KR102565471B1 - Amyloid beta-specific peptide CBRV1-04369 and a composition for treating Alzheimer's disease comprising the same - Google Patents

Amyloid beta-specific peptide CBRV1-04369 and a composition for treating Alzheimer's disease comprising the same Download PDF

Info

Publication number
KR102565471B1
KR102565471B1 KR1020220097555A KR20220097555A KR102565471B1 KR 102565471 B1 KR102565471 B1 KR 102565471B1 KR 1020220097555 A KR1020220097555 A KR 1020220097555A KR 20220097555 A KR20220097555 A KR 20220097555A KR 102565471 B1 KR102565471 B1 KR 102565471B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
amyloid beta
peptide
cbrv1
disease
present
Prior art date
Application number
KR1020220097555A
Other languages
Korean (ko)
Inventor
염승식
조예진
이나윤
이나영
안성수
심규환
김단영
장근아
하태영
김예지
Original Assignee
가천대학교 산학협력단
한국해양과학기술원
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 가천대학교 산학협력단, 한국해양과학기술원 filed Critical 가천대학교 산학협력단
Priority to KR1020220097555A priority Critical patent/KR102565471B1/en
Priority to PCT/KR2023/011509 priority patent/WO2024029995A1/en
Application granted granted Critical
Publication of KR102565471B1 publication Critical patent/KR102565471B1/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/001—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof by chemical synthesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4709—Amyloid plaque core protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

본 발명은 알츠하이머병의 원인 물질로 알려진 아밀로이드 베타 단백질 Aβ42와 직접 결합이 가능한 펩타이드 및 펩타이드를 포함하는 알츠하이머병의 치료 및 예방용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 펩타이드 CBRV1-04369를 이용하는 경우, 아밀로이드 베타의 섬유화 및 올리고머화를 방지할 수 있으므로 알츠하이머 등 아밀로이드성 질환의 치료 및 예방에 사용할 수 있다. 또한, 아밀로이드 베타의 검출에 사용할 수 있으므로 알츠하이머 등 아밀로이드성 질환의 진단에 사용할 수 있다. The present invention relates to a peptide capable of direct binding to the amyloid beta protein Aβ42, known as a causative agent of Alzheimer's disease, and a composition for treating or preventing Alzheimer's disease containing the peptide. In the case of using the peptide CBRV1-04369 of the present invention, since it is possible to prevent fibrosis and oligomerization of amyloid beta, it can be used for treatment and prevention of amyloid diseases such as Alzheimer's disease. In addition, since it can be used to detect amyloid beta, it can be used for diagnosis of amyloid-related diseases such as Alzheimer's disease.

Description

아밀로이드 베타 특이적 펩타이드 CBRV1-04369 및 이를 포함하는 알츠하이머병 치료용 조성물{Amyloid beta-specific peptide CBRV1-04369 and a composition for treating Alzheimer's disease comprising the same}Amyloid beta-specific peptide CBRV1-04369 and a composition for treating Alzheimer's disease comprising the same

본 발명은 알츠하이머병의 원인 물질로 알려진 아밀로이드 베타 단백질 Aβ42와 직접 결합이 가능한 펩타이드 및 펩타이드를 포함하는 알츠하이머병의 치료 및 예방용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a peptide capable of direct binding to the amyloid beta protein Aβ42, known as a causative agent of Alzheimer's disease, and a composition for treating or preventing Alzheimer's disease containing the peptide.

글로벌 대형 제약회사들의 알츠하이머병 치료제 개발이 연이어 실패하고 있다. 지금까지 알츠하이머병 치료제는 대부분 아밀로이드 베타 단백질(Aβ), 타우 단백질(tau)에 결합하는 항체를 중심으로 개발되어왔으나, 현재까지도 많은 한계점을 지니고 있다.The development of Alzheimer's disease treatments by large global pharmaceutical companies is failing one after another. So far, most Alzheimer's disease therapeutics have been developed focusing on antibodies that bind to amyloid beta protein (Aβ) and tau protein (tau), but they still have many limitations.

아밀로이드 베타 단백질(Aβ)의 경우 그 자체가 서로 올리고머화(oligomerization)하여 올리고머(oligomer)가 생성되고, 계속해서 응집되면 섬유화(fibrilization)이 진행되어 피브릴(fibril form)을 형성한다. 아밀로이드 베타 단백질의 형태인 올리고머와 피브릴 중 어떤 형태가 신경세포에 독성을 일으키는지에 대한 논의는 진행중이다. 현재까지의 연구결과를 종합하면 올리고머가 세포에 독성을 일으킬 수 있다는 주장이 우세하다.In the case of amyloid beta protein (Aβ), oligomerization is produced by oligomerization with each other, and when aggregation continues, fibrilization proceeds to form fibril form. Discussion is ongoing as to which form of amyloid beta protein, oligomers or fibrils, causes toxicity to neurons. Taken together, the results of studies so far are predominantly asserting that oligomers can cause toxicity to cells.

화합물 기반의 약물 후보를 스크리닝하는 대표적인 방법으로는 아밀로이드 베타 단백질의 섬유화(fibrilization) 저해 효과 확인이 있다. 하지만 아밀로이드 베타 단백질의 섬유화는 세포 독성을 보호하는 기작으로도 여겨지고 있기 때문에 약물 후보의 스크리닝 방법으로 적절하지 않을 가능성이 있다. 또한 아밀로이드 베타 단백질의 섬유화 저해 효과가 독성 성질을 가진 올리고머의 안정성을 높임으로써 발생할 수 있다는 문제점이 있다. As a representative method for screening compound-based drug candidates, there is confirmation of the fibrilization inhibitory effect of amyloid beta protein. However, since fibrosis of amyloid beta protein is also considered as a mechanism to protect cytotoxicity, it may not be suitable as a screening method for drug candidates. In addition, there is a problem that the fibrosis inhibitory effect of amyloid beta protein may occur by increasing the stability of oligomers having toxic properties.

아밀로이드 베타 올리고머가 알츠하이머병의 주요 독성 물질로 알려짐에 따라 이를 타겟하여 진단 또는 치료의 중요성이 부각되고 있다. 높은 효율을 위해서는 아밀로이드 베타 올리고머와 높은 결합력이 필요하며, 치료를 위해서는 독성이 없고 분해가 잘되는 물질이 스크리닝되어야 한다. 이러한 관점에서 천연 유래 펩타이드는 생체 내에서 분해가 용이하기 때문에 합성 화합물 독성의 단점을 보완할 수 있으며, 직접 합성이 가능하기 때문에 항체와는 달리 저비용이라는 장점이 있다.As amyloid beta oligomer is known to be the main toxic substance of Alzheimer's disease, the importance of diagnosis or treatment by targeting it has been highlighted. For high efficiency, a high binding force with amyloid beta oligomer is required, and for treatment, a substance that is non-toxic and decomposes well should be screened. From this point of view, naturally-derived peptides can compensate for the toxicity of synthetic compounds because they are easily degraded in vivo, and have the advantage of low cost unlike antibodies because they can be directly synthesized.

대한민국 등록특허 제10-0987639호 (2008.01.02 공개)Republic of Korea Patent No. 10-0987639 (published on 2008.01.02)

이에 본 발명자들은 아밀로이드 베타 단백질과 직접적으로 결합해 아밀로이드 베타 단백질의 섬유화 및 올리고머화를 방지하는 펩타이드 CBRV1-04369를 탐색하여 본 발명을 완성하게 되었다. Accordingly, the present inventors have completed the present invention by searching for peptide CBRV1-04369 that directly binds to amyloid beta protein to prevent fibrosis and oligomerization of amyloid beta protein.

따라서, 본 발명의 목적은 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 제공하는 것이다. Accordingly, it is an object of the present invention to provide a polypeptide comprising the amino acid sequence of peptide CBRV1-04369.

본 발명의 다른 목적은 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a nucleic acid molecule comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising the amino acid sequence of peptide CBRV1-04369.

본 발명의 또 다른 목적은 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a recombinant vector comprising a nucleic acid molecule comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising the amino acid sequence of peptide CBRV1-04369.

본 발명의 또 다른 목적은 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a host cell transformed with a recombinant vector comprising a nucleic acid molecule comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising the amino acid sequence of peptide CBRV1-04369.

본 발명의 또 다른 목적은 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함하는 아밀로이드 베타 관련 퇴행성 신경질환 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating amyloid beta-related neurodegenerative diseases comprising a polypeptide comprising the amino acid sequence of the peptide CBRV1-04369.

본 발명의 또 다른 목적은 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함하는 아밀로이드 베타 단백질 검출용 조성물을 제공하는 것이다. Another object of the present invention is to provide a composition for detecting amyloid beta protein comprising a polypeptide comprising the amino acid sequence of the peptide CBRV1-04369.

본 발명의 또 다른 목적은 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함하는 아밀로이드 베타 단백질 검출용 조성물을 시료 샘플과 접촉시켜 형성된 펩타이드-아밀로이드 베타 단백질 복합체를 검출하는 단계를 포함하는 아밀로이드 베타 단백질의 검출방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to detect a peptide-amyloid beta protein complex formed by contacting a composition for detecting amyloid beta protein comprising a polypeptide comprising the amino acid sequence of peptide CBRV1-04369 with a sample sample. It is to provide a method for detecting proteins.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 제공한다.According to one aspect of the present invention, the present invention provides a polypeptide comprising the amino acid sequence of peptide CBRV1-04369.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 펩타이드 CBRV1-04369는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다. In one embodiment of the present invention, the peptide CBRV1-04369 includes a polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.

