KR102131040B1 - Screening method of materials for improving senile skin disease - Google Patents

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Abstract

본 발명은 노인성 건조 피부 질환을 개선, 예방 또는 치료할 수 있는 물질을 스크리닝하는 방법에 관한 것이다. The present invention relates to a method of screening for a substance capable of improving, preventing or treating senile dry skin disease.

Description

노인성 피부 질환의 개선용 물질을 스크리닝하는 방법{SCREENING METHOD OF MATERIALS FOR IMPROVING SENILE SKIN DISEASE}Method for screening substances for improvement of senile skin disease {SCREENING METHOD OF MATERIALS FOR IMPROVING SENILE SKIN DISEASE}

본 발명은 노인성 건조 피부 질환을 개선, 예방 또는 치료할 수 있는 물질을 스크리닝하는 방법에 관한 것이다.
The present invention relates to a method of screening for a substance capable of improving, preventing or treating senile dry skin disease.

사람의 피부는 나이가 들거나 자외선 같은 외부환경의 변화에 의해 주름살이 증가하거나 탄력에 변화가 생기며, 건조피부 특징 및 소양증 등 다양한 변화가 나타난다. 이러한 변화에 대하여 표피는 피부의 세포간 지질과 각질형성 세포내에 NMR가 존재하여 물이 피부 밖으로 증발되는 것을 방지하는 기능이 있으며, 두거운 최외각각질을 형성하여 외부 자극으로부터 피부를 보호하는 물리적인 기능 및 미생물들이 침입시 방어물질을 분비하는 화학적 기능을 가지고 있다. 이러한 표피의 기능은 증식과 분화를 통해 일어날 수 있다. A person's skin ages or wrinkles increase or changes in elasticity due to changes in the external environment such as ultraviolet rays, and various changes such as dry skin characteristics and pruritus appear. Against this change, the epidermis has the function of preventing the evaporation of water out of the skin due to the presence of NMR in the intercellular lipids and keratinocytes of the skin, and forming a thick outermost keratin to protect the skin from external stimuli. It has a function and a chemical function that microbes secrete protective substances upon invasion. These epidermal functions can occur through proliferation and differentiation.

그런데, 노인 피부의 경우, 증식과 분화에 이상이 있어서 건조한 피부를 나타내기 쉽다. 대표적으로, 표피가 두꺼워지거나 각질이 많아지거나 피부가 가려운 소양증이 증가하는 경향이 있다.However, in the case of elderly skin, it is easy to show dry skin due to abnormality in proliferation and differentiation. Typically, there is a tendency to increase the thickness of the epidermis, increased keratin, or itching of the skin.

한편, 오스테오글라이신 (Osteoglycin)은 미메칸 (mimecan)이라고도 불리며, 13개의 small leucine-rich proteoglycans (SLRP) gene family 중 하나로 세포의 성장, 분화 등에 중요한 조절자이며, 뼈의 콜라겐 생성에도 관여하는 것으로 알려져 있다. 그러나, 오스테오글라이신 (Osteoglycin)은 주로 퇴행성 관절염 분야에서 연구가 이루어지고 있고, 피부의 표피 등과 관련하여서는 알려진 것이 없다.
On the other hand, Osteoglycin (Osteoglycin) is also called mimecan (mimecan), one of 13 small leucine-rich proteoglycans (SLRP) gene family, an important regulator of cell growth and differentiation, and is also involved in bone collagen production Is known. However, Osteoglycin (Osteoglycin) has been mainly studied in the field of degenerative arthritis, there is no known in relation to the epidermis of the skin.

대한민국 공개특허 제 10-2013-0091823 호Republic of Korea Patent Publication No. 10-2013-0091823

본 발명의 일 목적은 오스테오글라이신 (Osteoglycin)을 이용하여 노인성 건조 피부 질환을 개선, 예방 또는 치료할 수 있는 물질을 스크리닝하는 방법을 제공하는 것이다.
One object of the present invention is to provide a method for screening a substance capable of improving, preventing or treating senile dry skin disease using osteoglycin.

상기 목적을 달성하기 위해 본 발명의 일 관점은 오스테오글라이신(Osteoglycin) 단백질의 발현량을 증가시키는 물질을 유효성분으로 포함하는, 노인성 피부 건조 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한 오스테오글라이신(Osteoglycin) 단백질의 발현량을 증가시키는 물질을 유효성분으로 포함하는, 노인성 피부 건조 질환의 예방 또는 개선용 화장품 조성물 및 오스테오글라이신(Osteoglycin) 단백질의 발현량을 증가시키는 물질을 유효성분으로 포함하는, 노인성 피부 건조 질환의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, one aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for treating or preventing senile skin dry disease, comprising as an active ingredient a substance that increases the expression level of Osteoglycin protein. The present invention also includes a substance for increasing the expression level of osteoglycin (Osteoglycin) protein as an active ingredient, for preventing or improving senile skin dry disease cosmetic composition and to increase the expression level of Osteoglycin (Osteoglycin) protein Provided is a health food composition for preventing or improving senile skin dry disease, which contains a substance as an active ingredient.

