KR102489109B1 - Composition for treating dystonia comprising acetylcholine receptor gene variants - Google Patents
Composition for treating dystonia comprising acetylcholine receptor gene variants Download PDFInfo
- Publication number
- KR102489109B1 KR102489109B1 KR1020200066428A KR20200066428A KR102489109B1 KR 102489109 B1 KR102489109 B1 KR 102489109B1 KR 1020200066428 A KR1020200066428 A KR 1020200066428A KR 20200066428 A KR20200066428 A KR 20200066428A KR 102489109 B1 KR102489109 B1 KR 102489109B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- dystonia
- acetylcholine receptor
- present
- gene
- acetylcholine
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- A61K38/1787—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for neuromediators, e.g. serotonin receptor, dopamine receptor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Neurology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
본 발명은 본 발명은 아세틸콜린 수용체(acetylcholine receptors; AChR) 변이 유전자를 유효성분으로 포함하는 근긴장 이상증 치료용 조성물에 대한 것이다. 본 발명에서는 아세틸콜린 수용체의 활성을 연장시켜 느린 통로 증후군(slow channel syndrome)을 만드는 것으로 알려진 AChRε L289F를 아데노 연관 바이러스를 이용하여 마우스에 주사한 것으로, 도입 유전자가 발현하면서 마우스의 다리가 약해지며, 느린 통로 증후군의 치료제인 플루옥세틴(fluoxetine)을 투여했을 때 다리 힘이 돌아오는 것을 확인하였다. 즉, 신경근접합의 기능을 무력화시키기 위해 아세틸콜린 수용체 변이 유전자를 도입하여, 근긴장 이상에 대한 지속적이면서도 조절 가능한 치료에 유용할 것이라는 가능성을 제시하였다.The present invention relates to a composition for treating dystonia comprising an acetylcholine receptors (AChR) mutant gene as an active ingredient. In the present invention, AChRε L289F, which is known to cause slow channel syndrome by prolonging the activity of acetylcholine receptors, was injected into mice using an adeno-associated virus. It was confirmed that leg strength returned when fluoxetine, a treatment for slow passage syndrome, was administered. In other words, by introducing an acetylcholine receptor mutant gene to disable the function of the neuromuscular junction, the possibility was suggested that it would be useful for a continuous and controllable treatment for dystonia.
Description
본 발명은 아세틸콜린 수용체(acetylcholine receptors; AChR) 변이 유전자를 유효성분으로 포함하는 근긴장 이상증 치료용 조성물에 대한 것이다.The present invention relates to a composition for treating dystonia comprising an acetylcholine receptors (AChR) mutant gene as an active ingredient.
근긴장 이상증(dystonia)은 불수의적인 근육수축을 특징으로 하는 신경학적 운동장애이다. 이러한 비정상적인 근육수축에 영향을 받는 신체부위는 비자발적으로 비틀리게 되어 자연스럽지 못한 자세를 만들며 원하는 동작을 수행할 수 없게 되고, 심한 통증을 동반할 수 있다. 많은 질환과 관련하여 다양한 형태와 정도로 발생하는데, 서경(writer's cramp)과 같은 경우는 신체 한 부분에서 특정 동작에서만 발생, 사경(torticollis)은 신체 한부분에만 고정성으로 발생, 뇌성마비나 유전성 전신 근긴장 이상에서는 전신에 심한 근긴장 이상이 평생 지속된다.Dystonia is a neurological movement disorder characterized by involuntary muscle contractions. A body part affected by such abnormal muscle contraction is twisted involuntarily, creating an unnatural posture, making it impossible to perform a desired motion, and may be accompanied by severe pain. It occurs in various forms and degrees in relation to many diseases, such as writer's cramp, which occurs only in a specific movement in one part of the body, torticollis, which occurs fixedly in one part of the body, cerebral palsy or hereditary generalized dystonia In this case, severe dystonia throughout the body persists throughout life.
