KR102076001B1 - 콩잎 추출물을 포함하는 항염증용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 콩잎 추출물을 포함하는 항염증용, 항알러지용, 아토피 치료 또는 개선용, 보습용, 항균용 또는 모공 축소용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 염증의 원인 물질의 생성을 저해 또는 억제시켜 염증을 치료 또는 완화시킬 수 있는 항염증 효과를 가지고, 알러지를 치료 또는 완화시킬 수 있어서 유용하다. 또한 본 발명의 조성물은 아토피를 치료하거나 개선시킬 수 있으며, 각질형성세포에서 분화를 촉진하여 보습 효과를 가지므로, 피부 건조증과 관련된 질환의 치료 또는 증상의 완화에 유용하다. 특히 본 발명의 조성물은 항염증능, 항알러지능, 아토피 치료 또는 개선능 또는 보습능에 있어서 콩 추출물보다 더 우수한 효과를 보인다. 본 발명의 조성물은 또한 천연물로부터 얻어지는 자연 유래의 추출물을 포함하여 생물체에 자극이 거의 없다.

Description

콩잎 추출물을 포함하는 항염증용 조성물{COMPOSITION FOR ANTIINFLAMMATION CONTAINING EXTRACT OF SOYBEAN LEAF}

본 발명은 콩잎 추출물을 포함하는 항염증용, 항알러지용, 아토피 치료 또는 개선용, 보습용, 항균용 또는 모공 축소용 조성물에 관한 것이다.

인간의 피부는 인체의 일차 방어막으로서 온도 및 습도의 변화, 자외선, 공해물질과 같은 외부 환경의 자극으로부터 체내의 기관을 보호해 주는 기능을 하며, 나이가 들어감에 따라 여러 가지 내적, 외적 요인에 의해 변화를 겪는다. 즉, 내적으로는 신진대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하고, 면역 세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되어 생체에 필요한 면역 단백질 및 생체 구성 단백질들의 생합성이 줄어들게 되며, 외적으로는 오존층 파괴로 인하여 태양 광선 중 지표에 도달하는 자외선의 함량이 증가하고 환경 오염이 더욱 심화됨에 따라 자유 라디칼 및 활성 유해 산소 등이 증가함으로써, 피부의 두께가 감소하고, 주름이 증가하며, 탄력이 감소될 뿐 아니라 피부 혈색도 칙칙해지고, 피부 트러블이 자주 발생하며, 기미와 주근깨 및 검버섯 또한 증가하는 등 여러 가지 변화를 일으키게 된다.

이러한 피부 내적 및 외적 요인에 의한 피부 상태의 변화를 방지하고, 건강한 피부 상태를 유지하기 위해서 기존에 알려진 각종 동물, 식물, 미생물 등으로부터 얻은 생리 활성 물질들을 화장품에 부가하여 사용함으로써 피부 상태를 개선시키기 위한 노력이 있어 왔다.

이에 본 발명자들은 콩잎 추출물이 항염, 항알러지 효과뿐만 아니라 아토피 증상의 개선 효과도 제공할 수 있으며, 피부 보습 기능 효과 등의 피부 상태 개선 효과를 제공할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.

대한민국 공개특허 특1998-077876호

본 발명의 목적은 항염증용, 항알러지용, 아토피 치료 또는 개선용 또는 보습용으로 이용할 수 있는 천연 추출물을 포함하는 조성물을 제공하는 데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 콩잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 콩잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항알러지용 조성물을 제공하고, 콩잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 치료 또는 개선용 조성물 및 콩잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 보습용 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물은 염증의 원인 물질의 생성을 저해 또는 억제시켜 염증을 치료 또는 완화시킬 수 있는 항염증 효과를 가지고, 알러지를 치료 또는 완화시킬 수 있어서 유용하다. 또한 본 발명의 조성물은 아토피를 치료하거나 개선시킬 수 있고, 각질형성세포에서 분화를 촉진하여 보습 효과를 가지므로, 피부 건조증과 관련된 질환의 치료 또는 증상의 완화에 유용하며, 피부 가려움을 완화시킬 수 있다. 특히 본 발명의 조성물은 항염증능, 항알러지능, 아토피 치료 또는 개선능 또는 보습능에 있어서 콩 추출물보다 더 우수한 효과를 보인다. 본 발명의 조성물은 또한 천연물로부터 얻어지는 자연 유래의 추출물을 포함하여 생물체에 자극이 거의 없다.

본 명세서에서 '콩'은 그 종류에 제한이 없다. 본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 구체적으로, 본 명세서의 콩은 서리태, 서목태, 흑태, 청태, 황태, 울타리콩, 강낭콩, 얼룩강낭콩, 적두, 거두, 콩나물콩 및 대두로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함할 수 있지만 이에 제한되는 것은 아니다.

본 명세서에서 '콩잎'는 콩나무의 잎 부분을 의미한다.

