KR102632069B1 - Method of mechanical isolation for cell and tissue - Google Patents
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Abstract
본 발명은, 기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로, 지방조직을 준비하는 단계; 상기 지방조직을 희석액으로 희석하여 지방조직 혼합액을 제조하는 단계; 상기 지방조직 혼합액에서 지방조직과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 미세화하는 단계; 및 미세화된 지방조직 혼합액에서 지방조직과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리하는 단계;를 포함하는, 기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법에 관한 것이다. The present invention relates to a method for separating tissue and cells by a mechanical method, and more specifically, the steps of preparing adipose tissue; Preparing an adipose tissue mixture by diluting the adipose tissue with a diluent; Micronizing adipose tissue and various tissues and cells constituting the adipose tissue from the adipose tissue mixture; and separating adipose tissue and various tissues and cells constituting the adipose tissue from the micronized adipose tissue mixture. It relates to a method of separating tissues and cells by a mechanical method, including.
Description
본 발명은, 기계적 방식에 의해 생체조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for separating various tissues and cells constituting biological tissues by mechanical methods.
생체조직은 재생치료 및 미용목적에 이용될 수 있는 다양한 조직, 세포, 물질이 포함되어 있어 이를 분리하기 위한 다양한 방법들이 이용되고 있다. 특히 지방조직은 일반적으로 효소를 이용하여 조직을 분해하고 원심분리 하는 방법이 널리 사용되고 있으나, 적절한 의료용 효소가 없고, 사용되는 효소에 독성이 있어 효소를 이용해 분해된 지방조직으로부터 획득한 물질의 안전성에 대한 논란이 있다. 이에, 효소를 사용하지 않고 지방조직으로부터 재생치료 및 미용목적에 사용될 수 있는 물질을 얻기 위한 다양한 시도가 있다. 예를 들어, 미국공개출원은 여과 방법 및 장치(FILTRATION METHOD AND APPARATUS)를 개시한다.Biological tissue contains various tissues, cells, and substances that can be used for regenerative treatment and cosmetic purposes, and various methods are used to separate them. In particular, for fat tissue, the method of decomposing the tissue using enzymes and centrifuging is widely used, but there is no appropriate medical enzyme and the enzymes used are toxic, so the safety of materials obtained from fat tissue decomposed using enzymes is questionable. There is controversy about this. Accordingly, there are various attempts to obtain substances that can be used for regenerative treatment and cosmetic purposes from adipose tissue without using enzymes. For example, the US published application discloses FILTRATION METHOD AND APPARATUS.
본 발명은, 상기 언급한 문제점을 해결하기 위해서, 생체조직의 미세화 공정 이전에 희석과 같은 전처리 공정을 진행하여, 희석에 따른 물리적, 화학적 및 전기-기계적 효과에 의해 생체조직, 특히 지방조직(adipose tissue)에서 유용한 조직 및 세포 및 기질세포(stromal cell), 즉, 지방조직 유래 줄기세포가 포함된 세포의 분리 공정 효율을 향상시킬 수 있는, 기계적 방식에 의한 조직 및 세포의 분리 방법에 관한 것이다.In order to solve the above-mentioned problems, the present invention performs a pretreatment process such as dilution before the micronization process of biological tissue, and the physical, chemical, and electro-mechanical effects of dilution cause biological tissue, especially adipose tissue (adipose), to be removed. It relates to a method of separating tissues and cells by a mechanical method that can improve the separation process efficiency of useful tissues and cells and stromal cells, that is, cells containing adipose tissue-derived stem cells.
그러나, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 이상에서 언급한 것들로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 해당 분야 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.However, the problems to be solved by the present invention are not limited to those mentioned above, and other problems not mentioned will be clearly understood by those skilled in the art from the description below.
본 발명의 일 실시예에 따라, 지방조직을 준비하는 단계; 상기 지방조직을 희석액으로 희석하여 지방조직 혼합액을 제조하는 단계; 상기 지방조직 혼합액에서 지방조직과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 미세화하는 단계; 및 상기 미세화된 지방조직 혼합액에서 지방조직과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리하는 단계;를 포함하는, 기계적 방식에 의한 조직 및 세포의 분리 방법에 관한 것이다.According to one embodiment of the present invention, preparing adipose tissue; Preparing an adipose tissue mixture by diluting the adipose tissue with a diluent; Micronizing adipose tissue and various tissues and cells constituting the adipose tissue from the adipose tissue mixture; and separating adipose tissue and various tissues and cells constituting the adipose tissue from the micronized adipose tissue mixture. It relates to a method of separating tissues and cells by a mechanical method, including.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 희석액은, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토덱스트린 용액, 에탄올, 생리식염수, 락테이트 링거액, 링거액, 균형 전해질용액, PRP(platelet-rich plasma), PPP(platelet-poor plasma), PRP와 PPP의 혼합액 및 정맥주사 용액으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나 이상을 포함하는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present invention, the diluent includes buffered saline solution, dextrose solution, maltodextrin solution, ethanol, saline solution, lactated Ringer's solution, Ringer's solution, balanced electrolyte solution, PRP (platelet-rich plasma), PPP ( It may include at least one selected from the group consisting of platelet-poor plasma), a mixture of PRP and PPP, and an intravenous solution.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 지방조직 혼합액 중 상기 지방조직 대 상기 희석액의 희석비율은, 1 : 99 내지 99 : 1(v/v)인 것일 수 있다.According to one embodiment of the present invention, the dilution ratio of the adipose tissue to the diluent in the adipose tissue mixture may be 1:99 to 99:1 (v/v).