본 명세서에서, 폴리펩타이드는 폴리펩타이드의 C-말단 및 /또는 N-말단에 적어도 하나의 추가적인 아미노산을 포함할 수 있다. 상기의 추가적인 아미노산 잔기는 예를 들어, 생산성, 정제(purification), 생체 내 또는 생체 외에서의 안정화, 복합체의 커플링 또는 검출을 향상시키기 위한 목적으로 개별적 또는 집합적으로 추가될 수 있다. 예컨대 상기 폴리펩타이드는 상기 폴리펩타이드의 C-말단 및/또는 N-말단에 시스테인 잔기를 추가적으로 포함할 수 있다. 추가적인 아미노산 잔기는 정제 또는 폴리펩타이드의 검출을 위한 "태그(tag)"를 제공할 수도 있으며, 예를 들어 그 태그는 그 태그와 특이적인 항체와의 상호작용을 위한 것이다. His6 태그의 경우 고정화된 금속 친화성 크로마토그래피(IMAC)를 위하여, His6 태그, (HisGlu)3 태그 ("HEHEHE" tag) 또는 "myc"(c-myc) 태그 또는 "FLAG" 태그와 같은 태그를 제공할 수 있다.As used herein, a polypeptide may include at least one additional amino acid at the C-terminus and/or N-terminus of the polypeptide. These additional amino acid residues may be added individually or collectively for the purpose of enhancing, for example, productivity, purification, in vivo or ex vivo stabilization, coupling or detection of the complex. For example, the polypeptide may additionally include a cysteine residue at the C-terminus and/or the N-terminus of the polypeptide. Additional amino acid residues may provide a "tag" for purification or detection of the polypeptide, eg, for interaction of the tag with a specific antibody. For the His6 tag, a tag such as a His6 tag, a (HisGlu)3 tag ("HEHEHE" tag) or a "myc" (c-myc) tag or a "FLAG" tag can be used for immobilized metal affinity chromatography (IMAC). can provide

본 발명의 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하고, 서열번호 1의 서열과 실질적인 동일성(substantial identity)을 나타내는 서열도 포함하는 것으로 해석된다. 상기의 실질적인 동일성은, 상기한 본 발명의 서열과 임의의 다른 서열을 최대한 대응되도록 얼라인하고, 당업계에서 통상적으로 이용되는 알고리즘을 이용하여 얼라인된 서열을 분석한 경우에, 바람직하게는 최소 80%의 상동성, 보다 바람직하게는 최소 85%의 상동성, 보다 더 바람직하게는 최소 90%의 상동성, 가장 바람직하게는 최소 95%의 상동성을 나타내는 서열을 의미한다. 서열 비교를 위한 얼라인먼트 방법은 당업계에 공지되어 있다. 얼라인먼트에 대한 다양한 방법 및 알고리즘은 Smith and Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482(1981); Needleman and Wunsch, J. Mol. Bio. 48:443(1970); Pearson and Lipman, Methods in Mol. Biol. 24: 307-31(1988); Higgins and Sharp, Gene 73:237-44(1988); Higgins and Sharp, CABIOS 5:151-3(1989); Corpet et al., Nuc. Acids Res. 16:10881-90(1988); Huang et al., Comp. Appl. BioSci. 8:155-65(1992) and Pearson et al., Meth. Mol. Biol. 24:307-31(1994)에 개시되어 있다. NCBI Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) (Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-10(1990))은 NBCI (National Center for Biological Information) 등에서 접근 가능하며, 인터넷 상에서 blastp, blasm, blastx, tblastn and tblastx와 같은 서열 분석 프로그램과 연동되어 이용할 수 있다. BLSAT는 http://wwww.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/에서 접속 가능하다. 이 프로그램을 이용한 서열 상동성 비교 방법은 http://wwww.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/blast_help.html에서 확인할 수 있다.A polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 of the present invention includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, and is construed as including a sequence showing substantial identity with the sequence of SEQ ID NO: 1. The substantial identity of the above is, when the sequence of the present invention and any other sequence described above are aligned so as to correspond as much as possible, and the aligned sequence is analyzed using an algorithm commonly used in the art, preferably at least A sequence exhibiting 80% homology, more preferably at least 85% homology, even more preferably at least 90% homology, and most preferably at least 95% homology. Alignment methods for sequence comparison are known in the art. Various methods and algorithms for alignment are described in Smith and Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981); Needleman and Wunsch, J. Mol. Bio. 48:443 (1970); Pearson and Lipman, Methods in Mol. Biol. 24: 307-31 (1988); Higgins and Sharp, Gene 73:237-44 (1988); Higgins and Sharp, CABIOS 5:151-3 (1989); Corpet et al., Nuc. Acids Res. 16:10881-90 (1988); Huang et al., Comp. Appl. BioSci. 8:155-65 (1992) and Pearson et al., Meth. Mol. Biol. 24:307-31 (1994). The NCBI Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) (Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-10 (1990)) is accessible from the National Center for Biological Information (NBCI), etc., and blastp, blasm, It can be used in conjunction with sequence analysis programs such as blastx, tblastn and tblastx. The BLAST is accessible at http://wwww.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/. A sequence homology comparison method using this program can be found at http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/blast_help.html.

본 발명에서 이용되는 폴리펩타이드로서, 본 발명의 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드와 균등한 생물학적 활성을 발휘하는 아미노산 서열 변이체인 생물학적 기능 균등물도 이용될 수 있다. 이러한 아미노산 변이는 아미노산 곁사슬치환체의 상대적 유사성, 예컨대, 소수성, 친수성, 전하, 크기 등에 기초하여 이루어진다. 아미노산 곁사슬 치환체의 크기, 모양 및 종류에 대한 분석에 의하여, 아르기닌, 라이신과 히스티딘은 모두 양전하를 띤 잔기이고; 알라닌, 글라이신과 세린은 유사한 크기를 갖으며; 페닐알라닌, 트립토판과 타이로신은 유사한 모양을 갖는다는 것을 알 수 있다. 따라서, 이러한 고려 사항에 기초하여, 아르기닌, 라이신과 히스티딘; 알라닌, 글라이신과 세린; 그리고 페닐알라닌, 트립토판과 타이로신은 생물학적으로 기능 균등물이라 할 수 있다.As the polypeptide used in the present invention, a biologically functional equivalent, which is an amino acid sequence variant exhibiting the same biological activity as the polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 of the present invention, can also be used. These amino acid variations are made based on the relative similarity of amino acid side chain substituents, such as hydrophobicity, hydrophilicity, charge, size, etc. Analysis of the size, shape and type of amino acid side chain substituents revealed that arginine, lysine and histidine are all positively charged residues; Alanine, glycine and serine have similar sizes; It can be seen that phenylalanine, tryptophan and tyrosine have similar shapes. Accordingly, based on these considerations, arginine, lysine and histidine; alanine, glycine and serine; And phenylalanine, tryptophan and tyrosine are biologically functional equivalents.

변이를 도입하는 데 있어서, 아미노산의 소수성 인덱스(hydropathic idex)가 고려될 수 있다. 각각의 아미노산은 소수성과 전하에 따라 소수성 인덱스가 부여되어 있다: 아이소루이신(+4.5); 발린(+4.2); 루이신(+3.8); 페닐알라닌(+2.8); 시스테인/시스타인(+2.5); 메티오닌(+1.9); 알라닌(+1.8); 글라이신(-0.4); 쓰레오닌(-0.7); 세린(-0.8); 트립토판(-0.9); 타이로신(-1.3); 프롤린(-1.6); 히스티딘(-3.2); 글루타메이트(-3.5); 글루타민 (-3.5); 아스파르테이트(-3.5); 아스파라긴(-3.5); 라이신(-3.9); 및 아르기닌(-4.5). 단백질의 상호적인 생물학적 기능(interactive biological function)을 부여하는 데 있어서 소수성 아미노산 인덱스는 매우 중요하다. 유사한 소수성 인덱스를 가지는 아미노산으로 치환하여야 유사한 생물학적 활성을 보유할 수 있다는 것은 공지된 사실이다. 소수성 인덱스를 참조하여 변이를 도입시키는 경우, 바람직하게는 ± 2 이내, 보다 바람직하게는 ± 1 이내, 보다 더 바람직하게는 ± 0.5 이내의 소수성 인덱스 차이를 나타내는 아미노산 사이에 치환을 한다.In introducing mutations, the hydropathic index of amino acids can be considered. Each amino acid is given a hydrophobicity index according to its hydrophobicity and charge: Isoleucine (+4.5); valine (+4.2); leucine (+3.8); phenylalanine (+2.8); cysteine/cysteine (+2.5); methionine (+1.9); alanine (+1.8); glycine (-0.4); threonine (-0.7); serine (-0.8); tryptophan (-0.9); Tyrosine (-1.3); proline (-1.6); histidine (-3.2); glutamate (-3.5); glutamine (-3.5); aspartate (-3.5); asparagine (-3.5); Lysine (-3.9); and arginine (-4.5). The hydrophobic amino acid index is very important in conferring the interactive biological function of proteins. It is a known fact that amino acids having similar hydrophobicity indexes should be substituted to retain similar biological activities. When a mutation is introduced with reference to the hydrophobicity index, substitution is made between amino acids showing a difference in hydrophobicity index, preferably within ± 2, more preferably within ± 1, even more preferably within ± 0.5.

한편, 유사한 친수성 값(hydrophilicity value)을 가지는 아미노산 사이의 치환이 균등한 생물학적 활성을 갖는 단백질을 초래한다는 것도 잘 알려져 있다. 미국 특허 제4,554,101호에 개시된 바와 같이, 다음의 친수성 값이 각각의 아미노산 잔기에 부여되어 있다: 아르기닌(+3.0); 라이신(+3.0); 아스팔테이트(+3.0± 1); 글루타메이트 (+3.0± 1); 세린(+0.3); 아스파라긴(+0.2); 글루타민(+0.2); 글라이신(0); 쓰레오닌(-0.4); 프롤린(-0.5 ± 1); 알라닌(-0.5); 히스티딘(-0.5); 시스테인(-1.0); 메티오닌(-1.3); 발린(-1.5); 루이신(-1.8); 아이소루이신(-1.8); 타이로신(-2.3); 페닐알라닌(-2.5); 트립토판(-3.4). 친수성 값을 참조하여 변이를 도입시키는 경우, 바람직하게는 ± 2 이내, 보다 바람직하게는 ± 1 이내, 보다 더 바람직하게는 ± 0.5 이내의 친수성 값 차이를 나타내는 아미노산 사이에 치환을 한다.On the other hand, it is also well known that substitution between amino acids having similar hydrophilicity values results in proteins having equivalent biological activity. As disclosed in U.S. Patent No. 4,554,101, the following hydrophilicity values have been assigned to each amino acid residue: arginine (+3.0); lysine (+3.0); Asphaltate (+3.0±1); glutamate (+3.0±1); serine (+0.3); asparagine (+0.2); glutamine (+0.2); glycine (0); threonine (-0.4); proline (-0.5 ± 1); alanine (-0.5); histidine (-0.5); cysteine (-1.0); methionine (-1.3); valine (-1.5); Leucine (-1.8); isoleucine (-1.8); Tyrosine (-2.3); phenylalanine (-2.5); Tryptophan (-3.4). When a mutation is introduced by referring to the hydrophilicity value, substitution is made between amino acids showing a difference in hydrophilicity value, preferably within ±2, more preferably within ±1, even more preferably within ±0.5.

