KR102014685B1 - Compound from Caragana sinica and composition for skin whitening comprising the same - Google Patents

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성종혁
김승현
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Abstract

The present invention relates to a compound derived from Caragana sinica and a composition for skin whitening comprising the same. According to the present invention, the composition for skin whitening showing a melanin inhibitory activity can be provided by comprising a novel compound derived from Caragana sinica as an active ingredient, is safe to the body and has fewer side effects by using the compound derived from natural products, thereby being used in various materials such as cosmetics as well as health functional foods and oral cosmetics.

Description

골담초 유래 화합물 및 이를 함유하는 피부 미백용 조성물{Compound from Caragana sinica and composition for skin whitening comprising the same}Compound from Caragana sinica and composition for skin whitening comprising the same}

본 발명은 골담초 유래의 신규 화합물 및 이를 함유하는 피부 미백용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 골담초 유래 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물, 건강기능식품 조성물, 멜라닌 색소 과다 침착 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a novel compound derived from bone tobacco and a composition for skin whitening containing the same, and more particularly, a cosmetic composition for skin whitening, a health functional food composition, containing the compound derived from bone tobacco as an active ingredient, melanin pigment hyperdeposition disease It relates to a pharmaceutical composition for prophylaxis or treatment.

멜라닌은　피부와 머리카락의 색상을 결정하는 주요한 인자이며 검은 색소와 단백질의 복합체 형태를 갖는 페놀계 고분자 물질로서 자외선 차단 역할을 한다. 단파장의 자외선 및 발암물질은 피부에서 유해한 자유 라디칼을 형성하는데 멜라닌은 이러한 자유 라디칼 등을 제거하여 단백질과 유전자들을 보호해 주는 유용한 역할을 한다. 따라서 멜라닌의 양이 많다는 것은 물리적 또는 화학적 독성 물질로부터 피부를 보호할 수 있는 효과적인 대응 체계를 가지고 있다는 것을 의미한다.Melanin is a major factor in determining the color of skin and hair, and as a phenolic polymer material that has a complex form of black pigment and protein, it acts as a UV blocking agent. Short wavelength ultraviolet rays and carcinogens form harmful free radicals in the skin, and melanin plays a useful role in protecting proteins and genes by removing these free radicals. Therefore, a high amount of melanin means that it has an effective countermeasure system that can protect the skin from physical or chemical toxins.

멜라닌은 색소 세포 내에 존재하는 티로시나아제(tyrosinase)의 작용에 의해 티로신(tyrosine)으로부터 복잡한 과정을 거쳐 생성된다. 이때 생성된 멜라닌은 피부 세포에 전달되고 표피 박리와 함께 멜라닌이 상실되어 소멸되는 순환 작용을 보인다. 이러한 멜라닌 생성 과정은 자연적으로 일어나는 현상으로서, 정상 상태의 피부에서는 멜라닌의 과다 생성이 일어나지 않는다. 그러나 피부가 자외선, 환경오염 또는 스트레스와 같은 외부의 자극에 반응하면 멜라닌이 과다 생성되어 피부 밖으로 배출되지 못하고 각질형성세포(keratinocyte)로 전달되고 피부 표피층에 축적되어 기미, 주근깨 및 노인성 흑자 등 심각한 미용상의 문제를 일으킬 뿐만 아니라, 피부노화를 촉진하며 피부암을 유발하기도 한다.Melanin is produced from tyrosine through a complex process by the action of tyrosinase present in pigment cells. At this time, the generated melanin is delivered to the skin cells and exhibits a circulating action in which melanin is lost and disappeared along with epidermal detachment. This melanin production process is a naturally occurring phenomenon, and overproduction of melanin does not occur in normal skin. However, when the skin responds to external stimuli such as ultraviolet rays, environmental pollution or stress, melanin is produced excessively and cannot be discharged out of the skin.It is transferred to keratinocytes and accumulated in the skin layer, resulting in serious cosmetic effects such as spots, freckles and senile surpluses. Not only does it cause problems, it also promotes skin aging and causes skin cancer.

피부 미백제의 개발에 있어서, 생성된 멜라닌 색소를 환원시켜 탈색하는 방법과 멜라닌 색소를 형성하는 효소인 티로시나아제의 활성을 억제하는 방법이 널리 알려져 있다. 그러나 멜라닌 색소를 환원시키기 위해 사용되는 토코페롤이나 비타민류 등을 사용한 미백제는 멜라닌 색소의 탈색효과가 아주 작은 것으로 알려져 있다. 따라서 티로시나아제의 활성을 저해시킴으로써 멜라닌 색소의 생성을 억제하는 저해제가 주목 받고 있다.In the development of skin whitening agents, a method of decolorizing by reducing the produced melanin pigment and a method of inhibiting the activity of tyrosinase, an enzyme that forms melanin pigment, are widely known. However, whitening agents using tocopherol or vitamins, which are used to reduce melanin pigment, are known to have very little depigmentation effect of melanin pigment. Therefore, inhibitors that inhibit the production of melanin pigments by inhibiting the activity of tyrosinase are attracting attention.

종래의 화장품 분야에서는 미백 성분으로서, 코지산(Kojic acid), 알부틴(Arbutin) 등과 같은 티로시나아제 효소 활성을 억제하는 물질, 하이드로퀴논(Hydroquinone), 비타민 C(L-Ascorbic acid) 및 이들의 유도체와 각종 식물 추출물이 사용되었다. 그러나 코지산은 티로시나제의 활성 부위에 존재하는 구리 이온을 흡착시켜 효소활성을 저해하지만, 화장품에 배합 시 불안정성, 피부 부작용의 문제 및 최근 동물실험 결과 간암을 유발한다고 밝혀져 화장품 원료로 사용이 중지되었다. 또한, 비타민 C 및 그 유도체는 산화가 잘 되는 불안정성 때문에 화장품 원료로서 사용이 어려우며, 하이드로퀴논은 피부에 대한 미백효과는 탁월하지만 알레르기를 유발하는 성질, 멜라닌 생성 세포에 대한 독성, 피부의 영구 탈색화 등 피부에 대한 자극성이 높으며, 최근 발암성 물질로 규정되어 사용이 금지되어 각 나라별로 제한적인 농도만 허가하고 있다. 뿐만 아니라, 알부틴은 하이드로퀴논에 글루코피라노사이드(Glucopyranoside)가 결합된 유도체로 하이드로퀴논 사용 시 나타나는 부작용이 적으면서 인체에 대한 독성은 없이 멜라닌 색소의 합성을 억제하는 작용이 있어, 멜라닌 색소 침착이 증가되는 피부 질환의 치료제로서의 이용 가능성이 제시되었으나, 피부 효소에 의해 일부 분해되는 단점이 있다. 따라서, 소량으로도 효능이 우수하고 부작용이 적은 안전한 대체 미백제의 개발이 시급한 실정이다.As a whitening component in the conventional cosmetic field, substances that inhibit tyrosinase enzyme activity such as Kojic acid and arbutin, hydroquinone, vitamin C (L-Ascorbic acid), and derivatives thereof And various plant extracts were used. However, kojic acid inhibits enzymatic activity by adsorbing copper ions present in the active site of tyrosinase, but when formulated in cosmetics, it has been found to cause instability, skin side effects, and liver cancer as a result of recent animal tests, and it has been discontinued as a cosmetic ingredient. In addition, vitamin C and its derivatives are difficult to use as a cosmetic ingredient because of the instability that is well oxidized. Hydroquinone has an excellent whitening effect on the skin, but it causes allergies, toxicity to melanogenic cells, and permanent depigmentation of the skin. It is highly irritating to the skin of the back, and it is recently regulated as a carcinogenic substance, and its use is prohibited, so only limited concentrations are permitted by each country. In addition, arbutin is a derivative in which glucopyranoside is bound to hydroquinone, and has few side effects when using hydroquinone, and has the effect of inhibiting the synthesis of melanin pigment without toxicity to the human body, thereby preventing melanin pigmentation. Although the possibility of use as a therapeutic agent for increasing skin diseases has been suggested, there is a disadvantage of being partially degraded by skin enzymes. Therefore, it is urgent to develop a safe alternative whitening agent with excellent efficacy and low side effects even in a small amount.

