KR102053749B1

KR102053749B1 - An antibody specific for Neisseria gonorrhoeae and the use thereof

Info

Publication number: KR102053749B1
Application number: KR1020180008883A
Authority: KR
Inventors: 김미경; 정지은; 이정현; 김재석
Original assignee: 강원대학교산학협력단; 한림대학교 산학협력단
Priority date: 2018-01-24
Filing date: 2018-01-24
Publication date: 2020-01-22
Also published as: KR20190090247A

Abstract

본 발명은 임질균(Neisseria gonorrhoeae)에 특이적으로 결합하는 임질균 특이적 항체, 또는 그 기능적 단편 및 이의 용도를 제공한다.
본 발명의 임질균 특이적 항체 및 이를 포함하는 조성물은 임질균의 검출, 임질의 진단 및 치료, 임질균의 검출 방법 및 임질 진단에 필요한 정보를 제공하기 위한 분석 방법에 있어서 환자 맞춤 진단 기술로서 유용하게 사용될 수 있다.The present invention is Neisseria gonorrhoeae ), or a functional fragment thereof and a functional fragment thereof.
Gonorrhea specific antibodies of the present invention and compositions comprising the same may be usefully used as patient-specific diagnosis techniques in the detection of gonorrhea, diagnosis and treatment of gonorrhea, methods of detecting gonorrhea and analytical methods for providing information necessary for diagnosis of gonorrhea. have.

Description

임질균 특이적 항체 및 이의 용도{An antibody specific for Neisseria gonorrhoeae and the use thereof}An antibody specific for Neisseria gonorrhoeae and the use

본 발명은 임질균 특이적 항체 및 이의 용도에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 항생제 저항성 임질균에 특이적으로 결합하는 항체 및 이의 용도에 관한 것이다.The present invention relates to gonorrhea specific antibodies and uses thereof, and more particularly, to antibodies and their use specifically binding to antibiotic resistant gonorrhea.

임질은 성병 중 한가지로 나이제리아 고노리아(Neisseria gonorrhoeae, 임균) 그람음성균에 의해 발병되는 질환이다. 매년 7천 8백만 명 이상의 새로운 환자가 감염되고 있으며, 특히 세파로스포린 계열의 제3세대 항생제에 저항성을 보이는 균주가 나타나고 있어 세계 공중 보건에 큰 문제로 대두되고 있다.Gonorrhea is one of the sexually transmitted diseases of Neisseria gonorrhoeae ) A disease caused by Gram-negative bacteria. More than 79 million new patients are infected each year, and strains that are especially resistant to cephalosporin-type third-generation antibiotics are emerging as a major problem for global public health.

따라서, 임질을 조기에 진단 및 관리하여 컨트롤할 수 있는 빠르고 정확한 진단 제품의 개발에 대한 연구가 필요하며, 특히 항생제 저항성 임균(임질균)을 검출할 수 있는 면역크로마토그래피 기반의 신속 진단 제품이 필요한 실정이다.Therefore, research on the development of fast and accurate diagnostic products for early diagnosis, management and control of gonorrhea is needed, and in particular, an immunochromatography-based rapid diagnosis product capable of detecting antibiotic-resistant gonococcus is required. to be.

종래 기술에서는, 고노리아 임균(임질균) 진단법은 환자 샘플을 배양하거나 그람염색법 및 유전자증폭법에 의한 진단이 주로 이루어진다. 그람(Gram) 염색으로 특징적인 그람음성 쌍구균이 호중구(neutrophil) 내에 많이 관찰되면 임상상과 맞추어서 진단 가능하나 그람음성 쌍구균은 상재균으로 있어서 여성에서는 현미경 소견만으로 확진할 수 없어 추가 진단 검사가 필요하다. 현재 많이 사용되고 있는 분자진단법(PCR 및 multiplex PCR)은 배양 및 PCR 법에 시간이 걸리고 장비가 필요하여서, 신뢰도 높은 항체진단법이 필요한 실정이다.In the prior art, the gonoria gonococcal (gonorrhea) diagnosis is mainly made by culturing a patient sample or by gram staining and gene amplification. If Gram staining is characteristically observed in neutrophils, many characteristic Gram-negative diplococci can be diagnosed according to the clinical picture. However, Gram-negative diplococci are epithelial bacteria. Molecular diagnostic methods (PCR and multiplex PCR), which are widely used at present, require time-consuming cultivation and PCR methods and require equipment, and require reliable antibody diagnostic methods.

하지만, 면역학적 진단법은 고노리아에 대한 특이성이 낮으며, 다른 나이제리아 종(예를 들어, 나이제리아 메닌지티디스)에 대한 교차반응이 있어 추가적인 검사가 필요한 단점이 있다. 따라서 민감도 높으며 고노리아에 특이적으로 결합하는 항체가 필요한 실정이다.However, immunological diagnostic methods have a low specificity for gonoria and have cross-reaction with other Nigerian species (eg, Nigerian meningitidis), which requires additional tests. Therefore, there is a need for an antibody having high sensitivity and specifically binding to gonoria.

현재 임상에서는 특정 항생제가 포함된 배양액에서의 임균 생장이 억제된 최소 항생제 농도(MIC, minimal inhibitory concentration)를 기준으로 항생제 내성을 판정하는 방법을 이용하고 있으며, 특정 내성 유전자를 증폭하거나 항생제 내성 균주를 검출 가능한 면역크로마토그래피 기반의 진단제품이 상용화되어 있지 않다. Current clinical practice is to determine antibiotic resistance based on the minimum inhibitory concentration (MIC), which inhibits the growth of gonococci in cultures containing specific antibiotics. No detectable immunochromatography based diagnostic products are commercially available.

또한, 현재 항생제 내성 균주에 대한 해결책으로써 솔리스로마이신(solithromycin, CEM-101), 게포티다신(gepotidacin, GSK2140944), 졸리플로다신(zoliflodacin, AZE0914/ETX0914)과 같은 새로운 고노리아 항균제가 임상 개발 단계에 있으나, 고노리아 치료제 및 백신뿐만 아니라 신속하게 고노리아 균을 검출할 수 있는 검출방법의 개발이 필요한 실정이다.In addition, new gonoria antimicrobials such as solithromycin (CEM-101), gepotidacin (GSK2140944), and zoliflodacin (AZE0914 / ETX0914) are currently in clinical development as a solution to antibiotic resistant strains. However, there is a need for the development of a detection method capable of rapidly detecting gonoria, as well as a gonoria treatment and a vaccine.

한국공개특허 특2001-0072121호 (2001.07.31.)Korean Patent Publication No. 2001-0072121 (2001.07.31.) 한국공개특허 특1996-7002907호 (1996.05.23.)Korean Patent Publication No. 1996-7002907 (1996.05.23.) 한국공개특허 특1991-0020441호 (1991.12.20.)Korean Unexamined Patent Publication No. 1991-0020441 (1991.12.20.)

PLOS ONE | DOI:10.1371/journal.pone.0148986 February 9, 2016PLOS ONE | DOI: 10.1371 / journal.pone.0148986 February 9, 2016

본 발명의 발명자들은 신속하게 고노리아 균(특히, 항생제 저항성 임질균)을 검출할 수 있는 검출방법에 대하여 연구하던 중, 특정 아미노산 서열의 상보성 결정부위(CDR, complementarity determining region)를 갖는 항체가 세팔로스포린 계열의 제3세대 항생제에 저항성 특징을 보이는 WHO L 균주에 특이적으로 결합하고, 임상환자로부터 분리한 2종의 임상분리주에 특이적으로 결합하면서도, 임질균 근연종으로 알려진 수막염을 일으키는 나이제리아 메닌지티디스(Neisseria meningitidis) 및 음성대조균주에 교차반응을 나타내지 않음으로써 임질균 검출에 사용될 수 있다는 것을 발견하였다.The inventors of the present invention, while searching for a detection method that can quickly detect gonorrhea (especially antibiotic resistant gonorrhea), the antibody having a complementarity determining region (CDR) of a specific amino acid sequence Nigeria Meningititi, which binds specifically to WHO L strains resistant to Sporin-type third-generation antibiotics and specifically to two clinical isolates isolated from clinical patients, causing meningitis known as gonorrhea myoma It has been found that it can be used to detect gonorrhea by not cross-reacting to Neisseria meningitidis and negative control strains.

따라서, 본 발명은 임질균(Neisseria gonorrhoeae)에 특이적으로 결합하는 항체 및 이를 포함하는 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.Accordingly, the present invention is directed to Neisseria An object specifically binding to gonorrhoeae ) and a composition comprising the same.

본 발명의 일 측면에 따라, 임질균(Neisseria gonorrhoeae)에 특이적으로 결합하는 임질균 특이적 항체, 또는 그 기능적 단편이 제공된다.According to one aspect of the invention, gonorrhea ( Neisseria gonorrhoeae ), or a functional fragment thereof is provided.

일 구현예에서, 상기 항체는 In one embodiment, the antibody is

서열번호 1로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 2로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 3으로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄;A heavy chain comprising a CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 1, a CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 2 and a CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 3;

서열번호 7로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 8로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 9로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄;A heavy chain comprising a CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 7, a CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 8 and a CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 9;

서열번호 13으로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 14로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 15로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄;A heavy chain comprising a CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 13, a CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 14 and a CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 15;

서열번호 19로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 20으로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 21로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄;A heavy chain comprising a CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 19, a CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 20 and a CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 21;

서열번호 25로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 26으로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 27로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄;A heavy chain comprising a CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 25, a CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 26 and a CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 27;

서열번호 31로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 32로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 33으로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄;A heavy chain comprising a CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 31, a CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 32 and a CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 33;

서열번호 37로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 38로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 39로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄;A heavy chain comprising a CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 37, a CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 38 and a CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 39;

서열번호 43으로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 44로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 45로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄; 및A heavy chain comprising a CDR-H1 region as set out in SEQ ID NO: 43, a CDR-H2 region as set out in SEQ ID NO: 44 and a CDR-H3 region as set out in SEQ ID NO: 45; And

서열번호 49로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 50으로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 51로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄;로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 폴리펩티드 서열을 포함하는 중쇄와,A heavy chain comprising a CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 49, a CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 50 and a CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 51; With heavy chain to do,

서열번호 4로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 5로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 6으로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄;A light chain comprising a CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 4, a CDR-L2 region as depicted in SEQ ID NO: 5 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 6;

서열번호 10으로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 11로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 12로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄;A light chain comprising a CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 10, a CDR-L2 region as depicted in SEQ ID NO: 11 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 12;

서열번호 16으로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 17로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 18로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄;A light chain comprising a CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 16, a CDR-L2 region as depicted in SEQ ID NO: 17 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 18;

서열번호 22로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 23으로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 24로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄;A light chain comprising a CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 22, a CDR-L2 region as depicted in SEQ ID NO: 23 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 24;

서열번호 28로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 29로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 30으로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄;A light chain comprising a CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 28, a CDR-L2 region as depicted in SEQ ID NO: 29 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 30;

서열번호 34로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 35로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 36으로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄;A light chain comprising a CDR-L1 region as set out in SEQ ID NO: 34, a CDR-L2 region as set out in SEQ ID NO: 35 and a CDR-L3 region as set out in SEQ ID NO: 36;

서열번호 40으로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 41로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 42로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄;A light chain comprising a CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 40, a CDR-L2 region as depicted in SEQ ID NO: 41 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 42;

서열번호 46으로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 47로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 48로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄; 및A light chain comprising a CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 46, a CDR-L2 region as depicted in SEQ ID NO: 47 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 48; And

서열번호 52로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 53으로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 54로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄;로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 폴리펩티드 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그 기능적 단편일 수 있다:And a light chain comprising a CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 52, a CDR-L2 region as depicted in SEQ ID NO: 53, and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 54; It may be an antibody, or a functional fragment thereof characterized by having a light chain.

일 구현예에서, 상기 기능적 단편은 단일 측쇄 항체(scFv)이거나, 항원결합 분절(Fab)이거나, 상기 CDR 영역을 포함하는 가변 도메인(variable domain)일 수 있다.In one embodiment, the functional fragment may be a single side chain antibody (scFv), an antigen binding fragment (Fab), or a variable domain comprising the CDR region.

일 구현예에서, 상기 항체는 상기 기재된 CDR-H1 영역, CDR-H2 영역, CDR-H3 영역, CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 CDR 영역과의 아미노산 서열상동성이 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상인 CDR 영역을 포함하는 항체, 또는 그 기능적 단편일 수 있다.In one embodiment, the antibody is on amino acid sequence with one or more CDR regions selected from the group consisting of the CDR-H1 region, CDR-H2 region, CDR-H3 region, CDR-L1, CDR-L2 and CDR-L3 described above It may be an antibody comprising a CDR region having at least 80% homology, preferably at least 90%, or a functional fragment thereof.

