KR102461366B1 - Simultaneous analysis method of polyethylene glycol polymer having wide range of molecular weights - Google Patents

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Abstract

본 발명은 광범위한 분자량을 가진 폴리에틸렌글리콜의 동시 분석 방법 등에 관한 것으로, 본 발명의 동시분석법은 광범위한 분자량을 가지는 폴리에틸렌글리콜을 동시에 분석할 수 있어 분석을 신속하고 간편하게 할 수 있으며, 한국 뿐만 아니라, 국제 표준 및 유럽 기준을 만족하여, 다양한 국가에서 폴리에틸렌글리콜을 검출하는 방법으로 이용할 수 있으며, 그 정확도 또한 우수하므로, PEG 함유 식품 및 의약품에서 다양한 분자량을 가지는 PEG를 동시에 분석할 수 있을 것으로 기대된다.The present invention relates to a method for simultaneous analysis of polyethylene glycol having a wide range of molecular weights, etc., and the simultaneous analysis method of the present invention can analyze polyethylene glycol having a wide range of molecular weights at the same time, so that the analysis can be performed quickly and conveniently. and European standards, it can be used as a method for detecting polyethylene glycol in various countries, and its accuracy is also excellent, so it is expected that PEG having various molecular weights can be analyzed simultaneously in PEG-containing foods and pharmaceuticals.

Figure R1020200122364
Figure R1020200122364

Description

광범위한 분자량을 가진 폴리에틸렌글리콜의 동시 분석 방법{Simultaneous analysis method of polyethylene glycol polymer having wide range of molecular weights}Simultaneous analysis method of polyethylene glycol polymer having wide range of molecular weights

본 발명은 광범위한 분자량을 가진 폴리에틸렌글리콜의 동시 분석 방법 등에 관한 것이다.The present invention relates to a method for simultaneous analysis of polyethylene glycol having a wide range of molecular weights, and the like.

피막제는 사과, 감귤, 오렌지, 당근 등의 과실류, 채소류 혹은 캔디류 등의 표면에 도포되면 광택을 내거나 보호막을 형성하는 식품첨가물을 말한다. 식품의 표면에 만들어진 피막은 호흡 작용을 억제함으로써 수분의 손실을 제한하여 보존기간을 늘리고 광택을 부여해 외관을 좋게 할 뿐만 아니라, 세균 곰팡이 등의 미생물 침입을 방지해주는 역할을 한다.Film agent refers to a food additive that shines or forms a protective film when applied to the surface of fruits, vegetables, or candy such as apples, tangerines, oranges, and carrots. The film made on the surface of food restricts the loss of moisture by inhibiting respiration, thereby extending the storage period and providing gloss to improve the appearance, as well as preventing the intrusion of microorganisms such as bacteria and fungi.

피막제로 사용되는 물질 중에서도, 폴리에틸렌글리콜 (Polyethylene Glycol, PEG)는 분자량이 700 미만인 경우 약간 흡습성이 있는 무색의 투명 또는 반투명의 액체로 특유의 냄새가 있고, 분자량 700∼900인 것은 반고체이며, 분자량이 1000 이상이면 미백색의 덩어리, 얇은 조각 또는 분말 성상을 나타낸다.Among the materials used as coating agents, polyethylene glycol (Polyethylene Glycol, PEG) is a colorless, transparent or translucent liquid with slightly hygroscopic properties when the molecular weight is less than 700, and has a characteristic odor. If it is 1000 or more, it indicates a white-white lump, thin piece, or powdery appearance.

1994년 Alexis Oliva et al., 그리고 2007년 Virginia Zabaleta et al.에 의해 발표된 논문에 따르면, 분자량 1000이하의 PEG 분석법, 분자량 2000 이상의 PEG 분석법이 따로 존재했지만 한 번에 모든 분자량을 분석할 수 있는 분석 방법은 존재하지 않았다. 즉, 식품에 이용될 수 있는 PEG의 분자량 범위는 200에서 9000이므로, 광범위한 분자량을 갖는 PEG의 새로운 분석법의 개발이 필요한 실정이다.Alexis Oliva et al., 1994, and Virginia Zabaleta et al., 2007. According to the paper published by , there are separate PEG analysis methods with a molecular weight of 1000 or less and PEG analysis methods with a molecular weight of 2000 or more, but there is no analysis method that can analyze all molecular weights at once. That is, since the molecular weight range of PEG that can be used in food is 200 to 9000, it is necessary to develop a new analytical method for PEG having a wide molecular weight.

Alexis Oliva et al (1994) HPLC Determination of Polyethylene Glycol 400 in Urine: Oligomeric Profile in Healthy and Celiac Disease Subjects. Clinical Chemistry 40(8), 1571-1574Alexis Oliva et al (1994) HPLC Determination of Polyethylene Glycol 400 in Urine: Oligomeric Profile in Healthy and Celiac Disease Subjects. Clinical Chemistry 40(8), 1571-1574 Virginia Zabaleta et al (2007) An HPLC with evaporative light scattering detection method for the quantification of PEGs and Gantrez in PEGylated nanoparticlesVirginia Zabaleta et al (2007) An HPLC with evaporative light scattering detection method for the quantification of PEGs and Gantrez in PEGylated nanoparticles

본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 광범위한 분자량을 나타내는 폴리에틸렌글리콜을 동시분석하는 방법을 제공하는 것으로서, 본 발명자들은 본 발명의 특정조건을 이용한 정량/정성 동시분석법을 이용하여, 분자량 200 이하부터 8000 이상까지 광범위한 폴리에틸렌글리콜을 정확히 정량/정성 분석 할 수 있음을 확인하였다.The technical problem to be achieved by the present invention is to provide a method for simultaneous analysis of polyethylene glycol exhibiting a wide range of molecular weights, and the present inventors use the quantitative / qualitative simultaneous analysis method using the specific conditions of the present invention, from 200 or less molecular weight to 8000 or more. It was confirmed that a wide range of polyethylene glycols could be accurately quantitatively/qualitatively analyzed.

이에, 본 발명의 목적은 하기 단계를 포함하는, 광범위한 분자량을 갖는 폴리에틸렌글리콜 (Polyethylene glycol)의 동시분석법을 이용한 검출방법으로,Accordingly, an object of the present invention is a detection method using a simultaneous analysis method of polyethylene glycol having a wide range of molecular weight, including the following steps,

(a) 시료를 고성능 액체 크로마토그래피-증기화광산란검출기에 유입시켜 분자량에 따른 폴리에틸렌글리콜을 정성분석하는 단계; 및(a) introducing a sample into a high-performance liquid chromatography-vaporized light scattering detector to qualitatively analyze polyethylene glycol according to molecular weight; and

(b) 시료를 액체크로마토그래피 질량분석기로 유입시켜 분자량에 따른 폴리에틸렌글리콜을 정량분석하는 단계를 포함하며, (b) introducing a sample into a liquid chromatography mass spectrometer to quantitatively analyze polyethylene glycol according to molecular weight,

상기 (a) 및 (b) 단계가 동시에 이루어지는 것을 특징으로 하는, 검출방법을 제공하는 것이다.It is to provide a detection method, characterized in that the steps (a) and (b) are performed simultaneously.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.However, the technical problem to be achieved by the present invention is not limited to the above-mentioned problems, and other problems not mentioned will be clearly understood by those skilled in the art from the following description.

상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 하기 단계를 포함하는, 광범위한 분자량을 갖는 폴리에틸렌글리콜 (Polyethylene glycol)의 동시분석법을 이용한 검출방법으로,In order to solve the above problems, the present invention is a detection method using a simultaneous analysis method of polyethylene glycol having a wide range of molecular weight, comprising the following steps,

(a) 시료를 고성능 액체 크로마토그래피-증기화광산란검출기에 유입시켜 분자량에 따른 폴리에틸렌글리콜을 정성분석하는 단계; 및(a) introducing a sample into a high-performance liquid chromatography-vaporized light scattering detector to qualitatively analyze polyethylene glycol according to molecular weight; and

(b) 시료를 액체크로마토그래피 질량분석기로 유입시켜 분자량에 따른 폴리에틸렌글리콜을 정량분석하는 단계를 포함하며, (b) introducing a sample into a liquid chromatography mass spectrometer to quantitatively analyze polyethylene glycol according to molecular weight,

상기 (a) 및 (b) 단계가 동시에 이루어지는 것을 특징으로 하는, 검출방법을 제공한다.It provides a detection method, characterized in that the steps (a) and (b) are performed simultaneously.

본 발명의 일실시예에서, 상기 폴리에틸렌글리콜은 분자량이 200 내지 20000일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In one embodiment of the present invention, the polyethylene glycol may have a molecular weight of 200 to 20000, but is not limited thereto.

본 발명의 다른 실시예에서, 상기 액체크로마토그래피는 이동상 용매가 아세토니트릴, 물, 메탄올, 이소프로파놀, 암모늄포메이트(ammonium formate), 암모늄아세테이트(ammonium acetate), 포름산, 아세트산, 트리플로로아세트산 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, in the liquid chromatography, the mobile phase solvent is acetonitrile, water, methanol, isopropanol, ammonium formate, ammonium acetate, formic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid And it may be one or more selected from the group consisting of combinations thereof, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 이동상용매는 물 및 아세토니트릴일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the mobile phase solvent may be water and acetonitrile, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 시료는 물 및 메탄올 혼합액으로 전처리된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the sample may be pre-treated with a mixture of water and methanol, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 시료가 필름코팅정제 또는 당의정제인 경우, 전처리 시 볼텍싱하는 단계를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, when the sample is a film-coated tablet or a dragee tablet, it may include a step of vortexing during pretreatment, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 시료가 필름코팅정제인 경우, 전처리 시 150 내지 170초간 볼텍싱하는 단계를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, when the sample is a film-coated tablet, the pretreatment may include vortexing for 150 to 170 seconds, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 시료가 당의정제인 경우, 전처리 시 270 내지 290초간 볼텍싱하는 단계를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, when the sample is a dragee tablet, the pretreatment may include vortexing for 270 to 290 seconds, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 시료가 유화제인 경우, 전처리 시 볼텍싱하지 않을 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, when the sample is an emulsifier, vortexing may not be performed during pretreatment, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 크로마토그래피는 C8 컬럼을 이용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the chromatography may use a C8 column, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 정성분석하는 단계는 크로마토그램의 피크 한 개의 간격이 분자량 43 내지 45의 차이를 나타낼 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, in the qualitative analysis, an interval of one peak in the chromatogram may indicate a difference in molecular weight of 43 to 45, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 정량분석하는 단계는 폴리에틸렌글리콜 검량곡선이 2차 방정식일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, in the quantitative analysis step, the polyethylene glycol calibration curve may be a quadratic equation, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 2차 방정식은,In another embodiment of the present invention, the quadratic equation is

PEG의 분자량이 300 내지 1000인 경우 y=0.0009x2+1.8358x-772.59;y=0.0009x 2 +1.8358x-772.59 when the molecular weight of PEG is 300-1000;

PEG의 분자량이 1300 내지 3000인 경우 y=0.0012x2+2.7944x-1225.3;y=0.0012x 2 +2.7944x-1225.3 when the molecular weight of PEG is 1300 to 3000;

PEG의 분자량이 2500 내지 4000인 경우 y=0.0019x2+3.1435x-1145.1;y=0.0019x 2 +3.1435x-1145.1 when the molecular weight of PEG is 2500 to 4000;

PEG의 분자량이 4000 내지 7500인 경우 y=0.0022x2+3.353x-1244.6; 또는y=0.0022x 2 +3.353x-1244.6 when the molecular weight of PEG is 4000 to 7500; or

PEG의 분자량이 7000 내지 10000인 경우 y=0.0028x2+2.7149x-562.84이며,y = 0.0028x 2 +2.7149x-562.84 when the molecular weight of PEG is 7000 to 10000,

상기 x는 μg/ml 단위의 분석물질(PEG)의 농도를 나타내고, y는 대응하는 피크 면적 계수일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.Wherein x represents the concentration of the analyte (PEG) in μg/ml, and y may be a corresponding peak area coefficient, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 검량곡선은 결정 계수가 0.99 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the calibration curve may have a coefficient of determination of 0.99 or more, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 시료는 식품 또는 의약품일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the sample may be food or medicine, but is not limited thereto.

