KR102043363B1 - 마크로포미나 파세올리나로부터의 펙틴 분해 효소 및 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 마크로포미나 파세올리나 (Macrophomina phaseolina) ("엠. 파세올리나") 균류으로부터 유래되는 펙틴을 분해하는데 책임이 있는 효소를 암호화하는 분리된 폴리뉴클레오티드를 기재하며, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열번호 2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58 및 61에 제시된 뉴클레오티드 서열 또는 이러한 서열의 보체를 포함하고/하거나 이들로 이루어진다. 본 발명은 또한 서열번호 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60 및 63에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 암호화되는 분리된 폴리펩티드; 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 유전자 작제물; 상기 재조합 유전자 작제물을 포함하고 펙틴 분해 효소 생성이 증진된 형질전환체 또는 유전자전이 균류에 관한 것이다. 본 발명의 폴리펩티드는, 특히, 제조되는 과일 쥬스, 직물 제품, 펄프 및 종이, 커피, 차 및 오일 추출 및 펙틴 폐수 처리에 사용될 수 있다.
Description
연관 출원
본원은 2012년 8월 16일자로 출원된 미국 임시특허출원 제61/683914호를 우선권으로 주장하며, 이의 내용이 참조로 본원에 포함된다.
기술 분야
본 발명은 펙테이트 리아제 (pectate lyase) 활성을 갖는 엠. 파세올리나 (M. phaseolina)로부터의 분리된 폴리펩티드 및 상기 폴리펩티드를 암호화하는 분리된 폴리뉴클레오티드, 및 상기 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드를 제조하는 방법 및 사용하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 작제물, 벡터 및 숙주 세포뿐만 아니라 상기 폴리펩티드를 제조하는 방법 및 사용하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 폴리펩티드는, 특히, 섬유 및 직물의 침지 및 정련을 위해 섬유 산업에서 사용되고; 과일 및 야채 쥬스 추출을 위해 식품 산업에서 사용되고; 우수한 품질의 종이를 생산하기 위해 제지 산업에서 사용되고; 또한 커피 및 차의 발효, 오일 추출 및 펙틴 폐수 처리를 위해 사용될 수 있다.
펙틴은 주요한 식물-세포벽의 중간 라멜라에 존재하는 착물 헤테로중합체의 한 그룹이며, 세포간 시멘트로서 작용한다. 이들은 또한 이들의 콜로이드 특성에 기인하여 식물의 물-조절에 중요한 기능을 한다. 세포벽 사이에 위치되는 중간 라멜라는 프로토펙틴 (펙틴의 불용성 형태)으로부터 주로 조립된다.
펙틴은 2개의 상이한 뚜렷한 영역 "매끈한" 영역 및 "털모양" 영역으로 구성된다. "매끈한" 영역은 메탄올로 에스테르화되는 일부 카복실 그룹과 함께 폴리갈락투론산을 형성하는 α-1,4-연결된 D-갈락투론산의 골격 (backbone)으로 이루어진다 [Rouse A. Pectin: distribution, significance. In: Nagy S, Shaw P, Veldhuis Meds. Citrus Science and Technology, Vol I. Westport CT: AVI publishing Inc. 1977]. "털모양" 영역에서, 갈락투론산 골격은 α-1,2-연결된 L-람노즈 단위로 분해된다.
펙틴/펙테이트 리아제는 매끈한 영역에서 펙틴을 탈중합화하며, 이는 β-제거를 통해 글리코사이드 결합을 절단하여 4,5-불포화된 비-환원 말단인 올리고머를 생성한다 [Lombard V, Bernard T, Rancurel C, Brumer H, Coutinho PM, Henrissat B. A hierarchical classification of polysaccharide lyases for glycogenomics. Biochem J. 2010;432(3):437-444]. 반면, 람노갈락투로나제는 펙틴의 털모양 영역 내를 절단한다 [Jensen MH, Otten H, Christensen U, Borchert TV, Christensen LL, Larsen S, Leggio LL. Structural and biochemical studies elucidate the mechanism of rhamnogalacturonan lyase from Aspergillus aculeatus. J Mol Biol. 2010;404(1):100-111].
펙틴 에스테라제는 펙틴을 메탄올 및 폴리갈락투론산으로 가수분해시킨다. 이 효소는 아스퍼길루스 종 (Aspergillus sp), 보트리티스 시네레아 (Botrytis cinerea), 푸사리움 모닐포르메 (Fusarium monilforme), 리조푸스 스톨로니퍼 (Rhizopus stolonifer), 트리초더마 종 (Trichoderma sp) 등을 포함하는 수개의 균류에 의해 생성될 수 있다 [Polizeli ML, Jorge JA, Terenzi HF. Pectinase production by Neurospora crassa: purification and biochemical characterization of extracellular polygalacturonase activity, J. Gen. Microbiol. 1991;137: 1815-1823]. 그러나, 아스퍼길루스가 펙틴 에스테라제의 시판 생산을 위한 주요 공급원이다 [Torres EF, Aguilar C, Esquivel JCC, Gonzales GV. Pectinase. In: Enzyme Technology, Pandey, A., Webb, C., Soccol, C.R., Larroche, C (Eds), Asiatech Publishiers Inc., New Delhi, India, 2005. pp. 273-296].
펙틴-분해 효소는 식품 산업에서 주로 과일 쥬스 생산 또는 와인 제조와 같은 과일 및 야채 가공에 중요한 수단이다. 다른 적용 분야는 펄프 및 제지 산업 [Reid I, Ricard M. Pectinase in papermaking: solving retention problems in mechanical pulps bleached with hydrogen peroxide. Enz. Microbiol. Technol. 2000;26:115-123], 동물 사료 [Barreto de Menezes TJ, Salva JG, Baldini VL, Papini RS, Sales AM. Protein enrichment of citrus wastes by solid substrate fermentation. Proc. Biochem. 1989;23:167-171], 아마 및 다른 식물 섬유의 침지 [Hoondal GS, Tiwari RP, Tiwari R, Dahiya N, Beg QK. Microbial alkaline pectinases and their applications: a review. Appl. Microbiol. Biotechnol. 2000;9:409-418], 커피 및 차 발효 [Gar JG. Tea, coffee and cocoa. In: wood BJB, editor. Microbiology of fermented foods. 1985;vol 2. London: Elsevier Sci. Ltd. pp:133-154], 오일 추출 [Scott D. Enzymes, industrial. In: Encyclopedia of Chemical Technology. Grayson M, Ekarth D and Othmer K (eds), 1978; Wiley, NY. pp: 173-224], 면 섬유의 바이오-정련 [Singh R, Saxena S, Gupta R. Microbial pectinolytic enzymes: A review. Proc. Biochem. 2005;40:2931-2944], 식물성 인피 섬유의 정련 [Kapoor M, Beg QK, Bhushan B, Singh K, Dadich KS, Hoondal GS. Application of alkaline and thermostable polygalacturonase from Bacillus sp. MGcp-2 in degumming of ramie (Boehmeria nivea) and sunn hemp (Crotolaria juncia) bast fibers. Proc. Biochem. 2001;36:803-817], 섬유 산업 [Karmakar SR. Chemical technology in the pretreatment processes of textiles. In: Textile science and technology series1st ed., Amsterdam: Elsevier Science B.V. 1999; p. 12] 및 폐기물 관리 [Kashyap DR, Vohra PK, Chopra S, Tewari R. Applications of pectinases in the commercial sector: a review. Biores. Technol. 2001;77:215-227]를 포함한다. WO 98/45393는 진흙 오염에 대해 탁월한 세정력을 갖는 프로토펙티나제를 포함하는 세제 조성물을 기재한다.
이들 효소들은 산업에서 개별적으로 사용되거나 칵테일 (혼합) 형태로 사용된다. 예를 들어, 식품 산업에서는 겔화 (gellification)를 위해서는 개별 효소, 예컨대 펙틴 에스테라제가 사용되고, 식물 재료의 액화를 위해서는 상이한 효소의 배합, 예컨대 펙틴 에스테라제와 폴리갈락투로나제가 사용된다 [Heldt-Hansen HP, Kofod LV, Budolfsen G, Nielsen PM, Hutel S, Bladt T. Application of tailor made pectinases. In: Visser J and Voragen AJG (eds), Pectin and Peactnases. Progress in Biotechnology. 1996;14:463-474].
아스퍼길루스 니거 (Aspergillus niger)로부터 수득되는 이들 효소들 중 수개의 효소들에 대한 클로닝 및 발현이 보고되어 있다. EP 0 278 355는 펙틴 리아제 유전자의 클로닝, 이의 서열 및 발현을 기재하고 있다. EP 0 353 188은 일부 다른 펙틴 리아제를 추가한다. EO 0 421 919는 2개의 폴리갈락투로나제를 개시하며, 또 다른 엔도-폴리갈락투로나제가 EP 0 388 593에 개시되어 있다. 이들 특허원들 모두는 유전자 공급원으로서 아스퍼길루스 니거를 사용하였다. WO 94/14952는 아스퍼길루스 아쿨레아트스 (Aspergillus aculeatus)로부터 수득가능한 엔도-폴리갈락투로나제 활성을 갖는 3개의 효소들을 개시한다. 그러나, 어떠한 공개문헌도 엠. 파세올리나로부터의 펙틴 분해 효소를 암호화하는 유전자의 클로닝에 대해 보고한바 없었다.
본 발명은, 특히, 산업 공정 또는 목적에 사용될 수 있는 엠. 파세올리나로부터 유래되는 펙틴 분해 효소의 유전자 및 이에 의해 암호화되는 단백질을 밝히기 위해 게놈 접근법을 이용한다.
발명의 요지
특히, 본 발명은 엠. 파세올리나로부터 유도가능한 적어도 21개의 펙틴 분해 효소에 관한 것이다. 본 발명은 또한 펙틴 분해에 있어서의 균류 엠. 파세올리나의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 제1 목적은 균류 엠. 파세올리나의 펙테이트 리아제 (서열번호 1, 2, 4, 5, 7, 8, 10, 11, 13, 14, 16, 17, 19, 20, 22, 23, 25 및 26), 펙테이트 리아제 C (서열번호 28, 29, 31, 32, 34, 35, 37, 38, 40, 41, 43 및 44), 펙틴에스테라제 (서열번호 46, 47, 49, 50, 52, 53, 55 및 56) 및 람노갈락투로나제 (서열번호 58, 59, 61 및 62)를 암호화하는 뉴클레오티드 서열 세트를 제공하는 것이다. 본 발명의 각각의 유전자에 대해, 개방 판독 프레임 (ORF) 서열은 예측되는 인트론 서열을 결실시키고 엑손 서열을 함께 스플라이싱함으로써 각각의 게놈 서열로부터 수동으로 유도되었다. 상기 효소 유전자를 포함하는 벡터, 발현 벡터 및 숙주 세포도 또한 포함된다.
또한, 본 발명은 상기 유전자의 ORF 서열로부터 유추되는 폴리펩티드 서열을 제공한다. 본 발명의 폴리펩티드 서열은 펙테이트 리아제 (서열번호 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24 및 27), 펙테이트 리아제 C (서열번호 30, 33, 36, 39, 42 및 45), 펙틴에스테라제 (서열번호 48, 51, 54 및 57) 및 람노갈락투로나제 (서열번호 60 및 63)의 서열에 상응한다. 본 발명은 또한 상기된 뉴클레오티드 서열의 보체를 포함하는 분리된 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은, 가치있는 산업 제품의 생산을 위해 펙틴 분해의 조절, 전환에 활용/이용될, 제1 목적에서 제시된 유전자 및 효소에 대한 분자 생물학적 및 유전적 정보를 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 목적은 펙틴 분해 폴리펩티드의 시험관내 생성을 용이하게 하는 것이며, 본 발명은 또한 서열번호 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60 및 63에 제시되는 바와 같은 적어도 70%의 연속적 아미노산을 포함하는 폴리펩티드를 발현할 수 있는 발현 작제물을 포함한다. 바람직하게는, 발현 작제물은 서열번호 2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58 및 61에 제시된 연속적 뉴클레오티드를 갖는 삽입된 DNA 또는 cDNA를 갖는다.
본 발명의 또 다른 목적은 서열번호 2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58 및 61에 제시된 뉴클레오티드 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드 주형를 포함하는 재조합 유전자 작제물을 제공하는 것이며, 상기 폴리뉴클레오티드 주형은 펙틴을 분해하는 효소를 생성하도록 숙주 세포에서 발현가능하다. 바람직하게는, 재조합 유전자 작제물은 또한 폴리뉴클레오티드 주형의 발현을 향상시키도록 작동적으로 연결된 프로모터 영역을 포함한다.
본 발명의 바람직한 구현예 중의 하나는 감염된 황마 (jute) 식물로부터 분리된 엠. 파세올리나의 ms6 균주이다. 분리된 폴리펩티드는 또한 바람직하게는 이러한 균주로부터 유도된다.
또한, 본 발명의 목적은, 특히, 과일 쥬스, 직물 제품, 펄프 및 종이, 커피, 차 및 오일 추출물의 생산을 위한 증가하는 세계적인 수요에 따르기 위해 엠. 파세올리나로부터 펙틴 분해 효소를 분리하기 위한 잠재적으로 상업적으로 실현가능한 방식을 제공하는 것이다.
본 발명의 추가의 목적은 동물 사료, 과일 쥬스, 직물 제품, 펄프 및 종이, 커피, 차 및 오일 추출물의 가공, 인피 섬유의 침지/정련 시 펙틴 분해 물질을 사용하는 것이다.
이들 유용성 중 임의의 것 또는 모든 것들은 연구용 제품으로서 또는 산업 또는 기타 이용을 위한 자재로서 상업화하기 위한 키트로 개발될 수 있다. 키트는 본 발명의 하나 이상의 엠. 파세올리나 유전자에 상응하는 폴리뉴클레오티드 및/또는 폴리펩티드, 항체 및/또는 다른 시약을 포함할 수 있다.
당업자는 본 발명이 상기 목적들을 완수하기 위해 잘 조정되고 기재된 목표들 및 이점들뿐만 아니라 본원에 내재하는 것들을 달성한다는 것을 쉽게 알 수 있을 것이다. 본원에 기재된 구현예는 본 발명의 범위를 제한하려는 것이 아니다.
본 발명의 이들 및 다른 특징, 구현예 및 이점은 하기 설명 및 특허청구범위를 참조로 하여 더욱 잘 이해될 것이다.
본원에 포함되고 일부를 형성하는 첨부된 도면은 본 발명의 구현예를 설명하며, 설명과 함께 본 발명의 원리를 설명하기 위해 제공된다.
도 1은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 1의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 2는 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 4의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 3은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 7의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 4는 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 10의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 5는 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 13의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 6은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 16의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 7은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 19의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 8은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 22의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 9는 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 28의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 10은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 31의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 11은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 34의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 12는 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 37의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 13은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 40의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 14는 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 43의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 15는 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 46의 펙틴에스테라제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 16은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 49의 펙틴에스테라제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 17은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 55의 펙틴에스테라제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 18은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 58의 람노갈락투로나제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 19은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 61의 람노갈락투로나제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 1은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 1의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 2는 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 4의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 3은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 7의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 4는 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 10의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 5는 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 13의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 6은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 16의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 7은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 19의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 8은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 22의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 9는 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 28의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 10은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 31의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 11은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 34의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 12는 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 37의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 13은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 40의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 14는 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 43의 펙테이트 리아제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 15는 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 46의 펙틴에스테라제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 16은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 49의 펙틴에스테라제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 17은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 55의 펙틴에스테라제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 18은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 58의 람노갈락투로나제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
도 19은 PCR 증폭 결과를 나타내는 전기영동된 아가로즈 겔 이미지이며, 여기서 레인 1은 서열번호 61의 람노갈락투로나제의 폴리뉴클레오티드이고, 레인 M은 DNA 분자량 래더이다.
본원에서 제공되는 정의 및/또는 방법은 본 발명을 정의하며, 당업자에 의한 본 발명의 실시를 교시한다. 달리 기술되지 않는 한, 용어는 관련 분야의 통상의 기술자에 의한 통상적인 사용에 따라 이해되어야 한다. 임의의 정의 및/또는 방법이 본원에 포함되는 임의의 특허 또는 비-특허 참조문헌 또는 다른 곳에서 확인되는 임의의 참조문헌에서 제공되는 임의의 정의 및/또는 방법과 일치하지 않는 것으로 확인되는 경우, 본원에서 명백히 제공/채택된 정의 및/또는 방법이 본원에서 사용될 것이다. 단수 형태는, 문맥이 달리 명백히 지시하지 않는 한, 복수의 지시 대상물을 포함한다. 유사하게, 표현 "또는"도, 문맥이 달리 명백히 지시하지 않는 한, "및"을 포함하고자 한다. 따라서, "A 또는 B를 포함하는"은 A, B 또는 A와 B를 포함하는 것을 의미한다. 또한, 핵산 또는 폴리펩티드에 대해 주어지는 모든 염기 크기 또는 아미노산 크기 및 모든 분자 중량 또는 분자 질량 값은 근사치이며 설명을 위해 제공되는 것이라는 것을 알 수 있을 것이다. 본원에 기재되는 방법 및 물질과 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 본 기술의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 물질이 하기에 기재된다.
본 발명은 펙틴 분해에 수반되는 엠. 파세올리나의 뉴클레오티드 서열을 제공한다. 상기 유전자는 식품, 동물 사료, 종이, 오일 추출, 직물, 폐수를 포함하는 산업에 사용되거나 산업에서 흥미있는 펙틴 분해 효소 활성을 갖는 단백질을 암호화한다. 본 발명의 유전자, 이의 확인, 특성화, 변형 및 다양한 산업 공정에서의 사용 방법이 하기에 기재된다.
엠. 파세올리나 게놈 DNA의 뉴클레오티드 서열은 전체-게놈 랜덤 숏건 DNA 서열적 효과에 의해 수득되었다. 게놈 DNA는 감염된 황마 (Corchorus spp.) 식물로부터 분리된 엠. 파세올리나 ms6의 분리물로부터 제조되었다. 생성된 뉴클레오티드 서열은 뉴블러 (Newbler) 어셈블러에 의해 콘틱 (contig) 및 스캐폴드 (scaffold)를 형성하도록 어셈블링되었다. 뉴클레오티드 서열을 먼저 추정적 암호화 영역, 인트론 및 스플라이스 접합을 확인할 수 있는 소프트웨어 프로그램, 예컨대 Augustus, Glimmer M (The Institute of Genome Research, Rockville, Md.) 및 Evidence Modeler (EVM)에 의해 주석하였다(annotated). 뉴클레오티드 서열에 대한 추가의 자동 및 수동 큐레이션 (curation)을 수행하여 암호화 영역의 정확한 특성화 및 다른 유전자 특성을 정의하고 확립하였다.
펙틴 분해 효소를 암호화하는 본 발명의 게놈 서열은 먼저 엠. 파세올리나 게놈 DNA의 뉴클레오티드 서열을 다른 미생물의 공지된 효소 유전자의 뉴클레오티드 서열과 비교함으로써 확인되었다. 이들 엠. 파세올리나 유전자의 뉴클레오티드 서열, 판독 프레임, 엑손 및 인트론의 위치, 효소의 구조 및 다양한 산업에서의 잠재적 유용성, 예컨대 식품 및 사료, 음료, 직물 및 세제의 제조 시 수반되는 것들은 알려진바 없었다.
엠. 파세올리나로부터의 14000개 이상의 cDNA가 부분적으로 또는 완전히 서열분석되었다. 이들 중 펙틴 분해에서 추정적 역할을 갖는 새로운 효소를 암호화하는 21개의 cDNA가 발견되었다.
개방 판독 프레임 (ORF)은 엠. 파세올리나 mRNA로부터 유래되는 cDNA 라이브러리 클론에 대한 하기의 완전 또는 부분적 서열분석에 의해 분석되며, 또한 서열 분석 소프트웨어를 이용함으로써 또한 데이터베이스 (공개/비공개) 내의 공지된 서열에 대한 상동성을 측정함으로써 더욱 분석된다.
이러한 기재와 관련하여, 본원의 전반에 걸쳐 사용되는 다수의 용어는, 달리 명시적으로 상이한 의미를 갖는 것으로 지시되지 않는 한, 지정된 의미를 갖는다.
본원에서 사용되는 용어 "유전자"는 균류 엠. 파세올리나의 게놈 서열, 특히, 일련의 효소의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열로 정의된다. 이 용어는 또한 상부, 하부 및/또는 인트론 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 포함할 수 있다.
용어 "개방 판독 프레임 (ORF)"은 임의의 종결 코돈 없이 아미노산을 암호화하는 일련의 뉴클레오티드 삼중자를 의미하며, 삼중자 서열은 특정 생물에 대해 적합한 코돈 사용 정보를 사용하는 단백질로 해독된다.
"암호화 서열" 또는 "암호화 영역"은, 서열 발현시 유전자 생성물, 예컨대 아미노산 또는 폴리펩티드를 생성하는데 필요한 서열 정보를 갖는 핵산 분자를 지칭한다. 암호화 서열은 해독 영역 내에 비해독 서열 (예: 인트론 또는 5' 또는 3' 비해독 영역)을 포함할 수 있거나, 이러한 개재되는 비해독 서열 (예: cDNA에서와 같은 서열)이 결실될 수 있다.
본원에서 사용되는 "폴리뉴클레오티드"는 뉴클레오티드 서열, 예컨대 핵산 단편이다. 폴리뉴클레오티드는, 임의로 합성, 비-천연 또는 변화된 뉴클레오티드 염기를 포함하는, 단일- 또는 이중-가닥의 RNA 또는 DNA의 중합체일 수 있다. DNA의 중합체 형태인 폴리뉴클레오티드는 cDNA, 게놈 DNA, 합성 DNA 또는 이들의 혼합물의 하나 이상의 단편으로 구성될 수 있다. 본 발명의 분리된 폴리뉴클레오티드는 또한 서열번호 1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41, 44, 47, 50, 53, 56, 59 및 62, 또는 이러한 서열의 보체로부터 유도될 수 있다.
"분리된"은 천연 상태로부터 "인위적으로" 변화되는 것을 의미한다. 조성물 또는 물질이 자연에 존재하는 경우, 변화되거나 최초 환경으로부터 제거되거나 변화 및 제거된다면, 이는 "분리된" 것이다. 예를 들어, 살아 있는 식물 또는 동물에서 천연적으로 존재하는 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드는 "분리되지" 않으나, 천연 상태의 공존하는 물질로부터 구분된 동일한 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드는, 본원에서 사용되는 바와 같이, "분리된" 것이다.
폴리펩티드 또는 단백질을 지칭하기 위해 본원에서 사용되는 용어 "재조합"은, 폴리펩티드 또는 단백질이 재조합 (예: 미생물성 또는 포유동물성) 발현 시스템으로부터 유도된다는 것을 의미한다. "미생물성"은 세균 또는 균류 발현 시스템에서 제조되는 재조합 폴리펩티드 또는 단백질을 지칭한다. 대부분의 세균 시스템, 예를 들어, 에쉐리키아 콜라이 (Escherichia coli)에서 발현되는 폴리펩티드 또는 단백질은 글리코실화 변형이 없을 것이다; 균류에서 발현되는 폴리펩티드 또는 단백질은 글리코실화될 것이다.
용어 "벡터"는 뉴클레오티드 서열로부터 폴리펩티드를 발현시키기 위한 플라스미드, 파아지, 코스미드, 효모, 또는 바이러스, 인위적 복제 서열 (ARS) 또는 인위적 염색체를 지칭한다. 용어 "벡터"는 또한 연결된 또 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 지칭하고자 한다. 일 유형의 벡터는, 추가의 DNA 단편이 연결될 수 있는 원형의 이중-가닥 DNA 루프를 지칭하는 "플라스미드"이다. 또 다른 유형의 벡터는 추가의 DNA 단편이 바이러스 게놈에 결합될 수 있는 바이러스 벡터이다. 특정 벡터는 이러한 벡터가 도입되는 숙주 세포에서 자동 복제할 수 있다 (예: 세균 복제 기원을 갖는 세균 벡터 및 에피좀 포유동물 벡터). 기타 벡터는 숙주 세포로 도입시 숙주 세포의 게놈으로 통합될 수 있으며, 이로써 숙주 게놈과 함께 복제된다. 또한, 특정 벡터는 작동적으로 연결되는 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 "재조합 발현 벡터" (또는 "발현 벡터")라 지칭된다. 일반적으로, 재조합 DNA 기술에서 유용한 발현 벡터는 종종 플라스미드의 형태이다. 본원에서 "플라스미드" 및 "벡터"는 플라스미드가 가장 일반적으로 사용되는 형태의 벡터이기 때문에 상호교환적으로 사용될 수 있다. 그러나, 본 발명은 다른 형태의 발현 벡터, 예컨대 동등한 기능을 하는 바이러스 벡터 (예: 복제 결함 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-연관 바이러스)를 포함하고자 한다.
용어 "발현 벡터"는 본원에서, 발현을 돕는 추가의 뉴클레오티드에 작동적으로 연결된, 본 발명의 폴리펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 선형 또는 원형 DNA 분자로 정의된다.
용어 "발현 작제물"은, 유전자 발현시 조절 역할을 하는 유전 요소(들), 예를 들어, 프로모터 또는 인핸서, 또는 RNA인 mRNA로 전사되고 단백질로 해독되며 프로모터 또는 적합한 전사 기재 및 종결 서열에 작동적으로 연결되는 암호화 서열의 어셈블리를 포함할 수 있다.
용어 "작동적으로 연결된"은, 조절 서열이 폴리펩티드의 암호화 서열의 발현을 지시하도록 조절 서열이 폴리뉴클레오티드 서열의 암호화 서열에 대해 적합한 위치에 위치되는 배열을 나타낸다.
본원에서 사용되는 용어 "숙주 세포"는 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 작제물 또는 발현 벡터를 사용한 형질전환, 형질감염, 형질도입 등에 민감한 임의의 세포 유형을 포함한다.
용어 "재조합 숙주 세포"는 일반적으로 재조합 전사 단위를 포함하는 배양된 세포를 의미하며, 이종 폴리펩티드 또는 단백질 및 재조합 전사 단위 중의 DNA 단편 또는 합성 유전자에 의해 암호화되는 RNA를 발현할 것이다. 상기 세포는 원핵생물 또는 진핵생물일 수 있다.
본원에서 사용되는 "폴리펩티드"는 펩티드 결합에 의해 함께 결합되고 100개 초과의 아미노산 길이의 서열을 갖는 아미노산의 단일 선형 쇄이다.
본원에서 사용되는 용어 "프로모터"는 다운스트림 유전자의 전사를 지시하도록 기능하는 핵산 서열을 지칭한다. 프로모터는 일반적으로 표적 유전자가 발현되는 숙주 세포에 적합할 것이다. 다른 전사 및 해독 조절 핵산 서열 (또한 "조절 서열"로도 불림)과 함께 프로모터는 주어진 유전자를 발현하는데 필수적이다. 일반적으로, 전사 및 해독 조절 서열은, 이로 제한됨이 없이, 프로모터 서열, 리보좀 결합 부위, 전사 기재 및 정지 서열, 해독 기재 및 정지 서열 및 인핸서 또는 활성화제 서열을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "시험관내"는, 살아있는 생물 바깥의 인위적 환경에서 일어나는 생물학적 반응을 지칭하며, 일반적으로 보다 구체적이거나 보다 편리한 분석의 수행이 가능하도록 하기 위하여 보통의 생물학적 배경으로부터 분리된 생물의 성분을 사용하여 실험실에서 통상 수행된다.
용어 "상동성 %"은 본원에서 용어 "동일성 %"와 상호교환적으로 사용되며, 일반적으로, 서열 정렬 프로그램을 사용하여 정렬 시, 본 발명의 폴리펩티드 중 어느 하나를 암호화하는 핵산 서열 또는 본 발명의 폴리펩티드의 아미노산 서열 사이의 핵산 또는 아미노산 서열 동일성의 수준을 지칭한다.
예를 들어, 본원에서 사용되는 바와 같이, 80% 상동성은 정의된 알고리즘에 의해 결정되는 80% 서열 동일성과 같은 것을 의미하며, 따라서 주어진 서열의 동족체는 주어진 서열의 길이에 걸쳐서 80% 초과의 서열 동일성을 갖는다. 서열 동일성의 예시적 수준은, 이로 제한됨이 없이, 주어진 서열, 예를 들어, 본원에 기재되는 본 발명의 폴리펩티드 중 어느 하나에 대한 암호화 서열에 대한 80, 85, 90, 95, 98% 이상의 서열 동일성을 포함한다.
2개의 서열 사이의 동일성을 결정하는데 사용될 수 있는 예시적 컴퓨터 프로그램은, 이로 제한됨이 없이, BLAST 프로그램 세트, 예를 들어, www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST에 공개적으로 이용가능한 BLASTN, BLASTX, 및 TBLASTX, BLASTP 및 TBLASTN을 포함한다.
서열 조사는 전형적으로 GenBank DNA 서열 및 다른 공개된 데이터베이스의 핵산 서열과 비교하여 주어진 핵산 서열을 평가하는 경우 BLASTN 프로그램을 이용하여 수행된다. BLASTX 프로그램은 GenBank 단백질 서열 및 다른 공개된 데이터베이스의 아미노산 서열에 대해 모든 판독 프레임에서 해독되었던 핵산 서열을 조사하는데 선호된다.
2개 이상의 서열 사이의 "동일성 (%)"을 측정하기 위한 선택된 서열의 바람직한 정렬은, 예를 들어, CLUSTAL-W 프로그램을 이용하여 수행된다.
본원에서 사용되는 용어 "프라이머"는 표적 핵산 서열에 결합하고 핵산 합성을 프라이밍할 수 있는 올리고뉴클레오티드이다. 본원에서 정의되는 바와 같은 증폭 올리고뉴클레오티드는 바람직하게는 10 내지 50개 뉴클레오티드 길이, 가장 바람직하게는 15 내지 25개 뉴클레오티드 길이일 것이다. 본 발명의 증폭 올리고뉴클레오티드는 화학적으로 합성될 수 있다.
뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 지칭하기 위해 본 명세서 전반을 통해 사용되는 약어는 통상적인 1-문자 약어이다. 따라서, 천연 발생 암호화 뉴클레오티드는, 핵산에 포함되는 경우, 하기와 같이 약칭된다: 아데닌 (A), 구아닌 (G), 시토신 (C), 티민 (T) 및 우라실 (U). 또한, 달리 명시되지 않는 한, 본원에 제시되는 핵산 서열은 5'→ 3' 방향이다.
본원에서 사용되는 용어 "상보성" 또는 이의 파생어는 A는 T 또는 U와 짝을 짓고, C는 G와 짝을 짓는 잘 알려진 규칙에 의한 핵산의 짝짓기과 관련하여 사용된다. 보체는 "부분적" 또는 "완전한" 보체일 수 있다. 부분적 보체에서는 핵산 염기 중 단지 일부가 염기 짝짓기 규칙에 따라 매칭되며, 완전 보체에서는 모든 염기가 짝짓기 규칙에 따라 매칭된다. 핵산 가닥 사이의 보체의 정도는 당해 분야에 잘 알려진 바와 같이 핵산 가닥 사이의 하이브리드화의 효율 및 세기에 상당한 효과를 가질 수 있다. 이는 핵산 사이의 결합에 의존적인 검출 방법에서 특정될 수 있다.
본 발명의 DNA 서열은 반응물을 서열분석하여 생성되었으며, 잘못 확인된 뉴클레오티드로서 존재할 수 있는 가벼운 실수, 삽입 및/또는 결실을 포함할 수 있다. 그러나, 이러한 가벼운 실수는, 존재하는 경우, 산업적 관심 효소를 암호화하는 엠. 파세올리나의 유전자로서의 서열 확인을 방해하지 말아야 하며, 분명히 본 발명의 범위에 포함된다.
산업적 관심의 엠. 파세올리나의 효소를 암호화하는 유전자의 게놈 뉴클레오티드 서열 및 암호화 서열이 본 발명에 포함된다. 따라서, 하나의 구현예에서, 서열번호 2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41, 44, 47, 50, 53, 56, 59 및 62, 및/또는 이의 임의의 혼합물/조합물이 제공되며, 이들 각각은 확인된 유전자의 개방 판독 프레임 (ORF)의 뉴클레오티드 서열을 밝힌다. 또 다른 구현예에서, 서열번호 1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58 및 61, 및/또는 이의 임의의 혼합물/조합물에 의해 확인되는 유전자의 게놈 서열이 제공된다.
본원에서 사용되는 "유전자"는 하기를 지칭한다: (i) 서열번호 2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58 및 61에 제시된 뉴클레오티드 서열 및/또는 이의 단편 중 하나 이상을 포함하고/하거나 이들로 이루어진 유전자; (ii) 서열번호 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60 및 63에 제시된 아미노산 서열을 암호화하는 임의의 뉴클레오티드 서열 또는 이의 단편; (iii) 중간 (medium) 충실성 조건(stringency conditions), 예를 들어, 적합한/유효한 수준의 온도, 예컨대 (약) 45℃에서 적합한/유효한 양의 6x 염화나트륨/시트르산나트륨 (SSC) 중에서 필터-결합된 DNA에의 하이브리드 과정에 이어서, 적합한/유효한 양의 SDS, 예컨대 0.2x SSC/0.1% SDS에서 적합한/유효한 수준의 온도, 예컨대 (약) 50 내지 65℃에서 1회 이상의 세척 과정 조건, 또는 고도의 충실성 조건, 예를 들어, 적합한/유효한 수준의 온도, 예컨대 (약) 45℃에서 적합한/유효한 양의 SSC, 예컨대 6x SSC 중에서 필터-결합된 핵산에의 하이브리드 과정에 이어서, 적합한/유효한 양의 SDS, 예컨대 0.lx SSC/0.2% SDS에서 적합한/유효한 수준의 온도, 예컨대 (약) 68℃에서 1회 이상의 세척 과정 조건, 또는 당업자에게 분명한 다른 하이브리드화 조건 하에서 서열번호 2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58 및 61에 제시된 뉴클레오티드 서열의 보체에 하이브리드화하는 임의의 뉴클레오티드 서열 [참조: 예를 들어, Ausubel FM, Brent R, Kingston RE, Moore DD, Seidman JG, Smith JA, Struhl K. Current Protocols in Molecular Biology, 1994; Green Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., New York]. 바람직하게는, 본원에 기재된 DNA 서열의 보체에 하이브리드화하는 폴리뉴클레오티드는 유전자 생성물, 예를 들어, 효소 유전자 또는 이의 단편 중 하나에 의해 암호화되는 유전자 생성물과 기능적으로 동등한 유전자 생성물을 암호화한다.
상기 기재되는 바와 같이, 유전자 서열은 서열번호 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60 및 63의 아미노산 서열을 암호화하는 퇴화된 뉴클레오티드 서열뿐만 아니라 엠. 파세올리나 이외의 생물에서 해독시 서열번호 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60 및 63의 아미노산 서열 또는 이의 단편 중 하나를 포함하는 폴리펩티드를 생성하는 퇴화된 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 당업자는 엠. 파세올리나 또는 다른 생물에서 유전자 서열을 사용하는 경우 서열번호 2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58 및 61의 뉴클레오티드 서열의 적합한 코돈을 선택하거나 뉴클레오티드 서열을 변형시키는 방법을 알 수 있을 것이다. 예를 들어, 칸디다 알비칸스 (Candida albicans)에서 코돈 CTG는 류신 잔기 대신 세린 잔기를 암호화한다.
본 발명의 뉴클레오티드 서열은 엠. 파세올리나 게놈의 유전적, 물리적 또는 서열 지도의 전개를 도울 유전자 마커 및/또는 서열 마커로서 사용될 수 있다. 본 발명의 뉴클레오티드 서열 및 상응하는 유전자 생성물은 또한 엠. 파세올리나의 존재를 검출하는데 사용될 수 있다. 당해 분야에 잘 알려진 하이브리드화 및 항체-기반 방법을 본 발명의 뉴클레오티드 서열 및 상응하는 유전자 생성물의 존재 및 농도를 측정하는데 사용할 수 있다.
뉴클레오티드 서열은 또한 효소가 감염 동안 숙주의 침입시 역할을 할 수 있다는 사실을 감안할 때, 치료의 효과를 가질 수 있는 효소의 억제제를 확인하는데 사용될 수 있다.
또 다른 구현예에서, 상기 기재된 엠. 파세올리나의 뉴클레오티드 서열에 추가하여, 엠. 파세올리나 및 다른 균류 종에 존재할 수 있는 본 발명의 유전자의 동족체 또는 오솔로그 (ortholog)도 포함된다. 사상균에서의 동족체 또는 오솔로그가 특히 바람직하다. 이들 효소 유전자는 당해 분야에 잘 알려진 분자 생물학적 기술로 확인되고 분리될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "균류"는 문(phyla) 아스코미코타 (Ascomycota), 바시디오미코타 (Basidiomycota), 치트리디오미코타 (Chytridiomycota) 및 지고미코타 (Zygomycota) [Hawksworth DL, Kirk PM, Sutton BC, Pegler DN. Ainsworth and Bisby's Dictionary of the Fungi (8th Ed.). 1995; CAB International, Wallingford, United Kingdom. 616p] 및 효모를 포함한다. 아스코미코타의 대표적인 그룹은, 예를 들어, 뉴로스포라 (Neurospora), 페니실리움 (Penicillium), 아스페길루스 (Aspergillus)를 포함한다. 바시디오미코타의 대표적인 그룹은 버섯, 러스트 (rust) 및 스머트 (smut)를 포함하다. 치트리디오미코타의 대표적인 그룹은 알로마이세스 (Allomyces), 블라스토클라디엘라 (Blastocladiella), 코엘로모마이세스 (Coelomomyces)를 포함한다. 지고미코타의 대표적인 그룹은, 예를 들어, 리조푸스 (Rhizopus) 및 무코르 (Mucor)를 포함한다.
용어 "사상균"은 모든 실 모양의 균류를 포함한다. 사상균은 키틴, 셀룰로즈, 글루칸, 치토산, 만난 및 다른 착물 폴리사카이드로 구성되는 영양 균사체로 특징지어진다. 식물 생장은 균사 신장에 의하며, 탄소 대사는 완전 호기성이다.
따라서, 본 발명은 또한 유전자의 폴리뉴클레오티드에 하이브리드화 가능한 진균성 뉴클레오티드 서열을 제공한다. 하나의 구현예에서, 본 발명은 서열번호 2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58 및 61, 및/또는 이의 임의의 혼합물/조합물을 포함하고/하거나 이들로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 뉴클레오티드 서열과 50% 이상 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하고/하거나 이들로 이루어진 분리된 핵산을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 서열번호 2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58 및 61, 및/또는 이의 임의의 혼합물/조합물을 포함하고/하거나 이들로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 뉴클레오티드 서열로 이루어지고/지거나 이들을 포함하는 제2 핵산에 대해 중간 충실성 조건 하에 하이브리드화하는 진균성 뉴클레오티드 서열을 포함하는 분리된 핵산을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 서열번호 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60 및 63을 포함하고/하거나 이들로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 아미노산 서열과 50% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 암호화하는 진균성 뉴클레오티드 서열을 포함하는 분리된 핵산을 포함한다.
본 발명의 뉴클레오티드 서열은 또한 서열번호 2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58 및 61에 제시된 뉴클레오티드 서열과 40% 이상 동일한 진균성 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
상동성 유전자를 분리하기 위하여, 상기 기재된 엠. 파세올리나 유전자 서열은 표지될 수 있으며, 엠. 파세올리나를 포함하고 이로 제한되지 않는 관심 생물로부터 수득되는 mRNA로부터 작제되는 cDNA 라이브러리를 스크리닝하는데 사용될 수 있다. 따라서, 서열번호 2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58 및 61의 뉴클레오티드 서열 중 임의의 것으로 이루어지고 바람직하게는 검출가능하게 표지된 핵산 프로브가 포함된다. 하이브리드화 조건은, cDNA 라이브러리가 표지된 서열이 유도되는 생물의 유형과 상이한 생물로부터 유래되는 경우, 바람직하게는 더 낮은 충실성일 수 있다. cDNA 스크리닝은 또한 동일한 종에서 대안적으로 스플라이싱되는 전사체로부터 유래되는 클론을 확인할 수 있다. 대안적으로, 표지된 프로브는 다시 적당히 충실성 조건을 이용하여 관심 생물로부터 유래되는 게놈 라이브러리를 스크리닝하는데 사용될 수 있다. 낮은 충실성 조건은 당업자에게 잘 알려져 있으며, 라이브러리 및 표지된 서열이 유도되는 특정 생물에 의존적으로 예측가능하게 다양할 것이다 [Sambrook J, Russell DW. Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Third edition, 2001, Cold Spring Harbor Press, N.Y.; and Ausubel FM, Brent R, Kingston RE, Moore DD, Seidman JG, Smith JA, Struhl K. Current Protocols in Molecular Biology,1994;Green Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., New York].
또한, 상동성 유전자 서열은 관심 유전자 내의 아미노산 서열에 기초하여 디자인된 2개의 퇴화성 올리고뉴클레오티드 프라이머 풀을 사용하여 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR)을 수행함으로써 분리될 수 있다. 반응을 위한 주형은 관심 생물로부터 제조되는 mRNA의 역전사에 의해 수득되는 cDNA일 수 있다. PCR 생성물은 증폭된 서열이 상동성 효소 유전자 서열의 서열을 나타낸다는 것을 확인하기 위해 서브-클로닝되고 서열분석될 수 있다.
이어서, PCR 단편은 당업자에게 잘 알려진 다양한 방법에 의해 전장 cDNA 클론을 분리하는데 사용될 수 있다. 대안적으로, 표지된 단편이 게놈 라이브러리를 스크리닝하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예에서, 엠. 파세올리나 유전자 서열은 특히 바람직한 화학적 및/또는 물리적 특성을 나타내는 변형된 또는 신규한 효소를 개발하는데 사용될 수 있다. 엠. 파세올리나 및 다른 사상균의 효소 사이의 아미노산 서열의 뚜렷한 관련성/유사성 때문에, 또 다른 균류의 효소의 구조가 엠. 파세올리나 효소의 구조를 예측하는데 사용될 수 있고, 유용하고 뛰어난 특성을 위해 엠. 파세올리나 효소를 합리적으로 변형시키는데 도움이 된다. 본 발명에 의해 제공되는 서열은 또한 효소가 요구되는 과정을 더욱 잘 수행할 수 있게 하는 특성을 갖는 신규한 효소의 합리적인 변형 또는 디자인을 위한 예비적 물질로서 사용될 수 있다.
유전자 뉴클레오티드 서열은 무작위 및 부위-지정된 돌연변이유발 기술 또는 지정된 분자 진화 (evolution) 기술, 예컨대, 비제한적으로, 문헌 [Arnold FH. Protein engineering for unusal environments. Curr. Opinion Biotechnol. 1993;4:450-455]에 기재된 방법, 올리고뉴클레오티드-지정된 돌연변이유발 [Reidhaar-Olson JF, Sauer RT. Combinatorial cassette mutagenesis as a probe of the informational content of protein sequences. Science, 1988; 241:53-57], 화학적 돌연변이유발 [Eckert KA, Drinkwater NR. recA-dependent and recA-independent N-ethyl-N-nitrosourea mutagenesis at a plasmid-encoded herpes simplex virus thymidine kinase gene in E. coli. Mutat Res. 1987;178:1-10], 부위-지정된 돌연변이유발 [Kunkel TA. Rapid and efficient site-specific mutagenesis without phenotypic selection. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1985;82:488-492; Oliphant A, Nussbaum AL, Struhl K. Cloning of random-sequence oligodeoxynucleotides. Gene 1986;44 177-183], 오류 유발 PCR (error prone PCR) [Cadwell RC, Joyce GF. Randomization of genes by PCR mutagenesis. PCR Methods Appl. 1992;2:28-33], 카세트 돌연변이유발 [Stauss Hj, Davies H, Sadovnikova E, Chain B, Horowitz N, Sinclair C. Induction of cytotoxic T lymphocytes with peptides in vitro: identification of candidate T-cell epitopes in human papilloma virus. PNAS 1992; 89(17): 7871-7875], DNA 셔플링 방법 [Stemmer WP. DNA shuffling by random fragmentation and reassembly: in vitro recombination for molecular evolution. PNAS 1994;91(22):10747-10751; and U.S. Pat. Nos. 5,605,793; 6,117,679; and 6,132,970] 및 미국 특허번호 5,939,250, 5,965,408, 6,171,820 기재된 방법에 의해 변화될 수 있다. 뉴클레오티드 서열 내 돌연변이는 클론 내 유전자를 서열분석함으로써 측정될 수 있다.
하나의 구현예에서, 서열번호 2에 제시된 747 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 26 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 3에서와 같은 248개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 펙테이트 리아제 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 2의 SMART 분석 시, 서열 내에 Pfam 펙테이트 리아제 도메인의 존재를 나타낸다. 펙테이트 리아제는 펙테이트의 제거 절단에 촉매작용을 미치는 비-환원 말단에 4-데옥시-알파-D-gluc-4-에누로노실 그룹을 갖는 올리고사카라이드를 생성하는 세포외 효소이다. 이러한 효소는 펙틴의 분해에 관여된다.
바람직하게는, 서열번호 5에 제시된 735 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 25 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 6에서와 같은 244개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 펙테이트 리아제 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 5의 SMART 분석 시, 서열 내에 Pfam 펙테이트 리아제 도메인의 존재를 나타낸다. 펙테이트 리아제는 펙테이트의 제거 절단에 촉매작용을 미치는 비-환원 말단에 4-데옥시-알파-D-gluc-4-에누로노실 그룹을 갖는 올리고사카라이드를 생성하는 세포외 효소이다. 이러한 효소는 펙틴의 분해에 관여된다.
유사하게, 또 다른 구현예에서, 서열번호 8에 제시된 756 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 26 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 9에서와 같은 251개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 펙테이트 리아제 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 8의 SMART 분석 시, 서열 내에 Pfam 펙테이트 리아제 도메인의 존재를 나타낸다. 펙테이트 리아제는 펙테이트의 제거 절단에 촉매작용을 미치는 비-환원 말단에 4-데옥시-알파-D-gluc-4-에누로노실 그룹을 갖는 올리고사카라이드를 생성하는 세포외 효소이다. 이러한 효소는 펙틴의 분해에 관여된다.
또 다른 구현예에서, 서열번호 11에 제시된 771 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 27 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 12에서와 같은 256개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 펙테이트 리아제 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 11의 SMART 분석 시, 서열 내에 Pfam 펙테이트 리아제 도메인의 존재를 나타낸다. 펙테이트 리아제는 펙테이트의 제거 절단에 촉매작용을 미치는 비-환원 말단에 4-데옥시-알파-D-gluc-4-에누로노실 그룹을 갖는 올리고사카라이드를 생성하는 세포외 효소이다. 이러한 효소는 펙틴의 분해에 관여된다.
추가의 또 다른 구현예에서, 서열번호 14에 제시된 750 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 26 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 15에서와 같은 249개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 펙테이트 리아제 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 14의 SMART 분석 시, 서열 내에 Pfam 펙테이트 리아제 도메인의 존재를 나타낸다. 펙테이트 리아제는 펙테이트의 제거 절단에 촉매작용을 미치는 비-환원 말단에 4-데옥시-알파-D-gluc-4-에누로노실 그룹을 갖는 올리고사카라이드를 생성하는 세포외 효소이다. 이러한 효소는 펙틴의 분해에 관여된다.
또 다른 구현예에서, 서열번호 17에 제시된 756 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 26 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 18에서와 같은 251개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 펙테이트 리아제 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 17의 SMART 분석 시, 서열 내에 Pfam 펙테이트 리아제 도메인의 존재를 나타낸다. 펙테이트 리아제는 펙테이트의 제거 절단에 촉매작용을 미치는 비-환원 말단에 4-데옥시-알파-D-gluc-4-에누로노실 그룹을 갖는 올리고사카라이드를 생성하는 세포외 효소이다. 이러한 효소는 펙틴의 분해에 관여된다.
또 다른 구현예에서, 서열번호 20에 제시된 894 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 30 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 21에서와 같은 297개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 펙테이트 리아제 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 20의 SMART 분석 시, 서열 내에 Pfam 펙테이트 리아제 도메인의 존재를 나타낸다. 펙테이트 리아제는 펙테이트의 제거 절단에 촉매작용을 미치는 비-환원 말단에 4-데옥시-알파-D-gluc-4-에누로노실 그룹을 갖는 올리고사카라이드를 생성하는 세포외 효소이다. 이러한 효소는 펙틴의 분해에 관여된다.
또 다른 구현예에서, 서열번호 23에 제시된 747 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 26 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 24에서와 같은 248개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 펙테이트 리아제 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 23의 SMART 분석 시, 서열 내에 Pfam 펙테이트 리아제 도메인의 존재를 나타낸다. 펙테이트 리아제는 펙테이트의 제거 절단에 촉매작용을 미치는 비-환원 말단에 4-데옥시-알파-D-gluc-4-에누로노실 그룹을 갖는 올리고사카라이드를 생성하는 세포외 효소이다. 이러한 효소는 펙틴의 분해에 관여된다.
또 다른 구현예에서, 서열번호 26에 제시된 1707 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 64 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 27에서와 같은 568개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 펙테이트 리아제 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 26의 SMART 분석 시, 서열 내에 Pfam 펙테이트 리아제 도메인의 존재를 나타낸다. 펙테이트 리아제는 펙테이트의 제거 절단에 촉매작용을 미치는 비-환원 말단에 4-데옥시-알파-D-gluc-4-에누로노실 그룹을 갖는 올리고사카라이드를 생성하는 세포외 효소이다. 이러한 효소는 펙틴의 분해에 관여된다.
또 다른 구현예에서, 서열번호 29에 제시된 1314 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 46 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 30에서와 같은 437개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 펙테이트 리아제 C 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 29의 SMART 분석 시, 서열 내에 펙테이트 리아제 C 도메인 모티프의 존재를 나타낸다. 펙테이트 리아제 C는 식물 세포벽의 주요 성분인 폴리갈락투로네이트를 절단하는 세포외 효소이다. 이러한 효소는 펙틴의 분해에 관여된다.
또 다른 구현예에서, 서열번호 32에 제시된 972 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 34 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 33에서와 같은 323개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 펙테이트 리아제 C 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 32의 SMART 분석 시, 서열 내에 펙테이트 리아제 C 도메인 모티프의 존재를 나타낸다. 펙테이트 리아제 C는 식물 세포벽의 주요 성분인 폴리갈락투로네이트를 절단하는 세포외 효소이다. 이러한 효소는 펙틴의 분해에 관여된다.
또 다른 구현예에서, 서열번호 35에 제시된 966 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 33 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 36에서와 같은 321개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 펙테이트 리아제 C 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 35의 SMART 분석 시, 서열 내에 펙테이트 리아제 C 도메인 모티프의 존재를 나타낸다. 펙테이트 리아제 C는 식물 세포벽의 주요 성분인 폴리갈락투로네이트를 절단하는 세포외 효소이다. 이러한 효소는 펙틴의 분해에 관여된다.
또 다른 구현예에서, 서열번호 38에 제시된 1536 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 56 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 39에서와 같은 511개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 펙테이트 리아제 C 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 38의 SMART 분석 시, 서열 내에 펙테이트 리아제 C 도메인 모티프의 존재를 나타낸다. 펙테이트 리아제 C는 식물 세포벽의 주요 성분인 폴리갈락투로네이트를 절단하는 세포외 효소이다. 이러한 효소는 펙틴의 분해에 관여된다.
또 다른 구현예에서, 서열번호 41에 제시된 1137 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 39 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 42에서와 같은 378개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 펙테이트 리아제 C 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 41의 SMART 분석 시, 서열 내에 펙테이트 리아제 C 도메인 모티프의 존재를 나타낸다. 펙테이트 리아제 C는 식물 세포벽의 주요 성분인 폴리갈락투로네이트를 절단하는 세포외 효소이다. 이러한 효소는 펙틴의 분해에 관여된다.
또 다른 구현예에서, 서열번호 44에 제시된 1137 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 39 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 45에서와 같은 378개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 펙테이트 리아제 C 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 44의 SMART 분석 시, 서열 내에 펙테이트 리아제 C 도메인 모티프의 존재를 나타낸다. 펙테이트 리아제 C는 식물 세포벽의 주요 성분인 폴리갈락투로네이트를 절단하는 세포외 효소이다. 이러한 효소는 펙틴의 분해에 관여된다.
또 다른 구현예에서, 서열번호 47에 제시된 1182 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 42 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 48에서와 같은 393개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 펙틴에스테라제 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 47의 SMART 분석 시, 서열 내에 펙틴에스테라제 도메인의 존재를 나타낸다. 펙틴에스테라제는 펙틴 물질의 갈락투로난 골격에 있는 메틸 에스테르 연결의 탈-에스테르화를 촉매하여 산성 펙틴 및 메탄올을 생성하는 세포외 효소이다. 생성된 펙틴은 이어서 폴리갈락투로나제 및 리아제에 의해 처리된다.
또 다른 구현예에서, 서열번호 50에 제시된 975 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 35 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 51에서와 같은 324개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 펙틴에스테라제 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 50의 SMART 분석 시, 서열 내에 펙틴에스테라제 도메인의 존재를 나타낸다. 펙틴에스테라제는 펙틴 물질의 갈락투로난 골격에 있는 메틸 에스테르 연결의 탈-에스테르화를 촉매하여 산성 펙틴 및 메탄올을 생성하는 세포외 효소이다. 생성된 펙틴은 이어서 폴리갈락투로나제 및 리아제에 의해 처리된다.
또 다른 구현예에서, 서열번호 53에 제시된 5895 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 206 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 54에서와 같은 1964개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 펙틴에스테라제 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 53의 SMART 분석 시, 서열 내에 다수의 펙틴에스테라제 도메인의 존재를 나타낸다. 펙틴에스테라제는 펙틴 물질의 갈락투로난 골격에 있는 메틸 에스테르 연결의 탈-에스테르화를 촉매하여 산성 펙틴 및 메탄올을 생성하는 세포외 효소이다. 생성된 펙틴은 이어서 폴리갈락투로나제 및 리아제에 의해 처리된다.
또 다른 구현예에서, 서열번호 56에 제시된 981 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 34 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 57에서와 같은 326개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 펙틴에스테라제 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 56의 SMART 분석 시, 서열 내에 펙틴에스테라제 도메인의 존재를 나타낸다. 펙틴에스테라제는 펙틴 물질의 갈락투로난 골격에 있는 메틸 에스테르 연결의 탈-에스테르화를 촉매하여 산성 펙틴 및 메탄올을 생성하는 세포외 효소이다. 생성된 펙틴은 이어서 폴리갈락투로나제 및 리아제에 의해 처리된다.
또 다른 구현예에서, 서열번호 59에 제시된 1593 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 57 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 60에서와 같은 530개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 람노갈락투로나제 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 59의 SMART 분석 시, 서열 내에 람노갈락투로나제 도메인의 존재를 나타낸다. 람노갈락투로나제는 식물 세포벽 폴리사카라이드 펙틴의 주요 성분인 람노갈락투로난-I의 골격 내 L-람노즈와 D-갈락투론산 사이의 알파-1,4 글리코사이드 결합을 절단한다.
또 다른 구현예에서, 서열번호 62에 제시된 1605 bp 길이의 폴리뉴클레오티드는 약 57 kD의 계산된 분자량을 갖는, 서열번호 63에서와 같은 534개 아미노산 폴리펩티드를 암호화하는 개방 판독 프레임을 나타내는 람노갈락투로나제 단백질을 암호화한 전장 cDNA 클론이다. 서열번호 62의 SMART 분석 시, 서열 내에 람노갈락투로나제 도메인의 존재를 나타낸다. 람노갈락투로나제는 식물 세포벽 폴리사카라이드 펙틴의 주요 성분인 람노갈락투로난-I의 골격 내 L-람노즈와 D-갈락투론산 사이의 알파-1,4 글리코사이드 결합을 절단한다.
본 발명은 또한 (a) 유전자의 상기의 서열 및/또는 이들의 보체 중 임의의 것을 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고/하거나 이들로 이루어진 핵산 벡터; (b) 암호화 서열의 발현을 지시하는 조절 요소에 작동적으로 연결된 유전자에 대한 상기의 암호화 서열 중 임의의 것으로 이루어지고/지거나 이들을 포함하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 발현 작제물; 및 (c) 숙주 세포에서 암호화 서열의 발현을 지시하는 조절 요소에 작동적으로 연결된 암호화 영역을 포함하는 유전자의 상기 서열 중 임의의 것을 포함하고/하거나 이들로 이루어진 재조합 숙주 세포에 관한 것이다.
재조합 DNA 방법을 이용하여 폴리뉴클레오티드 서열을 변형시키기 위한 기술은 당해 분야에 잘 알려져 있다. 다양한 서열을 공지된 기술, 예컨대 제한, 상보적 제한 부위의 연결 및 결합, 돌출부 메우기에 의한 비첨착 말단화(blunt ending) 및 비점착말단 연결(blunt ligation) 등에 따라 연결될 수 있다. 폴리 링커 및 어댑터를 적절한 때에 사용하고 공지된 기술에 의해 도입 또는 제거하여 DNA 벡터 및 발현 작제물의 조립을 용이하게 할 수 있다. 다수의 벡터가 클로닝 및 유전자 조작에 사용가능하다. 일반적으로, 클로닝은 이. 콜라이에서 수행될 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예에서, 본 발명의 효소 유전자 서열을 포함하는 벡터는 이. 콜라이 세포, 사상균 세포, 효모 세포 및 바실러스 세포를 포함하고 이로 제한되지 않는 하나 이상의 숙주 세포에서 벡터의 전달, 유지 및 증식을 가능하게 하는 복제 기능을 추가로 포함할 수 있다. 벡터는 자가-복제를 보증하기 위한 임의의 수단을 포함할 수 있다. 대안적으로, 벡터는 숙주 세포로 도입시 게놈으로 통합되고 통합된 염색체와 함께 복제되는 것일 수 있다. 벡터의 선택은 벡터가 도입되는 숙주 세포와 벡터의 양립성(compatibility)에 통상적으로 의존할 것이다.
본 발명의 발현 작제물은 프로모터, 본 발명의 유전자 서열을 암호화하는 뉴클레오티드 서열, 전사 종결 서열 및 선별 마커 (선택적)를 포함하고/하거나 이들로 이루어진다. 이러한 발현 작제물을 숙주 세포로 도입하기 위한 당해 분야에 알려진 임의의 방법이 이용될 수 있다. 균류 세포는 원형질체 형성, 원형질체 형질전환 및 세포벽 재생을 수반하는 과정에 의해 자체적으로 공지된 방식으로 형질전환될 수 있다. 아스퍼길루스 및 트리초더마 숙주 세포의 형질전환을 위한 적합한 절차가 하기 문헌에 기재되어 있다 [EP 238 023 and Yelton MM, Hames JE, Timberlake WE. Transformation of Aspergillus nidulans by using a trpC plasmid. PNAS,1984; 81(5):1470-1474]. 푸사리움 종을 형질전환시키기 위한 적합한 방법은 하기 문헌에 기재되어 있다 [Malardier L, Daboussi MJ, Julien J, Roussel F, Scazzocchio C, Brygoo Y. Cloning of the nitrate reductase gene (niaD) of Aspergillus nidulans and its use for transformation of Fusarium oxysporum. Gene 1989; 78:147-156; WO 96/00787]. 효모는 하기 문헌에 기재되는 절차를 이용하여 형질전환될 수 있다 [Becker DM, Guarente L. High-efficiency transformation of yeast by electroporation. In: Abelson JN and Simon MI (eds), Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology, Methods in Enzymology,1991;194:182-187, Academic Press, Inc., New York; Ito H, Fukuda Y, Murata K, Kimura A. Transformation of intact yeast cells treated with alkali cations. Journal of Bacteriology, 1983;153: 163-168 and Hinnen A, Hicks JB, Fink GR. Transformation of yeast. PNAS, 1978; 75 (4):1929-1933].