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 희석액은, 상기 지방조직 혼합액 중 25 %(부피) 내지 75 %(부피)인 것일 수 있다. According to one embodiment of the present invention, the diluted solution may be 25% (volume) to 75% (volume) of the adipose tissue mixture.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 지방조직 혼합액을 제조하는 단계는, 상기 희석액의 희석비율에 따라 단위 부피 당 세포 수 및 세포 밀도를 조절하는 것일 수 있다. According to one embodiment of the present invention, the step of preparing the adipose tissue mixture may include adjusting the number of cells and cell density per unit volume according to the dilution ratio of the diluent.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 지방조직과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 미세화하는 단계는, 기계적인 방법을 이용하며 커팅, 찢기, 긁기, 분해 및 분리(separation) 중 적어도 하나 이상의 공정을 이용하는 것일 수 있다. According to one embodiment of the present invention, the step of micronizing the adipose tissue and various tissues and cells constituting the adipose tissue uses a mechanical method and includes at least one of cutting, tearing, scraping, decomposition, and separation. It may be using a process.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 지방조직과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 미세화하는 단계는, 10 ㎛ 내지 4,000 ㎛ 크기로 미세화하는 것일 수 있다. According to one embodiment of the present invention, the step of micronizing the adipose tissue and various tissues and cells constituting the adipose tissue may be micronizing the adipose tissue to a size of 10 ㎛ to 4,000 ㎛.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 지방조직과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 미세화하는 단계는, 상기 지방조직 혼합액을 순차적, 앞뒤로 반복적 또는 이 둘의 방식으로 복수개의 스크린의 관통공을 통과하도록 이동시키는 것일 수 있다. According to one embodiment of the present invention, the step of micronizing the adipose tissue and various tissues and cells constituting the adipose tissue is to pass the adipose tissue mixture through the through holes of a plurality of screens sequentially, back and forth, or both. It may be moved to pass.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 복수개의 스크린은, 상이하거나 또는 동일한 크기의 관통공을 포함하고, 상기 복수개의 스크린은, 상이하거나 또는 동일한 형태의 관통공을 포함하는 것일 수 있다. According to an embodiment of the present invention, the plurality of screens may include through-holes of different or the same size, and the plurality of screens may include through-holes of different or the same shape.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 복수개의 스크린은, 각각 10 ㎛ 내지 4,000 ㎛ 크기의 관통공을 포함하는 것일 수 있다. According to an embodiment of the present invention, each of the plurality of screens may include through holes with a size of 10 ㎛ to 4,000 ㎛.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 복수개의 스크린은, 관통공의 크기에 따라 순서대로 배열되고, 상기 관통공의 표면, 내부 또는 이 둘에 도출한 날카로운 날(edge)을 포함하는 것일 수 있다. According to one embodiment of the present invention, the plurality of screens are arranged in order according to the size of the through hole and may include sharp edges extending from the surface, inside, or both of the through hole. .
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 지방조직과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 미세화하는 단계는, 서로다른 크기를 가지는 복수개의 관통공을 가지는 복수개의 스크린을 내부에 장착한 하우징 및 상기 하우징 양면에 주사기를 연결한 연결구를 포함하는 장치를 이용하는 것일 수 있다. According to one embodiment of the present invention, the step of micronizing the adipose tissue and various tissues and cells constituting the adipose tissue includes a housing equipped therein with a plurality of screens having a plurality of through holes having different sizes, and the It may be using a device that includes a connector connecting a syringe to both sides of the housing.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 미세화된 지방조직 혼합액에서 미세지방과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리하는 단계는, 원심분리, 진동법 및 필터링 중 적어도 하나를 이용하여 비중 및/또는 크기에 따라 분리하는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present invention, the step of separating various tissues and cells constituting microfat and adipose tissue from the micronized adipose tissue mixture includes specific gravity and/or using at least one of centrifugation, vibration, and filtering. Alternatively, it may be separated according to size.
본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 미세화된 지방조직 혼합액에서 지방조직과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리하는 단계는, 지방조직을 구성하는 조직과 줄기세포를 포함하는 기질세포를 분리하는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present invention, the step of separating adipose tissue and various tissues and cells constituting the adipose tissue from the micronized adipose tissue mixture includes separating the tissues constituting the adipose tissue and stromal cells including stem cells. It may be.
본 발명은, 기계적 방식으로 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리하는 공정에서 기계적 미세화 절차를 진행하기 전에 생리식염수, 락테이트 링거액, 링거액, 균형된 전해질용액, PRP(platelet-rich plasma), PPP(platelet-poor plasma), PRP와 PPP의 혼합액 또는 정맥주사 방식으로 투여 가능한 용액 등으로 지방조직을 희석하는 희석 공정을 진행하고, 이러한 사전 희석방식은 희석에 따른 물리적, 화학적 및 전기-기계적 효과의 의해 보다 많은 지방조직을 구성하는 다양한 세포, 및 지방조직 유래 기질세포 즉 줄기세포들이 풍부하게 포함된 세포를 분리하고, 분리 공정 효율을 향상시킬 수 있다.The present invention relates to physiological saline solution, lactated Ringer's solution, Ringer's solution, balanced electrolyte solution, PRP (platelet-rich plasma), and A dilution process is performed to dilute adipose tissue with PPP (platelet-poor plasma), a mixture of PRP and PPP, or a solution that can be administered by intravenous injection. This pre-dilution method has physical, chemical, and electro-mechanical effects due to dilution. It is possible to separate various cells that make up adipose tissue and cells rich in adipose tissue-derived stromal cells, that is, stem cells, and improve the efficiency of the separation process.
도 1은, 본 발명의 일 실시예에 따라, 본 발명에 의한 분리 방법의 공정 흐름도를 예시적으로 나타낸 것이다.
도 2는, 본 발명의 일 실시예에 따라, 본 발명의 방법에 이용되는 장치의 정단면도를 예시적으로 나타낸 것이다.
도 3은, 본 발명의 일 실시예에 따라, 도 2의 장치의 일부 구조의 절단 사시도를 예시적으로 나타낸 것이다.
도 4는, 본 발명의 일 실시예에 따라, 본 발명의 방법에 이용되는 장치의 스크린을 예시적으로 나타낸 것이다.Figure 1 exemplarily shows a process flow diagram of the separation method according to the present invention, according to an embodiment of the present invention.
Figure 2 exemplarily shows a front cross-sectional view of a device used in the method of the present invention, according to one embodiment of the present invention.
Figure 3 exemplarily shows a cutaway perspective view of a portion of the structure of the device of Figure 2, according to one embodiment of the present invention.
Figure 4 illustrates an exemplary screen of a device used in the method of the present invention, according to one embodiment of the present invention.
