KR102636984B1 - L-리모넨의 선택적 당질코르티코이드 수용체 작용제로서의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 에센셜 오일 성분인 L-리모넨의 선택적 당질코르티코이드 수용체 아고니스트로서의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 L-리모넨은 선택적 당질코르티코이드 수용체 아고니스트로서, 종래 당질코르티코이드 수용체 아고니스트에 의한 부작용 유발을 억제하고, 나아가 염증을 예방, 개선 또는 치료할 수 있다.

Description

L-리모넨의 선택적 당질코르티코이드 수용체 작용제로서의 용도{The novel function of L-limonene as a selective glucocorticoid receptor agonist}

본 발명은 에센셜 오일 성분인 L-리모넨의 선택적 당질코르티코이드 수용체 작용제로서의 용도에 관한 것이다.

신체적 또는 정신적인 스트레스를 받으면, 인체는 스트레스 호르몬 코티솔을 포함한 화학물질을 방출한다. 코티솔은 부신 스테로이드 호르몬 중 하나인 당질코르티코이드(glucocorticoid, GC)로, 신체가 스트레스에 대하여 적절히 반응하도록 도와준다. 당질코르티코이드(glucocorticoid)는 부신피질에서 나오는 스테로이드 호르몬 중 하나로 글루코코르티코이드라고도 하며, 주로 부신피질의 제2층에서 생성된다. 당질코르티코이드는 탄수화물을 간에서 글리코겐으로 저장하고 단백질과 지질에서 당질을 만드는 작용을 도우며, 염증을 억제하여 항염증성 코르티코이드에 포함된다.

염증 억제는 당질코르티코이드와 당질코르티코이드 수용체와의 상호작용을 통해 일어나며, 당질코르티코이드 수용체 (Glucocorticoid receptor, GR)에 대한 이펙터(effectors)는 생체 내 당질코르티코이드-매개 전사 활성 (trans-activation) 또는 전사 억제 (trans-repression)를 통해 유전자 발현을 조절하여 생체 내에서 스트레스 반응, 면역체계 및 대사 조절에 관여한다고 보고된다.

그 중 가장 잘 알려진 GR 이펙터 중 하나인 GR 아고니스트 덱사메타손(Dexamethasone, Dex)은 항염증(anti-inflammatory) 및 면역억제 반응을 나타내는 약제로, 류마티스성 장애 및 급성 호흡기 질환, 알레르기 질환, 안과 질환 등 다양한 질환에 사용되고 있다. 그러나, 덱사메타손을 고농도로 장기간 쓰면 감염에 취약해지며 골다공증, 근육 약화, 당뇨병, 어린이 성장 부진, 쿠싱 증후군, 에디슨 병 등의 부작용이 따르기 때문에, 용량이나 투여 방식을 조절하는 것만으로 이의 부작용을 효과적으로 조절하는데 한계가 있다. 따라서, 항염증 작용만을 극대화시키고 부작용은 줄일 수 있는 GR 이펙터의 발견은 약물 개발에 상당한 관심을 끄는 영역이 되었다.

특히, GR 이펙터는 아고니스트(agonist), 패시브 안타고니스트(passive antagonist), 액티브 안타고니스트(active antagonist) 및 선택적 당질코르티코이드 수용체 아고니스트(selective GR agonist (SEGRA)) 4개의 유형으로 나뉘는데, 그 중 선택적 당질코르티코이드 수용체 아고니스트(selective glucocorticoid-receptor agonist, SEGRAs)는 당질코르티코이드가 가지고 있는 전사 억제만을 선택적으로 활성화하여 항염증 작용은 유지하면서, 전사 활성화에 의한 대사성 부작용은 억제하도록 하는 기능을 가지고 있어, 적절한 선택적 당질코르티코이드 수용체 아고니스트의 발견 및 개발은 기존의 부작용을 감소시키며 높은 효율의 치료효과를 나타낼 것으로 기대되고 있다.

한편, 에센셜 오일은 페퍼민트, 스위트 오렌지 등을 포함하며 시트러스계 에센셜 오일에 특히 리모넨 성분이 과량 포함되어 있는 것으로 알려져 있다. 스위트 오렌지의 학명은 시트러스 멕시마 X 레티큘라타 (Citrus maxima x reticulate)로, 열대 및 아열대 지역에서 널리 재배되는 것으로 알려져 있다.

그 중, 페퍼민트는 쌍떡잎 식물 통화식물목 꿀풀과의 여러해살이 풀로, 학명은 멘타 피페리타(Mentha piperita)이고, 유럽, 미국, 일본 등에서 자생하는 식물이다. 워터민트(Mentha aguatica)와 스피어민트(Mentha spicata)의 교잡종으로, 향기가 후추(pepper)의 톡 쏘는 성질과 닮았다고 하여 페퍼민트라는 이름이 붙여졌다.

페퍼민트에 포함된 다양한 성분 중 하나로, 리모넨은 L-리모넨과 D-리모넨 각각의 이성질체로 존재하는데, D-리모넨은 박테리아의 증식을 억제하고 BGC-823 위암 이식 마우스 모델에서 암의 생장을 47.6% 저해함과 동시에, 간, 복막 등 다른 장기에 전이되는 것을 감소시키는 것으로 알려져 있다. 이러한 D-리모넨 대비 L-리모넨의 경우 많은 연구가 진행되지 않은 실정이다.

이러한 배경 하에, 본 발명자들은 에센셜 오일 성분 중 L-리모넨이 종래 약제로 사용되고 있는 GR 아고니스트 덱사메타손, 베타메타손 또는 트리암시놀론 등이 가지는 항염증 등의 효과를 그대로 가지면서, 동시에 이들이 가지는 부작용을 줄일 수 있는 GR 이펙터, 즉 선택적 GR 아고니스트로서의 효과를 가지는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 하나의 목적은 L-리모넨 또는 이의 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물로서, 상기 조성물은 당질코르티코이드 수용체 아고니스트에 의한 부작용을 유발하지 않는 것이 특징인, 항염 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 하나의 목적은 L-리모넨 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 당질코르티코이드 수용체 아고니스트에 의한 부작용 유발 억제 또는 경감용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 L-리모넨 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 당질코르티코이드 수용체-매개 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물로서, 상기 조성물은 당질코르티코이드 수용체 아고니스트에 의한 부작용을 유발하지 않는 것이 특징인, 약학 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 상기 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 염증질환의 예방 또는 치료방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 L-리모넨 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함하는 당질코르티코이드 수용체 아고니스트에 의한 부작용 유발 억제 또는 경감방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 L-리모넨 또는 이의 식품학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 염증질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 L-리모넨 또는 이의 식품학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 염증질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 L-리모넨 또는 이의 허용되는 염의 항염 용도를 제공하는 것이다.

이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 발명에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 발명에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 발명의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 발명의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.

또한, 당해 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 통상의 실험만을 사용하여 본 발명에 기재된 본 발명의 특정 양태에 대한 다수의 등가물을 인지하거나 확인할 수 있다. 또한, 이러한 등가물은 본 발명에 포함되는 것으로 의도된다.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 하나의 양태는 L-리모넨 또는 이의 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물로서, 상기 조성물은 당질코르티코이드 수용체 아고니스트에 의한 부작용을 유발하지 않는 것이 특징인, 항염 조성물을 제공한다.

본 발명에서, 용어 “리모넨”은 아이소프렌 단위가 두 개 반복된 테르펜 중 하나로, 오렌지나 레몬의 껍질에 풍부하게 들어있으며 특유의 향기로 인해 향료의 원료나 방향제로 사용된다. 리모넨은 항균제, 항바이러스제, 항진균제, 항유충제, 곤충 유인제, 방취제, 착취제 등의 다양한 특성을 가진다.

리모넨은 광학적 이성질체로 L-리모넨과 D-리모넨이 있는데, L-리모넨은 소나무와 식물에 많이 함유되어 있고 D-리모넨은 오렌지 등의 감귤류에 많다. L-리모넨의 분자식은 C₁₀H₁₆이고, 분자량은 136.23이며, 무색의 상쾌한 레몬향을 가진다. 또한 끓는점은 175.5 ~ 176.5 ℃, 녹는점은 -95.5 ℃이며, 화학구조는 하기 화학식 1과 같다.

[화학식 1]

상기 화학식 1의 L-리모넨은 상업적으로 구입하여 사용하거나, 또는 당업계에 공지된 화학적 합성법으로 제조한 것을 사용할 수 있으나, 이에 특별히 제한되지 않는다. 예컨대, 일 예시로서 리모넨을 함유하고 있는 것으로 알려진 에센셜 오일, 구체적으로는 페퍼민트 오일이나 스위트 오렌지 등에서 분리 및 정제하여 사용 가능하며, 페퍼민트 외 상기 화합물이 포함되어 있다고 공지된 에센셜 오일이나 그 외 다른 추출물에서 추출하여서도 사용 가능하다.

