KR102499678B1 - A Composition for Diagnosing Cancer - Google Patents
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Abstract
본 발명은 암을 진단할 수 있는 조성물, 이를 포함하는 진단용 키트 및 상기 조성물을 이용하여 암의 진단을 위한 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다. The present invention relates to a composition capable of diagnosing cancer, a diagnostic kit including the composition, and a method for providing information for diagnosis of cancer using the composition.
Description
본 발명은 암을 진단할 수 있는 조성물, 이를 포함하는 진단용 키트 및 상기 조성물을 이용하여 암의 진단을 위한 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다. The present invention relates to a composition capable of diagnosing cancer, a diagnostic kit including the composition, and a method for providing information for diagnosis of cancer using the composition.
전 세계에서 유방암은 폐암에 이어 두 번째로 흔히 발생되는 암이며, 사망률은 5위에 해당하는 위험한 암이다. 특히 최근에는 저출산, 짧은 수유기간, 이른 초경, 늦은 폐경 등 생리적으로 왕성한 신체적 변화를 겪는 시기의 여성들에서는 여성호르몬의 자극을 받는 횟수의 급격한 증가로 인한 유선조직의 민감도 증가, 식생활의 서구화, 생활환경의 오염 등의 이유로 유방암 발생이 급격하게 증가하고 있다. 유방암의 경우 일단 암세포가 주변 조직에 침범하거나 림프절로 전이가 시작되면 완치가 어렵기 때문에 조기 발견이 다른 암보다 더 중요하다고 할 수 있다.In the world, breast cancer is the second most common cancer after lung cancer, and it is a dangerous cancer with a mortality rate of 5. In particular, recently, in women undergoing physiologically active physical changes such as low birth rate, short lactation period, early menarche, and late menopause, the sensitivity of mammary gland tissue increases due to the rapid increase in the number of times stimulated by female hormones, westernization of diet, and living environment The incidence of breast cancer is rapidly increasing for reasons such as pollution. In the case of breast cancer, it is difficult to cure it once cancer cells invade surrounding tissues or metastasize to lymph nodes, so early detection is more important than other cancers.
유방암으로 인한 사망률을 줄이기 위해서는 첫째, 유방암을 조기 진단하고, 둘째, 일차 수술에 의한 치료 이후 예후를 진단하여 적절한 부가 치료 (Adjuvant therapy)를 하는 것이 중요하다. 현재 유방암 진단에는 1차 촉진에 의한 자가 진단 외에, 유방 X-선 조영술, 초음파검사법 등이 예방차원에서의 검진방법으로 사용되고 있으며 이 방법은 초기의 유방암을 진단하는 데에도 가장 널리 사용되는 방법이다. 그러나 유방 X-선 조영술은 우리나라 여성들에서 흔히 발견되는 조밀유방일 경우 섬유질이 많아서, 진단율이 떨어지는 단점이 있으며, 특히 젊은 여성같이 유선이 많이 발달되어 있어도 진단율이 떨어진다. 또한, X-선을 사용하기 때문에 진단 과정에서 오히려 유방암이 생길 가능성도 배제할 수 없다. 그래서 대안으로 초음파검사법이 사용되고 있지만 이 역시 악성종양(cancer)과 양성종양(non-cancer)을 구별하기는 쉽지 않다. 실제 임상에서는 이상 소견이 있으면 세침흡입세포검사법, 자기공명촬영법 등을 부가적으로 사용하여 진단율을 높이고 있다. 그러나 이 방법들을 사용하더라도 정상조직과 비 정상조직을 형태상으로 구분할 뿐 악성종양(cancer)과 양성종양(non-cancer)을 구분하기가 쉽지 않기 때문에 확진을 위해서는 더욱 정밀한 조직검사를 하게 된다. 이와 같은 이유들로 인해 유방암은 다른 암에 비해 비교적 분자 유전학적인 방법으로 유방암을 진단하는 방법이 발달되어 있다. In order to reduce mortality due to breast cancer, it is important, first, to diagnose breast cancer early, and second, to diagnose prognosis after treatment by primary surgery, and to perform appropriate adjuvant therapy. Currently, in breast cancer diagnosis, in addition to self-diagnosis by primary palpation, mammography and ultrasonography are used as preventive screening methods, and this method is also the most widely used method for diagnosing early breast cancer. However, mammography has a disadvantage in that the diagnosis rate is low because dense breasts commonly found in Korean women have a lot of fiber. In addition, since X-rays are used, the possibility of breast cancer occurring during the diagnosis process cannot be ruled out. Therefore, ultrasound is used as an alternative, but it is also difficult to distinguish between malignant tumors (cancer) and benign tumors (non-cancer). In actual clinical practice, if abnormal findings are found, fine needle aspiration cytology and magnetic resonance imaging are additionally used to increase the diagnostic rate. However, even if these methods are used, a more precise biopsy is required to confirm the diagnosis because it is not easy to distinguish between normal and abnormal tissues only by morphology, and it is not easy to distinguish between malignant tumors (cancer) and non-cancer tumors. For these reasons, compared to other cancers, a method for diagnosing breast cancer using a molecular genetic method has been developed.
본 발명과 관련해, 유전자 또는 단백질의 발현과 유방암과의 관계를 좀 더 빠르고 확실하게 탐지하여 진단하기 위한 시도가 다양하게 이루어지고 있다.In relation to the present invention, various attempts have been made to more quickly and reliably detect and diagnose the relationship between gene or protein expression and breast cancer.
본 발명의 일 목적은 암 중에서도 특히 유방암을 정확하고 간편하게 진단할 수 있는 조성물을 제공하고자 한다. One object of the present invention is to provide a composition capable of accurately and conveniently diagnosing cancer, particularly breast cancer.
본 발명의 다른 목적은 암 중에서도 특히 유방암을 정확하고 간편하게 진단할 수 있는 키트를 제공하고자 한다.Another object of the present invention is to provide a kit capable of accurately and conveniently diagnosing cancer, particularly breast cancer.
본 발명의 또 다른 목적은 암 중에서도 특히 유방암을 진단하기 위한 정보를 제공하는 방법을 제공하고자 한다.Another object of the present invention is to provide a method for providing information for diagnosing breast cancer among cancers.
본 발명의 또 다른 목적은 암 중에서도 특히 유방암의 치료 반응성을 예측하는 방법을 제공하고자 한다. Another object of the present invention is to provide a method for predicting treatment responsiveness of cancer, particularly breast cancer.
본 발명의 또 다른 목적은 암 중에서도 특히 유방암의 예후를 예측하는 방법을 제공하고자 한다. Another object of the present invention is to provide a method for predicting the prognosis of cancer, particularly breast cancer.
본 발명의 또 다른 목적은 암 중에서도 특히 유방암의 병기를 예측하는 방법을 제공하고자 한다. Another object of the present invention is to provide a method for predicting the stage of cancer, particularly breast cancer.
본 발명의 또 다른 목적은 암 중에서도 특히 유방암의 재발 가능성을 예측하는 방법을 제공하고자 한다. Another object of the present invention is to provide a method for predicting the possibility of recurrence of cancer, particularly breast cancer.
본 발명의 또 다른 목적은 암 중에서도 특히 유방암을 치료하기 위한 약물을 스크리닝하는 방법을 제공하고자 한다.Another object of the present invention is to provide a method for screening drugs for treating cancer, particularly breast cancer.
본 발명의 또 다른 목적은 암 중에서도 특히 유방암을 진단하기 위한 진단 장치를 제공하고자 한다.Another object of the present invention is to provide a diagnostic device for diagnosing breast cancer among cancers.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.However, the technical problem to be achieved by the present invention is not limited to the above-mentioned problems, and other problems not mentioned will be clearly understood by those skilled in the art from the following description.
본 발명의 일 구현 예에 따르면, 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 암의 진단용 조성물에 관한 것이다.According to one embodiment of the present invention, it relates to a composition for diagnosing cancer comprising an agent for measuring the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding it.
본 발명에서, 상기 암은 유방암, 난소암, 대장암, 위암, 간암, 췌장암, 자궁경부암, 갑상선암, 부갑상선암, 폐암, 비소세포성폐암, 전립선암, 담낭암, 담도암, 비호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 혈액암, 방광암, 신장암, 흑색종, 결장암, 골암, 피부암, 두부암, 자궁암, 직장암, 뇌종양, 항문부근암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 질암, 음문암종, 식도암, 소장암, 내분비선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 수뇨관암, 신장세포 암종, 신장골반 암종, 중추신경계(CNS central nervoussystem) 종양, 1차 CNS 림프종, 척수 종양, 뇌간 신경교종 또는 뇌하수체 선종인, 암의 진단용 조성물에 관한 것이다.In the present invention, the cancer is breast cancer, ovarian cancer, colon cancer, stomach cancer, liver cancer, pancreatic cancer, cervical cancer, thyroid cancer, parathyroid cancer, lung cancer, non-small cell lung cancer, prostate cancer, gallbladder cancer, biliary tract cancer, non-Hodgkin's lymphoma, Hodgkin's Lymphoma, blood cancer, bladder cancer, kidney cancer, melanoma, colon cancer, bone cancer, skin cancer, head cancer, uterine cancer, rectal cancer, brain tumor, perianal cancer, fallopian tube carcinoma, endometrial carcinoma, vaginal cancer, vulvar carcinoma, esophageal cancer, small intestine cancer, endocrine adenocarcinoma, adrenal cancer, soft tissue sarcoma, urethral cancer, penile cancer, ureteric cancer, renal cell carcinoma, renal pelvic carcinoma, CNS central nervous system tumor, primary CNS lymphoma, spinal cord tumor, brainstem glioma, or pituitary adenoma; It relates to a composition for diagnosing cancer.
본 발명에서, 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드의 발현 수준을 측정하는 제제는 상기 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체, 올리고펩티드, 리간드, PNA(peptide nucleic acid) 및 앱타머(aptamer)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는, 암의 진단용 조성물에 관한 것이다.In the present invention, the agent for measuring the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 is a group consisting of antibodies, oligopeptides, ligands, PNA (peptide nucleic acid) and aptamers that specifically bind to the polypeptide It relates to a composition for diagnosis of cancer comprising at least one selected from.
본 발명에서, 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 제제는 상기 폴리펩티드를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머, 프로브 및 안티센스 뉴클레오티드로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는, 암의 진단용 조성물에 관한 것이다.In the present invention, the agent for measuring the expression level of the gene encoding the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 is at least one selected from the group consisting of primers, probes, and antisense nucleotides that specifically bind to the gene encoding the polypeptide It relates to a composition for diagnosis of cancer, comprising a.
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 암의 진단용 조성물을 포함하는 암의 진단용 키트에 관한 것이다.According to another embodiment of the present invention, it relates to a kit for diagnosing cancer including a composition for diagnosing cancer.
본 발명에서 상기 키트는 RT-PCR 키트, DNA 칩 키트, ELISA 키트, 단백질 칩 키트, 래피드(rapid) 키트 또는 MRM(Multiple reaction monitoring) 키트인, 암의 진단용 키트 일 수 있다.In the present invention, the kit may be a kit for diagnosing cancer, such as an RT-PCR kit, a DNA chip kit, an ELISA kit, a protein chip kit, a rapid kit, or a multiple reaction monitoring (MRM) kit.
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 목적하는 개체로부터 분리된 생물학적 시료에서 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는 암의 진단을 위한 정보 제공 방법일 수 있다.According to another embodiment of the present invention, a method for providing information for diagnosis of cancer comprising measuring the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding the polypeptide in a biological sample isolated from a subject of interest. can
본 발명에서 상기 "생물학적 시료" 내지 "시료"는 전혈(whole blood), 백혈구(leukocytes), 말초혈액 단핵 세포(peripheral blood mononuclear cells), 백혈구 연층(buffy coat), 혈장(plasma), 혈청(serum), 객담(sputum), 눈물(tears), 점액(mucus), 세비액(nasal washes), 비강 흡인물(nasal aspirate), 호흡(breath), 소변(urine), 정액(semen), 침(saliva), 복강 세척액(peritoneal washings), 복수(ascites), 낭종액(cystic fluid), 뇌척수막 액(meningeal fluid), 양수(amniotic fluid), 선액(glandular fluid), 췌장액(pancreatic fluid), 림프액(lymph fluid), 흉수(pleural fluid), 유두 흡인물(nipple aspirate), 기관지 흡인물(bronchial aspirate), 활액(synovial fluid), 관절 흡인물(joint aspirate), 기관 분비물(organ secretions), 세포(cell), 세포 추출물(cell extract) 또는 뇌척수액(cerebrospinal fluid)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In the present invention, the "biological sample" or "sample" refers to whole blood, leukocytes, peripheral blood mononuclear cells, leukocyte buffy coat, plasma, serum ), sputum, tears, mucus, nasal washes, nasal aspirate, breath, urine, semen, saliva ), peritoneal washings, ascites, cystic fluid, meningeal fluid, amniotic fluid, glandular fluid, pancreatic fluid, lymph fluid ), pleural fluid, nipple aspirate, bronchial aspirate, synovial fluid, joint aspirate, organ secretions, cell, It may be a cell extract or cerebrospinal fluid, but is not limited thereto.
본 발명에서 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드의 발현 수준을 측정하는 제제는 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체, 올리고펩티드, 리간드, PNA(peptide nucleic acid) 및 앱타머(aptamer)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함 할 수 있다.In the present invention, the agent for measuring the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 is an antibody, oligopeptide, ligand, PNA (peptide nucleic acid) and aptamer that bind specifically to the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 aptamer) may include one or more selected from the group consisting of
본 발명에서 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드의 발현 수준의 측정은 단백질 칩 분석, 면역측정법, 리간드 바인딩 어세이, MALDI-TOF(Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) 분석, SELDI-TOF(Sulface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) 분석, 방사선 면역분석, 방사 면역 확산법, 오우크테로니 면역 확산법, 로케트 면역전기영동, 조직면역 염색, 보체 고정 분석법, 2차원 전기영동 분석, 액상 크로마토그래피-질량분석(liquid chromatography-Mass Spectrometry, LC-MS), LC-MS/MS(liquid chromatography-Mass Spectrometry/ Mass Spectrometry), 웨스턴 블랏팅 또는 ELISA(enzyme linked immunosorbentassay)에 의해 수행될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, measurement of the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 is protein chip analysis, immunoassay, ligand binding assay, MALDI-TOF (Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) analysis, SELDI-TOF (Sulface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) analysis, radiation immunoassay, radioimmunodiffusion method, Oukteroni immunodiffusion method, rocket immunoelectrophoresis, tissue immunostaining, complement fixation assay, 2D electrophoresis assay, liquid phase Chromatography-mass spectrometry (liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS), LC-MS/MS (liquid chromatography-mass spectrometry/ mass spectrometry), western blotting, or ELISA (enzyme linked immunosorbentassay) may be performed, It is not limited thereto.
