KR102333208B1 - 율무 미강 추출물 또는 그 발효물을 이용한 피부 미백용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 멜라닌 생합성 저해 활성을 가지고, 또 항염증 활성과 항산화 활성을 가지는 율무 미강 추출물 또는 그 발효물을 이용한 피부 미백용 조성물을 개시한다.

Description

율무 미강 추출물 또는 그 발효물을 이용한 피부 미백용 조성물{Skin-lightening Composition Using an Extract of Adlay Bran or Fermentation Product Thereof}

본 발명은 율무(Coix lacryma-jobi L. var. mayuen (Roman.) Stapf) 미강 추출물 또는 그 발효물을 이용한 피부 미백용 조성물에 관한 것이다.

의학기술의 발달과 생활수준의 향상으로 사람들의 아름다움에 대한 욕구가 강해지고 외모 자체가 하나의 사회적 경쟁력이라는 인식도 증가하고 있어 피부 미백 등에 대한 선호도가 높아지고 화장품 시장이 확대되고 있다(J. Korean Soc. Food Sci. Nutr., 42(3):355 (2013)).

피부는 인체의 약 16%를 차지하고 있으며, 외부환경과 직접적으로 접해 있어 온도, 습도 및 자외선 등과 같은 외부 유해인자들로부터 인체를 보호하는 중요한 역할을 하고 있다. 피부는 각질 아래 표피, 진피, 피하조직으로 구성되어 있다. 표피는 주로 케라틴으로 되어 있는 케라티노사이트(keratinocytes), 멜라닌을 생성하고 분비하는 멜라닌 세포(melanocytes), 랑게르한스 세포(langerhans cells) 등의 면역세포 그리고 지각관련세포 (Merkel's copuscles)로 구성되는 얇은 보호층으로 외부자극과 병원균의 침입을 방지하고 체온조절, 수분과 지질 성분 유지 작용을 한다.

멜라닌은 생물체에 널리 존재하는 페놀류 고분자 천연 색소로 인체에서는 표피 기저층에 있는 멜라린 세포(melanocyte) 내의 멜라노솜(melanosome)에서 합성되며 주변 각질 세포로 전이되어 사람의 피부색을 나타낸다. 멜라닌이 비정상적으로 적게 되면 백반증과 같은 피부 병변이 유발되며, 반대로 과잉으로 생산될 경우에는 흑피증(melasma), 염증후흑피증(postinflammatory melanoderma), 일광흑색점(solar lentigo) 등과 같은 후천성 과다색소침착증을 포함하는 다양한 피부질환을 유발할 수 있다.

멜라닌의 합성은 피부의 기저층에 존재하는 멜라노사이트(melanocyte)에서 멜라닌소체(melanosome)를 만들어 이루어지며 멜라닌이 합성되는 일련의 과정을 총칭하여 멜라닌 생성 경로(melanogenesis)라 한다. 멜라닌 생성은 아미노산의 하나인 티로신(tyrosine)을 기질로 하며, 티로시나제(tyrosinase), TRP-1(tyrosinase related protein-1), TRP-2(tyrosinase related protein-2)에 의해 DOPA(3,4-dihydroxyphenylalanine)를 거쳐 도파 퀴논(DOPA quinone)으로 전환된 후 비효소적 반응, 자발적 산화 과정을 거친 후 아미노산 혹은 단백질과의 중합 반응에 의해 멜라닌이 합성된다(Korean J. FOOD SCI. TECHNOL., 2000. 32(3):736; Journal of Life Science, 2013. 23(12):1445; Pigment Cell Res.1999. 12(1):4-12.). 최근에는 티로시나제, TRP-1, TRP-2뿐만 아니라 MITF(microphtalmia associated transcription factor) 등과 같은 단백질을 이용하여 멜라닌 합성 억제에 대한 연구도 이루어지고 있다. 주요한 세포 내 신호전달 경로는 cAMP/PKA(cyclic monophosphate/protein kinase A) 경로로서, cAMP는 PKA, CREB1(cAMP responsive element binding protein 1)을 경유하여 MITF의 발현을 촉진하며 MITF는 멜라닌 합성 과정에서 중요한 전사 조절 인자로 티로시나제, TRP-1, TRP-2의 전사를 촉진한다(Pharmazie. 2015 Oct;70(10):646-9.; Int J Mol Sci. 2015 Oct 13;16(10):24219-42; Curr Pharm Biotechnol. 2015;16(12):1111-9.).