본 명세서에서 '콩잎 추출물'은 추출과정에 있어서 예를 들면, 세척하고 건조시킨 콩잎 또는 이를 세말화한 콩잎 가루를 물 또는 유기용매에 넣고 추출하여 침적시킨 후 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 콩잎 추출물을 얻을 수 있다. 본 발명에 사용 가능한 유기용매는 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트, 클로로포름 또는 이들 유기용매와 물의 혼합용매에서 선택될 수 있으며, 원료의 안전성을 고려할 때 바람직하게는 물 또는 30~70% 농도의 에탄올을 사용한다. 상기에서 용매를 이용하여 추출물을 얻은 이후 당업계에 알려진 통상적인 방법으로 상온에서 냉침, 가열 및 여과하여 액상물을 얻을 수 있으며, 또는 추가로 용매를 증발, 분무 건조 또는 동결 건조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 당업계에서 일반적으로 사용되는 방법이라면 제한없이 사용하여 얻어질 수 있다.

본 발명은 일 관점에서 콩잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 일 관점인 상기 조성물은 피부 자극을 완화시키고, 염증을 완화시킬 수 있어서, 항염증용으로 사용할 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 조성물은 프로스타글란딘 또는 인터루킨의 발현을 억제 또는 저해시키거나 또는 프로스타글란딘 또는 인터루킨의 활성을 억제 또는 저해시킴에 따라 항알러지 효과를 가져올 수 있다.

본 발명은 일 관점에서 콩잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항알러지용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 일 관점인 상기 조성물은 알러지를 완화시키거나 또는 알러지의 원인이 되는 체내의 기작을 저해시켜서 알러지를 치료하거나 또는 완화시킬 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 조성물은 프로스타글란딘 또는 인터루킨의 발현을 억제 또는 저해시키거나 또는 프로스타글란딘 또는 인터루킨의 활성을 억제 또는 저해시킴에 따라 항알러지 효과를 가져올 수 있다.

본 발명은 일 관점에서 콩잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 치료 또는 개선용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 일 관점인 상기 조성물은 항염증 및 항알러지 효과를 가질 뿐 아니라, 피부 장벽 기능을 강화시키고 피부 각질형성세포의 분화를 유도시킬 수 있어서, 피부 보호막의 이상 등이 원인이 되어 피부 건조증을 보이는 아토피의 치료 또는 아토피 증상의 완화를 위하여 사용할 수 있다.

본 발명은 일 관점에서 콩잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 보습용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 일 관점인 상기 조성물은 피부 장벽 기능을 강화시키고 피부 각질형성세포의 분화를 유도시켜서 피부의 수분을 증가킴에 따라 촉촉한 피부로 만들 수 있다. 따라서 본 발명의 일 관점인 상기 조성물은 표피 분화의 불완전함으로 생기는 피부건조증, 아토피 피부염, 접촉성 피부염 또는 건선 등을 예방 또는 개선하는 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명은 일 관점에서 콩잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 일 관점인 상기 조성물은 구체적으로, 여드름균에 대하여 우수한 항균력을 보인다. 그러므로 상기 조성물은 여드름의 치료 및 완화에 있어서 효과적으로 사용가능하다.

본 발명은 다른 일 관점에서 콩잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 모공 축소용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 일 관점인 상기 조성물은 구체적으로, 콜라겐의 생합성을 증가시켜, 모공의 크기를 축소시킬 수 있다.

본 발명의 조성물은 각종 이유로 발생하는 피부 트러블 또는 피부 질환의 완화, 상태의 개선을 의미하거나 또는 피부 트러블 또는 피부 질환을 유발하는 각종 이유를 제거하거나 저해할 수 있고, 피부 외적인 상태 또는 이를 유발하는 피부 내적인 상태를 개선할 수 있어서 피부 상태를 개선시키는 데 유용하다.

본 발명의 조성물은 또한 모공 축소, 피지 조절 및 피부 트러블 개선용 조성물로서 사용될 수 있으며, 이는 피부에 적용 시 과잉으로 분비되는 피지를 억제하고, 활성 산소 제거와 콜라겐 합성을 촉진함으로써 모공을 축소시키며, 염증 인자의 발현 감소로 피부 트러블을 억제하는 효과가 탁월하다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 10 중량%의 콩잎 추출물을 포함할 수 있다.