근긴장 이상이 심한 경우 매우 고통스럽고 일상 생활에 지장을 주지만, 원인 치료가 가능한 경우는 흔치 않다. 미국에는 25만명의 사람들이 근긴장 이상을 앓고 있어 필수진전 및 파킨슨병에 이어 세 번째로 흔한 운동 장애이며, 모든 인종의 전 연령대에 발생할 수 있다. 심부뇌자극으로 근긴장 이상을 만드는 뇌신경 회로에 변화를 주어 근긴장 이상을 해소하는 방법도 있으나, 침습적인 치료방법이며 적용 범위가 제한되어 있다.Severe dystonia is very painful and interferes with daily life, but it is rare that the cause can be treated. About 250,000 people in the United States have dystonia, making it the third most common movement disorder after essential tremor and Parkinson's disease, and can affect people of all races and all ages. There is also a method to relieve dystonia by changing the cranial nerve circuit that creates dystonia with deep brain stimulation, but it is an invasive treatment method and the scope of application is limited.
국소 근긴장 이상의 가장 일반적인 치료방법은 보툴리너스 독소 (보톡스) 주입으로, 이 약물을 주입하면 수개월 동안 신경근접합이 무력화되어 근긴장 이상이 완화된다. 하지만, 고가의 약물을 사용해야 하며, 시간에 따라 효과가 감소되어 반복 주사해야 하는 불편함이 있다. 이에, 근긴장 이상에 대한 지속적이면서도 조절 가능한 치료 방법이 필요한 실정이다.The most common treatment for focal dystonia is injection of botulinus toxin (Botox), which inactivates the neuromuscular junction for several months and relieves dystonia. However, it is inconvenient to use expensive drugs and to have repeated injections because the effect decreases over time. Accordingly, there is a need for a continuous and controllable treatment method for dystonia.
이에, 본 발명에서는 아세틸콜린 수용체(acetylcholine receptors; AChR) 변이 유전자 또는 상기 유전자가 코딩하는 단백질을 유효성분으로 포함하는 근긴장 이상증 개선 또는 치료용 조성물을 제공하는 데에 그 목적이 있다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a composition for improving or treating dystonia containing, as an active ingredient, a mutant gene of acetylcholine receptors (AChR) or a protein encoded by the gene.
본 발명은 아세틸콜린 수용체(acetylcholine receptors; AChR) 변이 유전자 또는 상기 유전자가 코딩하는 단백질을 유효성분으로 포함하는 근긴장 이상증 치료용 약학조성물을 제공한다.The present invention provides a pharmaceutical composition for treating dystonia containing, as an active ingredient, an acetylcholine receptors (AChR) mutant gene or a protein encoded by the gene.
본 발명은 본 발명은 아세틸콜린 수용체(acetylcholine receptors; AChR) 변이 유전자를 유효성분으로 포함하는 근긴장 이상증 치료용 조성물에 대한 것이다. 본 발명에서는 아세틸콜린 수용체의 활성을 연장시켜 느린 통로 증후군(slow channel syndrome)을 만드는 것으로 알려진 AChRε L289F를 아데노 연관 바이러스를 이용하여 마우스에 주사한 것으로, 도입 유전자가 발현하면서 마우스의 다리가 약해지며, 느린 통로 증후군의 치료제인 플루옥세틴(fluoxetine)을 투여했을 때 다리 힘이 돌아오는 것을 확인하였다. 즉, 신경근접합의 기능을 무력화시키기 위해 아세틸콜린 수용체 변이 유전자를 도입하여, 근긴장 이상에 대한 지속적이면서도 조절 가능한 치료에 유용할 것이라는 가능성을 제시하였다.The present invention relates to a composition for treating dystonia comprising an acetylcholine receptors (AChR) mutant gene as an active ingredient. In the present invention, AChRε L289F, which is known to cause slow channel syndrome by prolonging the activity of acetylcholine receptors, was injected into mice using an adeno-associated virus. It was confirmed that leg strength returned when fluoxetine, a treatment for slow passage syndrome, was administered. In other words, by introducing an acetylcholine receptor mutant gene to disable the function of the neuromuscular junction, the possibility was suggested that it would be useful for a continuous and controllable treatment for dystonia.
도 1은 아데노 연관 바이러스 주사 후 도입된 유전자를 형광면역염색과 웨스턴 블롯을 통해 확인한 결과를 나타낸다. A. 도입된 아세틸콜린 수용체에 붙어있는 FLAG 항원이 근섬유에 충분히 과발현하고 있다. B. 웨스턴 블롯에서도 양쪽 앞정강이근에 야생형 및 변이형 아세틸콜린 수용체가 과발현하고 있다.
