KR102478045B1 - Protein markers for predicting of preterm birth and diagnostic methods thereof - Google Patents

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Abstract

본 발명은 조산 예측 진단용 바이오마커에 관한 것으로, 구체적으로 GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 및 TGM3 단백질은 만기 출산과 조산에서 유의한 정량차이를 나타냄을 확인함으로써, 본 발명의 GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 및 TGM3 유전자 또는 단백질을 포함하는 마커 조성물은 조기에 높은 민감도 및 특이도로 조산의 위험도를 평가하는데 사용될 수 있으며, 이를 통한 조산을 예방할 수 있다.The present invention relates to a biomarker for predicting preterm birth, and specifically, by confirming that the GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 and TGM3 proteins show significant quantitative differences between full term birth and preterm birth, the GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 of the present invention And the marker composition containing the TGM3 gene or protein can be used to assess the risk of preterm birth with high sensitivity and specificity at an early stage, thereby preventing premature birth.

Description

조산 예측을 위한 진단용 단백질 마커 및 진단 방법{Protein markers for predicting of preterm birth and diagnostic methods thereof}Protein markers for predicting of preterm birth and diagnostic methods thereof}

본 발명은 조산 예측용 바이오마커에 관한 것으로, 보다 상세하게는 조산의 고위험군을 조기에 판별할 수 있는 단백질 마커 및 그 진단 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a biomarker for predicting premature birth, and more particularly, to a protein marker capable of early determining a high-risk group of premature birth and a method for diagnosing the same.

세계보건기구에 따르면 1,500만명으로 추산되는 신생아가 매년 임신 37주 이전에 조산(preterm birth: PTB)으로 출생하고 있으며, 그 발생율은 매년 증가하고 있는 추세이다. 우리나라에서도 조산율이 매년 10%를 넘는 것으로 추산되고 있으며, 100만명으로 추산되는 신생아가 매년 조산 합병증으로 사망하고, 조산아는 생존 후에도 미숙아로서 신경계 발달장애, 간질, 호흡기 이상, 청각 손실, 시력 손실 등의 이환율이 높아 조산아의 치료에도 막대한 비용이 소모된다. According to the World Health Organization, an estimated 15 million newborns are born prematurely before 37 weeks of pregnancy each year (preterm birth: PTB), and the incidence rate is increasing every year. In Korea, the preterm birth rate is estimated to exceed 10% every year, and an estimated 1 million newborns die every year due to complications of premature birth. The morbidity is high, and treatment of premature babies is costly.

조산은 신생아 이환율과 사망률의 가장 큰 원인으로써, 신생아 사망의 70%가 조기 분만과 연관이 있다는 보고가 있다. 조산이 일어나는 원인은 크게 조기 진통(preterm labor: PTL)과 조기 양막 파수(preterm premature rupture of membrane: PPROM)에 의한 자연적 조산과 산모나 태아의 심각한 문제에 의해 인위적으로 임신을 종결해야하는 경우로 나눌 수 있다. 이 중 많은 빈도를 차지하는 것은 전자인 조기 진통이다. Premature birth is the biggest cause of neonatal morbidity and mortality, and it has been reported that 70% of neonatal deaths are related to premature delivery. The causes of premature birth can be largely divided into natural premature birth due to preterm labor (PTL) and premature rupture of membranes (PPROM), and artificial termination of pregnancy due to serious problems in the mother or fetus. there is. Of these, the most frequent is the former, preterm labor.

그러나 조기 진통의 원인은 정확하게 밝혀지지 않고 있으며, 단지 고령 임신이 증가하고 보조생식술의 발달로 인해 다태 임신이 증가하는 것 때문인 것으로 추측되고 있다. 현재까지 조산의 치료를 위하여 조기 진통의 산모에게 자궁수축 억제제 투여, 항생제 치료, 스테로이드제 및 프로게스테론 투여를 통해 진통을 억제하고 분만을 지연시켜 왔다. 그러나 이미 조기 진통 및 조기 양막 파수가 발생한 경우에는 자궁 내 감염 및 염증에 대한 항생제의 치료 효과는 매우 제한적이며 조산을 막을 수는 없는 것으로 알려져 있다. However, the cause of preterm labor has not been precisely identified, and it is speculated that it is only due to the increase in older pregnancies and the increase in multiple pregnancies due to the development of assisted reproductive technology. To date, for the treatment of preterm labor, uterine contraction inhibitor administration, antibiotic treatment, and steroid and progesterone administration have been used to suppress labor pain and delay delivery. However, it is known that the therapeutic effect of antibiotics on intrauterine infection and inflammation is very limited and cannot prevent premature birth if preterm labor and membrane rupture have already occurred.

또한, 자궁경관 무력증의 산모인 경우 감염과 유산에 대한 위험도가 크기 때문에 조기 분만의 치료와 예방을 위해 자궁경부봉축술을 시행해 왔으나, 이것이 근본적인 치료는 될 수 없고, 단기간의 임신 연장에 도움이 되는 정도로 알려져 있다. 따라서 조기 양막 파수나 조산의 증상이 나타난 이후에 치료를 수행하는 것보다 조산의 위험을 조기에 예측하고, 이를 예방하는 것이 필요하다.In addition, since mothers with cervical incompetence have a high risk of infection and miscarriage, cervical ablation has been performed to treat and prevent premature delivery, but this cannot be a fundamental treatment and is helpful in prolonging pregnancy for a short period of time. known as such. Therefore, it is necessary to predict the risk of premature birth at an early stage and to prevent it, rather than performing treatment after symptoms of premature membrane rupture or premature birth appear.

조산을 예측하기 위한 방법으로 risk scoring system, 과거 조산 병력 유무, 초음파를 통한 자궁경관의 변화 확인, 증상과 징후, 자궁경관 및 질 내 태아 파이브로넥틴(fetal fibronectin) 검출, ambulatory ureine contraction test 그리고, 타액 내 estriol 측정 방법들이 있다. 현재 유용하게 이용되는 것은 초음파를 이용하여 자궁경부 길이를 측정하는 것으로, 임신 16~24주 사이에 자궁경부 길이가 2.5 cm 미만인 경우 조산의 위험이 높아지는 것으로 판단하고 있다. As a method for predicting preterm birth, a risk scoring system, the presence or absence of a history of preterm birth, confirmation of changes in the cervical cervix through ultrasound, symptoms and signs, detection of fetal fibronectin in the cervix and vagina, ambulatory ureine contraction test, and, There are several methods for measuring estriol in saliva. Currently, it is useful to measure cervical length using ultrasound, and it is judged that the risk of premature birth increases if the cervical length is less than 2.5 cm between 16 and 24 weeks of pregnancy.

그러나 이러한 방법들은 그 방식이 민감하거나 특이적이지 않다는 문제가 있어, 생화학적인 표지자를 발견하고자 하는 연구가 시행되어 왔고, 프로게스테론 또는 C-반응성 단백질(C-reactive protein)과 같은 물질들이 후보로 거론되었으나 이 역시 정확도가 떨어지는 문제가 있다. 따라서 보다 검출이 용이하고 민감도 및 특이도가 높은 단백질 마커의 개발이 필요한 실정이다.However, these methods have a problem that they are not sensitive or specific, so studies to find biochemical markers have been conducted, and substances such as progesterone or C-reactive protein have been mentioned as candidates. This also has a problem with poor accuracy. Therefore, there is a need to develop protein markers that are easier to detect and have higher sensitivity and specificity.

이에, 본 발명자들은 정상 임산부들과 조산을 겪은 임산부 사이의 유전자의 발현 및 단백질 활성 차이를 발견하고, 상기 유전자 또는 단백질이 조산 예측을 진단하는 바이오마커가 될 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성시켰다.Accordingly, the present inventors discovered differences in gene expression and protein activity between normal pregnant women and pregnant women who suffered premature birth, confirmed that the gene or protein could be a biomarker for diagnosing premature birth, and completed the present invention. .

본 발명은 GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 및 TGM3으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질을 포함하는, 조산 예측 진단용 바이오마커를 제공하는 것을 목적으로 한다.An object of the present invention is to provide a biomarker for predicting premature birth, comprising at least one gene selected from the group consisting of GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 and TGM3, or a protein encoded by the gene.

또한, 본 발명은 GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 및 TGM3으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질 및 상기 유전자의 발현 또는 상기 단백질의 활성 수준을 측정할 수 있는 제제를 포함하는, 조산 예측 진단용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.In addition, the present invention relates to at least one gene selected from the group consisting of GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 and TGM3, or a protein encoded by the gene, and an agent capable of measuring the expression of the gene or the activity level of the protein. , It is an object of the present invention to provide a composition for predicting and diagnosing premature birth.

