KR102540119B1 - Cultivation Method of Microbial Culture of Cordyceps sp. Comprising Vitamin D, and Microbial Culture Using the Same - Google Patents

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Abstract

본 발명은 비타민D 성분을 함유하는 동충하초 배양체의 제조방법 및 이에 따라 제조된 동충하초 배양체에 관한 것이다.
본 발명의 동충하초 배양체의 제조방법은 코디세핀, 아데노신, 및 폴리페놀 함량이 현저히 증가되고, 비타민D 성분이 새롭게 함유된 보리 동충하초 배양체를 제조할 수 있다.The present invention relates to a method for producing a culture of Cordyceps sinensis containing a vitamin D component and a culture of Cordyceps sinensis prepared thereby.
The method for producing a culture of Cordyceps sinensis of the present invention can produce a culture of barley Cordyceps sinensis in which the contents of cordycepin, adenosine, and polyphenol are remarkably increased, and the vitamin D component is newly contained.

Description

비타민D 성분을 함유하는 동충하초 배양체의 제조방법 및 이에 따라 제조된 동충하초 배양체{Cultivation Method of Microbial Culture of Cordyceps sp. Comprising Vitamin D, and Microbial Culture Using the Same}Manufacturing method of Cordyceps culture containing vitamin D component and Cordyceps culture produced thereby {Cultivation Method of Microbial Culture of Cordyceps sp. Comprising Vitamin D, and Microbial Culture Using the Same}

본 발명은 비타민D 성분을 함유하는 동충하초 배양체의 제조방법 및 이에 따라 제조된 동충하초 배양체에 관한 것이다.The present invention relates to a method for producing a culture of Cordyceps sinensis containing a vitamin D component and a culture of Cordyceps sinensis prepared thereby.

동충하초는 분류학적으로 자낭균강 맥각균과에 속하며 동충하초속 즉, 코디셉스속(Cordyceps sp.)에 속하는 버섯으로 예로부터 인삼, 녹용과 더불어 3대 보약의 하나로 알려져 왔으며, 세계적으로 300종, 우리나라는 20종 정도 분포하고 있으며, 현재 시넨시스, 밀리타리스, 눈꽃 동충하초 등 크게 3가지가 유통되고 있는 약용버섯이다. Cordyceps is a mushroom belonging to the genus Cordyceps sp. taxonomically and belongs to the Ascomomycete ergotaceae. There are only a few species distributed, and currently three types of medicinal mushrooms such as sinensis, militaris, and snow flower cordyceps are distributed.

동충하초는 분류학적으로 자낭균강 맥각균과에 속하며 동충하초속 즉, 코디셉스속(Cordyceps sp.)에 속하는 버섯으로 예로부터 인삼, 녹용과 더불어 3대 보약의 하나로 알려져 왔으며, 세계적으로 300종, 우리나라는 20종 정도 분포하고 있으며, 현재 시넨시스, 밀리타리스, 눈꽃 동충하초 등 크게 3가지가 유통되고 있는 약용버섯이다. Cordyceps is a mushroom belonging to the genus Cordyceps sp. taxonomically and belongs to the Ascomomycete ergotaceae. There are only a few species distributed, and currently three types of medicinal mushrooms such as sinensis, militaris, and snow flower cordyceps are distributed.

지금까지 알려진 동충하초의 인공재배방법은 동충하초가 곤충을 기주로 하여 자실체를 형성하는 방법이 주로 알려져 있는데, 그 예로, 대한민국 특허공개공보 제1998-023907호, 특허공개공보 제10-2004-0032001호, 특허등록공보 제10-0443200호, 특허공개공보 제10-1998-0033558호 등은 곤충을 이용하여 동충하초 자실체를 생산하는 방법을 개시하고 있다. As for the artificial cultivation method of Cordyceps sinensis known so far, a method in which Cordyceps sinensis forms a fruiting body using an insect as a host is mainly known. For example, Korean Patent Publication No. 1998-023907, Patent Publication No. Patent Registration Publication No. 10-0443200, Patent Publication No. 10-1998-0033558, etc. disclose methods for producing Cordyceps sinensis fruiting bodies using insects.

이외에도, 본 발명자들이 종래 연구하여 출원한 특허등록 제10-2123594호는 배암차즈기 추출액을 이용하여 도라지 또는 천마의 약성이 함유된 기능성 동충하초 자실체를 재배하는 방법을 공개한 바 있다. In addition, Patent Registration No. 10-2123594 filed by the present inventors has disclosed a method for cultivating functional Cordyceps sinensis fruiting bodies containing medicinal properties of Bellflower or Chunma using baeam chazuki extract.

한편, 해죽순(Nypa fruticans Wurmb)은 대니, 니파팜, 니파야자라고도 불리며, 천남성과에 속한 식물로서, 미얀마, 인도네시아, 필리핀 등 동남아시아의 강어귀의 민물이나 소금기 있는 해변에서 재배된다. 해죽순은 '바다에서 나는 죽순'이란 뜻으로 어린 새순의 모습이 우리나라의 죽순과 닮았기 때문에 붙여진 이름이다. 해죽순은 전통적으로 치아 염증에 쓰이던 식물로서, 최근에 한국에 수입되고 있다. 기존의 연구에 따르면 다량의 페놀산과 플라보노이드를 함유하고 있고, 그에 따라 항산화 효과 및 콜레스테롤 억제 효과 등이 우수하다고 보고되고 있다. On the other hand, Haejuksun ( Nypa fruticans Wurmb) is also called Danny, Nipa Palm, and Nipa Palm, and is a plant belonging to the Apiaceae family, and is cultivated in freshwater or salty beaches of estuaries in Southeast Asia, such as Myanmar, Indonesia, and the Philippines. Haejuksun means 'bamboo shoots from the sea', and the name was given because the appearance of young sprouts resembles Korean bamboo shoots. Haejuksun is a plant traditionally used for tooth inflammation and has recently been imported into Korea. According to previous studies, it has been reported that it contains large amounts of phenolic acids and flavonoids, and thus has excellent antioxidant effects and cholesterol-lowering effects.

그러나, 아직까지 해죽순을 이용한 버섯 재배 방법에 대해서는 알려진 바가 없다. However, there is still no known method for growing mushrooms using sea bamboo shoots.

이에, 본 발명자들은 동충하초 배양체에 함유되는 기능성 성분의 함량을 증진시키기 위한 연구를 수행하는 과정에서 다양한 식물 추출물을 이용하여 배지를 조성하고 이의 활성을 검증하는 과정에서 상기 해죽순 추출물을 동충하초 종균의 배양 배지로 사용되는 보리 배지의 증숙액 및 배양된 동충하초 배양체를 증숙하는 증숙액으로 사용하는 경우에, 재배된 동충하초 배양체에 함유된 기능성 성분들의 함량이 현저하게 증가되는 효과가 있으며, 아울러 종래 재배 방법을 적용하여 배양된 동충하초 배양체에는 전혀 존재하지 않던 성분인 비타민D 성분이 새롭게 생성됨을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.Accordingly, the present inventors prepared a medium using various plant extracts in the course of conducting research to increase the content of functional components contained in the culture of Cordyceps sinensis, and in the course of verifying its activity, the Haejuksun extract was used to cultivate the Cordyceps sinensis spawn. When the steamed broth of barley medium used as a medium and the cultured cordyceps cultures are used as a steamed broth for steaming, there is an effect of significantly increasing the content of functional components contained in the cultivated cordyceps cultures, and in addition, the conventional cultivation method It was confirmed that vitamin D, a component that did not exist at all in the cultured Cordyceps sinensis culture, was newly generated, and the present invention was completed.

따라서, 본 발명의 주된 목적은 코디세핀, 아데노신, 폴리페놀 등 기능성 성분의 함량이 현저하게 증가되고, 종래 재배 방법을 적용하여 배양된 동충하초 배양체에는 전혀 존재하지 않는 성분인 비타민D 성분이 새롭게 생성되는 보리 동충하초 배양체의 제조방법을 제공하는 데 있다.Therefore, the main object of the present invention is to significantly increase the content of functional components such as cordycepin, adenosine, and polyphenols, and to newly produce vitamin D, a component that does not exist in Cordyceps cultures cultured by applying conventional cultivation methods. It is to provide a method for producing barley cordyceps cultures.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.Other objects and advantages of the present invention will become more apparent from the following detailed description of the invention, claims and drawings.

