로서 양방향 종결인자 요소를 제공하는 것이 동등하게 관련이 있다.
양방향 종결인자를 함유하는 벡터는 하기를 함유한다:
a. 복제 기점,
b. 제2 양성 선택 마커,
c. 제1 타입 IIS 서열(타입 IIS #2),
d. 양방향 종결인자, 및
e. 제2 타입 IIS 서열(타입 IIS #2),
여기서, a) 및 b)는 박테리아 숙주 내에 양방향 종결인자를 보유하는 벡터의 증식 및 선택을 위해서 사용되고, c)는 표준화된 단일 가닥 오버행을 생성하도록 3' 방향으로 절단하도록 타입 IIS 제한 효소(타입 IIS #2)를 지시하는 타입 IIS 인식 서열을 나타내고, d)는, 재구성된 TCR ORF를 함유하는 상기 벡터가 포유동물 세포에 형질주입되는 경우, TRA 골격 내에 재구성된 TCR의 발현 동안 센스 및 안티센스 DNA 가닥 둘 다에 대한 전사 종결을 보장하기 위해서 사용되는 양방향 종결인자를 나타내고; e)는 표준화된 단일 가닥 오버행을 생성시키기 위해서 5' 방향으로 절단하도록 타입 IIS 제한 효소를 지시하는 타입 IIS 인식 서열(타입 IIS #2)을 나타낸다.
상기에 기재된 BiT 공여자 벡터의 배열을 도 21에 도시한다.
일반적으로, BiT 공여자 내에 함유된 양성 선택 마커는, 제2 단계 결합 반응에서 모체 BiT 공여자의 캐리오버를 최소화하도록, V-Cα 및 V-Cβ 유입 벡터에 의해서 보유된 양성 선택 마커의 것과 구별된다.
일반적으로, BiT 공여자에서 제1 및 제2 타입 IIS 부위(타입 IIS #2)는, 단일 타입 IIS 효소(타입 IIS #2)를 제2 결합 반응에 첨가하는 것 만이 필요하도록, V-Cα 유입 벡터의 제3 및 제4 타입 IIS 부위 및 V-Cβ 유입 벡터의 제1 및 제4 부위 모두와 동일하다.
양방향 종결인자 요소 서열은 SEQ0777로 표현된다.
전장 TCR ORF 쌍을 재구성 및 결합하기 위한 TORES2의 작동
TORES2의 작동은 제1 TCR ORF 재구성 단계, 및 제2 TCR ORF 결합 단계를 포함하는, 2-단계 공정이다. TCR ORF의 재구성 방법은 TORES에 대해서 상기에 기재된 것과 동일하다(도 1 및 도 4 참고). 따라서 제1 단계의 생성물은, V-CDR3-J-C 요소 배열을 함유하는 전장 TCR ORF를 암호화하는 벡터를 포함하는, TORES의 생성물과 유사하다. 그러나, TORES2 시스템은 TORES 시스템과 구별되는 골격 컨텍스트로 이러한 TCR ORF를 제공하고, 여기서 TORES2 골격은 제2 결합 단계 반응을 용이하게 하기 위해서 추가 클로닝 부위를 함유한다. 이러한 제2 단계 제한 효소 및 리가제 연쇄 반응은 역평행 센스의, 제1 단계로부터의 재구성된 TCR ORF의 결합 및 BiT 공여자에 의해서 제공된 양방향 종결인자 요소의 개재를 수반한다. 전체 공정은 도 22에 도시되어 있고, 이것은 상기에 기재된 TRA/TRB TORES2 배열을 도시한다.
재구성된 TRA 암호화 벡터(도 22a), TRB 암호화 벡터(도 22b) 및 BiT 공여자(도 22c)를 타입 IIS 효소(타입 IIS #2) 및 리가제를 갖는 단일 튜브에서 반응시키고, 제한 효소 및 리가제 연쇄 반응에 적용한다. 타입 IIS 제한 효소는 3종의 제공된 벡터를 3종 반응 부산물, 및 반응 생성물 내에서의 방향성 결찰을 위한 설계된 오버행을 갖는 3종의 반응 중간체로 소화시킨다.
이러한 3종의 반응 부산물은 TRA 벡터로부터의 절제된 -ve 선택 요소 #2 및 타입 IIS #2 부위(도 22d), 재구성된 TRB ORF가 절제된 개방된 TRB 암호화 벡터 골격(도 22e) 및 양방향 종결인자 요소가 절제된 개방된 BiT 공여자 골격(도 22f)으로 표현된다.
반응 중간체 중 첫 번째는 V-Cα 유입 벡터 골격 컨텍스트로 재구성된 TRA ORF를 암호화하는, 개방 TRA 벡터이다(도 22g). 상기에 기재된 바와 같은 본래 V-Cα 유입 벡터에서의 제3 타입 IIS #2 부위는 C 유전자 분절 뒤에 3' 단부에 표준화된 단일 가닥 오버행(도 22g, 오버행 1-5')을 생성시키기 위해서 5' 방향으로 절단하도록 효소를 지시하는 반면, 제4 타입 IIS #2 부위는 3' 유전 요소 앞에 표준화된 단일 가닥 오버행 (도 22e, 오버행 3-3')을 생성시키기 위해서 3' 방향으로 효소 전달을 지시한다.
제2 반응 중간체는 V-Cβ 유입 벡터 컨텍스트로부터 절제된 단편을 암호화하는 TRB ORF이다. 상기에 기재된 V-Cβ 유입 벡터에서 제1 타입 IIS #2 부위는 코작 서열 앞에 오버행(도 22h, 오버행 3-5')을 생성시키기 위해서 3' 방향으로 절단하도록 효소를 지시한다. 제4 타입 IIS #2 부위는 5' 방향으로 절단하도록 효소를 지시하여, C-분절 뒤에 오버행(도 22h 오버행 2-3')을 생성시킨다. 도 22h는 생성물 벡터 컨텍스트 내에 결찰될 안티센스 배향으로 이러한 중간체를 도시한다는 것을 주목해야 한다.
제3 반응 중간체는 BiT 공여자로부터 절제된 양방향 종결인자 요소이며, 여기서 제1 타입 IIS #2 부위는 표준화된 단일 가닥 오버행(도 22i, 오버행 1-3')을 산출하기 위해서 5' 방향으로 절단하도록 효소를 지시한다. 제2 타입 IIS #2 부위는 표준화된 단일 가닥 오버행(도 22i, 오버행 2-5')을 생성하기 위해서 3' 방향으로 절단하도록 효소를 지시한다.
제한 효소 및 리가제 연쇄 반응에서, 단일 가닥 오버행은 생성물 벡터 내에서 리가제-매개된 방향성 결찰을 유도하여, 본래 V-Cα 유입 벡터 골격 컨텍스트 내에서 TRA 및 TRB 쇄 둘 다를 결합한다(도 22j).
TORES2는 TCR 쇄의 임의의 수집물을 위해서 작제될 수 있다. 명확성을 위해서, TRA 및 TRB 유전자좌는 설명을 위한 케이스 연구로서 사용된다. 이러한 TORES2의 작제는 각각 TCR 델타 및 감마 쇄 쌍을 암호화하는, TRD 및 TRG 유전자좌 또는 실제로 턱이 있는 척추동물에서 발견되는 임의의TRA/TRB, TRD/TRG 또는 변이체 TCR 쇄 쌍 시스템의 맥락에서 동등하게 적용 가능하다.
하기 실시예에서, 인간 TRA/TRB 유전자좌를 위한 TORES2 시스템이 제공되며, 이것은 모델 인간 TCR ORF의 재구성에 적용되고, 그 다음 기원 V-Cα 유입 벡터 골격 컨텍스트의 5' 유전 요소 및 3' 유전 요소와 매칭된 RMCE 부위를 보유하는 매칭된 조작된 세포주에 통합된다. 이는, TORES2가 출원 WO 2018/083318 A1에 기재된 것과 유사한 2-부분 디바이스 구성으로 재구성된 TCR ORF의 통합 및 제시를 위해서 최적화된 매칭된 조작된 세포주와 조합하여 쉽게 사용된다는 것을 입증한다.
하기에 본 명세서에 언급된 서열을 나타내는 표를 제공한다.
약어 목록
정의 목록
한 쌍의 상보성 TCR 쇄: 번역된 단백질이 TCR 제시 세포의 표면 상에서 TCRsp를 형성할 수 있는 2개의 TCR 쇄.
친화성: 2종 이상의 분자 또는 단백질 간의 상호작용의 동적 또는 평형 파라미터.
대립유전자: 주어진 유전자의 변이체 형태.
앰플리콘: PCR을 비롯한 다양한 방법을 사용한 인공 증폭의 공급원 및/또는 산물인 DNA 또는 RNA의 조각.
분석물: 식별 및/또는 측정 및/또는 문의될 관심대상 엔티티.
항체: 면역계 호출된 B-세포의 전문화된 세포에 의해서 발현되고, 2개의 쇄를 함유하는 친화성 분자. B-세포는 자가 단백질에 일반적으로 결합하지 않지만 숙주를 위협할 병원체 또는 독소에 결합하여, 이를 중화시킬 수 있는 항체의 매우 크고 매우 다양한 레퍼토리를 발현한다. 자연 또는 인공 조작된 항체가 종종 친화성 시약으로서 사용된다.
APC: 항원-제시 세포. 일반적으로 HLA의 맥락에서, 세포 표면 상에 항원을 제시할 수 있는 세포.
C (-분절): 불변 분절. 또한 불변 영역. T-세포 수용체를 조립하는 데 사용되는 유전자 분절 중 하나. c-영역은, TCR의 다양성을 유도한다기 보다는, 면역계에서 그의 일반적인 기능을 정의하는 별개의 분절이다.
C 클로닝 단편: 불변 클로닝 단편. C 유전자 분절 클로닝 단편이라고도 지칭됨. V-C 유입 벡터를 작제하는 데 사용되는 C 유전자 분절의 일부를 보유하는 작제물.
C-부분: 불변 부분. 오버행 서열을 TORES의 작동을 위해서 표준화시켜 TCR ORF를 재구성하기 위한 J 수용 카세트 단편, J 수용 카세트 및 J 공여자 벡터에 의해서 보유된 불변 유전자 분절 서열의 작은 부분
CDR: 상보성-결정 영역. 표적 결합 기능의 대부분을 수행하는 TCR 및 항체의 항원-대면 단부 상의 짧은 서열. 각각의 항체 및 TCR은 6개의 CDR을 함유하고, 이것은 일반적으로 분자의 가장 가변적인 부분이어서, 상당한 수의 다양한 표적 분자의 검출을 가능하게 한다.
시스-작용 요소(Cis-acting element): 근처의 ORF의 전사를 조절하는 비-암호화 DNA의 영역.
D (-분절): 다양성 분절. 또한 D 영역. T-세포 수용체를 조립하는 데 사용되는 유전자 분절 중 하나. 각각의 개체는 이러한 영역의 상당한 수의 상이한 변형을 가져서 각각의 개체가 매우 다양한 상이한 TCR을 갖는 T-세포가 되게 한다.
다양화: 서열이 다양화되는 과정.
DNA: 데옥시리보핵산. 유전자 및 단백질을 암호화하는 유전 물질을 형성하는 분자의 화학 명칭.
내인성: 세포 내로부터 유래된 물질.
진핵생물 조건 조절 요소: 정의된 조건 하에서 유도 또는 억제될 수 있는, 프로모터의 활성도에 영향을 줄 수 있는 DNA 서열.
진핵생물 프로모터: RNA 중합효소 결합 부위 및 반응 요소를 암호화하는 DNA 서열. 프로모터 영역의 서열은 RNA 중합효소 및 전사 인자의 결합을 제어하고, 따라서 프로모터는 관심대상 유전자가 발현될 장소 및 시기의 결정에 중요한 역할을 한다.
진핵생물 종결인자/신호 종결인자: RNA 중합효소 II와 회합되어 전사의 종결 과정을 촉발하는 단백질 인자에 의해서 인식되는 DNA 서열. 그것은 또한 폴리-A 신호를 암호화한다.
FACS/유세포 분석법: 형광-활성화 세포 분류. 유세포 분석법은 개별 세포가 특이적 세포 표면 및 세포내 마커의 발현에 대해서 분석될 수 있는 분석 기술이다. 이 기술의 변형인 세포 분류는 마커의 정의된 세트를 보유한 세포가 추가 분석을 위해서 검색되는 것을 가능하게 한다.
플립파제: 빵 효모 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)의 2μm 플라스미드로부터 유래된 리콤비나제(플립파제, Flp)
이종특이적 리콤비나제 부위: 2개의 DNA 분자의 크로스오버를 촉진시키기 위해서 리콤비나제 효소에 의해서 인식되는 DNA 서열.
HLA I: 인간 백혈구 항원 클래스 I. 모든 유핵세포에서 인간에서 발현되고, 세포 표면(여기서 그것은 T-세포 수용체에 대한 내부 단백질의, 카고 짧은 단편, 펩타이드로서 존재함)으로 외수송되는 유전자. 따라서 그것은 내재하는 단백질과 함께 잠재하는 진행 중인 감염의 단편을 제시한다. HLA I은 배양 배지에 첨가되거나, 도입된 유전 요소로부터 발현된 단백질로부터 생성되거나, 세포에 의해서 취해진 단백질로부터 생성된 카고 펩타이드로서 추가로 존재할 수 있다. HLA 클래스 I 유전자는, 상이한 개체가 제시 시에 변이로 이어지는 동일한 유전자에서의 변이를 가질 가능성이 있다는 것을 의미하는 다형성이다. HLA 클래스 II에 관련됨.
HLA II: 인간 백혈구 항원 클래스 II. 인간에서 획득 면역 반응을 조직화하고, 돕는 특이적 세포, 예를 들어 수지상 세포에서 발현되는 유전자. HLA 클래스 I에 관련됨. HLA 클래스 II 단백질은 세포 표면(여기서 이것은 T-세포 수용체에 대한 외부 단백질의, 카고 짧은 단편, 펩타이드로서 존재함)으로 외수송된다. 따라서 그것은 내재하는 단백질과 함께 잠재하는 진행 중인 감염의 단편을 제시한다. HLA II는 배양 배지에 첨가되거나, 도입된 유전 요소로부터 발현된 단백질로부터 생성되거나, 세포에 의해서 취해진 단백질로부터 생성된 카고 펩타이드로서 추가로 존재할 수 있다. HLA 클래스 II 유전자는, 상이한 개체가 제시 시에 변이로 이어지는 동일한 유전자에서의 변이를 가질 가능성이 있다는 것을 의미하는 다형성이다.
상동 아암: 보체 상동 아암에 대해서 유사한 동일한 서열을 가져서, 세포 과정, 상동 직접 수선에 의해서 2개의 DNA 분자의 교환을 촉진시키는 DNA의 스트레치.
면역 감시: 면역계가 감염, 악성종양 또는 잠재적으로 병원성인 변경을 검출하고, 이에 의해서 활성화되는 과정.
인설레이터: 유전자가 근처 유전자의 활성화 또는 억압에 의해서 영향을 받는 것을 예방하는 DNA 서열. 인설레이터는 또한 침묵화된 유전자로부터 능동적으로 전사된 유전자로의 이질염색질의 확산을 예방한다.
통합: 세포의 염색체 내에서의 DNA 서열의 물리적 결찰.
내부 리보솜 유입 부위(IRES): 전사 시에, 캡-의존적 방식으로 번역의 개시를 허용하는 RAN 요소를 암호화하는 DNA 서열.
J (-분절): 결합 분절. 또한 J 영역. T-세포 수용체를 조립하는 데 사용되는 유전자 분절 중 하나. 각각의 개체는 이러한 영역의 상당한 수의 상이한 변형을 가져서 각각의 개체가 매우 다양한 상이한 TCR을 갖는 T-세포가 되게 한다.
J-C 유입 벡터: J 및 C TCR 분절을 보유하고, 전장 TCR ORF의 재구성 동안 V 공여자 벡터로부터의 서열 및 odeCDR3을 수용하는 2-성분 벡터 시스템의 벡터.
J 공여자 벡터 골격: 결합 공여자 벡터 골격. J 수용 카세트 단편이 삽입되어 J 수용 카세트 벡터를 생성하는 벡터 골격.
J 공여자 벡터: J TCR 분절을 보유하고, 이러한 분절을 전장 TCR ORF의 재구성 동안 V-C 유입 벡터에 제공하는 2-성분 벡터 시스템의 벡터.
J 수용 카세트 단편: 결합 수용 카세트 단편. J 수용 카세트 벡터를 작제하는 데 사용되는 C-부분을 보유하는 클로닝 단편.
J 수용 카세트 벡터: 결합 수용 카세트 벡터. J 분절 부분이 삽입되어 J 공여자 벡터를 생성하는, C-부분을 보유하는, 벡터.
J 분절 부분: 결합 분절 부분. J 수용 카세트 벡터 내에 삽입되어 J 공여자 벡터를 생성시키는 J 유전자 분절의 일부를 보유하는 DNA 작제물.
K는 Keto를 나타내는 뉴클레오타이드 암호(K = G 또는 T)
코작 서열: 번역의 효율적인 개시를 위해서 요구되는 짧은 서열.
M은 aMino를 나타내는 뉴클레오타이드 암호(M = A 또는 C)
주요 HLA 클래스 I: 유전자 HLA-A, HLA-B 및 HLA-C를 포함하는 APX의 패밀리.
매칭된: 두 성분이 상보성 성분 사이의 상호작용을 유도 및 제한하는 유전 요소를 암호화하는 경우.
메가뉴클레아제 인식 부위: 일반적으로 메가뉴클레아제라고 지칭되는, 엔도데옥시리보뉴클레아제에 의해서 인식되는 DNA 서열.
이동성 유전 요소: DNA와 트랜스포사제 효소의 활성도의 통합을 허용할 수 있는 DNA 서열.
N은 4g0 aNy 뉴클레오타이드를 나타내는 뉴클레오타이드 암호(N = A, T, C 또는 G)
네이티브: 세포에서 자연 발생하는 엔티티
음성 선택 마커: 상기 마커-보유 벡터를 보유하는 벡터 및/또는 숙주 유기체의 음성 선택을 부여하는 선택 가능한 마커.
odeCDR3: 상보성 결정 영역을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스. 전장 TCR ORF를 재구성하기 위해서 2-성분 벡터 시스템과 함께 사용되는, 종결 오버행을 갖는 CDR3 유전자 서열을 보유하는 합성 작제물.
복제 기점: 복제가 개시된 벡터, 플라스미드 또는 게놈 내의 특정 서열.
ORF: 오픈 리딩 프레임. 리보솜에 의해서 단백질(폴리펩타이드)의 합성을 위해서 번역 프레임을 암호화하는 유전 물질의 스트레치.
오버행: 이중 가닥 핵산 분자의 말단에서의 단일 가닥 서열. 점착성 또는 응집성 단부라 종종 지칭됨
PCR: 특이적 표적 DNA 분자가 기하급수적으로 증폭되는 중합효소 연쇄 반응.
펩타이드: 6 내지 30개 아미노산 길이의 아미노산의 짧은 스트링.
표현형 분석: 세포의 관찰 가능한 특징의 분석.
플라스미드: 유전학적 작제물은 염색체, 전형적으로는 박테리아 또는 원생동물의 세포질 내의 작은 원형 DNA 가닥과 독립적으로 복제할 수 있다.
다형성: 동일한 유전자의 상이한 대립유전자의 존재를 통해서 동일한 종의 개체에서 상이한 형태로 존재함.
폴리펩타이드: 3-차원 구조를 형성하는, 펩타이드의 스트레치로 이루어진 단백질.
양성 선택 마커: 상기 마커-보유 벡터를 보유하는 벡터 및/또는 숙주 유기체의 양성 선택을 부여하는 선택 가능한 마커.
프라이머: 예를 들어, PCR 동안 표적 DNA 서열의 특이적 인식을 허용하는 짧은 DNA 서열.
프로모터: 유전자 발현의 제어된 개시를 위한 조절 DNA 요소.
리콤비나제: 유전자 재조합을 매개하는 효소.
재구성: 본 발명에서, 재구성은 TCR ORF를 조립하기 위한 TORES 및 TORES2의 작동을 기재한다. '재구성 반응'은 이러한 작동이 수반되는 반응 믹스 및 열순환 반응이다.
리포터 요소: 이러한 요소를 보유하는 유기체 또는 벡터에서 보고된 신호를 매개하는 유전 요소. 양성 또는 음성 선택 마커로서 사용될 수 있음.
제한 효소 절단 서열: 상기 제한 효소의 인식 서열에 대해서 내인성 또는 내인성일 수 있는, 제한 효소에 의해서 절단되는 유전자 서열
제한 효소 인식 서열: 제한 효소에 의해서 인식 및 맞물리는 유전자 서열.
선택 가능한 마커: 인공적인 선택 방법에 적합한 특질을 부여하는 DNA 서열.
슬라이스 수용자 부위: 인트론 AM, APX CM 또는 표면 상에 TCRsp를 갖는 세포와의 상호작용을 위한 친화성 시약, 또는 TCRsp 기반 시약의 3' 단부의 DNA 서열.
슬라이스 공여자 부위: 인트론의 5' 단부에서의 DNA 서열.
자살 유전자: 상기 유전자를 보유한 숙주 유기체 내에서 세포사를 매개할 유전자. 양성 또는 음성 선택 마커로서 사용될 수 있음.
합성적: 인공적으로 생성된 엔티티.
T-세포: T 림프구. 표면 상에서 T-세포 수용체를 발현하는 백혈구. 자신의 신체와 반응하지 않지만 감염 및 악성종양을 인식하고, 동일한 종의 대부분의 구성원으로부터의 이식편을 거부하도록 면역계에 의해서 선택됨.
TCR: T-세포 수용체. 림프구 호출된 T-림프구의 하위군에 의해서 발현된 친화성 분자. 인간에서 TCR은 바이러스 또는 박테리아 감염 또는 암성 세포로부터의 단편을 비롯한, APX CM 또는 APX AM에 의해서 제시된 카고를 인식한다. 따라서, TCR 인식은 획득 면역계의 통합된 부분이다. TCR은 세포 표면 상에서 짝지워진 2개의 쇄로 이루어진다. 각각의 세포의 표면 상에 발현된 TCR은 다양한 유전자의 큰 풀로부터 무작위로 조립되고(v, d, j 및 c 분절), 따라서 각각의 개체는 상이한 TCR의 매우 크고 다양한 레퍼토리를 발현하는 T-세포의 풀을 갖는다.
TRA: TCR 알파 암호화 유전자좌. VDJ 재조합된 TCR 쇄를 형성할 수 있는 4종의 상이한 유전자좌 암호화 유전자 중 하나. 번역된 TCR 알파 쇄 단백질은 전형적으로 번역된 TCR 베타 쇄 단백질과 짝을 이뤄 알파/베타 TCRsp를 형성한다.
TRB: TCR 베타 암호화 유전자좌. VDJ 재조합된 TCR 쇄를 형성할 수 있는 4종의 상이한 유전자좌 암호화 유전자 중 하나. 번역된 TCR 베타 쇄 단백질은 전형적으로 TCR 알파 쇄 단백질과 짝을 이뤄 알파/베타 TCRsp를 형성한다.
TRD: TCR 델타 암호화 유전자좌. VDJ 재조합된 TCR 쇄를 형성할 수 있는 4종의 상이한 유전자좌 암호화 유전자 중 하나. 번역된 TCR 델타 쇄 단백질은 전형적으로 번역된 TCR 감마 쇄 단백질과 짝을 이뤄 감마/델타 TCRsp를 형성한다.
TRG: TCR 감마 암호화 유전자좌. VDJ 재조합된 TCR 쇄를 형성할 수 있는 4종의 상이한 유전자좌 암호화 유전자 중 하나. 번역된 TCR 감마 쇄 단백질은 전형적으로 번역된 TCR 델타 쇄 단백질과 짝을 이뤄 감마/델타 TCRsp를 형성한다.
타입 IIS 제한 효소: 비대칭 DNA 서열을 인식하고, 이의 인식 서열 외부를 절단하는 제한 효소.
V (-분절): 가변 영역. 또한 V 영역. T-세포 수용체를 조립하는 데 사용되는 유전자 분절 중 하나. 각각의 개체는 이러한 영역의 상당한 수의 상이한 변형을 가져서 각각의 개체가 매우 다양한 상이한 TCR을 갖는 T-세포가 되게 한다.
V-C 유입 벡터: V 및 C TCR 분절을 보유하고, 전장 TCR ORF의 재구성 동안 J 공여자 벡터로부터의 서열 및 odeCDR3을 수용하는 2-성분 벡터 시스템의 벡터.
V 클로닝 단편: 가변 클로닝 단편. V 유전자 분절 클로닝 단편이라고도 지칭됨. V-C 유입 벡터를 작제하는 데 사용되는 V 유전자 분절의 일부를 보유하는 작제물.
V 공여자 벡터: V TCR 분절을 보유하고, 이러한 분절을 전장 TCR ORF의 재구성 동안 J-C 유입 벡터에 제공하는 2-성분 벡터 시스템의 벡터.
벡터: 벡터는 유전 정보를 보유하는 유전학적 작제물이다. 본 발명에서 벡터는 통상적으로 플라스미드 DNA 벡터를 기술한다. 벡터는 숙주 유기체에서 증식 및 선택될 수 있는 임의의 이러한 작제물을 나타낼 수 있다.
W는 Weak를 나타내는 뉴클레오타이드 암호이다(W = A 또는 T).
도면의 설명
도 1. 신속한 전장 TCR ORF 재구성을 위한 2-성분 벡터 시스템.
A)
2-성분 벡터 시스템(박스 i), 요구되는 올리고 듀플렉스 투입물(박스 ii) 및 생성된 전장 TCR ORF 벡터(박스 iii)의 중심 특징부가 도시되어 있다. 제1 성분은 선택된 TCR V(가변) 유전자 분절 및 TCR C(불변) 유전자 분절을 혼입한 V-C 유입 벡터를 나타낸다. 이러한 유입 벡터는 최종 전장 TCR ORF가 보유될 골격을 나타낸다. 따라서, 이러한 벡터 골격의 임의의 바람직한 특징부는 의도된 하류 응용에 대해서 조정된다. 보통, 이것은 적어도 5' 유전 요소 및 3' 유전 요소로 표현될 것이다. 표적 전장 TCR ORF의 요구되는 V 유전자 분절 및 C 유전자 분절을 V-C 유입 벡터의 라이브러리로 선택하여 임의의 목적하는 V/C 조합물(박스 i)의 TCR ORF를 작제한다. 제2 성분은 선택된 J(결합) 유전자 분절을 함유하는, J 공여자 벡터를 나타낸다. 이러한 공여자 벡터는 J 유전자 분절을 공여하는 작용을 하여, 이러한 벡터의 골격은 반응 부산물이다. 표적 TCR ORF의 목적하는 J 유전자 분절은 라이브러리 J 공여자 벡터로부터 선택된다. 전장 TCR ORF에 요구되는 서열을 완성하기 위해서, 성숙 TCR ORF의 CDR3 영역에 상당히 상응하는 짧은 올리고 듀플렉스(박스 ii)를 합성한다. 이러한 올리고 듀플렉스는 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터의 제한 효소 소화에 의해서 생성된 고유한 오버행과 상용성인 단일 가닥 오버행으로 합성된다. 적절한 제한 효소 및 리가제 효소와 함께 단일-튜브 반응으로 조합되는 경우, 전장 TCR ORF는, 미리 존재하는 라이브러리로부터 선택된 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터, 및 합성된 올리고 듀플렉스에 의해서 제공된 서열로부터 재구성된다(박스 iii).
B)
TCR ORF 재구성 시스템의 전체 라이브러리 특징부의 기능을 도시한다. 단일 V-C 유입 벡터는 다양한 V-C 조합을 갖는 V-C 유입 벡터의 라이브러리(박스 i)로부터 선택된다. 이러한 선택은 선택된 TCR 쇄를 위한 요구된 V-C 조합 서열을 기초로 한다. 단일 J 유입 벡터는 암호화된 다양한 J 유전자 분절을 갖는 J 공여자 벡터의 라이브러리(박스 ii)로부터 선택된다. 이러한 선택은 V-C 유입 벡터의 것과 동일한 선택된 TCR 쇄를 위한 요구된 J 조합 서열을 기초로 한다. 마지막으로, CDR3을 암호화하는 올리고머 듀플렉스(odeCDR3)는 표적 TCR 쇄의 전장 ORF를 완성하도록 선택된다(박스 iii). 이러한 3종의 성분(박스 i, ii 및 iii)은 적절한 제한 효소 및 리가제 효소와 함께 단일 반응으로 조합된다. 반응 사이클은 단일 단계로 V-C 유입 벡터 골격 컨텍스트로 재구성된 전장 TCR ORF를 생산한다(박스 iv).
도 2. 제너릭 V-C 유입 벡터의 유전 특징부의 플라스미드 개략도.
표지된 박스로서 도시된 최소한으로 요구되는 유전 요소를 갖는 V-C 유입 벡터의 원형 플라스미드 개략도를 도시한다. 코작은 번역의 효율적인 개시에서 역할을 하는 공통 서열을 지칭한다. V-분절은 TCR 가변 생식 계열 ORF, 또는 돌연변이체/합성 ORF의 일부를 암호화하는 선택된 서열을 지칭한다. 타입 IIS 는 효소가 5' 방향으로 절단하도록 배향된 타입 IIS 제한 효소 결합 부위를 지칭한다. 타입 IIS 는 효소가 3' 방향으로 절단하도록 배향된 타입 IIS 제한 효소 결합 부위를 지칭한다. -ve 선택은 전장 TCR 재작제 반응, 또는 후속 선택 단계 동안 서열을 보유하는 플라스미드에 유해하도록 설계된 음성 선택 요소를 지칭한다. C-분절은 TCR 불변 생식 계열 ORF, 또는 돌연변이체/합성 ORF의 일부를 암호화하는 선택된 서열을 지칭한다. +ve 선택 #1은 벡터를 보유한 유기체에 선택적인 이점을 운반하는 데 사용되는 2-성분 시스템의 제1 양성 선택 마커를 지칭하며, 이것은 제2 벡터 성분(도 3 참고)의 양성 선택 마커와 상이하다. Ori는 상용성 숙주 내의 플라스미드의 증식을 위해서 사용되는 복제 기점을 지칭한다. 5' 유전 요소는 재작제된 전장 TCR의 하류 응용을 위해서 요구되는 속성을 제공하고, 재작제된 전장 TCR의 5'에 위치되어야 하는 임의의 목적하는 유전 요소, 예를 들어, 시스-작용 요소를 지칭한다. 3' 유전 요소는 재작제된 전장 TCR의 하류 응용을 위해서 요구되는 속성을 제공하고, 전장 TCR OFR의 3'에 위치되어야 하는 임의의 목적하는 유전 요소, 예를 들어, 전사 종결인자 요소를 지칭한다.
도 3. 제너릭 J 공여자 벡터의 유전 특징부의 플라스미드 개략도.
표지된 박스로서 도시된 최소한으로 요구되는 유전 특징부를 갖는 J 공여자 벡터의 원형 플라스미드 개략도를 도시한다. J 분절 부분은 TCR 결합 생식 계열 ORF, 또는 돌연변이체/합성 J 유전자 분절의 일부를 암호화하는 DNA 서열을 지칭한다. C 부분은 TCR 불변 유전자 분절의 작은 5' 부분을 지칭한다. 타입 IIS 는 효소가 5' 방향으로 절단하도록 배향된 타입 IIS 제한 효소 결합 부위를 지칭한다. 타입 IIS 는 효소가 3' 방향으로 절단하도록 배향된 타입 IIS 제한 효소 결합 부위를 지칭한다. +ve 선택 #2는 벡터를 보유한 유기체에 선택적인 이점을 운반하는 데 사용되는 2-성분 시스템의 제1 양성 선택 마커를 지칭하며, 이것은 제1 벡터 성분(도 2 참고)의 양성 선택 마커와 상이하다. Ori는 상용성 숙주 내의 플라스미드의 증식을 위해서 사용되는 복제 기점을 지칭한다.
도 4. 전장 TCR ORF를 재작제하기 위한 2-성분 벡터 시스템의 유전자 입력물, 부산물 중간체 및 생성물의 일반적인 설명.
벡터 시스템의 2종의 성분(a 및 b), 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스(c)가 도시되어 있고, 이러한 3종의 성분이 타입 IIS 제한 효소 및 리가제와 함께 단일 반응으로 조합되는 경우, 2종의 반응 부산물(d 및 e), 2종의 반응 중간체(f 및 g) 및 1종의 반응 생성물(h)이 생성된다. 2-성분 시스템의 입력 벡터 및 생성물을 표지된 박스로서 도시된 유전자 요소를 갖는 원형 플라스미드 도식으로 도시하고; 부산물 또는 중간체를 나타내는 개방 플라스미드 벡터는 표지된 박스로서 도시된 비원형 플라스미드이고; 선형 DNA를 유전 요소를 기술하는 표지된 박스의 시리즈로서 도시한다.
a) 도 2에 도시된 바와 같은 제너릭 V-C 유입 플라스미드.
b) 도 3에 도시된 바와 같은 제너릭 J 공여자 플라스미드.
c) 2개의 단일 가닥 DNA 오버행, 오버행 1-5' 및 오버행 1-3'가 측접된 CDR3 서열을 함유하는 DNA 듀플렉스. 오버행 1-5'는 개방 V-C 유입 벡터 중간체(g) 내의 오버행 1-3'와 상용성이다. 오버행 2-3'는 공여자 벡터 단편 중간체(f) 내의 오버행 2-5'와 상용성이다.
d) 타입 IIS 제한 효소에 의한 V-C 유입 벡터(a)의 소화는 -ve 선택 요소 및 타입 IIS 및 타입 IIS 요소를 함유하는 선형 DNA V-C 유입 벡터 반응 부산물을 초래한다.
e) 타입 IIS 제한 효소에 의한 J 공여자 벡터(b)의 소화는 절제된 J 공여자 벡터 단편 중간체(f)에 보유된 것을 제외하고는 모체 플라스미드의 모든 유전 요소를 함유하는 비원형 플라스미드 부산물을 초래한다.
f) 타입 IIS 제한 효소에 의한 J 공여자 벡터(b)의 소화는 단일 가닥 DNA 오버행, 오버행 2-5' 및 오버행 3-3'이 측접된 J 분절 부분 및 C 부분을 함유하는 선형 DNA 단편을 초래한다. 오버행 2-5'는 CDR3 DNA 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스(c) 내의 오버행 2-3'와 상용성이다. 오버행 3-3'는 개방 V-C 유입 벡터 중간체(g) 내의 오버행 3-5'와 상용성이다.
g) 타입 IIS 제한 효소에 의한 V-C 유입 벡터(a)의 소화는 절제된 선형 DNA V-C 유입 벡터 반응 부산물(d)에 보유된 것을 제외하고는 모체 플라스미드의 모든 유전 요소를 함유하는 비원형 플라스미드 중간체를 초래한다. 소화는 2개의 단일 가닥 DNA 오버행, 오버행 1-3' 및 오버행 3-5'를 추가로 생성시킨다. 오버행 1-3'는 CDR3 DNA 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스(c) 내의 오버행 1-5'와 상용성이다. 오버행 3-5'는 J 공여자 벡터 단편 중간체(f) 내의 오버행 3-3'와 상용성이다.
h) 모든 3종의 상용성 단일-가닥 DNA 오버행의 결찰은 원형 플라스미드로서 전장 TCR ORF 벡터를 초래한다. 이러한 플라스미드는 절제된 V-C 유입 벡터 반응 부산물(d)를 제외하고는 모체 V-C 유입 벡터(a)의 모든 유전 요소를 함유한다. 또한, 전장 TCR ORF 벡터는 CDR3 DNA 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스(c)로부터의 CDR3 서열 및 J 공여자 벡터 단편 반응 중간체로부터의 J 분절 부분 및 C 부분을 혼입한다. 화살표는 상용성 단일-가닥 DNA 오버행 1, 2 및 3 사이의 결찰의 근사 지점을 나타낸다. 결찰 지점 1은 각각 V-C 유입 벡터 반응 중간체(g) 및 CDR3 DNA 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스(c)에 의해서 제공된 1-3' 및 1-5' 요소로 구성된다. 결찰 지점 2는 각각 CDR3 DNA 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스(c) 및 J 공여자 벡터 단편 반응 중간체(f)에 의해서 제공된 2-3' 및 2-5' 요소로 구성된다. 결찰 지점 3은 각각 J 공여자 벡터 단편 반응 중간체(f) 및 V-C 유입 벡터 반응 중간체(g)에 의해서 제공된 3-3' 및 3-5' 요소로 구성된다.
도 5 V-C 유입 벡터의 작제를 위한 V 클로닝 단편의 배열
실시예 1 내지 4에 기술된 바와 같은 인간 TRA 및 TRB TCR 쇄를 위한 TORES의 V-C 유입 벡터를 조립하는 데 사용하기 위한 V 클로닝 단편의 도면을 도시한다.
V 클로닝 단편은 클로닝 단편의 PCR-매개된 증폭을 용이하게 하기 위해서 5' 및 3' 단부에 고유한 프라이머 결합 서열이 측접되어 있다. BbsI 부위는 V-C 유입 벡터의 조립에 사용되는 특이적 타입 IIS 제한 효소 결합 부위를 나타내고, 여기서 는 인식 부위가 부위의 3' 방향에서 절단되도록 배향된 것을 나타내고, 는 그 부위가 5' 방향에서 절단되도록 배향된 것을 나타낸다. BbsI 부위는 암호화된 코작 서열의 5'를 절단하여 오버행*1을 생성시킨다. BsaI 부위는 절단하여 NotI 5' 단편 내에 5' NotI 오버행을 생성시킨다. 오버행*1 및 5' NotI 오버행은 V-C 유입 벡터의 조립 시에 각각 소화된 V-C 유입 벡터 골격의 오버행*1', 및 소화된 C 클로닝 단편의 3' NotI 오버행과 궁극적으로 결찰된다. NotI 5' 단편은 NotI 인식 서열의 6 뉴클레오타이드 5' 단편을 나타내고, 여기서 NotI는 음성 선택 마커로서 작용하여 TORES의 작동 시에 모체 V-C 유입 벡터를 제거한다. 완성된 NotI 인식 부위는 C 클로닝 단편에 의해서 제공된, 3' NotI 단편으로 재구성된다. V-분절은 최종 V-C 유입 벡터에 의해서 암호화될 TCR V 유전자 분절을 나타내고, 주어진 V 분절의 ATG 시작 코돈에서부터 CDR3 영역의 가장자리를 획정하는 V 분절의 마지막 Cys 코돈까지 암호화한다. BsaI 부위 는 전장 TCR ORF를 재구성하기 위해서 TORES 시스템의 작동 동안 사용되는 타입 IIS 제한 효소 인식 서열이다. BsaI 효소의 작용(여기서 그 부위는 5' 방향에서 절단하도록 배향됨)은, 각각의 V 분절의 마지막 Cys 코돈의 3개의 뉴클레오타이드 및 그 Cys 코돈에 선행된 코돈의 제3 뉴클레오타이드를 포함하는 V 분절의 3' 단부에 오버행 1의 생성을 초래한다. 이러한 오버행은 주어진 TORES 세트에서 모든 V 분절 중에서 표준화된다. 궁극적으로, V 분절의 3'에서 오버행 1은 전장 TCR ORF의 재구성에 대한 TORES 시스템의 작동 시에 5' odeCDR3에서 오버행 1과 결찰된다. 모든 sp는 타입 IIS 인식 서열과 표적 오버행 서열 간의 적절한 이격을 생성시키거나, 또는 효율적인 작용을 위한 NotI 인식 및 절단 부위를 이격시키기 위한 하나 이상의 뉴클레오타이드의 첨가를 나타낸다.
도 6 V-C 유입 벡터의 작제를 위한 C 클로닝 단편의 배열
실시예 1 내지 4에 기술된 바와 같은 인간 TRA 및 TRB TCR 쇄를 위한 TORES의 V-C 유입 벡터를 조립하는 데 사용하기 위한 C 클로닝 단편의 도면을 도시한다.
C 클로닝 단편은 클로닝 단편의 PCR-매개된 증폭을 용이하게 하기 위해서 5' 및 3' 단부에 고유한 프라이머 결합 서열이 측접되어 있다. BbsI 부위는 V-C 유입 벡터의 조립에 사용되는 특이적 타입 IIS 제한 효소 결합 부위를 나타내고, 여기서 는 인식 부위가 부위의 3' 방향에서 절단되도록 배향된 것을 나타내고, 는 그 부위가 5' 방향에서 절단되도록 배향된 것을 나타낸다. BbsI 부위는 절단하여 NotI 3' 단편 내에 3' NotI 오버행을 생성시킨다. BsaI 부위는 C 분절의 정지 코돈의 3'를 절단하여 C 분절의 3' 단부에 오버행*2를 생성시킨다. 오버행*2 및 3' NotI 오버행은 V-C 유입 벡터의 조립 시에 각각 소화된 V-C 유입 벡터 골격의 오버행*2', 및 소화된 V 클로닝 단편의 5' NotI 오버행과 궁극적으로 결찰된다. NotI 3' 단편은 NotI 인식 서열의 6 뉴클레오타이드 3' 단편을 나타내고, 여기서 NotI는 음성 선택 마커로서 작용하여 TORES의 작동 시에 모체 V-C 유입 벡터를 제거한다. 완성된 NotI 인식 부위는 V 클로닝 단편에 의해서 제공된, 5' NotI 단편으로 재구성된다.
C-분절은 최종 V-C 유입 벡터에 의해서 암호화될 TCR C 유전자 분절을 나타내고, C 유전자 분절의 제1 Glu 코돈의 사이토신 잔기 5'에서부터 정지 코돈까지 암호화한다. BsaI 부위는 전장 TCR ORF를 재구성하기 위해서 TORES 시스템의 작동 동안 사용되는 타입 IIS 제한 효소 인식 서열이다. BsaI 효소의 작용(여기서 부위는 3' 방향에서 절단하도록 배향됨)은 C 분절의 5' 단부에 오버행 3의 생성을 초래한다. 이러한 오버행은 주어진 TORES 세트에서 모든 C 분절 중에서 표준화된다. 궁극적으로, C 분절의 5'에서 오버행 3은 전장 TCR ORF의 재구성에 대한 TORES 시스템의 작동 시에 J 공여자 벡터의 3' C 부분에서 오버행 3과 결찰된다. 모든 sp는 타입 IIS 인식 서열과 표적 오버행 서열 간의 적절한 이격을 생성시키거나, 또는 효율적인 작용을 위한 NotI 인식 및 절단 부위를 이격시키기 위한 하나 이상의 뉴클레오타이드의 첨가를 나타낸다.
도 7 V-C 유입 벡터의 작제를 위한 V-C 유입 벡터 골격의 배열
실시예 1 내지 4에 기술된 바와 같은 인간 TRA 및 TRB TCR 쇄를 위한 TORES의 V-C 유입 벡터를 조립하는 데 사용하기 위한 V-C 유입 벡터 골격의 도면을 도시한다.
환형 플라스미드 DNA는 복제 기점(Ori) 및 양성 선택 마커 #1을 함유한다. 이러한 선택 마커는, 조립 동안 V-C 유입 벡터 골격 및 V-C 유입 벡터의 클론을 단리하는 경우 형질전환된 숙주의 선택을 위해서 그리고 또한 TORES의 작동 동안 전장 TCR ORF를 함유하는 벡터의 선택을 위해서 사용된다. 5' 유전 요소 및 3' 유전 요소는 TORES 작동에 의한 이의 생성 후 전장 TCR ORF의 생성 후에 최종 TCR ORF 측접된 표적 요소를 암호화한다. 5' 유전 요소는 TCR 전사물의 발현을 유도하기 위해서 포유동물 프로모터 요소를 나타낼 수 있고, 3' 유전 요소는 전사 종결인자 서열을 나타낼 수 있다. ACC65I 부위는 제한 효소 인식 서열을 나타내고, 여기서 Acc65I 효소의 작용은 오버행*1'의 생성을 초래한다. 이러한 오버행*1'는 V-C 유입 벡터의 조립 동안 소화된 V 클로닝 단편에서 오버행*1과 결찰된다. XbaI 부위는 제한 효소 인식 서열을 나타내고, 여기서 XbaI 효소의 작용은 오버행*2'의 생성을 초래한다. 이러한 오버행*2'는 V-C 유입 벡터의 조립 동안 소화된 C 클로닝 단편에서 오버행*2와 결찰된다. Sp는 두 요소의 효율적인 작용을 위해서 Acc65I와 XbaI 인식 부위 사이를 이격시키기 위한 뉴클레오타이드의 첨가를 나타낸다.
도 8 J 수용 카세트 단편의 배열
실시예 2 및 3에 기술된 바와 같은 인간 TRA 및 TRB TCR 쇄를 위한 TORES의 J 공여자 벡터의 조립에 사용되는 J 수용 카세트 단편의 도면을 도시한다. J 수용 카세트 단편은 J 수용 카세트 벡터를 생성시키기 위해서 J 공여자 벡터 골격 내에 삽입된다.
J 수용 카세트 단편은, 2개의 상보성 올리고뉴클레오타이드를 어닐링하여 J 공여자 벡터 골격에 단편을 삽입하는 데 사용되는 5' 및 3' 단부에 4-뉴클레오타이드 단일 가닥 오버행을 갖는 선형 이중 가닥 DNA 작제물을 생성시킴으로써 생성된다. J 수용 카세트 단편의 5' 단부에서의 오버행*3은 소화된 J 공여자 벡터 골격의 오버행*3'와 결찰되는 반면, 3' 단부에서의 오버행*4는 소화된 J 공여자 벡터 골격의 오버행*4'와 결찰된다.
BsaI 부위는 전장 TCR ORF를 조립하기 위해서 TORES의 작동에서 사용되는 타입 IIS 제한 인식 부위를 나타낸다. BsaI 부위는 5' 방향에서 절단하도록 배향되고, C 부분 서열 상에서 작용하여 3' C 부분에서 오버행 3을 생성시킨다. BsaI 부위는 J 공여자 벡터의 J 분절 부분 상에서 작용하여 J 분절 부분의 5' 단부에 오버행 2를 궁극적으로 생성시킨다. BsaI 요소는 또한 오버행*5를 함유하는데, 이것은 J 공여자 벡터의 조립 동안 BbsI 부위 상에서의 BbsI의 작용에 의해서 생성된다.
BbsI 부위는 J 공여자 벡터를 조립하는 데 사용되는 타입 IIS 제한 인식 부위를 나타낸다. BbsI 부위는 BsaI 요소를 절단하여 오버행*5를 생성시키는 반면, BbsI # 부위는 C 부분의 5' 단부를 절단하여 오버행*6을 생성시킨다. 오버행*5 및 오버행*6은 각각 J 분절 부분의 오버행*5' 및 오버행*6'와 궁극적으로 결찰된다.
C 부분은 TORES의 작동 동안 비-회귀성 오버행의 표준화된 생성을 가능하게 하는 표적 C 유전자 분절의 작은 부분을 나타낸다. 이러한 C 부분은 J 분절 부분의 3' 단부에 궁극적으로 보유되고, TORES의 작동에서 소화된 V-C 유입 벡터에 의해서 보유된 C 분절과 결찰된 서열의 부분을 형성하여 전장 TCR ORF를 생성시킨다.
NotI 부위는 J 공여자 벡터의 생성 동안 모체 J 수용 카세트 벡터를 제거하는 데 사용되는 음성 선택 마커를 나타낸다.
모든 sp는 타입 IIS 인식 서열과 표적 오버행 서열 간의 적절한 이격을 생성시키거나, 또는 효율적인 작용을 위한 NotI 인식 및 절단 부위를 이격시키기 위한 하나 이상의 뉴클레오타이드의 첨가를 나타낸다.
도 9 J 공여자 골격의 배열
실시예 2 및 3에 기술된 바와 같은 인간 TRA 및 TRB TCR 쇄를 위한 TORES의 J 공여자 벡터의 조립에 사용되는 J 공여자 벡터 골격의 도면을 도시한다. J 수용 카세트 단편은 J 수용 카세트 벡터를 생성시키기 위해서 J 공여자 벡터 골격 내에 삽입된다.
환형 플라스미드 DNA는 복제 기점(Ori) 및 양성 선택 마커 #2를 함유한다. 이러한 선택 마커는, 조립 동안 J 공여자 벡터 골격 및 J 공여자 벡터의 클론을 단리하는 경우 형질전환된 숙주의 선택을 위해서 사용된다. 중요하게는, 이러한 양성 선택 마커는 V-C 유입 벡터 내의 양성 선택 마커 #1과 상이하여, 모체 J 공여자 벡터는 TORES의 작동 동안 #1에 대한 양성 선택 하에서 제거되어 V-C 유입 벡터 골격의 맥락에서 전장 TCR ORF를 생성시킨다.
EcoRI 부위는 제한 효소 인식 서열을 나타내고, 여기서 EcoRI 효소의 작용은 오버행*3'의 생성을 초래한다. 이러한 오버행*3'는 J 수용 카세트 벡터의 조립 동안 어닐링된 J 수용 카세트 단편에서 오버행*3과 결찰된다. XboI 부위는 제한 효소 인식 서열을 나타내고, 여기서 XboI 효소의 작용은 오버행*4'의 생성을 초래한다. 이러한 오버행*4'는 J 수용 카세트 벡터의 조립 동안 어닐링된 J 수용 카세트 단편에서 오버행*4와 결찰된다. Sp는 두 요소의 효율적인 작용을 위해서 Acc65I와 XbaI 인식 부위 사이를 이격시키기 위한 뉴클레오타이드의 첨가를 나타낸다.
도 10 J 수용 카세트 벡터의 배열
실시예 2 및 3에 기술된 바와 같은 인간 TRA 및 TRB TCR 쇄를 위한 TORES의 J 공여자 벡터의 조립에 사용되는 J 공여자 벡터 골격의 도면을 도시한다. J 수용 카세트 벡터는 J 수용 카세트 단편의 J 공여자 벡터 골격 내로의 삽입에 의해서 생성된다.
환형 플라스미드 DNA는 복제 기점(Ori) 및 양성 선택 마커 #2를 함유한다. 이러한 선택 마커는, 조립 동안 J 공여자 벡터 골격 및 J 공여자 벡터의 클론을 단리하는 경우 형질전환된 숙주의 선택을 위해서 사용된다. 중요하게는, 이러한 양성 선택 마커는 V-C 유입 벡터 내의 양성 선택 마커 #1과 상이하여, 모체 J 공여자 벡터는 TORES의 작동 동안 #1에 대한 양성 선택 하에서 제거되어 V-C 유입 벡터 골격의 맥락에서 전장 TCR ORF를 생성시킨다.
BsaI 부위는 전장 TCR ORF를 조립하기 위해서 TORES의 작동에서 사용되는 타입 IIS 제한 인식 부위를 나타낸다. BsaI 부위는 5' 방향에서 절단하도록 배향되고, C 부분 서열 상에서 작용하여 3' C 부분에서 오버행 3을 생성시킨다. BsaI 부위는 J 공여자 벡터의 J 분절 부분 상에서 작용하여 J 분절 부분의 5' 단부에 오버행 2를 궁극적으로 생성시킨다. BsaI 요소는 또한 오버행*5를 함유하는데, 이것은 J 공여자 벡터의 조립 동안 BbsI 부위 상에서의 BbsI의 작용에 의해서 생성된다.
BbsI 부위는 J 공여자 벡터를 조립하는 데 사용되는 타입 IIS 제한 인식 부위를 나타낸다. BbsI 부위는 BsaI 요소를 절단하여 오버행*5를 생성시키는 반면, BbsI 부위는 C 부분의 5' 단부를 절단하여 오버행*6을 생성시킨다. 오버행*5 및 오버행*6은 각각 J 분절 부분의 오버행*5' 및 오버행*6'와 궁극적으로 결찰된다.
C 부분은 TORES의 작동 동안 비-회귀성 오버행의 표준화된 생성을 가능하게 하는 표적 C 유전자 분절의 작은 부분을 나타낸다. 이러한 C 부분은 J 분절 부분의 3' 단부에 궁극적으로 보유되고, TORES의 작동에서 소화된 V-C 유입 벡터에 의해서 보유된 C 분절과 결찰된 서열의 부분을 형성하여 전장 TCR ORF를 생성시킨다.
NotI 부위는 J 공여자 벡터의 생성 동안 모체 J 수용 카세트 벡터를 제거하는 데 사용되는 음성 선택 마커를 나타낸다.
모든 sp는 타입 IIS 인식 서열과 표적 오버행 서열 간의 적절한 이격을 생성시키거나, 또는 효율적인 작용을 위한 NotI 인식 및 절단 부위를 이격시키기 위한 하나 이상의 뉴클레오타이드의 첨가를 나타낸다.
도 11 J 분절 부분의 배열
실시예 2 및 3에 기술된 바와 같은 인간 TRA 및 TRB TCR 쇄를 위한 TORES의 J 공여자 벡터의 조립에 사용되는 J 분절 부분의 도면을 도시한다. J 분절 부분은 J 수용 카세트 벡터 내에 삽입되어 J 공여자 벡터를 생성시킨다.
상보성 단일 가닥 올리고뉴클레오타이드를 어닐링하여 말단 중 하나에 단일 가닥 오버행을 갖는 선형 이중 가닥 DNA 작제물을 형성하는 것은 J 분절 부분을 생성시킨다. 5' 말단에서의 오버행*5'는 BbsI로 소화된 J 수용 카세트 벡터 내에 생성된 오버행*5와 어닐링된다. 3' 말단에서의 오버행*6'는 BbsI로 소화된 J 수용 카세트 벡터 내에 생성된 오버행*6과 어닐링된다.
J 분절 부분은 표적 J 유전자 분절 서열을 나타낸다. 작제될 공여자 벡터의 스타일(즉, 짧거나 김)에 따라서, J 분절 부분의 5' 가장자리는 상이하게 획정된다. 짧은 J 공여자 벡터의 경우, J 분절 부분의 5' 가장자리는, 전장 TCR ORF의 J 부분과 CDR3 부분 사이의 정규(canonical) 가장자리를 획정하는 데 사용되는 Phe-Ala/Gly 또는 Trp-Gly 모티프라고 정의된다. 긴 J 공여자 벡터의 경우, J 분절 부분의 5' 가장자리는 Phe-Ala/Gly 또는 Trp-Gly 모티프의 10 내지 12개의 뉴클레오타이드 5'에 연장된다. 이것은 J 공여자 벡터에 의해서 암호화된 전체 TCR ORF의 부분을 연장하고, 이에 반해서, TORES의 작동 시에 전장 TCR ORF를 작제하는 데 요구되는 odeCDR3의 길이를 단축시킨다. J 분절 부분의 3' 단부는, C 단편의 제1 뉴클레오타이드를 나타내는, 단일 아데닌 잔기(A)로 암호화된다. 이러한 아데닌은 J 수용 카세트 벡터로부터 배제된다.
도 12 재구성된 모델 TCR TRA/TRB 쌍의 특이성의 검증
HLA-A2*01-제한된 HCMV pp65 유래 항원에 대해서 특이성을 갖는 모델 TRA/TRB TCR 쇄 쌍을 실시예 7에 기재된 바와 같은 TORES 시스템을 사용하여 재구성하였다. 2개의 TRA 및 TRB 플라스미드 생성물을 CD3 성분을 구성적으로 발현하지만, TCR TRA 쇄 및 TRB 쇄의 내인성 발현이 결핍된 인간 세포주에 일시적으로 형질주입하였다. 형질주입 48시간 후, 세포를 CD3, TCR알파/베타 및 특이적 HLA-A2*01-NLVPMVATV 사량체에 대한 항체로 처리하고, 유세포 분석법으로 분석하였다. 모델 TCR 쌍은 CD3 및 TCR알파/베타 항체로의 양성 염색에 의해서 나타나는 바와 같이 세포 표면 상에 제시되었다(좌측, 상부 패널). 모델 TCR 쌍은 또한 HLA-A2*01-NLVPMVATV 사량체 시약에 대해서 양성 염색을 나타내었는데(좌측, 하단 패널), 이는 결합의 예측된 특이성을 나타낸다. TRA 및 TRB 플라스미드 작제물의 무관한 쌍을 또한 빈(empty) 벡터(최우측 패널)로서 동시에 형질주입시켰다. 무관한 TCR은 CD3 및 TCR알파/베타 항체(중심, 상부 패널)에 대한 양성 염색에 의해서 나타나는 바와 같이, 세포 표면 상에 존재하였지만, HLA-A2*01-NLVPMVATV 사량체 시약(중심, 하부 패널)에 대한 결합을 나타내지 않았다. 빈 벡터 형질주입된 세포는 CD3 또는 TCR알파/베타 항체, 또는 HLA-A2*01-NLVPMVATV 사량체 시약에 대한 염색을 나타내지 않았다.
도 13 인간 말초 혈액으로부터의 TCR TRA/TRB 쇄 쌍의 세트의 식별 및 재구성을 위한 작업 흐름
인간 시편으로부터 포획된 네이티브 TCR TRA/TRB 쇄 쌍의 재구성을 위한 TORES 시스템의 사용을 입증하기 위해서, 인간 PBMC 분획으로부터의 사량체-양성 세포의 단일-세포 분류로부터의 서열 정보의 포획을 통해서 HLA-B*07:02 제한된 HCMV pp65 항원, TPRVTGGGAM에 대해서 특이적인 TCR의 세트를 생성시켰다. 이 과정을 실시예 8에 기재한다.
i) HLA-B*07:02 대립유전자를 갖는 공여자로부터의 PBMC 분획을 HLA-B*07:02-TPRV 사량체 시약으로 염색한다. 사량체에 대해서 양성 염색을 나타내는 단일 CD8+ T-세포를 FACS에 의해서 단일 PCR 튜브에 넣는다.
ii) 단일 세포 함유 튜브를, TRA 쇄 및 TRB 쇄 둘 다에 대해서 모든 발현된 가변 유전자 분절 및 불변 유전자 분절에 고정된 프라이머 세트와 함께 역전사 반응에 적용하였다.
iii) TRA 쇄 및 TRB 쇄에 대해서 독립적으로, 모든 발현된 V 유전자 분절 및 C 유전자 분절에 여전히 고정된 내부 프라이머의 세트와 함께 역전사 생성물 상에서 네스티드(nested) PCR 반응을 수행하였다.
iv) 네스티드 PCR 생성물을 생어 서열결정에 적용한다.
v) PCR 생성물 서열을 인간 생식계열 TCR 유전자 분절의 라이브러리에 대해서 정렬하여 각각의 증폭된 TCR 쇄에 대한 V 및 J(및 C) 유전자 분절 사용을 결정한다. 5' Cys 코돈에서 3' Phe-Ala/Gly 또는 Trp-Gly 모티프까지의 CDR3 서열을 결정한다.
vi) 재구성될 각각의 TRA 및 TRB 쇄의 결정된 V 유전자 분절 및 C 유전자 분절 사용에 상응하는 TORES 라이브러리로부터 V-C 유입 벡터를 선택한다.
vii) 재구성될 각각의 TRA 및 TRB 쇄의 결정된 J 유전자 분절 사용에 상응하는 TORES 라이브러리로부터 J 공여자 벡터를 선택한다.
viii) 재구성될 각각의 TRA 및 TRB 쇄로부터 결정된 CDR3 영역에 상응하는 odeCDR3을 합성한다.
ix) 선택된 V-C 유입 벡터, J 공여자 벡터 및 합성된 odeCDR3을 함유하는, 재구성될 각각의 TRA 및 TRB TCR을 위해서 독립적인 제한 효소(RE)/ 리가제 연쇄 반응을 조립한다.
x) RE/리가제 연쇄 반응 생성물을 박테리아 내에서 형질전환시키고, 제1 양성 선택 마커(즉, V-C 유입 벡터 골격)를 위한 항생제 선택 하에 둔다.
xi) 클론을 증식시키고, 최종 전장 TCR ORF의 생어 서열결정에 의해서 확인한다.
도 14 인간 말초 혈액으로부터 포획되고, TORES로 재구성된 TCR TRA/TRB 쇄 쌍의 세트에 대한 특이성의 검증
6개의 TCR TRA/TRB 쇄 쌍의 세트를 인간 말초 혈액으로부터 포획하고, 도 13에 도시되고, 실시예 8에 기재된 작업 흐름을 통해서 재구성하였다. 6개의 TCR 쌍은 단일 CD8+ T-세포를 단리시키는 데 사용되는 B*07:02-TPRV 사량체 시약에 대해서 예측된 특이성을 가졌다. 6개의 포획된 쌍, 무관한 TCR 쇄 쌍 및 빈 벡터 대조군 각각을 CD3 성분을 발현하지만 TCR TRA 쇄 및 TRB 쇄의 내인성 발현이 결핍된 인간 세포주에 일시적으로 형질주입하였다. 형질주입 48시간 후, 유세포 분석을 사용하여 세포를 CD3, TCR 알파 및 베타 쇄에 대한 항체로 염색하였고, 재구성되고 발현된 TCR의 특이성을 특이적 HLA-B*07:02-TPRV 사량체 시약에 의해서 확인하였다. 데이터를 등고선 플롯으로 제공한다. 각각의 패널은 X-축 상에 CD3 신호를 나타내고 Y-축 상에 HLA-B*07:02-TPRV 사량체를 나타낸다. 각각의 패널의 우측 하부의 삽도는 사량체 염색도의 임의 단위로서 CD3 음성 세포에 대한 CD3 양성 세포의 HLA-B*07:02-TPRV 사량체 신호의 비이다. 제시된 모든 6개의 TCR 쇄 쌍은 무관한 TCR 쌍 대조군과 비교할 때 약간의 특이적 사량체 염색도를 나타낸다.
도 15 CDR3-다양화된 TCR 쇄를 생성시키기 위한 TORES의 작동
다양화된 CDR3 삽입부를 갖는 전장 TCR 쇄를 생성시키기 위해서 사용되는 경우 TORES의 개략적인 표현을 도시한다. 모체 TCR은 V-J-C 사용 및 정의된 CDR3 영역 서열로 정의된다. 상응하는 단일 V-C 유입 벡터(박스 i) 및 단일 J 공여자 벡터(박스 ii)가 반응 튜브에 배치된다. 암호화된 아미노산 서열을 변화시킨 정의된 위치적 뉴클레오타이드 축중 및/또는 점 돌연변이발생을 갖는 odeCDR3의 풀이 합성된다(박스 iii). 이러한 CDR3 풀은, 생식 계열 V-J-C 사용과 함께 전장 TCR ORF CDR3을 함유하는 '합성' CDR3을 생성시키도록, 정의된 odeCDR3 프레임워크의 경계부 내에 완전 무작위화된 CDR3 서열을 포함할 수 있다. 이러한 3종의 성분(박스 i, ii 및 iii)은 적절한 제한 효소 및 리가제 효소와 함께 단일 반응으로 조합된다. 반응 사이클은 단일 단계로, V-C 유입 벡터 골격 컨텍스트(박스 iv)로 포함된 변이체 odeCDR3의 수에 비례하는, 다수의 변이체 재구성된 전장 TCR ORF를 생성시킨다.
도 16 제한된 CDR3 축중을 사용한 단일 라운드의 TCR 쇄 다양화는 넓은 스펙트럼의 표적 친화성을 갖는 TCR 세트를 생성시킨다
실시예 7에 기재된 바와 같은 HCMV pp65 유래 항원에 대한 특이성을 갖는 모델 TRA/TRB TCR 쇄 쌍의 TRA 쇄를 도 15에 제공되고, 실시예 9에 기재된 도식에 따른 CDR3-다양화 주기에 적용하였다. 3개의 개별 위치에서 4-배 뉴클레오타이드 축중을 사용하여 TRA 쇄 odeCDR3를 합성하였고, 이러한 3개의 위치에서 코돈 사용을 변경하였다. 생성된 반응 생성물은 모체 서열을 포함하는, 64개의 전장 TRA 쇄 변이체를 함유하였다. 64개의 TRA 쇄 각각을 클로닝하고, 서열을 확인하였다.
A) 64개의 TRA 쇄 플라스미드 각각을 모체 TRB 플라스미드와 함께 CD3 성분을 구성적으로 발현하지만, TCR TRA 쇄 및 TRB 쇄의 내인성 발현이 결핍된 인간 세포주에 형질주입하였다. 형질주입 48시간 이후에, 세포를 CD3에 대한 항체 및 HLA-A2*01-NLVPMVATV 사량체 시약으로 염색하고, 유세포 분석법에 의해서 분석하였다. 각각의 TCR 쇄 쌍 변이체의 결합 강도의 표시로서, CD3- 집단에 대한, CD3+ 집단에 대한 HLA-A2*01-NLVPMVATV 사량체 신호의 평균 형광 강도(MFI)의 비를 플로팅하였다. 화살표는 모체 TRA에 상응하는 데이터 지점을 나타낸다. 타원형은 스펙트럼의 양 단부에서의 고결합 변이체 및 비결합 변이체를 나타낸다.
B) 각각의 TRA 쇄 변이체를, CD3- 집단에 대한, CD3+에 대한 HLA-A2*01- NLVPMVATV 사량체 신호의 MFI 비, 및 1 문자 암호의, 3개의 다양한 위치(Pos1, 2 및 3) 각각에 존재하는 아미노산과 함께 표에 제공한다. 화살표는 모체 TRA에 상응하는 데이터 지점을 나타낸다. 괄호는 스펙트럼의 양 단부에서의 고결합 변이체 및 비결합 변이체를 나타낸다.
도 17 V-분절 다양화된 TCR 쇄를 생성시키기 위한 TORES의 작동
다양화된 V-분절 사용을 갖는 전장 TCR 쇄를 생성시키기 위해서 사용되는 경우 TORES의 개략적인 표현을 도시한다. 모체 TCR은 V-J-C 사용 및 정의된 CDR3 영역 서열로 정의된다. 모체 CDR3 영역 서열(박스 iii)과 상응하도록 합성된 단일 odeCDR3에서와 같이, 상응하는 단일 J 공여자 벡터(박스 ii)가 반응 튜브에 배치된다. V-C 유입 벡터의 선택물이 또한 생성물 V-분절 다양화된 전장 TCR ORF 생성물(박스 i)에서 목적하는 V- 및 C-분절에 상응하는, 반응 튜브에 첨가된다. 이러한 3종의 성분(박스 i, ii 및 iii)은 적절한 제한 효소 및 리가제 효소와 함께 단일 반응으로 조합된다. 반응 사이클은 V-C 유입 벡터 골격 컨텍스트(박스 iv)에서 단일 단계로, 포함된 변이체 V-C 유입 벡터의 수에 비례하는, 다수의 변이체 재구성된 전장 TCR ORF를 생성시킨다.
도 18 J-분절 다양화된 TCR 쇄를 생성시키기 위한 TORES의 작동
다양화된 J-분절 사용을 갖는 전장 TCR 쇄를 생성시키기 위해서 사용되는 경우 TORES의 개략적인 표현을 도시한다. 모체 TCR은 V-J-C 사용 및 정의된 CDR3 영역 서열로 정의된다. 모체 CDR3 영역 서열(박스 iii)과 상응하도록 합성된 단일 odeCDR3에서와 같이, 상응하는 단일 V-C 유입 벡터(박스 i)가 반응 튜브에 배치된다. J 공여자의 선택물이 또한 생성물 J-분절 다양화된 전장 TCR ORF 생성물(박스 ii)에서 목적하는 J 분절에 상응하는, 반응 튜브에 첨가된다. 이러한 3종의 성분(박스 i, ii 및 iii)은 적절한 제한 효소 및 리가제 효소와 함께 단일 반응으로 조합된다. 반응 사이클은 V-C 유입 벡터 골격 컨텍스트(박스 iv)에서 단일 단계로, 포함된 변이체 J 공여자 벡터의 수에 비례하는, 다수의 변이체 재구성된 전장 TCR ORF를 생성시킨다.
도 19 V/J-분절 다양화된 TCR 쇄를 생성시키기 위한 TORES의 작동
다양화된 V- 및 J-분절 사용을 갖는 전장 TCR 쇄를 생성시키기 위해서 사용되는 경우 TORES의 개략적인 표현을 도시한다. 모체 TCR은 V-J-C 사용 및 정의된 CDR3 영역 서열로 정의된다. 모체 CDR3 영역 서열과 상응하도록 합성된 상응하는 단일 odeCDR3(박스 iii). V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터의 선택물이 생성물 V/J-분절 다양화된 전장 TCR ORF 생성물(박스 ii)에서 목적하는 V- (C-) 및 J-분절의 조합물에 상응하는, 반응 튜브에 첨가된다. 이러한 3종의 성분(박스 i, ii 및 iii)은 적절한 제한 효소 및 리가제 효소와 함께 단일 반응으로 조합된다. 반응 사이클은 V-C 유입 벡터 골격 컨텍스트(박스 iv)에서 단일 단계로, 포함된 것으로부터 가능한 변이체 V-C 및 J 공여자 벡터 조합물의 수에 비례하는, 다수의 변이체 재구성된 전장 TCR ORF를 생성시킨다.
도 20. TORES2 V-Cα 유입 벡터 및 V-Cβ 유입 벡터의 유전 특징부의 개략도
표지된 박스로서 도시된 최소한으로 요구되는 유전 요소를 갖는 V-Cα(a) 유입 벡터 및 V-Cβ(b) 유입 벡터의 원형 플라스미드 개략도를 도시한다. 코작은 번역의 효율적인 개시에서 역할을 하는 공통 서열을 지칭한다. V-분절은 TCR 가변 생식 계열 ORF, 또는 돌연변이체/합성 ORF의 일부를 암호화하는 선택된 서열을 지칭한다. 타입 IIS #1 는 효소가 5' 방향으로 절단하도록 배향된 제1 타입 IIS 제한 효소 결합 부위를 지칭한다. 타입 IIS #1 는 효소가 3' 방향으로 절단하도록 배향된 제1 타입 IIS 제한 효소 결합 부위를 지칭한다. -ve 선택 #1은 전장 TCR 재작제 반응, 또는 후속 선택 단계 동안 서열을 보유하는 플라스미드에 유해하도록 설계된 음성 선택 요소를 지칭한다. C-분절은 TCR 불변 생식 계열 ORF, 또는 돌연변이체/합성 ORF의 일부를 암호화하는 선택된 서열을 지칭한다. 타입 IIS #2 는 효소가 5' 방향으로 절단하도록 배향된 제2 타입 IIS 제한 효소 결합 부위를 지칭한다. 효소는 제1 타입 IIS와 상이하다. 타입 IIS #2 는 효소가 3' 방향으로 절단하도록 배향된 제2 타입 IIS 제한 효소 결합 부위를 지칭한다. 효소는 제1 타입 IIS와 상이하다. -ve 선택 #2는 전장 양방향 TCR ORF 벡터의 조합 동안 서열을 보유하는 플라스미드에 유해하도록 설계된 음성 선택 요소를 지칭한다. -ve 선택 #2는 제1 -ve 선택과 상이하다. +ve 선택 #1은 벡터를 보유한 유기체에 선택적인 이점을 운반하는 데 사용되는 2-성분 시스템의 제1 양성 선택 마커를 지칭하며, 이것은 제2(J 공여자) 벡터 성분(도 3 참고)의 양성 선택 마커와 상이하다. Ori는 상용성 숙주 내의 플라스미드의 증식을 위해서 사용되는 복제 기점을 지칭한다. 5' 유전 요소는 재작제된 전장 TCR의 하류 응용을 위해서 요구되는 속성을 제공하고, 재구성된 전장 TCR의 5'에 위치되어야 하는 임의의 목적하는 유전 요소, 예를 들어, RMCE 요소를 지칭한다. 3' 유전 요소는 재작제된 전장 TCR의 하류 응용을 위해서 요구되는 속성을 제공하고, 전장 TCR OFR의 3'에 위치되어야 하는 임의의 목적하는 유전 요소, 예를 들어, 제2 RMCE 요소를 지칭한다.
도 21. 양방향 종결인자 공여자(BiT 공여자) 벡터의 유전 특징부의 플라스미드 개략도.
표지된 박스로서 도시된 최소한으로 요구되는 유전 특징부를 갖는 양방향 종결인자 공여자 벡터의 원형 플라스미드 개략도를 도시한다. 양방향 종결인자 요소(T-T)는 양방향 종결인자를 암호화하는 DNA 서열을 지칭한다. 타입 IIS #2 는 효소가 3' 방향으로 절단하도록 배향된 제2 타입 IIS 제한 효소 결합 부위를 지칭한다. 타입 IIS #2 는 효소가 5' 방향으로 절단하도록 배향된 제2 타입 IIS 제한 효소 결합 부위를 지칭한다. +ve 선택 #2는 벡터를 보유한 유기체에 선택적인 이점을 운반하는 데 사용되는 2-성분 시스템의 제1 양성 선택 마커를 지칭하며, 이것은 제1 벡터 성분(도 20 참고)의 양성 선택 마커와 상이하다. Ori는 상용성 숙주 내의 플라스미드의 증식을 위해서 사용되는 복제 기점을 지칭한다.
도 22. 짝지워진 TRA 및 TRB 벡터를 작제하기 위한 양방향 2-성분 벡터 시스템의 유전자 입력물, 부산물 중간체 및 생성물의 포괄적인 설명.
TRA(a), TRB(b) 및 양방향 종결인자 공여자 벡터(c)가 도시되어 있고, 이러한 3종의 성분이 제2 타입 IIS 제한 효소 및 리가제와 함께 단일 반응으로 조합되는 경우, 3종의 반응 부산물(d, e 및 f), 3종의 반응 중간체(g, h 및 i) 및 1종의 반응 생성물(j)이 생성된다. 2-성분 시스템의 입력 벡터 및 생성물을 표지된 박스로서 도시된 유전자 요소를 갖는 원형 플라스미드 도식으로 도시하고; 부산물 또는 중간체는 나타내는 개방 플라스미드 벡터를 표지된 박스로서 도시된 비원형 플라스미드이고; 선형 DNA를 유전 요소를 기술하는 표지된 박스의 시리즈로서 도시한다.
a) 도 20a에 도시된 바와 같은 V-Cα 유입 벡터 컨텍스트 내의 재구성된 TRA ORF
b) 도 20b에 도시된 바와 같은 V-Cβ 유입 벡터 컨텍스트 내의 재구성된 TRA ORF
c) 도 21에 도시된 바와 같은 BiT 공여자 벡터
d) TRA 벡터(a)의 타입 IIS #2 제한 효소로의 소화는 -ve 선택 요소 #2 및 타입 IIS #2 및 타입 IIS #2 결합 부위를 함유하는 선형 DNA TRA 벡터 반응 부산물을 초래한다.
e) 타입 IIS #2 제한 효소에 의한 TRB 벡터(b)의 소화는 5' 유전 요소 및 3' 유전 요소, 타입 IIS #2 및 타입 IIS #2 요소, -ve 선택 요소 #2, +ve 선택 요소 #1 및 복제 기점 요소를 함유하는 선형 DNA TRB 벡터 반응 부산물을 초래한다.
f) 타입 IIS #2 제한 효소에 의한 양방향 종결인자 공여자 벡터(c)의 소화는 절제된 양방향 종결인자 단편 중간체(i)를 제외하고는 모체 플라스미드의 모든 벡터 요소를 함유하는 비환식 플라스미드 부산물을 초래한다.
g) 타입 IIS #2 제한 효소에 의한 TRA 벡터(a)의 소화는 절제된 선형 DNA TRA 벡터 반응 부산물(d)에 보유된 것을 제외하고는 모체 플라스미드의 모든 유전 요소를 함유하는 비원형 플라스미드 중간체를 초래한다. 소화는 2개의 단일 가닥 DNA 오버행, 오버행 1-5' 및 오버행 3-3'를 추가로 생성시킨다. 오버행 1-5'는 양방향 종결인자 중간체(i) 내의 오버행 1-3'와 상용성이다. 오버행 3-3'는 TRB 단편 중간체(h) 내의 오버행 3-5'와 상용성이다.
h) 타입 IIS #2 제한 효소에 의한 TRB 벡터(b)의 소화는 단일 가닥 DNA 오버행, 오버행 2-3' 및 오버행 3-5'이 측접된 C 분절, C 부분, J 분절, CDR3, Vβ 분절 및 코작 서열을 함유하는 선형 DNA 단편을 초래한다. 오버행 2-3'는 양방향 종결인자 중간체(i) 내의 오버행 2-5'와 상용성이다. 오버행 3-5'는 개방 TRA 벡터 중간체(g) 내의 오버행 3-3'와 상용성이다.
i) 타입 IIS #2 제한 효소에 의한 양방향 종결인자 공여자 벡터(c)의 소화는 양방향 종결인자를 함유하는 선형 DNA 단편 중간체를 초래한다. 소화는 2개의 단일 가닥 DNA 오버행, 오버행 1-3' 및 오버행 2-5'를 추가로 생성시킨다. 오버행 1-3'는 개방 TRA 벡터 중간체(g) 내의 오버행 1-5'와 상용성이다. 오버행 2-5'는 TRB 단편 중간체(h) 내의 오버행 2-3'와 상용성이다.
j) 모든 3종의 상용성 단일-가닥 DNA 오버행의 결찰은 원형 플라스미드로서 양방향의 짝지워진 TRA 및 TRB 벡터를 초래한다. 이러한 플라스미드는 절제된 TRA 벡터 반응 부산물(d)를 제외하고는 모체 TRA 벡터(a)의 모든 유전 요소를 함유한다. 또한, 전장 TCR ORF 벡터는 TRB 단편 중간체(h) 및 양방향 종결인자 중간체(i)를 혼입한다. 화살표는 상용성 단일-가닥 DNA 오버행 1, 2 및 3 사이의 결찰의 근사 지점을 나타낸다. 결찰 지점 1은 각각 TRA 벡터 반응 중간체(a) 및 양방향 종결인자 중간체(i)에 의해서 제공된 1-5' 및 1-3' 요소로 구성된다. 결찰 지점 2는 각각 TRB 단편 중간체(h) 및 양방향 종결인자 단편(i)에 의해서 제공된 2-3' 요소 및 2-5' 요소로 구성된다. 결찰 지점 3은 각각 TRA 벡터 반응 중간체(a) 및 TRB 단편 반응 중간체(h)에 의해서 제공된 3-3' 및 3-5' 요소로 구성된다.
