KR102028245B1

KR102028245B1 - Composition for improving dry skin or skin barrier function and composition for anti allergy

Info

Publication number: KR102028245B1
Application number: KR1020170028169A
Authority: KR
Inventors: 이광훈; 신정우; 노지연
Original assignee: 연세대학교 산학협력단
Priority date: 2016-04-06
Filing date: 2017-03-06
Publication date: 2019-10-04
Also published as: KR20190111870A; KR102106466B1; KR20170114921A

Abstract

ZAG (Zinc-alpha-2-glycoprotein) 를 유효 성분으로 함유하는 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 항알러지 약학 조성물과 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 개선용 화장료 조성물이 제공된다. ZAG 단백질을 유효 성분으로 함유하는 본 발명의 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방 또는 치료용 약학 조성물은 FLG 유전자의 발현을 활성시키는 효능을 나타내며 이에 의해 FLG의 생성을 촉진함으로써, FLG의 감소로 인해 비롯되는 아토피피부염과 같은 피부 건조증 또는 피부 장벽 이상을 치료하는데 사용될 수 있다. 나아가, ZAG 단백질을 유효 성분으로 함유하는 본 발명의 항알러지 약학 조성물 및 항염증 약학 조성물은 히스타민과 다양한 염증성 사이토카인의 수준을 낮추는 효능이 있어, 알러지성 질환, 특히 아토피피부염을 예방하거나 치료하는데 효과적일 수 있다.Provided are a pharmaceutical composition for preventing or treating skin dryness or abnormal skin barrier function, and an anti-allergic pharmaceutical composition containing ZAG (Zinc-alpha-2-glycoprotein) as an active ingredient, and a cosmetic composition for improving skin dryness or skin barrier function. A pharmaceutical composition for the prevention or treatment of dry skin or dysfunction of the skin barrier of the present invention containing a ZAG protein as an active ingredient exhibits the effect of activating the expression of the FLG gene and thereby promotes the generation of FLG, thereby resulting from the reduction of FLG. It can be used to treat dry skin or skin barrier abnormalities such as atopic dermatitis. Furthermore, the anti-allergic pharmaceutical composition and anti-inflammatory pharmaceutical composition of the present invention containing ZAG protein as an active ingredient have the effect of lowering the levels of histamine and various inflammatory cytokines, which are effective in preventing or treating allergic diseases, especially atopic dermatitis. Can be.

Description

피부 건조증 또는 피부 장벽 개선용 조성물 및 항알러지 조성물{COMPOSITION FOR IMPROVING DRY SKIN OR SKIN BARRIER FUNCTION AND COMPOSITION FOR ANTI ALLERGY}COMPOSITION FOR IMPROVING DRY SKIN OR SKIN BARRIER FUNCTION AND COMPOSITION FOR ANTI ALLERGY}

본 발명은 피부 건조증 또는 피부 장벽 개선용 화장료 조성물 및 약학 조성물과 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition and a pharmaceutical composition for improving skin dryness or skin barrier and a pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases.

피부 중에서 표피 (epidermis) 는 각질형성세포 (keratinocyte) 를 포함하고 있다. 피부의 최외각에 위치하고 있는 표피는 외부의 다양한 물리적, 화학적 및 기계적 자극에 대한 방어 및 피부를 통한 체내 수분의 과도한 발산을 막는 보호 기능을 수행한다. 이러한 보호 기능은 각질형성세포로 구성된 각질층이 정상적으로 형성되고 유지됨으로써 가능하다.The epidermis in the skin contains keratinocytes. The epidermis, located at the outermost part of the skin, serves to protect against various physical, chemical and mechanical stimuli from the outside and to prevent excessive release of moisture from the body through the skin. This protective function is possible by the normal formation and maintenance of the stratum corneum consisting of keratinocytes.

이러한 각화 과정에서 각질형성세포는 천연 보습 인자 (Natural Moisturizing Factor; NMF) 와 세라마이드, 콜레스테롤 및 지방산과 같은 세포 간 지질을 생성하여 각질층이 외부와의 차단층 역할을 하게 됨으로써 피부 장벽 (skin barrier) 으로서의 기능을 보유하게 된다.In this keratinization process, keratinocytes produce natural moisturizing factor (NMF) and intercellular lipids such as ceramides, cholesterol, and fatty acids, and the stratum corneum acts as a barrier to the outside. Function.

현대 사회의 주요 질환의 하나로 여겨지는 피부 건조증은 피부 장벽 기능 이상에 의해 야기되는 증상의 하나로, 최근, 환경 오염, 아파트, 고층 건물과 같은 건조한 환경의 증가, 사회적 스트레스의 증가, 우리 나라 특유의 과도한 목욕 문화, 피부 노화 등과 같은 여러 가지 요인에 의해 점점 더 증가하고 있으며, 증세가 심하여 치료를 필요로 하는 경우 또한 지속적으로 증가하고 있다. 최근 전체 인구의 약 15%에서 발병하는 아토피피부염 (atopic dermatitis) 역시 피부 건조증, 보다 근본적으로는 피부 장벽 기능의 이상을 주요 원인으로 하는 것으로 알려져 있다. 아토피피부염은 알러지성 질환의 대표적인 질환으로서 만성, 재발성의 피부 질환으로 다양한 임상양상을 가지며 아이들에서는 20%, 어른들에서는 1~3%의 유병률을 보인다. 이러한 아토피피부염 환자들은 알러지 천식, 알러지 비염과 같은 또 다른 알러지성 질환으로 발전하는 아토피 행진 양상을 보일 수 있다. 나아가, 아토피피부염은 수면을 방해하는 심한 가려움증을 동반하고 만성적으로 재발하는 경과를 가지기 때문에 환자들의 삶의 질이 떨어져 있으며 최근 유병률이 증가하고 있어 사회, 경제적인 문제를 초래하고 있다.Dry skin, which is considered to be one of the major diseases of modern society, is one of the symptoms caused by skin barrier dysfunction, and recently, environmental pollution, increase of dry environment such as apartments and high-rise buildings, increase of social stress, excessive inherent in our country It is increasing due to various factors such as bath culture, skin aging, etc., and the case of severe symptoms requiring treatment is also increasing continuously. Recently, atopic dermatitis, which affects about 15% of the total population, is also known to be caused by dry skin, more fundamentally, abnormal skin barrier function. Atopic dermatitis is a typical allergic disease. It is a chronic, recurrent skin disease with various clinical manifestations, with a prevalence rate of 20% in children and 1-3% in adults. These atopic dermatitis patients may develop atopic dermatitis that develops into other allergic diseases such as allergic asthma and allergic rhinitis. In addition, atopic dermatitis is accompanied by severe itching that interferes with sleep and has a chronic recurrence, which results in poor quality of life and recent prevalence of social problems, leading to social and economic problems.

알러지성 질환은 유전적인 소인과 환경적인 원인, 전신적 및 국소적 면역학적 이상 반응 및 피부 장벽의 이상 등이 주요 발병원인일 수 있다. 즉, 면역학적 결함, 피부장벽의 이상과 같은 아토피피부염의 유전적 소인을 가진 사람에서 여러 가지 환경적 요인에 노출되었을 때 증상이 나타나게 된다. 알러지성 질환이 일어나는 과정을 구체적으로 살펴보면, 먼지, 꽃가루, 곰팡이, 각종 음식물, 약물 등과 같은 알러젠 (알러지 항원) 이 호흡기, 소화기, 피부를 통해 체내로 들어오게 되고, 그 결과 알러젠이 조직 속의 비만세포 (mast cell) 혹은 랑게르한스 세포와 같은 항원전달 세포 표면에 부착되어 있는 IgE 항체에 결합하게 된다. 이에 따라 비만세포는 히스타민 (histamine) 이라는 물질을 분비한다. 히스타민은 비점막에서 알러지성 반응을 일으키는 가장 중요한 화학매체로서, 혈관의 투과성을 증가시켜 비점막의 부종을 일으키고, 감각신경 말단을 자극하여 눈물, 콧물, 가려움증과 같은 다양한 알러지 초기반응을 유발한다. 이어서 히스타민 이외에 호산구 화학주성 인자 (eosinophilic chemotactic factor), 류코트리엔 (leukotriene) 등과 같은 화학 주성능을 가진 화학매체가 조직 속의 비만세포로부터 분비된다. 이러한 화학주성 물질에 의해 호산구 (eosinophile) 가 알러지 발생부위로 이동하게 되어, 조직손상, 염증반응, 과민반응과 같은 알러지 후기반응을 유발한다.Allergic diseases may be due to genetic predisposition and environmental causes, systemic and local immunological adverse reactions and abnormal skin barriers. In other words, people with genetic predisposition to atopic dermatitis, such as immunological defects and abnormal skin barriers, develop symptoms when exposed to various environmental factors. Looking specifically at the process of allergic diseases, allergens (allergens) such as dust, pollen, mold, various foods, drugs, etc. enter the body through the respiratory, digestive, and skin, resulting in allergens in tissues It binds to IgE antibodies that are attached to the surface of antigen-transmitting cells, such as mast cells or Langerhans cells. Accordingly, mast cells secrete a substance called histamine. Histamine is the most important chemical medium that causes allergic reactions in the nasal mucosa. It increases the permeability of blood vessels, causes swelling of the nasal mucosa, and stimulates sensory nerve endings to cause various allergic reactions such as tears, runny nose and itching. Subsequently, chemical media with chemotactic properties, such as eosinophilic chemotactic factor and leukotriene, are secreted from mast cells in tissues in addition to histamine. These chemotactic substances cause eosinophils to move to allergic sites, causing late allergic reactions such as tissue damage, inflammatory and hypersensitivity reactions.

예를 들어, 알러지성 질환 중 하나인, 아토피피부염의 대부분은 IgE와 연관된 면역기전에 의해 발병할 수 있다. 이때, 아토피피부염은 특정 알레르겐에 대한 즉시형 면역반응보다는 T세포 이상에 의한 지연형 면역반응에 의해 유발된다. 또한, Th2 세포는 IgE의 생성을 유도하는 IL-4와 B세포로부터 IgE생성을 촉진하는 IL-5 및 IgE생성을 증폭시키는 IL-6등을 분비함에 따라, 아토피피부염과 연관된 세포일 수 있다. 구체적으로, 다른 피부질환과 달리 아토피피부염의 피부병변에 침윤되는 염증세포는 주로 Th2세포이고, Th2세포는 IL-4, IL-5 등의 염증성 사이토카인을 생성하여, 혈중 IgE의 상승을 촉진하고, 호산구의 증가를 유도한다. 사이토카인의 증가는 혈관 내피세포를 활성화하여 여러 세포유착분자의 발현을 유도하거나 증가시킬 수 있다. 이의 결과로 기억 T림프구의 복귀가 촉진됨으로써, 습진성 병변이 유발되게 된다.For example, most of atopic dermatitis, one of allergic diseases, can be caused by an immune mechanism associated with IgE. In this case, atopic dermatitis is caused by a delayed immune response caused by T cell abnormality rather than an immediate immune response to a specific allergen. In addition, Th2 cells may be cells associated with atopic dermatitis by secreting IL-4, which induces IgE production, IL-5, which promotes IgE production, and IL-6, which amplifies IgE production, from B cells. Specifically, unlike other skin diseases, the inflammatory cells infiltrating the skin lesions of atopic dermatitis are mainly Th2 cells, and Th2 cells produce inflammatory cytokines such as IL-4 and IL-5 to promote the elevation of blood IgE. Induces an increase in eosinophils. An increase in cytokines can activate vascular endothelial cells to induce or increase the expression of several cell adhesion molecules. As a result of this, the return of memory T lymphocytes is promoted, thereby causing eczema lesions.

아토피피부염 발병원인은 피부 장벽 기능의 이상이 있을 수 있다. 아토피 피부염 환자에 있어서, 가장 중요한 임상증상은 가려움증과 피부 건조증이다. 이러한 피부 장벽의 손상은 외부에 존재하는 항원이 피부에 통과하고 흡수되는 것을 증가시킬 수 있고, 이는 면역반응이 나타날 수 있는 중요한 요소로 작용하고 있다. 특히 아토피피부염 환자의 피부는 표피의 수분증발이 촉진되어, 피부건조증 또한, 유발될 수 있다.The cause of atopic dermatitis may be an abnormality of skin barrier function. In patients with atopic dermatitis, the most important clinical symptoms are itching and dry skin. This damage of the skin barrier can increase the penetration and absorption of external antigens into the skin, which is an important factor that can cause an immune response. In particular, the skin of patients with atopic dermatitis is promoted moisture evaporation of the epidermis, and skin dryness may also be caused.

이러한 알러지성 질환의 치료를 위해, 항히스타민, 스테로이드성 또는 비스테로이드성 항염증용 의약품 및 류코트리엔 길항제가 사용되고 있다. 구체적으로, 알러지성 질환 중 아토피피부염의 치료제로는 면역반응의 조절을 위한 국소 제제로 스테로이드제, 칼시뉴린억제제 등이 사용되고 있으며, 전신 경구 제제로 스테로이드제, 면역 조절제, 항히스타민제 등이 사용되고 있다. 하지만 국소제제 단독만으로는 조절되지 않는 환자가 많으며 특히 국소스테로이드제는 장기간 도포 시 피부 위축, 혈관 확장 등의 부작용을 일으킬 수 있어 만성 경과를 보이는 아토피피부염에는 적합하지 않다. 국소 칼시뉴린억제제의 경우 장기간 도포할 수 있으나 자극 증상이 있고 사용감이 불편한 한계가 있다. 경구 스테로이드제의 경우에는 당뇨, 골다공증, 쿠싱증후군 등의 부작용이 있으며 면역 조절제는 고혈압, 손발저림, 신장 기능 장애 등의 부작용이 있어 장기간 사용이 어렵고 경구 항히스타민제는 그 효과가 미미하다. 아토피피부염의 피부 장벽의 회복을 돕기 위한 치료 방법으로는 보습제의 사용이 중요하며 세라마이드 또는 항염 물질들을 포함한 보습제들이 제약, 화장품 영역에서 개발되어 사용 중에 있다. 하지만 이러한 여러 치료 방법에도 불구하고 아토피피부염은 아직까지 해결되지 않고 점차 늘어가는 추세에 있다.For the treatment of allergic diseases, antihistamine, steroidal or nonsteroidal anti-inflammatory drugs and leukotriene antagonists are used. Specifically, as a therapeutic agent for atopic dermatitis in allergic diseases, steroids, calcineurin inhibitors, and the like are used as topical agents for the regulation of immune responses, and steroids, immunomodulators, antihistamines, and the like are used as systemic oral preparations. However, many patients are not controlled by topical drugs alone, especially topical steroids can cause side effects such as skin atrophy and vasodilation when applied for a long time, which is not suitable for chronic atopic dermatitis. Topical calcineurin inhibitors can be applied for a long time, but there are limitations to irritation symptoms and uncomfortable feeling. Oral steroids have side effects such as diabetes, osteoporosis, and Cushing's syndrome, and immunomodulators have side effects such as hypertension, numbness and renal dysfunction, making them difficult to use for a long time. The use of moisturizers is important for the treatment of the skin barrier of atopic dermatitis. Moisturizers including ceramide or anti-inflammatory substances have been developed and used in the pharmaceutical and cosmetic fields. Despite these treatments, however, atopic dermatitis has not been resolved yet, and is increasing.

이에 따라, 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상과 연관될 뿐만 아니라, 대표적인 알러지성 질환 중 하나인 아토피피부염에 대하여, 이를 효과적으로 예방하거나 치료할 수 있는 물질들의 개발이 요구되고 있다. 나아가 보습효과와 동시에 염증반응을 억제효과를 갖는, 기존의 스테로이드 치료제들을 대체할 수 있는 새로운 치료제들의 개발이 요구되고 있다. Accordingly, there is a need for the development of substances that can be effectively prevented or treated for atopic dermatitis, which is not only associated with dry skin or skin barrier dysfunction, but also one of the representative allergic diseases. Furthermore, there is a need for the development of new therapeutic agents that can replace the existing steroid therapies, which have a moisturizing effect and suppress the inflammatory response.

발명의 배경이 되는 기술은 본 발명에 대한 이해를 보다 용이하게 하기 위해 작성되었다. 발명의 배경이 되는 기술에 기재된 사항들이 선행기술로 존재한다고 인정하는 것으로 이해되어서는 안 된다.The background art of the invention has been created to facilitate understanding of the present invention. It should not be understood that the matters described in the background of the invention exist as prior art.

아토피피부염의 원인은 면역학적, 환경적, 유전적인 복합적 요인으로 인해 발생하나 그 중 유전적 및 환경적 요인에 의한 피부 장벽의 손상이 중요한 역할을 한다. 피부 장벽의 주요 구성 성분인 FLG (Filaggrin) 은 피부 장벽에서 각질층의 형성 및 자연함습인자의 생성에 중요한 역할을 하며 아토피피부염 환자들에서 loss of mutation이 많은 것으로 보고되어 있다. FLG의 유전적 변이가 있는 경우 아토피피부염이 일찍 발생하고 임상 증상이 심하며 알러지 행진으로 진행할 가능성이 높은 것으로 알려져 있다. 최근 피부 장벽의 적절한 회복이 염증반응을 줄이고 알러지 감작을 줄여 아토피피부염의 발생 및 알러지 행진으로의 진행을 억제할 수 있다는 보고가 나오고 있다. 하지만 아직까지 FLG의 발현을 직접적으로 조절하여 아토피피부염의 치료에 쓰일 수 있는 약제 또는 화장료 조성물은 개발되어 있지 않다. 나아가, 아토피피부염을 포함하는 다양한 알러지성 질환에 효과적인 항알러지 약학 조성물의 개발이 요구되고 있는 실정이다. 특히, 현재 이용되고 있는 스테로이드성의 아토피피부염 치료제들은 이용에 따른, 다양한 부작용들이 알려져 있다. 이에 따라, 이를 대체할 수 있는 새로운 치료물질에 대한 개발이 매우 중요할 수 있다.Atopic dermatitis is caused by a combination of immunological, environmental, and genetic factors, but damage to the skin barrier caused by genetic and environmental factors plays an important role. FLG (Filaggrin), a major constituent of the skin barrier, plays an important role in the formation of the stratum corneum and the generation of spontaneous humectants in the skin barrier. Genetic mutations in FLG are known to cause early atopic dermatitis, severe clinical symptoms, and a high risk of allergic marching. Recently, it has been reported that proper recovery of the skin barrier can reduce the inflammatory response and allergic sensitization, thereby inhibiting the development of atopic dermatitis and progression to allergic march. However, no pharmaceutical or cosmetic composition has been developed that can be used to treat atopic dermatitis by directly controlling the expression of FLG. Furthermore, the development of anti-allergic pharmaceutical compositions effective for various allergic diseases including atopic dermatitis is required. In particular, the steroidal atopic dermatitis treatments currently used are known to have various side effects. Accordingly, the development of new therapeutic substances that can replace them may be very important.

이에, 본 발명의 해결하고자 하는 과제는 ZAG 단백질을 유효 성분으로 함유하는 조성물을 제공하고, 이를 이용하여 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상, 특히 아토피피부염의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a composition containing ZAG protein as an active ingredient, and to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of dry skin or skin barrier function, in particular, atopic dermatitis.

