KR102367436B1 - 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃의 혼합 발효물을 포함하는 조성물 및 그의 피부 상태 개선 용도 - Google Patents

어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃의 혼합 발효물을 포함하는 조성물 및 그의 피부 상태 개선 용도 Download PDF

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정용문
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정용문
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Abstract

어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃의 혼합 발효물을 포함하는 조성물 및 그의 피부 상태 개선 용도에 관한 것이다. 일 양상에 따른 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃의 혼합 발효물을 포함하는 조성물은 피부 노화 방지, 피부 주름 개선, 피부 탄력 증진, 피부 염증 개선, 피부 진정 등 피부 관련 상태의 예방, 개선, 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃의 혼합 발효물을 포함하는 조성물 및 그의 피부 상태 개선 용도{Composition comprising mixed fermented product of young trifoliate orange, young green tea and bitter orange flower, and its use for improving skin condition}
어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃의 혼합 발효물을 포함하는 화장료 조성물, 식품 조성물, 약학적 조성물, 및 그의 피부 상태 개선 용도에 관한 것이다.
기능성 화장품은 피부 미백, 주름 개선, 자외선 차단, 여드름 완화, 아토피 완화, 피부 진정 등의 특정 기능이 강화된 화장품이다. 한 가지 기능에 특화된 제품뿐만 아니라 다양한 기능을 하는 복합 기능 화장품이 개발되면서 사용의 간편성이 높아지고 있다.
그러나, 화장품에 기능성을 부여하기 위해 화학 성분을 첨가할 경우 피부에 오히려 악영향을 미치기도 하기 때문에, 최근에는 천연 화장품 개발에 대한 관심이 증가하고 있다. 천연 화장품은 동식물 및 그 유래 원료를 사용한 화장품이며, 피부에 안전하고 자극이 없다는 장점이 있다. 천연 화장품의 일례로 다양한 식물 혼합 추출물을 사용한 화장품이 개발되고 있다(특허문헌 1).
따라서, 피부 관련된 상태에 유용하게 사용될 수 있는 천연물 유래 성분의 지속적인 개발이 필요하다.
KR 10-0967018 B1
어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃의 혼합 발효물을 포함하는 조성물을 제공한다.
상기 발효물을 제조하는 방법을 제공한다.
유효량의 상기 발효물 또는 이를 포함하는 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 개체의 피부 상태를 개선하는 방법을 제공한다.
피부 상태 개선용 조성물을 제조하는데 사용하기 위한 상기 발효물의 용도를 제공한다.
피부 염증성 질환 예방 또는 치료용 약제를 제조하는데 사용하기 위한 상기 발효물의 용도를 제공한다.
일 양상은 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃의 혼합 발효물을 포함하는 조성물을 제공한다.
용어 "탱자(trifoliate orange)"는 탱자나무(Poncirus trifoliata)의 열매를 말한다. "어린탱자"는 탱자가 노란색으로 익어가기 전 초록색일 때를 의미하는 것으로, "지실"이라고도 한다.
용어 "녹차(green tea)"는 일반적으로 찻잎 또는 찻잎을 사용해 만든 차를 가리킨다. "어린녹차"는 차나무의 어린 잎을 말한다.
용어 "비터오렌지꽃(Citrus aurantium var. amara (Bitter Orange) Flower)"은 비터오렌지의 꽃을 의미한다.
상기 발효물은 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃을 포함하는 혼합물을 발효시켜 수득한 것일 수 있다.
상기 발효물은 어린탱자 추출물, 어린녹차 추출물 및 비터오렌지꽃 추출물의 혼합 발효물일 수 있다. 상기 추출물은 공지된 방법에 따라 통상적인 추출 용매를 사용하여 각 식물체 원물로부터 추출된 것일 수 있다. 상기 추출 용매는 물, 알코올, 이들의 조합 등일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, 상기 추출물은 열수추출물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃의 혼합 중량비 또는 부피비는 특정 중량비 또는 부피비에 제한되지 않는다. 일 구체예에서, 상기 발효물은 어린탱자 추출물, 어린녹차 추출물 및 비터오렌지꽃 추출물을 1~100:1~100:1~100, 1~50:1~50:1~50, 1~20:1~20:1~20, 1~10:1~10:1~10, 또는 1~5:1~5:1~5, 예를 들어, 3:1:1의 부피비로 포함하는 혼합물을 발효시켜 수득한 것일 수 있다.