일 구현예에서, 상기 항체는 하기의 폴리펩티드 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 폴리펩티드 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그 기능적 단편일 수 있다:In one embodiment, the antibody may be an antibody, or functional fragment thereof, characterized in that it comprises any one polypeptide sequence selected from the group consisting of the following polypeptide sequences:

서열번호 1로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 2로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 3으로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 4로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 5로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 6으로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄로 구성되는 항체;CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 1, CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 2 and a heavy chain comprising CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 3 and CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 4 An antibody consisting of a light chain comprising a CDR-L2 region as depicted in 5 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 6;

서열번호 7로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 8로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 9로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 10으로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 11로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 12로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄로 구성되는 항체;CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 7, CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 8, and a heavy chain comprising a CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 9 and a CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: An antibody consisting of a light chain comprising a CDR-L2 region as depicted in 11 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 12;

서열번호 13으로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 14로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 15로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 16으로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 17로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 18로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄로 구성되는 항체;CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 13, CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 14 and heavy chain comprising CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 15 and CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 16 An antibody consisting of a light chain comprising a CDR-L2 region as depicted in 17 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 18;

서열번호 19로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 20으로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 21로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 22로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 23으로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 24로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄로 구성되는 항체;CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 19, CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 20 and heavy chain comprising CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 21 and CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: An antibody consisting of a light chain comprising a CDR-L2 region as depicted in 23 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 24;

서열번호 25로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 26으로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 27로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 28로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 29로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 30으로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄로 구성되는 항체;CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 25, CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 26 and heavy chain comprising CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 27 and CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: An antibody consisting of a light chain comprising a CDR-L2 region as set forth at 29 and a CDR-L3 region as set forth in SEQ ID NO: 30;

서열번호 31로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 32로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 33으로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 34로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 35로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 36으로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄로 구성되는 항체;CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 31, CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 32 and a heavy chain comprising CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 33 and CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: An antibody consisting of a light chain comprising a CDR-L2 region as depicted at 35 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 36;

서열번호 37로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 38로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 39로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 40으로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 41로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 42로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄로 구성되는 항체;CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 37, CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 38 and heavy chain comprising CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO. An antibody consisting of a light chain comprising a CDR-L2 region as depicted in 41 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 42;

서열번호 43으로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 44로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 45로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 46으로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 47로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 48로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄로 구성되는 항체; 및CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 43, CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 44 and a heavy chain comprising CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 45 and CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: An antibody consisting of a light chain comprising a CDR-L2 region as depicted in 47 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 48; And

서열번호 49로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 50으로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 51로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 52로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 53으로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 54로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄로 구성되는 항체.CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 49, CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 50 and heavy chain comprising CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 51 and CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: An antibody consisting of a light chain comprising a CDR-L2 region as depicted in 53 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 54.

일 구현예에서, 상기 항체는 하기의 중쇄 및 경쇄로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄로 구성되는 항체, 또는 그 기능적 단편일 수 있다:In one embodiment, the antibody may be an antibody consisting of a heavy and light chain selected from the group consisting of the following heavy and light chains, or a functional fragment thereof:

서열번호 55로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 56으로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;A heavy chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 55 and a light chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 56;

서열번호 57로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 58로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;A heavy chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 57 and a light chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 58;

서열번호 59로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 60으로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;A heavy chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 59 and a light chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 60;

서열번호 61로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 62로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;A heavy chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 61 and a light chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 62;

서열번호 63으로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 64로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;A heavy chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 63 and a light chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 64;

서열번호 65로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 66으로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;A heavy chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 65 and a light chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 66;

서열번호 67로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 68로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;A heavy chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 67 and a light chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 68;

서열번호 69로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 70으로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 및A heavy chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 69 and a light chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 70; And

서열번호 71로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 72로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄.A heavy chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 71 and a light chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 72.

일 구현예에서, 상기 항체는 상기 기재된 중쇄 또는 경쇄와의 아미노산 서열상동성이 80% 이상인 중쇄 또는 경쇄를 포함하는 항체, 또는 그 기능적 단편이거나, 상기 기재된 임질균 특이적 항체와의 아미노산 서열상동성이 70% 이상인 항체, 또는 그 기능적 단편일 수 있다.In one embodiment, the antibody is an antibody comprising a heavy or light chain having an amino acid sequence homology of 80% or more with the heavy chain or light chain described above, or a functional fragment thereof, or an amino acid sequence homology with the gonorrhea specific antibody described above. At least 70% of the antibody, or functional fragments thereof.

상기 항체는 단일클론 항체 또는 다클론 항체일 수 있다.The antibody may be a monoclonal antibody or a polyclonal antibody.

본 발명의 다른 측면에 따라, 상기 항체를 생산하는 세포주가 제공된다.According to another aspect of the invention, a cell line for producing said antibody is provided.

본 발명의 또 다른 측면에 따라, 상기 임질균 특이적 항체; 또는 상기 임질균 특이적 항체에 표지물질을 결합한 컨쥬게이트를 포함하는 임질균 검출용 조성물이 제공된다. 일 구현예에서, 상기 임질균은 항생제 저항성 임질균일 수 있으며, 바람직하게는 페니실린, 테트라사이클린, 시프로플록사신 및 세프트리악손으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 항생제에 저항성인 임질균일 수 있다. 일 구현예에서, 상기 임질균은 WHO L 표준균주일 수 있다. 일 구현예에서, 상기 표지물질은 효소, 루시퍼레이즈, 자성입자, 형광물질 및 방사성 동위원소로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있다.According to another aspect of the invention, the gonorrhea specific antibody; Or there is provided a composition for detecting gonorrhea comprising a conjugate in which a labeling substance is bound to the gonorrhea specific antibody. In one embodiment, the gonorrhea may be antibiotic resistant gonorrhea, preferably gonorrhea resistant to one or more antibiotics selected from the group consisting of penicillin, tetracycline, ciprofloxacin and ceftriaxone. In one embodiment, the gonorrhea may be WHO L standard strain. In one embodiment, the labeling agent may be any one selected from the group consisting of enzymes, luciferases, magnetic particles, fluorescent materials, and radioisotopes.

본 발명의 또 다른 측면에 따라, 상기 임질균 특이적 항체를 포함하는 임질 치료용 조성물이 제공된다.According to another aspect of the present invention, there is provided a composition for treating gonorrhea comprising the gonorrhea specific antibody.

본 발명의 또 다른 측면에 따라, 상기 임질균 특이적 항체; 또는 상기 임질균 특이적 항체에 표지물질을 결합한 컨쥬게이트를 포함하는 임질 진단용 조성물 및 상기 임질균 진단용 조성물을 포함하는 임질 진단용 키트가 제공된다.According to another aspect of the invention, the gonorrhea specific antibody; Or a gonorrhea diagnostic composition comprising a conjugate binding a label to a gonorrhea specific antibody and a gonorrhea diagnostic kit comprising the gonorrhea diagnosis composition is provided.

본 발명의 또 다른 측면에 따라, 상기 임질균 특이적 항체를 이용하여 시료 내에 임질균의 존재 여부를 검출하는 단계를 포함하는, 임질균의 검출 방법이 제공된다. 또한, 상기 임질균 특이적 항체를 이용하여, 개체로부터 분리된 생체 시료 내에 임질균의 존재 여부를 검출하는 단계를 포함하는, 임질 진단에 필요한 정보를 제공하기 위한 분석 방법이 제공된다.According to another aspect of the invention, there is provided a method for detecting gonorrhea, comprising detecting the presence of gonorrhea in a sample using the gonorrhea specific antibody. In addition, an analysis method for providing information necessary for diagnosis of gonorrhea is provided, comprising detecting the presence of gonorrhea in a biological sample isolated from an individual using the gonorrhea specific antibody.

본 발명에 의해, 특정 아미노산 서열의 상보성 결정부위(CDR)를 갖는 항체가 세팔로스포린 계열의 제3세대 항생제에 저항성 특징을 보이는 WHO L 균주에 특이적으로 결합하고, 임상환자로부터 분리한 2종의 임상분리주에 특이적으로 결합하면서도, 임질균 근연종으로 알려진 수막염을 일으키는 나이제리아 메닌지티디스(Neisseria meningitidis) 및 음성대조균주에 교차반응을 나타내지 않아서, 임질균 검출에 사용될 수 있다는 것이 밝혀졌다.According to the present invention, two types of antibodies having a specific amino acid sequence complementarity determining region (CDR) specifically bind to a WHO L strain showing resistance to cephalosporin family of third generation antibiotics and isolated from clinical patients. Neisseria , which binds specifically to clinical isolates of U.S., but causes meningitis known as gonorrhea myoma meningitidis ) and negative control strains were found to be cross-reactive and could be used to detect gonorrhea.

따라서, 본 발명의 임질균 특이적 항체 및 이를 포함하는 조성물은 임질균의 검출, 임질의 진단 및 치료, 임질균의 검출 방법 및 임질 진단에 필요한 정보를 제공하기 위한 분석 방법에 있어서 환자 맞춤 진단 기술로서 유용하게 사용될 수 있다.Therefore, the gonorrhea specific antibody and the composition comprising the same of the present invention are useful as a patient-specific diagnosis technique in the detection of gonorrhea, diagnosis and treatment of gonorrhea, a method for detecting gonorrhea and an analytical method for providing information necessary for diagnosis of gonorrhea. Can be used.

도 1은 임질균 균주를 배양한 사진이다.
도 2는 세포 기반의 파이지 디스플레이(phage display) 기술을 이용한 임질균 특이적 항체 발굴 방법을 도식화한 것이다.
도 3은 임질균 세포주에 특이적으로 결합하는 파이지-나노항체를 선별한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 임질균 WHO L(표준균주) 세포주에 특이적으로 결합하는 파이지-나노항체를 선별한 결과이다.
도 5는 임질균 특이적 파이지-나노항체의 교차반응을 평가한 그래프이다.
도 6은 동물세포 발현 시스템에서 발현한 항-임질균 나노항체의 결합력 분석 결과이다.
도 7은 동물세포 발현 시스템에서 발현한 항-임질균 나노항체의 개별 임상분리주에 대한 결합력 분석 결과이다.
도 8은 임질균 특이적 항체로 선별된 9종 항체의 항체 중쇄가변영역(VH) 및 상기 항체 경쇄가변영역(VL)의 상보성 결정부위(CDR)의 아미노산 서열이다. 1 is a photograph of the culture of gonorrhea strain.
Figure 2 is gonorrhea using cell-based phage display technology It is a schematic of a specific antibody discovery method.
Figure 3 is a graph showing the results of screening the phage-nano antibody specifically binding to gonorrhea cell line.
4 is gonorrhea Fiji-nano antibody specifically binding to WHO L (standard strain) cell line is the result of screening.
5 is a graph evaluating the cross-reactivity of gonorrhea-specific phage-nanoantibodies.
Figure 6 is a binding analysis of the anti- gonorrhea bacteria nanoantibodies expressed in the animal cell expression system.
FIG. 7 shows the results of avidity analysis for individual clinical isolates of anti- gonorrhea nanoantibodies expressed in animal cell expression systems.
8 shows amino acid sequences of the antibody heavy chain variable region (VH) and complementarity determining regions (CDRs) of the antibody light chain variable region (VL) of nine antibodies selected as gonorrhea specific antibodies.

이하, 본 발명에서 사용한 용어를 설명한다.Hereinafter, the term used by this invention is demonstrated.

본 발명에서 사용되는 용어 "항체"는 면역학적으로 특정 항원과 반응성을 갖는 면역글로불린 분자를 포함하며, 다클론 항체 및 단일클론 항체를 모두 포함하는 개념이다. 또한, 상기 용어는 키메라 항체(예를 들면, 인간화 뮤린 항체) 및 이종결합항체(예를 들면, 양특이성 항체)와 같은 유전공학에 의해 생산된 형태를 포함한다.As used herein, the term “antibody” includes immunoglobulin molecules that are immunologically reactive with specific antigens and is a concept that includes both polyclonal and monoclonal antibodies. The term also includes forms produced by genetic engineering such as chimeric antibodies (eg, humanized murine antibodies) and heterologous antibodies (eg, bispecific antibodies).

