KR102175069B1 - Composition and process for freeze-drying of lipid nanoparticles for delivering an anionic drug - Google Patents

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Abstract

음이온성 약물 전달용 지질 나노입자(lipid nanoparticles, LNP)의 동결건조 조성물 및 방법이 제공된다.A lyophilized composition and method of lipid nanoparticles (LNP) for anionic drug delivery are provided.

Description

음이온성 약물 전달용 지질 나노입자의 동결건조 조성물 및 방법{Composition and process for freeze-drying of lipid nanoparticles for delivering an anionic drug}Composition and process for freeze-drying of lipid nanoparticles for delivering anionic drug

본 발명은 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자(lipid nanoparticles, LNP)의 동결건조 조성물 및 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는, 핵산 등의 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자의 동결건조를 위한 보호제(lyoprotectant) 조성물 및 이를 이용한 동결건조 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a lyophilized composition and method for anionic drug delivery lipid nanoparticles (lipid nanoparticles, LNP), and more particularly, a protective agent for lyophilization of lipid nanoparticles for anionic drug delivery such as nucleic acid ( lyoprotectant) composition and a freeze-drying method using the same.

의약품은 건조제제로 완제품화되는 것이 보통이다. 이를 위하여 감압건조, 분무건조, 동결건조 등의 통상적인 건조 방법을 이용할 수 있다. 이 중 동결건조 방법은 통상 물을 포함하는 제제를 제조하여 -80 ℃ 이하 온도로 급속 냉동시킨 후 0 ℃ 이하의 온도에서 건조하는 방법이다. 이와 같은 동결건조 시 보호제를 사용하는 경우가 많다.Medicines are usually finished as a desiccant. For this, conventional drying methods such as vacuum drying, spray drying, and freeze drying may be used. Among them, the freeze-drying method is a method of preparing a formulation containing water, rapidly freezing it at a temperature of -80°C or lower, and then drying it at a temperature of 0°C or lower. In such freeze drying, a protective agent is often used.

'의약품 첨가제 가이드라인(2015년 12월)'에 따르면, 의약품 제제는 일반적으로 첨가제를 가하여 제제의 안정성, 안전성 또는 균질성을 유지하면서 품질과 경제성을 높이고자 한다. 즉 첨가제는 의약품을 제제화할 때 안정성, 안전성 및 품질 등의 유용성을 높이기 위하여 추가 사용하는 물질을 말하며, 제제화할 때 이들 첨가제를 사용하여 의약품의 품질을 조절하며 일반적으로 다량 사용하는 경우가 많으므로 특별히 안전성도 확립되어야 한다. According to the'Pharmaceutical Additives Guideline (December 2015)', pharmaceutical formulations are generally added with additives to maintain the stability, safety, or homogeneity of the formulation, while improving quality and economy. In other words, additives refer to substances that are additionally used to increase the usefulness of stability, safety and quality when formulating drugs.These additives are used to control the quality of drugs when formulating drugs, and in general, they are often used in large quantities. Safety should also be established.

음이온성 약물, 특히 핵산은 유전자 치료에 있어서, 그 효능이 검증 되었다. 이에 따라 안전하고 효율적인 약물 전달기술이 오랫동안 연구되어 왔으며, 다양한 전달체 및 전달기술이 개발되어 왔다. 최근에는 지질 나노입자(lipid nanoparticles, LNP) 등을 이용하는 비바이러스성 전달체가 활발히 개발되는 중이다. 이러한 비바이러스성 전달체는 바이러스성 전달체에 비하여 효율성에서 뒤떨어지지만, 생체 내 안전성의 측면에서 부작용이 적고, 경제성 측면에서 생산 가격이 저렴하다는 장점을 가지고 있다. 그러나, 음이온성 약물의 생체 내, 생체 외로의 전달 효율, 치료 효과 검증 등에 대해서는 연구가 많이 이루어졌지만, 장기 안정성 등의 입증을 위한 동결건조 보호제에 대한 연구는 이루어지지 않고 있다. 최근에 mRNA의 백신으로서의 역할이 증대되면서 지질 나노입자들의 활용도가 증가되고 있지만, 동결건조에 대한 연구는 부족한 상황이다. 지질 나노입자의 동결건조 시 보호제로서 만니톨, 소비톨, 수크로스, 트레할로스와 같은 당 알코올류, 당류 등이 많이 사용되고 있으며, 현재 발표된 결과에 따르면 위의 첨가제를 여러 농도(0.1%~20% W/W)로 사용하고 있지만 안정화 효과는 부족한 상황이다. 특히 핵산 종류의 음이온성 약물은 동결 혹은 동결건조 시 구조적인 변화를 나타낼 수 있고, 비바이러스성 전달체의 구조 변화를 야기할 수 있다.Anionic drugs, especially nucleic acids, have been tested for efficacy in gene therapy. Accordingly, safe and efficient drug delivery technologies have been studied for a long time, and various delivery systems and delivery technologies have been developed. In recent years, non-viral delivery systems using lipid nanoparticles (LNP) and the like are being actively developed. Such a non-viral delivery system is inferior in efficiency compared to a viral delivery system, but has the advantage of having fewer side effects in terms of in vivo safety and low production cost in terms of economic efficiency. However, many studies have been conducted on the delivery efficiency of anionic drugs in vivo and in vitro, and verification of therapeutic effects, but no studies have been conducted on lyophilized protective agents to prove long-term stability. Recently, as the role of mRNA as a vaccine has increased, the utilization of lipid nanoparticles is increasing, but studies on lyophilization are insufficient. When lyophilizing lipid nanoparticles, sugar alcohols such as mannitol, sorbitol, sucrose, and trehalose, sugars, etc. are widely used as protective agents.According to the currently published results, the above additives are used in various concentrations (0.1%~20% W). /W), but the stabilization effect is insufficient. In particular, nucleic acid-type anionic drugs may exhibit structural changes upon freezing or lyophilization, and may cause structural changes in non-viral carriers.

이러한 배경하에서, 본 발명은 상기한 바와 같은 종래기술의 문제점들을 해결하기 위한 것으로서, 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자의 동결건조물을 대기압 상태에서 주사용 희석액 등으로 재건할 때 용이하게 재건할 수 있고, 동결건조 전과 동일한 분산도, 및 균질성 및 안정성을 유지할 수 있도록 하는, 동결건조 보호제 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다. Under this background, the present invention is to solve the problems of the prior art as described above, and can be easily reconstructed when the freeze-dried product of lipid nanoparticles for anionic drug delivery is reconstructed with a diluent for injection at atmospheric pressure. It is an object of the present invention to provide a lyophilized protective agent composition that allows maintaining the same degree of dispersion as before lyophilization, and homogeneity and stability.

본 발명의 다른 목적은 상기 보호제 조성물을 이용하여 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자를 동결건조하는 방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method of lyophilizing lipid nanoparticles for anionic drug delivery by using the protective agent composition.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 보호제 조성물을 포함하는 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자 동결건조물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a lipid nanoparticle lyophilisate for anionic drug delivery comprising the protective agent composition.

본 발명의 일 측면은 알부민을 포함하는, 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자의 동결건조 보호제 조성물에 관한 것이다One aspect of the present invention relates to a freeze-dried protective agent composition for anionic drug delivery lipid nanoparticles comprising albumin

구체예에서, 상기 조성물은 당 알코올 또는 당을 추가로 포함하는 것일 수 있다.In embodiments, the composition may be one further comprising a sugar alcohol or sugar.

구체예에서, 당 알코올 또는 당은 만니톨, 소비톨, 락토스, 수크로스 및 트레할로스로 구성된 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 것일 수 있다.In embodiments, the sugar alcohol or sugar may be one or more selected from the group consisting of mannitol, sorbitol, lactose, sucrose, and trehalose.

구체예에서, 알부민은 혈청 알부민, 예를 들어 소 혈청 알부민(bovine serum albumin, BSA)일 수 있다.In an embodiment, the albumin may be serum albumin, for example bovine serum albumin (BSA).

구체예에서, 당 알코올 또는 당:알부민의 중량비가 0.01~10:1, 특히 0.05~5:1일 수 있다.In embodiments, the weight ratio of sugar alcohol or sugar: albumin may be 0.01-10:1, particularly 0.05-5:1.

구체예에서, 음이온성 약물은 핵산일 수 있다.In embodiments, the anionic drug can be a nucleic acid.

구체예에서, 지질 나노입자는 음이온성 약물, 양이온성 지질, 및 양친성 블록 공중합체를 포함하며, 상기 음이온성 약물이 양이온성 지질과 정전기적 상호작용에 의해 복합체를 형성하고, 상기 복합체가 양친성 블록 공중합체의 나노입자 구조 내부에 봉입되어 있는 것일 수 있다. 특히, 지질 나노입자는 플라스미드 DNA, 핵 배치 신호 서열 또는 RGD 펩티드 서열을 포함하는 펩티드, 양이온성 지질, 및 양친성 블록 공중합체를 포함하며, 상기 플라스미드 DNA는 펩티드와 결합하여 상기 양이온성 지질과 정전기적 상호작용에 의해 복합체를 형성하고, 상기 복합체가 양친성 블록 공중합체의 나노입자 구조 내부에 봉입되어 있는 것일 수 있다.In an embodiment, the lipid nanoparticle includes an anionic drug, a cationic lipid, and an amphiphilic block copolymer, wherein the anionic drug forms a complex by electrostatic interaction with the cationic lipid, and the complex It may be enclosed in the nanoparticle structure of the block copolymer. In particular, the lipid nanoparticle includes a plasmid DNA, a peptide comprising a nuclear constellation signal sequence or an RGD peptide sequence, a cationic lipid, and an amphiphilic block copolymer, and the plasmid DNA binds to the peptide to prevent electrostatic activity with the cationic lipid. The complex may be formed by a miraculous interaction, and the complex may be encapsulated within the nanoparticle structure of the amphiphilic block copolymer.

본 발명의 다른 측면은 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자 수용액에 상기 보호제 조성물을 가하여 동결건조를 수행하는 단계를 포함하는, 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자를 동결건조하는 방법에 관한 것이다.Another aspect of the present invention relates to a method of lyophilizing lipid nanoparticles for anionic drug delivery, comprising the step of performing lyophilization by adding the protective agent composition to an aqueous solution of lipid nanoparticles for anionic drug delivery.