본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 종균배양 배지에서 동충하초 종균을 배양하는 배양단계; 해죽순 추출액으로 보리를 증숙 처리하여 보리 배지를 준비하는 단계; 상기 증숙된 보리 배지에 상기 동충하초 종균을 접종하고 배양하여 동충하초 배양체를 수득하는 단계; 및 상기 수득한 동충하초 배양체를 해죽순 추출액으로 증숙하는 단계;를 포함하는 동충하초 배양체의 제조방법을 제공한다.According to one aspect of the present invention, the present invention provides a culturing step of culturing Cordyceps sinensis in a seed culture medium; Preparing a barley medium by steaming barley with sea bamboo shoot extract; Obtaining a culture of Cordyceps sinensis by inoculating and culturing the Cordyceps fungus in the steamed barley medium; and steaming the obtained cultured Cordyceps sinensis with Haejuksun extract.

본 발명의 동충하초 배양체의 제조방법에서, 상기 동충하초 배양체를 증숙하는 단계에 선행하여 상기 동충하초 배양체를 건조하는 단계를 더 포함할 수 있다.In the manufacturing method of the cultured Cordyceps sinensis of the present invention, the step of drying the cultured Cordyceps sinensis may be further included prior to the step of steaming the cultured Cordyceps sinensis.

본 발명의 동충하초 배양체의 제조방법에서, 상기 보리 배지를 준비하는 단계는 보리 및 해죽순 추출물을 1 : 1.5~2.5(w/v)의 비율로 밀폐된 용기에 투입한 후, 105℃ 내지 115℃에서 10분 내지 20분 동안 증숙하는 방식으로 멸균된 보리 배지를 준비할 수 있다.In the method for producing a culture of Cordyceps sinensis of the present invention, the step of preparing the barley medium is to put the barley and haejuksun extracts in a ratio of 1: 1.5 to 2.5 (w / v) in a sealed container, and then to 105 ° C to 115 ° C A sterilized barley medium can be prepared by steaming for 10 to 20 minutes in

본 발명의 동충하초 배양체의 제조방법에서, 상기 동충하초 배양체를 수득하는 단계는 상기 멸균된 보리 배지 100 중량부를 기준으로 동충하초 종균 40 내지 48 중량부를 접종하고 배양할 수 있다.In the method for preparing a cultured Cordyceps sinensis of the present invention, in the step of obtaining the cultured Cordyceps sinensis, 40 to 48 parts by weight of the Cordyceps sinensis spawn may be inoculated and cultured based on 100 parts by weight of the sterilized barley medium.

본 발명의 동충하초 배양체의 제조방법에서, 상기 배양은 온도 19℃~23℃, 습도 45%~60%, 및 조도 900Lux~1,100Lux의 조건에서 45일 내지 50일 동안 배양할 수 있다.In the method for producing a culture of Cordyceps sinensis of the present invention, the culture can be cultured for 45 to 50 days under the conditions of a temperature of 19 ° C. to 23 ° C., humidity of 45% to 60%, and illumination of 900 Lux to 1,100 Lux.

본 발명의 동충하초 배양체의 제조방법에서, 상기 동충하초 배양체를 해죽순 추출액으로 증숙하는 단계는 동충하초 배양체 중량 대비 1.5 내지 2배 중량의 해죽순 추출액을 첨가한 후, 105~115℃에서 110분 내지 20분 동안 수행할 수 있다.In the method for producing the cultured Cordyceps sinensis of the present invention, the step of steaming the cultured Cordyceps sinensis with Haejuksun extract is 110 minutes to 20 minutes at 105 ~ 115 ℃ after adding 1.5 to 2 times the weight of Haejuksun extract compared to the weight of the Cordyceps sinensis culture. can be performed during

본 발명의 동충하초 배양체의 제조방법에서, 상기 수득한 동충하초 배양체를 추출하는 단계; 및 상기 추출된 동충하초 배양체를 농축하는 단계;를 더 포함할 수 있다.In the method for producing a cultured Cordyceps sinensis of the present invention, extracting the obtained cultured Cordyceps sinensis; And concentrating the extracted culture of Cordyceps sinensis; may further include.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 본 발명의 동충하초 배양체의 제조방법에 따라 제조된 비타민D 성분을 함유하는 동충하초 배양체를 제공한다.According to another aspect of the present invention, the present invention provides a cultured Cordyceps sinensis containing a vitamin D component prepared according to the method for producing a cultured Cordyceps sinensis of the present invention.

본 발명자들은 동충하초 배양체에 함유된 지표물질인 코디세핀의 함량을 증가시켜 동충하초 배양체의 기능성을 더욱 향상시키기 위해 예의 연구노력 하였다. The present inventors intensively researched to further improve the functionality of the cultured Cordyceps sinensis by increasing the content of cordycepin, an indicator substance contained in the cultured Cordyceps sinensis.

이 과정에서 동충하초 종균의 활력을 부여하기 위한 다양한 식물소재 추출물을 적용하였고, 동충하초 종균을 접종하게 되는 보리 배지에 해죽순 추출물을 이용하여 증숙한 뒤 접종하고, 이렇게 증숙하여 멸균된 보리 배지에 동충하초 종균을 접종하게 되면 코디세핀 등 기능성 성분들의 함량이 더욱 증가하는 것을 확인하였다. 이에, 동충하초 배양체를 제조하는 다양한 단계에 해죽순 추출물을 적용하였고, 배양된 동충하초 배양체를 해죽순 추출액으로 증숙하는 경우 종래 동충하초 배양체에는 전혀 존재하지 않던 비타민D 성분이 새롭게 생성되고, 기존 기능성 성분들의 함량도 증가되는 것을 국가공인 시험기관에 의뢰하여 확인받았으며, 이를 통해 기능성 성분의 함량이 증가되고, 비타민D 성분을 새롭게 함유하는 동충하초 배양체의 최적화 제조방법을 개발하게 되었다. In this process, various plant material extracts were applied to impart vitality to the Cordyceps sinensis spawn, and the barley medium to be inoculated with the Cordyceps sinensis spawn was steamed using sea bamboo shoot extract and then inoculated, and the steamed and sterilized barley medium was inoculated When inoculated, it was confirmed that the content of functional ingredients such as cordycepin was further increased. Therefore, sea bamboo shoot extract was applied to various stages of manufacturing a culture of Cordyceps sinensis, and when the cultured culture of Cordyceps sinensis is steamed with sea bamboo shoot extract, a vitamin D component that did not exist in the conventional culture of Cordyceps sinensis is newly produced, and the content of existing functional ingredients It was confirmed by requesting a nationally recognized test institute that the increase in

본 발명의 동충하초 배양체의 제조방법에 따라 제조된 동충하초 배양체는 기능성 성분의 함량이 현저하게 개선되고, 비타민D 성분을 새롭게 함유하는 것을 특징으로 한다. 구체적으로, 본 발명의 바람직한 실시예에서는 해죽순 추출액을 이용하여 보리 배지를 증숙하고, 추가로 동충하초 배양체를 증숙하는 방식으로 제조된 본 발명의 동충하초 배양체는 해죽순 추출물을 이용하여 보리 배지 및 배양체를 증숙 처리하지 않은 비교예 1의 동충하초 배양체 시료에 비해 6배 정도 증가된 아데노신 성분이 검출되는 것을 확인할 수 있었고, 해죽순 추출물을 사용하지 않고, 일반 정제수를 이용하여 증숙 과정을 거친 비교예 2의 동충하초 배양체와 비교하여도 아데노신 함량이 17.4% 증가하는 것을 확인할 수 있었다(도 2 내지 도 4).The culture of Cordyceps sinensis prepared according to the production method of the culture of Cordyceps sinensis of the present invention is characterized by significantly improved content of functional components and newly containing vitamin D component. Specifically, in a preferred embodiment of the present invention, the culture of Cordyceps sinensis of the present invention prepared by steaming the barley medium using the Haejuksun extract and further steaming the cultured culture of Cordyceps sinensis uses the Haejuksun extract to prepare the barley medium and the cultured body. Compared to the Cordyceps culture sample of Comparative Example 1 that was not steamed, it was confirmed that an adenosine component increased by about 6 times was detected. It was confirmed that the adenosine content increased by 17.4% compared to the cultured body (Figs. 2 to 4).

