KR102184804B1 - Composition for promoting muscle growth comprising hydrolysate of flounder or peptide isolated therefrom - Google Patents

Abstract

The present invention relates to a food composition for promoting muscle growth, comprising a hydrolysate of halibut or at least one peptide selected from a group consisting of an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 to 3 and isolated from the hydrolysate. It is confirmed that the hydrolysate of halibut fish cake and peptide isolated from the hydrolysate of halibut surimi have an effect of promoting muscle cell growth. Therefore, the hydrolysate of halibut fish cake and peptides isolated from a fraction of the hydrolysate of halibut surimi can be used in the food composition for promoting muscle growth, and prevention or treatment of muscle wasting diseases.

Description

광어의 가수분해물 또는 이로부터 분리된 펩티드를 포함하는 근육 증가 촉진용 조성물{Composition for promoting muscle growth comprising hydrolysate of flounder or peptide isolated therefrom}Composition for promoting muscle growth comprising hydrolysate of flounder or peptide isolated therefrom

본 발명은 광어의 가수분해물, 또는 이로부터 분리된 펩티드를 유효성분으로 포함하는, 근육 증가 촉진용 식품 조성물, 및 근육 소모성 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a food composition for promoting muscle growth, comprising a hydrolyzate of flatfish or a peptide isolated therefrom as an active ingredient, and a pharmaceutical composition for treating or preventing muscle wasting disease.

최근 전 세계적으로 인구 고령화 현상이 급속하게 진행되고 소득증대로 건강한 삶에 대해 관심이 높아지면서 항노화 산업이 부상하고 있다. 노년 건강은 근육량에서 큰 차이가 나며, 특히 하체 근육은 몸의 중심을 잡아줘 낙상이나 다른 질환을 예방하는 데 도움을 준다. 근육량이 부족하면 아플 때 부작용을 겪기 쉽고, 질병이나 사고로 오래 입원하면 근감소증이 빠르게 진행되어 건강 악화를 불러오게 된다. 몸 근육의 최대 50%는 허벅지 근육에 모여 있으며, 근육이 줄어들면 몸 안의 에너지를 쓰는 기능이 떨어져 남아 도는 에너지가 지방으로 축적돼 비만과 당뇨병의 원인이 되기도 한다. In recent years, as the population aging phenomenon rapidly progresses around the world and interest in healthy life is increasing due to income increase, the anti-aging industry is emerging. Old age health makes a big difference in muscle mass, especially the lower body muscles, helping to prevent falls and other diseases by centering the body. If muscle mass is insufficient, it is easy to suffer side effects when you are sick, and if you are hospitalized for a long time due to an illness or accident, sarcopenia progresses rapidly, leading to deterioration in health. Up to 50% of the muscles of the body are concentrated in the thigh muscles, and when the muscles are reduced, the ability to use energy in the body decreases, and the remaining energy accumulates as fat, which can cause obesity and diabetes.

이와 같이, 근육은 에너지 대사 및 운동능력에 있어서 매우 중요하다. 특히 운동 선수들은 경기력 증가를 위하여 신체 근력을 향상시키는데 집중한다. 신체 근력 향상을 위해서는 트레이닝 및 식이요법과 더불어 운동 능력 향상 보조물의 섭취를 필요로 한다. 특히, 영양학적 에너지 보충제는 필요한 영양소와 에너지를 빠르고 효율적으로 얻을 수 있게 해주며, 운동에 따른 피로의 누적과 에너지의 고갈을 지연시킴으로써 운동 수행력을 향상시킬 수 있다는 긍정적인 요인으로 작용한다. As such, muscles are very important for energy metabolism and exercise capacity. In particular, athletes focus on improving their physical strength to increase their athletic performance. In order to improve the physical strength, training and diet, as well as the intake of exercise performance supplements are required. In particular, nutritional energy supplements allow you to quickly and efficiently obtain necessary nutrients and energy, and act as a positive factor that can improve exercise performance by delaying accumulation of fatigue and energy exhaustion due to exercise.

이러한 근육성장 보조제로는 동화작용제(Anabolic steroids)가 있는데, 이는 남성 호르몬인 테스토스테론(testosterone)의 유도체로서 근육을 강화시키는 아나볼릭(anabolic) 효과와 남성 호르몬의 역할을 수행하는 안드로젠 효과(androgenic effect)를 가지고 있는 합성 스테로이드 호르몬이다. 상기 동화작용제(Anabolic steroids)는 체내의 단백질 합성 증가를 통해 근육과 뼈를 강화시킨다. 그러나 동화작용제(Anabolic steroids)를 과다하게 복용할 경우 간종양, 내분비 기능 장애, 황달 등의 부작용을 유발시킬 수 있다. These muscle growth aids include anabolic steroids, which are derivatives of the male hormone testosterone, which have an anabolic effect that strengthens muscles and an androgenic effect that plays the role of a male hormone. It is a synthetic steroid hormone that has. The anabolic steroids strengthen muscles and bones through increased protein synthesis in the body. However, excessive use of anabolic steroids can cause side effects such as liver tumors, endocrine dysfunction, and jaundice.

종래 합성 스테로이드 호르몬 등의 부작용 문제가 발생됨에 따라, 최근 세계 각국에서는 천연 물질로부터 근육성장을 유도하고 근력을 강화시키는 물질을 얻기 위한 노력이 지속되고 있다. 또한, 각국에서는 의약품은 물론이고, 효소와 건강보조제와 같은 식품 소재 등 다양한 용도에 활용될 수 있는 새로운 물질을 탐색하기 위하여 자연 상태의 생물, 특히 대량 배양 및 번식이 용이한 생물에 대한 연구도 활발하게 진행하고 있다.As side effects such as conventional synthetic steroid hormones occur, recent efforts have been made in countries around the world to obtain substances that induce muscle growth and strengthen muscle strength from natural substances. In addition, in each country, in order to search for new substances that can be used for various purposes such as food materials such as enzymes and health supplements, as well as medicines, studies on living organisms in their natural state, especially those that are easy to cultivate and reproduce in large quantities, are active. Is proceeding.

한편, 해양생물은 육상생물에 없는 특유의 대사과정과 독특한 환경으로 인하여 다양한 신규 생리활성물질의 탐색 기능성을 가지고 있다. 또한, 육상생물은 이미 많은 연구가 진행되었으나 해양생물은 아직 충분하게 연구되지 않아서 새로운 유용성을 가진 천연물질 개발에 대한 기대치가 높은 분야이기도 하다. On the other hand, marine organisms have the ability to search for various new physiologically active substances due to their unique metabolic processes and unique environments that are not in terrestrial organisms. In addition, many studies on terrestrial organisms have already been carried out, but marine organisms have not been sufficiently studied, so it is also a field with high expectations for the development of natural materials with new usefulness.

대한민국 공개특허 제10-2011-0049575호Republic of Korea Patent Publication No. 10-2011-0049575

본 발명의 목적은 광어의 가수분해물, 또는 이로부터 분리된 서열번호 1 내지 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하는, 근육 증가 촉진용 식품 조성물을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a food composition for promoting muscle growth, comprising as an active ingredient at least one peptide selected from the group consisting of a hydrolyzate of flounder or an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 to 3 separated therefrom. will be.

본 발명의 다른 목적은 광어의 가수분해물, 또는 이로부터 분리된 서열번호 1 내지 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하는, 근육 소모성 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공하는 것이다. Another object of the present invention is for the treatment or prevention of muscle wasting diseases, comprising as an active ingredient at least one peptide selected from the group consisting of a hydrolyzate of flatfish or an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 to 3 isolated therefrom It is to provide a pharmaceutical composition.

