KR102502920B1 - Methods of Ganoderma lucidum mycelia having enhanced whitening effect and use thereof - Google Patents

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Abstract

The present invention relates to a method for manufacturing Ganoderma lucidum mycelium with enhanced whitening activity and uses thereof, and since it is known that general Ganoderma lucidum mycelium has little whitening activity compared to fruiting bodies, but the Ganoderma lucidum mycelium according to the manufacturing method of the present invention has an excellent skin whitening effect, the Ganoderma lucidum mycelium of the present invention can be effectively provided as a cosmetic composition related to whitening. In addition, the Ganoderma lucidum mycelium of the present invention can be usefully used in industrial aspects because a cultivation period is shorter and production cost is lower than that of the Ganoderma lucidum fruiting body.

Description

미백 활성이 증진된 영지버섯 균사체 제조방법 및 이의 용도 {Methods of Ganoderma lucidum mycelia having enhanced whitening effect and use thereof}Manufacturing method of Ganoderma lucidum mycelia having enhanced whitening effect and use thereof}

본 발명은 미백 활성이 증진된 영지버섯 균사체 제조방법 및 이의 용도에 관한 것이다.The present invention relates to a method for preparing ganoderma lucidum mycelium with enhanced whitening activity and its use.

인간의 피부와 모발의 색을 결정하는 멜라닌은 피오멜라닌과 유멜라닌으로 구분되며, 멜라닌형성세포에 의해 생성되어 자외선으로부터 피부세포를 보호하는 역할을 한다. 자외선에 의한 멜라닌형성세포의 멜라닌의 합성에는 cAMP, protein kinase A (PKA), cAMP response element binding protein (CREB) 등 다양한 인자가 관여하며, 전사조절인자인 microphthalmia-associated transcription factor (MITF)에 의해 발현된 티로시나제가 티로신을 hydroxylation을 거쳐 L-DOPA (L-3,4-dihydroxyphenylalanine)로 전환시키고, 다시 L-DOPA를 산화(oxidation)시키는 과정을 거쳐 도파퀴논(dopaquinone)으로 전환하여 멜라닌 합성이 유도된다. 그러나 과도한 멜라닌의 생성은 피부의 색소 침착을 일으키고 특히 피오멜라닌은 피부암을 유발할 가능성이 있으며, 피부 건강뿐만 아니라 미용적인 측면에서도 피부 미백에 대한 관심은 지속적으로 증가하고 있다. 따라서 티로시나제 활성 및 멜라닌 생합성 경로와 관계된 인자들의 억제 활성을 가지는 미백소재에 대한 연구가 활발히 진행 되고 있다. 현재까지 티로시나제 활성억제 및 미백활성을 가지는 소재가 많이 보고되었으며, 알부틴, 코직산, 하이드로퀴논 및 비타민 C 등이 대표적이다. 그러나 일부 소재는 안정성이 떨어지거나 피부에 대한 안정성 측면에서 그 사용이 제한되어 있기 때문에 이러한 단점을 극복할 수 있는 미백 소재 개발 연구가 요구되는 상황이다. 또한 이들 대부분의 것은 효과가 불충분하거나 제형상 불완전한 면이 있고, 피부에 대한 안전성 측면에서 그 사용이 제한되어 있으며, 원료에 대한 수입 의존도가 높은 문제점으로 최근에는 보다 안전하고 효과적인 멜라닌 생성 억제물질을 개발하려는 연구들이 진행되고 있다.Melanin, which determines the color of human skin and hair, is divided into phyomelanin and eumelanin, and is produced by melanocytes to protect skin cells from ultraviolet rays. Various factors such as cAMP, protein kinase A (PKA), and cAMP response element binding protein (CREB) are involved in the synthesis of melanin in melanocytes by ultraviolet rays, and it is expressed by microphthalmia-associated transcription factor (MITF), a transcription factor. tyrosinase converts tyrosine to L-DOPA (L-3,4-dihydroxyphenylalanine) through hydroxylation, and then converts L-DOPA to dopaquinone through oxidation to induce melanin synthesis. . However, excessive production of melanin causes pigmentation of the skin, and phyomelanin, in particular, has the potential to cause skin cancer. Interest in skin whitening is continuously increasing in terms of beauty as well as skin health. Therefore, studies on whitening materials having inhibitory activity of factors related to tyrosinase activity and melanin biosynthesis pathway are being actively conducted. Until now, many materials having tyrosinase activity inhibition and whitening activity have been reported, and arbutin, kojic acid, hydroquinone, and vitamin C are representative examples. However, since some materials have low stability or their use is limited in terms of skin stability, research on the development of whitening materials that can overcome these disadvantages is required. In addition, most of these have insufficient effects or incomplete formulations, their use is limited in terms of safety for the skin, and their dependence on imports for raw materials is high. Recently, safer and more effective melanin production inhibitors have been developed. Research to do this is in progress.

관련 선행특허로 대한민국특허공개번호 제10-2010-0130109호는 '식용버섯 자실체 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백용 화장료 조성물'에 관한 것으로, 새송이버섯, 팽이버섯 및 만가닥버섯으로 이루어진 군에서 선택된 단독 또는 이들의 조합에서 선택된 식용버섯 자실체 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백용 화장료 조성물이 기재되어 있다. 다른 관련 선행특허로 대한민국특허공개번호 제10-2005-0034833호는 '차가버섯 추출물을 함유하는 있는 미백화장료'에 관한 것으로, 차가버섯 자실체 및 균사체와 물, 친수유기용제 및 그 혼합물 중 어느 하나의 용제를 섞어 차가버섯 자실체 및 균사체를 추출물을 추출하고, 상기 추출물은 화장료에 대하여 0.01 ~ 10 중량% 포함되는 것을 특징으로 하는 차가버섯 추출물을 함유하는 미백 화장료가 기재되어 있다.As a related prior patent, Korean Patent Publication No. 10-2010-0130109 relates to 'a cosmetic composition for skin whitening containing edible mushroom fruiting body extract as an active ingredient', A cosmetic composition for skin whitening containing an edible mushroom fruiting body extract selected alone or in combination thereof as an active ingredient is disclosed. As another related prior patent, Korean Patent Publication No. 10-2005-0034833 relates to 'whitening cosmetics containing chaga extract', which is a mixture of chaga fruiting bodies and mycelium, water, hydrophilic organic solvents, and mixtures thereof. A whitening cosmetic containing a chaga mushroom extract is described in which a solvent is mixed to extract an extract of the fruiting body and mycelium of the chaga mushroom, and the extract is contained in an amount of 0.01 to 10% by weight relative to the cosmetic.

그러나 버섯 자실체를 활용한 미백 기능성 제품 생산을 위한 자실체 재배 기간 및 비용 등의 측면을 고려하면 효율성과 경제성이 낮은 것이 현실이다. 따라서, 본 발명을 통해 영지버섯 균사체의 미백 활성을 증진시키는 효과가 있는 영지버섯 배양용 배지 조성물 및 상기 배지 조성물에서 배양된 영지버섯 균사체를 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공하고자 한다.However, considering aspects such as the cultivation period and cost of fruiting bodies for the production of whitening functional products using mushroom fruiting bodies, the reality is that efficiency and economic feasibility are low. Therefore, it is intended to provide a medium composition for culturing ganoderma lucidum, which has the effect of enhancing the whitening activity of ganoderma lucidum mycelium, and a cosmetic composition for skin whitening comprising ganoderma lucidum mycelium cultured in the medium composition.

대한민국 공개특허 제10-2010-0130109호Republic of Korea Patent Publication No. 10-2010-0130109

본 발명의 목적은 당밀, 옥수수침지액 및 살리실산을 포함하는 영지버섯 배양용 배지 조성물을 제공하는 데 있다.An object of the present invention is to provide a medium composition for ganoderma lucidum culture containing molasses, corn steep liquor and salicylic acid.

또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 배지 조성물에서 배양된 영지버섯 균사체 또는 이의 추출물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.In addition, another object of the present invention is to provide a cosmetic composition for skin whitening comprising Ganoderma lucidum mycelium or an extract thereof cultured in the medium composition.

또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 배지 조성물에서 배양된 영지버섯 균사체 또는 이의 추출물을 포함하는 멜라닌 색소 과다 침착 질환 예방 또는 치료용 피부외용제 조성물을 제공하는 데 있다.In addition, another object of the present invention is to provide a composition for external application for skin for preventing or treating hypermelanin hyperpigmentation disease comprising ganoderma lucidum mycelium or an extract thereof cultured in the medium composition.

또한, 본 발명의 다른 목적은 미백 활성이 증진된 영지버섯 균사체 추출물 제조방법을 제공하는 데 있다.In addition, another object of the present invention is to provide a method for preparing a ganoderma lucidum mycelium extract with enhanced whitening activity.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 당밀, 옥수수침지액 및 살리실산을 포함하는 영지버섯 배양용 배지 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a medium composition for ganoderma lucidum culture containing molasses, corn steep liquor and salicylic acid.

이어서, 본 발명은 상기 배지 조성물에서 배양된 영지버섯 균사체 또는 이의 추출물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.Next, the present invention provides a cosmetic composition for skin whitening comprising Ganoderma lucidum mycelium or an extract thereof cultured in the medium composition.

