KR102428553B1

KR102428553B1 - Oligonucleotide having anti-inflammatory activity

Info

Publication number: KR102428553B1
Application number: KR1020200022786A
Authority: KR
Inventors: 박동휘; 한승우; 조현정
Original assignee: 주식회사 카티프라임
Priority date: 2019-03-13
Filing date: 2020-02-25
Publication date: 2022-08-04
Also published as: KR20200110126A; KR20200110178A

Abstract

본 발명은 아데노신 및 구아노신으로 구성되고, 항염증 활성을 갖는 올리고뉴클레오티드 및 이를 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to an oligonucleotide composed of adenosine and guanosine and having anti-inflammatory activity, and a pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory diseases including the oligonucleotide.

Description

항염증 활성을 갖는 올리고뉴클레오티드{Oligonucleotide having anti-inflammatory activity}Oligonucleotide having anti-inflammatory activity

본 발명은 항염증 활성을 가지고, 염증자극에 의한 세포독성을 완화시킬 수 있는 합성 올리고뉴클레오티드 및 이를 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a synthetic oligonucleotide that has anti-inflammatory activity and can alleviate cytotoxicity caused by inflammatory stimulation, and a pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory diseases comprising the same.

염증(Inflammation)은 감염이나 조직 손상에 대한 인체의 초기 방어기전으로, 생체조직이 외부로부터 자극을 받을 때, 유해인자를 제거하고 손상부위를 정상으로 회복시킴으로써 그 영향을 국소화 하려는 생체 방어기전 중 하나이다. 염증 개시부터 염증 해소까지 이르는 일련의 과정 동안 다양한 매개체가 염증반응을 조절한다. 통상, 급성 염증에 의한 초기의 조직 손상은 해소(resolution)라는 생리적 방어를 통해 정상화될 수 있으나, 염증이 지속되면 조직의 손상과 이를 구성하는 세포의 기능의 소실을 야기한다. Inflammation is the human body's initial defense mechanism against infection or tissue damage. . Various mediators regulate the inflammatory response during a series of processes from initiation of inflammation to resolution of inflammation. In general, the initial tissue damage caused by acute inflammation can be normalized through a physiological defense called resolution.

염증을 유발하는 원인으로 외상, 동상, 화상, 방사능 등에 의한 물리적 요인과 산 (acid)과 같은 화학물질에 의한 화학적 요인 및 항체 반응에 의한 면역학적 요인들이 있으며, 그 외에 혈관이나 호르몬 불균형에 의해서도 발생한다. 외부 자극으로 손상된 세포들은 염증 유발 사이토카인 (pro-inflammatory cytokine)류 및 케모카인 (chemokine), 인터루킨 (interleukine), 인터페론 (interferon) 등의 다양한 생물학적 매개 물질을 분비하여 혈관 확장이 일어나고 투과성이 높아짐에 따라 항체, 보체, 혈장(plasma), 식균 세포와 같은 면역세포들이 염증 부위로 몰려들게 된다. The causes of inflammation include physical factors such as trauma, frostbite, burns, radiation, etc., chemical factors such as acids, and immunological factors caused by antibody reactions. do. Cells damaged by external stimuli secrete various biological mediators, such as pro-inflammatory cytokines and chemokines, interleukines, and interferons, resulting in vasodilation and increased permeability. Immune cells such as antibodies, complement, plasma, and phagocytic cells flock to the site of inflammation.

인체의 초기 방어기전인 염증반응이 과도하게 될 경우 병변 조직 뿐만 아니라 정상조직 내 세포도 많이 파괴가 되고, 이로 인해 세포내에서 adenosine triphosphate (ATP), guanosine triphosphate (GTP), deoxyribonucleic acid (DNA), ribonucleic acid (RNA) 형태로 나오는 아데노신과 구아노신과 같은 퓨린계 뉴클레오시드가 많이 나오게 되면 이는 염증화된 면역세포에 많이 존재하는 뉴클레오티다제 (nucleotidase), CD39, CD73과 같은 분해효소에 의해 각각 아데노신과 구아노신으로 분해되고, 이들은 염증화된 면역세포에 negative feedback으로 직접 작용하여 과도한 염증반응을 조절한다. 하지만 심한 염증반응일 경우 아데노신과 구아노신의 상기 feedback 과정이 제대로 작동하지 못할 경우, 과도한 염증반응으로 인해 통증, 폐혈쇼크과 같은 부작용이 지속되게 된다. When the inflammatory response, which is the body's initial defense mechanism, becomes excessive, not only the lesion tissue but also the cells in the normal tissue are destroyed. When a large amount of purine-based nucleosides such as adenosine and guanosine in the form of acid (RNA) are released, they are produced by adenosine by degrading enzymes such as nucleotidase, CD39, and CD73, which are present in many inflamed immune cells, respectively. and guanosine, which act directly as negative feedback on inflamed immune cells to control the excessive inflammatory response. However, in the case of a severe inflammatory reaction, if the feedback process of adenosine and guanosine does not work properly, side effects such as pain and pulmonary shock continue due to an excessive inflammatory reaction.

이러한 염증을 해소하기 위해 염증원의 제거, 생체 반응 및 증상을 감소시키는 작용을 하는 약물을 항염증제라 한다. 현재까지 항염증 용도로 이용되고 있는 물질로는 비스테로이드계로 이부프로펜 (ibuprofen), 인도메타신(indomethacin) 등이 있고 스테로이드 계통으로 덱사메타손 (dexamethasone) 등이 있으며, 이들은 신속한 소염작용을 나타내지만 사용 중지 시 증상이 악화되기도 하고, 특히 스테로이드의 경우 간, 신장기능 이상, 혈당능 장애, 당뇨, 고지혈증, 면역 능력의 감소 등과 같은 여러 문제점을 가지고 있어 장기간 사용할 수 없다. 이에, 기존 항염증제를 대체할 수 있는 물질의 개발이 요구되는 실정이다.In order to relieve such inflammation, a drug that removes an inflammatory source, reduces biological reactions and symptoms is called an anti-inflammatory agent. Substances that have been used for anti-inflammatory purposes so far include non-steroids such as ibuprofen and indomethacin, and steroids such as dexamethasone. Symptoms may worsen, and in particular, steroids cannot be used for a long time because they have several problems, such as liver and kidney dysfunction, impaired blood sugar, diabetes, hyperlipidemia, and decreased immunity. Accordingly, there is a need to develop a material that can replace the existing anti-inflammatory agent.

종래, 아데노신, 구아노신과 같은 퓨린계 뉴클레오시드는 인체로 투여되면 과도한 염증 반응을 조절하는 negative feedback 반응에 참여하여 항염증 효과를 나타내는 것을 확인한 연구 결과가 있었다. 그러나, 아데노신과 구아노신을 직접 투여하는 경우 아데노신이 심장 세포에도 작용하여 심정지, 서맥 등의 부작용을 유발하고, 아데노신을 소량 투여하더라도 구아노신과 병용 투여하는 경우 구아노신이 아데노신의 작용을 촉진하여 상기 부작용이 더 증가되는 문제가 있어 아데노신과 구아노신의 직접적인 투여는 위험하다. Previously, there have been studies confirming that purine-based nucleosides such as adenosine and guanosine exhibit anti-inflammatory effects by participating in a negative feedback reaction that regulates excessive inflammatory responses when administered to the human body. However, when adenosine and guanosine are directly administered, adenosine also acts on cardiac cells, causing side effects such as cardiac arrest and bradycardia. Direct administration of adenosine and guanosine is dangerous due to increased problems.

대한민국 특허 공개 제10-2018-0021856호Korean Patent Publication No. 10-2018-0021856

이러한 배경 하에, 본 발명자들은 본 발명자들은 아데노신과 구아노신이 결합된 올리고뉴클레오티드 형태로 투여되는 경우, 뉴클레오티다제 (nucleotidase) 등의 올리고뉴클레오티드 분해효소를 방출하는 염증반응이 활성화된 면역세포가 많은 조직에서만 국소적으로 아데노신과 구아노신으로 분해되어 전신적인 부작용 없이 안전하게 사용될 수 있고, 아데노신 또는 구아노신만으로 구성된 올리고뉴클레오티드와 달리 아데노신과 구아노신의 비율이 94:5 내지 5:94의 범위인 합성 올리고뉴클레오티드가 항염증 활성을 나타내는 것을 발견하여 본 발명을 완성하였다. Under this background, the present inventors found that, when administered in the form of an oligonucleotide in which adenosine and guanosine are combined, an inflammatory response that releases an oligonucleotide degrading enzyme such as nucleotidase is activated tissue with many immune cells It is locally degraded into adenosine and guanosine only in The present invention was completed by finding that it exhibits anti-inflammatory activity.

