KR101992817B1

KR101992817B1 - preparation method of lung cancer animal model

Info

Publication number: KR101992817B1
Application number: KR1020170019312A
Authority: KR
Inventors: 김현구; 용환석; 위화 ?; 노지윤; 최병현
Original assignee: 고려대학교 산학협력단
Priority date: 2016-02-15
Filing date: 2017-02-13
Publication date: 2019-09-30
Also published as: KR20170095742A

Abstract

본 발명은 폐암 동물모델의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 폐암 동물모델의 제조방법은 CT를 이용하여 종양 조직의 이식이 성공적인지 실시간으로 확인하는 것이 가능하면서 이식의 성공률도 현저히 높은 동물모델을 제조하는 것이 가능하다. 또한 이식에 따른 부작용이 현저히 줄어들며, 이식 후 빠른 시간 안에 폐암 동물모델을 제조할 수 있는 제조방법을 제공할 수 있다.The present invention relates to a method for producing a lung cancer animal model.
In the method for producing a lung cancer animal model according to the present invention, it is possible to confirm whether the transplantation of tumor tissue is successful in real time using CT, and to manufacture an animal model with a remarkably high success rate. In addition, the side effects of the transplantation is significantly reduced, it can provide a manufacturing method that can produce a lung cancer animal model quickly after transplantation.

Description

폐암 동물모델의 제조방법{preparation method of lung cancer animal model}Preparation method of lung cancer animal model

본 발명은 폐암 동물모델의 제조방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 간단한 과정을 통해 환자로부터 유래된 폐암 세포를 동물에 주입하여 정위적으로 폐종양이 발생한 폐암 동물모델의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for producing a lung cancer animal model, and more particularly, to a method for producing a lung cancer animal model in which lung tumors are generated stereotactically by injecting lung cancer cells derived from a patient through a simple process.

폐암은 일반적으로 원발성 폐암을 의미하며, 원발성 폐암은 폐에서 기원한 악성 종양을 의미한다. Lung cancer generally refers to primary lung cancer, and primary lung cancer refers to malignant tumors originating in the lung.

폐암에 걸린 환자는 이를 치료하는 과정에서 항암제를 복용하는 것이 필수적으로 수반되어야만 한다. 한편, 이러한 폐암의 발생 원인으로 가장 많이 알려진 것은 흡연으로서, 폐암의 85 %는 흡연에 의한 것으로 보고되고 있다. 일반적으로 흡연은 폐암의 발생 위험을 13 배 가량 증가시키며, 장기간의 간접 흡연은 1.5 배 정도 증가시키는 것으로 알려져 있다. 하지만, 폐암 발생자의 약 15 %는 비흡연자 및 예전부터 전혀 담배를 피운 적 없는 사람에게서 발생한다. 이렇게 흡연 이외에 폐암을 발병시키는 원인으로는 간접 흡연이나, 중금속 노출, 이온화를 하는 방사선, 다환방향족 탄화수소, 폐 섬유증 등이 보고되고 있다. 또한 유전적 요인도 폐암 발생 원인으로서 중요한 관련이 있다. 즉, 폐암을 일으키는 유전적 발병 원인은 환자마다 다양한 양상으로 차이가 있음에도 불구하고, 기존 항암제는 이러한 유전적 발병 원인을 반영하지 못하고 있어 환자마다 적절한 치료가 불가능하다는 문제점이 있었다. 또한 이러한 문제점을 개선하기 위해 폐암 환자의 감수성 검사를 진행한 후 항암제를 처리하고 있기는 하나, 상기 검토한 바와 같이 기존 항암제가 다양한 유전적 발병 원인을 반영하지 못하는 문제점으로 인해 감수성 검사의 실효를 거두지는 못하고 있는 실정이다. Patients with lung cancer must take chemotherapy as a treatment. On the other hand, smoking is the most known cause of lung cancer, and 85% of lung cancers are reported to be caused by smoking. In general, smoking increases the risk of developing lung cancer by 13 times and long-term secondhand smoke increases by 1.5 times. However, about 15% of lung cancer cases occur in nonsmokers and people who have never smoked. As a cause of lung cancer other than smoking, indirect smoking, heavy metal exposure, ionizing radiation, polyaromatic hydrocarbons, pulmonary fibrosis and the like have been reported. Genetic factors are also important as a cause of lung cancer. In other words, although the causes of genetic cancer causing lung cancer are different in various aspects among patients, existing anticancer drugs do not reflect the cause of genetic inheritance, and there was a problem that proper treatment was impossible for each patient. In addition, although the anti-cancer drugs are being treated after undergoing susceptibility tests of lung cancer patients to improve these problems, the existing anti-cancer drugs do not reflect the effects of various genetic causes, as discussed above. Is not.

이러한 문제점을 해결하고자 환자 맞춤형 항암제를 개발하기 위한 노력이 현재 활발하게 진행 중이며, 이러한 환자 맞춤형 항암제의 평가를 위한 전임상 동물 종양 모델을 제작하기 위한 연구들이 계속 진행 중에 있다. 특히 선행기술 중에는 내시경을 이용하여 토끼 VX2를 토끼 폐에 주입하는 동물모델에 관한 기술 등이 있으나, 토끼 VX2에만 적용 가능하다는 문제, 고형암 형태를 만들어내기 어렵다는 문제, 이식의 정확성이 현저히 떨어진다는 문제 및 각종 부작용의 문제가 여전히 남아 있다. Efforts are currently being made to develop patient-specific anticancer agents to solve these problems, and studies for producing preclinical animal tumor models for evaluation of such patient-specific anticancer agents are ongoing. Particularly, there are technologies related to animal models for injecting rabbit VX2 into the rabbit lung using endoscopes, but it is applicable only to rabbit VX2, difficult to form solid cancer, problems of poor accuracy of transplantation, and The problem of various side effects still remains.

