KR102210807B1 - A composition for treating oral mucositis comprising tonsil-derived MSCSs and a method for preparing oral mucositis animal model - Google Patents

A composition for treating oral mucositis comprising tonsil-derived MSCSs and a method for preparing oral mucositis animal model Download PDF

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Abstract

본원은 편도 유래 줄기세포를 포함하는 구강 점막염 예방 또는 치료용 약학 조성물, 편도 유래 줄기세포를 포함하는 암치료 보조용 약학 조성물, 구강 점막염 동물 모델 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 동물 모델을 이용하는 구강 점막염 치료제 스크리닝 방법에 관한 것이다.
본원의 구강 점막염 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 암치료 보조용 약학 조성물은 암 치료과정에서 발병할 수 있는 구강 점막염 치료에 이용할 수 있으며, 암 치료의 부작용을 효율적으로 억제할 수 있다. 또한, 본원의 구강 점막염 동물 모델 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 동물 모델을 이용한 구강 점막염 치료제 스크리닝 방법을 이용하여 구강 점막염 치료제를 효율적으로 발굴 할 수 있다.The present application is a pharmaceutical composition for preventing or treating oral mucositis comprising tonsil-derived stem cells, a pharmaceutical composition for cancer treatment auxiliary comprising tonsil-derived stem cells, oral mucositis animal model manufacturing method, and oral mucositis using the animal model prepared by the above method It relates to a therapeutic agent screening method.
The pharmaceutical composition for preventing or treating oral mucositis and the pharmaceutical composition for adjuvant cancer treatment of the present application can be used to treat oral mucositis that may occur in the course of cancer treatment, and can effectively suppress side effects of cancer treatment. In addition, oral mucositis therapeutic agents can be efficiently discovered using the oral mucositis animal model manufacturing method of the present application and the oral mucositis therapeutic agent screening method using the animal model manufactured by the above method.

Description

편도유래 줄기세포를 포함하는 구강 점막염 치료용 조성물, 및 구강 점막염 동물모델 제조방법 {A composition for treating oral mucositis comprising tonsil-derived MSCSs and a method for preparing oral mucositis animal model}A composition for treating oral mucositis comprising tonsil-derived MSCSs and a method for preparing oral mucositis animal model}

본원은 편도 유래 줄기세포를 포함하는 구강 점막염 예방 또는 치료용 약학 조성물, 편도 유래 줄기세포를 포함하는 암치료 보조용 약학 조성물, 구강 점막염 동물 모델 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 동물 모델을 이용하는 구강 점막염 치료제 스크리닝 방법에 관한 것이다. The present application is a pharmaceutical composition for preventing or treating oral mucositis comprising tonsil-derived stem cells, a pharmaceutical composition for cancer treatment auxiliary comprising tonsil-derived stem cells, oral mucositis animal model manufacturing method, and oral mucositis using the animal model prepared by the above method It relates to a therapeutic agent screening method.

구내염, 또는 구강 점막염(Oral mucositis, OM)은 암치료를 위한 방사선 또는 항암화학요법 치료 중 흔하게 발생하는 심한 합병증 중의 하나로서, 항암화학요법을 받는 환자의 20-40%에서 발생할 수 있다고 알려져 있다. 구내염은 임상적으로 점막의 발적부터 심각한 궤양까지 나타날 수 있으며, 구강 통증, 연하곤란으로 인해 영양분 섭취의 저하 및 삶의 질 저하를 초래할 수 있으며, 이는 항암치료의 지연 또는 중단을 초래하여 암의 치료 및 생존률에 영향을 미칠 수 있다.Stomatitis, or oral mucositis (OM), is one of the most common serious complications during radiation or chemotherapy for cancer treatment, and is known to occur in 20-40% of patients receiving chemotherapy. Stomatitis may clinically appear from redness of the mucous membrane to severe ulcers, and may lead to a decrease in nutrient intake and a decrease in quality of life due to oral pain and dysphagia, which may lead to delay or discontinuation of chemotherapy, thereby treating cancer. And survival rate.

현재까지 알려진 구강 점막염의 치료방법은 1) 구강 점막염 예방 및 2) 통증조절, 영양공급 및 이차감염의 예방 및 치료 등으로 크게 2가지로 나눌 수 있으며, 대한민국 공개특허 제10-2017-0102639호에 따르면 단삼(Salviae Miltiorrhizae Radix) 추출물을 유효성분으로 포함하는 구강 점막염 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 대해 개시하고 있으나, 현재까지 줄기세포를 이용한 구강 점막염 치료에 대해서는 알려진 바 없다.The treatment methods for oral mucositis known to date can be divided into two broadly divided into 1) oral mucositis prevention and 2) pain control, nutrition supply, and prevention and treatment of secondary infections, and Korean Patent Laid-Open No. 10-2017-0102639 According to the disclosure, a pharmaceutical composition for preventing or treating oral mucositis comprising an extract of Salviae Miltiorrhizae Radix as an active ingredient is disclosed, but there is no known about the treatment of oral mucositis using stem cells.

또한, 현재 알려진 구강 점막염 동물 모델의 경우, 모델 제작 과정에서 구강 궤양의 크기를 균일하지 못하게 제작되고 있다는 단점이 있다.In addition, in the case of the currently known animal model of oral mucositis, there is a disadvantage in that the size of the oral ulcer is not uniform in the model manufacturing process.

이에 본 발명자들은 구강 점막염 치료제 및 구강 점막역 동물 모델 제작 방법을 개발하고자 노력한 결과, 편도 유래 줄기세포를 포함하는 신규한 구강 점막염 예방 또는 치료용 조성물 및 신규한 구강 점막역 동물 모델 제작 방법을 개발하여 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors have endeavored to develop oral mucositis treatment and oral mucosal disease animal model production method, as a result of developing a novel oral mucositis prevention or treatment composition including tonsil-derived stem cells and a novel oral mucosal disease animal model production method. The present invention has been completed.

대한민국 공개특허 제10-2017-0102639호Republic of Korea Patent Publication No. 10-2017-0102639

본원의 제 1 측면은, 편도 유래 줄기세포(tonsil-derived stem cell)를 포함하는, 구강 점막염 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.The first aspect of the present application is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating oral mucositis, including tonsil-derived stem cells.

본원의 제 2 측면은, 편도 유래 줄기세포를 포함하는, 암치료 보조용 약학 조성물을 제공하는 것이다.A second aspect of the present application is to provide a pharmaceutical composition for auxiliary cancer treatment, including stem cells derived from tonsils.

본원의 제 3 측면은, 인간을 제외한 동물에 5-플루오로우라실 (5-fluorourasil, 5-FU)를 투여하는 단계 및 기계적 외상을 가하는 단계를 포함하는, 구강 점막염 동물 모델의 제조방법을 제공하는 것이다.The third aspect of the present application provides a method for preparing an animal model of oral mucositis comprising administering 5-fluorourasil (5-FU) to animals other than humans and applying mechanical trauma. will be.

본원의 제 4 측면은, (a) 상기 구강 점막염 동물 모델의 제조방법으로 제조된 구강 점막염 동물 모델에, 구강 점막염 치료 후보물질을 투여하는 단계; 및 (b) 상기 후보물질의 투여에 따른 구강 점막염 증상 정도를 확인하는 단계를 포함하는, 구강 점막염 치료제의 스크리닝 방법을 제공하는 것이다.A fourth aspect of the present application includes the steps of: (a) administering an oral mucositis treatment candidate material to an oral mucositis animal model prepared by the method of manufacturing the oral mucositis animal model; And (b) to provide a screening method for oral mucositis treatment comprising the step of checking the degree of symptoms of oral mucositis according to the administration of the candidate substance.

이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본원에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 출원에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 출원의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 출원의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.This will be described in detail as follows. Meanwhile, each description and embodiment disclosed herein may be applied to each other description and embodiment. That is, all combinations of various elements disclosed in the present application belong to the scope of the present application. In addition, it cannot be considered that the scope of the present application is limited by the specific description described below.

본원의 제 1 측면은, 편도 유래 줄기세포(tonsil-derived stem cell)를 포함하는, 구강 점막염 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.The first aspect of the present application provides a pharmaceutical composition for preventing or treating oral mucositis, including tonsil-derived stem cells.

본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "편도(tonsil)"는 목의 안쪽과 코의 뒷부분에 위치하여, 외부에서 침입하는 세균 등의 물질로부터 일차적으로 우리 몸을 방어함과 동시에 림프상피 면역조직으로 작용을 수행하는 조직을 의미한다. 상기 편도는 인두편도, 귀인두관편도, 구개편도, 혀편도 등을 포함할 수 있으며, 본원에 있어서 상기 편도는 편도유래의 중간엽 줄기세포를 제공하는 원천조직으로 사용될 수 있다.The term "tonsil" used throughout the specification of the present application is located on the inside of the neck and the back of the nose, and acts as a lymphepithelial immune tissue while primarily defending the body from substances such as bacteria that invade from the outside. It means the organization that performs it. The tonsils may include pharyngeal tonsils, ear pharyngeal tonsils, palatal tonsils, tongue tonsils, and the like, and in the present application, the tonsils may be used as a source tissue for providing mesenchymal stem cells derived from tonsils.

본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "줄기세포(stem cell)"는 자기 복제 능력을 가지면서 두 개 이상의 새로운 세포로 분화하는 능력을 갖는 세포를 의미하며, 만능 줄기세포 (totipotent stem cell), 전분화능 줄기세포(pluripotent stem cells), 다분화능(다능성) 줄기세포(multpotent stem cells)로 분류할 수 있다. 만능 줄기세포(totipotent stem cells)란, 하나의 완전한 개체로 발생해 나갈 수 있는 만능의 성질을 가진 세포로 난자와 정자의 수정 이후 8세포기까지의 세포가 이러한 성질을 가지며 이 세포를 분리하여 자궁에 이식하면 하나의 완전한 개체로 발생해 나갈 수 있는 세포를 의미한다. 전분화능 줄기세포(pluripotent stem cells)란, 외배엽, 중배엽, 내배엽층 유래의 다양한 세포와 조직으로 발생할 수 있는 세포로서, 수정 4-5일 후 나타나는 배반포(blastocyst)의 안쪽에 위치한 내세포괴(inner cell mass)에서 유래하며, 이를 배아줄기세포라 하며, 다양한 다른 조직 세포로 분화되지만 새로운 생명체를 형성하지는 못하는 세포를 의미한다.The term "stem cell" as used throughout the specification refers to a cell having the ability to differentiate into two or more new cells while having self-replicating ability, totipotent stem cell, pluripotency Stem cells (pluripotent stem cells), can be classified into multipotent (pluripotent) stem cells (multpotent stem cells). Totipotent stem cells are cells with a pluripotent property that can develop into one complete individual. Cells up to the 8-cell stage after fertilization of eggs and sperm have these properties. It refers to a cell that can develop as a complete individual when transplanted into. Pluripotent stem cells are cells that can develop into various cells and tissues derived from ectoderm, mesoderm, and endoderm layers, and are inner cells located inside the blastocyst that appear 4-5 days after fertilization. mass), which is called an embryonic stem cell, and refers to a cell that differentiates into various other tissue cells but cannot form new life forms.