본 발명의 다른 목적은 광어를 마쇄 및 수세한 다음 정제 처리하는 단계를 포함하는, 광어의 가수분해물, 또는 이로부터 분리된 서열번호 1 내지 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하는, 근육 증가 촉진용 식품 조성물의 제조방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is one or more peptides selected from the group consisting of a hydrolyzate of flounder, or an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 to 3 isolated therefrom, comprising the step of grinding, washing and then purifying flounder. It is to provide a method for producing a food composition for promoting muscle growth, comprising as an active ingredient.

본 발명자는 광어(flounder)를 마쇄 및 수세한 다음 정제 처리하여, 광어 연육과 광어 어묵을 제조하였으며, 펩신을 포함하는 인공위액과 트립신, 알파-키모트립신을 포함하는 인공장액을 이용하여, 광어 연육과 광어 어묵의 가수분해물을 제조하였으며, 상기 광어 연육의 가수분해물의 분획물에서 분리된 특정 아미노산 서열을 가지는 펩티드가 근육 세포 성장을 촉진하는 것을 확인하였다. 따라서, 상기 광어 연육 또는 광어 어묵의 가수분해물 그리고 이들의 가수분해물의 분획물에서 분리된 펩티드들을 이용하여, 근육 증가 촉진용 식품 조성물과 근육 소모성 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물에 사용할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.The inventors of the present invention prepared flounder meat and flounder fish cake by grinding and washing the flounder, followed by purification, and using artificial gastric juice containing pepsin and artificial intestinal fluid containing trypsin and alpha-chymotrypsin, And a hydrolyzate of flounder fish cake was prepared, and it was confirmed that a peptide having a specific amino acid sequence isolated from the fraction of the hydrolyzate of the flounder meat promotes muscle cell growth. Therefore, it was confirmed that the peptides isolated from the hydrolyzate of the flounder meat or flounder fish cake and the fraction of the hydrolyzate thereof can be used in a food composition for promoting muscle growth and a pharmaceutical composition for treating or preventing muscle wasting disease. The present invention has been completed.

상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 광어의 가수분해물, 또는 이로부터 분리된 서열번호 1 내지 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하는, 근육 증가 촉진용 식품 조성물을 제공한다.As an aspect for achieving the above object, the present invention comprises a hydrolyzate of flounder or one or more peptides selected from the group consisting of amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 1 to 3 isolated therefrom as an active ingredient, It provides a food composition for promoting muscle gain.

본 발명에서 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열은 Ile-Val-Asp-Arg (IVDR)이고, 상기 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열은 Trp-Tyr-Lys(WYK)이고, 상기 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열은 Val-Ala-Ser-Val-Ile(VASVI)이며, 상기 근육 증가 촉진용 식품 조성물은 상기 광어의 가수분해물, 또는 이로부터 분리된 서열번호 1 내지 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함한다. In the present invention, the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 is Ile-Val-Asp-Arg (IVDR), and the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 is Trp-Tyr-Lys (WYK), and represented by SEQ ID NO: 3. The amino acid sequence is Val-Ala-Ser-Val-Ile (VASVI), and the food composition for promoting muscle growth is a hydrolyzate of flatfish or a group consisting of an amino acid sequence represented by SEQ ID NOs: 1 to 3 isolated therefrom. One or more peptides selected from are included as an active ingredient.

상기 광어의 가수분해물은 광어 연육 또는 연제품의 가수분해물일 수 있다. The hydrolyzate of the flounder may be a hydrolyzate of flounder meat or a soft product.

상기 펩티드는 광어(flounder) 연육 또는 연제품의 가수분해물에서 분리될 수 있으며, 보다 구체적으로 광어 연육의 가수분해물의 분획물에서 분리될 수 있다. 상기 연제품은 어육에 식염을 가하여 고기갈이한 뒤 성형하여 가열한 식품의 총칭을 의미하여, 어묵, 튀김 어묵, 부들 어묵, 어육햄, 소시지 등이 이에 속한다. The peptide may be isolated from the hydrolyzate of flounder meat or soft product, and more specifically, may be isolated from the fraction of the hydrolyzate of flounder meat. The smoked product refers to a generic term for food that is heated by adding salt to fish meat, then molded and heated, and includes fish cake, fried fish cake, fish cake, fish meat ham, sausage, and the like.

본 발명에서 상기 가수분해물은 상기 광어(flounder) 연육 또는 연제품을 소화효소를 이용하여 분해한 가수분해물일 수 있으며, 상기 소화 효소로는, 펩신(pepsin), 트립신(Trypsin) 또는 알파키모트립신(a-chymotrypsin)를 포함할 수 있다. 따라서, 본 발명의 상기 광어 연육 또는 연제품의 가수분해물은 펩신, 트립신, 및 알파-키모트립신으로 이루어진 하나 이상의 효소의 가수분해물일 수 있다. In the present invention, the hydrolyzate may be a hydrolyzate obtained by decomposing the flounder meat or soft product using a digestive enzyme, and the digestive enzymes include pepsin, trypsin, or alpha chymotrypsin ( a-chymotrypsin) may be included. Accordingly, the hydrolyzate of the flounder meat or soft product of the present invention may be a hydrolyzate of one or more enzymes consisting of pepsin, trypsin, and alpha-chymotrypsin.

본 발명의 일실시예에서는 펩신을 포함하는 인공위액과 트립신, 알파-키모트립신을 포함하는 인공장액을 이용하여, 광어 연육 또는 연제품(어묵)의 가수분해물을 제조하였으며, 상기 제조된 광어 연제품(어묵) 그리고 광어 연육에 인공소화액을 첨가하여 제조한 가수분해물과 이들 가수분해물에서 분리된 펩티드가 근육세포의 증식을 촉진하는 것을 확인하였다. In an embodiment of the present invention, a hydrolyzate of flounder meat or soft product (fish cake) was prepared by using artificial gastric juice containing pepsin and artificial intestinal liquid containing trypsin and alpha-chymotrypsin, and the prepared flounder soft product (Fish cake) And it was confirmed that a hydrolyzate prepared by adding an artificial digestive solution to flatfish tenderloin and a peptide isolated from the hydrolyzate promoted the proliferation of muscle cells.

본 발명에서, 상기 분획물은 광어 연육 또는 연제품(어묵)의 가수분해물을 크기배제크로마토그래피를 이용하여 분자량 사이즈별로 분획한 분획물일 수 있다. 본 발명의 일실시예에서는 상기 광어 연육의 가수분해물을 Sephadex G-25와 크기배제크로마토그래피를 이용하여, 분자량 사이즈별로 분획하여 총 3개의 분획물을 얻었으며, 상기 분획물 2(F2)에서 서열번호 1 내지 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 펩티드 3개를 분리하였다. In the present invention, the fraction may be a fraction obtained by fractionating the hydrolyzate of flatfish tenderloin or soft product (fish cake) by size by molecular weight using size exclusion chromatography. In an embodiment of the present invention, a total of three fractions were obtained by fractionating the hydrolyzate of the flounder meat by size by size using Sephadex G-25 and size exclusion chromatography, and SEQ ID NO: 1 in the fraction 2 (F2). Three peptides consisting of the amino acid sequence represented by 3 to were isolated.