본 발명에서 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드의 발현 수준의 측정은 다중 반응 모니터링 (multiple reaction monitoring; MRM) 방법에 의하는, 암의 진단을 위한 정보 제공 방법일 수 있다.In the present invention, measuring the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 may be a method of providing information for diagnosis of cancer by a multiple reaction monitoring (MRM) method.
본 발명에서 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드의 타겟 펩티드의 서열번호 2의 어미이온의 질량 대 전하비는 336.607 m/z일 수 있고, 딸이온의 질량 대 전하비는 447.235, 403.719, 360.203, 286.669, 218.139 및 144.605 m/z일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the mass-to-charge ratio of the parent ion of SEQ ID NO: 2 of the target peptide of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 may be 336.607 m/z, and the mass-to-charge ratio of daughter ions may be 447.235, 403.719, 360.203, or 286.669. , 218.139 and 144.605 m/z, but is not limited thereto.
본 발명에서 상기 모니터링 방법 시 내부 표준 물질은 타겟 펩티드를 구성하는 특정 아미노산을 동위원소로 치환한 합성 펩티드 또는 대장균 베타 갈락토시다아제를 사용하는, 암의 진단을 위한 정보 제공 방법일 수 있다.In the monitoring method in the present invention, the internal standard material may be a method for providing information for diagnosis of cancer using a synthetic peptide or E. coli beta-galactosidase in which a specific amino acid constituting the target peptide is substituted with an isotope.
본 발명에서 상기 대장균 베타 갈락토시다아제의 타겟 펩티드는 서열번호 3으로 표시되는 폴리펩티드로 이루어지며 어미이온과 딸이온은 각각 542.3 m/z 와 636.3 m/z일 수 있다.In the present invention, the target peptide of E. coli beta-galactosidase consists of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 3, and the mother ion and daughter ion may be 542.3 m/z and 636.3 m/z, respectively.
본 발명에서 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 제제는 상기 폴리펩티드를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머, 프로브 및 안티센스 뉴클레오티드로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.In the present invention, the agent for measuring the expression level of the gene encoding the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 is at least one selected from the group consisting of primers, probes, and antisense nucleotides that specifically bind to the gene encoding the polypeptide. can include
본 발명에서 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 발현 수준의 측정은 역전사 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사 중합효소반응(Competitive RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소반응(Real-time RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA; RNase protection assay), 노던 블랏팅(Northern blotting) 또는 DNA 칩에 의하는 것일 수 있다.In the present invention, measurement of the expression level of the gene encoding the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 is reverse transcription polymerase reaction (RT-PCR), competitive reverse transcription polymerase reaction (Competitive RT-PCR), real-time reverse transcription polymerase reaction (Real -time RT-PCR), RNase protection assay (RPA), Northern blotting, or DNA chip.
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 목적하는 개체의 생물학적 시료에 대하여 측정된 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준이 정상 대조군에 비하여 증가한 경우, 상기 암의 발병 가능성이 높은 것으로 예측하는 단계를 포함하는 암의 진단을 위한 정보 제공 방법일 수 있다.According to another embodiment of the present invention, when the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding it measured in a biological sample of a target subject is increased compared to a normal control group, the possibility of developing the cancer is high. It may be an information providing method for diagnosing cancer, including the step of predicting that it will be.
본 발명에서 상기 정보 제공 방법은 목적하는 개체가 외과적 수술 후 예후를 예측하는 것일 수 있다. In the present invention, the method of providing information may be to predict the prognosis of a subject after a surgical operation.
본 발명에서 상기 정보 제공 방법은 상기 목적하는 개체의 암의 병기를 진단하는 것일 수 있다. In the present invention, the information providing method may be diagnosing the cancer stage of the subject.
본 발명에서 상기 정보 제공 방법은 상기 목적하는 개체의 암의 재발 가능성을 예측하는 것일 수 있다. In the present invention, the information providing method may be to predict the possibility of recurrence of cancer of the target subject.
본 발명에서 상기 암은 유방암, 난소암, 대장암, 위암, 간암, 췌장암, 자궁경부암, 갑상선암, 부갑상선암, 폐암, 비소세포성폐암, 전립선암, 담낭암, 담도암, 비호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 혈액암, 방광암, 신장암, 흑색종, 결장암, 골암, 피부암, 두부암, 자궁암, 직장암, 뇌종양, 항문부근암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 질암, 음문암종, 식도암, 소장암, 내분비선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 수뇨관암, 신장세포 암종, 신장골반 암종, 중추신경계(CNS central nervoussystem) 종양, 1차 CNS 림프종, 척수 종양, 뇌간 신경교종 또는 뇌하수체 선종일 수 있다. In the present invention, the cancer is breast cancer, ovarian cancer, colon cancer, stomach cancer, liver cancer, pancreatic cancer, cervical cancer, thyroid cancer, parathyroid cancer, lung cancer, non-small cell lung cancer, prostate cancer, gallbladder cancer, biliary tract cancer, non-Hodgkin's lymphoma, and Hodgkin's lymphoma. , blood cancer, bladder cancer, kidney cancer, melanoma, colon cancer, bone cancer, skin cancer, head cancer, uterine cancer, rectal cancer, brain tumor, perianal cancer, fallopian tube carcinoma, endometrial carcinoma, vaginal cancer, vulvar carcinoma, esophageal cancer, small intestine cancer, endocrine adenocarcinoma , adrenal cancer, soft tissue sarcoma, urethral cancer, penile cancer, ureteral cancer, renal cell carcinoma, renal pelvic carcinoma, CNS central nervous system tumor, primary CNS lymphoma, spinal cord tumor, brainstem glioma, or pituitary adenoma. .
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, (a) 암 개체로부터 분리한 시료 또는 암 질환 동물 모델에 후보 약제를 처리하는 단계; 및 (b) 상기 후보 약제가 처리된 시료 또는 암 질환 동물 모델에서 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 암의 예방 또는 치료용 약물을 스크리닝하는 방법에 관한 것일 수 있다.According to another embodiment of the present invention, (a) treating a sample isolated from a cancer subject or a cancer disease animal model with a candidate agent; And (b) measuring the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding the polypeptide in the sample treated with the candidate drug or in a cancer disease animal model, screening for a drug for preventing or treating cancer It could be about how.
본 발명에서 상기 시료는 암 개체로부터 분리된 세포 또는 조직일 수 있다. In the present invention, the sample may be a cell or tissue isolated from a cancer subject.
본 발명에서 (c) 상기 (b) 단계에서 측정된 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준이 후보 약제가 처리되기 전에 비하여 증가하거나 감소한 경우 상기 후보 약제를 암의 예방 또는 치료용 약제로 판단하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.In the present invention, (c) when the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding it measured in step (b) is increased or decreased compared to before the candidate agent is treated, the candidate agent is used to prevent or prevent cancer A step of determining the drug as a drug for treatment may be further included.
본 발명에서 상기 암은 유방암, 난소암, 대장암, 위암, 간암, 췌장암, 자궁경부암, 갑상선암, 부갑상선암, 폐암, 비소세포성폐암, 전립선암, 담낭암, 담도암, 비호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 혈액암, 방광암, 신장암, 흑색종, 결장암, 골암, 피부암, 두부암, 자궁암, 직장암, 뇌종양, 항문부근암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 질암, 음문암종, 식도암, 소장암, 내분비선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 수뇨관암, 신장세포 암종, 신장골반 암종, 중추신경계(CNS central nervoussystem) 종양, 1차 CNS 림프종, 척수 종양, 뇌간 신경교종 또는 뇌하수체 선종일 수 있다. In the present invention, the cancer is breast cancer, ovarian cancer, colon cancer, stomach cancer, liver cancer, pancreatic cancer, cervical cancer, thyroid cancer, parathyroid cancer, lung cancer, non-small cell lung cancer, prostate cancer, gallbladder cancer, biliary tract cancer, non-Hodgkin's lymphoma, and Hodgkin's lymphoma. , blood cancer, bladder cancer, kidney cancer, melanoma, colon cancer, bone cancer, skin cancer, head cancer, uterine cancer, rectal cancer, brain tumor, perianal cancer, fallopian tube carcinoma, endometrial carcinoma, vaginal cancer, vulvar carcinoma, esophageal cancer, small intestine cancer, endocrine adenocarcinoma , adrenal cancer, soft tissue sarcoma, urethral cancer, penile cancer, ureteral cancer, renal cell carcinoma, renal pelvic carcinoma, CNS central nervous system tumor, primary CNS lymphoma, spinal cord tumor, brainstem glioma, or pituitary adenoma. .
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 환자로부터 수득된 시료를 포함하는 시료부, 상기 시료에 포함된 시료에서 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자를 검출하는 검출부; 및 상기 검출부로부터 수득된 환자의 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준과 정상인의 수준을 비교하는 비교부를 포함하고, 상기 비교부를 통해서 얻는 결과에 따라 암을 진단하는, 진단 장치 일 수 있다.According to another embodiment of the present invention, a sample unit including a sample obtained from a patient, a detection unit for detecting the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or a gene encoding the same in a sample included in the sample; And a comparison unit for comparing the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding the same in the patient obtained from the detection unit and the level of a normal person, and diagnosing cancer according to the result obtained through the comparison unit. can be a device
본 발명에서, 상기 비교부에서 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자가 검출된 경우 유방암으로 진단하는, 진단 장치일 수 있다.In the present invention, it may be a diagnosis device that diagnoses breast cancer when the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding it is detected by the comparison unit.
본 발명의 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드를 포함하는 바이오마커를 사용하는 경우, 암, 특히는 유방암을 조기에 간편하고 정확하게 진단할 수 있으며, 더 나아가서는 암의 병기를 진단할 수 있고, 치료 반응성 또는 치료 후 예후를 예측할 수 있다. When the biomarker comprising the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 of the present invention is used, cancer, particularly breast cancer, can be easily and accurately diagnosed at an early stage, and furthermore, the stage of cancer can be diagnosed, and treatment responsiveness can be improved. Or predict the prognosis after treatment.
도 1은 본 발명의 실시예 1에서 유방암 환자와 비 환자 대조군 사이에 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드의 타겟 펩티드를 이용한 Neurogenic locus notch homolog protein 1(NOTCH 1)의 바이오마커의 정량 결과를 바탕으로 한 수용자-조작 특성(ROC) 그래프를 나타낸 것이다.Figure 1 is based on the quantitative results of the biomarker of Neurogenic locus notch homolog protein 1 (NOTCH 1) using the target peptide of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 between breast cancer patients and non-patient controls in Example 1 of the present invention. Recipient-operating characteristic (ROC) graph is shown.
본 발명의 일 구현 예에 따르면, 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드; 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는, 암의 진단용 조성물에 관한 것이다. According to one embodiment of the present invention, the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2; Or, it relates to a composition for diagnosing cancer, including an agent for measuring the expression level of a gene encoding the same.
본 발명에서 상기 폴리펩티드의 발현 수준을 측정하는 제제는 Neurogenic locus notch homolog protein 1(NOTCH 1)의 발현 수준을 측정하는 제제일 수 있다. 상기 NOTCH 유전자는 단일-통과 막 횡단 수용체를 암호화하는 인간 유전자이다. In the present invention, the agent for measuring the expression level of the polypeptide may be an agent for measuring the expression level of Neurogenic locus notch homolog protein 1 (NOTCH 1). The NOTCH gene is a human gene encoding a single-pass transmembrane receptor.
Notch 1 막 횡단 단백질 패밀리의 구성원은 다중 표피 성장 인자-유사 (EGF) 반복으로 구성된 세포 외 도메인 및 다수의 상이한 도메인 유형으로 구성된 세포 내 도메인을 포함하는 구조적 특성을 공유한다. NOTCH 패밀리는 세포 운명 결정을 제어하여 다양한 발생 과정을 조절한다 NOTCH 신호 전달 네트워크는 물리적으로 인접한 세포 사이의 상호 작용을 조절하는 진화적으로 보존된 세포 간 신호 전달 경로이다. Members of the Notch 1 transmembrane protein family share structural properties that include an extracellular domain composed of multiple epidermal growth factor-like (EGF) repeats and an intracellular domain composed of a number of different domain types. The NOTCH family regulates various developmental processes by controlling cell fate decisions The NOTCH signaling network is an evolutionarily conserved intercellular signaling pathway that modulates interactions between physically adjacent cells.
본 발명에서 상기 Neurogenic locus notch homolog protein 1(NOTCH 1)은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열로 이루어질 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the Neurogenic locus notch homolog protein 1 (NOTCH 1) may consist of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, but is not limited thereto.
본 발명에서 진단의 대상이 되는 질환으로 상기 "암"은 포유류에서 전형적으로 조절되지 않는 세포 성장으로 특징 지어진 생리적 상태를 나타내거나 가리킨다. 본 발명에서 진단의 대상이 되는 암은 유방암, 난소암, 대장암, 위암, 간암, 췌장암, 자궁경부암, 갑상선암, 부갑상선암, 폐암, 비소세포성폐암, 전립선암, 담낭암, 담도암, 비호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 혈액암, 방광암, 신장암, 흑색종, 결장암, 골암, 피부암, 두부암, 자궁암, 직장암, 뇌종양, 항문부근암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 질암, 음문암종, 식도암, 소장암, 내분비선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 수뇨관암, 신장세포 암종, 신장골반 암종, 중추신경계(CNS central nervoussystem) 종양, 1차 CNS 림프종, 척수 종양, 뇌간 신경교종 또는 뇌하수체 선종일 수 있으나, 바람직하게는 유방암일 수 있다. As a disease to be diagnosed in the present invention, the term "cancer" refers to or refers to a physiological condition typically characterized by unregulated cell growth in mammals. The cancers to be diagnosed in the present invention are breast cancer, ovarian cancer, colon cancer, stomach cancer, liver cancer, pancreatic cancer, cervical cancer, thyroid cancer, parathyroid cancer, lung cancer, non-small cell lung cancer, prostate cancer, gallbladder cancer, biliary tract cancer, and non-Hodgkin's lymphoma. , Hodgkin's lymphoma, blood cancer, bladder cancer, kidney cancer, melanoma, colon cancer, bone cancer, skin cancer, head cancer, uterine cancer, rectal cancer, brain tumor, perianal cancer, fallopian tube carcinoma, endometrial carcinoma, vaginal cancer, vulvar carcinoma, esophageal cancer, small intestine Cancer, endocrine adenocarcinoma, adrenal cancer, soft tissue sarcoma, urethral cancer, penile cancer, ureteral cancer, renal cell carcinoma, renal pelvic carcinoma, CNS central nervous system tumor, primary CNS lymphoma, spinal cord tumor, brainstem glioma or pituitary gland It may be an adenoma, but preferably it may be breast cancer.