조성물 총 중량에 대하여 콩잎 추출물의 함량이 0.001중량% 미만이면 항염, 항알러지, 아토피 등의 피부 트러블 개선, 피부 보습 효과가 미미하고, 10중량%를 초과하면 함유량 증가에 따른 뚜렷한 효과의 증가가 나타나지 않기 때문이다. 상기와 같은 관점에 있어서, 본 발명의 조성물은 조성물 총 중량에 대하여, 0.005~9.5중량%, 0.01~9중량%, 0.03~8.5중량%, 0.05~8중량%, 0.07~7.5중량%, 0.09~7중량%, 0.1~6.5중량%, 0.3~6중량%, 0.5~5.5중량% 또는 0.7~5중량%의 콩잎 추출물을 포함할 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 콩은 서리태 (Seoritae, Glycin max MERR), 서목태 (Seomoktae, Rhynchosia Nolubilis), 흑태 (Black soybean, Glycine max(L.) Merr.), 청태 (blue bean, Glycime max MERR ), 황태 (yellow bean, Glycime max MERR), 울타리콩 (field bean, Vicia faba), 강낭콩 (kidney bean, Phaseolus vulgaris), 얼룩강낭콩 (pinto bean, Phaseolus vulgaris L.), 적두 (small red bean, Vigna angularis), 거두 (small black bean, Phaseolus angularis W.F. WIGHT. ), 콩나물콩 (sprouting bean, Glycine max (L.) Merr.) 및 대두 (soybean, Glycine max)로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상을 포함한다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 프로스타글란딘의 생성을 억제 또는 저해시킬 수 있다. 본 발명의 일 관점인 상기 조성물은 프로스타글란딘 자체의 생성을 억제 또는 저해시킬 수 있거나 또는 프로스타글란딘의 활성을 억제 또는 저해시킬 수 있다. 본 발명의 일 관점인 상기 조성물은 또한 프로스타글란딘을 생성시키는 전단계 (up-stream)의 효소 또는 단백질의 활성을 억제 또는 저해시킬 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 인터루킨의 생성을 억제 또는 저해시킬 수 있다. 본 발명의 일 관점인 상기 조성물은 인터루킨 자체의 생성을 억제 또는 저해시킬 수 있거나 또는 인터루킨의 활성을 억제 또는 저해시킬 수 있다. 본 발명의 일 관점인 상기 조성물은 또한 인터루킨을 생성시키는 전단계 (up-stream)의 효소 또는 단백질의 활성을 억제 또는 저해시킬 수 있다. 구체적으로 상기 인터루킨은 인터루킨-6 또는 인터루킨-8을 포함할 수 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 균은 여드름균을 포함한다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 콜라겐의 생합성을 촉진시킬 수 있다. 상기 조성물은 콜라겐 자체의 생합성을 촉진시키거나 또는 활성을 증가시킬 수 있으며, 또는 콜라겐을 생성시키는 전단계 (up-stream)의 효소 또는 단백질의 활성을 증가 또는 촉진시킬 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 화장료 조성물을 포함한다.

본 발명에 따른 피부 외용제 조성물을 화장료의 형태로 제형화 할 경우, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이 크림, 영양 크림, 마사지 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 파우더, 에센스 또는 팩 등의 형태로 제형화 될 수 있으며, 그 제형이 특별히 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명에 의한 조성물은 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 상기 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다. 또한, 본 발명의 조성물은 피부 개선 효과를 증가시키기 위하여 피부 흡수 촉진 물질을 함유할 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기한 물질 이외에 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분들을 포함할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 보습제, 에몰리언트제, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및 무기 안료, 향료, 냉감제 또는 제한제를 더 포함할 수 있다. 상기 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.01 내지 5 중량%, 구체적으로 0.01 내지 3 중량%일 수 있다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 약학 조성물을 포함한다.

본 발명에 따른 조성물을 의약품에 적용할 경우에는, 상기 조성물을 유효성분으로 하여 상용되는 무기 또는 유기의 담체를 가하여 고체, 반고체 또는 액상의 형태로 경구 투여제 혹은 비경구 투여제로 제제화 할 수 있다.

상기 경구 투여를 위한 제재로서는 정제, 환제, 과립제, 캡슐제, 산제, 세립제, 분제, 유탁제, 시럽제, 펠렛제 등을 들 수 있다. 또한, 상기 비경구 투여를 위한 제재로는 주사제, 점적제, 연고, 로션, 스프레이, 현탁제, 유제, 좌제, 패ㅊ 등을 들 수 있다. 본 발명의 유효성분을 제제화하기 위해서는 상법에 따라서 실시하면 용이하게 제제화할 수 있으며 계면활성제, 부형제, 착색료, 향신료, 보존료, 안정제, 완충제, 현탁제, 기타 상용하는 보조제를 적당히 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 상기 약학 조성물은 경구, 비경구, 직장, 국소, 경피, 정맥 내, 근육 내, 복강 내, 피하 등으로 투여될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물의 유효 성분은 투여 받을 대상의 연령, 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 100mg/kg/일, 보다 구체적으로는 5 mg/kg/일 내지 50 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 건강식품 조성물을 포함한다.

본 발명에 따른 조성물은 포함하는 다양한 형태의 식품 첨가제 또는 기능성 식품을 제공한다. 상기 조성물을 포함하는 발효유, 치즈, 요구르트, 주스, 생균제제, 정제, 과립제, 드링크제, 캐러멜, 다이어트바 등으로 제형화될 수 있고, 통상적인 차 잎 형태나 티백 및 건강보조식품 등으로 가공될 수 있으며, 그 외 다양한 식품 첨가제의 형태로 사용될 수 있다.

일실시예에서 상기 조성물은, 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유할 수 있다. 예를 들어, 물성 개선을 위하여 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제, 보습제, 점증제, 무기염류, 유화제 및 합성 고분자 물질 등의 첨가제를 더 포함할 수 있다. 그 외에도, 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당 및 해초 엑기스 등의 보조 성분을 더 포함할 수도 있다. 상기 성분들은 제형 또는 사용 목적에 따라서 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 그 첨가량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 선택될 수 있다. 예를 들어, 상기 성분들의 첨가량은, 조성물 전체 중량을 기준으로, 0.01~5 중량%, 보다 구체적으로는 0.01~3 중량% 범위일 수 있다.