이하 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예들을 상세히 설명한다. 본 발명을 설명함에 있어서, 관련된 공지 기능 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 것이다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 용어들은 본 발명의 바람직한 실시예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 각 도면에 제시된 동일한 참조 부호는 동일한 부재를 나타낸다.Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail with reference to the attached drawings. In describing the present invention, if a detailed description of a related known function or configuration is judged to unnecessarily obscure the gist of the present invention, the detailed description will be omitted. In addition, the terms used in this specification are terms used to appropriately express preferred embodiments of the present invention, and may vary depending on the intention of the user or operator or the customs of the field to which the present invention belongs. Therefore, definitions of these terms should be made based on the content throughout this specification. The same reference numerals in each drawing indicate the same members.
명세서 전체에서, 어떤 부재가 다른 부재 "상에" 위치하고 있다고 할 때, 이는 어떤 부재가 다른 부재에 접해 있는 경우뿐 아니라 두 부재 사이에 또 다른 부재가 존재하는 경우도 포함한다.Throughout the specification, when a member is said to be located “on” another member, this includes not only cases where a member is in contact with another member, but also cases where another member exists between the two members.
명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.Throughout the specification, when a part “includes” a certain component, this does not mean excluding other components, but rather means that it can further include other components.
이하, 본 발명의 기계적 방식에 의한 조직 및 세포를 분리 방법에 대하여 실시예 및 도면을 참조하여 구체적으로 설명하도록 한다. 그러나, 본 발명이 이러한 실시예 및 도면에 제한되는 것은 아니다.Hereinafter, the method for separating tissues and cells by a mechanical method of the present invention will be described in detail with reference to examples and drawings. However, the present invention is not limited to these examples and drawings.
본 발명은, 기계적 방식에 의한 조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리 방법에 관한 것으로, 본 발명의 일 실시예에 따라, 상기 분리 방법은, 지방조직을 준비하는 단계(S1); 지방조직을 희석하는 단계(S2); 지방조직을 미세화하는 단계(S3); 및 지방조직 및 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리하는 단계(S4);를 포함할 수 있다.The present invention relates to a method for separating various tissues and cells constituting tissues by a mechanical method. According to one embodiment of the present invention, the separation method includes preparing adipose tissue (S1); Diluting adipose tissue (S2); Step of micronizing adipose tissue (S3); and a step (S4) of separating adipose tissue and various tissues and cells constituting the adipose tissue.
본 발명의 일 실시예에 따라, 지방조직을 준비하는 단계(S1)는, 지방조직에서 줄기세포를 포함하여 지방조직을 구성하는 조직 및 세포들을 분리하기 위한 지방조직 시료를 준비하는 것으로, 동물(어류, 포유류 등) 등에서 유래한 지방조직을 수집하고 지방조직을 구성하는 조직 및 세포 분리에 이용할 수 있는 농축된 지방조직을 준비할 수 있다. 예를 들어, 지방 흡입술(liposuction), 지방조직 절개(excision) 등의 원하는 방식으로 지방조직을 수집하고, 지방 흡인물(lipoaspirate) 또는 지방조직을 농축하기 위해, 디캔팅(decanting) 또는 원심분리법(centrifugation)으로 분리된 지방조직의 최상층(oil) 및 하층에 위치한 불순물을 제거할 수 있다. 상기 디캔팅(decanting)은, 지방조직이 혈액이나 물보다 가벼워 흡인용기를 가만히 세워 두면 수분 후 지방조직이 위로 떠오르고 그 후 지방조직의 아래에 있는 수분이나 혈액을 분리하는 방법에 해당될 수 있다.According to an embodiment of the present invention, the step (S1) of preparing adipose tissue involves preparing an adipose tissue sample to separate the tissues and cells constituting the adipose tissue, including stem cells, from the adipose tissue, animal ( It is possible to collect adipose tissue derived from fish, mammals, etc. and prepare concentrated adipose tissue that can be used to separate the tissues and cells that make up the adipose tissue. For example, adipose tissue may be collected by a desired method such as liposuction or adipose tissue excision, and to concentrate the lipoaspirate or adipose tissue, decanting or centrifugation may be used. ) can remove impurities located in the top layer (oil) and bottom layer of separated fat tissue. The decanting may correspond to a method of separating the water or blood below the adipose tissue after the adipose tissue rises to the top after several minutes because the adipose tissue is lighter than blood or water and the suction container is left standing still.
본 발명의 일 실시예에 따라, 지방조직을 희석하는 단계(S2)는, 상기 지방조직을 희석액으로 희석하여 지방조직 혼합액을 제조하는 단계이며, 지방조직의 미세화 공정, 분리 공정 같은 가공 처리, 즉 기계적으로 처리하기 이전에 농축된 지방조직을 최종적으로 회수(또는, 분리)하는 조직 및 세포 혼합액의 양 및 밀도에 따라 다양한 프로토콜/방법에 따른 희석 공정을 진행할 수 있다. 예를 들어, 상기 희석액의 희석비율에 따라 분리 공정에 이용되는 지방조직 또는 최종적으로 회수하는 조직 및 세포 혼합액의 단위 부피 당 세포 수 및 세포 밀도를 조절하고, 지방조직을 구성하는 다양한 조직, 세포 및 기질세포(Stromal cell)의 분리되는 양을 증가시킬 수 있다.According to one embodiment of the present invention, the step of diluting the adipose tissue (S2) is a step of preparing an adipose tissue mixture by diluting the adipose tissue with a diluent, and processing the adipose tissue such as a micronization process or a separation process, that is, Before mechanical processing, a dilution process can be performed according to various protocols/methods depending on the amount and density of the tissue and cell mixture from which the concentrated adipose tissue is finally recovered (or separated). For example, the number and cell density per unit volume of the adipose tissue used in the separation process or the ultimately recovered tissue and cell mixture are adjusted according to the dilution ratio of the diluent, and the various tissues, cells and The amount of stromal cells separated can be increased.