구체예에서, 음이온성 약물:알부민의 중량비가 1:30~500이 되도록 보호제 조성물을 가하는 것이 바람직하다.In a specific embodiment, it is preferable to add the protective agent composition so that the weight ratio of the anionic drug: albumin is 1:30 to 500.

본 발명의 또 다른 측면은 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자 및 상기 보호제 조성물을 포함하는, 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자의 동결건조물에 관한 것이다.Another aspect of the present invention relates to a lyophilisate of lipid nanoparticles for anionic drug delivery, including the lipid nanoparticles for anionic drug delivery and the protective agent composition.

구체예에서, 음이온성 약물:알부민의 중량비가 1:30~500인 것이 바람직하다.In a specific embodiment, it is preferable that the weight ratio of the anionic drug: albumin is 1:30 to 500.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명자들은 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자의 안정성, 안전성 및 균질성을 유지하기 위하여 동결건조 시 각종 보호제에 의한 영향을 시험하였다.The present inventors tested the effects of various protective agents upon lyophilization in order to maintain the stability, safety and homogeneity of the lipid nanoparticles for anionic drug delivery.

본 발명의 적용대상이 되는 제제는 음이온성 약물, 예를 들어 핵산, 특히, siRNA, mRNA, miRNA, pDNA, 보다 특히 pDNA를 전달하기 위해 사용되는 지질 나노입자이다. "지질　나노입자"는 하나 이상의　지질, 예를 들어, 양이온성　지질, 비-양이온성　지질, PEG-변형　지질 등을 포함하는 전달체를 가리킨다.Agents to which the present invention is applied are lipid nanoparticles used to deliver anionic drugs such as nucleic acids, in particular siRNA, mRNA, miRNA, pDNA, and more particularly pDNA. "Lipid 　 nanoparticles" refers to a carrier comprising one or more 　 lipids, for example, cationic 　 lipids, non-cationic 　 lipids, PEG-modified 　 lipids, and the like.

구체예에서, 지질 나노입자는 양이온성 지질 나노입자일 수 있다.In an embodiment, the lipid nanoparticle can be a cationic lipid nanoparticle.

예를 들어, 한국특허 공개번호 제2010-0076905호는 유효성분으로서 음이온성 약물; 양이온성 지질; 및 양친성 블록 공중합체를 포함하며, 상기 음이온성 약물은 상기 양이온성 지질과 복합체를 형성하고, 상기 복합체가 양친성 블록 공중합체의 미셀 구조 내부에 봉입되어 있는 것을 특징으로 하는 음이온성 약물 함유 약제학적 조성물을 제공하고 있다. 또한, 한국특허 출원번호 제10-2017-0115341호는 유효성분으로서 플라스미드 DNA; 핵 배치 신호(NLS; Nuclear Localization Signal) 서열 또는 RGD 펩티드 서열을 포함하는 펩티드, 양이온성 화합물(양이온성 지질 또는 양이온성 고분자); 및 양친성 블록 공중합체를 포함하며, 상기 플라스미드 DNA는 펩티드와 결합하여 상기 양이온성 화합물과 정전기적 상호작용에 의해 복합체를 형성하고, 상기 복합체가 양친성 블록 공중합체의 나노입자 구조 내부에 봉입되어 있는 것을 특징으로 하는 플라스미드 DNA 함유 약제학적 조성물을 제공하고 있다. 이들 조성물은 본 발명의 적용대상 제제로 할 수 있는 바, 상기 한국특허의 내용은 그 전체로 본 명세서에 참조로서 인용된다.For example, Korean Patent Publication No. 2010-0076905 discloses anionic drugs as active ingredients; Cationic lipids; And an amphiphilic block copolymer, wherein the anionic drug forms a complex with the cationic lipid, and the complex is enclosed in the micelle structure of the amphiphilic block copolymer. It provides a chemical composition. In addition, Korean Patent Application No. 10-2017-0115341 discloses plasmid DNA as an active ingredient; Peptides, cationic compounds (cationic lipids or cationic polymers) comprising a Nuclear Localization Signal (NLS) sequence or an RGD peptide sequence; And an amphiphilic block copolymer, wherein the plasmid DNA binds to a peptide to form a complex by electrostatic interaction with the cationic compound, and the complex is encapsulated inside the nanoparticle structure of the amphiphilic block copolymer. It provides a plasmid DNA-containing pharmaceutical composition, characterized in that. These compositions can be used as formulations for application of the present invention, and the contents of the Korean patent are incorporated herein by reference in their entirety.

음이온성 약물은 최종 제조되는 전체 조성물의 중량을 기준으로, 0.001 내지 10 중량%, 구체적으로는 0.01 내지 5 중량%로 포함되는 것이 좋다. 상기 음이온성 약물의 함량이 0.001 중량% 미만이면 약물에 비하여 사용되는 전달체의 양이 너무 많아서 전달체에 의한 부작용이 있을 수 있고, 10 중량%을 초과하면, 나노입자의 크기가 너무 커져 나노입자의 안정성이 저하되고 필터 멸균시 손실율이 커질 우려가 있다.The anionic drug is preferably contained in 0.001 to 10% by weight, specifically 0.01 to 5% by weight, based on the weight of the final composition. If the content of the anionic drug is less than 0.001% by weight, there may be side effects due to the delivery system because the amount of the delivery system used is too large compared to the drug, and when it exceeds 10% by weight, the size of the nanoparticles becomes too large and the stability of the nanoparticles There is a fear that this decreases and the loss rate increases during filter sterilization.

양이온성 지질은, 예를 들어, 이에 제한되는 것은 아니나, N,N-디올레일-N,N-디메틸암모늄클로라이드(DODAC), N,N-디스테아릴-N,N-디메틸암모늄브로마이드(DDAB), N-(1-(2,3-디올레오일옥시)프로필-N,N,N-트리메틸암모늄클로라이드(DOTAP), N,N-디메틸-(2,3-디올레오일옥시)프로필아민(DODMA), N,N,N-트리메틸-(2,3-디올레오일옥시)프로필아민(DOTMA), 1,2-디아실-3-트리메틸암모늄-프로판(TAP), 1,2-디아실-3-디메틸암모늄-프로판(DAP), 3베타-[N-(N',N',N'-트리메틸아미노에탄)카바모일]콜레스테롤(TC-콜레스테롤), 3베타-[N-(N',N'-디메틸아미노에탄)카바모일]콜레스테롤(DC-콜레스테롤), 3베타-[N-(N'-모노메틸아미노에탄)카바모일]콜레스테롤(MC-콜레스테롤), 3베타-[N-(아미노에탄)카바모일]콜레스테롤(AC-콜레스테롤), 콜레스테릴옥시프로판-1-아민(COPA), N-(N'-아미노에탄)카바모일프로파노익 토코페롤(AC-토코페롤) 및 N-(N'-메틸아미노에탄)카바모일프로파노익 토코페롤(MC-토코페롤)로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 둘 이상의 조합일 수 있다. 보다 바람직한 일 양태에서, 상기 양이온성 지질은 3베타-[N-(N',N',N'-트리메틸아미노에탄)카바모일]콜레스테롤(TC-콜레스테롤), 3베타[N-(N',N'- 디메틸아미노에탄)카바모일]콜레스테롤(DC-콜레스테롤), 3베타[N-(N'- 모노메틸아미노에탄)카바모일]콜레스테롤(MC-콜레스테롤), 3베타[N-(아미노에탄)카바모일]콜레스테롤(AC-콜레스테롤), N-(1-(2,3-디올레오일옥시) 프로필-N,N,N-트리메틸암모늄클로라이드(DOTAP), N,N-디메틸-(2,3-디올레오일옥시)프로필아민(DODMA), 및 N,N,N-트리메틸-(2,3-디올레오일옥시)프로필아민(DOTMA)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 것일 수 있다. Cationic lipids include, for example, but are not limited to, N,N-dioleyyl-N,N-dimethylammonium chloride (DODAC), N,N-distearyl-N,N-dimethylammonium bromide (DDAB ), N-(1-(2,3-dioleoyloxy)propyl-N,N,N-trimethylammonium chloride (DOTAP), N,N-dimethyl-(2,3-dioleoyloxy)propylamine (DODMA), N,N,N-trimethyl-(2,3-dioleoyloxy)propylamine (DOTMA), 1,2-diacyl-3-trimethylammonium-propane (TAP), 1,2-dia Sil-3-dimethylammonium-propane (DAP), 3beta-[N-(N',N',N'-trimethylaminoethane)carbamoyl]cholesterol (TC-cholesterol), 3beta-[N-(N ',N'-dimethylaminoethane)carbamoyl] cholesterol (DC-cholesterol), 3beta-[N-(N'-monomethylaminoethane)carbamoyl] cholesterol (MC-cholesterol), 3beta-[N- (Aminoethane) carbamoyl] cholesterol (AC-cholesterol), cholesteryloxypropan-1-amine (COPA), N-(N'-aminoethane) carbamoylpropanoic tocopherol (AC-tocopherol) and N- It may be one or a combination of two or more selected from the group consisting of (N'-methylaminoethane)carbamoylpropanoic tocopherol (MC-tocopherol) In a more preferred embodiment, the cationic lipid is 3beta-[N- (N',N',N'-trimethylaminoethane)carbamoyl]cholesterol (TC-cholesterol), 3beta[N-(N',N'-dimethylaminoethane)carbamoyl]cholesterol (DC-cholesterol), 3beta[N-(N'-monomethylaminoethane)carbamoyl]cholesterol (MC-cholesterol), 3beta[N-(aminoethane)carbamoyl]cholesterol (AC-cholesterol), N-(1-(2) ,3-dioleoyloxy) propyl-N,N,N-trimethylammonium chloride (DOTAP), N,N-dimethyl-(2,3-dioleoyloxy)propylamine (DODMA), and N,N, It may be one or more selected from the group consisting of N-trimethyl-(2,3-dioleoyloxy)propylamine (DOTMA).