도 23 TORES2를 사용하여 재구성된 모델 TCR TRA/TRB 쌍의 특이성의 검증
HLA-A*02:01-제한된 항원에 대해서 특이성을 갖는 모델 TRA/TRB TCR 쇄 쌍을 실시예 11에 기재된 바와 같은 TORES2 시스템을 사용하여 재구성하였다. 양방향 TRA/TRB 공여자 벡터를 사용하여 CD3 성분을 구성적으로 발현하지만 TRA 쇄 및 TRB 쇄의 내인성 발현이 결핍된 인간 세포주 내에 TCR ORF를 안정적으로 통합시켰는데, 이것은 본래 V-Cα 유입 벡터에 의해서 기여된 생성물 공여자 벡터 내에 함유된 RMCE 부위와 상용성인 게놈 수신자 부위를 추가로 암호화한다. TORES2에 의해서 생성된 재구성된 전장의 짝지워진 TRA 및 TRB 공여자 벡터의 기능을 CD3 복합체의 표면 염색에 의해서 결정하였고, 재구성되고 발현된 TCR의 예측된 특이성을 특이적 HLA-A*02:01- SLLMWITQV 사량체 염색에 의해서 확인하였다.
a) 모델 TCR 쌍을 공여자 벡터에 매칭된 게놈 수신자 부위를 함유하는 조작된 TCR 제시 세포주의 게놈 내에 통합시켰다. 이러한 게놈 수신자 부위는 실시예 11에 기재된 TRA/TRB TORES2의 최종 TRA/TRB 공여자 벡터 생성물과 유사한 양방향 종결인자 요소가 개재된, 역평행 배열의 2개의 개별 형광 마커(적색 형광 단백질, RFP, 및 청색 형광 단백질, BFP)를 유도하는 프로모터 요소를 함유한다. 수신자 세포의 형질주입 및 증식 시, 유세포 분석을 수행하여 이러한 형광 리포터의 지속을 관찰하였다. 따라서 게놈 수신자 부위의 부재(RFP-BFP-)는, 세포가 TRA/TRB 공여자 벡터를 성공적으로 통합하였음을 나타내었다. TRA/TRB 공여자 벡터를 통합하지 않은 세포는 게놈 수신자 부위의 존재(RFP+BFP+)를 나타내었다. 대부분의 세포는 게놈 수신자 부위 내에 TRA/TRB 공여자 벡터 서열을 성공적으로 통합하였다.
b) a)의 RFP-BFP- 집단 및 RFP+BFP+ 집단 각각을 게이팅시키고, 제2 오버레이 히스토그램 플롯으로 다시 도시하였다. 양방향 작제물을 통합한 세포는 또한 CD3 항체로 양성 염색을 나타내었는데, 이는 TCR이 세포 표면 상에서 발현되었음을 나타낸다(밝은 히스토그램). 양방향 작제물을 통합하지 않은 세포는 CD3 항체로의 염색에 실패하였다(어두운 히스토그램).
c) 및 d) a) 및 b)에서 분석된 RFP-BFP- 세포를 게이팅시키고, 등고선 플롯으로 다시 도시하였다. 세포의 평행 샘플은 HLA-A*02:01-SLLMWITQV 사량체 시약으로 염색되었고 c)(d)는 아님), 여기서 c)에서의 사량체/CD3 이중 양성은 재구성되고 통합된 TCR ORF 쌍의 예측된 특이성을 나타낸다.
물질 및 방법
DNA 서열결정
본 실시예에서 지칭된 모든 서열결정은 생어 방법에 의해서 수행되었고, GATC 바이오테크 AB(GATC Biotec AB)(스웨덴 소재)에 의해서 수행하였다.
DNA 합성
본 실시예에서 지칭된 모든 DNA 합성은 인데크레이티드 DNA 테크놀로지스 BVB(Integrated DNA technologies BVB)(벨기에 소재)에 의해서 수행되었다.
125bp를 초과하는 DNA 단편을 '지블록 유전자 단편(gBlock Gene Fragments)' 생성물로서 선형 이중 가닥 DNA 분자로서 합성하였다.
DNA 단편 15 내지 60nt를 '커스텀 올리고뉴클레오타이드 단편' 생성물로서 단일 가닥 DNA 분자로서 합성하였다.
DNA 단편 61 내지 124nt를 '울트라머 DNA 올리고뉴클레오타이드 단편(Ultramer DNA oligonucleotide)' 생성물로서 단일 가닥 DNA 분자로서 합성하였다.
벡터 라이브러리 조립 및 클로닝
실시예에 기술된 벡터의 작제는 관련 기술 분야의 당업자에게 널리 공지된 다양한 방법을 포함하고, 구체적인 반응 조성물을 실시예 1 내지 3에 상세하게 제시한다. 하기 주요 물질을 기술된 절차에서 사용하였다:
CDR3을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스(odeCDR3) 조립
상보성 단일 가닥 올리고뉴클레오타이드를 부분적으로 어닐링함으로써 odeCDR3을 일상적으로 조립하였다. 반응 조성물의 상세한 설명 및 조건을 실시예 6에 제공한다. 하기 주요 물질을 기술된 절차에서 사용하였다:
TCR 재구성
전장 TCR ORF를 재구성하기 위한 TORES의 작동을 실시예 7 내지 9에 기재한다. 하기 주요 물질을 기술된 절차에서 사용하였다:
형광 활성화 세포 분류(FACS)
TCR 쇄의 증폭 및 서열결정을 위해서 단일 HLA-다량체 양성 CD8+ T-세포를 FACS에 의해서 분류하였다. 이것을 BD인플럭스 장비를 사용한 표준 세포 분류 방법을 통해서 달성하였다. 간략하면, 세포를 얼음 상에서 HLA-다량체 시약으로 10분 동안 염색하고, 이어서, CD8+ T-세포의 마커로서 CD3 및 CD8 항체로 염색하였다. CD3+CD8+다량체+ 신호를 갖는 세포를 5㎕의 뉴클레아제-무함유 수가 미리 적재된 PCR 플레이트에 분류하였다. 후속 가공 시까지, 시편을 스냅-동결시켰다. 하기 주요 물질을 기술된 절차에서 사용하였다:
단일 T-세포로부터의 TCR 알파 및 베타 쇄의 서열결정
단일 FACS-분류된 T-세포를, 각각의 TRA 및 TRB에 대한 V-영역 특이적 프라이머 수집물을 동반하는 2-단계 증폭 공정에 적용하고, 그 다음 실시예 8에 기재된 바와 같은 서열 분석을 위해서 TRA 및 TRB 앰플리콘을 생성하는 짝지워진 네스팅된 PCR 반응에 적용하였다. 이러한 절차는 이미 기술되어 있다(Han et. al. Nat Biotechnol. 2014 32(7):684-692). 하기 물질을 기술된 절차에서 사용하였다:
실시예 1
네이티브 인간 TRA 레퍼토리를 위한 TRA V-C 유입 벡터 라이브러리의 설계 및 조립
TORES는 주어진 TCR 쇄에 대한 V-C 유입 벡터 라이브러리 및 J 공여자 벡터 라이브러리로 이루어진다. 선택된 V-J-C 컨텍스트 내에 삽입될 표적 odeCDR3 서열과 조합되는 경우, 전장 TCR ORF는 재구성될 수 있다. 다양한 odeCDR3 서열 특징부 및/또는 V/J/C 선택을 통해서, 이러한 재구성 단계는 또한 TCR ORF 조작 작업 흐름에서 서열 다양화 단계를 나타낼 수 있다. 본 실시예에서, 네이티브 인간 TRA V-C 서열 레퍼토리를 함유하는 TRA V-C 유입 벡터 라이브러리의 설계 및 조립을 기술한다. 이것은 도 2에 도시된 제너릭 V-C 유입 벡터 타입의 예이다.
TRA V-C 벡터 라이브러리에 요구되는 DNA 성분은 하기이다:
I. 인간 게놈에 암호화된 각각의 기능성 TRA V 유전자 분절에 대한 TRA V 클로닝 단편
II. 단일 TRA C 클로닝 단편,
III. V-C 유입 벡터 골격.
본 실시예에서, TRA V 및 TRA C 클로닝 단편을 합성하였고, 이를 사용하여 단일 제한 효소 및 리가제 반응에서 표적 V-C 유입 벡터 골격으로 조립하였다. 본 실시예에서, 표적 V-C 유입 골격을, 포유동물 세포 내에서 재구성된 TRA ORF의 일시적 발현을 허용하도록 설계하였다.
본 실시예에서, TRA V-C 유입 벡터 라이브러리는 타입 IIS 제한 효소 BbsI을 사용하여 작제된다. 전장 TRA ORF를 재구성하기 위한 완전한 TORES의 기능에서 사용되는 타입 IIS 제한 효소는 BsaI이다.
합성 TRA V 클로닝 단편의 설계
본 실시예에서 TRA V 클로닝 단편의 유전 요소의 배열을 도 5에 도시한다.
TRA V 클로닝 단편의 각각의 단부는 PCR에 의한 전체 단편의 증식을 위해서 20개의 뉴클레오타이드의 표준화된 5' 및 3' 프라이머 결합부 DNA 서열을 암호화한다.
5' 프라이머 결합부에 대한 근위에 BbsI 타입 IIS 제한 효소 결합 부위가 암호화되며, 여기서 BbsI 결합 부위의 방향은 DNA 3'을 이의 인식 서열로 절단하도록 BbsI 효소를 지시한다. BbsI 효소 활성도에 의해서 생성된 오버행은 오버행 *1에 의해서 암호화된다. 이러한 오버행은 V-C 유입 벡터 골격의 아암을 사용한 지향된 리가제-의존적 클로닝을 허용하도록 설계된다.
공통 코작 서열은 최종의 재구성되고 발현된 TRA mRNA의 번역의 효율적인 개시를 위한 TRA V 유전자 분절 내의 ATG 시작 코돈의 암호화된 5'이다. 본 실시예에서, 각각의 TRA V 분절은 시작 메티오닌 잔기에서부터 TRA V 분절의 마지막 시스테인(Cys)까지의 모든 아미노산을 암호화한다. 이러한 Cys 잔기는 일반적으로 TRA 가변 유전자 분절의 가장자리로서 인식되는데, 이의 결실은 자연 발생의 재조합된 기능성 TRA 쇄에서는 희귀하다. 필요한 경우, 네이티브 인간 TRA V 공통 서열은 TORES를 사용한 조립 또는 재구성 작동에서 사용되는 임의의 제한 효소 및 또한 하류 응용에서 사용되는 임의의 제한 효소에 대한 인식 서열을 제거하도록 편집되었다.
TRA V 분절의 3' 단부로 BsaI 타입 IIS 제한 효소 결합 부위가 암호화된다, BsaI . BsaI 결합 부위의 방향은 DNA 5'을 이의 인식 서열로 절단하도록 BsaI 효소를 지시한다. 생성된 오버행 서열은 시스테인에 선행된 아미노산 코돈에 대한 제3 뉴클레오타이드 및 V 분절 요소의 마지막 시스테인 코돈을 포함하도록 설계된다. 따라서 설계된 서열에 대한 BsaI의 작용은 TRA V 분절의 3' 단부에 TRA V Cys-오버행 1을 생성한다. 본 실시예에서, 이러한 Cys-오버행 1은 클로닝 전략을 단순화하고 통합하기 위해서 모든 포함된 TRA V 분절에 대해서 표준화된다. 필요한 경우, TRA V 유전 요소를 암호화하는 뉴클레오타이드는 이러한 표준환된 오버행을 암호화하도록 변경되었지만, 번역된 아미노산 서열을 변경시키지 않는다. 이러한 BsaI 부위는 전장 TRA 재구성 반응 동안 사용된다.
본 실시예에서, V-C 유입 벡터 음성 선택 마커는 NotI 제한 효소 결합 부위이다. NotI 결합 부위를 작제하기 위해서, TRA V 클로닝 단편 및 TRA C 클로닝 단편이 함께 결찰될 때 그 부위의 2개의 절반부를 조합한다. TRA V 클로닝 단편은 6개의 뉴클레오타이드의 NotI 5' 분절을 암호화한다.
3' 프라이머 결합부 서열의 5' 단부에 서열은 DNA 5'를 이의 인식 서열, BbsI 로 절단하도록 BbsI 효소를 지시하는 제2 BbsI 제한 부위를 암호화한다. 따라서 설계된 서열에 대한 BbsI의 작용은 4 뉴클레오타이드의 오버행, NotI 5' 오버행을 생성하고, 이것은 TRA C DNA 단편 상에 생성된 오버행에 상보성이도록 설계되고, 결찰 시 NotI 결합 부위를 재구성한다.
Sp는 이러한 부위에 인접하는 경우, 타입 IIS 제한 효소 결합 부위와 절단 부위의 적절한 이격을 성취하기 위한 TRA V 클로닝 단편의 특정 지점에 대한 뉴클레오타이드 첨가를 나타낸다. Sp는 효율적인 작용을 위해서 적절하게 NotI 결합 및 절단 부위를 이격시키는 데 사용된 NotI 제한 효소 결합 부위 서열이 측접하는 것을 차단한다. 뉴클레오타이드의 선택은 BsaI 결합 부위의 DAM 메틸화의 잠재적인 효과인 것으로 간주되었다.
네이티브 인간 TRA 쇄의 본 실시예에서 TRA V 클로닝 단편을 위한 완전 DNA 서열을 SEQ0001 내지 SEQ0046로서 제공한다. 이러한 서열은 5' 프라이머 결합부 및 3' 프라이머 결합부 서열을 포함한다.
합성 TRA C 클로닝 단편의 설계
본 실시예에서 TRA C 클로닝 단편의 유전 요소의 배열을 도 6에 도시한다.
TRA C 클로닝 단편의 각각의 단부는 PCR에 의한 전체 단편의 증식을 위해서 20개의 뉴클레오타이드의 표준화된 5' 및 3' 프라이머 결합부 DNA 서열을 암호화한다.
5' 프라이머 결합부 서열에 대한 근위에 BbsI 제한 효소 인식 부위가 암호화되어, BbsI 효소는 DNA 3'를 이의 인식 서열, BbsI 로 절단할 것이다.
TRA C 클로닝 단편은 6개의 뉴클레오타이드의 NotI 3' 분절을 암호화하며, 이것은 V-C 유입 벡터 음성 선택 마커를 구성할 NotI 인식 부위를 완결한다. 인접한 BbsI 제한 부위는 NotI 3' 요소에 작용하여 4개의 뉴클레오타이드의 NotI 3' 오버행을 생성시킨다. 이러한 오버행은 TRA V DNA 단편 상에 생성된 NotI 5' 오버행에 상보성이도록 설계되고, V-C 유입 벡터의 조립 시에 완전 NotI 결합 부위를 재구성한다.
NotI 3' 요소의 3' 단부로, TRA C 클로닝 단편은 BsaI 제한 효소 결합 부위, BsaI 를 암호화한다. BsaI 결합 부위의 방향은 DNA 5'을 이의 인식 서열로 절단하도록 BsaI 효소를 지시한다. 생성된 오버행 서열은 TRA C 유전자 단편, TRA C 오버행 3의 제1 사이토신으로부터 시작하도록 설계된다. 이러한 BsaI 부위는 전장 TRA 재구성 반응 동안 사용된다. BsaI 효소는 V-C 유입 벡터에 암호화된 TRA C 분절에 작용하여 재구성 반응 동안 필요한 TRA C 오버행 3을 생성한다. 제1 글루타민 코돈의 사이토신 잔기 5'에서부터 정지 코돈까지의 공통 TRA C 서열이 본 실시예에서 TRA C 클로닝 단편에 포함된다.
3'의 5'로 프라이머 결합부는 BbsI 제한 효소 인식 서열, BbsI 를 암호화한다. BbsI 결합 부위의 방향은 DNA 5'을 이의 인식 서열로 절단하도록 BbsI 효소를 지시한다. BbsI 효소 활성도에 의해서 생성된 오버행은 오버행 *2에 의해서 암호화된다. 이러한 오버행의 설계는 조립 동안 V-C 유입 벡터 골격의 아암을 사용한 지향된 리가제-의존적 클로닝을 허용한다.
Sp는 이러한 부위에 인접하는 경우, 타입 IIS 제한 효소 결합 부위와 절단 부위의 적절한 이격을 성취하기 위한 TRA C 클로닝 단편의 특정 지점에 대한 뉴클레오타이드 첨가를 나타낸다. Sp는 효율적인 작용을 위해서 적절하게 NotI 결합 및 절단 부위를 이격시키는 데 사용된 NotI 제한 효소 결합 부위 서열이 측접하는 것을 차단한다. 뉴클레오타이드의 선택은 BsaI 결합 부위의 DAM 메틸화의 잠재적인 효과인 것으로 간주되었다.
네이티브 인간 TRA 쇄의 본 실시예에서 TRA C 클로닝 단편을 위한 완전 DNA 서열을 SEQ0047로서 제공한다. 이러한 서열은 5' 프라이머 결합부 및 3' 프라이머 결합부 서열을 포함한다.
포유동물 세포에서 재구성된 TRA ORF의 일시적 발현을 위한 V-C 유입 벡터 골격의 설계
본 실시예에서, V-C 유입 벡터 골격는 pMA 플라스미드로부터 유래된다. 그것은 항생제 내성 베타-락타마제 유전자, 양성 선택 #1과 함께, Col E1 복제 기점, ori를 암호화한다. 베타-락타마제는 베타-락탐 항생제의 페니실린 군, 예컨대 암피실린 및 카베니실린에 대한 내성을 부여한다.
도 7에 도시된 바와 같은, 벡터 골격은 완전히 재구성된 TRA ORF의 하류 응용을 위한 적절한 기능을 부여하는 요구되는 유전 요소를 암호화한다. 본 실시예에서, 5' 유전 요소는 CMV 구성적 포유동물 프로모터를 암호화하고, 3' 유전 요소는 포유동물 세포에서 완전히 재구성된 TRA ORF의 일시적 발현을 허용하기 위해서 SV40pA 폴리아데닐화 신호를 암호화한다.
본 실시예에서, 벡터 골격은 각각 오버행 *1' 및 오버행 *2'를 생성시키는 Acc65I 및 XbaI 제한 효소 결합 부위를 암호화한다. 오버행 *1'은 TRA V 클로닝 단편 내의 오버행 *1과 상보성이다(도 5). 오버행 *2'은 TRA C 클로닝 단편 내의 오버행 *2와 상보성이다(도 6). 이러한 상보성 오버행은 TRA V 및 TRA C 클로닝 단편의 V-C 유입 벡터 골격 내에서의 지향된 클로닝을 허용한다.
Sp 특징부는 효율적인 작용을 위해서 2개의 부위를 이격시키는 데 요구되는 Acc65I와 XbaI 제한 효소 인식 부위 사이에 첨가되는 뉴클레오타이드를 지칭한다.
CMV 구성적 프로모터를 암호화하는 5' 유전 요소에서부터 SV40pA 폴리아데닐화 신호를 암호화하는 3' 유전 요소까지의 벡터 골격의 서열이 SEQ0048에 제시된다.
TRA V-C 유입 벡터 라이브러리의 조립 방법
이 방법은 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 선택된 TRA V 클로닝 단편(도 5) 및 TRA C 클로닝 단편(도 6)을 주어진 V-C 유입 벡터 골격(도 7) 내에서 조립하여 TRA V-C 유입 벡터(도 2)를 생성한다. 본 실시예에서, 이 방법은 제한 효소 소화 및 결찰 반응을 단일 반응으로 수행한다.
RE 소화 및 결찰 반응
100ng의 선형 벡터 골격(ACC65I 및 XbaI 소화에 의해서 선형화됨)
10ng의 TRA V 유전자 단편
20ng의 TRA C 유전자 단편
2㎕ 10x NEB 리가제 완충액
0.5㎕의 BbsI
1㎕의 T4 DNA 리가제
최대 20㎕의 H2O
반응 조건
단계1; 37℃에서 2분
단계2; 16℃에서 3분
단계 1 및 2 반복, 20회
50℃에서 5분
80℃에서 5분
실온으로 복귀
생성된 생성물을 카베니실린-내성 집락에 대해서 선택된 수용성 이.콜라이(E.coli) 세포 내에서 형질전환시킨다. 생성된 집락으로부터 단리된 플라스미드를 서열결정하여 적절하게 조립된 작제물을 결정한다. 각각의 독립적인 V 분절 클로닝 단편에 대해서 절차를 반복한다. 생성된 작제물은, 포유동물 세포에서 상기 재구성된 TRA의 일시적인 발현에 추후에 사용하기 위한 전장 TRA의 재구성에서의 사용을 위해서 TRA V-C 유입 벡터 라이브러리를 구성한다. TRA V-C 유입 벡터 라이브러리를 구성하는 클로닝된 V-C 단편의 서열을 SEQ0049 내지 SEQ0094로서 제공한다. 본 서열은 C 분절의 정지 코돈에 대한, 가변 분절의 시작 코돈에 선행된 모든 코작 서열을 포함한다.
실시예 2
네이티브 인간 TRA 레퍼토리의 TRA J 공여자 벡터 라이브러리의 설계 및 조립
TORES는 주어진 TCR 쇄에 대한 V-C 유입 벡터 라이브러리 및 J 공여자 벡터 라이브러리로 이루어진다. 선택된 V-J-C 컨텍스트 내에 삽입될 표적 odeCDR3 서열과 조합되는 경우, 전장 TCR ORF는 재구성될 수 있다. 다양한 odeCDR3 서열 특징부 및/또는 V/J/C 선택을 통해서, 이러한 재구성 단계는 또한 TCR ORF 조작 작업 흐름에서 서열 다양화 단계를 나타낼 수 있다.
본 실시예에서, 네이티브 인간 TRA J 서열 레퍼토리를 함유하는 TRA J 공여자 벡터 라이브러리의 설계 및 조립을 기술한다. 이것은 도 3에 도시된 제너릭 J 공여자 벡터 타입의 예이다.
본 실시예에서, TRA J 수용 카세트 단편을 작제하고, J 공여자 벡터 골격에 삽입하여 J 수용 카세트 벡터를 생성한다. 그 다음, 합성 TRA J 분절 부분은 TRA J 수용 카세트 벡터로 조립되어 J 공여자 벡터 라이브러리를 생성시킬 수 있다. 이러한 융통성있는 다단계 조립 방법은 J 공여자 벡터 분절 특징부, 예컨대, J 분절 길이의 신속하고 비용 효과적인 조작을 허용한다.
TRA J 공여자 벡터 라이브러리에 요구되는 DNA 성분은 하기이다:
I. TRA J 수용 카세트 단편
II. J 공여자 벡터 골격
III. TRA J 수용 카세트 벡터
IV. TRA J 분절 부분.
합성 TRA J 수용 카세트 단편의 설계
2개의 단일 가닥 DNA 올리고뉴클레오타이드의 어닐링을 사용하여, 설계에 의해서 DNA 단편의 각각의 단부에 4-뉴클레오타이드 단일-가닥 오버행; 오버행 *3 및 오버행 *4를 함유하는 수용 부위 카세트 단편을 생성시킨다. 4-뉴클레오타이드 오버행은 도 8에 도시된, TRA J 수용 카세트 벡터를 생성하기 위한 J 공여자 벡터 골격 내에서의 지향된 리가제-의존적 클로닝을 허용한다.
타입 IIS 제한 부위, BsaI 및 BsaI 의 쌍이 수용 부위 카세트 DNA 단편의 5' 및 3' 단부에 배치된다. 타입 IIS 제한 부위, BsaI 및 BsaI 방향은 DNA를 절제하기 위해서 BsaI 효소를 작제물의 중심으로 안내하는 것이다. 이러한 부위는 오버행 2-5' 및 오버행 3-3'을 생성시킴으로써 TRA ORF 재구성 프로토콜 동안 사용된다. 오버행 3은 수용 카세트 단편에 암호화된 TRA C 부분의 성분인 반면, 오버행 2는 TRA J 분절 부분이 클로닝된 이후에 정의된다(하기 참고).
타입 IIS 인식 부위의 쌍 BbsI 및 BbsI 는 합성된 TRA J 분절 부분에 포함된 상보성 오버행을 생성시키는 데 있어서, 카세트의 중앙 부근에 암호화되고, TRA J 공여자 벡터의 조립을 위해서 사용된다(하기 참고). 5' BbsI 부위, BbsI 는 BsaI 부위를 절단하여 이러한 특징부의 3' 단부에 오버행 *5를 생성한다. 3 BbsI 부위, BbsI 는 TRA C 부분 요소를 절단하여, 이 요소의 5' 단부에 오버행 *6을 생성한다. 이러한 오버행은, 최종 재구성된 TRA ORF 내로 혼입될 비-네이티브 뉴클레오타이드의 첨가를 회피하도록 이러한 작제물의 BsaI 및 TRA C 부분 특징부 내에 암호화된다.
BbsI 효소 생성된 오버행과 BsaI 효소 생성된 오버행 사이의 영역은 TRA C 유전자 단편의 제2 뉴클레오타이드로부터 시작하는 TRA C 영역의 일부, TRA C 부분을 암호화한다. TRA C 유전자 단편의 제2 뉴클레오타이드로부터 출발하기 위한 동기부여는, 인간 TRA 유전자좌 TORES의 본 실시예에서, 생성된 오버행이 회귀성 오버행(이것은 TRA C 유전자 단편의 시작부가 (생성된 오버행 ATAT)를 포함하는 경우임)이 아닌 TATC이기 때문이다. 회귀성 오버행은 회피되어야 하는데, 그 이유는 그것이 요구되는 TRA J 분절 부분 삽입부 없이 2개의 벡터 단부 결합을 허용할 것이 때문이다. BbsI 부위의 배향은 모든 TRA J 단편 3' 단부의 수용 부위 카세트 내의 TRA C 영역의 5' 시작부에 대한 인-프레임 리가제 의존적인 클로닝을 허용한다. BsaI 부위의 배향은 완성된 TORES를 사용하여 TRA 전장 ORF 재구성 프로토콜의 최종 단계에서 남아있는 TRA C 단편을 갖는 TRA C 영역의 시작부의 인-프레임 리가제-의존적 클로닝을 허용한다.
2개의 BbsI 결합 부위 사이에는 효소 NotI을 위한 8 뉴클레오타이드 인식 서열이 존재한다. 이러한 제한 부위는 음성 선택 마커로서 사용되어 모체 플라스미드 집락의 배경을 감소시킨다. 이는, TRA J 유전자 단편 삽입이 수행된 이후에 NotI 효소가 첨가되는 경우 달성된다. 따라서 TRA J 유전자 단편을 적절하게 클로닝하는 플라스미드는 NotI 효소의 존재 하에서 선형으로 유지될 것이지만, 이의 NotI 부위가 TRA J 유전자 단편으로 교환되지 않은 모체 플라스미드는 선형이 될 것이고, 결국, 박테리아 형질전환을 편향시켜 완전 TRA J 단편-함유 플라스미드를 번식시킬 것이다.
Sp는 이러한 부위에 인접하는 경우, 타입 IIS 제한 효소 결합 부위와 절단 부위의 적절한 이격을 성취하기 위한 TRA J 수용 카세트 단편의 특정 지점에 대한 뉴클레오타이드 첨가를 나타낸다. Sp는 효율적인 작용을 위해서 적절하게 NotI 결합 및 절단 부위를 이격시키는 데 사용된 NotI 제한 효소 결합 부위 서열이 측접하는 것을 차단한다. 최종 재구성된 전장 TRA 내의 적절한 리딩 프레임을 유지시키기 위해서 추가 뉴클레오타이드가 포함되었다. 뉴클레오타이드의 선택은 BsaI 결합 부위의 DAM 메틸화의 잠재적인 효과인 것으로 간주되었다.
네이티브 인간 TRA 쇄의 본 실시예에서 TRA J 수용 카세트 단편 올리고뉴클레오타이드를 위한 완전 DNA 서열을 SEQ0095 및 SEQ0096으로서 제공한다. 순방향(F1) 및 역방향(R1) 올리고뉴클레오타이드 서열 둘 모두를 열거한다.
J 공여자 벡터 골격의 설계
J 공여자 벡터 골격을 사용하여 TRA J 수용 카세트 단편을 삽입하여 TRA J 수용 카세트 벡터를 생성한다. 따라서 골격이 J 공여자 벡터 라이브러리 전체에 보유된다. TRA 전장 ORF를 생성시키기 위한 최종 반응에서, 이러한 골격은 반응 부산물(도 4e)이고, 따라서 도 9에 도시된 바와 같은 최소 특징부를 보유한다.
본 실시예에서, J 공여자 벡터 골격은 Col E1 복제 기점, ori를 암호화한다. 항생제 내성은 아미노글리코사이드 3'-포스포트랜스포라제 유전자, 양성 선택 #2이다. 아미노글리코사이드 3'-포스포트랜스포라제는 항생제 물질, 예컨대, 카나마이신, 스트렙토마이신, 네오마이신 및 젠타마이신에 대한 내성을 부여한다. 이러한 교호하는 양성 선택을 사용하여 J 공여자 벡터가 전장 TCR ORF 재구성(이것은 양성 선택 #1에 대해서 선택됨) 이후에 선택되지 않는 것을 보장한다.
본 실시예에서 벡터 EcoRI 및 XhoI 제한 효소 결합 부위는 각각 상보성 오버행, 오버행 *3' 및 오버행 *4'를 생성시킨다. 오버행 *3'는 TRA J 수용 카세트 단편 내에 함유된 오버행 *3과 상보성이다. 오버행 *4'는 TRA J 수용 카세트 단편 내에 함유된 오버행 *4와 상보성이다. 이러한 오버행은 TRA J 수용 카세트 단편의 지향된 클로닝을 허용한다.
Sp는 효율적인 작용을 보장하기 위해서 2개의 부위를 이격시키기 위해서 EcoRI과 XhoI 제한 효소 결합 부위 사이에 첨가되는 뉴클레오타이드를 나타낸다.
본 실시예에서, J 공여자 벡터 골격을 SEQ0097로서 제공한다.
TRA J 수용 카세트 벡터의 조립 방법
이 방법은 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 주어진 TRA J 수용 카세트 단편(도 8)을 주어진 J 공여자 벡터 골격(도 9) 내에서 조립하여 TRA J 수용 카세트 벡터(도 10)를 생성한다. 생성된 TRA J 수용 카세트 벡터를 사용하여 TRA J 분절 부분(도 11)을 삽입하여 TRA J 공여자 벡터(도 3)를 작제한다.
먼저, TRA J 수용 카세트 DNA 단편을 형성하기 위한 2개의 올리고뉴클레오타이드는 인산화 및 어닐링되어야 한다.
반응 믹스
올리고뉴클레오타이드(센스 가닥)(100μM) 1㎕
올리고뉴클레오타이드(안티-센스 가닥)(100μM) 1㎕
T4 리가제 완충액 10x 1㎕
T4 PNK 1㎕
H2O 6㎕
반응 조건
37℃에서 1시간 동안 인큐베이션시킴
95℃에서 5분 동안 변성시킴
반응을 분당 3℃로 25℃까지 서서히 냉각시킴으로써 센스 및 안티-센스 올리고뉴클레오타이드를 어닐링함
TRA J 수용 카세트 단편의 결찰 및 J 공여자 벡터 골격을 조립함.
반응 믹스
선형 벡터 골격 100 ng
수용 부위 카세트 DNA 단편(0.5μM) 2㎕
T4 리가제 완충액 10x 2㎕
T4 리가제 0.5㎕
H2O 최대 20㎕
반응 조건
25℃에서 1시간 동안 인큐베이션시킴
65℃에서 10분 동안 열 불활성화시킴
생성된 생성물을 수용성 이.콜라이 세포 내에 형질전환시키고, 카나마이신 내성 집락에 대해서 선택한다. 내성 집락을 선택하여 적절하게 조립된 작제물을 결정한다. 생성된 플라스미드는 TRA J 수용 카세트 벡터이다. 본 실시예에서, TRA J 수용 카세트 벡터를 SEQ0098로 제공하고, 도 10에 도시한다.
합성 TRA J 분절 부분의 설계
TRA J 수용 카세트 벡터를 생성한 후, 합성 TRA J 분절 부분을 생성시켜 이 벡터에 삽입해야 한다. 각각의 TRA J 서열은 독립적인 TRA J 수용 카세트 벡터 컨텍스트 내에 삽입되어 인간 TRA TORES의 부분으로서 TRA J 공여자 벡터 라이브러리를 생성시킨다.
TRA J 공여자 벡터 라이브러리는 긴 또는 짧은 J 분절 부분로 구성된 2개의 상이한 형태로 존재한다. 짧은 TRA J 분절 부분은 CDR3 가장자리 코돈의 시작부로부터의 모든 아미노산을 암호화한다. 그러나, 대부분의 TRA J 분절이 TCR 재배열 동안 10개 미만의 뉴클레오타이드로 다시 절단되는 것을 고려할 때, 더 긴 TRA J 생식 계열 분절을 함유하는 TRA J 공여자 벡터 라이브러리는 긴 TRA J 분절 부분으로 설계된다. 더 긴 TRA J 유전자 단편 라이브러리에 대한 동기부여는, CDR3을 암호화하는 더 짧은 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스(odeCDR3)가, 짧은 TRA J 단편이 사용되는 경우보다, 전장 TRA 재구성을 위해서 요구될 것이라는 것이다. 상당히 가변성인 서열이 짧은 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스, odeCDR3으로서 제공되기 때문에, 더 짧은 CDR3 올리고뉴클레오타이드 합성은 절두된 또는 돌연변이된 올리고뉴클레오타이드 오염물을 함유할 가능성이 더 낮고, 따라서 전장 TRA 재작제 동안 클로닝되는 서열 오류를 갖는 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스의 가능성을 감소시킨다. 추가로, 더 짧은 odeCDR3 합성은 비용 절약적이다.
TRA J 분절 부분은 DNA 단편의 각각의 단부에서 4-뉴클레오타이드 단일-가닥 오버행을 함유하도록 설계된 2개의 단일-가닥 DNA 올리고뉴클레오타이드를 어닐링함으로써 작제된다. 생성된 TRA J 분절 부분을 도 11에 도시한다.
오버행 *5'라고 지정된 5' 오버행은 BbsI 작용에 의해서 J 공여자 벡터 수용 카세트 벡터 내에 생성된 오버행 *5와 상보성이다. 오버행 *6'라고 지정된 3' 오버행은 BbsI 작용에 의해서 J 공여자 벡터 수용 카세트 벡터 내에 생성된 오버행 *6과 상보성이다. 이러한 상보성 오버행의 쌍은 TRA J 분절 부분의 TRA J 수용 카세트 벡터 내로의 지향성 클로닝을 허용한다.
짧은 TRA J 분절 부분은 CDR3-J 가장자리 Phe 코돈의 시작부로부터의 모든 아미노산을 암호화한다. CDR3은 V 영역의 C-말단-보존된 Cys, 및 Phe-Gly/Ala 보존된 모티프의 부분인 J 영역의 Phe가 측접된 서열로서 정의된다. 이러한 보존된 Phe-Gly/Ala 모티프를 사용하여 하류 TRA 재구성을 위해서 TRA J 단편의 5' 오버행을 TTTG에 대해서 표준화한다. 본 실시예에서 이러한 표준화에 대한 예외는 Trp 및 Gly를 갖는 CDR3 영역의 가장자리에 존재하는 인간 TRAJ33 및 TRAJ38이다. 5' 오버행은 본 실시예에서 TRAJ33 및 TRAJ38 둘 모두에 대해서 TGGG이다.
긴 TRA J 분절 부분은 CDR3 가장자리 아미노산의 하나 이상의 아미노산 N-말단을 암호화하도록 설계된다. 각각의 긴 유전자 단편의 시작 지점은 생식 계열 암호화된 TCR 결합 요소의 5' 단부로부터 10 내지 12nt에 위치된 아미노산 코돈의 제1 뉴클레오타이드이다. 각각의 긴 TRA J 분절 부분의 5' 단부는 짧은 TRA J 분절 부분의 것과 동일하게 남아있다.
짧은 TRA J 분절 부분 및 긴 TRA J 분절 부분 둘 모두에 대해서, 도 11에 A 블록으로서 나타낸, 아데닌이, 각각의 TRA J 분절 부분의 3' 단부에 첨가된다. 이러한 아데닌은 TRA J 수용 카세트로부터 배제된 TRA C 단편의 제1 뉴클레오타이드를 나타낸다.
네이티브 인간 J 분절의 본 실시예의 짧은 TRA J 분절 부분의 서열을 SEQ0099 내지 SEQ0210으로서 제공하고, 긴 TRA J 분절 부분을 SEQ0211 내지 SEQ0322로서 제공한다. 두 경우 모두에서, 순방향(F1) 및 역방향(R1) 올리고뉴클레오타이드 서열 둘 모두를 열거한다.
짧은 또는 긴 J-공여자 벡터 라이브러리의 조립 방법
이 방법은 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 짧은 TRA J 분절 또는 긴 TRA J 분절 부분(도 11)을 TRA J 수용 카세트 벡터(도 10) 내에 클로닝하여 짧은 또는 긴 TRA J 분절을 함유하는 TRA J 공여자 벡터(도 3)를 생성한다. 본 실시예에서, 이 방법은 제한 효소 소화 및 결찰 반응을 단일 반응으로 수행한다.
J 공여자 벡터 라이브러리에 요구되는 DNA 성분은 하기와 같다:
I. 짧은 TRA J 분절 부분 또는 긴 TRA J 분절 부분
II. J 공여자 벡터 수용 카세트 벡터
2개의 올리고뉴클레오타이드를 인산화 및 어닐링하여 TRA J 분절 부분 DNA 단편을 형성함
반응 믹스
올리고뉴클레오타이드(센스 가닥)(100μM) 1㎕
올리고뉴클레오타이드(안티-센스 가닥)(100μM) 1㎕
T4 리가제 완충액 10x 1㎕
T4 PNK 1㎕
H2O 6㎕
반응 조건
37℃에서 1시간 동안 인큐베이션시킴
95℃에서 5분 동안 변성시킴
반응을 분당 3℃로 25℃까지 서서히 냉각시킴으로써 센스 및 안티-센스 올리고뉴클레오타이드를 어닐링함
RE 소화 및 결찰 반응
TRA J 수용 카세트 골격 100 ng
TRA J DNA 단편(0.5μM) 2㎕
10x NEB T4 리가제 완충액 2㎕
BbsI 0.5㎕
T4 DNA 리가제 0.5㎕
H2O 최대 20㎕
반응 조건
단계1; 37℃에서 2분
단계2; 16℃에서 3분
단계 1 및 2 반복, 20회
50℃에서 5분
80℃에서 5분
실온으로 복귀
0.5㎕의 NotI 효소를 첨가하고, 30분 동안 37℃에서 인큐베이션시켜 모체 벡터를 선형화시킨다.
반응 생성물을 수용성 이.콜라이 세포 내에 형질전환시키고, 카나마이신 내성에 대해서 선택한다. 선택된 내성 집락을 서열결정하여 적절하게 조립된 작제물을 결정한다. 생성된 작제물은 긴 또는 짧은 TRA J 유전자 단편을 암호화하는, TRA J 공여자 벡터 라이브러리로 구성된다.
BsaI 인식 부위 외부의 골격 서열을 제외한, 생성된 라이브러리의 서열을 TRA 짧은 J 공여자 벡터 라이브러리의 경우에는 SEQ0323 내지 SEQ0378로서 제공하고, TRA 긴 J 공여자 벡터 라이브러리의 경우에는 SEQ0379 내지 SEQ0434로서 제공한다.
실시예 3
네이티브 인간 TRB 레퍼토리를 위한 TRB V-C 유입 벡터 및 TRB J 공여자 벡터 라이브러리의 설계 및 조립
상기 실시예에서, 네이티브 인간 TRA 레퍼토리에 대한 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 라이브러리의 설계 및 조립을 상세하게 기술하였다. TRB 레퍼토리를 암호화하는 이러한 벡터 라이브러리의 전체 설계 및 조립은 본질적으로 동일하다. 본 실시예에서, TORE 또는 네이티브 인간 TRB TCR 유전자좌를 작제하기 위해서 TRB V-C 유입 벡터 및 TRB J 공여자 벡터 라이브러리의 설계 및 조립을 간략하게 설명할 것이다.
네이티브 인간 TRB 레퍼토리의 TRB V-C 유입 벡터 라이브러리의 설계 및 조립
본 실시예에서, 네이티브 인간 TRB V-C 서열 레퍼토리를 함유하는 TRB V-C 유입 벡터 라이브러리의 설계 및 조립을 기술한다. 이것은 도 2에 도시된 제너릭 V-C 유입 벡터 타입의 예이다.
TRB V-C 벡터 라이브러리에 요구되는 DNA 성분은 하기이다:
I. 인간 게놈에 암호화된 각각의 기능성 TRB V 유전자 분절에 대한 TRB V 클로닝 단편
II. TRB C1 또는 TRB C2 클로닝 단편
III. V-C 유입 벡터 골격.
인간 TRA 유전자좌와 대조적으로, 인간 TRB 유전자좌는 2개의 별개의 불변 분절, TRB C1 및 C2를 암호화한다. 따라서, 두 불변 영역 모두를 포획하기 위해서, 2개의 V-C 유입 벡터 세트를 작제하여 V 분절 각각을 각각의 C1 및 C2 분절과 짝지운다.
본 실시예에서, TRB V 및 TRB C 클로닝 단편을 합성하였고, 이를 사용하여 단일 제한 효소 및 리가제 반응에서 표적 V-C 유입 벡터 골격으로 조립하였다. 본 실시예에서, 표적 V-C 유입 골격을, 포유동물 세포 내에서 재구성된 TRB ORF의 일시적 발현을 허용하도록 설계하였다.
본 실시예에서, TRB V-C 유입 벡터 라이브러리는 타입 IIS 제한 효소 BbsI을 사용하여 작제된다. 전장 TRB ORF를 재구성하기 위해서 라이브러리의 기능에서 사용되는 타입 IIS 제한 효소는 BsaI이다.
합성 TRB V 클로닝 단편의 설계
TRB V 클로닝 단편의 유전 요소의 배열은 도 5에 도시된 바와 같은, 실시예 1에 기술된 TRA V 클로닝 단편의 것과 동일하다.
네이티브 인간 TRB 쇄의 본 실시예에서 TRB V 클로닝 단편을 위한 완전 DNA 서열을 SEQ0435 내지 SEQ481로서 제공한다.
합성 TRB C 클로닝 단편의 설계
TRB C 클로닝 단편의 유전 요소의 배열은 도 6에 도시된 바와 같은, 실시예 1에 기술된 TRA C 클로닝 단편의 것과 동일하다.
TRB 유전자좌는 2개의 별개의 C 분절을 암호화하고, 둘 모두는 TRB V-C 유입 벡터 라이브러리의 설계에 포함된다.
네이티브 인간 TRB 쇄의 본 실시예에서 TRB C 클로닝 단편을 위한 완전 DNA 서열을 SEQ0482 및 SEQ0483으로서 제공한다.
TRB V-C 유입 벡터 라이브러리의 조립 방법
주어진 TRB V 및 TRB C 클로닝 단편을 주어진 V-C 유입 벡터 골격 내에 조립하여 TRB V-C 유입 벡터를 생성시키기 위한 방법은 실시예 1에 기술된 것과 동일하다. 포유동물 세포에서 전장 TRA 또는 TRB ORF의 일시적인 발현을 위해서 설계된, 사용된 V-C 유입 벡터 골격을 본 실시예 및 실시예 1에서 사용한다(SEQ0048).
TRA V-C 유입 벡터 라이브러리를 구성하는 클로닝된 V-C 단편의 서열을 SEQ0484 내지 SEQ0577로서 제공한다.
네이티브 인간 TRB 레퍼토리의 TRB J 공여자 벡터 라이브러리의 설계 및 조립
본 실시예에서, 네이티브 인간 TRB J 서열 레퍼토리를 함유하는 TRB J 공여자 벡터 라이브러리의 설계 및 조립을 기술한다. 이것은 도 3에 도시된 제너릭 J 공여자 벡터 타입의 예이다.
본 실시예에서, TRB J 수용 카세트 단편을 작제하고, J 공여자 벡터 골격에 삽입하여 TRB J 수용 카세트 벡터를 생성한다. 그 다음, 합성 TRB J 분절 부분은 TRB J 수용 카세트 벡터로 조립되어 TRB J 공여자 벡터 라이브러리를 생성시킬 수 있다. 이러한 융통성있는 다단계 조립 방법은 J 공여자 벡터 분절 특징부, 예컨대, J 분절 길이의 신속하고 비용 효과적인 조작을 허용한다.
이러한 절차는 실시예 2에 기술된 TRA J 공여자 벡터 조립과 동일한 패턴을 따른다. 그러나, J 수용 카세트 단편은 C 분절의 부분을 함유하기 때문에, TRA J 및 TRB J 수용 카세트 단편은 각각의 C 유전자 분절에 상응해야 하는, C 부분 분절과 관련하여 상이하다는 것을 주목해야 한다. 더욱이, 단일 J 수용 카세트 단편만을 요구하는 TRA J 시나리오와 대조적으로, TRB J는 2개의 별개의 J 수용 카세트 단편을 요구하여 교호하는 C1 및 C2 분절의 사용을 고려한다.
TRB J 공여자 벡터 라이브러리에 요구되는 DNA 성분은 하기이다:
I. TRB J C1 또는 TRB J C2 수용 카세트 단편
II. J 공여자 벡터 골격
III. TRB J C1 또는 TRB J C2 수용 카세트 벡터
IV. TRB J 분절 부분.
합성 TRA J 수용 카세트 단편의 설계
2개의 단일 가닥 DNA 올리고뉴클레오타이드의 어닐링을 사용하여 수용 카세트 단편을 생성시키는데, 이것은 도 8에 도시된, DNA 단편의 각각의 단부에 4-뉴클레오타이드 단일-가닥 오버행을 함유한다. 4-뉴클레오타이드 오버행은 J 공여자 벡터 골격 내에서의 지시된 리가제-의존적 클로닝을 허용하여 TRB J 수용 카세트 벡터를 생성한다.
C1 및 C2 분절의 교호 사용을 위해서 요구되는 2개의 수용 카세트 단편을 SEQ0578 및 SEQ0581로서 제공한다. 각각의 단편에 대해서, 순방향(F1) 및 역방향(R1) 올리고뉴클레오타이드 서열을 제공한다.
TRB J 수용 카세트 벡터의 조립 방법
TRB J 수용 카세트 벡터의 조립을 위한 방법은 실시예 2에 기술된 TRA J 수용 카세트 벡터의 조립을 위한 방법과 동일하다. 동일한 J 공여자 벡터 골격(SEQ0097)을 사용하여 TRB 유전자좌에 대한 교호하는 C 분절에 상응하는 각각 하나의 C1 또는 C2 부분을 함유하는 2개의 TRB J 수용 카세트 벡터를 생성시킨다.
생성된 2개의 J 수용 카세트 벡터를 사용하여 TRB J 분절 부분을 삽입하여 TRB J 공여자 벡터를 작제한다.
생성된 TRB J 수용 카세트 벡터를 SEQ0582 및 SEQ0583으로서 제공한다.
합성 TRB J 분절 부분의 설계
TRB J 분절 부분은 DNA 단편의 각각의 단부에서 4-뉴클레오타이드 단일-가닥 오버행을 함유하도록 설계된 2개의 단일-가닥 DNA 올리고뉴클레오타이드를 어닐링함으로써 작제된다. 이 부분의 배열 및 조립 방법은 TRA J 분절 부분의 것과 동일하고, 도 11에 도시되어 있다.
이 경우 짧은 TRB J 분절 부분은 CDR3-J 가장자리 Phe 코돈의 시작부로부터의 모든 아미노산을 암호화한다. CDR3은 V 영역의 C-말단-보존된 Cys, 및 인간 TRB J 분절 전체에서 보존된 Phe-Gly 모티프의 부분인 J 영역의 Phe가 측접된 서열로서 정의된다. 이러한 보존된 Phe-Gly 모티프를 사용하여 하류 TRB 재구성을 위해서 TRA J 단편의 5' 오버행을 TTTG에 대해서 표준화한다. TRA J 분절과 달리, 본 실시예에서 TRA J 분절 부분에서 이러한 표준화된 오버행에 대한 예외는 존재하지 않는다.
짧은 TRB J 분절 부분 및 긴 TRB J 분절 부분 둘 모두에 대해서, 도 11에 A 블록으로서 나타낸, 아데닌이, 각각의 TRB J 분절 부분의 3' 단부에 첨가된다. 이러한 아데닌은 TRB J 수용 카세트로부터 배제된 TRB C 단편의 제1 뉴클레오타이드를 나타낸다.
네이티브 인간 J 분절의 본 실시예의 짧은 TRB J 분절 부분의 서열을 SEQ0584 내지 SEQ0609로서 제공하고, 긴 TRB J 분절 부분을 SEQ0610 내지 SEQ0635로서 제공한다. 두 경우 모두에서, 순방향(F1) 및 역방향(R1) 올리고뉴클레오타이드 서열 둘 모두를 열거한다.
TRB 짧은 또는 긴 J 공여자 벡터 라이브러리의 조립 방법
TRB J 공여자 벡터 라이브러리를 조립하기 위한 절차는 실시예 2에 기술된 TRA 라이브러리의 것과 동일하다. 그러나, TRB 라이브러리의 경우, TRA 유전자좌 분절에 대한 짧은 라이브러리 및 긴 라이브러리와 대조적으로, 4개의 라이브러리가 생성된다.
TRB 라이브러리의 경우, 각각의 짧은 라이브러리 및 긴 라이브러리를 작제하여 교호하는 C1 및 C2 C 분절 각각을 보유하여, TRB J 공여자 벡터 라이브러리 내에 4개의 하위세트를 생성시킬 수 있다.
J 공여자 벡터 라이브러리에 요구되는 DNA 성분은 하기와 같다:
I. 짧은 TRB J 분절 부분 또는 긴 TRB J 분절 부분
II. TRB J C1 또는 TRB J C2 수용 카세트 벡터.
실시예 2에 기술된 바와 동일한 절차 이후에, TRB J 공여자 벡터 라이브러리 내에 4개의 생성된 하위세트가 생성된다. BsaI 인식 부위 외부의 골격 서열을 제외한, 생성된 라이브러리의 서열을 제공한다.
SEQ0636 내지 SEQ0648로서 제공된 TRB C1 짧은 J 공여자 벡터 라이브러리
SEQ0649 내지 SEQ0661로서 제공된 TRB C2 짧은 J 공여자 벡터 라이브러리
SEQ0662 내지 SEQ0674로서 제공된 TRB C1 긴 J 공여자 벡터 라이브러리
SEQ0675 내지 SEQ0687로서 제공된 TRB C2 긴 J 공여자 벡터 라이브러리.
실시예 4
리콤비나제 매개된 카세트 교환 응용을 위한 TRA 및 TRB V-C 유입 벡터의 설계
각각 실시예 1 및 3에서의 TRA 및 TRB V-C 유입 벡터의 설계는, 각각의 TCR 쇄를 위한 이들 TORES의 사용으로 재구성된 전장 TCR이 형질주입에 의해서 포유동물 세포에서 일시적인 발현에 직접 적용될 수 있도록 한다. TORES의 전체 설계는, V-C 유입 벡터 골격이 하류 응용에 적합한 임의의 골격 대신 교환되는 것을 허용하고, 필요한 V-C 유입 벡터 라이브러리가 V 클로닝 단편 및 C 클로닝 단편으로부터 신속하게 조립되는 것을 허용한다.
본 실시예에서, 한 쌍의 이종특이적 FRT V-C 유입 벡터 골격을 사용하여 TRA 및 TRB V-C 유입 벡터 라이브러리를 조립하였다. 별개의 플립파제 인식 표적(flippase recognition target: FRT) 서열을 함유하는 벡터 골격을 사용하여 각각의 TRA 및 TRB V-C 유입 벡터 라이브러리를 작제한다. 이러한 벡터의 하나의 하류 응용은, 관련 FRT 부위를 보유하는 포유동물 세포 내의 신속한 게놈 통합에 대한 최종 재구성된 TRA 및 TRB 쌍의 참여이다.
본 실시예에서, 도 7에 도시된 설계의 TRA V-C 유입 벡터는 각각 5' 및 3' 유전 요소로서 F14 및 F15 FRT 서열을 함유한다. 이러한 F14/F15 V-C 유입 벡터 골격 서열은 SEQ0688로서 제시된다.
실시예 1에 요약된 방법을 사용하고, TRA V 클로닝 단편(SEQ0001 내지 SEQ0046) 및 TRA C 클로닝 단편(SEQ0047)을 사용하면서 이러한 골격을 사용하여, 도 2에 요약된 설계의 TRA V-C 유입 라이브러리를 작제하였다. 이러한 작제는, 일시적인 발현 TRA V-C 유입 벡터 라이브러리(SEQ0049 내지 SEQ0094)의 것과 동일한 서열을 갖지만, F14/F15 V-C 유입 벡터 골격의 맥락에서 FRT 서열이 측접된 TRA V-C 유입 라이브러리를 산출하였다.
본 실시예에서, 도 7에 도시된 설계의 TRB V-C 유입 벡터는 각각 5' 및 3' 유전 요소로서 FRT 및 F3 FRT 서열을 함유한다. 이러한 FRT/F3 V-C 유입 벡터 골격 서열을 SEQ0689로서 제공한다.
실시예 3에 요약된 방법을 사용하고, TRA V 클로닝 단편(SEQ0435 내지 SEQ0481) 및 TRB C 클로닝 단편(SEQ0482 및 SEQ0483)을 사용하면서 이러한 골격을 사용하여, 도 2에 요약된 설계의 TRA V-C 유입 라이브러리를 작제하였다. 이러한 작제는, 일시적인 발현 TRB V-C 유입 벡터 라이브러리(SEQ0484 내지 SEQ0577)의 것과 동일한 서열을 갖지만, FRT/F3 V-C 유입 벡터 골격의 맥락에서 FRT 서열이 측접된 TRB V-C 유입 라이브러리를 산출하였다.
종합하면, 본 실시예에서 TRA V-C 유입 벡터 및 TRB V-C 유입 벡터를 상기 실시예에서의 V-C 유입 벡터와 상호 교환 가능하게 사용할 수 있다. 각각의 경우에, J 공여자 벡터는 odeCDR3의 설계 및 제공과 같이 변화되지 않는다(실시예 6 참고). 사실, 상이한 V-C 유입 벡터 골격은 TCR 재구성 반응의 직접 생성물로서 하류 응용을 위한 목적하는 벡터 컨텍스트 내에 전장 TCR ORF를 제공한다.
실시예 5
임의의 V-J-C 조합물의 제공에 적합한 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터의 설계
V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터의 상기 실시예에서, 네이티브 인간 TRA 및 TRC TCR 쇄를 TORES의 실제 설명으로서 사용한다. 그러나, 요구되는 TCR 쇄 서열을 명시된 벡터 포맷 내에 삽입할 때 임의의 네이티브 또는 비-네이티브 TCR 쇄가 TORES 포맷에서 사용될 수 있음이 명백하다.
임의의 주어진 TCR 쇄를 위한 TORES를 달성하기 위해서, 상기 TCR 쇄에 특이적인 4종의 서열 요소가 필요하다:
X - 가변(V) 유전자 분절 단편
Y - 불변(C) 유전자 분절 단편
Y'- 불변 (C) 유전자 분절 부분
Z - 결합(J) 유전자 분절 단편.
상기 실시예에 따라서, 이러한 4종의 형태의 서열 요소는 다양한 백터 컨텍스트 내에서 조립되어 임의의 주어진 TCR 쇄에 대한 임의의 주어진 V-J-C 조합물을 위한 TORES를 작제 및 배치할 수 있다. 예를 들어, 네이티브 인간 TRG 및 TRD 유전자좌, 변이체 합성 인간 TCR 쇄 형태 또는 인간 이외의 유기체의 네이티브 TCR 쇄 형태용 시스템.
V-C 유입 벡터 조립 및 최종 작제물
V-C 유입 벡터의 조립을 달성하기 위해서, 관련 V 유전자 분절 단편 및 C 유전자 분절 단편을 함유하는 2개의 중간체를 작제할 수 있다.
최종 V-C 유입 벡터 조립을 위한 적절한 클로닝 부위의 맥락에서 요구되는 V 유전자 분절 단편을 함유하도록 도 5에 따라서 V 클로닝 단편을 설계한다. 본 실시예에서, 또한 실시예 1, 3 및 4에 제시된 바와 같이, BbsI 제한 효소 부위의 사용을 통해서 V-C 유입 벡터의 조립을 달성하여 각각 V-C 유입 벡터 골격 및 C 클로닝 단편 내의 상보성 오버행에 매칭하도록 5' 단부 및 3' 단부에 표적 오버행을 생성시켰다. 예시된 전략은 또한 음성 선택 마커로서 NotI 제한 효소 부위를 혼입한다.
이러한 클로닝 접근법의 제너릭 서열을 SEQ-0690에 제시하며, 여기서 V 유전자 분절 단편은 5' 단부 및 3' 단부에서 BbsI 부위에 의해서 결합되고, V 유전자 분절 단편은 XNn으로 표현되고, 식 중 X는 V 유전자 분절에 대한 명칭이고, N은 임의의 뉴클레오타이드를 나타내고, n은 상기 서열 내의 뉴클레오타이드의 수를 나타낸다. V 유전자 분절 단편은 각각 5' 단부 및 3' 단부에서 코작 뉴클레오타이드 및 스페이서 뉴클레오타이드에 의해서 결합되고, 번역 시작 코돈을 포함한다.
특정 TCR 쇄 서열을 위한 V-C 유입 벡터 라이브러리를 조립하도록 작제될 수 있는 제2 중간체는 도 6에 도시된 바와 같은 C 클로닝 단편이다. 본 실시예에서, 또한 실시예 1, 3 및 4에 제시된 바와 같이, BbsI 제한 효소 부위의 사용을 통해서 V-C 유입 벡터의 조립을 달성하여 각각 V 클로닝 단편 및 골격 V-C 유입 벡터 내의 상보성 오버행에 매칭하도록 5' 단부 및 3' 단부에 표적 오버행을 생성시켰다. 예시된 전략은 또한 음성 선택 마커로서 NotI 제한 효소 부위를 혼입한다.
이러한 클로닝 접근법의 제너릭 서열을 SEQ-0691에 제시하며, 여기서 C 유전자 분절 단편은 5' 단부 및 3' 단부에서 BbsI 부위에 의해서 결합되고, C 유전자 분절 단편은 YNn으로 표현되고, 식 중 Y는 C 유전자 분절에 대한 명칭이고, N은 임의의 뉴클레오타이드를 나타내고, n은 상기 서열 내의 뉴클레오타이드의 수를 나타낸다. C 유전자 분절 단편은 각각 5' 단부 및 3' 단부에서 C 유전자 분절의 제1 Glu 코돈의 사이토신 5', 또는 동등한 보존된 부위, 및 스페이서 뉴클레오타이드(들)에 의해서 결합되고, 번역 중단 코돈을 포함할 것이다.
상기에 정의된 V 클로닝 단편 및 C 클로닝 단편을 사용하여 V-C 유입 벡터를 조립하기 위해서, 이들 단편을 도 7에 도시되고, 실시예 1 및 3에 기재된 바와 같이 V-C 유입 벡터 골격과 조합한다. 본 실시예 및 상기 실시예에서, 이러한 골격은 각각 오버행 *1' 및 오버행 *2'를 생성시키는 Acc65I 및 XbaI 제한 효소 결합 부위로 정의된다. 오버행 *1'은 V 클로닝 단편 내의 오버행 *1과 상보성이다(도 5). 오버행 *2'은 C 클로닝 단편 내의 오버행 *2와 상보성이다(도 6). 이러한 상보성 오버행은 V 및 C 클로닝 단편의 V-C 유입 벡터 골격 내에서의 지향된 클로닝을 허용한다.
Sp 특징부는 효율적인 작용을 위해서 2개의 부위를 이격시키는 데 요구되는 Acc65I와 XbaI 제한 효소 인식 부위 사이에 첨가되는 뉴클레오타이드를 지칭한다.
실시예 4에 요약된 바와 같이, 5' 유전 요소 및 3' 유전 요소를 V-C 유입 벡터에 제공하여(도 2), V-C 유입 벡터 골격(도 7)은 궁극적으로 전장 TCR ORF가 재구성되는 벡터 컨텍스트를 제공한다(도 4h). 따라서, V-C 유입 벡터 골격/V-C 유입 벡터에 대한 다양한 선택이 수행되어 재구성된 TCR ORF에 대한 다양한 하류 응용을 충족시킬 수 있다.
본 실시예에서, 상기 실시예 1, 3 및 4에서와 같이, 3종의 상이한 V-C 유입 벡터 골격이 제공된다.
CMV 구성적 프로모터를 암호화하는 5' 유전 요소, 및 SV40pA 폴리아데닐화 신호를 암호화하는 3' 유전 요소를 갖는 V-C 유입 벡터 골격의 서열이 SEQ0048에 제시된다. 이러한 벡터 컨텍스트는 포유동물 세포에서 재구성된 TCR ORF의 일시적인 발현을 허용한다.
이러한 일시적인 발현 V-C 유입 벡터 골격 SEQ0048이 본 실시예에서 제너릭 V 클로닝 단편(SEQ0690) 및 C 클로닝 단편(SEQ0691)과 조합되는 경우, 일반화된 V-C 유입 벡터는 서열 SEQ0692에 의해서 정의될 수 있다.
FTR 부위, F14, 서열을 암호화하는 5' 유전 요소, 및 FRT 부위, F15, 서열을 암호화하는 3' 유전 요소를 갖는 V-C 유입 벡터 골격의 서열이 SEQ0688에 제시된다. 이러한 벡터 컨텍스트는 F14 및 F15 이종특이적 FRT 부위에 의해서 결합된 유전자 컨텍스트 내에서 재구성된 TCR ORF의 플립파제 매개 카세트 교환을 허용한다. 예를 들어, 이러한 접근법은 이러한 이종특이적 FRT 수신자 부위를 보유하는 포유동물 세포주 내에서 TCR ORF의 안정적인 통합을 위해서 사용될 수 있다.
이러한 F14/F15 RCME V-C 유입 벡터 골격 SEQ0688이 본 실시예에서 제너릭 V 클로닝 단편(SEQ0690) 및 C 클로닝 단편(SEQ0691)과 조합되는 경우, 일반화된 V-C 유입 벡터는 서열 SEQ0693에 의해서 정의될 수 있다.
FTR 부위, FRT, 서열을 암호화하는 5' 유전 요소, 및 FRT 부위, F3, 서열을 암호화하는 3' 유전 요소를 갖는 제2 V-C 유입 벡터 골격의 서열이 SEQ0689에 제시된다. 이러한 벡터 컨텍스트는 FRT 및 F3 이종특이적 FRT 부위에 의해서 결합된 유전자 컨텍스트 내에서 재구성된 TCR ORF의 플립파제 매개 카세트 교환을 허용한다. 예를 들어, 이러한 접근법은 이러한 이종특이적 FRT 수신자 부위를 보유하는 포유동물 세포주 내에서 TCR ORF의 안정적인 통합을 위해서 사용될 수 있다.
이러한 FRT/F3 RCME V-C 유입 벡터 골격 SEQ0689가 본 실시예에서 제너릭 V 클로닝 단편(SEQ0691) 및 C 클로닝 단편(SEQ0692)과 조합되는 경우, 일반화된 V-C 유입 벡터는 서열 SEQ0694에 의해서 정의될 수 있다.
본 실시예에서, 하나의 TCR 쇄가 2개의 RCME 컨텍스트 중 하나에서 재구성될 수 있고, 제2 쇄가 나머지 RCME 컨텍스트에서 재구성될 수 있다. 예를 들어, TRA ORF는 F14/F15 컨텍스트 내에서 재구성될 수 있고, TRB ORF는 FRT/F3 컨텍스트 내에서 재구성될 수 있다. 따라서, 짝지워진 TRA/TRB 작제물은, 상기 세포주에서 TRA/TRB 쌍의 안정적인 발현을 위해서 RCME에 의해서 F14/F15 및 FRT/F3 부위를 보유하는 포유동물 세포주 내에 통합될 수 있다.
J 공여자 벡터 조립 및 최종 작제물
TORES의 성분으로서 V-C 유입 벡터 내에서 다양한 V TCR 유전자 분절 및 C TCR 유전자 분절 조합물을 조립하는 데 사용될 수 있는 제너릭 작제물을 상기에 기재한다. TORES를 완성하기 위해서, 적절한 J 공여자 벡터가 요구된다. 실시예 2에 상기에 기재된 바와 같이, J 공여자 벡터를 다단계 공정으로 조립하여 J 분절의 특징부를 설계하는 데 있어서 유연성을 갖는 J 공여자 시스템을 달성할 수 있다. 주목할 하나의 중요한 양상은, J 공여자 벡터가 매칭된 V-C 유입 벡터 라이브러리의 C 분절에 상응하는 C 부분에 기여한다는 것이다.
J 공여자 벡터 라이브러리를 조립하기 위해서, 4종의 상이한 작제물이 요구된다:
I. J 수용 카세트 단편
II. J 공여자 벡터 골격
III. J 수용 카세트 벡터
IV. J 분절 부분.
본 실시예에서, 실시예 2에서와 같이, BbsI 제한 부위를 사용하여 J 공여자 벡터를 조립하고, 전체 TORES는 BsaI 제한 부위가 생성된 J 공여자 벡터 및 매칭된 V-C 유입 벡터 둘 다에 보유되는 경우에 사용하여 작동한다.
도 8에 도시된 바와 같은 J 수용 카세트 단편은 중요하게는 매칭된 V-C 공여자 벡터 라이브러리에 의해서 보유된 C 분절에 상응하는 C 부분을 함유한다. 이러한 클로닝 접근법의 제너릭 서열은 SEQ0695 내지 SEQ0696로 제시되며, 여기서 C 분절 상의 5' 부분을 암호화하는 C 부분은 BbsI 인식 부위에 의해서 5'에 그리고 BsaI 부위에 의해서 3'에 결합된다. 2개의 제시된 서열은 J 수용 카세트 단편을 생성시키기 위해서 어닐링되는 센스 및 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 나타내며, 여기서 제공되는 Y' 서열은 상보성이다. 제시된 서열에서 C 부분은 Y'Nn이라고 지정되고, 여기서 Y'는 상기에 기재된 Y C 분절에 매칭하는 C 부분에 대한 명칭이고, N은 임의의 뉴클레오타이드를 나타내고, n은 상기 서열 내의 뉴클레오타이드의 수를 나타낸다. BbsI 부위는, 삽입될 J 분절 부분에 매칭하는 클로닝 오버행을 생성시키기 위해서, 이격되고, 3' 방향으로 절단하도록 배향된다. BsaI 부위는 TORES의 작동 시에 전장 TCR ORF를 생성시키기 위한 최종 조립 반응에서 C 오버행을 생성시키기 위해서 이격되고 5' 방향으로 절단한다. 3' 방향으로 절단하는, J 수용 카세트 단편의 5' 말단의 제2 BsaI 부위가 TORES의 최종 작동을 위해서 사용된다. 5' 방향으로 절단하는 내부 BbsI 부위는 J-공여자 벡터의 조립을 위해서 제2 클로닝 오버행을 생성시킨다. 본 실시예에서, J 공여자 벡터 조립 공정으로부터 모체 단편을 제거하기 위한 음성 선택 마커로서 작용하기 위해서 BbsI 인식 부위 사이에 이격된 NotI 제한 부위가 암호화된다. 실시예 2에 기재된 바와 같은 5' 말단의 오버행*3 및 3' 말단의 오버행*4라고 지정된, 2개의 4-뉴클레오타이드 단일-가닥 오버행을 생성시키도록 설계된 2개의 상보성 올리고뉴클레오타이드를 어닐링함으로써 J 수용 단편이 조립된다.
상기에 기재된 J 수용 카세트 단편을 사용하여 중간체 J 수용 카세트 벡터를 조립하기 위해서, 도 9에 도시된 바와 같은 J 공여자 골격이 생성되어야 한다. 본 실시예에서, 이러한 벡터 골격의 클로닝 특징부는 효율적인 제한 효소 작용을 허용하도록 이격된 EcoRI 및 XhoI 제한 부위이다. EcoRI 및 XhoI로의 이러한 골격의 소화는 조립된 J 수용 카세트 단편에서 오버행*3 및 오버행*4과 상보성인 오버행*3' 및 오버행*4'를 생성시킨다. 이는 J 공여자 골격 내에서 J 수용 카세트 단편의 방향성 클로닝을 허용하여 실시예 2에 기재된 바와 같은 J 수용 카세트 벡터를 생성시킨다. 상기에 기재된 V-C 유입 벡터의 양성 선택 마커와 상이한 양성 선택 마커를 갖는 J 공여자 벡터 골격의 예는 SEQ0097로 제시된다.
상기에서 획득된 J 수용 카세트 벡터가 도 10에 도시되며, 이것은 J 공여자 벡터 골격의 맥락에서 J 수용 카세트 단편을 본질적으로 나타내고, SEQ0697이라고 제시되는데, 여기서 Y'는 Y라고 지정되고 상기에 기재된 C 분절에 매칭하는 C 부분에 대한 명칭이고, N은 임의의 뉴클레오타이드를 나타내고, n은 상기 서열 내의 뉴클레오타이드의 수를 나타낸다.
이것은, J 공여자 벡터 라이브러리를 작제하기 위해서 J 분절의 어레이가 삽입되는 J 수용 카세트 벡터 내에 존재한다. J 유전자 분절의 설계를 도 11에 도시하는데, 여기서 J 유전자 분절은 각각 오버행*5' 및 오버행*6'에 의해서 5' 단부 및 3' 단부에 결합된다. J 분절 부분은, 실시예 2에 기재된 바와 같이, J 수용 카세트 벡터 내에 J 분절 부분을 삽입하여 J 공여자 벡터를 생성시키는 경우, 효소 인식 서열 및 올바른 리딩 프레임을 유지시키도록, 본 실시예에서 단일 아데닌 뉴클레오타이드에 의해서 3' 오버행으로부터 이격된다. 본 실시예에서, J 분절 부분에 대한 제너릭 서열은 SEQ0698 내지 SEQ0699로 제시되며, 여기서 J 유전자 분절 부분은 ZNn으로 표현되고, 식 중, Z는 J 유전자 분절의 명칭이고, N은 임의의 뉴클레오타이드를 나타내고, n은 상기 서열 내의 뉴클레오타이드의 수를 나타낸다. 제시된 2개의 서열은 J 분절 부분을 조립하기 위해서 어닐링되는 센스 및 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 나타내고, 여기서 Z 서열은 상보성이다.
본 실시예에서 제너릭의 최종 획득된 J 공여자 벡터는 SEQ0700으로 제시되며, 이의 대표를 도 3에 제시한다. 본 실시예에서 이러한 J 공여자 벡터는 J 수용 카세트 벡터로부터의 C 부분 및 삽입된 J 분절 부분을 나타낸다. 이러한 서열은 ZNn 및 Y'Nn의 2개의 명명된 서열 삽입물을 갖는 것으로 제시되며, 식 중, Z는 J 유전자 분절에 대한 명칭이고, Y'는 C 분절 부분의 명칭이고, N은 임의의 뉴클레오타이드를 나타내고, n은 상기 서열 내의 뉴클레오타이드의 수를 나타낸다.
모든 제공된 서열 내에서, 뉴클레오타이드의 선택은 BsaI 결합 부위의 DAM 메틸화의 잠재적인 효과인 것으로 간주되었다. 벡터 내의 조립 및 선택 효소를 위한 모든 추가 인식 서열을 제거하였다. 임의의 이러한 인식 서열 또한 기재된 단편 및 벡터 컨텍스트 내에 삽입된 생식계열 또는 합성 TCR V, J 및 C 요소로부터 제거되어야 한다.
실시예 6
CDR3을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스(odeCDR3)의 설계 및 생성
상기 실시예에서, TORES의 다양한 포맷을 다양한 응용을 위해서 매칭된 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 라이브러리의 설계 및 생성에 기재한다. 전장 TCR 오픈 리딩 프레임의 1-단계 재구성을 위한 이러한 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 라이브러리의 사용은, 표적 전장 TCR 쇄 서열을 완성하기 위해서 제공될 CDR3을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스(odeCDR3) 작제물을 요구한다(도 4c). V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 라이브러리가 일단 생성되면, 이러한 벡터는 표적 전장 TCR 쇄 서열의 목적하는 V-J-C 조합물을 선택하기 위해서 무한정으로 사용될 수 있는 스톡 항목을 나타낸다. 이와 대조적으로, odeCDR3은 표적 전장 TCR ORF에 대해서 특이적인 짧은 고유한 서열을 나타낸다.
본 실시예는 네이티브 인간 TRA 및 TRB 벡터 플랫폼에서 사용하기 위한 odeCDR3의 설계 및 생성을 기술한다.
TRA odeCDR3의 설계
2개의 단일 가닥 DNA 올리고뉴클레오타이드의 어닐링은 도 4c에 도시된 바와 같이 DNA 단편의 각각의 단부에서 4-뉴클레오타이드 단일-가닥 오버행을 함유하는 odeCDR3을 생성시킨다. 4-뉴클레오타이드 오버행은 TRA 재구성 동안 유입 벡터에 암호화된 TRA V 분절의 3' 단부(오버행 1-5') 및 TRA J 단편의 5' 단부(오버행 2-3')에 대한 지향된 리가제 의존적 클로닝을 허용하도록 설계된다. 오버행 1-5'는 TRA V-C 유입 벡터의 V 분절에 암호화된 오버행 1-5에 상보성인, CTGC에 대해서 표준화된다. 오버행 2-3'의 경우, 인간 TRA 유전자좌로부터의 J 분절 중에서의 서열 거리에 의해서 결정되는, 이들이 보유할 수 있는 2개의 서열 형태가 존재한다. 네이티브 인간 TRA J 분절 TRAJ33 및 TRAJ38의 경우, 오버행 2-3'는 이들 2개의 J 분절의 J 공여자 벡터에 암호화된 오버행 2-3에 상보성인 TGGG에 표준화된다. 모든 다른 인간 TRA J 분절의 경우, 오버행 2-3'는 2개의 J 분절의 J 공여자 벡터에 암호화된 오버행 2-3에 상보성인 TTTG에 표준화된다(실시예 2 참고).
TRB odeCDR3의 설계
TRB odeCDR3에 대해서, 2개의 단일 가닥 DNA 올리고뉴클레오타이드의 어닐링은 도 4c에 도시된 바와 같이 DNA 단편의 각각의 단부에서 4-뉴클레오타이드 단일-가닥 오버행을 함유하는 odeCDR3을 생성시킨다. 4-뉴클레오타이드 오버행은 TRB 재구성 동안 유입 벡터에 암호화된 TRB V 분절의 3' 단부, 오버행 1-5' 및 TRB J 단편의 5' 단부, 오버행 2-3'에 대한 지향된 리가제 의존적 클로닝을 허용하도록 설계된다. 오버행 1-5'는 TRB V-C 유입 벡터의 V 분절에 암호화된 오버행 1-5에 상보성인, TTGC에 대해서 표준화된다. 2개의 대안적인 오버행 2-3 형태가 요구되는 TRA odeCDR3과 대조적으로, TRB odeCDR3의 경우 오버행 2-3은 모든 TRB J 분절의 J 공여자 벡터에 암호화된 오버행 2-3에 상보성인, TTTG에 표준화된다(실시예 3 참고).
일반적인 odeCDR3 설계
일반적으로, odeCDR3 설계는 오버행에 매칭되어야 하고, 4-뉴클레오타이드 오버행은 TRB 재구성 동안 유입 벡터에 암호화된 TRB V 분절의 3' 단부(오버행 1-5') 및 TRB J 단편의 5' 단부(오버행 2-3')에 대한 지향된 리가제 의존적 클로닝을 허용하도록 설계된다.
인산화된 CDR3 DNA 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스의 생성 방법
2개의 올리고뉴클레오타이드를 인산화 및 어닐링하여 odeCDR3을 형성함
반응 믹스
올리고뉴클레오타이드(센스 가닥)(100μM) 1㎕
올리고뉴클레오타이드(안티-센스 가닥)(100μM) 1㎕
T4 리가제 완충액 10x 1㎕
T4 PNK 1㎕
H2O 6㎕
반응 조건
37℃에서 1시간 동안 인큐베이션시킴
95℃에서 5분 동안 변성시킴
반응을 분당 3℃로 25℃까지 서서히 냉각시킴으로써 센스 및 안티-센스 올리고뉴클레오타이드를 어닐링함
실시예 7
각각의 V-C 유입 벡터 라이브러리 및 J 공여자 벡터 라이브러리로부터의 TRA 전장 또는 및 TRB 전장 ORF의 재구성
JG9a/b 실시예.
본 실시예는 표적 TCR의 서열 정보를 고려하여 TRA 및 TRB 전장 TCR ORF를 재구성하는 데 요구되는 벡터 라이브러리 성분 및 odeCDR3을 획정하는 데 사용되는 단계를 기술한다. 본 실시예는 또한 전장 모델 TRA 및 TRB TCR 쇄 쌍의 조립 공정을 예시하고, 인간 세포 모델에서 일시적인 발현 및 특정 HLA-다량체 시약으로의 표면-제시된 TCR의 염색을 통해서 이의 특이성을 확인한다.