본 발명의 일 예로, 상기 희석액은, 정맥 주입 루트(intravenous route)에 적용될 수 있는 용액일 수 있고, 예를 들어, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토덱스트린 용액, 에탄올, 생리식염수(saline), 락테이트 링거액(ringer lactate), 링거액(ringer), 균형 전해질용액(balanced electrolyte) 또는 용액(solution), PRP(platelet-rich plasma), PPP(platelet-poor plasma), PRP와 PPP의 혼합액, 정맥주사 용액으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나 이상을 포함할 수 있다. 즉, 기계적 방식으로 지방조직으로부터 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리 및 획득하는 공정에 있어서, 임의의 정맥 주입 루트에 의해 적용될 수 있는 생리 식염수, 링거 락테이트, 링거, 균형 전해질 용액, PRP(platelet-rich plasma), PPP(platelet-poor plasma), PRP와 PPP의 혼합액 또는 용액을 이용하여 지방조직을 희석하는 사전 희석(predilution)은, 희석에 따른 물리적, 화학적 및/또는 전기 기계적 효과로 지방조직 및 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포의 분리를 증가시키고, 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포 분리 공정의 효율을 향상시킬 수 있다.As an example of the present invention, the diluent may be a solution that can be applied to an intravenous route, for example, buffered saline solution, dextrose solution, maltodextrin solution, ethanol, saline, Lactated Ringer's solution, Ringer's solution, balanced electrolyte or solution, PRP (platelet-rich plasma), PPP (platelet-poor plasma), mixture of PRP and PPP, intravenous injection It may include at least one selected from the group consisting of solutions. That is, in the process of mechanically separating and obtaining various tissues and cells constituting adipose tissue from adipose tissue, physiological saline, Ringer's lactate, Ringer's, balanced electrolyte solution, and PRP that can be applied by any intravenous infusion route. Predilution, which dilutes adipose tissue using (platelet-rich plasma), PPP (platelet-poor plasma), or a mixture or solution of PRP and PPP, is caused by physical, chemical, and/or electromechanical effects resulting from dilution. It can increase the separation of adipose tissue and the various tissues and cells that make up the adipose tissue, and improve the efficiency of the separation process of the various tissues and cells that make up the adipose tissue.
본 발명의 일 예로, 상기 희석액은, 상기 지방조직 혼합액 중 상기 지방조직 대 상기 희석액의 희석비율은, 1 : 99 내지 99 : 1(v/v); 20 : 80 내지 80 : 20(v/v); 또는 50 : 50 내지 20 : 80(v/v)이며, 바람직하게는 상기 희석액은, 상기 지방조직 혼합액 중 25 %(부피) 내지 75 %(부피)일 수 있다. 이는 미세화 공정 및 분리 공정에 이용되는 장치 및 시스템의 볼륨에 따라 적절하게 조절하고, 회수된 세포 및 조직의 희석액에 포함된 세포 수 및/또는 세포 밀도를 조절할 수 있다. 예를 들어, 임의의 정맥 주입 용액 등 50 %의 희석액 및 50 %의 지방조직을 이용함으로써 기계적 처리 이전에 희석이 이루어지고, 다음 공정이 진행될 수 있다. 보다 구체적으로, 10 cc의 주사기 또는 용기에 5 cc의 지방조직 및 5 cc의 희석액이 사용되거나, 20 cc의 주사기 또는 용기에 10 cc의 지방조직 및 10 cc의 희석액이 사용될 수 있다.As an example of the present invention, the dilution ratio of the adipose tissue to the dilution solution in the adipose tissue mixture is 1:99 to 99:1 (v/v); 20:80 to 80:20 (v/v); Or 50:50 to 20:80 (v/v), and preferably, the dilution may be 25% (volume) to 75% (volume) of the adipose tissue mixture. This can be appropriately adjusted according to the volume of the device and system used in the micronization process and separation process, and the number and/or cell density contained in the dilution of the recovered cells and tissues can be adjusted. For example, by using a 50% diluent such as an optional intravenous infusion solution and 50% adipose tissue, dilution can be achieved prior to mechanical treatment and the next process can proceed. More specifically, 5 cc of adipose tissue and 5 cc of diluent may be used in a 10 cc syringe or container, or 10 cc of adipose tissue and 10 cc of diluent may be used in a 20 cc syringe or container.
본 발명의 일 실시예에 따라, 지방조직을 미세화하는 단계(S3)는, 상기 희석된 지방조직 혼합액에서 지방조직과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 미세화하는 단계이며, 커팅(cutting), 찢기, 긁기, 분해(disintegration) 및 분리(separation) 중 적어도 하나 이상의 공정을 이용하여 미세화할 수 있다.According to one embodiment of the present invention, the step (S3) of micronizing adipose tissue is a step of micronizing adipose tissue and various tissues and cells constituting the adipose tissue from the diluted adipose tissue mixture, including cutting, It can be refined using at least one of tearing, scraping, disintegration, and separation processes.
본 발명의 일 예로, 지방조직을 미세화하는 단계(S3)는, 지방조직 혼합액에서 지방조직, 지방세포, 줄기세포를 포함하는 기질세포, 생체 물질 등을 10 ㎛ 내지 4,000 ㎛ 크기로 균일하게 미세화할 수 있다.As an example of the present invention, the step (S3) of micronizing adipose tissue involves uniformly micronizing adipose tissue, adipocytes, stromal cells including stem cells, biological materials, etc. in the adipose tissue mixture to a size of 10 ㎛ to 4,000 ㎛. You can.
본 발명의 일 예로, 지방조직을 미세화하는 단계(S3)는, 상기 지방조직 혼합액을 복수개의 스크린이 내장된 시스템 또는 장치를 이용하여 미세화할 수 있다. As an example of the present invention, in the step (S3) of micronizing adipose tissue, the adipose tissue mixture may be micronized using a system or device equipped with a plurality of screens.
예를 들어, 상기 복수개의 스크린은, 상이하거나 또는 동일한 크기의 관통공을 포함하고, 상이하거나 또는 동일한 형태의 관통공을 포함할 수 있다. 이는 다양한 크기의 지방세포 및 기질세포를 미세화하여 분리 공정의 효율을 향상시킬 수 있다. For example, the plurality of screens may include through holes of different or identical sizes and may include through holes of different or identical shapes. This can improve the efficiency of the separation process by miniaturizing adipocytes and stromal cells of various sizes.
예를 들어, 상기 복수개의 스크린은, 각각 단일 또는 복수개의 관통공을 포함할 수 있다.For example, the plurality of screens may each include a single or a plurality of through holes.
예를 들어, 상기 복수개의 스크린은, 각각 10 ㎛ 내지 4,000 ㎛ 크기의 관통공을 포함하고, 상기 관통공은, 구형, 타원형, 다각형 및 격자 형태 중 적어도 하나 이상을 포함할 수 있다. 상기 크기는 관통공의 직경, 길이 등을 의미할 수 있다. For example, the plurality of screens each include through holes with a size of 10 ㎛ to 4,000 ㎛, and the through holes may include at least one of a spherical shape, an elliptical shape, a polygonal shape, and a lattice shape. The size may mean the diameter, length, etc. of the through hole.