또한, GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 및 TGM3으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질 및 상기 유전자의 발현 또는 상기 단백질의 활성 수준을 측정할 수 있는 제제를 포함하는, 조산 예측 진단용 키트를 제공하는 것을 목적으로 한다.In addition, one or more genes selected from the group consisting of GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 and TGM3 or a protein encoded by the gene and an agent capable of measuring the expression of the gene or the activity level of the protein, Preterm birth prediction It is an object of the present invention to provide a diagnostic kit.

본 발명은 a) 개체로부터 얻은 생물학적 시료에서 GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 및 TGM3으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자의 mRNA의 발현 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질의 활성 수준을 측정하는 단계; 및The present invention comprises the steps of a) measuring the mRNA expression of one or more genes selected from the group consisting of GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 and TGM3 in a biological sample obtained from a subject or the activity level of a protein encoded by the gene; and

b) 상기 유전자의 mRNA의 발현 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질의 활성 수준을 대조군 시료와 비교하는 단계;를 포함하는, 조산 예측 진단을 위한 정보제공 방법을 제공하는 것을 또 다른 목적으로 한다.b) comparing the expression of mRNA of the gene or the activity level of the protein encoded by the gene with a control sample; another object is to provide a method for providing information for predicting and diagnosing premature birth.

상기의 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 및 TGM3으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질을 포함하는, 조산 예측 진단용 바이오마커 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a biomarker composition for predicting and diagnosing premature birth, comprising one or more genes selected from the group consisting of GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 and TGM3, or a protein encoded by the gene.

또한, 본 발명은 GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 및 TGM3으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질 및 상기 유전자의 발현 또는 상기 단백질의 활성 수준을 측정할 수 있는 제제를 포함하는, 조산 예측 진단용 조성물을 제공한다.In addition, the present invention relates to at least one gene selected from the group consisting of GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 and TGM3, or a protein encoded by the gene, and an agent capable of measuring the expression of the gene or the activity level of the protein. , A composition for predicting and diagnosing premature birth is provided.

또한, 본 발명은 GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 및 TGM3으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질 및 상기 유전자의 발현 또는 상기 단백질의 활성 수준을 측정할 수 있는 제제를 포함하는, 조산 예측 진단용 키트를 제공한다.In addition, the present invention relates to at least one gene selected from the group consisting of GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 and TGM3, or a protein encoded by the gene, and an agent capable of measuring the expression of the gene or the activity level of the protein. , A kit for predicting and diagnosing premature birth is provided.

뿐만 아니라, 본 발명은 a) 개체로부터 얻은 생물학적 시료에서 GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 및 TGM3으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자의 mRNA의 발현 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질의 활성 수준을 측정하는 단계; 및 b) 상기 유전자의 mRNA의 발현 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질의 활성 수준을 대조군 시료와 비교하는 단계;를 포함하는, 조산 예측 진단을 위한 정보제공 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a) measuring the mRNA expression of one or more genes selected from the group consisting of GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 and TGM3 in a biological sample obtained from the subject or the activity level of the protein encoded by the gene ; And b) comparing the expression of mRNA of the gene or the activity level of the protein encoded by the gene with a control sample; it provides a method for providing information for predicting and diagnosing premature birth.

본 발명의 일 예에 있어서, 조산 예측 진단을 위한 정보제공 방법으로서 상기 GRN 또는 NEDD8 유전자의 발현 수준 또는 단백질의 활성 수준이 대조군 시료보다 높을 경우 조산의 위험성이 높은 것으로 예측되는 것일 수 있다.In one example of the present invention, as a method for providing information for predicting premature birth, when the expression level or protein activity level of the GRN or NEDD8 gene is higher than that of a control sample, the risk of premature birth may be predicted to be high.

본 발명의 일 예에 있어서, 상기 CA1, SERPINB12 및 TGM3으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자의 mRNA 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질의 발현 또는 활성 수준이 대조군 시료보다 낮을 경우 조산의 위험성이 높은 것으로 예측되는 것일 수 있다.In one example of the present invention, when the mRNA of one or more genes selected from the group consisting of CA1, SERPINB12 and TGM3 or the expression or activity level of the protein encoded by the gene is lower than the control sample, the risk of premature birth is predicted to be high it may be

본 발명의 일 예에 있어서, 상기 생물학적 시료는 혈장, 혈청, 혈액, 소변, 양수, 활액(synovial fluid), 세척액(lavage fluid) 및 자궁경부 질액으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the biological sample may be at least one selected from the group consisting of plasma, serum, blood, urine, amniotic fluid, synovial fluid, lavage fluid, and cervical vaginal fluid.

본 발명의 일 예에 있어서, 상기 mRNA의 발현 수준은 중합효소연쇄반응(PCR), 역전사 중합효소연쇄반응(RTPCR), 실시간 중합효소연쇄반응(Real-Time PCR), Rnase 보호 분석법(Rnase protection assay: RPA), 마이크로 어레이(microarray) 및 노던 블롯팅(northern blotting)으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 방법을 통하여 측정되는 것일 수 있다.In one example of the present invention, the expression level of the mRNA is polymerase chain reaction (PCR), reverse transcription polymerase chain reaction (RTPCR), real-time polymerase chain reaction (Real-Time PCR), Rnase protection assay (Rnase protection assay : RPA), microarray, and may be measured through one or more methods selected from the group consisting of northern blotting.

본 발명의 일 예에 있어서, 상기 단백질의 활성 수준은 웨스턴 블롯팅(western blotting), 효소면역분석법(ELISA), 면역침강법(immunoprecipitation), 면역형광염색법(immunofluorescene), 및 단백질 칩(protein chip)으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 방법을 통하여 측정되는 것일 수 있다.In one example of the present invention, the activity level of the protein is measured by western blotting, enzyme immunoassay (ELISA), immunoprecipitation, immunofluorescence staining, and protein chip. It may be measured through one or more methods selected from the group consisting of.

본 발명에 따른 조산 예측용 바이오마커 조성물은 임상적 진단이 어려운 무증상 임산부에 대해서도 조산을 조기에 예측할 수 있도록 함으로써, 사전 치료로 조산을 예방할 수 있다. The biomarker composition for predicting premature birth according to the present invention can prevent premature birth through prior treatment by enabling early prediction of premature birth even for asymptomatic pregnant women for whom clinical diagnosis is difficult.

또한, 본 발명에 따른 조산 예측을 위한 진단 방법 또는 조산 예측 진단을 위한 정보제공 방법에 의하면 경질 초음파 검사에 의한 자궁경부의 길이를 측정하는 검사에 비해 정확도 및 특이도가 높다. In addition, according to the diagnosis method for predicting premature birth or the method for providing information for predicting and diagnosing premature birth according to the present invention, the accuracy and specificity are higher than that of the test for measuring the length of the cervix by transvaginal ultrasonography.

본 발명에 따른 조산 예측용 바이오마커 조성물을 이용하여 다양한 단백질군을 마커로 활용함으로써 민감도를 높여 침습적인 추가 검사를 통하지 않고도 조산을 예측하는 것이 가능하다. By using various protein groups as markers using the biomarker composition for predicting premature birth according to the present invention, it is possible to predict premature birth without additional invasive tests by increasing sensitivity.

도 1은 정상 분만 시료와 조산 시료에 대한 질 세척액 유래 단백체 분석 모식도를 나타낸 것이다.
도 2는 정상 분만 시료와 조산 시료에 대한 단백체 정량 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 정상 분만 시료와 조산 시료에 대한 질 세척액에서 up-/down- regulation된 단백질들의 세포 구성성분, 분자기능 및 생물학적 과정에 따른 분류를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명에 따른 단백질 바이오마커 중, 대조군 시료에 비해 조산 시료에서 단백질 발현 수준(expression level)이 낮게 나타나는 바이오마커를 나타낸 비교 그래프이다.
도 5는 본 발명에 따른 단백질 바이오마커 중, 대조군 시료에 비해 조산 시료에서 단백질 발현 수준이 높게 나타나는 바이오마커를 나타낸 비교 그래프이다.
도 6은 추가로 모집된 정상 분만 시료 및 조산 시료를 대상으로, 본 발명에 따른 단백질 바이오마커의 정량적 변화를 비교하여 검증하는 그래프이다.Figure 1 shows a schematic diagram of proteomic analysis derived from vaginal lavage fluid for normal delivery samples and preterm birth samples.
Figure 2 is a graph showing the results of proteomics quantitative analysis for normal delivery samples and preterm birth samples.
Figure 3 is a graph showing the classification according to cellular components, molecular functions, and biological processes of up-/down-regulated proteins in vaginal lavage fluid for normal delivery samples and preterm birth samples.
4 is a comparative graph showing biomarkers showing a lower protein expression level in preterm birth samples than in control samples, among the protein biomarkers according to the present invention.
5 is a comparative graph showing biomarkers showing higher protein expression levels in preterm birth samples than in control samples, among the protein biomarkers according to the present invention.
6 is a graph comparing and verifying quantitative changes in protein biomarkers according to the present invention, targeting additionally recruited normal delivery samples and preterm birth samples.

