KR102519489B1 - A composition for improving prostate or sexual function comprising a high content of compound K, which has increased absorption into the body through solid fermentation - Google Patents
A composition for improving prostate or sexual function comprising a high content of compound K, which has increased absorption into the body through solid fermentation Download PDFInfo
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Abstract
Description
본 발명은 고상발효를 통한 체내흡수율이 증가된 컴파운드 K를 고함량 포함하는 전립선 개선 또는 성기능 개선용 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 인삼을 매실발효액과 식물혼합추출액을 혼합한 천연혼합발효액에, 유산균, 막걸리효모액과 버섯균사체, 그리고 효소 등을 첨가하여 배양한 제1 천연발효효소복합액으로 고상발효한 후, 다시 아미노산를 함유한 액상발효용의 제2 천연발효효소복합액으로 액상발효함으로써, 체내흡수율이 증가된 컴파운드(Compound) K를 고함량으로 포함하는 인삼 발효 조성물로서, 컴파운드 K를 고함량 포함함으로써 체내흡수율 증가로 인해 전립선 개선 또는 성기능 개선 활성이 현저하게 우수한 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for prostate improvement or sexual function improvement containing a high content of compound K with increased body absorption through solid phase fermentation. After solid phase fermentation with the first natural fermentation enzyme complex cultured by adding lactic acid bacteria, rice wine yeast liquid, mushroom mycelia, and enzymes, etc., liquid phase fermentation is performed with the second natural fermentation enzyme complex liquid for liquid fermentation containing amino acids, A fermented ginseng composition containing a high content of compound K with increased body absorption rate, which contains a high content of compound K, thereby significantly improving the prostate or sexual function due to the increased body absorption rate.
발효란 유기물이 미생물이나 효소에 의해 분해 및 변화되는 과정을 말한다. 부패 역시 본질적으로는 발효와 같은 과정을 거친다. 따라서 발효와 부패의 경계는 모호하다. 단지 미생물의 분해결과가 사람에게 이로운가 해로운가에 따라 부패와 발효를 구별하는 것뿐이다. 사람에게 유익하면 발효라고 하지만 유익한 것이 꼭 건강에 좋다는 것은 아니다. Fermentation refers to a process in which organic matter is decomposed and changed by microorganisms or enzymes. Corruption is essentially the same process as fermentation. Therefore, the boundary between fermentation and decay is ambiguous. It is only to distinguish between spoilage and fermentation according to whether the decomposition result of microorganisms is beneficial or harmful to humans. If it is beneficial to people, it is called fermentation, but beneficial does not necessarily mean that it is good for health.
이러한 발효과정은 일반적인 식품 등에서 다양하게 이루어지는데, 많은 경우 발효는 탄수화물이 분해될 때 일어나고 부패는 단백질이 분해될 때에 일어난다. 단백질은 분해될 때 그에 포함된 질소나 황에 의해 생기는 암모니아 등 질소화합물이나 황화수소 등 황 화합물이 유독하고 악취가 나기 때문이다. 이를 역이용하는 식품도 있는데, 그 대표적인 사례는 우리나라에서 전통식품으로 이용되고 있는 홍어를 예로 들 수 있다.This fermentation process is variously performed in general foods, etc. In many cases, fermentation occurs when carbohydrates are decomposed, and spoilage occurs when proteins are decomposed. This is because when protein is decomposed, nitrogen compounds such as ammonia and sulfur compounds such as hydrogen sulfide generated by nitrogen or sulfur contained in it are toxic and smelly. There are also foods that use it reversely, and a representative example is skate, which is used as a traditional food in Korea.
농산물을 주식으로 해온 우리나라는 발효를 이용한 전통식품이 특히 많고 다양한 방법으로 응용, 발전되어 왔다. 예를 들어 우리나라 전통식품으로 세계적인 관심을 받기 시작한 김치를 비롯하여, 된장, 고추장, 술, 빵 등 우리의 주된 먹거리는 상당수가 발효식품이라고 할 수 있다. 실제로, 발효식품은 면역력 증강, 항암, 항산화, 중성지방 감소, 항바이러스 작용 등 다양한 생리활성물질이 강화되는 것이 알려져 있다. In Korea, where agricultural products have been the staple food, there are especially many traditional foods using fermentation, and they have been applied and developed in various ways. For example, many of our main foods, such as kimchi, which has begun to receive global attention as a traditional Korean food, as well as soybean paste, gochujang, alcohol, and bread, are fermented foods. In fact, it is known that fermented foods enhance various physiologically active substances such as immunity enhancement, anticancer, antioxidant, neutral fat reduction, and antiviral activity.
반면에, 이러한 식품들은 발효라는 특성 때문에 아플라톡신, 에틸카바메이트 등 인체에 해로운 물질들도 생성되는 것으로 알려져 있어서 세심한 주위와 발효조건의 정교한 제어가 필요하다.On the other hand, these foods are known to produce substances harmful to the human body such as aflatoxin and ethyl carbamate due to the nature of fermentation, so careful control of surroundings and fermentation conditions is required.
그럼에도 불구하고, 최근 웰빙 등 소비 트랜드의 급격한 변화로 건강에 대한 관심이 높아지면서, 자연에서 구한 건강한 재료로 만든 친환경 소재에 대한 소비자의 요구가 증가되고 있으며, 발효공법 또한 식품의 거의 모든 분야에서 적용되고 있다.Nevertheless, as interest in health has increased due to recent rapid changes in consumption trends such as well-being, consumer demand for eco-friendly materials made from healthy ingredients obtained from nature is increasing, and fermentation methods are also applied to almost all fields of food. It is becoming.
이러한 발효공정이 적용된 식품, 건강식품, 첨가제, 의약품 원료 등이 가히 폭발적으로 다양하게 개발되고 있지만, 대체로 유산균이나 널리 알려진 발효균에 의존하여 발효 처리하여 식품이나 의약품 원료를 개발하거나 자연발효공법으로 발효식품을 제조하는 것이 대부분이고, 발효를 효과적이고 고부가가치화하기 위한 바이오 소재는 별로 제안된 바가 없다.Foods, health foods, additives, pharmaceutical raw materials, etc. to which this fermentation process is applied are being developed explosively in various ways. Most of them are manufactured, and biomaterials for effective and high value-added fermentation have not been proposed.
한편, 인삼이나 홍삼은 우리나라의 특산물로서, 피로회복을 돕고 체력을 증진시키는 효능이 있으며 혈액에 있는 과량의 콜레스테롤과 포화지방 등을 몸에 흡수시켜 혈액순환을 개선하는 것으로 알려져 있다. 또한, 뇌의 혈류량을 증가시켜 두뇌발달과 고혈압 및 저혈압 치료 및 예방, 동맥경화 및 고지혈증 예방에 효과가 있다. 이러한 홍삼의 효과는 인삼의 효과를 그대로 나타내고 인삼에 의한 부작용 등을 경감시키는 가공 인삼으로 널리 활용되고 있다.On the other hand, ginseng or red ginseng is a special product of Korea, and is known to help recover from fatigue and improve physical strength, and improve blood circulation by absorbing excess cholesterol and saturated fat in the blood. In addition, by increasing blood flow to the brain, it is effective in brain development, treatment and prevention of high blood pressure and low blood pressure, and prevention of arteriosclerosis and hyperlipidemia. These effects of red ginseng are widely used as processed ginseng that shows the effects of ginseng as it is and reduces side effects caused by ginseng.
특히, 홍삼은 혈류 개선 등 심혈관계 질환의 예방 등에 효과가 있는 동시에, 당뇨병에도 효과가 있고, 면역력을 현저하게 높여주는 것으로 알려져 있다. 그 외에도, 항암, 갱년기 증상 개선, 항피로, 항스트레스 등의 효과가 있고, 피부미용 개선, 정력 증강, 숙취해소, 멀미 등 구토증상 개선 등에도 효과가 있는 것으로 알려져 있다.In particular, red ginseng is known to be effective in preventing cardiovascular diseases, such as improving blood flow, and at the same time, being effective in diabetes, and remarkably enhancing immunity. In addition, it is known to be effective in anticancer, menopausal symptom improvement, anti-fatigue, anti-stress, etc., and also effective in improving skin beauty, enhancing energy, relieving hangover, and improving vomiting symptoms such as motion sickness.
이러한 홍삼은 상기한 여러 효능 효과가 있어서 한약재로 널리 활용되고 있으며, 국내뿐만 아니라 해외에서도 홍삼의 효능이 알려지면서 광범위하게 이용되고 있다. 그러나 이러한 인삼이나 홍삼은 쓴맛 등 독특한 풍미가 있고, 대량 생산에 한계가 있으며, 일부 과다하게 섭취하는 경우 부작용도 있고, 실제 섭취 후 인체 흡수 정도가 제한적이어서 그 사용에 제한적인 문제가 있다.Such red ginseng is widely used as a herbal medicine because of the above-mentioned various effects, and as the efficacy of red ginseng is known not only in Korea but also abroad, it is widely used. However, such ginseng or red ginseng has a unique flavor such as bitter taste, has limitations in mass production, has side effects in case of excessive intake of some, and has a limited problem in its use because the degree of absorption by the human body after actual intake is limited.
이러한 기존의 문제에도 불구하고 인삼이나 그 가공품인 홍삼, 흑삼 등은 여전히 매우 귀중한 천연 기능성 소재로 각광을 받고 있다.Despite these existing problems, ginseng or its processed products, such as red ginseng and black ginseng, are still in the limelight as a very valuable natural functional material.
기존에 인삼이나 가공인삼, 홍삼 등을 효과적으로 활용하기 위한 방법으로 다양한 가공방법에 제안되어 있는바, 그 예로서 한국특허공개 제10-2017-0059774호 등에서는 인삼을 발효하여 사용하는 특정 용도로서 예컨대 항인플루엔자 바이어스 조성물을 제안하고 있으며, 한국특허공개 제10-2022-0009830호, 한국특허등록 제10-1924389호 등에서는 진세노사이드 컴파운드 K를 이용한 면역증강용 조성물이나 남성 성기능 개선용 조성물 등 다양한 용도에 관하여 제안되어 있다. 또한, 한국특허등록 제10-2350102호에서는 항산화 활성이 증진된 발효 홍삼 추출물을 유효성분으로 함유하는 항염증용 조성물에 관하여 제안하고 있다. Existing methods for effectively utilizing ginseng, processed ginseng, red ginseng, etc. have been proposed in various processing methods. An anti-influenza bias composition is proposed, and Korean Patent Publication No. 10-2022-0009830 and Korean Patent Registration No. 10-1924389 have various uses such as a composition for enhancing immunity using ginsenoside compound K or a composition for improving male sexual function. about is proposed. In addition, Korean Patent Registration No. 10-2350102 proposes an anti-inflammatory composition containing fermented red ginseng extract with enhanced antioxidant activity as an active ingredient.
그 외에도, 다양한 방법으로 인삼이나 홍삼, 흑삼 등을 가공하거나 발효하여 다양한 용도로 사용하는 기술이 다수 알려져 있다.In addition, many techniques are known for processing or fermenting ginseng, red ginseng, black ginseng, etc. in various ways and using them for various purposes.
이와 같이, 기존의 인삼이나 홍삼, 흑삼 등을 발효 처리하는 등의 가공 과정을 거쳐서 인삼, 홍삼 또는 흑삼의 기능을 개선하거나 진세노사이드 컴파운드 K를 활용한 다양한 용도의 조성물이 개발되어 있다.In this way, through a processing process such as fermenting existing ginseng, red ginseng, black ginseng, etc., a composition for various purposes has been developed that improves the function of ginseng, red ginseng, or black ginseng, or utilizes ginsenoside compound K.
그러나 이러한 기존의 인삼이나 홍삼, 흑삼 등 가공방법은 기존의 한약재를 추출 단순하게 발효하는 수준에서 크게 벗어나지 않아서 아직도 그 가공방법이 전문적으로 연구되어 있다고 볼 수 없으며, 활용도가 부족한 실정이다.However, these existing processing methods such as ginseng, red ginseng, and black ginseng do not deviate significantly from the level of simple fermentation of existing herbal medicines, so it cannot be said that the processing methods have been professionally studied, and their utilization is insufficient.
또한, 인삼 등 천연 기능성 물질의 발효물을 제조하는 종래의 방법에서는 초기단계에서 원물을 파쇄하거나 고온으로 처리함으로써, 고유의 유효성분이 유실되거니 파괴되고 필요성분에 합당한 효소들이 충분히 갖춰지지 않아 유효성분의 생성이나 증가가 제한되고 발효 효율이 떨어지는 문제점이 있었다. In addition, in the conventional method for producing fermented products of natural functional substances such as ginseng, raw materials are crushed or treated at high temperatures in the initial stage, resulting in loss or destruction of original active ingredients and insufficient enzymes suitable for the necessary ingredients. There was a problem in that the production or increase of was limited and the fermentation efficiency was low.
따라서 인삼이나 홍삼과 같은 고기능성 한약재에 대한 가공기술을 개발하여 귀한 한약재의 기능성을 향상시키고 효율적인 활용이 가능하게 하는 기술 개발이 절실하다.Therefore, it is urgent to develop processing technology for high-functional herbal medicines such as ginseng or red ginseng to improve the functionality of precious herbal medicines and enable efficient utilization.
상기와 같은 종래기술의 문제들을 해결하기 위하여, 본 발명은 다양한 기존에 한약재로 널리 사용되고 있는 인삼의 기능성을 향상시키고 활용성을 높일 수 있는 새로운 가공기술과 그 용도의 발견을 해결과제로 한다.In order to solve the problems of the prior art as described above, the present invention is to improve the functionality of ginseng, which is widely used as a variety of traditional herbal medicines, and to discover new processing technologies and uses thereof that can increase the usability.
따라서 본 발명의 목적은 가공인삼을 특정 조건의 발효액으로 발효처리하여 체내흡수율이 증가된 컴파운드 K를 고함량 포함하는 전립선 개선 또는 성기능 개선용 조성물을 제공하는데 있다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a composition for prostate improvement or sexual function improvement containing a high content of compound K with increased body absorption by fermenting processed ginseng with a fermentation broth under specific conditions.
위와 같은 본 발명의 과제해결을 위하여, 본 발명은 매실천연효소액, 황기, 마늘 및 멀꿀 중 2종 이상을 포함하는 식물혼합추출액, 유산균, 막걸리 효모액, 버섯 균사체와 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소가 함유된 제1 천연발효효소복합액으로 홍삼을 고상발효하고, In order to solve the above problems of the present invention, the present invention is a plant mixture extract containing two or more of plum natural enzyme solution, astragalus, garlic and honey, lactic acid bacteria, rice wine yeast solution, mushroom mycelium and cell membrane decomposition and biocomponent conversion enzyme Solid-phase fermentation of red ginseng with the first natural fermentation enzyme complex
매실천연효소액, 황기, 마늘 및 멀꿀 중 2종 이상을 포함하는 식물혼합추출액, 유산균, 막걸리효모액과 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소와 아미노산를 첨가하여 발효한 제2 천연발효효소복합액으로 상기 고상발효된 결과물을 2차 액상발효한 발효홍삼농축액과,The solid-phase fermentation with the second natural fermentation enzyme complex solution fermented by adding plant mixture extracts, lactic acid bacteria, makgeolli yeast solution, cell membrane decomposition and biocomponent conversion enzymes and amino acids containing two or more of natural plum enzyme solution, astragalus, garlic, and honey. Fermented red ginseng concentrate obtained by secondary liquid fermentation of the resulting product,
흑삼을 상기와 동일 방법으로 1차 고상발효 및 2차 액상발효한 발효흑삼농축액을 혼합하여 구성된Composed by mixing fermented black ginseng concentrate obtained by first solid phase fermentation and second liquid phase fermentation of black ginseng in the same way as above.
고상발효를 통한 체내흡수율이 증가된 컴파운드 K를 고함량 포함하는 전립선 개선 또는 성기능 개선용 조성물을 제공한다.Provided is a composition for improving prostate or sexual function containing a high content of compound K having an increased body absorption rate through solid phase fermentation.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 막걸리 효모액은 생막걸리를 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae)로 배양한 것이 바람직하게 이용될 수 있다. According to a preferred embodiment of the present invention, as the rice wine yeast liquid , raw rice wine cultured with Saccharomyces cerevisiae can be preferably used.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 유산균은 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 루테니(Lactobacillus reuteni), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 바실러스 아밀로리퀴피엔스(Bacillus amyloliquefaciens) 중에 하나 이상을 사용할 수 있다. 더 바람직하게는 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 루테니(Lactobacillus reuteni), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 중의 1종 이상과 바실러스 아밀로리퀴피엔스(Bacillus amyloliquefaciens)의 혼합 균을 사용할 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the lactic acid bacteria are Lactobacillus brevis , Lactobacillus casei , Lactobacillus reuteni, Lactobacillus plantarum , Bacillus amyl One or more of Bacillus amyloliquefaciens may be used. More preferably, one or more of Lactobacillus brevis, Lactobacillus casei , Lactobacillus reuteni, and Lactobacillus plantarum and Bacillus amyloriquipiens ( A mixed strain of Bacillus amyloliquefaciens ) can be used.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 버섯균사체는 동충하초, 차가버섯, 영지버섯, 능이버섯, 상황버섯, 운지버섯, 노루궁뎅이버섯 중에서 하나이상의 버섯 균사체를 사용할 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the mushroom mycelium may use at least one mushroom mycelium from among Cordyceps sinensis, Chaga mushroom, Ganoderma lucidum mushroom, Neungi mushroom, Sanghwang mushroom, Unji mushroom, and Hericium erinaceum.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소는 수미자임(Sumizyme), 얼티메이즈(Ultimase MFC), 파이르플로(Pyr-flo), 탄네이즈(Tannase) 중에서 선택된 하나 이상을 사용할 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the cell membrane degradation and biocomponent conversion enzyme is at least one selected from Sumizyme, Ultimase MFC, Pyr-flo, and Tannase. can be used
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 제1 천연발효효소복합액에서 사용된 황기, 마늘 및 멀꿀 중 2종 이상을 포함하는 식물혼합추출액은 황기, 마늘 및 멀꿀을 포함하고 여기에 산수유, 오미자, 헛개, 황칠 중에서 하나이상을 추가로 함유할 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the plant mixture extract containing two or more of Astragalus, garlic, and honey used in the first natural fermentation enzyme complex solution includes Astragalus, garlic, and honey, and includes Cornus officinalis, Schisandra chinensis, It may additionally contain at least one of hoveni and hwangchil.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 제2 천연발효효소복합액에서 사용된 황기, 마늘 및 멀꿀 중 2종 이상을 포함하는 식물혼합추출액은 황기, 마늘 및 멀꿀을 포함하고 여기에 오가피, 비타민나무, 연자육, 감태 중에서 하나이상을 추가로 함유할 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the plant mixture extract containing two or more of Astragalus, garlic, and honey used in the second natural fermenting enzyme complex solution includes Astragalus, garlic, and honey, and here, cucumber, vitamin tree , Yeonjayuk, and Ecklonia cava may additionally contain one or more.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 제1 천연발효효소복합액 또는 제2 천연발효효소복합액의 최종 발효 전 혼합물에 비타민 에이(vitamin A), 비타민 비 복합체(vitamin B complex) 및 비타민 씨(vitamin C) 중에서 2 이상을 함유하는 복합비타민을 포함할 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, vitamin A, vitamin B complex and vitamin C (vitamin A), vitamin B complex, and vitamin C ( It may include a complex vitamin containing two or more of vitamin C).
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 제1 천연발효효소복합액은 매실천연효소액 30~70중량부와 황기, 마늘, 멀꿀, 산수유, 오미자, 헛개 및 황칠을 포함하는 식물혼합추출액 30~70중량부가 혼합된 제1 천연혼합발효액 85~95중량%에, 유산균 0.1~5중량%와 막걸리효모액 0.5~10중량%, 동충하초 균사체 1~5중량%, 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소 0.01~3중량%, 멀티비타민 0.01~3중량%를 첨가하여 발효한 것일 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the first natural fermentation enzyme complex is 30 to 70 parts by weight of plum natural enzyme solution and 30 to 70 parts by weight of a mixed plant extract containing Astragalus, garlic, honey, Cornus officinalis, Omija, Hovenia, and Hwangchil. 85 to 95% by weight of the first natural mixed fermented liquid, 0.1 to 5% by weight of lactic acid bacteria, 0.5 to 10% by weight of makgeolli yeast solution, 1 to 5% by weight of cordyceps mycelium, 0.01 to 3% by weight of cell membrane decomposition and biocomponent conversion enzymes %, it may be fermented by adding 0.01 to 3% by weight of multivitamins.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 제2 천연발효효소복합액은 매실천연효소액 30~70중량부와 황기, 마늘, 멀꿀, 오가피, 비타민나무, 연자육 및 감태를 함유하는 식물혼합추출액 30~70중량부가 혼합된 천연혼합발효액 85~95중량%에, 유산균 0.1~5중량%와 막걸리효모액 0.5~10중량%, 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소 0.01~3중량%, 멀티비타민 0.01~3중량%, 아미노산 0.1~3 중량%을 첨가하여 발효한 것일 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the second natural fermentation enzyme complex solution is a plant mixture extract containing 30 to 70 parts by weight of plum natural enzyme solution and astragalus, garlic, honey, cucumber, vitamin tree, lotus root, and Ecklonia
또한, 본 발명은 상기 발효홍삼농축액 50~90중량%와 상기 발효흑삼농축액 10~50중량%가 혼합되어 이루어질 수 있다. In addition, in the present invention, 50 to 90% by weight of the fermented red ginseng concentrate and 10 to 50% by weight of the fermented black ginseng concentrate may be mixed.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 전립선 개선 또는 성기능 개선용 조성물은 건강식품조성물 또는 약학조성물로 적용될 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the composition for improving prostate or sexual function may be applied as a health food composition or a pharmaceutical composition.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 전립선 개선 또는 성기능 개선용 조성물은 동물사료용, 동물사료첨가제용 또는 동물약품용 조성물 등으로 적용될 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the composition for improving prostate or sexual function may be applied as a composition for animal feed, animal feed additive, or animal drug.