상기 발효물은 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃을 미생물에 의해 발효시켜 수득할 수 있다.
상기 미생물은 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.) 및 바실러스 속(Bacillus sp.)으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 미생물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.) 미생물은 특정 종류에 제한되지 않으나, 예를 들어, 락토바실러스 애시도필러스(L. acidophilus), 락토바실러스 카제이(L. casei), 락토바실러스 가세리(L. gasseri), 락토바실러스 델부르키 불가리쿠스(L. delbrueckii ssp. bulgaricus), 락토바실러스 헬베티쿠스(L. helveticus), 락토바실러스 퍼멘텀(L. fermentum), 락토바실러스 파라카제이(L. paracasei), 락토바실러스 플란타럼(L. plantarumm), 락토바실러스 류테리(L. reuteri), 락토바실러스 람노서스(L. rhamnosus), 및 락토바실러스 살리바리우스(L. salivarius)로 이루어진 군으로부터 선택된 것일 수 있다.
상기 바실러스 속(Bacillus sp.) 미생물은 자연계에 널리 분포하는 호기성 또는 통성 혐기성 간균을 모두 포함한다. 상기 바실러스 속 미생물은 특정 종류에 제한되지 않으나, 예를 들어, 바실러스 서브틸리스(B. subtilis), 바실러스 코아귤란스(B. coagulans), 바실러스 벨레젠시스(B. velezensis), 바실러스 리케니포르미스(B. licheniformis), 바실러스 폴리퍼멘티쿠스(B. polyfermenticus), 바실러스 메틸로트로피쿠스(B. methylotrophicus), 및 바실러스 아밀로리퀘파시엔스(B. amyloliquefaciens)로 이루어진 군으로부터 선택된 것일 수 있다.
상기 발효 조건은 미생물의 종류에 따라 적절한 온도 및 시간을 선택할 수 있다. 예를 들어, 상기 발효는 20 내지 40℃, 또는 30 내지 40℃에서 수행될 수 있으나, 특별히 이에 제한되지 않는다. 또한, 상기 발효는 1 내지 200시간, 1 내지 180시간, 24 내지 200시간, 24 내지 180시간, 24 내지 120시간, 48 내지 200시간, 48 내지 180시간, 또는 48 내지 120시간 동안 수행될 수 있으나, 특별히 이에 제한되지 않는다.
상기 발효 배지는 미생물의 종류에 따라 적절히 선택할 수 있다. 상기 배지는 미생물의 종류에 따라 그 미생물을 배양할 수 있는 공지된 배지 또는 통상적인 배지를 사용할 수 있다. 예를 들어, 상기 배지는 포도당, 이스트 추출물, 말트 추출물, 펩톤, 글루탐산, K2HPO4, KH2PO4, NaCl 중 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
일 구체예에서, 상기 미생물이 락토바실러스 속 미생물인 경우, 배지는 포도당, 펩톤, 및 이스트추출물을 포함할 수 있다.
다른 구체예에서, 상기 미생물이 바실러스 속 미생물인 경우, 배지는 포도당, 펩톤, 이스트추출물, 글루탐산, K2HPO4, 및 KH2PO4를 포함할 수 있다.
상기 발효물은 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃을 미생물에 의해 발효시켜 수득한 발효액, 상기 발효액의 희석액 또는 농축액, 상기 발효액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물, 이를 분획한 분획물 등을 포함할 수 있다.
상기 발효물은 전체 조성물 대비 0.0001 내지 99.9999%(v/v), 0.0001 내지 90%(v/v), 0.0001 내지 50%(v/v), 0.0001 내지 10%(v/v), 0.001 내지 99.9999%(v/v), 0.001 내지 90%(v/v), 0.001 내지 50%(v/v), 0.001 내지 10%(v/v), 0.01 내지 99.9999%(v/v), 0.01 내지 90%(v/v), 0.01 내지 50%(v/v), 0.01 내지 20%(v/v), 0.01 내지 10%(v/v), 0.1 내지 99.9999%(v/v), 0.1 내지 90%(v/v), 0.1 내지 50%(v/v), 0.1 내지 20%(v/v), 또는 0.1 내지 10%(v/v)로 포함될 수 있으나, 특별히 이에 제한되지 않는다.