나아가, 본 발명은 상기 배지 조성물에서 배양된 영지버섯 균사체 또는 이의 추출물을 포함하는 멜라닌 색소 과다 침착 질환 예방 또는 치료용 피부외용제 조성물을 제공한다.Furthermore, the present invention provides a composition for external application for skin for the prevention or treatment of hypermelanin hyperpigmentation disease comprising the ganoderma lucidum mycelium or an extract thereof cultured in the medium composition.

마지막으로, 본 발명은 영지버섯 종균을 감자한천배지(Potato Dextrose Agar)에 접종하여 배양하는 1단계; 영지버섯 종균이 배양된 감자한천배지로부터 영지버섯 균사체를 분리하는 2단계; 감자한천배지로부터 분리된 영지버섯 균사체를 당밀, 옥수수침지액 및 살리실산을 포함하는 영지버섯 균사체 배양용 배지 조성물에 접종하여 배양하는 3단계; 3단계의 영지버섯 균사체 배양용 배지 조성물로부터 영지버섯 균사체를 분리하는 4단계; 4단계의 영지버섯 균사체를 에탄올로 추출하는 5단계;를 포함하는 미백 활성이 증진된 영지버섯 균사체 추출물 제조방법을 제공한다.Finally, the present invention is a first step of inoculating and culturing the ganoderma lucidum spawn on potato agar medium (Potato Dextrose Agar); A second step of separating the mycelium of the Ganoderma lucidum mushroom from the potato agar medium in which the Ganoderma lucidum spawn is cultured; Step 3 of inoculating and culturing the Ganoderma lucidum mycelium isolated from the potato agar medium in a medium composition for culturing Ganoderma lucidum mycelium containing molasses, corn steep liquor and salicylic acid; Step 4 of separating Ganoderma lucidum mycelium from the medium composition for culturing Ganoderma lucidum mycelium in Step 3; Provided is a method for preparing a Ganoderma lucidum mycelium extract with enhanced whitening activity, including 5 steps of extracting the 4-step Ganoderma lucidum mycelium with ethanol.

일반적인 영지버섯 균사체는 자실체에 비해 미백 활성이 거의 없는 것으로 알려져 있으나, 본 발명의 제조방법에 따른 영지버섯 균사체는 우수한 피부 미백 효능을 가지므로, 본 발명의 영지버섯 균사체는 미백 관련 화장료 조성물로서 효과적으로 제공될 수 있다. 또한, 본 발명의 영지버섯 균사체는 영지버섯 자실체에 비해 재배 기간이 짧고, 생산비용이 저렴하기 때문에 산업적인 측면에서도 유용하게 활용될 수 있다.General ganoderma lucidum mycelium is known to have little whitening activity compared to fruiting bodies, but since the ganoderma lucidum mycelium according to the manufacturing method of the present invention has excellent skin whitening efficacy, the ganoderma lucidum mycelium of the present invention is effectively provided as a cosmetic composition related to whitening It can be. In addition, the Ganoderma lucidum mycelium of the present invention can be usefully used in the industrial aspect because the cultivation period is shorter and the production cost is lower than that of the Ganoderma lucidum fruiting body.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 당밀 0.2%, 옥수수침지액 0.2% 및 다양한 농도의 살리실산을 포함하는 배지 조성물의 균사 생장율을 나타내는 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 당밀 2%, 옥수수침지액 2% 및 다양한 농도의 살리실산을 포함하는 배지 조성물의 균사 생장율을 나타내는 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 있어서, 당밀 0.2 내지 2%, 옥수수침지액 0.2 내지 2% 및 0 내지 20 ppm 살리실산을 포함하는 배지 조성물에서 배양된 영지버섯 균사체의 티로시나제 활성 억제 평가 결과를 나타내는 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 있어서, 추출 용매 및 추출 온도에 따른 영지버섯 균사체 추출물의 티로시나제 활성 억제 평가 결과를 나타내는 그래프이다.
1 is a graph showing the mycelial growth rate of a medium composition containing 0.2% molasses, 0.2% corn steep liquor, and salicylic acid at various concentrations in one embodiment of the present invention.
Figure 2 is a graph showing the mycelial growth rate of a medium composition containing 2% molasses, 2% corn steep liquor, and salicylic acid at various concentrations in one embodiment of the present invention.
Figure 3 shows the evaluation results of inhibition of tyrosinase activity of Ganoderma lucidum mycelium cultured in a medium composition containing 0.2 to 2% of molasses, 0.2 to 2% of corn steep liquor, and 0 to 20 ppm salicylic acid in one embodiment of the present invention. it's a graph
4 is a graph showing the results of evaluation of inhibition of tyrosinase activity of ganoderma lucidum mycelium extract according to extraction solvent and extraction temperature according to an embodiment of the present invention.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 구현예로 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 다만, 하기 구현 예는 본 발명에 대한 예시로 제시되는 것으로, 당업자에게 주지 저명한 기술 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있고, 이에 의해 본 발명이 제한되지는 않는다. 본 발명은 후술하는 특허 청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다.Hereinafter, the present invention will be described in detail as an embodiment of the present invention with reference to the accompanying drawings. However, the following implementation examples are presented as examples of the present invention, and if it is determined that a detailed description of a well-known technology or configuration may unnecessarily obscure the gist of the present invention, the detailed description may be omitted. , the present invention is not limited thereby. Various modifications and applications of the present invention are possible within the description of the claims described later and equivalent scopes interpreted therefrom.

또한, 본 명세서에서 사용되는 용어(Terminology)들은 본 발명의 바람직한 실시 예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 “포함”한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.In addition, terms used in this specification (terminology) are terms used to appropriately express preferred embodiments of the present invention, which may vary according to the intention of a user or operator or customs in the field to which the present invention belongs. Therefore, definitions of these terms should be made based on the contents throughout this specification. Throughout the specification, when a certain component is said to "include", it means that it may further include other components without excluding other components unless otherwise stated.

본 명세서 전체에 걸쳐, 특정 물질의 농도를 나타내기 위하여 사용되는 '%'는 별도의 언급이 없는 경우, 고체/고체는 (w/w) %, 고체/액체는 (w/v) %, 그리고 액체/액체는 (v/v) %이다.Throughout this specification, '%' used to indicate the concentration of a particular substance is solid/solid (w/w) %, solid/liquid (w/v) %, and Liquid/liquid is (v/v) %.

이하, 본 발명에 대하여 보다 상세하게 설명하도록 한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

일 측면에 있어서, 본 발명은 당밀, 옥수수침지액 및 살리실산을 포함하는 영지버섯 배양용 배지 조성물을 제공한다.In one aspect, the present invention provides a medium composition for culturing ganoderma lucidum containing molasses, corn steep liquor and salicylic acid.

또한, 상기 당밀, 옥수수침지액 및 살리실산은 전체 배지 조성물 대비 당밀 0.15 내지 0.25%(w/v), 옥수수침지액 0.15 내지 0.25%(w/v) 및 살리실산 15 내지 25 ppm만큼 포함되는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In addition, the molasses, corn steep liquor and salicylic acid may be included as molasses 0.15 to 0.25% (w / v), corn steep liquor 0.15 to 0.25% (w / v) and salicylic acid 15 to 25 ppm relative to the total medium composition, , but is not limited thereto.

또한, 상기 배지 조성물은 한천(agar)을 더 포함하는 것일 수 있다.In addition, the medium composition may further include agar.

또한, 상기 한천(agar)은 전체 배지 조성물 대비 1 내지 2%(w/v)만큼 포함되는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In addition, the agar (agar) may be included as much as 1 to 2% (w / v) compared to the total medium composition, but is not limited thereto.

또한, 상기 배지는 PDB (Potato Dextrose Broth) 배지, PDA (Potato Dextrose Agar) 배지, MCM (mycelia complete medium) 배지일 수 있다.In addition, the medium may be a PDB (Potato Dextrose Broth) medium, a PDA (Potato Dextrose Agar) medium, or a MCM (mycelia complete medium) medium.

상기 배지조성물은 pH 5.6 내지 pH 6.5인 것일 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.The medium composition may be of pH 5.6 to pH 6.5, but is not limited thereto.

또한, 상기 배지 조성물은 영지버섯 균사체의 미백 활성을 증진시키는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In addition, the medium composition may enhance the whitening activity of Ganoderma lucidum mycelium, but is not limited thereto.

일 측면에 있어서, 본 발명은 상기 배지 조성물에서 배양된 영지버섯 균사체 또는 이의 추출물을 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.In one aspect, the present invention provides a cosmetic composition for skin whitening comprising Ganoderma lucidum mycelium or an extract thereof cultured in the medium composition.

본 발명에 따른 추출물은 당업계에 공지된 추출 및 분리방법을 사용하여 천연으로부터 추출 및 분리하여 수득한 것을 사용할 수 있으며, 본 발명에서 정의된 "추출물"은 적절한 용매를 이용하여 영지버섯 균사체로부터 추출한 것이며, 예를 들어, 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 모두 포함한다.The extract according to the present invention may be obtained by extraction and separation from nature using an extraction and separation method known in the art, and the "extract" defined in the present invention is extracted from ganoderma lucidum mycelium using an appropriate solvent. and includes, for example, a crude extract, a polar solvent-soluble extract, or a non-polar solvent-soluble extract.

