KR102344703B1 - 마름 발효물의 제조방법과 이로부터 제조된 마름 발효물이나 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선, 항노화에 효과가 있는 조성물과 발효물로 이루어진 피부노화 개선용 조성물 - Google Patents

마름 발효물의 제조방법과 이로부터 제조된 마름 발효물이나 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선, 항노화에 효과가 있는 조성물과 발효물로 이루어진 피부노화 개선용 조성물 Download PDF

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Abstract

콜라겐 분해 효소(Matrix Metalloproteinase-1)의 활성을 저해하고, 세포 내 콜라겐의 생성을 촉진하며, 표피 세포를 증식시킬 수 있는 화장료 조성물이 개시된다. 본 발명은 마름 발효물 또는 마름 발효 정제물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

Description

마름 발효물의 제조방법과 이로부터 제조된 마름 발효물이나 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선, 항노화에 효과가 있는 조성물과 발효물로 이루어진 피부노화 개선용 조성물{Method of Trapa Natans ferments, a composition for improving skin wrinkles and anti-aging containing the Trapa Natans fermentation product or peptide produced therefrom as an active ingredient and a composition for improving skin aging comprising a fermented product}
본 발명은 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 마름 발효물 또는 마름 발효 정제물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
화장료의 가장 큰 관심 분야 중 하나는 노화와 관련된 주름, 색소침착, 탄력감소, 피부건조화, 탈모, 모발의 윤기 부족 등이다. 피부는 노화를 통해 다양한 변화를 맞게 된다. 먼저 피부의 구성 성분인 표피, 진피 및 피하조직의 두께가 얇아지고 피부에 탄력을 주는 세포외 기질(Extracellular matrix; ECM) 성분이 변화하게 되는데 그 중 세포외 기질의 70~80%를 차지하는 콜라겐은 나이가 들면서 그 생성이 급격하게 저하되어 주름 생성과 밀접한 관계를 가지게 되고, 피부결합조직을 이루고 있는 콜라겐(collagen), 엘라스틴(elastin), 프로티오글리칸(proteoglycans), 글루코스아미노글리칸(glucosaminoglycan), 라미닌(laminin), 파이브로넥틴(fibronectin) 등은 산화되어 그 기능을 잃어버림으로써 피부가 탄력을 잃고 주름이 과도하게 형성되면서 노인성 피부로 변화되어 간다.
세포외 기질의 결합조직섬유에는 아교섬유(교원섬유, collagen fiber), 세망섬유(reticular fiber), 탄력섬유(탄성섬유, elastic fiber)가 있으며, 이 중 피부결합조직의 70% 정도를 차지하고 있는 콜라겐은 피부의 섬유아세포(fibroblast)에서 대부분 형성된다. 나이가 들면서 피부결합조직 내의 콜라겐 함량이 줄어드는데 이는 콜라겐 합성의 저하와 분해의 촉진에 의한 것이다. 따라서 콜라겐 생합성의 저하와 콜라겐 분해 촉진은 피부주름 형성의 가장 큰 원인이라 할 수 있다.
화장료의 가장 큰 관심 분야 중 하나는 노화와 관련된 주름, 색소침착, 탄력감소, 피부건조화, 탈모, 모발의 윤기 부족 등이다. 피부는 노화를 통해 다양한 변화를 맞게 된다. 먼저 피부의 구성 성분인 표피, 진피 및 피하조직의 두께가 얇아지고 피부에 탄력을 주는 세포외 기질(Extracellular matrix; ECM) 성분이 변화하게 되는데 그 중 세포외 기질의 70~80%를 차지하는 콜라겐은 나이가 들면서 그 생성이 급격하게 저하되어 주름 생성과 밀접한 관계를 가지게 되고, 피부결합조직을 이루고 있는 콜라겐(collagen), 엘라스틴(elastin), 프로티오글리칸(proteoglycans), 글루코스아미노글리칸(glucosaminoglycan), 라미닌(laminin), 파이브로넥틴(fibronectin) 등은 산화되어 그 기능을 잃어버림으로써 피부가 탄력을 잃고 주름이 과도하게 형성되면서 노인성 피부로 변화되어 간다.
등록특허 10-1784201호는 천연물을 발효시켜 유효성분으로 포함하는 피부 개선용 조성물에 대하여 개시하고 있으나, 마름을 이용한 화장료에 조성물에 대하여는 언급하지 않고 있다.
따라서, 본 발명은 상기 문제를 해결하기 위해 안출된 것으로, 콜라겐 분해 효소(Matrix Metalloproteinase-1)의 활성을 저해하고, 세포 내 콜라겐의 생성을 촉진하며, 표피 세포를 증식시킬 수 있는 화장료 조성물을 제공하고자 한다.
상기 과제를 해결하기 위하여 본 발명은 마름 발효물 또는 마름 발효 정제물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 상기 마름 발효물은 바실러스 속(Bacillus sp.) 균주, 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.) 균주 또는 이들의 혼합 균주로 발효된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 상기 바실러스 속(Bacillus sp.) 균주는 바실러스 메틸로트로피쿠스(Bacillus methylotrophicus) 또는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)이고, 상기 락토바실러스 속(Lactobacillus sp.) 균주는 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei)인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 상기 마름 발효 정제물은 트리펩타이드(Tripeptide)이고, 상기 트리펩타이드는 글리신(Glycine, Gly)-프롤린(Proline, Pro)-세린(Serine, Ser), 글리신(Glycine, Gly)-프롤린(Proline, Pro)-아르기닌(Arginine, Arg), 글리신(Glycine, Gly)-프롤린(Proline, Pro)-프롤린(Proline, Pro) 또는 글리신(Glycine, Gly)-프롤린(Proline, Pro)-메티오닌(Methionine, Met)인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 상기 화장료 조성물은 상기 마름 발효물 또는 상기 마름 발효 정제물을 1~90 중량% 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 상기 화장료 조성물은 콜라겐 분해 효소(Matrix Metalloproteinase-1)의 활성 저해, 세포 내 콜라겐 생성 촉진 및 표피 세포의 증식을 촉진하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 목적을 위하여 마름 열매 추출물에 미생물을 접종하고 발효시켜 발효물을 제조하는 단계; 및 상기 발효물에서 상기 미생물을 제거하는 단계;를 포함하는 마름 발효물 제조방법을 제공한다.