이하에서 본 발명에 대하여 구체적으로 설명한다. 본 명세서에서 사용되는 용어는 따로 정의하지 않는 경우 해당 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 일반적으로 이해하는 내용으로 해석되어야 할 것이다. 본 명세서의 도면 및 실시예는 통상의 지식을 가진 자가 본 발명을 쉽게 이해하고 실시하기 위한 것으로 도면 및 실시예에서 발명의 요지를 흐릴 수 있는 내용은 생략될 수 있으며, 본 발명이 도면 및 실시예로 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail. Terms used in this specification should be interpreted as generally understood by those skilled in the art unless otherwise defined. The drawings and embodiments in this specification are for those skilled in the art to easily understand and practice the present invention, and contents that may obscure the subject matter of the invention in the drawings and embodiments may be omitted, and the present invention is shown in the drawings and embodiments. is not limited to

본 발명은 GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 및 TGM3으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질을 포함하는, 조산 예측 진단용 바이오마커 조성물을 제공한다.The present invention provides a biomarker composition for predicting and diagnosing preterm birth, comprising at least one gene selected from the group consisting of GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 and TGM3, or a protein encoded by the gene.

본 발명에 따른 조산 예측 진단용 바이오마커 "GRN"은 그래뉼린(Granulin) 단백질을 암호화하는 유전자로서, 그래뉼린 단백질은 외부의 세균이나 바이러스로부터 유래한 DNA를 정확히 인식, 포획하여 여러 면역세포들에게 감염 여부를 알려줌으로써 감염된 세포를 효과적으로 제거하는 것으로 알려져 있다. 보다 구체적으로 그래뉼린 단백질은 선천성 면역 반응에 필수적인 톨 수용체(Toll-like receptor)와의 결합을 통하여 면역반응의 활성을 조절할 수 있는 기능을 한다.The biomarker "GRN" for predicting and diagnosing preterm birth according to the present invention is a gene encoding granulin protein, which accurately recognizes and captures DNA derived from external bacteria or viruses to infect various immune cells. It is known to effectively remove infected cells by telling whether or not it is present. More specifically, granulin protein functions to regulate the activity of an immune response through binding to a Toll-like receptor essential for an innate immune response.

본 발명에 따른 조산 예측 진단용 바이오마커 "NEDD8(neural precursor cell expressed developmentally down-regulated 8)"은 NEDD8 유전자가 암호화하는 단백질로서, 기질 단백질에 대해 변형(modification)을 진행할 수 있는 유비퀴틴 단백질이다. NEDD8 단백질은 다른 단백질과 결합하여 기능이 변하는 네딜화 현상에 의해 스트레스 과립을 형성하고, Cullin 단백질의 변형을 통하여 Cullin-RING E3 연결효소의 활성을 제어, 조절한다는 점이 알려져 있다. The biomarker "NEDD8 (neural precursor cell expressed developmentally down-regulated 8)" for predicting premature birth according to the present invention is a protein encoded by the NEDD8 gene, and is a ubiquitin protein capable of undergoing modification to a matrix protein. It is known that the NEDD8 protein binds to other proteins to form stress granules by the neddylation phenomenon, which changes its function, and controls and regulates the activity of the Cullin-RING E3 linking enzyme through modification of the Cullin protein.

본 발명에 따른 조산 예측 진단용 바이오마커 "SERPINB12"는 Serpin B12(Plasminogen activator inhibitor type 12) 단백질을 암호화하는 유전자로서, Serpin B12 단백질은 세린 프로테아제 억제제(세르핀) 수퍼 패밀리 중의 Class B에 속한다.The biomarker "SERPINB12" for predicting premature birth according to the present invention is a gene encoding Serpin B12 (Plasminogen activator inhibitor type 12) protein, and Serpin B12 protein belongs to Class B of the serine protease inhibitor (serpin) superfamily.

본 발명에 따른 조산 예측 진단용 바이오마커 "CA1"은 Carbonic anhydrase 1(탄산무수화 효소) 단백질을 암호화하는 유전자로서, 탄산무수화 효소는 탄소 이산화물의 가역적 수화반응과 사이안아마이드를 수화하여 유레아로 변형시킨다(Briganti F. et al., J, Biol, Inorg. Chem,. 4:528-536, 1999). 탄산무수화 효소는 여러 조직 및 기관이 적절한 작용을 통해 생명 활동을 조절하도록 하는 다양한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. The biomarker "CA1" for predicting preterm birth according to the present invention is a gene encoding carbonic anhydrase 1 (carbonic anhydrase) protein, which converts carbonic anhydrase into urea through reversible hydration of carbon dioxide and hydration of cyanamide. (Briganti F. et al., J, Biol, Inorg. Chem,. 4:528-536, 1999). Carbonic anhydrase is known to play a variety of roles that allow various tissues and organs to regulate vital activities through proper action.

한편, 본 발명의 일 실시예에서, 단백질 정량 프로파일링을 통하여, 조산을 예측하는 데 유의미한 상관관계를 가지는 153개의 유전자를 선별하였고, 본 발명의 다른 일 실시예에서 조산을 경험한 환자군에서 전술한 단백질을 암호화하는 GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 및 TGM3으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자 발현 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질의 활성 수준이 유의적으로 조산과 관련 있음을 확인하였다.On the other hand, in one embodiment of the present invention, through protein quantitative profiling, 153 genes having a significant correlation in predicting preterm birth were selected, and in another embodiment of the present invention, in a patient group experiencing preterm birth, It was confirmed that the expression of at least one gene selected from the group consisting of GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 and TGM3 encoding proteins or the activity level of the protein encoded by the gene was significantly related to premature birth.

상기의 결과는 GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 또는 TGM3 유전자가 조산의 조기 예측을 위한 진단에 있어 바이오마커로 사용될 수 있음을 확인한 것이다.The above results confirm that the GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 or TGM3 genes can be used as biomarkers for early prediction of preterm birth.

본 발명에서 사용되는 용어인 “진단(diagnosis)”이란, 넓은 의미에서는 환자의 병의 실태를 모든 면에 걸쳐서 판단하는 것을 의미하고, 판단의 내용은 병명, 병인, 병형, 경중, 병상의 상세한 양태 및 합병증의 유무 등이다. 본 발명에 있어서 진단은 조산의 예측 및 위험도 등을 판단하는 것이다.The term "diagnosis" as used in the present invention, in a broad sense, means to judge the actual condition of a patient's disease in all aspects, and the contents of the judgment include the name of the disease, etiology, disease type, severity, and detailed aspects of the disease. and the presence or absence of complications. Diagnosis in the present invention is to determine the prediction and risk of premature birth.

본 발명은 GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 및 TGM3으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질 및 상기 유전자의 발현 또는 상기 단백질의 활성 수준을 측정할 수 있는 제제를 포함하는, 조산 예측 진단용 키트를 제공한다. The present invention relates to one or more genes selected from the group consisting of GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 and TGM3, or a protein encoded by the gene, and an agent capable of measuring the expression of the gene or the activity level of the protein. A kit for predictive diagnosis is provided.

상기 제제는 GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 및 TGM3 유전자에 대한 프라이머, 프로브 또는 각 단백질에 대한 항체인 것이 바람직하나 이제 특별히 제한되는 것은 아니다. The agent is preferably a primer or probe for the GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 and TGM3 genes, or an antibody for each protein, but is not particularly limited.

상기 키트는 생물학적 샘플에서 본 발명에 따른 바이오마커로 사용될 수 있는 유전자 또는 단백질의 검출 및 정량 분석에 필요한 임의의 수단을 포함할 수 있으며, 질량분석법 기반 표적 단백질 측정용 트립신 분해 펩티드(tryptic peptide)들에 대한 특정 질량[또는 질량 대 전하량(mass to charge, m/z)] 및 텐덤 질량(MS/MS) 스펙트럼에 대한 정보를 포함하며, 필요한 시약에 더하여 상기 키트는 타깃 펩티드를 결합하기 위한 항체 또는 이의 절편(fragment), 고체 기질, 항체-항원 복합체 검출용의 추가적인 항원 등을 포함할 수 있다. The kit may include any means necessary for detection and quantitative analysis of genes or proteins that can be used as biomarkers according to the present invention in biological samples, and include tryptic peptides for measuring target proteins based on mass spectrometry. In addition to the necessary reagents, the kit includes information on a specific mass (or mass to charge, m/z ) and tandem mass (MS/MS) spectrum for the antibody or It may include a fragment thereof, a solid substrate, an additional antigen for detecting an antibody-antigen complex, and the like.