따라서, 본 발명의 목적은 항염증 활성을 가지고, 염증자극에 의한 세포독성을 완화 시킬 수 있는 올리고뉴클레오티드를 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide an oligonucleotide that has anti-inflammatory activity and can alleviate cytotoxicity caused by inflammatory stimulation.

본 발명의 다른 목적은 상기 올리고뉴클레오티드를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory diseases comprising the oligonucleotide as an active ingredient.

그러나, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 이상에서 언급한 과제로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 해당 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.However, the problems to be solved by the present invention are not limited to the problems mentioned above, and other problems not mentioned will be clearly understood by those of ordinary skill in the art from the following description.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 아데노신 및 구아노신으로 구성되는 올리고뉴클레오티드로서, 상기 아데노신 및 구아노신의 비율이 94:5 내지 5:94의 범위인, 항염증 활성을 갖는 올리고뉴클레오티드가 제공된다.According to one embodiment of the present invention, an oligonucleotide consisting of adenosine and guanosine, wherein the ratio of adenosine and guanosine is in the range of 94:5 to 5:94, an oligonucleotide having anti-inflammatory activity is provided.

일 측에 따르면, 상기 올리고뉴클레오티드의 길이는 4 내지 99 bp일 수 있다.According to one side, the length of the oligonucleotide may be 4 to 99 bp.

일 측에 따르면, 서열번호 2 내지 서열번호 4, 서열번호 7 내지 서열번호 21로 이루어진 군으로부터 선택되는 염기서열로 이루어질 수 있다.According to one side, it may consist of a base sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 2 to SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 7 to SEQ ID NO: 21.

일 측에 따르면, LPS에 의한 세포독성을 완화시킬 수 있다.According to one side, it is possible to alleviate the cytotoxicity caused by LPS.

일 측에 따르면, 산화질소(NO)의 생성을 저해할 수 있다.According to one side, it may inhibit the production of nitric oxide (NO).

일 측에 따르면, 염증성 사이토카인의 생성을 저해할 수 있다.According to one side, it may inhibit the production of inflammatory cytokines.

본 발명의 다른 일 실시예에 따르면, 상기 항염증 활성을 갖는 올리고뉴클레오티드를 유효성분으로 포함하는, 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물이 제공된다.According to another embodiment of the present invention, there is provided a pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory diseases, comprising the oligonucleotide having the anti-inflammatory activity as an active ingredient.

일 측에 따르면, 상기 염증성 질환은 뇌 염증성 질환 또는 골 관절염일 수 있다.According to one side, the inflammatory disease may be a brain inflammatory disease or osteoarthritis.

일 측에 따르면, 상기 뇌 염증성 질환은 뇌졸중, 헌팅턴병, 시신경척수염 스펙트럼 장애, 운동신경성질환, 파킨슨병(Parkinson's disease), 알츠하이머병(Alzheimer's disease) 및 다발성 경화증 (multiple sclerosis)을 포함할 수 있다.According to one side, the brain inflammatory disease may include stroke, Huntington's disease, optic neuromyelitis spectrum disorder, motor neuron disease, Parkinson's disease, Alzheimer's disease, and multiple sclerosis.

본 발명의 올리고뉴클레오티드는 뛰어난 항염증 효과를 나타냄은 물론, LPS에 의한 세포독성을 완화시킬 수 있으며, 올리고뉴클레오티드를 각각 아데노신과 구아노신으로 분해하는 물질이 많은 염증세포에 국소적으로 작용하여 부작용을 최소화할 수 있다. The oligonucleotide of the present invention not only exhibits excellent anti-inflammatory effects, but also can alleviate cytotoxicity caused by LPS, and substances that degrade oligonucleotides into adenosine and guanosine, respectively, act locally on many inflammatory cells, thereby reducing side effects. can be minimized

따라서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 스테로이드를 대체하는 항염증 물질로 이용될 수 있으며, 뇌 염증성 질환, 골 관절염 등의 염증성 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 이용될 수 있다.Therefore, the oligonucleotide of the present invention can be used as an anti-inflammatory substance replacing steroids, and can be usefully used for preventing or treating inflammatory diseases such as brain inflammatory disease and osteoarthritis.

본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.It should be understood that the effects of the present invention are not limited to the above-described effects, and include all effects that can be inferred from the configuration of the invention described in the detailed description or claims of the present invention.

도 1은 LPS로 염증 반응이 유도된 RAW세포cell (마우스 대식세포주)에 아데노신 및 구아노신 비율을 달리한 올리고뉴클레오티드를 처리하여 산화질소(NO)의 생성 정도를 확인한 것이다.
도 2는 LPS로 염증 반응이 유도된 RAW세포cell (마우스 대식세포주)에 아데노신 및 구아노신 비율을 달리한 올리고뉴클레오티드를 처리하여 세포독성 정도를 MTT 분석으로 확인한 것이다.
도 1, 2의 그래프에서 x축에 기재한 것은 다음을 나타낸다: con (RAW 세포), LPS (10ng/mL 24hr 처리), PDRN (LPS + PDRN), Dexamethasone (LPS + 덱사메타손), Oligo 100 (아데노신 100%), Oligo 73 (아데노신 73.3% + 구아노신 26.7%), Oligo 50 (아데노신 50% + 구아노신 50%), Oligo 27 (아데노신 26.7% + 구아노신 73.3%), Oligo 10 (아데노신 10% + 구아노신 90%), Oligo 0 (구아노신 100%), Oligo C (시티딘 100%), Oligo T (티미딘 100%).
도 3은 LPS로 염증 반응이 유도된 RAW세포cell (마우스 대식세포주)에 아데노신 및 구아노신의 비율이 1:3이고, 서열이나 길이가 서로 다른 올리고뉴클레오티드를 처리하여 산화질소(NO)의 발생량을 확인한 것이다.
도 4는 LPS로 염증 반응이 유도된 미세아교세포의 세포주에 서열번호 11의 올리고뉴클레오티드를 처리하여 산화질소(NO)의 발생량을 확인한 것이다.
도 5는 LPS로 염증 반응이 유도된 미세아교세포의 세포주에 서열번호 11의 올리고뉴클레오티드를 처리하여 전염증성 사이토카인 IL-1β, IL-6, TNF-α의 발현량을 확인한 것이다.
도 6은 LPS로 염증 반응이 유도된 쥐의 별아교세포에 서열번호 11의 올리고뉴클레오티드를 처리하여 산화질소(NO)의 발생량을 확인한 것이다.
도 7은 LPS로 염증 반응이 유도된 쥐의 별아교세포에 서열번호 11의 올리고뉴클레오티드를 처리하여 사이토카인의 발생량을 확인한 것이다.
도 8은 쥐의 연골세포에 서열번호 11의 올리고뉴클레오티드와 IL-1β를 순서대로 처리한 후 사이토카인 발현량을 확인한 것이다.
도 9는 쥐의 대식세포주인 RAW 세포에 LPS와 함께 서열번호 15 내지 21의 올리고뉴클레오티드를 처리하여 산화질소(NO)의 발생량을 확인한 것이다.1 is a view illustrating the level of nitric oxide (NO) production by treating RAW cell cells (mouse macrophage cell lines) induced by LPS with oligonucleotides having different ratios of adenosine and guanosine.
2 is a view showing the degree of cytotoxicity confirmed by MTT analysis by treating oligonucleotides with different ratios of adenosine and guanosine to RAW cell cells (mouse macrophage cell line) induced by LPS inflammatory response.
In the graphs of FIGS. 1 and 2, the x-axis indicates the following: con (RAW cells), LPS (10 ng/mL 24 hr treatment), PDRN (LPS + PDRN), Dexamethasone (LPS + dexamethasone), Oligo 100 (adenosine) 100%), Oligo 73 (Adenosine 73.3% + Guanosine 26.7%), Oligo 50 (Adenosine 50% + Guanosine 50%), Oligo 27 (Adenosine 26.7% + Guanosine 73.3%), Oligo 10 (Adenosine 10% + Guanosine 90%), Oligo 0 (guanosine 100%), Oligo C (cytidine 100%), Oligo T (thymidine 100%).
3 shows that the ratio of adenosine and guanosine is 1:3 in RAW cell cells (mouse macrophage cell line) induced with an inflammatory response with LPS, and the amount of nitric oxide (NO) is generated by processing oligonucleotides of different sequences or lengths. will be.
Figure 4 shows the amount of nitric oxide (NO) generated by treating the oligonucleotide of SEQ ID NO: 11 in the cell line of microglia induced in the inflammatory response with LPS.
5 shows the expression levels of proinflammatory cytokines IL-1β, IL-6, and TNF-α by treating the oligonucleotide of SEQ ID NO: 11 in a cell line of microglia induced with an inflammatory response with LPS.
6 shows the amount of nitric oxide (NO) generated by treating the oligonucleotide of SEQ ID NO: 11 in astrocytes of mice induced by an inflammatory response with LPS.
Figure 7 shows the amount of cytokines generated by treating the oligonucleotide of SEQ ID NO: 11 in astrocytes of mice induced in the inflammatory response with LPS.
8 is a view illustrating the expression level of cytokines after sequentially treating the rat chondrocytes with the oligonucleotide of SEQ ID NO: 11 and IL-1β.
9 shows the amount of nitric oxide (NO) generated by processing the oligonucleotides of SEQ ID NOs: 15 to 21 together with LPS in RAW cells, a mouse macrophage cell line.