본 발명의 추출물의 제조방법에는 제한이 없으며, 공지되어 있는 어떠한 방법도 이용될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 조성물에 포함되는 추출물은 상기한 열수 추출 또는 용매 추출법으로 추출된 1차 추출물을, 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말상태로 제조할 수 있다. 또한 상기 1차 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(Thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(High performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획을 얻을 수도 있다. 따라서, 본 발명에 있어서 추출물은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.There is no limitation on the preparation method of the extract of the present invention, and any known method may be used. For example, the extract included in the composition of the present invention can be prepared in a powder state by additional processes such as distillation under reduced pressure and freeze drying or spray drying of the primary extract extracted by the above-described hot water extraction or solvent extraction method. In addition, a fraction further purified from the primary extract using various chromatography such as silica gel column chromatography, thin layer chromatography, and high performance liquid chromatography you can also get Therefore, in the present invention, the extract is a concept that includes all extracts, fractions, and purified products obtained in each step of extraction, fractionation, or purification, and dilutions, concentrates, or dried products thereof.

또한, 상기 영지버섯 균사체로부터 추출물을 추출하기 위한 적절한 추출용매로는 식품학/약학/화장품학적으로 허용되는 유기용매라면 어느 것을 사용해도 무방하며, 물 또는 유기용매를 사용할 수 있으며, 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, 정제수, 에탄올(Ethanol), 메탄올(Methanol), 프로판올(Propanol), 이소프로판올(Isopropanol), 부탄올(Butanol) 등을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 알콜, 아세톤(Acetone), 에테르(Ether), 벤젠(Benzene), 클로로포름(Chloroform), 에틸아세테이트(Ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(Methylene chloride), 헥산(Hexane), 시클로헥산 (Cyclohexane) 등의 각종 추출용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있으며, 바람직하게는 60 내지 80% 에탄올로 추출된 것일 수 있다.In addition, as an appropriate extraction solvent for extracting the extract from the ganoderma lucidum mycelium, any organic solvent acceptable in food science/pharmaceutical/cosmetics may be used, and water or organic solvent may be used, but is not limited thereto. . For example, purified water, ethanol, methanol, propanol, isopropanol, alcohol having 1 to 4 carbon atoms including butanol, acetone, ether , Benzene, chloroform, ethyl acetate, methylene chloride, hexane, cyclohexane, etc. can be used alone or in combination with various extraction solvents, It may be preferably extracted with 60 to 80% ethanol.

또한, 상기 추출물은 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초임계추출법, 초음파추출법, 용출법 및 압착법으로 이루어진 군에서 선택된 추출법을 통해 수득하는 것일 수 있으며, 바람직하게는 용매추출법을 통해 수득하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In addition, the extract may be obtained through an extraction method selected from the group consisting of hot water extraction, cold extraction, reflux cooling extraction, solvent extraction, steam distillation, supercritical extraction, ultrasonic extraction, dissolution and compression, preferably. It may be obtained through a solvent extraction method, but is not limited thereto.

또한, 상기 추출물은 20 내지 80℃의 추출 온도로 추출된 것일 수 있고, 바람직하게는 60 내지 80℃, 더욱 바람직하게는 65 내지 75℃의 추출 온도로 추출된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In addition, the extract may be extracted at an extraction temperature of 20 to 80 ° C, preferably at an extraction temperature of 60 to 80 ° C, more preferably at an extraction temperature of 65 to 75 ° C, but is not limited thereto. .

또한, 상기 추출물은 영지버섯 균사체에 추출용매를 첨가하여 2 내지 6시간 동안 추출된 것일 수 있고, 바람직하게는 3 내지 5시간 동안 추출된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In addition, the extract may be extracted for 2 to 6 hours by adding an extraction solvent to ganoderma lucidum mycelium, preferably for 3 to 5 hours, but is not limited thereto.

또한, 상기 영지버섯 균사체 또는 이의 추출물은 티로시나제(tyrosinase) 활성을 억제하여 멜라닌 합성을 억제하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In addition, the Ganoderma lucidum mycelium or its extract may inhibit melanin synthesis by inhibiting tyrosinase activity, but is not limited thereto.

본 발명에서 사용되는 용어, “티로시나제(tyrosinase)”는 티로시나제 단백질은 멜라닌의 생합성 경로에서 티로신(tyrosine)을 산화시켜 도파퀴논(dopaquinone)으로 초기변환하는 핵심 효소로서, 멜라닌의 생성을 촉진시키는 효소를 의미한다.As used herein, the term "tyrosinase" refers to a tyrosinase protein as a key enzyme that oxidizes tyrosine in the melanin biosynthetic pathway and initially converts it into dopaquinone, which promotes the production of melanin. it means.

또한, 상기 화장료 조성물은, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.In addition, the cosmetic composition, for example, a solution, a gel, a solid or kneaded anhydrous product, an emulsion obtained by dispersing an oil phase in an aqueous phase, a suspension, a microemulsion, a microcapsule, a microgranule or an ionic type (liposome), a nonionic type It may be provided in the form of a follicular dispersion, cream, toner, lotion, powder, ointment, spray or conceal stick. In addition, it can be prepared in the form of a foam (foam) or the form of an aerosol composition further containing a compressed propellant.

또한, 상기 화장료 조성물은 본 발명의 영지버섯 균사체 또는 이의 추출물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.In addition, the cosmetic composition contains a fat substance, an organic solvent, a solubilizing agent, a thickening agent and a gelling agent, a softening agent, an antioxidant, a suspending agent, a stabilizer, a foaming agent, and a fragrance in addition to the Ganoderma lucidum mycelium or an extract thereof of the present invention. , surfactants, water, ionic or nonionic emulsifiers, fillers, sequestering and chelating agents, preservatives, vitamins, blocking agents, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic actives, lipid vesicles or cosmetics It may contain adjuvants commonly used in the field of cosmetics, such as any other ingredients commonly used in cosmetics.

본 발명의 영지버섯 균사체 또는 이의 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 있어서, 통상적으로 함유되는 화장료 조성물에 본 발명의 영지버섯 균사체 또는 이의 추출물이 0.1 내지 50 중량%, 바람직하게는 1 내지 10 중량%의 양으로 첨가될 수 있다.In the cosmetic composition containing the Ganoderma lucidum mycelium or its extract of the present invention, the amount of the Ganoderma lucidum mycelium or its extract of the present invention is 0.1 to 50% by weight, preferably 1 to 10% by weight, in the cosmetic composition usually contained can be added as

본 발명의 영지버섯 균사체 또는 이의 추출물을 피부 외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.When the ganoderma lucidum mycelium or its extract of the present invention is used as an external skin preparation, it may additionally contain a fatty substance, an organic solvent, a solubilizing agent, a thickening agent and a gelling agent, a softening agent, an antioxidant, a suspending agent, a stabilizer, a foaming agent, Fragrance agents, surfactants, water, ionic or nonionic emulsifiers, fillers, sequestering and chelating agents, preservatives, vitamins, blocking agents, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic actives, lipid vesicles or It may contain adjuvants commonly used in the field of dermatology, such as any other ingredients commonly used in external preparations for skin. In addition, the components may be introduced in an amount generally used in the field of skin science.

일 측면에 있어서, 본 발명은 상기 배지 조성물에서 배양된 영지버섯 균사체 또는 이의 추출물을 포함하는 멜라닌 색소 과다 침착 질환 예방 또는 치료용 피부외용제 조성물을 제공한다.In one aspect, the present invention provides a composition for external application for skin for preventing or treating hypermelanin hyperpigmentation disease comprising ganoderma lucidum mycelium or an extract thereof cultured in the medium composition.

본 발명의 피부외용제 조성물은 상술한 영지버섯 균사체 또는 이의 추출물을 포함하기 때문에, 상술한 본 발명의 영지버섯 균사체 또는 이의 추출물과 중복된 내용은 중복된 내용의 기재에 의한 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.Since the composition for external application for skin of the present invention includes the above-described Ganoderma lucidum mycelium or extract thereof, the above-described information overlapping with the Ganoderma lucidum mycelium or extract thereof of the present invention avoids excessive complexity of the present specification due to overlapping descriptions. omitted for this purpose.

또한, 상기 색소 과다 침착 질환은 기미, 주근깨, 노인성 색소반 또는 일광흑색증(solar lentigines)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In addition, the hyperpigmentation disease may be melasma, freckles, senile pigment spots or solar lentigines, but is not limited thereto.

본 발명의 피부외용제는 유효성분으로서 영지버섯 균사체 또는 이의 추출물을 포함하며 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 이외에도, 추가적으로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.The skin external preparation of the present invention contains ganoderma lucidum mycelium or an extract thereof as an active ingredient and may include a pharmaceutically acceptable carrier. In addition, fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickeners and gelling agents, softeners, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents, fragrances, surfactants, water, ionic or nonionic emulsifiers, fillers , sequestering agents and chelating agents, preservatives, vitamins, blocking agents, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic actives, lipid vesicles or any other component commonly used in external preparations for the skin in the field of dermatology may contain adjuvants commonly used in In addition, the components may be introduced in an amount generally used in the field of skin science.

