KR102010345B1 - 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료 조성물, 이를 이용한 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료 및 이의 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료 조성물 및 이를 이용하여 제조한 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 바이오 펩톤 발효물을 이용한 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료, 이를 제조하는 방법 및 이를 이용한 기능성 화장품 등의 피부외용제를 제공하기 위한 발명에 관한 것이다.

Description

피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료 조성물, 이를 이용한 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료 및 이의 제조방법{Cosmetic materials composition having inhibitor of skin photo-aging and regeneration of skin wound-cell, Cosmetic materials using the same and Manufacturing method thereof}

본 발명은 피부 광노화 억제 및 피부의 손상된 세포에 대한 재생 효과가 있는 화장료 및 이의 제조에 사용되는 조성물, 이의 제조방법에 관한 것으로서, 좀 더 구체적으로 설명하면, 바이오 펩톤 발효물을 이용한 광노화를 억제 및/또는 방지하고, 광노화 등에 의해 손상된 피부세포를 재생시킬 있는 피부외용제용 소재에 관한 것이다.

단백질의 중요한 공급원인 대두는 영양학적인 가치와 과학적으로 밝혀진 다양한 기능성으로 인해 대중적인 소비가 날로 늘어나고 있다. 최근에는 대두가 심혈관 질환, 당뇨, 암, 과체중, 비만에 치유 효과가 있을 뿐 아니라 콜라겐 생성 촉진, 멜라닌 생성 억제, 피부 노화 억제, 항염증 효과 등의 피부 개선 효과도 있는 것으로 알려져 많은 관심을 끌고 있다. 대두는 전세계적으로 재배되고 있어 원물수급이 용이할 뿐 아니라 건물 중 20-40%나 되는 단백질을 함유하고 있는 대표적인 식물성 단백질 공급원이다. 또한 오랜 역사를 통해 체내 안전성이 확보된 식물성 소재이기 때문에 다양한 생리활성 및 기능성 연구에 적극 활용되고 있다.

생리활성펩티드(BPs, biological　active　peptide)란 단백질로부터 유래한 생리활성을 가지고 있는 작은 분자량의 아미노산 시퀀스(sequence)를 말한다. 전구물질인 단백질에 포함되어 있는 아미노산 시퀀스는 대부분 불활성이나 분해 작용을 통해 생성된 작은 단위의 펩티드는 다양한 생물학적인 작용을 갖게 된다. 단백질 분해는 생리활성펩티드를 생산하는 데 있어 반드시 필요한 과정이며, 단백질의 분해로 생성된 펩티드의 생리활성 작용은 최초 단백질원의 형태, 효소의 종류, 생성조건에 따라 다르게 나타난다. 또한, 분해작용을 통해 생성된 생리활성펩티드는 저분자로 피부 침투력이 좋아질 뿐 아니라, 물에 대한 용해도가 증가하여 다양한 화장품 소재에 적용이 매우 용이하다.

피부는 외부환경에 직접적으로 노출되는 기관으로 일광 등의 자외선을 직·간접적으로 항상 접하게 된다. 자외선은 파장의 길이에 따라 3가지로 분류되는데 장파장인 UVA(320-400 nm), 중파장인 UVB(280-320 nm), 그리고 단파장인 UVC(200 ~ 280 nm)로 나뉜다. 지구표면에 도달하는 자외선의 90% 정도는 UVA이며 UVB는 대기권에서 대부분 흡수되고 10% 정도만 지구표면에 도달한다. UVC는 지표면에 도달하지 않아 피부에 영향을 주지 않는다.

특정 파장대의 광선이 피부에 홍반을 유발하는 최소 광량을 최소 홍반량(minimal erythema dose, MED)이라고 하는데 동양인에서 피부의 최소 홍반량은 UVA의 경우 50 ~ 70 J/cm², UVB의 경우 50 ~ 70 mJ/cm² 이다. 광선의 파장은 에너지와 반비례하므로 비록 UVB가 절대량은 적어도 강한 에너지를 갖고 있기 때문에 세포의 유전자에 영향을 미칠 수 있다. 실제 UVB는 UVA의 1/1000만으로도 홍반을 일으킬 수 있다. 피부 장벽 연구에 많이 사용하는 털이 없는(hairless) 마우스에서 UVB의 최소 홍반량은 보고마다 차이는 있으나 20 ~ 80 mJ/cm² 정도이다. 또한, 파장이 길수록 피부 속으로 더 깊이 투과한다. 피부의 두께에 따라 차이가 있지만 UVB는 주로 표피와 상부 진피까지 침투되어 영향을 미치고, UVA는 하부 진피에 영향을 미칠 수 있다. 즉, UVA와 UVB 모두 피부손상을 초래하지만 UVA는 피부세포의 DNA에 직접적인 손상을 주지 못하는 반면, UVB는 직접적으로 세포의 DNA에 작용함으로써 화상, 광노화, 피부암 등을 유발한다.

UVB에 노출된 피부는 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)의 증가로 피부에 산화적 스트레스가 일어나게 된다. 이로 인해 표피의 각질형성세포에서 염증성 사이토카인 분비가 증가하고 진피의 섬유아세포주에서 MMPs(matrix metalloproteinases)가 유도되어 세포외기질(extracellular matrix, ECM)의 주요 구성 요소인 콜라겐이 파괴된다. 극히 낮은 양의 UVB 노출에서도 MMP는 활성화될 수 있으며 이는 결국 주름과 같은 피부노화를 촉진하게 된다.

이뿐 아니라, 자외선은 멜란닌 색소의 생합성에도 영향을 끼친다. 멜라닌은 표피의 기저층에 존재하는 멜라닌 생성 세포인 멜라노사이트(melanocyte)의 멜라노좀(melanosome)에서 단계적인 효소반응을 통해 생성된다. 멜라닌은 자외선 노출 등에 의한 피부 손상에 대항하는 기작으로 생합성이 촉진되는데, 멜라닌 색소는 피부를 보호하는 긍정적이 역할을 하기도 하지만 자외선과 같은 과도한 자극으로 과잉 생성되게 되면 기미, 주근깨, 피부반점 등을 유발하게 되고 멜라닌 전구물질의 독성으로 인해 세포의 사멸 및 피부암이 발생하기도 한다. 멜라닌 생합성에 관여하는 주요 효소로는 티로시나아제(tyrosinase)가 대표적으로 알려져 있으며 티로시나아제 활성을 억제시키면 자외선 노출로 인한 멜란닌 색소의 과발현을 억제시킬 수 있다.

또한, 멜라닌 생성 억제제로서, 지의류 배양물 및/또는 추출물과 함께 밀배아, 대두, 호프 추출물 등의 식물 추출물을 함께 혼합하는 기술이 연구되었으나(일본공개번호 JP 2012-150173호), 이 역시 장기안정성 문제가 있다.

그리고, 비타민 B1이 함유된 소맥배아, 맥아와 알리신을 함유한 식물을 배양 성분으로 하여 사카로마이에스 세레비지에 균주로 발효시켜서 특정 성분인 알리티아민을 추출하여 이를 피부미백 등의 노화방지용 화장료 조성물로 사용하는 기술(한국공개번호 2010-0084209호)이 연구가 된 바 있다.

이렇듯 피부 미백에 도움을 주는 다양한 원료가 개발되고 있으나 부작용, 장기안정성이 떨어지는 등의 문제가 있고, 이러한 기존 멜라닌 생성 억제제, 화장료 조성물 등의 소재의 경우, 피부 흡수율이 낮은 바, 이를 해결할 수 있는 새로운 천연 소재의 원료 및/또는 제품이 필요하다.

상술한 과제를 해결하기 위하여 본 발명은 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 바이오 펩톤 발효물; 알파-아미노산; 당류; 아세틸글로코사민; 및 구연산;을 포함한다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 상기 바이오 펩톤 발효물은 바이오 펩톤 발효액 또는 바이오 펩톤 발효 분말을 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 상기 바이오 펩톤 발효물이 바이오 펩톤 발효액인 경우, 바이오 펩톤 발효물 86 ~ 97.5 중량%, 알파-아미노산 2.0 ~ 7 중량%, 당류 0.3 ~ 5 중량%, 아세틸글로코사민 0.05 ~ 1 중량% 및 구연산 0.1 ~ 2 중량%를 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 상기 바이오 펩톤 발효물이 바이오 펩톤 발효분말인 경우, 바이오 펩톤 발효물 40 ~ 60 중량%, 알파-아미노산 25 ~ 40 중량%, 당류 10 ~ 20 중량%, 아세틸글로코사민 0.1 ~ 2 중량% 및 구연산 1 ~ 5 중량%를 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 상기 바이오 펩톤 발효물은 펩톤화된 단백분해물을 유산균으로 발효시킨 발효물로서, 중량평균분자량 200 ~ 500의 저분자 펩타이드를 100 중량%(기타 불가피한 불순물 포함)로 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 상기 저분자 펩타이드는 디펩타이드, 트리펩타이드 및 테트라펩타이드 중에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 상기 발효에 사용되는 유산균은 락토바실러스(Lactobacillus) 속 균주를 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 상기 펩톤화된 단백분해물은 대두, 서리태, 서목태, 흑태, 강낭콩, 울타리콩, 푸르대콩, 녹두, 적두, 거두, 콩나물콩, 선비콩 및 풋콩 중에서 선택된 1종 이상을 함유한 콩을 펩신을 이용하여 펩톤화시킨 것일 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 상기 락토바실러스속 균주는 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus Casei) 및 락토바실러스 플란타넘(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) 중에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 조성물 성분 중 상기 알파-아미노산은 이소류신(isoleucine), 류신(leucine), 라이신(lysine), 메티오닌(Methionine), 페닐알라닌(phenylalanine), 트레오닌(Threonine), 트립토판(tryptophan), 발린(valine), 글루탐산(glutamic acid), 아세틸시스테인(N-Acetylcysteine) 중에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 조성물 성분 중 상기 당류는 글루코오스(glucose), 갈락토오스(galactose) 및 자일로오스(xylose) 중에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.