본 발명은 일 관점에서 또한 오스테오글라이신(Osteoglycin)에 대한 항체를 포함하는, 노인성 피부 건조 질환 진단용 키트를 제공한다. In one aspect, the present invention also provides a kit for diagnosing senile skin dry disease, which includes an antibody against osteoglycin.

본 발명은 일 관점에서 오스테오글라이신(Osteoglycin)에 대한 항체를 포함하는, 노인성 피부 건조 질환 진단용 마커 조성물을 제공하고, 또한 후보물질을 표피 세포에 처리한 후 오스테오글라이신(Osteoglycin)의 양을 측정하고 오스테오글라이신(Osteoglycin)의 양이 처리 전보다 증가하면 상기 후보물질을 노인성 건조 질환의 개선용 물질로 판단하는 것을 포함하는, 노인성 건조 질환의 개선용 물질을 스크리닝하는 방법을 제공한다.
The present invention provides a marker composition for diagnosing senile skin dry disease, which includes an antibody against osteoglycin in one aspect, and also measures the amount of osteoglycin after treating a candidate substance on epidermal cells. And when the amount of osteoglycin (Osteoglycin) increases than before treatment provides a method for screening a substance for improving senile dry disease, comprising determining the candidate substance as a substance for improving senile dry disease.

본 발명의 일 관점인 키트 및 마커 조성물을 이용하면 오스테오글라이신(Osteoglycin)에 대한 항체를 통해 표피의 오스테오글라이신의 발현량을 쉽게 알 수 있으므로, 이를 이용하여 노인성 피부 건조 질환을 간편하고 빠르게 진단할 수 있다는 장점이 있다. 아울러, 본 발명의 일 관점인 특정 물질을 표피 세포에 처리한 후 오스테오글라이신(Osteoglycin)의 양을 측정하고 이를 이용하여 상기 특정 물질을 노인성 건조 질환의 개선용 물질로 선별하는 스크리닝 방법을 이용하여, 노인성 건조 질환의 개선 물질을 간단하고 쉽게 선별할 수 있다는 장점이 있다. 이에 따라, 다가오는 고령화 시대에서 만연하게 될 노인성 건조 질환의 개선용 물질을 쉽고 빠르게 선별하여 상기 질환의 예방, 치료 또는 개선에 이용할 수 있어서 유용하다. Using the kit and marker composition, which is one aspect of the present invention, it is possible to easily know the expression level of epithelial osteoglycine through an antibody against osteoglycin, and thus use this to quickly and easily diagnose senile skin dry disease. It has the advantage of being able to. In addition, after treating a specific substance, which is one aspect of the present invention, to epidermal cells, a quantity of osteoglycin is measured and a screening method is used to select the specific substance as a substance for improving senile dry disease. , It has the advantage of being able to easily and easily select the substances for improvement of senile dry disease. Accordingly, it is useful to quickly and easily select a substance for improving senile dry disease, which will prevail in the coming aging era, and can be used to prevent, treat, or improve the disease.

뿐만 아니라, 상기 특정물질을 포함하는 조성물을 제공함에 따라, 노인성 건조 질환의 개선 등에 유용하게 이용할 수 있다는 장점이 있다.
In addition, by providing the composition containing the specific material, there is an advantage that it can be usefully used to improve senile dry disease.

도 1의 (a)는 노인 피부에서 오스테오글라이신(osteoglycin) mRNA 유전자가 감소하였음을 확인한 결과이고, 도 1의 (b)는 사람 피부의 오스테오글라이신을 붉은 색으로, Dapi를 이용해 세포의 핵을 파란색으로 염색시킨 후, 형광현미경을 이용해 노화 피부에서 오스테오글라이신(붉은 색)이 감소함을 확인한 결과이다.
도 2의 (a)는 노인 피부에서 데스모글라인 3 유전자가 감소하였음을 확인한 결과이고, 도 2의 (b)는 데스모글라인 3이 세포 주변에 위치한다는 것을 핵 염색으로 확인한 것이다.
도 3은 오스테오글라이신(osteoglycin)이 감소해 있는 노화 피부조직에서 데스모글라인 3 (Desmoglein 3) 단백질의 발현 역시 감소하였음을 확인한 결과이다.
도 4는 오스테오글라이신(osteoglycin)이 감소해 있는 노화 피부조직에서 데스모콜린 2/3 (desmocolline 2/3)와 데스모글라인 3 (Desmoglein 3) 단백질의 발현 역시 감소하였음을 확인한 결과이다.
도 5는 오스테오글라이신(osteoglycin)이 감소해 있는 노화 피부조직에서 트랜스글루타미네이즈(transglutaminase) 및 필라그린 (filaggrin) 단백질의 발현 역시 감소하였음을 확인한 결과이다.
도 6의 (a)는 정상노인피부와 건조한 노인의 피부에서 수분양을 비교한 것이고, 도 6의 (b)는 정상노인피부와 건조한 노인의 피부에서 오스테오글라이신 유전자의 발현량을 비교한 것이다. Figure 1 (a) is a result of confirming that the osteoglycin (osteoglycin) mRNA gene is reduced in the skin of the elderly, Figure 1 (b) is the color of the osteoglycin of human skin in red color, nuclei of cells using Dapi After dyeing in blue, the result was confirmed by using a fluorescence microscope to reduce osteoglycine (red) in aging skin.
Figure 2 (a) is a result of confirming that the desmogline 3 gene is reduced in the skin of the elderly, Figure 2 (b) is desmogline 3 is confirmed by nuclear staining that is located around the cell.
Figure 3 is a result of confirming that the expression of desmoglein 3 (Desmoglein 3) protein in aging skin tissue with reduced osteoglycin (osteoglycin) is also reduced.
FIG. 4 is a result confirming that the expression of desmocolline 2/3 and desmoglein 3 proteins in aging skin tissues in which osteoglycin is decreased is also reduced.
Figure 5 is a result of confirming that the expression of transglutaminase (transglutaminase) and filaggrin (filaggrin) protein in the aging skin tissue is reduced osteoostein (osteoglycin) is also reduced.
Figure 6 (a) is a comparison of the amount of moisture in the skin of normal elderly skin and dry elderly people, Figure 6 (b) is a comparison of the expression level of the osteoglycine gene in normal elderly skin and dry skin of the elderly .