V-C 유입 벡터, J 공여자 벡터 및 odeCDR3의 선택
클로닝 라이브러리에 나타낸 모든 가능한 생식 계열 단편의 서열을 관심대상 TRA 또는 TRB 서열에 정렬한다. TRA 또는 TRB 서열에 대해서 가장 높은 아이덴티티를 갖는 유전자 단편은, 어느 V, J 및 C 유전 요소가 목적하는 TRA 또는 TRB 클로노타입 서열을 구성할 것인지를 결정한다. TRA의 경우, 적절한 V-C 유입 벡터는 목적하는 TRA의 V 사용의 결정을 기초로 선택된다. TRB의 경우, 서열 커버리지가 V 및 C 사용을 결정하기에 충분한 경우, 상기 클로노타입이 TRBC1 또는 TRBC2를 사용할지의 여부에 더하여, 목적하는 TRB 클로노타입의 V 사용에 상응하는 적절한 V-C 유입 벡터가 선택될 것이다.
특이적 TRAJ 또는 TRB J 유전 요소의 짧은 버전 및 긴 버전 둘 모두가 각각 TRA 및 TRB 서열에 정렬하는 경우, 더 긴 유전 요소를 암호화하는 상응하는 플라스미드가 TRA 재작제를 위해서 사용될 것이다.
합성될 TRA를 위해서 요구되는 odeCDR3 서열은 TRA V 정렬된 유전자 단편의 3' 단부와 정렬된 TRAJ 유전자 단편의 5' 단부 사이의 영역으로서 결정된다. 올리고뉴클레오타이드 센스 가닥은 BsaI로 소화되는 경우 TRA V 유입 벡터 상에 생성된 오버행, 오버행 1-3'에 대해 만능인 추가적인 5' 4-뉴클레오타이드 오버행, 오버행 1-5', CTGC을 요구한다. 상보성 올리고뉴클레오타이드 안티-센스 가닥은 TRA 재작제 반응에 첨가되는 TRAJ 벡터에 대해서 특이적으로 오버행, 오버행 2-5'에 고유한, 추가적인 5' 4-뉴클레오타이드 오버행, 오버행 2-3'을 요구한다.
합성될 TRB를 위해서 요구되는 CDR3 서열은 TRB V 정렬된 유전자 단편의 3' 단부와 정렬된 TRB J 유전자 단편의 5' 단부 사이의 영역으로서 결정된다. 올리고뉴클레오타이드 센스 가닥은 BsaI로 소화되는 경우 TRB V 유입 벡터 상에 생성된 오버행, 오버행 1-3'에 대해 만능인 추가적인 5' 4-뉴클레오타이드 오버행, 오버행 1-5', TTGC을 요구한다. 상보성 올리고뉴클레오타이드 안티-센스 가닥은 TCR 재작제 반응에 첨가되는 TRB J 벡터에 대해서 특이적으로 오버행, 오버행 2-5'에 고유한, 추가적인 5' 4-뉴클레오타이드 오버행, 오버행 2-3'을 요구한다.
본 실시예에서, HLA-A2*01-제한된 항원에 대해서 공지된 특이성을 갖는 모델 TCR TRA/TRB 쌍을 사용한다. TRA 쇄 및 TRB 쇄의 서열을 각각 SEQ701 및 SEQ702로서 제공한다.
이러한 전장 서열을 기초로, 이것은 TRA 및 TRB 라이브러리로부터 적절한 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터를 선택하는 데 용이하다. 본 실시예에서, 일시적인 발현 유형의 V-C 유입 벡터, 즉 SEQ0048로 제시된 골격을 갖는 것을 사용하였다.
본 실시예에서 (목록 0049 내지 0094로부터의) TRA V-C 유입 벡터 SEQ0088 및 (목록 0323 내지 0378로부터의) J 공여자 벡터 SEQ0371을 선택하였다.
본 실시예에서 (목록 0484 내지 0577로부터의) TRB V-C 유입 벡터 SEQ0563 및 (목록 0636 내지 0687로부터의) J 공여자 벡터 SEQ0637을 선택하였다.
TRA 쇄에 대해서 합성된 odeCDR3을 각각 센스 및 안티센스로서 SEQ703 및 SEQ704에 제공한다.
TRB 쇄에 대해서 합성된 odeCDR3을 각각 센스 및 안티센스로서 SEQ705 및 SEQ706에 제공한다.
전장 재구성을 위한 방법
상기에 선택된 TRA 및 TRB 성분 각각의 경우, 제한 효소/리가제 연쇄 반응을 하기에 기술된 바와 같이 수행하였다.
RE 소화 및 결찰 반응
V-C 유입 벡터 100 ng
J 공여자 벡터 60 ng
odeCDR3 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스(0.5μM) 2㎕
10x T4 리가제 완충액 2㎕
BsaI 0.5㎕
T4 DNA 리가제 0.5㎕
H2O 최대 20㎕
반응 조건
단계1; 37℃에서 2분
단계2; 16℃에서 3분
단계 1 및 2 반복, 20회
50℃에서 5분
80℃에서 5분
실온으로 복귀
0.5㎕의 NotI 효소를 첨가하고, 30분 동안 37℃에서 인큐베이션시킴
생성된 반응 생성물을 수용성 이.콜라이 세포 내에서 형질전환시키고, 카베니실린 함유 플레이트 상에 플레이팅하였다.
카베니실린 내성 집락을 스크리닝 및 서열결정하여 적절하게 조립된 작제물을 결정하였다. 집락의 스크리닝은 단리된 플라스미드 DNA의 제한 효소 진단 소화물에 의해서 수행하였고, 예상된 DNA 단편 크기를 DNA 전기영동법에 의해서 관찰하였다. 생성된 작제물은 전장 TCR 알파 및 베타 클론 서열을 암호화한다.
재구성된 TRA 및 TRB 벡터의 검증
상기 재구성된 TCR TRA/TRB 쌍의 특이성을 검증하기 위해서, 두 작제물을 모든 CD3 성분을 발현하지만 TRA 및 TRB 발현이 결핍된 세포주 내에 일시적으로 형질주입시켰다. 이러한 분석법을 도 12에 제공하는데, 여기서 재구성된 TCR을 무관한 TCR, 및 빈 벡터 대조군과 함께 형질주입시킨다. 빈 벡터는 TCR알파/베타 또는 CD3에 대한 항체로 표면 염색되지 않으며, 이러한 대조군 세포는 HLA-A2*01- NLVPMVATV 사량체 시약에 대해서도 염색되지 않는다(도 12, 최우측 패널). TCR 발현은 CD3 복합체의 표면 제시에 필요하다. 무관한 TCR은 TCR알파/베타 및 CD3에 대해서 양성으로 염색되지만, HLA-A2*01- NLVPMVATV 사량체 시약에 대해서는 염색을 나타내지 않는다(도 12, 중심 패널). 이는, TCR이 세포 표면 상에서 발현되지만, HLA-A2*01 사량체 시약에 적재된 표적 항원에 대해서는 특이적이지 않음을 나타낸다. 표적 TCR은 TCR알파/베타 및 CD3에 대해서 양성으로 염색되며, HLA-A2*01- NLVPMVATV 사량체 시약에 대해서도 양성 염색을 나타낸다(최좌측 패널). 이는, 재구성된 TCR 모두가 세포 표면 상에 제시되며, 또한 예측된 바와 같이, HLA-A2*01 사량체 시약에 적재된 표적 항원에 또한 특이적임을 나타낸다.
실시예 8
인간 말초 혈액으로부터 식별된 항원-특이적 TCR TRA/TRB 쇄 쌍의 세트의 재구성
개인 맞춤 TCR-기반 진단 및 치료제에서의 대두되는 전략의 주요 요건 중 하나는 개체로부터 항원-특이적 TCR 쇄 쌍을 신속하게 포획하고, 특징규명하는 능력이다. 본 실시예에서, 작업 흐름을 수행하는데, 여기서 TCR TRA/TRB 쇄 쌍을 증폭시키고, 말초 인간 혈액으로부터 단리된 단일 T-세포로부터 서열결정하고, 그 다음 포유동물 세포에서의 일시적인 발현을 통해서 이러한 쌍의 재구성 및 검증을 수행한다.
TRA 및 TRB 쇄 쌍의 서열결정 및 재구성
도 13은 전체 작업 흐름을 제공한다. 간략하면, 새로운 PBMC 시편을 HLA-B*07:02 양성 공여자로부터 수집하고, HLA-B*07:02-TPRV HLA-다량체 시약으로 염색하였다. 이러한 HLA-다량체는 HCMV pp65 유전자(이의 완전 펩타이드 서열은 TPRVTGGGAM임)로부터의 공지된 면역우세 항원이 적재된 HLA-B*07:02 대립유전자이다. 단일 HLA-B*07:02-TPRV 다량체-양성 세포를 5㎕의 물을 함유하는 0.2mL PCR 튜브 내에 FACS 분류하였다. 샘플을 스냅 동결시키고, 추가 가공 시까지 -80℃에서 저장하였다(도 13 단계 i).
단일-세포 단리물을, 각각의 TRA 및 TRB에 대한 V-영역 특이적 프라이머 수집물을 동반하는 2-단계 증폭 공정에 적용하고(도 13, 단계 ii), 그 다음 서열 분석(도 13, 단계 iv)을 위해서 TRA 및 TRB 앰플리콘을 생성하는 짝지워진 네스팅된 PCR 반응에 적용하였다(도 13, 단계 iii). 이러한 절차는 이미 기술되어 있다(Han et. al. Nat Biotechnol. 2014 32(7): 684-692).
본 실시예에서, 6쌍의 클론을 하류 가공의 예로서 제공한다. 획득된 서열을 SEQ0707 내지 SEQ0718로 제시한다.
이어서 이들 서열을 이들의 상응하는 TRA 쇄 및 TRB 쇄에 대한 V, C 및 J 유전자 분절의 라이브러리에 대해서 정렬하여 각각의 증폭된 쇄의 V, C 및 J 분절 사용을 결정하였다. 이러한 서열 분석 단계는 또한 CDR3 암호 서열의 정의 및 이에 따른 odeCDR3 서열의 정의를 허용한다(도 13, 단계 v). 이러한 서열 분석은 TCR 쇄 재구성을 위한 V-C 유입 벡터(도 13 단계 vi) 및 J 공여자 벡터(도 13 단계 vii)의 선택을 허용한다. 분석은 또한 각각의 쇄 재구성 반응을 위한 odeCDR3의 합성을 허용한다(도 13 단계 viii). 선택 및 서열을 표 1에 요약한다.
하기 표는 신규 서열결정 및 재구성 실시예에서 식별된 TCR TRA/TRB 쌍에 대한 서열 ID의 요약을 제공한다.
이들 성분의 선택은 전장 TCR ORF의 재구성을 수행하기 위해서 각각의 TRA 및 TRB 쇄에 대한 독립적인 제한 효소/리가제 연쇄 반응의 조립을 허용한다(도 13 단계 ix). 각각의 반응을 상기 실시예 7에 기재된 바와 같이 수행하는데, 이것은 형질전환 및 항생제 선택(도 13 단계 x), 이어서 생성된 재구성된 TCR ORF의 증식 및 서열결정(도 13 단계 xi)을 포함한다.
TRA 및 TRB 쇄 쌍의 검증
상기 재구성된 TCR TRA/TRB 쌍의 세트의 특이성을 검증하기 위해서, 표 7에 제공된 바와 같이, 짝지워진 작제물을 모든 CD3 성분을 발현하지만 TRA 및 TRB 발현이 결핍된 세포주 내에 일시적으로 형질주입시켰다. 이 분석법을 도 14에 제공한다. 세포에 TRA/TRB 클론 쌍 및 빈 벡터 대조군과 동시에 6개의 TCR ORF 작제물 쌍 각각을 형질주입하였다. 세포를, PBMC 시편으로부터 단일 T-세포를 단리시키는 데 먼저 사용된 CD3 및 HLA-B*07:02-TPRV 사량체 시약에 대한 항체로 염색한 후 유세포 분석법에 의해서 분석하였다. 본 실시예에서 짝지워진 작제물은 모두 표적 HLA-B*07:02-TPRV 사량체 시약에 대한 결합을 나타내었고, 정량적인 차이가 관찰된다. 각각의 박스 내의 삽입 숫자는 CD3 양성 세포 사건에 대한 CD3 음성의 MFI 비를 나타낸다.
실시예 9
odeCDR3 축중을 통한 신속한 TCR 쇄 다양화
TCR ORF의 다양화 및 선택은 변경된 특이성, 친화성 및/또는 신호전달 능력을 갖는 TCRs 쇄 쌍을 조작하기에 바람직하다. TORES 시스템은 본래 표적 서열로부터 체계적으로 변경된 TCR 쇄의 수집물의 신속한 생성에 적합하다. 본 실시예에서, odeCDR3을 선택된 코돈 위치에서 정의되고 제한된 뉴클레오타이드 축중을 사용하는 재구성 반응에 포함시킴으로써 모델 TCR 쇄 쌍을 다양화시키는 접근법을 제공한다. 이러한 접근법을 사용하여 실시예 7에 제공된 모델 TCR TRA/TRB 쌍의 TRA 쇄를 다양화시켰다. 이러한 단일-반응 다양화는 이의 자연 TRB 쇄 쌍을 갖는 포유동물 세포의 표면 상에 제시되는 경우 특이적 HLA-다량체 시약에 대한 광범위한 친화성을 갖는 TCR 세트를 생성시키는 것으로 나타난다. 이러한 접근법은 생존 가능한 포유동물 세포의 기능성 컨텍스트에서 제시 및 선택될 수 있는 전장 TCR ORF를 사용한 신속한 TCR-조작에 이상적으로 적합하다.
다양한 TRA 쇄 수집물의 생성
도 15는 odeCDR3 풀을 사용함으로써 TCR 쇄의 서열-다양화된 수집물을 단일 반응으로 생성시키기 위한 전체 전략을 제공한다. 단일 C-V 유입 벡터 및 J 공여자 벡터를 선택하여 최종 전장 TCR 생성물에서 표적 V, J 및 C 유전자 분절을 나타낸다(도 15, 박스 i 및 박스 ii). odeCDR3 풀은 선택된 다양성으로 생성되어, odeCDR3 풀로 표현되는 다수의 상이한 CDR3 서열이 존재한다(도 15, 박스 iii). 모든 성분을 제한 효소/리가제 연쇄 반응으로 조합하는 경우, 생성된 생성물은 정의된 V, J C 유전자 분절 사용의 전장 TCR 쇄, 및 CDR3 영역 내에 정의된 다양성을 함유하는 작제물의 수집물이다(도 15, 박스 iv). 최종 생성물에서 다양화된 전장 TCR 쇄의 수는 반응에 첨가된 초기 odeCDR3내의 odeCDR3 변이체의 수에 직접 비례한다.
본 실시예에서, HLA-A2*01(실시예 7과 동일한 쌍)에 존재하는 인간 사이토메갈로바이러스(HCMV) 항원에 대해서 공지된 특이성을 갖는 모델 TCR TRA/TRB 쌍을 사용한다. 이러한 항원성 펩타이드는 HCMV pp65 단백질로부터 유래되고, HLA-A2*01에 존재하는 펩타이드 항원의 전체 아미노산 서열은 NLVPMVATV이다. TRA 쇄 및 TRB 쇄의 서열을 각각 SEQ701 및 SEQ702로서 제공한다.
본 실시예에서, TRA 쇄가 서열 다양화의 표적이었고, 이것은 3개의 상이한 위치에서 뉴클레오타이드 축중을 갖는 odeCDR3 센스 및 안티센스 올리고를 합성하고, 각각 개별 코돈을 변경시켜 3개의 코돈의 각각에서 4종의 상이한 아미노산의 가능성을 초래함으로써 달성되었다. 코돈을 축중을 위해서 선택하고, CDR3 루프를 통해서 이격시켰다. odeCDR3 올리고를 SEQ0743 및 SEQ0744로서 제공하고, 여기서 축중 코돈을 N으로 지정한다.
실시예 6에 나타낸 방법에 의해서 odeCDR3 올리고를 어닐링하였고, 3개의 개별 코돈 위치에서의 4-배 아미노산 축중은 본래 암호 서열을 포함하는, 64개의 고유한 서열을 갖는 odeCDR3 생성물 풀(즉, SEQ0701)을 생성시킨다.
odeCDR3을 사용하여 실시예 7에 나타낸 방법에 의해서 전장 TRA ORF를 조립하여 3개의 상이한 코돈 위치에서 4-배 아미노산 축중을 갖는 64개의 고유한 TRA ORF를 생성하였다. 본 실시예에서, 제시된 위치에서의 축중된 뉴클레오타이드 사용으로 odeCDR3을 합성하고, 따라서 단일 튜브에서 재구성을 수행하여 모든 64개 쇄 변이체를 생성시켰다. 이러한 접근법은 동등하게 유효하기 때문에, 별개의 반응에 대해서 고유한 odeCDR3이 동시에 제공된다. 예상된 클론 모두를 제조하고, 단일 반응으로부터 서열을 확인하였다. 각각의 TRA 쇄를 후속 특징규명을 위해서 개별 플라스미드 스톡으로서 제조하였다.
TRB 쇄 쌍을 갖는 다양화된 TRA 쇄의 특징규명
특이성을 특징규명하기 위해서, 상기로부터 유래된 64개의 TCR TRA 쇄 각각을 모든 CD3 성분을 발현하지만 TRA 및 TRB 발현이 결핍된 세포주 내에 TRB 쇄(SEQ0702)와 함께 공동 형질주입하였다. 이어서, 이러한 세포를 CD3, 및 HLA-A2*01- NLVPMVATV 다량체 시약에 대한 항체로 염색하고, 유세포 분석법으로 분석하였다. 이 분석법을 도 16에 제공한다.
각각의 형질주입체 집단을 CD3 음성 집단에 대한, CD3 양성의 HLA-A2*01-NLVPMVATV 다량체 신호의 평균 형광 강도(MFI)의 비로서 나타내고, 오름차순 비로 순위 매겨진 산포 플롯으로 플로팅한다(도 16a). 다양화된 TRA 쇄는 HLA-A2*01-NLVPMVATV 다량체에 대해서 광범위한 친화도를 생성시키는 것이 명백하다. 본래 알파 쇄를 화살표로 나타낸다. 대부분의 다양화된 클론은 본래 클론보다 더 불량한 결합을 나타내었다. 유의한 수의 비-결합물이 또한 관찰된다. 눈에 띄게, 다수의 클론이 HLA-A2*01-NLVPMVATV 다량체 염색에서 상당한 증가를 나타내었고(고결합물), 이것은 상대적인 신호를 3배를 초과하게 개선시키는 클론을 포함한다. 제시된 아미노산 및 다양화된 위치 1, 2 및 3을 열거하면서, 클론을 MFI 비율의 오름차순 순위 표로서 제시한다(도 16b). 위치 2의 Pro이 HLA-A2*01- NLVPMVATV 다량체 결합을 고도로 안정화시키고, 위치 3의 Asp는 더 낮은 수준으로 안정화시키는 것을 발견할 수 있다. 상반되게, 위치 3의 His은, 위치 2의 Pro의 존재를 제외하고는, 결합을 완전히 폐지한다. HLA-A2*01-NLVPMVATV 다량체의 증가된 결합 및 감소된 결합에 대한 아미노산 치환의 이러한 위치적 편향은, TORES를 사용하여 TRA 쇄에 생성되는 표적화된 아미노산 축충 시 결합 친화도가 진실되게 변경됨을 강력하게 시사한다.
종합하면, 본 실시예는, TORES 내의 odeCDR3 축중에 의해서 단일 단계로 도입된 CDR3 루프의 최소 다양성이 분석물 HLA-항원 복합체에 대해서 다양한 결합 특징을 갖는 TCR의 수집물을 생성할 수 있음을 입증한다. 이것은, 네이티브 V, J 및 C 유전자 분절 사용과 함께, TCR 쇄의 전장 네이티브 컨텍스트를 여전히 유지하면서, TCR 성숙 작업 흐름에 직접 혼입되어 다양한 TCR 조작 시나리오 내에서 변경된 특징을 갖는 합성 TCR을 생성시킬 수 있다.
실시예 10
V 분절 및 J 분절 셔플링을 통한 신속한 TCR 쇄 다양화
TCR ORF의 다양화 및 선택은 변경된 특이성, 친화성 및/또는 신호전달 능력을 갖는 TCRs 쇄 쌍을 조작하기에 바람직하다. TORES 시스템은 본래 표적 서열로부터 체계적으로 변경된 TCR 쇄의 수집물의 신속한 생성에 적합하다. 본 실시예에서, TCR 쇄 다양화 접근법을 요약하는데, 여기서 단일 odeCDR3이 다수의 V-C 유입 벡터, J 공여자 벡터, 또는 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 둘 다의 다수와 함께 전장 TCR 쇄 반응에 제공된다. 이러한 접근법을 사용하여, 신규 TCR 쇄에서 동족 HLA-항원 복합체와의 코어 CDR3 접촉을 통해서 보유 가능성을 유지하면서, 네이티브 생식계열 V, J 및 C 분절을 사용하여 주어진 TCR 쇄를 다양화할 수 있다. 이러한 접근법은 생존 가능한 포유동물 세포의 기능성 컨텍스트에서 제시 및 선택될 수 있는 전장 TCR ORF를 사용한 신속한 TCR-조작에 이상적으로 적합하다.
V 유전자 분절 사용의 셔플링의 예를 도 17에 제공한다. 이러한 개략적인 실시예는, 다수의 V-C 유입 벡터를 재구성 반응에 제공함으로써 V 유전자 분절의 선택을 제공하면서, 모체 TCR 쇄에 매칭하는 서열과 함께, 단일 odeCDR3 및 J 공여자 벡터 사용을 유지시키는 접근법을 요약한다. 다수의 C 유전자 분절 사용(예를 들어, 인간 TRB)의 기회를 갖는 TCR 쇄의 경우, 이것은 다양화 작업 흐름에 반영될 수 있다. 단일 odeCRD3 및 J 공여자 벡터, 및 V-C 유입 벡터의 선택을 함유하는 반응의 생성물은, 모체 CDR3/J 서열, 및 제공된 V(및/또는 C) 유전자 분절 각각을 함유하는 다수의 전장 TCR 쇄일 것이다. 이러한 접근법은 도 17에 도시된 풀링된 반응이라기 보다는, 다수의 선택된 V-C 유입 벡터를 사용하여 별개의 반응을 달성하는 데 있어서 동등하게 유효하다.
J 유전자 분절 사용의 셔플링의 예를 도 18에 제공한다. 이러한 개략적인 실시예는, J-공여자 벡터의 선택을 재구성 반응에 제공함으로써 J 유전자 분절의 선택을 제공하면서, 모체 TCR 쇄에 매칭하는 서열과 함께, 단일 odeCDR3 및 V-C 유입 벡터 사용을 유지시키는 접근법을 요약한다. 단일 odeCRD3 및 V-C 유입 벡터, 및 J 공여자 벡터의 선택을 함유하는 반응의 생성물은, 모체 CDR3/V-C 서열, 및 제공된 J 공여자 유전자 분절 각각을 함유하는 다수의 전장 TCR 쇄일 것이다. 이러한 접근법은 도 18에 도시된 풀링된 반응이라기 보다는, 다수의 선택된 J 공여자 벡터를 사용하여 별개의 반응을 달성하는 데 있어서 동등하게 유효하다.
V 및 J 유전자 분절 사용 둘 모두의 셔플링의 최종 예를 도 19에 제공한다. 이러한 개략적인 실시예는, V-C 및 J-공여자 벡터 둘 다의 선택을 재구성 반응에 제공함으로써 V(-C) 유전자 분절 및 J 유전자 분절 둘 다의 선택을 제공하면서, 모체 TCR 쇄에 매칭하는 서열과 함께, 단일 odeCDR3을 유지시키는 접근법을 요약한다. 단일 odeCRD3, 및 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 둘 다의 선택을 함유하는 반응의 생성물은, 반응에 제공되는 모체 CDR3 서열, 및 V(-C)와 J 공여자 유전자 분절의 각각의 조합물을 함유하는 다수의 전장 TCR 쇄일 것이다. 이러한 접근법은 도 19에 도시된 풀링된 반응이라기 보다는, 다수의 선택된 V-C 유입 및 J 공여자 벡터를 사용하여 별개의 반응을 달성하는 데 있어서 동등하게 유효하다.
실시예 11
TORES2를 사용한 TRA 및 TRB로부터의 전장 TCR ORF의 재구성
본 실시예는 5' 유전 요소 및 3' 유전 요소로서 RMCE 부위를 갖는 인간 TRA/TRB 유전자좌에 대한 TORES2를 기재하며, 이것은 모델 인간 TCR 쌍을 재구성하고, 그 다음 재구성된 ORF를 기원 V-Cα 유입 벡터 골격 컨텍스트의 5' 유전 요소 및 3' 유전 요소와 매칭되는 RMCE 부위를 보유하는 조작된 세포주 내에 통합시키는 것을 예시한다. 모델 TCR TRA/TRB 쌍은 HLA-A*02:01-제한된 항원에 대해서 공지된 특이성을 갖는다. 모델 TRA 및 TRB 서열은 각각 SEQ0778 및 SEQ0779로 표현된다. 항원 펩타이드는 아미노산 서열 SLLMWITQV를 갖는다.
TORES2에 대한 V-C 유입 벡터, J 공여자 벡터, odeCDR3 및 양방향 종결인자
실시예 7에 요약된 동일한 선택 기준을 사용하여 V-Cα, V-Cβ, J 공여자 벡터 및 odeCDR3을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스를 선택한다. 상기에 기재된 바와 같이, TORES2는 구별되는 타입 IIS 부위 및 음성 선택 요소를 혼입하기 위해서 V-Cα 및 V-Cβ의 개작이 필요하다. V-Cα 유입 벡터 골격 서열 및 V-Cβ 유입 벡터 골격 서열은 각각 SEQ7056 및 SEQ0764로 표현된다. 이러한 골격 서열에 대한 새로운 제한 부위의 첨가로 인해서, V-분절 서열은, TCR 암호 서열로부터 이러한 새로운 제한 부위를 제거하기 위해서, 상기 TORES 시스템에 대해서 제공된 것과 비교할 때 기본 뉴클레오타이드 서열에 대한 변형이 필요하다. 변형된 TRA V-C 서열을 SEQ0757 내지 SEQ0763으로 나타내고, 변형된 TRB V-C 서열은 SEQ0765 내지 SEQ0776으로 표현된다. 사용된 모든 다른 TRA 및 TRB 서열은 상기 TORES 시스템에 대해서 기재된 바와 같았다.
양방향 종결인자 공여자 성분
양방향 종결인자 공여자 벡터(BiT 공여자)는, 제2 단계 반응에서 도입된 양방향 종결인자 요소를 제공하며, 이것은 제1 단계 반응에서 재구성된 역평행 TRA 쇄 및 TRB 쇄에 궁극적으로 결합한다. 본 실시예에서, 양방향 종결인자 요소는 SEQ0777로 표현되고, 적합한 벡터 골격 컨텍스트 내에 제공된다.
재구성 반응
표적 TRA 및 TRB ORF를 재구성하기 위한 제1 제한 효소/리가제 연쇄 반응 반응을 실시예 7에 기재된 바와 같이 수행한다. 이것은, 각각의 V-C 유입 골격 컨텍스트 내의, 재구성된 TRA 및 TRB 각각을 초래한다. 제2 반응에서, 이들 2개의 생성물 벡터를 새로운 효소 리가제 연쇄 반응으로 BiT 공여자 벡터와 조합하여, 역평행 센스로 재구성된 TRA 및 TRB ORF를 암호화하고, 도입된 양방향 종결인자 요소에 의해서 결합된 최종 생성물 벡터를 생성시킨다.
TORES
2
에 대한 RE 소화 및 결찰 반응
재구성된 TRA ORF 벡터 25ng
재구성된 TRB ORF 벡터 25ng
BiT 공여자 벡터 25ng
10x T4 리가제 완충제 2㎕
Esp3I 0.5㎕
T4 DNA 리가제 0.5㎕
H2O 최대 20㎕
반응 조건
단계1; 37℃에서 2분
단계2; 16℃에서 3분
단계 1 및 2 반복, 20회
50℃에서 5분
80℃에서 5분
실온으로 복귀
0.5㎕의 SalI 및 MluI 효소를 첨가하고, 30분 동안 37℃에서 인큐베이션시킴
생성된 반응 생성물을 수용성 이.콜라이 세포 내에서 형질전환시키고, 카베니실린 함유 플레이트 상에 플레이팅하였다.
카베니실린 내성 집락을 스크리닝 및 서열결정하여 적절하게 조립된 작제물을 결정하였다. 집락의 스크리닝은 단리된 플라스미드 DNA의 제한 효소 진단 소화물에 의해서 수행하였고, 예상된 DNA 단편 크기를 DNA 전기영동법에 의해서 관찰하였다. 생성된 작제물은 전장 TCR 알파 및 베타 클론 서열을 암호화한다.
재구성된 전장 TCR ORF의 검증
TORES2 시스템에 의해서 생성된 재구성된 양방향성 TRA/TRB 공여자 벡터의 기능을 검증하기 위해서, 작제물을, 모든 CD3 성분을 발현하지만 TRA 및 TRB 발현이 결핍된 세포주에 전달하였는데, 이것은 생성물 공여자 벡터 내에 함유된 RMCE 부위와 상용성인 게놈 수신자 부위를 추가로 암호화하고, 본래 V-Cα 유입 벡터에 의해서 기여되고, 5' 단부 및 3' 단부에서의 적합한 역평행 프로모터 요소이다. 이러한 분석법을 도 23에 제공하는데, 여기서 재구성된 공여자 벡터를 세포 내에 형질주입시킨다. 게놈 수신자 부위 마커가 제거된 세포(도 23a, RFP- BFP-)는 양방향 TCR ORF를 발현하는 세포여서, CD3 표면 발현을 초래한다(도 23b, 밝은 회색 히스토그램). 게놈 수신자 부위 마커가 제거되지 않은 세포는 양방향 TCR 작제물을 통합시키는 데 실패한 세포이며(도 23a, RFP+BFP+), CD3 표면 발현에 대해서 염색되지 않는다(도 23b, 어두운 회색 히스토그램). TCR 발현은 CD3 복합체의 표면 제시에 필요하다. 게놈 수신자 마커가 제거된 모든 RFP-BFP- 세포는 CD3 표면 발현에 대해서 양성이다(도 23 b, 밝은 회색 히스토그램). 게놈 수신자 마커가 제거되지 않은 모든 RFP+BFP+ 세포는 CD3 표면 발현에 대해서 음성이다(도 23b) 어두운 회색 히스토그램). 재구성된 TCR을 발현하는 이들 CD3+ 세포는, 또한 HLA-A*02:01-SLLMWITQV 사량체 시약으로 염색되지 않는 세포(도 23d)와 비교할 때 사량체 시약에 대해서 양성 염색을 나타낸다(도 23c). 종합하면, 이러한 결과는, 재구성된 TCR 모두는 세포 표면 상에 제시되며, HLA-A*02:01 - SLLMWITQV 사량체 시약에 적재된 표적 항원에 대해서 특이적이라는 것을 나타낸다.
구체적인 실시형태
하기는 본 발명 및 이의 다양한 양상과 관련하여 보다 상세한 설명을 제공한다.
1. 조합 시스템으로서, 2개의 개별 성분을 포함하되, 제1 성분은 가변 및 불변(V-C) T-세포 수용체(TCR) 유전자 분절을 보유하는 벡터이고, 그리고 제2 성분은 결합(J) TCR 유전자 분절을 보유하는 벡터인, 조합 시스템.
2. 항목 1에 있어서, 제1 성분은,
a. 복제 기점,
b. 제1 양성 선택 마커,
c. 5' 유전 요소 또는 요소들,
d. 코작 서열,
e. TCR 가변 유전자 분절,
f. 타입 IIS 제한 효소에 의한 부위 특이적 인식 및 절단을 위한 제1 타입 IIS 서열,
g. 음성 선택 마커,
h. 제2 타입 IIS 서열
i TCR 불변 유전자 분절 및
j. 3' 유전 요소 또는 요소들
을 함유하는 V-C 유입 벡터인, 조합 시스템.
3. 항목 1 또는 2에 있어서, 제2 성분은,
a. 복제 기점,
b. 제2 양성 선택 마커,
c. 제3 타입 IIS 서열,
d. TCR 결합 유전자 분절,
e. 불변 유전자 분절의 작은 5' 부분에 상응하는, C 부분 및
f. 제4 타입 IIS 서열
을 함유하는 J 공여자 벡터인, 조합 시스템.
4. 항목 2 또는 3에 있어서, 제1, 제2, 제3 및 제4 타입 IIS 서열은 동일하거나 또는 상이한, 조합 시스템.
5. 항목 2 또는 3에 있어서, 제1, 제2, 제3 및 제4 타입 IIS 서열은 동일한, 조합 시스템.
6. 항목 2 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 제1 양성 선택 마커 및 제2 양성 선택 마커는 상이하고, 항생제 내성 유전자 또는 영양요구체 보완 유전자로부터 선택되는, 조합 시스템.
7. 항목 2 내지 항목 6 중 어느 하나에 있어서, 5' 유전 요소는,
a. 유전자 시스/작용 요소,
b. 리콤비나제 효소에 대한 이종특이적 인식 부위,
c. 관심대상 게놈 부위에 대한 5' 상동 재조합 아암,
d. mRNA 스플라이스 수용자 부위,
e. 내부 리보솜 유입 부위 및
f. 후성적 인설레이터 서열
로부터 선택된 1종 이상의 요소를 포함하는, 조합 시스템.
8. 항목 2 내지 7 중 어느 하나에 있어서, TCR 가변 유전자 분절은 제1 성분 및 제2 성분에 함유된 타입 IIS 서열을 함유하지 않는, 조합 시스템.
9. 항목 2 내지 8 중 어느 하나에 있어서, 제1 타입 IIS 서열은 상기 인식 서열의 5'를 절단하도록 배향되고, TCR 가변 유전자 분절 내에 존재하는, 조합 시스템.
10. 항목 2 내지 9 중 어느 한 하나에 있어서, 음성 선택 마커는,
a. 제1 성분에 또는 TCR 결합 유전자 분절 내의 다른 곳에는 함유되지 않은 제한 효소 인식 부위,
b. 박테리아 자살 유전자 및
c. 리포터 요소
로부터 선택되는, 조합 시스템.
11. 항목 2 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 제2 타입 IIS 서열은 상기 인식 서열의 3'를 절단하도록 배향되고, TCR 불변 유전자 분절 내에 존재하는, 조합 시스템.
12. 항목 2 내지 11 중 어느 하나에 있어서, TCR 불변 유전자 분절은 제1 성분 및 제2 성분에 함유된 타입 IIS 서열 중 임의의 것을 함유하지 않는, 조합 시스템.
13. 항목 2 내지 항목 12 중 어느 하나에 있어서, 3' 유전 요소는,
a. 종결인자 요소,
b. 리콤비나제 효소에 대한 이종특이적 인식 부위,
c. 관심대상 게놈 부위에 대한 3' 상동 재조합 아암,
d. mRNA 스플라이스 공여자 부위,
e. 내부 리보솜 유입 부위 및
f. 후성적 인설레이터 서열
로부터 선택된 1종 이상의 요소를 포함하는, 조합 시스템.
14. 항목 3 내지 13 중 어느 하나에 있어서, 제3 타입 IIS 서열은 상기 인식 서열의 3'를 절단하도록 배향되고, TCR 결합 유전자 분절 내에 존재하는, 조합 시스템.
15. 항목 3 내지 14 중 어느 하나에 있어서, TCR 결합 유전자 분절은 제1 성분 및 제2 성분에 함유된 타입 IIS 서열 중 임의의 것을 함유하지 않는, 조합 시스템.
16. 항목 3 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 제4 타입 IIS 서열은 상기 인식 서열의 5'를 절단하도록 배향되고, TCR C 부분 일부 또는 작제물 내에 존재하는, 조합 시스템.
17. 항목 3 내지 16 중 어느 하나에 있어서, TCR C 부분은 제1 성분 및 제2 성분에 함유된 타입 IIS 서열 중 임의의 것을 함유하지 않는, 조합 시스템.
18. 상기 항목 중 어느 하나에 있어서, 모든 함유된 서열은 항목 10에 정의된 바와 같은 음성 선택 마커 이외의 임의의 음성 선택 요소가 없는, 조합 시스템.
19. 상기 항목 중 어느 하나에 있어서, CDR3을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스(odeCDR3)를 포함하는 제3 성분을 더 포함하는, 조합 시스템.
20. 항목 19에 있어서, odeCDR3은,
a. 인식 서열의 5'를 절단하도록 배향되고, TCR 가변 유전자 분절 내에 존재하는 제1 타입 IIS 제한 효소 인식 및 절단 부위에 상보성인 제1 단일 가닥 오버행 서열,
b. TCR CDR3 영역을 암호화하고, 음성 선택 요소가 없는 이중 가닥 분절(음성 선택 요소는 항목 10에 정의된 바와 같고, 또한 제1 부분 또는 제2 부분의 임의의 타입 IIS 제한 서열이 없음),
c. 인식 서열의 3'를 절단하도록 배향되고, TCR 결합 유전자 분절 내에 존재하는 제3 타입 IIS 제한 효소 인식 및 절단 부위에 상보성인 제2 단일 가닥 오버행 서열
을 갖는, 조합 시스템.
21. 항목 1 내지 18 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 V-C 유입 벡터의 라이브러리로서, 라이브러리는 TCR을 갖는 유기체의 모든 생식계열 TCR 가변 유전자 분절 및 불변 유전자 분절을 나타내는 하나 이상의 벡터의 수집물인, 라이브러리.
22. 항목 1 내지 18 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 J 공여자 벡터의 라이브러리로서, 라이브러리는 TCR을 갖는 유기체의 생식계열 TCR 결합 유전자 분절을 나타내는 하나 이상의 벡터의 수집물인, 라이브러리.
23. 항목 1 내지 18 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 V-C 유입 벡터의 라이브러리로서, 라이브러리는 암호화된 단백질의 번역된 아미노산 서열이 생식계열 유전자 분절에 의해서 암호화된 단백질 서열과 관련하여 비변형되도록, 상기 TCR을 갖는 유기체의 변이체 생식계열 TCR 가변 유전자 분절 및 불변 유전자 분절의 수집물을 나타내는 하나 이상의 벡터의 수집물인, 라이브러리.
24. 항목 1 내지 18 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 J 공여자 벡터의 라이브러리로서, 라이브러리는 암호화된 단백질의 번역된 아미노산 서열이 생식계열 유전자 분절에 의해서 암호화된 단백질 서열과 관련하여 비변형되도록, 상기 TCR을 갖는 유기체의 변이체 생식계열 TCR 결합 유전자 분절을 나타내는 하나 이상의 벡터의 수집물인, 라이브러리.
25. 항목 1 내지 18 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 V-C 유입 벡터의 라이브러리로서, 라이브러리는 암호화된 단백질의 번역된 아미노산 서열이 생식계열 유전자 분절에 의해서 암호화된 단백질 서열과 관련하여 변형되도록, 상기 TCR을 갖는 유기체의 변이체 생식계열 TCR 가변 유전자 분절 및 불변 유전자 분절의 수집물을 나타내는 하나 이상의 벡터의 수집물인, 라이브러리.
26. 항목 1, 3 내지 18 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 J 공여자 벡터의 라이브러리로서, 라이브러리는 암호화된 단백질의 번역된 아미노산 서열이 생식계열 유전자 분절에 의해서 암호화된 단백질 서열과 관련하여 변형되도록, 상기 TCR을 갖는 유기체의 변이체 생식계열 TCR 결합 유전자 분절을 나타내는 하나 이상의 벡터의 수집물인, 라이브러리.
27. 항목 1 내지 26 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터의 조합물을 포함하는 라이브러리.
28. 키트로서,
a. 가변 유전자 분절 및 불변 유전자 분절의 조합물을 암호화하는 1종 이상의 V-C 유입 벡터, 및
b. J 유전자 분절을 암호화하는 1종 이상의 J 공여자 벡터, 및 선택적으로
c. 양성 대조군 odeCDR3으로서 V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 단일 가닥 오버행에 매칭된 단일 가닥 오버행을 갖는 1종 이상의 표준화된 odeCDR3, 및 선택적으로
d. 참조군으로서의 사전 조립된 전장의 조합물을 포함하는, 키트.
29. 전장 TCR 오픈 리딩 프레임(ORF)의 시험관내 재구성 방법으로서,
a. V-C 유입 벡터를 선택하는 단계,
b. J 공여자 벡터를 선택하는 단계,
c. odeCDR3을 선택하는 단계,
d. a, b 및 c를 조합하여 i) V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 내에 존재하는 모든 타입 IIS 제한 효소 인식 및 절단 부위를 절단하기 위한 타입 IIS 제한 효소(들) 및 ii) DNA 리가제 효소와 반응시키고, 조합된 믹스를 열순환 반응에 적용하는 단계,
e. 단계 d로부터 획득된 반응 생성물을 DNA 벡터 증식에 대해서 수용성인 선택 가능한 숙주 유기체에 대해서 형질전환시키는 단계, 및
f. 숙주 유기체의 선택을 수행하여 V-C 유입 벡터 골격 내에 전장의 재구성된 TCR 오픈 리딩 프레임을 수득하는 단계를 포함하는, 방법.
30. 항목 29에 있어서, V-C 유입 벡터는 항목 2에 정의된 바와 같고, J 공여자 벡터는 항목 3에 정의된 바와 같고, 항목 29의 단계 f는 형질전환된 숙주 세포에 대해서 항목 6에 정의된 바와 같은 제1 양성 선택 마커를 사용하여 수행되는, 방법.
31. 항목 29 또는 30에 있어서, 선택된 TCR 오픈 리딩 프레임은 선택된 TCR 서열로부터 재구성되고, 상기 방법은,
a. TCR 오픈 리딩 프레임 서열을 획득하는 단계로서, 상기 서열 정보는 i) 가변 유전자 분절 사용 ii) 불변 유전자 분절 사용 iii) 결합 유전자 분절 사용 iv) 가변 유전자 분절 가장자리를 결합 유전자 분절 가장자리에 연장하는 완전 CDR3 서열을 식별하기에 충분한, 상기 획득하는 단계,
b. 각각 단계 a. i) 및 a. ii)에서 식별된 가변 유전자 분절 및 유전자 분절에 상응하는 V-C 유입 벡터를 선택하는 단계, 및
c. 단계 a, iii)에서 식별된 결합 유전자 분절에 상응하는 J 공여자 벡터를 선택하는 단계, 및
d. 단계 a. iv)에서 식별된 CDR3 서열에 상응하는 odeCDR3을 생성시키는 단계, 및
e. b, c 및 d를 조합하여 i) V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 내에 존재하는 모든 타입 IIS 제한 효소 인식 및 절단 부위를 절단하기 위한 타입 IIS 제한 효소(들) 및 ii) DNA 리가제 효소와 반응시키고, 조합된 믹스를 열순환 반응에 적용하는 단계, 및
f. 단계 d로부터 획득된 반응 생성물을 벡터 복제에 대해서 수용성인 선택 가능한 숙주 유기체에 대해서 형질전환시키는 단계, 및
g. 숙주 유기체의 선택을 수행하여 V-C 유입 벡터 골격 내에 전장의 재구성된 TCR 오픈 리딩 프레임을 수득하는 단계를 포함하는, 방법.
32. 항목 29 내지 31 중 어느 하나에 있어서, 단계 d. i)은 단일 타입 IIS 제한 효소를 사용하여 수행되는, 방법.
33. 항목 29 내지 31 중 어느 하나에 있어서, 단계 d. i)은 적어도 2종의 타입 IIS 제한 효소를 사용하여 수행되는, 방법.
34. 항목 29 내지 33 중 어느 하나에 있어서,
a. 항목 29의 단계 e. 또는 항목 31의 단계 f. 이전에 반응 생성물의 제한 효소 소화를 수행하여 모체 V-C 유입 벡터를 제거하는 단계, 및/또는
b. 자살 유전자 선택을 수행하여 모체 V-C 유입 벡터로 형질전환된 수용성 숙주를 제거하는 단계, 및/또는
c. 리포터 식별의 방식에 의해서 모체 V-C 유입 벡터로 형질전환된 숙주 세포의 선택을 수행하는 단계
를 포함하는 적어도 하나의 음성 선택 단계를 더 포함하는, 방법.
35. 항목 29 내지 34 중 어느 하나에 있어서, 숙주 유기체의 선택은 배양계에 존재하는 항생제에 대해서 내성을 갖는 숙주 유기체의 선택 또는 배양계에 존재하지 않은 영양요구성 인자의 경쟁을 포함하고, 상기 항생제 내성 또는 영양요구성 상보성은 V-C 유입 벡터에 의해서 암호화된 유전자 산물에 의해서 부여되는, 방법.
36. 항목 29 내지 34 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 단계는 숙주 유기체의 배양 및 선택에 적합한 배양계에서 수행되는, 방법.
37. 항목 29 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 다양화된 CDR3 영역을 갖는 2종 이상의 TCR ORF의 풀을 생성시키는 데 사용되는 방법으로서, 2종 이상의 odeCDR3 형태는 항목 29 c에 따라서 선택되고, 항목 29 d에 따라서 단일 제한 효소/리가제 연쇄 반응에 조합되는, 방법.
38. 항목 29 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 다양화된 V 유전자 분절 사용 및/또는 C 유전자 분절 사용을 갖는 2종 이상의 TCR ORF의 풀을 생성시키는 데 사용되는 방법으로서, 2종 이상의 V-C 유입 벡터는 항목 29 c에 따라서 선택되고, 항목 29 d에 따라서 단일 제한 효소/리가제 연쇄 반응에 조합되는, 방법.
39. 항목 29 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 다양화된 J 유전자 분절 사용을 갖는 2종 이상의 TCR ORF의 풀을 생성시키는 데 사용되는 방법으로서, 2종 이상의 J 공여자 벡터는 항목 29 b에 따라서 선택되고, 항목 29 d에 따라서 단일 제한 효소/리가제 연쇄 반응에 조합되는, 방법.
40. 항목 29 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 다양화된 V 유전자 분절 사용 및/또는 C 유전자 분절 사용 및 J 유전자 분절 사용을 갖는 2종 이상의 TCR ORF의 풀을 생성시키는 데 사용되는 방법으로서, 2종 이상의 V-C 유입 벡터 또는 J 공여자 벡터는 항목 29 a 및 b에 따라서 선택되고, 항목 29 d에 따라서 단일 제한 효소/리가제 연쇄 반응에 조합되는, 방법.
41. 항목 29 내지 36 중 어느 하나에 있어서, 다양화된 V 유전자 분절 사용 및/또는 C 유전자 분절 사용 및 J 유전자 분절 사용에 더하여 다양화된 CDR3을 갖는 2종 이상의 TCR ORF의 풀을 생성시키는 데 사용되는 방법으로서, 2종 이상의 odeCDR3는 항목 29 c에 따라서 선택되고, 2종 이상의 V-C 유입 벡터 또는 J 공여자 벡터는 항목 29 a 및 b에 따라서 선택되고, 항목 29 d에 따라서 단일 제한 효소/리가제 연쇄 반응에 조합되는, 방법.
42. 항목 1 또는 2에 따른 V-C 유입 벡터의 작제 방법으로서,
a. 가변 유전자 분절 클로닝 단편,
b. 불변 유전자 분절 클로닝 단편,
c. V-C 유입 벡터 골격
으로부터 선택된 3개의 DNA 성분을 조합하는 것을 포함하는, 방법.
43. 항목 42에 있어서, 상기 가변 유전자 분절 클로닝 단편은,
a. 단편의 중합효소 연쇄 반응 의존적 증식을 위한 5' 프라이머 결합 서열,
b. 3' 방향으로 절단하도록 배향된 제5 타입 IIS 서열,
c. b.의 제5 타입 IIs 서열에 대한 타입 IIs 효소 작용 시 정의된 단일 가닥 오버행을 암호화하는 제1 오버행 서열,
d. 코작 서열,
e. TCR 가변 유전자 분절,
f. 제1 타입 IIS 서열,
g. 음성 선택 마커의 5' 서열 분절,
h. 단일 가닥 오버행이 g의 음성 선택 마커의 5' 서열 분절 내에 생성되도록 5' 방향으로 절단하도록 배향된 제6 타입 IIS 서열,
i. 단편의 중합효소 연쇄 반응 의존적 증식에 대한 3' 프라이머 결합 서열
을 포함하는, 방법.
44. 항목 42 또는 43에 있어서, 상기 불변 유전자 분절 클로닝 단편은,
a. 단편의 중합효소 연쇄 반응 의존적 증식을 위한 5' 프라이머 결합 서열,
b. 단일 가닥 오버행이 c의 음성 선택 마커의 3' 서열 분절 내에 생성되도록 3' 방향으로 절단하도록 배향된 제7 타입 IIS 서열,
c. 음성 선택 마커의 3' 서열 분절,
d. 제2 타입 IIS 서열,
e. TCR 불변 유전자 분절,
f. g의 제8 타입 IIs 서열에 대한 타입 IIs 효소 작용 시 정의된 단일 가닥 오버행을 암호화하는 제2 오버행 서열,
g. 단일 가닥 오버행이 f의 오버행에 생성되도록 5' 방향으로 절단하도록 배향된 제8 타입 IIS 서열,
h. 단편의 중합효소 연쇄 반응 의존적 증식에 대한 3' 프라이머 결합 서열
을 포함하는, 방법.
45. 항목 42 내지 44 중 어느 하나에 있어서 상기 V-C 유입 벡터 골격은,
a. 복제 기점,
b. 제1 양성 선택 마커,
c. 5' 유전 요소,
d. 항목 43c에 언급된 상기 제1 오버행과 상보성인 단일 가닥 오버행을 생성시키기 위한 골격의 소화를 허용하는 제1 제한 효소 인식 서열,
e. 항목 44f에 언급된 상기 제2 오버행과 상보성인 단일 가닥 오버행을 생성시키기 위한 골격의 소화를 허용하는 제2 제한 효소 인식 서열,
f. 3' 유전 요소
를 포함하는, 방법:
46. 항목 42 내지 45 중 어느 하나에 있어서, 제5, 제6, 제7 및 제8 타입 IIS 서열은 동일하거나 또는 상이한, 방법.
47. 항목 42 내지 45 중 어느 하나에 있어서, 제5, 제6, 제7 및 제8 타입 IIS 서열은 동일한, 방법.
48. 항목 42 내지 45 중 어느 하나에 있어서, 제5, 제6, 제7 및 제8 타입 IIS 서열은 항목 2 내지 5에 정의된 바와 같은 제1, 제2 제3 및 제4 타입 IIS 서열과 상이한, 방법.
49. 항목 42 내지 48 중 어느 하나에 있어서,
a. V-C 유입 벡터 골격을 상기 제1 제한 효소 및 상기 제2 제한 효소로 소화시켜 각각 상기 제1 오버행 및 제2 오버행을 생성시키는 단계,
b. 소화된 V-C 유입 벡터 골격을, 제5, 제6, 제7 및 제8 타입 IIS 서열을 인식하는 1종 이상의 타입 IIS 제한 효소(들) 및 DNA 리가제 효소와 함께, V 클로닝 단편 및 C 클로닝 단편과 조합하는 단계,
c. 생성된 반응 생성물을 수용성 숙주 유기체 내에서 형질전환시키고, 상기 제1 양성 선택 마커를 사용하여 양성 선택하여 완성된 V-C 유입 벡터를 획득하는 단계를 포함하는, 방법.
50. 서열 SEQ0690으로 표현되는 가변 유전자 분절 클로닝 단편.
51. 서열 SEQ0691로 표현되는 불변 유전자 분절 클로닝 단편.
52. 포유동물 세포에서 재구성된 전장 TCR 오픈 리딩 프레임의 일시적인 발현에 적합한 V-C 유입 벡터를 작제하기 위한, 서열 SEQ0048로 표현되는 V-C 유입 벡터.
53. 적합한 이종특이적 리콤비나제 서열을 갖는 매칭된 유전자 표적과의 리콤비나제 매개된 카세트 교환에 적합한 V-C 유입 벡터를 작제하기 위한, 서열 SEQ0688로 표현되는 V-C 유입 벡터.
54. 매칭된 이종특이적 리콤비나제 서열을 갖는 유전자 표적과의 리콤비나제 매개된 카세트 교환에 적합한 V-C 유입 벡터를 작제하기 위한, 서열 SEQ0689로 표현되는 V-C 유입 벡터 골격.
V-C 유입 벡터 제너릭
55. 포유동물 숙주 세포에서 재구성된 전장 TCR 오픈 리딩 프레임의 일시적인 발현에 적합한 서열 SEQ0692로 표현되는 V-C 유입 벡터.
56. 매칭된 이종특이적 리콤비나제 서열을 갖는 유전자 표적과의 리콤비나제 매개된 카세트 교환에 적합한 서열 SEQ0693으로 표현되는 V-C 유입 벡터.
57. 매칭된 이종특이적 리콤비나제 서열을 갖는 유전자 표적과의 리콤비나제 매개된 카세트 교환에 적합한 서열 SEQ0694로 표현되는 V-C 유입 벡터.
58. 항목 1 또는 3에 따른 J 공여자 벡터의 작제 방법으로서,
a. J 수용 카세트 단편,
b. J 공여자 벡터 골격,
c. J 수용 카세트 벡터,
d. J 분절 부분
으로부터 선택된 4종의 DNA 성분을 조합하는 것을 포함하는, 방법.
59. 항목 58에 있어서, 상기 J 수용 카세트 단편은,
a. 60 c에 언급된 오버행 서열과 상보성인 5' 단부의 제1 단일 가닥 오버행,
b. c에 언급된 제9 타입 IIS 서열에 의해서 지시되는 효소에 의한 작용 시에 단일 가닥 오버행을 형성하는 서열과 결합되는, 3' 방향으로 절단하도록 배향된 제3 타입 IIS 서열,
c. 5' 방향으로 절단하고, b에 언급된 단일 가닥 오버행을 생성시키도록 배향된 제9 타입 IIs 서열,
d. 음성 선택 마커,
e. 3' 방향으로 절단하고, f에 기재된 서열의 5'에 단일 가닥 오버행을 생성시키도록 배향된 제10 타입 IIS 서열,
f. 제10 타입 IIS 서열에 의해서 지시된 효소 작용에 의해서 생성된 5' 단부에 오버행 서열을 갖고, g에서 언급된 제4 타입 IIS 서열에 의해서 지시된 효소 작용에 의해서 생성된 3' 단부에 오버행 서열을 갖는, 불변 유전자 단편의 5' 부분을 나타내는 C-부분,
g. 단일 가닥 오버행이 f에 언급된 C-부분을 함유하는 5' 서열 내에 생성되도록 5' 방향으로 절단하도록 배향된 제4 타입 IIS 서열,
h. 60 d에 언급된 오버행 서열과 상보성인 3' 단부의 제2 단일 가닥 오버행
을 포함하는, 방법.
60. 항목 58 또는 59에 있어서, 상기 J 공여자 벡터 골격은,
a. 복제 기점,
b. 제2 양성 선택 마커,
c. 항목 59 a에 언급된 상기 제1 오버행과 상보성인 단일 가닥 오버행을 생성시키기 위한 골격의 소화를 허용하는 제1 제한 효소 인식 서열,
d. 항목 59h에 언급된 상기 제2 오버행과 상보성인 단일 가닥 오버행을 생성시키기 위한 골격의 소화를 허용하는 제2 제한 효소 인식 서열
을 포함하는, 방법.
61. 항목 58 내지 60 중 어느 하나에 있어서, 상기 J 수용 카세트 벡터는, 항목 53에 기재된 TRAJ 수용 카세트 단편과 항목 54에 기재된 TRAJ J 공여자 벡터 골격을 조합함으로써 작제되며,
a. J 공여자 벡터 골격을 상기 제1 제한 효소 및 상기 제2 제한 효소로 소화시켜 각각 상기 제1 오버행 및 제2 오버행을 생성시키는 단계,
b. 소화된 J 공여자 벡터 골격을 J 수용 카세트 단편과 조합하는 단계,
c. 생성된 반응 생성물을 수용성 숙주 유기체 내에서 형질전환시키고, 상기 제2 양성 선택 마커를 사용하여 양성 선택하여 완성된 J 수용 카세트 벡터를 획득하는 단계를 포함하는, 방법.
62. 항목 58 내지 61 중 어느 하나에 있어서, 상기 J 분절 부분은,
a. 항목 59 b에 언급된 제9 타입 IIS 서열에 의해서 지시된 효소에 의한 작용 시에, 항목 59 b에 언급된 J 수용 카세트 단편에 생성되는 오버행과 상보성인 5' 단부에서의 제1 단일 가닥 오버행 서열,
b. 결합 유전자 분절 부분,
c. 항목 59 e에 언급된 제9 타입 IIS 서열에 의해서 지시된 효소에 의한 작용 시에, 항목 59 f에 언급된 J 수용 카세트 단편에 생성되는 오버행과 상보성인 3' 단부에서의 제2 단일 가닥 오버행 서열
을 포함하는, 방법.
63. 항목 58 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 제9 및 제10 타입 IIS 서열은 동일하거나 또는 상이한, 방법.
64. 항목 58 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 제9 및 제10 타입 IIS 서열은 상이한, 방법.
65. 항목 42 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 제9 및 제10 타입 IIS 서열은 항목 2 내지 5에 정의된 바와 같은 제1, 제2 제3 및 제4 타입 IIS 서열과 상이한, 방법.
66. 항목 42 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 제9 및 제10 타입 IIS 서열은 항목 2 내지 5에 정의된 바와 같은 제5, 제6, 제7 및 제8 타입 IIS 서열과 동일하거나 또는 상이한, 방법.
67. 항목 42 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 제9 및 제10 타입 IIS 서열은 항목 2 내지 5에 정의된 바와 같은 제5, 제6, 제7 및 제8 타입 IIS 서열과 동일한, 방법.
68. 항목 42 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 상기 J 공여자 벡터는 J 공여자 벡터 골격을 J 분절 부분과 조합하여 작제되며,
a. J 수용 카세트 벡터를, DNA 리가제 효소 및 제9 및 제10 타입 IIS 서열을 인식하는 1종 이상의 타입 IIS 제한 효소(들)와 함께, J 분절 부분과 조합하고, 조합된 믹스를 열순환 반응에 적용하는 단계, 및
b. 생성된 반응 생성물을 수용성 숙주 유기체 내에서 형질전환시키고, 상기 제2 양성 선택 마커를 사용하여 양성 선택하여 완성된 J 공여자 벡터를 획득하는 단계를 포함하는, 방법.
69. 서열 SEQ0695 및 SEQ0696로 표현되는 J 수용 카세트 단편.
70. 서열 SEQ0097로 표현되는 J 공여자 벡터 골격.
71. 항목 69에 언급된 J 수용 카세트 단편과 항목 70에 언급된 J 공여자 벡터 골격의 조합에 의해서 작제된, SEQ0697로 표현되는 J 수용 카세트 벡터.
72. J 분절 부분을 항목 71에 언급된 J 수용 카세트 벡터 내에 삽입시킴으로써 J 공여자 벡터를 작제하기 위한, 서열 SEQ0698 및 SEQ0699로 표현되는 J 분절 부분.
73. 항목 71에 언급된 J 수용 카세트 벡터 및 항목 72에 언급된 J 분절 부분으로부터 조립된, 서열 SEQ0700으로 표현되는 J 공여자 벡터.
74. 항목 2 내지 19 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 V-C 유입 벡터의 라이브러리로서, 서열 SEQ0049 내지 SEQ0094로 표현되는, 인간 TRA 유전자좌의 유전자 분절 사용을 재정리하기 위한 가변 유전자 분절 및 불변 유전자 분절을 함유하되, 벡터는 재구성된 전장 TCR 오픈 리딩 프레임의 일시적인 발현에 적합한, 라이브러리.
75. 항목 3 내지 19 중 어느 한 하나에 정의된 바와 같은 J 공여자 벡터의 라이브러리로서, 서열 SEQ0323 내지 SEQ0378로 표현되는, 인간 TRA 유전자좌의 유전자 분절 사용을 재정리하기 위한 결합 유전자 분절을 함유하되, 벡터는 전체 CDR3 영역에 연장된 odeCDR3과 함께 사용되는, 라이브러리.
76. 항목 3에 정의된 바와 같은 J 공여자 벡터의 라이브러리로서, 서열 SEQ0379 내지 SEQ0434로 표현되는 인간 TRA 유전자좌의 유전자 분절 사용을 재정리하기 위한 결합 유전자 분절을 함유하되, 벡터는 3 내지 4개의 코돈 길이가 감소된 odeCDR3과 함께 사용되는, 라이브러리.
77. 항목 2 내지 19 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 V-C 유입 벡터의 라이브러리로서, 서열 SEQ0484 내지 SEQ0577로 표현되는, 인간 TRB 유전자좌의 유전자 분절 사용을 재정리하기 위한 가변 유전자 분절 및 불변 유전자 분절을 함유하되, 벡터는 재구성된 전장 TCR 오픈 리딩 프레임의 일시적인 발현에 적합한, 라이브러리.
78. 항목 3 내지 19 중 어느 한 하나에 정의된 바와 같은 J 공여자 벡터의 라이브러리로서, 서열 SEQ0636 내지 SEQ0661로 표현되는, 인간 TRB 유전자좌의 유전자 분절 사용을 재정리하기 위한 결합 유전자 분절을 함유하되, 벡터는 전체 CDR3 영역에 연장된 odeCDR3과 함께 사용되는, 라이브러리.
79. 항목 3 내지 19 중 어느 하나에 정의된 바와 같은 J 공여자 벡터의 라이브러리로서, 서열 SEQ0662 내지 SEQ0687로 표현되는 인간 TRB 유전자좌의 유전자 분절 사용을 재정리하기 위한 결합 유전자 분절을 함유하되, 벡터는 3 내지 4개의 코돈 길이가 감소된 odeCDR3과 함께 사용되는, 라이브러리.
80. 항목 1 내지 20 중 어느 하나에 있어서, 네이티브 생식계열 및/또는 다양화된 합성 TCR 오픈 리딩 프레임을 정의된 벡터 컨텍스트 내에 제공하는 데 사용하기 위한, 조합 시스템.
81. 진단 또는 치료 절차에 사용하기 위한, 정의된 벡터 컨텍스트 내의 TCR 오픈 리딩 프레임.
