KR102088441B1

KR102088441B1 - Complex agent improving skin for cosmetic composition , Nrf2 induction revitalizing cosmetic composition containing the same, Revitalizing cosmetics containing the same and Manufacturing method thereof

Info

Publication number: KR102088441B1
Application number: KR1020190040254A
Authority: KR
Inventors: 이충근
Original assignee: 이충근
Priority date: 2019-04-05
Filing date: 2019-04-05
Publication date: 2020-03-12

Abstract

The present invention relates to a skin improvement complex having high active oxygen scavenging activity as well as having NO activity suppression and skin whitening effects, a cosmetic product comprising the same, a serum type cosmetic product (including a mask pack), and a method for manufacturing the same. More specifically, provided is an invention which introduces different two types of materials in addition to an Inula japonica extract and a Rheum rhabarbarumas extract as a skin improvement complex, and manufactures an Nrf2 induction revitalizing complex using the same to support activation of Nrf2 distributed in the skin epidermal layer and highly improve active oxygen scavenging performance in the skin, thereby providing cosmetic products having excellent skin elasticity improvement and antioxidant effects and having excellent skin inflammation prevention and skin whitening effects.

Description

화장료용 복합제, 이를 포함하는 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 화장료, 이를 포함하는 화장품 및 이의 제조방법{Complex agent improving skin for cosmetic composition , Nrf2 induction revitalizing cosmetic composition containing the same, Revitalizing cosmetics containing the same and Manufacturing method thereof}Complex agent improving skin for cosmetic composition, Nrf2 induction revitalizing cosmetic composition containing the same, Revitalizing cosmetics containing the same and Manufacturing method thereof}

본 발명은 활성산소 소거 활성도가 높으면서 피부 미백 효과가 있는 화장료용 피부개선 복합제, 스트레스 받고 지친 피부를 효과적으로 회복시켜주는 상기 피부개선 복합제를 포함하는 화장료, 이를 이용한 화장품, 세럼 타입의 화장품(마스크팩 포함) 및 이를 제조하는 방법에 관한 것이다.The present invention has a high activity of oxygen scavenging activity and has a skin whitening complex for a cosmetic that has a skin whitening effect, a cosmetic comprising the skin improvement complex that effectively restores stressed and tired skin, a cosmetic using the same, a serum-type cosmetic (including a mask pack) ) And a method of manufacturing the same.

선복화는 뿌리줄기로서 원반상, 원주상 등으로 그 형태가 고르지 않으며, 원반상의 것은 지름 3 ~ 10cm, 두께 0.5 ~ 3cm이고 가는 것은 거의 원주상이며, 지름 1 ~ 3cm, 길이 5 ~ 8cm이나 때로 세로로 쪼개진 것도 있다. 횡단면은 회갈색 내지 황갈색이고, 형성층 부근은 갈색을 띤 환층이 명확한 특징이 있다. 그리고, 측면은 어두운 갈색이며, 가로 주름이 있고 껍질을 벗긴 것은 황갈색이며, 목부의 지름은 피부의 약 3 ~ 4배이고, 바깥 면은 매우 단단하나 섬유성이 아니다. 그리고, 특유한 냄새가 약간 있고 맛은 떫고 쓰며 씹으면 가는 모래를 씹는 것 같고 침을 노랗게 물들이는 특징이 있는 약재이다. 이러한 선복화의 추출물을 이용한 당뇨병 예방, 치료용 조성물(대한민국 공개번호 2005-0003669호), 식물병해 방제 활성제(대한민국 공개번호 2010-0048351호), 변비치료(대한민국 등록번호 1286467호) 등으로 이용된 기술이 공지된 바 있다.As the root stem, the roots are discoid, columnar, etc., and the shape is uneven. The discoid is 3 ~ 10cm in diameter, 0.5 ~ 3cm in thickness, and the thin one is almost columnar, 1 ~ 3cm in diameter, and 5 ~ 8cm in length. Some are split vertically. The cross-section is gray-brown to yellowish brown, and the brown layer is clear in the vicinity of the formation layer. And, the side is dark brown, there are transverse wrinkles and the skin is yellowish brown, the diameter of the neck is about 3 to 4 times the skin, and the outer surface is very hard but not fibrous. In addition, it has a peculiar smell and taste is bitter and bitter. When chewing it, it is like chewing fine sand. Diabetes prevention and treatment composition using the extract of bokbokhwa (Korea Publication No. 2005-0003669), plant disease control activator (Korea Publication No. 2010-0048351), constipation treatment (Korea Registration No. 1286467) Technology has been known.

종대황은 뿌리줄기로서 원반상, 원주상 등으로 그 형태가 고르지 않으며, 원반상의 것은 지름 3 ~ 10cm, 두께 0.5 ~ 3cm이고 가는 것은 거의 원주상이며, 지름 1 ~ 3cm, 길이 5 ~ 8cm이나 때로 세로로 쪼개진 것도 있다. 횡단면은 회갈색 내지 황갈색이고, 형성층 부근은 갈색을 띤 환층이 명확한 특징이 있다. 그리고, 측면은 어두운 갈색이며, 가로 주름이 있고 껍질을 벗긴 것은 황갈색이며, 목부의 지름은 피부의 약 3 ~ 4배이고, 바깥 면은 매우 단단하나 섬유성이 아니다. 그리고, 특유한 냄새가 약간 있고 맛은 떫고 쓰며 씹으면 가는 모래를 씹는 것 같고 침을 노랗게 물들이는 특징이 있는 약재이다. 이러한 종대황의 추출물을 이용한 당뇨병 예방, 치료용 조성물(대한민국 공개번호 2005-0003669호), 식물병해 방제 활성제(대한민국 공개번호 2010-0048351호), 변비치료(대한민국 등록번호 1286467호) 등으로 이용된 기술이 공지된 바 있다.The rhizome is a rhizome and has an uneven shape such as discoid or columnar, and discoid is 3 ~ 10cm in diameter, 0.5 ~ 3cm in thickness, and almost columnar in shape, 1 ~ 3cm in diameter, 5 ~ 8cm in length, sometimes vertical There are also split into. The cross-section is gray-brown to yellowish brown, and the brown layer is clear in the vicinity of the formation layer. And, the side is dark brown, there are transverse wrinkles and the skin is yellowish brown, the diameter of the neck is about 3 to 4 times the skin, and the outer surface is very hard but not fibrous. In addition, it has a peculiar smell and taste is bitter and bitter. When chewing it, it is like chewing fine sand. Diabetes prevention and treatment compositions using extracts of these species rhubarb (Korea Publication No. 2005-0003669), plant disease control activators (Korea Publication No. 2010-0048351), constipation treatment (Republic of Korea Registration No. 1286467) Technology has been known.

활성산소는 정상적인 인체의 대사과정에서 끊임없이 만들어지는 물질로, 통상 우리가 호흡하는 산소의 2 ~ 5% 정도는 활성산소로 바뀐다. 이러한 활성산소가 위험한 이유는 강력한 산화작용 때문이다. 몸 안의 과량의 유해활성 산소는세포와 단백질, DNA를 손상시켜 세포구조나 기능, 신호전달체계에 이상을 일으키게 되어 최종적으로는 체내에서 염증을 일으키거나 노화를 유도하기도 한다. 이러한 활성산소의 생성 원인 중 하나인 태양의 자외선은 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)을 유발하여 홍반, 수종, 자외선화상, 광노화 및 피부암 같은 질병을 일으킨다.Free radicals are substances that are constantly created during normal human metabolism, and usually 2 to 5% of the oxygen we breathe is converted into free radicals. The reason why these free radicals are dangerous is because of their strong oxidation. Excessive harmful free radicals in the body damage cells, proteins, and DNA, causing abnormalities in cell structures, functions, and signaling systems, which eventually lead to inflammation or aging in the body. One of the causes of the generation of free radicals, the sun's ultraviolet rays cause reactive oxygen species (ROS), causing diseases such as erythema, tree species, ultraviolet burns, photoaging and skin cancer.

과산화물 음이온(Superoxide anion,O₂·^-), H₂O₂(hydrogen peroxide), 그리고 ·OH(hydroxy radical) 등을 포함하는 ROS는 호흡 및 대사과정을 통해 지속적으로 생성되는 것으로, 체내에서는 SOD(superoxide dismutase), Gpxes(glutathione peroxidase), 카타라제(catalase)와 같은 효소를 이용하여 ROS에 의한 손상을 막는다. 그러나, 태양 광선에 의한 과량의 ROS 발생은 생체 내의 항산화적 방어 능력을 초과하게 되어 산화적 스트레스가 발생한다. 즉, DNA, 세포막 및 단백질 등과 반응하여 세포나 조직에 손상을 유발하고, 이는 각종 염증질환, 파킨슨병, 광노화, 암 발생 등을 촉진하는 것으로 알려져 있다.ROS, including superoxide anion (O ₂ · ^- ), H ₂ O ₂ (hydrogen peroxide), and OH (hydroxy radical), is continuously produced through respiration and metabolic processes. Enzymes such as superoxide dismutase), Gpxes (glutathione peroxidase), and catalase are used to prevent ROS damage. However, excessive ROS generation by the sun's rays exceeds the antioxidant defense capacity in vivo, resulting in oxidative stress. That is, it reacts with DNA, cell membranes, and proteins to cause damage to cells or tissues, which are known to promote various inflammatory diseases, Parkinson's disease, photoaging, and cancer.

따라서, 피부의 표피층에 분포하고 있는 Nrf2는 인체 내 및 외부로부터 발생한 활성산소 제거에 작용하는 전사인자인데, 이를 활성화시키면 피부 노화, 피부 세포, 피부 조직의 손상을 방지할 수 있다.Therefore, Nrf2 distributed in the epidermal layer of the skin is a transcription factor that acts on the removal of free radicals generated from inside and outside the human body. When activated, it can prevent skin aging, skin cells, and damage to skin tissue.

대한민국 등록특허번호 10-1857526호(공고일 2018.05.14.)Republic of Korea Registered Patent No. 10-1857526 (announcement date 2018.05.14.) 대한민국 등록특허번호 10-1730352호(공고일 2017.04.20.)Republic of Korea Patent No. 10-1730352 (announcement date 2017.04.20.)

본 발명자들은 끊임없이 연구한 결과, 선복화 추출물 및 종대황 추출물이 피부 노화를 유발시키는 활성산소를 제거하는 Nrf2의 활성을 촉진시킴으로서, 피부를 보호하고 개선할 수 있는데, 상기 선복화 추출물 및 종대황 추출물과 함께 담배잎산말 추출물의 발효물 및 홍화씨 추출 발효물을 혼합하여 사용하면 Nrf2 활성 촉진 효과가 크게 증가하면서 NO 생성 억제 및 피부 미백 효과도 있음을 알게 되어 본 발명을 완성하게 되었다. 즉, 본 발명은 선복화 추출물, 종대황 추출물 등 4종 물질이상을 유효성분으로 포함하는 화장료용 피부개선 복합제, 이를 포함하는 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 화장료, 이를 이용한 화장품, 세럼(마스크팩 포함), 이를 제조하는 방법을 제공하고자 한다.As a result of continuous research, the present inventors have been able to protect and improve the skin by promoting the activity of Nrf2, which removes free radicals that cause skin aging, as the sunbok extract and seed rhubarb extract, the sunbok extract and sundae extract When the fermentation product of the tobacco leaf aroma extract and the fermentation product of safflower seed are used in combination, the effect of promoting Nrf2 activity is greatly increased, and it has been found that there is also an effect of inhibiting NO production and skin whitening, thereby completing the present invention. That is, the present invention is a skin improvement complex for cosmetic products containing at least four kinds of substances such as sunbokhwa extract and seed rhubarb extract, as an active ingredient, Nrf2 induction revitalizing cosmetics, cosmetics using it, serum (including mask pack), and It is intended to provide a method of manufacturing.

상기 과제를 해결하기 위한 본 발명은 선복화 추출물, 종대황 추출물, 담배잎산말(Desmarestia tabacoides) 추출물 및 홍화씨 추출 발효물을 포함하는 화장료용 피부개선 복합제를 제공하고자 한다.The present invention for solving the above problems is to provide a skin improvement complex agent for a cosmetic product comprising a bokbok extract, a bellflower rhubarb extract, a desmarestia tabacoides extract and a fermented extract of safflower seed.

또한, 본 발명은 상기 화장료용 피부개선 복합제를 포함하는 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 화장료를 제공하고자 한다.In addition, the present invention is to provide an Nrf2 induction revitalizing cosmetic composition comprising the skin improvement complex for cosmetic.

또한, 본 발명은 포함하는 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 화장료를 포함하는 화장품, 바람직하게는 세럼 타입의 화장품(마스크팩 포함)을 제공하고자 한다.In addition, the present invention is to provide a cosmetic containing Nrf2 induction revitalizing cosmetic, preferably a serum-type cosmetic (including a mask pack).

또한, 본 발명은 상기 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 화장료를 제조하는 방법을 제공하고자 한다.In addition, the present invention is to provide a method of manufacturing the Nrf2 induction revitalizing cosmetic.

본 발명의 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 제제는 피부 표피층 내 분포되어 있는 Nrf2의 활성을 도와서 피부 내 활성산소 제거성능을 크게 향상시킴으로써, 피부탄력향상과 뛰어난 항산화 효과가 우수하여, 거칠고 칙칙한 피부의 생기를 되찾아 피부에 은은한 광택과 윤기를 부여할 수 있으며, 또한 피부 세포 내 NO 활성 억제 및 피부 미백 효과도 우수하며, 본 발명의 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 제제를 도입한 화장품은 사용시간에 구애 없이 피부에 언제든지 적용이 가능하다.The Nrf2 induction revitalizing agent of the present invention helps the activity of Nrf2 distributed in the skin epidermal layer and greatly improves the free radical scavenging performance in the skin, thereby improving skin elasticity and excellent antioxidant effect, regaining the revitalization of rough and dull skin It can give subtle gloss and shine to the skin, and also suppresses NO activity in skin cells and has excellent skin whitening effect, and the cosmetics introduced with the Nrf2 induction revitalizing agent of the present invention can be applied to the skin at any time regardless of use time. Do.

도 1은 실험예 2의 루시퍼라아제 활성도 측정 결과이다.
도 2는 실험예 3의 웨스턴 블랏 측정 결과이다.
도 3은 담배잎산말 추출물의 Raw264.7세포에 대한 산화적 스트레스 방어 측정 결과이다.1 is a result of measuring the luciferase activity of Experimental Example 2.
2 is a result of Western blot measurement of Experimental Example 3.
Figure 3 is a result of the measurement of oxidative stress defense against Raw264.7 cells of tobacco leaf agar extract.

이하, 본 발명에 대하여 더욱 자세하게 설명을 하겠다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

본 발명의 화장료용 피부개선 복합제는 선복화 추출물을 포함하며, 이는 정제수 100 중량부에 대하여 선복화 4 ~ 10 중량부를 혼합하여 원료를 준비하는 단계; 상기 원료를 90 ~ 100℃ 하에서, 4 ~ 8시간 동안 열수추출을 수행하여 추출하여 추출물을 얻는 단계; 상기 추출물을 1차 필터링(filtering)하여 얻은 1차 여과액을 제조하는 단계; 상기 1차 여과액에 1,2-헥산디올 및 에틸헥실글리세린을 첨가 및 교반한 후, 2차 필터링하여 선복화 추출물을 제조하는 단계;의 공정을 수행하여 제조한 것을 사용할 수 있다.The skin improvement complex for cosmetic of the present invention includes a sunbok extract, which comprises mixing 4 to 10 parts by weight of sunbokhwa with respect to 100 parts by weight of purified water to prepare a raw material; Obtaining the extract by extracting the raw material by performing hot water extraction for 4 to 8 hours at 90 to 100 ° C; Preparing a primary filtrate obtained by first filtering the extract; After adding and stirring 1,2-hexanediol and ethylhexylglycerin to the first filtrate, filtering the second step to prepare a sunbok extract; may be used by performing the process of.

상기 선복화 추출물 제조시, 상기 1차 필터링은 평균기공 20 ~ 30㎛ 필터막으로 필터링을 수행할 수 있고, 바람직하게는 평균기공 23 ~ 27㎛ 인 필터막으로 필터링을 수행할 수 있다.In the preparation of the bokbok extract, the primary filtering may be performed with a filter membrane having an average pore size of 20 to 30 μm, preferably filtering with a filter layer having an average pore size of 23 to 27 μm.

그리고, 상기 2차 필터링은 평균기공 8 ~ 15㎛ 필터막으로, 바람직하게는 8 ~ 12㎛ 필터막으로 필터링을 수행할 수 있다.In addition, the secondary filtering may be performed with an average pore size of 8 to 15 μm filter film, preferably 8 to 12 μm filter film.

선복화 추출물의 루시퍼라아제 활성 효과, 활성산소 소거 활성 효과, 산화적 스트레스 방어 효과는 등록특허번호 10-1857526호에 개시되어 있다.The luciferase activity effect, free radical scavenging activity effect, and oxidative stress defense effect of the sunbok extract are disclosed in Patent No. 10-1857526.

본 발명의 화장료용 피부개선 복합제 성분 중 상기 종대황 추출물은 정제수 100 중량부에 대하여 종대황 4 ~ 10 중량부를 혼합하여 원료를 준비하는 단계; 상기 원료를 90 ~ 100℃ 하에서, 4 ~ 8시간 동안 열수추출을 수행하여 추출하여 추출물을 얻는 단계; 상기 추출물을 1차 필터링(filtering)하여 얻은 1차 여과액을 제조하는 단계; 상기 1차 여과액에 1,2-헥산디올 및 에틸헥실글리세린을 첨가 및 교반한 후, 2차 필터링하여 종대황 추출물을 제조하는 단계;의 공정을 수행하여 제조한 것을 사용할 수 있다.In the cosmetic composition for improving skin, the rhubarb extract is prepared by mixing 4 to 10 parts by weight of rhubarb with respect to 100 parts by weight of purified water; Obtaining the extract by extracting the raw material by performing hot water extraction for 4 to 8 hours at 90 to 100 ° C; Preparing a primary filtrate obtained by first filtering the extract; After adding and stirring 1,2-hexanediol and ethylhexylglycerin to the first filtrate, filtering the second step to prepare a seed rhubarb extract may be used by performing the process of.

상기 종대황 추출물 제조시, 상기 1차 필터링은 평균기공 20 ~ 30㎛ 필터막으로 필터링을 수행할 수 있고, 바람직하게는 평균기공 23 ~ 27㎛인 필터막으로 필터링을 수행할 수 있다.When preparing the extract of the rhubarb, the primary filtering may be performed with a filter membrane having an average pore size of 20 to 30 µm, and preferably filtering with a filter layer having an average pore size of 23 to 27 µm.

종대황 추출물의 루시퍼라아제 활성 효과, 활성산소 소거 활성 효과, 산화적 스트레스 방어 효과는 등록특허번호 10-1730352호에 개시되어 있다.The luciferase activity effect, free radical scavenging activity effect, and oxidative stress defense effect of the species rhubarb extract are disclosed in Patent No. 10-1730352.

본 발명의 화장료용 피부개선 복합제는 대한민국 등록특허번호 10-1730352호의 선복화 추출물 및 종대황 추출물을 유효성분으로 하는 Nrf2 활성화제의 Nrf2 활성화 효과를 증대시키면서, NO 활성 억제 및 피부 미백 효과를 부여한 복합제에 관한 것으로서, 하기 2종의 유효성분을 더 포함한다.The skin improvement complex for cosmetic of the present invention increases the Nrf2 activation effect of the Nrf2 activator using the bokbok extract and seed rhubarb extract of Korean Patent No. 10-1730352 as an active ingredient, and suppresses the NO activity and the skin whitening effect As to, further comprises the following two active ingredients.

본 발명의 피부개선 복합제는 담배잎산말 추출물을 포함하며, 선복화 추출물의 Nrf2의 활성화를 증대시키면서, 피부 내 NO 활성 억제 효과를 부여하는 역할을 한다. 담배잎산말은 학명이 Desmarestia tabacoides인 해조류로서, 일명 Tabakogusa로도 불리는 해조류이다. 일본, 국내 방어진, 추자도, 제주도 등지에 분포하며, 형태적 특징은 몸이 매우 큰 엽상이며, 짧은 줄기가 있고, 넓은 난원형의 엽편을 가진다. 잎은 대체로 엇비슷하게 째어지고 단엽이며 중륵이 있다. 엽편은 열편을 펼치면 큰 난원형으로 되고 담배잎과도 비슷하다. 중륵은 하부에서는 좀 융기하나 차차 윗쪽으로 갈수록 희미하게 되고 대생하는 측맥이 있다. 측맥은 거의 그 기점에서 다수의 작은 세맥으로 된다. 담배잎산말의 색은 밤색이며 공기 중에서는 청록색으로 변하는 특징이 있다. Desmarestia에 속하는 해조류들은 산을 함유하고 있으며, Desmarestia에 속하는 해조류 추출액에는 능금산, 황산염 구연산 등이 함유되어 있는 것으로 알려져 있고 이들 산의 상승작용에 의해 산성도가 높은 걸로 알려져 있다.The skin improvement complex of the present invention includes a tobacco leaf aquatic extract, and increases the activation of Nrf2 of the sunbok extract, and serves to impart an NO activity inhibiting effect in the skin. Tobacco leaf aquatic algae, scientific name Desmarestia tabacoides, is also known as Tabakogusa. It is distributed in Japan, domestic defensive teams, Chuja-do, and Jeju-do. Its morphological features are very large blades, short stems, and broad ovate blades. The leaves are generally slanted, monocotyledonous, and have a midrib. Yeolpyeon becomes a large oval shape when it is opened and similar to tobacco leaves. The middle ear is slightly raised in the lower part, but gradually fades toward the upper part and there is a side vein that coexists. The side vein is almost a number of small vein at that point. The color of tobacco leaf trail is brown, and it has the characteristic of changing to turquoise in the air. The seaweeds belonging to Desmarestia contain acid, and the seaweed extracts belonging to Desmarestia are known to contain nitric acid, sulfate citric acid, etc., and it is known that these acids have high acidity.