산업적 적용을 위해, 본 발명의 효소는 균류 세포에 의해 생성된다. 바람직하게는 발현 숙주 세포는 대규모의 산업적 발효에 사용되어온 사상균 세포이다. 적합한 세포주 또는 숙주 시스템은 발현되는 외인성 단백질의 정확한 변형 및 프로세싱을 보장하도록 선택될 수 있다. 바람직하게는, 발현 숙주의 내인성 단백질을 효과적으로 분비할 수 있는 발현 숙주가 선택된다. 숙주 세포는 또한 분비되는 효소가 배양 배지에서 분해될 수 있으므로 세포외 프로테아제 활성에서 결함에 대하여 선택될 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 폴리펩티드를 생성하는 방법에 관한 것으로서, (i) 야생형 형태로 상기 폴리펩티드를 생성할 수 있는 세포를 폴리펩티드의 생성을 유도하는 조건 하에 배양하는 단계; 및 (ii) 상기 폴리펩티드를 회수하는 단계를 포함한다. 바람직한 구현예에서, 세포는 엠. 파세올리나이다.
본 발명의 또 다른 구현예는 또한 본 발명의 폴리펩티드를 생성하는 방법에 관한 것으로서, (i) 숙주 세포를 상기 폴리펩티드의 생성을 유도하는 조건 하에서 배양하는 단계; 및 (ii) 상기 폴리펩티드를 회수하는 단계를 포함하고, 이때 상기 숙주 세포는 서열번호 2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58 또는 61의 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상기 뉴클레오티드 서열은 서열번호 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60 또는 63의 성숙한 폴리펩티드를 포함하거나 이들로 이루어진 폴리펩티드를 암호화한다.
본 발명의 또 다른 구현예에서, 발현 숙주 세포 또는 형질전환체는 당해 분야에 잘 알려진 방법을 이용하여 단백질의 성장 및 발현에 적합한 영양 배지 중에서 배양된다. 예를 들어, 세포는 진동 플라스크 배양, 및 적합한 배지 및 폴리펩티드가 발현되고/되거나 분리될 수 있게 하는 조건 하에서 수행되는 실험실 또는 산업적 발효기에서의 소규모 또는 대규모 발효 (연속식, 회분식, 유가식 또는 고체 상태 발효)에 의해 배양될 수 있다. 배양은 당해 분야에 알려진 절차를 이용하여 탄소 및 질소 공급원 및 무기 염을 포함하는 적합한 배양 배지에서 수행한다 [참조: More Gene Manipulations in Fungi. Bennett J W, Lasure L., (eds). 1991; Academic Press, San Diego, CA]. 폴리펩티드가 영양 배지에 분비되는 경우, 폴리펩티드는 배지로부터 직접적으로 회수될 수 있다. 폴리펩티드가 배지로 분비되지 않는 경우, 이는 세포 용해물로부터 회수될 수 있다.
폴리펩티드는 이에 대해 특정한 당해 분야에 공지된 방법을 이용하여 검출될 수 있다. 이들 검출 방법은 특이적 항체의 사용, 효소 생성물의 형성 또는 효소 기질의 소실을 포함할 수 있다. 효소 검정은 폴리펩티드의 활성을 측정하는데 이용될 수 있다.
생성된 폴리펩티드는 당해 분야에 알려진 방법을 이용하여 회수될 수 있다. 폴리펩티드는, 이로 제한됨이 없이, 여과, 원심분리, 추출, 분무-건조, 증발 및 침전 또는 이의 조합을 포함한 통상의 절차에 의해 영양 배지로부터 다양한 방법으로 회수될 수 있다.
본 발명의 폴리펩티드는, 이로 제한됨이 없이, 실질적으로 순수한 폴리펩티드를 수독하기 위한 크로마토그래피 방법 (예: 이온 교화, 친화성, 소수성, 크로마토포커싱 및 크기별 제외), 전기영동 절차 (예: 등전점 맞춤), 차별적 용해도 (예: 황산암모늄 침전), SDS-PAGE 또는 추출을 포함한 당해 분야에 잘 알려진 다양한 절차에 의해 정제될 수 있다 [참조: Protein Purification, Principles, High Resolution Methods and Applications. Janson JC, Ryden L. (eds(). 1989; VCH Publishers Inc., New York].
본 발명은 또한 서열번호 2, 5, 8, 11, 14, 17, 20, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41, 44, 47, 50, 53, 56, 59 및 62에 제시된 유전자 서열에 의해 암호화되는 유전자 생성물 (예: RNA 또는 단백질)에 관한 것이다. 본 발명의 효소 유전자 생성물은 또한 서열번호 1, 4, 7, 10, 13, 16, 19, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58 및 61에 제시된 유전자의 게놈 서열에 의해 암호화되는 RNA 또는 단백질을 포함한다. 본 발명의 효소는 서열번호 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60 및 63을 포함하고/하거나 이들로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
본 발명의 효소는 펙테이트 리아제, 펙테이트 리아제 C, 펙틴에스테라제 및 람노갈락투로나제를 포함하고/하거나 이들로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 효소의 활성 중 하나 이상을 나타낸다. 본 발명의 효소 유전자 생성물은, 예를 들어, 당해 분야에 널리 알려진 합성 기술에 의해 또는 재조합 DNA 기술 방법에 의해 쉽게 생성될 수 있다 [참조: Creighton TE. Proteins: Structures and Molecular Principles, 1983; W. H. Freeman and Co., N.Y.].
또 다른 구현예에서, 본 발명의 방법 및 조성물은 또한 기능적으로 동등한 유전자 생성물을 나타내는 단백질 및 폴리펩티드를 포함한다. 이러한 기능적으로 동등한 유전자 생성물은, 이로 제한됨이 없이, 서열번호 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 45, 48, 51, 54, 57, 60 및 63에 제시된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드의 천연 변이체를 포함함다.
이러한 동등한 유전자 생성물은, 예를 들어, 상기 기재된 효소 유전자 서열에 의해 암호화되는 아미노산 서열 내 아미노산 잔기의 결실, 첨가 또는 치환을 포함할 수 있으나, 이는 침묵 변화(silent change)를 초래함으로써 기능적으로 동등한 생성물을 생성한다. 아미노산 치환은 관여되는 잔기의 극성, 하전, 가용성, 소수성, 친수성 및/또는 양쪽성의 유사함에 기초하여 이루어질 수 있다.
상기 기재된 유전자 생성물 암호화 서열에 대한 다른 변형이 선택된 숙주 세포에서, 예를 들어, 발현, 규모 확대 등에 적합한 폴리펩티드를 생성하기 위해 이루어질 수 있다. 예를 들어, 시스테인 잔기는 이황화물 브릿지를 제거하기 위해 결실되거나 또 다른 아미노산으로 대체될 수 있다.
본 발명의 또 다른 구현예는 추가로 고체 형태의 본 발명의 효소를 포함한다. 고체 형태의 효소 또는 효소 과립물은, 예를 들어, 고체 세제 및 동물 사료에 사용될 수 있다. 고체 형태의 효소를 제조하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어, 이로 제한됨이 없이, 프릴링 (prilling) (왁스 물질 중 분무-냉각), 압출, 응집화, 또는 과립화 (불활성 물질 및 결합제로 희석)를 포함한다. 고체 형태의 본 발명의 효소를 포함하는 혼합된 분말, 정제 등의 형태의 고체 효소 조성물이 고려된다.
본원은 이전에 설명에 포함된 내용들 뿐만 아니라, 첨부된 특허청구범위에 포함된 기재내용을 포함한다. 비록 본 발명은 차별성을 갖는 바람직한 형태로 기재되었지만, 바람직한 형태의 본원 개시내용은 단지 예시로써 주어진 것이며 본 발명의 범위 및 특허청구범위를 벗어나지 않으면서 상세한 구성 및 부분들의 조합 및 배열에서 수많은 변화를 가할 수 있을 것으로 이해된다.
다양한 참조문헌이 본원에 인용되며, 이의 기재내용은 전부 참조로 포함된다.
실시예
하기 실시예는 본 발명을 본원에 기재된 특정 구현예로 제한하려는 어떠한 의도 없이 본 발명을 추가로 설명하기 위한 것이다.
실시예
1: 엠.
파세올리나로부터
게놈 DNA의 분리
게놈 DNA를 하기 문헌에 기재되는 절차를 이용하여 엠. 파세올리나 균주 ms6으로부터 분리하였다 [Kieser T, Bibb MJ, Buttner MJ, Chater KF, Hopwood DA. Practical Streptomyces Genetics, 2000; John Innes Foundation, Norwich, UK, pp. 162-208]. 간단히 설명하면, 균사를 접종 루프를 사용하여 스톡 페트리 플레이트로부터 긁어내고, 삼각 플라스크 중의 액체 감자-덱스트로즈 배지에 접종하였다. 삼각 플라스크를 약 72시간 동안 30℃에서 진동시키지 않으면서 항온처리하였다. 균사는 공기-배지 계면의 표면에서 성장한다. 균사를 멸균 이쑤시개를 사용하여 수거하고, 멸균 종이 타올 사이에 놓고, 생리학적 용액 (인산나트륨 완충액 pH 7.0)으로 수회 세척하였다. 균사를 압착하여 과량의 액체를 제거하고, 수거된 균사를 30분 동안 공기 건조시켰다. 반-건조 균사를, 하기 문헌에 기재된 프로토콜에 따라, 액체 질소 중에 넣고 분쇄하여 미세한 분말을 생성하고 최종적으로 DNA를 분리하였다 [Kieser T, Bibb MJ, Buttner MJ, Chater KF, Hopwood DA. Practical Streptomyces Genetics, 2000; John Innes Foundation, Norwich, UK, pp. 162-208].
실시예
2:
프라이머의
설계 및 합성
본 연구에 사용된 프라이머는 서열을 완전 ORF로 수동으로 선택함으로써 엠. 파세올리나 ms6 균주의 게놈 서열로부터 예측되는 수동으로 큐레이트된 전사체 및 "유전자 모델"로부터 설계하거나, 유사한 유전자가 다른 식물로부터 성공적으로 분리된 데이터베이스를 사용하여 설계되었다. 전사체로부터 수득된 뉴클레오티드 서열의 비교를 통한 생물정보 분석을 NCBI BLAST, BLASTP, RPS-BLAST, BLASTX 및 PSI-BLAST를 이용하여 수행함으로써 관련 유전자의 동족체를 확인하고 유전자의 적합한 확인을 위한 것이었다. 뉴클레오티드 서열 정렬은 다수의 서열들이 "유전자 풀"로부터 발견될 때마다 clustalW 버젼 1.82을 이용하여 수행하였다. 이어서, 정렬을 편집하였다. 유전자 특이적 프라이머 (전방 및 역방 모두)는 수동적으로 또는 Primer 3 플러스 툴을 통해 선택하고, 프라이머를 주문-합성하였다.
본 연구에 사용된 모든 올리고뉴클레오티드는 합성되었으며 공급자에 의해 HPLC 정제되었으며 IDT (Integrated DNA Technologies )로부터 입수되었다. 100 pmol의 스톡 용액을 오토클레이드된 ddH2O 중에서 제조하고, 사용을 위해 분액으로서 -20℃에서 저장하였다.
삭제
삭제
실시예
3: 엠.
파세올리나
ms6
으로부터
펙테이트
리아제
,
펙테이트
리아제
C,
펙틴에스테라제
및
람노갈락투로나제의
증폭,
클로닝
및 서열분석
총 RNA를 하기 문헌에서 이전에 기재된 바와 같이 액체 배지에서 성장된 3일된 균사로부터 분리하였다 [Chomczynski P and Sacchi N, Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction (Anal Biochem 1987, 162: 156-159)]. RNA의 품질 또는 온전함을 아가로즈 겔 전기영동으로 점검하고, 표준 절차에 따라 Thermo Scientific Nano Drop 2000을 사용하여 정량화하였다. cDNA 제1 가닥을 제조자의 교시에 따라 SuperScript III 역전사효소 (Invitrogen)를 사용하여 합성하였다. 유전자를 유전자 특이적 프라이머를 사용하여 PCR에 의해 cDNA로부터 증폭시켰다. PCR 반응물 (50μL)은 1 μL의 cDNA, 20 pmole의 각각의 프라이머, 5 μL의 10X PCR 완충액, 5 μL의 2.5 mM dNTP 혼합물 및 1.0 단위의 PfuTaq DNA 폴리머라제를 포함하였다. PCR은 하기 조건을 이용하여 Thermal Cycler (Applied Biosystems)에서 수행하였다: 5분 ("min") 동안 95℃에서 초기 변성, 이어서 35회 사이클의 95℃에서 30초 ("sec") 동안의 변성, 59 내지 61℃에서 30초 동안의 어닐링 및 72℃에서 1 내지 2.0분 동안 연장 (표적 유전자의 길이에 의존), 72℃에서 7분 동안 최종 연장. PCR 생성물을 1% 아가로즈 겔에 의해 1XTAE 완충액을 사용하여 분석하고, 앰플리콘을 제조자의 교시에 따라 QIAGEN 겔 추출 키트를 사용하여 겔로부터 용출시켰다. 정제된 PCR 생성물을 pCR®8/GW/TOPO®TA 클로닝 키트 (Invitrogen)에 결합시키고, 경쟁(competent) 이. 콜라이 (E. coli) 세포 (Invitrogen)내로 형질전환시켰다. 플라스미드를 제조자의 교시에 따라 QIAprip Spin Miniprep 키트 (QIAGEN)를 사용하여 추정의 콜로니로부터 분리하였다. 삽입물의 존재를 유전자 특이적 프라이머를 사용하여 점검하고, 양성 플라스미드를 서열분석하였다.
실시예
3: 서열 분석
뉴클레오티드 서열 및 아미노산 서열을 각각 BLASTN 및 BLASTP 프로그램으로 분석하였다. 다른 식물로부터의 보고된 서열을 ClustalW를 이용하여 정렬하였다. 계통발생 분석을 NJ (Neighbour Joining)을 사용하여 수행하였다.
서열번호: 1
길이: 1047 (150 bp 5' UTR 및 150 bp 3' UTR 포함)
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
GAAGTCAAAAGTTTCGGTGTAC
서열번호: 2
길이: 747
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
특징 명칭/키: CDS
위치: (1).....(747)
atgcagtacaagtacaccgtccttgccgccactatggccgccgttgccttcgcccagcag
M Q Y K Y T V L A A T M A A V A F A Q Q
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N L I G I P T G T K A K P F T Q P E T I
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V W F K D V C E D A I T L K G N G P Y L
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G N K E S P H R E P P I G A C K G P Q G
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Q L K T A P A C -
서열번호: 3
길이: 248
유형: PRT
생물: 엠. 파세올리나
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서열번호: 4
길이: 1167 (150 bp 5' UTR 및 150 bp 3' UTR 포함)
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
AAAGCAAAACCAAACTAGAGCTTGGGCACGGATCACTCGCGTTGGATGTGGTCCGTGGAATCCTTGGTCAGTGCTCAATCGCCTGCTTCGAGTGGGAAACGGCCGTCTCAATTGATACCGGGCGAGTGTCTGCGCATGGATG
서열번호: 5
길이: 735
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
특징 명칭/키: CDS
위치: (1).....(735)
atgaagttcatctacgccgctatcaccgccaccgtggctggccttgcctctgcgcagtcc
M K F I Y A A I T A T V A G L A S A Q S
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L T I P T R S G S K V V L S A P S T I S
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I Q G G G A Q N A K D K V V Q H N G R G
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T V T I K N Y T V V N A G K L Y R S C G
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D S E K V S T T A N C K G A Q G T L S K
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L P T C -
서열번호: 6
길이: 244
유형: PRT
생물: 엠. 파세올리나
MKFIYAAITATVAGLASAQSLTIPTRSGSKVVLSAPSTISGSQDFGNKEFDRGIPCDSDDDTGSSSAVFILKNGASISNVIIGTDALEGVHCEGACTLTNVWFRDVCEDAISALGTGNVLIQGGGAQNAKDKVVQHNGRGTVTIKNYTVVNAGKLYRSCGDCTNNGGPRNVVVDNVRVNGMTSDLVGINSNYGDTATISNSCGVSKKVCQEYKGVTKGNGDSEKVSTTANCKGAQGTLSKLPTC*
서열번호: 7
길이: 1110 (150 bp 5' UTR 및 150 bp 3' UTR 포함)
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
GGCTCGGGAGAAGAAAGTGGATGGCATTCTATTCTTGTATCGACTTCTAGTACTAGAGCATCTTCTATACCTCTAATTTACTGTG
서열번호: 8
길이: 756
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
특징 명칭/키: CDS
위치: (1).....(756)
atgttctccaagcttttcctgcttcccctcctggcggcttccgccctggctgctcctgcc
M F S K L F L L P L L A A S A L A A P A
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D D T F G Y E L V R R A N F P I P A S K
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G N V K L S A A K S V S G T F D G G M K
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F I L E N G A T L K N A I I G T D Q I E
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V A D F G K L Y R S C G N C K K M G K R
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T V T I K N V K A S N G K L L A G I N S
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T E F K G N N S G K E P T E I S S G P S
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N A C K Y S S L K A C -
서열번호: 9
길이: 251
유형: PRT
생물: 엠. 파세올리나
MFSKLFLLPLLAASALAAPADDTFGYELVRRANFPIPASKGNVKLSAAKSVSGTFDGGMKTYGRGVKCTGQAEGGDKDAVFILENGATLKNAIIGTDQIEGVHCKGSCTIENVWWAGVCEDALSLKGDGSAKVIGGGATGAEDKVIQHNGVGSVSIDGFTVADFGKLYRSCGNCKKMGKRTVTIKNVKASNGKLLAGINSNYGDTATITGTCATSVKKVCTEFKGNNSGKEPTEISSGPSNACKYSSLKAC*
서열번호: 10
길이: 1127 (150 bp 5' UTR 및 150 bp 3' UTR 포함)
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
TCTATCGCTGTTGTGTCCGGTTGGTGAGGGCACCCGTACATATGTGGAATGGAGGTCACGTGGTGGATAGCATGTACATATTCTTGCCTGTTATGCCTACAC
서열번호: 11
길이: 771
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
특징 명칭/키: CDS
위치: (1).....(771)
atgcgttctacaaatctgctcgtcctcctcgcaacctccctcagcctggtcgcagcgagc
M R S T N L L V L L A T S L S L V A A S
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P L D A P T K V M G K R F A T N V L P A
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S S G H V V L P S A T T V S T F D G G M
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K K Y D R G T S C T G Q S E G G D A D A
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K R T V T M S G I W A V N G D L L A G V
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I C A W Y E G N D D G D E P T K L G T G
atcagctcttactgtgtctataccgccaatggtgtcgatgactgcccttga
I S S Y C V Y T A N G V D D C P -
서열번호: 12
길이: 256
유형: PRT
생물: 엠. 파세올리나
MRSTNLLVLLATSLSLVAASPLDAPTKVMGKRFATNVLPASSGHVVLPSATTVSTFDGGMKKYDRGTSCTGQSEGGDADAVFLVQSGGTLKNVIIGADQSEGVHCLGPCTIQNVWWEAVCEDALTIKQTSGTSYVVGGGAFGASDKIIQHNGGGTVSIKDFYAQDFGKVYRSCGNCGTQYKRTVTMSGIWAVNGDLLAGVNSNYGDTATISGTCADNVDNICAWYEGNDDGDEPTKLGTGISSYCVYTANGVDDCP*
서열번호: 13
길이: 1164 (150 bp 5' UTR 및 150 bp 3' UTR 포함)
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
ACGGTCGCTTGGGCTGGCTTTCGCGGATGCCCATTGTGAATAATCCGCTTGTTTCTTGTATGTAATTATTTTAAAGGCAAGAAGACCATTTAAATCAATAAATAGAGACGGGGCTAGACCTCGCTTGTACTACGCACAC
서열번호: 14
길이: 750
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
특징 명칭/키: CDS
위치: (1).....(750)
atgcagtccaagatcgttctcggcctttctctcctcgccgccaccggcatggcggctccc
M Q S K I V L G L S L L A A T G M A A P
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S E P L R V R A T L P I P S S K G S V T
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Y D E V K S I T G T F D G G M K T Y G R
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G V S C T G Q K E G G N K D A V F Q L E
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D G A T L K N V I I G E D Q I E G I H C
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M G S C T L E N V W W S A V C E D A L T
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F K G D G D A K V I G G G A Q G A D D K
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V L Q H N G V G D V T I D G F T V V D F
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G K L Y R S C G N C K Q N G G T R N V N
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I S N V K A Y N G K V L T G I N S N Y G
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D V A T F K D T C A S S V K D I C V E Y
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K G T N N N D E E P S K I G S G P S D N
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C V Y S D I P S C -
서열번호: 15
길이: 249
유형: PRT
생물: 엠. 파세올리나
MQSKIVLGLSLLAATGMAAPSEPLRVRATLPIPSSKGSVTYDEVKSITGTFDGGMKTYGRGVSCTGQKEGGNKDAVFQLEDGATLKNVIIGEDQIEGIHCMGSCTLENVWWSAVCEDALTFKGDGDAKVIGGGAQGADDKVLQHNGVGDVTIDGFTVVDFGKLYRSCGNCKQNGGTRNVNISNVKAYNGKVLTGINSNYGDVATFKDTCASSVKDICVEYKGTNNNDEEPSKIGSGPSDNCVYSDIPSC*
서열번호: 16
길이: 1238 (150 bp 5' UTR 및 150 bp 3' UTR 포함)
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
CCTGAAGAGATCAGCTCCGGCCCCTCTGATGCCTGCATTTACAGCGACGTTCCGGAGTGCTAGACGCACAGCTCGAACATGCCGCCTCAAAGCAAGCATTCTGATGGAGGGCCAGGGGGTGGGAAGGGATTTAGAGCCTCCGAAAAGGTGGAAGTGGGTTTAGGACTTCGTTGTATAATATAAACTTGTTTCCGAAAATAAGAACCATCCTGC
서열번호: 17
길이: 756
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
특징 명칭/키: CDS
위치: (1).....(756)
atgttgaccaagactcttcttcccctcctcgccatctctggcgccgtctctgccgtcaag
M L T K T L L P L L A I S G A V S A V K
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G S V T F D A A E E V D G E Y D G G Y K
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T Y G R G V S C T G Q E E G G D S D A V
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F I L K D G A S L K N A I I G S D Q I E
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T E Y E G N D T G D E P E E I S S G P S
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D A C I Y S D V P E C -
서열번호: 18
길이: 251
유형: PRT
생물: 엠. 파세올리나
MLTKTLLPLLAISGAVSAVKTKTFGKNLVRRADFPIPESQGSVTFDAAEEVDGEYDGGYKTYGRGVSCTGQEEGGDSDAVFILKDGASLKNAIIGSDQIEGVHCEGSCTLENVWWEAVCEDALSFKGDGDATVTGGGATGAEDKVLQQNGIGSITVDGFTVVDFGKLYRSCGNCDEMGQRTITLKNVKAYSGKKLVGINSNYGDTATITDTCATDVSDICTEYEGNDTGDEPEEISSGPSDACIYSDVPEC*
서열번호: 19
길이: 1245 (150 bp 5' UTR 및 150 bp 3' UTR 포함)
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
GCCCGAGGCTGCCGGCAGCGGCCCTAGCACTGCTTGCAAGTACACTGCCGCTGACGCCCAGGCCTGCTAAGCACATCCCTTTCTTGATTGACCAGTAAAAGTTCGACGGCCACACGGTTGGGTAATGCAGGGATTGGCAAAATGTCCGTCCGGCATAATTAGCACTTCTTTGATGTAGATATTGGGCCGGGTGTCCACAATGTATAACTCTGACATGTCA
서열번호: 20
길이: 894
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
특징 명칭/키: CDS
위치: (1).....(894)
atgcagtacagcatccgctcgctcgccttcggcctcgccgccctggccgtctccaccgac
M Q Y S I R S L A F G L A A L A V S T D
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A F M V P R D P S K G W G F P N A N N A
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P V A T P G V T G G A T A A A G F P A S
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S G T S Q L S A P M T V T G S F D G G M
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K A F G R G V S C T G Q A E G G D S D A
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V F M I E E G G T L S N V I I A A D Q I
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E G V H C F G S C T L K N V W W V A V C
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E D A F T I K E Q G A S G T T H I I G G
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G A Q G A E D K V L Q H N G G G T L A V
tctggcttcctcgccaaggacttcggtaagctctaccgcagctgcggcaactgcgacgag
S G F L A K D F G K L Y R S C G N C D E
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M P E R H V T I D G V T A E S G D I L V
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G I N S N M G D T A T I T N T C A T G V
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E T I C Q E F N G V T D G S E P E A A G
agcggccctagcactgcttgcaagtacactgccgctgacgcccaggcctgctaa
S G P S T A C K Y T A A D A Q A C -
서열번호: 21
길이: 297
유형: PRT
생물: 엠. 파세올리나
MQYSIRSLAFGLAALAVSTDAFMVPRDPSKGWGFPNANNARVAAAAASTPVQTPGNTPTTPVATPGVTGGATAAAGFPASSGTSQLSAPMTVTGSFDGGMKAFGRGVSCTGQAEGGDSDAVFMIEEGGTLSNVIIAADQIEGVHCFGSCTLKNVWWVAVCEDAFTIKEQGASGTTHIIGGGAQGAEDKVLQHNGGGTLAVSGFLAKDFGKLYRSCGNCDEMPERHVTIDGVTAESGDILVGINSNMGDTATITNTCATGVETICQEFNGVTDGSEPEAAGSGPSTACKYTAADAQAC*
서열번호: 22
길이: 1047 (150 bp 5' UTR 및 150 bp 3' UTR 포함)
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
GACAGGATGAAACGCGTTTATG
서열번호: 23
길이: 747
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
특징 명칭/키: CDS
위치: (1).....(747)
atgcagttcaagtacgccgctctcgctgccgccctggccgccgtcggctccacgcagagc
M Q F K Y A A L A A A L A A V G S T Q S
ctccccatccccgcctcccgcggagttgatcccaacaagggccaaaggatcgtcaagccc
L P I P A S R G V D P N K G Q R I V K P
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G N P F D G G M K E F G R G V V C N D K
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A D T G V R N A V F V I E D G G V L R N
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A I I G A D A V E G I H C E G K C T I E
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유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
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서열번호: 28
길이: 1922 (150 bp 5' UTR 및 150 bp 3' UTR 포함)
유형: DNA
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서열번호: 29
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서열번호: 31
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서열번호: 35
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서열번호: 40
길이: 1798 (150 bp 5' UTR 및 150 bp 3' UTR 포함)
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
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서열번호: 41
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위치: (1).....(1137)
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서열번호: 43
길이: 1631 (150 bp 5' UTR 및 150 bp 3' UTR 포함)
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
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서열번호: 44
길이: 1137
유형: DNA
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생물: 엠. 파세올리나
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서열번호: 46
길이: 1573 (150 bp 5' UTR 및 150 bp 3' UTR 포함)
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
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서열번호: 47
길이: 1182
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
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서열번호: 48
길이: 393
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서열번호: 49
길이: 1330 (150 bp 5' UTR 및 150 bp 3' UTR 포함)
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
TCAGGCTCGTATGCCTTGTCCTTCATTTGCTTGCACTCTAGGGCTGGCTAAGACCTCCTTACTTGAATAATGTATCTCTCTACGTCCGCCTTTATAGTCTGCCTGGCGGCTCCAAAACCCCTGAGCCTCACAACATTCATTCGCTTAACC
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서열번호: 50
길이: 975
유형: DNA
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P K F L -
서열번호: 51
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서열번호: 52
길이: 7706 (150 bp 5' UTR 및 150 bp 3' UTR 포함)
유형: DNA
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서열번호: 53
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W R A I -
서열번호: 54
길이: 1964
유형: PRT
생물: 엠. 파세올리나
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서열번호: 55
길이: 1281 (150 bp 5' UTR 및 150 bp 3' UTR 포함)
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
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서열번호: 56
길이: 981
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
특징 명칭/키: CDS
위치: (1).....(981)
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I D T S Y F -
서열번호: 57
길이: 326
유형: PRT
생물: 엠. 파세올리나
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서열번호: 58
길이: 1943 (150 bp 5' UTR 및 150 bp 3' UTR 포함)
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
CTATATTTCCATTTTTGGGAACGTACGCGTACGCCTTCTGTGGGGCCCCTTACTCCTGAGGTCGTGGTGCACTGGTACAACGACGACGCGCAGTACTGGACGTACGCCTCTTCGTCCGGCGCCTTCACGTCGCCCGCCATGAAGCCGGGGACCTACACCATGGCCCTGTACCAGACCGAACTCAAAGTGGCCACGTCCTCGGTGACGGTCAAGGCCGGATCGGCCACCAGCGCCAACATCGCCAGCACCTGGAGCTCCAATACCACGCTCTTCCAGATCGGCGACTGGGACGGGCAGCCGACCGGCTTCCTCAACGCGGCCAGCCAGCTGCGCATGCACCCGTCCGACTCGCGCATGGCCGACTGGGGCCCCGTCACCTACACCGTCGGCTCGTCCTCCGACAGCTCCGTCCCGATGGCGCTGTTCAAGGACGTCAACGACCCGCTGACCATCAGCTTCACGCTGGCGTCTTCGCAGGCCAGCGGCGCGGCGACGCTGCGCGTCGGCACCACGCTGTCGTTCGCGGGCGGGCGGCCGAGCGTCACCGTCAACGACTACAGCGACTCCGCCGCCGCGCCGACCAAGATCGACTCCCGGGGCGTGACGCGCGGCGCGTATCGCGGGTACGGCGAGATCTACGACTTCGAGCTGCCGGACGGGACGCTGTCGACGAGCAATACGATCACCATTTCGGTGATTTCGGGGAGCAGTGGGGCGGATTTCCTGGAGCCGAATTTTGTGAGTTCTCGCATTCCTCTTGGCCACTAGCATGTTTGAGAGGAATGTGACGCTGACGGTGTGACAGATCCTTGATGCTATTGAGCTGTGGAGATAGGGTTGATAGGTCTGCGGACGTGTTGTGGATGGTTTCGCGGGTCTGGGATCTTGATTGGTTGTTGGGATGGTATGCAGCAAAGA