SEQUENCE LISTING
<110> Genovie AB
<120> A two-component vector library system for rapid assembly and diversification of full-length T-cell receptor open reading frames
<130> WO/2019/016175
<140> PCT/EP2018/069333
<141> 2018-07-17
<150> EP17181798.4
<151> 2017-07-18
<160> 784
<170> BiSSAP 1.3
<210> 1
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV1-1_BB_1
<400> 1
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gtggggagct ttccttctct 60
atgtttccat gaagatggga ggcactgcag gacaaagcct tgagcagccc tctgaagtga 120
cagctgtgga aggagccatt gtccagataa actgcacgta ccagacatct gggttttatg 180
ggctgtcctg gtaccagcaa catgatggcg gagcacccac atttctttct tacaatgctc 240
tggatggttt ggaggagaca ggtcgttttt cttcattcct tagtcgctct gatagttatg 300
gttacctcct tctacaggag ctccagatga aagactctgc ctcttacttc tgcagagacc 360
ttgcggccgt gtcttcgact agtagctcac ctacga 396
<210> 2
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV1-2_BB_1
<400> 2
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gtggggagtt ttccttcttt 60
atgtttccat gaagatggga ggcactacag gacaaaacat tgaccagccc actgagatga 120
cagctacgga aggtgccatt gtccagatca actgcacgta ccagacatct gggttcaacg 180
ggctgttctg gtaccagcaa catgctggcg aagcacccac atttctgtct tacaatgttc 240
tggatggttt ggaggagaaa ggtcgttttt cttcattcct tagtcggtct aaagggtaca 300
gttacctcct tttgaaggag ctccagatga aagactctgc ctcttacctc tgcagagacc 360
ttgcggccgt gtcttcgact agtagctcac ctacga 396
<210> 3
<211> 408
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV2_BB_1
<400> 3
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat ggctttgcag agcactctgg 60
gggcggtgtg gctagggctt ctcctcaact ctctctggaa ggttgcagaa agcaaggacc 120
aagtgtttca gccttccaca gtggcatctt cagagggagc tgtggtggaa atcttctgta 180
atcactctgt gtccaatgct tacaacttct tctggtacct tcacttcccg ggatgtgcac 240
caagactcct tgttaaaggc tcaaagcctt ctcagcaggg acgatacaac atgacctatg 300
aacggttctc ttcatcgctg ctcatcctcc aggtgcggga ggcagatgct gctgtttact 360
actgcagaga ccttgcggcc gtgtcttcga ctagtagctc acctacga 408
<210> 4
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV3_BB_1
<400> 4
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat ggcctctgca cccatctcga 60
tgcttgcgat gctcttcaca ttgagtgggc tgagagctca gtcagtggct cagccggaag 120
atcaggtcaa cgttgctgaa gggaatcctc tgactgtgaa atgcacctat tcagtctctg 180
gaaaccctta tcttttttgg tatgttcaat accccaaccg aggcctccag ttccttctga 240
aatacatcac aggggataac ctggttaaag gcagctatgg ctttgaagct gaatttaaca 300
agagccaaac ctccttccac ctgaagaaac catctgccct tgtgagcgac tccgctttgt 360
acttctgcag agaccttgcg gccgtgtctt cgactagtag ctcacctacg a 411
<210> 5
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV4_BB_1
<400> 5
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gaggcaagtg gcgagagtga 60
tcgtgttcct gaccctgagt actttgagcc ttgctaagac cacccagccc atctccatgg 120
actcatatga aggacaagaa gtgaacataa cctgtagcca caacaacatt gctacaaatg 180
attatatcac gtggtaccaa cagtttccca gccaaggacc acgatttatt attcaaggat 240
acaagacaaa agttacaaac gaagtggcct ccctgtttat ccctgccgac agaaagtcca 300
gcactctgag cctgccccgg gtttccctga gcgacactgc tgtgtactac tgcagagacc 360
ttgcggccgt gtcttcgact agtagctcac ctacga 396
<210> 6
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV5_BB_1
<400> 6
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gaaaacattt gctggatttt 60
cgttcctgtt tttgtggctg cagctggact gtatgagtag aggagaggat gtggagcaga 120
gtcttttcct gagtgtccga gagggagaca gctccgttat aaactgcact tacacagaca 180
gctcctccac ctacttatac tggtataagc aagaacctgg agcaggtcta cagttgctga 240
cgtatatttt ttcaaatatg gacatgaaac aagaccaaag actcactgtt ctattgaata 300
aaaaggataa acatctgtct ctgcgcattg cagacaccca gactggggac tcagctatct 360
acttctgcag agaccttgcg gccgtgtctt cgactagtag ctcacctacg a 411
<210> 7
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV6_BB_1
<400> 7
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat ggagtcattc ctgggaggtg 60
ttttgctgat tttgtggctt caagtggact gggtgaagag ccaaaagata gaacagaatt 120
ccgaggccct gaacattcag gagggtaaaa cggccaccct gacctgcaac tatacaaact 180
attccccagc atacttacag tggtaccgac aagatccagg aagaggccct gttttcttgc 240
tactcatacg tgaaaatgag aaagaaaaaa ggaaagaaag actgaaggtc acctttgata 300
ccacccttaa acagagtttg tttcatatca cagcctccca gcctgcagac tcagctacct 360
acctctgcag agaccttgcg gccgtgtctt cgactagtag ctcacctacg a 411
<210> 8
<211> 408
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV7_BB_1
<400> 8
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat ggagaagatg cgtagacctg 60
tcctaattat attttgtcta tgtcttggct gggcaaatgg agaaaaccag gtggagcaca 120
gccctcattt tctgggaccc cagcagggag acgttgcctc catgagctgc acgtactctg 180
tcagtcgttt taacaatttg cagtggtaca ggcaaaatac agggatgggt cccaaacacc 240
tattatccat gtattcagct ggatatgaga agcagaaagg aaggctaaat gctacattac 300
tgaagaatgg aagcagcttg tacattacag ccgtgcagcc tgaagattca gccacctatt 360
tctgcagaga ccttgcggcc gtgtcttcga ctagtagctc acctacga 408
<210> 9
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV8-1_BB_1
<400> 9
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gctcctgttg ctcataccag 60
tgctggggat gatttttgcc ctgagagatg ccagagccca gtctgtgagc cagcataacc 120
accacgtaat tctctctgaa gcagcctcac tggagttggg atgcaactat tcctatggtg 180
gaactgttaa tctcttctgg tatgtccagt accctggtca acaccttcag cttctcctca 240
agtacttttc aggggatcca ctggttaaag gcatcaaggg ctttgaggct gaatttataa 300
agagtaaatt ctcctttaat ctgaggaaac cctctgtgca gtggagtgac acagctgagt 360
acttctgcag agaccttgcg gccgtgtctt cgactagtag ctcacctacg a 411
<210> 10
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV8-2_BB_1
<400> 10
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gctcctgctg ctcgtcccag 60
tgctcgaggt gatttttact ctgggaggaa ccagagccca gtcggtgacc cagcttgaca 120
gccacgtctc tgtctctgaa ggaaccccgg tgctgctgag gtgcaactac tcatcttctt 180
attcaccatc tctcttctgg tatgtgcaac accccaacaa aggactccag cttctcctga 240
agtacacatc agcggccacc ctggttaaag gcatcaacgg ttttgaggct gaatttaaga 300
agagtgaaac ctccttccac ctgacgaaac cctcagccca tatgagcgac gcggctgagt 360
acttctgcag agaccttgcg gccgtgtctt cgactagtag ctcacctacg a 411
<210> 11
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV8-3_BB_1
<400> 11
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gctcctggag cttatcccac 60
tgctggggat acattttgtc ctgagaactg ccagagccca gtcagtgacc cagcctgaca 120
tccacatcac tgtctctgaa ggagcctcac tggagttgag atgtaactat tcctatgggg 180
caacacctta tctcttctgg tatgtccagt cccccggcca aggcctccag ctgctcctga 240
agtacttttc aggagacact ctggttcaag gcattaaagg ctttgaggct gaatttaaga 300
ggagtcaatc ttccttcaat ctgaggaaac cctctgtgca ttggagtgat gctgctgagt 360
acttctgcag agaccttgcg gccgtgtctt cgactagtag ctcacctacg a 411
<210> 12
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV8-4_BB_1
<400> 12
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gctcctgctg ctcgtcccag 60
tgctcgaggt gatttttacc ctgggaggaa ccagagccca gtcggtgacc cagcttggca 120
gccacgtctc tgtctctgaa ggagccctgg ttctgctgag gtgcaactac tcatcgtctg 180
ttccaccata tctcttctgg tatgtgcaat accccaacca aggactccag cttctcctga 240
agtacacatc agcggccacc ctggttaaag gcatcaacgg ttttgaggct gaatttaaga 300
agagtgaaac ctccttccac ctgacgaaac cctcagccca tatgagcgac gcggctgagt 360
acttctgcag agaccttgcg gccgtgtctt cgactagtag ctcacctacg a 411
<210> 13
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV8-6_BB_1
<400> 13
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gctcctgctg ctcgtcccag 60
cgttccaggt gatttttacc ctgggaggaa ccagagccca gtctgtgacc cagcttgaca 120
gccaagtccc tgtctttgaa gaagcccctg tggagctgag gtgcaactac tcatcgtctg 180
tttcagtgta tctcttctgg tatgtgcaat accccaacca aggactccag cttctcctga 240
agtatttatc aggatccacc ctggttaaag gcatcaacgg ttttgaggct gaatttaaca 300
agagtcaaac ttccttccac ttgaggaaac cctcagtcca tataagcgac acggctgagt 360
acttctgcag agaccttgcg gccgtgtctt cgactagtag ctcacctacg a 411
<210> 14
<211> 408
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV8-7_BB_1
<400> 14
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gctcttagtg gtcattctgc 60
tgcttggaat gttcttcaca ctgagaacca gaacccagtc ggtgacccag cttgatggcc 120
acatcactgt ctctgaagaa gcccctctgg aactgaagtg caactattcc tatagtggag 180
ttccttctct cttctggtat gtccaatact ctagccaaag cctccagctt ctcctcaaag 240
acctaacaga ggccacccag gttaaaggca tcagaggttt tgaggctgaa tttaagaaga 300
gcgaaacctc cttctacctg aggaaaccat caacccatgt gagtgatgct gctgagtact 360
tctgcagaga ccttgcggcc gtgtcttcga ctagtagctc acctacga 408
<210> 15
<211> 408
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV9-1_BB_1
<400> 15
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gaattcttct ccaggaccag 60
cgattgcact attcttaatg tttgggggaa tcaatggaga ttcagtggtc cagacagaag 120
gccaagtgct cccctctgaa ggggattccc tgattgtgaa ctgctcctat gaaaccacac 180
agtacccttc ccttttttgg tatgtccaat atcctggaga aggtccacag ctccacctga 240
aagccatgaa ggccaatgac aagggaagga acaaaggttt tgaagccatg taccgtaaag 300
aaaccacttc tttccacttg gagaaagact cagttcaaga gtcagactcc gctgtgtact 360
tctgcagaga ccttgcggcc gtgtcttcga ctagtagctc acctacga 408
<210> 16
<211> 408
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV9-2_BB_1
<400> 16
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gaactattct ccaggcttag 60
tatctctgat actcttactg cttggaagaa cccgtggaaa ttcagtgacc cagatggaag 120
ggccagtgac tctctcagaa gaggccttcc tgactataaa ctgcacgtac acagccacag 180
gatacccttc ccttttctgg tatgtccaat atcctggaga aggtctacag ctcctcctga 240
aagccacgaa ggctgatgac aagggaagca acaaaggttt tgaagccaca taccgtaaag 300
aaaccacttc tttccacttg gagaaaggct cagttcaagt gtcagactca gcggtgtact 360
tctgcagaga ccttgcggcc gtgtcttcga ctagtagctc acctacga 408
<210> 17
<211> 414
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV10_BB_1
<400> 17
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gaaaaagcat ctgacgacct 60
tcttggtgat tttgtggctt tatttttata gggggaatgg caaaaaccaa gtggagcaga 120
gtcctcagtc cctgatcatc ctggagggaa agaactgcac tcttcaatgc aattatacag 180
tgagcccctt cagcaactta aggtggtata agcaagatac tgggagaggt cctgtttccc 240
tgacaatcat gactttcagt gagaacacaa agtcgaacgg aagatataca gcaactctgg 300
atgcagacac aaagcaaagc tctctgcaca tcacagcctc ccagctcagc gattcagcct 360
cctacatctg cagagacctt gcggccgtgt cttcgactag tagctcacct acga 414
<210> 18
<211> 408
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV12-1_BB_1
<400> 18
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gatatccttg agagttttac 60
tggtgatcct gtggcttcag ttaagctggg tttggagcca acggaaggag gtggagcagg 120
atcctggacc cttcaatgtt ccagagggag ccactgtcgc tttcaactgt acttacagca 180
acagtgcttc tcagtctttc ttctggtaca gacaggattg caggaaagaa cctaagttgc 240
tgatgtccgt atactccagt ggtaatgaag atggaaggtt tacagcacag ctcaatagag 300
ccagccagta tatttccctg ctcatcagag actccaagct cagtgattca gccacctacc 360
tctgcagaga ccttgcggcc gtgtcttcga ctagtagctc acctacga 408
<210> 19
<211> 414
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV12-2_BB_1
<400> 19
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gatgaaatcc ttgagagttt 60
tactagtgat cctgtggctt cagttgagct gggtttggag ccaacagaag gaggtggagc 120
agaattctgg acccctcagt gttccagagg gagccattgc ctctctcaac tgcacttaca 180
gtgaccgagg ttcccagtcc ttcttctggt acagacaata ttctgggaaa agccctgagt 240
tgataatgtt catatactcc aatggtgaca aagaagatgg aaggtttaca gcacagctca 300
ataaagccag ccagtatgtt tctctgctca tcagagactc ccagcccagt gattcagcca 360
cctacctctg cagagacctt gcggccgtgt cttcgactag tagctcacct acga 414
<210> 20
<211> 414
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV12-3_BB_1
<400> 20
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gatgaaatcc ttgagagttt 60
tactggtgat cctgtggctt cagttaagct gggtttggag ccaacagaag gaggtggagc 120
aggatcctgg accactcagt gttccagagg gagccattgt ttctctcaac tgcacttaca 180
gcaacagtgc ttttcaatac ttcatgtggt acagacagta ttccagaaaa ggccctgagt 240
tgctgatgta cacatactcc agtggtaaca aagaagatgg aaggtttaca gcacaggtcg 300
ataaatccag caagtatatc tccttgttca tcagagactc acagcccagt gattcagcca 360
cctacctctg cagagacctt gcggccgtgt cttcgactag tagctcacct acga 414
<210> 21
<211> 408
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV13-1_BB_1
<400> 21
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gacatccatt cgagctgtat 60
ttatattcct gtggctgcag ctggacttgg tgaatggaga gaatgtggag cagcatcctt 120
caaccctgag tgtccaggag ggagacagcg ctgttatcaa gtgtacttat tcagacagtg 180
cctcaaacta cttcccttgg tataagcaag aacttggaaa aggacctcag cttattatag 240
acattcgttc aaatgtgggc gaaaagaaag accaacgaat tgctgttaca ttgaacaaga 300
cagccaaaca tttctccctg cacatcacag aaacccaacc tgaggactcg gctgtctact 360
tctgcagaga ccttgcggcc gtgtcttcga ctagtagctc acctacga 408
<210> 22
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV13-2_BB_1
<400> 22
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat ggcaggcatt cgagctttat 60
ttatgtactt gtggctgcag ctggactggg tgagcagagg agagagtgtg gggctgcatc 120
ttcctaccct gagtgtccag gagggtgaca actctattat caactgtgct tattcaaaca 180
gcgcctcaga ctacttcatt tggtacaagc aagaatctgg aaaaggtcct caattcatta 240
tagacattcg ttcaaatatg gacaaaaggc aaggccaaag agtcaccgtt ttattgaata 300
agacagtgaa acatctctct ctgcaaattg cagctactca acctggagac tcagctgtct 360
acttctgcag agaccttgcg gccgtgtctt cgactagtag ctcacctacg a 411
<210> 23
<211> 417
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV14DV4_BB_1
<400> 23
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gtcactttct agcctgctga 60
aggtggtcac agcttcactg tggctaggac ctggcattgc ccagaagata actcaaaccc 120
aaccaggaat gttcgtgcag gaaaaggagg ctgtgactct ggactgcaca tatgacacca 180
gtgatcaaag ttatggtcta ttctggtaca agcagcccag cagtggggaa atgatttttc 240
ttatttatca ggggtcttat gacgagcaaa atgcaacaga aggtcgctac tcattgaatt 300
tccagaaggc aagaaaatcc gccaaccttg tcatctccgc ttcacaactg ggggactcag 360
caatgtattt ctgcagagac cttgcggccg tgtcttcgac tagtagctca cctacga 417
<210> 24
<211> 399
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV16_BB_1
<400> 24
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gaagcccacc ctcatctcag 60
tgcttgtgat aatatttata ctcagaggaa caagagccca gagagtgact cagcccgaga 120
agctcctctc tgtctttaaa ggggccccag tggagctgaa gtgcaactat tcctattctg 180
ggagtcctga actcttctgg tatgtccagt actccagaca acgcctccag ttactcttga 240
gacacatctc tagagagagc atcaaaggct tcactgctga ccttaacaaa ggcgagacat 300
ctttccacct gaagaaacca tttgctcaag aggaagattc agccatgtat tactgcagag 360
accttgcggc cgtgtcttcg actagtagct cacctacga 399
<210> 25
<211> 408
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV17_BB_1
<400> 25
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat ggaaactctc ctgggagtgt 60
ctttggtgat tctatggctt caactggcta gggtgaacag tcaacaggga gaagaggatc 120
ctcaggcctt gagcatccag gagggtgaaa atgccaccat gaactgcagt tacaaaacta 180
gtataaacaa tttacagtgg tatagacaaa attcaggtag aggccttgtc cacctaattt 240
taatacgttc aaatgaaaga gagaaacaca gtggaagatt aagagtcacg cttgacactt 300
ccaagaaaag cagttccttg ttgatcacgg cttcccgggc agcagacact gcttcttact 360
tctgcagaga ccttgcggcc gtgtcttcga ctagtagctc acctacga 408
<210> 26
<211> 405
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV18_BB_1
<400> 26
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gctgtctgct tcctgctcag 60
gacttgtgat cttgttgata ttcagaagga ccagtggaga ctcggttacc cagacagaag 120
gcccagttac cctccctgag agggcagctc tgacattaaa ctgcacttat cagtccagct 180
attcaacttt tctattctgg tatgtccagt atctaaacaa agagcctgag ctcctcctga 240
aaagttcaga aaaccaggag acggacagca gaggttttca ggccagtcct atcaagagtg 300
acagttcctt ccacctggag aagccctcgg tgcagctgtc ggactctgcc gtgtactact 360
gcagagacct tgcggccgtg tcttcgacta gtagctcacc tacga 405
<210> 27
<211> 417
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV19_BB_1
<400> 27
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gctgactgcc agcctgttga 60
gggcagtcat agcctccatc tgtgttgtat ccagcatggc tcagaaggta actcaagcgc 120
agactgaaat ttctgtggtg gagaaggagg atgtgacctt ggactgtgtg tatgaaaccc 180
gtgatactac ttattactta ttctggtaca agcaaccacc aagtggagaa ttggttttcc 240
ttattcgtcg gaactctttt gatgagcaaa atgaaataag tggtcggtat tcttggaact 300
tccagaaatc caccagttcc ttcaacttca ccatcacagc ctcacaagtc gtggactcag 360
cagtatactt ctgcagagac cttgcggccg tgtcttcgac tagtagctca cctacga 417
<210> 28
<211> 408
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV20_BB_1
<400> 28
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat ggagaaaatg ttggagtgtg 60
cattcatagt cttgtggctt cagcttggct ggttgagtgg agaggaccag gtgacgcaga 120
gtcccgaggc cctgagactc caggagggag agagtagcag tcttaactgc agttacacag 180
tcagcggttt aagagggctg ttctggtata ggcaagatcc tgggaaaggc cctgaattcc 240
tcttcaccct gtattcagct ggggaagaaa aggagaaaga aaggctaaaa gccacattaa 300
caaagaagga aagctttctg cacatcacag cccctaaacc tgaggactca gccacttatc 360
tctgcagaga ccttgcggcc gtgtcttcga ctagtagctc acctacga 408
<210> 29
<211> 408
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV21_BB_1
<400> 29
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat ggagaccctc ttgggcctgc 60
ttatcctttg gctgcagctg caatgggtga gcagcaaaca ggaggtgacg cagattcctg 120
cagctctgag tgtcccagaa ggagaaaact tggttctcaa ctgcagtttc actgatagcg 180
ctatttacaa cctccagtgg tttaggcagg accctgggaa aggactcaca tctctgttgc 240
ttattcagtc aagtcagaga gagcaaacaa gtggacgcct taatgcctcg ctggataaat 300
catcaggacg tagtacttta tacattgcag cttctcagcc tggtgactca gccacctacc 360
tctgcagaga ccttgcggcc gtgtcttcga ctagtagctc acctacga 408
<210> 30
<211> 402
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV22_BB_1
<400> 30
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gaagaggata ttgggagctc 60
tgctggggct cttgagtgcc caggtttgct gtgtgagagg aatacaagtg gagcagagtc 120
ctccagacct gattctccag gagggagcca attccacgct gcggtgcaat ttttctgact 180
ctgtgaacaa tttgcagtgg tttcatcaaa acccttgggg acagctcatc aacctgtttt 240
acattccctc agggacaaaa cagaatggaa gattaagcgc cacgactgtc gctacggaac 300
gctacagctt attgtacatt tcctcttccc agaccacaga ctcaggcgtt tatttctgca 360
gagaccttgc ggccgtgtct tcgactagta gctcacctac ga 402
<210> 31
<211> 435
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV23DV6_BB_1
<400> 31
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat ggacaagatc ttaggagcat 60
catttttagt tctgtggctt caactatgct gggtgagtgg ccaacagaag gagaaaagtg 120
accagcagca ggtgaaacaa agtcctcaat ctttgatagt ccagaaagga gggatttcaa 180
ttataaactg tgcttatgag aacactgcgt ttgactactt tccatggtac caacaattcc 240
ctgggaaagg ccctgcatta ttgatagcca tacgtccaga tgtgagtgaa aagaaagaag 300
gaagattcac aatctccttc aataaaagtg ccaagcagtt ctcattgcat atcatggatt 360
cccagcctgg agactcagcc acctacttct gcagagacct tgcggccgtg tcttcgacta 420
gtagctcacc tacga 435
<210> 32
<211> 417
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV24_BB_1
<400> 32
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat ggagaagaat cctttggcag 60
ccccattact aatcctctgg tttcatcttg actgcgtgag cagcatactg aacgtggaac 120
aaagtcctca gtcactgcat gttcaggagg gagacagcac caatttcacc tgcagcttcc 180
cttccagcaa tttttatgcc ttacactggt acagatggga aactgcaaaa agccccgagg 240
ccttgtttgt aatgacttta aatggggatg aaaagaagaa aggacgaata agtgccactc 300
ttaataccaa ggagggttac agctatttgt acatcaaagg atcccagcct gaagattcag 360
ccacatacct ctgcagagac cttgcggccg tgtcttcgac tagtagctca cctacga 417
<210> 33
<211> 402
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV25_BB_1
<400> 33
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gctactcatc acatcaatgt 60
tggtcttatg gatgcaattg tcacaggtga atggacaaca ggtaatgcaa attcctcagt 120
accagcatgt acaagaagga gaggacttca ccacgtactg caattcctca actactttaa 180
gcaatataca gtggtataag caaaggcctg gtggacatcc cgtattcttg atacagttag 240
tgaagagtgg agaagtgaag aagcagaaaa gactgacatt tcagtttgga gaagcaaaaa 300
agaacagctc cctgcacatc acagccaccc agactacaga tgtaggaacc tacttctgca 360
gagaccttgc ggccgtgtct tcgactagta gctcacctac ga 402
<210> 34
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV26-1_BB_1
<400> 34
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gaggctggtg gcaagagtaa 60
ctgtgtttct gacctttgga actataattg atgctaagac cacccagccc ccctccatgg 120
attgcgctga aggaagagct gcaaacctgc cttgtaatca ctctaccatc agtggaaatg 180
agtatgtgta ttggtatcga cagattcact cccaggggcc acagtatatc attcatggtc 240
taaaaaacaa tgaaaccaat gaaatggcct ctctgatcat cacagaagat agaaagtcca 300
gcaccttgat cctgccccac gctacgctga gagacactgc tgtgtactac tgcagagacc 360
ttgcggccgt gtcttcgact agtagctcac ctacga 396
<210> 35
<211> 396
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV26-2_BB_1
<400> 35
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gaagttggtg acaagcatta 60
ctgtactcct atctttgggt attatgggtg atgctaagac cacacagcca aattcaatgg 120
agagtaacga agaagagcct gttcacttgc cttgtaacca ctccacaatc agtggaactg 180
attacataca ttggtatcga cagcttccct cccagggtcc agagtacgtg attcatggtc 240
ttacaagcaa tgtgaacaac agaatggcct ctctggcaat cgctgaggac agaaagtcca 300
gtaccttgat cctgcaccgt gctaccttga gagatgctgc tgtgtactac tgcagagacc 360
ttgcggccgt gtcttcgact agtagctcac ctacga 396
<210> 36
<211> 402
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV27_BB_1
<400> 36
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat ggtcctgaaa ttctccgtgt 60
ccattctttg gattcagttg gcatgggtga gcacccagct gctggagcag agccctcagt 120
ttctaagcat ccaagaggga gaaaatctca ctgtgtactg caactcctca agtgtttttt 180
ccagcttaca atggtacaga caggagcctg gggaaggtcc tgtcctcctg gtgacagtag 240
ttacgggtgg agaagtgaag aagctgaaga gactaacctt tcagtttggt gatgcaagaa 300
aggacagttc tctccacatc actgcagccc agcctggtga tacaggcctc tacctctgca 360
gagaccttgc ggccgtgtct tcgactagta gctcacctac ga 402
<210> 37
<211> 429
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV29DV5_BB_1
<400> 37
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat ggccatgctc ctgggggcat 60
cagtgctgat tctgtggctt cagccagact gggtaaacag tcaacagaag aatgatgacc 120
agcaagttaa gcaaaattca ccatccctga gcgtccagga aggaagaatt tctattctga 180
actgtgacta tactaacagc atgtttgatt atttcctatg gtacaaaaaa taccctgctg 240
aaggtcctac attcctgata tctataagtt ccattaagga taaaaatgaa gatggaagat 300
tcactgtttt cttaaacaaa agtgccaagc acctctctct gcacattgtg ccctcccagc 360
ctggagactc tgcagtgtac ttctgcagag accttgcggc cgtgtcttcg actagtagct 420
cacctacga 429
<210> 38
<211> 408
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV30_BB_1
<400> 38
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat ggagactctc ctgaaagtgc 60
tttcaggcac cttgttgtgg cagttgacct gggtgagaag ccaacaacca gtgcagagtc 120
ctcaagccgt gatcctccga gaaggggaag atgctgtcat caactgcagt tcctccaagg 180
ctttatattc tgtacactgg tacaggcaga agcatggtga agcacccgtt ttcctgatga 240
tattactgaa gggtggagaa cagaagggtc atgaaaaaat atctgcttca tttaatgaaa 300
aaaagcagca aagctccctg taccttacgg cctcccagct cagttactca ggaacctact 360
tctgcagaga ccttgcggcc gtgtcttcga ctagtagctc acctacga 408
<210> 39
<211> 408
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV34_BB_1
<400> 39
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat ggagactgtt ctgcaagtac 60
tcctagggat attggggttc caagcagcct gggtcagtag ccaagaactg gagcagagtc 120
ctcagtcctt gatcgtccaa gagggaaaga atctcaccat aaactgcacg tcatcaaaga 180
cgttatatgg cttatactgg tataagcaaa agtatggtga aggtcttatc ttcttgatga 240
tgctacagaa aggtggggaa gagaaaagtc atgaaaagat aactgccaag ttggatgaga 300
aaaagcagca aagttccctg catatcacag cctcccagcc cagccatgca ggcatctacc 360
tctgcagaga ccttgcggcc gtgtcttcga ctagtagctc acctacga 408
<210> 40
<211> 402
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV35_BB_1
<400> 40
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gctccttgaa catttattaa 60
taatcttgtg gatgcagctg acatgggtca gtggtcaaca gctgaatcag agtcctcaat 120
ctatgtttat ccaggaagga gaagatgtct ccatgaactg cacttcttca agcatattta 180
acacctggct atggtacaag caggaacctg gggaaggtcc tgtcctcttg atagccttat 240
ataaggctgg tgaattgacc tcaaatggaa ggctgactgc tcagtttggt ataaccagaa 300
aggacagctt cctgaatatc tcagcatcca tacctagtga tgtaggcatc tacttctgca 360
gagaccttgc ggccgtgtct tcgactagta gctcacctac ga 402
<210> 41
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV36DV7_BB_1
<400> 41
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gatgaagtgt ccacaggctt 60
tactagctat cttttggctt ctactgagct gggtgagcag tgaagataag gtggtacaaa 120
gccctctatc tctggttgtc cacgagggag acaccgtaac tctcaattgc agttatgaag 180
tgactaactt tcgaagccta ctatggtaca agcaggaaaa gaaagctccc acatttctat 240
ttatgctaac ttcaagtgga attgaaaaga agtcaggtag actaagtagc atattagata 300
agaaagaact ttccagcatc ctgaacatca cagccaccca gaccggagac tcggccatct 360
acctctgcag agaccttgcg gccgtgtctt cgactagtag ctcacctacg a 411
<210> 42
<211> 417
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV38-1_BB_1
<400> 42
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gacacgagtt agcttgctgt 60
gggcagtcgt ggtcagtacc tgtcttgaat ccggcatggc ccagacagtc actcagtctc 120
aaccagagat gtctgtgcag gaggcagaga ctgtgaccct gagttgcaca tatgacacca 180
gtgagaataa ttattatttg ttctggtaca agcagcctcc cagcaggcag atgattctcg 240
ttattcgcca agaagcttat aagcaacaga atgcaacgga gaatcgtttc tctgtgaact 300
tccagaaagc agccaaatcc ttcagtctca agatctcaga ctcacagctg ggggacactg 360
cgatgtattt ctgcagagac cttgcggccg tgtcttcgac tagtagctca cctacga 417
<210> 43
<211> 417
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV38-2DV8_BB_1
<400> 43
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat ggcatgccct ggcttcctgt 60
gggcacttgt gatctccacc tgtcttgaat ttagcatggc tcagacagtc actcagtctc 120
aaccagagat gtctgtgcag gaggcagaga cggtgaccct gagctgcaca tatgacacca 180
gtgagagtga ttattattta ttctggtaca agcagcctcc cagcaggcag atgattctcg 240
ttattcgcca agaagcttat aagcaacaga atgcaacaga gaatcgtttc tctgtgaact 300
tccagaaagc agccaaatcc ttcagtctca agatctcaga ctcacagctg ggggatgccg 360
cgatgtattt ctgcagagac cttgcggccg tgtcttcgac tagtagctca cctacga 417
<210> 44
<211> 402
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV39_BB_1
<400> 44
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gaagaagcta ctagcaatga 60
ttctgtggct tcaactagac cggttaagtg gagagctgaa agtggaacaa aaccctctgt 120
tcctgagcat gcaggaggga aaaaactata ccatctactg caattattca accacttcag 180
acagactgta ttggtacagg caggatcctg ggaaaagtct ggaatctctg tttgtgttgc 240
tatcaaatgg agcagtgaag caggagggac gattaatggc ctcacttgat accaaagccc 300
gtctcagcac cctccacatc acagctgccg tgcatgacct ctctgccacc tacttctgca 360
gagaccttgc ggccgtgtct tcgactagta gctcacctac ga 402
<210> 45
<211> 387
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV40_BB_1
<400> 45
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat gaactcctct ctggactttc 60
taattctgat cttaatgttt ggaggaacca gcagcaattc agtcaagcag acgggccaaa 120
taaccgtctc ggagggagca tctgtgacta tgaactgcac atacacatcc acggggtacc 180
ctaccctttt ctggtatgtg gaatacccca gcaaacctct gcagcttctt cagagagaga 240
caatggaaaa cagcaaaaac ttcggaggcg gaaatattaa agacaaaaac tcccccattg 300
tgaaatattc agtccaggta tcagactcag ccgtgtacta ctgcagagac cttgcggccg 360
tgtcttcgac tagtagctca cctacga 387
<210> 46
<211> 408
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAV41_BB_1
<400> 46
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccaccat ggtgaagatc cggcaatttt 60
tgttggctat tttgtggctt cagctaagct gtgtaagtgc cgccaaaaat gaagtggagc 120
agagtcctca gaacctgact gcccaggaag gagaatttat cacaatcaac tgcagttact 180
cggtaggaat aagtgcctta cactggctgc aacagcatcc aggaggaggc attgtttcct 240
tgtttatgct gagctcaggg aagaagaagc atggaagatt aattgccaca ataaacatac 300
aggaaaagca cagctccctg cacatcacag cctcccatcc cagagactct gccgtctaca 360
tctgcagaga ccttgcggcc gtgtcttcga ctagtagctc acctacga 408
<210> 47
<211> 497
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAC1 cloning fragment
<400> 47
gtgcactcct atgactaacg gaagactagg ccgcataggt ctcaccagaa ccctgaccct 60
gccgtgtacc agctgagaga ctctaaatcc agtgacaagt ctgtctgcct attcaccgat 120
tttgattctc aaacaaatgt gtcacaaagt aaggattctg atgtgtatat cacagacaaa 180
actgtgctag acatgaggtc tatggacttc aagagcaaca gtgctgtggc ctggagcaac 240
aaatctgact ttgcatgtgc aaacgccttc aacaacagca ttattccaga ggacaccttc 300
ttccccagcc cagaaagttc ctgtgatgtc aagctggtcg agaaaagctt tgaaacagat 360
acgaacctaa actttcaaaa cctgtcagtg attgggttcc gaatcctcct cctgaaagtg 420
gccgggttta atctgctcat gacgctgcgg ctgtggtcca gctgactagg tgtcttccct 480
atgctgaatc gatggtc 497
<210> 48
<211> 3210
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-C entry backbone transient
<400> 48
tctagacctg atcataatca agccatatca catctgtaga ggtttacttg ctttaaaaaa 60
cctccacacc tccccctgaa cctgaaacat aaaatgaatg caattgttgt tgttaacttg 120
tttattgcag cttataatgg ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa 180
gcattttttt cactgcattc tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttatcat 240
gtctggatct gcggatccaa tctcgagctg ggcctcatgg gccttccgct cactgcccgc 300
tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct gcattaacat ggtcatagct gtttccttgc 360
gtattgggcg ctctccgctt cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg ttcgggtaaa 420
gcctggggtg cctaatgagc aaaaggccag caaaaggcca ggaaccgtaa aaaggccgcg 480
ttgctggcgt ttttccatag gctccgcccc cctgacgagc atcacaaaaa tcgacgctca 540
agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc 600
tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc 660
ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag 720
gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc 780
ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca 840
gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg 900
aagtggtggc ctaactacgg ctacactaga agaacagtat ttggtatctg cgctctgctg 960
aagccagtta ccttcggaaa aagagttggt agctcttgat ccggcaaaca aaccaccgct 1020
ggtagcggtg gtttttttgt ttgcaagcag cagattacgc gcagaaaaaa aggatctcaa 1080
gaagatcctt tgatcttttc tacggggtct gacgctcagt ggaacgaaaa ctcacgttaa 1140
gggattttgg tcatgagatt atcaaaaagg atcttcacct agatcctttt aaattaaaaa 1200
tgaagtttta aatcaatcta aagtatatat gagtaaactt ggtctgacag ttaccaatgc 1260
ttaatcagtg aggcacctat ctcagcgatc tgtctatttc gttcatccat agttgcctga 1320
ctccccgtcg tgtagataac tacgatacgg gagggcttac catctggccc cagtgctgca 1380
atgataccgc gagaaccacg ctcaccggct ccagatttat cagcaataaa ccagccagcc 1440
ggaagggccg agcgcagaag tggtcctgca actttatccg cctccatcca gtctattaat 1500
tgttgccggg aagctagagt aagtagttcg ccagttaata gtttgcgcaa cgttgttgcc 1560
attgctacag gcatcgtggt gtcacgctcg tcgtttggta tggcttcatt cagctccggt 1620
tcccaacgat caaggcgagt tacatgatcc cccatgttgt gcaaaaaagc ggttagctcc 1680
ttcggtcctc cgatcgttgt cagaagtaag ttggccgcag tgttatcact catggttatg 1740
gcagcactgc ataattctct tactgtcatg ccatccgtaa gatgcttttc tgtgactggt 1800
gagtactcaa ccaagtcatt ctgagaatag tgtatgcggc gaccgagttg ctcttgcccg 1860
gcgtcaatac gggataatac cgcgccacat agcagaactt taaaagtgct catcattgga 1920
aaacgttctt cggggcgaaa actctcaagg atcttaccgc tgttgagatc cagttcgatg 1980
taacccactc gtgcacccaa ctgatcttca gcatctttta ctttcaccag cgtttctggg 2040
tgagcaaaaa caggaaggca aaatgccgca aaaaagggaa taagggcgac acggaaatgt 2100
tgaatactca tactcttcct ttttcaatat tattgaagca tttatcaggg ttattgtctc 2160
atgagcggat acatatttga atgtatttag aaaaataaac aaataggggt tccgcgcaca 2220
tttccccgaa aagtgccacc taaattgtaa gcgttaatat tttgttaaaa ttcgcgttaa 2280
atttttgtta aatcagctca ttttttaacc aataggccga aatcggcaaa atcccttata 2340
aatcaaaaga atagaccgag atagggttga gtggccgcta cagggcgctc ccattcgcca 2400
ttcaggctgc gcaactgttg ggaagggcgt ttcggtgcgg gcctcttcgc tattacgcca 2460
gctggcgaaa gggggatgtg ctgcaaggcg attaagttgg gtaacgccag ggttttccca 2520
gtcacgacgt tgtaaaacga cggccagtga gcgcgacgta atacgactca ctatagggcg 2580
aattggcgga aggccgtcaa ggccgcatga attcgctacc ggtatagtaa tcaattacgg 2640
ggtcattagt tcatagccca tatatggagt tccgcgttac ataacttacg gtaaatggcc 2700
cgcctggctg accgcccaac gacccccgcc cattgacgtc aataatgacg tatgttccca 2760
tagtaacgcc aatagggact ttccattgac gtcaatgggt ggagtattta cggtaaactg 2820
cccacttggc agtacatcaa gtgtatcata tgccaagtac gccccctatt gacgtcaatg 2880
acggtaaatg gcccgcctgg cattatgccc agtacatgac cttatgggac tttcctactt 2940
ggcagtacat ctacgtatta gtcatcgcta ttaccatggt gatgcggttt tggcagtaca 3000
tcaatgggcg tggatagcgg tttgactcac ggggatttcc aagtctccac cccattgacg 3060
tcaatgggag tttgttttgg caccaaaatc aacgggactt tccaaaatgt cgtaacaact 3120
ccgccccatt gacgcaaatg ggcggtaggc gtgtacggtg ggaggtctat ataagcagag 3180
ctggtttagt gaaccgtcag atcaggtacc 3210
<210> 49
<211> 769
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV1-1_TRAC
<400> 49
gccaccatgt ggggagcttt ccttctctat gtttccatga agatgggagg cactgcagga 60
caaagccttg agcagccctc tgaagtgaca gctgtggaag gagccattgt ccagataaac 120
tgcacgtacc agacatctgg gttttatggg ctgtcctggt accagcaaca tgatggcgga 180
gcacccacat ttctttctta caatgctctg gatggtttgg aggagacagg tcgtttttct 240
tcattcctta gtcgctctga tagttatggt tacctccttc tacaggagct ccagatgaaa 300
gactctgcct cttacttctg cagagacctt gcggccgcat aggtctcacc agaaccctga 360
ccctgccgtg taccagctga gagactctaa atccagtgac aagtctgtct gcctattcac 420
cgattttgat tctcaaacaa atgtgtcaca aagtaaggat tctgatgtgt atatcacaga 480
caaaactgtg ctagacatga ggtctatgga cttcaagagc aacagtgctg tggcctggag 540
caacaaatct gactttgcat gtgcaaacgc cttcaacaac agcattattc cagaggacac 600
cttcttcccc agcccagaaa gttcctgtga tgtcaagctg gtcgagaaaa gctttgaaac 660
agatacgaac ctaaactttc aaaacctgtc agtgattggg ttccgaatcc tcctcctgaa 720
agtggccggg tttaatctgc tcatgacgct gcggctgtgg tccagctga 769
<210> 50
<211> 769
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV1-2_TRAC
<400> 50
gccaccatgt ggggagtttt ccttctttat gtttccatga agatgggagg cactacagga 60
caaaacattg accagcccac tgagatgaca gctacggaag gtgccattgt ccagatcaac 120
tgcacgtacc agacatctgg gttcaacggg ctgttctggt accagcaaca tgctggcgaa 180
gcacccacat ttctgtctta caatgttctg gatggtttgg aggagaaagg tcgtttttct 240
tcattcctta gtcggtctaa agggtacagt tacctccttt tgaaggagct ccagatgaaa 300
gactctgcct cttacctctg cagagacctt gcggccgcat aggtctcacc agaaccctga 360
ccctgccgtg taccagctga gagactctaa atccagtgac aagtctgtct gcctattcac 420
cgattttgat tctcaaacaa atgtgtcaca aagtaaggat tctgatgtgt atatcacaga 480
caaaactgtg ctagacatga ggtctatgga cttcaagagc aacagtgctg tggcctggag 540
caacaaatct gactttgcat gtgcaaacgc cttcaacaac agcattattc cagaggacac 600
cttcttcccc agcccagaaa gttcctgtga tgtcaagctg gtcgagaaaa gctttgaaac 660
agatacgaac ctaaactttc aaaacctgtc agtgattggg ttccgaatcc tcctcctgaa 720
agtggccggg tttaatctgc tcatgacgct gcggctgtgg tccagctga 769
<210> 51
<211> 781
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV2_TRAC
<400> 51
gccaccatgg ctttgcagag cactctgggg gcggtgtggc tagggcttct cctcaactct 60
ctctggaagg ttgcagaaag caaggaccaa gtgtttcagc cttccacagt ggcatcttca 120
gagggagctg tggtggaaat cttctgtaat cactctgtgt ccaatgctta caacttcttc 180
tggtaccttc acttcccggg atgtgcacca agactccttg ttaaaggctc aaagccttct 240
cagcagggac gatacaacat gacctatgaa cggttctctt catcgctgct catcctccag 300
gtgcgggagg cagatgctgc tgtttactac tgcagagacc ttgcggccgc ataggtctca 360
ccagaaccct gaccctgccg tgtaccagct gagagactct aaatccagtg acaagtctgt 420
ctgcctattc accgattttg attctcaaac aaatgtgtca caaagtaagg attctgatgt 480
gtatatcaca gacaaaactg tgctagacat gaggtctatg gacttcaaga gcaacagtgc 540
tgtggcctgg agcaacaaat ctgactttgc atgtgcaaac gccttcaaca acagcattat 600
tccagaggac accttcttcc ccagcccaga aagttcctgt gatgtcaagc tggtcgagaa 660
aagctttgaa acagatacga acctaaactt tcaaaacctg tcagtgattg ggttccgaat 720
cctcctcctg aaagtggccg ggtttaatct gctcatgacg ctgcggctgt ggtccagctg 780
a 781
<210> 52
<211> 784
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV3_TRAC
<400> 52
gccaccatgg cctctgcacc catctcgatg cttgcgatgc tcttcacatt gagtgggctg 60
agagctcagt cagtggctca gccggaagat caggtcaacg ttgctgaagg gaatcctctg 120
actgtgaaat gcacctattc agtctctgga aacccttatc ttttttggta tgttcaatac 180
cccaaccgag gcctccagtt ccttctgaaa tacatcacag gggataacct ggttaaaggc 240
agctatggct ttgaagctga atttaacaag agccaaacct ccttccacct gaagaaacca 300
tctgcccttg tgagcgactc cgctttgtac ttctgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcaccagaac cctgaccctg ccgtgtacca gctgagagac tctaaatcca gtgacaagtc 420
tgtctgccta ttcaccgatt ttgattctca aacaaatgtg tcacaaagta aggattctga 480
tgtgtatatc acagacaaaa ctgtgctaga catgaggtct atggacttca agagcaacag 540
tgctgtggcc tggagcaaca aatctgactt tgcatgtgca aacgccttca acaacagcat 600
tattccagag gacaccttct tccccagccc agaaagttcc tgtgatgtca agctggtcga 660
gaaaagcttt gaaacagata cgaacctaaa ctttcaaaac ctgtcagtga ttgggttccg 720
aatcctcctc ctgaaagtgg ccgggtttaa tctgctcatg acgctgcggc tgtggtccag 780
ctga 784
<210> 53
<211> 769
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV4_TRAC
<400> 53
gccaccatga ggcaagtggc gagagtgatc gtgttcctga ccctgagtac tttgagcctt 60
gctaagacca cccagcccat ctccatggac tcatatgaag gacaagaagt gaacataacc 120
tgtagccaca acaacattgc tacaaatgat tatatcacgt ggtaccaaca gtttcccagc 180
caaggaccac gatttattat tcaaggatac aagacaaaag ttacaaacga agtggcctcc 240
ctgtttatcc ctgccgacag aaagtccagc actctgagcc tgccccgggt ttccctgagc 300
gacactgctg tgtactactg cagagacctt gcggccgcat aggtctcacc agaaccctga 360
ccctgccgtg taccagctga gagactctaa atccagtgac aagtctgtct gcctattcac 420
cgattttgat tctcaaacaa atgtgtcaca aagtaaggat tctgatgtgt atatcacaga 480
caaaactgtg ctagacatga ggtctatgga cttcaagagc aacagtgctg tggcctggag 540
caacaaatct gactttgcat gtgcaaacgc cttcaacaac agcattattc cagaggacac 600
cttcttcccc agcccagaaa gttcctgtga tgtcaagctg gtcgagaaaa gctttgaaac 660
agatacgaac ctaaactttc aaaacctgtc agtgattggg ttccgaatcc tcctcctgaa 720
agtggccggg tttaatctgc tcatgacgct gcggctgtgg tccagctga 769
<210> 54
<211> 784
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV5_TRAC
<400> 54
gccaccatga aaacatttgc tggattttcg ttcctgtttt tgtggctgca gctggactgt 60
atgagtagag gagaggatgt ggagcagagt cttttcctga gtgtccgaga gggagacagc 120
tccgttataa actgcactta cacagacagc tcctccacct acttatactg gtataagcaa 180
gaacctggag caggtctaca gttgctgacg tatatttttt caaatatgga catgaaacaa 240
gaccaaagac tcactgttct attgaataaa aaggataaac atctgtctct gcgcattgca 300
gacacccaga ctggggactc agctatctac ttctgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcaccagaac cctgaccctg ccgtgtacca gctgagagac tctaaatcca gtgacaagtc 420
tgtctgccta ttcaccgatt ttgattctca aacaaatgtg tcacaaagta aggattctga 480
tgtgtatatc acagacaaaa ctgtgctaga catgaggtct atggacttca agagcaacag 540
tgctgtggcc tggagcaaca aatctgactt tgcatgtgca aacgccttca acaacagcat 600
tattccagag gacaccttct tccccagccc agaaagttcc tgtgatgtca agctggtcga 660
gaaaagcttt gaaacagata cgaacctaaa ctttcaaaac ctgtcagtga ttgggttccg 720
aatcctcctc ctgaaagtgg ccgggtttaa tctgctcatg acgctgcggc tgtggtccag 780
ctga 784
<210> 55
<211> 784
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV6_TRAC
<400> 55
gccaccatgg agtcattcct gggaggtgtt ttgctgattt tgtggcttca agtggactgg 60
gtgaagagcc aaaagataga acagaattcc gaggccctga acattcagga gggtaaaacg 120
gccaccctga cctgcaacta tacaaactat tccccagcat acttacagtg gtaccgacaa 180
gatccaggaa gaggccctgt tttcttgcta ctcatacgtg aaaatgagaa agaaaaaagg 240
aaagaaagac tgaaggtcac ctttgatacc acccttaaac agagtttgtt tcatatcaca 300
gcctcccagc ctgcagactc agctacctac ctctgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcaccagaac cctgaccctg ccgtgtacca gctgagagac tctaaatcca gtgacaagtc 420
tgtctgccta ttcaccgatt ttgattctca aacaaatgtg tcacaaagta aggattctga 480
tgtgtatatc acagacaaaa ctgtgctaga catgaggtct atggacttca agagcaacag 540
tgctgtggcc tggagcaaca aatctgactt tgcatgtgca aacgccttca acaacagcat 600
tattccagag gacaccttct tccccagccc agaaagttcc tgtgatgtca agctggtcga 660
gaaaagcttt gaaacagata cgaacctaaa ctttcaaaac ctgtcagtga ttgggttccg 720
aatcctcctc ctgaaagtgg ccgggtttaa tctgctcatg acgctgcggc tgtggtccag 780
ctga 784
<210> 56
<211> 781
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV7_TRAC
<400> 56
gccaccatgg agaagatgcg tagacctgtc ctaattatat tttgtctatg tcttggctgg 60
gcaaatggag aaaaccaggt ggagcacagc cctcattttc tgggacccca gcagggagac 120
gttgcctcca tgagctgcac gtactctgtc agtcgtttta acaatttgca gtggtacagg 180
caaaatacag ggatgggtcc caaacaccta ttatccatgt attcagctgg atatgagaag 240
cagaaaggaa ggctaaatgc tacattactg aagaatggaa gcagcttgta cattacagcc 300
gtgcagcctg aagattcagc cacctatttc tgcagagacc ttgcggccgc ataggtctca 360
ccagaaccct gaccctgccg tgtaccagct gagagactct aaatccagtg acaagtctgt 420
ctgcctattc accgattttg attctcaaac aaatgtgtca caaagtaagg attctgatgt 480
gtatatcaca gacaaaactg tgctagacat gaggtctatg gacttcaaga gcaacagtgc 540
tgtggcctgg agcaacaaat ctgactttgc atgtgcaaac gccttcaaca acagcattat 600
tccagaggac accttcttcc ccagcccaga aagttcctgt gatgtcaagc tggtcgagaa 660
aagctttgaa acagatacga acctaaactt tcaaaacctg tcagtgattg ggttccgaat 720
cctcctcctg aaagtggccg ggtttaatct gctcatgacg ctgcggctgt ggtccagctg 780
a 781
<210> 57
<211> 784
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV8-1_TRAC
<400> 57
gccaccatgc tcctgttgct cataccagtg ctggggatga tttttgccct gagagatgcc 60
agagcccagt ctgtgagcca gcataaccac cacgtaattc tctctgaagc agcctcactg 120
gagttgggat gcaactattc ctatggtgga actgttaatc tcttctggta tgtccagtac 180
cctggtcaac accttcagct tctcctcaag tacttttcag gggatccact ggttaaaggc 240
atcaagggct ttgaggctga atttataaag agtaaattct cctttaatct gaggaaaccc 300
tctgtgcagt ggagtgacac agctgagtac ttctgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcaccagaac cctgaccctg ccgtgtacca gctgagagac tctaaatcca gtgacaagtc 420
tgtctgccta ttcaccgatt ttgattctca aacaaatgtg tcacaaagta aggattctga 480
tgtgtatatc acagacaaaa ctgtgctaga catgaggtct atggacttca agagcaacag 540
tgctgtggcc tggagcaaca aatctgactt tgcatgtgca aacgccttca acaacagcat 600
tattccagag gacaccttct tccccagccc agaaagttcc tgtgatgtca agctggtcga 660
gaaaagcttt gaaacagata cgaacctaaa ctttcaaaac ctgtcagtga ttgggttccg 720
aatcctcctc ctgaaagtgg ccgggtttaa tctgctcatg acgctgcggc tgtggtccag 780
ctga 784
<210> 58
<211> 784
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV8-2_TRAC
<400> 58
gccaccatgc tcctgctgct cgtcccagtg ctcgaggtga tttttactct gggaggaacc 60
agagcccagt cggtgaccca gcttgacagc cacgtctctg tctctgaagg aaccccggtg 120
ctgctgaggt gcaactactc atcttcttat tcaccatctc tcttctggta tgtgcaacac 180
cccaacaaag gactccagct tctcctgaag tacacatcag cggccaccct ggttaaaggc 240
atcaacggtt ttgaggctga atttaagaag agtgaaacct ccttccacct gacgaaaccc 300
tcagcccata tgagcgacgc ggctgagtac ttctgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcaccagaac cctgaccctg ccgtgtacca gctgagagac tctaaatcca gtgacaagtc 420
tgtctgccta ttcaccgatt ttgattctca aacaaatgtg tcacaaagta aggattctga 480
tgtgtatatc acagacaaaa ctgtgctaga catgaggtct atggacttca agagcaacag 540
tgctgtggcc tggagcaaca aatctgactt tgcatgtgca aacgccttca acaacagcat 600
tattccagag gacaccttct tccccagccc agaaagttcc tgtgatgtca agctggtcga 660
gaaaagcttt gaaacagata cgaacctaaa ctttcaaaac ctgtcagtga ttgggttccg 720
aatcctcctc ctgaaagtgg ccgggtttaa tctgctcatg acgctgcggc tgtggtccag 780
ctga 784
<210> 59
<211> 784
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV8-3_TRAC
<400> 59
gccaccatgc tcctggagct tatcccactg ctggggatac attttgtcct gagaactgcc 60
agagcccagt cagtgaccca gcctgacatc cacatcactg tctctgaagg agcctcactg 120
gagttgagat gtaactattc ctatggggca acaccttatc tcttctggta tgtccagtcc 180
cccggccaag gcctccagct gctcctgaag tacttttcag gagacactct ggttcaaggc 240
attaaaggct ttgaggctga atttaagagg agtcaatctt ccttcaatct gaggaaaccc 300
tctgtgcatt ggagtgatgc tgctgagtac ttctgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcaccagaac cctgaccctg ccgtgtacca gctgagagac tctaaatcca gtgacaagtc 420
tgtctgccta ttcaccgatt ttgattctca aacaaatgtg tcacaaagta aggattctga 480
tgtgtatatc acagacaaaa ctgtgctaga catgaggtct atggacttca agagcaacag 540
tgctgtggcc tggagcaaca aatctgactt tgcatgtgca aacgccttca acaacagcat 600
tattccagag gacaccttct tccccagccc agaaagttcc tgtgatgtca agctggtcga 660
gaaaagcttt gaaacagata cgaacctaaa ctttcaaaac ctgtcagtga ttgggttccg 720
aatcctcctc ctgaaagtgg ccgggtttaa tctgctcatg acgctgcggc tgtggtccag 780
ctga 784
<210> 60
<211> 784
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV8-4_TRAC
<400> 60
gccaccatgc tcctgctgct cgtcccagtg ctcgaggtga tttttaccct gggaggaacc 60
agagcccagt cggtgaccca gcttggcagc cacgtctctg tctctgaagg agccctggtt 120
ctgctgaggt gcaactactc atcgtctgtt ccaccatatc tcttctggta tgtgcaatac 180
cccaaccaag gactccagct tctcctgaag tacacatcag cggccaccct ggttaaaggc 240
atcaacggtt ttgaggctga atttaagaag agtgaaacct ccttccacct gacgaaaccc 300
tcagcccata tgagcgacgc ggctgagtac ttctgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcaccagaac cctgaccctg ccgtgtacca gctgagagac tctaaatcca gtgacaagtc 420
tgtctgccta ttcaccgatt ttgattctca aacaaatgtg tcacaaagta aggattctga 480
tgtgtatatc acagacaaaa ctgtgctaga catgaggtct atggacttca agagcaacag 540
tgctgtggcc tggagcaaca aatctgactt tgcatgtgca aacgccttca acaacagcat 600
tattccagag gacaccttct tccccagccc agaaagttcc tgtgatgtca agctggtcga 660
gaaaagcttt gaaacagata cgaacctaaa ctttcaaaac ctgtcagtga ttgggttccg 720
aatcctcctc ctgaaagtgg ccgggtttaa tctgctcatg acgctgcggc tgtggtccag 780
ctga 784
<210> 61
<211> 784
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV8-6_TRAC
<400> 61
gccaccatgc tcctgctgct cgtcccagcg ttccaggtga tttttaccct gggaggaacc 60
agagcccagt ctgtgaccca gcttgacagc caagtccctg tctttgaaga agcccctgtg 120
gagctgaggt gcaactactc atcgtctgtt tcagtgtatc tcttctggta tgtgcaatac 180
cccaaccaag gactccagct tctcctgaag tatttatcag gatccaccct ggttaaaggc 240
atcaacggtt ttgaggctga atttaacaag agtcaaactt ccttccactt gaggaaaccc 300
tcagtccata taagcgacac ggctgagtac ttctgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcaccagaac cctgaccctg ccgtgtacca gctgagagac tctaaatcca gtgacaagtc 420
tgtctgccta ttcaccgatt ttgattctca aacaaatgtg tcacaaagta aggattctga 480
tgtgtatatc acagacaaaa ctgtgctaga catgaggtct atggacttca agagcaacag 540
tgctgtggcc tggagcaaca aatctgactt tgcatgtgca aacgccttca acaacagcat 600
tattccagag gacaccttct tccccagccc agaaagttcc tgtgatgtca agctggtcga 660
gaaaagcttt gaaacagata cgaacctaaa ctttcaaaac ctgtcagtga ttgggttccg 720
aatcctcctc ctgaaagtgg ccgggtttaa tctgctcatg acgctgcggc tgtggtccag 780
ctga 784
<210> 62
<211> 781
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV8-7_TRAC
<400> 62
gccaccatgc tcttagtggt cattctgctg cttggaatgt tcttcacact gagaaccaga 60
acccagtcgg tgacccagct tgatggccac atcactgtct ctgaagaagc ccctctggaa 120
ctgaagtgca actattccta tagtggagtt ccttctctct tctggtatgt ccaatactct 180
agccaaagcc tccagcttct cctcaaagac ctaacagagg ccacccaggt taaaggcatc 240
agaggttttg aggctgaatt taagaagagc gaaacctcct tctacctgag gaaaccatca 300
acccatgtga gtgatgctgc tgagtacttc tgcagagacc ttgcggccgc ataggtctca 360
ccagaaccct gaccctgccg tgtaccagct gagagactct aaatccagtg acaagtctgt 420
ctgcctattc accgattttg attctcaaac aaatgtgtca caaagtaagg attctgatgt 480
gtatatcaca gacaaaactg tgctagacat gaggtctatg gacttcaaga gcaacagtgc 540
tgtggcctgg agcaacaaat ctgactttgc atgtgcaaac gccttcaaca acagcattat 600
tccagaggac accttcttcc ccagcccaga aagttcctgt gatgtcaagc tggtcgagaa 660
aagctttgaa acagatacga acctaaactt tcaaaacctg tcagtgattg ggttccgaat 720
cctcctcctg aaagtggccg ggtttaatct gctcatgacg ctgcggctgt ggtccagctg 780
a 781
<210> 63
<211> 781
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV9-1_TRAC
<400> 63
gccaccatga attcttctcc aggaccagcg attgcactat tcttaatgtt tgggggaatc 60
aatggagatt cagtggtcca gacagaaggc caagtgctcc cctctgaagg ggattccctg 120
attgtgaact gctcctatga aaccacacag tacccttccc ttttttggta tgtccaatat 180
cctggagaag gtccacagct ccacctgaaa gccatgaagg ccaatgacaa gggaaggaac 240
aaaggttttg aagccatgta ccgtaaagaa accacttctt tccacttgga gaaagactca 300
gttcaagagt cagactccgc tgtgtacttc tgcagagacc ttgcggccgc ataggtctca 360
ccagaaccct gaccctgccg tgtaccagct gagagactct aaatccagtg acaagtctgt 420
ctgcctattc accgattttg attctcaaac aaatgtgtca caaagtaagg attctgatgt 480
gtatatcaca gacaaaactg tgctagacat gaggtctatg gacttcaaga gcaacagtgc 540
tgtggcctgg agcaacaaat ctgactttgc atgtgcaaac gccttcaaca acagcattat 600
tccagaggac accttcttcc ccagcccaga aagttcctgt gatgtcaagc tggtcgagaa 660
aagctttgaa acagatacga acctaaactt tcaaaacctg tcagtgattg ggttccgaat 720
cctcctcctg aaagtggccg ggtttaatct gctcatgacg ctgcggctgt ggtccagctg 780
a 781
<210> 64
<211> 781
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV9-2_TRAC
<400> 64
gccaccatga actattctcc aggcttagta tctctgatac tcttactgct tggaagaacc 60
cgtggaaatt cagtgaccca gatggaaggg ccagtgactc tctcagaaga ggccttcctg 120
actataaact gcacgtacac agccacagga tacccttccc ttttctggta tgtccaatat 180
cctggagaag gtctacagct cctcctgaaa gccacgaagg ctgatgacaa gggaagcaac 240
aaaggttttg aagccacata ccgtaaagaa accacttctt tccacttgga gaaaggctca 300
gttcaagtgt cagactcagc ggtgtacttc tgcagagacc ttgcggccgc ataggtctca 360
ccagaaccct gaccctgccg tgtaccagct gagagactct aaatccagtg acaagtctgt 420
ctgcctattc accgattttg attctcaaac aaatgtgtca caaagtaagg attctgatgt 480
gtatatcaca gacaaaactg tgctagacat gaggtctatg gacttcaaga gcaacagtgc 540
tgtggcctgg agcaacaaat ctgactttgc atgtgcaaac gccttcaaca acagcattat 600
tccagaggac accttcttcc ccagcccaga aagttcctgt gatgtcaagc tggtcgagaa 660
aagctttgaa acagatacga acctaaactt tcaaaacctg tcagtgattg ggttccgaat 720
cctcctcctg aaagtggccg ggtttaatct gctcatgacg ctgcggctgt ggtccagctg 780
a 781
<210> 65
<211> 787
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV10_TRAC
<400> 65
gccaccatga aaaagcatct gacgaccttc ttggtgattt tgtggcttta tttttatagg 60
gggaatggca aaaaccaagt ggagcagagt cctcagtccc tgatcatcct ggagggaaag 120
aactgcactc ttcaatgcaa ttatacagtg agccccttca gcaacttaag gtggtataag 180
caagatactg ggagaggtcc tgtttccctg acaatcatga ctttcagtga gaacacaaag 240
tcgaacggaa gatatacagc aactctggat gcagacacaa agcaaagctc tctgcacatc 300
acagcctccc agctcagcga ttcagcctcc tacatctgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcaccag aaccctgacc ctgccgtgta ccagctgaga gactctaaat ccagtgacaa 420
gtctgtctgc ctattcaccg attttgattc tcaaacaaat gtgtcacaaa gtaaggattc 480
tgatgtgtat atcacagaca aaactgtgct agacatgagg tctatggact tcaagagcaa 540
cagtgctgtg gcctggagca acaaatctga ctttgcatgt gcaaacgcct tcaacaacag 600
cattattcca gaggacacct tcttccccag cccagaaagt tcctgtgatg tcaagctggt 660
cgagaaaagc tttgaaacag atacgaacct aaactttcaa aacctgtcag tgattgggtt 720
ccgaatcctc ctcctgaaag tggccgggtt taatctgctc atgacgctgc ggctgtggtc 780
cagctga 787
<210> 66
<211> 781
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV12-1_TRAC
<400> 66
gccaccatga tatccttgag agttttactg gtgatcctgt ggcttcagtt aagctgggtt 60
tggagccaac ggaaggaggt ggagcaggat cctggaccct tcaatgttcc agagggagcc 120
actgtcgctt tcaactgtac ttacagcaac agtgcttctc agtctttctt ctggtacaga 180
caggattgca ggaaagaacc taagttgctg atgtccgtat actccagtgg taatgaagat 240
ggaaggttta cagcacagct caatagagcc agccagtata tttccctgct catcagagac 300
tccaagctca gtgattcagc cacctacctc tgcagagacc ttgcggccgc ataggtctca 360
ccagaaccct gaccctgccg tgtaccagct gagagactct aaatccagtg acaagtctgt 420
ctgcctattc accgattttg attctcaaac aaatgtgtca caaagtaagg attctgatgt 480
gtatatcaca gacaaaactg tgctagacat gaggtctatg gacttcaaga gcaacagtgc 540
tgtggcctgg agcaacaaat ctgactttgc atgtgcaaac gccttcaaca acagcattat 600
tccagaggac accttcttcc ccagcccaga aagttcctgt gatgtcaagc tggtcgagaa 660
aagctttgaa acagatacga acctaaactt tcaaaacctg tcagtgattg ggttccgaat 720
cctcctcctg aaagtggccg ggtttaatct gctcatgacg ctgcggctgt ggtccagctg 780
a 781
<210> 67
<211> 787
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV12-2_TRAC
<400> 67
gccaccatga tgaaatcctt gagagtttta ctagtgatcc tgtggcttca gttgagctgg 60
gtttggagcc aacagaagga ggtggagcag aattctggac ccctcagtgt tccagaggga 120
gccattgcct ctctcaactg cacttacagt gaccgaggtt cccagtcctt cttctggtac 180
agacaatatt ctgggaaaag ccctgagttg ataatgttca tatactccaa tggtgacaaa 240
gaagatggaa ggtttacagc acagctcaat aaagccagcc agtatgtttc tctgctcatc 300
agagactccc agcccagtga ttcagccacc tacctctgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcaccag aaccctgacc ctgccgtgta ccagctgaga gactctaaat ccagtgacaa 420
gtctgtctgc ctattcaccg attttgattc tcaaacaaat gtgtcacaaa gtaaggattc 480
tgatgtgtat atcacagaca aaactgtgct agacatgagg tctatggact tcaagagcaa 540
cagtgctgtg gcctggagca acaaatctga ctttgcatgt gcaaacgcct tcaacaacag 600
cattattcca gaggacacct tcttccccag cccagaaagt tcctgtgatg tcaagctggt 660
cgagaaaagc tttgaaacag atacgaacct aaactttcaa aacctgtcag tgattgggtt 720
ccgaatcctc ctcctgaaag tggccgggtt taatctgctc atgacgctgc ggctgtggtc 780
cagctga 787
<210> 68
<211> 787
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV12-3_TRAC
<400> 68
gccaccatga tgaaatcctt gagagtttta ctggtgatcc tgtggcttca gttaagctgg 60
gtttggagcc aacagaagga ggtggagcag gatcctggac cactcagtgt tccagaggga 120
gccattgttt ctctcaactg cacttacagc aacagtgctt ttcaatactt catgtggtac 180
agacagtatt ccagaaaagg ccctgagttg ctgatgtaca catactccag tggtaacaaa 240
gaagatggaa ggtttacagc acaggtcgat aaatccagca agtatatctc cttgttcatc 300
agagactcac agcccagtga ttcagccacc tacctctgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcaccag aaccctgacc ctgccgtgta ccagctgaga gactctaaat ccagtgacaa 420
gtctgtctgc ctattcaccg attttgattc tcaaacaaat gtgtcacaaa gtaaggattc 480
tgatgtgtat atcacagaca aaactgtgct agacatgagg tctatggact tcaagagcaa 540
cagtgctgtg gcctggagca acaaatctga ctttgcatgt gcaaacgcct tcaacaacag 600
cattattcca gaggacacct tcttccccag cccagaaagt tcctgtgatg tcaagctggt 660
cgagaaaagc tttgaaacag atacgaacct aaactttcaa aacctgtcag tgattgggtt 720
ccgaatcctc ctcctgaaag tggccgggtt taatctgctc atgacgctgc ggctgtggtc 780
cagctga 787
<210> 69
<211> 781
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV13-1_TRAC
<400> 69
gccaccatga catccattcg agctgtattt atattcctgt ggctgcagct ggacttggtg 60
aatggagaga atgtggagca gcatccttca accctgagtg tccaggaggg agacagcgct 120
gttatcaagt gtacttattc agacagtgcc tcaaactact tcccttggta taagcaagaa 180
cttggaaaag gacctcagct tattatagac attcgttcaa atgtgggcga aaagaaagac 240
caacgaattg ctgttacatt gaacaagaca gccaaacatt tctccctgca catcacagaa 300
acccaacctg aggactcggc tgtctacttc tgcagagacc ttgcggccgc ataggtctca 360
ccagaaccct gaccctgccg tgtaccagct gagagactct aaatccagtg acaagtctgt 420
ctgcctattc accgattttg attctcaaac aaatgtgtca caaagtaagg attctgatgt 480
gtatatcaca gacaaaactg tgctagacat gaggtctatg gacttcaaga gcaacagtgc 540
tgtggcctgg agcaacaaat ctgactttgc atgtgcaaac gccttcaaca acagcattat 600
tccagaggac accttcttcc ccagcccaga aagttcctgt gatgtcaagc tggtcgagaa 660
aagctttgaa acagatacga acctaaactt tcaaaacctg tcagtgattg ggttccgaat 720
cctcctcctg aaagtggccg ggtttaatct gctcatgacg ctgcggctgt ggtccagctg 780
a 781
<210> 70
<211> 784
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV13-2_TRAC
<400> 70
gccaccatgg caggcattcg agctttattt atgtacttgt ggctgcagct ggactgggtg 60
agcagaggag agagtgtggg gctgcatctt cctaccctga gtgtccagga gggtgacaac 120
tctattatca actgtgctta ttcaaacagc gcctcagact acttcatttg gtacaagcaa 180
gaatctggaa aaggtcctca attcattata gacattcgtt caaatatgga caaaaggcaa 240
ggccaaagag tcaccgtttt attgaataag acagtgaaac atctctctct gcaaattgca 300
gctactcaac ctggagactc agctgtctac ttctgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcaccagaac cctgaccctg ccgtgtacca gctgagagac tctaaatcca gtgacaagtc 420
tgtctgccta ttcaccgatt ttgattctca aacaaatgtg tcacaaagta aggattctga 480
tgtgtatatc acagacaaaa ctgtgctaga catgaggtct atggacttca agagcaacag 540
tgctgtggcc tggagcaaca aatctgactt tgcatgtgca aacgccttca acaacagcat 600
tattccagag gacaccttct tccccagccc agaaagttcc tgtgatgtca agctggtcga 660
gaaaagcttt gaaacagata cgaacctaaa ctttcaaaac ctgtcagtga ttgggttccg 720
aatcctcctc ctgaaagtgg ccgggtttaa tctgctcatg acgctgcggc tgtggtccag 780
ctga 784
<210> 71
<211> 790
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV14DV4_TRAC
<400> 71
gccaccatgt cactttctag cctgctgaag gtggtcacag cttcactgtg gctaggacct 60
ggcattgccc agaagataac tcaaacccaa ccaggaatgt tcgtgcagga aaaggaggct 120
gtgactctgg actgcacata tgacaccagt gatcaaagtt atggtctatt ctggtacaag 180
cagcccagca gtggggaaat gatttttctt atttatcagg ggtcttatga cgagcaaaat 240
gcaacagaag gtcgctactc attgaatttc cagaaggcaa gaaaatccgc caaccttgtc 300
atctccgctt cacaactggg ggactcagca atgtatttct gcagagacct tgcggccgca 360
taggtctcac cagaaccctg accctgccgt gtaccagctg agagactcta aatccagtga 420
caagtctgtc tgcctattca ccgattttga ttctcaaaca aatgtgtcac aaagtaagga 480
ttctgatgtg tatatcacag acaaaactgt gctagacatg aggtctatgg acttcaagag 540
caacagtgct gtggcctgga gcaacaaatc tgactttgca tgtgcaaacg ccttcaacaa 600
cagcattatt ccagaggaca ccttcttccc cagcccagaa agttcctgtg atgtcaagct 660
ggtcgagaaa agctttgaaa cagatacgaa cctaaacttt caaaacctgt cagtgattgg 720
gttccgaatc ctcctcctga aagtggccgg gtttaatctg ctcatgacgc tgcggctgtg 780
gtccagctga 790
<210> 72
<211> 772
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV16_TRAC
<400> 72
gccaccatga agcccaccct catctcagtg cttgtgataa tatttatact cagaggaaca 60
agagcccaga gagtgactca gcccgagaag ctcctctctg tctttaaagg ggccccagtg 120
gagctgaagt gcaactattc ctattctggg agtcctgaac tcttctggta tgtccagtac 180
tccagacaac gcctccagtt actcttgaga cacatctcta gagagagcat caaaggcttc 240
actgctgacc ttaacaaagg cgagacatct ttccacctga agaaaccatt tgctcaagag 300
gaagattcag ccatgtatta ctgcagagac cttgcggccg cataggtctc accagaaccc 360
tgaccctgcc gtgtaccagc tgagagactc taaatccagt gacaagtctg tctgcctatt 420
caccgatttt gattctcaaa caaatgtgtc acaaagtaag gattctgatg tgtatatcac 480
agacaaaact gtgctagaca tgaggtctat ggacttcaag agcaacagtg ctgtggcctg 540
gagcaacaaa tctgactttg catgtgcaaa cgccttcaac aacagcatta ttccagagga 600
caccttcttc cccagcccag aaagttcctg tgatgtcaag ctggtcgaga aaagctttga 660
aacagatacg aacctaaact ttcaaaacct gtcagtgatt gggttccgaa tcctcctcct 720
gaaagtggcc gggtttaatc tgctcatgac gctgcggctg tggtccagct ga 772
<210> 73
<211> 781
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV17_TRAC
<400> 73
gccaccatgg aaactctcct gggagtgtct ttggtgattc tatggcttca actggctagg 60
gtgaacagtc aacagggaga agaggatcct caggccttga gcatccagga gggtgaaaat 120
gccaccatga actgcagtta caaaactagt ataaacaatt tacagtggta tagacaaaat 180
tcaggtagag gccttgtcca cctaatttta atacgttcaa atgaaagaga gaaacacagt 240
ggaagattaa gagtcacgct tgacacttcc aagaaaagca gttccttgtt gatcacggct 300
tcccgggcag cagacactgc ttcttacttc tgcagagacc ttgcggccgc ataggtctca 360
ccagaaccct gaccctgccg tgtaccagct gagagactct aaatccagtg acaagtctgt 420
ctgcctattc accgattttg attctcaaac aaatgtgtca caaagtaagg attctgatgt 480
gtatatcaca gacaaaactg tgctagacat gaggtctatg gacttcaaga gcaacagtgc 540
tgtggcctgg agcaacaaat ctgactttgc atgtgcaaac gccttcaaca acagcattat 600
tccagaggac accttcttcc ccagcccaga aagttcctgt gatgtcaagc tggtcgagaa 660
aagctttgaa acagatacga acctaaactt tcaaaacctg tcagtgattg ggttccgaat 720
cctcctcctg aaagtggccg ggtttaatct gctcatgacg ctgcggctgt ggtccagctg 780
a 781
<210> 74
<211> 778
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV18_TRAC
<400> 74
gccaccatgc tgtctgcttc ctgctcagga cttgtgatct tgttgatatt cagaaggacc 60
agtggagact cggttaccca gacagaaggc ccagttaccc tccctgagag ggcagctctg 120
acattaaact gcacttatca gtccagctat tcaacttttc tattctggta tgtccagtat 180
ctaaacaaag agcctgagct cctcctgaaa agttcagaaa accaggagac ggacagcaga 240
ggttttcagg ccagtcctat caagagtgac agttccttcc acctggagaa gccctcggtg 300
cagctgtcgg actctgccgt gtactactgc agagaccttg cggccgcata ggtctcacca 360
gaaccctgac cctgccgtgt accagctgag agactctaaa tccagtgaca agtctgtctg 420
cctattcacc gattttgatt ctcaaacaaa tgtgtcacaa agtaaggatt ctgatgtgta 480
tatcacagac aaaactgtgc tagacatgag gtctatggac ttcaagagca acagtgctgt 540
ggcctggagc aacaaatctg actttgcatg tgcaaacgcc ttcaacaaca gcattattcc 600
agaggacacc ttcttcccca gcccagaaag ttcctgtgat gtcaagctgg tcgagaaaag 660
ctttgaaaca gatacgaacc taaactttca aaacctgtca gtgattgggt tccgaatcct 720
cctcctgaaa gtggccgggt ttaatctgct catgacgctg cggctgtggt ccagctga 778
<210> 75
<211> 790
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV19_TRAC
<400> 75
gccaccatgc tgactgccag cctgttgagg gcagtcatag cctccatctg tgttgtatcc 60
agcatggctc agaaggtaac tcaagcgcag actgaaattt ctgtggtgga gaaggaggat 120
gtgaccttgg actgtgtgta tgaaacccgt gatactactt attacttatt ctggtacaag 180
caaccaccaa gtggagaatt ggttttcctt attcgtcgga actcttttga tgagcaaaat 240
gaaataagtg gtcggtattc ttggaacttc cagaaatcca ccagttcctt caacttcacc 300
atcacagcct cacaagtcgt ggactcagca gtatacttct gcagagacct tgcggccgca 360
taggtctcac cagaaccctg accctgccgt gtaccagctg agagactcta aatccagtga 420
caagtctgtc tgcctattca ccgattttga ttctcaaaca aatgtgtcac aaagtaagga 480
ttctgatgtg tatatcacag acaaaactgt gctagacatg aggtctatgg acttcaagag 540
caacagtgct gtggcctgga gcaacaaatc tgactttgca tgtgcaaacg ccttcaacaa 600
cagcattatt ccagaggaca ccttcttccc cagcccagaa agttcctgtg atgtcaagct 660
ggtcgagaaa agctttgaaa cagatacgaa cctaaacttt caaaacctgt cagtgattgg 720
gttccgaatc ctcctcctga aagtggccgg gtttaatctg ctcatgacgc tgcggctgtg 780
gtccagctga 790
<210> 76
<211> 781
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV20_TRAC
<400> 76
gccaccatgg agaaaatgtt ggagtgtgca ttcatagtct tgtggcttca gcttggctgg 60
ttgagtggag aggaccaggt gacgcagagt cccgaggccc tgagactcca ggagggagag 120
agtagcagtc ttaactgcag ttacacagtc agcggtttaa gagggctgtt ctggtatagg 180
caagatcctg ggaaaggccc tgaattcctc ttcaccctgt attcagctgg ggaagaaaag 240
gagaaagaaa ggctaaaagc cacattaaca aagaaggaaa gctttctgca catcacagcc 300
cctaaacctg aggactcagc cacttatctc tgcagagacc ttgcggccgc ataggtctca 360
ccagaaccct gaccctgccg tgtaccagct gagagactct aaatccagtg acaagtctgt 420
ctgcctattc accgattttg attctcaaac aaatgtgtca caaagtaagg attctgatgt 480
gtatatcaca gacaaaactg tgctagacat gaggtctatg gacttcaaga gcaacagtgc 540
tgtggcctgg agcaacaaat ctgactttgc atgtgcaaac gccttcaaca acagcattat 600
tccagaggac accttcttcc ccagcccaga aagttcctgt gatgtcaagc tggtcgagaa 660
aagctttgaa acagatacga acctaaactt tcaaaacctg tcagtgattg ggttccgaat 720
cctcctcctg aaagtggccg ggtttaatct gctcatgacg ctgcggctgt ggtccagctg 780
a 781
<210> 77
<211> 781
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV21_TRAC
<400> 77
gccaccatgg agaccctctt gggcctgctt atcctttggc tgcagctgca atgggtgagc 60
agcaaacagg aggtgacgca gattcctgca gctctgagtg tcccagaagg agaaaacttg 120
gttctcaact gcagtttcac tgatagcgct atttacaacc tccagtggtt taggcaggac 180
cctgggaaag gactcacatc tctgttgctt attcagtcaa gtcagagaga gcaaacaagt 240
ggacgcctta atgcctcgct ggataaatca tcaggacgta gtactttata cattgcagct 300
tctcagcctg gtgactcagc cacctacctc tgcagagacc ttgcggccgc ataggtctca 360
ccagaaccct gaccctgccg tgtaccagct gagagactct aaatccagtg acaagtctgt 420
ctgcctattc accgattttg attctcaaac aaatgtgtca caaagtaagg attctgatgt 480
gtatatcaca gacaaaactg tgctagacat gaggtctatg gacttcaaga gcaacagtgc 540
tgtggcctgg agcaacaaat ctgactttgc atgtgcaaac gccttcaaca acagcattat 600
tccagaggac accttcttcc ccagcccaga aagttcctgt gatgtcaagc tggtcgagaa 660
aagctttgaa acagatacga acctaaactt tcaaaacctg tcagtgattg ggttccgaat 720
cctcctcctg aaagtggccg ggtttaatct gctcatgacg ctgcggctgt ggtccagctg 780
a 781
<210> 78
<211> 775
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV22_TRAC
<400> 78
gccaccatga agaggatatt gggagctctg ctggggctct tgagtgccca ggtttgctgt 60
gtgagaggaa tacaagtgga gcagagtcct ccagacctga ttctccagga gggagccaat 120
tccacgctgc ggtgcaattt ttctgactct gtgaacaatt tgcagtggtt tcatcaaaac 180
ccttggggac agctcatcaa cctgttttac attccctcag ggacaaaaca gaatggaaga 240
ttaagcgcca cgactgtcgc tacggaacgc tacagcttat tgtacatttc ctcttcccag 300
accacagact caggcgttta tttctgcaga gaccttgcgg ccgcataggt ctcaccagaa 360
ccctgaccct gccgtgtacc agctgagaga ctctaaatcc agtgacaagt ctgtctgcct 420
attcaccgat tttgattctc aaacaaatgt gtcacaaagt aaggattctg atgtgtatat 480
cacagacaaa actgtgctag acatgaggtc tatggacttc aagagcaaca gtgctgtggc 540
ctggagcaac aaatctgact ttgcatgtgc aaacgccttc aacaacagca ttattccaga 600
ggacaccttc ttccccagcc cagaaagttc ctgtgatgtc aagctggtcg agaaaagctt 660
tgaaacagat acgaacctaa actttcaaaa cctgtcagtg attgggttcc gaatcctcct 720
cctgaaagtg gccgggttta atctgctcat gacgctgcgg ctgtggtcca gctga 775
<210> 79
<211> 808
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV23DV6_TRAC
<400> 79
gccaccatgg acaagatctt aggagcatca tttttagttc tgtggcttca actatgctgg 60
gtgagtggcc aacagaagga gaaaagtgac cagcagcagg tgaaacaaag tcctcaatct 120
ttgatagtcc agaaaggagg gatttcaatt ataaactgtg cttatgagaa cactgcgttt 180
gactactttc catggtacca acaattccct gggaaaggcc ctgcattatt gatagccata 240
cgtccagatg tgagtgaaaa gaaagaagga agattcacaa tctccttcaa taaaagtgcc 300
aagcagttct cattgcatat catggattcc cagcctggag actcagccac ctacttctgc 360
agagaccttg cggccgcata ggtctcacca gaaccctgac cctgccgtgt accagctgag 420
agactctaaa tccagtgaca agtctgtctg cctattcacc gattttgatt ctcaaacaaa 480
tgtgtcacaa agtaaggatt ctgatgtgta tatcacagac aaaactgtgc tagacatgag 540
gtctatggac ttcaagagca acagtgctgt ggcctggagc aacaaatctg actttgcatg 600
tgcaaacgcc ttcaacaaca gcattattcc agaggacacc ttcttcccca gcccagaaag 660
ttcctgtgat gtcaagctgg tcgagaaaag ctttgaaaca gatacgaacc taaactttca 720
aaacctgtca gtgattgggt tccgaatcct cctcctgaaa gtggccgggt ttaatctgct 780
catgacgctg cggctgtggt ccagctga 808
<210> 80
<211> 790
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV24_TRAC
<400> 80
gccaccatgg agaagaatcc tttggcagcc ccattactaa tcctctggtt tcatcttgac 60
tgcgtgagca gcatactgaa cgtggaacaa agtcctcagt cactgcatgt tcaggaggga 120
gacagcacca atttcacctg cagcttccct tccagcaatt tttatgcctt acactggtac 180
agatgggaaa ctgcaaaaag ccccgaggcc ttgtttgtaa tgactttaaa tggggatgaa 240
aagaagaaag gacgaataag tgccactctt aataccaagg agggttacag ctatttgtac 300
atcaaaggat cccagcctga agattcagcc acatacctct gcagagacct tgcggccgca 360
taggtctcac cagaaccctg accctgccgt gtaccagctg agagactcta aatccagtga 420
caagtctgtc tgcctattca ccgattttga ttctcaaaca aatgtgtcac aaagtaagga 480
ttctgatgtg tatatcacag acaaaactgt gctagacatg aggtctatgg acttcaagag 540
caacagtgct gtggcctgga gcaacaaatc tgactttgca tgtgcaaacg ccttcaacaa 600
cagcattatt ccagaggaca ccttcttccc cagcccagaa agttcctgtg atgtcaagct 660
ggtcgagaaa agctttgaaa cagatacgaa cctaaacttt caaaacctgt cagtgattgg 720
gttccgaatc ctcctcctga aagtggccgg gtttaatctg ctcatgacgc tgcggctgtg 780
gtccagctga 790
<210> 81
<211> 775
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV25_TRAC
<400> 81
gccaccatgc tactcatcac atcaatgttg gtcttatgga tgcaattgtc acaggtgaat 60
ggacaacagg taatgcaaat tcctcagtac cagcatgtac aagaaggaga ggacttcacc 120
acgtactgca attcctcaac tactttaagc aatatacagt ggtataagca aaggcctggt 180
ggacatcccg tattcttgat acagttagtg aagagtggag aagtgaagaa gcagaaaaga 240
ctgacatttc agtttggaga agcaaaaaag aacagctccc tgcacatcac agccacccag 300
actacagatg taggaaccta cttctgcaga gaccttgcgg ccgcataggt ctcaccagaa 360
ccctgaccct gccgtgtacc agctgagaga ctctaaatcc agtgacaagt ctgtctgcct 420
attcaccgat tttgattctc aaacaaatgt gtcacaaagt aaggattctg atgtgtatat 480
cacagacaaa actgtgctag acatgaggtc tatggacttc aagagcaaca gtgctgtggc 540
ctggagcaac aaatctgact ttgcatgtgc aaacgccttc aacaacagca ttattccaga 600
ggacaccttc ttccccagcc cagaaagttc ctgtgatgtc aagctggtcg agaaaagctt 660
tgaaacagat acgaacctaa actttcaaaa cctgtcagtg attgggttcc gaatcctcct 720
cctgaaagtg gccgggttta atctgctcat gacgctgcgg ctgtggtcca gctga 775
<210> 82
<211> 769
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV26-1_TRAC
<400> 82
gccaccatga ggctggtggc aagagtaact gtgtttctga cctttggaac tataattgat 60
gctaagacca cccagccccc ctccatggat tgcgctgaag gaagagctgc aaacctgcct 120
tgtaatcact ctaccatcag tggaaatgag tatgtgtatt ggtatcgaca gattcactcc 180
caggggccac agtatatcat tcatggtcta aaaaacaatg aaaccaatga aatggcctct 240
ctgatcatca cagaagatag aaagtccagc accttgatcc tgccccacgc tacgctgaga 300
gacactgctg tgtactactg cagagacctt gcggccgcat aggtctcacc agaaccctga 360
ccctgccgtg taccagctga gagactctaa atccagtgac aagtctgtct gcctattcac 420
cgattttgat tctcaaacaa atgtgtcaca aagtaaggat tctgatgtgt atatcacaga 480
caaaactgtg ctagacatga ggtctatgga cttcaagagc aacagtgctg tggcctggag 540
caacaaatct gactttgcat gtgcaaacgc cttcaacaac agcattattc cagaggacac 600
cttcttcccc agcccagaaa gttcctgtga tgtcaagctg gtcgagaaaa gctttgaaac 660
agatacgaac ctaaactttc aaaacctgtc agtgattggg ttccgaatcc tcctcctgaa 720
agtggccggg tttaatctgc tcatgacgct gcggctgtgg tccagctga 769
<210> 83
<211> 769
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV26-2_TRAC
<400> 83
gccaccatga agttggtgac aagcattact gtactcctat ctttgggtat tatgggtgat 60
gctaagacca cacagccaaa ttcaatggag agtaacgaag aagagcctgt tcacttgcct 120
tgtaaccact ccacaatcag tggaactgat tacatacatt ggtatcgaca gcttccctcc 180
cagggtccag agtacgtgat tcatggtctt acaagcaatg tgaacaacag aatggcctct 240
ctggcaatcg ctgaggacag aaagtccagt accttgatcc tgcaccgtgc taccttgaga 300
gatgctgctg tgtactactg cagagacctt gcggccgcat aggtctcacc agaaccctga 360
ccctgccgtg taccagctga gagactctaa atccagtgac aagtctgtct gcctattcac 420
cgattttgat tctcaaacaa atgtgtcaca aagtaaggat tctgatgtgt atatcacaga 480
caaaactgtg ctagacatga ggtctatgga cttcaagagc aacagtgctg tggcctggag 540
caacaaatct gactttgcat gtgcaaacgc cttcaacaac agcattattc cagaggacac 600
cttcttcccc agcccagaaa gttcctgtga tgtcaagctg gtcgagaaaa gctttgaaac 660
agatacgaac ctaaactttc aaaacctgtc agtgattggg ttccgaatcc tcctcctgaa 720
agtggccggg tttaatctgc tcatgacgct gcggctgtgg tccagctga 769
<210> 84
<211> 775
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV27_TRAC
<400> 84
gccaccatgg tcctgaaatt ctccgtgtcc attctttgga ttcagttggc atgggtgagc 60
acccagctgc tggagcagag ccctcagttt ctaagcatcc aagagggaga aaatctcact 120
gtgtactgca actcctcaag tgttttttcc agcttacaat ggtacagaca ggagcctggg 180
gaaggtcctg tcctcctggt gacagtagtt acgggtggag aagtgaagaa gctgaagaga 240
ctaacctttc agtttggtga tgcaagaaag gacagttctc tccacatcac tgcagcccag 300
cctggtgata caggcctcta cctctgcaga gaccttgcgg ccgcataggt ctcaccagaa 360
ccctgaccct gccgtgtacc agctgagaga ctctaaatcc agtgacaagt ctgtctgcct 420
attcaccgat tttgattctc aaacaaatgt gtcacaaagt aaggattctg atgtgtatat 480
cacagacaaa actgtgctag acatgaggtc tatggacttc aagagcaaca gtgctgtggc 540
ctggagcaac aaatctgact ttgcatgtgc aaacgccttc aacaacagca ttattccaga 600
ggacaccttc ttccccagcc cagaaagttc ctgtgatgtc aagctggtcg agaaaagctt 660
tgaaacagat acgaacctaa actttcaaaa cctgtcagtg attgggttcc gaatcctcct 720
cctgaaagtg gccgggttta atctgctcat gacgctgcgg ctgtggtcca gctga 775
<210> 85
<211> 802
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV29DV5_TRAC
<400> 85
gccaccatgg ccatgctcct gggggcatca gtgctgattc tgtggcttca gccagactgg 60
gtaaacagtc aacagaagaa tgatgaccag caagttaagc aaaattcacc atccctgagc 120
gtccaggaag gaagaatttc tattctgaac tgtgactata ctaacagcat gtttgattat 180
ttcctatggt acaaaaaata ccctgctgaa ggtcctacat tcctgatatc tataagttcc 240
attaaggata aaaatgaaga tggaagattc actgttttct taaacaaaag tgccaagcac 300
ctctctctgc acattgtgcc ctcccagcct ggagactctg cagtgtactt ctgcagagac 360
cttgcggccg cataggtctc accagaaccc tgaccctgcc gtgtaccagc tgagagactc 420
taaatccagt gacaagtctg tctgcctatt caccgatttt gattctcaaa caaatgtgtc 480
acaaagtaag gattctgatg tgtatatcac agacaaaact gtgctagaca tgaggtctat 540
ggacttcaag agcaacagtg ctgtggcctg gagcaacaaa tctgactttg catgtgcaaa 600
cgccttcaac aacagcatta ttccagagga caccttcttc cccagcccag aaagttcctg 660
tgatgtcaag ctggtcgaga aaagctttga aacagatacg aacctaaact ttcaaaacct 720
gtcagtgatt gggttccgaa tcctcctcct gaaagtggcc gggtttaatc tgctcatgac 780
gctgcggctg tggtccagct ga 802
<210> 86
<211> 781
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV30_TRAC
<400> 86
gccaccatgg agactctcct gaaagtgctt tcaggcacct tgttgtggca gttgacctgg 60
gtgagaagcc aacaaccagt gcagagtcct caagccgtga tcctccgaga aggggaagat 120
gctgtcatca actgcagttc ctccaaggct ttatattctg tacactggta caggcagaag 180