본 발명의 해결하고자 하는 다른 과제는, ZAG 단백질을 유효 성분으로 함유하는 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a cosmetic composition for improving skin dryness or skin barrier dysfunction comprising a ZAG protein as an active ingredient.

나아가, 본 발명의 해결하고자 하는 또 다른 과제는 ZAG 단백질을 유효 성분으로 함유하는 항알러지 약학 조성물, 항염증 약학 조성물을 제공하는 것이다.Further, another object of the present invention is to provide an anti-allergic pharmaceutical composition, an anti-inflammatory pharmaceutical composition containing ZAG protein as an active ingredient.

본 발명이 해결하고자 하는 또 다른 과제는 피부 건조증, 피부 장벽 기능 이상의 개선과 동시에 항알러지, 항염증 효과를 나타낼 수 있는, ZAG 단백질을 유효 성분으로 함유하는 다양한 약학 조성물을 제공하는 것이다. 즉, 이러한 약학 조성물들은 건조증, 피부 장벽 기능 이상의 개선에 따른 보습 효과와 동시에, 항염증 효과를 나타냄으로써, 종래의 아토피피부염 치료제, 나아가 항염증제들을 대체할 수 있는 새로운 치료 물질로서 제공 가능하다.Another problem to be solved by the present invention is to provide various pharmaceutical compositions containing ZAG protein as an active ingredient, which may exhibit anti-allergic and anti-inflammatory effects at the same time as improving skin dryness, abnormal skin barrier function. That is, these pharmaceutical compositions can be provided as a new therapeutic substance that can replace the conventional atopic dermatitis therapeutic agent, and further anti-inflammatory agents by exhibiting an anti-inflammatory effect at the same time as the moisturizing effect of the dryness, skin barrier function improvement.

본 발명의 과제들은 이상에서 언급한 과제들로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.The objects of the present invention are not limited to the above-mentioned objects, and other objects that are not mentioned will be clearly understood by those skilled in the art from the following description.

본 발명의 일 실시예에 따르면, ZAG를 포함하는 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방 또는 치료용 약학 조성물이 제공된다.According to an embodiment of the present invention, there is provided a pharmaceutical composition for preventing or treating dry skin or skin barrier function, including ZAG.

본 명세서에서 사용되는 용어, "예방"은 본 발명의 일 실시예에 따른 상기 예방 또는 치료용 약학 조성물을 개체에 투여하여 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미한다.As used herein, the term "prevention" refers to any action that inhibits or delays skin dryness or skin barrier dysfunction by administering the prophylactic or therapeutic pharmaceutical composition according to an embodiment of the present invention to an individual.

본 명세서에서 사용되는 용어, "치료"는 본 발명의 일실시예에 따른 상기 예방 또는 치료용 약학 조성물을 개체에 투여하여 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상 증세가 호전되도록 하거나 이롭게 되도록 하는 모든 행위를 의미한다.As used herein, the term "treatment" refers to all the actions to improve or benefit dry skin or skin barrier dysfunction by administering the preventive or therapeutic pharmaceutical composition according to an embodiment of the present invention to a subject. do.

본 발명의 발명자들은 FLG의 활성을 연구하던 중, ZAG (Zinc-alpha-2-glycoprotein) 단백질과 FLG 단백질의 발현 위치가 유사하며 이들의 발현량에 상호관계가 있음을 처음으로 밝혀 내었다.The inventors of the present invention, while studying the activity of FLG, found for the first time that the expression positions of ZAG (Zinc-alpha-2-glycoprotein) protein and FLG protein are similar and correlated in their expression amount.

나아가, 본 발명의 발명자들은 ZAG 단백질을 표피에 처리함으로써 FLG 유전자의 발현을 증가시킬 수 있다는 것을 처음 발견하고, 이를 이용하여 ZAG 단백질을 표피에 처리함으로써 증가된 FLG 유전자의 발현 및 FLG 단백질이 피부 장벽의 손상을 예방하거나 손상을 회복시킬 수 있음을 처음으로 밝혀내어 본 발명을 완성하는데 이르렀다.Furthermore, the inventors of the present invention first discovered that the expression of the FLG gene can be increased by treating the epidermis with the ZAG protein, and using this to treat the epidermis with the ZAG protein, the expression of the FLG gene and the FLG protein are increased by the skin barrier. It has been found for the first time that the damage can be prevented or the damage can be repaired to complete the present invention.

현재까지 ZAG 단백질의 FLG 유전자 활성화 기능 및 피부 장벽 회복 능력에 관해서는 알려진 바가 없다. 본원 발명의 일 실시예에 따른 약학 조성물들은 FLG 유전자의 발현을 증가시킨다.To date, nothing is known about the FLG gene activation function and skin barrier repair ability of ZAG proteins. Pharmaceutical compositions according to one embodiment of the present invention increase the expression of the FLG gene.

본 명세서에서 사용되는 용어, "피부 건조증"은 피부의 수분이 부족하여 피부가 건조해짐으로 인해 발생하는 모든 증상을 의미한다.As used herein, the term "skin dryness" refers to all the symptoms caused by dry skin due to lack of moisture in the skin.

본 명세서에서 사용되는 용어, "피부 장벽 (skin barrier) 기능"이란, 피부, 특히 표피의 각질층이 외부로의 수분 유출을 방지하고 외부로부터의 물질 출입을 통제하는 등 외부와의 차단층 역할을 수행하는 모든 기능을 의미하며, 본 명세서에서 사용되는 용어, "피부 장벽 기능 이상"은 상기 피부 장벽 기능이 저하되거나 손상된 상태뿐 아니라 저하되거나 손상될 가능성이 있거나 이를 예방할 필요가 있는 모든 상태를 의미한다.As used herein, the term "skin barrier function" means that the stratum corneum of the skin, in particular the epidermis, acts as a barrier to the outside, such as preventing water from leaking out and controlling the entry of substances from the outside. As used herein, the term "skin barrier function abnormality" refers to any condition in which the skin barrier function is degraded or damaged, as well as any condition that may be degraded or damaged or need to be prevented.

본 명세서의 상기 피부 건조증은 피부의 수분이 부족하여 피부가 건조해짐으로 인해 발생하는 증상이라면, 그 구체적인 증상의 종류나 증상의 정도가 특별히 제한되지 않는다.If the skin dryness of the present specification is a symptom caused by the lack of moisture of the skin and the skin is dried, the kind or extent of the specific symptoms are not particularly limited.

본 명세서의 상기 피부 장벽 기능 이상은 피부 장벽 기능이 저하되거나 손상되는 것으로 인해 발생하는 증상이라면, 그 구체적인 증상의 종류나 증상의 정도가 특별히 제한되지 않는다.If the skin barrier function abnormality of the present specification is a symptom caused by deterioration or damage of the skin barrier function, the specific kind of symptoms or the degree of symptoms are not particularly limited.

본 발명의 상기 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상은 제한되지 않고 아토피피부염, 건성 습진, 어린선 등을 포함할 수 있다.The skin dryness or skin barrier dysfunction of the present invention is not limited and may include atopic dermatitis, dry eczema, young children and the like.

바람직하게, 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상은 아토피피부염일 수 있다. 본 명세서에서의 약학 조성물들은 특히 아토피피부염에 있어서, 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상을 개선에 대한 효과가 있고, 이에 따라 보습효과 또한 우수한 것으로 확인되었다. Preferably, dry skin or skin barrier dysfunction may be atopic dermatitis. The pharmaceutical compositions herein have been found to have an effect on improving skin dryness or skin barrier dysfunction, particularly in atopic dermatitis, and thus also have an excellent moisturizing effect.

나아가, 본 발명의 발명자들은 ZAG 단백질을 표피에 처리함으로써 다양한 면역 반응 및 이에 따른 염증 반응과 연관된 Th2 세포뿐만 아니라 다양한 염증성 사이토카인의 수준, 히스타민의 수준을 낮출 수 있다는 것을 발견하였다. 나아가, 본 발명의 발명자들은 ZAG 단백질이 면역 조절세포인 Treg 세포 (regulatory T cell) 의 수준을 증가시키는 것을 발견하였다.Furthermore, the inventors of the present invention have found that by treating the epidermis with ZAG protein, it is possible to lower the levels of various inflammatory cytokines, histamine as well as Th2 cells associated with various immune responses and thus inflammatory responses. Furthermore, the inventors of the present invention have found that ZAG protein increases the level of regulatory T cells, which are immune regulatory cells.

여기서, 염증성 사이토카인과 Treg 세포는 알러지성 질환 특히, 아토피피부염의 진행과 연관될 수 있다. 특히, 본 발명의 발명자들은 아토피피부염 환자의 혈액내에서는 Th2 세포가 분비하는 IL-4, IL-5 및 IL-13의 수준과 Th17 세포가 분비하는 IL-17의 수준이 크게 증가하는 것을 발견하였다. 이때, IL-17의 수준의 증가는 면역학적 이상의 특징 중 하나일 수 있다. 따라서, 염증성 사이토카인의 발현 수준을 낮추는 기작, 특히 Th2 세포, Th17 세포성 사이토카인의 수준을 낮추는 것은 염증 반응을 억제하고, 아토피피부염 나아가, 알러지성 질환의 예방과 치료에있어서, 핵심일 수 있다.Here, inflammatory cytokines and Treg cells may be associated with the development of allergic diseases, particularly atopic dermatitis. In particular, the inventors of the present invention found that the levels of IL-4, IL-5 and IL-13 secreted by Th2 cells and IL-17 secreted by Th17 cells were significantly increased in the blood of atopic dermatitis patients. . At this time, an increase in the level of IL-17 may be one of the features of immunological abnormalities. Therefore, mechanisms that lower the expression level of inflammatory cytokines, in particular lowering the levels of Th2 and Th17 cellular cytokines, may be key in inhibiting inflammatory responses, preventing atopic dermatitis, and in preventing and treating allergic diseases. .

나아가, Treg 세포는 아토피피부염의 병변부위에서 정상인에 비하여 감소될 수 있다. 이때, Treg 세포는 면역 조절세포로서 Th1, Th2, Th17 세포에 작용하는 수지상세포의 프라이밍 (priming) 역할 뿐 아니라 염증반응을 억제 시키고, 직접적으로 알러지 항원 특이 Th2 세포의 활성을 억제 시킴으로써 알러지 반응의 작동기 단계 동안 필수 사이토카인인 IL-4, IL-5 및 IL-13의 생성을 최소화 시킬 수 있다. 또한, Treg 세포는 비만 세포와 호염기구, 호산구에 직접 작용하여 알러지 염증을 억제 시키고 조직 세포와 상호작용 함으로써 조직 재구성에 중요한 역할을 할 수 있으며, B 세포에 직접 영향을 가하여 알러지 항원-특이 IgE의 생성을 억제하고 IgG4의 생성을 유도할 수 있다. 따라서, Treg 세포의 기능을 항진시키거나 이의 수준을 증가시키는 기작은 면역반응, 또는 이에 의한 염증 반응을 억제하는 데 있어 중요할 수 있다. 나아가, 이러한 기작은 알러지성 질환, 구체적으로 아토피피부염의 예방과 치료에 있어서, 중요할 수 있다.Furthermore, Treg cells can be reduced compared to normal people at the lesion site of atopic dermatitis. At this time, Treg cells are not only priming of dendritic cells that act on Th1, Th2, and Th17 cells as immune regulatory cells, but also inhibit inflammatory reactions and directly effect the allergen-specific Th2 cells. The production of the essential cytokines IL-4, IL-5 and IL-13 can be minimized during this step. In addition, Treg cells directly act on mast cells, basophils, and eosinophils to inhibit allergic inflammation and interact with tissue cells, which may play an important role in tissue reconstitution, and directly affect B cells to prevent allergen-specific IgE. Can inhibit production and induce the production of IgG4. Thus, mechanisms that enhance or increase the level of Treg cells may be important in suppressing immune responses, or inflammatory responses thereby. Furthermore, this mechanism may be important in the prevention and treatment of allergic diseases, in particular atopic dermatitis.

이에 따라, 본 발명의 발명자들은 염증성 사이토카인 및 Treg 세포의 수준을 조절할 수 있는 ZAG 단백질이 알러지성 질환의 예방 또는 치료에 효과적인 항알러지 약학 조성물, 더 나아가 항염증 약학 조성물로 제공될 수 있음을 인지하였다. Accordingly, the inventors of the present invention recognize that a ZAG protein capable of regulating levels of inflammatory cytokines and Treg cells can be provided as an anti-allergic pharmaceutical composition, furthermore an anti-inflammatory pharmaceutical composition, effective for the prevention or treatment of allergic diseases. It was.

이에, 본 발명의 일 실시예에 따르면, ZAG를 포함하는 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 약학 조성물이 제공된다. Thus, according to an embodiment of the present invention, there is provided an anti-allergic pharmaceutical composition comprising ZAG, a pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases, and an anti-inflammatory pharmaceutical composition.

본 발명의 일 실시예에 따른 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 조성물은 다양한 알러지성 질환의 예방 또는 치료용 조성물로 이용될 수 있다. 예를 들어, 상기 항알러지 약학 조성물은 과민증 (anaphylaxis), 알러지성 비염 (allergic rhinitis), 천식 (asthma), 아토피피부염, 곤충알러지, 식품알러지, 약품알러지 및 두드러기 (urticaria) 를 포함하는 알러지성 질환을 예방하거나 치료하는데 이용할 수 있다. 보다 바람직하게 본 발명의 일 실시예에 따른 항알러지 약학 조성물은 아토피피부염의 예방 또는 치료용 조성물로서 이용되는 것에 효과적일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 본 발명의 일 실시예에 따른 ZAG를 포함하는 항염증 약학 조성물은 염증성 사이토카인의 수준을 낮춤으로써 염증 반응을 억제할 수 있고, 이에, 염증성 피부질환, 특히 아토피피부염에 효과적일 수 있다. The anti-allergic pharmaceutical composition, the pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases, and the anti-inflammatory composition according to an embodiment of the present invention may be used as a composition for preventing or treating various allergic diseases. For example, the anti-allergic pharmaceutical composition may include allergic diseases including anaphylaxis, allergic rhinitis, asthma, atopic dermatitis, insect allergy, food allergy, drug allergy and urticaria. It can be used to prevent or treat cancer. More preferably, the anti-allergic pharmaceutical composition according to an embodiment of the present invention may be effective for use as a composition for preventing or treating atopic dermatitis, but is not limited thereto. In addition, the anti-inflammatory pharmaceutical composition comprising ZAG according to an embodiment of the present invention can suppress the inflammatory response by lowering the level of inflammatory cytokines, and thus, may be effective in inflammatory skin diseases, particularly atopic dermatitis.

나아가, 본 발명의 발명자들은 ZAG 단백질은 피부 장벽의 주요 구성 성분인 FLG 유전자의 발현 및 단백질의 수준을 증가시키는 것을 확인 하였다. 여기서, FLG는 피부 장벽에서 각질층의 형성 및 자연함습인자의 생성에 중요한 역할을 할 수 있다. 이에, 본 발명의 발명자들은 ZAG 단백질의 처리에 따라, 증가된 FLG 유전자의 발현 및 FLG 단백질이 피부 장벽의 손상을 예방하거나 손상을 회복시킬 수 있음을 처음으로 밝혀내어 본 발명을 완성하는데 이르렀다.Furthermore, the inventors of the present invention confirmed that the ZAG protein increases the expression of FLG gene and protein levels, which are the major constituents of the skin barrier. Here, FLG may play an important role in the formation of the stratum corneum and the generation of natural moisture factors in the skin barrier. Accordingly, the inventors of the present invention have completed the present invention by discovering for the first time that, according to the treatment of ZAG protein, increased expression of FLG gene and FLG protein can prevent or repair the damage of the skin barrier.

이에 따라, ZAG 단백질을 포함하는 본 발명의 다양한 실시예에서의 조성물들은 FLG 유전자 활성화제로서 제공될 수 있다. FLG 유전자 활성화제에서 ZAG 단백질의 유효 함량은 특별히 제한되지 않으며, FLG 활성화제의 총 중량에 대하여 0.000001 내지 10 중량%로 포함되거나 전체 함량으로도 포함될 수 있다. Accordingly, compositions in various embodiments of the present invention comprising a ZAG protein may be provided as FLG gene activators. The effective amount of the ZAG protein in the FLG gene activator is not particularly limited and may be included in 0.000001 to 10% by weight relative to the total weight of the FLG activator, or may be included in the total content.

이상의 ZAG 단백질을 포함하는 본 명세서에서의 다양한 약학 조성물들은 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상을 개선의 효과뿐만 아니라 항알러지, 항염증 효과를 나타낸 것에 의의가 있다. 특히, 다양한 염증성 피부질환에 대한 치료제로서 이용될 수 있는 스테로이드성 연고는 이의 이용에 따라 피부 건조증이 나타날 수 있다. 이에, ZAG 단백질을 포함하는 본 명세서에서의 다양한 약학 조성물들은 보습효과를 갖는 항염증 약학 조성물을 제공하여, 기존의 스테로이드성의 연고보다 우수한, 새로운 항염증제, 나아가 아토피피부염 치료제의 개발에 기여할 수 있다. 예를 들어, ZAG 단백질을 포함하는 본 발명의 일 실시예에 따른 약학 조성물은 아토피피부염의 임상적 증상 중 하나인, 피부 건조증을 개선과 동시에 염증반응을 억제할 수 있는, 다 기능성 아토피피부염 치료제, 나아가 항염증제로서 이용할 수 있다. Various pharmaceutical compositions in the present specification containing the above ZAG protein is meaningful in that it exhibits an anti-allergic, anti-inflammatory effect as well as an effect of improving skin dryness or skin barrier dysfunction. In particular, steroidal ointments, which can be used as therapeutic agents for various inflammatory skin diseases, may develop dry skin depending on their use. Accordingly, various pharmaceutical compositions herein comprising a ZAG protein may provide an anti-inflammatory pharmaceutical composition having a moisturizing effect, thereby contributing to the development of a new anti-inflammatory agent, even atopic dermatitis therapeutic agent, superior to existing steroidal ointments. For example, the pharmaceutical composition according to an embodiment of the present invention comprising a ZAG protein may be one of the clinical symptoms of atopic dermatitis, which may improve skin dryness and simultaneously suppress an inflammatory response, Furthermore, it can use as an anti-inflammatory agent.