서열번호: 59
길이: 1593
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
특징 명칭/키: CDS
위치: (1).....(1593)
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tttgtgagttctcgcattcctcttggccactag
F V S S R I P L G H -
서열번호: 60
길이: 530
유형: PRT
생물: 엠. 파세올리나
MMLSNVIVGLLAAAYGKPVLAAFGLTDNGDSYTIDAGSTNPLVITVDSSNCDITSFVYRSQKYQYASKGSHISSGLGSADVTAETIDDVIKVTCTTDTLIHYYVVKSGESNVYMATYTSAEPSVGELRYIARLDPSLLPYEYPFGDVSTTADSTSTVEGSDVFIVDGETRSKFYSSQRFIDDDVHCVYSDDVHACMLMPQYETSSGGPFHRDINTNNAGDSTNLYWYMNSGHVQTEAFRMGLHGPYALTWSRSGVPSLSGLDFSFMADLDLEGYVADSGRGTVSGTASGVSSDYEVVVHWYNDDAQYWTYASSSGAFTSPAMKPGTYTMALYQTELKVATSSVTVKAGSATSANIASTWSSNTTLFQIGDWDGQPTGFLNAASQLRMHPSDSRMADWGPVTYTVGSSSDSSVPMALFKDVNDPLTISFTLASSQASGAATLRVGTTLSFAGGRPSVTVNDYSDSAAAPTKIDSRGVTRGAYRGYGEIYDFELPDGTLSTSNTITISVISGSSGADFLEPNFVSSRIPLGH*
서열번호: 61
길이: 2009 (150 bp 5' UTR 및 150 bp 3' UTR 포함)
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
CTACGTTGCTGAGTCTGCTCGTGGCTACGTCAAGGGTACTGCTTCTGGAGTTGGTAGCTCTTACCAGAAAGTCCTTCATTGGTACAACAGCAACGCGCAGTACTGGGTCTATGCCTCGTCTAACGGTGCCTTTACTTCTCCTGCCATGAAGCCTGGCACCTACACCCAGGTCCTCTACCAGGACGAACTCAAGGTTGCCACCGACTCGGTCACTGTCTCTGCTGGATCGACGGTCACCAAGAACATTGCATCTACCTTCTCTTTCCCTTCGACCATCTGGACAATTGGCGACTGGGACGGCCAGCCATTCGGCTTCCGCAACGCCGACAAGATCGAGCGCATGCACCCGTCCGACAGCCGCATGAGCAGCTGGGGGCCGTTGACCTACACGGTCGGCTCCAGCGCACTGACTGACGTTCCCATGGCGCTCTTCAAGGGCGTCAACACGCCTTTCACCATCAAGTTCACGCTCTCCTCGTCGCAGACAGGTGCGGCGGTCCTCCGGATCGGCACGACTCTGGCCTTCGCCAGCGGCAGGCCGCAGCCCAAGATCAACAGCTACAGCCCTTCGGCGCCGGCGGCACCGACGAAGATCGATTCGCGCGGCGTCACACGTGGCACTTACCGCGGTTTGGGTGAGATCTACACCTTCGACATTCCCGCGGGCACTCTCGTGAGTGGCTCGAACACGATCACCATCGACTGCATCTCGGGAAGCTCGGGCGACACCTACCTGTCTCCCAACTTTGTAAGTTTCGCTCTGCATACCTCCGCCATGCGCCGTGCTAACGCAAGAAACAGATCCTTGACGCCATTGACCTGTACCTCAAGTGAGCGAGGGTCAGGAGAAGGGTGCTAGCTGAGGTTCGCTTCTGTAAATAAGTTTACGTCCTACATTGAACATACATTTTGGCTTTGATTGCCGGTCTGCATTACTCGTCAATACGAAGCTTCGCGAGCGCGCAGCTCCACCGAATGCGTGGC
서열번호: 62
길이: 1605
유형: DNA
생물: 엠. 파세올리나
특징 명칭/키: CDS
위치: (1).....(1605)
atggctctctttgctctgtttctgacctttatctctcttttcgcaccgtcggtgctggcc
M A L F A L F L T F I S L F A P S V L A
gcctttggagtgactacatcctcttccagctatgttgtcgatgccggctcatccaacccc
A F G V T T S S S S Y V V D A G S S N P
ttcgttgttaccatttcgcgcagcagttgcgacattacctcgatcaagtaccgtggagag
F V V T I S R S S C D I T S I K Y R G E
gaattccagtactccggcaagggttcgcacatctcgtccggccttggatctgcgaccgta
E F Q Y S G K G S H I S S G L G S A T V
acgtcagagatcgtcagcagcacttatgccaagatcacctgcacggctggcagcttgacc
T S E I V S S T Y A K I T C T A G S L T
cattacattattgtcaagtccggagagagctctttgtacatgggcacttacttcactgag
H Y I I V K S G E S S L Y M G T Y F T E
gagccctcgattggtgaagcccgtttcatcgctcgcttggacccggccaagctccctctc
E P S I G E A R F I A R L D P A K L P L
gaatacccctacggcactgcctccactactgctgggagcagcagcaccgtcgagggatcc
E Y P Y G T A S T T A G S S S T V E G S
gacgtctttgttgtgaatggccagacccgcagcaagttctactctagccaacgtttcatc
D V F V V N G Q T R S K F Y S S Q R F I
gacgacaaggtgcagtgcgtgtaccgcgatgatgatgctgtccacgcttgcatgatcttg
D D K V Q C V Y R D D D A V H A C M I L
cagcctctctcctacgagggatccagcggcggtcccttcttcagggacatcaacaccaac
Q P L S Y E G S S G G P F F R D I N T N
aacgccggtgactcgaccaacctgtacttctacatgaactccaaccatgctcagactgag
N A G D S T N L Y F Y M N S N H A Q T E
agttaccgtatgggcttccacggcccgtaccagttgcagttcagccgctctggtattccc
S Y R M G F H G P Y Q L Q F S R S G I P
aacagctttgacgcttcgttcttcgccgacctcaagctctccggctacgttgctgagtct
N S F D A S F F A D L K L S G Y V A E S
gctcgtggctacgtcaagggtactgcttctggagttggtagctcttaccagaaagtcctt
A R G Y V K G T A S G V G S S Y Q K V L
cattggtacaacagcaacgcgcagtactgggtctatgcctcgtctaacggtgcctttact
H W Y N S N A Q Y W V Y A S S N G A F T
tctcctgccatgaagcctggcacctacacccaggtcctctaccaggacgaactcaaggtt
S P A M K P G T Y T Q V L Y Q D E L K V
gccaccgactcggtcactgtctctgctggatcgacggtcaccaagaacattgcatctacc
A T D S V T V S A G S T V T K N I A S T
ttctctttcccttcgaccatctggacaattggcgactgggacggccagccattcggcttc
F S F P S T I W T I G D W D G Q P F G F
cgcaacgccgacaagatcgagcgcatgcacccgtccgacagccgcatgagcagctggggg
R N A D K I E R M H P S D S R M S S W G
ccgttgacctacacggtcggctccagcgcactgactgacgttcccatggcgctcttcaag
P L T Y T V G S S A L T D V P M A L F K
ggcgtcaacacgcctttcaccatcaagttcacgctctcctcgtcgcagacaggtgcggcg
G V N T P F T I K F T L S S S Q T G A A
gtcctccggatcggcacgactctggccttcgccagcggcaggccgcagcccaagatcaac
V L R I G T T L A F A S G R P Q P K I N
agctacagcccttcggcgccggcggcaccgacgaagatcgattcgcgcggcgtcacacgt
S Y S P S A P A A P T K I D S R G V T R
ggcacttaccgcggtttgggtgagatctacaccttcgacattcccgcgggcactctcgtg
G T Y R G L G E I Y T F D I P A G T L V
agtggctcgaacacgatcaccatcgactgcatctcgggaagctcgggcgacacctacctg
S G S N T I T I D C I S G S S G D T Y L
tctcccaactttatccttgacgccattgacctgtacctcaagtga
S P N F I L D A I D L Y L K -
서열번호: 63
길이: 534
유형: PRT
생물: 엠. 파세올리나
MALFALFLTFISLFAPSVLAAFGVTTSSSSYVVDAGSSNPFVVTISRSSCDITSIKYRGEEFQYSGKGSHISSGLGSATVTSEIVSSTYAKITCTAGSLTHYIIVKSGESSLYMGTYFTEEPSIGEARFIARLDPAKLPLEYPYGTASTTAGSSSTVEGSDVFVVNGQTRSKFYSSQRFIDDKVQCVYRDDDAVHACMILQPLSYEGSSGGPFFRDINTNNAGDSTNLYFYMNSNHAQTESYRMGFHGPYQLQFSRSGIPNSFDASFFADLKLSGYVAESARGYVKGTASGVGSSYQKVLHWYNSNAQYWVYASSNGAFTSPAMKPGTYTQVLYQDELKVATDSVTVSAGSTVTKNIASTFSFPSTIWTIGDWDGQPFGFRNADKIERMHPSDSRMSSWGPLTYTVGSSALTDVPMALFKGVNTPFTIKFTLSSSQTGAAVLRIGTTLAFASGRPQPKINSYSPSAPAAPTKIDSRGVTRGTYRGLGEIYTFDIPAGTLVSGSNTITIDCISGSSGDTYLSPNFILDAIDLYLK*
참조문헌의 인용
본원에 인용되는 미국 특허, 미국 공개 특허출원 및 공개된 PCT 출원 모두 참조로 본원에 포함된다.
등가물
본 발명의 수개의 구현예가 본원에 기재되고 설명되었으나, 당업자는 본원에 기재되는 기능을 수행하고/하거나 결과 및/또는 하나 이상의 이점을 얻기 위한 다양한 다른 수단 및 또는 구조물을 쉽게 계획할 것이며, 이러한 변화 및/또는 변형 각각은 본 발명의 범위에 속하는 것으로 여겨진다. 당업자는 단지 통상의 실험을 이용하여 본원에 기재된 본 발명의 특정 구현예에 대한 많은 등가물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 따라서, 상기한 구현예는 단지 예시로 제시된 것이며, 첨부된 특허청구범위 및 이의 등가물의 범위 내에서 본 발명은 구체적으로 기재되고 청구된 것과 달리 실시될 수 있다는 것을 알 수 있을 것이다.
SEQUENCE LISTING
<110> Bangladesh Jute Research Institute
ALAM, Maqsudul
<120> PECTIN DEGRADING ENZYMES FROM MACROPHOMINA PHASEOLINA AND USES
THEREOF
<130> JGX-00525
<140> PCT/US13/055198
<141> 2013-08-15
<150> 61/683914
<151> 2012-08-12
<160> 105
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1047
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 1
gaagagtata tagaggtggc cacgactgca ctgttgaact catcaccgac ccacaatcgc 60
tttctttctg cccactctcg ttcacaacac agatctctga tctaccacat tcgttcttac 120
cgaggatcaa aaattcctcc catctccaca atgcagtaca agtacaccgt ccttgccgcc 180
actatggccg ccgttgcctt cgcccagcag aacttgattg gcattcctac cggtactaaa 240
gctaagcctt tcacccagcc cgagaccatt accttcttcg acggtaaaat gatggaatac 300
ggccgcggca agccctgtgg caccgacgat gacaagggtg accttgaggc cgtcttcatc 360
atcaagcccg gcggcacgct gcagaacgcc atcatcggcg ccgactccct tgagggcgtg 420
cactgcgagg gcgcctgcac catcaagaac gtctggttca aggacgtgtg cgaagacgcc 480
atcaccctca agggcaacgg cccgtacctg atcaccggtg gcggtgcgca gcacgccaag 540
gacaaggtcg tccagcacaa cggcaagggc accgtgacca tctccgatta caagatcggc 600
gccgtcggta agctgtaccg cagctgtggc aactgcagca acaacggcgg cccccgcaac 660
gtcgtcctcg accgcatctc ttccttcggc cccggcacca cgtccgacct tgtcggcatc 720
aactccaact acaacgacgt cgccaccatc agtggcgtct gcggccctgt caagaacatg 780
tgtcaggagt tcaccggcat cgagaaggac ggcaacaagg agagccccca cagggagccc 840
ccgattggtg cttgcaaggg cccccagggc cagctcaaga cggctcccgc ttgctaagcg 900
cctcacggaa ttatcatggg tgtgcagtta cgggaaagga aatcgatatc gacctcccta 960
ttggtaacat caatctggct ccaaattgca tcatccgcca ctggtcggcc atgacaggac 1020
agagcgaagt caaaagtttc ggtgtac 1047
<210> 2
<211> 747
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 2
atgcagtaca agtacaccgt ccttgccgcc actatggccg ccgttgcctt cgcccagcag 60
aacttgattg gcattcctac cggtactaaa gctaagcctt tcacccagcc cgagaccatt 120
accttcttcg acggtaaaat gatggaatac ggccgcggca agccctgtgg caccgacgat 180
gacaagggtg accttgaggc cgtcttcatc atcaagcccg gcggcacgct gcagaacgcc 240
atcatcggcg ccgactccct tgagggcgtg cactgcgagg gcgcctgcac catcaagaac 300
gtctggttca aggacgtgtg cgaagacgcc atcaccctca agggcaacgg cccgtacctg 360
atcaccggtg gcggtgcgca gcacgccaag gacaaggtcg tccagcacaa cggcaagggc 420
accgtgacca tctccgatta caagatcggc gccgtcggta agctgtaccg cagctgtggc 480
aactgcagca acaacggcgg cccccgcaac gtcgtcctcg accgcatctc ttccttcggc 540
cccggcacca cgtccgacct tgtcggcatc aactccaact acaacgacgt cgccaccatc 600
agtggcgtct gcggccctgt caagaacatg tgtcaggagt tcaccggcat cgagaaggac 660
ggcaacaagg agagccccca cagggagccc ccgattggtg cttgcaaggg cccccagggc 720
cagctcaaga cggctcccgc ttgctaa 747
<210> 3
<211> 248
<212> PRT
<213> M. phaseolina
<400> 3
Met Gln Tyr Lys Tyr Thr Val Leu Ala Ala Thr Met Ala Ala Val Ala
1 5 10 15
Phe Ala Gln Gln Asn Leu Ile Gly Ile Pro Thr Gly Thr Lys Ala Lys
20 25 30
Pro Phe Thr Gln Pro Glu Thr Ile Thr Phe Phe Asp Gly Lys Met Met
35 40 45
Glu Tyr Gly Arg Gly Lys Pro Cys Gly Thr Asp Asp Asp Lys Gly Asp
50 55 60
Leu Glu Ala Val Phe Ile Ile Lys Pro Gly Gly Thr Leu Gln Asn Ala
65 70 75 80
Ile Ile Gly Ala Asp Ser Leu Glu Gly Val His Cys Glu Gly Ala Cys
85 90 95
Thr Ile Lys Asn Val Trp Phe Lys Asp Val Cys Glu Asp Ala Ile Thr
100 105 110
Leu Lys Gly Asn Gly Pro Tyr Leu Ile Thr Gly Gly Gly Ala Gln His
115 120 125
Ala Lys Asp Lys Val Val Gln His Asn Gly Lys Gly Thr Val Thr Ile
130 135 140
Ser Asp Tyr Lys Ile Gly Ala Val Gly Lys Leu Tyr Arg Ser Cys Gly
145 150 155 160
Asn Cys Ser Asn Asn Gly Gly Pro Arg Asn Val Val Leu Asp Arg Ile
165 170 175
Ser Ser Phe Gly Pro Gly Thr Thr Ser Asp Leu Val Gly Ile Asn Ser
180 185 190
Asn Tyr Asn Asp Val Ala Thr Ile Ser Gly Val Cys Gly Pro Val Lys
195 200 205
Asn Met Cys Gln Glu Phe Thr Gly Ile Glu Lys Asp Gly Asn Lys Glu
210 215 220
Ser Pro His Arg Glu Pro Pro Ile Gly Ala Cys Lys Gly Pro Gln Gly
225 230 235 240
Gln Leu Lys Thr Ala Pro Ala Cys
245
<210> 4
<211> 1167
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 4
ctaccacgaa tcggaattaa acgacgaatc tcctggtgaa gactataaaa ggcagacaac 60
ggcgtcgaca gtaaagacca tcgcaatcca acagtccagt tcctcctcaa gtctctcact 120
cccatcctcc actttccaat cacttccaac atgaagttca tctacgccgc tatcaccgcc 180
accgtggctg gccttgcctc tgcgcagtcc ctgaccatcc ccacccgctc cggcagcaag 240
gtcgtcctct ccgcgcccag taccatctcc ggctcgcaag actttggtaa caaggagttc 300
gaccgcggaa tcccctgcga ctcggacgat gacactggca gctccagcgc cgtcttcatc 360
ctcaagaacg gcgccagcat ctccaacgtc atcattggta ccgacgcgct cgagggcgtc 420
cactgcgagg gtgcctgcac cctgaccaac gtctggttcc gtgacgtctg cgagggtgag 480
ctaaatccac aacataccat caaacactca agtagtgcac acgaatgcta atgggaaaat 540
ccagacgcca tctccgcgct cggcaccggc aatgtcctca tccagggcgg cggtgcgcag 600
aacgccaagg acaaggtcgt ccagcacaac ggccgcggca ccgtcaccat caagaactac 660
accgtcgtca acgccggcaa gctgtaccgc agctgcggcg actgcaccaa caacggcggc 720
ccccgcaacg tcgtcgtgga caacgtccgc gtcaacggca tgacctctga cctcgtcggc 780
atcaactcca actacggtga cagtaagtcg gcaaaagata cttcaaatcg ttggaggaac 840
actcaatact gactgtcgat tccagctgct accatcagca actcttgcgg cgtctccaag 900
aaggtctgcc aggagtacaa gggcgtcacc aagggcaacg gcgacagcga gaaggtctcc 960
accactgcca actgcaaggg tgctcagggt actctgtcta agcttcccac ttgctagaca 1020
acctaaaagc aaaaccaaac tagagcttgg gcacggatca ctcgcgttgg atgtggtccg 1080
tggaatcctt ggtcagtgct caatcgcctg cttcgagtgg gaaacggccg tctcaattga 1140
taccgggcga gtgtctgcgc atggatg 1167
<210> 5
<211> 735
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 5
atgaagttca tctacgccgc tatcaccgcc accgtggctg gccttgcctc tgcgcagtcc 60
ctgaccatcc ccacccgctc cggcagcaag gtcgtcctct ccgcgcccag taccatctcc 120
ggctcgcaag actttggtaa caaggagttc gaccgcggaa tcccctgcga ctcggacgat 180
gacactggca gctccagcgc cgtcttcatc ctcaagaacg gcgccagcat ctccaacgtc 240
atcattggta ccgacgcgct cgagggcgtc cactgcgagg gtgcctgcac cctgaccaac 300
gtctggttcc gtgacgtctg cgaggacgcc atctccgcgc tcggcaccgg caatgtcctc 360
atccagggcg gcggtgcgca gaacgccaag gacaaggtcg tccagcacaa cggccgcggc 420
accgtcacca tcaagaacta caccgtcgtc aacgccggca agctgtaccg cagctgcggc 480
gactgcacca acaacggcgg cccccgcaac gtcgtcgtgg acaacgtccg cgtcaacggc 540
atgacctctg acctcgtcgg catcaactcc aactacggtg acactgctac catcagcaac 600
tcttgcggcg tctccaagaa ggtctgccag gagtacaagg gcgtcaccaa gggcaacggc 660
gacagcgaga aggtctccac cactgccaac tgcaagggtg ctcagggtac tctgtctaag 720
cttcccactt gctag 735
<210> 6
<211> 244
<212> PRT
<213> M. phaseolina
<400> 6
Met Lys Phe Ile Tyr Ala Ala Ile Thr Ala Thr Val Ala Gly Leu Ala
1 5 10 15
Ser Ala Gln Ser Leu Thr Ile Pro Thr Arg Ser Gly Ser Lys Val Val
20 25 30
Leu Ser Ala Pro Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gln Asp Phe Gly Asn Lys
35 40 45
Glu Phe Asp Arg Gly Ile Pro Cys Asp Ser Asp Asp Asp Thr Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Ala Val Phe Ile Leu Lys Asn Gly Ala Ser Ile Ser Asn Val
65 70 75 80
Ile Ile Gly Thr Asp Ala Leu Glu Gly Val His Cys Glu Gly Ala Cys
85 90 95
Thr Leu Thr Asn Val Trp Phe Arg Asp Val Cys Glu Asp Ala Ile Ser
100 105 110
Ala Leu Gly Thr Gly Asn Val Leu Ile Gln Gly Gly Gly Ala Gln Asn
115 120 125
Ala Lys Asp Lys Val Val Gln His Asn Gly Arg Gly Thr Val Thr Ile
130 135 140
Lys Asn Tyr Thr Val Val Asn Ala Gly Lys Leu Tyr Arg Ser Cys Gly
145 150 155 160
Asp Cys Thr Asn Asn Gly Gly Pro Arg Asn Val Val Val Asp Asn Val
165 170 175
Arg Val Asn Gly Met Thr Ser Asp Leu Val Gly Ile Asn Ser Asn Tyr
180 185 190
Gly Asp Thr Ala Thr Ile Ser Asn Ser Cys Gly Val Ser Lys Lys Val
195 200 205
Cys Gln Glu Tyr Lys Gly Val Thr Lys Gly Asn Gly Asp Ser Glu Lys
210 215 220
Val Ser Thr Thr Ala Asn Cys Lys Gly Ala Gln Gly Thr Leu Ser Lys
225 230 235 240
Leu Pro Thr Cys
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<212> DNA
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cagcggtata taaatgccct ggtaccctgc cccaaaatgc cttcttcacc accacagtcc 60
ttcgtttcaa tcgttcagca cattcactct ttcattcaca ctcactaacc gatctgcgat 120
cgtgttcttt gccttccact accagacaca atgttctcca agcttttcct gcttcccctc 180
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caggccgagg gtggtgacaa ggacgccgtc ttcatcctcg agaacggtgc taccctcaag 420
aacgccatca ttggtaccga ccagatcgag ggcgtccact gcaagggctc ctgcaccatc 480
gaaaacgtct ggtgggccgg tgtctgcgag gacgcgctct ccctgaaggg tgacggttcc 540
gccaaggtca tcggcggcgg cgctactggc gctgaagaca aggtacgtac gcctctgata 600
cgccttcgct cagattgctg accagatctg gtacaggtca tccagcacaa cggcgttggc 660
tccgtctcga ttgatggctt cactgttgcc gacttcggca agctctaccg ctcgtgcgga 720
aactgcaaga agatgggcaa gagaaccgtc accatcaaga acgtgaaggc tagcaacgga 780
aagcttttgg ctggcatcaa ctccaactac ggcgacactg ctaccatcac cggcacctgc 840
gctacctccg tcaagaaggt ctgcaccgag ttcaagggca acaacagcgg caaggagccc 900
accgagatca gctccggccc cagcaacgcc tgcaagtact cctccctcaa ggcctgctag 960
ggcctgctag acggttgctc aacaaacaaa catggcattt gccgcgtgag cccgggacct 1020
ttccgggctc gggagaagaa agtggatggc attctattct tgtatcgact tctagtacta 1080
gagcatcttc tatacctcta atttactgtg 1110
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<212> DNA
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ttcatcctcg agaacggtgc taccctcaag aacgccatca ttggtaccga ccagatcgag 300
ggcgtccact gcaagggctc ctgcaccatc gaaaacgtct ggtgggccgg tgtctgcgag 360
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gctgaagaca aggtcatcca gcacaacggc gttggctccg tctcgattga tggcttcact 480
gttgccgact tcggcaagct ctaccgctcg tgcggaaact gcaagaagat gggcaagaga 540
accgtcacca tcaagaacgt gaaggctagc aacggaaagc ttttggctgg catcaactcc 600
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100 105 110
Val Trp Trp Ala Gly Val Cys Glu Asp Ala Leu Ser Leu Lys Gly Asp
115 120 125
Gly Ser Ala Lys Val Ile Gly Gly Gly Ala Thr Gly Ala Glu Asp Lys
130 135 140
Val Ile Gln His Asn Gly Val Gly Ser Val Ser Ile Asp Gly Phe Thr
145 150 155 160
Val Ala Asp Phe Gly Lys Leu Tyr Arg Ser Cys Gly Asn Cys Lys Lys
165 170 175
Met Gly Lys Arg Thr Val Thr Ile Lys Asn Val Lys Ala Ser Asn Gly
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210 215 220
Gly Asn Asn Ser Gly Lys Glu Pro Thr Glu Ile Ser Ser Gly Pro Ser
225 230 235 240
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245 250
<210> 10
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<212> DNA
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ctgaggacgt gtatggacag gatccctcaa acagattgtc ttctacatct cagcgcatta 120
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gcaacctccc tcagcctggt cgcagcgagc ccgttggatg cgccgaccaa agtgatgggc 240
aagcggttcg ccaccaatgt tctacccgca tcatctggac atgttgtcct cccctcagca 300
accactgtga gcacttttga cggcggaatg aagaagtacg accgtggtac ctcttgcact 360
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aagaatgtca tcattggtgc ggaccaatct gaaggtgtcc actgtctcgg cccgtgcacg 480
atccagaacg tgtggtggga ggccgtctgc gagggtgaga gccagacgct tcgcgttgta 540
aaggggcgaa atgctgacct caagacccag acgccttgac catcaaacaa acttctggga 600
cctcctacgt cgttggcggc ggtgcttttg gcgcgtcaga caaaattatc cagcacaacg 660
gaggcggtac cgtctcgatc aaggacttct acgcccaaga tttcggcaaa gtttaccgca 720
gctgcggcaa ttgcggcact cagtacaaac gcaccgtcac catgtctggg atttgggccg 780
ttaatggtga tctccttgcc ggcgttaact ccaattacgg tgataccgcg accatttccg 840
gcacttgtgc agacaacgtg gacaacatct gcgcctggta cgaaggaaac gatgatggcg 900
atgagcccac caagttgggc actggcatca gctcttactg tgtctatacc gccaatggtg 960
tcgatgactg cccttgagtt gaacattggc ttctatttgc cacgacacta tgatcgtgtt 1020
gcggctctat cgctgttgtg tccggttggt gagggcaccc gtacatatgt ggaatggagg 1080
tcacgtggtg gatagcatgt acatattctt gcctgttatg cctacac 1127
<210> 11
<211> 771
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 11
atgcgttcta caaatctgct cgtcctcctc gcaacctccc tcagcctggt cgcagcgagc 60
ccgttggatg cgccgaccaa agtgatgggc aagcggttcg ccaccaatgt tctacccgca 120
tcatctggac atgttgtcct cccctcagca accactgtga gcacttttga cggcggaatg 180
aagaagtacg accgtggtac ctcttgcact ggtcagtccg aaggggggga tgcggacgct 240
gtcttcctcg ttcagtccgg aggcaccctc aagaatgtca tcattggtgc ggaccaatct 300
gaaggtgtcc actgtctcgg cccgtgcacg atccagaacg tgtggtggga ggccgtctgc 360
gaggacgcct tgaccatcaa acaaacttct gggacctcct acgtcgttgg cggcggtgct 420
tttggcgcgt cagacaaaat tatccagcac aacggaggcg gtaccgtctc gatcaaggac 480
ttctacgccc aagatttcgg caaagtttac cgcagctgcg gcaattgcgg cactcagtac 540
aaacgcaccg tcaccatgtc tgggatttgg gccgttaatg gtgatctcct tgccggcgtt 600
aactccaatt acggtgatac cgcgaccatt tccggcactt gtgcagacaa cgtggacaac 660
atctgcgcct ggtacgaagg aaacgatgat ggcgatgagc ccaccaagtt gggcactggc 720
atcagctctt actgtgtcta taccgccaat ggtgtcgatg actgcccttg a 771
<210> 12
<211> 256
<212> PRT
<213> M. phaseolina
<400> 12
Met Arg Ser Thr Asn Leu Leu Val Leu Leu Ala Thr Ser Leu Ser Leu
1 5 10 15
Val Ala Ala Ser Pro Leu Asp Ala Pro Thr Lys Val Met Gly Lys Arg
20 25 30
Phe Ala Thr Asn Val Leu Pro Ala Ser Ser Gly His Val Val Leu Pro
35 40 45
Ser Ala Thr Thr Val Ser Thr Phe Asp Gly Gly Met Lys Lys Tyr Asp
50 55 60
Arg Gly Thr Ser Cys Thr Gly Gln Ser Glu Gly Gly Asp Ala Asp Ala
65 70 75 80
Val Phe Leu Val Gln Ser Gly Gly Thr Leu Lys Asn Val Ile Ile Gly
85 90 95
Ala Asp Gln Ser Glu Gly Val His Cys Leu Gly Pro Cys Thr Ile Gln
100 105 110
Asn Val Trp Trp Glu Ala Val Cys Glu Asp Ala Leu Thr Ile Lys Gln
115 120 125
Thr Ser Gly Thr Ser Tyr Val Val Gly Gly Gly Ala Phe Gly Ala Ser
130 135 140
Asp Lys Ile Ile Gln His Asn Gly Gly Gly Thr Val Ser Ile Lys Asp
145 150 155 160
Phe Tyr Ala Gln Asp Phe Gly Lys Val Tyr Arg Ser Cys Gly Asn Cys
165 170 175
Gly Thr Gln Tyr Lys Arg Thr Val Thr Met Ser Gly Ile Trp Ala Val
180 185 190
Asn Gly Asp Leu Leu Ala Gly Val Asn Ser Asn Tyr Gly Asp Thr Ala
195 200 205
Thr Ile Ser Gly Thr Cys Ala Asp Asn Val Asp Asn Ile Cys Ala Trp
210 215 220
Tyr Glu Gly Asn Asp Asp Gly Asp Glu Pro Thr Lys Leu Gly Thr Gly
225 230 235 240
Ile Ser Ser Tyr Cys Val Tyr Thr Ala Asn Gly Val Asp Asp Cys Pro
245 250 255
<210> 13
<211> 1164
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 13
agtgacatat aagtcctctg ttctgccatc ggaaaatgct tctcatcacc aacattctct 60
tccttctttc ctcaccacca cttcccctct ttcaaacaat taccggatag atctgtgatc 120
atcccctact ttcgtttaac aacatacaaa atgcagtcca agatcgttct cggcctttct 180
ctcctcgccg ccaccggcat ggcggctccc tccgagcccc tccgcgtccg cgccaccctc 240
cccatcccct cctccaaggg ctctgtcacc tacgatgagg tcaagtccat caccggcact 300
ttcgacggtg gcatgaagac ctacggccgt ggtgtttcct gcactggcca gaaggagggt 360
ggcaacaagg acgccgtctt ccagcttgag gacggtgcta ccctcaagaa cgtcatcatt 420
ggcgaggacc agatcgaggg tatccactgc atgggcagct gcaccctgga gaacgtctgg 480
tggagcgccg tctgcgaggg tttgtcttct tccatccact gaagcacttc acagctaacg 540
tcatctcaga cgctcttacc ttcaagggtg acggtgacgc caaggtcatc ggcggcggtg 600
cccagggcgc cgacgacaag gtcctccagc acaacggtgt cggcgatgtg accatcgacg 660
gcttcaccgt tgtcgatttc ggcaagctgt atcgctcttg cggcagtaag ttccccccgg 720
cttctgccca cctccatccc tcattcacct gctcacacac gtgttccaga ctgcaagcag 780
aacggcggca cccgcaacgt caacatctcc aacgtcaagg cctacaacgg caaggtcctc 840
accggcatca actccaacta cggcgacgtc gccaccttca aggacacctg cgcctcttcc 900