본 발명에서 사용되는 용어 "단일클론 항체"란 당해 분야에 공지된 용어로서 단일 항원성 부위에 대해서 지시되는 고도의 특이적인 항체를 의미한다. 통상적으로, 상이한 에피토프(epitope, 항원결정기)들에 대해 지시되는 상이한 항체들을 포함하는 다클론 항체와는 다르게, 단일클론 항체는 항원상의 단일 결정기에 대해서 지시된다. 단일클론 항체는 항원-항체 결합을 이용하는 진단 및 분석학적 분석법의 선택성과 특이성을 개선시키는 장점이 있으며, 또한 하이브리도마 배양에 의해 합성되기 때문에 다른 면역글로불린에 의해 오염되지 않는 또 다른 장점을 갖는다.As used herein, the term "monoclonal antibody" refers to a highly specific antibody directed against a single antigenic site as is known in the art. Typically, unlike polyclonal antibodies that include different antibodies directed against different epitopes, monoclonal antibodies are directed against a single determinant on the antigen. Monoclonal antibodies have the advantage of improving the selectivity and specificity of diagnostic and analytical assays using antigen-antibody binding, and also have another advantage of not being contaminated by other immunoglobulins because they are synthesized by hybridoma culture.

전형적으로, 면역글로불린은 중쇄 및 경쇄를 가지며 각각의 중쇄 및 경쇄는 불변 영역 및 가변 영역(상기 부위는 "도메인"으로 또한 알려져 있음)을 포함한다. 경쇄 및 중쇄의 가변 영역은, "상보성 결정 영역"(complementarity determining region, "CDR"로 표시됨)이라고 불리는 3개의 가변 영역 및 4개의 "구조 영역" (framework region)을 포함한다. 상기 CDR은 주로 항원의 에피토프에 결합하는 역할을 한다. 각각의 사슬(쇄)의 CDR은 전형적으로 N-말단으로부터 시작하여 순차적으로 CDR1, CDR2, CDR3로 불리고, 또한 특정 CDR이 위치하고 있는 사슬에 의해서 식별된다.Typically, immunoglobulins have heavy and light chains, each heavy and light chain comprising a constant region and a variable region (the site is also known as a "domain"). The variable regions of the light and heavy chains comprise three variable regions and four "framework regions" called "complementarity determining regions" (denoted "CDRs"). The CDRs mainly serve to bind epitopes of antigens. The CDRs of each chain (chain) are typically called CDR1, CDR2, CDR3, starting sequentially from the N-terminus and also identified by the chain in which the particular CDR is located.

본 발명에서 사용되는 용어 "파이지 디스플레이 기술"은 파이지 라이브러리로부터 표적 항원과 유의적인 결합능을 나타내는 파이지만을 선별하는 것을 통해, 항원과의 결합능을 나타내는 scFv를 선별하는 기술을 나타낸다. 상기 기술에서, "패닝(panning)"은 파이지의 외벽(coat)에 펩타이드를 발현(display)하는 파이지 라이브러리로부터 표적 분자(항체, 효소, 세포표면 리셉터 등)와 결합하는 성질을 지닌 펩타이드를 표면에 발현하고 있는 파이지만을 선택해 내는 과정을 일컫는다. 이러한 과정을 3 내지 10회 반복하여, 표적 항원에 대하여 유의적인 결합능을 나타내는 scFv를 선별할 수 있고, 최종적으로 선별된 scFv를 임질균 특이적 항체로 제조할 수 있다.As used herein, the term “figage display technique” refers to a technique for selecting scFv that exhibits an ability to bind an antigen by selecting a phage that has a significant ability to bind to a target antigen from a phage library. In this technique, "panning" refers to the surface of a peptide having the property of binding to a target molecule (antibodies, enzymes, cell surface receptors, etc.) from a phage library that displays the peptide on the outer coat of the phage. It refers to the process of selecting a wave that is expressed in. This procedure can be repeated 3 to 10 times to select scFvs that show significant binding capacity to the target antigen, and finally the selected scFvs can be prepared as gonococcal specific antibodies.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.EMBODIMENT OF THE INVENTION Hereinafter, this invention is demonstrated in detail.

본 발명은 임질균(Neisseria gonorrhoeae)에 특이적으로 결합하는 임질균 특이적 항체, 또는 그 기능적 단편을 제공한다.The present invention is Neisseria gonorrhoeae ), or a functional fragment thereof is provided.

본 발명에서는 임질균 특이적 나노항체를 스크리닝 및 선별하기 위하여 바이오패닝(도 2 참조)을 반복 진행하여 9종의 파이지-나노항체를 선별하였다(도 3 참조). In the present invention gonorrhea In order to screen and screen specific nanoantibodies, bio-panning (see FIG. 2) was repeated to select nine fiji-nanoantibodies (see FIG. 3).

구체적으로, 상기 항체는 Specifically, the antibody

서열번호 52로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 53으로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 54로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄;로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 폴리펩티드 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그 기능적 단편일 수 있다.And a light chain comprising a CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 52, a CDR-L2 region as depicted in SEQ ID NO: 53, and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 54; It may be an antibody, or a functional fragment thereof characterized by having a light chain.

상기 기능적 단편은 단일 측쇄 항체(scFv)이거나, 항원결합 분절(Fab)이거나, 상기 CDR 영역을 포함하는 가변 도메인일 수 있다.The functional fragment may be a single side chain antibody (scFv), an antigen binding fragment (Fab), or a variable domain comprising the CDR region.

또한, 상기 항체는 중쇄 및 경쇄의 가변 부위가 상기 CDR 영역의 아미노산 서열을 포함하거나 이들 서열과의 상동성이 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상인 서열을 포함할 수 있다.In addition, the antibody may comprise sequences in which the variable regions of the heavy and light chains comprise the amino acid sequences of the CDR regions or at least 80%, preferably at least 90%, more preferably at least 95% homology with these sequences. Can be.

서열번호 31로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 32로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 33으로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 34로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 35로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 36으로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄로 구성되는 항체;CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 31, CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 32 and CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 33 and CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: An antibody consisting of a light chain comprising a CDR-L2 region as depicted at 35 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 36;

일 구현예에서, 상기 항체는 상기 기재된 중쇄 또는 경쇄와의 아미노산 서열상동성이 80% 이상, 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상일 수 있다. 또한, 상기 기재된 임질균 특이적 항체와의 아미노산 서열상동성이 70% 이상인 항체, 또는 그 기능적 단편일 수 있다.In one embodiment, the antibody may have at least 80%, preferably at least 90%, more preferably at least 95% amino acid sequence homology with the heavy or light chains described above. It may also be an antibody, or functional fragment thereof, having an amino acid sequence homology of at least 70% with the gonorrhea specific antibody described above.

본 발명은 또한 상기 항체를 생산하는 세포주를 제공한다. 구체적으로, 상기 항체는 scFv(single-chain variable fragment) 부분을 PCR 등의 방법으로 증폭한 후, 백본(backbone) 벡터에 서브클로닝(subcloning)하여 동물세포에 형질주입(transfection)하여 발현시킬 수 있다. 또한, 상기 기능적 단편(Fab, scFc, Vh/Vl)은 상기와 같은 동일한 방법으로 대장균에서 발현시킬 수 있다.The present invention also provides a cell line producing the antibody. Specifically, the antibody may be expressed by amplifying a single-chain variable fragment (scFv) by PCR or the like and then subcloning into a backbone vector and transfecting the animal cell. . In addition, the functional fragments (Fab, scFc, Vh / Vl) can be expressed in E. coli in the same manner as described above.

상기 특정 서열의 상보성 결정부위(CDR)를 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL) 및 항체 경쇄가변영역(VL)을 갖는 항체는 세팔로스포린 계열의 제3세대 항생제에 저항성 특징을 보이는 WHO L 균주에 특이적으로 결합하고(도 4 및 도 6 참조), 임상환자로부터 분리한 2종의 임상분리주에 특이적으로 결합하며(도 7 참조), 임질균 근연종으로 알려진 수막염을 일으키는 나이제리아 메닌지티디스(Neisseria meningitidis) 및 음성대조균주에 교차반응을 나타내지 않는다는 것(도 5 및 도 6 참조)을 확인하였다.Antibodies having an antibody light chain variable region (VL) and an antibody light chain variable region (VL) comprising the complementarity determining regions (CDRs) of the specific sequence are resistant to WHO L strains that exhibit resistance to cephalosporin family of third generation antibiotics. Neisseria binds specifically to two clinical isolates isolated from clinical patients (see FIG. 7) and specifically causes meningitis known as gonorrhea myoma. meningitidis ) and negative control strain showed no cross reaction (see Fig. 5 and 6).

또한, 본 발명은 상기 임질균 특이적 항체; 또는 상기 임질균 특이적 항체에 표지물질을 결합한 컨쥬게이트를 포함하는 임질균 검출용 조성물을 제공한다.In addition, the present invention is the gonorrhea specific antibody; Or it provides a composition for detecting gonorrhea comprising a conjugate in which a labeling substance is bound to the gonorrhea specific antibody.

본 발명의 일 구현예에서, 상기 임질균은 항생제 저항성 임질균일 수 있으며, 예를 들어, 페니실린, 테트라사이클린, 시프로플록사신 및 세프트리악손으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 항생제에 저항성인 임질균일 수 있다. 일 구현예에서, 상기 임질균은 WHO L 표준균주일 수 있으며, 이는 세계보건기구(WHO)에서 각 균주의 표현형, 유전적 특징 및 게놈 분석을 진행하여 품질 보증(quality assurance)을 제공하고 있는 표준균주 14종 중 하나이다. 임질균(N. gonorrhoeae) WHO L 표준균주는 페니실린, 테트라사이클린, 시프로플록사신 및 제3세대 세팔로스포린 항생제 계열의 세프트리악손에 저항성을 나타내는 특징을 갖고 있어, 항생제 저항성 임질균의 지표로서 사용되고 있다.In one embodiment of the invention, the gonorrhea may be antibiotic resistant gonorrhea, for example, gonorrhea resistant to one or more antibiotics selected from the group consisting of penicillin, tetracycline, ciprofloxacin and ceftriaxone. In one embodiment, the gonorrhea may be a WHO L standard strain, which is a standard strain that provides quality assurance by performing phenotypic, genetic characteristics and genome analysis of each strain in the World Health Organization (WHO). One of fourteen species. N. gonorrhoeae WHO L standard strain has the characteristics of being resistant to penicillin, tetracycline, ciprofloxacin and third-generation cephalosporin antibiotic-based ceftriaxone, and is used as an indicator of antibiotic-resistant gonorrhea.

일 구현예에서, 상기 표지물질은 효소, 루시퍼레이즈, 자성입자, 형광물질 및 방사성 동위원소로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있다. 그러나, 상기 예시된 것들 외에 면역학적 분석법에 사용할 수 있는 것이라면 어느 것이라도 사용할 수 있다.In one embodiment, the labeling agent may be any one selected from the group consisting of enzymes, luciferases, magnetic particles, fluorescent materials, and radioisotopes. However, any of those that can be used for immunological assays other than those exemplified above may be used.

본 발명에 따른 상기 검출용 조성물은 본 발명의 단일클론 항체 및 면역학적 분석에 사용되는 시약이 포함될 수 있다. 면역학적 분석에 사용되는 시약으로는 항원-항체 결합을 원리로 하는 공지의 모든 정량분석방법에 사용되는 적합한 담체, 검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 표지, 용해제, 세정제가 포함된다. 상기 정량분석방법의 예로는 이에 한정되지는 않으나, 면역블롯팅, 면역침전법, 효소면역분석법, 단백질 칩, 래피트 어세이 및 마이크로 어레이 방법 등이 있다.The detecting composition according to the present invention may include a monoclonal antibody of the present invention and a reagent used for immunological analysis. Reagents used in immunological analysis include suitable carriers for use in all known quantitative methods based on antigen-antibody binding, labels capable of producing detectable signals, solubilizers, cleaning agents. Examples of the quantitative analysis method include, but are not limited to, immunoblotting, immunoprecipitation, enzyme immunoassay, protein chip, rapid assay, and microarray method.

상기에서 적합한 담체로는 이에 한정되지는 않으나 가용성 담체, 예컨대 당 분야에 공지된 생리학적으로 허용되는 완충액들 중 어느 한 가지(예를 들어, PBS) 또는 불용성 담체, 예컨대 폴리스틸렌, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리에스테르, 폴리아크릴로니트릴, 불소수지, 가교덱스트란, 폴리사카라이드, 유리, 금속, 아가로스 및 이들의 조합일 수 있다.Suitable carriers above include, but are not limited to, soluble carriers such as any one of the physiologically acceptable buffers known in the art (eg PBS) or insoluble carriers such as polystyrene, polyethylene, polypropylene, Polyester, polyacrylonitrile, fluororesin, crosslinked dextran, polysaccharide, glass, metal, agarose and combinations thereof.