상기 L-리모넨은 당질코르티코이드 수용체 아고니스트에 의한 부작용 유발을 억제할 수 있는 함량이면 특별히 제한되지 않으나, 구체적으로는 화학식 1의 화합물을 전체 조성물 중량에 대하여 0.0001 중량% 내지 10 중량%, 보다 구체적으로는 0.0001 중량% 내지 1 중량%로 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물이 상기 화학식 1의 화합물을 0.0001 중량% 미만으로 포함할 경우에는 충분한 효과를 기대할 수 없고, 10 중량%를 초과하여 포함할 경우에는 알러지 등 원치 않는 반응이 발생하거나 안전성에 문제가 있을 수 있으므로 이를 방지하기 위한 것이다.

본 발명에서, 용어 “이의 허용되는 염”은 L-리모넨의 염으로서 L-리모넨으로부터 화학적으로 제조될 수 있는 염 형태를 제한 없이 포함할 수 있다.

본 발명에서, 용어 “에센셜 오일(essential oil)”은 식물의 꽃, 꽃봉오리, 잎, 줄기 등에서 수득한 향기가 강한 휘발성 기름으로, 천연 에센스라고도 불린다. 식물의 표면이나 조직 내의 특수한 세포에서 만들어지며, 외부 환경으로부터 자신을 방어하고, 번식과 생존을 위해 스스로 만들어 내는 생화학적 성분의 식물 에센스이다. "?향?* 약용식물의 꽃, 줄기, 열매, 뿌리, 수지 등에서 추출되며, 식물의 특성에 따라 냉압착법, 수증기 증류법, 용매추출법, 초임계 이산화탄소추출법 등으로 에센셜 오일을 추출할 수 있다. 식물 특유의 향을 가진 순수한 천연 식물성 오일로 지용성 액체이지만 끈적임이 없고 가벼우며 대부분 무색이거나 옅은 노란색을 띤다고 보고된다.

에센셜 오일은 페퍼민트, 스위트 오렌지 등을 포함하며 시트러스계 에센셜 오일에 특히 리모넨 성분이 과량 포함되어 있는 것으로 알려져 있다. 스위트 오렌지의 학명은 시트러스 멕시마 X 레티큘라타 (Citrus maxima x reticulate)로, 열대 및 아열대 지역에서 널리 재배되는 것으로 알려져 있다.

그 중 “페퍼민트”는 쌍떡잎 식물 통화식물목 꿀풀과의 여러해살이 풀로, 학명은 멘타 피페리타(Mentha piperita)이고, 유럽, 미국, 일본 등에서 자생하는 식물이다.

페퍼민트 오일은 피부와 점막을 시원하게 해주고, 항균과 통증 완화에 효과적이어서 고대 이집트에서는 식용과 약용 및 방향제로, 고대 그리스에서는 향수의 중요한 성분으로, 그리스와 로마에서는 향수 외에도 원기 강화제와 목욕 첨가제로 사용되었다. 그 외, 정신적 피로와 우울증, 신경성 발작 등에 효과가 있고, 더울 때에는 차갑게 해주고 추울 때에는 따뜻하게 해주는 성분이 점액의 유출을 막아주고 해열과 발한을 도우며, 감기·천식·기관지염·콜레라·폐렴·폐결핵·식중독·신경통 등에 효과가 있다고 보고된다.

상기 L-리모넨은 에센셜 오일 성분으로서, 선택적 당질코르티코이드 수용체 아고니스트일 수 있다.

본 발명에서 용어, “선택적 당질코르티코이드 수용체 아고니스트(selective GR agonist (SEGRA))”는 부신피질에서 나오는 스테로이드 호르몬 중 하나인 당질코르티코이드와 상호작용하는 당질코르티코이드 수용체(GR)의 이펙터 중 하나로서, 상기 GR 이펙터는 생체 내 당질코르티코이드-매개 전사 활성 (trans-activation) 또는 전사 억제 (trans-repression)를 통해 유전자 발현을 조절하여 생체 내에서 스트레스 반응, 면역체계 및 대사 조절에 관여하는 인자이다. 상기 선택적 당질코르티코이드 수용체 아고니스트는 당질코르티코이드가 가지고 있는 Nuclear factor-kappa B(NF-κB) 매개 간접적 전사 억제만을 선택적으로 활성화하고 당질 GR-매개 직접적 전사 활성화는 매개하지 않음으로써, 전사 억제에 따른 항염증 효과는 유지하고 전사 활성화에 의한 근위축등의 부작용은 일으키지 않는다.

본 발명에서 용어, “부작용”은 당질코르티코이드 수용체 아고니스트에 의해 유발되는 부작용으로서, 종래 이용되는 당질코르티코이드 수용체 아고니스트가 직접적으로 전사 활성화를 하여 유발되는 부작용을 의미한다. 보다 구체적으로는 골다공증, 근육 약화, 근위축증, 당뇨병, 성장 부진, 쿠싱 증후군, 에디슨 병 또는 이들의 조합인 것일 수 있으나 이에 제한되지 않으며, 당질코르티코이드 수용체 아고니스트에 의한 전사 활성화에 의하여 발생하는 부작용이라면 모두 제한 없이 포함될 수 있다.

상기 조성물은 당질코르티코이드 수용체 아고니스트에 의한 전사 활성화에 의하여 발생하는 부작용 유발 억제 또는 경감시키기 위한 것이라면 다양한 용도로서 제한 없이 사용될 수 있으며, 구체적으로는 화장료 조성물, 향초 조성물, 피부 외용제 또는 아로마테라피 조성물 등으로 사용될 수 있다.

본 발명의 구체적인 일 구현예에서는, 에센셜 오일 중 페퍼민트 오일 성분인 L-리모넨은 GR과 특이적으로 결합함을 보였다 (도 4). 코티솔이 GR-매개 직접적 전사 활성화 효과가 있는데 반해서 L-리모넨은 이러한 효과를 보이지 않는 것을 확인하고, 또한 L-리모넨은 코티솔에 의한 활성화를 효과적으로 억제하는 것을 확인했다. GR-매개 직접적 전사 활성화는 근생성을 억제하는 부작용을 일으키므로 L-리모넨은 이러한 부작용을 피할 수 있는 GR 효과인자(effector)로 작용할 수 있다. 코티솔은 NF-kB 매개 간접적 전사 활성화를 억제하는 효과에 의해서 항염증 효과를 나타내는데, L-리모넨은 NF-kB 매개 간접적 전사 활성화를 억제하는 효과가 있음을 확인하였다. 이는, L-리모넨이 선택적 당질코르티코이드 수용체 아고니스트로서, GR-매개 전사 활성을 억제하고, NF-kB 시그널링 경로를 억제함으로써 근생성을 억제하지 않으면서 항염 활성을 가지는 것을 시사한다 (실시예 2 내지 4).

또한, 본 발명의 다른 구체적인 일 구현예에서는, L-리모넨이 기존에 실제 약제로 사용되고 있는 GR 아고티스트 덱사메타손이 가지는 대표적인 부작용인 근위축증을 일으키지 않음을 확인함으로써, 새로운 SEGRA로써의 L-리모넨의 추가적인 활용방안을 확인하였다(실시예 4).

본 발명의 다른 하나의 양태는 L-리모넨 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 당질코르티코이드 수용체 아고니스트에 의한 부작용 유발 억제 또는 경감용 조성물을 제공한다.

상기 용어, "L-리모넨", "이의 약학적으로 허용되는 염", "당질코르티코이드 수용체 아고니스트" 및 "부작용"는 상기에서 설명한 바와 같다.

본 발명의 또 다른 하나의 양태는 L-리모넨을 유효성분으로 포함하는 당질코르티코이드 수용체-매개 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물로서, 상기 조성물은 당질코르티코이드 수용체 아고니스트에 의한 부작용을 유발하지 않는 것이 특징인, 약학 조성물을 제공한다.

또한, 또 다른 하나의 양태는 L-리모넨을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 당질코르티코이드 수용체-매개 관련 질환의 예방 또는 치료방법으로서, 상기 L-리모넨은 당질코르티코이드 수용체 아고니스트에 의한 부작용을 유발하지 않는 것이 특징인, 치료방법을 제공한다.

상기 용어, "L-리모넨", "이의 약학적으로 허용되는 염", "당질코르티코이드 수용체 아고니스트" 및 "부작용"는 상기에서 설명한 바와 같다.