용어 "유효성분으로 포함"은 상기에서 언급한 효과를 나타낼 수 있는 정도로 본 명세서의 발효물이 첨가되는 것을 의미한다. 또한, 이는 약물전달 및 안정화 등을 위하여 다양한 성분을 부성분으로 첨가하여 다양한 형태로 포뮬레이션(formulation)되는 것을 포함할 수 있다.
상기 조성물은 피부 상태 개선용, 피부 미용 개선용, 피부 질환 예방, 개선 또는 치료용 조성물일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 조성물은 피부 상태 개선용일 수 있다.
상기 피부 상태 개선은 피부 노화 방지, 피부 주름 개선, 피부 탄력 증진, 피부 염증 개선, 피부 진정, 또는 이들의 2 이상의 조합일 수 있다.
용어 "피부 노화"란 나이가 들어가면서 피부에 나타나게 되는 유형과 무형상의 변화를 통틀어 말하는 것으로, 예컨대 표피 두께가 얇아지는 현상, 진피의 세포 수나 혈관 수, DNA 손상복구 능력, 세포교체주기, 상처 회복, 피부 장벽 기능, 표피의 수분 유지, 땀분비, 피지분비, 비타민D 생산, 물리적 손상방어, 화학물질 제거능력, 면역반응, 감각 기능, 체온조절의 감소를 말한다.
상기 발효물은 외인성 요인 또는 내인성 요인에 의해 유발되는 피부 노화 방지용, 피부 노화 개선용, 또는 항노화용일 수 있다. 상기 외인성 요인은 여러 가지 외부 요인, 예컨대 자외선(광)을 말한다. 상기 내인성 요인은 연대기적 요인이라고도 지칭되며 주로 시간의 흐름에 의해 발생하는 요인을 말한다. 즉, 상기 피부 노화는 구체적으로는 자외선, 공해, 담배연기, 화학물질 등에 의한 외부 자극에 의해 유도되는 조기 노화 증상뿐만 아니라, 나이가 들어감에 의해 피부세포의 증식이 감소함에 따라 발생하는 자연 노화 현상, 즉, 연령에 의한 피부 노화를 포함하며, 주름, 탄력 감소, 피부 처짐 및 건조 현상 등을 모두 포함하는 개념이다. 또한, 주름은 내ㆍ외부 요인의 변화에 의한 자극이 피부조직을 구성하고 있는 성분을 변화시켜 주름을 유발하는 것을 포함한다.
상기 노화는 광노화일 수 있다. 용어 "광노화(Photoaging)"는 외부 환경적인 요인에 의해 유발되는 현상으로, 가장 대표적인 인자로는 자외선이 있다. 자외선은 단백질 분해효소의 활성화와 기질단백질의 사슬절단 및 비정상적인 교차결합 등의 생체 구성 성분들의 손상을 가져오고, 이러한 메커니즘의 반복은 외관상으로도 확연한 피부 노화를 초래하게 된다. 따라서, 상기 조성물은 자외선B(ultraviolet B, UVB)에 의한 광노화 예방, 개선, 또는 치료용일 수 있다.
용어 "피부 주름 개선"은 피부의 주름의 수를 감소시키거나 깊이를 감소시키는 작용을 의미할 뿐만 아니라, 주름 개선을 통하여 피부 노화를 억제하는 것도 포함하는 것으로 해석된다.
용어 "피부 탄력 증진"은 노화 등의 원인에 의해 저하된 피부 탄력이 증가하거나 피부 탄력의 저하를 방지하는 모든 작용을 의미할 수 있다.
용어 "피부 염증"은 피부에 발생한 염증을 의미한다.
용어 "피부 염증 개선"이란 "항염증"과 혼용될 수 있으며, 피부 염증을 감소 또는 개선시키거나, 피부 염증의 발생을 예방 또는 억제하는 모든 작용을 의미한다.
용어 "피부 진정"은 자극받은 피부의 열감이나 통증 따위를 가라앉히고 안정되게 하는 모든 작용을 의미한다. 상기 피부 진정은 염증에 의해 민감해진 피부를 가라앉히는 것을 포함할 수 있다.
용어 "피부 질환"은 피부 노화에 의한 질환 또는 피부 염증성 질환일 수 있다. 용어 "예방"은 질병의 발생을 억제하는 것을 포함한다. 용어 "치료"는 질병의 발전의 억제, 경감, 또는 제거를 포함한다.