본 발명에서 상기 "진단"은 특정 질병 또는 질환에 대한 대상(subject)의 감수성(susceptibility)을 판정하는 것, 대상이 특정 질병 또는 질환을 현재 가지고 있는지 여부를 판정하는 것, 특정 질병 또는 질환에 걸린 대상의 예후(prognosis)(예컨대, 전-전이성 또는 전이성 암 상태의 동정, 암의 단계 결정 또는 치료에 대한 암의 반응성 결정)를 판정하는 것, 또는 테라메트릭스(therametrics)(예컨대, 치료 효능에 대한 정보를 제공하기 위하여 객체의 상태를 모니터링하는 것)을 포함한다. 본 발명의 목적상, 상기 진단은 상기한 암의 발병 여부 또는 발병 가능성(위험성)을 확인하는 것이다. In the present invention, the "diagnosis" refers to determining a subject's susceptibility to a specific disease or disorder, determining whether a subject currently has a specific disease or disorder, or suffering from a specific disease or disorder Determining the subject's prognosis (e.g., identifying pre-metastatic or metastatic cancer status, determining the staging of a cancer, or determining the responsiveness of a cancer to treatment), or using therametrics (e.g., determining the efficacy of a treatment). monitoring the state of an object to provide information). For the purpose of the present invention, the diagnosis is to determine whether or not the cancer has occurred or is likely to develop (risk).
본 발명에서 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드의 발현 수준을 측정하는 제제는 특별히 제한하지는 않으나, 예를 들면 상기 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체, 올리고펩티드, 리간드, PNA(peptide nucleic acid) 및 앱타머(aptamer)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.In the present invention, the agent for measuring the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 is not particularly limited, but examples include antibodies, oligopeptides, ligands, PNA (peptide nucleic acid) and apps that specifically bind to the polypeptide. It may include at least one selected from the group consisting of aptamers.
본 발명에 상기 "항체"는 항원과 특이적으로 결합하여 항원-항체 반응을 일으키는 물질을 가리킨다. 본 발명의 목적상, 항체는 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드에 대해 특이적으로 결합하는 항체를 의미한다.In the present invention, the "antibody" refers to a substance that specifically binds to an antigen and causes an antigen-antibody reaction. For the purposes of the present invention, an antibody refers to an antibody that specifically binds to the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2.
본 발명의 상기 항체는 다클론 항체, 단클론 항체 및 재조합 항체를 모두 포함한다. 상기 항체는 당업계에 널리 공지된 기술을 이용하여 용이하게 제조될 수 있다. 예를 들어, 다클론 항체는 상기 단백질의 항원을 동물에 주사하고 동물로부터 채혈하여 항체를 포함하는 혈청을 수득하는 과정을 포함하는 당업계에 널리 공지된 방법에 의해 생산될 수 있다. 이러한 다클론 항체는 염소, 토끼, 양, 원숭이, 말, 돼지, 소, 개 등의 임의의 동물로부터 제조될 수 있다. 또한, 단클론 항체는 당업계에 널리 공지된 하이브리도마 방법(hybridoma method; Kohler 및 Milstein (1976) European Journal of Immunology 6:511-519 참조), 또는 파지 항체 라이브러리 기술(Clackson et al, Nature, 352:624-628, 1991; Marks et al, J. Mol. Biol., 222:58, 1-597, 1991 참조)을 이용하여 제조될 수 있다. 상기 방법으로 제조된 항체는 겔 전기영동, 투석, 염 침전, 이온교환 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피 등의 방법을 이용하여 분리, 정제될 수 있다. 또한, 본 발명의 항체는 2개의 전장의 경쇄 및 2개의 전장의 중쇄를 갖는 완전한 형태뿐만 아니라, 항체 분자의 기능적인 단편을 포함한다. 항체 분자의 기능적인 단편이란, 적어도 항원 결합 기능을 보유하고 있는 단편을 의미하며, Fab, F(ab'), F(ab')2 및 Fv 등이 있다.The antibodies of the present invention include both polyclonal antibodies, monoclonal antibodies and recombinant antibodies. Such antibodies can be readily prepared using techniques well known in the art. For example, polyclonal antibodies can be produced by a method well known in the art, including a process of injecting an antigen of the protein into an animal and collecting blood from the animal to obtain serum containing the antibody. Such polyclonal antibodies can be prepared from any animal, such as goat, rabbit, sheep, monkey, horse, pig, cow, dog, and the like. In addition, monoclonal antibodies can be prepared using the hybridoma method well known in the art (see Kohler and Milstein (1976) European Journal of Immunology 6:511-519), or the phage antibody library technique (Clackson et al, Nature, 352). :624-628, 1991; Marks et al, J. Mol. Biol., 222:58, 1-597, 1991). Antibodies prepared by the above methods may be separated and purified using methods such as gel electrophoresis, dialysis, salt precipitation, ion exchange chromatography, and affinity chromatography. In addition, the antibodies of the present invention include functional fragments of antibody molecules as well as complete forms having two full-length light chains and two full-length heavy chains. A functional fragment of an antibody molecule means a fragment having at least an antigen-binding function, and includes Fab, F(ab'), F(ab')2, and Fv.
본 발명에 상기 "PNA(Peptide Nucleic Acid)"는 인공적으로 합성된, DNA 또는 RNA와 비슷한 중합체를 가리키며, 1991년 덴마크 코펜하겐 대학교의 Nielsen, Egholm, Berg와 Buchardt 교수에 의해 처음으로 소개되었다. DNA는 인산-리보스당 골격을 갖는데 반해, PNA는 펩티드 결합에 의해 연결된 반복된 N-(2-아미노에틸)-글리신 골격을 가지며, 이로 인해 DNA 또는 RNA에 대한 결합력과 안정성이 크게 증가되어 분자 생물학, 진단 분석 및 안티센스 치료법에 사용되고 있다. PNA는 문헌[Nielsen PE, Egholm M, Berg RH, Buchardt O (December 1991). "Sequence-selective recognition of DNA by strand displacement with a thymine-substituted polyamide". Science 254(5037): 1497-1500]에 상세하게 개시되어 있다.In the present invention, the "PNA (Peptide Nucleic Acid)" refers to an artificially synthesized polymer similar to DNA or RNA, and was first introduced in 1991 by Professors Nielsen, Egholm, Berg and Buchardt of the University of Copenhagen, Denmark. Whereas DNA has a phosphate-ribose backbone, PNA has a repeated N-(2-aminoethyl)-glycine backbone linked by peptide bonds, which greatly increases its binding force and stability to DNA or RNA, thereby greatly increasing molecular biology. , diagnostic assays and antisense therapies. PNA is described by Nielsen PE, Egholm M, Berg RH, Buchardt O (December 1991). "Sequence-selective recognition of DNA by strand displacement with a thymine-substituted polyamide". Science 254(5037): 1497-1500.
본 발명에서 상기 "앱타머"는 올리고핵산 또는 펩티드 분자이며, 앱타머의 일반적인 내용은 문헌[Bock LC et al., Nature 355(6360):5646(1992); Hoppe-Seyler F, Butz K "Peptide aptamers: powerful new tools for molecular medicine". J Mol Med. 78(8):42630(2000); Cohen BA, Colas P, Brent R. "An artificial cell-cycle inhibitor isolated from a combinatorial library". Proc Natl Acad Sci USA. 95(24): 142727(1998)]에 상세하게 개시되어 있다.In the present invention, the "aptamer" is an oligonucleic acid or peptide molecule, and a general description of the aptamer is described in Bock LC et al., Nature 355(6360):5646(1992); Hoppe-Seyler F, Butz K "Peptide aptamers: powerful new tools for molecular medicine". J Mol Med. 78(8):42630 (2000); Cohen BA, Colas P, Brent R. "An artificial cell-cycle inhibitor isolated from a combinatorial library". Proc Natl Acad Sci USA. 95(24): 142727 (1998).
본 발명에서 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 제제는 상기 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머, 프로브 및 안티센스 뉴클레오티드로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다. In the present invention, the agent for measuring the expression level of the gene encoding the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 may include at least one selected from the group consisting of primers, probes, and antisense nucleotides that specifically bind to the gene. .
본 발명에서 상기 "프라이머"는 표적 유전자 서열을 인지하는 단편으로서, 정방향 및 역방향의 프라이머 쌍을 포함하나, 바람직하게는, 특이성 및 민감성을 가지는 분석 결과를 제공하는 프라이머 쌍이다. 프라이머의 핵산 서열이 시료 내 존재하는 비-표적 서열과 불일치하는 서열이어서, 상보적인 프라이머 결합 부위를 함유하는 표적 유전자 서열만 증폭하고 비특이적 증폭을 유발하지 않는 프라이머일 때, 높은 특이성이 부여될 수 있다.In the present invention, the "primer" is a fragment that recognizes a target gene sequence, and includes a forward and reverse primer pair, preferably a primer pair that provides an analysis result having specificity and sensitivity. High specificity can be imparted when the nucleic acid sequence of the primer is a sequence that is inconsistent with the non-target sequence present in the sample, so that the primer amplifies only the target gene sequence containing a complementary primer binding site and does not cause non-specific amplification. .
본 발명에서 상기 "프로브"란 시료 내의 검출하고자 하는 표적 물질과 특이적으로 결합할 수 있는 물질을 의미하며, 상기 결합을 통하여 특이적으로 시료 내의 표적 물질의 존재를 확인할 수 있는 물질을 의미한다. 프로브의 종류는 당업계에서 통상적으로 사용되는 물질로서 제한은 없으나, 바람직하게는 PNA(peptide nucleic acid), LNA(locked nucleic acid), 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, RNA 또는 DNA일 수 있으며, 가장 바람직하게는 PNA이다. 보다 구체적으로, 상기 프로브는 바이오 물질로서 생물에서 유래되거나 이와 유사한 것 또는 생체 외에서 제조된 것을 포함하는 것으로, 예를 들어, 효소, 단백질, 항체, 미생물, 동식물 세포 및 기관, 신경세포, DNA, 및 RNA일 수 있으며, DNA는 cDNA, 게놈 DNA, 올리고뉴클레오타이드를 포함하며, RNA는 게놈 RNA, mRNA, 올리고뉴클레오타이드를 포함하며, 단백질의 예로는 항체, 항원, 효소, 펩티드 등을 포함할 수 있다.In the present invention, the "probe" means a substance that can specifically bind to a target substance to be detected in a sample, and means a substance that can specifically confirm the presence of a target substance in a sample through the binding. The type of probe is not limited as a material commonly used in the art, but preferably may be peptide nucleic acid (PNA), locked nucleic acid (LNA), peptide, polypeptide, protein, RNA or DNA, and most preferably is a PNA. More specifically, the probe is a biomaterial, including one derived from or similar to a living organism or manufactured in vitro, for example, enzymes, proteins, antibodies, microorganisms, animal and plant cells and organs, nerve cells, DNA, and It may be RNA, DNA includes cDNA, genomic DNA, and oligonucleotides, RNA includes genomic RNA, mRNA, and oligonucleotides, and examples of proteins may include antibodies, antigens, enzymes, peptides, and the like.
본 발명에서 상기 "LNA(Locked nucleic acids)"란, 2'-O, 4'-C 메틸렌 브릿지를 포함하는 핵산 아날로그를 의미한다 [J Weiler, J Hunziker and J Hall Gene Therapy (2006) 13, 496.502]. LNA 뉴클레오사이드는 DNA와 RNA의 일반적 핵산 염기를 포함하며, Watson-Crick 염기 쌍 규칙에 따라 염기 쌍을 형성할 수 있다. 하지만, 메틸렌 브릿지로 인한 분자의 'locking'으로 인해, LNA는 Watson-Crick 결합에서 이상적 형상을 형성하지 못하게 된다. LNA가 DNA 또는 RNA 올리고뉴클레오티드에 포함되면, LNA는 보다 빠르게 상보적 뉴클레오티드 사슬과 쌍을 이루어 이중 나선의 안정성을 높일 수 있다. 본 발명에서 상기 "안티센스"는 안티센스 올리고머가 왓슨-크릭 염기쌍 형성에 의해 RNA 내의 표적 서열과 혼성화되어, 표적서열 내에서 전형적으로 mRNA와 RNA:올리고머 헤테로이중체의 형성을 허용하는, 뉴클레오티드 염기의 서열 및 서브유닛간 백본을 갖는 올리고머를 의미한다. 올리고머는 표적 서열에 대한 정확한 서열 상보성 또는 근사 상보성을 가질 수 있다.In the present invention, the "LNA (Locked nucleic acids)" means a nucleic acid analog containing a 2'-O, 4'-C methylene bridge [J Weiler, J Hunziker and J Hall Gene Therapy (2006) 13, 496.502 ]. LNA nucleosides contain the common nucleic acid bases of DNA and RNA, and can base pair according to the Watson-Crick base pairing rules. However, due to molecular 'locking' due to the methylene bridge, the LNA does not form an ideal shape in the Watson-Crick bond. When LNAs are included in DNA or RNA oligonucleotides, they can more rapidly pair with complementary nucleotide chains to increase the stability of the double helix. In the present invention, the "antisense" refers to a sequence of nucleotide bases in which an antisense oligomer is hybridized with a target sequence in RNA by Watson-Crick base pairing, allowing formation of a typical mRNA and RNA: oligomer heteroduplex in the target sequence and an oligomer having an inter-subunit backbone. Oligomers may have exact sequence complementarity or near complementarity to the target sequence.
본 발명에 따른 폴리펩티드의 아미노산 서열 정보는 서열번호 2로 표시되므로, 당업자라면 이를 바탕으로 상기 폴리펩티드를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머, 프로브 또는 안티센스 뉴클레오티드를 용이하게 디자인할 수 있을 것이다. Since the amino acid sequence information of the polypeptide according to the present invention is represented by SEQ ID NO: 2, those skilled in the art will be able to easily design primers, probes, or antisense nucleotides specifically binding to the gene encoding the polypeptide based on this information.
본 발명의 다른 구현 예에 따르면, 본 발명에 따른 암의 진단용 조성물을 포함하는 암의 진단용 키트에 관한 것이다. According to another embodiment of the present invention, it relates to a kit for diagnosing cancer comprising the composition for diagnosing cancer according to the present invention.
본 발명에서는 상기 진단용 키트를 이용하여 암 질환의 발병 여부, 발병 가능성, 치료 반응성, 예후, 병기, 재발 가능성 등을 진단할 수 있다. In the present invention, it is possible to diagnose cancer disease onset, onset possibility, treatment responsiveness, prognosis, stage, recurrence possibility, etc., by using the diagnostic kit.
본 발명에서 상기 진단의 대상이 되는 상기 암에 관한 기재는 앞서 기재된 바와 중복되어 명세서의 과도한 복잡을 피하기 위하여 이하 그 자세한 기재를 생략한다.In the present invention, the description of the cancer, which is the subject of the diagnosis, overlaps with that described above, and thus the detailed description thereof is omitted below to avoid excessive complexity of the specification.