또한, 본 발명의 동충하초 배양체의 제조방법을 적용하여 생산된 동충하초 배양체에 대한 성분분석을 식약처 국가공인기관에 의뢰하였고, 비타민D 성분의 함량 증가가 실질적으로 발생하였음을 확인받았으며, 보리 배지의 증숙 과정과 동충하초 배양체의 증숙 과정에서 해죽순 추출액을 사용으로 비타민 D 성분이 유의하게 증가하는 것을 확인할 수 있었다(도 5 및 도 6 참조). In addition, component analysis of the Cordyceps cultures produced by applying the method of manufacturing the cultures of Cordyceps sinensis of the present invention was requested to the Ministry of Food and Drug Safety, and it was confirmed that the increase in the content of vitamin D actually occurred, and the steaming of the barley medium It was confirmed that the vitamin D component was significantly increased by using Haejuksun extract during the steaming process and the process of steaming the culture of Cordyceps sinensis (see FIGS. 5 and 6).

이외에도, 본 발명의 동충하초 배양체의 제조방법을 적용하여 생산된 동충하초 배양체는 4561.44ppm(mg/kg) 농도의 코디세핀이 생성되어 종래 방식 대비 2.5배 이상 증가한 코디세핀 함량을 갖는 것을 확인할 수 있었으며(도 7 및 도 8 참조), 해죽순을 사용하지 않은 동충하초 배양체(비교예 1)에 비해 DPPH 소거능은 40% 이상, 총 플라보노이드 함량은 150% 정도, 총 폴리페놀 함량은 42% 정도 증가된 것을 확인할 수 있었다(도 9 및 도 10 참조). In addition, it was confirmed that the cordyceps culture produced by applying the method for manufacturing the culture of Cordyceps sinensis of the present invention produced cordycepin at a concentration of 4561.44 ppm (mg / kg), which increased by more than 2.5 times compared to the conventional method (Fig. 7 and 8), DPPH scavenging ability was increased by more than 40%, total flavonoid content by about 150%, and total polyphenol content by about 42% compared to the Cordyceps culture without sea bamboo shoots (Comparative Example 1). There was (see FIGS. 9 and 10).

상기와 같은 결과를 통해 본 발명의 동충하초 배양체의 제조방법을 적용하여 생산된 동충하초 배양체는 종래 동충하초에 포함된 기능성 성분인 코디세핀과 아데노신 함량이 현저하게 증가되고, 항산화 활성도 개선되며, 추가적으로 비타민D 성분이 새롭게 함유되어, 식품산업 또는 화장품 산업 등 산업 전반에서 기능성 식의약품 소재로 충분하게 사용될 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.Through the above results, the cordyceps culture produced by applying the method of manufacturing the culture of Cordyceps sinensis of the present invention significantly increased the content of cordycepin and adenosine, which are functional components included in conventional Cordyceps sinensis, and improved antioxidant activity, and additionally vitamin D component. It was newly contained, and it was confirmed that it could be sufficiently used as a functional food and drug material throughout the industry, such as the food industry or the cosmetics industry, and the present invention was completed.

이하, 도 1을 참조하여 본 발명의 동충하초 배양체의 제조방법을 단계별로 보다 구체적으로 설명한다.Hereinafter, with reference to FIG. 1, the manufacturing method of the Cordyceps sinensis culture of the present invention will be described in more detail step by step.

먼저, 본 발명의 보리 동충하초 배양체의 제조방법은 종균배양 배지에서 동충하초 종균을 배양하는 배양단계를 통해 동충하초 종균을 확보하게 된다. 동충하초 종균은 동충하초(Cordyceps militaris)의 자낭포자를 분리배양하여 확보할 수 있는데, 이때 사용되는 종균배양 배지는 당업계에 공지된 어떠한 배지를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 PDA(Potato Dextrose Agar) 배지 또는 PDB(Potato Dextrose Broth) 배지를 종균배양 배지로 이용하여 배양할 수 있다. First, in the method for producing a cultured barley cordyceps sinensis of the present invention, the cordyceps sinensis spawn is secured through a culturing step of culturing the cordyceps sinensis in a spawn culture medium. Cordyceps sinensis spawn can be obtained by isolating and culturing ascospores of Cordyceps militaris . Any medium known in the art can be used as the spawn culture medium used in this case, preferably PDA (Potato Dextrose Agar) medium or It can be cultured using PDB (Potato Dextrose Broth) medium as a spawn culture medium.

상기 종균배양 배지를 이용하여 어느 정도 배양된 동충하초 종균은 확대배양 배지를 이용하여 증식시킬 수 있다. 본 발명의 바람직한 실시예에서는 상기 확대배양 배지의 조성으로 PDA(Potato Dextrose Agar) 0.5 내지 1 중량부, 대두분 1 내지 3 중량부, 설탕 1 내지 5 중량부, MgSO4 0.2 내지 0.7 중량부, KH2PO4 0.2 내지 0.7 중량부, 및 보리 0.2 내지 1 중량부로 구성된 확대배양 배지를 사용한 바 있다. 또한, 확대 배양 중에 발생하는 거품 생성을 방지하기 위해 미량의 소포체를 첨가할 수도 있다. The cordyceps seed cultured to some extent using the spawn culture medium can be proliferated using the expansion culture medium. In a preferred embodiment of the present invention, as the composition of the expansion culture medium, PDA (Potato Dextrose Agar) 0.5 to 1 part by weight, soybean flour 1 to 3 parts by weight, sugar 1 to 5 parts by weight, MgSO 4 0.2 to 0.7 parts by weight, KH An expansion medium composed of 0.2 to 0.7 parts by weight of 2 PO 4 and 0.2 to 1 part by weight of barley has been used. In addition, a small amount of endoplasmic reticulum may be added to prevent foaming during expansion.

상기 종균배양 단계를 통해 확보된 동충하초 종균은 해죽순 추출액으로 보리를 증숙 처리하여 보리 배지에 접종되어 배양된다. 상기 보리는 생보리를 증숙하여 사용할 수 있는데, 겉보리는 식감을 개선하기 위해 도정하여 쌀겨를 제거한 겉보리를 사용할 수 있고, 쌀보리는 도정하지 않은 쌀보리를 사용할 수 있다.The Cordyceps sinensis spawn obtained through the spawn culture step is inoculated into a barley medium by steaming barley with Haejuksun extract and cultured. The barley may be used by steaming raw barley, and unpeeled barley may be used to improve the texture of unpeeled barley, and unpeeled barley may be used for unpeeled barley.

상기 보리 배지를 증숙하는데 사용되는 해죽순 추출액은 해죽순(Nypa fruticans Wurmb)의 추출 처리에 의하여 얻어지는 추출액, 상기 추출액의 희석액이나 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다. Haejuksun extract used for steaming the barley medium is an extract obtained by the extraction treatment of Nypa fruticans Wurmb, a diluted or concentrated solution of the extract, a dried product obtained by drying the extract, and a crude or purified product of the extract. , or mixtures thereof, including extracts of all formulations that can be formed using the extract itself and the extract.

또한, 상기 보리 배지를 증숙하는데 사용되는 해죽순 추출액은 증숙되는 보리를 기준으로 1 : 1.5~2.5(w/v) 비율로 혼합되어 밀폐된 용기에 투입되는 것이 바람직하다. 상기 해죽순 추출액이 보리를 기준으로 1.5(w/v) 미만인 경우에는 동충하초 종균의 활력을 증진시키는 효과가 크지 않으며, 2.5(w/v)를 초과하는 경우에는 투입되는 해죽순 추출액 대비 그 효과가 크지 않다. 상기 증숙은 105℃ 내지 115℃에서 10분 내지 20분 동안 증숙하는 과정을 거치게 되는데, 해죽순 추출액이 증숙과정을 거치면서 보리 배지에 골고루 흡수되게 되며, 보리에 침투한 잡균을 제거하여 배지를 멸균하는 효과도 있다. In addition, it is preferable that the sea bamboo shoot extract used for steaming the barley medium is mixed in a ratio of 1: 1.5 to 2.5 (w/v) based on the steamed barley and put into a sealed container. If the sea bamboo shoot extract is less than 1.5 (w / v) based on barley, the effect of enhancing the vitality of the Cordyceps sinensis spawn is not large, and if it exceeds 2.5 (w / v), the effect is higher than that of the sea bamboo shoot extract added not big. The steaming process is carried out at 105 ° C. to 115 ° C. for 10 to 20 minutes. The sea bamboo shoot extract is evenly absorbed into the barley medium through the steaming process, and the medium is sterilized by removing various germs penetrating into the barley There is also an effect of

상기 증숙된 보리 배지에 상기 동충하초 종균을 접종하고 45일 내지 50일 동안 배양하여 동충하초 배양체를 형성하게 되는데, 상기 멸균된 보리 배지 100 중량부를 기준으로 동충하초 종균 40 내지 48 중량부를 접종하고 배양할 수 있다. 접종되는 동충하초 종균의 비율이 상기 범위 미만이면 동충하초 균사체의 증식이 제대로 이루어지지 않아 코디세핀 등 기능성 성분의 생성이 충분하게 이루어지지 않으며, 접종되는 동충하초 종균의 비율이 상기 범위를 초과하면, 충분한 영양성분 공급이 이루어지지 않아 동충하초 균사체의 생장이 충분하게 이루어지지 않는다.The Cordyceps sinensis spawn is inoculated into the steamed barley medium and cultured for 45 to 50 days to form a Cordyceps sinensis culture. 40 to 48 parts by weight of the Cordyceps sinensis spawn can be inoculated and cultured based on 100 parts by weight of the sterilized barley medium. . If the ratio of the inoculated Cordyceps sinensis is less than the above range, the growth of Cordyceps sinensis mycelium is not performed properly, and functional ingredients such as cordycepin are not sufficiently produced. Due to insufficient supply, the growth of Cordyceps sinensis mycelium is not sufficiently performed.