본 발명은 마름 발효물 또는 마름 발효 정제물을 유효성분으로 포함함으로써 콜라겐 분해 효소(Matrix Metalloproteinase-1)의 활성을 저해하고, 세포 내 콜라겐의 생성을 촉진하며, 표피 세포를 증식시킬 수 있는 화장료 조성물을 제공할 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 마름 발효 정제물의 제조방법에 대한 도식도이고,
도 2는 본 발명의 실험예 2의 결과를 나타낸 그래프,
도 3은 본 발명의 실험예 3의 TLC 결과를 촬영한 사진,
도 4는 본 발명의 실험예 4의 TLC 결과를 촬영한 사진,
도 5는 본 발명의 실험예 5의 결과를 나타낸 그래프,
도 6은 본 발명의 실험예 6의 결과를 나타낸 그래프,
도 7은 본 발명에 따른 고성능 액상 크로마토그래피 분석 결과를 나타낸 그래프(도 7a는 comp2 : Gly-Pro-Ser, 도 7b는 comp1 : Gly-Pro-Arg, 도 7c는 comp3 : Gly-Pro-Pro, 도 7d는 comp4 : Gly-Pro-Met),
도 8은 본 발명에 따른 실험예 7의 NMR 분석 결과를 나타낸 그래프(도 8a 는 comp2 : Gly-Pro-Ser, 도 8b는 comp1 : Gly-Pro-Arg, 도 8c는 comp3 : Gly-Pro-Pro, 도 8d는 comp4 : Gly-Pro-Met),
도 9는 본 발명의 실험예 8의 MMP-1 저해능 측정 결과를 나타낸 그래프,
도 10은 본 발명의 실험예 9의 세포 내 콜라겐 생성 촉진효과 결과를 나타낸 그래프,
도 11 및 도 12 본 발명의 실험예 10의 세포 증식능을 3T3 세포 및 HACAT 세포에서 측정한 결과를 나타낸 그래프
도 13 및 도 14는 본 발명의 실험예 11의 광 안정성 및 열 안정성 측정 결과를 나타낸 그래프이다.
이하 바람직한 실시예를 통하여 본 발명을 상세히 설명하기로 한다. 이에 앞서, 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여, 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다. 따라서, 본 명세서에 기재된 실시예의 구성은 본 발명의 가장 바람직한 일실시예에 불과할 뿐이고 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.
본 발명자들은 피부노화 및 주름을 효과적으로 방지 또는 개선하기 위해서 항산화 효능이 확인된 원료와 피부 노화 방지에 효과가 있는 화장료 조성물을 개발하기 위하여 연구를 거듭한 결과, 마름 열매 추출물을 발효시키거나, 마름 발효물에서 유래된 펩타이드를 사용하는 경우, 콜라겐 분해 효소(Matrix Metalloproteinase-1)의 활성 저해, 세포 내 콜라겐 생성 촉진 및 표피 세포 증식 촉진 효능을 향상시킬 수 있음을 발견하고 본 발명에 이르게 되었다.
따라서, 본 발명은 마름 발효물 또는 마름 발효 정제물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 개시한다.
본 발명에서 상기 마름(Trapa japonica)은 연못에서 자라는 한해살이풀로서 주로 연못이나 늪 등에서 볼 수 있다. 상기 마름은 잎이 마름모꼴의 삼각형이기 때문에 마름이라고 지칭되며, 상기 마름의 열매는 물밤이라는 명칭으로도 지칭되며 물속에서 아래 방향으로 열리고, 2~4개의 뿔이 있는 독특한 모양을 하고 있다.
본 발명에서 상기 마름 발효물은 마름의 열매를 건조, 추출한 후 발효한 발효물을 의미하며 마름 추출물은 위궤양 등의 질환에 효과가 있는 약재로 활용되었으며, 망간 성분이 풍부하여 피부의 수분을 유지시키는 데 효능이 있다.
본 발명의 마름 발효물 또는 마름 발효 정제물은 피부에 작용하여, 피부 주름 개선, 피부 노화 완화에 도움을 주는 원료이며, 효능이 있는 특정 성분을 정제함으로 정제 전과 비교하여 그 효과가 더욱 증강될 수 있으며, 마름 발효물 및 마름 발효 정제물을 함께 사용할 수 있다.
본 발명은 다른 양태로 마름 발효물 제조방법을 제공하고, 상기 마름 발효물 제조방법은 마름 열매 추출물에 미생물을 접종하고 발효시켜 발효물을 제조하는 단계; 및 상기 발효물에서 상기 미생물을 제거하는 단계;를 포함한다.
이하 상기 마름 발효물 제조방법을 통해 본 발명을 자세히 설명한다.
본 발명에서 상기 마름 열매 추출물에 미생물을 접종하고 발효시켜 발효물을 제조하는 단계는 마름 열매의 기능성 물질의 함량을 증가시키기 위한 단계이다.
상기 마름 열매 추출물은 당업계에 공지된 통상의 추출 방법, 예를 들어 용매 추출법을 사용하여 제조될 수 있다. 용매 추출법을 이용한 혼합 추출물 제조시 사용되는 추출 용매는 물, 탄소 수가 1 내지 4인 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올) 또는 이들의 혼합물인 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고, 이중 물, 알코올 또는 이들의 혼합물에서 선택되는 것이 바람직하며, 추출 용매로 알코올을 사용하는 경우 알코올은 탄소 수가 1 내지 4인 저급알코올인 것이 바람직하고, 저급 알코올은 메탄올 또는 에탄올에서 선택되는 것이 더 바람직하며, 더욱 더 바람직하게는 에탄올일 수 있다.