본 발명은 또한 상기 임질균 특이적 항체를 포함하는 임질 치료용 조성물을 제공한다.The present invention also provides a composition for treating gonorrhea comprising the gonorrhea specific antibody.

일 구현예에서, 상기 임질 치료용 조성물은 약학적으로 허용되는 부형제, 담체, 희석제 등을 추가로 포함할 수 있다.In one embodiment, the gonorrhea composition may further comprise a pharmaceutically acceptable excipient, carrier, diluent and the like.

구체적으로, 상기 조성물은 담체로는 단백질, 폴리펩티드, 리포좀, 다당, 폴리락트산, 폴리글리콜산, 중합체성아미노산, 아미노산 공중합체 및 불활성 바이러스 입자와 같이 천천히 대사되는 거대분자를 들 수 있다. 예를 들면, 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 포스페이트 및 설페이트와 같이 무기산의 염; 아세테이트, 프로피오네이트, 말로네이트 및 벤조에이트와 같은 유기산의 염과 같은 약제학적으로 허용가능한 염; 물, 염수, 글리세롤 및 에탄올과 같은 액체, 및 수화제, 유화제 또는 pH 완충 물질과 같은 보조적 물질을 사용할 수 있다.Specifically, the composition may include macromolecules that are slowly metabolized, such as proteins, polypeptides, liposomes, polysaccharides, polylactic acid, polyglycolic acid, polymeric amino acids, amino acid copolymers, and inert virus particles. Salts of inorganic acids such as, for example, hydrochloride, hydrobromide, phosphate and sulfate; Pharmaceutically acceptable salts such as salts of organic acids such as acetates, propionates, malonates and benzoates; Liquids such as water, saline, glycerol and ethanol, and auxiliary substances such as wetting agents, emulsifiers or pH buffering materials can be used.

또한, 상기 조성물은 약학적 분야에서 통상의 방법에 따라 환자의 신체 내 투여에 적합한 단위투여형의 제제, 바람직하게는 단백질 의약품의 투여에 유용한 제제 형태로 제형화시켜 당업계에서 통상적으로 사용하는 투여방법을 이용하여 경구, 또는 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 수막강내, 심실내, 폐, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 소화관내, 국소, 설하, 질내 또는 직장 경로를 포함하는 비경구투여 경로에 의하여 투여될 수 있으나, 이들에 한정되는 것은 아니다.In addition, the composition may be formulated in a unit dosage form suitable for intrabody administration of a patient according to a conventional method in the pharmaceutical field, preferably in the form of a formulation useful for the administration of protein pharmaceuticals, and is commonly used in the art. Methods can be used to oral or intravenous, intramuscular, intraarterial, intramedullary, intramedullary, intraventricular, lung, transdermal, subcutaneous, intraperitoneal, intranasal, intestinal tract, topical, sublingual, intravaginal or rectal routes. It may be administered by a parenteral administration route, including, but not limited to.

이러한 목적에 적합한 제형으로는 정제, 환제, 당제(dragee), 산제, 캡슐제, 시럽제, 용액제, 겔제, 현탁제, 에멀젼, 마이크로에멀젼 등의 다양한 경구투여용 제제; 및 주사용 앰플과 같은 주사제, 주입제 및 하이포스프레이(hypospray)와 같은 분무제 등과 같은 비경구투여용 제제가 바람직하다. 주사 또는 주입용 제제의 경우에는 현탁액, 용액 또는 에멀젼 등의 형태를 취할 수 있고, 현탁화제, 보존제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 제제화제를 포함할 수 있다. 또한, 상기 항체 분자는 사용 전에 적절한 무균 액체를 재조정하여 사용할 수 있는 건조된 형태로 제제화될 수도 있다.Formulations suitable for this purpose include various oral preparations such as tablets, pills, dragees, powders, capsules, syrups, solutions, gels, suspensions, emulsions, microemulsions; And parenteral preparations such as injections, injectables, such as ampoules for injection, and nebulizers such as hypospray. Formulations for injection or infusion may take the form of suspensions, solutions or emulsions and may include formulations such as suspending agents, preservatives, stabilizers and / or dispersants. The antibody molecule may also be formulated in a dried form that can be used by readjusting the appropriate sterile liquid before use.

본 발명의 조성물은 유효성분으로서 위장관 내에서 분해되기 쉬운 항체 분자를 포함하므로, 상기 조성물이 위장관을 이용하는 경로에 의하여 투여되어야 하는 경우에는 분해로부터 항체를 보호하고, 항체를 방출한 후에는 위장관으로 흡수되는 약제를 포함하는 것이 바람직하다.Since the composition of the present invention contains an antibody molecule that is susceptible to degradation in the gastrointestinal tract as an active ingredient, when the composition is to be administered by a route using the gastrointestinal tract, the antibody is protected from degradation and absorbed into the gastrointestinal tract after releasing the antibody. It is preferable to include a drug.

본 발명의 조성물 또는 약학적 제제의 유효성분으로서 상기 항체는 사람을 포함하는 포유동물에 대해 하루에 0.01 내지 50 ㎎/㎏ 체중, 바람직하게는 0.1 내지 20 ㎎/㎏ 체중을 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 유효성분의 실제 투여량은 예방 또는 치료하고자 하는 질환, 질환의 중증도, 투여경로, 환자의 체중, 연령 및 성별, 약제조합, 반응 민감성 및 치료에 대한 내성/반응 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 하며, 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.As an active ingredient of the composition or pharmaceutical preparation of the present invention, the antibody is divided into 0.01 or 50 mg / kg body weight per day, preferably 0.1 to 20 mg / kg body weight, once or several times, for mammals including humans. May be administered. However, the actual dosage of the active ingredient may be based on a number of related factors such as the disease to be prevented or treated, the severity of the disease, the route of administration, the patient's weight, age and gender, drug combination, response sensitivity and resistance / response to treatment. It is to be understood that this determination should therefore be made, and therefore the dosages do not limit the scope of the invention in any aspect.

본 발명은 또한 상기 임질균 특이적 항체; 또는 상기 임질균 특이적 항체에 표지물질을 결합한 컨쥬게이트를 포함하는 임질 진단용 조성물 및 상기 임질균 진단용 조성물을 포함하는 임질 진단용 키트를 제공한다.The present invention also provides the above gonorrhea specific antibody; Or it provides a gonorrhea diagnostic composition comprising a conjugate bound to a gonorrhea specific antibody and a gonorrhea diagnostic kit comprising the gonorrhea diagnostic composition.

본 발명은 또한 상기 임질균 특이적 항체를 이용하여 시료 내에 임질균의 존재 여부를 검출하는 단계를 포함하는, 임질균의 검출 방법을 제공한다. 또한, 상기 임질균 특이적 항체를 이용하여, 개체로부터 분리된 생체 시료 내에 임질균의 존재 여부를 검출하는 단계를 포함하는, 임질 진단에 필요한 정보를 제공하기 위한 분석 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for detecting gonorrhea, comprising detecting the presence of gonorrhea in a sample using the gonorrhea specific antibody. In addition, the present invention provides an analysis method for providing information necessary for diagnosis of gonorrhea, comprising detecting the presence of gonorrhea in a biological sample isolated from an individual using the gonorrhea specific antibody.

본 발명의 기능적 항체 단편으로는 Fab, Fab', F(ab') 2 , scFv, Diabody, Tribody, dsFv, CDR을 함유하는 펩타이드 등을 들 수 있다.Functional antibody fragments of the present invention include Fab, Fab ', F (ab') 2, scFv, Diabody, Tribody, dsFv, peptides containing CDRs and the like.

Fab는 IgG를 단백질 분해효소 파파인으로 처리하여 수득되는 단편중(H쇄의 224번째의 아미노산 잔기로 절단된다), H쇄의 N 말단측 약 절반과 L쇄 전체가 디설파이드 결합(S-S 결합)으로 결합된 분자량 약 5만의 항원 결합 활성을 갖는 항체 단편이다.Fab binds about half of the N-terminal side of the H chain and the entire L chain with disulfide bonds (SS bonds) among fragments obtained by treating IgG with protease papain (cutting to the 224th amino acid residue of the H chain). Antibody fragment having an antigen binding activity of about 50,000 molecular weights.

본 발명의 Fab는 본 발명의 항체를 단백질 분해효소 파파인으로 처리하여 수득할 수 있다. 또는 당해 항체의 Fab를 암호화하는 DNA를 원핵생물용 발현 벡터 또는 진핵생물용 발현 벡터에 삽입하고, 당해 벡터를 원핵생물 또는 진핵생물로 도입함으로써 발현시켜 Fab를 제조할 수 있다.Fabs of the invention can be obtained by treating the antibodies of the invention with protease papain. Alternatively, the Fab can be prepared by inserting the DNA encoding the Fab of the antibody into an expression vector for prokaryotes or an expression vector for eukaryotes and introducing the vector into a prokaryote or eukaryote.

F(ab')2 는 IgG를 단백질 분해효소 펩신으로 처리하여 수득되는 단편중(H쇄의 234번째의 아미노산 잔기로 절단된다), Fab가 힌지영역의 S-S 결합을 개재하여 결합된 것보다 약간 큰 분자량 약 10만의 항원 결합 활성을 갖는 항체 단편이다.F (ab ') 2 is a fragment obtained by treating IgG with protease pepsin (cut to the 234th amino acid residue of the H chain), and the Fab is slightly larger than bound via the SS bond in the hinge region. An antibody fragment having an antigen binding activity of about 100,000 molecular weight.

본 발명의 F(ab') 2 는 본 발명의 항체를 단백질 분해효소 펩신으로 처리하여 수득할 수 있다. 또는 하기의 Fab'를 티오에테르 결합 또는 S-S 결합시켜 작제할 수 있다. Fab'는 상기 F(ab') 2 의 힌지영역의 S-S 결합을 절단한 분자량 약 5만의 항원 결합 활성을 갖는 항체 단편이다.F (ab ') 2 of the present invention can be obtained by treating the antibody of the present invention with protease pepsin. Alternatively, Fab 'below may be constructed by thioether linkage or S-S linkage. Fab 'is an antibody fragment having an antigen-binding activity of about 50,000 molecular weights obtained by cleaving the S-S bond of the hinge region of F (ab') 2.

scFv는 1개의 VH와 1개의 VL을 12잔기 이상의 적당한 펩타이드 링커(P)를 사용하여 연결한 VH-P-VL 내지는 VLP-VH 폴리펩타이드로, 항원 결합 활성을 갖는 항체 단편이다.scFv is a VH-P-VL or VLP-VH polypeptide that connects one VH and one VL with at least 12 residues of a suitable peptide linker (P) and is an antibody fragment having antigen binding activity.

본 발명의 scFv는 본 발명의 항체의 VH 및 VL을 암호화하는 cDNA를 수득하고, scFv를 암호화하는 DNA를 작제하며 당해 DNA를 원핵생물용 발현 벡터 또는 진핵생물용 발현 벡터에 삽입하여 당해 발현 벡터를 원핵생물 또는 진핵생물로 도입함으로써 발현시켜 제조할 수 있다.The scFv of the present invention obtains cDNA encoding the VH and VL of the antibody of the present invention, constructs a DNA encoding the scFv and inserts the DNA into an expression vector for prokaryotes or an expression vector for eukaryote to insert the expression vector. It can be produced by expression by introducing into a prokaryote or eukaryote.

Diabody는 항원 결합 특이성이 동일하거나 상이한 scFv가 이량체를 형성한 항체 단편이고, 동일한 항원에 대한 2가의 항원 결합 활성 또는 상이한 항원에 대한 2특이적인 항원 결합 활성을 갖는 항체 단편이다.Diabody is an antibody fragment in which scFvs with the same or different antigen binding specificities form dimers, and antibody fragments having bivalent antigen binding activity for the same antigen or bispecific antigen binding activity for different antigens.

본 발명의 Diabody는 예를 들면, 본 발명의 항체의 VH 및 VL을 암호화하는 cDNA를 수득하고, 3 내지 15 잔기의 폴리펩타이드 링커를 갖는 scFv를 암호화하는 DNA를 작제하며 당해 DNA를 원핵생물용 발현 벡터 또는 진핵생물용 발현 벡터에 삽입하여 당해 발현벡터를 원핵생물 또는 진핵생물로 도입함으로써 Diabody를 발현시켜 제조할 수 있다.Diabody of the present invention, for example, obtains a cDNA encoding the VH and VL of the antibody of the present invention, constructs a DNA encoding the scFv having a polypeptide linker of 3 to 15 residues and express the DNA for prokaryote Diabodies can be expressed by inserting the expression vector into a vector or an eukaryotic expression vector and introducing the expression vector into a prokaryote or eukaryote.

