KR102547834B1 - 동물에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및 예방에 유용한 치환된 인다졸 - Google Patents

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Abstract

본 출원은 동물에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및/또는 예방을 위한, 특히 동물에서의 아토피성 피부염, 벼룩 알레르기 피부염, 염증성 장 질환, 골관절염 및 염증성 통증, 비-감염성 재발성 기도 질환, 곤충 과민증, 천식, 호흡기 질환, 유방염 및 자궁내막염의 치료 및/또는 예방을 위한 치환된 인다졸의 용도에 관한 것이다.

Description

동물에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및 예방에 유용한 치환된 인다졸
본 출원은 동물에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 신규 치환된 인다졸의 용도 및 동물에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의, 특히 가축, 특히 개에서의, 및 특히 아토피성 피부염 및/또는 벼룩 알레르기 피부염의 치료 및/또는 예방을 위한 의약의 제조를 위한 그의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 인터류킨-1 수용체-연관 키나제 4 (IRAK4)를 억제하는 화학식 (I)의 신규 치환된 인다졸의 용도에 관한 것이다.
인간 IRAK4 (인터류킨-1 수용체-연관 키나제 4)는 면역계의 활성화에서 주요 역할을 한다. 따라서, 이 키나제는 염증-억제 물질의 개발을 위한 중요한 치료 표적 분자이다. IRAK4는 다수의 세포에 의해 발현되며 톨-유사 수용체 (TLR) (TLR3 제외), 및 인터류킨 (IL)-1R (수용체), IL-18R, IL-33R 및 IL-36R로 이루어진 IL-1β 패밀리의 수용체의 신호 전달을 매개한다 (Janeway and Medzhitov, Annu. Rev. Immunol., 2002; Dinarello, Annu. Rev. Immunol., 2009; Flannery and Bowie, Biochemical Pharmacology, 2010).
IRAK4 녹아웃 마우스도 IRAK4가 결핍된 환자로부터의 인간 세포도 TLR (TLR3 제외) 및 IL-1β 패밀리의 자극에 반응하지 않는다 (Suzuki, Suzuki, et al., Nature, 2002; Davidson, Currie, et al., The Journal of Immunology, 2006; Ku, von Bernuth, et al., JEM, 2007; Kim, Staschke, et al., JEM, 2007).
TLR 리간드 또는 IL-1β 패밀리의 리간드가 각각의 수용체에 결합하면 MyD88 [골수 분화 일차 반응 유전자 (88)]이 수용체에 동원 및 결합하게 된다. 그 결과, MyD88은 IRAK4와 상호작용하여, 키나제 IRAK1 또는 IRAK2와 상호작용하고 그를 활성화시키는 활성 복합체를 형성시킨다 (Kollewe, Mackensen, et al., Journal of Biological Chemistry, 2004; Precious et al., J. Biol. Chem., 2009). 그의 결과로, NF (핵 인자)-κB 신호전달 경로 및 MAPK (미토겐-활성화 단백질 키나제) 신호 경로가 활성화된다 (Wang, Deng, et al., Nature, 2001). NF-κB 신호 경로 및 MAPK 신호 경로 둘 다의 활성화는 여러 면역 과정과 연관된 과정으로 이어진다. 예를 들어, 다양한 염증성 신호 분자 및 효소 예컨대 시토카인, 케모카인 및 COX-2 (시클로옥시게나제-2)의 발현이 증가되고, 염증-연관 유전자, 예를 들어 COX-2, IL-6 (인터류킨-6), IL-8의 mRNA 안정성이 증가된다 (Holtmann, Enninga, et al., Journal of Biological Chemistry, 2001; Datta, Novotny, et al., The Journal of Immunology, 2004). 게다가, 이들 과정은 특정한 세포 유형, 예를 들어 단핵구, 대식세포, 수지상 세포, T 세포 및 B 세포의 증식 및 분화와 연관될 수 있다 (Wan, Chi, et al., Nat Immunol, 2006; McGettrick and J. O'Neill, British Journal of Haematology, 2007).
다양한 염증성 장애의 병리상태에서의 IRAK4의 중추적 역할은 야생형 (WT) 마우스와 IRAK4의 키나제-불활성화 형태 (IRAK4 KDKI)를 갖는 유전자 변형 동물의 직접적 비교에 의해 이미 밝혀졌다. IRAK4 KDKI 동물은 다발성 경화증, 아테롬성동맥경화증, 심근 경색 및 알츠하이머병의 동물 모델에서 개선된 임상 양상을 갖는다 (Rekhter, Staschke, et al., Biochemical and Biophysical Research Communication, 2008; Maekawa, Mizue, et al., Circulation, 2009; Staschke, Dong, et al., The Journal of Immunology, 2009; Kim, Febbraio, et al., The Journal of Immunology, 2011; Cameron, Tse, et al., The Journal of Neuroscience, 2012). 게다가, 동물 모델에서의 IRAK4의 결실이 개선된 항바이러스 반응과 동시에 감소된 전신 염증에 의해 바이러스-유발된 심근염에 대해 보호하는 것으로 발견되었다 (Valaperti, Nishii, et al., Circulation, 2013). 또한 IRAK4의 발현은 보그트-코야나기-하라다(Vogt-Koyanagi-Harada) 증후군의 질환 활성과 상관관계가 있는 것으로 밝혀졌다 (Sun, Yang, et al., PLoS ONE, 2014). 또한, 전신 홍반성 루푸스 (SLE)의 발병기전에서의 주요 과정인 형질세포양 수지상 세포에 의한 면역 복합체-매개 IFNα (인터페론-알파) 생산에 대한 IRAK4의 높은 관련성이 밝혀졌다 (Chiang et al., The Journal of Immunology, 2010). 게다가, 신호전달 경로는 비만과 연관된다 (Ahmad, R., P. Shihab, et al., Diabetology & Metabolic Syndrome, 2015).
선천성 면역에서의 IRAK4의 필수적인 역할뿐만 아니라, IRAK4가 적응 면역의 성분인 Th17 T 세포의 분화에 영향을 미친다는 암시가 또한 존재한다. IRAK4 키나제 활성의 부재 하에, WT 마우스에 비해 더 적은 IL-17-생산 T 세포 (Th17 T 세포)가 생성된다. IRAK4의 억제는 아테롬성동맥경화증, 제1형 당뇨병, 류마티스 관절염, 척추관절염 (특히 건선성 척추관절염 및 베크테레브병), 홍반성 루푸스, 건선, 백반증, 거대 세포 동맥염, 만성 염증성 장 장애 및 바이러스성 장애, 예를 들어 HIV (인간 면역결핍 바이러스), 간염 바이러스의 예방 및/또는 치료를 가능하게 한다 (Staschke, et al., The Journal of Immunology, 2009; Marquez, et al., Ann Rheum Dis, 2014; Zambrano-Zaragoza, et al., International Journal of Inflammation, 2014; Wang, et al., Experimental and Therapeutic Medicine, 2015; Ciccia, et al., Rheumatology, 2015).
TLR (TLR3 제외) 및 IL-1 수용체 패밀리의 MyD88-매개 신호 캐스케이드에서의 IRAK4의 중추적 역할 덕분에, IRAK4의 억제는 언급된 수용체에 의해 매개되는 장애의 예방 및/또는 치료에 이용될 수 있다.
선행 기술은 다수의 IRAK4 억제제를 개시한다 (예를 들어, 문헌 [Annual Reports in Medicinal Chemistry (2014), 49, 117 - 133] 참조).
US8293923 및 US20130274241은 3-치환된 인다졸 구조를 갖는 IRAK4 억제제를 개시한다. 2-치환된 인다졸에 대한 기재는 없다.
WO2013106254 및 WO2011153588은 2,3-이치환된 인다졸 유도체를 개시한다.
WO2007091107은 뒤시엔느 근육 이영양증의 치료를 위한 2-치환된 인다졸 유도체를 기재한다. 개시된 화합물은 6-히드록시알킬 치환을 갖지 않는다.
WO2015091426은 카르복스아미드 측쇄에 의해 2 위치에서 치환된 인다졸, 예컨대 실시예 64를 기재한다.
Figure 112018118699939-pct00001
WO2015104662는 하기 화학식의 2-치환된 인다졸을 개시하며
Figure 112018118699939-pct00002
여기서 R2는 알킬 또는 시클로알킬 기이다. 2 위치에서 메틸, 2-메톡시에틸 및 시클로펜틸 기를 갖는 2-치환된 인다졸에 대한 명백한 기재가 있다 (실시예 1, 4 및 76). 또한, 1 위치에서 히드록시에틸 치환기를 갖는 인다졸 유도체가 실시예 117에 의해 기재된다. 그러나, 1 위치 또는 2 위치에서 3-히드록시-3-메틸부틸 치환기를 갖는 인다졸 유도체는 기재되지 않는다.
2 위치에서 히드록실-치환된 알킬 기를 갖는 인다졸은 화학식에 의해 일반적으로 포괄되나, WO2015104662에 명백하게 개시되어 있지 않다.
2 위치에서 알킬 기를 가지며 여기서 알킬 기는 추가적으로 메틸술포닐 기에 의해 치환되는 것인 인다졸은 화학식 및 WO2015104662에서의 R2 치환기의 정의에 의해 포괄되지 않는다.
1 및 2 위치에서의 인다졸 상의 상기 기재된 치환 패턴에 더하여, WO2015104662는 R1이 하기와 같이 정의되는 6 위치에서 치환을 갖는 인다졸을 기재한다: 알킬, 시아노, -NRaRb, 또는 시클로알킬, 아릴 또는 헤테로시클릴로부터 선택되는 임의로 치환된 기, 여기서 치환기는 독립적으로 알킬, 알콕시, 할로겐, 히드록실, 히드록시알킬, 아미노, 아미노알킬, 니트로, 시아노, 할로알킬, 할로알콕시, -OCOCH2-O-알킬, -OP(O)(O-알킬)2 또는 -CH2-OP(O)(O-알킬)2이다. R1이 알킬 기인 인다졸 화합물의 경우, 유효 출원일은 2015년 1월 7일 (WO2015104662의 국제출원일)이다. 우선권이 주장된 인도 출원 146/CHE/2014 및 3018/CHE/2014는 R1이 알킬 기인 임의의 인다졸 화합물을 개시하지 않는다.
따라서, R1이 임의로 치환된 알킬 기인 하기 화학식의 인다졸 화합물은 2015년 1월 7일에 처음으로 및 이런 이유로 본 출원의 우선일 이후에 기재되어 있다.
Figure 112018118699939-pct00003
R1에 대해 WO2015104662에 기재된 6 위치에서의 치환기의 예는 시클로프로필, 시클로헥실, 시아노, 3-플루오로페닐 및 포화 헤테로시클릭 치환기이다. 6 위치에서 히드록실-치환된 알킬 기를 갖는 인다졸은 WO2015104662에 명백하게 기재되어 있지 않다.
본 발명에 사용된 화합물은 또한 2016년 6월 2일에 WO2016083433으로서 공개된, 동시계류 특허 출원 PCT/EP2015/077596에 기재된다.
동물에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환, 예를 들어 알레르기성 피부 질환에 대한 현행 치료 옵션은 전형적으로 스테로이드 및 시클로스포린의 사용을 포함하며 - 둘 다 부작용과 연관되어 있다. 최근에 소양증으로부터의 완화를 대증적으로 제공하는 야누스-키나제 (JAK) 억제제가 개 아토피성 피부염 (CAD)에 사용하기 위해 승인되었으나, 투여 요법이 부작용에 의해 다시 제한될 수 있다. 질환 조절제를 사용하면서 치료-관련 부작용이 없는 CAD의 치료가 미충족 의료 필요로 남아있다.
본 발명에 의해 다루고자 하는 과제는 동물에서의 염증성 및/또는 알레르기성 질환에 대한 보다 우수한 치료 옵션을 제공하는 것이다.
본 발명의 IRAK4 억제제는 과다반응 면역계를 특징으로 하는 동물에서의 염증성 장애의 치료 및 예방에 특히 적합하다. 여기서 개 아토피성 피부염, 개 및 고양이에서의 벼룩 알레르기 피부염, 개 및 고양이에서의 염증성 장 질환, 개, 고양이, 말 및 소에서의 골관절염 및 염증성 통증, 말에서의 비-감염성 재발성 기도 질환 (만성 폐쇄성 폐 질환, 식노로도 알려짐), 말에서의 곤충 과민증 (스위트 가려움증, 여름 습진으로도 알려짐), 고양이 천식, 소 호흡기 질환, 소에서의 유방염 및 자궁내막염, 및 돼지 호흡기 질환이 특히 언급되어야 한다.
아토피성 피부염은 예를 들어, 반려 동물에서, 특히 고양이 및 개에서 흔한 질환이다.
하나의 구체적 예로서, 개 아토피성 피부염 (CAD)은 개의 가장 흔한 질환 중 하나이다. CAD는 이른 연령에서부터 환자에게 영향을 미치며, 그들의 수명 전체에 걸쳐 재발할 수 있다. 문헌 [Lund et al. 1999]의 연구에서, 미국의 52개의 개인 병원에서 31,484마리의 개를 조사한 CAD의 유병률은 8.7%였다. CAD는 벼룩 알레르기 피부염 (FAD) 다음으로 두 번째로 가장 흔한 개 소양증의 원인이다.
개 아토피성 피부염은 '환경 알레르겐 (예컨대 먼지 응애 및 화분)에 대해 가장 흔하게 지시되는 IgE와 연관된 특징적인 임상 양상을 갖는 유전적 소인이 있는 염증성 및 소양성 알레르기성 피부 질환'으로 정의될 수 있으며 (Halliwell, Veterinary Immunology and Immunopathology, 2006), 먼지 응애는 실질적으로 어디에나 있고 화분은 실외 공기에 스며들기 때문에 애완동물이 이들을 피하기가 굉장히 어렵다.
개 아토피성 피부염은 면역 조절이상, 알레르기성 감작, 피부 장벽 결함, 미생물 콜로니화 및 환경 요인을 수반하는 복잡하고 다인성인 질환이다.
IgE가 모든 경우에 임상 징후의 발생을 위한 전제조건은 아니고, 아토피-유사 피부염으로 알려져 있는 별개의 임상 엔티티는 '환경 또는 다른 알레르겐에 대한 IgE 반응이 보고될 수 없는, 개 아토피성 피부염에서 나타나는 것들과 동일한 임상 양상을 갖는 염증성 및 소양성 피부 질환'으로 정의되었다 (Nuttall et al., Vet. Record, 2013).
개 아토피성 피부염의 가장 흔한 증상은 가려움증, 과도하게 긁는 것, 카펫에 문지르는 것, 탈모, 부패취가 나는 기름진 또는 박편상 피부, 과도하게 발 및 영역 예컨대 사타구니 및 겨드랑이를 씹는 것을 포함한다. 시간 경과에 따라, 긁힌 피부는 감염될 수 있는 뜨거운 반점 - 속살의, 염증생성 영역 -을 발생시킬 수 있다.
현재, 아토피성 피부염 (AD)의 급성 발적의 치료는 발적의 원인에 대한 모색에 이은 그의 제거, 순한 샴푸로의 목욕, 및 국소 및/또는 경구 글루코코르티코이드 또는 오클라시티닙을 포함한 개입에 의한 소양증 및 피부 병변의 제어를 수반하여야 한다. 만성 CAD의 경우, 관리의 제1 단계는 발적 인자의 확인 및 회피, 뿐만 아니라 적절한 피부 및 코트 위생 및 케어가 있음을 보장하는 것이며; 이는 더 빈번한 목욕 및 가능하게는 필수 지방산 섭취를 증가시키는 것을 포함할 수 있다. 만성 소양증 및 피부 병변을 감소시키는 데 최근 가장 효과적인 의약은 국소 및 경구 글루코코르티코이드, 경구 시클로스포린, 경구 오클라시티닙, 및, 이용가능한 경우, 주사가능한 재조합 인터페론이다. 알레르겐-특이적 면역요법 및 사전대응적 간헐성 국소 글루코코르티코이드 적용은 AD의 발적의 재발을 예방하거나 또는 지연시킬 가능성이 있는 유일한 개입이다 (Olivry et al., BMC Veterinary Research, 2015).
또 다른 구체적 예로서, 벼룩 알레르기 피부염 (FAD) 또는 벼룩 교상 과민증은 개 및 고양이에서의 단연코 가장 보편적인 벼룩: 크테노세팔리데스 펠리스(Ctenocephalides felis) (Beresford-Jones, J Small Animal Practice, 1981; Chesney, Veterinary Record, 1995)에 의해 유발되는 가축 개의 가장 흔한 피부과 질환이다 (Scott et al., In: Muller and Kirk's Small Animal Dermatology, 2001). 고양이는 또한 고양이 속립성 피부염의 주요 원인 중 하나인 FAD를 발생시킨다.
FAD는 여름에 가장 보편적이나, 따뜻한 기후에서는 벼룩 침입이 일년 내내 지속될 수 있다. 북쪽 온대 지역에서, 애완동물 및 그들의 벼룩의 인간 주거와의 밀접한 연관은 연중 계속되는 문제를 허용하는 조건을 생성한다. 온도 극단 및 낮은 습도는 벼룩 발생을 억제하는 경향이 있다.
섭식할 때, 벼룩은 매우 다양한 크기 (40-60 kD)에 걸치며 제I형, 제IV형, 및 호염기구 과민증을 유발하는 다양한 히스타민-유사 화합물, 효소, 폴리펩티드, 및 아미노산을 함유하는 타액을 주입한다. 벼룩 교상에 간헐적으로 노출된, 벼룩의 경험이 없는 개는 즉시형 (15분) 또는 지연형 (24-48시간) 반응, 또는 둘 다, 및 검출가능한 수준의 순환 IgE 및 IgG 항벼룩 항체 둘 다를 발생시킨다. 벼룩 교상에 연속적으로 노출된 개는 낮은 수준의 이들 순환 항체를 가지며, 피부 반응을 발생시키지 않거나 또는 이를 나중에 및 상당히 감소된 정도로 발생시킨다. 이는 면역 관용이 벼룩 교상에 연속해서 노출된 개에서 자연적으로 발생할 수 있다는 것을 나타낼 수 있다. 고양이에서의 FAD의 병리생리상태는 불충분하게 이해되나, 유사한 메카니즘이 존재할 수 있다.
고양이 벼룩 (크테노세팔리데스 펠리스)은 동물 및 사람에서 심한 자극을 유발하며, 벼룩 알레르기 피부염의 원인이 된다. 전형적인 증상은 소양증, 피부의 염증 및 피부 병변 (홍반, 각질, 구진, 딱지 및 태선화)이다. 이들 병변은 등을 따라 및 꼬리 기저부에서 가장 흔하게 나타난다.
상태가 진행됨에 따라 탈모, 끊어진 모발, 진물 또는 딱지 상처, 튀어나온 혹 및 전반적 붉어짐 및 피부의 염증이 있을 수 있다. 상처는 매우 고통스러울 수 있다. 심한 경우에 피부는 우세하게 꼬리 기저부에서의 개의 등 위의 영역에서 두꺼워지고 어두워진다. 개는, 스스로, 심한 가려움증으로 인한 자해로 손상을 유발한다.
일반적으로, 벼룩 침입의 예방 및 치료가 치료 선택 옵션이다. 가장 흔하게는 네오니코티노이드, 예컨대 이미다클로프리드, 또는 감마-아미노부티르산 (GABA)-게이팅 클로라이드 채널 차단제, 예컨대 피프로닐이 사용된다. 피부 알레르기성 피부염의 증상이 해소되지 않는 경우에, CAD 하에 언급된 현행 치료, 예컨대 국소 및 경구 글루코코르티코이드, 경구 시클로스포린, 경구 오클라시티닙이 사용된다.
본 발명은 동물에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 화학식 (I)의 화합물 및 그의 부분입체이성질체, 거울상이성질체, 대사물, 염, 용매화물 또는 염의 용매화물을 제공하며
Figure 112018118699939-pct00004
여기서:
R1은 C1-C6-알킬이며, 여기서 C1-C6-알킬 기는 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록실, 비치환된 또는 일- 또는 다-할로겐-치환된 C3-C6-시클로알킬, 또는 R6, R7SO2, R7SO 또는 R8O 기에 의해 동일하게 또는 상이하게 일- 또는 다치환되거나,
또는
Figure 112018118699939-pct00005
로부터 선택되는 기이며
여기서 *는 분자의 나머지 부분에 대한 기의 결합 부위를 나타내고;
R2 및 R3은 항상 동일한 정의를 갖고 둘 다 수소 또는 C1-C6-알킬이고;
R4는 할로겐, 시아노, 비치환된 또는 단일 또는 다중으로 동일하게 또는 상이하게 치환된 C1-C6-알킬 또는 비치환된 또는 단일 또는 다중으로 동일하게 또는 상이하게 치환된 C3-C6-시클로알킬이고, 치환기는 할로겐 및 히드록실의 군으로부터 선택되고;
R5는 수소, 할로겐 또는 비치환된 또는 일- 또는 다-할로겐-치환된 C1-C6-알킬이고;
R6은 O, S, SO 및 SO2의 군으로부터의 헤테로원자 또는 헤테로기를 함유하는, 4 내지 6개의 고리 원자를 갖는 비치환된 또는 일- 또는 이-메틸-치환된 모노시클릭 포화 헤테로사이클이고;
R7은 C1-C6-알킬이며, 여기서 C1-C6-알킬 기는 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록실 또는 C3-C6-시클로알킬에 의해 동일하게 또는 상이하게 일- 또는 다치환되거나;
또는 R7은 C3-C6-시클로알킬이고;
R8은 C1-C6-알킬이며, 여기서 C1-C6-알킬 기는 비치환되거나 또는 할로겐에 의해 동일하게 또는 상이하게 일- 또는 다치환된다.
이하에 기재된 본 발명의 합성 중간체 및 작업 실시예가 언급되는 경우에, 상응하는 염기 또는 산의 염 형태로 명시된 임의의 화합물은 일반적으로, 각각의 제조 및/또는 정제 방법에 의해 수득된 바와 같은, 미지의 정확한 화학량론적 조성의 염이다. 보다 상세하게 명시되지 않는 한, 명칭 및 구조 화학식에 대한 부가, 예컨대 "히드로클로라이드", "트리플루오로아세테이트", "나트륨 염" 또는 "x HCl", "x CF3COOH", "x Na+"는 따라서 이러한 염의 경우에 화학량론적 의미로 이해되어야 하는 것이 아니라, 거기에 존재하는 염-형성 성분과 관련하여 단지 설명적 특징을 갖는다.
이는 합성 중간체 또는 작업 실시예 또는 그의 염이, 기재된 제조 및/또는 정제 방법에 의해 미지의 화학량론적 조성 (이들이 정의된 유형인 경우)의 용매화물, 예를 들어 수화물의 형태로 수득된 경우에 상응하게 적용된다.
본 발명의 화합물은 화학식 (I)의 화합물 및 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물, 화학식 (I)에 의해 포괄되며 하기에 언급된 화학식의 화합물 및 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물 및 화학식 (I)에 의해 포괄되며 실시양태로서 하기에 언급된 화합물 및 그의 염, 용매화물 및 염의 용매화물 (화학식 (I)에 의해 포괄되며 하기에 언급된 화합물이 이미 염, 용매화물 및 염의 용매화물이 아닌 경우)이다.
본 발명의 문맥에서의 바람직한 염은 본 발명의 화합물의 생리학상 허용되는 염이다. 그러나, 본 개시내용은 또한, 그 자체로는 제약 용도에 적합하지 않으나, 예를 들어, 본 발명의 화합물의 단리 또는 정제에 사용될 수 있는 염을 포괄한다.
본 발명의 화합물의 생리학상 허용되는 염은 무기 산, 카르복실산 및 술폰산의 산 부가염, 예를 들어 염산, 브로민화수소산, 황산, 인산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 톨루엔술폰산, 벤젠술폰산, 나프탈렌디술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 프로피온산, 락트산, 타르타르산, 말산, 시트르산, 푸마르산, 말레산 및 벤조산의 염을 포함한다.
본 발명의 화합물의 생리학상 허용되는 염은 또한 통상적인 염기의 염, 예로서 및 바람직하게는 알칼리 금속 염 (예를 들어 나트륨 및 칼륨 염), 알칼리 토금속 염 (예를 들어 칼슘 및 마그네슘 염) 및 암모니아 또는 1 내지 16개의 탄소 원자를 갖는 유기 아민, 예로서 및 바람직하게는 에틸아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 에틸디이소프로필아민, 모노에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 디시클로헥실아민, 디메틸아미노에탄올, 프로카인, 디벤질아민, N-메틸모르폴린, 아르기닌, 리신, 에틸렌디아민 및 N-메틸피페리딘으로부터 유래된 암모늄 염을 포함한다.
본 발명의 문맥에서의 용매화물은 용매 분자와의 배위에 의해 고체 또는 액체 상태의 복합체를 형성하는 본 발명의 화합물의 그러한 형태로서 기재된다. 수화물은 물과 배위되는 특정한 형태의 용매화물이다.
본 발명의 화합물은, 그의 구조에 따라, 상이한 입체이성질체 형태로, 즉 배위 이성질체 또는 그 밖에, 적절한 경우, 형태 이성질체 (회전장애이성질체의 경우의 것들을 포함한 거울상이성질체 및/또는 부분입체이성질체)의 형태로 존재할 수 있다. 본 발명은 따라서 거울상이성질체 및 부분입체이성질체, 및 그의 각각의 혼합물의 용도를 포괄한다. 입체이성질체적으로 균질한 구성성분은 알려져 있는 방식으로 거울상이성질체 및/또는 부분입체이성질체의 이러한 혼합물로부터 단리될 수 있고; 크로마토그래피 방법, 특히 비키랄 또는 키랄 상 상에서의 HPLC 크로마토그래피가 바람직하게는 이 목적을 위해 사용된다.
본 발명의 화합물이 호변이성질체 형태로 발생할 수 있는 경우, 본 발명은 모든 호변이성질체 형태의 용도를 포괄한다.
본 발명은 또한 본 발명의 화합물의 모든 적합한 동위원소 변형체의 용도를 포괄한다. 본 발명의 화합물의 동위원소 변형체는 여기서 본 발명의 화합물 내의 적어도 1개의 원자가 동일한 원자 번호의, 그러나 자연에서 통상적으로 또는 우세하게 발생하는 원자 질량과는 상이한 원자 질량을 갖는 또 다른 원자로 교환된 화합물을 의미하는 것으로 이해된다. 본 발명의 화합물 내로 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 플루오린, 염소, 브로민 및 아이오딘의 동위원소, 예컨대 2H (중수소), 3H (삼중수소), 13C, 14C, 15N, 17O, 18O, 32P, 33P, 33S, 34S, 35S, 36S, 18F, 36Cl, 82Br, 123I, 124I, 129I 및 131I이다. 본 발명의 화합물의 특정한 동위원소 변형체, 예컨대, 특히, 1개 이상의 방사성 동위원소가 혼입된 것들은, 예를 들어, 체내 작용 메카니즘 또는 활성 성분 분포의 검사를 위해 유익할 수 있으며; 비교적 용이한 제조가능성 및 검출감도 때문에, 특히 3H 또는 14C 동위원소로 표지된 화합물이 이 목적을 위해 적합하다. 또한, 동위원소, 예를 들어 중수소의 혼입은 화합물의 보다 큰 대사 안정성의 결과로서의 특정한 치료 이익, 예를 들어 체내 반감기의 연장 또는 요구되는 활성 용량의 감소로 이어질 수 있고; 따라서 본 발명의 화합물의 이러한 변형은 일부 경우에 또한 본 발명의 용도의 바람직한 실시양태를 구성할 수 있다. 본 발명의 화합물의 동위원소 변형체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 방법, 예를 들어 하기에 추가로 기재된 방법 및 작업 실시예에 기재된 절차에 의해, 각각의 시약 및/또는 출발 화합물의 상응하는 동위원소 변형을 사용함으로써 제조될 수 있다.
본 발명은 추가로 본 발명의 화합물의 모든 가능한 결정질 및 다형체 형태의 용도를 제공하며, 여기서 다형체는 단일 다형체로서 또는 모든 농도 범위의 복수의 다형체의 혼합물로서 존재할 수 있다.