또한, 상기 마름 열매 추출물을 에탄올로 추출하는 경우, 예를 들어, 70%(v/v) 에탄올을 마름 열매의 5~20 배 중량으로 첨가하고, 상온에서 18~30시간 동안 추출할 수 있고, 상기 마름 열매 추출물의 당도는 4~10brix, 바람직하게는 6~8birx일 수 있다.
또한, 상기 마름 열매 추출물을 열수 추출로 추출하는 경우, 예를 들어, 정제수를 마름 열매의 5~20 배 중량으로 첨가하고, 100~140℃로 4~8시간 동안 추출할 수 있으며, 상기 마름 열매 추출물의 당도는 4~10brix, 바람직하게는 6~8birx일 수 있다.
본 발명에서 상기 미생물은 바실러스 속(Bacillus sp .) 균주, 락토바실러스 속(Lactobacillus sp .) 균주 또는 이들의 혼합 균주로 발효될 수 있으며, 상기 바실러스 속(Bacillus sp .) 균주는 바실러스 메틸로트로피쿠스(Bacillus methylotrophicus) 또는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)일 수 있고, 상기 락토바실러스 속(Lactobacillus sp .) 균주는 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei)일 수 있고, 바람직하게는 바실러스 서브틸리스 및 바실러스 메틸로트로피쿠스의 혼합균주일 수 있다.
상기 발효란 미생물이 가지고 있는 효소가 원재료를 변화시켜 이로운 성분을 만들어내는 과정을 말하며, 발효 과정 중에는 유효 성분들이 추출되며 기능성 물질의 함량이 증가한다. 또한, 본 발명에서 상기 발효는 상기 미생물 균주의 배양액을 107~1010 cfu/㎖로 조절하여, 상기 마름 열매 추출물에 대하여 0.1~10 중량%, 바람직하게는 0.5~5 중량%를 접종할 수 있고, 1~5일, 바람직하게는 2~4일 동안, 25~45℃, 바람직하게는 30~40℃에서 수행될 수 있다.
또한, 상기 미생물 배양 및 발효 시 배지 조성은 글루코오스 0.2~1 중량%, 효소 추출물 0.1~0.5 중량%, 소이톤(soytone) 0.05~0.3 중량% 및 증류수(잔량)일 수 있다.
본 발명에서 상기 발효물에서 상기 미생물을 제거하여 마름 발효물을 제조하는 단계는 마름 발효물의 추가 발효를 방지하기 위해 미생물을 제거하는 단계로서, 상기 미생물 제거는 원심분리 및 여과를 통해 제거될 수 있으며, 예를 들어, 상기 발효물을 원심분리기를 통해 미생물을 분리한 후, 0.1~0.3 ㎛ 필터로 여과하여 미생물을 제거할 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 마름 발효 정제물의 제조방법 모식도이다.
도 1을 참조하면, 마름 발효물을 용매 분획하는 단계는 마름 발효물을 정제하여 펩타이드를 추출하는 단계로서 상기 용매 분획은 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물을 통해 순차적으로 수행될 수 있다. 또한, 상기 용매 분획 후 컬럼을 통해 정제할 수 있다.
또한, 본 발명에서 상기 마름 발효 정제물은 마름 열매에서 유래된 트리펩타이드(Tripeptide)일 수 있고, 상기 트리펩타이드는 글리신(Glycine, Gly)-프롤린(Proline, Pro)-세린(Serine, Ser), 글리신(Glycine, Gly)-프롤린(Proline, Pro)-아르기닌(Arginine, Arg), 글리신(Glycine, Gly)-프롤린(Proline, Pro)-프롤린(Proline, Pro) 또는 글리신(Glycine, Gly)-프롤린(Proline, Pro)-메티오닌(Methionine, Met)일 수 있다.
본 발명에서 상기 화장료 조성물은 상기 마름 발효물 또는 상기 마름 발효 정제물을 1~90 중량% 포함할 수 있고, 바람직하게는 1~20 중량% 포함할 수 있다. 또한, 상기 화장료 조성물은 상기 마름 발효물 및 상기 마름 발효 정제물을 포함할 수 있고, 각각 1~20 중량% 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 콜라게나제, MMP-1(Matrix Metalloproteinase-1)과 같은 콜라겐 분해 효소의 활성을 저해하는 효과가 매우 우수한 것으로 확인이 되었으며, 또한 세포 내 콜라겐 생성을 촉진하는 효과와 피부세포의 재생능을 향상시키는 효과 또한 매우 우수한 것으로 확인이 되었다.
본 발명에 따른 상기 화장료 조성물은 젤 타입, 스킨 타입, 크림 타입, 연고 타입 등으로 적용될 수 있지만, 이들만으로 한정되는 것은 아니다. 상기의 조성물은 그것의 타입에 따라 적절한 통상의 연화제, 유화제, 증점제 또는 당업계에 공지되어 있는 기타 물질들을 첨가하여, 공지의 방법에 의해 적절하게 제조될 수 있다.
상기 젤 타입 조성물은 트리메틸올프로판, 폴리에틸렌 글리콜 또는 글리세린 등의 연화제, 프로필렌 글리콜, 에탄올, 이소세틱알콜 등의 용매, 정제주 등을 첨가하여 제조할 수 있다.
상기 스킨 타입 조성물은 스테아릴 알콜, 미리스틸 알콜, 베헤닐 알콜, 아라키딜 알콜, 이소스테아릴 알콜, 이소세틸 알콜 등의 지방 알콜, 부틸렌 글라이콜, 글리세린, 알란토인, 메틸 파라벤, 이디티에이-2-소디움, 잔탄검, 디메티콘, 폴리 에틸렌 글라이콜-60 하이드로제네이트 카스톨 오일, 폴리 소르베이트 60 및 정제수 등을 첨가하여 제조할 수 있다.