상기 해죽순 추출액으로 증숙한 보리 배지 상에서 동충하초 종균은 균사체를 형성하고 증식하게 되는데, 대략 45일 내지 50일 정도의 기간에 충분하게 성장하게 되며, 50일이 경과하면 동충하초 균사체의 노화가 진행되고 영양성분의 손실이 발생하여 바람직하지 않다.On the barley medium steamed with the sea bamboo shoot extract, the Cordyceps sinensis spawn forms and proliferates mycelium, and it grows sufficiently in a period of about 45 to 50 days, and after 50 days, the aging of the Cordyceps sinensis mycelium progresses This is undesirable because loss of components occurs.

또한, 상기 동충하초 배양체를 수득하는 단계의 배양은 온도 19℃~23℃, 습도 45%~60%, 및 조도 900Lux~1,100Lux의 조건에서 배양하는 것이 바람직하다. 구체적으로 19℃ 미만의 온도에서는 종균 활성이 저하되고, 23℃를 초과하는 온도에서는 동충하초 종균이 활성화되기 전에 다른 부패균들의 먼저 생장하여 배지의 오염이 발생할 우려가 있으므로 19℃~23℃의 온도에서 배양하는 것이 바람직하다. 또한, 45% 미만의 습도에서는 동충하초 종균의 활성이 저하되고, 60%를 초과하는 습도에서는 동충하초 종균이 부패하거나 변질되는 문제점이 있어 45%~60%의 습도에서 배양하는 것이 바람직하다. 또한, 조도 900Lux~1,100Lux 조건에서 배양하는 것이 바람직한데, 1,100Lux 초과의 조도에서 배양하는 경우 배양체의 색이 너무 짙어지고, 900Lux 미만의 조도에서 배양하는 경우 배양체의 색이 너무 옅어져서 상기 조도 조건에서 배양하는 것이 바람직하다. In addition, the culturing in the step of obtaining the Cordyceps sinensis culture is preferably cultured under the conditions of a temperature of 19 ° C to 23 ° C, a humidity of 45% to 60%, and an illuminance of 900 Lux to 1,100 Lux. Specifically, at temperatures below 19 ° C, spawn activity is reduced, and at temperatures above 23 ° C, other putrefying fungi grow first before activation of cordyceps fungi, causing contamination of the medium. So culture at a temperature of 19 ° C to 23 ° C It is desirable to do In addition, at a humidity of less than 45%, the activity of Cordyceps sinensis is reduced, and at a humidity of more than 60%, there is a problem that the Cordyceps sinensis spawn decays or deteriorates, so it is preferable to culture at a humidity of 45% to 60%. In addition, it is preferable to incubate under conditions of illumination of 900 Lux to 1,100 Lux. When cultured at an illumination intensity of more than 1,100 Lux, the color of the cultured body becomes too dark, and when cultured at an illumination intensity of less than 900 Lux, the color of the cultured body becomes too pale. It is preferable to cultivate in

상기와 같은 조건에서 배양된 동충하초 배양체는 해죽순 추출액을 이용하여 증숙하는 단계를 수행하게 된다. 상기 동충하초 배양체를 증숙하는 단계에 선행하여 상기 동충하초 배양체를 건조하는 단계를 더 포함할 수 있는데, 증숙 단계에 선행하여 건조 단계를 거치게 되면, 동충하초 배양체의 형태가 균일하게 유지되는 장점이 있고, 동충하초 배양체 내에 존재하는 전분, 탄수화물 등의 성분들이 증숙과정에서 흘러내리지 않아 영양성분의 손실을 예방하는 효과가 있다. The culture of Cordyceps sinensis cultured under the above conditions is subjected to a step of steaming using Haejuksun extract. The step of drying the cultured Cordyceps sinensis may be further included prior to the step of steaming the cultured Cordyceps sinensis. When the drying step is preceded by the steaming step, there is an advantage in maintaining a uniform shape of the cultured Cordyceps sinensis, and the cultured Cordyceps sinensis Ingredients such as starch and carbohydrates present in the stew do not spill out during the steaming process, which is effective in preventing loss of nutrients.

상기 건조 과정은 당업계에서 통상적으로 사용되는 어떠한 건조 방법도 사용 가능하나 바람직하게는 보리 동충하초 배양체의 향미 성분 및 영양 성분의 손실을 최소화할 수 있는 건조 방법을 사용하여 건조하는 것이 바람직하다. 이를 위해 본 발명의 바람직한 실시예에서는 상기 배양된 보리 동충하초 배양체를 35℃ 조건에서 72시간 동안 저온 감압하는 방식으로 건조하였다. In the drying process, any drying method commonly used in the art can be used, but it is preferable to dry using a drying method that can minimize the loss of flavor and nutritional components of the barley cordyceps culture. To this end, in a preferred embodiment of the present invention, the cultured barley Cordyceps sinensis culture was dried under low temperature and reduced pressure for 72 hours at 35 ° C.

상기와 같이 배양이 완료된 동충하초 배양체, 또는 배양이 완료되어 건조된 동충하초 배양체는 해죽순 추출액을 이용하여 증숙 처리되는 과정을 거쳐 비타민D 성분이 동충하초 배양체 내에 새롭게 생성되게 된다. 이때 사용되는 해죽순 추출액은 상기 보리를 증숙할 때 사용되는 해죽순 추출액과 동일한 용액을 사용할 수 있으며, 동충하초 배양체 중량 대비 1.5 내지 2배 중량의 해죽순 추출액을 첨가한 후, 105~115℃에서 110분 내지 20분 동안 증숙할 수 있으며, 상기 조건에서 증숙과정을 수행하는 것이 동충하초 배양체 내에 아데노신, 코디세핀, 폴리페놀 등 기능성 성분의 함량을 증진하고, 비타민D 성분의 생성을 촉진하는 측면에서 바람직하다. As described above, the cultured Cordyceps sinensis, or the cultured Cordyceps sinensis, which has been cultured and dried, is steamed using sea bamboo shoot extract, so that vitamin D components are newly generated in the cultured Cordyceps sinensis. The sea bamboo shoot extract used at this time can use the same solution as the sea bamboo shoot extract used when steaming the barley. It can be steamed for 20 minutes to 20 minutes, and performing the steaming process under the above conditions is preferable in terms of increasing the content of functional ingredients such as adenosine, cordycepin, and polyphenol in the culture of Cordyceps sinensis and promoting the production of vitamin D components. .

또한, 상기와 같이 증숙 과정을 거친 동충하초 배양체는 건조 과정을 추가적으로 거칠 수 있는데, 이를 통해 동충하초 배양체의 형태가 균일하게 유지되고, 동충하초 배양체 내에 존재하는 전분, 탄수화물 등의 성분들이 흘러내리지 않아 영양성분의 손실을 예방하는 효과가 있다. In addition, the cultured Cordyceps sinensis that has undergone the steaming process as described above may additionally undergo a drying process, through which the shape of the cultured Cordyceps sinensis is maintained uniformly, and components such as starch and carbohydrates present in the cultured Cordyceps sinensis do not flow down, so that nutrients are reduced. It has the effect of preventing losses.