분자의 활성을 전체적으로 변경시키지 않는 단백질에서의 아미노산 교환은 당해 분야에 공지되어 있다(H.Neurath, R.L.Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979). 가장 통상적으로 일어나는 교환은 아미노산 잔기 Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thr/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, Asp/Gly 간의 교환이다.Amino acid exchanges in proteins that do not entirely alter the activity of the molecule are known in the art (H. Neurath, R.L. Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979). The most commonly occurring exchanges are amino acid residues Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thr/Phe, Ala/ Exchange between Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, Asp/Gly.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자를 제공한다.According to another aspect of the invention, the invention provides a nucleic acid molecule comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising the amino acid sequence of peptide CBRV1-04369.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 2의 뉴클레오타이드 서열이다.In one embodiment of the present invention, the nucleotide sequence is the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2.

본 명세서에서 용어 "핵산 분자”는 DNA(gDNA 및 cDNA) 그리고 RNA 분자를 포괄적으로 포함하는 의미를 갖으며, 핵산 분자에서 기본 구성 단위인 뉴클레오타이드는 자연의 뉴클레오타이드뿐만 아니라, 당 또는 염기 부위가 변형된 유사체(analogue)도 포함한다(Scheit, Nucleotide Analogs, John Wiley, New York(1980); Uhlman 및 Peyman, Chemical Reviews, 90:543-584(1990)). As used herein, the term "nucleic acid molecule" has the meaning of comprehensively including DNA (gDNA and cDNA) and RNA molecules, and nucleotides, which are basic structural units in nucleic acid molecules, are natural nucleotides as well as modified sugar or base sites. Analogs are also included (Scheit, Nucleotide Analogs , John Wiley, New York (1980); Uhlman and Peyman, Chemical Reviews , 90:543-584 (1990)).

본 발명의 상기 폴리펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열은 상기 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열인 것으로 족하며, 어느 특정 뉴클레오타이드 서열에 한정되지 않는다는 것은 당업자에게 자명하다. It is apparent to those skilled in the art that the nucleotide sequence encoding the polypeptide of the present invention is sufficient to be a nucleotide sequence encoding the amino acid sequence of the peptide CBRV1-04369, and is not limited to any specific nucleotide sequence.

이는 뉴클레오타이드 서열의 변이가 발생하더라도 변이된 뉴클레오타이드 서열을 단백질로 발현하면 단백질 서열에서 변화를 가져오지 않는 경우도 있기 때문이다. 이를 코돈의 축퇴성이라고 한다. 따라서 상기 뉴클레오타이드 서열은 기능적으로 균등한 코돈 또는 동일한 아미노산을 코딩하는 코돈 (예를 들어, 코돈의 축퇴성에 의해, 아르기닌 또는 세린에 대한 코돈은 여섯 개이다), 또는 생물학적으로 균등한 아미노산을 코딩하는 코돈을 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.This is because even if a nucleotide sequence is mutated, expression of the mutated nucleotide sequence as a protein may not bring about a change in the protein sequence. This is called codon degeneracy. Thus, the nucleotide sequence may be a functionally equivalent codon or a codon encoding the same amino acid (e.g., by codon degeneracy, there are six codons for arginine or serine), or a codon encoding a biologically equivalent amino acid. It includes a nucleotide sequence comprising a.

본 발명의 구체적인 구현예에 따르면, 상기 본 발명의 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드의 서열은 본 명세서의 첨부된 서열목록에 수록되어 있다.According to a specific embodiment of the present invention, the sequence of the polypeptide comprising the amino acid sequence of the peptide CBRV1-04369 of the present invention is listed in the Sequence Listing attached hereto.

펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오다이드 서열을 포함하는 핵산 분자는 상기한 뉴클레오타이드 서열에 대하여 실질적인 동일성을 나타내는 뉴클레오타이드 서열도 포함하는 것으로 해석된다. 상기의 실질적인 동일성은, 상기한 본 발명의 뉴클레오타이드 서열과 임의의 다른 서열을 최대한 대응되도록 얼라인하고, 당업계에서 통상적으로 이용되는 알고리즘을 이용하여 얼라인된 서열을 분석한 경우에, 최소 80%의 상동성, 보다 바람직하게는 최소 90%의 상동성, 가장 바람직하게는 최소 95%, 97%, 98%, 또는 99%의 상동성을 나타내는 뉴클레오타이드 서열을 의미한다.A nucleic acid molecule comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising the amino acid sequence of peptide CBRV1-04369 is also construed to include a nucleotide sequence exhibiting substantial identity to the nucleotide sequence described above. The above substantial identity is at least 80% when the nucleotide sequence of the present invention and any other sequence described above are aligned so as to correspond as much as possible, and the aligned sequence is analyzed using an algorithm commonly used in the art. A nucleotide sequence exhibiting homology, more preferably at least 90% homology, most preferably at least 95%, 97%, 98%, or 99% homology.

상술한 생물학적 균등 활성을 갖는 변이를 고려한다면, 본 발명의 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오다이드 서열을 포함하는 핵산 분자는 서열목록에 기재된 서열과 실질적인 동일성(substantial identity)을 나타내는 서열도 포함하는 것으로 해석된다. 상기의 실질적인 동일성은, 상기한 본 발명의 서열과 임의의 다른 서열을 최대한 대응되도록 얼라인하고, 당업계에서 통상적으로 이용되는 알고리즘을 이용하여 얼라인된 서열을 분석한 경우에, 최소 61%의 상동성, 보다 바람직하게는 70%의 상동성, 보다 더 바람직하게는 80%의 상동성, 가장 바람직하게는 90%의 상동성을 나타내는 서열을 의미한다. 서열비교를 위한 얼라인먼트 방법은 당업계에 공지되어 있다. 얼라인먼트에 대한 다양한 방법 및 알고리즘은 Smith and Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482(1981); Needleman and Wunsch, J. Mol. Bio. 48:443(1970); Pearson and Lipman, Methods in Mol. Biol. 24: 307-31(1988); Higgins and Sharp, Gene 73:237-44(1988); Higgins and Sharp, CABIOS 5:151-3(1989); Corpet et al., Nuc. Acids Res. 16:10881-90(1988); Huang et al., Comp. Appl. BioSci. 8:155-65(1992) and Pearson et al., Meth. Mol. Biol. 24:307-31(1994)에 개시되어 있다. NCBI Basic Local Alignment Search Tool(BLAST)(Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-10(1990))은 NBCI(National Center for Biological Information) 등에서 접근 가능하며, 인터넷 상에서 blastp, blastn, blastx, tblastn 및 tblastx와 같은 서열 분석 프로그램과 연동되어 이용할 수 있다. BLAST는 ncbi 웹사이트의 BLAST 페이지를 통하여 접속 가능하다. 이 프로그램을 이용한 서열 상동성 비교 방법은 ncbi 웹사이트의 BLAST help 페이지에서 확인할 수 있다.Considering the mutations having the above-described biological equivalent activity, a nucleic acid molecule comprising a nucleodide sequence encoding a polypeptide comprising the amino acid sequence of the peptide CBRV1-04369 of the present invention is substantially identical to the sequence listed in the sequence listing ( Substantial identity) is also construed as including sequences. The above substantial identity is at least 61% when the sequence of the present invention and any other sequence described above are aligned so as to correspond as much as possible, and the aligned sequence is analyzed using an algorithm commonly used in the art. It means a sequence exhibiting homology, more preferably 70% homology, even more preferably 80% homology, and most preferably 90% homology. Alignment methods for sequence comparison are known in the art. Various methods and algorithms for alignment are described in Smith and Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981) ; Needleman and Wunsch, J. Mol. Bio. 48:443 (1970); Pearson and Lipman, Methods in Mol. Biol. 24: 307-31 (1988); Higgins and Sharp, Gene 73:237-44 (1988); Higgins and Sharp, CABIOS 5:151-3 (1989); Corpet et al., Nuc. Acids Res. 16:10881-90 (1988); Huang et al., Comp. Appl. BioSci. 8:155-65 (1992) and Pearson et al., Meth. Mol. Biol. 24:307-31 (1994). The NCBI Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) (Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-10 (1990)) is accessible from the National Center for Biological Information (NBCI), etc., and blastp, blastn, It can be used in conjunction with sequence analysis programs such as blastx, tblastn and tblastx. BLAST is accessible through the BLAST page on the ncbi website. The sequence homology comparison method using this program can be found on the BLAST help page of the ncbi website.

본 발명의 또 다른 일 양태에 따르면, 본 발명은 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자를 인코딩하는 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터를 제공한다. According to another aspect of the present invention, the present invention provides a recombinant vector comprising a nucleic acid molecule encoding a nucleic acid molecule comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising the amino acid sequence of the peptide CBRV1-04369.

본 명세서에서 용어 "벡터"는 숙주 세포에서 목적 유전자를 발현시키기 위한 수단으로 플라스미드 벡터; 코즈미드 벡터; 그리고 박테리오파아지 벡터, 아데노바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터 및 아데노-연관 바이러스 백터 같은 바이러스 벡터 등을 포함한다. As used herein, the term "vector" refers to a plasmid vector as a means for expressing a gene of interest in a host cell; cosmid vector; and viral vectors such as bacteriophage vectors, adenoviral vectors, retroviral vectors and adeno-associated viral vectors, and the like.

본 발명의 구체적인 구현예에 따르면, 본 발명의 벡터에서 상기 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자는 상기 벡터의 프로모터와 작동적으로 결합(operatively linked)되어 있다. According to a specific embodiment of the present invention, in the vector of the present invention, a nucleic acid molecule comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising the amino acid sequence of the peptide CBRV1-04369 is operatively linked to the promoter of the vector. ) has been

본 명세서에서, 용어 "작동적으로 결합"은 핵산 발현 조절 서열(예: 프로모터, 시그널 서열, 또는 전사조절인자 결합 위치의 어레이)과 다른 핵산 서열사이의 기능적인 결합을 의미하며, 이에 의해 상기 조절 서열은 상기 다른 핵산 서열의 전사 및/또는 해독을 조절하게 된다. As used herein, the term "operably linked" refers to a functional linkage between a nucleic acid expression control sequence (e.g., a promoter, signal sequence, or array of transcriptional regulator binding sites) and another nucleic acid sequence, whereby the regulation The sequence will control the transcription and/or translation of said other nucleic acid sequence.