본 발명에서, 용어 "당질코르티코이드 수용체-매개 관련 질환”은 당질코르티코이드 수용체와 관련된 질환을 의미하는 것으로서, 구체적으로는 염증 질환일 수 있으나, 이에 제한된 것은 아니다.

본 발명에서, 용어 "염증 질환"은 염증유발인자 또는 방사선조사 등 유해한 자극으로 인해 인체 면역체계를 과도하게 항진시켜 대식 세포와 같은 면역세포에서 분비되는 TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL1(interleukin-1), IL-6, 프로스타글란딘(prostagladin), 루코트리엔(luecotriene) 또는 산화질소(nitric oxide, NO)와 같은 염증유발물질(염증성 사이토카인)에 의해 유발되는 질환을 의미한다.

본 발명에 있어서, 상기 염증 질환은 특별히 이에 제한되지 않으나, 일 예 로서, 알레르기성 염증질환, 염증성 피부질환, 염증성 안구질환, 염증성 골관절질 환, 염증성 근육질환, 염증성 장질환 등이 될 수 있고, 다른 예로서, 알레르기 비 염, 맥관부종, 알러지성 결막염 등의 알레르기성 염증질환; 아토피피부염, 건선, 접촉성피부염, 습진성 피부염, 광선피부염, 지루피부염, 포진성피부염, 편평태선, 경화태선, 괴저성 농피증, 천포창, 수포성 표피박리증 등의 염증성 피부질환; 안검 염, 퇴행성 또는 염증성 안구염 등의 염증성 안구질환; 관절염, 류마티스관절염, 척추염 등의 염증성 골관절질환; 전신성 경화증, 피부근염, 다발성근염, 염증성 근 병변 등의 염증성 근육질환; 궤양성 대장염, 크론병 등의 염증성 장질환이 될 수 있다.

본 발명에서, 용어 “예방”은 본 발명에 따른 약학 조성물의 투여에 의해 염증질환의 발병을 억제시키거나 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에서, 용어 "치료"는 상기 약학 조성물의 투여에 의해 염증질환의 의심 및 발병 개체의 증상이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.

상기 약학적 조성물에 포함되는 L-리모넨은 특별히 이에 제한되지 않으나, 화학식 1의 화합물을 전체 조성물 중량에 대하여 0.0001 중량% 내지 10 중량%, 보다 구체적으로는 0.0001 중량% 내지 1 중량%로 포함할 수 있다.

또한, 상기 약학 조성물은 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있고, 상기 담체는 비자연적 담체(non-naturally occuring carrier)를 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

또한, 상기 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 경피흡수제, 겔제, 로션제, 연고제, 크림제, 첩부제, 카타플라스마제, 페이스트제, 스프레이, 피부 유화액, 피부 현탁액, 경피 전달성 패치, 약물 함유 붕대 또는 좌제의 형태로 제형화하여 사용할 수 있다. 구체적으로, 제형화할 경우 통상 사용하는 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제로는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제 등도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 첨가하여 조제될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제를 포함한다. 비수성 용제 및 현탁제로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 오일, 에틸올레이트와 같은 주사가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명에서, 용어 "개체"는 본 발명의 염증질환을 보유하거나 또는 발병한, 인간을 포함한 모든 동물을 의미할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물을 개체에 투여함으로 염증질환의 예방 및 치료 효과를 얻을 수 있다.

상기 본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다.

본 발명에서, 용어 "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 대상에게 본 발명의 약학 조성물을 도입하는 것을 말하며, 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다.

상기 약학 조성물은 목적 또는 필요에 따라 당업계에서 사용되는 통상적인 방법, 투여 경로, 투여량에 따라 적절하게 개체에 투여될 수 있다. 투여 경로의 예로는 경구, 비경구, 피하, 복강 내, 폐 내, 및 비강 내로 투여될 수 있으며, 비경구 주입에는 근육 내, 정맥 내, 동맥 내, 복강 내 또는 피하투여가 포함된다. 또한 당업계에 공지된 방법에 따라 적절한 투여량 및 투여 횟수가 선택될 수 있으며, 실제로 투여되는 본 발명의 약학 조성물의 양 및 투여 횟수는 치료하고자 하는 증상의 종류, 투여 경로, 성별, 건강 상태, 식이, 개체의 연령 및 체중, 및 질환의 중증도와 같은 다양한 인자에 의해 적절하게 결정될 수 있다.

본 발명에서, 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 용도에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 혈관 투과성 증가를 억제 또는 완화하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 예를 들면, 상기 L-리모넨을 포함하는 조성물은 1일 0.01 내지 500 mg/kg으로, 구체적으로 10 내지 100 mg/kg의 용량으로 투여할 수 있으며, 상기 투여는 하루에 한 번 또는 수회 나누어 투여할 수도 있다

본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 "다른 치료제와 병용"은 본 발명의 조성물을 다른 치료제와 병용하였을 때 염증질환을 정상화하는 효과가 일어나는 것이라면 특별히 제한되는 것은 아니나, 본 발명의 조성물 외에 염증질환에 대한 예방 또는 치료 효과를 갖는 물질을 추가로 포함하는 것을 의미할 수 있다.

본 발명의 조성물은 염증질환의 예방 또는 치료를 위하여 단독으로 사용할 수 있고, 수술, 호르몬 치료, 약물 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

본 발명의 또 다른 하나의 양태는 L-리모넨을 유효성분으로 포함하는, 염증질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

용어, "L-리모넨", "당질코르티코이드", "염증질환" 및 "예방"은 상기에서 설명한 바와 같다.

본 발명에서, 용어 "개선"은 본 발명의 조성물의 섭취에 의해 염증질환과 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미한다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물을 건강기능식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 L-리모넨을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상의 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있으며, 본 발명의 조성물은 안정성 면에서 문제가 없기 때문에 혼합량에 큰 제한은 없다.

본 발명의 식품 조성물은 일상적으로 섭취하는 것이 가능하기 때문에 염증질환의 예방, 치료, 또는 개선 효과를 기대할 수 있으므로, 건강 증진 목적으로 매우 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명의 용어 "식품"이란, 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료, 비타민 복합체, 건강기능식품 및 건강식품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함한다.

상기 용어, "건강기능식품"은 특정보건용 식품(food for special health use, FoSHU)과 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미한다. 여기서 '기능'이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 당 업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조 가능하며, 상기 제조시에는 당 업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 상기 건강기능식품의 제형 또한 식품으로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다. 본 발명의 식품 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 식품을 통해 섭취함으로써 합성의약품의 반복 처치에 의해 발생할 수 있는 기존의 부작용을 피할 수 있는 것이 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나므로, 본 발명의 건강기능식품은 염증질환의 개선 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.

상기 건강기능식품은 일반식품에 비해 적극적인 건강유지나 증진효과를 가지는 식품을 의미하고, 건강보조식품(health supplement food)은 건강보조 목적의 식품을 의미한다. 경우에 따라, 건강기능식품, 건강식품, 건강보조식품의 용어는 혼용된다.

구체적으로, 상기 건강기능식품은 본 발명의 조성물을 음료, 차류, 향신료, 껌, 과자류 등의 식품 소재에 첨가하거나, 캡슐화, 분말화, 현탁액 등으로 제조한 식품으로, 이를 섭취할 경우 건강상 특정한 효과를 가져오는 것을 의미하나 일반 약품과는 달리 식품을 통해 섭취함으로써 합성의약품의 반복 처치에 의해 발생할 수 있는 기존의 부작용을 피할 수 있는 것이 장점이다.

상기 식품 조성물은 생리학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있는데, 담체의 종류는 특별히 제한되지 않으며 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 담체라면 어느 것이든 사용할 수 있다.

또한, 상기 식품 조성물은 식품 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가 성분을 포함할 수 있다. 예들 들어, 비타민 A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, 니아신(niacin), 비오틴(biotin), 폴레이트(folate), 판토텐 산(panthotenic acid) 등을 포함할 수 있다. 또한, 아연(Zn), 철(Fe), 칼슘(Ca), 크롬(Cr), 마그네슘(Mg), 망간(Mn), 구리(Cu) 등의 미네랄; 및 라이신, 트립토판, 시스테인, 발린 등의 아미노산을 포함할 수 있다.