본 발명에서 상기 담배잎산말 추출물은 정제수 100 중량부에 대하여 담배잎산말 20 ~ 30 중량부를, 바람직하게는 22 ~ 30 중량부를, 더욱 바람직하게는 22 ~ 28 중량부를, 더 더욱 바람직하게는 24 ~ 26.5 중량부를 혼합하여 원료를 준비하는 단계; 상기 원료를 110℃ 하에서, 4 ~ 6시간 동안 증류추출을 수행하여 추출하여 추출물을 얻는 단계; 상기 추출물을 1차 필터링(filtering)하여 얻은 1차 여과액을 제조하는 단계; 상기 1차 여과액에 1,2-헥산디올을 첨가 및 교반한 후, 2차 필터링하여 담배잎산말 추출물을 제조하는 단계;의 공정을 수행하여 제조한 것을 사용할 수 있다.In the present invention, the tobacco leaf aroma extract is 20 to 30 parts by weight of the tobacco leaf aroma, preferably 22 to 30 parts by weight, more preferably 22 to 28 parts by weight, even more preferably 24 to 100 parts by weight of purified water Preparing a raw material by mixing 26.5 parts by weight; Extracting the raw material by performing distillation extraction for 4 to 6 hours at 110 ° C. to obtain an extract; Preparing a primary filtrate obtained by first filtering the extract; After adding and stirring 1,2-hexanediol to the first filtrate, filtering the second step to prepare a tobacco leaf aquatic acid extract; may be used by performing the process of.

상기 담배잎산말 추출물 제조시, 상기 1차 필터링은 평균기공 20 ~ 30㎛ 필터막으로 필터링을 수행할 수 있고, 바람직하게는 평균기공 23 ~ 27㎛ 인 필터막으로 필터링을 수행할 수 있다.When producing the tobacco leaf aroma extract, the primary filtering may be performed by filtering with an average pore size of 20 ~ 30㎛ filter film, preferably filtering with an average pore size of 23 ~ 27㎛ filter film.

이렇게 제조한 본 발명의 담배잎산말 추출물은 농도가 30 중량% 이하로 포함하는 수용액일 때, RAW264.7 세포 생존율이 100% 이상일 수 있으며, 바람직하게는 담배잎산말 추출물을 20 ~ 30 중량%로 포함할 때, RAW264.7 세포 생존율이 99.8 ~ 105%일 수 있다.Tobacco leaf aroma extract of the present invention prepared in this way, when the concentration is 30% by weight or less of an aqueous solution, RAW264.7 cell viability may be 100% or more, preferably 20 to 30% by weight of the tobacco leaf aquatic extract When included, RAW264.7 cell viability may be 99.8-105%.

또한, 본 발명의 담배잎산말 추출물을 200ppm 이하로 포함할 때, RAW264.7 세포 생존율이 100% 이상일 수 있다.In addition, when the tobacco leaf aroma extract of the present invention is contained in 200ppm or less, the RAW264.7 cell viability may be 100% or more.

또한, 본 발명의 담배잎산말 추출물의 농도가 10 ~ 200ppm일 때, 하기 수학식 1에 의거하여 측정시, RAW264.7 세포에서의 일산화질소 생성 억제율이 10 ~ 45%일 수 있으며, 바람직하게는 RAW264.7 세포에서의 일산화질소 생성 억제율이 25 ~ 45%일 수 있다.In addition, when the concentration of the tobacco leaf aroma extract of the present invention is 10 to 200ppm, when measured according to the following Equation 1, the inhibition rate of nitrogen monoxide production in RAW264.7 cells may be 10 to 45%, preferably The inhibition rate of nitrogen monoxide production in RAW264.7 cells may be 25-45%.

[수학식 1][Equation 1]

NO 생성 억제율(%) = (A-B)/Aⅹ100%NO production inhibition rate (%) = (A-B) / Aⅹ100%

상기 수학식 1에서 A는 NO 활성 억제제 내 담배잎산말 추출물 농도가 0ppm일 때 RAW264.7 세포에서의 NO 생성량(100%)이고, B는 NO 활성 억제제 내 담배잎산말 추출물의 특정 농도에서의 RAW264.7 세포에서의 NO 생성량(%) 측정 값이다.In Equation 1, A is the amount of NO produced in RAW264.7 cells (100%) when the concentration of the tobacco leaf aroma extract in the NO activity inhibitor is 0 ppm, and B is RAW264 at a specific concentration of the tobacco leaf aroma extract in the NO activity inhibitor. .7 This is a measure of the amount of NO produced in cells (%).

담배잎산말 추출물을 포함하는 본 발명의 피부개선 복합제는 iNOS(유도형 NO synthas), COX-2(cyclooxygenase-2), 및/또는 인터류킨수용체인 IL2, IL6의 활성을 억제하여, NO 활성억제 효과 및/또는 항염 효과를 가질 수 있다.The skin-improving complex of the present invention comprising tobacco leaf aroma extract inhibits the activity of iNOS (inductive NO synthas), COX-2 (cyclooxygenase-2), and / or interleukin receptor IL2, IL6, thereby inhibiting NO activity And / or have an anti-inflammatory effect.

본 발명의 피부개선 복합제는 선복화 추출물, 종대황 추출물 및 담배잎산말 추출물 외에 홍화씨 추출 발효물을 필수 유효성분으로 더 포함한다.The skin improvement complex of the present invention further comprises a fermented product of safflower seed extract as an essential active ingredient, in addition to the bokbok extract, the bellflower rhizome extract, and the tobacco leaf aroma extract.

홍화씨는 홍화자 (Carthamus tinctorius L.)의 씨로 잇꽃의 종자가 성숙한 여름철에 채취하고 볕에 건조하여 약제로 쓰는데, 성질이 따뜻하고 맛이 달다. 민간에서는 홍화자가 골절에 효과가 있다고 알려져 있고, 개나 닭의 골절치료에 특효를 보았다는 기록이 전해지고 있어 홍화꽃과 달리 홍화씨는 이혈약의 작용 이외에 골혈성 작용이 있는 것을 거론되고 있으나, 홍화자에 대한 한방의 기록은 홍화의 약능과 같은 이혈작용에 관한 것으로 알려져 있다. 본 발명의 피부개선 복합제는 상기 홍화씨의 추출물을 멜라민 생합성 저해 활성을 통한 미백 효과 기능을 부여하기 위해 도입한다.Safflower seeds are seeds of safflower (Carthamus tinctorius L.). The seeds of safflower are collected during the mature summer season and dried in the sun to be used as a medicine. The properties are warm and sweet. In the private sector, it is known that safflower is effective for fractures, and it has been reported that it has a special effect on the treatment of fractures in dogs and chickens. It is known that oriental medicine records are related to the hemorrhagic effects such as safflower medicinal properties. The skin improvement complex of the present invention is introduced to impart the whitening effect function of the extract of safflower seed through the activity of inhibiting melamine biosynthesis.

본 발명에서 상기 홍화씨 추출 발효물은 홍화씨 분말을 n-헥산으로 15 ~ 30℃ 하에서 추출한 후, 추출물로부터 지방을 제거하는 1 단계; 지방이 제거된 추출물에 60 ~ 75 부피% 농도의, 바람직하게는 65 ~ 75% 농도의 에탄올 수용액으로 15 ~ 30℃ 하에서 추출 및 여과하여 에탄올 추출물을 수득하는 2 단계; 상기 에탄올 추출물을 감압 농축 및 여과하여 감압 농축물을 수득하는 3 단계; 및 수득한 감압 농축물을 발효시켜서 발효물을 제조하는 4 단계;를 포함하는 공정을 수행하여 수득한 홍화씨 추출 발효물을 사용할 수 있다.In the present invention, the fermented safflower seed extract comprises: extracting safflower seed powder with n-hexane at 15 to 30 ° C., and then removing fat from the extract; A second step of extracting and filtering the fat-extracted extract at 15 to 30 ° C. with an ethanol aqueous solution having a concentration of 60 to 75% by volume, preferably 65 to 75%; Concentrating and filtering the ethanol extract under reduced pressure to obtain a reduced pressure concentrate; And 4 steps of preparing the fermentation product by fermenting the obtained reduced-pressure concentrate. The fermentation product of safflower seed obtained by performing the process including the can be used.

홍화씨 추출 발효물 제조시, 상기 1 단계는 2회 내지 5회, 바람직하게는 3회 내지 4회 반복수행하여 지방이 제거된 추출물을 제조한 후, 이를 2 단계에서 에탄올 수용액으로 재추출 공정을 수행할 수 있다.When preparing the safflower extract fermentation product, the first step is repeated 2 to 5 times, preferably 3 to 4 times, to prepare an extract from which fat has been removed, and then performing a re-extraction process with ethanol aqueous solution in step 2 can do.

상기 3 단계의 감압 농축은 당업계에서 사용하는 일반적인 방법을 통해서 수행할 수 있으며, 용매 및 불순물 제거를 위해 수행한다.The reduced pressure concentration of the above three steps can be performed through a general method used in the art, and is performed for removing solvents and impurities.

4 단계의 발효는 2 단계에서 수득한 감압 농축물에 발효 균주를 접종한 후, 30 ~ 45℃, 바람직하게는 40 ~ 45℃ 하에서 18 ~ 48시간 동안, 바람직하게는 24 ~ 30시간 동안 발효시켜서 발효물을 수득할 수 있다. 이때, 상기 발효 균주로는 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 및 바실러스 아밀로리퀴페시언스(Bacillus amyloliquefaciens) 중에서 선택된 1종 이상을 포함하는 균주를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 락토바실러스 플란타룸 및 바실러스 아밀로리퀴페시언스 중에서 선택된 1종 이상을 포함하는 균주를, 더욱 바람직하게는 락토바실러스 플란타룸 및 바실러스 아밀로리퀴페시언스를 1 : 2 ~ 3 중량비로 포함하도록 혼합하여 사용할 수 있다.The fermentation in step 4 is inoculated with the fermentation strain in the reduced pressure concentrate obtained in step 2, and then fermented for 30 to 45 ° C, preferably 40 to 45 ° C for 18 to 48 hours, preferably 24 to 30 hours Fermentation can be obtained. In this case, as the fermentation strain, a strain containing at least one selected from Lactobacillus plantarum, Bacillus subtilis, and Bacillus amyloliquefaciens may be used. Preferably, the strain comprising at least one selected from Lactobacillus plantarum and Bacillus amyloliquequiciens, and more preferably, Lactobacillus plantarum and Bacillus amyloliquequiciens in a weight ratio of 1: 2 to 3 It can be mixed to include.

본 발명의 피부개선 복합제는 추출 혼합물로서, 선복화 추출물, 종대황 추출물 및 담배잎산말 추출물 외에 홍화씨 추출 발효물을 1 : 0.2 ~ 0.5 : 0.5 ~ 1.0 : 0.3 ~ 1.0 중량비로, 바람직하게는 1 : 0.3 ~ 0.5 : 0.7 ~ 1.0 : 0.4 ~ 0.7 중량비로, 더욱 바람직하게는 1 : 0.4 ~ 0.5 : 0.8 ~ 1.0 : 0.5 ~ 0.6 중량비로 포함할 수 있으며, 상기 중량비 범위 내로 사용하는 것이 피부 내 Nrf2 활성화, NO 활성 억제 및 미백 효과를 적절하게 발휘하는 측면에서 유리하다.The skin improvement complexing agent of the present invention is an extract mixture, in addition to the bokbok extract, the bellflower rhubarb extract and the tobacco leaf aroma extract, the safflower extract fermentation product is in a weight ratio of 1: 0.2 ~ 0.5: 0.5 ~ 1.0: 0.3 ~ 1.0, preferably 1: 0.3 to 0.5: 0.7 to 1.0: 0.4 to 0.7 in a weight ratio, more preferably 1: 0.4 to 0.5: 0.8 to 1.0 may include a 0.5 to 0.6 weight ratio, the use within the weight ratio range of Nrf2 activation in the skin, It is advantageous in terms of properly exhibiting NO activity suppression and whitening effects.

본 발명의 피부개선 복합제는 선복화 추출물 및 종대황 추출물의 Nrf2 활성 효과 증대를 위해 택사(Alisma orentale) 추출물을 상기 추출 혼합물 100 중량부에 대하여, 5 ~ 15 중량부, 바람직하게는 5 ~ 10 중량부 더 포함할 수도 있다. 이때, 택사 추출물을 5 중량부 미만으로 사용시, 택사 추출물 사용으로 인한 Nrf2 활성 효과 증대가 너무 미약할 수 있고, 15 중량부를 초과하여 사용하면 과대 사용으로서 피부 트러블을 유발할 수 있으므로 상기 범위 내로 사용하는 것이 좋다.The skin improvement complexing agent of the present invention is 5 to 15 parts by weight, preferably 5 to 10 parts by weight, with respect to 100 parts by weight of the extract mixture of Alisma orentale extract to increase the effect of Nrf2 activity of the bokbok extract and the species rhubarb extract It may contain more parts. At this time, when using less than 5 parts by weight of the taxa extract, the increase in the Nrf2 activity effect due to the use of the taxa extract may be too weak, and when used in excess of 15 parts by weight may cause skin trouble as overuse, it is recommended to use within the above range. good.

택사는 택사과(Alismataceae) 식물로서 단자엽 식물 중 진화하는 과정에서 분화된 잔존군으로 세계적으로 약 13속 90여종이 분포되어 있는데, 중국의 복건, 강서 사천, 귀천 및 운남지방에서도 많이 생산되고 있으며, 우리나의 경우에는 그 생산량의 50% 이상을 차지하고 있는 전남 순천 지방을 비롯하여 전남 무안, 구례 및 경북 상주 지역에서 생산되고 있으며, 생약으로 쓰이는 택사는 질경이 택사(Alisma plantagoaquaticaL. Var. Orientalesamuels)가 주로 재배 생산되고 있다. 택사의 함유성분은 전분 25%, 단백질 7%, 정유의 푸르푸랄(furfural), 레진(resin), 무기염과 트리터페노이드계의 알리솔(alisol) A, B, C와 그 아세테이트 및 당류로 알려져 있다. 그리고, 택사는 예로부터 수분을 제거하고 오장을 도우며 기력을 튼튼히 하는 약제로 알려져 있으며, 칼륨(K)이 많이 함유되어 있어 뇨중의 칼륨(K)의 배출이 현저히 증가시키는 효능을 가지고 있다. 또한 택사는 혈중콜레스테롤을 감소시키고, 혈압 및 혈중의 당을 낮추는 작용이 있고 사염화탄소로 유발된 간독성에 유효한 보간 작용이 있음이 보고된 바 있는 식물이다.Taxi is a plant of the Alismataceae, which is a surviving group differentiated during the evolution of monocotyledonous plants, and is distributed in about 13 genera and 90 species worldwide. It is also produced in Fujian, Gangseo, Sichuan, Guichun and Yunnan provinces of China. Urina is produced in Suncheon, Jeonnam, Muan, Gurye, and Sangju, Gyeongbuk provinces, which account for more than 50% of its production.Alisma plantagoaquatica L. Var. Orientalesamuels is mainly grown and produced. Is becoming. The content of the taxa is 25% starch, 7% protein, furfural, resin of essential oil, inorganic salts and triterpenoid-based alisols A, B, C and their acetates and sugars. Is known. In addition, taxa is known as a drug that removes moisture from old days, helps with bowel and strengthens energy, and has a lot of potassium (K), which has the effect of significantly increasing the discharge of potassium (K) in urine. In addition, taxa is a plant that has been reported to reduce blood cholesterol, lower blood pressure and blood sugar, and have an effective interpolation effect on hepatotoxicity caused by carbon tetrachloride.

상기 택사 추출물은 75 ~ 90 부피% 농도의, 바람직하게는 80 ~　85 부피% 농도의 에탄올 수용액 1L당 택사 분말 150 ~ 300g, 바람직하게는 에탄올 수용액 1L당 택사 분말 180 ~ 250g을 혼합하여 혼합용액을 준비하는 1 단계; 상기 혼합용액을 55 ~ 70℃, 바람직하게는 60 ~ 70℃ 하에서 6 ~ 12시간 동안, 바람직하게는 6 ~ 10시간 동안 추출하여 추출물을 수득하는 2 단계; 및 상기 추출물을 여과한 후, 건조시키는 3 단계;를 수행하여 제조한 것을 사용할 수 있다.The texa extract is a mixture of 75 to 90% by volume, preferably 80 to 85% by volume of oxalate powder per 1L of ethanol aqueous solution, preferably 180 to 250g of texa powder per 1L of ethanol aqueous solution. Step 1 to prepare; 2 steps of obtaining the extract by extracting the mixed solution under 55 ~ 70 ℃, preferably 60 ~ 70 ℃ for 6 ~ 12 hours, preferably 6 ~ 10 hours; And after filtering the extract, and drying step 3; can be used to be prepared by performing.

본 발명의 피부개선 복합제는 피부 미백 효과 부여를 위해 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 포함할 수도 있다.The skin improvement complex of the present invention may include a compound represented by the following formula (1) to impart a skin whitening effect.

[화학식 1][Formula 1]

상기 화학식 1의 A는 C₂ ~ C₄의 알킬렌기이고, 바람직하게는 C₂ ~ C₄의 알킬렌기, 더욱 바람직하게는 에틸렌기이다. 또한, 화학식 1의 R¹ 및 R² 각각은 독립적으로 수소원자, -OH, -COOH 또는 -COH이며, 바람직하게는 R¹ 및 R² 각각은 독립적으로 -OH, 또는 -COOH이고, 더욱 바람직하게는 R¹ 및 R²은 -OH이다.A of Formula 1 is a C ₂ ~ C ₄ alkylene group, preferably a C ₂ ~ C ₄ alkylene group, more preferably an ethylene group. Further, each of R ¹ and R ^{2 in} Formula 1 is independently a hydrogen atom, -OH, -COOH or -COH, preferably each of R ¹ and R ² is independently -OH, or -COOH, more preferably R ¹ and R ² are -OH.

본 발명의 피부개선 복합제 내 화학식 1로 표시되는 화합물의 적정 사용량은 상기 추출 혼합물 100 중량부에 대하여, 1 ~ 10 중량부, 바람직하게는 2 ~ 8 중량부, 더 바람직하게는 3 ~ 6 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 화학식 1로 표시되는 화합물 사용량이 1 중량부 미만이면 미백 개선 효과가 미비할 수 있고, 10 중량부를 초과하면 오히려 다른 조성들과의 상용성 저하 등으로 인해 Nrf2 활성 저해 등의 문제가 발생할 수 있다.The appropriate amount of the compound represented by Chemical Formula 1 in the skin improvement complex of the present invention is 1 to 10 parts by weight, preferably 2 to 8 parts by weight, more preferably 3 to 6 parts by weight based on 100 parts by weight of the extraction mixture. In this case, when the amount of the compound represented by Chemical Formula 1 is less than 1 part by weight, the whitening improvement effect may be inadequate, and when it exceeds 10 parts by weight, Nrf2 activity is inhibited due to a decrease in compatibility with other compositions. Problems may arise.