또한, linker P 길이가 3-10 일 때는 tribody가 형성되어, tribody로 포함할 수 있다.In addition, when the linker P length is 3-10, a tribody is formed and may be included as a tribody.

dsFv는 VH 및 VL 중 각각 하나의 아미노산 잔기를 시스테인 잔기로 치환한 폴리펩타이드를 당해 시스테인 잔기간의 S-S 결합을 개재하여 결합시킨 것을 말한다. 시스테인 잔기로 치환되는 아미노산 잔기는 Reiter 등에 의해 기재된 방법[참조: Protein Engineering, 7, 697(1994)]에 따라서 항체의 입체구조 예측에 근거하여 선택할 수 있다.dsFv means that the polypeptide which substituted each amino acid residue of VH and VL with the cysteine residue was couple | bonded through the S-S bond between the said cysteine residues. Amino acid residues substituted with cysteine residues can be selected based on the conformational prediction of the antibody according to the method described by Reiter et al. (Protein Engineering, 7, 697 (1994)).

인간 항체 유전다(gene)를 파이지 표면 단백질에 융합시킨 형태로 E. coli에서 발현시켜 파이지의 표면에 다양한 항체를 display 할 수 있다. 이 기술을 파이지 디스플레이라고 하며, 인체 내에 존재하는 다양한 조합의 항체 라이브러리(library)를 제작할 수 있다. 이 라이브러리로부터 패닝 방법에 의하여 특정 항원에 결합하는 인간 단일클론 항체를 선별할 수 있다.Various antibodies can be displayed on the surface of the phage by expressing in human E. coli fused to the surface protein of the human antibody gene. This technique is called Fiji Display, and it is possible to produce various combinations of antibody libraries present in the human body. From this library, human monoclonal antibodies that bind to specific antigens can be selected by a panning method.

이하, 본 발명을 실시예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이에 제한되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. However, the following examples are intended to illustrate the invention, but the scope of the invention is not limited thereto.

<실시예><Example>

1. One. 나이제리아Nigeria (( NeisseriaNeisseria ) 속 균주의 배양Culture of the Genus Strain

환자로부터 분리한 8종의 나이제리아 속 균주[N. gonorrhoeae(임질균)], N. sicca(음성 대조균주), N. meningitidis(수막염균, 근연종) 및 N. gonorrhoeae WHO L 표준균주를 초콜릿 아가 플레이트(chocolate agar plate)에 배양하여 콜로니를 스크레이프하여(scrape) PBS 버퍼(인산 완충액)로 세척하였다. 그 후, 56 ℃에서 30분간 열처리하여 균주를 불활성화(inactivation)시켰다. 불활성화된 균주는 초콜릿 한천 플레이트에 다시 배양하여 사멸을 확인하였다(도 1 참조).Eight strains of Nigeria genus [ N. gonorrhoeae (gonorrhea)], N. sicca (negative control strain), N. meningitidis (meningitis, late species) and N. gonorrhoeae WHO L standard strains isolated from patients were isolated from chocolate agar plates. Colonies were scraped and incubated in chocolate agar plates and washed with PBS buffer (phosphate buffer). Thereafter, heat treatment was performed at 56 ° C. for 30 minutes to inactivate the strain. Inactivated strains were cultured again on chocolate agar plates to confirm death (see FIG. 1).

2. 파이지 디스플레이(phage display) 기술을 이용한 2. Using phage display technology 임질균Gonorrhea 세포 특이적 Cell specific 나노항체의Nano-antibody 스크리닝 및 선별 Screening and Screening

임질균 특이적 나노항체를 스크리닝 및 선별하기 위하여 바이오패닝을 진행하였다. 바이오패닝을 진행하기 위해, 나노항체 라이브러리를 N. sicca(음성 대조균주)에 넣고 1시간 동안 교반하여 비특이적으로(non-specific) 결합하는 항체를 디플리션(depletion)시켰다. 디플리션된 나노항체 라이브러리는 임질균 임상분리주 8종 혼합물에 넣어 2시간 동안 반응시켰다. 비특이적 결합체를 세척하여 제거한 후, 임질균 혼합 균주에 결합한 특이적 파이지(phage)-나노항체를 얻기 위하여 100 mM 글리신(glycine, pH 2.1)을 넣고 인큐베이션한 후에 1 M 트리스-염산염(Tris-HCl, pH 8)으로 용출액을 중화시켰다. 파이지 나노항체를 증폭하기 위해, 용출된 용액을 TG1 세포(cell)에 넣어 준 뒤 파이지 나노항체를 발현하고 파이지 역가를 측정하여 다음 회(round)에 사용하였다. 총 3회(R1, R2, R3)까지 파이지 디스플레이를 진행하여 단일 콜로니(single colony)를 획득하였다(도 2 참조). Gonorrhea Biopanning was performed to screen and screen specific nanoantibodies. To proceed with biopanning, nanoantibody libraries were placed in N. sicca (negative control strain) and stirred for 1 hour to deplete non-specifically binding antibodies. Depleted Nanoantibody Libraries Reaction was carried out for 2 hours in a mixture of eight clinical isolates. After removing the nonspecific conjugate by washing, gonococcus In order to obtain specific phage-nanoantibody bound to the mixed strain, 100 mM glycine (glycine, pH 2.1) was added and incubated, and the eluate was neutralized with 1 M tris-hydrochloride (Tris-HCl, pH 8). In order to amplify the fiji nanoantibody, the eluted solution was placed in TG1 cells, and then, the fiji nanoantibody was expressed and the phage titer was measured and used in the next round. Fiery display was performed up to three times (R1, R2, R3) to obtain a single colony (see FIG. 2).

3. 3. 임질균Gonorrhea 세포 특이적Cell specific 저분자Low molecular weight 항체의 선별 Screening of Antibodies

임질균 세포 특이적 나노항체를 선별하기 위하여 하기와 같이 파이지-ELISA를 진행하였다. 임질균 바이오패닝을 통해 획득한 콜로니 중 576개에 대하여 실험을 진행하였다. 임질균 파이지-나노항체를 실험 전 날 TG1에서 발현시켰다. 면역플레이트(Immunoplate)에 임질균 및 음성대조균주 용해물(lysate) 및 BSA(bovine serum albumin)를 코팅하였다. 다음날 코팅된 플레이트를 3번 PBST(0.05%)(Phosphate Buffered Saline with 0.05% Tween 20)로 세척한 후, MPBST(3% milk PBST)을 넣어 37 ℃에서 1시간 동안 인큐베이션을 진행하였다. 발현된 파이지-나노항체는 3% MPBST로 1시간동안 교반하면서 블로킹(blocking)하였다. 그 후, 파이지-나노항체를 블로킹된 플레이트에 넣고 1시간 동안 상온에서 반응시켰다. 반응이 끝난 후, 플레이트를 6번 PBST(0.05%)로 세척해주고 HRP 컨쥬게이션된 항-M13(horseradish peroxidase conjugated anti-M13) 항체를 플레이트에 넣고 상온에서 1시간 동안 반응시켰다. 인큐베이션 후 6번 세척하고, TMB(Tetramethylbenzidine)를 넣어 발색을 관찰하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.Fiji-ELISA was performed to select gonococcal cell-specific nanoantibodies as follows. Experiments were conducted on 576 colonies obtained through gonococcus biopanning. Gonococcal phage-nanoantibodies were expressed in TG1 the day before the experiment. Gonorrhea on Immunoplate And negative control strain lysate and BSA (bovine serum albumin). The next day, the coated plate was washed three times with PBST (0.05%) (Phosphate Buffered Saline with 0.05% Tween 20), and then MPBST (3% milk PBST) was added and incubated at 37 ° C for 1 hour. The expressed phage-nanoantibody was blocked with 3% MPBST with stirring for 1 hour. Thereafter, the phi-nano antibody was placed in a blocked plate and reacted at room temperature for 1 hour. After the reaction, the plate was washed with PBST (0.05%) 6 times and HRP conjugated anti-M13 (horseradish peroxidase conjugated anti-M13) antibody was added to the plate and reacted at room temperature for 1 hour. After incubation, the cells were washed six times, and TMB (Tetramethylbenzidine) was added to observe color development. The absorbance was measured at 450 nm.

상기와 같이 실험하여 총 576개 클론 중 임질균 세포 특이적 80종 파이지-나노항체를 확인하였다. 또한, 80종 중 단일 DNA 서열을 가지는 최종 선별된 9종 파이지-나노항체의 임질균 세포주 특이적 결합을 도 3에 나타내었다.The experiment was carried out as described above to identify 80 goji-nano antibodies specific for gonorrhea cells among 576 clones in total. In addition, gonorrhea of nine final phage-nano antibodies selected from a single DNA sequence out of 80 species Cell line specific binding is shown in FIG. 3.

4. 4. 임질균Gonorrhea WHO L WHO L 표준균주Standard strain 특이적 Specific 나노항체의Nano-antibody 선별 Selection

세계보건기구(WHO)에서는 임질균(N. gonorrhoeae) 표준균주 14종을 선정하여 각 균주의 표현형, 유전적 특징 및 게놈 분석을 진행하여 품질 보증(quality assurance)을 제공하고 있다. 그 중, 임질균(N. gonorrhoeae) WHO L 표준균주는 페니실린, 테트라사이클린, 시프로플록사신 및 제3세대 세팔로스포린 항생제 계열의 세프트리악손에 저항성을 나타내는 특징을 갖고 있다. 따라서, WHO L 표준균주에 대한 나노항체의 특이적 결합을 분석하였다.In the World Health Organization (WHO) Fourteen strains of N. gonorrhoeae were selected to provide quality assurance by performing phenotypic, genetic and genome analysis of each strain. Among them, the N. gonorrhoeae WHO L standard strain is characterized by resistance to penicillin, tetracycline, ciprofloxacin, and ceftriaxone of the third generation cephalosporin antibiotic family. Therefore, specific binding of nanoantibodies to WHO L standard strains was analyzed.

임질균 균주에 특이적 결합을 보이는 파이지-나노항체 80종에 대하여, 임질균 WHO L 표준균주에 대한 결합 여부를 파이지-ELISA 방법으로 확인하였다. 임질균 WHO L 표준균주 및 음성대조균주 용해물을 96-웰 면역플레이트에 코팅하여 파이지-나노항체를 반응시킨 후, TMB 기질(substrate)로 발색하여 결합 여부를 확인하였다.Gonorrhea For 80 fiji-nanoantibodies showing specific binding to the strain, binding to gonococcus WHO L standard strain was confirmed by Fiji-ELISA method. Gonorrhea WHO L standard strain and negative control strain lysate were coated on 96-well immunoplate to react with the phage-nano antibody, followed by color development with TMB substrate to confirm binding.

상기와 같이 실험하여 임질균 WHO L 표준균주에 특이적으로 결합하는 63종 파이지-나노항체를 확인하였다. 63종 중 단일 DNA 서열을 가지는 최종 선별된 9종 파이지-나노항체의 임질균 WHO L 표준균주 특이적 결합 결과를 도 4에 나타내었다.Experiment as above to gonorrhea 63 FY-nano antibodies were identified that specifically bind to the WHO L standard strain. Gonorrhea of 9 final phage-nanoantibodies selected from a single DNA sequence out of 63 WHO L standard strain specific binding results are shown in FIG. 4.

5. 5. 임질균Gonorrhea 특이적 선별 항체의 교차반응 평가Cross Reaction Assessment of Specific Selective Antibodies

사람에 집락형성(colonization)하는 나이제리아 속 11종 중에 병원균으로 알려져 있는 균주는 임질균(N. gonorrhoeae) 및 수막염균(N. meningitidis) 2종이다. 따라서 수막염을 일으키는 N. meningitidis 근연종(closely related species)에 대하여 나노항체의 교차반응을 평가하였다.The colonization of Nigeria in humans Among 11 strains known as pathogens, two species are N. gonorrhoeae and N. meningitidis . Therefore, we evaluated the cross-reactivity of nanoantibodies against N. meningitidis closely related species that cause meningitis .

선별 항체 교차반응 평가를 위해 임질균 WHO L 표준균주에 특이적 결합을 보이는 파이지-나노항체 63종을 N. meningitidis 근연종에 결합 여부를 분석하였다. N. gonorrhoeae , N. gonorrhoeae WHO L(표준균주), 음성대조균주 및 N. meningitidis(근연종) 용해물을 면역플레이트에 코팅하여 파이지-나노항체를 반응시킨 후, ABTS[2,2′-azino-di-(3-ethylbenzthiazoline sulfonic acid)] 기질로 발색하여 405 nm에서 흡광도 측정하여 그 결합 여부를 확인하였다.Gonorrhea for Screening Antibody Cross-Reaction Assessment 63 FY- nanoantibodies showing specific binding to WHO L standard strain were analyzed for binding to N. meningitidis species. N. gonorrhoeae , N. gonorrhoeae WHO L (standard strain), negative control strain, and N. meningitidis (relaxation species) lysate were coated on the immunoplate and reacted with the pyge-nano antibody, followed by ABTS [2,2′- azino-di- (3-ethylbenzthiazoline sulfonic acid)] was developed and the absorbance was measured at 405 nm to confirm its binding.