또한, 상기 식품 조성물은 방부제(소르빈산 칼륨, 벤조산나트륨, 살리실산, 데히드로초산나트륨 등), 살균제(표백분과 고도 표백분, 차아염소산나트륨 등), 산화방지제(부틸히드록시아니졸(BHA), 부틸히드록시톨류엔(BHT) 등), 착색제(타르색소 등), 발색제(아질산 나트륨, 아초산 나트륨 등), 표백제(아황산나트륨), 조미료(MSG 글루타민산나트륨 등), 감미료(둘신, 사이클레메이트, 사카린, 나트륨 등), 향료(바닐린, 락톤류 등), 팽창제(명반, D-주석산수소칼륨 등), 강화제, 유화제, 증점제(호료), 피막제, 검기초제, 거품억제제, 용제, 개량제 등의 식품 첨가물(food additives)을 포함할 수 있다. 상기 첨가물은 식품의 종류에 따라 선별되고 적절한 양으로 사용될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물의 일 예로 건강음료 조성물로 사용될 수 있으며, 이 경우 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드; 말토스, 수크로스와 같은 디사카라이드; 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드; 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당 알콜일 수 있다. 감미제는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제; 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강음료 조성물 100 ml 당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 구체적으로 약 0.02 ~ 0.03 g이 될 수 있다.

상기 외에 건강음료 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산, 펙트산의 염, 알긴산, 알긴산의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 또는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 천연 과일주스, 과일주스 음료, 또는 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다.

이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강음료 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명의 또 다른 하나의 양태는 L-리모넨 또는 이의 식품학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는, 염증질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공한다.

용어, "L-리모넨", "당질코르티코이드", “염증질환” 및 “예방”은 상기에서 설명한 바와 같다.

본 발명에서, 용어 "사료"는 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미한다.

상기 사료의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 사료를 사용할 수 있다. 상기 사료의 비제한적인 예로는, 곡물류, 근과류, 식품 가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박 류 또는 곡물 부산물류 등과 같은 식물성 사료; 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물 성류, 유지류, 단세포 단백질류, 동물성 플랑크톤류 또는 음식물 등과 같은 동물성 사료를 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.

본 발명의 사료 조성물에 포함되는 본 발명의 L-리모넨은 사료의 사용목적 및 사용조건에 따라 달라질 수 있으며, 일 예로 가축 사료 조성물의 총 중량에 대하여 0.01 내지 100 중량%, 보다 구체적으로는 1 내지 80 중량%로 포함될 수 있다.

종합하면, 본 발명은 에센셜 오일 중 페퍼민트 오일 성분인 L-리모넨은 GR과 특이적으로 결합함을 보였다 (도 4). 코티솔이 GR-매개 직접적 전사 활성화 효과가 있는데 반해서 L-리모넨은 이러한 효과를 보이지 않는 것과, 또한 L-리모넨은 당질코르티코이드인 코티솔에 의한 활성화를 효과적으로 억제하는 것을 확인하였다. GR-매개 직접적 전사 활성화는 근생성을 억제하는 부작용을 일으키므로 L-리모넨은 이러한 부작용을 피할 수 있는 GR 효과인자(effector)로 작용할 수 있다. 코티솔은 NF-kB 매개 간접적 전사 활성화를 억제하는 효과에 의해서 항염증 효과를 나타내는데, L-리모넨은 NF-kB 매개 간접적 전사 활성화를 억제하는 효과가 있음을 확인하였다. 이에, L-리모넨을 당질코르티코이드, 구체적으로는 코티솔의 비정상적인 분비에 따른 다양한 질환에 예방, 개선 또는 치료하기 위한 약학 조성물, 식품 조성물 또는 사료 조성물의 유효성분으로 매우 유용하게 사용될 수 있음을 확인할 수 있다.

본 발명의 에센셜 오일 성분인 L-리모넨은 선택적 당질코르티코이드 수용체 아고니스트로서, 종래 당질코르티코이드 수용체 아고니스트에 의한 부작용 유발을 억제하고, 나아가 염증을 예방, 개선 또는 치료할 수 있다.

도 1은 코티솔 검출을 위한 유전적으로 암호화된 세포 기반 바이오센서에 관한 것이다.
도 2는 5가지 에센셜 오일을 바이오센서에 처리 후 형광 현미경으로 세포질과 핵의 형광 강도 프로파일을 분석한 결과이다.
도 3은 바이오센서에 에센셜 오일 중 페퍼민트 유래 성분을 처리한 후 세포질과 핵의 형광 강도 프로파일을 분석한 결과이다.
도 4는 형광 편광법을 사용한 체외 경쟁적 GR 결합 분석에 관한 것이다.
도 5는 리포터 유전자 평가로 GR 이펙터에 의한 GR-매개 전사 활성화를 확인한 결과이다.
도 6은 리포터 유전자 평가로 GR 이펙터에 의한 NF-κB 매개 전사 억제를 확인한 결과이다.
도 7은 에센셜 오일 성분인 L-리모넨이 GR 아고니스트 덱사메타손에 의해 매개되는 부작용으로 알려진 근위축증에 미치는 영향을 확인한 결과이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실험예: 코티솔 검출을 위한 유전적으로 암호화된 세포 기반 바이오센서 구축

코티솔 검출을 위한 유전적으로 암호화된 세포 기반 바이오센서를 먼저 구축하였다. 이러한 세포 기반 바이오센서 구축을 위한 접근방식의 핵심은 코티솔과 결합한 GR의 핵 이동을 통하여 인테인(intein)에 의한 조건부 단백질 스플라이싱(conditional protein splicing, CPS)을 유발하도록 하며, 그 결과로 재구성된 신호 펩타이드 결합 형광단백질이 구성되어 형광단백질의 위치 이동을 통해 코티솔 또는 유사 기능을 하는 타겟을 검출 할 수 있는 것이다.

구체적으로, 융합단백질 1과 2 (mCherry-mNES_N-I_N-NLS 및 GR-I_C-mNES_C)를 암호화하는 두 유전적 구조가 센서 세포를 생성하도록 디자인하였다 (도 1). 먼저, 빠르고 효율적인 단백질 트랜스-스플라이싱(protein trans-splicing, PTS) 반응을 위해, Nostoc punctiforme (Npu) DnaE split-inteins I_N 및 I_C를 각 융합 단백질에 도입하였다. 이후, 인간 사스-코로나 바이러스 ORF-9b 단백질 유래 modified NES (mNES) 서열 (KVYPIILRLCFNLSL)을 위치 9에서 분할하고, 각 단편을 각각 융합단백질 1, 2의 N-extein 및 C-extein으로 사용하였다 (도 1).

이후, 광학 리포터로서 적색 형광 mCherry 단백질을 단백질 1 N-extein의 N-말단에 부착하였다. mCherry-포함 단백질 1은 C-말단 핵 위치 신호(C-terminal nuclear localization signal, NLS)를 사용하여 핵에 존재하는 반면, GR-포함 단백질 2는 Npu DnaE intein의 자발적인 PTS를 차단하기 위하여 세포질에 위치한다. 코티솔 결합 시 GR 포함 단백질 2가 핵으로 전위 되며, PTS에 의한 NES의 재구성이 유도된다. 그 결과 재구성된 mNES에 의해 형광전달체가 세포질로 이동할 수 있게 된다.

또한, 각 융합 단백질의 변이체를 준비하였다. 단백질 1(단백질 m1)의 스플라이싱 비활성 돌연변이를 I_N에서 C1A 돌연변이를 도입하여 준비하고, 분할-신호 펩타이드의 활성에서 PTS 매개 공유결합의 필요성을 모니터링하는데 사용하였다. 단백질 2의 변이체(단백질 3)에서 도입된 Flag-tag는 웨스턴 블롯을 통하여 준비하였다.