그리고, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 90 ~ 95 부피% 농도의 에탄올 수용액 100 중량부에 대하여, 호장근 뿌리 5 ~ 10 중량부를 혼합한 후, 5 ~ 7일간 20 ~ 35℃, 바람직하게는 6 ~ 7일간 20 ~ 30℃ 하에서 환류 냉각 추출을 수행한 후, 냉각 추출물을 감압 농축 및 건조하여 조출물을 제조하는 1 단계; 물 100 중량부에 대하여, 상기 조추출물 3 ~ 10 중량부를, 바람직하게는 4 ~ 8 중량부를 혼합하여 혼합용액을 제조한 후, 혼합용액에 상기 물 100 중량부에 대하여 메틸렌클로라이드 80 ~ 120 중량부를, 바람직하게는 90 ~ 105 중량부를 투입한 다음 진탕 추출 및 물층과 유기 용매층으로 분획한 후, 유기 용매층을 제거하여 물층의 분획용액을 수득하는 2 단계; 상기 분획용액과 에틸 아세테이트를 1 : 8 ~ 10 부피비로 혼합한 후, 진탕 추출하여 분획하여 유기용매층을 감압 농축하여 에틸아세테이트 추출물을 수득하는 3 단계; 상기 에틸아세테이트 추출물을 실리카겔이 충진된 컬럼에서 클로로포름 및 메탄올을 5 ~ 20 : 1 부피비로, 바람직하게는 15 ~ 16 : 1 부피비로 포함하는 혼합 용매로 분획하여 수득한 5개의 분획물을 수득하는 4 단계; 및 4 단계의 3번째 분획물을 컬럼을 사용하여 세미-프렙(semi-prep) 분리하여 5개의 분획물을 수득한 후, 이를 메탄올을 재결정시키는 5 단계;를 포함하는 공정을 수행하여 제조할 수 있다.In addition, the compound represented by Chemical Formula 1 is mixed with 5 to 10 parts by weight of elongated roots, and 20 to 35 ° C for 5 to 7 days, preferably 6 to 100 parts by weight of an ethanol aqueous solution having a concentration of 90 to 95% by volume. After performing reflux cooling extraction under 20 ~ 30 ℃ for ~ 7 days, the cooling extract was concentrated under reduced pressure and dried to prepare a crude product; With respect to 100 parts by weight of water, after mixing 3 to 10 parts by weight of the crude extract, preferably 4 to 8 parts by weight, to prepare a mixed solution, 80 to 120 parts by weight of methylene chloride with respect to 100 parts by weight of the water in the mixed solution , Preferably after adding 90 ~ 105 parts by weight, followed by shaking extraction and fractionation into a water layer and an organic solvent layer, removing the organic solvent layer to obtain a fractional solution of the water layer; 3 steps of mixing the fractional solution and ethyl acetate in a volume ratio of 1: 8 ~ 10, shaking extracting, fractionating, and concentrating the organic solvent layer under reduced pressure to obtain an ethyl acetate extract; Four steps to obtain the five fractions obtained by fractionating the ethyl acetate extract with a mixed solvent containing chloroform and methanol in a 5 to 20: 1 volume ratio, preferably 15 to 16: 1 volume ratio, on a column filled with silica gel. ; And semi-prep separation of the third fraction of step 4 using a column to obtain 5 fractions, followed by 5 steps of recrystallization of methanol;

4 단계의 수득한 분획물은 5개의 분획물 중 3번째 분획물을 5 단계에서 럼을 사용하여 세미-프렙(semi-prep) 분리할 수 있으며, 5 단계의 메탄올 재결정은 세미-프렙 분리하여 얻은 5개의 분획물 중 2번째 분획물을 메탄올로 재결정시킨 것일 수 있다.The fraction obtained in step 4 can be semi-prep separated from the third fraction of 5 fractions using rum in step 5, and methanol recrystallization in step 5 is 5 fractions obtained by semi-preparation The second fraction may be recrystallized from methanol.

본 발명의 피부개선 복합제는 항산화 효과를 증대 및 염증 인자 발현 억제를 위해 하기 화학식 2로 표시되는 화합물을 포함할 수도 있다.The skin improvement complex of the present invention may include a compound represented by the following Chemical Formula 2 to increase the antioxidant effect and suppress the expression of inflammatory factors.

[화학식 2][Formula 2]

화학식 2의 R¹ 및 R² 각각은 독립적으로 수소원자, -OH 또는 C₁ 내지 C₅의 직쇄형 알킬기이며, 바람직하게는 R¹은 C₁ 내지 C₃의 직쇄형 알킬기이고, R² 은 수소원자 또는 -OH기이고, 더욱 바람직하게는 R¹은 C₁ 내지 C₂의 직쇄형 알킬기이며, R² 은 수소원자이다. 그리고, 상기 R³ 및 R⁴ 각각은 독립적으로 수소원자, -COOH, -CH₂COOH, -CH₂CH₂COOH 또는

이고, 바람직하게는 R³는 수소원자 또는 -COOH이며, R⁴는 COOH, -CH₂COOH, -CH₂CH₂COOH 또는

이며, 더욱 바람직하게는 R³는 수소원자이고, R⁴는 -CH₂COOH, -CH₂CH₂COOH 또는

이다. 그리고, 상기 R⁵ 는 -H, -OH 또는 -OCH₃이고, 바람직하게는 -OH이다.Each of R ¹ and R ^{2 in} Formula 2 is independently a hydrogen atom, -OH or a C ₁ to C ₅ straight alkyl group, preferably R ¹ is a C ₁ to C ₃ straight alkyl group, and R ² is hydrogen It is an atom or -OH group, more preferably R ¹ is a C ₁ to C ₂ straight-chain alkyl group, and R ² is a hydrogen atom. And, each of R ³ and R ⁴ is independently a hydrogen atom, -COOH, -CH ₂ COOH, -CH ₂ CH ₂ COOH or

, Preferably R ³ is a hydrogen atom or -COOH, R ⁴ is COOH, -CH ₂ COOH, -CH ₂ CH ₂ COOH or

, More preferably R ³ is a hydrogen atom, R ⁴ is -CH ₂ COOH, -CH ₂ CH ₂ COOH or

to be. And, R ⁵ is -H, -OH or -OCH ₃ , preferably -OH.

본 발명의 피부개선 복합제 내 화학식 2로 표시되는 화합물의 적정 사용량은 상기 추출 혼합물 100 중량부에 대하여, 0.1 ~ 5 중량부, 바람직하게는 0.25 ~ 2 중량부, 더 바람직하게는 0.5 ~ 1.5 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 화학식 2로 표시되는 화합물 사용량이 0.1 중량부 미만이면 그 사용량이 너무 적어서 이를 사용하는 의미가 없을 수 있고, 5 중량부를 초과하여 사용하면 오히려 피부 트러블을 유발할 수 있으므로, 상기 범위 내로 사용하는 것이 좋다.The appropriate amount of the compound represented by the formula (2) in the skin improvement complex of the present invention is 0.1 to 5 parts by weight, preferably 0.25 to 2 parts by weight, more preferably 0.5 to 1.5 parts by weight based on 100 parts by weight of the extraction mixture. It can be used, wherein, if the amount of the compound represented by the formula (2) is less than 0.1 parts by weight, the amount is too small, so it may be meaningless to use it. It is good to use as mine.

이하에서는 본 발명의 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 화장료에 대해 설명한다.Hereinafter, the Nrf2 induction revitalizing cosmetic of the present invention will be described.

본 발명의 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 화장료는 앞서 설명한 화장료용 피부개선 복합제를 이용하며, 수상액; 유상액; 상기 화장료용 피부개선 복합제; 향료; 및 정제수;를 포함한다. 이때, 화장료용 피부개선 복합제는 앞서 설명한 선복화 추출물, 종대황 추출물, 담배잎산말 추출물 및 홍화씨 추출 발효물 혼합한 혼합물을 정제수와 35 ~ 50 : 50 ~ 15 부피% 비율로, 바람직하게는 40 ~ 50 : 50 ~ 60 부피% 비율로 포함할 수 있다. 여기서, 상기 혼합물은 택사 추출물, 화학식 1로 표시되는 화합물 및 화학식 2로 표시되는 화합물 중에서 선택된 1종 이상을 더 포함할 수도 있다.The Nrf2 induction revitalizing cosmetic of the present invention uses the skin-improving complex for cosmetic, as described above, and an aqueous solution; Emulsions; The cosmetic skin improvement complex agent; Spices; And purified water. At this time, the skin improvement complex for cosmetic is a mixture of the above-mentioned bokbokhwa extract, seed rhubarb extract, tobacco leaf aroma extract and safflower seed extract fermentation mixture with purified water in a ratio of 35 to 50: 50 to 15% by volume, preferably 40 to 50: 50 to 60% by volume. Here, the mixture may further include at least one selected from a taxa extract, a compound represented by Formula 1, and a compound represented by Formula 2.

그리고, 본 발명의 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 제제는 상기 수상액 15 ~ 20 중량%, 상기 유상액 18 ~ 25 중량%, 상기 피부개선 복합제 1 ~ 10 중량%, 상기 향료 0.05 ~ 1 중량% 및 잔량의 정제수를 포함하며, 바람직하게는 상기 수상액 16 ~ 19.5 중량%, 상기 유상액 18.5 ~ 23 중량%, 상기 피부개선 복합제 5.0 ~ 9.0 중량%, 상기 향료 0.1 ~ 0.5 중량% 및 잔량의 정제수를 포함한다.In addition, the Nrf2 induction revitalizing formulation of the present invention comprises 15 to 20% by weight of the aqueous solution, 18 to 25% by weight of the oily solution, 1 to 10% by weight of the skin improvement complex, 0.05 to 1% by weight of the fragrance, and the remaining amount of purified water It includes, preferably, 16 to 19.5% by weight of the aqueous solution, 18.5 to 23% by weight of the oily solution, 5.0 to 9.0% by weight of the skin improvement complex agent, 0.1 to 0.5% by weight of the perfume and the balance of purified water.

그리고, 상기 유상액이 18 중량% 미만이면 유분 미달로 피부 보습 유지에 문제가 있을 수 있고, 25 중량%를 초과하면 과도한 오일 성분이 함유되어 피부호흡 방해나 지성피부의 뽀루지 등의 문제를 일으킬 수 있다. 또한, Nrf2의 활성화 복합제가 1 중량% 미만이면 그 함량이 너무 적어서 활성산소 제거, NO 활성 억제 및 미백 효과를 볼 수 없을 수 있고, 10 중량%를 초과하면 과다 사용으로 인핸 다른 성분들과의 상용성이 떨어져서 제품의 질이 오히려 떨어질 수 있으며, 과다 사용으로 인한 NO 활성 억제 효과 증대가 거의 미비하므로 비경제적이다.In addition, if the oil solution is less than 18% by weight, there may be a problem in maintaining skin moisturization due to insufficient oil, and if it exceeds 25% by weight, excessive oil components may be contained, which may cause problems such as obstruction of skin breathing or oily skin's porosity. have. In addition, if the active complex of Nrf2 is less than 1% by weight, the content thereof is too small to prevent free radical removal, NO activity suppression and whitening effect, and if it exceeds 10% by weight, it is compatible with other ingredients enhanced by excessive use. Due to the poor sex, the quality of the product may rather deteriorate, and it is uneconomical because the effect of suppressing NO activity due to overuse is almost insignificant.

Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 제제 성분 중 상기 향료는 당업계에서 사용하는 일반적인 것을 사용할 수 있으며, 구체적인 일례를 들면, Perfume 85147, Perfume 25399 등을 사용할 수 있다.Among the components of the Nrf2 induction revitalizing agent, the fragrance may be a general one used in the art, and specific examples include Perfume 85147, Perfume 25399, and the like.

[수상액][Award amount]

본 발명의 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 제제 성분 중 상기 수상액은 피부컨디셔닝제, 금속이온봉쇄제, 증점제, 보습제, 점도감소제, 살균보존제 및 용제를 포함한다.Among the components of the Nrf2 induction revitalizing agent of the present invention, the aqueous solution includes a skin conditioning agent, a metal ion blocker, a thickener, a moisturizer, a viscosity reducing agent, a sterilizing preservative, and a solvent.

수상액 성분 중 상기 피부컨디셔닝제로는 소듐하이알루로네이트, 히알루론산, 감초가루 및 하이드롤라이트 중에서 선택된 1종 단독 또는 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 바람직하게는 히알루론산(hyaluronic acid), 감초가루 및 하이드롤라이트(hydrolite) 중에서 선택된 2종 이상을, 더욱 바람직하게는 히알루론산, 감초가루 및 하이드롤라이트를 혼합하여 사용할 수 있다. 그리고, 히알루론산, 감초가루 및 하이드롤라이트를 혼합하여 사용시 히알루론산, 감초가루 및 하이드롤라이트를 1 : 0.01 ~ 0.2 : 1 ~ 3 중량비로, 바람직하게는 하이드롤라이트를 1 : 0.02 ~ 0.15 : 1.2 ~ 2.7 중량비로 혼합하여 사용하는 것이 좋다.The skin conditioning agent among the aqueous solution components may be used alone or in combination of two or more selected from sodium hyaluronate, hyaluronic acid, licorice powder and hydrolite, preferably hyaluronic acid, Two or more selected from licorice powder and hydrolite may be used by mixing hyaluronic acid, licorice powder and hydrolite. And, when using a mixture of hyaluronic acid, licorice powder and hydrolite, hyaluronic acid, licorice powder and hydrolite in a weight ratio of 1: 0.01 to 0.2: 1 to 3, preferably hydrolite: 1: 0.02 to 0.15: It is recommended to mix and use in a weight ratio of 1.2 to 2.7.

수상액 성분 중 상기 금속이온봉쇄제는 제제에 함유할 수 있는 금속이온에 의해 변질을 방지하는 역할을 하는 것으로서, 그 사용량은 상기 피부컨디셔닝제 100 중량부에 대하여, 0.1 ~ 2 중량부를, 바람직하게는 0.2 ~ 1.5 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 금속이온봉쇄제의 사용량이 0.1 중량부 미만이면 금속이온 봉쇄 효과가 떨어질 수 있고, 2 중량부를 초과하여 사용하면 금속이온 봉쇄 증대 효과가 없으므로 비경제적인 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다. 상기 금속이온봉쇄제는 당업계에서 사용하는 일반적인 것을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 디소듐이디티에이(disodium EDTA), 디포타슘이디티에이(dipotassium EDTA), 트리소듐이디티에이, 테트라소듐이디티에이 및 라이스피테이트(rice phytate) 중에서 선택된 1종 단독 또는 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있다.The metal ion blocking agent in the aqueous solution component serves to prevent deterioration by metal ions that may be contained in the formulation, and the amount thereof is used in an amount of 0.1 to 2 parts by weight, preferably 100 parts by weight of the skin conditioning agent. 0.2 to 1.5 parts by weight can be used, wherein the amount of metal ion blocking agent used is less than 0.1 part by weight, the metal ion blocking effect may decrease, and when it is used in excess of 2 parts by weight, there is no effect of increasing metal ion blocking, so it is an uneconomical problem. It may be possible to use within the above range. The metal ion blocker may be used in general in the art, preferably disodium EDTA (disodium EDTA), dipotassium EDTA (dipotassium EDTA), trisodium LED, tetrasodium ID It can be used alone or in combination of two or more selected from A and rice phytate (rice phytate).

다음으로, 수상액 성분 중 상기 증점제는 제제에 적절한 점성과 끈적임을 부여하여 피부 밀착성을 증가시키 역할을 하는 것으로서, 증점제 사용량은 피부컨디셔닝제 100 중량부에 대하여, 0.5 ~ 2 중량부를, 바람직하게는 0.5 ~ 1.7 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 잔탄검의 사용량이 0.5 중량부 미만이면 그 사용량이 너무 적어서 이를 사용하는 효과가 미비하고, 2 중량부를 초과하여 사용하면 제제의 점도가 너무 높아져서 피부에 대한 끈쩍임이 너무 증가하여 상품성이 떨어지는 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다. 증점제로는 당업계에서 사용하는 일반적인 것을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 잔탐검, 구아하이드록시 트리모니움 클로라이드 및 하이드록시 에틸 셀룰로오스 중에서 선택된 1종 단독 또는 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있다.Next, the thickener in the aqueous solution component serves to increase skin adhesion by imparting appropriate viscosity and stickiness to the formulation, and the amount of the thickener used is 0.5 to 2 parts by weight, preferably 100 parts by weight of the skin conditioning agent. 0.5 to 1.7 parts by weight may be used, and if the amount of xanthan gum used is less than 0.5 parts by weight, the amount of use is too small, so the effect of using it is insufficient, and when it is used in excess of 2 parts by weight, the viscosity of the preparation becomes too high, and It is recommended to use within the above range, since there may be a problem that the stickiness is too high and the productability is poor. As a thickener, a general one used in the art may be used, and preferably, one or two or more selected from xantham gum, guarhydroxy trimonium chloride and hydroxy ethyl cellulose may be used.

다음으로, 수상액 성분 중 상기 보습제는 유상액의 수분증발차단제와 함께 피부 보습을 증대시키는 역할을 하는 것으로서, 이의 사용량은 피부컨디셔닝제 100 중량부에 대하여, 40 ~ 80 중량부를, 바람직하게는 42 ~ 70 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 보습제의 사용량이 40 중량부 미만이면 피부 보습 효과가 떨어질 수 있고, 80 중량부를 초과하여 사용하더라도 보습 증대 효과가 없으므로 비경제적인 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다. 그리고, 보습제로는 메틸프로판디올 및 글리세린 중에서 선택된 1종 단독 또는 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있다.Next, the moisturizing agent in the aqueous solution component serves to increase skin moisturizing together with the water vapor barrier of the emulsion, the amount of which is used in an amount of 40 to 80 parts by weight, preferably 42 to 100 parts by weight of the skin conditioning agent. ~ 70 parts by weight can be used, at this time, if the amount of the moisturizer is less than 40 parts by weight, the skin moisturizing effect may be deteriorated, and even if it is used in excess of 80 parts by weight, there is no moisturizing effect, so within the above range It is good to use. In addition, as the moisturizing agent, one type selected from methylpropanediol and glycerin may be used alone or in combination of two or more types.

다음으로, 수상액 성분 중 상기 점도감소제는 적정 점도를 유지하여 피부와의 점착력, 피부 흡수력을 증대시키기 위해 사용하는 것으로서, 이의 사용량은 피부컨디셔닝제 100 중량부에 대하여, 45 ~ 90 중량부를, 바람직하게는 50 ~ 85 중량부를, 더욱 바람직하게는 52 ~ 80 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 점도감소제 사용량이 45 중량부 미만이거나 90 중량부를 초과하면 제제의 점도가 너무 높거나 낮아져서 피부와의 점착력이 너무 낮거나 끈적임이 너무 증대하여 사용감이 떨어지는 문제가 있을 수 있다. 그리고, 상기 점도감소제로는 당업계에서 사용하는 일반적인 점도감소제를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 디(C2 ~ C5 알킬렌)글라이콜을, 더욱 바람직하게는 디프로필렌글라이콜을 사용할 수 있다.Next, the viscosity-reducing agent in the aqueous solution component is used to increase the adhesive force with the skin and the absorbency of the skin by maintaining an appropriate viscosity, the amount of which is used in an amount of 45 to 90 parts by weight with respect to 100 parts by weight of the skin conditioning agent, Preferably, 50 to 85 parts by weight, and more preferably 52 to 80 parts by weight, may be used. At this time, if the amount of the viscosity reducing agent is less than 45 parts by weight or more than 90 parts by weight, the viscosity of the formulation is too high or lowered, and thus the skin There may be a problem in that the adhesive strength is too low or the stickiness is too high and the feeling of use is deteriorated. In addition, a general viscosity reducing agent used in the art may be used as the viscosity reducing agent, preferably di (C2 to C5 alkylene) glycol, and more preferably dipropylene glycol. .

다음으로, 수상액 성분 중 상기 살균보존제는 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 제제가 미생물 등에 의해 오염되는 것을 방지하기 위해 사용하는 것으로서 화장품 소재로서 사용이 금지되지 않은 살균보존제라면 특별히 한정 없이 사용이 가능하며, 구체적인 일례로 클로페네신 등을 사용할 수 있다. 그리고, 이의 사용량은 피부컨디셔닝제 100 중량부에 대하여, 2 ~ 10 중량부를, 바람직하게는 4 ~ 8 중량부를 사용할 수 있으며, 그 사용량이 2 중량부 미만이면 미생물에 의한 오염 방지 효과가 미비할 수 있고, 10 중량부를 초과하여 사용하는 것은 과도한 사용으로서 피부 트러블을 유발할 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.Next, the sterilizing preservative in the aqueous solution component is used to prevent the Nrf2 induction revitalizing agent from being contaminated by microorganisms, and can be used without particular limitation as long as it is a sterilizing preservative that is not prohibited as a cosmetic material. Clofenesin and the like can be used. And, the amount of its use may be 2 to 10 parts by weight, preferably 4 to 8 parts by weight, based on 100 parts by weight of the skin conditioning agent, and if the amount is less than 2 parts by weight, the effect of preventing contamination by microorganisms may be insufficient. In addition, use in excess of 10 parts by weight may cause skin trouble as excessive use, so it is preferable to use within the above range.

다음으로, 수상액 성분 중 상기 용제로는 헥산디올, 프로필렌글라이콜, 부틸렌글라이콜 및 펜틸렌 클라이콜 중에서 선택된 1종 단독 또는 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 바람직하게는 헥산디올 및 부틸렌글라이콜을 혼합하여 사용하거나, 더욱 바람직하게는 1,2-헥산디올 및 1,3-부틸렌글라이콜을 혼합하여 사용할 수 있다. 그리고, 용제 사용량은 피부컨디셔닝제 100 중량부에 대하여, 30 ~ 60 중량부를, 바람직하게는 35 ~ 50 중량부를 사용할 수 있으며, 30 중량부 미만으로 사용시 수상액 성분간 용해 및 혼합이 잘 되지 않을 수 있고, 60 중량부를 초과하여 사용하는 것은 비경제적이다.Next, the solvent in the aqueous solution component may be used alone or in combination of two or more selected from hexanediol, propylene glycol, butylene glycol, and pentylene glycol, preferably hexanediol and It may be used by mixing butylene glycol, or more preferably, by mixing 1,2-hexanediol and 1,3-butylene glycol. In addition, the amount of the solvent used may be 30 to 60 parts by weight, preferably 35 to 50 parts by weight relative to 100 parts by weight of the skin conditioning agent, and when used in less than 30 parts by weight, dissolution and mixing between the aqueous phase components may not be good. And it is uneconomical to use more than 60 parts by weight.