상기와 같이 실험하여 N. meningitidis 근연종에 결합하는 4종의 파이지-나노항체를 제외한 총 59종 파이지-나노항체를 선별하였다. 59종 중 단일 DNA 서열을 가지는 최종 선별된 9종 파이지-나노항체의 교차반응 평가 결과를 도 5에 나타내었다.Experiment as above to N. meningitidis A total of 59 FY-nano antibodies were selected, except for four FY-nano antibodies that bind to the related species. 5 shows the cross-reaction evaluation results of the final selected 9 kinds of pie-nano antibodies having a single DNA sequence among 59 species.

6. 동물세포 발현 시스템에서 발현한 항-6. Anti-expression in Animal Cell Expression System 임질균Gonorrhea 나노항체의Nano-antibody 나이제리아Nigeria 균주에 대한 결합력 분석Binding Analysis for Strains

파이지-나노항체를 동물세포 발현 시스템에서 발현 가능하도록 클로닝 진행하여 나이제리아 균주에 대한 결합력을 분석하였다. 클로닝을 진행하기 위하여 선별한 파이지-나노항체의 scFv(single-chain variable fragment) 부분을 PCR 방법으로 증폭한 후, AgeI 및 HindIII 제한효소로 처리(digestion)하여 동물세포에서 발현 가능한 백본(backbone) 벡터에 서브클로닝(subcloning)을 진행하였다. 그 후, HEK293F 동물세포에 형질주입(transfection) 및 발현하여 상층액을 이용하여 나이제리아 균주에 대한 결합 여부를 분석하였다.PYGE-nano antibody was cloned to be expressed in animal cell expression system in Nigeria The binding force to the strain was analyzed. In order to proceed with cloning, the scFv (single-chain variable fragment) portion of the selected fiji-nano antibody was amplified by PCR, followed by digestion with AgeI and HindIII restriction enzymes (backgest) that can be expressed in animal cells. Subcloning was performed on the vector. Thereafter, transfection and expression were performed on HEK293F animal cells and analyzed for binding to the Nigeria strain using the supernatant.

선별된 9개 파이지-나노항체의 scFv 부분의 아미노산 서열은 하기 표 1 및 도 8과 같다.The amino acid sequence of the scFv portion of the nine phage-nano antibodies selected are shown in Table 1 and FIG. 8.

클론Clone 도메인domain CDRCDR 서열번호SEQ ID NO: sizesize 1One VHVH H1, H2, H3H1, H2, H3 1, 2, 31, 2, 3 116116 VLVL L1, L2, L3L1, L2, L3 4, 5, 64, 5, 6 110110 22 VHVH H1, H2, H3H1, H2, H3 7, 8, 97, 8, 9 122122 VLVL L1, L2, L3L1, L2, L3 10, 11, 1210, 11, 12 110110 33 VHVH H1, H2, H3H1, H2, H3 13, 14, 1513, 14, 15 121121 VLVL L1, L2, L3L1, L2, L3 16, 17, 1816, 17, 18 110110 44 VHVH H1, H2, H3H1, H2, H3 19, 20, 2119, 20, 21 127127 VLVL L1, L2, L3L1, L2, L3 22, 23, 2422, 23, 24 110110 55 VHVH H1, H2, H3H1, H2, H3 25, 26, 2725, 26, 27 127127 VLVL L1, L2, L3L1, L2, L3 28, 29, 3028, 29, 30 110110 66 VHVH H1, H2, H3H1, H2, H3 31, 32, 3331, 32, 33 121121 VLVL L1, L2, L3L1, L2, L3 34, 35, 3634, 35, 36 110110 77 VHVH H1, H2, H3H1, H2, H3 37, 38, 3937, 38, 39 121121 VLVL L1, L2, L3L1, L2, L3 40, 41, 4240, 41, 42 110110 88 VHVH H1, H2, H3H1, H2, H3 43, 44, 4543, 44, 45 121121 VLVL L1, L2, L3L1, L2, L3 46, 47, 4846, 47, 48 110110 99 VHVH H1, H2, H3H1, H2, H3 49, 50, 5149, 50, 51 116116 VLVL L1, L2, L3L1, L2, L3 52, 53, 5452, 53, 54 110110

동물세포 발현 시스템에서 발현한 항-임질균 나노항체의 나이제리아 균주에 대한 결합 여부를 하기와 같이 분석하였다. 실험 전날, N. gonorrhoeae , N. gonorrhoeae WHO L(표준균주), 음성대조균주 및 N. meningitidis(근연종) 용해물을 면역플레이트에 코팅하였다. 다음날 코팅된 플레이트를 PBST(0.05%)로 3번 세척한 후, MPBST(3% milk PBST)을 넣어 37 ℃에서 1시간 인큐베이션 진행하였다. 발현된 파이지-나노항체는 3% MPBST로 1시간 동안 교반하면서 블로킹하였다. 그 후, 발현 상층액을 블로킹된 플레이트에 넣고 1시간 동안 상온에서 반응시켰다. 반응이 끝난 후, 플레이트를 PBST(0.05%)로 6번 세척해주고 HRP 컨쥬게이션된 항-마우스 항체를 플레이트에 넣고 상온에서 1시간 동안 반응시켰다. 인큐베이션 후 6번 세척하고, TMB를 넣어 발색을 관찰하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.Nigeria of Anti-Glucobacterial Nanoantibodies Expressed in Animal Cell Expression Systems The binding to the strain was analyzed as follows. On the day before the experiment, N. gonorrhoeae , N. gonorrhoeae WHO L (standard strain), negative control strain and N. meningitidis lysate were coated on the immunoplate. The next day, the coated plate was washed three times with PBST (0.05%), and then MPBST (3% milk PBST) was added and incubated at 37 ° C for 1 hour. The expressed phage-nanoantibody was blocked with 3% MPBST for 1 hour with stirring. Thereafter, the expression supernatant was placed in a blocked plate and reacted at room temperature for 1 hour. After the reaction, the plate was washed six times with PBST (0.05%), HRP conjugated anti-mouse antibody was put in the plate and reacted at room temperature for 1 hour. After incubation, the cells were washed six times, and TMB was added to observe color development. The absorbance was measured at 450 nm.

상기와 같이 실험하여 동물세포에서 발현한 9종의 항-임질균 나노항체가 N. gonorrhoeae 및 N. gonorrhoeae WHO L 표준균주에 특이적으로 결합하며, N. sicca 및 N. meningitidis 음성대조균주에 교차반응하지 않는 것을 확인하였다(도 6 참조). 또한, 상용항체 1번(Artron, Antibody against N. gonorrhoeae Ab1)은 N. sicca 및 N. meningitidis 음성대조균주에 교차반응을 보였으며, 상용항체 2번(Artron, Antibody against N. gonorrhoeae Ab2)은 나이제리아 균주에 모두 결합하지 않는 것을 확인하였다. 결론적으로, 본 발명의 발명자가 개발한 9종의 항-임질균 나노항체가 2종의 상용항체보다 더 높은 결합력 및 특이성을 갖는 것으로 확인되었다.Nine gonorrhoeae and N. gonorrhoeae showed 9 anti- gonorrhea nanoantibodies expressed in animal cells. Specifically binds to WHO L standard strain, N. sicca and N. meningitidis It was confirmed that no cross-reaction to the negative control strain (see Figure 6). In addition, commercial antibody No. 1 (Artron, Antibody against N. gonorrhoeae Ab1 ) cross-reacted to N. sicca and N. meningitidis negative control strains, and commercial antibody No. 2 (Artron, Antibody against N. gonorrhoeae Ab2) was Nigeria It was confirmed that not all bind to the strain. In conclusion, it was confirmed that nine anti- gonorrhea nanoantibodies developed by the inventors of the present invention have higher binding capacity and specificity than two commercial antibodies.

7. 동물세포 발현 시스템에서 발현한 항-7. Anti-expression in Animal Cell Expression System 임질균Gonorrhea 나노항체의Nano-antibody 개별 Individual 임상분리주Clinical isolate 2종에 대한 결합력 분석 Binding force analysis for two species

환자로부터 분리한 개별 임상분리주 2종[임균(gonococcus) 7번 및 11번]에 대하여 동물세포 발현 시스템에서 발현한 항-임질균 나노항체의 결합 여부를 분석하였다. 상기 임상분리주 2종은 환자로부터 분리한 임질 균주로서, 특히 7번 임균은 베타락탐 분해효소를 지니고 있다(#7: 페니실린 저항성, #11: 페니실린 감수성).Two individual clinical isolates (gonococcus Nos. 7 and 11) isolated from patients were analyzed for binding of anti-gonomycotic nanoantibodies expressed in animal cell expression systems. The two isolates are gonorrhea strains isolated from patients, especially gonococcus 7 has beta-lactam degrading enzyme (# 7: penicillin resistance, # 11: penicillin susceptibility).

개별 환자로부터 분리한 2종의 임균(gonococcus) 용해물을 면역플레이트에 코팅하여 발현 상층액을 반응시킨 후, TMB 기질로 발색하여 450 nm에서 흡광도 측정하여 결합 여부를 확인하였다.Two gonococcus lysates isolated from individual patients were coated on an immunoplate to react the expression supernatants, followed by color development with TMB substrate and absorbance at 450 nm to confirm binding.

상기와 같이 실험하여 동물세포에서 발현한 9종의 항-임질균 나노항체가 2종의 개별 임상분리주에 특이적으로 결합하며 N. sicca 및 N. meningitidis 음성대조균주에 교차반응하지 않는 것을 확인하였다(도 7 참조). 이에 비하여, 상용항체 1번은 N. sicca 및 N. meningitidis 음성대조균주에 교차반응을 보였으며, 상용항체 2번은 나이제리아 균주에 모두 결합하지 않는 것으로 확인되었다. 결론적으로 본 발명의 발명자가 개발한 9종의 항-임질균 나노항체가 2종의 상용항체보다 임상분리주에 대하여 더 높은 결합력을 지니는 것으로 확인되었다.As described above, nine anti- gonococcal nanoantibodies expressed in animal cells specifically bind to two separate clinical isolates, and N. sicca and N. meningitidis It was confirmed that no cross-reaction with the negative control strain (see Fig. 7). In contrast, commercial antibody No. 1 cross-reacted with N. sicca and N. meningitidis negative control strains, and commercial antibody no. 2 did not bind to Nigeria strains. In conclusion, the nine anti- gonorrhea nanoantibodies developed by the inventors of the present invention were found to have a higher binding capacity to the clinical isolate than the two commercial antibodies.

8. 결론8. Conclusion

본 발명에서는 고노리아 환자 임상분리주 8종을 기반으로 한 파이지-디스플레이 바이로패닝 기술을 이용하여 임균에 특이적으로 결합하는 서로 다른 항-임질균 나노항체 9종을 발굴하였다. 항체의 유용성을 검증하기 위하여 세계보건기구(WHO)에서 선정한 표준균주 중 세팔로스포린 계열의 제3세대 항생제에 저항성 특징을 보이는 WHO L 균주에 특이적으로 결합하는 것을 확인하였으며, 임질균 근연종으로 알려진 수막염을 일으키는 나이제리아 메닌지티디스(Neisseria meningitidis) 및 음성대조균주에 항체 교차반응 분석하여 교차반응 없음을 확인하였다. 또한 고노리아 임상환자로부터 분리한 개별 임균 2종에 대하여 특이적 결합을 하는 단일 클론 항체를 확보하였다.In the present invention, different anti- gonorrhea bacteria that specifically bind to gonococcus using Fiji-Display Viropanning technology based on eight isolates of Gonoria patients Nine nanoantibodies were identified. In order to verify the usefulness of the antibody, it was confirmed that it specifically binds to the WHO L strain, which is resistant to cephalosporin-type third-generation antibiotics among standard strains selected by the World Health Organization (WHO). Nigeria menin GT causing meningitis disk (Neisseria meningitidis ) and negative control strains in the antibody cross-reaction analysis confirmed that no cross-reaction. In addition, monoclonal antibodies that specifically bind to two individual gonococci isolated from clinical trials of Gonoria were obtained.