본 발명은 일 관점에서 오스테오글라이신(Osteoglycin) 단백질의 발현량을 증가시키는 물질을 유효성분으로 포함하는, 노인성 피부 건조 질환의 치료 또는 예방용 약학 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a pharmaceutical composition for treating or preventing senile skin dry disease, comprising as an active ingredient a substance that increases the expression level of osteoglycin protein in one aspect.

본 발명은 다른 관점에서 오스테오글라이신(Osteoglycin) 단백질의 발현량을 증가시키는 물질을 유효성분으로 포함하는, 노인성 피부 건조 질환의 예방 또는 개선용 화장품 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a cosmetic composition for preventing or improving senile skin dry disease, comprising as an active ingredient a substance that increases the expression level of osteoglycin (Osteoglycin) protein in another aspect.

본 발명은 또 다른 관점에서 오스테오글라이신(Osteoglycin) 단백질의 발현량을 증가시키는 물질을 유효성분으로 포함하는, 노인성 피부 건조 질환의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a health food composition for preventing or improving senile skin dry disease, comprising as an active ingredient a substance that increases the expression level of osteoglycin protein in another aspect.

종래 오스테오글라이신 (Osteoglycin)은 뼈의 콜라겐 생성에 관여하는 것으로 알려져 있어 주로 퇴행성 관절염 분야에서 연구가 이루어지고 있었으나, 본 발명 발명자들이 노화 피부에서 오스테오글라이신 (Osteoglycin)의 발현량이 현저히 감소함을 확인하고, 이를 이용하여 본 발명을 완성하게 되었다. 이에 따라, 오스테오글라이신(Osteoglycin) 단백질의 발현량을 증가시키는 물질을 유효성분으로 포함하는 본원발명의 일 관점인 조성물은 노인성 피부 건조 질환의 예방 및 개선이 가능하고, 나아가 치료 역시 가능하다는 장점이 있다. Conventional osteoglycin (Osteoglycin) is known to be involved in the collagen production of bone, and thus has been mainly studied in the field of degenerative arthritis. Then, the present invention was completed by using this. Accordingly, the composition of one aspect of the present invention comprising a substance that increases the expression level of osteoglycin (Osteoglycin) protein as an active ingredient is capable of preventing and improving senile skin dry disease, and furthermore, treatment is also possible. have.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 노인성 건조 질환은 노인성 소양증, 노인성 건조증, 건조성 습진, 신경성 피부염 또는 대상포진을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 노인성 건조 질환은 노인에게서 발견되는 원인이 명확하지 않은 건선 현상을 모두 포함하는 것이다. In one aspect of the composition of the present invention, the senile dry disease may include senile pruritus, senile dryness, dry eczema, neurodermatitis or shingles, but is not limited thereto. The senile dry disease of the present invention includes all of the psoriasis phenomena in which the cause found in the elderly is not clear.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 물질은 데스모콜린 (desmocollin), 데스모글라인 (desmoglein), 트랜스글루타미네이즈 (transglutaminase) 및 필라그린 (filaggrin)으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질의 발현을 증가시킬 수 있다. In one aspect of the composition of the present invention, the substance is one or more proteins selected from the group consisting of desmocollin, desmoglein, transglutaminase, and pilarggrin. Expression can be increased.