본 발명은 추가적으로 또한 본 발명의 화합물의 전구약물의 용도를 포괄한다. 이 문맥에서의 용어 "전구약물"은 그 자체로 생물학적 활성 또는 불활성일 수 있으나 그의 체내 체류 시간 동안 본 발명의 화합물로 (예를 들어 대사적으로 또는 가수분해적으로) 전환되는 화합물을 지칭한다.
본 발명의 문맥에서, 달리 명시되지 않는 한, 치환기는 하기 의미를 갖는다:
본 발명의 문맥에서의 알킬은 명시된 특정한 개수의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알킬 기를 나타낸다. 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, 1-메틸프로필, 2-메틸프로필, tert-부틸, n-펜틸, 1-에틸프로필, 1-메틸부틸, 2-메틸부틸, 3-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, n-헥실, 1-메틸펜틸, 2-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 4-메틸펜틸, 1-에틸부틸 및 2-에틸부틸을 포함한다. 메틸, 에틸, n-프로필, n-부틸, 2-메틸부틸, 3-메틸부틸 및 2,2-디메틸프로필이 바람직하다.
본 발명의 문맥에서의 시클로알킬은 각 경우에 명시된 개수의 탄소 원자를 갖는 모노시클릭 포화 알킬 기이다. 바람직한 예는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 및 시클로헥실을 포함한다.
본 발명의 문맥에서의 알콕시는 명시된 특정한 개수의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지형 알콕시 기를 나타낸다. 1 내지 6개의 탄소 원자가 바람직하다. 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, 1-메틸프로폭시, n-부톡시, 이소부톡시, tert-부톡시, n-펜톡시, 이소펜톡시, 1-에틸프로폭시, 1-메틸부톡시, 2-메틸부톡시, 3-메틸부톡시 및 n-헥속시를 포함한다. 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형 알콕시 기가 특히 바람직하다. 바람직한 것으로서 언급될 수 있는 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 1-메틸프로폭시, n-부톡시 및 이소부톡시이다.
본 발명의 문맥에서의 할로겐은 플루오린, 염소 및 브로민이다. 플루오린이 바람직하다.
본 발명의 문맥에서의 히드록실은 OH이다.
모노시클릭 포화 헤테로사이클은 4 내지 6개의 고리 원자를 갖고 O, S, SO 및 SO2의 군으로부터의 헤테로원자 또는 헤테로기를 함유하는 모노시클릭 포화 헤테로사이클이다. O, SO 및 SO2의 군으로부터의 헤테로원자 또는 헤테로기를 갖는 헤테로사이클이 바람직하다. 예는 옥세탄, 테트라히드로푸란, 테트라히드로-2H-피란-4-일, 1,1-디옥시도테트라히드로-2H-티오피란-3-일, 1,1-디옥시도테트라히드로-2H-티오피란-2-일, 1,1-디옥시도테트라히드로-2H-티오피란-4-일, 1,1-디옥시도테트라히드로티오펜-3-일, 1,1-디옥시도테트라히드로티오펜-2-일, 1,1-디옥시도티에탄-2-일 또는 1,1-디옥시도티에탄-3-일을 포함한다. 여기서 옥세탄 및 테트라히드로푸란이 특히 바람직하다. 옥세탄-3-일이 매우 특히 바람직하다.
결합에서 기호 *는 분자 내 결합 부위를 나타낸다.
본 발명의 화합물에서 기가 치환되는 경우에, 달리 명시되지 않는 한, 기는 일- 또는 다치환될 수 있다. 본 발명의 문맥에서, 1회 초과로 발생하는 모든 기는 서로 독립적으로 정의된다. 1, 2 또는 3개의 동일하거나 상이한 치환기에 의한 치환이 바람직하다.
R1의 바람직한 실시양태는 1, 2 또는 3개의 플루오린 원자에 의해 치환된 C2-C6-알킬 기이다. 2,2,2-트리플루오로에틸, 3,3,3-트리플루오로프로필 및 4,4,4-트리플루오로부틸이 특히 바람직하다. 4,4,4-트리플루오로부틸 기가 매우 특히 바람직하다.
R1의 추가로 바람직한 실시양태는 1 또는 2개의 히드록실 기(들) 또는 1개의 C1-C3-알콕시 또는 삼-플루오린-치환된 C1-C3-알콕시에 의해 치환된 C2-C6-알킬 기이다. 히드록실 또는 C1-C3-알콕시 또는 트리플루오로메톡시 또는 2,2,2-트리플루오로에톡시에 의해 치환된 C2-C5-알킬 기가 특히 바람직하다. 3-히드록시-3-메틸부틸, 3-메톡시프로필, 3-히드록시프로필, 3-트리플루오로메톡시프로필, 2-메톡시에틸 또는 2-히드록시에틸이 매우 특히 바람직하다. 3-히드록시-3-메틸부틸 기가 특히 바람직하다.
추가로 바람직하게는, R1은 C1-C6-알킬-SO2 기에 의해 치환된 C2-C6-알킬 기이다. 메틸-SO2-치환된 C2-C4-알킬 기가 특히 바람직하다. R1의 경우 2-(메틸술포닐)에틸 또는 3-(메틸술포닐)프로필이 특히 바람직하다. 후자의 기로부터, 2-(메틸술포닐)에틸이 특히 바람직하다.
추가적으로 바람직하게는, R1은 옥세타닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로-2H-피란-4-일, 1,1-디옥시도테트라히드로-2H-티오피란-3-일, 1,1-디옥시도테트라히드로-2H-티오피란-2-일, 1,1-디옥시도테트라히드로-2H-티오피란-4-일, 1,1-디옥시도테트라히드로티오펜-3-일, 1,1-디옥시도테트라히드로티오펜-2-일, 1,1-디옥시도티에탄-2-일 또는 1,1-디옥시도티에탄-3-일에 의해 치환된 C1-C3-알킬 기이다. 옥세탄 기에 의해 치환된 C1-C3-알킬 기가 특히 바람직하다. R1의 경우 옥세탄-3-일메틸 기가 특히 바람직하다.
항상 동일한 정의를 갖는 R2 및 R3의 경우, 수소 또는 메틸이 바람직하다. 메틸이 특히 바람직하다.
R4의 경우에, 비치환된 또는 일- 또는 다-할로겐-치환된 C1-C3-알킬 기 또는 1개의 히드록실 기에 의해 치환된 C1-C3-알킬 기 또는 1개의 히드록실 기 및 3개의 플루오린 원자에 의해 치환된 C1-C3-알킬 기가 바람직하다.
R4의 경우, 하기 기: 메틸, 에틸, 트리플루오로-C1-C3-알킬, 디플루오로-C1-C3-알킬, 히드록시메틸, 1-히드록시에틸, 2-히드록시프로판-2-일 및 2,2,2-트리플루오로-1-히드록시에틸이 특히 바람직하다. R4의 경우, 메틸, 트리플루오로메틸 및 디플루오로메틸 기가 특히 바람직하다. 여기서 트리플루오로메틸 기가 특히 바람직하다.
R5의 바람직한 실시양태는 수소, 플루오린, 염소 또는 C1-C3-알킬이다. 보다 바람직하게는, R5는 수소, 플루오린 또는 메틸이다. 가장 바람직하게는, R5는 수소 또는 플루오린이다.
또한 R4가 메틸 또는 트리플루오로메틸이고 R5가 플루오린인 화합물이 특히 바람직하다. R4가 메틸이고 R5가 플루오린이며, 여기서 R5는 R4에 대해 오르토 위치에 있는 화합물이 매우 특히 바람직하다.
R6의 경우, 바람직한 실시양태는 옥세타닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로-2H-피란-4-일, 1,1-디옥시도테트라히드로-2H-티오피란-3-일, 1,1-디옥시도테트라히드로-2H-티오피란-2-일, 1,1-디옥시도테트라히드로-2H-티오피란-4-일, 1,1-디옥시도테트라히드로티오펜-3-일, 1,1-디옥시도테트라히드로티오펜-2-일, 1,1-디옥시도티에탄-2-일 또는 1,1-디옥시도티에탄-3-일을 포함한다. 여기서 옥세타닐이 특히 바람직하다. 옥세탄-3-일이 매우 특히 바람직하다.
R7은 관능기 -SO2- 및 -SO-에 독점적으로 연결되며, 즉 R7-치환된 -SO2- 또는 SO 기가 된다. 이와 관련하여, R7은 바람직하게는 C1-C4-알킬이며, 여기서 C1-C4-알킬 기는 비치환되거나 또는 히드록실에 의해 또는 시클로프로필에 의해 일치환되거나 또는 3개의 플루오린 원자에 의해 치환된다. R7의 경우 시클로프로필 기가 추가적으로 바람직하다. R7의 경우 메틸, 에틸 또는 히드록시에틸이 특히 바람직하다. R7의 경우 메틸이 매우 특히 바람직하다.
이는, R7SO2- 또는 R7SO-에 의해 치환된 C1-C6-알킬 기의 경우에, R1의 문맥에서, C1-C6-알킬-SO2 또는 C1-C6-알킬-SO에 의해 치환된 C1-C6-알킬이 바람직하다는 것을 의미한다. R1의 경우, 여기서 메틸술포닐에틸 및 메틸술포닐프로필이 특히 바람직하다. 여기서 메틸술포닐에틸이 매우 특히 바람직하다.
R8의 경우, 비치환된 C1-C4-알킬 기 또는 삼-플루오린-치환된 C1-C4-알킬 기가 바람직하다. 메틸, 에틸, 트리플루오로메틸 또는 2,2,2-트리플루오로에틸이 특히 바람직하다. 메틸, 트리플루오로메틸 또는 2,2,2-트리플루오로에틸이 매우 특히 바람직하다.
이전에 기재된 바와 같이, 세포내 효소 인터류킨-1 수용체-연관 키나제 4 (IRAK4)는 염증 과정에 연루되는 시토카인 및 TLR 리간드에 의해 활성화되는 수용체의 신호전달 경로에서 필수 부분을 담당한다. 염증 외에, IRAK4는 또한 알레르기 과정의 신호전달에 수반된다. 이러한 알레르기 과정은 알레르기성 피부 질환, 예컨대 아토피성 피부염의 발병기전에서 중요한 역할을 한다.
예를 들어, IL-18 및 IL-1을 또한 포함하는 시토카인의 IL-1 패밀리에 최근 추가된 IL-33은 IL-33 수용체 (IL-33R)에 결합하고 이를 활성화시키며, 이어서 IL-33R은 MyD88, IRAK4 및 TRF6과 회합한다 (Schmitz et al., Immunity, 2005). IRAK4는 이 신호전달 경로의 필수적 성분이다. IL-33R은 T 헬퍼 세포 제2형 (Th2) 세포, 비만 세포 및 호산구 상에서 강하게 발현된다. IL-33은 이들 세포를 활성화시키고 Th2 면역 반응을 촉진한다 (Schmitz et al., Immunity, 2005). 이들 세포 유형은 각각 아토피성 피부염의 발병기전에 수반된다. 혈청에서의 IL-33 수준은 인간에서의 아토피성 피부염의 중증도와 상관관계가 있고 국소 스테로이드 & 칼시뉴린 억제제를 사용한 치료에서 감소한다 (Tamagawa-Mineoka et al., J American Academy Dermatology, 2014). 급성 개 아토피성 피부염의 모델에서, IL-33 유전자가 피부 병변에서 유의하게 상향-조절된 것으로 밝혀졌다 (Schamber et al., G3 (Bethesda), 2014; Olivry et al., Journal of Investigative Dermatology, 2016).
게다가, 시토카인의 IL-1 패밀리의 제2 구성원인 IL-18이 아토피성 피부염에 연루되었다. IL-18의 혈청 수준은 소아에서의 아토피성 피부염의 중증도에 의해 증가한다 (Sohn et al., Allergy and Asthma Proceedings, 2004). 급성 개 아토피성 피부염의 모델에서, IL-18 유전자가 피부 병변에서 유의하게 상향-조절된 것으로 밝혀졌다 (Schamber et al., G3 (Bethesda), 2014; Olivry et al., Journal of Investigative Dermatology, 2016). 또한, 아토피성 피부염-유사 염증 & 가려움증은 IL-18의 과다-방출에 의해 개시되었고 마우스에서 IL-1에 의해 가속화되었다 (Konishi et al., Proceedings of the National Academy of Sciences, 2002). 다시 IRAK4는 IL-18 신호전달 캐스케이드의 필수적 성분인 것으로 밝혀졌다 (Suzuki et al., J Immunology, 2003). 유사하게 IRAK4는 IL-1 및 TLR 리간드의 신호전달에 결정적이다 (Suzuki et al., Nature, 2002). TLR 효능제는 아토피성 피부염의 중요한 증상인 가려움증을 유발하는 것으로 알려져 있고 (Liu et al., Neuroscience bulletin, 2012), 항-IL-1 요법은 아토피성 피부염을 치료하기 위해 오프-라벨 사용된다. 더욱이, IRAK4에서의 다형성은 알레르기성 질환 예컨대 천식 및 만성 비부비동염에서의 상승된 총 IgE와 연관된다 (Tewfik et al., Allergy, 2009). IgE 수준은 또한 아토피성 피부염에서 상승된다.
따라서, IRAK4가 다수의 시토카인, TLR 리간드에 의해 활성화되는 신호전달 경로의 결정적인 부분이고 IRAK4가 증가된 IgE 수준과 연관된 다형성을 가지므로, IRAK4의 억제는 알레르기성 피부 질환 예컨대 아토피성 피부염의 치료를 위한 중요한 치료 전략이다. 더욱이, 반려 동물 (특히 개 및 고양이)에서 아토피성 피부염 및 벼룩 알레르기 피부염 둘 다는 적절한 적응증인데, 이는 질환 둘 다가 IgE 항체, Th2 세포, 비만 세포 및 호산구를 수반하는 제I형 과민증으로 구성되기 때문이다. 또한, FAD는 IL-1 및 IL-18이 수반되는 제IV형 과민증으로 구성될 수 있다.
본 발명의 화합물은 IRAK4 키나제의 억제제로서 작용하고, 따라서 동물에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및/또는 예방에서 예견할 수 없는 유용한 약리학적 활성 스펙트럼을 갖는다.
동물에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 화학식 (I)의 화합물 및 그의 부분입체이성질체, 거울상이성질체, 대사물, 염, 용매화물 또는 염의 용매화물이 바람직하며 여기서
R1은 C1-C6-알킬이며, 여기서 C1-C6-알킬 기는 비치환되거나 또는 플루오린, 히드록실 또는 R6, R7SO2, R7SO 또는 R8O 기에 의해 동일하게 또는 상이하게 일- 또는 다치환되고;
R2 및 R3은 항상 동일한 정의를 갖고 둘 다 수소 또는 C1-C3-알킬이고;
R4는 할로겐, 시아노 또는 C1-C3-알킬이며, 여기서 C1-C3-알킬 기는 비치환되거나 또는 할로겐 또는 히드록실에 의해 동일하게 또는 상이하게 일- 또는 다치환되고;
R5는 수소, 플루오린, 염소 또는 C1-C3-알킬이고;
R6은 옥세타닐 또는 테트라히드로푸라닐이고;
R7은 C1-C4-알킬이며, 여기서 C1-C4-알킬 기는 비치환되거나 또는 히드록실에 의해 또는 시클로프로필에 의해 일치환되거나 또는 3개의 플루오린 원자에 의해 치환되고;
R8은 비치환된 C1-C4-알킬 또는 삼-플루오린-치환된 C1-C4-알킬이다.
동물에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 화학식 (I)의 화합물 및 그의 부분입체이성질체, 거울상이성질체, 대사물, 염, 용매화물 또는 염의 용매화물이 추가적으로 바람직하며 여기서
R1은 C2-C6-알킬이며, 여기서 C2-C6-알킬은 비치환되거나, 또는
C2-C6-알킬은 일-, 이- 또는 삼-플루오린-치환되거나 또는
C2-C6-알킬은 히드록실, R6, R7SO2, 또는 R8O에 의해 일치환되거나,
또는 R1은 옥세타닐-치환된 C1-C3-알킬이고;
R2 및 R3은 항상 동일한 정의를 갖고 둘 다 수소 또는 메틸이고;
R4는 비치환된 또는 일- 또는 다-할로겐-치환된 C1-C3-알킬 기 또는 1개의 히드록실 기에 의해 치환된 C1-C3-알킬 기 또는 1개의 히드록실 기 및 3개의 플루오린 원자에 의해 치환된 C1-C3-알킬 기이고;
R5는 수소, 플루오린 또는 C1-C3-알킬이고;
R7은 C1-C3-알킬이고;
R8은 C1-C4-알킬이며, 여기서 C1-C4-알킬 기는 비치환되거나 또는 일-, 이- 또는 삼-플루오린-치환된다.
동물에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 화학식 (I)의 화합물 및 그의 부분입체이성질체, 거울상이성질체, 대사물, 염, 용매화물 또는 염의 용매화물이 또한 특히 바람직하며 여기서
R1은 히드록실 또는 C1-C3-알콕시 또는 트리플루오로메톡시 또는 2,2,2-트리플루오로에톡시 또는 트리플루오로메틸에 의해 치환된 C2-C5-알킬 기이거나 또는
메틸-SO2-치환된 C2-C4-알킬 기이거나 또는
옥세탄-3-일-치환된 C1-C2-알킬 기이고;
R2 및 R3은 항상 동일한 정의를 갖고 둘 다 수소 또는 메틸이고;
R4는 메틸, 에틸, 트리플루오로-C1-C3-알킬, 디플루오로-C1-C3-알킬, 히드록시메틸, 1-히드록시에틸, 2-히드록시프로판-2-일 및 2,2,2-트리플루오로-1-히드록시에틸이고;
R5는 수소, 플루오린 또는 메틸이다.
동물에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 화합물 및 그의 부분입체이성질체, 거울상이성질체, 대사물, 염, 용매화물 또는 염의 용매화물이 매우 특히 바람직하며 여기서
R1은 4,4,4-트리플루오로부틸, 3-히드록시-3-메틸부틸, 3-히드록시부틸, 3-메톡시프로필, 3-히드록시프로필, 3-히드록시-2-메틸프로필, 3-히드록시-2,2-디메틸프로필, 3-트리플루오로메톡시프로필, 2-메톡시에틸, 2-히드록시에틸, 2-(메틸술포닐)에틸 또는 3-(메틸술포닐)프로필이고;
R2 및 R3은 둘 다 메틸 또는 수소이고;
R4는 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸 또는 메틸이고;
R5는 수소 또는 플루오린이다.
동물에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 화합물 및 그의 부분입체이성질체, 거울상이성질체, 대사물, 염, 용매화물 또는 염의 용매화물이 또한 매우 특히 바람직하며 여기서
R1은 3-히드록시-3-메틸부틸, 3-히드록시부틸, 3-히드록시-2-메틸프로필, 3-히드록시-2,2-디메틸프로필, 3-(메틸술포닐)프로필 또는 2-(메틸술포닐)에틸이고;
R2 및 R3은 둘 다 메틸이고;
R4는 디플루오로메틸 또는 트리플루오로메틸이고;
R5는 수소이다.
동물에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 화합물 및 그의 부분입체이성질체, 거울상이성질체, 대사물, 염, 용매화물 또는 염의 용매화물이 추가적으로 또한 특히 바람직하며 여기서
R1은 3-히드록시-3-메틸부틸, 3-히드록시부틸, 3-히드록시-2-메틸프로필, 3-히드록시-2,2-디메틸프로필, 3-(메틸술포닐)프로필 또는 2-(메틸술포닐)에틸이고;
R2 및 R3은 둘 다 메틸이고;
R4는 메틸이고;
R5는 플루오린이며, 여기서 R5는 R4에 대해 오르토 위치에 있다.
본 발명은 특히 동물에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 하기 화합물을 제공한다:
1) N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-(2-메톡시에틸)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
2) N-[6-(히드록시메틸)-2-(2-메톡시에틸)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
3) N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-(3-메톡시프로필)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
4) N-[6-(히드록시메틸)-2-(3-메톡시프로필)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
5) N-[2-(2-히드록시에틸)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
6) N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-(3-히드록시프로필)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
7) N-[2-(2-히드록시에틸)-6-(히드록시메틸)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
8) N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-(옥세탄-3-일메틸)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
9) N-[6-(히드록시메틸)-2-(옥세탄-3-일메틸)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
10) N-{6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-[3-(메틸술포닐)프로필]-2H-인다졸-5-일}-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
11) N-[2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
12) N-{6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-[2-(메틸술포닐)에틸]-2H-인다졸-5-일}-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
13) 6-(디플루오로메틸)-N-[2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-2H-인다졸-5-일]피리딘-2-카르복스아미드
14) 6-(디플루오로메틸)-N-{6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-[2-(메틸술포닐)에틸]-2H-인다졸-5-일}피리딘-2-카르복스아미드
15) 6-(디플루오로메틸)-N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-(3-히드록시프로필)-2H-인다졸-5-일]피리딘-2-카르복스아미드
16) N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-(4,4,4-트리플루오로부틸)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
17) N-{6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-[3-(트리플루오로메톡시)프로필]-2H-인다졸-5-일}-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
18) N-{6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-[3-(2,2,2-트리플루오로에톡시)프로필]-2H-인다졸-5-일}-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
19) 5-플루오로-N-[2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-2H-인다졸-5-일]-6-메틸피리딘-2-카르복스아미드
20) N-[2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-2H-인다졸-5-일]-6-메틸피리딘-2-카르복스아미드
21) 6-(2-히드록시프로판-2-일)-N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-(4,4,4-트리플루오로부틸)-2H-인다졸-5-일]피리딘-2-카르복스아미드
22) N-{2-[2-(1-히드록시시클로프로필)에틸]-6-(2-히드록시프로판-2-일)-2H-인다졸-5-일}-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드.
본 발명은 추가로 동물에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 화학식 (III)의 화합물 및 그의 부분입체이성질체, 거울상이성질체, 대사물, 염, 용매화물 또는 염의 용매화물을 제공하며
Figure 112018118699939-pct00006
여기서
R1은 4,4,4-트리플루오로부틸, 3-히드록시-3-메틸부틸, 3-메톡시프로필, 3-히드록시프로필, 3-히드록시부틸, 3-히드록시-2-메틸프로필, 3-히드록시-2,2-디메틸프로필, 3-트리플루오로메톡시프로필, 2-메톡시에틸, 2-히드록시에틸, 2-(메틸술포닐)에틸, 3-(메틸술포닐)프로필 또는 2-(1-히드록시시클로프로필)에틸이고;
R4는 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸 또는 메틸이고;
R5는 수소 또는 플루오린이다.
동물에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 화학식 (III)의 하기 화합물이 특히 바람직하다:
메틸 5-{[(5-플루오로-6-메틸피리딘-2-일)카르보닐]아미노}-2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-2H-인다졸-6-카르복실레이트 및
메틸 2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2H-인다졸-6-카르복실레이트.
화학식 (III)의 화합물은 화학식 (I)의 화합물의 부분의 제조에 적합하다.
게다가, 화학식 (III)의 화합물은 인터류킨-1 수용체 연관 키나제-4 (IRAK4)의 억제제이다.
화학식 (III)의 화합물은 화학식 (II)의 화합물로부터, 탄산칼륨의 존재 하에 (II)의 적절히 치환된 알킬 할라이드 또는 알킬 4-메틸벤젠술포네이트와의 반응에 의해 제조될 수 있으며
Figure 112018118699939-pct00007
여기서
R1은 4,4,4-트리플루오로부틸, 3-히드록시-3-메틸부틸, 3-메톡시프로필, 3-히드록시프로필, 3-히드록시-2-메틸프로필, 3-히드록시-2,2-디메틸프로필, 3-트리플루오로메톡시프로필, 2-메톡시에틸, 2-히드록시에틸, 2-(메틸술포닐)에틸, 3-(메틸술포닐)프로필 또는 2-(1-히드록시시클로프로필)에틸이고;
R4는 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸 또는 메틸이고;
R5는 수소 또는 플루오린이다.
추가로, 화학식 (I)의 화합물은 화학식 (III)의 화합물로부터, 메틸마그네슘 브로마이드와의 그리냐르 반응에 의해 제조될 수 있으며
Figure 112018118699939-pct00008
여기서
R1은 4,4,4-트리플루오로부틸, 3-히드록시-3-메틸부틸, 3-히드록시부틸, 3-메톡시프로필, 3-히드록시프로필, 3-히드록시-2-메틸프로필, 3-히드록시-2,2-디메틸프로필, 3-트리플루오로메톡시프로필, 2-메톡시에틸, 2-히드록시에틸, 3-(메틸술포닐)프로필 2-(1-히드록시시클로프로필)에틸이고;
R2 및 R3은 메틸이고;
R4는 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸 또는 메틸이고;
R5는 수소 또는 플루오린이다.
본 발명의 화합물은 IRAK4 키나제의 억제제로서 작용하고, 예견할 수 없는 유용한 약리학적 활성 스펙트럼을 갖는다.
가축에서의, 특히 고양이 및 개에서의, 및 보다 특히 개에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 화학식 (I)의 화합물 또는 상기에 특히 언급된 화합물이 추가로 바람직하다.
이와 관련하여 용어 "가축"은, 예를 들어, 포유동물, 예컨대 햄스터, 기니 피그, 래트, 마우스, 친칠라, 페릿 또는 특히 개, 고양이; 사육 조류; 파충류; 양서류 또는 관상어를 포함한다.
가축에서의 알레르기성 피부염, 특히 개 및 고양이 알레르기성 피부염, 및 보다 특히 개 알레르기성 피부염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 화학식 (I)의 화합물 또는 상기에 특히 언급된 화합물이 추가로 바람직하다. 농장 동물, 특히 양, 염소, 말, 소 및 돼지, 및 보다 특히 소 및 돼지에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한, 화학식 (I)의 화합물 또는 상기에 특히 언급된 화합물이 추가로 바람직하다.
이와 관련하여 용어 "농장 동물"은, 예를 들어, 포유동물, 예컨대 말, 양, 염소, 버팔로, 순록, 다마사슴 또는 특히 소 또는 돼지를 포함한다.
동물에서의 아토피성 피부염, 벼룩 알레르기 피부염, 염증성 장 질환, 골관절염 및 염증성 통증, 비-감염성 재발성 기도 질환, 곤충 과민증, 천식, 호흡기 질환, 유방염 및 자궁내막염, 특히 아토피성 피부염 및 벼룩 알레르기 피부염의 치료 및/또는 예방 방법에 사용하기 위한, 화학식 (I)의 화합물 또는 상기에 특히 언급된 화합물이 추가로 바람직하다.
개 아토피성 피부염, 개 또는 고양이에서의 벼룩 알레르기 피부염, 개 또는 고양이에서의 염증성 장 질환, 개, 고양이, 말 또는 소에서의 골관절염 및 염증성 통증, 말에서의 비-감염성 재발성 기도 질환, 말에서의 곤충 과민증, 고양이 천식, 소 호흡기 질환, 소에서의 유방염, 소에서의 자궁내막염, 및 돼지 호흡기 질환의 치료 및/또는 예방 방법에 사용하기 위한, 화학식 (I)의 화합물 또는 상기에 특히 언급된 화합물이 특히 바람직하다.
개 아토피성 피부염 및 개 또는 고양이에서의, 보다 특히 개에서의 벼룩 알레르기 피부염의 치료 및/또는 예방 방법에 사용하기 위한, 화학식 (I)의 화합물 또는 상기에 특히 언급된 화합물이 매우 특히 바람직하다.
소에서의 골관절염 및 염증성 통증, 소 호흡기 질환, 소에서의 유방염, 소에서의 자궁내막염, 및 돼지 호흡기 질환의 치료 및/또는 예방 방법에 사용하기 위한, 화학식 (I)의 화합물 또는 상기에 특히 언급된 화합물이 추가로 매우 특히 바람직하다.
화학식 (III)의 화합물과 관련하여, 가축에서의, 특히 고양이 및 개에서의, 및 보다 특히 개에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 화학식 (III)의 화합물이 추가로 바람직하다.
가축에서의 알레르기성 피부염, 특히 개 및 고양이 알레르기성 피부염, 및 보다 특히 개 알레르기성 피부염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 화학식 (III)의 화합물이 추가로 바람직하다.