본 발명의 일 실시예에 따른 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방 또는 치료용 약학 조성물과 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 약학 조성물에 사용되는 ZAG 단백질은 효모, 식물 또는 동물 유래의 모든 ZAG 단백질을 포함하고, 바람직하게는 동물, 더욱 바람직하게는 인간 유래의 ZAG 단백질을 포함한다. 야생형 (wild type) 의 ZAG 단백질을 포함할 수 있다. 특히, 본 발명의 일 실시예에 따른 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방 또는 치료용 약학 조성물에서의 ZAG 단백질은 FLG 유전자의 발현을 촉진하는 기능을 하는 한 결실, 삽입, 비보전적 또는 보전적 치환 또는 이들의 조합에 의한 ZAG 단백질의 변이체를 포함한다. 하나의 구체적 예시로서, 본 발명의 다양한 실시예에 따른 조성물들에서의 ZAG 단백질은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 ZAG 단백질일 수 있으며, 이러한 서열의 치환, 삽입, 결실 변이체도 본 발명의 다양한 실시예에서의 약학 조성물에 사용할 수 있다.ZAG protein used in the pharmaceutical composition for the prevention or treatment of dry skin or abnormal skin barrier function and the anti-allergic pharmaceutical composition, the pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases and the anti-inflammatory pharmaceutical composition according to an embodiment of the present invention is yeast , All ZAG proteins derived from plants or animals, preferably ZAG proteins derived from animals, more preferably humans. Wild type ZAG proteins. In particular, the ZAG protein in the pharmaceutical composition for preventing or treating dry skin or skin barrier function according to an embodiment of the present invention is deleted, inserted, non-conservative or conservative substitution as long as it functions to promote the expression of the FLG gene or Variants of ZAG proteins by combinations thereof. As one specific example, the ZAG protein in the compositions according to various embodiments of the present invention may be a ZAG protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, and substitution, insertion, and deletion variants of such a sequence are also various embodiments of the present invention. It can be used in the pharmaceutical composition in the examples.

ZAG 단백질의 변이체란 야생형의 아미노산 서열과 하나 이상의 아미노산 잔기가 상이한 서열을 가지는 단백질을 의미한다. 삽입은 통상적으로 약 1개 내지 20개 아미노산의 연속 서열로 이루어지나, 보다 큰 삽입도 가능할 수 있다. 결실은 통상적으로 약 1개 내지 30개의 잔기로 이루어지나, 일부의 경우에는 도메인중 하나가 결실될 수 있는 것과 같이 보다 큰 결실 또한 가능할 수 있다. 이런 변이체는 당해 분야에 공지된 화학적 펩티드 합성방법 또는 DNA 서열을 기본으로 하는 재조합 방법에 의해 제조될 수 있다 (Sambrook et al., Molecular Cloning, Cold Spring Harbour Laboratory Press, New York, USA, 2d Ed., 1989). 분자의 활성을 전체적으로 변경시키지 않는 단백질 및 펩티드에서의 아미노산 교환은 당해 분야에 공지되어 있다 (H.Neurath, R.L.Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979). 가장 통상적으로 일어나는 교환은 아미노산 잔기 Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thy/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu, Asp/Gly 간의 교환이다.A variant of a ZAG protein refers to a protein having a sequence in which the amino acid sequence of the wild type differs from one or more amino acid residues. Insertion typically consists of a contiguous sequence of about 1 to 20 amino acids, although larger insertions may be possible. Deletion typically consists of about 1 to 30 residues, but in some cases larger deletions may also be possible, such as one of the domains may be deleted. Such variants can be prepared by chemical peptide synthesis methods known in the art or by recombinant methods based on DNA sequences (Sambrook et al., Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, USA, 2d Ed. , 1989). Amino acid exchange in proteins and peptides that do not alter the activity of the molecule as a whole is known in the art (H. Neurode, R. L. Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979). The most commonly occurring exchanges are amino acid residues Ala / Ser, Val / Ile, Asp / Glu, Thr / Ser, Ala / Gly, Ala / Thr, Ser / Asn, Ala / Val, Ser / Gly, Thy / Phe, Ala / Exchange between Pro, Lys / Arg, Asp / Asn, Leu / Ile, Leu / Val, Ala / Glu, Asp / Gly.

또한, ZAG 단백질은 경우에 따라서는 인산화 (phosphorylation), 황화 (sulfation), 아크릴화 (acrylation), 당화 (glycosylation), 메틸화 (methylation), 파네실화 (farnesylation) 등으로 수식 (modification) 될 수도 있다.In addition, the ZAG protein may be modified by phosphorylation, sulfation, acrylation, glycosylation, methylation, farnesylation and the like in some cases.

상기 변이체 또는 수식체는 천연 단백질과 동일한 생물학적 활성을 나타내는 기능적 등가물이나, 필요에 따라서는 이의 단백질의 특성을 변형시킨 변이체 또는 수식체일 수 있다. 바람직하게는 아미노산 서열상의 변이와 수식에 의해서 단백질의 열, pH등에 대한 구조적 안정성이 증가하거나 단백질 활성이 증가한 단백질이다.The variant or modification may be a functional equivalent that exhibits the same biological activity as a natural protein, or may be a variant or modification that modifies the properties of the protein as needed. Preferably, the protein has increased structural stability against heat, pH, etc., or increased protein activity due to variation and modification on amino acid sequence.

ZAG 단백질은 당 분야에 널리 공지된 방법으로 천연에서 추출 및 정제하여 얻을 수 있다. 달리는, ZAG 단백질의 서열이 밝혀져 있으므로 화학적 합성 (Merrifleld, J. Amer. chem. Soc. 85:2149-2156, 1963) 하거나 유전자 재조합 기술을 이용하여 얻을 수 있다. 화학적으로 합성하여 제조하는 경우, 당 분야에 널리 공지된 폴리펩타이드 합성법을 이용하여 얻을 수 있다. 유전자 재조합 기술을 이용할 경우, ZAG를 코딩하는 핵산을 적절한 발현 벡터에 삽입하고, 벡터를 숙주세포로 형질전환하여 ZAG가 발현되도록 숙주 세포를 배양한 뒤, 숙주세포로부터 ZAG를 회수하는 과정으로 수득할 수 있다.ZAG proteins can be obtained by extraction and purification in nature by methods well known in the art. Alternatively, since the sequence of the ZAG protein is known, it can be obtained by chemical synthesis (Merrifleld, J. Amer. Chem. Soc. 85: 2149-2156, 1963) or by using genetic recombination techniques. When prepared by chemical synthesis, it can be obtained using a polypeptide synthesis method well known in the art. When using a recombinant technique, a nucleic acid encoding ZAG is inserted into an appropriate expression vector, the vector is transformed into a host cell, the host cell is cultured so that ZAG is expressed, and ZAG is recovered from the host cell. Can be.

ZAG 단백질을 발현시키기 위한 발현벡터는 통상의 모든 발현 벡터를 다 사용할 수 있다. 숙주 세포에 따라서 단백질의 발현량과 수식 등이 다르게 나타나므로, 목적에 가장 적합한 숙주세포를 선택하여 사용하면 된다. 사용될 수 있는 숙주세포로는 에스케리치아 콜라이 (Escherichia coli), 바실러스 서브틸리스 (Bacillus subtilis), 스트렙토마이세스 (Streptomyces), 슈도모나스 (Pseudomonas), 프로테우스 미라빌리스 (Proteus mirabilis) 또는 스타필로코쿠스 (Staphylococcus) 와 같은 원핵 숙주 세포가 있으나 이로 제한되는 것은 아니다. 이중 이. 콜라이가 가장 일반적으로 사용된다. 또한, 진균 (예를 들어, 아스페르길러스 (Aspergillus), 효모 (예를 들어, 피치아 파스토리스 (Pichia pastoris), 사카로마이세스 세르비시애 (Saccharomyces cerevisiae), 쉬조사카로마세스 (Schizosaccharomyces), 뉴로스포라 크라사 (Neurospora crassa) 등과 같은 하등 진핵 세포, 곤충 세포, 식물 세포, 포유동물 등을 포함하는 고등 진핵생물 유래의 세포를 숙주세포로 사용할 수 있다.As the expression vector for expressing the ZAG protein, any conventional expression vector can be used. Depending on the host cell, the expression level and expression of the protein are different. Therefore, the host cell may be selected and used according to the purpose. Host cells that can be used include Escherichia coli, Bacillus subtilis, Streptomyces, Pseudomonas, Proteus mirabilis or Staphylococcus There are prokaryotic host cells such as, but not limited to, Staphylococcus. Double teeth. E. coli is the most commonly used. In addition, fungi (eg Aspergillus), yeast (eg Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces) ), And cells derived from higher eukaryotes including lower eukaryotic cells such as neurospora crassa, insect cells, plant cells, mammals, and the like can be used as host cells.

본 발명의 일 실시예에 따른 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방 또는 치료용 약학 조성물, 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 약학 조성물은, ZAG 단백질을 함유하는 것에 더하여, 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 추가로 포함할 수 있다.A pharmaceutical composition for preventing or treating skin dryness or abnormal skin barrier function, an anti-allergic pharmaceutical composition, a pharmaceutical composition for preventing or treating an allergic disease, and an anti-inflammatory pharmaceutical composition according to an embodiment of the present invention may contain a ZAG protein. In addition, it may further comprise suitable carriers, excipients and diluents commonly used in the manufacture of pharmaceutical compositions.

본 발명의 일 실시예에 따른 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방 또는 치료용 약학 조성물, 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 멸균 주사 용액 등의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시 벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 광물유 등을 들 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.In accordance with an embodiment of the present invention, the pharmaceutical composition for preventing or treating dry skin or abnormal skin barrier function, the anti-allergic pharmaceutical composition, the pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases, and the anti-inflammatory composition, respectively, according to a conventional method Powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, oral dosage forms, external preparations, sterile injectable solutions, etc. can be used in the form of a carrier, excipients and diluents can be included in the composition Lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, Methylhydroxy benzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, Mineral oil and the like, but is not limited thereto. These may be used alone or in combination of two or more thereof.

본 발명의 일 실시예에 따른 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방 또는 치료용 약학 조성물, 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 약학 조성물을 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면 활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제할 수 있다.It is usually used when formulating a pharmaceutical composition for preventing or treating skin dryness or abnormal skin barrier function, an anti-allergic pharmaceutical composition, a pharmaceutical composition for preventing or treating an allergic disease, and an anti-inflammatory pharmaceutical composition according to an embodiment of the present invention. It can be prepared using diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents, surfactants.

본 발명의 일 실시예에 따른 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방 또는 치료용 약학 조성물, 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 조성물은 바람직하게는 외용 연고, 로션 등과 같은 반고형 제제로 제조될 수 있으나 이에 제한되지 않는다.The pharmaceutical composition for preventing or treating skin dryness or abnormal skin barrier function according to an embodiment of the present invention, the anti-allergic pharmaceutical composition, the pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases and the anti-inflammatory composition are preferably external ointments, lotions It may be prepared as a semi-solid formulation such as, but not limited to.

본 발명의 일 실시예에 따른 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방 또는 치료용 약학 조성물, 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 조성물은 개별 치료제로 도포하거나 다른 치료제와 병용하여 도포될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.The pharmaceutical composition for preventing or treating skin dryness or abnormal skin barrier function, the anti-allergic pharmaceutical composition, the pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases, and the anti-inflammatory composition according to an embodiment of the present invention may be applied as individual therapeutic agents or other therapeutic agents. It can be applied in combination with and can be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents. And single or multiple administrations. Taking all of the above factors into consideration, it is important to administer an amount that can obtain the maximum effect in a minimum amount without side effects, and can be easily determined by those skilled in the art.

본 발명의 일 실시예에 따른 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방 또는 치료용 약학 조성물, 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 조성물은 경구 투여를 위한 고형 제제로 제조되는 경우, 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함될 수 있으며, 이러한 고형 제제는 1 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로오스, 락토오스 또는 젤라틴 등을 섞어 조제할 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용할 수 있다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.The pharmaceutical composition for preventing or treating skin dryness or abnormal skin barrier function according to an embodiment of the present invention, the anti-allergic pharmaceutical composition, the pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases and the anti-inflammatory composition are solid preparations for oral administration. When prepared, solid preparations for oral administration may include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, which may include one or more excipients such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose Or gelatin can be mixed and prepared. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate, talc and the like can also be used. Liquid preparations for oral administration include suspensions, solutions, emulsions, and syrups, and may include various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin. have.

본 발명의 일 실시예에 따른 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방 또는 치료용 약학 조성물, 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 조성물이 비경구 투여를 위한 제제로 제조되는 경우, 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결 건조 제제, 외용제 등이 포함될 수 있다. 상기 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.A pharmaceutical composition for preventing or treating skin dryness or abnormal skin barrier function, an anti-allergic pharmaceutical composition, a pharmaceutical composition for preventing or treating an allergic disease, and an anti-inflammatory composition according to an embodiment of the present invention may be used as a preparation for parenteral administration. When prepared, preparations for parenteral administration may include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, external preparations, and the like. As the non-aqueous solvent and suspending agent, propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate and the like can be used.

본 발명의 다양한 실시예에 따른 조성물들은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다.Compositions according to various embodiments of the present invention may be formulated using pharmaceutically acceptable carriers and / or excipients in accordance with methods which can be easily carried out by those skilled in the art. It may be made in the form or prepared by incorporation into a multi-dose container.

본 발명의 일 실시예에 따른 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방 또는 치료용 약학 조성물, 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 조성물에서 ZAG은 전체 조성물 중량을 기준으로 0.0001 중량% 내지 10 중량%일 수 있다. 그러나 이에 제한되지 않고, 본 발명의 일 실시예에 따른 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방 또는 치료용 약학 조성물, 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 조성물에 대한 ZAG 단백질의 유효 함량, 나아가 전체 조성물의 약학 유효량, 유효 투여량은 상기 약학 조성물의 제제화 방법, 투여 방식, 투여 시간 및/또는 투여 경로 등에 의해 다양해질 수 있다. 나아가, 전체 조성물에 대한 ZAG 단백질의 유효 함량, 전체 조성물의 약학 유효랑, 유효 투여량은 상기 약학 조성물들의 투여로 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 투여 대상이 되는 개체의 종류, 연령, 체중, 일반적인 건강 상태, 질병의 증세나 정도, 성별, 식이, 배설, 해당 개체에 동시 또는 이시에 함께 사용되는 약물 기타 조성물의 성분 등을 비롯한 여러 인자 및 의약 분야에서 잘 알려진 유사 인자에 따라 다양해질 수 있으며, 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 목적하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다.In the pharmaceutical composition for preventing or treating skin dryness or abnormal skin barrier function, the anti-allergic pharmaceutical composition, the pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases, and the anti-inflammatory composition according to an embodiment of the present invention, ZAG is based on the total weight of the composition. It may be from 0.0001% to 10% by weight. However, the present invention is not limited thereto, and the pharmaceutical composition for preventing or treating skin dryness or abnormal skin barrier function, the anti-allergic pharmaceutical composition, the pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases, and the anti-inflammatory composition according to an embodiment of the present invention The effective amount of ZAG protein, furthermore, the pharmaceutically effective amount, the effective dosage amount of the whole composition can be varied by the method of formulating the pharmaceutical composition, mode of administration, time of administration and / or route of administration, and the like. Furthermore, the effective amount of ZAG protein with respect to the total composition, the pharmaceutical efficacy of the total composition, and the effective dosage may be determined by the type and extent of the reaction to be achieved by the administration of the pharmaceutical compositions, the type of subject to be administered, age, weight, general May vary according to a number of factors and similar factors well known in the medical arts, including health conditions, symptoms and severity of disease, sex, diet, excretion, components of drugs and other compositions used concurrently or concurrently with the subject, One of ordinary skill in the art can readily determine and prescribe a dosage effective for the desired treatment.

본 발명의 일 실시예에 따른 상기 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방 또는 치료용 약학 조성물, 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 조성물의 투여는 하루에 1 회 투여될 수 있고, 수회에 나누어 투여될 수 있다. 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.Administration of the pharmaceutical composition for preventing or treating skin dryness or abnormal skin barrier function, the anti-allergic pharmaceutical composition, the pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases and the anti-inflammatory composition according to an embodiment of the present invention is once a day It may be administered, and may be divided into several times. Therefore, the above dosage does not limit the scope of the present invention in any aspect.

본 발명의 일 실시예에 따른 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방 또는 치료용 약학 조성물, 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 조성물의 투여 경로 및 투여 방식은 각각 독립적일 수 있으며, 그 방식에 있어 특별히 제한되지 아니하며, 목적하는 해당 부위에 상기 약학 조성물들이 도달할 수 있는 한 임의의 투여 경로 및 투여 방식에 따를 수 있다. 상기 약학 조성물들은 경구 투여 또는 비경구 투여 방식으로 투여할 수 있으며, 바람직하게는 비경구 투여 방식으로 투여할 수 있다.A pharmaceutical composition for the prevention or treatment of dry skin or abnormal skin barrier function, an anti-allergic pharmaceutical composition, a pharmaceutical composition for preventing or treating an allergic disease and an anti-inflammatory composition according to an embodiment of the present invention are respectively It may be independent and is not particularly limited in its manner, and may be in accordance with any route of administration and mode of administration, as long as the pharmaceutical compositions can reach the desired site of interest. The pharmaceutical compositions may be administered by oral or parenteral administration, preferably by parenteral administration.

비경구 투여하는 방법으로는, 예를 들어 정맥 내 투여, 복강 내 투여, 근육 내 투여, 경피 투여 또는 피하 투여 등을 이용할 수 있으며, 본 발명의 일 실시예에 따른 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방 또는 치료용 약학 조성물, 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 조성물들을 질환 부위에 도포하거나 분무, 흡입하는 방법 또한 이용할 수 있으나 이들에 제한되지 아니한다.As a method for parenteral administration, for example, intravenous administration, intraperitoneal administration, intramuscular administration, transdermal administration or subcutaneous administration may be used, and the prevention of dry skin or abnormal skin barrier function according to an embodiment of the present invention. Alternatively, the method of applying, spraying or inhaling the therapeutic pharmaceutical composition, the anti-allergic pharmaceutical composition, the pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases, and the anti-inflammatory compositions may also be used, but is not limited thereto.

본 발명의 상기 약학 조성물들은 보다 바람직하게는 비경구 투여 중 경피 투여, 더욱 바람직하게는 상기 약학 조성물들을 개체의 피부에 도포하는 방식으로 이루어지는 국부 투여 방식으로 투여될 수 있다.The pharmaceutical compositions of the present invention may be administered by topical administration, more preferably transdermal administration during parenteral administration, more preferably by applying the pharmaceutical compositions to the skin of the individual.

본 발명의 다른 실시예에 따르면, ZAG를 포함하는 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 개선용 화장료 조성물이 제공된다.According to another embodiment of the present invention, a cosmetic composition for improving skin dryness or skin barrier function comprising ZAG is provided.

본 발명의 상기 화장료 조성물은 ZAG 단백질에 의하여 피부 장벽 기능을 개선하거나 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상을 예방, 개선 또는 치료하는 효과가 우수하며, 독성이 없어 인체에 적용하여도 부작용을 유발함이 없이 안전하다.The cosmetic composition of the present invention has an excellent effect of improving the skin barrier function or preventing, improving or treating skin dryness or abnormal skin barrier function by ZAG protein, without causing side effects even when applied to the human body because of no toxicity safe.

상기 함량 범위 내에서, 상기 ZAG 단백질을 적절한 양으로 사용하여 경제적이면서도 상기 단백질의 FLG 유전자 발현량 증가 효과가 충분히 발휘되어 본 발명의 목적을 달성하기에 보다 적합해지는 이점이 있다.Within the above content range, by using the ZAG protein in an appropriate amount, there is an advantage that the economic effect of increasing the expression level of the FLG gene of the protein is sufficiently exhibited to be more suitable to achieve the object of the present invention.