catggtgaag cacccgtttt cctgatgata ttactgaagg gtggagaaca gaagggtcat 240
gaaaaaatat ctgcttcatt taatgaaaaa aagcagcaaa gctccctgta ccttacggcc 300
tcccagctca gttactcagg aacctacttc tgcagagacc ttgcggccgc ataggtctca 360
ccagaaccct gaccctgccg tgtaccagct gagagactct aaatccagtg acaagtctgt 420
ctgcctattc accgattttg attctcaaac aaatgtgtca caaagtaagg attctgatgt 480
gtatatcaca gacaaaactg tgctagacat gaggtctatg gacttcaaga gcaacagtgc 540
tgtggcctgg agcaacaaat ctgactttgc atgtgcaaac gccttcaaca acagcattat 600
tccagaggac accttcttcc ccagcccaga aagttcctgt gatgtcaagc tggtcgagaa 660
aagctttgaa acagatacga acctaaactt tcaaaacctg tcagtgattg ggttccgaat 720
cctcctcctg aaagtggccg ggtttaatct gctcatgacg ctgcggctgt ggtccagctg 780
a 781
<210> 87
<211> 781
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV34_TRAC
<400> 87
gccaccatgg agactgttct gcaagtactc ctagggatat tggggttcca agcagcctgg 60
gtcagtagcc aagaactgga gcagagtcct cagtccttga tcgtccaaga gggaaagaat 120
ctcaccataa actgcacgtc atcaaagacg ttatatggct tatactggta taagcaaaag 180
tatggtgaag gtcttatctt cttgatgatg ctacagaaag gtggggaaga gaaaagtcat 240
gaaaagataa ctgccaagtt ggatgagaaa aagcagcaaa gttccctgca tatcacagcc 300
tcccagccca gccatgcagg catctacctc tgcagagacc ttgcggccgc ataggtctca 360
ccagaaccct gaccctgccg tgtaccagct gagagactct aaatccagtg acaagtctgt 420
ctgcctattc accgattttg attctcaaac aaatgtgtca caaagtaagg attctgatgt 480
gtatatcaca gacaaaactg tgctagacat gaggtctatg gacttcaaga gcaacagtgc 540
tgtggcctgg agcaacaaat ctgactttgc atgtgcaaac gccttcaaca acagcattat 600
tccagaggac accttcttcc ccagcccaga aagttcctgt gatgtcaagc tggtcgagaa 660
aagctttgaa acagatacga acctaaactt tcaaaacctg tcagtgattg ggttccgaat 720
cctcctcctg aaagtggccg ggtttaatct gctcatgacg ctgcggctgt ggtccagctg 780
a 781
<210> 88
<211> 775
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV35_TRAC
<400> 88
gccaccatgc tccttgaaca tttattaata atcttgtgga tgcagctgac atgggtcagt 60
ggtcaacagc tgaatcagag tcctcaatct atgtttatcc aggaaggaga agatgtctcc 120
atgaactgca cttcttcaag catatttaac acctggctat ggtacaagca ggaacctggg 180
gaaggtcctg tcctcttgat agccttatat aaggctggtg aattgacctc aaatggaagg 240
ctgactgctc agtttggtat aaccagaaag gacagcttcc tgaatatctc agcatccata 300
cctagtgatg taggcatcta cttctgcaga gaccttgcgg ccgcataggt ctcaccagaa 360
ccctgaccct gccgtgtacc agctgagaga ctctaaatcc agtgacaagt ctgtctgcct 420
attcaccgat tttgattctc aaacaaatgt gtcacaaagt aaggattctg atgtgtatat 480
cacagacaaa actgtgctag acatgaggtc tatggacttc aagagcaaca gtgctgtggc 540
ctggagcaac aaatctgact ttgcatgtgc aaacgccttc aacaacagca ttattccaga 600
ggacaccttc ttccccagcc cagaaagttc ctgtgatgtc aagctggtcg agaaaagctt 660
tgaaacagat acgaacctaa actttcaaaa cctgtcagtg attgggttcc gaatcctcct 720
cctgaaagtg gccgggttta atctgctcat gacgctgcgg ctgtggtcca gctga 775
<210> 89
<211> 784
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV36DV7_TRAC
<400> 89
gccaccatga tgaagtgtcc acaggcttta ctagctatct tttggcttct actgagctgg 60
gtgagcagtg aagataaggt ggtacaaagc cctctatctc tggttgtcca cgagggagac 120
accgtaactc tcaattgcag ttatgaagtg actaactttc gaagcctact atggtacaag 180
caggaaaaga aagctcccac atttctattt atgctaactt caagtggaat tgaaaagaag 240
tcaggtagac taagtagcat attagataag aaagaacttt ccagcatcct gaacatcaca 300
gccacccaga ccggagactc ggccatctac ctctgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcaccagaac cctgaccctg ccgtgtacca gctgagagac tctaaatcca gtgacaagtc 420
tgtctgccta ttcaccgatt ttgattctca aacaaatgtg tcacaaagta aggattctga 480
tgtgtatatc acagacaaaa ctgtgctaga catgaggtct atggacttca agagcaacag 540
tgctgtggcc tggagcaaca aatctgactt tgcatgtgca aacgccttca acaacagcat 600
tattccagag gacaccttct tccccagccc agaaagttcc tgtgatgtca agctggtcga 660
gaaaagcttt gaaacagata cgaacctaaa ctttcaaaac ctgtcagtga ttgggttccg 720
aatcctcctc ctgaaagtgg ccgggtttaa tctgctcatg acgctgcggc tgtggtccag 780
ctga 784
<210> 90
<211> 790
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV38-1_TRAC
<400> 90
gccaccatga cacgagttag cttgctgtgg gcagtcgtgg tcagtacctg tcttgaatcc 60
ggcatggccc agacagtcac tcagtctcaa ccagagatgt ctgtgcagga ggcagagact 120
gtgaccctga gttgcacata tgacaccagt gagaataatt attatttgtt ctggtacaag 180
cagcctccca gcaggcagat gattctcgtt attcgccaag aagcttataa gcaacagaat 240
gcaacggaga atcgtttctc tgtgaacttc cagaaagcag ccaaatcctt cagtctcaag 300
atctcagact cacagctggg ggacactgcg atgtatttct gcagagacct tgcggccgca 360
taggtctcac cagaaccctg accctgccgt gtaccagctg agagactcta aatccagtga 420
caagtctgtc tgcctattca ccgattttga ttctcaaaca aatgtgtcac aaagtaagga 480
ttctgatgtg tatatcacag acaaaactgt gctagacatg aggtctatgg acttcaagag 540
caacagtgct gtggcctgga gcaacaaatc tgactttgca tgtgcaaacg ccttcaacaa 600
cagcattatt ccagaggaca ccttcttccc cagcccagaa agttcctgtg atgtcaagct 660
ggtcgagaaa agctttgaaa cagatacgaa cctaaacttt caaaacctgt cagtgattgg 720
gttccgaatc ctcctcctga aagtggccgg gtttaatctg ctcatgacgc tgcggctgtg 780
gtccagctga 790
<210> 91
<211> 790
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV38-2DV8_TRAC
<400> 91
gccaccatgg catgccctgg cttcctgtgg gcacttgtga tctccacctg tcttgaattt 60
agcatggctc agacagtcac tcagtctcaa ccagagatgt ctgtgcagga ggcagagacg 120
gtgaccctga gctgcacata tgacaccagt gagagtgatt attatttatt ctggtacaag 180
cagcctccca gcaggcagat gattctcgtt attcgccaag aagcttataa gcaacagaat 240
gcaacagaga atcgtttctc tgtgaacttc cagaaagcag ccaaatcctt cagtctcaag 300
atctcagact cacagctggg ggatgccgcg atgtatttct gcagagacct tgcggccgca 360
taggtctcac cagaaccctg accctgccgt gtaccagctg agagactcta aatccagtga 420
caagtctgtc tgcctattca ccgattttga ttctcaaaca aatgtgtcac aaagtaagga 480
ttctgatgtg tatatcacag acaaaactgt gctagacatg aggtctatgg acttcaagag 540
caacagtgct gtggcctgga gcaacaaatc tgactttgca tgtgcaaacg ccttcaacaa 600
cagcattatt ccagaggaca ccttcttccc cagcccagaa agttcctgtg atgtcaagct 660
ggtcgagaaa agctttgaaa cagatacgaa cctaaacttt caaaacctgt cagtgattgg 720
gttccgaatc ctcctcctga aagtggccgg gtttaatctg ctcatgacgc tgcggctgtg 780
gtccagctga 790
<210> 92
<211> 775
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV39_TRAC
<400> 92
gccaccatga agaagctact agcaatgatt ctgtggcttc aactagaccg gttaagtgga 60
gagctgaaag tggaacaaaa ccctctgttc ctgagcatgc aggagggaaa aaactatacc 120
atctactgca attattcaac cacttcagac agactgtatt ggtacaggca ggatcctggg 180
aaaagtctgg aatctctgtt tgtgttgcta tcaaatggag cagtgaagca ggagggacga 240
ttaatggcct cacttgatac caaagcccgt ctcagcaccc tccacatcac agctgccgtg 300
catgacctct ctgccaccta cttctgcaga gaccttgcgg ccgcataggt ctcaccagaa 360
ccctgaccct gccgtgtacc agctgagaga ctctaaatcc agtgacaagt ctgtctgcct 420
attcaccgat tttgattctc aaacaaatgt gtcacaaagt aaggattctg atgtgtatat 480
cacagacaaa actgtgctag acatgaggtc tatggacttc aagagcaaca gtgctgtggc 540
ctggagcaac aaatctgact ttgcatgtgc aaacgccttc aacaacagca ttattccaga 600
ggacaccttc ttccccagcc cagaaagttc ctgtgatgtc aagctggtcg agaaaagctt 660
tgaaacagat acgaacctaa actttcaaaa cctgtcagtg attgggttcc gaatcctcct 720
cctgaaagtg gccgggttta atctgctcat gacgctgcgg ctgtggtcca gctga 775
<210> 93
<211> 760
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV40_TRAC
<400> 93
gccaccatga actcctctct ggactttcta attctgatct taatgtttgg aggaaccagc 60
agcaattcag tcaagcagac gggccaaata accgtctcgg agggagcatc tgtgactatg 120
aactgcacat acacatccac ggggtaccct acccttttct ggtatgtgga ataccccagc 180
aaacctctgc agcttcttca gagagagaca atggaaaaca gcaaaaactt cggaggcgga 240
aatattaaag acaaaaactc ccccattgtg aaatattcag tccaggtatc agactcagcc 300
gtgtactact gcagagacct tgcggccgca taggtctcac cagaaccctg accctgccgt 360
gtaccagctg agagactcta aatccagtga caagtctgtc tgcctattca ccgattttga 420
ttctcaaaca aatgtgtcac aaagtaagga ttctgatgtg tatatcacag acaaaactgt 480
gctagacatg aggtctatgg acttcaagag caacagtgct gtggcctgga gcaacaaatc 540
tgactttgca tgtgcaaacg ccttcaacaa cagcattatt ccagaggaca ccttcttccc 600
cagcccagaa agttcctgtg atgtcaagct ggtcgagaaa agctttgaaa cagatacgaa 660
cctaaacttt caaaacctgt cagtgattgg gttccgaatc ctcctcctga aagtggccgg 720
gtttaatctg ctcatgacgc tgcggctgtg gtccagctga 760
<210> 94
<211> 781
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRAV41_TRAC
<400> 94
gccaccatgg tgaagatccg gcaatttttg ttggctattt tgtggcttca gctaagctgt 60
gtaagtgccg ccaaaaatga agtggagcag agtcctcaga acctgactgc ccaggaagga 120
gaatttatca caatcaactg cagttactcg gtaggaataa gtgccttaca ctggctgcaa 180
cagcatccag gaggaggcat tgtttccttg tttatgctga gctcagggaa gaagaagcat 240
ggaagattaa ttgccacaat aaacatacag gaaaagcaca gctccctgca catcacagcc 300
tcccatccca gagactctgc cgtctacatc tgcagagacc ttgcggccgc ataggtctca 360
ccagaaccct gaccctgccg tgtaccagct gagagactct aaatccagtg acaagtctgt 420
ctgcctattc accgattttg attctcaaac aaatgtgtca caaagtaagg attctgatgt 480
gtatatcaca gacaaaactg tgctagacat gaggtctatg gacttcaaga gcaacagtgc 540
tgtggcctgg agcaacaaat ctgactttgc atgtgcaaac gccttcaaca acagcattat 600
tccagaggac accttcttcc ccagcccaga aagttcctgt gatgtcaagc tggtcgagaa 660
aagctttgaa acagatacga acctaaactt tcaaaacctg tcagtgattg ggttccgaat 720
cctcctcctg aaagtggccg ggtttaatct gctcatgacg ctgcggctgt ggtccagctg 780
a 781
<210> 95
<211> 53
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TRAJ_receiving_F1
<400> 95
aattcggtct cgaagtcttc tgcggccgct gaagacacta tccagtgaga ccc 53
<210> 96
<211> 53
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TRAJ_receiving_R1
<400> 96
tcgagggtct cactggatag tgtcttcagc ggccgcagaa gacttcgaga ccg 53
<210> 97
<211> 2308
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> J donor backbone
<400> 97
ctcgagctgg gcctcatggg ccttccgctc actgcccgct ttccagtcgg gaaacctgtc 60
gtgccagctg cattaacatg gtcatagctg tttccttgcg tattgggcgc tctccgcttc 120
ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcgggtaaag cctggggtgc ctaatgagca 180
aaaggccagc aaaaggccag gaaccgtaaa aaggccgcgt tgctggcgtt tttccatagg 240
ctccgccccc ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg gcgaaacccg 300
acaggactat aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg ctctcctgtt 360
ccgaccctgc cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag cgtggcgctt 420
tctcatagct cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc caagctgggc 480
tgtgtgcacg aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt 540
gagtccaacc cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag cagccactgg taacaggatt 600
agcagagcga ggtatgtagg cggtgctaca gagttcttga agtggtggcc taactacggc 660
tacactagaa gaacagtatt tggtatctgc gctctgctga agccagttac cttcggaaaa 720
agagttggta gctcttgatc cggcaaacaa accaccgctg gtagcggtgg tttttttgtt 780
tgcaagcagc agattacgcg cagaaaaaaa ggatctcaag aagatccttt gatcttttct 840
acggggtctg acgctcagtg gaacgaaaac tcacgttaag ggattttggt catgagatta 900
tcaaaaagga tcttcaccta gatcctttta aattaaaaat gaagttttaa atcaatctaa 960
agtatatatg agtaaacttg gtctgacagt tagaaaaatt cgtccagcat cagatgaaat 1020
tgcagtttgt tcatgtccgg gttatcaata ccatatttct ggaacagacg tttctgcagg 1080
ctcgggctaa attcacccag acaattccac agaattgcca gatcctgata acgatctgca 1140
ataccaacac gaccaacatc aatgcagcca atcagtttac cctcatcaaa aatcaggtta 1200
tccaggctaa aatcaccatg ggtaacaacg ctatccggac taaacggcag cagtttatgc 1260
atttctttcc aaacctgttc aacaggccaa ccattacgtt catcatcaaa atcgcttgca 1320
tcaaccagac cattattcat acggctctgt gcctgtgcca gacgaaaaac acgatcgcta 1380
ttaaacggac aattacaaac cggaatgcta tgcagacgac gcagaaaaac tgccagtgca 1440
tcaacaatat tttcgcctga atccggatat tcttccagaa cctgaaatgc ggttttaccc 1500
ggaattgcgg tggtcagcag ccatgcatca tccggtgtac gaataaaatg tttaatggtc 1560
ggcagcggca taaattcggt cagccaattc agacgaacca tttcatcggt cacatcattt 1620
gcaacgctac ctttaccatg tttcagaaac agttccggtg catccggttt accatacaga 1680
cgataaatgg ttgcaccgct ctgaccaaca ttatcacgtg cccatttata gccatacaga 1740
tctgcatcca tattgctatt cagacgcgga cggctacagc tggtttcacg ctgaatatgg 1800
ctcatactct tcctttttca atattattga agcatttatc agggttattg tctcatgagc 1860
ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg cacatttccc 1920
cgaaaagtgc cacctaaatt gtaagcgtta atattttgtt aaaattcgcg ttaaattttt 1980
gttaaatcag ctcatttttt aaccaatagg ccgaaatcgg caaaatccct tataaatcaa 2040
aagaatagac cgagataggg ttgagtggcc gctacagggc gctcccattc gccattcagg 2100
ctgcgcaact gttgggaagg gcgtttcggt gcgggcctct tcgctattac gccagctggc 2160
gaaaggggga tgtgctgcaa ggcgattaag ttgggtaacg ccagggtttt cccagtcacg 2220
acgttgtaaa acgacggcca gtgagcgcga cgtaatacga ctcactatag ggcgaattgg 2280
cggaaggccg tcaaggccgc atgaattc 2308
<210> 98
<211> 2355
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TRA J receiving cassette vector
<400> 98
cgctattacg ccagctggcg aaagggggat gtgctgcaag gcgattaagt tgggtaacgc 60
cagggttttc ccagtcacga cgttgtaaaa cgacggccag tgagcgcgac gtaatacgac 120
tcactatagg gcgaattggc ggaaggccgt caaggccgca tgaattcggt ctcgaagtct 180
tctgcggccg ctgaagacac tatccagtga gaccctcgag ctgggcctca tgggccttcc 240
gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctgcattaa catggtcata 300
gctgtttcct tgcgtattgg gcgctctccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg 360
tcgttcgggt aaagcctggg gtgcctaatg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg 420
taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa 480
aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt 540
tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct 600
gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct 660
cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc 720
cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt 780
atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc 840
tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaagaacag tatttggtat 900
ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa 960
acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa 1020
aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga 1080
aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct 1140
tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga 1200
cagttagaaa aattcgtcca gcatcagatg aaattgcagt ttgttcatgt ccgggttatc 1260
aataccatat ttctggaaca gacgtttctg caggctcggg ctaaattcac ccagacaatt 1320
ccacagaatt gccagatcct gataacgatc tgcaatacca acacgaccaa catcaatgca 1380
gccaatcagt ttaccctcat caaaaatcag gttatccagg ctaaaatcac catgggtaac 1440
aacgctatcc ggactaaacg gcagcagttt atgcatttct ttccaaacct gttcaacagg 1500
ccaaccatta cgttcatcat caaaatcgct tgcatcaacc agaccattat tcatacggct 1560
ctgtgcctgt gccagacgaa aaacacgatc gctattaaac ggacaattac aaaccggaat 1620
gctatgcaga cgacgcagaa aaactgccag tgcatcaaca atattttcgc ctgaatccgg 1680
atattcttcc agaacctgaa atgcggtttt acccggaatt gcggtggtca gcagccatgc 1740
atcatccggt gtacgaataa aatgtttaat ggtcggcagc ggcataaatt cggtcagcca 1800
attcagacga accatttcat cggtcacatc atttgcaacg ctacctttac catgtttcag 1860
aaacagttcc ggtgcatccg gtttaccata cagacgataa atggttgcac cgctctgacc 1920
aacattatca cgtgcccatt tatagccata cagatctgca tccatattgc tattcagacg 1980
cggacggcta cagctggttt cacgctgaat atggctcata ctcttccttt ttcaatatta 2040
ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa 2100
aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccaccta aattgtaagc 2160
gttaatattt tgttaaaatt cgcgttaaat ttttgttaaa tcagctcatt ttttaaccaa 2220
taggccgaaa tcggcaaaat cccttataaa tcaaaagaat agaccgagat agggttgagt 2280
ggccgctaca gggcgctccc attcgccatt caggctgcgc aactgttggg aagggcgttt 2340
cggtgcgggc ctctt 2355
<210> 99
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ1*01_BB-S_F1
<400> 99
ctcgtttggc aaaggaacca gagtttccac ttctcccca 39
<210> 100
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ2*01_BB-S_F1
<400> 100
ctcgtttggg aaagggaccc atgtattcat tatatctga 39
<210> 101
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ3*01_BB-S_F1
<400> 101
ctcgtttgga tcagggacca gactcagcat ccggccaaa 39
<210> 102
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ4*01_BB-S_F1
<400> 102
ctcgtttgga gcagggacca ggctggctgt acacccata 39
<210> 103
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ5*01_BB-S_F1
<400> 103
ctcgtttggg agtggaacaa gactccaagt gcaaccaaa 39
<210> 104
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ6*01_BB-S_F1
<400> 104
ctcgtttgga agaggaacca gccttattgt tcatccgta 39
<210> 105
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ7*01_BB-S_F1
<400> 105
ctcgtttggg aaggggaacc aagtggtggt cataccaaa 39
<210> 106
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ8*01_BB-S_F1
<400> 106
ctcgtttgga actggcaccc gacttctggt cagtccaaa 39
<210> 107
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ9*01_BB-S_F1
<400> 107
ctcgtttgga gcaggaacaa gactatttgt taaagcaaa 39
<210> 108
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ10*01_BB-S_F1
<400> 108
ctcgtttggg acaggcactc agctaaaagt ggaactcaa 39
<210> 109
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ11*01_BB-S_F1
<400> 109
ctcgtttggg aaggggacta tgcttctagt ctctccaga 39
<210> 110
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ12*01_BB-S_F1
<400> 110
ctcgtttggg agtgggacca gactgctggt caggcctga 39
<210> 111
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ13*01_BB-S_F1
<400> 111
ctcgtttgga attggaacaa agctccaagt catcccaaa 39
<210> 112
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ14*01_BB-S_F1
<400> 112
ctcgtttggg agtgggacaa gattatcagt aaaacctga 39
<210> 113
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ15*01_BB-S_F1
<400> 113
ctcgtttggg aagggaaccc acctatcagt gagttccaa 39
<210> 114
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ16*01_BB-S_F1
<400> 114
ctcgtttgca aggggaacca tgttaaaggt ggatcttaa 39
<210> 115
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ17*01_BB-S_F1
<400> 115
ctcgtttgga ggaggaacca gggtgctagt taaaccaaa 39
<210> 116
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ18*01_BB-S_F1
<400> 116
ctcgtttgga agaggaactc agttgactgt ctggcctga 39
<210> 117
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ19*01_BB-S_F1
<400> 117
ctcgtttgga aagggatcca aacataatgt cactccaaa 39
<210> 118
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ20*01_BB-S_F1
<400> 118
ctcgtttgga gccggaacca cagtaactgt aagagcaaa 39
<210> 119
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ21*01_BB-S_F1
<400> 119
ctcgtttgga tctgggacca aactcaatgt aaaaccaaa 39
<210> 120
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ22*01_BB-S_F1
<400> 120
ctcgtttgga tctgggacac aattgactgt tttacctga 39
<210> 121
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ23*01_BB-S_F1
<400> 121
ctcgtttgga cagggaacgg agttatctgt gaaacccaa 39
<210> 122
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ24*01_BB-S_F1
<400> 122
ctcgtttgga gcagggaccc aggttgtggt caccccaga 39
<210> 123
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ25*01_BB-S_F1
<400> 123
ctcgtttggg aaggggacaa ggctgcttgt caagccaaa 39
<210> 124
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ26*01_BB-S_F1
<400> 124
ctcgtttggt cccggaacca gattgtccgt gctgcccta 39
<210> 125
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ27*01_BB-S_F1
<400> 125
ctcgtttggg gatgggacta cgctcactgt gaagccaaa 39
<210> 126
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ28*01_BB-S_F1
<400> 126
ctcgtttggg aaggggacca aactctcggt cataccaaa 39
<210> 127
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ29*01_BB-S_F1
<400> 127
ctcgtttgga aagggcacaa gactttctgt gattgcaaa 39
<210> 128
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ30*01_BB-S_F1
<400> 128
ctcgtttgga aaagggacac gacttcatat tctccccaa 39
<210> 129
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ31*01_BB-S_F1
<400> 129
ctcgtttgga gatggaactc agctggtggt gaagcccaa 39
<210> 130
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ32*01_BB-S_F1
<400> 130
ctcgtttgga actggcactc tgcttgctgt ccagccaaa 39
<210> 131
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ33*01_BB-S_F1
<400> 131
ctcgtggggc gctgggacca agctaattat aaagccaga 39
<210> 132
<211> 38
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ34*01_BB-S_F1
<400> 132
ctcgtttggg actgggacca gattacaagt ctttccaa 38
<210> 133
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ36*01_BB-S_F1
<400> 133
ctcgtttggg actggaacga gactcaccgt tattcccta 39
<210> 134
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ37*01_BB-S_F1
<400> 134
ctcgtttggg caagggacaa ctttacaagt aaaaccaga 39
<210> 135
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ38*01_BB-S_F1
<400> 135
ctcgtgggga ttgggaacaa gcctggcagt aaatccgaa 39
<210> 136
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ39*01_BB-S_F1
<400> 136
ctcgtttgga ggaggaacaa ggttaatggt caaacccca 39
<210> 137
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ40*01_BB-S_F1
<400> 137
ctcgtttgga acaggcacca ggctgaaggt tttagcaaa 39
<210> 138
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ41*01_BB-S_F1
<400> 138
ctcgtttggc aaaggcacct cgctgttggt cacacccca 39
<210> 139
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ42*01_BB-S_F1
<400> 139
ctcgtttgga aaaggcacta aactctctgt taaaccaaa 39
<210> 140
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ43*01_BB-S_F1
<400> 140
ctcgtttgga gcagggacca gactgacagt aaaaccaaa 39
<210> 141
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ44*01_BB-S_F1
<400> 141
ctcgtttggg actggaacaa gacttcaggt cacgctcga 39
<210> 142
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ45*01_BB-S_F1
<400> 142
ctcgtttggc aaagggactc atctaatcat ccagcccta 39
<210> 143
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ46*01_BB-S_F1
<400> 143
ctcgtttggg accgggactc gtttagcagt taggcccaa 39
<210> 144
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ47*01_BB-S_F1
<400> 144
ctcgtttggc gcaggaacca ttctgagagt caagtccta 39
<210> 145
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ48*01_BB-S_F1
<400> 145
ctcgtttggg actggaacaa gactcaccat catacccaa 39
<210> 146
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ49*01_BB-S_F1
<400> 146
ctcgtttggg acagggacaa gtttgacggt cattccaaa 39
<210> 147
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ50*01_BB-S_F1
<400> 147
ctcgtttggg ccagggacaa gcttatcagt cattccaaa 39
<210> 148
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ52*01_BB-S_F1
<400> 148
ctcgtttgga caagggacca tcttgactgt ccatccaaa 39
<210> 149
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ53*01_BB-S_F1
<400> 149
ctcgtttgga aaaggaactc tcttaaccgt gaatccaaa 39
<210> 150
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ54*01_BB-S_F1
<400> 150
ctcgtttggc caaggaacca ggctgactat caacccaaa 39
<210> 151
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ56*01_BB-S_F1
<400> 151
ctcgtttgga aaaggaataa ctctgagtgt tagaccaga 39
<210> 152
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ57*01_BB-S_F1
<400> 152
ctcgtttgga aagggaacga aactgacagt aaacccata 39
<210> 153
<211> 33
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ59*01_BB-S_F1
<400> 153
ctcgtttgga atggggacgc aagtgagagt gaa 33
<210> 154
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ61*01_BB-S_F1
<400> 154
ctcgtttgga gccaacacta gaggaatcat gaaactcaa 39
<210> 155
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ1*01_BB-S_R1
<400> 155
gatatgggga gaagtggaaa ctctggttcc tttgccaaa 39
<210> 156
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ2*01_BB-S_R1
<400> 156
gatatcagat ataatgaata catgggtccc tttcccaaa 39
<210> 157
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ3*01_BB-S_R1
<400> 157
gatatttggc cggatgctga gtctggtccc tgatccaaa 39
<210> 158
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ4*01_BB-S_R1
<400> 158
gatatatggg tgtacagcca gcctggtccc tgctccaaa 39
<210> 159
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ5*01_BB-S_R1
<400> 159
gatatttggt tgcacttgga gtcttgttcc actcccaaa 39
<210> 160
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ6*01_BB-S_R1
<400> 160
gatatacgga tgaacaataa ggctggttcc tcttccaaa 39
<210> 161
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ7*01_BB-S_R1
<400> 161
gatatttggt atgaccacca cttggttccc cttcccaaa 39
<210> 162
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ8*01_BB-S_R1
<400> 162
gatatttgga ctgaccagaa gtcgggtgcc agttccaaa 39
<210> 163
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ9*01_BB-S_R1
<400> 163
gatatttgct ttaacaaata gtcttgttcc tgctccaaa 39
<210> 164
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ10*01_BB-S_R1
<400> 164
gatattgagt tccactttta gctgagtgcc tgtcccaaa 39
<210> 165
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ11*01_BB-S_R1
<400> 165
gatatctgga gagactagaa gcatagtccc cttcccaaa 39
<210> 166
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ12*01_BB-S_R1
<400> 166
gatatcaggc ctgaccagca gtctggtccc actcccaaa 39
<210> 167
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ13*01_BB-S_R1
<400> 167
gatatttggg atgacttgga gctttgttcc aattccaaa 39
<210> 168
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ14*01_BB-S_R1
<400> 168
gatatcaggt tttactgata atcttgtccc actcccaaa 39
<210> 169
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ15*01_BB-S_R1
<400> 169
gatattggaa ctcactgata ggtgggttcc cttcccaaa 39
<210> 170
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ16*01_BB-S_R1
<400> 170
gatattaaga tccaccttta acatggttcc ccttgcaaa 39
<210> 171
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ17*01_BB-S_R1
<400> 171
gatatttggt ttaactagca ccctggttcc tcctccaaa 39
<210> 172
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ18*01_BB-S_R1
<400> 172
gatatcaggc cagacagtca actgagttcc tcttccaaa 39
<210> 173
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ19*01_BB-S_R1
<400> 173
gatatttgga gtgacattat gtttggatcc ctttccaaa 39
<210> 174
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ20*01_BB-S_R1
<400> 174
gatatttgct cttacagtta ctgtggttcc ggctccaaa 39
<210> 175
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ21*01_BB-S_R1
<400> 175
gatatttggt tttacattga gtttggtccc agatccaaa 39
<210> 176
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ22*01_BB-S_R1
<400> 176
gatatcaggt aaaacagtca attgtgtccc agatccaaa 39
<210> 177
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ23*01_BB-S_R1
<400> 177
gatattgggt ttcacagata actccgttcc ctgtccaaa 39
<210> 178
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ24*01_BB-S_R1
<400> 178
gatatctggg gtgaccacaa cctgggtccc tgctccaaa 39
<210> 179
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ25*01_BB-S_R1
<400> 179
gatatttggc ttgacaagca gccttgtccc cttcccaaa 39
<210> 180
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ26*01_BB-S_R1
<400> 180
gatatagggc agcacggaca atctggttcc gggaccaaa 39
<210> 181
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ27*01_BB-S_R1
<400> 181
gatatttggc ttcacagtga gcgtagtccc atccccaaa 39
<210> 182
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ28*01_BB-S_R1
<400> 182
gatatttggt atgaccgaga gtttggtccc cttcccaaa 39
<210> 183
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ29*01_BB-S_R1
<400> 183
gatatttgca atcacagaaa gtcttgtgcc ctttccaaa 39
<210> 184
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ30*01_BB-S_R1
<400> 184
gatattgggg agaatatgaa gtcgtgtccc ttttccaaa 39
<210> 185
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ31*01_BB-S_R1
<400> 185
gatattgggc ttcaccacca gctgagttcc atctccaaa 39
<210> 186
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ32*01_BB-S_R1
<400> 186
gatatttggc tggacagcaa gcagagtgcc agttccaaa 39
<210> 187
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ33*01_BB-S_R1
<400> 187
gatatctggc tttataatta gcttggtccc agcgcccca 39
<210> 188
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ34*01_BB-S_R1
<400> 188
gatatttgga aagacttgta atctggtccc agtcccaaa 39
<210> 189
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ36*01_BB-S_R1
<400> 189
gatataggga ataacggtga gtctcgttcc agtcccaaa 39
<210> 190
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ37*01_BB-S_R1
<400> 190
gatatctggt tttacttgta aagttgtccc ttgcccaaa 39
<210> 191
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ38*01_BB-S_R1
<400> 191
gatattcgga tttactgcca ggcttgttcc caatcccca 39
<210> 192
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ39*01_BB-S_R1
<400> 192
gatatggggt ttgaccatta accttgttcc tcctccaaa 39
<210> 193
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ40*01_BB-S_R1
<400> 193
gatatttgct aaaaccttca gcctggtgcc tgttccaaa 39
<210> 194
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ41*01_BB-S_R1
<400> 194
gatatggggt gtgaccaaca gcgaggtgcc tttgccaaa 39
<210> 195
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ42*01_BB-S_R1
<400> 195
gatatttggt ttaacagaga gtttagtgcc ttttccaaa 39
<210> 196
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ43*01_BB-S_R1
<400> 196
gatatttggt tttactgtca gtctggtccc tgctccaaa 39
<210> 197
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ44*01_BB-S_R1
<400> 197
gatatcgagc gtgacctgaa gtcttgttcc agtcccaaa 39
<210> 198
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ45*01_BB-S_R1
<400> 198
gatatagggc tggatgatta gatgagtccc tttgccaaa 39
<210> 199
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ46*01_BB-S_R1
<400> 199
gatattgggc ctaactgcta aacgagtccc ggtcccaaa 39
<210> 200
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ47*01_BB-S_R1
<400> 200
gatataggac ttgactctca gaatggttcc tgcgccaaa 39
<210> 201
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ48*01_BB-S_R1
<400> 201
gatattgggt atgatggtga gtcttgttcc agtcccaaa 39
<210> 202
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ49*01_BB-S_R1
<400> 202
gatatttgga atgaccgtca aacttgtccc tgtcccaaa 39
<210> 203
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ50*01_BB-S_R1
<400> 203
gatatttgga atgactgata agcttgtccc tggcccaaa 39
<210> 204
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ52*01_BB-S_R1
<400> 204
gatatttgga tggacagtca agatggtccc ttgtccaaa 39
<210> 205
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ53*01_BB-S_R1
<400> 205
gatatttgga ttcacggtta agagagttcc ttttccaaa 39
<210> 206
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ54*01_BB-S_R1
<400> 206
gatatttggg ttgatagtca gcctggttcc ttggccaaa 39
<210> 207
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ56*01_BB-S_R1
<400> 207
gatatctggt ctaacactca gagttattcc ttttccaaa 39
<210> 208
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ57*01_BB-S_R1
<400> 208
gatatatggg tttactgtca gtttcgttcc ctttccaaa 39
<210> 209
<211> 33
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ59*01_BB-S_R1
<400> 209
gatattcact ctcacttgcg tccccattcc aaa 33
<210> 210
<211> 39
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ61*01_BB-S_R1
<400> 210
gatattgagt ttcatgattc ctctagtgtt ggctccaaa 39
<210> 211
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ1*01_BB-L_F1
<400> 211
ctcgattacc tcccagttgc aatttggcaa aggaaccaga gtttccactt ctcccca 57
<210> 212
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ2*01_BB-L_F1
<400> 212
ctcgggaaca attgataaac tcacatttgg gaaagggacc catgtattca ttatatctga 60
<210> 213
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ3*01_BB-L_F1
<400> 213
ctcgagtgct tccaagataa tctttggatc agggaccaga ctcagcatcc ggccaaa 57
<210> 214
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ4*01_BB-L_F1
<400> 214
ctcgggctac aataagctga tctttggagc agggaccagg ctggctgtac acccata 57
<210> 215
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ5*01_BB-L_F1
<400> 215
ctcgaggaga gcacttactt ttgggagtgg aacaagactc caagtgcaac caaa 54
<210> 216
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ6*01_BB-L_F1
<400> 216
ctcgggaagc tacataccta catttggaag aggaaccagc cttattgttc atccgta 57
<210> 217
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ7*01_BB-L_F1
<400> 217
ctcgaacaac agactcgctt ttgggaaggg gaaccaagtg gtggtcatac caaa 54
<210> 218
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ8*01_BB-L_F1
<400> 218
ctcgtttcag aaacttgtat ttggaactgg cacccgactt ctggtcagtc caaa 54
<210> 219
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ9*01_BB-L_F1
<400> 219
ctcgggcttc aaaactatct ttggagcagg aacaagacta tttgttaaag caaa 54
<210> 220
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ10*01_BB-L_F1
<400> 220
ctcgggagga aacaaactca cctttgggac aggcactcag ctaaaagtgg aactcaa 57
<210> 221
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ11*01_BB-L_F1
<400> 221
ctcgtacagc accctcacct ttgggaaggg gactatgctt ctagtctctc caga 54
<210> 222
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ12*01_BB-L_F1
<400> 222
ctcgagttat aaattgatct ttgggagtgg gaccagactg ctggtcaggc ctga 54
<210> 223
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ13*01_BB-L_F1
<400> 223
ctcgggttac cagaaagtta cctttggaat tggaacaaag ctccaagtca tcccaaa 57
<210> 224
<211> 45
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ14*01_BB-L_F1
<400> 224
ctcgttcatc tttgggagtg ggacaagatt atcagtaaaa cctga 45
<210> 225
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ15*01_BB-L_F1
<400> 225
ctcgggaact gctctgatct ttgggaaggg aacccaccta tcagtgagtt ccaa 54
<210> 226
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ16*01_BB-L_F1
<400> 226
ctcgggacag aagctgctct ttgcaagggg aaccatgtta aaggtggatc ttaa 54
<210> 227
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ17*01_BB-L_F1
<400> 227
ctcggcaggc aacaagctaa cttttggagg aggaaccagg gtgctagtta aaccaaa 57
<210> 228
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ18*01_BB-L_F1
<400> 228
ctcgtcaacc ctggggaggc tatactttgg aagaggaact cagttgactg tctggcctga 60
<210> 229
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ19*01_BB-L_F1
<400> 229
ctcgttctac aatttcacct ttggaaaggg atccaaacat aatgtcactc caaa 54
<210> 230
<211> 51
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ20*01_BB-L_F1
<400> 230
ctcgtacaag ctcagctttg gagccggaac cacagtaact gtaagagcaa a 51
<210> 231
<211> 48
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ21*01_BB-L_F1
<400> 231
ctcgaaattt tactttggat ctgggaccaa actcaatgta aaaccaaa 48
<210> 232
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ22*01_BB-L_F1
<400> 232
ctcgtctgca aggcaactga cctttggatc tgggacacaa ttgactgttt tacctga 57
<210> 233
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ23*01_BB-L_F1
<400> 233
ctcgcaggga ggaaagctta tctttggaca gggaacggag ttatctgtga aacccaa 57
<210> 234
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ24*01_BB-L_F1
<400> 234
ctcgagttgg ggtaaattgc agtttggagc agggacccag gttgtggtca ccccaga 57
<210> 235
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ25*01_BB-L_F1
<400> 235
ctcgggcttc tcctttatct ttgggaaggg gacaaggctg cttgtcaagc caaa 54
<210> 236
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ26*01_BB-L_F1
<400> 236
ctcgggtcag aattttgtct ttggtcccgg aaccagattg tccgtgctgc ccta 54
<210> 237
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ27*01_BB-L_F1
<400> 237
ctcggcaggc aaatcaacct ttggggatgg gactacgctc actgtgaagc caaa 54
<210> 238
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ28*01_BB-L_F1
<400> 238
ctcggctggg agttaccaac tcacttttgg gaaggggacc aaactctcgg tcataccaaa 60
<210> 239
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ29*01_BB-L_F1
<400> 239
ctcgaacaca cctcttgtct ttggaaaggg cacaagactt tctgtgattg caaa 54
<210> 240
<211> 51
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ30*01_BB-L_F1
<400> 240
ctcggacaag atcatctttg gaaaagggac acgacttcat attctcccca a 51
<210> 241
<211> 51
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ31*01_BB-L_F1
<400> 241
ctcggccaga ctcatgtttg gagatggaac tcagctggtg gtgaagccca a 51
<210> 242
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ32*01_BB-L_F1
<400> 242
ctcgggtgct acaaacaagc tcatctttgg aactggcact ctgcttgctg tccagccaaa 60
<210> 243
<211> 51
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ33*01_BB-L_F1
<400> 243
ctcgtatcag ttaatctggg gcgctgggac caagctaatt ataaagccag a 51
<210> 244
<211> 51
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ34*01_BB-L_F1
<400> 244
ctcggacaag ctcatctttg ggactgggac cagattacaa gtctttccaa a 51
<210> 245
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ36*01_BB-L_F1
<400> 245
ctcggcaaac aacctcttct ttgggactgg aacgagactc accgttattc ccta 54
<210> 246
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ37*01_BB-L_F1
<400> 246
ctcgaacaca ggcaaactaa tctttgggca agggacaact ttacaagtaa aaccaga 57
<210> 247
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ38*01_BB-L_F1
<400> 247
ctcgaacaac cgtaagctga tttggggatt gggaacaagc ctggcagtaa atccgaa 57
<210> 248
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ39*01_BB-L_F1
<400> 248
ctcggcaggc aacatgctca cctttggagg aggaacaagg ttaatggtca aacccca 57
<210> 249
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ40*01_BB-L_F1
<400> 249
ctcgacctac aaatacatct ttggaacagg caccaggctg aaggttttag caaa 54
<210> 250
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ41*01_BB-L_F1
<400> 250
ctcgtccggg tatgcactca actttggcaa aggcacctcg ctgttggtca cacccca 57
<210> 251
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ42*01_BB-L_F1
<400> 251
ctcgggaagc caaggaaatc tcatctttgg aaaaggcact aaactctctg ttaaaccaaa 60
<210> 252
<211> 48
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ43*01_BB-L_F1
<400> 252
ctcggacatg cgctttggag cagggaccag actgacagta aaaccaaa 48
<210> 253
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ44*01_BB-L_F1
<400> 253
ctcgactgcc agtaaactca cctttgggac tggaacaaga cttcaggtca cgctcga 57
<210> 254
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ45*01_BB-L_F1
<400> 254
ctcgggaggt gctgacggac tcacctttgg caaagggact catctaatca tccagcccta 60
<210> 255
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ46*01_BB-L_F1
<400> 255
ctcgagcgga gacaagctga cttttgggac cgggactcgt ttagcagtta ggcccaa 57
<210> 256
<211> 51
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ47*01_BB-L_F1
<400> 256
ctcgaacaaa ctggtctttg gcgcaggaac cattctgaga gtcaagtcct a 51
<210> 257
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ48*01_BB-L_F1
<400> 257
ctcgggaaat gagaaattaa cctttgggac tggaacaaga ctcaccatca tacccaa 57
<210> 258
<211> 51
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ49*01_BB-L_F1
<400> 258
ctcgaaccag ttctattttg ggacagggac aagtttgacg gtcattccaa a 51
<210> 259
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ50*01_BB-L_F1
<400> 259
ctcgtacgac aaggtgatat ttgggccagg gacaagctta tcagtcattc caaa 54
<210> 260
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ52*01_BB-L_F1
<400> 260
ctcgggtact agctatggaa agctgacatt tggacaaggg accatcttga ctgtccatcc 60
aaa 63
<210> 261
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ53*01_BB-L_F1
<400> 261
ctcgggtagc aactataaac tgacatttgg aaaaggaact ctcttaaccg tgaatccaaa 60
<210> 262
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ54*01_BB-L_F1
<400> 262
ctcggcccag aagctggtat ttggccaagg aaccaggctg actatcaacc caaa 54
<210> 263
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ56*01_BB-L_F1
<400> 263
ctcggccaat agtaagctga catttggaaa aggaataact ctgagtgtta gaccaga 57
<210> 264
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ57*01_BB-L_F1
<400> 264
ctcgggatct gaaaagctgg tctttggaaa gggaacgaaa ctgacagtaa acccata 57
<210> 265
<211> 48
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ59*01_BB-L_F1
<400> 265
ctcgaacagg aaatttacat ttggaatggg gacgcaagtg agagtgaa 48
<210> 266
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ61*01_BB-L_F1
<400> 266
ctcgaatagg aaactgacat ttggagccaa cactagagga atcatgaaac tcaa 54
<210> 267
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ1*01_BB-L_R1
<400> 267
gatatgggga gaagtggaaa ctctggttcc tttgccaaat tgcaactggg aggtaat 57
<210> 268
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ2*01_BB-L_R1
<400> 268
gatatcagat ataatgaata catgggtccc tttcccaaat gtgagtttat caattgttcc 60
<210> 269
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ3*01_BB-L_R1
<400> 269
gatatttggc cggatgctga gtctggtccc tgatccaaag attatcttgg aagcact 57
<210> 270
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ4*01_BB-L_R1
<400> 270
gatatatggg tgtacagcca gcctggtccc tgctccaaaa atcagcttat tgtagcc 57
<210> 271
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ5*01_BB-L_R1
<400> 271
gatatttggt tgcacttgga gtcttgttcc actcccaaaa gtaagtgctc tcct 54
<210> 272
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ6*01_BB-L_R1
<400> 272
gatatacgga tgaacaataa ggctggttcc tcttccaaat gtaggtatgt agcttcc 57
<210> 273
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ7*01_BB-L_R1
<400> 273
gatatttggt atgaccacca cttggttccc cttcccaaaa gcgagtctgt tgtt 54
<210> 274
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ8*01_BB-L_R1
<400> 274
gatatttgga ctgaccagaa gtcgggtgcc agttccaaat acaagtttct gaaa 54
<210> 275
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ9*01_BB-L_R1
<400> 275
gatatttgct ttaacaaata gtcttgttcc tgctccaaag atagttttga agcc 54
<210> 276
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ10*01_BB-L_R1
<400> 276
gatattgagt tccactttta gctgagtgcc tgtcccaaag gtgagtttgt ttcctcc 57
<210> 277
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ11*01_BB-L_R1
<400> 277
gatatctgga gagactagaa gcatagtccc cttcccaaag gtgagggtgc tgta 54
<210> 278
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ12*01_BB-L_R1
<400> 278
gatatcaggc ctgaccagca gtctggtccc actcccaaag atcaatttat aact 54
<210> 279
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ13*01_BB-L_R1
<400> 279
gatatttggg atgacttgga gctttgttcc aattccaaag gtaactttct ggtaacc 57
<210> 280
<211> 45
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ14*01_BB-L_R1
<400> 280
gatatcaggt tttactgata atcttgtccc actcccaaag atgaa 45
<210> 281
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ15*01_BB-L_R1
<400> 281
gatattggaa ctcactgata ggtgggttcc cttcccaaag atcagagcag ttcc 54
<210> 282
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ16*01_BB-L_R1
<400> 282
gatattaaga tccaccttta acatggttcc ccttgcaaag agcagcttct gtcc 54
<210> 283
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ17*01_BB-L_R1
<400> 283
gatatttggt ttaactagca ccctggttcc tcctccaaaa gttagcttgt tgcctgc 57
<210> 284
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ18*01_BB-L_R1
<400> 284
gatatcaggc cagacagtca actgagttcc tcttccaaag tatagcctcc ccagggttga 60
<210> 285
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ19*01_BB-L_R1
<400> 285
gatatttgga gtgacattat gtttggatcc ctttccaaag gtgaaattgt agaa 54
<210> 286
<211> 51
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ20*01_BB-L_R1
<400> 286
gatatttgct cttacagtta ctgtggttcc ggctccaaag ctgagcttgt a 51
<210> 287
<211> 48
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ21*01_BB-L_R1
<400> 287
gatatttggt tttacattga gtttggtccc agatccaaag taaaattt 48
<210> 288
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ22*01_BB-L_R1
<400> 288
gatatcaggt aaaacagtca attgtgtccc agatccaaag gtcagttgcc ttgcaga 57
<210> 289
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ23*01_BB-L_R1
<400> 289
gatattgggt ttcacagata actccgttcc ctgtccaaag ataagctttc ctccctg 57
<210> 290
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ24*01_BB-L_R1
<400> 290
gatatctggg gtgaccacaa cctgggtccc tgctccaaac tgcaatttac cccaact 57
<210> 291
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ25*01_BB-L_R1
<400> 291
gatatttggc ttgacaagca gccttgtccc cttcccaaag ataaaggaga agcc 54
<210> 292
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ26*01_BB-L_R1
<400> 292
gatatagggc agcacggaca atctggttcc gggaccaaag acaaaattct gacc 54
<210> 293
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ27*01_BB-L_R1
<400> 293
gatatttggc ttcacagtga gcgtagtccc atccccaaag gttgatttgc ctgc 54
<210> 294
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ28*01_BB-L_R1
<400> 294
gatatttggt atgaccgaga gtttggtccc cttcccaaaa gtgagttggt aactcccagc 60
<210> 295
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ29*01_BB-L_R1
<400> 295
gatatttgca atcacagaaa gtcttgtgcc ctttccaaag acaagaggtg tgtt 54
<210> 296
<211> 51
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ30*01_BB-L_R1
<400> 296
gatattgggg agaatatgaa gtcgtgtccc ttttccaaag atgatcttgt c 51
<210> 297
<211> 51
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ31*01_BB-L_R1
<400> 297
gatattgggc ttcaccacca gctgagttcc atctccaaac atgagtctgg c 51
<210> 298
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ32*01_BB-L_R1
<400> 298
gatatttggc tggacagcaa gcagagtgcc agttccaaag atgagcttgt ttgtagcacc 60
<210> 299
<211> 51
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ33*01_BB-L_R1
<400> 299
gatatctggc tttataatta gcttggtccc agcgccccag attaactgat a 51
<210> 300
<211> 51
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ34*01_BB-L_R1
<400> 300
gatatttgga aagacttgta atctggtccc agtcccaaag atgagcttgt c 51
<210> 301
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ36*01_BB-L_R1
<400> 301
gatataggga ataacggtga gtctcgttcc agtcccaaag aagaggttgt ttgc 54
<210> 302
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ37*01_BB-L_R1
<400> 302
gatatctggt tttacttgta aagttgtccc ttgcccaaag attagtttgc ctgtgtt 57
<210> 303
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ38*01_BB-L_R1
<400> 303
gatattcgga tttactgcca ggcttgttcc caatccccaa atcagcttac ggttgtt 57
<210> 304
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ39*01_BB-L_R1
<400> 304
gatatggggt ttgaccatta accttgttcc tcctccaaag gtgagcatgt tgcctgc 57
<210> 305
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ40*01_BB-L_R1
<400> 305
gatatttgct aaaaccttca gcctggtgcc tgttccaaag atgtatttgt aggt 54
<210> 306
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ41*01_BB-L_R1
<400> 306
gatatggggt gtgaccaaca gcgaggtgcc tttgccaaag ttgagtgcat acccgga 57
<210> 307
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ42*01_BB-L_R1
<400> 307
gatatttggt ttaacagaga gtttagtgcc ttttccaaag atgagatttc cttggcttcc 60
<210> 308
<211> 48
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ43*01_BB-L_R1
<400> 308
gatatttggt tttactgtca gtctggtccc tgctccaaag cgcatgtc 48
<210> 309
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ44*01_BB-L_R1
<400> 309
gatatcgagc gtgacctgaa gtcttgttcc agtcccaaag gtgagtttac tggcagt 57
<210> 310
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ45*01_BB-L_R1
<400> 310
gatatagggc tggatgatta gatgagtccc tttgccaaag gtgagtccgt cagcacctcc 60
<210> 311
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ46*01_BB-L_R1
<400> 311
gatattgggc ctaactgcta aacgagtccc ggtcccaaaa gtcagcttgt ctccgct 57
<210> 312
<211> 51
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ47*01_BB-L_R1
<400> 312
gatataggac ttgactctca gaatggttcc tgcgccaaag accagtttgt t 51
<210> 313
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ48*01_BB-L_R1
<400> 313
gatattgggt atgatggtga gtcttgttcc agtcccaaag gttaatttct catttcc 57
<210> 314
<211> 51
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ49*01_BB-L_R1
<400> 314
gatatttgga atgaccgtca aacttgtccc tgtcccaaaa tagaactggt t 51
<210> 315
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ50*01_BB-L_R1
<400> 315
gatatttgga atgactgata agcttgtccc tggcccaaat atcaccttgt cgta 54
<210> 316
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ52*01_BB-L_R1
<400> 316
gatatttgga tggacagtca agatggtccc ttgtccaaat gtcagctttc catagctagt 60
acc 63
<210> 317
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ53*01_BB-L_R1
<400> 317
gatatttgga ttcacggtta agagagttcc ttttccaaat gtcagtttat agttgctacc 60
<210> 318
<211> 51
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ54*01_BB-L_R1
<400> 318
gatatttggg ttgatagtca gcctggttcc ttggccaaat accagcttct g 51
<210> 319
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ56*01_BB-L_R1
<400> 319
gatatctggt ctaacactca gagttattcc ttttccaaat gtcagcttac tattggc 57
<210> 320
<211> 57
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ57*01_BB-L_R1
<400> 320
gatatatggg tttactgtca gtttcgttcc ctttccaaag accagctttt cagatcc 57
<210> 321
<211> 48
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ59*01_BB-L_R1
<400> 321
gatattcact ctcacttgcg tccccattcc aaatgtaaat ttcctgtt 48
<210> 322
<211> 54
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRAJ61*01_BB-L_R1
<400> 322
gatattgagt ttcatgattc ctctagtgtt ggctccaaat gtcagtttcc tatt 54
<210> 323
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ1
<400> 323
ggtctcgttt ggcaaaggaa ccagagtttc cacttctccc catatccagt gagacc 56
<210> 324
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ2
<400> 324
ggtctcgttt gggaaaggga cccatgtatt cattatatct gatatccagt gagacc 56
<210> 325
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ3
<400> 325
ggtctcgttt ggatcaggga ccagactcag catccggcca aatatccagt gagacc 56
<210> 326
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ4
<400> 326
ggtctcgttt ggagcaggga ccaggctggc tgtacaccca tatatccagt gagacc 56
<210> 327
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ5
<400> 327
ggtctcgttt gggagtggaa caagactcca agtgcaacca aatatccagt gagacc 56
<210> 328
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ6
<400> 328
ggtctcgttt ggaagaggaa ccagccttat tgttcatccg tatatccagt gagacc 56
<210> 329
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ7
<400> 329
ggtctcgttt gggaagggga accaagtggt ggtcatacca aatatccagt gagacc 56
<210> 330
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ8
<400> 330
ggtctcgttt ggaactggca cccgacttct ggtcagtcca aatatccagt gagacc 56
<210> 331
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ9
<400> 331
ggtctcgttt ggagcaggaa caagactatt tgttaaagca aatatccagt gagacc 56
<210> 332
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ10
<400> 332
ggtctcgttt gggacaggca ctcagctaaa agtggaactc aatatccagt gagacc 56
<210> 333
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ11
<400> 333
ggtctcgttt gggaagggga ctatgcttct agtctctcca gatatccagt gagacc 56
<210> 334
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ12
<400> 334
ggtctcgttt gggagtggga ccagactgct ggtcaggcct gatatccagt gagacc 56
<210> 335
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ13
<400> 335
ggtctcgttt ggaattggaa caaagctcca agtcatccca aatatccagt gagacc 56
<210> 336
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ14
<400> 336
ggtctcgttt gggagtggga caagattatc agtaaaacct gatatccagt gagacc 56
<210> 337
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ15
<400> 337
ggtctcgttt gggaagggaa cccacctatc agtgagttcc aatatccagt gagacc 56
<210> 338
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ16
<400> 338
ggtctcgttt gcaaggggaa ccatgttaaa ggtggatctt aatatccagt gagacc 56
<210> 339
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ17
<400> 339
ggtctcgttt ggaggaggaa ccagggtgct agttaaacca aatatccagt gagacc 56
<210> 340
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ18
<400> 340
ggtctcgttt ggaagaggaa ctcagttgac tgtctggcct gatatccagt gagacc 56
<210> 341
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ19
<400> 341
ggtctcgttt ggaaagggat ccaaacataa tgtcactcca aatatccagt gagacc 56
<210> 342
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ20
<400> 342
ggtctcgttt ggagccggaa ccacagtaac tgtaagagca aatatccagt gagacc 56
<210> 343
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ21
<400> 343
ggtctcgttt ggatctggga ccaaactcaa tgtaaaacca aatatccagt gagacc 56
<210> 344
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ22
<400> 344
ggtctcgttt ggatctggga cacaattgac tgttttacct gatatccagt gagacc 56
<210> 345
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ23
<400> 345
ggtctcgttt ggacagggaa cggagttatc tgtgaaaccc aatatccagt gagacc 56
<210> 346
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ24
<400> 346
ggtctcgttt ggagcaggga cccaggttgt ggtcacccca gatatccagt gagacc 56
<210> 347
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ25
<400> 347
ggtctcgttt gggaagggga caaggctgct tgtcaagcca aatatccagt gagacc 56
<210> 348
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ26
<400> 348
ggtctcgttt ggtcccggaa ccagattgtc cgtgctgccc tatatccagt gagacc 56
<210> 349
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ27
<400> 349
ggtctcgttt ggggatggga ctacgctcac tgtgaagcca aatatccagt gagacc 56
<210> 350
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ28
<400> 350
ggtctcgttt gggaagggga ccaaactctc ggtcatacca aatatccagt gagacc 56
<210> 351
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ29
<400> 351
ggtctcgttt ggaaagggca caagactttc tgtgattgca aatatccagt gagacc 56
<210> 352
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ30
<400> 352
ggtctcgttt ggaaaaggga cacgacttca tattctcccc aatatccagt gagacc 56
<210> 353
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ31
<400> 353
ggtctcgttt ggagatggaa ctcagctggt ggtgaagccc aatatccagt gagacc 56
<210> 354
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ32
<400> 354
ggtctcgttt ggaactggca ctctgcttgc tgtccagcca aatatccagt gagacc 56
<210> 355
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ33
<400> 355
ggtctcgtgg ggcgctggga ccaagctaat tataaagcca gatatccagt gagacc 56
<210> 356
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ34
<400> 356
ggtctcgttt gggactggga ccagattaca agtctttcca aatatccagt gagacc 56
<210> 357
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ36
<400> 357
ggtctcgttt gggactggaa cgagactcac cgttattccc tatatccagt gagacc 56
<210> 358
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ37
<400> 358
ggtctcgttt gggcaaggga caactttaca agtaaaacca gatatccagt gagacc 56
<210> 359
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ38
<400> 359
ggtctcgtgg ggattgggaa caagcctggc agtaaatccg aatatccagt gagacc 56
<210> 360
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ39
<400> 360
ggtctcgttt ggaggaggaa caaggttaat ggtcaaaccc catatccagt gagacc 56
<210> 361
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ40
<400> 361
ggtctcgttt ggaacaggca ccaggctgaa ggttttagca aatatccagt gagacc 56
<210> 362
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ41
<400> 362
ggtctcgttt ggcaaaggca cctcgctgtt ggtcacaccc catatccagt gagacc 56
<210> 363
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ42
<400> 363
ggtctcgttt ggaaaaggca ctaaactctc tgttaaacca aatatccagt gagacc 56
<210> 364
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ43
<400> 364
ggtctcgttt ggagcaggga ccagactgac agtaaaacca aatatccagt gagacc 56
<210> 365
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ44
<400> 365
ggtctcgttt gggactggaa caagacttca ggtcacgctc gatatccagt gagacc 56
<210> 366
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ45
<400> 366
ggtctcgttt ggcaaaggga ctcatctaat catccagccc tatatccagt gagacc 56
<210> 367
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ46
<400> 367
ggtctcgttt gggaccggga ctcgtttagc agttaggccc aatatccagt gagacc 56
<210> 368
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ47
<400> 368
ggtctcgttt ggcgcaggaa ccattctgag agtcaagtcc tatatccagt gagacc 56
<210> 369
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ48
<400> 369
ggtctcgttt gggactggaa caagactcac catcataccc aatatccagt gagacc 56
<210> 370
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ49
<400> 370
ggtctcgttt gggacaggga caagtttgac ggtcattcca aatatccagt gagacc 56
<210> 371
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ50
<400> 371
ggtctcgttt gggccaggga caagcttatc agtcattcca aatatccagt gagacc 56
<210> 372
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ52
<400> 372
ggtctcgttt ggacaaggga ccatcttgac tgtccatcca aatatccagt gagacc 56
<210> 373
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ53
<400> 373
ggtctcgttt ggaaaaggaa ctctcttaac cgtgaatcca aatatccagt gagacc 56
<210> 374
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ54
<400> 374
ggtctcgttt ggccaaggaa ccaggctgac tatcaaccca aatatccagt gagacc 56
<210> 375
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ56
<400> 375
ggtctcgttt ggaaaaggaa taactctgag tgttagacca gatatccagt gagacc 56
<210> 376
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ57
<400> 376
ggtctcgttt ggaaagggaa cgaaactgac agtaaaccca tatatccagt gagacc 56
<210> 377
<211> 50
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ59
<400> 377
ggtctcgttt ggaatgggga cgcaagtgag agtgaatatc cagtgagacc 50
<210> 378
<211> 56
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_TRAJ61
<400> 378
ggtctcgttt ggagccaaca ctagaggaat catgaaactc aatatccagt gagacc 56
<210> 379
<211> 74
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ1
<400> 379
ggtctcgatt acctcccagt tgcaatttgg caaaggaacc agagtttcca cttctcccca 60
tatccagtga gacc 74
<210> 380
<211> 77
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ2
<400> 380
ggtctcggga acaattgata aactcacatt tgggaaaggg acccatgtat tcattatatc 60
tgatatccag tgagacc 77
<210> 381
<211> 74
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ3
<400> 381
ggtctcgagt gcttccaaga taatctttgg atcagggacc agactcagca tccggccaaa 60
tatccagtga gacc 74
<210> 382
<211> 74
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ4
<400> 382
ggtctcgggc tacaataagc tgatctttgg agcagggacc aggctggctg tacacccata 60
tatccagtga gacc 74
<210> 383
<211> 71
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ5
<400> 383
ggtctcgagg agagcactta cttttgggag tggaacaaga ctccaagtgc aaccaaatat 60
ccagtgagac c 71
<210> 384
<211> 74
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ6
<400> 384
ggtctcggga agctacatac ctacatttgg aagaggaacc agccttattg ttcatccgta 60
tatccagtga gacc 74
<210> 385
<211> 71
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ7
<400> 385
ggtctcgaac aacagactcg cttttgggaa ggggaaccaa gtggtggtca taccaaatat 60
ccagtgagac c 71
<210> 386
<211> 71
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ8
<400> 386
ggtctcgttt cagaaacttg tatttggaac tggcacccga cttctggtca gtccaaatat 60
ccagtgagac c 71
<210> 387
<211> 71
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ9
<400> 387
ggtctcgggc ttcaaaacta tctttggagc aggaacaaga ctatttgtta aagcaaatat 60
ccagtgagac c 71
<210> 388
<211> 74
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ10
<400> 388
ggtctcggga ggaaacaaac tcacctttgg gacaggcact cagctaaaag tggaactcaa 60
tatccagtga gacc 74
<210> 389
<211> 71
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ11
<400> 389
ggtctcgtac agcaccctca cctttgggaa ggggactatg cttctagtct ctccagatat 60
ccagtgagac c 71
<210> 390
<211> 71
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ12
<400> 390
ggtctcgagt tataaattga tctttgggag tgggaccaga ctgctggtca ggcctgatat 60
ccagtgagac c 71
<210> 391
<211> 74
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ13
<400> 391
ggtctcgggt taccagaaag ttacctttgg aattggaaca aagctccaag tcatcccaaa 60
tatccagtga gacc 74
<210> 392
<211> 62
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ14
<400> 392
ggtctcgttc atctttggga gtgggacaag attatcagta aaacctgata tccagtgaga 60
cc 62
<210> 393
<211> 71
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ15
<400> 393
ggtctcggga actgctctga tctttgggaa gggaacccac ctatcagtga gttccaatat 60
ccagtgagac c 71
<210> 394
<211> 71
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ16
<400> 394
ggtctcggga cagaagctgc tctttgcaag gggaaccatg ttaaaggtgg atcttaatat 60
ccagtgagac c 71
<210> 395
<211> 74
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ17
<400> 395
ggtctcggca ggcaacaagc taacttttgg aggaggaacc agggtgctag ttaaaccaaa 60
tatccagtga gacc 74
<210> 396
<211> 77
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ18
<400> 396
ggtctcgtca accctgggga ggctatactt tggaagagga actcagttga ctgtctggcc 60
tgatatccag tgagacc 77
<210> 397
<211> 71
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ19
<400> 397
ggtctcgttc tacaatttca cctttggaaa gggatccaaa cataatgtca ctccaaatat 60
ccagtgagac c 71
<210> 398
<211> 68
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ20
<400> 398
ggtctcgtac aagctcagct ttggagccgg aaccacagta actgtaagag caaatatcca 60
gtgagacc 68
<210> 399
<211> 65
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ21
<400> 399
ggtctcgaaa ttttactttg gatctgggac caaactcaat gtaaaaccaa atatccagtg 60
agacc 65
<210> 400
<211> 74
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ22
<400> 400
ggtctcgtct gcaaggcaac tgacctttgg atctgggaca caattgactg ttttacctga 60
tatccagtga gacc 74
<210> 401
<211> 74
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ23
<400> 401
ggtctcgcag ggaggaaagc ttatctttgg acagggaacg gagttatctg tgaaacccaa 60
tatccagtga gacc 74
<210> 402
<211> 74
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ24
<400> 402
ggtctcgagt tggggtaaat tgcagtttgg agcagggacc caggttgtgg tcaccccaga 60
tatccagtga gacc 74
<210> 403
<211> 71
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ25
<400> 403
ggtctcgggc ttctccttta tctttgggaa ggggacaagg ctgcttgtca agccaaatat 60
ccagtgagac c 71
<210> 404
<211> 71
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ26
<400> 404
ggtctcgggt cagaattttg tctttggtcc cggaaccaga ttgtccgtgc tgccctatat 60
ccagtgagac c 71
<210> 405
<211> 71
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ27
<400> 405
ggtctcggca ggcaaatcaa cctttgggga tgggactacg ctcactgtga agccaaatat 60
ccagtgagac c 71
<210> 406
<211> 77
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ28
<400> 406
ggtctcggct gggagttacc aactcacttt tgggaagggg accaaactct cggtcatacc 60
aaatatccag tgagacc 77
<210> 407
<211> 71
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ29
<400> 407
ggtctcgaac acacctcttg tctttggaaa gggcacaaga ctttctgtga ttgcaaatat 60
ccagtgagac c 71
<210> 408
<211> 68
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ30
<400> 408
ggtctcggac aagatcatct ttggaaaagg gacacgactt catattctcc ccaatatcca 60
gtgagacc 68
<210> 409
<211> 68
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ31
<400> 409
ggtctcggcc agactcatgt ttggagatgg aactcagctg gtggtgaagc ccaatatcca 60
gtgagacc 68
<210> 410
<211> 77
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ32
<400> 410
ggtctcgggt gctacaaaca agctcatctt tggaactggc actctgcttg ctgtccagcc 60
aaatatccag tgagacc 77
<210> 411
<211> 68
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ33
<400> 411
ggtctcgtat cagttaatct ggggcgctgg gaccaagcta attataaagc cagatatcca 60
gtgagacc 68
<210> 412
<211> 68
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ34
<400> 412
ggtctcggac aagctcatct ttgggactgg gaccagatta caagtctttc caaatatcca 60
gtgagacc 68
<210> 413
<211> 71
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ36
<400> 413
ggtctcggca aacaacctct tctttgggac tggaacgaga ctcaccgtta ttccctatat 60
ccagtgagac c 71
<210> 414
<211> 74
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ37
<400> 414
ggtctcgaac acaggcaaac taatctttgg gcaagggaca actttacaag taaaaccaga 60
tatccagtga gacc 74
<210> 415
<211> 74
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ38
<400> 415
ggtctcgaac aaccgtaagc tgatttgggg attgggaaca agcctggcag taaatccgaa 60
tatccagtga gacc 74
<210> 416
<211> 74
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ39
<400> 416
ggtctcggca ggcaacatgc tcacctttgg aggaggaaca aggttaatgg tcaaacccca 60
tatccagtga gacc 74
<210> 417
<211> 71
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ40
<400> 417
ggtctcgacc tacaaataca tctttggaac aggcaccagg ctgaaggttt tagcaaatat 60
ccagtgagac c 71
<210> 418
<211> 74
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ41
<400> 418
ggtctcgtcc gggtatgcac tcaactttgg caaaggcacc tcgctgttgg tcacacccca 60
tatccagtga gacc 74
<210> 419
<211> 77
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ42
<400> 419
ggtctcggga agccaaggaa atctcatctt tggaaaaggc actaaactct ctgttaaacc 60
aaatatccag tgagacc 77
<210> 420
<211> 65
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ43
<400> 420
ggtctcggac atgcgctttg gagcagggac cagactgaca gtaaaaccaa atatccagtg 60
agacc 65
<210> 421
<211> 74
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ44
<400> 421
ggtctcgact gccagtaaac tcacctttgg gactggaaca agacttcagg tcacgctcga 60
tatccagtga gacc 74
<210> 422
<211> 77
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ45
<400> 422
ggtctcggga ggtgctgacg gactcacctt tggcaaaggg actcatctaa tcatccagcc 60
ctatatccag tgagacc 77
<210> 423
<211> 74
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ46
<400> 423
ggtctcgagc ggagacaagc tgacttttgg gaccgggact cgtttagcag ttaggcccaa 60
tatccagtga gacc 74
<210> 424
<211> 68
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ47
<400> 424
ggtctcgaac aaactggtct ttggcgcagg aaccattctg agagtcaagt cctatatcca 60
gtgagacc 68
<210> 425
<211> 74
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ48
<400> 425
ggtctcggga aatgagaaat taacctttgg gactggaaca agactcacca tcatacccaa 60
tatccagtga gacc 74
<210> 426
<211> 68
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ49
<400> 426
ggtctcgaac cagttctatt ttgggacagg gacaagtttg acggtcattc caaatatcca 60
gtgagacc 68
<210> 427
<211> 71
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ50
<400> 427
ggtctcgtac gacaaggtga tatttgggcc agggacaagc ttatcagtca ttccaaatat 60
ccagtgagac c 71
<210> 428
<211> 80
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ52
<400> 428
ggtctcgggt actagctatg gaaagctgac atttggacaa gggaccatct tgactgtcca 60
tccaaatatc cagtgagacc 80
<210> 429
<211> 77
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ53
<400> 429
ggtctcgggt agcaactata aactgacatt tggaaaagga actctcttaa ccgtgaatcc 60
aaatatccag tgagacc 77
<210> 430
<211> 71
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ54
<400> 430
ggtctcggcc cagaagctgg tatttggcca aggaaccagg ctgactatca acccaaatat 60
ccagtgagac c 71
<210> 431
<211> 74
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ56
<400> 431
ggtctcggcc aatagtaagc tgacatttgg aaaaggaata actctgagtg ttagaccaga 60
tatccagtga gacc 74
<210> 432
<211> 74
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ57
<400> 432
ggtctcggga tctgaaaagc tggtctttgg aaagggaacg aaactgacag taaacccata 60
tatccagtga gacc 74
<210> 433
<211> 65
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ59
<400> 433
ggtctcgaac aggaaattta catttggaat ggggacgcaa gtgagagtga atatccagtg 60
agacc 65
<210> 434
<211> 71
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_TRAJ61
<400> 434
ggtctcgaat aggaaactga catttggagc caacactaga ggaatcatga aactcaatat 60
ccagtgagac c 71
<210> 435
<211> 414
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV2_BB_1
<400> 435
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat ggatacctgg ctcgtatgct 60
gggcaatttt tagtctcttg aaagcaggac tcacagaacc tgaagtcacc cagactccca 120
gccatcaggt cacacagatg ggacaggaag tgatcttgcg ctgtgtcccc atctctaatc 180
acttatactt ctattggtac agacaaatct tggggcagaa agtcgagttt ctggtttcct 240
tttataataa tgaaatctca gagaagtctg aaatattcga tgatcaattc tcagttgaaa 300
ggcctgatgg atcaaatttc actctgaaga tccggtccac aaagctggag gactcagcca 360
tgtacttttg cagagacctt gcggccgtgt cttccgacgc tgacagtgta gata 414
<210> 436
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV3-1_BB_1
<400> 436
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggctgcagg ctcctctgct 60
gtgtggtctt ttgcctcctc caagcaggtc ccttggacac agctgtttcc cagactccaa 120
aatacctggt cacacagatg ggaaacgaca agtccattaa atgtgaacaa aatctgggcc 180
atgatactat gtattggtat aaacaggact ctaagaaatt tctgaagata atgtttagct 240
acaataataa ggagctcatt ataaatgaaa cagttccaaa tcgcttctca cctaaatctc 300
cagacaaagc tcacttaaat cttcacatca attccctgga gcttggtgac tctgctgtgt 360
atttttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 437
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV4-1_BB_1
<400> 437
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggctgcagg ctgctctgct 60
gtgcggttct ctgtctcctg ggagcagttc ccatagacac tgaagttacc cagacaccaa 120
aacacctggt catgggaatg acaaataaga agtctttgaa atgtgaacaa catatggggc 180
acagggctat gtattggtac aagcagaaag ctaagaagcc accggagctc atgtttgtct 240
acagctatga gaaactctct ataaatgaaa gtgtgccaag tcgcttctca cctgaatgcc 300
ccaacagctc tctcttaaac cttcacctac acgccctgca gccagaagat tcagccctgt 360
atctttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 438
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV4-2_BB_1
<400> 438
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggctgcagg ctgctctgct 60
gtgcggttct ctgtctcctg ggagcggtcc ccatggaaac gggagttacg cagacaccaa 120
gacacctggt catgggaatg acaaataaga agtctttgaa atgtgaacaa catctggggc 180
ataacgctat gtattggtac aagcaaagtg ctaagaagcc actggagctc atgtttgtct 240
acaactttaa agaacagact gaaaacaaca gtgtgccaag tcgcttctca cctgaatgcc 300
ccaacagctc tcacttattc cttcacctac acaccctgca gccagaagat tcggccctgt 360
atctttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 439
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV4-3_BB_1
<400> 439
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggctgcagg ctgctctgct 60
gtgcggttct ctgtctcctg ggagcggtcc ccatggaaac gggagttacg cagacaccaa 120
gacacctggt catgggaatg acaaataaga agtctttgaa atgtgaacaa catctgggtc 180
ataacgctat gtattggtac aagcaaagtg ctaagaagcc actggagctc atgtttgtct 240
acagtcttga agaacgggtt gaaaacaaca gtgtgccaag tcgcttctca cctgaatgcc 300
ccaacagctc tcacttattc cttcacctac acaccctgca gccagaagat tcggccctgt 360
atctttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 440
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV5-1_BB_1
<400> 440
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggctccagg ctgctctgtt 60
gggtgctgct ttgtctcctg ggagcaggcc cagtaaaggc tggagtcact caaactccaa 120
gatatctgat caaaacgaga ggacagcaag tgacactgag ctgctcccct atctctgggc 180
ataggagtgt atcctggtac caacagaccc caggacaggg ccttcagttc ctctttgaat 240
acttcagtga gacacagaga aacaaaggaa acttccctgg tcgattctca gggcgccagt 300
tctctaactc tcgctctgag atgaatgtga gcaccttgga gctgggggac tcggcccttt 360
atctttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 441
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV5-4_BB_1
<400> 441
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggccctggg ctcctctgct 60
gggtgctgct ttgtctcctg ggagcaggct cagtggagac tggagtcacc caaagtccca 120
cacacctgat caaaacgaga ggacagcaag tgactctgag atgctcttct cagtctgggc 180
acaacactgt gtcctggtac caacaggccc tgggtcaggg gccccagttt atctttcagt 240
attataggga ggaagagaat ggcagaggaa acttccctcc tagattctca ggactccagt 300
tccctaatta tagctctgag ctgaatgtga acgccttgga gctggacgac tcggccctgt 360
atctttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 442
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV5-5_BB_1
<400> 442
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggccctggg ctcctctgct 60
gggtgctgct ttgtctcctg ggagcaggcc cagtggacgc tggagtcacc caaagtccca 120
cacacctgat caaaacgaga ggacagcaag tgactctgag atgctctcct atctctgggc 180
acaagagtgt gtcctggtac caacaggtcc tgggtcaggg gccccagttt atctttcagt 240
attatgagaa agaagagaga ggaagaggaa acttccctga tcgattctca gctcgccagt 300
tccctaacta tagctctgag ctgaatgtga acgccttgtt gctgggggac tcggccctgt 360
atctttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 443
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV5-6_BB_1
<400> 443
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggccccggg ctcctctgct 60