상기 피부 노화에 관한 상세는 상술한 바와 같다. 따라서, 상기 피부 노화는 광노화, 또는 연령에 의한 피부 노화일 수 있다.
상기 피부 염증성 질환은 피부 상처, 피부염, 아토피 피부염, 소양증, 습진성 피부질환, 건성 습진, 홍반, 두드러기, 건선, 약발진, 및 여드름으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것일 수 있다.
상기 조성물은 프로콜라겐(procollagen)의 발현을 증가시킬 수 있다. 일반적으로 피부 세포의 주름과 관련된 콜라겐은 프로콜라겐이라는 전구 물질의 형태로 합성된다고 알려져 있다. 따라서, 프로콜라겐 펩타이드의 양을 측정함으로써, 세포 내에서의 콜라겐 합성 정도를 파악할 수 있다. 상기 조성물은 프로콜라겐의 발현을 증가시킴으로써 피부 주름 개선 및 피부 탄력 증진 효과를 나타내고, 그에 따라 피부 노화 방지 효과를 나타낼 수 있다.
상기 조성물은 산화질소 생성을 억제하거나, TNF-α의 발현을 억제할 수 있다. 따라서, 상기 조성물은 피부 염증 개선 및 피부 진정 효과를 나타낼 수 있다.
따라서, 상기 조성물은 프로콜라겐의 발현을 증가시키거나, 산화질소 생성을 억제하거나, TNF-α의 발현을 억제할 수 있다.
일 실시예에서, 상기 발효물은 피부 주름 개선 효과, 피부 탄력 증진 효과, 피부 노화 방지 효과, 항염증 효과 및 피부 진정 효과가 우수함을 확인하였다. 구체적으로, 어린탱자, 어린녹차, 비터오렌지꽃 각각의 추출물 또는 이들을 모두 포함하는 추출물에 비해, 어린탱자, 어린녹차, 비터오렌지꽃의 혼합 발효물이 피부 주름 개선 효과, 피부 탄력 증진 효과, 피부 노화 방지 효과, 항염증 효과 및 피부 진정 효과가 우수함을 확인하였다. 또한, 발효 미생물로서 락토바실러스 속, 바실러스 속 미생물을 사용할 경우 모두 효과가 우수하였으나, 특히 락토바실러스 속 미생물을 사용할 경우 가장 우수한 효과를 나타내었다.
상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.
상기 화장료 조성물은 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들면, 상기 화장료 조성물은 화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 앰플, 바디 로션, 바디 오일, 바디 젤, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 젤, 파운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스, 또는 피부 점착 타입의 화장료 제형을 갖는 것일 수 있다. 상기 피부 점착 타입의 화장료 제형은 예를 들어, 마스크팩일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 조성물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있다.
또한, 상기 조성물은 피부외용제용 조성물일 수 있다.
상기 피부외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제, 또는 이들의 조합과 필요에 따라서 적절하게 배합될 수 있다. 상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산인산마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류등도 적절하게 배합할 수 있다.
상기 조성물은 식품 조성물일 수 있다. 상기 조성물은 건강기능식품 조성물일 수 있다.
상기 식품 조성물은 상기 발효물 단독, 또는 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 상기 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 건강기능식품의 종류 중 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 건강식품 조성물은 또한 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제, 또는 그 조합을 함유할 수 있다. 상기 건강기능식품 조성물은 또한, 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육, 또는 그 조합을 함유할 수 있다.
상기 조성물은 약학적 조성물일 수 있다.
일 구체예에서, 상기 약학적 조성물은 피부 염증성 질환 예방 또는 치료용일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 추가적으로 포함할 수 있다. 상기 희석제는 유당, 옥수수 전분, 대두유, 미정질 셀룰로오스, 또는 만니톨, 활택제로는 스테아린산 마그네슘, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 담체는 부형제, 붕해제, 결합제, 활택제, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 부형제는 미결정 셀룰로오즈, 유당, 저치환도 히드록시셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 붕해제는 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 전분글리콜산 나트륨, 무수인산일수소 칼슘, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 결합제는 폴리비닐피롤리돈, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오즈, 히드록시프로필셀룰로오즈, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 활택제는 스테아린산 마그네슘, 이산화규소, 탈크, 또는 그 조합일 수 있다.