[유상액][Payment]

본 발명의 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 제제 성분 중 상기 유상액은 수분증발차단제, 토코페릴아세테이트, 피부컨디셔닝제, 유화제, 피부유연화제, 비이온계면활성제 및 피막형성제를 포함한다.Among the components of the Nrf2 induction revitalizing formulation of the present invention, the emulsion includes a moisture evaporation blocking agent, tocopheryl acetate, a skin conditioning agent, an emulsifying agent, a skin softening agent, a nonionic surfactant, and a film forming agent.

유상액 성분 중 수분증발차단제는 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 제제 제조 중 적정 수분 유지 및 제조된 제제를 피부에 적용시, 보습제와 함께 적정 수분 함량을 유지시키는 역할을 하는 것으로서, 당업계에서 사용하는 일반적인 것을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 오일(Caprylic/Capric Triglyceride oil), MCT 오일 및 스쿠알란 중에서 선택된 1종 또는 2종을 혼합하여 사용할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 MCT 오일 및 스쿠알란을 5 ~ 10 : 1 중량비로 혼합하여 사용하는 것이 좋다.Moisture evaporation blocking agent in the emulsion component serves to maintain the proper moisture content and maintain the proper moisture content together with the moisturizer when maintaining the proper moisture during preparation of the Nrf2 induction revitalizing formulation and applying the prepared formulation to the skin. May be used, preferably one or two selected from caprylic / capric triglyceride oil, MCT oil and squalane, and more preferably, MCT oil and squalane It is good to mix and use in 5-10: 1 weight ratio.

다음으로 유상액 성분 중 상기 토코페릴아세테이트는 제제가 시간이 지남에 따라 산화하여 변질되는 것을 막는 역할을 하는 것으로서, 그 사용량은 수분증발차단제 100 중량부에 대하여, 0.1 ~ 5 중량부를, 바람직하게는 0.4 ~ 2 중량부를 사용할 수 있다. 이때, 토코페릴아세테이트 사용량이 0.1 중량부 미만이면 그 사용량이 너무 적어서 산화방지 효과를 볼 수 없을 수 있고, 그 함량이 5 중량부를 초과하면 피부에 자극을 초래하는 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.Next, the tocopheryl acetate in the emulsion component serves to prevent the formulation from oxidizing and deteriorating over time, the amount of which is used in an amount of 0.1 to 5 parts by weight, preferably 100 parts by weight with respect to 100 parts by weight of a water vapor blocking agent. 0.4 to 2 parts by weight can be used. At this time, if the amount of tocopheryl acetate used is less than 0.1 parts by weight, the amount may be too small to prevent the antioxidant effect, and if the content exceeds 5 parts by weight, there may be a problem that causes irritation to the skin. It is good to use.

다음으로 유상액 성분 중 상기 피부컨디셔닝제는 피부에 영양분을 공급하는 역할을 하는 것으로서, 쉐어지방(shea butter) 및 코코넛 오일, 마카다미아넛 오일, 호호바 오일 중에서 선택된 단종 또는 2종을 혼합하여 사용할 수 있으며, 바람직하게는 쉐어지방 및 코코넛 오일을 1 : 0.4 ~ 0.8 중량비로 혼합하여 사용할 수 있다. 피부컨디셔닝제의 사용량은 수분증발차단제 100 중량부에 대하여, 10 ~ 35 중량부를, 바람직하게는 13 ~ 30 중량부를 사용하는 것이 좋으며, 이때, 피부컨디셔닝제 함량이 10 중량부 미만이면 피부 영양공급 효과가 미미할 수 있는 문제가 있을 수 있고, 그 함량이 35 중량부를 초과하면 그 사용량이 너무 과하여 일정부분 피부흡수 후 피부표면에 남아 번들거리게 하는 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.Next, the skin conditioning agent in the emulsion component serves to supply nutrients to the skin, and can be used by mixing one or two selected from shea butter and coconut oil, macadamia nut oil, and jojoba oil. , Preferably, shea fat and coconut oil may be used by mixing in a weight ratio of 1: 0.4 to 0.8. The skin conditioning agent is used in an amount of 10 to 35 parts by weight, preferably 13 to 30 parts by weight, with respect to 100 parts by weight of the water evaporation blocking agent. There may be a problem that may be insignificant, and if the content exceeds 35 parts by weight, the amount is too excessive, and it may be a problem that a portion of the skin remains after the skin is absorbed, so it is preferable to use within the above range.

다음으로 유상액 성분 중 상기 유화제는 유상액 조성물들간 상용성 향상 및 유화력을 증대시키기 위한 것으로서, 당업계에서 사용하는 일반적인 것을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 세테아릴 글루코사이드-세테아릴 알코올(cetearyl glucoside and cetearyl alcohol), 세테아릴알코올, 글리세릴스테아레이트, 피이지-6 소르비탄스테아레이트, 피이지-20 스테아레이트, 피이지-40 스테아레이트 및 피이지-100 스테아레이트 중에서 선택된 1종 단독 또는 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 세테아릴 글루코사이드-세테아릴 알코올 및 세테아릴알코올 중에서 선택된 종 단독 또는 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있다. 그리고, 유화제의 사용량은 피부컨디셔닝제 100 중량부에 대하여, 30 ~ 60 중량부를, 바람직하게는 40 ~ 55 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 유화제 사용량이 30 중량부 미만이면 유상액 간 혼합, 용해가 잘 되지 않을 수 있으며, 60 중량부를 초과하여 사용하는 것은 비경제적이다.Next, the emulsifier in the emulsion component is intended to increase the compatibility and emulsifying power between the emulsion composition, can be used in general used in the art, preferably cetearyl glucoside-cetearyl alcohol (cetearyl glucoside and cetearyl alcohol), cetearyl alcohol, glyceryl stearate, PEG-6 sorbitan stearate, PEG-20 stearate, PEG-40 stearate, and PEG-100 stearate alone or Two or more kinds may be used in combination, and more preferably, a species selected from cetearyl glucoside-cetearyl alcohol and cetearyl alcohol may be used alone or in combination of two or more species. In addition, the amount of the emulsifier used may be 30 to 60 parts by weight, preferably 40 to 55 parts by weight, based on 100 parts by weight of the skin conditioning agent. It may not work well, and it is uneconomical to use more than 60 parts by weight.

다음으로 유상액 성분 중 상기 피부유연화제는 거친 피부를 부드럽게 하는 역할을 하는 것으로서, 그 사용량은 피부컨디셔닝제 100 중량부에 대하여, 2 ~ 10 중량부를, 바람직하게는 3 ~ 7.5 중량부를 사용하는 것이 좋으며, 이때, 피부유연화제 사용량이 2 중량부 미만이면 효과가 미미 할 수 있는 문제가 있을 수 있고, 그 함량이 10 중량부를 초과하면 그 사용량이 너무 과하여 사용시 끈적거림이 심할 수 있는 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다. 그리고, 피부유연화제는 하나 이상의 중간사슬 모노글리세라이드 함유한 유상제, 글리세릴카프레이트, 폴리글리세릴-2-라우레이트 및 폴리글리세릴-10-라우레이트 중에서 선택된 1종 단독 또는 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 바람직하게는 하나 이상의 중간사슬 모노글리세라이드 함유한 유상제 및 폴리글리세릴-10-라우레이트 중에서 선택된 1종 단독 또는 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있다. 그리고, 하나 이상의 중간사슬 모노글리세라이드 함유한 상기 유상제의 구체적인 일례로는 알콜라인 MCM(AKOLINE MCM) 등이 있다.Next, the skin softener in the emulsion component serves to soften rough skin, the amount of which is used, based on 100 parts by weight of the skin conditioning agent, 2 to 10 parts by weight, preferably 3 to 7.5 parts by weight Good, and at this time, if the amount of the skin softener is less than 2 parts by weight, there may be a problem that the effect may be insignificant, and if the content exceeds 10 parts by weight, the amount of use of the skin softener may be excessive and stickiness may increase. Therefore, it is recommended to use within the above range. In addition, the skin softener may include one or two or more selected from an oily agent containing at least one medium chain monoglyceride, glyceryl caprate, polyglyceryl-2-laurate and polyglyceryl-10-laurate. It can be used in combination, and preferably, one or more selected from an oil agent containing at least one medium chain monoglyceride and polyglyceryl-10-laurate, or a mixture of two or more. And, as a specific example of the oil agent containing one or more intermediate chain monoglycerides, alcohol line MCM (AKOLINE MCM).

다음으로 유상액 성분 중 상기 비이온계면활성제는 유화제와 함께 조성물들에 대한 용해 보조제 역할을 하는 것으로서, 당업계에서 사용하는 일반적인 비이온 계면활성제를 사용할 수 있으며, 구체적인 일례로는 Tween 20, Tween 40 및 Tween 60 중에서 선택된 1종 단독 또는 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있다. 그리고, 비이온계면활성제의 사용량은 피부컨디셔닝제 100 중량부에 대하여, 7 ~ 20 중량부를, 바람직하게는 10 ~ 15 중량부를 사용할 수 있다.Next, the nonionic surfactant in the emulsion component serves as a dissolution aid for the compositions together with the emulsifier, and general nonionic surfactants used in the art may be used, and specific examples include Tween 20 and Tween 40 And it may be used alone or in combination of two or more selected from Tween 60. In addition, the amount of the nonionic surfactant used may be 7 to 20 parts by weight, preferably 10 to 15 parts by weight, based on 100 parts by weight of the skin conditioning agent.

다음으로, 유상액 성분 중 피막형성제는 제제가 피부에 적용 후, 외부의 불필요한 오염 물질 등으로부터 피부를 보호하는 역할을 하는 것으로서, 당업계에서 사용하는 일반적인 것을 사용할 수 있으며, 구체적인 일례로는 세피플러스 400(sepiplus 400) 등을 사용할 수 있다. 그리고, 피막형성제의 사용량은 피부컨디셔닝제 100 중량부에 대하여, 피막형성제 1.5 ~ 8 중량부를, 바람직하게는 2.5 ~ 7 중량부를 사용할 수 있으며, 그 사용량이 1.5 중량부 미만이면 그 사용량이 너무 적어서 이를 사용하는 효과를 볼 수 없고, 8 중량부를 초과하여 사용하면 유상액 성분 내 고형분이 발생할 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.Next, the film-forming agent in the emulsion component serves to protect the skin from unnecessary contaminants, etc. after the formulation is applied to the skin, and a general one used in the art may be used, and as a specific example, sepi Plus 400 (sepiplus 400) can be used. In addition, the amount of the film forming agent used may be 1.5 to 8 parts by weight of the film forming agent, preferably 2.5 to 7 parts by weight based on 100 parts by weight of the skin conditioning agent. The effect of using it is small, so it is not possible to use it, and if it is used in an amount exceeding 8 parts by weight, solid content in the emulsion component may be generated.

또한, 유상액은 증점안정제를 더 포함할 수 있다. 그 사용량은 피부컨디셔닝제 100 중량부에 대하여, 1 ~ 10 중량부를, 바람직하게는 2 ~ 8 중량부를 사용할 수 있으며, 10 중량부를 초과하면 그 사용량이 너무 과하여 이루고자 하는 점도를 초과하여 사용하기에 불편할 수 있는 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다. 그리고, 상기 증점안정화제로는 소듐폴리아크릴레이트, 폴리아크릴레이트, 폴리이소부텐, 카보머, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 50, 폴리소르베이트 60 및 폴리소르베이트 80 중에서 선택된 1종 단독 또는 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 바람직하게는 폴리아크릴레이트, 폴리이소부텐 및 폴리소르베이트 80 중에서 선택된 1종 단독 또는 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있다.In addition, the emulsion may further include a thickening stabilizer. The amount of use may be 1 to 10 parts by weight, preferably 2 to 8 parts by weight, with respect to 100 parts by weight of the skin conditioning agent, and when it exceeds 10 parts by weight, the amount of use is too excessive to exceed the viscosity to be achieved. Since there may be a problem, it is recommended to use within the above range. In addition, the thickening stabilizer is one or two selected from sodium polyacrylate, polyacrylate, polyisobutene, carbomer, polysorbate 20, polysorbate 50, polysorbate 60 and polysorbate 80. It can be used by mixing the above, preferably, one or two or more selected from polyacrylate, polyisobutene and polysorbate 80 can be used by mixing.

이하에서는 앞서 설명한 본 발명의 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 화장료를 제조하는 방법에 대하여 설명을 한다.Hereinafter, a method of manufacturing the Nrf2 induction revitalizing cosmetic of the present invention described above will be described.

본 발명의 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 화장료는 유상액 및 수상액을 각각 제조한 후, 이들을 특정 조건 온도 하에서 유화시켜 제조한 것으로서, 수상액 및 유상액을 각각 제조하는 1 단계; 상기 유상액에 수상액을 첨가한 다음 교반시켜서 혼합물을 제조하는 2 단계; 40 ~ 50℃ 하에서 상기 혼합물, 앞서 설명한 화장료용 피부개선 복합제, 향료 및 정제수를 혼합 및 2,000 ~ 3,000rpm의 교반속도로 교반시키는 3 단계;를 포함하는 공정을 수행하여 제조할 수 있다.The Nrf2 induction revitalizing cosmetic of the present invention is prepared by preparing an emulsion and an aqueous solution, respectively, and emulsifying them under a specific condition temperature, respectively, to prepare an aqueous solution and an emulsion; Step 2 to prepare a mixture by adding the aqueous solution to the emulsion and then stirred; It can be prepared by performing a process comprising; three steps of mixing the mixture under 40 ~ 50 ℃, the skin improvement complex for cosmetic, the fragrance and purified water described above and stirred at a stirring speed of 2,000 ~ 3,000rpm.

그리고, 상기 1 단계의 유상액은 피부컨디셔닝제, 토코페릴아세테이트, 유화제, 피부유연화제, 수분증발차단제 및 비이온계면활성제를 혼합한 후, 60 ~ 75℃, 바람직하게는 65 ~ 72℃의 온도가 되도록 가열 및 교반시켜서 용해액을 제조한 다음, 상기 용액에 피막형성제를 분산 및 교반시켜서 제조할 수 있다.And, the oil phase of the first step is a skin conditioning agent, tocopheryl acetate, emulsifier, skin softening agent, water evaporation blocking agent and nonionic surfactant, after mixing, 60 ~ 75 ℃, preferably 65 ~ 72 ℃ temperature It can be prepared by heating and stirring to prepare a dissolved solution, and then dispersing and stirring the film forming agent in the solution.

또한, 1 단계의 수상액은 피부컨디셔닝제, 금속이온봉쇄제, 증점제, 보습제, 점도감소제, 살균보존제 및 용제를 혼합한 후, 50 ~ 60℃가 되도록 가열 및 교반시켜서 제조할 수 있다.In addition, the aqueous solution of step 1 can be prepared by mixing the skin conditioning agent, metal ion blocker, thickener, moisturizer, viscosity reducing agent, preservative, and solvent, followed by heating and stirring to 50 to 60 ° C.

상기 유상액 및 수상액에 사용되는 성분 및 이의 사용량은 앞서 설명한 바와 동일하다.Ingredients used in the oil and water phase and the amount of use thereof are the same as described above.

2 단계는 유상액에 수상액을 첨가한 다음 70 ~ 80℃ 하에서 2,000 ~ 3,000rpm의 교반 속도로 1 ~ 4분간 유화를 수행하여 혼합물을 제조할 수 있다.Step 2 can be prepared by adding the aqueous solution to the oil phase, and then performing emulsification for 1 to 4 minutes at a stirring speed of 2,000 to 3,000 rpm under 70 to 80 ° C.

그리고, 3 단계의 화장료용 피부개선 복합제는 앞서 설명한 방법으로 제조한 것일 수 있다.In addition, the three-step cosmetic composition for skin improvement may be prepared by the method described above.

이렇게 제조된 본 발명의 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 제제는 pH 5.5 ~ 7.5, 바람직하게는 pH 6.0 ~ 7.2, 더욱 바람직하게는 pH 6.5 ~ 7.0 일 수 있다. 이대, pH가 5.5 미만이면 담배잎산말 추출물에 의한 NO 활성 억제 효과가 미비할 수 있고, pH가 7.5를 초과하면 선복화 추출물 및/또는 종대황 추출물 등에 의한 Nrf2 활성화 효과가 다소 감소하는 문제가 있을 수 있으므로, 상기 범위 내의 pH를 가지는 것이 좋다.The Nrf2 induction revitalizing agent of the present invention thus prepared may be pH 5.5 to 7.5, preferably pH 6.0 to 7.2, more preferably pH 6.5 to 7.0. In this case, if the pH is less than 5.5, the effect of inhibiting NO activity by the tobacco leaf extract may be insufficient, and if the pH exceeds 7.5, there is a problem that the effect of Nrf2 activation by the sunbok extract and / or species rhubarb extract is somewhat reduced. It is possible to have a pH within the above range.

앞서 설명한 본 발명의 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 화장료를 사용하여 다양한 타입의 화장품을 제조할 수 있으며, 일례를 들면, 크림 타입, 세럼 타입(마스크팩 포함) 등의 화장품을 제조할 수 있다.Various types of cosmetics may be manufactured using the Nrf2 induction revitalizing cosmetic of the present invention described above, and for example, cosmetics such as a cream type, a serum type (including a mask pack) may be manufactured.

이하, 실시예에 의거하여 본 발명을 더욱 자세하게 설명을 한다. 그러나, 하기 실시예에 의해 본 발명의 권리범위를 한정하여 해석해서는 안된다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail based on Examples. However, it should not be construed as limiting the scope of the present invention by the following examples.

[실시예][Example]

준비예 1 : 선복화 추출물의 제조Preparation Example 1: Preparation of Sunbokhwa extract

정제수 100 중량부에 대하여 선복화 5 중량부를 혼합하여 원료를 준비하는 준비하였다. 다음으로, 상기 원료를 90 ~ 100에서 4 ~ 8시간 동안 열수 추출하여 추출물을 얻었다. 다음으로, 상기 추출물을 평균기공 25㎛인 필터막으로 필터링하여 1차 여과액을 얻었다. 다음으로 상기 여과액 여과액 94.9ml에 1,2-헥산디올 5ml 및 에틸헥실글리세린 0.1ml을 첨가한 다음 충분하게 교반한 후, 교반액을 평균기공 10㎛인 필터막으로 2차 필터링을 수행하여 선복화 추출물을 제조하였다.5 parts by weight of pre-incubation was prepared with respect to 100 parts by weight of purified water to prepare raw materials. Next, the raw material was extracted from hot water at 90 to 100 for 4 to 8 hours to obtain an extract. Next, the extract was filtered with a filter membrane having an average pore size of 25 μm to obtain a primary filtrate. Next, after adding 5 ml of 1,2-hexanediol and 0.1 ml of ethylhexylglycerol to 94.9 ml of the filtrate, stir sufficiently, and then performing secondary filtering with a filter membrane having an average pore size of 10 µm. A bokbok extract was prepared.

선복화 추출물의 루시퍼라아제 활성 효과, 활성산소 소거 활성 효과, 산화적 스트레스 방어 효과는 등록특허번호 10-1857526호에 개시되어 있으며, 본 발명은 이를 인용한다.The luciferase activity effect, free radical scavenging activity effect, and oxidative stress defense effect of the sunbok extract are disclosed in Patent No. 10-1857526, and the present invention cites this.

준비예 2 : 종대황 추출물의 제조Preparation Example 2: Preparation of species rhubarb extract

정제수 100 중량부에 대하여 종대황 5 중량부를 혼합하여 원료를 준비하는 준비하였다. 다음으로, 상기 원료를 90 ~ 100에서 4 ~ 8시간 동안 열수 추출하여 추출물을 얻었다. 다음으로, 상기 추출물을 평균기공 25㎛인 필터막으로 필터링하여 1차 여과액을 얻었다. 다음으로 상기 여과액 94.9ml에 1,2-헥산디올 5ml 및 에틸헥실글리세린 0.1ml을 첨가한 다음 충분하게 교반한 후, 교반액을 평균기공 10㎛인 필터막으로 2차 필터링을 수행하여 종대황 추출물을 제조하였다.Prepared to prepare raw materials by mixing 5 parts by weight of rhubarb with respect to 100 parts by weight of purified water. Next, the raw material was extracted from hot water at 90 to 100 for 4 to 8 hours to obtain an extract. Next, the extract was filtered with a filter membrane having an average pore size of 25 μm to obtain a primary filtrate. Next, 5 ml of 1,2-hexanediol and 0.1 ml of ethylhexylglycerin were added to 94.9 ml of the filtrate, followed by sufficient stirring, followed by secondary filtering with a filter membrane having an average pore size of 10 µm. An extract was prepared.