이하에서, 첨부된 도면을 참조하여 실시예들을 상세하게 설명한다. 그러나, 실시예들에는 다양한 변경이 가해질 수 있어서 특허출원의 권리 범위가 이러한 실시예들에 의해 제한되거나 한정되는 것은 아니다. 실시예들에 대한 모든 변경, 균등물 내지 대체물이 권리 범위에 포함되는 것으로 이해되어야 한다.Hereinafter, embodiments will be described in detail with reference to the accompanying drawings. However, since various changes may be made to the embodiments, the scope of the patent application is not limited or limited by these embodiments. It should be understood that all modifications, equivalents and substitutes for the embodiments are included in the scope of the rights.

실시예에서 사용한 용어는 단지 설명을 목적으로 사용된 것으로, 한정하려는 의도로 해석되어서는 안된다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 명세서에서, "포함하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서 상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.Terms used in the examples are used for the purpose of description only, and should not be construed as limiting. The singular expression includes the plural expression unless the context clearly dictates otherwise. In the present specification, terms such as “comprise” or “have” are intended to designate that a feature, number, step, operation, component, part, or combination thereof described in the specification exists, but one or more other features It is to be understood that it does not preclude the possibility of the presence or addition of numbers, steps, operations, components, parts, or combinations thereof.

다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 실시예가 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥 상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.Unless defined otherwise, all terms used herein, including technical or scientific terms, have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which the embodiment belongs. Terms such as those defined in a commonly used dictionary should be interpreted as having a meaning consistent with the meaning in the context of the related art, and should not be interpreted in an ideal or excessively formal meaning unless explicitly defined in the present application. does not

또한, 첨부 도면을 참조하여 설명함에 있어, 도면 부호에 관계없이 동일한 구성 요소는 동일한 참조부호를 부여하고 이에 대한 중복되는 설명은 생략하기로 한다. 실시예를 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 실시예의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.In addition, in the description with reference to the accompanying drawings, the same components are assigned the same reference numerals regardless of the reference numerals, and the overlapping description thereof will be omitted. In the description of the embodiment, if it is determined that a detailed description of a related known technology may unnecessarily obscure the gist of the embodiment, the detailed description thereof will be omitted.

본 발명자들은 아데노신(Adenosine)과 구아노신(Guanosine)을 단순히 혼합하여 이용하는 경우 발생하는 부작용을 해결하기 위해, 다양한 아데노신과 구아노신의 비율을 갖는 올리고뉴클레오티드를 합성하여 항염증 효과를 확인하였다. 그 결과, 아데노신과 구아노신의 비율이 94:5 내지 5:94의 범위에서 항염증 활성과 함께 세포독성 완화 효과를 나타내는 것을 발견하여 본 발명을 완성하였다.The present inventors confirmed the anti-inflammatory effect by synthesizing oligonucleotides having various ratios of adenosine and guanosine in order to solve the side effects that occur when simply mixing adenosine and guanosine. As a result, it was found that the ratio of adenosine to guanosine exhibits a cytotoxic alleviation effect with anti-inflammatory activity in the range of 94:5 to 5:94, thereby completing the present invention.

따라서, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 아데노신 및 구아노신으로 구성되는 올리고뉴클레오티드로서, 상기 아데노신 및 구아노신의 비율이 94:5 내지 5:94의 범위인, 항염증 활성을 갖는 올리고뉴클레오티드가 제공된다. 상기 아데노신 및 구아노신의 비율은 94:5 내지 5:94 범위로서, 예를 들어 94:5, 9:1, 73.3:26.7 3:1, 1:1, 1:3, 26.7:73.3, 1:9, 5:94 일 수 있으나, 이에 한정되지 않고 해당 범위 내 모든 수치를 포함한다.Accordingly, according to an embodiment of the present invention, an oligonucleotide consisting of adenosine and guanosine, wherein the ratio of adenosine and guanosine is in the range of 94:5 to 5:94, an oligonucleotide having anti-inflammatory activity is provided. . The ratio of adenosine and guanosine is in the range of 94:5 to 5:94, for example, 94:5, 9:1, 73.3:26.7 3:1, 1:1, 1:3, 26.7:73.3, 1:9 , 5:94, but is not limited thereto and includes all values within the range.

상기 아데노신 및 구아노신의 비율 범위를 벗어나는 경우 항염증 활성을 나타내지 않거나 LPS에 의한 세포독성을 완화시키는 효과가 떨어지게 된다(실시예 2 및 3 참조). 또한, 항염증 활성 및 세포독성 완화 효과를 모두 충족시키는 점에서 아데노신 및 구아노신의 비율은 1:3인 것이 가장 바람직하다.When the ratio of adenosine and guanosine is out of the range, it does not exhibit anti-inflammatory activity or the effect of alleviating cytotoxicity caused by LPS is reduced (see Examples 2 and 3). In addition, the ratio of adenosine and guanosine is most preferably 1:3 in terms of satisfying both anti-inflammatory activity and cytotoxicity alleviation effect.

한편, 올리고뉴클레오티드의 길이는 4bp(base pair)이상으로, 바람직하게는 4 내지 99bp일 수 있으나, 아데노신 및 구아노신의 비율이 94:5 내지 5:94의 범위를 만족하는 것이면 올리고뉴클레오티드 길이에 관계없이 항염증 활성을 나타낼 수 있다. On the other hand, the length of the oligonucleotide is 4bp (base pair) or more, preferably 4 to 99bp, but if the ratio of adenosine to guanosine satisfies the range of 94:5 to 5:94, regardless of the length of the oligonucleotide It may exhibit anti-inflammatory activity.

본 발명의 올리고뉴클레오티드는 서열번호 2 내지 서열번호 4, 서열번호 7 내지 서열번호 21로 이루어진 군으로부터 선택되는 염기서열로 이루어질 수 있으나, 이하 실시예에서 확인되는 바와 같이, 아데노신 및 구아노신의 비율이 94:5 내지 5:94의 범위를 만족하는 경우에는 구체적인 서열에 관계없이 항염증 활성을 나타낼 수 있다.The oligonucleotide of the present invention may consist of a nucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 2 to SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 7 to SEQ ID NO: 21, but as confirmed in the Examples below, the ratio of adenosine and guanosine is 94 When the range of :5 to 5:94 is satisfied, anti-inflammatory activity may be exhibited regardless of the specific sequence.

본 발명의 올리고뉴클레오티드는 LPS에 의한 세포독성을 완화시키고, 산화질소(NO)의 생성을 저해하며, IL-1β, IL-6, TNF-α 와 같은 염증성 사이토카인의 생성을 저해하여 뛰어난 항염증 효과를 나타낸다. The oligonucleotide of the present invention relieves LPS-induced cytotoxicity, inhibits the production of nitric oxide (NO), and inhibits the production of inflammatory cytokines such as IL-1β, IL-6, and TNF-α, thereby providing excellent anti-inflammatory show the effect.