농장 동물에서의, 특히 양, 염소, 말, 소 및 돼지에서의, 및 보다 특히 소 및 돼지에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 화학식 (III)의 화합물이 추가로 바람직하다.
동물에서의 아토피성 피부염, 벼룩 알레르기 피부염, 염증성 장 질환, 골관절염 및 염증성 통증, 비-감염성 재발성 기도 질환, 곤충 과민증, 천식, 호흡기 질환, 유방염 및 자궁내막염, 특히 아토피성 피부염 및 벼룩 알레르기 피부염의 치료 및/또는 예방 방법에 사용하기 위한 화학식 (III)의 화합물이 추가로 바람직하다.
개 아토피성 피부염, 개 또는 고양이에서의 벼룩 알레르기 피부염, 개 또는 고양이에서의 염증성 장 질환, 개, 고양이, 말 또는 소에서의 골관절염 및 염증성 통증, 말에서의 비-감염성 재발성 기도 질환, 말에서의 곤충 과민증, 고양이 천식, 소 호흡기 질환, 소에서의 유방염, 소에서의 자궁내막염, 및 돼지 호흡기 질환의 치료 및/또는 예방 방법에 사용하기 위한 화학식 (III)의 화합물이 특히 바람직하다.
개 아토피성 피부염 및 개 또는 고양이에서의, 보다 특히 개에서의 벼룩 알레르기 피부염의 치료 및/또는 예방 방법에 사용하기 위한 화학식 (III)의 화합물이 매우 특히 바람직하다.
소에서의 골관절염 및 염증성 통증, 소 호흡기 질환, 소에서의 유방염, 소에서의 자궁내막염, 및 돼지 호흡기 질환의 치료 및/또는 예방 방법에 사용하기 위한 화학식 (III)의 화합물이 추가로 매우 특히 바람직하다.
예로서, 화합물 실시예 11, 12, 13, 19 (하기 제시된 바와 같음)는 재조합 개 IRAK4 효소를 사용하여 하기 상술된 시험관내 IRAK4 TR-FRET 검정에서 평가되었다. 각각의 화합물의 IC50 값이 개 IRAK4의 억제에 대해 계산되었다. 실시예 화합물 (11, 12, 13, 19)은 동물, 특히 개 및 고양이에서의 알레르기성 피부 질환, 예컨대 아토피성 피부염 및 벼룩 알레르기 피부염의 치료에 유용한 것으로 확인되었다. 실시예 화합물 11, 12, 13, 19는 각각 1.7, 9.2, 2.2, 7.6 nM의 IC50 값을 갖는 개 IRAK4의 각각의 강력한 억제제였다. 각각의 이들 화합물 실시예에 대한 IC50 값은 또한 인간 IRAK4의 억제에 대해 계산된 IC50 값과 유사하였다.
추가의 예로서, 실시예 화합물 12는 또한 개 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)에 의한 리포폴리사카라이드 (LPS)-유도된 시토카인 생산에 대한 화합물의 효과를 확립하기 위한 시험관내 검정에서 평가되었다. 실시예 화합물 12는 LPS에 의해 유도된 개 PBMC에 의한 염증유발 시토카인 종양 괴사 인자 알파 (TNFα)의 생산을, 농도-관련 방식으로 억제하였다. PBMC는 각각이 아토피성 피부염에 연루되는 세포 유형 예컨대 수지상 세포, T 및 B 림프구, 뿐만 아니라 단핵구를 포함하고, TNFα는 아토피성 피부염 환자에서 상승된다 (Sumimoto et al., Archives of Disease in Childhood, 1992). 본 실시예는 또한 도 7에 의해 설명된다.
따라서, 본 발명의 화합물은 개 PBMC에 의한 재조합 개 IRAK4 효소 및 시토카인 생산의 억제를 입증하며 이는 개 아토피성 피부염 및 벼룩 알레르기 피부염에서의 이러한 화합물 실시예의 잠재적 치료 이익을 나타낸다.
또한, 실시예 화합물 12는 또한 집 먼지 응애 모델에서, 개 알레르기성 피부염, 특히 개 아토피성 피부염 (CAD)과 연관된 임상 징후의 치료에서의 화합물의 효과를 확립하기 위한 추가의 연구에서 생체내 평가되었다. 실시예 화합물 12는 CAD의 임상 징후 예컨대 피부 부종 및 홍반을 유의하게 감소시켰다. 본 실시예는 또한 도 11 및 12에 의해 설명된다.
따라서, 본 발명의 화합물은 개 알레르기성 피부염의 특징적인 임상 징후의 감소를 입증하며, 따라서 개 알레르기성 피부염, 특히 개 아토피성 피부염 (CAD)에서의 이러한 화합물 실시예의 치료 이익을 나타낸다. 또한, 실시예 화합물 12는 화합물의 항소양 효과를 확립하기 위한 개 벼룩 알레르기 피부염 (FAD)의 생체내 모델에서 평가되었다. 실시예 화합물 12를 사용한 치료는 알레르기성 질환 예컨대 벼룩 알레르기 피부염과 연관된 소양증을 실질적으로 감소시켰다. 본 실시예는 또한 도 13에 의해 설명된다.
따라서, 본 발명의 화합물은 알레르기성 피부염의 연관된 병리특징적 임상 징후 예컨대 피부 염증 및 소양증의 감소를 입증하며 따라서 개 알레르기성 피부염, 특히 벼룩 알레르기 피부염 (FAD) 및 개 아토피성 피부염 (CAD)에서의 이러한 화합물 실시예의 치료 이익을 나타낸다.
이와 관련하여 용어 "개 알레르기성 피부염"은 특히 개 아토피성 피부염 (CAD) 및 벼룩 알레르기 피부염 (FAD)을 포함한다.
추가의 예로서, 실시예 화합물 12는 또한 소 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)에 의한 리포폴리사카라이드 (LPS)-유도된 시토카인 생산에 대한 화합물의 효과를 확립하기 위한 생체외 검정에서 평가되었다. 실시예 화합물 12는 LPS에 의해 유도된 소 PBMC에 의한 염증유발 시토카인 종양 괴사 인자 알파 (TNFα)의 생산을, 농도-관련 방식으로 억제하였다. PBMC는 각각이 오버슈팅(overshooting) 염증유발 면역 반응을 동반한 염증성 및 감염성 질환 예컨대 호흡기 질환 (Sterner-Kock, Haider, et al., Tropical Animal Health and Production, 2016), 장 질환 (Pan, Rostagnio, et al., Veterinary Immunology and Immunopathology, 2015), 및 유방염 (Zheng, Xu, et al., Free Radical Biology and Medicine, 2016)에 연루되는 세포 유형 예컨대 수지상 세포, T 및 B 림프구, 뿐만 아니라 단핵구를 포함하며 TNFα는 이들 환자에서 상승된다. 본 실시예는 또한 도 8 및 9에 의해 설명된다.
따라서, 본 발명의 화합물은 소 PBMC에 의한 시토카인 생산의 억제를 입증하며 이는 염증성 및/또는 감염성 질환 예컨대 호흡기 질환, 장 질환 및 유방염에서의 이러한 화합물 실시예의 잠재적 치료 이익을 나타낸다.
추가의 예로서, 실시예 화합물 12는 또한 돼지 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)에 의한 리포폴리사카라이드 (LPS)-유도된 시토카인 생산에 대한 화합물의 효과를 확립하기 위한 생체외 검정에서 평가되었다. 실시예 화합물 12는 LPS에 의해 유도된 돼지 PBMC에 의한 염증유발 시토카인 종양 괴사 인자 알파 (TNFα)의 생산을 억제하였다. PBMC는 각각이 오버슈팅 염증유발 면역 반응을 동반한 염증성 및 감염성 질환 예컨대 호흡기 질환 및 장 질환에 연루되는 세포 유형 예컨대 수지상 세포, T 및 B 림프구, 뿐만 아니라 단핵구를 포함하며 TNFα는 이들 환자에서 상승된다. 본 실시예는 또한 도 10에 의해 설명된다.
따라서, 본 발명의 화합물은 돼지 PBMC에 의한 시토카인 생산의 억제를 입증하며 이는 염증성 및/또는 감염성 질환 예컨대 호흡기 질환 및 장 질환에서의 이러한 화합물 실시예의 잠재적 치료 이익을 나타낸다.
동물에서의 소양증 및 통증, 특히 급성, 만성, 염증성 및 신경병증성 통증의 예방 및/또는 치료는 또한 본 발명의 화합물에 의해 제공된다.
또한, 본 발명의 화합물은 동물에서의 통증 장애, 특히 급성, 만성, 염증성 및 신경병증성 통증의 치료 및/또는 예방에 적합하다. 이는 바람직하게는 통각과민, 이질통, 관절염 (예컨대 골관절염, 류마티스 관절염 및 척추관절염)으로부터의 통증, 월경전 통증, 자궁내막증-연관 통증, 수술후 통증, 간질성 방광염으로부터의 통증, CRPS (복합 부위 통증 증후군), 삼차 신경통, 전립선염으로부터의 통증, 척수 손상에 의해 유발되는 통증, 염증-유발된 통증, 요통, 암 통증, 화학요법-연관 통증, HIV 치료-유발된 신경병증, 화상-유발된 통증 및 만성 통증을 포함한다.
본 발명은 추가로 또한 유효량의 제시된 화합물 중 적어도 1종을 사용한, 동물에서의 장애, 특히 상기 언급된 장애의 치료 및/또는 예방 방법을 제공한다.
유효량의 상기 정의된 바와 같은 적어도 본 발명의 화학식 (I)의 화합물을 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 동물에게 투여함으로써 동물에서 알레르기성 및/또는 염증성 질환을 치료 및/또는 예방하는 방법이 바람직하다.
본 발명의 문맥에서, 용어 "치료" 또는 "치료하는"은, 질환, 상태, 장애, 손상 또는 건강 문제, 또는 이러한 상태 및/또는 이러한 상태의 증상의 발생, 경과 또는 진행의 억제, 지연, 확인, 완화, 약화, 제한, 감소, 저해, 기피 또는 치유를 포함한다. 용어 "요법"은 여기서 용어 "치료"와 동의어인 것으로 이해된다.
용어 "방지", "예방" 및 "배제"는 본 발명의 문맥에서 동의어로 사용되고, 질환, 상태, 장애, 손상 또는 건강 문제, 또는 이러한 상태 및/또는 이러한 상태의 증상의 발생 또는 진전에 걸리거나, 이를 경험하거나, 이를 앓거나 또는 이를 가질 위험의 회피 또는 감소를 지칭한다.
질환, 상태, 장애, 손상 또는 건강 문제의 치료 또는 예방은 부분적이거나 또는 완전할 수 있다.
본 발명의 화합물은 단독으로 또는, 필요한 경우, 다른 활성 성분과 조합하여 사용될 수 있다. 본 발명은 추가로 동물에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및/또는 예방을 위한, 본 발명의 화합물 중 적어도 1종 및 1종 이상의 추가의 활성 성분을 함유하는 의약을 제공한다. 조합에 적합한 활성 성분의 바람직한 예는 하기를 포함한다:
활성 성분 예컨대 항박테리아 물질 (예를 들어 페니실린, 반코마이신, 시프로플록사신), 항바이러스 물질 (예를 들어 아시클로비르, 오셀타미비르) 및 항진균 물질 (예를 들어 나프티핀, 니스타틴) 및 감마 글로불린, 면역조정 및 면역억제 화합물 예컨대 시클로스포린, 메토트렉사트(Methotrexat)®, TNF 길항제 (예를 들어 휴미라(Humira)®, 에타네르셉트, 인플릭시맙), IL-1 억제제 (예를 들어 아나킨라, 카나키누맙, 릴로나셉트), 포스포디에스테라제 억제제 (예를 들어 아프레밀라스트), Jak/STAT 억제제 (예를 들어 토파시티닙, 바리시티닙, GLPG0634), 레플루노미드, 시클로포스파미드, 리툭시맙, 벨리무맙, 타크롤리무스, 라파마이신, 미코페놀레이트 모페틸, 인터페론, 코르티코스테로이드 (예를 들어 프레드니손, 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론, 히드로코르티손, 베타메타손), 시클로포스파미드, 아자티오프린 및 술파살라진; 파라세타몰, 비-스테로이드성 항염증 물질 (NSAID) (아스피린, 이부프로펜, 나프록센, 에토돌락, 셀레콕시브, 콜키신)이 일반적으로 언급될 수 있다.
상기 언급된 것들에 더하여, 본 발명의 IRAK4 억제제는 또한 하기 활성 성분과 조합될 수 있다:
폐 장애의 치료를 위한 물질, 예를 들어 베타-2-교감신경흥분제 (예를 들어 살부타몰), 항콜린제 (예를 들어 글리코피로늄), 메틸크산틴 (예를 들어 테오필린), 류코트리엔 수용체 길항제 (예를 들어 몬테루카스트), PDE-4 (포스포디에스테라제 제4형) 억제제 (예를 들어 로플루밀라스트), 메토트렉세이트, IgE 항체, 아자티오프린 및 시클로포스파미드, 코르티솔-함유 제제; 골관절염의 치료를 위한 물질 예컨대 비-스테로이드성 항염증 물질 (NSAID). 언급된 2종의 요법에 더하여, B-세포 및 T-세포 요법을 위한 메토트렉세이트 및 생물제제 (예를 들어 리툭시맙, 아바타셉트)가 류마티스 장애, 예를 들어 류마티스 관절염, 척추관절염 및 소아 특발성 관절염에 대해 언급되어야 한다. 신경영양 물질 예컨대 아세틸콜린에스테라제 억제제 (예를 들어 도네페질), MAO (모노아미노옥시다제) 억제제 (예를 들어 셀레길린), 인터페론 및 항경련제 (예를 들어 가바펜틴); 심혈관 장애의 치료를 위한 활성 성분 예컨대 베타-차단제 (예를 들어 메토프롤롤), ACE 억제제 (예를 들어 베나제프릴), 안지오텐신 수용체 차단제 (예를 들어 로사르탄, 발사르탄), 이뇨제 (예를 들어 히드로클로로티아지드), 칼슘 채널 차단제 (예를 들어 니페디핀), 스타틴 (예를 들어 심바스타틴, 플루바스타틴); 항당뇨병 약물, 예를 들어 메트포르민, 글리니드 (예를 들어 나테글리니드), DPP-4 (디펩티딜 펩티다제-4) 억제제 (예를 들어 리나글립틴, 삭사글립틴, 시타글립틴, 빌다글립틴), SGLT2 (소듐/글루코스 공동수송체 2) 억제제/ 글리플로진 (예를 들어 다파글리플로진, 엠파글리플로진), 인크레틴 모방체 (호르몬 글루코스-의존성 인슐린분비자극 펩티드 (GIP) 및 글루카곤-유사 펩티드 1 (GLP-1) 유사체/효능제) (예를 들어 엑세나티드, 리라글루티드, 릭시세나티드), α-글루코시다제 억제제 (예를 들어 아카르보스, 미글리톨, 보글리보스) 및 술포닐우레아 (예를 들어 글리벤클라미드, 톨부타미드), 인슐린 감작제 (예를 들어 피오글리타존) 및 인슐린 요법 (예를 들어 NPH 인슐린, 인슐린 리스프로). 만성 염증성 장 질환의 치료를 위한 활성 성분 예컨대 메살라진, 술파살라진, 아자티오프린, 6-메르캅토퓨린 또는 메토트렉세이트, 프로바이오틱 박테리아 (무타플로르, VSL#3®, 락토바실루스(Lactobacillus) GG, 락토바실루스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 엘. 아시도필루스(L. acidophilus), 엘. 카세이(L. casei), 비피도박테리움 인판티스(Bifidobacterium infantis) 35624, 엔테로코쿠스 페시움(Enterococcus fecium) SF68, 비피도박테리움 롱굼(Bifidobacterium longum), 에스케리키아 콜라이 니슬(Escherichia coli Nissle) 1917), 항생제, 예를 들어 시프로플록사신 및 메트로니다졸, 항설사 약물, 예를 들어 로페라미드, 또는 완하제 (비사코딜). 홍반성 루푸스의 치료를 위한 면역억제제 예컨대 글루코코르티코이드 및 비-스테로이드성 항염증 물질 (NSAID), 코르티손, 클로로퀸, 시클로스포린, 아자티오프린, 벨리무맙, 리툭시맙, 시클로포스파미드. 피부과 장애를 위한 비타민 D3 유사체, 예를 들어 칼시포트리올, 타칼시톨 또는 칼시트리올, 살리실산, 우레아, 시클로스포린, 메토트렉세이트, 에팔리주맙.
또한 상기 언급된 장애의 치료 및/또는 예방을 위한, 본 발명의 용도를 위한 본 발명의 화합물 중 적어도 1종 및 1종 이상의 추가의 활성 성분, 특히 EP4 억제제 (프로스타글란딘 E2 수용체 4 억제제), P2X3 억제제 (P2X 퓨린수용체 3), PTGES 억제제 (프로스타글란딘 E 신타제 억제제) 또는 AKR1C3 억제제 (알도-케토 리덕타제 패밀리 1 구성원 C3 억제제)를 포함하는 의약이 언급되어야 한다.
본 발명의 화합물은 전신 및/또는 국부로 작용할 수 있다. 이 목적을 위해, 이들은 적합한 방식으로, 예를 들어 경구, 비경구, 폐, 비강, 설하, 설측, 협측, 직장, 피부, 경피 또는 결막 경로에 의해, 귀를 통해 또는 이식물 또는 스텐트로서 투여될 수 있다.
본 발명의 화합물은 이들 투여 경로에 적합한 투여 형태로 투여될 수 있다.
경구 투여에 적합한 투여 형태는, 선행 기술에 따라 작용하고 본 발명의 화합물을 신속하게 및/또는 변형된 방식으로 방출하고 결정질 및/또는 무정형 및/또는 용해된 형태의 본 발명의 화합물을 함유하는 것들, 예를 들어 정제 (비코팅 또는 코팅된 정제, 예를 들어 본 발명의 화합물의 방출을 제어하는 위액-내성 또는 지연-용해 또는 불용성 코팅을 사용함), 구강 내에서 신속하게 붕해되는 정제 또는 필름/오블레이트, 필름/동결건조물, 캡슐 (예를 들어 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐), 당-코팅된 정제, 츄어블제 (예를 들어 연질 츄어블제), 과립, 펠릿, 분말, 에멀젼, 현탁액, 에어로졸 또는 용액이다.
비경구 투여는 흡수 단계를 회피하면서 (예를 들어 정맥내, 동맥내, 심장내, 척수내 또는 요추내 경로에 의함) 또는 흡수를 포함하면서 (예를 들어 근육내, 피하, 피내, 경피 또는 복강내 경로에 의함) 달성될 수 있다. 비경구 투여에 적합한 투여 형태는 용액, 현탁액, 에멀젼, 동결건조물 또는 멸균 분말 형태의 주사 및 주입을 위한 제제를 포함한다.
다른 투여 경로를 위해, 적합한 예는 흡입가능한 의약 형태 (분말 흡입기, 네뷸라이저 포함), 점비제, 용액 또는 스프레이, 설측, 설하 또는 협측 투여를 위한 정제, 필름/오블레이트 또는 캡슐, 좌제, 귀 또는 눈 제제, 질 캡슐, 수성 현탁액 (로션, 진탕 혼합물), 친지성 현탁액, 연고, 크림, 푸어-온(pour-on), 경피 치료 시스템 (예를 들어 패치), 유액, 페이스트, 폼, 살포 분말, 이식물 또는 스텐트이다.
경구 또는 비경구 투여, 특히 경구 투여가 바람직하다.
본 발명의 화합물은 언급된 투여 형태로 전환될 수 있다. 이는 불활성, 비독성, 제약상 적합한 부형제와 혼합함으로써 그 자체로 공지된 방식으로 달성될 수 있다. 이들 부형제는 담체 (예를 들어 미세결정질 셀룰로스, 락토스, 만니톨), 용매 (예를 들어 액체 폴리에틸렌 글리콜), 유화제 및 분산제 또는 습윤제 (예를 들어 소듐 도데실술페이트, 폴리옥시소르비탄 올레에이트), 결합제 (예를 들어 폴리비닐피롤리돈), 합성 및 천연 중합체 (예를 들어 알부민), 안정화제 (예를 들어 항산화제, 예를 들어 아스코르브산), 착색제 (예를 들어 무기 안료, 예를 들어 산화철) 및 향미제 및/또는 냄새 교정제를 포함한다.
본 발명은 추가로 동물에서의 알레르기성 및/또는 염증성 질환의 치료 및/또는 예방 방법에 사용하기 위한, 적어도 1종의 본 발명의 화합물을 전형적으로 1종 이상의 불활성, 비독성, 제약상 적합한 부형제와 함께 포함하는 의약을 제공한다.
일반적으로, 비경구 투여의 경우에 체중 기준 약 0.001 내지 1 mg/kg, 바람직하게는 약 0.01 내지 0.5 mg/kg의 양을 투여하는 것이 효과적인 결과를 달성하는 데 유리한 것으로 밝혀졌다. 경구 투여의 경우에 투여량은 체중 기준 약 0.01 내지 100 mg/kg, 바람직하게는 약 0.01 내지 20 mg/kg 및 가장 바람직하게는 0.1 내지 10 mg/kg이다.
그럼에도 불구하고 일부 경우에, 구체적으로 체중, 투여 경로, 활성 성분에 대한 개별 반응, 제제의 성질 및 투여가 일어나는 시간 또는 간격의 함수로서, 언급된 양에서 벗어나는 것이 필요할 수 있다. 따라서 일부 경우에는 상기 언급된 최소량 미만으로 관리하는 것이 충분할 수 있는 반면에, 다른 경우에는 언급된 상한치를 초과하여야 한다. 보다 많은 양을 투여하는 경우에, 이들을 하루에 걸쳐 여러 개별 용량으로 분할하는 것이 권장될 수 있다.
하기 작업 실시예는 본 발명을 예시한다. 본 발명은 실시예로 제한되지 않는다.
달리 언급되지 않는 한, 하기 시험 및 실시예에서의 백분율은 중량 백분율이고; 부는 중량부이다. 액체/액체 용액에 대한 용매 비, 희석 비 및 농도 데이터는 각 경우에 부피를 기준으로 한다.
화합물의 제조
본 발명의 화합물의 제조는 하기 합성 반응식에 의해 예시된다.
본 발명의 화합물의 합성에 사용된 출발 물질은 카르복실산 (중간체 V3)이며, 이는 상업적으로 입수가능하거나 또는 문헌으로부터 공지된 경로에 의해 또는 문헌으로부터 공지된 경로와 유사하게 제조될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [European Journal of Organic Chemistry 2003, 8, 1559 - 1568, Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 1990, 38, 9, 2446 - 2458, Synthetic Communications 2012, 42, 658 - 666, Tetrahedron, 2004, 60, 51, 11869 - 11874] 참조) (예를 들어, 합성 반응식 1 참조). 일부 카르복실산 V3은 카르복실산 에스테르 (중간체 V2)로부터 진행하여 가수분해 (예를 들어, 에틸 6-(히드록시메틸)피리딘-2-카르복실레이트와 메탄올 중 수성 수산화나트륨 용액의 반응, WO2004113281 참조)에 의해 또는 - tert-부틸 에스테르의 경우에 - 산, 예를 들어 염화수소 또는 트리플루오로아세트산과의 반응 (예를 들어, 문헌 [Dalton Transactions, 2014, 43, 19, 7176 - 7190] 참조)에 의해 제조될 수 있다. 카르복실산 V3은 또한 그의 알칼리 금속 염 형태로 사용될 수 있다. 중간체 V2는 치환기 X1로서 염소, 브로민 또는 아이오딘을 보유하는 중합체 V1로부터, 일산화탄소 분위기 중에서, 임의로 승압 하에, 포스핀 리간드, 예를 들어 1,3-비스(디페닐포스피노)프로판, 팔라듐 화합물, 예를 들어 아세트산팔라듐 (II), 및 염기, 예를 들어 트리에틸아민의 존재 하에, 용매, 예를 들어 디메틸 술폭시드 중 에탄올 또는 메탄올을 첨가하여 반응시켜 임의로 또한 제조될 수 있다 (제조 방법에 대해, 예를 들어, WO2012112743, WO 2005082866, 문헌 [Chemical Communications (Cambridge, England), 2003, 15, 1948 - 1949], WO200661715 참조). 중간체 V1은 상업적으로 입수가능하거나 또는 문헌으로부터 공지된 경로에 의해 제조될 수 있다. 예시적인 제조 방법은 WO 2012061926, 문헌 [European Journal of Organic Chemistry, 2002, 2, 327 - 330, Synthesis, 2004, 10, 1619 - 1624, Journal of the American Chemical Society, 2013, 135, 32, 12122 - 12134, Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, 2014, 24, 16, 4039 - 4043], US2007185058, WO2009117421에 상술되어 있다.
Figure 112018118699939-pct00009
합성 반응식 1
X1은 염소, 브로민 또는 아이오딘이다.
Rd는 메틸, 에틸, 벤질 또는 tert-부틸이다.
R4, R5는 각각 화학식 (I)에 정의된 바와 같다.
메틸 5-아미노-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 2)는 메틸 1H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 0)로부터 진행하여 합성 반응식 2에 따라 WO 2008/001883과 유사하게 니트로화 및 목탄 상 팔라듐의 존재 하에 수소에 의한 중간체 1의 니트로 기의 환원에 의해 수득될 수 있다. 중간체 2로부터 진행되는 중간체 3의 제조의 경우, 문헌 (Amino Acids, Peptides and Proteins in Organic Chemistry, Vol.3 - Building Blocks, Catalysis and Coupling Chemistry, Andrew B. Hughes, Wiley, Chapter 12 - Peptide-Coupling Reagents, 407-442; Chem. Soc. Rev., 2009, 38, 606)으로부터 공지된 다양한 커플링 시약을 사용하는 것이 가능하다. 예를 들어, 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드를 커플링제로서의 1-히드록시-1H-벤조트리아졸 수화물 (HOBt, WO2012107475; Bioorg. Med. Chem. Lett., 2008, 18, 2093), (1H-벤조트리아졸-1-일옥시)(디메틸아미노)-N,N-디메틸메탄이미늄 테트라플루오로보레이트 (TBTU, CAS 125700-67-6), (디메틸아미노)-N,N-디메틸(3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피리딘-3-일옥시)메탄아미늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU, CAS 148893-10-1), 프로판포스폰산 무수물 (에틸 아세테이트 또는 DMF 중의 용액으로서, CAS68957-94-8) 또는 디-1H-이미다졸-1-일메타논 (CDI)과 조합하고, 각 경우에 염기 예컨대 트리에틸아민 또는 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민을 반응 혼합물에 첨가하여 사용하는 것이 가능하다. THF 중 TBTU 및 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민을 사용하는 것이 바람직하다.
Figure 112018118699939-pct00010
합성 반응식 2
치환기 R4, R5는 각각 화학식 (I)에 정의된 바와 같다.