본 발명에 따른 조성물의 제형은 용액, 유화물, 점성형 혼합물, 타블렛, 분말 등의 다양한 형태일 수 있으며, 이는 단순 음용, 주사 투여, 스프레이 방식 또는 스퀴즈 방식 등의 다양한 방법으로 투여될 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

[ 제조예 1] 콩잎 추출물의 제조

콩잎 1.5 kg을 믹서기로 분쇄한 뒤 80% 에탄올 수용액 7 ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 콩잎 추출물 216 g을 얻었다.

[ 비교예 1] 콩 추출물의 제조

콩 1.5 kg을 믹서기로 분쇄한 뒤 80% 에탄올 수용액 7 ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 콩 추출물 252 g을 얻었다.

[ 시험예 1] 염증 개선 효과

1. 프로스타글란딘의 생성 억제 효과

항염증 효과를 프로스타글란딘의 생성 억제 효과로 평가하였다. 콩잎 추출물과 비교예1의 콩 추출물을 이용하여 대식세포를 대상으로 효과를 측정하였다. 우선, 마우스의 복강에서 채취한 대식세포에 최종농도가 500uM이 되도록 아스피린을 첨가해 세포에 잔존하는 시클로옥시제나제(cyclooxygenase, COX) 활성을 비가역적으로 억제하였다. 그런 다음 상기 현탁액을 96웰의 세포 배양관의 각 웰에 100μl를 넣어 5% CO₂와 37℃ 조건의 배양기에서 2시간 동안 배양하여 대식 세포를 용기 표면에 부착시켰다. 이어, 부착된 대식 세포를 PBS로 3회 세척한 후 이를 염증 개선 효과 시험에 사용하였다. 상기 배양된 대식세포 5x10⁴ 세포/ml에 LPS를 1%(w/v)로 함유하는 RPMI 배지를 첨가하여 12시간 동안 배양한 후 프로스타글란딘의 생성을 유발하고 콩잎 추출물을 100μl 처리하여 유리된 프로스타글란딘을 효소면역 분석법(ELISA)을 이용하여 정량하였다.

이때, 콩잎 추출물의 프로스타글란딘의 생성억제 활성은 LPS를 처리한 군과 처리하지 않은 군에서 각각 생성된 프로스타글란딘의 차이를 100%로 설정하고, LPS와 시료를 함께 처리하여 감소된 프로스타글란딘의 백분율을 통하여 대조군과 비교, 판정하였으며, 그 결과(프로스타글란딘의 생성억제 효과)를 하기 표 1에 나타내었다.

시험물질	프로스타글란딘 억제능 (%)
블랭크 (Blank)	0%
대조군 (아스피린 처리군)	56.3%
콩 추출물	21.4%
콩잎 추출물	61.9%

상기 표 1에서 보는 바와 같이, 실험결과 아스피린으로 처리한 대조군과 같이 콩잎 추출물을 처리한 경우에도 프로스타글란딘의 생성 억제 효과가 매우 높음을 알 수 있었다. 또한 콩 추출물에 비하여 콩잎 추출물은 프로스타글란딘의 생성 억제 효과가 더 우수함을 알 수 있었다. 이를 통해 본 발명의 콩잎 추출물은 우수한 염증 개선 효과를 제공할 수 있음을 알 수 있었다. 또한, 콩잎 추출물은 피부 염증 인자인 프로스타글란딘의 발현을 억제하여 피부 트러블을 방지하고 개선시킬 수 있음을 알 수 있었다.

2. IL -8 생성 억제 효과

실험 하루 전 피부 각화상피세포(Normal human skin keratinocyte, NHEK, 입수처: Lonza)를 96웰(well) 플레이트에 5x10⁴ 세포/웰이 되도록 분주한 후 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터(incubator)에서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 후, PBS로 세포를 2회 씻어주고 무혈청 KBM(serum free keratinocyte basement media)으로 갈아주었다. 콩 추출물 50ppm과 각각의 웰에 콩잎 추출물을 하기 표 2의 농도별로 처리하여 30분간 반응시킨 후, PGSA(10㎍/㎖) 를 각각의 웰에 처리하였다. 여기서, PGSA(peptidoglycan from S. aureus)는 포도상구균에서 추출한 펩티도글리칸(peptidoglycan)으로서, 그람 양성(+) 균의 세포벽의 주요 구성 성분이고 박테리아의 세포막 성분들은 염증을 유발시키는 것으로 알려져 있으며, 특히 포도상구균의 경우 아토피 환자의 90% 정도가 이 균에 의한 2차 감염을 일으키는 것으로 보고되어 있다. 24시간 동안 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 배양한 후 배양액을 취하여 인터루킨-8(Interleukin-8, IL-8)에 대한 ELISA를 진행하였으며, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다. ELISA는 제조회사(BD science)의 실험 방법을 이용하였다.

