KR102364721B1 - Biomarker composition for diagnosis of glioblastoma - Google Patents
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Abstract
교모종줄기세포 엑소좀 유래 miRNA를 포함하는 교모세포종 진단용 바이오마커들에 관한 것으로, 본 발명의 교모종줄기세포 엑소좀 유래의 교모세포종 특이적 마커인 miRNA는 교모세포종의 암줄기세포능에 특이적으로 그 발현이 증가하거나 감소하므로 이들을 교모세포종의 암줄기세포 특이적인 바이오마커로서 유용하게 사용할 수 있다.It relates to biomarkers for diagnosing glioblastoma including glioblastoma stem cell exosome-derived miRNA. Since their expression is increased or decreased, they can be usefully used as cancer stem cell-specific biomarkers of glioblastoma.
Description
본 발명은 교모세포종 진단용 바이오마커 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a biomarker composition for diagnosing glioblastoma.
신경교종 (glioma)은 원발성 뇌종양 (primary brain tumor)의 60%를 차지하는 종양으로 현재까지도 방사선 치료외엔 특별한 치료법이 없는 악성 종양이다. 특히 가장 악성으로 분류되는 교모세포종 (glioblastoma)은 다른 암과 비교하여 방사선 및 항암제 치료에 대한 저항성이 매우 높아 일단 진단되면 기대 생존기간이 1년에 불과하다. 악성 교모세포종은 전체 뇌종양의 12~15%를 차지하고, 뇌 교종의 50~60%를 차지하는 뇌에 발생하는 단일 종양 중 가장 많이 발생하는 종양이다. 또한, 뇌혈관 장벽이 있어 약물의 전달이 쉽지 않고, 상대적으로 뇌신경 생물학에 대한 이해의 부족 때문에 치료제 개발에서 소외된 분야이기도 하다.Glioma is a malignant tumor that accounts for 60% of primary brain tumors and has no specific treatment other than radiation therapy to date. In particular, glioblastoma, which is classified as the most malignant, has very high resistance to radiation and chemotherapy compared to other cancers, and once diagnosed, the expected survival period is only one year. Malignant glioblastoma accounts for 12-15% of all brain tumors and is the most common single tumor occurring in the brain, accounting for 50-60% of gliomas. In addition, because there is a cerebrovascular barrier, drug delivery is not easy, and it is a field neglected in the development of therapeutic agents due to a relatively lack of understanding of brain neurobiology.
교모세포종 (Glioblastoma multiforme, GBM)에서 중간엽 서브타입 (Mesenchymal subtype)으로의 분화는 종양형 성능을 촉진시켜 다른 서브타입에 비해 확연한 환자 예후 불량을 보인다 (Phillips, H.S., et al., Cancer cell 9:157-173, 2006; Verhaak, R.G., et al., Cancer cell 17:98-110, 2010). 중간엽 (MES) 표현형으로의 이동으로 인해 종양의 공격성이 강해져 재발시 예후가 좋지 않으며, 이러한 중간엽 교모세포종 (Mesenchymal GBM)으로의 분화 과정에서 종양 관련 대식세포 (Tumor-Associated Macrophage; TAM)의 침습이 증가되어 있다.Differentiation from Glioblastoma multiforme (GBM) to a mesenchymal subtype promotes tumorigenic performance, resulting in a markedly poorer prognosis for patients compared to other subtypes (Phillips, HS, et al., Cancer cell 9 :157-173, 2006; Verhaak, RG, et al., Cancer cell 17:98-110, 2010). Due to the migration to the mesenchymal (MES) phenotype, the aggression of the tumor becomes stronger and the prognosis is poor at recurrence. Invasion is increased.
한편, 엑소좀은 대부분의 세포에서 분비되는 작은 형태의 소포체(membrane vesicle)이다. 엑소좀 안에는 그 세포에서 유래된 다양한 종류의 단백질, 유전물질(DNA, mRNA, miRNA), 지질 등이 포함되어 있는 것으로 보고되었다. 또한, 조직 유래 엑소좀은 엑소좀을 분비한 조직의 상태를 반영하기 때문에, 질병의 진단에 이용될 수 있음이 보고된 바 있다. 엑소좀 유래 물질 중에서도 특히 miRNA는 폭넓은 생물학적 과정들에 대해 깊은 영향을 주는 조절성 RNA의 중요한 신규한 부류로서 대두되었다. 이들 소형 비(非)암호화 RNA 분자는 RNA 분해 촉진, mRNA 번역 저해, 및 또한 유전자 전사에의 영향을 통해 단백질 발현 패턴을 조절할 수 있을 뿐 아니라 miRNA는 발달 및 분화, 세포 증식 제어, 스트레스 반응 및 대사작용 등의 다양한 과정에서 중심적 역할을 한다. 다수의 miRNA의 발현이 수많은 유형의 인간 암에서 변화된 상태로 발견되었으며, 일부 경우 그러한 변화가 종양 진행에서 원인적 역할을 할 수 있다는 추측을 지지하는 강력한 증거가 제시되었다. miRNA는 상기와 같은 특징을 가지므로 연구, 진단 및 치료 목적용 바이오 마커로도 이용될 수 있다.On the other hand, exosomes are small types of vesicles secreted by most cells (membrane vesicle). It has been reported that exosomes contain various types of proteins, genetic materials (DNA, mRNA, miRNA), lipids, etc. derived from the cell. In addition, it has been reported that tissue-derived exosomes can be used for diagnosis of diseases because they reflect the state of the tissue that secreted the exosomes. Among exosome-derived materials, miRNAs in particular have emerged as an important novel class of regulatory RNAs with profound implications for a wide range of biological processes. These small non-coding RNA molecules can modulate protein expression patterns through promotion of RNA degradation, inhibition of mRNA translation, and also effects on gene transcription, as well as miRNAs in development and differentiation, control of cell proliferation, stress response and metabolism. It plays a central role in various processes such as action. The expression of multiple miRNAs has been found to be altered in numerous types of human cancer, and in some cases strong evidence has been provided to support the speculation that such alterations may have a causative role in tumor progression. Since miRNA has the above characteristics, it can be used as a biomarker for research, diagnosis and treatment purposes.