상기 피부외용제 영지버섯 균사체 또는 이의 추출물의 투여량은 0.0001 내지 1000 ㎎/㎏이고, 바람직하게는 0.001 내지 100 ㎎/㎏이며, 이에 제한되는 것은 아니다. 투여량은 특정 환자의 체중, 연령, 성별, 건강 상태, 투여 기간, 제거율, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.The dosage of the Ganoderma lucidum mycelium or its extract for external use for skin is 0.0001 to 1000 mg/kg, preferably 0.001 to 100 mg/kg, but is not limited thereto. The dosage may vary according to the weight, age, sex, health condition, administration period, removal rate, severity of disease, etc. of a specific patient.

상기 피부외용제의 제제 형태로는 이에 한정되지는 않으나 예를 들면, 액상도포제, 분무제, 로션제, 겔제, 파스타제, 연고제, 에어로졸, 분말제, 패취, 크림, 롤온, 경피흡수제 등이 있다. 본 발명의 외용제에서 약학적으로 허용되는 담체로는 그의 제형에 따라 다르나, 바셀린, 유동 파라핀, 겔화 탄화수소(플라스티베이스) 등의 탄화수소류; 중쇄지방산트리글리세라이드, 돈지, 하드 팻, 카카오지 등의 동식물성 오일; 세탄올, 스테아릴알코올, 스테아린산, 팔미틴산이소프로필 등의 고급지방산 알코올 및 지방산 및 그의 에스테르류; 폴리에틸렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세롤, 젤라틴, 백당, 당알코올 등의 수용성 기제; 글리세린 지방산 에스테르, 스테아린산폴리옥실, 폴리옥시에틸렌경화 피마자유 등의 유화제; 아크릴산에스테르, 알긴산나트륨 등의 점착제; 액화석유가스, 이산화탄소 등의 분사제; 파라옥시벤조산에스테르류 등의 방부제 등을 들 수 있다. 또한, 이들 외에도 안정제, 향료, 착색제, pH 조정제, 희석제, 계면활성제, 보존제, 항산화제 등을 필요에 따라 배합할 수 있다. 본 발명의 외용제의 사용은 통상의 방법에 의해 환부 또는 통증이 발현하는 피부에 도포하는 것이 바람직하다.Formulations of the external skin preparation include, but are not limited to, for example, liquid coating agents, sprays, lotions, gels, pastas, ointments, aerosols, powders, patches, creams, roll-ons, transdermal absorbers, and the like. The pharmaceutically acceptable carrier for the external preparation of the present invention varies depending on the formulation, but includes hydrocarbons such as petroleum jelly, liquid paraffin, and gelled hydrocarbon (plasty base); animal and vegetable oils such as medium-chain fatty acid triglyceride, lard, hard fat, and cacao butter; higher fatty alcohols and fatty acids and their esters, such as cetanol, stearyl alcohol, stearic acid and isopropyl palmitate; water-soluble bases such as polyethylene glycol, 1,3-butylene glycol, glycerol, gelatin, white sugar, and sugar alcohol; emulsifiers such as glycerin fatty acid ester, polyoxyl stearate, and polyoxyethylene hydrogenated castor oil; adhesives such as acrylic esters and sodium alginate; propellants such as liquefied petroleum gas and carbon dioxide; Preservatives, such as paraoxybenzoic acid ester, etc. are mentioned. In addition to these, stabilizers, fragrances, colorants, pH adjusters, diluents, surfactants, preservatives, antioxidants and the like may be incorporated as needed. The use of the external preparation of the present invention is preferably applied to the affected area or skin experiencing pain by a conventional method.

또한, 본 발명에 따른 외용제는 통상적인 반창고의 창상 박리 커버 등과 같은 고체 지지체 상에 점착되어 사용될 수 있다. 점착은 본 발명의 조성물을 고체 지지체에 포화시킨 후 탈수시켜 달성할 수 있다. 바람직하게는 고체 지지체를 먼저 점착제로 피복하여 고체 지지체에 본 발명의 조성물의 부착을 향상시킬 수 있다. 점착제의 예로는 폴리아크릴레이트 및 시아노아크릴레이트 등이 있다. 이러한 형태의 제형은, 예를 들어 천공된 플라스틱 필름 형태의 비부착성 상처 박리 커버를 갖는 반창고(Smith & Nephew Ltd); Johnson& Johnson의 얇은 스트립(strip), 패취(patch), 스팟(spot), 가소성 스트립 형태의 밴드-에이드 (BAND-AID); Colgate-Palmolive Co.(Kendall)의 큐리티 큐러드 오우취리스(Curity CURAD Ouchless) 반창고; 및 American White Cross Laboratories Inc.의 스틱-타이트(STIK-TITE) 탄성 스트립을 들 수 있다. 본 발명의 조성물은 이러한 형태의 제형에 유효성분으로서 적용될 수 있다.In addition, the external preparation according to the present invention can be used by being adhered on a solid support such as a wound release cover of a conventional plaster. Adhesion can be achieved by saturating the composition of the present invention on a solid support followed by dehydration. Preferably, the solid support is first coated with an adhesive to improve adhesion of the composition of the present invention to the solid support. Examples of tackifiers include polyacrylates and cyanoacrylates. Formulations of this type include, for example, bandages with non-adhesive wound release covers in the form of perforated plastic films (Smith & Nephew Ltd); Johnson & Johnson's BAND-AID in thin strip, patch, spot, and plastic strip form; Curity CURAD Ouchless Band-Aid from Colgate-Palmolive Co. (Kendall); and American White Cross Laboratories Inc.'s STIK-TITE elastic strip. The composition of the present invention can be applied as an active ingredient in this type of formulation.

또한, 상기 피부외용제 조성물은 구체적으로 피부외용 약학 조성물에 관한 것이다.In addition, the composition for external application for skin specifically relates to a pharmaceutical composition for external application for skin.

상기 "예방"은 병리학적 현상의 발생 빈도 또는 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다. 예방은 완전할 수 있으며 또는 부분적일 수도 있다. 이 경우에는 개체 내의 멜라닌 색소 과다 침작 질환 증상이 상기 조성물을 사용 하지 않은 경우와 비교하여 감소하는 현상을 의미할 수 있다.The "prevention" refers to any action that reduces the frequency or severity of pathological phenomena. Prevention can be complete or partial. In this case, it may mean that symptoms of melanin pigment hyperpigmentation disease in the subject are reduced compared to the case where the composition is not used.

상기 "치료"는 치료하고자 하는 대상 또는 세포의 천연 과정을 변경시키기 위하여 임상적으로 개입하는 모든 행위를 의미하며, 임상 병리 상태가 진행되는 동안 또는 이를 예방하기 위하여 수행할 수 있다. 목적하는 치료효과는 질병의 발생 또는 재발을 예방하거나, 증상을 완화시키거나, 질병에 따른 모든 직접 또는 간접적인 병리학적 결과를 저하시키거나, 전이를 예방하거나, 질병 진행 속도를 감소시키거나, 질병 상태를 경감 또는 일시적 완화시키거나, 예후를 개선시키는 것을 포함할 수 있다.The "treatment" refers to any action that clinically intervenes in order to change the natural process of a target or cell to be treated, and may be performed while a clinical pathological state is progressing or to prevent it. The desired therapeutic effect is to prevent the occurrence or recurrence of the disease, alleviate the symptoms, reduce any direct or indirect pathological consequences of the disease, prevent metastasis, reduce the rate of disease progression, or reduce the rate of disease progression. alleviating or palliating the condition, or improving the prognosis.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서 사용되는 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 건강상태, 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여, 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount. As used herein, the term "pharmaceutically effective amount" means an amount that is sufficient to treat a disease with a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment and does not cause side effects, and the effective dose level is the patient's health The condition, type of disease, severity, activity of the drug, sensitivity to the drug, method of administration, time of administration, route of administration and excretion rate, duration of treatment, factors including drugs used in combination or concurrently, and other factors well known in the medical field can be determined according to The composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and may be administered singly or in multiple doses. Considering all of the above factors, it is important to administer the amount that can obtain the maximum effect with the minimum amount without side effects, which can be easily determined by those skilled in the art.

본 발명에서 "개체"는 색소 과다 침작 질환을 예방 또는 치료를 목적으로 하는 개체이면 특별히 한정되지 않고, 인간을 포함하는 동물, 예를 들어 비-영장류 (예를 들면, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 래트 및 마우스) 및 영장류 (예를 들면, 원숭이, 예를 들어 사이노몰구스 (cynomolgous) 원숭이 및 침팬지)를 비롯한 포유동물을 나타낸다. 때에 따라서는 인간을 제외하는 개체일 수 있다.In the present invention, "individual" is not particularly limited as long as it is an individual for the purpose of preventing or treating hyperpigmentation disease, and animals including humans, such as non-primates (eg, cows, pigs, horses, cats) , dogs, rats and mice) and primates (eg, monkeys such as cynomolgous monkeys and chimpanzees). In some cases, it may be an entity excluding humans.