상기 염증성 질환은 염증을 주 병변으로 하는 질병을 총칭하는 의미로서, 이에 제한되는 것은 아니나, 바람직하게는 아토피, 건선, 피부염, 알레르기, 관절염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 방광염, 신장염, 골반염, 크론병, 궤양성 대장염, 강직성 척추염, 전신 홍반성 낭창 (systemic lupus erythematodes, SLE), 천식, 부종, 지연성 알레르기 (IV형 알레르기), 이식거부, 이식편 대 숙주 질환, 자가면역 뇌척수염, 다발성 경화증, 염증성 장질환, 낭포성 섬유증, 당뇨성 망막증, 허혈성-재관류 손상, 혈관 재협착, 사구체신염, 또는 위장관 알레르기일 수 있다. 여기서, 관절염은 세균이나 외상, 자가면역 질환 등과 같은 다양한 원인에 의해 관절 내에 염증성 변화로 유발되는 질환을 의미하며, 바람직하게는 뇌 염증성 질환 또는 골 관절염이다. The inflammatory disease is a generic term for diseases whose main lesion is inflammation, but is not limited thereto, but preferably atopic dermatitis, psoriasis, dermatitis, allergy, arthritis, rhinitis, otitis media, sore throat, tonsillitis, cystitis, nephritis, pelvicitis, Crohn's disease, ulcerative colitis, ankylosing spondylitis, systemic lupus erythematodes (SLE), asthma, edema, delayed allergy (type IV allergy), transplant rejection, graft-versus-host disease, autoimmune encephalomyelitis, multiple sclerosis, inflammatory bowel disease, cystic fibrosis, diabetic retinopathy, ischemic-reperfusion injury, vascular restenosis, glomerulonephritis, or gastrointestinal allergy. Here, the arthritis refers to a disease caused by inflammatory changes in the joint due to various causes such as bacteria, trauma, autoimmune disease, and the like, and is preferably an inflammatory disease of the brain or osteoarthritis.

상기 뇌 염증성 질환은 뇌졸중(stroke), 헌팅턴병 (Huntinton`s disease), 시신경척수염 스펙트럼 장애 (NMOSD), 운동신경성 질환(motor neuron disease), 파킨슨병(Parkinson's disease), 알츠하이머병(Alzheimer's disease) 및 다발성 경화증 (multiple sclerosis)을 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The brain inflammatory disease includes stroke, Huntington's disease, optic neuromyelitis spectrum disorder (NMOSD), motor neuron disease, Parkinson's disease, Alzheimer's disease and multiple may include, but is not limited to, multiple sclerosis.

본 명세서에서 사용되는 용어, “예방”은 본 발명의 약학적 조성물을 투여하여 염증성 질환을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.As used herein, the term “prevention” refers to any action that suppresses or delays the onset of an inflammatory disease by administering the pharmaceutical composition of the present invention.

본 명세서에서 사용되는 용어 "치료"는 본 발명의 약학적 조성물을 투여하여 염증성 질환의 증세가 호전되도록 하거나 이롭게 되도록 하는 모든 행위를 포함하는 것으로 해석될 수 있으나, 특별히 이에 제한되지는 않는다.As used herein, the term "treatment" may be construed to include any action to improve or benefit symptoms of an inflammatory disease by administering the pharmaceutical composition of the present invention, but is not particularly limited thereto.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 추가로 포함할 수 있는데, 상기 담체는 비자연적인 담체가 될 수 있다. 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may further include suitable carriers, excipients and diluents commonly used in the preparation of pharmaceutical compositions, and the carrier may be a non-natural carrier. Carriers, excipients and diluents include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, gum acacia, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose , polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, and mineral oil.

한편, 본 발명의 약학적 조성물은, 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제제화하여 사용될 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. On the other hand, the pharmaceutical composition of the present invention may be formulated in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc., external preparations, suppositories, and sterile injection solutions according to conventional methods. can In the case of formulation, it is prepared using diluents or excipients, such as commonly used fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants.

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 줄기세포 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc., and these solid preparations include at least one excipient in the stem cell extract, for example, starch, calcium carbonate, sucrose. It is prepared by mixing (sucrose) or lactose, gelatin, etc. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc may also be used. Liquid formulations for oral use include various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to water and liquid paraffin, which are simple diluents commonly used for suspensions, solutions, emulsions, syrups, etc. have.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. Non-aqueous solvents and suspending agents include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate. As a base of the suppository, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin, glycerogelatin, and the like can be used.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있는데, 본 발명의 용어 "약학적으로 유효한 양"이란, 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. The pharmaceutical composition of the present invention may be administered in a pharmaceutically effective amount. As used herein, the term "pharmaceutically effective amount" refers to an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment. The effective dose level depends on the subject type and severity, age, sex, activity of the drug, sensitivity to the drug, time of administration, route and excretion rate, duration of treatment, factors including concomitant drugs, and other medical fields. It may be determined according to known factors.

본 발명의 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하다.The pharmaceutical composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or may be administered in combination with other therapeutic agents, and may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents. and may be administered single or multiple. Taking all of the above factors into consideration, it is important to administer an amount that can obtain the maximum effect with a minimum amount without side effects.

한편, 본 명세서에서 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 대상에게 본 발명의 약학적 조성물을 도입하는 것을 말하며, 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다. Meanwhile, as used herein, the term "administration" refers to introducing the pharmaceutical composition of the present invention to a subject by any suitable method, and the administration route may be administered through various routes as long as it can reach the target tissue.

투여 경로의 예로는 경구, 비경구, 피하, 복강 내, 폐 내, 및 비강 내로 투여될 수 있으며, 비경구 주입에는 근육 내, 관절강 내, 척수강 내, 척추 경막외공간 내, 정맥 내, 동맥 내, 복강 내 또는 피하투여가 포함된다. 상기 조성물의 비경구 투여는 바람직한 순도 하에 약제학적으로 허용 가능한 담체, 즉 사용되는 농도와 투여량에서 수용체에 비독성이고 다른 제제 성분과 혼화 될 수 있는 것을 혼합하여 단위 투여량의 제형으로 조제하는 것이 바람직할 수 있다.Examples of routes of administration include oral, parenteral, subcutaneous, intraperitoneal, intrapulmonary, and intranasal administration, and parenteral injection includes intramuscular, intraarticular, intrathecal, intrathecal epidural space, intravenous, intraarterial. , intraperitoneal or subcutaneous administration. For parenteral administration of the composition, it is preferable to prepare a unit dosage form by mixing a pharmaceutically acceptable carrier, that is, non-toxic to the receptor at the concentration and dosage used, and that is miscible with other formulation ingredients under the desired purity. may be desirable.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하기로 한다. 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 목적으로 기술된 것으로서, 본 발명의 범위가 이에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. The following examples are described for the purpose of illustrating the present invention, but the scope of the present invention is not limited thereto.

실시예Example 1: 올리고뉴클레오티드의 합성 1: Synthesis of oligonucleotides

아데노신과 구아노신의 비율을 각각 100:0, 5:94, 1:9, 26.7:73.3, 1:1, 94:5, 9:1, 73.3:26.7, 0:100으로 하고, 길이가 4bp, 30bp, 90bp, 99bp인 올리고뉴클레오티드를 합성하였다. 올리고뉴클레오티드는 전용 합성기(Mermade192 (Bioautomation, USA))에서 1) Deblocking 2) Coupling 3) Capping 4) Oxidation 4단계의 cycle을 거쳐 3' 말단에서 5' 말단까지 합성하는 방법으로 합성되었다. 이후, 불완전하게 합성된 올리고뉴클레오티드는 HAP (high affinity purification)을 사용하여 제거하였다.The ratio of adenosine and guanosine is 100:0, 5:94, 1:9, 26.7:73.3, 1:1, 94:5, 9:1, 73.3:26.7, 0:100, respectively, and the length is 4bp, 30bp , 90bp, 99bp oligonucleotides were synthesized. Oligonucleotides were synthesized by synthesizing from the 3' end to the 5' end through a 4-step cycle of 1) Deblocking 2) Coupling 3) Capping 4) Oxidation in a dedicated synthesizer (Mermade192 (Bioautomation, USA)). Thereafter, incompletely synthesized oligonucleotides were removed using high affinity purification (HAP).