이에 본 발명자는 교모세포종 진단용 바이오마커 조성물 및 이를 이용한 진단 방법을 개발하기 위한 연구를 지속한 결과, 교모종줄기세포 모사 GBM(glioblastoma) 엑소좀 유래 miRNA를 선별하여, 본 발명의 miRNA를 교모세포종을 진단 및 예측에 이용할 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다. Accordingly, the present inventors continued research to develop a biomarker composition for diagnosing glioblastoma and a diagnostic method using the same. As a result, miRNAs derived from glioblastoma-mimicking GBM (glioblastoma) exosomes were selected, and the miRNA of the present invention was used to treat glioblastoma. The present invention was completed by confirming that it can be used for diagnosis and prediction.
본 발명의 목적은 교모종줄기세포 모사 GBM(glioblastoma) 엑소좀에서 유래한 miRNA를 포함하는 교모세포종 진단 또는 예후 예측용 바이오마커 조성물을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a biomarker composition for diagnosing or predicting a glioblastoma prognosis, including miRNA derived from glioblastoma (glioblastoma) exosomes mimicking glioblastoma stem cells.
본 발명의 다른 목적은 교모종줄기세포 모사 GBM(glioblastoma) 엑소좀에서 유래한 miRNA의 발현을 측정하는 제제;를 포함하는 교모세포종 진단 또는 예후 예측용 조성물을 제공하는 것이다. Another object of the present invention is to provide a composition for diagnosing or predicting a glioblastoma, including an agent for measuring the expression of miRNA derived from glioblastoma (glioblastoma) exosomes mimicking glioblastoma stem cells.
또한 본 발명의 목적은 교모종줄기세포 모사 GBM(glioblastoma) 엑소좀에서 유래한 miRNA의 발현량을 측정하는 것인, 교모세포종 진단 또는 예후 예측을 위한 정보 제공 방법을 제공하는 것이다. It is also an object of the present invention to provide an information providing method for glioblastoma diagnosis or prognosis prediction, which is to measure the expression level of miRNA derived from glioblastoma exosomes mimicking glioblastoma (GBM) exosomes.
또한 본 발명의 목적은 교모종줄기세포 모사 GBM(glioblastoma) 엑소좀에서 유래한 miRNA의 발현수준을 측정하는 제제;를 포함하는 교모세포종 진단 또는 예후 예측용 키트를 제공하는 것이다. It is also an object of the present invention to provide a kit for diagnosing glioblastoma or predicting prognosis, including a preparation for measuring the expression level of miRNA derived from glioblastoma exosomes mimicking glioblastoma (GBM).
상기 목적을 달성하기 위하여, In order to achieve the above object,
본 발명은 교모종줄기세포 모사 GBM(glioblastoma) 엑소좀에서 유래한 miRNA를 포함하는 교모세포종 진단 또는 예후 예측용 바이오마커 조성물을 제공한다.The present invention provides a biomarker composition for diagnosing or predicting a glioblastoma prognosis comprising miRNA derived from glioblastoma (glioblastoma) exosomes mimicking glioblastoma stem cells.
본 발명은 또한 교모종줄기세포 모사 GBM(glioblastoma) 엑소좀에서 유래한 miRNA의 발현을 측정하는 제제;를 포함하는 교모세포종 진단 또는 예후 예측용 조성물을 제공한다.The present invention also provides a composition for diagnosing glioblastoma or predicting a prognosis, comprising an agent for measuring the expression of miRNA derived from glioblastoma (glioblastoma) exosomes mimicking glioblastoma stem cells.
또한 본 발명은 교모종줄기세포 모사 GBM(glioblastoma) 엑소좀에서 유래한 miRNA의 발현량을 측정하는 것인, 교모세포종 진단 또는 예후 예측을 위한 정보 제공 방법을 제공한다. In addition, the present invention provides a method for providing information for diagnosing glioblastoma or predicting a prognosis, which is to measure the expression level of miRNA derived from glioblastoma (glioblastoma) exosomes mimicking glioblastoma stem cells.
또한 본 발명은 교모종줄기세포 모사 GBM(glioblastoma) 엑소좀에서 유래한 miRNA의 발현수준을 측정하는 제제;를 포함하는 교모세포종 진단 또는 예후 예측용 키트를 제공한다. In addition, the present invention provides a kit for diagnosing or predicting a prognosis of glioblastoma, comprising a preparation for measuring the expression level of miRNA derived from glioblastoma exosomes mimicking glioblastoma stem cells (GBM).
본 발명은 교모종줄기세포 모사 GBM(glioblastoma) 엑소좀에서 분리한 miRNA의 발현양이 감소하거나 증가함을 확인한 바, 상기 miRNA를 이용하여 교모세포종 진단 또는 예후 예측용 바이오마커 조성물로 유용하게 활용할 수 있다. The present invention confirms that the expression level of miRNA isolated from glioblastoma exosomes mimicking glioblastoma (GBM) is decreased or increased. Using the miRNA, it can be usefully utilized as a biomarker composition for glioblastoma diagnosis or prognosis prediction. there is.
도 1은 부착/엑소좀 제거 혈청 배지 조건(Nm) 및 비부착/무혈청 배지 조건(GBM)에서 배양한 세포 배양액에서 분리한 엑소좀으로부터 추출한 miRNA 중 hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98 및 hsa-miR-98-5p의 발현양이 증가함을 확인하여 나타낸 도이다.
도 2는 부착/엑소좀 제거 혈청 배지 조건(Nm) 및 비부착/무혈청 배지 조건(GBM)에서 배양한 세포 배양액에서 분리한 엑소좀으로부터 추출한 miRNA 중 hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p 및 hsa-miR-1307-5p의 발현양이 감소함을 확인하여 나타낸 도이다. 1 shows hsa-mir-196a-2, hsa-miR among miRNAs extracted from exosomes isolated from cell culture medium cultured in adherent/exosome-removed serum medium condition (Nm) and non-adherent/serum-free medium condition (GBM). -196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa -miR-486-3p, hsa-mir-98 and hsa-miR-98-5p is a diagram showing an increase in the expression amount confirmed.