본 발명에서 상기 키트는 RT-PCR 키트, DNA 칩 키트, ELISA 키트, 단백질 칩 키트, 래피드(rapid) 키트 또는 MRM(Multiple reaction monitoring) 키트일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the kit may be an RT-PCR kit, a DNA chip kit, an ELISA kit, a protein chip kit, a rapid kit, or a multiple reaction monitoring (MRM) kit, but is not limited thereto.
본 발명의 상기 암의 진단용 키트는 분석 방법에 적합한 한 종류 또는 그 이상의 다른 구성 성분 조성물, 용액 또는 장치를 더 포함할 수 있다.The kit for diagnosing cancer of the present invention may further include one or more other component compositions, solutions, or devices suitable for the analysis method.
예를 들면, 본 발명에서 상기 암의 진단용 키트는 역전사 중합효소반응을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 더 포함할 수 있다. 역전사 중합효소반응 키트는 마커 단백질을 코딩하는 유전자에 대해 특이적인 프라이머 쌍을 포함한다. 프라이머는 상기 유전자의 핵산서열에 특이적인 서열을 가지는 뉴클레오티드로서, 약 7 bp 내지 50 bp의 길이, 보다 바람직하게는 약 10 bp 내지 30 bp의 길이를 가질 수 있다. 또한 대조군 유전자의 핵산 서열에 특이적인 프라이머를 포함할 수 있다. 그 외 역전사 중합효소반응 키트는 테스트 튜브 또는 다른 적절한 용기, 반응 완충액(pH 및 마그네슘 농도는 다양), 데옥시뉴클레오타이드(dNTPs), Taq-폴리머라아제 및 역전사효소와 같은 효소, DNase, RNase 억제제 DEPC-수(DEPC-water), 멸균수 등을 포함할 수 있다.For example, the kit for diagnosing cancer in the present invention may further include essential elements necessary for carrying out a reverse transcription polymerase reaction. The reverse transcription polymerase reaction kit contains a pair of primers specific for a gene encoding a marker protein. The primer is a nucleotide having a sequence specific to the nucleic acid sequence of the gene, and may have a length of about 7 bp to 50 bp, more preferably about 10 bp to 30 bp. In addition, a primer specific for the nucleic acid sequence of the control gene may be included. Other reverse transcription polymerase reaction kits contain a test tube or other suitable container, reaction buffer (with varying pH and magnesium concentration), deoxynucleotides (dNTPs), enzymes such as Taq-polymerase and reverse transcriptase, DNase and RNase inhibitor DEPC. -Water (DEPC-water), sterilized water, etc. may be included.
또한, 본 발명의 진단용 키트는 DNA 칩을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함할 수 있다. DNA 칩 키트는 유전자 또는 그의 단편에 해당하는 cDNA 또는 올리고뉴클레오티드(oligonucleotide)가 부착되어 있는 기판, 및 형광표지 프로브를 제작하기 위한 시약, 제제, 효소 등을 포함할 수 있다. 또한 기판은 대조군 유전자 또는 그의 단편에 해당하는 cDNA 또는 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다.In addition, the diagnostic kit of the present invention may include essential elements necessary for performing DNA chip. The DNA chip kit may include a substrate to which cDNA or oligonucleotides corresponding to genes or fragments thereof are attached, and reagents, reagents, enzymes, and the like for producing fluorescently labeled probes. In addition, the substrate may include a cDNA or oligonucleotide corresponding to a control gene or a fragment thereof.
또한, 본 발명의 진단용 키트는 ELISA를 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함할 수 있다. ELISA 키트는 상기 단백질에 대해 특이적인 항체를 포함한다. 항체는 마커 단백질에 대한 특이성 및 친화성이 높고 다른 단백질에 대한 교차 반응성이 거의 없는 항체로, 단클론 항체, 다클론 항체 또는 재조합 항체이다. 또한 ELISA 키트는 대조군 단백질에 특이적인 항체를 포함할 수 있다. 그 외 ELISA 키트는 결합된 항체를 검출할 수 있는 시약, 예를 들면, 표지된 2차 항체, 발색단(chromophores), 효소(예: 항체와 컨주게이트됨) 및 그의 기질 또는 항체와 결합할 수 있는 다른 물질 등을 포함할 수 있다.In addition, the diagnostic kit of the present invention may include essential elements required to perform ELISA. ELISA kits contain antibodies specific for the protein. An antibody is an antibody that has high specificity and affinity for a marker protein and little cross-reactivity to other proteins, and is a monoclonal antibody, polyclonal antibody, or recombinant antibody. ELISA kits may also include antibodies specific for a control protein. Other ELISA kits include reagents capable of detecting bound antibodies, such as labeled secondary antibodies, chromophores, enzymes (eg, conjugated with antibodies) and substrates thereof or those capable of binding the antibody. may contain other substances and the like.
본 발명의 진단용 키트에서 항원-항체 결합반응을 위한 고정체로는 니트로셀룰로오즈 막, PVDF 막, 폴리비닐(polyvinyl) 수지 또는 폴리스티렌(polystyrene) 수지로 합성된 웰 플레이트(Well plate), 유리로 된 슬라이드 글래스 등이 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the diagnostic kit of the present invention, the fixture for the antigen-antibody binding reaction includes a nitrocellulose film, a PVDF film, a well plate made of polyvinyl resin or polystyrene resin, and a slide glass made of glass. The like may be used, but is not limited thereto.
또한, 본 발명의 진단용 키트에서 2차 항체의 표지체는 발색 반응을 하는 통상의 발색제가 바람직하며, HRP(horseradish peroxidase), 염기성 탈인산화효소(alkaline phosphatase), 콜로이드 골드(coloid gold), FITC(폴리 L-라이신-플루오르세인 아이소티오시아네이트), RITC(로다민-B-아이소티오시아네이트) 등의 형광물질(fluorescein) 및 색소(dye) 등의 표지체가 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. In addition, the marker of the secondary antibody in the diagnostic kit of the present invention is preferably a conventional colorant that reacts to color, and HRP (horseradish peroxidase), alkaline phosphatase, colloid gold, FITC ( Labels such as fluorescein and dyes such as poly L-lysine-fluorscein isothiocyanate) and RITC (rhodamine-B-isothiocyanate) may be used, but are not limited thereto .
또한, 본 발명의 진단용 키트에서 발색을 유도하기 위한 발색 기질은 발색 반응을 하는 표지체에 따라 사용하는 것이 바람직하며, TMB(3,3',5,5'-테트라메틸 베지딘), ABTS[2,2'-아지노-비스(3-에틸벤조티아졸린-6-설폰산)], OPD(o-페닐렌다이아민) 등을 사용할 수 있다. 이때, 발색기질은 완충용액(0.1 M NaAc, pH 5.5)에 용해된 상태로 제공되는 것이 더욱 바람직하다. TMB와 같은 발색기질은 이차항체 접합체의 표지체로 사용된 HRP에 의해 분해되어 발색 침적체를 생성하고, 이 발색 침적체의 침적 정도를 육안으로 확인함으로써 상기 마커 단백질들의 존재 유무를 검출한다.In addition, the chromogenic substrate for inducing color development in the diagnostic kit of the present invention is preferably used according to a marker that reacts to color development, and TMB (3,3',5,5'-tetramethyl bezidine), ABTS [ 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)], OPD (o-phenylenediamine), and the like can be used. At this time, it is more preferable that the color-developing substrate is provided in a dissolved state in a buffer solution (0.1 M NaAc, pH 5.5). A chromogenic substrate such as TMB is degraded by HRP used as a marker for the secondary antibody conjugate to generate a chromogenic deposit, and the presence or absence of the marker proteins is detected by visually checking the degree of chromogenic deposit.
본 발명의 진단용 키트에서 세척액은 인산염 완충용액, NaCl 및 트윈 20(Tween 20)을 포함하는 것이 바람직하며, 0.02 M 인산염 완충용액, 0.13 M NaCl, 및 0.05% 트윈 20으로 구성된 완충용액(PBST)이 더욱 바람직하다. 세척액은 항원-항체 결합반응 후 항원-항체 결합체에 2차 항체를 반응시킨 다음 적당량을 고정체에 첨가하여 3 내지 6회 세척한다. 반응 정지용액은 황산 용액(H2SO4)이 바람직하게 사용될 수 있다.In the diagnostic kit of the present invention, the washing solution preferably includes a phosphate buffer solution, NaCl and Tween 20, and a buffer solution (PBST) composed of 0.02 M phosphate buffer solution, 0.13 M NaCl, and 0.05% Tween 20 is more preferable The washing solution is washed 3 to 6 times by reacting the secondary antibody with the antigen-antibody conjugate after the antigen-antibody reaction, and then adding an appropriate amount to the stationary body. The reaction stop solution is a sulfuric acid solution (H 2 SO 4 ) may be preferably used.
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 목적하는 개체로부터 분리된 생물학적 시료에서 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드; 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는 암의 진단을 위한 정보 제공 방법에 관한 것이다. According to another embodiment of the present invention, the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 in a biological sample isolated from a subject of interest; Or it relates to a method for providing information for diagnosis of cancer comprising measuring the expression level of a gene encoding the same.
본 발명에서 상기 "목적하는 개체"란, 상기 암의 발병 여부가 불확실한 개체로, 발병 가능성이 높은 개체를 의미한다. In the present invention, the "object of interest" refers to an individual with a high possibility of developing the cancer, as an individual whose onset of the cancer is uncertain.
본 발명에서 상기 "생물학적 시료"는 개체로부터 얻어지거나 개체로부터 유래된 임의의 물질, 생물학적 체액, 조직 또는 세포를 의미하는 것으로, 예를 들면, 전혈(whole blood), 백혈구(leukocytes), 말초혈액 단핵 세포(peripheral blood mononuclear cells), 백혈구 연층(buffy coat), 혈장(plasma), 혈청(serum), 객담(sputum), 눈물(tears), 점액(mucus), 세비액(nasal washes), 비강 흡인물(nasal aspirate), 호흡(breath), 소변(urine), 정액(semen), 침(saliva), 복강 세척액(peritoneal washings), 복수(ascites), 낭종액(cystic fluid), 뇌척수막 액(meningeal fluid), 양수(amniotic fluid), 선액(glandular fluid), 췌장액(pancreatic fluid), 림프액(lymph fluid), 흉수(pleural fluid), 유두 흡인물(nipple aspirate), 기관지 흡인물(bronchial aspirate), 활액(synovial fluid), 관절 흡인물(joint aspirate), 기관 분비물(organ secretions), 세포(cell), 세포 추출물(cell extract) 또는 뇌척수액(cerebrospinal fluid)을 포함할 수 있지만, 바람직하게는 발병 가능성이 높은 환자의 피부를 절개하지 않고 중공침 등을 생체 내 기관에 자입하여 병리조직학적 검사용으로 채취한 액체 생검(예를 들면, 환자의 조직, 세포, 혈액, 혈청, 혈장, 타액, 객담 또는 복수(ascites) 등)일 수 있다.In the present invention, the "biological sample" refers to any material, biological fluid, tissue, or cell obtained from or derived from an individual, for example, whole blood, leukocytes, peripheral blood mononuclear Peripheral blood mononuclear cells, buffy coat, plasma, serum, sputum, tears, mucus, nasal washes, nasal aspirates (nasal aspirate), breath, urine, semen, saliva, peritoneal washings, ascites, cystic fluid, meningeal fluid , amniotic fluid, glandular fluid, pancreatic fluid, lymph fluid, pleural fluid, nipple aspirate, bronchial aspirate, synovial fluid fluid), joint aspirate, organ secretions, cells, cell extracts, or cerebrospinal fluid, but preferably for patients with a high risk of developing the disease. Liquid biopsy (e.g., patient's tissue, cells, blood, serum, plasma, saliva, sputum, or ascites) taken for histopathological examination by inserting a hollow needle into an organ in vivo without incision of the skin etc.) can be
본 발명에서는 상기와 같이 분리된 생물학적 시료에서 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함할 수 있다.In the present invention, the step of measuring the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding the polypeptide in the biological sample separated as described above may be included.
본 발명에서 상기 발현 수준을 측정하는 단계는 Neurogenic locus notch homolog protein 1(NOTCH 1) 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 단계일 수 있다. In the present invention, the step of measuring the expression level may be a step of measuring the expression level of Neurogenic locus notch homolog protein 1 (NOTCH 1) or a gene encoding the same.
본 발명에서 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드의 발현 수준을 측정하는 제제는 특별히 제한하지는 않으나, 예를 들면 상기 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체, 올리고펩티드, 리간드, PNA(peptide nucleic acid) 및 앱타머(aptamer)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.In the present invention, the agent for measuring the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 is not particularly limited, but examples include antibodies, oligopeptides, ligands, PNA (peptide nucleic acid) and apps that specifically bind to the polypeptide. It may include at least one selected from the group consisting of aptamers.
본 발명에 상기 폴리펩티드의 발현 수준을 측정 또는 비교 분석 방법으로는 단백질 칩 분석, 면역측정법, 리간드 바인딩 어세이, MALDI-TOF(Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) 분석, SELDI-TOF(Sulface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) 분석, 방사선 면역분석, 방사 면역 확산법, 오우크테로니 면역 확산법, 로케트 면역전기영동, 조직면역 염색, 보체 고정 분석법, 2차원 전기영동 분석, 액상 크로마토그래피-질량분석(liquid chromatography-Mass Spectrometry, LC-MS), LC-MS/MS(liquid chromatography-Mass Spectrometry/ Mass Spectrometry), 웨스턴 블랏팅 및 ELISA(enzyme linked immunosorbentassay) 등이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, methods for measuring or comparing the expression level of the polypeptide include protein chip analysis, immunoassay, ligand binding assay, MALDI-TOF (Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) analysis, SELDI-TOF ( Sulface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) analysis, radiation immunoassay, radioimmunodiffusion method, Oukteroni immunodiffusion method, rocket immunoelectrophoresis, tissue immunostaining, complement fixation assay, two-dimensional electrophoretic assay, liquid phase chromatography There are graph-mass spectrometry (liquid chromatography-Mass Spectrometry, LC-MS), LC-MS/MS (liquid chromatography-Mass Spectrometry/ Mass Spectrometry), Western blotting, and ELISA (enzyme linked immunosorbentassay), but are not limited thereto no.
본 발명에서 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드의 발현 수준을 측정 또는 비교 분석 방법으로는 다중 반응 모니터링 (multiple reaction monitoring; MRM) 방법에 의할 수 있다.In the present invention, as a method for measuring or comparing the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2, a multiple reaction monitoring (MRM) method may be used.
본 발명에서 상기 다중 반응 모니터링 방법은 질량분석기 (mass-spectrometry), 바람직하게는 삼중 사극자 질량분석기 (triple quadrupole mass-spectrometry)를 이용하여 수행될 수 있다. In the present invention, the multiple reaction monitoring method may be performed using mass-spectrometry, preferably triple quadrupole mass-spectrometry.