본 발명에서 광어는 다른 이름으로 넙치라고 불리며, 넙치의 학명은 Paralichthys olivaceus이며, 몸길이는 60cm 가량이며, 모양은 위아래로 넓적한 긴 타원형이다. 입이 크고 이빨이 잘 발달되어 있으며, 눈은 몸의 왼쪽에 있다. 눈이 있는 쪽은 진한 황갈색 바탕에 흑색 및 백색 반점이 흩어져 있으나, 눈이 없는 쪽은 백색이다. 수심 10-200m 연안의 모래나 펄 지역에 서식하며, 2-6월에 산란한다. 우리나라 전 연안에 출현하며, 쿠릴 열도, 일본, 남중국해에 분포한다. 넙적한 체형 때문에 흔히 '광어'라고 부르며, 눈이 왼쪽에 있기 때문에 일반적으로 눈이 오른쪽에 있는 가자미류와 쉽게 구별된다. In the present invention, flatfish is called flounder by another name, and the scientific name of flounder is Paralichthys olivaceus , its body length is about 60cm, and its shape is a long oval that is wide up and down. The mouth is large and the teeth are well developed, and the eyes are on the left side of the body. The side with eyes has black and white spots scattered on a dark yellowish brown background, but the side without eyes is white. It lives in the sand or pearl area of the coast of 10-200m depth and spawns in February-June. It appears in all coasts of Korea, and is distributed in the Kuril Islands, Japan, and the South China Sea. It is commonly called'flour' because of its flat body shape, and because the eye is on the left, it is generally easily distinguished from the flatfish with the eye on the right.

본 발명의 일실시예에서는 광어를 마쇄 및 수세한 다음 정제 처리하여, 광어의 연육을 제조하였다. 구체적으로, 제주 광어의 두부와 내장, 껍질, 뼈 등을 제거하고 어육만을 얻은 후, chopper (M-12S, 한국후지공업, 한국)로 마쇄한 후, 냉수를 추가하여 수세하고, 탈수하였으며, 탈수된 어육을 stephan mixer(774027-01, UMC 5 Electronic Co. LTD, Germany)를 이용하여 4% 솔비톨 ((주) 엘지생활건강, 한국)과 0.2% 중합인산염을 혼합한 후, 정제처리하여 광어 연육을 제조하였다. In one embodiment of the present invention, flatfish was ground and washed with water and then purified to prepare soft meat of flatfish. Specifically, after removing the tofu, internal organs, skin, bones, etc. of Jeju flounder, only fish meat was obtained, ground with chopper (M-12S, Fuji Industries Korea, Korea), washed with cold water, dehydrated, and dehydrated. The resulting fish meat is mixed with 4% sorbitol (LG Household & Health Care, Korea) and 0.2% polymerized phosphate using a stephan mixer (774027-01, UMC 5 Electronic Co. LTD, Germany), and then purified to soften flatfish. Was prepared.

또한, 제조된 광어 연육을 10분간 stephan mixer에서 초벌갈이, 10분간 2% 식염 첨가 후 두번갈이, 10분간 2% 전분 첨가 후 세번갈이를 하였으며, 케이싱한 후, 가열하여 광어 연제품 보다 구체적으로 광어 어묵을 제조하였다. In addition, the prepared flatfish tenderloin was unglazed in a stephan mixer for 10 minutes, 2% salt was added for 10 minutes, and then twice, 2% starch was added for 10 minutes, and then three times were changed. To prepare a flatfish fish cake.

본 발명에서, 상기 식품 조성물은 근육증가 촉진용 뿐만 아니라, 운동수행능력 증강용 또는 근 피로 회복 촉진용도로도 사용될 수 있다. In the present invention, the food composition may be used not only for promoting muscle growth, but also for enhancing exercise performance or promoting muscle fatigue recovery.

본 발명의 식품 조성물은 환제, 분말, 과립, 침제, 정제, 캡슐 또는 액제 등의 형태를 포함할 수 있으며, 본 발명의 상기 펩티드들을 첨가할 수 있는 식품의 종류에는 별다른 제한이 없으며, 예를 들어 각종 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있다.The food composition of the present invention may include the form of pills, powders, granules, needles, tablets, capsules or liquids, and there is no particular limitation on the type of food to which the peptides of the present invention can be added, for example There are various beverages, gum, tea, vitamin complexes, and health supplements.

상기 식품 조성물에는 상기 광어의 가수분해물, 또는 이로부터 분리된 서열번호 1 내지 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드 이외에도 다른 성분을 추가할 수 있으며, 그 종류는 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 통상의 식품과 같이 여러 가지 생약 추출물, 식품학적으로 허용가능한 식품보조첨가제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.In addition to the hydrolyzate of flounder, or one or more peptides selected from the group consisting of amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 1 to 3 separated therefrom, other components may be added to the food composition, and the kind is not particularly limited. . For example, it may contain various herbal extracts, food additives or natural carbohydrates, and the like, as additional ingredients, as in ordinary foods, but is not limited thereto.

본 발명에서 용어, "식품보조첨가제"란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the term "food supplementary additive" refers to a component that can be added auxiliary to food, and is added to the manufacture of health functional foods of each formulation, and can be appropriately selected and used by those skilled in the art. Examples of food additives include various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavoring agents such as synthetic flavors and natural flavors, coloring agents and fillers, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloid thickeners. , pH regulators, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohol, carbonation agents used in carbonated beverages, etc. are included, but the types of the food additives of the present invention are not limited by the above examples.

상기 천연 탄수화물의 예는 포도당, 과당 등의 단당류; 말토스, 수크로스 등의 이당류; 및 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 다당류와, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이 있으며, 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴 등), 스테비아 추출물(레바우디오시드 Ａ, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.Examples of the natural carbohydrate include monosaccharides such as glucose and fructose; Disaccharides such as maltose and sucrose; And polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol. As flavoring agents other than those described above, natural flavoring agents (taumatin, etc.), stevia extract (rebaudioside A, glysir) Hydrine, etc.) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be used advantageously.

본 발명의 상기 식품 조성물은 광어의 연육 또는 광어의 연제품일 수 있다. 또한, 상기 식품 조성물에는 건강기능식품이 포함될 수 있는 바, 본 발명에서 상기 식품 조성물은 건강기능식품일 수 있다. 본 발명에서 사용된 용어 "건강기능식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 기능성이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어날 수 있다.The food composition of the present invention may be soft meat of flatfish or soft product of flatfish. In addition, the food composition may include a health functional food, and in the present invention, the food composition may be a health functional food. The term "health functional food" as used in the present invention refers to food manufactured and processed in the form of tablets, capsules, powders, granules, liquids and pills using raw materials or ingredients having useful functions for the human body. Here, the term "functionality" refers to obtaining useful effects for health purposes such as controlling nutrients or physiological effects on the structure and function of the human body. The health functional food of the present invention can be prepared by a method commonly used in the art, and at the time of manufacture, it can be prepared by adding raw materials and ingredients commonly added in the art. In addition, unlike general drugs, it has the advantage of not having side effects that may occur when taking drugs for a long time by using food as a raw material, and it can be excellent in portability.

유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품의 제조 시에 본 발명의 상기 펩티드는 원료 조성물 중 0.1 내지 50 중량%, 바람직하게는 1 내지 10 중량%의 양으로 첨가될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하로도 사용될 수 있다.The mixing amount of the active ingredient may be appropriately determined according to the purpose of use (prevention, health or therapeutic treatment). In general, in the manufacture of food, the peptide of the present invention may be added in an amount of 0.1 to 50% by weight, preferably 1 to 10% by weight of the raw material composition, but is not limited thereto. However, in the case of long-term intake for the purpose of health and hygiene or for the purpose of health control, the amount may be used even below the above range.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 연육, 연제품, 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.There is no particular limitation on the type of food. Examples of foods to which the above substances can be added include soft meat, soft products, meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gum, dairy products including ice cream, various soups, beverages. , Tea, drinks, alcoholic beverages, and vitamin complexes, and includes all health functional foods in the usual sense.