또한, 상기 양이온성 지질은 분자 당 수용액상에서 양이온을 나타낼 수 있는 작용기가 여러 개인 지질 종류일 수 있다. 구체적으로, N,N-디올레일-N,N-디메틸암모늄클로라이드 (DODAC), N,N-디스테아릴-N,N-디메틸암모늄브로마이드 (DDAB), 1,2-디아실-3-트리메틸암모늄-프로판 (TAP), 1,2-디아실-3-디메틸암모늄-프로판 (DAP) 으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 것일 수 있다.In addition, the cationic lipid may be a type of lipid having several functional groups capable of representing a cation in an aqueous solution per molecule. Specifically, N,N-dioleyyl-N,N-dimethylammonium chloride (DODAC), N,N-distearyl-N,N-dimethylammonium bromide (DDAB), 1,2-diacyl-3-trimethyl It may be one or more selected from the group consisting of ammonium-propane (TAP), 1,2-diacy-3-dimethylammonium-propane (DAP).

또한, 상기 양이온성 지질은 1 내지 12 개의 올리고알킬렌아민 (oligoalkyleneamine)의 아민 작용기에 탄소수 11 내지 25 개의 포화 또는 불포화 탄화수소를 결합시킨 양이온성 지질일 수도 있으며, 상기 양이온성 지질은 다음의 화학식 1로 표현될 수 있다.In addition, the cationic lipid may be a cationic lipid in which a saturated or unsaturated hydrocarbon having 11 to 25 carbon atoms is bonded to an amine functional group of 1 to 12 oligoalkyleneamines, and the cationic lipid is the following Formula 1 It can be expressed as

[화학식 1] [Formula 1]

Figure 112017111612217-pat00001
Figure 112017111612217-pat00001

상기 식에서,In the above formula,

n과 m 및 l은 각각 0 내지 12이되, 1 ≤ n + m + l ≤ 12이며, a와 b 및 c는 각각 1 내지 6이며, R1, R2 및 R3는 각각 독립적으로 수소 또는 탄소수 11 내지 25개의 포화 및 불포화 탄화수소로서, R1, R2 및 R3 중 적어도 하나는 탄소수 11 내지 25개의 포화 및 불포화 탄화수소이다.n and m and l are each 0 to 12, but 1 ≤ n + m + l ≤ 12, a and b and c are each 1 to 6, and R1, R2 and R3 are each independently hydrogen or 11 to 25 carbon atoms As the saturated and unsaturated hydrocarbons, at least one of R1, R2 and R3 is a saturated and unsaturated hydrocarbon having 11 to 25 carbon atoms.

바람직하게는, n과 m 및 l은 독립적으로 0 내지 7이며, 1 ≤ n+m+l ≤ 7일 수 있다.Preferably, n, m, and l are independently 0 to 7, and may be 1≦n+m+l≦7.

바람직하게는, a와 b 및 c는 2 내지 4일 수 있다.Preferably, a and b and c may be 2 to 4.

바람직하게는, R1, R2 및 R3는 각각 독립적으로, 라우릴 (lauryl), 미리스틸 (myristyl), 팔미틸 (palmityl), 스테아릴 (stearyl), 아라키딜 (arachidyl), 베헨닐 (behenyl), 리그노세릴 (lignoceryl), 세로틸 (cerotyl), 미리스트올레일 (myristoleyl), 팔미트올레일 (palmitoleyl), 사피에닐 (sapienyl), 올레일 (oleyl), 리놀레일 (linoleyl), 아라키도닐 (arachidonyl), 에이코사펜타에닐 (eicosapentaenyl), 에루실 (erucyl), 도코사헥사에닐 (docosahexaenyl), 및 세로틸 (cerotyl)로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있다. Preferably, R1, R2 and R3 are each independently, lauryl, myristyl, palmityl, stearyl, arachidyl, behenyl, Lignoceryl, cerotyl, myristoleyl, palmitoleyl, sapienyl, oleyl, linoleyl, arachido Neil (arachidonyl), eicosapentaenyl (eicosapentaenyl), erucyl (erucyl), docosahexaenyl (docosahexaenyl), and may be selected from the group consisting of serotyl (cerotyl).

상기 양이온성 지질의 구체적인 예는 모노올레오일트리에틸렌테트라마이드, 디올레오일트리에틸렌테트라마이드, 트리올레오일트리에틸렌테트라마이드, 테트라올레오일트리에틸렌테트라마이드 모노리놀레오일테트라에틸렌 펜타마이드, 디리놀레오일테트라에틸렌펜타마이드, 트리리놀레오일 테트라에틸렌펜타마이드, 테트라리놀레오일테트라에틸렌펜타마이드, 펜타 리놀레오일테트라에틸렌펜타마이드, 모노미리스톨레오일디에틸렌트리 아마이드, 디미리스톨레오일디에틸렌트리아마이드, 모노올레오일펜타에틸렌 헥사마이드, 디올레오일펜타에틸렌헥사마이드, 트리올레오일펜타에틸렌 헥사마이드, 테트라올레오일펜타에틸렌헥사마이드, 펜타올레오일펜타에틸렌 헥사마이드 및 헥사올레오일펜타에틸렌헥사마이드로 구성된 그룹으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있다.Specific examples of the cationic lipid include monooleoyltriethylenetetramide, dioleoyltriethylenetetramide, trioleoyltriethylenetetramide, tetraoleoyltriethylenetetramide monolinoleoyltetraethylene pentamide, dilinol Reoyltetraethylenepentamide, trilinoleoyl tetraethylenepentamide, tetralinoleoyltetraethylenepentamide, pentalinoleoyltetraethylenepentamide, monomyristoleoyldiethylenetriamide, dimyristoleoyldiethylenetri Amide, monooleoylpentaethylene hexamide, dioleoylpentaethylenehexamide, trioleoylpentaethylene hexamide, tetraoleoylpentaethylene hexamide, pentaoleoylpentaethylene hexamide and hexaoleoylpentaethylene hexamide It may be one or more selected from the configured group.

구체예에서, 상기 양친성 블록 공중합체는, 친수성 A 블록 및 소수성 B 블록을 포함하는 A-B 형 블록 공중합체일 수 있다. 상기 A-B 형 블록 공중합체는, 수상에서, 소수성 B 블록이 코어(내벽)를 형성하고 친수성 A 블록이 쉘(외벽)을 형성하는 코어-쉘 타입의 고분자 전달체의 체내 분포를 조절하거나 상기 전달체가 세포 내로 전달되는 효율을 높일 수 있다. 상기 작용기나 리간드는 단당류, 다당류, 비타민, 펩티드, 단백질 및 세포 표면 수용체에 대한 항체로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 작용기나 리간드는 아니사마이드(anisamide), 비타민 B9(엽산), 비타민 B12, 비타민A, 갈락토오스, 락토오스, 만노오스, 히알루론산, RGD 펩티드, NGR 펩티드, 트랜스페린, 트랜스페린 수용체에 대한 항체 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.In a specific embodiment, the amphiphilic block copolymer may be an A-B type block copolymer including a hydrophilic A block and a hydrophobic B block. In the AB-type block copolymer, in the aqueous phase, the hydrophobic B block forms a core (inner wall) and the hydrophilic A block forms a shell (outer wall). It is possible to increase the efficiency delivered to the inside. The functional group or ligand may be at least one selected from the group consisting of monosaccharides, polysaccharides, vitamins, peptides, proteins, and antibodies against cell surface receptors. More specifically, the functional groups or ligands are anisamide, vitamin B9 (folic acid), vitamin B12, vitamin A, galactose, lactose, mannose, hyaluronic acid, RGD peptide, NGR peptide, transferrin, antibodies against transferrin receptors. It may be one or more selected from the group consisting of.

상기 소수성 B 블록은, 생체적합성 생분해성 고분자로서, 일실시예에서, 폴리에스테르, 폴리언하이드라이드, 폴리아미노산, 폴리오르소에스테르 및 폴리포스파진으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있다. 보다 구체적으로, 상기 소수성 B 블록은 폴리락타이드, 폴리글리콜라이드, 폴리카프로락톤, 폴리디옥산-2-온, 폴리락타이드와 글리콜라이드의 공중합체, 폴리락타이드와 폴리디옥산-2-온의 공중합체, 폴리락타이드와 폴리카프로락톤의 공중합체 및 폴리글리콜라이드와 폴리카프로락톤의 공중합체로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있다. 또 다른 일실시예에서, 상기 소수성 B 블록은 수평균분자량이 50 내지 50,000달톤, 보다 구체적으로는 200 내지 20,000달톤, 보다 더 구체적으로는 1,000 내지 5,000달톤인 것일 수 있다. 또한, 소수성 블록의 소수성을 증가시켜 나노입자의 안정성을 향상시키기 위하여 토코페롤, 콜레스테롤, 또는 탄소수 10 내지 24개의 지방산을 소수성 블록 말단의 히드록시기에 화학적으로 결합시킬 수 있다. The hydrophobic B block is a biocompatible biodegradable polymer, and in one embodiment, may be at least one selected from the group consisting of polyester, polyanhydride, polyamino acid, polyorthoester, and polyphosphazine. More specifically, the hydrophobic B block is polylactide, polyglycolide, polycaprolactone, polydioxan-2-one, a copolymer of polylactide and glycolide, polylactide and polydioxan-2-one It may be at least one selected from the group consisting of a copolymer of, a copolymer of polylactide and polycaprolactone, and a copolymer of polyglycolide and polycaprolactone. In another embodiment, the hydrophobic B block may have a number average molecular weight of 50 to 50,000 Daltons, more specifically 200 to 20,000 Daltons, and even more specifically 1,000 to 5,000 Daltons. In addition, tocopherol, cholesterol, or a fatty acid having 10 to 24 carbon atoms may be chemically bonded to a hydroxyl group at the terminal of the hydrophobic block in order to increase the stability of the nanoparticles by increasing the hydrophobicity of the hydrophobic block.