본 발명에서 질량분석기 (mass-spectrometry)를 이용한 다중 반응 모니터링 (multiple reaction monitoring; MRM) 방법은 특정 분석물질을 선택적으로 분리하여 검출하고 정량하여 그 농도변화를 모니터링할 수 있는 분석기술이다. MRM은 생체 시료 중에 존재하는 미량의 바이오마커와 같은 물질을 정량적으로 정확하게 다중 측정할 수 있는 방법으로 제1 질량필터 (Q1)를 이용하여 이온화원에서 생성된 이온 단편들 중 어미이온을 선택적으로 충돌관으로 전달한다. 이어 충돌관에 도달한 어미이온은 내부 충돌기체와 충돌하여, 쪼개져 딸이온을 생성하여 제2 질량 필터 (Q2)로 보내지고, 여기서 특징적인 이온만이 검출부로 전달된다. 이런 방식으로 목적하는 성분의 정보만을 검출할 수 있는 선택성 및 민감도가 높은 분석방법이다. MRM은 작은 분자의 정량분석에 활용되어 특정 유전병을 진단하는데 쓰이고 있다. MRM 방법은 다수의 펩티드를 동시에 측정하기에 용이하며, 항체가 없이 정상인과 암환자 사이에서 단백질 진단 마커 후보들의 상대적 농도차를 확인할 수 있다는 장점이 있다. 또한 민감도와 선택성이 탁월하여 특히, 질량분석기를 이용한 프로테옴 분석에서 혈액 내에 있는 복잡한 단백질과 펩티드의 분석을 위해 MRM 분석방법이 도입되고 있다(Anderson L. et al., Mol CellProteomics, 5: 375-88, 2006; DeSouza, L. V. et al., Anal. Chem., 81: 3462-70, 2009).In the present invention, the multiple reaction monitoring (MRM) method using mass-spectrometry is an analysis technique capable of selectively separating, detecting, and quantifying a specific analyte and monitoring the concentration change. MRM is a method that can quantitatively and accurately multi-measure substances such as a small amount of biomarkers present in a biological sample. Using the first mass filter (Q1), parent ions among ion fragments generated in an ionization source are selectively collided with each other. delivered to the tube Subsequently, the mother ions that have reached the collision tube collide with the internal collider gas, are split to generate daughter ions, and are sent to the second mass filter (Q2), where only characteristic ions are transferred to the detector. In this way, it is an analysis method with high selectivity and sensitivity that can detect only the information of the target component. MRM is used for quantitative analysis of small molecules and is used to diagnose specific genetic diseases. The MRM method is advantageous in that it is easy to simultaneously measure a plurality of peptides, and it is possible to confirm the relative concentration difference of protein diagnostic marker candidates between a normal person and a cancer patient without an antibody. In addition, because of its excellent sensitivity and selectivity, MRM analysis is being introduced for the analysis of complex proteins and peptides in blood, especially in proteome analysis using mass spectrometry (Anderson L. et al., Mol CellProteomics, 5: 375-88 , 2006; DeSouza, L. V. et al., Anal. Chem., 81: 3462-70, 2009).
본 발명에서 상기 다중 반응 모니터링 방법에 의해 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드의 발현 수준의 측정을 할 수 있다.In the present invention, the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 can be measured by the multiple reaction monitoring method.
본 발명에서 상기 다중 반응 모니터링 방법에 의해 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드의 발현 수준을 분석하기 위하여, 상기 선정된 타겟 펩티드에서의 어미이온/딸이온 쌍을 선정할 수 있고, 이때 어미이온/딸이온 쌍의 정보는 하기 표 1에 나타낸 바와 같으나, 이에 제한되는 것은 아니다 In the present invention, in order to analyze the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 by the multiple reaction monitoring method, it is possible to select a parent ion/daughter ion pair in the selected target peptide. The pair information is as shown in Table 1 below, but is not limited thereto.
(서열번호 2)NSSFHFLR
(SEQ ID NO: 2)
본 발명에서 폴리펩티드는 Neurogenic locus notch homolog protein 1(NOTCH 1)일 수 있다. 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드의 타겟 펩티드를 이용하여 목적하는 개체의 생물학적 시료 속의 Neurogenic locus notch homolog protein 1(NOTCH 1)의 발현 수준을 측정할 수 있다.In the present invention, the polypeptide may be Neurogenic locus notch homolog protein 1 (NOTCH 1). The expression level of Neurogenic locus notch homolog protein 1 (NOTCH 1) in a biological sample of a subject can be measured using the target peptide of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2.
본 발명에서는 상기 Neurogenic locus notch homolog protein 1(NOTCH 1)을 검출하기 위하여, 상기한 각각의 단백질의 타겟 펩티드 중 일부 아미노산이 안정한 동위원소로 치환된 펩티드를 합성하고, 다중 반응 모니터링 분석 시 내부 표준 물질로 사용하면 상기 단백질의 혈액 내 절대량도 측정할 수 있어 분석의 정확도를 더욱 높일 수 있다. In the present invention, in order to detect the Neurogenic locus notch homolog protein 1 (NOTCH 1), peptides in which some amino acids of the target peptides of each of the above proteins are substituted with stable isotopes are synthesized, and an internal standard material is used for multiple reaction monitoring analysis When used as , the absolute amount of the protein in the blood can be measured, further increasing the accuracy of the analysis.
본 발명에 있어서 내부 표준 물질은 상기 다중 반응 모니터링 분석 시 일반적으로 사용되는 임의의 내부 표준 물질이 사용될 수 있으나, 예를 들어, 대장균 베타 갈락토시다아제가 사용될 수 있다. 대장균 베타 갈락토시다아제를 대표하는 타겟 펩티드는 서열번호 3으로 표시되는 폴리펩티드로 이루어지며 어미이온과 딸이온은 각각 542.3 m/z 와 636.3 m/z 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. In the present invention, any internal standard material generally used in the multiple reaction monitoring analysis may be used as the internal standard material, but, for example, E. coli beta galactosidase may be used. The target peptide representing E. coli beta-galactosidase consists of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 3, and the mother ion and daughter ion may be 542.3 m/z and 636.3 m/z, respectively, but are not limited thereto.
또한, 본 발명에서 상기 Neurogenic locus notch homolog protein 1(NOTCH 1)의 혈액 내 절대량을 측정하기 위하여 타겟 펩티드의 일부 아미노산이 안정한 동위원소로 치환된 특정 펩티드를 내부 표준물질로서 합성하는 경우, 동위 원소로 치환된 아미노산은 리신(Lysine)이나 아르기닌(Arginine)이 바람직하나 이에 제한되는 것은 아니다. 여기서 합성된 펩티드는 95% 이상 순수 분리된 펩티드를 사용하는 것이 바람직하다.In addition, in the present invention, in order to measure the absolute amount of the Neurogenic locus notch homolog protein 1 (NOTCH 1) in blood, when synthesizing a specific peptide in which some amino acids of the target peptide are substituted with stable isotopes as an internal standard, The substituted amino acid is preferably lysine or arginine, but is not limited thereto. As the peptide synthesized here, it is preferable to use a 95% or more pure isolated peptide.
한편, 본 발명에서 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 제제는 상기 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머, 프로브 및 안티센스 뉴클레오티드로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.On the other hand, in the present invention, the agent for measuring the expression level of the gene encoding the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 may include at least one selected from the group consisting of primers, probes, and antisense nucleotides that specifically bind to the gene. can
본 발명에 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 존재 여부와 발현 정도를 확인하는 과정으로 mRNA의 양을 측정하는 분석 방법으로는 역전사 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사 중합효소반응(Competitive RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소반응(Real-time RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA; RNase protection assay), 노던 블랏팅(Northern blotting), DNA 칩 등이 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. As an analysis method for measuring the amount of mRNA in the process of confirming the presence and expression level of the gene encoding the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 in the present invention, reverse transcription polymerase reaction (RT-PCR), competitive reverse transcription polymerase reaction (Competitive RT-PCR), real-time reverse transcription polymerase reaction (Real-time RT-PCR), RNase protection assay (RPA; RNase protection assay), Northern blotting, DNA chip, etc., but are not limited thereto no.
본 발명에서 목적하는 개체의 생물학적 시료에 대하여 측정된 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준이 정상 대조군에 비하여 증가하거나 감소한 경우, 상기 암의 발병 가능성이 높은 것으로 예측할 수 있다. When the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding the same measured in a biological sample of a subject of interest in the present invention is increased or decreased compared to a normal control group, it can be predicted that the possibility of developing the cancer is high.
본 발명에서 목적하는 개체의 생물학적 시료에 대하여 측정된 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하여 치료 반응성, 바람직하게는 화학적 항암 치료 또는 면역 치료에 대한 반응성을 예측할 수 있다. Treatment responsiveness, preferably responsiveness to chemotherapy or immunotherapy, can be predicted by measuring the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding it measured in a biological sample of a subject of interest in the present invention. .
본 발명에서 목적하는 개체의 생물학적 시료에 대하여 측정된 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하여 상기 개체의 예후, 바람직하게는 외과적 수술 후 예후를 예측할 수 있다. 여기서 상기 목적하는 개체는 암이 발병하여 외과적 절제 수술을 받은 개체일 수 있다. In the present invention, by measuring the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding the polypeptide measured in a biological sample of the subject of interest, the prognosis of the subject, preferably the prognosis after surgical operation can be predicted. Here, the target individual may be an individual who has developed cancer and has undergone surgical resection.
본 발명에서 목적하는 개체의 생물학적 시료에 대하여 측정된 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하여 상기 개체에서 암의 병기를 예측할 수 있다. In the present invention, the stage of cancer in the subject can be predicted by measuring the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding the polypeptide measured in a biological sample of the subject of interest.
본 발명에서 상기 "병기(stage)"란 암세포가 퍼진 정도, 암의 진행 단계를 의미하는 것으로, 암의 진행상황에 따른 국제적분류는 일반적으로 TNM 병기 분류에 따른다. 여기서 'T(Tumor Size)'는 원발 종양의 크기에 따른 분류이고, 'N(Lymph Node)'은 림프절 전이 정도에 따른 분류이며, 'M(Metastasis)'은 다른 장기로의 전이 여부에 따른 분류에 해당한다. T, N, M에 있어서 상세 분류는 하기 표 2와 같으며 이에 따른 암의 병기 분류는 하기 표 3과 같다. In the present invention, the "stage" refers to the degree of spread of cancer cells and the stage of cancer progression, and international classification according to the progress of cancer generally follows the TNM stage classification. Here, 'T (Tumor Size)' is a classification according to the size of the primary tumor, 'N (Lymph Node)' is a classification according to the degree of lymph node metastasis, and 'M (Metastasis)' is a classification according to whether or not it has metastasized to other organs. corresponds to The detailed classification of T, N, and M is shown in Table 2 below, and the stage classification of cancer according to this is shown in Table 3 below.
(T 병기)
Size of the primary tumor
(T stage)size of primary tumor
(T stage)
Size of the primary tumor
(T stage)
(N 병기)
Lymph node status
(N stage)Lymph node metastasis
(stage N)
Lymph node status
(N stage)
(M 병기)
Distant metastasis
(M stage)Distant metastasis
(stage M)
Distant metastasis
(M stage)
본 발명에서 목적하는 개체의 생물학적 시료에 대하여 측정된 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하여 암의 재발 가능성을 예측할 수 있다. The possibility of cancer recurrence can be predicted by measuring the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding the polypeptide measured in a biological sample of a subject of interest in the present invention.
본 발명에서 상기 암에 관한 기재는 앞서 기재된 바와 중복되어 명세서의 과도한 복잡을 피하기 위하여 이하 그 자세한 기재를 생략한다. In the present invention, the description of the cancer is duplicated with the previous description, and the detailed description thereof is omitted below to avoid excessive complexity of the specification.
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, (a) 암 개체로부터 분리한 시료 또는 암 질환 동물 모델에 후보 약제를 처리하는 단계; 및 According to another embodiment of the present invention, (a) treating a sample isolated from a cancer subject or a cancer disease animal model with a candidate drug; and
(b) 상기 후보 약제가 처리된 시료 또는 암 질환 동물 모델에서 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 암의 예방 또는 치료용 약물을 스크리닝하는 방법에 관한 것이다. (b) a method for screening a drug for preventing or treating cancer, comprising measuring the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding the polypeptide in a sample treated with the candidate drug or in a cancer animal model; It is about.
본 발명에서 상기 시료 및 상기 암에 관한 기재는 앞서 기재된 바와 중복되어 명세서의 과도한 복잡을 피하기 위하여 이하 그 자세한 기재를 생략한다. In the present invention, the description of the sample and the cancer is duplicated with the previous description, so that detailed description thereof is omitted below to avoid excessive complexity of the specification.
본 발명에서 이들 생물학적 시료를 조작하거나 조작하지 않은 상태로 암의 예방 또는 치료용 후보 약제와 반응시킬 수 있다. In the present invention, these biological samples can be reacted with candidate drugs for preventing or treating cancer with or without manipulation.
본 발명에 상기 "암 질환 동물 모델"이란 인간을 제외한 동물로서, 암의 병리학적 상태에 있다고 통상의 기술자가 판단할 수 있는 상태에 있는 동물을 의미한다. In the present invention, the term "cancer disease animal model" refers to an animal other than humans, which is in a condition that a person skilled in the art can determine to be in a pathological state of cancer.
본 발명에서는 상기 암 개체로부터 분리한 시료 또는 암 질환 동물 모델에 후보 약제를 처리하기에 앞서, 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 단계를 수행할 수 있다. In the present invention, a step of measuring the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding the polypeptide may be performed prior to treating the sample isolated from the cancer subject or the cancer disease animal model with the candidate drug.
본 발명에서의 용어 "후보 물질"은 암 환자에 적용하여 암에 의한 환자의 증세를 호전시키거나 이롭게 변경할 수 있는 물질을 의미하며 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 또는 활성을 감소시킬 수 있는 물질로, 저분자 화합물, 항체, 안티센스 뉴클레오티드, 작은 간섭 RNA(short interfering RNA), 짧은 헤어핀 RNA(short hairpin RNA), 핵산, 단백질, 펩티드, 기타 추출물 또는 천연물을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않고 제한없이 포함될 수 있다. The term "candidate substance" in the present invention means a substance that can be applied to cancer patients to improve or beneficially change the symptoms of cancer patients, and the expression or activity of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding it Substances capable of reducing may include small-molecular compounds, antibodies, antisense nucleotides, short interfering RNA, short hairpin RNA, nucleic acids, proteins, peptides, other extracts or natural products. It is not limited and can be included without limitation.
본 발명에서 상기 후보 약제의 처리 전 또는 후에 있어서, 시료 또는 암 질환 동물 모델에서 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 방법 및 그에 사용되는 제제는 상기 암의 진단을 위한 정보 제공 방법에 기재된 바와 중복되어 이하 자세한 기재를 생략한다. In the present invention, before or after treatment with the candidate agent, the method for measuring the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding it in a sample or cancer disease animal model and the agent used therefor can be used to diagnose the cancer. The detailed description is omitted below as it overlaps with that described in the method for providing information for.
본 발명에서는, (c) 상기 (b) 단계에서 측정된 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준이 후보 약제가 처리되기 전에 비하여 증가하거나 감소한 경우 상기 후보 약제를 암의 예방 또는 치료용 약제로 판단하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. In the present invention, (c) when the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding it measured in step (b) is increased or decreased compared to before the candidate agent is treated, the candidate agent is used to prevent or prevent cancer A step of determining the drug as a drug for treatment may be further included.
본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 환자로부터 수득된 시료를 포함하는 시료부, 상기 시료에 포함된 시료에서 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자를 검출하는 검출부; 및 상기 검출부로부터 수득된 환자의 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준과 정상인의 수준을 비교하는 비교부를 포함하고, 상기 비교부를 통해서 얻는 결과에 따라 암을 진단하는, 진단 장치를 제공할 수 있다.According to another embodiment of the present invention, a sample unit including a sample obtained from a patient, a detection unit for detecting the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or a gene encoding the same in a sample included in the sample; And a comparison unit for comparing the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding the same in the patient obtained from the detection unit and the level of a normal person, and diagnosing cancer according to the result obtained through the comparison unit. device can be provided.
본 발명의 상기 비교부에서 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자가 검출된 경우 유방암으로 진단할 수 있다.Breast cancer can be diagnosed when the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding it is detected in the comparison unit of the present invention.
이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by the following examples. However, the following examples are only to illustrate the present invention, and the content of the present invention is not limited by the following examples.
실시예 Example
[실시예 1] Neurogenic locus notch homolog protein 1(NOTCH 1) 측정을 위한 타겟 펩티드의 검출[Example 1] Detection of target peptide for measuring Neurogenic locus notch homolog protein 1 (NOTCH 1)
1. 시료의 준비1. Preparation of samples
본 발명의 바이오마커 조합의 유방암 진단의 정확도를 확인하기 위하여, 유방암 환자들과 정상 대조군들로부터 얻은 혈액 시료에서 혈장을 분리하고, Bradford assay를 통하여 총 단백질을 정량하였다. In order to confirm the accuracy of breast cancer diagnosis of the biomarker combination of the present invention, plasma was separated from blood samples obtained from breast cancer patients and normal controls, and total protein was quantified by Bradford assay.
실험에 사용된 샘플은 암 환자 10명/ 양성 종양 환자 10명/ 정상 10명 이며, 양성 종양 환자도 정상으로 하여 악성 종양만을 더욱 분별 할 수 있도록 설계했다. 도출되는 ROC 커브는 하기와 같으며, AUC = 0.8875 이며(그림 1), 특히 특이도 100%에서 암환자 중 5명의 수치가 특이적으로 높아 확실한 암 선별성을 보이고 있음을 확인했다.The samples used in the experiment were 10 cancer patients / 10 benign tumor patients / 10 normal patients. The derived ROC curve is as follows, and AUC = 0.8875 (Figure 1). In particular, it was confirmed that 5 of the cancer patients had a particularly high value at 100% specificity, showing clear cancer selectivity.
이 중 총 단백질 200 ㎍을 우레아(urea)로 변형시킨 뒤 디티오트레이톨(dithiothreitol, DTT)로 환원시키고, 이오도아세트아미드(iodoacetamide)를 통해 알킬화 시켰다. 이후, 트립신을 넣어주어 펩티드화 시키고, C18 컬럼을 이용하여 염을 제거하였다. 내부표준물질로는 펩티드의 말단에 붙어있는 아미노산기가 동위원소로 치환된 합성품을 이용하였다.Of these, 200 μg of total protein was modified with urea, reduced with dithiothreitol (DTT), and alkylated with iodoacetamide. Thereafter, trypsin was added to peptide, and salts were removed using a C18 column. As an internal standard, a synthetic product in which the amino acid group attached to the end of the peptide was substituted with an isotope was used.
2. 삼중 사극자 질량분석기(텐덤메스 질량분석기)를 이용한 다중 반응 모니터링 수행2. Perform multiple reaction monitoring using a triple quadrupole mass spectrometer (tandem mass spectrometer)
삼중 사극자 질량분석을 위하여 본 발명의 Neurogenic locus notch homolog protein 1(NOTCH 1)의 타겟 펩티드와 어미이온과 딸이온 쌍을 선정하여 그 결과는 하기 표 4에 나타내었다. For triple quadrupole mass spectrometry, the target peptide of the Neurogenic locus notch homolog protein 1 (NOTCH 1) of the present invention and the mother ion and daughter ion pairs were selected, and the results are shown in Table 4 below.
(서열번호 2)NSSFHFLR
(SEQ ID NO: 2)
상기 1.에서 준비된 최종 시료를 역상 수지 크로마토그래피에 걸어 혈장 펩티드 절편을 분리하였고, 삼중 사극자 질량분석기(기기: 5500 Qtrap, AB Sciex, USA)를 사용해 각 펩티드의 MRM 스펙트럼을 얻었다. 이때, 역상 수지 크로마토그래피는 HALOTM C18 컬럼 (Eksigent, USA) 컬럼으로 45분간 5%~40%의 아세토니트릴 농도 구배를 이용하여 실시하였다. MultiQuantTM 컴퓨터 정량 분석 프로그램 (AB Sciex, USA)으로 타깃 펩티드의 MRM 크로마토그램의 피크 면적을 계산하여 정량 정보를 확인하였다. 이때 각 타깃 펩티드의 정량값은 내부 표준물질로 넣어준 대장균 베타 갈락토시다아제의 MRM 크로마토그램의 피크 면적에 대한 비율로 표시하였다. The final sample prepared in 1. above was subjected to reverse phase resin chromatography to separate plasma peptide fragments, and the MRM spectrum of each peptide was obtained using a triple quadrupole mass spectrometer (device: 5500 Qtrap, AB Sciex, USA). At this time, reverse-phase resin chromatography was performed using a HALOTM C18 column (Eksigent, USA) for 45 minutes using an acetonitrile concentration gradient of 5% to 40%. Quantitative information was confirmed by calculating the peak area of the MRM chromatogram of the target peptide using a MultiQuantTM computer quantitative analysis program (AB Sciex, USA). At this time, the quantitative value of each target peptide was expressed as a ratio to the peak area of the MRM chromatogram of E. coli beta-galactosidase added as an internal standard.
3. 각 타겟 펩티드의 유방암 진단의 정확도 확인3. Confirmation of the accuracy of breast cancer diagnosis of each target peptide
상기 2.에서 확인된 Neurogenic locus notch homolog protein 1(NOTCH 1)의 서열번호 2에 대한 유방암 진단 효율을 확인하여, 도 1에 유방암 환자, 양성 종양 환자 및 비 환자 대조군에 대한 수용자-조작 특성(ROC) 그래프로 도시하였다.By confirming the breast cancer diagnosis efficiency for SEQ ID NO: 2 of the Neurogenic locus notch homolog protein 1 (NOTCH 1) identified in 2. above, FIG. ) is shown as a graph.
도 1에서 보는 바와 같이, 본 발명의 일 실시예에 따른 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드의 타겟 펩티드를 이용한 경우 유방암 환자들과 정상 대조군들에 대한 수용자-조작 특성(ROC) 그래프로 도시한 결과 AUC(area under the curve) 값이 0.8875로 매우 높은 진단의 정확도를 보였다. As shown in FIG. 1, when the target peptide of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 according to an embodiment of the present invention is used, the recipient-engineered characteristic (ROC) graph of breast cancer patients and normal controls shows the results AUC (area under the curve) value was 0.8875, showing very high diagnostic accuracy.
이처럼 본 발명의 서열번호 2로 표시되는 타겟 펩티드를 이용한 Neurogenic locus notch homolog protein 1(NOTCH 1) 마커는 높은 정확도로 유방암을 진단할 수 있음을 알 수 있었다. As such, it was found that the Neurogenic locus notch homolog protein 1 (NOTCH 1) marker using the target peptide represented by SEQ ID NO: 2 of the present invention can diagnose breast cancer with high accuracy.
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Val Asn Glu Cys Gly Gln Lys Pro Gly Leu Cys Arg His Gly 180 185 190 Gly Thr Cys His Asn Glu Val Gly Ser Tyr Arg Cys Val Cys Arg Ala 195 200 205 Thr His Thr Gly Pro Asn Cys Glu Arg Pro Tyr Val Pro Cys Ser Pro 210 215 220 Ser Pro Cys Gln Asn Gly Gly Thr Cys Arg Pro Thr Gly Asp Val Thr 225 230 235 240 His Glu Cys Ala Cys Leu Pro Gly Phe Thr Gly Gln Asn Cys Glu Glu 245 250 255 Asn Ile Asp Asp Cys Pro Gly Asn Asn Cys Lys Asn Gly Gly Ala Cys 260 265 270 Val Asp Gly Val Asn Thr Tyr Asn Cys Arg Cys Pro Pro Glu Trp Thr 275 280 285 Gly Gln Tyr Cys Thr Glu Asp Val Asp Glu Cys Gln Leu Met Pro Asn 290 295 300 Ala Cys Gln Asn Gly Gly Thr Cys His Asn Thr His Gly Gly Tyr Asn 305 310 315 320 Cys Val Cys Val Asn Gly Trp Thr Gly Glu Asp Cys Ser Glu Asn Ile 325 330 335 Asp Asp Cys Ala Ser Ala Ala Cys Phe His Gly Ala Thr Cys His Asp 340 345 350 Arg Val Ala Ser Phe Tyr Cys Glu Cys Pro His Gly Arg Thr Gly Leu 355 360 365 Leu Cys His Leu Asn Asp Ala Cys Ile Ser Asn Pro Cys Asn Glu Gly 370 375 380 Ser Asn Cys Asp Thr Asn Pro Val Asn Gly Lys Ala Ile Cys Thr Cys 385 390 395 400 Pro Ser Gly Tyr Thr Gly Pro Ala Cys Ser Gln Asp Val Asp Glu Cys 405 410 415 Ser Leu Gly Ala Asn Pro Cys Glu His Ala Gly Lys Cys Ile Asn Thr 420 425 430 Leu Gly Ser Phe Glu Cys Gln Cys Leu Gln Gly Tyr Thr Gly Pro Arg 435 440 445 Cys Glu Ile Asp Val Asn Glu Cys Val Ser Asn Pro Cys Gln Asn Asp 450 455 460 Ala Thr Cys Leu Asp Gln Ile Gly Glu Phe Gln Cys Ile Cys Met Pro 465 470 475 480 Gly Tyr Glu Gly Val His Cys Glu Val Asn Thr Asp Glu Cys Ala Ser 485 490 495 Ser Pro Cys Leu His Asn Gly Arg Cys Leu Asp Lys Ile Asn Glu Phe 500 505 510 Gln Cys Glu Cys Pro Thr Gly Phe Thr Gly His Leu Cys Gln Tyr Asp 515 520 525 Val Asp Glu Cys Ala Ser Thr Pro Cys Lys Asn Gly Ala Lys Cys Leu 530 535 540 Asp Gly Pro Asn Thr Tyr Thr Cys Val Cys Thr Glu Gly Tyr Thr Gly 545 550 555 560 Thr His Cys Glu Val Asp Ile Asp Glu Cys Asp Pro Asp Pro Cys His 565 570 575 Tyr Gly Ser Cys Lys Asp Gly Val Ala Thr Phe Thr Cys Leu Cys Arg 580 585 590 Pro Gly Tyr 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Gly Thr Cys Ile Asp Asp Val Ala Gly Tyr Lys Cys Asn 805 810 815 Cys Leu Leu Pro Tyr Thr Gly Ala Thr Cys Glu Val Val Leu Ala Pro 820 825 830 Cys Ala Pro Ser Pro Cys Arg Asn Gly Gly Glu Cys Arg Gln Ser Glu 835 840 845 Asp Tyr Glu Ser Phe Ser Cys Val Cys Pro Thr Gly Trp Gln Gly Gln 850 855 860 Thr Cys Glu Val Asp Ile Asn Glu Cys Val Leu Ser Pro Cys Arg His 865 870 875 880 Gly Ala Ser Cys Gln Asn Thr His Gly Gly Tyr Arg Cys His Cys Gln 885 890 895 Ala Gly Tyr Ser Gly Arg Asn Cys Glu Thr Asp Ile Asp Asp Cys Arg 900 905 910 Pro Asn Pro Cys His Asn Gly Gly Ser Cys Thr Asp Gly Ile Asn Thr 915 920 925 Ala Phe Cys Asp Cys Leu Pro Gly Phe Arg Gly Thr Phe Cys Glu Glu 930 935 940 Asp Ile Asn Glu Cys Ala Ser Asp Pro Cys Arg Asn Gly Ala Asn Cys 945 950 955 960 Thr Asp Cys Val Asp Ser Tyr Thr Cys Thr Cys Pro Ala Gly Phe Ser 965 970 975 Gly Ile His Cys Glu Asn Asn Thr Pro Asp Cys Thr Glu Ser Ser Cys 980 985 990 Phe Asn Gly Gly Thr Cys Val Asp Gly Ile Asn Ser Phe Thr Cys Leu 995 1000 1005 Cys Pro Pro Gly Phe Thr Gly Ser Tyr Cys Gln His Asp Val Asn Glu 1010 1015 1020 Cys Asp Ser Gln Pro Cys Leu His Gly Gly Thr Cys Gln Asp Gly Cys 1025 1030 1035 1040 Gly Ser Tyr Arg Cys Thr Cys Pro Gln Gly Tyr Thr Gly Pro Asn Cys 1045 1050 1055 Gln Asn Leu Val His Trp Cys Asp Ser Ser Pro Cys Lys Asn Gly Gly 1060 1065 1070 Lys Cys Trp Gln Thr His Thr Gln Tyr Arg Cys Glu Cys Pro Ser Gly 1075 1080 1085 Trp Thr Gly Leu Tyr Cys Asp Val Pro Ser Val Ser Cys Glu Val Ala 1090 1095 1100 Ala Gln Arg Gln Gly Val Asp Val Ala Arg Leu Cys Gln His Gly Gly 1105 1110 1115 1120 Leu Cys Val Asp Ala Gly Asn Thr His His Cys Arg Cys Gln Ala Gly 1125 1130 1135 Tyr Thr Gly Ser Tyr Cys Glu Asp Leu Val Asp Glu Cys Ser Pro Ser 1140 1145 1150 Pro Cys Gln Asn Gly Ala Thr Cys Thr Asp Tyr Leu Gly Gly Tyr Ser 1155 1160 1165 Cys Lys Cys Val Ala Gly Tyr His Gly Val Asn Cys Ser Glu Glu Ile 1170 1175 1180 Asp Glu Cys Leu Ser His Pro Cys Gln Asn Gly Gly Thr Cys Leu Asp 1185 1190 1195 1200 Leu Pro Asn Thr Tyr Lys Cys Ser Cys Pro Arg Gly Thr Gln Gly Val 1205 1210 1215 His Cys Glu Ile Asn Val Asp Asp Cys Asn Pro Pro Val Asp Pro Val 1220 1225 1230 Ser Arg Ser Pro Lys Cys Phe Asn Asn Gly Thr Cys Val Asp Gln Val 1235 1240 1245 Gly Gly Tyr Ser Cys Thr Cys Pro Pro Gly Phe Val Gly Glu Arg Cys 1250 1255 1260 Glu Gly Asp Val Asn Glu Cys Leu Ser Asn Pro Cys Asp Ala Arg Gly 1265 1270 