또한, 본 발명은 시료로부터 얻은 정보에 대한 입력을 수신하는 입력 수신부;In addition, the present invention provides an input receiving unit for receiving an input for information obtained from a sample;

광범위한 분자량을 갖는 폴리에틸렌글리콜 (Polyethylene glycol)에 대한 정보를 포함하는 라이브러리;a library containing information on polyethylene glycol having a wide range of molecular weights;

입력된 정보를 대입하여 폴리에틸렌글리콜의 분자량 및 함량을 계산하는 계산부;를 포함하며, A calculation unit for calculating the molecular weight and content of polyethylene glycol by substituting the input information;

상기 폴리에틸렌글리콜에 대한 정보는 분석값 [M+Na++H3O+ n-1]에 따른 PEG 분자량별 체류 시간, 질량, MS 단편 및 하전 상태를 포함하고,The information on the polyethylene glycol includes the retention time, mass, MS fragment and charge state for each PEG molecular weight according to the analysis value [M+Na + +H 3 O + n-1 ],

상기 폴리에틸렌글리콜에 대한 정보는 고성능 액체 크로마토그래피-증기화광산란검출기 및 액체크로마토그래피 질량분석기에 의하여 정성 분석 및 정량 분석된 결과인 것을 특징으로 하는, 광범위한 분자량을 갖는 폴리에틸렌글리콜 (Polyethylene glycol)의 검출 장치를 제공한다.The information on the polyethylene glycol is a detection device of polyethylene glycol having a wide molecular weight, characterized in that it is the result of qualitative and quantitative analysis by a high-performance liquid chromatography-vaporized light scattering detector and liquid chromatography mass spectrometer. provides

또한, 본 발명은 광범위한 분자량을 갖는 폴리에틸렌글리콜 (Polyethylene glycol)에 대한 정보를 포함하는 라이브러리를 사용하는 방법으로서,In addition, the present invention is a method of using a library containing information on polyethylene glycol (Polyethylene glycol) having a wide range of molecular weight,

상기 폴리에틸렌글리콜에 대한 정보는 분석값 [M+Na++H3O+ n-1]에 따른 PEG 분자량별 체류 시간, 질량, MS 단편 및 하전 상태를 포함하고,The information on the polyethylene glycol includes the retention time, mass, MS fragment and charge state for each PEG molecular weight according to the analysis value [M+Na + +H 3 O + n-1 ],

상기 폴리에틸렌글리콜에 대한 정보는 고성능 액체 크로마토그래피-증기화광산란검출기 및 액체크로마토그래피 질량분석기에 의하여 정성 분석 및 정량 분석된 결과인 것을 특징으로 하고,The information on the polyethylene glycol is characterized in that it is the result of qualitative analysis and quantitative analysis by high performance liquid chromatography-vaporized light scattering detector and liquid chromatography mass spectrometer,

상기 방법은,The method is

시료로부터 얻은 정보에 대한 입력을 수신하는 단계;receiving input for information obtained from the sample;

상기 라이브러리가 저장된, 컴퓨터로 읽을 수 있는 저장매체를 액세스(Access)하는 단계; 및accessing a computer-readable storage medium in which the library is stored; and

상기 정보를 기반으로, 입력된 정보를 대입하여 시료에 포함된 폴리에틸렌글리콜의 분자량 및 함량을 계산하는 단계를 포함하는, 라이브러리를 사용하는 방법을 제공한다.Based on the information, it provides a method of using a library, including the step of calculating the molecular weight and content of polyethylene glycol contained in the sample by substituting the input information.

또한, 본 발명은 컴퓨터에 상기 라이브러리를 사용하는 방법을 실행시키기 위한 프로그램을 기록한 컴퓨터로 읽을 수 있는 매체를 제공한다.In addition, the present invention provides a computer-readable medium in which a program for executing the method of using the library is recorded on a computer.

본 발명의 동시분석법은 광범위한 분자량을 가지는 폴리에틸렌글리콜을 동시에 분석할 수 있어 분석을 신속하고 간편하게 할 수 있으며, 한국 뿐만 아니라, 국제 표준 및 유럽 기준을 만족하여, 다양한 국가에서 폴리에틸렌글리콜을 검출하는 방법으로 이용할 수 있으며, 그 정확도 또한 우수하므로, PEG 함유 식품 및 의약품에서 다양한 분자량을 가지는 PEG를 동시에 분석할 수 있을 것으로 기대된다.The simultaneous analysis method of the present invention can analyze polyethylene glycol having a wide range of molecular weights at the same time, so that the analysis can be performed quickly and conveniently. Since it can be used and its accuracy is also excellent, it is expected that PEG having various molecular weights can be analyzed simultaneously in PEG-containing foods and pharmaceuticals.

도 1a 내지 도 1l은 8 가지 PEG 제품의 크로마토그램 및 PEG 함유 샘플으 크로마토그램을 나타낸 것이다: a) PEG 200, b) PEG 300, c) PEG 400, d) PEG 600, e) PEG 2000, f) PEG 4000, g) PEG 6000, h) PEG 8000, i) PEG 400, j) PEG 4000, k) PEG 6000 및 l) PEG 6000 및 8000.
도 2는 115개의 질량 피크 분석에 따른 로그 분자량과 체류 시간 사이의 선형성를 나타낸 것이다.
도 3은 PEG 사용 식품 및 의약품의 matrix 유형별 전처리법을 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따라, 광범위한 분자량을 갖는 폴리에틸렌글리콜 (Polyethylene glycol)의 검출 장치를 도시한 블록도이다.
도 5는 본 발명의 일 실시에에 따라, 광범위한 분자량을 갖는 폴리에틸렌글리콜 (Polyethylene glycol)에 대한 정보를 포함하는 라이브러리를 사용하는 방법을 설명하기 위한 흐름도이다.1a to 1l show chromatograms of eight PEG products and chromatograms of samples containing PEG: a) PEG 200, b) PEG 300, c) PEG 400, d) PEG 600, e) PEG 2000, f ) PEG 4000, g) PEG 6000, h) PEG 8000, i) PEG 400, j) PEG 4000, k) PEG 6000 and l) PEG 6000 and 8000.
2 shows the linearity between log molecular weight and retention time according to 115 mass peak analysis.
Figure 3 shows the pretreatment method for each matrix type of PEG-using food and drug.
4 is a block diagram illustrating an apparatus for detecting polyethylene glycol having a wide range of molecular weights, according to an embodiment of the present invention.
5 is a flowchart illustrating a method of using a library including information on polyethylene glycol having a wide range of molecular weights, according to an embodiment of the present invention.

본 발명은 하기 단계를 포함하는, 광범위한 분자량을 갖는 폴리에틸렌글리콜 (Polyethylene glycol)의 동시분석법을 이용한 검출방법으로,The present invention is a detection method using a simultaneous analysis method of polyethylene glycol having a wide molecular weight, comprising the following steps,

(a) 시료를 고성능 액체 크로마토그래피-증기화광산란검출기에 유입시켜 분자량에 따른 폴리에틸렌글리콜을 정성분석하는 단계; 및(a) introducing a sample into a high-performance liquid chromatography-vaporized light scattering detector to qualitatively analyze polyethylene glycol according to molecular weight; and

(b) 시료를 액체크로마토그래피 질량분석기로 유입시켜 분자량에 따른 폴리에틸렌글리콜을 정량분석하는 단계를 포함하며, (b) introducing a sample into a liquid chromatography mass spectrometer to quantitatively analyze polyethylene glycol according to molecular weight,

상기 (a) 및 (b) 단계가 동시에 이루어지는 것을 특징으로 하는, 검출방법을 제공한다.It provides a detection method, characterized in that the steps (a) and (b) are performed simultaneously.

본 발명자들은 본 발명의 분석 기기, 및 분석 조건을 이용한 PEG 검출 방법이 정량시험 결과 크로마토그램에서 115개의 MS 피크를 나타내며, PEG 0 에서 10000까지 분자량의 로그 값과 머무름 시간은 정의 상관관계를 보여주며, R2값은 0.9985임을 확인하였다 (본 발명의 도 2 참조).The present inventors have found that the PEG detection method using the analytical instrument and analytical conditions of the present invention shows 115 MS peaks in the chromatogram as a result of quantitative testing, and the log value of the molecular weight from 0 to 10000 of PEG and the retention time show a positive correlation. , R 2 It was confirmed that the value was 0.9985 (see FIG. 2 of the present invention).

본 발명의 일실시예에서, 상기 폴리에틸렌글리콜은 분자량이 200 내지 20000, 200 내지 19000, 200 내지 18000, 200 내지 17000, 200 내지 16000, 200 내지 15000, 200 내지 14000, 200 내지 13000, 200 내지 12000, 200 내지 11000, 200 내지 10000, 또는 200 내지 9000 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In one embodiment of the present invention, the polyethylene glycol has a molecular weight of 200 to 20000, 200 to 19000, 200 to 18000, 200 to 17000, 200 to 16000, 200 to 15000, 200 to 14000, 200 to 13000, 200 to 12000, It may be 200 to 11000, 200 to 10000, or 200 to 9000, but is not limited thereto.

본 발명의 다른 실시예에서, 상기 크로마토그래피는 C8 컬럼을 이용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the chromatography may use a C8 column, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 컬럼은 온도가 40 ℃ 내지 80 ℃, 45 ℃ 내지 75 ℃, 50 ℃ 내지 70 ℃, 55 ℃ 내지 65 ℃, 또는 약 60 ℃일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the column may have a temperature of 40 °C to 80 °C, 45 °C to 75 °C, 50 °C to 70 °C, 55 °C to 65 °C, or about 60 °C, but is limited thereto not.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 이동상의 속도는 0.1 내지 10 mL/min, 0.1 내지 8 mL/min, 0.1 내지 6 mL/min, 0.3 내지 5 mL/min, 0.5 내지 5 mL/min, 0.5 내지 3 mL/min, 0.6 내지 2.5 mL/min, 0.7 내지 2 mL/min, 0.8 내지 1.5 mL/min, 0.8 내지 1.5 mL/min, 0.8 내지 1.3 mL/min, 0.8 내지 1.2 mL/min, 0.9 내지 1.1 mL/min, 또는, 약 1 mL/min일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the speed of the mobile phase is 0.1 to 10 mL/min, 0.1 to 8 mL/min, 0.1 to 6 mL/min, 0.3 to 5 mL/min, 0.5 to 5 mL/min, 0.5 to 3 mL/min, 0.6 to 2.5 mL/min, 0.7 to 2 mL/min, 0.8 to 1.5 mL/min, 0.8 to 1.5 mL/min, 0.8 to 1.3 mL/min, 0.8 to 1.2 mL/min, 0.9 to It may be 1.1 mL/min, or about 1 mL/min, but is not limited thereto.

본 발명의 다른 실시예에서, 상기 액체크로마토그래피는 이동상 용매가 아세토니트릴, 물, 메탄올, 이소프로파놀, 암모늄포메이트(ammonium formate), 암모늄아세테이트(ammonium acetate), 포름산, 아세트산, 트리플로로아세트산 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, in the liquid chromatography, the mobile phase solvent is acetonitrile, water, methanol, isopropanol, ammonium formate, ammonium acetate, formic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid And it may be one or more selected from the group consisting of combinations thereof, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 이동상용매는 물 및/또는 아세토니트릴일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the mobile phase solvent may be water and/or acetonitrile, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 시료는 물 및 메탄올 혼합액으로 전처리된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the sample may be pre-treated with a mixture of water and methanol, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 시료가 필름코팅정제 또는 당의정제인 경우, 전처리 시 볼텍싱하는 단계를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, when the sample is a film-coated tablet or a dragee tablet, it may include a step of vortexing during pretreatment, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 시료가 필름코팅정제인 경우, 전처리 시 150 내지 170초간 볼텍싱하는 단계를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, when the sample is a film-coated tablet, the pretreatment may include vortexing for 150 to 170 seconds, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 시료가 필름코팅정제인 경우, 전처리 시 150 내지 170초간 볼텍싱하는 단계를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, when the sample is a film-coated tablet, the pretreatment may include vortexing for 150 to 170 seconds, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 시료가 당의정제인 경우, 전처리 시 270 내지 290초간 볼텍싱하는 단계를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, when the sample is a dragee tablet, the pretreatment may include vortexing for 270 to 290 seconds, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 정성분석하는 단계는 크로마토그램의 피크 한 개의 간격이 분자량 43 내지 45, 바람직하게는 44.05±0.5의 차이를 나타낼 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, in the qualitative analysis, the interval between one peak of the chromatogram may represent a difference in molecular weight of 43 to 45, preferably 44.05±0.5, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 정량분석하는 단계는 폴리에틸렌글리콜 검량곡선이 2차 방정식과 상관관계가 성립할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, in the quantitative analysis, the polyethylene glycol calibration curve may be correlated with a quadratic equation, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 2차 방정식은,In another embodiment of the present invention, the quadratic equation is

PEG의 분자량이 300 내지 1000인 경우 y=0.0009x2+1.8358x-772.59;y=0.0009x 2 +1.8358x-772.59 when the molecular weight of PEG is 300-1000;

PEG의 분자량이 1300 내지 3000인 경우 y=0.0012x2+2.7944x-1225.3;y=0.0012x 2 +2.7944x-1225.3 when the molecular weight of PEG is 1300 to 3000;

PEG의 분자량이 2500 내지 4000인 경우 y=0.0019x2+3.1435x-1145.1;y=0.0019x 2 +3.1435x-1145.1 when the molecular weight of PEG is 2500 to 4000;

PEG의 분자량이 4000 내지 7500인 경우 y=0.0022x2+3.353x-1244.6; 또는y=0.0022x 2 +3.353x-1244.6 when the molecular weight of PEG is 4000 to 7500; or

PEG의 분자량이 7000 내지 10000인 경우 y=0.0028x2+2.7149x-562.84이며,y = 0.0028x 2 +2.7149x-562.84 when the molecular weight of PEG is 7000 to 10000,

상기 x는 μg/ml 단위의 분석물질(PEG)의 농도를 나타내고, y는 대응하는 피크 면적 계수일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.Wherein x represents the concentration of the analyte (PEG) in μg/ml, and y may be a corresponding peak area coefficient, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 정량분석하는 단계는 폴리에틸렌글리콜 검량곡선이 1차 방정식과 상관관계가 성립할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, in the quantitative analysis, the polyethylene glycol calibration curve may be correlated with the first-order equation, but is not limited thereto.