다른 하나의 양태로서, 본 발명은 광어의 가수분해물, 또는 이로부터 분리된 서열번호 1 내지 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하는, 근육 소모성 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공한다.In another aspect, the present invention comprises as an active ingredient at least one peptide selected from the group consisting of a hydrolyzate of flounder or an amino acid sequence represented by SEQ ID NOs: 1 to 3 isolated therefrom, treatment of muscle wasting disease Or it provides a pharmaceutical composition for prevention.

본 발명에서, 광어의 가수분해물, 서열번호 1 내지 3의 아미노산 서열로 이루어진 펩티드에 대한 설명은 전술한 바와 같다. In the present invention, description of the peptide consisting of the hydrolyzate of flatfish and the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 1 to 3 is as described above.

상기 근육 소모성 질환은 근감소증, 근위축증, 근육퇴행 위축 및 심위축증으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있다.The muscle wasting disease may be at least one selected from the group consisting of sarcopenia, muscle atrophy, muscle degeneration atrophy, and cardiac atrophy.

본 발명에서 근육 소모성 질환이란 근력 약화로 인해 발생할 수 있는 모든 질환을 의미하며, 예를 들어 근감소증, 근위축증, 근육퇴행 위축(muscle dystrophy), 또는 심위축증을 들 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the muscle wasting disease refers to all diseases that may occur due to muscle weakness, and examples thereof include sarcopenia, muscular atrophy, muscle dystrophy, or cardiac atrophy, but are not limited thereto.

본 발명에서 사용된 용어 "근력 약화" 란 한 개 또는 그 이상의 근육의 힘이 감소된 상태를 의미한다. 상기 근력 약화는 어느 한 근육이나, 몸의 한쪽, 상지나 하지 등에 국한될 수도 있고, 전신에 걸쳐 나타날 수도 있다. 또한 근피로나 근육통을 포함하는 주관적인 근력 약화 증상은 이학적 검진을 통해 객관적인 방법으로 정량화될 수 있다.The term "muscle weakness" as used herein refers to a state in which the strength of one or more muscles is reduced. The muscle weakness may be limited to any one muscle, one side of the body, upper limbs or lower limbs, or may appear throughout the entire body. In addition, symptoms of subjective muscle weakness, including muscle fatigue or muscle pain, can be quantified in an objective way through physical examination.

구체적으로, 본 발명의 근감소증이란, 노화에 따른 점진적인 골격 근육량의 감소를 의미하는 것으로서, 직접적으로 근력의 저하를 유발하며 그 결과 각종 신체기능의 감소 및 장애를 일으킬 수 있는 상태를 의미한다.Specifically, sarcopenia of the present invention refers to a gradual decrease in skeletal muscle mass according to aging, which directly causes a decrease in muscle strength, and as a result, refers to a condition in which various bodily functions can be reduced and disorders.

또한 근위축증은 사지의 근육이 거의 좌우대칭적으로 점점 위축되어 가는 것으로서, 척수에 있는 운동신경섬유 및 세포의 진행성 변성을 유발하여 근위축성 측삭경화증(Amyotrophic lateral sclerosis, ALS)과 척수성 진행성 근위축증(Spinal progressive muscular atrophy, SPMA)을 일으킬 수 있다.In addition, muscular atrophy is a result of gradual atrophy of the muscles of the limbs almost symmetrically, and causes progressive degeneration of motor nerve fibers and cells in the spinal cord, resulting in amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and spinal progressive muscular atrophy (Spinal). progressive muscular atrophy (SPMA).

근육퇴행 위축(muscle dystrophy)이란, 점진적인 근위축과 근쇠약이 나타나는 질환으로서, 병리학적으로 근육섬유의 괴사를 특징으로 하는 퇴행성 근육병증을 의미한다. 근세포막의 손상으로 근육섬유의 괴사와 퇴행과정을 거쳐 근력저하 및 위축이 발생하게 된다.Muscle dystrophy is a disease in which gradual muscle atrophy and muscle weakness appear, and refers to a degenerative myopathy characterized by necrosis of muscle fibers in pathology. Damage to the muscle cell membrane causes muscle weakness and atrophy through necrosis and degeneration of muscle fibers.

본 발명의 심위축증은 심장이 외부적이거나 내부적인 요인에 의해서 위축되어 가는 것으로서, 기아, 소모성질환, 노쇠했을 때 심근섬유가 마르고 가늘어져 지방조직의 감소를 유발하는 심장의 갈색위축 증세를 일으킬 수 있다.Cardiac atrophy of the present invention is that the heart is atrophy due to external or internal factors, and can cause brown atrophy of the heart that causes the reduction of adipose tissue due to hunger, wasting disease, and senile myocardial fibers dry and thin. have.

본 발명의 상기 광어의 가수분해물 또는 이로부터 분리된 펩티드들을 포함하는 약학 조성물은 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형체 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 이때, 상기 조성물에 포함되는 펩티드는 특별히 이에 제한되지 않으나, 조성물 총 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 99 중량%로, 바람직하게는 0.01 중량% 내지 50 중량%를 포함할 수 있다.The pharmaceutical composition comprising the hydrolyzate of flatfish or peptides isolated therefrom of the present invention may further include an appropriate carrier, excipient, or diluent commonly used in the preparation of pharmaceutical compositions. At this time, the peptide included in the composition is not particularly limited thereto, but may include 0.001% to 99% by weight, preferably 0.01% to 50% by weight, based on the total weight of the composition.

상기 약학 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 동결 건조제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. The pharmaceutical composition may have any one formulation selected from the group consisting of tablets, pills, powders, granules, capsules, suspensions, solutions, emulsions, syrups, sterilized aqueous solutions, non-aqueous solvents, freeze-driers, and suppositories. , May be oral or parenteral in various dosage forms. In the case of formulation, it is prepared using diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants that are usually used.

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and such solid preparations include at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose or lactose, gelatin. It can be prepared by mixing etc. Further, in addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc may also be used. Liquid preparations for oral administration include suspensions, liquid solutions, emulsions, syrups, etc.In addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents, various excipients such as wetting agents, sweetening agents, fragrances, and preservatives may be included. have. Preparations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, and suppositories. As the non-aqueous solvent and the suspension solvent, propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, and injectable ester such as ethyl oleate may be used. As a base for suppositories, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin paper, glycerogelatin, and the like may be used.

본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여할 수 있다. 본 발명에서 용어, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 질병의 종류, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention can be administered in a pharmaceutically effective amount. In the present invention, the term "pharmaceutically effective amount" means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level is the type and severity of the individual, age, sex, and disease. It can be determined by the type, activity of the drug, sensitivity to the drug, the time of administration, the route of administration and the rate of excretion, the duration of treatment, factors including drugs used concurrently, and other factors well known in the medical field. The composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or administered in combination with other therapeutic agents, and may be administered sequentially or simultaneously with a conventional therapeutic agent. And can be administered single or multiple. It is important to administer an amount capable of obtaining the maximum effect in a minimum amount without side effects in consideration of all the above factors, and can be easily determined by a person skilled in the art.