본 발명 발명자들은 노인의 피부, 구체적으로 표피에서 오스테오글라이신 (Osteoglycin)의 발현량이 현저히 감소함에 따라, 데스모콜린 (desmocollin), 데스모글라인 (desmoglein), 트랜스글루타미네이즈 (transglutaminase) 및 필라그린 (filaggrin)으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 단백질의 발현 역시 현저히 감소함을 확인하였다. 즉, 오스테오글라이신 (Osteoglycin)은 표피에서 세포-세포간 부착(cell-cell adhesion) 단백질인 데스모콜린 2/3 (desmocollin 2/3) 및 데스모글라인 (Desmoglein)의 생성에 중요한 역할을 할 뿐 아니라, 표피에서 트랜스글루타미나아제 (Transglutaminase)의 형성에 관여하여 표피의 수분량을 유지하기 위한 각질의 형성에 중요한 역할을 한다. 특히, 오스테오글라이신 (Osteoglycin) NMF(Natural Moisturizing Factor)의 전구체인 필라그린 (filaggrin)의 생성에도 중요한 역할을 하므로, 표피의 수분량을 유지할 수 있다.The inventors of the present invention, as the expression level of osteoglycin is significantly reduced in the skin of the elderly, specifically the epidermis, desmocollin, desmoglein, transglutaminase and pilargrin It was confirmed that the expression of one or more proteins selected from the group consisting of (filaggrin) also significantly decreased. In other words, Osteoglycin plays an important role in the production of cell-cell adhesion proteins desmocollin 2/3 and desmoglein in the epidermis. In addition, it participates in the formation of transglutaminase in the epidermis and plays an important role in the formation of keratin to maintain the moisture content of the epidermis. In particular, since it plays an important role in the production of pilarggrin, which is a precursor of Osteoglycin (NMF) Natural Moisturizing Factor, it is possible to maintain the moisture content of the epidermis.

본 발명의 조성물은 오스테오글라이신 (Osteoglycin) 단백질 발현량을 증가시키는 물질뿐 아니라, 오스테오글라이신 (Osteoglycin) 단백질을 코딩하는 유전자의 발현량을 조절하는 물질 및 상기 유전자의 상위 유전자 (up-stream)의 발현량을 조절하는 물질 역시 유효성분으로 포함할 수 있다. The composition of the present invention, as well as a substance that increases the expression level of osteoglycin (Osteoglycin) protein, a substance that regulates the expression level of the gene encoding Osteoglycin protein and the upper gene of the gene (up-stream) A substance that regulates the expression level of may also be included as an active ingredient.

본 발명은 또 다른 관점에서, 오스테오글라이신(Osteoglycin)에 대한 항체를 포함하는, 노인성 피부 건조 질환 진단용 키트에 관한 것이다. 본 발명에 의해 노인성 건조 질환에서 오스테오글라이신(Osteoglycin) 단백질의 발현량이 감소하는 것을 확인하였으므로, 상기 키트로 진단 대상 표피에서 상기 항체에 결합하는 항원의 양을 측정하고 이를 정상적인 노인성 피부의 양과 비교하면, 진단 대상이 노인성 피부 건조 질환을 가지는지 여부를 간편하고 쉽게 판단할 수 있다는 장점이 있다. In another aspect, the present invention relates to a kit for diagnosing senile skin dry disease, comprising an antibody against osteoglycin. According to the present invention, since it was confirmed that the expression level of the osteoglycin protein in the senile dry disease decreases, the amount of the antigen binding to the antibody in the epidermis to be diagnosed with the kit is measured and compared with the amount of normal senile skin. , It has the advantage of being able to easily and easily determine whether the object to be diagnosed has senile skin dry disease.

본 발명의 일 관점인 키트에 있어서, 상기 키트는 진단 대상 표피에서 상기 항체에 결합하는 항원의 양을 측정하는 것을 포함할 수 있다. In one aspect of the kit of the present invention, the kit may include measuring the amount of antigen binding to the antibody in the epidermis to be diagnosed.

본 발명의 일 관점인 키트에 있어서, 상기 노인성 건조 질환은 노인성 소양증, 노인성 건조증, 건조성 습진, 신경성 피부염 또는 대상포진을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. In the kit of one aspect of the present invention, the senile dry disease may include senile pruritus, senile dryness, dry eczema, neurodermatitis or shingles, but is not limited thereto.

본 발명은 또 다른 관점에서, 오스테오글라이신(Osteoglycin)에 대한 항체를 포함하는, 노인성 피부 건조 질환 진단용 마커 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 의해 노인성 건조 질환에서 오스테오글라이신(Osteoglycin) 단백질의 발현량이 감소하는 것을 확인하였으므로, 상기 마커 조성물로 진단 대상 표피에서 상기 항체에 결합하는 항원을 분리하고 이러한 항원의 양을 측정한 후 이를 정상적인 노인성 피부에 존재하는 오스테오글라이신 단백질의 양과 비교하면, 진단 대상이 노인성 피부 건조 질환을 가지는지 여부를 간편하고 쉽게 판단할 수 있다는 장점이 있다. In another aspect, the present invention relates to a marker composition for diagnosing senile skin dry disease, comprising an antibody against osteoglycin. Since it was confirmed by the present invention that the expression level of the osteoglycin protein in the senile dry disease decreases, the antigen binding to the antibody is isolated from the epidermis to be diagnosed with the marker composition and the amount of the antigen is measured. Compared to the amount of osteoglycine protein present in normal senile skin, there is an advantage that it can be easily and easily determined whether or not the diagnosis target has senile skin dry disease.