예를 들어, 상기 관통공의 표면, 내 또는 이 둘에 도출한 날카로운 날(edge)을 포함하고, 이는 도 4에 나타낸 바와 같이, 날카로운 날을 포함하는 블레이드 형태로 도출될 수 있다. For example, it may include a sharp edge drawn on the surface, inside, or both of the through hole, and this may be in the form of a blade including a sharp edge, as shown in FIG. 4.
예를 들어, 상기 복수개의 스크린은, 시스템 또는 장치 내에서 관통공의 크기에 따라 순차적으로 배열되고, 관통공이 큰 순서대로 또는 관통공이 작은 순서대로 배열될 수 있다. For example, the plurality of screens may be arranged sequentially according to the size of the through-holes within the system or device, and may be arranged in the order of the largest through-holes or in the order of the smallest through-holes.
예를 들어, 상기 지방조직 혼합액은 상기 복수개의 스크린이 배열된 시스템 또는 장치 내에 투입되고 입구에서 출구로 이동하며 순차적, 앞뒤로 반복적 또는 이 둘의 방식으로 복수개의 스크린 의 관통공을 통과 하면서 미세화될 수 있다. For example, the adipose tissue mixture is introduced into a system or device in which the plurality of screens are arranged, moves from the inlet to the outlet, and can be micronized while passing through the through holes of the plurality of screens sequentially, repeatedly, back and forth, or both. there is.
예를 들어, 상기 복수개의 스크린이 배열된 시스템 또는 장치 내에 지방조직을 관통공을 통과하도록 이동시키는 반복 횟수는 약 3 내지 30회일 수 있다. 예를 들어, 큰 미세기공을 가지는 스크린에서 상대적으로 작은 기공을 가지는 스크린으로 또는 반대 순서로 반복될 수 있다.For example, the number of repetitions of moving fat tissue through the through hole in the system or device in which the plurality of screens are arranged may be about 3 to 30 times. For example, it can be repeated from a screen with large micropores to a screen with relatively small pores, or in the reverse order.
본 발명의 일 예로, 희석된 지방조직으로부터 지방조직을 구성하는 조직 및 세포를 획득하기 미세화 공정이 진행되는 복수개의 스크린을 장착한 장치는 도 1에서 도시된 생체조직 미세화 시스템(1)을 이용할 수 있다. 생체조직 미세화 시스템(1)은, 제1 시린지(C1), 제2 시린지(C2), 제2 커버(160), 제1 커버(150), 하우징(110), 제2 로커(192) 및 제1 로커(191)를 포함할 수 있다. 생체조직 미세화 시스템(1)은, 날카로운 날을 갖는 블레이드 형태로 돌출부를 가지고 있는 다양한 크기의 관통공을 포함하는 복수개의 스크린을 포함하는 디스크(120)가 장착된 하우징(110)에서 양 측의 접속부 사이에 장착되고, 하우징(110)의 양 측에 있는 접속부에 각각 연결된 제1 시린지(C1) 및 제2 시린지(C2)를 포함한다. 제1 시린지(C1) 및 제2 시린지(C2)는, 각각 희석된 지방조직 혼합물(BT)을 수용하도록 구성된 제1 용기 및 제2 용기를 형성하고, 내부에 압력을 인가하고 지방조직(BT)을 스크린(120)을 향해 가압하도록 구성된 제1 푸시 로드를 포함할 수 있다. 2개의 시린지(C1, C2)들의 플런저를 각각 가압하여 하우징(110)을 매개로 희석된 지방조직을 스크린을 통과하도록 반복적으로 이동시키면, 다양한 크기를 가진 균질의 미세화된 지방조직을 획득하고, 이를 이용하여 다양한 크기의 균질화된 미세지방과 그외 지방조직을 구성하는 조직 및 세포를 기계적으로 분리할 수 있다.As an example of the present invention, a device equipped with a plurality of screens in which a micronization process is performed to obtain tissues and cells constituting adipose tissue from diluted adipose tissue can use the biological tissue micronization system 1 shown in FIG. there is. The biological tissue micronization system 1 includes a first syringe (C1), a second syringe (C2), a second cover 160, a first cover 150, a housing 110, a second rocker 192, and a second syringe (C2). 1 may include a rocker (191). The biological tissue micronization system 1 includes a housing 110 on which a disk 120 including a plurality of screens including through-holes of various sizes having protrusions in the form of blades with sharp blades is mounted, and connection portions on both sides thereof. It is mounted between them and includes a first syringe (C1) and a second syringe (C2) respectively connected to connection parts on both sides of the housing 110. The first syringe (C1) and the second syringe (C2) form a first and a second container, respectively, configured to receive the diluted adipose tissue mixture (BT), apply pressure therein, and It may include a first push rod configured to press toward the screen 120. By repeatedly moving the diluted fat tissue through the screen through the housing 110 by pressurizing the plungers of the two syringes (C1, C2), homogeneous micronized fat tissue of various sizes is obtained, which is It can be used to mechanically separate homogenized microfat of various sizes and other tissues and cells that make up adipose tissue.
예를 들어, 상기 복수개의 스크린은, 10 ㎛ 내지 4000 ㎛ 크기의 관통공을 가지며 블레이드 형태로 날이 관통공의 중앙을 향해 돌출된 형상의 관통공을 포함하고, 2000 ㎛ 내지 3000 ㎛, 1000 ㎛ 내지 2000 ㎛, 500 ㎛ 내지 1000 ㎛, 및 250 ㎛ 내지 500 ㎛ 크기의 미세 구멍을 갖는 스크린 순으로 배열될 수 있다. For example, the plurality of screens include through holes having a size of 10 ㎛ to 4000 ㎛, blade-shaped blades protruding toward the center of the through holes, and 2000 ㎛ to 3000 ㎛, 1000 ㎛ The screens may be arranged in the following order: screens with fine holes ranging in size from 2000 ㎛ to 2000 ㎛, 500 ㎛ to 1000 ㎛, and 250 ㎛ to 500 ㎛.