골담초(Caragana sinica)는 골담초 또는 기타 동속 근연 식물의 뿌리를 기원으로 하고, 한국 및 중국 산지에서 자라는 콩과 식물이다. 높이는 약 2 m로 위를 향한 가지는 사방으로 퍼지고, 줄기는 회갈색으로 가시가 뭉쳐나고 5개의 능선이 있다. 잎은 어긋나고, 홀수 1회 깃꼴겹 잎이며, 작은 잎은 4개로 타원형인 특징이 있다. 작은 잎의 길이가 8~17 cm인 것을 반용골담초(var. megalantha), 작은 잎이 12~18 cm인 것을 좀골담초 (C. microphylla)라고 한다. 잎과 가지에 플라보노이드, 열매 껍질에 알칼로이드, 여물지 않은 열매에는 이노시톨 등이 있으며, carpahenol A (resveratrol trimer), (+)-isoampelopson F (resveratrol dimer), caraphenol B (resveratrol dimer), caraphenol C (resveratrol dimer) 등의 올리고스틸벤(oligostilbene) 류를 함유하고 있는 것으로 보고되어 있다. (Hong-Feng Luo et al., Tetrahedron, 57, 4849, 2001). 주요 효능으로는 강장, 이뇨, 류마티즘, 관절염, 대하증, 요통, 급성유선염, 이명, 뼈, 신경통에 효능이 있는 것으로 보고 되었다. Caragana sinica is a leguminous plant that originates from the root of a plant that is related to the genus Caragana or other genus, and grows in Korea and China. The height is about 2 m, the branches facing upwards are spread in all directions, and the stem is grayish brown, with thorns clustered and there are 5 ridges. The leaves are alternate, odd numbered once pinnate, and four small leaves are elliptical. Small leaves with a length of 8 to 17 cm are called var. megalantha, and those with small leaves of 12 to 18 cm are called C. microphylla. Flavonoids in leaves and branches, alkaloids in fruit peels, and inositol in unripe fruits. It has been reported to contain oligostilbenes such as dimer). (Hong-Feng Luo et al., Tetrahedron, 57, 4849, 2001). The main effects were reported to be effective in tonic, diuretic, rheumatism, arthritis, hypoplasia, low back pain, acute mastitis, tinnitus, bone, and neuralgia.

본 발명자들은 피부 미백 효과를 낼 수 있는 신규 화합물을 선별하고자 노력한 결과 골담초에서 분리된 화합물을 B16 세포에 처리하여 멜라닌 생합성 억제활성을 조사함으로써 상기 화합물의 미백 및 기능성 화장료의 유용자원으로서 활용가능성이 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.As a result of the present inventors' efforts to select a new compound capable of skin whitening effect, the compound isolated from Osmella is treated on B16 cells to investigate the inhibitory activity of melanin biosynthesis, so that the compound has the potential to be utilized as a useful resource for whitening and functional cosmetics. By confirming the present invention was completed.

본 발명의 목적은 골담초 유래의 신규 화합물을 제공하고자 하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a novel compound derived from bone damweed.

본 발명의 다른 목적은 골담초로부터 상기 화합물을 분리하는 방법을 제공하고자 하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for separating the compound from the bone damweed.

아울러, 본 발명의 또 다른 목적은 상기 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물을 제공하고자 하는 것이다.In addition, another object of the present invention is to provide a skin whitening composition containing the compound as an active ingredient.

상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 골담초(Caragana sinica) 추출물로부터 분리 정제된 하기 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 신규 스틸벤(stilbene)계 화합물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a novel stilbene-based compound represented by the following Formula 1 or Formula 2 separated and purified from the extract of Caragana sinica.

[화학식 1][Formula 1]

Figure 112019066557216-pat00001
Figure 112019066557216-pat00001

[화학식 2][Formula 2]

Figure 112019066557216-pat00002
Figure 112019066557216-pat00002

본 발명은 또한, 상기 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 신규 스틸벤(stilbene)계 화합물의 분리 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for separating a novel stilbene-based compound represented by Chemical Formula 1 or Chemical Formula 2.

본 발명은 또한, 상기 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.The present invention also provides a composition for skin whitening containing the compound represented by Formula 1 or Formula 2 as an active ingredient.

본 발명은 또한, 골담초(Caragana sinica) 추출물로부터 분리 정제된 하기 화학식 6로 표시되는 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.The present invention also provides a composition for skin whitening containing as an active ingredient a compound represented by the following formula (6) separated and purified from the extract of Caragana sinica.

[화힉식 6][Japanese style 6]

Figure 112019066557216-pat00003
Figure 112019066557216-pat00003

본 발명은 또한, 상기 화학식 6으로 표시되는 화합물의 분리 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for separating the compound represented by Chemical Formula 6.

본 발명에서, 상기 피부 미백용 조성물은 화장료 조성물, 멜라닌 색소 과다 침착 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 또는 건강기능성 식품 조성물로 사용될 수 있다.In the present invention, the skin whitening composition may be used as a cosmetic composition, a pharmaceutical composition for preventing or treating melanin hyperpigmentation disease, or a health functional food composition.

본 발명은 신규한 골담초 유래 화합물을 유효성분으로 함유함으로써 높은 멜라닌 저해 활성을 보이는 피부 미백용 조성물을 제공할 수 있는 우수한 효과를 가진다.The present invention has an excellent effect that can provide a composition for skin whitening exhibiting high melanin inhibitory activity by containing a novel compound derived from osteoclast as an active ingredient.

또한, 본 발명의 조성물은 천연물 유래 화합물을 사용함으로써 인체에 안전하고 부작용이 적어 바르는 화장품뿐 아니라 건강기능식품 및 경구용 화장품 등의 소재로 다양하게 사용될 수 있다.In addition, the composition of the present invention can be variously used as a material such as health functional food and oral cosmetics as well as cosmetics to be applied because it is safe to the human body and has few side effects by using compounds derived from natural substances.

도 1은 본 발명의 골담초(Caragana sinica) 추출물 및 분획물을 제조하는 과정을 개략적으로 표시한 도면이다.
도 2는 골담초 분획물로부터 본 발명의 화합물을 분리, 정제하는 과정을 개략적으로 표시한 도면이다.
도 3은 B16 세포주에서 세포 침전물의 색 변화를 통해 화합물 1 및 6의 미백 효과를 확인한 결과이다.
도 4은 B16 세포주에서 화합물 1 및 6의 티로시나아제 저해 활성을 확인한 결과이다.
도 5는 B16 세포주에서 화합물 1 및 6이 멜라닌 생합성 관련 유전자 발현에 미치는 영향을 확인한 결과이다.Figure 1 is a view schematically showing the process of preparing the extract and fractions of the present invention bonedamcho ( Caragana sinica ).
2 is a diagram schematically showing a process of separating and purifying the compound of the present invention from a fraction of bone damweed.
3 is a result of confirming the whitening effect of Compounds 1 and 6 through the color change of cell sediment in the B16 cell line.
4 is a result of confirming the tyrosinase inhibitory activity of compounds 1 and 6 in the B16 cell line.
5 is a result of confirming the effect of compounds 1 and 6 on the expression of genes related to melanin biosynthesis in the B16 cell line.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 골담초(Caragana sinica) 추출물로부터 분리 정제된 하기 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 신규의 스틸벤(stilbene)계 화합물을 제공한다.According to one aspect of the present invention, the present invention provides a novel stilbene-based compound represented by the following formula (1) or formula (2) separated and purified from the extract of Caragana sinica.

[화학식 1][Formula 1]

Figure 112019066557216-pat00004
Figure 112019066557216-pat00004

[화학식 2][Formula 2]

Figure 112019066557216-pat00005
Figure 112019066557216-pat00005

본 발명에서, 상기 화학식 1 또는 2로 표시되는 신규의 스틸벤계 화합물은 골담초의 뿌리로부터 분리될 수 있다.In the present invention, the novel stilbene-based compound represented by Chemical Formula 1 or 2 may be isolated from the roots of bone damweed.

다른 하나의 양태로서, 본 발명은 골담초로부터 상기 화학식 1 또는 2로 표시되는 신규 화합물을 분리하는 방법을 제공한다.As another aspect, the present invention provides a method of separating a novel compound represented by the formula 1 or 2 from the bone damweed.