상기 친수성 블록(A)과 소수성 블록(B)을 포함하는 양친성 블록 공중합체의 함량은, 조성물 전체 건조중량을 기준으로, 40 내지 99.98 중량%이며, 구체적으로는 85 내지 99.8중량%, 더 구체적으로는 90 내지 99.8 중량%인 것이 좋다. 상기 양친성 블록 공중합체의 함량이 40 중량% 미만이면 나노입자의 크기가 너무 커져 나노입자의 안정성이 저하되고 필터 멸균시 손실율이 커질 우려가 있고, 함량이 99.98 중량%를 초과하면 함입할 수 있는 음이온성 약물의 함량이 너무 적어지게 된다.The content of the amphiphilic block copolymer including the hydrophilic block (A) and the hydrophobic block (B) is 40 to 99.98% by weight, specifically 85 to 99.8% by weight, more specifically based on the total dry weight of the composition. It is preferably 90 to 99.8% by weight. If the content of the amphiphilic block copolymer is less than 40% by weight, the size of the nanoparticles becomes too large to reduce the stability of the nanoparticles and increase the loss rate during filter sterilization. If the content exceeds 99.98% by weight, it may be incorporated. The content of anionic drugs becomes too low.

나아가, 상기 양친성 블록 공중합체에 있어서, 친수성 블록(A)과 소수성 블록(B)의 조성비는, 공중합체 중량을 기준으로, 친수성 블록(A)이 40 내지 70 중량%, 구체적으로는 50 내지 60 중량% 범위일 수 있다. 친수성 블록(A)의 비율이 40 중량% 미만이면 고분자의 물에 대한 용해도가 낮아서 나노입자를 형성하기 어렵기 때문에, 공중합체가 나노입자를 형성하기에 충분한 물에 대한 용해도를 갖기 위하여 친수성 블록(A)의 비율이 40 중량% 이상인 것이 좋은 한편, 70중량%를 초과하면 친수성이 너무 높아 고분자 나노입자의 안정성이 낮아져서 음이온성 약물/양이온성 화합물 복합체의 가용화 조성물로 사용하기 어려우므로, 나노입자 안정성을 고려하여 친수성 블록(A)의 비율이 70 중량% 이하인 것이 좋다.Further, in the amphiphilic block copolymer, the composition ratio of the hydrophilic block (A) and the hydrophobic block (B) is, based on the weight of the copolymer, the hydrophilic block (A) is 40 to 70% by weight, specifically 50 to It may be in the range of 60% by weight. If the proportion of the hydrophilic block (A) is less than 40% by weight, it is difficult to form nanoparticles because the polymer has low solubility in water, so that the copolymer has sufficient solubility in water to form nanoparticles. On the other hand, if the ratio of A) is 40% by weight or more, it is preferable to use it as a solubilizing composition for anionic drug/cationic compound complex because the hydrophilicity is too high and the stability of the polymer nanoparticles is low when it exceeds 70% by weight. In consideration of, it is preferable that the proportion of the hydrophilic block (A) is 70% by weight or less.

구체예에서, 양이온성 지질 나노입자는 융합성 지질을 추가로 포함할 수 있다. 상기 융합성 지질은 음이온성 약물, 특히 핵산(예: 플라스미드 DNA)과 양이온성 지질의 복합체에 혼합시, 소수성 상호작용으로 결합하여 핵산, 양이온성 지질 및 융합성 지질의 복합체를 형성하고, 상기 융합성 지질을 포함하는 복합체는 양친성 블록 공중합체의 나노입자 구조 내부에 봉입된다. 일실시예에서, 상기 융합성 지질은 인지질, 콜레스테롤, 및 토코페롤로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 둘 이상의 조합일 수 있다. In an embodiment, the cationic lipid nanoparticle may further comprise a fusable lipid. When the fusible lipid is mixed with an anionic drug, in particular a complex of a nucleic acid (eg, plasmid DNA) and a cationic lipid, it binds through a hydrophobic interaction to form a complex of a nucleic acid, a cationic lipid, and a fusible lipid, and the fusion The complex containing the sexual lipid is enclosed within the nanoparticle structure of the amphiphilic block copolymer. In one embodiment, the confluent lipid may be one or a combination of two or more selected from the group consisting of phospholipids, cholesterol, and tocopherol.

구체적으로, 상기 인지질은 포스파티딜에탄올아민(phosphatidylethanolamin, PE), 포스파티딜콜린(phosphatidylcholine, PC) 및 포스파티딘산(phosphatidic acid)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 상기 포스파티딜에탄올아민(phosphatidylethanolamin, PE), 포스파티딜콜린(phosphatidylcholine, PC) 및 포스파티딘산은 하나 또는 2 개의 C10-24 지방산과 결합된 형태일 수 있다. 상기 콜레스테롤 및 토코페롤에는 콜레스테롤 및 토코페롤의 각 유사체, 유도체, 및 대사체가 포함된다.Specifically, the phospholipid may be at least one selected from the group consisting of phosphatidylethanolamine (PE), phosphatidylcholine (PC), and phosphatidic acid. The phosphatidylethanolamine (PE), phosphatidylcholine (PC), and phosphatidic acid may be combined with one or two C10-24 fatty acids. The cholesterol and tocopherol include each analog, derivative, and metabolite of cholesterol and tocopherol.

구체적으로는 융합성 지질은 디라우로일 포스파티딜에탄올아민(dilauroyl phosphatidylethanolamine), 디미리스토일 포스파티딜에탄올아민(dimyristoyl phosphatidylethanolamine), 디팔미토일 포스파티딜에탄올아민(dipalmitoyl phosphatidylethanolamine), 디스테아로일 포스파티딜에탄올아민(distearoyl phosphatidylethanolamine), 디올레오일 포스파티딜에탄올아민(dioleoyl phosphatidylethanolamine), 디리놀레오일 포스파티딜에탄올아민(dilinoleoyl phosphatidylethanolamine), 1-팔미토일-2-올레오일 포스파티딜에탄올아민(1-palmitoyl-2-oleoyl phosphatidylethanolamine), 1,2-디피타노일-3-sn-포스파티딜에탄올아민(1,2-diphytanoyl-3-sn-phosphatidylethanolamine), 디라우로일 포스파티딜콜린(dilauroyl phosphatidylcholine), 디미리스토일 포스파티딜콜린(dimyristoyl phosphatidylcholine), 디팔미토일 포스파티딜콜린(dipalmitoyl phosphatidylcholine), 디스테아로일 포스파티딜콜린(distearoyl phosphatidylcholine), 디올레오일 포스파티딜콜린(dioleoyl phosphatidylcholine), 디리놀레오일 포스파티딜콜린(dilinoleoyl phosphatidylcholine), 1-팔미토일-2-올레오일 포스파티딜콜린(1-palmitoyl-2-oleoyl phosphatidylcholine), 1,2-디피타노일-3-sn-포스파티딜콜린(1,2-diphytanoyl-3-sn-phosphatidylcholine), 디라우로일 포스파티딘산(dilauroyl phosphatidic acid), 디미리스토일 포스파티딘산(dimyristoyl phosphatidic acid), 디팔미토일 포스파티딘산(dipalmitoyl phosphatidic acid), 디스테아로일 포스파티딘산(distearoyl phosphatidic acid), 디올레오일 포스파티딘산(dioleoyl phosphatidic acid), 디리놀레오일 포스파티딘산(dilinoleoyl phosphatidic acid), 1-팔미토일-2-올레오일 포스파티딘산(1-palmitoyl-2-oleoyl phosphatidic acid), 1,2-디피타노일-3-sn-포스파티딘산(1,2-diphytanoyl-3-sn-phosphatidic acid), 콜레스테롤 및 토코페롤로 구성된 군으로부터 선택된 하나 또는 둘 이상의 조합일 수 있다.Specifically, the fusible lipids are dilauroyl phosphatidylethanolamine, dimyristoyl phosphatidylethanolamine, dipalmitoyl phosphatidylethanolamine, and distearoyl phosphatidylethanolamine. distearoyl phosphatidylethanolamine), dioleoyl phosphatidylethanolamine, dilinoleoyl phosphatidylethanolamine, 1-palmitoyl-2-oleoyl phosphatidylethanolamine, 1-palmitoylethanolamine, and phosphatidylethanolamine 1,2-diphytanoyl-3-sn-phosphatidylethanolamine, dilauroyl phosphatidylcholine, dimyristoyl phosphatidylcholine, dimyristoyl phosphatidylcholine Palmitoyl phosphatidylcholine (dipalmitoyl phosphatidylcholine), distearoyl phosphatidylcholine (distearoyl phosphatidylcholine), dioleoyl phosphatidylcholine (dioleoyl phosphatidylcholine), dilinoleoyl phosphatidylcholine (dilinoleoyl phosphatidylcholine 2-oleoyl phosphatidylcholine) palmitoyl-2-oleoyl phosphatidylcholine), 1,2-diphytanoyl-3-sn-phosphatidylcholine (1,2-diphytanoyl-3-sn-phosphatidylcholine), dilauroyl phosphatidic acid, dimyri Dimyristoyl phosphatidic acid, Dipalmitoyl phosphatidic acid, distearoyl phosphatidic acid, dioleoyl phosphatidic acid, dilinoleoyl phosphatidic acid, 1-palmitoyl-2-oleoyl phosphatidic acid, 1,2-diphytanoyl-3-sn-phosphatidic acid (1,2-diphytanoyl-3-sn- phosphatidic acid), cholesterol, and a combination of two or more selected from the group consisting of tocopherol.

바람직한 구체예에서, 상기 융합성 지질은 디올레오일 포스파티딜에탄올아민(dioleoyl phosphatidylethanolamine, DOPE), 디팔미토올레오일포스포콜린(1,2-dipalmitoleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, DPPC), 디올레오일포스포콜린 (1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, DOPC), 디팔미토올레오일포스포에탄올아민 (1,2-dipalmitoleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine, DPPE) 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.In a preferred embodiment, the fusion lipid is dioleoyl phosphatidylethanolamine (DOPE), dipalmitoleoylphosphocholine (1,2-dipalmitoleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, DPPC), diol Reoylphosphocholine (1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, DOPC), dipalmitoleoylphosphoethanolamine (1,2-dipalmitoleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine, DPPE), etc. It may be one or more selected from the group consisting of.

본 발명에 따른 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자의 동결건조 보호제 조성물은 알부민을 포함한다.The lyophilized protective agent composition of lipid nanoparticles for anionic drug delivery according to the present invention includes albumin.