상기 1차 방정식은, y=0.1418x+2.2202 (여기서, x는 시간(min) 및 y는 상대적 수 (Relatively Abundance)이다.)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The first-order equation may be y=0.1418x+2.2202 (where x is time (min) and y is a relative number (Relatively Abundance)), but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 시료는 식품 또는 의약품일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In another embodiment of the present invention, the sample may be food or medicine, but is not limited thereto.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다. 또한, 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.The terms used in the present invention have been selected as currently widely used general terms as possible while considering the functions in the present invention, but these may vary depending on the intention or precedent of a person skilled in the art, the emergence of new technology, and the like. In addition, in a specific case, there is a term arbitrarily selected by the applicant, and in this case, the meaning will be described in detail in the description of the corresponding invention. Therefore, the term used in the present invention should be defined based on the meaning of the term and the overall content of the present invention, rather than the name of a simple term.

명세서 전체에서 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있음을 의미한다. 또한, 명세서에 기재된 "...부", "모듈" 등의 용어는 적어도 하나의 기능이나 동작을 처리하는 단위를 의미하며, 이는 하드웨어 또는 소프트웨어로 구현되거나 하드웨어와 소프트웨어의 결합으로 구현될 수 있다.In the entire specification, when a part "includes" a certain component, it means that other components may be further included, rather than excluding other components, unless otherwise stated. In addition, terms such as "...unit" and "module" described in the specification mean a unit that processes at least one function or operation, which may be implemented as hardware or software, or a combination of hardware and software. .

제1, 제2 등의 용어는 다양한 구성요소들을 설명하는데 사용될 수 있지만, 상기 구성요소들은 상기 용어들에 의해 한정되어져서는 안 된다. 상기 용어들은 하나의 구성요소를 다른 구성요소로부터 구별하는 목적으로만 사용된다. 예를 들어, 본 발명의 권리 범위를 벗어나지 않으면서 제1 구성요소는 제2 구성요소로 명명될 수 있고, 유사하게 제2 구성요소도 제1 구성요소로 명명될 수 있다. 및/또는 이라는 용어는 복수의 관련된 기재된 항목들의 조합 또는 복수의 관련된 기재된 항목들 중의 어느 항목을 포함한다.Terms such as first, second, etc. may be used to describe various elements, but the elements should not be limited by the terms. The above terms are used only for the purpose of distinguishing one component from another. For example, without departing from the scope of the present invention, a first component may be referred to as a second component, and similarly, a second component may also be referred to as a first component. and/or includes a combination of a plurality of related listed items or any of a plurality of related listed items.

어떤 실시예가 달리 구현 가능한 경우에 특정한 단계는 설명되는 순서와 다르게 수행될 수도 있다. 예를 들어, 연속하여 설명되는 두 단계는 실질적으로 동시에 수행될 수도 있고, 설명되는 순서와 반대의 순서로 수행될 수도 있다.Where certain embodiments are otherwise implementable, certain steps may be performed out of the order in which they are described. For example, two steps described in succession may be performed substantially simultaneously, or may be performed in an order opposite to the order described.

본 명세서에서, ‘크로마토그램’은 특수 검출기를 통해 시료를 통과시킴으로써 검출되는 성분들에 대한 UV/VIS 흡광도, 이온화 강도, 핵자기 공명 시그널, 광산란도, 반사 지수 및 다른 물리적 성질에 기초하는 크로마토그래피 분석 결과의 도해를 말한다.As used herein, 'chromatogram' refers to chromatography based on UV/VIS absorbance, ionization intensity, nuclear magnetic resonance signal, light scattering, reflection index and other physical properties for components detected by passing a sample through a special detector. An illustration of the analysis results.

본 명세서에서, 크로마토그래피는 물질의 혼합물을 분리하는 확립된 수단인데, 생화학, 분석화학과 임상화학에서 널리 쓰인다. 본 발명의 크로마토그래피는 예를 들어, 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC, high performance (high pressure) liquid chromatography의 약어) 또는 액체 크로마토그래피 (LC, liquid chromatography)이다.In the present specification, chromatography is an established means of separating mixtures of substances, and is widely used in biochemistry, analytical chemistry and clinical chemistry. The chromatography of the present invention is, for example, high performance liquid chromatography (HPLC, an abbreviation of high performance (high pressure) liquid chromatography) or liquid chromatography (LC, liquid chromatography).

상기 ‘HPLC’는 가장 간단한 경우에 이동상(mobile phase)을 담고 있는 용리액 저장조(eluent reservoir)를 갖춘 펌프, 시료 부가 시스템, 정지상(stationary phase)을 담고 있는 분리용 컬럼과 감지기로 이루어진다. 덧붙여서 분획 수집기(fraction collector)를 더 갖추고 있을 수 있는데, 여기서는 분리 후 각각을 따로 수집하여 추후 용도에 사용하는 것이 가능하다. 상기 크로마토그래피는 기준 원료 및 시료의 분자량 측정 시 크로마토그래피 실시가 동일한 조건 하에서 행해지는 것일 수 있다. 구체적으로 상기 조건은 컬럼의 종류, 온도, 이동상 속도, 전개 용액의 종류일 수 있다.In the simplest case, the 'HPLC' consists of a pump equipped with an eluent reservoir containing a mobile phase, a sample addition system, a separation column containing a stationary phase, and a detector. In addition, it may be further equipped with a fraction collector, where it is possible to collect each separately after separation and use it for future use. The chromatography may be performed under the same conditions as when the molecular weight of the reference raw material and the sample is measured. Specifically, the conditions may be the type of column, temperature, mobile phase speed, and the type of developing solution.

본 명세서에서, 크로마토그래피, 증기화광산란검출기 및 질량분석기는, 특정 모델의 기기에 한정되는 것은 아니며, 크로마토그래피에 의한 상분리 및 질량분석을 연속적으로 할 수 있는 기기가 적용될 수 있다.In the present specification, chromatography, vaporized light scattering detector, and mass spectrometer are not limited to a specific model of an instrument, and an instrument capable of continuously performing phase separation and mass spectrometry by chromatography may be applied.

본 명세서에서, 증기화광산란검출기 (ELSD)는 분석 물질이 용매와 용질이 혼합된 상태로 배출되면 분무기(nebulizer)를 사용하여 원통형관 내부로 뿜어주고 원형형관을 고온으로 승온시켜 용매만을 증발시켜 남아 있는 비휘발성 용질에 레이저를 조사하여 용질에서 산란되어 나오는 광을 다이오드(diode)로 검출하는 검출기로서, 용질의 양이 과량이면 산란되는 광의 세기가 강하며, 용질의 양이 소량이면 산란되는 광의 세기가 약한 특성을 이용하여 산란되어 나오는 광의 세기를 측정하여 분석 물질을 정량 분석한다.In the present specification, the vaporized light scattering detector (ELSD) uses a nebulizer when the analyte is discharged in a mixed state with the solvent and solute, and then sprays it into the cylindrical tube, and the circular tube is heated to a high temperature to evaporate only the solvent. A detector that irradiates a laser to a non-volatile solute and detects the light scattered from the solute with a diode. If the amount of solute is excessive, the intensity of scattered light is strong, and if the amount of solute is small, the intensity of scattered light Quantitative analysis of the analyte is performed by measuring the intensity of scattered light using the weak characteristic.

본 명세서에서, 질량분석기는 LC-MS/MS일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. LC-MS/MS는 LC/MS가 업그레이드 된 것으로 두 회사의 MS를 함께 사용함으로써 보다 정밀한 측정이 가능하도록 한 것이다.In the present specification, the mass spectrometer may be LC-MS/MS, but is not limited thereto. LC-MS/MS is an upgraded version of LC/MS, enabling more precise measurement by using the MSs of the two companies together.

또한, 본 발명은 시료로부터 얻은 정보에 대한 입력을 수신하는 입력 수신부;In addition, the present invention provides an input receiving unit for receiving an input for information obtained from a sample;

광범위한 분자량을 갖는 폴리에틸렌글리콜 (Polyethylene glycol)에 대한 정보를 포함하는 라이브러리;a library containing information on polyethylene glycol having a wide range of molecular weights;

입력된 정보를 대입하여 폴리에틸렌글리콜의 분자량 및 함량을 계산하는 계산부;를 포함하며, A calculation unit for calculating the molecular weight and content of polyethylene glycol by substituting the input information;

상기 폴리에틸렌글리콜에 대한 정보는 분석값 [M+Na++H3O+ n-1]에 따른 PEG 분자량별 체류 시간, 질량, MS 단편 및 하전 상태를 포함하고,The information on the polyethylene glycol includes the retention time, mass, MS fragment and charge state for each PEG molecular weight according to the analysis value [M+Na + +H 3 O + n-1 ],

상기 폴리에틸렌글리콜에 대한 정보는 고성능 액체 크로마토그래피-증기화광산란검출기 및 액체크로마토그래피 질량분석기에 의하여 정성 분석 및 정량 분석된 결과인 것을 특징으로 하는, 광범위한 분자량을 갖는 폴리에틸렌글리콜 (Polyethylene glycol)의 검출 장치를 제공한다.The information on the polyethylene glycol is a detection device of polyethylene glycol having a wide molecular weight, characterized in that it is the result of qualitative and quantitative analysis by a high-performance liquid chromatography-vaporized light scattering detector and liquid chromatography mass spectrometer. provides

도 8은 일실시예에 따라, 광범위한 분자량을 갖는 폴리에틸렌글리콜 (Polyethylene glycol)의 검출 장치를 도시한 블록도이다. 상기 장치(800)는 메모리(802), 프로세서(804), 입력 수신부(806), 라이브러리 검색부(808), 계산부(810), 라이브러리(818) 및 버스(820)를 포함할 수 있다.8 is a block diagram illustrating an apparatus for detecting polyethylene glycol having a wide range of molecular weights, according to an embodiment. The device 800 may include a memory 802 , a processor 804 , an input receiving unit 806 , a library searching unit 808 , a calculating unit 810 , a library 818 , and a bus 820 .

메모리(802)는 입력 수신부(806), 라이브러리 검색부(808), 계산부(810), 및 라이브러리(818)를 포함할 수 있다.The memory 802 may include an input receiving unit 806 , a library search unit 808 , a calculation unit 810 , and a library 818 .

버스(820)는 메모리(802)와 프로세서(804)사이를 연결할 수 있다.A bus 820 may connect between the memory 802 and the processor 804 .