상기 크림 타입 조성물은 스테아릴 알콜, 미리스틸 알콜, 베헤닐 알콜, 아라키딜 알콜, 이소스테아릴 알콜, 이소세틸 알콜 등의 지방 알콜, 레시틴, 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 소프파티질세린, 소프파티딜이노시톨 등의 리피드, 이들의 유도체, 글리세릴 스테아레이트, 소르비탄 팔미테이트, 소리비탄 스테아레이트 등의 유화제, 아보카도 오일, 살구 오일, 바바수 오일, 유리지치 오일, 동백 오일 등의 천연 지방 또는 오일, 프로필렌글리콜 등의 용매 및 정제수 등을 첨가하여 제조할 수 있다.
상기 연고 타입 조성물은 연화제, 유화제 및 마이크로크리스탈린납, 파라핀, 세레신, 밀납, 경납, 바세린 등의 왁스를 첨가하여 제조할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 유효성분 이외에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 피부 주름개선 성분을 1종 이상 추가로 함유할 수 있다. 피부주름개선 성분으로는 비타민 C, 레티노산, TGF, 동물 태반 유래의 단백질, 베튤린산 및 클로렐라 추출물로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 형광물질, 살진균제, 굴수성 유발물질, 보습제, 방향제, 방향제 담체, 단백질, 용해화제, 당유도체, 일광차단제, 비타민, 식물 추출물 등을 포함하는 부형제를 추가로 함유할 수 있다.
본 발명에서 상기 화장료 조성물은 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이크림, 세럼, 영양크림, 맛사지크림, 클렌징크림, 클렌징로션, 클렌징폼, 클렌징워터, 파우더, 엣센스, 팩, 헤어토닉, 헤어트리트먼트, 샴푸 또는 린스로 제형화 될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 통상의 방법에 의해 제형화될 수 있다. 피부 외용제의 제형화에 있어서 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있고, 화장료 조성물의 제형화에 있어서 International cosmetic ingredient dictionary, 6th ed(The cosmetic, Toiletry and Fragrance Association, Inc, Washington, 1995)에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있다.
구체적으로, 상기 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형으로 제조할 수 있다. 예컨대, 유연 화장수 또는 영양 화장수 등의 화장수; 훼이셜 로션, 바디로션 등의 유액; 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림 등의 크림; 에센스; 화장연고; 스프레이; 젤; 팩; 선 스크린; 메이크업 베이스; 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션; 파우더; 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일 등의 메이크업 제거제; 또는 클렌징 폼, 비누, 바디워시 등의 세정제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 상기 피부 외용제는, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 화장료 조성물은 각각의 제형에 있어서 상기 필수성분 외에 제형의 종류 또는 사용 목적 등에 따라 본 발명에 따른 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 다른 성분들이 적절히 배합될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 통상적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있으며, 예컨대 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 허용 가능한 담체는 제형에 따라 달리할 수 있다. 예컨대, 연고, 페이스트, 크림 또는 젤로 제형화될 때담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 파우더 또는 스프레이로 제형화될 때, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있고, 스프레이의 경우 클로 로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 더 포함할 수 있다.
상기 화장료 조성물은 용액 또는 유탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 용매, 용해화제, 또는 유탁화제가 사용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-브틸글리콜 오일이 사용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 사용될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 현탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리 옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 사용될 수 있다.
상기 화장료 조성물은 최종 제품의 품질이나 기능에 따라 업계에서 통상적으로 사용되는 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉 쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가적으로 함유할 수 있다. 다만, 상기 보조제 및 그 혼합 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 영향을 미치지 않도록 적절히 선택할 수 있다.
본 발명에 따라 제조된 마름 발효물 또는 마름 발효 정제물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 마름 발효물 또는 마름 발효 정제물을 포함함으로써 콜라겐 분해 효소(Matrix Metalloproteinase-1)의 활성을 저해하고, 세포 내 콜라겐의 생성을 촉진하며, 표피 세포를 증식시킬 수 있다.
이하, 본 발명에 따른 구체적인 실시예를 들어 설명한다.
제조예 1
건조된 마름 열매 200g에 정제수 2kg을 첨가하여 120℃에서 6시간 동안 열수 추출하였으며, 추출 후 당도 6~8birx인 마름 열매 추출물을 사용하였다. 추출 후 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei , 한국세포주 은행에서 구입)균주를 배양하여 상기 마름 열매 추출물에 spectrophotometer로 측정한 농도가 1.0×109cfu/ml인 배양액 1 중량%를 접종하고, 37℃에서 3일간 발효하였으며, 배양에 사용된 배지는 글루코오스 0.6중량%, 효소 추출물 0.3 중량%, 소이톤 0.1 중량% 및 증류수로 구성된 배지를 사용하였다. 발효 후 발효액을 4000rpm, 10분 동안 원심분리하여 유산균과 배양액을 분리한 후, 배양액을 0.2㎛ 필터로 여과하여 마름 발효물을 제조하였다.
제조예 2
상기 제조예 1에서 미생물로 바실러스 메틸로트로피쿠스(Bacillus methylotrophicus, Apep microrganism S001, 한국세포주 은행에서 구입)를 사용한 것을 제외하고는 동일하게 마름 발효물을 제조하였다.
제조예 3
상기 제조예 1에서 미생물로 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis , Apep microrganism K007, 한국세포주 은행에서 구입)를 사용한 것을 제외하고는 동일하게 마름 발효물을 제조하였다.
제조예 4
상기 제조예 1에서 미생물로 바실러스 메틸로트로피쿠스(Bacillus methylotrophicus, Apep microrganism S001, 한국세포주 은행에서 구입) 및 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis , Apep microrganism K007, 한국세포주 은행에서 구입)를 1:1 중량부로 혼합한 혼합균주를 사용한 것을 제외하고는 동일하게 마름 발효물을 제조하였다.