본 발명에 따른 조성물은 약학적으로 유효한 양의 영지버섯 균사체는 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기에서 약학적으로 유효한 양이란 색소 과다 침작 질환의 증상을 예방, 개선 및 치료하기에 충분한 양을 말한다. 상기에서 "약학적으로 허용되는"이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다. The composition according to the present invention may include a pharmaceutically effective amount of ganoderma lucidum mycelium alone or may include one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients or diluents. In the above, the pharmaceutically effective amount refers to an amount sufficient to prevent, improve, and treat symptoms of hyperpigmentation disease. In the above, "pharmaceutically acceptable" refers to a composition that is physiologically acceptable and does not cause allergic reactions such as gastrointestinal disorders and dizziness or similar reactions when administered to humans.

또한, 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 생리식염수, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이트, 프로필렌글리콜 및 리퀴드 파라핀으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용 가능하다. 상기 성분들은 상기 유효성분인 영지버섯 균사체에 독립적으로 또는 조합하여 추가될 수 있다.In addition, the composition including a pharmaceutically acceptable carrier may be in various oral or parenteral formulations. When formulated, it may be prepared using diluents or excipients such as commonly used fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants. The carriers, excipients and diluents include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, gum acacia, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, It may be at least one selected from the group consisting of polyvinyl pyrrolidone, physiological saline, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, and mineral oil, dextrin, calcium carbonate, propylene glycol, and liquid paraffin. It is not limited, and all conventional carriers, excipients or diluents can be used. The above ingredients may be added independently or in combination to the mycelium of ganoderma lucidum, which is the active ingredient.

또한, 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함될 수 있으며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스 (sucrose) 또는 락토오스 (lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.In addition, solid preparations for oral administration may include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc., and such solid preparations may contain at least one excipient, for example, starch, calcium carbonate, sucrose, etc., in one or more compounds. Alternatively, it may be prepared by mixing lactose, gelatin, and the like. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc may also be used. Liquid preparations for oral administration include suspensions, internal solutions, emulsions, syrups, etc. In addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents, various excipients such as wetting agents, sweeteners, aromatics, and preservatives may be included. there is.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspension solutions, emulsions, freeze-dried formulations, suppositories, and the like. Propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate may be used as non-aqueous solvents and suspending agents. As a base for suppositories, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin paper, glycerol, gelatin, and the like may be used.

또한, 본 발명의 약학적 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.In addition, the pharmaceutical composition of the present invention is a group consisting of tablets, pills, powders, granules, capsules, suspensions, internal solutions, emulsions, syrups, sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations and suppositories. It may have any one formulation selected from. As a base for suppositories, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin paper, glycerol, gelatin, and the like may be used.

본 발명의 영지버섯 균사체는 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있으며, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된다.The Ganoderma lucidum mycelium of the present invention can be administered in various oral and parenteral formulations during clinical administration, and when formulated, diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, surfactants, etc. manufactured using

경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환자, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 본 발명의 영지버섯 균사체에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.Solid preparations for oral administration include tablets, patients, powders, granules, capsules, troches, etc., and these solid preparations contain at least one excipient, such as starch, calcium carbonate, in one or more ganoderma mycelium of the present invention. It is prepared by mixing sucrose, lactose, or gelatin. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium styrate and talc are also used. Liquid formulations for oral administration include suspensions, internal solutions, emulsions, or syrups. In addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents, various excipients such as wetting agents, sweeteners, aromatics, and preservatives may be included. can

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspension solutions, emulsions, freeze-dried formulations, suppositories, and the like. Propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate may be used as non-aqueous solvents and suspending agents. As a base for suppositories, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin paper, glycerol, gelatin, and the like may be used.

또한, 본 발명의 영지버섯 균사체의 인체에 대한 효과적인 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로 약 0.001-100 mg/kg/일이며, 바람직하게는 0.01-35 mg/kg/일이다. 몸무게가 70㎏인 성인 환자를 기준으로 할 때, 일반적으로 0.07-7000 mg/일이며, 바람직하게는 0.7-2500 ㎎/일이며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.In addition, the effective dosage of the Ganoderma lucidum mycelium of the present invention for the human body may vary depending on the patient's age, weight, sex, dosage form, state of health and degree of disease, and is generally about 0.001-100 mg/kg/day. , preferably 0.01-35 mg/kg/day. Based on an adult patient weighing 70 kg, it is generally 0.07-7000 mg/day, preferably 0.7-2500 mg/day, and once or twice a day at regular intervals according to the judgment of a doctor or pharmacist. It may be divided into several doses.

본 발명의 약학적 조성물은 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 또는 생물학적 반응조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may be used alone or in combination with methods using surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy or biological response modifiers.

본 발명의 약학적 조성물은 또한 영지버섯 균사체를 유효성분으로 포함하는 외용제의 제형으로 제공할 수 있다. The pharmaceutical composition of the present invention may also be provided in the form of an external preparation containing ganoderma lucidum mycelium as an active ingredient.

본 발명의 약학적 조성물을 피부외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 유화제, 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 활성제, 친유성 활성제 또는 지질 소낭 등 피부 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물이 피부 외용제로 제공될 경우, 이에 제한되는 것은 아니나, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제 등의 제형일 수 있다.When the pharmaceutical composition of the present invention is used as an external skin preparation, it may additionally contain a fatty substance, an organic solvent, a solubilizing agent, a thickening agent and a gelling agent, a softening agent, an antioxidant, a suspending agent, a stabilizer, a foaming agent, a fragrance, and an interface agent. Active agents, water, ionic emulsifiers, non-ionic emulsifiers, fillers, sequestering agents, chelating agents, preservatives, vitamins, blocking agents, humectants, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic actives, lipophilic actives or lipid vesicles, etc. Skin It may contain adjuvants commonly used in the field of dermatology, such as any other ingredients commonly used in external preparations. In addition, the components may be introduced in an amount generally used in the field of dermatology. When the pharmaceutical composition of the present invention is provided as an external skin preparation, it may be formulated as an ointment, patch, gel, cream or spray, but is not limited thereto.

일 측면에 있어서, 본 발명은 미백 활성이 증진된 영지버섯 균사체 제조방법을 제공한다.In one aspect, the present invention provides a method for producing ganoderma lucidum mycelium with enhanced whitening activity.

상기 제조방법은 영지버섯 종균을 감자한천배지(Potato Dextrose Agar)에 접종하여 배양하는 1단계; 영지버섯 종균이 배양된 감자한천배지로부터 영지버섯 균사체를 분리하는 2단계; 감자한천배지로부터 분리된 영지버섯 균사체를 당밀, 옥수수침지액 및 살리실산을 포함하는 영지버섯 균사체 배양용 배지 조성물에 접종하여 배양하는 3단계; 3단계의 영지버섯 균사체 배양용 배지 조성물로부터 영지버섯 균사체를 분리하는 4단계; 및 4단계의 영지버섯 균사체를 에탄올로 추출하는 5단계;를 포함하는 것일 수 있다.The manufacturing method includes a first step of inoculating and culturing ganoderma lucifera spawn on potato dextrose agar; A second step of separating the mycelium of the Ganoderma lucidum mushroom from the potato agar medium in which the Ganoderma lucidum spawn is cultured; Step 3 of inoculating and culturing the Ganoderma lucidum mycelium isolated from the potato agar medium in a medium composition for culturing Ganoderma lucidum mycelium containing molasses, corn steep liquor and salicylic acid; Step 4 of separating Ganoderma lucidum mycelium from the medium composition for culturing Ganoderma lucidum mycelium in Step 3; and step 5 of extracting the mycelium of Ganoderma lucidum in step 4 with ethanol.

본 발명의 영지버섯 균사체 추출물 제조방법은 상술한 영지버섯 균사체 배양용 배지 조성물을 포함하기 때문에, 상술한 본 발명의 영지버섯 균사체 배양용 배지 조성물과 중복된 내용은 중복된 내용의 기재에 의한 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략한다.Since the method for preparing the ganoderma lucidum mycelium extract of the present invention includes the above-described medium composition for culturing ganoderma lucidum mycelium, the content overlapping with the above-described medium composition for culturing ganoderma lucidum mycelium of the present invention is described herein according to the overlapping description. In order to avoid excessive complexity of , its description is omitted.

또한, 상기 5단계의 에탄올은 60 내지 80% 에탄올일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In addition, the ethanol in step 5 may be 60 to 80% ethanol, but is not limited thereto.

또한, 상기 5단계의 추출은 20 내지 80℃의 추출 온도로 2 내지 6시간 동안 수행되는 것일 수 있고, 바람직하게는 60 내지 80℃의 추출 온도로 3 내지 5시간 동안 수행되는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In addition, the extraction in step 5 may be performed for 2 to 6 hours at an extraction temperature of 20 to 80 ° C, and preferably for 3 to 5 hours at an extraction temperature of 60 to 80 ° C. It is not limited.