또한, 본 발명은 매실천연효소액 30~70중량부와 황기, 마늘 및 멀꿀 중에서 2종 이상을 포함하는 식물혼합추출액 30~70중량부가 혼합된 제1 천연혼합발효액을 제조하는 단계; In addition, the present invention comprises the steps of preparing a first natural mixed fermentation liquid mixed with 30 to 70 parts by weight of plum natural enzyme solution and 30 to 70 parts by weight of a plant mixture extract containing two or more of Astragalus, garlic and honey;
상기 제1 천연혼합발효액에 유산균과 막걸리효모액, 그리고 동충하초, 차가버섯, 영지버섯, 능이버섯, 상황버섯, 운지버섯, 노루궁뎅이버섯 중 하나이상의 버섯균사체를 접종하고 30~45℃에서 12~72시간 발효하는 단계; The first natural mixed fermentation liquid was inoculated with lactic acid bacteria, makgeolli yeast liquid, and cordyceps sinensis, chaga mushroom, ganoderma lucidum mushroom, neungi mushroom, Sanghwang mushroom, Unji mushroom, and ericium erinaceus mushroom, and inoculating the mycelium of one or more mushrooms at 30 ~ 45
상기 버섯균사체 적용 발효물에 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소 를 첨가하여 30~45℃에서 1~6시간 발효하는 단계를 포함하는 제1 천연발효효소복합액을 제조하는 단계;Preparing a first natural fermentation enzyme complex solution comprising adding cell membrane decomposition and biocomponent conversion enzymes to the mushroom mycelium-applied fermented product and fermenting it at 30-45 ° C. for 1-6 hours;
상기 제1 천연발효효소복합액을 이용하여 홍삼을 고상발효하는 단계;solid-phase fermentation of red ginseng using the first natural fermentation enzyme complex;
상기 고상발효물을 추출하여 고상발효 추출액을 제조하는 단계;Extracting the solid phase fermentation product to prepare a solid phase fermentation extract;
매실천연효소액 30~70중량부와 황기, 마늘 및 멀꿀 중에서 2종 이상을 포함하는 식물혼합추출액 30~70중량부가 혼합된 제2 천연혼합발효액을 제조하는 단계; Preparing a second natural mixed fermented liquid by mixing 30 to 70 parts by weight of plum natural enzyme solution and 30 to 70 parts by weight of a mixed plant extract containing two or more of Astragalus, garlic, and honey;
상기 제2 천연혼합발효액에 유산균과 막걸리효모액를 접종하고 30~45℃에서 12~72시간 발효하는 단계; Inoculating the second natural mixed fermentation liquid with lactic acid bacteria and makgeolli yeast liquid and fermenting at 30 ~ 45 ℃ for 12 ~ 72 hours;
상기 발효물에 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소와 아미노산을 첨가하여 30~45℃에서 1~6시간 발효하는 단계를 포함하는 제2 천연발효효소복합액을 제조하는 단계;Preparing a second natural fermentation enzyme complex solution comprising adding cell membrane decomposition and biocomponent conversion enzymes and amino acids to the fermented product and fermenting it at 30 to 45 ° C for 1 to 6 hours;
상기 제2 천연발효효소복합액을 이용하여 상기 제조된 고상발효 추출물을 액상발효하는 단계;liquid phase fermentation of the prepared solid phase fermentation extract using the second natural fermentation enzyme complex;
상기 액상발효물을 농축하여 발효홍삼농축액을 제조하는 단계;Concentrating the liquid fermentation product to prepare a fermented red ginseng concentrate;
상기와 동일한 공정으로 흑삼을 1차 고상발효 및 2차 액상발효하여 발효흑삼농축액을 제조하는 단계; 및Preparing a fermented black ginseng concentrate by first solid-phase fermentation and second liquid-phase fermentation of black ginseng in the same process as above; and
상기 발효홍삼농축액과 상기 발효흑삼농축액을 혼합하는 단계Mixing the fermented red ginseng concentrate and the fermented black ginseng concentrate
를 포함하는 고상발효를 통한 체내흡수율이 증가된 컴파운드 K를 고함량 포함하는 조성물의 제조방법을 제공한다.It provides a method for producing a composition containing a high content of compound K with increased body absorption through solid phase fermentation.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 발효홍삼농축액 제조 또는 발효흑삼농축 제조과정에서, 상기 고상발효는 홍삼 또는 흑삼을 절단하여 상기 제1 천연복합발효액에 20~25℃에서 40-80분 동안 1차 침지한 후 꺼내어 45~55℃에서 2~4일 동안 1차 발효하는 단계;와 상기 1차 발효한 홍삼 또는 흑삼을 다시 상기 천연 복합발효액에 20~25℃에서 10~20분 동안 2차 침지한 후 꺼내어 45~55℃에서 1~3일 동안 2차 발효할 수 있다. According to a preferred embodiment of the present invention, in the process of manufacturing fermented red ginseng concentrate or fermented black ginseng concentrate, the solid-phase fermentation is performed by cutting red ginseng or black ginseng to the first natural complex fermentation liquid at 20 to 25 ° C for 40 to 80 minutes. Taking out after immersion and primary fermentation for 2 to 4 days at 45 to 55 ° C; and secondary immersion of the first fermented red ginseng or black ginseng in the natural complex fermentation liquid at 20 to 25 ° C for 10 to 20 minutes After that, it can be taken out and secondary fermentation at 45 to 55 ° C for 1 to 3 days.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 제2 천연발효효소복합액은 상기 고상발효 농축물에 0.1~50부피%로 첨가하여 발효된 것일 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the second natural fermentation enzyme complex may be fermented by adding 0.1 to 50% by volume to the solid phase fermented concentrate.
본 발명에 따라 제조된 홍삼 또는 흑삼 발효물은 기존에 알려지지 않은 새로운 제1 천연발효효소복합액으로 1차 고상발효 후 제2 천연발효효소액으로 2차 액상 발효하여 얻음으로써, 종래의 일반적인 발효물에 비해 맛과 풍미가 현저하게 증가할 뿐만 아니라, 홍삼 또는 흑삼의 부작용을 현저하게 경감시키고, 특히 기존의 일반적인 방법으로 발효처리한 인삼, 홍삼 또는 흑삼 등에 비해 체내흡수율이 매우 우수한 컴파운드 K의 함량을 고함량으로 증대시킴으로써, 전립선 개선 또는 성기능 개선 등에 월등하게 우수한 효과를 나타낸다.The fermented red ginseng or black ginseng produced according to the present invention is obtained by first solid phase fermentation with a previously unknown first natural fermentation enzyme complex solution and then secondary liquid phase fermentation with a second natural fermentation enzyme solution. Compared to ginseng, red ginseng, or black ginseng fermented by conventional methods, it not only significantly increases the taste and flavor, but also significantly reduces the side effects of red ginseng or black ginseng. By increasing the content, it shows a significantly superior effect such as prostate improvement or sexual function improvement.
또한, 본 발명에 의한 발효물은 제1 및 제2 천연발효효소복합액을 이용한 이중 발효로 발효 효율을 크게 개선시키고, 특히 홍삼 및 흑삼의 유효성분을 향상시킴과 동시에 효소, 버섯균사체, 막걸리 발효액 등의 상호작용으로 인하여 세포벽을 분해하고 영양성분과 유효성분의 추출율을 높이고, 특히 진세노사이드 컴파운드 K 함량을 현저하게 높여서 기능성 성분의 체내흡수율을 현저하게 향상시킬 수 있는 새로운 효과를 발휘할 수 있다.In addition, the fermented product according to the present invention greatly improves fermentation efficiency by double fermentation using the first and second natural fermentation enzyme complex solutions, and in particular, improves the active ingredients of red ginseng and black ginseng, as well as enzymes, mushroom mycelium, and rice wine fermentation broth. Due to the interaction such as decomposition of the cell wall, increase the extraction rate of nutrients and active ingredients, and in particular, significantly increase the content of ginsenoside compound K, thereby exhibiting new effects that can significantly improve the absorption rate of functional ingredients in the body.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, Rg1, Rb1, Rg3의 총함량이 5mg/g 이상, 더 바람직하게는 6.5mg/g 이상을 함유할 수 있으며, Rg3, Rg5, Rk1의 총함량이 5mg/g 이상, 더 바람직하게는 9mg/g 이상으로 과량 함유할 수 있고, 통상적으로 홍삼이나 흑삼 농축액 등에 전혀 존재하지 아니하는 컴파운드 K가 적어도 2mg/g 이상 함유할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물에는 진세노사이드가 적어도 15종 이상 함유될 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the total content of Rg1, Rb1, and Rg3 may be 5 mg/g or more, more preferably 6.5 mg/g or more, and the total content of Rg3, Rg5, and Rk1 is 5 mg/g. It may contain more than 9mg/g or more, more preferably 9mg/g or more, and may contain at least 2mg/g of compound K, which is not normally present in red ginseng or black ginseng concentrate. In addition, the composition of the present invention may contain at least 15 or more ginsenosides.
따라서 본 발명에 의해 제조된 고상발효로 진세노사이드 컴파운드 K가 고함량으로 함유된 조성물은 효능이 우수하고 체내흡수율이 현저하게 우수하므로 전립선 개선 또는 성기능 개선을 위한 제제로 효율적으로 제제화할 수 있어서, 건강식품, 의약품 등으로 널리 활용될 수 있는 효과가 있다.Therefore, since the composition containing a high content of ginsenoside compound K by solid phase fermentation prepared according to the present invention has excellent efficacy and remarkably excellent absorption rate in the body, it can be efficiently formulated as a formulation for improving prostate or sexual function, It has effects that can be widely used as health foods and medicines.
도 1은 본 발명에 따른 고상발효용 제1 천연발효효소복합액의 제조공정에 대한 예시도이다.
도 2는 본 발명에 따른 실시예의 시료 DDK-401과 대조군 시료 DDK-201에 대한 경구섭취 후 혈액 내 CK 흡수 프로파일을 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 실시예의 시료 DDK-401과 대조군 시료 DDK-201에 대한 약동학적 비교실험 결과이다.
도 4는 본 발명의 실시예의 시료 DDK-401과 대조군 시료 DDK-201에 대한 남녀간의 컴파운드 K(CK) 흡수율 비교실험 결과이다.
도 5는 본 발명의 실시예의 시료 DDK-401과 대조군 시료 DDK-201에 대한 Hacat 세포(좌) 및 원시 세포(우)에서의 세포생존율 비교실험 결과이다.
도 6a, 도 6b는 본 발명의 실시예의 시료 DDK-201과 DDK-401에 대한 암 세포 A549의 세포성장 억제효과를 나타낸 그림으로서, 도 6(a)는 MTT 세포독성 분석 결과이고, 도 6(b)는 RT-PCR 및 C. ROS 생성 결과를 보여준다.
도 7은 본 발명의 실시예의 시료 DDK-401과 홍삼(RG)에 대한 LPS에 의해 유도된 NO 생성 억제효과를 나타낸 그림이다.
도 8은 HaCaT세포의 산화적 스트레스에 대한 DDK-201과 DDK-401의 항산화(ROS) 실험결과 그래프이다.1 is an exemplary view of a manufacturing process of a first natural fermentation enzyme complex solution for solid phase fermentation according to the present invention.
2 is a graph showing CK absorption profiles in the blood after oral ingestion of sample DDK-401 according to an example of the present invention and sample DDK-201 as a control.
Figure 3 shows the pharmacokinetic comparison test results of sample DDK-401 of the present invention and control sample DDK-201.
4 is a result of a comparison test of compound K (CK) absorption between men and women for sample DDK-401 of the present invention and control sample DDK-201.
Figure 5 shows the results of cell viability comparison experiments in Hacat cells (left) and primitive cells (right) for sample DDK-401 of the present invention and control sample DDK-201.
Figures 6a and 6b are diagrams showing the cell growth inhibitory effect of cancer cell A549 on samples DDK-201 and DDK-401 of Examples of the present invention, Figure 6 (a) is the result of MTT cytotoxicity analysis, Figure 6 ( b) shows the results of RT-PCR and C. ROS production.
Figure 7 is a picture showing the NO production inhibitory effect induced by LPS on sample DDK-401 and red ginseng (RG) of an embodiment of the present invention.
8 is a graph showing the results of antioxidant (ROS) experiments of DDK-201 and DDK-401 on oxidative stress in HaCaT cells.
이하, 본 발명을 하나의 실시예에 의거 더욱 상세하게 설명하면 다음과 같다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail based on one embodiment.
본 발명은 한약재로 오랫동안 각광을 받고있는 인삼을 발효처리 가공함에 있어서, 이를 보다 효율적으로 개선하고 기능성 성분의 증대와 체내 흡수율 개선 등을 위하여 새로운 원료인 천연발효호소복합액을 이용한 고상발효를 통해 새롭게 가공 처리한 것으로서, 홍삼과 흑삼의 고상발효를 통한 컴파운드 K를 고함량으로 함유한 전립선 개선 또는 성기능 개선용 조성물에 관한 것이다.In the fermentation process of ginseng, which has been in the spotlight for a long time as a herbal medicine, the present invention improves it more efficiently, increases functional ingredients, and improves absorption in the body through solid-phase fermentation using a new raw material, natural fermented soybean complex. As processed, it relates to a composition for improving prostate or sexual function containing a high content of compound K through solid phase fermentation of red ginseng and black ginseng.
또한, 본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 본 발명은 홍삼과 흑삼을 특정 방법으로 제조한 천연발효효소복합액을 발효용 바이오 소재로 활용하여, 홍삼과 흑삼을 각각 발효함으로써, 세포벽의 분해를 통한 활성성분의 현저한 향상과 인체 흡수율이 개선되게 하고, 특히 컴파운드 K를 고함량으로 함유하는 새로운 형태의 조성물의 새로운 용도에 관한 것이다.In addition, according to a preferred embodiment of the present invention, the present invention utilizes a natural fermentation enzyme complex prepared by a specific method of red ginseng and black ginseng as a biomaterial for fermentation, fermenting red ginseng and black ginseng, respectively, through cell wall decomposition. It relates to a new use of a new type of composition that allows significant improvement of active ingredients and improved absorption by the human body, and in particular contains a high content of compound K.
본 발명에서 사용되는 홍삼은 인삼의 1차 가공제품으로서, 본질적으로는 홍삼 대신에 인삼을 사용하여도 유사한 개선 효과를 얻을 수 있다.Red ginseng used in the present invention is a primary processed product of ginseng, and similar improvement effects can be obtained even if ginseng is essentially used instead of red ginseng.
본 발명에서 사용되는 홍삼은 인삼을 푹 찌고 말리는 이른바 증포(蒸曝)과정을 거치면 색이 붉게 변하는데, 이것을 홍삼이라고 한다. 이러한 홍삼은 증포 과정에서 인삼의 성분이 농축되고 수삼에 비해 체질을 덜 타게 되므로 체질에 따라 일부 부작용이 발생하는 것으로 경감시킬 수 있어서 일반적으로 인삼을 사용하지 아니하고 홍삼을 사용하는 것이 더 바람직하게 이용되는 추세이다. 일반적으로 인삼의 부작용으로는 마치 흥분제를 먹은 것 같은 발열과 심박수 증가 등이 있다고 알려져 있다. 홍삼도 다소 부작용이 적지만 유사한 부작용이 있다고 한다. 다만, 홍삼 농축액의 경우 HPLC에 의한 분석결과 인삼 농축액에 비해 사포닌 함량은 다소 낮다고 한다.When the red ginseng used in the present invention goes through a so-called steaming process in which ginseng is steamed and dried, the color changes to red, which is called red ginseng. In red ginseng, the components of ginseng are concentrated during the steaming process and the constitution is less burned than fresh ginseng, so it is possible to reduce some side effects depending on the constitution, so it is generally more preferable to use red ginseng instead of ginseng It is a trend. In general, it is known that side effects of ginseng include fever and increased heart rate, as if taking a stimulant. Red ginseng also has fewer side effects, but it is said to have similar side effects. However, in the case of red ginseng concentrate, as a result of analysis by HPLC, it is said that the saponin content is slightly lower than that of ginseng concentrate.
또한, 흑삼은 증포과정을 더 반복하여 얻은 것으로서, 일반적인 홍삼은 증포 과정을 한 번 거치나 증포 과정을 반복하면 색이 점점 짙어져 갈색을 거쳐 검게 변하며, 아홉 번 반복(구증구포)한 것을 흑삼이라고 한다. 농축과정을 반복하는 만큼 특이한 사포닌 농도가 홍삼보다 높은 것으로 알려져 있으나, 반면에 다른 사포닌의 손실도 있는 것으로 알려져 있다.In addition, black ginseng is obtained by repeating the steaming process, and general red ginseng goes through the steaming process once, but when the steaming process is repeated, the color gradually darkens and turns brown and then black. do. It is known that the specific concentration of saponin is higher than that of red ginseng as much as the concentration process is repeated, but on the other hand, it is known that there is a loss of other saponins.
본 발명에서는 이러한 홍삼이나 흑삼을 발효 처리한 것을 특징으로 하는데, 기존에 알려진 발효공정과는 전혀 다른 방식으로 발효 처리하여 컴파운드 K가 현저하게 고함량으로 함유된 조성물을 특징으로 한다.The present invention is characterized in that such red or black ginseng is fermented, and a composition containing a remarkably high content of Compound K is characterized by fermentation in a completely different way from previously known fermentation processes.
본 발명의 바람직한 실시예에 다르면 홍삼과 흑삼은 각각 1차 고상발효와 2차 액상발효를 거쳐서 새로운 발효농축액으로 제조할 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, red ginseng and black ginseng can be prepared as new fermented concentrates through primary solid-phase fermentation and secondary liquid-phase fermentation, respectively.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 홍삼 또는 흑삼의 발효에 사용된 여러 효소, 효모, 균주 등을 매우 유익한 조건과 선택적 조합으로 구성함으로써, 본 발명의 특별한 효과와 기능 향상을 가능하게 하고, 특히 진세노사이드 K의 함량을 현저하게 높이고, 유용한 기능의 진세노사이드의 함량도 높여서 전립선 개선 또는 성기능 개선에 대한 현저한 효과를 얻을 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, by configuring various enzymes, yeasts, strains, etc. used for fermentation of red or black ginseng under very beneficial conditions and selective combinations, it is possible to improve the special effects and functions of the present invention. Significant effects on prostate improvement or sexual function improvement can be obtained by significantly increasing the content of senoside K and also increasing the content of ginsenosides having useful functions.
일반적으로 천연물의 발효는 발효대상이 되는 원물이 함유하고 있는 기능성 유효성분과 이에 합당한 미생물의 선택에 의해서 그 유용성이 결정된다. 그러나 미생물이라고 하지만 결국은 미생물 내에 존재하는 특정 효소의 존재와 활성도가 더욱 중요하다. 모든 효소는 고유의 기질특이성을 가지고 있기 때문에 한 효소는 한 반응만 촉매하고 온도, pH, 염의 농도 등 특이한 조건을 요구한다. In general, the usefulness of fermentation of natural products is determined by the selection of functional active ingredients contained in raw materials to be fermented and suitable microorganisms. However, even though it is called a microorganism, the existence and activity of a specific enzyme present in the microorganism is more important. Since all enzymes have their own substrate specificity, one enzyme catalyzes only one reaction and requires specific conditions such as temperature, pH, and salt concentration.
본 발명의 바람직한 구성은 이러한 개념에 기초로 하고, 홍삼 또는 흑삼이 함유하고 있는 진세노사이드 등 유효성분들과 특정 미생물에 존재하는 효소들과의 상관관계가 발효물의 효율과 특성을 부여하는 점을 고려하여, 특정 성분의 조성과 발효조건으로 특정 조성의 제1 및 제2 천연발효효소복합액을 제조하고, 이를 이용하여 1차 고상발효 및 2차 액상발효시켜서 우수한 체내흡수율을 가지면서 전립선 개선 또는 성기능 개선 효과가 있는 발효농축액을 얻을 수 있다.The preferred configuration of the present invention is based on this concept, and considering that the correlation between active ingredients such as ginsenosides contained in red ginseng or black ginseng and enzymes present in specific microorganisms gives the efficiency and characteristics of the fermented product. Therefore, the first and second natural fermentation enzyme complexes of a specific composition are prepared with a specific composition and fermentation conditions, and the first solid phase fermentation and the second liquid phase fermentation are performed using the same to improve prostate or sexual function while having excellent body absorption rate A fermented concentrate having an improvement effect can be obtained.
또한, 본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 발효하기 전에 식물세포가 함유한 다양한 성분들을 손실함이 없이 최대한 노출될 수 있도록 효모 및 세포막 분해효소를 혼합한 발효액을 이용하는 것을 특징으로 한다.In addition, according to a preferred embodiment of the present invention, it is characterized by using a fermentation broth in which yeast and a cell membrane decomposing enzyme are mixed so that various components contained in plant cells can be maximally exposed without loss before fermentation.
또한, 본 발명에서 발효액 구성에 사용되는 다양한 성분들은 발효 미생물 고유의 효소 외에 탄네이즈 등 발효대상물에 존재하는 성분들을 변환시킬 수 있는 효소들을 첨가하여 어떤 천연물에서도 다양하고 많은 생리활성물질이 생성될 수 있는 다기능(multi-functional) 효소복합물로 제조하고, 이를 이용하여 홍삼 또는 흑삼을 발효함으로써 생체이용율도 현저하게 개선하고, 특히 컴파운드 K의 함량을 현저하게 높여서 체내흡수율이 매우 우수하다.In addition, various components used in the composition of the fermentation broth in the present invention can be produced from any natural product by adding enzymes that can convert components present in the fermentation target, such as tannase, in addition to enzymes inherent in fermenting microorganisms. It is prepared as a multi-functional enzyme complex, and by fermenting red or black ginseng using it, the bioavailability is significantly improved, and in particular, the content of compound K is remarkably increased, so the absorption rate in the body is very excellent.
본 발명은 제1 천연발효효소복합액으로 홍삼과 흑삼을 각각 고상발효하고, 제1 천연발효효소액으로 다시 액상발효하여 얻은 발효홍삼농축액 및 발효흑삼농축액을 혼합한 전립선 개선 또는 성기능 개선용 조성물을 그 특징으로 한다.The present invention provides a composition for improving prostate or sexual function, which is a mixture of fermented red ginseng concentrate and fermented black ginseng concentrate obtained by performing solid phase fermentation of red ginseng and black ginseng with the first natural fermenting enzyme complex solution and liquid fermentation again with the first natural fermenting enzyme solution. to be characterized
본 발명에서 홍삼이나 흑삼의 고상발효에 사용되는 발효액은 매실천연효소액과 황기, 마늘 및 멀꿀 중 2종 이상을 포함하는 식물혼합물을 혼합한 혼합액에 유산균, 막걸리효모액과 버섯균사체로 발효하고 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소를 첨가하여 발효한 제1 천연발효효소복합액을 바람직하게 사용할 수 있다. 더 바람직하게는, 여기에 멀티비타민을 추가로 포함할 수 있다.In the present invention, the fermented liquid used for solid phase fermentation of red or black ginseng is fermented with lactic acid bacteria, makgeolli yeast liquid and mushroom mycelia in a mixture of a natural enzyme solution of plum and a plant mixture containing at least two types of astragalus, garlic, and honey, and decomposing cell membranes. and a first natural fermentation enzyme complex solution fermented with the addition of a biocomponent converting enzyme may be preferably used. More preferably, it may further include a multivitamin.
이러한 본 발명에 따른 제1 천연발효효소복합액은 그 자체로서 홍삼이나 흑삼의 고상발효에 사용될 수 있지만, 보다 바람직한 발효 특성을 구현하기 위해 상기 혼합 효소액에 추가로 여기에 산수유, 오미자, 헛개, 황칠 중에서 하나이상을 함유하는 식물혼합물을 극성용매로 추출한 추출액이 바람직하게 사용될 수 있다. The first natural fermenting enzyme complex solution according to the present invention can be used for solid phase fermentation of red or black ginseng by itself, but in addition to the mixed enzyme solution, in order to realize more desirable fermentation characteristics, cornus officinalis, Schisandra chinensis, hoveni, and hwangchil are added. An extract obtained by extracting a plant mixture containing at least one of them with a polar solvent may be preferably used.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 고상발효는 홍삼이나 흑삼을 천연 복합발효액에 침지한 후 꺼내어 발효하는 과정으로 수행될 수 있다. 더 바람직하게는 이러한 침지 및 발효는 2차례 반복하여 실시할 수 있다. According to a preferred embodiment of the present invention, the solid phase fermentation may be performed by immersing red ginseng or black ginseng in a natural composite fermented liquid and then taking it out and fermenting it. More preferably, such soaking and fermentation can be repeated twice.
본 발명에서 제조된 홍삼이나 흑삼의 1차 고상발효된 발효물은 일반적으로는 액상의 발효물로 얻어질 수 있다.The primary solid-phase fermented product of red ginseng or black ginseng prepared in the present invention can generally be obtained as a liquid fermented product.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 고상발효된 고상발효 추출물은 제2 천연발효효소복합액으로 매실천연효소액과 식물혼합추출액, 유산균, 막걸리효모액, 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소, 그리고 아미노산 등을 첨가하여 발효한 제2 천연발효효소복합액으로 2차 액상발효한 홍삼이나 흑삼 발효물을 얻을 수 있다. 더 바람직하게는 2차 액상발효를 위한 발효액에도 복합비타민을 추가로 함유할 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the solid-phase fermented solid-phase fermented extract is a second natural fermentation enzyme complex solution, such as plum natural enzyme solution and plant mixed extract, lactic acid bacteria, rice wine yeast solution, cell membrane decomposition and biocomponent conversion enzymes, amino acids, etc. It is possible to obtain a second liquid fermented red ginseng or black ginseng fermented product with the second natural fermentation enzyme complex fermented by adding . More preferably, the fermentation broth for the secondary liquid phase fermentation may additionally contain complex vitamins.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 제2 천연발효효소복합액에 사용된 매실천연효소액에 식물혼합추출액을 혼합 사용할 수 있는데, 여기서는 상기 제1 천연발효효소복합액에서 사용된 식물혼합추출액과 같은 황기, 마늘 및 멀꿀을 포함하고, 다만 여기에 추가되는 식물로서는 산수유, 오미자, 헛개, 황칠 중에서 하나이상을 추가로 함유할 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the plant mixture extract may be mixed with the plum natural enzyme solution used in the second natural fermentation enzyme complex solution, where the plant mixture extract used in the first natural fermentation enzyme complex solution is the same. It includes astragalus, garlic, and honey, but as plants added thereto, one or more of cornus oil, Schisandra chinensis, hoveni, and hwangchil may be additionally contained.
한편, 본 발명에 따르면 상기 제1 및 제2 천연발효효소복합액에서 사용되는 막걸리 효모액과 매실천연효소액은 30~70 : 70~30의 중량비율, 더 좋기로는 2~3:3~2의 중량비율, 통상적으로는 서로 동일량이나 비슷한 중량으로 사용할 수 있다.On the other hand, according to the present invention, the rice wine yeast solution and the plum natural enzyme solution used in the first and second natural fermentation enzyme complex solutions have a weight ratio of 30 to 70: 70 to 30, more preferably 2 to 3: 3 to 2 The weight ratio of, typically, can be used in the same amount or similar weight to each other.
또한, 본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 매실천연효소액은 바람직하게는 5~30brix, 더 좋기로는 5~15brix로 농축된 것이 사용될 수 있고, 상기 식물혼합추출액 역시 바람직하게는 5~30brix, 더 좋기로는 5~15brix로 농축된 것이 바람직하게 사용될 수 있다.In addition, according to a preferred embodiment of the present invention, the plum natural enzyme solution is preferably concentrated to 5 to 30 brix, more preferably to 5 to 15 brix, and the plant mixture extract is also preferably 5 to 30 brix, More preferably, those concentrated to 5 to 15 brix may be preferably used.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 매실천연효소액과 식물혼합추출액은 30~70 : 70~30 중량부의 비율로 사용하는 것이 바람직한데, 만일 이 범위를 벗어나면 다양한 식물에 대한 발효과정에서 발효의 균형을 이루지 못하고 특히 효과적인 발효를 기대하기 어렵다,According to a preferred embodiment of the present invention, the plum natural enzyme solution and the mixed plant extract are preferably used in a ratio of 30 to 70: 70 to 30 parts by weight. It is not balanced and it is difficult to expect particularly effective fermentation,
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 사용되는 유산균은 효율적인 발효를 위해 사용되는데, 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 루테니(Lactobacillus reuteni), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus fermentum 중에 하나 이상을 사용할 수 있다. 더 바람직하게는 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 루테니(Lactobacillus reuteni), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 중의 1종 이상과 추가로 바실러스 아밀로리퀴피엔스(Bacillus amyloliquefaciens), Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, Streptococcus thermophilus 중 하나이상이 혼합된 혼합 균을 사용할 수 있다. 여기서 유산균에 바실러스 아밀로리퀴피엔스(Bacillus amyloliquefaciens)를 혼합하는 것은 된장, 고추장 등 우리나라의 대표적인 발효식품에 존재하는 발효균으로서 질소대사를 촉진하기 위함이다.According to a preferred embodiment of the present invention, the lactic acid bacteria used are used for efficient fermentation, such as Lactobacillus brevis , Lactobacillus casei , Lactobacillus reuteni , Lactobacillus pla One or more of Lanta room (Lactobacillus plantarum ), Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus acidophilus, and Lactobacillus fermentum may be used. More preferably, one or more of Lactobacillus brevis, Lactobacillus casei , Lactobacillus reuteni, Lactobacillus plantarum and further Bacillus amylolithic A mixture of at least one of Bacillus amyloliquefaciens , Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, and Streptococcus thermophilus may be used. Here, mixing Bacillus amyloliquefaciens with lactic acid bacteria is a fermenting bacterium present in Korea's representative fermented foods such as soybean paste and gochujang to promote nitrogen metabolism.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 이러한 유산균은 상기 제1 또는 제2 천연발효효소복합액 모두에서 각각 0.1~5중량%, 더 바람직하게는 0.5~3 중량%로 사용하는 것이 바람직하다. 만일 그 사용량이 너무 적으면 발효 효과가 저하되고, 너무 과다하면 과발효로 인하여 원하지 않는 물질 발생 등의 염려가 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, such lactic acid bacteria are preferably used in an amount of 0.1 to 5% by weight, more preferably 0.5 to 3% by weight, respectively, in both the first and second natural fermentation enzyme complex solutions. If the amount used is too small, the fermentation effect is lowered, and if it is too excessive, there is concern about the generation of unwanted substances due to over-fermentation.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 제1 또는 제2 천연발효효소복합액에서 상기 유산균과 더불어서 막걸리 효모액을 사용하는 바, 이러한 막걸리 효모액은 바람직하게는 생막걸리를 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae)로 배양한 것이 바람직하게 이용될 수 있다. According to a preferred embodiment of the present invention, in the first or second natural fermenting enzyme complex solution, the rice wine yeast liquid is used together with the lactic acid bacteria. Cultured with Saccharomyces cerevisiae can be preferably used.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 이러한 막걸리 효모액은 상기 제1 또는 제2 천연발효효소복합액 모두에서 각각 0.5~10중량%로 사용하는 것이 좋은데, 더 바람직하게는 0.5~5중량%로 사용할 수 있다. 만일 그 사용량이 너무 적으면, 발효 성능이 저하되고, 그 사용량이 너무 과다하면 과발효 문제가 발생하여 좋지 않고 유효성분의 향상 효과가 낮아질 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the makgeolli yeast liquid is preferably used in an amount of 0.5 to 10% by weight, more preferably 0.5 to 5% by weight, in both the first or second natural fermentation enzyme complex solution. can If the amount is too small, fermentation performance is degraded, and if the amount is too excessive, over-fermentation problems occur, which is not good and the effect of improving the active ingredient may be lowered.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소는 식물 세포막을 분해하여 세포내 성분을 유출하고 고분자 물질을 저분자 물질로 또는 생리활성이 우수한 물질로 변환시켜서 흡수율을 향상시키는데 기여하는 바, 예컨대 수미자임(Sumizyme), 얼티메이즈(Ultimase MFC), 파이르플로(Pyr-flo), 탄네이즈(Tannase) 중에서 하나 이상을 바람직하게 사용할 수 있다. According to a preferred embodiment of the present invention, the cell membrane decomposition and biocomponent conversion enzyme decomposes plant cell membranes to release intracellular components and converts high-molecular substances into low-molecular substances or substances with excellent physiological activity, thereby contributing to improving the absorption rate For example, one or more of Sumizyme, Ultimase MFC, Pyr-flo, and Tannase may be preferably used.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소는 상기 제1 또는 제2 천연발효효소복합액 모두에서 각각 0.01~3 중량%. 더 바람직하게는 0.05~1중량%로 사용하는 것이 바람직한데, 만일 그 사용량이 너무 적으면 흡수율 등이 저하되며, 과다하면 원하는 유효성분의 효능이 저하될 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the cell membrane decomposition and biocomponent conversion enzymes are 0.01 to 3% by weight, respectively, in both the first or second natural fermentation enzyme complex solution. More preferably, it is preferable to use 0.05 to 1% by weight, but if the amount is too small, the absorption rate and the like are lowered, and if it is excessive, the efficacy of the desired active ingredient may be lowered.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 제1 또는 제2 천연발효효소복합액 모두에서 최종 발효 전에 추가로 복합비타민을 0.01~1중량%로 첨가할 수 있다. 이러한 복합비타민으로서는 예컨대, 비타민 에이(vitamin A), 비타민 비 복합체(vitamin B complex) 및 비타민 씨(vitamin C) 중에서 2 이상을 포함할 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, complex vitamins may be additionally added in an amount of 0.01 to 1% by weight before final fermentation in both the first or second natural fermentation enzyme complex solution. These complex vitamins may include, for example, two or more of vitamin A, vitamin B complex, and vitamin C.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 제2 천연발효효소복합액의 최종 발효 전 혼합물에 아미노산을 함유하고, 복합비타민을 추가로 함유할 수 있다. According to a preferred embodiment of the present invention, the mixture before final fermentation of the second natural fermentation enzyme complex solution may contain amino acids and additionally contain complex vitamins.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 제1 천연발효효소복합액은 매실천연효소액 30~70중량부와 황기, 마늘, 멀꿀, 산수유, 오미자, 헛개 및 황칠을 포함하는 식물혼합추출액 30~70중량부가 혼합된 제1 천연혼합발효액 85~95중량%에, 유산균 0.1~5중량%와 막걸리효모액 0.5~10중량%, 동충하초 균사체 1~5중량%, 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소 0.01~3중량%, 멀티비타민 0.01~3중량%를 첨가하여 발효한 것이 효과적으로 사용될 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the first natural fermentation enzyme complex is 30 to 70 parts by weight of plum natural enzyme solution and 30 to 70 parts by weight of a mixed plant extract containing Astragalus, garlic, honey, Cornus officinalis, Omija, Hovenia, and Hwangchil. 85 to 95% by weight of the first natural mixed fermented liquid, 0.1 to 5% by weight of lactic acid bacteria, 0.5 to 10% by weight of makgeolli yeast solution, 1 to 5% by weight of cordyceps mycelium, 0.01 to 3% by weight of cell membrane decomposition and biocomponent conversion enzymes %, fermented by adding 0.01 to 3% by weight of multivitamins can be effectively used.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 제2 천연발효효소복합액은 매실천연효소액 30~70중량부와 황기, 마늘, 멀꿀, 오가피, 비타민나무, 연자육 및 감태를 함유하는 식물혼합추출액 30~70중량부가 혼합된 천연혼합발효액 85~95중량%에, 유산균 0.1~5중량%와 막걸리효모액 0.5~10중량%, 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소 0.01~3중량%, 멀티비타민 0.01~3중량%, 아미노산 0.1~3 중량%을 첨가하여 발효한 것이 효과적으로 사용될 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the second natural fermentation enzyme complex solution is a plant mixture extract containing 30 to 70 parts by weight of plum natural enzyme solution and astragalus, garlic, honey, cucumber, vitamin tree, lotus root, and
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 이러한 제1 천연발효효소복합액을 이용하여 홍삼을 1차로 고상발효하고, 상기 2차 발효효소복합액을 이용하여 고상발효한 홍삼 발효물을 2차로 액상발효하게 되면 체내흡수율이 우수한 진세노사이드 컴파운드 K가 고함량 함유된 바람직한 발효홍삼농축액을 얻을 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, red ginseng is firstly fermented in solid phase using the first natural fermentation enzyme complex solution, and the fermented red ginseng product fermented in solid phase is secondarily fermented in liquid phase using the second fermentation enzyme complex solution. Then, a desirable fermented red ginseng concentrate containing a high content of ginsenoside compound K having excellent body absorption can be obtained.
또한, 본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 제1 천연발효효소복합액과 제2 천연발효효소복합액을 이용하여 흑삼을 상기와 같은 방식으로 1차 고상발효 후 2차로 액상발효하게 되면, 역시 체내흡수율이 우수한 진세노사이드 컴파운드 K가 고함량 함유된 바람직한 발효흑삼농축액을 얻을 수 있다.In addition, according to a preferred embodiment of the present invention, when black ginseng is fermented in liquid phase after the first solid phase fermentation in the same way as above using the first natural fermentation enzyme complex solution and the second natural fermentation enzyme complex solution, A desirable fermented black ginseng concentrate containing a high content of ginsenoside compound K, which has excellent body absorption rate, can be obtained.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기와 같이 얻어진 발효홍삼농축액과 발효흑삼농축액을 하여 본 발명의 컴파운드 K가 고함량 함유된 조성물을 얻을 수 있는 것이다.According to a preferred embodiment of the present invention, a composition containing a high content of Compound K of the present invention can be obtained by mixing the fermented red ginseng concentrate obtained as described above and the fermented black ginseng concentrate.
특히, 상기와 같은 본 발명의 조성물은 홍삼이나 흑삼을 발효 가공함에 있어서, 일반적인 발효와는 그 발효 후의 기능성이 현저하게 개선되는 효과를 기대할 수 있다. 더욱이 본 발명에서는 일반 발효가 아닌 본 발명에서 특별히 제조된 특정 조건의 제1 천연복합발효액을 이용하여 고상발효 과정을 거치고 나서, 이를 제2 천연발효효소복합액으로 액상발효한 결과물로 얻어진 것이 바람직하게 사용된다. 따라서 발효 전의 홍삼이나 흑삼을 기존의 일반적인 유산균 등을 이용하여 발효한 발효물에 비해 진세노아시느 컴파운드 K가 고함량으로 함유되어 있어서 월등하게 우수한 효과를 얻을 수 있으며, 또 기호성과 활용성 측면에서도 우수한 효과를 나타낼 수 있는 것이다.In particular, in the composition of the present invention as described above, in fermenting and processing red ginseng or black ginseng, the effect of significantly improving the functionality after fermentation can be expected compared to general fermentation. Moreover, in the present invention, it is preferable that the product obtained as a result of liquid phase fermentation with the second natural fermentation enzyme complex solution after going through a solid phase fermentation process using the first natural complex fermentation solution under specific conditions specially prepared in the present invention, rather than general fermentation used Therefore, compared to fermented products made by fermenting red or black ginseng before fermentation using general lactic acid bacteria, it contains a higher content of ginsenoacine compound K, so it is possible to obtain a significantly superior effect, and also in terms of palatability and usability. It can show excellent effect.
상기와 같은 본 발명의 제1 및 제2 천연발효효소복합액을 제조하기 위한 방법과 이를 이용하여 홍삼 또는 흑삼의 제조공정을 각 단계별로 하나의 실시예로 설명하면 다음과 같다.The method for preparing the first and second natural fermenting enzyme complex solutions of the present invention as described above and the manufacturing process of red ginseng or black ginseng using the same will be described as an example for each step.
(1) 사용원료의 제조(1) Manufacture of raw materials used
<매실천연효소액의 제조><Manufacture of plum natural enzyme solution>
본 발명은 매실천연효소액 30~70중량부와 황기, 마늘 및 멀꿀 중에서 2종 이상을 포함하는 식물혼합추출액 30~70중량부를 혼합한 천연혼합발효액을 제조하는 단계를 거친다.The present invention goes through the steps of preparing a natural mixed fermentation solution by mixing 30 to 70 parts by weight of plum natural enzyme solution and 30 to 70 parts by weight of a plant mixture extract containing at least two of Astragalus, garlic and honey.
여기서 사용되는 매실천연효소액은 매실에 설탕 또는 흑설탕을 1:0.8∼1.5의 중량비로 혼합하여 상온에서 3∼6개월 동안 발효시킨 것이 바람직하게 사용될 수 있다. 이러한 매실천연효소액은 상기 농도로 농축하여 사용하면 좋다.The plum natural enzyme solution used here can be preferably used by mixing plum with sugar or brown sugar at a weight ratio of 1:0.8 to 1.5 and fermenting it at room temperature for 3 to 6 months. This plum natural enzyme solution may be used after being concentrated to the above concentration.
이러한 매실천연효소액은 구체적으로는 예컨대, 청매실을 중량비율로 동량의 설탕으로 침지하여 음지 상온에서 3개월 이상 자연발효한 것으로 최종 농도가 상기 범위의 brix인 것을 바람직하게 사용할 수 있다. 여기서 사용된 청매실 대신 홍매실을 사용할 수 있고, 설탕은 흑설탕을 바람직하게 사용할 수 있다. 매실천연효소액의 당도는 상기 범위가 바람직한데, 그 이유는 첨가한 매실청이 이후 첨가할 유산균의 성장을 위한 탄소원을 제공할 수 있기 때문에 바람직한 환경으로 조성하는 것이다. 만일, 매실천연효소액의 당도가 너무 높으면 미생물의 성장과 효소의 활성도를 저해할 수 있다. Specifically, such a plum natural enzyme solution is, for example, immersed in the same amount of sugar in a weight ratio of blue plum and naturally fermented at room temperature in the shade for 3 months or more, and the final concentration can be preferably used in brix in the above range. Red plums can be used instead of the green plums used here, and brown sugar can be preferably used as sugar. The sugar content of the plum natural enzyme solution is preferably within the above range, because the added plum syrup can provide a carbon source for the growth of lactic acid bacteria to be added later, so it is created in a desirable environment. If the sugar content of the plum natural enzyme solution is too high, it can inhibit the growth of microorganisms and the activity of enzymes.
<식물혼합추출액의 제조><Preparation of mixed plant extract>
본 발명에서 사용된 상기 식물혼합추출액은 상기 열거된 종류의 천연물을 이용하여 예컨대, 10배 내지 20배 용량의 정제수를 가하고 80∼98℃에서 5~15시간. 좋기로는 8시간 침지한 후 여과하여 상기 농도의 brix로 만들어 사용할 수 있다. 추출은 천연물의 종류에 따라서 1, 2회 더 수행할 수 있고 이들을 합하여 제조할 수 있다. 추출 용매는 극성용매, 바람직하게는 30∼90% 주정을 사용할 수 있다. The plant mixture extract used in the present invention is obtained by adding, for example, 10 to 20 times the amount of purified water using the above-listed types of natural products, and 5 to 15 hours at 80 to 98 ° C. Preferably, after soaking for 8 hours, it can be filtered and used to make brix of the above concentration. Extraction may be performed one or two more times depending on the type of natural product and may be prepared by combining them. As the extraction solvent, a polar solvent, preferably 30 to 90% alcohol may be used.
<막걸리효모액의 제조><Preparation of Makgeolli yeast solution>
본 발명에서 사용되는 막걸리효모액은 예컨대, 생막걸리에 막걸리 대비 설탕 2~10%(w/v)와 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 3~7%를 첨가한 후 25~40℃, 더 좋기로는 28~32℃에서 2~10일, 더 좋기로는 3~5일 동안 배양하여 제조할 수 있다. 더욱 바람직하게는 생막걸리에 설탕 3.5%(w/v)와 사카로마이세스 세레비지애를 첨가한 후 30℃에서 4일 동안 배양하여, 이후 단계인 발효과정에서 효모의 활성이 최적화된 막걸리효모액으로 제조할 수 있다. The makgeolli yeast liquid used in the present invention is, for example, 2-10% (w / v) of sugar compared to makgeolli in raw makgeolli and 3-7% of Saccharomyces cerevisiae ( Saccharomyces cerevisiae ) After adding 25 to 40 ℃ , More preferably, it can be prepared by culturing for 2 to 10 days at 28 to 32 ° C., more preferably for 3 to 5 days. More preferably, after adding 3.5% (w/v) sugar and Saccharomyces cerevisiae to raw makgeolli, incubating at 30 ° C for 4 days, Makgeolli yeast with optimized yeast activity in the subsequent fermentation process It can be made into a liquid.
(2) 제1 천연발효효소복합액의 제조(2) Preparation of the first natural fermentation enzyme complex solution
본 발명에서 고상발효를 위해 사용되는 제1 천연발효효소복합액은 상기 매실천연효소액에 유산균과 상기 막걸리효모액, 그리고 버섯균사체, 바람직하게는 동충하초, 차가버섯, 영지버섯, 능이버섯, 상황버섯, 운지버섯, 노루궁뎅이버섯 중 하나이상의 버섯 균사체를 접종하고 30~45℃에서 12~72시간 발효하는 단계;와 상기 버섯균사체 적용 발효물에 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소를 첨가하여 30~45℃에서 1~6시간 발효하는 단계를 포함하는 제1 천연발효효소복합액을 제조하는 단계를 거쳐서 제조할 수 있다.The first natural fermentation enzyme complex solution used for solid phase fermentation in the present invention is the plum natural enzyme solution, lactic acid bacteria, the makgeolli yeast solution, and mushroom mycelium, preferably Cordyceps sinensis, Chaga mushroom, Ganoderma lucidum, Neungi mushroom, Sanghwang mushroom, Inoculating at least one mushroom mycelium of fingernail mushroom and ericium erinaceus and fermenting it at 30-45 ° C for 12-72 hours; and adding cell membrane decomposition and biocomponent conversion enzymes to the mushroom mycelium-applied fermented product at 30-45 ° C. It can be prepared through a step of preparing a first natural fermentation enzyme complex solution including fermentation for 1 to 6 hours.
여기서, 상기 버섯균사체로는 동충하초 균사체가 바람직하게 사용될 수 있고, 동충하초 균사체는 코디셉스속 동충하초(Cordyceps spp.) 균사체를 바람직하게 사용할 수 있고, 예컨대 코디셉스 시넨시스(Cordyceps sinensis), 코디셉스 밀라타리스(Cordyceps militaris), 코디셉스 스카라베콜라(Cordyceps scarabaecola), 코디셉스 누탄스(Cordyceps nutans), 코디셉스 스페코세팔라(Cordyceps sphecocephala), 코디셉스 트리센트리(Cordyceps tricentri), 패실로마이세스테누이페스(Paecilomyceps tenuipes) 및 패실로마이세스 자포니카(Paecilomyces japonica)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 사용할 수 있다.Here, Cordyceps mycelium may be preferably used as the mushroom mycelium, Cordyceps mycelium may preferably use Cordyceps spp. Cordyceps militaris , Cordyceps scarabaecola, Cordyceps nutans, Cordyceps sphecocephala , Cordyceps tricentri , Pasilomycestenui At least one selected from the group consisting of Paecilomyceps tenuipes and Paecilomyces japonica may be used.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 더 좋기로는 매실천연효소액에 마늘, 멀꿀 및 황기를 함유하는 식물혼합추출액을 혼합하여 사용할 수 있다. 이 경우 바람직하게는 매실천연효소액 30~70중량부와 황기, 마늘 및 멀꿀 중 2종 이상을 포함하는 식물혼합추출액 30~70중량부를 혼합한 제1 천연혼합발효액을 제조하여 홍삼의 고상발효에 사용할 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, more preferably, it can be used by mixing the plant mixture extract containing garlic, honey and astragalus in plum natural enzyme solution. In this case, preferably, a first natural mixed fermentation liquid prepared by mixing 30 to 70 parts by weight of natural enzyme solution of plum and 30 to 70 parts by weight of a mixed plant extract containing two or more of Astragalus, garlic, and honey was prepared and used for solid phase fermentation of red ginseng. can
이와 같이, 본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 매실천연효소액 단독 또는 상기 제1 천연혼합발효액을 사용하되, 여기에 유산균과 막걸리효모액, 그리고 버섯 균사체를 접종하여 발효하고, 이 버섯균사체 적용 발효물에 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소를 첨가하여 2차 발효하여 제1 천연발효효소복합액을 제조할 수 있다. 이때 2차 발효 이전에 복합비타민을 추가로 첨가하면 더욱 바람직하다.As such, according to a preferred embodiment of the present invention, the natural plum enzyme solution alone or the first natural mixed fermentation solution is used, but lactic acid bacteria, rice wine yeast solution, and mushroom mycelium are inoculated and fermented, and the mushroom mycelium applied fermented product A first natural fermentation enzyme complex solution may be prepared by adding a cell membrane decomposition and biocomponent conversion enzyme to secondary fermentation. At this time, it is more preferable to additionally add a complex vitamin before the secondary fermentation.
본 발명에 의하면, 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소를 첨가함으로써 세포벽을 유효성분 소실없이 분해하고 발효 효율을 더욱 개선하므로, 기능성 성분의 함량을 현저하게 상승시키고 고분자량 유효물질은 저분자량으로 전환시켜 생체 흡수율을 크게 향상시킬 수 있다. 특히, 이러한 고상발효에 의해 진세노사이드 컴파운드 K가 고함량으로 함유될 수 있는 기반이 마련될 수 있다.According to the present invention, cell walls are decomposed without loss of active ingredients and fermentation efficiency is further improved by adding enzymes that decompose cell membranes and convert biocomponents, thereby significantly increasing the content of functional ingredients and converting high-molecular-weight active substances to low-molecular-weight Absorption can be greatly improved. In particular, a basis for containing a high content of ginsenoside compound K may be provided by such solid phase fermentation.
이러한 본 발명에 따른 천연발효효소복합액의 바람직한 일 예의 제조공정은 도 1에 도시한 바와 같이 수행될 수 있다.A preferred example of the manufacturing process of the natural fermentation enzyme complex solution according to the present invention may be performed as shown in FIG.
이렇게 제조된 제1 천연발효효소복합액은 홍삼 또는 흑삼의 고상발효에 바람직하게 이용된다. The first natural fermentation enzyme complex solution thus prepared is preferably used for solid phase fermentation of red or black ginseng.
(3) 고상발효(3) Solid phase fermentation
본 발명에 따르면, 홍삼 또는 흑삼을 상기 제조한 제1 천연발효효소복합액에 침지한 후 꺼내어 발효하는 단계를 거칠 수 있다.According to the present invention, red ginseng or black ginseng may be immersed in the prepared first natural fermentation enzyme complex solution and then taken out and fermented.
여기서 홍삼 또는 흑삼은 한약재 등에서 널리 사용되는 통상의 홍삼 또는 흑삼을 사용할 수 있다. Here, red ginseng or black ginseng may be conventional red ginseng or black ginseng widely used in oriental medicine.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 홍삼 또는 흑삼을 상기 제1 천연발효효소복합액에 20~25℃에서 40-80분, 더 좋기로는 50~70분 동안 1차 침지한 후 꺼내어 45~55℃에서 2~4일 동안 1차 발효하고, 상기 1차 발효한 홍삼을 다시 상기 제1 천연발효효소복합액에 20~25℃에서 10~20분 동안 2차 침지한 후 꺼내어 45~55℃에서 1~3일 동안 2차 발효할 수 있다. According to a preferred embodiment of the present invention, red ginseng or black ginseng is first immersed in the first natural fermentation enzyme complex solution at 20 to 25 ° C for 40 to 80 minutes, more preferably 50 to 70 minutes, and then taken out and 45 to 55 After primary fermentation at °C for 2 to 4 days, the primary fermented red ginseng is secondarily immersed in the first natural fermentation enzyme complex at 20 to 25 °C for 10 to 20 minutes, then taken out and stored at 45 to 55 °C. It can be fermented for 1 to 3 days.
이렇게 하면 고상발효한 홍삼 또는 흑삼의 1차 고상발효물을 홍삼 또는 흑삼의 추출물 형태로 얻을 수 있다.In this way, the primary solid-phase fermented product of red ginseng or black ginseng that has been fermented in solid phase can be obtained in the form of an extract of red ginseng or black ginseng.
(4) 제2 천연발효효소복합액의 제조(4) Preparation of the second natural fermentation enzyme complex solution
상기 방법으로 제조되는 매실천연효소액 30~70중량부와 황기, 마늘 및 멀꿀 중 2종 이상을 포함하는 식물혼합추출액 30~70중량부를 발효한 제2 천연혼합발효액을 제조할 수 있다.A second natural mixed fermented liquid can be prepared by fermenting 30 to 70 parts by weight of the plum natural enzyme solution prepared by the above method and 30 to 70 parts by weight of a plant mixed extract containing at least two of Astragalus, garlic and honey.
본 발명에 의하면, 상기 제2 천연발효효소복합액을 제조하기 위해서는 상기 매실천연효소액이나 제2 천연혼합발효액에, 유산균과 막걸리효모액를 접종하고 30~45℃에서 12~72시간 발효한다. 여기서 사용되는 매실천연효소액, 식물혼합추출액과 및 막걸리효모액은 상기와 같은 방법으로 제조될 수 있다.According to the present invention, in order to prepare the second natural fermentation enzyme complex solution, the natural plum enzyme solution or the second natural mixed fermentation solution is inoculated with lactic acid bacteria and makgeolli yeast solution, and fermented at 30 to 45 ° C. for 12 to 72 hours. The plum natural enzyme solution, plant mixture extract and makgeolli yeast solution used here can be prepared in the same way as above.
그 다음으로는, 상기 발효물에 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소와 아미노산을 첨가하여 30~45℃에서 1~6시간 발효하는 단계 거쳐서 제2 천연발효효소복합액을 제조할 수 있다. 여기서 더 바람직하게는 복합비타민을 추가로 혼합할 수 있다. Next, a second natural fermentation enzyme complex may be prepared by adding enzymes and amino acids for cell membrane decomposition and biocomponent conversion to the fermented product, followed by fermentation at 30 to 45° C. for 1 to 6 hours. More preferably, a multivitamin may be additionally mixed.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 이러한 효소나 아미노산을 혼합하는 경우 추후 이를 이용하여 홍삼 또는 흑삼을 액상발효하였을 때, 그 2차 발효물에서 컴파운드 K의 함량을 높이는 효과가 현저하게 더 우수한 효과를 보일 수 있다. According to a preferred embodiment of the present invention, when these enzymes or amino acids are mixed, when liquid phase fermentation of red or black ginseng is performed later, the effect of increasing the content of Compound K in the secondary fermentation product is significantly better. can be seen
이렇게 제조된 제2 천연발효효소복합액은 상기 고상발효된 홍삼 또는 흑삼의 1차 발효 추출물에 대하여 액상발효를 수행하는 2차 발효에 바람직하게 사용될 수 있다.The second natural fermentation enzyme complex solution thus prepared can be preferably used for secondary fermentation in which liquid phase fermentation is performed on the primary fermented extract of red ginseng or black ginseng fermented in solid phase.
(5) 액상발효(5) Liquid fermentation
본 발명의 바람직한 실시에에 의하면, 상기 고상발효 과정을 거쳐 얻어진 홍삼이나 흑삼의 고상발효물은 바람직하게는 추출액으로 제조하여, 이를 상기 제조된 제2 천연발효효소복합액을 이용하여 액상발효시킨다.According to a preferred embodiment of the present invention, the solid-phase fermented product of red ginseng or black ginseng obtained through the solid-phase fermentation process is preferably prepared as an extract and liquid-phase fermented using the prepared second natural fermentation enzyme complex solution.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 제2 천연발효효소복합액은 상기 발효원료인 고상발효물 추출액에 0.1~50부피%로 첨가하여 액상발효시킬 수 있다. 만일 그 사용량이 적으면 발효가 제대로 일어나지 않게 되고, 그 사용량이 과다하면 과발효로 인해 부작용이나 부생성물이 나타날 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the second natural fermentation enzyme complex may be added in an amount of 0.1 to 50% by volume to the solid phase fermentation extract, which is the fermentation raw material, for liquid phase fermentation. If the amount is small, fermentation does not occur properly, and if the amount is excessive, side effects or by-products may appear due to over-fermentation.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 액상발효에서는 상기 발효원료에 상기 제2 천연발효효소복합액을 0.5∼50부피%, 더 좋기로는 1~10부피%로 첨가 또는 분사하고 15℃∼45℃, 더 바람직하게는 17~37℃에서 1시간 내지 30일 동안 발효하는 단계를 거쳐서 액상발효로 얻어지는 2차 발효물인 발효홍삼농축액 또는 발효흑삼농축액이 제조될 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, in the liquid phase fermentation, the second natural fermentation enzyme complex is added or sprayed to the fermentation raw material in an amount of 0.5 to 50% by volume, more preferably 1 to 10% by volume, and the temperature is 15 ° C to 45 ° C. ℃, more preferably fermented red ginseng concentrate or fermented black ginseng concentrate, which is a secondary fermentation product obtained by liquid phase fermentation, can be prepared through fermentation at 17 to 37 ° C for 1 hour to 30 days.
상기와 같이 홍삼 또는 흑삼을 상기 제1 및 제2 천연발효효소복합액으로 각각 고상발효 후 액상발효한 발효홍삼농축액 또는 발효흑삼농축액은 기존의 일반적인 발효공정을 거친 혹삼이나 흑삼의 발효물에 비해 그 기능성분의 효과가 매우 우수하고 컴파운드 K가 고함량으로 함유되는 결과로 나타난다. 이것은 홍삼이나 흑삼을 단순하게 유산균이나 효소 등으로 발효하는 것과는 달리 본 발명에 의해 제조된 제1 천연효소발효액이나 제2 천연효소발효액을 이용하여 고상발효와 액상발효를 수행함으로써 발현되는 우수한 효과의 결과로 보인다. 또한, 본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 매실천연효소액, 막걸리효모액의 사용, 특정 유산균과 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소의 사용 등에 의한 효과에 기인한 것으로 평가된다. As described above, the fermented red ginseng concentrate or the fermented black ginseng concentrate obtained by solid-phase fermentation of red ginseng or black ginseng with the first and second natural fermentation enzyme complexes, respectively, and liquid phase fermentation, is more effective than the fermented product of black ginseng or black ginseng that has undergone a conventional fermentation process. The effect of the functional component is very good and it appears as a result of the compound K being contained in a high content. Unlike simply fermenting red or black ginseng with lactic acid bacteria or enzymes, this is the result of excellent effects expressed by performing solid-phase fermentation and liquid-phase fermentation using the first natural enzyme fermentation liquid or the second natural enzyme fermentation liquid prepared according to the present invention. looks like In addition, according to a preferred embodiment of the present invention, it is evaluated that the effect is due to the use of natural plum enzyme solution, makgeolli yeast solution, specific lactic acid bacteria and cell membrane degradation, and the use of biocomponent conversion enzymes.
특히, 본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기와 같이 제조한 제1 또는 제2 천연발효효소복합액은 일종의 Lactobacillus와 일종의 대표적인 토종 발효균인 Bacillus amyloliquefaciens 및 효모를 포함하여 제조할 수 있으며, 이를 사용하는 경우 이 균들은 자체가 가지고 있는 고유의 효소반응 외에 산화질소 대사를 촉매하는 nitrate reductase 효소도 함유되어 있다. 또한, 천연발효효소의 주요 성분인 매실천연효소액은 다량의 설탕을 함유하고 있어 식물혼합추출액 성분들과 함께 본 발효시 미생물 성장에 필요한 탄소원 등 영양분을 제공할 수 있다. 그러므로 그 발효 효과가 현저하게 개선될 수 있다.In particular, according to a preferred embodiment of the present invention, the first or second natural fermentation enzyme complex solution prepared as described above can be prepared by including a kind of Lactobacillus , a kind of representative native fermenting bacterium, Bacillus amyloliquefaciens , and yeast. In this case, these bacteria contain nitrate reductase enzyme that catalyzes nitric oxide metabolism in addition to their own enzymatic reaction. In addition, the plum natural enzyme solution, which is the main component of the natural fermentation enzyme, contains a large amount of sugar, so it can provide nutrients such as carbon sources necessary for the growth of microorganisms during this fermentation together with the components of the mixed plant extract. Therefore, the fermentation effect can be remarkably improved.
또한, 본 발명에서 사용되는 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소인 Sumizyme, Pyr-flo, Ultimase 등은 cellulase, Hemi-cellulase, β-glucosidase, arabinosidase, 및 pectinase 등을 함유할 수 있어서 세포막, 세포벽을 분해하고 유출된 활성성분을 가수분해하여 다양한 성분으로 변환할 수 있다. 그리고 추가로 첨가하는 복합비타민은 유산균의 성장이나 효소의 촉매반응을 더욱 활성화할 수 있다.In addition, Sumizyme , Pyr-flo, Ultimase, etc., which are cell membrane decomposition and biocomponent conversion enzymes used in the present invention, can contain cellulase, hemi-cellulase, β-glucosidase, arabinosidase, and pectinase to degrade cell membranes and cell walls. It can be converted into various components by hydrolyzing the extracted active component. In addition, the additionally added complex vitamins can further activate the growth of lactic acid bacteria or the catalytic reaction of enzymes.
상기와 같이 제조된 본 발명의 발효홍삼농축액 또는 발효흑삼농축액은 천연물의 영양성분 추출율을 높여 체내 흡수율을 상승시키며, 인체에 유익한 항산화 물질, 산화질소 전구체 등 다양한 생리활성 성분이 크게 증가되고, 체내흡수율이 우수한 컴파운드 K가 고함량으로 함유된 조성물로 얻을 수 있어서, 종래의 가공인삼인 홍삼이나 흑삼 또는 그의 일반적인 발효물과는 현저하게 차별화되어 경쟁력이 높은 제품의 생산 가능하다. The fermented red ginseng concentrate or fermented black ginseng concentrate of the present invention prepared as described above increases the absorption rate in the body by increasing the extraction rate of nutrients from natural substances, and greatly increases various physiologically active components such as antioxidant substances and nitric oxide precursors beneficial to the human body, and the absorption rate in the body Since this excellent compound K can be obtained as a composition containing a high content, it is possible to produce a highly competitive product that is significantly differentiated from conventional processed ginseng such as red ginseng or black ginseng or its general fermented products.
본 발명에 따르면 이렇게 제조된 발효홍삼농축액과 발효흑삼농축액의 혼합물은 발효홍삼농축액 50~90중량%와 상기 발효흑삼농축액 10~50중량%가 혼합된 컴파운드 K가 고함량으로 함유된 새로운 조성물로 제조될 수 있다. 더 바람직하게는 발효홍삼농축액 70~80중량%와 상기 발효흑삼농축액 20~30중량%가 혼합된 조성물로 제조될 수 있다. According to the present invention, the mixture of the fermented red ginseng concentrate and the fermented black ginseng concentrate thus prepared is prepared as a new composition containing a high content of Compound K, a mixture of 50 to 90% by weight of the fermented red ginseng concentrate and 10 to 50% by weight of the fermented black ginseng concentrate. It can be. More preferably, it may be prepared as a composition in which 70 to 80% by weight of the fermented red ginseng concentrate and 20 to 30% by weight of the fermented black ginseng concentrate are mixed.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 이러한 컴파운드 K가 고함량 함유된 조성물은 전립선 개선 또는 성기능 개선에 현저하게 우수한 효과를 나타내는 것으로 확인되었다. 이러한 효과는 기존과 다른 새로운 성분에 의한 고상발효 및 액상발효의 결과로 인해 더욱 우수한 효과를 보이는 것으로 판단된다. 특히, 예컨대 인삼, 홍삼, 흑삼 등의 일반적인 가공이나 발효처리에 의해 얻어지는 진세노사이드 조성물에 비해 성기능 강화 효과나 전립선 기능 개선 등에서 월등하게 우수한 효과를 나타낼 수 있다. 이러한 효과는 바람직하게도 예컨대 전립선 비대증 억제나 발기촉진 효과, 정자수, 정소무게, 정낭무게 등에서도 우수한 효과를 보인다.According to a preferred embodiment of the present invention, it was confirmed that the composition containing a high content of compound K exhibits a remarkably excellent effect on improving prostate or sexual function. These effects are judged to be more excellent due to the results of solid-phase fermentation and liquid-phase fermentation by new and different ingredients. In particular, compared to ginsenoside compositions obtained by general processing or fermentation of, for example, ginseng, red ginseng, black ginseng, etc., it can exhibit significantly superior effects in enhancing sexual function or improving prostate function. These effects are preferably excellent in, for example, suppression of prostatic hyperplasia, promotion of erection, sperm count, testicular weight, seminal vesicle weight, and the like.
본 발명에서는 이러한 천연발효효소복합액을 이용하여 홍삼이나 흑삼의 고상발효 추출액을 액상발효하는데 사용하기 때문에 그 자체로서 컴파운드 K의 함량을 높이는데 더욱 바람직한 효과를 발휘하고, 발효과정에서 다른 천연성분들과의 상승효과 및 홍삼이나 흑삼과의 상승효과가 더욱 향상됨으로 인하여 매우 우수하고 예측할 수 없는 우수한 전립선 개선 또는 성기능 개선 효과를 발휘하는 것이다.In the present invention, since the solid phase fermentation extract of red ginseng or black ginseng is used for liquid phase fermentation using such a natural fermentation enzyme complex solution, it exerts a more desirable effect in increasing the content of compound K by itself, and other natural ingredients in the fermentation process Because the synergistic effect with red ginseng or black ginseng is further improved, it exhibits a very excellent and unpredictable prostate improvement or sexual function improvement effect.
또한, 본 발명에 따르면, 서로 다른 구성의 제1 또는 제2 천연발효효소복합액을 이용하여 1차 고상발효 및 2차 액상발효를 시행하고, 저온에서도 안정적이고 효율적인 조건으로 발효함으로써, 홍삼 또는 흑삼이 함유하고 있는 고분자 물질을 저분자화하고, 세포벽을 분해하여 영양성분 추출율을 높임으로써 고함량의 컴파운드 K의 함량으로 높이고 영양성분의 체내 흡수율을 현저하게 상승시킬 수 있다.In addition, according to the present invention, the first solid-phase fermentation and the second liquid-phase fermentation are performed using the first or second natural fermentation enzyme complex solution having different configurations, and fermented under stable and efficient conditions even at low temperatures, thereby red ginseng or black ginseng It is possible to increase the content of high-content compound K and remarkably increase the absorption rate of nutrients into the body by reducing the molecular weight of the polymeric substances contained therein and increasing the extraction rate of nutrients by decomposing the cell walls.
또한, 본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 홍삼 또는 흑삼의 발효, 분해 및 변환을 통해 인체에 유익한 진세노사이드 Rg1, Rb1, Rg3, Rg5, Rk1 등의 총함량을 높일 수 있으며, 그 외에도 항산화 물질, 산화질소 전구체, 홍삼 또는 흑삼 특유의 기능성분 등 다양한 생리활성 성분이 크게 증가된 형태로 홍발효홍삼농축액과 발효흑삼농축액의 혼합 조성물을 얻을 수 있는 것이다.In addition, according to a preferred embodiment of the present invention, the total content of ginsenosides Rg1, Rb1, Rg3, Rg5, Rk1, etc. beneficial to the human body can be increased through fermentation, decomposition and conversion of red or black ginseng, and other antioxidants It is possible to obtain a mixed composition of red fermented red ginseng concentrate and fermented black ginseng concentrate in a form in which various physiologically active ingredients such as , nitric oxide precursor, and functional components unique to red ginseng or black ginseng are greatly increased.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, Rg1, Rb1, Rg3의 총함량이 5mg/g 이상, 더 바람직하게는 6.5mg/g 이상을 함유할 수 있다. 또한, Rg3, Rg5, Rk1의 총함량이 5mg/g 이상, 더 바람직하게는 9mg/g 이상으로 함유될 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the total content of Rg1, Rb1, and Rg3 may be 5 mg/g or more, more preferably 6.5 mg/g or more. Also, the total content of Rg3, Rg5, and Rk1 may be 5 mg/g or more, more preferably 9 mg/g or more.
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 상기 조성물은 체내흡수율이 우수한 컴파운드 K가 고함량으로 함유될 수 있는 바, 통상적으로 홍삼이나 흑삼 농축액 등에 전혀 존재하지 아니하는 컴파운드 K가 적어도 2mg/g 이상 함유할 수 있으며, 적어도 15종 이상의 진세노사이드가 함유될 수 있다. 예컨대, 컴파운드 K 이외에, Rg1, Re, Rf, Rb1, Rg2, Rc, Rb2, Rb3, Rd, F2, Rg3, Rk1, Rg5, Rh2 등이 함유될 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the composition may contain a high content of Compound K, which has excellent body absorption, so that it contains at least 2 mg/g of Compound K, which is not normally present in red ginseng or black ginseng concentrate. It may contain at least 15 or more ginsenosides. For example, in addition to compound K, Rg1, Re, Rf, Rb1, Rg2, Rc, Rb2, Rb3, Rd, F2, Rg3, Rk1, Rg5, Rh2 and the like may be contained.
본 발명에 따른 조성물은 이러한 체내 흡수율 향상이나 특성 유효성분의 항산화 효과 및 유효성분의 증진 등의 다양하게 향상된 작용 효과에 의해 전립선 개선 또는 성기능 개선에 더욱 우수한 효과를 발휘하는 것이다.The composition according to the present invention exerts a more excellent effect on improving prostate or sexual function by variously improved functional effects such as improvement of absorption rate in the body, antioxidant effect of characteristic active ingredients, and enhancement of active ingredients.
따라서 본 발명의 조성물은 여러 기능 성분이 매우 복합적이고 바람직한 형태로 존재하여 전립선 개선 또는 성기능 개선 효과를 위한 바람직한 조성물로 제조될 수 있다. 그 외에도 일반적인 인삼 발효물과 대비하여 더욱 우수한 항산화 효과, 기력증진, 정력보강, 피로회복 등에 효과를 나타내는 건강식품으로 활용이 가능하다. 건강식품이나 의약품으로 적용시 예컨대, 정제 기준으로 성인 1일 1~3회 복용하되, 10~1000mg/1회의 투여량으로 복용할 수 있다.Therefore, the composition of the present invention is present in a very complex and desirable form of various functional components, so it can be prepared as a desirable composition for improving prostate or sexual function. In addition, compared to general fermented ginseng products, it can be used as a health food that has more excellent antioxidant effects, energy enhancement, energy reinforcement, and fatigue recovery. When applied as a health food or medicine, for example, it is taken 1 to 3 times a day for adults on a tablet basis, but it can be taken at a dosage of 10 to 1000 mg/time.
그러므로 이러한 홍삼 또는 흑삼 발효물은 전립선 개선 또는 성기능 개선용의 건강식품, 의약품 등에 매우 유용한 원료로 널리 활용될 수 있을 것이다. 이 경우 다양한 통상의 첨가제가 사용될 수 있다.Therefore, such fermented red ginseng or black ginseng can be widely used as a very useful raw material for health foods and medicines for improving prostate or sexual function. In this case, various conventional additives may be used.
또한, 인체와 유사한 반려동물에도 적용이 가능할 것이므로, 상기 전립선 개선 또는 성기능 개선용 조성물은 동일한 효과를 위하여 펫용 건강식품, 사료용 조성물, 사료첨가제 또는 동물용 약품 등으로 바람직하게 적용될 수 있다.In addition, since it can be applied to companion animals similar to the human body, the composition for improving prostate or sexual function can be preferably applied as a health food for pets, a composition for feed, a feed additive, or a drug for animals for the same effect.
이하 본 발명을 구체적인 실시예에 의거 상세하게 설명하겠는바, 본 발명이 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail based on specific examples, but the present invention is not limited by the examples.
실시예 1 : Example 1:
발효홍삼농축액의 제조Production of fermented red ginseng concentrate
(1) 생막걸리에 생막걸리 대비 흑설탕 3.5%(w/v)와 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 5%(w/v)를 접종한 후 30℃에서 4일 동안 배양하여 막걸리 효모액을 제조하였다.(1) Raw rice wine was inoculated with 3.5% (w / v) of brown sugar and 5% (w / v) of Saccharomyces cerevisiae compared to raw rice wine, and then cultured at 30 ° C for 4 days to obtain rice wine yeast liquid was prepared.
(2) 마늘, 멀꿀 및 황기 식물을 서로 동일량으로 혼합한 식물혼합물에 식물혼합물 대비 정제수 8배(v/w)를 첨가한 후 90℃에서 8시간 동안 추출하여 식물혼합추출액을 제조하였다.(2) Plant mixture extract was prepared by adding 8 times (v / w) of purified water compared to the plant mixture to a plant mixture mixed with garlic, honey and Astragalus plants in equal amounts, and then extracted at 90 ° C. for 8 hours.
(3) 매실과 설탕을 1:1 중량비율로 혼합한 후 25~30℃에서 동안 숙성시킨 후 여과하여 매실천연효소액을 제조하였다.(3) Plum and sugar were mixed at a weight ratio of 1: 1, aged at 25 to 30 ° C., and then filtered to prepare a natural plum enzyme solution.
(4) 상기 (2)단계에서 제조한 식물혼합추출액(10브릭스)과 상기 (3)단계에서 제조한 매천연효소액(10브릭스)을 7:3의 중량비율로 혼합하여 식물혼합 효소액을 제조하였다.(4) A plant mixed enzyme solution was prepared by mixing the plant mixture extract (10 brix) prepared in step (2) and the natural enzyme solution (10 brix) prepared in step (3) at a weight ratio of 7:3. .
(5) 상기 (4)단계의 제조한 식물혼합 효소액 대비 상기 (1)단계에서 제조한 막걸리 효모액 1중량%와, 8종 알파 혼합 유산균-엘(L)2(Lactobacillus plantarum, Lactobacillus casei, Lactobacillus rhamnosus, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus acidophilus 및 Lactobacillus fermentum) 1중량%와, 동충하초 균사체 3중량%를 혼합한 후, 이를 37℃에서 24시간 배양하여 제1 천연혼합발효액을 제조하였다.(5) 1% by weight of the makgeolli yeast solution prepared in step (1), compared to the plant mixed enzyme solution prepared in step (4), and 8 types of alpha mixed lactic acid bacteria-L2 ( Lactobacillus plantarum, Lactobacillus casei, Lactobacillus rhamnosus, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus acidophilus, and Lactobacillus fermentum ) and 3% by weight of cordyceps mycelium were mixed, and then cultured at 37° C. for 24 hours to prepare a first natural mixed fermentation liquid.
(6) 여기에 Sumizyme, Ultimase MFC, Pyr-filo 및 Tannase의 효소 각각 0.5중량%와 복합비타민(비타민A, 비타민B 복합체 및 비타민C)을 가하고, 37℃에서 24시간 배양하여 제1 천연발효효소복합액을 제조하였다.(6) Add 0.5% by weight of Sumizyme, Ultimase MFC, Pyr-filo, and Tannase enzymes and complex vitamins (vitamin A, vitamin B complex, and vitamin C), and incubate at 37 ° C for 24 hours to obtain the first natural fermenting enzyme A complex solution was prepared.
(7) 홍삼을 5~50 mesh 크기로 분쇄하여 상기 (5)단계에서 제조한 제1 천연발효효소복합액에 서 5℃에서 80분 동안 침지하였다(1차 침지).(7) Red ginseng was pulverized to a size of 5 to 50 mesh and immersed in the first natural fermentation enzyme complex prepared in step (5) at 5 ° C for 80 minutes (first soak).
(8) 상기 (6)단계에서 침지한 홍삼을 꺼내어 50℃ 온도 및 습도 35%에 서 5일 동안 발효하였다(1차 발효). 상기 발효한 홍삼을 다시 상기 제1 천연발효효소복합액에 20~25℃에서 20분 동안 침지하고(2차 침지), 꺼내어 50℃ 온도 및 습도 35%에서 3일 동안 발효하였다(2차 발효). 이렇게 하여 고상발효된 홍삼의 1차 발효물 추출액을 얻었다.(8) The red ginseng soaked in step (6) was taken out and fermented for 5 days at a temperature of 50 ° C and a humidity of 35% (primary fermentation). The fermented red ginseng was again immersed in the first natural fermentation enzyme complex at 20-25 ° C for 20 minutes (secondary immersion), taken out and fermented at 50 ° C and 35% humidity for 3 days (secondary fermentation) . In this way, an extract of the primary fermented product of solid phase fermented red ginseng was obtained.
(9) 액상발효를 위한 제2 천연발효효소복합액을 제조하기 위하여, 황기, 마늘, 멀꿀을 동일량으로 함유하는 식물혼합추출액(10브릭스)에 매실천연효소액(10브릭스)을 동량 혼합하고, 여기에 이들 혼합액 대비 lactobacillus brevis (1x108cfu/ml)와 Bacillus amyloliquefaciens(1x108cfu/ml)를 각각 0.5중량%, 그리고 막걸리효모액을 1중량% 첨가하고 37℃에서 24시간 회전 보온기에서 배양하여 제2 천연혼합발효액을 제조하였다. (9) In order to prepare a second natural fermentation enzyme complex solution for liquid fermentation, an equal amount of plum natural enzyme solution (10 Brix) was mixed with a plant mixture extract (10 Brix) containing equal amounts of astragalus, garlic, and honey, Here, 0.5% by weight of each of lactobacillus brevis (1x10 8 cfu / ml) and Bacillus amyloliquefaciens (1x10 8 cfu / ml) and 1% by weight of rice wine yeast solution were added to these mixtures, and cultured in a rotating thermostat at 37 ° C for 24 hours. A second natural mixed fermentation liquid was prepared.
(10) 상기 제2 천연혼합발효액에 수미자임(Sumizyme), 얼티메이즈(Ultimase MFC), 파이르플로(Pyr-flo), 탄네이즈(Tannase) 각각 0.5 중량%와, 아미노산 1중량% 및 복합비타민(비타민A, 비타민B 복합체 및 비타민C)를 첨가하고 37℃에서 2시간 더 배양하여 제2 천연발효효소복합액을 제조하였다.(10) 0.5 wt% each of Sumizyme, Ultimase MFC, Pyr-flo, and Tannase, 1 wt% amino acid, and complex vitamins in the second natural mixed fermentation liquid (Vitamin A, vitamin B complex, and vitamin C) were added and further cultured at 37° C. for 2 hours to prepare a second natural fermentation enzyme complex solution.
(11) 상기 (8)단계에서 제조된 홍삼 1차 발효물 추출액에 상기 제조된 제2 천연발효효소복합액을 10부피% 되게 첨가하였다. 이를 37℃에서 24시간 동안 발효시켜서 액상발효된 홍삼 발효물을 얻었다.(11) The second natural fermentation enzyme complex solution prepared above was added to the first fermented red ginseng extract prepared in step (8) in an amount of 10% by volume. This was fermented at 37 ° C. for 24 hours to obtain a liquid fermented red ginseng product.
(12) 상기 제조된 홍삼 발효물은 농축하여 발효홍삼농축액을 제조하였다.(12) The prepared fermented red ginseng product was concentrated to prepare a fermented red ginseng concentrate.
발효흑삼농축액의 제조Production of fermented black ginseng concentrate
상기 홍삼 대신 흑삼을 사용하여 (1) 내지 (12) 단계의 방법으로 흑삼을 1차 고상발효하고, 이어서 2차로 액상발효하여 발효흑삼농축액을 제조하였다.Using black ginseng instead of red ginseng, black ginseng was first solid-phase fermented by the method of steps (1) to (12), and then liquid-phase fermented secondly to prepare a fermented black ginseng concentrate.
컴파운드 K 농축액의 제조Preparation of Compound K Concentrate
상기와 같이 제조된 발효홍삼농축액 75중량%와 상기 제조된 발효흑삼농축액 25중량%를 혼합하여 고상발효 컴파운드 K 농축액을 제조하였다.A solid phase fermentation compound K concentrate was prepared by mixing 75% by weight of the fermented red ginseng concentrate prepared as described above and 25% by weight of the fermented black ginseng concentrate prepared above.
실시예 2Example 2
상기 실시예 1과 동일한 방법으로 발효홍삼농축액 및 발효흑삼농축액을 각각 제조하되, 제1 천연발효혼합물 제조시에 식물혼합추출액으로 황기, 마늘, 멀꿀 이외에 추가로 산수유, 오미자, 헛개 및 황칠을 각각 동일한 량으로 포함하는 식물혼합추출액 혼합 사용한 것을 제외하고는 동일하게 실시하여 발효홍삼농축액 및 발효흑삼농축액을 각각 제조하였다.Fermented red ginseng concentrate and fermented black ginseng concentrate were prepared in the same manner as in Example 1, but cornus officinalis, Schisandra chinensis, hoveniae, and hwangchil were added in addition to Astragalus root, garlic, and honey as plant mixture extracts in the preparation of the first natural fermentation mixture. Fermented red ginseng concentrate and fermented black ginseng concentrate were prepared in the same manner, except that the mixed plant extract containing the amount was used.
상기와 같이 제조된 발효홍삼농축액 75중량%와 상기 제조된 발효흑삼농축액 25중량%를 혼합하여 고상발효 컴파운드 K 농축액을 제조하였다.A solid phase fermentation compound K concentrate was prepared by mixing 75% by weight of the fermented red ginseng concentrate prepared as described above and 25% by weight of the fermented black ginseng concentrate prepared above.
실시예 3Example 3
상기 실시예 1과 동일한 방법으로 발효홍삼농축액 및 발효흑삼농축액을 각각 제조하되, 제2 천연발효혼합물 제조시에 식물혼합추출액으로 황기, 마늘, 멀꿀 이외에 추가로 오가피, 비타민나무, 연자육 및 감태를 함유하는 식물혼합추출액을 사용하지 것을 제외하고는 동일하게 실시하여 발효홍삼농축액 및 발효흑삼농축액을 각각 제조하였다.Fermented red ginseng concentrate and fermented black ginseng concentrate were prepared in the same manner as in Example 1, but in addition to Astragalus root, garlic, and honey, as plant mixture extracts, vitamin tree, lotus root, and Ecklonia cava were additionally contained in the preparation of the second natural fermentation mixture. Fermented red ginseng concentrate and fermented black ginseng concentrate were prepared in the same manner, except that the mixed plant extract to be used was not used.
상기와 같이 제조된 발효홍삼농축액 75중량%와 상기 제조된 발효흑삼농축액 25중량%를 혼합하여 고상발효 컴파운드 K 농축액을 제조하였다.A solid phase fermentation compound K concentrate was prepared by mixing 75% by weight of the fermented red ginseng concentrate prepared as described above and 25% by weight of the fermented black ginseng concentrate prepared above.
비교예 1Comparative Example 1
상기 실시예 1과 동일한 방법으로 발효홍삼농축액 및 발효흑삼농축액을 각각 제조하되, 제1 천연발효혼합물을 이용한 고상발효만을 진행하고, 제2 천연발효효소복합액을 이용한 액상발효는 진행하지 아니하고 발효홍삼농축액 및 발효흑삼농축액을 각각 제조하였다.Fermented red ginseng concentrate and fermented black ginseng concentrate were prepared in the same manner as in Example 1, but only solid phase fermentation was performed using the first natural fermentation mixture, and liquid phase fermentation was not performed using the second natural fermentation enzyme complex. Fermented red ginseng Concentrates and fermented black ginseng concentrates were prepared, respectively.
상기와 같이 제조된 발효홍삼농축액 75중량%와 상기 제조된 발효흑삼농축액 25중량%를 혼합하여 고상발효 컴파운드 K 농축액을 제조하였다.A solid phase fermentation compound K concentrate was prepared by mixing 75% by weight of the fermented red ginseng concentrate prepared as described above and 25% by weight of the fermented black ginseng concentrate prepared above.
비교예 2Comparative Example 2
상기 실시예 1과 동일한 방법으로 발효홍삼농축액 및 발효흑삼농축액을 제조하되, 제1 및 제2 천연발효혼합물 제조시에 매실천연효소액과 식물혼합추출액을 사용하지 않은 것을 제외하고는 동일하게 실시하여 발효홍삼농축액 및 발효흑삼농축액을 각각 제조하였다.Fermented red ginseng concentrate and fermented black ginseng concentrate were prepared in the same manner as in Example 1, except that natural plum enzyme solution and mixed plant extract were not used when preparing the first and second natural fermentation mixtures. Red ginseng concentrate and fermented black ginseng concentrate were prepared respectively.
상기와 같이 제조된 발효홍삼농축액 75중량%와 상기 제조된 발효흑삼농축액 25중량%를 혼합하여 컴파운드 K 농축액을 제조하였다.Compound K concentrate was prepared by mixing 75% by weight of the fermented red ginseng concentrate prepared as described above and 25% by weight of the fermented black ginseng concentrate prepared above.
비교예 3Comparative Example 3
상기 실시예 1과 동일한 방법으로 발효홍삼농축액 및 발효흑삼농축액을 제조하되, 제1 및 제2 천연발효혼합물 제조시에 막걸리효모액을 사용하지 않은 것을 제외하고는 동일하게 실시하여 발효홍삼농축액 및 발효흑삼농축액을 각각 제조하였다.Fermented red ginseng concentrate and fermented black ginseng concentrate were prepared in the same manner as in Example 1, except that makgeolli yeast was not used in the preparation of the first and second natural fermentation mixtures, and the fermented red ginseng concentrate and fermentation were carried out in the same manner. Black ginseng concentrates were prepared respectively.
상기와 같이 제조된 발효홍삼농축액 75중량%와 상기 제조된 발효흑삼농축액 25중량%를 혼합하여 고상발효 컴파운드 K 농축액을 제조하였다.A solid phase fermentation compound K concentrate was prepared by mixing 75% by weight of the fermented red ginseng concentrate prepared as described above and 25% by weight of the fermented black ginseng concentrate prepared above.
비교예 4Comparative Example 4
상기 실시예 1과 동일한 방법으로 발효홍삼농축액 및 발효흑삼농축액을 제조하되, 제1 및 제2 천연발효혼합물 제조시에 수미자임(Sumizyme), 얼티메이즈(Ultimase MFC), 파이르플로(Pyr-flo) 및 탄네이즈(Tannase)를 사용하지 않은 것을 제외하고는 동일하게 실시하여 발효홍삼농축액 및 발효흑삼농축액을 각각 제조하였다.Fermented red ginseng concentrate and fermented black ginseng concentrate were prepared in the same manner as in Example 1, but Sumizyme, Ultimase MFC, and Pyr-flo were used when preparing the first and second natural fermentation mixtures. ) And fermented red ginseng concentrate and fermented black ginseng concentrate were prepared in the same manner, except that Tannase was not used.
상기와 같이 제조된 발효홍삼농축액 75중량%와 상기 제조된 발효흑삼농축액 25중량%를 혼합하여 고상발효 컴파운드 K 농축액을 제조하였다.A solid phase fermentation compound K concentrate was prepared by mixing 75% by weight of the fermented red ginseng concentrate prepared as described above and 25% by weight of the fermented black ginseng concentrate prepared above.
실험예 1 : 성분 분석Experimental Example 1: Component Analysis
DDK-401 및 DDK-201 제조 및 ginsenoside분석DDK-401 and DDK-201 manufacturing and ginsenoside analysis
상기 실시예 1에서 제조된 발효를 통해 CK가 다량 함유된 고상발효 컴파운드 K(DDK-401)과 일반 홍삼 추출물(DDK-201)에 대한 성분분석을 실시하였다. 상기 실험에 사용된 시료 제조는 대동고려삼주식회사(한국 금산 소재)에서 제조하였다. 이들 추출물에 함유된 ginsensides 분석을 위해 DDK-401과 DDK-201을 각각 1g을 취하여 70% methanol 50 ml에 용해시킨 후 0.45μm membrane filter로 여과하고 HPLC를 이용하여 분석하였다. Ginsenoside 표준용액을 조제하기 위하여 각 ginsenoside를 먼저 정확히 평량하고, HPLC grade methanol 로 1000μg/ml stock solution을 제조하였다. 그리고 정량을 위한 표준곡선 작성을 위해 이 stack solution을 HPLC grade methanol로 희석하여 200, 100, 50, 25, 12.5μg/ml concentration의 working solution을 제조하였다. Component analysis was performed on the solid phase fermentation compound K (DDK-401) containing a large amount of CK through fermentation prepared in Example 1 and the general red ginseng extract (DDK-201). The sample used in the experiment was prepared by Daedong Korea Ginseng Co., Ltd. (Geumsan, Korea). To analyze ginsensides contained in these extracts, 1 g of each of DDK-401 and DDK-201 was dissolved in 50 ml of 70% methanol, filtered through a 0.45 μm membrane filter, and analyzed using HPLC. To prepare a standard ginsenoside solution, each ginsenoside was accurately weighed first, and a 1000 μg/ml stock solution was prepared with HPLC grade methanol. And to prepare a standard curve for quantification, this stack solution was diluted with HPLC grade methanol to prepare working solutions with concentrations of 200, 100, 50, 25, and 12.5 μg/ml.
상기와 같이 준비한 DDK-201 및 DDK-401 시료는 Agilent HPLC system (Agilent 1260 Infinity Quaternary pump(G1311B), 1260 Infinity Auto Sampler, 1260 Infinity column thermostat compartment와 1260 Infinity variable wavelength detector)에 Zorbax Eclipse Plus C18 column (250 x 4.6mm, 5μm particle size)을 이용하여 분리, 정량하였다. 이때 이동상은 물(solvent A)과 Acetonitrile(Solvent B)로 다음과 같은 용매 농도구배로 실시하였다. 즉, 0-10분(20% B), 10-42분(29% B), 42-67분 (41%B), 67-70분 (47% B), 70-90분(71% B), 90-95분 (70% B). 이동상의 유속은 분당 1.0ml, 주입량은 10μl, column 온도는 40℃, 검출파장은 203nm였다. The DDK-201 and DDK-401 samples prepared as above were run on a Zorbax Eclipse Plus C18 column ( 250 x 4.6 mm, 5 μm particle size) was used to separate and quantify. At this time, the mobile phase was carried out with water (solvent A) and acetonitrile (Solvent B) in the following solvent concentration gradient. That is, 0-10 min (20% B), 10-42 min (29% B), 42-67 min (41% B), 67-70 min (47% B), 70-90 min (71% B). ), 90-95 min (70% B). The flow rate of the mobile phase was 1.0 ml per minute, the injection amount was 10 μl, the column temperature was 40 ° C, and the detection wavelength was 203 nm.
상기와 같이 생체내(In vivo) 양동학적 평가를 위한 진세노사이드 성분분석을 실시한 결과는 다음 표 1에 나타낸 바와 같다. As described above, the results of the ginsenoside component analysis for quantitative kinetic evaluation in vivo are shown in Table 1 below.
상기 표 1에서 보면 실시예의 경우 비교예에 비하여 유효성분이 월등하게 증가된 현상을 확인할 수 있다.In Table 1, it can be seen that in the case of the examples, the active ingredient is significantly increased compared to the comparative example.
또한, 경구투여용 Spout pouches의 진세노사이드 함량을 분석한 결과는 다음 표 2와 같다.In addition, the results of analyzing the ginsenoside content of spout pouches for oral administration are shown in Table 2 below.
상기 실험에서, 홍삼의 미세근(Root hair, fine roots) 비중이 높거나, 또는 일차 농축액(1stextraction)일 경우 Rg5, Rk1가 0.1-0.8(mg/g, 60brix 눙축액) 생성될 수 있으며, 일반적으로 색도, pH조정 과정에서 Rg5, Rk1이 생성될 수 있다. 이 경우 Gensenoside(Rg1+Rb1+Rg3) 함량이 20-30mg/g 60brix일 수 있다.In the above experiment, if the proportion of root hair and fine roots of red ginseng is high, or the primary concentrate ( 1st extraction), Rg5 and Rk1 can be 0.1-0.8 (mg/g, 60brix concentrate), , In general, Rg5 and Rk1 can be generated in the process of adjusting chromaticity and pH. In this case, the Gensenoside (Rg1+Rb1+Rg3) content may be 20-30mg/g 60brix.
실험예 2 : 컴파운드 K의 체내 흡수 실험Experimental Example 2: In vivo absorption test of Compound K
실시예의 시료에 대한 임상시험을 위해 건강한 한국인 남녀 11명을 대상으로 하였으며, A randomized, open-label, single dose, 2-period, 2 sequence, crossover study로 수행하였다.A randomized, open-label, single dose, 2-period, 2 sequence, crossover study was conducted on 11 healthy Korean men and women for the clinical test on the samples of the examples.
본 실험은 헬싱키 선언의 원칙과 한국의 우수임상관리기준 지침에 따라 수행되었으며, 사전에 각 피험자로부터 사전 서면 동의와 경희대학교병원의 기관심사위원회(KHGIRB-21-419)의 승인을 받았다. 이 실험에서 진세노사이드 컴파운드 K (CK)의 약동학 프로파일에서 큰 개인간 차이를 예상하고, 성별로 인한 개인간 변동성을 줄이기 위해, 남성과 여성 약동학 데이터의 평균치를 계산하였다.This experiment was conducted in accordance with the principles of the Declaration of Helsinki and guidelines for good clinical practice in Korea, and prior written consent from each subject and approval from the Institutional Review Board (KHGIRB-21-419) of Kyung Hee University Hospital were obtained. In this experiment, in order to anticipate large inter-individual differences in the pharmacokinetic profile of ginsenoside compound K (CK) and to reduce inter-individual variability due to gender, the average value of male and female pharmacokinetic data was calculated.
임상시험 대상자 중 연구 전 2주 이내의 중대한 임상 질환, 고혈압, 당뇨병, 심혈관, 간, 신장, 혈액학적, 위장계, 신경계, 정신과 질환의 병력이 있는 자, 연구 전 8주 이내의 헌혈한 적이 있는 자는 제외되었다. 등록된 대상자는DDK-201(100ml Spout파우치, ginsenosideRg1, Rb1 및 Rb3 11.29mg 및 ginsenosideCK 0mg) 또는 DDK-401(100ml spout 파우치, ginsenosideRg1, Rb1 and Rb3 at 21.51mg 및ginsenosideCK at 31.19 mg) 의 2가지 시퀀스 중 하나가 할당되었다.Among the clinical trial subjects, those with a history of serious clinical disease, hypertension, diabetes, cardiovascular, liver, kidney, hematological, gastrointestinal, nervous system, or psychiatric diseases within 2 weeks before the study, those who have donated blood within 8 weeks before the study sleepers were excluded. Enrolled subjects received two sequences of DDK-201 (100ml spout pouch, ginsenosideRg1, Rb1 and Rb3 11.29mg and ginsenosideCK 0mg) or DDK-401 (100ml spout pouch, ginsenosideRg1, Rb1 and Rb3 at 21.51mg and ginsenosideCK at 31.19mg). one of which has been assigned
그리고 7일 간의 워시아웃 후 두 번째 기간에 대체 시퀀스 처리를 수행하였으며 경구 투여량은 각 시료의 1일 총 권장 섭취량을 기준으로 하였다.In addition, an alternative sequence treatment was performed in the second period after 7 days of washout, and the oral dose was based on the total recommended daily intake of each sample.
실험 결과, 실시예의 시료 DDK-401과 대조군 시료 DDK-201의 경구섭취 후 혈액 내 CK 흡수 프로파일은 도 2에 나타낸 바와 같다. As a result of the experiment, the CK absorption profile in the blood after oral intake of sample DDK-401 of Example and DDK-201 of control sample was shown in FIG. 2 .
CK의 체내 흡수율Absorption rate of CK in the body
사람(남녀)이 CK 고함유 시료인 DDK-401를 섭취하면 혈중의 CK 농도가 급격히 증가하여 2시간 후에 167+ 126에 도달하고 그 후 서서히 감소되어 12시간 후에는 19+16으로 대부분 체외로 배출된다. When a person (male and female) ingests DDK-401, a sample with high CK content, the concentration of CK in the blood increases rapidly, reaching 167+126 after 2 hours, and then slowly decreases to 19+16 after 12 hours, most of which are excreted outside the body do.
그러나 CK가 없는 시료 DDK-201 섭취군은 섭취 후 4시간까지는 혈중에서 CK가 검출되지 않았다. 그러나 8시간에서 12시간 후에는 0.7+1.2ug/ml 1.0+1.5 수준의 극미량이 검출은 되었다. However, in the sample DDK-201 intake group without CK, CK was not detected in the blood until 4 hours after intake. However, after 8 to 12 hours, a trace amount of 0.7+1.2ug/ml 1.0+1.5 was detected.
실험결과에서, CK의 흡수는 도 2에서 확인되는 바와 같이 섭취 후 2시간 전후에 가장 높고 12시간 후에는 거의 배출된다는 것을 암시해 주며, CK가 전혀 없는 시료(DDK-201)의 경우 섭취 후 장 등 체내 대사를 통해 Rb1 등으로부터 미량의 CK가 생성됨을 암시해 준다. 그러나 CK의 검출 한계치 하에 있는 극미량이라 실제로 얼마나 생성되는지는 더 많은 실험이 필요하다.The experimental results suggest that absorption of CK is highest around 2 hours after ingestion and almost discharged after 12 hours, as shown in FIG. 2, and in the case of a sample without CK (DDK-201), intestinal This suggests that a small amount of CK is produced from Rb1 and the like through in vivo metabolism. However, since it is an extremely small amount below the detection limit of CK, more experiments are needed to determine how much is actually produced.
약동학적 평가Pharmacokinetic evaluation
혈장 내 CK 함량을 정량하기 위해, 각 기간에서 시료투여 전 및 투여 후 2, 4, 8 및 12시간에 2ml의 정맥내 혈액 샘플을 수집하였다. 혈액 샘플을 3000rpm에서 10분 동안 원심분리하고, 상층액을 분리하고 CK를 분석할 때까지 -80°C에서 동결시켰다. 혈장 중의 CK 함량은 HPLC-MS/MS 시스템으로 분석하였다.To quantify the CK content in plasma, 2 ml intravenous blood samples were collected before and 2, 4, 8 and 12 hours after administration in each period. Blood samples were centrifuged at 3000 rpm for 10 min, the supernatant was separated and frozen at -80 °C until analysis for CK. CK content in plasma was analyzed by HPLC-MS/MS system.
크로마토그래피분석은 WatersI-class(Waters, USA)시스템에 내부 표준은 Berberine(Dr. EhrenstorferGmbH, Germany)으로, 45℃로 유지된 AcquityUPLC BEH C18 컬럼(100mm × 2.1mm, 1.7μm; Waters, USA)을 사용하였다. 이동상은 0.1% 포름산수용액과 100% 아세토니트릴을 농도 구배로구성되었다.Chromatographic analysis was performed using an AcquityUPLC BEH C18 column (100 mm × 2.1 mm, 1.7 μm; Waters, USA) maintained at 45 ° C with Berberine (Dr. Ehrenstorfer GmbH, Germany) as an internal standard in a WatersI-class (Waters, USA) system. used The mobile phase was composed of 0.1% formic acid aqueous solution and 100% acetonitrile in a concentration gradient.
질량 분석은 포지티브 모드의 전자 분무 이온화 프로브가 장착된 API XevoTQ-XS 기기(Waters, USA)에서, 이온 소스의 온도를 150℃에, 이온 스프레이 전압은 3kV로 각각 설정하고 실시하였다. 정량화는 11.28분의 체류 시간으로 진세노사이드 CK의 이온에 대해 645.2 → 203에서 전이의 다중 반응 모니터링에 의해 수행되었다.Mass spectrometry was performed on an API XevoTQ-XS instrument (Waters, USA) equipped with an electrospray ionization probe in positive mode, with the temperature of the ion source set to 150 °C and the ion spray voltage set to 3 kV. Quantification was performed by multiple reaction monitoring of the transition at 645.2 → 203 for the ion of ginsenoside CK with a retention time of 11.28 min.
그 결과는 도 3과 같다.The result is shown in FIG. 3 .
남녀간 CK 흡수율 차이 비교Comparison of differences in CK absorption rates between men and women
도 4는 CK의 체내 흡수율을 남자와 여자를 비교한 data 이다. CK 흡수율 및 흡수 pattern에 있어서 남녀간 유의한 차이는 없었다. 그러나 CK가 없는 일반 시료 DDK-201 섭취의 경우 혈중 CK 함량에 다소의 차이를 보여주었다. 즉, 남성의 경우 비록 극미량이긴 하지만 섭취 2주간 후부터 CK가 검출된 반면, 여성의 경우는 8시간 후에 검출되었다. 이는 장내 미생물 등 진세노사이드 대사와 관련된 체내 환경에 있어서 남녀 간 차이가 있음을 암시해 준다.Figure 4 is data comparing the absorption rate of CK in the body between men and women. There was no significant difference between men and women in CK absorption rate and absorption pattern. However, in case of ingestion of normal sample DDK-201 without CK, some difference was shown in blood CK content. That is, in the case of males, CK was detected from 2 weeks after ingestion, although in very small amounts, whereas in females, it was detected after 8 hours. This suggests that there are differences between men and women in the internal environment related to ginsenoside metabolism, such as intestinal microbes.
실험예 3 : 세포생존율 측정Experimental Example 3: Measurement of cell viability
세포생존율 측정Cell viability measurement
DDK-201 및 DDK-401 시료의 세포생존에 미치는 영향을 다음과 같이 측정하였다. 먼저 대식세포주인 RAW264.7는 10% FBS를 포함하는 RPMI 1640 배지를 이용하고, 인체 각질세포주인 HaCaT은 10% FBS를 포함하는 DMEM 1640 배지를 이용하여, 5% CO2, 37℃ 배양기에서 70~80%의 밀도로 배양하였다. 상기 배지들에는 항생제로서 페니실린(100 IU/㎖) 및 스트렙토마이신(100㎍/㎖)을 첨가하였다. 상기 각각의 세포주에서 각 시료의 세포 생존에 미치는 영향을 알아보기 위해, MTT (3-[4,5-디메틸티아졸-2-일]-2,5-디페닐테트라졸륨브로마이드) 시험법을 이용하여 측정하였다. The effect of DDK-201 and DDK-401 samples on cell viability was measured as follows. First, RAW264.7, a macrophage cell line, uses RPMI 1640 medium containing 10% FBS, and HaCaT, a human keratinocyte line, uses DMEM 1640 medium containing 10% FBS. Cultured at 80% density. To these media, penicillin (100 IU/ml) and streptomycin (100 μg/ml) were added as antibiotics. In order to determine the effect on cell viability of each sample in each of the above cell lines, the MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl] -2,5-diphenyltetrazolium bromide) test method was used. was measured.
96-wall plate에 1×106의 세포를 플레이팅(plating)하고, 37℃에서 각 실험 조건에 상응하는 배양시간동안 CO2 배양기에서 배양하였다. 이후 10㎕ MTT 용액 (스톡 농도: 5mg/㎖)을 첨가하고 3시간 동안 추가 반응을 유도하였다. 반응 종료 및 포르마잔 결정(formazan crystal)의 용해를 위해, 각 웰에100㎕ MTT 정지 용액(stopping solution, 0.01M HCl 중의 10% SDS)을 추가로 첨가하였다. 세포 생존율은 MTT가 포르마잔으로 환원된 양을 570nm에서 흡광도를 측정하여 얻어진 OD570 값을 통해 산출하였다.1×10 6 cells were plated on a 96-wall plate, and cultured in a CO2 incubator at 37° C. for an incubation time corresponding to each experimental condition. Then, 10 μl MTT solution (stock concentration: 5 mg/ml) was added and further reaction was induced for 3 hours. For termination of the reaction and dissolution of formazan crystals, 100 μl MTT stopping solution (10% SDS in 0.01 M HCl) was further added to each well. The cell viability was calculated through the OD570 value obtained by measuring the absorbance at 570 nm of the amount of MTT reduced to formazan.
HaCat& Raw cell의 생존에 미치는 영향 측정Measurement of the effect on survival of HaCat& Raw cells
도 5는 Hacat 세포(A) 및 원시 세포(B)에서 샘플 DDK-401 및 DDK -201의 생체 적합성에 관한 비교그래프로서, 생리활성 측정을 위해 사용될 대식세포(Raw264.7 cells) 및 각질생성포세포(Hacat cells) 생존에 미치는 영향을 관찰한 결과이다. Hacat cell의 경우 DDK-401 및 DDK-201 모두 ml당 1000μg 농도까지 세포독성을 나타내지 않았다. DDK-201의 경우 500μg/ml 농도 이하에서는 DDK-401에 비해 생존율이 다소 증가되었다.Figure 5 is a comparative graph of the biocompatibility of samples DDK-401 and DDK-201 in Hacat cells (A) and primitive cells (B), macrophages (Raw264.7 cells) and keratinocytes to be used for measuring physiological activity. This is the result of observing the effect on the survival of Hacat cells. In the case of Hacat cells, both DDK-401 and DDK-201 showed no cytotoxicity up to a concentration of 1000 μg per ml. In the case of DDK-201, the survival rate was slightly increased compared to DDK-401 at a concentration of 500 μg/ml or less.
Raw cell의 경우도 두 시료 모두 500μg/ml 농도까지 80% 이상의 생존율을 보여 세포독성이 없었고 낮은 농도에서는 오히려 세포 생존을 촉진시켰다. 그러나 Raw cell에서도 DDK-201이 DDK-401보다 다소 세포생존율이 상대적으로 다소 높았다. In the case of raw cells, both samples showed a viability of more than 80% up to a concentration of 500μg/ml, showing no cytotoxicity, and rather promoting cell survival at a low concentration. However, even in raw cells, DDK-201 showed slightly higher cell viability than DDK-401.
실험예 4 : 암세포 독성실험Experimental Example 4: Cancer cell toxicity test
암세포(A549 cancer cell)에 대한 세포독성 측정Cytotoxicity measurement for cancer cells (A549 cancer cell)
DDK-201 및 DDK-401 시료의 A549 cancer cell에 대한 세포독성시험은 다음과 같이 측정하였다.The cytotoxicity test for A549 cancer cells of DDK-201 and DDK-401 samples was measured as follows.
즉, 사람의 암 유래세포(A549)를 10% FBS와 1% penicillin-steptomycin이 함유된 89% RPMI 배지에서 5% CO2, 37℃ humidified chamber에서 배양하였다. 또한, 시료를 처리하기 전에 세포가 잘 점착할 수 있도록 24시간 동안 배양하였다. 두 시료의 세포독성 비를 측정하기 위하여 암세포(A549)를 MTT용액으로 염색하였다.That is, human cancer-derived cells (A549) were cultured in 89% RPMI medium containing 10% FBS and 1% penicillin-steptomycin in a 5% CO 2 , 37° C. humidified chamber. In addition, before processing the sample, the cells were cultured for 24 hours so that they could adhere well. To measure the cytotoxicity ratio of the two samples, cancer cells (A549) were stained with MTT solution.
먼저 암세포를 96 well plate에 well 당 1x104cell 농도로 접종하고 24시간 후 세포가 충분히 정착한 뒤 초기 배양액을 제거하고 시료를 25ug에서 500ug/ml 까지 농도별로 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 그 후 각 well에 20ul의 MTT용액을 가하고 세포를 4시간 동안 보온하였다. 마지막으로 남아있는 formazan을 용해하기 위해 100ul의 DMSO를 첨가하였다. 그리고나서 암소에서 microplate를 shaking하며 formazan을 녹여 형성된 purple color를 ELISA Leader를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하였다.First, cancer cells were inoculated in a 96 well plate at a concentration of 1x10 4 cells per well, and after 24 hours, the cells were sufficiently settled, the initial culture medium was removed, and the samples were treated by concentration from 25ug to 500ug/ml and cultured for 24 hours. Then, 20ul of MTT solution was added to each well, and the cells were kept warm for 4 hours. Finally, 100 μl of DMSO was added to dissolve the remaining formazan. Then, while shaking the microplate in the dark, the purple color formed by dissolving formazan was measured for absorbance at 570 nm using an ELISA Leader.
세포내 ROS생성에 미치는 영향 측정Measurement of the effect on intracellular ROS production
DDK-201 및 DDK-401의 암세포(A549) 내의 ROS 생성에 미치는 영향은 DCFH-DA(dichloro-dihydro-fluorescein diacetate)방법으로 측정하였다. 즉 96-well plate에 A549세포(5x104 cells/well)를 접종하고 5% CO2, 37℃ 배양기에서 24시간 배양하였다. 이후 PBS로 충분히 세척 한 후25, 50, 100, 250, 500μg/ml의 시료를 무혈청 배지에 처리하고 24시간 보온하였다.The effects of DDK-201 and DDK-401 on ROS production in cancer cells (A549) were measured by the DCFH-DA (dichloro-dihydro-fluorescein diacetate) method. That is, A549 cells (5x10 4 cells/well) were inoculated into a 96-well plate and cultured for 24 hours in a 5% CO 2 , 37°C incubator. Thereafter, after sufficiently washing with PBS, samples of 25, 50, 100, 250, and 500 μg/ml were treated in a serum-free medium and kept warm for 24 hours.