본 발명의 다른 실시예에 따른 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 개선용 화장료 조성물에 함유된 ZAG 단백질은 본 발명의 일 실시예에 따른 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 개선용 약학 조성물, 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 조성물과 관련하여 상기에서 설명한 바와 실질적으로 동일하다.ZAG protein contained in the cosmetic composition for improving skin dryness or skin barrier function according to another embodiment of the present invention is a pharmaceutical composition, anti-allergic pharmaceutical composition, allergic properties for improving skin dryness or skin barrier function according to an embodiment of the present invention It is substantially the same as described above in connection with the pharmaceutical and anti-inflammatory compositions for the prophylaxis or treatment of the disease.

상기 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상은 아토피피부염일 수 있다.The dry skin or skin barrier dysfunction may be atopic dermatitis.

상기 화장료 조성물은 전체 조성물 중량을 기준으로 0.0001 중량% 내지 10 중량%의 상기 ZAG를 포함할 수 있다.The cosmetic composition may include 0.0001 wt% to 10 wt% of the ZAG based on the total weight of the composition.

본 발명의 다른 실시예에 따른 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 개선용 화장료 조성물은 겔, 로션, 파우더, 클렌징, 오일, 파운데이션, 스프레이, 용액, 외용 연고, 크림, 폼, 영양 화장수, 유연 화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업 베이스, 에센스, 비우, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린 크림, 선 오일, 현탁액, 유탁액 및 페이스트로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.Cosmetic composition for improving skin dryness or skin barrier function according to another embodiment of the present invention is a gel, lotion, powder, cleansing, oil, foundation, spray, solution, external ointment, cream, foam, nutrition lotion, flexible lotion, pack, It may have a formulation selected from the group consisting of soft water, emulsion, makeup base, essence, emptying, liquid cleanser, bath, sunscreen cream, sun oil, suspension, emulsion and paste.

본 발명의 다른 실시예에 따른 상기 화장료 조성물은 바람직하게는 외용 연고, 로션 등과 같은 반고형 제제로 제조될 수 있으나 이에 제한되지 않는다.The cosmetic composition according to another embodiment of the present invention may be preferably prepared as a semi-solid preparation, such as external ointment, lotion, but is not limited thereto.

본 발명의 다른 실시예에 따른 상기 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1 종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면 활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The cosmetic composition according to another embodiment of the present invention may further include one or more cosmetically acceptable carriers formulated in general skin cosmetics, and as a typical component, for example, oil, water, surfactants, moisturizers Lower alcohols, thickeners, chelating agents, pigments, preservatives, fragrances and the like may be appropriately blended, but are not limited thereto.

본 발명의 다른 실시예에 따른 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 제형에 따라 다양하다.The cosmetically acceptable carrier included in the cosmetic composition according to another embodiment of the present invention varies depending on the dosage form.

본 발명의 다른 실시예에 따른 화장료 조성물의 제형이 연고, 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는, 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화 아연 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.When the formulation of the cosmetic composition according to another embodiment of the present invention is an ointment, a paste, a cream or a gel, as a carrier component, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracant, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite , Silica, talc, zinc oxide and the like may be used, but is not limited thereto. These may be used alone or in combination of two or more thereof.

본 발명의 다른 실시예에 따른 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 등이 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로하드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.When the formulation of the cosmetic composition according to another embodiment of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate, polyamide powder, etc. may be used as the carrier component, and in particular, spray May further include, but are not limited to, propellants such as chlorofluorohydrocarbons, propane / butane or dimethyl ether. These may be used alone or in combination of two or more thereof.

본 발명의 다른 실시예에 따른 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the cosmetic composition according to another embodiment of the present invention is a surfactant-containing cleansing agent, as a carrier component, an aliphatic alcohol sulfate, an aliphatic alcohol ether sulfate, a sulfosuccinic acid monoester, an isethionate, an imidazolinium derivative, a methyltau Laterates, sarcosinates, fatty acid amide ether sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, lanolin derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters and the like can be used.

본 발명의 다른 실시예에 따른 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제 등이 이용될 수 있으며, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일 등이 이용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.When the formulation of the cosmetic composition according to another embodiment of the present invention is a solution or emulsion, a solvent, a solubilizer or an emulsifier may be used as a carrier component, for example, water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate Benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1,3-butylglycol oil and the like can be used, and in particular, cottonseed oil, peanut oil, corn seed oil, olive oil, castor oil and sesame oil, glycerol aliphatic ester, Fatty acid esters of polyethylene glycol or sorbitan may be used, but are not limited thereto. These may be used alone or in combination of two or more thereof.

본 발명의 다른 실시예에 따른 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타하이드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.When the formulation of the cosmetic composition according to another embodiment of the present invention is a suspension, a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbent as carrier components Suspending agents such as non-elastic esters, microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracant and the like can be used, but are not limited thereto. These may be used alone or in combination of two or more thereof.

본 발명의 다른 실시예에 따른 화장료 조성물의 제형이 비누인 경우에는, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 이용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상 혼합되어 사용될 수 있다.When the formulation of the cosmetic composition according to another embodiment of the present invention is a soap, as a carrier component, an alkali metal salt of a fatty acid, fatty acid hemiester salt, fatty acid protein hydrolyzate, isethionate, lanolin derivative, aliphatic alcohol, vegetable Oil, glycerol, sugars and the like may be used, but are not limited thereto. These may be used alone or in combination of two or more thereof.

본 발명의 또 다른 실시예에 따르면, 상기 약학적 조성물을 개체의 피부에 도포하는 것을 포함하는, 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방 또는 치료 방법이 제공된다. 본 발명의 또 다른 실시예에 따른 치료 방법에서의 약학적 조성물에 함유된 ZAG 단백질은 본 발명의 일 실시예에 따른 예방 또는 치료용 조성물과 관련하여 상기에서 설명한 바와 실질적으로 동일하다.According to another embodiment of the present invention, there is provided a method for preventing or treating skin dryness or skin barrier dysfunction comprising applying the pharmaceutical composition to the skin of an individual. The ZAG protein contained in the pharmaceutical composition in the method of treatment according to another embodiment of the present invention is substantially the same as described above in connection with the prophylactic or therapeutic composition according to an embodiment of the present invention.

본 발명의 또 다른 실시예에 따른 ZAG 를 포함하는 FLG 활성화제가 제공된다.In accordance with another embodiment of the present invention there is provided an FLG activator comprising a ZAG.

본 발명에서 사용되는 용어, "FLG 활성화제"는 표피에서의 FLG 유전자의 발현량을 증가시키는 작용을 하는 물질을 의미한다. 본 발명의 ZAG 단백질은 FLG 유전자의 발현량을 크게 증가시키는 것으로 확인되었다.As used herein, the term "FLG activator" means a substance that acts to increase the expression level of the FLG gene in the epidermis. The ZAG protein of the present invention was found to significantly increase the expression level of the FLG gene.

본 발명의 상기 ZAG 단백질의 유효 함량은 특별히 제한되지 않으며, 상기 FLG 활정화제의 총 중량에 대하여 0.00001 내지 10 중량％로 포함되거나 전체 함량으로도 포함될 수 있다. 바람직하게는 ZAG 단백질의 유효 함량은 정상 혈중 농도에 근접하거나 정상 혈중 농도에 근접하도록 하는 함량일 수 있다.An effective amount of the ZAG protein of the present invention is not particularly limited and may be included in 0.00001 to 10% by weight or in total as a total weight of the FLG lubricating agent. Preferably, the effective amount of ZAG protein may be such that it is close to or close to normal blood concentration.

본 명세서에서 "개체"는 쥐, 가축, 인간 등을 포함하는 포유 동물을 비롯한 모든 동물을 의미한다.As used herein, "individual" means all animals, including mammals, including rats, domestic animals, humans, and the like.

본 명세서에서 "도포"는 임의의 적절한 방법으로 개체의 피부에 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 접촉시키는 것을 의미하며, 이를 통해 해당 조성물을 피부 내부로 흡수시키는 것을 목적으로 한다.As used herein, "application" refers to contacting the skin of a subject with any suitable method for the prevention or treatment of dry skin or dysfunction of the skin barrier, through which the composition is intended to be absorbed into the skin. .

본 발명의 일 실시예에 따른 상기 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상을 개선시키는 방법에서 개체의 피부에 도포하는 도포량 또는 투여량은 본 발명의 상기 약학적 조성물과 관련하여 상기에서 설명한 투여량과 실질적으로 동일하므로, 중복되는 설명은 생략된다.In the method for improving dry skin or skin barrier function according to an embodiment of the present invention, the application amount or dosage applied to the skin of the individual is substantially the same as the dosage described above in connection with the pharmaceutical composition of the present invention. Since it is the same, overlapping description is omitted.

본 발명의 일 실시예에 따른 상기 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상을 개선시키는 방법은 상기 약학적 조성물을 인간을 제외한 개체에 투여하는 것을 포함한다.According to one embodiment of the present invention, the method for improving dry skin or abnormal skin barrier function includes administering the pharmaceutical composition to a subject other than a human.

본 발명의 약학 조성물들은 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상을 예방, 개선 또는 치료할 수 있으며, 나아가 아토피피부염을 예방, 개선 또는 치료하는 효과를 나타낸다.The pharmaceutical compositions of the present invention can prevent, ameliorate or treat dry skin or skin barrier dysfunction, and furthermore, have an effect of preventing, ameliorating or treating atopic dermatitis.

보다 구체적으로, 본 발명의 상기 약학 조성물들은 피부 세포의 분화를 촉진함으로써 표피 분화의 불완전에서 비롯되는 여러 피부 질환들을 치료하는 데에 사용될 수 있다.More specifically, the pharmaceutical compositions of the present invention can be used to treat various skin diseases resulting from incomplete epidermal differentiation by promoting differentiation of skin cells.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 다만, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것에 불과하므로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 한정되는 것으로 해석되어서는 아니된다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. However, these examples are only for illustrating the present invention by way of example, and the scope of the present invention should not be construed as being limited by these examples.

본 발명은 ZAG 단백질을 유효 성분으로 함유하는 다양한 조성물을 제공하고, 이를 이용하여 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상, 특히 아토피피부염의 예방 또는 치료하는 효과를 나타낸다.The present invention provides various compositions containing ZAG protein as an active ingredient, and exhibits the effect of preventing or treating skin dryness or skin barrier dysfunction, in particular atopic dermatitis.

구체적으로, ZAG 단백질을 유효 성분으로 함유하는 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방용 또는 치료용 약학 조성물은 FLG 유전자의 발현을 활성시키는 효능을 나타내며 이에 의해 FLG의 생성을 촉진함으로써, FLG의 감소로 인해 비롯되는 아토피피부염을 치료하는데 사용될 수 있다.In particular, the prophylactic or therapeutic pharmaceutical composition for skin dryness or skin barrier dysfunction containing a ZAG protein as an active ingredient exhibits the effect of activating the expression of the FLG gene and thereby promotes the production of FLG, thereby reducing FLG. It can be used to treat the resulting atopic dermatitis.

나아가, ZAG 단백질을 유효 성분으로 함유하는 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 조성물은 알러지성 질환과 연관된 히스타민뿐만 아니라, 다양한 염증성 사이토카인의 수준, Treg 세포의 수준을 조절하는 효과를 나타낸다. Furthermore, anti-allergic pharmaceutical compositions containing ZAG protein as an active ingredient, pharmaceutical compositions for the prophylaxis or treatment of allergic diseases, and anti-inflammatory compositions include not only histamine associated with allergic diseases, but also various levels of inflammatory cytokines, Treg cells. It has the effect of adjusting the level.

이에, ZAG 단백질을 유효 성분으로 함유하는 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 조성물은 아토피피부염을 포함하는 다양한 알러지성 질환의 예방 또는 치료하는데 이용될 수 있는 효과가 있다. Accordingly, the anti-allergic pharmaceutical composition containing ZAG protein as an active ingredient, the pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases, and the anti-inflammatory composition can be used to prevent or treat various allergic diseases including atopic dermatitis. There is.

나아가, ZAG 단백질을 유효 성분으로 함유하는 본 발명의 다양한 실시예에 따른 약학 조성물들은 피부 건조증, 피부 장벽 이상에 대한 개선 효과를 나타내는 동시에, 항염증 효과를 나타내어, 향후 스테로이제 성분의 아토피피부염 치료제의 대체물로서 이용될 수 있는 효과가 있다. Furthermore, the pharmaceutical compositions according to various embodiments of the present invention containing ZAG protein as an active ingredient exhibit an improvement effect on dry skin and abnormal skin barriers and at the same time have an anti-inflammatory effect, thereby treating atopic dermatitis of the steroid agent component in the future. There is an effect that can be used as a substitute for.

본 발명에 따른 효과는 이상에서 예시된 내용에 의해 제한되지 않으며, 더욱 다양한 효과들이 본 명세서 내에 포함되어 있다.The effects according to the present invention are not limited by the contents exemplified above, and more various effects are included in the present specification.

도 1a는 IF (immunofluorescence) 방식으로 ZAG와 FLG의 위치와 발현량을 확인하기 위한 실험 결과이다.
도 1b는 정상의 인간 피부와 아토피피부염의 인간 피부에서 ZAG와 FLG의 위치와 발현량을 비교하기 위한 실험 결과들이다.
도 1c는 아토피피부염 마우스 모델에서의 ZAG와 FLG의 위치와 발현량을 나타내기 위한 실험 결과이다.
도 1d는 아토피피부염 마우스 모델에서 정상의 피부와 아토피피부염의 피부에서 ZAG와 FLG의 위치와 발현량을 비교하기 위한 실험 결과들이다.
도 2a 및 2b는 정상 마우스와 FLG가 결실된 Flanky Tail 마우스에서 ZAG의 발현량을 확인하기 위한 실험 결과들이다.
도 3a 내지 3b는 ZAG를 녹다운 (knockdown) 시킨 각질형성세포 (Keratinocyte) 에서 ZAG, FLG의 발현량을 RT-Q-PCR 및 면역형광염색 방식으로 확인하기 위한 실험 결과들이다.
도 4는 아토피피부염 유발 사이토카인인 TSLP와 보습제의 한 성분인 caffeic acid, hydroxydecine 에 의한 ZAG의 발현량 변화를 확인하기 위한 실험 결과들이다.
도 5a 및 5b는 H&E 염색 방식으로 정상군과 ZAG를 녹다운 시킨 3D-SKIN에서 rhZAG를 처리한 후의 효과를 나타내는 실험 결과들이다.
도 5c는 면역형광염색 방식으로 ZAG를 녹다운 시킨 3D-SKIN에서 rhZAG를 처리한 후의 ZAG의 발현량을 확인하기 위한 실험 결과들이다.
도 5d는 RT-Q-PCR 방식으로 3D-SKIN에서 rhZAG를 처리한 후 FLG과 ZAG 유전자의 발현량을 확인하기 위한 실험 결과이다.
도 6a는 정상의 피부 모델, 아토피피부염의 피부 모델, ZAG를 처리한 아토피피부염 피부 모델에서의 조직학적 분석결과를 나타내는 실험결과이다.
도 6b는 정상의 피부 모델, 아토피피부염의 피부 모델, ZAG를 처리한 아토피피부염 피부 모델에서의 피부염 발생점수 및 TEWL의 수준을 측정한 결과를 나타내는 실험결과이다.
도 6c는 정상의 피부 모델, 아토피피부염의 피부 모델, ZAG를 처리한 아토피피부염 피부 모델내의 혈청에서의 IgE의 수준을 측정한 결과를 나타내는 실험결과이다.
도 6d는 아토피피부염의 피부 모델, ZAG를 처리한 아토피피부염 피부 모델내의 림프절에서의 염증성 사이토카인 및 Treg 세포의 수준을 측정한 결과를 나타내는 실험결과이다.
도 6e는 아토피피부염의 피부 모델, ZAG를 처리한 아토피피부염 피부 모델내의 비장에서의 염증성 사이토카인 및 Treg 세포의 수준을 측정한 결과를 나타내는 실험결과이다.
도 7a는 ZAG 처리에 따른, B 림프구 세포주에서의 IgE의 수준을 나타내는 실험결과이다.
도 7b는 ZAG 처리에 따른, 호염구/비만 세포주에서의 히스타민 및 염증성 사이토카인의 수준을 나타내는 실험결과이다.
도 7c는 ZAG 처리에 따른, 대식세포주에서의 염증성 사이토카인의 수준을 나타내는 실험결과이다.
도 7d는 ZAG 처리에 따른, 각질형성세포주에서의 염증성 사이토카인의 수준을 나타내는 실험결과이다.
도 7e는 ZAG 처리에 따른, B 림프구 세포주, 호염구/비만 세포주, 대식세포주 및 각질형성세포주의 세포증식 효과를 나타내는 실험결과이다.Figure 1a is an experimental result for confirming the position and expression amount of ZAG and FLG in the IF (immunofluorescence) method.
1B are experimental results for comparing the position and expression level of ZAG and FLG in normal human skin and human skin of atopic dermatitis.
Figure 1c is an experimental result to show the location and expression of ZAG and FLG in atopic dermatitis mouse model.
FIG. 1D is experimental results for comparing the position and expression level of ZAG and FLG in normal skin and skin of atopic dermatitis in atopic dermatitis mouse model.
2a and 2b are experimental results for confirming the expression level of ZAG in normal mice and Flanky Tail mice deleted FLG.
3A to 3B are experimental results for confirming ZAG and FLG expression levels in RT-Q-PCR and immunofluorescence staining in Keratinocytes knocked down ZAG.
Figure 4 is an experimental result for confirming the change in the expression level of ZAG by atopic dermatitis-induced cytokine TSLP and moisturizers caffeic acid, hydroxydecine.
5a and 5b are experimental results showing the effect after rhZAG treatment in 3D-SKIN knocked down the normal group and ZAG by H & E staining method.
5C shows experimental results for confirming the expression level of ZAG after rhZAG treatment in 3D-SKIN knocked down ZAG by immunofluorescence staining.
Figure 5d is an experimental result for confirming the expression level of the FLG and ZAG gene after rhZAG treatment in 3D-SKIN by RT-Q-PCR method.
Figure 6a is an experimental result showing the results of histological analysis in a normal skin model, atopic dermatitis skin model, ZAG-treated atopic dermatitis skin model.
Figure 6b is an experimental result showing the results of measuring the dermatitis occurrence score and the level of TEWL in a normal skin model, atopic dermatitis skin model, ZAG-treated atopic dermatitis skin model.
6C is an experimental result showing the result of measuring the level of IgE in serum in a normal skin model, atopic dermatitis skin model, and ZAG-treated atopic dermatitis skin model.
Figure 6d is an experimental result showing the results of measuring the level of inflammatory cytokines and Treg cells in lymph nodes in atopic dermatitis skin model, ZAG-treated atopic dermatitis skin model.
Figure 6e is an experimental result showing the results of measuring the levels of inflammatory cytokines and Treg cells in the spleen in atopic dermatitis skin model, ZAG-treated atopic dermatitis skin model.
Figure 7a is an experimental result showing the level of IgE in B lymphocyte cell line following ZAG treatment.
Figure 7b is an experimental result showing the level of histamine and inflammatory cytokines in basophils / mast cell lines following ZAG treatment.
Figure 7c is an experimental result showing the level of inflammatory cytokines in macrophages following ZAG treatment.
Figure 7d is an experimental result showing the level of inflammatory cytokines in keratinocytes following ZAG treatment.
Figure 7e is an experimental result showing the cell proliferation effect of B lymphocyte cell line, basophils / mast cell line, macrophage cell line and keratinocyte cell line according to ZAG treatment.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나, 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.Advantages and features of the present invention and methods for achieving them will be apparent with reference to the embodiments described below in detail with the accompanying drawings. However, the present invention is not limited to the embodiments disclosed below, but may be implemented in various different forms, only the present embodiments to make the disclosure of the present invention complete, and common knowledge in the art to which the present invention pertains. It is provided to fully inform the person having the scope of the invention, which is defined only by the scope of the claims.