바람직한 양태로서, 상기 화학식 1 또는 2로 표시되는 신규 스틸벤계 화합물의 분리 방법은 하기 단계를 포함할 수 있다:As a preferred embodiment, the separation method of the novel stilbene compound represented by Formula 1 or 2 may include the following steps:

골담초를 물, C1　내지 C4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매로 추출하여 골담초 추출물을 얻는 단계;Extracting the bone tobacco with a solvent selected from water, a lower alcohol of C1 　 to C4, or a mixed solvent thereof to obtain a bone tobacco extract;

상기 골담초 추출물을 헥산, 클로로포름 및 에틸 아세테이트로 분획하여 각 용매 분획물을 얻는 단계;Fractionation of the extract of the bone tobacco with hexane, chloroform, and ethyl acetate to obtain a solvent fraction;

상기 에틸 아세테이트 분획물을 전개용매로서 헥산과 아세톤을 사용하여 실리카겔 컬럼크로마토그래피 수행하여 분획하는 단계; Fractionating the ethyl acetate fraction by performing silica gel column chromatography using hexane and acetone as developing solvents;

상기 실리카겔 컬럼크로마토그래피 분획물을 전개용매로서 메탄올과 증류수의 혼합용매를 사용하여 YMC 컬럼크로마토그래피 수행하는 단계; 및Performing YMC column chromatography on the silica gel column chromatography fraction using a mixed solvent of methanol and distilled water as a developing solvent; And

상기 YMC 컬럼 크로마토그래피 분획물을 아세토니트릴로 프랩 크로마토그래피를 실시하는 단계.Preparing the YMC column chromatography fraction with acetonitrile.

본 발명에서, 상기 골담초 추출물은 물, 에탄올, 메탄올과 같은 C1 내지 C4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매, 바람직하게는 메탄올로 추출하여 얻을 수 있다. 또한, 본 발명에 있어서, 상기 추출물에는, 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물 중 어느 하나를 포함할 수 있다.In the present invention, the extract can be obtained by extraction with a solvent selected from C1 to C4 lower alcohols such as water, ethanol, and methanol, or a mixed solvent thereof, preferably methanol. In addition, in the present invention, the extract may contain an extract obtained by an extraction treatment, a diluted solution or a concentrate of the extract, a dried product obtained by drying the extract, or any one of these preparations or purified products.

본 발명의 일 실시예로서, 상기 골담초 추출물은 골담초 뿌리를 열풍건조하고 분쇄하여 얻은 분쇄물을 100 % 메탄올로 3시간씩 초음파 추출로 3회 추출하여 여과한 다음 감압농축 함으로써 수득할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the extract of the bone damweed can be obtained by hot-air drying the roots of the goldfish and pulverizing the resulting pulverized product with 100% methanol for 3 hours by ultrasonic extraction three times, filtering, and then concentrating under reduced pressure.

본 발명에서, 골담초 추출물의 용매분획은 골담초 추출물을 증류수로 현탁한 후 비극성 용매부터 n-헥산(n-hexane), 클로로포름(CHCl3) 및 에틸 아세테이트(EtOAc)를 사용하여 분획함으로써 수득할 수 있다.In the present invention, the solvent fraction of the extract can be obtained by suspending the extract of osteoid in distilled water and fractionating using n-hexane, chloroform (CHCl 3 ) and ethyl acetate (EtOAc) from a non-polar solvent. .

본 발명의 일 실시예로서, 골담초 추출물의 용매분획은 골담초 메탄올 추출물을 증류수에 현탁하고 분별 깔대기에서 비극성 용매부터 n-헥산(n-hexane), 클로로포름(CHCl3) 및 에틸 아세테이트(EtOAc)를 사용하여 분획한 뒤 여과, 감압 농축하여 각각의 용매별 분획물을 얻었다.As an embodiment of the present invention, the solvent fraction of the extract of the extract of the extract of osteoccus was suspended in distilled water and the methanol extract of the extract of the extract was used in a separatory funnel using n-hexane, chloroform (CHCl 3 ), and ethyl acetate (EtOAc) from a non-polar solvent. After fractionation, filtration and concentration under reduced pressure were performed to obtain fractions for each solvent.

다른 하나의 양태로서, 본 발명은 하기 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 신규 스틸벤(stilbene)계 화합물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.As another aspect, the present invention provides a skin whitening composition containing a novel stilbene-based compound represented by the following Formula 1 or Formula 2 as an active ingredient.

[화학식 1][Formula 1]

Figure 112019066557216-pat00006
Figure 112019066557216-pat00006

[화학식 2][Formula 2]

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본 발명의 용어 "피부 미백"은 멜라닌의 과다 생성으로 인하여 감소된 피부 밝기의 증가로 이해될 수 있으며, 구체적으로는 멜라닌의 과다 생성에 의한 기미, 주근깨, 검버섯 등의 개선(증상 경감), 치료, 예방, 발현 억제 또는 지연을 의미한다.The term "skin whitening" of the present invention can be understood as an increase in skin brightness reduced due to excessive production of melanin, and specifically, improvement (reduction of symptoms) and treatment of spots, freckles, age spots, etc. due to excessive production of melanin , Prevents, inhibits or delays expression.

본 발명에서, 상기 조성물은 티로시나아제 발현을 저해하거나 멜라닌 생성을 억제함으로써 피부 미백 효과를 낼 수 있다.In the present invention, the composition may exhibit a skin whitening effect by inhibiting tyrosinase expression or melanin production.

본 발명의 바람직한 구현예에 의하면, 본 발명의 피부 미백용 조성물은 "화장료 조성물"의 형태로 제공될 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the composition for skin whitening of the present invention may be provided in the form of a "cosmetic composition".

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크 림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.The cosmetic composition of the present invention may be prepared in any formulation conventionally prepared in the art, for example, solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant-containing cleansing , Oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation and spray may be formulated, but is not limited thereto. More specifically, it may be prepared in the form of a flexible lotion, a nutritional lotion, a nutritional cream, a massage cream, an essence, an eye cream, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, a pack, a spray, or a powder.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전 분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracanth, cellulose derivatives, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc, or zinc oxide are used as carrier components. Can be.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이 인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로 로플루오로히드로 카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다. When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component. In particular, in the case of a spray, additionally chlorofluorohydrocarbon, Propellants such as propane/butane or dimethyl ether may be included.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 가 있다.When the formulation of the present invention is a solution or emulsion, a solvent, a solubilizing agent or an emulsifying agent is used as a carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1 ,3-butylglycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or fatty acid ester of sorbitan.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다. 본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방 족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다. When the formulation of the present invention is a suspension, as a carrier component, a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol, an ethoxylated isostearyl alcohol, a suspending agent such as polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, and crystallites Sex cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracanth, and the like can be used. When the formulation of the present invention is a surfactant containing cleansing, as a carrier component, aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyltaurate, sarcosinate, fatty acid Amide ether sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty diethanolamides, vegetable oils, lanolin derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters may be used.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분과 담체 성분 이외에, 화장료 조성물에 통상적으로 이용 되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제를 포함할 수 있다. In addition to the active ingredient and the carrier ingredient, the ingredients included in the cosmetic composition of the present invention include ingredients commonly used in cosmetic compositions, such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments, and flavors. Can include.

본 발명의 화장료 조성물에서 유효성분인 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 화합물의 양은 특별히 한정되지 않으며, 바람직하게는 상기 피부 미백 효능을 달성하는 데 충분한 양으로 포함된다.The amount of the compound represented by Formula 1 or Formula 2 as an active ingredient in the cosmetic composition of the present invention is not particularly limited, and is preferably included in an amount sufficient to achieve the skin whitening effect.

본 발명의 또 다른 바람직한 구현예에 의하면, 본 발명의 피부 미백용 조성물은 멜라닌 색소 과다 침착 질환의 예방 또는 치료용 "약학적 조성물"의 형태로 제공될 수 있다.According to another preferred embodiment of the present invention, the composition for skin whitening of the present invention may be provided in the form of a "pharmaceutical composition" for preventing or treating melanin hyperpigmentation disease.

본 발명에서 상기 멜라닌 색소 과다 침착 질환은 주근깨, 노인성 반점, 간반, 기미, 갈색 또는 흑점, 일광 색소반, 푸른흑피증(cyanic melasma), 약물 사용 후의 멜라닌 색소 과다 침착, 임신성 갈색반(gravidic chloasma), 또는 찰상 및 화상을 비롯한 상처 또는　피부염으로 인한 염증 후 과다 색소 침착일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.In the present invention, the melanin hyperpigmentation disease is freckles, senile spots, liver spots, melasma, brown or black spots, sun pigment spots, cyanic melasma, melanin hyperpigmentation after drug use, gestational brown spots (gravidic chloasma) , Or wounds, including abrasions and burns, or hyperpigmentation after inflammation due to dermatitis, but is not limited thereto.