본 발명의 약학 조성물은 근육 소모성 질환 치료를 목적으로 하는 개체이면 특별히 한정되지 않고, 어떠한 것이든 적용가능하다. 예를 들면, 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 모르모트, 랫트, 마우스, 소, 양, 돼지, 염소 등과 같은 비인간동물, 인간, 조류 및 어류 등 어느 것이나 사용할 수 있으며, 상기 약학 조성물은 비 경구, 피하, 복강 내, 폐 내 및 비강 내로 투여될 수 있고, 국부적 치료를 위해, 필요하다면 병변 내 투여를 포함하는 적합한 방법에 의하여 투여될 수 있다. 본 발명의 상기 약학 조성물의 바람직한 투여량은 개체의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 예를 들어, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited as long as it is an individual for the purpose of treating a muscle wasting disease, and anything can be applied. For example, non-human animals such as monkeys, dogs, cats, rabbits, mormons, rats, mice, cows, sheep, pigs, goats, etc., humans, birds and fish can be used, and the pharmaceutical composition may be parenterally or subcutaneously , Intraperitoneal, intrapulmonary and intranasal administration, and for local treatment, if necessary, may be administered by any suitable method including intralesional administration. The preferred dosage of the pharmaceutical composition of the present invention varies depending on the condition and weight of the individual, the degree of disease, the drug form, the route and duration of administration, but may be appropriately selected by those skilled in the art. For example, it may be administered by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine dura mater, or cerebrovascular injection, but is not limited thereto.

적합한 총 1일 사용량은 올바른 의학적 판단범위 내에서 처치의에 의해 결정될 수 있으며, 일반적으로 0.001 내지 1000 mg/kg의 양, 바람직하게는 0.05 내지 200 mg/kg, 보다 바람직하게는 0.1 내지 100 mg/kg의 양을 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다.A suitable total daily use amount can be determined by the treating physician within the range of correct medical judgment, and generally in an amount of 0.001 to 1000 mg/kg, preferably 0.05 to 200 mg/kg, more preferably 0.1 to 100 mg/ The amount of kg can be divided and administered once to several times a day.

다른 하나의 양태로서, 본 발명은 광어를 마쇄 및 수세한 다음 정제 처리하는 단계를 포함하는, 광어의 가수분해물, 또는 이로부터 분리된 서열번호 1 내지 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하는, 근육 증가 촉진용 식품 조성물의 제조방법을 제공한다.In another aspect, the present invention is selected from the group consisting of a hydrolyzate of flounder, or an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 to 3 isolated therefrom, comprising the step of grinding and washing the flounder and then purifying. It provides a method for producing a food composition for promoting muscle growth, comprising one or more peptides as an active ingredient.

본 발명에서, 광어의 가수분해물, 서열번호 1 내지 3의 아미노산 서열로 이루어진 펩티드, 근육 증가 촉진에 대한 설명은 전술한 바와 같다. In the present invention, the description of the hydrolyzate of flatfish, the peptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 1 to 3, and the promotion of muscle growth are as described above.

본 발명의 일실시예에서는 광어를 마쇄 및 수세한 다음 정제 처리하여 광어의 연육을 제조하였으며, 상기 광어 연육을 식염과 혼합하여 광어의 연제품을 제조하였다. 전술한 바와 같이, 상기 광어 연육의 가수분해물의 분획물에서 상기 서열번호 1 내지 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 펩티드가 존재하는 것을 확인하였는 바, 광어 연육 또는 광어 연육을 식염과 혼합하여 제조된 광어 연제품에도 서열번호 1 내지 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 펩티드가 존재한다. 따라서, 본 발명에서는 광어를 마쇄 및 수세한 다음 정제 처리하는 단계에 의해, 광어의 가수분해물, 또는 이로부터 분리된 서열번호 1 내지 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하는, 근육 증가 촉진용 식품 조성물, 보다 구체적으로 광어의 연육 또는 광어 연제품의 제조방법을 제공할 수 있다. In one embodiment of the present invention, flatfish was ground and washed with water, and then purified to prepare flatfish tenderloin, and the flounder tenderloin was mixed with salt to prepare a rolled flatfish product. As described above, it was confirmed that the peptide consisting of the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 to 3 was present in the fraction of the hydrolyzate of the flounder meat, which was prepared by mixing the flatfish meat or flatfish meat with salt. Peptides consisting of amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 1 to 3 also exist in the product. Therefore, in the present invention, the hydrolyzate of flounder or one or more peptides selected from the group consisting of the amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 1 to 3 isolated therefrom are effective by grinding and washing the flounder and then purifying. It is possible to provide a food composition for promoting muscle growth, including as an ingredient, and more specifically, a method for producing a soft meat or soft flat fish product.

본 발명은 광어의 가수분해물, 또는 이로부터 분리된 서열번호 1 내지 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하는, 근육 증가 촉진용 식품 조성물에 관한 것으로, 광어 어묵의 가수분해물과 광어 연육의 가수분해물에서 분리된 펩티드가 근육세포 증가를 촉진하는 효과를 가지는 것을 확인하였다. 따라서, 상기 광어 어묵의 가수분해물과 광어 연육의 가수분해물의 분획물에서 분리된 펩티드들을 이용하여, 근육 증가 촉진용 식품 조성물과 근육 소모성 질환의 예방 또는 치료에 사용할 수 있다.The present invention relates to a food composition for promoting muscle growth, comprising as an active ingredient at least one peptide selected from the group consisting of a hydrolyzate of flounder or an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 to 3 separated therefrom, It was confirmed that the peptides isolated from the hydrolyzate of fish cake and the hydrolyzate of flatfish meat had an effect of promoting muscle cell growth. Therefore, by using the peptides separated from the hydrolyzate of the flounder fish cake and the fraction of the hydrolyzate of flatfish soft meat, it can be used in a food composition for promoting muscle growth and for preventing or treating muscle wasting diseases.

도 1은 광어 연육과 광어 연제품(어묵)을 나타낸다.
도 2는 광어 어묵의 근육세포 증식 활성을 나타낸다.
도 3은 Sephadex G-25컬럼을 이용한 광어 연육 가수분해물의 크기배제크로마토그래피을 나타낸 것이다.
도 4는 광어 연육 가수분해물의 분획물의 역상크로마토그램 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 분획물 (fraction) 2 유래 펩티드의 아미노산 서열, Ile-Val-Asp-Arg (IVDR)와 이의 분자량을 나타낸다.
도 6은 분획물(fraction) 2 펩티드의 아미노산 서열, Trp-Tyr-Lys (WYK)와 이의 분자량을 나타낸다.
도 7은 분획물(fraction) 2 펩티드의 아미노산 서열, Val-Ala-Ser-Val-Ile (VASVI)와 이의 분자량을 나타낸다.
도 8은 광어 연육 유래 펩티드의 근육 세포 증식 효과를 나타낸다.
도 9는 광어 연육 유래 펩티드의 세포독성을 나타낸다. 1 shows a flatfish soft meat and a soft flatfish product (fish cake).
Figure 2 shows the muscle cell proliferation activity of flatfish fish cake.
Figure 3 shows the size exclusion chromatography of the hydrolyzate of flatfish soft meat using Sephadex G-25 column.
Figure 4 shows the reverse phase chromatogram result of the fraction of the hydrolyzate of flatfish soft meat.
Figure 5 shows the amino acid sequence of the peptide derived from fraction 2, Ile-Val-Asp-Arg (IVDR) and its molecular weight.
6 shows the amino acid sequence of the fraction 2 peptide, Trp-Tyr-Lys (WYK) and its molecular weight.
7 shows the amino acid sequence of the fraction 2 peptide, Val-Ala-Ser-Val-Ile (VASVI) and molecular weight thereof.
8 shows the muscle cell proliferation effect of the peptide derived from flatfish meat.
Figure 9 shows the cytotoxicity of the flatfish meat-derived peptide.