본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "편도 유래 줄기세포(tonsil-derived stem cell)"는 편도에서 유래한 중간엽 줄기세포(mesenchymal stem cells; MSCs)를 의미하며, 중간엽 줄기세포란, 골, 연골, 지방, 골수간질, 근육, 신경 등으로 분화될 수 있는 미분화된 줄기세포를 의미하는데, 성인에서는 일반적으로 골수에 머물러 있지만 제대혈, 말초혈액, 기타 조직 등에도 존재한다. 본원의 편도 유래 줄기세포는 편도 줄기세포 또는 편도 유래 중간엽 줄기세포로도 불릴 수 있다.The term "tonsil-derived stem cells" as used throughout the specification of the present application means mesenchymal stem cells (MSCs) derived from the tonsils, and mesenchymal stem cells are bone, cartilage It refers to undifferentiated stem cells that can be differentiated into fat, bone marrow stroma, muscle, and nerves. In adults, they generally stay in the bone marrow, but are also present in umbilical cord blood, peripheral blood, and other tissues. Tonsil-derived stem cells herein may also be referred to as tonsil stem cells or tonsil-derived mesenchymal stem cells.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 편도 유래 줄기세포는 편도선 절제수술을 받은 환자에서 분리한 편도선 조직으로부터 채취하여 사용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to the exemplary embodiment of the present disclosure, the tonsil-derived stem cells may be collected and used from tonsil tissue isolated from a patient who has undergone tonsillectomy, but is not limited thereto.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 구강 점막염 예방 또는 치료용 약학 조성물은 편도 유래 줄기세포의 배양액을 추가로 포함하는 것일 수 있다.According to the exemplary embodiment of the present disclosure, the pharmaceutical composition for preventing or treating oral mucositis may further include a culture medium of tonsil-derived stem cells.

본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "편도 유래 줄기세포의 배양액"은 편도 유래 줄기세포를 배양하여 수득된 배양액 자체, 또는 그로부터 편도 유래 줄기세포가 제거된 배양 상층액을 의미하는 것일 수 있으며, "편도 유래 줄기세포 배양 상층액", "편도 유래 줄기세포 조건 배양액" 또는 "편도 유래 중간엽 줄기세포 배양 배지"와 호환적으로 사용될 수 있다.As used throughout the specification of the present application, the term "a culture medium of tonsil-derived stem cells" may refer to a culture medium obtained by culturing tonsil-derived stem cells, or a culture supernatant from which tonsil-derived stem cells are removed, and "tonsil It can be used interchangeably with the derived stem cell culture supernatant", the "tonsil-derived stem cell condition culture medium", or the "tonsil-derived mesenchymal stem cell culture medium".

본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "구강 점막염(Oral mucositis, OM)"은 입 속　상피세포를 파괴해 통증과 궤양, 출혈을 동반하는 질환으로서, 구내염 또는 구강내 점막염이라고도 불린다. 상기 구강 점막염은 항암화학요법 또는 방사선치료 후 흔히 발생하는 부작용으로서, 최근에는 암환자 치료 중 가장 심각한 부작용으로 알려져 있으며, 중증 환자는 음식을 전혀 삼킬 수 없을 정도로 심각한 통증을 유발하고, 삶의 질을 떨어뜨릴 뿐만 아니라, 이차적으로 탈수, 영양실조, 전신 감염의 위험 요인으로 작용하여 치료의 지연이나 중단을 유발할 수도 있어서 예방 및 치료가 중요하다. 일반적인 구강 점막염은 다양한 인자가 관여하여 발생하는 것으로 알려져 있다. 스트레스, 외상, 유전적 문제 등의 소인을 바탕으로 박테리아와 같은 감염과 같은 악화인자와 타액과 점막각화도 같은 구강을 보호하는 방어인자들의 복합적인 상호작용으로 발생한다. 반면, 항암제로 유발된 구강 점막염의 경우는 다른 양상을 보인다. 항암제가 분열중인 상피모세포에 비특이적인 손상을 입혀 나타나는 상피조직에 국한된 현상으로서, 항암제의 독성이 기저 상피세포층에 손상을 입히고, 이는 상피의 재생능을 떨어뜨려 결국 클론원성 세포사, 위축, 그리고 궤양에 이르는 상피 변화가 초래된다.The term "oral mucositis (OM)" used throughout the specification of the present application is a disease accompanied by pain, ulcers, and bleeding by destroying epithelial cells in the mouth and is also called stomatitis or oral mucositis. The oral mucositis is a side effect that often occurs after chemotherapy or radiation therapy, and is recently known as the most serious side effect of cancer treatment.Severe patients cause severe pain so that they cannot swallow food at all, and improve the quality of life. In addition to dropping, prevention and treatment are important because it may cause delay or discontinuation of treatment by acting as a risk factor for dehydration, malnutrition, and systemic infections secondary. It is known that general oral mucositis is caused by the involvement of various factors. Based on the predisposition of stress, trauma, and genetic problems, aggravating factors such as infections such as bacteria and defensive factors such as saliva and mucosal keratosis occur as a result of a complex interaction of protective factors protecting the oral cavity. On the other hand, the case of oral mucositis induced by anticancer drugs shows a different pattern. As a phenomenon limited to epithelial tissues that appear due to non-specific damage to dividing epithelial cells, anticancer drugs damage the basal epithelial cell layer, which lowers the regeneration ability of the epithelium, resulting in clonal cell death, atrophy, and ulcers. Leading to epithelial changes.

또한, 암세포의 분열에 영향을 주는 메토트렉세이트와 플루오로우라실과 같은 약물은 40-60%에 가까운 구강 점막염의 발생률을 보이며, 메토트렉세이트와 에토포사이드는 침으로 분비되어 경구 독성을 증가시키게 된다. 방사선 요법 그리고/또는 골수 이식을 위해 투여되거나 병행되는 치료의 빈도 역시 구강 점막염의 주요 원인이다. 실제로 항암 방사선 치료를 구강을 포함하는 두경부 영역에 시행하는 경우 치료 환자의 거의 100%에서 구강 점막염이 발생한다는 보고가 있다.In addition, drugs such as methotrexate and fluorouracil, which affect the division of cancer cells, show an incidence of oral mucositis close to 40-60%, and methotrexate and etoposide are secreted by saliva, increasing oral toxicity. The frequency of radiation therapy and/or treatment administered or combined for bone marrow transplantation is also a major cause of oral mucositis. In fact, there is a report that almost 100% of treated patients develop oral mucositis when anticancer radiation therapy is administered to the head and neck region including the oral cavity.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 구강 점막염은 항암화학요법 또는 방사선 치료에 의해 발생된 것을 특징으로 하는 것일 수 있으며, 구체적으로, 5-플루오로우라실(5-fluorourasil, 5-FU)에 의해 발생하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the oral mucositis may be characterized by being caused by chemotherapy or radiation therapy, and specifically, caused by 5-fluorourasil (5-FU) It may be, but is not limited thereto.

본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "항암화학요법"은 암을 치료하기 위해 약물을 사용하는 것으로 항암제를 이용한 내과적인 약물 치료를 의미한다. 상기 항암제는 세포가 자라는 주기에 영향을 미쳐 성장이나 증식을 멈추게 하여 암세포를 파괴하는 역할을 하며, 이 때 한 종류의 항암제만 쓰기도 하고, 여러 가지 다른 기전의 항암제를 같이 사용함으로써 효과를 증진시킬 수 있으므로, 주로 두 가지 이상의 항암제를 조합하여 치료하기도 한다.As used throughout the present specification, the term "chemotherapy" refers to the use of drugs to treat cancer and medical drug treatment using an anticancer agent. The anticancer agent plays a role in destroying cancer cells by affecting the cell growth cycle and stopping growth or proliferation. In this case, only one type of anticancer agent is used, and the effect is enhanced by using anticancer drugs of various mechanisms. Therefore, it is often treated by combining two or more anticancer drugs.

본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "5-플루오로우라실(5-fluorourasil, 5-FU)"은 항대사성 약물에 속하는 항암제로서, 암세포가 자라는 데 필요한 정상 세포내 영양분과 비슷하나 암세포가 이 약을 받아들였을 때 암세포의 성장을 방해하는 작용을 하며, 주로 결장암, 직장암, 유방암 치료에 사용되나 이외에도 난소암, 자궁암, 간암, 식도암, 폐암, 악암, 설암 등에 다른 항암제와 같이 사용된다. 또한, 5-플루오로우라실과 같은 약물은 40-60%에 가까운 구강 점막염의 발생률을 보이며, 이와 같은 암치료 부작용으로 인해 항암치료의 지연이나 중단을 유발할 수 있다.The term "5-fluorourasil (5-FU)" as used throughout the specification is an anti-cancer drug belonging to an anti-metabolic drug, and is similar to the normal intracellular nutrients required for cancer cells to grow, but cancer cells use this drug. When accepted, it acts to hinder the growth of cancer cells, and is mainly used for the treatment of colon cancer, rectal cancer, and breast cancer, but is also used with other anticancer drugs such as ovarian cancer, uterine cancer, liver cancer, esophageal cancer, lung cancer, malignant cancer, and tongue cancer. In addition, drugs such as 5-fluorouracil show an incidence of oral mucositis close to 40-60%, and may cause delay or discontinuation of chemotherapy due to such side effects of cancer treatment.

본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "방사선 치료" 또는 "방사선 요법"이란 방사선이 발생되는 장치(라이낙 치료기) 또는 방사성 동위원소를 이용하여 고에너지 방사선을 조사하여 암세포를 죽이는 치료법으로서, 암세포에 집중적으로 방사선을 조사하여 암세포를 파괴하고 더 이상 증식되는 것을 막는다.As used throughout the specification, the term "radiation therapy" or "radiation therapy" refers to a treatment that kills cancer cells by irradiating high-energy radiation using a device that generates radiation (Rainak treatment device) or a radioactive isotope. It is irradiated with radiation to destroy cancer cells and prevent further proliferation.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 구강 점막염 예방 또는 치료용 약학 조성물은 신생혈관 생성을 촉진시키는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다. 구체적으로, 신생혈관 생성은 조직재생뿐만 아니라 상처 치유 과정에서 필수적인 요소로서, 본원의 조성물은 구강 점막염 병변 및 병변 주위 조직의 신생혈관 생성을 촉진시킴으로서 구강 점막염을 예방 또는 치료할 수 있다.According to one embodiment of the present application, the pharmaceutical composition for preventing or treating oral mucositis may be characterized in that it promotes the generation of angiogenesis. Specifically, angiogenesis is an essential element in the process of not only tissue regeneration but also wound healing, and the composition of the present application can prevent or treat oral mucositis by promoting the generation of angiogenesis in oral mucositis lesions and tissues around the lesion.

본원의 일 구현예에 따르면 상기 구강 점막염 예방 또는 치료용 약학 조성물은 상처 수축을 촉진시키는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다. 구체적으로, 신속하고 효과적인 상처 봉합 과정에서 매우 중요한 요소인 상처 수축은 섬유아세포의 근섬유아세포로의 적절한 분화에 의해 발생하는 것으로서, 본원의 조성물은 구강 점막염 병변 및 병변 주위 조직의 섬유아세포의 분화 및 상처 수축을 촉진시킴으로서 구강 점막염을 예방 또는 치료할 수 있다.According to one embodiment of the present application, the pharmaceutical composition for preventing or treating oral mucositis may be characterized by promoting wound contraction. Specifically, wound contraction, which is a very important factor in the rapid and effective wound closure process, is caused by the proper differentiation of fibroblasts into myofibroblasts, and the composition of the present application includes oral mucositis lesions and differentiation of fibroblasts of tissue around the lesion and wound. By promoting contraction, oral mucositis can be prevented or treated.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 구강 점막염 예방 또는 치료용 약학 조성물은 CD31(cluster of differentiation 31), TGF-β(Transforming growth factor-β) 및 NOX4(NAPDH oxidase 4)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질의 발현수준이 증가하는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the pharmaceutical composition for preventing or treating oral mucositis is at least one selected from the group consisting of CD31 (cluster of differentiation 31), TGF-β (Transforming growth factor-β), and NOX4 (NAPDH oxidase 4). It may be characterized by an increase in the expression level of the protein.