2 shows hsa-mir-1180, hsa-miR-1180 among miRNAs extracted from exosomes isolated from cell culture medium cultured in adherent/exosome-removed serum medium condition (Nm) and non-adherent/serum-free medium condition (GBM). It is a diagram showing the decrease in the expression levels of -3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p and hsa-miR-1307-5p.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 구현예로 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 다만, 하기 구현예는 본 발명에 대한 예시로 제시되는 것으로, 당업자에게 주지 저명한 기술 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있고, 이에 의해 본 발명이 제한되지는 않는다. 본 발명은 후술하는 특허청구범위의 기재 및 그로부터 해석되는 균등 범주 내에서 다양한 변형 및 응용이 가능하다. Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of embodiments of the present invention with reference to the accompanying drawings. However, the following embodiments are presented as examples for the present invention, and when it is determined that detailed descriptions of well-known techniques or configurations known to those skilled in the art may unnecessarily obscure the gist of the present invention, the detailed description may be omitted, and , the present invention is not limited thereby. Various modifications and applications of the present invention are possible within the scope of equivalents interpreted therefrom and the description of the claims to be described later.
또한, 본 발명에서 사용되는 용어(terminology)들은 본 발명의 바람직한 실시예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다. 따라서 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.In addition, the terms used in the present invention (terminology) are terms used to properly express the preferred embodiment of the present invention, which may vary according to the intention of the user or operator or customs in the field to which the present invention belongs. Therefore, definitions of these terms should be made based on the content throughout this specification. Throughout the specification, when a part "includes" a certain element, it means that other elements may be further included, rather than excluding other elements, unless otherwise stated.
본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는 달리 정의되지 않는 이상 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 또한 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다. 본 명세서에 참고문헌으로 기재되는 모든 간행물의 내용은 본 발명에 도입된다.All technical terms used in the present invention have the meanings commonly understood by those skilled in the art in the relevant field of the present invention unless otherwise defined. In addition, although preferred methods and samples are described herein, similar or equivalent ones are also included in the scope of the present invention. The contents of all publications herein incorporated by reference are incorporated herein by reference.
본 발명은 교모종줄기세포 모사 GBM(glioblastoma) 엑소좀에서 유래한 miRNA를 포함하는, 교모세포종 진단 또는 예후 예측용 바이오마커 조성물을 제공한다.The present invention provides a biomarker composition for diagnosing glioblastoma or predicting prognosis, including miRNA derived from glioblastoma exosomes mimicking glioblastoma (GBM).
본 발명의 일 구현예에서 "miRNA"란, 17~25개의 핵산으로 이루어진 단일가닥 RNA 분자로서 mRNA의 3'-UTR에 결합하여 진핵생물의 유전자 발현을 제어하는 새로운 물질이다. miRNA의 생성은 Drosha(RNaseⅢ type 효소)에 의해 stem-loop 구조의 pre-miRNA로 만들어지고, 세포질로 이동하여 다이서(dicer)에 의해 절단되어 miRNA로 만들어진다. 이렇게 만들어진 miRNA는 표적단백질의 발현을 조절함으로써 발생, 세포증식 및 사멸, 지방대사, 종양형성 등에 관여한다. 또한, 숙주세포에서 면역반응을 포함한 다양한 생리활성의 조절에 중요한 역할을 담당한다. 최근 들어, miRNA는 암, 심장질환, 임신, 당뇨, 정신질환 등 다양한 분야의 진단에서 새로운 형태의 바이오마커로서 심도 깊게 연구되고 있다.In one embodiment of the present invention, "miRNA" is a single-stranded RNA molecule consisting of 17 to 25 nucleic acids and is a novel substance that binds to the 3'-UTR of mRNA and controls gene expression in eukaryotes. Generation of miRNA is made into stem-loop pre-miRNA by Drosha (RNase III type enzyme), moves to the cytoplasm, and is cut by dicer to make miRNA. The miRNA produced in this way is involved in development, cell proliferation and death, fat metabolism, and tumorigenesis by regulating the expression of the target protein. In addition, it plays an important role in the regulation of various physiological activities, including immune responses, in host cells. Recently, miRNA is being studied in depth as a new type of biomarker in the diagnosis of various fields such as cancer, heart disease, pregnancy, diabetes, and mental disease.
본 발명의 일 구현예에서 miRNA는 Let7 family이며, 보다 구체적으로는 hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98, hsa-miR-98-5p, hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p 및 hsa-miR-1307-5p로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 miRNA를 의미하나 이에 구속되지는 않는다. In one embodiment of the present invention, miRNA is a Let7 family, more specifically hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395 -3p, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98, hsa-miR-98-5p, hsa from the group consisting of -mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p and hsa-miR-1307-5p It refers to one or more miRNAs selected, but is not limited thereto.
본 발명에서 용어 "엑소좀"은 세포에서 분비되는 작은 형태의 소포체를 의미하는 것으로, 바람직하게는 전혈, 혈청 및 혈장 등 혈액 내에 존재하는 Circulating 엑소좀이다.As used herein, the term “exosome” refers to a small endoplasmic reticulum secreted from cells, and is preferably a circulating exosome present in blood such as whole blood, serum and plasma.
본 발명에서 용어 "진단"은 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 본 발명의 목적상, 교모세포종을 진단하는 것이다. 보다 구체적으로는 교모세포종에서 엑소좀 내 hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98 및 hsa-miR-98-5p로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 miRNA의 발현이 증가하며, hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p 및 hsa-miR-1307-5p로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 miRNA의 발현이 감소하므로, 상기 엑소좀 내 miRNA의 발현양을 확인함으로써 해당 개체의 교모세포종에 대해 진단이 가능하다.In the present invention, the term “diagnosis” refers to confirming the presence or characteristics of a pathological condition. For the purposes of the present invention, it is to diagnose glioblastoma. More specifically, hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR- in exosomes in glioblastoma at least one miRNA selected from the group consisting of 10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98 and hsa-miR-98-5p expression of hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p and hsa-miR- Since the expression of one or more miRNAs selected from the group consisting of 1307-5p is reduced, it is possible to diagnose glioblastoma of the subject by checking the expression level of miRNA in the exosome.
본 발명에서 용어 "예후(prognosis)"는 질병을 진단하여 판단된 장래의 증세 또는 경과에 대한 전망을 말한다. 예후의 예측은 향후 항암 치료의 방향에 대한 단서를 제시하므로 매우 중요한 임상적 과제이다.In the present invention, the term "prognosis" refers to the prospect of future symptoms or progress determined by diagnosing a disease. The prediction of prognosis is a very important clinical task as it provides clues to the direction of future anticancer treatment.