상기와 같은 증숙 단계를 거친 동충하초 배양체는 추가적으로 추출 단계 및 농축 단계를 거쳐 추출물 또는 농축물 형태로 가공할 수 있다. 상기 동충하초 배양체의 추출에 있어서, 상기 추출물을 추출하는 방법은 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용하는 방법에 따라 추출할 수 있다. 상기 추출 방법의 비제한적인 예로는, 용매분획법, 원심분리법 등을 들 수 있으며, 이들은 단독으로 수행되거나 2종 이상의 방법을 병용하여 수행될 수 있다.The culture of Cordyceps sinensis that has undergone the above steaming step can be further processed into an extract or concentrate form through an extraction step and a concentration step. In the extraction of the culture of Cordyceps sinensis, a method for extracting the extract is not particularly limited, and may be extracted according to a method commonly used in the art. Non-limiting examples of the extraction method include solvent fractionation, centrifugation, and the like, which may be performed alone or in combination with two or more methods.

상기와 같은 과정을 거쳐 동충하초 배양체는 코디세핀, 아데노신, 및 폴리페놀의 함량이 증가되고, 비타민D 성분이 새롭게 생성된 특징이 있다. Through the above process, the cordyceps cultures are characterized by an increased content of cordycepin, adenosine, and polyphenols, and a new vitamin D component.

본 발명의 보리 동충하초 배양체는 상술한 본 발명의 보리 동충하초 배양체의 제조방법에 의해 제조되는 것으로서, 이 둘 사이에 공통된 내용은 반복 기재에 따른 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여, 그 기재를 생략한다.The barley cordyceps culture of the present invention is prepared by the method for producing the barley cordyceps culture of the present invention described above, and the description of the common content between the two is omitted to avoid excessive complexity of the specification due to repetitive description.

본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:The features and advantages of the present invention are summarized as follows:

(1) 본 발명은 비타민D 성분을 함유하는 동충하초 배양체의 제조방법을 제공한다.(1) The present invention provides a method for producing a culture of Cordyceps sinensis containing a vitamin D component.

(2) 본 발명의 동충하초 배양체의 제조방법은 코디세핀, 아데노신, 및 폴리페놀 함량이 현저히 증가되고, 비타민D 성분이 새롭게 함유된 보리 동충하초 배양체를 제조할 수 있다. (2) The method for producing a cultured culture of Cordyceps sinensis of the present invention can produce a cultured barley Cordyceps sinensis in which the contents of cordycepin, adenosine, and polyphenol are remarkably increased and vitamin D is newly contained.

도 1은 본 발명의 동충하초 배양체의 제조방법을 설명하는 개략도이다.
도 2는 본 발명의 동충하초 배양체에 함유된 아데노신 함량을 측정한 시험성적서이다.
도 3은 보리배지 증숙 및 동충하초 배양체 증숙 과정에서 해죽순 추출액을 사용하지 않고 제조한 동충하초 배양체에 함유된 아데노신 함량을 측정한 시험성적서이다.
도 4는 동충하초 배양체 증숙 과정에서 해죽순 추출액을 사용하지 않고 제조한 동충하초 배양체에 함유된 아데노신 함량을 측정한 시험성적서이다.
도 5는 본 발명의 동충하초 배양체에 함유된 비타민D 함량을 식약처 인증 국가공인기관(제일분석센터)에 의뢰하여 측정한 시험성적서이다.
도 6은 국제공인 인증기관인 ㈜아이지씨인증원에 의뢰하여 해죽순 추출액을 사용하지 않고 제조한 동충하초 배양체에 함유된 비타민D 함량을 측정한 시험성적서이다.
도 7은 본 발명의 동충하초 배양체에 함유된 코디세핀 함량을 측정한 시험성적서이다.
도 8은 해죽순 추출액을 사용하지 않고 제조한 동충하초 배양체에 함유된 코디세핀 함량을 측정한 시험성적서이다.
도 9는 본 발명의 동충하초 배양체의 항산화 활성을 분석한 시험성적서이다.
도 10은 해죽순 추출액을 사용하지 않고 제조한 동충하초 배양체의 항산화 활성을 분석한 시험성적서이다. 1 is a schematic diagram illustrating a method for producing a culture of Cordyceps sinensis of the present invention.
Figure 2 is a test report measuring the adenosine content contained in the culture of Cordyceps sinensis of the present invention.
Figure 3 is a test report measuring the adenosine content contained in the cordyceps cultures prepared without using sea bamboo shoot extract in the process of steaming barley medium and steaming the cultures of Cordyceps sinensis.
Figure 4 is a test report measuring the adenosine content contained in the cultured Cordyceps sinensis prepared without using Haejuksun extract in the process of steaming the cultured Cordyceps sinensis.
5 is a test report measuring the vitamin D content contained in the culture of Cordyceps sinensis of the present invention by requesting the Ministry of Food and Drug Safety certified national accredited institution (First Analysis Center).
6 is a test report measuring the vitamin D content contained in the cultured cordyceps sinensis prepared without using Haejuksun extract by requesting IGC Certification, an internationally recognized certification institution.
7 is a test report measuring the content of cordycepin contained in the culture of Cordyceps sinensis of the present invention.
8 is a test report measuring the cordycepin content contained in the cultured cordyceps sinensis prepared without using Haejuksun extract.
Figure 9 is a test report analyzing the antioxidant activity of the culture of Cordyceps sinensis of the present invention.
10 is a test report analyzing the antioxidant activity of Cordyceps sinensis cultures prepared without using Haejuksun extract.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. Since these examples are intended to illustrate the present invention only, the scope of the present invention is not to be construed as being limited by these examples.

실시예 1. 보리 동충하초 배양체의 제조Example 1. Preparation of Barley Cordyceps Cultures

1-1. 종균 제조1-1. spawn manufacturing

농업회사법인 모이식품에서 재배된 동충하초(Cordyceps militaris)의 자낭포자를 분리하여 PDA(Potato Dextrose Agar) 배지에 넣고, 25℃로 항온기에서 20~30일 배양한 후, PDB(Potato Dextrose Broth)로 옮겨 25℃에서 5일간 진탕 배양하였다. Separate the ascospores of Cordyceps militaris grown in Feed Food, an agricultural company, put them in a PDA (Potato Dextrose Agar) medium, incubate in a thermostat at 25 ° C for 20 to 30 days, and then transfer to PDB (Potato Dextrose Broth) It was cultured with shaking at 25°C for 5 days.

상기 진탕 배양된 동충하초 종균의 증식을 위해 이를 확대배양 배지로 옮기고, 증식하였다. For the growth of the shake-cultured Cordyceps sinensis, it was transferred to an expansion medium and grown.

종균 확대 배양을 위해 사용한 배지는 PDB 0.5 내지 1 중량부, 대두분 1 내지 3 중량부, 설탕 1 내지 5 중량부, MgSO4 0.2 내지 0.7 중량부, KH2PO4 0.2 내지 0.7 중량부, 보리 0.2 내지 1 중량부와 미량의 소포체 및 증류수가 혼합되어 전체 100 중량부로 혼합된 배지를 사용하였다. The medium used for seed expansion culture includes 0.5 to 1 part by weight of PDB, 1 to 3 parts by weight of soybean flour, 1 to 5 parts by weight of sugar, 0.2 to 0.7 parts by weight of MgSO 4 , 0.2 to 0.7 parts by weight of KH 2 PO 4 , and 0.2 parts by weight of barley. To 1 part by weight, a small amount of vesicles and distilled water were mixed to use a mixed medium in a total of 100 parts by weight.

확대 배양은 25℃ 조건에서 5일간 진탕 배양하였고, 종균을 제조하였다. Expansion culture was shaken for 5 days at 25 ° C., and spawners were prepared.

1-2. 해죽순 추출액을 이용하여 증숙한 보리 배지의 준비1-2. Preparation of steamed barley medium using Haejuksun extract

도정한 겉보리와 도정하지 않은 쌀보리를 1:1 중량비로 혼합한 보리 50g을 준비하였다. 50 g of barley was prepared by mixing polished hulled barley and unpeeled rice barley in a 1:1 weight ratio.