제조예 5
건조된 마름 열매 200g에 70%(v/v) 에탄올 2kg을 첨가하여 25℃에서 24시간 동안 추출하였으며, 추출 후 당도 6~8birx인 마름 열매 추출물을 사용하였다. 추출 후 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei , 한국세포주 은행에서 구입)균주를 배양하여 상기 마름 열매 추출물에 spectrophotometer로 측정한 농도가 1.0×109cfu/ml인 배양액 1 중량%를 접종하고, 37℃에서 3일간 발효하였으며, 배양에 사용된 배지는 글루코오스 0.6중량%, 효소 추출물 0.3 중량%, 소이톤 0.1 중량% 및 증류수로 구성된 배지를 사용하였다. 발효 후 발효액을 4000rpm, 10분 동안 원심분리하여 유산균과 배양액을 분리한 후, 배양액을 0.2㎛ 필터로 여과하여 마름 발효물을 제조하였다.
제조예 6
상기 제조예 5에서 미생물로 바실러스 메틸로트로피쿠스(Bacillus methylotrophicus, Apep microrganism S001, 한국세포주 은행에서 구입)를 사용한 것을 제외하고는 동일하게 마름 발효물을 제조하였다.
제조예 7
상기 제조예 5에서 미생물로 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis , Apep microrganism K007, 한국세포주 은행에서 구입)를 사용한 것을 제외하고는 동일하게 마름 발효물을 제조하였다.
제조예 8
상기 제조예 5에서 미생물로 바실러스 메틸로트로피쿠스(Bacillus methylotrophicus, Apep microrganism S001, 한국세포주 은행에서 구입) 및 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis , Apep microrganism K007, 한국세포주 은행에서 구입)를 1:1 중량부로 혼합한 혼합균주를 사용한 것을 제외하고는 동일하게 마름 발효물을 제조하였다.
제조예 9
건조된 마름 열매 200g에 정제수 2kg을 첨가하여 120℃에서 6시간 동안 열수 추출하여 당도 6~8birx인 마름 열매 추출물을 제조하였다.
제조예 10
건조된 마름 열매 200g에 70%(v/v) 에탄올 2kg을 첨가하여 25℃에서 24시간 동안 추출하여 당도 6~8birx인 마름 열매 추출물을 제조하였다.
정제예
1) 상기 제조예 4에서 제조한 마름 발효물에 n-헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트 및 부탄올을 순차적으로 가하여 n-헥산 분획물, 디클로로메탄 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물 및 물 분획물로 분리하여 분획물을 제조하였다.
2) 분리된 물 분획물을 감압 농축한 후, 소량의 70%(v/v) 메탄올에 용해하고 Sephadex LH-20 수지(Sigma)가 충진된 open column(수지 50g이 담긴 직경 28cm, 길이 45cm의 유리컬럼)을 이용하여 SP1(fr1~2), SP2(fr3~5), SP3(fr6~7), SP4(fr8~14) 및 SP5(fr15~21)로 분리하였다.
3) 분리된 SP2(fr3~5)를 실리카 컬럼 크로마토그래피를 수행하였다. 이때 컬럼은 역상 실리카 컬럼(Reverse phase Silica column)을 사용하였고, 이동상 용매는 증류수 100%부터 증류수 : 99.5%(v/v) 메탄올 90 : 10, 80 : 20 순으로 1L 씩 변화시켜 진행하여 fr1(1~2), fr2(3~5), fr3(6~7), fr4(8~14) 및 fr5(15~21)로 분리하였다.
4) 분리된 fr2(3~5)를 prep-HPLC(Xterra C18 ODS column, 3ml/min)를 하여 정제하였다. 용매는 용매 A : Water in 0.1% TFA, 용매 B : 아세토나이트릴(ACN) in 0.1% TFA, 용매 C : 99.5%(v/v) 메탄올을 95:2.5:2.5 조건으로 진행하여 comp1, comp2, comp3, comp4, comp5 및 comp6으로 분리된 마름 발효 정제물을 정제하였다.
실험예 1
상기 제조예 1 내지 10에서 제조된 마름 발효물의 피부 주름 개선 효과를 확인하기 위해 하기 방법에 따라 생체 외(In vitro) 콜라게나아제(collagenase) 활성 저해 실험을 진행하였고, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
<실험 방법>
(1) 콜라겐을 인산 완충액에 녹여 준비한다(100ppm). 이때 양성 대조군으로 아데노신을 같은 농도로 준비한다.
(2) 100mM Tris-cl buffer, 100mM CaCl2 및 0.25mg/ml 콜라게나제가 포함된 mixture를 준비하고, 상기 각각의 시험물질 및 양성대조군을 상기 mixture에 5%(v/v)의 농도로 첨가하여 반응을 진행시킨다.
(2) 25mM 시트르산을 400㎕/tube 첨가하여 반응을 종료시킨다.
(3) 이후 에틸아세테이트를 1.5㎖/tube 첨가하고, 볼텍싱(vortexing)한 후 상등액을 취하여 황산나트륨 150mg/ep-tube에 옮기고, 볼텍싱 후 원심분리(10,000rpm, 3분)한다.
(4) 상등액 300㎕/ep-tube를 취하여 석영 96well 플레이트에 옮긴 후 320nm에서 흡광도를 측정한다.
Figure 112019130893637-pat00001
상기 표 1을 참조하면, 모든 발효물(제조예 1 내지 8)에서 콜라게나제 억제능을 확인할 수 있으며, 발 상기 표 1을 참조하면, 모든 발효물(제조예 1 내지 8)에서 콜라게나제 억제능을 확인할 수 있으며, 발효하지 않은 경우(제조예 9 및 10)보다 콜라게나제 억제능이 우수함을 확인할 수 있다.