상기 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여 제형으로 제형화될 수 있다. 경구 투여 제형은 과립제, 산제, 액제, 정제, 캅셀제, 건조시럽제, 또는 그 조합일 수 있다. 비경구 투여 제형은 주사제일 수 있다.
다른 양상은 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃의 복합 발효물을 제조하는 방법을 제공한다.
상기 방법은, 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃의 조합을 미생물과 인큐베이션하여 발효물을 수득하는 단계를 포함한다.
상기 발효물을 수득하는 단계는, 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃을 배지에 첨가하고 살균하는 단계; 및 상기 배지에 미생물을 접종하고 인큐베이션하여 발효물을 수득하는 단계를 포함할 수 있다.
상기 어린탱자, 어린녹차, 비터오렌지꽃, 배지, 미생물, 및 발효물에 관한 상세는 상술한 바와 같다.
상기 어린탱자, 어린녹차, 비터오렌지꽃은 배지 전체 부피에 대해 각각 0.01 내지 20%(v/v), 또는 0.1 내지 10%(v/v)로 첨가할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 살균은 공지된 통상적인 방법을 사용할 수 있다.
상기 미생물은 발효가 일어날 수 있도록 충분한 양을 사용할 수 있으며, 이는 발효 원료의 양 등을 고려하여 당업자가 적절히 선택할 수 있다.
상기 인큐베이션 온도 및 시간은 발효가 일어날 수 있도록 충분한 온도 및 시간을 선택할 수 있으며, 이는 발효 원료의 양, 미생물의 종류 등을 고려하여 당업자가 적절히 선택할 수 있다. 예를 들어, 상기 인큐베이션은 20 내지 40℃에서 수행될 수 있으나, 특별히 이에 제한되지 않는다. 또한, 상기 인큐베이션은 1 내지 200시간, 1 내지 180시간, 24 내지 200시간, 24 내지 180시간, 24 내지 120시간, 48 내지 200시간, 48 내지 180시간, 또는 48 내지 120시간 동안 수행될 수 있으나, 특별히 이에 제한되지 않는다.
상기 발효는 미생물을 배양할 수 있는 배지에서 수행될 수 있다. 상기 배지는 미생물의 종류에 따라 그 미생물을 배양할 수 있는 공지된 배지 또는 통상적인 배지를 사용할 수 있다. 미생물의 종류에 따른 예시적인 배지 성분은 상술한 바와 같다.
상기 방법은, 상기 발효물로부터 균체를 분리하는 단계를 더 포함할 수 있다. 상기 균체의 분리는 공지된 통상적인 방법을 사용할 수 있으며, 예를 들어, 정치, 원심분리, 이들의 조합 등을 사용할 수 있다.
상기 방법은, 상기 발효물을 여과하는 단계를 더 포함할 수 있다. 상기 여과는 공지된 통상적인 방법을 사용할 수 있다.
다른 양상은 유효량의 상기 발효물 또는 이를 포함하는 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 개체의 피부 상태를 개선하는 방법을 제공한다.
상기 발효물, 조성물, 피부 상태 개선에 관한 상세는 상술한 바와 같다.
용어 "유효량"이란 상기에서 언급한 효과를 나타낼 수 있을 정도로 유효한 양을 의미한다.
용어 "투여하는", "도입하는", 및 "이식하는"은 상호교환적으로 사용되고 일 구체예에 따른 조성물의 원하는 부위로의 적어도 부분적 국소화를 초래하는 방법 또는 경로에 의한 개체 내로의 일 구체예에 따른 조성물의 배치를 의미할 수 있다.
투여는 당업계에 알려진 방법에 의하여 투여될 수 있다. 투여는 예를 들면, 정맥내, 근육내, 경구, 경피(transdermal), 점막, 코안(intranasal), 기관내(intratracheal) 또는 피하 투여와 같은 경로로, 임의의 수단에 의하여 개체로 직접적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 피부에 도포하는 것일 수 있다.
상기 개체는 포유동물, 예를 들면, 사람, 소, 말, 돼지, 개, 양, 염소, 또는 고양이일 수 있다. 상기 개체는 피부 상태 개선, 예를 들어 피부 노화 방지, 피부 주름 개선, 피부 탄력 증진, 피부 염증 개선, 또는 피부 진정을 필요로 하는 개체일 수 있다.