gggcactgct ttgtctcctg ggagcaggct tagtggacgc tggagtcacc caaagtccca 120
cacacctgat caaaacgaga ggacagcaag tgactctgag atgctctcct aagtctgggc 180
atgacactgt gtcctggtac caacaggccc tgggtcaggg gccccagttt atctttcagt 240
attatgagga ggaagagaga cagagaggca acttccctga tcgattctca ggtcaccagt 300
tccctaacta tagctctgag ctgaatgtga acgccttgtt gctgggggac tcggccctct 360
atctttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 444
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV5-7_BB_1
<400> 444
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggccccggg ctcctctgct 60
gggtgctgct ttgtccccta ggagaaggcc cagtggacgc tggagtcacc caaagtccca 120
cacacctgat caaaacgaga ggacagcacg tgactctgag atgctctcct atctctgggc 180
acaccagtgt gtcctcgtac caacaggccc tgggtcaggg gccccagttt atctttcagt 240
attatgagaa agaagagaga ggaagaggaa acttccctga tcaattctca ggtcaccagt 300
tccctaacta tagctctgag ctgaatgtga acgccttgtt gctaggggac tcggccctct 360
atctttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 445
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV5-8_BB_1
<400> 445
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggacccagg ctcctcttct 60
gggcactgct ttgtctcctc ggaacaggcc cagtggaggc tggagtcaca caaagtccca 120
cacacctgat caaaacgaga ggacagcaag cgactctgag atgctctcct atctctgggc 180
acaccagtgt gtactggtac caacaggccc tgggtctggg cctccagttc ctcctttggt 240
atgacgaggg tgaagagaga aacagaggaa acttccctcc tagattttca ggtcgccagt 300
tccctaatta tagctctgag ctgaatgtga acgccttgga gctggaggac tcggccctgt 360
atctttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 446
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV6-1_BB_1
<400> 446
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gagcatcggg ctcctgtgct 60
gtgtggcctt ttctctcctg tgggcaagtc cagtgaatgc tggtgtcact cagaccccaa 120
aattccaggt cctgaaaaca ggacagagca tgacactgca gtgtgcccag gatatgaacc 180
ataactccat gtactggtat cgacaagacc caggcatggg actgaggctg atttattact 240
cagcttctga gggtaccact gacaaaggag aagtccccaa tggctacaat gtctccagat 300
taaacaaacg ggagttctcg ctcaggctgg agtcggctgc tccctcccag acatctgtgt 360
acttttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 447
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV6-3_BB_1
<400> 447
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gagcctcggg ctcctgtgct 60
gtggggtctt ttctctcctg tgggcaggtc cagtgaatgc tggtgtcact cagaccccaa 120
aattccgggt cctgaaaaca ggacagagca tgacactgct gtgtgcccag gatatgaacc 180
atgaatacat gtactggtat cgacaagacc caggcatggg gctgaggctg attcattact 240
cagttggtga gggtacaact gccaaaggag aggtccctga tggctacaat gtctccagat 300
taaaaaaaca gaatttcctg ctggggttgg agtcggctgc tccctcccaa acatctgtgt 360
acttttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 448
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV6-4_BB_1
<400> 448
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gagaatcagg ctcctgtgct 60
gtgtggcctt ttctctcctg tgggcaggtc cagtgattgc tgggatcacc caggcaccaa 120
catctcagat cctggcagca ggacggcgca tgacactgag atgtacccag gatatgagac 180
ataatgccat gtactggtat agacaagatc taggactggg gctaaggctc atccattatt 240
caaatactgc aggtaccact ggcaaaggag aagtccctga tggttatagt gtctccagag 300
caaacacaga tgatttcccc ctcacgttgg cgtctgctgt accctctcag acatctgtgt 360
acttttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 449
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV6-5_BB_1
<400> 449
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gagcatcggc ctcctgtgct 60
gtgcagcctt gtctctcctg tgggcaggtc cagtgaatgc tggtgtcact cagaccccaa 120
aattccaggt cctgaaaaca ggacagagca tgacactgca gtgtgcccag gatatgaacc 180
atgaatacat gtcctggtat cgacaagacc caggcatggg gctgaggctg attcattact 240
cagttggtgc tggtatcact gaccaaggag aagtccccaa tggctacaat gtctccagat 300
caaccacaga ggatttcccg ctcaggctgc tgtcggctgc tccctcccag acatctgtgt 360
acttttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 450
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV6-6_BB_1
<400> 450
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gagcatcagc ctcctgtgct 60
gtgcagcctt tcctctcctg tgggcaggtc cagtgaatgc tggtgtcact cagaccccaa 120
aattccgcat cctgaagata ggacagagca tgacactgca gtgtacccag gatatgaacc 180
ataactacat gtactggtat cgacaagacc caggcatggg gctgaagctg atttattatt 240
cagttggtgc tggtatcact gataaaggag aagtcccgaa tggctacaac gtctccagat 300
caaccacaga ggatttcccg ctcaggctgg agttggctgc tccctcccag acatctgtgt 360
acttttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 451
<211> 408
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV6-8_BB_1
<400> 451
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gagcctcggg ctcctgtgct 60
gtgcggcctt ttctctcctg tgggcaggtc ccgtgaatgc tggtgtcact cagaccccaa 120
aattccacat cctgaaaaca ggacagagca tgacactgca gtgtgcccag gatatgaacc 180
atggatacat gtcctggtat cgacaagacc caggcatggg gctgagactg atttactact 240
cagctgctgc tggtactact gacaaagaag tccccaatgg ctacaatgtc tctagattaa 300
acacagagga tttcccactc aggctggtgt cggctgctcc ctcccagaca tctgtgtacc 360
tttgcagaga ccttgcggcc gtgtcttccg acgctgacag tgtagata 408
<210> 452
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV6-9_BB_1
<400> 452
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gagcatcggg ctcctgtgct 60
gtgtggcctt ttctctcctg tgggcaggtc cagtgaatgc tggtgtcact cagaccccaa 120
aattccacat cctgaaaaca ggacagagca tgacactgca gtgtgcccag gatatgaacc 180
atggatactt gtcctggtat cgacaagacc caggcatggg gctgaggcgc attcattact 240
cagttgctgc tggtatcact gacaaaggag aagtccccga tggctacaat gtatccagat 300
caaacacaga ggatttcccg ctcaggctgg agtcagctgc tccctcccag acatctgtat 360
acttttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 453
<211> 414
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV7-2_BB_1
<400> 453
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggcaccagg ctcctcttct 60
gggtggcctt ctgtctcctg ggggcagatc acacaggagc tggagtctcc cagtccccca 120
gtaacaaggt cacagagaag ggaaaggatg tagagctcag gtgtgatcca atttcaggtc 180
atactgccct ttactggtac cgacagagcc tggggcaggg cctggagttt ttaatttact 240
tccaaggcaa cagtgcacca gacaaatcag ggctgcccag tgatcgcttc tctgcagaga 300
ggactggggg atccgtctcc actctgacga tccagcgcac acagcaggag gactcggccg 360
tgtatctttg cagagacctt gcggccgtgt cttccgacgc tgacagtgta gata 414
<210> 454
<211> 414
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV7-3_BB_1
<400> 454
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggcaccagg ctcctctgct 60
gggcagccct gtgcctcctg ggggcagatc acacaggtgc tggagtctcc cagaccccca 120
gtaacaaggt cacagagaag ggaaaatatg tagagctcag gtgtgatcca atttcaggtc 180
atactgccct ttactggtac cgacaaagcc tggggcaggg cccagagttt ctaatttact 240
tccaaggcac gggtgcggca gatgactcag ggctgcccaa cgatcggttc tttgcagtca 300
ggcctgaggg atccgtctct actctgaaga tccagcgcac agagcggggg gactcagccg 360
tgtatctttg cagagacctt gcggccgtgt cttccgacgc tgacagtgta gata 414
<210> 455
<211> 414
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV7-6_BB_1
<400> 455
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggcaccagt ctcctatgct 60
gggtggtcct gggtttccta gggacagatc acacaggtgc tggagtctcc cagtctccca 120
ggtacaaagt cacaaagagg ggacaggatg tagctctcag gtgtgatcca atttcgggtc 180
atgtatccct ttattggtac cgacaggccc tggggcaggg cccagagttt ctgacttact 240
tcaattatga agcccaacaa gacaaatcag ggctgcccaa tgatcggttc tctgcagaga 300
ggcctgaggg atccatctcc actctgacga tccagcgcac agagcagcgg gactcggcca 360
tgtatcgttg cagagacctt gcggccgtgt cttccgacgc tgacagtgta gata 414
<210> 456
<211> 414
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV7-7_BB_1
<400> 456
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggtaccagt ctcctatgct 60
gggtggtcct gggtttccta gggacagatc acacaggtgc tggagtctcc cagtctccca 120
ggtacaaagt cacaaagagg ggacaggatg taactctcag gtgtgatcca atttcgagtc 180
atgcaaccct ttattggtat caacaggccc tggggcaggg cccagagttt ctgacttact 240
tcaattatga agctcaacca gacaaatcag ggctgcccag tgatcggttc tctgcagaga 300
ggcctgaggg atccatctcc actctgacga ttcagcgcac agagcagcgg gactcagcca 360
tgtatcgttg cagagacctt gcggccgtgt cttccgacgc tgacagtgta gata 414
<210> 457
<211> 414
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV7-8_BB_1
<400> 457
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggcaccagg ctcctctgct 60
gggtggtcct gggtttccta gggacagatc acacaggtgc tggagtctcc cagtccccta 120
ggtacaaagt cgcaaagaga ggacaggatg tagctctcag gtgtgatcca atttcgggtc 180
atgtatccct tttttggtac caacaggccc tggggcaggg gccagagttt ctgacttatt 240
tccagaatga agctcaacta gacaaatcgg ggctgcccag tgatcgcttc tttgcagaaa 300
ggcctgaggg atccgtctcc actctgaaga tccagcgcac acagcaggag gactccgccg 360
tgtatctttg cagagacctt gcggccgtgt cttccgacgc tgacagtgta gata 414
<210> 458
<211> 414
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV7-9_BB_1
<400> 458
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggcaccagc ctcctctgct 60
ggatggccct gtgtctcctg ggggcagatc acgcagatac tggagtctcc cagaacccca 120
gacacaagat cacaaagagg ggacagaatg taactttcag gtgtgatcca atttctgaac 180
acaaccgcct ttattggtac cgacagaccc tggggcaggg cccagagttt ctgacttact 240
tccagaatga agctcaacta gaaaaatcaa ggctgctcag tgatcggttc tctgcagaga 300
ggcctaaggg atctttctcc accttggaga tccagcgcac agagcagggg gactcggcca 360
tgtatctttg cagagacctt gcggccgtgt cttccgacgc tgacagtgta gata 414
<210> 459
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV9_BB_1
<400> 459
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggcttcagg ctcctctgct 60
gtgtggcctt ttgtctcctg ggagcaggcc cagtggattc tggagtcaca caaaccccaa 120
agcacctgat cacagcaact ggacagcgag tgacgctgag atgctcccct aggtctggtg 180
acctctctgt gtactggtac caacagagcc tggaccaggg cctccagttc ctcattcagt 240
attataatgg agaagagaga gcaaaaggaa acattcttga acgattctcc gcacaacagt 300
tccctgactt gcactctgaa ctaaacctga gctctctgga gctgggggac tcagctttgt 360
acttttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 460
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV10-1_BB_1
<400> 460
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggcacgagg ctcttcttct 60
atgtggccct ttgtctgctg tgggcaggac acagggatgc tgaaatcacc cagagcccaa 120
gacacaagat cacagagaca ggaaggcagg tgaccttggc gtgtcaccag acttggaacc 180
acaacaatat gttctggtat cgacaagacc tgggacatgg gctgaggctg atccattact 240
catatggtgt tcaagacact aacaaaggag aagtctcaga tggctacagt gtctctagat 300
caaacacaga ggacctcccc ctcactctgg agtctgctgc ctcctcccag acatctgtat 360
acttttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 461
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV10-2_BB_1
<400> 461
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggcaccagg ctcttcttct 60
atgtggccct ttgtctgctg tgggcaggac acagggatgc tggaatcacc cagagcccaa 120
gatacaagat cacagagaca ggaaggcagg tgaccttgat gtgtcaccag acttggagcc 180
acagctatat gttctggtat cgacaagacc tgggacatgg gctgaggctg atctattact 240
cagcagctgc tgatattaca gataaaggag aagtccccga tggctatgtt gtctccagat 300
ccaagacaga gaatttcccc ctcactctgg agtcagctac ccgctcccag acatctgtgt 360
acttttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 462
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV10-3_BB_1
<400> 462
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggcacaagg ttgttcttct 60
atgtggccct ttgtctcctg tggacaggac acatggatgc tggaatcacc cagagcccaa 120
gacacaaggt cacagagaca ggaacaccag tgactctgag atgtcaccag actgagaacc 180
accgctatat gtactggtat cgacaagacc cggggcatgg gctgaggctg atccattact 240
catatggtgt taaagatact gacaaaggag aagtctcaga tggctatagt gtctctagat 300
caaagacaga ggatttcctc ctcactctgg agtccgctac cagctcccag acatctgtgt 360
acttttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 463
<211> 414
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV11-1_BB_1
<400> 463
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gagcaccagg cttctctgct 60
ggatggccct ctgtctcctg ggggcagaac tctcagaagc tgaagttgcc cagtccccca 120
gatataagat tacagagaaa agccaggctg tggctttttg gtgtgatcct atttctggcc 180
atgctaccct ttactggtac cggcagatcc tgggacaggg cccggagctt ctggttcaat 240
ttcaggatga gagtgtagta gatgattcac agttgcctaa ggatcgattt tctgcagaga 300
ggctcaaagg agtagactcc actctcaaga tccagcctgc agagcttggg gactcggcca 360
tgtatctttg cagagacctt gcggccgtgt cttccgacgc tgacagtgta gata 414
<210> 464
<211> 414
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV11-2_BB_1
<400> 464
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggcaccagg ctcctctgct 60
gggcggccct ctgtctcctg ggagcagaac tcacagaagc tggagttgcc cagtctccca 120
gatataagat tatagagaaa aggcagagtg tggctttttg gtgcaatcct atatctggcc 180
atgctaccct ttactggtac cagcagatcc tgggacaggg cccaaagctt ctgattcagt 240
ttcagaataa cggtgtagtg gatgattcac agttgcctaa ggatcgattt tctgcagaga 300
ggctcaaagg agtagactcc actctcaaga tccagcctgc aaagcttgag gactcggccg 360
tgtatctttg cagagacctt gcggccgtgt cttccgacgc tgacagtgta gata 414
<210> 465
<211> 414
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV11-3_BB_1
<400> 465
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggtaccagg ctcctctgct 60
gggtggcctt ctgtctcctg gtggaagaac tcatagaagc tggagtggtt cagtctccca 120
gatataagat tatagagaaa aaacagcctg tggctttttg gtgcaatcct atttctggcc 180
acaataccct ttactggtac ctgcagaact tgggacaggg cccggagctt ctgattcgat 240
atgagaatga ggaagcagta gacgattcac agttgcctaa ggatcgattt tctgcagaga 300
ggctcaaagg agtagactcc actctcaaga tccagcctgc agagcttggg gactcggccg 360
tgtatctttg cagagacctt gcggccgtgt cttccgacgc tgacagtgta gata 414
<210> 466
<211> 414
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV12-3_BB_1
<400> 466
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat ggactcctgg accttctgct 60
gtgtgtccct ttgcatcctg gtagcgaagc atacagatgc tggagttatc cagtcacccc 120
gccatgaggt gacagagatg ggacaagaag tgactctgag atgtaaacca atttcaggcc 180
acaactccct tttctggtac agacagacca tgatgcgggg actggagttg ctcatttact 240
ttaacaacaa cgttccgata gatgattcag ggatgcccga ggatcgattc tcagctaaga 300
tgcctaatgc atcattctcc actctgaaga tccagccctc agaacccagg gactcagctg 360
tgtacttttg cagagacctt gcggccgtgt cttccgacgc tgacagtgta gata 414
<210> 467
<211> 414
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV12-4_BB_1
<400> 467
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat ggactcctgg accctctgct 60
gtgtgtccct ttgcatcctg gtagcaaagc acacagatgc tggagttatc cagtcacccc 120
ggcacgaggt gacagagatg ggacaagaag tgactctgag atgtaaacca atttcaggac 180
acgactacct tttctggtac agacagacca tgatgcgggg actggagttg ctcatttact 240
ttaacaacaa cgttccgata gatgattcag ggatgcccga ggatcgattc tcagctaaga 300
tgcctaatgc atcattctcc actctgaaga tccagccctc agaacccagg gactcagctg 360
tgtacttttg cagagacctt gcggccgtgt cttccgacgc tgacagtgta gata 414
<210> 468
<211> 414
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV12-5_BB_1
<400> 468
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat ggccaccagg ctcctctgct 60
gtgtggttct ttgtctcctg ggagaagagc ttatagatgc tagagtcacc cagacaccaa 120
ggcacaaggt gacagagatg ggacaagaag taacaatgag atgtcagcca attttaggcc 180
acaatactgt tttctggtac agacagacca tgatgcaagg actggagttg ctggcttact 240
tccgcaaccg ggctcctcta gatgattcgg ggatgccgaa ggatcgattc tcagcagaga 300
tgcctgatgc aactttagcc actctgaaga tccagccctc agaacccagg gactcagctg 360
tgtacttttg cagagacctt gcggccgtgt cttccgacgc tgacagtgta gata 414
<210> 469
<211> 441
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV13_BB_1
<400> 469
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gcttagtcct gacctgcctg 60
actctgcctg gaacaccagg ctcctctgcc atgtcatgct ttgtctcctg ggagcagttt 120
cagtggctgc tggagtcatc cagtccccaa gacatctgat caaagaaaag agggaaacag 180
ccactctgaa atgctatcct atccctagac acgacactgt ctactggtac cagcagggtc 240
caggtcagga cccccagttc ctcatttcgt tttatgaaaa gatgcagagc gataaaggaa 300
gcatccctga tcgattctca gctcaacagt tcagtgacta tcattctgaa ctgaacatga 360
gctccttgga gctgggggac tcagccctgt acttttgcag agaccttgcg gccgtgtctt 420
ccgacgctga cagtgtagat a 441
<210> 470
<211> 414
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV14_BB_1
<400> 470
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat ggtttccagg cttctcagtt 60
tagtgtccct ttgtctcctg ggagcaaagc acatagaagc tggagttact cagttcccca 120
gccacagcgt aatagagaag ggccagactg tgactctgag atgtgaccca atttctggac 180
atgataatct ttattggtat cgacgtgtta tgggaaaaga aataaaattt ctgttacatt 240
ttgtgaaaga gtctaaacag gatgagtccg gtatgcccaa caatcgattc ttagctgaaa 300
ggactggagg gacgtattct actctgaagg tgcagcctgc agaactggag gattctggag 360
tttacttttg cagagacctt gcggccgtgt cttccgacgc tgacagtgta gata 414
<210> 471
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV15_BB_1
<400> 471
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggtcctggg cttctccact 60
ggatggccct ttgtctcctt ggaacaggtc atggggatgc catggtcatc cagaacccaa 120
gataccaggt tacccagttt ggaaagccag tgaccctgag ttgttctcag actttgaacc 180
ataacgtcat gtactggtac cagcagaagt caagtcaggc cccaaagctg ctgttccact 240
actatgacaa agattttaac aatgaagcag acacccctga taacttccaa tccaggaggc 300
cgaacacttc tttctgcttt cttgacatcc gctcaccagg cctgggggac acagccatgt 360
acctttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 472
<211> 414
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV16_BB_1
<400> 472
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gagcccaata ttcacctgca 60
tcacaatcct ttgtctgctg gctgcaggtt ctcctggtga agaagtcgcc cagactccaa 120
aacatcttgt cagaggggaa ggacagaaag caaaattata ttgtgcccca ataaaaggac 180
acagttatgt tttttggtac caacaggtcc tgaaaaacga gttcaagttc ttgatttcct 240
tccagaatga aaatgtcttt gatgaaacag gtatgcccaa ggaaagattt tcagctaagt 300
gcctcccaaa ttcaccctgt agccttgaga tccaggctac gaagcttgag gattcagcag 360
tgtacttttg cagagacctt gcggccgtgt cttccgacgc tgacagtgta gata 414
<210> 473
<211> 414
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV18_BB_1
<400> 473
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat ggacaccaga gtactctgct 60
gtgcggtcat ctgccttctg ggggcaggac tctcaaatgc cggcgtcatg cagaacccaa 120
gacacctggt caggaggagg ggacaggagg caagactgag atgcagccca atgaaaggac 180
acagtcatgt ttactggtat cggcagctcc cagaggaagg tctgaaattc atggtttatc 240
tccagaaaga aaatatcata gatgagtcag gaatgccaaa ggaacgattt tctgctgaat 300
ttcccaaaga gggccccagc atcctgagga tccagcaggt agtgcgagga gattcggcag 360
cttacttttg cagagacctt gcggccgtgt cttccgacgc tgacagtgta gata 414
<210> 474
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV19_BB_1
<400> 474
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gagcaaccag gtgctctgct 60
gtgtggtcct ttgtttcctg ggagcaaaca ccgtggatgg tggaatcact cagtccccaa 120
agtacctgtt cagaaaggaa ggacagaatg tgaccctgag ttgtgaacag aatttgaacc 180
acgatgccat gtactggtac cgacaggacc cagggcaagg gctgagattg atctactact 240
cacagatagt aaatgacttt cagaaaggag atatagctga agggtacagc gtctctcggg 300
agaagaagga atcctttcct ctcactgtga catcggccca aaagaacccg acagctttct 360
atctttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 475
<211> 405
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV20-1_BB_1
<400> 475
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gctgctgctt ctgctgcttc 60
tggggccagg ctccgggctt ggtgctgtcg tctctcaaca tccgagctgg gttatctgta 120
agagtggaac ctctgtgaag atcgagtgcc gttccctgga ctttcaggcc acaactatgt 180
tttggtatcg tcagttcccg aaacagagtc tcatgctgat ggcaacttcc aatgagggct 240
ccaaggccac atacgagcaa ggcgtcgaga aggacaagtt tctcatcaac catgcaagcc 300
tgaccttgtc cactctgaca gtgaccagtg cccatcctga agatagcagc ttctacattt 360
gcagagacct tgcggccgtg tcttccgacg ctgacagtgt agata 405
<210> 476
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV24-1_BB_1
<400> 476
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat ggcctccctg ctcttcttct 60
gtggggcctt ttatctcctg ggaacagggt ccatggatgc tgatgttacc cagaccccaa 120
ggaataggat cacaaagaca ggaaagagga ttatgctgga atgttctcag actaagggtc 180
atgatagaat gtactggtat cgacaagacc caggactggg cctacggttg atctattact 240
cctttgatgt caaagatata aacaaaggag agatctctga tggatacagt gtctctcgac 300
aggcacaggc taaattctcc ctgtccctag agtctgccat ccccaaccag acagctcttt 360
acttttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 477
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV25-1_BB_1
<400> 477
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gactatcagg ctcctctgct 60
acatgggctt ttattttctg ggggcaggcc tcatggaagc tgacatctac cagaccccaa 120
gataccttgt tatagggaca ggaaagaaga tcactctgga atgttctcaa accatgggcc 180
atgacaaaat gtactggtat caacaagatc caggaatgga actacacctc atccactatt 240
cctatggagt taattccaca gagaagggag atctttcctc tgagtcaaca gtctccagaa 300
taaggacgga gcattttccc ctgaccctgg agtctgccag gccctcacat acctctcagt 360
acctttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 478
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV27_BB_1
<400> 478
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggcccccag ctccttggct 60
atgtggtcct ttgccttcta ggagcaggcc ccctggaagc ccaagtgacc cagaacccaa 120
gatacctcat cacagtgact ggaaagaagt taacagtgac ttgttctcag aatatgaacc 180
atgagtatat gtcctggtat cgacaagacc cagggctggg cttaaggcag atctactatt 240
caatgaatgt tgaggtgact gataagggag atgttcctga agggtacaaa gtctctcgaa 300
aagagaagag gaatttcccc ctgatcctgg agtcgcccag ccccaaccag acctctctgt 360
acttttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 479
<211> 411
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV28_BB_1
<400> 479
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gggaatcagg ctcctctgtc 60
gtgtggcctt ttgtttcctg gctgtaggcc tcgtagatgt gaaagtaacc cagagctcga 120
gatatctagt caaaaggacg ggagagaaag tttttctgga atgtgtccag gatatggacc 180
atgaaaatat gttctggtat cgacaagacc caggtctggg gctacggctg atctatttct 240
catatgatgt taaaatgaaa gaaaaaggag atattcctga ggggtacagt gtctctagag 300
agaagaagga gcgcttctcc ctgattctgg agtccgccag caccaaccag acatctatgt 360
acctttgcag agaccttgcg gccgtgtctt ccgacgctga cagtgtagat a 411
<210> 480
<211> 405
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV29-1_BB_1
<400> 480
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gctgagtcta ctgctccttc 60
tcctgggact aggctctgtg ttcagtgctg tcatctctca aaagccaagc agggatatct 120
gtcaacgtgg aacctccctg acgatccagt gtcaagtcga tagccaagtc accatgatgt 180
tctggtaccg tcagcaacct ggacagagcc tgacactgat cgcaactgca aatcagggct 240
ctgaggccac atatgagagt ggatttgtca ttgacaagtt tcccatcagc cgcccaaacc 300
taacattctc aactctgact gtgagcaaca tgagccctga agatagcagc atatatcttt 360
gcagagacct tgcggccgtg tcttccgacg ctgacagtgt agata 405
<210> 481
<211> 405
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBV30_BB_1
<400> 481
gttcgaagct ggcatgacac gaagacttgt acgccaccat gctctgctct ctccttgccc 60
ttctcctggg cactttcttt ggggtcagat ctcagactat tcatcaatgg ccagcgaccc 120
tggtgcagcc tgtgggcagc ccgctctctc tggagtgcac tgtggaggga acatcaaacc 180
ccaacctata ctggtaccga caggctgcag gcaggggcct ccagctgctc ttctactccg 240
ttggtattgg ccagatcagc tctgaggtgc cccagaatct ctcagcctcc agaccccagg 300
accggcagtt catcctgagt tctaagaagc tccttctcag tgactctggc ttctatcttt 360
gcagagacct tgcggccgtg tcttccgacg ctgacagtgt agata 405
<210> 482
<211> 595
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBC1 cloning fragment
<400> 482
cagcactcgt atgatcagag gaagactagg ccgcataggt ctcagtgttc ccacccgagg 60
tcgctgtgtt tgagccatca gaagcagaga tctcccacac ccaaaaggcc acactggtgt 120
gcctggccac aggcttcttc cccgaccacg tggagctgag ctggtgggtg aatgggaagg 180
aggtgcacag tggggtcagc acagacccgc agcccctcaa ggagcagccc gccctcaatg 240
actccagata ctgcctgagc agccgcctga gggtgtcggc caccttctgg cagaaccccc 300
gcaaccactt ccgctgtcaa gtccagttct acgggctctc ggagaatgac gagtggaccc 360
aggatagggc caaacccgtc acccagatcg tcagcgccga ggcctggggt agagcagact 420
gtggctttac ctcggtgtcc taccagcaag gggtcctgtc tgccaccatc ctctatgaga 480
tcctgctagg gaaggccacc ctgtatgctg tgctggtcag cgcccttgtg ttgatggcca 540
tggtcaagag aaaggatttc tgactaggtg tcttcgctac actgatccga tggtc 595
<210> 483
<211> 601
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBC2 cloning fragment
<400> 483
cagcactcgt atgatcagag gaagactagg ccgcataggt ctcagtgttc ccacccgagg 60
tcgctgtgtt tgagccatca gaagcagaga tctcccacac ccaaaaggcc acactggtat 120
gcctggccac aggcttctac cccgaccacg tggagctgag ctggtgggtg aatgggaagg 180
aggtgcacag tggggtcagc acagacccgc agcccctcaa ggagcagccc gccctcaatg 240
actccagata ctgcctgagc agccgcctga gggtgtcggc caccttctgg cagaaccccc 300
gcaaccactt ccgctgtcaa gtccagttct acgggctctc ggagaatgac gagtggaccc 360
aggatagggc caaacccgtc acccagatcg tcagcgccga ggcctggggt agagcagact 420
gtggcttcac ctccgagtct taccagcaag gggtcctgtc tgccaccatc ctctatgaga 480
tcttgctagg gaaggccacc ttgtatgccg tgctggtcag tgccctcgtg ctgatggcca 540
tggtcaagag aaaggattcc agaggctagc taggtgtctt cgctacactg atccgatggt 600
c 601
<210> 484
<211> 891
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV2_TRBC2
<400> 484
gccaccatgg atacctggct cgtatgctgg gcaattttta gtctcttgaa agcaggactc 60
acagaacctg aagtcaccca gactcccagc catcaggtca cacagatggg acaggaagtg 120
atcttgcgct gtgtccccat ctctaatcac ttatacttct attggtacag acaaatcttg 180
gggcagaaag tcgagtttct ggtttccttt tataataatg aaatctcaga gaagtctgaa 240
atattcgatg atcaattctc agttgaaagg cctgatggat caaatttcac tctgaagatc 300
cggtccacaa agctggagga ctcagccatg tacttttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt atgcctggcc acaggcttct accccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttc acctccgagt cttaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcttgcta gggaaggcca ccttgtatgc cgtgctggtc 840
agtgccctcg tgctgatggc catggtcaag agaaaggatt ccagaggcta g 891
<210> 485
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV3-1_TRBC2
<400> 485
gccaccatgg gctgcaggct cctctgctgt gtggtctttt gcctcctcca agcaggtccc 60
ttggacacag ctgtttccca gactccaaaa tacctggtca cacagatggg aaacgacaag 120
tccattaaat gtgaacaaaa tctgggccat gatactatgt attggtataa acaggactct 180
aagaaatttc tgaagataat gtttagctac aataataagg agctcattat aaatgaaaca 240
gttccaaatc gcttctcacc taaatctcca gacaaagctc acttaaatct tcacatcaat 300
tccctggagc ttggtgactc tgctgtgtat ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 486
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV4-1_TRBC2
<400> 486
gccaccatgg gctgcaggct gctctgctgt gcggttctct gtctcctggg agcagttccc 60
atagacactg aagttaccca gacaccaaaa cacctggtca tgggaatgac aaataagaag 120
tctttgaaat gtgaacaaca tatggggcac agggctatgt attggtacaa gcagaaagct 180
aagaagccac cggagctcat gtttgtctac agctatgaga aactctctat aaatgaaagt 240
gtgccaagtc gcttctcacc tgaatgcccc aacagctctc tcttaaacct tcacctacac 300
gccctgcagc cagaagattc agccctgtat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 487
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV4-2_TRBC2
<400> 487
gccaccatgg gctgcaggct gctctgctgt gcggttctct gtctcctggg agcggtcccc 60
atggaaacgg gagttacgca gacaccaaga cacctggtca tgggaatgac aaataagaag 120
tctttgaaat gtgaacaaca tctggggcat aacgctatgt attggtacaa gcaaagtgct 180
aagaagccac tggagctcat gtttgtctac aactttaaag aacagactga aaacaacagt 240
gtgccaagtc gcttctcacc tgaatgcccc aacagctctc acttattcct tcacctacac 300
accctgcagc cagaagattc ggccctgtat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 488
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV4-3_TRBC2
<400> 488
gccaccatgg gctgcaggct gctctgctgt gcggttctct gtctcctggg agcggtcccc 60
atggaaacgg gagttacgca gacaccaaga cacctggtca tgggaatgac aaataagaag 120
tctttgaaat gtgaacaaca tctgggtcat aacgctatgt attggtacaa gcaaagtgct 180
aagaagccac tggagctcat gtttgtctac agtcttgaag aacgggttga aaacaacagt 240
gtgccaagtc gcttctcacc tgaatgcccc aacagctctc acttattcct tcacctacac 300
accctgcagc cagaagattc ggccctgtat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 489
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV5-1_TRBC2
<400> 489
gccaccatgg gctccaggct gctctgttgg gtgctgcttt gtctcctggg agcaggccca 60
gtaaaggctg gagtcactca aactccaaga tatctgatca aaacgagagg acagcaagtg 120
acactgagct gctcccctat ctctgggcat aggagtgtat cctggtacca acagacccca 180
ggacagggcc ttcagttcct ctttgaatac ttcagtgaga cacagagaaa caaaggaaac 240
ttccctggtc gattctcagg gcgccagttc tctaactctc gctctgagat gaatgtgagc 300
accttggagc tgggggactc ggccctttat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 490
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV5-4_TRBC2
<400> 490
gccaccatgg gccctgggct cctctgctgg gtgctgcttt gtctcctggg agcaggctca 60
gtggagactg gagtcaccca aagtcccaca cacctgatca aaacgagagg acagcaagtg 120
actctgagat gctcttctca gtctgggcac aacactgtgt cctggtacca acaggccctg 180
ggtcaggggc cccagtttat ctttcagtat tatagggagg aagagaatgg cagaggaaac 240
ttccctccta gattctcagg actccagttc cctaattata gctctgagct gaatgtgaac 300
gccttggagc tggacgactc ggccctgtat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 491
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV5-5_TRBC2
<400> 491
gccaccatgg gccctgggct cctctgctgg gtgctgcttt gtctcctggg agcaggccca 60
gtggacgctg gagtcaccca aagtcccaca cacctgatca aaacgagagg acagcaagtg 120
actctgagat gctctcctat ctctgggcac aagagtgtgt cctggtacca acaggtcctg 180
ggtcaggggc cccagtttat ctttcagtat tatgagaaag aagagagagg aagaggaaac 240
ttccctgatc gattctcagc tcgccagttc cctaactata gctctgagct gaatgtgaac 300
gccttgttgc tgggggactc ggccctgtat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 492
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV5-6_TRBC2
<400> 492
gccaccatgg gccccgggct cctctgctgg gcactgcttt gtctcctggg agcaggctta 60
gtggacgctg gagtcaccca aagtcccaca cacctgatca aaacgagagg acagcaagtg 120
actctgagat gctctcctaa gtctgggcat gacactgtgt cctggtacca acaggccctg 180
ggtcaggggc cccagtttat ctttcagtat tatgaggagg aagagagaca gagaggcaac 240
ttccctgatc gattctcagg tcaccagttc cctaactata gctctgagct gaatgtgaac 300
gccttgttgc tgggggactc ggccctctat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 493
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV5-7_TRBC2
<400> 493
gccaccatgg gccccgggct cctctgctgg gtgctgcttt gtcccctagg agaaggccca 60
gtggacgctg gagtcaccca aagtcccaca cacctgatca aaacgagagg acagcacgtg 120
actctgagat gctctcctat ctctgggcac accagtgtgt cctcgtacca acaggccctg 180
ggtcaggggc cccagtttat ctttcagtat tatgagaaag aagagagagg aagaggaaac 240
ttccctgatc aattctcagg tcaccagttc cctaactata gctctgagct gaatgtgaac 300
gccttgttgc taggggactc ggccctctat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 494
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV5-8_TRBC2
<400> 494
gccaccatgg gacccaggct cctcttctgg gcactgcttt gtctcctcgg aacaggccca 60
gtggaggctg gagtcacaca aagtcccaca cacctgatca aaacgagagg acagcaagcg 120
actctgagat gctctcctat ctctgggcac accagtgtgt actggtacca acaggccctg 180
ggtctgggcc tccagttcct cctttggtat gacgagggtg aagagagaaa cagaggaaac 240
ttccctccta gattttcagg tcgccagttc cctaattata gctctgagct gaatgtgaac 300
gccttggagc tggaggactc ggccctgtat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 495
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV6-1_TRBC2
<400> 495
gccaccatga gcatcgggct cctgtgctgt gtggcctttt ctctcctgtg ggcaagtcca 60
gtgaatgctg gtgtcactca gaccccaaaa ttccaggtcc tgaaaacagg acagagcatg 120
acactgcagt gtgcccagga tatgaaccat aactccatgt actggtatcg acaagaccca 180
ggcatgggac tgaggctgat ttattactca gcttctgagg gtaccactga caaaggagaa 240
gtccccaatg gctacaatgt ctccagatta aacaaacggg agttctcgct caggctggag 300
tcggctgctc cctcccagac atctgtgtac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 496
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV6-3_TRBC2
<400> 496
gccaccatga gcctcgggct cctgtgctgt ggggtctttt ctctcctgtg ggcaggtcca 60
gtgaatgctg gtgtcactca gaccccaaaa ttccgggtcc tgaaaacagg acagagcatg 120
acactgctgt gtgcccagga tatgaaccat gaatacatgt actggtatcg acaagaccca 180
ggcatggggc tgaggctgat tcattactca gttggtgagg gtacaactgc caaaggagag 240
gtccctgatg gctacaatgt ctccagatta aaaaaacaga atttcctgct ggggttggag 300
tcggctgctc cctcccaaac atctgtgtac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 497
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV6-4_TRBC2
<400> 497
gccaccatga gaatcaggct cctgtgctgt gtggcctttt ctctcctgtg ggcaggtcca 60
gtgattgctg ggatcaccca ggcaccaaca tctcagatcc tggcagcagg acggcgcatg 120
acactgagat gtacccagga tatgagacat aatgccatgt actggtatag acaagatcta 180
ggactggggc taaggctcat ccattattca aatactgcag gtaccactgg caaaggagaa 240
gtccctgatg gttatagtgt ctccagagca aacacagatg atttccccct cacgttggcg 300
tctgctgtac cctctcagac atctgtgtac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 498
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV6-5_TRBC2
<400> 498
gccaccatga gcatcggcct cctgtgctgt gcagccttgt ctctcctgtg ggcaggtcca 60
gtgaatgctg gtgtcactca gaccccaaaa ttccaggtcc tgaaaacagg acagagcatg 120
acactgcagt gtgcccagga tatgaaccat gaatacatgt cctggtatcg acaagaccca 180
ggcatggggc tgaggctgat tcattactca gttggtgctg gtatcactga ccaaggagaa 240
gtccccaatg gctacaatgt ctccagatca accacagagg atttcccgct caggctgctg 300
tcggctgctc cctcccagac atctgtgtac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 499
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV6-6_TRBC2
<400> 499
gccaccatga gcatcagcct cctgtgctgt gcagcctttc ctctcctgtg ggcaggtcca 60
gtgaatgctg gtgtcactca gaccccaaaa ttccgcatcc tgaagatagg acagagcatg 120
acactgcagt gtacccagga tatgaaccat aactacatgt actggtatcg acaagaccca 180
ggcatggggc tgaagctgat ttattattca gttggtgctg gtatcactga taaaggagaa 240
gtcccgaatg gctacaacgt ctccagatca accacagagg atttcccgct caggctggag 300
ttggctgctc cctcccagac atctgtgtac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 500
<211> 885
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV6-8_TRBC2
<400> 500
gccaccatga gcctcgggct cctgtgctgt gcggcctttt ctctcctgtg ggcaggtccc 60
gtgaatgctg gtgtcactca gaccccaaaa ttccacatcc tgaaaacagg acagagcatg 120
acactgcagt gtgcccagga tatgaaccat ggatacatgt cctggtatcg acaagaccca 180
ggcatggggc tgagactgat ttactactca gctgctgctg gtactactga caaagaagtc 240
cccaatggct acaatgtctc tagattaaac acagaggatt tcccactcag gctggtgtcg 300
gctgctccct cccagacatc tgtgtacctt tgcagagacc ttgcggccgc ataggtctca 360
gtgttcccac ccgaggtcgc tgtgtttgag ccatcagaag cagagatctc ccacacccaa 420
aaggccacac tggtatgcct ggccacaggc ttctaccccg accacgtgga gctgagctgg 480
tgggtgaatg ggaaggaggt gcacagtggg gtcagcacag acccgcagcc cctcaaggag 540
cagcccgccc tcaatgactc cagatactgc ctgagcagcc gcctgagggt gtcggccacc 600
ttctggcaga acccccgcaa ccacttccgc tgtcaagtcc agttctacgg gctctcggag 660
aatgacgagt ggacccagga tagggccaaa cccgtcaccc agatcgtcag cgccgaggcc 720
tggggtagag cagactgtgg cttcacctcc gagtcttacc agcaaggggt cctgtctgcc 780
accatcctct atgagatctt gctagggaag gccaccttgt atgccgtgct ggtcagtgcc 840
ctcgtgctga tggccatggt caagagaaag gattccagag gctag 885
<210> 501
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV6-9_TRBC2
<400> 501
gccaccatga gcatcgggct cctgtgctgt gtggcctttt ctctcctgtg ggcaggtcca 60
gtgaatgctg gtgtcactca gaccccaaaa ttccacatcc tgaaaacagg acagagcatg 120
acactgcagt gtgcccagga tatgaaccat ggatacttgt cctggtatcg acaagaccca 180
ggcatggggc tgaggcgcat tcattactca gttgctgctg gtatcactga caaaggagaa 240
gtccccgatg gctacaatgt atccagatca aacacagagg atttcccgct caggctggag 300
tcagctgctc cctcccagac atctgtatac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 502
<211> 891
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV7-2_TRBC2
<400> 502
gccaccatgg gcaccaggct cctcttctgg gtggccttct gtctcctggg ggcagatcac 60
acaggagctg gagtctccca gtcccccagt aacaaggtca cagagaaggg aaaggatgta 120
gagctcaggt gtgatccaat ttcaggtcat actgcccttt actggtaccg acagagcctg 180
gggcagggcc tggagttttt aatttacttc caaggcaaca gtgcaccaga caaatcaggg 240
ctgcccagtg atcgcttctc tgcagagagg actgggggat ccgtctccac tctgacgatc 300
cagcgcacac agcaggagga ctcggccgtg tatctttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt atgcctggcc acaggcttct accccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttc acctccgagt cttaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcttgcta gggaaggcca ccttgtatgc cgtgctggtc 840
agtgccctcg tgctgatggc catggtcaag agaaaggatt ccagaggcta g 891
<210> 503
<211> 891
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV7-3_TRBC2
<400> 503
gccaccatgg gcaccaggct cctctgctgg gcagccctgt gcctcctggg ggcagatcac 60
acaggtgctg gagtctccca gacccccagt aacaaggtca cagagaaggg aaaatatgta 120
gagctcaggt gtgatccaat ttcaggtcat actgcccttt actggtaccg acaaagcctg 180
gggcagggcc cagagtttct aatttacttc caaggcacgg gtgcggcaga tgactcaggg 240
ctgcccaacg atcggttctt tgcagtcagg cctgagggat ccgtctctac tctgaagatc 300
cagcgcacag agcgggggga ctcagccgtg tatctttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt atgcctggcc acaggcttct accccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttc acctccgagt cttaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcttgcta gggaaggcca ccttgtatgc cgtgctggtc 840
agtgccctcg tgctgatggc catggtcaag agaaaggatt ccagaggcta g 891
<210> 504
<211> 891
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV7-6_TRBC2
<400> 504
gccaccatgg gcaccagtct cctatgctgg gtggtcctgg gtttcctagg gacagatcac 60
acaggtgctg gagtctccca gtctcccagg tacaaagtca caaagagggg acaggatgta 120
gctctcaggt gtgatccaat ttcgggtcat gtatcccttt attggtaccg acaggccctg 180
gggcagggcc cagagtttct gacttacttc aattatgaag cccaacaaga caaatcaggg 240
ctgcccaatg atcggttctc tgcagagagg cctgagggat ccatctccac tctgacgatc 300
cagcgcacag agcagcggga ctcggccatg tatcgttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt atgcctggcc acaggcttct accccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttc acctccgagt cttaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcttgcta gggaaggcca ccttgtatgc cgtgctggtc 840
agtgccctcg tgctgatggc catggtcaag agaaaggatt ccagaggcta g 891
<210> 505
<211> 891
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV7-7_TRBC2
<400> 505
gccaccatgg gtaccagtct cctatgctgg gtggtcctgg gtttcctagg gacagatcac 60
acaggtgctg gagtctccca gtctcccagg tacaaagtca caaagagggg acaggatgta 120
actctcaggt gtgatccaat ttcgagtcat gcaacccttt attggtatca acaggccctg 180
gggcagggcc cagagtttct gacttacttc aattatgaag ctcaaccaga caaatcaggg 240
ctgcccagtg atcggttctc tgcagagagg cctgagggat ccatctccac tctgacgatt 300
cagcgcacag agcagcggga ctcagccatg tatcgttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt atgcctggcc acaggcttct accccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttc acctccgagt cttaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcttgcta gggaaggcca ccttgtatgc cgtgctggtc 840
agtgccctcg tgctgatggc catggtcaag agaaaggatt ccagaggcta g 891
<210> 506
<211> 891
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV7-8_TRBC2
<400> 506
gccaccatgg gcaccaggct cctctgctgg gtggtcctgg gtttcctagg gacagatcac 60
acaggtgctg gagtctccca gtcccctagg tacaaagtcg caaagagagg acaggatgta 120
gctctcaggt gtgatccaat ttcgggtcat gtatcccttt tttggtacca acaggccctg 180
gggcaggggc cagagtttct gacttatttc cagaatgaag ctcaactaga caaatcgggg 240
ctgcccagtg atcgcttctt tgcagaaagg cctgagggat ccgtctccac tctgaagatc 300
cagcgcacac agcaggagga ctccgccgtg tatctttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt atgcctggcc acaggcttct accccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttc acctccgagt cttaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcttgcta gggaaggcca ccttgtatgc cgtgctggtc 840
agtgccctcg tgctgatggc catggtcaag agaaaggatt ccagaggcta g 891
<210> 507
<211> 891
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV7-9_TRBC2
<400> 507
gccaccatgg gcaccagcct cctctgctgg atggccctgt gtctcctggg ggcagatcac 60
gcagatactg gagtctccca gaaccccaga cacaagatca caaagagggg acagaatgta 120
actttcaggt gtgatccaat ttctgaacac aaccgccttt attggtaccg acagaccctg 180
gggcagggcc cagagtttct gacttacttc cagaatgaag ctcaactaga aaaatcaagg 240
ctgctcagtg atcggttctc tgcagagagg cctaagggat ctttctccac cttggagatc 300
cagcgcacag agcaggggga ctcggccatg tatctttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt atgcctggcc acaggcttct accccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttc acctccgagt cttaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcttgcta gggaaggcca ccttgtatgc cgtgctggtc 840
agtgccctcg tgctgatggc catggtcaag agaaaggatt ccagaggcta g 891
<210> 508
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV9_TRBC2
<400> 508
gccaccatgg gcttcaggct cctctgctgt gtggcctttt gtctcctggg agcaggccca 60
gtggattctg gagtcacaca aaccccaaag cacctgatca cagcaactgg acagcgagtg 120
acgctgagat gctcccctag gtctggtgac ctctctgtgt actggtacca acagagcctg 180
gaccagggcc tccagttcct cattcagtat tataatggag aagagagagc aaaaggaaac 240
attcttgaac gattctccgc acaacagttc cctgacttgc actctgaact aaacctgagc 300
tctctggagc tgggggactc agctttgtac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 509
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV10-1_TRBC2
<400> 509
gccaccatgg gcacgaggct cttcttctat gtggcccttt gtctgctgtg ggcaggacac 60
agggatgctg aaatcaccca gagcccaaga cacaagatca cagagacagg aaggcaggtg 120
accttggcgt gtcaccagac ttggaaccac aacaatatgt tctggtatcg acaagacctg 180
ggacatgggc tgaggctgat ccattactca tatggtgttc aagacactaa caaaggagaa 240
gtctcagatg gctacagtgt ctctagatca aacacagagg acctccccct cactctggag 300
tctgctgcct cctcccagac atctgtatac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 510
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV10-2_TRBC2
<400> 510
gccaccatgg gcaccaggct cttcttctat gtggcccttt gtctgctgtg ggcaggacac 60
agggatgctg gaatcaccca gagcccaaga tacaagatca cagagacagg aaggcaggtg 120
accttgatgt gtcaccagac ttggagccac agctatatgt tctggtatcg acaagacctg 180
ggacatgggc tgaggctgat ctattactca gcagctgctg atattacaga taaaggagaa 240
gtccccgatg gctatgttgt ctccagatcc aagacagaga atttccccct cactctggag 300
tcagctaccc gctcccagac atctgtgtac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 511
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV10-3_TRBC2
<400> 511
gccaccatgg gcacaaggtt gttcttctat gtggcccttt gtctcctgtg gacaggacac 60
atggatgctg gaatcaccca gagcccaaga cacaaggtca cagagacagg aacaccagtg 120
actctgagat gtcaccagac tgagaaccac cgctatatgt actggtatcg acaagacccg 180
gggcatgggc tgaggctgat ccattactca tatggtgtta aagatactga caaaggagaa 240
gtctcagatg gctatagtgt ctctagatca aagacagagg atttcctcct cactctggag 300
tccgctacca gctcccagac atctgtgtac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 512
<211> 891
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV11-1_TRBC2
<400> 512
gccaccatga gcaccaggct tctctgctgg atggccctct gtctcctggg ggcagaactc 60
tcagaagctg aagttgccca gtcccccaga tataagatta cagagaaaag ccaggctgtg 120
gctttttggt gtgatcctat ttctggccat gctacccttt actggtaccg gcagatcctg 180
ggacagggcc cggagcttct ggttcaattt caggatgaga gtgtagtaga tgattcacag 240
ttgcctaagg atcgattttc tgcagagagg ctcaaaggag tagactccac tctcaagatc 300
cagcctgcag agcttgggga ctcggccatg tatctttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt atgcctggcc acaggcttct accccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttc acctccgagt cttaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcttgcta gggaaggcca ccttgtatgc cgtgctggtc 840
agtgccctcg tgctgatggc catggtcaag agaaaggatt ccagaggcta g 891
<210> 513
<211> 891
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV11-2_TRBC2
<400> 513
gccaccatgg gcaccaggct cctctgctgg gcggccctct gtctcctggg agcagaactc 60
acagaagctg gagttgccca gtctcccaga tataagatta tagagaaaag gcagagtgtg 120
gctttttggt gcaatcctat atctggccat gctacccttt actggtacca gcagatcctg 180
ggacagggcc caaagcttct gattcagttt cagaataacg gtgtagtgga tgattcacag 240
ttgcctaagg atcgattttc tgcagagagg ctcaaaggag tagactccac tctcaagatc 300
cagcctgcaa agcttgagga ctcggccgtg tatctttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt atgcctggcc acaggcttct accccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttc acctccgagt cttaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcttgcta gggaaggcca ccttgtatgc cgtgctggtc 840
agtgccctcg tgctgatggc catggtcaag agaaaggatt ccagaggcta g 891
<210> 514
<211> 891
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV11-3_TRBC2
<400> 514
gccaccatgg gtaccaggct cctctgctgg gtggccttct gtctcctggt ggaagaactc 60
atagaagctg gagtggttca gtctcccaga tataagatta tagagaaaaa acagcctgtg 120
gctttttggt gcaatcctat ttctggccac aatacccttt actggtacct gcagaacttg 180
ggacagggcc cggagcttct gattcgatat gagaatgagg aagcagtaga cgattcacag 240
ttgcctaagg atcgattttc tgcagagagg ctcaaaggag tagactccac tctcaagatc 300
cagcctgcag agcttgggga ctcggccgtg tatctttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt atgcctggcc acaggcttct accccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttc acctccgagt cttaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcttgcta gggaaggcca ccttgtatgc cgtgctggtc 840
agtgccctcg tgctgatggc catggtcaag agaaaggatt ccagaggcta g 891
<210> 515
<211> 891
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV12-3_TRBC2
<400> 515
gccaccatgg actcctggac cttctgctgt gtgtcccttt gcatcctggt agcgaagcat 60
acagatgctg gagttatcca gtcaccccgc catgaggtga cagagatggg acaagaagtg 120
actctgagat gtaaaccaat ttcaggccac aactcccttt tctggtacag acagaccatg 180
atgcggggac tggagttgct catttacttt aacaacaacg ttccgataga tgattcaggg 240
atgcccgagg atcgattctc agctaagatg cctaatgcat cattctccac tctgaagatc 300
cagccctcag aacccaggga ctcagctgtg tacttttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt atgcctggcc acaggcttct accccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttc acctccgagt cttaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcttgcta gggaaggcca ccttgtatgc cgtgctggtc 840
agtgccctcg tgctgatggc catggtcaag agaaaggatt ccagaggcta g 891
<210> 516
<211> 891
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV12-4_TRBC2
<400> 516
gccaccatgg actcctggac cctctgctgt gtgtcccttt gcatcctggt agcaaagcac 60
acagatgctg gagttatcca gtcaccccgg cacgaggtga cagagatggg acaagaagtg 120
actctgagat gtaaaccaat ttcaggacac gactaccttt tctggtacag acagaccatg 180
atgcggggac tggagttgct catttacttt aacaacaacg ttccgataga tgattcaggg 240
atgcccgagg atcgattctc agctaagatg cctaatgcat cattctccac tctgaagatc 300
cagccctcag aacccaggga ctcagctgtg tacttttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt atgcctggcc acaggcttct accccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttc acctccgagt cttaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcttgcta gggaaggcca ccttgtatgc cgtgctggtc 840
agtgccctcg tgctgatggc catggtcaag agaaaggatt ccagaggcta g 891
<210> 517
<211> 891
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV12-5_TRBC2
<400> 517
gccaccatgg ccaccaggct cctctgctgt gtggttcttt gtctcctggg agaagagctt 60
atagatgcta gagtcaccca gacaccaagg cacaaggtga cagagatggg acaagaagta 120
acaatgagat gtcagccaat tttaggccac aatactgttt tctggtacag acagaccatg 180
atgcaaggac tggagttgct ggcttacttc cgcaaccggg ctcctctaga tgattcgggg 240
atgccgaagg atcgattctc agcagagatg cctgatgcaa ctttagccac tctgaagatc 300
cagccctcag aacccaggga ctcagctgtg tacttttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt atgcctggcc acaggcttct accccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttc acctccgagt cttaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcttgcta gggaaggcca ccttgtatgc cgtgctggtc 840
agtgccctcg tgctgatggc catggtcaag agaaaggatt ccagaggcta g 891
<210> 518
<211> 918
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV13_TRBC2
<400> 518
gccaccatgc ttagtcctga cctgcctgac tctgcctgga acaccaggct cctctgccat 60
gtcatgcttt gtctcctggg agcagtttca gtggctgctg gagtcatcca gtccccaaga 120
catctgatca aagaaaagag ggaaacagcc actctgaaat gctatcctat ccctagacac 180
gacactgtct actggtacca gcagggtcca ggtcaggacc cccagttcct catttcgttt 240
tatgaaaaga tgcagagcga taaaggaagc atccctgatc gattctcagc tcaacagttc 300
agtgactatc attctgaact gaacatgagc tccttggagc tgggggactc agccctgtac 360
ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt 420
gagccatcag aagcagagat ctcccacacc caaaaggcca cactggtatg cctggccaca 480
ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt 540
ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac 600
tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc accttctggc agaacccccg caaccacttc 660
cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc 720
aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag gcctggggta gagcagactg tggcttcacc 780
tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg 840
aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga 900
aaggattcca gaggctag 918
<210> 519
<211> 891
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV14_TRBC2
<400> 519
gccaccatgg tttccaggct tctcagttta gtgtcccttt gtctcctggg agcaaagcac 60
atagaagctg gagttactca gttccccagc cacagcgtaa tagagaaggg ccagactgtg 120
actctgagat gtgacccaat ttctggacat gataatcttt attggtatcg acgtgttatg 180
ggaaaagaaa taaaatttct gttacatttt gtgaaagagt ctaaacagga tgagtccggt 240
atgcccaaca atcgattctt agctgaaagg actggaggga cgtattctac tctgaaggtg 300
cagcctgcag aactggagga ttctggagtt tacttttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt atgcctggcc acaggcttct accccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttc acctccgagt cttaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcttgcta gggaaggcca ccttgtatgc cgtgctggtc 840
agtgccctcg tgctgatggc catggtcaag agaaaggatt ccagaggcta g 891
<210> 520
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV15_TRBC2
<400> 520
gccaccatgg gtcctgggct tctccactgg atggcccttt gtctccttgg aacaggtcat 60
ggggatgcca tggtcatcca gaacccaaga taccaggtta cccagtttgg aaagccagtg 120
accctgagtt gttctcagac tttgaaccat aacgtcatgt actggtacca gcagaagtca 180
agtcaggccc caaagctgct gttccactac tatgacaaag attttaacaa tgaagcagac 240
acccctgata acttccaatc caggaggccg aacacttctt tctgctttct tgacatccgc 300
tcaccaggcc tgggggacac agccatgtac ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 521
<211> 891
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV16_TRBC2
<400> 521
gccaccatga gcccaatatt cacctgcatc acaatccttt gtctgctggc tgcaggttct 60
cctggtgaag aagtcgccca gactccaaaa catcttgtca gaggggaagg acagaaagca 120
aaattatatt gtgccccaat aaaaggacac agttatgttt tttggtacca acaggtcctg 180
aaaaacgagt tcaagttctt gatttccttc cagaatgaaa atgtctttga tgaaacaggt 240
atgcccaagg aaagattttc agctaagtgc ctcccaaatt caccctgtag ccttgagatc 300
caggctacga agcttgagga ttcagcagtg tacttttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt atgcctggcc acaggcttct accccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttc acctccgagt cttaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcttgcta gggaaggcca ccttgtatgc cgtgctggtc 840
agtgccctcg tgctgatggc catggtcaag agaaaggatt ccagaggcta g 891
<210> 522
<211> 891
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV18_TRBC2
<400> 522
gccaccatgg acaccagagt actctgctgt gcggtcatct gccttctggg ggcaggactc 60
tcaaatgccg gcgtcatgca gaacccaaga cacctggtca ggaggagggg acaggaggca 120
agactgagat gcagcccaat gaaaggacac agtcatgttt actggtatcg gcagctccca 180
gaggaaggtc tgaaattcat ggtttatctc cagaaagaaa atatcataga tgagtcagga 240
atgccaaagg aacgattttc tgctgaattt cccaaagagg gccccagcat cctgaggatc 300
cagcaggtag tgcgaggaga ttcggcagct tacttttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt atgcctggcc acaggcttct accccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttc acctccgagt cttaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcttgcta gggaaggcca ccttgtatgc cgtgctggtc 840
agtgccctcg tgctgatggc catggtcaag agaaaggatt ccagaggcta g 891
<210> 523
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV19_TRBC2
<400> 523
gccaccatga gcaaccaggt gctctgctgt gtggtccttt gtttcctggg agcaaacacc 60
gtggatggtg gaatcactca gtccccaaag tacctgttca gaaaggaagg acagaatgtg 120
accctgagtt gtgaacagaa tttgaaccac gatgccatgt actggtaccg acaggaccca 180
gggcaagggc tgagattgat ctactactca cagatagtaa atgactttca gaaaggagat 240
atagctgaag ggtacagcgt ctctcgggag aagaaggaat cctttcctct cactgtgaca 300
tcggcccaaa agaacccgac agctttctat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 524
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV20-1_TRBC2
<400> 524
gccaccatgc tgctgcttct gctgcttctg gggccaggct ccgggcttgg tgctgtcgtc 60
tctcaacatc cgagctgggt tatctgtaag agtggaacct ctgtgaagat cgagtgccgt 120
tccctggact ttcaggccac aactatgttt tggtatcgtc agttcccgaa acagagtctc 180
atgctgatgg caacttccaa tgagggctcc aaggccacat acgagcaagg cgtcgagaag 240
gacaagtttc tcatcaacca tgcaagcctg accttgtcca ctctgacagt gaccagtgcc 300
catcctgaag atagcagctt ctacatttgc agagaccttg cggccgcata ggtctcagtg 360
ttcccacccg aggtcgctgt gtttgagcca tcagaagcag agatctccca cacccaaaag 420
gccacactgg tatgcctggc cacaggcttc taccccgacc acgtggagct gagctggtgg 480
gtgaatggga aggaggtgca cagtggggtc agcacagacc cgcagcccct caaggagcag 540
cccgccctca atgactccag atactgcctg agcagccgcc tgagggtgtc ggccaccttc 600
tggcagaacc cccgcaacca cttccgctgt caagtccagt tctacgggct ctcggagaat 660
gacgagtgga cccaggatag ggccaaaccc gtcacccaga tcgtcagcgc cgaggcctgg 720
ggtagagcag actgtggctt cacctccgag tcttaccagc aaggggtcct gtctgccacc 780
atcctctatg agatcttgct agggaaggcc accttgtatg ccgtgctggt cagtgccctc 840
gtgctgatgg ccatggtcaa gagaaaggat tccagaggct ag 882
<210> 525
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV24-1_TRBC2
<400> 525
gccaccatgg cctccctgct cttcttctgt ggggcctttt atctcctggg aacagggtcc 60
atggatgctg atgttaccca gaccccaagg aataggatca caaagacagg aaagaggatt 120
atgctggaat gttctcagac taagggtcat gatagaatgt actggtatcg acaagaccca 180
ggactgggcc tacggttgat ctattactcc tttgatgtca aagatataaa caaaggagag 240
atctctgatg gatacagtgt ctctcgacag gcacaggcta aattctccct gtccctagag 300
tctgccatcc ccaaccagac agctctttac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 526
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV25-1_TRBC2
<400> 526
gccaccatga ctatcaggct cctctgctac atgggctttt attttctggg ggcaggcctc 60
atggaagctg acatctacca gaccccaaga taccttgtta tagggacagg aaagaagatc 120
actctggaat gttctcaaac catgggccat gacaaaatgt actggtatca acaagatcca 180
ggaatggaac tacacctcat ccactattcc tatggagtta attccacaga gaagggagat 240
ctttcctctg agtcaacagt ctccagaata aggacggagc attttcccct gaccctggag 300
tctgccaggc cctcacatac ctctcagtac ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 527
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV27_TRBC2
<400> 527
gccaccatgg gcccccagct ccttggctat gtggtccttt gccttctagg agcaggcccc 60
ctggaagccc aagtgaccca gaacccaaga tacctcatca cagtgactgg aaagaagtta 120
acagtgactt gttctcagaa tatgaaccat gagtatatgt cctggtatcg acaagaccca 180
gggctgggct taaggcagat ctactattca atgaatgttg aggtgactga taagggagat 240
gttcctgaag ggtacaaagt ctctcgaaaa gagaagagga atttccccct gatcctggag 300
tcgcccagcc ccaaccagac ctctctgtac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 528
<211> 888
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV28_TRBC2
<400> 528
gccaccatgg gaatcaggct cctctgtcgt gtggcctttt gtttcctggc tgtaggcctc 60
gtagatgtga aagtaaccca gagctcgaga tatctagtca aaaggacggg agagaaagtt 120
tttctggaat gtgtccagga tatggaccat gaaaatatgt tctggtatcg acaagaccca 180
ggtctggggc tacggctgat ctatttctca tatgatgtta aaatgaaaga aaaaggagat 240
attcctgagg ggtacagtgt ctctagagag aagaaggagc gcttctccct gattctggag 300
tccgccagca ccaaccagac atctatgtac ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 529
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV29-1_TRBC2
<400> 529
gccaccatgc tgagtctact gctccttctc ctgggactag gctctgtgtt cagtgctgtc 60
atctctcaaa agccaagcag ggatatctgt caacgtggaa cctccctgac gatccagtgt 120
caagtcgata gccaagtcac catgatgttc tggtaccgtc agcaacctgg acagagcctg 180
acactgatcg caactgcaaa tcagggctct gaggccacat atgagagtgg atttgtcatt 240
gacaagtttc ccatcagccg cccaaaccta acattctcaa ctctgactgt gagcaacatg 300
agccctgaag atagcagcat atatctttgc agagaccttg cggccgcata ggtctcagtg 360
ttcccacccg aggtcgctgt gtttgagcca tcagaagcag agatctccca cacccaaaag 420
gccacactgg tatgcctggc cacaggcttc taccccgacc acgtggagct gagctggtgg 480
gtgaatggga aggaggtgca cagtggggtc agcacagacc cgcagcccct caaggagcag 540
cccgccctca atgactccag atactgcctg agcagccgcc tgagggtgtc ggccaccttc 600
tggcagaacc cccgcaacca cttccgctgt caagtccagt tctacgggct ctcggagaat 660
gacgagtgga cccaggatag ggccaaaccc gtcacccaga tcgtcagcgc cgaggcctgg 720
ggtagagcag actgtggctt cacctccgag tcttaccagc aaggggtcct gtctgccacc 780
atcctctatg agatcttgct agggaaggcc accttgtatg ccgtgctggt cagtgccctc 840
gtgctgatgg ccatggtcaa gagaaaggat tccagaggct ag 882
<210> 530
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV30_TRBC2
<400> 530
gccaccatgc tctgctctct ccttgccctt ctcctgggca ctttctttgg ggtcagatct 60
cagactattc atcaatggcc agcgaccctg gtgcagcctg tgggcagccc gctctctctg 120
gagtgcactg tggagggaac atcaaacccc aacctatact ggtaccgaca ggctgcaggc 180
aggggcctcc agctgctctt ctactccgtt ggtattggcc agatcagctc tgaggtgccc 240
cagaatctct cagcctccag accccaggac cggcagttca tcctgagttc taagaagctc 300
cttctcagtg actctggctt ctatctttgc agagaccttg cggccgcata ggtctcagtg 360
ttcccacccg aggtcgctgt gtttgagcca tcagaagcag agatctccca cacccaaaag 420
gccacactgg tatgcctggc cacaggcttc taccccgacc acgtggagct gagctggtgg 480
gtgaatggga aggaggtgca cagtggggtc agcacagacc cgcagcccct caaggagcag 540
cccgccctca atgactccag atactgcctg agcagccgcc tgagggtgtc ggccaccttc 600
tggcagaacc cccgcaacca cttccgctgt caagtccagt tctacgggct ctcggagaat 660
gacgagtgga cccaggatag ggccaaaccc gtcacccaga tcgtcagcgc cgaggcctgg 720
ggtagagcag actgtggctt cacctccgag tcttaccagc aaggggtcct gtctgccacc 780
atcctctatg agatcttgct agggaaggcc accttgtatg ccgtgctggt cagtgccctc 840
gtgctgatgg ccatggtcaa gagaaaggat tccagaggct ag 882
<210> 531
<211> 885
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV2_TRBC1
<400> 531
gccaccatgg atacctggct cgtatgctgg gcaattttta gtctcttgaa agcaggactc 60
acagaacctg aagtcaccca gactcccagc catcaggtca cacagatggg acaggaagtg 120
atcttgcgct gtgtccccat ctctaatcac ttatacttct attggtacag acaaatcttg 180
gggcagaaag tcgagtttct ggtttccttt tataataatg aaatctcaga gaagtctgaa 240
atattcgatg atcaattctc agttgaaagg cctgatggat caaatttcac tctgaagatc 300
cggtccacaa agctggagga ctcagccatg tacttttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt gtgcctggcc acaggcttct tccccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttt acctcggtgt cctaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcctgcta gggaaggcca ccctgtatgc tgtgctggtc 840
agcgcccttg tgttgatggc catggtcaag agaaaggatt tctga 885
<210> 532
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV3-1_TRBC1
<400> 532
gccaccatgg gctgcaggct cctctgctgt gtggtctttt gcctcctcca agcaggtccc 60
ttggacacag ctgtttccca gactccaaaa tacctggtca cacagatggg aaacgacaag 120
tccattaaat gtgaacaaaa tctgggccat gatactatgt attggtataa acaggactct 180
aagaaatttc tgaagataat gtttagctac aataataagg agctcattat aaatgaaaca 240
gttccaaatc gcttctcacc taaatctcca gacaaagctc acttaaatct tcacatcaat 300
tccctggagc ttggtgactc tgctgtgtat ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 533
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV4-1_TRBC1
<400> 533
gccaccatgg gctgcaggct gctctgctgt gcggttctct gtctcctggg agcagttccc 60
atagacactg aagttaccca gacaccaaaa cacctggtca tgggaatgac aaataagaag 120
tctttgaaat gtgaacaaca tatggggcac agggctatgt attggtacaa gcagaaagct 180
aagaagccac cggagctcat gtttgtctac agctatgaga aactctctat aaatgaaagt 240
gtgccaagtc gcttctcacc tgaatgcccc aacagctctc tcttaaacct tcacctacac 300
gccctgcagc cagaagattc agccctgtat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 534
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV4-2_TRBC1
<400> 534
gccaccatgg gctgcaggct gctctgctgt gcggttctct gtctcctggg agcggtcccc 60
atggaaacgg gagttacgca gacaccaaga cacctggtca tgggaatgac aaataagaag 120
tctttgaaat gtgaacaaca tctggggcat aacgctatgt attggtacaa gcaaagtgct 180
aagaagccac tggagctcat gtttgtctac aactttaaag aacagactga aaacaacagt 240
gtgccaagtc gcttctcacc tgaatgcccc aacagctctc acttattcct tcacctacac 300
accctgcagc cagaagattc ggccctgtat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 535
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV4-3_TRBC1
<400> 535
gccaccatgg gctgcaggct gctctgctgt gcggttctct gtctcctggg agcggtcccc 60
atggaaacgg gagttacgca gacaccaaga cacctggtca tgggaatgac aaataagaag 120
tctttgaaat gtgaacaaca tctgggtcat aacgctatgt attggtacaa gcaaagtgct 180
aagaagccac tggagctcat gtttgtctac agtcttgaag aacgggttga aaacaacagt 240
gtgccaagtc gcttctcacc tgaatgcccc aacagctctc acttattcct tcacctacac 300
accctgcagc cagaagattc ggccctgtat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 536
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV5-1_TRBC1
<400> 536
gccaccatgg gctccaggct gctctgttgg gtgctgcttt gtctcctggg agcaggccca 60
gtaaaggctg gagtcactca aactccaaga tatctgatca aaacgagagg acagcaagtg 120
acactgagct gctcccctat ctctgggcat aggagtgtat cctggtacca acagacccca 180
ggacagggcc ttcagttcct ctttgaatac ttcagtgaga cacagagaaa caaaggaaac 240
ttccctggtc gattctcagg gcgccagttc tctaactctc gctctgagat gaatgtgagc 300
accttggagc tgggggactc ggccctttat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 537
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV5-4_TRBC1
<400> 537
gccaccatgg gccctgggct cctctgctgg gtgctgcttt gtctcctggg agcaggctca 60
gtggagactg gagtcaccca aagtcccaca cacctgatca aaacgagagg acagcaagtg 120
actctgagat gctcttctca gtctgggcac aacactgtgt cctggtacca acaggccctg 180
ggtcaggggc cccagtttat ctttcagtat tatagggagg aagagaatgg cagaggaaac 240
ttccctccta gattctcagg actccagttc cctaattata gctctgagct gaatgtgaac 300
gccttggagc tggacgactc ggccctgtat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 538
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV5-5_TRBC1
<400> 538
gccaccatgg gccctgggct cctctgctgg gtgctgcttt gtctcctggg agcaggccca 60
gtggacgctg gagtcaccca aagtcccaca cacctgatca aaacgagagg acagcaagtg 120
actctgagat gctctcctat ctctgggcac aagagtgtgt cctggtacca acaggtcctg 180
ggtcaggggc cccagtttat ctttcagtat tatgagaaag aagagagagg aagaggaaac 240
ttccctgatc gattctcagc tcgccagttc cctaactata gctctgagct gaatgtgaac 300
gccttgttgc tgggggactc ggccctgtat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 539
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV5-6_TRBC1
<400> 539
gccaccatgg gccccgggct cctctgctgg gcactgcttt gtctcctggg agcaggctta 60
gtggacgctg gagtcaccca aagtcccaca cacctgatca aaacgagagg acagcaagtg 120
actctgagat gctctcctaa gtctgggcat gacactgtgt cctggtacca acaggccctg 180
ggtcaggggc cccagtttat ctttcagtat tatgaggagg aagagagaca gagaggcaac 240
ttccctgatc gattctcagg tcaccagttc cctaactata gctctgagct gaatgtgaac 300
gccttgttgc tgggggactc ggccctctat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 540
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV5-7_TRBC1
<400> 540
gccaccatgg gccccgggct cctctgctgg gtgctgcttt gtcccctagg agaaggccca 60
gtggacgctg gagtcaccca aagtcccaca cacctgatca aaacgagagg acagcacgtg 120
actctgagat gctctcctat ctctgggcac accagtgtgt cctcgtacca acaggccctg 180
ggtcaggggc cccagtttat ctttcagtat tatgagaaag aagagagagg aagaggaaac 240
ttccctgatc aattctcagg tcaccagttc cctaactata gctctgagct gaatgtgaac 300
gccttgttgc taggggactc ggccctctat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 541
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV5-8_TRBC1
<400> 541
gccaccatgg gacccaggct cctcttctgg gcactgcttt gtctcctcgg aacaggccca 60
gtggaggctg gagtcacaca aagtcccaca cacctgatca aaacgagagg acagcaagcg 120
actctgagat gctctcctat ctctgggcac accagtgtgt actggtacca acaggccctg 180
ggtctgggcc tccagttcct cctttggtat gacgagggtg aagagagaaa cagaggaaac 240
ttccctccta gattttcagg tcgccagttc cctaattata gctctgagct gaatgtgaac 300
gccttggagc tggaggactc ggccctgtat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 542
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV6-1_TRBC1
<400> 542
gccaccatga gcatcgggct cctgtgctgt gtggcctttt ctctcctgtg ggcaagtcca 60
gtgaatgctg gtgtcactca gaccccaaaa ttccaggtcc tgaaaacagg acagagcatg 120
acactgcagt gtgcccagga tatgaaccat aactccatgt actggtatcg acaagaccca 180
ggcatgggac tgaggctgat ttattactca gcttctgagg gtaccactga caaaggagaa 240
gtccccaatg gctacaatgt ctccagatta aacaaacggg agttctcgct caggctggag 300
tcggctgctc cctcccagac atctgtgtac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 543
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV6-3_TRBC1
<400> 543
gccaccatga gcctcgggct cctgtgctgt ggggtctttt ctctcctgtg ggcaggtcca 60
gtgaatgctg gtgtcactca gaccccaaaa ttccgggtcc tgaaaacagg acagagcatg 120
acactgctgt gtgcccagga tatgaaccat gaatacatgt actggtatcg acaagaccca 180
ggcatggggc tgaggctgat tcattactca gttggtgagg gtacaactgc caaaggagag 240
gtccctgatg gctacaatgt ctccagatta aaaaaacaga atttcctgct ggggttggag 300
tcggctgctc cctcccaaac atctgtgtac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 544
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV6-4_TRBC1
<400> 544
gccaccatga gaatcaggct cctgtgctgt gtggcctttt ctctcctgtg ggcaggtcca 60
gtgattgctg ggatcaccca ggcaccaaca tctcagatcc tggcagcagg acggcgcatg 120
acactgagat gtacccagga tatgagacat aatgccatgt actggtatag acaagatcta 180
ggactggggc taaggctcat ccattattca aatactgcag gtaccactgg caaaggagaa 240
gtccctgatg gttatagtgt ctccagagca aacacagatg atttccccct cacgttggcg 300
tctgctgtac cctctcagac atctgtgtac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 545
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV6-5_TRBC1
<400> 545
gccaccatga gcatcggcct cctgtgctgt gcagccttgt ctctcctgtg ggcaggtcca 60
gtgaatgctg gtgtcactca gaccccaaaa ttccaggtcc tgaaaacagg acagagcatg 120
acactgcagt gtgcccagga tatgaaccat gaatacatgt cctggtatcg acaagaccca 180
ggcatggggc tgaggctgat tcattactca gttggtgctg gtatcactga ccaaggagaa 240
gtccccaatg gctacaatgt ctccagatca accacagagg atttcccgct caggctgctg 300
tcggctgctc cctcccagac atctgtgtac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 546
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV6-6_TRBC1
<400> 546
gccaccatga gcatcagcct cctgtgctgt gcagcctttc ctctcctgtg ggcaggtcca 60
gtgaatgctg gtgtcactca gaccccaaaa ttccgcatcc tgaagatagg acagagcatg 120
acactgcagt gtacccagga tatgaaccat aactacatgt actggtatcg acaagaccca 180
ggcatggggc tgaagctgat ttattattca gttggtgctg gtatcactga taaaggagaa 240
gtcccgaatg gctacaacgt ctccagatca accacagagg atttcccgct caggctggag 300
ttggctgctc cctcccagac atctgtgtac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 547
<211> 879
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV6-8_TRBC1
<400> 547
gccaccatga gcctcgggct cctgtgctgt gcggcctttt ctctcctgtg ggcaggtccc 60
gtgaatgctg gtgtcactca gaccccaaaa ttccacatcc tgaaaacagg acagagcatg 120
acactgcagt gtgcccagga tatgaaccat ggatacatgt cctggtatcg acaagaccca 180
ggcatggggc tgagactgat ttactactca gctgctgctg gtactactga caaagaagtc 240
cccaatggct acaatgtctc tagattaaac acagaggatt tcccactcag gctggtgtcg 300
gctgctccct cccagacatc tgtgtacctt tgcagagacc ttgcggccgc ataggtctca 360
gtgttcccac ccgaggtcgc tgtgtttgag ccatcagaag cagagatctc ccacacccaa 420
aaggccacac tggtgtgcct ggccacaggc ttcttccccg accacgtgga gctgagctgg 480
tgggtgaatg ggaaggaggt gcacagtggg gtcagcacag acccgcagcc cctcaaggag 540
cagcccgccc tcaatgactc cagatactgc ctgagcagcc gcctgagggt gtcggccacc 600
ttctggcaga acccccgcaa ccacttccgc tgtcaagtcc agttctacgg gctctcggag 660
aatgacgagt ggacccagga tagggccaaa cccgtcaccc agatcgtcag cgccgaggcc 720
tggggtagag cagactgtgg ctttacctcg gtgtcctacc agcaaggggt cctgtctgcc 780
accatcctct atgagatcct gctagggaag gccaccctgt atgctgtgct ggtcagcgcc 840
cttgtgttga tggccatggt caagagaaag gatttctga 879
<210> 548
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV6-9_TRBC1
<400> 548
gccaccatga gcatcgggct cctgtgctgt gtggcctttt ctctcctgtg ggcaggtcca 60
gtgaatgctg gtgtcactca gaccccaaaa ttccacatcc tgaaaacagg acagagcatg 120
acactgcagt gtgcccagga tatgaaccat ggatacttgt cctggtatcg acaagaccca 180
ggcatggggc tgaggcgcat tcattactca gttgctgctg gtatcactga caaaggagaa 240
gtccccgatg gctacaatgt atccagatca aacacagagg atttcccgct caggctggag 300
tcagctgctc cctcccagac atctgtatac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 549
<211> 885
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV7-2_TRBC1
<400> 549
gccaccatgg gcaccaggct cctcttctgg gtggccttct gtctcctggg ggcagatcac 60
acaggagctg gagtctccca gtcccccagt aacaaggtca cagagaaggg aaaggatgta 120
gagctcaggt gtgatccaat ttcaggtcat actgcccttt actggtaccg acagagcctg 180
gggcagggcc tggagttttt aatttacttc caaggcaaca gtgcaccaga caaatcaggg 240
ctgcccagtg atcgcttctc tgcagagagg actgggggat ccgtctccac tctgacgatc 300
cagcgcacac agcaggagga ctcggccgtg tatctttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt gtgcctggcc acaggcttct tccccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttt acctcggtgt cctaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcctgcta gggaaggcca ccctgtatgc tgtgctggtc 840
agcgcccttg tgttgatggc catggtcaag agaaaggatt tctga 885
<210> 550
<211> 885
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV7-3_TRBC1
<400> 550
gccaccatgg gcaccaggct cctctgctgg gcagccctgt gcctcctggg ggcagatcac 60
acaggtgctg gagtctccca gacccccagt aacaaggtca cagagaaggg aaaatatgta 120
gagctcaggt gtgatccaat ttcaggtcat actgcccttt actggtaccg acaaagcctg 180
gggcagggcc cagagtttct aatttacttc caaggcacgg gtgcggcaga tgactcaggg 240
ctgcccaacg atcggttctt tgcagtcagg cctgagggat ccgtctctac tctgaagatc 300
cagcgcacag agcgggggga ctcagccgtg tatctttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt gtgcctggcc acaggcttct tccccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttt acctcggtgt cctaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcctgcta gggaaggcca ccctgtatgc tgtgctggtc 840
agcgcccttg tgttgatggc catggtcaag agaaaggatt tctga 885
<210> 551
<211> 885
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV7-6_TRBC1
<400> 551
gccaccatgg gcaccagtct cctatgctgg gtggtcctgg gtttcctagg gacagatcac 60
acaggtgctg gagtctccca gtctcccagg tacaaagtca caaagagggg acaggatgta 120
gctctcaggt gtgatccaat ttcgggtcat gtatcccttt attggtaccg acaggccctg 180
gggcagggcc cagagtttct gacttacttc aattatgaag cccaacaaga caaatcaggg 240
ctgcccaatg atcggttctc tgcagagagg cctgagggat ccatctccac tctgacgatc 300
cagcgcacag agcagcggga ctcggccatg tatcgttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt gtgcctggcc acaggcttct tccccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttt acctcggtgt cctaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcctgcta gggaaggcca ccctgtatgc tgtgctggtc 840
agcgcccttg tgttgatggc catggtcaag agaaaggatt tctga 885
<210> 552
<211> 885
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV7-7_TRBC1
<400> 552
gccaccatgg gtaccagtct cctatgctgg gtggtcctgg gtttcctagg gacagatcac 60
acaggtgctg gagtctccca gtctcccagg tacaaagtca caaagagggg acaggatgta 120
actctcaggt gtgatccaat ttcgagtcat gcaacccttt attggtatca acaggccctg 180
gggcagggcc cagagtttct gacttacttc aattatgaag ctcaaccaga caaatcaggg 240
ctgcccagtg atcggttctc tgcagagagg cctgagggat ccatctccac tctgacgatt 300
cagcgcacag agcagcggga ctcagccatg tatcgttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt gtgcctggcc acaggcttct tccccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttt acctcggtgt cctaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcctgcta gggaaggcca ccctgtatgc tgtgctggtc 840
agcgcccttg tgttgatggc catggtcaag agaaaggatt tctga 885
<210> 553
<211> 885
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV7-8_TRBC1
<400> 553
gccaccatgg gcaccaggct cctctgctgg gtggtcctgg gtttcctagg gacagatcac 60