선복화 추출물의 루시퍼라아제 활성 효과, 활성산소 소거 활성 효과, 산화적 스트레스 방어 효과는 등록특허번호 10-1730352호에 개시되어 있으며, 본 발명은 이를 인용한다.The luciferase activity effect, free radical scavenging activity effect, and oxidative stress defense effect of the sunbok extract are disclosed in Patent No. 10-1730352, and the present invention cites this.

실험예 1 : 선복화 추출물 및 종대황 추출물의 DPPH 라디칼 소거 활성 측정Experimental Example 1: Measurement of DPPH radical scavenging activity of Sunbokhwa extract and seed rhubarb extract

준비예 1에서 제조한 선복화 추출물 및 준비예 2에서 제조한 종대황 추출물의 DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) 라디칼 소거 소거활성을 측정하였다.DPPH (2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) radical scavenging scavenging activity of the bokbok extract prepared in Preparation Example 1 and the species rhubarb extract prepared in Preparation Example 2 were measured.

시료를 최종 농도 예비 실험을 통해 50% 정도의 자유라디칼(free radical) 소거 활성을 나타낼 수 있는 적절한 농도 범위로 희석하여 준비하였고, 대조군으로 아스코르빈산(Ascorbic acid)을 사용하였다.Samples were prepared by diluting them to an appropriate concentration range capable of exhibiting free radical scavenging activity of about 50% through final concentration preliminary experiments, and ascorbic acid was used as a control.

각 시험 물질 50㎕에 0.1mM DPPH 250㎕, EtOH 200㎕을 넣고 4℃에서 30분간 반응시킨 후, 520nm에서 흡광도를 측정하여 DPPH 라디칼의 농도를 확인하여 하기 수학식 1에 의거하여 DPPH 라디칼 소거 활성을 측정하였다.Put 50 μl of 0.1 mM DPPH and 200 μl of EtOH in 50 μl of each test substance, react for 30 minutes at 4 ° C., measure the absorbance at 520 nm, check the concentration of DPPH radicals, and purify DPPH radical scavenging activity according to Equation 1 below. Was measured.

[수학식 1][Equation 1]

DPPH 소거활성도(%)=100(%)-(시험물질 첨가군 흡광도/무첨가 흡광도)*100(%)DPPH scavenging activity (%) = 100 (%)-(absorbance / no added absorbance of the test substance added group) * 100 (%)

IC50: DPPH 라디칼 50%를 소거하는 데 필요한 시료의 농도IC50: concentration of sample required to scavenge 50% of DPPH radical

(1) 양성 대조군 아스코르빈산의 DPPH 라디칼 소거 활성 측정(1) Measurement of DPPH radical scavenging activity of positive control ascorbic acid

항산화 활성을 가지는 것으로 알려진 ascorbic acid를 양성대조군으로 한 DPPH radical 소거 활성 시험 결과를 하기 표 1에 나타내었다. 그 결과, 시험농도 범위에서 농도의존적인 DPPH 라디칼 소거 활성을 나타내어(IC50 : 3.72ug/ml), 본 시험 과정에 문제가 없음을 확인할 수 있었다.Table 1 shows the results of DPPH radical scavenging activity using ascorbic acid, which is known to have antioxidant activity, as a positive control. As a result, it showed concentration-dependent DPPH radical scavenging activity in the test concentration range (IC50: 3.72 ug / ml), and it was confirmed that there was no problem in this test process.

Free radical scavenging(% of control)Free radical scavenging (% of control) 농도(ng/ml)Concentration (ng / ml) 1차평균1st average 2차평균2nd average 3차평균3rd average 평균Average 표준편차Standard Deviation 00 00 00 00 00 00 0.0781250.078125 3.783.78 0.670.67 1.411.41 1.951.95 1.621.62 0.156250.15625 4.094.09 -1.51-1.51 4.084.08 2.222.22 3.233.23 0.31250.3125 8.358.35 3.023.02 6.126.12 5.835.83 2.682.68 0.6250.625 14.8014.80 8.728.72 13.1913.19 12.2412.24 3.153.15 1.251.25 28.6628.66 24.1624.16 27.6327.63 26.8226.82 2.362.36 2.52.5 42.9942.99 39.4339.43 45.5345.53 42.6542.65 3.063.06 55 56.6956.69 52.1852.18 59.1859.18 56.0256.02 3.553.55

(2) 선복화 추출물의 DPPH 라디칼 소거 활성 측정(2) Measurement of DPPH radical scavenging activity of sunbok extract

선복화 추출물의 항산화 활성을 DPPH 라디칼 소거 활성 시험을 통해 확인하였다(하기 표 2). 그 결과, 선복화 추출물은 0.00156% 내지 0.05% 범위에서 농도의존적이고, IC50 0.027%의 우수한 DPPH 라디칼 소거 활성을 나타내어 우수한 항산화 활성을 가지는 것을 확인할 수 있었다.The antioxidant activity of the sunbokhwa extract was confirmed through a DPPH radical scavenging activity test (Table 2 below). As a result, it was confirmed that the sunbok extract was concentration-dependent in the range of 0.00156% to 0.05%, exhibiting excellent DPPH radical scavenging activity of IC50 0.027%, and thus having excellent antioxidant activity.

Free radical scavenging(% of control)Free radical scavenging (% of control) 농도(ng/ml)Concentration (ng / ml) 1차평균1st average 2차평균2nd average 3차평균3rd average 평균Average 표준편차Standard Deviation 00 00 00 00 00 00 0.001560.00156 9.389.38 6.536.53 8.278.27 8.068.06 1.441.44 0.003130.00313 15.9415.94 10.4410.44 15.6215.62 14.0014.00 3.093.09 0.006250.00625 28.2828.28 23.4923.49 28.7928.79 26.8526.85 2.922.92 0.01250.0125 41.2541.25 36.8736.87 42.1142.11 40.0840.08 2.812.81 0.0250.025 52.6652.66 48.6148.61 54.5254.52 51.9351.93 3.023.02 0.050.05 56.4156.41 54.8154.81 58.5058.50 56.5756.57 1.851.85 0.10.1 55.4755.47 53.1853.18 54.9854.98 54.5454.54 1.201.20

(3) 종대황 추출물의 DPPH 라디칼 소거 활성 측정(3) Measurement of DPPH radical scavenging activity of species rhubarb extract

종대황 추출물의 항산화 활성을 DPPH 라디칼 소거 활성 시험을 통해 확인하였다(하기 표 3 참조) 그 결과, 종대황 추출물이 0.00313 ~ 0.25% 범위에서 농도의존적이고, IC₅₀ 0.174%의 DPPH 라디칼 소거 활성을 나타내어 우수한 항산화 활성을 가지는 것을 확인할 수 있었다.The antioxidant activity of the species rhubarb extract was confirmed through a DPPH radical scavenging activity test (see Table 3 below). As a result, the species rhubarb extract was concentration-dependent in the range of 0.00313 to 0.25% and exhibited DPPH radical scavenging activity of IC ₅₀ 0.174%. It was confirmed that it has excellent antioxidant activity.

Free radical scavenging(% of control)Free radical scavenging (% of control) 농도(ng/ml)Concentration (ng / ml) 1차평균1st average 2차평균2nd average 3차평균3rd average 평균Average 표준편차Standard Deviation 00 00 00 00 00 00 0.001560.00156 2.832.83 -0.49-0.49 1.691.69 1.341.34 1.691.69 0.003130.00313 3.623.62 -1.97-1.97 3.383.38 1.681.68 3.163.16 0.006250.00625 6.606.60 0.820.82 6.626.62 4.684.68 3.343.34 0.01250.0125 13.8413.84 5.915.91 11.3811.38 10.3810.38 4.064.06 0.0250.025 20.7520.75 17.0817.08 20.6220.62 19.4819.48 2.082.08 0.050.05 32.7032.70 28.2428.24 33.5433.54 31.5031.50 2.852.85 0.10.1 44.8144.81 38.2638.26 45.5445.54 42.8742.87 4.014.01 0.1250.125 48.0048.00 50.2350.23 49.2549.25 49.1649.16 1.121.12 0.250.25 54.4654.46 56.4356.43 57.0157.01 55.9755.97 1.341.34

준비예 3 : 담배잎산말 추출물의 제조Preparation Example 3: Preparation of tobacco leaf aquatic extract

정제수 100 중량부에 대하여 건조 및 분말화시킨 담배잎산말 20 ~ 30 중량부를 혼합하여 원료를 준비하는 준비하였다. 다음으로, 상기 원료를 110℃에서 4시간 동안 증류 추출하여 추출물을 얻었다. 다음으로, 상기 추출물을 평균기공 25㎛인 필터막으로 필터링하여 1차 여과액을 얻었다. 다음으로 상기 여과액 94.9ml에 1,2-헥산디올 2ml 을 첨가한 다음 충분하게 교반한 후, 교반액을 평균기공 10㎛인 필터막으로 2차 필터링을 수행하여 담배잎산말 추출물을 제조하였다.Prepared to prepare raw materials by mixing 20 to 30 parts by weight of dried and powdered tobacco leaf powder with respect to 100 parts by weight of purified water. Next, the raw material was distilled and extracted at 110 ° C. for 4 hours to obtain an extract. Next, the extract was filtered with a filter membrane having an average pore size of 25 μm to obtain a primary filtrate. Next, 2 ml of 1,2-hexanediol was added to 94.9 ml of the filtrate, followed by sufficient stirring, followed by secondary filtering of the stirred liquid with a filter membrane having an average pore size of 10 µm to prepare tobacco leaf aquatic acid extract.

실험예 2 : 담배잎산말 추출물의 루시퍼라아제 활성도 측정Experimental Example 2: Measurement of luciferase activity of tobacco leaf extract

(1) 준비예 2의 담배잎산말 추출물을 증류수와 혼합하여, 20ppm(pH 1.7), 200ppm(pH 1.7), 2,000ppm(pH 1.7), 20ppm(pH 4.8), 200ppm(pH 4.8), 2,000ppm(pH 4.8), 20ppm(pH 6), 200ppm(pH 6), 2,000ppm(pH 6), 20ppm(pH 7), 200ppm(pH 7), 2,000ppm(pH 7)인 담배잎산말 추출물을 각각 준비하였다. 이때 pH는 1M NaOH를 적가하여 조절하였다.(1) Tobacco leaf aquatic extract of Preparation Example 2 was mixed with distilled water, 20 ppm (pH 1.7), 200 ppm (pH 1.7), 2,000 ppm (pH 1.7), 20 ppm (pH 4.8), 200 ppm (pH 4.8), 2,000 ppm (pH 4.8), 20ppm (pH 6), 200ppm (pH 6), 2,000ppm (pH 6), 20ppm (pH 7), 200ppm (pH 7), 2,000ppm (pH 7) tobacco leaf agar extracts are prepared respectively Did. At this time, the pH was adjusted by dropwise addition of 1M NaOH.

또한, 준비예 1의 담배잎산말 추출물을 80% 에탄올 수용액과 혼합하여 10ppm, 20ppm, 50ppm, 100ppm, 200ppm, 1,000ppm 및 2,000ppm을 각각 준비하였다.In addition, 10 ppm, 20 ppm, 50 ppm, 100 ppm, 200 ppm, 1,000 ppm, and 2,000 ppm were prepared by mixing the tobacco leaf aquatic extract of Preparation Example 1 with an 80% aqueous ethanol solution.

(2) 인간피부 세포주인 HaCaT 세포에 ARE(antioxidant response element)로 루시퍼라아제를 삽입하여 HaCaT 리포터 세포(HaCaT reporter cell, HaCaT-ARE-GFP-luciferase cell)을 만들었고, 이 세포주는 이용하여 루시퍼라아제 활성도를 측정하였다. 이 세포주는 Nrf2에 의하여 ARE가 활성화되면 GFP 또는 루시퍼라아제(luciferase)가 발현되므로 Nrf2의 활성을 빠르게 감지할 수 있는 측정이다.(2) HaCaT reporter cell (HaCaT reporter cell, HaCaT-ARE-GFP-luciferase cell) was prepared by inserting luciferase as an antioxidant response element (ARE) into the human skin cell line HaCaT cell, and this cell line was used to generate lucifera. Azase activity was measured. This cell line is a measure that can rapidly detect the activity of Nrf2 because GFP or luciferase is expressed when ARE is activated by Nrf2.

루시퍼라아제 활성도 측정은 HaCaT 리포터 세포(HaCaT-ARE-GFP-luciferase cell)에 RPMI1640 미디아(media) 0ug/ml(control), 상기 담배잎산말 추출물 20ppm(pH 1.7), 200ppm(pH 1.7), 2,000ppm(pH 1.7), 20ppm(pH 4.8), 200ppm(pH 4.8), 2,000ppm(pH 4.8), 증류 20 ~ 2,000ppm, 80% 에탄올 수용액 20 ~ 2,000ppm 및 브로콜리 추출물인 설포라페인(sulforaphane, SFN, Positive Control)으로 각각 10Um의 농도로 처리 한 후, 24시간 동안 인큐베이션시킨 후 세포(cell)의 용해물(Lysate)를 단백질 정량한 값과 루시퍼라아제 활성도(Luciferase activity)의 값을 측정하여 데이터 처리하였다.Measurement of luciferase activity is RPMI1640 media 0ug / ml (control) in HaCaT reporter cells (HaCaT-ARE-GFP-luciferase cells), 20ppm (pH 1.7), 200ppm (pH 1.7), 2,000 ppm (pH 1.7), 20ppm (pH 4.8), 200ppm (pH 4.8), 2,000ppm (pH 4.8), distillation 20 ~ 2,000ppm, 20 ~ 2,000ppm of 80% ethanol aqueous solution and sulfoaphane (Solforaphane, SFN, Positive) of broccoli extract Control) and then incubated for 24 hours after treatment at a concentration of 10 Um, and then the data was measured by measuring the value of protein lysate (Lysate) and the value of luciferase activity. .

측정 결과, 설포라페인(SFN) 보다 루시퍼라아제 활성도가 작지만, 항산화 반응을 보이는 것을 확인할 수 있었다(하기 표 4참조). 구체적으로, pH 7의 200ppm에서의 활성이 항산화 반응이 가장 우수했으며, pH 7의 2,000의 경우, pH7의 200ppm에 비해 큰 증대 효과가 없었다. 다만 pH 1.7의 2000ppm의 경우, 낮은 산도 때문에 루시퍼라아제 값이 튄 것으로 사료되며, 2,000ppm(pH 1.7)이 항산화 반응이 있다고 단정 짓기는 모호한 문제가 있다. 하기 표 4의 값은 대조군 값을 기준으로 수치화한 것이다. 즉 대조군에 대한 배율이다.As a result of the measurement, although the luciferase activity was smaller than that of sulforaphane (SFN), it was confirmed that it exhibited an antioxidant reaction (see Table 4 below). Specifically, the activity at 200 ppm of pH 7 was the best antioxidant reaction, and at 2,000 of pH 7, there was no significant increase effect compared to 200 ppm of pH 7. However, in the case of 2000 ppm of pH 1.7, it is thought that the luciferase value splattered due to the low acidity, and there is an ambiguous problem to presume that 2,000 ppm (pH 1.7) has an antioxidant reaction. The values in Table 4 are numerical values based on the control values. That is, it is the magnification for the control group.

구분division Fold induction of Luciferase activityFold induction of Luciferase activity 대조군Control 1.001.00 설포라페인(SFN)Sulforaphane (SFN) 5.225.22 pH 1.7-20ppmpH 1.7-20ppm 0.680.68 pH 1.7-200ppmpH 1.7-200ppm 0.780.78 pH 1.7-2000ppmpH 1.7-2000ppm 1.631.63 pH 4.8-20ppmpH 4.8-20ppm 0.720.72 pH 4.8-200ppmpH 4.8-200ppm 0.790.79 pH 4.8-2000ppmpH 4.8-2000ppm 0.960.96 pH 6.0-20ppmpH 6.0-20ppm 1.211.21 pH 6.0-200ppmpH 6.0-200ppm 1.251.25 pH 6.0-2000ppmpH 6.0-2000ppm 1.351.35 pH 7.0-20ppmpH 7.0-20ppm 1.631.63 pH 7.0-200ppmpH 7.0-200ppm 3.093.09 pH 7.0-2000ppmpH 7.0-2000ppm 3.113.11

(3) 상기 루시퍼라아제 활성도 측정과 동일한 방법으로 상기 대조군, 상기 설포라페인, 80% 에탄올 수용액 10ppm, 20ppm, 50ppm, 100ppm, 200ppm 및 1,000ppm의 루시퍼라아제 활성 측정을 수행하였고, 그 결과를 도 1에 나타내었다.(3) The luciferase activity measurement was performed in the same manner as the luciferase activity measurement. It is shown in.

도 1에서 80% 에탄올 수용액에 6개의 농도로 담배잎산말 추출물을 용해 및 나누어 루시퍼라아제 활성도를 측정한 것인데, 80% 에탄올-200ppm에서 가장 우수한 항산화 반응이 확인되었다.In FIG. 1, luciferase activity was measured by dissolving and dividing tobacco leaf extract in six concentrations in an 80% aqueous ethanol solution, and the best antioxidant reaction was confirmed at 80% ethanol-200 ppm.

실험예 3 : 웨스턴 블랏 측정Experimental Example 3: Western blot measurement

HaCaT 세포에 대조군(LPS, lipopolysaccharide), 담배잎산말 추출물, 80% 에탄올 수용액 20ppm, 80% 에탄올 수용액 200ppm 을 처리한 후, 1시간 후에 염증반응을 유발하기 위해 2㎍/㎖ 농도의 LPS 를 처리한 다음, 24시간 배양한 후, 웨스턴 블랏(Western blot)을 이용하여 단백질 양을 정량하였으며, 그 결과를 도 2의 A 및 B에 나타내었다. 이때, 담배잎산말 추출물은 상기 실험예 2의 (1)과 동일한 방법으로 20ppm(pH 1.7), 200ppm(pH 1.7), 20ppm(pH 4.8), 200ppm(pH 4.8), 20ppm(pH 6), 200ppm(pH 6), 20ppm(pH 7), 200ppm(pH 7)의 담배잎산말 추출물을 제조하고, 이를 이용하여 측정하였다.HaCaT cells were treated with a control group (LPS, lipopolysaccharide), tobacco leaf aquatic extract, 80% ethanol aqueous solution 20ppm, 80% ethanol aqueous solution 200ppm, and then treated with 2 μg / ml LPS to induce an inflammatory reaction after 1 hour. Next, after incubation for 24 hours, the amount of protein was quantified using Western blot, and the results are shown in A and B of FIG. 2. At this time, the extract of tobacco leaf agar is 20ppm (pH 1.7), 200ppm (pH 1.7), 20ppm (pH 4.8), 200ppm (pH 4.8), 20ppm (pH 6), 200ppm in the same manner as in Experimental Example 2 (1). (pH 6), 20ppm (pH 7), 200ppm (pH 7) tobacco leaf agar extract was prepared and measured using this.

도 2의 A는 루시퍼라아제 활성을 통해 항산화 반응을 보인 것 중에서 염증반응에도 반응하는지 여부를 확인하기 위해 염증마커인 COX-2와 cJun 항체를 이용하여 웨스턴블럿을 측정한 것인데, pH 1.7-200ppm 에서 항산화 반응은 있었으나 산도로 인한 것으로 사료되었듯이 cJun의 활성을 보아 염증에는 효과가 없었고, pH7 200ppm은 COX-2와 cJun 모두 감소시켰고, 80% 에탄올 수용액-200ppm은 cJun에서 반응하였기에 이 결과로 pH 7-200ppm이 가장 적합하다고 결정하였습니다.In FIG. 2A, Western blot was measured using COX-2 and cJun antibodies, which are inflammation markers, in order to confirm whether they also respond to inflammatory reactions among those showing an antioxidant reaction through luciferase activity, pH 1.7-200ppm There was an antioxidant reaction, but as it was thought to be due to acidity, cJun activity showed no effect on inflammation, pH7 200ppm reduced both COX-2 and cJun, and 80% ethanol aqueous solution-200ppm reacted in cJun, resulting in pH We decided that 7-200ppm is the most suitable.

다음으로, 도 2의 B는 20ppm(pH 7)과 200ppm(pH 7)의 COX-2 뿐만 아니라 iNOS 염증마커를 이용하여 염증에 대한 반응을 보이는 것을 다시 확인한 결과이다.Next, B of FIG. 2 is a result confirming that the 20xm (pH 7) and 200ppm (pH 7) COX-2 as well as an iNOS inflammation marker show a response to inflammation.

실험예 4 : 담배잎산말 추출물에 대한 세포 생존율 측정Experimental Example 4: Measurement of cell viability for tobacco leaf extract

담배잎산말 추출물의 세포 독성을 확인하기 위해서 마우스 대식세포주인 RAW 264.7 세포를 염증유발 모델로 측정하였다.In order to confirm the cytotoxicity of the tobacco leaf agar extract, the mouse macrophage cell line RAW 264.7 cells were measured by an inflammatory model.