본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "CD31(cluster of differentiation 31)"은 130kDa 크기의 세포막에 존재하는 당단백질이며, 혈관 내피세포뿐만 아니라 혈소판, 단핵구, 백혈구에도 존재하는 것으로 알려져 있다. 또한, 상기 CD31은 조직재생 및 상처 치유에서 필수적인 요소인 신생혈관 생성과 관련 있는 단백질로서, 본원의 조성물은 구강 점막염 병변 및 병변 주위 조직의 CD31의 발현수준이 증가시킴으로서 구강 점막염을 예방 또는 치료할 수 있다.The term "CD31 (cluster of differentiation 31)" used throughout the present specification is a glycoprotein present in a 130kDa-sized cell membrane, and is known to be present in platelets, monocytes, and leukocytes as well as vascular endothelial cells. In addition, the CD31 is a protein related to angiogenesis, which is an essential element in tissue regeneration and wound healing, and the composition of the present application can prevent or treat oral mucositis by increasing the expression level of CD31 in oral mucositis lesions and tissues around the lesion. .

본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "TGF-β(Transforming growth factor-β)"는 상처 치유 과정에서 중심적 역할을 하는 단백질로서, 섬유아세포의 근섬유아세포로의 분화에 결정적인 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 본원의 조성물은 구강 점막염 병변 및 병변 주위 조직의 TGF-β의 발현수준이 증가시킴으로서 상처 치유과정을 촉진시켜 구강 점막염을 예방 또는 치료할 수 있다.As used throughout the specification, the term "TGF-β (Transforming growth factor-β)" is a protein that plays a central role in the wound healing process, and is known to play a crucial role in the differentiation of fibroblasts into myofibroblasts. Accordingly, the composition of the present application can prevent or treat oral mucositis by promoting the wound healing process by increasing the expression level of TGF-β in oral mucositis lesions and tissues around the lesion.

본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "NOX4(NAPDH oxidase 4)"는 신장, 혈관 내피세포, 파골세포, 평활근세포, 섬유모세포, 지방세포, 췌도세포, 배아 줄기세포 등 여러 세포에 존재하며 활성산소종(reactive oxygen species, ROX) 생성과 관련 있는 것으로 알려져 있으며, 상기 NOX4는 효과적인 상처 수축에 관여하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 본원의 조성물은 구강 점막염 병변 및 병변 주위 조직의 NOX4의 발현수준이 증가시킴으로서 상처 수축을 촉진시켜 구강 점막염을 예방 또는 치료할 수 있다.The term "NOX4 (NAPDH oxidase 4)" used throughout this specification is present in various cells such as kidney, vascular endothelial cells, osteoclasts, smooth muscle cells, fibroblasts, adipocytes, islet cells, embryonic stem cells, and reactive oxygen species. It is known to be related to the production of (reactive oxygen species, ROX), and NOX4 is known to be involved in effective wound contraction. Accordingly, the composition of the present application can prevent or treat oral mucositis by promoting wound contraction by increasing the expression level of NOX4 in oral mucositis lesions and tissues around the lesion.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 구강 점막염 예방 또는 치료용 약학 조성물은 MMP2(Matrix Metalloproteinase-2)의 발현 수준이 감소하는 것을 특징으로 하는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the pharmaceutical composition for preventing or treating oral mucositis may be characterized in that the expression level of MMP2 (Matrix Metalloproteinase-2) decreases.

본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "MMP2 (Matrix Metalloproteinase-2)"는 72 kDa type IV 콜라게나제(collagenase) 또는 젤라티나제 A(gelatinase A)로 알려져 있는 효소로서, 사멸한 단백질을 제거하여 궤양 부위를 청소하고 새로운 세포가 성장하도록 하는 역할을 하지만, MMP2는 세포성장 및 궤양치유에 필요한 세포기질단백질까지 제거하므로, MMP2 단백질을 적절히 억제시키는 것이 구강 점막염 치료에 중요하다.The term "MMP2 (Matrix Metalloproteinase-2)" used throughout the present specification is an enzyme known as 72 kDa type IV collagenase or gelatinase A, and ulcers by removing dead proteins Although it plays a role in cleaning the area and allowing new cells to grow, MMP2 removes even cell substrate proteins necessary for cell growth and ulcer healing, so it is important to properly inhibit the MMP2 protein in the treatment of oral mucositis.

본원의 일 실시예에 따르면, 구강 점막염 동물 모델(5-FU+MT 군)에 편도 유래 줄기세포를 주입한 TMSC 군의 경우 실험시간이 경과할수록 MMP2의 발현수준이 점차 감소되며, 14일째에서는 TMSC 군의 MMP2 발현 수준이 다른 군에 비해 현저히 낮은 것을 확인하였는 바, 편도 유래 줄기세포는 구강 점막염이 발생한 후 MMP2를 감소시키는 데에 효과적인 것을 알 수 있다.According to an embodiment of the present application, in the case of the TMSC group in which tonsil-derived stem cells were injected into the oral mucositis animal model (5-FU+MT group), the expression level of MMP2 gradually decreased as the experiment time elapsed, and on the 14th day, TMSC It was confirmed that the MMP2 expression level of the group was significantly lower than that of the other groups, and it was found that tonsil-derived stem cells were effective in reducing MMP2 after oral mucositis occurred.

본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "치료"란, 본원의 약학 조성물의 투여에 의해 구강 점막염이 억제되거나 지연되는 모든 행위를 의미한다.The term "treatment", as used throughout the present specification, refers to any action in which oral mucositis is inhibited or delayed by administration of the pharmaceutical composition of the present application.

본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "예방"이란, 본원의 약학 조성물의 투여에 의해 구강 점막염의 증세가 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.The term "prevention", as used throughout the specification of the present application, refers to any action in which symptoms of oral mucositis are improved or beneficially altered by administration of the pharmaceutical composition of the present application.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 약학 조성물은 약학적 분야의 통상의 방법에 따라 환자의 신체 내 투여에 적합한 단위투여형의 약학적 제제로 제형화시켜 투여할 수 있으며, 상기 제제는 1회 또는 수회 투여에 의해 효과적인 투여량을 포함할 수 있다. 이러한 목적에 적합한 제형으로는 비경구투여 제제로서 주사제, 주입제 등이 바람직하다. 또한, 상기 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 통상의 불활성 담체 및 희석제를 포함할 수 있다. 본원의 약학 조성물에 포함될 수 있는 약학적으로 허용가능한 담체 및 희석제는 전분, 당, 및 만니톨과 같은 부형제, 칼슘 포스페이트 등과 같은 충전제 및 증량제, 카르복시메틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스 등과 같은 셀룰로오스 유도체, 젤라틴, 알긴산염, 및 폴리비닐 피롤리돈 등과 같은 결합제, 활석, 스테아린산 칼슘, 수소화 피마자유 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 윤활제, 포비돈, 크로스포비돈과 같은 붕해제, 폴리소르베이트, 세틸알코올, 및 글리세롤 등과 같은 계면활성제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 약학적으로 허용되는 담체 및 희석제는 편도 유래 줄기세포 및 이를 이식 받을 수혜자에 대해 생물학적 및 생리학적으로 친화적인 것일 수 있다. 희석제로는 이에 한정되지 않으나, 염수, 수용성 완충액, 용매 및/또는 분산제(dispersion media)를 들 수 있다. 이외에도, 예를 들어, 주사제의 경우에는 보존제, 무통화제, 가용화제 또는 안정화제 등을, 국소투여용 제제의 경우에는 기제(base), 부형제, 윤활제 또는 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 본원의 조성물은 동결되지 않은 채 사용되거나 차후 사용을 위해 동결될 수 있다. 동결되어야 할 경우, 표준 냉동보존제 (예를 들어 DMSO, 글리세롤, 에피라이프 (Epilife®) 세포 동결 배지 (Cascade Biologics))가 동결 전 세포 집단에 첨가될 수 있다.According to one embodiment of the present application, the pharmaceutical composition may be formulated and administered in a unit dosage form suitable for administration in the body of a patient according to a conventional method in the pharmaceutical field, and the formulation may be administered once or Effective dosages can be included by multiple administrations. As a formulation suitable for this purpose, injections, injections, etc. are preferred as parenteral formulations. In addition, the pharmaceutical composition may include a conventional pharmaceutically acceptable inert carrier and a diluent. Pharmaceutically acceptable carriers and diluents that may be included in the pharmaceutical composition of the present invention include excipients such as starch, sugar, and mannitol, fillers and extenders such as calcium phosphate, cellulose derivatives such as carboxymethylcellulose, hydroxypropylcellulose, and gelatin, Alginates, binders such as polyvinyl pyrrolidone, lubricants such as talc, calcium stearate, hydrogenated castor oil and polyethylene glycol, disintegrants such as povidone, crospovidone, surfactants such as polysorbate, cetyl alcohol, and glycerol Including, but not limited to. The pharmaceutically acceptable carrier and diluent may be biologically and physiologically friendly to tonsil-derived stem cells and recipients to be transplanted. Examples of the diluent include, but are not limited to, saline, an aqueous buffer, a solvent and/or a dispersion media. In addition, for example, in the case of an injection, a preservative, a painless agent, a solubilizing agent or a stabilizer, etc. may be additionally included, and in the case of a formulation for topical administration, a base, an excipient, a lubricant or a preservative may be additionally included. The compositions herein may be used unfrozen or frozen for later use. If frozen, standard cryopreservatives (eg DMSO, glycerol, Epilife® Cell Freezing Medium (Cascade Biologics)) can be added to the cell population prior to freezing.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 조성물은 구강 점막염을 예방 또는 치료하기 적절한 양의 편도 유래 줄기세포를 포함할 수 있으며, 본원의 일 실시예에 따르면, 2Х104 개의 편도 유래 줄기세포를 구강 점막염 병변에 주입하였으나, 이제 제한되는 것은 아니며, 상기 투여량은 구강 점막염의 진행 상태, 환자의 연령, 체중, 증상의 특성 및 정도, 현재 치료법의 종류, 치료 회수, 투여 형태 및 경로 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있으며, 해당 분야의 전문가들에 의해 용이하게 결정될 수 있다.According to one embodiment of the present application, the composition may include an appropriate amount of tonsil-derived stem cells to prevent or treat oral mucositis, and according to an embodiment of the present application, 2Х10 4 tonsil-derived stem cells are used as oral mucositis lesions. However, the dosage is not limited now, and the dosage will vary depending on various factors such as the progression of oral mucositis, the patient's age, weight, the nature and extent of symptoms, the type of the current treatment, the number of treatments, and the dosage form and route. And can be easily determined by experts in the field.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 구강 점막염 예방 또는 치료용 약학 조성물은 구강 점막염을 치료하기 위하여, 또는 구강 점막염의 발병을 억제하기 위하여 약학적으로 효과적인 양으로 투여될 수 있으며 상기 투여량은 구강 점막염의 진행 상태, 환자의 연령, 체중, 증상의 특성 및 정도, 현재 치료법의 종류, 치료 회수, 투여 형태 및 경로 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있으며, 해당 분야의 전문가들에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 본원의 조성물은 상기한 약리학적 또는 생리학적 성분을 함께 투여하거나 순차적으로 투여할 수 있으며, 또한 추가의 종래의 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 이러한 투여는 단일 또는 다중 투여일 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.According to one embodiment of the present application, the pharmaceutical composition for preventing or treating oral mucositis may be administered in a pharmaceutically effective amount to treat oral mucositis or to suppress the onset of oral mucositis, and the dosage is oral mucositis It may vary depending on various factors such as the progress of the patient, the patient's age, weight, characteristics and extent of symptoms, the type of current treatment, the number of treatments, the dosage form and route, and can be easily determined by experts in the field. The composition of the present application may be administered together or sequentially with the pharmacological or physiological components described above, and may be administered in combination with an additional conventional therapeutic agent, and may be administered sequentially or simultaneously with the conventional therapeutic agent. Such administration may be single or multiple administration. It is important to administer an amount capable of obtaining the maximum effect in a minimum amount without side effects in consideration of all the above factors, and can be easily determined by a person skilled in the art.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 구강 점막염 예방 또는 치료용 약학 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 구강 점막염의 예방 또는 치료 방법을 제공한다. 구체적으로, 본원의 구강 점막염의 예방 또는 치료 방법은 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, there is provided a method for preventing or treating oral mucositis, comprising administering the pharmaceutical composition for preventing or treating oral mucositis to an individual. Specifically, the method of preventing or treating oral mucositis of the present application may include administering to an individual other than humans, but is not limited thereto.