구체예에서, 상기 조성물은 당 알코올 또는 당을 추가로 포함한다.In an embodiment, the composition further comprises a sugar alcohol or sugar.

구체예에서, 당 알코올 또는 당은 동결건조 보호제로 통상적으로 사용되는 것들 중 하나 이상일 수 있으며, 예를 들어 만니톨, 소비톨, 락토스, 수크로스 및 트레할로스로 구성된 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 것일 수 있으나, 이들로 제한되는 것은 아니다.In embodiments, the sugar alcohol or sugar may be one or more of those commonly used as a lyophilized protectant, for example, one or more selected from the group consisting of mannitol, sorbitol, lactose, sucrose, and trehalose, It is not limited to these.

구체예에서, 알부민은 식물 또는 동물 알부민일 수 있으며, 예를 들어 혈청 알부민, 예를 들어 소 혈청 알부민, 인간 혈청 알부민, 특히 소 혈청 알부민일 수 있으나, 이들로 제한되는 것은 아니다.In an embodiment, the albumin may be plant or animal albumin, for example, but not limited to, serum albumin, such as bovine serum albumin, human serum albumin, particularly bovine serum albumin.

구체예에서, 당 알코올 또는 당:알부민의 중량비는 0.01~10:1, 바람직하게는 0.05~5:1일 수 있다. 상기 범위에서 동결건조물의 재건 시 재건이 용이하고 제제의 분산도 및 균질성이 유지될 수 있기 때문이다.In a specific embodiment, the weight ratio of sugar alcohol or sugar: albumin may be 0.01-10:1, preferably 0.05-5:1. This is because the reconstruction of the lyophilisate within the above range is easy, and dispersion and homogeneity of the formulation can be maintained.

본 발명은 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자 수용액에 상기 보호제 조성물을 가하여 동결건조를 수행하는 단계를 포함하는, 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자를 동결건조하는 방법을 제공한다.The present invention provides a method of lyophilizing lipid nanoparticles for anionic drug delivery, comprising the step of performing lyophilization by adding the protective agent composition to an aqueous solution of lipid nanoparticles for anionic drug delivery.

구체예에서, 음이온성 약물:알부민의 중량비가 1:30~500이 되도록 보호제 조성물을 가할 수 있으며, 바람직하게는 1:50~300, 보다 바람직하게는 1:70~200, 보다 더 바람직하게는 1:80~150, 가장 바람직하게는 1: 90~120, 특히 1:100이 되도록 가할 수 있다. 상기 범위에서 동결건조물의 재건 시 재건이 용이하고 제제의 분산도 및 균질성이 유지될 수 있기 때문이다.In a specific embodiment, a protective agent composition may be added such that the weight ratio of anionic drug: albumin is 1:30 to 500, preferably 1:50 to 300, more preferably 1:70 to 200, even more preferably 1:80 to 150, most preferably 1: 90 to 120, it may be added to be particularly 1:100. This is because the reconstruction of the lyophilisate within the above range is easy, and dispersion and homogeneity of the formulation can be maintained.

본 발명은 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자 및 상기 보호제 조성물을 포함하는, 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자의 동결건조물에 관한 것이다.The present invention relates to a lyophilisate of lipid nanoparticles for anionic drug delivery, including the lipid nanoparticles for anionic drug delivery and the protective agent composition.

구체예에서, 음이온성 약물:알부민의 중량비가 1:30~500인 것이 바람직하며, 바람직하게는 1:50~300, 보다 바람직하게는 1:70~200, 보다 더 바람직하게는 1:80~150, 가장 바람직하게는 1: 90~120, 특히 1:100일 수 있다. 상기 범위에서 동결건조물의 재건 시 재건이 용이하고 제제의 분산도 및 균질성이 유지될 수 있기 때문이다.In specific embodiments, the weight ratio of the anionic drug: albumin is preferably 1:30 to 500, preferably 1:50 to 300, more preferably 1:70 to 200, even more preferably 1:80 to 150, most preferably 1: 90 to 120, in particular may be 1: 100. This is because the reconstruction of the lyophilisate within the above range is easy, and dispersion and homogeneity of the formulation can be maintained.

본 발명에 따르면, 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자의 동결건조물을 대기압 상태에서 주사용 희석액 등으로 재건할 때 용이하게 재건할 수 있고, 동결건조 전과 동일한 분산도, 및 균질성 및 안정성을 유지할 수 있다.According to the present invention, when the lyophilized product of lipid nanoparticles for anionic drug delivery is rebuilt with a diluent for injection at atmospheric pressure, the same degree of dispersion as before lyophilization, and homogeneity and stability can be maintained. .

이하 본 발명을 실시예에 의거 구체적으로 기재하나, 본 발명을 설명하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위를 어떤 식으로든지 제한하는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail based on examples, but it is only for explaining the present invention and does not limit the scope of the present invention in any way.

[[ 비교예Comparative example 1-2] 플라스미드 DNA / 1,6- 1-2] Plasmid DNA / 1,6- 디올레오일Diole oil 트리에틸렌테트라미드Triethylenetetramide (dio-TETA) / mPEG- (dio-TETA) / mPEG- PLAPLA 토코페롤 (2k-1.7k) / Tocopherol (2k-1.7k) / 디올레일포스파티딜Dioleylphosphatidyl -- 에탄올아민Ethanolamine (DOPE) 함유 조성물 제조 후 동결건조에 따른 비교 Comparison of freeze-drying after (DOPE)-containing composition preparation

플라스미드 DNA (이하 'pDNA'라 함) 1 ㎍을 증류수 2 ㎕에 녹인 용액, dioTETA 3.15 ㎍을 증류수 혹은 산성 용매인 4 mM 소듐아세테이트 완충용액 (pH 4.2) 1.05 ㎕에 녹인 용액을 증류수 50 ㎕에 녹이고, DOPE 2.9 ㎍을 에틸아세테이트 0.29 ㎕에 녹인 용액, mPEG-PLA-토코페롤 50 ㎍을 에틸아세테이트 0.5 ㎕에 녹인 용액을 차례로 섞어준 후 초음파 분쇄 상태(bath type)에서 10분간 더 섞어주었다. 제조한 복합 유상액을 1-구 둥근 플라스크에 넣고 증류농축장치 (rotary evaporator)에서 감압 증류함으로써 에틸아세테이트를 선택적으로 제거하여 pDNA/ dioTETA/ mPEG-PLA-토코페롤 (2k-1.7k)/ DOPE 함유 조성물을 제조하였다. 제조된 조성물은 0.45 ㎛ hydrophilic filter로 여과시킨 후 4℃에 보관하였고 추후 세포 실험 진행 시 10% PBS (10x)를 섞어 주었다.A solution of 1 µg of plasmid DNA (hereinafter referred to as'pDNA') in 2 µl of distilled water, 3.15 µg of dioTETA in distilled water or 1.05 µl of 4 mM sodium acetate buffer solution (pH 4.2) as an acidic solvent, dissolved in 50 µl of distilled water. , A solution of 2.9 μg of DOPE in 0.29 μl of ethyl acetate, and a solution of 50 μg of mPEG-PLA-tocopherol in 0.5 μl of ethyl acetate were sequentially mixed, followed by further mixing for 10 minutes in a sonicated state (bath type). A composition containing pDNA/dioTETA/mPEG-PLA-tocopherol (2k-1.7k)/DOPE by selectively removing ethyl acetate by placing the prepared complex emulsion in a 1-neck round flask and distilling under reduced pressure in a rotary evaporator. Was prepared. The prepared composition was filtered with a 0.45 µm hydrophilic filter and then stored at 4°C, and 10% PBS (10x) was mixed with the cell at the time of the cell experiment.

비교예 1과 동일한 방법으로 pDNA/ dioTETA/ mPEG-PLA-토코페롤 (2k-1.7k)/ DOPE 함유 조성물 제조 후 초저온냉동고에서 동결건조를 실시 하였다. 동결건조 조건은 아래의 표 1과 같다. 동결 건조된 것은 0.9% 생리식염수 30 ㎕를 이용하여 재건하였다. 비교예 1 및 2에서 얻어진 조성물은 아래의 표 2와 같다.After preparing a composition containing pDNA/dioTETA/mPEG-PLA-tocopherol (2k-1.7k)/DOPE in the same manner as in Comparative Example 1, freeze-drying was performed in a cryogenic freezer. Freeze drying conditions are shown in Table 1 below. The freeze-dried one was reconstructed using 30 µl of 0.9% physiological saline. The compositions obtained in Comparative Examples 1 and 2 are shown in Table 2 below.

단계step 온도조건Temperature condition 진공도
(mTorr)Degree of vacuum
(mTorr) 공정시간(분)Process time (minutes) 설정온도(℃)Set temperature (℃) 변경조건Conditions of change 초기 냉각Initial cooling -40-40 내림fall 대기압Atmospheric pressure 9090 FreezingFreezing -40-40 유지maintain 대기압Atmospheric pressure 240240 Cold TrapCold Trap -50-50 내림fall 대기압Atmospheric pressure 2020 1 Step1 Step -40-40 유지maintain 200200 6060 2 Step2 Step -10-10 올림Sincerely 200200 240240 3 Step3 Step -10-10 유지maintain 200200 360360 4 Step4 Step +5+5 올림Sincerely 200200 120120 5 Step5 Step +5+5 유지maintain 150150 1,2001,200 6 Step6 Step +25+25 올림Sincerely 150150 120120 7 Step7 Step +25+25 유지maintain 150150 240240 합계Sum 2,6902,690

조성물Composition pDNApDNA Cationic lipidCationic lipid 고분자Polymer Helper lipidHelper lipid 동결건조
여부Freeze drying
Whether 비교예 1Comparative Example 1 pDNA/ dioTETA/ mPEG-PLA-토코페롤 (2k-1.7k)/ DOPEpDNA/ dioTETA/ mPEG-PLA-tocopherol (2k-1.7k)/ DOPE 1 ㎍1 ㎍ 3.15 ㎍3.15 ㎍ 50 ㎍50 ㎍ 2.9 ㎍2.9 ㎍ XX 비교예 2Comparative Example 2 pDNA/ dioTETA/ mPEG-PLA-토코페롤 (2k-1.7k)/ DOPEpDNA/ dioTETA/ mPEG-PLA-tocopherol (2k-1.7k)/ DOPE 1 ㎍1 ㎍ 3.15 ㎍3.15 ㎍ 50 ㎍50 ㎍ 2.9 ㎍2.9 ㎍ OO