예를들어, 상기 복수개의 스크린은, 미세화 시스템(1)에서 복수개의 스크린을 포함하는 디스크(120)은, 플레이트(121) 및 복수개의 스크린(122a, 122b, 122c, 122d, 122e)을 포함할 수 있다. 플레이트(121)는 제1마운트(111)에 고정될 수 있다. 플레이트(121)는 제1중심 개구(1211)를 포함할 수 있다. 즉, 지방조직을 미세화하도록 구성된 복수개의 관통공을 각각 포함하는 복수개의 스크린(122a, 122b, 122c, 122d, 122e) 중 제1스크린(122a)을 선택하고, 선택된 제1스크린(122a)으로 지방조직을 미세화 한 후, 복수개의 스크린(122a, 122b, 122c, 122d, 122e) 중 제2스크린(122b)을 선택하고, 선택된 제2스크린(122b)으로 지방조직을 미세화하도록 구성될 수 있다. 여기서, 복수개의 스크린(122a, 122b, 122c, 122d, 122e)의 선택 및 순서는 사용자에 의해 결정되는 것이므로, 상기 설명한 스크린의 선택 및 순서에 구속되지 않는다.For example, the plurality of screens may include a plate 121 and a plurality of screens 122a, 122b, 122c, 122d, and 122e. You can. Plate 121 may be fixed to the first mount 111. Plate 121 may include a first central opening 1211. That is, the first screen 122a is selected among the plurality of screens 122a, 122b, 122c, 122d, and 122e, each of which includes a plurality of through holes configured to refine the fat tissue, and the fat is extracted with the selected first screen 122a. After micronizing the tissue, the second screen 122b may be selected from among the plurality of screens 122a, 122b, 122c, 122d, and 122e, and the fat tissue may be micronized using the selected second screen 122b. Here, the selection and order of the plurality of screens 122a, 122b, 122c, 122d, and 122e are determined by the user and are not limited to the selection and order of the screens described above.
도 4를 참조하면, 본 발명의 일 실시예에 따라 복수개의 스크린을 장착한 장치에서 상기 스크린의 구성을 예시적으로 나타낸 것으로, 도 4에서 스크린(220)은 플레이트(221) 및 관통공(222)을 포함할 수 있다. 관통공(222)은 플레이트(221)의 복수개의 모서리들에 의해 규정될 수 있다. 예를 들어, 스크린(220)은 관통공(222)의 제1측에 형성된 제1선형부(223a), 관통공(222)의 제1측에 형성되고 관통공(222)의 중심을 향해 제1방향(T1)으로 돌출하는 제1돌출부(224a), 관통공(222)의 제2측에 형성된 제2선형부(223b) 및 관통공(222)의 제2측에 형성되고 관통공(222)의 중심을 향해 제2방향(T2)으로 돌출하는 제2돌출부(224b)를 포함할 수 있다. 제1돌출부(224a) 및 제2돌촐부(224b)는 스크린(220)에 대해 각이 지도록 배향될 수 있고, 스크린(220)을 통과하는 지방조직을 긁고 찢도록 구성될 수 있다. 제1방향(T1)으로 돌출하는 제1돌출부(224a)의 제1연장선(L1) 및 제2방향(T2)으로 돌출하는 제2돌출부(224b)의 제2연장선(L2)은 서로 꼬인 위치에 있을 수 있다. 즉, 제1연장선(L1) 및 제2연장선(L2)은 서로 평행하지도 않고 서로 만나지도 않을 수 있다. 제1돌출부(224a) 및 제2돌출부(224b)는 제1커버(150) 및 제2커버(160) 중 어느 하나의 커버를 향하도록 제1돌출부(224a)의 방향(T1) 및 제2돌출부(224b)의 방향(T2)이 설정될 수 있다.Referring to FIG. 4, the configuration of the screen in a device equipped with a plurality of screens according to an embodiment of the present invention is exemplarily shown. In FIG. 4, the screen 220 includes a plate 221 and a through hole 222. ) may include. The through hole 222 may be defined by a plurality of edges of the plate 221. For example, the screen 220 includes a first linear portion 223a formed on the first side of the through hole 222, formed on the first side of the through hole 222, and directed toward the center of the through hole 222. A first protruding portion 224a protruding in one direction (T1), a second linear portion 223b formed on the second side of the through hole 222, and a through hole 222 formed on the second side of the through hole 222. ) may include a second protrusion 224b protruding in the second direction T2 toward the center. The first protrusion 224a and the second protrusion 224b may be oriented at an angle with respect to the screen 220 and may be configured to scratch and tear the fatty tissue passing through the screen 220. The first extension line L1 of the first protrusion 224a protruding in the first direction T1 and the second extension line L2 of the second protrusion 224b protruding in the second direction T2 are twisted with each other. There may be. That is, the first extension line (L1) and the second extension line (L2) may not be parallel to each other and may not meet each other. The first protrusion 224a and the second protrusion 224b are directed in a direction T1 of the first protrusion 224a and the second protrusion 224a to face one of the first cover 150 and the second cover 160. The direction T2 of (224b) may be set.
본 발명의 일 실시예에 따라, 지방조직 및 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리하는 단계(S4)는, 상기 지방조직 혼합액에서 미세지방과 지방조직을 구성하는 다양한 조직 및 세포를 분리하는 단계이며, 원심분리, 디캔팅, 진동법(vibration), 필터링 등을 이용할 수 있다.According to one embodiment of the present invention, the step (S4) of separating adipose tissue and various tissues and cells constituting adipose tissue is to separate microfat and various tissues and cells constituting adipose tissue from the adipose tissue mixture. This is a step, and centrifugation, decanting, vibration, and filtering can be used.