본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "개체"란, 본원의 약학 조성물을 투여하여 구강 점막염이 경감, 억제 또는 치료될 수 있는 상태 또는 구강 점막염을 앓고 있거나 그러한 위험이 있는 인간을 포함한 마우스, 래트, 햄스터, 돼지, 소, 가축 등의 모든 동물을 의미한다.As used throughout the present specification, the term "subject" refers to a condition in which oral mucositis can be alleviated, inhibited or treated by administering the pharmaceutical composition of the present application, or a mouse, rat, hamster, including a human suffering from or at risk of oral mucositis , Pigs, cows, livestock, and all other animals.

본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "투여"란, 적절한 방법으로 개체에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며, 본원의 약학 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있지만, 이에 제한되지 않으며, 구체적으로 구강 점막염이 발생한 병변 또는 병변 주위에 직접 투여하는 것일 수 있다. 또한, 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.The term "administration" as used throughout the present specification means introducing a predetermined substance to an individual by an appropriate method, and the route of administration of the pharmaceutical composition of the present application is administered through any general route as long as it can reach the target tissue. Can be. Intraperitoneal administration, intravenous administration, intramuscular administration, subcutaneous administration, intradermal administration, oral administration, topical administration, intranasal administration, intrapulmonary administration, intrapulmonary administration, but not limited thereto, specifically, lesions with oral mucositis or It may be administered directly around the lesion. In addition, the active substance can be administered by any device capable of moving to the target cell.

본원의 제2측면은, 편도 유래 줄기세포를 포함하는, 암 치료 보조용 약학 조성물을 제공한다. 제1측면과 중복되는 내용은 제2측면의 암 치료 보조용 약학 조성물에도 공히 적용된다.A second aspect of the present application provides a pharmaceutical composition for assisting cancer treatment, including stem cells derived from tonsils. The content overlapping with the first aspect also applies to the second aspect of the pharmaceutical composition for aiding cancer treatment.

본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "암 치료 보조"란, 암 치료용 약학 조성물의 투여에 의하여 유발될 수 있는 부작용을 예방 또는 치료하여, 보다 안전한 암 치료를 도모할 수 있는 효과를 의미하는 것일 수 있다.As used throughout the present specification, the term "cancer treatment aid" may mean an effect that can promote safer cancer treatment by preventing or treating side effects that may be caused by administration of a pharmaceutical composition for cancer treatment. have.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 암 치료용 약학 조성물의 투여에 의하여 유발될 수 있는 부작용은 구강 점막염일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the side effect that may be caused by the administration of the pharmaceutical composition for treating cancer may be oral mucositis, but is not limited thereto.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 조성물은 항암화학요법 또는 방사선 치료에 의하여 유발되는 구강 점막염을 억제하는 효과를 나타내는 것일 수 있다.According to the exemplary embodiment of the present application, the composition may exhibit an effect of inhibiting oral mucositis caused by chemotherapy or radiation treatment.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 조성물은 항암화학요법 또는 방사선 치료 등을 포함하는 암 치료용 조성물 또는 암 치료 방법과 병용하여 투여될 수 있으며, 상기 병용 투여는 동시, 순차적, 또는 역순으로 병용 투여되는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the composition may be administered in combination with a cancer treatment composition or a cancer treatment method including anticancer chemotherapy or radiation therapy, and the combined administration is concurrently, sequentially, or in reverse order. It can be.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 암 치료 보조용 약학 조성물은 암 치료에 따르는 부작용을 치료 또는 억제하기 위하여, 약학적으로 효과적인 양으로 투여될 수 있으며 상기 투여량은 부작용의 진행 상태, 환자의 연령, 체중, 증상의 특성 및 정도, 현재 치료법의 종류, 치료 회수, 투여 형태 및 경로 등 다양한 요인에 따라 달라질 수 있으며, 해당 분야의 전문가들에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 본원의 조성물은 상기한 약리학적 또는 생리학적 성분을 함께 투여하거나 순차적으로 투여할 수 있으며, 또한 추가의 종래의 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 이러한 투여는 단일 또는 다중 투여일 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.According to one embodiment of the present application, the pharmaceutical composition for adjuvant cancer treatment may be administered in a pharmaceutically effective amount in order to treat or suppress the side effects associated with cancer treatment, and the dosage is the progression of the side effects, the age of the patient , Weight, characteristics and degree of symptoms, the type of the current treatment, the number of treatments, dosage forms and routes, etc. may vary according to various factors, and can be easily determined by experts in the field. The composition of the present application may be administered together or sequentially with the pharmacological or physiological components described above, and may be administered in combination with an additional conventional therapeutic agent, and may be administered sequentially or simultaneously with the conventional therapeutic agent. Such administration may be single or multiple administration. It is important to administer an amount capable of obtaining the maximum effect in a minimum amount without side effects in consideration of all the above factors, and can be easily determined by a person skilled in the art.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 암치료 보조용 약학 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 암치료 부작용 예방 또는 치료 방법을 제공한다. 구체적으로, 본원의 암치료 부작용 예방 또는 치료 방법은 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, there is provided a method for preventing or treating side effects of cancer treatment, comprising administering the pharmaceutical composition for auxiliary cancer treatment to an individual. Specifically, the method of preventing or treating side effects of cancer treatment herein may include administering to an individual other than humans, but is not limited thereto.

본원 명세서 전체에서 사용되는 용어, "개체"란, 본원의 약학 조성물을 투여하여 암 치료 부작용이 경감, 억제 또는 치료될 수 있는 상태; 또는 암 치료 부작용을 앓고 있거나 그러한 위험이 있는 인간을 포함한 쥐, 생쥐, 가축 등의 모든 동물을 의미한다.As used throughout the present specification, the term "subject" refers to a condition in which cancer treatment side effects can be alleviated, suppressed or treated by administering the pharmaceutical composition of the present application; Or it means all animals such as rats, mice, livestock, including humans suffering from or at risk of cancer treatment side effects.

본원의 명세서 전체에서 사용되는 용어, "투여"란, 적절한 방법으로 개체에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며, 본원의 약학 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있지만, 이에 제한되지 않으며, 구체적으로 암 치료 부작용이 발생한 병변 또는 병변 주위에 직접 투여하는 것일 수 있다. 또한, 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.As used throughout the specification of the present application, the term "administration" means introducing a predetermined substance to an individual by an appropriate method, and the route of administration of the pharmaceutical composition of the present application is through any general route as long as it can reach the target tissue. Can be administered. Intraperitoneal administration, intravenous administration, intramuscular administration, subcutaneous administration, intradermal administration, oral administration, topical administration, intranasal administration, intrapulmonary administration, intrapulmonary administration, but not limited thereto, specifically lesions with side effects of cancer treatment Alternatively, it may be administered directly around the lesion. In addition, the active substance can be administered by any device capable of moving to the target cell.

본원의 제3측면은, 인간을 제외한 동물에 5-플루오로우라실(5-fluorourasil, 5-FU)를 투여하는 단계 및 기계적 외상을 가하는 단계를 포함하는, 구강 점막염 동물 모델의 제조방법을 제공한다. 제1측면 및 제2측면과 중복되는 내용은 제3측면의 구강 점막염 동물 모델의 제조방법에도 공히 적용된다.A third aspect of the present application provides a method of preparing an animal model of oral mucositis, comprising administering 5-fluorourasil (5-FU) to animals other than humans and applying mechanical trauma. . The content overlapping with the first and second aspects also applies to the method of manufacturing an animal model of oral mucositis of the third aspect.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 항암화학요법 또는 방사선 치료에 의한 구강 점막염 동물 모델의 제조 방법일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the method may be a method of manufacturing an animal model of oral mucositis by chemotherapy or radiation therapy.

본원의 명세서 전체에서 사용되는 용어, "구강 점막염 동물 모델"이란, 다양한 구강 점막염 증상이 발현될 수 있도록 제작된 동물 모델을 의미한다. 상기 동물은 인간을 제외한 동물이라면 특별히 이에 제한되지는 않으나 마우스(mouse), 랫트(rat), 햄스터, 토끼, 염소, 침팬지, 원숭이 등의 포유동물이 될 수 있고, 구체적으로는 햄스터일 수 있다.As used throughout the specification of the present application, the term "oral mucositis animal model" refers to an animal model designed to express various oral mucositis symptoms. The animal is not particularly limited as long as it is an animal other than humans, but may be a mammal such as a mouse, a rat, a hamster, a rabbit, a goat, a chimpanzee, and a monkey, and specifically, may be a hamster.

본원의 일 실시예에 따르면, 구강 점막염 동물 모델을 제작하기 위해, 7주령, 무게 90 g 내지 120 g의 수컷 시리아 골든 햄스터를 사용하였다.According to an example of the present application, in order to produce an oral mucositis animal model, a male Syrian golden hamster of 7 weeks old and weighing 90 g to 120 g was used.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 햄스터의 볼점막 주머니에 구강 점막염을 유도하는 것일 수 있으며, 구체적으로 양측 볼점막 주머니에 구강 점막염을 유도하는 것일 수 있다. 구체적으로, 햄스터의 볼점막은 구강점막의 연장으로서, 쉽게 관찰이 가능한 바, 구강 염증과 관련된 동물모델로 유용하게 이용될 수 있다. 또한, 햄스터의 볼점막의 가장 주요한 역할은 먹이 등을 저장하는 것으로서, 먹이를 섭취할 때 직접적으로 닿는 부분은 아니므로 유의한 통증을 일으키지 못해, 상기 동물 모델의 경우 유의한 체중 감소를 확인하지 못할 수 있다.According to one embodiment of the present application, the method may be to induce oral mucositis in the cheek mucosa pockets of a hamster, and specifically induce oral mucositis in both cheek mucosal pockets. Specifically, the hamster's cheek mucosa is an extension of the oral mucosa and can be easily observed, and thus can be usefully used as an animal model related to oral inflammation. In addition, the most important role of the hamster's cheek mucosa is to store food, etc., and it does not cause significant pain because it is not a part that is directly touched when eating, so in the case of the animal model, significant weight loss cannot be confirmed. I can.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법에서 5-플루오로우라실을 투여하는 방법은 경구 투여, 피하 투여, 복강 투여, 근육 투여, 정맥 투여, 피내 투여일 수 있고, 구체적으로는 복강 투여일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the method of administering 5-fluorouracil in the above method may be oral administration, subcutaneous administration, intraperitoneal administration, intramuscular administration, intravenous administration, intradermal administration, and specifically intraperitoneal administration. , But is not limited thereto.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 5-플루오로우라실을 일정 기간 동안 투여하는 것일 수 있다. 상기의 일정 기간이란, 5-플루오로우라실로 인해 구강 점막염을 발병 시킬 수 있는 기간을 말하는 것으로서, 1 내지 7일, 2 내지 6일 또는 3 내지 5일 동안 5-플루오로우라실을 투여하는 것일 수 있고, 구체적으로 동물 모델 제작 0일째, 2일째 및 4일째에 5-플루오로우라실을 투여하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to an embodiment of the present disclosure, the method may be administering 5-fluorouracil for a certain period of time. The above-mentioned certain period refers to a period in which oral mucositis may develop due to 5-fluorouracil, and may be administration of 5-fluorouracil for 1 to 7 days, 2 to 6 days, or 3 to 5 days. In particular, 5-fluorouracil may be administered on the 0th, 2nd, and 4th days of animal model production, but is not limited thereto.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법에서 상기의 5-플루오로우라실 1일 투여량은 구강 점막염을 유도할 수 있을 정도의 투여량을 말하는 것으로서, 하루에 투여된 코카인의 양은 30mg/kg 내지 90mg/kg, 40mg/kg 내지 80mg/kg 또는 50mg/kg 내지 70mg/kg일 수 있고, 구체적으로는 60mg/kg일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. According to one embodiment of the present application, in the method, the daily dosage of 5-fluorouracil refers to a dosage sufficient to induce oral mucositis, and the amount of ***e administered per day is 30mg/kg to 90mg /kg, 40mg/kg to 80mg/kg, or 50mg/kg to 70mg/kg, may be specifically 60mg/kg, but is not limited thereto.