투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있고, 당업자라면 이러한 요인들을 고려하여 투여량을 적절히 조절할 수 있다. 투여 횟수는 1일 1회 또는 임상적으로 용인가능한 부작용의 범위 내에서 2회 이상이 가능하고, 투여 부위에 대해서도 1개소 또는 2개소 이상에 투여할 수 있으며, 매일 또는 2 내지 5일 간격으로 총 투여 일수는 한번 치료 시 1일에서 30일까지 투여될 수 있다. 필요한 경우, 적정 시기 이후에 동일한 치료를 반복할 수 있다. 인간 이외의 동물에 대해서도, kg당 인간과 동일한 투여량으로 하거나, 또는 예를 들면 목적의 동물과 인간과의 기관(심장 등)의 용적비(예를 들면, 평균값) 등으로 상기의 투여량을 환산한 양을 투여할 수 있다.
다른 양상은 피부 상태 개선용 조성물을 제조하는데 사용하기 위한 상기 발효물의 용도를 제공한다.
다른 양상은 피부 염증성 질환 예방 또는 치료용 약제를 제조하는데 사용하기 위한 상기 발효물의 용도를 제공한다.
상기 피부 상태 개선, 조성물, 발효물 및 피부 염증성 질환에 관한 상세는 상술한 바와 같다.
일 양상에 따른 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃의 혼합 발효물을 포함하는 조성물은 피부 노화 방지, 피부 주름 개선, 피부 탄력 증진, 피부 염증 개선, 피부 진정 등 피부 관련 상태의 예방, 개선, 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 인간 피부 섬유아세포에서 프로콜라겐 생산율을 분석한 결과이다.
도 2는 대식세포에서 산화질소 생성 억제 효과를 확인한 NO assay 결과이다.
도 3은 대식세포에서 TNF-α 수준을 확인한 ELISA 결과이다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1~2. 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃 발효액의 제조
어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃을 미생물에 의해 발효시켜 복합 발효액을 제조하였다. 구체적인 제조 방법은 다음과 같다.
먼저, 제조된 배지에 어린탱자 추출물, 어린녹차 추출물 및 비터오렌지꽃 추출물을 첨가하고 121℃에서 15분간 살균하였다. 각각의 추출물은 열수추출물을 사용하였다. 상기 배지는 접종되는 미생물의 종류에 따라 적절하게 선택되는 것이 바람직하다. 예를 들어, 포도당, 이스트 추출물, 말트 추출물, 펩톤, 글루탐산, K2HPO4, KH2PO4, NaCl 중 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물로 제조된 배지를 사용할 수 있다. 상기 배지에 첨가하는 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃은 각각 0.1%(v/v) 내지 10%(v/v)로 첨가할 수 있으나, 본 실시예에서는 어린탱자 추출물 3%(v/v), 어린녹차 추출물 1%(v/v) 및 비터오렌지꽃 추출물 1%(v/v)를 첨가하였다. 다음으로, 살균된 배지에 미생물을 접종한 후, 30 내지 40℃ 조건에서 150rpm으로 교반하며 72시간 동안 발효를 진행하였다. 다음으로, 상기 발효된 발효물을 여과 및 수득하는 단계를 수행하였다. 발효 종료 후 원심분리를 통해 분리함으로써, 균체 및 발효 잔여물을 분리하였고, 0.45㎛ 여과를 거쳐 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃 혼합 발효물을 제조하였다.
실시예 1 및 2에서 사용한 배지 조성, 추출물 첨가량 및 미생물 종류를 하기 표 1에 나타내었다.
함량 (%(v/v))
성분 실시예 1 실시예 2
포도당 2 2
펩톤 1 0.5
이스트 추출물 4 0.5
글루탐산 - 0.5
K2HPO4 - 0.1
KH2PO4 - 0.05
NaCl - -
어린탱자 추출물 3 3
어린녹차 추출물 1 1
비터오렌지꽃 추출물 1 1
물 To 100 To 100
미생물 락토바실러스 속
(Lactobacillus sp.)		 바실러스 속
(Bacillus sp.)
실시예 3~4 및 비교예 1~4. 발효액 또는 추출물을 포함하는 조성물의 제조
하기 표 2와 같은 조성 및 함량(%(v/v))으로 조성물을 제조하였다.