시험물질	IL-8 분비 (pg/㎖)
무처리 대조군 (Control)	932.19
PGSA (10㎍/㎖)	4831.20
콩 추출물 (50ppm) + PGSA (10㎍/㎖)	3987.37
콩잎 추출물 (5ppm) + PGSA (10㎍/㎖)	3832.38
콩잎 추출물 (25ppm) + PGSA (10㎍/㎖)	2412.41
콩잎 추출물 (50ppm) + PGSA (10㎍/㎖)	1477.25

상기 표 2에서 콩잎 추출물이 PGSA와 LPS에 의해 증가한 IL-8의 분비를 현저히 감소 및 억제시키는 것을 확인할 수 있었다. 또한 콩 추출물과 비교하여도 현저히 높은 IL-8 분비 억제 효과를 확인할 수 있었다. 따라서, 본 발명의 피부 외용제 조성물은 PGSA 의해 증가한 IL-8의 분비를 현저히 감소시킴으로써 우수한 항염증 효과를 제공할 수 있음을 알 수 있다.

[ 시험예 2] 가려움 완화 평가

실험 하루 전 각질형성세포(세포주명: HaCaT 입수처: ATCC)를 96 웰(well) 플레이트에 4x10⁴세포/웰이 되도록 분주한 후 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터(incubator)에서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 후, HBSS(Hanks’Balanced Salt solution) 버퍼로 96 웰 플레이트를 2회 워싱(washing)한 후, 반응 버퍼(2μM Fluo-4-AM, 20% pluronic acid, 2.5mM probenecid)를 세포에 넣어주었다. 37℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 30분, 상온에서 30분간 반응시킨 후, HBSS 버퍼로 2회 워싱 하고 하기 표 3과 같은 농도(%)의 콩잎 추출물로 세포를 처리하였다.

10분간 반응시킨 후, 2U/ml 트립신(Trypsin) 또는 5μM PAR-2 활성 펩타이드(SLIGKV)를 처리하고 80초간 세포 내 Ca^{2 +} 농도 변화를 측정하였다. 세포 내 Ca^{2 +} 농도 변화 측정은 플렉스테이션3(FlexStation 3: Molecular Device, USA)를 이용하였다. 콩잎 추출물, 콩 추출물과 2U/ml 트립신(Trypsin) 또는 5μM PAR-2 활성 펩타이드(SLIGKV) 처리 후 80초간의 플렉스(flex)를 측정하여 얻어낸 값의 최소값과 최대값의 차를 구한 후, 그 값을 2U/ml 트립신 또는 5μM PAR-2 활성 펩타이드(SLIGKV) 처리 시의 최소값과 최대값의 차와 비교하여 칼슘 이온들의 세포 내 유입에 대한 억제율(%)을 하기 표 3에 나타내었다.

시험 물질 농도	칼슘 이온들의 세포 내 유입에 대한 억제율 (%)
	트립신 (2U/ml)	PAR-2 활성 펩타이드 (5μM)
콩잎 추출물0.05%	25.2	18.4
콩잎 추출물 0.1%	31.4	25.7
콩잎 추출물 0.5%	45.7	48.3
콩 추출물 0.5%	25.9	16.4

상기 표 3에서 알 수 있듯이, 트립신 또는 PAR-2 활성 펩타이드(SLIGKV)에 의한 세포 내 칼슘 이온들의 유입이 콩잎 추출물의 처리에 의해 감소되었으며, 콩잎 추출물의 농도를 높여줌에 따라 세포 내 칼슘 이온들의 유입이 현저하게 감소됨을 확인할 수 있었다. 또한 콩 추출물과 비교할 때, 콩잎 추출물이 현저히 높은 칼슘 이온 유입 억제 효능을 가짐을 확인할 수 있었다.

따라서, 본 발명의 콩잎 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물은 가려움을 유발시키는 PAR-2 활성을 효과적으로 억제함으로써 우수한 항소양 효과를 제공할 수 있다.

[ 시험예 3] 여드름균에 대한 항균력 시험

하기 표 4에 나타낸 성분 및 함량(중량%)에 따라 제형예 1 및 비교제형예 1~3를 제조하였다. 구체적으로 설명하면, 제형예 1은 콩잎 추출물을 배합시킨 것이고, 비교제형예 1은 여드름 피부 개선의 유효성분을 전혀 포함시키지 않은 것이며, 비교제형예 2는 항균력에 대한 기준으로 삼을 표준물질로서, 여드름 치료제로 많이 사용하는 에리스롬마이신(erythromycin)을 함유시킨 것이다. 비교제형예 3은 콩 추출물을 배합시킨 제형이다.

제형예 1 및 비교제형예 1~3의 제조 방법은 다음과 같다. 하기 표 4의 A상의 성분들을 완전 용해시키고 별도의 용해조에서 B상의 성분들을 완전 용해시킨 다음, B상을 A상에 첨가하여 혼합 가용화 시켰다. 여기에 C상의 성분들을 표 4에 기재된 배합비율에 따라 첨가하여 혼합 균일화시킨 다음 여과시켜 본 조성물들을 제조하였다.

배합성문 (중량%)		제형예 1	비교제형예 1	비교제형예 2	비교제형예 3
A	정제수	To 100	To 100	To 100
	EDTA -2 Na	0.02	0.02	0.02
	글리세린	5.0	5.0	5.0
B	에탄올	2.0	2.0	2.0
	PEG -60 경화 피마자유 ( hydrogenated castor oil )	0.4	0.4	0.4
	향료( perfume )	0.04	0.04	0.04
C	콩잎 추출물	5.0	-	-
	에리스롬마이신	-	-	5.0
	콩 추출물	-	-	-	5.0

제형예 1 및 비교제형예 1~3의 조성으로 제조된 각각의 화장료 조성물을 가지고 여드름 원인 균주인 프로피오니박테리움 아크네스(ATCC 6919: 배지-BHI 브로스(broth))에 대하여 항균력을 시험하였다.