본원의 명세서 전체에서 사용되는 용어, "기계적 외상(mechanical trauma)"이란, 물리적으로 자극을 주어 상처를 만드는 것을 의미하는 것으로서, 구체적으로 구강 점막염을 유도하기 위해 동물의 점막 부위에 상처를 만드는 것일 수 있다.The term "mechanical trauma", as used throughout the specification of the present application, refers to making a wound by physically stimulating it, and specifically, it may refer to making a wound on the mucous membrane of an animal to induce oral mucositis. have.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 기계적 외상은 점막의 내층을 제거한 후, 표피에 자극, 스크래치 또는 상처를 만드는 것일 수 있으며, 구체적으로 바이옵시 펀치를 이용하여 점막의 내층을 제거하고, 바늘을 이용하여 내층이 제거된 점막에 표피 스크래치를 만드는 것일 수 있다.According to one embodiment of the present application, the mechanical trauma may be to create irritation, scratches, or wounds on the epidermis after removing the inner layer of the mucous membrane, specifically removing the inner layer of the mucous membrane using a biopunch, and using a needle Thus, it may be to create an epidermal scratch on the mucous membrane from which the inner layer has been removed.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 기계적 외상을 일정 기간 동안 가하는 것일 수 있다. 상기의 일정 기간이란, 기계적 외상으로 인해 구강 점막염을 발병 시킬 수 있는 기간을 말하는 것으로서, 1 내지 7일, 2 내지 6일 또는 3 내지 5일 동안 기계적 외상을 가하는 것일 수 있고, 구체적으로 동물 모델 제작 1일째, 2일째 및 4일째에 기계적 외상을 가하는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the method may be to apply a mechanical trauma for a certain period of time. The predetermined period refers to a period in which oral mucositis may develop due to mechanical trauma, and may be mechanical trauma for 1 to 7 days, 2 to 6 days, or 3 to 5 days, and specifically, animal model production Mechanical trauma may be applied on the first, second, and fourth days, but is not limited thereto.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 제조 0일째, 2일째 및 4일째에 5-플루오로우라실(5-fluorourasil, 5-FU)를 투여하는 단계 및 제조 1일째, 2일째 및 4일째에 기계적 외상을 가하는 단계를 포함하는 것일 수 있다.According to an embodiment of the present disclosure, the method comprises the steps of administering 5-fluorourasil (5-FU) on days 0, 2, and 4 of manufacture, and on days 1, 2, and 4 of manufacture. It may include the step of applying a mechanical trauma.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 동물 모델 제조방법은 5-플루오로우라실 투여 및 기계적 외상을 중단하고 회복시키는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 상기의 회복 기간은 5-플루오로우라실 투여 및 기계적 외상으로 인해 구강 점막염의 증상이 발현될 수 있는 기간을 말하는 것으로서, 1 내지 7일, 2 내지 6일 또는 2 내지 4일 동안 제조방법은 5-플루오로우라실 투여 및 기계적 외상을 중단하여 회복시키는 것일 수 있고, 구체적으로 3일 동안 5-플루오로우라실 투여 및 기계적 외상을 중단하고 회복시키는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.According to one embodiment of the present application, the method for preparing the animal model may further include the step of stopping and recovering from administration of 5-fluorouracil and mechanical trauma. The above recovery period refers to a period during which symptoms of oral mucositis may develop due to administration of 5-fluorouracil and mechanical trauma, and the preparation method for 1 to 7 days, 2 to 6 days or 2 to 4 days is 5- The fluorouracil administration and mechanical trauma may be stopped to recover, and specifically, 5-fluorouracil administration and mechanical trauma may be stopped and recovered, but is not limited thereto.

보다 구체적으로, 본원의 구강 점막염 동물 모델 제조방법은 약 5일간 5-플루오로우라실 투여 및 기계적 외상을 가하는 단계 및 약 3일간 5-플루오로우라실 투여 및 기계적 외상을 중단하여 회복시키는 단계를 포함하는 것으로서, 구강 점막염 동물 모델을 제조하는데 약 8일의 시간만이 소모되는 바, 단기간에 구강 점막염 동물 모델을 제조할 수 있으므로, 구강 점막염 연구 등에 유용하게 이용될 수 있다.More specifically, the method of manufacturing an animal model of oral mucositis of the present application comprises the steps of administering 5-fluorouracil and applying mechanical trauma for about 5 days, and stopping and recovering from 5-fluorouracil administration and mechanical trauma for about 3 days. As a result, since only about 8 days are consumed to prepare an oral mucositis animal model, an oral mucositis animal model can be produced in a short period of time, and thus can be usefully used for oral mucositis studies.

본원의 제4측면은 (a) 상기 방법으로 제조된 구강 점막염 동물 모델에, 구강 점막염 치료 후보물질을 투여하는 단계; 및 (b) 상기 후보물질의 투여에 따른 구강 점막염 증상 정도를 확인하는 단계를 포함하는, 구강 점막염 치료제의 스크리닝 방법을 제공한다. 제1측면 내지 제3측면과 중복되는 내용은 제4측면의 구강 점막염 치료제의 스크리닝 방법에도 공히 적용된다.The fourth aspect of the present application includes the steps of: (a) administering an oral mucositis treatment candidate to an animal model of oral mucositis prepared by the above method; And (b) it provides a screening method for oral mucositis treatment comprising the step of checking the degree of symptoms of oral mucositis according to the administration of the candidate substance. The contents overlapping with the first to third aspects also apply to the screening method for the oral mucositis treatment of the fourth aspect.

상기의 증상 정도를 확인하는 단계란, 병세의 진행 또는 회복에 관해 확인하는 단계를 의미한다. 본원의 목적상 상기 증상 정도를 확인하는 단계는 개체에서 발생된 구강 점막염을 치료할 수 있는 후보물질을 본원의 구강 점막염 동물 모델에 투여한 후, 구강 점막염의 진행상황을 확인하여 상기 후보물질이 상기 구강 점막염을 치료할 수 있는지의 여부를 평가하는 일련의 과정으로 이해될 수 있으나, 특별히 이에 제한되지는 않는다. 구체적으로, 상기의 구강 점막염의 증상 정도를 확인하여, 증상이 완화되는 경우에는, 상기의 후보물질을 구강 점막염 치료제로 판단할 수 있다. The step of confirming the degree of symptoms described above refers to a step of confirming progress or recovery of a condition. For the purposes of the present application, the step of confirming the degree of symptoms includes administering a candidate substance capable of treating oral mucositis generated in an individual to the oral mucositis animal model of the present application, and then confirming the progress of oral mucositis, and the candidate substance is the oral mucositis. It can be understood as a series of processes for evaluating whether or not mucositis can be cured, but is not particularly limited thereto. Specifically, when the symptom level of the oral mucositis is checked and the symptoms are alleviated, the candidate substance may be determined as a therapeutic agent for oral mucositis.

또한, 본원의 구강 점막염 동물 모델을 이용하여 구강 점막염 치료제를 스크리닝하는 데에 있어서, 구강 점막염에 대해 전체적인 치료 효능을 갖는 치료제를 스크리링할 수 있으며, 구강 점막염의 구체적인 증상별 치료 효능을 갖는 치료제를 스크리닝 할 수도 있다. 구체적으로, 구강 점막염에 의한 점막의 발적, 충혈, 출혈, 상피궤양 및 농의 상태 각각에 대한 치료 효능을 확인함으로서, 각 증상에 대한 치료제를 판단할 수 있다.In addition, in screening oral mucositis therapeutic agents using the oral mucositis animal model of the present application, a therapeutic agent having overall therapeutic efficacy for oral mucositis can be screened, and a therapeutic agent having therapeutic efficacy for specific symptoms of oral mucositis can be selected. You can also screen. Specifically, treatment for each symptom can be determined by confirming the therapeutic efficacy for each of the conditions of redness, congestion, bleeding, epithelial ulcer, and pus due to oral mucositis.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 항암화학요법 또는 방사선 치료에 의한 구강 점막염 치료제의 스크리닝 방법일 수 있다.According to the exemplary embodiment of the present disclosure, the method may be a screening method for a therapeutic agent for oral mucositis by chemotherapy or radiation therapy.

본원의 일 구현예에 따르면, 상기 방법은 상기 구강 점막염 치료 후보물질에 따라 구강 점막염 증상이 완화되는 경우 상기 후보물질을 구강 점막염 치료제로 판단하는 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다.According to the exemplary embodiment of the present disclosure, the method may further include determining the candidate substance as a therapeutic agent for oral mucositis when the symptoms of oral mucositis are alleviated according to the candidate substance for treating oral mucositis.

본원의 구강 점막염 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 암치료 보조용 약학 조성물은 암 치료과정에서 발병할 수 있는 구강 점막염 치료에 이용할 수 있으며, 암 치료의 부작용을 효율적으로 억제할 수 있다. 또한, 본원의 구강 점막염 동물 모델 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 동물 모델을 이용한 구강 점막염 치료제 스크리닝 방법을 이용하여 구강 점막염 치료제를 효율적으로 발굴 할 수 있다.The pharmaceutical composition for preventing or treating oral mucositis and the pharmaceutical composition for adjuvant cancer treatment of the present application can be used to treat oral mucositis that may occur in the course of cancer treatment, and can effectively suppress side effects of cancer treatment. In addition, oral mucositis therapeutic agents can be efficiently discovered using the oral mucositis animal model manufacturing method of the present application and the oral mucositis therapeutic agent screening method using the animal model manufactured by the above method.