도 2는 변이형 아세틸콜린 유전자가 도입된 왼쪽 다리에서 위약이 발생한 결과를 나타낸다. 아세틸콜린 수용체 유전자가 발현하고 19주째의 사진으로, 왼쪽 발목만 처진 것을 확인할 수 있다.
도 3은 왼쪽 다리의 위약을 보폭검사로 재확인한 결과를 나타낸다. 아세틸콜린 유전자 도입을 하지 않은 대조 마우스에서는 양발 보폭 차이가 없으나, 유전자 도입을 한 경우에는 왼발 위약으로 인해, [왼발→오른발] 간격이 [오른발→ 왼발] 간격보다 뚜렷이 짧아진 것을 확인할 수 있다.
도 4는 플루옥세틴(fluoxetine) 투여를 통한 근력 회복 결과를 나타낸다. 느린 통로 증후군의 치료제인 플루옥세틴(fluoxetine)을 투여하여 왼쪽 다리의 근력이 회복된 것을 확인하였다. 변이 유전자의 도입으로 인한 위약은 가역적이고 기능적임을 보여주는 결과이다.Figure 1 shows the results of confirming the gene introduced after adeno-associated virus injection through fluorescence immunostaining and Western blotting. A. The FLAG antigen attached to the introduced acetylcholine receptor is sufficiently overexpressed in muscle fibers. B. In Western blotting, wild-type and mutant acetylcholine receptors were overexpressed in both tibialis anterior muscles.
Figure 2 shows the results of placebo occurrence in the left leg into which the mutant acetylcholine gene was introduced. In the photo at 19 weeks after the acetylcholine receptor gene was expressed, only the left ankle was drooping.
Figure 3 shows the results of reconfirming the weakness of the left leg by the stride test. There was no difference in stride length between the two feet in the control mice without introduction of the acetylcholine gene, but in the case of introduction of the gene, the [left foot → right foot] interval was significantly shorter than the [right foot → left foot] interval due to left foot placebo.
Figure 4 shows the results of muscle strength recovery through administration of fluoxetine (fluoxetine). It was confirmed that muscle strength of the left leg was restored by administering fluoxetine, a treatment for slow passage syndrome. The result shows that the placebo caused by the introduction of the mutant gene is reversible and functional.
본 발명은 아세틸콜린 수용체(acetylcholine receptors; AChR) 변이 유전자 또는 상기 유전자가 코딩하는 단백질을 유효성분으로 포함하는 근긴장 이상증 치료용 약학조성물을 제공한다.The present invention provides a pharmaceutical composition for treating dystonia containing, as an active ingredient, an acetylcholine receptors (AChR) mutant gene or a protein encoded by the gene.
상세하게는, 상기 아세틸콜린 수용체 변이 유전자는 AChRα V176M, AChRα G173S, AChRα S289I, AChRα N237K, AChRα S246F, AChRα S246Y, AChRα V269F, AChRα T274I, AChRα C438W, AChRβ V252F, AChRβ L285M, AChRβ T288S, AChRβ V289M, AChRδ S289Y, AChRδ S289F, AChRε L241F, AChRε V279L, AChRε T284P, AChRε V285A 및 AChRε L289F로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.Specifically, the acetylcholine receptor mutant gene is AChRα V176M, AChRα G173S, AChRα S289I, AChRα N237K, AChRα S246F, AChRα S246Y, AChRα V269F, AChRα T274I, AChRα C438W, AChRβ V252F, AChRβ L28βM, AChRβ L28βM, AChRβ L28βM, AChRβ It may be one or more selected from the group consisting of AChRδ S289Y, AChRδ S289F, AChRε L241F, AChRε V279L, AChRε T284P, AChRε V285A, and AChRε L289F, but is not limited thereto.
본 명세서에서 기재된 아세틸콜린 수용체 변이 유전자는 느린 통로 증후군 관련 변이로서, signal peptide를 포함한 명명으로 다음과 같이 기재될 수도 있다.The acetylcholine receptor mutant gene described herein is a slow passage syndrome-related mutation, and may be described as a name including a signal peptide as follows.