본 발명의 제조방법은 영지버섯 균사체의 티로시나제 활성 저해능을 향상시키는 효과가 있어 일반적인 영지버섯 균사체와 비교하여 미백 활성이 현저히 우수한 균사체의 제조가 가능하다.The manufacturing method of the present invention has the effect of improving the tyrosinase activity inhibitory ability of ganoderma lucidum mycelium, and thus it is possible to prepare a mycelium with significantly superior whitening activity compared to general ganoderma lucidum mycelium.

이하, 본 발명의 실시예를 첨부된 도면을 참고하여 보다 상세하게 설명하도록 한다. 그러나, 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 구체화하기 위한 것일 뿐, 이에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아닐 것이다.Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in more detail with reference to the accompanying drawings. However, the following examples are only for specifying the contents of the present invention, and the present invention will not be limited thereby.

<실시예1-1 내지 1-11> 영지버섯 균사체 배양용 배지 조성물의 제조<Examples 1-1 to 1-11> Preparation of medium composition for culturing ganoderma lucidum mycelium

미백활성을 증진시킨 영지버섯 균사체 배양을 위해, 11종의 당밀, 옥수수침지액, 살리실산 농도별 영지버섯 균사체 배양용 배양배지를 제조하였다. 구체적으로는 100 mL의 증류수에 당밀 0.2 % (w/v), 옥수수침지액 0.2 % (w/v) 및 살리실산 0 ~ 1000 ppm을 혼합하고 한천 1.5 %(w/v)를 첨가하여 실시예 1-1 내지 1-11을 제조하였으며, 구체적인 배지 조성은 표 1에 기재하였다.For the cultivation of ganoderma lucidum mycelium with enhanced whitening activity, 11 types of molasses, corn steeping liquid, and culture medium for culturing ganoderma lucidum mycelium at different concentrations of salicylic acid were prepared. Specifically, in 100 mL of distilled water, molasses 0.2% (w / v), corn steep liquor 0.2% (w / v) and salicylic acid 0 ~ 1000 ppm were mixed and agar 1.5% (w / v) was added to Example 1 -1 to 1-11 were prepared, and specific medium compositions are described in Table 1.

실시예Example 1-11-1 1-21-2 1-31-3 1-41-4 1-51-5 1-61-6 1-71-7 1-81-8 1-91-9 1-101-10 1-111-11 당밀(%)molasses(%) 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 옥수수
침지액(%)
corner
Immersion liquid (%)
0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2 0.20.2
살리실산(ppm)Salicylic Acid (ppm) 00 2020 4040 6060 8080 100100 200200 300300 400400 750750 10001000 한천(%)Agar (%) 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5

<실시예 2-1 내지 2-11> 영지버섯 균사체 배양용 배지 조성물의 제조<Examples 2-1 to 2-11> Preparation of medium composition for culturing Ganoderma lucidum mycelium

상기 실시예 1-1 내지 1-11의 배양용 배지 조성물 제조방법과 동일하게 제조하되, 당밀, 옥수수침지액, 살리실산 농도를 달리하여 11종의 영지버섯 균사체 배양용 배양배지를 제조하였다. 구체적으로는 상기 PDA 배지에 100 mL의 증류수에 당밀 2 % (w/v), 옥수수침지액 2 % (w/v) 및 살리실산 0 ~ 1000 ppm을 혼합하고 한천 1.5 % (w/v)를 첨가하여 실시예 2-1 내지 2-11을 제조하였다. 구체적인 배양배지의 조성은 표 2에 기재하였다.11 types of culture medium for culturing ganoderma lucidum mycelium were prepared in the same manner as in the method for preparing culture medium compositions of Examples 1-1 to 1-11, but with different concentrations of molasses, corn steep liquor, and salicylic acid. Specifically, molasses 2% (w/v), corn steep liquor 2% (w/v) and salicylic acid 0 to 1000 ppm were mixed in 100 mL of distilled water in the PDA medium, and agar 1.5% (w/v) was added. Thus, Examples 2-1 to 2-11 were prepared. The specific composition of the culture medium is shown in Table 2.

실시예Example 2-12-1 2-22-2 2-32-3 2-42-4 2-52-5 2-62-6 2-72-7 2-82-8 2-92-9 2-102-10 2-112-11 당밀(%)molasses(%) 22 22 22 22 22 22 22 22 22 22 22 옥수수
침지액(%)
corner
Immersion liquid (%)
22 22 22 22 22 22 22 22 22 22 22
살리실산(ppm)Salicylic Acid (ppm) 00 2020 4040 6060 8080 100100 200200 300300 400400 750750 10001000 한천(%)Agar (%) 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5 1.51.5

<실시예 3> 영지버섯 균사체 추출물의 제조<Example 3> Preparation of ganoderma lucidum mycelium extract

미백 활성이 가장 우수한 추출 조건을 우선 확인하기 위해, 농촌진흥청 국립원예특작과학원 버섯과에서 분양받은 영지2호 종균(Ganoderma lucidum)을 무균적으로 감자한천배지 (PDA, 배양액 1L 당 한천(agar) 15g, 감자추출물(potato extract) 4g, 글루코스(glucose) 20g 함유)배지에 접종하여 배양한 후, 감자한천배지로부터 영지버섯 균사체를 분리하였다. 그 후, 당밀 0.2 %와 0.2 %의 옥수수침지액 배지와 당밀 2 %와 옥수수침지액 2 % 배지에 각각 살리실산 20 ppm이 첨가하여 제조된 영지버섯 균사체 배양용 배양배지에 상기 감자한천배지로부터 분리된 영지버섯 균사체를 접종하여 배양하였다.In order to first confirm the extraction conditions with the best whitening activity, Ganoderma lucidum , which was distributed from the Mushroom Department of the National Institute of Horticultural and Herbal Science of the Rural Development Administration, was aseptically plated with potato agar medium (PDA, 15 g of agar per 1 L of culture medium). , potato extract (potato extract) 4g, glucose (glucose) containing 20g) medium was inoculated and cultured, and then the ganoderma lucidum mycelium was isolated from the potato agar medium. Thereafter, molasses 0.2% and 0.2% corn steep liquor medium and molasses 2% and corn steep liquor 2% medium were added with 20 ppm of salicylic acid, respectively. Ganoderma lucidum mycelium was inoculated and cultured.

영지버섯 균사체를 영지버섯 균사체 배양용 배양배지에서 분리하여 열풍건조시킨 후 10g의 영지버섯 균사체 건조 시료에 증류수, 30 %, 50 % 및 70 % 에탄올을 50ml 씩 각각 첨가하고 실온, 50℃, 60℃, 70℃ 및 80℃의 다른 온도로 각각 4시간 동안 추출하였으며, 여과한 추출액을 수득하였다. 상기 수득한 추출액을 감압 농축하여 영지버섯 균사체 추출물을 확보하였다.After separating the Ganoderma lucidum mycelium from the culture medium for culturing the Ganoderma lucidum mycelium and drying it with hot air, 50 ml each of distilled water, 30%, 50% and 70% ethanol were added to 10g of dried mycelium of Ganoderma lucidum, respectively, at room temperature, 50℃ and 60℃. , Extracted at different temperatures of 70 ° C and 80 ° C for 4 hours, respectively, to obtain a filtered extract. The obtained extract was concentrated under reduced pressure to obtain a ganoderma lucidum mycelium extract.

<비교예 1> PDB 배지 유래 영지버섯 균사체 추출물의 제조<Comparative Example 1> Preparation of PDB medium-derived ganoderma lucidum mycelium extract

PDB 배지 유래 영지버섯 균사체 추출물은 상기 실시예 3과 동일한 방법으로 제조하되, PDA 배지에서 배양된 영지버섯 균사체를 배양액에서 분리한 후, PDB 배지에 접종하여 배양하였으며, 추출온도 70℃에서 70 % 에탄올을 추출용매로 4시간 동안 추출하였다.The PDB medium-derived Ganoderma lucidum mycelium extract was prepared in the same manner as in Example 3, but the Ganoderma lucidum mycelium cultured in the PDA medium was separated from the culture medium, and then inoculated and cultured in the PDB medium, 70% ethanol at an extraction temperature of 70 ° C. was extracted for 4 hours with an extraction solvent.

<실험예 1> 영지버섯 균사 생장율 분석<Experimental Example 1> Ganoderma lucidum mycelial growth rate analysis

영지버섯 균사체는 농촌진흥청 국립원예특작과학원 버섯과에서 분양받은 영지2호 종균(Ganoderma lucidum)을 무균적으로 감자한천배지 (PDA, 배양액 1L 당 한천(agar) 15g, 감자추출물(potato extract) 4g, 글루코스(glucose) 20g 함유)배지에 순수분리 배양한 것을 이용하였다.The ganoderma lucidum mycelium was prepared by aseptically using Ganoderma lucidum from the Mushroom Department of the National Institute of Horticultural and Herbal Science of the Rural Development Administration on a potato agar medium (PDA, 15g of agar per 1L of culture medium, 4g of potato extract, 4g of potato extract, A medium containing 20 g of glucose) was used for pure isolation culture.