acaggtgctg gagtctccca gtcccctagg tacaaagtcg caaagagagg acaggatgta 120
gctctcaggt gtgatccaat ttcgggtcat gtatcccttt tttggtacca acaggccctg 180
gggcaggggc cagagtttct gacttatttc cagaatgaag ctcaactaga caaatcgggg 240
ctgcccagtg atcgcttctt tgcagaaagg cctgagggat ccgtctccac tctgaagatc 300
cagcgcacac agcaggagga ctccgccgtg tatctttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt gtgcctggcc acaggcttct tccccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttt acctcggtgt cctaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcctgcta gggaaggcca ccctgtatgc tgtgctggtc 840
agcgcccttg tgttgatggc catggtcaag agaaaggatt tctga 885
<210> 554
<211> 885
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV7-9_TRBC1
<400> 554
gccaccatgg gcaccagcct cctctgctgg atggccctgt gtctcctggg ggcagatcac 60
gcagatactg gagtctccca gaaccccaga cacaagatca caaagagggg acagaatgta 120
actttcaggt gtgatccaat ttctgaacac aaccgccttt attggtaccg acagaccctg 180
gggcagggcc cagagtttct gacttacttc cagaatgaag ctcaactaga aaaatcaagg 240
ctgctcagtg atcggttctc tgcagagagg cctaagggat ctttctccac cttggagatc 300
cagcgcacag agcaggggga ctcggccatg tatctttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt gtgcctggcc acaggcttct tccccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttt acctcggtgt cctaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcctgcta gggaaggcca ccctgtatgc tgtgctggtc 840
agcgcccttg tgttgatggc catggtcaag agaaaggatt tctga 885
<210> 555
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV9_TRBC1
<400> 555
gccaccatgg gcttcaggct cctctgctgt gtggcctttt gtctcctggg agcaggccca 60
gtggattctg gagtcacaca aaccccaaag cacctgatca cagcaactgg acagcgagtg 120
acgctgagat gctcccctag gtctggtgac ctctctgtgt actggtacca acagagcctg 180
gaccagggcc tccagttcct cattcagtat tataatggag aagagagagc aaaaggaaac 240
attcttgaac gattctccgc acaacagttc cctgacttgc actctgaact aaacctgagc 300
tctctggagc tgggggactc agctttgtac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 556
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV10-1_TRBC1
<400> 556
gccaccatgg gcacgaggct cttcttctat gtggcccttt gtctgctgtg ggcaggacac 60
agggatgctg aaatcaccca gagcccaaga cacaagatca cagagacagg aaggcaggtg 120
accttggcgt gtcaccagac ttggaaccac aacaatatgt tctggtatcg acaagacctg 180
ggacatgggc tgaggctgat ccattactca tatggtgttc aagacactaa caaaggagaa 240
gtctcagatg gctacagtgt ctctagatca aacacagagg acctccccct cactctggag 300
tctgctgcct cctcccagac atctgtatac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 557
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV10-2_TRBC1
<400> 557
gccaccatgg gcaccaggct cttcttctat gtggcccttt gtctgctgtg ggcaggacac 60
agggatgctg gaatcaccca gagcccaaga tacaagatca cagagacagg aaggcaggtg 120
accttgatgt gtcaccagac ttggagccac agctatatgt tctggtatcg acaagacctg 180
ggacatgggc tgaggctgat ctattactca gcagctgctg atattacaga taaaggagaa 240
gtccccgatg gctatgttgt ctccagatcc aagacagaga atttccccct cactctggag 300
tcagctaccc gctcccagac atctgtgtac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 558
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV10-3_TRBC1
<400> 558
gccaccatgg gcacaaggtt gttcttctat gtggcccttt gtctcctgtg gacaggacac 60
atggatgctg gaatcaccca gagcccaaga cacaaggtca cagagacagg aacaccagtg 120
actctgagat gtcaccagac tgagaaccac cgctatatgt actggtatcg acaagacccg 180
gggcatgggc tgaggctgat ccattactca tatggtgtta aagatactga caaaggagaa 240
gtctcagatg gctatagtgt ctctagatca aagacagagg atttcctcct cactctggag 300
tccgctacca gctcccagac atctgtgtac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 559
<211> 885
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV11-1_TRBC1
<400> 559
gccaccatga gcaccaggct tctctgctgg atggccctct gtctcctggg ggcagaactc 60
tcagaagctg aagttgccca gtcccccaga tataagatta cagagaaaag ccaggctgtg 120
gctttttggt gtgatcctat ttctggccat gctacccttt actggtaccg gcagatcctg 180
ggacagggcc cggagcttct ggttcaattt caggatgaga gtgtagtaga tgattcacag 240
ttgcctaagg atcgattttc tgcagagagg ctcaaaggag tagactccac tctcaagatc 300
cagcctgcag agcttgggga ctcggccatg tatctttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt gtgcctggcc acaggcttct tccccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttt acctcggtgt cctaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcctgcta gggaaggcca ccctgtatgc tgtgctggtc 840
agcgcccttg tgttgatggc catggtcaag agaaaggatt tctga 885
<210> 560
<211> 885
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV11-2_TRBC1
<400> 560
gccaccatgg gcaccaggct cctctgctgg gcggccctct gtctcctggg agcagaactc 60
acagaagctg gagttgccca gtctcccaga tataagatta tagagaaaag gcagagtgtg 120
gctttttggt gcaatcctat atctggccat gctacccttt actggtacca gcagatcctg 180
ggacagggcc caaagcttct gattcagttt cagaataacg gtgtagtgga tgattcacag 240
ttgcctaagg atcgattttc tgcagagagg ctcaaaggag tagactccac tctcaagatc 300
cagcctgcaa agcttgagga ctcggccgtg tatctttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt gtgcctggcc acaggcttct tccccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttt acctcggtgt cctaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcctgcta gggaaggcca ccctgtatgc tgtgctggtc 840
agcgcccttg tgttgatggc catggtcaag agaaaggatt tctga 885
<210> 561
<211> 885
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV11-3_TRBC1
<400> 561
gccaccatgg gtaccaggct cctctgctgg gtggccttct gtctcctggt ggaagaactc 60
atagaagctg gagtggttca gtctcccaga tataagatta tagagaaaaa acagcctgtg 120
gctttttggt gcaatcctat ttctggccac aatacccttt actggtacct gcagaacttg 180
ggacagggcc cggagcttct gattcgatat gagaatgagg aagcagtaga cgattcacag 240
ttgcctaagg atcgattttc tgcagagagg ctcaaaggag tagactccac tctcaagatc 300
cagcctgcag agcttgggga ctcggccgtg tatctttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt gtgcctggcc acaggcttct tccccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttt acctcggtgt cctaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcctgcta gggaaggcca ccctgtatgc tgtgctggtc 840
agcgcccttg tgttgatggc catggtcaag agaaaggatt tctga 885
<210> 562
<211> 885
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV12-3_TRBC1
<400> 562
gccaccatgg actcctggac cttctgctgt gtgtcccttt gcatcctggt agcgaagcat 60
acagatgctg gagttatcca gtcaccccgc catgaggtga cagagatggg acaagaagtg 120
actctgagat gtaaaccaat ttcaggccac aactcccttt tctggtacag acagaccatg 180
atgcggggac tggagttgct catttacttt aacaacaacg ttccgataga tgattcaggg 240
atgcccgagg atcgattctc agctaagatg cctaatgcat cattctccac tctgaagatc 300
cagccctcag aacccaggga ctcagctgtg tacttttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt gtgcctggcc acaggcttct tccccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttt acctcggtgt cctaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcctgcta gggaaggcca ccctgtatgc tgtgctggtc 840
agcgcccttg tgttgatggc catggtcaag agaaaggatt tctga 885
<210> 563
<211> 885
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV12-4_TRBC1
<400> 563
gccaccatgg actcctggac cctctgctgt gtgtcccttt gcatcctggt agcaaagcac 60
acagatgctg gagttatcca gtcaccccgg cacgaggtga cagagatggg acaagaagtg 120
actctgagat gtaaaccaat ttcaggacac gactaccttt tctggtacag acagaccatg 180
atgcggggac tggagttgct catttacttt aacaacaacg ttccgataga tgattcaggg 240
atgcccgagg atcgattctc agctaagatg cctaatgcat cattctccac tctgaagatc 300
cagccctcag aacccaggga ctcagctgtg tacttttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt gtgcctggcc acaggcttct tccccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttt acctcggtgt cctaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcctgcta gggaaggcca ccctgtatgc tgtgctggtc 840
agcgcccttg tgttgatggc catggtcaag agaaaggatt tctga 885
<210> 564
<211> 885
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV12-5_TRBC1
<400> 564
gccaccatgg ccaccaggct cctctgctgt gtggttcttt gtctcctggg agaagagctt 60
atagatgcta gagtcaccca gacaccaagg cacaaggtga cagagatggg acaagaagta 120
acaatgagat gtcagccaat tttaggccac aatactgttt tctggtacag acagaccatg 180
atgcaaggac tggagttgct ggcttacttc cgcaaccggg ctcctctaga tgattcgggg 240
atgccgaagg atcgattctc agcagagatg cctgatgcaa ctttagccac tctgaagatc 300
cagccctcag aacccaggga ctcagctgtg tacttttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt gtgcctggcc acaggcttct tccccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttt acctcggtgt cctaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcctgcta gggaaggcca ccctgtatgc tgtgctggtc 840
agcgcccttg tgttgatggc catggtcaag agaaaggatt tctga 885
<210> 565
<211> 912
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV13_TRBC1
<400> 565
gccaccatgc ttagtcctga cctgcctgac tctgcctgga acaccaggct cctctgccat 60
gtcatgcttt gtctcctggg agcagtttca gtggctgctg gagtcatcca gtccccaaga 120
catctgatca aagaaaagag ggaaacagcc actctgaaat gctatcctat ccctagacac 180
gacactgtct actggtacca gcagggtcca ggtcaggacc cccagttcct catttcgttt 240
tatgaaaaga tgcagagcga taaaggaagc atccctgatc gattctcagc tcaacagttc 300
agtgactatc attctgaact gaacatgagc tccttggagc tgggggactc agccctgtac 360
ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt 420
gagccatcag aagcagagat ctcccacacc caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca 480
ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt 540
ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac 600
tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc accttctggc agaacccccg caaccacttc 660
cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc 720
aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag gcctggggta gagcagactg tggctttacc 780
tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg 840
aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga 900
aaggatttct ga 912
<210> 566
<211> 885
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV14_TRBC1
<400> 566
gccaccatgg tttccaggct tctcagttta gtgtcccttt gtctcctggg agcaaagcac 60
atagaagctg gagttactca gttccccagc cacagcgtaa tagagaaggg ccagactgtg 120
actctgagat gtgacccaat ttctggacat gataatcttt attggtatcg acgtgttatg 180
ggaaaagaaa taaaatttct gttacatttt gtgaaagagt ctaaacagga tgagtccggt 240
atgcccaaca atcgattctt agctgaaagg actggaggga cgtattctac tctgaaggtg 300
cagcctgcag aactggagga ttctggagtt tacttttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt gtgcctggcc acaggcttct tccccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttt acctcggtgt cctaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcctgcta gggaaggcca ccctgtatgc tgtgctggtc 840
agcgcccttg tgttgatggc catggtcaag agaaaggatt tctga 885
<210> 567
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV15_TRBC1
<400> 567
gccaccatgg gtcctgggct tctccactgg atggcccttt gtctccttgg aacaggtcat 60
ggggatgcca tggtcatcca gaacccaaga taccaggtta cccagtttgg aaagccagtg 120
accctgagtt gttctcagac tttgaaccat aacgtcatgt actggtacca gcagaagtca 180
agtcaggccc caaagctgct gttccactac tatgacaaag attttaacaa tgaagcagac 240
acccctgata acttccaatc caggaggccg aacacttctt tctgctttct tgacatccgc 300
tcaccaggcc tgggggacac agccatgtac ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 568
<211> 885
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV16_TRBC1
<400> 568
gccaccatga gcccaatatt cacctgcatc acaatccttt gtctgctggc tgcaggttct 60
cctggtgaag aagtcgccca gactccaaaa catcttgtca gaggggaagg acagaaagca 120
aaattatatt gtgccccaat aaaaggacac agttatgttt tttggtacca acaggtcctg 180
aaaaacgagt tcaagttctt gatttccttc cagaatgaaa atgtctttga tgaaacaggt 240
atgcccaagg aaagattttc agctaagtgc ctcccaaatt caccctgtag ccttgagatc 300
caggctacga agcttgagga ttcagcagtg tacttttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt gtgcctggcc acaggcttct tccccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttt acctcggtgt cctaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcctgcta gggaaggcca ccctgtatgc tgtgctggtc 840
agcgcccttg tgttgatggc catggtcaag agaaaggatt tctga 885
<210> 569
<211> 885
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV18_TRBC1
<400> 569
gccaccatgg acaccagagt actctgctgt gcggtcatct gccttctggg ggcaggactc 60
tcaaatgccg gcgtcatgca gaacccaaga cacctggtca ggaggagggg acaggaggca 120
agactgagat gcagcccaat gaaaggacac agtcatgttt actggtatcg gcagctccca 180
gaggaaggtc tgaaattcat ggtttatctc cagaaagaaa atatcataga tgagtcagga 240
atgccaaagg aacgattttc tgctgaattt cccaaagagg gccccagcat cctgaggatc 300
cagcaggtag tgcgaggaga ttcggcagct tacttttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt gtgcctggcc acaggcttct tccccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttt acctcggtgt cctaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcctgcta gggaaggcca ccctgtatgc tgtgctggtc 840
agcgcccttg tgttgatggc catggtcaag agaaaggatt tctga 885
<210> 570
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV19_TRBC1
<400> 570
gccaccatga gcaaccaggt gctctgctgt gtggtccttt gtttcctggg agcaaacacc 60
gtggatggtg gaatcactca gtccccaaag tacctgttca gaaaggaagg acagaatgtg 120
accctgagtt gtgaacagaa tttgaaccac gatgccatgt actggtaccg acaggaccca 180
gggcaagggc tgagattgat ctactactca cagatagtaa atgactttca gaaaggagat 240
atagctgaag ggtacagcgt ctctcgggag aagaaggaat cctttcctct cactgtgaca 300
tcggcccaaa agaacccgac agctttctat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 571
<211> 876
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV20-1_TRBC1
<400> 571
gccaccatgc tgctgcttct gctgcttctg gggccaggct ccgggcttgg tgctgtcgtc 60
tctcaacatc cgagctgggt tatctgtaag agtggaacct ctgtgaagat cgagtgccgt 120
tccctggact ttcaggccac aactatgttt tggtatcgtc agttcccgaa acagagtctc 180
atgctgatgg caacttccaa tgagggctcc aaggccacat acgagcaagg cgtcgagaag 240
gacaagtttc tcatcaacca tgcaagcctg accttgtcca ctctgacagt gaccagtgcc 300
catcctgaag atagcagctt ctacatttgc agagaccttg cggccgcata ggtctcagtg 360
ttcccacccg aggtcgctgt gtttgagcca tcagaagcag agatctccca cacccaaaag 420
gccacactgg tgtgcctggc cacaggcttc ttccccgacc acgtggagct gagctggtgg 480
gtgaatggga aggaggtgca cagtggggtc agcacagacc cgcagcccct caaggagcag 540
cccgccctca atgactccag atactgcctg agcagccgcc tgagggtgtc ggccaccttc 600
tggcagaacc cccgcaacca cttccgctgt caagtccagt tctacgggct ctcggagaat 660
gacgagtgga cccaggatag ggccaaaccc gtcacccaga tcgtcagcgc cgaggcctgg 720
ggtagagcag actgtggctt tacctcggtg tcctaccagc aaggggtcct gtctgccacc 780
atcctctatg agatcctgct agggaaggcc accctgtatg ctgtgctggt cagcgccctt 840
gtgttgatgg ccatggtcaa gagaaaggat ttctga 876
<210> 572
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV24-1_TRBC1
<400> 572
gccaccatgg cctccctgct cttcttctgt ggggcctttt atctcctggg aacagggtcc 60
atggatgctg atgttaccca gaccccaagg aataggatca caaagacagg aaagaggatt 120
atgctggaat gttctcagac taagggtcat gatagaatgt actggtatcg acaagaccca 180
ggactgggcc tacggttgat ctattactcc tttgatgtca aagatataaa caaaggagag 240
atctctgatg gatacagtgt ctctcgacag gcacaggcta aattctccct gtccctagag 300
tctgccatcc ccaaccagac agctctttac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 573
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV25-1_TRBC1
<400> 573
gccaccatga ctatcaggct cctctgctac atgggctttt attttctggg ggcaggcctc 60
atggaagctg acatctacca gaccccaaga taccttgtta tagggacagg aaagaagatc 120
actctggaat gttctcaaac catgggccat gacaaaatgt actggtatca acaagatcca 180
ggaatggaac tacacctcat ccactattcc tatggagtta attccacaga gaagggagat 240
ctttcctctg agtcaacagt ctccagaata aggacggagc attttcccct gaccctggag 300
tctgccaggc cctcacatac ctctcagtac ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 574
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV27_TRBC1
<400> 574
gccaccatgg gcccccagct ccttggctat gtggtccttt gccttctagg agcaggcccc 60
ctggaagccc aagtgaccca gaacccaaga tacctcatca cagtgactgg aaagaagtta 120
acagtgactt gttctcagaa tatgaaccat gagtatatgt cctggtatcg acaagaccca 180
gggctgggct taaggcagat ctactattca atgaatgttg aggtgactga taagggagat 240
gttcctgaag ggtacaaagt ctctcgaaaa gagaagagga atttccccct gatcctggag 300
tcgcccagcc ccaaccagac ctctctgtac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 575
<211> 882
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV28_TRBC1
<400> 575
gccaccatgg gaatcaggct cctctgtcgt gtggcctttt gtttcctggc tgtaggcctc 60
gtagatgtga aagtaaccca gagctcgaga tatctagtca aaaggacggg agagaaagtt 120
tttctggaat gtgtccagga tatggaccat gaaaatatgt tctggtatcg acaagaccca 180
ggtctggggc tacggctgat ctatttctca tatgatgtta aaatgaaaga aaaaggagat 240
attcctgagg ggtacagtgt ctctagagag aagaaggagc gcttctccct gattctggag 300
tccgccagca ccaaccagac atctatgtac ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 576
<211> 876
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV29-1_TRBC1
<400> 576
gccaccatgc tgagtctact gctccttctc ctgggactag gctctgtgtt cagtgctgtc 60
atctctcaaa agccaagcag ggatatctgt caacgtggaa cctccctgac gatccagtgt 120
caagtcgata gccaagtcac catgatgttc tggtaccgtc agcaacctgg acagagcctg 180
acactgatcg caactgcaaa tcagggctct gaggccacat atgagagtgg atttgtcatt 240
gacaagtttc ccatcagccg cccaaaccta acattctcaa ctctgactgt gagcaacatg 300
agccctgaag atagcagcat atatctttgc agagaccttg cggccgcata ggtctcagtg 360
ttcccacccg aggtcgctgt gtttgagcca tcagaagcag agatctccca cacccaaaag 420
gccacactgg tgtgcctggc cacaggcttc ttccccgacc acgtggagct gagctggtgg 480
gtgaatggga aggaggtgca cagtggggtc agcacagacc cgcagcccct caaggagcag 540
cccgccctca atgactccag atactgcctg agcagccgcc tgagggtgtc ggccaccttc 600
tggcagaacc cccgcaacca cttccgctgt caagtccagt tctacgggct ctcggagaat 660
gacgagtgga cccaggatag ggccaaaccc gtcacccaga tcgtcagcgc cgaggcctgg 720
ggtagagcag actgtggctt tacctcggtg tcctaccagc aaggggtcct gtctgccacc 780
atcctctatg agatcctgct agggaaggcc accctgtatg ctgtgctggt cagcgccctt 840
gtgttgatgg ccatggtcaa gagaaaggat ttctga 876
<210> 577
<211> 876
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> V-C entry TRBV30_TRBC1
<400> 577
gccaccatgc tctgctctct ccttgccctt ctcctgggca ctttctttgg ggtcagatct 60
cagactattc atcaatggcc agcgaccctg gtgcagcctg tgggcagccc gctctctctg 120
gagtgcactg tggagggaac atcaaacccc aacctatact ggtaccgaca ggctgcaggc 180
aggggcctcc agctgctctt ctactccgtt ggtattggcc agatcagctc tgaggtgccc 240
cagaatctct cagcctccag accccaggac cggcagttca tcctgagttc taagaagctc 300
cttctcagtg actctggctt ctatctttgc agagaccttg cggccgcata ggtctcagtg 360
ttcccacccg aggtcgctgt gtttgagcca tcagaagcag agatctccca cacccaaaag 420
gccacactgg tgtgcctggc cacaggcttc ttccccgacc acgtggagct gagctggtgg 480
gtgaatggga aggaggtgca cagtggggtc agcacagacc cgcagcccct caaggagcag 540
cccgccctca atgactccag atactgcctg agcagccgcc tgagggtgtc ggccaccttc 600
tggcagaacc cccgcaacca cttccgctgt caagtccagt tctacgggct ctcggagaat 660
gacgagtgga cccaggatag ggccaaaccc gtcacccaga tcgtcagcgc cgaggcctgg 720
ggtagagcag actgtggctt tacctcggtg tcctaccagc aaggggtcct gtctgccacc 780
atcctctatg agatcctgct agggaaggcc accctgtatg ctgtgctggt cagcgccctt 840
gtgttgatgg ccatggtcaa gagaaaggat ttctga 876
<210> 578
<211> 64
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TRBJ-C1_receiving_F1
<400> 578
aattcggtct cgaagtcttc tgcggccgct gaagacacag gacctgaaca aggtgttgag 60
accc 64
<210> 579
<211> 64
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TRBJ-C2_receiving_F1
<400> 579
aattcggtct cgaagtcttc tgcggccgct gaagacacag gacctgaaaa acgtgttgag 60
accc 64
<210> 580
<211> 64
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TRBJ-C1_receiving_R1
<400> 580
tcgagggtct caacaccttg ttcaggtcct gtgtcttcag cggccgcaga agacttcgag 60
accg 64
<210> 581
<211> 64
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TRBJ-C2_receiving_R1
<400> 581
tcgagggtct caacacgttt ttcaggtcct gtgtcttcag cggccgcaga agacttcgag 60
accg 64
<210> 582
<211> 2366
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TRB J_C1 receiving cassette vector
<400> 582
gccagggttt tcccagtcac gacgttgtaa aacgacggcc agtgagcgcg acgtaatacg 60
actcactata gggcgaattg gcggaaggcc gtcaaggccg catgaattcg gtctcgaagt 120
cttctgcggc cgctgaagac acaggacctg aacaaggtgt tgagaccctc gagctgggcc 180
tcatgggcct tccgctcact gcccgctttc cagtcgggaa acctgtcgtg ccagctgcat 240
taacatggtc atagctgttt ccttgcgtat tgggcgctct ccgcttcctc gctcactgac 300
tcgctgcgct cggtcgttcg ggtaaagcct ggggtgccta atgagcaaaa ggccagcaaa 360
aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg 420
acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa 480
gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc 540
ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac 600
gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac 660
cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg 720
taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt 780
atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagaa 840
cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct 900
cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga 960
ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg 1020
ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct 1080
tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt 1140
aaacttggtc tgacagttag aaaaattcgt ccagcatcag atgaaattgc agtttgttca 1200
tgtccgggtt atcaatacca tatttctgga acagacgttt ctgcaggctc gggctaaatt 1260
cacccagaca attccacaga attgccagat cctgataacg atctgcaata ccaacacgac 1320
caacatcaat gcagccaatc agtttaccct catcaaaaat caggttatcc aggctaaaat 1380
caccatgggt aacaacgcta tccggactaa acggcagcag tttatgcatt tctttccaaa 1440
cctgttcaac aggccaacca ttacgttcat catcaaaatc gcttgcatca accagaccat 1500
tattcatacg gctctgtgcc tgtgccagac gaaaaacacg atcgctatta aacggacaat 1560
tacaaaccgg aatgctatgc agacgacgca gaaaaactgc cagtgcatca acaatatttt 1620
cgcctgaatc cggatattct tccagaacct gaaatgcggt tttacccgga attgcggtgg 1680
tcagcagcca tgcatcatcc ggtgtacgaa taaaatgttt aatggtcggc agcggcataa 1740
attcggtcag ccaattcaga cgaaccattt catcggtcac atcatttgca acgctacctt 1800
taccatgttt cagaaacagt tccggtgcat ccggtttacc atacagacga taaatggttg 1860
caccgctctg accaacatta tcacgtgccc atttatagcc atacagatct gcatccatat 1920
tgctattcag acgcggacgg ctacagctgg tttcacgctg aatatggctc atactcttcc 1980
tttttcaata ttattgaagc atttatcagg gttattgtct catgagcgga tacatatttg 2040
aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac atttccccga aaagtgccac 2100
ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc 2160
attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga 2220
gatagggttg agtggccgct acagggcgct cccattcgcc attcaggctg cgcaactgtt 2280
gggaagggcg tttcggtgcg ggcctcttcg ctattacgcc agctggcgaa agggggatgt 2340
gctgcaaggc gattaagttg ggtaac 2366
<210> 583
<211> 2366
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TRB J_C2 receiving cassette vector
<400> 583
gccagggttt tcccagtcac gacgttgtaa aacgacggcc agtgagcgcg acgtaatacg 60
actcactata gggcgaattg gcggaaggcc gtcaaggccg catgaattcg gtctcgaagt 120
cttctgcggc cgctgaagac acaggacctg aaaaacgtgt tgagaccctc gagctgggcc 180
tcatgggcct tccgctcact gcccgctttc cagtcgggaa acctgtcgtg ccagctgcat 240
taacatggtc atagctgttt ccttgcgtat tgggcgctct ccgcttcctc gctcactgac 300
tcgctgcgct cggtcgttcg ggtaaagcct ggggtgccta atgagcaaaa ggccagcaaa 360
aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg 420
acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa 480
gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc 540
ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac 600
gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac 660
cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg 720
taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt 780
atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagaa 840
cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct 900
cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga 960
ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg 1020
ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct 1080
tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt 1140
aaacttggtc tgacagttag aaaaattcgt ccagcatcag atgaaattgc agtttgttca 1200
tgtccgggtt atcaatacca tatttctgga acagacgttt ctgcaggctc gggctaaatt 1260
cacccagaca attccacaga attgccagat cctgataacg atctgcaata ccaacacgac 1320
caacatcaat gcagccaatc agtttaccct catcaaaaat caggttatcc aggctaaaat 1380
caccatgggt aacaacgcta tccggactaa acggcagcag tttatgcatt tctttccaaa 1440
cctgttcaac aggccaacca ttacgttcat catcaaaatc gcttgcatca accagaccat 1500
tattcatacg gctctgtgcc tgtgccagac gaaaaacacg atcgctatta aacggacaat 1560
tacaaaccgg aatgctatgc agacgacgca gaaaaactgc cagtgcatca acaatatttt 1620
cgcctgaatc cggatattct tccagaacct gaaatgcggt tttacccgga attgcggtgg 1680
tcagcagcca tgcatcatcc ggtgtacgaa taaaatgttt aatggtcggc agcggcataa 1740
attcggtcag ccaattcaga cgaaccattt catcggtcac atcatttgca acgctacctt 1800
taccatgttt cagaaacagt tccggtgcat ccggtttacc atacagacga taaatggttg 1860
caccgctctg accaacatta tcacgtgccc atttatagcc atacagatct gcatccatat 1920
tgctattcag acgcggacgg ctacagctgg tttcacgctg aatatggctc atactcttcc 1980
tttttcaata ttattgaagc atttatcagg gttattgtct catgagcgga tacatatttg 2040
aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac atttccccga aaagtgccac 2100
ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc 2160
attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga 2220
gatagggttg agtggccgct acagggcgct cccattcgcc attcaggctg cgcaactgtt 2280
gggaagggcg tttcggtgcg ggcctcttcg ctattacgcc agctggcgaa agggggatgt 2340
gctgcaaggc gattaagttg ggtaac 2366
<210> 584
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-1*01_BB-S_F1
<400> 584
ctcgtttgga caaggcacca gactcacagt tgtag 35
<210> 585
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-2*01_BB-S_F1
<400> 585
ctcgtttggt tcggggacca ggttaaccgt tgtag 35
<210> 586
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-3*01_BB-S_F1
<400> 586
ctcgtttgga gagggaagtt ggctcactgt tgtag 35
<210> 587
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-4*01_BB-S_F1
<400> 587
ctcgtttggc agtggaaccc agctctctgt cttgg 35
<210> 588
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-5*01_BB-S_F1
<400> 588
ctcgtttggt gatgggactc gactctccat cctag 35
<210> 589
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-6*01_BB-S_F1
<400> 589
ctcgtttggg aacgggacca ggctcactgt gacag 35
<210> 590
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-1*01_BB-S_F1
<400> 590
ctcgtttggg ccagggacac ggctcaccgt gctag 35
<210> 591
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-2*01_BB-S_F1
<400> 591
ctcgtttgga gaaggctcta ggctgaccgt actgg 35
<210> 592
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-3*01_BB-S_F1
<400> 592
ctcgtttggc ccaggcaccc ggctgacagt gctcg 35
<210> 593
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-4*01_BB-S_F1
<400> 593
ctcgtttggc gccgggaccc ggctctcagt gctgg 35
<210> 594
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-5*01_BB-S_F1
<400> 594
ctcgtttggg ccaggcacgc ggctcctggt gctcg 35
<210> 595
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-6*01_BB-S_F1
<400> 595
ctcgtttggg gccggcagca ggctgaccgt gctgg 35
<210> 596
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-7*01_BB-S_F1
<400> 596
ctcgtttggg ccgggcacca ggctcacggt cacag 35
<210> 597
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-1*01_BB-S_R1
<400> 597
tcctctacaa ctgtgagtct ggtgccttgt ccaaa 35
<210> 598
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-2*01_BB-S_R1
<400> 598
tcctctacaa cggttaacct ggtccccgaa ccaaa 35
<210> 599
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-3*01_BB-S_R1
<400> 599
tcctctacaa cagtgagcca acttccctct ccaaa 35
<210> 600
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-4*01_BB-S_R1
<400> 600
tcctccaaga cagagagctg ggttccactg ccaaa 35
<210> 601
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-5*01_BB-S_R1
<400> 601
tcctctagga tggagagtcg agtcccatca ccaaa 35
<210> 602
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-6*01_BB-S_R1
<400> 602
tcctctgtca cagtgagcct ggtcccgttc ccaaa 35
<210> 603
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-1*01_BB-S_R1
<400> 603
tcctctagca cggtgagccg tgtccctggc ccaaa 35
<210> 604
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-2*01_BB-S_R1
<400> 604
tcctccagta cggtcagcct agagccttct ccaaa 35
<210> 605
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-3*01_BB-S_R1
<400> 605
tcctcgagca ctgtcagccg ggtgcctggg ccaaa 35
<210> 606
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-4*01_BB-S_R1
<400> 606
tcctccagca ctgagagccg ggtcccggcg ccaaa 35
<210> 607
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-5*01_BB-S_R1
<400> 607
tcctcgagca ccaggagccg cgtgcctggc ccaaa 35
<210> 608
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-6*01_BB-S_R1
<400> 608
tcctccagca cggtcagcct gctgccggcc ccaaa 35
<210> 609
<211> 35
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-7*01_BB-S_R1
<400> 609
tcctctgtga ccgtgagcct ggtgcccggc ccaaa 35
<210> 610
<211> 44
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-1*01_BB-L_F1
<400> 610
ctcggaagct ttctttggac aaggcaccag actcacagtt gtag 44
<210> 611
<211> 44
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-2*01_BB-L_F1
<400> 611
ctcgggctac acctttggtt cggggaccag gttaaccgtt gtag 44
<210> 612
<211> 44
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-3*01_BB-L_F1
<400> 612
ctcgaccata tattttggag agggaagttg gctcactgtt gtag 44
<210> 613
<211> 47
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-4*01_BB-L_F1
<400> 613
ctcggaaaag ctgttctttg gcagtggaac ccagctctct gtcttgg 47
<210> 614
<211> 44
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-5*01_BB-L_F1
<400> 614
ctcgccccag cattttggtg atgggactcg actctccatc ctag 44
<210> 615
<211> 47
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-6*01_BB-L_F1
<400> 615
ctcgtcaccc ctccactttg ggaacgggac caggctcact gtgacag 47
<210> 616
<211> 44
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRB J Long segment part
<400> 616
ctcggagcag ttctttgggc cagggacacg gctcaccgtg ctag 44
<210> 617
<211> 47
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRB J Long segment part
<400> 617
ctcgggggag ctgttctttg gagaaggctc taggctgacc gtactgg 47
<210> 618
<211> 44
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRB J Long segment part
<400> 618
ctcgacgcag tattttggcc caggcacccg gctgacagtg ctcg 44
<210> 619
<211> 44
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRB J Long segment part
<400> 619
ctcgattcag tactttggcg ccgggacccg gctctcagtg ctgg 44
<210> 620
<211> 44
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRB J Long segment part
<400> 620
ctcgacccag tactttgggc caggcacgcg gctcctggtg ctcg 44
<210> 621
<211> 47
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRB J Long segment part
<400> 621
ctcgaacgtc ctgacttttg gggccggcag caggctgacc gtgctgg 47
<210> 622
<211> 41
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRB J Long segment part
<400> 622
ctcgcagtac tttgggccgg gcaccaggct cacggtcaca g 41
<210> 623
<211> 44
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-1*01_BB-L_R1
<400> 623
tcctctacaa ctgtgagtct ggtgccttgt ccaaagaaag cttc 44
<210> 624
<211> 44
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-2*01_BB-L_R1
<400> 624
tcctctacaa cggttaacct ggtccccgaa ccaaaggtgt agcc 44
<210> 625
<211> 44
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-3*01_BB-L_R1
<400> 625
tcctctacaa cagtgagcca acttccctct ccaaaatata tggt 44
<210> 626
<211> 47
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-4*01_BB-L_R1
<400> 626
tcctccaaga cagagagctg ggttccactg ccaaagaaca gcttttc 47
<210> 627
<211> 44
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-5*01_BB-L_R1
<400> 627
tcctctagga tggagagtcg agtcccatca ccaaaatgct gggg 44
<210> 628
<211> 47
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ1-6*01_BB-L_R1
<400> 628
tcctctgtca cagtgagcct ggtcccgttc ccaaagtgga ggggtga 47
<210> 629
<211> 44
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-1*01_BB-L_R1
<400> 629
tcctctagca cggtgagccg tgtccctggc ccaaagaact gctc 44
<210> 630
<211> 47
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-2*01_BB-L_R1
<400> 630
tcctccagta cggtcagcct agagccttct ccaaagaaca gctcccc 47
<210> 631
<211> 44
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-3*01_BB-L_R1
<400> 631
tcctcgagca ctgtcagccg ggtgcctggg ccaaaatact gcgt 44
<210> 632
<211> 44
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-4*01_BB-L_R1
<400> 632
tcctccagca ctgagagccg ggtcccggcg ccaaagtact gaat 44
<210> 633
<211> 44
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-5*01_BB-L_R1
<400> 633
tcctcgagca ccaggagccg cgtgcctggc ccaaagtact gggt 44
<210> 634
<211> 47
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-6*01_BB-L_R1
<400> 634
tcctccagca cggtcagcct gctgccggcc ccaaaagtca ggacgtt 47
<210> 635
<211> 41
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRBJ2-7*01_BB-L_R1
<400> 635
tcctctgtga ccgtgagcct ggtgcccggc ccaaagtact g 41
<210> 636
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C1_TRBJ1-1
<400> 636
ggtctcgttt ggacaaggca ccagactcac agttgtagag gacctgaaca aggtgttgag 60
acc 63
<210> 637
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C1_TRBJ1-2
<400> 637
ggtctcgttt ggttcgggga ccaggttaac cgttgtagag gacctgaaca aggtgttgag 60
acc 63
<210> 638
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C1_TRBJ1-3
<400> 638
ggtctcgttt ggagagggaa gttggctcac tgttgtagag gacctgaaca aggtgttgag 60
acc 63
<210> 639
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C1_TRBJ1-4
<400> 639
ggtctcgttt ggcagtggaa cccagctctc tgtcttggag gacctgaaca aggtgttgag 60
acc 63
<210> 640
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C1_TRBJ1-5
<400> 640
ggtctcgttt ggtgatggga ctcgactctc catcctagag gacctgaaca aggtgttgag 60
acc 63
<210> 641
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C1_TRBJ1-6
<400> 641
ggtctcgttt gggaacggga ccaggctcac tgtgacagag gacctgaaca aggtgttgag 60
acc 63
<210> 642
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C1_TRBJ2-1
<400> 642
ggtctcgttt gggccaggga cacggctcac cgtgctagag gacctgaaca aggtgttgag 60
acc 63
<210> 643
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C1_TRBJ2-2
<400> 643
ggtctcgttt ggagaaggct ctaggctgac cgtactggag gacctgaaca aggtgttgag 60
acc 63
<210> 644
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C1_TRBJ2-3
<400> 644
ggtctcgttt ggcccaggca cccggctgac agtgctcgag gacctgaaca aggtgttgag 60
acc 63
<210> 645
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C1_TRBJ2-4
<400> 645
ggtctcgttt ggcgccggga cccggctctc agtgctggag gacctgaaca aggtgttgag 60
acc 63
<210> 646
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C1_TRBJ2-5
<400> 646
ggtctcgttt gggccaggca cgcggctcct ggtgctcgag gacctgaaca aggtgttgag 60
acc 63
<210> 647
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C1_TRBJ2-6
<400> 647
ggtctcgttt ggggccggca gcaggctgac cgtgctggag gacctgaaca aggtgttgag 60
acc 63
<210> 648
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C1_TRBJ2-7
<400> 648
ggtctcgttt gggccgggca ccaggctcac ggtcacagag gacctgaaca aggtgttgag 60
acc 63
<210> 649
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C2_TRBJ1-1
<400> 649
ggtctcgttt ggacaaggca ccagactcac agttgtagag gacctgaaaa acgtgttgag 60
acc 63
<210> 650
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C2_TRBJ1-2
<400> 650
ggtctcgttt ggttcgggga ccaggttaac cgttgtagag gacctgaaaa acgtgttgag 60
acc 63
<210> 651
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C2_TRBJ1-3
<400> 651
ggtctcgttt ggagagggaa gttggctcac tgttgtagag gacctgaaaa acgtgttgag 60
acc 63
<210> 652
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C2_TRBJ1-4
<400> 652
ggtctcgttt ggcagtggaa cccagctctc tgtcttggag gacctgaaaa acgtgttgag 60
acc 63
<210> 653
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C2_TRBJ1-5
<400> 653
ggtctcgttt ggtgatggga ctcgactctc catcctagag gacctgaaaa acgtgttgag 60
acc 63
<210> 654
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C2_TRBJ1-6
<400> 654
ggtctcgttt gggaacggga ccaggctcac tgtgacagag gacctgaaaa acgtgttgag 60
acc 63
<210> 655
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C2_TRBJ2-1
<400> 655
ggtctcgttt gggccaggga cacggctcac cgtgctagag gacctgaaaa acgtgttgag 60
acc 63
<210> 656
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C2_TRBJ2-2
<400> 656
ggtctcgttt ggagaaggct ctaggctgac cgtactggag gacctgaaaa acgtgttgag 60
acc 63
<210> 657
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C2_TRBJ2-3
<400> 657
ggtctcgttt ggcccaggca cccggctgac agtgctcgag gacctgaaaa acgtgttgag 60
acc 63
<210> 658
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C2_TRBJ2-4
<400> 658
ggtctcgttt ggcgccggga cccggctctc agtgctggag gacctgaaaa acgtgttgag 60
acc 63
<210> 659
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C2_TRBJ2-5
<400> 659
ggtctcgttt gggccaggca cgcggctcct ggtgctcgag gacctgaaaa acgtgttgag 60
acc 63
<210> 660
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRB C2 J Short donor vector
<400> 660
ggtctcgttt ggggccggca gcaggctgac cgtgctggag gacctgaaaa acgtgttgag 60
acc 63
<210> 661
<211> 63
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Short_C2_TRBJ2-7
<400> 661
ggtctcgttt gggccgggca ccaggctcac ggtcacagag gacctgaaaa acgtgttgag 60
acc 63
<210> 662
<211> 72
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C1_TRBJ1-1
<400> 662
ggtctcggaa gctttctttg gacaaggcac cagactcaca gttgtagagg acctgaacaa 60
ggtgttgaga cc 72
<210> 663
<211> 72
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C1_TRBJ1-2
<400> 663
ggtctcgggc tacacctttg gttcggggac caggttaacc gttgtagagg acctgaacaa 60
ggtgttgaga cc 72
<210> 664
<211> 72
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C1_TRBJ1-3
<400> 664
ggtctcgacc atatattttg gagagggaag ttggctcact gttgtagagg acctgaacaa 60
ggtgttgaga cc 72
<210> 665
<211> 75
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C1_TRBJ1-4
<400> 665
ggtctcggaa aagctgttct ttggcagtgg aacccagctc tctgtcttgg aggacctgaa 60
caaggtgttg agacc 75
<210> 666
<211> 72
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C1_TRBJ1-5
<400> 666
ggtctcgccc cagcattttg gtgatgggac tcgactctcc atcctagagg acctgaacaa 60
ggtgttgaga cc 72
<210> 667
<211> 75
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C1_TRBJ1-6
<400> 667
ggtctcgtca cccctccact ttgggaacgg gaccaggctc actgtgacag aggacctgaa 60
caaggtgttg agacc 75
<210> 668
<211> 72
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C1_TRBJ2-1
<400> 668
ggtctcggag cagttctttg ggccagggac acggctcacc gtgctagagg acctgaacaa 60
ggtgttgaga cc 72
<210> 669
<211> 75
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C1_TRBJ2-2
<400> 669
ggtctcgggg gagctgttct ttggagaagg ctctaggctg accgtactgg aggacctgaa 60
caaggtgttg agacc 75
<210> 670
<211> 72
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C1_TRBJ2-3
<400> 670
ggtctcgacg cagtattttg gcccaggcac ccggctgaca gtgctcgagg acctgaacaa 60
ggtgttgaga cc 72
<210> 671
<211> 72
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C1_TRBJ2-4
<400> 671
ggtctcgatt cagtactttg gcgccgggac ccggctctca gtgctggagg acctgaacaa 60
ggtgttgaga cc 72
<210> 672
<211> 72
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C1_TRBJ2-5
<400> 672
ggtctcgacc cagtactttg ggccaggcac gcggctcctg gtgctcgagg acctgaacaa 60
ggtgttgaga cc 72
<210> 673
<211> 75
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C1_TRBJ2-6
<400> 673
ggtctcgaac gtcctgactt ttggggccgg cagcaggctg accgtgctgg aggacctgaa 60
caaggtgttg agacc 75
<210> 674
<211> 69
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C1_TRBJ2-7
<400> 674
ggtctcgcag tactttgggc cgggcaccag gctcacggtc acagaggacc tgaacaaggt 60
gttgagacc 69
<210> 675
<211> 72
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C2_TRBJ1-1
<400> 675
ggtctcggaa gctttctttg gacaaggcac cagactcaca gttgtagagg acctgaaaaa 60
cgtgttgaga cc 72
<210> 676
<211> 72
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C2_TRBJ1-2
<400> 676
ggtctcgggc tacacctttg gttcggggac caggttaacc gttgtagagg acctgaaaaa 60
cgtgttgaga cc 72
<210> 677
<211> 72
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C2_TRBJ1-3
<400> 677
ggtctcgacc atatattttg gagagggaag ttggctcact gttgtagagg acctgaaaaa 60
cgtgttgaga cc 72
<210> 678
<211> 75
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C2_TRBJ1-4
<400> 678
ggtctcggaa aagctgttct ttggcagtgg aacccagctc tctgtcttgg aggacctgaa 60
aaacgtgttg agacc 75
<210> 679
<211> 72
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C2_TRBJ1-5
<400> 679
ggtctcgccc cagcattttg gtgatgggac tcgactctcc atcctagagg acctgaaaaa 60
cgtgttgaga cc 72
<210> 680
<211> 75
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C2_TRBJ1-6
<400> 680
ggtctcgtca cccctccact ttgggaacgg gaccaggctc actgtgacag aggacctgaa 60
aaacgtgttg agacc 75
<210> 681
<211> 72
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C2_TRBJ2-1
<400> 681
ggtctcggag cagttctttg ggccagggac acggctcacc gtgctagagg acctgaaaaa 60
cgtgttgaga cc 72
<210> 682
<211> 75
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C2_TRBJ2-2
<400> 682
ggtctcgggg gagctgttct ttggagaagg ctctaggctg accgtactgg aggacctgaa 60
aaacgtgttg agacc 75
<210> 683
<211> 72
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C2_TRBJ2-3
<400> 683
ggtctcgacg cagtattttg gcccaggcac ccggctgaca gtgctcgagg acctgaaaaa 60
cgtgttgaga cc 72
<210> 684
<211> 72
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C2_TRBJ2-4
<400> 684
ggtctcgatt cagtactttg gcgccgggac ccggctctca gtgctggagg acctgaaaaa 60
cgtgttgaga cc 72
<210> 685
<211> 72
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C2_TRBJ2-5
<400> 685
ggtctcgacc cagtactttg ggccaggcac gcggctcctg gtgctcgagg acctgaaaaa 60
cgtgttgaga cc 72
<210> 686
<211> 75
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C2_TRBJ2-6
<400> 686
ggtctcgaac gtcctgactt ttggggccgg cagcaggctg accgtgctgg aggacctgaa 60
aaacgtgttg agacc 75
<210> 687
<211> 69
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> J Donor_Long_C2_TRBJ2-7
<400> 687
ggtctcgcag tactttgggc cgggcaccag gctcacggtc acagaggacc tgaaaaacgt 60
gttgagacc 69
<210> 688
<211> 2471
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-C entry backbone F14/F15
<400> 688
tctagacgaa gttcctattc cgaagttcct attcttatag gagtatagga acttcctcga 60
gctgggcctc atgggccttc cgctcactgc ccgctttcca gtcgggaaac ctgtcgtgcc 120
agctgcatta acatggtcat agctgtttcc ttgcgtattg ggcgctctcc gcttcctcgc 180
tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggg taaagcctgg ggtgcctaat gagcaaaagg 240
ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg 300
cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg 360
actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac 420
cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca 480
tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt 540
gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc 600
caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag 660
agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac 720
tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt 780
tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa 840
gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg 900
gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa 960
aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat 1020
atatgagtaa acttggtctg acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc 1080
gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat 1140
acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagaac cacgctcacc 1200
ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc 1260
tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag 1320
ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg 1380
ctcgtcgttt ggtatggctt cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg 1440
atcccccatg ttgtgcaaaa aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag 1500
taagttggcc gcagtgttat cactcatggt tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt 1560
catgccatcc gtaagatgct tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga 1620
atagtgtatg cggcgaccga gttgctcttg cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc 1680
acatagcaga actttaaaag tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc 1740
aaggatctta ccgctgttga gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc 1800
ttcagcatct tttactttca ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc 1860
cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tcctttttca 1920
atattattga agcatttatc agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat 1980
ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctaaatt 2040
gtaagcgtta atattttgtt aaaattcgcg ttaaattttt gttaaatcag ctcatttttt 2100
aaccaatagg ccgaaatcgg caaaatccct tataaatcaa aagaatagac cgagataggg 2160
ttgagtggcc gctacagggc gctcccattc gccattcagg ctgcgcaact gttgggaagg 2220
gcgtttcggt gcgggcctct tcgctattac gccagctggc gaaaggggga tgtgctgcaa 2280
ggcgattaag ttgggtaacg ccagggtttt cccagtcacg acgttgtaaa acgacggcca 2340
gtgagcgcga cgtaatacga ctcactatag ggcgaattgg cggaaggccg tcaaggccgc 2400
atgaattcgc taccgggaag ttcctattcc gaagttccta ttctatcaga agtataggaa 2460
cttcaggtac c 2471
<210> 689
<211> 2471
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-C entry backbone FRT/F3
<400> 689
tctagacgaa gttcctattc cgaagttcct attcttcaaa tagtatagga acttcctcga 60
gctgggcctc atgggccttc cgctcactgc ccgctttcca gtcgggaaac ctgtcgtgcc 120
agctgcatta acatggtcat agctgtttcc ttgcgtattg ggcgctctcc gcttcctcgc 180
tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggg taaagcctgg ggtgcctaat gagcaaaagg 240
ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg 300
cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg 360
actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac 420
cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca 480
tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt 540
gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc 600
caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag 660
agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac 720
tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt 780
tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa 840
gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg 900
gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa 960
aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat 1020
atatgagtaa acttggtctg acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc 1080
gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat 1140
acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagaac cacgctcacc 1200
ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc 1260
tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag 1320
ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg 1380
ctcgtcgttt ggtatggctt cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg 1440
atcccccatg ttgtgcaaaa aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag 1500
taagttggcc gcagtgttat cactcatggt tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt 1560
catgccatcc gtaagatgct tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga 1620
atagtgtatg cggcgaccga gttgctcttg cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc 1680
acatagcaga actttaaaag tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc 1740
aaggatctta ccgctgttga gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc 1800
ttcagcatct tttactttca ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc 1860
cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tcctttttca 1920
atattattga agcatttatc agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat 1980
ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctaaatt 2040
gtaagcgtta atattttgtt aaaattcgcg ttaaattttt gttaaatcag ctcatttttt 2100
aaccaatagg ccgaaatcgg caaaatccct tataaatcaa aagaatagac cgagataggg 2160
ttgagtggcc gctacagggc gctcccattc gccattcagg ctgcgcaact gttgggaagg 2220
gcgtttcggt gcgggcctct tcgctattac gccagctggc gaaaggggga tgtgctgcaa 2280
ggcgattaag ttgggtaacg ccagggtttt cccagtcacg acgttgtaaa acgacggcca 2340
gtgagcgcga cgtaatacga ctcactatag ggcgaattgg cggaaggccg tcaaggccgc 2400
atgaattcgc taccgggaag ttcctattcc gaagttccta ttctctagaa agtataggaa 2460
cttcaggtac c 2471
<210> 690
<211> 38
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic V cloning fragment (left part)
<220>
<221> misc_feature
<222> 38
<223> /note="The last nucleotide of SEQ ID 690 is linked to the first
nucleotide of XNn (described in specification), and the last
nucleotide of XNn is then linked to the first nucleotide of SEQ
ID 745."
<400> 690
gtcagatact ccatgagcac gaagacttgt acgccacc 38
<210> 691
<211> 44
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic C cloning fragment (left part)
<220>
<221> misc_feature
<222> 44
<223> /note="The last nucleotide of SEQ ID 691 is linked to the first
nucleotide of YNn (described in specification), and the last
nucleotide of YNn is then linked to the first nucleotide of SEQ
ID 746."
<400> 691
gtgcactcct atgactaacg gaagactagg ccgcataggt ctca 44
<210> 692
<211> 592
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic transient V-C entry vector (left part)
<220>
<221> misc_feature
<222> 592
<223> /note="The last nucleotide of SEQ ID 692 is linked to the first
nucleotide of XNn (described in specification), and the last
nucleotide of XNn is then linked to the first nucleotide of SEQ
ID 747."
<400> 692
atagtaatca attacggggt cattagttca tagcccatat atggagttcc gcgttacata 60
acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat 120
aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc aatgggtgga 180
gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc caagtacgcc 240
ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt 300
atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta ccatggtgat 360
gcggttttgg cagtacatca atgggcgtgg atagcggttt gactcacggg gatttccaag 420
tctccacccc attgacgtca atgggagttt gttttggcac caaaatcaac gggactttcc 480
aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga 540
ggtctatata agcagagctg gtttagtgaa ccgtcagatc aggtacgcca cc 592
<210> 693
<211> 60
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic F14-F15 V-C entry vector (left part)
<220>
<221> misc_feature
<222> 60
<223> /note="The last nucleotide of SEQ ID 693 is linked to the first
nucleotide of XNn (described in specification), and the last
nucleotide of XNn is then linked to the first nucleotide of SEQ
ID 749."
<400> 693
gaagttccta ttccgaagtt cctattctat cagaagtata ggaacttcag gtacgccacc 60
<210> 694
<211> 60
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic FRT-F3 V-C entry vector (left part)
<220>
<221> misc_feature
<222> 60
<223> /note="The last nucleotide of SEQ ID 694 is linked to the first
nucleotide of XNn (described in specification), and the last
nucleotide of XNn is then linked to the first nucleotide of SEQ
ID 751."
<400> 694
gaagttccta ttccgaagtt cctattctct agaaagtata ggaacttcag gtacgccacc 60
<210> 695
<211> 38
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic J receiving cassette F (left part)
<220>
<221> misc_feature
<222> 38
<223> /note="The last nucleotide of SEQ ID 695 is linked to the first
nucleotide of Y’Nn (described in specification), and the last
nucleotide of Y’Nn is then linked to the first nucleotide of
TGAGACCC."
<400> 695
aattcggtct cgaagtcttc tgcggccgct gaagacac 38
<210> 696
<211> 12
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic J receiving cassette R (left part)
<220>
<221> misc_feature
<222> 12
<223> /note="The last nucleotide of SEQ ID 696 is linked to the first
nucleotide of Y’Nn (described in specification), and the last
nucleotide of Y’Nn is then linked to the first nucleotide of SEQ
ID 753."
<400> 696
tcgagggtct ca 12
<210> 697
<211> 38
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic J receiving cassette vector (left part)
<220>
<221> misc_feature
<222> 38
<223> /note="The last nucleotide of SEQ ID 697 is linked to the first
nucleotide of Y’Nn (described in specification), and the last
nucleotide of Y’Nn is then linked to the first nucleotide of SEQ
ID 754."
<400> 697
aattcggtct cgaagtcttc tgcggccgct gaagacac 38
<210> 698
<211> 10
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic J segment F (dummy, see specification for description)
<400> 698
aaaaaaaaaa 10
<210> 699
<211> 10
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic J segment R (dummy, see specification for description))
<400> 699
aaaaaaaaaa 10
<210> 700
<211> 13
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic J donor vector (left part)
<220>
<221> misc_feature
<222> 13
<223> /note="The last nucleotide of SEQ ID 700 is linked to the first
nucleotide of ZNnY’Nn (described in specification), and the last
nucleotide of ZNnY’Nn is then linked to the first nucleotide of
SEQ ID 755."
<400> 700
gaattcggtc tcg 13
<210> 701
<211> 816
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> JG9 TRA FL
<400> 701
atgctccttg aacatttatt aataatcttg tggatgcagc tgacatgggt cagtggtcaa 60
cagctgaatc agagtcctca atctatgttt atccaggaag gagaagatgt ctccatgaac 120
tgcacttctt caagcatatt taacacctgg ctatggtaca agcaggaccc tggggaaggt 180
cctgtcctct tgatagcctt atataaggct ggtgaattga cctcaaatgg aagactgact 240
gctcagtttg gtataaccag aaaggacagc ttcctgaata tctcagcatc catacccagt 300
gatgtaggca tctacttctg tgctggaccc atgaaaacct cctacgacaa ggtgatattt 360
gggccaggga caagcttatc agtcattcca aatatccaga accctgaccc tgccgtgtac 420
cagctgagag actctaaatc cagtgacaag tctgtctgcc tattcaccga ttttgattct 480
caaacaaatg tgtcacaaag taaggattct gatgtgtata tcacagacaa aactgtgcta 540
gacatgaggt ctatggactt caagagcaac agtgctgtgg cctggagcaa caaatctgac 600
tttgcatgtg caaacgcctt caacaacagc attattccag aagacacctt cttccccagc 660
ccagaaagtt cctgtgatgt caagctggtc gagaaaagct ttgaaacaga tacgaaccta 720
aactttcaaa acctgtcagt gattgggttc cgaatcctcc tcctgaaagt ggccgggttt 780
aatctgctca tgacgctgcg gctgtggtcc agctga 816
<210> 702
<211> 927
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> JG9 TRB FL
<400> 702
atggactcct ggaccttctg ctgtgtgtcc ctttgcatcc tggtagcaaa gcacacagat 60
gctggagtta tccagtcacc ccggcacgag gtgacagaga tgggacaaga agtgactctg 120
agatgtaaac caatttcagg acacgactac cttttctggt acagacagac catgatgcgg 180
ggactggagt tgctcattta ctttaacaac aacgttccga tagatgattc agggatgccc 240
gaggatcgat tctcagctaa gatgcctaat gcatcattct ccactctgaa gatccagccc 300
tcagaaccca gggactcagc tgtgtacttc tgtgccagca gttcggcaaa ctatggctac 360
accttcggtt cggggaccag gttaaccgtt gtagaggacc tgaacaaggt gttcccaccc 420
gaggtcgctg tgtttgagcc atcagaagca gagatctccc acacccaaaa ggccacactg 480
gtgtgcctgg ccacaggctt cttccctgac cacgtggagc tgagctggtg ggtgaatggg 540
aaggaggtgc acagtggggt cagcacggac ccgcagcccc tcaaggagca gcccgccctc 600
aatgactcca gatactgcct gagcagccgc ctgagggtct cggccacctt ctggcagaac 660
ccccgcaacc acttccgctg tcaagtccag ttctacgggc tctcggagaa tgacgagtgg 720
acccaggata gggccaaacc cgtcacccag atcgtcagcg ccgaggcctg gggtagagca 780
gactgtggct ttacctcggt gtcctaccag caaggggtcc tgtctgccac catcctctat 840
gagatcctgc tagggaaggc caccctgtat gctgtgctgg tcagcgccct tgtgttgatg 900
gccatggtca agagaaagga tttctga 927
<210> 703
<211> 40
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> JG9 TRA odeCDR3 F
<400> 703
ctgcgctgga cccatgaaaa cctcctacga caaggtgata 40
<210> 704
<211> 40
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> JG9 TRA odeCDR3 R
<400> 704
caaatatcac cttgtcgtag gaggttttca tgggtccagc 40
<210> 705
<211> 34
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> JG9 TRB odeCDR3 F
<400> 705
ttgcgccagc agttccgcaa actatggcta cacc 34
<210> 706
<211> 34
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> JG9 TRB odeCDR3 R
<400> 706
caaaggtgta gccatagttt gcggaactgc tggc 34
<210> 707
<211> 257
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRA HBD4.1.S9-1.D5.a
<400> 707
gaagacagaa agtccagcac cttgatcctg ccccacgcta cgctgagaga cactgctgtg 60
tactattgca tcgtcaggga tcgttataac accggtaacc agttctattt tgggacaggg 120
acaagtttga cggtcattcc aaatatccag aaccctgacc ctgccgtgta ccagctgaga 180
gactctaaat ccagtgacaa gtctgtctgc ctattcaccg attttgattc tcaaacaaat 240
gtgtcacaaa gtaagga 257
<210> 708
<211> 257
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRB HBD4.1.S9-1.D5.b
<400> 708
cagggttttc ccagtcacga ctagaaaaga gaagaggaat ttccccctga tcctggagtc 60
gcccagcccc aaccagacct ctctgtactt ctgtgccagc agtttgggcc caagctccta 120
cgagcagtac ttcgggccgg gcaccaggct cacggtcaca gaggacctga aaaacgtgtt 180
cccacccgag gtcgctgtgt ttgagccatc agaagcagag atcttccaca cccaaaaggc 240
cacactggtg tgcctgg 257
<210> 709
<211> 298
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRA HBD4.1.S9-2.A6.a
<400> 709
gttttcccag tcacgactcc agaaggcaag aaaatccgcc aaccttgtca tctccgcttc 60
acaactgggg gactcagcaa tgtatttctg tgcaatgaga gagggcatgg atagcagcta 120
taaattgatc ttcgggagtg ggaccagact gctggtcagg cctgatatcc agaaccctga 180
ccctgccgtg taccagctga gagactctaa atccagtgac aagtctgtct gcctattcac 240
cgattttgat tctcaaacaa atgtgtcaca aagtaaggat tctgtactga gtgagtat 298
<210> 710
<211> 235
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRA HBD4.1.S9-2.A6.a
<400> 710
ctttctccac tttggagatc cagcgcacag agcaggggga ctcggccatg tatctctgtg 60
ccagcagttt gcacgaccgg ggggcgcgga ctgaagcttt ctttggacaa ggcaccagac 120
tcacagttgt agaggacctg aacaaggtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat 180
cagaagcaga gatctcccac acccaaaagg ccacactggt gtgcctggcc acagg 235
<210> 711
<211> 273
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRA HBD4.1.S9-3.A1.a
<400> 711
cgacactaac ctttcagttt ggtgatgcaa gaaaggacag ttctctccac atcactgcag 60
cccagcctgg tgatacaggc ctctacctct gtgcaggagc tcgaggaggc ttcaaaacta 120
tctttggagc aggaacaaga ctatttgtta aagcaaatat ccagaaccct gaccctgccg 180
tgtaccagct gagagactct aaatccagtg acaagtctgt ctgcctattc accgattttg 240
attctcaaac aaatgtgtca caaagtaagg att 273
<210> 712
<211> 221
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRB HBD4.1.S9-3.A1.b
<400> 712
ccccctgatc ctggagtcgc ccaaccccaa ccaagcctct ctgtacttct gtgccagcar 60
wttatcacca tctactggga actatggcta caccttcggt tcggggacca ggttaaccgt 120
tgtagaggac ctgaacaagg tgttcccacc cgaggtcgct gtgtttgagc catcagaagc 180
agagatctcc cacacccaaa aggcccacca ctggtgkgcc t 221
<210> 713
<211> 286
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRA HBD4.1.S9-7.E5.a
<400> 713
aaggcaagaa aatccgccaa ccttgtcatm tccgcttcac aactggggga ctcagcaatg 60
tatttctgtg caatgaggcc ttatactgga ggcttcaaaa ctatctttgg agcaggaaca 120
agactatttg ttaaagcaaa tatccagaac cctgaccctg ccgtgtacca gctgagagac 180
tctaaatcca gtgacaagtc tgtctgccta ttcaccgatt ttgattctca aacaaatgtg 240
tcacaaagta aggattctga tgtgtatatc acagacaaaa ctktgc 286
<210> 714
<211> 238
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRA HBD4.1.S9-7.E5.a
<400> 714
cgaaaagaga agaggaattt ccccmtgatc ctggagtcgc ccagccccaw ccagacctct 60
ctgtacttct gtgccagcts cactagcccc tcgmcagctc gctatggcta cwccttcggt 120
tcggggacca ggttaaccgt tgtagaggac ctgaacaagg tgttcccacc cgaggtcgct 180
gtgtttgagc catcagaagc agmswtctcc cacacccaaa aggccacact gagkgkgc 238
<210> 715
<211> 306
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRA HBD4.1.S9-7.C5.a
<400> 715
tttgaacccg aatttaacaa gacacaaacc tccttccccc tgaagaaacc atctgccctt 60
gtgagcgatt ccgctttgta cttctgtgct gtgagatccc ggatggatag cagctataaa 120
ttgatcttcg ggagtgggac cagactactg gtcaggcctg atatccagaa ccctgaccct 180
gccgtgtacc agctgagaga ctctaaatcc agtgacaagt ctgtctgcct attcaccgat 240
tttgattctc aaacaaatgt gtcacaaagt aaggattctg atgtgtatat cacagacaaa 300
actgtg 306
<210> 716
<211> 251
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRB HBD4.1.S9-7.C5.b
<400> 716
acgacctcca gggttttcta agggatgttt ctccaccttg aagatccagc gcacagagca 60
gggggactcg gccatgtatc tctgtgccag cagccccccc gacgcggcct acaatgagca 120
gttcttcggg ccagggacac ggctcaccgt gctagaggac ctgaaaaacg tgttcccacc 180
cgaggtcgct gtgtttgagc catcagaagc agagatctcc cacacccaaa aggccacact 240
ggtgtgcctg g 251
<210> 717
<211> 319
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRA HBD4.1.S9-5.E3.a
<400> 717
agggttttcc cagtcacgac ttaagagtca cgcttgacac ttccaagaaa agcagttcct 60
tgttgatcac ggcttcccgg gcagcagaca ctgcttctta cttctgtgct acggagctcc 120
ggatggatag cagctataaa ttgatcttcg ggagtgggac cagactgctg gtcaggcctg 180
atatccagaa ccctgaccct gccgtgtacc agctgagaga ctctaaatcc agtgacaagt 240
ctgtctgcct attcaccgat tttgattctc aaacaaatgt gtcacaaagt aaggattctg 300
atgtgtatat cacagacaa 319
<210> 718
<211> 270
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> TRA HBD4.1.S9-5.E3.b
<400> 718
agggttttcc cagtcacgac ctccagagag gcctaaggga tgtttctcca ctttggagat 60
ccagcgcaca gagcaggggg actcggccat gtatctctgt gccagcagct taagggaagg 120
acgactccca gagacccagt acttcgggcc aggcacgcgg ctcctggtgc tcgaggacct 180
gaaaaacgtg ttcccacccg aggtcgctgt gtttgagcca tcagaagcag agatctccca 240
cacccaaaag gccacactgg tgtgcctggc 270
<210> 719
<211> 43
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Forward TRA HBD4.1.S9-1.D5
<400> 719
ctgcatcgtc agggatcgtt ataacaccgg taaccagttc tat 43
<210> 720
<211> 43
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Reverse TRA HBD4.1.S9-1.D5
<400> 720
caaaatagaa ctggttaccg gtgttataac gatccctgac gat 43
<210> 721
<211> 40
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Forward TRB HBD4.1.S9-1.D5
<400> 721
ttgcgccagc agtttgggcc caagctccta cgagcagtac 40
<210> 722
<211> 40
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Reverse TRB HBD4.1.S9-1.D5
<400> 722
caaagtactg ctcgtaggag cttgggccca aactgctggc 40
<210> 723
<211> 43
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Forward TRA HBD4.1.S9-2.A6
<400> 723
ctgcgcaatg agagagggca tggatagcag ctataaattg atc 43
<210> 724
<211> 43
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Reverse TRA HBD4.1.S9-2.A6
<400> 724
caaagatcaa tttatagctg ctatccatgc cctctctcat tgc 43
<210> 725
<211> 46
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Forward TRB HBD4.1.S9-2.A6
<400> 725
ttgcgccagc agtttgcacg accgtggtgc gcggactgaa gctttc 46
<210> 726
<211> 46
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Reverse TRB HBD4.1.S9-2.A6
<400> 726
caaagaaagc ttcagtccgc gcaccacggt cgtgcaaact gctggc 46
<210> 727
<211> 34
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Forward TRA HBD4.1.S9-3.A1
<400> 727
ctgcgcagga gctcgaggag gcttcaaaac tatc 34
<210> 728
<211> 34
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Reverse TRA HBD4.1.S9-3.A1
<400> 728
caaagatagt tttgaagcct cctcgagctc ctgc 34
<210> 729
<211> 46
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Forward TRB HBD4.1.S9-3.A1
<400> 729
ttgcgccagc agtttatcac catctactgg gaactatggc tacacc 46
<210> 730
<211> 46
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Reverse TRB HBD4.1.S9-3.A1
<400> 730
caaaggtgta gccatagttc ccagtagatg gtgataaact gctggc 46
<210> 731
<211> 40
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Forward TRA HBD4.1.S9-7.E5
<400> 731
ctgcgcaatg aggccttata ctggaggctt caaaactatc 40
<210> 732
<211> 40
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Reverse TRA HBD4.1.S9-7.E5
<400> 732
caaagatagt tttgaagcct ccagtataag gcctcattgc 40
<210> 733
<211> 46
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Forward TRB HBD4.1.S9-7.E5
<400> 733
ttgcgccagc tccactagcc cctcgacagc tcgctatggc tacacc 46
<210> 734
<211> 46
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Reverse TRB HBD4.1.S9-7.E5
<400> 734
caaaggtgta gccatagcga gctgtcgagg ggctagtgga gctggc 46
<210> 735
<211> 43
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Forward TRA HBD4.1.S9-7.C5
<400> 735
ctgcgctgtg agatcccgga tggatagcag ctataaattg atc 43
<210> 736
<211> 43
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Reverse TRA HBD4.1.S9-7.C5
<400> 736
caaagatcaa tttatagctg ctatccatcc gggatctcac agc 43
<210> 737
<211> 43
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Forward TRB HBD4.1.S9-7.C5
<400> 737
ttgcgccagc agccctcctg acgcggccta caatgagcag ttc 43
<210> 738
<211> 43
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Reverse TRB HBD4.1.S9-7.C5
<400> 738
caaagaactg ctcattgtag gccgcgtcag gagggctgct ggc 43
<210> 739
<211> 43
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Forward TRA HBD4.1.S9-5.E3
<400> 739
ctgcgctacg gagctccgga tggatagcag ctataaattg atc 43
<210> 740
<211> 43
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Reverse TRA HBD4.1.S9-5.E3
<400> 740
caaagatcaa tttatagctg ctatccatcc ggagctccgt agc 43
<210> 741
<211> 46
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Forward TRB HBD4.1.S9-5.E3
<400> 741
ttgcgccagc agcttaaggg aaggacgact cccagagaca cagtac 46
<210> 742
<211> 46
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Reverse TRB HBD4.1.S9-5.E3
<400> 742
caaagtactg tgtctctggg agtcgtcctt cccttaagct gctggc 46
<210> 743
<211> 40
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Forward TRA odeCDR3 - 3 positions degenerate
<220>
<221> misc_feature
<222> 15
<223> /note="n = a, t, c or g"
<220>
<221> misc_feature
<222> 20
<223> /note="n = a, t, c or g"
<220>
<221> misc_feature
<222> 26
<223> /note="n = a, t, c or g"
<400> 743
ctgcgctgga cccangaaan cctccnacga caaggtgata 40
<210> 744
<211> 40
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Reverse TRA odeCDR3 - 3 positions degenerate
<220>
<221> misc_feature
<222> 19
<223> /note="n = a, t, c or g"
<220>
<221> misc_feature
<222> 25
<223> /note="n = a, t, c or g"
<220>
<221> misc_feature
<222> 30
<223> /note="n = a, t, c or g"
<400> 744
caaatatcac cttgtcgtng gaggntttcn tgggtccagc 40
<210> 745
<211> 43
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic V cloning fragment (right part)
<220>
<221> misc_feature
<222> 1
<223> /note="The first nucleotide of SEQ ID 745 is linked to the last
nucleotide of XNn (described in specification), and the first
nucleotide of XNn is then linked to the last nucleotide of SEQ ID
690. "
<400> 745
agagaccttg cggccgtgtc ttcgactagt agctcaccta cga 43
<210> 746
<211> 32
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic C cloning fragment (right part)
<220>
<221> misc_feature
<222> 1
<223> /note="The first nucleotide of SEQ ID 746 is linked to the last
nucleotide of YNn (described in specification), and the first
nucleotide of YNn is then linked to the last nucleotide of SEQ ID
691."
<400> 746
ctaggtgtct tccctatgct gaatcgatgg tc 32
<210> 747
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic transient V-C entry vector (middle part)
<220>
<221> misc_feature
<222> 1
<223> /note="The first nucleotide of SEQ ID 747 is linked to the last
nucleotide of XNn (described in specification), and the first
nucleotide of XNn is then linked to the last nucleotide of SEQ ID
692."
<220>
<221> misc_feature
<222> 27
<223> /note="The last nucleotide of SEQ ID 747 is linked to the first
nucleotide of YNn (described in specification), and the last
nucleotide of YNn is then linked to the first nucleotide of SEQ
ID 748."
<400> 747
agagaccttg cggccgcata ggtctca 27
<210> 748
<211> 2622
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic transient V-C entry vector (right part)
<220>
<221> misc_feature
<222> 1
<223> /note="The first nucleotide of SEQ ID 748 is linked to the last
nucleotide of YNn (described in specification), and the first
nucleotide of YNn is then linked to the last nucleotide of SEQ ID
747."
<400> 748
ctagacctga tcataatcaa gccatatcac atctgtagag gtttacttgc tttaaaaaac 60
ctccacacct ccccctgaac ctgaaacata aaatgaatgc aattgttgtt gttaacttgt 120
ttattgcagc ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag 180
catttttttc actgcattct agttgtggtt tgtccaaact catcaatgta tcttatcatg 240
tctggatctg cggatccaat ctcgagctgg gcctcatggg ccttccgctc actgcccgct 300
ttccagtcgg gaaacctgtc gtgccagctg cattaacatg gtcatagctg tttccttgcg 360
tattgggcgc tctccgcttc ctcgctcact gactcgctgc gctcggtcgt tcgggtaaag 420
cctggggtgc ctaatgagca aaaggccagc aaaaggccag gaaccgtaaa aaggccgcgt 480
tgctggcgtt tttccatagg ctccgccccc ctgacgagca tcacaaaaat cgacgctcaa 540
gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat aaagatacca ggcgtttccc cctggaagct 600
ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc cgcttaccgg atacctgtcc gcctttctcc 660
cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct cacgctgtag gtatctcagt tcggtgtagg 720
tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg aaccccccgt tcagcccgac cgctgcgcct 780
tatccggtaa ctatcgtctt gagtccaacc cggtaagaca cgacttatcg ccactggcag 840
cagccactgg taacaggatt agcagagcga ggtatgtagg cggtgctaca gagttcttga 900
agtggtggcc taactacggc tacactagaa gaacagtatt tggtatctgc gctctgctga 960
agccagttac cttcggaaaa agagttggta gctcttgatc cggcaaacaa accaccgctg 1020
gtagcggtgg tttttttgtt tgcaagcagc agattacgcg cagaaaaaaa ggatctcaag 1080
aagatccttt gatcttttct acggggtctg acgctcagtg gaacgaaaac tcacgttaag 1140
ggattttggt catgagatta tcaaaaagga tcttcaccta gatcctttta aattaaaaat 1200
gaagttttaa atcaatctaa agtatatatg agtaaacttg gtctgacagt taccaatgct 1260
taatcagtga ggcacctatc tcagcgatct gtctatttcg ttcatccata gttgcctgac 1320
tccccgtcgt gtagataact acgatacggg agggcttacc atctggcccc agtgctgcaa 1380
tgataccgcg agaaccacgc tcaccggctc cagatttatc agcaataaac cagccagccg 1440
gaagggccga gcgcagaagt ggtcctgcaa ctttatccgc ctccatccag tctattaatt 1500
gttgccggga agctagagta agtagttcgc cagttaatag tttgcgcaac gttgttgcca 1560
ttgctacagg catcgtggtg tcacgctcgt cgtttggtat ggcttcattc agctccggtt 1620
cccaacgatc aaggcgagtt acatgatccc ccatgttgtg caaaaaagcg gttagctcct 1680
tcggtcctcc gatcgttgtc agaagtaagt tggccgcagt gttatcactc atggttatgg 1740
cagcactgca taattctctt actgtcatgc catccgtaag atgcttttct gtgactggtg 1800
agtactcaac caagtcattc tgagaatagt gtatgcggcg accgagttgc tcttgcccgg 1860
cgtcaatacg ggataatacc gcgccacata gcagaacttt aaaagtgctc atcattggaa 1920
aacgttcttc ggggcgaaaa ctctcaagga tcttaccgct gttgagatcc agttcgatgt 1980
aacccactcg tgcacccaac tgatcttcag catcttttac tttcaccagc gtttctgggt 2040
gagcaaaaac aggaaggcaa aatgccgcaa aaaagggaat aagggcgaca cggaaatgtt 2100
gaatactcat actcttcctt tttcaatatt attgaagcat ttatcagggt tattgtctca 2160
tgagcggata catatttgaa tgtatttaga aaaataaaca aataggggtt ccgcgcacat 2220
ttccccgaaa agtgccacct aaattgtaag cgttaatatt ttgttaaaat tcgcgttaaa 2280
tttttgttaa atcagctcat tttttaacca ataggccgaa atcggcaaaa tcccttataa 2340
atcaaaagaa tagaccgaga tagggttgag tggccgctac agggcgctcc cattcgccat 2400
tcaggctgcg caactgttgg gaagggcgtt tcggtgcggg cctcttcgct attacgccag 2460
ctggcgaaag ggggatgtgc tgcaaggcga ttaagttggg taacgccagg gttttcccag 2520
tcacgacgtt gtaaaacgac ggccagtgag cgcgacgtaa tacgactcac tatagggcga 2580
attggcggaa ggccgtcaag gccgcatgaa ttcgctaccg gt 2622
<210> 749
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic F14-F15 V-C entry vector (middle part)
<220>
<221> misc_feature
<222> 1
<223> /note="The first nucleotide of SEQ ID 749 is linked to the last
nucleotide of XNn (described in specification), and the first
nucleotide of XNn is then linked to the last nucleotide of SEQ ID
693."