이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 첨부한 도면을 참고로 하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다. Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings so that those of ordinary skill in the art can easily implement the present invention. However, the present invention may be implemented in various different forms and is not limited to the embodiments described herein.

실시예 1: 광어연육 및 어묵(연제품) 제조Example 1: Preparation of flatfish meat and fish cake (smoked product)

본 발명에 사용된 연육은 제주 광어의 두부와 내장, 껍질, 뼈 등을 제거하고 어육만을 얻은 후, chopper (M-12S, 한국후지공업, 한국)로 마쇄하였다. 이 후 냉수를 추가하여 수세하고 탈수하는 공정을 3회 반복하였다. 기타 불순물을 제거하고 탈수된 어육을 stephan mixer (774027-01, UMC 5 Electronic Co. LTD, Germany)를 이용하여 4% 솔비톨 ((주) 엘지생활건강, 한국)과 0.2% 중합인산염을 혼합한 후 정제처리하여 광어 연육을 제조하였으며, 500g씩 케이스에 보관하여 -70℃에서 보관하였다.After removing the tofu, internal organs, skin, bones, etc. of Jeju flatfish, the meat used in the present invention was ground with chopper (M-12S, Fuji Industries Korea, Korea). After that, the process of washing with water by adding cold water and dehydrating was repeated three times. After removing other impurities and mixing the dehydrated fish meat with 4% sorbitol (LG Household & Health Care, Korea) and 0.2% polymerized phosphate using a stephan mixer (774027-01, UMC 5 Electronic Co. LTD, Germany) The flatfish was purified by treatment, and 500g was stored in a case and stored at -70°C.

연제품(어묵)은 냉동된 연육을 4℃에서 저온해동 시킨 후, 10분간 stephan mixer에서 초벌갈이, 10분간 2% 식염 첨가 후 두번갈이, 10분간 2% 전분 첨가 후 세번갈이를 하였다. 이후 지름 2cm의 원통형 폴리에틸렌비닐에 주입하여 케이싱하고 24시간 동안 4℃에서 자연 응고시켰다. 이 후, 95℃ water bath에서 30분 동안 가열하고 4℃에서 저온냉각시켜 제조하였다. For soft products (fish cake), frozen soft meat was thawed at low temperature at 4°C, and then unglazed in a stephan mixer for 10 minutes, 2% salt was added for 10 minutes, then 2% salt was added, and 2% starch was added for 10 minutes and then three times. Then, it was injected into a cylindrical polyethylene vinyl having a diameter of 2 cm, casing, and naturally solidified at 4° C. for 24 hours. Thereafter, it was prepared by heating in a 95°C water bath for 30 minutes and cooling at a low temperature at 4°C.

대조군으로 사용된 닭 가슴살은 시장에서 닭 가슴살만 분리하여 판매하는 것을 구매하였고, 95℃에서 30분동안 가열 후, 어묵과 같은 인공소화를 진행하여 시료로 사용하였다.The chicken breast used as a control group was purchased from the market by separating only chicken breasts, and after heating at 95° C. for 30 minutes, artificial digestion such as fish cake was performed and used as a sample.

실시예 2: 인공소화액 제조 및 인공 소화액을 이용한 광어 연육 또는 광어 어묵의 가수분해물 제조Example 2: Preparation of artificial digestive solution and preparation of hydrolyzate of flatfish tenderloin or flatfish fish cake using artificial digestive solution

인공소화모델에 사용되는 인공위액과 인공장액은 Hur (2011)의 방법을 약간 변경하여 사용하였으며, 조성은 표 1에 나타내었다. 광어 연육 또는 어묵 500g에 인공위액 1L를 첨가 후, pH를 1.5로 조정하고, 37℃에서 4시간 동안 교반시켰다. 이 후 pH를 8로 조정 후, 인공장액 1L를 첨가하여, 37℃에서 4시간 동안 다시 교반하였고, 이 후 95℃에서 효소 불활성화 단계를 거쳐 잔사를 제거하여 광어 연육 또는 광어 어묵의 가수분해물을 제조하여 실험에 사용하였다. The artificial gastric juice and artificial intestinal fluid used in the artificial digestion model were used by slightly changing the method of Hur (2011), and the composition is shown in Table 1. After adding 1 L of artificial gastric juice to 500 g of flatfish tenderloin or fish cake, the pH was adjusted to 1.5, and stirred at 37°C for 4 hours. Thereafter, after adjusting the pH to 8, 1L of artificial intestinal liquid was added, and the mixture was stirred again at 37°C for 4 hours, and then the residue was removed through an enzyme inactivation step at 95°C to obtain hydrolyzate of flatfish tenderloin or flounder fish cake. It was prepared and used in the experiment.

인공소화액의 조성Composition of artificial digestive fluid 인공위액Artificial gastric juice 인공장액Artificial intestinal fluid Inorganic solutionInorganic solution 15.7 mL NaCl 175.3 g/L
3.0 mL NaH2PO4 88.8 g/L
9.2 mL KCl 89.6 g/L
18 mL CaCl2 ·2H2O 22.2 g/L
10 mL NH4Cl 30.6 g/L
6.5 mL HCl 3.7% g/g15.7 mL NaCl 175.3 g/L
3.0 mL NaH2PO4 88.8 g/L
9.2 mL KCl 89.6 g/L
18 mL CaCl2 2H2O 22.2 g/L
10 mL NH4Cl 30.6 g/L
6.5 mL HCl 3.7% g/g 40 mL NaCl 175.3 g/L
40 mL NaHCO3 84.7 g/L
10mL KH2PO4 8 g/L
6.3 mL KCl 89.6 g/L
10ml MgCl2 5g/L
180 ㎕ HCl 37% g/g40 mL NaCl 175.3 g/L
40 mL NaHCO3 84.7 g/L
10mL KH2PO4 8 g/L
6.3 mL KCl 89.6 g/L
10ml MgCl2 5g/L
180 μl HCl 37% g/g Organic solutionOrganic solution 10 mL glucose 65 g/L
10 mL glucuronic acid 2 g/L
10 mL glucosamine hydrochloride 33 g/L 10 mL glucose 65 g/L
10 mL glucuronic acid 2 g/L
10 mL glucosamine hydrochloride 33 g/L Enzyme and etcEnzyme and etc 2.5g Pepsin
907.6mL DW 2.5g Pepsin
907.6mL DW 9 ml CaCl2 · 2H2O2 22.2 g/L
8g Trypsin
2g a-Chymotrypsin
884.52mL DW9 ml CaCl2 2H2O2 22.2 g/L
8g Trypsin
2g a-Chymotrypsin
884.52mL DW

실시예 3: 펩티드 분리정제 방법Example 3: Peptide separation and purification method

Sephadex G-25를 이용하여 광어 연육의 가수분해물을 분자량 사이즈별로 분획하여 총 3개의 분획물을 얻었다. 그 중 fraction 2(분획물 2)를 이용하여 아미노산 시퀀싱을 하였고, 3개의 펩티드를 규명하였다.A total of three fractions were obtained by fractionating the hydrolyzate of flounder meat by molecular weight and size using Sephadex G-25. Among them, amino acid sequencing was performed using fraction 2 (fraction 2), and three peptides were identified.