1275 1280 Thr Gln Asn Cys Val Gln Arg Val Asn Asp Phe His Cys Glu Cys Arg 1285 1290 1295 Ala Gly His Thr Gly Arg Arg Cys Glu Ser Val Ile Asn Gly Cys Lys 1300 1305 1310 Gly Lys Pro Cys Lys Asn Gly Gly Thr Cys Ala Val Ala Ser Asn Thr 1315 1320 1325 Ala Arg Gly Phe Ile Cys Lys Cys Pro Ala Gly Phe Glu Gly Ala Thr 1330 1335 1340 Cys Glu Asn Asp Ala Arg Thr Cys Gly Ser Leu Arg Cys Leu Asn Gly 1345 1350 1355 1360 Gly Thr Cys Ile Ser Gly Pro Arg Ser Pro Thr Cys Leu Cys Leu Gly 1365 1370 1375 Pro Phe Thr Gly Pro Glu Cys Gln Phe Pro Ala Ser Ser Pro Cys Leu 1380 1385 1390 Gly Gly Asn Pro Cys Tyr Asn Gln Gly Thr Cys Glu Pro Thr Ser Glu 1395 1400 1405 Ser Pro Phe Tyr Arg Cys Leu Cys Pro Ala Lys Phe Asn Gly Leu Leu 1410 1415 1420 Cys His Ile Leu Asp Tyr Ser Phe Gly Gly Gly Ala Gly Arg Asp Ile 1425 1430 1435 1440 Pro Pro Pro Leu Ile Glu Glu Ala Cys Glu Leu Pro Glu Cys Gln Glu 1445 1450 1455 Asp Ala Gly Asn Lys Val Cys Ser Leu Gln Cys Asn Asn His Ala Cys 1460 1465 1470 Gly Trp Asp Gly Gly Asp Cys Ser Leu Asn Phe Asn Asp Pro Trp Lys 1475 1480 1485 Asn Cys Thr Gln Ser Leu Gln Cys Trp Lys Tyr Phe Ser Asp Gly His 1490 1495 1500 Cys Asp Ser Gln Cys Asn Ser Ala Gly Cys Leu Phe Asp Gly Phe Asp 1505 1510 1515 1520 Cys Gln Arg Ala Glu Gly Gln Cys Asn Pro Leu Tyr Asp Gln Tyr Cys 1525 1530 1535 Lys Asp His Phe Ser Asp Gly His Cys Asp Gln Gly Cys Asn Ser Ala 1540 1545 1550 Glu Cys Glu Trp Asp Gly Leu Asp Cys Ala Glu His Val Pro Glu Arg 1555 1560 1565 Leu Ala Ala Gly Thr Leu Val Val Val Val Leu Met Pro Pro Glu Gln 1570 1575 1580 Leu Arg Asn Ser Ser Phe His Phe Leu Arg Glu Leu Ser Arg Val Leu 1585 1590 1595 1600 His Thr Asn Val Val Phe Lys Arg Asp Ala His Gly Gln Gln Met Ile 1605 1610 1615 Phe Pro Tyr Tyr Gly Arg Glu Glu Glu Leu Arg Lys His Pro Ile Lys 1620 1625 1630 Arg Ala Ala Glu Gly Trp Ala Ala Pro Asp Ala Leu Leu Gly Gln Val 1635 1640 1645 Lys Ala Ser Leu Leu Pro Gly Gly Ser Glu Gly Gly Arg Arg Arg Arg 1650 1655 1660 Glu Leu Asp Pro Met Asp Val Arg Gly Ser Ile Val Tyr Leu Glu Ile 1665 1670 1675 1680 Asp Asn Arg Gln Cys Val Gln Ala Ser Ser Gln Cys Phe Gln Ser Ala 1685 1690 1695 Thr Asp Val Ala Ala Phe Leu Gly Ala Leu Ala Ser Leu Gly Ser Leu 1700 1705 1710 Asn Ile Pro Tyr Lys Ile Glu Ala Val Gln Ser Glu Thr Val Glu Pro 1715 1720 1725 Pro Pro Pro Ala Gln Leu His Phe Met Tyr Val Ala Ala Ala Ala Phe 1730 1735 1740 Val Leu Leu Phe Phe Val Gly Cys Gly Val Leu Leu Ser Arg Lys Arg 1745 1750 1755 1760 Arg Arg Gln His Gly Gln Leu Trp Phe Pro Glu Gly Phe Lys Val Ser 1765 1770 1775 Glu Ala Ser Lys Lys Lys Arg Arg Glu Pro Leu Gly Glu Asp Ser Val 1780 1785 1790 Gly Leu Lys Pro Leu Lys Asn Ala Ser Asp Gly Ala Leu Met Asp Asp 1795 1800 1805 Asn Gln Asn Glu Trp Gly Asp Glu Asp Leu Glu Thr Lys Lys Phe Arg 1810 1815 1820 Phe Glu Glu Pro Val Val Leu Pro Asp Leu Asp Asp Gln Thr Asp His 1825 1830 1835 1840 Arg Gln Trp Thr Gln Gln His Leu Asp Ala Ala Asp Leu Arg Met Ser 1845 1850 1855 Ala Met Ala Pro Thr Pro Pro Gln Gly Glu Val Asp Ala Asp Cys Met 1860 1865 1870 Asp Val Asn Val Arg Gly Pro Asp Gly Phe Thr Pro Leu Met Ile Ala 1875 1880 1885 Ser Cys Ser Gly Gly Gly Leu Glu Thr Gly Asn Ser Glu Glu Glu Glu 1890 1895 1900 Asp Ala Pro Ala Val Ile Ser Asp Phe Ile Tyr Gln Gly Ala Ser Leu 1905 1910 1915 1920 His Asn Gln Thr Asp Arg Thr Gly Glu Thr Ala Leu His Leu Ala Ala 1925 1930 1935 Arg Tyr Ser Arg Ser Asp Ala Ala Lys Arg Leu Leu Glu Ala Ser Ala 1940 1945 1950 Asp Ala Asn Ile Gln Asp Asn Met Gly Arg Thr Pro Leu His Ala Ala 1955 1960 1965 Val Ser Ala Asp Ala Gln Gly Val Phe Gln Ile Leu Ile Arg Asn Arg 1970 1975 1980 Ala Thr Asp Leu Asp Ala Arg Met His Asp Gly Thr Thr Pro Leu Ile 1985 1990 1995 2000 Leu Ala Ala Arg Leu Ala Val Glu Gly Met Leu Glu Asp Leu Ile Asn 2005 2010 2015 Ser His Ala Asp Val Asn Ala Val Asp Asp Leu Gly Lys Ser Ala Leu 2020 2025 2030 His Trp Ala Ala Ala Val Asn Asn Val Asp Ala Ala Val Val Leu Leu 2035 2040 2045 Lys Asn Gly Ala Asn Lys Asp Met Gln Asn Asn Arg Glu Glu Thr Pro 2050 2055 2060 Leu Phe Leu Ala Ala Arg Glu Gly Ser Tyr Glu Thr Ala Lys Val Leu 2065 2070 2075 2080 Leu Asp His Phe Ala Asn Arg Asp Ile Thr Asp His Met Asp Arg Leu 2085 2090 2095 Pro Arg Asp Ile Ala Gln Glu Arg Met His His Asp Ile Val Arg Leu 2100 2105 2110 Leu Asp Glu Tyr Asn Leu Val Arg Ser Pro Gln Leu His Gly Ala Pro 2115 2120 2125 Leu Gly Gly Thr Pro Thr Leu Ser Pro Pro Leu Cys Ser Pro Asn Gly 2130 2135 2140 Tyr Leu Gly Ser Leu Lys Pro Gly Val Gln Gly Lys Lys Val Arg Lys 2145 2150 2155 2160 Pro Ser Ser Lys Gly Leu Ala Cys Gly Ser Lys Glu Ala Lys Asp Leu 2165 2170 2175 Lys Ala Arg Arg Lys Lys Ser Gln Asp Gly Lys Gly Cys Leu Leu Asp 2180 2185 2190 Ser Ser Gly Met Leu Ser Pro Val Asp Ser Leu Glu Ser Pro His Gly 2195 2200 2205 Tyr Leu Ser 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Pro Pro Pro Gln 2405 2410 2415 Pro His Leu Gly Val Ser Ser Ala Ala Ser Gly His Leu Gly Arg Ser 2420 2425 2430 Phe Leu Ser Gly Glu Pro Ser Gln Ala Asp Val Gln Pro Leu Gly Pro 2435 2440 2445 Ser Ser Leu Ala Val His Thr Ile Leu Pro Gln Glu Ser Pro Ala Leu 2450 2455 2460 Pro Thr Ser Leu Pro Ser Ser Leu Val Pro Pro Val Thr Ala Ala Gln 2465 2470 2475 2480 Phe Leu Thr Pro Pro Ser Gln His Ser Tyr Ser Ser Pro Val Asp Asn 2485 2490 2495 Thr Pro Ser His Gln Leu Gln Val Pro Glu His Pro Phe Leu Thr Pro 2500 2505 2510 Ser Pro Glu Ser Pro Asp Gln Trp Ser Ser Ser Ser Pro His Ser Asn 2515 2520 2525 Val Ser Asp Trp Ser Glu Gly Val Ser Ser Pro Pro Thr Ser Met Gln 2530 2535 2540 Ser Gln Ile Ala Arg Ile Pro Glu Ala Phe Lys 2545 2550 2555 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> NOTCH fragment <400> 2 Asn Ser Ser Phe His Phe Leu Arg 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Escherichia coli <400> 3 Gly Asp Phe Gln Phe Asn Ile Ser Arg 1 5 <110> BERTIS CO., LTD. <120> A Composition for Diagnosing Cancer <130> PDPB201905 <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 2555 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Pro Pro Leu Leu Ala Pro Leu Leu Cys Leu Ala Leu Leu Pro Ala 1 5 10 15 Leu Ala Ala Arg Gly Pro Arg Cys Ser Gln Pro Gly Glu Thr Cys Leu 20 25 30 Asn Gly Gly Lys Cys Glu Ala Ala Asn Gly Thr Glu Ala Cys Val Cys 35 40 45 Gly Gly Ala Phe Val Gly Pro Arg Cys Gln Asp Pro Asn Pro Cys Leu 50 55 60 Ser Thr Pro Cys Lys Asn Ala Gly Thr Cys His Val Val Asp Arg Arg 65 70 75 80 Gly Val Ala Asp Tyr Ala Cys Ser Cys Ala Leu Gly Phe Ser Gly Pro 85 90 95 Leu Cys Leu Thr Pro Leu Asp Asn Ala Cys Leu Thr Asn Pro Cys Arg 100 105 110 Asn Gly Gly Thr Cys Asp Leu Leu Thr Leu Thr Glu Tyr Lys Cys Arg 115 120 125 Cys Pro Pro Gly Trp Ser Gly Lys Ser Cys Gln Gln Ala Asp Pro Cys 130 135 140 Ala Ser Asn Pro Cys Ala Asn Gly Gly Gln Cys Leu Pro Phe Glu Ala 145 150 155 160 Ser Tyr Ile Cys His Cys Pro Pro Ser Phe His Gly Pro Thr Cys Arg 165 170 175 Gln Asp Val Asn Glu Cys Gly Gln Lys Pro Gly Leu Cys 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Ser 595 600 605 Ser Gln Pro Cys Arg His Gly Gly Thr Cys Gln Asp Arg Asp Asn Ala 610 615 620 Tyr Leu Cys Phe Cys Leu Lys Gly Thr Thr Thr Gly Pro Asn Cys Glu Ile 625 630 635 640 Asn Leu Asp Asp Cys Ala Ser Ser Pro Cys Asp Ser Gly Thr Cys Leu 645 650 655 Asp Lys Ile Asp Gly Tyr Glu Cys Ala Cys Glu Pro Gly Tyr Thr Gly 660 665 670 Ser Met Cys Asn Ile Asn Ile Asp Glu Cys Ala Gly Asn Pro Cys His 675 680 685 Asn Gly Gly Thr Cys Glu Asp Gly Ile Asn Gly Phe Thr Cys Arg Cys 690 695 700 Pro Glu Gly Tyr His Asp Pro Thr Cys Leu Ser Glu Val Asn Glu Cys 705 710 715 720 Asn Ser Asn Pro Cys Val His Gly Ala Cys Arg Asp Ser Leu Asn Gly 725 730 735 Tyr Lys Cys Asp Cys Asp Pro Gly Trp Ser Gly Thr Asn Cys Asp Ile 740 745 750 Asn Asn Asn Glu Cys Glu Ser Asn Pro Cys Val Asn Gly Gly Thr Cys 755 760 765 Lys Asp Met Thr Ser Gly Tyr Val Cys Thr Cys Arg Glu Gly Phe Ser 770 775 780 Gly Pro Asn Cys Gln Thr Asn Ile Asn Glu Cys Ala Ser Asn Pro Cys 785 790 795 800 Leu Asn Gln Gly Thr Cys Ile Asp Asp Val Ala Gly Tyr Lys 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Leu 1410 1415 1420 Cys His Ile Leu Asp Tyr Ser Phe Gly Gly Gly Ala Gly Arg Asp Ile 1425 1430 1435 1440 Pro Pro Pro Leu Ile Glu Glu Ala Cys Glu Leu Pro Glu Cys Gln Glu 1445 1450 1455 Asp Ala Gly Asn Lys Val Cys Ser Leu Gln Cys Asn Asn His Ala Cys 1460 1465 1470 Gly Trp Asp Gly Gly Asp Cys Ser Leu Asn Phe Asn Asp Pro Trp Lys 1475 1480 1485 Asn Cys Thr Gln Ser Leu Gln Cys Trp Lys Tyr Phe Ser Asp Gly His 1490 1495 1500 Cys Asp Ser Gln Cys Asn Ser Ala Gly Cys Leu Phe Asp Gly Phe Asp 1505 1510 1515 1520 Cys Gln Arg Ala Glu Gly Gln Cys Asn Pro Leu Tyr Asp Gln Tyr Cys 1525 1530 1535 Lys Asp His Phe Ser Asp Gly His Cys Asp Gln Gly Cys Asn Ser Ala 1540 1545 1550 Glu Cys Glu Trp Asp Gly Leu Asp Cys Ala Glu His Val Pro Glu Arg 1555 1560 1565 Leu Ala Ala Gly Thr Leu Val Val Val Val Leu Met Pro Pro Glu Gln 1570 1575 1580 Leu Arg Asn Ser Ser Phe His Phe Leu Arg Glu Leu Ser Arg Val Leu 1585 1590 1595 1600 His Thr Asn Val Val Phe Lys Arg Asp Ala His Gly Gln Gln Met Ile 1605 1610 1615 Phe Pro Tyr Tyr 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Phe Arg 1810 1815 1820 Phe Glu Glu Pro Val Val Leu Pro Asp Leu Asp Asp Gln Thr Asp His 1825 1830 1835 1840 Arg Gln Trp Thr Gln Gln His Leu Asp Ala Ala Asp Leu Arg Met Ser 1845 1850 1855 Ala Met Ala Pro Thr Pro Pro Gln Gly Glu Val Asp Ala Asp Cys Met 1860 1865 1870 Asp Val Asn Val Arg Gly Pro Asp Gly Phe Thr Pro Leu Met Ile Ala 1875 1880 1885 Ser Cys Ser Gly Gly Gly Leu Glu Thr Gly Asn Ser Glu Glu Glu Glu Glu 1890 1895 1900 Asp Ala Pro Ala Val Ile Ser Asp Phe Ile Tyr Gln Gly Ala Ser Leu 1905 1910 1915 1920 His Asn Gln Thr Asp Arg Thr Gly Glu Thr Ala Leu His Leu Ala Ala 1925 1930 1935 Arg Ser Tyr Arg Ser Asp Ala Ala Lys Arg Leu Leu Glu Ala Ser Ala 1940 1945 1950 Asp Ala Asn Ile Gln Asp Asn Met Gly Arg Thr Pro Leu His Ala Ala 1955 1960 1965 Val Ser Ala Asp Ala Gln Gly Val Phe Gln Ile Leu Ile Arg Asn Arg 1970 1975 1980 Ala Thr Asp Leu Asp Ala Arg Met His Asp Gly Thr Thr Pro Leu Ile 1985 1990 1995 2000 Leu Ala Ala Arg Leu Ala Val Glu Gly Met Leu Glu Asp Leu Ile Asn 2005 2010 2015 Ser His 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Ser Pr o Phe Gln 2210 2215 2220 Gln Ser Pro Ser Val Pro Leu Asn His Leu Pro Gly Met Pro Asp Thr 2225 2230 2235 2240 His Leu Gly Ile Gly His Leu Asn Val Ala Ala Lys Pro Glu Met Ala 2245 2250 2255 Ala Leu Gly Gly Gly Gly Arg Leu Ala Phe Glu Thr Gly Pro Pro Arg 2260 2265 2270 Leu Ser His Leu Pro Val Ala Ser Gly Thr Ser Thr Val Leu Gly Ser 2275 2280 2285 Ser Ser Gly Gly Ala Leu Asn Phe Thr Val Gly Gly Ser Thr Ser Leu 2290 2295 2300 Asn Gly Gln Cys Glu Trp Leu Ser Arg Leu Gln Ser Gly Met Val Pro 2305 2310 2315 2320 Asn Gln Tyr Asn Pro Leu Arg Gly Ser Val Ala Pro Gly Pro Leu Ser 2325 2330 2335 Thr Gln Ala Pro Ser Leu Gln His Gly Met Val Gly Pro Leu His Ser 2340 2345 2350 Ser Leu Ala Ala Ser Ala Leu Ser Gln Met Met Ser Tyr Gln Gly Leu 2355 2360 2365 Pro Ser Thr Arg Leu Ala Thr Gln Pro His Leu Val Gln Thr Gln Gln 2370 2375 2380 Val Gln Pro Gln Asn Leu Gln Met Gln Gln Gln Asn Leu Gln Pro Ala 2385 2390 2395 2400 Asn Ile Gln Gln Gln Gln Ser Leu Gln Pro Pro Pro Pro Pro Pro Gln 2405 2410 2415 Pro 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Claims (28)
A composition for diagnosis of breast cancer comprising an agent for measuring the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding it.