중간체 3으로부터 진행하여, 2-치환된 인다졸 유도체 (중간체 4)를 제조하는 것이 가능하다 (합성 반응식 3 참조). 이 목적을 위한 유용한 반응은 임의로 치환된 알킬 클로라이드, 알킬 브로마이드, 알킬 아이오다이드 또는 알킬 4-메틸벤젠술포네이트와의 반응을 포함한다. 사용된 알킬 할라이드 또는 알킬 4-메틸벤젠술포네이트는 상업적으로 입수가능하거나 또는 문헌으로부터 공지된 경로와 유사하게 제조될 수 있다 (알킬 4-메틸벤젠술포네이트의 제조의 경우, 한 예는 트리에틸아민 또는 피리딘의 존재 하에 적절한 알콜과 4-메틸벤젠술포닐 클로라이드의 반응이다; 예를 들어, 문헌 [Bioorganic and Medicinal Chemistry, 2006, 14, 12 4277 - 4294] 참조). 임의로, 알킬 클로라이드 또는 알킬 브로마이드의 사용의 경우에, 알칼리 금속 아이오딘화물 예컨대 아이오딘화칼륨 또는 아이오딘화나트륨을 첨가하는 것이 또한 가능하다. 사용된 염기는, 예를 들어, 탄산칼륨, 탄산세슘 또는 수소화나트륨일 수 있다. 반응성 알킬 할라이드의 경우에, 일부 경우에 N-시클로헥실-N-메틸시클로헥산아민을 사용하는 것이 또한 가능하다. 유용한 용매는, 예를 들어, 1-메틸피롤리딘-2-온, DMF, DMSO 또는 THF를 포함한다. 임의로, 사용된 알킬 할라이드 또는 알킬 4-메틸벤젠술포네이트는 미리 보호기로 임의로 보호된 관능기를 가질 수 있다 (또한 문헌 [P. G. M. Wuts, T. W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Fourth Edition, ISBN: 9780471697541] 참조). 예를 들어, 1개 이상의 히드록실 기를 갖는 알킬 할라이드 또는 알킬 4-메틸벤젠술포네이트가 사용되는 경우, 이들 히드록실 기는 tert-부틸(디메틸)실릴 기 또는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 익숙한 유사한 규소-함유 보호기에 의해 임의로 보호될 수 있다. 대안적으로, 히드록실 기는 또한 테트라히드로-2H-피란 (THP) 기에 의해 또는 아세틸 또는 벤조일 기에 의해 보호될 수 있다. 이어서, 사용된 보호기는 중간체 4의 합성에 후속적으로, 또는 그 밖에 (I)의 합성 후에 탈착될 수 있다. 예를 들어, tert-부틸(디메틸실릴) 기가 보호기로서 사용되는 경우, 이는 예를 들어, 용매 예컨대 THF 중 테트라부틸암모늄 플루오라이드를 사용하여 탈착될 수 있다. THP 보호기는, 예를 들어, 4-메틸벤젠술폰산 (임의로 1수화물 형태)을 사용하여 탈착될 수 있다. 아세틸 기 또는 벤조일 기는 수성 수산화나트륨 용액으로 처리함으로써 탈착될 수 있다.
임의로, 사용된 알킬 할라이드 또는 알킬 4-메틸벤젠술포네이트는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 산화 또는 환원 반응에 의해 전환될 수 있는 관능기를 함유할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Science of Synthesis, Georg Thieme Verlag] 참조). 예를 들어, 관능기가 술피드 기인 경우, 이는 문헌에 공지된 방법에 의해 술폭시드 또는 술폰 기로 산화될 수 있다. 술폭시드 기의 경우에, 이는 마찬가지로 술폰 기로 산화될 수 있다. 이들 산화 단계의 경우, 예를 들어, 3-클로로퍼벤조산 (CAS 937-14-4)을 사용하는 것이 가능하다 (이에 관해, 또한, 예를 들어, 2-(메틸술파닐)에틸-1H-피라졸 유도체의 2-(메틸술피닐)에틸-1H-피라졸 유도체로의 산화 및 추가의 2-(메틸술파닐)에틸-1H-피라졸 유도체의 2-(메틸술포닐)에틸-1H-피라졸 유도체로의 산화에 대해 US201094000 참조). 사용된 알킬 할라이드 또는 토실레이트가 케토 기를 함유하는 경우, 이는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 환원 방법에 의해 알콜 기로 환원될 수 있다 (예를 들어, 수소화붕소나트륨의 사용에 대해 문헌 [Chemische Berichte, 1980, 113, 1907 - 1920] 참조). 이들 산화 또는 환원 단계는 중간체 4의 합성에 후속적으로, 또는 그 밖에 본 발명의 화학식 (I)의 화합물의 합성 후에 실시될 수 있다. 대안적으로, 중간체 4는 중간체 3과 임의로 치환된 알킬 알콜의 미츠노부(Mitsunobu) 반응 (예를 들어, 문헌 [K. C. K. Swamy et al. Chem. Rev. 2009, 109, 2551 - 2651] 참조)을 통해 제조될 수 있다. 다양한 포스핀 예컨대 트리페닐포스핀, 트리부틸포스핀 또는 1,2-디페닐포스피노에탄을 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (CAS 2446-83-5) 또는 문헌 (K. C. K. Swamy et al. Chem. Rev. 2009, 109, 2551 - 2651)에 언급된 추가의 디아젠 유도체와 조합하여 이용하는 것이 가능하다. 트리페닐포스핀 및 디이소프로필 아조디카르복실레이트를 사용하는 것이 바람직하다. 알킬 알콜이 관능기를 보유하는 경우 - 상기 언급된 알킬 할라이드와의 반응의 경우에서와 같이 - 알려져 있는 보호기 전략의 경우 (추가의 지침은 문헌 [P. G. M. Wuts, T. W. Greene, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Fourth Edition, ISBN: 9780471697541]에서 찾아볼 수 있음) 및 - 상기 언급된 알킬 할라이드와의 반응의 경우에서와 같이 - 산화 또는 환원 단계의 경우 중간체 4의 합성에 상응하게, 또는 그 밖에 본 발명의 화학식 (I)의 화합물의 합성 후에 실시되는 것이 가능하다. 중간체 4로부터 진행하여, R2 및 R3이 C1-C6-알킬로서 정의되는 (여기서 R2 및 R3은 동일한 정의를 가짐) 본 발명의 화학식 (I)의 화합물은 그리냐르 반응에 의해 수득될 수 있다 (예를 들어, EP 2489663에서의 메틸 1H-인다졸-6-카르복실레이트 유도체와 메틸마그네슘 브로마이드의 반응 참조). 그리냐르 반응의 경우, 알킬마그네슘 할라이드를 사용하는 것이 가능하다. THF 또는 디에틸 에테르 중, 또는 그 밖에 THF 및 디에틸 에테르의 혼합물 중 메틸마그네슘 클로라이드 또는 메틸마그네슘 브로마이드가 특히 바람직하다. 대안적으로, 중간체 4로부터 진행하여, R2 및 R3이 C1-C6-알킬로서 정의되는 (여기서 R2 및 R3은 동일한 정의를 가짐) 본 발명의 화학식 (I)의 화합물은 알킬리튬 시약과의 반응에 의해 수득될 수 있다 (예를 들어, WO2006116412에서의 메틸 2-아미노-4-클로로-1-메틸-1H-벤즈이미다졸-7-카르복실레이트 유도체와 이소프로필리튬 또는 tert-부틸리튬의 반응 참조). 중간체 4로부터 진행하여, THF 중 수소화알루미늄리튬, THF 중 수소화붕소리튬 또는 THF 중 수소화붕소나트륨 (임의로 메탄올 첨가), 또는 수소화붕소리튬 및 수소화붕소나트륨의 혼합물로의 환원에 의해, R2 및 R3이 H로서 정의되는 본 발명의 화학식 (I)의 화합물을 제조하는 것이 가능하다.
Figure 112018118699939-pct00011
합성 반응식 3
치환기 R1, R2, R3, R4, R5는 각각 화학식 (I)에 정의된 바와 같다.
중간체 3으로부터 진행하여, R2 및 R3이 C1-C6-알킬로서 정의되는 (여기서 R2 및 R3은 동일한 정의를 가짐) 중간체 5는 그리냐르 반응에 의해 수득될 수 있다 (예를 들어, 합성 반응식 4 참조). 이 목적을 위해, THF 중 또는 디에틸 에테르 중 또는 그 밖에 THF 및 디에틸 에테르의 혼합물 중 적합한 알킬마그네슘 할라이드, 예를 들어 메틸마그네슘 클로라이드 또는 메틸마그네슘 브로마이드를 사용하는 것이 가능하다.
이어서, 중간체 5로부터 진행하여, R2 및 R3이 C1-C6-알킬로서 정의되는 (여기서 R2 및 R3은 동일한 정의를 가짐) 본 발명의 화합물 (I)의 부분 (I-a)을 제조하는 것이 가능하다. 이 목적을 위해, 합성 반응식 3 (중간체 3의 제조)과 유사하게, 유용한 반응은 중간체 5와 임의로 치환된 알킬 클로라이드, 알킬 브로마이드, 알킬 아이오다이드 또는 알킬 4-메틸벤젠술포네이트의 반응이다. 합성 반응식 3에 기재된 것과 유사하게 보호기 전략을 사용하는 것이 가능하다.
대안적으로, R2 및 R3이 C1-C6-알킬로서 정의되는 (여기서 R2 및 R3은 동일한 정의를 가짐) 본 발명의 화합물 (I)의 부분 (I-a)의 제조를 위해, (합성 반응식 3과 유사하게) 중간체 5와 임의로 치환된 알킬 알콜의 미츠노부 반응을 사용하는 것이 가능하다.
화학식 (I-a)의 화합물에서 R1이 적합한 관능기를 포함하는 경우, 임의로 후속적으로, 합성 반응식 3과 유사하게, 추가의 본 발명의 화합물의 제조를 위한 산화 또는 환원 반응을 사용하는 것이 가능하다.
Figure 112018118699939-pct00012
합성 반응식 4
치환기 R1, R4, R5는 각각 화학식 (I)에 정의된 바와 같다. R2 및 R3은 항상 동일한 정의를 갖고 둘 다 C1-C6-알킬이다.
중간체 1로부터 진행하여, 대안적 방식으로 중간체 4를 제조하는 것이 가능하다 (합성 반응식 5 참조). 가장 먼저, 중간체 1은 합성 반응식 3 (중간체 3으로부터 중간체 4의 제조)에서와 같은 방법에 의해 중간체 6으로 전환된다.
이어서 중간체 6은 니트로 기의 환원에 의해 중간체 7로 전환될 수 있다. 예를 들어, 니트로 기는 수소 분위기 하에 탄소 상 팔라듐에 의해 (예를 들어, 6-이소프로폭시-5-니트로-1H-인다졸의 6-이소프로폭시-1H-인다졸-5-아민으로의 환원에 대해 WO2013174744 참조) 또는 물 및 에탄올 중 철 및 염화암모늄의 사용에 의해 (예를 들어, 또한 문헌 [Journal of the Chemical Society, 1955, 2412-2419] 참조), 또는 염화주석 (II) (CAS 7772-99-8)의 사용에 의해 환원될 수 있다. 물 및 에탄올 중 철 및 염화암모늄의 사용이 바람직하다. 중간체 7로부터 중간체 4의 제조는 합성 반응식 2 (중간체 2로부터 중간체 3의 제조)와 유사하게 실시될 수 있다.
합성 반응식 3에 대해 기재된 바와 같이, 임의로 합성 반응식 5의 경우에도 보호기 전략을 사용하는 것이 가능하다. 임의로, 합성 반응식 3에 대해 기재된 바와 같이, 중간체 6 또는 중간체 7로부터 진행하여, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 산화 또는 환원 반응을 수행하는 것이 추가적으로 가능하다 (예를 들어, 문헌 [Science of Synthesis, Georg Thieme Verlag] 참조).
Figure 112018118699939-pct00013
합성 반응식 5
치환기 R1, R4, R5는 각각 화학식 (I)에 정의된 바와 같다.
실시예 화합물의 합성
약어 및 규명
Figure 112018118699939-pct00014
용어 염화나트륨 용액은 항상 포화 수성 염화나트륨 용액을 의미한다.
중간체 및 실시예의 화학 명칭은 ACD / LABS (배치 버전 12.01.) 소프트웨어를 사용하여 생성되었다.
방법
일부 경우에, 본 발명의 화합물 및 그의 전구체 및/또는 중간체를 LC-MS에 의해 분석하였다.
방법 A1: UPLC (MeCN-HCOOH):
기기: 워터스 액퀴티(Waters Acquity) UPLC-MS SQD 3001; 칼럼: 액퀴티 UPLC BEH C18 1.7 50 x 2.1 mm; 용리액 A: 물 + 0.1 부피%의 포름산 (99%), 용리액 B: 아세토니트릴; 구배: 0-1.6분 1-99% B, 1.6-2.0분 99% B; 유량 0.8 ml/분; 온도: 60℃; 주입: 2 μl; DAD 스캔: 210-400 nm; MS ESI+, ESI-, 스캔 범위 160-1000 m/z; ELSD.
방법 A2: UPLC (MeCN-NH3):
기기: 워터스 액퀴티 UPLC-MS SQD 3001; 칼럼: 액퀴티 UPLC BEH C18 1.7 50 x 2.1 mm; 용리액 A: 물 + 0.2 부피%의 암모니아 (32%), 용리액 B: 아세토니트릴; 구배: 0-1.6분 1-99% B, 1.6-2.0분 99% B; 유량 0.8 ml/분; 온도: 60℃; 주입: 2 μl; DAD 스캔: 210-400 nm; MS ESI+, ESI-, 스캔 범위 160-1000 m/z; ELSD.
방법 A3: (LC-MS)
기기: 애질런트(Agilent) 1290 인피니티(Infinity) LC; 칼럼: 액퀴티 UPLC BEH C18 1.7 50 x 2.1 mm; 용리액 A: 물 + 0.05 부피%의 포름산, 용리액 B: 아세토니트릴 + 0.05 부피%의 포름산; 구배: 0-1.7분 2-90% B, 1.7-2.0분 90% B; 유량 1.2 ml/분; 온도: 60℃; 주입: 2 μl; DAD 스캔: 190-390 nm; MS: 애질런트 TOF 6230.
방법 A4: (LC-MS)
기기: 워터스 액퀴티; 칼럼: 키네텍스(Kinetex) (페노메넥스(Phenomenex)), 50 x 2 mm; 용리액 A: 물 + 0.05 부피%의 포름산, 용리액 B: 아세토니트릴 + 0.05 부피%의 포름산; 구배: 0-1.9분 1-99% B, 1.9-2.1분 99% B; 유량 1.5 ml/분; 온도: 60℃; 주입: 0.5 μl; DAD 스캔: 200-400 nm.
일부 경우에, 본 발명의 화합물 및 그의 전구체 및/또는 중간체를 하기 예시된 정제용 HPLC 방법에 의해 정제하였다:
방법 P1: 시스템: 워터스 자동정제 시스템: 펌프 2545, 샘플 매니저 2767, CFO, DAD 2996, ELSD 2424, SQD; 칼럼: 엑스브리지(XBridge) C18 5 μm 100 x 30 mm; 용리액 A: 물 + 0.1 부피%의 포름산, 용리액 B: 아세토니트릴; 구배: 0-8분 10-100% B, 8-10분 100% B; 유량: 50 ml/분; 온도: 실온; 용액: 최대 250 mg / 최대 2.5 ml DMSO 또는 DMF; 주입: 1 x 2.5 ml; 검출: DAD 스캔 범위 210-400 nm; MS ESI+, ESI-, 스캔 범위 160-1000 m/z.
방법 P2: 시스템: 워터스 자동정제 시스템: 펌프 254, 샘플 매니저 2767, CFO, DAD 2996, ELSD 2424, SQD 3100; 칼럼: 엑스브리지 C18 5 μm 10 x 30 mm; 용리액 A: 물 + 0.2 부피%의 암모니아 (32%), 용리액 B: 메탄올; 구배: 0-8분 30-70% B; 유량: 50 ml/분; 온도: 실온; 검출: DAD 스캔 범위 210-400 nm; MS ESI+, ESI-, 스캔 범위 160-1000 m/z; ELSD.
방법 P3: 시스템: 래보마틱(Labomatic), 펌프: HD-5000, 분획 수집기: 래보콜 배리오(LABOCOL Vario)-4000, UV 검출기: 크나우어(Knauer) UVD 2.1S; 칼럼: 엑스브리지 C18 5 μm 100x30 mm; 용리액 A: 물 + 0.2 부피%의 암모니아 (25%), 용리액 B: 아세토니트릴; 구배: 0-1분 15% B, 1-6.3분 15-55% B, 6.3-6.4분 55-100% B, 6.4-7.4분 100% B; 유량: 60 ml/분; 온도: 실온; 용액: 최대 250 mg / 2 ml DMSO; 주입: 2 x 2 ml; 검출: UV 218 nm; 소프트웨어: SCPA PrepCon5.
방법 P4: 시스템: 래보마틱, 펌프: HD-5000, 분획 수집기: 래보콜 배리오-4000, UV 검출기: 크나우어 UVD 2.1S; 칼럼: 크로마토렉스(Chromatorex) RP C18 10 μm 125 x 30 mm; 용리액 A: 물 + 0.1 부피%의 포름산, 용리액 B: 아세토니트릴; 구배: 0-15분 65 - 100% B; 유량: 60 ml/분; 온도: 실온; 용액: 최대 250 mg / 2 ml DMSO; 주입: 2 x 2 ml; 검출: UV 254 nm; 소프트웨어: SCPA PrepCon5.
방법 P5: 시스템: 세피아텍(Sepiatec): 정제용 SFC100, 칼럼: 키랄팩(Chiralpak) IA 5 μm 250x20 mm; 용리액 A: 이산화탄소, 용리액 B: 에탄올; 구배: 등용매 20% B; 유량: 80 ml/분; 온도: 40℃; 용액: 최대 250 mg / 2 ml DMSO; 주입: 5 x 0.4 mL; 검출: UV 254 nm.
방법 P6: 시스템: 애질런트: 정제용 1200, 2 x 정제용 펌프, DLA, MWD, 길슨(Gilson): 액체 핸들러 215; 칼럼: 키랄셀(Chiralcel) OJ-H 5 μm 250 x 20 mm; 용리액 A: 헥산, 용리액 B: 에탄올; 구배: 등용매 30% B; 유량: 25 ml/분; 온도: 25℃; 용액: 187 mg / 8 ml 에탄올/메탄올; 주입: 8 x 1.0 ml; 검출: UV 280 nm.
방법 P7: 시스템: 래보마틱, 펌프: HD-5000, 분획 수집기: 래보콜 배리오-4000, UV 검출기: 크나우어 UVD 2.1S; 칼럼: 엑스브리지 C18 5 μm 100 x 30 mm; 용리액 A: 물 + 0.1 부피%의 포름산, 용리액 B: 아세토니트릴; 구배: 0-3분: 65% B 등용매, 3-13분: 65-100% B; 유량: 60 ml/분; 온도: 실온; 용액: 최대 250 mg / 2 ml DMSO; 주입: 2 x 2 ml; 검출: UV 254 nm.
방법 P8: 시스템: 애질런트: 정제용 1200, 2 x 정제용 펌프, DLA, MWD, 길슨: 액체 핸들러 215; 칼럼: 키랄팩 IF 5 μm 250 x 20 mm; 용리액 A: 에탄올, 용리액 B: 메탄올; 구배: 등용매 50% B; 유량: 25 ml/분; 온도: 25℃; 용액: 600 mg / 7 ml N,N-디메틸포름아미드; 주입: 10 x 0.7 ml; 검출: UV 254 nm.
일부 경우에, 물질 혼합물을 실리카 겔 상 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다.
일부의 본 발명의 화합물 및 그의 전구체 및/또는 중간체의 제조를 위해, 칼럼 크로마토그래피 정제 ("플래시 크로마토그래피")를 바이오타지(Biotage)로부터의 이솔레라(Isolera)® 장치를 사용하여 실리카 겔 상에서 수행하였다. 이는 바이오타지로부터의 카트리지, 예를 들어 상이한 크기의 "SNAP 카트리지, KP_SIL" 카트리지 및 상이한 크기의 인터킴(Interchim)으로부터의 "인터킴 퓨리플래시 실리카(Interchim Puriflash Silica) HP 15UM 플래시 칼럼" 카트리지를 사용하여 행하였다.
출발 물질
중간체 V2-1
메틸 6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-카르복실레이트
Figure 112018118699939-pct00015
2.00 g (9.26 mmol)의 2-(6-브로모피리딘-2-일)프로판-2-올 (CAS 638218-78-7)을 20 ml의 메탄올 및 20 ml의 DMSO 중에 용해시켰다. 후속적으로, 250 mg의 1,3-비스(디페닐포스피노)프로판, 130 mg의 아세트산팔라듐 (II) 및 3 ml의 트리에틸아민을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 일산화탄소로 3회 퍼징하고, 13 bar 일산화탄소 분위기 하에 30분 동안 교반하였다. 일산화탄소 분위기를 진공을 적용함으로써 제거하고, 혼합물을 14 bar 일산화탄소 분위기 하에 100℃에서 24시간 동안 교반하였다. 오토클레이브를 감압시키고, 물을 반응 혼합물에 첨가하고, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트로 3회 추출하고, 포화 수성 탄산수소나트륨 용액 및 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 이로써 1.60 g의 조 생성물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 0.76분 (UV 검출기: TIC), 질량 실측치 195.00.
중간체 V3-1
포타슘 6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-카르복실레이트
Figure 112018118699939-pct00016
중간체 0-1의 조 생성물 1.60 g을 처음에 15 ml의 메탄올 중에 충전하고, 0.74 g의 수산화칼륨을 첨가하고 혼합물을 50℃에서 16.5시간 동안 교반하였다. 농축 후에, 이로써 2.1 g의 잔류물을 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 0.47분 (UV 검출기: TIC), 질량 실측치 181.00.
중간체 1-1
메틸 5-니트로-1H-인다졸-6-카르복실레이트
Figure 112018118699939-pct00017
4.60 g (26.1 mmol)의 메틸 1H-인다졸-6-카르복실레이트 (CAS 번호: 170487-40-8)를 120 ml의 황산 (96%) 중에 용해시키고, CPG 교반기, 적하 깔때기 및 내부 온도계를 갖춘 3구 플라스크에서 -15℃로 냉각시켰다. 15분의 기간에 걸쳐, 미리 제조하고 냉각시킨 니트로화 산 (5 ml의 65% 질산 중 10 ml의 96% 황산)을 이 용액에 적가하였다. 적가가 완료된 후, 혼합물을 추가로 1시간 동안 교반하였다 (-13℃의 내부 온도). 반응 혼합물을 얼음에 첨가하고, 침전물을 흡인으로 여과하고, 물로 세척하고, 건조 캐비닛에서 50℃에서 감압 하에 건조시켰다. 5.49 g의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A2): Rt = 0.75분
MS (ESIpos): m/z = 222(M+H)+
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 3.87 (s, 3 H), 7.96 (s, 1 H), 8.44 (s, 1 H), 8.70 (s, 1 H), 13.98 (br. s., 1 H).
중간체 2-1
메틸 5-아미노-1H-인다졸-6-카르복실레이트
Figure 112018118699939-pct00018
4.40 g (19.8 mmol)의 메틸 5-니트로-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 1-1)를 236 ml의 메탄올 중에 용해시키고, 1.06 g (0.99 mmol)의 활성탄 상 팔라듐으로 표준 수소 압력 하에 25℃에서 3시간 동안 수소화시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 필터를 메탄올로 세척하고, 여과물을 농축시켰다. 3.53 g의 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 3.85 (s, 3 H) 6.01 (s, 2 H) 6.98 (s, 1 H) 7.79 - 7.91 (m, 1 H) 7.99 (s, 1 H) 12.84 (br. s., 1 H).
중간체 3-1
메틸 5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-1H-인다졸-6-카르복실레이트
Figure 112018118699939-pct00019
4.95 g (25.9 mmol)의 6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복실산을 처음에 45 ml의 THF 중에 충전하였다. 9.07 g (28.2 mmol)의 O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 및 4.92 ml (28.2 mmol)의 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반하였다. 후속적으로, 4.50 g (23.5 mmol)의 메틸 5-아미노-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 2-1)를 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 막 필터를 통해 흡인으로 여과하고, 고체를 THF 및 물로 세척하고, 건조 캐비닛에서 밤새 건조시켰다. 7.60 g의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A2): Rt = 1.16분
MS (ESIpos): m/z = 365 (M+H)+
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 3.97 (s, 3 H), 8.13 - 8.27 (m, 2 H), 8.30 (s, 1 H), 8.33 - 8.45 (m, 1 H), 8.45 - 8.51 (m, 1 H), 9.15 (s, 1 H), 12.57 (s, 1 H), 13.44 (s, 1 H).
중간체 3-2
메틸 5-({[6-(디플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-1H-인다졸-6-카르복실레이트
Figure 112018118699939-pct00020
2.85 g (23.5 mmol)의 6-(디플루오로메틸)피리딘-2-카르복실산을 처음에 30 ml의 THF 중에 충전하였다. 6.05 g (18.8 mmol)의 O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 및 3.3 ml의 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하였다. 후속적으로, 3.00 g (15.7 mmol)의 메틸 5-아미노-1H-인다졸-6-카르복실레이트를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물과 혼합하고, 침전물을 흡인으로 여과하고, 물 및 디클로로메탄으로 반복해서 세척하였다. 이로써 1.53 g (이론치의 27%)의 표제 화합물을 수득하였다. 여과물의 상을 분리하고, 유기 상을 농축시키고, 약간의 디클로로메탄과 혼합하고, 초음파 조에서 현탁시키고, 침전물을 흡인으로 여과하였다. 이로써 추가의 1.03 g의 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR (제1 생성물 분획, 300MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 3.99 (s, 3H), 7.09 (t, 1H), 8.00 (d, 1H), 8.21 - 8.40 (m, 4H), 9.14 (s, 1H), 12.53 (s, 1H), 13.44 (s, 1H).
중간체 3-3
메틸 5-({[6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-1H-인다졸-6-카르복실레이트
Figure 112018118699939-pct00021
2.10 g의 포타슘 6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-카르복실레이트 (중간체 V3-1)를 처음에 15 ml의 THF 중에 충전하였다. 3.69 g (11.5 mmol)의 O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 및 2.00 ml의 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 후속적으로, 1.83 g (9.58 mmol)의 메틸 5-아미노-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 2-1)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 19시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 및 에틸 아세테이트와 혼합하고, 미용해 고체를 여과하고, 여과물의 상을 분리하고, 수성 상을 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 상 칼럼 크로마토그래피 (헥산/에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 용매를 제거한 후, 1.56 g의 표제 화합물을 황색 발포체로서 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 1.00분 (UV 검출기: TIC 스무스(Smooth)), 질량 실측치 354.00.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.63 (s, 6H), 3.97 (s, 3H), 5.37(s ,1H), 7.90 - 7.95 (m, 1H), 8.03-8.07 (m, 2H), 8.23(s, 1H),8.29 (s, 1H), 9.19 (s, 1H), 12.79 (s, 1H), 13.41 (br.s., 1H).
중간체 4-1
메틸 2-(옥세탄-3-일메틸)-5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2H-인다졸-6-카르복실레이트
Figure 112018118699939-pct00022
1.00 g (2.66 mmol)의 메틸 5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 3-1)를 10 ml의 DMF 중에 용해시키고, 1.10 g (7.99 mmol)의 탄산칼륨 및 221 mg (1.33 mmol)의 아이오딘화칼륨의 첨가 후, 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반하였다. 603 mg (3.99 mmol)의 3-브로모메틸옥세탄을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물과 에틸 아세테이트 사이에 분배하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 합한 유기 상을 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상 칼럼 크로마토그래피 (헥산/에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 260 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A2): Rt = 1.24분
MS (ESIpos): m/z = 435(M+H)+
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 3.49 - 3.64 (m, 1 H), 3.95 (s, 3 H), 4.49 (t, 2 H), 4.68 (dd, 2 H), 4.81 (d, 2 H), 8.20 (dd, 1 H), 8.35 - 8.41 (m, 1 H), 8.43 - 8.49 (m, 2 H), 8.55 - 8.58 (m, 1 H), 9.06 (s, 1 H), 12.53 (s, 1 H).
중간체 4-2
메틸 2-(2-메톡시에틸)-5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2H-인다졸-6-카르복실레이트
Figure 112018118699939-pct00023
1.00 g (2.75 mmol)의 메틸 5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 3-1)를 5 ml의 DMF 중에 용해시키고, 387 μl (4.12 mmol)의 2-브로모에틸 메틸 에테르, 1.14 g (8.23 mmol)의 탄산칼륨 및 228 mg (1.37 mmol)의 아이오딘화칼륨을 교반하면서 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하고, 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상 칼럼 크로마토그래피 (헥산/에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 12 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 1.24분
MS (ESIpos): m/z = 423 (M+H)+
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 3.24 (s, 3 H), 3.86 (t, 2 H), 3.96 (s, 3 H), 4.65 (t, 2 H), 8.21 (dd, 1 H), 8.35 - 8.42 (m, 1 H), 8.43 - 8.51 (m, 2 H), 8.52 (d, 1 H), 9.06 (s, 1 H), 12.53 (s, 1 H).