본 발명의 재조합 벡터 시스템은 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 구축될 수 있으며, 이에 대한 구체적인 방법은 Sambrook et al., Molecular Cloning, 기 Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press(2001)에 개시되어 있으며, 이 문헌은 본 명세서에 참조로서 삽입된다. The recombinant vector system of the present invention can be constructed through various methods known in the art, and specific methods for this are disclosed in Sambrook et al., Molecular Cloning, Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001), , this document is incorporated herein by reference.

본 발명의 벡터는 전형적으로 유전자 클로닝을 위한 벡터 또는 단백질의 발현을 위한 벡터로서 구축될 수 있다. 또한, 본 발명의 벡터는 원핵 세포 또는 진핵 세포를 숙주로 하여 구축될 수 있다. Vectors of the present invention may typically be constructed as vectors for gene cloning or as vectors for the expression of proteins. In addition, the vector of the present invention can be constructed using a prokaryotic cell or a eukaryotic cell as a host.

예를 들어, 본 발명의 벡터가 발현 벡터이고, 진핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 포유동물 세포의 지놈으로부터 유래된 프로모터(예: 메탈로티오닌 프로모터, beta 액틴 프로모터, 사람 해로글로빈 프로모터 및 사람 근육 크레아틴 프로모터) 또는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터(예: 아데노바이러스 후기 프로모터, 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터, SV40 프로모터, 사이토메갈로바이러스 프로모터, HSV의 tk 프로모터, 마우스 유방 종양 바이러스(MMTV) 프로모터, HIV의 LTR 프로모터, 몰로니 바이러스의 프로모터 엡스타인 바 바이러스(EBV)의 프로모터 및 로우스 사고마 바이러스(RSV)의 프로모터)가 이용될 수 있으며, 이들은 일반적으로 전사 종결 서열로서 폴리아데닐화 서열을 갖는다. For example, when the vector of the present invention is an expression vector and a eukaryotic cell is used as a host, promoters derived from the genome of mammalian cells (e.g., metallothionein promoter, beta actin promoter, human haeroglobin promoter, and human muscle creatine promoter) or from a mammalian virus (e.g. adenovirus late promoter, vaccinia virus 7.5K promoter, SV40 promoter, cytomegalovirus promoter, tk promoter of HSV, mouse mammary tumor virus (MMTV) promoter, HIV LTR promoter of moloney virus, promoter of Epstein Barr virus (EBV) and promoter of Roussagoma virus (RSV) can be used, and they generally have a polyadenylation sequence as a transcription termination sequence.

본 발명의 벡터는 그로부터 발현되는 폴리펩타이드 또는 단백질의 정제를 용이하게 하기 위하여, 다른 서열과 융합될 수도 있다. 융합되는 서열은 예컨대, 글루타티온 S-트랜스퍼라제(Pharmacia, USA), 말토스 결합 단백질(NEB, USA), FLAG(IBI, USA) 및 6)( His(hexahistidine; Quiagen, USA) 등이 있다. Vectors of the present invention may be fused with other sequences to facilitate purification of the polypeptide or protein expressed therefrom. Sequences to be fused include, for example, glutathione S-transferase (Pharmacia, USA), maltose binding protein (NEB, USA), FLAG (IBI, USA) and 6)( His (hexahistidine; Quiagen, USA).

한편, 본 발명의 발현 벡터는 선택표지로서, 당업계에서 통상적으로 이용되는 항생제 내성 유전자를 포함하며 예를 들어 암피실린, 겐타마이신, 카베니실린, 클로람페니콜, 스트렙토마이신, 카나마이신, 제네티신, 네오마이신 및 테트라사이클린에 대한 내성 유전자가 있다. On the other hand, the expression vector of the present invention contains an antibiotic resistance gene commonly used in the art as a selection marker, for example, ampicillin, gentamicin, carbenicillin, chloramphenicol, streptomycin, kanamycin, geneticin, neomycin and a gene for resistance to tetracycline.

본 발명의 또 다른 일 양태에 따르면, 본 발명은 상기 재조합 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 제공한다. According to another aspect of the present invention, the present invention provides a host cell transformed with the recombinant vector.

본 발명의 벡터를 안정되면서 연속적으로 클로닝 및 발현시킬 수 있는 숙주 세포는 당업계에 공지되어 있으며, 어떠한 숙주 세포도 이용할 수 있다. 예컨대, 상기 벡터의 적합한 진핵세포 숙주 세포는 원숭이 신장 세포7(COS7: monkey kidney cells), NSO 세포, SP2/0, 차이니즈 햄스터 난소(CHO: Chinese hamster ovary) 세포, \138, 어린 햄스터 신장(BHK: baby hamster kidney) 세포, MDCK, 골수종 세포주, HuT 78 세포 및 HEK-293 세포를 포함하나 이에 한정되지 않는다. Host cells capable of stably and continuously cloning and expressing the vector of the present invention are known in the art, and any host cell may be used. For example, suitable eukaryotic host cells for the vector include monkey kidney cells (COS7), NSO cells, SP2/0, Chinese hamster ovary (CHO) cells, \138, young hamster kidney (BHK). : baby hamster kidney) cells, MDCK, myeloma cell lines, HuT 78 cells, and HEK-293 cells, but are not limited thereto.

본 명세서에서 용어 "형질전환된", 형질도입된" 또는 "형질감염된' 은 외인성 핵산이 숙주세포 내로 전달되거나 도입되는 과정을 지칭한다. "형질전환된", "형질도입된" 또는 "형질감염된" 세포는 외인성 핵산으로 형질전환, 형질도입 또는 형질감염된 세포이며, 상기 세포는 당해 세포 및 그의 계대 배양으로 인한 자손 세포를 포함한다.As used herein, the terms “transformed”, “transduced” or “transfected” refer to a process by which an exogenous nucleic acid is transferred or introduced into a host cell. A "transformed", "transduced" or "transfected" cell is a cell that has been transformed, transduced or transfected with an exogenous nucleic acid, including the cell and progeny cells resulting from its passage.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함하는 아밀로이드 베타 관련 퇴행성 신경질환 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.According to another aspect of the present invention, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating amyloid beta-related neurodegenerative diseases comprising a polypeptide comprising the amino acid sequence of the peptide CBRV1-04369.

본 발명의 일 구현예에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 아밀로이드 베타의 섬유화 및 올리고머화를 저해하는 것이다.In one embodiment of the present invention, the polypeptide inhibits fibrosis and oligomerization of amyloid beta.

본 명세서의 용어 '아밀로이드 베타'는 아밀로이드 전구체 단백질(Amyloid precursor protein, APP)이 베타 및 감마 세크리타아제(β-, γ-secretase)에 의해 순차적으로 가수분해로 생성되는 39 내지 43개의 아미노산으로 이루어진 다수의 단백질을 말한다.As used herein, the term 'amyloid beta' refers to an amyloid precursor protein (APP) composed of 39 to 43 amino acids produced by sequential hydrolysis by beta and gamma secretases (β-, γ-secretase). refers to many proteins.

본 명세서의 용어 '아밀로이드 베타42(Aβ42)'는 C말단이 Ala인 응집성이 높고 알츠하이머병 환자의 뇌에 초기부터 우세하게 축적되는 것으로 알려진 아밀로이드베타 단백질을 말한다. As used herein, the term 'amyloid beta 42 (Aβ42)' refers to an amyloid beta protein known to be highly cohesive and predominantly accumulated in the brain of Alzheimer's disease patients from the early stage, the C-terminus of which is Ala.

본 명세서의 용어, 아밀로이드베타 '올리고머(oligomer)'는 아밀로이드 베타 모노머가 서로 응집된(aggregated) 가용성(soluble) 또는 비가용성 형태를 의미한다.As used herein, the term 'oligomer' of amyloid beta refers to a soluble or insoluble form in which amyloid beta monomers are aggregated with each other.

본 명세서의 용어, 아밀로이드 베타 '올리고머화(oligomerization)'은 아밀로이드 베타 모노머 자체가 서로 집적된 가용성 또는 비가용성의 올리고머가 형성되는 과정을 의미한다.As used herein, the term 'oligomerization' of amyloid beta refers to a process in which soluble or insoluble oligomers in which amyloid beta monomers themselves are integrated with each other are formed.

본 명세서의 용어 '퇴행성 신경 질환'은 알츠하이머병(Alzheimer's disease), 파킨슨 병, 헌팅턴 병, 경도인지장애(mild cognitive impairment), 아밀로이드 맥관병증, 아밀로이드성 뇌졸증(stroke), 및 전신성 아밀로이드병으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 말한다.The term 'degenerative neurological disease' as used herein is a group consisting of Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, mild cognitive impairment, amyloid angiopathy, amyloidogenic stroke, and systemic amyloidosis. means to be selected from

본 명세서의 용어 '알츠하이머병(Alzheimer's disease, AD)'은 대뇌 피질, 해마 등의 뇌 영역에서 아밀로이드 베타의 침착으로 인해 아밀로이드 플라크가 형성되고, 단백질 타우(tau)가 미세소관에 결합하여 신경원섬유 엉킴(neurofibrillary tangle)이 형성되는, 점진적인 기억력의 상실, 인지 능력의 감소, 및 치매를 수반하는 퇴행성 신경질환을 의미한다. 알츠하이머병의 임상적 증상에는 기억력 감퇴, 언어능력 저하, 시공간 파악능력 저하, 판단력 및 일상생활 수행 능력의 저하, 보행장애, 거동장애 등의 인지장애 증상이 포함된다.As used herein, the term 'Alzheimer's disease (AD)' refers to the formation of amyloid plaques due to the deposition of amyloid beta in brain regions such as the cerebral cortex and hippocampus, and the protein tau binds to microtubules to entangle neurofibrillary tangles It refers to a degenerative neurological disease in which a neurofibrillary tangle is formed, accompanied by progressive memory loss, cognitive decline, and dementia. Clinical symptoms of Alzheimer's disease include cognitive impairment symptoms such as memory decline, decline in language ability, decline in visuospatial ability, decline in judgment and daily life performance, gait disorder, and behavior disorder.