<110> KANGWON NATIONAL UNIVERSITY RESEARCH & UNIVERSITY-INDUSTRY COOPERATION FOUNDATION <120> An antibody specific for Neisseria gonorrhoeae and the use thereof <130> P171245 <160> 72 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 1-CDR H1 <400> 1 Ser Gly Tyr Ser Met Ser 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 1-CDR H2 <400> 2 Gly Ile Tyr Ser Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 1-CDR H3 <400> 3 Arg Thr Asn Gly Trp Phe Asp Tyr 1 5 <210> 4 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 1-CDR L1 <400> 4 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Thr 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 1-CDR L2 <400> 5 Ala Asp Ser His Arg Pro Ser 1 5 <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 1-CDR L3 <400> 6 Ala Thr Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Gly Tyr Val 1 5 10 <210> 7 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 2-CDR H1 <400> 7 Ser Ser Tyr Asp Met Ser 1 5 <210> 8 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 2-CDR H2 <400> 8 Gly Ile Tyr Pro Asn Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 1 5 10 15 Lys Gly <210> 9 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 2-CDR H3 <400> 9 Lys Gly Pro Thr Thr Leu Gly Pro Ser Ala Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 10 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 2-CDR L1 <400> 10 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Tyr 1 5 10 <210> 11 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 2-CDR L2 <400> 11 Ser Asn Ser Gln Arg Pro Ser 1 5 <210> 12 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 2-CDR L3 <400> 12 Ala Ser Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Gly Tyr Val 1 5 10 <210> 13 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 3-CDR H1 <400> 13 Ser Asn Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 14 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 3-CDR H2 <400> 14 Val Ile Ser His Asp Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 15 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 3-CDR H3 <400> 15 Lys Asp Pro Ser Tyr Phe Arg Pro Arg Lys Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 16 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 3-CDR L1 <400> 16 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Tyr 1 5 10 <210> 17 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 3-CDR L2 <400> 17 Asp Asp Ser Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 18 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 3-CDR L3 <400> 18 Gly Ser Trp Asp Ala Ser Leu Asn Ala Tyr Val 1 5 10 <210> 19 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 4-CDR H1 <400> 19 Ser Asp Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 20 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 4-CDR H2 <400> 20 Ala Ile Ser Pro Gly Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 21 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 4-CDR H3 <400> 21 Lys His Ser Arg Arg Leu Leu Pro Thr Trp Gly Ser Tyr Asp Asn Gly 1 5 10 15 Met Asp Val <210> 22 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 4-CDR L1 <400> 22 Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 23 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 4-CDR L2 <400> 23 Ala Asp Ser Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 24 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 4-CDR L3 <400> 24 Gly Ser Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Gly Tyr Val 1 5 10 <210> 25 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 6-CDR H1 <400> 25 Ser Asp Tyr Tyr Met Ser 1 5 <210> 26 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 6-CDR H2 <400> 26 Leu Ile Ser His Gly Gly Gly Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 27 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 6-CDR H3 <400> 27 Arg Tyr Leu Val Asp Leu Tyr Pro Arg Arg Thr Ser Tyr Asp Tyr Ala 1 5 10 15 Met Asp Val <210> 28 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 6-CDR L1 <400> 28 Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Ser 1 5 10 <210> 29 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 6-CDR L2 <400> 29 Ala Asn Ser Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 30 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 6-CDR L3 <400> 30 Gly Thr Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Gly Tyr Val 1 5 10 <210> 31 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 8-CDR H1 <400> 31 Ser Ser Tyr Asp Met Ser 1 5 <210> 32 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 8-CDR H2 <400> 32 Val Ile Ser Ser Gly Gly Ser Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 33 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 8-CDR H3 <400> 33 Arg Gly Ala Pro Arg Val Lys Ser Tyr Lys Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 34 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 8-CDR L1 <400> 34 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Tyr 1 5 10 <210> 35 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 8-CDR L2 <400> 35 Phe Asp Asn Gln Arg Pro Ser 1 5 <210> 36 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 8-CDR L3 <400> 36 Ala Thr Trp Asp Ser Ser Leu Ser Ala Tyr Val 1 5 10 <210> 37 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 9-CDR H1 <400> 37 Ser Asp Tyr Tyr Met Ser 1 5 <210> 38 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 9-CDR H2 <400> 38 Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Gly Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 39 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 9-CDR H3 <400> 39 Lys Gly Arg Arg Tyr Lys Ser Gly Ile Lys Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 40 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 9-CDR L1 <400> 40 Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Tyr 1 5 10 <210> 41 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 9-CDR L2 <400> 41 Ser Asp Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 42 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 9-CDR L3 <400> 42 Ala Ala Trp Asp Ala Ser Leu Ser Ala Tyr Val 1 5 10 <210> 43 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 11-CDR H1 <400> 43 Ser Ser Tyr Asp Met Ser 1 5 <210> 44 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 11-CDR H2 <400> 44 Leu Ile Ser His Gly Gly Gly Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 45 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 11-CDR H3 <400> 45 Lys Gly Ala Ser His Val Leu Pro Gly Val Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 46 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 11-CDR L1 <400> 46 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 47 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 11-CDR L2 <400> 47 Tyr Asn Ser His Arg Pro Ser 1 5 <210> 48 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 11-CDR L3 <400> 48 Gly Ala Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Ala Tyr Val 1 5 10 <210> 49 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 12-CDR H1 <400> 49 Ser Asp Tyr Tyr Met Ser 1 5 <210> 50 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 12-CDR H2 <400> 50 Val Ile Ser His Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 51 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 12-CDR H3 <400> 51 Arg Trp Ala Gly Asn Phe Asp Tyr 1 5 <210> 52 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 12-CDR L1 <400> 52 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Ala Val Asn 1 5 10 <210> 53 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 12-CDR L2 <400> 53 Ala Asn Ser Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 54 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 12-CDR L3 <400> 54 Gly Ser Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Ala Tyr Val Phe 1 5 10 <210> 55 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 1-VH <400> 55 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Tyr Ser Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Thr Asn Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 56 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 1-VL <400> 56 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Arg 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ala Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Tyr Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 57 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 2-VH <400> 57 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Tyr Pro Asn Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser 50 55 60 Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Lys Gly Pro Thr Thr Leu Gly Pro Ser Ala Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 58 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 2-VL <400> 58 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Ser Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Tyr Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 59 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 3-VH <400> 59 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser His Asp Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Pro Ser Tyr Phe Arg Pro Arg Lys Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 60 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 3-VL <400> 60 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ala Ser Leu 85 90 95 Asn Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 61 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 4-VH <400> 61 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Gly Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys His Ser Arg Arg Leu Leu Pro Thr Trp Gly Ser Tyr Asp Asn 100 105 110 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 62 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 4-VL <400> 62 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Gly Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ala Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Tyr Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 63 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 6-VH <400> 63 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Leu Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Leu Ile Ser His Gly Gly Gly Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Leu Val Asp Leu Tyr Pro Arg Arg Thr Ser Tyr Asp Tyr 100 105 110 Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 64 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 6-VL <400> 64 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Thr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ala Asn Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Tyr Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Tyr Val Leu Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 65 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 8-VH <400> 65 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser Ser Gly Gly Ser Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Pro Arg Val Lys Ser Tyr Lys Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 66 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 8-VL <400> 66 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Thr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Phe Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Ser Ser Leu 85 90 95 Ser Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Ala Val Leu 100 105 110 <210> 67 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 9-VH <400> 67 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Leu Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Gly Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Arg Arg Tyr Lys Ser Gly Ile Lys Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 68 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 9-VL <400> 68 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Thr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Ala Ser Leu 85 90 95 Ser Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 69 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 11-VH <400> 69 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Leu Ile Ser His Gly Gly Gly Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Ala Ser His Val Leu Pro Gly Val Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 70 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 11-VL <400> 70 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Tyr Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ala Trp Asp Tyr Ser Leu 85 90 95 Ser Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 71 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 12-VH <400> 71 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Pro Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser His Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Lys Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Ala Gly Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 72 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 12-VL <400> 72 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ala Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Ser Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Tyr Ser Leu 85 90 95 Ser Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <110> KANGWON NATIONAL UNIVERSITY RESEARCH & UNIVERSITY-INDUSTRY COOPERATION FOUNDATION <120> An antibody specific for Neisseria gonorrhoeae and the use about <130> P171245 <160> 72 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 1-CDR H1 <400> 1 Ser Gly Tyr Ser Met Ser 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 1-CDR H2 <400> 2 Gly Ile Tyr Ser Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 1-CDR H3 <400> 3 Arg Thr Asn Gly Trp Phe Asp Tyr 1 5 <210> 4 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 1-CDR L1 <400> 4 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Thr 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 1-CDR L2 <400> 5 Ala Asp Ser His Arg Pro Ser 1 5 <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 1-CDR L3 <400> 6 Ala Thr Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Gly Tyr Val 1 5 10 <210> 7 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> Clone 2-CDR H1 <400> 7 Ser Ser Tyr Asp Met Ser 1 5 <210> 8 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> Clone 2-CDR H2 <400> 8 Gly Ile Tyr Pro Asn Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 1 5 10 15 Lys gly <210> 9 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> Clone 2-CDR H3 <400> 9 Lys Gly Pro Thr Thr Leu Gly Pro Ser Ala Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 10 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> Clone 2-CDR L1 <400> 10 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Tyr 1 5 10 <210> 11 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> Clone 2-CDR L2 <400> 11 Ser Asn Ser Gln Arg Pro Ser 1 5 <210> 12 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 2-CDR L3 <400> 12 Ala Ser Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Gly Tyr Val 1 5 10 <210> 13 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> Clone 3-CDR H1 <400> 13 Ser Asn Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 14 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> Clone 3-CDR H2 <400> 14 Val Ile Ser His Asp Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 15 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> Clone 3-CDR H3 <400> 15 Lys Asp Pro Ser Tyr Phe Arg Pro Arg Lys Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 16 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> Clone 3-CDR L1 <400> 16 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Tyr 1 5 10 <210> 17 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> Clone 3-CDR L2 <400> 17 Asp Asp Ser Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 18 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> Clone 3-CDR L3 <400> 18 Gly Ser Trp Asp Ala Ser Leu Asn Ala Tyr Val 1 5 10 <210> 19 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 4-CDR H1 <400> 19 Ser Asp Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 20 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 4-CDR H2 <400> 20 Ala Ile Ser Pro Gly Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 21 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 4-CDR H3 <400> 21 Lys His Ser Arg Arg Leu Leu Pro Thr Trp Gly Ser Tyr Asp Asn Gly 1 5 10 15 Met asp val <210> 22 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 4-CDR L1 <400> 22 Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 23 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 4-CDR L2 <400> 23 Ala Asp Ser Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 24 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 4-CDR L3 <400> 24 Gly Ser Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Gly Tyr Val 1 5 10 <210> 25 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 6-CDR H1 <400> 25 Ser Asp Tyr Tyr Met Ser 1 5 <210> 26 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 6-CDR H2 <400> 26 Leu Ile Ser His Gly Gly Gly Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 27 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 6-CDR H3 <400> 27 Arg Tyr Leu Val Asp Leu Tyr Pro Arg Arg Thr Ser Tyr Asp Tyr Ala 1 5 10 15 Met asp val <210> 28 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 6-CDR L1 <400> 28 Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Ser 1 5 10 <210> 29 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 6-CDR L2 <400> 29 Ala Asn Ser Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 30 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 6-CDR L3 <400> 30 Gly Thr Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Gly Tyr Val 1 5 10 <210> 31 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 8-CDR H1 <400> 31 Ser Ser Tyr Asp Met Ser 1 5 <210> 32 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 8-CDR H2 <400> 32 Val Ile Ser Ser Gly Gly Ser Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 33 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 8-CDR H3 <400> 33 Arg Gly Ala Pro Arg Val Lys Ser Tyr Lys Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 34 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 8-CDR L1 <400> 34 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Tyr 1 5 10 <210> 35 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 8-CDR L2 <400> 35 Phe Asp Asn Gln Arg Pro Ser 1 5 <210> 36 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 8-CDR L3 <400> 36 Ala Thr Trp Asp Ser Ser Leu Ser Ala Tyr Val 1 5 10 <210> 37 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 9-CDR H1 <400> 37 Ser Asp Tyr Tyr Met Ser 1 5 <210> 38 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 9-CDR H2 <400> 38 Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Gly Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 39 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 9-CDR H3 <400> 39 Lys Gly Arg Arg Tyr Lys Ser Gly Ile Lys Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 40 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 9-CDR L1 <400> 40 Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Tyr 1 5 10 <210> 41 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 9-CDR L2 <400> 41 Ser Asp Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 42 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 9-CDR L3 <400> 42 Ala Ala Trp Asp Ala Ser Leu Ser Ala Tyr Val 1 5 10 <210> 43 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 11-CDR H1 <400> 43 Ser Ser Tyr Asp Met Ser 1 5 <210> 44 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 11-CDR H2 <400> 44 Leu Ile Ser His Gly Gly Gly Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 45 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 11-CDR H3 <400> 45 Lys Gly Ala Ser His Val Leu Pro Gly Val Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 46 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 11-CDR L1 <400> 46 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 47 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 11-CDR L2 <400> 47 Tyr Asn Ser His Arg Pro Ser 1 5 <210> 48 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 11-CDR L3 <400> 48 Gly Ala Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Ala Tyr Val 1 5 10 <210> 49 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 12-CDR H1 <400> 49 Ser Asp Tyr Tyr Met Ser 1 5 <210> 50 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 12-CDR H2 <400> 50 Val Ile Ser His Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 51 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 12-CDR H3 <400> 51 Arg Trp Ala Gly Asn Phe Asp Tyr 1 5 <210> 52 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 12-CDR L1 <400> 52 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Ala Val Asn 1 5 10 <210> 53 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 12-CDR L2 <400> 53 Ala Asn Ser Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 54 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 12-CDR L3 <400> 54 Gly Ser Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Ala Tyr Val Phe 1 5 10 <210> 55 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 1-VH <400> 55 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Tyr Ser Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Thr Asn Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 56 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 1-VL <400> 56 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Arg 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ala Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Tyr Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 57 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> Clone 2-VH <400> 57 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Tyr Pro Asn Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser 50 55 60 Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Lys Gly Pro Thr Thr Leu Gly Pro Ser Ala Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 58 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> Clone 2-VL <400> 58 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asn Ser Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Tyr Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 59 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> Clone 3-VH <400> 59 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser His Asp Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Pro Ser Tyr Phe Arg Pro Arg Lys Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 60 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> Clone 3-VL <400> 60 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asp Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ala Ser Leu 85 90 95 Asn Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 61 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 4-VH <400> 61 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Pro Gly Ser Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys His Ser Arg Arg Leu Leu Pro Thr Trp Gly Ser Tyr Asp Asn 100 105 110 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 62 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 4-VL <400> 62 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Gly Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ala Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Tyr Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 63 <211> 127 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 6-VH <400> 63 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Leu Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Leu Ile Ser His Gly Gly Gly Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Leu Val Asp Leu Tyr Pro Arg Arg Thr Ser Tyr Asp Tyr 100 105 110 Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 64 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 6-VL <400> 64 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Thr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ala Asn Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Tyr Ser Leu 85 90 95 Ser Gly Tyr Val Leu Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 65 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> Clone 8-VH <400> 65 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser Ser Gly Gly Ser Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Ala Pro Arg Val Lys Ser Tyr Lys Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 66 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 8-VL <400> 66 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Thr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Phe Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Ser Ser Leu 85 90 95 Ser Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Ala Val Leu 100 105 110 <210> 67 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> Clone 9-VH <400> 67 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Leu Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Tyr Asp Gly Gly Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Arg Arg Tyr Lys Ser Gly Ile Lys Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 68 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 9-VL <400> 68 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Thr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ser Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Ala Ser Leu 85 90 95 Ser Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 69 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 11-VH <400> 69 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Leu Ile Ser His Gly Gly Gly Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Gly Ala Ser His Val Leu Pro Gly Val Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 70 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 11-VL <400> 70 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Tyr Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ala Trp Asp Tyr Ser Leu 85 90 95 Ser Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 71 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 12-VH <400> 71 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Pro Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Ser His Asp Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Lys Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp Ala Gly Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 72 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Clone 12-VL <400> 72 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn 20 25 30 Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Ala Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Ser Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Tyr Ser Leu 85 90 95 Ser Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110