상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드의 발현 수준을 측정하는 제제는 상기 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체, 올리고펩티드, 리간드, PNA(peptide nucleic acid) 및 앱타머(aptamer)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는, 유방암의 진단용 조성물.
According to claim 1,
The agent for measuring the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 is one selected from the group consisting of an antibody, an oligopeptide, a ligand, a peptide nucleic acid (PNA), and an aptamer that binds specifically to the polypeptide. A composition for diagnosis of breast cancer, comprising the above.
상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 제제는 상기 폴리펩티드를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머, 프로브 및 안티센스 뉴클레오티드로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는, 유방암의 진단용 조성물.
According to claim 1,
The agent for measuring the expression level of the gene encoding the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 includes at least one selected from the group consisting of primers, probes, and antisense nucleotides that specifically bind to the gene encoding the polypeptide, A composition for diagnosis of breast cancer.
A kit for diagnosis of breast cancer comprising the composition for diagnosis of any one of claims 1, 3 and 4.
상기 키트는 RT-PCR 키트, DNA 칩 키트, ELISA 키트, 단백질 칩 키트, 래피드(rapid) 키트 또는 MRM(Multiple reaction monitoring) 키트인, 유방암의 진단용 키트.
According to claim 5,
The kit is an RT-PCR kit, a DNA chip kit, an ELISA kit, a protein chip kit, a rapid kit, or a multiple reaction monitoring (MRM) kit, a kit for diagnosing breast cancer.
A method for providing information for diagnosis of breast cancer, comprising measuring the expression level of a polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or a gene encoding the same in a biological sample isolated from a subject of interest.
상기 생물학적 시료는 전혈(whole blood), 백혈구(leukocytes), 말초혈액 단핵 세포(peripheral blood mononuclear cells), 백혈구 연층(buffy coat), 혈장(plasma), 혈청(serum), 객담(sputum), 눈물(tears), 점액(mucus), 세비액(nasal washes), 비강 흡인물(nasal aspirate), 호흡(breath), 소변(urine), 정액(semen), 침(saliva), 복강 세척액(peritoneal washings), 복수(ascites), 낭종액(cystic fluid), 뇌척수막 액(meningeal fluid), 양수(amniotic fluid), 선액(glandular fluid), 췌장액(pancreatic fluid), 림프액(lymph fluid), 흉수(pleural fluid), 유두 흡인물(nipple aspirate), 기관지 흡인물(bronchial aspirate), 활액(synovial fluid), 관절 흡인물(joint aspirate), 기관 분비물(organ secretions), 세포(cell), 세포 추출물(cell extract) 또는 뇌척수액(cerebrospinal fluid)인, 유방암의 진단을 위한 정보 제공 방법.
According to claim 7,
The biological sample is whole blood, leukocytes, peripheral blood mononuclear cells, leukocyte buffy coat, plasma, serum, sputum, tears ( tears, mucus, nasal washes, nasal aspirates, breath, urine, semen, saliva, peritoneal washings, Ascites, cystic fluid, meningeal fluid, amniotic fluid, glandular fluid, pancreatic fluid, lymph fluid, pleural fluid, nipple Nipple aspirate, bronchial aspirate, synovial fluid, joint aspirate, organ secretions, cells, cell extract or cerebrospinal fluid ( cerebrospinal fluid), a method for providing information for diagnosis of breast cancer.
상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드의 발현 수준을 측정하는 제제는 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 항체, 올리고펩티드, 리간드, PNA(peptide nucleic acid) 및 앱타머(aptamer)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는, 유방암의 진단을 위한 정보 제공 방법.
According to claim 7,
The agent for measuring the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 is an antibody that specifically binds to the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2, an oligopeptide, a ligand, a peptide nucleic acid (PNA), and an aptamer. Information providing method for diagnosis of breast cancer, comprising at least one selected from the group consisting of.
상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드의 발현 수준의 측정은 단백질 칩 분석, 면역측정법, 리간드 바인딩 어세이, MALDI-TOF(Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) 분석, SELDI-TOF(Sulface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) 분석, 방사선 면역분석, 방사 면역 확산법, 오우크테로니 면역 확산법, 로케트 면역전기영동, 조직면역 염색, 보체 고정 분석법, 2차원 전기영동 분석, 액상 크로마토그래피-질량분석(liquid chromatography-Mass Spectrometry, LC-MS), LC-MS/MS(liquid chromatography-Mass Spectrometry/ Mass Spectrometry), 웨스턴 블랏팅 또는 ELISA(enzyme linked immunosorbentassay)에 의해 수행되는, 유방암의 진단을 위한 정보 제공 방법.
According to claim 7,
Measurement of the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 is protein chip analysis, immunoassay, ligand binding assay, MALDI-TOF (Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) analysis, SELDI-TOF (Sulface Enhanced Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry) analysis, radiation immunoassay, radioimmunodiffusion method, Oukteroni immunodiffusion method, rocket immunoelectrophoresis, tissue immunostaining, complement fixation assay, two-dimensional electrophoresis assay, liquid chromatography- For diagnosis of breast cancer, performed by liquid chromatography-Mass Spectrometry (LC-MS), LC-MS/MS (Liquid chromatography-Mass Spectrometry/ Mass Spectrometry), Western blotting or ELISA (enzyme linked immunosorbentassay) How to Provide Information.
상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드의 발현 수준의 측정은 다중 반응 모니터링 (multiple reaction monitoring; MRM) 방법에 의하는, 유방암의 진단을 위한 정보 제공 방법.
According to claim 7,
The measurement of the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 is a method of providing information for diagnosis of breast cancer by a multiple reaction monitoring (MRM) method.
상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드의 타겟 펩티드에서 어미이온의 질량 대 전하비는 336.607 m/z 이고, 딸이온의 질량 대 전하비는 447.235, 403.719, 360.203, 286.669, 218.139 및 144.605 m/z 인, 유방암의 진단을 위한 정보 제공 방법.
According to claim 11,
In the target peptide of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2, the mass-to-charge ratio of the mother ion is 336.607 m / z, and the mass-to-charge ratio of daughter ions is 447.235, 403.719, 360.203, 286.669, 218.139 and 144.605 m / z, Information provision method for diagnosis of breast cancer.
상기 다중 반응 모니터링 방법 시 내부 표준 물질은 타겟 펩티드를 구성하는 특정 아미노산을 동위원소로 치환한 합성 펩티드 또는 대장균 베타 갈락토시다아제를 사용하는, 유방암의 진단을 위한 정보 제공 방법.
According to claim 12,
In the multiple reaction monitoring method, the internal standard material is a synthetic peptide or E. coli beta galactosidase in which a specific amino acid constituting the target peptide is substituted with an isotope, a method for providing information for diagnosis of breast cancer.
상기 대장균 베타 갈락토시다아제의 타겟 펩티드는 서열번호 3으로 표시되는 폴리펩티드로 이루어지며 어미이온과 딸이온은 각각 542.3 m/z 와 636.3 m/z 인, 유방암의 진단을 위한 정보 제공 방법.
According to claim 13,
The target peptide of the E. coli beta-galactosidase consists of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 3, and the mother ion and daughter ion are 542.3 m / z and 636.3 m / z, respectively, information providing method for diagnosis of breast cancer.
상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 제제는 상기 폴리펩티드를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머, 프로브 및 안티센스 뉴클레오티드로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는, 유방암의 진단을 위한 정보 제공 방법.
According to claim 7,
The agent for measuring the expression level of the gene encoding the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 includes at least one selected from the group consisting of primers, probes, and antisense nucleotides that specifically bind to the gene encoding the polypeptide, Information provision method for diagnosis of breast cancer.
상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드를 코딩하는 유전자의 발현 수준의 측정은 역전사 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사 중합효소반응(Competitive RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소반응(Real-time RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA; RNase protection assay), 노던 블랏팅(Northern blotting) 또는 DNA 칩에 의하는, 유방암의 진단을 위한 정보 제공 방법.
According to claim 7,
Measurement of the expression level of the gene encoding the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 is reverse transcription polymerase reaction (RT-PCR), competitive reverse transcription polymerase reaction (Competitive RT-PCR), real-time reverse transcription polymerase reaction (Real-time RT - A method for providing information for diagnosis of breast cancer by PCR), RNase protection assay (RPA), Northern blotting, or DNA chip.
상기 목적하는 개체의 생물학적 시료에 대하여 측정된 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준이 정상 대조군에 비하여 증가한 경우, 상기 유방암의 발병 가능성이 높은 것으로 예측하는, 유방암의 진단을 위한 정보 제공 방법.
According to claim 7,
When the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding it measured in the biological sample of the subject is increased compared to the normal control group, the diagnosis of breast cancer is predicted to be highly likely to occur. How to provide information for
상기 정보 제공 방법은 목적하는 개체의 화학적 항암 치료 또는 면역 치료에 대한 반응성을 예측하는 것인, 유방암의 진단을 위한 정보 제공 방법.
According to claim 7,
The method of providing information for diagnosing breast cancer, wherein the method of providing information predicts the responsiveness of a subject to chemotherapy or immunotherapy.
상기 정보 제공 방법은 목적하는 개체가 외과적 수술 후 예후를 예측하는 것인, 유방암의 진단을 위한 정보 제공 방법.
According to claim 7,
The information providing method is an information providing method for diagnosing breast cancer, wherein the target subject predicts a prognosis after a surgical operation.
상기 정보 제공 방법은 상기 목적하는 개체의 유방암의 병기를 진단하는 것인, 유방암의 진단을 위한 정보 제공 방법.
According to claim 7,
The method of providing information for diagnosing breast cancer, wherein the method of providing information is diagnosing the stage of breast cancer of the target subject.
상기 정보 제공 방법은 상기 목적하는 개체의 유방암의 재발 가능성을 예측하는 것인, 유방암의 진단을 위한 정보 제공 방법.
According to claim 7,
The method of providing information for diagnosing breast cancer, wherein the information providing method predicts the possibility of recurrence of breast cancer of the target subject.
상기 시료에 포함된 시료에서 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자를 검출하는 검출부; 및
상기 검출부로부터 수득된 환자의 상기 서열번호 2로 표시되는 폴리펩티드 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준과 정상인의 수준을 비교하는 비교부를 포함하고,
상기 비교부를 통해서 얻는 결과에 따라 유방암을 진단하는, 진단 장치.A sample unit containing a sample obtained from a patient;
a detector for detecting the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 in the sample included in the sample; and
Comprising a comparison unit for comparing the expression level of the polypeptide represented by SEQ ID NO: 2 or the gene encoding the same of the patient obtained from the detection unit and the level of a normal person,
A diagnosis device for diagnosing breast cancer according to a result obtained through the comparison unit.
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