본 발명의 멜라닌 색소 과다 침착 질환 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물은 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 화합물을 단독으로 함유하거나 또는 상기 화합물의 유도체와 그의 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 추가적인 성분을 포함하게 되면 본 발명의 조성물의 멜라닌 색소 과다 침착 질환 예방 또는 치료 효과가 더욱 증진될 수 있을 것이다. 상기 성분 추가 시에는 복합 사용에 따른 피부 안전성, 제형화의 용이성, 유효성분들의 안정성을 고려할 수 있다.The pharmaceutical composition for preventing or treating melanin hyperpigmentation disease of the present invention contains a compound represented by Formula 1 or Formula 2 alone, or a derivative of the compound and at least one active ingredient exhibiting a similar function thereof. I can. When the additional components are included, the effect of preventing or treating melanin hyperpigmentation disease of the composition of the present invention may be further enhanced. When the above ingredients are added, skin safety, ease of formulation, and stability of active ingredients can be considered in combination with use.

또한, 본 발명의 멜라닌 색소 과다 침착 질환 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 더 포함할 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체는 완충액, 주사용 멸균수, 일반 식염수 또는 인산염 완충 식염수, 수크로즈, 히스티딘, 염 및 폴리솔베이트 등과 같은 여러 성분을 함유할 수 있다.In addition, the pharmaceutical composition for preventing or treating melanin hyperpigmentation disease of the present invention may further include a pharmaceutically acceptable carrier. The pharmaceutically acceptable carrier may contain various components such as a buffer solution, sterile water for injection, general saline or phosphate buffered saline, sucrose, histidine, salt, and polysorbate.

본 발명의 조성물을 의약품으로 사용하는 경우, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물은 임상투여 시에 다양한 하기의 경구 또는 비경구 투여 형태로 제제화 되어 투여될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.When the composition of the present invention is used as a pharmaceutical, the pharmaceutical composition containing the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient is formulated and administered in various oral or parenteral dosage forms at the time of clinical administration. May be, but is not limited thereto.

경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경/연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제, 엘릭시르제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 정제는 또한 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제를 함유할 수 있다. Formulations for oral administration include, for example, tablets, pills, hard/soft capsules, solutions, suspensions, emulsifiers, syrups, granules, elixirs, and the like. Rose, sucrose, mannitol, sorbitol, cellulose and/or glycine), lubricants (e.g. silica, talc, stearic acid and their magnesium or calcium salts and/or polyethylene glycol). Tablets may also contain binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and/or polyvinylpyrrolidine, and optionally starch, agar, alginic acid or sodium salts thereof. It may contain disintegrants or boiling mixtures and/or absorbents, colorants, flavoring agents, and sweetening agents.

경피 투여제의 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태가 포함된다. 상기에서 '경피 투여'는 약학 조성물을 국소적으로 피부에 투여하여 약학 조성물에 함유된 유효한 양의 활성성분이 피부 내로 전달되는 것을 의미한다.In the case of transdermal administration, ointments, creams, lotions, gels, external solutions, pasta, liniment, and air rolls are included. In the above, "transdermal administration" means that an effective amount of the active ingredient contained in the pharmaceutical composition is delivered into the skin by topically administering the pharmaceutical composition to the skin.

본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효 성분으로 하는 약학적 조성물은 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사를 주입하는 방법에 의한다. 이때, 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 안정제 또는 완충제와 함께 물에 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알 단위 투여형으로 제조할 수 있다. 상기 조성물은 멸균되고/되거나 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제제화할 수 있다.The pharmaceutical composition containing the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient can be administered parenterally, and parenteral administration is a method of injecting subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection, or intrathoracic injection. By. At this time, in order to formulate a formulation for parenteral administration, the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof is mixed in water with a stabilizer or buffer to prepare a solution or suspension, which is prepared in an ampoule or vial unit dosage form. I can. The composition may be sterilized and/or contain adjuvants such as preservatives, stabilizers, hydrating agents or emulsification accelerators, salts and/or buffers for controlling osmotic pressure, and other therapeutically useful substances, which are conventional methods of mixing and granulation. It can be formulated according to the method of painting or coating.

또한, 본 발명의 화합물의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 몸무게가 60 ㎏인 성인 환자를 기준으로 할 때, 일반적으로 0.001 ~ 1,000 ㎎/일이며, 바람직하게는 0.01 ~ 500 ㎎/일이며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.In addition, the dosage of the compound of the present invention to the human body may vary depending on the patient's age, weight, sex, dosage form, health condition, and degree of disease, and when based on an adult patient weighing 60 kg, generally It is 0.001 to 1,000 mg/day, preferably 0.01 to 500 mg/day, and may be dividedly administered once a day or several times a day at regular time intervals according to the judgment of a doctor or pharmacist.

본 발명에서 사용되는 용어 "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미하는 것으로, 예를 들어 약사법에 따르면 의약외품이란 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로, 사람ㆍ동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않는 제품 등이 포함된다.The term "quasi-drug" as used in the present invention refers to items that are less effective than medicines among items used for the purpose of diagnosing, treating, improving, alleviating, treating, or preventing diseases of humans or animals. According to this, quasi-drugs exclude items used for pharmaceutical purposes, and include products used to treat or prevent diseases of humans and animals, and products that have a mild or no direct effect on the human body.

본 발명의 의약외품 조성물은 색소 과다 침착 질환 예방 또는 치료를 목적으로 사용되는 것으로, 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없으며, 상기 제형화된 제품은 자외선 차단제, 선크림, 선로션, 선스프레이, 헤어토닉, 헤어로션, 헤어크림, 헤어스프레이, 헤어무스, 헤어젤, 헤어컨디셔너, 헤어샴푸, 헤어 린스, 헤어팩, 헤어트리트먼트, 눈썹발모제, 속눈썹발모제, 속눈썹영양제, 애완동물용 샴푸, 애완동물용 린스, 손 세정제, 세제 비누, 비누, 소독청결제, 물티슈, 마스크, 연고제, 패치 또는 필터 충진제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 의약외품을 모두 포함한다.The quasi-drug composition of the present invention is used for the purpose of preventing or treating hyperpigmentation diseases, and is not particularly limited in its formulation, and the formulated products include sunscreen, sunscreen, sun lotion, sunspray, hair tonic, Hair Lotion, Hair Cream, Hair Spray, Hair Mousse, Hair Gel, Hair Conditioner, Hair Shampoo, Hair Rinse, Hair Pack, Hair Treatment, Eyebrow Hair Extension, Eyelash Extension, Eyelash Nutrient, Pet Shampoo, Pet Rinse, Hand There are detergents, detergent soaps, soaps, disinfectant cleaners, wet tissues, masks, ointments, patch or filter fillers, etc., including all quasi-drugs in the usual sense.

또한, 각 제형에 있어서 의약외품 조성물은 다른 성분들을 기타 의약외품의 제형 또는 사용목적 등에 따라 임의로 선정하여 배합할 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(억제 또는 완화)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 예를 들어, 점증제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 및 담체 등을 포함할 수 있다.In addition, in each formulation, the quasi-drug composition may be arbitrarily selected and blended according to the formulation or purpose of use of other quasi-drugs. The mixing amount of the active ingredient may be appropriately determined depending on the purpose of use (inhibition or mitigation). For example, thickeners, stabilizers, solubilizers, conventional adjuvants such as vitamins, pigments and flavors, and carriers may be included.

본 발명의 화합물 또는 이의 염의 함량은 의약외품 조성물의 총 중량을 기준으로 각각 0.0001 내지 20 중량% 인 것이 바람직하다. 20 중량%를 초과하는 경우에는 조성물 제조시 색상 및 안정성이 떨어지며, 0.0001% 미만의 경우에는 그 작용효과가 미미하다.The content of the compound of the present invention or a salt thereof is preferably 0.0001 to 20% by weight, respectively, based on the total weight of the quasi-drug composition. If it exceeds 20% by weight, color and stability are deteriorated during the preparation of the composition, and if it is less than 0.0001%, the effect is insignificant.

또한, 각 제형의 의약외품 조성물에 있어서, 상기한 필수 성분 이외의 다른 성분들은 제형 또는 사용목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.In addition, in the quasi-drug composition of each formulation, components other than the essential components described above may be appropriately selected and blended by a person skilled in the art without difficulty depending on the formulation or purpose of use.