본 명세서의 용어 '예방'은 질환 또는 질환 상태의 방지 또는 보호적인 치료를 의미한다. 본 명세서의 용어 '치료'는 질환 상태의 감소, 억제, 진정 또는 근절을 의미한다.The term 'prevention' as used herein refers to the prevention or protective treatment of a disease or disease state. The term 'treatment' as used herein means reduction, suppression, sedation or eradication of a disease state.

본 발명의 약학 조성물은 분말, 과립, 정제, 피복정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 현탁액제, 겔제, 시럽제, 슬러리제, 좌약, 관장제, 에멀전제, 페이스트제(pastes), 연고제, 크림제, 로션제, 산제, 분무제 또는 현탁액으로 제형화될 수 있다. The pharmaceutical composition of the present invention can be formulated into powders, granules, tablets, coated tablets, pills, dragees, capsules, solutions, suspensions, gels, syrups, slurries, suppositories, enemas, emulsions, pastes, ointments, It can be formulated as a cream, lotion, powder, spray or suspension.

본 발명의 약학 조성물은 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가 로 포함할 수 있다. 예를 들면, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피를리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유 등이다. The pharmaceutical composition of the present invention may further include suitable carriers, excipients or diluents commonly used in the preparation of pharmaceutical compositions. For example, lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, mannitol, starch, gum acacia, alginates, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrlidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate or mineral oil.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, 약학적으로 유효한 양은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수해/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 상기 조성물의 사용량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 펩타이드가 아밀로이드성 질병의 치료에 유용한 혈중 농도가 되도록 충분한 양을 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있다,The pharmaceutical composition according to the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount. In the present invention, a pharmacologically effective amount means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable damage / risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level is the type of patient's disease, severity, activity of the drug, and It may be determined according to factors including sensitivity, time of administration, route of administration and excretion rate, duration of treatment, drugs used concurrently, and other factors well known in the medical field. The amount of the composition used may vary depending on the age, sex, and weight of the patient, but a sufficient amount of the peptide may be administered once or several times a day to achieve a blood concentration useful for the treatment of amyloidosis.

상기 조성물의 투여량은 투여 경로, 질병의 정도, 성별 체중, 나이 등에 따라 증감될 수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.The dosage of the composition may be increased or decreased depending on the route of administration, severity of disease, gender, weight, age, and the like. Accordingly, the dosage is not intended to limit the scope of the present invention in any way.

본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 뇌내 투여, 경구 복용, 피하 주사, 복강 투여, 정맥 주사, 근육 주사, 척수 주위 공간(경막내) 주사, 설하 투여, 불점막 투여, 직장 내삽입, 질 내 삽입, 안구 투여, 귀 투여, 비강 투여, 흡입, 입 또는 코를 통한 분무, 피부 투여, 경피 투여 등에 따라 투여될 수 있다. The pharmaceutical composition of the present invention can be administered to a subject by various routes. All modes of administration can be envisaged, for example, intracerebral administration, oral administration, subcutaneous injection, intraperitoneal administration, intravenous injection, intramuscular injection, paraspinal space (intrathecal) injection, sublingual administration, mucosal administration, intrarectal It can be administered by insertion, vaginal insertion, ocular administration, ear administration, nasal administration, inhalation, spraying through the mouth or nose, dermal administration, transdermal administration, and the like.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 본 발명이 속하는 기술분야에 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. The pharmaceutical composition according to the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and may be administered single or multiple times. Considering all of the above factors, it is important to administer an amount that can obtain the maximum effect with the minimum amount without side effects, which can be easily determined by a person skilled in the art to which the present invention belongs.

본 발명에서 “예방" 이란 알츠하이머 치매의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미하고, “치료" 란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 알츠하이머 치매가 호전되거나 이롭게 변경되는 모는 행위를 의미하며, “개선" 이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 알츠하이머 치매와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다. In the present invention, "prevention" means any action that suppresses or delays the onset of Alzheimer's dementia, and "treatment" means any action that improves or beneficially changes Alzheimer's dementia by administration of the pharmaceutical composition according to the present invention. , "Improvement" refers to any activity that reduces parameters related to Alzheimer's dementia, for example, the severity of symptoms, by administration of the composition according to the present invention.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함하는 아밀로이드 베타 단백질 검출용 조성물을 제공한다.According to another aspect of the present invention, the present invention provides a composition for detecting amyloid beta protein comprising a polypeptide comprising the amino acid sequence of the peptide CBRV1-04369.

본 발명의 아밀로이드 베타 단백질 검출용 조성물에는 펩타이드의 활성 유지 및 펩타이드와 아밀로이드 베타 단백질의 결합을 확인하기 위한 보조물질 등 통상의 잔류 약물 검출용 조성물에 포함될 수 있는 첨가물이 더 포함될 수 있다.The composition for detecting amyloid beta protein of the present invention may further include additives that may be included in conventional compositions for detecting residual drug, such as auxiliary substances for maintaining the activity of the peptide and confirming the binding between the peptide and amyloid beta protein.

본 발명의 아밀로이드 베타 단백질 검출용 조성물에는 검사대상의 시료를 채취 또는 진단 시약을 적용하기 위한 도구, 펩타이드 CBRV1-04369와 아밀로이드 베타 단백질의 결합을 확인하기 위한 시약 또는 장치 등 펩타이드를 사용하여 생물학적 시료로부터 아밀로이드 베타 단백질의 존재유무를 확인하는 통상의 진단용 조성물에 포함될 수 있는 도구, 장치 또는 시약이 더 포함될 수 있다.In the composition for detecting amyloid beta protein of the present invention, a tool for collecting a sample to be tested or applying a diagnostic reagent, a reagent or device for confirming the binding of peptide CBRV1-04369 and amyloid beta protein, etc. A tool, device, or reagent that can be included in a conventional diagnostic composition for confirming the presence or absence of amyloid beta protein may be further included.

상기 검출용 조성물에 포함될 수 있는 도구/시약으로는 적합한 담체, 검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 표지 물질, 용해제, 세정제, 완충제, 안정화제 등이 포함되나 이로 제한되지 않는다. 적합한 담체로는, 이에 한정되지는 않으나, 가용성 담체, 예를 들어 당 분야에 공지된 생리학적으로 허용되는 완충액, 예를 들어 PBS, 불용성 담체, 예를 들어 폴리스티렌, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리에스테르, 폴리아크릴로니트릴, 불소 수지, 가교덱스트란, 폴리사카라이드, 라텍스에 금속을 도금한 자성 미립자와 같은 고분자, 기타 종이, 유리, 금속, 아가로오스 및 이들의 조합일 수 있다.Tools/reagents that may be included in the detection composition include, but are not limited to, suitable carriers, labeling substances capable of generating detectable signals, solubilizers, detergents, buffers, and stabilizers. Suitable carriers include, but are not limited to, soluble carriers such as physiologically acceptable buffers known in the art such as PBS, insoluble carriers such as polystyrene, polyethylene, polypropylene, polyester, Polyacrylonitrile, fluorine resin, cross-linked dextran, polysaccharide, polymers such as magnetic fine particles plated with metal on latex, other paper, glass, metal, agarose, and combinations thereof.

본 명세서의 용어 '멀티머 검출 시스템(multimer detection system, MDS)'은 멀티머-형성 폴리펩타이드의 모노머형으로부터 멀티머형을 분별 검출하는 방법을 의미한다. 더욱 구체적으로, 대한민국 등록특허 제10-0987639호에 개시된 검출 방법일 수 있다.The term 'multimer detection system (MDS)' used herein refers to a method for differentially detecting a multimer type from a monomer type of a multimer-forming polypeptide. More specifically, it may be a detection method disclosed in Korean Patent Registration No. 10-0987639.

본 명세서의 용어 'Thioflavin T(ThT) assay'는 항아밀로이드 생성 화합물의 존재 하에서 아밀로이드 단백질의 섬유화 형성 및 억제 정도를 정량화하기 위해 사용되는 분석 기법을 말한다.As used herein, the term 'Thioflavin T (ThT) assay' refers to an analysis technique used to quantify the degree of fibrosis formation and inhibition of amyloid protein in the presence of an anti-amyloidogenic compound.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상기 아밀로이드 베타 단백질 검출용 조성물을 시료 샘플과 접촉시켜 형성된 펩타이드-아밀로이드 베타 단백질 복합체를 검출하는 단계를 포함하는 아밀로이드 베타 단백질의 검출방법을 제공한다.According to another aspect of the present invention, the present invention provides a method for detecting amyloid beta protein comprising the step of detecting a peptide-amyloid beta protein complex formed by contacting the composition for detecting amyloid beta protein with a sample sample.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 검출하는 단계는 ELISA 또는 표면 플라스마 공명(SRP) 기법 등 단백질과 펩타이드의 결합 시그널을 확인할 수 있는 모든 실험 방법을 통해 수행될 수 있다.According to one embodiment of the present invention, the detecting step may be performed through any experimental method capable of confirming the binding signal between a protein and a peptide, such as ELISA or surface plasma resonance (SRP) technique.

본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:The features and advantages of the present invention are summarized as follows:

(a) 본 발명은 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 제공한다. (a) The present invention provides a polypeptide comprising the amino acid sequence of peptide CBRV1-04369.

(b) 본 발명은 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자를 제공한다.(b) The present invention provides a nucleic acid molecule comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising the amino acid sequence of peptide CBRV1-04369.

(c) 본 발명은 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터를 제공한다.(c) The present invention provides a recombinant vector comprising a nucleic acid molecule comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising the amino acid sequence of peptide CBRV1-04369.

(d) 본 발명은 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 제공한다.(d) The present invention provides a host cell transformed with a recombinant vector comprising a nucleic acid molecule comprising a nucleotide sequence encoding a polypeptide comprising the amino acid sequence of peptide CBRV1-04369.

(e) 본 발명은 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함하는 아밀로이드 베타 관련 퇴행성 신경질환 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.(e) The present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating amyloid beta-related neurodegenerative diseases comprising a polypeptide comprising the amino acid sequence of the peptide CBRV1-04369.

(f) 본 발명은 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함하는 아밀로이드 베타 단백질 검출용 조성물을 제공한다.(f) The present invention provides a composition for detecting amyloid beta protein comprising a polypeptide comprising the amino acid sequence of the peptide CBRV1-04369.