본 발명의 일 예로, 원심분리, 진동법, 및 필터링 중 적어도 하나를 이용하여 비중 및/또는 크기에 따라분리하여 원하는 지방조직 및 세포를 분리할 수 있다. 하나의 예로, 상기 미세화 공정을 거친 지방조직 혼합액을 원심분리로 분리 공정 이후에 4개의 층(트리글리세라드(triglyceride)층; 지방조직, 지방조직과 희석액 + 체액의 경계층으로 세포들이 집약된 기질세포 집약(aggregate)층; 및 희석액, 체액, 줄기세포를 포함하는 기질세포 용액층)으로 분리되면, i) 그 중 최하층의 줄기세포를 가진 기질세포 용액층 및 그 바로 위의 세포들이 집약(aggregate)된 층을 주사기로부터 회수할 수 있다. 상기 2개의 층은 서로 혼합되어 적용(치료)을 위해 준비될 수 있다. ii) 용액만을 원하는 경우, 줄기세포 내지 기질세포 용액(희석액 + 체액 + 기질세포)층으로 불리는 최하 용액층이 사용될 수 있다. iii) 젤 형태의 최종 산물만을 원하는 경우, 최하층(기질세포 용액층)으로부터 2번째 층인 세포 집약 층(aggregate)이 회수될 수 있고, 이 층은 점성이 높아 젤로서 이용될 수 있다. 또는, 이 층은 일반 지방조직과 직접적으로 혼합되고 사용될 수 있다. 또는, 이 층은 획득된 이후에, 원하는 희석액으로 희석되어 사용될 수 있다.As an example of the present invention, desired adipose tissue and cells can be separated by separation according to specific gravity and/or size using at least one of centrifugation, vibration, and filtering. As an example, after the adipose tissue mixture that has gone through the micronization process is separated by centrifugation, it is divided into four layers (triglyceride layer; adipose tissue, adipose tissue and diluent + stromal cells in which cells are concentrated as a boundary layer of body fluid) When separated into an aggregate layer; and a stromal cell solution layer containing diluents, body fluids, and stem cells), i) the stromal cell solution layer with stem cells in the lowest layer and the cells immediately above it are aggregated The layer can be recovered from the syringe. The two layers can be mixed together and ready for application (treatment). ii) When only a solution is desired, the lowest solution layer, called the stem cell to stromal cell solution (diluent + body fluid + stromal cells) layer, can be used. iii) If only the final product in the form of a gel is desired, the second layer, the cell aggregate layer, can be recovered from the bottom layer (stromal cell solution layer), and this layer has high viscosity and can be used as a gel. Alternatively, this layer can be mixed and used directly with normal adipose tissue. Alternatively, after this layer is obtained, it can be diluted with a desired diluent and used.
다른 예로, 최종 산물에서 최상층인 트리글리세라드(triglyceride)층을 제거함으로써, 상부 지방조직이 하부의 전체적인 기질 분화(stromal differentiation)층, 즉 지방조직층 이하의 모든 층을 가리키는 기질세포 집약(aggregate)층, 희석액, 체액 및 기질세포를 포함하는 기질세포 용액층과 혼합될 수 있고 혼합물은 세포 풍부화(cell-enriched) 지방조직 이식(graft)으로서 사용될 수 있다.As another example, by removing the top triglyceride layer from the final product, the upper adipose tissue becomes a stromal cell aggregate layer, which refers to the entire stromal differentiation layer below, i.e., all layers below the adipose tissue layer. , can be mixed with a diluent, body fluid, and a stromal cell solution layer containing stromal cells, and the mixture can be used as a cell-enriched adipose tissue graft.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 하나, 하기의 실시예는 단지 설명의 목적을 위한 것이며, 본 발명의 범위를 한정하고자 하는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. However, the following examples are for illustrative purposes only and are not intended to limit the scope of the present invention.
실시예 Example
인체에서 지방흡인 방식으로 수집한 지방조직에서 불순물을 제거하고 원심분리한 이후에 농축된 지방조직을 준비하였다. 상기 농축된 지방조직은 표 1 및 표 2에 따라 희석 공정을 거치고 도 2의 장치에서 400 ㎛ 내지 4,000 ㎛ 크기의 관통공을 갖는 복수개의 스크린을 이용하여 30회 반복적으로 미세화하였다. 미세화 공정 이전에 희석 공정 및 희석 비율에 따라 기질세포(유핵 세포)의 수 및 밀도를 분석하여 표 1 및 표 2에 나타내었다. 미세화 공정 이전에 희석 공정이 이루어지지 않은 대조군 대비 유핵세포 수의 비율을 나타내었다. Impurities were removed from adipose tissue collected from the human body by liposuction, centrifuged, and concentrated adipose tissue was prepared. The concentrated adipose tissue went through a dilution process according to Tables 1 and 2 and was repeatedly micronized 30 times using a plurality of screens with through holes of 400 ㎛ to 4,000 ㎛ in size in the device of FIG. 2. Before the micronization process, the number and density of stromal cells (nucleated cells) were analyzed according to the dilution process and dilution ratio and are shown in Tables 1 and 2. The ratio of the number of nucleated cells compared to the control group in which no dilution process was performed before the micronization process was shown.
표 1 및 표 2를 살펴보면, 희석액을 이용하여 미세화 공정 이전에 희석할 경우에 기질세포(유핵세포)의 세포 수 및 밀도가 증가되고, 기계적 분리 공정을 통해 지방조직에서 기질세포(유핵세포)의 분리되는 양이 증가될 수 있음을 확인할 수 있다.Looking at Tables 1 and 2, when diluted before the micronization process using a diluent, the cell number and density of stromal cells (nucleated cells) increase, and the stromal cells (nucleated cells) are separated from adipose tissue through a mechanical separation process. It can be seen that the amount of separation can increase.
Nucleated cells/ml
Total Nucleated cell number
Nucleated cells in 1mL condensed fat
이상과 같이 실시예들이 비록 한정된 실시예와 도면에 의해 설명되었으나, 해당 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기의 기재로부터 다양한 수정 및 변형이 가능하다. 예를 들어, 설명된 기술들이 설명된 방법과 다른 순서로 수행되거나, 및/또는 설명된 구성요소들이 설명된 방법과 다른 형태로 결합 또는 조합되거나, 다른 구성요소 또는 균등물에 의하여 대치되거나 치환되더라도 적절한 결과가 달성될 수 있다. 그러므로, 다른 구현들, 다른 실시예들 및 특허청구범위와 균등한 것들도 후술하는 특허청구범위의 범위에 속한다.As described above, although the embodiments have been described with limited examples and drawings, various modifications and variations can be made by those skilled in the art from the above description. For example, even if the described techniques are performed in a different order than the described method, and/or the described components are combined or combined in a different form than the described method, or are replaced or substituted by other components or equivalents. Adequate results can be achieved. Therefore, other implementations, other embodiments, and equivalents of the claims also fall within the scope of the claims described below.