gtcaaggaca tctgcgtcga gtacaagggt accaacaaca acgacgagga gccctccaag 960
atcggctccg gtccttccga caactgcgtc tactccgaca tcccctcttg ctagacggct 1020
cgccaacggt cgcttgggct ggctttcgcg gatgcccatt gtgaataatc cgcttgtttc 1080
ttgtatgtaa ttattttaaa ggcaagaaga ccatttaaat caataaatag agacggggct 1140
agacctcgct tgtactacgc acac 1164
<210> 14
<211> 750
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 14
atgcagtcca agatcgttct cggcctttct ctcctcgccg ccaccggcat ggcggctccc 60
tccgagcccc tccgcgtccg cgccaccctc cccatcccct cctccaaggg ctctgtcacc 120
tacgatgagg tcaagtccat caccggcact ttcgacggtg gcatgaagac ctacggccgt 180
ggtgtttcct gcactggcca gaaggagggt ggcaacaagg acgccgtctt ccagcttgag 240
gacggtgcta ccctcaagaa cgtcatcatt ggcgaggacc agatcgaggg tatccactgc 300
atgggcagct gcaccctgga gaacgtctgg tggagcgccg tctgcgagga cgctcttacc 360
ttcaagggtg acggtgacgc caaggtcatc ggcggcggtg cccagggcgc cgacgacaag 420
gtcctccagc acaacggtgt cggcgatgtg accatcgacg gcttcaccgt tgtcgatttc 480
ggcaagctgt atcgctcttg cggcaactgc aagcagaacg gcggcacccg caacgtcaac 540
atctccaacg tcaaggccta caacggcaag gtcctcaccg gcatcaactc caactacggc 600
gacgtcgcca ccttcaagga cacctgcgcc tcttccgtca aggacatctg cgtcgagtac 660
aagggtacca acaacaacga cgaggagccc tccaagatcg gctccggtcc ttccgacaac 720
tgcgtctact ccgacatccc ctcttgctag 750
<210> 15
<211> 249
<212> PRT
<213> M. phaseolina
<400> 15
Met Gln Ser Lys Ile Val Leu Gly Leu Ser Leu Leu Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15
Met Ala Ala Pro Ser Glu Pro Leu Arg Val Arg Ala Thr Leu Pro Ile
20 25 30
Pro Ser Ser Lys Gly Ser Val Thr Tyr Asp Glu Val Lys Ser Ile Thr
35 40 45
Gly Thr Phe Asp Gly Gly Met Lys Thr Tyr Gly Arg Gly Val Ser Cys
50 55 60
Thr Gly Gln Lys Glu Gly Gly Asn Lys Asp Ala Val Phe Gln Leu Glu
65 70 75 80
Asp Gly Ala Thr Leu Lys Asn Val Ile Ile Gly Glu Asp Gln Ile Glu
85 90 95
Gly Ile His Cys Met Gly Ser Cys Thr Leu Glu Asn Val Trp Trp Ser
100 105 110
Ala Val Cys Glu Asp Ala Leu Thr Phe Lys Gly Asp Gly Asp Ala Lys
115 120 125
Val Ile Gly Gly Gly Ala Gln Gly Ala Asp Asp Lys Val Leu Gln His
130 135 140
Asn Gly Val Gly Asp Val Thr Ile Asp Gly Phe Thr Val Val Asp Phe
145 150 155 160
Gly Lys Leu Tyr Arg Ser Cys Gly Asn Cys Lys Gln Asn Gly Gly Thr
165 170 175
Arg Asn Val Asn Ile Ser Asn Val Lys Ala Tyr Asn Gly Lys Val Leu
180 185 190
Thr Gly Ile Asn Ser Asn Tyr Gly Asp Val Ala Thr Phe Lys Asp Thr
195 200 205
Cys Ala Ser Ser Val Lys Asp Ile Cys Val Glu Tyr Lys Gly Thr Asn
210 215 220
Asn Asn Asp Glu Glu Pro Ser Lys Ile Gly Ser Gly Pro Ser Asp Asn
225 230 235 240
Cys Val Tyr Ser Asp Ile Pro Ser Cys
245
<210> 16
<211> 1238
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 16
ctataaagat ggagaccagc cagcttctag aggcttttcc ctccaggcaa gcatcctctc 60
tccggccatc actttcattc tttcgcattc ttccactctt ttgtccaact ccgacccgaa 120
cagatctgtg atcgttcact acactacaca atgttgacca agactcttct tcccctcctc 180
gccatctctg gcgccgtctc tgccgtcaag accaagacct tcggcaagaa cctcgtccgc 240
cgtgcggact tccctatccc tgaatcccag ggttccgtca cctttgacgc cgccgaggag 300
gtcgatggcg agtacgacgg tggctacaag acgtacggcc gtggtgtttc ttgcactggc 360
caggaggagg gtggcgactc tgacgccgtc ttcatcctga aggacggtgc ttccctcaag 420
aacgccatca tcggctctga ccagattgag ggtgtccact gcgagggctc ctgcactctt 480
gagaacgttt ggtgggaggc cgtctgcgag gacgctctgt ccttcaaggg tgacggtgat 540
gccaccgtca ctggcggtgg tgcaactggt gctgaggaca aagtcctcca gcaaaacggt 600
attggctcca tcaccgtcga tggcttcacc gttgtggact tcggcaagct gtaccgctct 660
tgcggtaact gcgacgagat gggccagcgc actgtacgtc aatgctatcg ctcattctgt 720
agggcagaga gtgctgacat ggctgtgcga cttagatcac cctcaagaac gtcaaggcct 780
actccggcaa gaagcttgtc ggcatcaact ccaactacgg tgacagtgcg tcatgttcct 840
ttaggctttc aacccttgag ccatgtgcta atagcatcct cagctgccac catcaccgac 900
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ggggtgggaa gggatttaga gcctccgaaa aggtggaagt gggtttagga cttcgttgta 1200
taatataaac ttgtttccga aaataagaac catcctgc 1238
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<211> 756
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 17
atgttgacca agactcttct tcccctcctc gccatctctg gcgccgtctc tgccgtcaag 60
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ggttccgtca cctttgacgc cgccgaggag gtcgatggcg agtacgacgg tggctacaag 180
acgtacggcc gtggtgtttc ttgcactggc caggaggagg gtggcgactc tgacgccgtc 240
ttcatcctga aggacggtgc ttccctcaag aacgccatca tcggctctga ccagattgag 300
ggtgtccact gcgagggctc ctgcactctt gagaacgttt ggtgggaggc cgtctgcgag 360
gacgctctgt ccttcaaggg tgacggtgat gccaccgtca ctggcggtgg tgcaactggt 420
gctgaggaca aagtcctcca gcaaaacggt attggctcca tcaccgtcga tggcttcacc 480
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actatcaccc tcaagaacgt caaggcctac tccggcaaga agcttgtcgg catcaactcc 600
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<211> 251
<212> PRT
<213> M. phaseolina
<400> 18
Met Leu Thr Lys Thr Leu Leu Pro Leu Leu Ala Ile Ser Gly Ala Val
1 5 10 15
Ser Ala Val Lys Thr Lys Thr Phe Gly Lys Asn Leu Val Arg Arg Ala
20 25 30
Asp Phe Pro Ile Pro Glu Ser Gln Gly Ser Val Thr Phe Asp Ala Ala
35 40 45
Glu Glu Val Asp Gly Glu Tyr Asp Gly Gly Tyr Lys Thr Tyr Gly Arg
50 55 60
Gly Val Ser Cys Thr Gly Gln Glu Glu Gly Gly Asp Ser Asp Ala Val
65 70 75 80
Phe Ile Leu Lys Asp Gly Ala Ser Leu Lys Asn Ala Ile Ile Gly Ser
85 90 95
Asp Gln Ile Glu Gly Val His Cys Glu Gly Ser Cys Thr Leu Glu Asn
100 105 110
Val Trp Trp Glu Ala Val Cys Glu Asp Ala Leu Ser Phe Lys Gly Asp
115 120 125
Gly Asp Ala Thr Val Thr Gly Gly Gly Ala Thr Gly Ala Glu Asp Lys
130 135 140
Val Leu Gln Gln Asn Gly Ile Gly Ser Ile Thr Val Asp Gly Phe Thr
145 150 155 160
Val Val Asp Phe Gly Lys Leu Tyr Arg Ser Cys Gly Asn Cys Asp Glu
165 170 175
Met Gly Gln Arg Thr Ile Thr Leu Lys Asn Val Lys Ala Tyr Ser Gly
180 185 190
Lys Lys Leu Val Gly Ile Asn Ser Asn Tyr Gly Asp Thr Ala Thr Ile
195 200 205
Thr Asp Thr Cys Ala Thr Asp Val Ser Asp Ile Cys Thr Glu Tyr Glu
210 215 220
Gly Asn Asp Thr Gly Asp Glu Pro Glu Glu Ile Ser Ser Gly Pro Ser
225 230 235 240
Asp Ala Cys Ile Tyr Ser Asp Val Pro Glu Cys
245 250
<210> 19
<211> 1245
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 19
ggttcacctc atcaactcgc ttcttcattc gttccttgct gtgcaagaca ccatccagac 60
ggacattcca ttacaacggt ctttgatagc caatccaact ttgtctactc cctgcctctc 120
catcctaccc taccaataag cccatccaaa atgcagtaca gcatccgctc gctcgccttc 180
ggcctcgccg ccctggccgt ctccaccgac gctttcatgg ttccccgtga ccctagcaag 240
ggctggggct tccccaacgc caacaacgct cgcgttgctg ctgccgccgc ctccactcct 300
gtccagaccc ccggcaacac ccctaccact cccgtggcca cccctggtgt cactggcggc 360
gccactgccg ccgctggctt ccccgcctcg tccggcacca gccagctcag cgcccccatg 420
accgtcaccg gcagcttcga cggtggcatg aaggccttcg gccgcggtgt ctcctgcact 480
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ctcaagaacg tctggtgggt cgccgtctgc gaggacgctt tcaccatcaa ggagcagggc 660
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taactcctga ttttgcaagc gatgaggcaa tgctaacaat gcgcagctgc taccatcacc 960
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ggttgggtaa tgcagggatt ggcaaaatgt ccgtccggca taattagcac ttctttgatg 1200
tagatattgg gccgggtgtc cacaatgtat aactctgaca tgtca 1245
<210> 20
<211> 894
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 20
atgcagtaca gcatccgctc gctcgccttc ggcctcgccg ccctggccgt ctccaccgac 60
gctttcatgg ttccccgtga ccctagcaag ggctggggct tccccaacgc caacaacgct 120
cgcgttgctg ctgccgccgc ctccactcct gtccagaccc ccggcaacac ccctaccact 180
cccgtggcca cccctggtgt cactggcggc gccactgccg ccgctggctt ccccgcctcg 240
tccggcacca gccagctcag cgcccccatg accgtcaccg gcagcttcga cggtggcatg 300
aaggccttcg gccgcggtgt ctcctgcact ggccaggctg agggtggcga cagcgacgct 360
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gagggtgtcc actgcttcgg ttcctgcact ctcaagaacg tctggtgggt cgccgtctgc 480
gaggacgctt tcaccatcaa ggagcagggc gcctctggca ctacccacat catcggcggt 540
ggtgctcagg gcgccgaaga caaggttctc cagcacaacg gcggcggcac tctcgctgtc 600
tctggcttcc tcgccaagga cttcggtaag ctctaccgca gctgcggcaa ctgcgacgag 660
atgcccgagc gccacgttac catcgacggc gttaccgctg agtctggtga catcctggtc 720
ggcatcaact ccaacatggg cgacactgct accatcacca acacctgcgc caccggcgtc 780
gagaccatct gccaggagtt caacggtgtc acggacggca gcgagcccga ggctgccggc 840
agcggcccta gcactgcttg caagtacact gccgctgacg cccaggcctg ctaa 894
<210> 21
<211> 297
<212> PRT
<213> M. phaseolina
<400> 21
Met Gln Tyr Ser Ile Arg Ser Leu Ala Phe Gly Leu Ala Ala Leu Ala
1 5 10 15
Val Ser Thr Asp Ala Phe Met Val Pro Arg Asp Pro Ser Lys Gly Trp
20 25 30
Gly Phe Pro Asn Ala Asn Asn Ala Arg Val Ala Ala Ala Ala Ala Ser
35 40 45
Thr Pro Val Gln Thr Pro Gly Asn Thr Pro Thr Thr Pro Val Ala Thr
50 55 60
Pro Gly Val Thr Gly Gly Ala Thr Ala Ala Ala Gly Phe Pro Ala Ser
65 70 75 80
Ser Gly Thr Ser Gln Leu Ser Ala Pro Met Thr Val Thr Gly Ser Phe
85 90 95
Asp Gly Gly Met Lys Ala Phe Gly Arg Gly Val Ser Cys Thr Gly Gln
100 105 110
Ala Glu Gly Gly Asp Ser Asp Ala Val Phe Met Ile Glu Glu Gly Gly
115 120 125
Thr Leu Ser Asn Val Ile Ile Ala Ala Asp Gln Ile Glu Gly Val His
130 135 140
Cys Phe Gly Ser Cys Thr Leu Lys Asn Val Trp Trp Val Ala Val Cys
145 150 155 160
Glu Asp Ala Phe Thr Ile Lys Glu Gln Gly Ala Ser Gly Thr Thr His
165 170 175
Ile Ile Gly Gly Gly Ala Gln Gly Ala Glu Asp Lys Val Leu Gln His
180 185 190
Asn Gly Gly Gly Thr Leu Ala Val Ser Gly Phe Leu Ala Lys Asp Phe
195 200 205
Gly Lys Leu Tyr Arg Ser Cys Gly Asn Cys Asp Glu Met Pro Glu Arg
210 215 220
His Val Thr Ile Asp Gly Val Thr Ala Glu Ser Gly Asp Ile Leu Val
225 230 235 240
Gly Ile Asn Ser Asn Met Gly Asp Thr Ala Thr Ile Thr Asn Thr Cys
245 250 255
Ala Thr Gly Val Glu Thr Ile Cys Gln Glu Phe Asn Gly Val Thr Asp
260 265 270
Gly Ser Glu Pro Glu Ala Ala Gly Ser Gly Pro Ser Thr Ala Cys Lys
275 280 285
Tyr Thr Ala Ala Asp Ala Gln Ala Cys
290 295
<210> 22
<211> 1047
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 22
gaatggtata aagagcggtg ggatatccat cattgagctc atcaccaacc cacaattact 60
ttcgttctac actcctctcg tttacacaac ggatcactga tctaccacat tcgctcttac 120
caaagatcct gtctaccaac catctacaac atgcagttca agtacgccgc tctcgctgcc 180
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cccaacaagg gccaaaggat cgtcaagccc ggcaatcctt tcgacggcgg gatgaaggag 300
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gtcatcgagg acggcggtgt tctgcgcaac gccatcatcg gcgccgacgc cgtcgagggc 420
atccactgcg agggcaagtg caccatcgag aacgtctggt tccgcgacgt gtgcgaggac 480
gccatcacgc tgaagggcaa cggcccttac accatcactg gcggcggcgc ccagaacgcc 540
ggcgacaagg tcatccagca caacggcaag ggcgagctgc gcatctcaaa ctaccaggtc 600
aacaacgtcg gcaagctgtt ccgcacctgc ggcaactgca gcaacaacgg cggcccgcgc 660
agcatcgtcg ccaccggcat cagggccttc ggcgtcacca gcgacctcat cggcatcaac 720
tccaactacg gcgacaaggc ctccatcacc ggctcctgcg gcaacaccaa gacggtctgc 780
caggaatatg tcggcatcga gaagggcgcc aacggcggga aggacagcga gaagagggtc 840
ccgccggtcg gcgcttgcac cggccagggc ggtctcgcca ggctcccttc ctgctagacg 900
cctcgcggaa tcttgcgctg agtatgggat gggaggaatg gattgaccgc ctcagtttgg 960
gatccgtgcg aacagtcggg aacttcgcaa ctgcctcatc cgtcaagagg tgtgggcccc 1020
tgccggacag gatgaaacgc gtttatg 1047
<210> 23
<211> 747
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 23
atgcagttca agtacgccgc tctcgctgcc gccctggccg ccgtcggctc cacgcagagc 60
ctccccatcc ccgcctcccg cggagttgat cccaacaagg gccaaaggat cgtcaagccc 120
ggcaatcctt tcgacggcgg gatgaaggag tttggccgtg gtgtcgtctg caacgacaag 180
gccgacactg gcgtcaggaa cgccgtcttc gtcatcgagg acggcggtgt tctgcgcaac 240
gccatcatcg gcgccgacgc cgtcgagggc atccactgcg agggcaagtg caccatcgag 300
aacgtctggt tccgcgacgt gtgcgaggac gccatcacgc tgaagggcaa cggcccttac 360
accatcactg gcggcggcgc ccagaacgcc ggcgacaagg tcatccagca caacggcaag 420
ggcgagctgc gcatctcaaa ctaccaggtc aacaacgtcg gcaagctgtt ccgcacctgc 480
ggcaactgca gcaacaacgg cggcccgcgc agcatcgtcg ccaccggcat cagggccttc 540
ggcgtcacca gcgacctcat cggcatcaac tccaactacg gcgacaaggc ctccatcacc 600
ggctcctgcg gcaacaccaa gacggtctgc caggaatatg tcggcatcga gaagggcgcc 660
aacggcggga aggacagcga gaagagggtc ccgccggtcg gcgcttgcac cggccagggc 720
ggtctcgcca ggctcccttc ctgctag 747
<210> 24
<211> 248
<212> PRT
<213> M. phaseolina
<400> 24
Met Gln Phe Lys Tyr Ala Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Ser Thr Gln Ser Leu Pro Ile Pro Ala Ser Arg Gly Val Asp Pro Asn
20 25 30
Lys Gly Gln Arg Ile Val Lys Pro Gly Asn Pro Phe Asp Gly Gly Met
35 40 45
Lys Glu Phe Gly Arg Gly Val Val Cys Asn Asp Lys Ala Asp Thr Gly
50 55 60
Val Arg Asn Ala Val Phe Val Ile Glu Asp Gly Gly Val Leu Arg Asn
65 70 75 80
Ala Ile Ile Gly Ala Asp Ala Val Glu Gly Ile His Cys Glu Gly Lys
85 90 95
Cys Thr Ile Glu Asn Val Trp Phe Arg Asp Val Cys Glu Asp Ala Ile
100 105 110
Thr Leu Lys Gly Asn Gly Pro Tyr Thr Ile Thr Gly Gly Gly Ala Gln
115 120 125
Asn Ala Gly Asp Lys Val Ile Gln His Asn Gly Lys Gly Glu Leu Arg
130 135 140
Ile Ser Asn Tyr Gln Val Asn Asn Val Gly Lys Leu Phe Arg Thr Cys
145 150 155 160
Gly Asn Cys Ser Asn Asn Gly Gly Pro Arg Ser Ile Val Ala Thr Gly
165 170 175
Ile Arg Ala Phe Gly Val Thr Ser Asp Leu Ile Gly Ile Asn Ser Asn
180 185 190
Tyr Gly Asp Lys Ala Ser Ile Thr Gly Ser Cys Gly Asn Thr Lys Thr
195 200 205
Val Cys Gln Glu Tyr Val Gly Ile Glu Lys Gly Ala Asn Gly Gly Lys
210 215 220
Asp Ser Glu Lys Arg Val Pro Pro Val Gly Ala Cys Thr Gly Gln Gly
225 230 235 240
Gly Leu Ala Arg Leu Pro Ser Cys
245
<210> 25
<211> 2495
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 25
gtttggtgcg tgggaacgca tttaacggtg gatgaatcga tccaaggctt ccaaggcaga 60
gcctccgaaa cagtcaatat tccatccaaa ccaacgccta ttggattcaa gatttgggca 120
ctttgtaacg aggctttttt ggttgattgg atgttccatt caaatggcga aggaccgtgg 180
gatcttgacg agtattacac cgacgaacag tacgaaatta acctcacaca gacggctgca 240
gtggtgcccg atttggtggc tcagttatgc ccacatgagc tgccatttga cagcccaaaa 300
tacatcgttt ggatagacaa tctgcttact tctgcgcggc ttatgacaac gctccggaac 360
gagaatattg gcgctgcagg gactgttcga atgggcaaga cacagcgtga gaagaatgaa 420
gagaaggcag ctagcaaaaa gaagcaagcc accaaagaag ataaccgtgg tttacaccaa 480
aggcttcgag atttgaggtc aaaaaatgaa ggacagatcg aatggggcac gcagtattgc 540
tgtctatcac aggacgagca gtcaatgcaa tttggctggc aggatgcaag aattgtgcta 600
ttcatgagca ctgttcatga cggtaaacaa tgggtgattc gacgacgacg gcggcccaca 660
aagacctcca ccaattcgaa gatcactcag aagccatttg gtgataacgt ggaacaagat 720
atggagattc cgaggtgggc agacgagtac aatcacaaca agaatgcggt tgaccgtttt 780
gaccaattca aagccgaacg ccaaatcaat cgactttgtt atcgaacatg gaagcctctt 840
tggaacttcc tcttccaatc atcgatcatc agtgcatatc tgctcacttg tagaggcttg 900
gatgacgatg agaaacctcc attcgcgtcc ctgaacgcat tccgccagag gctttgggag 960
cagctctttg aacgctcaga acgcgttgac ggacgccgtg gacgagcaga gcctcgttat 1020
cgtgagattc cacgcgaaga acatcaatat gagaggctta aggtccaagg gaactgcagt 1080
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accaacattc ggccaccaag gccaaggtgg ggctgtgggc tatgtaatct gaatctttgt 1200
gaaggcattt gcttcaaaaa tcacttgaat cgggtgatag gaagcagttg aatttgatgt 1260
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cgacctcaaa acactacgtt ttagttgaat tattgcgatt attgggctgc gaaaagcccc 1440
tgatgacttt ggtgttctga cccctgtcac cacccctgtc gctctcaagc tctccataga 1500
ttgagagcat atccagccta cgaagggata ccactgcccc ctcctggcgg cttccgccct 1560
ggctgctcct gccgacgaca ctttcggcta cgagctcgtt cgccgtgcga acttccctat 1620
tcctgcctcc aagggcaccg tcaagtacag cgctgccaag tccatctccg gcactttcga 1680
tggtggcctg aagaccctac agccgtggtg tcaagtgcat cggtcaggct gagggcggtg 1740
acaaaaaagc cgtcttcatc cctgaggacg gtgctagcct caagagcgcc atcactggca 1800
ccgagcagat cgagggcgtc cactgcaagg ggctcctgca ctatcgagaa cgtctggtgg 1860
gctggtgtct gcgaggatgc tctctccctc aagggcaacg gcaacgccaa gatcattggt 1920
ggcggtgcca ctggtgccga agacaagggt aagctctctt ctgcaagagc gttgcgatcg 1980
gatttctaac actctctggt gcaggtcatc cagcaccggt tttggatccg tctctattga 2040
cggcttcact gttgccgatt tcggcaagct ctaccgctct tgcggaaact gcaagaagca 2100
gggcaagaga actgtcacca tcaagaatgt caaggcatca tccggcaagc tgctcgctgg 2160
tatcaactcc aactacggcg acactgctac catcaccggc acctgcgctg cctccgtcaa 2220
gaagatctgc accgagttca tgggcaacaa cagcggcaag gagcccagtg tggttttcaa 2280
tctcgatctt atcaatctta tcaatcgatc cctatcaatc gatatcaagt ccatcatgga 2340
attgaattga cgattgataa ggatcgacag cctcctggtt gccctgccaa acgccaccaa 2400
acaaacgcca taaaacacgc ccgcagggag ccgcaggacc cgaaatgcat caaacagtcc 2460
tcttctattg cattatcaat tatcgggcat ggatg 2495
<210> 26
<211> 1707
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 26
atgttccatt caaatggcga aggaccgtgg gatcttgacg agtattacac cgacgaacag 60
tacgaaatta acctcacaca gacggctgca gtggtgcccg atttggtggc tcagttatgc 120
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catctccggc actttcgatg gtggcctgaa gaccctacag ccgtggtgtc aagtgcatcg 1140
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tcgatatcaa gtccatcatg gaattga 1707
<210> 27
<211> 568
<212> PRT
<213> M. phaseolina
<400> 27
Met Phe His Ser Asn Gly Glu Gly Pro Trp Asp Leu Asp Glu Tyr Tyr
1 5 10 15
Thr Asp Glu Gln Tyr Glu Ile Asn Leu Thr Gln Thr Ala Ala Val Val
20 25 30
Pro Asp Leu Val Ala Gln Leu Cys Pro His Glu Leu Pro Phe Asp Ser
35 40 45
Pro Lys Tyr Ile Val Trp Ile Asp Asn Leu Leu Thr Ser Ala Arg Leu
50 55 60
Met Thr Thr Leu Arg Asn Glu Asn Ile Gly Ala Ala Gly Thr Val Arg
65 70 75 80
Met Gly Lys Thr Gln Arg Glu Lys Asn Glu Glu Lys Ala Ala Ser Lys
85 90 95
Lys Lys Gln Ala Thr Lys Glu Asp Asn Arg Gly Leu His Gln Arg Leu
100 105 110
Arg Asp Leu Arg Ser Lys Asn Glu Gly Gln Ile Glu Trp Gly Thr Gln
115 120 125
Tyr Cys Cys Leu Ser Gln Asp Glu Gln Ser Met Gln Phe Gly Trp Gln
130 135 140
Asp Ala Arg Ile Val Leu Phe Met Ser Thr Val His Asp Gly Lys Gln
145 150 155 160
Trp Val Ile Arg Arg Arg Arg Arg Pro Thr Lys Thr Ser Thr Asn Ser
165 170 175
Lys Ile Thr Gln Lys Pro Phe Gly Asp Asn Val Glu Gln Asp Met Glu
180 185 190
Ile Pro Arg Trp Ala Asp Glu Tyr Asn His Asn Lys Asn Ala Val Asp
195 200 205
Arg Phe Asp Gln Phe Lys Ala Glu Arg Gln Ile Asn Arg Leu Cys Tyr
210 215 220
Arg Thr Trp Lys Pro Leu Trp Asn Phe Leu Phe Gln Ser Ser Ile Ile
225 230 235 240
Ser Ala Tyr Leu Leu Thr Cys Arg Gly Leu Asp Asp Asp Glu Lys Pro
245 250 255
Pro Phe Ala Ser Leu Asn Ala Phe Arg Gln Arg Leu Trp Glu Gln Leu
260 265 270
Phe Glu Arg Ser Glu Arg Val Asp Gly Arg Arg Gly Arg Ala Glu Pro
275 280 285
Arg Tyr Arg Glu Ile Pro Arg Glu Glu His Gln Tyr Glu Arg Leu Lys
290 295 300
Val Gln Gly Asn Cys Ser Glu Ser Tyr Glu Gly Ile Pro Leu Pro Pro
305 310 315 320
Pro Gly Gly Phe Arg Pro Gly Cys Ser Cys Arg Arg His Phe Arg Leu
325 330 335
Arg Ala Arg Ser Pro Cys Glu Leu Pro Tyr Ser Cys Leu Gln Gly His
340 345 350
Arg Gln Val Gln Arg Cys Gln Val His Leu Arg His Phe Arg Trp Trp
355 360 365
Pro Glu Asp Pro Thr Ala Val Val Ser Ser Ala Ser Val Arg Leu Arg
370 375 380
Ala Val Thr Lys Lys Pro Ser Ser Ser Leu Arg Thr Val Leu Ala Ser
385 390 395 400
Arg Ala Pro Ser Leu Ala Pro Ser Arg Ser Arg Ala Ser Thr Ala Arg
405 410 415
Gly Ser Cys Thr Ile Glu Asn Val Trp Trp Ala Gly Val Cys Glu Asp
420 425 430
Ala Leu Ser Leu Lys Gly Asn Gly Asn Ala Lys Ile Ile Gly Gly Gly
435 440 445
Ala Thr Gly Ala Glu Asp Lys Gly His Pro Ala Pro Val Leu Asp Pro
450 455 460
Ser Leu Leu Thr Ala Ser Leu Leu Pro Ile Ser Ala Ser Ser Thr Ala
465 470 475 480
Leu Ala Glu Thr Ala Arg Ser Arg Ala Arg Glu Leu Ser Pro Ser Arg
485 490 495
Met Ser Arg His His Pro Ala Ser Cys Ser Leu Val Ser Thr Pro Thr
500 505 510
Thr Ala Thr Leu Leu Pro Ser Pro Ala Pro Ala Leu Pro Pro Ser Arg
515 520 525
Arg Ser Ala Pro Ser Ser Trp Ala Thr Thr Ala Ala Arg Ser Pro Val
530 535 540
Trp Phe Ser Ile Ser Ile Leu Ser Ile Leu Ser Ile Asp Pro Tyr Gln
545 550 555 560
Ser Ile Ser Ser Pro Ser Trp Asn
565
<210> 28
<211> 1922
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 28
caagatgtgc ttttgctctc caggacattc ctctccatcc ctcgtttcca atcactttca 60
gtctttgcca ctccttcgct gtccactgta gtccggaact acatcagtaa accaccttct 120
tttccaacag accccatcac atccgccaaa atggtcaaca ttgctgccgt ctgccgcgct 180
gcggctttct ttcttcctgt cctcgccgcc gcccagagcg gtgtcgttgg taccccttcc 240
ggtttcgccg ccggcaccac tggtggtggt gacgctgccg ccgccgctcc ctccgacgtt 300
gctgagctca tctcttggct tgaggatgag actccccgtg tcatcctcat cgacaaggag 360
ttcaacttcc tcggcacgga gggcaccaag agcgatcagg gctgccgtcc cgacagcaac 420
aagtgccctg gcaagggtgg ccaggatgcc atcaaccagg ccaactggtg cgacaacggc 480
aacgctggcg agggtgtctc ggccgtcacc gtcaagtacg accaggctgc gctcaagggc 540
atcgctgtca agagcaacaa gtccatcgtc ggtgttggcg acaagggtgt cctcaagggc 600
aagggcctca gcctgactgg tggcgttgag aacgttatca tccagaacat ccacatcacc 660
gacctgaacc ccgagtacat ctggggtggt gatgccatca cgctcgctgg ttccgacaag 720
gtctggagta agtacttccg aactgtttcg atcccatacg gttggccttg aaacccaaat 780
cgggaaacgc actataccca atatggcaat tttctacgaa catcgagaca ccgcagcaga 840
acacgagttt cacgccattg cttgtttctg tggctgtcaa tgctgtctcg aagtccctgt 900
atgctgtttg gcttgatgcg ctagtgcgtt tcctgagaga ggtgcccacc acaccatcat 960
gccccaagct cccttacccc tttcccagca tcccacatca tgctatatcc tttactatgc 1020
tttcaacagt aaaactaacg cccgaaacgt cgatcatgtc aaaatttctc tcgtcggtcg 1080