(g) 본 발명은 펩타이드 CBRV1-04369의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함하는 아밀로이드 베타 단백질 검출용 조성물을 시료 샘플과 접촉시켜 형성된 펩타이드-아밀로이드 베타 단백질 복합체를 검출하는 단계를 포함하는 아밀로이드 베타 단백질의 검출방법을 제공한다.(g) Amyloid beta protein comprising the step of detecting a peptide-amyloid beta protein complex formed by contacting a composition for detecting amyloid beta protein comprising a polypeptide comprising an amino acid sequence of peptide CBRV1-04369 with a sample of the present invention A detection method is provided.

(h) 본 발명의 아밀로이드 베타 단백질과 직접적으로 결합하는 펩타이드 CBRV1-04369를 이용하는 경우, 아밀로이드 베타의 섬유화 및 올리고머화를 방지할 수 있으므로 알츠하이머 등 아밀로이드성 질환의 치료 및 예방에 사용할 수 있다. 또한, 아밀로이드 베타의 검출에 사용할 수 있으므로 알츠하이머 등 아밀로이드성 질환의 진단에 사용할 수 있다. (h) When using the peptide CBRV1-04369 that directly binds to amyloid beta protein of the present invention, it can prevent fibrosis and oligomerization of amyloid beta protein, so it can be used for treatment and prevention of amyloid diseases such as Alzheimer's disease. In addition, since it can be used to detect amyloid beta, it can be used for diagnosis of amyloid-related diseases such as Alzheimer's disease.

도 1은 펩타이드 CBRV1-04369의 구조와 아미노산 서열을 나타낸다. 상기 도 1의 펩타이드 CBRV1-04369는 6개의 시스테인을 포함하며, 모두 3개의 이황화결합을 포함한다. 상기 이황화결합은 첫번째 Cys와 여섯번째 Cys, 두번째 Cys와 네번째 Cys 및 세번째 Cys와 다섯번째 Cys이 각각 이황화결합한다. 구체적으로 살펴보면, 상기 도 1의 펩타이드는 1번 Cys과 36번 Cys, 9번 Cys과 29번 Cys 및 18번 Cys과 33번 Cys이 각각 이황화결합할 수 있다
도 2는 Thioflovin T(ThT) assay를 이용해 아밀로이드 베타 단백질(Aβ)의 섬유화 저해 효과를 측정한 것이다. 펩타이드 CBRV1-04369 처리군의 경우, 아무 물질을 첨가하지 않은 negative control군 및 기존에 아밀로이드베타의 결합을 저해하는 것으로 알려진 화합물인 독소루비신(doxorubicin)을 넣은 positive control군에 비해 아밀로이드 베타의 단백질의 섬유화를 저해함을 나타낸다.
도 3는 멀티머 검출 시스템(multimer detention system, MDS) assay를 통한 약물의 아밀로이드 베타 단백질(Aβ)의 올리고머화 저해 효과를 측정한 것이다. 펩타이드 CBRV1-04369가 아밀로이드 베타 단백질의 올리고머화를 저해함을 나타낸다.
도 4는 펩타이드 CBRV1-04369와 아밀로이드 베타42(Aβ42)의 직접적인 결합도를 측정한 것이다. 펩타이드를 플레이트 표면에 친수성 결합시킨 후 Aβ42 처리해 결합을 유도하고 항 Aβ42 항체를 사용해 결합여부와 정도를 ELISA를 통해 측정하였다. 일반 ELISA와 malemide ELISA 모두에서 펩타이드 CBRV1-04369는 높은 시그널로 Aβ42와 결합함을 나타낸다.
도 5는 펩타이드 CBRV1-04369를 처리하는 경우 Aβ의 세포 독성이 저해되는지 여부를 측정한 것이다. 신경모세포종 SH-SY5Y 세포에 펩타이드 CBRV1-04369를 처리하고 Aβ1-42(5M)과 함께 배양한 경우 세포 생존율이 증가하였다.Figure 1 shows the structure and amino acid sequence of peptide CBRV1-04369. Peptide CBRV1-04369 of FIG. 1 includes 6 cysteines and 3 disulfide bonds. The disulfide bonds are disulfide bonds between the first Cys and the sixth Cys, between the second Cys and the fourth Cys, and between the third Cys and the fifth Cys. Specifically, in the peptide of FIG. 1, Cys 1 and Cys 36, Cys 9 and Cys 29, and Cys 18 and Cys 33 may be disulfide bonded, respectively.
Figure 2 is a measurement of the fibrosis inhibitory effect of amyloid beta protein (Aβ) using Thioflovin T (ThT) assay. In the case of the peptide CBRV1-04369 treatment group, compared to the negative control group to which no substance was added and the positive control group to which doxorubicin, a compound known to inhibit the binding of amyloid beta, was added, the fibrosis of amyloid beta protein was reduced. indicates inhibition.
3 is a measurement of the oligomerization inhibitory effect of amyloid beta protein (Aβ) of a drug through a multimer detention system (MDS) assay. Indicates that peptide CBRV1-04369 inhibits oligomerization of amyloid beta protein.
Figure 4 measures the degree of direct binding between the peptide CBRV1-04369 and amyloid beta 42 (Aβ42). After hydrophilic binding of the peptide to the plate surface, Aβ42 treatment was used to induce binding, and the binding status and degree were measured by ELISA using an anti-Aβ42 antibody. In both general ELISA and malemide ELISA, peptide CBRV1-04369 binds to Aβ42 with a high signal.
5 is a measurement of whether the cytotoxicity of Aβ is inhibited when the peptide CBRV1-04369 is treated. Cell viability increased when neuroblastoma SH-SY5Y cells were treated with the peptide CBRV1-04369 and cultured with Aβ1-42 (5M).

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are only for explaining the present invention in more detail, and it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the present invention is not limited by these examples according to the gist of the present invention. .

실시예Example

본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 "%"는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (중량/중량) %, 고체/액체는 (중량/부피) %, 그리고 액체/액체는 (부피/부피) %이다.Throughout this specification, unless otherwise specified, "%" used to indicate the concentration of a particular substance is (weight/weight) % for solids/solids, (weight/volume) % for solids/liquids, and liquid/liquid is (volume/volume) %.

실시예 1. 실험방법 Example 1. Experimental method

1-1. 펩타이드 CBRV1-04369의 합성1-1. Synthesis of Peptide CBRV1-04369

도 1에 나타낸 펩타이드 CBRV1-04369를 Shanghai royobiotech Co.,Ltd (http://www.royobiotech.com)에 의뢰하여 제작하였다. 본 발명의 사용된 펩타이드 CBRV1-04369는 당업계의 통상적인 펩타이드의 화학적 합성 방법(W H Freeman and Co, Proteins; structures and molecular principles, 1983)으로 합성하는 것이 바람직하며, 구체적으로는 액상 펩타이드 합성법(Solution Phase Peptide synthesis), 고상 펩타이드 합성법(solid-phase peptide syntheses), 단편 응축법 및 F-moc 또는 T-BOC 화학법으로 합성하는 것이 보다 바람직하고, 더욱 구체적으로는 고상 펩타이드 합성법으로 합성하는 것이 가장 바람직하다.Peptide CBRV1-04369 shown in Figure 1 was produced by requesting Shanghai royobiotech Co., Ltd ( http://www.royobiotech.com ). Peptide CBRV1-04369 used in the present invention is preferably synthesized by a conventional chemical synthesis method of peptides in the art (WH Freeman and Co, Proteins; structures and molecular principles, 1983), specifically, liquid peptide synthesis method (Solution Phase Peptide synthesis), solid-phase peptide syntheses, fragment condensation, and F-moc or T-BOC chemistry are more preferable, and more specifically, solid-phase peptide synthesis is most preferable. do.

1-2. ThT assay1-2. ThT assay

인간 Aβ42(AggreSureTM, AnaSpec)를 PBS에 용해하여 아밀로이드 베타를 준비하였다. 펩타이드를 아밀로이드 베타에 첨가한 후 티오플라빈 T 용액(ThT, 50 μM, Sigma Aldrich 사)을 섞어서, 37℃에서 24시간 동안 반응시켰다. 그 후, 마이크로플레이트 판독기(PerkinElmer Victor-3®)를 사용하여 형광 시그널(fluorescence signal)을 측정하였다. 음성 대조군(negative control)으로는 펩타이드나 화합물과 같은 첨가 없이 티오플라빈 T 용액과 아밀로이드 베타를 반응시킨 혼합물을 사용하였다.Amyloid beta was prepared by dissolving human Aβ42 (AggreSure ™ , AnaSpec) in PBS. After the peptide was added to amyloid beta, a thioflavin T solution (ThT, 50 μM, Sigma Aldrich) was mixed and reacted at 37° C. for 24 hours. After that, the fluorescence signal was measured using a microplate reader (PerkinElmer Victor-3 ® ). As a negative control, a mixture obtained by reacting thioflavin T solution with amyloid beta without addition of peptides or compounds was used.

1-3. MDS assay1-3. MDS assay

먼저, 아밀로이드 베타 포획 항체(capturing antibody) 6E10(BioLegend, USA)을 pH 9.4의 소듐 카보네이트-바이카보네이트(Sodium Carbonate-Bicarbonate)에 희석하여 코팅 버퍼(coating buffer)를 제조하였다. 상기 코팅 버퍼를 96 웰 플레이트에 분주하고, 4℃ 냉장고에서 밤새 항온 반응시킴으로써, 상기 플레이트를 상기 포획 항체로 코팅하였다. First, a coating buffer was prepared by diluting the amyloid beta capturing antibody 6E10 (BioLegend, USA) in sodium carbonate-bicarbonate of pH 9.4. The coating buffer was dispensed into a 96-well plate, and the plate was coated with the capture antibody by incubating overnight in a 4° C. refrigerator.

코팅된 플레이트에 블로킹 버퍼(blocking buffer)를 분주하여 상온에서 2시간 동안 항온 반응시켜 블로킹하였다. 상기 블로킹 버퍼는 2% BSA(bovine serum albumin)를 포함하는 PBST이다. 블로킹 과정을 거친 각 샘플을 웰에 분주하였다. 이 후, 상온에서 1시간 동안 항온 반응시켰다. A blocking buffer was dispensed on the coated plate and blocked by incubation at room temperature for 2 hours. The blocking buffer is PBST containing 2% bovine serum albumin (BSA). Each sample that had undergone the blocking process was dispensed into wells. Thereafter, the reaction was incubated at room temperature for 1 hour.