(1) 세포 배양(1) Cell culture

마우스 대식세포주인 RAW 264.7 세포는 10% 소태아혈청(fetal bovine serum, Thermo사의 SH30406.02) 및 1% 페니실린/스테렙토마이신(penicillin/streptomycin, Thermo사의 SV30010)이 함유된 DMEM 배지(high glucose, Thermo사의 SH30243.01)를 이용하여 100mm 세포배양접시(cell culture dish)를 사용하여 5% CO₂배양기에 배양했다. 컨플루언스(confluence)에 도달한 세포는 스크래퍼(Scraper, SPL사의 90030)를 사용하여 계대 배양하여 유지했다.The mouse macrophage cell line, RAW 264.7 cells, contains 10% fetal bovine serum (SH30406.02 from Thermo) and 1% penicillin / streptomycin (SV30010 from Thermo), DMEM medium (high glucose, Using Thermo Thermo SH30243.01), the cells were cultured in a 5% CO ₂ incubator using a 100 mm cell culture dish. Cells that reached confluence were maintained by subculture using a scraper (90030 from SPL).

(2) 세포 생존율 실험(2) Cell viability experiment

살아있는 세포 내의 미토콘드리아에 존재하는 탈수소효소는 WST(Tetrazolium Salt)에서 포르마잔(formazan)이라는 발색물질을 생성한다. 따라서 이를 측정하여 살아있는 세포의 수를 측정할 수 있다. 96 웰세포 배양기(well cell culture plate, 코닝사의 3595)에 1×10⁴cells/well 농도의 RAW 264.7 세포를 10% FBS(fetal bovine serum), 1% 페니실린/스테렙토마이신이 첨가된 DMEM 배양액으로 24시간 배양한다. 그 후 시료가 담배잎산말 추출물(10ppm, 20ppm, 50ppm, 100ppm, 200ppm, 1,000ppm)의 농도별로 포함된 DMEM 배지로 교체하여 48시간 배양한다. 배양이 끝난 세포에 EZ-CYTOX 시약(Daeilab의 EZ-1000)을 이용하고 570nm에서 흡광도를 측정하여 하기 수학식 2 에 의거하여, 농도별 세포 생존율을 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.The dehydrogenase present in the mitochondria in living cells produces a colorant called formazan in Tetrazolium Salt (WST). Therefore, the number of living cells can be measured by measuring this. A 96 well cell culture plate (3595 from Corning, Inc.) was used as a DMEM culture medium containing 10% fetal bovine serum (FBS) and 1% penicillin / stereptomycin in RAW 264.7 cells at a concentration of 1 × 10 ⁴ cells / well. Incubate for 24 hours. After that, the sample was replaced with DMEM medium contained by the concentration of the tobacco leaf aroma extract (10ppm, 20ppm, 50ppm, 100ppm, 200ppm, 1,000ppm) and incubated for 48 hours. Using the EZ-CYTOX reagent (EZ-1000 of Daeilab) on the cultured cells and measuring the absorbance at 570 nm, cell viability by concentration was measured according to Equation 2 below, and the results are shown in Table 5 below. .

그리고, 대조군(control)은 담배잎산말을 처리하지 않은 Raw 264.7 세포를 이용하여 측정한 것이다.In addition, the control (control) was measured using raw 264.7 cells not treated with tobacco leaf streaks.

[수학식 2][Equation 2]

세포생존율(Cell viability)=(시료 첨가군의 흡광도/무처리군 흡광도)×100Cell viability = (absorbance of sample-added group / absorbance of untreated group) × 100

구분division 세포생존율(대조군 기준 %)Cell viability (% of control group) 대조군(0 중량%)Control (0% by weight) 100100 10ppm10ppm 120120 20ppm20ppm 120120 50ppm50ppm 105105 100ppm100ppm 100100 200ppm200ppm 9797 1000ppm1000ppm 9595 3000ppm3000ppm 5353

상기 표 5의 실험결과를 살펴보면, 담배잎산말 추출물을 200ppm 이하의 농도로 처리한 시험군은 대조군과 대비하여 통계적으로 유의한 세포 생존율의 차이를 나타내지 않았으나, 2,000ppm 농도에서는 생포 생존율이 급격하게 감소함을 확인할 수 있었다. 즉, 1000ppm 이하의 농도에서는 RAW264.7 세포에 대한 세포 독성을 나타내지 않는 것을 확인할 수 있었다.Looking at the experimental results in Table 5, the test group treated with the tobacco leaf aroma extract at a concentration of 200 ppm or less did not show a statistically significant difference in cell viability compared to the control group, but at 2,000 ppm, the viable viability was rapidly decreased. Was confirmed. That is, it was confirmed that at a concentration of 1000 ppm or less, it did not show cytotoxicity to RAW264.7 cells.

실험예 5 : real time RT PCR 측정Experimental Example 5: Real time RT PCR measurement

인터류킨수용체인 IL2, IL6, 염증마커인iNOS 및 COX-2에 대해 mRNA 레벨을 감소시키지 확인하기 위해 실시간 중합효소 연쇄반응(Real-time RT PCR)으로 측정하였다.Interleukin receptors IL2, IL6, inflammatory markers iNOS and COX-2 were measured by real-time polymerase chain reaction (Real-time RT PCR) to confirm that mRNA levels were not reduced.

준비예 2의 담배잎산말 추출물을 20ppm(pH 7), 200ppm(pH 7) 및 1000ppm(pH 7)을 준비하였다. 또한, 대조군(control)로서, Raw264.7세포를 준비하였고, LPS(lipopolysaccharide) 준비하였다.Tobacco leaf extract of Preparation Example 2 was prepared 20ppm (pH 7), 200ppm (pH 7) and 1000ppm (pH 7). In addition, as a control (control), Raw264.7 cells were prepared and LPS (lipopolysaccharide) was prepared.

Raw264.7 세포에 대조군, 담배잎산말 추출물을 각각 처리한 후, 1시간 후에 염증반응을 유발하기 위해 2㎍/㎖ 농도의 LPS 를 처리(18시간 인큐베이션함)하여 RNA를 뽑고, 뽑아낸 RNA를 다시 cDNA로 합성한 후에 실시간 중합효소 연쇄반응으로 mRNA 레벨을 측정하였고, 그 결과를 하기 표 6(IL2, iL6, iNOS, COX-2)에 각각 나타내었다.Raw264.7 cells were treated with control and tobacco leaf extract, respectively, and after 1 hour, 2 μg / ml LPS was treated (incubated for 18 hours) to induce an inflammatory reaction, RNA was extracted, and extracted RNA was extracted. After synthesizing with cDNA again, mRNA levels were measured by real-time polymerase chain reaction, and the results are shown in Table 6 (IL2, iL6, iNOS, COX-2), respectively.

구분(Relative mRNA Level)Classification (Relative mRNA Level) IL2IL2 IL6IL6 iNOSiNOS COX-2 COX-2 대조군Control 1One 1One 1One 1One LPSLPS 2.672.67 9.659.65 3.773.77 4.844.84 pH 7-담배잎산말 추출물 20 ppmpH 7- Tobacco leaf extract 20 ppm 1.281.28 3.323.32 2.522.52 3.143.14 pH 7-담배잎산말 추출물 200 ppmpH 7- Tobacco leaf extract 200 ppm 0.760.76 1.801.80 1.631.63 0.940.94 pH 7-담배잎산말 추출물 1000 ppmpH 7- Tobacco leaf extract 1000 ppm 0.680.68 1.511.51 1.381.38 0.900.90

상기 표 6 을 보면, 담배잎산말 추출물을 처리한 경우, IL2, IL6, iNOS 및 COX-2의 Phase II mRNA 레벨이 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 이에 반해, LPS만 처리한 경우, Phase II mRNA 레벨이 증가하는 결과를 보였다. 이를 통하여, 담배잎산말 추출물이 iNOS, COX-2, IL2및 IL6 인자를 감소시킴을 확인할 수 있었다.Looking at Table 6, when the tobacco leaf aroma extract treatment, it was confirmed that the phase II mRNA level of IL2, IL6, iNOS and COX-2 is reduced. On the other hand, when only LPS was treated, it showed a result of increasing Phase II mRNA level. Through this, it was confirmed that the tobacco leaf aquatic extract reduced iNOS, COX-2, IL2 and IL6 factors.

실험예 6 : 담배잎산말 추출물의 산화적 스트레스 방어 테스트 측정Experimental Example 6: Measurement of oxidative stress defense test of tobacco leaf extract

(1) Raw264.7세포에 대한 산화적 스트레스 방어 테스트(1) Oxidative stress defense test against Raw264.7 cells

Raw264.7세포 (대조군, control), Raw264.7세포에 2㎍/㎖ 농도의 LPS(lipopolysaccharide)만 처리한 경우 및 RAW 264.7 세포에 상기 LPS(2㎍/㎖)와 담배잎산말 추출물(200ppm)를 함께 처리한 경우의 Raw264.7 세포내 방어 여부를 측정하였고, 그 결과를 하기 도 3에 나타내었다.Raw264.7 cells (control), Raw264.7 cells treated with only 2 μg / ml lipopolysaccharide (LPS) at concentrations of 26 μg / ml, and LPS (2 μg / ml) and tobacco leaf aroma extract (200 ppm) in RAW 264.7 cells. In the case of processing together, Raw264.7 intracellular defense was measured, and the results are shown in FIG. 3.

도 3의 대조군(control)은 산화적 스트레스에 의하여 DNA 손실(damage)이 일어나는지를 알아보기 위해 RAW 264.7 세포 에 DNA 염색을 하여 세포 내 DAPI, 8-OH-dG(8-hydroxy deoxyguanosine) 및 MERGE 레벨을 측정한 것이다.In the control of FIG. 3, DNA staining is performed on RAW 264.7 cells to determine whether DNA damage occurs due to oxidative stress, and DAPI, 8-OH-dG (8-hydroxy deoxyguanosine) and MERGE levels in the cells. It is measured.

도 3을 살펴보면, LPS만으로 처리한 것과 LPS와 함께 담배잎산말 추출물로 처리한 경우가 산화적 스트레스 방어를 하고 있음을 확인할 수 있다.Referring to FIG. 3, it can be seen that the treatment with LPS alone and the treatment with tobacco leaf aquatic extract together with LPS provide oxidative stress protection.

실험예 7: 담배잎산말 추출물의 NO 생성억제 측정Experimental Example 7: Measurement of NO production inhibition of tobacco leaf extract

(1) 시험 물질 처리(1) Test substance treatment

RAW 264.7 세포를 4×10⁴cells/dishdensity로 96well 플레이트(plate)에 분주하여 24시간 동안 플레이트에 부착시켰다. 담배잎산말 추출물을 각각 처리한 1시간 후에 염증반응을 유발하기 위해 2㎍/㎖ 농도의 LPS(lipopolysaccharide)를 처리하여 18시간 배양하였다.RAW 264.7 cells were dispensed into 96-well plates at 4 × 10 ⁴ cells / dishdensity and attached to the plates for 24 hours. 1 hour after each treatment with the tobacco leaf aroma extract, in order to induce an inflammatory reaction, 2 μg / ml concentration of LPS (lipopolysaccharide) was treated and cultured for 18 hours.

(2) 일산화질소(NO) 생성량 측정 실험(2) Measurement of nitrogen monoxide (NO) production

RAW 264.7 세포에서 생성되어 배양액에 존재하는 NO 수준을 그리스(Griess) 반응을 기본으로 하는 NO 디텍션키트(detection kit, intron사의 21021)를 사용하여 측정하였다. NO가 존재한다고 추정되는 배양액을 96 well-플레이트(well plate)에 100㎕씩 분주한 후 N1 버퍼(sulfanilamide) 50㎕를 넣어 10분간 실온에서 반응시킨다. 이어서 N2 버퍼(naphthylethylenediamine) 50㎕를 넣고 10분간 실온에서 반응시킨 후 540nm에서 흡광도 측정하였으며, 각 NO 생성량은 아질산염 기준(nitrite standard)를 이용하여 얻은 표준검량곡선을 이용하여 산출하였다. 양성대조군(Positive control)은 L-NMMA 50μM(N^G-Methyl-L-arginineacetatesalt,시그마사의 M7033)을 사용하였다.The NO level generated in RAW 264.7 cells and present in the culture was measured using a NO detection kit based on the Greases reaction (21021 from Intron). After incubating 100 µl of the culture solution presumed to have NO in a 96 well plate, add 50 µl of N1 buffer (sulfanilamide) and react at room temperature for 10 minutes. Subsequently, 50 μl of N2 buffer (naphthylethylenediamine) was added and reacted at room temperature for 10 minutes, and absorbance was measured at 540 nm, and each NO production amount was calculated using a standard calibration curve obtained using a nitrite standard. As a positive control (Positive control) L-NMMA 50μM (N ^G -Methyl-L-arginineacetatesalt, Sigma M7033) was used.

각각의 결과는 마이크로소프트사의 오피스 엑셀 2007(Office Excel 2007)의 t-테스트(Paired t-test, 양측검증) 기능을 이용하여 시험결과의 통계적 유의성을 확인한 것이며, 그 결과는 하기 표 7과 같다. 그리고, 표 7의 NO 생성 억제율은 하기 수학식 1에 의거하여 계산하였다.Each result confirms the statistical significance of the test result by using the t-test (two-sided verification) function of Microsoft's Office Excel 2007, and the results are shown in Table 7 below. And, the NO production inhibition rate in Table 7 was calculated based on the following equation (1).

[수학식 1][Equation 1]

NO 생성 억제율(%) = (A-B)/A * 100%NO production inhibition rate (%) = (A-B) / A * 100%

수학식 1에서 A는 NO 활성 억제제 내 담배잎산말 추출물 농도가 0%일 때 RAW264.7 세포에서의 NO 생성량(100%)이고, B는 NO 활성 억제제 내 담배잎산말 추출물의 특정 농도에서의 RAW264.7 세포에서의 NO 생성량(%) 측정 값이다.In Equation 1, A is NO production amount in RAW264.7 cells (100%) when the concentration of the tobacco leaf aroma extract in the NO activity inhibitor is 0%, and B is RAW264 at a specific concentration of the tobacco leaf aroma extract in the NO activity inhibitor. .7 This is a measure of the amount of NO produced in cells (%).

구분division NO 생성 저해율(대조군 기준%)NO production inhibition rate (% of control group) 대조군(0 중량%)Control (0% by weight) 100100 양성대조군Positive control group 45.2%45.2% pH7-10ppmpH7-10ppm 10.3%10.3% pH7-100ppmpH7-100ppm 18.5%18.5% pH7-200ppmpH7-200ppm 35.2%35.2% pH7-1500ppmpH7-1500ppm 43.8%43.8% pH7-3000ppmpH7-3000ppm 40.5%40.5%

상기 표 7의 측정결과를 살펴보면, 양성 대조군인 L-NMMA는 50μM 농도 범위에서 RAW264.7 세포의 NO 생성을 약 45% 정도 저해시켰다. 그리고, 담배잎산말 추출물은 10ppm, 100ppm, 200ppm 및 1500ppm 농도 범위에서 통계적으로 유의한 수준으로 RAW264.7 세포의 Nitirc oxide(NO) 생성을 저해하는 것을 확인할 수 있다. 200ppm 이하로 처리시 약 10 ~ 44%의 NO 생성을 저해하는 것을 확인할 수 있었으며, 3000ppm 농도에서는 오히려 NO 생성 저해율이 저하되는 문제가 있었다.Looking at the measurement results in Table 7, the positive control L-NMMA inhibited the production of NO in RAW264.7 cells by about 45% in the 50 μM concentration range. And, it can be seen that the tobacco leaf aroma extract inhibits the production of Nitirc oxide (NO) in RAW264.7 cells at a statistically significant level in a concentration range of 10 ppm, 100 ppm, 200 ppm, and 1500 ppm. When treated at 200 ppm or less, it was confirmed that about 10 to 44% of NO was inhibited, and at 3000 ppm, the NO production inhibition rate was rather lowered.

준비예 4 : 홍화씨 추출 발효물의 제조Preparation Example 4: Preparation of safflower extract fermentation product

건조된 홍화씨를 분쇄하여 홍화씨 분말을 제조하였다. 다음으로, 상기 홍화씨 분말 및 비극성 용매인 99.99 부피% 농도의 n-헥산을 1 : 22 중량비로 혼합한 후, 24 ~ 25℃하에서 추출한 후, 지방을 제거하였다. 상기 추출 및 지방 제거를 3회 반복 수행하여 지방이 제거된 추출물을 수득하였다. 다음으로, 상기 지방비 제거된 추출물 및 72 ~ 73 부피% 농도의 에탄올 수용액을 1 : 10 중량비로 혼합한 후, 24 ~ 25℃하에서 추출하여 에탄올 추출물을 수득하였다. 다음으로, 상기 에탄올 추출물을 감압 농축한 후, 여과하여 감압 농축물을 수득하였다. 다음으로, 상기 감압 농축물에 약 6×10⁴ ~ 6.2×10⁴의 바실러스 아밀로리퀘파시엔스 및 약 1.2×10⁴ ~ 1.3×10⁴의 락토바실러스 플란타룸을 접종 및 혼합한 후, 약 42 ~ 44℃ 하에서 26시간 동안 발효시켜서 홍화씨 추출 발효물을 수득하였다.The dried safflower seeds were crushed to prepare safflower seed powder. Next, after mixing the safflower seed powder and n-hexane at a concentration of 99.99% by volume, which is a non-polar solvent, in a weight ratio of 1:22, and extracting at 24 to 25 ° C, fat was removed. The extraction and fat removal were repeated three times to obtain an extract from which fat was removed. Next, the fat ratio-extracted extract and an aqueous ethanol solution having a concentration of 72 to 73% by volume were mixed at a weight ratio of 1: 10, and then extracted at 24 to 25 ° C to obtain an ethanol extract. Next, the ethanol extract was concentrated under reduced pressure, and then filtered to obtain a reduced pressure concentrate. Next, after inoculating and mixing about 6 × 10 ⁴ ~ 6.2 × 10 ⁴ of Bacillus amyloliquefaciens and about 1.2 × 10 ⁴ ~ 1.3 × 10 ⁴ of Lactobacillus plantarum in the reduced pressure concentrate, about Fermentation was carried out for 26 hours under 42 to 44 ° C. to obtain safflower seed extract fermentation products.

준비예 5 : 택사 추출물의 제조Preparation Example 5 Preparation of Taxa Extract

85 부피% 농도의 에탄올 수용액 1L에 택사 분말 220g을 혼합하여 혼합용액을 제조하였다. 다음으로, 상기 혼합용액을 65℃ 하에서 8시간 동안 추출 공정을 수행한 후, 추출물을 여과 및 건조하여 택사 추출물을 수득하였다.A mixed solution was prepared by mixing 220 g of texa powder in 1 L of an ethanol aqueous solution having a concentration of 85% by volume. Next, after performing the extraction process for 8 hours under 65 ℃ the mixed solution, the extract was filtered and dried to obtain a taxa extract.

준비예 6 : 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조Preparation Example 6: Preparation of compound represented by Chemical Formula 1

92 부피% 농도의 에탄올 수용액 100 중량부에 대하여, 건조된 호장근 뿌리 15 중량부를 넣고, 7일간 25℃ 하에서 환류 냉각 추출을 수행하여 냉각 추출액을 얻은 후, 이를 감압농축기로 강압 농축하여 조추출물을 제조하였다.With respect to 100 parts by weight of an aqueous solution of ethanol at a concentration of 92% by volume, 15 parts by weight of dried walnut roots were added, and reflux cooling extraction was performed at 25 ° C for 7 days to obtain a cooling extract, which was concentrated under reduced pressure with a concentrated concentrator to obtain crude extract It was prepared.

다음으로, 증류수 100 중량부에 대하여 상기 조추출물을 10 중량부를 혼합하여 혼합용액을 제조한 후, 혼합용액 100 중량부에 대하여, 메틸렌클로라이드 100 중량부를 투입한 다음 진탕 추출한 후, 물층과 유기용매층으로 분획하고, 유기 용매층을 제거한 후, 물층의 분획용액을 수득하였다.Next, after mixing 10 parts by weight of the crude extract with respect to 100 parts by weight of distilled water to prepare a mixed solution, 100 parts by weight of methylene chloride with respect to 100 parts by weight of the mixed solution, followed by shaking extraction, water layer and organic solvent layer After fractionating with and removing the organic solvent layer, a fractional solution of the water layer was obtained.

다음으로, 상기 분획용액 및 에틸아세테이트를 1 : 5 중량비로 혼합한 후, 이를 진탕 추출하여 유기용매층을 분획한 다음, 유기용매층의 용액을 감압농축기로 감압 농축하여 에틸아세테이트 추출물을 수득하였다.Next, after mixing the fractional solution and ethyl acetate in a ratio of 1: 5 by weight, this was shake-extracted to fractionate the organic solvent layer, and then the solution of the organic solvent layer was concentrated under reduced pressure with a reduced pressure concentrator to obtain an ethyl acetate extract.