본 발명에서 사용되는 용어 “조산 예측 진단을 위한 정보제공 방법”이란, 진단을 위한 예비적 단계로서 조산의 예측을 위하여 필요한 객관적인 기초 정보를 제공하는 것이며, 의사의 임상학적 판단 또는 소견은 제외된다. As used in the present invention, the term “information provision method for predicting and diagnosing premature birth” is a preliminary step for diagnosis and provides objective basic information necessary for predicting premature birth, and the clinical judgment or opinion of a doctor is excluded.

본 발명은 a) 개체로부터 얻은 생물학적 시료에서 GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 및 TGM3으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 유전자의 mRNA의 발현 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질의 활성 수준을 측정하는 단계; 및 b) 상기 유전자의 mRNA의 발현 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질의 활성 수준을 대조군 시료와 비교하여 조산의 위험을 평가하는 단계;를 포함하는, 조산 예측 진단을 위한 정보제공 방법을 제공한다. The present invention comprises the steps of a) measuring the mRNA expression of one or more genes selected from the group consisting of GRN, NEDD8, CA1, SERPINB12 and TGM3 in a biological sample obtained from a subject or the activity level of a protein encoded by the gene; And b) evaluating the risk of premature birth by comparing the expression of mRNA of the gene or the activity level of the protein encoded by the gene with a control sample; It provides a method for providing information for predicting and diagnosing premature birth.

상기 개체로부터 얻은 생물학적 시료는 혈장, 혈청(sera), 혈액, 소변(urine), 뇌척수액, 양수(amniotic fluid), 활액(synovial fluid), 세척액(lavage fluid) 및 자궁경부 질액(cervicovaginal fluid: CVF)으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상일 수 있고, 바람직하게는 자궁경부 질액으로부터얻어진 것일 수 있으나, 이에 특별히 제한되는 것은 아니다.Biological samples obtained from the subject include plasma, serum (sera), blood, urine, cerebrospinal fluid, amniotic fluid, synovial fluid, lavage fluid and cervicovaginal fluid (CVF) It may be any one or more selected from the group consisting of, and preferably may be obtained from cervical vaginal fluid, but is not particularly limited thereto.

질량 분석기(mass spectrometer) 기반 단백질 정량(quantification)은 다수의 시료(sample)에 존재하는 단백질 혼합물을 트립신(trypsin) 효소 반응을 통해 펩티드화 한 후, 동위원소 표지 기법을 통해 시료 간 서로 다른 질량을 갖는 펩티드 혼합물을 제조한다. 동위원소 표지 기법에 의해 생성된 펩티드 혼합물은 시료 간 동일한 농도로 혼합한 후, 역상 액체크로마토그래피(reversed phase chromatography, RPLC)를 통해 펩타이드가 갖는 소수성 정도에 따라 분리한다. RPLC를 통해 분리되어 용리된 펩타이드는 전기분무 이온화(electrospray ionization, ESI) 과정을 통해 질량분석기에 도입되어 서로 다른 질량값을 갖는 펩티드 특이적 MS 및 MS/MS 분석을 통해 용리된 펩티드의 정성 분석 및 서로 다른 동위원소 비율로 상대적인 정량 비교분석이 가능하다.In mass spectrometer-based protein quantification, protein mixtures present in multiple samples are peptided through a trypsin enzyme reaction, and then different masses between samples are measured through an isotope labeling technique. Prepare a peptide mixture with Peptide mixtures generated by the isotope labeling technique are mixed at the same concentration between samples, and then separated according to the degree of hydrophobicity of the peptides through reversed phase chromatography (RPLC). Peptides separated and eluted through RPLC are introduced into a mass spectrometer through electrospray ionization (ESI), and qualitative analysis of eluted peptides through peptide-specific MS and MS/MS analysis with different mass values Relative quantitative comparative analysis is possible with different isotope ratios.

이하 하기의 실시 예를 통하여 본 발명에 대해 설명하고자 한다. 다만, 하기의 실시 예는 본 발명을 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위를 하기의 실시 예로 한정하는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described through the following examples. However, the following examples are intended to specifically explain the present invention, and the scope of the present invention is not limited to the following examples.

<시험예 1> 실험준비 및 실험방법<Test Example 1> Experiment preparation and experiment method

1. 연구 대상집단의 준비1. Preparation of study population

본 시험은 건양대학교 병원의 연구윤리위원회의 승인을 받아 건양대학교 병원에서 대상집단을 모집하였다. 62명의 임부로부터 동의를 받아 14주와 20주 임신기간에 있는 CVF 시료샘플을 수집하였다. 이들 중 9명은 추적 중 데이터를 소실하였고, 시험에 적합한 53명의 시료를 연구에 적용하였다. 53명의 참가자들에서 47명은 만기 출산, 6명이 조기 출산(preterm birth: PTB)을 하였으며, 조기 출산자들 중 1명의 데이터는 오염되어 제외하였다. 최종적으로 상기 47명의 만기 출산자들 중 20명을 컨트롤 집단으로 선정하고, 5명의 PTB군과 함께 단백질 프로파일링을 진행하였다.This study was approved by the Research Ethics Committee of Konyang University Hospital, and the target group was recruited at Konyang University Hospital. Consent was obtained from 62 pregnant women, and CVF samples were collected at 14 and 20 weeks of gestation. Nine of them lost data during follow-up, and 53 eligible samples were included in the study. Of the 53 participants, 47 had full-term births and 6 had preterm births (PTB), and the data of 1 of the preterm births was excluded due to contamination. Finally, 20 of the 47 full-term women were selected as a control group, and protein profiling was performed together with 5 PTB groups.

2. 단백질 정량분석 및 결과2. Quantitative protein analysis and results

iTRAQ(isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitaion)기반 동중 표지 기법을 이용하여 단백질 정량분석을 실시하였다. iTRAQ를 통한 정량 분석은 펩티드 말단에 동일한 m/ z 를 나타내는 동중 원소표지를 서로 다른 조건에서 추출한 시료들 각각에 서로 다른 동중 동위원소 표지 기법이다.Protein quantification was performed using an isobaric tags for relative and absolute quantitaion (iTRAQ)-based isobaric labeling technique. Quantitative analysis through iTRAQ is an isobaric isotope labeling technique that isolates different isotopic labels at the end of the peptide under different conditions.

iTRAQ 기반 동중 표지에는 114 리포터 이온(reporter ion)을 갖는 iTRAQ-114는 컨트롤 CVF 시료, PTB CVF 시료는 115 리포터 이온, 5개의 개별적인 PTB CVF 시료는 각각 116, 117, 118, 119, 121로 동중 표지되었다. 2시간 동안 실온에서 반응 후, 오아시스 HLB 카트리지로 탈염시키고, 건조시켰다. CVF 프로테옴의 정량적 프로파일링을 위해 컨트롤 군으로부터 랜덤하게 선택된 7개의 개별 CVF 시료는 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119로 표지하였으며, pooled 컨트롤 시료는 121로 동중 표지되었다. 도 1에 이러한 과정에 대한 모식도가 나타나 있다.iTRAQ-based isobaric labeling includes iTRAQ-114 with 114 reporter ions, a control CVF sample, PTB CVF sample with 115 reporter ions, and five individual PTB CVF samples with 116, 117, 118, 119, and 121, respectively. It became. After reaction at room temperature for 2 hours, it was desalted with an Oasis HLB cartridge and dried. For quantitative proteome profiling, 7 individual CVF samples randomly selected from the control group were labeled 113, 114, 115, 116, 117, 118, and 119, and the pooled control sample was labeled 121. Figure 1 shows a schematic diagram of this process.

3. 통계적 분석3. Statistical Analysis

개별 시료에 대한 two-sample student's t-test에서 p-value 0.05 미만을 기준으로 질 세척액에서 조산 시료/정상 분만 시료를 비교하였으며, 분석결과, 71개의 단백질이 정상 분만 시료 대비 1.5배 이상 증가하였으며, 82개의 단백질 종이 1.5배 이상 감소되었음을 도 2를 통해 확인할 수 있다.In the two-sample student's t-test for individual samples, preterm birth samples/normal delivery samples were compared in vaginal washing fluid based on p-value less than 0.05. As a result, 71 proteins increased more than 1.5 times compared to normal delivery samples, It can be confirmed through FIG. 2 that 82 protein species were reduced by more than 1.5 times.

또한, 상기 조산시료(PTB)에서 정량적으로 증가한 71개의 단백질과 감소한 82개의 단백질을 대상으로 Gene Ontology 분석을 수행하여 단백질을 세포 구성성분(cellular component), 분자 기능 (molecular function) 및 생물학적 과정 (biological process)으로 분류하였다. 도 3은 그 결과를 나타낸 그래프로서, 조산 시료(PTB)에서 정상 분만 시료(Control)에 비해 염증반응(inflammatory response), 세르핀 활성(Serine-type endopeptidase inhibitor activity), 세포골격의 구조체 (Structural constituent of cytoskeleton)를 담당하는 단백질군이 확연한 차이를 보였음을 확인할 수 있다. In addition, Gene Ontology analysis was performed on 71 proteins that were quantitatively increased and 82 proteins that were decreased in the preterm sample (PTB), and proteins were classified into cellular components, molecular functions, and biological processes. process). Figure 3 is a graph showing the results, inflammatory response, serine-type endopeptidase inhibitor activity, and structural constituents of the cytoskeleton compared to normal delivery samples (Control) in preterm birth samples (PTB) It can be seen that the protein group responsible for the cytoskeleton) showed a clear difference.