본 발명에서 용어 "예측"은 의학적 귀추에 대하여 미리 헤아려 짐작하는 것을 의미하며, 본 발명의 목적상 암으로 진단받은 환자의 병의 경과(병의 진행, 개선, 위암의 재발, 종양 성장, 약 저항성)를 미리 짐작하는 것을 의미한다.In the present invention, the term "prediction" means to guess in advance for medical reasons, and for the purpose of the present invention, the disease course of a patient diagnosed with cancer (disease progression, improvement, gastric cancer recurrence, tumor growth, drug resistance) ) to predict in advance.
본 발명의 용어 "miRNA 발현 수준 측정”이란, 교모세포종을 진단 또는 예측하기 위하여 생물학적 시료에서 질병 마커 유전자들의 miRNA 존재 여부와 발현 정도를 확인하는 과정으로서, miRNA의 양을 측정함으로써 알 수 있다. 이를 위한 분석 방법으로는 역전사 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사 중합효소반응(Competitive RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소반응(Real-time RT-PCR), RNase 보호 분석법(RNase protection assay, RPA), 노던 블랏팅(Northern blotting) 또는 DNA 칩 등이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The term "measuring miRNA expression level" as used herein refers to a process of confirming the presence and expression level of miRNAs of disease marker genes in a biological sample in order to diagnose or predict glioblastoma, and can be known by measuring the amount of miRNA. Analysis methods for this are reverse transcription polymerase reaction (RT-PCR), competitive reverse transcription polymerase reaction (Competitive RT-PCR), real-time RT-PCR, RNase protection assay (RPA). ), Northern blotting, or a DNA chip, but is not limited thereto.
본 발명에서 용어 "바이오마커"는 생물학적 현상의 존재와 정량적 또는 정성적으로 연관된 분자를 의미하며, 본 발명의 마커는 교모세포종을 예측하거나 진단해내는 기준이 되는 유전자를 지칭한다. 마커는 게놈 뉴클레오티드 서열로부터 또는 발현된 뉴클레오티드 서열로부터(예를 들어, RNA, nRNA, mRNA, cDNA 등으로부터), 또는 코딩된 폴리펩티드로부터 유래될 수 있다. 이 용어는 마커 서열에 상보적이거나 이에 플랭킹된 핵산 서열, 예컨대 마커 서열을 증폭시킬 수 있는 프로브 또는 프라이머 쌍으로 사용된 핵산을 포함한다.In the present invention, the term "biomarker" refers to a molecule quantitatively or qualitatively related to the existence of a biological phenomenon, and the marker of the present invention refers to a gene that is a criterion for predicting or diagnosing glioblastoma. A marker may be derived from a genomic nucleotide sequence or from an expressed nucleotide sequence (eg, from RNA, nRNA, mRNA, cDNA, etc.), or from an encoded polypeptide. The term includes nucleic acids used as pairs of probes or primers capable of amplifying a nucleic acid sequence complementary to or flanking a marker sequence, such as a marker sequence.
본 발명에서 용어, "프라이머"는 짧은 자유 3 말단 수산화기(free 3` hydroxyl group)을 가지는 핵산 서열로 상보적인 주형(template)과 염기쌍(base pair)을 형성할 수 있고 주형의 복사를 위한 시작지점으로 기능을 하는 짧은 핵산 서열을 의미한다. 본 발명에서는 본 발명 마커 폴리뉴클레오티드의 센스 및 안티센스 프라이머를 이용하여 PCR 증폭을 실시하여 원하는 생성물의 생성 여부를 통해 교모세포종을 진단 또는 예측할 수 있다. PCR 조건, 센스 및 안티센스 프라이머의 길이는 당업계에 공지된 것을 기초로 변형할 수 있다.As used herein, the term "primer" is a nucleic acid sequence having a short free 3' hydroxyl group, which can form a base pair with a complementary template and is a starting point for copying the template. It refers to a short nucleic acid sequence that functions as In the present invention, it is possible to diagnose or predict glioblastoma based on whether a desired product is generated by PCR amplification using the sense and antisense primers of the marker polynucleotide of the present invention. PCR conditions, the length of the sense and antisense primers can be modified based on what is known in the art.
본 발명에서 용어, "프로브(probe)" 란 mRNA와 특이적 결합을 이룰 수 있는 짧게는 수 염기 내지 길게는 수백염기에 해당하는 RNA 또는 DNA 등의 핵산 단편을 의미하며, 표지(labeling)되어 있어서 특정 mRNA의 존재 유무를 확인할 수 있다. 프로브는 올리고 뉴클레오티드 프로브, 단일 사슬 DNA(single stranded DNA) 프로브, 이중사슬 DNA(double stranded DNA) 프로브, RNA 프로브 등의 형태로 제작될 수 있다. 본 발명에서는 본 발명의 마커 폴리뉴클레오티드와 상보적인 프로브를 이용하여 혼성화를 실시하여, 혼성화 여부를 통해 교모세포종을 진단 또는 예측할 수 있다. 적당한 프로브의 선택 및 혼성화 조건은 당업계에 공지된 것을 기초로 변형할 수 있다.As used herein, the term "probe" refers to a nucleic acid fragment such as RNA or DNA corresponding to several bases to several hundred bases in length that can form specific binding to mRNA, and is labeled The presence or absence of specific mRNA can be checked. The probe may be manufactured in the form of an oligonucleotide probe, a single stranded DNA probe, a double stranded DNA probe, an RNA probe, or the like. In the present invention, hybridization is performed using a probe complementary to the marker polynucleotide of the present invention, and glioblastoma can be diagnosed or predicted through hybridization. Selection of appropriate probes and hybridization conditions can be modified based on those known in the art.
본 발명의 프라이머 또는 프로브는 포스포르아미다이트 고체 지지체 방법 또는 기타 널리 공지된 방법을 사용하여 화학적으로 합성할 수 있다. 이러한 핵산 서열은 또한 당해 분야에 공지된 많은 수단을 이용하여 변형시킬 수 있다. 이러한 변형의 비-제한적인 예로는 메틸화, 캡화, 천연 뉴클레오티드 하나 이상의 동족체로의 치환, 및 뉴클레오티드 간의 변형, 예를 들면, 하전되지 않은 연결체(예: 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포로아미데이트, 카바메이트 등) 또는 하전된 연결체(예: 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등)로의 변형이 있다.The primers or probes of the present invention can be chemically synthesized using the phosphoramidite solid support method or other well-known methods. Such nucleic acid sequences may also be modified using a number of means known in the art. Non-limiting examples of such modifications include methylation, encapsulation, substitution of one or more homologues of natural nucleotides, and modifications between nucleotides, such as uncharged linkages such as methyl phosphonates, phosphotriesters, phosphoros. amidates, carbamates, etc.) or charged linkages (eg phosphorothioates, phosphorodithioates, etc.).