- CHRNA1 (NP_000070): p.V176M, p.G173S, p.S289I, p.N237K, p.S246F, p.S246Y, p.V269F, p.T274I, p.C438W- CHRNA1 (NP_000070): p.V176M, p.G173S, p.S289I, p.N237K, p.S246F, p.S246Y, p.V269F, p.T274I, p.C438W
- CHRNB1 (NP_000738): p.V252F, p.L285M, p.T288S, p.V289M-CHRNB1 (NP_000738): p.V252F, p.L285M, p.T288S, p.V289M
- CHRND (NP_000742): p.S289Y, p.S289F- CHRND (NP_000742): p.S289Y, p.S289F
- CHRNE (NP_000071): p.L241F, p.V279L, p.T284P, p.V285A, p.L289F- CHRNE (NP_000071): p.L241F, p.V279L, p.T284P, p.V285A, p.L289F
본 발명의 아세틸콜린 수용체 변이 유전자의 NCBI accession number는 사람 NM_000080.4 (NP_000071.1), 마우스 NM_009603.4일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 사람 및 마우스의 유전자는 매우 비슷하며, p.L289F (NP_033733.1) 변이 위치는 같다. 한편, 아세틸콜린 수용체 변이 유전자의 자세한 변이 정보는 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/rs121909511#publications에서 확인 가능하다.The NCBI accession number of the acetylcholine receptor mutant gene of the present invention may be human NM_000080.4 (NP_000071.1) and mouse NM_009603.4, but is not limited thereto. In addition, the human and mouse genes are very similar, and the p.L289F (NP_033733.1) mutation location is the same. On the other hand, detailed mutation information of the acetylcholine receptor mutant gene can be found at https://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/rs121909511#publications.
바람직하게는, 상기 아세틸콜린 수용체 변이 유전자는 아데노 연관 바이러스(Adeno-Associated Virus, AAV) 벡터에 포함되어 있을 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.Preferably, the acetylcholine receptor mutant gene may be included in an adeno-associated virus (AAV) vector, but is not limited thereto.
바람직하게는, 상기 조성물은 신경근접합의 기능 부전을 일으켜 근력을 약화시켜 근긴장 이상증을 치료할 수 있다.Preferably, the composition can treat dystonia by causing dysfunction of the neuromuscular junction to weaken muscle strength.
본 발명의 약학 조성물 또는 복합 제제는 유효 성분 이외에 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등의 가용화제를 사용할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 투여를 위해서 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1 종 이상 포함하여 약학 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. The pharmaceutical composition or combined preparation of the present invention can be prepared using pharmaceutically suitable and physiologically acceptable adjuvants in addition to the active ingredients, and the adjuvants include excipients, disintegrants, sweeteners, binders, coating agents, expanding agents, and lubricants. , solubilizing agents such as lubricants or flavoring agents may be used. The pharmaceutical composition of the present invention may be preferably formulated as a pharmaceutical composition by including one or more pharmaceutically acceptable carriers in addition to the active ingredient for administration. In compositions formulated as liquid solutions, acceptable pharmaceutical carriers are sterile and biocompatible, and include saline, sterile water, Ringer's solution, buffered saline, albumin injection solution, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol and One or more of these components may be mixed and used, and other conventional additives such as antioxidants, buffers, and bacteriostatic agents may be added if necessary. In addition, diluents, dispersants, surfactants, binders, and lubricants may be additionally added to prepare formulations for injections such as aqueous solutions, suspensions, and emulsions, pills, capsules, granules, or tablets.