본 발명의 또 다른 바람직한 구현예에 의하면, 본 발명의 피부 미백용 조성물은 "건강기능성 식품 조성물"의 형태로 제공될 수 있다.According to another preferred embodiment of the present invention, the composition for skin whitening of the present invention may be provided in the form of a "health functional food composition".

본 발명에서 용어 “건강기능식품”은 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 '기능성'이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능식품은 당 업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조 시에는 당 업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 상기 건강기능식품의 제형 또한 건강기능식품으로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다. 본 발명의 건강기능식품 조성물은 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 피부 미백 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.In the present invention, the term "health functional food" refers to a food manufactured and processed in the form of tablets, capsules, powders, granules, liquids and pills using raw materials or ingredients having useful functions for the human body. Here, "functionality" means obtaining useful effects for health purposes such as controlling nutrients or physiological effects on the structure and function of the human body. The health functional food of the present invention can be prepared by a method commonly used in the art, and at the time of manufacture, it can be prepared by adding raw materials and ingredients commonly added in the art. In addition, the formulation of the health functional food may be prepared without limitation as long as it is a formulation recognized as a health functional food. The health functional food composition of the present invention has the advantage of having no side effects that may occur during long-term use of the drug, unlike general drugs, and is excellent in portability, and can be consumed as an adjuvant to enhance the skin whitening effect. It is possible.

본 발명의 건강기능식품 조성물은 정제, 과립, 분말, 캅셀, 액상의 용액 및 환으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형으로 제조된 것일 수 있다.The health functional food composition of the present invention may be prepared in any one formulation selected from the group consisting of tablets, granules, powders, capsules, liquid solutions, and pills.

본 발명에 따른 건강기능식품 조성물은 본 발명의 화합물을 유효성분으로 포함시켜 분말제, 액제, 정제, 연질캅셀제, 과립제, 티백차, 인스턴트 차 또는 드링크제 등의 형태로 제형화될 수 있다. 유효 성분으로서의 화합물의 함량은 그 사 용 목적(예방 또는 개선용)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 건강기능식품 조성물 중에 포함되는 본 발명의 화합물의 양은 전체 식품 중량의 0.1 내지 90 중량%로 가할 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 건강기능식품 조성물은 본 발명의 화합물 이외에 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 바람직하게는 주 효과에 상승효과를 줄 수 있는 다른 성분 예를 들면, 비타민 C와 같은 주름 개선용 화합물 또는 녹차 추출물, 닥나무 추출물, 감초추출물, 상백피 추출물, 빈랑자 추출물, 황금 추출물, 산삼 추출물 등의 천연물을 함유하는 것도 무방하다.The health functional food composition according to the present invention may be formulated in the form of a powder, a liquid, a tablet, a soft capsule, a granule, a tea bag, an instant tea or a drink by including the compound of the present invention as an active ingredient. The content of the compound as an active ingredient may be appropriately determined depending on the purpose of use (for prevention or improvement). In general, the amount of the compound of the present invention contained in the health functional food composition may be added in 0.1 to 90% by weight of the total food weight. However, in the case of long-term intake for the purpose of health and hygiene or for the purpose of health control, the amount may be less than the above range. In addition, the health functional food composition according to the present invention preferably provides a synergistic effect to the main effect within a range that does not impair the main effect of the present invention other than the compound of the present invention, such as vitamins. It is also okay to contain natural products such as a compound for improving wrinkles such as C or green tea extract, black oak extract, licorice extract, mosquito extract, betel nut extract, golden extract, and wild ginseng extract.

상기와 같은 형태로 제형화된 건강기능식품 조성물은 식품에 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 식품의 예로는 드링크제, 육류, 소시지, 빵, 비스킷, 떡, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 알코올 음료 및 비타민 복합제, 유제품 및 유가공 제품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품은 모두 포함한다.The health functional food composition formulated in the form as described above may be added to food as it is or may be used with other foods or food ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method. Examples of foods include drinks, meat, sausages, bread, biscuits, rice cakes, chocolate, candies, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gum, dairy products including ice cream, various soups, beverages, alcoholic beverages, and vitamin complexes. , Dairy products and processed dairy products, and all health functional foods in the usual sense are included.

본 발명의 건강기능식품 조성물이 드링크제인 경우는 지시된 비율로 필수성분으로서 본 발명의 신규 화합물을 함유하며, 그 밖의 드링크제 제조를 목적으로 사용되는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등), 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등), 올리고당, 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등), 또는 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)인 것이 바람직하다. 상기 향미제는 천연 향미제(예컨대, 타우마틴, 스테비아 추출물 등)와 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)를 이용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.When the health functional food composition of the present invention is a drink agent, it contains the novel compound of the present invention as an essential ingredient in the indicated ratio, and there is no particular limitation on other ingredients used for the purpose of manufacturing other drink preparations. Eggplant flavors or natural carbohydrates, etc. may be contained as additional ingredients. The natural carbohydrates are monosaccharides (e.g., glucose, fructose, etc.), disaccharides (e.g., maltose, sucrose, etc.), oligosaccharides, polysaccharides (e.g., dextrin, cyclodextrin, etc.), or sugar alcohol ( For example, xylitol, sorbitol, erythritol, etc.) are preferable. As the flavoring agent, natural flavoring agents (eg, taumatin, stevia extract, etc.) and synthetic flavoring agents (eg, saccharin, aspartame, etc.) may be used. The proportion of the natural carbohydrate is generally about 1 to 20 g, preferably about 5 to 12 g per 100 ml of the composition of the present invention.

또한 본 발명의 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에도 본 발명의 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 화합물 100 중량부 당 0.01 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.In addition, the health functional food composition of the present invention includes various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavoring agents such as synthetic flavors and natural flavoring agents, coloring agents and heavy weight agents (cheese, chocolate, etc.), pectic acid and salts thereof, alginic acid. And salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonates used in carbonated beverages, and the like. In addition, the food composition of the present invention of the present invention may contain pulp for the production of natural fruit juice and fruit juice beverages and vegetable beverages. These components may be used independently or in combination. The proportion of these additives is not so critical, but is generally selected in the range of 0.01 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the compound of the present invention.

다른 하나의 양태로서, 본 발명은 또한 골담초(Caragana sinica) 추출물로부터 분리 정제된 하기 화학식 6으로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.As another aspect, the present invention also provides a composition for skin whitening comprising as an active ingredient a compound represented by the following formula (6) separated and purified from the extract of Caragana sinica.

[화학식 6][Formula 6]

Figure 112019066557216-pat00008
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본 발명에서, 상기 조성물은 티로시나아제 발현을 저해하거나 멜라닌 생성을 억제하는 함으로서 피부 미백 효과를 낼 수 있다.In the present invention, the composition may exhibit a skin whitening effect by inhibiting tyrosinase expression or melanin production.

본 발명의 바람직한 구현예에 의하면, 본 발명의 상기 피부 미백용 조성물은 "화장료 조성물", 멜라닌 색소 과다 침착 질환의 예방 또는 치료용 "약학적 조성물"및 "건강기능성 식품 조성물"의 형태로 제공될 수 있다.According to a preferred embodiment of the present invention, the composition for skin whitening of the present invention may be provided in the form of a "cosmetic composition", a "pharmaceutical composition" for preventing or treating a melanin hyperpigmentation disease, and a "health functional food composition". I can.

상기 "화장료 조성물", "약학적 조성물" 및 "건강기능성 식품 조성물"에 대한 설명은 전술한 바와 같다.The description of the "cosmetic composition", "pharmaceutical composition" and "health functional food composition" is as described above.

이하, 실시예를 통해 본 발명의 구성 및 효과를 보다 더 구체적으로 설명하고자 하나, 이들 실시예는 본 발명의 예시적인 기재일 뿐 본 발명의 범위가 이들 실시예에만 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the configuration and effects of the present invention will be described in more detail through examples, but these examples are only illustrative descriptions of the present invention, and the scope of the present invention is not limited to these examples.

[실시예][Example]

실시예 1. 골담초 추출물 및 분획물의 제조Example 1. Preparation of extracts and fractions of osteophytes

골담초의 건조된 뿌리 2.4 kg을 경동시장에서 구입한 후, 믹서로 분쇄한 다음, 실온에서 100% 메탄올 5 L에 침지하고 3시간씩 초음파 추출하는 것을 3회 반복하였다. 수득한 메탄올 추출액을 감압 농축기로 농축하여 용매 성분을 제거한 골담초 추출물을 266.46g 수득하였다.After purchasing 2.4 kg of dried roots of Osmium chinensis at Gyeongdong Market, pulverizing with a mixer, immersing in 5 L of 100% methanol at room temperature, and ultrasonic extraction for 3 hours were repeated 3 times. The obtained methanol extract was concentrated with a reduced pressure concentrator to obtain 266.46 g of an extract of Goldweed extract from which the solvent component was removed.

상기에서 제조한 골담초 메탄올 추출물을 물에 현탁 한 후 분획 깔때기를 이용하여 n-헥산, 클로로포름(CHCl3), 에틸아세테이트(EtOAc)로 분획하여 각각 10.82 g, 44.11 g, 7.12 g의 분획물을 수득하였다.The methanol extract prepared above was suspended in water and fractionated with n-hexane, chloroform (CHCl 3 ), and ethyl acetate (EtOAc) using a fractionation funnel to obtain fractions of 10.82 g, 44.11 g, and 7.12 g, respectively. .

실시예 2. 분획물로부터 화합물의 분리Example 2. Separation of compounds from fractions

실시예 1에서 제조한 n-헥산 분획과 클로로포름 분획을 혼합하여 (54.93 g) 실리카겔 레진으로 충진한 컬럼에 적재한 후 크로마토그래피를 실시하였다. 전개용매로 n-헥산-아세톤 (40:1 → 1:1) 를 사용하여 두 개의 소분획 3G와 3H를 얻었다. 3G를 다시 클로로포름-메탄올 (7:1)을 전개용매로 사용하여 실리카겔 컬럼 크로마토그레피를 실시한 후 40% 아세토니트릴(acetonitrile)을 전개용매로 하여 prep-HPLC를 실시하여 화합물 3 (46.4 mg)을 확보하였다. 3H는 CHCl3-MeOH-Water (3:1:0.15)를 전개용매로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 실시한 후 35% 아세토니트릴(acetonitrile)을 전개용매로 prep-HPLC를 실시하여 화합물 4 (8.2 mg)을 분리하였다.The n-hexane fraction and chloroform fraction prepared in Example 1 were mixed (54.93 g) and loaded on a column filled with silica gel resin, followed by chromatography. Two small fractions 3G and 3H were obtained using n-hexane-acetone (40:1 → 1:1) as a developing solvent. 3G was again subjected to silica gel column chromatography using chloroform-methanol (7:1) as a developing solvent, and then prep-HPLC was performed using 40% acetonitrile as a developing solvent to obtain compound 3 (46.4 mg). Secured. For 3H, CHCl 3 -MeOH-Water (3:1:0.15) was used as a developing solvent to perform silica gel column chromatography, and then 35% acetonitrile was used as a developing solvent, followed by prep-HPLC to obtain Compound 4 (8.2 mg). Separated.

EtOAc 분획은 CHCl3-MeOH (40:1 → 1:1)로 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 실시하여 4개의 소분획 4C, 4D, 4E, 4F를 얻었다. 이 중 4D 분획을 YMC를 이용한 컬럼 크로마토그래피를 MeOH-Water (1.2:1)를 전개용매로 분리를 실시한 후 25% 아세토니트릴(acetonitrile)로 prep-HPLC를 실시하여 화합물 5 (15.2 mg)를 분리하였다. 4E 분획은 YMC column에 MeOH-Water (1.2:1)로 크로마토그래피를 실시하여 8A와 8C 소분획을 얻었다. 각각에 20% 아세토니트릴(acetonitrile) 및 40% 아세토니트릴(acetonitrile)로 prep-HPLC를 실시하여 화합물 6 (10.0 mg)과 화합물 1 (18.3 mg) 및 화합물 2 (7.9 mg)를 분리하였다.The EtOAc fraction was subjected to silica gel column chromatography with CHCl3-MeOH (40:1 → 1:1) to obtain 4 small fractions 4C, 4D, 4E, and 4F. Of these, the 4D fraction was separated by column chromatography using YMC with MeOH-Water (1.2:1) as a developing solvent and then prep-HPLC with 25% acetonitrile to separate compound 5 (15.2 mg). I did. Fraction 4E was chromatographed on a YMC column with MeOH-Water (1.2:1) to obtain small fractions 8A and 8C. Each was subjected to prep-HPLC with 20% acetonitrile and 40% acetonitrile to separate compound 6 (10.0 mg), compound 1 (18.3 mg), and compound 2 (7.9 mg).

실시예 3. 골담초 유래 화합물의 구조 확인Example 3. Structure confirmation of a compound derived from bone damweed

(1) 화합물 1 및 화합물 2(1) Compound 1 and Compound 2

화합물 1과 2는 백색의 무정형 가루로 분리되었다. HR-EIS-MS를 통해 m/z 471.1436과 471.1446 에서 각각의 [M-H] - ion이 확인되어 분자식은 C28H23O7 (471.1444)로 결정되었다.Compounds 1 and 2 were separated into white amorphous powder. Each [MH] at m / z 471.1436 and 471.1446 via HR-EIS-MS - is the ion confirmed the molecular formula was determined to be C 28 H 23 O 7 (471.1444 ).

두 화합물 모두 1H NMR spectrum에서는 AB2-type signals이 확인하였고 2개의 1,4-disubstituted aromatic ring이 있음을 확인하였다. 또한 4개의 aliphatic protons을 확인하였다. 13C NMR spectrum에서는 4개의 aliphatic carbons과 4개의 aromatic rings이 확인되었다. Both compounds confirmed AB 2 -type signals in 1 H NMR spectrum and confirmed that there were two 1,4-disubstituted aromatic rings. In addition, four aliphatic protons were identified. In the 13 C NMR spectrum, 4 aliphatic carbons and 4 aromatic rings were identified.

이를 통하여 화합물 1,2는 모두 Gnetuhainin D과 매우 유사한 구조이며 1,2,4-trisubstitued aromatic ring 대신 1,4-disubstitued aromatic ring을 가진 화합물임을 알 수 있었다. 방향족 고리가 치환된 위치는 H-7b (δ H 4.90)과 C-6b (δ C 146.6) 사이의 HMBC correlation을 통해 확인하여 C-7b에 1,4-disubstitued 방향족 고리가 치환된 것임을 확인하였다. Relative stereochemistry는 NOESY data로 확인하였다. H-7a/H-2a(6a), H-8a/H-2b(6b), H-8b/H-10b(14b)의 NOE correlation을 통해 H-8a, H-8b와 C-7 위치의 aryl group이 cis-relationship인 것을 확인하였다. H-2와 H-14의 NOE correlation을 통해 C-7의 benzene ring이 H-14에 이웃한 것을 확인하였다. Higher field의 proton signals들을 통해 C-7a의 aryl group이 화합물 1에서는 H-7b (δ H 3.04)에 인접해 있으며 화합물 2에서는 H-14a (δ H 5.61)에 인접한 것을 확인하였다. 따라서 이들의 relative configuration는 rel-(7aS, 8aR, 7bS, 8bR)과 (7aR, 8aR, 7bS, 8bR)로 결정하였다.Through this, it was found that both compounds 1 and 2 have a structure very similar to Gnetuhainin D and have a 1,4-disubstitued aromatic ring instead of a 1,2,4-trisubstitued aromatic ring. The position at which the aromatic ring was substituted was confirmed through HMBC correlation between H-7b (δ H 4.90) and C-6b ( δ C 146.6) to confirm that the 1,4-disubstitued aromatic ring was substituted in C-7b. Relative stereochemistry was confirmed by NOESY data. H-7a/H-2a(6a), H-8a/H-2b(6b), H-8b/H-10b(14b) It was confirmed that the aryl group was cis-relationship. It was confirmed that the benzene ring of C-7 was adjacent to H-14 through NOE correlation between H-2 and H-14. Through the proton signals of the Higher field, it was confirmed that the aryl group of C-7a was adjacent to H-7b (δ H 3.04) in Compound 1 and H-14a ( δ H 5.61) in Compound 2. Therefore, their relative configuration was determined as rel -(7a S , 8a R , 7b S , 8b R ) and (7a R , 8a R , 7b S , 8b R ).

이들 결과를 바탕으로 화합물 1과 2는 아래와 같이 각각 화학식 1과 2의 스틸벤계 화합물로 동정되었다.Based on these results, compounds 1 and 2 were identified as stilbene compounds of formulas 1 and 2, respectively, as follows.

화합물 1 및 2의 1H NMR 및 13C NMR 데이터를 하기 [표 1]에 나타내었다. 1 H NMR and 13 C NMR data of compounds 1 and 2 are shown in Table 1 below.

[화학식 1] [Formula 1]

Figure 112019066557216-pat00009
Figure 112019066557216-pat00009

[화학식 2][Formula 2]

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화합물 1 (Compound 1): 백색의 무정형의 분말;

Figure 112019066557216-pat00011
: +80.0 (c=1.0 in MeOH) Molecular formula: C28H24O7 ESI-QTOF/MS m/z 471.1452 [M-H] - (calcd for C28H23O7, 471.1444) 1H (MeOD-d 4 , 400 MHz) and 13C NMR (MeOD-d 4 , 100 MHz).Compound 1: white amorphous powder;
Figure 112019066557216-pat00011
: +80.0 (c=1.0 in MeOH) Molecular formula: C 28 H 24 O 7 ESI-QTOF/MS m/z 471.1452 [MH] - (calcd for C 28 H 23 O 7 , 471.1444) 1 H (MeOD- d 4 , 400 MHz) and 13 C NMR (MeOD- d 4 , 100 MHz).

화합물 2(Compound 2): 백색의 무정형의 분말;

Figure 112019066557216-pat00012
: -105.0 (c=1.0 in MeOH) Molecular formula: C28H24O7 ESI-QTOF/MS m/z 471.1448[M-H] - (calcd for C28H23O7, 471.1444) 1H (MeOD-d 4 , 400 MHz) and 13C NMR (MeOD-d 4 , 100 MHz).Compound 2: white amorphous powder;
Figure 112019066557216-pat00012
: -105.0 (c=1.0 in MeOH) Molecular formula: C 28 H 24 O 7 ESI-QTOF/MS m/z 471.1448[MH] - (calcd for C 28 H 23 O 7 , 471.1444) 1 H (MeOD- d 4 , 400 MHz) and 13 C NMR (MeOD- d 4 , 100 MHz).

[표 1][Table 1]

Figure 112019066557216-pat00013
Figure 112019066557216-pat00013

(2) 화합물 3 내지 6(2) compounds 3 to 6

화합물 3 내지 6은 하기 화학식 3 내지 6의 구조로 동정되었으며, 각종 분광학적 분석 결과를 문헌과 비교하여 각각 화합물 3은 kobophenol A, 화합물 4는 α-viniferin, 화합물 5는 wistin 및 화합물 6은 5-hydroxy-2-[2-(4-hydroxyphenyl0 acetyl)-3-methoxylbezoic acid 로 결정하였다. 화합물 3 내지 6의 1H NMR 및 13C NMR 데이터를 하기 [표 2] 및 [표 3]에 나타내었다.Compounds 3 to 6 were identified as structures of the following Chemical Formulas 3 to 6, and by comparing the results of various spectroscopic analysis with literature, respectively, Compound 3 was kobophenol A, Compound 4 was α-viniferin, Compound 5 was wistin, and Compound 6 was 5- It was determined as hydroxy-2-[2-(4-hydroxyphenyl0 acetyl)-3-methoxylbezoic acid. 1 H NMR and 13 C NMR data of compounds 3 to 6 are shown in the following [Table 2] and [Table 3].

[화학식 3][Formula 3]

Figure 112019066557216-pat00014
Figure 112019066557216-pat00014

[화학식 4][Formula 4]

Figure 112019066557216-pat00015
Figure 112019066557216-pat00015

[화학식 5][Formula 5]

Figure 112019066557216-pat00016
Figure 112019066557216-pat00016

[화학식 6][Formula 6]

Figure 112019066557216-pat00017
Figure 112019066557216-pat00017

화합물 3 (Compound 3): 백색의 무정형의 분말; Molecular formula: C56H44O12 ESI-QTOF/MS m/z 908.2838 [M+H]+ (calcd for C56H45O12, 908.2832) 1H (MeOD-d 4 , 400 MHz) and 13C NMR (MeOD-d 4 , 100 MHz).Compound 3: white amorphous powder; Molecular formula: C 56 H 44 O 12 ESI-QTOF/MS m/z 908.2838 [M+H] + (calcd for C 56 H 45 O 12 , 908.2832) 1 H (MeOD- d 4 , 400 MHz) and 13 C NMR (MeOD- d 4 , 100 MHz).

화합물 4 (Compound 4): 노란색의 무정형의 분말; Molecular formula: C23H24O10 ESI-QTOF/MS m/z461.1367 [M+H]+ (calcd for C23H24O10, 461.1370) 1H (DMSO-d 6,400 MHz) and 13C NMR (DMSO-d 6,100 MHz).Compound 4: yellow amorphous powder; Molecular formula: C 23 H 24 O 10 ESI-QTOF/MS m/z 461.1367 [M+H] + (calcd for C 23 H 24 O 10 , 461.1370) 1 H (DMSO- d 6 ,400 MHz) and 13 C NMR (DMSO- d 6 ,100 MHz).

화합물 5 (Compound 5): 녹색의 유성 물질; Molecular formula: C16H14O6 ESI-QTOF/MS m/z 302.0785 [M-H] - (calcd for C16H13O6, 301.0790) 1H (MeOD-d 4 , 400 MHz) and 13C NMR (MeOD-d 4 , 100 MHz).Compound 5: Green oily substance; Molecular formula: C 16 H 14 O 6 ESI-QTOF/MS m/z 302.0785 [MH] - (calcd for C 16 H 13 O 6 , 301.0790) 1 H (MeOD- d 4 , 400 MHz) and 13 C NMR ( MeOD- d 4 , 100 MHz).

화합물 6 (Compound 6): 무색 화합물; Molecular formula: C42H30O9 ESI-QTOF/MS m/z 677.1892 [M-H] - (calcd for C42H29O9, 677.1890) 1H (MeOD-d 4 , 400 MHz) and 13C NMR (MeOD-d 4 , 100 MHz).Compound 6: colorless compound; Molecular formula: C 42 H 30 O 9 ESI-QTOF/MS m/z 677.1892 [MH] - (calcd for C 42 H 29 O 9 , 677.1890) 1 H (MeOD- d 4 , 400 MHz) and 13 C NMR ( MeOD- d 4 , 100 MHz).

[표 2][Table 2]

Figure 112019066557216-pat00018
Figure 112019066557216-pat00018

[표 3][Table 3]

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Figure 112019066557216-pat00019

실험예 1. 화합물 1 및 화합물 6의 세포 침전물의 색 변화를 통한 피부 미백 효과 확인(도 3)Experimental Example 1. Confirmation of skin whitening effect through color change of cell precipitates of Compound 1 and Compound 6 (FIG. 3)

멜라닌 형성 세포주인 B16 세포주에서 본 발명의 화합물 1 및 화합물 6에 의한 미백 효과를 세포 침전물의 색 변화를 통하여 확인하였다.In the melanin-forming cell line, the B16 cell line, the whitening effect of the compounds 1 and 6 of the present invention was confirmed by changing the color of the cell precipitate.

구체적으로, B16 세포를 60 mm 플레이트에 1.0Х105로 시딩(seeding)한 후 1일 뒤에 본 발명의 화합물 1 및 화합물 6을 농도별로 처리하였다(100nM, 500nM, 1uM, 10uM, 50uM). 3일 후에 트립신을 처리하여 플레이트에서 세포를 분리한 후, 분리한 세포를 EP Tube에 넣고 원심분리기로 모아 가라앉은 세포 침전물의 색 변화를 확인하였다. Specifically, B16 cells were seeded with 1.0 to 10 5 on a 60 mm plate, and one day later, Compound 1 and Compound 6 of the present invention were treated at different concentrations (100 nM, 500 nM, 1 uM, 10 uM, 50 uM). After 3 days, the cells were separated from the plate by treatment with trypsin, and then the separated cells were placed in an EP tube and collected by a centrifuge to check the color change of the settled cell precipitate.

그 결과 도 3에 나타난 바와 같이, 화합물 1을 10μM, 50uM 처리한 세포 침전물에서 확연하게 미백 효과가 나타난 것을 알 수 있었고, 화합물 6를 처리한 세포 침전물들은 농도의존적으로 미백 효과가 나타난다는 것을 확인할 수 있었다.As a result, as shown in FIG. 3, it was found that the cell sediment treated with 10 μM and 50 μM of Compound 1 exhibited a distinct whitening effect, and the cell sediments treated with Compound 6 showed a concentration-dependent whitening effect. there was.

실험예 2. 화합물 1 및 화합물 6의 티로시나아제 생성 저해 활성 측정(도 4)Experimental Example 2. Measurement of tyrosinase production inhibitory activity of Compound 1 and Compound 6 (FIG. 4)

100ul의 potassium phosphate buffer(pH7)에 샘플 20ul, 20ul 티로시나아제를 순서대로 넣은 뒤, 37°C에 5분간 인큐베이션 시킨다. 그 이후, L-DOPA 40ul를 첨가한 뒤, 다시 37°C에 5~10분간 인큐베이션 시킨다. 475nm에서 OD값을 측정하여 저해값을 계산한다. 티로시나아제는 멜라닌 생성에 기여하는 핵심 효소 중 하나로써, 티로시나아제의 활성이 낮아지면, 미백효과가 있다고 판단할 수 있다.Add 20ul of sample and 20ul of tyrosinase in order to 100ul of potassium phosphate buffer (pH7), and incubate at 37°C for 5 minutes. After that, after adding 40ul of L-DOPA, incubate again at 37°C for 5-10 minutes. The inhibition value is calculated by measuring the OD value at 475 nm. Tyrosinase is one of the key enzymes contributing to the production of melanin, and when the activity of tyrosinase decreases, it can be determined that it has a whitening effect.

그 결과 도 4에 나타난 바와 같이, 화합물 1과 6을 10μM, 50uM 처리하였을 때 티로시나아제의 활성이 낮아지는 것으로부터, 미백 효과가 나타난 것을 확인할 수 있었다.As a result, as shown in FIG. 4, when the compounds 1 and 6 were treated with 10 μM and 50 μM, the activity of tyrosinase decreased, indicating that the whitening effect was exhibited.

실험예 3. 화합물 1 및 화합물 6의 멜라닌 색소 관련 mRNA 발현 억제 효과(도 5)Experimental Example 3. Effect of Compound 1 and Compound 6 on the inhibition of melanin pigment-related mRNA expression (Fig. 5)

본 발명의 화합물 1 및 화합물 6이 멜라닌 색소 생합성에 관여하는 MITF(Microphthalmia-associated transcription factor), 티로시나제(tyrosinase),　TRP1(Tyrosinase-related protein 1),　TRP2(Tyrosinase-related protein 2) 발현을 저해하는지 여부를 확인하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.Whether Compounds 1 and 6 of the present invention inhibit the expression of microphthalmia-associated transcription factor (MITF), tyrosinase, 　Tyrosinase-related protein 1 (TRP1), 　Tyrosinase-related protein 2 (TRP2) involved in melanin pigment biosynthesis In order to check whether or not, the following experiment was performed.

구체적으로, B16 세포를 6well 플레이트에 1.0Х105로 시딩(seeding)한 후 1일 뒤에 본 발명의 화합물 1을 100nM, 500nM, 1uM 농도로 처리하고, 화합물 6의 경우에는 100nM의 농도로 처리하였다. 3일 후에 트리졸(Trizol) 시약을 사용하여 세포막을 융해하고, 이소프로판올과 에탄올로 정제하여 전체 RNA를 분리하였다. 분리된 RNA로부터 하기 [표 4]에 기재된 프라이머 및 역전사 효소를 사용하여 MITF, 티로시나아제, TRP1 및 TRP2의 cDNA를 합성하였다. 그 다음, 상기 합성한 cDNA 30 ㎕를 주형으로 하여, Tag 중합효소와 각각의 표적 유전자의 상보적 프라이머를 이용하여 해당 DNA를 증폭하였다.Specifically, B16 cells were seeded with 1.0 to 10 5 in a 6- well plate, and one day later, Compound 1 of the present invention was treated at a concentration of 100 nM, 500 nM, and 1 uM, and in the case of Compound 6, it was treated at a concentration of 100 nM. After 3 days, the cell membrane was melted using a Trizol reagent and purified with isopropanol and ethanol to isolate total RNA. From the isolated RNA, cDNAs of MITF, tyrosinase, TRP1 and TRP2 were synthesized using the primers and reverse transcriptase described in the following [Table 4]. Then, using 30 µl of the synthesized cDNA as a template, the DNA was amplified using Tag polymerase and complementary primers of each target gene.

PCR 수행 조건은 다음과 같다: 95℃에서 5분간 변성; 95 ℃에서 0s, 54℃에서 20s 및 72℃에서 30s간 증폭(총 35 사이클); 및 72℃에서 10분간 최종 연장. GAPDH mRNA 발현 수준은 시료의 표준화(strandarization)을 위해 사용하였다.PCR performance conditions are as follows: denaturation at 95° C. for 5 minutes; Amplification for 0 s at 95° C., 20 s at 54° C. and 30 s at 72° C. (35 cycles total); And a final extension of 10 minutes at 72°C. GAPDH mRNA expression level was used for strandarization of the sample.

미처리 대조군(control)은 본 발명의 화합물을 처리하지 않은 세포주를 대상으로 하였다.The untreated control group was a cell line not treated with the compound of the present invention.

[표 4][Table 4]

Figure 112019066557216-pat00020
Figure 112019066557216-pat00020

그 결과 도 5에 나타난 바와 같이, 화합물 1를 처리한 경우 TRP1, TRP2 유전자의 발현이 농도의존적으로 감소하였으며, 화합물 6을 처리한 경우 MITF와 TRP2, Tyrosinase 유전자의 발현이 현저하게 감소하는 것을 확인할 수 있었다.As a result, as shown in FIG. 5, when compound 1 was treated, the expression of TRP1 and TRP2 genes decreased in a concentration-dependent manner, and when compound 6 was treated, the expression of MITF, TRP2, and Tyrosinase genes was significantly reduced. there was.

<110> Industry-Academic Cooperation Foundation, Yonsei University <120> Compound from Caragana sinica and composition for skin whitening comprising the same <130> 1063644 <160> 10 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MITF_F <400> 1 aaagatggtg ggaaagacat 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MITF_R <400> 2 ttctagccag acaatcctca 20 <210> 3 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TRP1_F <400> 3 cccctagcct atatctccct ttt 23 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TRP1_R <400> 4 taccatcgtg gggataatgg c 21 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TRP2_F <400> 5 attacaccgt cgctcatctt 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TRP2_R <400> 6 ctttgaccgt ggtgaatgac 20 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Tyrosinase_F <400> 7 ggagggacat tgattttgcc 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Tyrosinase_R <400> 8 tcccaagtac tcatctgtgc 20 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH_F <400> 9 ctggagaaac ctgccaagta 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH_R <400> 10 aagagtggga gttgctgttg 20 <110> Industry-Academic Cooperation Foundation, Yonsei University <120> Compound from Caragana sinica and composition for skin whitening comprising the same <130> 1063644 <160> 10 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MITF_F <400> 1 aaagatggtg ggaaagacat 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MITF_R <400> 2 ttctagccag acaatcctca 20 <210> 3 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TRP1_F <400> 3 cccctagcct atatctccct ttt 23 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TRP1_R <400> 4 taccatcgtg gggataatgg c 21 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TRP2_F <400> 5 attacaccgt cgctcatctt 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TRP2_R <400> 6 ctttgaccgt ggtgaatgac 20 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Tyrosinase_F <400> 7 ggagggacat tgattttgcc 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Tyrosinase_R <400> 8 tcccaagtac tcatctgtgc 20 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH_F <400> 9 ctggagaaac ctgccaagta 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH_R <400> 10 aagagtggga gttgctgttg 20

Claims (5)

하기 화학식 6으로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물:
[화학식 6]
Figure 112019066557216-pat00021

Skin whitening composition comprising a compound represented by the following formula (6) as an active ingredient:
[Formula 6]
Figure 112019066557216-pat00021

 제1항에 있어서,
상기 조성물은 티로시나아제 발현을 저해하거나 멜라닌 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
The method of claim 1,
The composition is a composition for skin whitening, characterized in that it inhibits tyrosinase expression or inhibits melanin production.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 화장료 조성물임을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
The method of claim 1,
The composition for skin whitening, characterized in that the cosmetic composition.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 멜라닌 색소 과다 침착 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물임을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
The method of claim 1,
The composition is a composition for skin whitening, characterized in that the pharmaceutical composition for the prevention or treatment of melanin hyperpigmentation disease.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 건강기능성 식품 조성물임을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.The method of claim 1,
The composition is a composition for skin whitening, characterized in that the health functional food composition.
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