본 발명에서 용어 "검출" 또는 "측정"은 검출 또는 측정된 대상의 농도를 정량하는 것을 의미한다.In the present invention, the term “detection” or “measurement” means quantifying the concentration of a detected or measured target.
본 발명은 또한 교모종줄기세포 모사 GBM(glioblastoma) 엑소좀에서 유래한 miRNA의 발현을 측정하는 제제;를 포함하는 교모세포종 진단 또는 예후 예측용 조성물을 제공한다. The present invention also provides a composition for diagnosing glioblastoma or predicting a prognosis, comprising an agent for measuring the expression of miRNA derived from glioblastoma (glioblastoma) exosomes mimicking glioblastoma stem cells.
본 발명에서 용어 "검출" 또는 "측정"은 검출 또는 측정된 대상의 농도를 정량하는 것을 의미한다.In the present invention, the term “detection” or “measurement” means quantifying the concentration of a detected or measured target.
본 발명의 일 구현예에서 miRNA는 Let7 family이며, 보다 구체적으로는 hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98, hsa-miR-98-5p, hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p 및 hsa-miR-1307-5p로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 miRNA를 의미하나 이에 구속되지는 않는다. 보다 구체적으로는 교모세포종에서 엑소좀 내 hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98 및 hsa-miR-98-5p로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 miRNA의 발현이 증가하며, hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p 및 hsa-miR-1307-5p로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 miRNA의 발현이 감소하므로, 상기 엑소좀 내 miRNA의 발현양을 확인함으로써 해당 개체의 교모세포종에 대해 진단이 가능하다.In one embodiment of the present invention, miRNA is a Let7 family, more specifically hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395 -3p, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98, hsa-miR-98-5p, hsa from the group consisting of -mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p and hsa-miR-1307-5p It refers to one or more miRNAs selected, but is not limited thereto. More specifically, hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR- in exosomes in glioblastoma at least one miRNA selected from the group consisting of 10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98 and hsa-miR-98-5p expression of hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p and hsa-miR- Since the expression of one or more miRNAs selected from the group consisting of 1307-5p is reduced, it is possible to diagnose glioblastoma of the subject by checking the expression level of miRNA in the exosome.
본 발명은 또한 The present invention also
1)분리된 시료로부터 엑소좀을 분리하는 단계;1) separating the exosomes from the separated sample;
2)상기 분리된 엑소좀으로부터 miRNA의 발현을 측정하는 것인, 교모세포종 진단 또는 예후 예측을 위한 정보 제공 방법을 제공한다. 2) to measure the expression of miRNA from the isolated exosome, provides an information providing method for glioblastoma diagnosis or prognosis prediction.
상기 1) 단계의 시료는 조직, 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 객담, 뇌척수액, 세포 배양액 또는 뇨와 같은 시료 등을 포함할 수 있으며 이에 제한되지 않으며 바람직하게는 교모종줄기세포를 배양한 배양액이다.The sample of step 1) may include, but is not limited to, a sample such as tissue, cell, whole blood, serum, plasma, saliva, sputum, cerebrospinal fluid, cell culture solution or urine, and preferably a cultured glioblastoma stem cell. is a culture medium.
상기 2) 단계의 miRNA는 Let7 family이며, 보다 구체적으로는 hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98, hsa-miR-98-5p, hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p 및 hsa-miR-1307-5p로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 miRNA를 의미하나 이에 구속되지는 않는다. 보다 구체적으로는 교모세포종에서 엑소좀 내 hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98 및 hsa-miR-98-5p로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 miRNA의 발현이 증가하며, hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p 및 hsa-miR-1307-5p로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 miRNA의 발현이 감소하므로, 상기 엑소좀 내 miRNA의 발현양을 확인함으로써 해당 개체의 교모세포종에 대해 진단 또는 예후 예측이 가능하다. The miRNA in step 2) is a Let7 family, and more specifically, hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p , hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98, hsa-miR-98-5p, hsa-mir -1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p and hsa-miR-1307-5p means one or more miRNAs, but not limited thereto. More specifically, hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR- in exosomes in glioblastoma at least one miRNA selected from the group consisting of 10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98 and hsa-miR-98-5p expression of hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p and hsa-miR- Since the expression of one or more miRNAs selected from the group consisting of 1307-5p is reduced, it is possible to diagnose or predict the prognosis of glioblastoma of the subject by checking the expression level of miRNA in the exosome.
본 발명은 또한 교모종줄기세포 모사 GBM(glioblastoma) 엑소좀에서 유래한 miRNA의 발현수준을 측정하는 제제;를 포함하는 교모세포종 진단 또는 예후 예측용 키트를 제공한다.The present invention also provides a kit for diagnosing or predicting a prognosis of glioblastoma, including a preparation for measuring the expression level of miRNA derived from glioblastoma (glioblastoma) exosomes mimicking glioblastoma stem cells.
본 발명의 용어 "키트"란, 특정한 목적을 위해 필요한 조성물 및 부속품들을 모아놓은 세트를 의미한다. 본 발명의 목적상, 본 발명의 키트는 교모세포종의 진단 또는 예후를 확인하는 것이다. 본 발명의 키트에는 교모세포종의 진단 또는 예후를 확인하기 위한 프라이머, 프로브, 선택적으로 펩타이드를 인지하는 항체 또는 교모세포종 발병시 특이적으로 발현이 변화되는 특정 펩타이드를 인지하는 항체뿐만 아니라 분석방법에 적합한 한 종류 또는 그 이상의 다른 구성성분 조성물, 용액 또는 장치가 포함될 수 있다.As used herein, the term "kit" refers to a set of compositions and accessories necessary for a particular purpose. For the purposes of the present invention, the kit of the present invention is to confirm the diagnosis or prognosis of glioblastoma. The kit of the present invention includes primers, probes, and antibodies that selectively recognize peptides for confirming the diagnosis or prognosis of glioblastoma, or antibodies that recognize specific peptides whose expression is specifically changed when glioblastoma occurs, as well as suitable for analysis methods. One or more other component compositions, solutions or devices may be included.