PDA 배지에서 1차적으로 순수 배양된 균사 조각을 상기 22종의 배양배지에 각각 접종하고 1 ~ 5일간 배양하며 매일 균사의 직경을 측정하여 균사 생장율을 평가 하였다.The hyphal fragments, which were primarily pure cultured in the PDA medium, were inoculated into the above 22 culture mediums, incubated for 1 to 5 days, and the hyphal diameter was measured every day to evaluate the mycelial growth rate.

실시예 1-1 내지 1-11의 배양배지(당밀 0.2 %, 옥수수침지액 0.2 % 및 0 ~ 100ppm 농도의 살리실산 첨가)에 따른 균사 생장율 평가 결과는 도 1과 표 3에, 실시예 2-1 내지 2-11의 배양배지(당밀 2 %, 옥수수침지액 2 % 및 0 ~ 100ppm 농도의 살리실산 첨가)에 따른 균사 생장율 평가 결과는 도 2와 표 4에 나타내었다.The mycelial growth rate evaluation results according to the culture medium (molasses 0.2%, corn steep liquor 0.2%, and salicylic acid at a concentration of 0 to 100 ppm) of Examples 1-1 to 1-11 are shown in FIG. 1 and Table 3, Example 2-1 The mycelial growth rate evaluation results according to the culture medium of 2-11 (molasses 2%, corn steep liquor 2%, and salicylic acid at a concentration of 0 to 100 ppm) are shown in FIG. 2 and Table 4.

도 1 및 표 3에 나타낸 바와 같이, 당밀 0.2 % 와 옥수수침지액 0.2 %의 배지에서 살리실산의 농도가 20 ppm이 첨가되었을 때 직경이 24 cm로 성장률이 가장 높은 것으로 확인되었고, 도 2 및 표 4에 나타낸 바와 같이 당밀 2 %와 옥수수침지액 2 %의 배지에서 살리실산의 농도가 20 ~ 40 ppm이 첨가되었을 때 직경이 25 cm로 가장 성장률이 높은 것을 확인할 수 있었다.As shown in Figure 1 and Table 3, it was confirmed that the growth rate was the highest with a diameter of 24 cm when 20 ppm of salicylic acid was added in the medium of 0.2% molasses and 0.2% corn steep liquor, and Figure 2 and Table 4 As shown in , it was confirmed that the growth rate was the highest with a diameter of 25 cm when a concentration of 20 to 40 ppm of salicylic acid was added in a medium containing 2% molasses and 2% corn steep liquor.

배양culture 실시예Example 1-11-1 1-21-2 1-31-3 1-41-4 1-51-5 1-61-6 1-71-7 1-81-8 1-91-9 1-101-10 1-111-11 1일1 day 0.50.5 1One 1One 1One 1One 1One 1One 1One 00 00 00 2일2 days 3.373.37 55 55 3.53.5 4.54.5 5.55.5 6.56.5 44 00 00 00 3일3 days 99 1111 1010 88 1111 1010 1212 99 1One 00 00 4일4 days 17.6217.62 1818 1717 9.59.5 13.513.5 1616 1717 1515 22 00 00 5일5 days 22.6222.62 2424 2222 2020 2222 2222 2222 2020 6.56.5 00 00

배양culture 실시예Example 2-12-1 2-22-2 2-32-3 2-42-4 2-52-5 2-62-6 2-72-7 2-82-8 2-92-9 2-102-10 2-112-11 1일1 day 1.751.75 22 22 1One 1One 1One 1One 1One 1One 22 00 2일2 days 66 66 66 55 55 55 55 4.54.5 4.54.5 22 1One 3일3 days 13.2513.25 1111 1111 1010 1010 1010 1010 99 88 44 1One 4일4 days 22.6322.63 1818 1818 1717 1717 1616 1616 14.514.5 1212 5.55.5 1.51.5 5일5 days 23.7523.75 2525 2525 2424 2424 2424 2424 2121 1818 88 1.51.5

<실험예 2> 영지버섯 균사체의 미백활성 평가<Experimental Example 2> Evaluation of whitening activity of ganoderma lucidum mycelium

2-1. 티로시나제 활성 저해능 평가2-1. Evaluation of tyrosinase activity inhibition

실시예 3의 영지버섯 균사체 추출물에 대한 티로시나제(tyrosinase) 활성을 측정하였다.The tyrosinase activity of the ganoderma lucidum mycelium extract of Example 3 was measured.

티로시나제 활성 측정은 mushroom tyrosinase (Sigma, Korea)와 기질인 L-tyrosine (Sigma, Korea)을 사용하였다. 상기 실시예 3에서 준비된 추출물 시료, 비교예 1에서 준비된 추출물 시료 또는 알부틴(arbutin)이 첨가된 0.1 M sodium phosphate buffer (pH 6.8) 40 μL와 2 mM L-tyrosine 35 μL를 혼합하고 250 U/mL의 mushroom tyrosinase 5 μL를 첨가하여 37 ℃에서 10 min간 반응하였다. 반응 후 475 nm에서 흡광도를 측정하여 tyrosinase 저해 활성을 평가하였다. 0.1 M sodium phosphate buffer (pH 6.8)를 음성대조군으로 사용하였고, 상대적 티로시나제 저해활성을 양성대조군(arbutin)과 비교하였으며, 티로시나제 저해율은 수학식 1에 의해 계산되었다.To measure tyrosinase activity, mushroom tyrosinase (Sigma, Korea) and substrate L-tyrosine (Sigma, Korea) were used. The extract sample prepared in Example 3, the extract sample prepared in Comparative Example 1, or arbutin-added 0.1 M sodium phosphate buffer (pH 6.8) 40 μL and 2 mM L-tyrosine 35 μL were mixed and 250 U/mL 5 μL of mushroom tyrosinase was added and reacted at 37 ° C for 10 min. After the reaction, absorbance was measured at 475 nm to evaluate tyrosinase inhibitory activity. 0.1 M sodium phosphate buffer (pH 6.8) was used as a negative control group, the relative tyrosinase inhibitory activity was compared with the positive control group (arbutin), and the tyrosinase inhibition rate was calculated by Equation 1.

Figure 112022100481181-pat00001
Figure 112022100481181-pat00001

A: 티로시나아제를 처리하여 반응한 시료 무처리군의 흡광도A: Absorbance of the sample untreated group reacted by treatment with tyrosinase

B: 티로시나아제를 처리하지 않은 시료 무처리군의 흡광도B: Absorbance of sample untreated group not treated with tyrosinase

C: 티로시나아제를 처리하여 반응한 시료 처리군의 흡광도C: Absorbance of sample treated group reacted by treatment with tyrosinase

D: 티로시나아제를 처리하지 않은 시료 처리군의 흡광도D: Absorbance of sample treated group not treated with tyrosinase

그 결과, 도 3 및 표 5에 나타낸 바와 같이 당밀 0.2 %와 옥수수침지액 0.2 %에 살리실산이 20 ppm 첨가된 배지에서 배양된 영지버섯 균사 10g의 건조 시료에 70 % 에탄올을 50ml 첨가하고 70℃의 온도로 4시간 동안 추출한 추출물은 41.75 %의 티로시나제 저해활성을 보이며, arbutine (0.5mM) 처리구의 티로시나제 저해 활성인 38.1 %보다 더 우수한 티로시나제 저해 활성이 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 특히, 당밀 0.2 %와 옥수수침지액 0.2 %에 살리실산이 20 ppm 첨가된 배지에서 배양된 영지버섯 균사체 추출물이 PDB 배지에서 배양된 균사체 유래 추출물보다 현저히 우수한 티로시나제 저해 활성을 나타나는 것을 확인하였다.As a result, as shown in FIG. 3 and Table 5, 50 ml of 70% ethanol was added to a dry sample of 10 g of ganoderma lucidum mycelia cultured in a medium in which 20 ppm of salicylic acid was added to 0.2% of molasses and 0.2% of corn steep liquor, and 50 ml of 70% ethanol was added. The extract extracted for 4 hours at temperature showed tyrosinase inhibitory activity of 41.75%, and it was confirmed that tyrosinase inhibitory activity was better than 38.1% of tyrosinase inhibitory activity of arbutine (0.5mM) treatment group. In particular, it was confirmed that the ganoderma lucidum mycelium extract cultured in a medium in which 20 ppm of salicylic acid was added to 0.2% of molasses and 0.2% of corn steep liquor exhibited significantly better tyrosinase inhibitory activity than the mycelium-derived extract cultured in a PDB medium.