이하에서는 피부 건조증 및 피부 기능 이상을 아토피피부염의 피부, FLG 결실, ZAG 녹다운된 각질형성세포 등을 예시로 들어 설명하나, 이에 제한되지 않고, 본 발명의 다양한 실시예에 따른 피부 건조증 및 피부 기능 이상의 개선은 ZAG 단백질에 의해 FLG이 증가함으로써 개선되는 한 다양한 피부 건조증 및 피부 기능 이상에 적용될 수 있다.Hereinafter, the skin dryness and abnormal skin function will be described as an example of skin of atopic dermatitis, FLG deletion, ZAG knocked down keratinocytes and the like, but not limited thereto, and the skin dryness and abnormal skin function according to various embodiments of the present invention. The improvement may be applied to a variety of dry skin and skin dysfunction as long as it is improved by increasing FLG by ZAG protein.

또한, 이하에서는 NHEK (normal human epidermal keratinocyte), HaCaT, RPMI 1788, RBL-2H3 및 Raw 264.7세포를 예시적으로, 다양한 실시예에 따른 조성물에 대한 항알러지 효과를 설명하지만, 이에 제한되지 않고 본 발명의 조성물은 알러지와 연관된 다양한 세포, 더 나아가 알러지와 연관된 다양한 반응을 나타내는 개체에 대하여 알러지 반응의 억제 효과가 있을 수 있다. In addition, exemplified by the anti-allergic effect of NHEK (normal human epidermal keratinocyte), HaCaT, RPMI 1788, RBL-2H3 and Raw 264.7 cells by way of example, compositions according to various embodiments, without being limited thereto. The composition of may have an inhibitory effect on the allergic response to various cells associated with the allergy, and further to individuals exhibiting various responses associated with the allergy.

실시예 1: 아토피피부염 피부에서의 ZAG 단백질 및 FLG의 발현량 분석Example 1 Analysis of Expression of ZAG Protein and FLG in Atopic Dermatitis Skin

아토피피부염에서의 ZAG 단백질의 기능을 분석하기 위해 정상의 인간 피부와 아토피피부염의 피부에서 면역형광염색 (immunofluorescence) 방식으로 ZAG 단백질과 FLG 단백질을 각각 염색하였다. 도 1a의 (a) - (e) 를 참조하면, 정상의 인간 피부에서의 DAPI (청색), ZAG (녹색: FITC) 및 FLG (적색: alexa633) 이 도시된다. 정상의 인간 피부에서는 ZAG와 FLG이 위쪽 과립층 (granular layer) 에 발현된다. 도 1b의 (a) 에서는 정상의 인간 피부 (HC) 와 아토피피부염의 피부 (HAD) 를 비교하여 도시한다. 정상의 인간 피부 (HC) 와 비교하여 아토피피부염의 피부 (HAD) 에서 FLG와 ZAG의 발현량이 현저하게 감소된다. 도 1b의 (b) 에서는 피부 장벽과 각질형성세포 분화와 연관된 단백질인 IVL (Involurine) 과 TGase1을 IF 방식으로 염색하였다. IVL과 TGase 1도 모두 감소하였다. 도 1b의 (c) 에서는 도 1b의 (a) 에서의 형광 강도를 측정하였으며, 아토피피부염의 피부 (HAD) 에서 FLG와 ZAG의 발현량이 정상의 피부 (HC) 와 비교하여 약 절반으로 나타난다.In order to analyze the function of ZAG protein in atopic dermatitis, ZAG protein and FLG protein were stained by immunofluorescence in normal human skin and atopic dermatitis skin, respectively. Referring to FIGS. 1A-A, DAPI (blue), ZAG (green: FITC) and FLG (red: alexa633) in normal human skin are shown. In normal human skin, ZAG and FLG are expressed in the upper granular layer. FIG. 1B (a) shows a comparison between normal human skin (HC) and skin of atopic dermatitis (HAD). The expression levels of FLG and ZAG in the skin of atopic dermatitis (HAD) are significantly reduced compared to normal human skin (HC). In FIG. 1B (b), IVL (Involurine) and TGase1, proteins associated with skin barrier and keratinocyte differentiation, were stained by IF. Both IVL and TGase 1 also decreased. In (c) of FIG. 1b, the fluorescence intensity of (a) of FIG. 1b was measured, and the expression level of FLG and ZAG in the skin (HAD) of atopic dermatitis was about half that of normal skin (HC).

도 1c와 1d에서는 아토피피부염에서의 ZAG 단백질의 기능을 분석하기 위해 정상의 NC/Nga 마우스 피부와 아토피피부염 유발 NC/Nga 마우스 피부에서 IF 방식으로 ZAG 단백질과 FLG 단백질을 각각 염색하였다. 아토피피부염 유발 NC/Nga 마우스 피부 (AD) 모델의 설정을 위해, 먼저 NC/ Nga 마우스의 등쪽의 털을 완전히 제거한 후, 200 μl의 4% SDS (sodium dodecyl sulfate) 용액을 도포하여 마우스의 피부장벽을 무력화한다. SDS 도포 2시간 후, 100 mg의 DfE (D. farinae body extract) 를 마우스의 피부에 도포한다. 이상의 과정을 일주일에 2번씩, 6주동안 반복하여 아토피피부염 유발 마우스 피부 (AD) 모델을 설정한다.In FIGS. 1C and 1D, ZAG protein and FLG protein were stained by IF method in normal NC / Nga mouse skin and atopic dermatitis-induced NC / Nga mouse skin to analyze the function of ZAG protein in atopic dermatitis. To set up atopic dermatitis-induced NC / Nga mouse skin (AD) model, first remove the dorsal hair completely from the NC / Nga mouse, and then apply 200 μl of 4% SDS (sodium dodecyl sulfate) solution to the skin barrier of the mouse. Neutralize. 2 mg after SDS application, 100 mg of Df E ( D. farinae body extract) is applied to the skin of mice. The above procedure is repeated twice a week for 6 weeks to establish an atopic dermatitis-induced mouse skin (AD) model.

도 1c의 (a) - (d) 를 참조하면, 정상의 마우스 피부에서의 ZAG (녹색) 및 FLG (적색) 이 도시된다. 도 1d의 (a) 에서는 정상의 마우스 피부 (NL) 와 아토피피부염 유발 마우스 피부 (AD) 를 비교하여 도시한다. 정상의 마우스 피부 (NL) 와 비교하여 아토피피부염 유발 마우스 피부 (AD) 에서 FLG와 ZAG의 발현량이 현저하게 감소된다. 도 1d의 (b) 에서는 도 1d의 (a) 에서의 형광 강도를 측정하였으며, 아토피피부염 유발 마우스 피부 (AD) 에서 FLG와 ZAG의 발현량이 정상의 마우스 피부 (NL) 와 비교하여 약 절반으로 나타난다.Referring to (a)-(d) of FIG. 1C, ZAG (green) and FLG (red) in normal mouse skin are shown. FIG. 1D shows a comparison of normal mouse skin (NL) and atopic dermatitis-induced mouse skin (AD). The expression levels of FLG and ZAG are markedly reduced in atopic dermatitis induced mouse skin (AD) compared to normal mouse skin (NL). In (b) of FIG. 1d, the fluorescence intensity of (a) of FIG. 1d was measured, and the expression level of FLG and ZAG in atopic dermatitis-induced mouse skin (AD) was about half that of normal mouse skin (NL). .

실시예 2: FLG이 결실된 Flanky Tail 마우스에서의 ZAG 발현량 분석Example 2: Analysis of ZAG Expression in Flanky Tail Mice Deleting FLG

ZAG와 FLG의 기능적 상호 작용을 확인하기 위해 정상의 B6 마우스의 피부와 FLG이 결실된 Flanky Tail 마우스에서 면역형광염색 방식으로 DAPI (청색), ZAG (녹색) 및 FLG (적색) 을 각각 염색하였다. 도 2a 및 도 2b를 참조하면, 정상의 B6 마우스의 피부 (정상 B6 Mouse, 도 2b의 a-1, a-2) 보다 FLG이 결실된 Flanky Tail 마우스의 피부 (Flanky Tail mouse, 도 2b의 b-1, b-2) 에서 ZAG 및 FLG의 발현량이 감소하였다.To confirm the functional interaction of ZAG and FLG, DAPI (blue), ZAG (green) and FLG (red) were stained by immunofluorescent staining in the skin of normal B6 mice and Flanky Tail mice that had FLG deleted. 2A and 2B, the skin of a Flanky Tail mouse (Flanky Tail mouse, b of FIG. 2B) in which FLG is deleted from the skin of a normal B6 mouse (normal B6 Mouse, a-1 and a-2 of FIG. 2B). -1, b-2) decreased the expression level of ZAG and FLG.

실시예 3: ZAG를 낙다운시킨 각질형성세포 (keratinocytes) 및 TSLP를 처리한 각질형성세포에서 FLG의 발현량 분석Example 3 Analysis of FLG Expression Levels in Keratinocytes Dropped by ZAG and Keratinocytes Treated with TSLP

ZAG와 FLG의 기능적 상호 작용을 확인하기 위해 대조군으로 각질형성세포에 Scramble siRNA (25 nM, 48hr) 를 처리하고, 실험군으로 각질형성세포에 ZAG siRNA (25 nM, 48hr) 를 처리하였다. 도 3a의 (a) 를 참조하면, RT-q-PCR을 통해 48시간 이후에 Scramble siRNA를 처리한 Control에 비해 ZAG siRNA를 처리한 대조 군에서 ZAG 유전자의 발현량이 현저하게 감소하여 녹다운된다. 도 3a의 (b) 를 참조하면, 면역형광염색 방식을 통해 ZAG와 FLG이 대조군 (SC siRNA 처리 각질형성세포) 에 비해 실험군 (ZAG siRNA 처리 각질형성세포) 에서 감소된다. 도 3b에서는 RT-q-PCR 방법을 통하여 대조군에비해 실험군에서 ZAG 와 FLG 유전자 발현이 감소된다.In order to confirm the functional interaction of ZAG and FLG, Scramble siRNA (25 nM, 48hr) was treated to keratinocytes as a control group, and ZAG siRNA (25 nM, 48hr) was treated to keratinocytes as an experimental group. Referring to (a) of FIG. 3A, the expression level of the ZAG gene in the control group treated with ZAG siRNA is significantly reduced and knocked down compared to the control treated with Scramble siRNA after 48 hours through RT-q-PCR. Referring to Figure 3a (b), through the immunofluorescent staining method ZAG and FLG is reduced in the experimental group (ZAG siRNA treated keratinocytes) compared to the control group (SC siRNA treated keratinocytes). In FIG. 3b, ZAG and FLG gene expression is reduced in the experimental group compared to the control group by the RT-q-PCR method.

실시예 4: 아토피피부염과 연관된 피부 장벽 붕괴에 대한 ZAG의 기능 분석Example 4 Functional Analysis of ZAG on Skin Barrier Disruption Associated with Atopic Dermatitis

정상 각질형성세포에 TSLP를 처리하여 아토피피부염과 연관된 피부 장벽 붕괴를 재현하였다. 도 4의 (a) 와 (b) 를 참조하면, TSLP 처리 후 ZAG 유전자 및 단백질의 발현량이 다소 감소하였고 각질형성세포의 분화를 촉진하는 것으로 알려진 카페산 (caffeic acid) 와 hydroxydesin 각각을 추가로 처리하였을 때, ZAG의 발현량이 증가한다.Normal keratinocytes were treated with TSLP to reproduce skin barrier disruption associated with atopic dermatitis. Referring to (a) and (b) of FIG. 4, after ZLP, ZAG genes and proteins were slightly reduced in expression and treated with caffeic acid and hydroxydesin, which are known to promote differentiation of keratinocytes. When expressed, the expression level of ZAG increases.

HaCaT에 집먼지 진드기 항원 (DfE) 를 처리하여 아토피피부염과 연관된 피부 장벽 붕괴를 재현하였다. 도 4의 (c) 를 참조하면, 집먼지 진드기 항원을 처리했을 때 ZAG 단백질의 발현량이 다소 감소하였다. HaCaT was treated with house dust mite antigen ( Df E) to reproduce skin barrier disruption associated with atopic dermatitis. Referring to Figure 4 (c), the amount of ZAG protein expression was slightly reduced when the house dust mite antigen treatment.

실시예 1 내지 4를 참조하면, ZAG의 발현량과 FLG의 발현량에는 비례적 관계가 있음을 확인할 수 있었으며, 본 발명의 발명자들은 이에 착안하여 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 경우 ZAG 및/또는 FLG의 발현량이 감소될 수 있으므로, ZAG 단백질을 처리함으로써 FLG의 발현량을 증가시키고 활성화시킬 수 있다는 점을 발견하였다. 이에 본 발명의 발명자들은 아토피피부염 사이토카인인 TSLP와 아토피피부염 원인 항원인 집먼지 진드기에 의해 ZAG의 발현이 감소하며 ZAG 단백질의 처리는 FLG의 발현량 증가시킬 수 있음을 발견하고, 피부 건조증의 완화 또는 피부 장벽 기능을 개선시킬 수 있으며, 보다 구체적으로는 아토피피부염의 증상중 하나인 피부 건조증을 완화시킬 수 있는, ZAG를 포함하는 약학 조성물을 발명하였다.Referring to Examples 1 to 4, it was confirmed that there is a proportional relationship between the expression level of ZAG and the expression level of FLG, and the inventors of the present invention focus on the ZAG and / or FLG in case of skin dryness or abnormal skin barrier function. It has been found that the amount of expression of FLG can be increased and activated by treating the ZAG protein since the amount of expression can be reduced. Therefore, the inventors of the present invention found that the expression of ZAG is reduced by TSLP, which is an atopic dermatitis cytokine, and house dust mite, which is an atopic dermatitis-causing antigen, and that the treatment of ZAG protein can increase the expression level of FLG, Invented a pharmaceutical composition comprising ZAG, which can improve skin barrier function, and more specifically, can alleviate dry skin, which is one of the symptoms of atopic dermatitis.

실시예 5: 3D-SKIN에서 scrambled siRNA를 처리한 그룹과 ZAG siRNA를 처리하고 rhZAG를 처리한 후의 피부 건조증의 완화, 피부 장벽 기능 개선 및 아토피피부염 증상 완화 평가Example 5: Evaluation of alleviation of dry skin, improvement of skin barrier function and alleviation of atopic dermatitis after treatment with scrambled siRNA and ZAG siRNA and rhZAG in 3D-SKIN

1번 그룹 (NL) 은 3D-SKIN (Tego science사의 Neoderm ED) 을 1주일간 배양시켰다. 2번 그룹 (Scrambled siRNA) 은 3D-SKIN에 Scrambled siRNA를 포함하는 배지를 2일마다 갈아주며 1주일간 배양시켰다. 3번 그룹 (ZAG siRNA) 은 3D-SKIN에 ZAG siRNA를 포함하는 배지를 2일 마다 갈아주며 1주일간 배양시켰다. 4번 그룹 (ZAG siRNA + rhZAG) 은 3번 그룹과 동일하게 ZAG siRNA를 포함하는 배지를 2일 마다 갈아주며 1주일간 배양한 후, rhZAG (human recombinant ZAG 40㎍) 을 처리하고 7일 후 파라핀 블록을 제작하였다. 각각의 그룹은 3개의 샘플로 제작되었으며, H&E 염색하여 촬영하였다.Group 1 (NL) incubated 3D-SKIN (Neoderm ED from Tego Science) for 1 week. Group 2 (Scrambled siRNA) was cultured for 1 week, changing the medium containing Scrambled siRNA in 3D-SKIN every 2 days. Group 3 (ZAG siRNA) was incubated for 1 week by changing the medium containing ZAG siRNA in 3D-SKIN every 2 days. Group 4 (ZAG siRNA + rhZAG) is the same as the Group 3, the medium containing ZAG siRNA change every 2 days and incubated for 1 week, treated with rhZAG (human recombinant ZAG 40㎍) and 7 days after paraffin block Was produced. Each group was made of three samples and photographed by H & E staining.

도 5a를 참조하면, 1번 그룹 (NL) 의 모든 샘플에서 상부의 표피와 하부의 진피가 굵고 선명하게 나타나며, 2번 그룹 (Scarmbled siRNA) 에서도 마찬가지로 표피와 진피가 견고하며 선명하게 나타난다. 도 5b를 참조하면, 3번 그룹 (ZAG siRNA) 에서는 진피와 표피에 간극이 발생하고 진피와 표피의 양이 1번 및 2번 그룹과 비교하여 상대적으로 감소한다. 한편, rhZAG를 처리한 4번 그룹에서는 ZAG가 낙다운되었음에도 불구하고 3번 그룹과는 다르고 1번 그룹과 2번 그룹과 같이 진피와 표피 사이의 간극이 없어지고 진피와 표피의 양이 증가한다. RhZAG를 처리했을 때 피부 장벽이 ZAG가 감소되었을 때보다 개선된다.Referring to FIG. 5A, the upper epidermis and the lower dermis appear thick and clear in all samples of group 1 (NL), and the epidermis and dermis appear firmly and clearly in group 2 (Scarmbled siRNA). Referring to FIG. 5B, in group 3 (ZAG siRNA), gaps occur in the dermis and the epidermis, and the amount of the dermis and the epidermis decreases in comparison with the groups 1 and 2. On the other hand, in group 4 treated with rhZAG, although ZAG fell down, it was different from group 3 and the gap between the dermis and epidermis disappeared and the amount of dermis and epidermis increased as in group 1 and group 2. Treatment with RhZAG improves the skin barrier than when ZAG is reduced.

도 5c는 상기 3D-SKIN 군들을 면역형광염색 방식으로 DAPI (청색), ZAG (녹색) 및 FLG (적색) 을 염색한 후 촬영한 결과이다. 도 5c를 참조하면, Scrambled siRNA를 처리한 군에서는 ZAG와 FLG 모두 관찰되며, ZAG siRNA를 처리한 군에서는 ZAG와 FLG 모두 감소된다. rhZAG를 처리한 후에는 ZAG와 FLG모두 발현량이 증가한다.Figure 5c is the result of the 3D-SKIN group was photographed after staining DAPI (blue), ZAG (green) and FLG (red) by the immunofluorescent staining method. Referring to FIG. 5C, both ZAG and FLG are observed in the group treated with Scrambled siRNA, and both ZAG and FLG are decreased in the group treated with ZAG siRNA. After rhZAG treatment, the expression levels of both ZAG and FLG increased.

도 5d는 상기 3D-SKIN에서 1번 및 2번 정상 그룹 (NL) 과 3D-SKIN에 ZAG를 13㎍ 처리한 3번 그룹 그리고 ZAG를 40㎍ 처리한 4번 그룹에서 FLG 유전자와 ZAG 유전자의 발현량을 RT-q-PCR 방식으로 확인한 것이다. 도 5d를 참조하면, 1번 정상 그룹 (1. NL) 과 비교하여 rhZAG를 정상 혈중 농도인 40㎍을 처리한 4번 그룹에서 FLG과 ZAG 유전자가 증가한다. 5D shows the expression of the FLG and ZAG genes in the normal groups 1 and 2 in the 3D-SKIN (NL), the 3rd group treated with 13 μg of ZAG in 3D-SKIN, and the 4th group treated with 40 μg of ZAG. The amount was confirmed by RT-q-PCR method. Referring to FIG. 5D, the FLG and ZAG genes are increased in the fourth group which treated rhZAG with a normal blood concentration of 40 µg compared to the first normal group (1. NL).

실시예 6: ZAG를 처리한 아토피피부염 유발 마우스 피부 (AD) 에 대한 평가Example 6: Evaluation of Atopic Dermatitis-Induced Mouse Skin (AD) Treated with ZAG

본 평가를 위해, 실시예 1에 전술된 방법과 동일한 방법으로 설정한 아토피피부염 유발 마우스 피부 (AD) 모델과 정상의 마우스 피부 (NL) 을 이용한다. 이때, 대조군으로는, 무처리 대조군의 NL 및 처리 대조군의 AD1과 AD2를 설정하고 실험군으로는, AD 모델에 총 12 ㎍/ml ZAG를 처리한 AD3, AD 모델에 총 24 ㎍/ml ZAG를 처리한 AD4 및 AD 모델에 48 ㎍/ml ZAG를 처리한 AD5를 설정한다. 구체적으로, AD1은 AD 모델 이고, AD2는 AD 모델에 ZAG의 vehicle로 이용하는 글리세롤을 함께 처리한 모델이다. AD3는 AD 모델에 50%의 글리세롤에 녹아있는 ZAG 1 ㎍/ml을 일주일에 두 번, 6 주 동안 처리한 모델이고, AD4는 AD 모델에 50%의 글리세롤에 녹아있는 ZAG 2 ㎍/ml을 일주일에 두 번, 6 주 동안 처리한 모델이며 AD5는 AD 모델에 50%의 글리세롤에 녹아있는 ZAG 4 ㎍/ml을 일주일에 두 번, 6 주 동안 처리한 모델이다. For this evaluation, the atopic dermatitis-induced mouse skin (AD) model and normal mouse skin (NL) set in the same manner as described in Example 1 are used. At this time, as a control group, NL of the untreated control group and AD1 and AD2 of the treated control group were set, and as an experimental group, a total of 24 µg / ml ZAG was treated to the AD3 and AD models treated with a total of 12 µg / ml ZAG on the AD model. One AD4 and AD model was set up with AD5 treated with 48 μg / ml ZAG. Specifically, AD1 is an AD model, AD2 is a model in which the glycerol used as a vehicle of ZAG in the AD model. AD3 was treated with 1 µg / ml of ZAG dissolved in 50% glycerol twice a week for 6 weeks in AD model, and AD4 was treated with 2 µg / ml of ZAG dissolved in 50% glycerol in AD model for 1 week. The model was treated twice for 6 weeks, and AD5 was treated with 4 μg / ml of ZAG dissolved in 50% glycerol twice a week for 6 weeks.

도 6a는 정상의 피부 모델, 아토피피부염의 피부 모델, ZAG를 처리한 아토피피부염 피부 모델에서의 조직학적 분석결과를 나타내는 실험결과이다. 이때, H&E 염색을 이용하여 표피층을 염색하였다. 도 6a를 참조하면, 처리 대조군의 AD1 그룹과 AD2 그룹은 무처리 대조군의 NL과 대조적으로 표피층이 두꺼워진 것을 알 수 있다. 또한, ZAG를 처리한 AD3 그룹, AD4 그룹 및 AD5 그룹은 AD1 그룹 및 AD2 그룹과 대조적으로 표피층이 얇아진다. 특히, AD3 그룹의 표피층은 무처리 대조군인 NL과 유사한 수준으로 얇아진다. 이에, ZAG를 포함하는 본 발명의 다양한 실시예에 따른 조성물들은 피부 건조증 또는 피부 장벽 개선할 수 있는 효과가 있다. 나아가, 본 발명의 일 실시예에 따른 약학 조성물들 및 화장료 조성물은 표피층을 정상으로 회복시킬 수 있어, 아토피피부염을 포함하는 피부 건조증과 피부 장벽의 기능 이상에 따른 질환을 예방하고 치료할 수 있는 효과가 있을 수 있다.Figure 6a is an experimental result showing the results of histological analysis in a normal skin model, atopic dermatitis skin model, ZAG-treated atopic dermatitis skin model. At this time, the epidermal layer was stained using H & E staining. Referring to Figure 6a, it can be seen that the epidermal layer thickened in contrast to the NL of the untreated control group AD1 and AD2 group of the treated control group. In addition, ZAG-treated AD3, AD4, and AD5 groups had a thinner epidermal layer in contrast to AD1 and AD2 groups. In particular, the epidermal layer of the AD3 group was thinned to a level similar to NL, which was an untreated control. Accordingly, the compositions according to various embodiments of the present invention including ZAG have an effect of improving skin dryness or skin barrier. Furthermore, the pharmaceutical compositions and the cosmetic composition according to an embodiment of the present invention can restore the epidermal layer to the normal, thereby preventing and treating diseases caused by dry skin and dysfunction of the skin barrier including atopic dermatitis. There may be.

도 6b는 정상의 피부 모델, 아토피피부염의 피부 모델, ZAG를 처리한 아토피피부염 피부 모델에서의 피부염 발생점수 및 경피 수분손실량 (TEWL, transepidermal water loss) 의 수준을 측정한 결과를 나타내는 실험결과이다. 이때, 피부염 발생점수는 SCORAD index에 따라 홍반 및 출혈, 흉터 및 각질, 부종, 탈락의 4 가지 항목에 대해 점수를 매겨 측정한다. 각 현상에 대해 0 (없음), 1 (약함), 2 (보통), 3 (심각) 으로 점수를 매기며, 총 SCORAD 점수는 이들의 합으로 계산하고, SCORAD 점수는 일주일에 한 번 측정한다. 나아가 TEWL의 측정은 제모된 아토피피부염 유발 마우스 피부 (AD) 모델의 등과 목 부위에 대한 피부장벽의 손상도를 테와미터 (Tewameter) TM210 장비를 이용함으로써 수행된다. 도 6b를 참조하면, 처리 대조군의 AD1 그룹과 AD2 그룹은 무처리 대조군의 NL과 대조적으로 피부염 발생점수와 TEWL 수준이 증가한다. 이와 대조적으로, ZAG를 처리한 AD3 그룹, AD4 그룹 및 AD5 그룹은 피부염 발생 점수 및 TEWL 수준 모두 감소한다. 특히, AD3 그룹에서의 피부염 발생 점수 및 TEWL 수준은 나머지 실험군의 AD4 그룹 및 AD5 그룹에 비하여 큰 폭으로 감소한다. 즉, 아토피피부염 모델에 총 12 ㎍/ml의 ZAG를 처리한 AD3에서 피부염 발생점수 및 TEWL 수준은 큰 폭으로 낮아진다. 이에, ZAG를 포함하는 본 발명의 다양한 실시예에서의 조성물들은 피부염 발생점수를 낮추며, 수분 손실량을 줄일 수 있어, 피부 건조증 및 피부 장벽 개선의 효과가 있을 수 있다. 나아가, 본 발명의 일 실시예에 따른 약학 조성물들 및 화장료 조성물은 피부염 발생점수 및 TEWL 수준을 낮춤으로써, 아토피피부염을 포함하는 피부 건조증과 피부 장벽의 기능 이상에 따른 질환을 예방하고 치료할 수 있는 효과가 있을 수 있다.Figure 6b is an experimental result showing the results of measuring the dermatitis occurrence score and the level of transepidermal water loss (TEWL) in a normal skin model, atopic dermatitis skin model, ZAG-treated atopic dermatitis skin model. At this time, the dermatitis incidence score is measured by scoring the four categories of erythema and bleeding, scar and keratin, edema, dropout according to the SCORAD index. For each phenomenon, scores are given as 0 (none), 1 (weak), 2 (medium), 3 (severe), and the total SCORAD score is calculated as their sum, and the SCORAD score is measured once a week. Further measurement of TEWL is performed by using a Tewameter TM210 instrument for the degree of damage of the skin barrier to the back and neck of the depilated atopic dermatitis-induced mouse skin (AD) model. Referring to FIG. 6B, the AD1 group and the AD2 group of the treated control group have increased dermatitis incidence scores and TEWL levels in contrast to the NL of the untreated control group. In contrast, the ZAG treated AD3 group, AD4 group and AD5 group decreased both dermatitis score and TEWL level. In particular, the dermatitis incidence score and TEWL levels in the AD3 group are significantly reduced compared to the AD4 and AD5 groups of the remaining experimental groups. In other words, in AD3 treated with a total of 12 μg / ml of ZAG in the atopic dermatitis model, the dermatitis incidence score and TEWL levels are significantly lowered. Thus, the compositions in various embodiments of the present invention including ZAG can reduce the dermatitis occurrence score, reduce the amount of water loss, it can be effective in improving the dry skin and skin barrier. Furthermore, the pharmaceutical compositions and cosmetic compositions according to an embodiment of the present invention lower the dermatitis incidence score and the TEWL level, thereby preventing and treating diseases caused by dry skin and dysfunction of the skin barrier including atopic dermatitis. There can be.

도 6c는 정상의 피부 모델, 아토피피부염의 피부 모델, ZAG를 처리한 아토피피부염 피부 모델내의 혈청에서의 IgE의 수준을 측정한 결과를 나타내는 실험결과이다. 이때, 6개의 그룹 (NL, AD1, AD2, AD3, AD4 및 AD5) 의 마우스로부터 혈청을 이용한다. 구체적으로, IgE의 수준의 측정을 위해, 마우스로부터 100 μl의 혈액을 채혈하고, 이를 원심분리하여 혈청을 수득한다. 수득한 혈청은 분석 하루 전, 96-웰 플레이트상에 포획 항체 (capture antibody) 를 코팅하여 4 ℃ 에 보관한다. 이후 분석을 위해, 보관된 혈청을 워싱 버퍼 (PBS with 0.05% Tween20) 로 세척한 후 1X assay diluent로 상온에서 1시간 처리한 뒤, 1:100으로 희석한 혈청 샘플을 처리한다. 그 다음, 처리 혈청을 세척한 후, 세척한 혈청에 검출 항체 (detection antibody) 를 상온에서 1시간 처리한다. 여기에 Avidin-HRP를 30분간 처리하면 혈청이 발색된다. 혈청에 TMB를 10분간 처리한 후, 동량의 stop solution (KPL) 을 넣어줌으로써, 혈청의 발색이 중단된다. 이후 마이크로플레이트 리더 (microplate reader) 를 이용하여, 450nm 파장에서 발색된 혈청의 흡광도를 측정하여 IgE의 수준을 측정한다. 도 6c를 참조하면, 처리 대조군의 AD1 그룹과 AD2 그룹은 무처리 대조군의 NL과 대조적으로 IgE의 수준이 3주차까지 유의하다 증가하다가 4주차에 감소하는 경향을 보인다. 그리고 IgE의 수준은 다시 6주차까지 지속적으로 증가한다. 이와 대조적으로, ZAG를 처리한 AD3 그룹, AD4 그룹 및 AD5 그룹은 처리 대조군에 비하여 IgE의 수준이 작은 폭으로 증가한다. 나아가, AD3 그룹, AD4 그룹 및 AD5 그룹은 AD1 그룹 및 AD2 그룹과 마찬가지로 3주차에 IgE의 수준이 큰 폭으로 증가한다. 그러나, 4주차에 다시 이의 수준이 유의하게 감소한다. 이에, 히스타민의 분비와 관련 있는 IgE의 수준이 감소함에 따라, ZAG를 포함하는 본 발명의 조성물들은 항알러지 효과가 있을 수 있다. 나아가, 본 발명의 일 실시예에 따른 항알러지 약학 조성물 및 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물은 면역반응을 조절함으로써, 아토피피부염을 포함하는 다양한 알러지성 질환을 예방하고 치료할 수 있는 효과가 있을 수 있다. 6C is an experimental result showing the result of measuring the level of IgE in serum in a normal skin model, atopic dermatitis skin model, and ZAG-treated atopic dermatitis skin model. At this time, serum from six groups of mice (NL, AD1, AD2, AD3, AD4 and AD5) is used. Specifically, for the measurement of the level of IgE, 100 μl of blood is drawn from the mice and centrifuged to obtain serum. The obtained serum is stored at 4 ° C. by coating a capture antibody on a 96-well plate one day before analysis. For later analysis, the stored serum is washed with a wash buffer (PBS with 0.05% Tween20), and then treated with 1X assay diluent for 1 hour at room temperature, and then treated with a 1: 100 diluted serum sample. Then, after washing the treated serum, the washed serum is treated with a detection antibody at room temperature for 1 hour. Serum is developed after 30 minutes of Avidin-HRP treatment. After 10 minutes of TMB treatment in serum, the same amount of stop solution (KPL) was added to stop the development of serum. Thereafter, using a microplate reader, the absorbance of the serum developed at 450 nm wavelength is measured to determine the level of IgE. Referring to FIG. 6C, in contrast to the NL of the untreated control group, the AD1 group and the AD2 group of the untreated control group showed a significant increase in IgE levels up to 3 weeks and then decreased at 4 weeks. The level of IgE continues to increase again until week 6. In contrast, the ZAG treated AD3, AD4 and AD5 groups have a small increase in IgE levels compared to the treated controls. Furthermore, the AD3 group, the AD4 group, and the AD5 group, like the AD1 group and the AD2 group, significantly increase the level of IgE at 3 weeks. However, again at week 4 its level decreases significantly. Thus, as the level of IgE associated with the secretion of histamine decreases, the compositions of the present invention comprising ZAG may have an antiallergic effect. Furthermore, the anti-allergic pharmaceutical composition and the pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases according to an embodiment of the present invention have an effect of preventing and treating various allergic diseases including atopic dermatitis by controlling an immune response. There may be.

도 6d는 아토피피부염의 피부 모델, ZAG를 처리한 아토피피부염 피부 모델내의 림프절에서의 염증성 사이토카인 및 Treg 세포의 수준을 측정한 결과를 나타내는 실험결과이다. 도 6e는 아토피피부염의 피부 모델, ZAG를 처리한 아토피피부염 피부 모델내의 비장에서의 염증성 사이토카인 및 Treg 세포의 수준을 측정한 결과를 나타내는 실험결과이다. 이때, 림프절에서의 염증성 사이토카인 및 Treg 세포의 수준을 측정하기 위해, 6개의 그룹 (NL, AD1, AD2, AD3, AD4 및 AD5) 의 마우스로부터 림프절을 적출한 뒤, 40 μm의 메쉬에 적출한 림프를 갈아 단일세포를 수득한다. 나아가, 비장에서의 염증성 사이토카인 및 Treg 세포의 수준을 측정하기 위해, 5개의 그룹 (AD1, AD2, AD3, AD4 및 AD5) 의 마우스로부터 비장을 적출한 뒤, 40 μm의 메쉬에 적출한 비장을 갈아 단일세포를 수득한다. 비장의 단일세포의 경우, 적혈구 용해 용액 (Sigma-Aldrich, 8.3　g/L ammonium chloride in 0.01　M Tris-HCl buffer) 을 상온에서 5분간 처리하여 적혈구를 제거한다. 이렇게 수득한 림프절 및 비장의 단일세포는 항-마우스 CD3와 -CD28이 코팅된 플레이트에서 배양한다. 두 세포 내에 존재하는 인자 염색을 위해, 배양된 두 세포는 phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA), ionomycin, monensin이 포함된 Cell Stimulation Cocktail로 6시간 내지 16시간 동안 처리된다. 그 다음, 두 세포는 fixable viability dye로 4 ℃에서 30 분간 염색된 후 세척 된다. 이후, 두 세포에서 형광 표지된 항-마우스 CD4, CD8, CD25항체와 형광 표지 된 항-마우스 IL-4, IL-10, IL-17 및 Foxp3이 염색된다. 이들 염증성 사이토카인과 Treg 세포의 수준은 BD LSR FortessaTM flow cytometer 장비로 형광도를 측정하고, FlowJo Software로 결과를 분석한다. 도 6d를 참조하면, 림프구내의 염증성 사이토카인인 IL-4, IL-13, IL-17 및 IFN-γ의 수준은 처리 대조군과 대조적으로 ZAG를 처리한 AD3 그룹, AD4 그룹 및 AD5 그룹에서 유의하게 감소한다. 나아가, Th2 세포의 활성을 억제시킴으로써 알러지 반응 기작에 필수인 염증성 사이토카인의 생성을 최소화할 수 있는 Treg 세포의 수준은, 처리 대조군과 대조적으로 ZAG를 처리한 AD3 그룹, AD4 그룹 및 AD5 그룹에서 유의하게 증가한다. 도 6e를 참조하면, 비장 내의 염증성 사이토카인인 IL-4, IL-13 및 IL-17의 수준은 처리 대조군과 대조적으로 ZAG를 처리한 AD3 그룹, AD4 그룹 및 AD5 그룹에서 유의하게 감소한다. 나아가, Treg 세포의 수준은 처리 대조군과 대조적으로 ZAG를 처리한 AD3 그룹과 AD4 그룹에서 유의하게 증가한다. 이에, ZAG 단백질을 포함하는 본 발명의 다양한 실시예의 조성물들은 항염증반응, 나아가 항알러지 반응과 연관이 있는, 염증성 사이토카인의 수준을 낮출 수 있어, 항염증 약학 조성물 및 항알러지 약학 조성물 더 나아가, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물로서 제공될 수 있다. 나아가, 본 발명의 일 실시예에 따른 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 조성물은 염증반응과 면역반응을 조절함으로써, 아토피피부염을 포함하는 다양한 알러지성 질환을 예방하고 치료할 수 있는 효과가 있을 수 있다. Figure 6d is an experimental result showing the results of measuring the level of inflammatory cytokines and Treg cells in lymph nodes in atopic dermatitis skin model, ZAG-treated atopic dermatitis skin model. Figure 6e is an experimental result showing the results of measuring the levels of inflammatory cytokines and Treg cells in the spleen in atopic dermatitis skin model, ZAG-treated atopic dermatitis skin model. At this time, in order to measure the levels of inflammatory cytokines and Treg cells in lymph nodes, lymph nodes were extracted from six groups of mice (NL, AD1, AD2, AD3, AD4 and AD5), and then extracted into a 40 μm mesh. Grind the lymph to obtain single cells. Furthermore, in order to measure the levels of inflammatory cytokines and Treg cells in the spleen, spleens were taken from five groups of mice (AD1, AD2, AD3, AD4 and AD5) and then spleens extracted on a 40 μm mesh. Grind to obtain single cells. In the case of single cells in the spleen, erythrocytes are removed by treatment with erythrocyte lysis solution (Sigma-Aldrich, 8.3 μg / L ammonium chloride in 0.01 μM Tris-HCl buffer) at room temperature for 5 minutes. Single cells of lymph nodes and spleens thus obtained are cultured in anti-mouse CD3 and -CD28 coated plates. For factor staining present in both cells, the cultured two cells are treated for 6 to 16 hours with Cell Stimulation Cocktail containing phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA), ionomycin, and monensin. The cells are then stained with fixable viability dye at 4 ° C for 30 minutes and washed. Thereafter, fluorescently labeled anti-mouse CD4, CD8, CD25 antibodies and fluorescently labeled anti-mouse IL-4, IL-10, IL-17 and Foxp3 are stained in both cells. Levels of these inflammatory cytokines and Treg cells were measured for fluorescence with a BD LSR FortessaTM flow cytometer and analyzed with FlowJo Software. Referring to FIG. 6D, the levels of inflammatory cytokines IL-4, IL-13, IL-17 and IFN-γ in lymphocytes were significantly higher in the AD3, AD4 and AD5 groups treated with ZAG as opposed to the treatment control. Decreases. Furthermore, the level of Treg cells that can minimize the production of inflammatory cytokines essential for allergic reaction mechanisms by inhibiting Th2 cell activity is significant in AD3, AD4 and AD5 groups treated with ZAG as opposed to treatment controls. Increases. Referring to FIG. 6E, levels of inflammatory cytokines IL-4, IL-13 and IL-17 in the spleen are significantly reduced in the AD3 group, the AD4 group and the AD5 group treated with ZAG as opposed to the treatment control. Furthermore, the levels of Treg cells are significantly increased in the AD3 and AD4 groups treated with ZAG as opposed to the treatment control. Thus, the compositions of various embodiments of the present invention comprising a ZAG protein can lower the levels of inflammatory cytokines, which are associated with anti-inflammatory responses, and further anti-allergic reactions, thereby leading to anti-inflammatory pharmaceutical compositions and anti-allergic pharmaceutical compositions. It may be provided as a pharmaceutical composition for the prophylaxis or treatment of allergic diseases. Furthermore, the anti-allergic pharmaceutical composition, the pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases, and the anti-inflammatory composition according to an embodiment of the present invention may control various allergic diseases including atopic dermatitis by controlling inflammatory and immune responses. There may be effects that can be prevented and treated.