본 발명의 키트는 엑소좀 내 miRNA의 발현양을 확인함으로써 교모세포종을 진단하는데 이용될 수 있다.The kit of the present invention can be used to diagnose glioblastoma by confirming the expression level of miRNA in the exosome.
본 발명의 키트는 교모세포종에서 엑소좀 내 hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98 및 hsa-miR-98-5p로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 miRNA의 발현이 증가하며, hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p 및 hsa-miR-1307-5p로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 이상의 miRNA의 발현이 감소하므로 상기 miRNA의 발현 수준을 확인함으로써 교모세포종을 진단하는데 이용될 수 있다. The kit of the present invention is a hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR in exosomes in glioblastoma. at least one selected from the group consisting of -10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98 and hsa-miR-98-5p Increased miRNA expression, hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p and hsa-miR Since the expression of at least one miRNA selected from the group consisting of -1307-5p is reduced, it can be used to diagnose glioblastoma by checking the expression level of the miRNA.
이하 하기 실시예를 통해 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명의 기술적 사상의 내용과 범위를 쉽게 설명하기 위한 예시일 뿐, 이에 의해 본 발명의 기술적 범위가 한정되거나 변경되는 것은 아니다. 또한 이러한 예시에 기초하여 본 발명의 기술적 사상의 범위 안에서 다양한 변형과 변경이 가능함은 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail by way of Examples. However, the following examples are only examples for easily explaining the content and scope of the technical idea of the present invention, and thereby the technical scope of the present invention is not limited or changed. In addition, various modifications and changes within the scope of the technical spirit of the present invention based on these examples can be easily determined by those skilled in the art.
<실시예 1><Example 1>
교모세포종 세포주의 암줄기세포능 특이적 배양Cancer stem cell ability-specific culture of a glioblastoma cell line
모든 인간 교모세포종(glioblastoma) A172 세포주를 한국세포주은행으로부터 구입하여, 열-불활화 우태아혈청(FBS) 10%, 페니실린 100 units/ml 및 스트렙토마이신 100 mg/ml이 함유된 DMEM(Hyclone, Logan, UT, USA) 배지를 이용하여, 37℃의 5% CO2 인큐베이터에서 배양하여 유지하였으며, Nm (유혈청/부착) 조건 배양을 위해 세포를 PBS로 2번 씻어 엑소좀이 제거된 혈청 (EXO-FBS, System Bioscience사)이 포함된 조건에서 배양하였다. 암 줄기세포능을 촉진하는 배양 조건인 구체 형성(sphere forming, GBM) 배양을 위해서는 세포를 트립신처리(trypsinization) 하여 단일 세포를 분리하고, 이를 B27-첨가된 배지 DMEM/F12 (Cellgro, Manassas, VA, USA)에서 혈청 없이 epidermal growth factor 및 basic fibroblast growth factor (10 ng/mL each: R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)를 첨가하여 초저-부착 플레이트(attachment plates) (Corning, Tewksbury, MA)에서 각각 1 × 105cells/mL 밀도로 구체 형성 배양을 수행하였다 (무혈청/비부착 배양, GBM). All human glioblastoma A172 cell lines were purchased from the Korea Cell Line Bank, and DMEM (Hyclone, Logan) containing 10% heat-inactivated fetal bovine serum (FBS),
<실시예 2><Example 2>
세포 배양액에서 엑소좀 분리Isolation of exosomes from cell culture medium
먼저 교모세포를 Nm(부착, 혈청을 포함한 배지 배양 조건)과 GBM(비부착, 무혈청 배지 배양조건) 조건에서 배양 후 파이펫으로 배양액을 각각 수득하여 튜브에 담고, 이를 3000x g로 15분간 원심분리하여 세포와 cell debris를 제거하고 상층액을 0.8 마이크로미터 크기의 주사기 필터 (MilliporeSigma사, MILLEX AA filter, 0.8 μm)로 통과시켰다. 상기 주사기 필터에서 걸러진 배양액 5mL 당 ExoQuick-TC (System Bioscience사) 1mL을 첨가하고, 튜브 뚜껑을 잠근 후, 위 아래로 뒤집어 배양액과 ExoQuick-TC액을 혼합하였다. 이를 12시간 내지 16시간 동안 4℃ 조건에서 방치하였다. 이후 튜브를 1500x g에서 30분간 원심분리하여 튜브 바닥 면에 침전된 흰색의 펠렛을 얻기 위해 상층액은 원심분리로 버리고 Phosphate buffered saline (PBS) 용액으로 2번 처리하고 원심분리하여 수득하였다. First, the glioblasts are cultured in Nm (adherent, serum-containing medium culture condition) and GBM (non-adherent, serum-free medium culture condition) conditions, and then the culture solution is obtained with a pipette, placed in a tube, and centrifuged at 3000x g for 15 minutes. After separation, cells and cell debris were removed, and the supernatant was passed through a 0.8 micrometer syringe filter (MilliporeSigma, MILLEX AA filter, 0.8 μm). 1 mL of ExoQuick-TC (System Bioscience) was added per 5 mL of the culture solution filtered from the syringe filter, the tube lid was closed, and the culture solution and ExoQuick-TC solution were mixed by turning it upside down. This was left at 4° C. for 12 to 16 hours. Thereafter, the tube was centrifuged at 1500x g for 30 minutes to obtain a white pellet precipitated on the bottom of the tube, the supernatant was discarded by centrifugation, treated twice with phosphate buffered saline (PBS) solution, and centrifuged to obtain.
<실시예 3><Example 3>
엑소좀 내 miRNA 분석 및 선별miRNA analysis and selection in exosomes
상기 <실시예 2>와 같이 분리하여 준비한 Nm과 GBM 조건의 엑소좀에서의 miRNA를 분석 및 선별하기 위하여 차세대염기서열분석법(Next Generation Sequencing, NGS)을 하기와 같이 실시하였다. Next generation sequencing (NGS) was performed as follows to analyze and select miRNAs in exosomes under Nm and GBM conditions separated and prepared as in <Example 2>.