본 발명의 일 관점인 마커 조성물에 있어서, 상기 진단은 진단 대상 표피에서 상기 항체에 결합하는 항원의 양을 측정하는 것을 포함하는 것일 수 있다. In the marker composition of one aspect of the present invention, the diagnosis may include measuring the amount of antigen binding to the antibody in the epidermis to be diagnosed.

본 발명의 일 관점인 마커 조성물에 있어서, 상기 노인성 건조 질환은 노인성 소양증, 노인성 건조증, 건조성 습진, 신경성 피부염 또는 대상포진을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. In one aspect of the marker composition of the present invention, the senile dry disease may include senile pruritus, senile dryness, dry eczema, neurodermatitis or shingles, but is not limited thereto.

본 발명은 또 다른 관점에서, 후보물질을 표피 세포에 처리한 후 오스테오글라이신(Osteoglycin)의 양을 측정하고 오스테오글라이신(Osteoglycin)의 양이 처리 전보다 증가하면 상기 후보물질을 노인성 건조 질환의 개선용 물질로 판단하는 것을 포함하는, 노인성 건조 질환의 개선용 물질을 스크리닝하는 방법에 관한 것이다. In another aspect, the present invention measures the amount of osteoglycin (Osteoglycin) after treating a candidate substance on epidermal cells and improves senile dry disease when the amount of Osteoglycin increases than before treatment. It relates to a method for screening a substance for improving the senile dry disease, including judging as a substance.

본 발명의 스크리닝 방법에 의해, 노인성 건조 질환의 개선에 유용하게 쓰일 수 있는 신물질을 빠르고 간편하게 선별할 수 있어서 유용하다. By the screening method of the present invention, it is useful because it is possible to quickly and easily select new substances that can be useful for the improvement of senile dry disease.

본 발명의 일 관점인 스크리닝하는 방법에 있어서, 상기 노인성 건조 질환은 노인성 소양증, 노인성 건조증, 건조성 습진, 신경성 피부염 또는 대상포진을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. In the method of screening, which is an aspect of the present invention, the senile dry disease may include senile pruritus, senile dryness, dry eczema, neurodermatitis, or shingles, but is not limited thereto.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are only for illustrating the present invention, it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the present invention is not to be construed as limited by these examples.

평균나이 32+/-2세의 젊은이 4명 (Young)과 평균나이 65+/-2세의 노인 4명 (Aged)의 엉덩이 피부를 생검하여 얻어진 조직을 액체 질소를 넣어 잘게 부수어 주고, 트리졸로 mRNA를 분리하여 정량 분석을 한 후 reverse transcription using a SuperScript reverse transcriptase III kit (Invitrogen, USA)로 cDNA를 합성하였다. 이렇게 얻어진 cDNA를 TaqMan universal PCR mixture (Applied biosystems, USA)와 오스테오글라이신에 특이적인 primer (Applied biosystems, USA)와 함께 Real-time PCR을 진행하여 오스테오글라이신 유전자의 발현량을 비교하였다 (도 1-(a)). 이 때, 오스테오글라이신의 발현양이 어느 정도인지 비교를 위해 일정하게 발현되는 GAPDH (Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)의 발현양을 통해 상대적인 보정을 하였다. 이러한 보정은 실험시 동일한 농도로 실험하였다는 것을 의미한다. 그 결과(도 1-(a)), 노인 (Aged) 피부에서 오스테오글라이신 유전자의 발현이 극도로 감소하는 것을 확인할 수 있었다. The tissues obtained by biopsy of the hip skin of 4 young adults (average age 32+/-2 years old) and 4 elderly men aged 65+/-2 years old (Aged) are crushed with liquid nitrogen and crushed with trizol After the mRNA was separated and quantitatively analyzed, cDNA was synthesized using reverse transcription using a SuperScript reverse transcriptase III kit (Invitrogen, USA). The cDNA thus obtained was subjected to real-time PCR with a TaqMan universal PCR mixture (Applied biosystems, USA) and a primer specific for osteoglycine (Applied biosystems, USA) to compare the expression level of the osteoglycine gene (FIG. 1). -(a)). At this time, relative correction was performed through the expression amount of GAPDH (Glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase) which is uniformly expressed for comparison with the expression level of osteoglycine. This correction means that the experiment was conducted at the same concentration. As a result (FIG. 1-(a)), it was confirmed that the expression of the osteoglycine gene was extremely decreased in aged (Aged) skin.

한편, 상기 실험군과 동일한 실험군 (Young 및 Aged) 각각에서 채취한 피부로 조직 절편을 만든 후, 오스테오글라이신의 발현양을 형광염색을 통해 비교하였다. 먼저, 붉은색으로 표지된 오스테오글라이신의 항체를 상기 조직 절편과 반응시켜 도 1-(b)를 얻었다. 도 1-(b)에서, 붉은색으로 관찰되는 부분은 오스테오글라이신의 항체가 붙어 있는 부위이고 파란색으로 관찰되는 부분은 조직 내 세포의 위치 기준을 설정하기 위해 DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole)(Cell signaling, USA)로 세포 내의 DNA를 염색한 것이다. On the other hand, after the tissue section was made of skin collected from each of the same experimental group (Young and Aged) as the above experimental group, the expression level of osteoglycine was compared through fluorescent staining. First, a red labeled antibody of osteoglycine was reacted with the tissue section to obtain FIG. 1-(b). In FIG. 1-(b), the part observed in red is the site to which the antibody of osteoglycine is attached, and the part observed in blue is DAPI (4',6-diamidino-) to set the standard for the location of cells in the tissue. 2-phenylindole (Cell signaling, USA) was used to stain DNA in cells.

그 결과(도 1-(b)), 노인 (Aged) 피부에서 오스테오글라이신의 발현량이 극도로 감소하는 것을 확인할 수 있었다.
As a result (FIG. 1-(b)), it was confirmed that the expression level of osteoglycine was extremely decreased in aged skin.

상기 실시예 1의 실험군과 동일한 실험군 (Young 및 Aged) 각각에서 채취한 피부로 조직 절편을 만든 후, 표피층의 세포 간(cell-cell) 부착단백질인 데스모글라인 3 (desmoglein 3)의 발현양을 확인하기 위해 녹색 형광표지된 데스모글레인 (desmoglein) 3 항체를 사용하여 형광염색을 수행한 결과, 도 2-(a)가 얻어졌다. 그 결과, 노인 (Aged) 피부에서 녹색이 훨씬 적게 발견됨에 따라, 오스테오글라이신의 발현량이 극도로 감소하는 것을 확인할 수 있었다. After the tissue sections were made from skins collected from each of the same experimental groups (Young and Aged) as in the experimental group of Example 1, the expression level of desmoglein 3, a cell-cell adhesion protein in the epidermal layer, was determined. As a result of fluorescence staining using a green fluorescently labeled desmoglein 3 antibody to confirm, FIG. 2-(a) was obtained. As a result, as much green was found in aged skin, it was confirmed that the expression level of osteoglycine was extremely decreased.

한편, 세포 내의 DNA를 DAPI((Cell signaling, USA)로 염색하고, 이를 도 2-(a)와 겹치게 하여 (Merge), 도 2-(b)를 얻었다. 그 결과, 데스모글라인 3의 위치가 세포주변에 있다는 것을 핵 염색을 통해 확인할 수 있었으므로, 노인피부는 데스모글라인 3가 감소되어 세포의 부착능 감소 및 이에 따라 세포-세포간 기능 감소를 가져옴을 알 수 있었다.
On the other hand, DNA in cells was stained with DAPI ((Cell signaling, USA), and overlapped with Fig. 2-(a) to obtain (Merge), Fig. 2-(b). Since it can be confirmed by nuclear staining that is around the cell, it was found that desmogline 3 is decreased in the elderly skin, leading to a decrease in cell adhesion and thus a decrease in cell-to-cell function.

세포 간(cell-cell) 부착단백질인 데스모콜린(desmocollin) 2/3이 오스테오글라이신에 의해 조절되는지 여부를 확인하기 위해 실험을 진행하였다. The experiment was conducted to confirm whether the cell-cell adhesion protein desmocollin 2/3 is regulated by osteoglycine.

오스테오글라이신이 유전자 발현을 하지 못하도록 짧은 간섭 RNA (small interfering RNA, siRNA) (바이오니아, 한국)를 리포펙타민(Sigma, USA)과 함께 각질형성세포에 형질 주입 (transfection)하였다. 대조군으로는 siRNA 기능이 없는 non-target siRNA (바이오니아, 한국)를 각질형성세포에 형질주입시켜 사용하였다. 그 후, 각각의 세포에서 오스테오글라이신과 데스모콜린 2/3의 단백질 발현 정도를 확인하기 위해 각각의 항체를 사용하여 웨스턴 블롯을 수행하여, 도 3을 얻었다. 각군의 상태적인 비교를 위해 항상 일정하게 발현되는 단백질인 베타-액틴(beta-actin)을 사용하여 보정하여 비교하였다. 그 결과 (도 3), 오스테오글라이신의 유전자 기능을 못하게 하는 간섭 RNA를 처리한 군 (OGN-si)의 데스모콜린 3의 단백질이 대조군 (con si, 간섭 RNA이지만 오스테오글라이신의 유전자 기능에 무관한 간섭 RNA)과 비교하여 감소되어 있음을 확인할 수 있었다. 이는 오스테오글라이신의 유전자가 기능하지 못하도록 하는 간섭 RNA를 처리하면 세포의 부착능 감소를 유발하고 이에 따라 이는 세포-세포 기능이 떨어지는 것을 의미하고, 결과적으로 표피층이 이상을 유발할 수 있음을 의미한다.
Short interfering RNA (siRNA) (Bionia, Korea) was transfected into keratinocytes with lipofectamine (Sigma, USA) to prevent osteoglycine from expressing genes. As a control, non-target siRNA (Bionica, Korea) without siRNA function was used by transfecting keratinocytes. Then, Western blot was performed using each antibody to confirm the degree of protein expression of osteoglycine and desmocholine 2/3 in each cell, thereby obtaining FIG. 3. For the state comparison of each group, the beta-actin, a protein that is constantly expressed, was corrected and compared. As a result (FIG. 3), the protein of desmocholine 3 of the group (OGN-si) treated with interfering RNA that prevents the gene function of osteoglycine is a control (con si, interfering RNA, but not in the gene function of osteoglycine. It was confirmed that it was reduced compared to the unrelated interference RNA). This means that processing the interfering RNA that prevents the gene of osteoglycine from functioning leads to a decrease in cell adhesion, and thus, impairs cell-cell function, and consequently, the epidermal layer can cause abnormalities.