실시예 4: 세포배양Example 4: Cell culture

마우스 유래 근아세포 C₂C₁₂ 세포주는 ATCC에서 분양 받아 사용하였으며 10% 소 태아 혈청 (Fetal bovine serum, FBS)과 1% penicillin을 포함하는 DMEM 배지를 이용하여 37°C를 유지하는 5% CO₂ 배양기에서 배양하였다.The mouse-derived myoblast C ₂ C ₁₂ cell line was pre-sold and used by ATCC, and 5% CO ₂ maintained at 37°C using DMEM medium containing 10% fetal bovine serum (FBS) and 1% penicillin. It was cultured in an incubator.

실시예 5: 분화유도Example 5: Differentiation induction

C₂C₁₂ 세포를 96 well plate에 3 x 10⁴ cells/mL로 분주하고 2일 동안 배양하여 plate에 80% 차지하였을 때 분화를 유도하였다. 분화 유도는 6일 동안 2일 간격으로 2% horse serum (HS) 및 1% penicillin이 포함된 DMEM 배지로 교체하면서 시행하였다.C ₂ C ₁₂ cells were aliquoted into a 96 well plate at 3 x 10 ⁴ cells/mL and cultured for 2 days to induce differentiation when 80% of the cells occupied the plate. Differentiation induction was performed by replacing with DMEM medium containing 2% horse serum (HS) and 1% penicillin every 2 days for 6 days.

실시예 6: 세포독성평가Example 6: Cytotoxicity evaluation

C₂C₁₂ 세포를 1 x 10⁵ cells/mL 농도로 하여 96 well plate에 분주하고 16시간 경과 후, 광어 연육의 가수분해물 유래 펩티드를 처리하고 24시간 동안 배양하였다. 세포 독성은 MTT 방법을 이용하여 실험하였다. MTT 용액 50 μL (2 mg/mL)를 첨가하여 4시간 동안 반응시켰다. 이후 상층액을 완전히 제거하고 DMSO를 가하여 침전물을 완전히 용해시킨 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.C ₂ C ₁₂ cells were dispensed into a 96 well plate at a concentration of 1 x 10 ⁵ cells/mL. After 16 hours, peptides derived from hydrolyzate of flounder meat were treated and incubated for 24 hours. Cytotoxicity was tested using the MTT method. 50 μL (2 mg/mL) of MTT solution was added and reacted for 4 hours. Thereafter, the supernatant was completely removed, DMSO was added to completely dissolve the precipitate, and the absorbance was measured at 540 nm.

실시예 7: 근육세포 증식능 평가Example 7: Evaluation of muscle cell proliferation ability

세포를 5 x 10⁴ cells/mL 농도로 하여 48 well plate에 분주하고 분화를 유도하였다. 그 후, 광어 어묵의 가수분해물 또는 광어 연육의 가수분해물 유래 펩티드를 분화 과정 동안 2일 간격으로 처리하였다. 세포 증식은 5-bromo-2’-deoxyuridine (BrdU)를 처리한 후 면역조직화학염색법 BrdU assay (Millipore, Billerica, MA, USA)를 통하여 확인하였다.Cells were aliquoted into 48 well plates at a concentration of 5 x 10 ⁴ cells/mL to induce differentiation. Thereafter, a peptide derived from a hydrolyzate of flatfish fish cake or a hydrolyzate of flatfish soft meat was treated at intervals of 2 days during the differentiation process. Cell proliferation was confirmed by treatment with 5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU) and then immunohistochemical staining BrdU assay (Millipore, Billerica, MA, USA).

실험예 1. 광어 어묵의 근력개선 효과(근육 세포 증식 효과)Experimental Example 1. Muscle strength improvement effect of flatfish fish cake (muscle cell proliferation effect)

근육세포 증식효과를 BrdU assay를 이용하여 측정하였고 그 결과는 도 2에 나타내었다. 양성대조군으로 닭 가슴살의 가수분해물을 사용하였고 두 시료 모두 농도가 높아짐에 따라 근육세포가 증식하는 것을 확인할 수 있었으나, 광어 어묵의 가수분해물을 처리한 군에서 500㎍/㎖에서는 유의적인 증식을 나타내지 않았다. 하지만 250㎍/㎖에서는 양성대조군으로 사용한 옥타코사놀과 유사한 근육세포 증식능을 나타내었다.The muscle cell proliferation effect was measured using BrdU assay, and the results are shown in FIG. 2. Chicken breast hydrolyzate was used as a positive control, and muscle cells proliferated as the concentration increased in both samples, but in the group treated with hydrolyzate of flounder fish cake, there was no significant proliferation at 500 μg/ml. . However, at 250µg/ml, the muscle cell proliferation ability was similar to that of octacosanol used as a positive control.

실험예 2. Sephadex G-25 컬럼을 이용한 광어 연육 가수분해물 유래 활성 펩티드의 분리Experimental Example 2. Isolation of active peptide derived from hydrolyzate of flatfish soft meat using Sephadex G-25 column

Sephadex G-25와 크기배제크로마토그래피를 이용하여, 광어 연육의 가수분해물을 분자량 사이즈별로 분획하여 총 3개의 분획물을 얻었으며, 도 3은 Sephadex G-25컬럼을 이용한 광어 연육 가수분해물의 크기배제크로마토그래피 결과를 나타낸 것이다. 각 분획물들의 역상크로마토그램은 도 4에 나타내었으며, 각 분획물들은 220nm와 280nm의 파장에서 측정하였다. 분획물 1(fraction 1, F1)은 매우 많은 피크들이 검출되어 분획물 내에 다량의 물질들이 함유된 것으로 보이며, 분획물 2(fraction 2, F2)는 주요 피크 1개외에 작은 피크가 검출되어 90% 이상의 순도를 나타내었고 분획물 3(fraction 3, F3)은 주요 피크 1개 외에 피크들이 검출되지 않아 95% 이상의 순도를 나타내었다. Using Sephadex G-25 and size exclusion chromatography, the hydrolyzate of flounder meat was fractionated by molecular weight and size to obtain a total of three fractions. FIG. 3 is a size exclusion chromatography of the hydrolyzate of flounder meat using Sephadex G-25 column. It shows the graphic result. The reverse phase chromatogram of each fraction is shown in FIG. 4, and each fraction was measured at a wavelength of 220 nm and 280 nm. Fraction 1 (F1) has a large number of peaks detected, and it appears that a large amount of substances are contained in the fraction, and fraction 2 (F2) has a purity of 90% or more as a small peak other than the main peak 1 is detected. And fraction 3 (fraction 3, F3) showed a purity of 95% or more because no peaks other than one main peak were detected.

다음으로, 분획물 중에서 F2 분획물을 이용하여 펩티드들의 분자량 및 아미노산 서열을 Q-TOF mass spectrometer (Micromass, Altrincham, UK) electrospray ionization (ESI)을 사용하여 측정하고 그 결과를 도 5 내지 7에 나타내었다. 도 5 내지 7은 분획물 2 유래 펩티드들의 아미노산 서열과 분자량을 나타낸다. 도 5를 참고하면, 분획물 2 유래 펩티드의 아미노산 서열은 Ile-Val-Asp-Arg (IVDR)(서열번호 1)이고, 분자량은 502.30 Da으로 나타났다. 도 6을 참고하면, 분획물 2 유래 펩티드의 아미노산 서열은 Trp-Tyr-Lys (WYK)(서열번호 2)이고, 분자량은 496.25 Da으로 나타났다. 또한, 도 7을 참고하면, 분획물 2 유래 펩티드의 아미노산 서열은 Val-Ala-Ser-Val-Ile (VASVI)(서열번호 3)이고, 분자량은 488.32 Da으로 나타났다. Next, the molecular weight and amino acid sequence of the peptides were measured using the F2 fraction among the fractions using a Q-TOF mass spectrometer (Micromass, Altrincham, UK) electrospray ionization (ESI), and the results are shown in FIGS. 5 to 7. 5 to 7 show the amino acid sequence and molecular weight of the peptides derived from Fraction 2. 5, the amino acid sequence of the peptide derived from Fraction 2 was Ile-Val-Asp-Arg (IVDR) (SEQ ID NO: 1), and the molecular weight was 502.30 Da. 6, the amino acid sequence of the peptide derived from Fraction 2 was Trp-Tyr-Lys (WYK) (SEQ ID NO: 2), and the molecular weight was 496.25 Da. In addition, referring to FIG. 7, the amino acid sequence of the peptide derived from Fraction 2 was Val-Ala-Ser-Val-Ile (VASVI) (SEQ ID NO: 3), and the molecular weight was 488.32 Da.