[[ 비교예Comparative example 3-18] 3-18] pDNApDNA / 1,6- / 1,6- 디올레오일Diole oil 트리에틸렌테트라미드Triethylenetetramide ( ( diodio -- TETATETA ) / mPEG-PLA 토코페롤 (2k-1.7k) / ) / mPEG-PLA tocopherol (2k-1.7k) / 디올레일포스파티딜Dioleylphosphatidyl -- 에탄올아민Ethanolamine (DOPE) 함유 조성물 제조 후 기존 동결건조 보호제 ( Existing freeze-dried protectant ( 수크로스Sucrose / / 만니톨Mannitol / / 소비톨Sorbitol / / 트레할로스Trehalose ) 첨가에 따른 비교) Comparison by addition

위와 동일한 방법으로 조성물 제조 후 기존 동결건조 보호제 종류 및 함량을 달리하여 초저온냉동고에서 동결건조를 실시 하였다. 동결 건조된 것은 0.9% 생리식염수 30 ㎕를 이용하여 재건하였다. 비교예 3 내지 18에서 얻어진 조성물은 아래의 표 3과 같다.After preparing the composition in the same manner as above, freeze-drying was performed in a cryogenic freezer by varying the type and content of the existing freeze-dried protectant. The freeze-dried one was reconstructed using 30 µl of 0.9% physiological saline. The compositions obtained in Comparative Examples 3 to 18 are shown in Table 3 below.

보호제 종류Type of protectant 보호제 함량(㎎)Protective agent content (mg) 보호제 비율(중량%)Protection agent ratio (wt%) 비교예 3Comparative Example 3 수크로스Sucrose 0.050.05 0.10.1 비교예 4Comparative Example 4 수크로스Sucrose 0.50.5 1.01.0 비교예 5Comparative Example 5 수크로스Sucrose 2.52.5 5.05.0 비교예 6Comparative Example 6 수크로스Sucrose 55 10.010.0 비교예 7Comparative Example 7 만니톨Mannitol 0.050.05 0.10.1 비교예 8Comparative Example 8 만니톨Mannitol 0.50.5 1.01.0 비교예 9Comparative Example 9 만니톨Mannitol 2.52.5 5.05.0 비교예 10Comparative Example 10 만니톨Mannitol 5 5 10.010.0 비교예 11Comparative Example 11 소비톨Sorbitol 0.050.05 0.10.1 비교예 12Comparative Example 12 소비톨Sorbitol 0.50.5 1.01.0 비교예 13Comparative Example 13 소비톨Sorbitol 2.52.5 5.05.0 비교예 14Comparative Example 14 소비톨Sorbitol 55 10.010.0 비교예 15Comparative Example 15 트레할로스Trehalose 0.050.05 0.10.1 비교예 16Comparative Example 16 트레할로스Trehalose 0.50.5 1.01.0 비교예 17Comparative Example 17 트레할로스Trehalose 2.52.5 5.05.0 비교예 18Comparative Example 18 트레할로스Trehalose 55 10.010.0

[[ 실시예Example 1-3] 1-3] pDNApDNA / 1,6- / 1,6- 디올레오일Diole oil 트리에틸렌테트라미드Triethylenetetramide ( ( diodio -- TETATETA ) / mPEG-PLA 토코페롤 (2k-1.7k) / ) / mPEG-PLA tocopherol (2k-1.7k) / 디올레일포스파티딜Dioleylphosphatidyl -- 에탄올아민Ethanolamine (DOPE) 함유 조성물 제조 후 알부민 첨가에 따른 비교 Comparison of Addition of Albumin after Preparation of (DOPE) Containing Composition

위와 동일한 방법으로 조성물 제조 후 Bovine serum albumin (이하 'BSA'라 함) 함량을 달리하여 초저온냉동고에서 동결건조를 실시 하였다. 동결 건조된 것은 0.9% 생리식염수 30 ㎕를 이용하여 재건하였다. 실시예 1 내지 3에서 얻어진 조성물은 아래의 표 4와 같다.After the composition was prepared in the same manner as above, lyophilization was performed in a cryogenic freezer by varying the content of Bovine serum albumin (hereinafter referred to as'BSA'). The freeze-dried one was reconstructed using 30 µl of 0.9% physiological saline. The compositions obtained in Examples 1 to 3 are shown in Table 4 below.

BSA 함량(㎎)BSA content (mg) 실시예 1Example 1 0.030.03 실시예 2Example 2 0.10.1 실시예 3Example 3 0.50.5

[[ 실시예Example 4-19] 4-19] pDNApDNA / 1,6- / 1,6- 디올레오일Diole oil 트리에틸렌테트라미드Triethylenetetramide ( ( diodio -- TETATETA ) / mPEG-PLA 토코페롤 (2k-1.7k) / ) / mPEG-PLA tocopherol (2k-1.7k) / 디올레일포스파티딜Dioleylphosphatidyl -- 에탄올아민Ethanolamine (DOPE) 함유 조성물 제조 후 기존 동결건조 보호제 ( Existing freeze-dried protectant ( 수크로스Sucrose / / 만니톨Mannitol / / 소비톨Sorbitol / / 트레할로스Trehalose ) 및 BSA 0.03 mg 첨가에 따른 비교) And BSA 0.03 mg addition

위와 동일한 방법으로 조성물을 제조하여 BSA 함량을 고정한 후 기존 동결건조 보호제 함량을 달리하여 초저온냉동고에서 동결건조를 실시 하였다. 동결 건조된 것은 0.9% 생리식염수 30 ㎕를 이용하여 재건하였다. 실시예 4 내지 19에서 얻어진 조성물은 아래의 표 5와 같다.The composition was prepared in the same manner as above, and the BSA content was fixed, and then freeze-drying was performed in a cryogenic freezer by varying the content of the existing freeze-dried protectant. The freeze-dried one was reconstructed using 30 µl of 0.9% physiological saline. The compositions obtained in Examples 4 to 19 are shown in Table 5 below.

실시예Example 보호제 종류Type of protectant 보호제 함량(㎎)Protective agent content (mg) 44 수크로스Sucrose 0.050.05 BSABSA 0.030.03 55 수크로스Sucrose 0.50.5 BSABSA 0.030.03 66 수크로스Sucrose 2.52.5 BSABSA 0.030.03 77 수크로스Sucrose 55 BSABSA 0.030.03 88 만니톨Mannitol 0.050.05 BSABSA 0.030.03 99 만니톨Mannitol 0.50.5 BSABSA 0.030.03 1010 만니톨Mannitol 2.52.5 BSABSA 0.030.03 1111 만니톨Mannitol 55 BSABSA 0.030.03 1212 소비톨Sorbitol 0.050.05 BSABSA 0.030.03 1313 소비톨Sorbitol 0.50.5 BSABSA 0.030.03 1414 소비톨Sorbitol 2.52.5 BSABSA 0.030.03 1515 소비톨Sorbitol 55 BSABSA 0.030.03 1616 트레할로스Trehalose 0.050.05 BSABSA 0.030.03 1717 트레할로스Trehalose 0.50.5 BSABSA 0.030.03 1818 트레할로스Trehalose 2.52.5 BSABSA 0.030.03 1919 트레할로스Trehalose 55 BSABSA 0.030.03

[ [ 실시예Example 20-35] 20-35] pDNApDNA / 1,6- / 1,6- 디올레오일Diole oil 트리에틸렌테트라미드Triethylenetetramide ( ( diodio -- TETATETA ) / mPEG-PLA 토코페롤 (2k-1.7k) / ) / mPEG-PLA tocopherol (2k-1.7k) / 디올레일포스파티딜Dioleylphosphatidyl -- 에탄올아민Ethanolamine (DOPE) 함유 조성물 제조 후 기존 동결건조 보호제 (수크로오스 / Existing freeze-dried protective agent (Sucrose / 만니톨Mannitol / / 소비톨Sorbitol / / 트레할로스Trehalose ) 및 BSA 0.1 mg 첨가에 따른 비교) And BSA 0.1 mg addition

위와 동일한 방법으로 조성물을 제조하여 BSA 함량을 고정한 후 기존 동결건조 보호제 함량을 달리하여 초저온냉동고에서 동결건조를 실시 하였다. 동결 건조된 것은 0.9% 생리식염수 30 ㎕를 이용하여 재건하였다. 실시예 20 내지 35에서 얻어진 조성물은 아래의 표 6과 같다.The composition was prepared in the same manner as above, and the BSA content was fixed, and then freeze-drying was performed in a cryogenic freezer by varying the content of the existing freeze-dried protectant. The freeze-dried one was reconstructed using 30 µl of 0.9% physiological saline. The compositions obtained in Examples 20 to 35 are shown in Table 6 below.