<220>
<221> misc_feature
<222> 27
<223> /note="The last nucleotide of SEQ ID 749 is linked to the first
nucleotide of YNn (described in specification), and the last
nucleotide of YNn is then linked to the first nucleotide of SEQ
ID 750."
<400> 749
agagaccttg cggccgcata ggtctca 27
<210> 750
<211> 2415
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic F14-F15 V-C entry vector (right part)
<220>
<221> misc_feature
<222> 1
<223> /note="The first nucleotide of SEQ ID 750 is linked to the last
nucleotide of YNn (described in specification), and the first
nucleotide of YNn is then linked to the last nucleotide of SEQ ID
749."
<400> 750
ctagacgaag ttcctattcc gaagttccta ttcttatagg agtataggaa cttcctcgag 60
ctgggcctca tgggccttcc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca 120
gctgcattaa catggtcata gctgtttcct tgcgtattgg gcgctctccg cttcctcgct 180
cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcgggt aaagcctggg gtgcctaatg agcaaaaggc 240
cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc 300
ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga 360
ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc 420
ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat 480
agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg 540
cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc 600
aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga 660
gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact 720
agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt 780
ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag 840
cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg 900
tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa 960
aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata 1020
tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg 1080
atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat aactacgata 1140
cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaacc acgctcaccg 1200
gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct 1260
gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag agtaagtagt 1320
tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgcta caggcatcgt ggtgtcacgc 1380
tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga 1440
tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt 1500
aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc tcttactgtc 1560
atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa 1620
tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa tacgggataa taccgcgcca 1680
catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca 1740
aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc caactgatct 1800
tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc 1860
gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt cctttttcaa 1920
tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt 1980
tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc acctaaattg 2040
taagcgttaa tattttgtta aaattcgcgt taaatttttg ttaaatcagc tcatttttta 2100
accaataggc cgaaatcggc aaaatccctt ataaatcaaa agaatagacc gagatagggt 2160
tgagtggccg ctacagggcg ctcccattcg ccattcaggc tgcgcaactg ttgggaaggg 2220
cgtttcggtg cgggcctctt cgctattacg ccagctggcg aaagggggat gtgctgcaag 2280
gcgattaagt tgggtaacgc cagggttttc ccagtcacga cgttgtaaaa cgacggccag 2340
tgagcgcgac gtaatacgac tcactatagg gcgaattggc ggaaggccgt caaggccgca 2400
tgaattcgct accgg 2415
<210> 751
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic FRT-F3 V-C entry vector (middle part)
<220>
<221> misc_feature
<222> 1
<223> /note="The first nucleotide of SEQ ID 751 is linked to the last
nucleotide of XNn (described in specification), and the first
nucleotide of XNn is then linked to the last nucleotide of SEQ ID
694."
<220>
<221> misc_feature
<222> 27
<223> /note="The last nucleotide of SEQ ID 751 is linked to the first
nucleotide of YNn (described in specification), and the last
nucleotide of YNn is then linked to the first nucleotide of SEQ
ID 752."
<400> 751
agagaccttg cggccgcata ggtctca 27
<210> 752
<211> 2415
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic FRT-F3 V-C entry vector (middle part)
<220>
<221> misc_feature
<222> 1
<223> /note="The first nucleotide of SEQ ID 752 is linked to the last
nucleotide of YNn (described in specification), and the first
nucleotide of YNn is then linked to the last nucleotide of SEQ ID
751."
<400> 752
ctagacgaag ttcctattcc gaagttccta ttcttcaaat agtataggaa cttcctcgag 60
ctgggcctca tgggccttcc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca 120
gctgcattaa catggtcata gctgtttcct tgcgtattgg gcgctctccg cttcctcgct 180
cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcgggt aaagcctggg gtgcctaatg agcaaaaggc 240
cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc 300
ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga 360
ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc 420
ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat 480
agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg 540
cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc 600
aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga 660
gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact 720
agaagaacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt 780
ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag 840
cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg 900
tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa 960
aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata 1020
tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg 1080
atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat aactacgata 1140
cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaacc acgctcaccg 1200
gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct 1260
gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag agtaagtagt 1320
tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgcta caggcatcgt ggtgtcacgc 1380
tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga 1440
tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt 1500
aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc tcttactgtc 1560
atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa 1620
tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa tacgggataa taccgcgcca 1680
catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca 1740
aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc caactgatct 1800
tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc 1860
gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt cctttttcaa 1920
tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt 1980
tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc acctaaattg 2040
taagcgttaa tattttgtta aaattcgcgt taaatttttg ttaaatcagc tcatttttta 2100
accaataggc cgaaatcggc aaaatccctt ataaatcaaa agaatagacc gagatagggt 2160
tgagtggccg ctacagggcg ctcccattcg ccattcaggc tgcgcaactg ttgggaaggg 2220
cgtttcggtg cgggcctctt cgctattacg ccagctggcg aaagggggat gtgctgcaag 2280
gcgattaagt tgggtaacgc cagggttttc ccagtcacga cgttgtaaaa cgacggccag 2340
tgagcgcgac gtaatacgac tcactatagg gcgaattggc ggaaggccgt caaggccgca 2400
tgaattcgct accgg 2415
<210> 753
<211> 34
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic J receiving cassette R (right part)
<220>
<221> misc_feature
<222> 1
<223> /note="The first nucleotide of SEQ ID 753 is linked to the last
nucleotide of Y’Nn (described in specification), and the first
nucleotide of Y’Nn is then linked to the last nucleotide of SEQ
ID 696."
<400> 753
gtgtcttcag cggccgcaga agacttcgag accg 34
<210> 754
<211> 2310
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic J receiving cassette vector (right part)
<220>
<221> misc_feature
<222> 1
<223> /note="The first nucleotide of SEQ ID 754 is linked to the last
nucleotide of Y’Nn (described in specification), and the first
nucleotide of Y’Nn is then linked to the last nucleotide of SEQ
ID 697."
<400> 754
tgagaccctc gagctgggcc tcatgggcct tccgctcact gcccgctttc cagtcgggaa 60
acctgtcgtg ccagctgcat taacatggtc atagctgttt ccttgcgtat tgggcgctct 120
ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg ggtaaagcct ggggtgccta 180
atgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt 240
ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg 300
aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc 360
tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt 420
ggcgctttct catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa 480
gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta 540
tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa 600
caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa 660
ctacggctac actagaagaa cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt 720
cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt 780
ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat 840
cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat 900
gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc 960
aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttag aaaaattcgt ccagcatcag 1020
atgaaattgc agtttgttca tgtccgggtt atcaatacca tatttctgga acagacgttt 1080
ctgcaggctc gggctaaatt cacccagaca attccacaga attgccagat cctgataacg 1140
atctgcaata ccaacacgac caacatcaat gcagccaatc agtttaccct catcaaaaat 1200
caggttatcc aggctaaaat caccatgggt aacaacgcta tccggactaa acggcagcag 1260
tttatgcatt tctttccaaa cctgttcaac aggccaacca ttacgttcat catcaaaatc 1320
gcttgcatca accagaccat tattcatacg gctctgtgcc tgtgccagac gaaaaacacg 1380
atcgctatta aacggacaat tacaaaccgg aatgctatgc agacgacgca gaaaaactgc 1440
cagtgcatca acaatatttt cgcctgaatc cggatattct tccagaacct gaaatgcggt 1500
tttacccgga attgcggtgg tcagcagcca tgcatcatcc ggtgtacgaa taaaatgttt 1560
aatggtcggc agcggcataa attcggtcag ccaattcaga cgaaccattt catcggtcac 1620
atcatttgca acgctacctt taccatgttt cagaaacagt tccggtgcat ccggtttacc 1680
atacagacga taaatggttg caccgctctg accaacatta tcacgtgccc atttatagcc 1740
atacagatct gcatccatat tgctattcag acgcggacgg ctacagctgg tttcacgctg 1800
aatatggctc atactcttcc tttttcaata ttattgaagc atttatcagg gttattgtct 1860
catgagcgga tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac 1920
atttccccga aaagtgccac ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta 1980
aatttttgtt aaatcagctc attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat 2040
aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg agtggccgct acagggcgct cccattcgcc 2100
attcaggctg cgcaactgtt gggaagggcg tttcggtgcg ggcctcttcg ctattacgcc 2160
agctggcgaa agggggatgt gctgcaaggc gattaagttg ggtaacgcca gggttttccc 2220
agtcacgacg ttgtaaaacg acggccagtg agcgcgacgt aatacgactc actatagggc 2280
gaattggcgg aaggccgtca aggccgcatg 2310
<210> 755
<211> 2309
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Generic J donor vector (right part)
<220>
<221> misc_feature
<222> 1
<223> /note="The first nucleotide of SEQ ID 755 is linked to the last
nucleotide of ZNnY’Nn (described in specification), and the first
nucleotide of ZNnY’Nn is then linked to the last nucleotide of
SEQ ID 700."
<400> 755
tgagaccctc gagctgggcc tcatgggcct tccgctcact gcccgctttc cagtcgggaa 60
acctgtcgtg ccagctgcat taacatggtc atagctgttt ccttgcgtat tgggcgctct 120
ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg ggtaaagcct ggggtgccta 180
atgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt 240
ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg 300
aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc 360
tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt 420
ggcgctttct catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa 480
gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta 540
tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa 600
caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa 660
ctacggctac actagaagaa cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt 720
cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt 780
ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat 840
cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat 900
gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc 960
aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttag aaaaattcgt ccagcatcag 1020
atgaaattgc agtttgttca tgtccgggtt atcaatacca tatttctgga acagacgttt 1080
ctgcaggctc gggctaaatt cacccagaca attccacaga attgccagat cctgataacg 1140
atctgcaata ccaacacgac caacatcaat gcagccaatc agtttaccct catcaaaaat 1200
caggttatcc aggctaaaat caccatgggt aacaacgcta tccggactaa acggcagcag 1260
tttatgcatt tctttccaaa cctgttcaac aggccaacca ttacgttcat catcaaaatc 1320
gcttgcatca accagaccat tattcatacg gctctgtgcc tgtgccagac gaaaaacacg 1380
atcgctatta aacggacaat tacaaaccgg aatgctatgc agacgacgca gaaaaactgc 1440
cagtgcatca acaatatttt cgcctgaatc cggatattct tccagaacct gaaatgcggt 1500
tttacccgga attgcggtgg tcagcagcca tgcatcatcc ggtgtacgaa taaaatgttt 1560
aatggtcggc agcggcataa attcggtcag ccaattcaga cgaaccattt catcggtcac 1620
atcatttgca acgctacctt taccatgttt cagaaacagt tccggtgcat ccggtttacc 1680
atacagacga taaatggttg caccgctctg accaacatta tcacgtgccc atttatagcc 1740
atacagatct gcatccatat tgctattcag acgcggacgg ctacagctgg tttcacgctg 1800
aatatggctc atactcttcc tttttcaata ttattgaagc atttatcagg gttattgtct 1860
catgagcgga tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac 1920
atttccccga aaagtgccac ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta 1980
aatttttgtt aaatcagctc attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat 2040
aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg agtggccgct acagggcgct cccattcgcc 2100
attcaggctg cgcaactgtt gggaagggcg tttcggtgcg ggcctcttcg ctattacgcc 2160
agctggcgaa agggggatgt gctgcaaggc gattaagttg ggtaacgcca gggttttccc 2220
agtcacgacg ttgtaaaacg acggccagtg agcgcgacgt aatacgactc actatagggc 2280
gaattggcgg aaggccgtca aggccgcat 2309
<210> 756
<211> 2510
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-Ca entry backbone FRT/F3
<400> 756
ctagctagag acgttgtcga catcgtctct tacctagacg aagttcctat tccgaagttc 60
ctattcttca aatagtatag gaacttcctc gagctgggcc tcatgggcct tccgctcact 120
gcccgctttc cagtcgggaa acctgtcgtg ccagctgcat taacatggtc atagctgttt 180
ccttgcgtat tgggcgctct ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg 240
ggtaaagcct ggggtgccta atgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag 300
gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga 360
cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc gtttccccct 420
ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc 480
tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac gctgtaggta tctcagttcg 540
gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc 600
tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga cttatcgcca 660
ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag 720
ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagaa cagtatttgg tatctgcgct 780
ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc 840
accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga 900
tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca 960
cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat 1020
taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc tgacagttac 1080
caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt 1140
gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg gcttaccatc tggccccagt 1200
gctgcaatga taccgcgaga accacgctca ccggctccag atttatcagc aataaaccag 1260
ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc catccagtct 1320
attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt 1380
gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc 1440
tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt 1500
agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg 1560
gttatggcag cactgcataa ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg 1620
actggtgagt actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct 1680
tgcccggcgt caatacggga taataccgcg ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc 1740
attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt 1800
tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt 1860
tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg 1920
aaatgttgaa tactcatact cttccttttt caatattatt gaagcattta tcagggttat 1980
tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg 2040
cgcacatttc cccgaaaagt gccacctaaa ttgtaagcgt taatattttg ttaaaattcg 2100
cgttaaattt ttgttaaatc agctcatttt ttaaccaata ggccgaaatc ggcaaaatcc 2160
cttataaatc aaaagaatag accgagatag ggttgagtgg ccgctacagg gcgctcccat 2220
tcgccattca ggctgcgcaa ctgttgggaa gggcgtttcg gtgcgggcct cttcgctatt 2280
acgccagctg gcgaaagggg gatgtgctgc aaggcgatta agttgggtaa cgccagggtt 2340
ttcccagtca cgacgttgta aaacgacggc cagtgagcgc gacgtaatac gactcactat 2400
agggcgaatt ggcggaaggc cgtcaaggcc gcatgaattc gctaccggga agttcctatt 2460
ccgaagttcc tattctctag aaagtatagg aacttcaggt actcaggtac 2510
<210> 757
<211> 785
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-C entry TRAV7_TRAC_FRT-F3
<400> 757
gccaccatgg agaagatgcg tagacctgtc ctaattatat tttgtctatg tcttggctgg 60
gcaaatggag aaaaccaggt ggagcacagc cctcattttc tgggacccca gcagggagat 120
gttgcctcca tgagctgcac gtactctgtc agtcgtttta acaatttgca gtggtacagg 180
caaaatacag ggatgggtcc caaacaccta ttatccatgt attcagctgg atatgagaag 240
cagaaaggaa ggctaaatgc tacattactg aagaatggaa gcagcttgta cattacagcc 300
gtgcagcctg aagattcagc cacctatttc tgcagagacc ttgcggccgc ataggtctca 360
ccagaaccct gaccctgccg tgtaccagct gagagactct aaatccagtg acaagtctgt 420
ctgcctattc accgattttg attctcaaac aaatgtgtca caaagtaagg attctgatgt 480
gtatatcaca gacaaaactg tgctagacat gaggtctatg gacttcaaga gcaacagtgc 540
tgtggcctgg agcaacaaat ctgactttgc atgtgcaaac gccttcaaca acagcattat 600
tccagaggac accttcttcc ccagcccaga aagttcctgt gatgtcaagc tggtcgagaa 660
aagctttgaa acagatacga acctaaactt tcaaaacctg tcagtgattg ggttccgaat 720
cctcctcctg aaagtggccg ggtttaatct gctcatgacg ctgcggctgt ggtccagctg 780
actag 785
<210> 758
<211> 788
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-C entry TRAV8-2_TRAC_FRT-F3
<400> 758
gccaccatgc tcctgctgct cgtcccagtg ctcgaggtga tttttactct gggaggaacc 60
agagcccagt cggtgaccca gcttgacagc cacgtttctg tctctgaagg aaccccggtg 120
ctgctgaggt gcaactactc atcttcttat tcaccatctc tcttctggta tgtgcaacac 180
cccaacaaag gactccagct tctcctgaag tacacatcag cggccaccct ggttaaaggc 240
atcaacggtt ttgaggctga atttaagaag agtgaaacct ccttccacct gacgaaaccc 300
tcagcccata tgagcgacgc ggctgagtac ttctgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcaccagaac cctgaccctg ccgtgtacca gctgagagac tctaaatcca gtgacaagtc 420
tgtctgccta ttcaccgatt ttgattctca aacaaatgtg tcacaaagta aggattctga 480
tgtgtatatc acagacaaaa ctgtgctaga catgaggtct atggacttca agagcaacag 540
tgctgtggcc tggagcaaca aatctgactt tgcatgtgca aacgccttca acaacagcat 600
tattccagag gacaccttct tccccagccc agaaagttcc tgtgatgtca agctggtcga 660
gaaaagcttt gaaacagata cgaacctaaa ctttcaaaac ctgtcagtga ttgggttccg 720
aatcctcctc ctgaaagtgg ccgggtttaa tctgctcatg acgctgcggc tgtggtccag 780
ctgactag 788
<210> 759
<211> 784
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-C entry TRAV8-4_TRAC_FRT-F3
<400> 759
gccaccatgc tcctgctgct cgtcccagtg ctcgaggtga tttttaccct gggaggaacc 60
agagcccagt cggtgaccca gcttggcagc cacgtttctg tctctgaagg agccctggtt 120
ctgctgaggt gcaactactc atcgtctgtt ccaccatatc tcttctggta tgtgcaatac 180
cccaaccaag gactccagct tctcctgaag tacacatcag cggccaccct ggttaaaggc 240
atcaacggtt ttgaggctga atttaagaag agtgaaacct ccttccacct gacgaaaccc 300
tcagcccata tgagcgacgc ggctgagtac ttctgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcaccagaac cctgaccctg ccgtgtacca gctgagagac tctaaatcca gtgacaagtc 420
tgtctgccta ttcaccgatt ttgattctca aacaaatgtg tcacaaagta aggattctga 480
tgtgtatatc acagacaaaa ctgtgctaga catgaggtct atggacttca agagcaacag 540
tgctgtggcc tggagcaaca aatctgactt tgcatgtgca aacgccttca acaacagcat 600
tattccagag gacaccttct tccccagccc agaaagttcc tgtgatgtca agctggtcga 660
gaaaagcttt gaaacagata cgaacctaaa ctttcaaaac ctgtcagtga ttgggttccg 720
aatcctcctc ctgaaagtgg ccgggtttaa tctgctcatg acgctgcggc tgtggtccag 780
ctga 784
<210> 760
<211> 778
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-C entry TRAV18_TRAC_FRT-F3
<400> 760
gccaccatgc tgtctgcttc ctgctcagga cttgtgatct tgttgatatt cagaaggacc 60
agtggagact cggttaccca gacagaaggc ccagttaccc tccctgagag ggcagctctg 120
acattaaact gcacttatca gtccagctat tcaacttttc tattctggta tgtccagtat 180
ctaaacaaag agcctgagct cctcctgaaa agttcagaaa accaggagac tgacagcaga 240
ggttttcagg ccagtcctat caagagtgac agttccttcc acctggagaa gccctcggtg 300
cagctgtcgg actctgccgt gtactactgc agagaccttg cggccgcata ggtctcacca 360
gaaccctgac cctgccgtgt accagctgag agactctaaa tccagtgaca agtctgtctg 420
cctattcacc gattttgatt ctcaaacaaa tgtgtcacaa agtaaggatt ctgatgtgta 480
tatcacagac aaaactgtgc tagacatgag gtctatggac ttcaagagca acagtgctgt 540
ggcctggagc aacaaatctg actttgcatg tgcaaacgcc ttcaacaaca gcattattcc 600
agaggacacc ttcttcccca gcccagaaag ttcctgtgat gtcaagctgg tcgagaaaag 660
ctttgaaaca gatacgaacc taaactttca aaacctgtca gtgattgggt tccgaatcct 720
cctcctgaaa gtggccgggt ttaatctgct catgacgctg cggctgtggt ccagctga 778
<210> 761
<211> 790
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-C entry TRAV38-2DV8_TRAC_FRT-F3
<400> 761
gccaccatgg catgccctgg cttcctgtgg gcacttgtga tctccacctg tcttgaattt 60
agcatggctc agacagtcac tcagtctcaa ccagagatgt ctgtgcagga ggcagaaacg 120
gtgaccctga gctgcacata tgacaccagt gagagtgatt attatttatt ctggtacaag 180
cagcctccca gcaggcagat gattctcgtt attcgccaag aagcttataa gcaacagaat 240
gcaacagaga atcgtttctc tgtgaacttc cagaaagcag ccaaatcctt cagtctcaag 300
atctcagact cacagctggg ggatgccgcg atgtatttct gcagagacct tgcggccgca 360
taggtctcac cagaaccctg accctgccgt gtaccagctg agagactcta aatccagtga 420
caagtctgtc tgcctattca ccgattttga ttctcaaaca aatgtgtcac aaagtaagga 480
ttctgatgtg tatatcacag acaaaactgt gctagacatg aggtctatgg acttcaagag 540
caacagtgct gtggcctgga gcaacaaatc tgactttgca tgtgcaaacg ccttcaacaa 600
cagcattatt ccagaggaca ccttcttccc cagcccagaa agttcctgtg atgtcaagct 660
ggtcgagaaa agctttgaaa cagatacgaa cctaaacttt caaaacctgt cagtgattgg 720
gttccgaatc ctcctcctga aagtggccgg gtttaatctg ctcatgacgc tgcggctgtg 780
gtccagctga 790
<210> 762
<211> 775
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-C entry TRAV39_TRAC_FRT-F3
<400> 762
gccaccatga agaagctact agcaatgatt ctgtggcttc aactagaccg gttaagtgga 60
gagctgaaag tggaacaaaa ccctctgttc ctgagcatgc aggagggaaa aaactatacc 120
atctactgca attattcaac cacttcagac agactgtatt ggtacaggca ggatcctggg 180
aaaagtctgg aatctctgtt tgtgttgcta tcaaatggag cagtgaagca ggagggacga 240
ttaatggcct cacttgatac caaagcccga ctcagcaccc tccacatcac agctgccgtg 300
catgacctct ctgccaccta cttctgcaga gaccttgcgg ccgcataggt ctcaccagaa 360
ccctgaccct gccgtgtacc agctgagaga ctctaaatcc agtgacaagt ctgtctgcct 420
attcaccgat tttgattctc aaacaaatgt gtcacaaagt aaggattctg atgtgtatat 480
cacagacaaa actgtgctag acatgaggtc tatggacttc aagagcaaca gtgctgtggc 540
ctggagcaac aaatctgact ttgcatgtgc aaacgccttc aacaacagca ttattccaga 600
ggacaccttc ttccccagcc cagaaagttc ctgtgatgtc aagctggtcg agaaaagctt 660
tgaaacagat acgaacctaa actttcaaaa cctgtcagtg attgggttcc gaatcctcct 720
cctgaaagtg gccgggttta atctgctcat gacgctgcgg ctgtggtcca gctga 775
<210> 763
<211> 760
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-C entry TRAV40_TRAC_FRT-F3
<400> 763
gccaccatga actcctctct ggactttcta attctgatct taatgtttgg aggaaccagc 60
agcaattcag tcaagcagac gggccaaata accgtatcgg agggagcatc tgtgactatg 120
aactgcacat acacatccac ggggtaccct acccttttct ggtatgtgga ataccccagc 180
aaacctctgc agcttcttca gagagagaca atggaaaaca gcaaaaactt cggaggcgga 240
aatattaaag acaaaaactc ccccattgtg aaatattcag tccaggtatc agactcagcc 300
gtgtactact gcagagacct tgcggccgca taggtctcac cagaaccctg accctgccgt 360
gtaccagctg agagactcta aatccagtga caagtctgtc tgcctattca ccgattttga 420
ttctcaaaca aatgtgtcac aaagtaagga ttctgatgtg tatatcacag acaaaactgt 480
gctagacatg aggtctatgg acttcaagag caacagtgct gtggcctgga gcaacaaatc 540
tgactttgca tgtgcaaacg ccttcaacaa cagcattatt ccagaggaca ccttcttccc 600
cagcccagaa agttcctgtg atgtcaagct ggtcgagaaa agctttgaaa cagatacgaa 660
cctaaacttt caaaacctgt cagtgattgg gttccgaatc ctcctcctga aagtggccgg 720
gtttaatctg ctcatgacgc tgcggctgtg gtccagctga 760
<210> 764
<211> 2501
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-Cb entry backbone F14/F15
<400> 764
ctagacctgg agacgacgcg tctagacgaa gttcctattc cgaagttcct attcttatag 60
gagtatagga acttcctcga gctgggcctc atgggccttc cgctcactgc ccgctttcca 120
gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta acatggtcat agctgtttcc ttgcgtattg 180
ggcgctctcc gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggg taaagcctgg 240
ggtgcctaat gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg 300
gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag 360
aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc 420
gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg 480
ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt 540
cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc 600
ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc 660
actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg 720
tggcctaact acggctacac tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca 780
gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc 840
ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat 900
cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt 960
ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt 1020
tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca atgcttaatc 1080
agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc ctgactcccc 1140
gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc tgcaatgata 1200
ccgcgagaac cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc agccggaagg 1260
gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat taattgttgc 1320
cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt tgccattgct 1380
acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt cattcagctc cggttcccaa 1440
cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa aagcggttag ctccttcggt 1500
cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat cactcatggt tatggcagca 1560
ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct tttctgtgac tggtgagtac 1620
tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg cggcgaccga gttgctcttg cccggcgtca 1680
atacgggata ataccgcgcc acatagcaga actttaaaag tgctcatcat tggaaaacgt 1740
tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga gatccagttc gatgtaaccc 1800
actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct tttactttca ccagcgtttc tgggtgagca 1860
aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa atgttgaata 1920
ctcatactct tcctttttca atattattga agcatttatc agggttattg tctcatgagc 1980
ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg cacatttccc 2040
cgaaaagtgc cacctaaatt gtaagcgtta atattttgtt aaaattcgcg ttaaattttt 2100
gttaaatcag ctcatttttt aaccaatagg ccgaaatcgg caaaatccct tataaatcaa 2160
aagaatagac cgagataggg ttgagtggcc gctacagggc gctcccattc gccattcagg 2220
ctgcgcaact gttgggaagg gcgtttcggt gcgggcctct tcgctattac gccagctggc 2280
gaaaggggga tgtgctgcaa ggcgattaag ttgggtaacg ccagggtttt cccagtcacg 2340
acgttgtaaa acgacggcca gtgagcgcga cgtaatacga ctcactatag ggcgaattgg 2400
cggaaggccg tcaaggccgc atgaattcgc taccgggaag ttcctattcc gaagttccta 2460
ttctatcaga agtataggaa cttcaggtac gtctcaggta c 2501
<210> 765
<211> 888
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-Cb entry TRBV6-6_TRBC2_F14-F15
<400> 765
gccaccatga gcatcagcct cctgtgctgt gcagcctttc ctctcctgtg ggcaggtcca 60
gtgaatgctg gtgtcactca gaccccaaaa ttccgcatcc tgaagatagg acagagcatg 120
acactgcagt gtacccagga tatgaaccat aactacatgt actggtatcg acaagaccca 180
ggcatggggc tgaagctgat ttattattca gttggtgctg gtatcactga taaaggagaa 240
gtcccgaatg gctacaacgt gtccagatca accacagagg atttcccgct caggctggag 300
ttggctgctc cctcccagac atctgtgtac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 766
<211> 891
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-Cb entry TRBV7-2_TRBC2_F14-F15
<400> 766
gccaccatgg gcaccaggct cctcttctgg gtggccttct gtctcctggg ggcagatcac 60
acaggagctg gagtctccca gtcccccagt aacaaggtca cagagaaggg aaaggatgta 120
gagctcaggt gtgatccaat ttcaggtcat actgcccttt actggtaccg acagagcctg 180
gggcagggcc tggagttttt aatttacttc caaggcaaca gtgcaccaga caaatcaggg 240
ctgcccagtg atcgcttctc tgcagagagg actgggggat ccgtgtccac tctgacgatc 300
cagcgcacac agcaggagga ctcggccgtg tatctttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt atgcctggcc acaggcttct accccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttc acctccgagt cttaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcttgcta gggaaggcca ccttgtatgc cgtgctggtc 840
agtgccctcg tgctgatggc catggtcaag agaaaggatt ccagaggcta g 891
<210> 767
<211> 891
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-Cb entry TRBV7-3_TRBC2_F14-F15
<400> 767
gccaccatgg gcaccaggct cctctgctgg gcagccctgt gcctcctggg ggcagatcac 60
acaggtgctg gagtctccca gacccccagt aacaaggtca cagagaaggg aaaatatgta 120
gagctcaggt gtgatccaat ttcaggtcat actgcccttt actggtaccg acaaagcctg 180
gggcagggcc cagagtttct aatttacttc caaggcacgg gtgcggcaga tgactcaggg 240
ctgcccaacg atcggttctt tgcagtcagg cctgagggat ccgtgtctac tctgaagatc 300
cagcgcacag agcgggggga ctcagccgtg tatctttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt atgcctggcc acaggcttct accccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttc acctccgagt cttaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcttgcta gggaaggcca ccttgtatgc cgtgctggtc 840
agtgccctcg tgctgatggc catggtcaag agaaaggatt ccagaggcta g 891
<210> 768
<211> 891
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-Cb entry TRBV7-8_TRBC2_F14-F15
<400> 768
gccaccatgg gcaccaggct cctctgctgg gtggtcctgg gtttcctagg gacagatcac 60
acaggtgctg gagtctccca gtcccctagg tacaaagtcg caaagagagg acaggatgta 120
gctctcaggt gtgatccaat ttcgggtcat gtatcccttt tttggtacca acaggccctg 180
gggcaggggc cagagtttct gacttatttc cagaatgaag ctcaactaga caaatcgggg 240
ctgcccagtg atcgcttctt tgcagaaagg cctgagggat ctgtctccac tctgaagatc 300
cagcgcacac agcaggagga ctccgccgtg tatctttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt atgcctggcc acaggcttct accccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttc acctccgagt cttaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcttgcta gggaaggcca ccttgtatgc cgtgctggtc 840
agtgccctcg tgctgatggc catggtcaag agaaaggatt ccagaggcta g 891
<210> 769
<211> 888
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-Cb entry TRBV19_TRBC2_F14-F15
<400> 769
gccaccatga gcaaccaggt gctctgctgt gtggtccttt gtttcctggg agcaaacacc 60
gtggatggtg gaatcactca gtccccaaag tacctgttca gaaaggaagg acagaatgtg 120
accctgagtt gtgaacagaa tttgaaccac gatgccatgt actggtaccg acaggaccca 180
gggcaagggc tgagattgat ctactactca cagatagtaa atgactttca gaaaggagat 240
atagctgaag ggtacagcgt gtctcgggag aagaaggaat cctttcctct cactgtgaca 300
tcggcccaaa agaacccgac agctttctat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtatg cctggccaca ggcttctacc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggcttcacc tccgagtctt accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cttgctaggg aaggccacct tgtatgccgt gctggtcagt 840
gccctcgtgc tgatggccat ggtcaagaga aaggattcca gaggctag 888
<210> 770
<211> 882
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-Cb entry TRBV20-1_TRBC2_F14-F15
<400> 770
gccaccatgc tgctgcttct gctgcttctg gggccaggct ccgggcttgg tgctgtcgtg 60
tctcaacatc cgagctgggt tatctgtaag agtggaacct ctgtgaagat cgagtgccgt 120
tccctggact ttcaggccac aactatgttt tggtatcgtc agttcccgaa acagagtctc 180
atgctgatgg caacttccaa tgagggctcc aaggccacat acgagcaagg cgtcgagaag 240
gacaagtttc tcatcaacca tgcaagcctg accttgtcca ctctgacagt gaccagtgcc 300
catcctgaag atagcagctt ctacatttgc agagaccttg cggccgcata ggtctcagtg 360
ttcccacccg aggtcgctgt gtttgagcca tcagaagcag agatctccca cacccaaaag 420
gccacactgg tatgcctggc cacaggcttc taccccgacc acgtggagct gagctggtgg 480
gtgaatggga aggaggtgca cagtggggtc agcacagacc cgcagcccct caaggagcag 540
cccgccctca atgactccag atactgcctg agcagccgcc tgagggtgtc ggccaccttc 600
tggcagaacc cccgcaacca cttccgctgt caagtccagt tctacgggct ctcggagaat 660
gacgagtgga cccaggatag ggccaaaccc gtcacccaga tcgtcagcgc cgaggcctgg 720
ggtagagcag actgtggctt cacctccgag tcttaccagc aaggggtcct gtctgccacc 780
atcctctatg agatcttgct agggaaggcc accttgtatg ccgtgctggt cagtgccctc 840
gtgctgatgg ccatggtcaa gagaaaggat tccagaggct ag 882
<210> 771
<211> 882
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-Cb entry TRBV6-6_TRBC1_F14-F15
<400> 771
gccaccatga gcatcagcct cctgtgctgt gcagcctttc ctctcctgtg ggcaggtcca 60
gtgaatgctg gtgtcactca gaccccaaaa ttccgcatcc tgaagatagg acagagcatg 120
acactgcagt gtacccagga tatgaaccat aactacatgt actggtatcg acaagaccca 180
ggcatggggc tgaagctgat ttattattca gttggtgctg gtatcactga taaaggagaa 240
gtcccgaatg gctacaacgt gtccagatca accacagagg atttcccgct caggctggag 300
ttggctgctc cctcccagac atctgtgtac ttttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 772
<211> 885
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-Cb entry TRBV7-2_TRBC1_F14-F15
<400> 772
gccaccatgg gcaccaggct cctcttctgg gtggccttct gtctcctggg ggcagatcac 60
acaggagctg gagtctccca gtcccccagt aacaaggtca cagagaaggg aaaggatgta 120
gagctcaggt gtgatccaat ttcaggtcat actgcccttt actggtaccg acagagcctg 180
gggcagggcc tggagttttt aatttacttc caaggcaaca gtgcaccaga caaatcaggg 240
ctgcccagtg atcgcttctc tgcagagagg actgggggat ccgtgtccac tctgacgatc 300
cagcgcacac agcaggagga ctcggccgtg tatctttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt gtgcctggcc acaggcttct tccccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttt acctcggtgt cctaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcctgcta gggaaggcca ccctgtatgc tgtgctggtc 840
agcgcccttg tgttgatggc catggtcaag agaaaggatt tctga 885
<210> 773
<211> 885
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-Cb entry TRBV7-3_TRBC1_F14-F15
<400> 773
gccaccatgg gcaccaggct cctctgctgg gcagccctgt gcctcctggg ggcagatcac 60
acaggtgctg gagtctccca gacccccagt aacaaggtca cagagaaggg aaaatatgta 120
gagctcaggt gtgatccaat ttcaggtcat actgcccttt actggtaccg acaaagcctg 180
gggcagggcc cagagtttct aatttacttc caaggcacgg gtgcggcaga tgactcaggg 240
ctgcccaacg atcggttctt tgcagtcagg cctgagggat ccgtgtctac tctgaagatc 300
cagcgcacag agcgggggga ctcagccgtg tatctttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt gtgcctggcc acaggcttct tccccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttt acctcggtgt cctaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcctgcta gggaaggcca ccctgtatgc tgtgctggtc 840
agcgcccttg tgttgatggc catggtcaag agaaaggatt tctga 885
<210> 774
<211> 885
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-Cb entry TRBV7-8_TRBC1_F14-F15
<400> 774
gccaccatgg gcaccaggct cctctgctgg gtggtcctgg gtttcctagg gacagatcac 60
acaggtgctg gagtctccca gtcccctagg tacaaagtcg caaagagagg acaggatgta 120
gctctcaggt gtgatccaat ttcgggtcat gtatcccttt tttggtacca acaggccctg 180
gggcaggggc cagagtttct gacttatttc cagaatgaag ctcaactaga caaatcgggg 240
ctgcccagtg atcgcttctt tgcagaaagg cctgagggat ctgtctccac tctgaagatc 300
cagcgcacac agcaggagga ctccgccgtg tatctttgca gagaccttgc ggccgcatag 360
gtctcagtgt tcccacccga ggtcgctgtg tttgagccat cagaagcaga gatctcccac 420
acccaaaagg ccacactggt gtgcctggcc acaggcttct tccccgacca cgtggagctg 480
agctggtggg tgaatgggaa ggaggtgcac agtggggtca gcacagaccc gcagcccctc 540
aaggagcagc ccgccctcaa tgactccaga tactgcctga gcagccgcct gagggtgtcg 600
gccaccttct ggcagaaccc ccgcaaccac ttccgctgtc aagtccagtt ctacgggctc 660
tcggagaatg acgagtggac ccaggatagg gccaaacccg tcacccagat cgtcagcgcc 720
gaggcctggg gtagagcaga ctgtggcttt acctcggtgt cctaccagca aggggtcctg 780
tctgccacca tcctctatga gatcctgcta gggaaggcca ccctgtatgc tgtgctggtc 840
agcgcccttg tgttgatggc catggtcaag agaaaggatt tctga 885
<210> 775
<211> 882
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-Cb entry TRBV19_TRBC1_F14-F15
<400> 775
gccaccatga gcaaccaggt gctctgctgt gtggtccttt gtttcctggg agcaaacacc 60
gtggatggtg gaatcactca gtccccaaag tacctgttca gaaaggaagg acagaatgtg 120
accctgagtt gtgaacagaa tttgaaccac gatgccatgt actggtaccg acaggaccca 180
gggcaagggc tgagattgat ctactactca cagatagtaa atgactttca gaaaggagat 240
atagctgaag ggtacagcgt gtctcgggag aagaaggaat cctttcctct cactgtgaca 300
tcggcccaaa agaacccgac agctttctat ctttgcagag accttgcggc cgcataggtc 360
tcagtgttcc cacccgaggt cgctgtgttt gagccatcag aagcagagat ctcccacacc 420
caaaaggcca cactggtgtg cctggccaca ggcttcttcc ccgaccacgt ggagctgagc 480
tggtgggtga atgggaagga ggtgcacagt ggggtcagca cagacccgca gcccctcaag 540
gagcagcccg ccctcaatga ctccagatac tgcctgagca gccgcctgag ggtgtcggcc 600
accttctggc agaacccccg caaccacttc cgctgtcaag tccagttcta cgggctctcg 660
gagaatgacg agtggaccca ggatagggcc aaacccgtca cccagatcgt cagcgccgag 720
gcctggggta gagcagactg tggctttacc tcggtgtcct accagcaagg ggtcctgtct 780
gccaccatcc tctatgagat cctgctaggg aaggccaccc tgtatgctgt gctggtcagc 840
gcccttgtgt tgatggccat ggtcaagaga aaggatttct ga 882
<210> 776
<211> 876
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> V-Cb entry TRBV20-1_TRBC1_F14-F15
<400> 776
gccaccatgc tgctgcttct gctgcttctg gggccaggct ccgggcttgg tgctgtcgtg 60
tctcaacatc cgagctgggt tatctgtaag agtggaacct ctgtgaagat cgagtgccgt 120
tccctggact ttcaggccac aactatgttt tggtatcgtc agttcccgaa acagagtctc 180
atgctgatgg caacttccaa tgagggctcc aaggccacat acgagcaagg cgtcgagaag 240
gacaagtttc tcatcaacca tgcaagcctg accttgtcca ctctgacagt gaccagtgcc 300
catcctgaag atagcagctt ctacatttgc agagaccttg cggccgcata ggtctcagtg 360
ttcccacccg aggtcgctgt gtttgagcca tcagaagcag agatctccca cacccaaaag 420
gccacactgg tgtgcctggc cacaggcttc ttccccgacc acgtggagct gagctggtgg 480
gtgaatggga aggaggtgca cagtggggtc agcacagacc cgcagcccct caaggagcag 540
cccgccctca atgactccag atactgcctg agcagccgcc tgagggtgtc ggccaccttc 600
tggcagaacc cccgcaacca cttccgctgt caagtccagt tctacgggct ctcggagaat 660
gacgagtgga cccaggatag ggccaaaccc gtcacccaga tcgtcagcgc cgaggcctgg 720
ggtagagcag actgtggctt tacctcggtg tcctaccagc aaggggtcct gtctgccacc 780
atcctctatg agatcctgct agggaaggcc accctgtatg ctgtgctggt cagcgccctt 840
gtgttgatgg ccatggtcaa gagaaaggat ttctga 876
<210> 777
<211> 519
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Bidirectional terminator element (Esp3I to Esp3I site)
<400> 777
cgtctcggac tccgctgatc ataatcaagc catatcacat ctgtagaggt ttacttgctt 60
taaaaaacct ccacacctcc ccctgaacct gaaacataaa atgaatgcaa ttgttgttgt 120
taacttgttt attgcagctt ataatggtta caaataaagc aatagcatca caaatttcac 180
aaataaagca tttttttcac tgcattctag ttgtggtttg tccaaactca tcaatgtatc 240
ttatcatgtc tggatctgct gaagagaagc cttcttcacc atagagccca ccgcatcccc 300
agcatgcctg ctattgtcta cccaatcctc ccccttgctg tcctgcccca ccccaccccc 360
cagaatagaa tgacacctac tcagacaatg cgttgcaatt tcctcatttt attaggaaag 420
gacagtggga gtggcacctt ccagggtcaa ggaaggcacg ggggaggggc aaacaacaga 480
tggctggcaa ctagaaggca cagtcgcaag gtcgagacg 519
<210> 778
<211> 825
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TRA ORF
<400> 778
atggagaccc tcttgggcct gcttatcctt tggctgcagc tgcaatgggt tagcagcaaa 60
caggaggtga cgcagattcc tgcagctctg agtgtcccag aaggagaaaa cttggttctc 120
aactgcagtt tcactgatag cgctatttac aacctccagt ggtttaggca ggaccctggg 180
aaaggactca catctctgtt gcttattcag tcaagtcaga gagagcaaac aagtggacgc 240
cttaatgcct cgctggataa atcatcagga cgtagtactt tatacattgc agcttctcag 300
cctggtgact cagccaccta cctctgcgcc gtgaggccaa ccagcggcgg cagctacatc 360
ccaacctttg gaagaggaac cagccttatt gttcatccgt atatccagaa ccctgaccct 420
gccgtgtacc agctgagaga ctctaaatcc agtgacaagt ctgtctgcct attcaccgat 480
tttgattctc aaacaaatgt gtcacaaagt aaggattctg atgtgtatat cacagacaaa 540
actgtgctag acatgaggtc tatggacttc aagagcaaca gtgctgtggc ctggagcaac 600
aaatctgact ttgcatgtgc aaacgccttc aacaacagca ttattccaga ggacaccttc 660
ttccccagcc cagaaagttc ctgtgatgtc aagctggtcg agaaaagctt tgaaacagat 720
acgaacctaa actttcaaaa cctgtcagtg attgggttcc gaatcctcct cctgaaagtg 780
gccgggttta atctgctcat gacgctgcgg ctgtggtcca gctga 825
<210> 779
<211> 936
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> TRB ORF
<400> 779
atgagcatcg gcctcctgtg ctgtgcagcc ttgtctctcc tgtgggcagg tccagtgaat 60
gctggtgtca ctcagacccc aaaattccag gtcctgaaaa caggacagag catgacactg 120
cagtgtgccc aggatatgaa ccatgaatac atgtcctggt atcgacaaga cccaggcatg 180
gggctgaggc tgattcatta ctcagttggt gctggtatca ctgaccaagg agaagtcccc 240
aatggctaca atgtctccag atcaaccaca gaggatttcc cgctcaggct gctgtcggct 300
gctccctccc agacatctgt gtacttttgc gccagcagct acgtgggcaa caccggcgaa 360
ctgttctttg gagaaggctc taggctgacc gtactggagg acctgaaaaa cgtgttccca 420
cccgaggtcg ctgtgtttga gccatcagaa gcagagatct cccacaccca aaaggccaca 480
ctggtatgcc tggccacagg cttctacccc gaccacgtgg agctgagctg gtgggtgaat 540
gggaaggagg tgcacagtgg ggtcagcaca gacccgcagc ccctcaagga gcagcccgcc 600
ctcaatgact ccagatactg cctgagcagc cgcctgaggg tgtcggccac cttctggcag 660
aacccccgca accacttccg ctgtcaagtc cagttctacg ggctctcgga gaatgacgag 720
tggacccagg atagggccaa acccgtcacc cagatcgtca gcgccgaggc ctggggtaga 780
gcagactgtg gcttcacctc cgagtcttac cagcaagggg tcctgtctgc caccatcctc 840
tatgagatct tgctagggaa ggccaccttg tatgccgtgc tggtcagtgc cctcgtgctg 900
atggccatgg tcaagagaaa ggattccaga ggctag 936
<210> 780
<211> 10
<212> PRT
<213> Cytomegalovirus
<220>
<223> HLA-B*07:02 restricted HCMV pp65 antigen
<400> 780
Thr Pro Arg Val Thr Gly Gly Gly Ala Met
1 5 10
<210> 781
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CMV-B.07:02-TPRVT-pp65 (PE) dextramer
<400> 781
Thr Pro Arg Val Thr
1 5
<210> 782
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HLA-B*07:02-TPRV tetramer reagent
<400> 782
Thr Pro Arg Val
1
<210> 783
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HLA-A2*01- NLVPMVATV tetramer reagent
<400> 783
Asn Leu Val Pro Met Val Ala Thr Val
1 5
<210> 784
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> HLA-A*02:01?SLLMWITQV tetramer reagent
<400> 784
Ser Leu Leu Met Trp Ile Thr Gln Val
1 5
Claims (31)
- 조합 시스템(combined system)으로서, 2개의 개별 성분을 포함하되, 제1 성분은 가변 및 불변(variable and constant: V-C) T-세포 수용체(T-cell receptor: TCR) 유전자 분절을 보유하는 벡터이고, 그리고 제2 성분은 결합(joining: J) TCR 유전자 분절을 보유하며,
상기 제1 성분은,
a. 복제 기점,
b. 제1 양성 선택 마커,
c. 5' 유전 요소 또는 요소들,
d. 코작 서열,
e. TCR 가변 유전자 분절,
f. 제1 타입 IIS 제한 효소에 의한 부위 특이적 인식 및 절단을 위한 제1 타입 IIS 서열로서, 상기 서열은 상기 효소가 상기 인식 서열의 5'를 절단하도록 배향되고, 상기 TCR 가변 유전자 분절의 3' 단부에 존재하는, 상기 제1 타입 IIS 서열,
g. 음성 선택 마커,
h. 제2 타입 IIS 제한 효소에 의한 부위 특이적 인식 및 절단을 위한 제2 타입 IIS 서열로서, 상기 서열은 상기 효소가 상기 인식 서열의 3'를 절단하는 것을 지시하도록 배향되고, 상기 TCR 불변 유전자 분절의 5' 단부에 존재하는, 상기 제2 타입 IIS 서열,
i. TCR 불변 유전자 분절 및
j. 3' 유전 요소 또는 요소들
을 함유하는 V-C 유입 벡터(entry vector)이고,
상기 제2 성분은,
a. 복제 기점,
b. 제2 양성 선택 마커,
c. 제3 타입 IIS 제한 효소에 의한 부위 특이적 인식 및 절단을 위한 제3 타입 IIS 서열로서, 상기 서열은 상기 효소가 상기 인식 서열의 3'를 절단하도록 배향되고, 상기 TCR 결합 유전자 분절의 5' 단부에 존재하는, 상기 제3 타입 IIS 서열,
d. TCR 결합 유전자 분절,
e. 불변 유전자 분절의 작은 5' 부분에 상응하는, C 부분 및
f. 제4 타입 IIS 제한 효소에 의한 부위 특이적 인식 및 절단을 위한 제4 타입 IIS 서열로서, 상기 서열은, 생성되는 단일 가닥 오버행 서열이 상기 제2 타입 IIS 서열에 의해서 생성되는 것과 상보성이도록, 상기 효소가 상기 인식 서열의 5'를 절단하도록 배향되고, 작제물의 TCR C-부분의 3' 단부에 존재하는, 상기 제4 타입 IIS 서열
을 함유하는 J 공여자 벡터인, 조합 시스템. - 제1항에 있어서, 상기 5' 유전 요소는,
a. 유전자 시스/작용 요소(gene cis/acting element),
b. 리콤비나제 효소에 대한 이종특이적 인식 부위,
c. 관심대상 게놈 부위에 대한 5' 상동 재조합 아암,
d. mRNA 스플라이스 수용자 부위,
e. 내부 리보솜 유입 부위 및
f. 후성적 인설레이터 서열(epigenetic insulator sequence)
로부터 선택된 1종 이상의 요소를 포함하는, 조합 시스템. - 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 음성 선택 마커는,
a. 제1 성분에 또는 TCR 결합 유전자 분절 내의 다른 곳에는 함유되지 않은 제한 효소 인식 부위,
b. 박테리아 자살 유전자(bacterial suicide gene), 및
c. 리포터 요소
로부터 선택되는, 조합 시스템. - 제1항에 있어서, 상기 3' 유전 요소는,
a. 종결인자 요소,
b. 리콤비나제 효소에 대한 이종특이적 인식 부위,
c. 관심대상 게놈 부위에 대한 3' 상동 재조합 아암,
d. mRNA 스플라이스 공여자 부위,
e. 내부 리보솜 유입 부위 및
f. 후성적 인설레이터 서열
로부터 선택된 1종 이상의 요소를 포함하는, 조합 시스템. - 제1항에 있어서, 상기 성분들은 제1항에 정의된 V-C 유입 벡터의 f 및 h 성분 및 J 공여자 벡터의 c 및 f 성분 이외의 임의의 타입 IIS 서열을 함유하지 않고, 상기 음성 선택 마커만 함유하는, 조합 시스템.
- 제1항에 있어서, CDR3을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스(oligonucleotide duplex encoding CDR3: odeCDR3)를 포함하는 제3 성분을 더 포함하되, 상기 odeCDR3은,
a. TCR 가변 유전자 분절의 상기 3' 단부에 상기 제1 타입 IIS 제한 부위의 절단에 의해서 생성되는 것과 상보성인 제1 단일 가닥 오버행 서열,
b. TCR CDR3 영역을 암호화하고, 음성 선택 마커가 없는 이중 가닥 분절(음성 선택 마커는 제5항에 정의된 바와 같고, 상기 이중 가닥 요소는 또한 제1 또는 제2 성분의 임의의 타입 IIS 제한 서열이 없음),
c. TCR 결합 유전자 분절의 5' 단부에 상기 제3 타입 IIS 제한 효소 부위의 절단에 의해서 생성되는 것과 상보성인 제2 단일 가닥 오버행 서열
을 갖는, 조합 시스템. - 제1항에 있어서, CDR3을 암호화하는 올리고뉴클레오타이드 듀플렉스(odeCDR3)를 포함하는 제3 성분을 더 포함하되, 상기 odeCDR3은 2개의 타입 IIS 인식 및 절단 부위가 측접된 CDR3을 암호화하는 dsDNA 분자 또는 플라스미드 DNA여서, 상기 효소에 의한 절단은 상기 5' 단부에서 상기 V-C 유입 벡터 내의 상기 제1 타입 IIS 절단에 의해서 그리고 상기 3' 단부에서 상기 J 공여자 벡터의 제3 타입 IIS 절단으로 생성되는 것에 상보성인 단일 가닥 오버행을 초래하여, 제6항에 기재된 바와 같은 a, b 및 c를 포함하는 상기 odeCDR3의 소화된 생성물을 획득하는, 조합 시스템.
- 제1항에 있어서, 상기 제1 내지 제4 타입 IIS 서열은 동일하거나 또는 상이한, 조합 시스템.
- 제1항에 정의된 바와 같은 V-C 유입 벡터의 라이브러리 및 제1항에 정의된 바와 같은 J 공여자 벡터의 라이브러리를 포함하는 2-부분 벡터 라이브러리로서, 상기 V-C 유입 벡터의 라이브러리는,
TCR을 갖는 유기체의 모든 생식계열 TCR 가변 유전자 분절 및 불변 유전자 분절을 나타내는 하나 이상의 벡터의 수집물, 또는
암호화된 단백질의 아미노산 서열이 상기 생식계열 유전자 분절에 의해서 암호화된 단백질 서열과 관련하여 비변형되도록, 상기 TCR을 갖는 유기체의 변이체 생식계열 TCR 가변 유전자 분절 및 불변 유전자 분절의 수집물을 나타내는 하나 이상의 벡터의 수집물, 또는
암호화된 단백질의 아미노산 서열이 상기 생식계열 유전자 분절에 의해서 암호화된 단백질 서열과 관련하여 변형되도록, 상기 TCR을 갖는 유기체의 변이체 생식계열 TCR 가변 유전자 분절 및 불변 유전자 분절의 수집물을 나타내는 하나 이상의 벡터의 수집물 (여기서, J 공여자 벡터 라이브러리는 상기 TCR을 갖는 유기체의 생식계열 TCR 결합 유전자 분절을 나타내는 하나 이상의 벡터의 수집물임), 또는
암호화된 단백질의 아미노산 서열이 상기 생식계열 유전자 분절에 의해서 암호화된 단백질 서열과 관련하여 비변형되도록, 상기 TCR을 갖는 유기체의 변이체 생식계열 TCR 결합 유전자 분절을 나타내는 하나 이상의 벡터의 수집물, 또는
암호화된 단백질의 아미노산 서열이 상기 생식계열 유전자 분절에 의해서 암호화된 단백질 서열과 관련하여 변형되도록, 상기 TCR을 갖는 유기체의 변이체 생식계열 TCR 결합 유전자 분절을 나타내는 하나 이상의 벡터의 수집물인, 2-부분 벡터 라이브러리. - 전장 TCR 오픈 리딩 프레임(open reading frame: ORF)의 시험관내 재구성 방법으로서,
a. V-C 유입 벡터를 선택하는 단계,
b. J 공여자 벡터를 선택하는 단계,
c. odeCDR3을 선택하는 단계,
d. a, b 및 c를 조합하여 i) 상기 V-C 유입 벡터 및 상기 J 공여자 벡터 내에 존재하는 모든 타입 IIS 제한 효소 인식 및 절단 부위를 절단하기 위한 타입 IIS 제한 효소(들) 및 ii) DNA 리가제 효소와 반응시키고, 조합된 믹스를 열순환 반응(thermocycling reaction)에 적용하는 단계,
e. 단계 d.로부터 획득된 반응 생성물을 DNA 벡터 증식에 대해서 수용성인 숙주 유기체 내에서 형질전환시키는 단계, 및
f. 상기 숙주 유기체를 증식시켜 생성된 V-C 유입 벡터 골격 내에 전장의 재구성된 TCR 오픈 리딩 프레임을 획득하는 단계
를 포함하는, 전장 TCR 오픈 리딩 프레임(ORF)의 시험관내 재구성 방법. - 서열 SEQ0692,
서열 SEQ0693, 및
서열 SEQ0694
로부터 선택되는, V-C 유입 벡터. - 서열 SEQ0700으로 표현되는 J 공여자 벡터.
- 전장 TCR ORF를 재구성하기 위해서 J 공여자 벡터의 라이브러리 및 odeCDR3과 조합하여 사용하기 위한 제1항에 정의된 바와 같은 V-C 유입 벡터의 라이브러리로서, 상기 V-C 유입 벡터는 서열 SEQ0049 내지 SEQ0094로 표현되는, 인간 TRA 유전자좌의 유전자 분절 사용을 재정리하기 위한 가변 유전자 분절 및 불변 유전자 분절을 함유하고/하거나; 상기 V-C 유입 벡터는 서열 SEQ0484 내지 SEQ0577로 표현되는, 인간 TRB 유전자좌의 유전자 분절 사용을 재정리하기 위한 가변 유전자 분절 및 불변 유전자 분절을 함유하는, V-C 유입 벡터의 라이브러리.
- 제1항에 정의된 바와 같은 J 공여자 벡터의 라이브러리로서, 서열 SEQ0323 내지 SEQ0378로 표현되는, 상기 인간 TRA 유전자좌의 유전자 분절 사용을 재정리하기 위한 결합 유전자 분절을 함유하되, 상기 벡터는 전체 CDR3 영역에 연장된 odeCDR3과 함께 사용되고/사용되거나;
서열 SEQ0379 내지 SEQ0434로 표현되는 상기 인간 TRA 유전자좌의 상기 유전자 분절 사용을 재정리하기 위한 결합 유전자 분절을 함유하되, 상기 벡터는 3 내지 4개의 코돈 길이가 감소된 odeCDR3과 함께 사용되는, J 공여자 벡터의 라이브러리. - 제1항에 정의된 바와 같은 J 공여자 벡터의 라이브러리로서, 서열 SEQ0636 내지 SEQ0661로 표현되는, 상기 인간 TRB 유전자좌의 상기 유전자 분절 사용을 재정리하기 위한 결합 유전자 분절을 함유하되, 상기 벡터는 상기 전체 CDR3 영역에 연장된 odeCDR3과 함께 사용되고/사용되거나;
서열 SEQ0662 내지 SEQ0687로 표현되는 상기 인간 TRB 유전자좌의 상기 유전자 분절 사용을 재정리하기 위한 결합 유전자 분절을 함유하되, 상기 벡터는 3 내지 4개의 코돈 길이가 감소된 odeCDR3과 함께 사용되는, J 공여자 벡터의 라이브러리. - 제14항 또는 제15항에 있어서, 전장 TCR ORF를 재구성하기 위해서 V-C 유입 벡터 및 odeCDR3과 조합하여 사용하기 위한, 라이브러리.
- 제1항에 있어서, 상기 제1 성분은 제1 TCR 쇄를 암호화하는 V-C 유입 벡터이되, 상기 시스템은 양방향 종결인자(Bidirectional Terminator: BiT) 공여자 벡터를 포함하는 성분, 및 상기 제1 TCR 쇄에 상보성인 제2 TCR 쇄를 암호화하는 V-C 유입 벡터를 포함하는 성분을 더 포함하는, 조합 시스템.
- 제17항에 있어서, 상기 제1 성분의 상기 V-C 유입 벡터는,
a. 제5 타입 IIS 제한 효소에 의한 부위 특이적 인식 및 절단을 위한 제5 타입 IIS 서열로서, 상기 서열은 상기 효소가 상기 인식 서열의 5'를 절단하도록 배향되고, 상기 불변 유전자 분절의 3' 단부에 존재하는, 상기 제5 타입 IIS 서열,
b. 상기 제5 타입 IIS 서열의 3'에 위치된 음성 선택 마커,
c. b.의 음성 선택 마커의 3'에 위치된 제6 타입 IIS 제한 효소에 의한 부위 특이적 인식 및 절단을 위한 제6 타입 IIS 서열로서, 상기 서열은 상기 효소가 상기 인식 서열의 3'를 절단하도록 배향되고, 상기 3' 유전 요소(들)의 5'에 존재하는, 상기 제6 타입 IIS 서열
을 더 포함하는, 조합 시스템. - 제17항 또는 제18항에 있어서, 상기 V-C 유입 벡터는 상기 제1 쇄에 상보성인 제2 TCR 쇄를 암호화하고,
a. 제7 타입 IIS 제한 효소에 의한 부위 특이적 인식 및 절단을 위한 제7 타입 IIS 서열로서, 상기 서열은 상기 효소가 상기 인식 서열의 3'를 절단하도록 배향되고, 코작 서열의 5' 단부에 존재하는, 상기 제7 타입 IIS 서열,
b. 제8 타입 IIS 제한 효소에 의한 부위 특이적 인식 및 절단을 위한 제8 타입 IIS 서열로서, 상기 서열은 상기 효소가 상기 인식 서열의 5'를 절단하도록 배향되고, 상기 불변 유전자 분절의 3' 단부에 존재하는, 상기 제8 타입 IIS 서열,
c. 상기 제8 타입 IIS 서열의 상기 3'에 위치된 음성 선택 마커
를 더 포함하는, 조합 시스템. - 제17항 또는 제18항에 있어서, 상기 BiT 공여자 벡터는,
복제 기점,
a. 양성 선택 마커,
b. 제9 타입 IIS 제한 효소에 의한 부위 특이적 인식 및 절단을 위한 제9 타입 IIS 서열로서, 상기 서열은 상기 효소가 상기 인식 서열의 3' 및 양방향 종결인자 요소, d의 5' 단부를 절단하도록 배향되는, 상기 제9 타입 IIS 서열,
c. 안티센스 배열의 2개의 전사 종결인자를 암호화하는 양방향 종결인자 요소, 및
d. 제10 타입 IIS 제한 효소에 의한 부위 특이적 인식 및 절단을 위한 제10 타입 IIS 서열로서, 상기 서열은 상기 효소가 상기 인식 서열의 5' 및 상기 양방향 종결인자 요소, d의 상기 3'를 절단하도록 배향되는, 상기 제10 타입 IIS 서열
을 함유하는, 조합 시스템. - 제17항 또는 제18항에 있어서, 상기 제1 내지 제4 타입 IIS 서열은 동일하거나 또는 상이한, 조합 시스템.
- 제19항에 있어서, 상기 제5 내지 제10 타입 IIS 서열은 동일하거나 또는 상이하며, 제1 내지 제4 타입 IIS 서열의 것과는 상이한, 조합 시스템.
- 제17항 또는 제18항에 있어서, 상기 음성 선택 마커는,
a. 제1 성분에 또는 TCR 결합 유전자 분절 내의 다른 곳에는 함유되지 않은 제한 효소 인식 부위,
b. 박테리아 자살 유전자, 및
c. 리포터 요소
로부터 선택되되,
제18항의 b. 및 제19항의 c.에 정의된 상기 음성 선택 마커는 제1항의 g.에 정의된 음성 선택 마커와 상이하고, 그리고 제1항의 g.에 정의된 음성 선택 마커는 상기 제1 성분의 V-C 유입 벡터 및 상기 제1 TCR 쇄에 상보성인 상기 제2 TCR 쇄를 암호화하는 V-C 유입 벡터의 것과 상이한, 조합 시스템. - 제17항 또는 제18항에 정의된 바와 같은 V-C 유입 벡터의 라이브러리로서, 상기 라이브러리는 제1 및 제2 V-C 유입 벡터 라이브러리를 포함하되, 각각은,
TCR을 갖는 유기체의 모든 생식계열 TCR 가변 유전자 분절 및 불변 유전자 분절을 나타내는 하나 이상의 벡터의 수집물, 또는
암호화된 단백질의 아미노산 서열이 상기 생식계열 유전자 분절에 의해서 암호화된 단백질 서열과 관련하여 비변형되도록, 상기 TCR을 갖는 유기체의 변이체 생식계열 TCR 가변 유전자 분절 및 불변 유전자 분절의 수집물을 나타내는 하나 이상의 벡터의 수집물, 또는
암호화된 단백질의 아미노산 서열이 상기 생식계열 유전자 분절에 의해서 암호화된 단백질 서열과 관련하여 변형되도록, 상기 TCR을 갖는 유기체의 변이체 생식계열 TCR 가변 유전자 분절 및 불변 유전자 분절의 수집물을 나타내는 하나 이상의 벡터의 수집물을 함유하며,
상기 제1 및 제2 V-C 유입 벡터 라이브러리는 상호(reciprocal) TCR 쇄를 암호화하는, V-C 유입 벡터의 라이브러리. - 제24항에 있어서, 단일 생성물 작제물에서 역평행 배열로 암호화된, 한 쌍의 전장 TCR 오픈 리딩 프레임(ORF)을 제공하기 위해서 사용하기 위한 V-C 유입 벡터의 라이브러리.
- 단일 생성물 작제물에서 역평행 배열로 암호화된, 한 쌍의 전장 TCR 오픈 리딩 프레임(ORF)의 시험관내 재구성 방법으로서,
a. 각각의 TCR 쇄에 대한 V-C 유입 벡터를 선택하는 단계,
b. 각각의 TCR 쇄에 대한 J 공여자 벡터를 선택하는 단계,
c. 각각의 TCR 쇄에 대한 odeCDR3을 선택하는 단계,
d. 각각의 TCR에 대한, b 및 c를 독립적인 반응으로 조합하여 i) V-C 유입 벡터 및 J 공여자 벡터 내에 존재하는 제1 내지 제4 타입 IIS 제한 효소 인식 및 절단 부위를 절단하기 위한 타입 IIS 제한 효소(들) 및 ii) DNA 리가제 효소와 반응시키고, 조합된 믹스를 열순환 반응에 적용하여 제1 및 제2 반응 생성물을 획득하는 단계,
e. 단계 d.로부터의 반응 생성물 모두를 제17항에 정의된 바와 같은 BiT 공여자 벡터와 함께 i) 제5 내지 제10 타입 IIS 제한 효소 인식 및 절단 부위를 절단하기 위한 타입 IIS 제한 효소(들) 및 ii) DNA 리가제 효소와 조합하고, 상기 조합된 반응 생성물을 열순환 반응에 적용하여 제3 반응 생성물을 획득하는 단계,
f. 단계 e.로부터의 제3 반응 생성물을 DNA 벡터 증식에 대해서 수용성인 숙주 유기체 내에서 형질전환시키는 단계, 및
g. 상기 숙주 유기체를 증식시켜 생성된 V-C 유입 벡터 골격 내에 전장의 재구성된 TCR 오픈 리딩 프레임을 획득하는 단계
를 포함하는, 한 쌍의 전장 TCR 오픈 리딩 프레임(ORF)의 시험관내 재구성 방법. - SEQ0756 및 SEQ0764로 표현되는, 한 쌍의 V-C 유입 벡터로서, 제1항의 조합 시스템에 사용되는, 한 쌍의 V-C 유입 벡터.
- 매칭된 이종특이적 리콤비나제 서열을 갖는 유전자 표적과의 리콤비나제 매개된 카세트 교환(recombinase mediated cassette exchange)에 사용하기 위한, 제27항에 따른 한 쌍의 V-C 유입 벡터.
- SEQ0777로 표시되는 양방향 종결인자 요소로서, 제17항의 조합 시스템에 사용되는, 양방향 종결인자 요소.
- 삭제
- 삭제
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP17181798 | 2017-07-18 | ||
| EP17181798.4 | 2017-07-18 | ||
| PCT/EP2018/069333 WO2019016175A1 (en) | 2017-07-18 | 2018-07-17 | TWO-COMPONENT VECTOR LIBRARY SYSTEM FOR RAPID ASSEMBLY AND DIVERSIFICATION OF FULL-LENGTH T-CELL RECEPTOR OPEN READER FRAMES |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20200028415A KR20200028415A (ko) | 2020-03-16 |
| KR102652494B1 true KR102652494B1 (ko) | 2024-03-28 |
Family
ID=59387893
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020207003522A KR102652494B1 (ko) | 2017-07-18 | 2018-07-17 | 전장 t-세포 수용체 오픈 리딩 프레임의 신속한 조립 및 다양화를 위한 2-성분 벡터 라이브러리 시스템 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20200231974A1 (ko) |
| EP (1) | EP3655532B1 (ko) |
| JP (1) | JP7335224B2 (ko) |
| KR (1) | KR102652494B1 (ko) |
| CN (1) | CN111315883B (ko) |
| AU (1) | AU2018303164A1 (ko) |
| CA (1) | CA3067124A1 (ko) |
| DK (1) | DK3655532T3 (ko) |
| ES (1) | ES2897202T3 (ko) |
| WO (1) | WO2019016175A1 (ko) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7460643B2 (ja) | 2018-10-16 | 2024-04-02 | ブルーアレル， エルエルシー | 遺伝子へのｄｎａの標的化挿入のための方法 |
| KR20220004060A (ko) * | 2019-04-05 | 2022-01-11 | 루트패스 제노믹스, 인크. | T-세포 수용체 유전자 어셈블리를 위한 조성물 및 방법 |
| CN112739833A (zh) * | 2020-04-25 | 2021-04-30 | 黄婉秋 | 利用巢式RPA技术检测SARS-CoV-2的引物对、探针、试剂盒及其应用 |
| EP4142782A1 (en) | 2020-04-27 | 2023-03-08 | Genovie AB | Methods to generate vaccine compositions that prime human leukocyte antigen class i restricted cd8 t-cell responses against viral non-virion-integral derived epitopes |
| CN117897167A (zh) * | 2021-05-13 | 2024-04-16 | 福奇生物制品公司 | 腺病毒辅助质粒 |
| IL311778A (en) * | 2021-09-27 | 2024-05-01 | Intergalactic Therapeutics Inc | Synthetic production of circular DNA vectors |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20150203886A1 (en) | 2012-07-25 | 2015-07-23 | National University Corporation University Of Toyama | Method for Cloning T Cell Receptor |
| WO2016193299A1 (en) | 2015-06-01 | 2016-12-08 | Medigene Immunotherapies Gmbh | T cell receptor library |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20170039316A1 (en) * | 2003-11-12 | 2017-02-09 | Yuriy Fofanov | Compositions, processes and algorithms for microbial detection |
| US20100291633A1 (en) * | 2007-09-03 | 2010-11-18 | Thorsten Selmer | Method of cloning at least one nucleic acid molecule of interest using type iis restriction endonucleases, and corresponding cloning vectors, kits and system using type iis restriction endonucleases |
| EP2395087A1 (en) * | 2010-06-11 | 2011-12-14 | Icon Genetics GmbH | System and method of modular cloning |
| US9738890B2 (en) * | 2012-03-27 | 2017-08-22 | Dsm Ip Assets B.V. | Cloning method |
| NZ704157A (en) * | 2012-07-27 | 2018-08-31 | Univ Illinois | Engineering t-cell receptors |
| CN105658796B (zh) * | 2012-12-12 | 2021-10-26 | 布罗德研究所有限公司 | 用于序列操纵的crispr-cas组分***、方法以及组合物 |
| ES2740930T3 (es) * | 2014-03-14 | 2020-02-07 | Immunocore Ltd | Bibliotecas de TCR |
| GB201407852D0 (en) * | 2014-05-02 | 2014-06-18 | Iontas Ltd | Preparation of libraries od protein variants expressed in eukaryotic cells and use for selecting binding molecules |
| DK3268482T3 (da) * | 2015-03-09 | 2020-03-09 | Novozymes As | Fremgangsmåder til indføring af en flerhed af ekspressionskonstruktioner i en eukaryot celle |
| JP6803480B2 (ja) | 2016-11-07 | 2020-12-23 | ジェノヴィー エービーＧｅｎｏｖｉｅ Ａｂ | Ｔ細胞受容体の合成及びｔｃｒ提示細胞への安定なゲノム組込みのための二部分装置 |
| CA3043263A1 (en) * | 2016-11-17 | 2018-05-24 | Innovative Targeting Solutions Inc. | Chimeric receptors, biosensor host cells and methods/uses thereof |
-
2018
- 2018-07-17 WO PCT/EP2018/069333 patent/WO2019016175A1/en active Search and Examination
- 2018-07-17 CN CN201880047571.7A patent/CN111315883B/zh active Active
- 2018-07-17 AU AU2018303164A patent/AU2018303164A1/en active Pending
- 2018-07-17 DK DK18743749.6T patent/DK3655532T3/da active
- 2018-07-17 US US16/632,301 patent/US20200231974A1/en active Pending
- 2018-07-17 KR KR1020207003522A patent/KR102652494B1/ko active IP Right Grant
- 2018-07-17 ES ES18743749T patent/ES2897202T3/es active Active
- 2018-07-17 EP EP18743749.6A patent/EP3655532B1/en active Active
- 2018-07-17 JP JP2020502407A patent/JP7335224B2/ja active Active
- 2018-07-17 CA CA3067124A patent/CA3067124A1/en active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20150203886A1 (en) | 2012-07-25 | 2015-07-23 | National University Corporation University Of Toyama | Method for Cloning T Cell Receptor |
| WO2016193299A1 (en) | 2015-06-01 | 2016-12-08 | Medigene Immunotherapies Gmbh | T cell receptor library |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| BBRC.,474(4):709-714(2016.5.4.) |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20200231974A1 (en) | 2020-07-23 |
| CN111315883B (zh) | 2024-06-18 |
| AU2018303164A1 (en) | 2019-12-12 |
| JP2020530769A (ja) | 2020-10-29 |
| EP3655532B1 (en) | 2021-08-18 |
| DK3655532T3 (da) | 2021-11-08 |
| JP7335224B2 (ja) | 2023-08-29 |
| CN111315883A (zh) | 2020-06-19 |
| WO2019016175A9 (en) | 2020-04-02 |
| CA3067124A1 (en) | 2019-01-24 |
| WO2019016175A1 (en) | 2019-01-24 |
| KR20200028415A (ko) | 2020-03-16 |
| EP3655532A1 (en) | 2020-05-27 |
| ES2897202T3 (es) | 2022-02-28 |
| NZ759372A (en) | 2023-11-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR102652494B1 (ko) | 전장 t-세포 수용체 오픈 리딩 프레임의 신속한 조립 및 다양화를 위한 2-성분 벡터 라이브러리 시스템 | |
| AU2019203955C1 (en) | Multipartite signaling proteins and uses thereof | |
| KR20210149060A (ko) | Tn7-유사 트랜스포존을 사용한 rna-유도된 dna 통합 | |
| KR20180081618A (ko) | 유전자 편집에 의한 인간 디스트로핀 유전자의 교정을 위한 치료용 표적 및 사용 방법 | |
| CN101939434B (zh) | 用于在大豆中提高种子贮藏油脂的生成和改变脂肪酸谱的来自解脂耶氏酵母的dgat基因 | |
| AU2022200903B2 (en) | Engineered Cascade components and Cascade complexes | |
| CN101365788B (zh) | Δ-9延伸酶及其在制备多不饱和脂肪酸中的用途 | |
| DK2623594T3 (da) | Antistof mod human prostaglandin-E2-receptor EP4 | |
| KR20220004959A (ko) | 종양, 종양-상주 면역 세포, 및 종양 미세환경을 콜로니화하기 위해 조작된 면역자극성 박테리아 | |
| CN101646766B (zh) | △17去饱和酶及其用于制备多不饱和脂肪酸的用途 | |
| KR102614328B1 (ko) | T-세포 수용체 합성 및 tcr-제시 세포에 대한 안정적인 게놈 통합을 위한 2-부분 디바이스 | |
| KR20220113943A (ko) | 면역자극성 박테리아 전달 플랫폼 및 치료 제품의 전달을 위한 이의 용도 | |
| KR20210080375A (ko) | 암 면역요법을 위한 재조합 폭스바이러스 | |
| KR20230066000A (ko) | 면역자극성 박테리아-기초 백신, 치료제, 및 rna 전달 플랫폼 | |
| KR20100049084A (ko) | 질병 진단을 위한 방법 및 조성물 | |
| KR20210151916A (ko) | 뒤시엔느 근육 이영양증의 치료를 위한 aav 벡터-매개된 큰 돌연변이 핫스팟의 결실 | |
| US20240207318A1 (en) | Chimeric costimulatory receptors, chemokine receptors, and the use of same in cellular immunotherapies | |
| JP2024037917A (ja) | 組換えｔ細胞受容体遺伝子を用いて細胞ベースの治療薬を製造するための技法 | |
| CN111094569A (zh) | 光控性病毒蛋白质、其基因及包含该基因的病毒载体 | |
| KR20220078607A (ko) | 융합 단백질들을 이용한 tcr 재프로그래밍을 위한 조성물 및 방법들 | |
| US11814412B2 (en) | Artificial proteins and compositions and methods thereof | |
| KR20230112625A (ko) | 나이세리아 고노레아에 대한 백신접종을 위한 조성물 및 방법 | |
| RU2774631C1 (ru) | Сконструированные компоненты cascade и комплексы cascade | |
| CN114058607B (zh) | 一种用于c到u碱基编辑的融合蛋白及其制备方法和应用 | |
| KR20240029020A (ko) | Dna 변형을 위한 crispr-트랜스포손 시스템 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant |