KR102504867B1 - 유제품 프로바이오틱스 건조 제제의 제조 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 상이한 중합체의 조합을 사용하여 유제품 프로바이오틱 박테리아의 건조 제제를 제조하는 방법에 관한 것이다. 상기 제제는 가공, 저장 동안 및 낙농 동물의 루멘으로 전달 시 증가된 생존력을 갖는다. 추가적으로 상기 제제는 낙농 동물의 루멘에서 락테이트 및 아세테이트에 대한 높은 내성을 갖는다.

Description

유제품 프로바이오틱스 건조 제제의 제조
본 발명은 상이한 중합체(polymer)의 조합을 사용하여 유제품의 프로바이오틱 박테리아 (dairy probiotic bacteria)의 건조 제제(formulation)를 제조하는 방법에 관한 것이다. 상기 제제는 가공, 저장 동안 및 낙농 동물(dairy animal)의 루멘(rumen)으로 전달 시 증가된 생존력(viability)을 갖는다. 또한 상기 제제는 낙농 동물의 루멘에서 락테이트 및 아세테이트에 대한 높은 내성을 갖는다.
소(cattle)는 일반적으로 고-농축 식이에 적응된다. 소의 루멘에서 자연적으로 발생하는 미생물 집단은 일반적으로 사료(forage)의 소화에 매우 적합하다. 농축된 식이의 전이 동안 기회감염 박테리아 (opportunistic bacteria)는 젖산을 빠르게 생산하며, 이는 루멘에 과잉의 젖산을 유도하여 경증 내지 중증의 산증 (acidosis)을 유발할 수 있다. 소의 제1위과산증(ruminal acidosis)(젖산 산증이라고도 함)은 급성 또는 아급성의 두 가지 유형이 있다. 제1위과산증 동안, 루멘의 pH는 급격히 떨어지고, 장기간 동안 낮게 유지되어 루멘의 손상을 유발한다. 이는 과도한 양의 젖산이 생성되어, 고 발효성 탄수화물, 주로 전분과 당(sugars)을 갑자기 과잉 섭취한 경우 발생한다. 락테이트 이용 박테리아(lactate utilizing bacteria)의 부재로 인해 동물이 식이 변화에 올바르게 적응할 수 없을 때 산이 축적된다. 루멘 내 락테이트 이용 박테리아의 증가는 제1위과산증에 대한 예방 조치 중 하나이다.
메가스파에라 엘스데니(Megasphaera elsdenii)는 반추 동물(ruminant animal)의 루멘에서 발견되는 절대 혐기성 박테리아 (obligate anaerobic bacterium)이다. 이는 젖산을 탄소 기질로서 이용한다. 상기 동물 또는 젖소(dairy cow)가 고 섬유질(roughage) 식이로부터 고 농축 식이로 빠르게 전환될 때 젖산이 생산된다. 엠. 엘스데니(M. elsdenii)는 다른 루멘 미생물에 의해 생산되는 가용성 당 및 락테이트에 의존하지만, 어떠한 산도 생산하지 않는다. 인 비트로(In vitro) 엠. 엘스데니는 글루코오스, 프룩토오스, 말토오스, 글루코사민, 만니톨, 락테이트, 피루베이트와 같은 다양한 기질에서 잘 성장하며 당 및 락테이트로부터 상이한 최종 산물을 생산한다. 엠. 엘스데니는 우선적으로 락테이트를 1 내지 2 mm의, 낮은 농도까지 발효시키며, 그 후 기질로서 글루코오스를 이용한다. 락테이트를 우선적으로 이용하는 엠. 엘스데니의 이러한 능력으로 상기 유기체를 소를 위한 프로바이오틱으로서 사용하려는 관심이 절정에 달하였다. 엠. 엘스데니를 경구로 투여하여 소의 락테이트-이용 박테리아의 수를 증가시키는 것은 사육되는 소에서 제1위과산증의 위험을 감소시키는데 유용하다. 상기 박테리아는 소에게 사료 첨가제로 경구 투여되지만 엠. 엘스데니는 주로 살아있을 때 유익한 효과를 나타낸다. 따라서, 이들이 사료 제품에 첨가되는 경우, 사료 소비(consumption) 시 생존해야 하지만 추가의 산도(acidity) 때문에 루멘을 통과하는 동안 집락(colonization)의 장소에서 이들의 생존이 영향을 받는다. 그러므로 경구 제제에서 안정성 및 배양물(culture) 생존력이 주요한 관심사이다. 혐기성 미생물인 엠. 엘스데니는 장기 저장을 위해 혐기성 환경 하에서 이의 취급, 생산 및 유지가 이의 임의의 프로바이오틱 제제를 개발하는데 주요한 관심사이다.
상업적 제제에서 박테리아의 저장 기간(shelf life)을 증가시키는 다양한 기술이 알려져 있다. 캡슐화(encapsulation)는 프로바이오틱 제제의 저장 기간을 증가시키는 하나의 알려진 방법이다(국제공개 WO2012/0983239). 캡슐화는 작은 방울(tiny droplet) 또는 입자가 보호 코팅으로 감싸서 박테리아가 봉입된 캡슐을 산출하는 과정이다. 이들 프로바이오틱 박테리아의 캡슐화는 일반적으로 가공 동안 생존력을 향상시키고, 또한 루멘 내 표적 전달(delivery)을 위해 사용된다. 이들 프로바이오틱스는 동물 사료, 의약품, 및 건강 보조식품과 함께 사용된다. 이들은 동물 건강을 유지하는데 큰 역할을 한다. 동물 루멘 시스템에서 이들 박테리아의 생존이 의심스럽기 때문에 프로바이오틱 박테리아의 생존력을 보호하기 위해 알기네이트(alginate), 키토산, 젤라틴, 유청 단백질 단리물(whey protein isolate), 펙틴, 셀룰로오스 유도체와 같은 여러 유형의 바이오중합체가 캡슐화를 위해 사용되었으며 분무 건조, 압출(extrusion), 에멀젼과 같은 여러 캡슐화 방법이 보고되었다.
본원에 제시된 발명은 낮은 다공성을 갖고 바람직하지 않은 환경 조건에 대한 노출을 낮추는데 도움이 되는 2 개의 상이한 중합체의 조합을 사용하여 대규모로 엠. 엘스데니의 건조 제제를 개발하는 방법을 개시한다. 가공 동안 상기 생존력이 증가하며 봉입된 박테리아를 루멘으로 이동시킨다. 상기 캡슐화된 엠. 엘스데니 균주는 젖소(dairy cattle)의 루멘에서 고농도의 락테이트 및 아세테이트에 내성이 있으며 산을 빠르게 이용한다. 이러한 건조 산제(powder)는 취급 및 운송이 용이하며 자연에서 더 안정하다.
메가스파에라 엘스데니 균주는 건조 고형 산제 제제의 추가 개발을 위한 프로바이오틱 배양물로서 사용되었다. 메가스파에라 엘스데니를 젖산 및 아세트산 조건에 대한 이의 내성 및 이의 소수성을 기반으로 선택되었다. 상기 배양물은 루멘 벽에 잘 부착될 수 있고 다른 당보다 우선적으로 락테이트를 이용한다.
본 발명의 구체예 중 하나에서, 메가스파에라 엘스데니는 탈기된(degassed) 마개 병(stoppered bottle)을 사용하여 약 37℃에서 약 24 시간 동안 정적(static) 인큐베이션 조건으로 소듐 락테이트 배지에서 배양되었다. 상기 배양물을 통상적으로 전달하고 전달 사이에 20 %(vol/vol) 글리세롤 스톡에서 약 -80℃로 저장하였다. 상기 소듐 락테이트 배지는 그 안에 고체가 현탁된 복합 배지(complex medium)이다. 제제 개발의 목적으로 데만-로고사-샤프(deMan-Rogosa-Sharpe: MRS) 배지를 사용하였으며, 이는 보다 간단하고 맑은(clear) 성장 배지이고 취급, 스케일 업 및 미생물 수 측정(enumeration)이 용이하다. MRS 배지에서의 총 생존 수(total viable count)는 탈기된 마개 병을 사용한 약 24 시간 동안 약 37℃의 정적 인큐베이션 조건에서 약 1.1 x 109 CFU/ml이다. 상기 배지는 발효 및 프로바이오틱 제제 개발을 위해 추가로 선택되었다. 상기 메가스파에라 엘스데니 배양물을 탈기된 MRS 브로스 병에 접종하고 약 37℃에서 약 24 시간 동안 정적 조건에서 인큐베이션하였다. 추가적으로 상기 접종물(inoculum)을 MRS 브로스에 접종하였고 약 37℃에서 약 24 시간 동안 정적 조건에서 인큐베이션하였다. 추가적으로, 상기 브로스를 약 500 ml/분의 공급 속도로 원심분리하여 습윤 케이크(wet cake)를 분리시켰다. 다음으로, 상기 습윤 케이크를 LAF 유닛(층류 기류)에서 무균적으로 즉시 제거하고 혐기성 챔버(chamber)로 전달하였다. 추가적으로 약 1 % 카복시메틸셀룰로오스(CMC) 및 약 1 %의 펙틴; 2.5 % 글리세롤과 조합하여 캡슐화제로 사용하였다. 다음으로, 캡슐화 물질 및 70 % 글리세롤을 약 121℃에서 약 20 분 동안 멸균시켰다. 추가적으로 상기 습윤 케이크, 캡슐화 화학물질(1 % 펙틴 + 1 % CMC) 및 2.5 % 글리세롤을 혐기성 챔버에서 적절히 혼합하여 분산슬러리(lyoslurry)를 혼합에 의해 제조하였다. 이어서 상기 제조된 분산슬러리를 트레이에 붓고 약 -80℃에서 약 2 시간 동안 동결시켰다. 동결 후, 상기 동결된 분산슬러리를 약 -50℃에서 약 28 내지 약 36 시간 동안 동결건조하여 분산산제(lyopowder)를 제조하였다. 얻어진 상기 분산산제를 TVC 및 고체 함량에 대해 분석하였다. 상기 브로스, 습윤 케이크, 분산슬러리 및 분산산제를 멸균 탈기된 식염수 트윈(Tween) 80 용액을 사용하여 혐기성 챔버에서 연속적으로 희석하였고 멸균 MRS 아가 플레이트 위에 도말하였다. 상기 플레이트를 혐기성 조건 하에 약 37℃에서 약 48 내지 약 72 시간 동안 인큐베이션하였다. 브로스, 습윤 케이크, 분산산제 및 분산슬러리에 대한 총 고체 및 TVC 값을 하기 표 1에 열거하였다.
상이한 공정 단계에서 메가스파에라 엘스데니 배양물의 TVC.
시리얼 넘버 시료 TS(% w/w) TVC(CFU/gm)
1 수확(harvest)/브로스 04.04 5 x 108
2 습윤 케이크 23.57 1 x 1011
3 분산슬러리 12.75 1 x 109
4 분산산제 96.63 1 x 107
본 발명의 다른 구체예에서, 상기 분산산제를 기밀(air-tight) 용기에 포장하고 실온에서 약 50 % 상대 습도로 저장하였다. 분산산제 제제의 수분 함량은 5 중량 % 이하이다. 특정 기간 후 저장 동안 상기 제제에서 박테리아의 생존력을 확인하기 위해 TVC 분석을 수행하였다.
본 발명의 다른 구체예에서, 건조 제제의 생산 동안, 메가스파에라 엘스데니 배양물은 총 생존 수의 측정에 의해 확인된 바와 같이 원심분리 또는 연속 희석과 같은 짧은 기간 동안 산소화된 조건에서 생존하였다. 이는 호기성 조건 하에 박테리아의 생존이 상기 건조 제제의 형성에 필요하기 때문에 중요한 특징이다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 히드록시 메틸 프로필 셀룰로오스, 검 아카시아(gum acacia), 카파 카라기난(kappa carrageenan), 말토덱스트린과 같은 다른 중합체를 또한 건조 제제의 제조를 위한 루멘 박테리아용 캡슐화제로서 단독 또는 글리세롤과 조합하여 또는 글리세롤 없이 시험하였다.
상기 제공된 구체예는 당해 기술분야의 통상의 기술자가 이해할 수 있는 변형(variation)에 관해 어떠한 제한없이 본 발명의 더 넓은 유용성을 제공한다. 다양한 구체예의 비-제한적인 요약이 상기 제공되며, 이는 본원에 개시된 방법의 이점 및 신규한 양상을 입증한다.
이점(advantage):
1. 발효를 위해 데만-로고사-샤프(MRS) 배지의 사용으로 인해 운영 비용이 기존 공정에 비해 크게 감소된다.
2. 메가스파에라 엘스데니는 소수성 특성을 가지므로 이들이 루멘에 부착하는데 도움이 된다.
3. 메가스파에라 엘스데니는 젖산 및 아세트산 조건에 대한 내성을 가지고 있다. 상기 박테리아는 최소 pH 3까지 내성이 있을 수 있고 이는 약 7 pH에서도 잘 자랄 수 있다.
4. 엠. 엘스데니에 사용된 상기 캡슐화제는 낮은 다공성을 가지며 이는 바람직하지 않은 환경 조건에 대한 노출을 줄이는데 도움이 된다.
5. 캡슐화된 건조 제제는 가공 및 루멘으로의 전달 동안 박테리아 생존력을 증가시켰다.
6. 프로바이오틱 건조 산물은 보다 안정적이고 취급 및 운송이 훨씬 용이하다.
7. 프로바이오틱 산물의 분말 성질로 인해 복용량 요건(dosage requirements)가 매우 낮다.
하기 제공된 실시예는 당해 기술분야의 통상의 기술자가 이해할 수 있는 변형에 대한 어떠한 제한없이 본 발명의 더 넓은 유용성을 제공한다. 다양한 실험 결과의 비-제한적인 요약이 실시예에서 제공되며, 이는 중합체 및 글리세롤의 조합을 사용하여 메가스파에라 엘스데니의 건조 제제의 제조의 이점이 있는 신규한 양상을 입증한다.
실시예 1
메가스파에라 엘스데니 균주(ATCC 25940)를 건조 고형 산제 제제 개발용 프로바이오틱 배양물로 사용하였다. 메가스파에라 엘스데니에 권장되는 배지는 소듐 락테이트 배지였다. 상기 배양물을 탈기된 마개 병을 사용하여 약 37℃에서 약 24 시간 동안 정적 인큐베이션 조건 하에 소듐 락테이트 배지에서 성장시켰다. 상기 배양물을 통상적으로 전달하고 전달 사이에 부피 기준으로 약 20 % 글리세롤에서 약 -80℃로 저장하였다. 소듐 락테이트 배지의 총 생존 수는 약 4.0 x 107 CFU/ml이었다. 상기 소듐 락테이트 배지는 그 안에 현탁된 고체를 갖고 있어서 이는 TVC 방법에 의한 스케일 업 및 세포 계수가 실현불가능하고 유용하지 않게 하였다. 여러 상이한 배지를 스크리닝하였으며 이 중 데만-로고사-샤프(MRS) 액체 배지가 더 간단하고 맑은 성장 배지였고 이는 취급, 스케일 업 및 미생물 세포 계수에 용이하였다. MRS 배지에서의 총 생존 수는 탈기된 마개 병을 사용하여 약 24 시간 동안 약 37℃의 정적 인큐베이션 조건에서 약 1.1 x 109 CFU/ml이었다. 그러므로 이는 발효 및 프로바이오틱 제제 개발을 위해 추가로 선택되었다.
실시예 2 : 건조 제제의 제조를 위한 취급 동안 엠. 엘스데니 의 산소 내성
초기 계수가 약 4.0 x 107 CFU/ml를 갖는 약 10 ml 배양물을 실험에 사용하였다. 약 1 ml 배양물을 각각 3 가지 상이한 조건에 노출시키고 내성 수준을 확인하기 위해 TVC를 계산하였다. 첫 시험에서 상기 배양물을 층류 기류[호기성 조건]에서 연속적으로 희석한 다음 글러브 박스(glove box)에서 약 37℃로 약 24 시간 동안 인큐베이션하고 최종적으로 TVC를 계수하였다. 두 번째 시험에서 상기 배양물을 혐기성 챔버에서 연속적으로 희석한 다음 글러브 박스에서 약 37℃로 약 24 시간 동안 인큐베이션하고 마지막에 TVC를 계수하였다. 세 번째 시험에서 상기 배양물을 원심분리하고, 습윤 케이크를 수집하고 연속적으로 희석하였고[호기성 조건에서 TVC 계수]; 이어서 글러브 박스에서 약 37℃로 약 24 시간 동안 인큐베이션하였고[혐기성 조건] 최종적으로 TVC를 계수하였다. 상기 3 가지 상이한 조건 및 그 계수를 하기 표 2에 열거하였다.
연속 희석 및
플레이팅 조건 		인큐베이션 조건 TVC(CFU/ml)
호기성 혐기성 6.0 x 105
혐기성 4.0 x 107
원심분리, 습윤 케이크
연속 희석 및 플레이팅		 3.0 x 106
실시예 3
메가스파에라 엘스데니 배양물을 탈기된 MRS 브로스 병에 접종하였고 약 37℃에서 약 24 시간 동안 정적 조건에서 인큐베이션하여 출발 배양물을 형성하였다. 다음으로 상기 출발 배양물을 1.5 l MRS 브로스에 접종하고 약 37℃에서 약 24 시간 동안 정적 조건에서 인큐베이션하였다. 이어서 상기 브로스를 원심분리하여 바이오매스(biomass)를 분리시켰다. 이어서 약 1 % 또는 2 % 농도를 갖는 펙틴 용액[캡슐화제]을 약 121℃에서 약 20 분 동안 멸균시켰다. 원심분리 후 얻어진 메가스파에라 엘스데니의 바이오매스를 혐기성 조건 하에 멸균된 펙틴 용액과 1:1 비율로 혼합하였다. 상기 혼합물을 전단 붕괴(shear disruption)를 피하기 위해 저속으로 볼텍스 믹서(vortex mixer)를 사용하여 잘 혼합하였다. 상기 제조된 분산슬러리를 약 -80℃에서 2 시간 동안 동결시켰다. 동결 후, 동결된 분산슬러리를 약 -50℃에서 약 28 내지 약 36 시간 동안 동결건조하여 분산산제를 제조하였다. 상기 분산산제 및 분산슬러리를 멸균 탈기된 식염수 트윈 80 용액을 사용하여 혐기성 챔버에서 연속적으로 희석하고 멸균 MRS 아가 플레이트 상에 도말하였다. 상기 플레이트를 약 37℃에서 약 48 내지 약 72 시간 동안 인큐베이션하였다. 상기 분산산제 및 분산슬러리의 총 생존 수 분석을 혐기성 챔버에서 수행하여 동결건조 후 중합체의 캡슐화 가능성 및 프로바이오틱 세포의 생존력의 손실을 확인하였다. 동결건조 전(분산슬러리) 및 동결건조 후(분산산제)의 총 생존 수를 하기 표 3에 제공하였다.
시리얼 넘버 재료 분산슬러리 TVC
(cfu/ml) 		분산산제 TVC(cfu/g)
1 대조군 6.4 x 109 0
2 1 % 펙틴 6.0 x 106
3 2 % 펙틴 6.0 x 106
실시예 4
메가스파에라 엘스데니 배양물을 탈기된 MRS 브로스 병에 접종하고 약 37℃에서 약 24 시간 동안 정적 조건에서 인큐베이션하여 출발 배양물을 형성하였다. 다음으로 상기 출발 배양물을 1.5 l MRS 브로스에 접종하고 약 37℃에서 약 24 시간 동안 정적 조건에서 인큐베이션하였다. 이어서 상기 브로스를 원심분리하여 바이오매스를 분리시켰다. 이어서 약 1 % 또는 2 % 농도를 갖는 카복시메틸셀룰로오스(CMC), 용액[캡슐화제]을 약 121℃에서 약 20 분 동안 멸균시켰다. 원심분리 후 얻어진 메가스파에라 엘스데니의 바이오매스를 혐기성 조건 하에 멸균된 CMC 용액과 1:1 비율로 혼합하였다. 상기 혼합물을 전단 붕괴를 피하기 위해 저속으로 볼텍스 믹서를 사용하여 잘 혼합하였다. 상기 제조된 분산슬러리를 약 -80℃에서 2 시간 동안 동결시켰다. 동결 후, 동결된 분산슬러리를 약 -50℃에서 약 28 내지 약 36 시간 동안 동결건조하여 분산산제를 제조하였다. 상기 분산산제 및 분산슬러리를 멸균된 탈기 식염수 트윈 80 용액을 사용하여 혐기성 챔버에서 연속적으로 희석하고 멸균 MRS 아가 플레이트 상에 도말하였다. 상기 플레이트를 약 37℃에서 약 48 내지 약 72 시간 동안 인큐베이션하였다. 상기 분산산제 및 분산슬러리의 총 생존 수 분석을 혐기성 챔버에서 수행하여 동결건조 후 중합체의 캡슐화 가능성 및 프로바이오틱 세포의 생존력의 손실을 확인하였다. 동결건조 전(분산슬러리) 및 동결 건조 후(분산산제)의 총 생존 수를 하기 표 4에 제공하였다.
시리얼 넘버 재료 분산슬러리 TVC
(cfu/ml) 		분산산제 TVC(cfu/g)
1 대조군 7.0 x 109 0
2 1 % CMC 6.0 x 106
3 2 % CMC 2.0 x 106
실시예 5
메가스파에라 엘스데니 배양물을 탈기된 MRS 브로스 병에 접종하고 약 37℃에서 약 24 시간 동안 정적 조건에서 인큐베이션하여 출발 배양물을 형성하였다. 다음으로 상기 출발 배양물을 1.5 l MRS 브로스에 접종하고 약 37℃에서 약 24 시간 동안 정적 조건에서 인큐베이션하였다. 이어서 상기 브로스를 원심분리하여 바이오매스를 분리시켰다. 이어서 1 % 카복시메틸셀룰로오스(CMC) 및 1 % 펙틴[캡슐화제]의 용액을 약 121℃에서 약 20 분 동안 멸균시켰다. 원심분리 후 얻어진 메가스파에라 엘스데니의 바이오매스를 혐기성 조건 하에 멸균된 CMC + 펙틴 용액과 1:1 비율로 혼합하였다. 상기 혼합물을 전단 붕괴를 피하기 위해 저속으로 볼텍스 믹서를 사용하여 잘 혼합하였다. 상기 제조된 분산슬러리를 약 -80℃에서 2 시간 동안 동결시켰다. 동결 후, 동결된 분산슬러리를 약 -50℃에서 약 28 내지 약 36 시간 동안 동결건조하여 분산산제를 제조하였다. 상기 분산산제 및 분산슬러리를 멸균된 탈기 식염수 트윈 80 용액을 사용하여 혐기성 챔버에서 연속적으로 희석하고 멸균 MRS 아가 플레이트 상에 도말하였다. 상기 플레이트를 약 37℃에서 약 48 내지 약 72 시간 동안 인큐베이션하였다. 동결건조 후 중합체의 캡슐화 가능성 및 프로바이오틱 세포의 생존력의 손실을 확인하기 위해 혐기성 챔버에서 상기 분산산제 및 분산슬러리의 총 생존 수 분석을 수행하였다. 동결건조 전(분산슬러리) 및 동결 건조 후(분산산제)의 총 생존 수를 하기 표 5에 제공하였다.
시리얼 넘버 재료 분산슬러리 TVC
(cfu/ml) 		분산산제 TVC(cfu/g)
1 대조군 2.0 x 109 0
2 1 % CMC + 1 % 펙틴 2.0 x 103
실시예 6
다음으로 엠. 엘스데니의 건조 제제를 제조할 때 약 2.5 % 글리세롤을 포함시켰다. 캡슐화제 중의 수분 유지제인 글리세롤은 하기 표 6에 나타낸 바와 같이 건조 제제의 TVC를 유의하게 증가시켰다.
캡슐화제 분산산제 TVC(cfu/g)
1 % CMC + 1 % 펙틴 2.0 x 103
1 % CMC + 1 % 펙틴 + 2.5 % 글리세롤 2.0 x 106
실시예 7: 엠. 엘스데니 동결건조된 산제 제제의 저장 기간 연구.
엠. 엘스데니의 건조 제제에 대한 저장 기간을 추정하기 위해, 이들을 실시예 6에 따라 제조하여 30, 60 또는 90 일 동안 STP 조건에서 저장하였다. 저장 기간 후, TVC를 각각의 시료에 대해 계수하고 하기 표 7에 열거하였다.
저장 기간(일) 저장 기간 TVC(cfu/g)
0 4.0 x 105
30 3.2 x 104
60 3.0 x 104
90 1.0 x 104
실시예 8: 주사 전자 현미경(scanning electron microscopy)으로 캡슐화된 세포 분석.
엠. 엘스데니의 건조 제제의 입자의 형태(morphology)를 확립하기 위해 캡슐화제[1 % CMC + 1 % 펙틴 + 2.5 % 글리세롤] 그대로 및 이에 봉입된 박테리아 세포와 함께 주사 전자 현미경으로 분석하였다. 도 1은 SEM 분석의 세부사항을 제공한다. 도 1의 A 및 C는 분말 물질과 같은 캡슐화제를 나타낸다. 도 1의 B 및 D는 일정한 크기 및 모양의 입자를 형성하는 박테리아 세포가 봉입된 캡슐화제를 나타낸다.
실시예 9: 캡슐화된 제제의 적외선 스펙트럼 분석(infrared spectral analysis).
엠. 엘스데니의 건조 제제의 입자의 스펙트럼 특성을 확립하기 위해 상기와 같은 캡슐화제 성분 및 상기와 같은 혼합물 및 박테리아 세포가 봉입된 혼합물을 FT-IR 분광분석법으로 분석하였다. 도 2는 FT-IR 분석의 세부사항을 제공한다. 도 2의 A는 상기와 같은 펙틴의 스펙트럼이다. 도 2의 B는 상기와 같은 CMC의 스펙트럼이다. 도 2의 C는 CMC + 펙틴 혼합물의 스펙트럼이다. 도 2의 D는 박테리아 세포가 봉입된 CMC + 펙틴 + 글리세롤 혼합물의 스펙트럼이다. IR 스펙트럼은 4 cm-1의 스펙트럼 분해능으로 4000 cm-1 내지 500 cm-1의 파장에서 기록되었다. 펙틴은 약 1000 cm-1에서 날카로운 흡수를 가지며, CMC는 1000 cm-1 및 1600 cm-1에서 날카로운 흡수를 갖는다. 글리세롤과 함께 펙틴 및 CMC를 혼합한 후, 이들 주요 주파수에서 흡수가 변하지 않았고, 세포 캡슐화 후, 약 1000 cm-1 및 1600 cm-1에서 흡수를 나타내었고, 약 1500 cm-1에서 새로운 흡수를 나타내었으며, 이는 본원에 개시된 박테리아의 캡슐화된 제제에 대해 현저하다.
상기 제공된 구체예는 당해 기술분야의 통상의 기술자가 이해할 수 있는 변형에 대한 어떠한 제한없이 본 발명의 더 넓은 유용성을 제공한다. 다양한 구체예의 비-제한적인 요약이 실시예 및 표에 제공되며, 이는 본원에 개시된 방법의 이점이 있는 신규한 양상을 입증한다.

Claims (11)

  1. 하기 단계를 포함하는 혐기성 프로바이오틱 박테리아의 건조 제제를 제조하는 방법:
    (a) 혐기성 프로바이오틱 박테리아의 배양물을 제공하는 단계로서, 상기 혐기성 프로바이오틱 박테리아는 메가스파에라 엘스데니(Megasphaera elsdenii)인 것인 단계;
    (b) 상기 배양물을 원심분리하여 박테리아를 습윤 케이크(wet cake)로서 분리하는 단계;
    (c) 상기 습윤 케이크를 캡슐화제와 혼합하여 분산슬러리(lyoslurry)를 형성하는 단계로서, 상기 캡슐화제는 카복시메틸셀룰로오스, 펙틴 및 글리세롤의 혼합물인 것인 단계;
    (d) 상기 분산슬러리를 동결건조시켜 분산산제(lyopowder)를 형성시키는 단계; 및
    (e) 상기 분산산제를 기밀(air-tight) 용기에 포장(packaging)하는 단계.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 캡슐화제는 1 중량%의 카복시메틸셀룰로오스를 포함하는 것인 방법.
  5. 청구항 1에 있어서, 상기 캡슐화제는 1 중량%의 펙틴을 포함하는 것인 방법.
  6. 청구항 1에 있어서, 상기 캡슐화제는 2.5 중량%의 글리세롤을 포함하는 것인 방법.
  7. 청구항 1에 있어서, 상기 동결건조(lyophilisation)는 -50 ℃에서 30 내지 36 시간 동안 수행되는 것인 방법.
  8. 청구항 1에 있어서, 상기 분산산제는 기밀 용기에 저장될 때 90 일 동안 안정한 것인 방법.
  9. 청구항 1에 있어서, 상기 분산산제는 동물 사료(animal feed)의 성분으로 사용되는 것인 방법.
  10. 청구항 1에 있어서, 상기 혐기성 프로바이오틱 박테리아의 배양물은 상기 혐기성 프로바이오틱 박테리아를 데만-로고사-샤프(deMan-Rogosa-Sharpe: MRS) 액체 배지에서 배양하는 것에 의해 수득되는 것인 방법.
  11. 청구항 1의 방법에 따라 제조된 메가스파에라 엘스데니(Magasphaera elsdenii)를 포함하는 프로바이오틱 건조 제제.
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018144653A1 (en) 2017-01-31 2018-08-09 Kansas State University Research Foundation Microbial cells, methods of producing the same, and uses thereof
US11814617B2 (en) 2017-10-20 2023-11-14 Kansas State University Research Foundation Methods of producing ensiled plant materials using Megasphaera elsdenii
BR112022015098A2 (pt) * 2020-01-31 2022-11-08 ProAgni Pty Ltd Formulação probiótica e entrega
BR112022015553A2 (pt) * 2020-02-07 2022-10-04 Dupont Nutrition Biosci Aps Composições de ração para saúde animal
CN114304688B (zh) * 2021-11-25 2023-08-01 中粮集团有限公司 玉米醇溶蛋白包被剂、利用该包被剂进行包被的益生菌制剂及其制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140010918A1 (en) 2011-01-21 2014-01-09 Johan Henri Herman Quintens Microencapsulated probiotic substance and process of manufacture

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4138498A (en) * 1976-12-07 1979-02-06 W. R. Grace & Co. Ruminant feed additive
US5308615A (en) * 1992-01-17 1994-05-03 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Probiotic for control of Salmonella
AUPQ137699A0 (en) * 1999-07-02 1999-07-22 University Of New England, The Control of acidosis
CN100582215C (zh) 2002-07-18 2010-01-20 农业调查委员会 埃氏巨球形菌菌株及其应用
BR112015032918B1 (pt) * 2013-07-02 2021-09-28 Austrianova Singapore Pte Ltd Métodos para preparação de células encapsuladas para liofilização, composição e seus usos

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140010918A1 (en) 2011-01-21 2014-01-09 Johan Henri Herman Quintens Microencapsulated probiotic substance and process of manufacture

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Bulgarian Journal of Agricultural Science, Vol. 13, pp. 153-159 (2007)*

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