이어서, 검출 버퍼(detecting buffer)를 각 웰에 분주하여, 상온에서 30분 동안 항온 반응시켰다. 상기 검출 버퍼는 0.1 μg/ml 농도의 검출 항체(detecting antibody) WO2-HRP(WO2-horseradish peroxidase antibody, PeopleBio Inc., South Korea)를 포함하는 PBST이다. Subsequently, a detecting buffer was dispensed into each well and incubated at room temperature for 30 minutes. The detection buffer is PBST containing a detecting antibody WO2-HRP (WO2-horseradish peroxidase antibody, PeopleBio Inc., South Korea) at a concentration of 0.1 μg/ml.

TMB(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine) 용액을 각 웰에 분주하여 30분간 항온 반응시켰다. 정지 용액(H2SO4, 1 M)을 각 웰에 분주하였다. 이어서, 450 nm 파장에서 마이크로플레이트 판독기(PerkinElmer Victor-3®)를 사용하여 신호를 측정하였다. 음성 대조군(negative control) 또한 450 nm 파장에서 신호를 측정하였다. A 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine (TMB) solution was dispensed into each well and incubated for 30 minutes. A stop solution (H 2 SO 4 , 1 M) was dispensed into each well. The signal was then measured using a microplate reader (PerkinElmer Victor- 3® ) at a wavelength of 450 nm. A negative control signal was also measured at a wavelength of 450 nm.

1-4. ELISA1-4. ELISA

일반 ELISA의 경우 폴리펩타이드를 pH 9.4의 소듐 카보네이트-바이카보네이트(Sodium Carbonate-Bicarbonate)에 희석하여 마이크로플레이트에 분주한 후, 4℃에서 overnight으로 반응시켰다. 코팅된 플레이트에 블로킹 버퍼(blocking buffer)를 분주하여 상온에서 2시간 동안 항온 반응시켜 블로킹하였다. 상기 블로킹 버퍼는 2% BSA(bovine serum albumin)를 포함하는 PBST이다. 블로킹 과정이 끝나면 Aβ42를 처리하여 폴리펩타이드와 반응시켰다. 이어서, 검출 버퍼(detecting buffer)를 각 웰에 분주하여, 상온에서 30분 동안 항온 반응시켰다. 상기 검출 버퍼는 0.1 μg/ml 농도의 검출 항체(detecting antibody) WO2-HRP(WO2-horseradish peroxidase antibody, PeopleBio Inc., South Korea)를 포함하는 PBST이다. TMB(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine) 용액을 각 웰에 분주하여 30분간 항온 반응시켰다. 정지 용액(H2SO4, 1 M)을 각 웰에 분주하였다. 이어서, 450 nm 파장에서 마이크로플레이트 판독기(PerkinElmer Victor-3®)를 사용하여 신호를 측정하였다. 음성 대조군(negative control) 또한 450 nm 파장에서 신호를 측정하였다. In the case of general ELISA, the polypeptide was diluted in sodium carbonate-bicarbonate at pH 9.4, dispensed on a microplate, and then reacted overnight at 4°C. A blocking buffer was dispensed on the coated plate and blocked by incubation at room temperature for 2 hours. The blocking buffer is PBST containing 2% bovine serum albumin (BSA). After the blocking process, Aβ42 was treated and reacted with the polypeptide. Subsequently, a detecting buffer was dispensed into each well and incubated at room temperature for 30 minutes. The detection buffer is PBST containing a detecting antibody WO2-HRP (WO2-horseradish peroxidase antibody, PeopleBio Inc., South Korea) at a concentration of 0.1 μg/ml. A 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine (TMB) solution was dispensed into each well and incubated for 30 minutes. A stop solution (H 2 SO 4 , 1 M) was dispensed into each well. The signal was then measured using a microplate reader (PerkinElmer Victor- 3® ) at a wavelength of 450 nm. A negative control signal was also measured at a wavelength of 450 nm.

Maleimide ELISA의 경우 Maleimide Activated Plates (Thermo)에 PBS에 희석된 폴리펩타이드를 처리한 후, 4℃에서 overnight 반응하였다. 코팅된 플레이트에 블로킹 버퍼(blocking buffer)를 분주하여 상온에서 2시간 동안 항온 반응시켜 블로킹하였다. 상기 블로킹 버퍼는 2% BSA(bovine serum albumin)를 포함하는 PBST이다. 블로킹 과정이 끝나면 Aβ42를 처리하여 폴리펩타이드와 반응시켰다. 이어서, 검출 버퍼(detecting buffer)를 각 웰에 분주하여, 상온에서 30분 동안 항온 반응시켰다. 상기 검출 버퍼는 0.1 μg/ml 농도의 검출 항체(detecting antibody) WO2-HRP(WO2-horseradish peroxidase antibody, PeopleBio Inc., South Korea)를 포함하는 PBST이다. TMB(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine) 용액을 각 웰에 분주하여 30분간 항온 반응시켰다. 정지 용액(H2SO4, 1 M)을 각 웰에 분주하였다. 이어서, 450 nm 파장에서 마이크로플레이트 판독기(PerkinElmer Victor-3®)를 사용하여 신호를 측정하였다. 음성 대조군(negative control) 또한 450 nm 파장에서 신호를 측정하였다.In the case of Maleimide ELISA, Maleimide Activated Plates (Thermo) were treated with a polypeptide diluted in PBS, followed by overnight reaction at 4°C. A blocking buffer was dispensed on the coated plate and blocked by incubation at room temperature for 2 hours. The blocking buffer is PBST containing 2% bovine serum albumin (BSA). After the blocking process, Aβ42 was treated and reacted with the polypeptide. Subsequently, a detecting buffer was dispensed into each well and incubated at room temperature for 30 minutes. The detection buffer is PBST containing a detecting antibody WO2-HRP (WO2-horseradish peroxidase antibody, PeopleBio Inc., South Korea) at a concentration of 0.1 μg/ml. A 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine (TMB) solution was dispensed into each well and incubated for 30 minutes. Stop solution (H2SO4, 1 M) was dispensed into each well. The signal was then measured using a microplate reader (PerkinElmer Victor-3®) at a wavelength of 450 nm. A negative control signal was also measured at a wavelength of 450 nm.

1-5. ATP 발광분석1-5. ATP luminescence assay

세포를 96 well plate에 2 Х 105 cell/well의 농도가 되도록 DMEM 배양액에 분주하여 overnight 동안 안정화시킨 후, 대조군으로는 아밀로이드베타만 처리하였으며 실험군으로는 폴리펩타이드와 아밀로이드베타를 같이 처리한 후 24시간 동안 반응시켰다. 배양액을 제거한 후 0.5 mg/ml MTT solution을 100 μl씩 각 well에 넣고 최소 1시간 동안 37℃인큐베이터에서 배양한 후 MTT를 제거하고 DMSO를 200μl 씩 분주하여 well에 생성된 포르마진(formazin)의 흡광도를 ELISA reader로 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.The cells were dispensed in DMEM culture medium to a concentration of 2 Х 10 5 cell/well in a 96 well plate and stabilized overnight. As a control group, only amyloid beta was treated, and as an experimental group, polypeptide and amyloid beta were treated together, and then 24 reacted over time. After removing the culture medium, add 100 μl of 0.5 mg/ml MTT solution to each well, incubate in an incubator at 37°C for at least 1 hour, remove MTT, and dispense 200 μl of DMSO. Absorbance of formazin generated in the well The absorbance was measured at 540 nm with an ELISA reader.

실시예 2. 알츠하이머병 치료용 후보물질의 선정 및 검증Example 2. Selection and verification of candidates for treatment of Alzheimer's disease

알츠하이머병의 원인 물질인 아밀로이드 베타 단백질의 올리고머화(Oligomerization) 및 섬유화(fibrilization)을 방지하는 후보물질을 탐색하였다. 기존에는 일반적으로 아밀로이드 베타 단백질의 섬유화를 방지하는 물질을 알츠하이머병 치료제의 후보물질로 선정하였다. 그러나 아밀로이드 베타 단백질의 올리고머 형태가 세포 독성을 가지는 것으로 지적되는 점, 아밀로이드 베타의 섬유화 저해가 올리고머의 안정성을 높임으로써 발생할 수 있는 점을 고려할 때 섬유화 저해 효과만으로 유효물질을 적절하게 스크리닝 할 수 없을 가능성이 있다. 따라서 본 발명에서는 아밀로이드 베타 단백질의 올리고머화 및 섬유화 모두를 방지하는지를 검증하여 알츠하이머병 치료제 후보물질 CBRV1-04369를 선정하였다. Candidates for preventing oligomerization and fibrilization of amyloid beta protein, which is a causative agent of Alzheimer's disease, were searched for. In the past, substances that prevent fibrosis of amyloid beta protein were generally selected as candidates for treatment of Alzheimer's disease. However, considering that the oligomeric form of amyloid beta protein is pointed out to have cytotoxicity and that inhibition of fibrosis of amyloid beta protein can occur by increasing the stability of oligomers, it is possible that effective substances cannot be properly screened only with the effect of inhibiting fibrosis. there is Therefore, in the present invention, CBRV1-04369, a candidate drug for Alzheimer's disease, was selected by verifying whether it prevents both oligomerization and fibrosis of amyloid beta protein.

2-1. ThT assay를 통한 CBRV1-04369의 Aβ의 섬유화 저해 효과 검증2-1. Verification of Aβ fibrosis inhibitory effect of CBRV1-04369 through ThT assay

ThT assay (Thioflovin T asaay)를 통해 CBRV1-04369와 thioflavin T 및 Aβ를 함께 반응시켜 형광을 관찰하였다. 형광은 5분 간격으로 2시간 측정되었다. Negative 대조군에 비해 CBRV1-04369 처리군의 Aβ의 섬유화가 약 86.4%의 매우 높은 수준으로 저해되었다(도 2).Fluorescence was observed by reacting CBRV1-04369 with thioflavin T and Aβ together through ThT assay (Thioflavin T assay). Fluorescence was measured for 2 hours at 5 minute intervals. Fibrosis of Aβ in the CBRV1-04369-treated group was inhibited at a very high level of about 86.4% compared to the negative control group (FIG. 2).