본 발명의 다른 목적은 앞서 설명한 조성물을 이용하여 제조한 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료에 관한 것으로서, 앞서 설명한 다양한 형태의 화장료 조성물 및 인지질 혼합물을 포함한다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 상기 화장료 조성물의 혼합물 40 ~ 80 중량% 및 인지질 혼합물 20 ~ 60 중량%을 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 상기 인지질 혼합물은 레시틴 100 중량부에 대하여, 세라마이드 1 ~ 10 중량부 및 용매 10 ~ 100 중량부를 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 상기 용매는 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드(Caprylic/Capric Triglyceride) 카프릴릭/카프릭/스테아릭트리글리세라이드(Caprylic/Capric/Stearic Triglyceride) 및 카프릴릭/카프릭/미리스틱/스테아릭트리글리세라이드(Caprylic/Capric/Myristic/Stearic Triglyceride) 중에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 본 발명의 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료는 상기 화장료 조성물의 혼합물; 및 상기 화장료 조성물의 혼합물을 랩핑(wrapping)하는 인지질 코팅막;을 포함하는 리포좀(liposome)화 된 화장료일 수 있다.

또한, 본 발명의 다른 목적은 앞서 설명한 조성물을 이용하여 상기 리포좀화된 화장료를 제조하는 방법에 관한 것으로서, 세라마이드를 용매에 용해시킨 세라마이드 용해액을 제조하는 1단계; 상기 세라마이드 용해액을 레시틴과 혼합 후, 저속 교반시켜서 인지질 혼합물 함유 용액을 제조하는 2단계; 상기 인지질 혼합물 함유 용액에 화장료 조성물의 혼합물을 투입한 후, 저속 교반하여 리포좀 현탁액을 제조하는 3단계; 및 여과시켜서 리포좀을 회수하는 4단계;를 포함하는 공정을 수행하여 제조할 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 상기 2단계 및 3단계의 저속 교반은 10 ~ 30℃ 하에서 1,000 ~ 2,000 rpm의 교반속도로 15분 ~ 30분간 교반을 수행할 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 4단계의 상기 리포좀의 내부는 화장료 조성물의 혼합물을 포함하고, 리포좀 표면은 상기 화장료 조성물의 혼합물을 랩핑(wrapping)하는 인지질 코팅막으로 형성되어 있을 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 상기 3단계의 화장료 조성물의 혼합물 조성 중 바이오 펩톤 발효물은 펩톤화된 단백분해물을 포함하는 배지를 제조하는 제3-1단계; 상기 배지에 유산균을 접종하는 제3-2단계; 제2단계의 접종된 유산균을 배양하여 펩톤화된 단백분해물을 발효시켜서 저분자 펩타이드 배양물을 제조하는 제3-3단계; 및 상기 저분자 펩타이드 배양물로부터 균체 및 불용성 성분을 제거하여 바이오 펩타이드 발효액을 얻는 제3-4단계;를 포함하는 공정을 수행하여 제조할 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 제3-4단계의 바이오 펩타이드 발효액을 건조 및 분말화시켜서 바이오 펩타이드 발효분말을 얻는 제3-5단계;를 더 포함할 수도 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 상기 제1단계의 펩톤화된 단백분해물은 펩톤화된 콩단백분해물일 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 상기 바이오 펩톤 발효액 제조시, 제1단계의 상기 배지는 글루코오스, 수크로오스, 말토오스, 프럭토오스, 락토오스, 자일로오스, 갈락토오스 및 아라비노오스 중에서 선택된 1종 이상을 함유한 탄소원; 및 마그네슘 설페이트, 망가닉 설페이트, 징크 설페이트, 쿠퍼 설페이트, 소듐 아세테이트, 포타슘포스페이트 및 칼슘 클로라이드 중에서 선택된 1종 이상의 무기원소 화합물;를 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 상기 바이오 펩톤 발효액 제조시, 제2단계의 상기 접종은 유산균을 1×10⁴ ~ 1×10⁷ cfu/㎖로 유산균을 배지에 접종시키는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 상기 바이오 펩톤 발효액 제조시, 제3단계의 상기 발효는 25 ~ 35 하에서 12 시간 ~ 72 시간 동안 발효를 수행하는 하는 것을 특징으로 할 수 있다.

또한, 본 발명의 또 다른 목적은 상기 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료 조성물 또는 상기 화장료를 이용한 피부외용제에 관한 것으로서, 상기 피부외용제는 화장품, 연고 또는 앰플일 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 상기 화장품은 유액 타입, 화장수 타입, 크림 타입, 로션 타입, 에멀젼 타입, 에센스 타입, 팩 타입, 젤 타입, 또는 미스트(mist) 타입의 화장품일 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예로서, 본 발명의 피부외용제는 상기 화장료 조성물 또는 상기 화장료를 50 μg/mL ~ 20,000 μg/mL 농도로 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예로서, 본 발명에서 상기 피부외용제가 화장품이고, 화장품이 크림 타입 또는 로션 타입인 경우, 앞서 설명한 다양한 형태의 상기 화장료 조성물 또는 상기 화장료, 글리세린, 부틸렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 카르복실비닐폴리머, 폴리솔베이트, 경화피마자 오일, 글리세릴스테아레이트, 세테아릴알코올, 세틸에틸헥사노에이트 및 감초추출물을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예로서, 본 발명에서 상기 피부외용제가 화장품이고, 화장품이 유액 타입, 화장수 타입, 에멀젼 타입, 앰플 타입 또는 에센스 타입인 경우, 앞서 설명한 다양한 형태의 상기 화장료 조성물 또는 상기 화장료, 디프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 폴리솔베이트, 디포타슘글리시리제이트, 알란토인, 판테놀 및 글리세린을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

본 발명의 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료는 바이오 펩톤 발효물 자체를 피부 외용제 성분 등으로 적용하는 경우 보다 피부 흡수율이 좋을 뿐만 아니라, 피부 광노화 억제 및/또는 개선 효과, 광노화 등에 의한 피부손상세포의 재생 효과가 우수하며, 피부외용제 제조에 사용되는 다른 조성물들과의 상용성이 우수한 바, 용이하게 화장품, 앰플 또는 연고 등의 다양한 타입 형태로 피부외용제를 제조할 수 있다.

도 1a는 본 발명의 피부 광노화 억제, 피부손상세포 재생 성분인 바이오 펩톤 발효액을 제조하는 개략적인 공정도이고, 도 1b는 제조된 바이오 펩톤 발효물을 이용하여 리포좀 타입의 본 발명의 화장료 조성물을 리포좀화시켜서 제조하는 개략적인 공정도이다.
도 2a는 본 발명의 리포좀 형태의 화장료의 개략도를 나타낸 것이며, 도 2b는 피부 광노화 억제제 제조시, 리포좀화 전후를 찍은 광학현미경 측정 사진이다.
도 3a ~ 도 3b는 실험예 1에서 수행한 HLPC 측정 결과로서, 실시예 1에서 제조한 바이오 펩톤 발효물에 대한 측정 결과이다. 도 3a는 0 ~ 60 분까지, 도 3b는 0 ~ 25분까지의 결과를 나타낸 것이다.
도 4 의 ① ~ ⑤ 각각은 실험예 1에서 수행한 MS 스펙트럼 측정 결과로서, 도 3b에 표시된 부분의 분자량을 확인한 결과이다.
도 5a 및 도 5b는 실험예 2의 세포독성 확인 시험 측정 결과이다.
도 6 및 도 7은 실험예 3에서 실시한 UVB조사에 의한 세포보호 효과 측정 결과이다.
도 8은 실험예 4-1에서 실시한 콜라겐 타입 합성 촉진 효과 측정 결과이다.
도 9는 실험예 4-2에서 실시한 UVB조사에 의해 손상된 세포의 콜라겐 타입 합성 촉진 효과 측정 결과이다.
도 10은 실험예 5에서 실시한 티로시나아제 효소 저해 효과 측정 결과이다.
도 11a 및 도 11b는 실험예 6에서 실시한 멜라닌 색소 생성 저해 효과 측정 결과이다.
도 12a 및 도 12b는 실험예 7에서 실시한 항산화 효과 측정 결과이다.

본 발명에서 사용하는 용어인 [바이오 펩톤 발효물]은 펩신에 의해 펩톤화된 콩의 단백분핵물을 발효시킨 발효물을 의미하며, 특별히 언급하지 않는 한, 바이오 펩톤 발효액 및 바이오 펩톤 발효분말을 모두 포함하는 의미이다. 그리고, [단백분해물]은 특별하게 언급이 없는 한, 콩의 단백분해물을 의미한다. 그리고, 발효 전의 펩톤화된 단백분해물은 다양한 분자량을 갖는 올리고펩타이드와 폴리펩타이드의 혼합체를 의미하며, 이를 발효시킨 바이오 펩톤 발효물은 디펩타이드(di-peptide), 트리펩타이드(tri-peptide), 테트라펩타이드(tetra-peptide) 등의 중량평균분자량 200 ~ 500의 저분자량의 펩타이드로 구성된 혼합체를 의미한다.

이하에서는 본 발명을 더욱 구체적으로 설명을 한다.

본 발명의 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료 조성물은 바이오 펩톤 발효액 또는 바이오 펩톤 발효 분말을 포함하는 바이오 펩톤 발효물; 알파-아미노산; 당류; 아세틸글로코사민; 및 구연산;을 포함한다.

상기 바이오 펩톤 발효물에 대하여 설명하면 다음과 같다.

3단계의 상기 바이오 펩톤 발효액은 도 1a에 개략도로 나타낸 공정을 통해서 제조할 수 있는데, 구체적으로 설명하면, 펩톤화된 단백분해물을 포함하는 배지를 제조하는 제3-1단계; 상기 배지에 유산균을 접종하는 제3-2단계; 제2단계의 접종된 유산균을 배양하여 펩톤화된 단백분해물을 발효시켜서 저분자 펩타이드 배양물을 제조하는 제3-3단계; 및 상기 저분자 펩타이드 배양물로부터 균체 및 불용성 성분을 제거하여 바이오 펩톤 발효액을 얻는 제3-4단계;를 포함하는 공정을 수행하여 제조할 수 있다.