Claims

임질균(Neisseria gonorrhoeae)에 특이적으로 결합하는 임질균 특이적 항체, 또는 그 기능적 단편으로서 하기의 항체 군으로부터 선택되는 어느 하나의 항체, 또는 그 기능적 단편:
서열번호 1로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 2로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 3으로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 4로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 5로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 6으로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄로 구성되는 항체;
서열번호 7로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 8로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 9로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 10으로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 11로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 12로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄로 구성되는 항체;
서열번호 13으로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 14로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 15로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 16으로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 17로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 18로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄로 구성되는 항체;
서열번호 19로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 20으로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 21로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 22로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 23으로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 24로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄로 구성되는 항체;
서열번호 25로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 26으로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 27로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 28로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 29로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 30으로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄로 구성되는 항체;
서열번호 31로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 32로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 33으로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 34로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 35로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 36으로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄로 구성되는 항체;
서열번호 37로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 38로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 39로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 40으로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 41로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 42로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄로 구성되는 항체;
서열번호 43으로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 44로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 45로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 46으로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 47로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 48로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄로 구성되는 항체; 및
서열번호 49로 기재되는 CDR-H1 영역, 서열번호 50으로 기재되는 CDR-H2 영역 및 서열번호 51로 기재되는 CDR-H3 영역을 포함하는 중쇄 및 서열번호 52로 기재되는 CDR-L1 영역, 서열번호 53으로 기재되는 CDR-L2 영역 및 서열번호 54로 기재되는 CDR-L3 영역을 포함하는 경쇄로 구성되는 항체. Neisseria gonorrhoeae ), or any one antibody selected from the group of antibodies as functional fragments thereof, or functional fragments thereof, or functional fragments thereof:
CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 1, CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 2 and a heavy chain comprising CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 3 and CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 4 An antibody consisting of a light chain comprising a CDR-L2 region as depicted in 5 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 6;
CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 7, CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 8, and a heavy chain comprising a CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 9 and a CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: An antibody consisting of a light chain comprising a CDR-L2 region as depicted in 11 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 12;
CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 13, CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 14 and heavy chain comprising CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 15 and CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 16 An antibody consisting of a light chain comprising a CDR-L2 region as depicted in 17 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 18;
CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 19, CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 20 and heavy chain comprising CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 21 and CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: An antibody consisting of a light chain comprising a CDR-L2 region as depicted in 23 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 24;
CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 25, CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 26 and heavy chain comprising CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 27 and CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: An antibody consisting of a light chain comprising a CDR-L2 region as set forth at 29 and a CDR-L3 region as set forth in SEQ ID NO: 30;
CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 31, CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 32 and a heavy chain comprising CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 33 and CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: An antibody consisting of a light chain comprising a CDR-L2 region as depicted at 35 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 36;
CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 37, CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 38 and heavy chain comprising CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO. An antibody consisting of a light chain comprising a CDR-L2 region as depicted in 41 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 42;
CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 43, CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 44 and a heavy chain comprising CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 45 and CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: An antibody consisting of a light chain comprising a CDR-L2 region as depicted in 47 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 48; And
CDR-H1 region as depicted in SEQ ID NO: 49, CDR-H2 region as depicted in SEQ ID NO: 50 and heavy chain comprising CDR-H3 region as depicted in SEQ ID NO: 51 and CDR-L1 region as depicted in SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: An antibody consisting of a light chain comprising a CDR-L2 region as depicted in 53 and a CDR-L3 region as depicted in SEQ ID NO: 54.

삭제delete

제1항에 있어서, 상기 기능적 단편은 단일 측쇄 항체(scFv)인 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그 기능적 단편.The antibody, or functional fragment thereof, according to claim 1, wherein the functional fragment is a single side chain antibody (scFv).

제1항에 있어서, 상기 기능적 단편은 항원결합 분절(Fab)인 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그 기능적 단편.The antibody, or functional fragment thereof, according to claim 1, wherein the functional fragment is an antigen binding fragment (Fab).

제1항에 있어서, 상기 기능적 단편은 상기 CDR 영역를 포함하는 가변 도메인(variable domain)인 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그 기능적 단편.The antibody, or functional fragment thereof, according to claim 1, wherein the functional fragment is a variable domain including the CDR region.

삭제delete

제1항에 있어서, 상기 항체가
서열번호 55로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 56으로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 57로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 58로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 59로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 60으로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 61로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 62로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 63으로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 64로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 65로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 66으로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 67로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 68로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;
서열번호 69로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 70으로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 및
서열번호 71로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 72로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 및 경쇄로 구성되는 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그 기능적 단편.The method of claim 1, wherein the antibody is
A heavy chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 55 and a light chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 56;
A heavy chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 57 and a light chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 58;
A heavy chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 59 and a light chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 60;
A heavy chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 61 and a light chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 62;
A heavy chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 63 and a light chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 64;
A heavy chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 65 and a light chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 66;
A heavy chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 67 and a light chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 68;
A heavy chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 69 and a light chain comprising an amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 70; And
An antibody, or a functional fragment thereof, comprising a heavy chain and a light chain selected from the group consisting of a heavy chain comprising an amino acid sequence as set out in SEQ ID NO: 71 and a light chain comprising an amino acid sequence as set out in SEQ ID NO: 72.

삭제delete

제1항에 있어서, 상기 항체가 단일클론 항체 또는 다클론 항체인 것을 특징으로 하는 항체, 또는 그 기능적 단편.The antibody, or functional fragment thereof, according to claim 1, wherein the antibody is a monoclonal antibody or a polyclonal antibody.

제1항, 제3항 내지 제5항, 제9항 및 제12항 중 어느 한 항의 항체 생산 세포주.The antibody-producing cell line of any one of claims 1, 3 to 5, 9 and 12.

제1항, 제3항 내지 제5항, 제9항 및 제12항 중 어느 한 항의 임질균 특이적 항체; 또는 제1항, 제3항 내지 제5항, 제9항 및 제12항 중 어느 한 항의 임질균 특이적 항체에 표지물질을 결합한 컨쥬게이트를 포함하는 임질균 검출용 조성물.13. The gonorrhea specific antibody of any one of claims 1, 3 to 5, 9 and 12; Or a composition for detecting gonorrhea comprising a conjugate in which a label is bound to the gonorrhea specific antibody of any one of claims 1, 3 to 5, 9 and 12.

제14항에 있어서, 상기 임질균이 항생제 저항성 임질균인 것을 특징으로 하는 임질균 검출용 조성물.15. The composition of claim 14, wherein the gonorrhea is an antibiotic resistant gonorrhea.

제14항에 있어서, 상기 임질균이 페니실린, 테트라사이클린, 시프로플록사신 및 세프트리악손으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 항생제에 저항성인 임질균인 것을 특징으로 하는 임질균 검출용 조성물.15. The composition of claim 14, wherein the gonorrhea is gonorrhea resistant to at least one antibiotic selected from the group consisting of penicillin, tetracycline, ciprofloxacin and ceftriaxone.

제14항에 있어서, 상기 임질균이 WHO L 표준균주인 것을 특징으로 하는 임질균 검출용 조성물.The composition for detecting gonorrhea according to claim 14, wherein the gonorrhea is a WHO L standard strain.

제14항에 있어서, 상기 표지물질이 효소, 루시퍼레이즈, 자성입자, 형광물질 및 방사성 동위원소로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 임질균 검출용 조성물.The composition of claim 14, wherein the labeling substance is any one selected from the group consisting of enzymes, luciferases, magnetic particles, fluorescent substances, and radioisotopes.

삭제delete

제1항, 제3항 내지 제5항, 제9항 및 제12항 중 어느 한 항의 임질균 특이적 항체; 또는 제1항, 제3항 내지 제5항, 제9항 및 제12항 중 어느 한 항의 임질균 특이적 항체에 표지물질을 결합한 컨쥬게이트를 포함하는 임질 진단용 조성물.13. The gonorrhea specific antibody of any one of claims 1, 3 to 5, 9 and 12; Or a composition for diagnosing gonorrhea comprising a conjugate bound to a gonorrhea specific antibody of any one of claims 1, 3 to 5, 9 and 12.

제20항의 임질 진단용 조성물을 포함하는 임질 진단용 키트.Gonorrhea diagnosis kit comprising a composition for diagnosing gonorrhea of claim 20.

제1항, 제3항 내지 제5항, 제9항 및 제12항 중 어느 한 항의 임질균 특이적 항체를 이용하여 시료 내에 임질균의 존재 여부를 검출하는 단계를 포함하는, 임질균의 검출 방법.13. A method for detecting gonorrhea, comprising detecting the presence of gonorrhea in a sample using the gonorrhea specific antibody of any one of claims 1, 3 to 5, 9 and 12.

제1항, 제3항 내지 제5항, 제9항 및 제12항 중 어느 한 항의 임질균 특이적 항체를 이용하여, 개체로부터 분리된 생체 시료 내에 임질균의 존재 여부를 검출하는 단계를 포함하는, 임질 진단에 필요한 정보를 제공하기 위한 분석 방법.A method for detecting the presence of gonorrhea in a biological sample isolated from an individual using the gonorrhea specific antibody of any one of claims 1, 3 to 5, 9 and 12, Analytical methods to provide information needed to diagnose gonorrhea.