또한, 해죽순 추출액은 건조된 해죽순 20g을 분쇄한 후, 40L의 정제수를 용매로 사용하여 12시간 동안 가온 환류추출한 후, 냉침 시키고, 1.2㎛ 투과 사이즈를 갖는 여과지로 여과하여 해죽순 추출액을 수득하였다.In addition, the sea bamboo shoot extract was pulverized by pulverizing 20 g of dried sea bamboo shoots, heated and refluxed for 12 hours using 40 L of purified water as a solvent, cooled, and filtered with a filter paper having a 1.2 μm permeation size to obtain sea bamboo shoot extract. did

상기 혼합 보리 50g에 상기 해죽순 추출액 100ml를 첨가하고, 고압스팀 멸균기(JSR, JSAT-105, 대한민국)에서 121℃, 35분 조건으로 증숙 처리를 수행하여 멸균처리된 보리 배지를 준비하였다. A sterilized barley medium was prepared by adding 100 ml of the sea bamboo shoot extract to 50 g of the mixed barley, and steaming in a high-pressure steam sterilizer (JSR, JSAT-105, Korea) at 121 ° C. for 35 minutes.

1-3. 접종 및 배양1-3. Inoculation and culture

상기 1-1에서 제조한 동충하초 종균 20~24g을 상기 1-2의 해죽순 추출액을 이용하여 멸균한 보리 배지 50g에 접종하고, 생육실에서 온도 19~23℃, 습도 45~60%, 조도 900~1100Lux 조건을 유지하면서 45~50일간 배양하였다. 20 to 24 g of Cordyceps sinensis spawn prepared in 1-1 above was inoculated into 50 g of barley medium sterilized using the haejuksun extract of 1-2 above, and in a growth chamber, temperature 19 ~ 23 ℃, humidity 45 ~ 60%, illuminance 900 It was cultured for 45 to 50 days while maintaining ~1100 Lux conditions.

1-4. 건조1-4. dry

상기 배양한 동충하초 배양체를 35℃, 감압조건에서 72시간 동안 저온 감압하여 건조하여 동충하초 배양체를 수득하였다.The cultured Cordyceps sinensis culture was dried under low temperature and reduced pressure at 35 ° C. under reduced pressure for 72 hours to obtain a Cordyceps sinensis culture.

1-5. 증숙1-5. steamed

상기 건조된 동충하초 배양체를 채반에 넣고, 상기 1-2에서 추출해 낸 해죽순 추출액을 상기 동충하초 배양체 중량의 1.5 내지 2.5배(w/v) 비율로 첨가한 후, 면포를 덮어 105~115℃에서 15분 동안 증숙하였다. The dried Cordyceps sinensis culture was placed in a sieve, and the sea bamboo shoot extract extracted in 1-2 was added at a rate of 1.5 to 2.5 times (w/v) the weight of the Cordyceps sinensis culture, and then covered with a cotton cloth at 105 to 115 ° C for 15 Boiled for minutes.

1-6. 건조1-6. dry

상기 증숙한 동충하초 배양체를 35℃, 감압조건에서 72시간 동안 저온 감압하여 건조하여 보리 동충하초 배양체를 수득하였다.The steamed Cordyceps sinensis culture was dried under low temperature and reduced pressure at 35 ° C. for 72 hours to obtain a barley Cordyceps culture.

1-7. 추출1-7. extraction

상기 건조 과정을 거친 보리 동충하초 배양체에 40배수의 정제수를 넣고, 110℃, 1.8~2기압(atm) 조건에서 6시간 동안 열수추출하여 동충하초 배양체 추출액을 수득하였다. 40-fold purified water was added to the barley cordyceps cultures subjected to the drying process, and hot water extraction was performed for 6 hours at 110 ° C. and 1.8 to 2 atmospheres (atm) to obtain an extract of the cordyceps cultures.

1-8. 농축1-8. concentration

상기 열수추출한 보리 동충하초 배양체 추출액을 60~70℃의 온도에서 저온진공농축을 수행하여 50% 수준으로 농축된 보리 동충하초 배양체 농축액을 수득하였다. The barley cordyceps culture extract obtained by hot water extraction was subjected to low-temperature vacuum concentration at a temperature of 60 to 70° C. to obtain a barley cordyceps culture concentrate concentrated to a level of 50%.

비교예 1. 해죽순 추출액으로 멸균 및 증숙하지 않은 보리 배지를 이용한 동충하초 배양체의 제조Comparative Example 1. Preparation of Cordyceps sinensis culture using barley medium that has not been sterilized and steamed with Haejuksun extract

실시예 1-2의 보리 배지의 증숙 과정 및 실시예 1-5의 동충하초 배양체의 증숙 과정에서 해죽순 추출액을 대신하여 일반 정제수로 증숙한 보리 배지를 사용하고, 일반 정제수로 동충하초 배양체를 증숙한 것을 제외하고, 상기 실시예 1과 동일한 방법을 사용하여 동충하초 배양체의 추출액과 농축액을 제조하였다. In the process of steaming the barley medium of Example 1-2 and the steaming process of the culture of Cordyceps sinensis of Example 1-5, a barley medium steamed with ordinary purified water was used instead of sea bamboo shoot extract, and the culture of Cordyceps sinensis was steamed with ordinary purified water. Except, extracts and concentrates of Cordyceps cultures were prepared using the same method as in Example 1 above.

비교예 2. 해죽순 추출액으로 멸균하지 않은 보리 배지를 이용한 동충하초 배양체의 제조Comparative Example 2. Preparation of Cordyceps sinensis culture using non-sterilized barley medium with Haejuksun extract

실시예 1-2의 보리 배지의 증숙 과정에서 해죽순 추출액을 대신하여 일반 정제수로 증숙한 보리 배지를 사용한 것을 제외하고, 상기 실시예 1과 동일한 방법을 사용하여 동충하초 배양체의 추출액과 농축액을 제조하였다. Extracts and concentrates of Cordyceps sinensis cultures were prepared in the same manner as in Example 1, except that in the steaming process of the barley medium of Example 1-2, barley medium steamed with general purified water was used instead of sea bamboo shoot extract. .

비교예 3. 해죽순 추출액으로 증숙하지 않은 동충하초 배양체의 제조Comparative Example 3. Preparation of Cordyceps sinensis culture not steamed with Haejuksun extract

실시예 1-5의 동충하초 배양체의 증숙 과정에서 해죽순 추출액이 첨가되지 않은 정제수를 이용하여 증숙한 것을 제외하고, 상기 실시예 1과 동일한 방법을 사용하여 동충하초 배양체의 추출액과 농축액을 제조하였다.Extracts and concentrates of the cultures of Cordyceps sinensis were prepared in the same manner as in Example 1, except that in the steaming process of the cultures of Cordyceps sinensis of Examples 1-5, the extracts and concentrates of the cultures of Cordyceps sinensis were prepared.

실험예 1. 보리배지 멸균 여부에 따른 아데노신 함량분석Experimental Example 1. Adenosine content analysis according to barley medium sterilization

실시예 1의 동충하초 배양체 시료와, 비교예 1, 및 비교예 2의 동충하초 배양체 시료를 채취하여 아데노신 함량을 분석하였다. The Cordyceps sinensis culture sample of Example 1 and the Cordyceps sinensis culture sample of Comparative Example 1 and Comparative Example 2 were collected and analyzed for adenosine content.

아데노신 함량 분석은 ㈜KOTITI 시험연구원에 의뢰하여 분석하였고, 그 결과를 하기 [표 1]에 정리하였다(도 2 내지 도 4 참조). Adenosine content analysis was analyzed by requesting KOTITI Co., Ltd., and the results are summarized in [Table 1] (see FIGS. 2 to 4).

[표 1][Table 1]

Figure 112020130785774-pat00001
Figure 112020130785774-pat00001

분석결과, 해죽순 추출액을 이용하여 보리 배지를 증숙하고, 추가로 동충하초 배양체를 증숙하는 방식으로 제조된 본 발명의 동충하초 배양체는 해죽순 추출물을 이용하여 보리 배지 및 배양체를 증숙 처리하지 않은 비교예 1의 동충하초 배양체 시료에 비해 6배 정도 증가된 아데노신 성분이 검출되는 것을 확인할 수 있었다. As a result of the analysis, the culture of Cordyceps sinensis of the present invention prepared by steaming the barley medium using the Haejuksun extract and further steaming the culture of Cordyceps sinensis is Comparative Example 1 in which the barley medium and the cultured body are not steamed using the Haejuksun extract It was confirmed that an adenosine component increased by about 6 times compared to that of the Cordyceps sinensis culture sample was detected.

또한, 해죽순 추출물을 사용하지 않고, 일반 정제수를 이용하여 보리 배지만 증숙하는 과정을 거친 비교예 2의 동충하초 배양체와 비교하여도 17.4% 증가한 아데노신 함량이 측정되었다. In addition, the adenosine content increased by 17.4% compared to the Cordyceps sinensis culture of Comparative Example 2 in which only barley medium was steamed using ordinary purified water without using the Haejuksun extract.