도 1은 구강 점막염 모델 제작 과정을 나타낸 도면이다.
도 2는 실험군 설계 및 실험 진행에 대한 전반적인 과정을 나타낸 도면이다.
도 3은 실험 진행에 따른 몸무게 및 섭취량 변화를 나타낸 도면이다.
도 4는 실험 진행에 따른 육안 검사 결과를 나타낸 도면이다.
도 5는 실험 7일째의 육안 검사 결과를 나타낸 도면이다.
도 6은 실험 진행에 따른 조직 검사 결과를 나타낸 도면이다.
도 7은 실험 진행에 따른 CD31에 대한 면역형광검사 결과를 나타낸 도면이다.
도 8은 실험 진행에 따른 MMP2에 대한 면역형광검사 결과를 나타낸 도면이다.
도 9는 실험 진행에 따른 TGF-β에 대한 면역형광검사 결과를 나타낸 도면이다.
도 10은 실험 진행에 따른 NOX4에 대한 면역형광검사 결과를 나타낸 도면이다.1 is a view showing a process of making an oral mucositis model.
2 is a diagram showing an overall process for designing an experimental group and conducting an experiment.
3 is a diagram showing changes in body weight and intake according to the progress of the experiment.
4 is a view showing the results of visual inspection according to the progress of the experiment.
5 is a view showing the results of the visual inspection on the 7th day of the experiment.
6 is a diagram showing the results of the tissue examination according to the progress of the experiment.
7 is a diagram showing the results of an immunofluorescence test for CD31 according to the progress of the experiment.
8 is a diagram showing the results of an immunofluorescence test for MMP2 according to the progress of the experiment.
9 is a diagram showing the results of an immunofluorescence test for TGF-β according to the progress of the experiment.
10 is a diagram showing the results of an immunofluorescence test for NOX4 according to the progress of the experiment.

이하, 아래 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 단, 아래 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail through the following examples. However, the following examples are for illustrative purposes only, and the scope of the present invention is not limited thereto.

실시예 1: 편도 유래 줄기세포의 제조 및 배양Example 1: Preparation and culture of tonsil-derived stem cells

편도 유래 줄기세포(tonsil-derived MSCs)의 추출 및 배양은 기존의 공지된 방법을 이용하였다. 구체적으로, 편도절제술을 시행 받은 10세 여자환자의 조직을 이용하였으며, 수술로 얻어진 편도 조직을 얇게 저민 후에, 고농도 글루코스 DMEM [210 U/mL collagenase type I (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) 및 10 mg/mL DNase (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA) 포함] 배지에 37℃에서 30분간 넣어 조직을 녹였다. 상기 녹인 조직은 철망(wire mesh)으로 필터링 한 후, 고농도 글루코스DMEM 배지/20% 소태아혈청(fetal bovine serum, FBS)에서 2차례 세척한 후, 고농도 글루코스DMEM 배지/10% 소태아혈청(fetal bovine serum, FBS)에서 1차례 세척하였다. 다음으로, Ficolle-Paque (GE Healthcare, Little Chalfont, UK) 농도구배 원심분리기를 이용하여 단핵구(mononuclear cell)를 수득하였으며, 상기 수득하나 세포 1Х106 개를 100-mm 배양 접시에 분주하고 고농도 글루코스 DMEM, 10% FBS, 100 U/mL 페니실린/스트렙토마이신(Gibco, Grand Island, NY, USA) 배지에서 배양하였다. 배양 48시간 후에 접시에 붙어 자라는 점착성 단핵구 세포(adherent mononuclear cell)로 계대배양을 수행하였다.Extraction and culture of tonsil-derived MSCs were performed using a known method. Specifically, tissues from a 10-year-old female patient who underwent tonsillectomy were used, and after thinning the tonsil tissue obtained through surgery, high-concentration glucose DMEM (210 U/mL collagenase type I (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) and 10 mg/mL DNase (including Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA)] was put in a medium at 37°C for 30 minutes to dissolve the tissue. The melted tissue was filtered with a wire mesh, washed twice in high-concentration DMEM medium/20% fetal bovine serum (FBS), and then washed twice in high-concentration DMEM medium/10% fetal bovine serum (fetal bovine serum, FBS) was washed once. Next, mononuclear cells were obtained using a Ficolle-Paque (GE Healthcare, Little Chalfont, UK) concentration gradient centrifuge, and 6 cells of 1Х10 obtained above were dispensed into a 100-mm culture dish and a high-concentration glucose DMEM , 10% FBS, 100 U/mL penicillin/streptomycin (Gibco, Grand Island, NY, USA) cultured in medium. After 48 hours of culture, passage was performed with adherent mononuclear cells growing on the plate.

실시예 2: 구강 점막염(Oral mucositis) 모델 제작Example 2: Oral mucositis model construction

구강 점막염 모델을 제작하기 위해 7주령, 무게 90 g 내지 120 g의 수컷 시리아 골든 햄스터(Syrian golden hamsters)(Japan SLC, Nagoya, Japan)를 이용하였으며, 하기와 같은 방법으로 제작하였다.In order to produce an oral mucositis model, male Syrian golden hamsters (Syrian golden hamsters) (Japan SLC, Nagoya, Japan) 7 weeks old and weighing 90 g to 120 g were used, and were produced in the following manner.

(1) 0, 2, 4일째에 햄스터에 60 mg/kg 5-FU(5-fluorourasil)를 복강 주사함.(1) Intraperitoneal injection of 60 mg/kg 5-FU (5-fluorourasil) into hamsters on the 0, 2, and 4 days.

(2) 1일째에 8mm 바이옵시 펀치를 사용하여 햄스터 볼점막 주머니 점막의 내층을 제거한 후, 노출된 볼점막 주머니에 18 게이지 바늘을 이용하여 표면 스크래치(superficial scratch)를 가함(도 1).(2) After removing the inner layer of the hamster cheek mucosa mucosa using an 8mm biopsy punch on the first day, a superficial scratch was applied to the exposed cheek mucosa using an 18 gauge needle (FIG. 1).

(3) 2일째 및 4일째에 추가적으로 표면 스크래치 가하여 기계적 외상(mechanical trauma, MT)을 가함(1일째에 만든 구강 점막역 위치 내에서 시행).(3) On the 2nd and 4th days, a mechanical trauma (MT) was applied by additional surface scratching (in the oral mucosa site created on the 1st day).

본원의 구강 점막염 동물 모델은 바이옵시 펀치를 사용하여 동일한 크기의 점막염을 유발하고, 주사침을 이용하여 점막을 자극하였는 바, 이는 기존의 동물 모델보다 구강 점막염 치료 등의 연구에 있어 유용하게 이용할 수 있다.The animal model of oral mucositis of the present invention induces mucositis of the same size using a biopunch and stimulates the mucous membrane using an injection needle, which can be usefully used in studies such as oral mucositis treatment than the conventional animal model. .

실시예 3: 실험군 설계Example 3: Experimental group design

실험군은 하기의 5개의 군으로 설계하였다(도 2).The experimental group was designed into the following five groups (Fig. 2).

(1) MT: 기계적 외상만 유도, n=6(1) MT: induced only mechanical trauma, n=6

(2) 5-FU+MT: 5-FU 복강 주사 및 기계적 외상 유도, 실시예 2의 구강 점막염 모델, n=6(2) 5-FU+MT: 5-FU intraperitoneal injection and mechanical trauma induction, oral mucositis model of Example 2, n=6

(3) TMSC: 5-FU+MT 군에 편도 유래 줄기세포 주입, n=6(3) TMSC: tonsil-derived stem cells injected into 5-FU+MT group, n=6

(4) DEXA: 5-FU+MT 군에 덱사메타손(dexamethasone) 주입, n=6(4) DEXA: injection of dexamethasone into the 5-FU+MT group, n=6

(5) saline: 5-FU+MT 군에 생리식염수 주입, n=6(5) saline: physiological saline injection into the 5-FU+MT group, n=6

실험에 이용된 동물 수는 각 군당 총 3마리이며, 양측 볼점막 주머니에 실험을 시행하였기 때문에 각 군당 총 샘플 수는 각 6개이다.The number of animals used in the experiment was a total of 3 animals in each group, and since the experiment was conducted on both cheek mucosa, the total number of samples in each group was 6 each.

TMSC 군의 경우, 2Х104개의 편도 유래 줄기세포가 포함된 성장 배지와 Matrigel® (MA, BD Biosciences, San Jose, CA, USA)을 1:2의 비율로 섞어 총 100μl로 만든 후, 이를 실험일 7일차에 구강 점막염 주변 점막 하에 주사하였다.In the case of TMSC group, a growth medium containing 2Х10 4 tonsil-derived stem cells and Matrigel® (MA, BD Biosciences, San Jose, CA, USA) were mixed in a ratio of 1:2 to make a total of 100 μl. On the 7th day, it was injected under the mucous membrane around oral mucositis.

DEXA 군의 경우, 항염증 물질로서 임상에서 구강 점막염 치료제로 널리 알려진 덱사메타손 이인산나트륨(Dexamethasone disodium phosphate)(Ilsung Pharmaceuticals Co., Seoul, Republic of Korea, 5 mg/ml)을 인산완충생리식염수(phosphate-buffered saline, PBS, pH 7.4)에 혼합하여 1 mg/kg 의 용액으로 제조한 후, 실험일 7일차에 구강 점막염 주변 점막 하에 주사하였다. In the case of the DEXA group, dexamethasone disodium phosphate (Ilsung Pharmaceuticals Co., Seoul, Republic of Korea, 5 mg/ml), which is widely known in clinical practice as an anti-inflammatory substance, is used to treat oral mucositis. -buffered saline, PBS, pH 7.4) and prepared as a 1 mg/kg solution, and then injected under the mucous membrane around oral mucositis on the 7th day of the experiment.

Saline 군의 경우 생리식염수 100μl을 실험일 7일차에 구강 점막염 주변 점막 하에 주사하였다.In the case of the Saline group, 100 μl of physiological saline was injected under the mucous membrane around oral mucositis on the 7th day of the experiment.

실시예 4: 치료 평가(Assessment)Example 4: Treatment Assessment (Assessment)

실시예 4-1: 무게 및 섭취량 확인Example 4-1: Confirmation of weight and intake

실험에 사용한 모든 15마리의 햄스터의 무게 및 구강섭취량은 동물의 상태를 확인하기 위해 매일 측정하였다.The weight and oral intake of all 15 hamsters used in the experiment were measured daily to check the condition of the animals.

실시예 4-2: 구강 점막염 상태의 육안 소견(Gross analysis)Example 4-2: Gross analysis of oral mucositis

볼점막 주머니의 구강 점막염의 육안적 상태는 사진을 촬영하여 심각도를 평가하였으며, 점막의 발적, 충혈, 출혈, 상피궤양, 농의 상태를 기존에 제안된 방식에 입각하여 0-5점으로 평가하였다.The severity of oral mucositis of the buccal mucosa was evaluated by taking pictures, and redness, redness, bleeding, epithelial ulcer, and pus were evaluated as 0-5 points based on the previously proposed method. .

구체적으로, 볼점막 주머니는 점막염의 중증도를 특정 짓기 위해 촬영하였다. 중증도를 평가하고, 홍반, 충혈, 출혈, 상피 궤양 및 농양을 기존에 공지된 방법에 기초하여 하기와 같이 0점에서 5점으로 평가하였다.Specifically, the buccal mucosa was photographed to determine the severity of mucositis. The severity was evaluated, and erythema, congestion, bleeding, epithelial ulcers and abscesses were evaluated from 0 to 5 as follows based on known methods.

0점: 건강한 점막으로서, 침식이나 혈관 확장의 흔적이 없음.0 points: Healthy mucosa, showing no signs of erosion or vasodilation.

1점: 홍반이 존재하지만, 점막 침식의 흔적은 없음.1 point: Erythema is present, but there is no evidence of mucosal erosion.

2점: 심한 홍반, 혈관 확장 및 표면 침식2 points: severe erythema, vasodilation and surface erosion

3점: 점막의 하나 이상의 면에 궤양이 존재하며, 25% 이하의 영역에만 궤양이 존재, 심한 홍반 및 혈관확장3 points: ulcers exist on one or more sides of the mucous membrane, ulcers only exist in less than 25% of the area, severe erythema and vasodilation

4점: 볼 점막의 약 50%에 궤양이 존재4 points: ulcer is present on about 50% of the cheek mucosa

5점: 볼 점막의 모든 부위에 궤양이 존재하여, 조직을 노출시키는 것이 불가능함.5 points: There is an ulcer in all areas of the cheek mucosa, making it impossible to expose the tissue.