Illumina NGS 라이브러리를 구축하기 위하여 The SBI’s Exo-NGS 서비스를 이용하였으며 1 x 50-bp single-end Illumina HiSeq NGS와 Maverix Analytic 플랫폼의 시퀀싱을 이용하였다. To construct the Illumina NGS library, The SBI's Exo-NGS service was used, and 1 x 50-bp single-end Illumina HiSeq NGS and sequencing of the Maverix Analytic platform were used.
그 결과, 교모세포종에서 엑소좀 내 miRNA 중 hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98, hsa-miR-98-5p, hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p 및 hsa-miR-1307-5p를 바이오 마커로 선정하여 Nm과 GBM 조건에서 그 발현양을 비교하였다. As a result, among miRNAs in exosomes in glioblastoma, hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR -10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98, hsa-miR-98-5p, hsa-mir-1180, hsa -miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p and hsa-miR-1307-5p were selected as biomarkers for Nm and GBM conditions The expression levels were compared in
<실시예 4><Example 4>
엑소좀 내 miRNA 발현양 비교Comparison of miRNA expression levels in exosomes
상기 <실시예 2>와 같이 분리하여 준비한 Nm과 GBM 조건의 엑소좀에서의 miRNA의 발현양을 비교하기 위하여 하기와 같이 실시하였다.In order to compare the expression levels of miRNAs in the exosomes under Nm and GBM conditions separated and prepared as in <Example 2>, it was carried out as follows.
Illumina NGS 라이브러리를 구축하기 위하여 The SBI’s Exo-NGS 서비스를 이용하였으며 1 x 50-bp single-end Illumina HiSeq NGS와 Maverix Analytic 플랫폼의 시퀀싱을 이용하였다. To construct the Illumina NGS library, The SBI's Exo-NGS service was used, and 1 x 50-bp single-end Illumina HiSeq NGS and sequencing of the Maverix Analytic platform were used.
그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이 GBM 조건의 교모세포종에서 엑소좀 내 miRNA Let7 family 중 hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98 및 hsa-miR-98-5p의 발현양이 증가함을 확인하였다. As a result, as shown in Figure 1, in the exosome miRNA Let7 family in glioblastoma under GBM conditions, hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98 and hsa-miR- It was confirmed that the expression level of 98-5p was increased.
또한 도 2에 나타낸 바와 같이 hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p 및 hsa-miR-1307-5p의 발현이 감소함을 확인하였다. Also, as shown in Figure 2, hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p and hsa-miR It was confirmed that the expression of -1307-5p was reduced.
따라서 본 발명의 miRNA를 이용하는 경우 교모세포종 진단 또는 예후 예측용 바이오마커 조성물로 유용하게 이용할 수 있음을 확인하였다. Therefore, it was confirmed that when the miRNA of the present invention is used, it can be usefully used as a biomarker composition for glioblastoma diagnosis or prognosis prediction.
<110> Metacura Inc. <120> Biomarker composition for diagnosis of glioblastoma <130> PN2001-004 <160> 17 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 110 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-mir-196a-2 <400> 1 ugcucgcuca gcugaucugu ggcuuaggua guuucauguu guugggauug aguuuugaac 60 ucggcaacaa gaaacugccu gaguuacauc agucgguuuu cgucgagggc 110 <210> 2 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-miR-196a-5p <400> 2 uagguaguuu cauguuguug gg 22 <210> 3 <211> 63 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-miR-3182 <400> 3 gcugcuucug uaguguaguc cgugcauccg cccuucgaug cuuggguugg aucauagagc 60 agu 63 <210> 4 <211> 64 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-mir-10395 <400> 4 gugauggaga gcaauacccg gggaugacug ugaccacauu gggauguauu cguacugucu 60 gaug 64 <210> 5 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-miR-10395-3p <400> 5 auguauucgu acugucugau g 21 <210> 6 <211> 18 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-miR-10395-5p <400> 6 gugauggaga gcaauacc 18 <210> 7 <211> 78 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-miR-27a-5p <400> 7 cugaggagca gggcuuagcu gcuugugagc aggguccaca ccaagucgug uucacagugg 60 cuaaguuccg ccccccag 78 <210> 8 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-miR-486-3p <400> 8 cggggcagcu caguacagga u 21 <210> 9 <211> 119 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-mir-98 <400> 9 aggauucugc ucaugccagg gugagguagu aaguuguauu guuguggggu agggauauua 60 ggccccaauu agaagauaac uauacaacuu acuacuuucc cuggugugug gcauauuca 119 <210> 10 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-miR-98-5p <400> 10 ugagguagua aguuguauug uu 22 <210> 11 <211> 69 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-mir-1180 <400> 11 gcugcuggac ccacccggcc gggaauagug cuccugguug uuuccggcuc gcgugggugu 60 gucggcggc 69 <210> 12 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-miR-1180-3p <400> 12 uuuccggcuc gcgugggugu gu 22 <210> 13 <211> 18 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-mir-12136 <400> 13 gaaaaaguca uggaggcc 18 <210> 14 <211> 85 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-mir-122 <400> 14 ccuuagcaga gcuguggagu gugacaaugg uguuuguguc uaaacuauca aacgccauua 60 ucacacuaaa uagcuacugc uaggc 85 <210> 15 <211> 149 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-mir-1307 <400> 15 caucaagacc cagcugaguc acugucacug ccuaccaauc ucgaccggac cucgaccggc 60 ucgucugugu ugccaaucga cucggcgugg cgucggucgu gguagauagg cggucaugca 120 uacgaauuuu cagcucuugu ucuggugac 149 <210> 16 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-miR-1307-3p <400> 16 acucggcgug gcgucggucg ug 22 <210> 17 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-miR-1307-5p <400> 17 ucgaccggac cucgaccggc u 21 <110> Metacura Inc. <120> Biomarker composition for diagnosis of glioblastoma <130> PN2001-004 <160> 17 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 110 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-mir-196a-2 <400> 1 ugcucgcuca gcugaucugu ggcuuaggua guuucauguu guugggauug aguuuugaac 60 ucggcaacaa gaaacugccu gaguuacauc agucgguuuu cgucgagggc 110 <210> 2 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-miR-196a-5p <400> 2 uagguaguuu cauguuguug gg 22 <210> 3 <211> 63 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-miR-3182 <400> 3 gcugcuucug uaguguaguc cgugcauccg cccuucgaug cuuggguugg aucauagagc 60 agu 63 <210> 4 <211> 64 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-mir-10395 <400> 4 gugauggaga gcaauacccg gggaugacug ugaccacauu gggauguauu