ccagatgatc gttaccggct acgacaaggc cggtagggtc acgatctcca actccgagtt 1140
cgacggccag accgactggt ccgcctcctg caacggcgaa cactactgga ccgtcctcgt 1200
gtacggtgcc gacgaccaga tcaccttcgc aaacaactac atgcacgaca cctcgggccg 1260
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cttccagacc aacaagggcc ataacttcga catcggctcc ggtgccgagg ttttgctcga 1380
gggtaacacc ttcaacgagt gcaaccagcc catcacctcc aagtcggcca acgagggcgg 1440
cgccatcttc aacaccccct ccggctccga gagctcctgc tccagctacc tcaagcgcgc 1500
ctgccaggcc aacactctca ccagctccgg tgacttcggc acttacaagg acacctcggt 1560
tctcgagggc ttcaacggcg ccacctccat ctgggaggcc gtcagcgctg aggaggctgc 1620
tgcgtccgtc atcgccaacg ccggtattgg caagctccag ggcggtgcta gcaactccac 1680
tgccaagttc agtatgtctt ctcccttcaa ccctgtatca caggagacat gtactaataa 1740
ttctctcctc tgcagggcgc ttccaatcct agattaataa gcacgatcga ccgaatacta 1800
gcatcagtac ggtttttaga taaaaaggga tctgtctggt ttactgtaga tatttagcct 1860
tcctttcttt ggcttcacat atttttaact ttacagccca agagggctca atgcaaatac 1920
tt 1922
<210> 29
<211> 1314
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 29
atggtcaaca ttgctgccgt ctgccgcgct gcggctttct ttcttcctgt cctcgccgcc 60
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<212> PRT
<213> M. phaseolina
<400> 30
Met Val Asn Ile Ala Ala Val Cys Arg Ala Ala Ala Phe Phe Leu Pro
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Val Leu Ala Ala Ala Gln Ser Gly Val Val Gly Thr Pro Ser Gly Phe
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Ala Ala Gly Thr Thr Gly Gly Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala Pro Ser
35 40 45
Asp Val Ala Glu Leu Ile Ser Trp Leu Glu Asp Glu Thr Pro Arg Val
50 55 60
Ile Leu Ile Asp Lys Glu Phe Asn Phe Leu Gly Thr Glu Gly Thr Lys
65 70 75 80
Ser Asp Gln Gly Cys Arg Pro Asp Ser Asn Lys Cys Pro Gly Lys Gly
85 90 95
Gly Gln Asp Ala Ile Asn Gln Ala Asn Trp Cys Asp Asn Gly Asn Ala
100 105 110
Gly Glu Gly Val Ser Ala Val Thr Val Lys Tyr Asp Gln Ala Ala Leu
115 120 125
Lys Gly Ile Ala Val Lys Ser Asn Lys Ser Ile Val Gly Val Gly Asp
130 135 140
Lys Gly Val Leu Lys Gly Lys Gly Leu Ser Leu Thr Gly Gly Val Glu
145 150 155 160
Asn Val Ile Ile Gln Asn Ile His Ile Thr Asp Leu Asn Pro Glu Tyr
165 170 175
Ile Trp Gly Gly Asp Ala Ile Thr Leu Ala Gly Ser Asp Lys Val Trp
180 185 190
Met Arg Phe Leu Arg Glu His Pro Thr Ser Cys Tyr Ile Leu Tyr Tyr
195 200 205
Ala Phe Asn Ser Lys Thr Asn Ala Arg Asn Val Asp His Val Lys Ile
210 215 220
Ser Leu Val Gly Arg Gln Met Ile Val Thr Gly Tyr Asp Lys Ala Gly
225 230 235 240
Arg Val Thr Ile Ser Asn Ser Glu Phe Asp Gly Gln Thr Asp Trp Ser
245 250 255
Ala Ser Cys Asn Gly Glu His Tyr Trp Thr Val Leu Val Tyr Gly Ala
260 265 270
Asp Asp Gln Ile Thr Phe Ala Asn Asn Tyr Met His Asp Thr Ser Gly
275 280 285
Arg Ser Pro Lys Ile Gly Gly Ala Asp Gly Ala Gly Ile Thr Phe His
290 295 300
Ala Val Asn Asn Val Phe Gln Thr Asn Lys Gly His Asn Phe Asp Ile
305 310 315 320
Gly Ser Gly Ala Glu Val Leu Leu Glu Gly Asn Thr Phe Asn Glu Cys
325 330 335
Asn Gln Pro Ile Thr Ser Lys Ser Ala Asn Glu Gly Gly Ala Ile Phe
340 345 350
Asn Thr Pro Ser Gly Ser Glu Ser Ser Cys Ser Ser Tyr Leu Lys Arg
355 360 365
Ala Cys Gln Ala Asn Thr Leu Thr Ser Ser Gly Asp Phe Gly Thr Tyr
370 375 380
Lys Asp Thr Ser Val Leu Glu Gly Phe Asn Gly Ala Thr Ser Ile Trp
385 390 395 400
Glu Ala Val Ser Ala Glu Glu Ala Ala Ala Ser Val Ile Ala Asn Ala
405 410 415
Gly Ile Gly Lys Leu Gln Gly Gly Ala Ser Asn Ser Thr Ala Lys Phe
420 425 430
Arg Arg Phe Gln Ser
435
<210> 31
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<213> M. phaseolina
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accaatcgtc acagatccgc tggacacgat gcagcgtgca catatagatc ggctccgcag 60
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tccaacgccg gcgaggacac gggcaagctg cacgtcacct acgccaacaa ctactggagc 840
aacgtcggct cgcgctgccc gctcgtgcgc ttcggcaccg tccacatcgt caacaactac 900
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gagagaagcc tatctacata gcctgtgttt acaagcaatt ctctgtagat atttttatac 1260
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<400> 32
atgaagtttc tttccacttt ggccctggcg gccctcgcgc acctggcgtg cgccgtcccc 60
atggccgaga agcgtgcccc cgcggccacg cccgtcggct acgcctcgca gaacggcggc 120
gtgaccggcg gtcagggcgg caccaccacc accgtctcct cgctgcccga gatgacggct 180
gcccttaaga agggggacac ggagaagaag gtcgtctacg tcaagggcaa gatctccggc 240
aaggcgaaga tctacgttgg ctcgaacaag tccatcctcg gcgttgactc cagctccggc 300
ctcgagggca tcggactcct cgtccgtgac gccaagaacg tcatcatccg caacctggcc 360
atctccaagg tcgaggccga cacgggcggc gacgccatcg ccatcgacgg ctccaccaac 420
gtctgggtcg accactgcga cctgtccagc gacctggccg ccgacaagga cttctacgac 480
ggcctgctcg acatctccca cggcgccgac tacgtcaccg tctcgaacgt ctacttccac 540
gaccaccaca agaactcgct cgtcggccac tccgactcca acgccggcga ggacacgggc 600
aagctgcacg tcacctacgc caacaactac tggagcaacg tcggctcgcg ctgcccgctc 660
gtgcgcttcg gcaccgtcca catcgtcaac aactacttcg aggacgtctc cgtctccggc 720
atcaacaccc gcatgggcgc ccaggtcctc gtcgagaaca acgtcttcaa caacgtcgtg 780
caggccctcg tctcgatcga ctccaaggag ctcggctacg ccgtcgcgcg aggcaacgac 840
tggggcacct ccaagaacga ggcccccgag ggtaccctta ccaaggtgcc ttacacctac 900
accgctgttg aagcgagcgc ggtcaaggct gctgttgttg gcagcgcggg caacaccctc 960
tctggcttgt aa 972
<210> 33
<211> 323
<212> PRT
<213> M. phaseolina
<400> 33
Met Lys Phe Leu Ser Thr Leu Ala Leu Ala Ala Leu Ala His Leu Ala
1 5 10 15
Cys Ala Val Pro Met Ala Glu Lys Arg Ala Pro Ala Ala Thr Pro Val
20 25 30
Gly Tyr Ala Ser Gln Asn Gly Gly Val Thr Gly Gly Gln Gly Gly Thr
35 40 45
Thr Thr Thr Val Ser Ser Leu Pro Glu Met Thr Ala Ala Leu Lys Lys
50 55 60
Gly Asp Thr Glu Lys Lys Val Val Tyr Val Lys Gly Lys Ile Ser Gly
65 70 75 80
Lys Ala Lys Ile Tyr Val Gly Ser Asn Lys Ser Ile Leu Gly Val Asp
85 90 95
Ser Ser Ser Gly Leu Glu Gly Ile Gly Leu Leu Val Arg Asp Ala Lys
100 105 110
Asn Val Ile Ile Arg Asn Leu Ala Ile Ser Lys Val Glu Ala Asp Thr
115 120 125
Gly Gly Asp Ala Ile Ala Ile Asp Gly Ser Thr Asn Val Trp Val Asp
130 135 140
His Cys Asp Leu Ser Ser Asp Leu Ala Ala Asp Lys Asp Phe Tyr Asp
145 150 155 160
Gly Leu Leu Asp Ile Ser His Gly Ala Asp Tyr Val Thr Val Ser Asn
165 170 175
Val Tyr Phe His Asp His His Lys Asn Ser Leu Val Gly His Ser Asp
180 185 190
Ser Asn Ala Gly Glu Asp Thr Gly Lys Leu His Val Thr Tyr Ala Asn
195 200 205
Asn Tyr Trp Ser Asn Val Gly Ser Arg Cys Pro Leu Val Arg Phe Gly
210 215 220
Thr Val His Ile Val Asn Asn Tyr Phe Glu Asp Val Ser Val Ser Gly
225 230 235 240
Ile Asn Thr Arg Met Gly Ala Gln Val Leu Val Glu Asn Asn Val Phe
245 250 255
Asn Asn Val Val Gln Ala Leu Val Ser Ile Asp Ser Lys Glu Leu Gly
260 265 270
Tyr Ala Val Ala Arg Gly Asn Asp Trp Gly Thr Ser Lys Asn Glu Ala
275 280 285
Pro Glu Gly Thr Leu Thr Lys Val Pro Tyr Thr Tyr Thr Ala Val Glu
290 295 300
Ala Ser Ala Val Lys Ala Ala Val Val Gly Ser Ala Gly Asn Thr Leu
305 310 315 320
Ser Gly Leu
<210> 34
<211> 1320
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 34
tctccaagtt catcttcatc ttcagtcttt ctctattaaa cgcgttgact cgcgccattc 60
tttgacagcc atcagcctgc tgagcacgct tgaccacata ttccttccct tgaaagttcc 120
cgtttgctca acaacacttc caccgcaacc atgaaggcca ccaccctcgc tacttttgct 180
ctttccgccg tgagcgctct ggcagcgccc accaagacct tcgccaagcg tgccgccatc 240
actgacggcc ccgacgtcgg ctatgccacc ctgaacggtg gcaccactgg cggtgctggc 300
ggttccacca ccaccgtctc cagcctggcc cagttcaccg ctgccgccga ggctgatggc 360
gccgccgtca ttgtcgtctc cggcaacatc tctggcgccg ccaaggtccg cgtcggcagc 420
gacaagacca tcatcggcaa ggactccagc gccgtgctcg agggcgtcgg tctctacatc 480
aacaagcaga agaacgtcat cgtccgcaac ctgtccatca agaatgtgct tgcggagaat 540
ggtgacgcca tcggcatcca ggcttcccag aacgtctgga tcgaccactg cgacctgtcc 600
tcggaccgtg accacgacaa ggactactac gacggtctcc tcgacgtgac ccacgcctct 660
gactacatca ccctgtccaa caactacctc catgaccact ggaaggcctc gctcgtcggc 720
cactccgact ccaacggctc tgaggacaag ggccacttga ccgtcaccta ctaccagaac 780
cacttcgaga acctgaactc gcgtggtcct tctttccgct tcggcaccgg tcacattgta 840
tgttgcccac caacctgaca ccacagtaat gattctaacg gcaaatgcta ggtcaacaac 900
ctctacacca gcgtcagcga cggtatcaac gctcgccagg gcgcccagct ccttgttgag 960
ggcaacgtct tcactggcag caagaagccg ctgtacagca ccgatgccgg ctacgccgcc 1020
gtcaacgaca acgacttcgg cggcgctgag aacactgctg aggctggcac cctcactgcc 1080
tctgacctcg gctacaagta taccgctctg aagtcttccg aggtctctgc cgccgtctcc 1140
aagtcggctg gcgccacgct cactttctaa acgaagtcgc gacgctctct cgttttggaa 1200
ctcgccgcaa tgcccgagcc agggttcgga tgcatggaag gaatgcattg tgatggatga 1260
agagcaacat acttttttgg gggggaaaaa gcacagggcg tgctactttt tcatgtacat 1320
<210> 35
<211> 966
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 35
atgaaggcca ccaccctcgc tacttttgct ctttccgccg tgagcgctct ggcagcgccc 60
accaagacct tcgccaagcg tgccgccatc actgacggcc ccgacgtcgg ctatgccacc 120
ctgaacggtg gcaccactgg cggtgctggc ggttccacca ccaccgtctc cagcctggcc 180
cagttcaccg ctgccgccga ggctgatggc gccgccgtca ttgtcgtctc cggcaacatc 240
tctggcgccg ccaaggtccg cgtcggcagc gacaagacca tcatcggcaa ggactccagc 300
gccgtgctcg agggcgtcgg tctctacatc aacaagcaga agaacgtcat cgtccgcaac 360
ctgtccatca agaatgtgct tgcggagaat ggtgacgcca tcggcatcca ggcttcccag 420
aacgtctgga tcgaccactg cgacctgtcc tcggaccgtg accacgacaa ggactactac 480
gacggtctcc tcgacgtgac ccacgcctct gactacatca ccctgtccaa caactacctc 540
catgaccact ggaaggcctc gctcgtcggc cactccgact ccaacggctc tgaggacaag 600
ggccacttga ccgtcaccta ctaccagaac cacttcgaga acctgaactc gcgtggtcct 660
tctttccgct tcggcaccgg tcacattgtc aacaacctct acaccagcgt cagcgacggt 720
atcaacgctc gccagggcgc ccagctcctt gttgagggca acgtcttcac tggcagcaag 780
aagccgctgt acagcaccga tgccggctac gccgccgtca acgacaacga cttcggcggc 840
gctgagaaca ctgctgaggc tggcaccctc actgcctctg acctcggcta caagtatacc 900
gctctgaagt cttccgaggt ctctgccgcc gtctccaagt cggctggcgc cacgctcact 960
ttctaa 966
<210> 36
<211> 321
<212> PRT
<213> M. phaseolina
<400> 36
Met Lys Ala Thr Thr Leu Ala Thr Phe Ala Leu Ser Ala Val Ser Ala
1 5 10 15
Leu Ala Ala Pro Thr Lys Thr Phe Ala Lys Arg Ala Ala Ile Thr Asp
20 25 30
Gly Pro Asp Val Gly Tyr Ala Thr Leu Asn Gly Gly Thr Thr Gly Gly
35 40 45
Ala Gly Gly Ser Thr Thr Thr Val Ser Ser Leu Ala Gln Phe Thr Ala
50 55 60
Ala Ala Glu Ala Asp Gly Ala Ala Val Ile Val Val Ser Gly Asn Ile
65 70 75 80
Ser Gly Ala Ala Lys Val Arg Val Gly Ser Asp Lys Thr Ile Ile Gly
85 90 95
Lys Asp Ser Ser Ala Val Leu Glu Gly Val Gly Leu Tyr Ile Asn Lys
100 105 110
Gln Lys Asn Val Ile Val Arg Asn Leu Ser Ile Lys Asn Val Leu Ala
115 120 125
Glu Asn Gly Asp Ala Ile Gly Ile Gln Ala Ser Gln Asn Val Trp Ile
130 135 140
Asp His Cys Asp Leu Ser Ser Asp Arg Asp His Asp Lys Asp Tyr Tyr
145 150 155 160
Asp Gly Leu Leu Asp Val Thr His Ala Ser Asp Tyr Ile Thr Leu Ser
165 170 175
Asn Asn Tyr Leu His Asp His Trp Lys Ala Ser Leu Val Gly His Ser
180 185 190
Asp Ser Asn Gly Ser Glu Asp Lys Gly His Leu Thr Val Thr Tyr Tyr
195 200 205
Gln Asn His Phe Glu Asn Leu Asn Ser Arg Gly Pro Ser Phe Arg Phe
210 215 220
Gly Thr Gly His Ile Val Asn Asn Leu Tyr Thr Ser Val Ser Asp Gly
225 230 235 240
Ile Asn Ala Arg Gln Gly Ala Gln Leu Leu Val Glu Gly Asn Val Phe
245 250 255
Thr Gly Ser Lys Lys Pro Leu Tyr Ser Thr Asp Ala Gly Tyr Ala Ala
260 265 270
Val Asn Asp Asn Asp Phe Gly Gly Ala Glu Asn Thr Ala Glu Ala Gly
275 280 285
Thr Leu Thr Ala Ser Asp Leu Gly Tyr Lys Tyr Thr Ala Leu Lys Ser
290 295 300
Ser Glu Val Ser Ala Ala Val Ser Lys Ser Ala Gly Ala Thr Leu Thr
305 310 315 320
Phe
<210> 37
<211> 1896
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 37
cagccaatac ggtggcctga aacatactca tattcctata tccaattcca cccagaaaca 60
tatttacacg gcccgtccct tagcccaatt gaccccggaa gcgtctctct ttttccctta 120
cgctcgtttc tttttctccc tgtcatgctg atggcgtcct gtcttcccct ggccctagtg 180
gccttttctt cactttccta tgctcttcag ccctacagtg gcccggcgcc agaccttcct 240
gatcgtaagc cattcggctt cggtgccgcc gccacaggtg gcggtacccc cacgccgaac 300
aatacctacc tggtcgacaa catgcctgat ctgcggaccg ttctaaagat ggagactccc 360
cgcacagttt acgtgaaggg cgagatcaaa ggcaacgaaa tcaacgagac cacgaccggc 420
aattgccaat tctacattga cagcagcaac aactccaagt tcaactttac cctctacatc 480
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ttcgacggac agaacgccac cgagctcctc aatctactcg gccgccagaa cgtgagcttc 600
catgtgcccg gaaaggtttc aaaataacag caacgctaac ccacctcgca gggctggcgc 660
ggccaagtgc aaaacgtgca aaagtcctac gaagccattg acgtggccag caaccttacg 720
cttatcggct gggactcgtc cgcgtacctg aatggcgtca atctcgggtt caactcgcgc 780
tccaacatca tcatgcgcaa cctgcgcatt tcgtcgccgc gtgactgctt cccgtcgccg 840
gaaacctacc ccagcagctg gaacgcgcgt tacgacgccg tgtccatggt gtcgacgacg 900
accgcgtggc tcgacggcaa catcttcgag gacggccccg tcgccgtcgc gcccgacgac 960
ttcgcgggcg ggtggaaggt cgaccggtac gacggcttgt ttgacgccga ggacggcagc 1020
gacgacatca ccttctcgca caacatcgtc accaaccacc acaagagcct gctgtggggc 1080
ggcggcaaca aggaggcgga ccgcgacatc ggcaagatga agttcaccgt cttcggcaac 1140
cgcttcgtcg acagcttgtc gcgcaacccg ctgatgcgct tcggcacctt ctacatcgtc 1200
gccaacgtct tcgagaacta cgccgagcgc gcgccgctgt tcgaggacga cagcgtcgcc 1260
gcgagcgcgg ccgcctcgcg gctcgttcga cgcgcggaca atgccaccac ctacaggccg 1320
gacttccagt acaacatggg catctacaac gccagcaccg tgtacgtcgc ggcgaatgcg 1380
tttgtccaga cgggcaccta tgcggacgat tcgtcgcgcg tcttctcctt ctcggacctt 1440
gcgacgccgg gcctgcccgc gacgctgtgc tcgccggctg atggcgcgaa cgggacggcg 1500
tcggcgtcgt ccctgccgaa gagcgttttc aatggcaggc ctatcgacct tgcgaagaat 1560
gccaagaaca cgtgggcgta tttcctggag agcaagaatg aggacggcga gttcgccgag 1620
ggtgggttcg tgattggatg tgacgggctg gaggagcagg agacgccggt tgcgtttaag 1680
gatggtaacg aggtcgatgc atatgtgcgg aagaatgcag ggcaggtagg gagggcgacg 1740
ccgtaggggt gcaagtggat gccaggctga tggttggtgg tggaatgttt gtggaaccgc 1800
gagcggatag acttggcggg aagtgcctcc tcttggcgga aggtatgcat gtacaatggg 1860
tcaacggtag agatctgcgg cttttccggc ggcggg 1896
<210> 38
<211> 1536
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 38
atggcgtcct gtcttcccct ggccctagtg gccttttctt cactttccta tgctcttcag 60
ccctacagtg gcccggcgcc agaccttcct gatcgtaagc cattcggctt cggtgccgcc 120
gccacaggtg gcggtacccc cacgccgaac aatacctacc tggtcgacaa catgcctgat 180
ctgcggaccg ttctaaagat ggagactccc cgcacagttt acgtgaaggg cgagatcaaa 240
ggcaacgaaa tcaacgagac cacgaccggc aattgccaat tctacattga cagcagcaac 300
aactccaagt tcaactttac cctctacatc cagagctaca acgagaccta catgggccag 360
gttaaggctg cctccgaagc gggccagcta ttcgacggac agaacgccac cgagctcctc 420
aatctactcg gccgccagaa cggctggcgc ggccaagtgc aaaacgtgca aaagtcctac 480
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tcgtcgccgc gtgactgctt cccgtcgccg gaaacctacc ccagcagctg gaacgcgcgt 660
tacgacgccg tgtccatggt gtcgacgacg accgcgtggc tcgacggcaa catcttcgag 720
gacggccccg tcgccgtcgc gcccgacgac ttcgcgggcg ggtggaaggt cgaccggtac 780
gacggcttgt ttgacgccga ggacggcagc gacgacatca ccttctcgca caacatcgtc 840
accaaccacc acaagagcct gctgtggggc ggcggcaaca aggaggcgga ccgcgacatc 900
ggcaagatga agttcaccgt cttcggcaac cgcttcgtcg acagcttgtc gcgcaacccg 960
ctgatgcgct tcggcacctt ctacatcgtc gccaacgtct tcgagaacta cgccgagcgc 1020
gcgccgctgt tcgaggacga cagcgtcgcc gcgagcgcgg ccgcctcgcg gctcgttcga 1080
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gccagcaccg tgtacgtcgc ggcgaatgcg tttgtccaga cgggcaccta tgcggacgat 1200
tcgtcgcgcg tcttctcctt ctcggacctt gcgacgccgg gcctgcccgc gacgctgtgc 1260
tcgccggctg atggcgcgaa cgggacggcg tcggcgtcgt ccctgccgaa gagcgttttc 1320
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agcaagaatg aggacggcga gttcgccgag ggtgggttcg tgattggatg tgacgggctg 1440
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aagaatgcag ggcaggtagg gagggcgacg ccgtag 1536
<210> 39
<211> 511
<212> PRT
<213> M. phaseolina
<400> 39
Met Ala Ser Cys Leu Pro Leu Ala Leu Val Ala Phe Ser Ser Leu Ser
1 5 10 15
Tyr Ala Leu Gln Pro Tyr Ser Gly Pro Ala Pro Asp Leu Pro Asp Arg
20 25 30
Lys Pro Phe Gly Phe Gly Ala Ala Ala Thr Gly Gly Gly Thr Pro Thr
35 40 45
Pro Asn Asn Thr Tyr Leu Val Asp Asn Met Pro Asp Leu Arg Thr Val
50 55 60
Leu Lys Met Glu Thr Pro Arg Thr Val Tyr Val Lys Gly Glu Ile Lys
65 70 75 80
Gly Asn Glu Ile Asn Glu Thr Thr Thr Gly Asn Cys Gln Phe Tyr Ile
85 90 95
Asp Ser Ser Asn Asn Ser Lys Phe Asn Phe Thr Leu Tyr Ile Gln Ser
100 105 110
Tyr Asn Glu Thr Tyr Met Gly Gln Val Lys Ala Ala Ser Glu Ala Gly
115 120 125
Gln Leu Phe Asp Gly Gln Asn Ala Thr Glu Leu Leu Asn Leu Leu Gly
130 135 140
Arg Gln Asn Gly Trp Arg Gly Gln Val Gln Asn Val Gln Lys Ser Tyr
145 150 155 160
Glu Ala Ile Asp Val Ala Ser Asn Leu Thr Leu Ile Gly Trp Asp Ser
165 170 175
Ser Ala Tyr Leu Asn Gly Val Asn Leu Gly Phe Asn Ser Arg Ser Asn
180 185 190
Ile Ile Met Arg Asn Leu Arg Ile Ser Ser Pro Arg Asp Cys Phe Pro
195 200 205
Ser Pro Glu Thr Tyr Pro Ser Ser Trp Asn Ala Arg Tyr Asp Ala Val
210 215 220
Ser Met Val Ser Thr Thr Thr Ala Trp Leu Asp Gly Asn Ile Phe Glu
225 230 235 240
Asp Gly Pro Val Ala Val Ala Pro Asp Asp Phe Ala Gly Gly Trp Lys
245 250 255
Val Asp Arg Tyr Asp Gly Leu Phe Asp Ala Glu Asp Gly Ser Asp Asp
260 265 270
Ile Thr Phe Ser His Asn Ile Val Thr Asn His His Lys Ser Leu Leu
275 280 285
Trp Gly Gly Gly Asn Lys Glu Ala Asp Arg Asp Ile Gly Lys Met Lys
290 295 300
Phe Thr Val Phe Gly Asn Arg Phe Val Asp Ser Leu Ser Arg Asn Pro
305 310 315 320
Leu Met Arg Phe Gly Thr Phe Tyr Ile Val Ala Asn Val Phe Glu Asn
325 330 335
Tyr Ala Glu Arg Ala Pro Leu Phe Glu Asp Asp Ser Val Ala Ala Ser
340 345 350
Ala Ala Ala Ser Arg Leu Val Arg Arg Ala Asp Asn Ala Thr Thr Tyr
355 360 365
Arg Pro Asp Phe Gln Tyr Asn Met Gly Ile Tyr Asn Ala Ser Thr Val
370 375 380
Tyr Val Ala Ala Asn Ala Phe Val Gln Thr Gly Thr Tyr Ala Asp Asp
385 390 395 400
Ser Ser Arg Val Phe Ser Phe Ser Asp Leu Ala Thr Pro Gly Leu Pro
405 410 415
Ala Thr Leu Cys Ser Pro Ala Asp Gly Ala Asn Gly Thr Ala Ser Ala
420 425 430
Ser Ser Leu Pro Lys Ser Val Phe Asn Gly Arg Pro Ile Asp Leu Ala
435 440 445
Lys Asn Ala Lys Asn Thr Trp Ala Tyr Phe Leu Glu Ser Lys Asn Glu
450 455 460
Asp Gly Glu Phe Ala Glu Gly Gly Phe Val Ile Gly Cys Asp Gly Leu
465 470 475 480
Glu Glu Gln Glu Thr Pro Val Ala Phe Lys Asp Gly Asn Glu Val Asp
485 490 495
Ala Tyr Val Arg Lys Asn Ala Gly Gln Val Gly Arg Ala Thr Pro
500 505 510
<210> 40
<211> 1798
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 40
cgggttttgg gaatatctcc gggcttcggt ggaccgtcct atccgtctga gcatgccaat 60
atgttttctt gcctttctgt ccgtatataa aatgccagtc aagaagaatt ctcgtgtttc 120
acacctttct tcatccgatc tcgcctcagt atgcgtgcat cagtctcaat tacggtctcg 180
ctactggcat ttgccctgag ggcgtgcgct gttggtgtgg ttgggagtcc ggagggattt 240
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accaaacaat tgtttaataa gcctaaaact gaccatgtcc aggttcaact tcaagggcac 420
caccaccact gcgacgggct gcagacccac atccaacact tgccccggta atggtggcca 480
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tgactaatgt tcaacgcagg tgcggaagtg ctccggcggt ctccgtgaag tacgacacgg 600
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gtgtcatccg cggaaagggt ctccgtatcg tcagtaaaac taattcttgc tatcagttga 720
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caaaatattc atattaccga tctcaacccg cagtacatct ggggtggaga tgccattacc 840
ctggatggtg ctgatctggt ttgggtggac cacgttaagg gacgtatact cccgaaccct 900
cgctcgagca ttattctgac cttgccaact acagatctct ctcatcggcc gccagatgtt 960
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actggactat tttgcttttg ggctcaaacg acttgatcac aatgaaaggc aactatatcc 1200
accacaccag cggccgtgga cccaagatcg gaggcaacac cctgctccac gccgtaagtt 1260
ccgccccaca aacacccttg cctcaccaat cgcctgctga aacatgctat ttccacaggt 1320
caataatgag tggtacgccg tttcgggcca cgccttcgac ctgggcgagt cgggcgccat 1380
ggccgttgcc gagggcaacg ttttccagaa cgtcgtcacg ccgctgcttt cgcccgtcga 1440
gggccgcatc ttcacggcgc ccagcactag cgccaacacc gcctgcgcga cctaccttgg 1500
ccgcaactgc gtcgtcaacg ccttcggcag cagcggcacc ttctccggaa ccgacaccag 1560
cttcttctcc aacttcaacg gcaagacgat cgcgagtgca gccgccgccg catacaagga 1620
ttcgacagcg ggtgtgggga agatttaagg gcggagcggg tggttttgca tttaggggct 1680
gtgatattgc gttggatgtt ggaatgaggt cagcaaaaga aaatctaaaa tcaacgatca 1740
tgaatgctgg ctggaaggaa attgtttgag aactacttgt gctttttttt tattactg 1798
<210> 41
<211> 1137
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 41
atgcgtgcat cagtctcaat tacggtctcg ctactggcat ttgccctgag ggcgtgcgct 60
gttggtgtgg ttgggagtcc ggagggattt ggctccggga caacaggtgg aggtagtgcc 120
acgccggttt atccttcgac cacgagcgaa ttgcagtcct acttggaaga cgatgttgcc 180
cgagttatcg tcctgaacaa ggagttcaac ttcaagggca ccaccaccac tgcgacgggc 240
tgcagaccca catccaacac ttgccccggt aatggtggcc aagatgcaat taatgccaac 300
ggttggtgcg gaagtgctcc ggcggtctcc gtgaagtacg acacggccgc tattacgccc 360
ataaatctcg gctctaacaa gtctcttatc ggcattggca catctggtgt catccgcgga 420
aagggtctcc gtatcttgat gaaatctctt caggccaacg gagctaaaaa tgtcatcatc 480
caaaatattc atattaccga tctcaacccg cagtacatct ggggtggaga tgccattacc 540
ctggatggtg ctgatctggt ttgggtggac cacatctctc tcatcggccg ccagatgttt 600
gtcgcgggct acggggcatc taacagagta actatcagca acacggagtt cgacggctca 660
acctcctgga gcgcaacttg cgacgggcat cactactgga ctattttgct tttgggctca 720
aacgacttga tcacaatgaa aggcaactat atccaccaca ccagcggccg tggacccaag 780