여기에서 사용된 플라스미드 구조는 하기와 같다.

mCherry (pJHJ066): pJHJ066 플라스미드를 제조하기 위하여, PCR로 증폭된 mCherry 유전자를 EcoRI와 ApaI 위치 사이의 pBI-CMV1에 삽입하였다.

rNES-mCherry (pRJH006): 인간 사스코로나바이러스 ORF-9b 단백질 유래 rNES (KVYPIILRLCFNLSL)를 코딩하는 DNA 서열을 ApaI 및 XbaI 위치 사이에 mCherry 유전자를 포함하는 pJHJ066 벡터에 도입하였다.

mCherry-rNES_N-Npu_N-NLS (pRJH014): pRJH007의 제조를 위해 pJHJ066로부터 증폭된 상기 mCherry 유전자를 NotI 및 SalI 위치 사이 pIRES 벡터에 도입하였다. pRJH009의 제조를 위해 합성된 rNES_N-Npu_N-NLS 유전자를 SacII 및 XbaI 위치 사이 pRJH007에 도입하였다. 마지막으로, pRJH014의 제조를 위해 mCherry-rNES_N-Npu_N-NLS 서열을 pRJH009로부터 증폭 후 EcoRI 및 XbaI 위치 사이 pBI-CMV1로 도입하였다.

mCherry-rNES_N-Npu_N-NLS 및 GR-Npu_C-rNES_C (pRJH013): pRJH014을 이용하여 PCR 증폭된 GR을 코딩하는 유전자를 pRJH008 제조를 위해 NheI 및 XhoI 위치 사이 pRJH014 벡터로 도입하였다. pRJH010의 제조를 위해 합성된 Npu_C-rNES_C 유전자를 XhoI 및 MluI 위치 사이 pRJH008로 도입하였다. 마지막으로, pRJH013 제조를 위해 cDNA를 코딩하는 GR-Npu_C-rNES_C를 pRJH010로부터 증폭 후 NheI 및 EagI 위치 사이 pRJH014로 도입하였다.

mCherry-rNES_N-Npu_N-NLS 및 GR-Npu_C-rNES_C-flag-flag (pRJH022): pRJH019의 제조를 위해 상기 PCR 증폭된 서열 (템플릿: pRJH013)을 코딩하는 GR-Npu_C-rNES_C를 NdeI 및 NheI 위치 사이 pET28a 벡터로 도입하였다. pRJH020의 제조를 위해 상기 합성된 flag-flag 서열을 코딩하는 DNA 올리고머를 pRJH019의 NheI 및 NotI 사이로 도입하였다. 마지막으로, pRJH022의 제조를 위해 프라이머 세트 6 (템플릿: pRJH020)을 이용하여 GR-Npu_C-NES_C-flag-flag 유전자를 증폭 후 BamHI 및 MluI 위치를 이용하여 pRJH014로 도입되었다.

mCherry-NES_N-mNpu_N-NLS 및 GR-Npu_C-NESC (pRJH025): pRJH025의 제조를 위해 상기 NpuN의 C1A 점 돌연변이를 QuikChange Site-Directed Mutagenesis kit (Agilent, Santa Clara, CA)를 이용하여 PCR로 pRJH013에 도입하였다. 상기 돌열변이 생성 올리고머는 5'-CGATTATTCTGCGTCTGGCCTTGAGCTACGAAACGG-3' 및 5'-CCGTTTCGTAGCTCAAGGCCAGACGCAGAATAATCG-3'이다.

mCherry-NES_N-mNpu_N-NLS 및 GR-Npu_C-NES_C-flag-flag (pRJH026): pRJH026의 제조를 위해 상기 NpuN의 C1A 점 돌연변이를 QuikChange Site-Directed Mutagenesis kit (Agilent, Santa Clara, CA)를 이용하여 PCR로 pRJH013에 도입하였다. 이 때 사용된 올리고머는 상기 pRJH025의 제조에서 사용된 올리고머와 같다.

상기 과정은 표준 프로토콜에 따라 DNA 클로닝을 수행하였으며, 모든 플라스미드 서열은 DNA 시퀀싱으로 확인하고 대장균 DH5α를 이용하여 증폭하였다.

실시예 1: 세포기반 센서를 이용한 에센셜 오일 추출물의 GR 이펙터의 스크리닝 평가

상기 센서 세포는 생물학적 기능에 기반하여, 복잡한 시약에서 미지의 분석물을 스크리닝할 수 있는 능력을 가지므로, 이를 토대로 에센셜 오일에서 코티솔의 천연 모방체를 확인하기 위한 스크리닝을 수행하였다.

스트레스 해소 요법에 에센셜 오일이 종종 사용되어 왔기 때문에, GR 이펙터 스크리닝을 위해 에센셜 오일을 이용하여 확인하였다. 구체적인 에센셜 오일로 유칼립투스(Eucalyptus), 라벤더(Lavender), 당귤나무(Sweet orange), 니아울리(Niaouli), 및 페퍼민트(Peppermint)에서 추출한 5개의 일반적인 에센셜 오일을 선택하였다.

5가지 에센셜 오일을 DMSO에 용해시키고 상기 5개의 에센셜 오일 각각으로 최종 농도 1ug/ml을 센서 세포를 처리한 후, 형광 현미경을 이용하여 개별적으로 모니터링하고 세포질과 핵의 형광 강도 프로파일을 분석하였다(도 2).

그 결과, 도 2에서 확인할 수 있는 바와 같이, 결정된 형광신호 비는 각각 코티솔(Cortisol) 및 유칼립투스(Eucalyptus), 라벤더(Lavender), 당귤나무(Sweet orange), 니아울리(Niaouli), 페퍼민트(Peppermint) 오일 처리 센서 세포에서 각각 1.0, -0.01, -0.02, 0.09, 0.15, 0.38 인 것을 확인할 수 있었다.

특히, 테스트된 5개의 오일 중, 페퍼민트 오일 처리 세포에서 다른 오일 처리 세포 대비 강한 반응을 보이는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 페퍼민트 오일 유도 신호는 패시브 안타고니스트(passive antagonist)인 CPA와 함께 처리되었을 때 상당히 억제되었다. 이를 통해, 관찰된 신호는 페퍼민트 오일에서 존재하는 당질코르티코이드 유사 분자인 GR 이펙터의 특정한 결합에서 비롯된 것을 알 수 있다. 페퍼민트 오일 이외의 에센셜 오일 구성 성분에 GR 이펙터가 포함될 수 있으나, 복합적인 조성으로 인한 GR 이펙터의 효과 저해 및 비활성화가 유도된 것일 수 있다.

실시예 2: 세포기반 센서를 이용한 에센셜 오일 중 페퍼민트 구성 성분의 GR 이펙터의 스크리닝 평가

GR 이펙터(effector)의 스크리닝을 위해, 센서 세포에 페퍼민트 유래 화합물인 L-리모넨, D-리모넨, L-멘톤 및 -테르피넨 4 개의 주요 성분을 DMSO에 용해시키고 최종 농도 10uM로 개별적으로 처리 후, 형광 이동은 분자 90분동안 자극 후 모니터링하고 세포질과 핵의 형광 강도 프로파일을 분석하였다(도 3).

그 결과, 도 3에서 확인할 수 있는 바와 같이, 센서 세포가 D-리모넨, L-멘톤과 γ-테르피넨에 반응하지 않는 것과 달리, L-리모넨을 처리하였을 때는 반응하는 것을 확인할 수 있었다.

이로써, L-리모넨이 유도하는 신호는 CPA와 함께 처리할 때 현저하게 억제되어 이들 물질이 선택적으로 GR에 결합하고 활성화됨을 확인할 수 있었다(도 3의 C).

나아가, L-리모넨의 입체 이성질체인 D-리모넨이 처리된 센서 세포에서는 형광 신호의 이동이 일어나지 않은 것으로 볼 때, D-리모넨은 GR 이펙터로서 작용하지 않는 것을 알 수 있었다(도 3의 C). 실제로, 형광 편광법을 사용한 체외 경쟁적 GR 결합 분석을 확인한 결과, L-리모넨의 경우 GR에 대한 결합을 입증한 반면, 광학입체이성질체인 D-리모넨은 결합하지 않는 것을 확인할 수 있었다(도 4).

실시예 3: 리포터 유전자 평가를 이용한 GR 이펙터에 의한 GR-매개 전사 활성화 및 NF-κB 매개 전사 억제 평가

리포터 유전자 평가를 이용한 GR 이펙터에 의한 GR-매개 전사 활성화 및 NF-κB 매개 전사 억제를 확인하기 위하여 HeLa 세포를 페놀레드가 없는 5% FBS를 포함하는 DMEM에서 96 white plate (1x10⁴ cells/well)에 24시간동안 성장시키고, 프로메가(Madison, WI)의 pGL4.36 [luc2P/MMTV/hygro] 벡터에 형질도입하였다. 이후 상기 세포를 각각 코티솔 (1 uM), L-리모넨 (100 uM)에 24시간동안 처리하였다. 그런 다음 루시퍼라제 활성을 One-Glo Reporter Assay System kit from Promega (Madison, WI)로 확인 후, Cytation 5 (BioTek, Winooski, VT)를 사용하여 측정하였다.

발광으로 GR 매개 변환 테스트를 수행할 수 있는 리포터 유전자 분석을 수행한 결과, 도 5에서 확인할 수 있듯이, L-리모넨은 GR-매개 전사 활성화를 유도하지 않고, 코티솔 처리에 의해 유도된 GR-매개 전사 활성화를 유의적으로 억제하는 것을 확인할 수 있었다 (도 5).