성분 비교예 1 비교예 2 비교예 3 비교예 4 실시예 3 실시예 4 구분
물 Up to 100 Up to 100 Up to 100 Up to 100 Up to 100 Up to 100 증류수
부틸렌글리콜 10 10 10 10 10 10 보습제
1,2-헥산디올 2 2 2 2 2 2 방부제
어린탱자 추출물 3 3
어린녹차 추출물 1 1
비터오렌지꽃 추출물 1 1
실시예 1의 발효액 10
실시예 2의 발효액 10
실시예 3은 어린탱자 열수추출물 3%(v/v), 어린녹차 열수추출물 1%(v/v) 및 비터오렌지꽃 열수추출물 1%(v/v)를 배지에 첨가하고 락토바실러스 속 미생물에 의해 발효시켜 수득한 실시예 1의 발효액을 10%(v/v)로 포함한다.
실시예 4는 어린탱자 열수추출물 3%(v/v), 어린녹차 열수추출물 1%(v/v) 및 비터오렌지꽃 열수추출물 1%(v/v)를 배지에 첨가하고 바실러스 속 미생물에 의해 발효시켜 수득한 실시예 2의 발효액을 10%(v/v)로 포함한다.
비교예 1은 어린탱자 열수추출물 3%(v/v)를 포함한다.
비교예 2는 어린녹차 열수추출물 1%(v/v)를 포함한다.
비교예 3은 비터오렌지꽃 열수추출물 1%(v/v)를 포함한다.
비교예 4는 어린탱자 열수추출물 3%(v/v), 어린녹차 열수추출물 1%(v/v) 및 비터오렌지꽃 열수추출물 1%(v/v)를 포함한다.
즉, 실시예 3 및 4의 경우, 3종 추출물 총합 5%(v/v)를 포함하는 발효액을 전체 조성물 대비 10%(v/v)로 포함시키므로, 3종 추출물 총합 5%(v/v)를 포함하는 비교예 4의 조성물에 비해 유효성분의 양이 1/10 수준으로 감소한 것이다.
실험예 1. 피부 주름 개선, 피부 탄력 증진 및 피부 노화 방지 효과 확인
어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃 혼합 발효물의 피부 주름 개선 및 피부 탄력 증진 효과를 확인하기 위해, 프로콜라겐의 생산 분석을 수행하였다.
구체적으로, 인간 피부 섬유아세포(Human Dermal Fibroblast)에 비교예 1 내지 4, 실시예 3 및 4의 조성물을 처리하고, 프로콜라겐의 상대적인 생산율을 확인하였다. 각 실험군에서 조성물의 처리 농도는 0.1 내지 5.0%(v/v) 범위에서 선택할 수 있으나, 본 실험에서는 1%(v/v)로 사용하였다. 상기 조성물을 처리하지 않은 군(MO: media only)을 음성대조군으로, TGF-β를 처리한 군을 양성대조군으로 하였다.
도 1은 인간 피부 섬유아세포에서 프로콜라겐 생산율을 분석한 결과이다.
그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 어린탱자, 어린녹차, 비터오렌지꽃 각각의 추출물을 포함하는 비교예 1 내지 3과 어린탱자 추출물, 어린녹차 추출물 및 비터오렌지꽃 추출물을 모두 포함하는 비교예 4는 프로콜라겐 합성 효과가 거의 없었다. 반면, 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃 혼합 발효물을 포함하는 실시예 3 및 4는 음성대조군에 비해 프로콜라겐의 합성을 증가시킴을 확인하였다. 실시예 3 및 4는 비교예 4에 비해 유효성분의 양이 1/10 수준임에도 불구하고 효능이 더 뛰어났으므로, 더 적은 함량으로 우수한 효과를 나타낸다고 볼 수 있다. 특히, 락토바실러스 속 미생물을 사용한 발효물을 포함하는 실시예 3은 프로콜라겐 합성 증가 효과가 가장 우수하였다.
상기 결과로부터, 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃의 혼합 발효물은 프로콜라겐 합성을 증가시켜, 현저히 우수한 피부 주름 개선 효과 및 피부 탄력 증진 효과를 나타내며, 그에 따라 피부 노화 방지 효과가 있음을 확인할 수 있다.