멜라닌을 생성하는 첫 단계로 티로시나아제가 가장 중요한 역할을 하기 때문에 미백제에 대한 연구는 주로 티로시나아제(tyrosinase) 활성을 조절하기 위하여 티로시나아제 활성 저해 물질이나 티로시나아제의 기질에 대한 길항물질을 개발하는 방향으로 연구가 진행되어 왔다(Kor. J. Pharmacogn., 44(3):220, 2013).

현재 미백제로 가장 많이 사용되는 알부틴(arbutin)은 티로신의 길항제이며, 코지산(kojic acid)은 티로시나아제 활성 부위를 킬레이트화하여 티로신에서 도파, 도파퀴논으로 진행되는 과정을 저해한다(Korean J. Plant Res., 26(5):526, 2013; J. Korean Soc. Food Sci. Nutr., 41(2):156, 2012). 알부틴과 코직산은 강력한 미백효과가 있는 것으로 알려져 있으나, 피부 자극 등의 일부 부작용으로 인하여 상대적으로 부작용이 적은 천연의 물질로부터 미백 활성을 가지는 물질을 찾기 위한 연구가 활발하게 이루어지고 있다.

특히 천연물질은 항산화 활성을 가지는 경우가 많고 항산화 활성은 멜라닌 생성 과정에서 도파 퀴논(DOPA quinone)의 산화를 억제하여 미백 활성을 나타내기 때문에 멜라닌 생성 경로(melanogenesis) 억제뿐만 아니라 항산화 활성의 증가가 미백 활성의 증가를 유도할 수 있다(J. Am. Acad. Dermatol. 3: 99-105, 1994).

본 발명은 율무 미강 추출물과 그 발효물의 멜라닌 생합성 저해 활성, 항산화 활성 등을 개시한다.

본 발명의 목적은율무 미강 추출물과 그 발효물을 이용한 피부 미백용 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.

본 발명자들은 아래의 실시에 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 율무 미강 추출물과 그 유산균 발효물이 B16F10 멜라노마 세포에서 멜라닌 생합성 저해 활성을 가짐을 확인하는 한편, 더불어 LPS(Lipopolysaccharide, 세균 지질 다당류)로 염증 반응을 유발시킨 마우스 대식세포 raw264.7 cell에서 염증 유발 물질인 NO(일산화질소)의 생성을 억제함을 확인하였고, 또한 ABTS 법에 따라 항산화 활성도 가짐을 확인하였다.

전술한 바를 고려할 때, 본 발명은 일 측면에 있어서, 율무 미강 추출물, 그 유산균 발효물 또는 그 발효물의 추출물을 유효성분을 포함하는 피부 미백용 조성물로 파악할 수 있고, 다른 측면에 있어서, 본 발명은 율무 미강 추출물, 그 유산균 발효물 또는 그 발효물의 추출물을 유효성분을 포함하는 항염증용 조성물 또는 염증 반응을 일으키는 NO 생성 억제제 조성물로 파악할 수 있으며, 또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 율무 미강 추출물, 그 유산균 발효물 또는 그 발효물의 추출물을 유효성분으로 하는 항산화용 조성물로 파악할 수 있다.

본 명세서에서, "율무 미강"이란 율무를 도정하는 과정에서 얻어지는 부산물로서, 일반적으로 종피와 배아로 구성된다.