중간체 4-3
메틸 2-(3-메톡시프로필)-5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2H-인다졸-6-카르복실레이트
Figure 112018118699939-pct00024
1.00 g (2.75 mmol)의 메틸 5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 3-1)를 5 ml의 DMF 중에 용해시키고, 460 μl (4.12 mmol)의 1-브로모-3-메톡시프로판, 1.14 g (8.23 mmol)의 탄산칼륨 및 228 mg (1.37 mmol)의 아이오딘화칼륨을 교반하면서 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 72시간 동안 교반하고, 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상 칼럼 크로마토그래피 (헥산/에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 28 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 1.29분
MS (ESIpos): m/z = 437 (M+H)+
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2.17 (quin, 2 H), 3.24 (s, 3 H), 3.33 - 3.36 (m, 2 H), 3.96 (s, 3 H), 4.53 (t, 2 H), 8.21 (dd, 1 H), 8.35 - 8.42 (m, 1 H), 8.45 - 8.49 (m, 2 H), 8.54 (d, 1 H), 9.06 (s, 1 H), 12.54 (s, 1 H).
중간체 4-4
메틸 2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2H-인다졸-6-카르복실레이트
제조 방법 1
Figure 112018118699939-pct00025
930 mg (2.55 mmol)의 메틸 5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 3-1), 1.06 g의 탄산칼륨 및 212 mg의 아이오딘화칼륨을 처음에 9 ml의 DMF 중에 충전하고, 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 이어서, 0.62 ml의 4-브로모-2-메틸부탄-2-올을 첨가하고, 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물과 혼합하고, 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 추출물을 포화 염화나트륨 용액으로 3회 세척하고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상 칼럼 크로마토그래피 정제 (헥산/에틸 아세테이트)에 의해 424 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A2): Rt = 1.21분 (UV 검출기: TIC), 질량 실측치 450.00.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.16 (s, 6 H) 2.02 - 2.11 (m, 2 H) 3.96 (s, 3 H) 4.51 - 4.60 (m, 3 H) 8.20 (dd, J=7.83, 1.01 Hz, 1 H) 8.39 (s, 1 H) 8.45 (s, 2 H) 8.55 (d, J=0.76 Hz, 1 H) 9.05 (s, 1 H) 12.52 (s, 1 H)
제조 방법 2
1.95 g (7.03 mmol)의 메틸 5-아미노-2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 7-1)를 처음에 30 ml의 THF 중에 충전하였다. 1.48 g (7.73 mmol)의 6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복실산, 2.71 g (8.44 mmol)의 O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 및 1.47 ml (8.44 mmol)의 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 20.5시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 3회 추출하고, 추출물을 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상 칼럼 크로마토그래피 (헥산/에틸 아세테이트 구배)에 의해 분리하였다. 2.79 g의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 1.23분 (UV 검출기: TIC), 질량 실측치 450.00.
중간체 4-5
메틸 2-(2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}에틸)-5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2H-인다졸-6-카르복실레이트
Figure 112018118699939-pct00026
1.00 g (2.66 mmol, 97%)의 메틸 5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 3-1)를 처음에 50 ml의 DMF 중에 충전하고, 1.10 g (7.99 mmol)의 탄산칼륨 및 221 mg (1.33 mmol)의 아이오딘화칼륨을 교반하면서 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반하였다. 후속적으로, 857 μl (3.99 mmol)의 (2-브로모에톡시)(tert-부틸)디메틸실란을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 상을 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상 칼럼 크로마토그래피 (헥산/에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 400 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 1.58분
MS (ESIpos): m/z = 523(M+H)+
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = -0.18 - -0.13 (m, 6 H), 0.74 (s, 9 H), 3.96 (s, 3 H), 4.08 (t, 2 H), 4.57 (t, 2 H), 8.15 - 8.25 (m, 1 H), 8.32 - 8.43 (m, 1 H), 8.43 - 8.52 (m, 3 H), 9.07 (s, 1 H), 12.53 (s, 1 H).
중간체 4-6
메틸 2-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2H-인다졸-6-카르복실레이트
Figure 112018118699939-pct00027
중간체 4-5와 유사하게, 1.00 g (2.75 mmol)의 메틸 5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 3-1)를 10 ml의 DMF 중에 용해시키고, 1.14 g (8.24 mmol)의 탄산칼륨 및 228 mg (1.37 mmol)의 아이오딘화칼륨을 교반하면서 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반하였다. 후속적으로, 1.04 g (4.12 mmol)의 (3-브로모프로폭시)(tert-부틸)디메틸실란을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 필터케이크를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 반응 혼합물을 물과 에틸 아세테이트 사이에 분배하고, 수성 상을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 428 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 1.63분
MS (ESIpos): m/z = 537(M+H)+
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = -0.02 - 0.06 (m, 6 H), 0.87 (s, 9 H), 2.14 (quin, 2 H), 3.62 (t, 2 H), 3.96 (s, 3 H), 4.54 (t, 2 H), 8.20 (d, 1 H), 8.35 - 8.42 (m, 1 H), 8.43 - 8.48 (m, 3 H), 8.49 - 8.53 (m, 1 H), 9.06 (s, 1 H).
중간체 4-7
메틸 5-({[6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2-(4,4,4-트리플루오로부틸)-2H-인다졸-6-카르복실레이트
Figure 112018118699939-pct00028
300 mg (0.80 mmol)의 메틸 5-({[6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 3-3)를 처음에 4.5 ml의 DMF 중에 충전하였다. 287 mg (1.21 mmol)의 1,1,1-트리플루오로-4-아이오도부탄 및 333 mg의 탄산칼륨을 첨가하고, 혼합물을 100℃에서 23시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 혼합물을 농축시키고, 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 이로써 72 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 1.26분 (UV 검출기: TIC), 질량 실측치 464.17.
중간체 4-8
메틸 5-{[(5-플루오로-6-메틸피리딘-2-일)카르보닐]아미노}-2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-2H-인다졸-6-카르복실레이트
Figure 112018118699939-pct00029
195 mg (0.46 mmol)의 메틸 5-아미노-2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 7-1)를 중간체 4-4 (제조 방법 2)와 유사하게 19.5시간 내에 78 mg (0.50 mmol)의 5-플루오로-6-메틸피리딘-2-카르복실산과 반응시켰다. 228 mg의 조 생성물을 유사한 수성 후처리 후에 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 1.20분 (UV 검출기: TIC), 질량 실측치 414.00.
중간체 4-9
메틸 2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-5-{[(6-메틸피리딘-2-일)카르보닐]아미노}-2H-인다졸-6-카르복실레이트
Figure 112018118699939-pct00030
195 mg (0.45 mmol)의 메틸 5-아미노-2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 7-1)를 중간체 4-4 (제조 방법 2)의 제조와 유사하게 19.5시간 내에 70 mg (0.50 mmol)의 6-메틸피리딘-2-카르복실산과 반응시켰다. 278 mg의 표제 화합물을 조 생성물로서 유사한 수성 후처리 후에 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 1.14분 (UV 검출기: TIC), 질량 실측치 396.00.
중간체 4-10
메틸 2-[3-(2,2,2-트리플루오로에톡시)프로필]-5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2H-인다졸-6-카르복실레이트
Figure 112018118699939-pct00031
3 ml의 DMF 중 250 mg (0.58 mmol)의 메틸 5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 3-1), 193 mg (0.88 mmol)의 3-브로모프로필 2,2,2-트리플루오로에틸 에테르, 242 mg의 탄산칼륨 및 145 mg의 아이오딘화칼륨의 혼합물을 100℃에서 20시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 추출물을 염화나트륨 용액으로 세척하고, 농축시켰다. 정제용 HPLC에 의해 정제하여 52 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 1.39분 (UV 검출기: TIC), 질량 실측치 504.12.
중간체 4-11
메틸 5-({[6-(디플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-2H-인다졸-6-카르복실레이트
Figure 112018118699939-pct00032
2.00 g의 메틸 5-아미노-2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 7-1)를 처음에 40 ml의 THF 중에 충전하였다. 1.50 g의 6-(디플루오로메틸)피리딘-2-카르복실산, 2.78 g의 O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TBTU, CAS 번호 125700-67-6) 및 1.5 ml의 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민을 첨가하고, 혼합물을 RT에서 24시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 3회 추출하고, 합한 유기 상을 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하였다. 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 상 칼럼 크로마토그래피 (헥산/에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 이로써 3.05 g의 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 1.15분 (UV 검출기 TIC), 질량 실측치 432.00.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.17 (s, 6H), 2.04 - 2.11 (m, 2H), 3.99 (s, 3H), 4.52 - 4.60 (m, 3H), 7.10 (t, 1H), 8.00 (dd, 1H), 8.28 - 8.38 (m, 2H), 8.44 - 8.47 (m, 1H), 8.56 (d, 1H), 9.05 (s, 1H), 12.49 (s, 1H).
중간체 5-1
N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-1H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00033
빙수 냉각조에서 냉각시킨, 20 ml의 THF 중 1.50 g (4.12 mmol)의 메틸 5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 3-1)의 용액에 6.9 ml (5 당량)의 디에틸 에테르 중 3M 메틸마그네슘 브로마이드 용액을 조심스럽게 첨가하였다. 혼합물을 빙조로 1시간 동안 냉각시키면서 및 실온에서 19.5시간 동안 교반하였다. 또 다른 2 당량의 메틸마그네슘 브로마이드 용액을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 추가로 24시간 동안 교반하였다. 포화 수성 염화암모늄 용액을 첨가하고, 혼합물을 교반하고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상 칼럼 크로마토그래피 (헥산/에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 763 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.63 (s, 6H), 5.99 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 8.14 - 8.19 (m, 1H), 8.37 (t, 1H), 8.46 (d, 1H), 8.78 (s, 1H), 12.32 (s, 1H), 12.97 (s, 1H).
중간체 5-2
6-(디플루오로메틸)-N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-1H-인다졸-5-일]피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00034
중간체 5-1의 제조와 유사하게, 10 ml의 THF 중 2.40 g (6.93 mmol)의 메틸 5-({[6-(디플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 3-2)를 디에틸 에테르 중 3M 메틸마그네슘 브로마이드 용액의 3 부분과 반응시켰다 (6.9 ml, 이어서 실온에서 45분 동안 교반함; 11.6 ml, 이어서 실온에서 2시간 동안 교반함; 6.9 ml, 이어서 실온에서 2시간 동안 교반함). 중간체 5-1의 경우와 같이 후처리 후에, 2.39 g의 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 추가로 사용하였다.
중간체 6-1
메틸 2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-5-니트로-2H-인다졸-6-카르복실레이트
Figure 112018118699939-pct00035
5.00 g (22.6 mmol)의 메틸 5-니트로-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 1-1)를 처음에 40 ml의 DMF 중에 충전하였다. 5.65 g (33.9 mmol)의 4-브로모-2-메틸부탄-2-올, 9.37 g (67.8 mmol)의 탄산칼륨 및 5.63 g (33.9 mmol)의 아이오딘화칼륨을 첨가하고, 혼합물을 100℃에서 20시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 3회 추출하고, 추출물을 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상 칼럼 크로마토그래피 (헥산/에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 수득한 고체를 디에틸 에테르와 교반하고, 흡인으로 여과하고, 디에틸 에테르로 세척하고, 건조시켰다. 2.49 g의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 0.93분 (UV 검출기: TIC), 질량 실측치 307.00.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.15 (s, 6H), 2.02 - 2.11 (m, 2H), 3.84 (s, 3H), 4.54 (s, 1H), 4.58 - 4.65 (m, 2H), 8.05 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.86 (s, 1H).
중간체 7-1
메틸 5-아미노-2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-2H-인다졸-6-카르복실레이트
Figure 112018118699939-pct00036
4.53 g의 철 및 217 mg의 염화암모늄을 30 ml의 에탄올 및 10 ml의 물 중 2.49 g (8.10 mmol)의 메틸 2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-5-니트로-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 6-1)에 첨가하고, 혼합물을 90℃에서 21.5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 에탄올로 3회 세척하고, 여과물을 농축시키고, 잔류물을 물과 혼합하였다. 추출을 에틸 아세테이트로 3회 실시하였다 (상 분리를 개선하기 위해, 염화나트륨 용액을 첨가함). 합한 유기 상을 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 이로써 1.95 g (이론치의 85%)의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 0.67분 (UV 검출기: TIC), 질량 실측치 277.00.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.14 (s, 6H), 1.96 - 2.08 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 4.39 - 4.51 (m, 3H), 5.81 (s, 2H), 6.80 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 8.18 (s, 1H).
작업 실시예
실시예 1
N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-(2-메톡시에틸)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00037
75 mg (0.18 mmol)의 메틸 2-(2-메톡시에틸)-5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 4-2)를 500 μl의 THF 중에 용해시키고, 887 μl (0.89 mmol)의 THF 중 1 M 메틸마그네슘 브로마이드 용액과 혼합하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 60분 동안 교반하였다. 후속적으로, 1 ml의 포화 수성 염화암모늄 용액을 조심스럽게 첨가하고, 혼합물을 여과하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 유기 상을 합하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 3 ml의 DMSO 중에 용해시키고, 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 동결-건조시켰다. 20 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 1.08분
MS (ESIpos): m/z = 423 (M+H)+
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.62 (s, 6 H), 3.22 (s, 3 H), 3.82 (t, 2 H), 4.55 (t, 2 H), 5.96 (s, 1 H), 7.57 (s, 1 H), 8.16 (d1 H), 8.29 - 8.42 (m, 2 H), 8.42 - 8.50 (m, 1 H), 8.71 (s, 1 H), 12.36 (s, 1 H)
실시예 2
N-[6-(히드록시메틸)-2-(2-메톡시에틸)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00038
13 mg (0.36 mmol)의 수소화알루미늄리튬을 1 ml의 THF 중에 현탁시키고, 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 500 μl의 THF 중에 용해시킨 75 mg (0.17 mmol)의 메틸 2-(2-메톡시에틸)-5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 4-2)를 적가하고, 혼합물을 25℃에서 60분 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 합한 유기 상을 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시키고, 감압 하에 건조시켰다. 이로써 13 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A2): Rt = 0.99분
MS (ESIpos): m/z = 394 (M+H)+
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 3.23 (s, 3 H), 3.83 (t, 2 H), 4.56 (t, 2 H), 4.69 (d, 2 H), 5.77 (t, 1 H), 7.57 (s, 1 H), 8.19 (d, 1 H), 8.33 - 8.41 (m, 2 H), 8.43 - 8.47 (m, 1 H), 8.51 (s, 1 H), 11.20 (s, 1 H)
실시예 3
N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-(3-메톡시프로필)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00039
75 mg (0.17 mmol)의 메틸 2-(3-메톡시프로필)-5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 4-3)를 500 μl의 THF 중에 용해시키고, 859 μl (0.86 mmol)의 THF 중 1 M 메틸마그네슘 브로마이드 용액과 혼합하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 60분 동안 교반하였다. 후속적으로, 1 ml의 포화 염화암모늄 용액을 조심스럽게 첨가하고, 혼합물을 여과하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 유기 상을 합하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 3 ml의 DMSO 중에 용해시키고, 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 동결-건조시켰다. 25 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 1.13분
MS (ESIpos): m/z = 437 (M+H)+
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.62 (s, 6 H), 2.14 (quin, 2 H), 3.23 (s, 3 H), 3.26 - 3.32 (m, 2 H), 4.44 (t, 2 H), 5.95 (s, 1 H), 7.58 (s, 1 H), 8.16 (d, 1 H), 8.31 - 8.40 (m, 2 H), 8.43 - 8.48 (m, 1 H), 8.72 (s, 1 H), 12.36 (s, 1 H).
실시예 4
N-[6-(히드록시메틸)-2-(3-메톡시프로필)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00040
13 mg의 수소화알루미늄리튬을 THF 중에 현탁시키고, 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 75 mg (0.17 mmol)의 THF 중 메틸 2-(3-메톡시프로필)-5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 4-3)를 적가하고, 혼합물을 30분 내에 실온이 되도록 하였다. 혼합물을 물로 희석하고, 여과하고, 잔류물을 에틸 아세테이트로 세척하고, 여과물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 상을 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2.14 (quin, 2 H), 3.23 (s, 3 H), 3.29 (t, 2 H), 4.45 (t, 2 H), 4.68 (d, 2 H), 5.77 (t, 1 H), 7.58 (s, 1 H), 8.18 (d, 1 H), 8.32 - 8.48 (m, 3 H), 8.51 (s, 1 H), 11.21 (s, 1 H).
실시예 5
N-[2-(2-히드록시에틸)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
단계 A:
N-[2-(2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}에틸)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure 112018118699939-pct00041
100 mg (0.19 mmol)의 메틸 2-(2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}에틸)-5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 4-5)를 1 ml의 THF 중에 용해시키고, 669 μl (0.67 mmol)의 THF 중 1 M 메틸마그네슘 브로마이드 용액과 혼합하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 60분 동안 교반하였다. 또 다른 287 μl (0.29 mmol)의 THF 중 1 M 메틸마그네슘 브로마이드 용액을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 후속적으로, 20 ml의 포화 염화암모늄 용액을 조심스럽게 첨가하고, 혼합물을 여과하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 유기 상을 합하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 감압 하에 건조시켰다. 이로써 50 mg의 N-[2-(2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}에틸)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드를 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A2): Rt = 1.51분
MS (ESIpos): m/z = 523(M+H)+
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = -0.17 - -0.09 (m, 6 H), 0.78 (s, 9 H), 1.62 (s, 6 H), 4.04 (t, 2 H), 4.47 (t, 2 H), 5.98 (s, 1 H), 7.57 (s, 1 H), 8.16 (d, 1 H), 8.29 (s, 1 H), 8.37 (t, 1 H), 8.45 (d, 1 H), 8.73 (s, 1 H), 12.38 (s, 1 H).
단계 B:
Figure 112018118699939-pct00042
50 mg (96 μmol)의 N-[2-(2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}에틸)-6-(히드록시메틸)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드를 1.0 ml의 THF 중에 용해시키고, 144 μl (0.14 mmol)의 THF 중 테트라부틸암모늄 플루오라이드의 1 M 용액과 혼합하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 합한 유기 상을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 이로써 36 mg의 N-[2-(2-히드록시에틸)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드 (실시예 5)를 수득하였다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): d [ppm] = 1.62 (s, 6H), 3.86 (q, 2H), 4.43 (t, 2H), 4.95 (t, 1H), 5.94 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 8.16 (dd, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.37 (t, 1H), 8.45 (d, 1H), 8.72 (s, 1H), 12.36 (s, 1H).
UPLC-MS (방법 A2): Rt = 0.97분 (UV 검출기: TIC), 질량 실측치 408.00.
실시예 6
N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-(3-히드록시프로필)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
단계 A:
N-[2-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure 112018118699939-pct00043
50 mg (0.09 mmol)의 메틸 2-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 4-6)를 500 μl의 THF 중에 용해시키고, 326 μl (0.33 mmol)의 THF 중 1 M 메틸마그네슘 브로마이드 용액과 혼합하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 60분 동안 교반하였다. 후속적으로, 20 ml의 포화 염화암모늄 용액을 조심스럽게 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시키고, 감압 하에 건조시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 40 mg의 N-[2-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드를 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 1.58분
MS (ESIpos): m/z = 537(M+H)+
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 0.02 - 0.05 (m, 6 H), 0.84 - 0.91 (m, 9 H), 1.62 (s, 6 H), 2.02 - 2.18 (m, 2 H), 3.55 - 3.62 (m, 2 H), 4.45 (t, 2 H), 5.96 (s, 1 H), 7.57 (s, 1 H), 8.16 (d, 1 H), 8.31 (s, 1 H), 8.33 - 8.42 (m, 1 H), 8.45 (d, 1 H), 8.72 (s, 1 H), 12.37 (s, 1 H).
단계 B:
Figure 112018118699939-pct00044
37 mg (0.07 mmol)의 N-[2-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드를 500 μl의 THF 중에 용해시키고, 207 μl (0.21 mmol)의 THF 중 테트라부틸암모늄 플루오라이드의 1 M 용액과 혼합하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 합한 유기 상을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 여과하고, 농축시켰다. 정제용 HPLC에 의한 정제 후, 10 mg의 N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-(3-히드록시프로필)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드 (실시예 6, 2차 성분 함유)를 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A2): Rt = 1.00분
MS (ESIpos): m/z = 423 (M+H)+
1H NMR 선택된 신호 (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.61 (s), 2.00 - 2.12 (m), 3.38 (t, 2 H), 4.44 (t, 2 H), 4.62 (br. s., 1 H), 5.93 (br. s., 1 H), 7.55 (s, 1 H), 8.13 (d, 1 H), 8.27 - 8.38 (m, 2 H), 8.43 (d, 1 H), 8.71 (s, 1 H), 12.30 (br. s., 1 H).
실시예 7
N-[2-(2-히드록시에틸)-6-(히드록시메틸)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
단계 A:
N-[2-(2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}에틸)-6-(히드록시메틸)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00045
100 mg (0.19 mmol)의 메틸 2-(2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}에틸)-5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 4-5)를 1 ml의 THF 중에 용해시키고, 191 μl (0.38 mmol)의 2 M 수소화붕소리튬 용액과 혼합하였다. 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반되도록 하였다. 14 mg (0.38 mmol)의 수소화붕소나트륨 및 500 μl의 메탄올을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 4시간 동안 교반하였다. 또 다른 14 mg (0.38 mmol)의 수소화붕소나트륨을 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하였다. 물을 반응 혼합물에 조심스럽게 첨가하고, 유기 상을 제거하였다. 이어서, 혼합물을 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 합한 유기 상을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 2 ml의 DMSO 중에 녹이고, 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 이로써 30 mg의 N-[2-(2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}에틸)-6-(히드록시메틸)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드를 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A2): Rt = 1.44분
MS (ESIpos): m/z = 495(M+H)+
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = -0.16 - -0.12 (m, 6 H), 0.75 - 0.79 (m, 9 H), 4.05 (t, 2 H), 4.48 (t, 2 H), 4.69 (d, 2 H), 5.75 - 5.77 (m, 1 H), 7.57 (s, 1 H), 8.18 (dd, 1 H), 8.30 - 8.33 (m, 1 H), 8.38 (t, 1 H), 8.45 (d, 1 H), 8.51 (s, 1 H), 11.20 (s, 1 H).
단계 B:
Figure 112018118699939-pct00046
33 mg (0.07 mmol)의 N-[2-(2-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}에틸)-6-(히드록시메틸)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드를 1 ml의 THF 중에 용해시키고, 100 μl (0.10 mmol)의 THF 중 테트라부틸암모늄 플루오라이드의 1 M 용액과 혼합하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 합한 유기 상을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시키고, 감압 하에 건조시켰다. 25 mg의 N-[2-(2-히드록시에틸)-6-(히드록시메틸)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드 (실시예 7)를 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A2): Rt = 0.87분
MS (ESIpos): m/z = 381 (M+H)+
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 3.87 (q, 2 H), 4.44 (t, 2 H), 4.69 (d, 2 H), 4.98 (t, 1 H), 5.70 - 5.81 (m, 1 H), 7.57 (s, 1 H), 8.11 - 8.23 (m, 1 H), 8.31 - 8.42 (m, 2 H), 8.43 - 8.49 (m, 1 H), 8.51 (s, 1 H), 11.20 (s, 1 H).
실시예 8
N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-(옥세탄-3-일메틸)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00047
50 mg (0.12 mmol)의 메틸 2-(옥세탄-3-일메틸)-5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 4-1)를 500 μl의 THF 중에 용해시키고, 576 μl (0.58 mmol)의 THF 중 1 M 메틸마그네슘 브로마이드 용액과 혼합하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 60분 동안 교반하였다. 후속적으로, 20 ml의 포화 수성 염화암모늄 용액을 조심스럽게 첨가하고, 혼합물을 농축시켰다. 수성 상을 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 유기 상을 합하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 2.0 ml의 DMSO 중에 용해시키고, 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 동결-건조시켰다. 30 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A2): Rt = 1.03분
MS (ESIpos): m/z = 435 (M+H)+
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.62 (s, 6 H), 3.45 - 3.61 (m, 1 H), 4.48 (t, 2 H), 4.66 (dd, 2 H), 4.72 (d, 2 H), 5.94 (s, 1 H), 7.57 (s, 1 H), 8.16 (d, 1 H), 8.33 - 8.42 (m, 2 H), 8.42 - 8.47 (m, 1 H), 8.72 (s, 1 H), 12.36 (s, 1 H).
실시예 9
N-[6-(히드록시메틸)-2-(옥세탄-3-일메틸)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00048
75 mg (0.17 mmol)의 메틸 2-(옥세탄-3-일메틸)-5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 4-1)를 THF/메탄올 (1:1)의 1 ml의 혼합물 중에 용해시키고, 8 mg (0.21 mmol)의 수소화붕소나트륨을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 60분 동안 교반되도록 하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 물과 혼합하였다. 현탁액을 15분 동안 격렬히 교반하고, 고체를 흡인으로 여과하고, 물로 2회 및 디에틸 에테르로 2회 세척하고, 감압 하에 건조시켰다. 48 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A2): Rt = 0.94분
MS (ESIpos): m/z = 407 (M+H)+
1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 3.55 (s, 1 H), 4.48 (t, 2 H), 4.61 - 4.77 (m, 6 H), 7.57 (s, 1 H), 8.18 (dd, 1 H), 8.33 - 8.49 (m, 3 H), 8.51 (s, 1 H), 11.21 (s, 1 H).
실시예 10
N-{6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-[3-(메틸술포닐)프로필]-2H-인다졸-5-일}-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00049
5.0 ml의 DMF 중 500 mg (1.32 mmol)의 N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-1H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드 (중간체 5-1), 569 mg의 탄산칼륨 및 114 mg의 아이오딘화칼륨의 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 414 mg의 1-브로모-3-(메틸술포닐)프로판을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 추출물을 염화나트륨 용액으로 세척하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (디클로로메탄/메탄올 구배)에 의해 정제하였다. 생성물 분획을 디에틸 에테르와 교반하고, 여과하고, 건조시켰다. 59 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A2): Rt = 1.02분
MS (ESIpos): m/z = 485 (M+H)+
1H NMR (300MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.63 (s, 6H), 2.26 - 2.42 (m, 2H), 2.99 (s, 3H), 3.06 - 3.16 (m, 2H), 4.55 (t, 2H), 5.96 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 8.16 (d, 1H), 8.33 - 8.48 (m, 3H), 8.73 (s, 1H), 12.37 (s, 1H).
실시예 11
N-[2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00050
제조 방법 1
705 mg (1.57 mmol)의 메틸 2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 4-4)를 처음에 10 ml의 THF 중에 충전하고, 빙수 냉각조에서 냉각시켰다. 2.6 ml (5.0 당량)의 (디에틸 에테르 중) 3M 메틸마그네슘 브로마이드 용액을 첨가하고, 혼합물을 빙조로 1시간 동안 냉각시키면서 및 실온에서 4.5시간 동안 교반되도록 하였다. 또 다른 1 당량의 메틸마그네슘 브로마이드 용액을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 20.5시간 동안 교반되도록 하였다. 또 다른 1 당량의 메틸마그네슘 브로마이드 용액을 다시 첨가하고, 혼합물을 실온에서 22시간 동안 교반되도록 하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 염화암모늄 용액과 혼합하고, 교반하고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 이로써 790 mg의 잔류물을 수득하였으며, 이를 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 이로써 234 mg의 표제 화합물 및 164 mg의 생성물 분획을 수득하였으며, 이를 디에틸 에테르와 교반하였다. 흡인으로 여과하고 이어서 건조시킨 후, 추가의 146 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 1.10분 (UV 검출기: TIC), 질량 실측치 450.00.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.14 (s, 6H), 1.61 (s, 6H), 1.99 - 2.08 (m, 2H), 4.42 - 4.55 (m, 3H), 5.93 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.32 - 8.39 (m, 2H), 8.41 - 8.47 (m, 1H), 8.70 (s, 1H), 12.34 (s, 1H).