atcggaggca acaccctgct ccacgccgtc aataatgagt ggtacgccgt ttcgggccac 840
gccttcgacc tgggcgagtc gggcgccatg gccgttgccg agggcaacgt tttccagaac 900
gtcgtcacgc cgctgctttc gcccgtcgag ggccgcatct tcacggcgcc cagcactagc 960
gccaacaccg cctgcgcgac ctaccttggc cgcaactgcg tcgtcaacgc cttcggcagc 1020
agcggcacct tctccggaac cgacaccagc ttcttctcca acttcaacgg caagacgatc 1080
gcgagtgcag ccgccgccgc atacaaggat tcgacagcgg gtgtggggaa gatttaa 1137
<210> 42
<211> 378
<212> PRT
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<400> 42
Met Arg Ala Ser Val Ser Ile Thr Val Ser Leu Leu Ala Phe Ala Leu
1 5 10 15
Arg Ala Cys Ala Val Gly Val Val Gly Ser Pro Glu Gly Phe Gly Ser
20 25 30
Gly Thr Thr Gly Gly Gly Ser Ala Thr Pro Val Tyr Pro Ser Thr Thr
35 40 45
Ser Glu Leu Gln Ser Tyr Leu Glu Asp Asp Val Ala Arg Val Ile Val
50 55 60
Leu Asn Lys Glu Phe Asn Phe Lys Gly Thr Thr Thr Thr Ala Thr Gly
65 70 75 80
Cys Arg Pro Thr Ser Asn Thr Cys Pro Gly Asn Gly Gly Gln Asp Ala
85 90 95
Ile Asn Ala Asn Gly Trp Cys Gly Ser Ala Pro Ala Val Ser Val Lys
100 105 110
Tyr Asp Thr Ala Ala Ile Thr Pro Ile Asn Leu Gly Ser Asn Lys Ser
115 120 125
Leu Ile Gly Ile Gly Thr Ser Gly Val Ile Arg Gly Lys Gly Leu Arg
130 135 140
Ile Leu Met Lys Ser Leu Gln Ala Asn Gly Ala Lys Asn Val Ile Ile
145 150 155 160
Gln Asn Ile His Ile Thr Asp Leu Asn Pro Gln Tyr Ile Trp Gly Gly
165 170 175
Asp Ala Ile Thr Leu Asp Gly Ala Asp Leu Val Trp Val Asp His Ile
180 185 190
Ser Leu Ile Gly Arg Gln Met Phe Val Ala Gly Tyr Gly Ala Ser Asn
195 200 205
Arg Val Thr Ile Ser Asn Thr Glu Phe Asp Gly Ser Thr Ser Trp Ser
210 215 220
Ala Thr Cys Asp Gly His His Tyr Trp Thr Ile Leu Leu Leu Gly Ser
225 230 235 240
Asn Asp Leu Ile Thr Met Lys Gly Asn Tyr Ile His His Thr Ser Gly
245 250 255
Arg Gly Pro Lys Ile Gly Gly Asn Thr Leu Leu His Ala Val Asn Asn
260 265 270
Glu Trp Tyr Ala Val Ser Gly His Ala Phe Asp Leu Gly Glu Ser Gly
275 280 285
Ala Met Ala Val Ala Glu Gly Asn Val Phe Gln Asn Val Val Thr Pro
290 295 300
Leu Leu Ser Pro Val Glu Gly Arg Ile Phe Thr Ala Pro Ser Thr Ser
305 310 315 320
Ala Asn Thr Ala Cys Ala Thr Tyr Leu Gly Arg Asn Cys Val Val Asn
325 330 335
Ala Phe Gly Ser Ser Gly Thr Phe Ser Gly Thr Asp Thr Ser Phe Phe
340 345 350
Ser Asn Phe Asn Gly Lys Thr Ile Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Tyr
355 360 365
Lys Asp Ser Thr Ala Gly Val Gly Lys Ile
370 375
<210> 43
<211> 1631
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 43
ggtggtggtc ttgcacctct tccggtccac tactcacatt aacccgttca atcgttccca 60
cacattcact tatattccaa ctctcacaca ttcgttctgt atcacgcaat caatcttttt 120
gtttttgttt tttgatctat tttagcaaac atgaagctca ctctcttgtc tattgttctc 180
gctcttgccc accagactcg ggccaccagg gttacgggcg ctgccgaagg cttcgccaaa 240
ggcgtcacag ggggtggctc tgctgcccct gtcaccccca aaaatattgt tgagctgacc 300
aaataccttg ccgacgctca gccccgtgtc atcatcttgg acaaggagta agtccgctat 360
cacgggaggg cttcaaccgc tctatctggg ggattttctc cagccgaacg aacgctgaca 420
tctatcttcc tcagattcaa cttcaagggc tcagagggaa ccgtcaagga gatgggctgc 480
cgtcctcgta ccaaatgctc cgagactggc ggtggccaag atgccatcaa ccacgctagc 540
tggtgcacaa acggcaacgc tggtgccggc tccaaagccg tttctgtcac ctatgataga 600
gcgggaaccc tcgccttaaa ggtaaactcc aacaaatcca ttgtcggtgt cggcaacaag 660
ggtgtcatcc gcggcaaggg tctccgtctc gccggcgcta agaacgtcat catccaaaac 720
atccacatta ccgagcttaa ccctcagtac atctggggcg gtgacggcat tcagatcgac 780
ggcgccgaca tggtctggat cgacaggtcc aagatctctc tcgtgggccg gcagatgctt 840
gtccttggca acggcgcgtc cggcagggtc tcggtcacca acaacgaatt cgacggctct 900
actagtatgc tgatctccat agcccccttg atcaccaaac ggctaatcgc tctttccagg 960
ctggtcggct acctgtgacg gtcaccacta ctgggccctc tacttcaccg gttccaacga 1020
catggtcacg ttcaagggta actacatcca ccacacttct ggccggagcc ccaagatcgg 1080
cggtaccacg ctcctccacg ctgtaagatc cccaatgatc cgtgtctcgt gactcgcgct 1140
gattccacgc ccaggtcaac aacgtctggt atgccaactc cggccacgct ttcgagatcc 1200
tcgcgcccaa gtcgaacgcc ctcatcgagg gcaacatctt ccagaacgtc gtccgaccca 1260
tgaaggccag cacgggcaag gtctttgctc cctcttcggt ccaggccgtc tgcaatcgcg 1320
ctcttggccg cgcttgccag gccaactctt tcggctcctc tggccccttg accggcaccg 1380
acagcagctt cctcggtctg ttcaagggca agaaccccgc tactgcttcc gccgccagcc 1440
ccgccatttc tggccgcgct ggtgtcggga agattgccta aatgctggct atgttctggg 1500
ttggacgctt gctgagcaag ctgtcttggc tggttgggtg catgcactca gttgataggc 1560
acaaccaaca atctctggac gtgttatctc acttgtctgg cactgagtgg gaatgattta 1620
tgacagtttt t 1631
<210> 44
<211> 1137
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 44
atgaagctca ctctcttgtc tattgttctc gctcttgccc accagactcg ggccaccagg 60
gttacgggcg ctgccgaagg cttcgccaaa ggcgtcacag ggggtggctc tgctgcccct 120
gtcaccccca aaaatattgt tgagctgacc aaataccttg ccgacgctca gccccgtgtc 180
atcatcttgg acaaggaatt caacttcaag ggctcagagg gaaccgtcaa ggagatgggc 240
tgccgtcctc gtaccaaatg ctccgagact ggcggtggcc aagatgccat caaccacgct 300
agctggtgca caaacggcaa cgctggtgcc ggctccaaag ccgtttctgt cacctatgat 360
agagcgggaa ccctcgcctt aaaggtaaac tccaacaaat ccattgtcgg tgtcggcaac 420
aagggtgtca tccgcggcaa gggtctccgt ctcgccggcg ctaagaacgt catcatccaa 480
aacatccaca ttaccgagct taaccctcag tacatctggg gcggtgacgg cattcagatc 540
gacggcgccg acatggtctg gatcgacagg tccaagatct ctctcgtggg ccggcagatg 600
cttgtccttg gcaacggcgc gtccggcagg gtctcggtca ccaacaacga attcgacggc 660
tctactagct ggtcggctac ctgtgacggt caccactact gggccctcta cttcaccggt 720
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cccttgaccg gcaccgacag cagcttcctc ggtctgttca agggcaagaa ccccgctact 1080
gcttccgccg ccagccccgc catttctggc cgcgctggtg tcgggaagat tgcctaa 1137
<210> 45
<211> 378
<212> PRT
<213> M. phaseolina
<400> 45
Met Lys Leu Thr Leu Leu Ser Ile Val Leu Ala Leu Ala His Gln Thr
1 5 10 15
Arg Ala Thr Arg Val Thr Gly Ala Ala Glu Gly Phe Ala Lys Gly Val
20 25 30
Thr Gly Gly Gly Ser Ala Ala Pro Val Thr Pro Lys Asn Ile Val Glu
35 40 45
Leu Thr Lys Tyr Leu Ala Asp Ala Gln Pro Arg Val Ile Ile Leu Asp
50 55 60
Lys Glu Phe Asn Phe Lys Gly Ser Glu Gly Thr Val Lys Glu Met Gly
65 70 75 80
Cys Arg Pro Arg Thr Lys Cys Ser Glu Thr Gly Gly Gly Gln Asp Ala
85 90 95
Ile Asn His Ala Ser Trp Cys Thr Asn Gly Asn Ala Gly Ala Gly Ser
100 105 110
Lys Ala Val Ser Val Thr Tyr Asp Arg Ala Gly Thr Leu Ala Leu Lys
115 120 125
Val Asn Ser Asn Lys Ser Ile Val Gly Val Gly Asn Lys Gly Val Ile
130 135 140
Arg Gly Lys Gly Leu Arg Leu Ala Gly Ala Lys Asn Val Ile Ile Gln
145 150 155 160
Asn Ile His Ile Thr Glu Leu Asn Pro Gln Tyr Ile Trp Gly Gly Asp
165 170 175
Gly Ile Gln Ile Asp Gly Ala Asp Met Val Trp Ile Asp Arg Ser Lys
180 185 190
Ile Ser Leu Val Gly Arg Gln Met Leu Val Leu Gly Asn Gly Ala Ser
195 200 205
Gly Arg Val Ser Val Thr Asn Asn Glu Phe Asp Gly Ser Thr Ser Trp
210 215 220
Ser Ala Thr Cys Asp Gly His His Tyr Trp Ala Leu Tyr Phe Thr Gly
225 230 235 240
Ser Asn Asp Met Val Thr Phe Lys Gly Asn Tyr Ile His His Thr Ser
245 250 255
Gly Arg Ser Pro Lys Ile Gly Gly Thr Thr Leu Leu His Ala Val Asn
260 265 270
Asn Val Trp Tyr Ala Asn Ser Gly His Ala Phe Glu Ile Leu Ala Pro
275 280 285
Lys Ser Asn Ala Leu Ile Glu Gly Asn Ile Phe Gln Asn Val Val Arg
290 295 300
Pro Met Lys Ala Ser Thr Gly Lys Val Phe Ala Pro Ser Ser Val Gln
305 310 315 320
Ala Val Cys Asn Arg Ala Leu Gly Arg Ala Cys Gln Ala Asn Ser Phe
325 330 335
Gly Ser Ser Gly Pro Leu Thr Gly Thr Asp Ser Ser Phe Leu Gly Leu
340 345 350
Phe Lys Gly Lys Asn Pro Ala Thr Ala Ser Ala Ala Ser Pro Ala Ile
355 360 365
Ser Gly Arg Ala Gly Val Gly Lys Ile Ala
370 375
<210> 46
<211> 1573
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 46
cggatgccgt gcagctgtca aagtcatgat aaaagtcccc actcccaggt acataatgtg 60
atcggtagtt ctgcgctctc ctttccaacg gttgtccctt gagcttcccg tgccatggta 120
gccttttctt cccttacgtc tggcaatgcc atggcgtccc tcctgtctct atccgtcctt 180
tcagcttttc ttgcttcacc gacacttgca tacagtcgtg ctgaatgcca ggctccatct 240
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acggctaaca acagcacctc ctttacctct gtccaatcag ctatcctttc cctcggcaac 360
accaccacac ccgccaccat cctcattctt cccggcacct atgttgagca agtcaatatc 420
acccgcccgg gaccagtgac gctcctcggg cagacttcat ccccgaacaa ttcctccacc 480
aacggcgtta agatcctctg gcgtcaggcc actggcaact cggtcaacac cttcgacaac 540
gcctatacct ctgtcctcac tgtcgcgccg accctcgaga gcagcctaac aggcagcggg 600
cccaccggat acgccgtccc cgccggcacg cccttcggca acgaggactt ccgcgcatac 660
aacgtcgact tcgtcaacga ctacgcgccc tactcggccg gcccggcact cgccattagc 720
atcagctacg ccaacgcggg cttctacttc tgcggcttct acagctatca ggacaccgta 780
agtgtcatct ccactcgtcc actacacgca acaaacaaac atgcatccga gaatcccttt 840
tccccaccaa ctaacgccaa accgcaaggt ctacatcggc aagctcggca acgcctactt 900
ctacgactcc atcatcgccg gccaaaccga cttcctctac ggcttcggca ccgcctggat 960
ccagtcatcg cagctctctc tccgctcctg cggcggcggc atcaccgcct ggaagggcac 1020
caatacgtcc ttccccaacg cctacggcgt ctacatccac gacagcgtcg tcgagaaggc 1080
caacgcctcg ctctccatcg ccgggctctg cgccctcggc aggccctgga atgcgcagca 1140
tcgctccatc ttcgcgaaca cgtggctcga tgacagcatc aagccgagcg ggtacatcat 1200
ctgggggagc acggatccga ggaccaacaa ttacacgttt atggcggagt atgaggactt 1260
tgggccgggt tggaatgaga ccgggaggag ggcggcgaat attacgaagg tgttgacgga 1320
ggccgagtat gagccgtatg acagtctgga gaaggtgttc cagtatccgt tcagtggcga 1380
gttcgggaac gtggggtgga tcgatgagag tccggaggct tgagccggtg gggatagtgt 1440
ggattgtggt ggccagcggc gtagacgagg cggatctggt aagaactgcg tagcatgaat 1500
gaaattcgtt tgtacatacg tctttatatc gagcagcgct tatgcaagtt aaatgacgcc 1560
gtatttgcat gcg 1573
<210> 47
<211> 1182
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 47
atggcgtccc tcctgtctct atccgtcctt tcagcttttc ttgcttcacc gacacttgca 60
tacagtcgtg ctgaatgcca ggctccatct gccgaccccc tggcgggctg cgtacccgga 120
acgctgctcg tcagtccaaa cagcaccgtg acggctaaca acagcacctc ctttacctct 180
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cccggcacct atgttgagca agtcaatatc acccgcccgg gaccagtgac gctcctcggg 300
cagacttcat ccccgaacaa ttcctccacc aacggcgtta agatcctctg gcgtcaggcc 360
actggcaact cggtcaacac cttcgacaac gcctatacct ctgtcctcac tgtcgcgccg 420
accctcgaga gcagcctaac aggcagcggg cccaccggat acgccgtccc cgccggcacg 480
cccttcggca acgaggactt ccgcgcatac aacgtcgact tcgtcaacga ctacgcgccc 540
tactcggccg gcccggcact cgccattagc atcagctacg ccaacgcggg cttctacttc 600
tgcggcttct acagctatca ggacaccgtc tacatcggca agctcggcaa cgcctacttc 660
tacgactcca tcatcgccgg ccaaaccgac ttcctctacg gcttcggcac cgcctggatc 720
cagtcatcgc agctctctct ccgctcctgc ggcggcggca tcaccgcctg gaagggcacc 780
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<210> 48
<211> 393
<212> PRT
<213> M. phaseolina
<400> 48
Met Ala Ser Leu Leu Ser Leu Ser Val Leu Ser Ala Phe Leu Ala Ser
1 5 10 15
Pro Thr Leu Ala Tyr Ser Arg Ala Glu Cys Gln Ala Pro Ser Ala Asp
20 25 30
Pro Leu Ala Gly Cys Val Pro Gly Thr Leu Leu Val Ser Pro Asn Ser
35 40 45
Thr Val Thr Ala Asn Asn Ser Thr Ser Phe Thr Ser Val Gln Ser Ala
50 55 60
Ile Leu Ser Leu Gly Asn Thr Thr Thr Pro Ala Thr Ile Leu Ile Leu
65 70 75 80
Pro Gly Thr Tyr Val Glu Gln Val Asn Ile Thr Arg Pro Gly Pro Val
85 90 95
Thr Leu Leu Gly Gln Thr Ser Ser Pro Asn Asn Ser Ser Thr Asn Gly
100 105 110
Val Lys Ile Leu Trp Arg Gln Ala Thr Gly Asn Ser Val Asn Thr Phe
115 120 125
Asp Asn Ala Tyr Thr Ser Val Leu Thr Val Ala Pro Thr Leu Glu Ser
130 135 140
Ser Leu Thr Gly Ser Gly Pro Thr Gly Tyr Ala Val Pro Ala Gly Thr
145 150 155 160
Pro Phe Gly Asn Glu Asp Phe Arg Ala Tyr Asn Val Asp Phe Val Asn
165 170 175
Asp Tyr Ala Pro Tyr Ser Ala Gly Pro Ala Leu Ala Ile Ser Ile Ser
180 185 190
Tyr Ala Asn Ala Gly Phe Tyr Phe Cys Gly Phe Tyr Ser Tyr Gln Asp
195 200 205
Thr Val Tyr Ile Gly Lys Leu Gly Asn Ala Tyr Phe Tyr Asp Ser Ile
210 215 220
Ile Ala Gly Gln Thr Asp Phe Leu Tyr Gly Phe Gly Thr Ala Trp Ile
225 230 235 240
Gln Ser Ser Gln Leu Ser Leu Arg Ser Cys Gly Gly Gly Ile Thr Ala
245 250 255
Trp Lys Gly Thr Asn Thr Ser Phe Pro Asn Ala Tyr Gly Val Tyr Ile
260 265 270
His Asp Ser Val Val Glu Lys Ala Asn Ala Ser Leu Ser Ile Ala Gly
275 280 285
Leu Cys Ala Leu Gly Arg Pro Trp Asn Ala Gln His Arg Ser Ile Phe
290 295 300
Ala Asn Thr Trp Leu Asp Asp Ser Ile Lys Pro Ser Gly Tyr Ile Ile
305 310 315 320
Trp Gly Ser Thr Asp Pro Arg Thr Asn Asn Tyr Thr Phe Met Ala Glu
325 330 335
Tyr Glu Asp Phe Gly Pro Gly Trp Asn Glu Thr Gly Arg Arg Ala Ala
340 345 350
Asn Ile Thr Lys Val Leu Thr Glu Ala Glu Tyr Glu Pro Tyr Asp Ser
355 360 365
Leu Glu Lys Val Phe Gln Tyr Pro Phe Ser Gly Glu Phe Gly Asn Val
370 375 380
Gly Trp Ile Asp Glu Ser Pro Glu Ala
385 390
<210> 49
<211> 1330
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 49
tcaggctcgt atgccttgtc cttcatttgc ttgcactcta gggctggcta agacctcctt 60
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ggccccattt ccatttatgg acaagcctcg gatgacagct cataccacac caatactgtc 420
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cgcgctcact ctcccgattt caacttgtac aacgtgaatg tggagaacac ctacggcaaa 540
gggagccagg ccgtcgctgt ctcggcctac ggtaccgagc aggcatacta cggctgcaag 600
ctcacgggct tccaagacac cctcctcacc cagagaggca ggcactactt cgtaaacacc 660
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cctgcgcgtc cccgcggcca agcagggatg ggtcaccgcg agcggccgca acacgaccaa 840
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gacgcgggcc agcttttcgc agcagctggc ggagccggtg gacatcacgg aggtgctagg 1140
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cgcggtacga acgcctttgc cgtaattaga taatcccagg aagacggaga gaatgattat 1260
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cgcctgcatg 1330
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<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 50
atgcatagtt cttccatcct tttcagcctt ttcggctccg cactcgctct gacatctcca 60
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aaccttagca acgacctcac ggccaccctc cgcgctcact ctcccgattt caacttgtac 360
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<213> M. phaseolina
<400> 51
Met His Ser Ser Ser Ile Leu Phe Ser Leu Phe Gly Ser Ala Leu Ala
1 5 10 15
Leu Thr Ser Pro Pro Pro Gly Ala Leu Thr Val Gly Gly Ser Glu Gly
20 25 30
Lys Phe Ser Thr Val Gln Ala Ala Val Asp Ala Leu Gln Asn Thr Thr
35 40 45
Ala Arg Gln Ser Ile Phe Ile Tyr Ser Gly Thr Tyr Glu Glu Gln Val
50 55 60
Tyr Ile Ala Lys His Asn Gly Pro Ile Ser Ile Tyr Gly Gln Ala Ser
65 70 75 80
Asp Asp Ser Ser Tyr His Thr Asn Thr Val Thr Leu Ser Phe Gly Leu
85 90 95
Ser Gln Ala Phe Asn Leu Ser Asn Asp Leu Thr Ala Thr Leu Arg Ala
100 105 110
His Ser Pro Asp Phe Asn Leu Tyr Asn Val Asn Val Glu Asn Thr Tyr
115 120 125
Gly Lys Gly Ser Gln Ala Val Ala Val Ser Ala Tyr Gly Thr Glu Gln
130 135 140
Ala Tyr Tyr Gly Cys Lys Leu Thr Gly Phe Gln Asp Thr Leu Leu Thr
145 150 155 160
Gln Arg Gly Arg His Tyr Phe Val Asn Thr Tyr Ile Glu Gly Ala Thr
165 170 175
Asp Phe Ile Phe Gly Gln Tyr Ser Ala Ala Trp Phe Glu Asn Cys Asp
180 185 190
Leu Arg Val Pro Ala Ala Lys Gln Gly Trp Val Thr Ala Ser Gly Arg
195 200 205
Asn Thr Thr Asn Asp Gly Trp Tyr Val Ile Asn Gly Gly Ser Val Gln
210 215 220
Ala Ala Pro Gly Gln Asn Val Thr Ala Gly Ala Tyr Phe Leu Gly Arg
225 230 235 240
Pro Trp Arg Ser Phe Ala Arg Ala Val Phe Gln Asn Val Tyr Leu Ser
245 250 255
Glu Val Ile Asn Pro Ala Gly Trp Ala Ile Trp Ser Thr Ser Thr Pro
260 265 270
Asn Thr Gly Asn Val Thr Phe Ala Glu Tyr Asn Asn Thr Gly Pro Gly
275 280 285
Ala Ser Asn Gly Thr Arg Ala Ser Phe Ser Gln Gln Leu Ala Glu Pro
290 295 300
Val Asp Ile Thr Glu Val Leu Gly Ser Asn Tyr Thr Leu Trp Ile Asp
305 310 315 320
Pro Lys Phe Leu
<210> 52
<211> 7706
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 52
gctgcttctc tgagcggctc caagaacgcc ttttacaact gccaattcat ctccgccggc 60
gatttaggaa tatcctcgtc caccggtacc acgttcgtct acaattcgta catcgaagcg 120
cgttctaagc tcatctacaa tacgcctaac atgtacattt acggctcaac tctcacgcct 180
acggcgagca acgcactctt ggtttataac aagggcgtgt cttctggcac ggtggtgacc 240
accaactcca ccgttgtctt cgactcctgc accgtcactc cgaagccggg caccactgtg 300
accggtattt cccttgccgc agcgaacggt gttgggtcaa ttgtggtcta tagaaactcc 360
gtcctgccag gcttcattct cagcaccggt attcacgttg acgccaagac ccaggcagca 420
cagaacttct acggcgagtt cggtaacaca ggtgccggat cctactcttc caactccgcc 480
gcgagggcct cctacgtgaa gagcctgagc gtcgatcagc tttctcaatt ctccgttgat 540
caagtgttcg gcaccgcaaa cactaactgg atcgactctt cagtcatctc cctcgtccag 600
gattcggatg catctcaagc ggcaaaggcg accacggcag gtgtggtgtc atacactact 660
acgtcttcct cttcaagtac tacaagctct gtactgtcga gcagcttggt caccgcatcg 720
ggcagctccg tgtccacatc atcaagctcg gtgtcgtcta cgtcttcaac ctccgcctct 780
gccagtgacg cgccttcgct ttccagcagt gctgctctcg cttcatcagt acctggatct 840
tcctccaaca ctacagtgac caccagcggc acagcaagct caagctctgt cactggttcc 900
tcgttcgcac tgtccactag ctcgatctcc tccagcgtga gcactccggg ggacacagcg 960
agctccaccg ccgctgcgtc taattcgact tcgagttgcg ctcttccttc ctcagtgccc 1020
accactgctc gcgtcgtggg tccggctggg tcctgcgcca actacaccag catcgccgat 1080
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acctataccg agcagatcat tttcagccgt gtaggtccca ccgtcttccg cggcgagaca 1200
tcaagcgagc tcgatcagtc cagcaacaaa gtgactatca agtcttctac tggtgtgccc 1260
tccagtagcg ggggatcttc cagtaccgcc ccgttccagg cgactcagta ctacagcaag 1320
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gcggttgcat tgtccagcaa agctttgaag gcctattatt acaactgcgg gatcacttcc 1440
tctcaaggag ctctgctgct caacttcggc gcccacttct tctcgggctg caagattacc 1500
ggtaccaccg acatcgtctg gggccaaggt ggcgcttaca tctacaattc gaagatcgtt 1560
agcaccggaa ccacgactgg tcagtctctc tccgcacagt cgtaccagtc acaatacaat 1620
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tccagcactt ctgctgctgc aactgcggcc aacaccctca ttgtctcaac cacgcctgcc 2100
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tacccgcaga cgaagaacac ggctgcgctt gcggctgact tctacggtac caatatggct 2460
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<210> 53
<211> 5895
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<213> M. phaseolina
<400> 53
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accacggcag gtgtggtgtc atacactact acgtcttcct cttcaagtac tacaagctct 540
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<211> 1964
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<213> M. phaseolina
<400> 54
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1 5 10 15
Leu Val Tyr Asn Lys Gly Val Ser Ser Gly Thr Val Val Thr Thr Asn
20 25 30
Ser Thr Val Val Phe Asp Ser Cys Thr Val Thr Pro Lys Pro Gly Thr
35 40 45
Thr Val Thr Gly Ile Ser Leu Ala Ala Ala Asn Gly Val Gly Ser Ile
50 55 60
Val Val Tyr Arg Asn Ser Val Leu Pro Gly Phe Ile Leu Ser Thr Gly
65 70 75 80
Ile His Val Asp Ala Lys Thr Gln Ala Ala Gln Asn Phe Tyr Gly Glu
85 90 95
Phe Gly Asn Thr Gly Ala Gly Ser Tyr Ser Ser Asn Ser Ala Ala Arg
100 105 110
Ala Ser Tyr Val Lys Ser Leu Ser Val Asp Gln Leu Ser Gln Phe Ser
115 120 125
Val Asp Gln Val Phe Gly Thr Ala Asn Thr Asn Trp Ile Asp Ser Ser
130 135 140
Val Ile Ser Leu Val Gln Asp Ser Asp Ala Ser Gln Ala Ala Lys Ala
145 150 155 160
Thr Thr Ala Gly Val Val Ser Tyr Thr Thr Thr Ser Ser Ser Ser Ser
165 170 175
Thr Thr Ser Ser Val Leu Ser Ser Ser Leu Val Thr Ala Ser Gly Ser
180 185 190
Ser Val Ser Thr Ser Ser Ser Ser Val Ser Ser Thr Ser Ser Thr Ser
195 200 205
Ala Ser Ala Ser Asp Ala Pro Ser Leu Ser Ser Ser Ala Ala Leu Ala
210 215 220
Ser Ser Val Pro Gly Ser Ser Ser Asn Thr Thr Val Thr Thr Ser Gly
225 230 235 240
Thr Ala Ser Ser Ser Ser Val Thr Gly Ser Ser Phe Ala Leu Ser Thr
245 250 255
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Val Ser Thr Pro Gly Asp Thr Ala Ser Ser
260 265 270
Thr Ala Ala Ala Ser Asn Ser Thr Ser Ser Cys Ala Leu Pro Ser Ser
275 280 285
Val Pro Thr Thr Ala Arg Val Val Gly Pro Ala Gly Ser Cys Ala Asn
290 295 300
Tyr Thr Ser Ile Ala Asp Ala Val Lys Asp Leu Ser Thr Asp Gln Ser
305 310 315 320
Lys Thr Glu Tyr Val Tyr Ile Leu Ala Gly Thr Tyr Thr Glu Gln Ile
325 330 335
Ile Phe Ser Arg Val Gly Pro Thr Val Phe Arg Gly Glu Thr Ser Ser
340 345 350
Glu Leu Asp Gln Ser Ser Asn Lys Val Thr Ile Lys Ser Ser Thr Gly
355 360 365
Val Pro Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ser Ser Thr Ala Pro Phe Gln Ala
370 375 380
Thr Gln Tyr Tyr Ser Lys Ser Ile Ser Phe Tyr Asn Ile Asn Phe Glu
385 390 395 400
Asn Thr Tyr Ala Ala Ala Thr Gly Tyr Asn Ala Val Ala Leu Ser Ser
405 410 415
Lys Ala Leu Lys Ala Tyr Tyr Tyr Asn Cys Gly Ile Thr Ser Ser Gln
420 425 430
Gly Ala Leu Leu Leu Asn Phe Gly Ala His Phe Phe Ser Gly Cys Lys
435 440 445
Ile Thr Gly Thr Thr Asp Ile Val Trp Gly Gln Gly Gly Ala Tyr Ile
450 455 460
Tyr Asn Ser Lys Ile Val Ser Thr Gly Thr Thr Thr Gly Gln Ser Leu
465 470 475 480
Ser Ala Gln Ser Tyr Gln Ser Gln Tyr Asn Pro Ser Gln Phe Val Phe
485 490 495
Asp Thr Cys Ala Phe Val Pro Asn Asp Ser Thr Val Pro Lys Ala Ser
500 505 510
Thr Tyr Leu Gly Arg Asp Tyr Thr Ala Ser Ala Arg Val Ala Val Ile
515 520 525
Asn Ser Tyr Leu Asp Ala His Ile Thr Pro Val Gly Trp Leu Ile Ala
530 535 540
Ser Lys Thr Thr Asn Val Thr Phe Val Glu Ala Ser Asn Ser Gly Pro
545 550 555 560
Gly Ala Ser Thr Ala Ser Arg Val Ser Gln Ile Val Thr Asp Thr Ser
565 570 575