또한, 도 6에서 확인할 수 있듯이, L-리모넨은 염증인자인 TNF-α 처리시 나타나는 NF-κB 매개 염증 유전자의 발현을 억제하는 것을 확인할 수 있었으며(도 6), 이는 L-리모넨이 NF-κB 시그널링의 다운레귤레이션(downregulation)을 통해 코티솔과 같이 NO 신테아제 및 사이클로옥시게나아제-2 유전자의 선택적인 유도를 하는 것을 나타내는 것이다.

종합하면, 이러한 결과는 L-리모넨이 GR 아고니스트가 아닌 액티브 안타고니스트이거나 또는 선택적 당질코르티코이드 수용체 아고니스트일 가능성을 시사하는 것이다.

실시예 4: L-리모넨이 종래 공지된 GR 아고니스트 덱사메타손에 의해 매개되는 부작용으로 알려진 근위축증에 미치는 영향 평가

마우스 근종인 C2C1₂ 세포를 이용하여 L-리모넨의 근육 위축 효과를 확인하였다.

구체적으로, C2CL₂ 세포를 분화 전에 35-mm dishes (1×10⁵)에서 성장시켰다. Dex, 코티솔, L-리모넨, D-리모넨 (100 μM)의 각각 존재 하에 FBS를 2% 감소시켜 상기 세포가 80% 컨플루언스에 도달하였을 때 분화를 유도하였다. 다른 그룹간의 형태학적 차이를 니콘 이클립스 Ts2 마이크로스코프(Nikon Eclipse Ts2 microscope /Tokyo, Japan)로 4일 차에 촬영하였다. 웨스턴 블롯팅은 산타 크루즈 바이오테크놀로지(Santa Cruz Biotechnology /Dallas, TX)의 항-MYC2(anti-MYC2) 항체를 사용하여 미오신 중사슬 II (MYC2)의 발현 정도를 확인하고 그 결과를 도 7에 나타내었다.

그 결과, 도 7에서 확인할 수 있는 바와 같이, L-리모넨이 GR 아고니스트에 의해 활성화되는 GR-매개 전사 활성화의 부작용으로 알려진 부작용을 일으키지 않는 것을 알 수 있었다. 구체적으로, 웨스턴 블롯 분석에서 L-리모넨을 처리 시 미오신 중사슬 II (MYC2)가 형성되는 것을 확인할 수 있었으며, GR 아고니스트인 코티솔 또는 덱사메타손은 MYC2 발현을 상당히 억제하는 것을 확인함으로써, L-리모넨이 GR 아고니스트가 아니며 GR-매개 전사 활성화에 의한 부작용을 일으키지 않는 것을 알 수 있었다.

종합하면, 상기 결과는 에센셜 오일 성분인 L-리모넨이 종래 약제로 사용되고 있는 GR 아고니스트 덱사메타손이 가지는 항염증 효과를 그대로 가지면서, 동시에 종래 공지된 덱사메타손이 가지는 부작용을 줄일 수 있는 GR 이펙터, 즉 선택적 GR 아고니스트로서의 효과를 가지는 것을 확인하여, 종래 GR 이펙터의 부작용을 줄이고, 염증을 예방, 개선 또는 치료할 수 있음을 시사한다.