합성된 올리고뉴클레오티드의 구체적인 서열은 다음과 같다.The specific sequence of the synthesized oligonucleotide is as follows.

서열번호SEQ ID NO: 아데노신:구아노신 비율Adenosine:Guanosine Ratio 서열order 1One 100:0(Oligo 100)100:0 (Oligo 100) AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAAAAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA 22 73.3:26.7(Oligo 73)73.3:26.7 (Oligo 73) AAA GAA AGA AAG AAA GAA AGA AAG AAA GAGAAA GAA AGA AAG AAA GAA AGA AAG AAA GAG 33 1:1(Oligo 50)1:1 (Oligo 50) AGA GAG AGA GAG AGA GAG AGA GAG AGA GAGAGA GAG AGA GAG AGA GAG AGA GAG AGA GAG 44 26.7:73.3(Oligo 27)26.7:73.3 (Oligo 27) AGG GAG GGA GGG AGG GAG GGA GGG AGG GAGAGG GAG GGA GGG AGG GAG GGA GGG AGG GAG 55 1:9(Oligo 10)1:9 (Oligo 10) AGG GAG GGA GGG GGG GGG GGG GGG GGG GGGAGG GAG GGA GGG GGG GGG GGG GGG GGG GGG 66 0:100(Oligo 0)0:100 (Oligo 0) GGG GGG GGG GGG GGG GGG GGG GGG GGG GGGGGG GGG GGG GGG GGG GGG GGG GGG GGG GGG 1515 1:3(Oligo 4-1)1:3 (Oligo 4-1) GAGGGAGG 1616 3:1(Oligo 4-2)3:1 (Oligo 4-2) AGAAAGAA 1717 94:5(Oligo 99-1)94:5 (Oligo 99-1) AGA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAG AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA GAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AGA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAG AAA AAA AAAAGA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAG AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA GAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AGA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAG AAA AAA AAA 1818 5:94(Oligo 99-2)5:94 (Oligo 99-2) GAG GGG GGG GGG GGG GGG GGG GGA GGG GGG GGG GGG GGG GGG GGG AGG GGG GGG GGG GGG GGG GGG GAG GGG GGG GGG GGG GGG GGG GGA GGG GGG GGGGAG GGG GGG GGG GGG GGG GGG GGA GGG GGG GGG GGG GGG GGG GGG AGG GGG GGG GGG GGG GGG GGG GAG GGG GGG GGG GGG GGG GGG GGA GGG GGG GGG 1919 1:3(Oligo 96-1)1:3 (Oligo 96-1) GAG AGG GGG AGA GGG GGG AGA GGG GGA GAG GGG GAG AGG GGG AGA GGG GGA GAG GGG GAG AGG GGG AGA GGG GGA GAG GGG GAG AGG GGA GAG GGGGAG AGG GGG AGA GGG GGG AGA GGG GGA GAG GGG GAG AGG GGG AGA GGG GGA GAG GGG GAG AGG GGG AGA GGG GGA GAG GGG GAG AGG GGA GAG GGG 2020 9:1(Oligo 90-1)9:1 (Oligo 90-1) AAA AAA AGA AAA AAA AAG AAA AAA AAA GAA AAA AAA AGA AAA AAA AAG AAA AAA AAA GAA AAA AAA AGA AAA AAA AAG AAA AAA AAA GAAAAA AAA AGA AAA AAA AAG AAA AAA AAA GAA AAA AAA AGA AAA AAA AAG AAA AAA AAA GAA AAA AAA AGA AAA AAA AAG AAA AAA AAA GAA 2121 1:9(Oligo 90-2)1:9 (Oligo 90-2) GGG GGG GAG GGG GGG GGA GGG GGG GGG AGG GGG GGG GAG GGG GGG GGA GGG GGG GGG AGG GGG GGG GAG GGG GGG GGA GGG GGG GGG AGGGGG GGG GAG GGG GGG GGA GGG GGG GGG AGG GGG GGG GAG GGG GGG GGA GGG GGG GGG AGG GGG GGG GAG GGG GGG GGA GGG GGG GGG AGG

실시예2Example 2 : : LPSLPS 처리에 의해 유도된 산화질소(NO)의 생성 저해 효과 Inhibitory effect on nitric oxide (NO) production induced by treatment

RAW 세포(Sigma-Aldrich)에 염증반응 유발 물질인 LPS(lipopolysaccharide)를 10ng/mL의 농도로 처리하고, 2시간 후 상기 실시예 1에서 제조된 올리고뉴클레오티드를 1㎍/ml, 10㎍/ml, 100㎍/ml의 농도로 처리하여 산화질소(NO)의 발생량을 비교하였다. NO의 생성 저해 효과는 아무 처리하지 않은 RAW세포(con)에 LPS를 처리한 후의 NO 발생량과 비교하여 NO 발생을 저해하는 정도로 평가하였다. RAW cells (Sigma-Aldrich) were treated with LPS (lipopolysaccharide), an inflammatory reaction-inducing substance, at a concentration of 10 ng/mL, and 2 hours later, the oligonucleotide prepared in Example 1 was treated with 1 μg/ml, 10 μg/ml, The amount of nitric oxide (NO) generated by treatment at a concentration of 100 μg/ml was compared. The NO generation inhibitory effect was evaluated to the extent of inhibiting NO generation compared with the NO generation amount after LPS treatment in RAW cells ( con ) untreated.

그 결과, 도 1 및 도 9에 나타낸 바와 같이, 아데노신만을 포함하는 올리고뉴클레오티드(Oligo 100)는 오히려 염증을 악화시킨 반면, 아데노신과 구아노신의 비율이 94:5 내지 5:94 범위를 만족하는 Oligo 73, Oligo 50, Oligo 27, Oligo 10, Oligo 4-1, Oligo 4-2, Oligo 99-1, Oligo 99-2, Oligo 96-1, Oligo 90-1, Oligo 90-2의 올리고뉴클레오티드는 LPS 처리에 의해 유도된 산화질소 생성을 억제하여 항염증 활성을 가지는 것을 알 수 있었다. As a result, as shown in FIGS. 1 and 9, the oligonucleotide containing only adenosine (Oligo 100) rather exacerbated the inflammation, while the ratio of adenosine and guanosine to Oligo 73 satisfies the range of 94:5 to 5:94. , Oligo 50, Oligo 27, Oligo 10, Oligo 4-1, Oligo 4-2, Oligo 99-1, Oligo 99-2, Oligo 96-1, Oligo 90-1, Oligo 90-2 oligonucleotides were treated with LPS It was found to have anti-inflammatory activity by inhibiting the production of nitric oxide induced by

실시예3Example 3 : : LPSLPS 처리에 의한 세포독성 완화 효과 Cytotoxicity mitigation effect by treatment

RAW 세포(Sigma-Aldrich)에 LPS(lipopolysaccharide)를 10ng/mL의 농도로 처리하여 염증 반응을 유발시킨 다음, 상기 실시예 1에서 제조된 올리고뉴클레오티드를 1㎍/ml, 10㎍/ml, 100㎍/ml의 농도로 처리하고 24시간 동안 배양시켰다. 세포독성은 MMT 분석을 통해 측정하였다.RAW cells (Sigma-Aldrich) were treated with LPS (lipopolysaccharide) at a concentration of 10 ng/mL to induce an inflammatory response, and then the oligonucleotide prepared in Example 1 was added to 1 μg/ml, 10 μg/ml, 100 μg. /ml and incubated for 24 hours. Cytotoxicity was measured by MMT assay.

그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 아데노신 10% + 구아노신 90%의 올리고뉴클레오티드(Oligo 10)을 처리한 경우, 스테로이드제인 덱사메타손을 처리한 경우보다도 LPS에 의한 세포독성이 상당히 완화되었다. 아데노신 26.7% + 구아노신 73.3%의 올리고뉴클레오티드(Oligo 27)까지 세포독성 완화 효과가 나타났으며, 그 이상으로 아데노신의 비율이 높아지는 경우에는 세포독성이 완화 효과가 약간 저하되는 것을 확인할 수 있었다.As a result, as shown in Figure 2, when treated with adenosine 10% + guanosine 90% oligonucleotide (Oligo 10), the cytotoxicity caused by LPS was significantly alleviated compared to the case of treatment with the steroid dexamethasone. Adenosine 26.7% + guanosine 73.3% oligonucleotide (Oligo 27) showed a cytotoxic mitigation effect, and when the ratio of adenosine was higher than that, it was confirmed that the cytotoxic mitigation effect was slightly reduced.