데스모콜린 2/3과 데스모글라인 3의 위치를 세포에서 확인하기 위하여 각질형성 세포를 배양한 후, 형광 표지된 데스모콜린 2/3 항체 (Abcam, USA)와 형광 표지된 데스모글라인 3의 항체 (Abcam, USA) 를 상기 세포와 반응시킨 후, 세포 내에서 데스모콜린 2/3과 데스모글라인의 위치를 확인하였다. 데스모콜린 2/3과 데스모글레인의 형광염색된 부위와 데옥시리보 핵산(Deoxyribonucleic acid, DNA) 위치가 다르다는 것을 확인하기 위해 DAPI로 함께 Merge하여 표시하였다. 그 결과 (도 4), 오스테오글라인신의 기능을 못하도록 오스테오글라인 간섭 RNA을 형진전환 시킨 군(OSN-si)에서 데스모콜린 2/3(Dsc)과 데스모글라인 3(Dsg 3)의 형광이 감소되었음을 확인할 수 있었다. 이로부터 오스테오글라이신의 간섭 RNA을 형진전환 시킨 군의 세포는 주변의 다른세포와의 부착력이 감소하여 세포 상호간의 기능 유지을 가능하게 하는 신호 전달에 문제가 발생함을 알 수 있었다.
After culturing keratinocytes to confirm the location of desmocholine 2/3 and desmogline 3 in the cells, fluorescently labeled desmocholine 2/3 antibody (Abcam, USA) and fluorescently labeled desmogline 3 After the antibody (Abcam, USA) was reacted with the cells, the location of desmocholine 2/3 and desmogline in the cells was confirmed. To confirm that the positions of desmocholine 2/3 and the desmogline fluorescent staining and deoxyribonucleic acid (DNA) are different, they were marked by merging with DAPI. As a result (FIG. 4), fluorescence of desmocholine 2/3 (Dsc) and desmogline 3 (Dsg 3) in a group (OSN-si) in which the austenoline interfering RNA was transformed to prevent the function of osteoglysin. It was confirmed that it was reduced. From this, it was found that the cells of the group that transformed the interference RNA of the osteoglycine had a problem in signal transmission enabling the maintenance of functions between cells due to a decrease in adhesion to other cells in the vicinity.

오스테오글라이신이 유전자 발현을 하지 못하게 짧은 간섭 RNA (small interfering RNA, siRNA)(바이오니아, 한국)를 리포펙타민(Sigma, USA)과 함께 각질형성세포에 형질 주입 (Transfection)시켜 오스테오글라이신의 유전자가 발현할 수 없도록 만든 상태에서, 이러한 상황이 각질형성세포의 막 구성 단백질인 트랜스글루타미나제 (Transglutaminase, TG)와 각질형성세포의 분화 마커이고 보습인자로 알려진 필라그린의 유전자 발현에 미치는 영향을 트랜스글루타미나아제 (Transglutaminase)와 필라그린 (filaggrin) 각각의 프라이머를 사용하여 Real-time PCR을 수행하였다. 그 결과 (도 5), 간섭 RNA을 넣지 않은 대조군(Con)과 비교시 오스테오글라이신 간섭 RNA을 형진전환시킨 군 (OGN-si)은 각질형성 과정에 관여하는 TG의 양이 감소되어 있었고, 또한 보습 인자인 필라그린 유전자의 양이 감소하였음을 확인할 수 있었다. 이러한 결과를 통해 오스테오글라이신이 정상적으로 기능하지 못하면 각질형성에 문제가 발생하게 되어 보습력이 감소할 것임을 확인할 수 있었다.
The gene of osteoglycine is transfected with small interfering RNA (siRNA) (Bionia, Korea) into keratinocytes to prevent osteoglycine from expressing the gene. In the state that is not expressed, the effect of this situation on the gene expression of transglutaminase (Transglutaminase, TG), which is a membrane constituent protein of keratinocytes, and pilargreen, a marker for differentiation of keratinocytes and a moisturizing factor Real-time PCR was performed using transglutaminase and filaggrin primers. As a result (FIG. 5), compared to the control group (Con) with no interfering RNA, the group that transformed the osteoglycine interfering RNA (OGN-si) had a reduced amount of TG involved in the keratinization process. It was confirmed that the amount of the moisturizing factor, the pilargreen gene, was reduced. Through these results, it could be confirmed that when osteoglycine does not function normally, a problem in keratin formation occurs and the moisturizing power will decrease.