이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

<110> Dongguk University Industry-Academic Cooperation Foundation <120> The novel function of L-limonene as a selective glucocorticoid receptor agonist <130> KPA210207-KR <160> 4 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 820 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> GR-NpuC-rNESC <400> 1 Met Asp Ser Lys Glu Ser Leu Thr Pro Gly Arg Glu Glu Asn Pro Ser 1 5 10 15 Ser Val Leu Ala Gln Glu Arg Gly Asp Val Met Asp Phe Tyr Lys Thr 20 25 30 Leu Arg Gly Gly Ala Thr Val Lys Val Ser Ala Ser Ser Pro Ser Leu 35 40 45 Ala Val Ala Ser Gln Ser Asp Ser Lys Gln Arg Arg Leu Leu Val Asp 50 55 60 Phe Pro Lys Gly Ser Val Ser Asn Ala Gln Gln Pro Asp Leu Ser Lys 65 70 75 80 Ala Val Ser Leu Ser Met Gly Leu Tyr Met Gly Glu Thr Glu Thr Lys 85 90 95 Val Met Gly Asn Asp Leu Gly Phe Pro Gln Gln Gly Gln Ile Ser Leu 100 105 110 Ser Ser Gly Glu Thr Asp Leu Lys Leu Leu Glu Glu Ser Ile Ala Asn 115 120 125 Leu Asn Arg Ser Thr Ser Val Pro Glu Asn Pro Lys Ser Ser Ala Ser 130 135 140 Thr Ala Val Ser Ala Ala Pro Thr Glu Lys Glu Phe Pro Lys Thr His 145 150 155 160 Ser Asp Val Ser Ser Glu Gln Gln His Leu Lys Gly Gln Thr Gly Thr 165 170 175 Asn Gly Gly Asn Val Lys Leu Tyr Thr Thr Asp Gln Ser Thr Phe Asp 180 185 190 Ile Leu Gln Asp Leu Glu Phe Ser Ser Gly Ser Pro Gly Lys Glu Thr 195 200 205 Asn Glu Ser Pro Trp Arg Ser Asp Leu Leu Ile Asp Glu Asn Cys Leu 210 215 220 Leu Ser Pro Leu Ala Gly Glu Asp Asp Ser Phe Leu Leu Glu Gly Asn 225 230 235 240 Ser Asn Glu Asp Cys Lys Pro Leu Ile Leu Pro Asp Thr Lys Pro Lys 245 250 255 Ile Lys Asp Asn Gly Asp Leu Val Leu Ser Ser Pro Ser Asn Val Thr 260 265 270 Leu Pro Gln Val Lys Thr Glu Lys Glu Asp Phe Ile Glu Leu Cys Thr 275 280 285 Pro Gly Val Ile Lys Gln Glu Lys Leu Gly Thr Val Tyr Cys Gln Ala 290 295 300 Ser Phe Pro Gly Ala Asn Ile Ile Gly Asn Lys Met Ser Ala Ile Ser 305 310 315 320 Val His Gly Val Ser Thr Ser Gly Gly Gln Met Tyr His Tyr Asp Met 325 330 335 Asn Thr Ala Ser Leu Ser Gln Gln Gln Asp Gln Lys Pro Ile Phe Asn 340 345 350 Val Ile Pro Pro Ile Pro Val Gly Ser Glu Asn Trp Asn Arg Cys Gln 355 360 365 Gly Ser Gly Asp Asp Asn Leu Thr Ser Leu Gly Thr Leu Asn Phe Pro 370 375 380 Gly Arg Thr Val Phe Ser Asn Gly Tyr Ser Ser Pro Ser Met Arg Pro 385 390 395 400 Asp Val Ser Ser Pro Pro Ser Ser Ser Ser Thr Ala Thr Thr Gly Pro 405 410 415 Pro Pro Lys Leu Cys Leu Val Cys Ser Asp Glu Ala Ser Gly Cys His 420 425 430 Tyr Gly Val Leu Thr Cys Gly Ser Cys Lys Val Phe Phe Lys Arg Ala 435 440 445 Val Glu Gly Gln His Asn Tyr Leu Cys Ala Gly Arg Asn Asp Cys Ile 450 455 460 Ile Asp Lys Ile Arg Arg Lys Asn Cys Pro Ala Cys Arg Tyr Arg Lys 465 470 475 480 Cys Leu Gln Ala Gly Met Asn Leu Glu Ala Arg Lys Thr Lys Lys Lys 485 490 495 Ile Lys Gly Ile Gln Gln Ala Thr Thr Gly Val Ser Gln Glu Thr Ser 500 505 510 Glu Asn Pro Gly Asn Lys Thr Ile Val Pro Ala Thr Leu Pro Gln Leu 515 520 525 Thr Pro Thr Leu Val Ser Leu Leu Glu Val Ile Glu Pro Glu Val Leu 530 535 540 Tyr Ala Gly Tyr Asp Ser Ser Val Pro Asp Ser Thr Trp Arg Ile Met 545 550 555 560 Thr Thr Leu Asn Met Leu Gly Gly Arg Gln Val Ile Ala Ala Val Lys 565 570 575 Trp Ala Lys Ala Ile Pro Gly Phe Arg Asn Leu His Leu Asp Asp Gln 580 585 590 Met Thr Leu Leu Gln Tyr Ser Trp Met Phe Leu Met Ala Phe Ala Leu 595 600 605 Gly Trp Arg Ser Tyr Arg Gln Ser Ser Ala Asn Leu Leu Cys Phe Ala 610 615 620 Pro Asp Leu Ile Ile Asn Glu Gln Arg Met Thr Leu Pro Cys Met Tyr 625 630 635 640 Asp Gln Cys Lys His Met Leu Tyr Val Ser Ser Glu Leu His Arg Leu 645 650 655 Gln Val Ser Tyr Glu Glu Tyr Leu Cys Met Lys Thr Leu Leu Leu Leu 660 665 670 Ser Ser Val Pro Lys Asp Gly Leu Lys Ser Gln Glu Leu Phe Asp Glu 675 680 685 Ile Arg Met Thr Tyr Ile Lys Glu Leu Gly Lys Ala Ile Val Lys Arg 690 695 700 Glu Gly Asn Ser Ser Gln Asn Trp Gln Arg Phe Tyr Gln Leu Thr Lys 705 710 715 720 Leu Leu Asp Ser Met His Glu Val Val Glu Asn Leu Leu Asn Tyr Cys 725 730 735 Phe Gln Thr Phe Leu Asp Lys Thr Met Ser Ile Glu Phe Pro Glu Met 740 745 750 Leu Ala Glu Ile Ile Thr Asn Gln Ile Pro Lys Tyr Ser Asn Gly Asn 755 760 765 Ile Lys Lys Leu Leu Phe His Gln Lys Leu Glu Ile Lys Ile Ala Thr 770 775 780 Arg Lys Tyr Leu Gly Lys Gln Asn Val Tyr Asp Ile Gly Val Glu Arg 785 790 795 800 Asp His Asn Phe Ala Leu Lys Asn Gly Phe Ile Ala Ser Asn Cys Phe 805 810 815 Asn Leu Ser Leu 820 <210> 2 <211> 388 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mCherry-rNESN-NpuN-NLS <400> 2 Met Val Ser Lys Gly Glu Glu Asp Asn Met Ala Ile Ile Lys Glu Phe 1 5 10 15 Met Arg Phe Lys Val His Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe 20 25 30 Glu Ile Glu Gly Glu Gly Glu Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Thr 35 40 45 Ala Lys Leu Lys Val Thr Lys Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ala Trp Asp 50 55 60 Ile Leu Ser Pro Gln Phe Met Tyr Gly Ser Lys Ala Tyr Val Lys His 65 70 75 80 Pro Ala Asp Ile Pro Asp Tyr Leu Lys Leu Ser Phe Pro Glu Gly Phe 85 90 95 Lys Trp Glu Arg Val Met Asn Phe Glu Asp Gly Gly Val Val Thr Val 100 105 110 Thr Gln Asp Ser Ser Leu Gln Asp Gly Glu Phe Ile Tyr Lys Val Lys 115 120 125 Leu Arg Gly Thr Asn Phe Pro Ser Asp Gly Pro Val Met Gln Lys Lys 130 135 140 Thr Met Gly Trp Glu Ala Ser Ser Glu Arg Met Tyr Pro Glu Asp Gly 145 150 155 160 Ala Leu Lys Gly Glu Ile Lys Gln Arg Leu Lys Leu Lys Asp Gly Gly 165 170 175 His Tyr Asp Ala Glu Val Lys Thr Thr Tyr Lys Ala Lys Lys Pro Val 180 185 190 Gln Leu Pro Gly Ala Tyr Asn Val Asn Ile Lys Leu Asp Ile Thr Ser 195 200 205 His Asn Glu Asp Tyr Thr Ile Val Glu Gln His Glu Arg Ala Glu Gly 210 215 220 Arg His Ser Thr Gly Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys Pro Arg Lys Val 225 230 235 240 Tyr Pro Ile Ile Leu Arg Leu Cys Leu Ser Tyr Glu Thr Glu Ile Leu 245 250 255 Thr Val Glu Tyr Gly Leu Leu Pro Ile Gly Lys Ile Val Glu Lys Arg 260 265 270 Ile Glu Cys Thr Val Tyr Ser Val Asp Asn Asn Gly Asn Ile Tyr Thr 275 280 285 Gln Pro Val Ala Gln Trp His Asp Arg Gly Glu Gln Glu Val Phe Glu 290 295 300 Tyr Cys Leu Glu Asp Gly Ser Leu Ile Arg Ala Thr Lys Asp His Lys 305 310 315 320 Phe Met Thr Val Asp Gly Gln Met Leu Pro Ile Asp Glu Ile Phe Glu 325 330 335 Arg Glu Leu Asp Leu Met Arg Val Asp Asn Leu Pro Asn Ile Lys Ile 340 345 350 Ala Thr Arg Lys Tyr Leu Gly Lys Gln Asn Val Tyr Asp Ile Gly Val 355 360 365 Glu Arg Lys Arg Pro Ala Ala Thr Lys Lys Ala Gly Gln Ala Lys Lys 370 375 380 Lys Lys Leu Asp 385 <210> 3 <211> 838 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> GR-NpuC-rNESC-2xFlag <400> 3 Met Asp Ser Lys Glu Ser Leu Thr Pro Gly Arg Glu Glu Asn Pro Ser 1 5 10 15 Ser Val Leu Ala Gln Glu Arg Gly Asp Val Met Asp Phe Tyr Lys Thr 20 25 30 Leu Arg Gly Gly Ala Thr Val Lys Val Ser Ala Ser Ser Pro Ser Leu 35 40 45 Ala Val Ala Ser Gln Ser Asp Ser Lys Gln Arg Arg Leu Leu Val Asp 50 55 60 Phe Pro Lys Gly Ser Val Ser Asn Ala Gln Gln Pro Asp Leu Ser Lys 65 70 75 80 Ala Val Ser Leu Ser Met Gly Leu Tyr Met Gly Glu Thr Glu Thr Lys 85 90 95 Val Met Gly Asn Asp Leu Gly Phe Pro Gln Gln Gly Gln Ile Ser Leu 100 105 110 Ser Ser Gly Glu Thr Asp Leu Lys Leu Leu Glu Glu Ser Ile Ala Asn 115 120 125 Leu Asn Arg Ser Thr Ser Val Pro Glu Asn Pro Lys Ser Ser Ala Ser 130 135 140 Thr Ala Val Ser Ala Ala Pro Thr Glu Lys Glu Phe Pro Lys Thr His 145 150 155 160 Ser Asp Val Ser Ser Glu Gln Gln His Leu Lys Gly Gln Thr Gly Thr 165 170 175 Asn Gly Gly Asn Val Lys Leu Tyr Thr Thr Asp Gln Ser Thr Phe Asp 180 185 190 Ile Leu Gln Asp Leu Glu Phe Ser Ser Gly Ser Pro Gly Lys Glu Thr 195 200 205 Asn Glu Ser Pro Trp Arg Ser Asp Leu Leu Ile Asp Glu Asn Cys Leu 210 215 220 Leu Ser Pro Leu Ala Gly Glu Asp Asp Ser Phe Leu Leu Glu Gly Asn 225 230 235 240 Ser Asn Glu Asp Cys Lys Pro Leu Ile Leu Pro Asp Thr Lys Pro Lys 245 250 255 Ile Lys Asp Asn Gly Asp Leu Val Leu Ser Ser Pro Ser Asn Val Thr 260 265 270 Leu Pro Gln Val Lys Thr Glu Lys Glu Asp Phe Ile Glu Leu Cys Thr 275 280 285 Pro Gly Val Ile Lys Gln Glu Lys Leu Gly Thr Val Tyr Cys Gln Ala 290 295 300 Ser Phe Pro Gly Ala Asn Ile Ile Gly Asn Lys Met Ser Ala Ile Ser 305 310 315 320 Val His Gly Val Ser Thr Ser Gly Gly Gln Met Tyr His Tyr Asp Met 325 330 335 Asn Thr Ala Ser Leu Ser Gln Gln Gln Asp Gln Lys Pro Ile Phe Asn 340 345 350 Val Ile Pro Pro Ile Pro Val Gly Ser Glu Asn Trp Asn Arg Cys Gln 355 360 365 Gly Ser Gly Asp Asp Asn Leu Thr Ser Leu Gly Thr Leu Asn Phe Pro 370 375 380 Gly Arg Thr Val Phe Ser Asn Gly Tyr Ser Ser Pro Ser Met Arg Pro 385 390 395 400 Asp Val Ser Ser Pro Pro Ser Ser Ser Ser Thr Ala Thr Thr Gly Pro 405 410 415 Pro Pro Lys Leu Cys Leu Val Cys Ser Asp Glu Ala Ser Gly Cys His 420 425 430 Tyr Gly Val Leu Thr Cys Gly Ser Cys Lys Val Phe Phe Lys Arg Ala 435 440 445 Val Glu Gly Gln His Asn Tyr Leu Cys Ala Gly Arg Asn Asp Cys Ile 450 455 460 Ile Asp Lys Ile Arg Arg Lys Asn Cys Pro Ala Cys Arg Tyr Arg Lys 465 470 475 480 Cys Leu Gln Ala Gly Met Asn Leu Glu Ala Arg Lys Thr Lys Lys Lys 485 490 495 Ile Lys Gly Ile Gln Gln Ala Thr Thr Gly Val Ser Gln Glu Thr Ser 500 505 510 Glu Asn Pro Gly Asn Lys Thr Ile Val Pro Ala Thr Leu Pro Gln Leu 515 520 525 Thr Pro Thr Leu Val Ser Leu Leu Glu Val Ile Glu Pro Glu Val Leu 530 535 540 Tyr Ala Gly Tyr Asp Ser Ser Val Pro Asp Ser Thr Trp Arg Ile Met 545 550 555 560 Thr Thr Leu Asn Met Leu Gly Gly Arg Gln Val Ile Ala Ala Val Lys 565 570 575 Trp Ala Lys Ala Ile Pro Gly Phe Arg Asn Leu His Leu Asp Asp Gln 580 585 590 Met Thr Leu Leu Gln Tyr Ser Trp Met Phe Leu Met Ala Phe Ala Leu 595 600 605 Gly Trp Arg Ser Tyr Arg Gln Ser Ser Ala Asn Leu Leu Cys Phe Ala 610 615 620 Pro Asp Leu Ile Ile Asn Glu Gln Arg Met Thr Leu Pro Cys Met Tyr 625 630 635 640 Asp Gln Cys Lys His Met Leu Tyr Val Ser Ser Glu Leu His Arg Leu 645 650 655 Gln Val Ser Tyr Glu Glu Tyr Leu Cys Met Lys Thr Leu Leu Leu Leu 660 665 670 Ser Ser Val Pro Lys Asp Gly Leu Lys Ser Gln Glu Leu Phe Asp Glu 675 680 685 Ile Arg Met Thr Tyr Ile Lys Glu Leu Gly Lys Ala Ile Val Lys Arg 690 695 700 Glu Gly Asn Ser Ser Gln Asn Trp Gln Arg Phe Tyr Gln Leu Thr Lys 705 710 715 720 Leu Leu Asp Ser Met His Glu Val Val Glu Asn Leu Leu Asn Tyr Cys 725 730 735 Phe Gln Thr Phe Leu Asp Lys Thr Met Ser Ile Glu Phe Pro Glu Met 740 745 750 Leu Ala Glu Ile Ile Thr Asn Gln Ile Pro Lys Tyr Ser Asn Gly Asn 755 760 765 Ile Lys Lys Leu Leu Phe His Gln Lys Leu Glu Ile Lys Ile Ala Thr 770 775 780 Arg Lys Tyr Leu Gly Lys Gln Asn Val Tyr Asp Ile Gly Val Glu Arg 785 790 795 800 Asp His Asn Phe Ala Leu Lys Asn Gly Phe Ile Ala Ser Asn Cys Phe 805 810 815 Asn Leu Ser Leu Ala Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Asp Tyr 820 825 830 Lys Asp Asp Asp Asp Lys 835 <210> 4 <211> 388 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> mCherry-rNESN-mNpuN-NLS (m1) <400> 4 Met Val Ser Lys Gly Glu Glu Asp Asn Met Ala Ile Ile Lys Glu Phe 1 5 10 15 Met Arg Phe Lys Val His Met Glu Gly Ser Val Asn Gly His Glu Phe 20 25 30 Glu Ile Glu Gly Glu Gly Glu Gly Arg Pro Tyr Glu Gly Thr Gln Thr 35 40 45 Ala Lys Leu Lys Val Thr Lys Gly Gly Pro Leu Pro Phe Ala Trp Asp 50 55 60 Ile Leu Ser Pro Gln Phe Met Tyr Gly Ser Lys Ala Tyr Val Lys His 65 70 75 80 Pro Ala Asp Ile Pro Asp Tyr Leu Lys Leu Ser Phe Pro Glu Gly Phe 85 90 95 Lys Trp Glu Arg Val Met Asn Phe Glu Asp Gly Gly Val Val Thr Val 100 105 110 Thr Gln Asp Ser Ser Leu Gln Asp Gly Glu Phe Ile Tyr Lys Val Lys 115 120 125 Leu Arg Gly Thr Asn Phe Pro Ser Asp Gly Pro Val Met Gln Lys Lys 130 135 140 Thr Met Gly Trp Glu Ala Ser Ser Glu Arg Met Tyr Pro Glu Asp Gly 145 150 155 160 Ala Leu Lys Gly Glu Ile Lys Gln Arg Leu Lys Leu Lys Asp Gly Gly 165 170 175 His Tyr Asp Ala Glu Val Lys Thr Thr Tyr Lys Ala Lys Lys Pro Val 180 185 190 Gln Leu Pro Gly Ala Tyr Asn Val Asn Ile Lys Leu Asp Ile Thr Ser 195 200 205 His Asn Glu Asp Tyr Thr Ile Val Glu Gln His Glu Arg Ala Glu Gly 210 215 220 Arg His Ser Thr Gly Gly Met Asp Glu Leu Tyr Lys Pro Arg Lys Val 225 230 235 240 Tyr Pro Ile Ile Leu Arg Leu Ala Leu Ser Tyr Glu Thr Glu Ile Leu 245 250 255 Thr Val Glu Tyr Gly Leu Leu Pro Ile Gly Lys Ile Val Glu Lys Arg 260 265 270 Ile Glu Cys Thr Val Tyr Ser Val Asp Asn Asn Gly Asn Ile Tyr Thr 275 280 285 Gln Pro Val Ala Gln Trp His Asp Arg Gly Glu Gln Glu Val Phe Glu 290 295 300 Tyr Cys Leu Glu Asp Gly Ser Leu Ile Arg Ala Thr Lys Asp His Lys 305 310 315 320 Phe Met Thr Val Asp Gly Gln Met Leu Pro Ile Asp Glu Ile Phe Glu 325 330 335 Arg Glu Leu Asp Leu Met Arg Val Asp Asn Leu Pro Asn Ile Lys Ile 340 345 350 Ala Thr Arg Lys Tyr Leu Gly Lys Gln Asn Val Tyr Asp Ile Gly Val 355 360 365 Glu Arg Lys Arg Pro Ala Ala Thr Lys Lys Ala Gly Gln Ala Lys Lys 370 375 380 Lys Lys Leu Asp 385