실시예 4-3: 조직 검사(Histologic analysis)Example 4-3: Histologic analysis

실험에 참여한 동물은 한림대학교성심병원 연구소의 동물실험 지침에 따라 안락사시켰다. 실험 표본은 파라핀 블록에 넣은 뒤 7μm 두께의 절편으로 절단 하였고, 상기 절편을 헤마톡실린-에오신(hematoxylin-eosin, H&E)으로 염색하였다.Animals participating in the experiment were euthanized according to the animal experiment guidelines of the Institute of Hallym University Sacred Heart Hospital. The experimental sample was put in a paraffin block and cut into 7 μm-thick sections, and the sections were stained with hematoxylin-eosin (H&E).

실시예 4-4: 면역형광검사 (Immunohistochemial analysis)Example 4-4: Immunohistochemial analysis

조직의 면역형광검사를 위해 다음과 같이 수행하였다. 구체적으로, 절편 조직 슬라이드를 조직-건조 오븐에서 60℃, 40분동안 인큐베이션시키고, 탈파라핀화된 조직을 10 mM 나트륨 구연산염 완충액 (pH 6.0)을 이용하여 전자레인지에서 변성시킨 후, 블로킹 완충액으로 60분동안 블록킹시켰다. 다음으로, 1차 항체를 희석시킨 후, 25℃, 16시간동안 상기 블록킹된 조직과 인큐베이션시키고, 상기 조직을 0.3% 과산화수소가 포함된 10% PBS로 10분동안 처리하였다. 다음으로, 조직과 반응한 1차 항체를 검출하기 HRP(horseradish peroxidase)과 연결된 2차 항체를 이용하여 반응을 진행하였고, HRP 활성은 3,3-디아미노벤지딘 (diaminobenzidine, DAB) 기질을 이용하여 검출하였다. 상기 조직은 PBS로 3번 세척하였다. 본 실험에서 사용한 모든 조직은 Mayer's hematoxylin으로 대조염색하였다.The tissue immunofluorescence test was performed as follows. Specifically, sectioned tissue slides were incubated in a tissue-drying oven at 60° C. for 40 minutes, and deparaffinized tissues were denatured in a microwave using 10 mM sodium citrate buffer (pH 6.0), and then 60 with blocking buffer. Blocked for minutes. Next, after diluting the primary antibody, it was incubated with the blocked tissue at 25° C. for 16 hours, and the tissue was treated with 10% PBS containing 0.3% hydrogen peroxide for 10 minutes. Next, the reaction was carried out using a secondary antibody linked to horseradish peroxidase (HRP) to detect the primary antibody reacted with the tissue, and HRP activity was performed using a 3,3-diaminobenzidine (DAB) substrate. Detected. The tissue was washed 3 times with PBS. All tissues used in this experiment were counter-stained with Mayer's hematoxylin.

1차 항체는 다음의 제품을 이용하였다: 항-TGF-β1 항체 (1:100, Abcam, Cambridge, UK), 마우스 항-CD31 항체 (1:100, BD Pharmingen, NJ, USA), 항-MMP2 항체 (8B4) (1:100, Santa Cruz Biotechnology Inc.), 및 항-NOX4 항체(1:500, Cusabio Technol LLC, Houston, TX, USA).The following products were used as the primary antibody: anti-TGF-β1 antibody (1:100, Abcam, Cambridge, UK), mouse anti-CD31 antibody (1:100, BD Pharmingen, NJ, USA), anti-MMP2 Antibody (8B4) (1:100, Santa Cruz Biotechnology Inc.), and anti-NOX4 antibody (1:500, Cusabio Technol LLC, Houston, TX, USA).

2차 항체는 다음의 제품을 이용하였다: 염소 항-마우스 IgG 항체(1:500, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA) 및 염소 항-토끼 IgG, (1:500, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA).The following products were used as the secondary antibody: goat anti-mouse IgG antibody (1:500, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA) and goat anti-rabbit IgG, (1:500, Thermo Fisher Scientific Inc. ., Waltham, MA, USA).

구강 점막 조직은 광학 현미경(Carl Zeiss Microscopy GmbH, Zeiss, Germany)을 이용하여 관찰하였고, 면역-양성 세포는 Image J program (ImageJ 1.49v, National Institutes of Health, USA)를 이용하여 측정되었다.Oral mucosal tissue was observed using an optical microscope (Carl Zeiss Microscopy GmbH, Zeiss, Germany), and immune-positive cells were measured using the Image J program (ImageJ 1.49v, National Institutes of Health, USA).

실시예 4-5: 통계적 분석 (Statistical analysis)Example 4-5: Statistical analysis

실험예 및 실시예의 모든 데이터는 평균 ± 표준편차로 표현하였다. 또한, GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, San Diego, CA, USA)을 이용하여 실험 결과의 통계적 분석을 수행하였으며, p 값은 스튜던트 T 검정(Student 's t test)을 이용하여 통계적 유의성을 *p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.005로 설정하였다.All data of Experimental Examples and Examples were expressed as mean ± standard deviation. In addition, statistical analysis of the experimental results was performed using GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, San Diego, CA, USA), and the p value was statistically significant using the Student's T test *p <0.05 , **p<0.01, ***p<0.005.

실험예 1: 실험군의 몸무게 및 섭취량 확인Experimental Example 1: Checking the weight and intake of the experimental group

각 실험군의 실험 0일째의 평균 몸무게는 MT 군은 141.4+5.5 g, 5-FU+MT 군은 139.5+3.5 g, saline 군은 146.9+20.5 g, TMSC 군은 138.9+0.1 g, DEXA 군은 145.6+16.4 g으로서 각 군간에 큰 차이는 없었으며, 모든 군에서 시간에 따른 유의한 몸무게 변화는 관찰되지 않았다(도 3A).The average weight of each experimental group on day 0 of the experiment was 141.4+5.5 g in the MT group, 139.5+3.5 g in the 5-FU+MT group, 146.9+20.5 g in the saline group, 138.9+0.1 g in the TMSC group, and 145.6 in the DEXA group. There was no significant difference between each group as +16.4 g, and no significant change in weight over time was observed in all groups (Fig. 3A).

또한, 섭취량을 실험 0일째와 비교하여 비율로 나타냈을 때, 모든 군에서 실험 4-10일째 및 실험 11-14일째에 0일째와 비교하여 섭취량이 40 내지 60% 감소하였으나, 각 군간의 통계적으로 유의한 차이는 없었는 바, 모든 군에서 시간에 따른 유의한 몸무게 변화는 관찰되지 않았다(도 3B).In addition, when the intake was expressed as a ratio compared to the experiment day 0, in all groups, the intake amount decreased by 40 to 60% compared to the 0 day in the experiment 4-10 days and the experiment 11-14 days, but statistically between each group There was no significant difference, and no significant change in weight over time was observed in all groups (Fig. 3B).

실험예 2: 실험군의 구강 점막염 상태 육안 소견 확인Experimental Example 2: Visual findings of oral mucositis of the experimental group

실시예 4-2의 방법을 이용하여, 실험군의 구강 점막염 상태를 육안으로 확인하였다. 육안적으로 MT 군은 점막의 미란 및 궤양이 7일째에 관찰되었으며, 14일 이내에 자연 치유된 것이 확인되었다. 반면 5-FU+MT 군은 저명한 점막염, 상피의 파열 및 괴사가 7일째 및 10일째에 보였으며, 14일째에는 궤양이 약간 호전되긴 했으나 여전히 심한 점막 발적 및 궤양이 존재하는 것으로 확인되었다. 또한, TMSC 군은 10일째에 거의 정상적으로 회복이 되었으나(약간의 점막 파열 및 발적만 확인), DEXA 군은 10일째에 궤양 및 중증도의 점막 발적이 관찰되었으며, 14일째에는 TMSC 군의 점막파열은 회복이 되었고, DEXA 군도 궤양이 호전된 양상을 보이는 것을 확인하였다(도 4A).Using the method of Example 4-2, the state of oral mucositis in the experimental group was visually confirmed. Visually, in the MT group, erosion and ulcers of the mucous membrane were observed on the 7th day, and it was confirmed that spontaneous healing within 14 days. On the other hand, in the 5-FU+MT group, prominent mucositis, rupture and necrosis of the epithelium were seen on the 7th and 10th days, and the ulcers were slightly improved on the 14th day, but severe mucosal redness and ulcers were still present. In addition, the TMSC group recovered almost normally on the 10th day (only slight mucosal rupture and redness were confirmed), but the DEXA group had ulcers and severe mucosal redness on the 10th day, and on the 14th day, the TMSC group recovered its mucosa. It was confirmed that the DEXA group also showed an improved pattern of the ulcer (FIG. 4A).

각 실험군의 시간 경과에 따른 평균 그로스 점수(gross score)는 도 4B에 기재하였다. 구체적으로, 평균 그로스 점수는 7일째에는 실험군 별로 차이가 없었으나(도 5), 10일째에는 TMSC 군과 DEXA 군이 MT 군, 5-FU+MT 군 및 saline 군과 비교하여 통계적으로 유의하게 그로스 점수가 낮은 것이 확인되었으며, TMSC 군의 그로스 점수가 DEXA 군에 비교하여 낮게 나온 것이 확인되었다. 또한, 14일째에는 TMSC 군을 제외한 모든 군에서, 10일째와 비교하여 그로스 점수가 낮아진 것이 확인되었다. 또한, MT 군, TMSC 군 및 DEXA 군은 5-FU+MT 군 및 saline 군과 비교하여 그로스 점수가 낮았으며, TMSC 군 및 DEXA 군의 그로스 점수는 5-FU+MT 및 saline 군보다 통계적으로 유의하게 낮은 것이 확인되었다.The average gross score of each experimental group over time is shown in FIG. 4B. Specifically, the average gross score did not differ between the experimental groups on the 7th day (Fig. 5), but on the 10th day, the TMSC group and the DEXA group had statistically significant growth compared to the MT group, 5-FU+MT group, and saline group. It was confirmed that the score was low, and it was confirmed that the gross score of the TMSC group was lower than that of the DEXA group. In addition, it was confirmed that on the 14th day, in all groups except the TMSC group, the gross score was lowered compared to the 10th day. In addition, the MT group, TMSC group, and DEXA group had a lower gross score compared to the 5-FU+MT group and the saline group, and the TMSC group and the DEXA group had statistically significant growth scores compared to the 5-FU+MT and saline groups. It was confirmed that it was low.

상기 결과로부터, 육안 소결 결과, 편도 유래 줄기세포를 주입한 TMSC 군이 기존에 치료제로 사용되는 덱사메타손을 주입한 DEXA 군보다 빠른 시간에 구강 점막염 상태가 호전된 것을 확인하였는 바, 편도 유래 줄기세포를 포함하는 조성물이 현저히 우수한 구강 점막염 치료 효과를 갖는 다는 것을 알 수 있다.From the above results, as a result of visual sintering, it was confirmed that the TMSC group injected with tonsil-derived stem cells improved the oral mucositis condition in a faster time than the DEXA group injected with dexamethasone, which was used as a conventional treatment. It can be seen that the containing composition has a remarkably excellent oral mucositis treatment effect.