또한, 락토바실러스 속 균주를 사용한 경우(제조예 1 및 제조예 5)보다 바실러스 속 균주를 사용한 경우(제조예 2 내지 4 및 제조예 6 내지 8)의 콜라게나제 억제능이 우수하며, 단독 균주를 사용한 경우(제조예 1, 2, 3, 5, 6 및 7)보다 혼합균주를 사용한 경우(제조예 4 및 8)의 콜라게나제 억제능이 우수한 것을 알 수 있다.
또한, 열수 추출한 경우(제조예 1 내지 4)가 에탄올 추출한 경우(제조예 5 내지 8)보다 콜라게나제 억제능이 우수한 것을 알 수 있다.
실험예 2
제조예 9의 마름 열매 추출물, 제조예 4 마름 발효물 및 정제예에서 분리한 분획물의 단백질 함량을 로우리방법(lowry methods)를 이용하여 측정하였으며, 측정 결과를 하기 표 2 및 도 2에 나타내었다.
Figure 112019130893637-pat00002
상기 표 2 및 도 2를 참조하면, 마름 열매 추출물(제조예 9)에 비해 마름 발효물(제조예 4)의 단백질 함량이 정량 값이 약 12.3% 증가하는 것을 확인할 수 있으며, 마름 발효 분획물(정제예)은 물 분획물의 단백질 함량이 가장 높은 것을 확인할 수 있다.
또한, 마름 발효물(제조예 4)보다 마름 발효 분획물(정제예)의 단백질 함량이 2배 이상인 것을 확인할 수 있다.
실험예 3
상기 정제예에서 분리된 SP1 내지 SP5에 대하여 실리카겔 박막크로마토그래피(Thin Layer Chromatography, TLC)를 디클로로메탄 : 99.5%(v/v) 메탄올(1:1) 혼합 용매 하에 실시하였으며, 이에 따른 TLC 패턴을 도 3에 나타내었다.
도 3을 참조하면, 분리된 물질을 확인한 결과 단백질임을 확인할 수 있고, 이에 따라 단백질 정제 조건을 확인할 수 있다.
실험예 4
상기 정제예에서 분리된 fr1 내지 fr5에 대하여 실리카겔 박막크로마토그래피(Thin Layer Chromatography, TLC)를 디클로로메탄 : 99.5%(v/v) 메탄올(1:1) 혼합 용매 하에 실시하였으며, 이에 따른 TLC 패턴을 도 4에 나타내었다.
도 4를 참조하면, 분리된 물질을 확인한 결과 펩타이드임을 확인할 수 있고, 이에 따라 펩타이드 정제 조건을 확인할 수 있다.
실험예 5
상기 정제예에서 분리된 물(물 층), SP2, fr2 및 comp2에 포함된 단백질 함량을 로우리방법(lowry methods)를 이용하여 측정하였으며, 측정 결과를 하기 표 3 및 도 5에 나타내었다.
Figure 112019130893637-pat00003
상기 표 3 및 도 5를 참조하면, HPLC(High Pressure Liquid Chromatography)를 통한 분리정제 진행 시 단백질 함량이 높아짐은 확인하였으나, 일정수준 이상으로는 단백질 함량이 높아지지 않는 것을 확인할 수 있다.
실험예 6
제조예 4에 따른 마름 발효물, 정제예의 물 층, SP2, 및 comp1 내지 comp4에 포함된 타겟 펩타이드(Gly-Pro-Ser) 함량을 상기 정제예와 동일한 prep-HPLC를 이용하여 측정하였으며, 측정 결과를 하기 표 4 및 도 6에 나타내었다.
Figure 112019130893637-pat00004
상기 표 3 및 도 6을 참조하면, 마름 발효물(제조예 4) 및 comp4(정제예)의 경우는 타겟 펩타이드가 나타나지는 않았으나, 상이한 펩타이드가 존재하였으며, comp2(정제예)의 경우 타겟 펩타이드의 함량이 92%까지 향상된 것을 확인할 수 있다.
실험예 7
정제예에서 분리된 comp1 내지 comp4의 HPLC 분석 결과를 도 7에 나타내었고, comp1 내지 comp4의 구조를 확인하기 위하여 하기 실험방법에 따라 실험을 진행하였고, 그 결과를 도 8에 나타내었다.
<실험 방법>
100ppm으로 각각의 시료를 준비한 후, Mass(LCMS-IT-TOF, SHIMADZU)를 이용하여 시료 별 Mass를 측정하였다. 이후 600MHz NMR(Agilent Technologies(DD2 600 MHz FT NMR))을 이용하여, 1H, 13C, HMBC, HMQC, COSY 및 DEPT를 측정하여 구조를 확인하였다.
도 8a를 참조하면, Tripeptide-G1(comp2)의 경우 1H NMR와 13C NMR과 2D NMR을 통해 정확한 구조를 파악하였으며, 1H NMR에서 δ 1.8~2.173에서 피롤리딘(pyrrolidine)의 특징적인 주변환경에 의해 갈라진 CH2*2개의 피크(peak)를 확인하였으며, CH2-CH의 특징적인 피크들을 δ3.4~3.829에서 확인하였다. 또한, DEPT를 통해 C*3, CH*2, CH2*5를 확인하여 총 CH,CH2,CH3의 개수를 파악하였으며, 2D-NMR을 통해 H-NMR에서 확인한 피롤리딘(pyrrolidine)과 C=O의 이중결합에 결합되어 있는 것을 확인하였으며, CH-CH2에서 결합된 C=O 피크 또한 확인하였다. 이를 통해 MS에서 확인한 분자량과 확인하였을 때, Gly-Pro에 Ser이 붙어 있는 구조(Gly-Pro-Ser)임을 확인하였다. 그 후 펩타이드 합성을 진행하였으며, 합성된 펩타이드와 발효물에서 분리, 정제한 펩타이드를 HPLC를 통해 비교하여 동일한 시간대에 피크가 나옴을 확인하였다.