본 발명의 약학 조성물의 약제 제제 형태는 과립제, 산제, 피복정, 정제, 캡슐제, 좌제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 및 활성 화합물의 서방출형 제제 등이 될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 복강내, 흉골내, 경피, 비측내, 흡입, 국소, 직장, 경구, 안구내 또는 피내 경로를 통해 통상적인 방식으로 투여할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물의 유효성분의 유효량은 질환의 치료 요구되는 양을 의미한다. 따라서, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효 성분 및 다른 성분의 종류 및 함량, 제형의 종류 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. The pharmaceutical formulation form of the pharmaceutical composition of the present invention may be granules, powders, coated tablets, tablets, capsules, suppositories, syrups, juices, suspensions, emulsions, drops or injectable solutions, and sustained-release preparations of active compounds. can The pharmaceutical composition of the present invention can be administered in a conventional manner via intravenous, intraarterial, intraperitoneal, intramuscular, intraarterial, intraperitoneal, intrasternal, transdermal, intranasal, inhalational, topical, rectal, oral, intraocular or intradermal routes. can be administered with The effective amount of the active ingredient of the pharmaceutical composition of the present invention means the amount required for treatment of a disease. Therefore, the type of disease, the severity of the disease, the type and amount of the active ingredient and other ingredients contained in the composition, the type of formulation and the patient's age, weight, general health condition, sex and diet, administration time, administration route and composition It can be controlled by various factors including secretion rate, duration of treatment, and drugs used concurrently.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.Hereinafter, examples will be described in detail to aid understanding of the present invention. However, the following examples are merely illustrative of the contents of the present invention, but the scope of the present invention is not limited to the following examples. The embodiments of the present invention are provided to more completely explain the present invention to those skilled in the art.
<< 실시예Example > >
1.야생형과 변이형의 아세틸콜린 수용체 유전자를 운반하는 1. Carrying wild-type and mutant acetylcholine receptor genes 아데노adeno 연관 바이러스 제작 Associated virus production
야생형과 변이형의 엡실론 아세틸콜린 수용체 유전자를 전달하기 위해, pAAV-CMV-AChRε_WT-3XFlag-IRES-eGFP와 pAAV-CMV-AChRε_L289F-3XFlag-IRES-mRFP를 제작하였고, 이를 이용하여 아데노 연관 바이러스(Adeno-Associated Virus, AAV)를 제작하였다.To transfer the wild-type and mutant epsilon acetylcholine receptor genes, pAAV-CMV-AChRε_WT-3XFlag-IRES-eGFP and pAAV-CMV-AChRε_L289F-3XFlag-IRES-mRFP were prepared, and adeno-associated virus (Adeno -Associated Virus, AAV) was produced.
2. 2. 아데노adeno 연관 바이러스 벡터를 마우스 뒷다리에 주사 Injecting the associated viral vector into the mouse hind limb
6주령의 정상 C57BL/6 마우스 뒷다리의 오른쪽 앞정강이근에는 야생형의 엡실론 아세틸콜린 수용체 (pAAV-CMV-AChRε_WT-3XFlag-IRES-eGFP), 왼쪽 앞정강이근에는 변이형의 엡실론 아세틸콜린 수용체 (pAAV-CMV-AChRε_L289F-3XFlag-IRES-mRFP) 유전자를 운반하는 아데노 연관 바이러스를 각각 주사하였다. 사용한 바이러스의 농도는 각각 2×1011 viral genome 이었다. A wild-type epsilon acetylcholine receptor (pAAV-CMV-AChRε_WT-3XFlag-IRES-eGFP) was present in the right anterior tibialis muscle of the hind limb of 6-week-old normal C57BL/6 mice, and a mutant epsilon acetylcholine receptor (pAAV-CMV- Adeno-associated virus carrying the AChRε_L289F-3XFlag-IRES-mRFP) gene was injected respectively. The concentration of virus used was 2×10 11 viral genome, respectively.
아데노 연관 바이러스 주사 후 도입된 유전자를 형광면역염색과 웨스턴 블롯을 통해 확인하였다. 도입된 아세틸콜린 수용체에 붙어있는 FLAG 항원이 근섬유에 충분히 과발현하고 있고(도 1A), 웨스턴 블롯에서도 양쪽 앞정강이근에 야생형 및 변이형 아세틸콜린 수용체가 과발현하고 있다(도 1B). After adeno-associated virus injection, the introduced gene was confirmed by fluorescence immunostaining and Western blotting. The FLAG antigen attached to the introduced acetylcholine receptor was sufficiently overexpressed in muscle fibers (FIG. 1A), and western blots showed wild-type and mutant acetylcholine receptors overexpressed in both tibialis anterior muscles (FIG. 1B).
3. 변이형 아세틸콜린 수용체가 도입된 왼쪽 다리에서는 위약 발생3. Placebo occurred in the left leg in which the mutant acetylcholine receptor was introduced.