상기와 같은 실험 결과를 통해 해죽순 추출액이 보리 배지를 증숙 및 멸균하는 과정에서 보리 배지에 침투하여 배지 내에 첨가되고, 배양 과정에서 동충하초 균주 또는 배양체에 활력을 부여하여 생장을 촉진시키는 역할을 하는 것을 확인할 수 있었고, 추가적으로 배양된 동충하초 배양체의 증숙 과정에서 아데노신의 생성을 촉진시켜 전체적으로 동충하초 배양체에 존재하는 아데노신 함량을 증진시키는데 큰 역할을 수행하는 것을 확인할 수 있었다. Through the above experimental results, it was found that the sea bamboo shoot extract penetrates into the barley medium in the process of steaming and sterilizing the barley medium and is added to the medium, and plays a role in promoting growth by giving vitality to the Cordyceps sinensis strain or culture during the culturing process. It could be confirmed, and it was confirmed that the production of adenosine was promoted during the steaming process of the additionally cultured cordyceps culture, thereby playing a large role in enhancing the adenosine content present in the culture of Cordyceps sinensis as a whole.

또한, 항주름(Anti-wrinkle) 기능성 화장품 원료인 아데노신의 화장품에 포함되어야 하는 최저 함량이 0.04mg/g 임을 감안하면, 본 발명의 보리 동충하초 배양체는 아데노신을 다량 함유하여 영양학적으로 현저히 개선되었을 뿐만 아니라, 항노화 및 주름 개선 활성을 갖는 기능성 화장품의 원료로도 충분하게 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다. In addition, considering that the minimum content of adenosine, which is an anti-wrinkle functional cosmetic raw material, should be included in cosmetics is 0.04 mg / g, the barley cordyceps culture of the present invention contains a large amount of adenosine and is not only nutritionally improved In addition, it was confirmed that it can be sufficiently used as a raw material for functional cosmetics having anti-aging and wrinkle-reducing activities.

실험예 2. 보리 배지 및 동충하초 균사체의 증숙 여부에 따른 비타민D 성분 분석Experimental Example 2. Analysis of vitamin D components according to steaming of barley medium and cordyceps mycelium

보리 배지의 증숙 및 동충하초 배양체의 증숙 과정에서 해죽순 추출물의 사용에 따른 본 발명의 동충하초 배양체의 영양성분 변화를 확인하기 위하여, 실시예 1의 동충하초 배양체(시료명: 코디셉 플러스)를 식약처 인증 국가공인기관(제일분석센터)에 의뢰하여 영양성분 분석을 수행하였다(도 5 참조). In order to confirm the change in nutritional components of the cordyceps culture of the present invention according to the use of sea bamboo shoot extract in the process of steaming barley medium and steaming the culture of Cordyceps sinensis, the culture of Cordyceps sinensis of Example 1 (sample name: Cordyceps Plus) was used in a country certified by the Ministry of Food and Drug Safety Nutrient component analysis was performed by requesting an authorized institution (Jeil Analysis Center) (see FIG. 5).

실험결과, 본 발명의 동충하초 배양체(실시예 1)는 비타민 D의 함량이 4,820(ug/100g)으로 측정되어 비타민D 성분 함량이 현저하게 증가하였음을 확인할 수 있었다. As a result of the experiment, it was confirmed that the vitamin D content of the Cordyceps sinensis culture of the present invention (Example 1) was measured to be 4,820 (ug/100g), and the vitamin D component content was significantly increased.

이에, 국제공인 인증기관인 ㈜아이지씨인증원에 비교예 1의 해죽순 추출물을 사용하지 않은 일반 동충하초 배양체의 영양성분 분석 자료(도 6 참조)와 비교하였고, 일반 동충하초 배양체에서는 비타민D 성분이 전혀 검출되지 않는 것을 확인할 수 있었다. Accordingly, it was compared with the nutritional component analysis data (see FIG. 6) of the general Cordyceps sinensis culture without the Haejuksun extract of Comparative Example 1 in IGC Certification, an internationally recognized certification body, and no vitamin D component was detected in the general Cordyceps sinensis culture. I was able to confirm that it is not.

또한, 실시예 1의 동충하초 배양체(시료명: 코디셉 플러스)에 대한 성분분석을 식약처 인증 국가공인기관(제일분석센터)에 재의뢰하였고, 비타민D 성분의 함량 증가가 실질적으로 발생하였음을 재확인받았다. In addition, the component analysis of the cordyceps culture of Example 1 (sample name: Cordyceps Plus) was re-requested to the Ministry of Food and Drug Safety certified national accredited institution (Jeil Analysis Center), and it was reconfirmed that the increase in the content of vitamin D actually occurred. .

상기 결과를 통해, 보리 배지의 증숙 과정과 동충하초 배양체의 증숙 과정에서 해죽순 추출액을 사용으로 비타민 D 성분이 유의하게 증가하는 것을 확인할 수 있었다. Through the above results, it was confirmed that the vitamin D component was significantly increased by using Haejuksun extract during the steaming process of the barley medium and the steaming process of the cultured culture of Cordyceps sinensis.

실험예 3. 코디세핀 함량분석Experimental Example 3. Cordycepin content analysis

보리 배지의 증숙 및 동충하초 배양체의 증숙 과정에서 해죽순 추출물의 사용에 따라 아데노신 성분이 증가하고, 비타민D 성분이 새롭게 생성됨을 확인한 후, 동충하초 배양체에 대표적인 기능성 성분인 코디세핀 성분 함량에는 어떠한 변화가 있는지 추가적으로 확인하였다. After confirming that the adenosine component increases and vitamin D component is newly produced according to the use of Haejuksun extract during the steaming process of barley medium and cordyceps culture, what kind of change is found in the content of cordycepin, a representative functional component of the culture of Cordyceps sinensis? additionally confirmed.

이를 위해, 실시예 1의 동충하초 배양체와, 비교예 1의 동충하초 배양체의 코디세핀 함량을 분석하였다. 코디세핀 함량 분석은 한국과학기술연구원에 의뢰하여 분석하였고, 그 결과를 하기 [표 2]에 정리하였다. To this end, the cordycepin content of the cultured Cordyceps sinensis of Example 1 and the cultured Cordyceps sinensis of Comparative Example 1 was analyzed. Cordycepin content was analyzed by requesting the Korea Institute of Science and Technology, and the results are summarized in [Table 2].

[표 2][Table 2]

Figure 112020130785774-pat00002
Figure 112020130785774-pat00002

분석결과, 해죽순 추출액을 이용하여 보리 배지를 증숙하고, 추가적으로 배양된 동충하초 배양체를 증숙 처리하는 방식으로 제조된 본 발명의 동충하초 배양체는 4561.44ppm(mg/kg) 농도의 코디세핀이 생성되는 것을 확인할 수 있었다(도 7 참조). As a result of the analysis, it was confirmed that cordycepin at a concentration of 4561.44 ppm (mg/kg) was produced in the culture of Cordyceps sinensis of the present invention prepared by steaming the barley medium using sea bamboo shoot extract and steaming the additionally cultured Cordyceps culture. could (see FIG. 7).

통상적으로, 다양한 조건에서 보리 배지를 이용하여 배양해 낸 동충하초 배양체의 코디세핀 함량은 700 내지 1,300ppm(mg/kg) 전후이며, 동사에서 비교예 1의 방법에 의해 보리 원료에 바꾸면서 다양한 생산방식을 적용하여 제조한 보리 동충하초 배양체 중 최대 코디세핀 함량이 2,000ppm(mg/kg) 정도인 것을 감안하면(도 8 참조), 본 발명의 방법에 따라 제조된 보리 동충하초 배양체는 종래 방식 대비 2.5배 이상 증가한 코디세핀 함량을 갖는 우수한 기능성 식품원료임을 확인할 수 있었다. Usually, the content of cordycepin in Cordyceps cultures grown using barley medium under various conditions is around 700 to 1,300 ppm (mg/kg), and the company uses various production methods while changing to barley raw materials by the method of Comparative Example 1. Considering that the maximum cordycepin content of barley Cordyceps sinensis cultures prepared by application is about 2,000 ppm (mg/kg) (see FIG. 8), the barley Cordyceps cultures prepared according to the method of the present invention have increased by more than 2.5 times compared to the conventional method. It was confirmed that it is an excellent functional food raw material having cordycepin content.