도 8b를 참조하면, Tripeptide-G2(comp1)의 경우 1H NMR을 통해 δ 1.8~2.173에서 피롤리딘의 특징적인 주변환경에 의해 갈라진 CH2*2개의 피크를 확인하였으며,δ1.510~ 1.8대에서 CH2-CH2-CH2의 피크들이 확인되었으며, δ4.2에서 CH 피크를 확인하였다. 이를 통해 Ms에서 확인한 분자량과 확인하였을 때, Gly-Pro에 Arg이 붙어 있는 구조(Gly-Pro-Arg)임을 확인하였다. 그 후 펩타이드 합성을 진행하였으며, 합성된 펩타이드와 발효물에서 분리, 정제한 펩타이드를 HPLC를 통해 비교하여 동일한 시간대에 피크가 나옴을 확인하였다.
도 8c를 참조하면, Tripeptide-G3(comp3)의 경우 1H NMR을 통해 δ 1.8~2.173에서 피롤리딘의 특징적인 주변환경에 의해 갈라진 CH2*2개의 피크를 확인하였으며, 이 피크를 통해 프롤린(proline)이 있음을 확인하였다. 다만 이 피크가 2배로 나온 것으로 보아 pro-pro의 구조를 가진 것을 확인하였고, 이 피크들이 동일하게 2배로 확인되어 pro이 두 개인 구조(Gly-pro-pro)임을 확인하였다. 그 후 펩타이드 합성을 진행하였으며, 합성된 펩타이드와 발효물에서 분리, 정제한 펩타이드를 HPLC를 통해 비교하여 동일한 시간대에 피크가 나옴을 확인하였다.
도 8d를 참조하면, Tripeptide-G4(comp4)의 경우 1H NMR와 13C NMR과 2D NMR을 통해 구조를 파악하였으며, 1H NMR을 통해 δ 1.8~2.173에서 피롤리딘의 특징적인 주변환경에 의해 갈라진 CH2*2개의 피크를 확인 하였으며, δ1.9대에서 S-CH3의 피크를 확인하였다. 또한, DEPT를 통해 C*3, CH*2, CH2*6, CH3*1을 확인하여 총 C의 개수를 파악하였으며, 2D-NMR을 통해 H-NMR에서 확인한 피롤리딘과 C=O의 이중결합에 결합되어 있는 것을 확인하였으며, CH-CH2의 피크 또한 확인하였다. 이를 통해 Ms에서 확인한 분자량과 확인하였을 때, Gly-Pro에 Met이 붙어 있는 구조(Gly-Pro-Met)임을 확인하였다. 그 후 펩타이드 합성을 진행하였으며, 합성된 펩타이드와 발효물에서 분리, 정제한 펩타이드를 HPLC를 통해 비교하여 동일한 시간대에 피크가 나옴을 확인하였다.
실험예 8
Matrix methaloprotease-1(MMP-1, collagenase) 생성을 저해하는 물질은 콜라겐을 보호하여 피부조직의 기계적 특성을 유지시켜 탄력과 피부가 늘어지는 것을 방지하기 때문에 원료에 대한 MMP-1 생성을 저해하는 활성을 측정하여 활성을 갖는 원료는 주름을 개선하고 탄력 있는 피부를 위한 화장품 개발에 유용하게 사용될 수 있는 것으로 평가할 수가 있다. 이에, 상기 제조예 4의 마름 발효물, 제조예 9의 마름 열매 추출물 및 정제예의 분획물의 MMP-1 생성 저해능 시험을 하기와 같은 방법으로 진행하였고, 이에 대한 결과를 도 9에 나타내었다. 대조군으로 레티놀을 이용하였다.
<실험 방법>
사람 진피섬유아세포 Human dermal fibroblst(HDF) 세포는 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's media, Sigma)에 10% 우태아혈청(fetal bovine serum, Sigma)을 첨가한 배지로 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다. 24-웰 플레이트에 2 X 105 cells/well의 농도로 세포를 배양하고 세포의 부착을 확인한 뒤, 대조군에는 아무것도 처리하지 않고 용매만 넣었으며, 디쉬에는 실험군과 대조군으로 레티놀을 10 ug/ml의 농도가 되도록 처리를 하였다. 각각의 디쉬에 시험물질을 가한 뒤 2일 동안 배양하였다. 2일 뒤, 배지를 채취하여 Matrix Metalloproteinase-1(MMP-1), Human,biotrak,ELISA kit (GE healthcare RPN2610)을 통해 MMP-1의 생성저해능을 측정하였다.
도 9를 참조하면, 생성되는 MMP-1의 발현 양이 대부분의 실험군에서 줄어드는 것을 확인하였으며 실험군 내에서도 조성물 내 기능성 원료성분의 조합 및 조성물에 따라 차이가 있는 것으로 확인되었다. 특히 마름 발효 후 분획 시 물층(정제예)에 가장 MMP-1 발현을 저해하는 물질이 많이 분포되어 있는 판단된다. 이러한 결과로부터 피부에 MMP-1생성을 유발하는 UV가 요인으로 적용되었을 때, 마름 발효물 및 마름 발효 정제물을 혼합하여 사용하는 것이 더 유용한 결과를 나타내어 MMP-1생성을 저해하여 피부의 피부노화을 억제할 수 있을 것으로 사료된다.
실험예 9
상기 제조예 4의 마름 발효물, 정제예의 물층, SP2, fr2 및 comp2의 세포 내 콜라겐 생성능을 하기와 같은 방법으로 진행하였고, 이에 대한 결과를 도 10에 나타내었다. 대조군으로 형질전환 성장 인자 베타(transforming growth factor beta: TGFβ)를 사용하였다.