cguacugucu 60 gaug 64 <210> 5 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-miR-10395-3p <400> 5 auguauucgu acugucugau g 21 <210> 6 <211> 18 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-miR-10395-5p <400> 6 gugauggaga gcaauacc 18 <210> 7 <211> 78 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-miR-27a-5p <400> 7 cugaggagca gggcuuagcu gcuugugagc aggguccaca ccaagucgug uucacagugg 60 cuaaguuccg ccccccag 78 <210> 8 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-miR-486-3p <400> 8 cggggcagcu caguacagga u 21 <210> 9 <211> 119 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-mir-98 <400> 9 aggauucugc ucaugccagg gugagguagu aaguuguauu guuguggggu agggauauua 60 ggccccaauu agaagauaac uauacaacuu acuacuuucc cuggugugug gcauauuca 119 <210> 10 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-miR-98-5p <400> 10 ugagguagua aguuguauug uu 22 <210> 11 <211> 69 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-mir-1180 <400> 11 gcugcuggac ccacccggcc gggaauagug cuccugguug uuuccggcuc gcgugggugu 60 gucggcggc 69 <210> 12 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-miR-1180-3p <400> 12 uuuccggcuc gcgugggugu gu 22 <210> 13 <211> 18 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-mir-12136 <400> 13 gaaaaaguca uggaggcc 18 <210> 14 <211> 85 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-mir-122 <400> 14 ccuuagcaga gcuguggagu gugacaaugg uguuuguguc uaaacuauca aacgccauua 60 ucacacuaaa uagcuacugc uaggc 85 <210> 15 <211> 149 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-mir-1307 <400> 15 caucaagacc cagcugaguc acugucacug ccuaccaauc ucgaccggac cucgaccggc 60 ucgucugugu ugccaaucga cucggcgugg cgucggucgu gguagauagg cggucaugca 120 uacgaauuuu cagcucuugu ucuggugac 149 <210> 16 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-miR-1307-3p <400> 16 acucggcgug gcgucggucg ug 22 <210> 17 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> hsa-miR-1307-5p <400> 17 ucgaccggac cucgaccggc u 21
Claims (12)
상기 miRNA는 엑소좀 유래인 것을 특징으로 하는, 교모세포종 진단용 바이오마커 조성물. hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a- 5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98, hsa-miR-98-5p, hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, In a biomarker composition for diagnosing glioblastoma, comprising miRNAs of hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p and hsa-miR-1307-5p,
The miRNA is a biomarker composition for glioblastoma diagnosis, characterized in that the exosome-derived.
hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98 및 hsa-miR-98-5p가 정상 세포에서 miRNA 발현양과 비교하여 고발현되는 경우, 교모세포종인 것으로 진단하는 것인, 교모세포종 진단용 바이오마커 조성물.The method of claim 1,
hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a- When 5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98 and hsa-miR-98-5p are highly expressed compared to the miRNA expression level in normal cells, it is diagnosed as glioblastoma, glioblastoma diagnostic bio marker composition.
상기 hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p 및 hsa-miR-1307-5p가 정상 세포에서 miRNA 발현양과 비교하여 저발현되는 경우, 교모세포종인 것으로 진단하는 것인, 교모세포종 진단용 바이오마커 조성물.
The method of claim 1,
The hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p and hsa-miR-1307-5p are normal. When the expression is low compared to the miRNA expression level in the cell, it is diagnosed as glioblastoma, a biomarker composition for glioblastoma diagnosis.
상기 miRNA는 엑소좀 유래인 것을 특징으로 하는, 교모세포종 진단용 조성물.hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a- 5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98, hsa-miR-98-5p, hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, In a composition for diagnosing glioblastoma, comprising: an agent for measuring miRNA expression of hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p and hsa-miR-1307-5p;
The miRNA is characterized in that the exosome-derived, glioblastoma diagnostic composition.
2)상기 분리된 엑소좀으로부터 hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98, hsa-miR-98-5p, hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p 및 hsa-miR-1307-5p의 miRNA의 발현을 측정하는 단계;를 포함하는, 교모세포종 진단을 위한 정보 제공 방법에서,
상기 miRNA는 엑소좀 유래이고,
상기 hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98 및 hsa-miR-98-5p가 정상 세포에서 miRNA 발현양과 비교하여 고발현되는 경우, 교모세포종인 것으로 진단하는 것을 특징으로 하며,
상기 hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p 및 hsa-miR-1307-5p가 정상 세포에서 miRNA 발현양과 비교하여 저발현되는 경우, 교모세포종인 것으로 진단하는 것을 특징으로 하는, 교모세포종 진단을 위한 정보 제공 방법.1) separating the exosomes from the separated sample; and
2) hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395- 5p, hsa-miR-27a-5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98, hsa-miR-98-5p, hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir- 12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, measuring the expression of miRNA of hsa-miR-1307-3p and hsa-miR-1307-5p; comprising, information providing method for glioblastoma diagnosis at,
The miRNA is derived from exosomes,
The hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a When -5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98 and hsa-miR-98-5p are highly expressed in normal cells compared to the miRNA expression level in normal cells, it is characterized in that the diagnosis is glioblastoma,
The hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p and hsa-miR-1307-5p are normal. When the expression is low compared to the miRNA expression level in the cell, it is characterized in that the diagnosis is glioblastoma, information providing method for glioblastoma diagnosis.
상기 miRNA는 엑소좀 유래인 것을 특징으로 하는, 교모세포종 진단용 키트. hsa-mir-196a-2, hsa-miR-196a-5p, hsa-miR-3182, hsa-mir-10395, hsa-miR-10395-3p, hsa-miR-10395-5p, hsa-miR-27a- 5p, hsa-miR-486-3p, hsa-mir-98, hsa-miR-98-5p, hsa-mir-1180, hsa-miR-1180-3p, hsa-mir-12136, hsa-mir-122, In a kit for diagnosing glioblastoma, comprising: an agent for measuring the expression level of miRNA of hsa-mir-1307, hsa-miR-1307-3p and hsa-miR-1307-5p;
The miRNA is an exosome-derived, glioblastoma diagnostic kit.
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