입력 수신부(806)는 시료로부터 고성능 액체 크로마토그래피-증기화광산란검출기 및 액체크로마토그래피 질량분석기에 의하여 정성 분석 및 정량 분석된 결과로서, 분석값 [M+Na++H3O+ n-1]에 따른 PEG 분자량별 체류 시간, 질량, MS 단편 및 하전 상태에 대한 입력을 수신할 수 있다.The input receiving unit 806 is a result of qualitative analysis and quantitative analysis by a high-performance liquid chromatography-vaporization light scattering detector and a liquid chromatography mass spectrometer from the sample, and the analysis value [M+Na + +H 3 O + n-1 ] can receive input for retention time, mass, MS fragment and charge state by PEG molecular weight according to

또한, 본 발명은 광범위한 분자량을 갖는 폴리에틸렌글리콜 (Polyethylene glycol)에 대한 정보를 포함하는 라이브러리를 사용하는 방법으로서,In addition, the present invention is a method of using a library containing information on polyethylene glycol (Polyethylene glycol) having a wide range of molecular weight,

상기 폴리에틸렌글리콜에 대한 정보는 분석값 [M+Na++H3O+ n-1]에 따른 PEG 분자량별 체류 시간, 질량, MS 단편 및 하전 상태를 포함하고,The information on the polyethylene glycol includes the retention time, mass, MS fragment and charge state for each PEG molecular weight according to the analysis value [M+Na + +H 3 O + n-1 ],

상기 폴리에틸렌글리콜에 대한 정보는 고성능 액체 크로마토그래피-증기화광산란검출기 및 액체크로마토그래피 질량분석기에 의하여 정성 분석 및 정량 분석된 결과인 것을 특징으로 하고,The information on the polyethylene glycol is characterized in that it is the result of qualitative analysis and quantitative analysis by high performance liquid chromatography-vaporized light scattering detector and liquid chromatography mass spectrometer,

상기 방법은,The method is

시료로부터 얻은 정보에 대한 입력을 수신하는 단계;receiving input for information obtained from the sample;

상기 라이브러리가 저장된, 컴퓨터로 읽을 수 있는 저장매체를 액세스(Access)하는 단계; 및accessing a computer-readable storage medium in which the library is stored; and

상기 정보를 기반으로, 입력된 정보를 대입하여 시료에 포함된 폴리에틸렌글리콜의 분자량 및 함량을 계산하는 단계를 포함하는, 라이브러리를 사용하는 방법을 제공한다.Based on the information, it provides a method of using a library, including the step of calculating the molecular weight and content of polyethylene glycol contained in the sample by substituting the input information.

라이브러리 및 입력 수신부는 각각 이론 정보 및 실험 정보를 포함한다. 구체적으로 이 정보는 폴리에틸렌글리콜, 예를 들어, 폴리에틸렌글리콜에 대한 정보는 분석값 [M+Na++H3O+ n-1]에 따른 PEG 분자량별 체류 시간, 질량, MS 단편 및 하전 상태의 정보를 포함할 수 있는데, 이는 분자량에 따라 크로마토그램의 패턴, 검량곡선, 피크 면적 및 개수 등에 차이를 보이므로, 상기 라이브러리의 크로마트그램 패턴, 피크의 개수, 검량곡선, 검량곡선 방정식 등을 실험에서 측정된 폴리에틸렌글리콜의 크로마토그램의 패턴, 피크의 개수, 피크 면적, MS 단편 및 하전 상태 등과 비교함으로써, 상기 실험에서 측정된 폴리에틸렌글리콜의 종류 및 함량(질량)을 용이하게 확인하기 위해서이다.The library and the input receiving unit include theoretical information and experimental information, respectively. Specifically, this information is polyethylene glycol, for example, information about polyethylene glycol is the analysis value [M+Na + +H 3 O + n-1 ] retention time, mass, MS fragment and charge state by PEG molecular weight according to the It may include information, which shows differences in the pattern, calibration curve, peak area and number of the chromatogram according to the molecular weight, so the chromatogram pattern of the library, the number of peaks, calibration curve, calibration curve equation, etc. are tested By comparing the pattern, number of peaks, peak area, MS fragment and charge state of the chromatogram of polyethylene glycol measured in , it is to easily confirm the type and content (mass) of polyethylene glycol measured in the above experiment.

또한, 본 발명은 컴퓨터에 상기 라이브러리를 사용하는 방법을 실행시키기 위한 프로그램을 기록한 컴퓨터로 읽을 수 있는 매체를 제공한다.In addition, the present invention provides a computer-readable medium in which a program for executing the method of using the library is recorded on a computer.

본 발명에서 이러한 매체의 종류는 특별히 제한되지 않으며, 분자의 분석을 위해 사용되는 매체를 이용할 수 있다.In the present invention, the type of the medium is not particularly limited, and a medium used for molecular analysis may be used.

본 실시예들에 따른 장치는 프로세서, 프로그램 데이터를 저장하고 실행하는 메모리, 디스크 드라이브와 같은 영구 저장부(permanent storage), 외부 장치와 통신하는 통신 포트, 터치 패널, 키(key), 버튼 등과 같은 사용자 인터페이스 장치 등을 포함할 수 있다. 소프트웨어 모듈 또는 알고리즘으로 구현되는 방법들은 상기 프로세서상에서 실행 가능한 컴퓨터가 읽을 수 있는 코드들 또는 프로그램 명령들로서 컴퓨터가 읽을 수 있는 기록 매체 상에 저장될 수 있다. 여기서 컴퓨터가 읽을 수 있는 기록 매체로 마그네틱 저장 매체(예컨대, ROM(readonly memory), RAM(random-access memory), 플로피 디스크, 하드 디스크 등) 및 광학적 판독 매체(예컨대, 시디롬(CD-ROM), 디브이디(DVD: Digital Versatile Disc)) 등이 있다. 컴퓨터가 읽을 수 있는 기록 매체는 네트워크로 연결된 컴퓨터 시스템들에 분산되어, 분산 방식으로 컴퓨터가 판독 가능한 코드가 저장되고 실행될 수 있다. 매체는 컴퓨터에 의해 판독가능하며, 메모리에 저장되고, 프로세서에서 실행될 수 있다.The device according to the present embodiments includes a processor, a memory for storing and executing program data, a permanent storage such as a disk drive, a communication port for communicating with an external device, a touch panel, a key, a button, etc. user interface devices, and the like. Methods implemented as software modules or algorithms may be stored on a computer-readable recording medium as computer-readable codes or program instructions executable on the processor. Here, the computer-readable recording medium includes a magnetic storage medium (eg, readonly memory (ROM), random-access memory (RAM), floppy disk, hard disk, etc.) and an optically readable medium (eg, CD-ROM); DVD (Digital Versatile Disc), and the like. The computer-readable recording medium is distributed among network-connected computer systems, so that the computer-readable code can be stored and executed in a distributed manner. The medium may be readable by a computer, stored in a memory, and executed on a processor.

본 실시예는 기능적인 블록 구성들 및 다양한 처리 단계들로 나타내어질 수 있다. 이러한 기능 블록들은 특정 기능들을 실행하는 다양한 개수의 하드웨어 또는/및 소프트웨어 구성들로 구현될 수 있다. 예를 들어, 실시예는 하나 이상의 마이크로프로세서들의 제어 또는 다른 제어 장치들에 의해서 다양한 기능들을 실행할 수 있는, 메모리, 프로세싱, 로직(logic), 룩 업 테이블(look-up table) 등과 같은 직접 회로 구성들을 채용할 수 있다. 구성 요소들이 소프트웨어 프로그래밍 또는 소프트웨어 요소들로 실행될 수 있는 것과 유사하게, 본 실시예는 데이터 구조, 프로세스들, 루틴들 또는 다른 프로그래밍 구성들의 조합으로 구현되는 다양한 알고리즘을 포함하여, C, C++, 자바(Java), 어셈블러(assembler) 등과 같은 프로그래밍 또는 스크립팅 언어로 구현될 수 있다. 기능적인 측면들은 하나 이상의 프로세서들에서 실행되는 알고리즘으로 구현될 수 있다. 또한, 본 실시예는 전자적인 환경 설정, 신호 처리, 및/또는 데이터 처리 등을 위하여 종래 기술을 채용할 수 있다. “매커니즘”, “요소”, “수단”, “구성”과 같은 용어는 넓게 사용될 수 있으며, 기계적이고 물리적인 구성들로서 한정되는 것은 아니다. 상기 용어는 프로세서 등과 연계하여 소프트웨어의 일련의 처리들(routines)의 의미를 포함할 수 있다.This embodiment may be represented by functional block configurations and various processing steps. These functional blocks may be implemented in any number of hardware and/or software configurations that perform specific functions. For example, an embodiment may be an integrated circuit configuration, such as memory, processing, logic, look-up table, etc., capable of executing various functions by means of the control of one or more microprocessors or other control devices. can be hired Similar to how components may be implemented as software programming or software components, this embodiment includes various algorithms implemented in a combination of data structures, processes, routines, or other programming constructs, including C, C++, Java ( Java), assembler, etc. may be implemented in a programming or scripting language. Functional aspects may be implemented in an algorithm running on one or more processors. In addition, the present embodiment may employ the prior art for electronic environment setting, signal processing, and/or data processing, and the like. Terms such as “mechanism”, “element”, “means” and “configuration” may be used broadly and are not limited to mechanical and physical configurations. The term may include the meaning of a series of routines of software in connection with a processor or the like.

본 실시예에서 설명하는 특정 실행들은 예시들로서, 어떠한 방법으로도 기술적 범위를 한정하는 것은 아니다. 명세서의 간결함을 위하여, 종래 전자적인 구성들, 제어 시스템들, 소프트웨어, 상기 시스템들의 다른 기능적인 측면들의 기재는 생략될 수 있다. 또한, 도면에 도시된 구성 요소들 간의 선들의 연결 또는 연결 부재들은 기능적인 연결 및/또는 물리적 또는 회로적 연결들을 예시적으로 나타낸 것으로서, 실제 장치에서는 대체 가능하거나 추가의 다양한 기능적인 연결, 물리적인 연결, 또는 회로 연결들로서 나타내어질 수 있다.The specific implementations described in this embodiment are examples, and do not limit the technical scope in any way. For brevity of the specification, descriptions of conventional electronic components, control systems, software, and other functional aspects of the systems may be omitted. In addition, the connections or connecting members of the lines between the components shown in the drawings exemplify functional connections and/or physical or circuit connections, and in an actual device, various functional connections, physical connections that are replaceable or additional may be referred to as connections, or circuit connections.

본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 특정 실시예들을 도면에 예시하고 상세한 설명에 상세하게 설명하고자 한다. 그러나 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.Since the present invention can apply various transformations and can have various embodiments, specific embodiments are illustrated in the drawings and described in detail in the detailed description. However, this is not intended to limit the present invention to specific embodiments, and it should be understood to include all modifications, equivalents and substitutes included in the spirit and scope of the present invention. In describing the present invention, if it is determined that a detailed description of a related known technology may obscure the gist of the present invention, the detailed description thereof will be omitted.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, preferred examples are presented to help the understanding of the present invention. However, the following examples are only provided for easier understanding of the present invention, and the contents of the present invention are not limited by the following examples.

[실시예][Example]

실시예 1. 실험 방법Example 1. Experimental method

1.1 화합물1.1 compounds

시판되는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 제품 (PEG 200, PEG 300, PEG 400, PEG 600, PEG 2000, PEG 4000 및 PEG 8000)은 Tokyo Chemical Industry (일본 도쿄)에서 구입했으며, PEG 6000은 Sigma-Aldrich (미국)에서 구입하였다. 아세토니트릴, 메탄올 및 물 (HPLC 등급)은 Honeywell (울산, 한국)에서 구입하였다.Commercially available polyethylene glycol (PEG) products (PEG 200, PEG 300, PEG 400, PEG 600, PEG 2000, PEG 4000 and PEG 8000) were purchased from Tokyo Chemical Industry (Tokyo, Japan), and PEG 6000 was obtained from Sigma-Aldrich (USA). ) was purchased from Acetonitrile, methanol and water (HPLC grade) were purchased from Honeywell (Ulsan, Korea).

1.2 HPLC 및 LC-ESI-MS/MS 분석1.2 HPLC and LC-ESI-MS/MS analysis

탈기 장치 (Tokyo, Japan), 이진 펌프 (Wardbronn, Germany), 오토 샘플러 (Germany), 온도 조절식 컬럼 구획 (Waldbronn, Germany) 및 Agilent 380 ELSD 검출기 (UK)가 장착된 Agilent Technologies 1200 시리즈 HPLC 기기를 사용하여 PEG를 분리하고 식별하였다. 본 발명의 HPLC 분석 방법에서 C8 컬럼 (YMC-Triart C8 4.6 mm I.D. × 150 mm S-5, 12 nm, Japan)을 60 ℃의 컬럼 온도에서 적용하였다; 이동상은 물 및 아세토니트릴을 포함하고 다음과 같이 구배 용리 조건에서 사용되었다 : 0-7 min: 80% A: 20% B; 7-14 min: 80% A to 55% A:20% B to 45% B; 14-15 min: 55% A to 45% A: 45% B to 55% B; 15-20 min (re-equilibrium step): 45% A to 80% A: 55% B to 20% B. 유속은 1 mL min-1로 조정하였다; 주입 부피는 10 μL였다. ELSD의 증발기 온도 및 분무기 온도는 각각 50 ℃ 및 70 ℃였다. 질소 가스의 유량은 1.4 SLM이었다.An Agilent Technologies 1200 series HPLC instrument equipped with a degasser (Tokyo, Japan), a binary pump (Wardbronn, Germany), an autosampler (Germany), a temperature-controlled column compartment (Waldbronn, Germany) and an Agilent 380 ELSD detector (UK). was used to isolate and identify PEG. In the HPLC analysis method of the present invention, a C8 column (YMC-Triart C8 4.6 mm ID × 150 mm S-5, 12 nm, Japan) was applied at a column temperature of 60°C; The mobile phase comprised water and acetonitrile and was used in gradient elution conditions as follows: 0-7 min: 80% A: 20% B; 7-14 min: 80% A to 55% A:20% B to 45% B; 14-15 min: 55% A to 45% A: 45% B to 55% B; 15-20 min (re-equilibrium step): 45% A to 80% A: 55% B to 20% B. The flow rate was adjusted to 1 mL min -1 ; The injection volume was 10 μL. The evaporator temperature and atomizer temperature of the ELSD were 50 °C and 70 °C, respectively. The flow rate of nitrogen gas was 1.4 SLM.

Waters ACQUITY UPLC 시스템 (Milford, USA)에 연결된 전기 분무 이온화 (Manchester, UK) 기능을 갖는 Waters Xevo TQD Triple Quadrupole 질량 분석기를 사용하여 PEG를 식별하였다. 본 발명의 HPLC 시스템에 사용된 동일한 컬럼 및 구배 용리 조건을 양이온 모드에서 LC-ESI-MS/MS 분석에 적용하였다. Mass Lynx V 4.1 (Waters, Manchester, UK)을 사용하여 데이터를 획득하였다. 보다 상세한 ESI-MS/MS 조건은 다음과 같다 : 분무 전압 (spray voltage):5.0 kV; 차단 가스 (sheath gas):35 arb; Aux 가스:5 arb; 모세관 온도 (capillary temperature):275 ℃; 충돌 에너지 (collision energy):35V. PEG was identified using a Waters Xevo TQD Triple Quadrupole mass spectrometer with electrospray ionization (Manchester, UK) connected to a Waters ACQUITY UPLC system (Milford, USA). The same column and gradient elution conditions used in the HPLC system of the present invention were subjected to LC-ESI-MS/MS analysis in positive ion mode. Data were acquired using Mass Lynx V 4.1 (Waters, Manchester, UK). More detailed ESI-MS/MS conditions were as follows: spray voltage: 5.0 kV; Sheath gas: 35 arb; Aux Gas: 5 arb; capillary temperature: 275 °C; Collision energy: 35V.

LC-ESI-MS/MS 분석을 위해, PEG 표준 샘플을 물 : 메탄올 (1 : 1, v/v) 용액 중 0.1 % 소듐 포르메이트(sodium formate)를 사용하여 희석하고, 나트륨 부가물을 생성시켰다.For LC-ESI-MS/MS analysis, PEG standard samples were diluted using 0.1 % sodium formate in water:methanol (1:1, v/v) solution and sodium adduct was generated .

구체적인 크로마토그래피 분석 조건은, 다음과 같다.Specific chromatography analysis conditions are as follows.

(1) 검출기 : ELSD (Evaporative Light Scattering Detector)(1) Detector: ELSD (Evaporative Light Scattering Detector)

(2) 컬럼 : YMC-Pack Pro C8 (4.6 mmI.D. × 150 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것(2) Column: YMC-Pack Pro C8 (4.6 mmI.D. × 150 mm, 5 μm) or equivalent

(3) 이동상 : 물:아세토니트릴(3) Mobile phase: water: acetonitrile

Figure 112020100737138-pat00001
Figure 112020100737138-pat00001

(4) 컬럼 온도 : 60 °C(4) Column temperature: 60 °C

(5) 유속 : 1 mL/min(5) Flow rate: 1 mL/min

(6) 주입량 : 10 μL(6) Injection volume: 10 μL

(7) ELSD 조건 : (7) ELSD conditions:

Figure 112020100737138-pat00002
Figure 112020100737138-pat00002

1.3 분석법 검증1.3 Method validation

본 발명의 정량 분석 방법이 본 발명의 목적을 충족하는지 확인하기 위해 정량 분석 방법의 검증을 수행하였다 (미국 FDA, 2015). 선형성, 검출 한계 (LOD), 정량 한계 (LOQ), 정밀도, 정확도 및 복구 속도 (recovery rate)를 포함한 6 가지 검증 파라미터를 ICH (EMEA, 2006), US FDA (2015) 및 식품의약품안전처 (MFDS, 2017) 가이드라인에 기초하여 확인하였다.Validation of the quantitative analysis method was performed to confirm that the quantitative analysis method of the present invention satisfies the purpose of the present invention (US FDA, 2015). Six validation parameters including linearity, limit of detection (LOD), limit of quantitation (LOQ), precision, accuracy, and recovery rate were identified by ICH (EMEA, 2006), US FDA (2015), and Ministry of Food and Drug Safety (MFDS). , 2017) was confirmed based on the guidelines.

본 발명의 방법을 통해 상이한 체류 시간 (RT) 및 피크 패턴을 갖는 식품에서 다양한 MW의 PEG를 동시에 분석할 수 있었다. MFDS 지침 (Korean MFDS, 2017)에 따라 캘리브레이션 곡선 (calibration solutions)을 준비하였다. 저분자량의 PEG (PEG 200, PEG 300, PEG 400, PEG 600, and PEG 2000)에 대한 캘리브레이션 곡선은 500, 1000, 2000, 3000 및 4000 μg mL-1의 농도를 사용하여 구성하였다. 500, 1000, 1500, 2000 및 3000 μg mL-1의 농도를 사용하여 PEG 4000 및 PEG 6000에 대한 캘리브레이션 곡선을 구성하였다. PEG 8000에 대한 캘리브레이션 곡선은 250, 500, 1000, 1500, 3000 μg mL-1의 농도로 구성하였다.The method of the present invention allowed the simultaneous analysis of PEGs of various MWs in foods with different retention times (RT) and peak patterns. Calibration solutions were prepared according to the MFDS guidelines (Korean MFDS, 2017). Calibration curves for low molecular weight PEGs (PEG 200, PEG 300, PEG 400, PEG 600, and PEG 2000) were constructed using concentrations of 500, 1000, 2000, 3000 and 4000 μg mL −1 . Calibration curves for PEG 4000 and PEG 6000 were constructed using concentrations of 500, 1000, 1500, 2000 and 3000 μg mL −1 . Calibration curves for PEG 8000 were constructed at concentrations of 250, 500, 1000, 1500, and 3000 μg mL −1 .

PEG 의 LOD 및 LOQ는 ICH 지침 (EMEA, 2006)에 따라 추정되었으며, 신호 대 잡음비로 표시하였다. 정밀도는 PEG 강화 샘플의 검정을 위한 반복성 및 중간 정밀도를 나타내며, 여기서 블랭크 식품 보충제 정제 (blank food supplement tablets)는 다양한 농도에서 PEG로 첨가 (spike)된다. 일일 시험의 경우, MW가 2000 미만인 3 가지 농도 (750, 1500, 및 2500 μg g -1)의 PEG가 첨가된 강화 샘플을 3 일 동안 하루에 한 번 분석하였다 (PEG 4000 및 PEG 6000는 750, 1250, 및 2500 μg g-1; 및 PEG 8000은 300, 750, 및 1500 μg g-1). 주간 시험의 경우, MW가 2000 미만인 500, 1000, 2000, 3000 및 4000 ㎍ g-1의 PEG가 첨가된 강화 샘플에 대해 HPLC를 사용하여 하루에 5 회 반복 시험을 수행하였다 (PEG 4000 및 6000은 500, 1000, 1500, 2000, 및 3000 μg g-1; PEG 8000은 250, 500, 1000, 2000, 및 2500 μg g-1). PEG 강화 샘플을 사용하여 정확도를 평가하였으며, 이때 블랭크 식품 보충제 정제를 3 가지 농도로 첨가 (spike)하였다. 정확도는 회수율 (%)로 표시하였으며, 측정된 농도 / 이론적 농도 × 100으로 계산된다.The LOD and LOQ of PEG were estimated according to the ICH guidelines (EMEA, 2006) and expressed as a signal-to-noise ratio. Precision represents repeatability and intermediate precision for assays of PEG-enriched samples, where blank food supplement tablets are spiked with PEG at various concentrations. For the daily test, three concentrations (750, 1500, and 2500 μg g −1 ) of PEG-added enriched samples with a MW of less than 2000 were analyzed once a day for 3 days (750 for PEG 4000 and PEG 6000; 1250, and 2500 μg g −1; and PEG 8000 is 300, 750, and 1500 μg g −1 ) . For the weekly test, 5 replicates per day using HPLC were performed on fortified samples with 500, 1000, 2000, 3000 and 4000 μg g −1 of PEG with a MW less than 2000 (PEG 4000 and 6000 were 500, 1000, 1500, 2000, and 3000 μg g −1 ; PEG 8000 is 250, 500, 1000, 2000, and 2500 μg g −1 ). Accuracy was evaluated using PEG-enriched samples, at which time blank food supplement tablets were spiked at three concentrations. Accuracy is expressed as recovery (%) and is calculated as measured concentration / theoretical concentration × 100.

1.4 샘플 준비1.4 Sample Preparation

일반적으로, PEG는 필름 코팅 및 설탕 코팅 식품 정제에서 코팅제로서 사용된다. 필름 코팅 및 설탕 코팅 식품 정제의 무게는 15mL 원뿔형 튜브에서 측정하였다 (1.6-1.7g 및 0.6-0.8g). 샘플 함유 원뿔형 튜브에 메탄올 (5 mL) 및 물의 혼합물 (1 : 1, v/v)을 첨가하고, 필름-코팅된 정제의 경우 튜브를 160초 동안 볼텍싱하고, 설탕 코팅된 정제의 경우 280초 동안 볼텍싱하였다. 상기 혼합물 (1 mL)의 용액을 에펜도르프 (Eppendorf) 튜브로 옮기고, 11,000 rpm에서 1 분 동안 원심 분리하였다. 상청액은 0.45μm PVDF 주사기 필터 (WhatmanTM, Germany)를 통해 여과하고, 여액을 HPLC 또는 LC-ESI-MS/MS를 사용하여 분석하였다.In general, PEG is used as a coating agent in film-coated and sugar-coated food tablets. Film coated and sugar coated food tablets were weighed in 15 mL conical tubes (1.6-1.7 g and 0.6-0.8 g). Add a mixture of methanol (5 mL) and water (1 : 1, v/v) to the conical tube containing the sample, vortex the tube for 160 seconds for film-coated tablets, 280 seconds for sugar coated tablets while vortexing. A solution of the mixture (1 mL) was transferred to an Eppendorf tube and centrifuged at 11,000 rpm for 1 minute. The supernatant was filtered through a 0.45 μm PVDF syringe filter (Whatman™, Germany) and the filtrate was analyzed using HPLC or LC-ESI-MS/MS.

실시예 2. 실험 결과Example 2. Experimental results

2.1 HPLC 분석법 개발2.1 HPLC method development

PEG 분석을 최적화하기 위한 예비 단계로서, 기존에 보고된 상이한 검출기, 이동상 및 구배 조건을 사용하는 3 가지 분석 방법을 사용하여 비교하였다 (Oliva et al., 1994; Cleaver, 2011; Aubin, 2003). 모든 데이터는 분자량 (MW) 600 이하인 PEG가 크로마토그램에서 성공적으로 검출될 수 있음을 보여준 반면, MW가 600보다 큰 PEG 제품은 분석할 수 없었다.As a preliminary step to optimize the PEG assay, three previously reported assay methods using different detectors, mobile phases and gradient conditions were used and compared (Oliva et al., 1994; Cleaver, 2011; Aubin, 2003). All data showed that PEG with molecular weight (MW) less than 600 could be successfully detected in the chromatogram, whereas PEG products with MW greater than 600 could not be analyzed.

본 발명자들은 넓은 MW 범위 (200-8000)의 다양한 PEG 제품의 동시 정량화 요구를 충족시키기 위해, 새로운 HPLC 프로토콜을 개발하여 최적화하였으며, 상기 방법은 LC-ESI-MS/MS를 사용하여 추가로 검증하였다. 흥미롭게도, MW가 다른 별도의 PEG 제품의 피크를 분석한 결과, 이전 분석 방법의 경우와 달리 본 발명의 HPLC 방법을 사용하여 성공적으로 해결되었다.We developed and optimized a new HPLC protocol to meet the simultaneous quantification requirements of various PEG products in a wide MW range (200-8000), and the method was further validated using LC-ESI-MS/MS. . Interestingly, as a result of analyzing the peaks of separate PEG products with different MWs, they were successfully resolved using the HPLC method of the present invention, unlike the case of the previous analysis method.

그 결과, 도 1a 내지 도 1h에 나타난 바와 같이, 8 개의 PEG 제품 ((PEG 200, PEG 300, PEG 400, PEG 600, PEG 2000, PEG 4000, PEG 6000 및 PEG 8000)에 대해 상이한 피크 패턴이 관찰되었다. 낮은 MW (PEG 200, PEG 300, PEG 400 및 PEG 600)를 갖는 PEG 제품은 다수의 피크를 나타내었다. 여기서 주요 서브 피크는 각각의 PEG 제품의 평균 분자량에 상응하였으며, 다른 마이너 서브 피크는 PEG 폴리머에서 에틸렌글리콜의 상이한 중합비에 따른 것이다. 각 서브 피크는 LC-MS/MS 프로파일에서 MW 차이가 44.05 인 하나의 에틸렌글리콜 단위로 분리되었다. PEG 600 의 HPLC 크로마토그램은 저분자량의 PEG (예를 들어 PEG 200, PEG 300 및 PEG 400)의 최대 서브 피크를 포함하였다. 또한, 고분자량의 PEG (PEG 2000, PEG 4000, PEG 6000 및 PEG 8000)의 HPLC 크로마토그램은 각각 8.83, 9.72, 11.44 및 12.33 분에서 단일의 넓은 피크를 나타냈다. 체류 시간은 PEG 제품의 분자량과 연관이 있으며, 이는 용매가 물에서 ACN으로 변화함에 따라 더 높은 MW의 PEG가 나중에 용리되는 것이다.As a result, different peak patterns were observed for 8 PEG products ((PEG 200, PEG 300, PEG 400, PEG 600, PEG 2000, PEG 4000, PEG 6000 and PEG 8000), as shown in FIGS. 1a to 1h . PEG products with low MW (PEG 200, PEG 300, PEG 400 and PEG 600) showed multiple peaks, where the major sub-peaks corresponded to the average molecular weight of each PEG product, and the other minor sub-peaks were It is according to the different polymerization ratio of ethylene glycol in PEG polymer.Each sub-peak is separated into one ethylene glycol unit with a MW difference of 44.05 in LC-MS/MS profile. The HPLC chromatogram of PEG 600 shows the low molecular weight PEG ( For example, the maximum sub-peaks of PEG 200, PEG 300 and PEG 400) were included, and the HPLC chromatograms of the high molecular weight PEGs (PEG 2000, PEG 4000, PEG 6000 and PEG 8000) were 8.83, 9.72, and 11.44, respectively. and a single broad peak at 12.33 min Retention time correlates with the molecular weight of the PEG product, with higher MW PEG eluting later as the solvent changes from water to ACN.

한국의 현지 시장에서 12 개의 PEG 함유 식품 샘플을 수집했으며, 여기서 PEG의 존재는 성분 라벨에 명시되어 있었다. 450-1597 mg의 PEG / kg-제품 농도를 갖는 4 개의 PEG (PEG 400, PEG 4000, PEG 6000, 및 PEG 8000)을 함유하는 11 개의 양성 샘플에 대해 PEG 수준을 연속적으로 분석 하였다. Twelve PEG-containing food samples were collected from a local market in Korea, where the presence of PEG was indicated on the ingredient label. PEG levels were analyzed serially for 11 positive samples containing 4 PEGs (PEG 400, PEG 4000, PEG 6000, and PEG 8000) with PEG/kg-product concentrations of 450–1597 mg.

도 1l에 나타난 바와 같이, PEG 8000을 함유 한 샘플은 PEG 6000의 동시 사용을 나타냈다. 도 1i 내지 도 1l의 실험결과에서의 샘플에 대한 모든 PEG 수준은 MFDS의 규제 지침 (less than 10 g kg-1)을 충족하였다. 11, the sample containing PEG 8000 showed the simultaneous use of PEG 6000. All PEG levels for the samples in the experimental results of FIGS. 1I to 1L met the regulatory guidelines of MFDS (less than 10 g kg −1 ).

본 발명자들은 이에 더하여 식품 샘플에서 검출된 PEG는 LC-ESI-MS/MS 분석을 이용하여 추가로 확인하였다.The present inventors further confirmed the PEG detected in food samples using LC-ESI-MS/MS analysis.

2.2. LC-ESI-MS/MS 분석을 이용한 측정2.2. Measurements using LC-ESI-MS/MS analysis

HPLC 프로파일에서 PEG 피크는 LC-ESI-MS/MS 분석에 기초하여 구별되었다. 상이한 MW에 상응하는 100 개 이상의 PEG 피크를, 새로운 HPLC 방법에서 사용 된 것과 동일한 C8 컬럼 및 용매 조건을 사용하는 MS/MS 분석에 기초하여 1 차 LC 크로마토그램에서 확인하였다. The PEG peaks in the HPLC profile were distinguished based on LC-ESI-MS/MS analysis. More than 100 PEG peaks corresponding to different MWs were identified in the first LC chromatogram based on MS/MS analysis using the same C8 column and solvent conditions used in the new HPLC method.

그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 상이한 MW를 갖는 PEG는 LC-ESI-MS/MS에서의 체류 시간의 차이에 기초하여 분리되었다.As a result, as shown in FIG. 2 , PEGs with different MWs were separated based on the difference in retention time in LC-ESI-MS/MS.

총 이온 크로마토그램 (TIC, Total ion chromatogram)에서의 MW와 체류 시간 사이의 상관 관계는 PEG 중합체에서 하나의 에틸렌글리콜 단위의 차이가 MW의 44.05 ± 0.5 증가에 상응한다는 점을 고려하면, HPLC 분석 결과와 매우 유사하였다.The correlation between the MW and the retention time in the total ion chromatogram (TIC) is the result of HPLC analysis, considering that a difference of one ethylene glycol unit in the PEG polymer corresponds to a 44.05 ± 0.5 increase in MW. was very similar to

MS/MS 분석에서 관찰된 PEG의 이러한 중합 특성은 화합물이 PEG 중합체인지 아닌지를 확인할 수 있게 하였다. MS/MS 프로파일에서 MW 차이가 44.05 ± 0.5 인 PEG의 몇몇 피크를 선택하여, 추가 질량 스펙트럼 분석에 의해 분자량을 추정하였다.This polymeric property of PEG observed in MS/MS analysis made it possible to determine whether the compound was a PEG polymer or not. Several peaks of PEG with a MW difference of 44.05 ± 0.5 in the MS/MS profile were selected and the molecular weight was estimated by further mass spectral analysis.

MS 스펙트럼에서 정량이온 (m/z)은 매우 특징적인 경향을 나타냈는데, PEG의 MW가 증가하면, 제품 이온의 하전된 상태도 증가하였다. m/z 값이 단일 하전된 상태에 해당하는 경우, m/z 값과 이론적으로 계산된 PEG 중합체의 MS 간의 질량 차이는 23 ± 0.5이며, 이는 나트륨 부가물을 나타낸다. 2가, 3가 및 4가로 하전된 상태의 경우, 질량 차이는 각각 42 ± 0.5, 61 ± 0.5 및 80 ± 0.5이며, 이는 [M+Na++ H3O+ n-1]로 표시 될 수 있으며, 여기서 n은 제품 이온의 전하를 나타낸 것이다.In the MS spectrum, the quantitative ion (m/z) showed a very characteristic trend. As the MW of PEG increased, the charged state of the product ion also increased. If the m/z value corresponds to a single charged state, then the mass difference between the m/z value and the theoretically calculated MS of the PEG polymer is 23 ± 0.5, indicating sodium adduct. For the divalent, trivalent and tetravalent charged states, the mass differences are 42 ± 0.5, 61 ± 0.5 and 80 ± 0.5, respectively, which can be expressed as [M+Na + + H 3 O + n-1 ] where n represents the charge of the product ion.

또한, 도 2에 나타난 바와 같이, LC-ESI-MS/MS 분석에서 C8 컬럼을 사용하는 본 연구에서는, 더 높은 분자량을 가진 PEG 제품이 TIC 크로마토그램에서의 피크 검출을 지연시키는 것을 확인하였다. 로그-스케일 분자량과 체류 시간 사이의 관계에 대한 결정 계수 (R2)는 0.9985였다.In addition, as shown in FIG. 2 , in this study using a C8 column in LC-ESI-MS/MS analysis, it was confirmed that a PEG product with a higher molecular weight delayed peak detection in the TIC chromatogram. The coefficient of determination (R 2 ) for the relationship between log-scale molecular weight and retention time was 0.9985.

따라서, 본원 발명에서는 넓은 MW 범위를 갖는 PEG 제품 (PEG 600, PEG 2000, PEG 4000 및 PEG 8000)이 HPLC에 의해 동시에 분석 될 수 있으며, 여기서 패턴은 ESI-MS/MS 분석에 의해 확인되었다. TIC 크로마토그램에서 모든 PEG (PEG 600, PEG 2000, PWG 4000 및 PEG 8000)의 피크로부터 총 115 개의 PEG 피크가 선택되었다 [M+Na++H3O+ n-1].Therefore, in the present invention, PEG products with a wide MW range (PEG 600, PEG 2000, PEG 4000 and PEG 8000) can be analyzed simultaneously by HPLC, where the pattern was confirmed by ESI-MS/MS analysis. A total of 115 PEG peaks were selected from the peaks of all PEGs (PEG 600, PEG 2000, PWG 4000 and PEG 8000) in the TIC chromatogram [M+Na + +H 3 O + n-1 ].

PEG 분자량별 체류 시간, 측정된 질량, MS 단편 및 관찰된 하전 상태는 표 1 내지 표 4에 기재하였다.Retention times, measured masses, MS fragments, and observed state of charge by PEG molecular weight are listed in Tables 1 to 4.

표 1 : MS 단편 및 상이한 분자량을 갖는 하전된 상태의 PEG 600 및 PEG 2000Table 1: MS fragments and charged states of PEG 600 and PEG 2000 with different molecular weights

표 2 : MS 단편 및 상이한 분자량을 갖는 하전된 상태의 PEG 4000Table 2: MS Fragments and PEG 4000 in Charged State with Different Molecular Weights

표 3 : MS 단편 및 상이한 분자량을 갖는 하전된 상태의 PEG 6000Table 3: MS fragment and PEG 6000 in charged state with different molecular weights

표 4 : MS 단편 및 상이한 분자량을 갖는 하전된 상태의 PEG 8000Table 4: MS fragments and charged state PEG 8000 with different molecular weights

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2.50 분 내지 5.41 분의 체류 시간에서 16 개의 피크가 PEG 600의 피크로부터 선택되었고; 선택된 피크의 MW는 7-22 에틸렌글리콜 단위 (피크 번호 1-16)에 대응하여, 326.36 내지 987.11 범위였다. m/z 722.81 (16 개의 에틸렌글리콜 단위)을 갖는 이중 하전된 상태는 4.36 분에 용리되었고, m/z 1427.61 (32 개의 에틸렌글리콜 단위)을 사용한 3중 하전된 상태는 6.68 분에 용리되었다.16 peaks at retention times of 2.50 min to 5.41 min were selected from the peaks of PEG 600; The MW of the selected peaks ranged from 326.36 to 987.11, corresponding to 7-22 ethylene glycol units (peak numbers 1-16). The double charged state with m/z 722.81 (16 ethylene glycol units) eluted at 4.36 min, and the triple charged state with m/z 1427.61 (32 ethylene glycol units) eluted at 6.68 min.

PEG 2000의 23 개의 피크는 [M+Na++H3O+ n-1]로 표시되는 충전 상태를 기준으로 선택되었으며, 32-59 에틸렌글리콜 단위 (피크 번호 17-40)에 대응하여, MW의 범위는 1427.61 ~ 2616.96 였다. 이중 및 삼중 하전 상태는 6.68 분 내지 7.49 분에 용리되었고, PEG의 MW가 1868.11을 초과하면 다중 하전 상태가 관찰되었다. PEG 2000의 최고 충전 상태는 5+였다. PEG 4000의 경우, 3+ 내지 6+의 충전 상태에 상응하는 2705.06 내지 3806.31 (61-86 에틸렌글리콜 단위)의 MW를 갖는 24 개의 피크 (피크 번호 41-64)가 동일한 대표 충전 상태에 기초하여 선택되었다.The 23 peaks of PEG 2000 were selected based on the state of charge expressed as [M+Na + +H 3 O + n-1 ], corresponding to 32-59 ethylene glycol units (peak numbers 17-40), MW The range of was 1427.61 ~ 2616.96. Double and triple charged states eluted from 6.68 min to 7.49 min, and multiple charged states were observed when the MW of PEG exceeded 1868.11. The highest state of charge for PEG 2000 was 5+. For PEG 4000, 24 peaks (peak numbers 41-64) with MWs of 2705.06-3806.31 (61-86 ethylene glycol units) corresponding to charge states of 3+ to 6+ were selected based on the same representative state of charge. became

PEG 6000의 선택된 피크의 MW는 각각 4555.16 내지 7286.26이며, 체류 시간은 각각 10.07-11.66 분이었다.The selected peaks of PEG 6000 had a MW of 4555.16 to 7286.26, respectively, and a retention time of 10.07-11.66 min, respectively.

5+ 내지 11+ 사이의 충전 상태에 해당하는 PEG 6000의 피크에서 총 31 개의 피크 (103-165 에틸렌글리콜 단위에 대응하는 피크 번호 65-95)를 선택할 수 있으며, 이는 동일한 충전 상태에 대응한다 [M+Na++H3O+ n-1].A total of 31 peaks (peak numbers 65-95 corresponding to 103-165 ethylene glycol units) can be selected from the peaks of PEG 6000, which correspond to states of charge between 5+ and 11+, which correspond to the same states of charge [ M+Na + +H 3 O + n-1 ].

PEG 8000에 대해 선택된 피크의 MW는 7550.56 내지 9797.11 범위였으며, 11.72-12.58 분의 체류 시간을 나타냈다 (171 내지 222 에틸렌글리콜 단위를 갖는 피크 번호 96-115). 최저 및 최고로 측정된 충전 상태는 각각 9+ 및 +14였으며, 충전 상태는 [M+Na++H3O+ n-1]로 나타내었다. 가장 많이 충전된 이온의 피크는 12.29 분 (204 폴리에틸렌 글리콜 단위)에서 m/z 9004.21으로 나타났다.The MW of the selected peaks for PEG 8000 ranged from 7550.56 to 9797.11 with retention times of 11.72-12.58 minutes (peak numbers 96-115 with 171 to 222 ethylene glycol units). The lowest and highest measured state of charge were 9+ and +14, respectively, and the state of charge was expressed as [M+Na + +H 3 O + n-1 ]. The peak of the most charged ion appeared at 12.29 min (204 polyethylene glycol units) at m/z 9004.21.

상기와 같이, LC-ESI-MS/MS 분석에서 관찰된 경향은 PEG 제품의 식별에 연속적으로 적용될 수 있음을 나타낸다. PEG-함유 샘플의 HPLC 스펙트럼에서 모든 PEG 피크는 표 1 내지 표 4의 데이터를 기초로 하여, LC-ESI-MS/MS 분석에 의해 추가로 확인될 수 있으며, 이는 MS2 스펙트럼에서 MW 차이가 하나의 에틸렌글리콜 단위 패턴 (44.05±0.5)에 상응함을 나타내었다.As above, the trends observed in LC-ESI-MS/MS analysis indicate that they can be applied continuously to the identification of PEG products. All PEG peaks in the HPLC spectrum of the PEG-containing sample can be further identified by LC-ESI-MS/MS analysis based on the data in Tables 1 to 4, which indicates that the MW difference in the MS2 spectrum is one It was shown to correspond to the ethylene glycol unit pattern (44.05±0.5).

이에 더하여, 완전 자동화 시스템을 위한 PEG의 라이브러리 특성화를 위해 상기 방법을 적용범위를 확대하기 위한 추가적인 질량 분석 연구를 진행하였다.In addition, additional mass spectrometry studies were conducted to expand the scope of application of the method for library characterization of PEG for a fully automated system.

2.3. 분석법의 검증2.3. Validation of the method

PEG의 각 분자량에 대해 5 개의 농도에서의 분석 반응으로부터 교정 곡선을 플롯팅함으로써 본 발명 방법의 선형성을 평가하였다. 모든 측정은 3 회 수행되었고, 평균값은 교정 곡선으로 그렸다. The linearity of the method of the present invention was assessed by plotting calibration curves from the assay responses at five concentrations for each molecular weight of PEG. All measurements were performed in triplicate, and the average value was plotted as a calibration curve.

도 1의 HPLC 분석에 나타난 바와 같이, 선택된 PEG 제품인 PEG 200, PEG 300, PEG 400, PEG 600, PEG 2000, PEG 4000, PEG 6000 및 PEG 8000은 상이한 피크 패턴을 나타냈다. PEG 200, PEG 300, PEG 400 및 PEG 600의 HPLC 크로마토그램이 다중 피크를 포함함에 따라, 각 PEG 제품에 대한 체류 시간 내의 모든 피크의 합을 정량적 HPLC 분석에 적용 하였다. 한편, PEG 2000, PEG 4000, PEG 6000 및 PEG 8000의 HPLC 크로마토그램은 단지 하나의 큰 피크만을 나타냈다.As shown in the HPLC analysis of FIG. 1 , the selected PEG products PEG 200, PEG 300, PEG 400, PEG 600, PEG 2000, PEG 4000, PEG 6000 and PEG 8000 showed different peak patterns. As the HPLC chromatograms of PEG 200, PEG 300, PEG 400 and PEG 600 contained multiple peaks, the sum of all peaks within the retention time for each PEG product was subjected to quantitative HPLC analysis. On the other hand, HPLC chromatograms of PEG 2000, PEG 4000, PEG 6000 and PEG 8000 showed only one large peak.

상기 단일 피크의 면적은 PEG 농도를 결정하기 위해 캘리브레이션 곡선의 구성을 간단히 사용하였다. 보정 곡선의 다항식 관계는 ELSD 검출기를 사용하여 나타내었다. 이 다항식 회귀(regression)의 결정 계수 (R2)는 0.997을 초과하였다.The area of the single peak was simply used to construct a calibration curve to determine the PEG concentration. The polynomial relationship of the calibration curve was shown using an ELSD detector. The coefficient of determination (R 2 ) of this polynomial regression was greater than 0.997.

모든 PEG 표준 (MW 200-8000)의 HPLC 분석에 대한 LOD 값은 7.47 내지 25 μg mL-1의 범위였으며, 계산된 LOQ는 동일한 분석에서 22.40 내지 75 μg mL-1이었다. 이에 대한 보다 상세한 데이터는 상기 표 1 내지 표 4에 기재하였다. 10 g kg-1까지의 PEG 사용에 대한 MFDS의 제제를 고려하면, 본 발명에 따른 LOD 및 LOQ는 PEG의 정량 분석에 매우 적합하다는 것을 알 수 있다.The LOD values for HPLC analysis of all PEG standards (MW 200-8000) ranged from 7.47 to 25 μg mL −1 , and the calculated LOQ was 22.40 to 75 μg mL −1 for the same assay. More detailed data on this are described in Tables 1 to 4 above. Considering the formulation of MFDS for the use of PEG up to 10 g kg -1 , it can be seen that the LOD and LOQ according to the present invention are very suitable for quantitative analysis of PEG.

또한, 본 발명자들은 정밀도를 반복성 및 중간 정밀도로 표현하였다. 정밀도는 동일한 샘플을 사용하여 각 테스트의 산포도를 의미한다. ICH 조화 삼자선 지침 (EMEA, 2006)에 따라 % RSD로 표현된 정밀도 (Precision)를 결정하기 위해 일내 (intra-day) 분석 및 일간 (inter-day) 분석을 수행하였다. 반복성 (일간 분석)을 추정하기 위해, HPLC-ELSD 분석을 사용하여 5 가지 상이한 농도의 PEG 제품 (MW = 200-8000)으로 첨가된 강화 식품 샘플에서 PEG의 농도를 추정하였다.In addition, we expressed precision as repeatability and intermediate precision. Precision refers to the spread of each test using the same sample. Intra-day and inter-day analyzes were performed to determine the precision expressed in %RSD according to the ICH harmonized tripartite guidelines (EMEA, 2006). To estimate repeatability (daily analysis), HPLC-ELSD analysis was used to estimate the concentration of PEG in fortified food samples added with 5 different concentrations of PEG product (MW = 200-8000).

PEG 강화 샘플에 대한 측정치의 % RSD로서 계산된 일간 분석의 반복성은 0.2-2.5의 범위였으며, 일내 분석으로부터 얻은 중간 정밀도는 0.1-5.9 범위로 나타났다. 본원 발명의 모든 데이터는 유럽위원회 (EC, 2015) 기준 (RSD ≤ 20 %)을 충족하였다. 따라서, HPLC-ELSD를 사용한 본원발명의 PEG 분석 방법은 일내 또는 일간분석에서 높은 정밀도로 재현될 수 있다.The repeatability of the daily assays, calculated as % RSD of measurements for the PEG enriched samples, ranged from 0.2-2.5 and the median precision obtained from the intraday assays ranged from 0.1-5.9. All data of the present invention met the European Commission (EC, 2015) criteria (RSD ≤ 20 %). Therefore, the PEG analysis method of the present invention using HPLC-ELSD can be reproduced with high precision in intra-day or daily analysis.

회수율 (%)로 표시되는 정확도는 실시예 1.4에서 기술한 바와 같이, 두 가지 유형의 블랭크 식품 보충제 정제를 첨가함으로써 저농도, 중농도 및 고농도의 PEG (MW 200 내지 8000)에서 얻어졌다. Accuracy, expressed in percent recovery, was obtained at low, medium and high concentrations of PEG (MW 200 to 8000) by adding two types of blank food supplement tablets, as described in Example 1.4.

표 5 (HPLC 분석법 검증 : 8가지 PEG 표준 샘플의 정밀도, 선형성, LOD 및 LOQ.)에 나타난 바와 같이, 필름 코팅 정제보다 당의정제의 회수율이 낮은 것으로 나타났다. 구체적으로, 필름 코팅 및 당의정제의 회수율 (%)은 각각 90.4-104.9 % 및 80.1-94.7 %였다. 본 발명의 회수율 (80.1-104.9 %)은 유럽위원회 (2015)가 제안한 방법 검증 표준 기준을 충족하는 것이다.As shown in Table 5 (HPLC assay validation: precision, linearity, LOD and LOQ. of 8 PEG standard samples), it was found that the recovery of the dragee tablets was lower than that of the film coated tablets. Specifically, the recovery rates (%) of the film coating and dragees were 90.4-104.9% and 80.1-94.7%, respectively. The recovery rate of the present invention (80.1-104.9%) satisfies the method verification standard criteria proposed by the European Commission (2015).

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따라서, 본 발명자들은 식품 시료의 확인 및 식별 목적으로 다양한 MW를 가진 상업용 PEG 제품을 분석하기 위한 정량적 방법을 개발하였다. 검출기로 ELSD가 장착된 HPLC 시스템에 의해 넓은 MW 범위의 PEG 제품에 대한 동시 분석을 달성하였다. 샘플에서 상이한 중합 비율에 따라 1,000 미만의 낮은 MW를 갖는 PEG 제품에서 다수의 서브 피크가 관찰될 수 있지만, 1,000을 초과하는 MW를 갖는 PEG 제품은 HPLC 크로마토그램에서 단일 넓은 피크를 나타내는 것으로 나타났다. 즉, 각 PEG 제품 (PEG 200, 300, 400, 600, 2000, 4000, 6000 및 8000)은 서로 다른 피크 패턴을 보여 PEG 제품을 쉽게 식별할 수 있었다. 본 발명의 방법은 선형성, LOD, LOQ, 정밀도 및 정확도를 기반으로 검증되었으며, 이 모두는 ICH (EMEA, 2006), 유럽위원회 (2015) 및 한국 MFDS 지침 (2017)의 검증 기준을 충족한다.Therefore, the present inventors have developed a quantitative method for analyzing commercial PEG products with various MWs for the purpose of identification and identification of food samples. Simultaneous analysis of PEG products in a wide MW range was achieved by HPLC system equipped with ELSD as detector. Multiple sub-peaks can be observed for PEG products with MWs as low as less than 1,000 depending on different polymerization rates in the samples, whereas PEG products with MWs above 1,000 show a single broad peak in the HPLC chromatogram. That is, each PEG product (PEG 200, 300, 400, 600, 2000, 4000, 6000 and 8000) showed a different peak pattern, making it easy to identify the PEG product. The method of the present invention was verified based on linearity, LOD, LOQ, precision and accuracy, all of which meet the verification criteria of ICH (EMEA, 2006), European Commission (2015) and Korean MFDS Directive (2017).

또한, 본 발명의 동시분석법은 충전 상태의 일반화된 표현 [M+Na++H3O+ n-1]에 기초한 LC-ESI-MS/MS 분석으로 추가로 검증될 수 있으며, 여기서 n은 이온의 충전 상태를 나타낸다. 따라서, 본 발명의 동시분석법은 기존의 분석 방법의 경우와 달리, PEG 함유 식품 샘플에서 다양한 분자량을 가진 PEG 제품을 동시에 분석할 수 있을 것으로 기대된다.In addition, the co-analysis method of the present invention can be further verified by LC-ESI-MS/MS analysis based on the generalized expression of the state of charge [M+Na + +H 3 O + n-1 ], where n is the ion indicates the state of charge. Therefore, the simultaneous analysis method of the present invention is expected to be able to simultaneously analyze PEG products having various molecular weights in PEG-containing food samples, unlike the conventional analysis method.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가지는 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. The above description of the present invention is for illustration, and those of ordinary skill in the art to which the present invention pertains can understand that it can be easily modified into other specific forms without changing the technical spirit or essential features of the present invention. will be. Therefore, it should be understood that the embodiments described above are illustrative in all respects and not restrictive.

Claims (17)

하기 단계를 포함하는, 광범위한 분자량을 갖는 폴리에틸렌글리콜 (Polyethylene glycol)의 동시분석법을 이용한 검출방법으로,
(a) 시료를 고성능 액체 크로마토그래피-증기화광산란검출기에 유입시켜 분자량에 따른 폴리에틸렌글리콜을 정성분석하는 단계; 및
(b) 시료를 액체크로마토그래피 질량분석기로 유입시켜 분자량에 따른 폴리에틸렌글리콜을 정량분석하는 단계를 포함하며,
상기 (a) 및 (b) 단계가 동시에 이루어지는 것을 특징으로 하는, 검출방법.
A detection method using simultaneous analysis of polyethylene glycol having a wide range of molecular weights, comprising the steps of:
(a) introducing a sample into a high-performance liquid chromatography-vaporized light scattering detector to qualitatively analyze polyethylene glycol according to molecular weight; and
(b) introducing a sample into a liquid chromatography mass spectrometer to quantitatively analyze polyethylene glycol according to molecular weight,
The detection method, characterized in that the steps (a) and (b) are performed simultaneously.
 제1항에 있어서,
상기 폴리에틸렌글리콜은 분자량이 200 내지 20000인 것을 특징으로 하는, 검출방법.
According to claim 1,
The polyethylene glycol is a detection method, characterized in that the molecular weight is 200 to 20000.
 제1항에 있어서,
상기 액체크로마토그래피는 이동상 용매가 아세토니트릴, 물, 메탄올, 이소프로파놀, 암모늄포메이트(ammonium formate), 암모늄아세테이트(ammonium acetate), 포름산, 아세트산, 트리플로로아세트산 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 검출방법.
According to claim 1,
In the liquid chromatography, the mobile phase solvent is selected from the group consisting of acetonitrile, water, methanol, isopropanol, ammonium formate, ammonium acetate, formic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, and combinations thereof. A detection method, characterized in that at least one selected.
 제3항에 있어서,
상기 이동상용매는 물 및 아세토니트릴인 것을 특징으로 하는, 검출방법.
4. The method of claim 3,
The mobile phase solvent is a detection method, characterized in that water and acetonitrile.
 제1항에 있어서,
상기 시료는 물 및 메탄올 혼합액으로 전처리된 것을 특징으로 하는, 검출방법.
According to claim 1,
The detection method, characterized in that the sample is pre-treated with a mixture of water and methanol.
 제1항에 있어서,
상기 시료가 필름코팅정제 또는 당의정제인 경우, 전처리 시 볼텍싱하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 검출방법.
According to claim 1,
When the sample is a film-coated tablet or a dragee tablet, the detection method comprising the step of vortexing during pretreatment.
 제1항에 있어서,
상기 시료가 유화제인 경우, 전처리 시 볼텍싱하지 않는 것을 특징으로 하는, 검출방법.
According to claim 1,
When the sample is an emulsifier, the detection method, characterized in that not vortexing during pretreatment.
 제1항에 있어서,
상기 크로마토그래피는 C8 컬럼을 이용하는 것을 특징으로 하는, 검출방법.
According to claim 1,
The chromatography is a detection method, characterized in that using a C8 column.
 제1항에 있어서,
상기 정성분석하는 단계는 크로마토그램의 피크 한 개의 간격이 분자량 43 내지 45의 차이를 나타내는 것을 특징으로 하는, 검출방법.
According to claim 1,
The qualitative analysis is a detection method, characterized in that the interval of one peak of the chromatogram represents a difference in molecular weight of 43 to 45.
 제1항에 있어서,
상기 정량분석하는 단계는 폴리에틸렌글리콜의 분자량별 검량곡선이 2차 방정식인 것을 특징으로 하는, 검출방법.
According to claim 1,
The quantitative analysis is a detection method, characterized in that the calibration curve for each molecular weight of polyethylene glycol is a quadratic equation.
 제10항에 있어서,
상기 2차 방정식은,
PEG의 분자량이 300 내지 1000인 경우 y=0.0009x2+1.8358x-772.59;
PEG의 분자량이 1300 내지 3000인 경우 y=0.0012x2+2.7944x-1225.3;
PEG의 분자량이 2500 내지 4000인 경우 y=0.0019x2+3.1435x-1145.1;
PEG의 분자량이 4000 내지 7500인 경우 y=0.0022x2+3.353x-1244.6; 또는
PEG의 분자량이 7000 내지 10000인 경우 y=0.0028x2+2.7149x-562.84이며,
상기 x는 μg/ml 단위의 분석물질(PEG)의 농도를 나타내고, y는 대응하는 피크 면적 계수인 것을 특징으로 하는, 검출방법.
11. The method of claim 10,
The second equation is
y=0.0009x 2 +1.8358x-772.59 when the molecular weight of PEG is 300-1000;
y=0.0012x 2 +2.7944x-1225.3 when the molecular weight of PEG is 1300 to 3000;
y=0.0019x 2 +3.1435x-1145.1 when the molecular weight of PEG is 2500 to 4000;
y=0.0022x 2 +3.353x-1244.6 when the molecular weight of PEG is 4000 to 7500; or
y = 0.0028x 2 +2.7149x-562.84 when the molecular weight of PEG is 7000 to 10000,
Wherein x represents the concentration of the analyte (PEG) in μg/ml, and y is the corresponding peak area coefficient, the detection method.
 제1항에 있어서,
상기 시료는 식품 또는 의약품인 것을 특징으로 하는, 검출방법.
According to claim 1,
The sample is a food or drug, characterized in that the detection method.
 시료로부터 얻은 정보에 대한 입력을 수신하는 입력 수신부;
광범위한 분자량을 갖는 폴리에틸렌글리콜 (Polyethylene glycol)에 대한 정보를 포함하는 라이브러리;
입력된 정보를 대입하여 폴리에틸렌글리콜의 분자량 및 함량을 계산하는 계산부;를 포함하며,
상기 폴리에틸렌글리콜에 대한 정보는 분석값 [M+Na++H3O+ n-1]에 따른 PEG 분자량별 체류 시간, 질량, MS 단편 및 하전 상태를 포함하고,
상기 폴리에틸렌글리콜에 대한 정보는 고성능 액체 크로마토그래피-증기화광산란검출기 및 액체크로마토그래피 질량분석기에 의하여 정성 분석 및 정량 분석된 결과인 것을 특징으로 하는, 광범위한 분자량을 갖는 폴리에틸렌글리콜 (Polyethylene glycol)의 검출 장치.
an input receiving unit for receiving an input for information obtained from the sample;
a library containing information on polyethylene glycol having a wide range of molecular weights;
A calculation unit for calculating the molecular weight and content of polyethylene glycol by substituting the input information;
The information on the polyethylene glycol includes the retention time, mass, MS fragment and charge state for each PEG molecular weight according to the analysis value [M+Na + +H 3 O + n-1 ],
The information on the polyethylene glycol is a detection device of polyethylene glycol having a wide molecular weight, characterized in that it is the result of qualitative and quantitative analysis by a high-performance liquid chromatography-vaporized light scattering detector and liquid chromatography mass spectrometer. .
 제13항에 있어서,
상기 폴리에틸렌글리콜은 분자량이 200 내지 20000인 것을 특징으로 하는, 검출 장치.
14. The method of claim 13,
The polyethylene glycol has a molecular weight of 200 to 20000, the detection device.
 광범위한 분자량을 갖는 폴리에틸렌글리콜 (Polyethylene glycol)에 대한 정보를 포함하는 라이브러리를 사용하는 방법으로서,
상기 폴리에틸렌글리콜에 대한 정보는 분석값 [M+Na++H3O+ n-1]에 따른 PEG 분자량별 체류 시간, 질량, MS 단편 및 하전 상태를 포함하고,
상기 폴리에틸렌글리콜에 대한 정보는 고성능 액체 크로마토그래피-증기화광산란검출기 및 액체크로마토그래피 질량분석기에 의하여 정성 분석 및 정량 분석된 결과인 것을 특징으로 하고,
상기 방법은,
시료로부터 얻은 정보에 대한 입력을 수신하는 단계;
상기 라이브러리가 저장된, 컴퓨터로 읽을 수 있는 저장매체를 액세스(Access)하는 단계; 및
상기 정보를 기반으로, 입력된 정보를 대입하여 시료에 포함된 폴리에틸렌글리콜의 분자량 및 함량을 계산하는 단계를 포함하는, 라이브러리를 사용하는 방법.
As a method of using a library containing information on polyethylene glycol having a wide range of molecular weights,
The information on the polyethylene glycol includes the retention time, mass, MS fragment and charge state for each PEG molecular weight according to the analysis value [M+Na + +H 3 O + n-1 ],
The information on the polyethylene glycol is characterized in that it is the result of qualitative analysis and quantitative analysis by high performance liquid chromatography-vaporized light scattering detector and liquid chromatography mass spectrometer,
The method is
receiving an input for information obtained from the sample;
accessing a computer-readable storage medium in which the library is stored; and
Based on the information, a method of using a library, comprising the step of calculating the molecular weight and content of polyethylene glycol contained in the sample by substituting the input information.
 제15항에 있어서,
상기 폴리에틸렌글리콜은 분자량이 200 내지 20000인 것을 특징으로 하는, 라이브러리를 사용하는 방법.
16. The method of claim 15,
The method using a library, characterized in that the polyethylene glycol has a molecular weight of 200 to 20000.
 컴퓨터에 제15항에 따른 라이브러리를 사용하는 방법을 실행시키기 위한 프로그램을 기록한 컴퓨터로 읽을 수 있는 매체.
A computer-readable medium in which a program for executing the method of using the library according to claim 15 on a computer is recorded.
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US20070196927A1 (en) * 2003-09-04 2007-08-23 Christian Grandfils Method For Qualitative And/Or Quantitative Detection Of Polyethylene Glycols In Biological Fluids
KR101654776B1 (en) * 2016-03-21 2016-09-06 주식회사 위드텍 An apparatus and a method for automatic sample monitoring based on chromatography, and recording medium storing program for executing the same

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