<실험 방법>
시험에 사용할 사람 진피섬유아세포 Human dermal fibroblst(HDF) 세포는 Medium 106 (cascade biologics, M-106-500) 에 1X LSGS(Low Serum Growth Supplement, cascade biologics S-003-10)을 첨가한 배지로 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다. 24-웰 플레이트에 1X 105 cells/well의 농도로 세포를 배양하고 세포의 부착을 확인한 뒤, 실험군과 대조군으로 TGFβ를 각각 1mg/ml 및 10μg/ml의 농도가 되도록 처리를 하였다. 각각의 디쉬에 시험물질을 가한 뒤 2일 동안 배양하였다. 2일 뒤, 배지를 채취하여 Procollagen Type I C-peptide(이하 PIP) EIA kit (takara MK101) 을 통해 Collagen 생성량을 측정하였다.
도 10을 참조하면, 모든 실험군과 대조군에서 콜라겐 생성량이 증가하는 것을 확인하였고, 정제되지 않은 경우(마름 발효물)보다 정제된 경우(정제예 물층, SP2, fr2 및 comp2)가 우수한 콜라겐 생성효과가 있음을 확인할 수 있고, 또한 가장 많이 정제된 comp2가 가장 높은 콜라겐 생성효과가 있음을 알 수 있다.
이러한 결과로부터 피부에서의 collagen 생성을 촉진하는 성분이 마름 열매 내에 다량 포함되어 있는 것으로 추측되며, 마름 발효물 및 마름 발효 정제물을 혼합하여 사용하는 것이 collagen 생성을 증가시켜 피부의 피부노화을 억제할 수 있을 것으로 사료된다.
실험예 10
정제예의 comp1 내지 4의 세포 증식능을 확인하기 위해 하기와 같은 방법으로 실험을 진행하였고, 그에 대한 결과를 도 11 및 도 12에 나타내었다. 세포 증식능 실험은 MTT assay를 이용하여 측정하였다.
<실험 방법>
3T3세포 및 HACAT세포를 24웰 플레이트에 각 웰당 4 X 104 cells/24well의 세포수가 되도록 seeding 한 후 24시간 동안 37℃, 5% CO2조건으로 항온 배양하였다. PBS(phosphate buffer saline)로 2회 세척하고, 각각의 시료를 농도별(1mg~1ug/mL)로 처리하여 24시간 동안 항온 배양하였다. 배양 후 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 0.5% in DPBS(Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline)를 배양 배지와 1:9(v/v)로 혼합하여 첨가한 후 2시간 동안 CO2 인큐베이터에서 배양한다. 이후 생성된 포르마잔(frmazan)을 DMSO(Dimethyl sulfoxide)에 녹여 ELISA를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하였다.
도 11 및 도 12를 참조하면, HACAT 세포 및 3T3세포에 대하여, 저농도에서 고농도까지 처리한 4종의 펩타이드(comp1 내지 4) 모두 농도 의존적으로 세포 증식능이 있는 것으로 확인었으며 특히 comp2 펩타이드에서 가장 높은 세포 증식능을 보이는 것으로 확인되었으며, 세포들의 현미경적인 관찰에서도 별다른 변화가 관찰되지 않았다.
이를 통해 본 발명의 화장료 조성물은 피부 관련 세포에 독성이 전혀 없음을 알 수 있으며 피부 세포 증식효과가 있는 것으로 보인다. 따라서 본 발명의 화장료 조성물을 피부에 처리하여도 큰 영향을 끼치지 않으리라는 것을 예측할 수 있다
실험예 11
정제예의 comp1 내지 4의 열 및 광안전성을 확인하기 위하여 하기와 같은 방법으로 실험을 진행하였고, 그에 대한 결과를 도 13 및 도 14에 나타내었다.
<실험 방법>
시료가 각각 10 mg/mL이 되도록 각각의 시료를 50 mM Tris-HCl(pH 8.0) 완충용액에 용해하여 유리 바이알에 분주하여 넣은 후 50℃에서 4주간 보관하며 열에 의한 조성물 내 펩타이드의 손실을 측정하고 동일한 방법으로 일광 조건에서 안정성 여부를 측정하였다.
도 13 및 도 14를 참조하면, 열에 의한 펩타이드 손실을 측정하고 일광 조건에서 안정성 여부를 측정한 결과, 모든 4종의 펩타이드(comp1 내지 4)에서 4주까지 단지 10% 미만의 펩타이드 손실을 나타내어 열 및 일광 보관 기간에 있어 높은 안정성을 갖는다는 것을 확인하였다.
실시예
하기 표 5에 기재된 각각의 성분들을 화장료 조성물 100 중량%에 대하여 하기 기재된 비율에 따라 첨가하였으며, 마름 발효물 및 마름 발효 정제물은 1~20 중량%를 크림 타입 조성물에 첨가하였다.
Figure 112019130893637-pat00005
이상에서 설명한 본 발명의 바람직한 실시예들은 기술적 과제를 해결하기 위해 개시된 것으로, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 사상 및 범위 안에서 다양한 수정, 변경, 부가 등이 가능할 것이며, 이러한 수정 변경 등은 이하의 특허청구범위에 속하는 것으로 보아야 할 것이다.
따라서, 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미, 범위 및 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (7)

  1. 마름 발효 정제물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물로서,
    상기 마름 발효 정제물은 트리펩타이드(Tripeptide)이고, 상기 트리펩타이드는 글리신(Glycine, Gly)-프롤린(Proline, Pro)-세린(Serine, Ser), 글리신(Glycine, Gly)-프롤린(Proline, Pro)-아르기닌(Arginine, Arg), 글리신(Glycine, Gly)-프롤린(Proline, Pro)-프롤린(Proline, Pro) 또는 글리신(Glycine, Gly)-프롤린(Proline, Pro)-메티오닌(Methionine, Met)인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제1항에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 상기 마름 발효 정제물을 1~90 중량% 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 콜라겐 분해 효소(Matrix Metalloproteinase-1)의 활성 저해, 세포 내 콜라겐 생성 촉진 및 표피 세포의 증식을 촉진하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  7. 삭제
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