제조 방법 2
5 ml의 DMF 중 500 mg (1.37 mmol)의 N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-1H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드 (중간체 5-1), 569 mg의 탄산칼륨 및 114 mg의 아이오딘화칼륨의 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 344 mg (1.5 당량)의 4-브로모-2-메틸부탄-2-올을 첨가하고, 혼합물을 100℃로 2시간 동안 가열하였다. 또 다른 0.5 당량의 4-브로모-2-메틸부탄-2-올을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물과 혼합하고, 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 합한 유기 상을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상 칼럼 크로마토그래피 정제 (헥산/에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 이로써 100 mg의 생성물 분획을 수득하였으며, 이를 디에틸 에테르와 교반하였다. 고체를 여과하고, 건조시켰다. 60 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.14 (s, 6 H), 1.61 (s, 6H), 1.99 - 2.07 (m, 2 H), 4.43 - 4.52 (m, 3 H) 5.94 (s, 1 H) 7.57 (s, 1 H) 8.15 (dd, 1H) 8.33 - 8.40 (m, 2 H), 8.42 - 8.48 (m, 1 H), 8.71 (s, 1 H), 12.35 (s, 1 H)
실시예 12
N-{6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-[2-(메틸술포닐)에틸]-2H-인다졸-5-일}-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00051
160 mg (0.44 mmol)의 N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-1H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드 (중간체 5-1)를 1.0 ml의 DMF 중 182 mg의 탄산칼륨 및 36 mg의 아이오딘화칼륨과 함께 현탁시키고, 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 이어서, 123 mg의 2-브로모에틸 메틸 술폰 (0.66 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 추출물을 포화 수성 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 20 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC (방법 A2): Rt = 1.01분;
MS (ESIpos): m/z = 471 (M+H)+
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.63 (s, 6 H), 2.90 (s, 3 H), 3.85 (t, 2 H), 4.86 (t, 2 H), 5.97 (s, 1 H), 7.59 (s, 1 H), 8.13 - 8.19 (m, 1 H), 8.37 (s, 1 H), 8.41 - 8.48 (m, 2 H), 8.74 (s, 1 H), 12.37 (s, 1 H).
실시예 13
6-(디플루오로메틸)-N-[2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-2H-인다졸-5-일]피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00052
제조 방법 1
2.5 ml의 DMF 중 250 mg의 6-(디플루오로메틸)-N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-1H-인다졸-5-일]피리딘-2-카르복스아미드 (중간체 5-2의 조 생성물), 144 mg의 아이오딘화칼륨 및 239 mg의 탄산칼륨의 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 145 mg (0.87 mmol)의 4-브로모-2-메틸부탄-2-올을 첨가하고, 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 교반하고, 또 다른 96 mg의 4-브로모-2-메틸부탄-2-올을 첨가하고, 혼합물을 110℃에서 4시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 추출물을 반포화 수성 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 정제를 실리카 겔 상 칼럼 크로마토그래피 (헥산/에틸 아세테이트)에 의해 실시하였다. 61 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 1.00분 (UV 검출기: TIC), 질량 실측치 432.00.
1H NMR (300MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.14 (s, 6H), 1.63 (s, 6H), 1.97 - 2.08 (m, 2H), 4.41 - 4.55 (m, 3H), 5.99 (s, 1H), 7.03 (t, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.94 - 8.00 (m, 1H), 8.24 - 8.38 (m, 3H), 8.71 (s, 1H), 12.49 (s, 1H).
제조 방법 2
실시예 11의 제조 (제조 방법 1)와 유사하게, 3.00 g의 메틸 5-({[6-(디플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 4-11)를 (디에틸 에테르 중) 3M 메틸마그네슘 브로마이드 용액과 반응시켰다. 디에틸 에테르와의 교반, 여과에 이어서 정제용 HPLC에 의한 조 생성물의 정제 후, 1.37 g의 표제 화합물을 수득하였다.
실시예 14
6-(디플루오로메틸)-N-{6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-[2-(메틸술포닐)에틸]-2H-인다졸-5-일}피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00053
2.5 ml의 DMF 중 250 mg의 6-(디플루오로메틸)-N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-1H-인다졸-5-일]피리딘-2-카르복스아미드 (중간체 5-2의 조 생성물), 144 mg의 아이오딘화칼륨 및 239 mg의 탄산칼륨의 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 162 mg의 2-브로모에틸 메틸 술폰 (0.87 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 2회 추출하고, 추출물을 반포화 수성 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하고, 생성물 분획을 추가적으로 실리카 겔 상 칼럼 크로마토그래피 정제 (헥산/에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 40 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.65 (s, 6H), 2.90 (s, 3H), 3.85 (t, 2H), 4.85 (t, 2H), 6.03 (s, 1H), 7.04 (t, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.98 (d, 1H), 8.25 - 8.36 (m, 2H), 8.43 (s, 1H), 8.75 (s, 1H), 12.52 (s, 1H).
실시예 15
6-(디플루오로메틸)-N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-(3-히드록시프로필)-2H-인다졸-5-일]피리딘-2-카르복스아미드
단계 A:
N-[2-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-2H-인다졸-5-일]-6-(디플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드의 제조
Figure 112018118699939-pct00054
2.5 ml의 DMF 중 250 mg의 6-(디플루오로메틸)-N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-1H-인다졸-5-일]피리딘-2-카르복스아미드 (중간체 5-2), 48 mg의 아이오딘화칼륨 및 239 mg의 탄산칼륨의 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 219 mg (0.87 mmol, 1.5 당량)의 (3-브로모프로폭시)(tert-부틸)디메틸실란을 첨가하고, 혼합물을 110℃에서 3시간 동안 교반하였다. 또 다른 1 당량의 (3-브로모프로폭시)(tert-부틸)디메틸실란을 첨가하고, 혼합물을 100℃에서 4시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 추출물을 수성 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (헥산/에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 92 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
단계 B:
Figure 112018118699939-pct00055
실시예 6, 단계 B의 제조와 유사하게, 92 mg의 N-[2-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-2H-인다졸-5-일]-6-(디플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드를 0.53 ml의 THF 중 테트라부틸암모늄 플루오라이드의 1 M 용액과 1시간 내에 반응시켰다. 실시예 6에서와 같이 수성 후처리하고 정제용 HPLC에 의해 정제하여 46 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 0.92분 (UV 검출기: TIC), 질량 실측치 404.00.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.64 (s, 6H), 2.05 (quin, 2H), 3.35 - 3.46 (m, 2H), 4.45 (t, 2H), 4.64 (t, 1H), 5.99 (s, 1H), 7.04 (t, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.95 - 7.99 (m, 1H), 8.25 - 8.36 (m, 3H), 8.73 (s, 1H), 12.50 (s, 1H).
실시예 16
N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-(4,4,4-트리플루오로부틸)-2H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00056
3 ml의 DMF 중 210 mg (0.58 mmol)의 N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-1H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드 (중간체 5-1)의 혼합물을 0.11 ml (0.87 mmol)의 1,1,1-트리플루오로-4-아이오도부탄 및 239 mg의 탄산칼륨과 혼합하고, 혼합물을 80℃에서 6시간 동안 교반하였다. 물의 첨가 후, 혼합물을 에틸 아세테이트로 3회 추출하고, 합한 유기 상을 포화 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 19 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 1.27분 (UV 검출기: TIC), 질량 실측치 474.15.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.62 (s, 6H), 2.10 - 2.33 (m), 4.49 (t, 2H), 5.94 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 8.13 - 8.18 (m, 1H), 8.32 - 8.41 (m, 2H), 8.41 - 8.47 (m, 1H), 8.72 (s, 1H), 12.35 (s, 1H).
실시예 17
N-{6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-[3-(트리플루오로메톡시)프로필]-2H-인다졸-5-일}-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00057
150 mg (0.33 mmol)의 N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-1H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드 (중간체 5-1)를 처음에 2 ml의 THF 중에 충전하였다. 58 mg (0.40 mmol)의 3-(트리플루오로메톡시)프로판-1-올, 131 mg의 트리페닐포스핀 및 71 μl의 디이소프로필 아조디카르복실레이트 (DIAD, CAS 2446-83-5)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 19시간 동안 교반하였다. 0.83 ml의 수산화나트륨 용액 (2M)을 첨가하고, 혼합물을 40℃에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하고, 합한 유기 상을 농축시키고, 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 16 mg의 표제 화합물을 조 생성물로서 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A2): Rt = 1.26분 (UV 검출기: TIC), 질량 실측치 490.14.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6, 선택된 신호): δ [ppm]= 1.61 (s, 6H), 1.84 (d, 1H), 2.32 (quint, 2H), 4.08 (t, 2H), 4.51 (t, 2H), 7.58 (s, 1H), 8.15 (d, 1H), 8.31 - 8.39 (m, 2H), 8.44 (d, 1H), 8.72 (s, 1H), 12.35 (s, 1H).
실시예 18
N-{6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-[3-(2,2,2-트리플루오로에톡시)프로필]-2H-인다졸-5-일}-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00058
실시예 11의 제조 (제조 방법 1)와 유사하게, 3 ml의 THF 중 52 mg (0.10 mmol)의 메틸 2-[3-(2,2,2-트리플루오로에톡시)프로필]-5-({[6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 4-10)를 디에틸 에테르 중 2 × 171 μl의 3M 마그네슘 브로마이드 용액과 반응시켰다. 정제용 HPLC에 의해 정제하여 12 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A1): Rt = 1.25분 (UV 검출기: TIC), 질량 실측치 504.16.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 1.63 (s, 6H), 2.20(quin, 2H), 3.58(t, 2H),4.05(q, 2H), 4.47(t, 2H),5.94(s, 1H), 7.58 (s, 1H), 8.15 (dd, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.36 (t, 1H), 8.45(d, 1H), 8.73 (s, 1H), 12.36 (s,1H).
실시예 19
5-플루오로-N-[2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-2H-인다졸-5-일]-6-메틸피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00059
228 mg (0.31 mmol)의 메틸 5-{[(5-플루오로-6-메틸피리딘-2-일)카르보닐]아미노}-2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 4-8)를 처음에 4.5 ml의 THF 중에 충전하고, 빙 냉각조로 냉각시켰다. 0.63 ml의 (디에틸 에테르 중) 3M 메틸마그네슘 브로마이드 용액을 첨가하고, 혼합물을 빙조로 2시간 동안 냉각시키면서 및 실온에서 21시간 동안 교반되도록 하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 염화암모늄 용액과 혼합하고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 82 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A2): Rt = 1.03분 (UV 검출기: TIC), 질량 실측치 414.21.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.13 (s, 6H), 1.63 (s, 6H), 1.99 - 2.05 (m, 2H), 2.55 - 2.59 (m, 3H), 4.42 - 4.50 (m, 3H), 5.95 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.83 (t, 1H), 8.05 (dd, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 12.33 (s, 1H).
실시예 20
N-[2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-6-(2-히드록시프로판-2-일)-2H-인다졸-5-일]-6-메틸피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00060
278 mg (0.48 mmol)의 메틸 2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-5-{[(6-메틸피리딘-2-일)카르보닐]아미노}-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 4-9)를 처음에 5.0 ml의 THF 중에 충전하고, 빙 냉각조로 냉각시켰다. 0.97 ml의 (디에틸 에테르 중) 3M 메틸마그네슘 브로마이드 용액을 첨가하고, 혼합물을 빙조로 2시간 동안 냉각시키면서 및 실온에서 20.5시간 동안 교반되도록 하였다. 또 다른 0.48 ml의 3M 메틸마그네슘 브로마이드 용액을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 67시간 동안 교반되도록 하였다. 혼합물을 포화 수성 염화암모늄 용액과 혼합하고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하고, 추출물을 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 111 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A2): Rt = 0.97분 (UV 검출기: TIC), 질량 실측치 396.22.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.15 (s, 6H), 1.64 (s, 6H), 2.00 - 2.08 (m, 2H), 2.61 (s, 3H), 4.41 - 4.59 (m, 3H), 5.92 (s, 1H), 7.50 (dd, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.90 - 7.99 (m, 2H), 8.33 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 12.39 (s, 1H).
실시예 21
6-(2-히드록시프로판-2-일)-N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-2-(4,4,4-트리플루오로부틸)-2H-인다졸-5-일]피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00061
10 ml의 THF 중 72 mg (0.16 mmol)의 메틸 5-({[6-(2-히드록시프로판-2-일)피리딘-2-일]카르보닐}아미노)-2-(4,4,4-트리플루오로부틸)-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (중간체 4-7)의 용액을 빙/수 냉각조에서 냉각시켰다. 0.26 ml의 디에틸 에테르 중 3M 메틸마그네슘 브로마이드 용액을 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 교반한 다음, 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 또 다른 1 당량의 3M 메틸마그네슘 브로마이드 용액을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 포화 수성 염화암모늄 용액을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 3회 추출하고, 추출물을 염화나트륨 용액으로 세척하고, 농축시켰다. 정제용 HPLC에 의해 22 mg (이론치의 31%)의 표제 화합물을 수득하였다.
UPLC-MS (방법 A2): Rt = 1.15분 (UV 검출기: TIC), 질량 실측치 464.20.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 1.56 (s, 6H), 1.64 (s, 6H), 2.07 - 2.34 (m, 4H), 4.49 (t, 2H), 5.32 (s, 1H), 6.05 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.87 (dd, 1H), 7.99 - 8.05 (m, 2H), 8.35 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 12.45 (s, 1H).
실시예 22
N-{2-[2-(1-히드록시시클로프로필)에틸]-6-(2-히드록시프로판-2-일)-2H-인다졸-5-일}-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드
Figure 112018118699939-pct00062
250 mg (0.69 mmol)의 N-[6-(2-히드록시프로판-2-일)-1H-인다졸-5-일]-6-(트리플루오로메틸)피리딘-2-카르복스아미드 (중간체 5-1)를 처음에 5 ml의 DMSO 중에 충전하였다. 159 mg (0.96 mmol)의 1-(2-브로모에틸)시클로프로판올, 285 mg의 탄산칼륨 및 171 mg의 아이오딘화칼륨을 첨가하고, 혼합물을 100℃에서 5시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 합한 유기 상을 염화나트륨 용액으로 세척하고, 소수성 필터를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC (칼럼: 워터스 엑스브리지 C18 5μ 100x30mm, 용리액 A: 물 + 0.1 부피%의 포름산 (99%), 용리액 B: 아세토니트릴)에 의해 정제하였다. 동결-건조시켜 45 mg의 표제 화합물을 수득하였다.
1H NMR (500MHz, DMSO-d6): δ [ppm]= 0.18 - 0.22 (m, 2H), 0.48 - 0.52 (m, 2H), 1.62 (s, 6H), 2.08 (t, 2H), 4.54 - 4.60 (m, 2H), 5.36 (s, 1H), 5.96 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 8.16 (dd, 1H), 8.34 - 8.39 (m, 2H), 8.45 (d, 1H), 8.72 (s, 1H), 12.36 (s, 1H).
생리학적 효능의 평가
IRAK4 키나제 검정
본 발명의 물질의 IRAK4-억제 활성을 이하에 기재된 IRAK4 TR-FRET 검정 (TR-FRET = 시간 분해 형광 공명 에너지 전달)에서 측정하였다.
바큘로바이러스-감염된 곤충 세포 (Hi5, BTI-TN-5B1-4, 인비트로젠(Invitrogen), 카탈로그 번호 B855-02로부터 구입한 세포주)에서 발현되고 친화성 크로마토그래피를 통해 정제된, N-말단 GST (글루타티온 S-트랜스퍼라제) 및 인간 IRAK4로부터의 재조합 융합 단백질을 효소로서 사용하였다. 키나제 반응에 사용된 기질은, 예를 들어, 바이오신탄 게엠베하(Biosyntan GmbH) (베를린-부흐)로부터 구입할 수 있는 비오티닐화 펩티드 비오틴-Ahx-KKARFSRFAGSSPSQASFAEPG (아미드 형태의 C-말단)였다.
검정을 위해, 20 μM 내지 0.073 nM 범위 내의 11개의 상이한 농도를 시험 물질의 2 mM DMSO 용액으로부터 제조하였다. 50 nl의 각각의 용액을 흑색 저부피 384-웰 마이크로타이터 플레이트 (그라이너 바이오-원(Greiner Bio-One), 독일 프리켄하우젠) 내로 피펫팅하고, 검정 완충제 [50 mM HEPES pH 7.5, 5 mM MgCl2, 1.0 mM 디티오트레이톨, 30 μM 활성화된 소듐 오르토바나데이트, 0.1 % (w/v)의 소 감마-글로불린 (BGG) 0.04% (v/v) 노니데트-P40 (시그마(Sigma))] 중 IRAK4의 용액 2 μl를 첨가하고, 혼합물을 15분 동안 인큐베이션하여 물질이 키나제 반응 전에 효소에 사전결합하도록 하였다. 이어서, 키나제 반응을 검정 완충제 중 아데노신 트리포스페이트 (ATP, 1.67 mM = 5 μl의 검정 부피 중 최종 농도: 1 mM) 및 펩티드 기질 (0.83 μM = 5 μl 검정 부피 중 최종 농도: 0.5 μM)의 용액 3 μl의 첨가에 의해 시작하고, 생성된 혼합물을 22℃에서 45분의 반응 시간 동안 인큐베이션하였다. IRAK4의 농도를 효소의 각각의 활성으로 조정하고, 검정이 선형 범위에서 수행되도록 설정하였다. 전형적인 농도는 약 0.2 nM 정도였다. 수성 EDTA 용액 (25 mM HEPES pH 7.5 중 100 mM EDTA, 0.4% [w/v] 소 혈청 알부민 [BSA]) 중 TR-FRET 검출 시약 [0.1 μM 스트렙타비딘-XL665 (시스바이오 바이오어세이즈(Cisbio Bioassays); 프랑스, 카탈로그 번호 610SAXLG)] 및 1.5 nM 항-포스포세린 항체 [머크 밀리포어(Merck Millipore), "STK 항체", 카탈로그 번호 35-002] 및 0.6 nM 랜스(LANCE) EU-W1024-표지된 항-마우스-IgG 항체 (퍼킨-엘머(Perkin-Elmer), 제품 번호 AD0077; 대안적으로, 시스바이오 바이오어세이즈로부터의 테르븀 크립테이트-표지된 항-마우스-IgG 항체를 사용하는 것이 가능함)의 용액 5 μl의 첨가에 의해 반응을 정지시켰다.
생성된 혼합물을 22℃에서 1시간 동안 인큐베이션하여 비오티닐화 인산화 기질 및 검출 시약의 복합체가 형성되도록 하였다. 이어서, 유로퓸 킬레이트-표지된 항-마우스-IgG 항체로부터 스트렙타비딘-XL665로의 공명 에너지 전달을 측정함으로써 인산화 기질의 양을 평가하였다. 이를 위해, 350 nm에서의 여기 후 620 nm 및 665 nm에서의 형광 방출을 TR-FRET 측정 기기, 예를 들어 루비스타(Rubystar) (BMG 랩테크놀로지스(BMG Labtechnologies), 독일 오펜부르크) 또는 뷰럭스(Viewlux) (퍼킨-엘머)에서 측정하였다. 665 nm 및 622 nm에서의 방출 비를 인산화 기질의 양의 척도로서 취하였다. 데이터를 정규화하였다 (시험 물질 부재 하의 효소 반응 = 0% 억제; 효소가 없는 모든 다른 검정 성분 = 100% 억제). 전형적으로, 시험 물질을 20 μM 내지 0.073 nM 범위 내의 11개의 상이한 농도 (20 μM, 5.7 μM, 1.6 μM, 0.47 μM, 0.13 μM, 38 nM, 11 nM, 3.1 nM, 0.89 nM, 0.25 nM 및 0.073 nM)에서 동일한 마이크로타이터 플레이트 상에서 시험하였다. 검정 전에 일련의 희석물 (100% DMSO 중 2 mM 내지 7.3 nM)을 연속 희석에 의해 제조하였다. IC50 값을 4-파라미터 피트에 의해 계산하였다.
표 1: IRAK4 키나제 검정에서의 실시예 화합물의 IC50 값
Figure 112018118699939-pct00063
IRAK4에 대한 본 발명의 화학식 (III)의 물질의 억제 활성을 마찬가지로 상기 기재된 IRAK4 TR-FRET 검정에서 측정하였다. 하기가 예로서 언급된다: IC50 = 21.7 nM을 갖는 화합물 중간체 4-2, IC50 = 13.0 nM을 갖는 중간체 4-3 및 IC50 = 6.2 nM을 갖는 중간체 4-4.
THP-1 세포에서의 TNF-α 분비
이 시험은 물질을 THP-1 세포 (인간 단핵구성 급성 백혈병 세포주)에서 TNF-α (종양 괴사 인자 알파)의 분비를 억제하는 그의 능력에 대해 시험하는 데 적합하다. TNF-α는 염증 과정에 수반되는 시토카인이다. 이 시험에서, TNF-α 분비는 박테리아 리포폴리사카라이드 (LPS)와의 인큐베이션에 의해 촉발된다.
THP-1 세포를 연속 현탁 세포 배양액 [소 태아 혈청 (FCS) 10% (인비트로젠, 카탈로그 번호 10082-147), 1% 페니실린/스트렙토마이신 (깁코(Gibco) BRL, 카탈로그 번호 15140-114)으로 보충된 L-글루타맥스 (깁코, 카탈로그 번호 61870-044)를 갖는 RPMI 1460 배지] 중에서 유지하였으며, 이는 1x106개 세포/ml의 세포 농도를 초과해서는 안 된다. 검정을 세포 배양 배지 (FCS 10%로 보충된 L-글루타맥스를 갖는 RPMI 1460 배지) 중에서 수행하였다.
각 경우에 웰당 2-2.5 μl의 세포 현탁액 (4000개 세포에 상응함)을 384-웰 시험 플레이트 (그라이너, 카탈로그 번호 784076) 내로 분배하였으며, 이들 각각에서 40-50 nl 물질이 100% DMSO 중에 용해되어 있었다. 이는 각각의 물질에 대해 20 μM 내지 0.073 nM 범위 내의 10개의 상이한 농도를 사용하여 행하였다. 세포를 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 세포 배양 배지 중에 용해된 0.1 μg/ml LPS (시그마, 에스케리키아 콜라이 055:B5, 카탈로그 번호 L5418)의 2-2.5 μl (최종 농도 0.05 μg/ml)를 각 웰 내로 분배하였다. 중성 대조군으로서, 세포를 0.05 μg/ml LPS 및 1% DMSO로 처리하고, 억제제 대조군으로서, 오직 1% DMSO로 처리하였다.
플레이트를 80 g에서 30초 동안 원심분리하고, 37℃, 5% CO2 및 95% 대기 습도에서 17시간 동안 인큐베이션하였다. TNF-α의 양은 TNF-알파 HTRF 검출 키트 (시스바이오, 카탈로그 번호 62TNFPEB/C)를 사용하여 결정하였다. 이를 위해, 각 경우에 제조업체의 지침에 따라 재구성 완충제 중에 용해된 항-TNF-α-XL665 접합체 및 항-TNF-α-크립테이트 접합체로 이루어진 검출 용액 2 μl를 HTRF (균질 시간-분해 형광) 시험을 위해 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 또는 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 이어서, 신호를 HTRF-가능형 측정 기기 예컨대 BMG 페라스타(BMG PheraStar)를 사용하여 620/665 nm에서 판독하였다.
물질의 활성은 중성과 억제제 대조군 사이의 비로서 퍼센트로 표시된다. IC50 값은 4-파라미터 피트를 사용하여 계산하였다.
표 2: THP-1 세포에서의 TNF-α의 분비와 관련한 실시예 화합물의 IC50 값
Figure 112018118699939-pct00064
인간 PBMC (말초 혈액 단핵 세포)에서의 시험관내 LPS (리포폴리사카라이드)-유도된 시토카인 생산
인간 PBMC에서의 유도된 시토카인 생산에 대한 본 발명의 화학식 (I)의 화합물의 효과를 검사하였다. 여기서, 시토카인 생산은 TLR4 리간드인 LPS에 의해 유도되었으며, 이는 IRAK4-매개 신호 경로의 활성화로 이어진다.
인간 PBMC를 항응고된 인간 전혈로부터 수득하였다. 이 목적을 위해, 15 ml의 피콜-파크(Ficoll-Paque) (바이오크롬(Biochrom), 카탈로그 번호 L6115)를 처음에 류코셉(Leucosep) 튜브에 피펫팅하고, 20 ml의 인간 혈액을 첨가하였다. 800 g에서 15분 동안 실온에서 혈액을 원심분리한 후, 혈소판을 포함한 혈장을 제거하고, 폐기하였다. PBMC를 원심분리 튜브 내로 옮기고, PBS (포스페이트-완충 염수) (깁코, 카탈로그 번호 14190)로 보충하였다. 세포 현탁액을 실온에서 250 g에서 10분 동안 원심분리하고, 상청액을 폐기하였다. PBMC를 완전 배지 (RPMI 1640, L-글루타민 (PAA, 카탈로그 번호 E15-039) 부재, 10% FCS; 50 U/ml 페니실린, 50 μg/ml 스트렙토마이신 (PAA, 카탈로그 번호 P11-010) 및 1% L-글루타민 (시그마, 카탈로그 번호 G7513)) 중에 재현탁시켰다.
검정을 또한 완전 배지 중에서 수행하였다. PBMC를 96-웰 플레이트에서 2.5x105개 세포/웰의 세포 밀도로 시딩하였다. 본 발명의 화합물을 일정한 부피의 100% DMSO로의 연속 희석에 적용하고, 최종 DMSO 농도가 0.4% DMSO가 되도록 10 μM 내지 3 nM 범위 내의 8개의 상이한 농도로 검정에 사용하였다. 이어서, 실제 자극 전에, 세포를 그와 함께 30분 동안 사전-인큐베이션하였다. 시토카인 분비를 유도하기 위해, 세포를 0.1 μg/ml LPS (시그마, 에스케리키아 콜라이 0128:B12, 카탈로그 번호 L2887)로 24시간 동안 자극하였다. 세포 생존율은 제조업체의 지침에 따라 셀타이터-글로(CellTiter-Glo) 발광 검정 (프로메가(Promega), 카탈로그 번호 G7571 (G755/G756A))을 사용하여 결정하였다. 세포 배지 상청액 중의 분비된 TNF-α의 양은 제조업체의 지침에 따라 인간 염증유발 9-플렉스(Plex) 조직 배양 키트 (MSD, 카탈로그 번호 K15007B)를 사용하여 결정하였다. 예로서, 실시예 화합물 11 및 실시예 화합물 12는 ≤ 1 μM의 활성을 갖는다.
인간 수지상 세포 (DC)의 시험관내 TLR-4/TLR-7-유도된 인터류킨 (IL)-23 분비
TH-17 세포의 생성에 필수적인 역할을 하는 염증유발 시토카인 IL-23의 유도된 생산에 대한 본 발명의 화학식 (I)의 화합물의 효과를 인간 DC에서 검사하였다. TH-17 세포는 장애 예컨대 류마티스 관절염, 건선성 관절염, 베크테레브병 (강직성 척추염) 또는 그 밖에 다발성 경화증의 발병기전에서 중요한 역할을 하는 것으로 언급된다 (Lubberts, Nat. Rev. Rheumatol., 2015; Marinoni et al., Auto. Immun. Highlights, 2014; Isailovic et al., J. Autoimmun., 2015; Staschke et al., J Immunol., 2009). IL-23 생산에 대한 본 발명의 화합물의 효과를 검출하기 위해, 자기 분리 [밀테니 바이오테크(Miltenyi Biotech), 단핵구 단리 키트, 카탈로그 번호 130-091-153]를 사용하여 및 완전 배지 (VLE (매우 낮은 내독소) RPMI 1640 [바이오크롬 아게, 카탈로그 번호 FG1415], 10% 소 태아 혈청 (FBS) [깁코, 카탈로그 번호 10493-106]; 50 μM β-메르캅토에탄올 [깁코, 카탈로그 번호 31350], 50 U/ml 페니실린 및 스트렙토마이신 [깁코, 카탈로그 번호 15140-114]) 중 성장 인자 (재조합 인간 GM-CSF [페프로테크(PeproTech), 카탈로그 번호 300-03] 및 IL-4 [페프로테크, 카탈로그 번호 200-04])의 첨가에 의해 인간 PBMC로부터 단리된 인간 1차 단핵구를 6일에 걸쳐 배양액 중에서 DC로 분화시켰다. DC를 수거한 후, 이들을 완전 배지 중에 재현탁시키고, 96-웰 플레이트 (코스타(Costar), 카탈로그 번호 3599)에서 2x105개 세포/웰의 세포 밀도로 시딩하였다. 본 발명의 화합물을 일정한 부피의 100% DMSO로의 연속 희석에 적용하고, 10μM 내지 1 nM 범위 내의 9개의 상이한 농도로 검정에 사용하였다. 여기서 존재하는 DMSO 농도가 사용된 9개 농도 각각에 대해 항상 0.1% DMSO가 되도록 보장하였다. 본 발명의 화합물과 함께 DC의 30분 사전인큐베이션이 있었다. 그 후, DC는 10 ng/ml LPS (시그마, 에스케리키아 콜라이 혈청형 0127:B8, 카탈로그 번호 L3129) (TLR4 리간드) 및 2.5 μg/ml의 TLR-7/8 리간드 R848 (인비보젠(Invivogen), 카탈로그 번호 tlrl-r848-5) (둘 다 IRAK4-매개 신호전달 경로를 활성화시킴)의 첨가에 의해 인큐베이터 (37℃, 95%rH, 5% CO2)에서 24시간 동안 IL-23을 생산하도록 자극되었다. 24시간의 이러한 인큐베이션 시간 후, 상청액을 수거하고, 상업적으로 입수가능한 hIL-23 ELISA (이바이오사이언시스(eBiosciences), 카탈로그 번호 88-7237-88)를 사용하여 분석하였으며, 이는 제조업체의 지침에 따라 수행하였다. 인간 DC에서의 IL-23의 억제의 결과는 도 1에 실시예 화합물 12에 대한 예로서 제시된다.