실시예Example 보호제 종류Type of protectant 보호제 함량(㎎)Protective agent content (mg) 2020 수크로오스Sucrose 0.050.05 BSABSA 0.10.1 2121 수크로오스Sucrose 0.50.5 BSABSA 0.10.1 2222 수크로오스Sucrose 2.52.5 BSABSA 0.10.1 2323 수크로오스Sucrose 55 BSABSA 0.10.1 2424 만니톨Mannitol 0.050.05 BSABSA 0.10.1 2525 만니톨Mannitol 0.50.5 BSABSA 0.10.1 2626 만니톨Mannitol 2.52.5 BSABSA 0.10.1 2727 만니톨Mannitol 55 BSABSA 0.10.1 2828 소비톨Sorbitol 0.050.05 BSABSA 0.10.1 2929 소비톨Sorbitol 0.50.5 BSABSA 0.10.1 3030 소비톨Sorbitol 2.52.5 BSABSA 0.10.1 3131 소비톨Sorbitol 55 BSABSA 0.10.1 3232 트레할로스Trehalose 0.050.05 BSABSA 0.10.1 3333 트레할로스Trehalose 0.50.5 BSABSA 0.10.1 3434 트레할로스Trehalose 2.52.5 BSABSA 0.10.1 3535 트레할로스Trehalose 55 BSABSA 0.10.1

[[ 실험예Experimental example 1] One] pDNApDNA / 1,6- / 1,6- 디올레오일Diole oil 트리에틸렌테트라미드Triethylenetetramide ( ( diodio -- TETATETA ) / mPEG-PLA 토코페롤 (2k-1.7k) / ) / mPEG-PLA tocopherol (2k-1.7k) / 디올레일포스파티딜Dioleylphosphatidyl -- 에탄올아민Ethanolamine (DOPE) 함유 조성물 제조 후 동결건조에 따른 비교 Comparison of freeze-drying after (DOPE)-containing composition preparation

비교예 1 및 2에서 얻어진 조성물의 나노 입자 형성 여부를 확인하기 위하여 Intensity 기준 나노입자의 크기 (d.nm)를 확인하였다.In order to confirm the formation of nanoparticles in the compositions obtained in Comparative Examples 1 and 2, the size (d.nm) of nanoparticles based on intensity was confirmed.

동적 광산란 (DLS; dynamic light scattering) 방법을 이용하여 나노입자의 크기를 측정하였다. 구체적으로, He-Ne 레이져를 광원으로 사용하였으며, MALVERN사의 Zetasizer Nano ZS90 기기를 매뉴얼에 따라 작동하였다. 비교예 1 내지 2 조성물 나노입자의 크기는 아래의 표 7과 같다.The size of the nanoparticles was measured using a dynamic light scattering (DLS) method. Specifically, a He-Ne laser was used as a light source, and the Zetasizer Nano ZS90 device of MALVERN was operated according to the manual. Comparative Examples 1 to 2 The sizes of the composition nanoparticles are shown in Table 7 below.

동결건조
여부Freeze drying
Whether PDIPDI Pk 1 Mean Int.
(d.nm)Pk 1 Mean Int.
(d.nm) Pk 1 Area Int.
(%)Pk 1 Area Int.
(%) Pk 2 Mean Int.
(d.nm)Pk 2 Mean Int.
(d.nm) Pk 2 Area Int.
(%)Pk 2 Area Int.
(%) 비교예 1Comparative Example 1 XX 0.2170.217 259.6259.6 100100 00 00 비교예 2Comparative Example 2 OO 0.6070.607 391.1391.1 73.573.5 91.1391.13 23.823.8

PdI(Polydisperse index)는 입자에서 응집의 지표이므로, 이 값이 클수록 다중분산 시스템임을 나타내고 0에 가까울수록 단일분산 시스템임을 나타내는 것이며, 다중분산 시스템이 단일분산 시스템에 비해 응집 경향이 강하므로 PdI는 0.5 미만이어야 하고 작을수록 바람직하다. Pk1 및 Pk2는 분해로 인한 것으로, Pk1이 100%에 가까울수록 바람직하다. 표 7로부터 알 수 있는 바와 같이, 동결건조 과정으로 입자의 분산도가 증가하고 균질성과 안정성이 저하되는 것으로 나타났다.
PdI (Polydisperse index) is an indicator of agglomeration in particles, so a larger value indicates a polydisperse system, and a closer to 0 indicates a monodisperse system. It should be less than and the smaller the more preferable. Pk1 and Pk2 are due to decomposition, and the closer Pk1 is to 100%, the more preferable. As can be seen from Table 7, it was found that the dispersion degree of the particles increased and the homogeneity and stability were decreased by the lyophilization process.

[[ 실험예Experimental example 2] 2] pDNApDNA / 1,6- / 1,6- 디올레오일Diole oil 트리에틸렌테트라미드Triethylenetetramide ( ( diodio -- TETATETA ) / mPEG-PLA 토코페롤 (2k-1.7k) / ) / mPEG-PLA tocopherol (2k-1.7k) / 디올레일포스파티딜Dioleylphosphatidyl -- 에탄올아민Ethanolamine (DOPE) 함유 조성물 제조 후 기존 동결건조 보호제 ( Existing freeze-dried protectant ( 수크로스Sucrose / / 만니톨Mannitol / / 소비톨Sorbitol / / 트레할로스Trehalose ) 첨가에 따른 비교) Comparison by addition

비교예 3 내지 18에서 얻어진 조성물 나노입자의 크기는 아래의 표 8과 같다.The sizes of the composition nanoparticles obtained in Comparative Examples 3 to 18 are shown in Table 8 below.

PDIPDI Pk 1 Mean Int.
(d.nm)Pk 1 Mean Int.
(d.nm) Pk 1 Area Int.
(%)Pk 1 Area Int.
(%) Pk 2 Mean Int.
(d.nm)Pk 2 Mean Int.
(d.nm) Pk 2 Area Int.
(%)Pk 2 Area Int.
(%) 비교예 3Comparative Example 3 0.4560.456 512.5512.5 71.671.6 89.4989.49 28.428.4 비교예 4Comparative Example 4 0.3590.359 305.4305.4 80.580.5 85.1585.15 17.917.9 비교예 5Comparative Example 5 0.3890.389 384.3384.3 56.856.8 93.6193.61 43.243.2 비교예 6Comparative Example 6 0.4190.419 346.3346.3 63.263.2 84.5884.58 36.836.8 비교예 7Comparative Example 7 0.5940.594 451.1451.1 74.674.6 78.4578.45 25.425.4 비교예 8Comparative Example 8 0.4790.479 471.1471.1 78.478.4 83.6383.63 19.919.9 비교예 9Comparative Example 9 0.4320.432 421.1421.1 8181 78.7878.78 1919 비교예 10Comparative Example 10 0.3870.387 399.4399.4 75.475.4 94.3494.34 24.624.6 비교예 11Comparative Example 11 0.4890.489 462.3462.3 77.577.5 79.2579.25 22.522.5 비교예 12Comparative Example 12 0.3670.367 331.8331.8 7676 83.0683.06 2424 비교예 13Comparative Example 13 0.6350.635 854.2854.2 83.483.4 78.9278.92 16.616.6 비교예 14Comparative Example 14 0.8010.801 675.1675.1 80.780.7 71.2371.23 15.415.4 비교예 15Comparative Example 15 0.5380.538 491.6491.6 72.872.8 81.9681.96 20.820.8 비교예 16Comparative Example 16 0.3950.395 383.5383.5 76.276.2 89.6789.67 23.823.8 비교예 17Comparative Example 17 0.3880.388 331.7331.7 6666 82.7882.78 3434 비교예 18Comparative Example 18 0.2920.292 368.7368.7 57.657.6 99.6999.69 42.442.4

표 8로부터 알 수 있는 바와 같이, 기존 동결건조 보호제 사용으로는 동결건조로 인한 문제점을 해결할 수 없는 것으로 나타났다.
As can be seen from Table 8, it was found that the problem caused by lyophilization could not be solved by using the existing lyophilized protective agent.

[[ 실험예Experimental example 3] 3] pDNApDNA / 1,6- / 1,6- 디올레오일Diole oil 트리에틸렌테트라미드Triethylenetetramide ( ( diodio -- TETATETA ) / mPEG-PLA 토코페롤 (2k-1.7k) / ) / mPEG-PLA tocopherol (2k-1.7k) / 디올레일포스파티딜Dioleylphosphatidyl -- 에탄올아민Ethanolamine (DOPE) 함유 조성물 제조 후 알부민 첨가에 따른 비교 Comparison of Addition of Albumin after Preparation of (DOPE) Containing Composition

실시예 1 내지 3에서 얻어진 조성물 나노입자의 크기는 아래의 표 9와 같다.The sizes of the composition nanoparticles obtained in Examples 1 to 3 are shown in Table 9 below.

PDIPDI Pk 1 Mean Int.
(d.nm)Pk 1 Mean Int.
(d.nm) Pk 1 Area Int.
(%)Pk 1 Area Int.
(%) Pk 2 Mean Int.
(d.nm)Pk 2 Mean Int.
(d.nm) Pk 2 Area Int.
(%)Pk 2 Area Int.
(%) 실시예 1Example 1 0.4140.414 454.8454.8 80.280.2 90.590.5 19.819.8 실시예 2Example 2 0.3150.315 323.6323.6 98.898.8 48244824 1.21.2 실시예 3Example 3 0.5920.592 285.2285.2 92.292.2 11.9811.98 6.66.6

표 9로부터 알 수 있는 바와 같이, BSA 단독 사용 시 동결건조로 인한 분산도 증가, 균질성 및 안정성 저하 문제를 어느 정도 해결할 수 있는 것으로 나타났다.
As can be seen from Table 9, when BSA alone was used, it was found that the problems of increasing dispersion, homogeneity, and decreased stability due to lyophilization could be solved to some extent.

[[ 실험예Experimental example 4] 4] pDNApDNA / 1,6- / 1,6- 디올레오일Diole oil 트리에틸렌테트라미드Triethylenetetramide ( ( diodio -- TETATETA ) / mPEG-PLA 토코페롤 (2k-1.7k) / ) / mPEG-PLA tocopherol (2k-1.7k) / 디올레일포스파티딜Dioleylphosphatidyl -- 에탄올아민Ethanolamine (DOPE) 함유 조성물 제조 후 기존 동결건조 보호제 ( Existing freeze-dried protectant ( 수크로스Sucrose / / 만니톨Mannitol / / 소비톨Sorbitol / / 트레할로스Trehalose ) 및 BSA 첨가에 따른 비교) And BSA addition

실시예 4 내지 19에서 얻어진 조성물 나노입자의 크기는 아래의 표 10과 같다.The sizes of the composition nanoparticles obtained in Examples 4 to 19 are shown in Table 10 below.