다음으로, 상기 에틸아세테이트 추출물을 실리카겔로 충진된 컬럼에서 로로포름 및 메탄올을 15 : 1 부피비로 포함하는 혼합 용매로 분획하여 5개의 분획물을 수득하였으며, 3번째 분획물을 캅셀팍 컬럼을 사용하여 세미-프렙(semi-prep)으로 분리하여 다시 5개의 분획물을 수득하였다. 이때, 전개용매로는 아세토나이트릴을 사용하였다.Next, the ethyl acetate extract was fractionated with a mixed solvent containing loroform and methanol in a volume ratio of 15: 1 in a column filled with silica gel to obtain 5 fractions, and the 3rd fraction was semi- using a capsule capsule column. Separated by semi-prep to give 5 fractions again. At this time, acetonitrile was used as the developing solvent.

이 중 2번째 분획물을 메탄올로 재결정하여 하기 화학식 1-1로 표시되는 호합물을 최종 수득하였다.The second fraction of this was recrystallized with methanol to obtain a final product represented by the following Chemical Formula 1-1.

[화학식 1-1][Formula 1-1]

화학식 1-1의 A는 에틸렌기이고, R¹ 및 R²은 독립적으로 -OH이다.A in Formula 1-1 is an ethylene group, and R ¹ and R ² are independently -OH.

¹H-NMR (500MHz, Acetone-d6): δppm 6.14 (t, 1H, H-4), 6.43 (d, 2H, H-2, 6), 6.75 (d, 2H, H-3′, 5′), 6.79 (d, 1H, H-α), 6.94 (d, 1H, H-β), 7.33 (d, 2H, H-2′, 6′); ¹ H-NMR (500MHz, Acetone-d6): δppm 6.14 (t, 1H, H-4), 6.43 (d, 2H, H-2, 6), 6.75 (d, 2H, H-3 ′, 5 ′ ), 6.79 (d, 1H, H-α), 6.94 (d, 1H, H-β), 7.33 (d, 2H, H-2 ', 6');

¹³C-NMR (125MHz, Acetone-d6): δppm 102.64 (C-4), 105.76 (C-2), 108.20 (C-6), 115.84 (C-3′), 116.48(C-5′), 127.02 (C-α), 128.79 (C-6′), 129.38 (C-2′), 130.42 (C-β), 131.40 (C-1′), 141.31 (C-1), 158.37 (C-4′), 159.37 (C-3, 5) ¹³ C-NMR (125MHz, Acetone-d6): δppm 102.64 (C-4), 105.76 (C-2), 108.20 (C-6), 115.84 (C-3 ′), 116.48 (C-5 ′), 127.02 (C-α), 128.79 (C-6 ′), 129.38 (C-2 ′), 130.42 (C-β), 131.40 (C-1 ′), 141.31 (C-1), 158.37 (C-4) ′), 159.37 (C-3, 5)

실시예 1 : 화장료용 피부개선 복합제의 제조Example 1: Preparation of a skin improvement complex for cosmetic

준비예 1의 선복화 추출물(농도 0.027ng/ml), 준비예 2의 종대황 추출물(농도 0.174ng/ml), 준비예 3의 담배잎산말 추출물 및 준비예 4의 홍화씨 추출 발효물을 1 : 0.42 : 0.85 : 0.53 중량비로 혼합한 혼합물을 제조한 다음, 물과 혼합한 후, pH를 약 6.8로 조절하였다.Pre-purification extract of Preparation Example 1 (concentration 0.027 ng / ml), seed rhubarb extract of Preparation Example 2 (concentration 0.174 ng / ml), tobacco leaf aroma extract of Preparation Example 3 and safflower seed extract fermentation product of Preparation Example 1: A mixture mixed at a weight ratio of 0.42: 0.85: 0.53 was prepared, and then mixed with water to adjust the pH to about 6.8.

여기서, 상기 선복화 추출물 및 종대황 추출물 각각의 농도는 공지 특허 등록특허번호 10-1730352호와 비교하기 위해 상기 농도로 조절하여 사용한 것이며, 상기 선복화 추출물 및 종대황 추출물의 농도는 다양하게 하여 본 발명의 피부개선 복합제에 적용할 수 있다.Here, the concentration of each of the bokbok extract and the bellflower rhubarb extract is used by adjusting to the concentration to compare with the known patent registration number 10-1730352, the concentration of the bokbokbok extract and the bellflower rhubarb extract is varied It can be applied to the skin improvement complex of the invention.

실시예 2 ~ 3 및 비교예 1 ~ 7Examples 2 to 3 and Comparative Examples 1 to 7

상기 실시예 1과 동일하게 제조하되, 선복화 추출물, 종대황 추출물, 담배잎산말 추출물 및 홍화씨 추출 발효물을 하기 표 8과 같은 중량비가 되도록 하여 pH6.8의 피부개선 복합제를 제조하였다.Prepared in the same manner as in Example 1, the bokbok extract, seed rhubarb extract, tobacco leaf aroma extract and safflower seed extract fermented to have a weight ratio as shown in Table 8 to prepare a skin improvement complex of pH6.8.

실시예 4Example 4

상기 실시예 1과 동일하게 복화 추출물, 종대황 추출물, 담배잎산말 추출물 및 홍화씨 추출 발효물을 혼합하여 추출 혼합물을 제조한 후, 추출 혼합물 100 중량부에 대하여, 준비예 5에서 제조한 택사 추출물 8 중량부를 혼합하여 피부개선 복합제를 제조하였다.In the same manner as in Example 1, after preparing the extract mixture by mixing the extract of botanical extract, seed rhubarb extract, tobacco leaf aquatic extract, and safflower seed extract, 100 parts by weight of the extract mixture, the taxa extract prepared in Preparation Example 5 8 A skin improvement complex was prepared by mixing parts by weight.

실시예 5Example 5

상기 실시예 1과 동일하게 복화 추출물, 종대황 추출물, 담배잎산말 추출물 및 홍화씨 추출 발효물을 혼합하여 추출 혼합물을 제조한 후, 추출 혼합물 100 중량부에 대하여, 준비예 6에서 제조한 화학식 1-1로 표시되는 화합물 4.5 중량부를 혼합하여 피부개선 복합제를 제조하였다.As in Example 1, the extract mixture was prepared by mixing fermented extract, seed rhubarb extract, tobacco leaf aroma extract and safflower seed extract fermentation, and then, with respect to 100 parts by weight of the extraction mixture, formula 1- prepared in Preparation Example 6 A compound for improving skin was prepared by mixing 4.5 parts by weight of the compound represented by 1.

실시예 6Example 6

상기 실시예 1과 동일하게 복화 추출물, 종대황 추출물, 담배잎산말 추출물 및 홍화씨 추출 발효물을 혼합하여 추출 혼합물을 제조한 후, 추출 혼합물 100 중량부에 대하여, 준비예 5에서 제조한 택사 추출물 6 중량부, 준비예 6에서 제조한 화학식 1-1로 표시되는 화합물 4.0 중량부 및 하기 화학식 2-1로 표시되는 화합물 0.8 중량부를 혼합하여 피부개선 복합제를 제조하였다.In the same manner as in Example 1, the extract mixture was prepared by mixing the extract of botanical extract, seed rhubarb extract, tobacco leaf aroma extract and safflower seed extract, and then, with respect to 100 parts by weight of the extract mixture, the taxa extract prepared in Preparation Example 5 6 The skin improvement composite agent was prepared by mixing parts by weight, 4.0 parts by weight of the compound represented by Chemical Formula 1-1 prepared in Preparation Example 6, and 0.8 parts by weight of the compound represented by Chemical Formula 2-1.

[화학식 2-1][Formula 2-1]

화학식 2-1의 R¹는 메틸기이고, R² 및 R³는 수소원자이며, R⁴는

이며, R⁵ 는 -OH이다.R ¹ in Formula 2-1 is a methyl group, R ² and R ³ are hydrogen atoms, and R ⁴ is

And R ⁵ is -OH.

구분
(중량비)division
(Weight ratio) 선복화
추출물Sunbokhwa
extract 종대황 추출물Species rhubarb extract 담배잎산
추출물Tobacco leaf
extract 홍화씨
추출
발효물Safflower Seed
extraction
Fermentation 택사
추출물
(중량부)Tax
extract
(Parts by weight) 화학식 1-1로
표시되는
화합물(중량부)With formula 1-1
Displayed
Compound (parts by weight) 화학식 2-1로
표시되는
화합물(중량부)With formula 2-1
Displayed
Compound (parts by weight) 실시예 1Example 1 1One 0.420.42 0.850.85 0.530.53 -- -- -- 실시예 2Example 2 1One 0.420.42 0.650.65 0.800.80 -- -- -- 실시예 3Example 3 1One 0.420.42 0.950.95 0.500.50 -- -- -- 실시예 4Example 4 1One 0.420.42 0.850.85 0.530.53 8.08.0 -- -- 실시예 5Example 5 1One 0.420.42 0.850.85 0.530.53 -- 4.54.5 -- 실시예 6Example 6 1One 0.420.42 0.850.85 0.530.53 6.06.0 4.04.0 0.80.8 비교예 1Comparative Example 1 1One 0.420.42 -- -- -- -- -- 비교예 2Comparative Example 2 1One 0.420.42 -- 0.530.53 -- -- -- 비교예 3Comparative Example 3 1One 0.100.10 0.850.85 0.530.53 -- -- -- 비교예 4Comparative Example 4 1One 0.420.42 0.400.40 0.530.53 -- -- -- 비교예 5Comparative Example 5 1One 0.420.42 1.201.20 0.530.53 -- -- -- 비교예 6Comparative Example 6 1One 0.420.42 0.850.85 0.100.10 -- -- -- 비교예 7Comparative Example 7 1One 0.420.42 0.850.85 1.201.20 -- -- --

실험예 8 : DPPH 라디칼 소거 활성 측정Experimental Example 8: DPPH radical scavenging activity measurement

상기 실험예 1과 동일한 방법으로 실시예 1 ~ 6 및 비교예 1 ~ 2에서 제조한 피부개선 복합제의 DPPH 라디칼 소거 활성 측정하였고 그 결과를 하기 표 9에 나타내었다. 그리고, 측정값은 3회 측정한 값은 평균값을 나타낸 것이다.In the same manner as in Experimental Example 1, the DPPH radical scavenging activity of the skin improvement complexes prepared in Examples 1 to 6 and Comparative Examples 1 to 2 was measured, and the results are shown in Table 9 below. In addition, the measured value is an average value measured three times.

구분division Free radical scavenging
(% of control)Free radical scavenging
(% of control) 비고Remarks 대조군 1(선복화 추출물
- 농도 0.027 ng/ml)Control 1 (precursor extract
-Concentration 0.027 ng / ml) 약 52.12About 52.12 표 2 참조See Table 2 대조군 2(종대황 추출물
- 농도 0.125 g/ml)Control 2 (species rhubarb extract
-Concentration 0.125 g / ml) 약 49.88About 49.88 표 3 참조See Table 3 비교예 1(선복화+종대황)Comparative Example 1 (pre-emption + species rhubarb) 56.6556.65 한국 등록특허번호
10-1730352호에 개시된 실험예 8의 표 6 참조Korean Registered Patent Number
See Table 6 of Experimental Example 8 disclosed in 10-1730352 비교예 2Comparative Example 2 65.0865.08 선복화추출물+종대황추출물+홍화씨 발효 추출물Seonbokhwa extract + species rhubarb extract + safflower seed fermentation extract 실시예 1Example 1 66.8966.89 -- 실시예 2Example 2 68.2468.24 -- 실시예 3Example 3 66.7066.70 -- 실시예 4Example 4 70.4870.48 -- 실시예 5Example 5 63.3263.32 -- 실시예 6Example 6 69.7169.71 --

상기 표 9의 측정 결과를 살펴보면, 선복화 추출물(대조군 1) 또는 종대황 추출물(대조군 2) 단독으로 사용하는 것 보다 선복화 및 종대황 추출물을 혼합하여 사용한 비교예 1이 DPPH 라디칼 소거 활성이 우수함을 확인할 수 있다.Looking at the measurement results of Table 9, compared to using the bokbok extract (control group 1) or bellflower rhubarb extract (control group 2) alone, Comparative Example 1 using a mixture of bokbok and bellflower extract has superior DPPH radical scavenging activity. can confirm.

그리고, 비교예 1에 홍화씨 발효 추출물을 추가적으로 사용한 비교예 2 및 실시예 1 ~ 6의 경우, 비교예 1 보다 월등하게 DPPH 라디칼 소거 활성이 증가하는 결과를 보였다. 또한, 실시예 1에 비해 홍화씨 추출 발효물을 더 사용한 실시예 2가 실시예 1 보다 상대적으로 DPPH 라디칼 소거 활성이 증가하는 결과를 보였는데, 이를 통하여 홍화씨 추출 발효물이 선복화 추출물 및 종대황 추출물의 항산화 효과를 증대시킴을 확인할 수 있었다. 또한, 실시예 1의 혼합 추출물 100 중량부에 대해 택사 추출물을 8 중량부 추가적으로 사용한 실시예 4의 경우, 실시예 1 또는 실시예 2 보다 더 우수한 DPPH 라디칼 소거 활성을 보였으며, 택사 추출물을 추가적으로 함께 사용시 항산화 효과 증대를 볼 수 있음을 확인할 수 있었다.In addition, in Comparative Examples 2 and Examples 1 to 6 in which the safflower seed fermentation extract was additionally used in Comparative Example 1, DPPH radical scavenging activity was significantly increased compared to Comparative Example 1. In addition, Example 2 using more safflower seed extract fermentation compared to Example 1 showed a result of relatively increased DPPH radical scavenging activity than Example 1, through which safflower seed extract fermentation product was bokbok extract and seed rhubarb extract It was confirmed that it increases the antioxidant effect of. In addition, in the case of Example 4 in which 8 parts by weight of the taxa extract was additionally used with respect to 100 parts by weight of the mixed extract of Example 1, it showed better DPPH radical scavenging activity than Example 1 or Example 2, and the taxa extract was additionally added together. When used, it was confirmed that an increase in antioxidant effect can be seen.

그리고, 실시예 1과 실시예 3을 비교할 때, 담배잎산 추출물이 DPPH 라디칼 소거 활성이 증가에 큰 영향을 주지는 않음을 확인할 수 있었다.And, when comparing Example 1 and Example 3, it was confirmed that the tobacco leaf acid extract did not significantly affect the increase in DPPH radical scavenging activity.

실험예 8 : real time RT PCR 측정Experimental Example 8: Real time RT PCR measurement

활성산소가 발생하였을 때 Phase II대사 시스템에 관련된 효소들이 이 활성산소에 반응하여 그 레벨이 급격히 증가하는 것으로 알려져 있다. 이때 이 Phase II 대사 조절에 관련된 단백질의 증가는 전사단계에서 조절되고, 이를 조절하는 전사인자들은 Nrf2, HO-1, NQO-1등이 있다.It is known that when free radicals are generated, enzymes related to the Phase II metabolic system react to the free radicals and their levels increase rapidly. At this time, the increase of the protein related to the regulation of Phase II metabolism is regulated in the transcription step, and the transcription factors that regulate it are Nrf2, HO-1, and NQO-1.

이에 mRNA 레벨이 증가되는지 확인하기 위해 실시간 중합효소 연쇄반응(Real-time RT PCR)으로 측정하였다.Accordingly, it was measured by real-time polymerase chain reaction (Real-time RT PCR) to confirm that the mRNA level is increased.

HaCaT cell에 대조군인 비교예 1의 선복화 및 종대황 추출물, 실시예 1 ~ 6 및 비교예 2 ~ 7의 피부개선 복합제 각각을 20 ug/ml로 처리하여 RNA를 뽑고, 뽑아낸 RNA를 다시 cDNA로 합성한 후에 Real Time RT PCR로 mRNA 레벨을 측정하였고, 그 결과를 하기 표 10(Nrf2, HO-1, NQ01)에 나타내었다. 표 10은 4시간 후, Nrf2, HO-1, NQO-1의 Phase II mRNA 레벨을 측정한 것이다.HaCaT cells were treated with 20 ug / ml of each of the control group, Comparative Example 1, bokbok and seed rhubarb extracts, Examples 1 to 6, and Comparative Examples 2 to 7, respectively, to extract RNA and extract RNA again cDNA After synthesis, the mRNA level was measured by Real Time RT PCR, and the results are shown in Table 10 (Nrf2, HO-1, NQ01). Table 10 shows the phase II mRNA levels of Nrf2, HO-1, and NQO-1 after 4 hours.

구분
(Relative mRNA Level)division
(Relative mRNA level) Nrf2Nrf2 HO-1HO-1 NQ01NQ01 0시간0 hours 4시간4 hours 0시간0 hours 4시간4 hours 0시간0 hours 4시간4 hours 대조군 (비교예 1)Control group (Comparative Example 1) 1.01.0 1.211.21 1.01.0 2.452.45 1.01.0 1.531.53 비교예 2Comparative Example 2 1.01.0 1.421.42 1.01.0 2.892.89 1.01.0 1.751.75 실시예 1Example 1 1.01.0 1.451.45 1.01.0 2.802.80 1.01.0 1.871.87 실시예 2Example 2 1.01.0 1.551.55 1.01.0 2.812.81 1.01.0 1.921.92 실시예 3Example 3 1.01.0 1.471.47 1.01.0 2.722.72 1.01.0 1.701.70 실시예 4Example 4 1.01.0 1.681.68 1.01.0 2.942.94 1.01.0 2.132.13 실시예 5Example 5 1.01.0 1.401.40 1.01.0 2.792.79 1.01.0 1.891.89 실시예 6Example 6 1.01.0 1.571.57 1.01.0 2.842.84 1.01.0 2.042.04 비교예 3Comparative Example 3 1.01.0 1.221.22 1.01.0 2.382.38 1.01.0 1.491.49 비교예 4Comparative Example 4 1.01.0 1.391.39 1.01.0 2.882.88 1.01.0 1.761.76 비교예 5Comparative Example 5 1.01.0 1.441.44 1.01.0 2.632.63 1.01.0 1.691.69 비교예 6Comparative Example 6 1.01.0 1.251.25 1.01.0 2.462.46 1.01.0 1.541.54 비교예 7Comparative Example 7 1.01.0 1.461.46 1.01.0 2.832.83 1.01.0 1.931.93

상기 표 10의 측정 결과를 살펴보면, 대조군(비교예 1) 및 비교예 2 보다 실시예 1 ~ 6이 전반적으로 Nrf2, HO-1, NQO1의 Phase II mRNA 레벨이 우수한 결과를 보였다.Looking at the measurement results of Table 10, the control group (Comparative Example 1) and Comparative Example 2 than Examples 1 to 6 overall showed excellent results of Phase II mRNA levels of Nrf2, HO-1, and NQO1.

실시예 1 ~ 2, 비교예 4 ~ 5 및 비교예 2를 비교해보면, 담배잎산 추출물의 첨가는 Nrf2, HO-1, NQO1의 레벨 향상에 큰 영향을 주지는 않으나, 이의 사용량이 증가하면 HO-1 및 NQ01이 다소 낮아지는 경향이 있음을 확인할 수 있다.When comparing Examples 1 and 2, Comparative Examples 4 and 5, and Comparative Example 2, the addition of the tobacco leaf acid extract did not significantly affect the level of Nrf2, HO-1, and NQO1, but when its usage increased, HO- It can be seen that 1 and NQ01 tend to be slightly lower.

그리고, 종대황 추출물을 적게 사용한 비교예 3의 경우, 실시예 1과 비교할 때, 상대적으로 낮은 Nrf2, HO-1, NQO1의 Phase II mRNA 레벨을 보였다. 그리고, 실시예 및 비교예 2, 비교예 6 ~ 7을 살펴보면 선복화 및 종대황 추출물과 함께 홍화씨 발효 추출물 사용하면 전반적으로 Nrf2, HO-1, NQO1의 Phase II mRNA 레벨이 증대하는 경향을 보였으며, 다만, 홍화씨 발효 추출물을 너무 많이 비교예 7의 경우, 실시예 2와 비교할 때 Nrf2, HO-1, NQO1의 Phase II mRNA 레벨 향상 효과가 미비하였다.And, in the case of Comparative Example 3 using less species rhubarb extract, compared to Example 1, it showed relatively low Phase II mRNA levels of Nrf2, HO-1, and NQO1. In addition, looking at Examples and Comparative Examples 2 and 6 to 7, when using the fermented extract of safflower seed together with the extracts of bokbok and jongdae rhubarb, phase II mRNA levels of Nrf2, HO-1, and NQO1 were generally increased. , However, too many safflower seed ferment extract, Comparative Example 7, compared to Example 2, Nrf2, HO-1, NQO1 Phase II mRNA level improvement effect was insufficient.

그리고, 택사 추출물을 더 혼합하여 사용하면 Nrf2, HO-1, NQO1의 Phase II mRNA 레벨 향상 증대 효과가 있음을 확인할 수 있었다(실시예 4 및 실시예 6).In addition, it was confirmed that the use of a mixture of taxa extracts has an effect of increasing the level II mRNA level of Nrf2, HO-1, and NQO1 (Examples 4 and 6).