실험예 4. 항산화 활성 분석Experimental Example 4. Antioxidant activity analysis

보리 배지의 증숙 및 동충하초 배양체의 증숙 과정에서 해죽순 추출물의 사용에 따라 아데노신 성분이 증가하고, 비타민D 성분이 새롭게 생성됨을 확인한 후, 동충하초 배양체에 함유된 또 다른 기능성 성분인 폴리페놀 성분 함량에는 어떠한 변화가 있는지 추가로 확인하였다. After confirming that the adenosine component increased and the vitamin D component was newly produced according to the use of Haejuksun extract during the steaming process of the barley medium and the cordyceps culture, what was the content of the polyphenol component, another functional component contained in the culture of Cordyceps sinensis? It was further checked whether there was any change.

실시예 1의 보리 동충하초 배양체(시료명: cordycepsplus)의 항산화 활성을 분석하였다. 비교분석을 위해 해죽순 추출물을 사용하지 않고 배양한 동충하초 배양체(시료명: cordycepsplus-1)를 시료로 하여 비교 실험하였다.Antioxidant activity of the barley cordyceps culture of Example 1 (sample name: cordycepsplus) was analyzed. For comparative analysis, a comparative experiment was conducted using a cordyceps culture (sample name: cordycepsplus-1) cultured without using Haejuksun extract as a sample.

항산화 활성 분석은 계명대학교 전통미생물자원개발 및 산업화연구센터에 의뢰하여 분석하였고, 그 결과를 하기 [표 3]에 정리하였다(도 9 및 도 10 참조). Antioxidant activity analysis was analyzed by commissioning Keimyung University Traditional Microbial Resource Development and Industrialization Research Center, and the results are summarized in [Table 3] (see FIGS. 9 and 10).

[표 3][Table 3]

Figure 112020130785774-pat00003
Figure 112020130785774-pat00003

분석결과, 해죽순 추출액을 보리 보리 배지의 증숙액 및 동충하초 배양체의 증숙액으로 사용하여 제조된 본 발명의 동충하초 배양체(실시예 1)는 해죽순을 사용하지 않은 동충하초 배양체(비교예 1)에 비해 DPPH 소거능은 40% 이상, 총 플라보노이드 함량은 150% 정도, 총 폴리페놀 함량은 42% 정도 증가된 것을 확인할 수 있었다. As a result of the analysis, the Cordyceps sinensis culture of the present invention (Example 1) prepared by using the sea bamboo shoot extract as the steamed liquid of the barley barley medium and the steamed liquid of the Cordyceps culture was superior to the Cordyceps culture without sea bamboo shoot (Comparative Example 1). It was confirmed that the DPPH scavenging ability was increased by more than 40%, the total flavonoid content increased by about 150%, and the total polyphenol content increased by about 42%.

상기와 같은 결과를 종합하면, 해죽순 추출액을 보리 증숙액 및 동충하초 배양체의 증숙액으로 하여 제조된 본 발명의 동충하초 배양체는 코디세핀과 아데노신의 기능성 물질의 함량이 현저하게 증가되었고, 항산화 활성도 개선되었으며, 신규 물질인 비타민D 성분이 새롭게 생성되어, 기능성 측면에서 현격하게 개선된 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과를 토대로 본 발명의 동충하초 배양체를 식품산업 및 화장품 산업 전반에서 기능성 원료 소재로 충분하게 사용될 수 있음을 확인할 수 있었다. Summarizing the above results, the content of cordycepin and adenosine functional substances in the cordycepin and adenosine cultures of the present invention prepared by using sea bamboo shoot extract as a steamed barley solution and a steamed solution of cordyceps cultures were significantly increased, and antioxidant activity was also improved. , it was confirmed that vitamin D, a new substance, was newly created, and markedly improved in terms of functionality. Based on these results, it was confirmed that the culture of Cordyceps sinensis of the present invention can be sufficiently used as a functional raw material throughout the food industry and cosmetics industry.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.Having described specific parts of the present invention in detail above, it is clear that these specific techniques are merely preferred embodiments for those skilled in the art, and the scope of the present invention is not limited thereto. Accordingly, the substantial scope of the present invention will be defined by the appended claims and equivalents thereof.

Claims (8)

종균배양 배지에서 동충하초 종균을 배양하는 배양단계;
해죽순 추출액으로 보리를 증숙 처리하여 보리 배지를 준비하는 단계;
상기 증숙된 보리 배지에 상기 동충하초 종균을 접종하고 배양하여 동충하초 배양체를 수득하는 단계; 및
상기 수득한 동충하초 배양체를 해죽순 추출액으로 증숙하는 단계;를 포함하되,
상기 보리 배지를 준비하는 단계는 보리 및 해죽순 추출물을 1 : 1.5~2.5(w/v)의 비율로 밀폐된 용기에 투입한 후, 105℃ 내지 115℃에서 10분 내지 20분 동안 증숙하여 멸균된 보리 배지를 준비하는 것을 특징으로 하는,
동충하초 배양체의 제조방법.A culturing step of culturing the cordyceps seed in a seed culture medium;
Preparing a barley medium by steaming barley with sea bamboo shoot extract;
Obtaining a culture of Cordyceps sinensis by inoculating and culturing the Cordyceps fungus in the steamed barley medium; and
Including; steaming the obtained Cordyceps sinensis culture with Haejuksun extract;
In the step of preparing the barley medium, barley and sea bamboo shoot extracts are put into a sealed container at a ratio of 1: 1.5 to 2.5 (w / v), and then steamed at 105 ° C to 115 ° C for 10 to 20 minutes to sterilize Characterized in preparing a barley medium,
Method for producing a culture of Cordyceps sinensis. 제1항에 있어서,
상기 동충하초 배양체를 증숙하는 단계에 선행하여 상기 동충하초 배양체를 건조하는 단계;를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 동충하초 배양체의 제조방법.According to claim 1,
Method for producing a cultured Cordyceps sinensis, characterized in that it further comprises; drying the cultured Cordyceps sinensis prior to the step of steaming the cultured Cordyceps sinensis. 삭제delete 제1항에 있어서,
상기 동충하초 배양체를 수득하는 단계는 상기 증숙된 보리 배지 100 중량부를 기준으로 동충하초 종균 40 내지 48 중량부를 접종하고 배양하는 것을 특징으로 하는 동충하초 배양체의 제조방법. According to claim 1,
The step of obtaining the culture of Cordyceps sinensis is a method for producing a culture of Cordyceps sinensis, characterized in that inoculating and culturing 40 to 48 parts by weight of Cordyceps sinensis based on 100 parts by weight of the steamed barley medium. 제4항에 있어서,
상기 배양은 온도 19℃~23℃, 습도 45%~60%, 및 조도 900Lux~1,100Lux의 조건에서 45일 내지 50일 동안 배양하는 것을 특징으로 하는 동충하초 배양체의 제조방법. According to claim 4,
The culture method for producing a culture of Cordyceps sinensis, characterized in that cultured for 45 to 50 days under conditions of a temperature of 19 ° C. to 23 ° C., humidity of 45% to 60%, and illumination of 900 Lux to 1,100 Lux. 제1항에 있어서,
상기 동충하초 배양체를 해죽순 추출액으로 증숙하는 단계는 동충하초 배양체 중량 대비 1.5 내지 2배 중량의 해죽순 추출액을 첨가한 후, 105~115℃에서 110분 내지 20분 동안 증숙하는 것을 특징으로 하는 동충하초 배양체의 제조방법.According to claim 1,
The step of steaming the Cordyceps sinensis culture into sea bamboo shoot extract is to add 1.5 to 2 times the weight of sea bamboo shoot extract relative to the weight of the Cordyceps sinensis culture, and then steam at 105 to 115 ° C for 110 minutes to 20 minutes. manufacturing method. 제1항에 있어서,
상기 수득한 동충하초 배양체를 추출하는 단계; 및
상기 추출된 동충하초 배양체를 농축하는 단계;를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 동충하초 배양체의 제조방법.According to claim 1,
Extracting the obtained culture of Cordyceps sinensis; and
Method for producing a culture of Cordyceps sinensis, characterized in that it further comprises; concentrating the extracted culture of Cordyceps sinensis. 제1항, 제2항, 및 제4항 내지 제7항 중 어느 한 항의 방법에 따라 제조된 비타민D 성분을 함유하는 동충하초 배양체.A culture of Cordyceps sinensis containing a vitamin D component prepared according to the method of any one of claims 1, 2, and 4 to 7.
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