ROS 생성에 미치는 영향을 평가하기 위해 A549 세포를 충분한 량의 PBS로 세척한 후 PBS에 녹인 20μM의 DCFH-DA로 37℃에서 30분간 전 처리하였다. 이 세포를 PBS로 세척하고 무혈청 배지에, 37℃에서 2시간 보온하였다. 마지막으로 이 세포를 PBS로 두차례 세척하고 Multi-model plate reader에서 excitation 파장 485nm, emission 파장 528nm에서 흡광도를 측정하여 ROS level을 정량하였다.To evaluate the effect on ROS generation, A549 cells were washed with a sufficient amount of PBS and then pre-treated with 20 μM DCFH-DA dissolved in PBS at 37°C for 30 minutes. The cells were washed with PBS and incubated in a serum-free medium at 37°C for 2 hours. Finally, the cells were washed twice with PBS, and the ROS level was quantified by measuring absorbance at an excitation wavelength of 485 nm and an emission wavelength of 528 nm in a multi-model plate reader.
암세포(A549 cancer cell) 독성Cancer cell (A549 cancer cell) toxicity
도 6(a)는 DDK-201과 DDK-401의 폐암 세포 A549에 대한 세포성장 억제효과를 나타낸 그림이다. DDK-201 및 DDK-401은 100μg 이상의 농도에서 A549 암 세포의 성정을 억제하였고,이 세포 독성은 농도의 증가에 따라 더욱 증가되었다. 특히, DDK-401은 250μg에서 약 40%, 500μg에서는 약 70%까지 생존율을 억제하였으며, DDK-201에 비해서도 억제 활성이 유의하게 높았다. 이 결과는 DDK-201이나 DDK-401 모두 암세포의 성장을 억제하지만 CK 함량이 높은 DDK-401의 암세포 성장억제 효과가 훨씬 더 큼을 알 수 있다.Figure 6 (a) is a picture showing the cell growth inhibitory effect of DDK-201 and DDK-401 on lung cancer cell A549. DDK-201 and DDK-401 inhibited the growth of A549 cancer cells at concentrations above 100 μg, and this cytotoxicity increased further with increasing concentrations. In particular, DDK-401 inhibited the survival rate by about 40% at 250 μg and by about 70% at 500 μg, and the inhibitory activity was significantly higher than that of DDK-201. This result indicates that both DDK-201 and DDK-401 inhibit cancer cell growth, but DDK-401 with a high CK content has a much greater cancer cell growth inhibitory effect.
암세포(A549 cancer cell) 독성Cancer cell (A549 cancer cell) toxicity
도 6(b)는 DDK-201과 DDK-401의 암 세포 A549에서 ROS 생성에 미치는 영향을 관찰한 결과 이다. DDK-201과 DDK-401 모두 처리 농도의 증가에 따라 ROS생성을 증가시키는 약간 경향을 보였고, DDK-201보다 DDK-401가 다소 높은 값을 보였다. 그러나 DDK-401의 250μg 처리구(p<0.05)를 제외하면 유의한 차이는 없었다. 6(b) shows the results of observing the effects of DDK-201 and DDK-401 on ROS generation in cancer cells A549. Both DDK-201 and DDK-401 showed a slight tendency to increase ROS production as the treatment concentration increased, and DDK-401 showed a slightly higher value than DDK-201. However, there was no significant difference except for the 250 μg treatment group of DDK-401 (p<0.05).
이 결과는 DDK-201, DDK-401 모두 정상세포(RAW264.7)에서와는 달리 A549 암세포에서는 pro-oxidant로 작용하여 ROS 생성을 증가시켜 ROS-mediated apoptosis에 관여한 것으로 보인다.This result suggests that both DDK-201 and DDK-401 were involved in ROS-mediated apoptosis by acting as pro-oxidants and increasing ROS generation in A549 cancer cells, unlike normal cells (RAW264.7).
도 6(a), 6(b)는 폐 A549 암세포의 샘플에 의한 세포 독성 및 세포 사멸 경로 유전자의 시험관 검증 결과로서, 도 6(a)는 MTT 세포독성 분석 결과이고, 도 6(b)는 RT-PCR 및 C. ROS 생성 결과를 보여준다.6(a) and 6(b) show the results of in vitro verification of cytotoxicity and apoptosis pathway genes by samples of lung A549 cancer cells. FIG. 6(a) shows the results of MTT cytotoxicity analysis, and FIG. 6(b) RT-PCR and C. ROS production results are shown.
실험예 5 : NO 억제 활성 실험Experimental Example 5: NO inhibition activity test
NO 생성에 미치는 영향 측정 실험Effect measurement experiment on NO production
DDK-201 및 DDK-401시료의 NO 생성 억제 시험은 RAW 264.7 세포에서 시행하였다. 즉, RAW264.7 세포를 DMEM 배지를 이용하여 1×105 cells/ml로 조절한 후 96 well plate에 접종하고, 시료와 LPS(1μg/mL)를 함유한 새로운 배지를 동시에 처리하여 24시간 배양하였다. 생성된 NO의 양을 Griessreagent을 이용하여 세포배양 상등액 100μL와 Griessreagent[1%(w/v) sulfanilamide, 0.1%(w/v) naphtyl-ethylenediaminein 2.5%(v/v) phosphoric acid] 100μL를 혼합하여 96 well plates에서 10분 동안 반응시킨 후 ELISA microplate reader를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 생성된 nitrite의 농도는 sodium nitrite를 DMEM 배지에 용해한 표준곡선을 이용하여 계산하였으며, LPS를 처리한 시험군과 LPS를 처리하지 않은 대조군에서 생성된 nitrite 양의 차이를 기준으로 각 시료의 NO 생성 저해활성을 확인하였다. 또한, 현재 알려진 NO 생성을 억제하는 물질로 L-arginine의 구조 유사체인 N-monomethyl-L-arginine (L-NMMA)와 비교하여 iNOS 유도 후 단계에 미치는 영향을 비교 조사하였다.NO production inhibition test of DDK-201 and DDK-401 samples was performed in RAW 264.7 cells. That is, RAW264.7 cells were adjusted to 1×10 5 cells/ml using DMEM medium, inoculated into a 96-well plate, and cultured for 24 hours by simultaneously treating the sample and new medium containing LPS (1 μg/mL). did The amount of NO generated was measured by mixing 100 μL of the cell culture supernatant and 100 μL of Griessreagent [1% (w/v) sulfanilamide, 0.1% (w/v) naphtyl-ethylenediaminein 2.5% (v/v) phosphoric acid] using Griessreagent. After reacting in 96 well plates for 10 minutes, absorbance was measured at 540 nm using an ELISA microplate reader. The concentration of nitrite produced was calculated using a standard curve in which sodium nitrite was dissolved in DMEM medium. Based on the difference in the amount of nitrite produced in the test group treated with LPS and the control group not treated with LPS, NO production was inhibited in each sample. activity was confirmed. In addition, compared with N-monomethyl-L-arginine (L-NMMA), a structural analogue of L-arginine, which is currently known to inhibit NO production, its effect on the post-induction stage of iNOS was compared and investigated.
실험결과Experiment result
도 7은 홍삼(RG)과 DDK-401가 염증지표의 하나인 LPS에 의해 유도된 NO 생성 시스템에서 이를 억제하는 효과를 나타낸 그림이다. 이 결과는 RAW 세포의 샘플에 의한 염증 억제 및 NFkB 경로 유전자의 시험관 내 평가에 의한 NO 억제 분석결과이다.7 is a diagram showing the effect of suppressing red ginseng (RG) and DDK-401 in the NO production system induced by LPS, which is one of the inflammatory markers. This result is an assay of inhibition of inflammation by samples of RAW cells and inhibition of NO by in vitro evaluation of NFkB pathway genes.
양성대조군으로는 L-arginine 유사체인 L-NMMA를 사용하였다. 도 7에서와 같이 RG 및 DDK-401 모두 NO생성을 농도 의존적으로 억제하였다. 특히 DDK-401은 RG에 비해 억제효과가 높았으며 250μg에서 약 17%, 500μg에서 약 25%까지 억제하여 RG에 비해 유의하게 높았다.As a positive control, L-NMMA, an analog of L-arginine, was used. As shown in FIG. 7, both RG and DDK-401 inhibited NO production in a concentration-dependent manner. In particular, DDK-401 had a higher inhibitory effect than RG, and it was significantly higher than RG by suppressing about 17% at 250μg and about 25% at 500μg.
실험예 6 : 항산화 활성 실험Experimental Example 6: Antioxidant activity test
DDK-201 및 DDK-401 시료의 항산화 활성은 프리라디컬 소거능(DPPH) 및 환원력(reducingpower)를 측정하여 비교하였다.Antioxidant activities of DDK-201 and DDK-401 samples were compared by measuring free radical scavenging ability (DPPH) and reducing power.
프리라디칼 소거능은 DPPH 이용한 자유 라디칼 소거 활성 측정법으로 실시하였다. 즉, 에탄올에 용해시킨 DPPH 용액을 495㎕씩 시험관에 분주하고, 여기에 상기 시료를 5㎕씩 첨가하여, 최종 반응용액이 500㎕가 되도록 하였다. 이를 일정시간 동안 반응시킨 후, 96-wall plate에 200㎕씩 2개의 wall에 분주한 뒤 517nm에서의 흡광도 변화를 측정하였다.The free radical scavenging activity was measured by a free radical scavenging activity measurement method using DPPH. That is, 495 μl of the DPPH solution dissolved in ethanol was dispensed into the test tube, and 5 μl of the sample was added thereto to make the
두 시료의 환원력(reducing power)는 다음과 같이 측정하였다. 즉, 1.0mL의 시료를 2.5mL의 0.2mM 인산염완충액(pH 6,6) 잘 혼합한 후 이 용액에 2.5mL의 1.0% ferricyanide를 첨가하였다. 이 용액을 50℃ 수조에서 20분간 보온한 후 2.5mL의 10% trichloroacetic acid를 첨가하고 3,000rpm에서 10분간 원심분리하였다. 그 후 2.5mL의 상등액을 취하고 0.5mL의 0.1% ferric chlroride와 2.5mL 증류수를 첨가한 후 700nm에서 흡광도를 측정하였으며, 이때 표준물질로는 ascorbic acid를 사용하여 검량선을 작성하고 시료의 환원력을 계산하였다. The reducing power of the two samples was measured as follows. That is, after mixing 1.0mL of the sample with 2.5mL of 0.2mM phosphate buffer (pH 6,6) well, 2.5mL of 1.0% ferricyanide was added to the solution. After warming this solution in a 50°C water bath for 20 minutes, 2.5 mL of 10% trichloroacetic acid was added and centrifuged at 3,000 rpm for 10 minutes. Then, 2.5 mL of the supernatant was taken, 0.5 mL of 0.1% ferric chlroride and 2.5 mL of distilled water were added, and the absorbance was measured at 700 nm. At this time, a calibration curve was prepared using ascorbic acid as a standard material, and the reducing power of the sample was calculated. .
하기 표 3은 DDK-201과 DDK-401의 항산화 활성을 프리라디칼 소거능과 환원력을 측정하여 비교한 결과다. Table 3 below shows the results of comparing the antioxidant activity of DDK-201 and DDK-401 by measuring free radical scavenging ability and reducing power.
Ascorbic acid 대응값으로 나타낸 DDK-401의 프리라디칼 소거능은0.093으로 DDK-201의 0.049에 비해 약2배 높았으며, 환원력은 0.340으로DDK-201의 0.97 보다 약 3.5배 높았다. The free radical scavenging ability of DDK-401, expressed as the corresponding value of ascorbic acid, was 0.093, which was about twice as high as that of DDK-201, which was 0.049.
이 결과는 CK 함량이 높은 DDK-401이 항산화 활성이 훨씬 더 높음을 보여주는 것이다.This result shows that DDK-401 with high CK content has much higher antioxidant activity.
실험예 7 : 항스트레스 활성 실험Experimental Example 7: Anti-stress activity test
세포내 ROS 생성에 미치는 영향 측정Measurement of effect on intracellular ROS generation
DDK-201 및 DDK-401의 각질형성세포(HaCaTcell) 내의 ROS 생성에 미치는 영향은 DCFH-DA(dichloro-dihydro-fluorescein diacetate)방법으로 측정하였다. 즉 96-well plate에 HaCaT세포(5x10*4 cells/well)을 접종하고 5% CO2, 37℃ 배양기에서 24시간 배양하였다. 이후 PBS로 충분히 세척 한 후250, 500, 및 1000μg의 시료를 무혈청 배지에 처리하고 24시간 보온하였다. 이때, 양성대조군으로는 ascorbic acid를 사용하였다.The effect of DDK-201 and DDK-401 on ROS generation in keratinocytes (HaCaTcell) was measured by the DCFH-DA (dichloro-dihydro-fluorescein diacetate) method. That is, HaCaT cells (5x10*4 cells/well) were inoculated into a 96-well plate and cultured for 24 hours in a 5% CO2, 37°C incubator. Thereafter, after sufficiently washing with PBS, samples of 250, 500, and 1000 μg were treated in serum-free media and kept warm for 24 hours. At this time, ascorbic acid was used as a positive control group.
ROS 생성에 미치는 영향을 평가하기 위해 HaCaT 세포를 충분한 량의 PBS로 세척한 후 PBS에 녹인 20μM의 DCFH-DA로 37℃에서 30분간 전 처리하였다. 다시 HaCaT 세포를 PBS로 세척하고 무혈청 배지에 녹인 500μmol/L의 H2O2 가하고 37℃에서 2시간 보온하였다. 마지막으로 이 세포를 PBS로 두차례 세척하고 Multi-model plate reader에서 excitation 파장485nm, emission 파장 528nm에서 흡광도를 측정하여 ROS level을 정량하였다.To evaluate the effect on ROS generation, HaCaT cells were washed with a sufficient amount of PBS and then pre-treated with 20 μM DCFH-DA dissolved in PBS at 37°C for 30 minutes. Again, the HaCaT cells were washed with PBS, and 500 μmol/L of H2O2 dissolved in serum-free medium was added thereto, followed by incubation at 37°C for 2 hours. Finally, the cells were washed twice with PBS, and the ROS level was quantified by measuring absorbance at an excitation wavelength of 485 nm and an emission wavelength of 528 nm in a multi-model plate reader.
HaCaT세포의 산화적 스트레스에 대한 DDK-201과 DDK-401의 보호 효과Protective effect of DDK-201 and DDK-401 against oxidative stress in HaCaT cells
실험 결과, 도 8에서와 같이 HaCaT세포에 H2O2를 첨가하여 배양한 결과 세포내 ROS 수준은 약 270% 까지 증가되었다. 그러나 이 배양조건에 DDK-201 또는 DDK-401를 첨가하면 ROS level이 농도 의존적으로 유의하게 감소되었고, 그 감소효과는 시험한 전 농도에서 DDK-401이 DDK-201에 비해 훨씬 높았다. DDK-401을1000μg 처리했을 때는 ROS level이 거의 H2O2 무처리 수준으로 떨어졌고 ascorbic acid 100μg 처리 수준으로 근접하였다. 이는 DDK-401의 높은 항산화 활성 능력을 보여주는 것이다. As a result of the experiment, as shown in FIG. 8, when HaCaT cells were cultured with the addition of H2O2, the intracellular ROS level increased to about 270%. However, when DDK-201 or DDK-401 was added to these culture conditions, the ROS level was significantly reduced in a concentration-dependent manner, and the reduction effect was much higher in DDK-401 than in DDK-201 at all tested concentrations. When 1000μg of DDK-401 was treated, the ROS level almost fell to the untreated level of H2O2 and approached the level of ascorbic acid 100μg. This shows the high antioxidant activity of DDK-401.
실험예 8 : NK세포 활성에 미치는 면역 영향평가Experimental Example 8: Evaluation of immune effects on NK cell activity
비장세포 증식능, 사이토카인 분비능 및 CD4 T 세포 활성능을 통하여 DDK-201과 DDK-401 시료의 NK세포 활성능을 비교 평가하기 위하여, 각 시료를 100 mg/kg BW로 1일 1회 14일간 투여하고, 투여된 마우스의 비장을 적출하여 비장세포 내 성숙한 NK 세포를 분리하였고, 분리된 NK 세포(Effector cell)에 암세포(Target cell; Yac-1)를 혼합하여 NK 세포 활성을 평가하였다.In order to compare and evaluate the NK cell activity of DDK-201 and DDK-401 samples through splenocyte proliferation, cytokine secretion, and CD4 T cell activation, each sample was administered at 100 mg/kg BW once a day for 14 days Then, the spleen of the administered mouse was removed to separate mature NK cells from splenocytes, and cancer cells (Target cells; Yac-1) were mixed with the isolated NK cells (Effector cells) to evaluate NK cell activity.
비장에서 분리된 NK 세포에 암세포를 비율(1:1, 5:1, 10:1, 20:1)별로 처리하여 암세포를 사멸하는 NK 세포의 활성능을 측정한 결과, 다음 표와 같이 effector cell의 농도 의존적으로 NK 세포 활성능이 증가하는 것으로 나타났다.NK cells isolated from the spleen were treated with cancer cells at a ratio (1:1, 5:1, 10:1, 20:1) to measure the activation ability of NK cells to kill cancer cells. NK cell activity was found to increase in a concentration-dependent manner.
상기 실험결과, 가장 높은 NK세포 활성능은 Effector cell:Target의 비율이 20:1에서 나타났으며, DDK-201과 DDK-401 투여군 간의 효능을 비교하였을 때 모든 비율 처리구 (1:1, 5:1, 10:1, 20:1)에서 DDK-401의 NK 세포 활성능이 월등하게 높게 나타나는 것으로 관찰되었다.As a result of the above experiment, the highest NK cell activity was found at the effector cell:target ratio of 20:1, and when comparing the efficacy between the DDK-201 and DDK-401 administration groups, all ratio treatment groups (1:1, 5: 1, 10:1, 20:1), it was observed that the NK cell activating ability of DDK-401 was significantly higher.
실험예 9 : 전립선 개선 효과 확인실험Experimental Example 9: Prostate improvement effect verification test
시료 DDK-401의 발효물에 대하여 전립선 염증 및 비대증 개선 정도를 확인하기 위해 동물실험을 하였다.For the fermented product of the sample DDK-401, animal experiments were conducted to confirm the degree of improvement of prostate inflammation and hypertrophy.
동물실험을 위한 대조군(정상쥐, 생리식염수 투여군)과 전립선 비대증에 감염된 실험군 쥐에 회당 상기 시료를 300mg/kg을 10마리씩 6주령 웅성마우스에 4주간 1일 2회 경구투여 후 비교하였으며, 그 결과 시료의 비투여군에서는 전립선의 무게가 약 2.4배 증가하였으나, 실험군쥐의 전립선 무게는 최소 98.2% 감소하였고, 전립선조직 내상피세포의 과형성도 현저히 완화되었다. 동시에 전립선 비대증의 원인 물질인 디하이드 로테스토스테론(Dihydrotestosterone)은 혈청 중에서는 73.6% 감소하였고, 전립선 내에서는 74.1% 감소하였다.300mg/kg of the sample per time was administered to 10 6-week-old male mice twice a day for 4 weeks in the control group (normal rats, physiological saline administration group) and experimental rats infected with benign prostatic hyperplasia for animal experiments. The results were compared. In the non-administration group, the weight of the prostate increased about 2.4 times, but the weight of the prostate in the experimental group decreased by at least 98.2%, and hyperplasia of epithelial cells in the prostate tissue was significantly alleviated. At the same time, dihydrotestosterone, a causative agent of BPH, decreased by 73.6% in serum and by 74.1% in prostate.
아래 표는 상기 시료를 섭취 후 PSA 지수를 측정한 임상실험결과이다. 여기서, 혈중전립선 특이환원(Prostate Specific Antigen; PSA)지수란 정상적으로 전립선에서 생성되는 물질로 전립선 암종 등과 같은 질환에서 혈중치가 상승하여 암을 진단할 때 사용하며, 본 실험예서는 PSA가 증가하면 전립선 염증과 비대증 및 전립선암의 질환이 증가한다고 볼 수 있다.The table below shows the results of clinical experiments measuring the PSA index after ingesting the sample. Here, the blood prostate specific antigen (PSA) index is a substance normally produced in the prostate, and is used when diagnosing cancer when the blood level rises in diseases such as prostate carcinoma. It can be seen that the diseases of hypertrophy and prostate cancer are increasing.
일반적으로 PSA의 정상수치는 0~4ng/ml로서, PSA수치가 4ng/ml 이상이면 전립선암의 가능성이 있으며, 또 전립선염, 전립선 비대증이 심한 경우, 배뇨 곤란이 심한 경우 등에도 PSA의 수치는 높아진다.In general, the normal level of PSA is 0 to 4ng/ml, and if the PSA level is higher than 4ng/ml, there is a possibility of prostate cancer. It rises.
실험은 남성 50대(제1군), 60대(제2군), 70대(제3군)으로 실험군을 정하고, 각 실험군별 8명씩 실험에 참여하였다.Experimental groups were defined as males in their 50s (group 1), 60s (group 2), and 70s (group 3), and 8 people in each experimental group participated in the experiment.
실험은 1회 시료 3g 분량을 아침, 저녁으로 1일 2회씩 6개월간 복용하게 하였다. 복용 후 매월 경과 시마다 PSA지수를 측정하여 각 실험군별로 평균치를 구하여 하기 표로 제시하였다.In the experiment, 3 g of sample was taken twice a day in the morning and evening for 6 months. After taking, the PSA index was measured every month, and the average value was obtained for each experimental group and presented in the table below.
상기 실험결과, 상기 실시예 1의 고상 및 액상 발효한 홍삼 및 인삼 복합 발효물을 투여한 경우, 환자에 따라 차이가 있으나 PSA 지수가 현저히 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 특히, 약 3개월 이후부터는 사이에 전립선 염증과 비대증을 치료할 수 있으며, 6개월 이후부터는 매우 안정적으로 관리되고 전립선 비대증과 전립성 염증은 100% 완치가 가능한 것으로 기대된다. 또한, 전체 실험군에서 전립선암 발병 가능성이 현저하게 경감되어 대부분 정상범위(<4ng/ml)로 관리되었다.As a result of the experiment, it was confirmed that the PSA index significantly decreased when the solid and liquid fermented red ginseng and ginseng complex fermented product of Example 1 were administered, although there were differences depending on the patient. In particular, from about 3 months onwards, prostatic inflammation and hypertrophy can be treated in between, and from 6 months onwards, it is expected to be managed very stably and 100% cure of prostatic hyperplasia and prostatic inflammation is possible. In addition, the possibility of developing prostate cancer was significantly reduced in all experimental groups, and most of them were managed within the normal range (<4ng/ml).
실험예 10 : 전립선비대증 세포 내 ROS 함량 측정 시험Experimental Example 10: ROS content measurement test in prostatic hyperplasia cells
상기 DDH-201 및 DDH-402의 시료에 대하여 전립선 비대증 세포 내 ROS 함량 측정 시험을 실시하였다.The DDH-201 and DDH-402 samples were tested for measuring ROS content in BPH cells.
실험은 PC3 전립선 세포를 96웰 플레이트에 각 웰당 약 4×104 세포가 되도록 분주하여 배양한 후 70~80% 정도 되었을 때 각 시료를 12시간 처리하였다. 20uM DCFHH-DA가 함유된 Hank's balanced salt solution(HBSS, pH 7.4)을 1시간 배양한 다음, 1mM H2O2를 30분간 처리하였다. SpectraMax M2 multimode microplate reader(Molecular Devices,Sunnyvale, CA, USA)를 이용하여 excitation 485nm, emission 524nm에서 DCF-DA 형광을 측정하였다.In the experiment, PC3 prostate cells were cultured by dispensing to about 4×10 4 cells per well in a 96-well plate, and then each sample was treated for 12 hours when the concentration was about 70 to 80%. Hank's balanced salt solution (HBSS, pH 7.4) containing 20uM DCFHH-DA was incubated for 1 hour, and then treated with 1mM H 2 O 2 for 30 minutes. DCF-DA fluorescence was measured at excitation 485 nm and emission 524 nm using a SpectraMax M2 multimode microplate reader (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA).
각 시료를 전처리한 다음, H2O2로 산화적 스트레스를 유도하여 세포내 ROS 함량과 RNS에 의한 nitrotyrosine(NT) 변화를 살펴보았다. After each sample was pretreated, oxidative stress was induced with H 2 O 2 , and intracellular ROS contents and nitrotyrosine (NT) changes by RNS were examined.
여기서, 대조군 1은 정제수를 사용하였으며, 대조군 2는 H2O2를 사용하였다. 대조군 및 DDH-201, DDH-401의 각 시료 사용 군에 대한 전립선 비대증 세포 내 ROS 함량 측정 시험 결과는 하기 표와 같다.Here, the control group 1 used purified water, and the control group 2 used H 2 O 2 . The test results for measuring the ROS content in BPH cells for the control group, DDH-201, and DDH-401 samples are shown in the table below.
상기 실험결과, 전립선 세포에 H2O2를 처리한 경우, 세포내 ROS함량이 유의적으로 증가한 반면, DDH-401의 시료 처리 시 현저하게 감소되는 것을 확인할 수 있었다. 이와 유사하게, NT 발현량 또한 H2O2 처리군에 비해 DDH-401의 시료 사용시 감소되어, H2O2에 의한 산화적 스트레스가 실시예의 시료에 의해 저해되어 세포내 ROS 함량및 RNS에 의한 NT발현이 감소된 것으로 보인다.As a result of the experiment, it was confirmed that when the prostate cells were treated with H 2 O 2 , the intracellular ROS content was significantly increased, whereas when the sample of DDH-401 was treated, it was significantly decreased. Similarly, the amount of NT expression was also reduced when using the sample of DDH-401 compared to the H 2 O 2 treated group, so that the oxidative stress caused by H 2 O 2 was inhibited by the sample of the example, resulting in intracellular ROS content and RNS NT expression appears to be reduced.
실험예 11 : 전립선 비대증 억제 실험Experimental Example 11: Prostatic hyperplasia inhibition test
상기 DDH-201 및 DDH-402의 시료를 이용하여 in vivo 상에서 전립선 비대증 활성을 확인해 보았다. 이때 양성대조군으로는 피나스테라이드를 사용하였다.The DDH-201 and DDH-402 samples were used to confirm the prostatic hyperplasia activity in vivo. At this time, finasteride was used as a positive control group.
실험은 수컷 SD계 래트를 대상으로 테스토스테론을 투여하지 않은 control군을 제외하고는 각 그룹당 n=5마리로 2주일 동안 테스토스테론을 3mg/kg/day의 양을 피하주사로 투입하여 전립선 비대를 유발하고, 2주일 후 적출을 통하여 전립선 비대가 충분히 유발되었음을 확인 후, 계속적으로 테스토스테론을 주입하여 전립선 비대를 유지하면서 각 시료를 5㎎/kg의 양으로 경구 투여하였고, 피나스테라이드는 2mg/kg의 양으로 경구 투여하였다. 그리고 약물 투여 3주일이 지난 후 전립선 크기를 측정하였으며, 전립선 조직에서 5-alpha reductase II 활성의 결과를 관찰하였다.In the experiment, male SD rats were injected subcutaneously with testosterone at an amount of 3 mg/kg/day for 2 weeks with n = 5 rats per group, except for the control group, which was not administered with testosterone, to induce prostate enlargement. After confirming that prostatic hyperplasia was sufficiently induced through extraction after 2 weeks, each sample was orally administered in an amount of 5 mg/kg while maintaining prostatic hypertrophy by continuously injecting testosterone, and finasteride was orally administered in an amount of 2 mg/kg. administered. In addition, the size of the prostate was measured after 3 weeks of drug administration, and the results of 5-alpha reductase II activity were observed in the prostate tissue.
마지막 투여가 끝난 날 체중 측정 후 희생을 한 이후에 채혈 및 전립선을 적출하였다. 적출된 전립선의 무게를 측정하고 체중당 전립선의 무게 비율을 계산하였고, 그 결과를 다음 표에 나타내었다.On the day after the last administration, blood was collected and the prostate was removed after sacrifice was performed after body weight was measured. The weight of the extracted prostate was measured and the prostate weight ratio per body weight was calculated, and the results are shown in the following table.
전립선 무게비율=전립선 무게(g)/체중(g) x 100Prostate weight ratio = prostate weight (g)/body weight (g) x 100
무게(g)prostate
weight (g)
무게비율(%)prostate
Weight ratio (%)
실험예 12 : 발기촉진 효과 실험Experimental Example 12: Erection promoting effect test
상기 시료 DDH-201, DDH-401의 조성물을 이용하여 in vivo 상에서 발기촉진 약효를 측정해 보았다. 이때 양성대조군으로는 실데나필 시트레이트를 사용하였다.Erectile stimulation efficacy was measured in vivo using the compositions of the samples DDH-201 and DDH-401. At this time, sildenafil citrate was used as a positive control group.
구체적으로, 실험동물로는 웅성의 SPF 뉴질랜드 알비노 래빗(체중 약 3.5 ~ 4.0 ㎏)을 시험 그룹당 각각 5마리씩 사용하였으며, 이들을 우리 속에서 동일한 조건으로 4일 이상 일정량의 통상적인 래빗용 고체 사료 및 물을 공급하여 사육하였다. 래빗은 48시간 이상 절식시킨 후 시험에 사용하였으며, 절식 시에는 물을 자유롭게 마실 수 있게 하였다.Specifically, male SPF New Zealand albino rabbits (about 3.5 to 4.0 kg in weight) were used for each test group, 5 each, and they were fed with regular rabbit feed and water for 4 days or more under the same conditions in a cage was supplied and bred. Rabbits were used in the test after fasting for 48 hours or more, and were allowed to drink water freely during fasting.
상기와 같이 준비된 래빗에 상기 각 시료를 마리당 50㎎/kg 량으로 구강 내에 투여하였다. 한편, 양성 대조군인 실데나필 시트레이트는 20㎎/kg 량을 경구 투여하였다. 이와 같이 투여 후 발기 시작시간 및 지속시간을 측정하였다.Each of the samples was intraorally administered to the rabbits prepared as described above in an amount of 50 mg/kg per animal. Meanwhile, 20 mg/kg of sildenafil citrate, a positive control group, was orally administered. Thus, the erection start time and duration after administration were measured.
그 실험결과는 다음 표에 나타내었다.The experimental results are shown in the following table.
상기 실험결과, DDH-401(실시예 시료)의 경우 모두 양성 대조군과 비교하여 유사한 수준으로 매우 우수한 발기 성능을 나타내는 것으로 확인되었다.As a result of the above experiment, it was confirmed that all of the DDH-401 (Example samples) exhibited very good erection performance at a similar level to that of the positive control group.
실험예 13 : 환경호르몬 예방 및 정자수 증가효능 확인Experimental Example 13: Confirmation of endocrine disruptor prevention and sperm count increasing effect
대조군와 DDH-201, DDH401의 시료에 대하여 환경 대응력과 정자수 증가 효능 확인을 위하여 실험동물로 웅성 흰쥐(ICR계 마우스, 7주령)를 각 군당 10마리씩 사용하여 실험하였다.For the control group, DDH-201, and DDH401 samples, 10 male rats (ICR mice, 7 weeks old) were used as experimental animals to confirm the ability to respond to the environment and increase the sperm count.
실내온도 22±1℃, 습도 55±5%, 명암주기 12시간의 일정한 환경에서 가능한 스트레스를 받지 않도록 사육하고, 증류수를 투여한 대조군과 각 시료를 30㎎/생쥐/일 투여한 실험군에 각각 1일 1회 7일간 경구투여하였다. 마지막 경구투여 후, 마우스를 희생시켜 정소, 부정소, 정낭을 분리하여 각각의 무게를 측정하고, 분리한 부정소를 2㎖ 생리식염수에서 균질화한 다음, 37℃에서 20분간 방치시킨 후 혼합액을 1/5 희석하여 현미경 상에서 정자 수를 측정하고, 정소, 부정소, 정낭의 무게를 측정하였다. 그 결과는 다음 표와 같다.The room temperature was 22±1℃, the humidity was 55±5%, and the light/dark cycle was 12 hours in a constant environment so as not to be subjected to stress as much as possible. It was orally administered once a day for 7 days. After the last oral administration, the mice were sacrificed, testis, epididymis, and seminal vesicles were separated, each weight was measured, and the separated epididymis was homogenized in 2 ml physiological saline, left at 37 ° C. After dilution of /5, the number of sperm was measured under a microscope, and the weight of testes, epididymis, and seminal vesicles was measured. The result is shown in the table below.
상기 실험들의 결과, 본 발명에 따른 홍삼 및 흑삼발효물의 경우 매우 우수한 전립선 개선 및 성기능 개선 효과가 있는 것으로 확인되었다. 이러한 효과는 실험에서 전립선염, 전립선암 등의 억제 효과와 전립선 비대증에 개선된 효과가 있는 것으로부터 뒷받침된다. 또한, 정자수 개선과 스트레스 개선 등의 효과로 인해 발기부전 개선이나 성기능 개선에 효과가 있는 것으로 확인된다.As a result of the above experiments, it was confirmed that the fermented red ginseng and black ginseng products according to the present invention had excellent prostate and sexual function improvement effects. These effects are supported by the fact that there is an inhibitory effect on prostatitis, prostate cancer, etc., and an improved effect on prostatic hyperplasia in experiments. In addition, it is confirmed that it is effective in improving erectile dysfunction or sexual function due to effects such as improving sperm count and stress.
상기와 같이, 본 발명의 조성물인 실시예의 경우 전립선 개선 또는 성기능 개선 효과가 현저하게 우수한 것으로 확인되었다. 이것은 본 발명에서 사용한 제1 및 제2 천연발효효소복합액의 구성의 특징에 기인한 것으로 보이며, 이러한 결과는 기존의 일반적인 발효에 비해 월등하게 우수한 효과로서, 본 발명에서 사용된 천연발효효소복합액을 이용한 고상발효와 액상발효로 인하여 각 사용된 성분의 상호작용에 의해 우수한 효과가 있음을 보여주는 것이다.As described above, in the case of the composition of the present invention, it was confirmed that the effect of improving prostate or sexual function was remarkably excellent. This seems to be due to the characteristics of the composition of the first and second natural fermentation enzyme complex solutions used in the present invention, and these results are significantly superior to conventional fermentation, and the natural fermentation enzyme complex solution used in the present invention It shows that there is an excellent effect by the interaction of each used component due to solid phase fermentation and liquid phase fermentation using.
Claims (14)
매실천연효소액 30~70중량부와, 황기, 마늘, 멀꿀, 오가피, 비타민나무, 연자육 및 감태를 포함하는 식물혼합추출액 30~70중량부가 혼합된 제2 천연혼합발효액 85~95중량%에, 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis)와 바실러스 아밀로리퀴피엔스(Bacillus amyloliquefaciens)를 포함하는 혼합 유산균 0.1~5중량%, 막걸리효모액 0.5~10중량%, 동충하초 균사체 1~5중량%, 수미자임(Sumizyme), 얼티메이즈(Ultimase MFC), 파이르플로(Pyr-flo) 및 탄네이즈(Tannase)를 포함하는 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소 0.01~3중량%, 아미노산 0.1~3 중량% 및 멀티비타민 0.01~3중량%가 함유된 제2 천연발효효소복합액으로 상기 고상발효된 결과물을 2차 액상발효한 발효홍삼농축액과,
흑삼을 상기와 동일 방법으로 1차 고상발효 및 2차 액상발효한 발효흑삼농축액을 혼합하되
상기 발효홍삼농축액 50~90중량%와 상기 발효흑삼농축액 10~50중량%가 혼합된 것
을 특징으로 하는 고상발효를 통한 체내흡수율이 증가된 컴파운드 K를 고함량 포함하는 전립선 개선 또는 성기능 개선용 조성물.85 to 95% by weight of the first natural mixed fermentation solution mixed with 30 to 70 parts by weight of plum natural enzyme solution and 30 to 70 parts by weight of plant mixed extracts including Astragalus, garlic, honey, Cornus officinalis, Schizandra, Hutgae, and Hwangchil, Lactobacillus Brevis (Lactobacillus brevis ) and Bacillus amyloliquefiens ( Bacillus amyloliquefaciens ) 0.1 to 5% by weight of mixed lactic acid bacteria, rice wine yeast solution 0.5 to 10% by weight, cordyceps mycelium 1 to 5% by weight, Sumizyme, Ulti First natural fermentation containing 0.01-3% by weight of cell membrane decomposition and biocomponent conversion enzymes including Ultimase MFC, Pyr-flo and Tannase and 0.01-3% by weight of multivitamin Solid-phase fermentation of red ginseng with enzyme complex solution,
85-95% by weight of the second natural mixed fermentation solution mixed with 30-70 parts by weight of plum natural enzyme solution and 30-70 parts by weight of plant mixture extracts including Astragalus, garlic, honey, cucumber, vitamin tree, lotus root, and Ecklonia cava, lactose 0.1 to 5% by weight of mixed lactic acid bacteria including Lactobacillus brevis and Bacillus amyloliquefaciens , 0.5 to 10% by weight of rice wine yeast solution, 1 to 5% by weight of cordyceps mycelium, Sumizyme, Cell membrane degradation and biocomponent conversion enzymes including Ultimase MFC, Pyr-flo and Tannase 0.01-3 wt%, amino acids 0.1-3 wt%, and multivitamin 0.01-3 wt% A fermented red ginseng concentrate obtained by secondary liquid phase fermentation of the product of the solid phase fermentation with a second natural fermentation enzyme complex solution containing %;
Mix the fermented black ginseng concentrate obtained by first solid phase fermentation and second liquid phase fermentation of black ginseng in the same way as above.
A mixture of 50 to 90% by weight of the fermented red ginseng concentrate and 10 to 50% by weight of the fermented black ginseng concentrate
A composition for improving prostate or sexual function comprising a high content of compound K with increased body absorption through solid phase fermentation, characterized in that.
상기 제1 천연혼합발효액 85~95중량%에, 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis)와 바실러스 아밀로리퀴피엔스(Bacillus amyloliquefaciens)를 포함하는 혼합 유산균 0.1~5중량%, 막걸리효모액 0.5~10중량%, 동충하초 균사체 1~5중량%를 접종하고 30~45℃에서 12~72시간 발효하는 단계;
상기 동충하초 균사체 적용 발효물에, 수미자임(Sumizyme), 얼티메이즈(Ultimase MFC), 파이르플로(Pyr-flo) 및 탄네이즈(Tannase)를 포함하는 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소 0.01~3중량%, 멀티비타민 0.01~3중량%를 첨가하여 30~45℃에서 1~6시간 발효하는 단계를 포함하는 제1 천연발효효소복합액을 제조하는 단계;
상기 제1 천연발효효소복합액을 이용하여 홍삼을 고상발효하는 단계;
상기 고상발효물을 추출하여 고상발효 추출액을 제조하는 단계;
매실천연효소액 30~70중량부와, 황기, 마늘, 멀꿀, 오가피, 비타민나무, 연자육 및 감태를 포함하는 식물혼합추출액 30~70중량부가 혼합된 제2 천연혼합발효액을 제조하는 단계;
상기 제2 천연혼합발효액 85~95중량%에, 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis)와 바실러스 아밀로리퀴피엔스(Bacillus amyloliquefaciens)를 포함하는 혼합 유산균 0.1~5중량%, 막걸리효모액 0.5~10중량%, 동충하초 균사체 1~5중량% 를 접종하고 30~45℃에서 12~72시간 발효하는 단계;
상기 발효물에 수미자임(Sumizyme), 얼티메이즈(Ultimase MFC), 파이르플로(Pyr-flo) 및 탄네이즈(Tannase)를 포함하는 세포막 분해 및 생체성분 변환 효소 0.01~3중량%, 아미노산 0.1~3 중량% 및 멀티비타민 0.01~3중량%를 첨가하여 30~45℃에서 1~6시간 발효하는 단계를 포함하는 제2 천연발효효소복합액을 제조하는 단계;
상기 제2 천연발효효소복합액을 이용하여 상기 제조된 고상발효 추출물을 액상발효하는 단계;
상기 액상발효물을 농축하여 발효홍삼농축액을 제조하는 단계;
상기와 동일한 공정으로 흑삼을 1차 고상발효 및 2차 액상발효하여 발효흑삼농축액을 제조하는 단계; 및
상기 발효홍삼농축액 50~90중량%와 상기 발효흑삼농축액 10~50중량%를 혼합하는 단계
를 포함하는 고상발효를 통한 체내흡수율이 증가된 컴파운드 K를 고함량 포함하는 전립선 개선 또는 성기능 개선용 조성물의 제조방법. Preparing a first natural mixed fermented liquid by mixing 30 to 70 parts by weight of plum natural enzyme solution with 30 to 70 parts by weight of plant mixed extracts including Astragalus, garlic, honey, Cornus officinalis, Schizandra, Hutgae, and Hwangchil;
85 to 95% by weight of the first natural mixed fermentation liquid, 0.1 to 5% by weight of mixed lactic acid bacteria including Lactobacillus brevis and Bacillus amyloliquefaciens , 0.5 to 10% by weight of rice wine yeast solution, Inoculating 1 to 5% by weight of cordyceps mycelium and fermenting at 30 to 45 ° C. for 12 to 72 hours;
0.01 to 3% by weight of cell membrane decomposition and biocomponent conversion enzymes including Sumizyme, Ultimase MFC, Pyr-flo and Tannase in the fermented product of Cordyceps sinensis mycelium , Preparing a first natural fermentation enzyme complex solution comprising adding 0.01 to 3% by weight of multivitamins and fermenting at 30 to 45 ° C. for 1 to 6 hours;
solid-phase fermentation of red ginseng using the first natural fermentation enzyme complex;
Extracting the solid phase fermentation product to prepare a solid phase fermentation extract;
Preparing a second natural mixed fermented liquid by mixing 30 to 70 parts by weight of plum natural enzyme solution and 30 to 70 parts by weight of plant mixed extract including astragalus, garlic, honey, cucumber, vitamin tree, lotus root, and Ecklonia cava;
85 to 95% by weight of the second natural mixed fermentation liquid, 0.1 to 5% by weight of mixed lactic acid bacteria including Lactobacillus brevis and Bacillus amyloliquefaciens , 0.5 to 10% by weight of rice wine yeast solution, Inoculating 1 to 5% by weight of cordyceps mycelium and fermenting at 30 to 45 ° C. for 12 to 72 hours;
In the fermented product, 0.01 to 3% by weight of cell membrane degradation and biocomponent conversion enzymes including Sumizyme, Ultimase MFC, Pyr-flo and Tannase, and 0.1 to 3% amino acids Preparing a second natural fermentation enzyme complex solution comprising adding 3% by weight and 0.01 to 3% by weight of multivitamins and fermenting at 30 to 45° C. for 1 to 6 hours;
liquid phase fermentation of the prepared solid phase fermentation extract using the second natural fermentation enzyme complex;
Concentrating the liquid fermentation product to prepare a fermented red ginseng concentrate;
Preparing a fermented black ginseng concentrate by first solid-phase fermentation and second liquid-phase fermentation of black ginseng in the same process as above; and
Mixing 50 to 90% by weight of the fermented red ginseng concentrate and 10 to 50% by weight of the fermented black ginseng concentrate
A method for producing a composition for improving prostate or sexual function containing a high content of compound K having an increased body absorption rate through solid phase fermentation.
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|---|---|---|---|---|
| KR20120060934A (en) * | 2010-09-17 | 2012-06-12 | 주식회사 한국인삼공사 | Composition for Preventing or Treating Benign Prostate Hyperplasia Comprising Ginseng Extract as an Active Ingredient |
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- 2022-07-04 KR KR1020220082007A patent/KR102519489B1/en active IP Right Grant
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