인간 형질세포양 수지상 세포 (pDC)의 시험관내 TLR-7/8- 또는 TLR-9-유도된 IFNα 생산
이 시험의 도움으로, 전신 홍반성 루푸스의 발병기전에서 주요 시토카인인 IFNα (인터페론-알파)의 인간 pDC에서의 생산에 대한 본 발명의 화학식 (I)의 화합물의 효과 (Mathian et al., Arthritis Rheum, 2009; Crow M.K., Rheum Dis Clin N Am, 2010)를 연구할 수 있다. 이 목적을 위해, 인간 PBMC를 상기 기재된 바와 같은 전혈로부터 단리하고, 형질세포양 DC (pDC)를 상업적으로 이용가능한 세포 분리 키트 (밀테니 바이오테크, 형질세포양 수지상 세포 단리 키트 II, 카탈로그 번호 130-097-415)를 사용하여 그로부터 단리하였다. 수득한 pDC를 완전 배지 (10% FBS [깁코, 카탈로그 번호 10493-106] 및 50 U 페니실린/스트렙토마이신 [깁코, 카탈로그 번호 15140-114]으로 보충된 RPMI 1640 + 글루타맥스 [깁코, 카탈로그 번호 61870-010]) 중에 재현탁시키고, 96-웰 마이크로타이터 플레이트 (코스타, 카탈로그 번호 3599)에 5x104개 세포/웰의 세포 밀도로 시딩하였다. 본 발명의 화합물을 일정한 부피의 100% DMSO로의 연속 희석에 적용하고, 10 μM 내지 1 nM 범위 내의 9개의 상이한 농도로 검정에 사용하였다. 존재하는 DMSO 농도가 시험된 9개 농도 각각에 대해 항상 0.1% DMSO가 되도록 보장하였다. 본 발명의 화합물과 함께 pDC의 30분 사전인큐베이션이 있었다. pDC는 TLR7/8 리간드 (이미퀴모드, R837, 인비보젠, 카탈로그 번호 tlrl-imq) 또는 TLR-9 리간드 (CPG-A, ODN2216, 인비보젠, 카탈로그 번호 tlrl-2216-1)로 자극되었고, 이는 IRAK4-매개 신호전달 경로의 활성화로 이어졌다. 24시간 동안의 인큐베이션 후, 세포 배양 상청액을 제거하고, 상업적으로 입수가능한 인간 IFNα ELISA (IFN알파 다중-하위유형 ELISA 키트, pbl 어세이 사이언스(Assay Science), 카탈로그 번호 41105-1)를 사용하여 분석하였다. 인간 형질세포양 DC에서의 IFNα의 억제의 결과는 도 2에 실시예 화합물 12에 대한 예로서 제시된다.
TLR-매개 염증의 생체내 모델
본 발명의 화학식 (I)의 화합물을 생체내 TLR-매개 염증의 모델에서 그의 생체내 효능에 대해 검사하였다. 이 기계론적 모델은, LPS-매개 염증 모델이 사용되었으므로, 특히 TLR4-매개 장애에 대한 본 발명의 화합물의 잠재적 효과를 보여준다. 이 모델에서, 암컷 Balb/c 마우스 (약 8주령; 찰스 리버 래보러토리즈(Charles River Laboratories), 독일)를 각각 5마리 동물의 군으로 분류하였다. 대조군을 물질이 용해된 비히클 (물질 비히클) 및 또한 LPS가 용해된 비히클로 치료하였다. 물질 치료군뿐만 아니라 양성 대조군은 0.2 mg LPS/kg 체중 (시그마, 카탈로그 번호 L4391) (이. 콜라이 0111:B4로부터의 리포폴리사카라이드)을 복강내로 (i.p.) 받았다. 또한, 양성 대조군을 상기 기재된 물질 비히클로 치료하였다. 물질을 LPS의 투여에 의한 염증의 유발 16시간 전에 경구로 투여하였다. 염증에 대한 본 발명의 화합물의 효과를 검사하기 위해, 혈액 샘플을 1.5시간 후에 동물로부터 취하였다. 혈장 내 특정한 시토카인의 농도는 마우스 염증유발 7-플렉스 조직 배양 키트 (MSD, 카탈로그 번호 K15012B)를 사용하여 제조업체의 지침에 따라 결정하였다. IRAK4 억제제는 TLR-매개 염증 모델에서 효과적이다. 도 3은 LPS-유도된 농도에 비한, 실시예 화합물 11의 투여에 의해 용량-의존성 방식으로 감소되는 혈장 내 TNF-α의 양을 보여준다.
IL-1β-매개 염증의 생체내 모델
IL-1β-매개 장애에서 본 발명의 화학식 (I)의 화합물의 잠재적 효능을 평가하기 위해, IL-1β를 암컷 Balb/c 마우스 (약 8주령, 찰스 리버 래보러토리즈, 독일)에게 i.p. 투여하고, IL-1β-매개 시토카인 분비에 대한 본 발명의 화합물의 효과를 검사하였다. 각 군에 5마리의 동물이 있었다. 대조군을 물질 및 IL-1β를 용해시키는 데 사용된 비히클로 치료하였다. 물질 치료군 및 양성 대조군에 각각 90 μg IL-1β/kg 체중을 i.p. 투여하였다 (알앤디(R&D), 카탈로그 번호 401-ML/CF). 양성 대조군에서 물질 또는 그의 비히클을 IL-1β의 투여 6시간 전에 투여하였다. IL-1β의 투여 2시간 후에, TNF-α를 마우스 염증유발 7-플렉스 조직 배양 키트 (MSD, 카탈로그 번호 K15012B)를 제조업체의 지침에 따라 사용하여 혈액으로부터 단리된 혈장에서 결정하였다. IL-1β의 투여는 실시예 화합물 11 및 12를 사용한 치료에 의해 억제된 TNF-α 혈장 농도를 상승시켰다. 이는 도 4에 의해 설명된다.
생체내 아주반트-유발된 관절염 모델
본 발명의 화학식 (I)의 화합물의 항염증 활성을 결정하기 위해, 이들을 관절염 모델에서 그의 생체내 효능에 대해 검사하였다. 이 목적을 위해, 수컷 루이스 래트 (약 100-125 g, 찰스 리버 래보러토리즈, 독일)에 100 μl의 완전 프로인트 아주반트 (CFA) 용액 (불완전 프로인트 아주반트 [디프코 랩(Difco Lab), 카탈로그 번호 263910]에 용해된 엠. 투베르쿨로리스(M. tuberculosis) H37Ra [디포 랩(Difo Lab), 카탈로그 번호 231141])을 제0일에 미근 내로 피하로 각각 투여하였다. 각 군에 n = 8마리의 래트가 있었다. 건강한 대조군 및 질환 대조군 둘 다를 연구에 포함시켰다. 각 대조군에 오직 시험 물질의 비히클을 사용한 p.o. 치료를 제공하였다. 상이한 투여량의 시험 물질을 사용한 치료를 예방적 방식으로, 즉 제0일부터 시작하여 경구 투여에 의해 수행하였다. 제0일에, 동물의 시작 상태를 추가적으로 질환 활성 점수 (포인트 시스템에 기초한 관절염의 중증도의 등급화)의 관점에서 결정하였다. 여기서, 포인트를 양쪽 뒷발에 대한 관절 종창을 포함한 홍반의 존재에 대해 0 내지 4로 부여하고 (0 = 없음; 1 = 경미함; 2 = 중등도; 3 = 뚜렷함; 4 = 중증), 합산하였다. 화합물의 항염증 효능을 결정하기 위해, 동물의 질환 활성을 동물이 처음 관절염의 징후를 나타낸 때인 제8일부터 시작하여, 후속적으로 1주에 3회, 종료 시 (제20일)까지 질환 활성 점수화에 의해 점수화하였다. 단일-인자 분산 분석 (ANOVA)을 사용하여 및 다중 비교 분석 (던넷 시험)에 의한 대조군과의 비교에 의해 통계적 분석을 수행하였다.
래트에서의 CFA의 s.c. 투여는 래트에서 뚜렷한 관절 염증을 동반한 급성 관절염으로 이어진다. 이러한 유발된 관절염은 실시예 화합물 11을 사용한 치료에 의해 억제되었다. 이는 도 5에 의해 설명된다.
마우스에서 생체내 콜라겐 항체-유발된 관절염 모델
본 발명의 화학식 (I)의 화합물의 항염증 효과를 추가의 뮤린 관절염 모델에서 검사하였다. 이 목적을 위해, 암컷 Balb/c 마우스 (약 9주령, 찰스 리버 래보러토리즈, 캐나다 킹스턴)에 각각 제0일에 200 μl의 콜라겐 항체 칵테일 (10 mg/ml; 아르트리토맙(ArthritoMab), MD 바이오프로덕츠(Bioproducts))을 꼬리 정맥 내로 정맥내로 주사하였다 (연구에 포함된 건강한 대조군 제외). 제6일에, 이어서 이들 마우스는 각각 200 μl의 LPS의 추가의 복강내 주사를 받았다. 각 군에 n = 10마리의 마우스가 있었다. 건강한 대조군 및 질환 대조군 둘 다를 연구에 포함시켰다. 각 대조군에 오직 시험 물질의 비히클을 사용한 치료를 p.o. 제공하였다. 상이한 투여량의 시험 물질을 사용한 치료를 예방적 방식으로, 즉 제0일부터 시작하여 경구 투여에 의해 수행하였다. 실험의 과정에 걸쳐, 질환의 정도를 4개의 모든 발에 대한 질환 활성 점수에 대한 포인트 부여 시스템에 기초하여 점수화하였다. 이러한 포인트 부여에서, 건강한 발에 대해 어떠한 포인트도 부여하지 않은 반면, 각 경우에 발가락으로부터 중족 관절을 통해 발목 관절까지 발생하는 특정한 정도의 관절 염증에 대해 1 [예를 들어, 발가락(들)의 경도 염증] 내지 4 [전체 발에 걸쳐 확장되는 중증 염증]의 포인트를 부여하였으며, 하기와 같이 설명된다:
● 0 = 정상
● 1 = 족근 또는 발목 또는 발가락으로 제한된 홍반 및 경도 종창
● 2 = 발목으로부터 중족 (2개 분절)까지 확장된 홍반 및 경도 종창
● 3 = 발목으로부터 중족 관절까지 확장된 홍반 및 중등도 종창
● 4 = 중족, 발 및 발가락을 포괄하는 홍반 및 중증 종창
이 파라미터에 대해, 시작 상태를 실험 시작 1일 전에 (제-1일) 미리 결정하였고, 이 질환 활성 점수를 후속적으로 제8일부터 이후로 1주에 3회 점수화하였다. 단일-인자 분산 분석 (ANOVA)을 사용하여 및 다중 비교 분석 (던넷 시험)에 의한 대조군과의 비교에 의해 통계적 분석을 수행하였다.
마우스에서 LPS의 후속적인 i.p. 투여를 포함한 콜라겐 항체 칵테일의 i.v. 투여는 뚜렷한 관절 염증을 동반한 급성 관절염으로 이어진다. 이러한 유발된 관절염은 실시예 화합물 12를 사용한 치료에 의해 억제되었다. 이는 도 6에 의해 설명된다.
생체내 NASH 마우스 모델
NASH를 실험적으로 유발하기 위해, 200 μg 스트렙토조토신 (STZ; 시그마-알드리치, 미국)을 각각 45마리의 수컷 2일령 C57BL/6 마우스에 피하로 주사하였다. 4주령에서 시작하여, 이들 동물에게 고지방 식이 (HFD; 57 kcal% 지방, CLEA로부터의 #HFD32, 일본)를 자유롭게 공급하였다. 6주령에서, 동물을 3개 군으로 무작위화하였다 (군당 15마리 동물). 군 중 하나는 어떠한 치료도 받지 않았지만, 다른 2개 군은 4주에 걸쳐 비히클 또는 시험 물질로 매일 경구로 치료되었다. 4주 치료 후에, 모든 동물을 마취 하에 무통으로 희생시키고, 간을 제거하고 조직학적 연구를 위해 보우인(Bouin) 용액 중에서 고정시켰다 (H. Denk, "Fixierung histologischer Praeparate" [Fixing of Histological Preparations], in: P. Boeck (ed.): "Romeis Mikroskopische Technik" [Romei's Microscopy Techniques], Urban & Schwarzenberg, Munich-Vienna-Baltimore 1989, 17th edition, page 97, ISBN 3-541-11227-1). 그 후, 간 샘플을 파라핀에 포매하고, 5 μm 두께의 파라핀 절편을 생성하였다. 각각의 간의 조직학적 절편을 a) NAFLD 활성 점수 (NAS)의 결정을 위해 헤마톡실린-에오신 (HC)에 의해, 및 b)간 섬유증의 결정을 위해 피크로-시리우스 레드 (발데크(Waldeck), 독일)에 의해 염색하였다. NAFLD 활성 점수는 문헌 [D.E. Kleiner et al., Hepatology 41 (2005), 1313-1321]에서 권장된 기준에 기초하여 헤마톡실린-에오신 절편에서 결정하였다 (표 1). 섬유증 영역의 조직학적 정량화를 위해, 200배 현미경 확대 하에 각각의 절편에 대해 5장의 디지털 사진 (DFC280; 레이카(Leica), 독일)을 촬영하고, 이미지제이 소프트웨어(ImageJ Software) (내셔널 인스티튜트 오브 헬스(National Institute of Health), 미국)를 사용하여 섬유증의 백분율을 결정하였다.
생체내 db/db 마우스 모델
30마리의 수컷 8주령 db/db 마우스를 사용하였다. 이 모델은 비만, 인슐린 내성 및 제2형 당뇨병에 대해 널리 허용되는 모델이다 (Aileen JF King; The use of animal models in diabetes research; British Journal of Pharmacology 166 (2012), 877-894). 실험 동안, 동물은 표준 식이 (RM1(E) 801492, SDS) 및 수돗물을 자유롭게 받았다. 동물을 3개 군으로 무작위화하고 (군당 10마리 동물), 6주에 걸쳐 시험 물질로 경구로 치료하였다. 연구 기간 동안, 상이한 시점 (치료 시작 전, 치료 시작 3주 후 및 치료 종료 2일 전)에 동물로부터 혈액을 채취하여 인슐린 감수성 파라미터 (예를 들어 HbA1c, 글루코스 함량, 인슐린 함량)를 결정하였다. 또한, 인슐린 감수성의 결정을 위한 파라미터로서의 OGTT (경구 글루코스 내성 시험)를 치료 시작 1일 전 및 치료 종료 2일 후에 수행하였다. 또한, HOMA-IR 지표 (공복 인슐린 수준 (mU/l) * 공복 글루코스 수준 (mmol/l) / 22.5)를 계산하였다.
생체내 B-세포 림프종-연관 이종이식 모델
본 발명의 화학식 (I)의 화합물의 항종양 활성을 뮤린 이종이식 모델에서 연구하였다. 이 목적을 위해, 암컷 C.B-17 SCID 마우스에게 인간 B-세포 림프종 세포주, 예를 들어 TMD-8을 피하로 이식하였다. 20-30 mm2의 평균 종양 크기에서, 경구 단일요법 치료를 본 발명의 화합물을 사용하여 또는 본 발명의 화합물을 표준 요법과 조합하여 투여함으로써 (각각 경구 투여됨) 시작하였다. 그러나, 동물을 미리 무작위화하였다. 비치료된 대조군이 큰 종양을 갖자마자 치료를 종료하였다. 종양 크기 및 체중은 1주에 3회 결정하였다. 체중의 감소는 치료-관련 독성의 척도이다 (> 10% = 임계, 회복 시까지 치료 중단, > 20% = 독성, 종결). 종양 면적은 전자 캘리퍼 게이지 [길이 (mm) x 폭 (mm)]로 검출하였다. 연구 종료 시에, 종양 중량을 또한 결정하였다. 항종양 효능은 치료군 vs. 대조군의 종양 중량의 비 (T/C) [제x일에 치료군의 종양 중량/제x일에 대조군의 종양 중량] 또는 치료군 vs. 대조군의 종양 면적의 비 [제x일에 치료군의 종양 면적/제x일에 대조군의 종양 면적]로 규정된다. 0.5 초과의 T/C를 갖는 화합물이 활성 (효과적)인 것으로 규정된다. 단일-인자 ANOVA를 사용하여 및 쌍별 비교 분석 (던넷 시험)에 의한 대조군과의 비교에 의해 통계적 분석을 수행하였다.
개 IRAK4 키나제 검정
개 IRAK4에 대한 본 발명의 화합물의 IRAK4-억제 활성을 이하에 기재된 IRAK4 TR-FRET 검정 (TR-FRET = 시간 분해 형광 공명 에너지 전달)에서 측정하였다.
바큘로바이러스-감염된 곤충 세포 (Hi5, BTI-TN-5B1-4, 인비트로젠, 카탈로그 번호 B855-02로부터 구입한 세포주)에서 발현되고 친화성 크로마토그래피를 통해 정제된, N-말단 HIS (폴리-히스티딘) 및 개 IRAK4로부터의 재조합 융합 단백질을 효소로서 사용하였다. 키나제 반응에 사용된 기질은, 예를 들어, 바이오신탄 게엠베하 (베를린-부흐)로부터 구입할 수 있는 비오티닐화 펩티드 비오틴-Ahx-KKARFSRFAGSSPSQASFAEPG (아미드 형태의 C-말단)였다.
검정을 위해, 20 μM 내지 0.073 nM 범위 내의 11개의 상이한 농도를 DMSO 중 시험 물질의 2 mM 용액으로부터 제조하였다. 50 nl의 각각의 용액을 흑색 저부피 384-웰 마이크로타이터 플레이트 (그라이너 바이오-원, 독일 프리켄하우젠) 내로 피펫팅하고, 검정 완충제 [50 mM HEPES pH 7.5, 5 mM MgCl2, 1.0 mM 디티오트레이톨, 30 μM 활성화된 소듐 오르토바나데이트, 0.1 % (w/v)의 소 감마-글로불린 (BGG) 0.04% (v/v) 노니데트-P40 (시그마)] 중 IRAK4의 용액 2 μl를 첨가하고, 혼합물을 15분 동안 인큐베이션하여 물질이 키나제 반응 전에 효소에 사전결합하도록 하였다. 이어서, 키나제 반응을 검정 완충제 중 아데노신 트리포스페이트 (ATP, 1.67 mM = 5 μl의 검정 부피 중 최종 농도: 1 mM) 및 펩티드 기질 (0.83 μM = 5 μl 검정 부피 중 최종 농도: 0.5 μM)의 용액 3 μl의 첨가에 의해 시작하고, 생성된 혼합물을 22℃에서 45분의 반응 시간 동안 인큐베이션하였다. IRAK4의 농도를 효소의 각각의 활성으로 조정하고, 검정이 선형 범위에서 수행되도록 설정하였다. 전형적인 농도는 약 0.1 nM 정도였다. 수성 EDTA 용액 (25 mM HEPES pH 7.5 중 100 mM EDTA, 0.4% [w/v] 소 혈청 알부민 [BSA]) 중 TR-FRET 검출 시약 [0.1 μM 스트렙타비딘-XL665 (시스바이오 바이오어세이즈; 프랑스, 카탈로그 번호 610SAXLG)] 및 1.5 nM 항-포스포세린 항체 [머크 밀리포어, "STK 항체", 카탈로그 번호 35-002] 및 0.6 nM 랜스 EU-W1024-표지된 항-마우스-IgG 항체 (퍼킨-엘머, 제품 번호 AD0077; 대안적으로, 시스바이오 바이오어세이즈로부터의 테르븀 크립테이트-표지된 항-마우스-IgG 항체를 사용하는 것이 가능함)의 용액 5 μl의 첨가에 의해 반응을 정지시켰다.
생성된 혼합물을 22℃에서 1시간 동안 인큐베이션하여 비오티닐화 인산화 기질 및 검출 시약의 복합체가 형성되도록 하였다. 이어서, 유로퓸 킬레이트-표지된 항-마우스-IgG 항체로부터 스트렙타비딘-XL665로의 공명 에너지 전달을 측정함으로써 인산화 기질의 양을 평가하였다. 이를 위해, 350 nm에서의 여기 후 620 nm 및 665 nm에서의 형광 방출을 TR-FRET 측정 기기, 예를 들어 루비스타 (BMG 랩테크놀로지스, 독일 오펜부르크) 또는 뷰럭스 (퍼킨-엘머)에서 측정하였다. 665 nm 및 622 nm에서의 방출 비를 인산화 기질의 양의 척도로서 취하였다. 데이터를 정규화하였다 (시험 물질 부재 하의 효소 반응 = 0% 억제; 효소가 없는 모든 다른 검정 성분 = 100% 억제). 전형적으로, 시험 물질을 20 μM 내지 0.073 nM 범위 내의 11개의 상이한 농도 (20 μM, 5.7 μM, 1.6 μM, 0.47 μM, 0.13 μM, 38 nM, 11 nM, 3.1 nM, 0.89 nM, 0.25 nM 및 0.073 nM)에서 동일한 마이크로타이터 플레이트 상에서 시험하였다. 검정 전에 일련의 희석물 (100% DMSO 중 2 mM 내지 7.3 nM)을 연속 희석에 의해 제조하였다. IC50 값을 4-파라미터 피트에 의해 계산하였다.
표 3: IRAK4 개 키나제 검정에서의 실시예 화합물의 2회 실험으로부터의 IC50-값
Figure 112018118699939-pct00065
개 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)에 의한 시험관내 리포폴리사카라이드 (LPS)-유도된 시토카인 생산
개 PBMC에서의 유도된 시토카인 생산에 대한 본 발명의 화학식 (I)의 화합물의 효과를 검사하였다. 여기서, 시토카인 생산은 TLR4 리간드인 LPS에 의해 유도되었으며, 이는 IRAK4-매개 신호 경로의 활성화로 이어진다.
개 PBMC를 항응고된 개 전혈로부터 수득하였다. 이 목적을 위해, 개 백혈구 풍부 혈장을 15 ml 개 혈액으로부터 400g에서 15분 동안 4℃에서 원심분리한 후, 수거한 다음 혈장 중에 개 PBMC 백혈구 연층을 현탁시켰다. 칠 (7) ml 피콜-파크 플러스 (피셔 사이언티픽(Fischer Scientific), 카탈로그 번호 11778538)를 원심분리 튜브에 피펫팅한 다음, 7 ml 개 백혈구 풍부 혈장을 피콜-파크 플러스 상부에 적층하였다. 400 g에서 20분 동안 4℃에서 튜브를 원심분리한 후, 개 PBMC를 개 혈장 및 피콜-파크 플러스의 계면으로부터 수거하였다. PBMC를 신선한 원심분리 튜브 내로 옮기고, Ca2 +/Mg2 +가 없는 행크 평형 염 용액 (시그마-알드리치, 카탈로그 번호 H9394) 1x (HBSS)로 보충하였다. 세포 현탁액을 400g에서 5분 동안 4℃에서 원심분리하고, 상청액을 폐기하였다. 이어서, 세포 펠릿을 0.2% 저장성 염수 중에 재현탁시켜 나머지 적혈구를 용해시켰다. 30초 후에 세포 현탁액을 등장성으로 만들고, 400g에서 5분 동안 4℃에서 원심분리하였다. 이어서, 세포 펠릿을 최종 세척을 위해 Ca2 +/Mg2 +가 없는 HBSS 중에 현탁시키고, 400g에서 5분 동안 4℃에서 원심분리하였다. 이어서, PBMC를 완전 배지 (글루타맥스 (시그마-알드리치, 카탈로그 번호 R0883), 10% FCS; 50 U/ml 페니실린, 50 μg/ml 스트렙토마이신 (시그마-알드리치, 카탈로그 번호 P4333)을 갖는 RPMI 1640) 중에 재현탁시켰다.
검정을 또한 완전 배지 중에서 수행하였다. PBMC를 96-웰 플레이트 내에 2.5 x 105개 세포/웰의 세포 밀도로 시딩하였다. 본 발명의 화합물을 DMSO 중에 용해시키고, 완전 배지로의 연속 희석에 적용하였다. 화합물 실시예를 최종 DMSO 농도가 0.0003 - 0.4%가 되도록 3 nM 내지 10 μM 범위 내의 8개의 상이한 농도로 검정에 사용하였다. 시토카인 분비를 유도하기 위해, 세포를 0.1 μg/ml LPS (시그마-알드리치, 에스케리키아 콜라이 0111:B4, 카탈로그 번호 L3024)로 24시간 동안 자극하였다. 세포 생존율은 0.2% 트리판 블루 (시그마-알드리치, 카탈로그 번호 T8154)를 사용하여 결정하였다. 세포 배양 상청액 중의 분비된 TNF-α의 양은 제조업체의 지침에 따라 개 TNFα DuoSet Elisa (알앤디 시스템즈(R&D Systems), 카탈로그 번호 DY1507)를 사용하여 결정하였다. 예로서, 실시예 화합물 12는 LPS로 자극된 개 PBMC에 의한 TNFα의 생산을 억제하였다. 이는 도 7에 의해 설명된다.
소 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)에 의한 시험관내 리포폴리사카라이드 (LPS)-유도된 시토카인 생산
소 PBMC에서의 유도된 시토카인 생산에 대한 본 발명의 화학식 (I)의 화합물의 효과를 검사하였다. 여기서, 시토카인 생산은 TLR4 리간드인 LPS에 의해 유도되었으며, 이는 IRAK4-매개 신호 경로의 활성화로 이어진다.
소 PBMC를 항응고된 소 전혈로부터 수득하였다. 이 목적을 위해, 소 백혈구 풍부 혈장을 500 ml 소 혈액으로부터 1000g에서 20분 동안 실온 (RT)에서 원심분리한 후, 수거한 다음 소 PBMC 백혈구 연층을 동등한 부피의 PBS/5 mM EDTA 중에 현탁시킴으로써 (RT) 제조하였다. 삼십 (30) ml 피콜-파크 플러스 (피셔 사이언티픽, 카탈로그 번호 11778538)를 류코셉 튜브에 피펫팅한 다음, 30 ml 소 PBMC 백혈구 연층/PBS/EDTA 혼합물을 피콜-파크 플러스 상부에 적층하였다. 800 g에서 25분 동안 RT에서 튜브를 원심분리한 후, 소 PBMC를 소 혈장 및 피콜-파크 플러스의 계면으로부터 수거하였다. PBMC를 신선한 원심분리 튜브 내로 옮기고, 차가운 PBS/ 5 mM EDTA로 보충하였다. 세포 현탁액을 350g에서 10분 동안 4℃에서 원심분리하고, 상청액을 폐기하였다. 이어서, 세포 펠릿을 0.2% 저장성 염수 중에 재현탁시켜 나머지 적혈구를 용해시켰다. 30초 후에 세포 현탁액을 등장성으로 만들고, 500g에서 5분 동안 4℃에서 원심분리하였다. 이어서, PBMC 세포 펠릿을 완전 배지 (글루타맥스 (써모피셔(ThermoFisher), 카탈로그 번호 32430100), 10% 말 혈청 (ATCC® 30-2040™), 20 μM β-메르캅토에탄올 (써모피셔 카탈로그 번호 31350010 [원액: 50 mM]을 갖는 DMEM) 중에 재현탁시켰다.