상기 실시예 2 및 3의 결과를 종합해볼 때, 표 2에 나타낸 바와 같이 염증자극에 의한 세포독성을 완화시키면서 항염증 활성을 나타낼 수 있는 올리고뉴클레오티드는 아데노신과 구아노신의 비율이 비율은 94:5 내지 5:94 범위사이인 경우에 해당한다.Combining the results of Examples 2 and 3, as shown in Table 2, oligonucleotides capable of exhibiting anti-inflammatory activity while alleviating cytotoxicity caused by inflammatory stimulation have a ratio of adenosine and guanosine of 94:5 to It is in the range of 5:94.

아데노신adenosine 100%100% 94.9%94.9% 73.30%73.30% 50.00%50.00% 26.70%26.70% 5.1%5.1% 0%0% 구아노신guanosine 0%0% 5.1%5.1% 26.70%26.70% 50.00%50.00% 73.30%73.30% 94.9%94.9% 100%100% 비율 (A:G)Ratio (A:G) 100:0100:0 94:594:5 1:31:3 1:11:1 3:13:1 5:945:94 0:1000:100 항염증 활성anti-inflammatory activity XX OO OO OO OO OO OO LPS에 의한 세포독성 완화 효과Cytotoxicity mitigation effect by LPS XX OO OO OO OO OO XX

실시예Example 4: 올리고뉴클레오티드 서열 및 길이 차이에 따른 항염증 작용 비교 4: Comparison of anti-inflammatory action according to difference in oligonucleotide sequence and length

올리고뉴클레오티드의 서열이나 길이에 따라 항염증 효과가 달리 나타나는지 여부를 확인하기 위해, 아데노신과 구아노신의 비율이 1:3인 올리고뉴클레오티드를 추가로 제조하였다. 올리고뉴클레오티드는 상기 실시예 1에 기재한 방법을 이용하여 제조하였고, 제조된 뉴클레오티드의 구체적인 서열은 다음과 같다.In order to determine whether the anti-inflammatory effect is different depending on the sequence or length of the oligonucleotide, an oligonucleotide having a ratio of adenosine and guanosine of 1:3 was additionally prepared. The oligonucleotide was prepared using the method described in Example 1 above, and the specific sequence of the prepared nucleotide is as follows.

서열번호SEQ ID NO: 명칭designation 서열order 44 Oligo25-1Oligo25-1 AGG GAG GGA GGG AGG GAG GGA GGG AGG GAGAGG GAG GGA GGG AGG GAG GGA GGG AGG GAG 88 Oligo25-2Oligo25-2 GGG GAG GAG GGA GGA GGG GGA GAG AGG GGAGGG GAG GAG GGA GGA GGG GGA GAG AGG GGA 99 Oligo25-3Oligo25-3 AGG GGG GGG GAG GGA GAG GGA AGA GGG GGAAGG GGG GGG GAG GGA GAG GGA AGA GGG GGA 1010 Oligo25-4Oligo25-4 GGG AGA GAG GAG AGG GAG GGA GGA GGG GGGGGG AGA GAG GAG AGG GAG GGA GGA GGG GGG 1111 15bp Oligo2515bp Oligo25 AGG GAG GGA GGG AGGAGG GAG GGA GGG AGG 1212 42bp Oligo2542bp Oligo25 AGG GAG GGA GGG AGG GAG GGA GGG AGG GAG GGA GGG AGG GAGAGG GAG GGA GGG AGG GAG GGA GGG AGG GAG GGA GGG AGG GAG 1313 60bp Oligo2560bp Oligo25 AGG GAG GGA GGG AGG GAG GGA GGG AGG GAG GGA GGG AGG GAG GGG AGG GAG GGA GGG AGGAGG GAG GGA GGG AGG GAG GGA GGG AGG GAG GGA GGG AGG GAG GGG AGG GAG GGA GGG AGG 1414 75bp Oligo2575bp Oligo25 AGG GAG GGA GGG AGG GAG GGA GGG AGG GAG GGA GGG AGG GAG GGG AGG GAG GGA GGG AGG GAG GGA GGG AGG GAGAGG GAG GGA GGG AGG GAG GGA GGG AGG GAG GGA GGG AGG GAG GGG AGG GAG GGA GGG AGG GAG GGA GGG AGG GAG

다음으로, RAW 세포(Sigma-Aldrich)에 염증반응 유발 물질인 LPS(lipopolysaccharide)를 10ng/mL의 농도로 처리하고, 2시간 후 상기 서열번호 7 내지 14의 올리고뉴클레오티드를 1㎍/ml, 10㎍/ml, 100㎍/ml의 농도로 처리하여 산화질소(NO)의 발생량을 비교하였다. 그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 아무 처리를 하지 않은 대조군에 비해 올리고뉴클레오티드를 처리한 세포에서는 농도에 비례하여 NO 발생량이 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는, 올리고뉴클레오티드의 항염증 활성은 아데노신과 구아노신의 비율이 특정 범위를 만족하면 서열이나 길이에 관계없이 유사한 항염증 효과를 나타낼 수 있음을 시사한다.Next, RAW cells (Sigma-Aldrich) were treated with LPS (lipopolysaccharide), an inflammatory reaction-inducing substance, at a concentration of 10 ng/mL, and 2 hours later, the oligonucleotides of SEQ ID NOs: 7 to 14 were added to 1 μg/ml, 10 μg. /ml, the amount of nitric oxide (NO) generated by treatment at a concentration of 100㎍/ml was compared. As a result, as shown in FIG. 3 , it was confirmed that the amount of NO generation decreased in proportion to the concentration in the cells treated with the oligonucleotide compared to the control group without any treatment. These results suggest that the anti-inflammatory activity of the oligonucleotide may exhibit a similar anti-inflammatory effect regardless of the sequence or length if the ratio of adenosine to guanosine satisfies a specific range.

실시예Example 5: 미세아교세포( 5: microglia ( microgliamicroglia )에서의 항염증 효과) anti-inflammatory effect in

미세아교세포 세포에서도 동일한 항염증 효과를 나타내는지 확인하기 위해, 쥐의 미세아교세포 세포주인 BV2 세포에 염증자극을 위한 LPS (100ng/ml) + interferon-gamma (50unit/ml)을 처리하고 2시간 방치한 다음 올리고뉴클레오티드(15bp Oligo25, 서열번호 11)를 처리하여 NO 발생량 및 전염증성(proinflammatory) 사이토카인 발현량을 확인하였다.In order to check whether the microglia also exhibit the same anti-inflammatory effect, BV2 cells, a mouse microglia cell line, were treated with LPS (100ng/ml) + interferon-gamma (50unit/ml) for inflammatory stimulation for 2 hours. After leaving, the oligonucleotide (15bp Oligo25, SEQ ID NO: 11) was treated to determine the amount of NO generation and the expression level of proinflammatory cytokines.

사이토카인의 발현량은 conventional PCR 분석을 이용하여 BV2 cell에서의 사이토카인 유전자의 발현 수준을 측정함으로써 확인하였으며, 구체적인 방법은 다음과 같다. TRIZOL 시약(Invitrogen, Carlsbad, CA, United States)을 사용하여 처리된 세포로부터 총 리보 핵산 (RNA)을 추출하였다. 역전사(RT)는 Superscript II 역전사 효소 (Invitrogen) 및 올리고 (dT) 프라이머를 사용하여 수행되었다. PCR 증폭은 특정 프라이머 세트를 사용하여 55-60℃의 어닐링 온도, 25-32 사이클로 C1000 Touch Thermal Cycler (Bio-Rad, Richmond, CA, United States)에서 수행되었다. 에티디움 브로마이드를 갖는 PCR 생성물을 1% 아가로스겔 상에서 전기 영동하고, 자외선을 조사하여 밴드를 관찰하였다.The expression level of cytokines was confirmed by measuring the expression level of cytokine genes in BV2 cells using conventional PCR analysis, and the specific method is as follows. Total ribonucleic acid (RNA) was extracted from treated cells using TRIZOL reagent (Invitrogen, Carlsbad, CA, United States). Reverse transcription (RT) was performed using Superscript II reverse transcriptase (Invitrogen) and oligo (dT) primers. PCR amplification was performed in a C1000 Touch Thermal Cycler (Bio-Rad, Richmond, CA, United States) at an annealing temperature of 55-60 °C, 25-32 cycles using specific primer sets. The PCR product having ethidium bromide was electrophoresed on a 1% agarose gel, and a band was observed by irradiation with ultraviolet rays.