<시험예 2> 조산의 예측을 위한 마커의 선별<Test Example 2> Selection of markers for prediction of premature birth

도 3의 분석 결과를 바탕으로 염증반응에 관여하는 단백질 GRN, 세르핀 활성에 관여하는 단백질 SERPINB12, 세포골격의 구조체에 관련된 단백질 TGM3 및 그 외 2 종의 단백질(CA1과 NEDD8)을 조산의 예측을 위한 마커로 선별하였다.Based on the analysis results of FIG. 3, the protein GRN involved in inflammatory response, the protein SERPINB12 involved in serpin activity, the protein TGM3 related to the structure of the cytoskeleton, and two other proteins (CA1 and NEDD8) were used to predict premature birth. was selected as a marker for

도 4는 조산 시료(PTB)가 정상 분만 시료(Control)에 대하여 down-regulation되는 단백질 마커인 SERPINB12, TGM3 및 CA1에 대한 iTRAQ ratio값을 나타낸 그래프이다. 4 is a graph showing iTRAQ ratio values for SERPINB12, TGM3, and CA1, which are protein markers down-regulated in a preterm sample (PTB) with respect to a normal delivery sample (Control).

SERPINB12는 정상 분만 시료(Control)에 비해 조산 시료(PTB)에서 2.21배 감소 (p-value 0.0069), TGM3은 2.42배 감소 (p-value 0.0016), CA1은 2.11배 감소 (p-value 0.0068)하였다. 대상체의 질 세척액에서 상기 단백질들의 down regulation이 측정된 경우 조산의 고위험군에 해당하는 것으로 진단이 가능함을 확인할 수 있다.SERPINB12 decreased 2.21 times (p-value 0.0069) in preterm birth samples (PTB) compared to normal birth samples (Control), TGM3 decreased 2.42 times (p-value 0.0016), and CA1 decreased 2.11 times (p-value 0.0068). . When the down regulation of the proteins is measured in the vaginal lavage fluid of the subject, it can be confirmed that the subject is diagnosed as belonging to the high-risk group of preterm birth.

도 5는 조산 시료(PTB)가 정상 분만 시료(Control)에 대하여 up-regulation되는 단백질 마커인 NEDD8 및 GRN에 대한 iTRAQ ratio값을 나타낸 그래프이다. NEDD8은 정상 분만 시료(Control)에 비해 조산 시료(PTB)에서 1.59 배 증가 (p-value 0.0051), GRN은 1.78 배 증가 (p-value 0.0051)하였다. 대상체의 질 세척액에서 상기 단백질들의 up regulation이 측정된 경우 조산의 고위험군에 해당하는 것으로 진단이 가능함을 확인할 수 있다.5 is a graph showing iTRAQ ratio values for NEDD8 and GRN, which are protein markers up-regulated in a preterm birth sample (PTB) with respect to a normal delivery sample (Control). NEDD8 increased 1.59 times (p-value 0.0051) and GRN increased 1.78 times (p-value 0.0051) in preterm birth samples (PTB) compared to normal delivery samples (Control). When the up-regulation of the above proteins is measured in the vaginal lavage fluid of the subject, it can be confirmed that the subject is diagnosed as belonging to the high-risk group of preterm birth.

<시험예 3> 조산 예측 마커의 검증<Test Example 3> Verification of premature birth predictive markers

상기 5종의 조산 예측 마커 (SERPINB12, TGM3, CA1, NEDD8 및 GRN)의 검증을 위해 건양대학교 병원에서 추가 연구대상 집단을 모집하였다. 50명의 만기 출산자(Control), 12명의 조기 출산(PTB)자의 질 세척액 시료(임신 14-20 주 사이)가 확보되었으며, 무작위적으로 선정된 7개의 정상분만 시료(Control)와 9개의 조산 시료 (PTB)를 대상으로 검증 실험을 수행하였다. 12명의 조기 출산(PTB)자의 질 세척액 시료 중 3개의 시료는 시료 양의 부족으로 분석을 수행하지 못하였다. 실험 방법은 시험예 1과 동일하게 iTRAQ 정량 분석법을 사용하였다.An additional study group was recruited from Konyang University Hospital for the verification of the 5 preterm birth predictive markers (SERPINB12, TGM3, CA1, NEDD8 and GRN). Vaginal irrigation fluid samples (between 14 and 20 weeks of gestation) were obtained from 50 full-term (Control) and 12 preterm (PTB) women, 7 randomly selected normal delivery samples (Control) and 9 preterm birth samples. (PTB) was subjected to verification experiments. Of the 12 preterm birth (PTB) women's vaginal lavage fluid samples, 3 samples could not be analyzed due to insufficient sample volume. The experimental method was the same as Test Example 1, and the iTRAQ quantitative analysis method was used.

도 6은 조산 시료(PTB)가 정상 분만 시료(Control)에 대하여 up/down-regulation되는 단백질 마커인 SERPINB12, TGM3, CA1, NEDD8 및 GRN에 대한 iTRAQ ratio값을 나타낸 그래프이다. 6 is a graph showing iTRAQ ratio values for SERPINB12, TGM3, CA1, NEDD8, and GRN, which are protein markers up/down-regulated in a preterm birth sample (PTB) with respect to a normal delivery sample (Control).

SERPINB12는 정상 분만 시료(Control)에 비해 조산 시료(PTB)에서 1.78배 감소(p-value 0.019), TGM3은 1.97배 감소(p-value 0.008), CA1은 1.93배 감소 (p-value 0.000)하였다. NEDD8은 정상 분만 시료(Control)에 비해 조산 시료(PTB)에서 1.67배 증가(p-value 0.013), GRN은 1.68배 증가(p-value 0.009)하였다. 이를 통해, 대상체의 질 세척액에서 상기 단백질들의 up/down regulation이 측정된 경우 조산의 고위험군에 해당하는 것으로 진단이 가능함을 확인할 수 있다.SERPINB12 decreased 1.78 times (p-value 0.019) in preterm birth samples (PTB) compared to normal birth samples (Control), TGM3 decreased 1.97 times (p-value 0.008), and CA1 decreased 1.93 times (p-value 0.000). . NEDD8 increased 1.67 times (p-value 0.013) and GRN 1.68 times (p-value 0.009) in preterm birth samples (PTB) compared to normal delivery samples (Control). Through this, it can be confirmed that when the up/down regulation of the proteins in the vaginal lavage fluid of the subject is measured, it can be diagnosed as belonging to the high-risk group of premature birth.