배지badge 살리실산(ppm)Salicylic Acid (ppm) Tyrosinaseinhibitory activity (% of control) Tyrosinase inhibitory activity (% of control) Arbutine
(0.5mM)
Arbutine
(0.5 mM)
-- 1st1st 2nd 2nd 3rd 3rd 평균 average 표준편자 standard deviation
38.0938.09 36.1936.19 40.0040.00 38.1038.10 1.901.90 음성대조군negative control group -- 0.0000.000 -7.76-7.76 7.767.76 0.000.00 감자배지 (PDB)Potato Medium (PDB) 00 17.8817.88 17.8817.88 17.8817.88 17.8917.89 0.000.00 2020 18.5718.57 16.9916.99 20.1520.15 18.5818.58 1.581.58 당밀0.2% + 옥수수침지액0.2%molasses 0.2% + corn steep liquor 0.2% 00 34.9534.95 33.9833.98 35.9235.92 34.9534.95 0.970.97 2020 41.7441.74 38.8338.83 44.6644.66 41.7541.75 2.912.91 당밀 2% + 옥수수침지액2%molasses 2% + corn steep liquor 2% 00 10.3510.35 17.4517.45 12.1312.13 13.3113.31 3.703.70 2020 14.1514.15 12.2612.26 16.0316.03 14.1514.15 1.891.89

또한, 도 4에 나타낸 바와 같이 실시예 3에서 제조된 추출 조건별 영지버섯 균사체 추출물의 티로시나제 활성 비교실험 결과, 70 % 에탄올을 50ml 첨가하고 70℃의 온도로 4시간 동안 추출한 추출물이 가장 높은 티로시나제 저해 활성이 나타나는 것을 확인하였다. 이러한 결과는 가장 우수한 미백활성을 보이는 추출물을 확보하기 위해서는 상기의 방법을 사용하는 것이 바람직하다는 것을 의미한다.In addition, as shown in FIG. 4, as a result of comparative experiments on tyrosinase activity of the ganoderma lucidum mycelium extract for each extraction condition prepared in Example 3, 50 ml of 70% ethanol was added and extracted at a temperature of 70 ° C for 4 hours. The highest tyrosinase inhibition activity was confirmed. These results mean that it is preferable to use the above method in order to secure an extract showing the best whitening activity.

이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 구체적인 실시예를 상세하게 설명되었으나, 본 발명의 사상을 이해하는 당업자는 동일한 사상의 범위 내에서 다른 구성요소를 추가, 변경, 삭제 등을 통하여, 퇴보적인 다른 발명이나 본 발명 사상의 범위 내에 포함되는 다른 실시예를 용이하게 제안할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상술한 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구의 범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구의 범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.As described above, the specific embodiments of the present invention have been described in detail, but those skilled in the art who understand the spirit of the present invention may add, change, delete, etc. other components within the scope of the same idea, and other degenerate inventions. However, other embodiments included within the scope of the present invention can be easily suggested. Therefore, the embodiments described above should be understood as illustrative in all respects and not limiting. The scope of the present invention is indicated by the claims to be described later rather than the above detailed description, and all changes or modifications derived from the meaning and scope of the claims and equivalent concepts thereof are included in the scope of the present invention. should be interpreted as

Claims (14)

0.15 내지 0.25 %(w/v) 당밀, 0.15 내지 0.25 %(w/v) 옥수수침지액 및 15 내지 25 ppm 살리실산을 포함하는 배지에서 배양된 영지버섯 균사체 추출물을 포함하는, 피부 미백용 화장료 조성물.
0.15 to 0.25% (w / v) molasses, 0.15 to 0.25% (w / v) corn steep liquor and 15 to 25 ppm salicylic acid containing a cultured Ganoderma lucidum mycelium extract, skin whitening cosmetic composition.
삭제delete 제1항에 있어서,
상기 배지는 한천(agar)을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 피부 미백용 화장료 조성물.
According to claim 1,
The medium is characterized in that it further comprises agar (agar), a cosmetic composition for skin whitening.
제3항에 있어서,
상기 한천(agar)은 전체 배지 대비 1 내지 2 %(w/v)로 첨가되는 것을 특징으로 하는, 피부 미백용 화장료 조성물.
According to claim 3,
The agar (agar) is characterized in that the addition of 1 to 2% (w / v) compared to the total medium, skin whitening cosmetic composition.
삭제delete 삭제delete 제1항에 있어서,
상기 추출물은 탄소수 1 내지 4의 알콜, 아세톤(Acetone), 에테르(Ether), 벤젠(Benzene), 클로로포름(Chloroform), 에틸아세테이트(Ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(Methylene chloride), 헥산(Hexane) 및 시클로헥산 (Cyclohexane)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출용매로 추출된 것을 특징으로 하는, 피부 미백용 화장료 조성물.
According to claim 1,
The extract is an alcohol having 1 to 4 carbon atoms, acetone, ether, benzene, chloroform, ethyl acetate, methylene chloride, hexane and cyclo A cosmetic composition for skin whitening, characterized in that extracted with any one or more extraction solvents selected from the group consisting of hexane (Cyclohexane).
제1항에 있어서,
상기 조성물은 티로시나제(tyrosinase) 활성을 억제하여 멜라닌 합성을 억제하는 것인, 피부 미백용 화장료 조성물.
According to claim 1,
The composition is to inhibit melanin synthesis by inhibiting tyrosinase (tyrosinase) activity, a cosmetic composition for skin whitening.
0.15 내지 0.25 %(w/v) 당밀, 0.15 내지 0.25 %(w/v) 옥수수침지액 및 15 내지 25 ppm 살리실산을 포함하는 배지에서 배양된 영지버섯 균사체 추출물을 포함하는, 멜라닌 색소 과다 침착 질환 예방 또는 치료용 피부외용제 조성물.
Prevention of melanin hyperpigmentation disease comprising ganoderma lucidum mycelium extract cultured in a medium containing 0.15 to 0.25% (w/v) molasses, 0.15 to 0.25% (w/v) corn steep liquor and 15 to 25 ppm salicylic acid Or a composition for external application for skin for treatment.
제9항에 있어서,
상기 추출물은 탄소수 1 내지 4의 알콜, 아세톤(Acetone), 에테르(Ether), 벤젠(Benzene), 클로로포름(Chloroform), 에틸아세테이트(Ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(Methylene chloride), 헥산(Hexane) 및 시클로헥산 (Cyclohexane)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 추출용매로 추출된 것을 특징으로 하는, 멜라닌 색소 과다 침착 질환 예방 또는 치료용 피부외용제 조성물.
According to claim 9,
The extract is an alcohol having 1 to 4 carbon atoms, acetone, ether, benzene, chloroform, ethyl acetate, methylene chloride, hexane and cyclo A composition for external application for skin for preventing or treating hypermelanin hyperpigmentation disease, characterized in that it is extracted with any one or more extraction solvents selected from the group consisting of hexane (Cyclohexane).
제9항에 있어서,
상기 색소 과다 침착 질환은 기미, 주근깨, 노인성 색소반 또는 일광흑색증(solar lentigines)인 것을 특징으로 하는, 멜라닌 색소 과다 침착 질환 예방 또는 치료용 피부외용제 조성물.
According to claim 9,
The hyperpigmentation disease is characterized in that melasma, freckles, senile pigment spots or solar lentigines, melanin hyperpigmentation disease prevention or treatment composition for external application for skin.
영지버섯 종균을 감자한천배지(Potato Dextrose Agar)에 접종하여 배양하는 1단계;
영지버섯 종균이 배양된 감자한천배지로부터 영지버섯 균사체를 분리하는 2단계;
감자한천배지로부터 분리된 영지버섯 균사체를 0.15 내지 0.25 %(w/v) 당밀, 0.15 내지 0.25 %(w/v) 옥수수침지액 및 15 내지 25 ppm 살리실산을 포함하는 영지버섯 균사체 배양용 배지 조성물에 접종하여 배양하는 3단계;
3단계의 영지버섯 균사체 배양용 배지 조성물로부터 영지버섯 균사체를 분리하는 4단계; 및
4단계의 영지버섯 균사체를 에탄올로 추출하는 5단계;를 포함하는 미백 활성이 증진된 영지버섯 균사체 추출물 제조방법.
Step 1 of inoculating and culturing ganoderma lucidum spawn on potato dextrose agar;
A second step of separating the mycelium of the Ganoderma lucidum mushroom from the potato agar medium in which the Ganoderma lucidum spawn is cultured;
Ganoderma lucidum mycelium isolated from potato agar medium was added to a medium composition for culturing ganoderma lucidum mycelium containing 0.15 to 0.25% (w/v) molasses, 0.15 to 0.25% (w/v) corn steep liquor and 15 to 25 ppm salicylic acid 3 steps of inoculation and culturing;
Step 4 of separating the mycelium of Ganoderma lucidum from the medium composition for culturing Ganoderma lucidum mycelium of Step 3; and
A method for producing a Ganoderma lucidum mycelium extract with enhanced whitening activity, including step 5 of extracting the mycelium of Ganoderma lucidum in step 4 with ethanol.
제12항에 있어서,
상기 5단계의 에탄올은 60 내지 80% 에탄올인 것을 특징으로 하는, 미백 활성이 증진된 영지버섯 균사체 추출물 제조방법.
According to claim 12,
Characterized in that the ethanol in step 5 is 60 to 80% ethanol, a method for producing a ganoderma lucidum mycelium extract with enhanced whitening activity.
제12항에 있어서,
상기 5단계의 추출은 20 내지 80℃의 추출 온도로 2 내지 6시간 동안 수행되는 것을 특징으로 하는, 미백 활성이 증진된 영지버섯 균사체 추출물 제조방법.
According to claim 12,
Characterized in that the extraction of step 5 is performed for 2 to 6 hours at an extraction temperature of 20 to 80 ° C., a method for producing a ganoderma lucidum mycelium extract with enhanced whitening activity.
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한국균학회지,제27권,1호,82-86면(1999) 1부.* *

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