여드름균에 대한 항균력 시험 방법은 다음과 같았다.

(1) 시험 균액 준비

프로피오니박테리움 아크네스는 BHI 브로스에 접종하여 혐기 배양한 배양액을 사용하였다.

(2) 희석 용액 준비

BHI 브로스(pH 6.8) 또는 LB 브로스(pH 4.5) 15ml에 상기 시험 균액을 0.15ml 첨가하여 잘 혼합한 것을 희석용액으로 사용하였다.

(3) 시료 준비

제형예 1 및 비교제형예 1~3로부터 제조된 화장료 조성물 원액 그대로를 시료로 사용하였다.

(4) 항균력 시험

1) 96웰의 세포 배양관(96 well plate) 1번 행에 출발 농도에 맞도록 시료를 넣고 희석용액으로 총량을 200μl씩을 넣는다.

2) 1번 행의 혼합액을 잘 섞어준 다음 100μl를 취하여 2번 행에 넣고 잘 섞어준 다음, 다시 100μl를 취하여 3번 행에 넣는 방식으로 이중 희석(double dilution)을 행한다.

3) 32℃에서 24시간 및 48시간 정치 배양한 후 현탁된 정도로 균의 증식 유무를 판단하여 균의 증식이 없는 최소농도를 MIC(최소저지농도; Minimum Inhibitory Concentration) 값으로 결정한다. 만약 혼합액이 불투명하여 균의 증식 유무를 판단하기 어려우면 현미경 관찰을 통하여 확인한다.

여드름균에 대한 항균력 시험 결과를 하기 표 5에 나타내었다. MIC는 제형에 함유된 유효성분의 농도로 환산하여 표기하였다.

항목	pH	프로피오니박테리움 아크네스
제형예 1	5.7	> 30 ppm
비교제형예 1	5.7	최고 농도 (항균력 없음)
비교제형예 2	5.7	> 90 ppm
비교제형예 3	5.7	> 200 ppm

MIC에서 ppm 농도가 작을수록 여드름균에 대한 항균력에 대하여 유효한 물질이라고 할 수 있다. 제형예 1은 공지의 여드름 치료제인 에리스롬마이신을 사용한 비교제형예 2보다 현저히 낮은 ppm 농도를 가지는 것으로 확인되므로, 콩잎 추출물을 함유하는 조성물이 매우 우수한 항균력을 가짐을 확인할 수 있었다. 뿐만 아니라 본 발명의 콩잎 추출물을 포함하는 제형예 1은 콩 추출물을 함유한 비교제형예 3에 비해 현저히 높은 항균 효과를 가짐을 확인할 수 있었다.

[ 시험예 4] 인체에서 아토피 증상 개선 시험

본 발명의 조성물에 의한 조성물을 화장료로 사용하기 위하여, 콩잎 추출물과 콩 추출물을 함유하는 조성물을 하기 표 6에 명시된 조성으로 크림을 제조하였다.

배합성분 (중량%)	제형예2	비교제형예 4	비교제형예 5
정제수	To 100	To 100	To 100
콩잎 추출물	1.0	-	-
콩 추출물	-	-	1.0
식물성 경화유	1.50	1.50	1.50
스테아린산	0.60	0.60	0.60
스테아릴 알코올	2.00	2.00	2.00
글리세롤 스테아레이트	1.00	1.00	1.00
폴리글리세릴-10 펜타스테아레이트 & 베헤닐 알코올 & 소디움 스테아로일 락틸에이트	1.00	1.00	1.00
아라키딜 베헤닐 알코올 & 아라키딜 글루코사이드	1.00	1.00	1.00
세틸아릴 알코올 & 세테아릴 글루코사이드	2.00	2.00	2.00
PEG-100 스테아레이트 & 글리세롤 올레이트 & 프로필렌 글리콜	1.50	1.50	1.50
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	11.00	11.00	11.00
사이클로메디콘	6.00	6.00	6.00
트리에탄올아민	0.1	0.1	0.1

본 발명의 조성물에 의한 아토피 증상 개선 효과를 확인하기 위하여, 상기 제형예 2 및 비교제형예 4~5에서 제조된 크림을 패널들에게 적용하여 아토피성 피부염 개선 정도를 평가하였다. 비슷한 정도의 증상을 나타내는 피부염 증상이 있다고 생각하는 패널 20명에 대하여, 각 조 10명씩 3개조로 나누어, 온도 24~26?, 습도 75% 조건에서 상기 표6의 각 조성물을 매일 2회씩 12주간 안면에 도포하게 하였다. 시험을 종료한 시점에 시험 대상자들로 하여금 설문지를 작성하게 하여 주관적인 효능 평가를 실시하였다. 설문에서는 아토피성 피부염의 증상을“소양감”, “건조함”, “각질 발생”, “비듬”, “홍반”, “부어오름”, “피부균열”, “진물과 습진”및 “태선화”로 나누고, 상기 증상이 있는 경우 각각의 증상에 대하여 개선 정도를 평가한 후 이를 평균 하여 아토피 증상 개선효과를 개인별로 평가하였다. 그 결과를 표 7에 나타내었다.