실험예 3: 실험군의 조직 검사 결과 확인Experimental Example 3: Confirmation of the tissue examination result of the experimental group

실시예 4-3의 방법을 이용하여, 실험군의 구강 점막 상태를 조직 검사로 확인하였다. MT 군의 경우, 실험 10일째 및 14일째에서 정상 연골 조직으로서의 완전한 상피화를 나타냈으나, 5-FU+MT 군 및 saline 군의 경우, 10일째 및 14일째에 염증세포의 침윤을 동반한 상피 결손 및 섬유화를 동반한 출혈 영역이 관찰되었다.Using the method of Example 4-3, the state of the oral mucosa of the experimental group was confirmed by biopsy. In the MT group, complete epithelialization as normal cartilage tissue was shown on the 10th and 14th days of the experiment, but in the 5-FU+MT group and the saline group, epithelial defects accompanied by infiltration of inflammatory cells on the 10th and 14th days. And a bleeding area with fibrosis was observed.

또한, TMSC 군의 경우 10일째에 완전한 상피화를 나타냈으나, DEXA 군의 경우 10일째에 염증 세포의 침윤 및 과립 형성과 함께 상피 결손이 관찰되었다. 14일째의 경우 DEXA 군 또한 완전한 상피화가 관찰되었다(도 6).In addition, the TMSC group showed complete epithelialization on the 10th day, but in the DEXA group, the epithelial defect was observed along with the infiltration of inflammatory cells and the formation of granules on the 10th day. On the 14th day, complete epithelialization was also observed in the DEXA group (Fig. 6).

상기 결과로부터, 조직 검사 결과 다른 실험군과 비교하여 빠른 시간에 상피화가 진행되는 것을 확인하였는 바, 편도 유래 줄기세포를 포함하는 조성물이 현저히 우수한 구강 점막염 치료 효과를 갖는 다는 것을 알 수 있다.From the above results, as a result of histologic examination, it was confirmed that epithelialization proceeds in a rapid time compared to other experimental groups, and it can be seen that the composition containing tonsil-derived stem cells has a remarkably excellent treatment effect for oral mucositis.

실험예 4: 실험군의 면역형광검사 결과 확인Experimental Example 4: Confirmation of the immunofluorescence test result of the experimental group

실시예 4-4의 방법을 이용하여, 각 실험군의 CD31, MMP2, TGF-β 및 NOX4의 발현 수준을 평가하였다.Using the method of Example 4-4, the expression levels of CD31, MMP2, TGF-β, and NOX4 in each experimental group were evaluated.

구체적으로, 면역형광검사를 통해 CD31의 발현수준을 확인한 결과, 실험 10일째에 MT 군 및 TMSC 군은 다른 군과 비교하여 CD31의 발현수준이 증가되었으며, TMSC군의 경우 5-FU+MT 군 및 saline 군과 비교하여 통계적으로 유의하게 CD31의 발현수준이 증가되어 있었으며, MT 군과 비교하여서도 증가되어 있는 것이 확인되었다. 또한, 5-FU+MT 군은 10일째 통계적으로 유의하게 CD31 발현수준이 감소되어 있으며, 10-14일째에 약간 증가되는 결과를 나타내었고, DEXA 군은 5-FU+MT, saline군과 비교하여 10일째 CD31 발현수준이 증가되었으나, 이 수치는 MT 군에 비교하여서는 낮았다. 14일째에는 모든 군에서 10일째와 비교하여 CD31 발현수준이 증가되었으며, 특히 TMSC 군은 DEXA 군과 비교하여 통계적으로 유의하게 CD31 발현수준이 증가된 것이 확인되었다(도 7).Specifically, as a result of confirming the expression level of CD31 through immunofluorescence test, the expression level of CD31 was increased in the MT group and TMSC group compared to other groups on the 10th day of the experiment, and in the case of the TMSC group, the 5-FU+MT group and Compared to the saline group, the expression level of CD31 was statistically significantly increased, and it was also confirmed that the expression level was increased compared to the MT group. In addition, the 5-FU+MT group showed a statistically significant decrease in CD31 expression level on the 10th day, and slightly increased on the 10-14th day, and the DEXA group compared with the 5-FU+MT and saline groups. On the 10th day, the level of CD31 expression was increased, but this level was lower than that of the MT group. On the 14th day, it was confirmed that the CD31 expression level was increased in all groups compared to the 10th day, and in particular, the TMSC group had a statistically significant increase in the CD31 expression level compared to the DEXA group (Fig. 7).

다음으로, 면역형광검사를 통해 MMP2의 발현수준을 확인한 결과, TMSC 군은 10일째에 MMP2 발현수준이 가장 높게 나타났으며, 10 내지 14일째 점차 감소하였으며, DEXA군도 10일째에 MMP2 발현수준이 5FU+MT 군보다 높게 나타났다. 또한, 14일째에는 TMSC 군에서 MMP2 발현수준이 가장 낮게 나타났으나, 10일째 및 14일째에 군 간에 통계적 유의성은 보이지 않았다(도 8).Next, as a result of confirming the expression level of MMP2 through immunofluorescence, the TMSC group showed the highest MMP2 expression level on the 10th day, and gradually decreased on the 10th to 14th day, and the DEXA group also showed a 5FU MMP2 expression level on the 10th day. It was higher than that of the +MT group. In addition, on the 14th day, the MMP2 expression level was the lowest in the TMSC group, but there was no statistical significance between the groups on the 10th and 14th days (FIG. 8).

다음으로, 면역형광검사를 통해 TGF-β의 발현수준을 확인한 결과, 10일째에 TMSC 군은 TGF-β가 상피 및 점막 하에 강하게 발현되었고, 이는 정상 점막, MT 군, 5-FU+MT 군과 비교하여 유의하게 높았으며, 특히 5-MT+FU 군과 비교하여 특징적으로 높았다(p<0.01). 또한, 14일째에 TGF-β의 발현수준은 TMSC 군 및 DEXA 군에서 MT 군, 5-FU+MT 군, 및 saline 군보다 높았고, 특히 5-FU+MT 군과 비교하여 통계적 유의성을 가진 것이 확인되었다(도 9).Next, as a result of confirming the expression level of TGF-β through immunofluorescence test, TGF-β was strongly expressed in the epithelium and submucosa in the TMSC group on the 10th day, which was compared with the normal mucosa, MT group, and 5-FU+MT group. In comparison, it was significantly higher, especially compared with the 5-MT+FU group (p<0.01). In addition, the expression level of TGF-β on the 14th day was higher in the TMSC group and the DEXA group than in the MT group, 5-FU+MT group, and saline group, and in particular, it was confirmed that it had statistical significance compared to the 5-FU+MT group. Became (Fig. 9).

마지막으로, 면역형광검사를 통해 NOX4의 발현수준을 확인한 결과, 10일째에 TMSC 군은 다른 군과 비교하여 NOX4 발현수준이 증가되었으며, 정상 점막 및 5-FU+MT 군과 비교하였을 때 통계적으로 유의하게 높은 것을 확인하였다. 또한, 14일째에는 군 간에 유의한 차이는 없었다(도 10).Finally, as a result of confirming the expression level of NOX4 through immunofluorescence test, on the 10th day, the TMSC group increased the NOX4 expression level compared to other groups, and it was statistically significant when compared to the normal mucosa and 5-FU+MT group. It was confirmed that it was high. In addition, there was no significant difference between groups on the 14th day (FIG. 10).

상기 결과로부터, 조직 재생 또는 상처 치유와 관련된 신생혈관 생성을 촉진하는 CD31의 발현수준, 상처 치유와 관련된 섬유아세포 분화를 촉진하는 TGF-β의 발현수준 및 상처 수축과 관련된 NOX4의 발현수준은, TMSC 군의 경우 다른 실험군과 비교하여 빠른 시간에 발현 수준이 유의하게 높은 것을 확인하였는 바, 편도 유래 줄기세포를 포함하는 조성물이 현저히 우수한 구강 점막염 치료 효과를 갖는 다는 것을 알 수 있다.From the above results, the expression level of CD31 that promotes angiogenesis related to tissue regeneration or wound healing, the expression level of TGF-β that promotes fibroblast differentiation related to wound healing, and the expression level of NOX4 related to wound contraction are TMSC In the case of the group, it was confirmed that the expression level was significantly higher in a short time compared to the other experimental groups, and it can be seen that the composition containing the tonsil-derived stem cells has a remarkably excellent treatment effect for oral mucositis.

상기 실험예들의 결과를 종합해보면, 본원에서 제작한 구강 점막염 동물 모델에 편도 유래 줄기세포를 주입한 TMSC 군의 경우 현저히 우수한 구강 점막염 치료 효과가 있는 것을 육안 소견, 조직 검사 및 면역형광검사 등을 통해 확인하였는 바, 편도 유래 줄기세포를 포함하는 조성물은 구강 점막염 치료 또는 암치료 보조용으로 유용하게 사용할 수 있다.Summarizing the results of the above experimental examples, the TMSC group in which tonsil-derived stem cells were injected into the oral mucositis animal model produced herein showed remarkably excellent oral mucositis treatment effect through visual findings, biopsy, immunofluorescence, etc. As confirmed, the composition containing stem cells derived from tonsils can be usefully used for the treatment of oral mucositis or cancer treatment.

이상의 설명으로부터, 본원이 속하는 기술분야의 당업자는 본원이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예 및 실험예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본원의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.From the above description, those skilled in the art to which the present application pertains will understand that the present application may be implemented in other specific forms without changing the technical spirit or essential features. In this regard, it should be understood that the examples and experimental examples described above are illustrative in all respects and not limiting. The scope of the present application should be construed that all changes or modifications derived from the meaning and scope of the claims to be described later rather than the detailed description and equivalent concepts thereof are included in the scope of the present invention.

Claims (11)

삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 인간을 제외한 동물에 제조 0일째, 2일째 및 4일째에 5-플루오로우라실(5-fluorourasil, 5-FU) 60mg/kg을 투여하는 단계, 제조 1일째에 바이옵시 펀치를 사용하여 점막의 내층을 제거하고 주사침을 사용하여 표면 스크레치를 가하는 단계, 2일째 및 4일째에 추가적으로 표면 스크래치를 가하여 기계적 외상을 가하는 단계, 및 3일간 상기 플루오로우라실(5-fluorourasil, 5-FU) 투여 및 기계적 외상을 중단하고 회복시시키는 단계를 포함하는 구강 점막염 동물 모델의 제조방법.
Steps of administering 60 mg/kg of 5-fluorourasil (5-FU) on the 0th, 2nd and 4th days of manufacture to animals other than humans, the inner layer of the mucous membrane using a biopsy punch on the 1st day of manufacture Removal and applying a surface scratch using a needle, additionally applying a surface scratch on the 2nd and 4th days to apply mechanical trauma, and the fluorourasil (5-FU) administration and mechanical trauma for 3 days Method of producing an animal model of oral mucositis comprising the step of stopping and recovering.
 삭제delete (a) 제8항의 방법으로 제조된 구강 점막염 동물 모델에, 구강 점막염 치료 후보물질을 투여하는 단계; 및
(b) 상기 후보물질의 투여에 따른 구강 점막염 증상 정도를 확인하는 단계
를 포함하는, 구강 점막염 치료제의 스크리닝 방법.
(a) administering an oral mucositis treatment candidate material to an oral mucositis animal model prepared by the method of claim 8; And
(b) checking the degree of symptoms of oral mucositis according to the administration of the candidate substance
Containing, oral mucositis screening method.
 제10항에 있어서, 상기 구강 점막염 치료 후보물질에 따라 구강 점막염 증상이 완화되는 경우 상기 후보물질을 구강 점막염 치료제로 판단하는 것인, 구강 점막염 치료제의 스크리닝 방법.The method of claim 10, wherein when the symptoms of oral mucositis are alleviated according to the oral mucositis treatment candidate material, the candidate substance is determined as an oral mucositis treatment agent.
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