PDIPDI Pk 1 Mean Int.
(d.nm)Pk 1 Mean Int.
(d.nm) Pk 1 Area Int.
(%)Pk 1 Area Int.
(%) Pk 2 Mean Int.
(d.nm)Pk 2 Mean Int.
(d.nm) Pk 2 Area Int.
(%)Pk 2 Area Int.
(%) 실시예 4Example 4 0.3120.312 362362 72.372.3 86.8186.81 27.727.7 실시예 5Example 5 0.3140.314 395.1395.1 67.467.4 99.0899.08 32.632.6 실시예 6Example 6 0.4680.468 378.4378.4 77.577.5 69.669.6 22.522.5 실시예 7Example 7 0.4570.457 408.3408.3 75.475.4 74.4674.46 24.624.6 실시예 8Example 8 0.4620.462 335.4335.4 8080 66.3366.33 17.717.7 실시예 9Example 9 0.3750.375 357.9357.9 85.485.4 67.5167.51 14.614.6 실시예 10Example 10 0.3870.387 449.3449.3 74.774.7 99.4299.42 25.325.3 실시예 11Example 11 0.3830.383 372.8372.8 83.483.4 74.8174.81 16.616.6 실시예 12Example 12 0.4280.428 476.6476.6 61.661.6 121.7121.7 3737 실시예 13Example 13 0.3980.398 389.8389.8 76.676.6 88.2688.26 23.423.4 실시예 14Example 14 0.5190.519 508.1508.1 82.282.2 71.9771.97 17.817.8 실시예 15Example 15 0.4860.486 385.3385.3 82.182.1 70.570.5 1616 실시예 16Example 16 0.4490.449 480.7480.7 6868 97.2897.28 3232 실시예 17Example 17 0.4080.408 454.4454.4 63.963.9 110.5110.5 36.136.1 실시예 18Example 18 0.4310.431 409.3409.3 72.372.3 81.0281.02 27.727.7 실시예 19Example 19 0.420.42 403.1403.1 71.371.3 86.0686.06 28.728.7

표 10으로부터 알 수 있는 바와 같이, 기존 동결건조 보호제에 BSA 배합 사용 시 동결건조로 인한 분산도 증가, 균질성 및 안정성 저하 문제를 해결할 수 있는 것으로 나타났다.
As can be seen from Table 10, it was found that when using the BSA combination with the existing lyophilized protective agent, the problem of increased dispersion due to lyophilization, decreased homogeneity and stability could be solved.

[[ 실험예Experimental example 5] 5] pDNApDNA / 1,6- / 1,6- 디올레오일Diole oil 트리에틸렌테트라미드Triethylenetetramide ( ( diodio -- TETATETA ) / mPEG-PLA 토코페롤 (2k-1.7k) / ) / mPEG-PLA tocopherol (2k-1.7k) / 디올레일포스파티딜Dioleylphosphatidyl -- 에탄올아민Ethanolamine (DOPE) 함유 조성물 제조 후 기존 동결건조 보호제 ( Existing freeze-dried protectant ( 수크로스Sucrose / / 만니톨Mannitol / / 소비톨Sorbitol / / 트레할로스Trehalose ) 및 BSA 첨가에 따른 비교) And BSA addition

실시예 20 내지 35에서 얻어진 조성물 나노입자의 크기는 아래의 표 11과 같다.The sizes of the composition nanoparticles obtained in Examples 20 to 35 are shown in Table 11 below.

PDIPDI Pk 1 Mean Int.
(d.nm)Pk 1 Mean Int.
(d.nm) Pk 1 Area Int.
(%)Pk 1 Area Int.
(%) Pk 2 Mean Int.
(d.nm)Pk 2 Mean Int.
(d.nm) Pk 2 Area Int.
(%)Pk 2 Area Int.
(%) 실시예 20Example 20 0.2170.217 215.3215.3 96.996.9 48794879 3.13.1 실시예 21Example 21 0.2560.256 238.9238.9 9898 53545354 22 실시예 22Example 22 0.1430.143 193.5193.5 100100 00 00 실시예 23Example 23 0.1350.135 203.1203.1 100100 00 00 실시예 24Example 24 0.320.32 374.2374.2 83.783.7 80.9680.96 16.316.3 실시예 25Example 25 0.220.22 218.1218.1 96.296.2 50275027 3.83.8 실시예 26Example 26 0.2310.231 292.2292.2 100100 00 00 실시예 27Example 27 0.2720.272 362.8362.8 85.885.8 78.3778.37 14.214.2 실시예 28Example 28 0.3950.395 359.7359.7 84.284.2 65.7265.72 14.514.5 실시예 29Example 29 0.2020.202 227.6227.6 100100 00 00 실시예 30Example 30 0.2260.226 257.6257.6 95.695.6 45984598 4.44.4 실시예 31Example 31 0.2570.257 350.1350.1 91.191.1 70.8770.87 8.98.9 실시예 32Example 32 0.190.19 205.7205.7 100100 00 00 실시예 33Example 33 0.1730.173 221221 100100 00 00 실시예 34Example 34 0.2480.248 268.6268.6 100100 00 00 실시예 35Example 35 0.2770.277 250.5250.5 100100 00 00

따라서, 기존 동결건조 보호제에 BSA 배합에 의해 동결건조 전과 동일한 분산도와 균질성 및 안정성을 확보할 수 있음을 알 수 있다.Therefore, it can be seen that the same dispersion, homogeneity and stability as before lyophilization can be secured by blending BSA with the existing lyophilized protective agent.

Claims (14)

알부민; 및 당 알코올 또는 당을 포함하고,
당 알코올 또는 당:알부민의 중량비가 0.01~10:1인, 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자의 동결건조 보호제 조성물.albumin; And a sugar alcohol or sugar,
A freeze-dried protective agent composition of lipid nanoparticles for anionic drug delivery, wherein the weight ratio of sugar alcohol or sugar: albumin is 0.01-10:1. 삭제delete 제1항에 있어서, 당 알코올 또는 당은 만니톨, 소비톨, 락토스, 수크로스 및 트레할로스로 구성된 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 것인, 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자의 동결건조 보호제 조성물.According to claim 1, wherein the sugar alcohol or sugar is at least one selected from the group consisting of mannitol, sorbitol, lactose, sucrose, and trehalose, lyophilized protective agent composition of lipid nanoparticles for anionic drug delivery. 제1항에 있어서, 알부민은 혈청 알부민인 것인, 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자의 동결건조 보호제 조성물.The lyophilized protective agent composition of claim 1, wherein the albumin is serum albumin. 제4항에 있어서, 알부민은 소 혈청 알부민인 것인, 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자의 동결건조 보호제 조성물.The lyophilized protective agent composition of lipid nanoparticles for anionic drug delivery according to claim 4, wherein the albumin is bovine serum albumin. 삭제delete 제1항에 있어서, 당 알코올 또는 당:알부민의 중량비가 0.05~5:1인 것인, 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자의 동결건조 보호제 조성물.The freeze-dried protective agent composition of lipid nanoparticles for anionic drug delivery according to claim 1, wherein the weight ratio of sugar alcohol or sugar: albumin is 0.05-5:1. 제1항에 있어서, 음이온성 약물이 핵산인 것인, 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자의 동결건조 보호제 조성물.The lyophilized protective agent composition of lipid nanoparticles for anionic drug delivery according to claim 1, wherein the anionic drug is a nucleic acid. 제1항에 있어서, 지질 나노입자가 음이온성 약물, 양이온성 지질, 및 양친성 블록 공중합체를 포함하며, 상기 음이온성 약물이 양이온성 지질과 정전기적 상호작용에 의해 복합체를 형성하고, 상기 복합체가 양친성 블록 공중합체의 나노입자 구조 내부에 봉입되어 있는 것인, 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자의 동결건조 보호제 조성물.The method of claim 1, wherein the lipid nanoparticle comprises an anionic drug, a cationic lipid, and an amphiphilic block copolymer, and the anionic drug forms a complex by electrostatic interaction with the cationic lipid, and the complex Is enclosed in the nanoparticle structure of the amphiphilic block copolymer, the freeze-dried protective agent composition of the lipid nanoparticles for anionic drug delivery. 제1항에 있어서, 지질 나노입자가 플라스미드 DNA, 핵 배치 신호 서열 또는 RGD 펩티드 서열을 포함하는 펩티드, 양이온성 화합물, 및 양친성 블록 공중합체를 포함하며, 상기 플라스미드 DNA는 펩티드와 결합하여 상기 양이온성 화합물과 복합체를 형성하고, 상기 복합체가 양친성 블록 공중합체의 나노입자 구조 내부에 봉입되어 있는 것인, 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자의 동결건조 보호제 조성물.The method of claim 1, wherein the lipid nanoparticle comprises a plasmid DNA, a peptide comprising a nuclear constellation signal sequence or an RGD peptide sequence, a cationic compound, and an amphiphilic block copolymer, and the plasmid DNA binds to the peptide and Forming a complex with a sexual compound, the complex is encapsulated in the nanoparticle structure of the amphiphilic block copolymer, anionic drug delivery lipid nanoparticles freeze-dried protective agent composition. 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자 수용액에 제1항, 제3항 내지 제5항 및 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 보호제 조성물을 가하여 동결건조를 수행하는 단계를 포함하는, 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자를 동결건조하는 방법.An anion comprising the step of performing lyophilization by adding the protective agent composition according to any one of claims 1, 3 to 5, and 7 to 10 to an aqueous lipid nanoparticle solution for anionic drug delivery. A method of lyophilizing lipid nanoparticles for drug delivery. 제11항에 있어서, 음이온성 약물:알부민의 중량비가 1:30~500이 되도록 보호제 조성물을 가하는 것인, 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자를 동결건조하는 방법.The method of lyophilizing lipid nanoparticles for anionic drug delivery according to claim 11, wherein a protective agent composition is added so that the weight ratio of anionic drug: albumin is 1:30 to 500. 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자 및 제1항, 제3항 내지 제5항 및 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 보호제 조성물을 포함하는, 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자의 동결건조물.Freezing of lipid nanoparticles for anionic drug delivery, including lipid nanoparticles for anionic drug delivery and the protective agent composition according to any one of claims 1, 3 to 5, and 7 to 10 Dry matter. 제13항에 있어서, 음이온성 약물:알부민의 중량비가 1:30~500인, 음이온성 약물 전달용 지질 나노입자의 동결건조물.The freeze-dried product of lipid nanoparticles for anionic drug delivery according to claim 13, wherein the weight ratio of anionic drug: albumin is 1:30 to 500.
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