이상의 실시예 6의 결과로, 아토피피부염 유발 마우스 피부 (AD) 모델에 대하여 ZAG단백질을 처리했을 때, 피부염 점수, 경피 수분 손실량이 줄어드는 효과를 확인할 수 있었다. 보다 구체적으로, AD 모델에 ZAG 단백질 처리했을 때 면역반응, 나아가 염증반응과 연관이 있는 IgE, IL-4, IL-13, IL-17 및 IFN-γ의 수준이 감소하였으며, 면역 조절세포인 Treg 세포의 수준의 증가하였다. 여기서 IgE와 IL-4, IL-13은 아토피피부염의 발생에 따라, 아토피피부염 환자의 혈액 내에서 수준이 높아질 수 있다. 또한, 면역 조절능의 Treg 세포는 알러지성 질환을 가진 환자에게서 감소될 수 있다. 따라서, 이들의 수준을 조절하는 ZAG 단백질을 포함하는 본 발명의 일 실시예에 따른 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 항알러지 약학 조성물은 아토피피부염의 예방 또는 치료에 이용될 수 있다. 나아가, 본 발명의 다양한 실시예에서의 조성물들은 염증반응과 면역반응을 조절함으로써, 아토피피부염을 포함하는 다양한 알러지성 질환을 예방하고 치료할 수 있는 효과가 있을 수 있다. As a result of Example 6, when the ZAG protein was treated in the atopic dermatitis-induced mouse skin (AD) model, it was confirmed that the dermatitis score, the amount of transdermal water loss is reduced. More specifically, the ZAG protein treatment of the AD model reduced the levels of IgE, IL-4, IL-13, IL-17 and IFN-γ, which are associated with immune responses, and also with inflammatory responses. The level of cells increased. Here, IgE, IL-4, and IL-13 may be elevated in the blood of patients with atopic dermatitis, depending on the occurrence of atopic dermatitis. In addition, Treg cells of immunomodulatory capacity can be reduced in patients with allergic diseases. Therefore, the pharmaceutical composition and the anti-allergic pharmaceutical composition for preventing or treating dry skin or skin barrier dysfunction according to an embodiment of the present invention comprising a ZAG protein that modulates their levels may be used for the prevention or treatment of atopic dermatitis. have. Furthermore, the compositions in various embodiments of the present invention may have the effect of preventing and treating various allergic diseases including atopic dermatitis by regulating inflammatory and immune responses.

나아가 ZAG을 포함하는 본 발명의 다양한 약학 조성물들은 피부의 수분 손실량을 줄임으로써 보습 효과를 부여하는 동시에, 면역반응과 이에 따른 염증반응을 억제함으로써 아토피피부염에 대한 실질적인 치료 효과를 나타낸다. 이에 따라, 본 발명의 약학 조성물들은 기존의 아토피피부염, 알러지성 질환의 치료제로 이용되던 스테로이드성 약제들을 대체할 수 있는 새로운 치료제로 이용될 수 있다. 특히, 본 발명의 약학 조성물들은 보습 효과를 갖는, 아토피피부염 치료제, 나아가 항염증제로 이용될 수 있어, 스테로이드성 약제의 단점을 극복할 수 있을 것으로 사료된다. Furthermore, various pharmaceutical compositions of the present invention including ZAG impart a moisturizing effect by reducing water loss of the skin, and at the same time exhibit a substantial therapeutic effect on atopic dermatitis by suppressing an immune response and thus an inflammatory response. Accordingly, the pharmaceutical compositions of the present invention can be used as a new therapeutic agent that can replace the steroidal drugs used to treat existing atopic dermatitis and allergic diseases. In particular, the pharmaceutical compositions of the present invention can be used as a therapeutic agent for atopic dermatitis, and also as an anti-inflammatory agent, which has a moisturizing effect, so that the disadvantages of steroidal drugs may be overcome.

또한, 실시예 6의 결과에서 전반적으로 12 ㎍/ml (약 0.1 ㎎/kg) 내지 24 ㎍/ml (약 0.2 ㎎/kg) 의 ZAG 단백질을 처리했을 때 아토피피부염 모델에 대하여 효과적일 수 있다. 따라서, 이의 결과를 고려하여 본 발명의 다양한 실시예에서의 조성물들에 대한 ZAG 단백질의 비율을 결정할 수 있으나, 이에 제한되지 않고 조성물의 제형, 개체의 알러지성 질환의 진행 정도, 목적 부위등에 따라 당업자에 의해 용이하게 조절될 수 있다. In addition, in the results of Example 6, overall treatment of 12 μg / ml (about 0.1 mg / kg) to 24 μg / ml (about 0.2 mg / kg) of ZAG protein may be effective against the atopic dermatitis model. Accordingly, the ratio of ZAG protein to the compositions in various embodiments of the present invention may be determined in consideration of the results thereof, but the present invention is not limited thereto, and it is not limited thereto. It can be adjusted easily.

실시예 7: ZAG를 처리한 면역세포에 대한 평가 Example 7: Evaluation on Immune Cells Treated with ZAG

본 평가를 위해, B 림프구 세포주, 호염구/비만 세포주, 대식세포주 및 각질형성세포주의 면역세포를 이용한다. 보다 구체적으로, B 림프구 세포주로는 RPMI 1788 세포를, 호염구/비만 세포주로는 RBL-2H3 세포를, 대식세포주로는 Raw 264.7 세포를 이용하여, ZAG 단백질에 대한 효과를 예시적으로 설명한다. 마지막으로, 각질형성세포주로는 NHEK 세포 및 HaCaT 세포를 이용하여, ZAG 단백질에 대한 효과를 예시적으로 설명한다. 그러나, 면역세포에 대한 ZAG 단백질의 효과는 전술한 세포들에 제한되는 것은 아니다. For this evaluation, immune cells of B lymphocyte cell line, basophils / mast cell line, macrophage line and keratinocyte line are used. More specifically, the effect on ZAG protein is exemplarily described using RPMI 1788 cells as B lymphocyte cell line, RBL-2H3 cells as basophil / mast cell line, and Raw 264.7 cells as macrophage line. Finally, NHEK cells and HaCaT cells are used as keratinocyte cell lines to exemplify the effect on ZAG protein. However, the effect of ZAG protein on immune cells is not limited to the cells described above.

도 7a는 ZAG 처리에 따른, B 림프구 세포주에서의 IgE의 수준을 나타내는 실험결과이다. IgE의 수준을 측정하기 위해, RPMI 1788 세포에 ZAG를 11 ㎍/ml, 2 ㎍/ml 및 4 ㎍/ml 농도로 24시간 처리 한 후, 면역반응 유도를 위해 0.5 ㎍/ml LPS를 24 시간 처리 하고 37 ℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 24시간 배양한다. 배양액 중 일부를 취해, human IgE ELISA kit 를 이용하여 IgE의 생성 수준을 측정한다. 도 7a를 참조하면, IgE의 수준은 LPS 단독처리 그룹에서, 아무것도 처리하지 않은 NL 그룹에 비해 증가하였고, 1 ㎍/ml, 2 ㎍/ml 및 4 ㎍/ml 농도로 처리한 ZAG 처리 그룹 모두에서 유의하게 정상 그룹 수준으로 IgE의 수준이 유의하게 감소한다. 이의 결과로, B 림프구 세포주에서 IgE의 수준을 낮출 수 있는 ZAG를 포함하는 본 발명의 다양한 실시예에의 조성물들은 항알러지 효과가 있을 수 있다. 나아가, 본 발명의 일 실시예에 따른 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 조성물은 면역반응을 조절함으로써, 아토피피부염을 포함하는 다양한 알러지성 질환을 예방하고 치료할 수 있는 효과가 있을 수 있다.Figure 7a is an experimental result showing the level of IgE in B lymphocyte cell line following ZAG treatment. To measure the level of IgE, RPMI 1788 cells were treated with ZAG at concentrations of 11 μg / ml, 2 μg / ml and 4 μg / ml for 24 hours and then treated with 0.5 μg / ml LPS for 24 hours to induce immune responses. And incubate for 24 hours in a 37%, 5% CO ₂ incubator. Take a portion of the culture and measure the production level of IgE using the human IgE ELISA kit. Referring to FIG. 7A, the level of IgE was increased in the LPS monotherapy group, compared to the NL group without any treatment, and in all ZAG treated groups treated with 1 μg / ml, 2 μg / ml and 4 μg / ml concentrations. Significantly reduced levels of IgE to normal group levels. As a result, the compositions of the various embodiments of the present invention comprising ZAG capable of lowering the level of IgE in B lymphocyte cell lines may have an antiallergic effect. Furthermore, the anti-allergic pharmaceutical composition, the pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases, and the anti-inflammatory composition according to an embodiment of the present invention may prevent and treat various allergic diseases including atopic dermatitis by controlling an immune response. It can be effective.

도 7b는 ZAG 처리에 따른, 호염구/비만 세포주에서의 히스타민 및 염증성 사이토카인의 수준을 나타내는 실험결과이다. 먼저, 호염구/비만 세포주에서의 ZAG 단백질의 처리에 따른 히스타민 및 염증성 사이토카인의 수준을 측정하기 위해, RBL-2H3 세포에 ZAG를 1 ㎍/ml, 2 ㎍/ml 및 4 ㎍/ml 농도로 24 시간 처리 한다. 그 다음, 면역반응 유도를 위해 PMA와 A23187를 각각 50 nM 농도로 처리 하고 37 ℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 6시간 (히스타민 수준 측정) 또는 24 시간 (염증성 사이토카인 수준 측정) 배양한다. 배양액 중 일부를 취해 히스타민 분비 수준을 assay kit를 이용하여 측정하고, ELISA kit를 이용하여 IL-6, IL-4 및 IL-13의 수준을 측정한다. 도 7b를 참조하면, 히스타민의 수준은 PMA + A23187 처리 그룹에서, 아무것도 처리하지 않은 NL 그룹에 비해 증가하였고, 1 ㎍/ml, 2 ㎍/ml 및 4 ㎍/ml 농도로 처리한 모든 ZAG 처리 그룹에서 히스타민의 수준이 유의하게 감소한다. 나아가, IL-6, IL-4 및 IL-13의 수준은 PMA + A23187처리군보다 유의하게 감소한다. 이의 결과로, 호염구/비만 세포주에서 히스타민 및 염증성 사이토카인의 수준을 낮출 수 있는 ZAG를 포함하는 본 발명의 다양한 실시예에의 조성물들은 항알러지 효과가 있을 수 있다. 나아가, 본 발명의 일 실시예에 따른 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 조성물은 염증반응과 면역반응을 조절함으로써, 염증반응을 억제할뿐만 아니라 아토피피부염을 포함하는 다양한 알러지성 질환을 예방하고 치료할 수 있는 효과가 있을 수 있다.Figure 7b is an experimental result showing the level of histamine and inflammatory cytokines in basophils / mast cell lines following ZAG treatment. First, in order to measure the levels of histamine and inflammatory cytokines following ZAG protein treatment in basophils / mast cells, RBL-2H3 cells were treated with ZAG at concentrations of 1 μg / ml, 2 μg / ml and 4 μg / ml. Time to deal with. PMA and A23187 are then treated with 50 nM concentrations, respectively, and incubated at 37 ° C., 5% CO ₂ incubator for 6 hours (measuring histamine levels) or 24 hours (measuring inflammatory cytokine levels) to induce immune responses. Take a portion of the culture and measure the histamine secretion level using the assay kit, and measure the levels of IL-6, IL-4 and IL-13 using the ELISA kit. Referring to FIG. 7B, the level of histamine was increased in the PMA + A23187 treated group compared to the NL untreated group, and all ZAG treated groups treated at 1 μg / ml, 2 μg / ml and 4 μg / ml concentrations. In histamine levels are significantly reduced. Furthermore, the levels of IL-6, IL-4 and IL-13 are significantly reduced than the PMA + A23187 treated group. As a result of this, the compositions in various embodiments of the present invention comprising ZAG capable of lowering the levels of histamine and inflammatory cytokines in basophils / mast cells lines may have an antiallergic effect. Furthermore, the anti-allergic pharmaceutical composition, the pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases, and the anti-inflammatory composition according to an embodiment of the present invention may not only suppress the inflammatory response but also inhibit atopic dermatitis by controlling the inflammatory response and the immune response. It may be effective to prevent and treat various allergic diseases, including.

도 7c는 ZAG 처리에 따른, 대식세포주에서의 염증성 사이토카인의 수준을 나타내는 실험결과이다. 먼저, 대식세포주에서의 ZAG 단백질의 처리에 따른 염증성 사이토카인의 수준을 측정하기 위해, Raw 264.7 세포에 ZAG를 1 ㎍/ml, 2 ㎍/ml 및 4 ㎍/ml 농도로 24 시간 처리 한다. 그 다음, 면역반응 유도를 위해 LPS를 0.5 ㎍/ml 농도로 처리 하고 37 ℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 24시간 배양한다. 배양액 중 일부를 취해 ELISA kit를 이용하여 IL-6, IL-4 및 IL-13의 수준을 측정한다. 도 7c를 참조하면, IL-6, IL-4 및 IL-13의 수준은 ZAG를 처리한 모든 그룹에서 LPS 처리군보다 유의하게 감소 되었고, 특히, IL-6의 수준은 ZAG 처리 농도에 의존적으로 감소한다. 이의 결과로, 대식세포주에서 염증성 사이토카인의 수준을 낮출 수 있는 ZAG를 포함하는 본 발명의 다양한 실시예에의 조성물들은 항알러지 효과가 있을 수 있다. 나아가, 본 발명의 일 실시예에 따른 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 조성물은 염증반응과 면역반응을 조절함으로써, 아토피피부염을 포함하는 다양한 알러지성 질환을 예방하고 치료할 수 있는 효과가 있을 수 있다. Figure 7c is an experimental result showing the level of inflammatory cytokines in macrophages following ZAG treatment. First, to measure the level of inflammatory cytokines following ZAG protein treatment in macrophage lines, Raw 264.7 cells were treated with ZAG at concentrations of 1 μg / ml, 2 μg / ml and 4 μg / ml for 24 hours. Then, LPS is treated at a concentration of 0.5 μg / ml to induce an immune response and incubated for 24 hours in a 37 ° C., 5% CO ₂ incubator. Take a portion of the culture and measure the levels of IL-6, IL-4 and IL-13 using an ELISA kit. Referring to FIG. 7C, the levels of IL-6, IL-4 and IL-13 were significantly reduced in all groups treated with ZAG than in the LPS treated group, in particular, the level of IL-6 was dependent on the ZAG treated concentration. Decreases. As a result, the compositions of the various embodiments of the present invention, including ZAG, which can lower the level of inflammatory cytokines in macrophage lines, may have an antiallergic effect. Furthermore, the anti-allergic pharmaceutical composition, the pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases, and the anti-inflammatory composition according to an embodiment of the present invention may control various allergic diseases including atopic dermatitis by controlling inflammatory and immune responses. There may be effects that can be prevented and treated.

도 7d는 ZAG 처리에 따른, 각질형성세포주에서의 염증성 사이토카인의 수준을 나타내는 실험결과이다. 먼저, 각질형성세포주에서의 ZAG 단백질의 처리에 따른 염증성 사이토카인의 수준을 측정하기 위해, NHEK 세포 및 HaCaT 세포에 ZAG를 1 ㎍/ml, 2 ㎍/ml 및 4 ㎍/ml 농도로 24 시간 처리 한다. 그 다음, 면역반응 유도를 위해 TNF-α 및 IFN-γ를 각각 50 ng/ml 농도로 처리 하고 37 ℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 24시간 배양한다. 배양액 중 일부를 취해 ELISA kit를 이용하여 TARC (thymus and activation-regulated chemokine) 의 수준을 측정한다. 도 7d를 참조하면, TARC의 수준은 ZAG를 처리한 모든 그룹에서 TNF-α + IFN-γ 처리군보다 유의하게 감소되었다. 여기서, TARC는 흉선 및 활성화 조절 케모카인으로서, 아토피피부염 환자에게서 높은 수준으로 나타나는 사이토카인 중 하나이다. 이의 결과로, 각질형성세포주에서 염증성 사이토카인의 수준을 낮출 수 있는 ZAG를 포함하는 본 발명의 다양한 실시예에의 조성물들은 항알러지 효과가 있을 수 있다. 나아가, 본 발명의 일 실시예에 따른 항알러지 약학 조성물, 알러지성 질환의 예방용 또는 치료용 약학 조성물 및 항염증 조성물은 염증반응과 면역반응을 조절함으로써, 아토피피부염을 포함하는 다양한 알러지성 질환을 예방하고 치료할 수 있는 효과가 있을 수 있다.Figure 7d is an experimental result showing the level of inflammatory cytokines in keratinocytes following ZAG treatment. First, to measure the level of inflammatory cytokines following treatment with ZAG protein in keratinocytes, NHAG cells and HaCaT cells were treated with ZAG at concentrations of 1 μg / ml, 2 μg / ml and 4 μg / ml for 24 hours. do. Next, to the immune response induced TNF-α and IFN-γ, respectively treated with 50 ng / ml concentration, and cultured for 24 hours at 37 ℃, 5% CO ₂ incubator. Take a portion of the culture and measure the level of TARC (thymus and activation-regulated chemokine) using an ELISA kit. Referring to FIG. 7D, the level of TARC was significantly reduced in all groups treated with ZAG than in the TNF-α + IFN-γ treated group. Here, TARC is a thymus and activation regulating chemokine, one of the high levels of cytokines in atopic dermatitis patients. As a result of this, the compositions of various embodiments of the present invention comprising ZAG capable of lowering the level of inflammatory cytokines in keratinocyte lines may have an antiallergic effect. Furthermore, the anti-allergic pharmaceutical composition, the pharmaceutical composition for preventing or treating allergic diseases, and the anti-inflammatory composition according to an embodiment of the present invention may control various allergic diseases including atopic dermatitis by controlling inflammatory and immune responses. There may be effects that can be prevented and treated.