또 본 명세서에서, "추출물"이란 본 발명에서의 추출 대상인 추출 대상인 율무 미강이나 그 발효물을 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜(메탄올, 에탄올, 부탄올 등), 메틸렌클로라이드, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, N,N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 침출하여 얻어진 추출물, 이산화탄소, 펜탄 등 초임계 추출 용매를 사용하여 얻어진 추출물 또는 그 추출물을 분획하여 얻어진 분획물을 의미하며, 추출 방법은 활성물질의 극성, 추출 정도, 보존 정도를 고려하여 냉침, 환류, 가온, 초음파 방사, 초임계 추출 등 임의의 방법을 적용할 수 있다. 분획된 추출물의 경우 추출물을 특정 용매에 현탁시킨 후 극성이 다른 용매와 혼합·정치시켜 얻은 분획물, 상기 조추출물을 실리카겔 등이 충진된 칼럼에 흡착시킨 후 소수성 용매, 친수성 용매 또는 이들의 혼합 용매를 이동상으로 하여 얻은 분획물을 포함하는 의미이다. 또한 상기 추출물의 의미에는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조 등의 방식으로 추출 용매가 제거된 농축된 액상의 추출물 또는 고형상의 추출물이 포함된다. 바람직하게는 추출용매로서 물, 메탄올 또는 이들의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물, 더 바람직하게는 추출용매로서 물과 메탄올의 혼합 용매를 사용하여 얻어진 추출물을 의미한다.

또 본 명세서에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

또 본 명세서에서 "발효물"은 그 발효 대상인 율무 미강에 유산균을 접종하고 배양시켜 얻어진 배양물을 의미한다. 이 배양물은 그대로 이용되거나, 감압농축 및/또는 동결건조시켜 액상 또는 분말상으로 이용되거나, 전술한 바의 방식으로 물, 에탄올 등을 사용하여 추출하거나, 그 추출물을 분획하거나, 그 추출물 또는 분획물을 농축하여 이용될 수 있다.

상기 발효물의 제조시 접종 미생물인 유산균의 탄소원이 배지에 첨가될 수 있는데 그러한 탄소원은 당업계에 잘 알려져 있고, 따라서 당업계에 알려진 임의의 것을 사용할 수 있는데, 통상은 올리고당, 유당, 포도당, 과당, 설탕, 당밀, 덱스트로스, 이들의 혼합물 등이 사용될 것이다. 이러한 탄소원은 의도한 발효 시간, 발효 정도 등을 고려하여 임의의 범위로 첨가될 수 있다. 첨가될 경우 발효 대상인 울무 미강 분말 100 중량부 기준 0.1 중량부 내지 5 중량부의 범위로 첨가될 것이다.

상기 발효물의 제조시 접종 미생물인 유산균은 특별한 제한이 없이, 락토바실러스 속 유산균(Lactobacillus sp.), 스트렙토코쿠스 속 유산균(Streptococcus sp.), 페디오코쿠스 속 유산균(Pediococcus sp.), 류코노스톡 속 유산균(Leuconostoc sp.) 및 비피도박테리움 속 유산균(Bifidobacterium sp.)이 모두 사용될 수 있는데, 구체적으로 락토바실러스 델브루에키(Lactobacillus delbrueckii), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 람노우수스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum), 페디오코커스 펜토사세우스(Pediococcus pentosaceus), 페디오코커스 세레비세(Pediococcus cerevisiae), 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis), 레코노스톡 시트레움(Leuconostoc citreum), 레코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides), 비피도박테리움 비피둠(Bifidobacterium bifidum) 등이 사용될 수 있다. 바람직하게는 아래의 실시예를 고려할 때 락토바실러스 속 유산균(Lactobacillus sp.) 중 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum)를 사용하는 경우이다.

또 상기에서 유산균 접종 후의 배양은 발효 원료인 율무 미강 추출물의 배지에의 첨가량, 탄소원의 첨가 여부나 첨가량, 의도한 피부 미백 활성의 정도 등을 고려하여 15℃~45℃의 온도 조건 특히 30℃~40℃의 온도 조건에서 10시간 이상, 특히 1일 내지 5일 동안 이루어질 수 있다.

본 발명의 피부 미백용 조성물은 유효성분 이외에, 피부 관련 활성을 보강·추가하기 위하여 당업계에 공지된 피부 미백 성분, 피부 주름 개선 성분, 자외선 보호 성분, 피부 보습 성분 등을 포함하여 제조될 수 있다. 구체적으로 피부 미백 성분으로서는 알부틴, 나이아신아마이드, 아스코빌글루코사이드, 알파-비사보롤, 유용성 감초 추출물(Oil Soluble Licorice(Glycyrrhiza) Extract) 등을 들 수 있으며, 또 피부 주름 개선 성분으로서는 레티놀, 레티닐팔미테이트, 아데노신, 폴리에톡실레이티드아마이드 등을 들 수 있고, 자외선 보호 성분으로서는 드로메트리졸, 드로메트리졸트리실록산, 디갈로일트리올리에이트, 디메치코디에칠벤잘말로네이트, 디에칠헥실부타미도트리아존, 소나무 껍질 추출물 등의 복합물, 포스파티딜세린, 핑거루트 추출 분말, 홍삼과 산수유 등의 복합 추출물 등을 들 수 있다. 또 보습 성분으로서는 AP 콜라겐 효소 분해 펩타이드, Collactive 콜라겐 펩타이드, N-아세틸글루코사민, 곤약 감자 추출물, 민들레 등의 복합 추출물, 쌀겨 추출물, 옥수수 배아 추출물, 저분자 콜라겐 펩타이드, 지초 추출 분말, 포스파티딜세린, 히알루론산 등을 들 수 있다. 여타의 피부 미백 성분, 주름 개선 성분, 자외선 보호 성분, 피부 보습 성분들에 대해서는 한국 화장품법에 따른 기능성화장품공전(식약처고시 「기능성화장품 기준 및 시험방법」), 한국 건강기능식품에관한법률의 건강기능식품공전(식약처고시 「건강기능식품 기준 및 규격」)을 참조할 수 있다. 이러한 성분들은 본 발명의 피부 미백용 조성물에 그 유효성분과 함께 하나 이상 포함될 수 있다.

본 발명의 조성물은 그 유효성분을 용도, 제형, 배합 목적 등에 따라 피부 미백 효과, 항염증 효과 등을 나타낼 수 있는 한 임의의 양(유효량)으로 포함할 수 있는데, 통상적인 유효량은 조성물 전체 중량을 기준으로 할 때 0.001 중량 % 내지 15 중량 % 범위 내에서 결정될 것이다. 여기서 "유효량"이란 그 적용 대상인 포유동물 바람직하게는 사람에게 의료 전문가 등의 제언에 의한 투여 기간 동안 본 발명의 조성물이 투여될 때, 피부 미백 효과, 항염증 효과 등 의도한 의료적·화장품학적 효과 등을 나타낼 수 있는, 본 발명의 조성물에 포함되는 유효성분의 양을 말한다. 이러한 유효량은 당업자의 통상의 능력 범위 내에서 실험적으로 결정될 수 있다.

본 발명의 조성물은 구체적인 양태에 있어서, 식품 조성물로서 파악할 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 어떠한 형태로도 제조될 수 있으며, 예컨대 차, 쥬스, 탄산음료, 이온음료 등의 음료류, 우유, 요구르트 등의 가공 유류, 껌류, 떡, 한과, 빵, 과자, 면 등의 식품류, 정제, 캡슐, 환, 과립, 액상, 분말, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 젤리, 바 등의 건강기능식품 제제류 등으로 제조될 수 있다.

또 본 발명의 식품 조성물은 법률상·기능상의 구분에 있어서 제조·유통 시점의 시행 법규에 부합하는 한 임의의 제품 구분을 띨 수 있다. 예컨대 한국 「건강기능식품에관한법률」에 따른 건강기능식품이거나, 한국 「식품위생법」의 식품공전(식약처 고시 「식품의 기준 및 규격」)상 각 식품유형에 따른 과자류, 두류, 다류, 음료류, 특수용도식품 등일 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에는 그 유효성분 이외에 식품첨가물이 포함될 수 있다. 식품첨가물은 일반적으로 식품을 제조, 가공 또는 보존함에 있어 식품에 첨가되어 혼합되거나 침윤되는 물질로서 이해될 수 있는데, 식품과 함께 매일 그리고 장기간 섭취되므로 그 안전성이 보장되어야 한다. 식품의 제조·유통을 규율하는 각국 법률(한국에서는 「식품위생법」임)에 따른 식품첨가물공전에는 안전성이 보장된 식품첨가물이 성분 면에서 또는 기능 면에서 한정적으로 규정되어 있다. 한국 식품위생법에 따른 식품첨가물공전(식약처 고시 「식품첨가물 기준 및 규격」)에서는 식품첨가물이 성분 면에서 화학적 합성품, 천연 첨가물 및 혼합 제제류로 구분되어 규정되어 있는데, 이러한 식품첨가물은 기능 면에 있어서는 감미제, 풍미제, 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등으로 구분된다.

감미제는 식품에 적당한 단맛을 부여하기 위하여 사용되는 것으로, 천연의 것이거나 합성된 것 모두 본 발명의 조성물에 사용할 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.

풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.

보존제로서는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등이 사용될 수 있고, 또 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있으며, 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등이 사용될 수 있다. 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.

점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 전술한 바의 식품첨가물 이외에, 기능성과 영양성을 보충, 보강할 목적으로 당업계에 공지되고 식품첨가물로서 안정성이 보장된 생리활성 물질이나 미네랄류를 포함할 수 있다.

그러한 생리활성 물질로서는 녹차 등에 포함된 카테킨류, 비타민 B1, 비타민 C, 비타민 E, 비타민 B12 등의 비타민류 등이나, 한국 건강기능식품공전(한국 식약처 「건강기능식품 기준 및 규격」)에 실려 있는 기능성 원료인 홍삼, 클로렐라, 엽록소 함유 식물, 스피루리나, 녹차 추출물, 프로폴리스 추출물, 코엔자임 Q10, 스쿠알렌, 토마토 추출물 등을 들 수 있으며, 미네랄류로서는 구연산칼슘 등의 칼슘 제제, 스테아린산마그네슘 등의 마그네슘 제제, 구연산철 등의 철 제제, 염화크롬, 요오드칼륨, 셀레늄, 게르마늄, 바나듐, 아연 등을 들 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에는 전술한 바의 식품첨가물이 제품 유형에 따라 그 첨가 목적을 달성할 수 있는 적량으로 포함될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에 포함될 수 있는 기타의 식품첨가물과 관련하여서는 각국 식품공전이나 식품첨가물 공전을 참조할 수 있다.

본 발명의 조성물은 다른 구체적인 양태에 있어서는 약제학적 조성물로 파악될 수 있다. 특히 본 발명의 피부 미백용 조성물이 약제학적 조성물로 파악될 경우, 그 용도는 피부 과색소 침착증 개선용 조성물로 이해될 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하여 당업계에 공지된 통상의 방법으로 투여 경로에 따라 경구용 제형 또는 비경구용 제형으로 제조될 수 있다. 여기서 투여 경로는 국소 경로, 경구 경로, 정맥 내 경로, 근육 내 경로, 및 점막 조직을 통한 직접 흡수를 포함하는 임의의 적절한 경로일 수 있으며, 두 가지 이상의 경로를 조합하여 사용할 수도 있다. 두 가지 이상 경로의 조합의 예는 투여 경로에 따른 두 가지 이상의 제형의 약물이 조합된 경우로서 예컨대 1차로 어느 한 약물은 정맥 내 경로로 투여하고 2차로 다른 약물은 국소 경로로 투여하는 경우이다.

약학적으로 허용되는 담체는 투여 경로나 제형에 따라 당업계에 주지되어 있으며, 구체적으로는 "대한민국약전"을 포함한 각국의 약전을 참조할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물이 경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 현탁액, 웨이퍼 등의 제형으로 제조될 수 있다. 이때 적합한 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 덱스트로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨 등의 당류, 옥수수 전분, 감자 전분, 밀 전분 등의 전분류, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 맥아, 젤라틴, 탈크, 폴리올, 식물성유, 에탄올, 그리세롤 등을 들 수 있다. 제제화활 경우 필요에 따라적절한 결합제, 윤활제, 붕해제, 착색제, 희석제 등을 포함시킬 수 있다. 적절한 결합제로서는 전분, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분페리스트, 젤라틴, 메틸셀룰로스, 소듐 카복시메틸셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 글루코스, 옥수수 감미제, 소듐 알지네이트, 폴리에틸렌 글리콜, 왁스 등을 들 수 있고, 윤활제로서는 올레산나트륨, 스테아르산나트륨, 스테아르산마그네슘, 벤조산나트륨, 초산나트륨, 염화나트륨, 실리카, 탈쿰, 스테아르산, 그것의 마그네슘염과 칼슘염, 폴리데틸렌글리콜 등을 들 수 있으며, 붕해제로서는 전분, 메틸 셀룰로스, 아가(agar), 벤토나이트, 잔탄 검, 전분, 알긴산 또는 그것의 소듐 염 등을 들 수 있다. 또 희석제로서는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 소비톨, 셀룰로스, 글라이신 등을 들 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물이 비경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 주사제, 경피 투여제, 비강 흡입제 및 좌제의 형태로 제제화될 수 있다. 주사제로 제제화할 경우 적합한 담체로서는 수성 등장 용액 또는 현탁액을 사용할 수 있으며, 구체적으로는 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline)나 주사용 멸균수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 경피 투여제로 제제화할 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태로 제제화할 수 있다. 비강 흡입제의 경우 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 등의 적합한 추진제를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 제제화할 수 있으며, 좌제로 제제화할 경우 그 담체로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 폴리에틸렌글리콜류, 카카오지, 라우린지, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르류, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트류, 소르비탄 지방산 에스테르류 등을 사용할 수 있다.

약제학적 조성물의 구체적인 제제화와 관련하여서는 당업계에 공지되어 있으며, 예컨대 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)] 등을 참조할 수 있다. 상기 문헌은 본 명세서의 일부로서 간주 된다.

본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태, 체중, 성별, 연령, 환자의 중증도, 투여 경로에 따라 1일 0.001mg/kg ~ 10g/kg 범위, 바람직하게는 0.001mg/kg ~ 1g/kg 범위일 수 있다. 투여는 1일 1회 또는 수회로 나누어 이루어질 수 있다. 이러한 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니 된다.

본 발명의 조성물은 또 다른 구체적인 양태에 있어서, 화장료 조성물로 파악할 수 있다. 특히 본 발명의 항염증용 조성물이 화장품 조성물로 파악될 경우 그 용도는 염증성 피부 트러블 억제, 염증성 피부 자극 완화 등의 용도로 이해될 수 있다.

본 발명의 조성물이 화장료 조성물로 파악될 경우에도 그 화장료 조성물은 그 용도상, 법률상 임의의 제품 구분을 띨 수 있으며, 구체적으로 피부 트러블 개선, 아토피 피부염 개선 등의 용도를 가진 기능성 화장품, 비기능성 일반 화장품 등일 수 있다. 제품 형태에 있어서도 임의의 제품 형태를 띨 수 있는데, 구체적으로 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 스프레이 등의 제품 형태를 띨 수 있다. 구체적인 제품 형태에 있어서는 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형 등일 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 그 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들, 예컨대, 안정화제, 용해화제, 계면활성제, 비타민, 색소 및 항료와 같은 통상적인 보조제, 및 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되는데, 구체적으로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 피부 미백 활성 등을 나타내는 그 유효성분을 포함하는 것을 제외하고는 당업계에 통상적으로 행하여지는 화장료 조성물의 제조방법에 따라 제조할 수 있다.

전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 율무 미강 추출물이나 그 유산균 발효물을 이용한 피부 미백용 조성물 등을 제공할 수 있다. 본 발명의 조성물은 식품, 약품 또는 화장품으로 제품화될 수 있다.

도 1은 율무 미강 추출물(G77-1)과 율무 미강 유산균 발효물(G77-2-2)의 처리 농도별 멜라닌 생합성 저해율을 보여주는 결과이다.

이하 본 발명을 실시예 및 실험예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

<실시예> 시료의 제조

<실시예 1> 율무 미강 추출물의 제조

율무 미강(adlay bran) 분말에 20배 중량의 70% 에탄올을 첨가하여 24시간 침출한 뒤 와트만(whatman paper) 여과지 No.2로 여과하고 그 여과액을 감압농축하여 분말상의 율무 미강 추출물을 제조하였다.

<실시예 2> 율무 미강 유산균 발효물의 제조

율무 미강(adlay bran) 분말에 5배 중량의 정제수를 가하고 80℃에서 4시간 동안 추출한 후 30~35℃까지 냉각시켰다. 자체 보유 유산균(락토바실러스 플란타럼, Lactobacillus plantarum) 스타터(10⁶ ∼ 10⁸ CFU/mL)를 3%(v/v) 접종한 후 35~40℃에서 24시간 배양하였다. 그후 90℃에서 10분간 가열하여 발효를 종료시키고 감압농축하여 분말상의 발효물을 얻었다.

<실험예> 율무 미강 추출물의 피부 미백 활성, 항염증 활성 및 항산화 활성

<실험예 1> 피부 미백 활성 - 멜라닌 생합성 억제 활성

B16F10 멜라노마 세포를 6 well plate에 1×10⁵/well의 세포수로 분주하고 24시간 배양 후, 100 nM의 α-MSH를 처리하여 멜라닌 합성을 유도하고 시료를 농도별로 처리하여 72시간 배양하였다. PBS로 2번 세척한 후 세포용해버퍼(lysis buffer)(100 mM sodium phosphate (pH6.8), 0.1 mM PMSF, 1% Triton X-100)를 넣고 -80℃에서 30분간 용해시키고 세포 수거한 후 10% DMSO가 포함된 1N NaOH로 65℃에서 1시간 반응하여 pellet을 용해시킨 후 405 nm에서 흡광도 측정하였다. α-MSH만의 처리군 대비 시료의 처리 농도별 멜라닌 생합성 저해율(%)을 각각 도 1에 나타내었고, 멜라닌 생합성을 50% 저해하는 농도인 IC₅₀을 아래의 표 1에 나타내었다. 결과는 각 농도별 3회 반복 실험에 따른 결과이다.

멜라닌 생합성 저해 활성(IC₅₀, ㎍/ml)

구분	Tyrosinase inhibition assay(㎍/ml))
율무 미강 추출물	177.64
율무 미강 발효물	138.65
Albutin	399.26

도 1과 상기 표에서 확인되듯이, 율무 미강 추출물과 율무 미강 유산균 발효물은 농도 의존적으로 멜라닌 생합성 저해 활성을 보였으며, 각 시료의 IC₅₀은 177.64 ㎍/ml 및 138.65 ㎍/ml로 나타나 발효를 통해 멜라닌 생합성 저해 활성이 높아진 것으로 나타났다. 양성대조군으로는 기능성화장품공전(식약처, 「기능성화장품 기준 및 시험방법」)에 등재된 피부 미백제인 알부틴을 사용하였으며, 알부틴의 IC₅₀이 399.26 ㎍/ml로 나타났다.

<실험예 2> 항염증 활성 - NO 생성 억제 활성 평가

항염증 유효성은 Raw264.7 cell의 NO synthesis 유도하고, 이로부터 NO assay를 분석하여 항염증 효능을 평가하였다. 유효성을 평가하기 위한 Raw264.7 cell의 NO synthesis는 아래와 같이 수행되었다.

마우스 대식세포인 raw264.7 cell을 10% FBS DMEM 배지를 넣고 37℃, 5% CO₂ 의 조건에서 배양하였다. Raw264.7 대식세포를 96 well plate에 4×10⁴cells/well의 세포 수로 분주하고 24시간 후 내독소로 작용하여 NO synthesis mitogen으로 쓰이는 LPS(Lipopolysacharide)를 0.5 ㎍/㎖농도로 처리하였다.

다음으로 37℃, 5% CO₂의 조건에서 1시간 30분 인큐베이션한 후 시료를 농도별로 처리하고, 24시간 인큐베이션하였다. 다음으로 항염증 효능평가를 위하여 아래와 같이 NO assay를 분석하였다. 1% sulfanilamide와 0.1% N-(1-naphtyl) ethylenediamine dihydrochloride 시약을 1:1의 부피비로 섞고, 혼합 시약과 Raw264.7 cell의 NO synthesis 유도 실험의 시료 처리 후 24시간 배양된 배지 상등액을 1:1의 부피비로 각각 50 ㎕씩 섞어주고 10분간 상온에 보관한 후 540 nm에서 ELISA 측정하여 대조군 대비 NO 생성 억제능을 측정하였다. 표준곡선은 NaNO₂를 사용하여 작성하였다.

결과를 NO 생성을 50% 저해하는 농도인 IC₅₀로 아래의 표 3에 나타내었다. 결과는 각 농도별 3회 반복 실험에 따른 결과이다.

NO 생성 억제 활성(IC₅₀, ㎍/ml)

구분	NO assay(㎍/ml))	MTT assay(㎍/ml)
율무 미강 추출물	69.85	>100
율무 미강 발효물	62.01	>100
L-NMMA	19.14(μM)	>100(μM)

율무 미강 추출물과 율무 미강 유산균 발효물의 IC₅₀이 각각 69.85 ㎍/ml, 62.01 ㎍/ml로 나타나 항염증 활성은 발효를 통해 특별히 높아지지는 않은 것으로 나타났다. L-NMMA(N-monomethyl-L-arginine)는 양성대조군으로 사용된 NO 생성 억제 약물이다.

한편 MTT 법에 따른 세포독성 평가 결과를 상기 표 3에 함께 나타내었다. 최고 처리 농도 100 ㎍/ml에서도 특별한 세포독성을 보이지 않았다.

<실험예 4> 항산화 활성 - ABST 법 실험

7 mM ABTS buffer와 2.45 mM potassium persulfate buffer(K₂S₂O₈)를 제조하여 ABTS:K₂S₂O₈=2:1 ratio로 섞은 후 12-16시간 차광하에 반응시켜 양이온 라디칼을 형성시킨 후 Stock buffer를 734nm에서 측정한 O.D. 값이 0.70±0.02가 나오도록 희석하고 buffer 100 ㎕와 농도별로 희석한 추출물 시료 100 ㎕를 첨가하고 실온에서 6분간 반응시켰다. 반응 후 734 nm에서 흡광도를 측정하여 아래의 식에 따라 대조군인 무처리군과 비교하여 각 처리 농도에 따른 시료의 ABTS 양이온 라디칼 소거 활성을, 도 5에 나타내는 한편, 50%의 소거 활성에 해당하는 농도 IC₅₀에 대해서는 아래의 표 5에 나타내었다. 양성대조군으로 항산화제인 BHA를 사용하였다. 결과는 각 농도별 3회 반복 실험에 따른 결과이다.

ABTS 양이온 라디칼 소거율(%) = (Control-sample) / Control X 100

ABTS 법에 따른 항산화 활성(IC₅₀, ㎍/ml)

구분	ABTS assay(㎍/ml)
율무 미강 추출물	90.41
율무 미강 발효물	62.95
BHA	4.61

항산화 활성도 멜라닌 생성 억제 활성과 마찬가지로 발효에 의하여 높아진 것으로 나타났다. BHA는 은 8.75 ㎍/mL로 나타났다. 합성 항산화제인 BHA(Butyl hydroxyanisole)가 양성대조군으로 사용되었다.

Claims (15)

1. 율무 미강의 유산균에 의한 발효물 또는 그 발효물의 추출물을 유효성분을 포함하되, 상기 유산균은 락토바실러스 플란타럼인 것을 특징으로 하는 항산화용 식품 조성물.
   
2. 삭제
3. 삭제
4. 제1항에 있어서,
   상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매 추출물인 것을 특징으로 하는 조성물.
   
5. 율무 미강의 유산균에 의한 발효물 또는 그 발효물의 추출물을 유효성분을 포함하되, 상기 유산균은 락토바실러스 플란타럼인 것을 특징으로 하는 항산화용 화장료 조성물.
   
6. 삭제
7. 제5항에 있어서,
   상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매 추출물인 것을 특징으로 하는 조성물.
   
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