검정을 또한 완전 배지 중에서 수행하였다. PBMC를 24-웰 플레이트에서 1x106개 세포/웰의 세포 밀도로 시딩하였다. 본 발명의 화합물을 DMSO 중에 용해시키고, 완전 배지로의 연속 희석에 적용하였다. 화합물 실시예를 최종 DMSO 농도가 0.5%가 되도록 0.003 μM 내지 10 μM 범위 내의 8개의 상이한 농도로 검정에 사용하였다. 시토카인 분비를 유도하기 위해, 세포를 1 μg/ml (도 8) 및 0.1 μg/ml LPS (도 9) (이 콜라이 K12로부터의 LPS; 인비보젠 # tlrl-eklps)로 24시간 동안 자극하였다. 세포 생존율은 튀르크 용액 (머크 밀리포어 # 1092770100)을 사용하여 결정하였다.
LPS-노출된 소 PBMC의 세포 배지 상청액 중의 분비된 TNFα의 양은 토끼 항-소 TNFα 항체 기반 ELISA 판독을 사용하여 결정하였다. ELISA 검정을 384 웰 ELISA 플레이트에서 수행하였으며, 이를 50 mM Na2CO3/NaHCO3 pH 9.6 완충제 중 5 μg/ml 토끼 항-소 TNFα 항체 (바이오라드(BioRad), AHP2383)로 10 μl/웰로 밤새 4℃에서 코팅하였다. 항체를 제거하고 웰을 50 μl의 세척 완충제 (PBS, 0.05 % (v/v) 트윈(Tween) 20)로 3회 헹군 후에, 웰을 90분 동안 37℃에서 40 μl 차단 완충제 (PBS, 0.05 % (v/v) 트윈 20, 1% (w/v) 소 혈청 알부민)와 함께 인큐베이션하였다. 그 후, 차단 완충제를 제거하고, 배양 상청액 샘플을 첨가하였다 (20 μl/웰). 37℃에서 90분 동안 인큐베이션한 후에, 샘플을 제거하고, 웰을 50 μl 세척 완충제로 3회 헹구었다. 차단 완충제 중 1 μg/ml 토끼 항-소 TNFα-비오틴 접합 항체 (바이오라드, AHP2383B)를 플레이트에 첨가하였으며 (20 μl/웰), 이를 37℃에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 비오티닐화 항체를 제거하고 웰을 50 μl 세척 완충제로 3회 헹군 후에, 차단 완충제 중에 1:10.000 희석된 20 μl/웰의 엑스트라비딘(ExtrAvidin)™-알칼리성 포스파타제 (시그마, E2636)를 37℃에서 1시간 동안 첨가하였다. 엑스트라비딘™-알칼리성 포스파타제를 제거하고 웰을 50 μl 세척 완충제로 3회 헹군 후에, 50 μl/웰의 발현 완충제 (50 mM Na2CO3/NaHCO3 pH 9.6, 2 mM MgCl2 중 5 mM 파라-니트로페닐 포스페이트 (pNPP))를 첨가함으로써 효소적 반응/색 발현을 개시하였다. 광학 밀도를 405 nm 파장에서 기록하였다. 동역학적 측정을 위해 데이터 포인트를 1시간 동안 5분마다 기록하고, 종점을 2시간 후에 측정하였다. 예로서, 실시예 화합물 12는 LPS로 자극된 소 PBMC에 의한 TNFα의 생산을 억제하였다. 이는 도 8 및 9에 의해 설명된다.
돼지 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)에 의한 시험관내 리포폴리사카라이드 (LPS)-유도된 시토카인 생산
추가의 예로서, 돼지 PBMC에서의 유도된 시토카인 생산에 대한 본 발명의 화학식 (I)의 화합물의 효과를 검사하였다. 여기서, 시토카인 생산은 TLR4 리간드인 LPS에 의해 유도되었으며, 이는 IRAK4-매개 신호 경로의 활성화로 이어진다.
돼지 PBMC를 항응고된 돼지 전혈로부터 수득하였다. 이 목적을 위해, 돼지 백혈구 풍부 혈장을 36 ml 돼지 혈액으로부터 1000g에서 20분 동안 실온 (RT)에서 원심분리한 후, 수거한 다음 돼지 PBMC 백혈구 연층을 동등한 부피의 PBS/5 mM EDTA 중에 현탁시킴으로써 (RT) 제조하였다. 삼십 (30) ml 피콜-파크 플러스 (피셔 사이언티픽, 카탈로그 번호 11778538)를 류코셉 튜브에 피펫팅한 다음, 30 ml 소 PBMC 백혈구 연층/PBS/EDTA 혼합물을 피콜-파크 플러스 상부에 적층하였다. 800 g에서 25분 동안 RT에서 튜브를 원심분리한 후, 돼지 PBMC를 돼지 혈장 및 피콜-파크 플러스의 계면으로부터 수거하였다. PBMC를 신선한 원심분리 튜브 내로 옮기고, 차가운 PBS/ 5 mM EDTA로 보충하였다. 세포 현탁액을 350g에서 10분 동안 4℃에서 원심분리하고, 상청액을 폐기하였다. 이어서, 세포 펠릿을 0.2% 저장성 염수 중에 재현탁시켜 임의의 나머지 적혈구를 용해시켰다. 30초 후에 세포 현탁액을 등장성으로 만들고, 500g에서 5분 동안 4℃에서 원심분리하였다. 이어서, PBMC 세포 펠릿을 완전 배지 (글루타맥스 (써모피셔, 카탈로그 번호 32430100), 10% 말 혈청 (ATCC® 30-2040™), 20 μM β-메르캅토에탄올 (써모피셔 카탈로그 번호 31350010 [원액: 50 mM]을 갖는 DMEM) 중에 재현탁시켰다.
검정을 또한 완전 배지 중에서 수행하였다. PBMC를 24-웰 플레이트에서 1x106개 세포/웰의 세포 밀도로 시딩하였다. 본 발명의 화합물을 DMSO 중에 용해시키고, 완전 배지로의 연속 희석에 적용하였다. 화합물 실시예를 최종 DMSO 농도가 0.5%가 되도록 0.003 μM 내지 10 μM 범위 내의 8개의 상이한 농도로 검정에 사용하였다. 시토카인 분비를 유도하기 위해, 세포를 0.01 내지 1 ng/ml의 농도 범위의 LPS (이 콜라이 K12로부터의 LPS; 인비보젠 # tlrl-eklps)로 24시간 동안 자극하였다. 세포 생존율은 튀르크 용액 (머크 밀리포어 # 1092770100)을 사용하여 결정하였다.
LPS-노출된 돼지 PBMC의 세포 배지 상청액 중의 분비된 TNFα의 양은 토끼 항-돼지 TNFα 항체 기반 ELISA 판독을 사용하여 결정하였다. ELISA 검정을 384 웰 ELISA 플레이트에서 수행하였으며, 이를 50 mM Na2CO3/NaHCO3 pH 9.6 완충제 중 3 μg/ml 토끼 항-돼지 TNFα 항체 (바이오라드, AHP2397)로 10 μl/웰로 48시간 동안 4℃에서 코팅하였다. 항체를 제거하고 웰을 50 μl의 세척 완충제 (PBS, 0.05 % (v/v) 트윈 20)로 3회 헹군 후에, 웰을 60분 동안 37℃에서 50 μl 차단 완충제 (PBS, 0.05 % (v/v) 트윈 20, 1% (w/v) 소 혈청 알부민)와 함께 인큐베이션하였다. 그 후, 차단 완충제를 제거하고, 배양 상청액 샘플을 첨가하였다 (20 μl/웰). 37℃에서 90분 동안 인큐베이션한 후에, 샘플을 제거하고, 웰을 50 μl 세척 완충제로 3회 헹구었다. 차단 완충제 중 0.25 μg/ml 토끼 항-돼지 TNFα-비오틴 접합 항체 (바이오라드, AHP2397B)를 플레이트에 첨가하였으며 (20 μl/웰), 이를 37℃에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 비오티닐화 항체를 제거하고 웰을 50 μl 세척 완충제로 3회 헹군 후에, 차단 완충제 중에 1:10.000 희석된 20 μl/웰의 엑스트라비딘™-알칼리성 포스파타제 (시그마, E2636)를 37℃에서 1시간 동안 첨가하였다. 엑스트라비딘™-알칼리성 포스파타제를 제거하고 웰을 50 μl 세척 완충제로 3회 헹군 후에, 90 μl/웰의 발현 완충제 (50 mM Na2CO3/NaHCO3 pH 9.6, 2 mM MgCl2 중 5 mM 파라-니트로페닐 포스페이트 (pNPP))를 첨가함으로써 효소적 반응/색 발현을 개시하였다. 광학 밀도를 405 nm 파장에서 기록하였다. 동역학적 측정을 위해 데이터 포인트를 1시간 동안 5분마다 기록하고, 종점을 2시간 후에 측정하였다. 예로서, 10 μM 실시예 화합물 12는 0.1 ng/ml LPS로 자극된 소 PBMC에 의한 TNFα의 생산을 억제하였다. 이는 도 10에 의해 설명된다.
집 먼지 응애 유발된 개 알레르기성 피부염의 생체내 모델
본 발명의 화학식 (I)의 화합물의 잠재적 항알레르기/항염증 효능을 평가하기 위해 집 먼지 응애 (HDM)-감작화된 비글 개의 모델을 사용하였다. 거기에서, HDM-감작은 대략 2주의 시간 간격으로 HDM 항원 (10 μg, 그리어 래보러토리즈(Greer Laboratories), 미국 노스 캐롤라이나주 르누아) 및 알히드로겔® (0.2 mL, 인비보젠, 미국 캘리포니아주 921221 샌디에고)의 아주반트로서의 피하 주사의 시리즈로 이루어졌다. 감작 과정을 모니터링하고, 피내 피부 시험에 의해 확인하였다. 개가 HDM 피부 피내 시험에 대해 양성이면, 마지막 감작으로부터 1개월에, HDM 항원 (135 μg)을 국소로 적용하고 후방 하지의 내부에서 성체 비글 개의 피부 내로 (2 mm 길이 마이크로 니들로) 찌르고, 알레르기성 피부염의 징후, 예를 들어 홍반 및 부종에 대한 본 발명의 화합물의 효과를 검사하였다. 각각 4마리 동물의 2개 군이 있었다: 1개의 위약 대조군 및 1개의 실시예 화합물 12로 치료된 군. 대조군은 마이크로 셀룰로스를 함유하는 젤라틴 캡슐로 경구로 치료된 한편, 실시예 화합물 12로 치료된 군은 실시예 화합물 12 및 마이크로 셀룰로스를 함유하는 젤라틴 캡슐로 경구로 치료되었다. 실시예 화합물 12 또는 위약의 투여는 HDM 항원으로의 챌린지 5일 전에 시작되었고 챌린지 후 2일까지 계속되었다. 치료 빈도는 실시예 화합물 12의 경우에 10 mg/kg 체중의 용량으로, 매일 1회였다. 챌린지 30분 후에 시작하여 48시간 동안 상이한 시점에, 홍반 및 부종을 VAS (시각 상사 척도)를 사용하여 2개 군에서 평가하였다. 혈장 샘플을 분석하여 임상 평가와 관련되는 화합물에 대한 노출을 결정하였다. 홍반 및 부종은 실시예 화합물 12를 사용한 치료 후에 유의하게 감소되었다. 이는 표 4 및 5에 의해, 및 도 11 및 12에 의해 설명된다.
표 4: 위약과 비교하여 실시예 화합물 12를 사용한 치료 후의 홍반 (VAS 단위)
Figure 112018118699939-pct00066
표 5: 위약과 비교하여 실시예 화합물 12를 사용한 치료 후의 부종 (VAS 단위)
Figure 112018118699939-pct00067
벼룩 알레르기 피부염의 생체내 소양성 모델
본 발명의 화학식 (I)의 화합물의 잠재적 항소양 효과를 평가하기 위해 벼룩 알레르기 피부염 (FAD)의 모델을 사용하였다. FAD의 병력이 있는 성체 개만을 연구에 등록하였다. 연구의 생존기는 2개 시기로 이루어졌다: 소양증 유발기 (2주)에 이은 치료 기 (2주). 개를 연구 시기 둘 다 동안 매주 2회 크테노세팔리데스 벼룩으로 침입시켰다 (제1 챌린지는 100마리 벼룩/개, 모든 후속 챌린지는 30마리 벼룩/개). 각각 12마리 동물의 2개 군이 있었다: 1개의 위약 대조군 및 1개의 실시예 화합물 12로 치료된 군. 대조군은 마이크로 셀룰로스를 함유하는 젤라틴 캡슐로 경구로 치료된 한편, 실시예 화합물 12로 치료된 군은 실시예 화합물 12 및 마이크로 셀룰로스를 함유하는 젤라틴 캡슐로 경구로 치료되었다. 치료 빈도는 실시예 화합물 12의 경우에 20 mg/kg 체중의 용량으로, 매일 1회였다. 치료 1일 후에 시작하여 3일마다, 개를 4시간 동안 기록하고 소양증 행동에 소요되는 시간을 긁기, 핥기, 물기에 소요되는 초로서 결정하였다. 혈장 샘플을 분석하여 임상 평가에 관련되는 화합물에 대한 노출을 결정하였다. 소양증은 실시예 화합물 12를 사용한 치료의 10일 후에 실질적으로 감소되었다. 이는 표 6 및 도 13에 의해 설명된다.
표 6: 위약과 비교하여 실시예 화합물 12를 사용한 치료 후 기준선에 비한 소양증 행동의 감소 (치료 후 열거된 날에 기준선으로부터의 퍼센트-변화로서 제시됨)
Figure 112018118699939-pct00068
도 1: 실시예 화합물 12에 대한 인간 단핵구-생성 DC에서의 IL-23의 억제. 데이터는 평균 값과 표준 편차로서 제시된다.
도 2: 실시예 화합물 12에 대한 (a) 이미퀴모드 (R837)- 또는 (b) CpG-A-자극 인간 형질세포양 DC에서의 INF-α의 억제. 데이터는 평균 값과 표준 편차로서 제시된다.
도 3: 실시예 화합물 11을 사용한 LPS-유발된 염증의 치료는 분비된 TNF-α의 감소된 양으로 이어진다. 데이터는 평균 값과 표준 편차로서 제시된다.
도 4: 실시예 화합물 11 (좌측) 및 12 (우측)를 사용한 IL-1β-유발된 염증의 치료는 분비된 TNF-α의 양의 용량-의존성 감소로 이어진다. 데이터는 평균 값과 표준 편차로서 제시된다.
도 5: 류마티스 관절염의 동물 모델 (아주반트-유발된 래트 모델)에서의 실시예 화합물 11의 항염증 효과. 류마티스성 관절 염증의 유의하고 용량-의존성인 억제를 질환 활성 점수에 기초하여 측정하였다. 데이터는 평균 값 + 표준 편차에 상응한다. 단일-인자 ANOVA 분산 분석과 던넷 시험에 의한 CFA 대조군과의 후속적인 다중 비교 분석; *p < 0.05; **p < 0.01;***p < 0.001; ****p < 0.0001.
도 6: 류마티스 관절염의 동물 모델 (콜라겐 항체-유발된 마우스 모델)에서의 실시예 화합물 12의 항염증 효과. 류마티스성 관절 염증의 유의하고 용량-의존성인 억제를 질환 활성 점수에 기초하여 측정하였다. 데이터는 평균 값 + 표준 편차에 상응한다. 콜라겐 항체 (AK) 대조군과 치료군 사이의 통계적 유의성은 단일-인자 ANOVA 분산 분석과 후속적인 다중 비교 분석 (던넷 시험)에 의해 계산하였다 (*p < 0.05; **p < 0.01;***p < 0.001; ****p < 0.0001).
도 7: 실시예 화합물 12에 대한 개 PBMC에 의한 LPS-유도된 TNFα 생산의 억제. 데이터는 평균 값과 표준 편차로서 제시된다.
도 8: 1 μg/ml LPS에 의해 유도된 소 PBMC에 의한 TNFα 생산의 실시예 화합물 12에 의한 용량-의존성 억제 (동역학적 측정). 데이터는 각각 이중으로 측정된 생물학적 삼중값의 평균 값과 표준 편차를 보여준다. 이 곡선으로부터 결정된 IC50 값은 120 nM이다.
도 9: 0.1 μg/ml LPS에 의해 유도된 소 PBMC에 의한 TNFα 생산의 실시예 화합물 12에 의한 용량-의존성 억제 (동역학적 측정). 데이터는 각각 이중으로 측정된 생물학적 삼중값의 평균 값과 표준 편차를 보여준다. 이 곡선으로부터 결정된 IC50 값은 70.5 nM이다.
도 10: 0.1 ng/ml LPS에 의해 유도된 돼지 PBMC에 의한 TNFα 생산의 10 μM의 실시예 화합물 12에 의한 억제 (동역학적 측정). 데이터는 각각 이중으로 측정된 생물학적 삼중값의 평균 값과 표준 편차를 보여준다.
도 11: 실시예 화합물 12를 사용한 집 먼지 응애 유발된 개 알레르기성 피부염 모델의 치료는 홍반을 감소시킨다 (a). 데이터는 평균 값과 표준 편차로서 제시된다.
도 12: 실시예 화합물 12를 사용한 집 먼지 응애 유발된 개 알레르기성 피부염 모델의 치료는 부종을 감소시킨다 (b). 데이터는 평균 값과 표준 편차로서 제시된다.
도 13: 벼룩 알레르기 피부염의 동물 모델에서의 실시예 화합물 12의 항소양 효과. 데이터는 중앙값에 상응하는 기준선으로부터의 퍼센트 변화로서 표시된다.

Claims (27)

  1. 화학식
    Figure 112023004810596-pct00086

    의 화합물 또는 그의 부분입체이성질체, 거울상이성질체, 염, 용매화물 또는 염의 용매화물을 포함하는, 개에서의 알레르기성 피부염의 치료 및/또는 예방에 사용하기 위한 의약.
  2. 제1항에 있어서, 알레르기성 피부염이 아토피성 피부염인 의약.
  3. 제1항에 있어서, 알레르기성 피부염이 벼룩 알레르기 피부염인 의약.
  4. 제2항에 있어서, 의약이 체중 1 kg 당 10 mg의 용량을 전달하는 양의 화합물을 포함하는 정제 또는 캡슐의 형태인 의약.
  5. 제3항에 있어서, 의약이 체중 1 kg 당 20 mg의 용량을 전달하는 양의 화합물을 포함하는 정제 또는 캡슐의 형태인 의약.
  6. 제1항에 있어서, 적어도 하나의 불활성, 비-독성, 제약상 적합한 부형제를 추가로 포함하는 의약.
  7. 제1항에 있어서, 알레르기성 피부염이 아토피성 피부염 또는 벼룩 알레르기 피부염인 의약.
  8. 제1항에 있어서, 화합물이 제약상 허용되는 염의 형태인 의약.
  9. 제4항에 있어서, 화합물이 제약상 허용되는 염의 형태인 의약.
  10. 제5항에 있어서, 화합물이 제약상 허용되는 염의 형태인 의약.
  11. 화학식
    Figure 112022081680933-pct00087

    의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 개에서의 알레르기성 피부염의 치료에 사용하기 위한, 경구로 투여가능한 정제 또는 캡슐 형태인 의약이며, 여기서 정제 또는 캡슐은 체중 1 kg 당 10 내지 20 mg의 용량을 전달하는 양의 화합물을 포함하는 의약.
  12. 삭제
  13. 삭제
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Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JO3705B1 (ar) 2014-11-26 2021-01-31 Bayer Pharma AG إندازولات مستبدلة جديدة، عمليات لتحضيرها، مستحضرات دوائية تحتوي عليها واستخدامها في إنتاج أدوية
EP3423446B1 (de) 2016-03-03 2020-09-16 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Neue 2-substituierte indazole, verfahren zu ihrer herstellung, pharmazeutische präparate die diese enthalten, sowie deren verwendung zur herstellung von arzneimitteln
MA44759B1 (fr) 2016-04-29 2024-01-31 Bayer Pharma AG Forme polymorphe de n-(6-(2-hydroxypropan-2-yl)-2-[2-(méthylsulfonyl)éthyl]-2h-indazol-5-yl)-6-(trifluorométhyl)pyridine-2-carboxamide
SG11201808686VA (en) 2016-04-29 2018-11-29 Bayer Pharma AG Synthesis of indazoles
SG11201810769QA (en) * 2016-06-01 2018-12-28 Bayer Pharma AG Use of 2-substituted indazoles for the treatment and prophylaxis of autoimmune diseases
WO2019076817A1 (en) 2017-10-19 2019-04-25 Bayer Animal Health Gmbh USE OF FUSED HETEROAROMATIC PYRROLIDONES FOR THE TREATMENT AND PREVENTION OF DISEASES IN ANIMALS
CN110835338A (zh) * 2018-08-17 2020-02-25 浙江海正药业股份有限公司 咪唑并吡啶类衍生物及其制备方法和其在医药上的用途
BR112021023292A2 (pt) 2019-05-23 2022-02-08 The Univ Of Montana Composto, formulação, composição de vacina, composição farmacêutica, e, método para modular uma resposta imune em um indivíduo
BR112022001568A2 (pt) * 2019-09-24 2022-03-22 Shanghai Meiyue Biotech Dev Co Ltd Composto, método para preparação do composto, composição farmacêutica, e, uso do composto
EP3800188A1 (en) 2019-10-02 2021-04-07 Bayer AG Substituted pyrazolopyrimidines as irak4 inhibitors
JP7429032B2 (ja) 2019-12-24 2024-02-07 学校法人順天堂 間質性肺炎モデル非ヒト動物の作製方法
CN113521079A (zh) * 2020-04-20 2021-10-22 上海领泰生物医药科技有限公司 Irak4抑制剂在治疗ali/ards中的应用
CN115300627B (zh) * 2021-05-08 2024-01-26 中南大学湘雅医院 钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂的应用、一种药物组合物及其应用
CN113402499B (zh) 2021-06-21 2022-05-13 上海勋和医药科技有限公司 一种亚磺酰亚胺取代的吲唑类irak4激酶抑制剂、制备方法及用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016008343A1 (en) 2014-07-18 2016-01-21 Beijing Zhigu Rui Tuo Tech Co., Ltd. Content sharing methods and apparatuses
JP2019517495A (ja) 2016-06-01 2019-06-24 バイエル・ファルマ・アクティエンゲゼルシャフト 自己免疫疾患を治療および予防するための２−置換インダゾールの使用
KR102083857B1 (ko) 2014-11-26 2020-03-03 바이엘 파마 악티엔게젤샤프트 신규 치환된 인다졸, 그의 제조 방법, 상기 신규 치환된 인다졸을 함유하는 제약 제제, 및 약물을 제조하기 위한 상기 신규 치환된 인다졸의 용도

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20050026535A (ko) * 2002-07-31 2005-03-15 쉐링 악티엔게젤샤프트 Ｖｅｇｆｒ-2 및 ｖｅｇｆｒ-3 억제성 안트라닐아미도피리딘
CN100393698C (zh) 2003-06-25 2008-06-11 第一药品(株) 三环衍生物或其药学上可接受的盐、其制备以及包含它们的药物组合物
WO2005082866A2 (en) 2004-02-20 2005-09-09 Pfizer Limited Substituted 1, 2, 4- triazole derivatives as oxytocin antagonists
CA2591332A1 (en) 2004-12-08 2006-06-15 Warner-Lambert Company Llc Methylene inhibitors of matrix metalloproteinase
TWI370820B (en) 2005-04-27 2012-08-21 Takeda Pharmaceutical Fused heterocyclic compounds
US7745477B2 (en) 2006-02-07 2010-06-29 Hoffman-La Roche Inc. Heteroaryl and benzyl amide compounds
EP1986643A1 (en) 2006-02-10 2008-11-05 Summit Corporation Plc Treatment of duchenne muscular dystrophy
US7879887B2 (en) 2006-06-29 2011-02-01 Nissan Chemical Industries, Ltd. α-amino acid derivatives and medicaments containing the same as an active ingredient
CA2663100A1 (en) 2006-09-07 2008-03-13 Biogen Idec Ma Inc. Indazole derivatives as modulators of interleukin-1 receptor-associated kinase
WO2009117421A2 (en) 2008-03-17 2009-09-24 Kalypsys, Inc. Heterocyclic modulators of gpr119 for treatment of disease
US20100094000A1 (en) 2008-09-03 2010-04-15 Takeda Pharmaceutical Company Limited Pyrazole compounds
WO2011153588A1 (en) 2010-06-10 2011-12-15 Biota Scientific Management Pty Ltd Viral polymerase inhibitors
US20140113898A1 (en) 2010-11-08 2014-04-24 Zalicus Pharmaceuticals Ltd. Bisarylsulfone and dialkylarylsulfone compounds as calcium channel blockers
RS55165B1 (sr) 2010-12-20 2017-01-31 Merck Serono Sa Indazolil triazol derivati kao irak inhibitori
CN103402985A (zh) 2011-02-10 2013-11-20 先正达参股股份有限公司 杀微生物的吡唑衍生物
EP2489663A1 (en) 2011-02-16 2012-08-22 Almirall, S.A. Compounds as syk kinase inhibitors
EP2675812B1 (en) 2011-02-18 2017-08-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Chroman - spirocyclic piperidine amides as modulators of ion channels
US8575336B2 (en) * 2011-07-27 2013-11-05 Pfizer Limited Indazoles
WO2013042137A1 (en) * 2011-09-19 2013-03-28 Aurigene Discovery Technologies Limited Bicyclic heterocycles as irak4 inhibitors
WO2013106254A1 (en) 2012-01-11 2013-07-18 Dow Agrosciences Llc Pesticidal compositions and processes related thereto
WO2013174744A1 (en) 2012-05-21 2013-11-28 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Thienopyrimidines
WO2015017336A1 (en) * 2013-07-29 2015-02-05 OmniGen Research, L.L.C. Combination and method for administration to an animal
TWI667233B (zh) * 2013-12-19 2019-08-01 德商拜耳製藥公司 新穎吲唑羧醯胺，其製備方法、含彼等之醫藥製劑及其製造醫藥之用途
US10160753B2 (en) * 2014-01-10 2018-12-25 Aurigene Discovery Technologies Limited Indazole compounds as IRAK4 inhibitors
TW201701879A (zh) * 2015-04-30 2017-01-16 拜耳製藥公司 Ｉｒａｋ４抑制劑組合
MA44759B1 (fr) * 2016-04-29 2024-01-31 Bayer Pharma AG Forme polymorphe de n-(6-(2-hydroxypropan-2-yl)-2-[2-(méthylsulfonyl)éthyl]-2h-indazol-5-yl)-6-(trifluorométhyl)pyridine-2-carboxamide
SG11201808686VA (en) * 2016-04-29 2018-11-29 Bayer Pharma AG Synthesis of indazoles

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016008343A1 (en) 2014-07-18 2016-01-21 Beijing Zhigu Rui Tuo Tech Co., Ltd. Content sharing methods and apparatuses
KR102083857B1 (ko) 2014-11-26 2020-03-03 바이엘 파마 악티엔게젤샤프트 신규 치환된 인다졸, 그의 제조 방법, 상기 신규 치환된 인다졸을 함유하는 제약 제제, 및 약물을 제조하기 위한 상기 신규 치환된 인다졸의 용도
JP2019517495A (ja) 2016-06-01 2019-06-24 バイエル・ファルマ・アクティエンゲゼルシャフト 自己免疫疾患を治療および予防するための２−置換インダゾールの使用

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