Claims (14)
상기 지방조직을 희석액으로 희석하여 지방조직 혼합액을 제조하는 단계;
상기 지방조직 혼합액에서 지방조직과 지방조직을 구성하는 조직 및 세포를 미세화하는 단계; 및
미세화된 지방조직 혼합액에서 지방조직과 지방조직을 구성하는 조직 및 세포를 분리하는 단계;
를 포함하고,
상기 지방조직 혼합액을 제조하는 단계는,
상기 희석액의 희석비율에 따라 회수된 조직 및 세포의 단위 부피 당 세포 수 및 세포 밀도를 조절하는 것이고,
상기 지방조직과 지방조직을 구성하는 조직 및 세포를 미세화하는 단계는,
상기 지방조직 혼합액을 순차적, 앞뒤로 반복적 또는 이 둘의 방식으로 관통공의 표면, 내 또는 이 둘에 도출한 날카로운 날(edge)을 포함하는 복수개의 스크린 관통공을 통과하도록 이동시키고,
상기 관통공의 표면, 내 또는 이 둘에 도출한 날카로운 날(edge)을 가지는 스크린을 통과하는 상기 지방조직과 지방조직을 구성하는 조직 및 세포를 찢고, 긁어 분해하고,
10 ㎛ 내지 4,000 ㎛ 크기로 미세화하는 것인,
기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
Preparing adipose tissue;
Preparing an adipose tissue mixture by diluting the adipose tissue with a diluent;
Micronizing adipose tissue and the tissues and cells constituting the adipose tissue from the adipose tissue mixture; and
Separating adipose tissue and the tissues and cells constituting the adipose tissue from the micronized adipose tissue mixture;
Including,
The step of preparing the adipose tissue mixture is,
Adjusting the number of cells and cell density per unit volume of recovered tissues and cells according to the dilution ratio of the diluent,
The step of micronizing the adipose tissue and the tissues and cells constituting the adipose tissue,
Moving the adipose tissue mixture through a plurality of screen through-holes including sharp edges drawn on the surface, inside, or both of the through-holes sequentially, repeatedly, back and forth, or both,
Tearing, scraping, and disintegrating the adipose tissue and the tissues and cells constituting the adipose tissue that pass through a screen having sharp edges on the surface, inside, or both of the through holes,
Micronizing to a size of 10 ㎛ to 4,000 ㎛,
Tissue and cell separation method by mechanical method.
상기 희석액은,
균형 전해질용액, PRP(platelet-rich plasma), PPP(platelet-poor plasma), PRP와 PPP의 혼합액 및 정맥주사 용액으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나 이상을 포함하는 것인,
기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
According to paragraph 1,
The dilution solution is,
Containing at least one selected from the group consisting of a balanced electrolyte solution, platelet-rich plasma (PRP), platelet-poor plasma (PPP), a mixture of PRP and PPP, and an intravenous solution,
Tissue and cell separation method by mechanical method.
상기 지방조직 혼합액 중 상기 지방조직 대 상기 희석액의 희석비율은,
1 : 99 내지 99 : 1(v/v)인 것인,
기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
According to paragraph 1,
The dilution ratio of the adipose tissue to the diluent in the adipose tissue mixture is,
1:99 to 99:1 (v/v),
Tissue and cell separation method by mechanical method.
상기 희석액은,
상기 지방조직 혼합액 중 25 %(부피) 내지 75 %(부피)인 것인,
기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
According to paragraph 1,
The dilution solution is,
25% (volume) to 75% (volume) of the adipose tissue mixture,
Tissue and cell separation method by mechanical method.
상기 복수개의 스크린 관통공은, 상이하거나 또는 동일한 크기의 관통공을 포함하고,
상기 복수개의 스크린 관통공은, 상이하거나 또는 동일한 형태의 관통공을 포함하는 것인,
기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
According to paragraph 1,
The plurality of screen through holes include through holes of different or identical sizes,
The plurality of screen through holes include through holes of different or identical shapes,
Tissue and cell separation method by mechanical method.
상기 복수개의 스크린 관통공은,
각각 10 ㎛ 내지 4,000 ㎛ 크기의 관통공을 포함하는 것인,
기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
According to paragraph 1,
The plurality of screen through holes are,
Each containing through holes with a size of 10 ㎛ to 4,000 ㎛,
Tissue and cell separation method by mechanical method.
상기 스크린은, 관통공의 크기에 따라 순서대로 복수개의 스크린이 배열된 것인,
기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
According to paragraph 1,
The screen is a plurality of screens arranged in order according to the size of the through hole,
Tissue and cell separation method by mechanical method.
상기 지방조직과 지방조직을 구성하는 조직 및 세포를 미세화하는 단계는,
서로다른 크기를 가지는 복수개의 관통공을 가지는 복수개의 스크린을 내부에 장착한 하우징 및 상기 하우징 양면에 주사기를 연결한 연결구를 포함하는 장치를 이용하는 것인,
기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
According to paragraph 1,
The step of micronizing the adipose tissue and the tissues and cells constituting the adipose tissue,
Using a device including a housing with a plurality of screens having a plurality of through holes of different sizes mounted therein, and a connector connecting a syringe to both sides of the housing,
Tissue and cell separation method by mechanical method.
상기 미세화된 지방조직 혼합액에서 지방조직과 지방조직을 구성하는 조직 및 세포를 분리하는 단계는,
원심분리, 진동법 및 필터링 중 적어도 하나를 이용하여 크기와 비중에 따라 분리하는 것인,
기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.
According to paragraph 1,
The step of separating adipose tissue and the tissues and cells constituting the adipose tissue from the micronized adipose tissue mixture is,
Separating according to size and specific gravity using at least one of centrifugation, vibration, and filtering,
Tissue and cell separation method by mechanical method.
상기 미세화된 지방조직 혼합액에서 지방조직과 지방조직을 구성하는 조직 및 세포를 분리하는 단계는,
지방조직을 구성하는 조직과 줄기세포를 포함하는 기질세포를 분리하는 것인,
기계적 방식에 의한 조직 및 세포 분리 방법.According to paragraph 1,
The step of separating adipose tissue and the tissues and cells constituting the adipose tissue from the micronized adipose tissue mixture is,
To separate the tissues that make up adipose tissue and the stromal cells containing stem cells,
Tissue and cell separation method by mechanical method.
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