도포군(응답자수-명)	제형예 2	비교제형예 4	비교제형예 5
현저히 개선	3
개선	6	2	4
변화없음	1	8	6
악화

상기 표 7로부터, 본 발명의 콩잎 추출물을 함유하는 조성물이 비교제형예 4에 비해 기존의 아토피성 피부염 증상을 더욱 개선함을 확인할 수 있었다. 또한 콩 추출물을 함유하는 조성물에 비해서도 현저한 아토피성 피부염 개선 효과를 확인 할 수 있다.

[ 시험예 5] 모공 축소 효과

1. 콜라겐 생합성 촉진을 통한 모공 축소 효과

본 발명에 의한 콩잎 추출물의 콜라겐 생합성 촉진 효과를 TGF-β와 비교하여 측정하였다. 먼저, 섬유아세포(fibroblast)를 24 공(well)에 1공당 10⁵개씩 파종(seeding)하여 90% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 이를 24시간 동안 무혈청 DMEM 배지로 배양한 후 무혈청 배지에 녹인 본 발명의 콩잎 추출물, 콩 추출물과 TGF-β를 각각 10㎎/㎖씩 처리하고 CO₂ 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 이들의 상층액을 떠내어 프로콜라겐 형(I) ELISA 키트(procollagen type(I))를 이용하여 프로콜라겐 (procollagen)의 증감여부를 보았다. 그 결과를 하기 표 8에 나타내었으며, 콜라겐의 합성능은 비처리군을 100으로 하여 대비하였다.

시험물질	콜라겐 합성능 (%)
비처리군	100
TGF-β	183.5
콩 추출물	142.6
콩잎 추출물	178.2

상기 표 8과 같이, 본 발명의 콩잎 추출물은 양성대조군인 TGF-β 과 비슷한 콜라겐 합성능을 나타내는 것을 확인할 수 있었고, 이는 콩 추출물에 비해 현저한 것이었다. 따라서, 본 발명에 의한 콩잎 추출물이 모공 주변의 콜라겐 생성량을 증가시켜 넓어진 모공을 축소시킬 수 있음을 확인하였다.

2. 모공 축소 효과

본 발명의 콩잎 추출물에 의한 모공 축소 효과를 알아보기 위하여 표 6의 제형예 2 및 비교제형예 4~5를 이용하여 다음과 같이 평가하였다. 모공 크기가 넓은 피험자 남녀 30명을 선정하여 10명씩 3개 군으로 나누고 각 군별로 얼굴에 제형예 2 및 비교제형예 4~5의 각각의 영양크림을 4주간 매일 바르게 하였다. 모공 축소의 효과에 대한 판정은 실험 전과 4주 후 사진을 찍어서 전문가들의 육안 평가로 이루어졌다. 그 결과는 하기 표 9에서 나타내었다.

(평가 등급: 0 - 전혀 축소 되지 않았다; 5 - 매우 축소되었다)

시험물질	평가 등급
제형예 2	3.8
비교제형예 4	1
비교제형예 5	1.5

상기 표 9의 결과로부터, 비교제형예 4~5은 모공 축소 효과가 거의 없지만, 제형예 2의 경우에는 육안으로 확인 가능할 정도의 모공 축소 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 그러므로, 발명에 의한 콩잎 추출물은 모공의 크기를 감소시키는 효과가 우수함을 알 수 있었다.

이하, 본 발명에 따른 조성물의 제형 예를 설명하나, 약학 조성물 및 화장료 조성물은 여러 가지 제형으로 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

[제제예 1] 연질캅셀제

콩잎 추출물 150 mg, 팜유 2 mg, 팜경화유 8 mg, 황납 4 mg 및 레시틴 6 mg을 혼합하고, 통상의 방법에 따라 1 캡슐당 400 mg씩 충진하여 연질캅셀을 제조하였다.

[제제예 2] 정제

콩잎 추출물 150 mg, 포도당 100 mg, 홍삼추출물 50 mg, 전분 96 mg 및 마그네슘 스테아레이트 4 mg을 혼합하고 30% 에탄올을 40 mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60℃에서 건조하고 타정기를 이용하여 정제로 타정하였다.

[제제예 3] 과립제

콩잎 추출물 150 mg, 포도당 100 mg, 홍삼추출물 50 mg 및 전분 600 mg을 혼합하고 30% 에탄올을 100 mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 다음 포에 충진하였다. 내용물의 최종 중량은 1 g으로 하였다.

[제제예 4] 드링크제

콩잎 추출물 150 mg, 포도당 10 g, 홍삼추출물 50 mg, 구연산 2 g 및 정제수 187.8 g을 혼합하고 병에 충진하였다. 내용물의 최종 용량은 200 ml로 하였다.