아데노 관련 바이러스 양쪽 뒷다리 앞정강이근에 주사하였으며, 야생형 아세틸콜린 유전자가 도입된 오른쪽 다리는 위약이 없는 반면, 변이형 아세틸콜린 유전자가 도입된 왼쪽다리는 발목 처짐이 발생하였다(도 2). 앞정강이근은 발목을 몸쪽으로 들어올리는 근육이다.Adeno-associated virus was injected into the anterior tibialis muscle of both hind limbs, and the right leg into which the wild-type acetylcholine gene was introduced showed no placebo, whereas the left leg into which the mutant acetylcholine gene was introduced showed sagging ankles (FIG. 2). The tibialis anterior muscle is the muscle that lifts the ankle toward the body.
4. 왼쪽 다리의 위약을 보폭검사로 재확인4. Weakness of the left leg was reconfirmed with a stride test
동일한 마우스 그룹에서 왼쪽 다리의 위약을 확인한 뒤 걸음걸이를 잉크로 찍어서 보폭을 측정하였다. 바이러스를 주사하지 않은 대조 마우스는 양쪽의 보폭이 대칭적인 반면, 실험군에서 아세틸콜린 수용체 변이가 도입된 왼쪽 다리는 근육힘이 부족하여 양쪽 보폭이 차이가 나는 것을 확인하였다(도 3).After confirming weakness of the left leg in the same group of mice, the gait was stamped with ink to measure the stride length. In the control mice not injected with the virus, both stride lengths were symmetrical, whereas in the experimental group, the left leg with the acetylcholine receptor mutation showed a difference in both stride lengths due to lack of muscle strength (FIG. 3).
5. 플루옥세틴(5. Fluoxetine ( fluoxetinefluoxetine ) 투여를 통한 회복) recovery through administration
플루옥세틴(fluoxetine)은 아세틸콜린 수용체의 개방시간을 단축시켜, 본 발명에 사용된 변이로 인한 느린 통로 증후군을 완화 시켜주는 약물이다. 왼쪽 다리 위약이 발생한 상태에서, 이 유전자 변이에 대한 치료제인 플루옥세틴(fluoxetine)을 18 mg/kg/day의 농도로 9주 동안 물에 녹여서 섭취시켰다. 변이 아세틸콜린 수용체 도입으로 약해졌던 왼쪽 다리가 플루옥세틴(fluoxetine) 섭취 후 근력을 회복하였다(도 4). Fluoxetine is a drug that shortens the opening time of acetylcholine receptors and alleviates slow passage syndrome caused by the mutation used in the present invention. In the state of left leg weakness, fluoxetine, a treatment for this genetic mutation, was dissolved in water at a concentration of 18 mg/kg/day and ingested for 9 weeks. The left leg, which had been weakened due to the introduction of the mutant acetylcholine receptor, recovered muscle strength after ingesting fluoxetine (FIG. 4).
즉, 마비성 식중독을 가져오는 보툴리너스 독소 (보톡스)를 정제하여 근긴장 이상을 치료하는 방법의 경우, 3개월에 한 번씩 재주사가 필요하지만, 본 발명은 한 번의 주사로도 더욱 지속적인 효과를 낼 수 있다. That is, in the case of the method of treating dystonia by purifying botulinus toxin (Botox), which causes paralytic food poisoning, re-injection is required once every 3 months, but the present invention will have a more continuous effect even with a single injection. can
또한, 본 발명에서 사용한 아세틸콜린 수용체 변이 유전자들은 근육을 비가역적으로 파괴시키지 않고 약하게만 만들며, 혹시 과발현으로 인해 심한 근무력이 발생하더라도, 안전하게 사용할 수 있는 플루옥세틴(fluoxetine)으로 조절이 가능하다.In addition, the acetylcholine receptor mutant genes used in the present invention do not irreversibly destroy muscles but only weaken them, and even if severe muscle weakness occurs due to overexpression, they can be controlled with fluoxetine, which can be safely used.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.Having described specific parts of the present invention in detail above, it is clear to those skilled in the art that these specific descriptions are only preferred embodiments, and the scope of the present invention is not limited thereby. something to do. Accordingly, the substantial scope of the present invention will be defined by the appended claims and their equivalents.