실험예 2. 항염증 및 피부 진정 효과 확인
어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃 혼합 발효물의 항염증 효과를 확인하기 위해, NO assay (Nitric oxide Reduction Assay) 및 TNF-α 수준(level) 분석을 수행하였다.
구체적으로, 대식세포(Macrophage)에 LPS(liposaccharides)를 처리한 후, 비교예 1 내지 4, 실시예 3 및 4의 조성물을 처리하였다. 각 실험군에서 조성물의 처리 농도는 0.1 내지 5.0%(v/v) 범위에서 선택할 수 있으나, 본 실험에서는 1%(v/v)로 사용하였다. NO assay에 의해 산화질소 생성 억제 효과를 확인하였으며, ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)에 의해 전염증성 사이토카인(Pro-inflammatory cytokine) TNF-α 수준을 확인하였다. 상기 조성물을 처리하지 않은 군(MO: media only)을 음성대조군으로, LPS만을 처리한 군을 양성대조군으로 하였다.
도 2는 대식세포에서 산화질소 생성 억제 효과를 확인한 NO assay 결과이다.
도 3은 대식세포에서 TNF-α 수준을 확인한 ELISA 결과이다.
그 결과, 도 2 및 도 3에 나타낸 바와 같이, 어린탱자, 어린녹차, 비터오렌지꽃 각각의 추출물을 포함하는 비교예 1 내지 3과 어린탱자 추출물, 어린녹차 추출물 및 비터오렌지꽃 추출물을 모두 포함하는 비교예 4에 비해, 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃 혼합 발효물을 포함하는 실시예 3 및 4는 산화질소 생성 억제 효과 및 TNF-α 감소 효과가 매우 우수하였다. 실시예 3 및 4는 비교예 4에 비해 유효성분의 양이 1/10 수준임에도 불구하고 효능이 더 뛰어났으므로, 더 적은 함량으로 우수한 효과를 나타낸다고 볼 수 있다. 특히, 락토바실러스 속 미생물을 사용한 발효물을 포함하는 실시예 3은 산화질소 생성 억제 효과 및 TNF-α 감소 효과가 가장 우수하였다.
상기 결과로부터, 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃의 혼합 발효물은 현저히 우수한 항염증 효과 및 이를 통한 피부 진정 효과가 있음을 확인할 수 있다.
종합하면, 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃의 혼합 발효물은 피부 주름 개선 효과, 피부 탄력 증진 효과, 피부 노화 방지 효과, 항염증 효과 및 피부 진정 효과가 우수함을 알 수 있었다.

Claims (9)

  1. 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃의 혼합 발효물을 포함하고,
    상기 발효물은 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.) 또는 바실러스 속(Bacillus sp.)의 미생물에 의해 발효시켜 수득하는 것이며,
    프로콜라겐의 발현을 증가시키는 것인, 화장료 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 발효물은 어린탱자 추출물, 어린녹차 추출물 및 비터오렌지꽃 추출물의 혼합 발효물인 것인 화장료 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 발효물은 어린탱자 추출물, 어린녹차 추출물 및 비터오렌지꽃 추출물을 1~10:1~10:1~10의 부피비로 포함하는 혼합물을 발효시켜 수득한 것인 화장료 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서, 피부 노화 방지, 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진용인 것인 화장료 조성물.
  5. 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃의 혼합 발효물을 포함하고,
    상기 발효물은 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.) 또는 바실러스 속(Bacillus sp.)의 미생물에 의해 발효시켜 수득하는 것이며,
    산화질소 생성을 억제하거나, TNF-α의 발현을 억제하는 것인, 화장료 조성물.
  6. 청구항 5에 있어서, 피부 염증 개선 또는 피부 진정용인 것인 화장료 조성물.
  7. 삭제
  8. 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃의 혼합 발효물을 포함하고,
    상기 발효물은 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.) 또는 바실러스 속(Bacillus sp.)의 미생물에 의해 발효시켜 수득하는 것인, 피부 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  9. 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃의 조합을 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.) 또는 바실러스 속(Bacillus sp.)의 미생물과 인큐베이션하여 발효물을 수득하는 단계를 포함하는, 어린탱자, 어린녹차 및 비터오렌지꽃의 복합 발효물을 제조하는 방법으로서,
    상기 발효물은 프로콜라겐의 발현을 증가시키거나, 산화질소 생성을 억제하거나, TNF-α의 발현을 억제하는 것인, 방법.
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