상기 실험예를 통하여 본 발명의 피부개선 복합제가 선복화 추출물 단독으로 사용하는 것보다 선복화 추출물, 종대황 추출물, 담배잎산말 추출물 및 홍화씨 추출 발효물 등을 함께 사용하고 또한 적정 비율로 사용시 항산화 활성이 우수함을 확인할 수 있었다.Through the above experimental examples, the skin improving complex of the present invention is used together with the bokbok extract, the bellflower rhizome extract, the tobacco leaf aquatic extract and the safflower seed extract fermentation product, and the antioxidant activity when used in an appropriate ratio than the bokbok extract alone. This excellence was confirmed.

실험예 9 : 피부 멜라노사이트에서 멜라닌 생합성 억제 효과Experimental Example 9: Melanin biosynthesis inhibitory effect on skin melanocytes

사람의 피부조직을 채취한 다음 미세한 절편으로 피부조직을 자른 후, 항생제(50mg/ml gentamicin, 50mg/ml amphotericin, 50U/ml penicillin, 50㎍/streptomycin)을 함유하는 인산완충용액 (PhosphateBufferedSaline)으로 세척하고 0.25% Trypsin/EDTA를 5분 동안 처리하여 멜라노사이트 선택배지인 M2 배지 (Promocell)에서 5% CO₂ 및 37℃ 조건의 배양기에서 15일 동안 배양한 후에, 멜라노사이트 세포를 다시 0.25% Trypsin/EDTA로 떼어내어 혈구계수기로 세포수를 세어 M2 배지(Promocell)가 들어 있는 24-well 에 well당 1×10⁴개로 접종한 후 37℃에서 포가 well 닥에 80% 이상 부착될 때까지 배양했다.After collecting the human skin tissue, cut the skin tissue into fine sections, and wash it with a phosphate buffer solution (PhosphateBufferedSaline) containing antibiotics (50mg / ml gentamicin, 50mg / ml amphotericin, 50U / ml penicillin, 50µg / streptomycin) And treated with 0.25% Trypsin / EDTA for 5 minutes, incubated for 15 days in an incubator with 5% CO ₂ and 37 ° C. in M2 medium (Promocell), a melanocyte selection medium, for 15 days, and then the melanocyte cells were again 0.25% Trypsin / The cells were removed with EDTA, counted with a hemocytometer, inoculated with 1 × 10 ⁴ per well into 24-wells containing M2 medium (Promocell), and cultured at 37 ° C until 80% or more of the cells adhered to the well duct.

1일 배양 후 멜라닌 색소의 전구체인 도파를 0.08mM 되게 첨가한 다음 실시예 1 ~ 3 및 비교예 3 ~ 4을 각각 0.1 중량%의 시험 농도로 첨가하고 3일 동안 배양하여 대조군에는 식염수를 넣었다. 배지를 제거한 세포를 인산완충용액(PBS, Phosphate Buffered Saline)으로 세척하고, 이것을 트립신으로 처리하여 세포를 회수한다. 회수된세포는 헤마토사이토메터(Hematocytometer)를 이용하여 세포수를 측정한 후 10분간 원심분리한 다음 상등액을 제거하여 침전물을 얻었다.After incubation for 1 day, dopa, a precursor of the melanin pigment, was added to 0.08 mM, and then Examples 1 to 3 and Comparative Examples 3 to 4 were added at a test concentration of 0.1% by weight, respectively, and cultured for 3 days to add saline to the control group. The cells from which the medium has been removed are washed with a phosphate buffer (PBS, Phosphate Buffered Saline), and treated with trypsin to recover the cells. The recovered cells were counted using a hematocytometer, centrifuged for 10 minutes, and then the supernatant was removed to obtain a precipitate.

이 세포침전물은 60℃에서 건조한 후 10%가 함유된 1M의 수산화나트륨액 100㎕를 넣어 60℃ 항온조에서 세포내 멜라닌을 얻었다. 이 액을 가지고 마이크로프레이트(Microplate)로 490nm에서 흡광도를 측정하여 세포수당 멜라닌 함량을 본 발명의 피부개선 복합제로 처리하지 않은 대조군과 실험군(실시예 1 ~ 6 및 비교예 1 ~ 3)을 비교하여, 대조군 100%를 기준으로 %로 표시하였고, 그 결과를 하기 표 11에 나타내었다.After drying the cell precipitate at 60 ° C, 100 μl of 1M sodium hydroxide solution containing 10% was added to obtain intracellular melanin in a 60 ° C constant temperature bath. Using this solution, the absorbance was measured at 490 nm with a microplate to compare the melanin content per cell with the control group not treated with the skin improvement complex of the present invention and the experimental groups (Examples 1 to 6 and Comparative Examples 1 to 3). , It was expressed as a percentage based on 100% of the control, and the results are shown in Table 11 below.

구분division 세포수당 멜라닌 함량Melanin content per cell 대조군Control 100%100% 실시예 1Example 1 62.8%62.8% 실시예 2Example 2 61.3%61.3% 실시예 3Example 3 63.5%63.5% 실시예 4Example 4 60.8%60.8% 실시예 5Example 5 54.5%54.5% 실시예 6Example 6 52.1%52.1% 비교예 1Comparative Example 1 89.3%89.3% 비교예 2Comparative Example 2 80.5%80.5% 비교예 3Comparative Example 3 88.3%88.3% 비교예 4Comparative Example 4 61.0%61.0% 비교예 5Comparative Example 5 69.1%69.1%

상기 표 11의 측정결과를 살펴보면, 대조군과 비교할 때, 실시예 1 ~ 6 및 비교예 1 ~ 3이 멜라닌 함량이 감소하는 결과를 보였다. 그리고, 비교예 1 ~ 3 보다 실시예 1 ~ 6이 우수한 멜라닌 함량 감소 효과를 보였다.Looking at the measurement results of Table 11, compared to the control group, Examples 1 to 6 and Comparative Examples 1 to 3 showed a decrease in melanin content. And, Examples 1 to 6 showed better melanin content reduction effect than Comparative Examples 1 to 3.

특히, 화학식 1-1로 표시되는 화합물을 사용한 실시예 5 및 실시예 6이 실시예 1 ~ 4 보다 상대적으로 우수한 멜라닌 함량 감소 효과를 보였으며, 미백 효과를 극대화 하기 위해서는 화학식 1로 표시되는 화합물 및/또는 화학식 2로 표시되는 화합물을 사용하는 것이 유리함을 확인할 수 있었다.In particular, Example 5 and Example 6 using the compound represented by Formula 1-1 showed a relatively superior melanin content reduction effect than Examples 1 to 4, and in order to maximize the whitening effect, the compound represented by Formula 1 and / Or it was confirmed that it is advantageous to use the compound represented by the formula (2).

그리고, 실시예 1과 실시예 2 ~ 3 및 비교예 4 ~ 5를 비교해보면, 담배잎산 추출물의 함량이 증대하면 멜라닌 함량 감소 효과가 떨어지는 경향이 있음을 확인할 수 있었다.And, comparing Example 1 and Examples 2 to 3 and Comparative Examples 4 to 5, it was confirmed that the increase in the content of tobacco leaf acid extract tends to decrease the melanin content reduction effect.

상기 실험을 통하여, 본 발명의 피부개선 복합제가 멜라닌 감소를 통한 미백 효과가 있음을 확인할 수 있었다.Through the above experiment, it was confirmed that the skin improvement complex of the present invention has a whitening effect through melanin reduction.

제조예 1 : Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 제제의 제조Preparation Example 1: Preparation of Nrf2 induction revitalizing formulation

(1) 수상액의 제조(1) Preparation of aqueous solution

하기 표 12의 성분들을 용제에 완전 분산시킨 후, 정제수를 투입한 다음, 56 ~ 57℃로 가열 및 교반하여 완전 용해시켜서 수상액을 제조하였다.After completely dispersing the components of Table 12 in a solvent, purified water was added, and then heated and stirred at 56 to 57 ° C to completely dissolve to prepare an aqueous solution.

수상액Award amount 구분division 종류Kinds 중량부Parts by weight 피부컨디셔닝Skin conditioning 히알루론산(1% 농도)Hyaluronic acid (1% concentration) 39.239.2 감초분말Licorice powder 22 하이드롤라이트-5Hydrolite-5 58.858.8 금속이온봉쇄제Metal ion blocker EDTA-2NAEDTA-2NA 0.390.39 증점제Thickener 잔탄검(Keltrol F)Xanthan gum (Keltrol F) 0.980.98 보습제Moisturizer 글리세린glycerin 49.0649.06 점도감소제Viscosity reducing agent 디프로필렌 글라이콜Dipropylene glycol 58.8358.83 용제solvent 1,2-헥산디올1,2-hexanediol 19.6119.61 1,3-부틸렌글라이콜1,3-butylene glycol 19.6119.61 살균보존제Antiseptic preservative 클로페네신Clofenesin 5.885.88

(2) 유상액의 제조(2) Preparation of oily liquid

하기 표 13의 성분들을 혼합한 후, 68℃ 에서 아지믹서로 저어주면서 혼합 및 용해시킨 다음, 피막형성제를 투입하여 골고루 분산 및 혼합하여 유상액을 제조하였다.After mixing the components of Table 13, stirring and stirring with an agitator at 68 ° C., and then dispersing and mixing evenly by introducing a film-forming agent to prepare an emulsion.

유상액Emulsion 구분division 종류Kinds 사용량(중량부)Usage (parts by weight) 피부증발차단제Skin evaporation blocker MCT 오일MCT oil 87.587.5 스쿠알란Squalane 12.512.5 토코페릴아세테이트Tocopheryl Acetate Vit-E AcetateVit-E Acetate 0.6250.625 피부컨디셔닝Skin conditioning 쉐어버터Shea butter 12.5012.50 코코넛 오일Coconut oil 6.256.25 유화제Emulsifier 세테아릴글루코시드 및
세테아릴알코올(Emulgade PL 68/50)Cetearyl glucoside and
Cetearyl alcohol (Emulgade PL 68/50) 18.7518.75 세테아릴알코올(KALCOL 6850)Cetearyl alcohol (KALCOL 6850) 2525 피부유연화제Skin softener 하나 이상의 중간사슬 모노글리세라이드
포함 유상(AKOLINE MCM)One or more medium chain monoglycerides
Included payment (AKOLINE MCM) 55 비이온계면활성제Nonionic surfactant Tween 60Tween 60 12.512.5 피막형성제Film-forming agent SEPIPLUS 400SEPIPLUS 400 3.753.75

(3) 앞서 제조한 유상액에 수상액을 천천히 첨가한 후, 호모믹서를 이용하여 이들의 혼합물을 74 ~ 75℃ 하에서 2,500rpm의 교반 속도로 2분간 교반한 후, 45℃에서 Nrf2 활성화 복합제(실시예 1의 피부개선 복합제:정제수=45.5:64.5 부피%) 및 향료(Perfume 85147)를 첨가하고, 천천히 교반시켜서 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 제제 제조하였으며, 제조된 제제는 세럼 타입(마스크팩 포함)이다.(3) After the aqueous solution was slowly added to the oil solution prepared above, the mixture was stirred for 2 minutes at a stirring speed of 2,500 rpm under 74 to 75 ° C using a homomixer, and then the Nrf2 activated complex at 45 ° C ( The skin improvement complex of Example 1: purified water = 45.5: 64.5% by volume) and fragrance (Perfume 85147) were added and slowly stirred to prepare an Nrf2 induction revitalizing formulation, and the prepared formulation was a serum type (including mask pack).

그리고, 제조된 제제는 전체 중량 중 수상액 17.90 중량%, 유상액 20.70 중량%, Nrf2 활성화 복합제 6.54 중량%, 향료 0.28 중량% 및 잔량의 물을 포함하도록 제조하였다.In addition, the prepared formulation was prepared to include 17.90% by weight of the aqueous solution, 20.70% by weight of the oily solution, 6.54% by weight of the Nrf2 activated complex, 0.28% by weight of the fragrance, and the balance of water.

Claims

선복화 추출물, 종대황 추출물, 담배잎산말(Desmarestia tabacoides) 추출물 및 홍화씨 추출 발효물을 1 : 0.3 ~ 0.5 : 0.5 ~ 1.0 : 0.4 ~ 0.7 중량비로 포함하는 추출 혼합물을 포함하며,
상기 담배잎산말 추출물은 담배잎산말 추출물의 농도가 10 ~ 200ppm일 때, 하기 수학식 1에 의거하여 측정시, RAW264.7 세포에서의 일산화질소 생성 억제율이 10 ~ 45%인 것을 특징으로 하는 화장료용 복합제.
[수학식 1]
NO 생성 억제율(%) = (A-B)/Aⅹ100%
상기 수학식 1에서 A는 NO 활성 억제제 내 담배잎산말 추출물 농도가 0ppm일 때 RAW264.7 세포에서의 NO 생성량(100%)이고, B는 NO 활성 억제제 내 담배잎산말 추출물의 특정 농도에서의 RAW264.7 세포에서의 NO 생성량(%) 측정 값이다.Includes an extract mixture comprising a sunbokhwa extract, a species rhubarb extract, a desmarestia tabacoides extract, and a safflower extract fermentation product in a weight ratio of 1: 0.3 ~ 0.5: 0.5 ~ 1.0: 0.4 ~ 0.7,
The tobacco leaf aroma extract, when the concentration of the tobacco leaf aroma extract is 10 to 200ppm, measured according to the following equation 1, cosmetic composition characterized in that the rate of inhibition of nitrogen monoxide production in RAW264.7 cells is 10 to 45% Dragon complex.
[Equation 1]
NO production inhibition rate (%) = (AB) / Aⅹ100%
In Equation 1, A is the amount of NO produced in RAW264.7 cells (100%) when the concentration of the tobacco leaf aroma extract in the NO activity inhibitor is 0 ppm, and B is RAW264 at a specific concentration of the tobacco leaf aroma extract in the NO activity inhibitor. .7 This is a measure of the amount of NO produced in cells (%).

제1항에 있어서, 상기 추출 혼합물 100 중량부에 대하여, 택사(alisma orentale) 추출물 5 ~ 25 중량부를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료용 복합제.According to claim 1, With respect to 100 parts by weight of the extraction mixture, a combination for cosmetic, characterized in that it further comprises 5 to 25 parts by weight of taxa (alisma orentale) extract.

제1항에 있어서, 상기 추출 혼합물 100 중량부에 대하여, 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 1 ~ 10 중량부를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료용 복합제;
[화학식 1]

화학식 1의 A는 C₂ ~ C₄의 알킬렌기이고, R¹ 및 R² 각각은 독립적으로 수소원자, -OH, -COOH 또는 -COH이다.According to claim 1, With respect to 100 parts by weight of the extraction mixture, cosmetic composites characterized in that it further comprises 1 to 10 parts by weight of a compound represented by the formula (1);
[Formula 1]

A in Formula 1 is an alkylene group of C ₂ to C ₄ , and each of R ¹ and R ² is independently a hydrogen atom, -OH, -COOH or -COH.

삭제delete

수상액; 유상액; 제1항 내지 제3항 중에서 선택된 어느 한 항의 화장료용 복합제; 향료; 및 정제수;를 포함하며,
상기 수상액은 피부컨디셔닝제, 금속이온봉쇄제, 증점제, 보습제, 점도감소제, 살균보존제 및 용제를 포함하고,
상기 유상액은 수분증발차단제, 토코페릴아세테이트, 피부컨디셔닝제, 유화제, 피부유연화제, 비이온계면활성제 및 피막형성제를 포함하는 것을 특징으로 하는 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 화장료.Awards; Emulsions; Claims 1 to 3 of any one of the cosmetic combinations for cosmetics; Spices; And purified water;
The aqueous solution includes a skin conditioning agent, a metal ion blocker, a thickener, a moisturizer, a viscosity reducing agent, a sterilizing preservative and a solvent,
The emulsion is a Nrf2 induction revitalizing cosmetic comprising a water evaporation blocking agent, tocopheryl acetate, skin conditioning agent, emulsifying agent, skin softening agent, nonionic surfactant and film forming agent.

제6항에 있어서,
상기 수상액 15 ~ 20 중량%, 상기 유상액 18 ~ 25 중량%, 상기 화장료용 피부개선 복합제 1 ~ 15 중량%, 상기 향료 0.05 ~ 1 중량% 및 잔량의 정제수를 포함하는 것을 특징으로 하는 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 화장료.The method of claim 6,
Nrf2 induction, characterized in that it comprises 15 to 20% by weight of the aqueous solution, 18 to 25% by weight of the oily solution, 1 to 15% by weight of the cosmetic skin improvement complex, 0.05 to 1% by weight of the fragrance and the balance of purified water Revitalizing cosmetics.

제6항의 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 화장제를 포함하는 것을 특징으로 하는 화장품.A cosmetic comprising the Nrf2 induction revitalizing cosmetic agent of claim 6.

제6항의 Nrf2 인덕션 리바이탈라이징 화장제를 포함하는 것을 특징으로 하는 세럼(serum).A serum comprising the Nrf2 induction revitalizing cosmetic of claim 6.

삭제delete

수상액 및 유상액을 각각 제조하는 1 단계;
상기 유상액에 수상액을 첨가한 다음 교반시켜서 혼합물을 제조하는 2 단계;
40 ~ 50℃ 하에서 2 단계의 상기 혼합물, 제1항 내지 제3항 중에서 선택된 어느 한 항의 화장료용 피부개선 복합제, 향료 및 정제수를 혼합 및 2,000 ~ 3,000rpm의 교반 속도로 교반시키는 3 단계;를 포함하는 공정을 수행하며,
상기 화장료용 피부개선 복합제는 선복화 추출물, 종대황 추출물, 담배잎산말(Desmarestia tabacoides) 추출물 및 홍화씨 추출 발효물을 1 : 0.3 ~ 0.5 : 0.5 ~ 1.0 : 0.4 ~ 0.7 중량비로 포함하는 추출 혼합물을 포함하며,
상기 담배잎산말 추출물은
정제수 100 중량부에 대하여, 담배잎산말 추출물 20 ~ 30 중량부를 혼합하여 원료를 준비하는 1 단계; 상기 원료를 100 ~ 110℃ 하에서, 4 ~ 6시간 동안 증류추출을 수행하여 추출하여 추출물을 얻는 2 단계; 상기 추출물을 1차 필터링(filtering)하여 얻은 1차 여과액을 제조하는 3 단계; 및 상기 1차 여과액에 1,2-헥산디올을 첨가 및 교반한 후, 2차 필터링하여 담배잎산말 추출물을 제조하는 4 단계;를 포함하는 공정을 수행하여 제조한 것이고,
상기 홍화씨 추출 발효물은
홍화씨 분말을 n-헥산으로 15 ~ 30℃ 하에서 추출한 후, 추출물로부터 지방을 제거하는 1 단계; 지방이 제거된 추출물에 60 ~ 75 부피% 농도의 에탄올 수용액으로 15 ~ 30℃ 하에서 추출 및 여과하여 에탄올 추출물을 수득하는 2 단계; 상기 에탄올 추출물을 감압 농축 및 여과하여 감압 농축물을 수득하는 3 단계; 및 수득한 감압 농축물을 발효시켜서 발효물을 제조하는 4 단계;를 포함하는 공정을 수행하여 제조한 것을 특징으로 하는 화장료용 복합제의 제조방법.Step 1 for preparing each of the aqueous solution and the oil phase;
Step 2 to prepare a mixture by adding the aqueous solution to the emulsion and then stirred;
3 steps of mixing the mixture of the two steps under 40 to 50 ° C, the cosmetic skin improvement complex agent of any one selected from claims 1 to 3, fragrance and purified water and stirring at a stirring speed of 2,000 to 3,000 rpm. Process
The cosmetic skin-improving complex includes an extract mixture containing bokbok extract, seed rhubarb extract, desmarestia tabacoides extract and safflower seed extract fermentation in a weight ratio of 1: 0.3 ~ 0.5: 0.5 ~ 1.0: 0.4 ~ 0.7 And
The tobacco leaf acid extract
1 step of preparing raw materials by mixing 20 to 30 parts by weight of tobacco leaf acid extract with respect to 100 parts by weight of purified water; 2 steps to obtain the extract by extracting the raw material by performing distillation extraction for 4 to 6 hours under 100 ~ 110 ℃; 3 steps for preparing a primary filtrate obtained by primary filtering the extract; And 4 steps of adding and stirring 1,2-hexanediol to the primary filtrate, followed by secondary filtering to prepare a tobacco leaf aroma extract;
The safflower extract fermentation product
After the safflower seed powder is extracted with n-hexane under 15 ~ 30 ℃, 1 step of removing fat from the extract; Step 2 to obtain the ethanol extract by extracting and filtering under 15 ~ 30 ℃ with an aqueous solution of ethanol at a concentration of 60 ~ 75% by volume of the fat-extracted extract; Concentrating and filtering the ethanol extract under reduced pressure to obtain a reduced pressure concentrate; And 4 steps of preparing the fermented product by fermenting the obtained reduced-pressure concentrate.