[제제예 5] 건강 식품의 제조

콩잎 추출물 .............................. 1000 ㎎

비타민 혼합물

비타민 A 아세테이트.......................70 ㎍

비타민 E ............................................ 1.0 ㎎

비타민 B1........................................... 0.13 ㎎

비타민 B2 .......................................... 0.15 ㎎

비타민 B6........................................... 0.5 ㎎

비타민 B12......................................... 0.2 ㎍

비타민 C............................................. 10 ㎎

비오틴.................................................. 10 ㎍

니코틴산아미드.................................. 1.7 ㎎

엽산...................................................... 50 ㎍

판토텐산 칼슘.................................... 0.5 ㎎

무기질 혼합물

황산제1철.......................................... 1.75 ㎎

산화아연.............................................. 0.82 ㎎

탄산마그네슘...................................... 25.3 ㎎

제1인산칼륨.......................................... 15 ㎎

제2인산칼슘.......................................... 55 ㎎

구연산칼륨............................................ 90 ㎎

탄산칼슘.............................................. 100 ㎎

염화마그네슘..................................... 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

[제제예 6] 건강 음료의 제조

콩잎 추출물............................ 1000 ㎎

구연산..................................................... 1000 ㎎

올리고당..................................................... 100 g

매실농축액..................................................... 2 g

타우린............................................................ 1 g

정제수를 가하여 전체......................... 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비율을 임의로 변형 실시하여도 무방하다. 본 발명이 속한 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 내용을 바탕으로 본 발명의 범주 내에서 다양한 응용 및 변형을 행하는 것이 가능할 것이다.

[제형예 3] 유연화장수(스킨로션)

배합 성분	함량 (중량 %)
콩잎 추출물	0.1
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	2.0
프로필렌글리콜	2.0
카르복시비닐폴리머	0.1
피이지-12 노닐페닐에테르	0.2
폴리솔베이트 80	0.4
에탄올	10.0
트리에탄올아민	0.1
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

[제형예 4] 영양화장수(밀크로션)

배합 성분	함량 (중량 %)
콩잎 추출물	0.1
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
카르복시비닐폴리머	0.1
밀납	4.0
폴리솔베이트 60	1.5
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	5.0
스쿠알란	5.0
솔비타세스퀴올레이트	1.5
유동파라핀	0.5
세테아릴 알코올	1.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

[제형예 5] 영양크림

배합 성분	함량(중량%)
콩잎 추출물	0.1
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	3.0
유동파라핀	7.0
베타글루칸	7.0
카보머	0.1
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	3.0
스쿠알란	5.0
세테아릴 글루코사이드	1.5
소르비탄 스테아레이트	0.4
폴리솔베이트 60	1.2
트리에탄올아민	0.1
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

[제형예 6] 마사지 크림

배합 성분	함량(중량%)
콩잎추출물	0.1
글리세린	8.0
부틸렌글리콜	4.0
유동파라핀	45.0
베타글루칸	7.0
카보머	0.1
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	3.0
밀납	4.0
세테아릴 글루코사이드	1.5
세스퀴 올레인산 소르비탄	0.9
바세린	3.0
파라핀	1.5
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

[제형예 7] 팩

배합 성분	함량(중량%)
콩잎 추출물	0.1
글리세린	4.0
폴리비닐알콜	15.0
히알루론산 추출물	5.0
베타글루칸	7.0
알란토인	0.1
노닐 페닐에테르	0.4
폴리솔베이트 60	1.2
에탄올 방부제	6.0적량
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

[제형예 8] 연고

배합 성분	함량(중량%)
콩잎 추출물	0.1
글리세린	8.0
부틸렌글리콜	4.0
유동파라핀	15.0
베타글루칸	7.0
카보머	0.1
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	3.0
스쿠알란	1.0
세테아릴 글루코사이드	1.5
소르비탄 스테아레이트	0.4
세테아릴 알코올	1.0
밀납	4.0
방부제, 색소, 향료	적량
정제수	잔량

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (15)

1. 삭제
2. 삭제
3. 콩잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 증상이 있는 피부 보습용 화장료 조성물.
4. 삭제
5. 삭제
6. 삭제
7. 제3항에 있어서, 상기 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 10 중량%의 콩잎 추출물을 포함하는, 조성물.
8. 제3항에 있어서, 상기 콩은 서리태 (Seoritae, Glycin max MERR), 서목태 (Seomoktae, Rhynchosia Nolubilis), 흑태 (Black soybean, Glycine max(L.) Merr.), 청태 (blue bean, Glycime max MERR ), 황태 (yellow bean, Glycime max MERR), 울타리콩 (field bean, Vicia faba), 강낭콩 (kidney bean, Phaseolus vulgaris), 얼룩강낭콩 (pinto bean, Phaseolus vulgaris L.), 적두 (small red bean, Vigna angularis), 거두 (small black bean, Phaseolus angularis W.F. WIGHT. ), 콩나물콩 (sprouting bean, Glycine max (L.) Merr.) 및 대두 (soybean, Glycine max)로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 조성물.
9. 제3항에 있어서, 상기 조성물은 프로스타글란딘의 생성을 억제 또는 저해시키는, 조성물.
10. 제3항에 있어서, 상기 조성물은 인터루킨의 생성을 억제 또는 저해시키는, 조성물.
11. 삭제
12. 삭제
13. 삭제
14. 삭제
15. 삭제