정상적인 노인피부와 건조 노인피부를 구별하게 위해 평균나이 65+/-2세의 6명의 노인들의 피부 수분량을 Corneometer®MPA580 (Courage-Khazaka, Cologne, Germany)으로 비교한 후, 도 6 (a) 처럼 정상피부와 건조노인피부로 두 군으로 구분하였다. 건조 피부를 가진 노인의 경우, 정상적인 피부를 가진 노인 피부의 수분량보다 약 50% 가량 감소된 피부 수분량을 가지는 것을 확인할 수 있었다. After comparing normal and dry skin, aged skin moisture content of six elderly seniors an average age of 65 +/- 2 in order to distinguish the skin three to Corneometer ® MPA580 (Courage-Khazaka, Cologne, Germany), as 6 (a) also It was divided into two groups: normal skin and dry aged skin. In the case of the elderly with dry skin, it was confirmed that the moisture content of the skin was reduced by about 50% compared to the moisture content of the elderly skin with normal skin.

이렇게 분류한 각 군의 대상에 있어서, 오스테오글라인의 유전자 발현양 차이를 비교하기 위해 실시예 1과 같이 실험을 진행하였다. 그 결과(도 6 -(b)), 건조 노인피부에서 오스테오글라이신 유전자의 발현량은 정상적인 노인 피부에 비해 20% 정도 감소되어 있음을 확인할 수 있었다. For the subjects of each group classified as described above, experiments were conducted as in Example 1 to compare the difference in the amount of gene expression of osteoglines. As a result (FIG. 6-(b)), it was confirmed that the expression level of the osteoglycine gene in dry elderly skin is reduced by about 20% compared to normal elderly skin.

Claims (13)

삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 오스테오글라이신(Osteoglycin)에 대한 항체를 포함하고,
정상 노인 피부보다 피부 수분량이 감소된 노인성 피부 건조 질환을 진단하기 위한 것이며,
상기 노인성 건조 질환은 노인성 소양증, 노인성 건조증, 건조성 습진, 신경성 피부염 또는 대상포진을 포함하는, 노인성 피부 건조 질환 진단용 키트.
Contains an antibody against Osteoglycin,
It is for diagnosing senile skin dry disease with reduced skin moisture content than normal elderly skin.
The senile dry disease comprises senile pruritus, senile dryness, dry eczema, neurodermatitis or shingles, kit for diagnosing senile dry skin disease.
제6항에 있어서,
상기 키트는 진단 대상 표피에서 상기 항체에 결합하는 항원의 양을 측정하는 것을 포함하는, 노인성 피부 건조 질환 진단용 키트.
The method of claim 6,
The kit comprises measuring the amount of antigen binding to the antibody in the epidermis to be diagnosed, kit for diagnosing senile skin dry disease.
삭제delete 오스테오글라이신(Osteoglycin)에 대한 항체를 포함하고,
정상 노인 피부보다 피부 수분량이 감소된 노인성 피부 건조 질환을 진단하기 위한 것이며,
상기 노인성 건조 질환은 노인성 소양증, 노인성 건조증, 건조성 습진, 신경성 피부염 또는 대상포진을 포함하는, 노인성 피부 건조 질환 진단용 마커 조성물.
Contains an antibody against Osteoglycin,
It is for diagnosing senile skin dry disease with reduced skin moisture content than normal elderly skin.
The senile dry disease comprises senile pruritus, senile dryness, dry eczema, neurodermatitis or shingles, a marker composition for diagnosing senile dry skin disease.
제9항에 있어서,
상기 진단은 진단 대상 표피에서 상기 항체에 결합하는 항원의 양을 측정하는 것을 포함하는, 노인성 피부 건조 질환 진단용 마커 조성물.
The method of claim 9,
The diagnosis comprises measuring the amount of antigen binding to the antibody in the epidermis to be diagnosed, a marker composition for diagnosing senile skin dry disease.
삭제delete 후보물질을 표피 세포에 처리한 후 오스테오글라이신(Osteoglycin)의 양을 측정하고 오스테오글라이신(Osteoglycin)의 양이 처리 전보다 증가하면 상기 후보물질을 노인성 건조 질환의 개선용 물질로 판단하는 것을 포함하며,
상기 노인성 건조 질환은 정상 노인 피부보다 피부 수분량이 감소하는 질환을 의미하고,
상기 노인성 건조 질환은 노인성 소양증, 노인성 건조증, 건조성 습진, 신경성 피부염 또는 대상포진을 포함하는, 노인성 건조 질환의 개선용 물질을 스크리닝하는 방법.
After treating the candidate substance to epidermal cells, measuring the amount of osteoglycin and increasing the amount of osteoglycin before treatment includes judging the candidate substance as a substance for improving senile dry disease. ,
The senile dry disease refers to a disease in which the moisture content of the skin is reduced compared to normal elderly skin,
The senile dry disease includes senile pruritus, senile dryness, dry eczema, neurodermatitis or shingles, and a method for screening for a substance for improving senile dry disease.
삭제delete
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