도 7e는 ZAG 처리에 따른, B 림프구 세포주, 호염구/비만 세포주, 대식세포주 및 각질형성세포주의 세포증식 효과를 나타내는 실험결과이다. 본 실험은 모든 in vitro 실험에서 ZAG 처리에 따라 세포들이 정상의 세포증식능을 갖는지 확인하기 위한 실험이다. 세포 증식효과를 분석하기 위해, 먼저, RPMI 1788 세포, RBL-2H3, Raw 264.7, NHEK 세포를 준비한다. 이들 중 RPMI 1788 세포는 96-웰 플레이트에 1 x 10⁵/well이 되도록 분주하고, ZAG를 0.5 ㎍/ml, 1 ㎍/ml, 2 ㎍/ml 및 4 ㎍/ml 농도 별로 처리한 후 각각 24시간과 48시간 동안 배양한다. 배양액에 WST solution (Roche) 을 10 μl 처리하고 37 ℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 3시간 내지 4시간 배양한 후 440 nm에서 흡광도를 측정한다. 나머지 RBL-2H3 세포, Raw 264.7 세포, NHEK 세포는 96-웰 플레이트에 1 x 10⁵/well이 되도록 분주하고, ZAG를 0.5 ㎍/ml, 1 ㎍/ml, 2 ㎍/ml 및 4 ㎍/ml 농도 별로 처리한 후 각각 24시간과 48시간 동안 배양한 후 MTT assay를 이용하여 세포 증식능을 측정한다. 각 웰에 MTT를 첨가한 후, 37 ℃, 5% CO₂ 인큐베이터에서 3시간 내지 4시간 배양한 후 배양액을 제거한 후 세포에 DMSO를 첨가해 녹인 후 540 nm에서 흡광도를 측정한다. 도 7e를 참조하면, RPMI 1788 세포, RBL-2H3 세포, Raw 264.7 세포 및 NHEK 세포 모두에서, ZAG를 0.5 ㎍/ml, 1 ㎍/ml, 2 ㎍/ml 및 4 ㎍/ml 농도로 24시간 처리 시 세포증식효과가 80% 이상을 나타낸다. 이에 따라, 전술한 in vitro test는 ZAG 농도 0.5 ㎍/ml, 1 ㎍/ml, 2 ㎍/ml 및 4 ㎍/ml 농도로 24시간 처리하는 것으로 결정하였다. Figure 7e is an experimental result showing the cell proliferation effect of B lymphocyte cell line, basophils / mast cell line, macrophage cell line and keratinocyte cell line according to ZAG treatment. This experiment is to check whether cells have normal cell proliferation ability following ZAG treatment in all in vitro experiments. To analyze the cell proliferation effect, first, RPMI 1788 cells, RBL-2H3, Raw 264.7, NHEK cells are prepared. Among them, RPMI 1788 cells were dispensed into 96-well plates at 1 × 10 ⁵ / well, and treated with ZAG at concentrations of 0.5 μg / ml, 1 μg / ml, 2 μg / ml and 4 μg / ml, respectively. Incubate for hours and 48 hours. 10 μl of the WST solution (Roche) was added to the culture solution, and incubated for 3 to 4 hours at 37 ° C. in a 5% CO ₂ incubator, and then absorbance was measured at 440 nm. Remaining RBL-2H3 cells, Raw 264.7 cells, NHEK cells were dispensed in 96-well plates to 1 x 10 ⁵ / well, and ZAG was 0.5 μg / ml, 1 μg / ml, 2 μg / ml and 4 μg / ml After treatment by concentration, the cells were cultured for 24 hours and 48 hours, respectively, and then measured for cell proliferation by MTT assay. After MTT was added to each well, the cells were incubated for 3 hours to 4 hours at 37 ° C. in a 5% CO ₂ incubator. After removal of the culture solution, the cells were dissolved by adding DMSO and absorbance was measured at 540 nm. Referring to FIG. 7E, ZAG was treated 24 hours at concentrations of 0.5 μg / ml, 1 μg / ml, 2 μg / ml and 4 μg / ml in both RPMI 1788 cells, RBL-2H3 cells, Raw 264.7 cells and NHEK cells. Cell proliferation effect is more than 80%. Accordingly, the in vitro test described above was determined to be treated with ZAG concentrations of 0.5 μg / ml, 1 μg / ml, 2 μg / ml and 4 μg / ml for 24 hours.

이상의 실시예 7의 결과로, B 림프구 세포주, 호염구/비만 세포주, 대식세포주 및 각질형성세포주의 면역세포에 대하여 ZAG 단백질을 처리했을때, IgE의 수준, 히스타민의 수준 및 염증성 사이토카인의 수준이 감소하는 효과를 확인할 수 있었다. 이는 실시예 6의 in vivo 실험의 결과와 함께, in vitro 에서도 ZAG의 효과가 입증된 분석 결과이다. 특히, 아토피피부염과 연관된 각질형성세포에서의 TARC의 수준의 감소의 결과는 ZAG 단백질이 아토피피부염의 개선에 효과적인 것을 의미할 수 있다. 이에 따라, IgE의 수준, 히스타민의 수준 및 염증성 사이토카인의 수준을 감소시키는 ZAG 단백질을 포함하는 본 발명의 다양한 실시예에서의 조성물들은 아토피피부염의 예방 또는 치료에 이용될 수 있다. 나아가, 본 발명의 일 실시예에 따른 피부 건조증 또는 피부 장벽 기능 이상의 화장료 조성물 및 이의 예방 또는 치료용 약학 조성물은 염증반응과 면역반응을 조절함으로써, 아토피피부염을 예방하고 치료할 수 있는 효과가 있을 수 있다. 또한, 본 발명의 다양한 약학 조성물들, 특히 항알러지 약학 조성물 및 항염증 약학 조성물은 염증반응과 면역반응을 조절함으로써, 염증 반응을 억제하고, 아토피피부염을 포함하는 다양한 알러지성 질환을 예방하고 치료할 수 있는 효과가 있을 수 있다. As a result of the above Example 7, when the ZAG protein was treated for immune cells of B lymphocyte cell line, basophils / mastogen cell line, macrophage line and keratinocyte line, IgE level, histamine level and inflammatory cytokine level decreased. It could confirm the effect. This, together with the results of the in vivo experiment of Example 6, is an analysis result proved the effect of ZAG in vitro. In particular, the result of a decrease in the level of TARC in keratinocytes associated with atopic dermatitis may mean that the ZAG protein is effective in improving atopic dermatitis. Accordingly, compositions in various embodiments of the present invention comprising ZAG proteins that reduce the level of IgE, the level of histamine, and the level of inflammatory cytokines can be used for the prevention or treatment of atopic dermatitis. Furthermore, the dry skin or skin barrier function cosmetic composition according to an embodiment of the present invention and the pharmaceutical composition for the prevention or treatment thereof may have the effect of preventing and treating atopic dermatitis by controlling the inflammatory response and immune response. . In addition, the various pharmaceutical compositions of the present invention, in particular anti-allergic pharmaceutical composition and anti-inflammatory pharmaceutical composition, by controlling the inflammatory response and immune response, can inhibit the inflammatory response, prevent and treat various allergic diseases including atopic dermatitis It can be effective.

나아가, 본 발명의 약학 조성물들은 기존의 아토피피부염, 알러지성 질환의 치료제로 이용되던 스테로이드성 약제들을 대체할 수 있는 새로운 치료제로 이용될 수 있다. 특히, 본 발명의 약학 조성물들은 보습 효과를 갖는, 아토피피부염 치료제, 나아가 항염증제로 이용될 수 있어, 스테로이드성 약제의 단점을 극복할 수 있을 것으로 사료된다. Furthermore, the pharmaceutical compositions of the present invention can be used as a new therapeutic agent that can replace the steroidal drugs that have been used to treat existing atopic dermatitis and allergic diseases. In particular, the pharmaceutical compositions of the present invention can be used as a therapeutic agent for atopic dermatitis, and also as an anti-inflammatory agent, which has a moisturizing effect, so that the disadvantages of steroidal drugs may be overcome.

이상 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예들을 더욱 상세하게 설명하였으나, 본 발명은 반드시 이러한 실시예로 국한되는 것은 아니고, 본 발명의 기술사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 다양하게 변형 실시될 수 있다. 따라서, 본 발명에 개시된 실시예들은 본 발명의 기술 사상을 한정하기 위한 것이 아니라 설명하기 위한 것이고, 이러한 실시예에 의하여 본 발명의 기술 사상의 범위가 한정되는 것은 아니다. 그러므로, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 보호 범위는 아래의 청구범위에 의하여 해석되어야 하며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술 사상은 본 발명의 권리범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.Although the embodiments of the present invention have been described in more detail with reference to the accompanying drawings, the present invention is not necessarily limited to these embodiments, and various modifications can be made without departing from the spirit of the present invention. . Therefore, the embodiments disclosed in the present invention are not intended to limit the technical idea of the present invention but to describe the present invention, and the scope of the technical idea of the present invention is not limited by these embodiments. Therefore, it should be understood that the embodiments described above are exemplary in all respects and not restrictive. The protection scope of the present invention should be interpreted by the following claims, and all technical ideas within the equivalent scope should be interpreted as being included in the scope of the present invention.

<110> INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION, YONSEI UNIVERSITY <120> OMPOSITION FOR IMPROVING DRY SKIN OR SKIN BARRIER FUNCTION AND COMPOSITION FOR ANTI ALLERGY <130> 16PD5771KR <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 291 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Pro Gly Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Pro Ala Gly Gln Glu Asn 1 5 10 15 Gln Asp Gly Arg Tyr Ser Leu Thr Tyr Ile Tyr Thr Gly Leu Ser Lys 20 25 30 His Val Glu Asp Val Pro Ala Phe Gln Ala Leu Gly Ser Leu Asn Asp 35 40 45 Leu Gln Phe Phe Arg Tyr Asn Ser Lys Asp Arg Lys Ser Gln Pro Met 50 55 60 Gly Leu Trp Arg Gln Val Glu Gly Met Glu Asp Trp Lys Gln Asp Ser 65 70 75 80 Gln Leu Gln Lys Ala Arg Glu Asp Ile Phe Met Glu Thr Leu Lys Asp 85 90 95 Ile Val Glu Tyr Tyr Asn Asp Ser Asn Gly Ser His Val Leu Gln Gly 100 105 110 Arg Phe Gly Cys Glu Ile Glu Asn Asn Arg Ser Ser Gly Ala Phe Trp 115 120 125 Lys Tyr Tyr Tyr Asp Gly Lys Asp Tyr Ile Glu Phe Asn Lys Glu Ile 130 135 140 Pro Ala Trp Val Pro Phe Asp Pro Ala Ala Gln Ile Thr Lys Gln Lys 145 150 155 160 Trp Glu Ala Glu Pro Val Tyr Val Gln Arg Ala Lys Ala Tyr Leu Glu 165 170 175 Glu Glu Cys Pro Ala Thr Leu Arg Lys Tyr Leu Lys Tyr Ser Lys Asn 180 185 190 Ile Leu Asp Arg Gln Asp Pro Pro Ser Val Val Val Thr Ser His Gln 195 200 205 Ala Pro Gly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Cys Leu Ala Tyr Asp Phe Tyr 210 215 220 Pro Gly Lys Ile Asp Val His Trp Thr Arg Ala Gly Glu Val Gln Glu 225 230 235 240 Pro Glu Leu Arg Gly Asp Val Leu His Asn Gly Asn Gly Thr Tyr Gln 245 250 255 Ser Trp Val Val Val Ala Val Pro Pro Gln Asp Thr Ala Pro Tyr Ser 260 265 270 Cys His Val Gln His Ser Ser Leu Ala Gln Pro Leu Val Val Pro Trp 275 280 285 Glu Ala Ser 290 <110> INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION, YONSEI UNIVERSITY <120> OMPOSITION FOR IMPROVING DRY SKIN OR SKIN BARRIER FUNCTION AND COMPOSITION FOR ANTI ALLERGY <130> 16PD5771KR <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 291 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Pro Gly Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys Pro Ala Gly Gln Glu Asn 1 5 10 15 Gln Asp Gly Arg Tyr Ser Leu Thr Tyr Ile Tyr Thr Gly Leu Ser Lys 20 25 30 His Val Glu Asp Val Pro Ala Phe Gln Ala Leu Gly Ser Leu Asn Asp 35 40 45 Leu Gln Phe Phe Arg Tyr Asn Ser Lys Asp Arg Lys Ser Gln Pro Met 50 55 60 Gly Leu Trp Arg Gln Val Glu Gly Met Glu Asp Trp Lys Gln Asp Ser 65 70 75 80 Gln Leu Gln Lys Ala Arg Glu Asp Ile Phe Met Glu Thr Leu Lys Asp 85 90 95 Ile Val Glu Tyr Tyr Asn Asp Ser Asn Gly Ser His Val Leu Gln Gly 100 105 110 Arg Phe Gly Cys Glu Ile Glu Asn Asn Arg Ser Ser Gly Ala Phe Trp 115 120 125 Lys Tyr Tyr Tyr Asp Gly Lys Asp Tyr Ile Glu Phe Asn Lys Glu Ile 130 135 140 Pro Ala Trp Val Pro Phe Asp Pro Ala Ala Gln Ile Thr Lys Gln Lys 145 150 155 160 Trp Glu Ala Glu Pro Val Tyr Val Gln Arg Ala Lys Ala Tyr Leu Glu 165 170 175 Glu Glu Cys Pro Ala Thr Leu Arg Lys Tyr Leu Lys Tyr Ser Lys Asn 180 185 190 Ile Leu Asp Arg Gln Asp Pro Pro Ser Val Val Val Thr Ser His Gln 195 200 205 Ala Pro Gly Glu Lys Lys Lys Leu Lys Cys Leu Ala Tyr Asp Phe Tyr 210 215 220 Pro Gly Lys Ile Asp Val His Trp Thr Arg Ala Gly Glu Val Gln Glu 225 230 235 240 Pro Glu Leu Arg Gly Asp Val Leu His Asn Gly Asn Gly Thr Tyr Gln 245 250 255 Ser Trp Val Val Val Ala Val Pro Pro Gln Asp Thr Ala Pro Tyr Ser 260 265 270 Cys His Val Gln His Ser Ser Leu Ala Gln Pro Leu Val Val Pro Trp 275 280 285 Glu ala ser 290

Claims

ZAG (Zinc-alpha-2-glycoprotein) 를 포함하는, 피부 건조증의 예방 또는 치료용 약학 조성물.A pharmaceutical composition for preventing or treating dry skin, comprising ZAG (Zinc-alpha-2-glycoprotein).

제1항에 있어서,
상기 피부 건조증은 아토피피부염에 의한 것인, 피부 건조증의 예방 또는 치료용 약학 조성물.The method of claim 1,
The dry skin is due to atopic dermatitis, the pharmaceutical composition for the prevention or treatment of dry skin.

제1항에 있어서,
상기 ZAG는 전체 조성물 중량을 기준으로 0.0001 중량% 내지 10 중량%인, 피부 건조증의 예방 또는 치료용 약학 조성물.The method of claim 1,
The ZAG is 0.0001% to 10% by weight based on the total weight of the composition, the pharmaceutical composition for preventing or treating dry skin.

제1항에 있어서,
상기 ZAG는 서열번호 1의 아미노산 서열로 구성된, 피부 건조증의 예방 또는 치료용 약학 조성물.The method of claim 1,
The ZAG is composed of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, a pharmaceutical composition for preventing or treating dry skin.

ZAG (Zinc-alpha-2-glycoprotein) 를 포함하는 피부 건조증 개선용 화장료 조성물.A cosmetic composition for improving dry skin, comprising ZAG (Zinc-alpha-2-glycoprotein).

제5항에 있어서,
상기 피부 건조증은 아토피피부염에 의한 것인, 피부 건조증 개선용 화장료 조성물.The method of claim 5,
The skin dryness is caused by atopic dermatitis, cosmetic composition for improving skin dryness.

제5항에 있어서,
상기 ZAG는 전체 조성물 중량을 기준으로 0.0001 중량% 내지 10 중량%인, 피부 건조증 개선용 화장료 조성물.The method of claim 5,
The ZAG is 0.0001 wt% to 10 wt% based on the total weight of the composition, cosmetic composition for improving dry skin.

제5항에 있어서,
상기 조성물은 겔, 로션, 파우더, 클렌징, 오일, 파운데이션, 스프레이, 용액, 외용 연고, 크림, 폼, 영양 화장수, 유연 화장수, 팩, 유연수, 유액, 메이크업 베이스, 에센스, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 선 스크린 크림, 선 오일, 현탁액, 유탁액 및 페이스트로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는, 피부 건조증 개선용 화장료 조성물.The method of claim 5,
The composition includes gel, lotion, powder, cleansing, oil, foundation, spray, solution, external ointment, cream, foam, nourishing lotion, flexible lotion, pack, flexible water, latex, makeup base, essence, soap, liquid cleanser, bath A cosmetic composition for improving skin dryness, having a formulation selected from the group consisting of sunscreen creams, sun oils, suspensions, emulsions and pastes.

제5항에 있어서,
화장품학적으로 허용 가능한 담체를 더 포함하는, 피부 건조증 개선용 화장료 조성물.The method of claim 5,
A cosmetic composition for improving skin dryness, further comprising a cosmetically acceptable carrier.

제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 상기 약학 조성물을 개체의 피부에 도포하는 단계를 포함하고,
상기 개체는 인간을 제외한 포유 동물인, 피부 건조증의 예방 또는 치료 방법.
Applying the pharmaceutical composition of claim 1 to the skin of an individual;
The subject is a mammal other than a human, the method of preventing or treating dry skin.

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