2-2. MDS assay를 통한 CBRV1-04369의 Aβ의 올리고머화 저해 효과 검증2-2. Verification of Aβ oligomerization inhibitory effect of CBRV1-04369 through MDS assay

MDS assay (Multimer Detection System assay)를 통해 CBRV1-04369의 올리고머화 저해효과를 검증하였다. Aβ를 CBRV1-04369와 반응시켜 샘플을 만들고 -80℃에 보관하였다. MDS-HTS를 통해 각 샘플의 Aβ 올리고머화 수준을 측정하였다. Negative 대조군에 비해 CBRV1-04369의 올리고머화 저해능이 약 70% 정도로 매우 높게 나타났다(도 3).The oligomerization inhibitory effect of CBRV1-04369 was verified through MDS assay (Multimer Detection System assay). Samples were prepared by reacting Aβ with CBRV1-04369 and stored at -80°C. The Aβ oligomerization level of each sample was measured by MDS-HTS. Compared to the negative control group, the oligomerization inhibition ability of CBRV1-04369 was very high, about 70% (FIG. 3).

실시예 3. ELISA를 통한 Aβ와 펩타이드 CBRV1-04369의 직접적인 결합 측정Example 3. Direct binding measurement between Aβ and peptide CBRV1-04369 by ELISA

ELISA를 통해 플레이트에 CBRV1-04369와 Aβ를 처리하여 흡광도를 측정하였다. 일반 ELISA는 플레이트 표면에 펩타이드를 친수성 결합(hydrophilic binding) 시킨 뒤 Aβ42를 처리해 결합을 유도하여 진행하였다. 항Aβ42항체를 사용해 결합여부와 그 정도를 측정하였다. Maleimide ELISA는 플레이트 표면에 maleimide 잔기가 있어 펩타이드의 시스테인(cysteine) 잔기와 결합한다. 펩타이드를 플레이트에 결합시키고 동일하게 Aβ42를 처리해 결합을 유도하고 항체로 결합 여부와 정도를 측정하였다. CBRV1-04369 펩타이드는 일반 ELISA 및 maleimide ELISA에서 높은 Aβ42 결합력을 보여주었다. The absorbance was measured by treating the plate with CBRV1-04369 and Aβ through ELISA. General ELISA was performed by hydrophilic binding the peptide to the surface of the plate and then inducing binding by treating with Aβ42. The presence and degree of binding were measured using an anti-Aβ42 antibody. Maleimide ELISA has a maleimide residue on the surface of the plate, which binds to the cysteine residue of the peptide. The peptides were bound to the plate, treated with Aβ42 in the same way to induce binding, and the presence and degree of binding were measured with antibodies. The CBRV1-04369 peptide showed high Aβ42 binding ability in general ELISA and maleimide ELISA.

실시예 4. Aβ에 의한 세포 독성 저해 효과 검증Example 4. Verification of cytotoxicity inhibitory effect by Aβ

96웰 플레이트의 각 웰에 신경모세포종 SH-SY5Y 세포를 5000개씩 시딩하고, Aβ와 펩타이드 CBRV1-04369를 포함하는 약물을 처리하여 세포의 생존율을 흡광도로 측정하였다. 미처리 대조군은 약물 및 Aβ를 처리하지 않았고, Aβ처리 대조군은 약물없이 Aβ만 처리하였다. 실험군은 5시간 동안 15uM의 펩타이드 CBRV1-04369를 포함하는 화합물로 전처리한 후 Aβ1-42(5M)를 처리해 배양하였다. Aβ 처리군은 세포 생존률이 64%에 불과하였으나, 펩타이드 CBRV1-04369를 함께 처리한 경우 생존률이 84%로 증가하여 해당 펩타이드의 세포 독성 저해 효과가 검증되었다 (도 5).5000 neuroblastoma SH-SY5Y cells were seeded in each well of a 96-well plate, treated with a drug containing Aβ and the peptide CBRV1-04369, and cell viability was measured by absorbance. The untreated control group was not treated with drug and Aβ, and the Aβ-treated control group was treated with only Aβ without drug. The experimental group was pretreated with a compound containing 15uM of the peptide CBRV1-04369 for 5 hours and then treated with Aβ1-42 (5M) and cultured. The cell viability of the Aβ-treated group was only 64%, but when treated together with the peptide CBRV1-04369, the viability increased to 84%, confirming the cytotoxicity inhibitory effect of the peptide (FIG. 5).

Claims (10)

서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩타이드.
A polypeptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
 제1항의 폴리펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자.
A nucleic acid molecule comprising a nucleotide sequence encoding the polypeptide of claim 1 .
 제2항에 있어서, 상기 뉴클레오타이드 서열은 서열번호 2의 뉴클레오타이드 서열인, 핵산 분자.
The nucleic acid molecule according to claim 2, wherein the nucleotide sequence is the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2.
 제2항의 핵산 분자를 포함하는 재조합 벡터.
A recombinant vector comprising the nucleic acid molecule of claim 2 .
 제4항의 재조합 벡터로 형질전환된 숙주 세포.
A host cell transformed with the recombinant vector of claim 4.
 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩타이드를 포함하는 알츠하이머병, 아밀로이드 맥관병증, 아밀로이드성 뇌졸중(stroke), 전신성 아밀로이드병, 및 파킨슨 병으로 이루어진 군에서 선택되는 아밀로이드 베타 관련 퇴행성 신경질환 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
For preventing or treating amyloid beta-related neurodegenerative diseases selected from the group consisting of Alzheimer's disease, amyloid angiopathy, amyloid stroke, systemic amyloid disease, and Parkinson's disease comprising a polypeptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 Pharmaceutical composition.
 제6항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 아밀로이드 베타의 섬유화 및 올리고머화를 저해하는 것인, 조성물.
The composition of claim 6, wherein the polypeptide inhibits fibrosis and oligomerization of amyloid beta.
 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 폴리펩타이드를 포함하는 아밀로이드 베타 단백질 검출용 조성물.
A composition for detecting amyloid beta protein comprising a polypeptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
 제8항의 조성물을 시료 샘플과 접촉시켜 형성된 펩타이드-아밀로이드 베타 단백질 복합체를 검출하는 단계를 포함하는 아밀로이드 베타 단백질의 검출방법.
A method for detecting amyloid beta protein comprising the step of detecting a peptide-amyloid beta protein complex formed by contacting the composition of claim 8 with a sample sample.
 삭제delete
KR1020220097555A 2022-08-04 2022-08-04 Amyloid beta-specific peptide CBRV1-04369 and a composition for treating Alzheimer's disease comprising the same KR102565471B1 (en)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020220097555A KR102565471B1 (en) 2022-08-04 2022-08-04 Amyloid beta-specific peptide CBRV1-04369 and a composition for treating Alzheimer's disease comprising the same
PCT/KR2023/011509 WO2024029995A1 (en) 2022-08-04 2023-08-04 Amyloid beta-specific peptide cbrv1-04369 and composition for treating alzheimer's disease comprising same

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020220097555A KR102565471B1 (en) 2022-08-04 2022-08-04 Amyloid beta-specific peptide CBRV1-04369 and a composition for treating Alzheimer's disease comprising the same

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR102565471B1 true KR102565471B1 (en) 2023-08-10

Family

ID=87560683

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020220097555A KR102565471B1 (en) 2022-08-04 2022-08-04 Amyloid beta-specific peptide CBRV1-04369 and a composition for treating Alzheimer's disease comprising the same

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR102565471B1 (en)
WO (1) WO2024029995A1 (en)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100987639B1 (en) 2005-02-19 2010-10-13 주식회사 피플바이오 Method for Differentially Detecting Multimeric Form from Monomeric Form of Multimer-Forming Polypeptides
KR20180123339A (en) * 2017-05-08 2018-11-16 가톨릭대학교 산학협력단 Natural peptides for inhibition of aggregation of β-amyloid protein
KR20190015947A (en) * 2017-08-07 2019-02-15 한양대학교 산학협력단 Peptide probe for detecting amyloid beta

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008156621A1 (en) * 2007-06-12 2008-12-24 Ac Immune S.A. Monoclonal anti beta amyloid antibody
MX370725B (en) * 2012-10-15 2019-12-20 Medimmune Ltd Antibodies to amyloid beta.

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100987639B1 (en) 2005-02-19 2010-10-13 주식회사 피플바이오 Method for Differentially Detecting Multimeric Form from Monomeric Form of Multimer-Forming Polypeptides
KR20180123339A (en) * 2017-05-08 2018-11-16 가톨릭대학교 산학협력단 Natural peptides for inhibition of aggregation of β-amyloid protein
KR20190015947A (en) * 2017-08-07 2019-02-15 한양대학교 산학협력단 Peptide probe for detecting amyloid beta

Also Published As

Publication number Publication date
WO2024029995A1 (en) 2024-02-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6860618B2 (en) Anti-complement C1s antibodies and their uses
US20220041671A1 (en) Modified ligand-gated ion channels and methods of use
US20090131327A1 (en) Nogo receptor functional motifs and peptide mimetics related thereto and methods of using the same
CA2832391C (en) Means and methods for diagnosing and treating multiple sclerosis
JP5709876B2 (en) Composition for treating multiple sclerosis
KR102565471B1 (en) Amyloid beta-specific peptide CBRV1-04369 and a composition for treating Alzheimer's disease comprising the same
KR102565470B1 (en) Amyloid beta-specific peptide SMA_04088-2 and a composition for treating Alzheimer's disease comprising the same
US6906177B1 (en) GABA transporter protein and DNA thereof
US20230181748A1 (en) Means and methods for the treatment of pathological aggregation
JP4055579B2 (en) New antibody
US20080161239A1 (en) Agent For Prevention/Treatment of Neurodegenerative Disease
WO2007126111A1 (en) PEPTIDE CAPABLE OF INHIBITING AMYLOID-β FIBROSIS
JP7320494B2 (en) Voltage-gated calcium channel auxiliary subunit α2δ and its uses
KR102447161B1 (en) Amyloid beta 42 binding peptide probe
WO2009101942A1 (en) Screening method
KR20020059331A (en) Nicotinic acetylcholine receptor
KR102442481B1 (en) Amyloid beta 42 binding peptide probe
US20220348609A1 (en) Computational design of alpha(v) beta (6) integrin binding proteins
EP4046653A1 (en) Immunogenic polypeptides and uses thereof
US20030220232A1 (en) Peptide and nucleic acid coding therefor for the detection, diagnosis and therapy of diseases of the nervous system
JPH0892290A (en) Inositol polyphosphate-bonding peptide
NZ615912B2 (en) Means and methods for diagnosing and treating multiple sclerosis

Legal Events

Date Code Title Description
GRNT Written decision to grant