Claims (12)

1. L-리모넨을 유효성분으로 포함하는 항염 조성물로서, 상기 조성물은 당질코르티코이드 수용체 아고니스트에 의한 부작용을 유발하지 않는 것이 특징인, 항염 조성물
   
2. 제1항에 있어서, 상기 L-리모넨은 당질코르티코이드 수용체 매개 전사 활성화와 NF-kB 매개 전사 활성화를 모두 억제하는 것이 특징인, 항염 조성물.
   
3. 제1항에 있어서, 상기 부작용은 골다공증, 근육 약화, 근위축증, 당뇨병, 성장 부진, 쿠싱 증후군, 에디슨 병 또는 이들의 조합인 것인, 항염 조성물.
   
4. 제1항에 있어서, 상기 아고니스트는 덱사메타손, 베타메타손 및 트리암시놀론으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것인, 항염 조성물.
   
5. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 화장료, 향료, 또는 아로마테라피 조성물인 것인, 항염 조성물.
   
6. L-리모넨 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 당질코르티코이드 수용체 아고니스트에 의한 부작용 유발 억제 또는 경감용 조성물로서,
   상기 아고니스트는 덱사메타손, 베타메타손 및 트리암시놀론으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것이고,
   상기 부작용은 골다공증, 근육 약화, 근위축증, 당뇨병, 성장 부진, 쿠싱 증후군, 에디슨 병 또는 이들의 조합인 것인, 조성물.
   
7. 삭제
8. 삭제
9. L-리모넨 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 당질코르티코이드 수용체-매개 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물로서,
   상기 당질코르티코이드 수용체-매개 관련 질환은 염증 질환이고,
   상기 조성물은 당질코르티코이드 수용체 아고니스트에 의한 부작용을 유발하지 않는 것이 특징인, 약학 조성물.
   
10. 삭제
11. L-리모넨 또는 이의 식품학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 염증질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물로서, 상기 조성물은 당질코르티코이드 수용체 아고니스트에 의한 부작용을 유발하지 않는 것이 특징인, 식품 조성물.
    
12. L-리모넨 또는 이의 식품학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 포함하는 염증질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물로서, 상기 조성물은 당질코르티코이드 수용체 아고니스트에 의한 부작용을 유발하지 않는 것이 특징인, 사료 조성물.