Ala Tyr Ala Ala Asn Asn Val Leu Gly Ser Leu Ser Ile Asp Thr Ala
580 585 590
Ala Val Ala Pro Val Ala Ala Phe Pro Asp Ser Val Tyr Gly Ser Pro
595 600 605
Leu Ser Pro Ser Ser Ser Thr Val Leu Ala Asn Ser Thr Thr Ala Thr
610 615 620
Ser Val Ser Ala Ser Thr Ser Ser Thr Ser Ala Ala Ala Thr Ala Ala
625 630 635 640
Asn Thr Leu Ile Val Ser Thr Thr Pro Ala Ser Gly Glu Tyr Gly Asn
645 650 655
Val Thr Ala Ala Ile Ala Ala Leu Pro Asn Asp Ser Lys Glu Tyr Thr
660 665 670
Ile Tyr Ile Arg Ala Gly Thr Tyr Gln Glu Gln Phe Thr Ile Val Arg
675 680 685
Asn Gly Lys Val Thr Leu Arg Gly Glu Thr Ala Phe Pro Asn Asp Phe
690 695 700
Ser Gln Asn Gln Val Thr Ile Gln Phe Ser Tyr Gly Val Leu Thr Ser
705 710 715 720
Ala Gly Gln Asn Glu Leu Thr Pro Val Ile Asn Ala Lys Lys Asn Asp
725 730 735
Gly Ser Gly Leu Ala Leu Tyr Asn Ile Asn Phe Ile Asn Thr Tyr Pro
740 745 750
Gln Thr Lys Asn Thr Ala Ala Leu Ala Ala Asp Phe Tyr Gly Thr Asn
755 760 765
Met Ala Ala Tyr Gly Cys Lys Phe Val Gly Tyr Gln Asp Thr Leu Leu
770 775 780
Ala Asn Lys Gly Thr Gln Val Phe Ser Asn Ser Tyr Ile Glu Gly Ser
785 790 795 800
Ile Asp Tyr Ile Trp Gly Phe Ser Thr Ala Tyr Phe His Gln Cys Tyr
805 810 815
Ile Ala Ser Asn Thr Ala Gly Gly Tyr Ile Ser Ala Met Ser Arg Ala
820 825 830
Ser Ala Ser Ala Thr Gly Gly Tyr Val Phe Asp Ser Cys Tyr Val Thr
835 840 845
Tyr Thr Ser Thr Tyr Gly Ser Thr Phe Gly Thr Ser Tyr Leu Gly Arg
850 855 860
Pro Tyr Ser Ser Tyr Ser Ile Ala Val Tyr Met Asn Ser Phe Ile Asp
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Lys His Ile Ser Pro Ala Gly Trp Ala Val Trp Gln Thr Ser Asn Pro
885 890 895
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965 970 975
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980 985 990
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1010 1015 1020
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1025 1030 1035
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1040 1045 1050
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1055 1060 1065
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1070 1075 1080
Gly His Ser Asp Ala Glu Thr Ala Thr Phe Ser Thr Thr Ser Asn
1085 1090 1095
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Gly Ser Arg Ile Ala Phe Tyr Gly Cys Ser Phe Ile Gly Trp Gln
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Ser Cys Tyr Ile Asp Gly Ala Ile Asp Phe Ile Trp Gly Tyr Ser
1160 1165 1170
Lys Ala Tyr Phe Lys Gly Cys Thr Ile Gly Ala Lys Arg Gln Lys
1175 1180 1185
Ser Ala Ile Thr Ala His Ser Arg Ala Ser Ser Ser Ala Val Gly
1190 1195 1200
Gly Tyr Ile Phe Asp Gln Cys Leu Phe Thr Ala Ala Ser Ser Ala
1205 1210 1215
Thr Val Asp Leu Thr Gln Ser Val Tyr Leu Gly Arg Pro Tyr Ser
1220 1225 1230
Lys Tyr Ala Leu Val Val Val Lys Asn Ser Tyr Leu Asp Lys Thr
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Ile Gln Pro Ala Gly Trp Lys Ile Trp Ser Ala Thr Asp Pro Arg
1250 1255 1260
Thr Asp Tyr Val Thr Phe Ala Glu Phe Asn Asn Ser Gly Pro Gly
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Asn Trp Glu Asn Asn Ala Ala Ala Arg Thr Ala Phe Gly Tyr Cys
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Ser Pro Ser Asp Trp Ile Asp Met Thr Tyr Trp Asp Ser Ile Thr
1310 1315 1320
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1340 1345 1350
Ala Leu Ile Val Ser Lys Thr Ala Ile Glu Gly Val Thr Thr Tyr
1355 1360 1365
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1370 1375 1380
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1385 1390 1395
Leu Val Leu Ser Lys Ser Gly Thr Thr Val Phe Ile Gly Tyr Ser
1400 1405 1410
Asn Ser Thr Asp Asp Tyr Leu Gln Asn Gln Val Thr Ile Asp Phe
1415 1420 1425
Asn Lys Gly Ile Asp Thr Gln Ala Asp Ala Ser Asn Ser Asp Ser
1430 1435 1440
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1445 1450 1455
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1925 1930 1935
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1940 1945 1950
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1955 1960
<210> 55
<211> 1281
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 55
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accatcagcg cgggcaagtc gcaggccgac ggcctctcca acgacggcac cgccaccctc 480
gccgtccaca cgggcaacat caaggtctac aacatcaacg tcgccaacac gtacggctcc 540
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<212> DNA
<213> M. phaseolina
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<213> M. phaseolina
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Leu Thr Ser Pro Pro Ser Gly Ala Leu Thr Val Gly Ser Ser Gly Lys
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Gly Ser Gly Ser Gln Ala Val Ala Leu Ser Ala Tyr Ala Ser Gly Asn
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Ala Gln Glu Gly Lys Gln Val Tyr Ala Asn Ser Tyr Ile Glu Gly Ala
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195 200 205
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Val Ala Ala Ala Asp Gly Ala Thr Val Lys Ser Gly Gly Ile Tyr Leu
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Gly Arg Pro Trp Arg Asn Tyr Ala Arg Val Val Phe Gln Glu Thr Ser
245 250 255
Leu Ser Asn Ile Ile Asn Ser Ala Gly Trp Val Gln Trp Gly Ser Ser
260 265 270
Asp Pro Arg Thr Asp Asn Val Asn Phe Ala Glu Tyr Lys Asn Ser Gly
275 280 285
Ala Gly Ala Ser Thr Ser Gly Arg Ala Ser Phe Ser Lys Gln Leu Ser
290 295 300
Ser Pro Val Ser Ile Ser Glu Val Leu Gly Ser Asn Tyr Ala Asp Trp
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325
<210> 58
<211> 1943
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 58
ctatatttcc atttttggga acgtacgcgt acgccttctg tggggcccct tactcccgga 60
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<210> 59
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<212> DNA
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<400> 59
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cagaaatacc agtatgcctc gaaaggatcc cacattagct caggccttgg ctcggctgat 240
gtgacggcag agactattga tgatgtaatc aaggtcactt gcacaaccga cacactgatc 300
cactactatg tcgtcaaatc cggagagagc aacgtctaca tggctacgta cacttcagct 360
gagccttcag tgggagagct gcgctacatc gcacgacttg atccttcgct gcttccatat 420
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Met Met Leu Ser Asn Val Ile Val Gly Leu Leu Ala Ala Ala Tyr Gly
1 5 10 15
Lys Pro Val Leu Ala Ala Phe Gly Leu Thr Asp Asn Gly Asp Ser Tyr
20 25 30
Thr Ile Asp Ala Gly Ser Thr Asn Pro Leu Val Ile Thr Val Asp Ser
35 40 45
Ser Asn Cys Asp Ile Thr Ser Phe Val Tyr Arg Ser Gln Lys Tyr Gln
50 55 60
Tyr Ala Ser Lys Gly Ser His Ile Ser Ser Gly Leu Gly Ser Ala Asp
65 70 75 80
Val Thr Ala Glu Thr Ile Asp Asp Val Ile Lys Val Thr Cys Thr Thr
85 90 95
Asp Thr Leu Ile His Tyr Tyr Val Val Lys Ser Gly Glu Ser Asn Val
100 105 110
Tyr Met Ala Thr Tyr Thr Ser Ala Glu Pro Ser Val Gly Glu Leu Arg
115 120 125
Tyr Ile Ala Arg Leu Asp Pro Ser Leu Leu Pro Tyr Glu Tyr Pro Phe
130 135 140
Gly Asp Val Ser Thr Thr Ala Asp Ser Thr Ser Thr Val Glu Gly Ser
145 150 155 160
Asp Val Phe Ile Val Asp Gly Glu Thr Arg Ser Lys Phe Tyr Ser Ser
165 170 175
Gln Arg Phe Ile Asp Asp Asp Val His Cys Val Tyr Ser Asp Asp Val
180 185 190
His Ala Cys Met Leu Met Pro Gln Tyr Glu Thr Ser Ser Gly Gly Pro
195 200 205
Phe His Arg Asp Ile Asn Thr Asn Asn Ala Gly Asp Ser Thr Asn Leu
210 215 220
Tyr Trp Tyr Met Asn Ser Gly His Val Gln Thr Glu Ala Phe Arg Met
225 230 235 240
Gly Leu His Gly Pro Tyr Ala Leu Thr Trp Ser Arg Ser Gly Val Pro
245 250 255
Ser Leu Ser Gly Leu Asp Phe Ser Phe Met Ala Asp Leu Asp Leu Glu
260 265 270
Gly Tyr Val Ala Asp Ser Gly Arg Gly Thr Val Ser Gly Thr Ala Ser
275 280 285
Gly Val Ser Ser Asp Tyr Glu Val Val Val His Trp Tyr Asn Asp Asp
290 295 300
Ala Gln Tyr Trp Thr Tyr Ala Ser Ser Ser Gly Ala Phe Thr Ser Pro
305 310 315 320
Ala Met Lys Pro Gly Thr Tyr Thr Met Ala Leu Tyr Gln Thr Glu Leu
325 330 335
Lys Val Ala Thr Ser Ser Val Thr Val Lys Ala Gly Ser Ala Thr Ser
340 345 350
Ala Asn Ile Ala Ser Thr Trp Ser Ser Asn Thr Thr Leu Phe Gln Ile
355 360 365
Gly Asp Trp Asp Gly Gln Pro Thr Gly Phe Leu Asn Ala Ala Ser Gln
370 375 380
Leu Arg Met His Pro Ser Asp Ser Arg Met Ala Asp Trp Gly Pro Val
385 390 395 400
Thr Tyr Thr Val Gly Ser Ser Ser Asp Ser Ser Val Pro Met Ala Leu
405 410 415
Phe Lys Asp Val Asn Asp Pro Leu Thr Ile Ser Phe Thr Leu Ala Ser
420 425 430
Ser Gln Ala Ser Gly Ala Ala Thr Leu Arg Val Gly Thr Thr Leu Ser
435 440 445
Phe Ala Gly Gly Arg Pro Ser Val Thr Val Asn Asp Tyr Ser Asp Ser
450 455 460
Ala Ala Ala Pro Thr Lys Ile Asp Ser Arg Gly Val Thr Arg Gly Ala
465 470 475 480
Tyr Arg Gly Tyr Gly Glu Ile Tyr Asp Phe Glu Leu Pro Asp Gly Thr
485 490 495
Leu Ser Thr Ser Asn Thr Ile Thr Ile Ser Val Ile Ser Gly Ser Ser
500 505 510
Gly Ala Asp Phe Leu Glu Pro Asn Phe Val Ser Ser Arg Ile Pro Leu
515 520 525
Gly His
530
<210> 61
<211> 2009
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 61
tcgctgatcg tcttggatat gcgcctggca gtgcattcgc gccggggact acaaaagcag 60
gggacgcatg ccacaacaga attggctttt cttgtcactg cacttcctgc cgctccaagt 120
ccccccctcg cgtttgaggg aaccgccaca atggctctct ttgctctgtt tctgaccttt 180
atctctcttt tcgcaccgtc ggtgctggcc gcctttggag tgactacatc ctcttccagc 240
tatgttgtcg atgccggctc atccaacccc ttcgttgtta ccatttcgcg cagcagttgc 300
gacattacct cgatcaagta ccgtggagag gaattccagt actccggcaa gggttcgcac 360
atctcgtccg gccttggatc tgcgaccgta acgtcagaga tcgtcagcag tgagcgtctc 420
ttgcaacccg tcatacgccc ctcaggctaa caatcgacag gcacttatgc caagatcacc 480
tgcacggctg gcagcttgac ccattacatt attgtcaagt ccggagagag ctctttgtac 540
atgggcactt acttcactga ggagccctcg attggtgaag cccgtttcat cgctcgcttg 600
gacccggcca agctccctct cgaatacccc tacggcactg cctccactac tgctgggagc 660
agcagcaccg tcgagggatc cgacgtcttt gttgtgaatg gccagacccg cagcaagttc 720
tactctagcc aacgtttcat cgacgacaag gtgcagtgcg tgtaccgcga tgatgatgct 780
gtccacgctt gcatgatctt gcagcctctc tcctacgagg gatccagcgg cggtcccttc 840
ttcagggaca tcaacaccaa caacgccggt gactcgacca acctgtactt ctacatgaac 900
tccaaccatg ctcagactga gagttaccgt atgggcttcc acggcccgta ccagttgcag 960
ttcagccgct ctggtattcc caacagcttt gacgcttcgt tcttcgccga cctcaagctc 1020
tccggctacg ttgctgagtc tgctcgtggc tacgtcaagg gtactgcttc tggagttggt 1080
agctcttacc agaaagtcct tcattggtac aacagcaacg cgcagtactg ggtctatgcc 1140
tcgtctaacg gtgcctttac ttctcctgcc atgaagcctg gcacctacac ccaggtcctc 1200
taccaggacg aactcaaggt tgccaccgac tcggtcactg tctctgctgg atcgacggtc 1260
accaagaaca ttgcatctac cttctctttc ccttcgacca tctggacaat tggcgactgg 1320
gacggccagc cattcggctt ccgcaacgcc gacaagatcg agcgcatgca cccgtccgac 1380
agccgcatga gcagctgggg gccgttgacc tacacggtcg gctccagcgc actgactgac 1440
gttcccatgg cgctcttcaa gggcgtcaac acgcctttca ccatcaagtt cacgctctcc 1500
tcgtcgcaga caggtgcggc ggtcctccgg atcggcacga ctctggcctt cgccagcggc 1560
aggccgcagc ccaagatcaa cagctacagc ccttcggcgc cggcggcacc gacgaagatc 1620
gattcgcgcg gcgtcacacg tggcacttac cgcggtttgg gtgagatcta caccttcgac 1680
attcccgcgg gcactctcgt gagtggctcg aacacgatca ccatcgactg catctcggga 1740
agctcgggcg acacctacct gtctcccaac tttgtaagtt tcgctctgca tacctccgcc 1800
atgcgccgtg ctaacgcaag aaacagatcc ttgacgccat tgacctgtac ctcaagtgag 1860
cgagggtcag gagaagggtg ctagctgagg ttcgcttctg taaataagtt tacgtcctac 1920
attgaacata cattttggct ttgattgccg gtctgcatta ctcgtcaata cgaagcttcg 1980
cgagcgcgca gctccaccga atgcgtggc 2009
<210> 62
<211> 1605
<212> DNA
<213> M. phaseolina
<400> 62
atggctctct ttgctctgtt tctgaccttt atctctcttt tcgcaccgtc ggtgctggcc 60
gcctttggag tgactacatc ctcttccagc tatgttgtcg atgccggctc atccaacccc 120
ttcgttgtta ccatttcgcg cagcagttgc gacattacct cgatcaagta ccgtggagag 180
gaattccagt actccggcaa gggttcgcac atctcgtccg gccttggatc tgcgaccgta 240
acgtcagaga tcgtcagcag cacttatgcc aagatcacct gcacggctgg cagcttgacc 300
cattacatta ttgtcaagtc cggagagagc tctttgtaca tgggcactta cttcactgag 360
gagccctcga ttggtgaagc ccgtttcatc gctcgcttgg acccggccaa gctccctctc 420
gaatacccct acggcactgc ctccactact gctgggagca gcagcaccgt cgagggatcc 480
gacgtctttg ttgtgaatgg ccagacccgc agcaagttct actctagcca acgtttcatc 540
gacgacaagg tgcagtgcgt gtaccgcgat gatgatgctg tccacgcttg catgatcttg 600
cagcctctct cctacgaggg atccagcggc ggtcccttct tcagggacat caacaccaac 660
aacgccggtg actcgaccaa cctgtacttc tacatgaact ccaaccatgc tcagactgag 720
agttaccgta tgggcttcca cggcccgtac cagttgcagt tcagccgctc tggtattccc 780
aacagctttg acgcttcgtt cttcgccgac ctcaagctct ccggctacgt tgctgagtct 840
gctcgtggct acgtcaaggg tactgcttct ggagttggta gctcttacca gaaagtcctt 900
cattggtaca acagcaacgc gcagtactgg gtctatgcct cgtctaacgg tgcctttact 960
tctcctgcca tgaagcctgg cacctacacc caggtcctct accaggacga actcaaggtt 1020
gccaccgact cggtcactgt ctctgctgga tcgacggtca ccaagaacat tgcatctacc 1080
ttctctttcc cttcgaccat ctggacaatt ggcgactggg acggccagcc attcggcttc 1140
cgcaacgccg acaagatcga gcgcatgcac ccgtccgaca gccgcatgag cagctggggg 1200
ccgttgacct acacggtcgg ctccagcgca ctgactgacg ttcccatggc gctcttcaag 1260
ggcgtcaaca cgcctttcac catcaagttc acgctctcct cgtcgcagac aggtgcggcg 1320
gtcctccgga tcggcacgac tctggccttc gccagcggca ggccgcagcc caagatcaac 1380
agctacagcc cttcggcgcc ggcggcaccg acgaagatcg attcgcgcgg cgtcacacgt 1440
ggcacttacc gcggtttggg tgagatctac accttcgaca ttcccgcggg cactctcgtg 1500
agtggctcga acacgatcac catcgactgc atctcgggaa gctcgggcga cacctacctg 1560
tctcccaact ttatccttga cgccattgac ctgtacctca agtga 1605
<210> 63
<211> 534
<212> PRT
<213> M. phaseolina
<400> 63
Met Ala Leu Phe Ala Leu Phe Leu Thr Phe Ile Ser Leu Phe Ala Pro
1 5 10 15
Ser Val Leu Ala Ala Phe Gly Val Thr Thr Ser Ser Ser Ser Tyr Val
20 25 30
Val Asp Ala Gly Ser Ser Asn Pro Phe Val Val Thr Ile Ser Arg Ser
35 40 45
Ser Cys Asp Ile Thr Ser Ile Lys Tyr Arg Gly Glu Glu Phe Gln Tyr
50 55 60
Ser Gly Lys Gly Ser His Ile Ser Ser Gly Leu Gly Ser Ala Thr Val
65 70 75 80
Thr Ser Glu Ile Val Ser Ser Thr Tyr Ala Lys Ile Thr Cys Thr Ala
85 90 95
Gly Ser Leu Thr His Tyr Ile Ile Val Lys Ser Gly Glu Ser Ser Leu
100 105 110
Tyr Met Gly Thr Tyr Phe Thr Glu Glu Pro Ser Ile Gly Glu Ala Arg
115 120 125
Phe Ile Ala Arg Leu Asp Pro Ala Lys Leu Pro Leu Glu Tyr Pro Tyr
130 135 140
Gly Thr Ala Ser Thr Thr Ala Gly Ser Ser Ser Thr Val Glu Gly Ser
145 150 155 160
Asp Val Phe Val Val Asn Gly Gln Thr Arg Ser Lys Phe Tyr Ser Ser
165 170 175
Gln Arg Phe Ile Asp Asp Lys Val Gln Cys Val Tyr Arg Asp Asp Asp
180 185 190
Ala Val His Ala Cys Met Ile Leu Gln Pro Leu Ser Tyr Glu Gly Ser
195 200 205
Ser Gly Gly Pro Phe Phe Arg Asp Ile Asn Thr Asn Asn Ala Gly Asp
210 215 220
Ser Thr Asn Leu Tyr Phe Tyr Met Asn Ser Asn His Ala Gln Thr Glu
225 230 235 240
Ser Tyr Arg Met Gly Phe His Gly Pro Tyr Gln Leu Gln Phe Ser Arg
245 250 255
Ser Gly Ile Pro Asn Ser Phe Asp Ala Ser Phe Phe Ala Asp Leu Lys
260 265 270
Leu Ser Gly Tyr Val Ala Glu Ser Ala Arg Gly Tyr Val Lys Gly Thr
275 280 285
Ala Ser Gly Val Gly Ser Ser Tyr Gln Lys Val Leu His Trp Tyr Asn
290 295 300
Ser Asn Ala Gln Tyr Trp Val Tyr Ala Ser Ser Asn Gly Ala Phe Thr
305 310 315 320
Ser Pro Ala Met Lys Pro Gly Thr Tyr Thr Gln Val Leu Tyr Gln Asp
325 330 335
Glu Leu Lys Val Ala Thr Asp Ser Val Thr Val Ser Ala Gly Ser Thr
340 345 350
Val Thr Lys Asn Ile Ala Ser Thr Phe Ser Phe Pro Ser Thr Ile Trp
355 360 365
Thr Ile Gly Asp Trp Asp Gly Gln Pro Phe Gly Phe Arg Asn Ala Asp
370 375 380
Lys Ile Glu Arg Met His Pro Ser Asp Ser Arg Met Ser Ser Trp Gly
385 390 395 400
Pro Leu Thr Tyr Thr Val Gly Ser Ser Ala Leu Thr Asp Val Pro Met
405 410 415
Ala Leu Phe Lys Gly Val Asn Thr Pro Phe Thr Ile Lys Phe Thr Leu
420 425 430
Ser Ser Ser Gln Thr Gly Ala Ala Val Leu Arg Ile Gly Thr Thr Leu
435 440 445
Ala Phe Ala Ser Gly Arg Pro Gln Pro Lys Ile Asn Ser Tyr Ser Pro
450 455 460
Ser Ala Pro Ala Ala Pro Thr Lys Ile Asp Ser Arg Gly Val Thr Arg
465 470 475 480
Gly Thr Tyr Arg Gly Leu Gly Glu Ile Tyr Thr Phe Asp Ile Pro Ala
485 490 495
Gly Thr Leu Val Ser Gly Ser Asn Thr Ile Thr Ile Asp Cys Ile Ser
500 505 510
Gly Ser Ser Gly Asp Thr Tyr Leu Ser Pro Asn Phe Ile Leu Asp Ala
515 520 525
Ile Asp Leu Tyr Leu Lys
530
<210> 64
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 64
tcatcaccga cccacaatcg c 21
<210> 65
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 65
cttagcaagc gggagccgtc 20
<210> 66
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> synthetic primer
<400> 66
cagacaacgg cgtcgacagt 20
<210> 67
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 67
acggaccaca tccaacgcga 20
<210> 68
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 68
atgccctggt accctgcccc 20
<210> 69
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 69
gaaaggtccc gggctcacgc 20
<210> 70
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 70
ccgctcctct gtgcgttgtt gaa 23
<210> 71
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 71
acagcgatag agccgcaaca cg 22
<210> 72
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 72
tttcctcacc accacttccc ctct 24
<210> 73
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 73
cgaaagccag cccaagcgac 20
<210> 74
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 74
ggcaagcatc ctctctccgg c 21
<210> 75
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 75
cctgaggccc atcgtccgag t 21
<210> 76
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 76
tccctgcctc tccatcctac cct 23
<210> 77
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 77
ccaaccgtgt ggccgtcgaa 20
<210> 78
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 78
acatgcagtt caagtacgcc gct 23
<210> 79
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 79
gcaggggccc acacctcttg 20
<210> 80
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 80
tccaaggcag agcctccgaa aca 23
<210> 81
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 81
gctccctgcg ggcgtgtttt a 21
<210> 82
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 82
acagacccca tcacatccgc ca 22
<210> 83
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 83
ttgcattgag ccctcttggg ctgt 24
<210> 84
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 84
ctgtcctcca gcagcagcct c 21
<210> 85
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 85
cgagcaaccc gtcgaggtca a 21
<210> 86
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 86
catgaaggcc accaccctcg c 21
<210> 87
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 87
ccgaaccctg gctcgggcat 20
<210> 88
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 88
acccccacgc cgaacaatac c 21
<210> 89
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 89
ccgccaagtc tatccgctcg c 21
<210> 90
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 90
ggcttcggtg gaccgtccta t 21
<210> 91
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 91
ccacccgctc cgcccttaaa 20
<210> 92
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 92
aggagatggg ctgccgtcct 20
<210> 93
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 93
gctcagcaag cgtccaaccc a 21
<210> 94
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 94
tcccgtgcca tggtagcctt t 21
<210> 95
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 95
gctggccacc acaatccaca 20
<210> 96
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 96
tggcctcttg atcaggctcg t 21
<210> 97
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 97
gcggtgaccc atccctgctt 20
<210> 98
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 98
tcgtccaccg gtaccacgtt 20
<210> 99
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 99
tgctacgcaa gtgtgcaaag tgt 23
<210> 100
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 100
atcacagcat gcctcgcctc g 21
<210> 101
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 101
cagtcctgcc ggttccttgc at 22
<210> 102
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 102
cggaggattg ctgcgggact t 21
<210> 103
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 103
ccgcgaaacc atccacaaca cg 22
<210> 104
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 104
acgggccaag gtgccagaac 20
<210> 105
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic primer
<400> 105
cacccttctc ctgaccctcg ct 22
Claims (30)
- 서열번호 40 또는 41에 제시된 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 마크로포미나 파세올리나 (Macrophomina phaseolina)로부터의 펙테이트 리아제 C (pectate lyase C)를 암호화하는, 분리된 폴리뉴클레오티드.
- 제1항에 있어서, cDNA인 분리된 폴리뉴클레오티드.
- 제1항에 있어서, 단일-가닥인 분리된 폴리뉴클레오티드.
- 제1항의 분리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 작제물 (construct).
- 제1항의 분리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 작제물로서, 상기 폴리뉴클레오티드는 숙주 세포에서 뉴클레오티드 서열의 발현을 조절하는 전사 또는 해독 조절 시그널 또는 둘 모두를 포함하는 조절 뉴클레오티드 서열과 작동적으로 연관되는, 발현 작제물.
- 제1항의 분리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 유전적으로 조작된 숙주 세포.
- 하기를 포함하는 폴리펩티드를 제조하는 방법:
제5항의 발현 작제물로 형질전환된 세포를 효과적인 조건 하에서 배양하여 상기 폴리펩티드를 생성하는 단계; 및
폴리펩티드를 분리하는 단계. - 서열번호 42에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 마크로포미나 파세올리나로부터의 펙테이트 리아제 C의 촉매 활성을 나타내는, 분리된 폴리펩티드.
- 제5항의 발현 작제물을 포함하는 인간을 제외한 형질전환체.
- 제5항의 발현 작제물을 포함하는 마크로포미나 파세올리나의 유전자전이 균류.
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