광어 연육의 가수분해물 유래 펩티드Peptide derived from hydrolyzate of flounder meat 순번turn 펩티드명Peptide name 아미노산 서열Amino acid sequence 분자량Molecular Weight 서열번호 1SEQ ID NO: 1 IVDRIVDR Isoleucine-Valine-Aspartic acid-ArginineIsoleucine-Valine-Aspartic acid-Arginine 502.30 502.30 서열번호 2SEQ ID NO: 2 WYKWYK Tryptophan-Tyrosine-LysineTryptophan-Tyrosine-Lysine 496.25 496.25 서열번호 3SEQ ID NO: 3 VASVIVASVI Valine-Alanine-Serine-Valine-IsoleucineValine-Alanine-Serine-Valine-Isoleucine 488.32 488.32

실험예 3. 광어 연육 유래 펩티드의 근육세포의 증식 효능Experimental Example 3. Efficacy of Proliferation of Muscle Cells of Peptides Derived from Flatfish Meat

광어 연육 가수분해물의 분획물 2에서 분리된 3가지 펩티드들의 근육세포 증식 효과를 실험예 1과 동일하게 확인하였다. 그 결과는 도 8에 나타내었으며, 광어 연육 가수분해물 유래 모든 펩티드에서 근육세포 증식 효과가 있는 것을 확인하였다. 그 중, IVDR 펩티드에서 가장 뛰어난 근육세포 증식 효능을 보였다.The muscle cell proliferation effect of the three peptides isolated from fraction 2 of the hydrolyzate of flatfish meat was confirmed in the same manner as in Experimental Example 1. The results are shown in Fig. 8, and it was confirmed that all the peptides derived from the hydrolyzate of flatfish tenderloin had a muscle cell proliferation effect. Among them, the IVDR peptide showed the most excellent muscle cell proliferation efficacy.

실험예 4. 광어 연육 유래 펩티드의 세포독성 평가Experimental Example 4. Evaluation of cytotoxicity of peptides derived from flounder meat

광어 연육 가수분해물의 분획물 2에서 분리된 3가지 펩티드들의 근육세포에서 독성 유무를 평가하고 도 9에 나타내었다. 상기 IVDR, WYK와 VASVI의 세포독성은 없었으며, WYK와 VASVI의 경우 200㎍/㎖ 처리하였을 때 유의적인 세포감소가 일어났으나, 정도가 미미하여 독성을 나타낸다고는 볼 수 없다.The presence or absence of toxicity in the muscle cells of the three peptides isolated from fraction 2 of the hydrolyzate of flatfish tenderloin was evaluated and shown in FIG. 9. There was no cytotoxicity of IVDR, WYK, and VASVI. In the case of WYK and VASVI, significant cell reduction occurred when 200 µg/ml was treated, but the degree of toxicity was insignificant, so it cannot be seen that they show toxicity.

이상에서 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리범위에 속하는 것이다.Although the preferred embodiments of the present invention have been described in detail above, the scope of the present invention is not limited thereto, and various modifications and improvements by those skilled in the art using the basic concept of the present invention defined in the following claims are also present. It belongs to the scope of rights of

<110> Jeju National University Industry-Academic Cooperation Foundation <120> Composition for promoting muscle growth comprising hydrolysate of flounder or peptide isolated therefrom <130> DP20190298 <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 4 <212> PRT <213> Paralichthys olivaceus <400> 1 Ile Val Asp Arg 1 <210> 2 <211> 3 <212> PRT <213> Paralichthys olivaceus <400> 2 Trp Tyr Lys 1 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Paralichthys olivaceus <400> 3 Val Ala Ser Val Ile 1 5 <110> Jeju National University Industry-Academic Cooperation Foundation <120> Composition for promoting muscle growth comprising hydrolysate of flounder or peptide isolated therefrom <130> DP20190298 <160> 3 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 4 <212> PRT <213> Paralichthys olivaceus <400> 1 Ile Val Asp Arg One <210> 2 <211> 3 <212> PRT <213> Paralichthys olivaceus <400> 2 Trp Tyr Lys One <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Paralichthys olivaceus <400> 3 Val Ala Ser Val Ile 1 5

Claims (6)

광어의 가수분해물, 또는 이로부터 분리된 서열번호 1 내지 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하며,
상기 가수분해물은 펩신, 트립신 및 알파-키모트립신으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 효소로 분해한 것인,
근육 증가 촉진용 식품 조성물.A hydrolyzate of flatfish, or one or more peptides selected from the group consisting of amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 1 to 3 isolated therefrom, as an active ingredient,
The hydrolyzate is digested with one or more enzymes selected from the group consisting of pepsin, trypsin and alpha-chymotrypsin,
Food composition for promoting muscle gain. 제1항에 있어서, 상기 광어의 가수분해물은 광어 연육 또는 연제품의 가수분해물인 것인, 식품 조성물.The food composition according to claim 1, wherein the hydrolyzate of the flatfish is a hydrolyzate of flatfish soft meat or a soft product. 제1항에 있어서, 상기 식품 조성물은 건강기능식품인 것인, 식품 조성물.The food composition according to claim 1, wherein the food composition is a health functional food. 광어의 가수분해물, 또는 이로부터 분리된 서열번호 1 내지 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하며,
상기 가수분해물은 펩신, 트립신 및 알파-키모트립신으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 효소로 분해한 것인,
근감소증, 근위축증, 근육퇴행 위축 및 심위축증으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 근육 소모성 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물.A hydrolyzate of flatfish, or one or more peptides selected from the group consisting of amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 1 to 3 isolated therefrom, as an active ingredient,
The hydrolyzate is digested with one or more enzymes selected from the group consisting of pepsin, trypsin and alpha-chymotrypsin,
A pharmaceutical composition for the treatment or prevention of one or more muscle wasting diseases selected from the group consisting of sarcopenia, muscular atrophy, muscle degeneration, atrophy, and cardiac atrophy. 삭제delete 광어를 마쇄 및 수세한 다음 정제 처리하는 단계 및
상기 광어를 펩신, 트립신 및 알파-키모트립신으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 효소로 분해하여 광어의 가수분해물을 제조하는 단계를 포함하는,
광어의 가수분해물, 또는 이로부터 분리된 서열번호 1 내지 3으로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 펩티드를 유효성분으로 포함하는, 근육 증가 촉진용 식품 조성물의 제조방법.Grinding and washing the flatfish and then purifying and
Comprising the step of producing a hydrolyzate of flounder by decomposing the flounder with one or more enzymes selected from the group consisting of pepsin, trypsin and alpha-chymotrypsin,
A method for producing a food composition for promoting muscle growth, comprising as an active ingredient at least one peptide selected from the group consisting of a hydrolyzate of flatfish or an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 to 3 isolated therefrom.

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