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020200066428A KR102489109B1 (en) | 2020-06-02 | 2020-06-02 | Composition for treating dystonia comprising acetylcholine receptor gene variants |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020200066428A KR102489109B1 (en) | 2020-06-02 | 2020-06-02 | Composition for treating dystonia comprising acetylcholine receptor gene variants |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20210149413A KR20210149413A (en) | 2021-12-09 |
| KR102489109B1 true KR102489109B1 (en) | 2023-01-16 |
Family
ID=78866230
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020200066428A KR102489109B1 (en) | 2020-06-02 | 2020-06-02 | Composition for treating dystonia comprising acetylcholine receptor gene variants |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR102489109B1 (en) |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20060032633A (en) * | 2003-07-11 | 2006-04-17 | 엘비온 아게 | Method of treating or preventing central nervous system disorders with compounds having selectivity for the alpha 3 subunit of the benzodiazepine receptor |
| KR20140003580A (en) | 2011-01-27 | 2014-01-09 | 노파르티스 아게 | Use of nicotinic acetylcholine receptor alpha 7 activators |
| CA3030147A1 (en) * | 2016-07-07 | 2018-01-11 | Howard Hughes Medical Institute | Modified ligand-gated ion channels and methods of use |
-
2020
- 2020-06-02 KR KR1020200066428A patent/KR102489109B1/en active IP Right Grant
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Journal of Neurology. 2012. Vol.259, pp.474-481. |
| Neuroscience. 2020. Vol.440. pp.337-359. |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20210149413A (en) | 2021-12-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20230105611A1 (en) | Combination therapy with cgrp antagonists and clostridial derivatives | |
| US6335021B1 (en) | Composition for controlling mood disorders in healthy individuals | |
| US20230158128A1 (en) | Cgrp antagonists and clostridial derivatives for the treatment of neuropsychiatric and neurological disorders | |
| WO2004039322A2 (en) | Novel combination therapy for schizophrenia focused on improved cognition: 5-ht-2a/d2 blockade with adjunctive blockade of prefrontal da reuptake | |
| JP6889154B2 (en) | A pharmaceutical composition for the treatment of myocytopenia containing a glucagon-like peptide-1 receptor enhancer. | |
| KR102489109B1 (en) | Composition for treating dystonia comprising acetylcholine receptor gene variants | |
| Nagatomo et al. | Relationships between convulsive seizures and serum and brain concentrations of phenobarbital and zonisamide in mutant inbred strain EL mouse | |
| EA006881B1 (en) | USE OF gp130 ACTIVATORS IN DIABETIC NEUROPATHY | |
| EA012264B1 (en) | Pharmaceutical compositions based on nk2 antagonists for pediatric use | |
| WO2022261400A1 (en) | Methods and compositions for treating seizure disorders in pediatric patients | |
| WO2017211273A1 (en) | Dsg2-derived peptides | |
| Lader | Antianxiety drugs: clinical pharmacology and therapeutic use | |
| Scollo-Lavizzari et al. | A Clinical Note on a New Antiepileptic,‘Depakine®’ | |
| Pappalardo et al. | Pharmacologic management of spasticity in multiple sclerosis | |
| JPH0143727B2 (en) | ||
| WO2018195055A1 (en) | Therapies for treating infantile spasms and other treatment-resistant epilepsies | |
| JP6840178B2 (en) | Use of hydroxyanigorphon | |
| Uchihara et al. | Myoclonus with burning sensation in legs that remits with sympathetic blockade | |
| Maspero et al. | Long-Term Safety of Dupilumab in Patients With Moderate-to-Severe Asthma: TRAVERSE Continuation Study | |
| US10265300B2 (en) | Methods of treating seizure disorders | |
| WO2017070731A1 (en) | Compositions and methods for the treatment of alzheimer's disease | |
| WO2017059486A1 (en) | Compositions and methods for the treatment of epilepsy | |
| JPH02501389A (en) | Medicinal preparations for the treatment of multiple sclerosis and amyotrophic lateral sclerosis | |
| Rueter et al. | Improving the therapeutic window in the treatment of pain with nicotinic ligands | |
| US20070082013A1 (en) | Use of botulinum toxin for producing drug for preventing or treating final phase of lung troubles |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant |