KR102314785B1 - 신규한 황반변성 진단용 마커 및 황반변성 진단방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 신규한 황반변성 진단용 마커 및 황반변성 진단방법에 관한 것으로, 더 상세하게는 CFH, CFB, C3, CFI 유전자의 변이와 관련된 황반변성 진단용 조성물, 진단용 키트와 쟁거(sanger) 시퀀싱, 멀티플렉스 파이로 시퀀싱 및 HRM 분석법과 같이 상기 유전자 변이를 신속하고도 정확하게 분석할 수 있는 신규한 황반변성 진단방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 황반변성 진단용 조성물, 진단용 키트 및 이를 진단하는 방법은, 황반변성을 효과적으로 진단할 수 있는 신규한 마커로서, 민감도가 우수할 뿐만 아니라, 신속하고 간편하게 분석할 수 있어, 황반변성 조기진단에 유용하게 사용될 수 있을 것이다.

Description

신규한 황반변성 진단용 마커 및 황반변성 진단방법{A new marker for diagnosis of macular degeneration and a diagnostic method using the smae}

본 발명은 신규한 황반변성 진단용 마커 및 황반변성 진단방법에 관한 것으로, 더 상세하게는 CFH, CFB, C3, CFI 유전자의 변이와 관련된 황반변성 진단용 조성물 및 진단용 마커와 쟁거(sanger) 시퀀싱, 멀티플렉스 파이로 시퀀싱 및 HRM 분석법과 같이 상기 유전자 변이를 신속하고도 정확하게 분석할 수 있는 신규한 황반변성 진단방법에 관한 것이다.

눈의 안쪽 망막의 중심부에 위치한 신경조직을 황반이라고 하는데, 빛 자극에 반응하는 시세포의 대부분이 이곳에 모여 있고 물체의 상이 맺히는 곳도 황반의 중심이므로 시력에 대단히 중요한 역할을 담당하고 있다. 연령관련 황반변성(AMD: Age-related Macular Degeneration)은 황반의 망막색소 상피와 부르크막 및 맥락막모세혈관의 변성을 특징으로 하는 만성 질환이다. 해부학적으로 감각신경망막은 망막색소 상피의 앞쪽에 위치하며 영양, 지지, 재순환 및 노폐물의 처리를 망막색소 상피에 의존한다. 브루크막은 5층으로 된 구조물로 맥락막과 망막색소 상피 사이에 끼어 있다. 가장 안쪽 층은 망막색소 상피의 기저막이고 가장 바깥쪽은 맥락막 모세혈관 내피세포의 기저막이다. 즉, 망막색소 상피와 부르크막 및 맥락막 모세혈관 복합체에 발생한 변성 질환이다.

이 질환은 50세 이상의 연령층에서 주로 발생하는데, 이미 서구에서는 60세 이상의 인구에서 실명의 가장 주된 원인이며 우리나라에서도 점점 증가하는 추세이다. 연령관련 황반변성의 원인에 대해서는 아직 정확히 밝혀지지는 않았으나 위험인자로 알려져 있는 것은 나이(특히 75세 이후 가파른 증가를 보인다), 가장 주목받는 환경적 요인인 흡연 외에도 고혈압, 비만, 유전적 소인, 과도한 자외선 노출, 낮은 혈중 항산화제 농도 등이 있다.

황반변성에는 건성(비삼출성) 황반변성과 습성(삼출성) 황반변성의 두 유형이 있다. 건성 황반변성(dry AMD, nonexudative AMD, nonneovascular AMD)은 노폐물이 망막하에 드루젠(drusen)이라는 황색 침전물을 형성하여 쌓이게 되는 것으로 이것이 커지게 되면 망막 특히 황반으로의 혈류를 방해하고 시야를 가리게 되어 시력에 장애가 오기 시작한다. 건성 황반변성은 급격한 시력 상실을 유발하지는 않지만 습성 황반변성으로 진행할 수 있다. 망막의 아래에는 섬유조직 내에 파묻힌 혈관 집합을 포함하는 맥락막 및 맥락막층을 덮고 있는 색소상피가 있다. 습성 황반변성(wet AMD, exudative AMD, neovascular AMD)은 망막 아래 맥락막 부분에서 신생혈관이 자라서 생긴다. 이러한 약한 신생혈관이 터져서 출혈이 발생하고 삼출을 일으켜서 망막의 황반영역에 변성을 일으켜 시력장애가 발생하는 것이다. 습성 황반변성은 진행속도가 매우 빨라서 수주 안에 시력이 급속히 나빠지기도 하고 2개월 ~ 3년 사이에 실명을 초래하기도 하는 것으로 알려져 있다.

진행성 황반변성 발생의 70%는 유전적 특성(CFH, ARMS2등)에 의해 결정되고, 나머지 30%는 흡연, 습관과 같은 환경적 요인에 의해 결정된다고 알려져 있는데, 황반변성의 발생 위험과 관련성이 임상적으로 검증된 주요 위험유전자로 CFH, HTRA1, ARMS2, C2, C3, CFB등의 유전자가 보고되어 있다(Nat Genet. 2013 Apr;45(4):433-9, Nat Genet. 2013 Nov;45(11):1371-4). 그러나, 이러한 유전자 변이는 서구인을 대상으로 연구된 것으로, 아시아인(한국인, 일본인, 중국인 등)을 대상으로 한 연구는 아직까지 미흡한 실정이다. 따라서 극동 아시아인에서 황반변성 질환의 발병과 관련되거나 안전성을 예측할 수 있는 추가적인 다형성의 확인을 이용하고자 하는 요구가 늘고 있다.

한편, 차세대 시퀀싱(NGS)은 DNA 염기서열을 모두 읽어내는 기술 방법으로 2007년 Solexa가 Illumina 사에 합병되면서 차세대 염기서열분석(Next Generation Sequencing, NGS)이라는 용어가 사용되기 시작하였고, 현재는 2세대에 해당하며, NGS 기술의 발달에 힘입어 대용량 염기서열 정보를 전통적인 방법들에 비해 보다 쉽고 저렴한 비용으로 분석할 수 있게 되었다.

이러한 차세대 시퀀싱을 통해 분석된 DNA 염기서열 정보는 개인차 및 민족적 특성을 파악하거나 유전자 이상과 관련된 질환에서 염색체 이상을 포함한 선천성 원인의 규명, 그리고 황반변성, 당뇨병, 고혈압과 같은 복합질병을 억제하는 유전자의 결함을 손쉽게 찾을 수 있으며, 또한 유전자 발현, 유전자 다양성 및 그 상호작용 등의 정보들을 분자 진단과 치료의 영역에서 폭넓게 활용할 수 있어 매우 중요하다 할 것이다.

이에 본 발명자들은 황반변성 질환에 대한 관련있는 유전자 세트를 차세대 시퀀싱을 통해 분석하여 황반변성 위험도 예측과 관련된 신규 변이 유전자 8종 (CFH Y56C, CFH L77S, CFH D798E, CFH F176L, CFB G208S, CFB V716L, C3 R1134Q, CFI M204R)과 질환 유전자 변이 3종(CFH G1110A, C3 A636S, C3 H16Q)를 발굴하였고, 이렇게 발굴된 11종 유전자 변이는 유전자 분석(HRM, Taq-man assays) 방법을 통하여 질환군에서만 발견되는 변이임을 다시 한번 확인하였다.

1. Nat Genet. 2013 Apr;45(4):433-9, Nat Genet. 2013 Nov;45(11):1371-4

따라서 본 발명의 목적은 황반변성 발생 위험도를 예측하고, 그 예후 및 치료 경과를 추정할 수 있는 황반변성 진단용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은, 상기 진단용 조성물을 포함하는 황반변성 진단용 키트를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 황반변성의 신속하고 정확한 분석을 위하여 황반변성 위험도와 관련된 유전자의 변이를 검출하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 황반변성 특이적 돌연변이 폴리펩티드를 제공하는 것이다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 하기 단백질의 돌연변이 군으로부터 선택되는 하나 또는 둘 이상의 조합으로 구성된 돌연변이를 검출할 수 있는 제제를 포함하는 황반변성 진단용 조성물을 제공하는 것이다.

CFH 단백질의 Y56C, L77S, D798E, F176L, G1110A;

C3 단백질의 R1134Q, A636S, C3 H16Q;

CFB 단백질의 G208S, V716L; 및

CFI 단백질의 M204R.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 제제는 상기 단백질을 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머쌍 또는 프로브일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 프라이머 쌍은 서열번호 1 및 2, 서열번호 3 및 4, 서열번호 5 및 6, 서열번호 7 및 8, 서열번호 9 및 10, 서열번호 11 및 12, 서열번호 13 및 14, 서열번호 15 및 16, 서열번호 17 및 18, 서열번호 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 또는 둘 이상의 프라이머 쌍의 조합으로 구성될 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 제제는 상기 단백질에 특이적인 항체일 수 있다.

한편, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는, 황반변성 진단용 키트를 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 키트는 RT-PCR 키트, 마이크로어레이 칩 키트 또는 단백질 칩 키트일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 RT-PCR 키트는 상기 단백질을 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머 쌍을 포함할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 프라이머 쌍은 서열번호 1 및 2, 서열번호 3 및 4, 서열번호 5 및 6, 서열번호 7 및 8, 서열번호 9 및 10, 서열번호 11 및 12, 서열번호 13 및 14, 서열번호 15 및 16, 서열번호 17 및 18, 서열번호 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 또는 둘 이상의 프라이머 쌍의 조합으로 구성될 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 마이크로어레이 칩 키트는 상기 단백질을 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합하는 프로브를 포함할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 단백질 칩 키트는 상기 단백질에 특이적인 항체를 포함할 수 있다.

또한, 본 발명은 (i) 서열번호 1 및 2의 프라이머 쌍을 이용하여 PCR을 수행하는 단계; (ii) 상기 단계 (i)에서 수득한 PCR 산물에 대해 서열번호 3 및 4의 시퀀싱 프라이머를 이용하여 파이로시퀀싱(pyrosequencing)하는 단계를 포함하는, 황반변성 위험도와 관련된 유전자의 변이를 검출하는 방법을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 황반변성 위험도와 관련된 유전자는 CFH(complement factor H)일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 CFH 유전자 변이에 의한 아미노산 변이는 CFH Y56C 또는 L77S일 수 있다.

또한, 본 발명은 서열번호 21의 56번 아미노산이 Tyr에서 Cys로 치환되는 돌연변이; 77번 아미노산이 Leu에서 Ser으로 치환되는 돌연변이; 798번 아미노산이 Asp에서 Glu로 치환되는 돌연변이; 176번 아미노산이 Phe에서 Leu으로 치환되는 돌연변이; 1110번 아미노산이 Gly에서 Ala으로 치환되는 돌연변이;

서열번호 22의 208번 아미노산이 Gly에서 Ser으로 치환되는 돌연변이; 716번 아미노산이 Val에서 Leu으로 치환되는 돌연변이;

서열번호 23의 1134번 아미노산이 Arg에서 Gln으로 치환되는 돌연변이; 636번 아미노산이 Ala에서 Ser으로 치환되는 돌연변이, 16번 아미노산이 His에서 Gln으로 치환되는 돌연변이; 및

서열번호 24의 204번 아미노산이 Met에서 Arg로 치환되는 돌연변이;로 구성되는 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 황반변성 질환 특이적 돌연변이 폴리펩티드를 제공한다.

본 발명에 따른 황반변성 진단용 조성물, 진단용 키트 및 이를 진단하는 방법은, 황반변성을 효과적으로 진단할 수 있는 신규한 마커로서, 민감도가 우수할 뿐만 아니라, 신속하고 간편하게 분석할 수 있어, 황반변성 조기진단에 유용하게 사용될 수 있을 것이다.

도 1은 CFH Y56C, CFH L77S, CFH D798E, CFH G1110A, CFH F176L, C3 H16Q, C3 A636S, C3 R1134Q, CFB G208S, CFB V716L, CFI M204R, CFB G208S, CFB V716L, CFI M204R의 Sanger 시퀀싱 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 CFH 56YY, CFH 77LL 타입의 멀티플렉스 파이로 시퀀싱 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 CFH 56YY, CFH 77LS 타입의 멀티플렉스 파이로 시퀀싱 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 CFH 56YC, CFH 77LL 타입의 멀티플렉스 파이로 시퀀싱 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 CFH 1110 GG 타입(붉은색), CFH 1110 GA 타입(푸른색)의 Aligned Melt Curve 와 Difference Plot 을 HRM assay로 분석한 결과이다.
도 6은 CFH 176 FF 타입(붉은색), CFH 176FL 타입(푸른색)의 Aligned Melt Curve 와 Difference Plot 을 HRM assay로 분석한 결과이다.
도 7은 C3 16HH 타입(붉은색), C3 16HQ 타입(푸른색)의 Aligned Melt Curve 와 Difference Plot 을 HRM assay로 분석한 결과이다.
도 8은 C3 636AA 타입(붉은색), C3 636AS 타입(푸른색)의 Aligned Melt Curve 와 Difference Plot 을 HRM assay로 분석한 결과이다.
도 9는 C3 1134RR 타입(붉은색), C3 1134RQ 타입(푸른색)의 Aligned Melt Curve 와 Difference Plot 을 HRM assay로 분석한 결과이다.
도 10은 CFB 208GG 타입(붉은색), CFB 208GS 타입(푸른색)의 Aligned Melt Curve 와 Difference Plot 을 HRM assay로 분석한 결과이다.
도 11은 CFB 716VV 타입(붉은색), CFB 716VL 타입(푸른색)의 Aligned Melt Curve 와 Difference Plot 을 HRM assay로 분석한 결과이다.
도 12는 CFI 204MM 타입(붉은색), CFI 204MR 타입(푸른색)의 Aligned Melt Curve 와 Difference Plot 을 HRM assay로 분석한 결과이다.

본 발명에서 사용되는 용어의 정의는 다음과 같다.

'유전적 다형성(genetic polymorphism)'은 인구집단에서 적어도 1% 이상의 빈도로 유전자 변이가 나타나는 경우를 말한다. DNA에서 한 개의 뉴클레오티드의 삽입, 소실, 또는 치환이 일어나는 것을 단일염기다형성(single nucleotide polymorphism, SNP) 이라고 한다. SNP에 의한 염기서열의 변이가 아미노산의 변화를 초래하는 경우를 nonsynonymous SNP라고 하고, 아미노산의 변화를 일으키지 않는 경우를 silent SNP 또는 synonymous SNP라 한다

'다형성'이라는 용어는 군집 내에서 변하는 유전자의 서열에서의 배치를 지칭한다. 다형성은 상이한 "대립유전자"로 구성된다. 이러한 다형성의 배치는 유전자에서의 그의 위치 및 그에서 발견되는 상이한 아미노산 또는 염기에 의해 확인될 수 있다. 예를 들어, Y402H CFH는 CFH 유전자 중 아미노산 위치 402가 티로신 (Y)과 히스티딘 (H) 사이에서 변화됨을 나타낸다. 이러한 아미노산 변이는 2개의 상이한 대립유전자인, 2개의 가능한 변이체 염기, C 및 T의 결과이다. 유전자형은 2개의 다른 별개의 대립유전자로 구성되기 때문에, 여러 가능한 변이체 중 임의의 변이체가 어느 한 개체에서 관찰될 수 있다 (예를 들어, 이 예에서, CC, CT 또는 TT). 개개의 다형성은 또한 당업자에게 공지되어 있고, 예를 들면, NCBI 웹사이트 상에서 이용가능한 뉴클레오티드 염기 변이의 단일 뉴클레오티드 다형성 데이터베이스(Single Nucleotide Polymorphism Database (dbSNP) of Nucleotide Sequence Variation)에서 사용되는 것인, 지정된 독특한 식별자 ("기준 SNP", "refSNP" 또는 "rs#")이다.

'유전자형'이라는 용어는 세포 또는 조직 샘플에서 특정 유전자의 특이적 대립유전자를 지칭한다. 상기 예에서, CC, CT 또는 TT가 Y402H CFH 다형성에서의 가능한 유전자형이다

'마커'는 좌위 또는 연관된 좌위를 확인할 때 기준점으로 사용되는 뉴클레오티드 서열 또는 이의 코딩 생성물 (예를 들어, 단백질)을 지칭한다. 마커는 게놈 뉴클레오티드 서열로부터 또는발현된 뉴클레오티드 서열로부터 (예를 들어, RNA, nRNA, mRNA, cDNA 등으로부터), 또는 코딩된 폴리펩티드로부터 유래될 수 있다. 이 용어는 마커 서열에 상보적이거나 이에 플랭킹된 핵산 서열, 예컨대 마커 서열을 증폭시킬 수 있는 프로브 또는 프라이머 쌍으로 사용된 핵산을 포함한다.

'핵산'은 데옥시리보핵산(DNA), 및 적절하다면 리보핵산(RNA)과 같은 폴리뉴클레오티드 또는 올리고뉴클레오티드를 나타낸다. 이 용어는 또한, 동등하게, 뉴클레오티드 유사체(예, 펩티드 핵산)로부터 제조된 RNA 또는 DNA 중 어느 하나의 유사체, 및, 서술된 구체예에 적용된대로, 단일(센스 또는 안티센스) 및 이중나선 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 본 발명에서는 '핵산'이라는 용어와 '뉴클레오티드'가 병용하여 쓰이고 있다.

'프라이머'는 상보성 RNA 또는 DNA 표적 폴리뉴클레오티드에 혼성화하고 예를 들어 폴리머라제 연쇄 반응에서 발생하는 뉴클레오티딜트랜스퍼라제의 작용에 의해 모노뉴클레오티드로부터 폴리뉴클레오티드의 단계적 합성을 위한 출발점으로 기능하는 올리고뉴클레오티드 서열을 의미한다.

'다형성과 연관된 질환 및 상태'는 다양한 질환 또는 상태, 즉 하나 이상의 대립유전자의 동일화에 근거한 피험체에서 표시될 수 있는 감수성을 나타낸다.

'위험'은 특정 다형성 대립유전자를 보유하지 않은 개체의 구성원에서의 질환 또는 상태의 발생 빈도에 비교하여, 특정 다형성 대립유전자를 보유한 개체에서의 질환 또는 상태의 발생 빈도가 통계적으로 높음을 나타낸다.

'표현형'은 유전형에 의해서 결정되는 개체의 형태학적, 생리학적,또는 생화학적 특징을 표현형이라 한다. 유전형이란 표현형과 구별되는 것으로, 개인의 유전자 구성을 뜻하며, 보다 좁은 의미로는 한 유전자 위에 존재하는 대립 유전자들(alleles)을 말한다.

'대상' 또는 '환자'는 인간, 소, 개, 기니아 피그, 토끼, 닭, 곤충 등을 포함하여 치료가 요구되는 임의의 단일 개체를 의미한다. 또한, 임의의 질병 임상 소견을 보이지 않는 임상 연구 시험에 참여한 임의의 대상 또는 역학 연구에 참여한 대상 또는 대조군으로 사용된 대상이 대상에 포함된다. 본 발명의 일 실시예에서는 인간을 대상으로 하였다.

'조직 또는 세포 샘플'은 대상 또는 환자의 조직으로부터 얻은 유사한 세포의 집합체를 의미한다. 조직 또는 세포 샘플의 공급원은 신선한, 동결된 및/또는 보존된 장기 또는 조직 샘플 또는 생검 또는 흡인물로부터의 고형 조직; 혈액 또는 임의의 혈액 구성분; 대상의 임신 또는 발생의 임의의 시점의 세포일 수 있다. 조직 샘플은 또한 1차 또는 배양 세포 또는 세포주일 수 있다.

'유효량'은, 이롭거나 바람직한 임상적 또는 생화학적 결과에 영향을 주는 적절한 양이다. 유효량은 한번 또는 그 이상 투여될 수 있다. 본 발명의 목적을 위하여, 저해제 화합물의 유효량은 질병 상태의 진행을 일시적으로 완화, 개선, 안정화, 되돌림, 속도를 늦춤 또는 지연시키는데 적절한 양이다. 만약, 수혜동물이 조성물의 투여에 견딜 수 있거나, 조성물의 그 동물에의 투여가 적합한 경우라면, 조성물은 "약학적으로 또는 생리학적으로 허용가능함"을 나타낸다. 투여된 양이 생리학적으로 중요한 경우에는 상기 제제는 "치료학적으로 유효량"으로 투여되었다고 말할 수 있다. 상기 제제의 존재가 수혜 환자의 생리학적으로 검출가능한 변화를 초래한 경우라면 상기 제제는 생리학적으로 의미가 있다.

'치료하는'이란 용어는, 달리 언급되지 않는 한, 상기 용어가 적용되는 질환 또는 질병, 또는 상기 질환 또는 질병의 하나 이상의 증상을 역전시키거나, 완화시키거나, 그 진행을 억제하거나, 또는 예방하는 것을 의미한다. 본원에서 사용된 바와 같이, '치료'란 용어는 '치료하는'이 상기와 같이 정의될 때 치료하는 행위를 말한다.

본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 또한 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다. 본 명세서에 참고문헌으로 기재되는 모든 간행물의 내용은 본 발명에 도입된다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

달리 지시되지 않는 한, 핵산은 좌측에서 우측으로 5'3' 배향으로 기록된다. 명세서 내에서 열거된 수치 범위는 범위를 정의하는 숫자를 포함하고, 정의된 범위 내의 각각의 정수 또는 임의의 비-정수 분획을 포함한다.

달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 분야의 당업자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기술된 것들과 유사하거나 등가인 임의의 방법 및 재료가 본 발명을 테스트하기 위한 실행에서 사용될 수 있지만, 바람직한 재료 및 방법이 본원에서 기술된다.

본 발명에서 기술된 HRM assay는 real time PCR 실험 기법 중 하나로 Tm 값의 차이를 이용하여, 소량의 게놈 DNA로도 genotyping 유전형 분석이 가능한 방법이다. HRM assay는 실험 비용이 저렴하고, 프라이머 디자인이 프로브에 비해 간단하며, 분석시간이 단축되는 분석방법으로, 샘플의 양이 방대한 스크리닝 등에 활용될 수 있다. HRM assay에 사용되는 dsDNA intercalating dyes로는 SYBR® GREEN, SYTO9®, LCGreen®, EvaGreen 등이 사용될 수 있으며, 바람직하게는 SYTO9®을 사용할 수 있다.

HEM assay는 PCR과 다른 분석법으로, PCR이 완료된 후 dsDNA에서 유전자 변이가 있는지 판별하기 위한 post-PCR 분석방법으로 활용될 수 있다. 즉, DNA 증폭이 아닌 유전자 변이 유무의 판별을 목적으로 활용될 수 있으며, dsDNA에 결합하는 형광물질을 PCR 반응시 첨가하면 PCR 과정에서 형광감지가 가능하여 제한효소 처리 후 전기영동이나 Sanger 시퀀싱 같은 추가 과정없이 빠른 시간 내 유전자 변이 유무를 확인할 수 있다.

차세대 시퀀싱은 DNA 서열분석 방법의 하나로 개인유전체를 분석하여 변이(variants)들을 발굴하는 기술로, 시퀀싱 반응을 동시에 엄청난 양으로 진행하기 때문에 빠른 시간에 30억 개가 넘는 유전체에 대한 정보를 얻을 수 있다. 본 발명자들은 황반변성 환자 298명과 대조군 188명에 대해 차세대 시퀀싱 분석을 하여 황바변성에서만 발현되는 신규한 변이 11증을 발견하였다.

실시예 1 : 차세대 시퀀싱( NGS )을 이용한 변이 유전자 발굴

질환군과 대조군의 피험자의 혈액을 채혈한 후, Qiagen 사의 genomic DNA 분리 키트를 사용하여 DNA를 분리하였다.

Illumina HiSeq.시퀀싱 기기로 DNA 염기서열을 분석하였다. 분석 결과, 황반변성 질환군에서만 신규 변이 유전자 8종(CFH Y56C, CFH L77S, CFH D798E, CFH F176L, CFB G208S, CFB V716L, C3 R1134Q, CFI M204R,)과 변이 유전자 3종(CFH G1110A, C3 A636S, C3 H16Q)이 확인되었다. 이러한 유전자는 sanger 시퀀싱을 통해 유전자 변위의 진위를 확인하였다.

차세대 시퀀싱-targeted NGS는 특정 부분의 유전자 혹은 유전체 영역에 집중해서 시퀀싱하는 방법으로, 특정 영역을 capture 할 수 있는 특정 kit를 제작하여 capture한 후 amplification(증폭) 한 후 시퀀싱을 수행하여 raw 데이타를 얻어서 분석한다.

아래와 같이 각 유전자 별로 보았을때, CFH는 20X 이상의 coverage는 평균 99.7%, 100X이상의 coverage는 평균 94.3%이고, CFB는 20X 이상의 coverage는 평균 100%, 100X 이상의 coverage는 평균 95.4%, C3는 20X 이상의 coverage는 평균 98.1%, 100X 이상의 coverage는 평균 62.7%로 나타나, 각 유전자의 뎁스(depth)에 따른 차세대 시퀀싱 평균 커버리지 결과는 하기 표 1과 같고, sanger 시퀀싱 확인 결과는 도 1과 같다.

유전자	Coverage
	1X	5X	10X	20X	30X	40X	50X	100X
CFH	100.0	100.0	99.9	99.7	99.4	99.0	98.4	94.3
CFB	100.0	100.0	100.0	100.0	100.0	99.9	99.7	95.4
C3	100.0	100.0	99.8	98.1	94.2	89.9	85.6	62.7

실시예 2 : 신규변이유전자의 고속변이 유전형 분석법 구축

질환군 변이 11종(CFH Y56C, CFH L77S, CFH D798E, CFH G1110A, CFH F176L, CFB G208S, CFB V716L, CFI M204R, C3 R1134Q, C3A636S, C3H16Q)의 전체 염기 서열을 자동 염기서열 분석기와 차세대 시퀀싱 분석기를 이용하여 확인하였다. 한편, 질환군 예측을 위한 주요 변이 SNP에 대한 고속변이 유전형 분석법을 개발하였다. 자세하게는 CFH 유전자 2종- CFH Y56C, CFH L77S -의 multiplex-pyrosequencing 방법을 실시하였고, CFH 변이 유전자 2종(CFH F176L, CFH G1110A), CFB 2종 (CFB G208S, CFB V716L), C3 변이 유전자 3종(C3 H16Q, C3 A636S, C3 R1134Q), CFI M204R 에 대해서 HRM assay를 수행하였다.

실시예 2-1 : multiplex - pyrosequencing 을 이용한 변이유전자의 고속 검사법

하기 표 2는 PCR에 사용된 프라이머 세트이다.

Primer 이름	Primer 서열 (5'~3')	서열번호	크기 (bp)
CFH_Y56C/L77S_F	TCC AGA AGG CAC CCA GGC TA	서열번호 1	338
CFH_Y56C/L77S_BR*	CCA GGC GAT AGA GGG AGA CT	서열번호 2

(*: 5' 말단에 Biotin을 붙혀서 제작한 것이다.)

하기 표3은 PCR 반응 조건이다.

PCR product	반응조건
CFH_Y56C/L778	94℃ 5분, (94℃ 30초, 60 ℃ 30초, 72℃30초) 35 cycles, 72℃ 5분

하기 표4는 시퀀싱용 프라이머이다.

Primer 이름	Primer 서열 (5'~3')	서열번호
CFH_Y56C_SF	CTA TAA ATG CCG CCC TGG AT	서열번호 3
CFH_L77S_SF	AGA ATG GGT TGC TCT TAA TC	서열번호 4

실시예 2-2 : HRM assay 를 이용한 변이유전자의 고속 검사법

HRM assay는 real time PCR 실험 기법 중 하나로 Tm 값의 차이를 이용하여 소량의 게놈 DNA(100pg~10ng)만으로도 genotyping 유전형 분석이 가능한 방법으로, 본 발명에서는 하기와 같은 프라이머와 PCR 조건에 따라 HRM assay를 진행하였다.

하기 표 5는 PCR에 사용된 프라이머 세트이다.

Primer 이름	Primer 서열 (5'~3')		서열번호	크기 (bp)
CFH_G1110A_F	AGT GCT GTG TTT GCG TTT GC		서열번호 5	178
CFH_G1110A_R	CAA CTG ATG AAG CTG GAG CA		서열번호 6
CFH_F176L _F	CCA GTG ACA GCA CCA GAG AA		서열번호 7	156
CFH_F176L _R	ACT CCA AAA ACC ATC GTC TGA		서열번호 8
CFB_G208S_F	TTG CTC TCT ACC TTG CTC ACG		서열번호 9	309
CFB_G208S_R	GAG GTG GGG AGA GAA GAC AGT		서열번호 10
CFB_V716L_F	TGT CTT GCC TGC GTG TGT CA		서열번호 11	234
CFB_V716L_R	TGT GAA AGT CTC GGG CGT GA		서열번호 12
C3_H16Q_F	GCT GCT CCT GCT ACT AAC CC		서열번호 13	187
C3_H16Q_R	CCA AAT GTC TGC TTC CAC CC		서열번호 14
C3_A636S _F	GGT GGA GAA GGC AGA CAT CG		서열번호 15	95
C3_A636S _R	CAC TGC TGC TCG TGA AGG TCA		서열번호 16
C3_R1134Q_F	CCA TCC TTG CTT TCT GCT CT		서열번호 17	173
C3_R1134Q_R	GCA TCG GGT AAG GTA GGG TA		서열번호 18
CFI_M204R_F	CAT TGC CGA GGA TTA GAG ACC		서열번호 19	116
CFI_M204R_R	CTC CAC CAA CCT GCT TTC TG		서열번호 20

하기 표6은 HRM 분석을 위한 형광 dye가 포함된 반응물 조건이다.

조성	부피( ul / sample )
2X buffer	10
MeltDoctor™	1
Forward primer(5pmol/ul)	1
Reverse primer(5pmol/ul)	1
genomic DNA(20ng/ul)	2
ultra pure D.W	5
합계	20

하기 표 7은 PCR 반응 조건이다.

PCR product	반응조건
CFH_G1110A	95℃ 10분, (95℃ 15초, 60 ℃ 15초, 72℃15초) 35 cycles, 95℃ 10초, 60℃ 1분, 95℃ 15초, 60℃ 15초
CFH 176L	95℃ 10분, (95℃ 15초, 60 ℃ 15초, 72℃15초) 35 cycles, 95℃ 10초, 60℃ 1분, 95℃ 15초, 60℃ 15초
CFB_G208S	95℃ 10분, (95℃ 15초, 60 ℃ 15초, 72℃15초) 35 cycles, 95℃ 10초, 60℃ 1분, 95℃ 15초, 60℃ 15초
CFB_V716L	95℃ 10분, (95℃ 15초, 60 ℃ 15초, 72℃15초) 35 cycles, 95℃ 10초, 60℃ 1분, 95℃ 15초, 60℃ 15초
C3_H16Q	95℃ 10분, (95℃ 15초, 60 ℃ 15초, 72℃15초) 35 cycles, 95℃ 10초, 60℃ 1분, 95℃ 15초, 60℃ 15초
C3_A636S	95℃ 10분, (95℃ 15초, 60 ℃ 15초, 72℃15초) 35 cycles, 95℃ 10초, 60℃ 1분, 95℃ 15초, 60℃ 15초
C3_R1134Q	95℃ 10분, (95℃ 15초, 60 ℃ 15초, 72℃15초) 35 cycles, 95℃ 10초, 60℃ 1분, 95℃ 15초, 60℃ 15초
CFI_M204R	95℃ 10분, (95℃ 15초, 60 ℃ 15초, 72℃15초) 35 cycles, 95℃ 10초, 60℃ 1분, 95℃ 15초, 60℃ 15초

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

<110> inje university industry-academic cooperation foundation <120> A new marker for diagnosis of macular degeneration and a diagnostic method using the same <130> PN1501-031 <160> 28 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CFH Y56C/L77S PCR forward primer <400> 1 tccagaaggc acccaggcta 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CFH Y56C/L77S PCR reverse primer <400> 2 ccaggcgata gagggagact 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CFH Y56C sequencing primer <400> 3 ctataaatgc cgccctggat 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CFH L77S sequencing primer <400> 4 agaatgggtt gctcttaatc 20 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CFH G1110A PCR forward primer <400> 5 agtgctgtgt ttgcgtttgc 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CFH G1110A PCR reverse primer <400> 6 caactgatga agctggagca 20 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CFH F176L PCR forward primer <400> 7 ccagtgacag caccagagaa 20 <210> 8 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CFH F176L PCR reverse primer <400> 8 actccaaaaa ccatcgtctg a 21 <210> 9 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CFB G208S PCR forward primer <400> 9 ttgctctcta ccttgctcac g 21 <210> 10 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CFB G208S PCR reverse primer <400> 10 gaggtgggga gagaagacag t 21 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CFB V716L PCR forward primer <400> 11 tgtcttgcct gcgtgtgtca 20 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CFB V716L PCR reverse primer <400> 12 tgtgaaagtc tcgggcgtga 20 <210> 13 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C3 H16Q PCR forward primer <400> 13 gctgctcctg ctactaaccc 20 <210> 14 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C3 H16Q PCR reverse primer <400> 14 ccaaatgtct gcttccaccc 20 <210> 15 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C3 A636S PCR forward primer <400> 15 ggtggagaag gcagacatcg 20 <210> 16 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C3 A636S PCR reverse primer <400> 16 cactgctgct cgtgaaggtc a 21 <210> 17 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C3 R1134Q PCR forward primer <400> 17 ccatccttgc tttctgctct 20 <210> 18 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C3 R1134Q PCR reverse primer <400> 18 gcatcgggta aggtagggta 20 <210> 19 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CFI M204R PCR forward primer <400> 19 cattgccgag gattagagac c 21 <210> 20 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> CFI M204R PCR reverse primer <400> 20 ctccaccaac ctgctttctg 20 <210> 21 <211> 1231 <212> PRT <213> Homo sapiens CFH amino acids sequence <400> 21 Met Arg Leu Leu Ala Lys Ile Ile Cys Leu Met Leu Trp Ala Ile Cys 1 5 10 15 Val Ala Glu Asp Cys Asn Glu Leu Pro Pro Arg Arg Asn Thr Glu Ile 20 25 30 Leu Thr Gly Ser Trp Ser Asp Gln Thr Tyr Pro Glu Gly Thr Gln Ala 35 40 45 Ile Tyr Lys Cys Arg Pro Gly Tyr Arg Ser Leu Gly Asn Val Ile Met 50 55 60 Val Cys Arg Lys Gly Glu Trp Val Ala Leu Asn Pro Leu Arg Lys Cys 65 70 75 80 Gln Lys Arg Pro Cys Gly His Pro Gly Asp Thr Pro Phe Gly Thr Phe 85 90 95 Thr Leu Thr Gly Gly Asn Val Phe Glu Tyr Gly Val Lys Ala Val Tyr 100 105 110 Thr Cys Asn Glu Gly Tyr Gln Leu Leu Gly Glu Ile Asn Tyr Arg Glu 115 120 125 Cys Asp Thr Asp Gly Trp Thr Asn Asp Ile Pro Ile Cys Glu Val Val 130 135 140 Lys Cys Leu Pro Val Thr Ala Pro Glu Asn Gly Lys Ile Val Ser Ser 145 150 155 160 Ala Met Glu Pro Asp Arg Glu Tyr His Phe Gly Gln Ala Val Arg Phe 165 170 175 Val Cys Asn Ser Gly Tyr Lys Ile Glu Gly Asp Glu Glu Met His Cys 180 185 190 Ser Asp Asp Gly Phe Trp Ser Lys Glu Lys Pro Lys Cys Val Glu Ile 195 200 205 Ser Cys Lys Ser Pro Asp Val Ile Asn Gly Ser Pro Ile Ser Gln Lys 210 215 220 Ile Ile Tyr Lys Glu Asn Glu Arg Phe Gln Tyr Lys Cys Asn Met Gly 225 230 235 240 Tyr Glu Tyr Ser Glu Arg Gly Asp Ala Val Cys Thr Glu Ser Gly Trp 245 250 255 Arg Pro Leu Pro Ser Cys Glu Glu Lys Ser Cys Asp Asn Pro Tyr Ile 260 265 270 Pro Asn Gly Asp Tyr Ser Pro Leu Arg Ile Lys His Arg Thr Gly Asp 275 280 285 Glu Ile Thr Tyr Gln Cys Arg Asn Gly Phe Tyr Pro Ala Thr Arg Gly 290 295 300 Asn Thr Ala Lys Cys Thr Ser Thr Gly Trp Ile Pro Ala Pro Arg Cys 305 310 315 320 Thr Leu Lys Pro Cys Asp Tyr Pro Asp Ile Lys His Gly Gly Leu Tyr 325 330 335 His Glu Asn Met Arg Arg Pro Tyr Phe Pro Val Ala Val Gly Lys Tyr 340 345 350 Tyr Ser Tyr Tyr Cys Asp Glu His Phe Glu Thr Pro Ser Gly Ser Tyr 355 360 365 Trp Asp His Ile His Cys Thr Gln Asp Gly Trp Ser Pro Ala Val Pro 370 375 380 Cys Leu Arg Lys Cys Tyr Phe Pro Tyr Leu Glu Asn Gly Tyr Asn Gln 385 390 395 400 Asn His Gly Arg Lys Phe Val Gln Gly Lys Ser Ile Asp Val Ala Cys 405 410 415 His Pro Gly Tyr Ala Leu Pro Lys Ala Gln Thr Thr Val Thr Cys Met 420 425 430 Glu Asn Gly Trp Ser Pro Thr Pro Arg Cys Ile Arg Val Lys Thr Cys 435 440 445 Ser Lys Ser Ser Ile Asp Ile Glu Asn Gly Phe Ile Ser Glu Ser Gln 450 455 460 Tyr Thr Tyr Ala Leu Lys Glu Lys Ala Lys Tyr Gln Cys Lys Leu Gly 465 470 475 480 Tyr Val Thr Ala Asp Gly Glu Thr Ser Gly Ser Ile Thr Cys Gly Lys 485 490 495 Asp Gly Trp Ser Ala Gln Pro Thr Cys Ile Lys Ser Cys Asp Ile Pro 500 505 510 Val Phe Met Asn Ala Arg Thr Lys Asn Asp Phe Thr Trp Phe Lys Leu 515 520 525 Asn Asp Thr Leu Asp Tyr Glu Cys His Asp Gly Tyr Glu Ser Asn Thr 530 535 540 Gly Ser Thr Thr Gly Ser Ile Val Cys Gly Tyr Asn Gly Trp Ser Asp 545 550 555 560 Leu Pro Ile Cys Tyr Glu Arg Glu Cys Glu Leu Pro Lys Ile Asp Val 565 570 575 His Leu Val Pro Asp Arg Lys Lys Asp Gln Tyr Lys Val Gly Glu Val 580 585 590 Leu Lys Phe Ser Cys Lys Pro Gly Phe Thr Ile Val Gly Pro Asn Ser 595 600 605 Val Gln Cys Tyr His Phe Gly Leu Ser Pro Asp Leu Pro Ile Cys Lys 610 615 620 Glu Gln Val Gln Ser Cys Gly Pro Pro Pro Glu Leu Leu Asn Gly Asn 625 630 635 640 Val Lys Glu Lys Thr Lys Glu Glu Tyr Gly His Ser Glu Val Val Glu 645 650 655 Tyr Tyr Cys Asn Pro Arg Phe Leu Met Lys Gly Pro Asn Lys Ile Gln 660 665 670 Cys Val Asp Gly Glu Trp Thr Thr Leu Pro Val Cys Ile Val Glu Glu 675 680 685 Ser Thr Cys Gly Asp Ile Pro Glu Leu Glu His Gly Trp Ala Gln Leu 690 695 700 Ser Ser Pro Pro Tyr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val Glu Phe Asn Cys Ser 705 710 715 720 Glu Ser Phe Thr Met Ile Gly His Arg Ser Ile Thr Cys Ile His Gly 725 730 735 Val Trp Thr Gln Leu Pro Gln Cys Val Ala Ile Asp Lys Leu Lys Lys 740 745 750 Cys Lys Ser Ser Asn Leu Ile Ile Leu Glu Glu His Leu Lys Asn Lys 755 760 765 Lys Glu Phe Asp His Asn Ser Asn Ile Arg Tyr Arg Cys Arg Gly Lys 770 775 780 Glu Gly Trp Ile His Thr Val Cys Ile Asn Gly Arg Trp Asp Pro Glu 785 790 795 800 Val Asn Cys Ser Met Ala Gln Ile Gln Leu Cys Pro Pro Pro Pro Gln 805 810 815 Ile Pro Asn Ser His Asn Met Thr Thr Thr Leu Asn Tyr Arg Asp Gly 820 825 830 Glu Lys Val Ser Val Leu Cys Gln Glu Asn Tyr Leu Ile Gln Glu Gly 835 840 845 Glu Glu Ile Thr Cys Lys Asp Gly Arg Trp Gln Ser Ile Pro Leu Cys 850 855 860 Val Glu Lys Ile Pro Cys Ser Gln Pro Pro Gln Ile Glu His Gly Thr 865 870 875 880 Ile Asn Ser Ser Arg Ser Ser Gln Glu Ser Tyr Ala His Gly Thr Lys 885 890 895 Leu Ser Tyr Thr Cys Glu Gly Gly Phe Arg Ile Ser Glu Glu Asn Glu 900 905 910 Thr Thr Cys Tyr Met Gly Lys Trp Ser Ser Pro Pro Gln Cys Glu Gly 915 920 925 Leu Pro Cys Lys Ser Pro Pro Glu Ile Ser His Gly Val Val Ala His 930 935 940 Met Ser Asp Ser Tyr Gln Tyr Gly Glu Glu Val Thr Tyr Lys Cys Phe 945 950 955 960 Glu Gly Phe Gly Ile Asp Gly Pro Ala Ile Ala Lys Cys Leu Gly Glu 965 970 975 Lys Trp Ser His Pro Pro Ser Cys Ile Lys Thr Asp Cys Leu Ser Leu 980 985 990 Pro Ser Phe Glu Asn Ala Ile Pro Met Gly Glu Lys Lys Asp Val Tyr 995 1000 1005 Lys Ala Gly Glu Gln Val Thr Tyr Thr Cys Ala Thr Tyr Tyr Lys Met 1010 1015 1020 Asp Gly Ala Ser Asn Val Thr Cys Ile Asn Ser Arg Trp Thr Gly Arg 1025 1030 1035 1040 Pro Thr Cys Arg Asp Thr Ser Cys Val Asn Pro Pro Thr Val Gln Asn 1045 1050 1055 Ala Tyr Ile Val Ser Arg Gln Met Ser Lys Tyr Pro Ser Gly Glu Arg 1060 1065 1070 Val Arg Tyr Gln Cys Arg Ser Pro Tyr Glu Met Phe Gly Asp Glu Glu 1075 1080 1085 Val Met Cys Leu Asn Gly Asn Trp Thr Glu Pro Pro Gln Cys Lys Asp 1090 1095 1100 Ser Thr Gly Lys Cys Gly Pro Pro Pro Pro Ile Asp Asn Gly Asp Ile 1105 1110 1115 1120 Thr Ser Phe Pro Leu Ser Val Tyr Ala Pro Ala Ser Ser Val Glu Tyr 1125 1130 1135 Gln Cys Gln Asn Leu Tyr Gln Leu Glu Gly Asn Lys Arg Ile Thr Cys 1140 1145 1150 Arg Asn Gly Gln Trp Ser Glu Pro Pro Lys Cys Leu His Pro Cys Val 1155 1160 1165 Ile Ser Arg Glu Ile Met Glu Asn Tyr Asn Ile Ala Leu Arg Trp Thr 1170 1175 1180 Ala Lys Gln Lys Leu Tyr Ser Arg Thr Gly Glu Ser Val Glu Phe Val 1185 1190 1195 1200 Cys Lys Arg Gly Tyr Arg Leu Ser Ser Arg Ser His Thr Leu Arg Thr 1205 1210 1215 Thr Cys Trp Asp Gly Lys Leu Glu Tyr Pro Thr Cys Ala Lys Arg 1220 1225 1230 <210> 22 <211> 764 <212> PRT <213> Homo sapiens CFB amino acids sequence <400> 22 Met Gly Ser Asn Leu Ser Pro Gln Leu Cys Leu Met Pro Phe Ile Leu 1 5 10 15 Gly Leu Leu Ser Gly Gly Val Thr Thr Thr Pro Trp Ser Leu Ala Arg 20 25 30 Pro Gln Gly Ser Cys Ser Leu Glu Gly Val Glu Ile Lys Gly Gly Ser 35 40 45 Phe Arg Leu Leu Gln Glu Gly Gln Ala Leu Glu Tyr Val Cys Pro Ser 50 55 60 Gly Phe Tyr Pro Tyr Pro Val Gln Thr Arg Thr Cys Arg Ser Thr Gly 65 70 75 80 Ser Trp Ser Thr Leu Lys Thr Gln Asp Gln Lys Thr Val Arg Lys Ala 85 90 95 Glu Cys Arg Ala Ile His Cys Pro Arg Pro His Asp Phe Glu Asn Gly 100 105 110 Glu Tyr Trp Pro Arg Ser Pro Tyr Tyr Asn Val Ser Asp Glu Ile Ser 115 120 125 Phe His Cys Tyr Asp Gly Tyr Thr Leu Arg Gly Ser Ala Asn Arg Thr 130 135 140 Cys Gln Val Asn Gly Arg Trp Ser Gly Gln Thr Ala Ile Cys Asp Asn 145 150 155 160 Gly Ala Gly Tyr Cys Ser Asn Pro Gly Ile Pro Ile Gly Thr Arg Lys 165 170 175 Val Gly Ser Gln Tyr Arg Leu Glu Asp Ser Val Thr Tyr His Cys Ser 180 185 190 Arg Gly Leu Thr Leu Arg Gly Ser Gln Arg Arg Thr Cys Gln Glu Gly 195 200 205 Gly Ser Trp Ser Gly Thr Glu Pro Ser Cys Gln Asp Ser Phe Met Tyr 210 215 220 Asp Thr Pro Gln Glu Val Ala Glu Ala Phe Leu Ser Ser Leu Thr Glu 225 230 235 240 Thr Ile Glu Gly Val Asp Ala Glu Asp Gly His Gly Pro Gly Glu Gln 245 250 255 Gln Lys Arg Lys Ile Val Leu Asp Pro Ser Gly Ser Met Asn Ile Tyr 260 265 270 Leu Val Leu Asp Gly Ser Asp Ser Ile Gly Ala Ser Asn Phe Thr Gly 275 280 285 Ala Lys Lys Cys Leu Val Asn Leu Ile Glu Lys Val Ala Ser Tyr Gly 290 295 300 Val Lys Pro Arg Tyr Gly Leu Val Thr Tyr Ala Thr Tyr Pro Lys Ile 305 310 315 320 Trp Val Lys Val Ser Glu Ala Asp Ser Ser Asn Ala Asp Trp Val Thr 325 330 335 Lys Gln Leu Asn Glu Ile Asn Tyr Glu Asp His Lys Leu Lys Ser Gly 340 345 350 Thr Asn Thr Lys Lys Ala Leu Gln Ala Val Tyr Ser Met Met Ser Trp 355 360 365 Pro Asp Asp Val Pro Pro Glu Gly Trp Asn Arg Thr Arg His Val Ile 370 375 380 Ile Leu Met Thr Asp Gly Leu His Asn Met Gly Gly Asp Pro Ile Thr 385 390 395 400 Val Ile Asp Glu Ile Arg Asp Leu Leu Tyr Ile Gly Lys Asp Arg Lys 405 410 415 Asn Pro Arg Glu Asp Tyr Leu Asp Val Tyr Val Phe Gly Val Gly Pro 420 425 430 Leu Val Asn Gln Val Asn Ile Asn Ala Leu Ala Ser Lys Lys Asp Asn 435 440 445 Glu Gln His Val Phe Lys Val Lys Asp Met Glu Asn Leu Glu Asp Val 450 455 460 Phe Tyr Gln Met Ile Asp Glu Ser Gln Ser Leu Ser Leu Cys Gly Met 465 470 475 480 Val Trp Glu His Arg Lys Gly Thr Asp Tyr His Lys Gln Pro Trp Gln 485 490 495 Ala Lys Ile Ser Val Ile Arg Pro Ser Lys Gly His Glu Ser Cys Met 500 505 510 Gly Ala Val Val Ser Glu Tyr Phe Val Leu Thr Ala Ala His Cys Phe 515 520 525 Thr Val Asp Asp Lys Glu His Ser Ile Lys Val Ser Val Gly Gly Glu 530 535 540 Lys Arg Asp Leu Glu Ile Glu Val Val Leu Phe His Pro Asn Tyr Asn 545 550 555 560 Ile Asn Gly Lys Lys Glu Ala Gly Ile Pro Glu Phe Tyr Asp Tyr Asp 565 570 575 Val Ala Leu Ile Lys Leu Lys Asn Lys Leu Lys Tyr Gly Gln Thr Ile 580 585 590 Arg Pro Ile Cys Leu Pro Cys Thr Glu Gly Thr Thr Arg Ala Leu Arg 595 600 605 Leu Pro Pro Thr Thr Thr Cys Gln Gln Gln Lys Glu Glu Leu Leu Pro 610 615 620 Ala Gln Asp Ile Lys Ala Leu Phe Val Ser Glu Glu Glu Lys Lys Leu 625 630 635 640 Thr Arg Lys Glu Val Tyr Ile Lys Asn Gly Asp Lys Lys Gly Ser Cys 645 650 655 Glu Arg Asp Ala Gln Tyr Ala Pro Gly Tyr Asp Lys Val Lys Asp Ile 660 665 670 Ser Glu Val Val Thr Pro Arg Phe Leu Cys Thr Gly Gly Val Ser Pro 675 680 685 Tyr Ala Asp Pro Asn Thr Cys Arg Gly Asp Ser Gly Gly Pro Leu Ile 690 695 700 Val His Lys Arg Ser Arg Phe Ile Gln Val Gly Val Ile Ser Trp Gly 705 710 715 720 Val Val Asp Val Cys Lys Asn Gln Lys Arg Gln Lys Gln Val Pro Ala 725 730 735 His Ala Arg Asp Phe His Ile Asn Leu Phe Gln Val Leu Pro Trp Leu 740 745 750 Lys Glu Lys Leu Gln Asp Glu Asp Leu Gly Phe Leu 755 760 <210> 23 <211> 1663 <212> PRT <213> Homo sapiens C3 amino acids sequence <400> 23 Met Gly Pro Thr Ser Gly Pro Ser Leu Leu Leu Leu Leu Leu Thr His 1 5 10 15 Leu Pro Leu Ala Leu Gly Ser Pro Met Tyr Ser Ile Ile Thr Pro Asn 20 25 30 Ile Leu Arg Leu Glu Ser Glu Glu Thr Met Val Leu Glu Ala His Asp 35 40 45 Ala Gln Gly Asp Val Pro Val Thr Val Thr Val His Asp Phe Pro Gly 50 55 60 Lys Lys Leu Val Leu Ser Ser Glu Lys Thr Val Leu Thr Pro Ala Thr 65 70 75 80 Asn His Met Gly Asn Val Thr Phe Thr Ile Pro Ala Asn Arg Glu Phe 85 90 95 Lys Ser Glu Lys Gly Arg Asn Lys Phe Val Thr Val Gln Ala Thr Phe 100 105 110 Gly Thr Gln Val Val Glu Lys Val Val Leu Val Ser Leu Gln Ser Gly 115 120 125 Tyr Leu Phe Ile Gln Thr Asp Lys Thr Ile Tyr Thr Pro Gly Ser Thr 130 135 140 Val Leu Tyr Arg Ile Phe Thr Val Asn His Lys Leu Leu Pro Val Gly 145 150 155 160 Arg Thr Val Met Val Asn Ile Glu Asn Pro Glu Gly Ile Pro Val Lys 165 170 175 Gln Asp Ser Leu Ser Ser Gln Asn Gln Leu Gly Val Leu Pro Leu Ser 180 185 190 Trp Asp Ile Pro Glu Leu Val Asn Met Gly Gln Trp Lys Ile Arg Ala 195 200 205 Tyr Tyr Glu Asn Ser Pro Gln Gln Val Phe Ser Thr Glu Phe Glu Val 210 215 220 Lys Glu Tyr Val Leu Pro Ser Phe Glu Val Ile Val Glu Pro Thr Glu 225 230 235 240 Lys Phe Tyr Tyr Ile Tyr Asn Glu Lys Gly Leu Glu Val Thr Ile Thr 245 250 255 Ala Arg Phe Leu Tyr Gly Lys Lys Val Glu Gly Thr Ala Phe Val Ile 260 265 270 Phe Gly Ile Gln Asp Gly Glu Gln Arg Ile Ser Leu Pro Glu Ser Leu 275 280 285 Lys Arg Ile Pro Ile Glu Asp Gly Ser Gly Glu Val Val Leu Ser Arg 290 295 300 Lys Val Leu Leu Asp Gly Val Gln Asn Pro Arg Ala Glu Asp Leu Val 305 310 315 320 Gly Lys Ser Leu Tyr Val Ser Ala Thr Val Ile Leu His Ser Gly Ser 325 330 335 Asp Met Val Gln Ala Glu Arg Ser Gly Ile Pro Ile Val Thr Ser Pro 340 345 350 Tyr Gln Ile His Phe Thr Lys Thr Pro Lys Tyr Phe Lys Pro Gly Met 355 360 365 Pro Phe Asp Leu Met Val Phe Val Thr Asn Pro Asp Gly Ser Pro Ala 370 375 380 Tyr Arg Val Pro Val Ala Val Gln Gly Glu Asp Thr Val Gln Ser Leu 385 390 395 400 Thr Gln Gly Asp Gly Val Ala Lys Leu Ser Ile Asn Thr His Pro Ser 405 410 415 Gln Lys Pro Leu Ser Ile Thr Val Arg Thr Lys Lys Gln Glu Leu Ser 420 425 430 Glu Ala Glu Gln Ala Thr Arg Thr Met Gln Ala Leu Pro Tyr Ser Thr 435 440 445 Val Gly Asn Ser Asn Asn Tyr Leu His Leu Ser Val Leu Arg Thr Glu 450 455 460 Leu Arg Pro Gly Glu Thr Leu Asn Val Asn Phe Leu Leu Arg Met Asp 465 470 475 480 Arg Ala His Glu Ala Lys Ile Arg Tyr Tyr Thr Tyr Leu Ile Met Asn 485 490 495 Lys Gly Arg Leu Leu Lys Ala Gly Arg Gln Val Arg Glu Pro Gly Gln 500 505 510 Asp Leu Val Val Leu Pro Leu Ser Ile Thr Thr Asp Phe Ile Pro Ser 515 520 525 Phe Arg Leu Val Ala Tyr Tyr Thr Leu Ile Gly Ala Ser Gly Gln Arg 530 535 540 Glu Val Val Ala Asp Ser Val Trp Val Asp Val Lys Asp Ser Cys Val 545 550 555 560 Gly Ser Leu Val Val Lys Ser Gly Gln Ser Glu Asp Arg Gln Pro Val 565 570 575 Pro Gly Gln Gln Met Thr Leu Lys Ile Glu Gly Asp His Gly Ala Arg 580 585 590 Val Val Leu Val Ala Val Asp Lys Gly Val Phe Val Leu Asn Lys Lys 595 600 605 Asn Lys Leu Thr Gln Ser Lys Ile Trp Asp Val Val Glu Lys Ala Asp 610 615 620 Ile Gly Cys Thr Pro Gly Ser Gly Lys Asp Tyr Ala Gly Val Phe Ser 625 630 635 640 Asp Ala Gly Leu Thr Phe Thr Ser Ser Ser Gly Gln Gln Thr Ala Gln 645 650 655 Arg Ala Glu Leu Gln Cys Pro Gln Pro Ala Ala Arg Arg Arg Arg Ser 660 665 670 Val Gln Leu Thr Glu Lys Arg Met Asp Lys Val Gly Lys Tyr Pro Lys 675 680 685 Glu Leu Arg Lys Cys Cys Glu Asp Gly Met Arg Glu Asn Pro Met Arg 690 695 700 Phe Ser Cys Gln Arg Arg Thr Arg Phe Ile Ser Leu Gly Glu Ala Cys 705 710 715 720 Lys Lys Val Phe Leu Asp Cys Cys Asn Tyr Ile Thr Glu Leu Arg Arg 725 730 735 Gln His Ala Arg Ala Ser His Leu Gly Leu Ala Arg Ser Asn Leu Asp 740 745 750 Glu Asp Ile Ile Ala Glu Glu Asn Ile Val Ser Arg Ser Glu Phe Pro 755 760 765 Glu Ser Trp Leu Trp Asn Val Glu Asp Leu Lys Glu Pro Pro Lys Asn 770 775 780 Gly Ile Ser Thr Lys Leu Met Asn Ile Phe Leu Lys Asp Ser Ile Thr 785 790 795 800 Thr Trp Glu Ile Leu Ala Val Ser Met Ser Asp Lys Lys Gly Ile Cys 805 810 815 Val Ala Asp Pro Phe Glu Val Thr Val Met Gln Asp Phe Phe Ile Asp 820 825 830 Leu Arg Leu Pro Tyr Ser Val Val Arg Asn Glu Gln Val Glu Ile Arg 835 840 845 Ala Val Leu Tyr Asn Tyr Arg Gln Asn Gln Glu Leu Lys Val Arg Val 850 855 860 Glu Leu Leu His Asn Pro Ala Phe Cys Ser Leu Ala Thr Thr Lys Arg 865 870 875 880 Arg His Gln Gln Thr Val Thr Ile Pro Pro Lys Ser Ser Leu Ser Val 885 890 895 Pro Tyr Val Ile Val Pro Leu Lys Thr Gly Leu Gln Glu Val Glu Val 900 905 910 Lys Ala Ala Val Tyr His His Phe Ile Ser Asp Gly Val Arg Lys Ser 915 920 925 Leu Lys Val Val Pro Glu Gly Ile Arg Met Asn Lys Thr Val Ala Val 930 935 940 Arg Thr Leu Asp Pro Glu Arg Leu Gly Arg Glu Gly Val Gln Lys Glu 945 950 955 960 Asp Ile Pro Pro Ala Asp Leu Ser Asp Gln Val Pro Asp Thr Glu Ser 965 970 975 Glu Thr Arg Ile Leu Leu Gln Gly Thr Pro Val Ala Gln Met Thr Glu 980 985 990 Asp Ala Val Asp Ala Glu Arg Leu Lys His Leu Ile Val Thr Pro Ser 995 1000 1005 Gly Cys Gly Glu Gln Asn Met Ile Gly Met Thr Pro Thr Val Ile Ala 1010 1015 1020 Val His Tyr Leu Asp Glu Thr Glu Gln Trp Glu Lys Phe Gly Leu Glu 1025 1030 1035 1040 Lys Arg Gln Gly Ala Leu Glu Leu Ile Lys Lys Gly Tyr Thr Gln Gln 1045 1050 1055 Leu Ala Phe Arg Gln Pro Ser Ser Ala Phe Ala Ala Phe Val Lys Arg 1060 1065 1070 Ala Pro Ser Thr Trp Leu Thr Ala Tyr Val Val Lys Val Phe Ser Leu 1075 1080 1085 Ala Val Asn Leu Ile Ala Ile Asp Ser Gln Val Leu Cys Gly Ala Val 1090 1095 1100 Lys Trp Leu Ile Leu Glu Lys Gln Lys Pro Asp Gly Val Phe Gln Glu 1105 1110 1115 1120 Asp Ala Pro Val Ile His Gln Glu Met Ile Gly Gly Leu Arg Asn Asn 1125 1130 1135 Asn Glu Lys Asp Met Ala Leu Thr Ala Phe Val Leu Ile Ser Leu Gln 1140 1145 1150 Glu Ala Lys Asp Ile Cys Glu Glu Gln Val Asn Ser Leu Pro Gly Ser 1155 1160 1165 Ile Thr Lys Ala Gly Asp Phe Leu Glu Ala Asn Tyr Met Asn Leu Gln 1170 1175 1180 Arg Ser Tyr Thr Val Ala Ile Ala Gly Tyr Ala Leu Ala Gln Met Gly 1185 1190 1195 1200 Arg Leu Lys Gly Pro Leu Leu Asn Lys Phe Leu Thr Thr Ala Lys Asp 1205 1210 1215 Lys Asn Arg Trp Glu Asp Pro Gly Lys Gln Leu Tyr Asn Val Glu Ala 1220 1225 1230 Thr Ser Tyr Ala Leu Leu Ala Leu Leu Gln Leu Lys Asp Phe Asp Phe 1235 1240 1245 Val Pro Pro Val Val Arg Trp Leu Asn Glu Gln Arg Tyr Tyr Gly Gly 1250 1255 1260 Gly Tyr Gly Ser Thr Gln Ala Thr Phe Met Val Phe Gln Ala Leu Ala 1265 1270 1275 1280 Gln Tyr Gln Lys Asp Ala Pro Asp His Gln Glu Leu Asn Leu Asp Val 1285 1290 1295 Ser Leu Gln Leu Pro Ser Arg Ser Ser Lys Ile Thr His Arg Ile His 1300 1305 1310 Trp Glu Ser Ala Ser Leu Leu Arg Ser Glu Glu Thr Lys Glu Asn Glu 1315 1320 1325 Gly Phe Thr Val Thr Ala Glu Gly Lys Gly Gln Gly Thr Leu Ser Val 1330 1335 1340 Val Thr Met Tyr His Ala Lys Ala Lys Asp Gln Leu Thr Cys Asn Lys 1345 1350 1355 1360 Phe Asp Leu Lys Val Thr Ile Lys Pro Ala Pro Glu Thr Glu Lys Arg 1365 1370 1375 Pro Gln Asp Ala Lys Asn Thr Met Ile Leu Glu Ile Cys Thr Arg Tyr 1380 1385 1390 Arg Gly Asp Gln Asp Ala Thr Met Ser Ile Leu Asp Ile Ser Met Met 1395 1400 1405 Thr Gly Phe Ala Pro Asp Thr Asp Asp Leu Lys Gln Leu Ala Asn Gly 1410 1415 1420 Val Asp Arg Tyr Ile Ser Lys Tyr Glu Leu Asp Lys Ala Phe Ser Asp 1425 1430 1435 1440 Arg Asn Thr Leu Ile Ile Tyr Leu Asp Lys Val Ser His Ser Glu Asp 1445 1450 1455 Asp Cys Leu Ala Phe Lys Val His Gln Tyr Phe Asn Val Glu Leu Ile 1460 1465 1470 Gln Pro Gly Ala Val Lys Val Tyr Ala Tyr Tyr Asn Leu Glu Glu Ser 1475 1480 1485 Cys Thr Arg Phe Tyr His Pro Glu Lys Glu Asp Gly Lys Leu Asn Lys 1490 1495 1500 Leu Cys Arg Asp Glu Leu Cys Arg Cys Ala Glu Glu Asn Cys Phe Ile 1505 1510 1515 1520 Gln Lys Ser Asp Asp Lys Val Thr Leu Glu Glu Arg Leu Asp Lys Ala 1525 1530 1535 Cys Glu Pro Gly Val Asp Tyr Val Tyr Lys Thr Arg Leu Val Lys Val 1540 1545 1550 Gln Leu Ser Asn Asp Phe Asp Glu Tyr Ile Met Ala Ile Glu Gln Thr 1555 1560 1565 Ile Lys Ser Gly Ser Asp Glu Val Gln Val Gly Gln Gln Arg Thr Phe 1570 1575 1580 Ile Ser Pro Ile Lys Cys Arg Glu Ala Leu Lys Leu Glu Glu Lys Lys 1585 1590 1595 1600 His Tyr Leu Met Trp Gly Leu Ser Ser Asp Phe Trp Gly Glu Lys Pro 1605 1610 1615 Asn Leu Ser Tyr Ile Ile Gly Lys Asp Thr Trp Val Glu His Trp Pro 1620 1625 1630 Glu Glu Asp Glu Cys Gln Asp Glu Glu Asn Gln Lys Gln Cys Gln Asp 1635 1640 1645 Leu Gly Ala Phe Thr Glu Ser Met Val Val Phe Gly Cys Pro Asn 1650 1655 1660 <210> 24 <211> 583 <212> PRT <213> Homo sapiens CFI amino acids sequence <400> 24 Met Lys Leu Leu His Val Phe Leu Leu Phe Leu Cys Phe His Leu Arg 1 5 10 15 Phe Cys Lys Val Thr Tyr Thr Ser Gln Glu Asp Leu Val Glu Lys Lys 20 25 30 Cys Leu Ala Lys Lys Tyr Thr His Leu Ser Cys Asp Lys Val Phe Cys 35 40 45 Gln Pro Trp Gln Arg Cys Ile Glu Gly Thr Cys Val Cys Lys Leu Pro 50 55 60 Tyr Gln Cys Pro Lys Asn Gly Thr Ala Val Cys Ala Thr Asn Arg Arg 65 70 75 80 Ser Phe Pro Thr Tyr Cys Gln Gln Lys Ser Leu Glu Cys Leu His Pro 85 90 95 Gly Thr Lys Phe Leu Asn Asn Gly Thr Cys Thr Ala Glu Gly Lys Phe 100 105 110 Ser Val Ser Leu Lys His Gly Asn Thr Asp Ser Glu Gly Ile Val Glu 115 120 125 Val Lys Leu Val Asp Gln Asp Lys Thr Met Phe Ile Cys Lys Ser Ser 130 135 140 Trp Ser Met Arg Glu Ala Asn Val Ala Cys Leu Asp Leu Gly Phe Gln 145 150 155 160 Gln Gly Ala Asp Thr Gln Arg Arg Phe Lys Leu Ser Asp Leu Ser Ile 165 170 175 Asn Ser Thr Glu Cys Leu His Val His Cys Arg Gly Leu Glu Thr Ser 180 185 190 Leu Ala Glu Cys Thr Phe Thr Lys Arg Arg Thr Met Gly Tyr Gln Asp 195 200 205 Phe Ala Asp Val Val Cys Tyr Thr Gln Lys Ala Asp Ser Pro Met Asp 210 215 220 Asp Phe Phe Gln Cys Val Asn Gly Lys Tyr Ile Ser Gln Met Lys Ala 225 230 235 240 Cys Asp Gly Ile Asn Asp Cys Gly Asp Gln Ser Asp Glu Leu Cys Cys 245 250 255 Lys Ala Cys Gln Gly Lys Gly Phe His Cys Lys Ser Gly Val Cys Ile 260 265 270 Pro Ser Gln Tyr Gln Cys Asn Gly Glu Val Asp Cys Ile Thr Gly Glu 275 280 285 Asp Glu Val Gly Cys Ala Gly Phe Ala Ser Val Ala Gln Glu Glu Thr 290 295 300 Glu Ile Leu Thr Ala Asp Met Asp Ala Glu Arg Arg Arg Ile Lys Ser 305 310 315 320 Leu Leu Pro Lys Leu Ser Cys Gly Val Lys Asn Arg Met His Ile Arg 325 330 335 Arg Lys Arg Ile Val Gly Gly Lys Arg Ala Gln Leu Gly Asp Leu Pro 340 345 350 Trp Gln Val Ala Ile Lys Asp Ala Ser Gly Ile Thr Cys Gly Gly Ile 355 360 365 Tyr Ile Gly Gly Cys Trp Ile Leu Thr Ala Ala His Cys Leu Arg Ala 370 375 380 Ser Lys Thr His Arg Tyr Gln Ile Trp Thr Thr Val Val Asp Trp Ile 385 390 395 400 His Pro Asp Leu Lys Arg Ile Val Ile Glu Tyr Val Asp Arg Ile Ile 405 410 415 Phe His Glu Asn Tyr Asn Ala Gly Thr Tyr Gln Asn Asp Ile Ala Leu 420 425 430 Ile Glu Met Lys Lys Asp Gly Asn Lys Lys Asp Cys Glu Leu Pro Arg 435 440 445 Ser Ile Pro Ala Cys Val Pro Trp Ser Pro Tyr Leu Phe Gln Pro Asn 450 455 460 Asp Thr Cys Ile Val Ser Gly Trp Gly Arg Glu Lys Asp Asn Glu Arg 465 470 475 480 Val Phe Ser Leu Gln Trp Gly Glu Val Lys Leu Ile Ser Asn Cys Ser 485 490 495 Lys Phe Tyr Gly Asn Arg Phe Tyr Glu Lys Glu Met Glu Cys Ala Gly 500 505 510 Thr Tyr Asp Gly Ser Ile Asp Ala Cys Lys Gly Asp Ser Gly Gly Pro 515 520 525 Leu Val Cys Met Asp Ala Asn Asn Val Thr Tyr Val Trp Gly Val Val 530 535 540 Ser Trp Gly Glu Asn Cys Gly Lys Pro Glu Phe Pro Gly Val Tyr Thr 545 550 555 560 Lys Val Ala Asn Tyr Phe Asp Trp Ile Ser Tyr His Val Gly Arg Pro 565 570 575 Phe Ile Ser Gln Tyr Asn Val 580 <210> 25 <211> 3696 <212> DNA <213> Homo sapiens CHF nucleotides sequence <400> 25 atgagacttc tagcaaagat tatttgcctt atgttatggg ctatttgtgt agcagaagat 60 tgcaatgaac ttcctccaag aagaaataca gaaattctga caggttcctg gtctgaccaa 120 acatatccag aaggcaccca ggctatctat aaatgccgcc ctggatatag atctcttgga 180 aatgtaataa tggtatgcag gaagggagaa tgggttgctc ttaatccatt aaggaaatgt 240 cagaaaaggc cctgtggaca tcctggagat actccttttg gtacttttac ccttacagga 300 ggaaatgtgt ttgaatatgg tgtaaaagct gtgtatacat gtaatgaggg gtatcaattg 360 ctaggtgaga ttaattaccg tgaatgtgac acagatggat ggaccaatga tattcctata 420 tgtgaagttg tgaagtgttt accagtgaca gcaccagaga atggaaaaat tgtcagtagt 480 gcaatggaac cagatcggga ataccatttt ggacaagcag tacggtttgt atgtaactca 540 ggctacaaga ttgaaggaga tgaagaaatg cattgttcag acgatggttt ttggagtaaa 600 gagaaaccaa agtgtgtgga aatttcatgc aaatccccag atgttataaa tggatctcct 660 atatctcaga agattattta taaggagaat gaacgatttc aatataaatg taacatgggt 720 tatgaataca gtgaaagagg agatgctgta tgcactgaat ctggatggcg tccgttgcct 780 tcatgtgaag aaaaatcatg tgataatcct tatattccaa atggtgacta ctcaccttta 840 aggattaaac acagaactgg agatgaaatc acgtaccagt gtagaaatgg tttttatcct 900 gcaacccggg gaaatacagc aaaatgcaca agtactggct ggatacctgc tccgagatgt 960 accttgaaac cttgtgatta tccagacatt aaacatggag gtctatatca tgagaatatg 1020 cgtagaccat actttccagt agctgtagga aaatattact cctattactg tgatgaacat 1080 tttgagactc cgtcaggaag ttactgggat cacattcatt gcacacaaga tggatggtcg 1140 ccagcagtac catgcctcag aaaatgttat tttccttatt tggaaaatgg atataatcaa 1200 aatcatggaa gaaagtttgt acagggtaaa tctatagacg ttgcctgcca tcctggctac 1260 gctcttccaa aagcgcagac cacagttaca tgtatggaga atggctggtc tcctactccc 1320 agatgcatcc gtgtcaaaac atgttccaaa tcaagtatag atattgagaa tgggtttatt 1380 tctgaatctc agtatacata tgccttaaaa gaaaaagcga aatatcaatg caaactagga 1440 tatgtaacag cagatggtga aacatcagga tcaattacat gtgggaaaga tggatggtca 1500 gctcaaccca cgtgcattaa atcttgtgat atcccagtat ttatgaatgc cagaactaaa 1560 aatgacttca catggtttaa gctgaatgac acattggact atgaatgcca tgatggttat 1620 gaaagcaata ctggaagcac cactggttcc atagtgtgtg gttacaatgg ttggtctgat 1680 ttacccatat gttatgaaag agaatgcgaa cttcctaaaa tagatgtaca cttagttcct 1740 gatcgcaaga aagaccagta taaagttgga gaggtgttga aattctcctg caaaccagga 1800 tttacaatag ttggacctaa ttccgttcag tgctaccact ttggattgtc tcctgacctc 1860 ccaatatgta aagagcaagt acaatcatgt ggtccacctc ctgaactcct caatgggaat 1920 gttaaggaaa aaacgaaaga agaatatgga cacagtgaag tggtggaata ttattgcaat 1980 cctagatttc taatgaaggg acctaataaa attcaatgtg ttgatggaga gtggacaact 2040 ttaccagtgt gtattgtgga ggagagtacc tgtggagata tacctgaact tgaacatggc 2100 tgggcccagc tttcttcccc tccttattac tatggagatt cagtggaatt caattgctca 2160 gaatcattta caatgattgg acacagatca attacgtgta ttcatggagt atggacccaa 2220 cttccccagt gtgtggcaat agataaactt aagaagtgca aatcatcaaa tttaattata 2280 cttgaggaac atttaaaaaa caagaaggaa ttcgatcata attctaacat aaggtacaga 2340 tgtagaggaa aagaaggatg gatacacaca gtctgcataa atggaagatg ggatccagaa 2400 gtgaactgct caatggcaca aatacaatta tgcccacctc cacctcagat tcccaattct 2460 cacaatatga caaccacact gaattatcgg gatggagaaa aagtatctgt tctttgccaa 2520 gaaaattatc taattcagga aggagaagaa attacatgca aagatggaag atggcagtca 2580 ataccactct gtgttgaaaa aattccatgt tcacaaccac ctcagataga acacggaacc 2640 attaattcat ccaggtcttc acaagaaagt tatgcacatg ggactaaatt gagttatact 2700 tgtgagggtg gtttcaggat atctgaagaa aatgaaacaa catgctacat gggaaaatgg 2760 agttctccac ctcagtgtga aggccttcct tgtaaatctc cacctgagat ttctcatggt 2820 gttgtagctc acatgtcaga cagttatcag tatggagaag aagttacgta caaatgtttt 2880 gaaggttttg gaattgatgg gcctgcaatt gcaaaatgct taggagaaaa atggtctcac 2940 cctccatcat gcataaaaac agattgtctc agtttaccta gctttgaaaa tgccataccc 3000 atgggagaga agaaggatgt gtataaggcg ggtgagcaag tgacttacac ttgtgcaaca 3060 tattacaaaa tggatggagc cagtaatgta acatgcatta atagcagatg gacaggaagg 3120 ccaacatgca gagacacctc ctgtgtgaat ccgcccacag tacaaaatgc ttatatagtg 3180 tcgagacaga tgagtaaata tccatctggt gagagagtac gttatcaatg taggagccct 3240 tatgaaatgt ttggggatga agaagtgatg tgtttaaatg gaaactggac ggaaccacct 3300 caatgcaaag attctacagg aaaatgtggg ccccctccac ctattgacaa tggggacatt 3360 acttcattcc cgttgtcagt atatgctcca gcttcatcag ttgagtacca atgccagaac 3420 ttgtatcaac ttgagggtaa caagcgaata acatgtagaa atggacaatg gtcagaacca 3480 ccaaaatgct tacatccgtg tgtaatatcc cgagaaatta tggaaaatta taacatagca 3540 ttaaggtgga cagccaaaca gaagctttat tcgagaacag gtgaatcagt tgaatttgtg 3600 tgtaaacggg gatatcgtct ttcatcacgt tctcacacat tgcgaacaac atgttgggat 3660 gggaaactgg agtatccaac ttgtgcaaaa agatag 3696 <210> 26 <211> 2295 <212> DNA <213> Homo sapiens CFB nucleotides sequence <400> 26 atggggagca atctcagccc ccaactctgc ctgatgccct ttatcttggg cctcttgtct 60 ggaggtgtga ccaccactcc atggtctttg gcccggcccc agggatcctg ctctctggag 120 ggggtagaga tcaaaggcgg ctccttccga cttctccaag agggccaggc actggagtac 180 gtgtgtcctt ctggcttcta cccgtaccct gtgcagacac gtacctgcag atctacgggg 240 tcctggagca ccctgaagac tcaagaccaa aagactgtca ggaaggcaga gtgcagagca 300 atccactgtc caagaccaca cgacttcgag aacggggaat actggccccg gtctccctac 360 tacaatgtga gtgatgagat ctctttccac tgctatgacg gttacactct ccggggctct 420 gccaatcgca cctgccaagt gaatggccga tggagtgggc agacagcgat ctgtgacaac 480 ggagcggggt actgctccaa cccgggcatc cccattggca caaggaaggt gggcagccag 540 taccgccttg aagacagcgt cacctaccac tgcagccggg ggcttaccct gcgtggctcc 600 cagcggcgaa cgtgtcagga aggtggctct tggagcggga cggagccttc ctgccaagac 660 tccttcatgt acgacacccc tcaagaggtg gccgaagctt tcctgtcttc cctgacagag 720 accatagaag gagtcgatgc tgaggatggg cacggcccag gggaacaaca gaagcggaag 780 atcgtcctgg acccttcagg ctccatgaac atctacctgg tgctagatgg atcagacagc 840 attggggcca gcaacttcac aggagccaaa aagtgtctag tcaacttaat tgagaaggtg 900 gcaagttatg gtgtgaagcc aagatatggt ctagtgacat atgccacata ccccaaaatt 960 tgggtcaaag tgtctgaagc agacagcagt aatgcagact gggtcacgaa gcagctcaat 1020 gaaatcaatt atgaagacca caagttgaag tcagggacta acaccaagaa ggccctccag 1080 gcagtgtaca gcatgatgag ctggccagat gacgtccctc ctgaaggctg gaaccgcacc 1140 cgccatgtca tcatcctcat gactgatgga ttgcacaaca tgggcgggga cccaattact 1200 gtcattgatg agatccggga cttgctatac attggcaagg atcgcaaaaa cccaagggag 1260 gattatctgg atgtctatgt gtttggggtc gggcctttgg tgaaccaagt gaacatcaat 1320 gctttggctt ccaagaaaga caatgagcaa catgtgttca aagtcaagga tatggaaaac 1380 ctggaagatg ttttctacca aatgatcgat gaaagccagt ctctgagtct ctgtggcatg 1440 gtttgggaac acaggaaggg taccgattac cacaagcaac catggcaggc caagatctca 1500 gtcattcgcc cttcaaaggg acacgagagc tgtatggggg ctgtggtgtc tgagtacttt 1560 gtgctgacag cagcacattg tttcactgtg gatgacaagg aacactcaat caaggtcagc 1620 gtaggagggg agaagcggga cctggagata gaagtagtcc tatttcaccc caactacaac 1680 attaatggga aaaaagaagc aggaattcct gaattttatg actatgacgt tgccctgatc 1740 aagctcaaga ataagctgaa atatggccag actatcaggc ccatttgtct cccctgcacc 1800 gagggaacaa ctcgagcttt gaggcttcct ccaactacca cttgccagca acaaaaggaa 1860 gagctgctcc ctgcacagga tatcaaagct ctgtttgtgt ctgaggagga gaaaaagctg 1920 actcggaagg aggtctacat caagaatggg gataagaaag gcagctgtga gagagatgct 1980 caatatgccc caggctatga caaagtcaag gacatctcag aggtggtcac ccctcggttc 2040 ctttgtactg gaggagtgag tccctatgct gaccccaata cttgcagagg tgattctggc 2100 ggccccttga tagttcacaa gagaagtcgt ttcattcaag ttggtgtaat cagctgggga 2160 gtagtggatg tctgcaaaaa ccagaagcgg caaaagcagg tacctgctca cgcccgagac 2220 tttcacatca acctctttca agtgctgccc tggctgaagg agaaactcca agatgaggat 2280 ttgggttttc tataa 2295 <210> 27 <211> 4992 <212> DNA <213> Homo sapiens C3 nucleotides sequence <400> 27 atgggaccca cctcaggtcc cagcctgctg ctcctgctac taacccacct ccccctggct 60 ctggggagtc ccatgtactc tatcatcacc cccaacatct tgcggctgga gagcgaggag 120 accatggtgc tggaggccca cgacgcgcaa ggggatgttc cagtcactgt tactgtccac 180 gacttcccag gcaaaaaact agtgctgtcc agtgagaaga ctgtgctgac ccctgccacc 240 aaccacatgg gcaacgtcac cttcacgatc ccagccaaca gggagttcaa gtcagaaaag 300 gggcgcaaca agttcgtgac cgtgcaggcc accttcggga cccaagtggt ggagaaggtg 360 gtgctggtca gcctgcagag cgggtacctc ttcatccaga cagacaagac catctacacc 420 cctggctcca cagttctcta tcggatcttc accgtcaacc acaagctgct acccgtgggc 480 cggacggtca tggtcaacat tgagaacccg gaaggcatcc cggtcaagca ggactccttg 540 tcttctcaga accagcttgg cgtcttgccc ttgtcttggg acattccgga actcgtcaac 600 atgggccagt ggaagatccg agcctactat gaaaactcac cacagcaggt cttctccact 660 gagtttgagg tgaaggagta cgtgctgccc agtttcgagg tcatagtgga gcctacagag 720 aaattctact acatctataa cgagaagggc ctggaggtca ccatcaccgc caggttcctc 780 tacgggaaga aagtggaggg aactgccttt gtcatcttcg ggatccagga tggcgaacag 840 aggatttccc tgcctgaatc cctcaagcgc attccgattg aggatggctc gggggaggtt 900 gtgctgagcc ggaaggtact gctggacggg gtgcagaacc cccgagcaga agacctggtg 960 gggaagtctt tgtacgtgtc tgccaccgtc atcttgcact caggcagtga catggtgcag 1020 gcagagcgca gcgggatccc catcgtgacc tctccctacc agatccactt caccaagaca 1080 cccaagtact tcaaaccagg aatgcccttt gacctcatgg tgttcgtgac gaaccctgat 1140 ggctctccag cctaccgagt ccccgtggca gtccagggcg aggacactgt gcagtctcta 1200 acccagggag atggcgtggc caaactcagc atcaacacac accccagcca gaagcccttg 1260 agcatcacgg tgcgcacgaa gaagcaggag ctctcggagg cagagcaggc taccaggacc 1320 atgcaggctc tgccctacag caccgtgggc aactccaaca attacctgca tctctcagtg 1380 ctacgtacag agctcagacc cggggagacc ctcaacgtca acttcctcct gcgaatggac 1440 cgcgcccacg aggccaagat ccgctactac acctacctga tcatgaacaa gggcaggctg 1500 ttgaaggcgg gacgccaggt gcgagagccc ggccaggacc tggtggtgct gcccctgtcc 1560 atcaccaccg acttcatccc ttccttccgc ctggtggcgt actacacgct gatcggtgcc 1620 agcggccaga gggaggtggt ggccgactcc gtgtgggtgg acgtcaagga ctcctgcgtg 1680 ggctcgctgg tggtaaaaag cggccagtca gaagaccggc agcctgtacc tgggcagcag 1740 atgaccctga agatagaggg tgaccacggg gcccgggtgg tactggtggc cgtggacaag 1800 ggcgtgttcg tgctgaataa gaagaacaaa ctgacgcaga gtaagatctg ggacgtggtg 1860 gagaaggcag acatcggctg caccccgggc agtgggaagg attacgccgg tgtcttctcc 1920 gacgcagggc tgaccttcac gagcagcagt ggccagcaga ccgcccagag ggcagaactt 1980 cagtgcccgc agccagccgc ccgccgacgc cgttccgtgc agctcacgga gaagcgaatg 2040 gacaaagtcg gcaagtaccc caaggagctg cgcaagtgct gcgaggacgg catgcgggag 2100 aaccccatga ggttctcgtg ccagcgccgg acccgtttca tctccctggg cgaggcgtgc 2160 aagaaggtct tcctggactg ctgcaactac atcacagagc tgcggcggca gcacgcgcgg 2220 gccagccacc tgggcctggc caggagtaac ctggatgagg acatcattgc agaagagaac 2280 atcgtttccc gaagtgagtt cccagagagc tggctgtgga acgttgagga cttgaaagag 2340 ccaccgaaaa atggaatctc tacgaagctc atgaatatat ttttgaaaga ctccatcacc 2400 acgtgggaga ttctggctgt gagcatgtcg gacaagaaag ggatctgtgt ggcagacccc 2460 ttcgaggtca cagtaatgca ggacttcttc atcgacctgc ggctacccta ctctgttgtt 2520 cgaaacgagc aggtggaaat ccgagccgtt ctctacaatt accggcagaa ccaagagctc 2580 aaggtgaggg tggaactact ccacaatcca gccttctgca gcctggccac caccaagagg 2640 cgtcaccagc agaccgtaac catccccccc aagtcctcgt tgtccgttcc atatgtcatc 2700 gtgccgctaa agaccggcct gcaggaagtg gaagtcaagg ctgctgtcta ccatcatttc 2760 atcagtgacg gtgtcaggaa gtccctgaag gtcgtgccgg aaggaatcag aatgaacaaa 2820 actgtggctg ttcgcaccct ggatccagaa cgcctgggcc gtgaaggagt gcagaaagag 2880 gacatcccac ctgcagacct cagtgaccaa gtcccggaca ccgagtctga gaccagaatt 2940 ctcctgcaag ggaccccagt ggcccagatg acagaggatg ccgtcgacgc ggaacggctg 3000 aagcacctca ttgtgacccc ctcgggctgc ggggaacaga acatgatcgg catgacgccc 3060 acggtcatcg ctgtgcatta cctggatgaa acggagcagt gggagaagtt cggcctagag 3120 aagcggcagg gggccttgga gctcatcaag aaggggtaca cccagcagct ggccttcaga 3180 caacccagct ctgcctttgc ggccttcgtg aaacgggcac ccagcacctg gctgaccgcc 3240 tacgtggtca aggtcttctc tctggctgtc aacctcatcg ccatcgactc ccaagtcctc 3300 tgcggggctg ttaaatggct gatcctggag aagcagaagc ccgacggggt cttccaggag 3360 gatgcgcccg tgatacacca agaaatgatt ggtggattac ggaacaacaa cgagaaagac 3420 atggccctca cggcctttgt tctcatctcg ctgcaggagg ctaaagatat ttgcgaggag 3480 caggtcaaca gcctgccagg cagcatcact aaagcaggag acttccttga agccaactac 3540 atgaacctac agagatccta cactgtggcc attgctggct atgctctggc ccagatgggc 3600 aggctgaagg ggcctcttct taacaaattt ctgaccacag ccaaagataa gaaccgctgg 3660 gaggaccctg gtaagcagct ctacaacgtg gaggccacat cctatgccct cttggcccta 3720 ctgcagctaa aagactttga ctttgtgcct cccgtcgtgc gttggctcaa tgaacagaga 3780 tactacggtg gtggctatgg ctctacccag gccaccttca tggtgttcca agccttggct 3840 caataccaaa aggacgcccc tgaccaccag gaactgaacc ttgatgtgtc cctccaactg 3900 cccagccgca gctccaagat cacccaccgt atccactggg aatctgccag cctcctgcga 3960 tcagaagaga ccaaggaaaa tgagggtttc acagtcacag ctgaaggaaa aggccaaggc 4020 accttgtcgg tggtgacaat gtaccatgct aaggccaaag atcaactcac ctgtaataaa 4080 ttcgacctca aggtcaccat aaaaccagca ccggaaacag aaaagaggcc tcaggatgcc 4140 aagaacacta tgatccttga gatctgtacc aggtaccggg gagaccagga tgccactatg 4200 tctatattgg acatatccat gatgactggc tttgctccag acacagatga cctgaagcag 4260 ctggccaatg gtgttgacag atacatctcc aagtatgagc tggacaaagc cttctccgat 4320 aggaacaccc tcatcatcta cctggacaag gtctcacact ctgaggatga ctgtctagct 4380 ttcaaagttc accaatactt taatgtagag cttatccagc ctggagcagt caaggtctac 4440 gcctattaca acctggagga aagctgtacc cggttctacc atccggaaaa ggaggatgga 4500 aagctgaaca agctctgccg tgatgaactg tgccgctgtg ctgaggagaa ttgcttcata 4560 caaaagtcgg atgacaaggt caccctggaa gaacggctgg acaaggcctg tgagccagga 4620 gtggactatg tgtacaagac ccgactggtc aaggttcagc tgtccaatga ctttgacgag 4680 tacatcatgg ccattgagca gaccatcaag tcaggctcgg atgaggtgca ggttggacag 4740 cagcgcacgt tcatcagccc catcaagtgc agagaagccc tgaagctgga ggagaagaaa 4800 cactacctca tgtggggtct ctcctccgat ttctggggag agaagcccaa cctcagctac 4860 atcatcggga aggacacttg ggtggagcac tggcccgagg aggacgaatg ccaagacgaa 4920 gagaaccaga aacaatgcca ggacctcggc gccttcaccg agagcatggt tgtctttggg 4980 tgccccaact ga 4992 <210> 28 <211> 1752 <212> DNA <213> Homo sapiens CFI nucleotides sequence <400> 28 atgaagcttc ttcatgtttt cctgttattt ctgtgcttcc acttaaggtt ttgcaaggtc 60 acttatacat ctcaagagga tctggtggag aaaaagtgct tagcaaaaaa atatactcac 120 ctctcctgcg ataaagtctt ctgccagcca tggcagagat gcattgaggg cacctgtgtt 180 tgtaaactac cgtatcagtg cccaaagaat ggcactgcag tgtgtgcaac taacaggaga 240 agcttcccaa catactgtca acaaaagagt ttggaatgtc ttcatccagg gacaaagttt 300 ttaaataacg gaacatgcac agccgaagga aagtttagtg tttccttgaa gcatggaaat 360 acagattcag agggaatagt tgaagtaaaa cttgtggacc aagataagac aatgttcata 420 tgcaaaagca gctggagcat gagggaagcc aacgtggcct gccttgacct tgggtttcaa 480 caaggtgctg atactcaaag aaggtttaag ttgtctgatc tctctataaa ttccactgaa 540 tgtctacatg tgcattgccg aggattagag accagtttgg ctgaatgtac ttttactaag 600 agaagaacta tgggttacca ggatttcgct gatgtggttt gttatacaca gaaagcagat 660 tctccaatgg atgacttctt tcagtgtgtg aatgggaaat acatttctca gatgaaagcc 720 tgtgatggta tcaatgattg tggagaccaa agtgatgaac tgtgttgtaa agcatgccaa 780 ggcaaaggct tccattgcaa atcgggtgtt tgcattccaa gccagtatca atgcaatggt 840 gaggtggact gcattacagg ggaagatgaa gttggctgtg caggctttgc atctgtggct 900 caagaagaaa cagaaatttt gactgctgac atggatgcag aaagaagacg gataaaatca 960 ttattaccta aactatcttg tggagttaaa aacagaatgc acattcgaag gaaacgaatt 1020 gtgggaggaa agcgagcaca actgggagac ctcccatggc aggtggcaat taaggatgcc 1080 agtggaatca cctgtggggg aatttatatt ggtggctgtt ggattctgac tgctgcacat 1140 tgtctcagag ccagtaaaac tcatcgttac caaatatgga caacagtagt agactggata 1200 caccccgacc ttaaacgtat agtaattgaa tacgtggata gaattatttt ccatgaaaac 1260 tacaatgcag gcacttacca aaatgacatc gctttgattg aaatgaaaaa agacggaaac 1320 aaaaaagatt gtgagctgcc tcgttccatc cctgcctgtg tcccctggtc tccttaccta 1380 ttccaaccta atgatacatg catcgtttct ggctggggac gagaaaaaga taacgaaaga 1440 gtcttttcac ttcagtgggg tgaagttaaa ctaataagca actgctctaa gttttacgga 1500 aatcgtttct atgaaaaaga aatggaatgt gcaggtacat atgatggttc catcgatgcc 1560 tgtaaagggg actctggagg ccccttagtc tgtatggatg ccaacaatgt gacttatgtc 1620 tggggtgttg tgagttgggg ggaaaactgt ggaaaaccag agttcccagg tgtttacacc 1680 aaagtggcca attattttga ctggattagc taccatgtag gaaggccttt tatttctcag 1740 tacaatgtat aa 1752

Claims (14)

1. CFH 단백질의 Y56C, L77S, D798E, F176L, G1110A, C3 단백질의 R1134Q, A636S, H16Q, CFB 단백질의 G208S, V716L 및 CFI 단백질의 M204R의 조합으로 구성된 단백질 돌연변이와 이를 검출할 수 있는 제제를 포함하는 황반변성 진단용 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 제제는 상기 단백질을 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머쌍 또는 프로브인 것을 특징으로 하는 황반변성 진단용 조성물.
3. 제2항에 있어서,
   상기 프라이머 쌍이 서열번호 1 및 2, 서열번호 3 및 4, 서열번호 5 및 6, 서열번호 7 및 8, 서열번호 9 및 10, 서열번호 11 및 12, 서열번호 13 및 14, 서열번호 15 및 16, 서열번호 17 및 18, 서열번호 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 또는 둘 이상의 프라이머 쌍의 조합으로 구성된 것을 특징으로 하는 황반변성 진단용 조성물.
4. 제 1항에 있어서,
   상기 제제는 상기 단백질에 특이적인 항체인 것을 특징으로 하는 황반변성 진단용 조성물.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, 황반변성 진단용 키트.
6. 제5항에 있어서,
   상기 키트는 RT-PCR 키트, 마이크로어레이 칩 키트 또는 단백질 칩 키트인 것을 특징으로 하는 황반변성 진단용 키트.
7. 제6항에 있어서,
   상기 RT-PCR 키트가 상기 단백질을 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머 쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 황반변성 진단용 키트.
8. 제7항에 있어서,
   상기 프라이머 쌍이 서열번호 1 및 2, 서열번호 3 및 4, 서열번호 5 및 6, 서열번호 7 및 8, 서열번호 9 및 10, 서열번호 11 및 12, 서열번호 13 및 14, 서열번호 15 및 16, 서열번호 17 및 18, 서열번호 19 및 20으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 또는 둘 이상의 프라이머 쌍의 조합으로 구성된 것을 특징으로 하는 황반변성 진단용 키트.
9. 제6항에 있어서,
   상기 마이크로어레이 칩 키트가 상기 단백질을 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합하는 프로브를 포함하는 것을 특징으로 하는 황반변성 진단용 키트.
10. 제6항에 있어서,
    상기 단백질 칩 키트가 상기 단백질에 특이적인 항체를 포함하는 것을 특징으로 하는 황반변성 진단용 키트.
11. 삭제
12. 삭제
13. 삭제
14. 삭제

Images