<110> Korea Research Institute Standard and Science <120> PROTEIN MARKERS FOR PREDICTING OF PRETERM BIRTH AND DIAGNOSTIC METHODS THEREOF <130> RESI0096500023 <160> 5 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 81 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Leu Ile Lys Val Lys Thr Leu Thr Gly Lys Glu Ile Glu Ile Asp 1 5 10 15 Ile Glu Pro Thr Asp Lys Val Glu Arg Ile Lys Glu Arg Val Glu Glu 20 25 30 Lys Glu Gly Ile Pro Pro Gln Gln Gln Arg Leu Ile Tyr Ser Gly Lys 35 40 45 Gln Met Asn Asp Glu Lys Thr Ala Ala Asp Tyr Lys Ile Leu Gly Gly 50 55 60 Ser Val Leu His Leu Val Leu Ala Leu Arg Gly Gly Gly Gly Leu Arg 65 70 75 80 Gln <210> 2 <211> 405 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Asp Ser Leu Val Thr Ala Asn Thr Lys Phe Cys Phe Asp Leu Phe 1 5 10 15 Gln Glu Ile Gly Lys Asp Asp Arg His Lys Asn Ile Phe Phe Ser Pro 20 25 30 Leu Ser Leu Ser Ala Ala Leu Gly Met Val Arg Leu Gly Ala Arg Ser 35 40 45 Asp Ser Ala His Gln Ile Asp Glu Val Leu His Phe Asn Glu Phe Ser 50 55 60 Gln Asn Glu Ser Lys Glu Pro Asp Pro Cys Leu Lys Ser Asn Lys Gln 65 70 75 80 Lys Ala Gly Ser Leu Asn Asn Glu Ser Gly Leu Val Ser Cys Tyr Phe 85 90 95 Gly Gln Leu Leu Ser Lys Leu Asp Arg Ile Lys Thr Asp Tyr Thr Leu 100 105 110 Ser Ile Ala Asn Arg Leu Tyr Gly Glu Gln Glu Phe Pro Ile Cys Gln 115 120 125 Glu Tyr Leu Asp Gly Val Ile Gln Phe Tyr His Thr Thr Ile Glu Ser 130 135 140 Val Asp Phe Gln Lys Asn Pro Glu Lys Ser Arg Gln Glu Ile Asn Phe 145 150 155 160 Trp Val Glu Cys Gln Ser Gln Gly Lys Ile Lys Glu Leu Phe Ser Lys 165 170 175 Asp Ala Ile Asn Ala Glu Thr Val Leu Val Leu Val Asn Ala Val Tyr 180 185 190 Phe Lys Ala Lys Trp Glu Thr Tyr Phe Asp His Glu Asn Thr Val Asp 195 200 205 Ala Pro Phe Cys Leu Asn Ala Asn Glu Asn Lys Ser Val Lys Met Met 210 215 220 Thr Gln Lys Gly Leu Tyr Arg Ile Gly Phe Ile Glu Glu Val Lys Ala 225 230 235 240 Gln Ile Leu Glu Met Arg Tyr Thr Lys Gly Lys Leu Ser Met Phe Val 245 250 255 Leu Leu Pro Ser His Ser Lys Asp Asn Leu Lys Gly Leu Glu Glu Leu 260 265 270 Glu Arg Lys Ile Thr Tyr Glu Lys Met Val Ala Trp Ser Ser Ser Glu 275 280 285 Asn Met Ser Glu Glu Ser Val Val Leu Ser Phe Pro Arg Phe Thr Leu 290 295 300 Glu Asp Ser Tyr Asp Leu Asn Ser Ile Leu Gln Asp Met Gly Ile Thr 305 310 315 320 Asp Ile Phe Asp Glu Thr Arg Ala Asp Leu Thr Gly Ile Ser Pro Ser 325 330 335 Pro Asn Leu Tyr Leu Ser Lys Ile Ile His Lys Thr Phe Val Glu Val 340 345 350 Asp Glu Asn Gly Thr Gln Ala Ala Ala Ala Thr Gly Ala Val Val Ser 355 360 365 Glu Arg Ser Leu Arg Ser Trp Val Glu Phe Asn Ala Asn His Pro Phe 370 375 380 Leu Phe Phe Ile Arg His Asn Lys Thr Gln Thr Ile Leu Phe Tyr Gly 385 390 395 400 Arg Val Cys Ser Pro 405 <210> 3 <211> 593 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Met Trp Thr Leu Val Ser Trp Val Ala Leu Thr Ala Gly Leu Val Ala 1 5 10 15 Gly Thr Arg Cys Pro Asp Gly Gln Phe Cys Pro Val Ala Cys Cys Leu 20 25 30 Asp Pro Gly Gly Ala Ser Tyr Ser Cys Cys Arg Pro Leu Leu Asp Lys 35 40 45 Trp Pro Thr Thr Leu Ser Arg His Leu Gly Gly Pro Cys Gln Val Asp 50 55 60 Ala His Cys Ser Ala Gly His Ser Cys Ile Phe Thr Val Ser Gly Thr 65 70 75 80 Ser Ser Cys Cys Pro Phe Pro Glu Ala Val Ala Cys Gly Asp Gly His 85 90 95 His Cys Cys Pro Arg Gly Phe His Cys Ser Ala Asp Gly Arg Ser Cys 100 105 110 Phe Gln Arg Ser Gly Asn Asn Ser Val Gly Ala Ile Gln Cys Pro Asp 115 120 125 Ser Gln Phe Glu Cys Pro Asp Phe Ser Thr Cys Cys Val Met Val Asp 130 135 140 Gly Ser Trp Gly Cys Cys Pro Met Pro Gln Ala Ser Cys Cys Glu Asp 145 150 155 160 Arg Val His Cys Cys Pro His Gly Ala Phe Cys Asp Leu Val His Thr 165 170 175 Arg Cys Ile Thr Pro Thr Gly Thr His Pro Leu Ala Lys Lys Leu Pro 180 185 190 Ala Gln Arg Thr Asn Arg Ala Val Ala Leu Ser Ser Ser Val Met Cys 195 200 205 Pro Asp Ala Arg Ser Arg Cys Pro Asp Gly Ser Thr Cys Cys Glu Leu 210 215 220 Pro Ser Gly Lys Tyr Gly Cys Cys Pro Met Pro Asn Ala Thr Cys Cys 225 230 235 240 Ser Asp His Leu His Cys Cys Pro Gln Asp Thr Val Cys Asp Leu Ile 245 250 255 Gln Ser Lys Cys Leu Ser Lys Glu Asn Ala Thr Thr Asp Leu Leu Thr 260 265 270 Lys Leu Pro Ala His Thr Val Gly Asp Val Lys Cys Asp Met Glu Val 275 280 285 Ser Cys Pro Asp Gly Tyr Thr Cys Cys Arg Leu Gln Ser Gly Ala Trp 290 295 300 Gly Cys Cys Pro Phe Thr Gln Ala Val Cys Cys Glu Asp His Ile His 305 310 315 320 Cys Cys Pro Ala Gly Phe Thr Cys Asp Thr Gln Lys Gly Thr Cys Glu 325 330 335 Gln Gly Pro His Gln Val Pro Trp Met Glu Lys Ala Pro Ala His Leu 340 345 350 Ser Leu Pro Asp Pro Gln Ala Leu Lys Arg Asp Val Pro Cys Asp Asn 355 360 365 Val Ser Ser Cys Pro Ser Ser Asp Thr Cys Cys Gln Leu Thr Ser Gly 370 375 380 Glu Trp Gly Cys Cys Pro Ile Pro Glu Ala Val Cys Cys Ser Asp His 385 390 395 400 Gln His Cys Cys Pro Gln Gly Tyr Thr Cys Val Ala Glu Gly Gln Cys 405 410 415 Gln Arg Gly Ser Glu Ile Val Ala Gly Leu Glu Lys Met Pro Ala Arg 420 425 430 Arg Ala Ser Leu Ser His Pro Arg Asp Ile Gly Cys Asp Gln His Thr 435 440 445 Ser Cys Pro Val Gly Gln Thr Cys Cys Pro Ser Leu Gly Gly Ser Trp 450 455 460 Ala Cys Cys Gln Leu Pro His Ala Val Cys Cys Glu Asp Arg Gln His 465 470 475 480 Cys Cys Pro Ala Gly Tyr Thr Cys Asn Val Lys Ala Arg Ser Cys Glu 485 490 495 Lys Glu Val Val Ser Ala Gln Pro Ala Thr Phe Leu Ala Arg Ser Pro 500 505 510 His Val Gly Val Lys Asp Val Glu Cys Gly Glu Gly His Phe Cys His 515 520 525 Asp Asn Gln Thr Cys Cys Arg Asp Asn Arg Gln Gly Trp Ala Cys Cys 530 535 540 Pro Tyr Arg Gln Gly Val Cys Cys Ala Asp Arg Arg His Cys Cys Pro 545 550 555 560 Ala Gly Phe Arg Cys Ala Ala Arg Gly Thr Lys Cys Leu Arg Arg Glu 565 570 575 Ala Pro Arg Trp Asp Ala Pro Leu Arg Asp Pro Ala Leu Arg Gln Leu 580 585 590 Leu <210> 4 <211> 261 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Ala Ser Pro Asp Trp Gly Tyr Asp Asp Lys Asn Gly Pro Glu Gln 1 5 10 15 Trp Ser Lys Leu Tyr Pro Ile Ala Asn Gly Asn Asn Gln Ser Pro Val 20 25 30 Asp Ile Lys Thr Ser Glu Thr Lys His Asp Thr Ser Leu Lys Pro Ile 35 40 45 Ser Val Ser Tyr Asn Pro Ala Thr Ala Lys Glu Ile Ile Asn Val Gly 50 55 60 His Ser Phe His Val Asn Phe Glu Asp Asn Asp Asn Arg Ser Val Leu 65 70 75 80 Lys Gly Gly Pro Phe Ser Asp Ser Tyr Arg Leu Phe Gln Phe His Phe 85 90 95 His Trp Gly Ser Thr Asn Glu His Gly Ser Glu His Thr Val Asp Gly 100 105 110 Val Lys Tyr Ser Ala Glu Leu His Val Ala His Trp Asn Ser Ala Lys 115 120 125 Tyr Ser Ser Leu Ala Glu Ala Ala Ser Lys Ala Asp Gly Leu Ala Val 130 135 140 Ile Gly Val Leu Met Lys Val Gly Glu Ala Asn Pro Lys Leu Gln Lys 145 150 155 160 Val Leu Asp Ala Leu Gln Ala Ile Lys Thr Lys Gly Lys Arg Ala Pro 165 170 175 Phe Thr Asn Phe Asp Pro Ser Thr Leu Leu Pro Ser Ser Leu Asp Phe 180 185 190 Trp Thr Tyr Pro Gly Ser Leu Thr His Pro Pro Leu Tyr Glu Ser Val 195 200 205 Thr Trp Ile Ile Cys Lys Glu Ser Ile Ser Val Ser Ser Glu Gln Leu 210 215 220 Ala Gln Phe Arg Ser Leu Leu Ser Asn Val Glu Gly Asp Asn Ala Val 225 230 235 240 Pro Met Gln His Asn Asn Arg Pro Thr Gln Pro Leu Lys Gly Arg Thr 245 250 255 Val Arg Ala Ser Phe 260 <210> 5 <211> 81 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Met Leu Ile Lys Val Lys Thr Leu Thr Gly Lys Glu Ile Glu Ile Asp 1 5 10 15 Ile Glu Pro Thr Asp Lys Val Glu Arg Ile Lys Glu Arg Val Glu Glu 20 25 30 Lys Glu Gly Ile Pro Pro Gln Gln Gln Arg Leu Ile Tyr Ser Gly Lys 35 40 45 Gln Met Asn Asp Glu Lys Thr Ala Ala Asp Tyr Lys Ile Leu Gly Gly 50 55 60 Ser Val Leu His Leu Val Leu Ala Leu Arg Gly Gly Gly Gly Leu Arg 65 70 75 80 Gln <110> Korea Research Institute Standard and Science <120> PROTEIN MARKERS FOR PREDICTING OF PRETERM BIRTH AND DIAGNOSTIC METHODS THEREOF <130> RESI0096500023 <160> 5 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 81 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Leu Ile Lys Val Lys Thr Leu Thr Gly Lys Glu Ile Glu Ile Asp 1 5 10 15 Ile Glu Pro Thr Asp Lys Val Glu Arg Ile Lys Glu Arg Val Glu Glu 20 25 30 Lys Glu Gly Ile Pro Pro Gln Gln Gln Arg Leu Ile Tyr Ser Gly Lys 35 40 45 Gln Met Asn Asp Glu Lys Thr Ala Ala Asp Tyr Lys Ile Leu Gly Gly 50 55 60 Ser Val Leu His Leu Val Leu Ala Leu Arg Gly Gly Gly Gly Leu Arg 65 70 75 80 Gln <210> 2 <211> 405 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Asp Ser Leu Val Thr Ala Asn Thr Lys Phe Cys Phe Asp Leu Phe 1 5 10 15 Gln Glu Ile Gly Lys Asp Asp Arg His Lys Asn Ile Phe Phe Ser Pro 20 25 30 Leu Ser Leu Ser Ala Ala Leu Gly Met Val Arg Leu Gly Ala Arg Ser 35 40 45 Asp Ser Ala His Gln Ile Asp Glu Val Leu His Phe Asn Glu Phe Ser 50 55 60 Gln Asn Glu Ser Lys Glu Pro Asp Pro Cys Leu Lys Ser Asn Lys Gln 65 70 75 80 Lys Ala Gly Ser Leu Asn Asn Glu Ser Gly Leu Val Ser Cys Tyr Phe 85 90 95 Gly Gln Leu Leu Ser Lys Leu Asp Arg Ile Lys Thr Asp Tyr Thr Leu 100 105 110 Ser Ile Ala Asn Arg Leu Tyr Gly Glu Gln Glu Phe Pro Ile Cys Gln 115 120 125 Glu Tyr Leu Asp Gly Val Ile Gln Phe Tyr His Thr Thr Ile Glu Ser 130 135 140 Val Asp Phe Gln Lys Asn Pro Glu Lys Ser Arg Gln Glu Ile Asn Phe 145 150 155 160 Trp Val Glu Cys Gln Ser Gln Gly Lys Ile Lys Glu Leu Phe Ser Lys 165 170 175 Asp Ala Ile Asn Ala Glu Thr Val Leu Val Leu Val Asn Ala Val Tyr 180 185 190 Phe Lys Ala Lys Trp Glu Thr Tyr Phe Asp His Glu Asn Thr Val Asp 195 200 205 Ala Pro Phe Cys Leu Asn Ala Asn Glu Asn Lys Ser Val Lys Met Met 210 215 220 Thr Gln Lys Gly Leu Tyr Arg Ile Gly Phe Ile Glu Glu Val Lys Ala 225 230 235 240 Gln Ile Leu Glu Met Arg Tyr Thr Lys Gly Lys Leu Ser Met Phe Val 245 250 255 Leu Leu Pro Ser His Ser Lys Asp Asn Leu Lys Gly Leu Glu Glu Leu 260 265 270 Glu Arg Lys Ile Thr Tyr Glu Lys Met Val Ala Trp Ser Ser Ser Glu 275 280 285 Asn Met Ser Glu Glu Ser Val Val Leu Ser Phe Pro Arg Phe Thr Leu 290 295 300 Glu Asp Ser Tyr Asp Leu Asn Ser Ile Leu Gln Asp Met Gly Ile Thr 305 310 315 320 Asp Ile Phe Asp Glu Thr Arg Ala Asp Leu Thr Gly Ile Ser Pro Ser 325 330 335 Pro Asn Leu Tyr Leu Ser Lys Ile Ile His Lys Thr Phe Val Glu Val 340 345 350 Asp Glu Asn Gly Thr Gln Ala Ala Ala Ala Thr Gly Ala Val Val Ser 355 360 365 Glu Arg Ser Leu Arg Ser Trp Val Glu Phe Asn Ala Asn His Pro Phe 370 375 380 Leu Phe Phe Ile Arg His Asn Lys Thr Gln Thr Ile Leu Phe Tyr Gly 385 390 395 400 Arg Val Cys Ser Pro 405 <210> 3 <211> 593 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Met Trp Thr Leu Val Ser Trp Val Ala Leu Thr Ala Gly Leu Val Ala 1 5 10 15 Gly Thr Arg Cys Pro Asp Gly Gln Phe Cys Pro Val Ala Cys Cys Leu 20 25 30 Asp Pro Gly Gly Ala Ser Tyr Ser Cys Cys Arg Pro Leu Leu Asp Lys 35 40 45 Trp Pro Thr Thr Leu Ser Arg His Leu Gly Gly Pro Cys Gln Val Asp 50 55 60 Ala His Cys Ser Ala Gly His Ser Cys Ile Phe Thr Val Ser Gly Thr 65 70 75 80 Ser Ser Cys Cys Pro Phe Pro Glu Ala Val Ala Cys Gly Asp Gly His 85 90 95 His Cys Cys Pro Arg Gly Phe His Cys Ser Ala Asp Gly Arg Ser Cys 100 105 110 Phe Gln Arg Ser Gly Asn Asn Ser Val Gly Ala Ile Gln Cys Pro Asp 115 120 125 Ser Gln Phe Glu Cys Pro Asp Phe Ser Thr Cys Cys Val Met Val Asp 130 135 140 Gly Ser Trp Gly Cys Cys Pro Met Pro Gln Ala Ser Cys Cys Glu Asp 145 150 155 160 Arg Val His Cys Cys Pro His Gly Ala Phe Cys Asp Leu Val His Thr 165 170 175 Arg Cys Ile Thr Pro Thr Gly Thr His Pro Leu Ala Lys Lys Leu Pro 180 185 190 Ala Gln Arg Thr Asn Arg Ala Val Ala Leu Ser Ser Ser Val Met Cys 195 200 205 Pro Asp Ala Arg Ser Arg Cys Pro Asp Gly Ser Thr Cys Cys Glu Leu 210 215 220 Pro Ser Gly Lys Tyr Gly Cys Cys Pro Met Pro Asn Ala Thr Cys Cys 225 230 235 240 Ser Asp His Leu His Cys Cys Pro Gln Asp Thr Val Cys Asp Leu Ile 245 250 255 Gln Ser Lys Cys Leu Ser Lys Glu Asn Ala Thr Thr Asp Leu Leu Thr 260 265 270 Lys Leu Pro Ala His Thr Val Gly Asp Val Lys Cys Asp Met Glu Val 275 280 285 Ser Cys Pro Asp Gly Tyr Thr Cys Cys Arg Leu Gln Ser Gly Ala Trp 290 295 300 Gly Cys Cys Pro Phe Thr Gln Ala Val Cys Cys Glu Asp His Ile His 305 310 315 320 Cys Cys Pro Ala Gly Phe Thr Cys Asp Thr Gln Lys Gly Thr Cys Glu 325 330 335 Gln Gly Pro His Gln Val Pro Trp Met Glu Lys Ala Pro Ala His Leu 340 345 350 Ser Leu Pro Asp Pro Gln Ala Leu Lys Arg Asp Val Pro Cys Asp Asn 355 360 365 Val Ser Ser Cys Pro Ser Ser Asp Thr Cys Cys Gln Leu Thr Ser Gly 370 375 380 Glu Trp Gly Cys Cys Pro Ile Pro Glu Ala Val Cys Cys Ser Asp His 385 390 395 400 Gln His Cys Cys Pro Gln Gly Tyr Thr Cys Val Ala Glu Gly Gln Cys 405 410 415 Gln Arg Gly Ser Glu Ile Val Ala Gly Leu Glu Lys Met Pro Ala Arg 420 425 430 Arg Ala Ser Leu Ser His Pro Arg Asp Ile Gly Cys Asp Gln His Thr 435 440 445 Ser Cys Pro Val Gly Gln Thr Cys Cys Pro Ser Leu Gly Gly Ser Trp 450 455 460 Ala Cys Cys Gln Leu Pro His Ala Val Cys Cys Glu Asp Arg Gln His 465 470 475 480 Cys Cys Pro Ala Gly Tyr Thr Cys Asn Val Lys Ala Arg Ser Cys Glu 485 490 495 Lys Glu Val Val Ser Ala Gln Pro Ala Thr Phe Leu Ala Arg Ser Pro 500 505 510 His Val Gly Val Lys Asp Val Glu Cys Gly Glu Gly His Phe Cys His 515 520 525 Asp Asn Gln Thr Cys Cys Arg Asp Asn Arg Gln Gly Trp Ala Cys Cys 530 535 540 Pro Tyr Arg Gln Gly Val Cys Cys Ala Asp Arg Arg His Cys Cys Pro 545 550 555 560 Ala Gly Phe Arg Cys Ala Ala Arg Gly Thr Lys Cys Leu Arg Arg Glu 565 570 575 Ala Pro Arg Trp Asp Ala Pro Leu Arg Asp Pro Ala Leu Arg Gln Leu 580 585 590 Leu <210> 4 <211> 261 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Ala Ser Pro Asp Trp Gly Tyr Asp Asp Lys Asn Gly Pro Glu Gln 1 5 10 15 Trp Ser Lys Leu Tyr Pro Ile Ala Asn Gly Asn Asn Gln Ser Pro Val 20 25 30 Asp Ile Lys Thr Ser Glu Thr Lys His Asp Thr Ser Leu Lys Pro Ile 35 40 45 Ser Val Ser Tyr Asn Pro Ala Thr Ala Lys Glu Ile Ile Asn Val Gly 50 55 60 His Ser Phe His Val Asn Phe Glu Asp Asn Asp Asn Arg Ser Val Leu 65 70 75 80 Lys Gly Gly Pro Phe Ser Asp Ser Tyr Arg Leu Phe Gln Phe His Phe 85 90 95 His Trp Gly Ser Thr Asn Glu His Gly Ser Glu His Thr Val Asp Gly 100 105 110 Val Lys Tyr Ser Ala Glu Leu His Val Ala His Trp Asn Ser Ala Lys 115 120 125 Tyr Ser Ser Leu Ala Glu Ala Ala Ser Lys Ala Asp Gly Leu Ala Val 130 135 140 Ile Gly Val Leu Met Lys Val Gly Glu Ala Asn Pro Lys Leu Gln Lys 145 150 155 160 Val Leu Asp Ala Leu Gln Ala Ile Lys Thr Lys Gly Lys Arg Ala Pro 165 170 175 Phe Thr Asn Phe Asp Pro Ser Thr Leu Leu Pro Ser Ser Leu Asp Phe 180 185 190 Trp Thr Tyr Pro Gly Ser Leu Thr His Pro Pro Leu Tyr Glu Ser Val 195 200 205 Thr Trp Ile Ile Cys Lys Glu Ser Ile Ser Val Ser Ser Glu Gln Leu 210 215 220 Ala Gln Phe Arg Ser Leu Leu Ser Asn Val Glu Gly Asp Asn Ala Val 225 230 235 240 Pro Met Gln His Asn Asn Arg Pro Thr Gln Pro Leu Lys Gly Arg Thr 245 250 255 Val Arg Ala Ser Phe 260 <210> 5 <211> 81 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Met Leu Ile Lys Val Lys Thr Leu Thr Gly Lys Glu Ile Glu Ile Asp 1 5 10 15 Ile Glu Pro Thr Asp Lys Val Glu Arg Ile Lys Glu Arg Val Glu Glu 20 25 30 Lys Glu Gly Ile Pro Pro Gln Gln Gln Arg Leu Ile Tyr Ser Gly Lys 35 40 45 Gln Met Asn Asp Glu Lys Thr Ala Ala Asp Tyr Lys Ile Leu Gly Gly 50 55 60 Ser Val Leu His Leu Val Leu Ala Leu Arg Gly Gly Gly Gly Leu Arg 65 70 75 80 Gln

Claims (9)

TGM3 유전자 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질을 포함하는, 조산 예측 진단용 바이오마커 조성물.A biomarker composition for predicting premature birth, comprising a TGM3 gene or a protein encoded by the gene. TGM3 유전자 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질; 및
상기 유전자의 발현 또는 상기 단백질의 활성 수준을 측정할 수 있는 제제;를 포함하는, 조산 예측 진단용 조성물.TGM3 gene or a protein encoded by the gene; and
An agent capable of measuring the expression of the gene or the activity level of the protein; containing, a composition for predicting preterm birth diagnosis. TGM3 유전자 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질; 및
상기 유전자의 발현 또는 상기 단백질의 활성 수준을 측정할 수 있는 제제;를 포함하는, 조산 예측 진단용 키트.TGM3 gene or a protein encoded by the gene; and
An agent capable of measuring the expression of the gene or the activity level of the protein; containing, a diagnostic kit for predicting premature birth. a) 개체로부터 얻은 생물학적 시료에서 TGM3 유전자의 mRNA의 발현 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질의 활성 수준을 측정하는 단계; 및
b) 상기 유전자의 mRNA의 발현 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질의 활성 수준을 대조군 시료와 비교하는 단계;를 포함하는, 조산 예측 진단을 위한 정보제공 방법.a) measuring the expression of the mRNA of the TGM3 gene or the activity level of the protein encoded by the gene in a biological sample obtained from the subject; and
b) comparing the expression of mRNA of the gene or the activity level of the protein encoded by the gene with a control sample; containing information providing method for predicting and diagnosing premature birth. 삭제delete 제 4항에 있어서,
상기 TGM3 유전자의 mRNA 또는 상기 유전자가 암호화하는 단백질의 발현 또는 활성 수준이 대조군 시료보다 낮을 경우 조산의 위험성이 높은 것으로 예측되는 것인, 조산 예측 진단을 위한 정보제공 방법.According to claim 4,
If the mRNA of the TGM3 gene or the expression or activity level of the protein encoded by the gene is lower than that of the control sample, the risk of premature birth is predicted to be high, an information providing method for predicting and diagnosing premature birth. 제 4항에 있어서,
상기 생물학적 시료는 혈장, 혈청, 혈액, 소변, 뇌척수액, 양수, 활액(synovial fluid), 세척액(lavage fluid) 및 자궁경부 질액으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상인, 조산 예측 진단을 위한 정보제공 방법.According to claim 4,
The biological sample is any one or more selected from the group consisting of plasma, serum, blood, urine, cerebrospinal fluid, amniotic fluid, synovial fluid, lavage fluid and cervical vaginal fluid. 제 4항에 있어서,
상기 mRNA의 발현 수준은 중합효소연쇄반응(PCR), 역전사 중합효소연쇄반응(RTPCR), 실시간 중합효소연쇄반응(Real-Time PCR), Rnase 보호 분석법(Rnase protection assay: RPA), 마이크로 어레이(microarray) 및 노던 블롯팅(northern blotting)으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 방법을 통하여 측정되는 것인, 조산 예측 진단을 위한 정보제공 방법.According to claim 4,
The expression level of the mRNA is polymerase chain reaction (PCR), reverse transcription polymerase chain reaction (RTPCR), real-time polymerase chain reaction (Real-Time PCR), Rnase protection assay (RPA), microarray ) And Northern blotting (northern blotting) to be measured through any one or more methods selected from the group consisting of, a method for providing information for premature birth prediction diagnosis. 제 4항에 있어서,
상기 단백질의 활성 수준은 웨스턴 블롯팅(western blotting), 효소면역분석법(ELISA), 면역침강법(immunoprecipitation), 면역형광염색법(immunofluorescene), 및 단백질 칩(protein chip)으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 방법을 통하여 측정되는 것인, 조산 예측 진단을 위한 정보제공 방법.According to claim 4,
The activity level of the protein is any one selected from the group consisting of western blotting, enzyme immunoassay (ELISA), immunoprecipitation, immunofluorescence staining, and protein chip. To be measured through the above method, an information providing method for predicting and diagnosing premature birth.
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