그 결과, 도 4 및 도 5에 나타낸 바와 같이, 올리고뉴클레오티드의 처리 농도에 비례하여 NO 발생이 감소하였고(도 4), LPS 처리에 의해 증가한 전염증성 사이토카인 IL-1β, IL-6, TNF-α의 유전자 발현정도가 이 유의미하게 감소(도 5)하는 결과를 보였다.As a result, as shown in FIGS. 4 and 5 , NO generation was reduced in proportion to the treatment concentration of the oligonucleotide ( FIG. 4 ), and the pro-inflammatory cytokines IL-1β, IL-6, TNF- increased by LPS treatment The expression level of the α gene was significantly reduced (FIG. 5).

실시예Example 6: 별아교세포( 6: Astrocytes ( astrocyteastrocyte )에서의 항염증 효과) anti-inflammatory effect in

별아교세포 세포에서도 동일한 항염증 효과를 나타내는지 확인하기 위해 쥐의 primary astrocyte (neonate mice 생후 2-3일의 뇌에서 별아교세포를 culture하여 만듬)를 준비하였다. 준비한 별아교세포에 염증자극을 위한 LPS (100ng/ml) + interferon-gamma (50unit/ml)을 처리하고 2시간 방치한 다음 올리고뉴클레오티드(15bp Oligo25, 서열번호 11)를 처리하여 NO 발생량 및 사이토카인 발현량을 확인하였다.In order to check whether the same anti-inflammatory effect is also exhibited in astrocytes, primary astrocytes (made by culturing astrocytes in the brain of neonate mice 2-3 days after birth) were prepared. The prepared astrocytes were treated with LPS (100ng/ml) + interferon-gamma (50unit/ml) for inflammatory stimulation, left for 2 hours, and then treated with oligonucleotides (15bp Oligo25, SEQ ID NO: 11) to generate NO and cytokine expression. amount was confirmed.

사이토카인 발현량은 상기 실시예 5에 기재된 conventional PCR 분석을 이용한 사이토카인 유전자의 발현 수준 및 웨스턴 블롯 분석을 이용한 세포 배양액의 사이토카인 단백질 농도를 측정함으로써 확인하였다. The cytokine expression level was confirmed by measuring the cytokine protein concentration in the cell culture medium using the expression level of the cytokine gene using the conventional PCR analysis described in Example 5 and Western blot analysis.

그 결과, 도 6 및 도 7에 나타낸 바와 같이, 올리고뉴클레오티드의 처리 농도에 비례하여 NO 발생이 감소하였고(도 6), 전염증성 사이토카인 IL-1β, IL-6, TNF-α의 유전자 발현정도가 유의미하게 감소한 것뿐만 아니라, 항염증성 사이토카인인 IL-10의 유전자 발현정도가 유의미하게 증가한 결과를 보였다(도 7).As a result, as shown in FIGS. 6 and 7 , NO generation was reduced in proportion to the treatment concentration of the oligonucleotide ( FIG. 6 ), and gene expression levels of the pro-inflammatory cytokines IL-1β, IL-6, and TNF-α was significantly decreased, and the gene expression level of IL-10, an anti-inflammatory cytokine, was significantly increased (FIG. 7).

실시예Example 7: 연골세포에서의 항염증 효과 7: Anti-inflammatory effect on chondrocytes

연골세포에서 동일한 항염증 효과를 나타내는지 확인하기 위해 쥐의 primary chondrocyte(연골세포)에 올리고뉴클레오티드(15bp Oligo25, 서열번호 11)를 10ng/mL로 처리하여 2시간 동안 방치한 다음, IL-1β를 처리하고 6시간 후 PCR analysis을 통해 사이토카인 발현량을 확인하였다.In order to check whether the chondrocytes exhibit the same anti-inflammatory effect, oligonucleotides (15bp Oligo25, SEQ ID NO: 11) were treated with 10ng/mL in primary chondrocytes (chondrocytes) of mice and left for 2 hours, and then IL-1β was After 6 hours of treatment, the cytokine expression level was confirmed through PCR analysis.

사이토카인의 발현량은 conventional PCR 분석을 이용하여 사이토카인 유전자의 발현 수준을 측정함으로써 확인하였으며, 구체적인 방법은 다음과 같다. TRIZOL 시약(Invitrogen, Carlsbad, CA, United States)을 사용하여 처리된 세포로부터 총 리보 핵산 (RNA)을 추출하였다. 역전사(RT)는 Superscript II 역전사 효소 (Invitrogen) 및 올리고 (dT) 프라이머를 사용하여 수행되었다. One Step SYBR PrimeScript RT-PCR Kit (Takara Bio, Otsu, Shiga, Japan)를 이용하여 Real-time PCR을 수행한 후, ABI Prism 7000 서열 검출 시스템 (Applied Biosystems, California, CA, United States)을 이용하여 검출하였다. 내부 대조군으로는 글리세르알데히드-3-인산탈수소효소(GADPH)를 이용하였다.The expression level of cytokines was confirmed by measuring the expression level of cytokine genes using conventional PCR analysis, and the specific method is as follows. Total ribonucleic acid (RNA) was extracted from treated cells using TRIZOL reagent (Invitrogen, Carlsbad, CA, United States). Reverse transcription (RT) was performed using Superscript II reverse transcriptase (Invitrogen) and oligo (dT) primers. Real-time PCR was performed using the One Step SYBR PrimeScript RT-PCR Kit (Takara Bio, Otsu, Shiga, Japan), and then the ABI Prism 7000 sequence detection system (Applied Biosystems, California, CA, United States) was used. detected. As an internal control, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GADPH) was used.

그 결과, 도 8에 나타낸 바와 같이, 골관절염에서 증가하는 것으로 알려진 MMP13, MMP12, MMP9, MMP3 유전자 발현 정도를 감소시키고, 골관절염에서 감소하는 것으로 알려진 ADAMTS5 유전자 발현 정도는 증가시켜, 골관절염의 marker 들을 상당히 의미 있게 호전시키는 것을 알 수 있었다. As a result, as shown in FIG. 8 , the expression level of the MMP13, MMP12, MMP9, and MMP3 gene, which is known to be increased in osteoarthritis, was decreased, and the expression level of the ADAMTS5 gene, which is known to be decreased in osteoarthritis, was increased, significantly meaning markers of osteoarthritis. was found to be improving.

상기 실시예 5 내지 7의 결과로부터, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 대식세포주 뿐만 아니라 미세아교세포, 성상 세포 및 연골세포에서 모두 우수한 항염 효과를 나타냄을 알 수 있는바, 상기 올리고뉴클레오티드는 염증반응으로 인해 뇌신경의 손상이 유발되는 뇌 염증성 질환 및 골 관절염의 치료에 유용하게 이용될 수 있다.From the results of Examples 5 to 7, it can be seen that the oligonucleotide of the present invention exhibits excellent anti-inflammatory effects in not only macrophages but also microglia, astrocytes and chondrocytes. It can be usefully used in the treatment of brain inflammatory diseases and osteoarthritis in which cranial nerve damage is induced.

이상과 같이 실시예들이 비록 한정된 도면에 의해 설명되었으나, 해당 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기를 기초로 다양한 기술적 수정 및 변형을 적용할 수 있다. 예를 들어, 설명된 기술들이 설명된 방법과 다른 순서로 수행되거나, 및/또는 설명된 구성요소들이 설명된 방법과 다른 형태로 결합 또는 조합되거나, 다른 구성요소 또는 균등물에 의하여 대치되거나 치환되더라도 적절한 결과가 달성될 수 있다.As described above, although the embodiments have been described with reference to the limited drawings, those skilled in the art may apply various technical modifications and variations based on the above. For example, even if the described techniques are performed in an order different from the described method, and/or the described components are combined or combined in a different form from the described method, or replaced or substituted by other components or equivalents Appropriate results can be achieved.

그러므로, 다른 구현들, 다른 실시예들 및 특허청구범위와 균등한 것들도 후술하는 청구범위의 범위에 속한다.Therefore, other implementations, other embodiments, and equivalents to the claims are also within the scope of the following claims.

<110> Missionary Benedictine sisters of Tutzing Daegu priory <120> Oligonucleotide having anti-inflammatory effect <130> APC-2019-0452 <150> KR 10-2019-0028575 <151> 2019-03-13 <150> KR 10-2019-0116657 <151> 2019-09-23 <160> 21 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo 100 <400> 1 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 30 <210> 2 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo 27 <400> 2 aaagaaagaa agaaagaaag aaagaaagag 30 <210> 3 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo 50 <400> 3 agagagagag agagagagag agagagagag 30 <210> 4 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo 73 <400> 4 agggagggag ggagggaggg agggagggag 30 <210> 5 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo 10 <400> 5 agggagggag gggggggggg gggggggggg 30 <210> 6 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo 0 <400> 6 gggggggggg gggggggggg gggggggggg 30 <210> 7 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo25-1 <400> 7 agggagggag ggagggaggg agggagggag 30 <210> 8 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo25-2 <400> 8 ggggaggagg gaggaggggg agagagggga 30 <210> 9 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo25-3 <400> 9 aggggggggg agggagaggg aagaggggga 30 <210> 10 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo25-4 <400> 10 gggagagagg agagggaggg aggagggggg 30 <210> 11 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 15bp Oligo25 <400> 11 agggagggag ggagg 15 <210> 12 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 45bp Oligo25 <400> 12 agggagggag ggagggaggg agggagggag ggagggaggg ag 42 <210> 13 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 63bp Oligo25 <400> 13 agggagggag ggagggaggg agggagggag ggagggaggg aggggaggga gggagggagg 60 60 <210> 14 <211> 75 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 78bp Oligo25 <400> 14 agggagggag ggagggaggg agggagggag ggagggaggg aggggaggga gggagggagg 60 gagggaggga gggag 75 <210> 15 <211> 4 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo4-1 <400> 15 gagg 4 <210> 16 <211> 4 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo4-2 <400> 16 agaa 4 <210> 17 <211> 99 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo99-1 <400> 17 agaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaagaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaagaaaa aaaaaaaaaa 60 aaaaaaagaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaag aaaaaaaaa 99 <210> 18 <211> 99 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo99-2 <400> 18 gagggggggg gggggggggg gggagggggg gggggggggg gggggagggg gggggggggg 60 gggggggagg gggggggggg ggggggggga ggggggggg 99 <210> 19 <211> 96 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo96-1 <400> 19 gagaggggga gaggggggag agggggagag ggggagaggg ggagaggggg agagggggag 60 agggggagag ggggagaggg ggagagggga gagggg 96 <210> 20 <211> 90 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo90-1 <400> 20 aaaaaaagaa aaaaaaagaa aaaaaaagaa aaaaaaagaa aaaaaaagaa aaaaaaagaa 60 aaaaaaagaa aaaaaaagaa aaaaaaagaa 90 <210> 21 <211> 90 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo90-2 <400> 21 gggggggagg gggggggagg gggggggagg gggggggagg gggggggagg gggggggagg 60 gggggggagg gggggggagg gggggggagg 90 <110> Missionary Benedictine sisters of Tutzing Daegu priory <120> Oligonucleotide having anti-inflammatory effect <130> APC-2019-0452 <150> KR 10-2019-0028575 <151> 2019-03-13 <150> KR 10-2019-0116657 <151> 2019-09-23 <160> 21 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo 100 <400> 1 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 30 <210> 2 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo 27 <400> 2 aaagaaagaa agaaagaaag aaagaaagag 30 <210> 3 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo 50 <400> 3 agagagagag agagagagag <210> 4 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo 73 <400> 4 agggagggag ggagggaggg agggagggag 30 <210> 5 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo 10 <400> 5 agggagggag gggggggggg gggggggggg 30 <210> 6 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo 0 <400> 6 gggggggggg gggggggggg gggggggggg 30 <210> 7 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo25-1 <400> 7 agggagggag ggagggaggg agggagggag 30 <210> 8 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo25-2 <400> 8 ggggaggagg gaggaggggg agagagggga 30 <210> 9 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo25-3 <400> 9 agggggggggg agggagaggg aagaggggga 30 <210> 10 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo25-4 <400> 10 gggagagagg agagggaggg aggagggggg 30 <210> 11 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 15bp Oligo25 <400> 11 agggagggag ggagg 15 <210> 12 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 45bp Oligo25 <400> 12 agggagggag ggagggaggg agggagggag ggagggaggg ag 42 <210> 13 <211> 60 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 63bp Oligo25 <400> 13 agggagggag ggagggaggg agggagggag ggagggaggg aggggaggga gggagggagg 60 60 <210> 14 <211> 75 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 78bp Oligo25 <400> 14 agggagggag ggagggaggg agggagggag ggagggaggg aggggaggga gggagggagg 60 gagggaggga gggag 75 <210> 15 <211> 4 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo4-1 <400> 15 gagg 4 <210> 16 <211> 4 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo4-2 <400> 16 agaa 4 <210> 17 <211> 99 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo99-1 <400> 17 agaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaagaaaaaa aaaaaaaaaaa aaaaagaaaa aaaaaaaaaa 60 aaaaaaagaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaag aaaaaaaaa 99 <210> 18 <211> 99 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo99-2 <400> 18 gagggggggg gggggggggg gggagggggg gggggggggg gggggagggg gggggggggg 60 gggggggagg gggggggggg ggggggggga ggggggggg 99 <210> 19 <211> 96 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo96-1 <400> 19 gagaggggga gaggggggag aggggggagag ggggagaggg ggagaggggg agagggggag 60 aggggggagag ggggagaggg ggagagggga gagggg 96 <210> 20 <211> 90 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo90-1 <400> 20 aaaaaaagaa aaaaaaagaa aaaaaaagaa aaaaaaagaa aaaaaaagaa aaaaaaagaa 60 aaaaaaagaa aaaaaaagaa aaaaaaagaa 90 <210> 21 <211> 90 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Oligo90-2 <400> 21 gggggggagg gggggggagg gggggggagg gggggggagg gggggggagg gggggggagg 60 gggggggagg gggggggagg gggggggagg 90

Claims

아데노신 및 구아노신의 비율이 94:5 내지 5:94의 범위이며,
서열번호 11의 염기서열로 이루어지는 올리고뉴클레오티드를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
the ratio of adenosine and guanosine ranges from 94:5 to 5:94,
A pharmaceutical composition for preventing or treating an inflammatory disease comprising an oligonucleotide consisting of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 11 as an active ingredient.

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제1항에 있어서,
LPS에 의한 세포독성을 완화시키는, 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
According to claim 1,
Alleviating cytotoxicity caused by LPS, a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammatory diseases.

제1항에 있어서,
산화질소(NO)의 생성을 저해하는, 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
According to claim 1,
Inhibiting the production of nitric oxide (NO), a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammatory diseases.

제1항에 있어서,
염증성 사이토카인의 생성을 저해하는, 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
According to claim 1,
A pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory diseases, which inhibits the production of inflammatory cytokines.

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제1항에 있어서,
상기 염증성 질환은 뇌 염증성 질환 또는 골 관절염인, 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
According to claim 1,
The inflammatory disease is a brain inflammatory disease or osteoarthritis, a pharmaceutical composition for preventing or treating an inflammatory disease.

제8항에 있어서,
상기 뇌 염증성 질환은 뇌졸중, 헌팅턴병, 시신경척수염 스펙트럼 장애, 운동신경성질환, 파킨슨병, 알츠하이머병 및 다발성 경화증을 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.

9. The method of claim 8,
The brain inflammatory disease is stroke, Huntington's disease, optic neuromyelitis spectrum disorder, motor neuron disease, Parkinson's disease, Alzheimer's disease and a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammatory diseases, including multiple sclerosis.