또한, 상기 바이오 펩톤 발효물을 건조 및 분말화시키는 제3-5단계;를 공정을 더 수행하여 분말화시킨 후, 이를 액화시켜서 사용할 수도 있다.

그리고, 상기 바이오 펩톤 발효물 제조시, 제3-1단계의 상기 배지는 글루코오스, 수크로오스, 말토오스, 프럭토오스, 락토오스, 자일로오스, 갈락토오스 및 아라비노오스 중에서 선택된 1종 이상을 함유한 탄소원; 및 마그네슘 설페이트, 망가닉 설페이트, 징크 설페이트, 쿠퍼 설페이트, 소듐 아세테이트, 포타슘포스페이트 및 칼슘 클로라이드 중에서 선택된 1종 이상의 무기원소 화합물;을 포함할 수 있다.

또한, 상기 바이오 펩톤 발효물 제조시, 제3-2단계의 상기 접종은 유산균을 1×10⁴ ~ 1×10⁷ cfu/㎖로, 바람직하게는 1×10⁵ ~ 5×10⁶ cfu/㎖으로 유산균을 배지에 접종시키는 것을 특징으로 할 수 있다. 이때, 유산균 접종 양이 1×10⁴ cfu/㎖ 미만이면 발효시간이 너무 길어질 수 있으며, 유산균 접종 양이 1×10⁷ cfu/㎖을 초과하여 접종시키더라도 바이오 펩톤 발효물 내 저분자의 펩타이드 함유량이 더 이상 증가하지 않으므로 비경제적이다.

상기 바이오 펩톤 발효물 제조시, 제3-3단계의 상기 발효는 25 ~ 35 하에서 12 시간 ~ 72 시간 동안, 바람직하게는 24 시간 ~ 48 시간 동안 발효를 수행하는 하는 것이 좋다. 이때, 발효시간이 12 시간 미만이면 펩톤화된 콩단백분해물의 분해 시간이 부족해서 저분자량의 펩타이드 함유량이 너무 적을 수 있고, 발효 시간이 72 시간을 초과하면 경제성이 떨어질 수 있으므로 상기 시간 동안 발효를 수행하는 것이 좋다.

이렇게 제조된 상기 바이오 펩톤 발효물은 중량평균 200 ~ 500의 저분자 바이오 펩타이드를 포함하며, 상기 저분자 펩타이드는 디펩타이드, 트리펩타이드 및 테트라펩타이드 중에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.

그리고, 상기 바이오 펩톤 발효물은 펩톤화된 단백분해물을 유산균으로 발효시킨 것을 특징으로 할 수 있으며, 상기 펩톤화된 단백분해물은 대두, 서리태, 서목태, 흑태, 강낭콩, 울타리콩, 푸르대콩, 녹두, 적두, 거두, 콩나물콩, 선비콩 및 풋콩 중에서 선택된 1종 이상을, 바람직하게는 대두, 서리태, 서목태, 강낭콩 및 녹두 중에서 선택된 1종 이상을 함유한 콩을 펩신을 이용해 펩톤화시킨 것을 특징으로 할 수 있다.

또한, 상기 발효에 사용되는 유산균은 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus Casei) 및 락토바실러스 플란타넘(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 애시도필러스(Lactobacillus acidophilus) 중에서 선택된 1종 이상의 락토바실러스(Lactobacillus) 속 균주를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 락토바실러스 람노서스 및 락토바실러스 카제이 중에서 선택된 1종 이상의 락토바실러스 속 균주를 사용할 수 있다.

본 발명의 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료 조성물은 상기 바이오 펩톤 발효물이 바이오 펩톤 발효액인 경우, 바이오 펩톤 발효액 86 ~ 97.5 중량%, 알파-아미노산 2 ~ 7 중량%, 당류 0.3 ~ 5 중량%, 아세틸글로코사민 0.05 ~ 1 중량% 및 구연산 0.1 ~ 2 중량%를 포함할 수 있으며, 바람직하게는 바이오 펩톤 발효액 92 ~ 97 중량%, 알파-아미노산 2.0 ~ 4 중량%, 당류 0.8 ~ 3 중량%, 아세틸글로코사민 0.1 ~ 0.5 중량% 및 구연산 0.1 ~ 0.5 중량%를 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료 조성물은 상기 바이오 펩톤 발효물이 바이오 펩톤 발효분말인 경우, 바이오 펩톤 발효분말 40 ~ 60 중량%, 알파-아미노산 25 ~ 40 중량%, 당류 10 ~ 20 중량%, 아세틸글로코사민 0.1 ~ 2 중량% 및 구연산 1 ~ 5 중량%를 포함할 수 있으며, 바람직하게는 바이오 펩톤 발효분말 45 ~ 55 중량%, 알파-아미노산 27 ~ 36 중량%, 당류 12 ~ 18 중량%, 아세틸글로코사민 0.5 ~ 1.5 중량% 및 구연산 1 ~ 3.5 중량%를 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물 성분 중 상기 알파-아미노산은 단백질을 구성하는 성분으로 콜라겐을 구성하고 피부의 신진대사를 증가시켜주며 효과적으로 피부를 보습해주는 역할을 하는 것으로서, 상기 조성물 전체 중량 중 상기 범위 미만으로 사용하는 경우 그 사용량이 적어서 단백질의 합성이 발휘되지 않을 수 있고, 상기 범위를 초과해서 사용하는 경우 단백질이 석출될 수 있다.

그리고, 본 발명의 조성물 성분 중 상기 당류는 피부 보습 역할을 하는 것으로서, 상기 조성물 전체 중량 중 상기 범위 미만으로 사용하는 경우 그 사용량이 적어서 보습감이 떨어지게 하는 문제가 있을 수 있고, 상기 범위를 초과해서 사용하는 경우 특유의 끈적임을 일으키는 문제가 있을 수 있다.

그리고, 본 발명의 조성물 성분 중 상기 아세틸글루코사민은 피부 보습 역할을 하는 것으로서, 상기 조성물 전체 중량 중 상기 범위 미만으로 사용하는 경우 그 사용량이 적어서 보습감이 떨어지게 하는 문제가 있을 수 있고, 상기 범위를 초과해서 사용하는 경우 용해도에 문제가 있을 수 있다.

그리고, 본 발명의 조성물 성분 중 상기 구연산은 산도조절, 중화제 및 보존제의 역할을 하는 것으로서, 상기 조성물 전체 중량 중 상기 범위 미만으로 사용하는 경우 그 사용량이 적어서 효과가 부족해지는 문제가 있을 수 있고, 상기 범위를 초과해서 사용하는 경우 산도의 영향으로 자극이 발생하는 문제가 있을 수 있다.

또한, 본 발명은 앞서 설명한 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료 조성물을 이용하여 제조한 피부외용제에 사용되는 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료(이하, "화장료"로 정의함)에 관한 것이다. 이러한 본 발명의 화장료는 상기 화장료 조성물의 혼합물을 사용할 수 있으며, 또는 하기와 같이 화장료 조성물의 혼합물을 리포좀화시켜서 사용할 수도 있다.

좀 더 구체적으로 설명하면, 본 발명의 화장료는 도 2의 개략도로 나타낸 바와 같이 리포좀화된 제형으로서, 바이오 펩톤 발효액; 및 상기 바이오 펩톤 발효액을 랩핑(wrapping)하는 인지질 코팅막;을 포함한다.

그리고, 상기 인지질 코팅막은 리포좀과 세라마이드 용해액으로 형성된 인지질이 단층 또는 다중층으로 형성되어 있을 수 있다. 이때, 상기 세라마이드 용해액은 세라마이드가 용매에 용해된 용해액이다.

이러한, 본 발명의 화장료는 바이오 펩톤 발효액 40 ~ 80 중량% 및 인지질 혼합물 20 ~ 60 중량%를, 바람직하게는 바이오 펩톤 발효액 55 ~ 75 중량% 및 인지질 혼합물 25 ~ 45 중량%를, 더욱 바람직하게는 60 ~ 72.5 중량% 및 인지질 혼합물 27.5 ~ 40 중량%를 포함한다. 이때, 인지질 혼합물 함량이 20 중량% 미만이면 그 사용량이 너무 적어서 인지질 코팅막이 잘 형성되지 않는 문제가 있을 수 있고, 인지질 혼합물 함량이 60 중량%를 초과하면 불필요하게 과다 사용된 것으로서, 인지질 코팅막이 너무 두껍게 형성되어 화장료의 피부 흡수율을 떨어질 수 있으며, 화장료 제조시 불순물로 남는 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내로 사용하는 것이 좋다.

상기 조성물 중 인지질 혼합물은 레시틴, 세라마이드 및 용매를 포함하며, 그 함량은 레시틴 100 중량부에 대하여, 세라마이드 1 ~ 10 중량부 및 용매 10 ~ 100 중량부를, 바람직하게는 레시틴 100 중량부에 대하여, 세라마이드 4 ~ 8.5 중량부 및 용매 30 ~ 85 중량부를, 더욱 바람직하게는 레시틴 100 중량부에 대하여, 세라마이드 5 ~ 8 중량부 및 용매 35 ~ 80 중량부를 포함할 수 있다.

이때, 레시틴 100 중량부에 대하여 세라마이드 함량이 1 중량부 미만이면 피부장벽을 개선하고자 하는 효과를 기대하기 어렵고, 세라마이드 함량이 10 중량부를 초과하면 세라마이드의 낮은 용해성으로 인해 세라마이드가 충분히 용해되지 않는 문제가 있을 수 있으므로, 상기 범위 내로 사용하는 것이 좋다.

그리고, 상기 용매는 세라마이드를 용해시켜서 레시틴과의 혼용성을 증대시키는 역할 및 수분증발차단 역할을 하는 것으로서, 그 사용량이 레시틴 100 중량부에 대하여 10 중량부 미만이며 그 사용량이 너무 적어서 세라마이드를 충분히 용해시키지 못하는 문제가 있을 수 있고, 용매 사용량이 100 중량부를 초과하며 과다사용으로 인해 인지질 혼합물의 점도를 너무 낮추게 되어 인지질 코팅막 형성에 방해가 되는 문제가 있을 수 있다. 그리고, 상기 용매로는 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드(Caprylic/Capric Triglyceride) 카프릴릭/카프릭/스테아릭트리글리세라이드(Caprylic/Capric/Stearic Triglyceride) 및 카프릴릭/카프릭/미리스틱/스테아릭트리글리세라이드(Caprylic/Capric/Myristic/Stearic Triglyceride) 중에서 선택된 1종 이상을 중에서 선택된 단종 또는 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있다.

앞서 설명한 본 발명의 화장료는 도 2a에 개략적인 공정도로 나타낸 바와 같이 세라마이드를 용매에 용해시킨 세라마이드 용해액을 제조하는 1단계; 상기 세라마이드 용해액을 레시틴과 혼합 후, 저속 교반시켜서 인지질 혼합물 함유 용액을 제조하는 2단계; 상기 인지질 혼합물 함유 용액에 상기 화장료 조성물의 혼합물을 투입한 후, 저속 교반하여 리포좀 현탁액을 제조하는 3단계; 및 여과시켜서 리포좀을 회수하는 4단계;를 포함하는 공정을 수행하여 제조할 수 있다.

상기 제조공정에서 사용되는 세라마이드, 용매, 레시틴, 바이오 펩톤 발효액 조성 및 사용량은 앞서 설명한 바와 동일하다.

그리고, 상기 2단계 및 3단계의 저속 교반은 10 ~ 30℃ 하에서 1,000 ~ 2,000 rpm의 교반속도로 15분 ~ 30분간 교반을 수행할 수 있으며, 바람직하게는 15 ~ 25℃ 하에서 1,200 ~ 1,600 rpm의 교반속도로 20분 ~ 30분간 교반을 수행하는 것이 좋다. 이때, 온도가 10℃ 미만이면 온도가 너무 낮아서 인지질 코팅막이 효과적으로 형성되지 않을 수 있고, 온도가 40℃를 초과하면 형성된 인지질 코팅막이 풀리는 문제가 있을 수 있다. 그리고, 교반속도가 1,000 rpm 미만이면 교반속도가 너무 느려 바이오 펩톤 발효물과 세라마이드 용해액이 충분히 혼합되지 못하는 문제가 있을 수 있고, 교반속도가 2,000 rpm을 초과하면 교반속도가 너무 빨라 형성된 인지질 코팅막이 풀리는 문제가 있을 수 있다.

그리고, 3단계의 저속 교반을 통해 리포좀화가 되며, 저속 교반 전후의 광학현미경 사진을 도 2b에 나타내었다.

위와 같은 단계의 공정을 거쳐 제조한 본 발명의 피부 광노화 억제제는 리포좀 내부에 바이오 펩톤 발효물을 포함하는 화장료 조성물의 혼합물을 포함하고, 리포좀 표면은 상기 혼합물을 랩핑(wrapping)하는 인지질 코팅막을 형성하게 된다(도 2 참조).

앞서 설명한 방법으로 제조한 본 발명의 화장료는 피부 세포 독성이 거의 없으며, 자외선에 의해 손상된 세포의 콜라겐 타입 I의 합성을 촉진시키며, 티로시나아제 저해 효과가 있는 바, 피부 광노화 억제 효과 및 피부손상세포에 대한 재생 효과가 우수하다.

이러한, 본 발명의 화장료는 다양한 제형의 화장품, 연고 또는 앰플 등의 피부외용제로 응용할 수 있다.

상기 화장품은 유액 타입, 화장수 타입, 크림 타입, 로션 타입, 에멀젼 타입, 에센스 타입, 팩 타입, 젤 타입, 또는 미스트(mist) 타입 등의 화장품일 수 있다.

그리고, 본 발명의 피부외용제는 상기 피부 광노화 억제제를 50 μg/mL ~ 20,000 μg/mL 농도로, 바람직하게는 400 μg/mL ~ 10,000 μg/mL 농도로, 더욱 바람직하게는 500 μg/mL ~ 5,000 μg/mL의 농도로, 더 더욱 바람직하게는 450 μg/mL ~ 3,500 μg/mL의 농도로 포함하는 것이 좋다. 이러한, 본 발명의 피부 광노화 억제제는 피부 흡수력이 매우 높은 바, 리포좀화 되지 않은 바이오 펩톤 발효액(또는 바이오 펩톤 발효물)을 그대로 피부외용제에 적용하는 양의 40 ~ 70%만 사용해도 동일한 효과를 볼 수가 있다.

본 발명이 이에 한정되는 것은 아니나, 이의 구체적인 예를 들면, 상기 피부 광노화 억제제를 크림 타입 또는 로션 타입의 화장품으로 제조할 경우에, 피부 광노화 억제제, 글리세린, 부틸렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 카르복실비닐폴리머, 폴리솔베이트, 경화피마자 오일, 글리세릴스테아레이트, 세테아릴알코올, 세틸에틸헥사노에이트 및 감초추출물을 혼합하여 제조할 수 있으며, 정제수, 향료, 방부제 등을 더 혼합할 수도 있다.

좀 더 구체적으로 설명하면, 카르복시비닐폴리머, 정제수, 글리세린, 부틸렌글리콜 및 디프로필렌글리콜을 혼합하여 제1혼합물을 제조하는 단계; 폴리솔베이트, 경화 피마자오일, 글리세릴스테아레이트, 세테아릴알코올, 세틸에틸헥사노에이트를 혼합하여 제2혼합물을 제조하는 단계; 상기 제1혼합물 및 제2 혼합물 각각을 70℃ ~ 90℃까지, 바람직하게는 75℃ ~ 85℃까지 가온시킨 후, 가온된 제1혼합물 및 제2 혼합물을 혼합 및 교반하여 제3혼합물을 제조하는 단계; 및 상기 제3혼합물을 교반시키면서 35℃ ~ 50℃까지, 바람직하게는 38℃ ~ 45℃까지 온도를 낮춘 후, 피부 광노화 억제제, 감초추출물 및 첨가제를 혼합하는 단계;를 포함하는 공정을 수행하여 크림 타입 또는 로션 타입의 피부 외용제를 제조할 수 있다.

이때, 상기 글리세린은 피부보습 역할을 하는 것으로서, 피부 광노화 억제제 100 중량부에 대하여, 글리세린 600 ~ 1,600 중량부로, 바람직하게는 800 ~ 1,400 중량부를 사용할 수 있다. 이때, 글리세린의 사용량이 600 중량부 미만이면 보습감을 떨어지게 하는 문제가 있을 수 있고, 1,400 중량부를 초과하여 사용하면 끈적임을 유발하는 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.

그리고, 상기 부틸렌글리콜은 피부보습 역할을 하는 것으로서, 피부 광노화 억제제 100 중량부에 대하여, 부틸렌글리콜 900 ~ 2,000 중량부, 바람직하게는 1,350 ~ 1,900 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 부틸렌글리콜의 사용량이 900 중량부 미만이면 보습감을 떨어지게 하는 문제가 있을 수 있고, 2,000 중량부를 초과하여 사용하면 제형을 불안정하게 하는 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.

그리고, 상기 디프로필렌글리콜은 피부보습 역할을 하는 것으로서, 피부 광노화 억제제100 중량부에 대하여, 디프로필렌글리콜 1,400 중량부 ~ 3,000 중량부, 바람직하게는 1,700 ~ 2,200 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 디프로필렌글리콜의 사용량이 1,400 중량부 미만이면 보습감을 떨어지게 하는 문제가 있을 수 있고, 3,000 중량부를 초과하여 사용하면 비경제적인 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.

그리고, 상기 카르복실비닐폴리머는 점증제 역할을 하는 것으로서, 피부 광노화 억제제100 중량부에 대하여, 카르복실비닐폴리머 50 ~ 200 중량부, 바람직하게는 100 ~ 180 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 카르복실비닐폴리머의 사용량이 50 중량부 미만이면 점도를 떨어지게 하는 문제가 있을 수 있고, 200 중량부를 초과하여 사용하면 밀림현상(피부에 흡수되지 않고 겉도는)을 유발하는 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.

그리고, 상기 폴리솔베이트는 가용화제 역할을 하는 것으로서, 피부 광노화 억제제 100 중량부에 대하여, 폴리솔베이트 80 ~ 300 중량부, 바람직하게는 120 ~ 260 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 폴리솔베이트의 사용량이 80 중량부 미만이면 제형을 분리하게 하는 문제가 있을 수 있고, 300 중량부를 초과하여 사용하면 끈적임과 피부 도포시 거품을 유발하게 하는 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.

그리고, 상기 경화피마자 오일은 가용화제 역할을 하는 것으로서, 피부 광노화 억제제 100 중량부에 대하여, 경화피마자 오일 900 ~ 1,800 중량부, 바람직하게는 1,350 ~ 1,700 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 경화피마자 오일의 사용량이 900 중량부 미만이면 제형을 분리하게 하는 문제가 있을 수 있고, 1,800 중량부를 초과하여 사용하면 도포시 거품을 유발하는 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.

그리고, 상기 글리세릴스테아레이트는 유화제 역할을 하는 것으로서, 피부 광노화 억제제100 중량부에 대하여, 글리세릴스테아레이트 140 ~ 280 중량부, 바람직하게는 160 ~ 260 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 글리세릴스테아레이트의 사용량이 140 중량부 미만이면 유화안정도를 떨어지게 하는 문제가 있을 수 있고, 280 중량부를 초과하여 사용하면 유화안정도를 떨어지게 하는 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.

그리고, 상기 세테아릴알코올은 유화제 역할을 하는 것으로서, 피부 광노화 억제제 100 중량부에 대하여, 세테아릴알코올 250 ~ 550 중량부, 바람직하게는 300 ~ 450 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 세테아릴알코올의 사용량이 250 중량부 미만이면 유화안정도를 떨어지게 하는 문제가 있을 수 있고, 550 중량부를 초과하여 사용하면 유화안정도를 떨어지게 하는 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.

그리고, 상기 세틸에틸헥사노에이트는 오일성분으로 사용감 개선의 역할을 하는 것으로서, 피부 광노화 억제제100 중량부에 대하여, 세틸에틸헥사노에이트 700 ~ 1,600 중량부, 바람직하게는 900 ~ 1,450 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 세틸에틸헥사노에이트의 사용량이 700 중량부 미만이면 사용감을 떨어지게 하는 문제가 있을 수 있고, 1,600 중량부를 초과하여 사용하면 변취의 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.

그리고, 상기 감초추출물은 피부보습 및 항염 역할을 하는 것으로서, 피부 광노화 억제제100 중량부에 대하여, 감초추출물 15 ~ 80 중량부, 바람직하게는 20 ~ 60 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 감초추출물의 사용량이 15 중량부 미만이면 피부보습 및 항염의 제역할을 수행하지 못하게 하는 문제가 있을 수 있고, 80 중량부를 초과하여 사용하면 피부자극을 유발하는 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.

그리고, 상기 정제수는 용매 및 점도 조절 역할을 하며, 피부 외용제 타입에 따라 그 사용량을 조절하여 사용할 수 있으며, 바람직하게는 피부 광노화 억제제 100 중량부에 대하여 20,000 ~ 35,000 중량부를 사용할 수 있다.

본 발명의 피부 외용제의 또 다른 구체적인 예를 들면, 본 발명의 화장품을 유액 타입, 화장수 타입, 에멀젼 타입, 앰플 타입 또는 에센스 타입 등으로 제조할 경우에는 상기 피부 광노화 억제제, 디프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 폴리솔베이트, 디포타슘글리시리제이트, 알란토인, 판테놀 및 글리세린을 이용하여 제조할 수 있으며, 정제수, 향료 및 방부제 등을 더 혼합하여 제조할 수도 있다. 그리고, 이러한 타입의 피부 외용제는 피부 광노화 억제제, 디프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 폴리솔베이트, 디포타슘글리시리제이트, 알란토인, 판테놀 및 글리세린를 포함할 수 있다.

이때, 상기 디프로필렌글리콜은 피부보습 역할을 하는 것으로서, 피부 광노화 억제제 100 중량부에 대하여, 디프로필렌글리콜 1,500 ~ 3,000 중량부, 바람직하게는 2,000 ~ 2,800 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 디프로필렌글리콜의 사용량이 1,500 중량부 미만이면 보습감을 떨어지게 하는 문제가 있을 수 있고, 3,000 중량부를 초과하여 사용하면 비경제일 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.

그리고, 상기 1,3-부틸렌글리콜은 피부보습 역할을 하는 것으로서, 피부 광노화 억제제100 중량부에 대하여, 1,3-부틸렌글리콜 1,500 ~ 2,500 중량부, 바람직하게는 1,800 ~ 2,400 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 1,3-부틸렌글리콜의 사용량이 1,500 중량부 미만이면 보습감을 떨어지게 하는 문제가 있을 수 있고, 2,500 중량부를 초과하여 사용하면 제형을 불안정하게 하는 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.

그리고, 상기 폴리솔베이트는 가용화제 역할을 하는 것으로서, 피부 광노화 억제제 100 중량부에 대하여, 폴리솔베이트 600 ~ 1,250 중량부, 바람직하게는 700 ~ 1,100 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 폴리솔베이트의 사용량이 600 중량부 미만이면 제형을 분리하게 하는 문제가 있을 수 있고, 1,250 중량부를 초과하여 사용하면 끈적임과 피부 도포시 거품을 유발하는 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.

그리고, 상기 디포타슘글리시리제이트는 자극완화 역할을 하는 것으로서, 피부 광노화 억제제 100 중량부에 대하여, 디포타슘글리시리제이트 120 ~ 250 중량부, 바람직하게는 140 ~ 220 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 디포타슘글리시리제이트의 사용량이 120 중량부 미만이면 자극완화의 제 역할을 못하게 하는 문제가 있을 수 있고, 250 중량부를 초과하여 사용하면 제형의 안정도를 깨는 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.

그리고, 상기 알란토인은 자극완화 역할을 하는 것으로서, 피부 광노화 억제제 100 중량부에 대하여, 알란토인 90 ~ 280 중량부, 바람직하게는 140 ~ 220 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 알란토인의 사용량이 90 중량부 미만이면 자극완화의 제 역할을 못하게 하는 문제가 있을 수 있고, 280 중량부를 초과하여 사용하면 제형의 안정도를 깨는 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.

그리고, 상기 판테놀은 자극완화제 및 비타민 B5로 피부에 영양분을 공급 하는 역할을 하는 것으로서, 피부 광노화 억제제 100 중량부에 대하여, 판테놀 80 ~ 300 중량부, 바람직하게는 120 ~ 200 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 알란토인의 사용량이 80 중량부 미만이면 자극완화, 피부영양분 공급의 제 역할을 못하게 하는 문제가 있을 수 있고, 250 중량부를 초과하여 사용하면 제형의 안정도를 깨는 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다.

그리고, 상기 글리세린은 피부보습 역할을 하는 것으로서, 피부 광노화 억제제 100 중량부에 대하여, 글리세린 650 ~ 1,550 중량부를, 바람직하게는 800 ~ 1,250 중량부를 사용할 수 있으며, 이때, 알란토인의 사용량이 650 중량부 미만이면 피부보습을 떨어지게 하는 문제가 있을 수 있고, 1,550 중량부를 초과하여 사용하면 끈적임을 유발하게 하는 문제가 있을 수 있으므로 상기 범위 내에서 사용하는 것이 좋다

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하기로 하지만, 하기 실시예가 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니며, 이는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것으로 해석되어야 할 것이다.

[실시예]

준비예 1 : 바이오 펩톤 발효액의 제조

펩톤화된 단백분해물은 Fluka(Sigma-Aldrich, St. QuentinFallavier,France)로부터 구입하였다. 상기 펩톤화된 단백분해물인 대두펩톤(soybean peptone) 500g을 하기 표 1의 성분 및 함량의 배지에 가하여 혼합한 다음, 121℃에서, 15분간 가열하여 멸균처리하였다. 다음으로, 이를 냉각 후, 유산균으로서 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus)를 초기 균수가 1×10⁶ cfu/㎖ 이 되도록 접종한 후, 50 rpm으로 교반하면서 30℃에서, 48시간 배양 및 발효시켜 바이오 펩톤 발효 배양물을 수득하였다.

다음으로, 상기 과정을 통해 수득한 바이오 펩톤 발효 배양물을 최종온도가 95℃가 되도록 가열 처리한 후, 원심분리(3,000rpm, 15min)하여 균체 및 불용성 성분을 제거하여 바이오 펩톤 발효액을 제조하였다.

No.	성분명	함량(w/w)
1	대두펩톤(Soybean Peptone)	5.000%
2	글루코오스(Glucose)	0.500%
3	인산칼륨(Potassium phosphate)	0.2500%
4	아세트산나트륨(Sodium acetate)	0.120%
5	시트르산암모늄(Dimmonium citrate)	0.120%
6	황산마그네슘(MgSO4)	0.012%
7	황산망간(MnSO4)	0.003%
8	황산아연(ZnSO4)	0.001%
9	황산구리(CuSO4)	0.001%
10	정제수	93.993%
합계		100.000%

준비예 2 : 바이오 펩톤 발효분말의 제조

상기 준비예 1에서 제조한 바이오 펩톤 발효액을 동결건조된 바이오 펩타이드 발효물 약 45g을 얻었다.

실험예 1 : 고속액체 크로마토그래피( HPLC ) 및 MS(Mass spectrometry) 측정을 통한 바이오 펩톤 발효액의 분자량 확인 시험

상기 준비예 1의 바이오 펩톤 발효액 분자량을 확인하기 위하여, 고속액체 크로마토그래피 및 MS 스펙트럼을 측정하였다.

고속액체 크로마토그래피 측정은 Accela UHPLC(제조사 : Thermo Scientific) 를 이용하였다. 동결건조한 바이오 펩톤 발효물을 0.1% 개미산(Formic acid)에 녹였으며, 분석 시 온도는 RT(Room Temperature)로 하였다. 컬럼은 Water BEH C18(2.1×100 ㎖, 1.7 ㎛)을 이용하였고, 유량(Flow rate)은 분당 300 ㎕가 되도록 유지하였다. 시료 분석 시간은 최대 60분까지 진행하였으며, 0분 ~ 60분까지의 측정 결과를 도 3a에 나타내었고, 이중 0 분 ~ 25분까지의 측정 결과를 도 3b에 나타내었다.

또한, MS 스펙트럼 측정은 LTQ Orbitrap XL mass spectrometer(제조사 : Thermo Scientific)을 이용하여 수행하였다. 액체 크로마토그래피에서 분리한 단일성분 중 면적이 큰5개의 피크를 임의로 선정한 후, MS 스펙트럼을 통해 분자량을 확인하였고, 그 결과를 도 4에 나타내었다.

도 4의 ① ~ ⑤ 각각은 도 3b의 ① ~ ⑤ 표시 부분의 피크의 분자량을 측정한 데이터이며, 도 4의 ① ~ ⑤ 결과를 통하여, 대부분의 피크의 중량평균분자량이 100 ~ 500 이하, 바람직하게는 중량평균분자량 200 ~ 300사이의 펩타이드로서, 2 ~ 4개의 아미노산으로 구성된 펩타이드임을 추정 및/또는 확인할 수 있었다.

실시예 1 : 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료 조성물의 제조

상기 준비예 1에서 제조한 바이오 펩톤 발효액 95 중량%, 알파-아미노산 3.2 중량%, 당류 1.5 중량%, 아세틸글루코사민 0.1 중량% 및 구연산 0.2 중량%를 혼합 및 교반하여 하기 표 2와 같은 조성을 가지는 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료 조성물의 혼합물을 제조하였다.

이때, 상기 알파-아미노산은 이소류신, 류신, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 트레오닌, 트립토판, 발린, 글루탐산 및 아세틸시스테인을 혼합하여 준비한 것을 사용하였으며, 상기 당류는 글루코오스, 갈락토오스 및 자일로오스를 혼합하여 준비한 것을 사용하였다.

실시예 2

상기 준비예 2에서 제조한 바이오 펩톤 발효분말 50 중량%, 알파-아미노산 32 중량%, 당류 15 중량%, 아세틸글루코사민 1 중량% 및 구연산 2 중량%를 혼합 및 교반하여, 하기 표 2와 같은 조성을 가지는 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료 조성물의 혼합물을 제조하였다.

비교예

상기 비교예로서 준비예 1의 바이오 펩톤 발효액을 준비하였다.

구분(중량%)		실시예 1	실시예 2	비교예
바이오펩톤발효액		95	-	100
바이오펩톤발효분말		-	50	-
알파-아미노산	이소류신	0.30	3	-
	류신	0.30	3	-
	라이신	0.50	5	-
	메치오닌	0.20	2	-
	페닐알라닌	0.20	2	-
	트레오닌	0.30	3	-
	트립토판	0.20	2	-
	발린	0.20	2	-
	글루타믹애씨드	0.50	5	-
	아세틸시스테인	0.50	5	-
당류	글루코오스	0.50	5	-
	갈락토오스	0.50	5	-
	자일로오스	0.50	5	-
아세틸글루코사민		0.10	1	-
구연산		0.20	2	-
합계		100.00	100.00	100.00

실험예 2 : In-vitro 상에서의 세포독성 확인 시험

(1) 인간진피형성세포주인 섬유아세포주(Human Dermal Fibroblasts)를 Innoprot사(Bizkaia, Spain)에서 분양 받아 10% FBS(Fetal bovine serum, Welgene, Daegu, Korea)이 포함된 DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium, Welgene, Daegu, Korea)을 사용하여 37℃, 5% CO₂ 세포배양기에서 배양하였다. 3일마다 배양액을 교체하였으며, 세포 수가 80% 이상 성장을 보이면 계대를 진행하였고, 2주간의 안정된 상태의 세포 상태에서 실험을 진행하였다.

(2) 실시예 1 및 비교예의 섬유아세포에 독성을 미치는지 확인하기 위해 WST-1 Assay를 진행하였다. 96 웰 플레이트(well plate)에 웰(well)당 1×10⁴ cell/well을 200 μL씩 분주한 후 37℃, 5% CO₂ 세포배양기에서 24시간 동안 배양시킨 후, FBS가 함유되지 않은 DMEM배지와 피부 광노화 억제제를 처리하고 24시간 뒤에 진행하였다. 각각의 웰에 WST-1 용액(Cell Proliferation Reagent WST-1, Cat no. 05 015 944 001, Roche)을 전체의 10%가 되도록 20 μL를 넣은 뒤 37℃, 5% CO₂ 세포배양기에서 2시간 반응시켰다.

흡광도 측정을 위해 VersaMax microplate reader(Molecular Devices, Sunnyvale, CA)를 이용하여 450nm, 620nm에서 흡광도를 측정하였으며, 대조군을 기준으로 세포의 생존비를 계산하였으며, 그 결과를 도 5a 및 도 5b에 나타내었다. 그리고, 분석 자료는 평균±표준오차(mean±SE)로 나타내었으며, 실험결과는 SPSS 12.0K (SPSS Inc., Chicago, IL, USA)를 이용하여 p<0.05 수준에서 통계처리 하였고, t-test와 Duncan's multiple range test로 검증하였다.

도 5a 및 도 5b에서 대조군은 EGF및 바이오 펩톤 발효물을 처리하지 않고 DMEM 배지만으로 배양한 결과이고, EGF는 상피세포의 증식, 성장 및 분화를 촉진하는 성장인자로 알려진 EGF(Sigma aldrich사의 Epidermal Growth Factor human, Cat.no E9644)를 20 μg/mL 처리한 결과이다. 그리고, 도 5a는 비교예(바이오 펩톤 발효물)의 농도별(100 μg/mL ~ 2,000 μg/mL) 측정 결과이다.

도 5a를 살펴보면, 0 ~ 2,000 μg/mL 전 농도구간에서 세포독성이 나타나지 않았으며 오히려 세포의 증식이 활발하게 일어남을 확인할 수 있었다. 특히, 300 ~ 1,000 μg/mL 부근에서 매우 높은 세포증식효과를 보여주었으며, 특히, 600 ~ 900 μg/mL 부근에서 가장 높은 세포증식 효과를 보였다.

(2) 도 5b는 도 5a에서 가장 우수한 세포증식 효과를 보인 바이오 펩톤 발효물 800 μg/mL으로 실시예 및 비교예에서 사용한 후, 세포증식 효과를 측정한 결과이다.

도 5b를 살펴보면, 바이오 펩톤 발효물만 사용한 비교예 보다 실시예가 세포증식 결과가 다소 높은 것을 확인할 수 있다.

실험예 3 : UVB조사에 의한 세포보호 효과 측정

(1) 상기 실험예 2의 인간진피형성세포주인 섬유아세포주(Human Dermal Fibroblasts)를 60mm 세포배양접시(cell culture dish)에 배양한 후 자외선을 조사하기 전 배지를 제거하고, 인산완충용액(PBS) 1mL및 실시예 1의 화장료 조성물 및 비교예를 800 μg/mL 농도로 넣어주었다. UV 램프(VL-6LM, Vilber Lourmat, France)를 이용하여 312m에서 50 mJ/cm² 세기로 UVB를 조사하였다.

자외선 조사 직후 세럼(serum)이 포함되지 않은 세포배양액으로 교환해주고, 37℃, 5% CO₂ 세포배양기에서 배양하였다. 대조군의 경우 자외선 조사 과정을 제외한 전 과정을 동일하게 처리하였다. 그리고, 분석 자료는 평균±표준오차(mean±SE)로 나타내었으며, 실험결과는 SPSS 12.0K (SPSS Inc., Chicago, IL, USA)를 이용하여 p<0.05 수준에서 통계 처리하였고, t-test와 Duncan's multiple range test로 검증하였다.

도 6을 살펴보면, UVB를 조사하지 않은 대조군에 비해 UVB를 조사한 대조군 2에서는 48%로 세포생존율이 감소하였으나, 이에 반해 비교예 및 실시예 1은 대조군 2와 비교할 때, 상대적으로 매우 높은 세포 생존율을 보였으며, 특히, 실시예 1이 비교예 보다 상대적으로 우수한 세포 생존율을 보였다. 이 결과를 통해 본 발명의 화장료 조성물이 UVB로 인한 세포 사멸을 저해하여 자외선으로부터 피부를 효과적으로 보호할 수 있다는 사실을 확인할 수 있었다

또한, 도 7에 실험 전후에 찍은 사진을 나타내었다.

실험예 4-1 : 콜라겐 타입 (Collagen type ) 합성 촉진 효과 측정

피부상피세포 건조 중량의 약 70~80%를 차지하는 콜라겐은 히알루론산(hyaluronic acid) 및 엘라스틴(elastin)과 함께 피부의 탄력 및 주름과 관련된 주요 인자로 알려져 있다. 일반적으로 피부에서 콜라겐 타입 의 합성과 분해 효소의 하나인 MMP-1(Matrix metalloproteinase-1)의 활성이 균형을 이루고 있지만, 노화가 진행되는 피부조직에서는 콜라겐 타입 의 합성이 저하되고 MMP-1의 효소 활성이 증가되어 있는 것으로 알려져 있다. 그러므로 콜라겐 합성 촉진 효능은 탄력 저하 및 주름 방지를 위한 중요한 인자라 할 수 있다.

광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료 조성물의 UVB조사에 의한 세포보호 효과 외에 추가적인 효과를 아래와 같이 콜라켄 합성 촉진 효과를 측정하였다.

화장료 조성물의 1형 콜라겐 생합성 촉진 효과를 확인하기 위해 PIP(Procollagen Type C-peptide) EIA 키트(Cat no. MK101, Takara Bio)를 사용하여 실험을 수행하였다.

6 웰-플레이트에 실험예 2에서 사용한 동일한 인간진피형성세포주인 섬유아세포주(Human Dermal Fibroblast)를 5×10⁵ cells/well로 접종한 후 37℃, 5% CO₂ 세포배양기에서 배양하였다. 24시간 후 혈청(FBS)이 함유되지 않은 DMEM(Dulbeco’s Modified Eagle’s Media) 배지와 함께 실시예 1의 본 발명의 화장료 조성물을 농도별로 처리한 다음 37℃, 5% CO₂ 조건 하에서 24시간 배양하고 세포 배양액을 회수하였다.

다음으로, Anti-PIP Monoclonal Antibody Plate에 Antibody-POD Conjugate Solution을 웰(well)당 10μL 처리하고 회수한 세포 배양액을 20μL 첨가하여 37℃, 5% CO₂ 세포배양기에서 3시간 반응시켰다. PBS를 이용하여 웰을 4회 세척한 후 기질용액(TMBZ, 3,3',5,5'-tetramethylbenzene)을 100μL 처리하여 반응을 정지시키고 흡광도 측정을 위해 VERSAmax microplate reader(Molecular Devices, Sunnyvale, CA)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하고 표준 곡선(Standard curve)을 기준으로 합성된 형 콜라겐 (PIP)를 계산하였다. 그리고, 분석 자료는 평균±표준오차(mean±SE)로 나타내었으며, 실험결과는 SPSS 12.0K (SPSS Inc., Chicago, IL, USA)를 이용하여 p<0.05 수준에서 통계처리 하였고, t-test와 Duncan's multiple range test로 검증하였다.

도 8에서 대조군은 EGF 및 바이오 펩톤 발효물을 처리하지 않고 DMEM 배지만으로 배양한 결과이고, EGF는 상피세포의 증식, 성장 및 분화를 촉진하는 성장인자로 알려진 EGF(Sigma aldrich사의 Epidermal Growth Factor human, Cat.no E9644)를 20 μg/mL 처리한 결과이다. 그리고, 비교예 및 실시예 1은 800 μg/mL로 측정 결과이다.

도 8을 살펴보면, 실시예 1의 화장료 조성물이 가장 우수한 콜라겐합성 촉진효과가 있음을 확인할 수 있다. 특히 800 μg/mL 이상의 농도에서는 대조군에 비해 약 250%에 가까운 콜라겐 합성 촉진효과를 보여주어 본 발명의 화장료 조성물이 피부의 탄력을 증대시키거나 장기적으로 피부노화로 인한 주름 생성을 효과적으로 방지할 수 있음을 확인할 수 있었다.

실험예 4-2 : UVB조사에 의해 손상된 세포의 콜라겐 타입 (Collagen type ) 합성 촉진 효과 측정

(1) 본 발명의 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료 조성물이 인간유래 섬유아세포주(Fibroblast cell)를 이용한 실험에서 UVB에 의한 세포손상을 억제시킬 뿐 아니라, 뛰어난 콜라겐 합성 촉진효과를 보여주었기에, UVB로 손상된 세포에서도 콜라겐합성을 촉진시키는지를 피부 광노화 억제제를 이용하여, 실험을 수행하였다.

상기 실험예 3과 동일한 방법으로 UVB를 조사한 후, 실험예 4-1과 동일한 방법으로 콜라겐합성 촉진을 측정하였으며, 실시예 1의 조성물을 사용하였으며, 그 결과를 도 9에 나타내었다.

도 9를 살펴보면, UVB를 조사하지 않은 대조군에 비해 50 mJ/cm²의 UVB를 조사한 대조군 2에서는 40%로 세포생존율이 감소하였다. 이에 반해, 비교예(800 μg/mL) 및 실시예 1(800 μg/mL)를 첨가하고 UVB를 조사한 군에서는 농도 의존적으로 세포 생존율이 매우 높았으며 특히, 실시예 1의 경우, 대조군에 비해 20% 정도의 세포생존율이 증가하는 결과를 보였다. 따라서, 본 발명의 화장료 조성물이 자외선으로 인한 피부의 광노화를 예방하여 피부의 주름생성을 최대한 억제시킬 수 있을 것으로 판단된다.

실험예 5 : 티로시나아제 효소( Tyrosinase ) 저해 효과 측정

티로시나아제(Tyrosinase)는 인체 내 멜라닌 생합성 경로에서 초기 합성 단계에 관여하는 효소이다. 멜라닌 세포가 자외선, 약물, α-MSH 등의 외·내인적 요인에 의한 스트레스에 노출되면, 아미노산인 티로신(tyrosine)이 티로시나아제(tyrosinase)의 촉매작용으로 L-도파(L-DOPA)에서 도파퀴논(Dopaquinone)의 경로를 거치면서 멜라닌 색소를 형성한다. 따라서 멜라닌 생합성에서 중요한 촉매제로 작용하는 티로시나아제의 억제 효과를 확인하기 위해 본 발명의 화장료 조성물에 대한 멜라닌 생합성 단계에 관여하는 티로시나아제 효소 억제 효과를 진행하였다.

(1) 멜라닌색소형성세포주인 멜라닌 세포 B16F10(Human Epidermal Melanocytes)는 Innoprot사(Bizkaia, Spain)에서 분양 받아 10% FBS(Fetal bovine serum, Welgene, Daegu, Korea)이 포함된 DMEM(Dulbecco’s modified Eagle’s medium, Welgene, Daegu, Korea)을 사용하여 37℃, 5% CO₂ 세포배양기에서 배양하였다. 3일마다 배양액을 교체하였으며 세포 수가 80% 이상 성장을 보이면 계대를 진행하였고, 2주간의 안정된 상태의 세포 상태에서 실험을 진행하였다.

다음으로, 증류수(DW) 550μL, 100U 티로신 산화효소(Mushroom tyrosinase) 100μL, 0.1M KPB(potassium phosphate buffer) 50μL, 상기 멜라노사이트 세포 50μL및 실시예 1의 본 발명의 화장료 조성물을 농도별(100 ~ 2,000 μg/mL)로 투입 및 혼합 후, 37℃에서 5분간 사전 배양(pre-incubating)시켰다. 그리고, 기질로서 10mM L-DOPA를 200μL 넣고 효소의 활성을 위해 37℃에서 10~20 분간 반응시켰다. 다음으로, 반응액을 96 웰-플레이트로 옮긴 뒤 VersaMax microplate reader(Molecular Devices, Sunnyvale, CA)를 이용하여 475nm에서 흡광도를 측정하고 대조군과 비교하여 티로시나아제 효소 활성 저해를 측정하였다. 여기서, 대조군 1은 상기 실시예 1 대신 1X PBS(Gibco사의 Dulbecco`s Phosphate Buffer Saline, Cat.no 21300-025)로만 처리한 것이며, 대조군 2는 알부틴(arbutin, 100 μg/mL)을 처리한 것이다. 이의 측정 결과는 도 10에 나타내었다.

도 10을 살펴보면, 대조군 2, 비교예(800 μg/mL) 및 실시예 1(800 μg/mL) 모두 티로시나아제 활성 억제 효과가 나타남을 확인할 수 있었다. 그리고, 실시예 1이 비교예 보다 상대적으로 티로시나아제의 활성을 저해시킴으로써 티로신(tyrosine)으로부터 멜라닌 색소의 생성을 효과적으로 감소시킴을 확인할 수 있었다.

실험예 6 : 멜라노사이트(Melanocyte)에서 멜라닌 색소 생성 저해 효과

(1) 본 발명의 화장료 조성물의 멜라닌 세포 내 멜라닌 색소 생성 저해 효과를 측정하기 위해 멜라닌 세포 B16F10(Human Epidermal Melanocytes)를 6 well-plate에 2×10⁵ cells/well로 분주하고 37℃, 5% CO₂ 조건 하에서 배양하였다. 24시간 후 시료와 함께 0.1mM IBMX(3-isobutyl-1-methylxanthine)를 처리하여 37℃, 5% CO₂ 세포배양기에서 48시간 배양하여 세포 내 멜라닌 생성을 유도한 뒤, 알부틴(arbutin, 100 μg/mL), 비교예(800 μg/mL) 및 실시예 1(800 μg/mL)을 800 μg/mL로 처리하였다. 그리고, PBS를 이용하여 세척하고 세포 스크레퍼(cell scraper)를 이용하여 세포를 회수하여 원심분리한 후 상등액 제거로 얻은 펠렛(pellet)에 1N-NaOH 800μL를 넣고 80℃ 항온조에서 반응시켜 세포를 용해하였다. 다음으로, VersaMax microplate reader(Molecular Devices, Sunnyvale, CA)를 이용하여 405nm에서 흡광도를 측정하고 대조군과 비교하여 멜라닌 색소량을 계산하였으며, 그 결과를 도 11a에 나타내었다. 이와 함께, 현미경(phase contrast microscope)을 이용하여 100배율로 멜라닌 생성을 관찰한 사진을 도 11b에 나타내었다. 여기서, 대조군 1 은 IBMX, 알부틴 및 본 발명의 화장료 조성물 어느 것도 사용하지 않은 것이고, 대조군 2는 IBMX를 처리한 것이다.

도 11a를 살펴보면, 대조군 2의 IBMX를 첨가한 세포에서 멜라닌 색소가 대조군 1 대비 146% 정도로 증가한 반면, IBMX와 비교예(800 μg/mL)를 함께 첨가하자 멜라닌색소의 생성율이 대조군 대비 117%로 증가하였다. 이에 반해, IBMX와 실시예 1(800 μg/mL)를 함께 첨가한 경우, 비교예와 비교할 때, 멜라닌색소의 생성율이 105% 정도로 비교예 보다 낮은 결과를 보였다.

실험예 7 : DPPH assay에 의한 항산화 효과

본 발명의 화장료 조성물의 항산화 효과를 측정하기 위해 DPPH assay 실험을 진행하였다. DPPH 분말을 에탄올에 희석하여 0.2mM로 녹인 후 DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 용액과 실시예 1의 화장료 조성물을 1:1의 중량비율로 30분간 반응시키고 VERSAmax microplate reader(Molecular Devices, Sunnyvale, CA)를 이용하여 517nm에서 흡광도를 측정하고 대조군을 기준으로 라디칼소거능(IC50값)을 계산하였으며, 그 결과를 도 12a 및 도 12b에 나타내었다. 또한, DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 용액과 비교예의 바이오 펩톤 발효물도 1:1의 중량비율로 30분간 반응시킨 후, 동일한 방법으로 라디칼 소거능을 측정하였다. 도 12a는 아스코르빈산의 농도별 자유라디칼 소거능(%) 측정결과이며, 도 12b는 비교예 및 실시예 1의 화장료 조성물의 농도별 라디칼 소거능 측정 결과이다.

표 12b를 살펴보면, 농도의존적으로 자유 라디칼 소거능이 증가함을 확인할 수 있으며, 아스코르빈산과 비교할 때, 동량 적용시 라디칼 소거능이 떨어지지만, 매우 우수한 라디칼 소거능을 갖음을 확인할 수 있었다. 그리고, 비교예 보다 실시예 1이 라디칼 소거능이 상대적으로 우수함을 확인할 수 있었다.

실시예 3 : 리포좀 타입의 화장료의 제조

비이커에 레시틴을 투입한 다음, 레시틴 100 중량부에 대하여, 세라마이드 용해액 57 중량부를 혼합한 후, 20 ~ 21℃ 하에서 교반속도 1,350 ~ 1,400 rpm 하에서 15분간 저속 교반시켜서 인지질 혼합물을 제조하였다. 이때, 상기 세라미이드 용해액은 레시틴 100 중량부 기준으로 세라마이드 7 중량부를 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 50 중량부에 투입 및 용해시켜서 제조한 것이다.

다음으로, 상기 인지질 혼합물 35.7 중량% 및 실시예 1에서 제조한 화장료 조성물64.3 중량%을 혼합한 후, 20 ~ 21℃ 하에서 교반속도 1,350 ~ 1,400 rpm 하에서 15분간 저속 교반시켜서 리포좀 현탁액을 제조하였다(도 1b의 B 사진 참조).

다음으로, 상기 리포좀 현탁액을 방치시켜서 형성된 리포좀을 침적시키고, 이를 필터링하여 리포좀을 회수함으로써, 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료를 제조하였다.

실시예 2 ~ 실시예 5 및 비교예 1 ~ 4

상기 실시예 1과 동일한 방법으로 피부 광노화 억제제를 제조하되, 하기 표 3와 같은 조성비를 가지도록 하여 피부 광노화 억제제를 각각 제조하였다.

구분	실시예 1	인지질 혼합물
		함량	레시틴	세라마이드	용매
실시예 3	64.3 중량%	35.7 중량%	100 중량부	7 중량부	50 중량부

제조예 1 : 기능성 앰플의 제조

상기 실시예 3의 리포좀 타입의 화장료를 이용하여 하기 표 4와 같은 성분을 갖는 앰플을 제조하였다. 이를 좀 더 구체적으로 설명하면, 디프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 디포타슘그리시리제이트, 알란토인, 판테놀, 글리세린을 정제수에 넣고 잘 혼합하여 제 1 혼합물을 제조하였다. 여기에 폴리솔베이트 80을 넣고 혼합하여 가용화한 후 방부제를 넣고 혼합하여 제2혼합물을 제조하였다. 다음으로, 제2 혼합물에 방부제, 향료, 바이오 펩톤 발효물을 넣고, 잘 교반시켜서 2,630 μg/mL 정도로 피부 광노화 억제제를 함유한 앰플 타입의 기능성 피부 외용제를 제조하였다. 앰플 제조는 가온 조건 없이 실온 조건에서 제조가 가능하므로 26℃에서 제품을 제조하였다.

구분	성분	제조배합비 (중량부)
1	실시예 3의 리포좀 타입의 화장료	100
2	디프로필렌글리콜	2,500
3	1,3-부틸렌글리콜	2,200
4	폴리솔베이트 80	950
5	디포타슘글리시리제이트	200
6	알란토인	190
7	판테놀	150
8	글리세린	900
9	정제수	30,500
10	방부제	150
11	향료	120

제조예 2 : 기능성 외용제(크림)의 제조

상기 실시예 3의 리포좀 타입의 화장료를 이용하여 하기 표 5와 같은 성분을 갖는 크림타입의 외용제를 제조하였다. 이를 좀 더 구체적으로 설명하면, 카르복시비닐폴리머에 정제수를 넣고 혼합하여 카르복시비닐폴리머를 잘 풀어 준비한 후 여기에 글리세린, 부틸렌글리콜, 디프로필렌글리콜을 넣어 제 1 혼합물을 제조하였다. 또한, 폴리솔베이트 80, 경화 피마자오일, 글리세릴스테아레이트, 세테아릴알코올, 세틸에칠헥사노에이트를 넣어 제 2 혼합물을 제조하였다. 그리고, 상기 제 1, 2 혼합물 각각을 80℃까지 가온한 후, 이들을 혼합 및 교반하여 제 3혼합물을 제조하였다. 다음으로, 제3혼합물을 고르게 저어가며 온도를 40℃까지 떨어뜨린 후, 방부제, 향료, 바이오 펩톤 발효물 및 감초추출물을 넣은 후, 교반 및 혼합시켜서 2,560 μg/mL 정도의 바이오 펩톤 발효물을 함유한 크림타입의 기능성 외용제를 제조하였다.

구분	성분	제조배합비 (중량부)
1	실시예 3의 리포좀 타입의 화장료	100
2	글리세린	1,200
3	부틸렌글리콜	1,800
4	디프로필렌글리콜	1,900
5	카르복실비닐폴리머	150
6	폴리솔베이트 80	180
7	경화피마자 오일	1500
8	글리세릴스테아레이트	200
9	세테아릴알코올	380
10	세틸에틸헥사노에이트	1,200
11	감초추출물	45
12	정제수	30,000
13	방부제	180
14	향료	170

상기 실시예 및 실험예를 통하여, 본 발명의 피부 광노화 억제제가 피부 UVB 등에 의해 손상된 세포의 콜라겐 합성 촉진, 티로시나아제 저해를 통한 멜라닌 색소 생성 저해 효과가 우수한 것을 확인할 수 있었으며, 이를 이용하여, 화장품, 앰플 또는 연고 등의 다양한 타입 형태로 피부외용제로 응용할 수 있다.

Claims (15)

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2. 바이오 펩톤 발효액을 포함하는 바이오 펩톤 발효물 92 ~ 97 중량%, 알파-아미노산 2.0 ~ 4.0 중량%, 당류 0.8 ~ 3 중량%, 아세틸글로코사민 0.1 ~ 0.5 중량% 및 구연산 0.1 ~ 0.5 중량%를 포함하고,
   상기 바이오 펩톤 발효물은 펩톤화된 단백분해물을 유산균으로 발효시킨 발효물이며,
   상기 바이오 펩톤 발효물은 중량평균분자량 200 ~ 500의 저분자 펩타이드를 100 중량%(기타 불가피한 불순물 포함)로 포함하고,
   상기 펩톤화된 단백분해물은 대두, 서리태, 서목태, 강낭콩 및 녹두 중에서 선택된 1종 이상을 함유한 콩을 펩톤화시킨 것이며,
   상기 유산균은 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 플란타넘(Lactobacillusplantarum) 및 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis) 중에서 선택된 1종 이상을 포함하며,
   상기 알파-아미노산은 이소류신, 류신, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 트레오닌, 트립토판, 발린, 글루탐산 및 아세틸시스테인을 포함하고,
   상기 당류는 글루코오스, 갈락토오스 및 자일로오스를 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료 조성물.
3. 바이오 펩톤 발효분말을 포함하는 바이오 펩톤 발효물 45 ~ 55 중량%, 알파-아미노산 27 ~ 36 중량%, 당류 12 ~ 18 중량%, 아세틸글로코사민 0.5 ~ 1.5 중량% 및 구연산 1 ~ 3.5 중량%를 포함하고,
   상기 바이오 펩톤 발효물은 펩톤화된 단백분해물을 유산균으로 발효시킨 발효물이며,
   상기 바이오 펩톤 발효물은 중량평균분자량 200 ~ 500의 저분자 펩타이드를 100 중량%(기타 불가피한 불순물 포함)로 포함하고,
   상기 펩톤화된 단백분해물은 대두, 서리태, 서목태, 강낭콩 및 녹두 중에서 선택된 1종 이상을 함유한 콩을 펩톤화시킨 것이며,
   상기 유산균은 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 플란타넘(Lactobacillusplantarum) 및 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis) 중에서 선택된 1종 이상을 포함하며,
   상기 알파-아미노산은 이소류신, 류신, 라이신, 메티오닌, 페닐알라닌, 트레오닌, 트립토판, 발린, 글루탐산 및 아세틸시스테인을 포함하고,
   상기 당류는 글루코오스, 갈락토오스 및 자일로오스를 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료 조성물.
   
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9. 제2항 또는 제3항의 화장료 조성물 55 ~ 75 중량% 및 인지질 혼합물 25 ~ 45 중량%를 포함하며,
   상기 인지질 혼합물이 상기 조성물을 랩핑(wrapping)하여 인지질 코팅막을 형성하는 리포좀 제형 화장료이고,
   상기 인지질 혼합물은 레시틴 100 중량부에 대하여, 세라마이드 4 ~ 8.5 중량부 및 용매 30 ~ 85 중량부를 포함하며,
   상기 용매는 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드(Caprylic/Capric Triglyceride) 카프릴릭/카프릭/스테아릭트리글리세라이드(Caprylic/Capric/Stearic Triglyceride) 및 카프릴릭/카프릭/미리스틱/스테아릭트리글리세라이드(Caprylic/Capric/Myristic/Stearic Triglyceride) 중에서 선택된 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료.
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11. 세라마이드를 용매에 용해시킨 세라마이드 용해액을 제조하는 1단계;
    상기 세라마이드 용해액을 레시틴과 혼합 후, 교반을 수행하여 인지질 혼합물 함유 용액을 제조하는 2단계;
    상기 인지질 혼합물 함유 용액에 제2항 또는 제3항의 화장료 조성물을 투입한 후, 교반을 수행하여 리포좀 현탁액을 제조하는 3단계; 및
    여과시켜서 리포좀을 회수하는 4단계;를 포함하며,
    상기 리포좀의 내부는 화장료 조성물을 포함하고, 리포좀 표면은 상기 화장료 조성물의 혼합물을 랩핑(wrapping)하는 인지질 코팅막으로 형성되어 있고,
    상기 리포좀은 화장료 조성물 55 ~ 75 중량% 및 인지질 혼합물 25 ~ 45 중량%를 포함하며,
    2단계의 인지질 혼합물 함유 용액은 레시틴 100 중량부에 대하여, 세라마이드 4 ~ 8.5 중량부 및 용매 30 ~ 85 중량부를 포함하고,
    상기 용매는 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드(Caprylic/Capric Triglyceride) 카프릴릭/카프릭/스테아릭트리글리세라이드(Caprylic/Capric/Stearic Triglyceride) 및 카프릴릭/카프릭/미리스틱/스테아릭트리글리세라이드(Caprylic/Capric/Myristic/Stearic Triglyceride) 중에서 선택된 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료의 제조방법.
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13. 제11항에 있어서, 상기 2단계 및 3단계의 교반은 10 ~ 30℃ 하에서 1,000 ~ 2,000 rpm의 교반속도로 15분 ~ 30분간 교반을 수행하는 것을 특징으로 하는 피부 광노화 억제 및 피부손상세포 재생용 화장료의 제조방법.
14. 제9항의 화장료를 포함하는 것을 특징으로 하는 화장품.
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