또한 본 발명과 관련된 선행기술문헌으로는 대한민국 공개특허 제10-2014-0133399호(특허문헌 1)가 있으며, 상기 특허문헌 1에는 종양세포의 일차 배양방법 및 이를 이용하여 암 환자의 발병 장기와 동일한 장기에 이식하는 자기자리 이식 동물모델에 관한 기술이 개시되어 있다. In addition, the prior art literature related to the present invention is Republic of Korea Patent Application Publication No. 10-2014-0133399 (Patent Document 1), the Patent Document 1 is a primary culture method of tumor cells and the same as the onset of cancer patients using the same Disclosed is a technique related to a seating transplant animal model for transplantation into an organ.

특허문헌 1. 대한민국 공개특허 제10-2014-0133399호Patent Document 1. Republic of Korea Patent Publication No. 10-2014-0133399

본 발명은 상술한 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로서, 본 발명의 목적은 간단한 과정을 통해 정확하게 폐암이 이식된 폐암 동물모델의 제조방법을 제공하는 것으로, 상기 동물모델에 폐암 세포를 이식하여도 부작용이 발생하지 않고, 폐암 세포의 이식 성공율이 현저히 높으면서, 정확한 이식 여부를 실시간으로 확인하는 것이 가능한 폐암 동물모델의 제조방법을 제공하는 것이 목적이다. The present invention has been made to solve the above problems, an object of the present invention to provide a method for producing a lung cancer animal model accurately transplanted lung cancer through a simple process, even if the lung cancer cells transplanted into the animal model side effects It is an object of the present invention to provide a method for producing an animal model of lung cancer which can confirm in real time whether or not the transplantation is remarkable while the transplantation success rate of lung cancer cells is remarkably high.

상술한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 아래 단계를 포함하는 폐암 동물모델의 제조방법을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a method for producing a lung cancer animal model comprising the following steps.

1) 실시간 CT로 동물의 폐위치를 확인하는 단계 및1) checking the lung position of the animal by real-time CT and

2) 상기 단계에서 확인된 동물의 폐 위치에, 종양세포 및 증점제 혼합액을 24-30 게이지 바늘로 주사하는 단계.2) injecting tumor cells and a thickener mixture into a 24-30 gauge needle at the lung location of the animal identified in the above step.

또한 본 발명은 다른 목적을 달성하기 위하여, 증점제; 및 24-30 게이지 바 주사기;를 포함하는 폐암 동물모델 제조용 키트를 제공한다.The present invention also provides a thickener; And 24-30 gauge bar syringe; provides a kit for lung cancer animal model manufacturing comprising a.

또한 본 발명은 또 다른 목적을 달성하기 위하여 아래 단계를 포함하는 항암제의 스크리닝 방법을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a method for screening an anticancer agent comprising the following steps to achieve another object.

1) 상기 제조방법을 통해 제조된 폐암 동물모델에 항암제 후보 물질을 투여하는 단계; 및1) administering an anticancer drug candidate to a lung cancer animal model prepared by the method; And

2) 상기 1)단계의 폐암 동물모델에서 종양 세포의 성장 또는 전이를 측정하여 항암제 후보물질의 치료 효능을 결정하는 단계.2) determining the therapeutic efficacy of the anticancer drug candidate by measuring the growth or metastasis of tumor cells in the lung cancer animal model of step 1).

또한 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여 아래 단계를 포함하는 폐암 환자 맞춤형 항암제 선별방법을 제공한다.In addition, to achieve another object of the present invention provides a method for screening a customized anticancer agent for lung cancer patients comprising the following steps.

1) 실시간 CT로 동물의 폐위치를 확인하는 단계,1) checking the lung position of the animal by real-time CT,

2) 상기 단계에서 확인된 동물의 폐 위치에, 종양세포 및 증점제 혼합액을 24-30 게이지 바늘로 주사하여 환자 맞춤형 폐암 동물모델을 수득하는 단계,2) obtaining a patient-specific lung cancer animal model by injecting tumor cells and a thickener mixture into a 24-30 gauge needle at a lung position of the animal identified in the above step;

3) 상기 수득된 환자 맞춤형 폐암 동물모델에 항암제를 투여하는 단계 및3) administering an anticancer agent to the obtained patient-specific lung cancer animal model and

4) 상기 환자 맞춤형 폐암 동물모델에서 종양 세포의 성장 또는 전이를 측정하여 환자에 따른 항암제의 치료 효능을 결정하는 단계.4) determining the therapeutic efficacy of the anticancer agent according to the patient by measuring the growth or metastasis of tumor cells in the patient-specific lung cancer animal model.

본 발명에 따른 폐암 동물모델의 제조방법은 실시간 CT를 이용하여 종양 세포의 이식이 성공적인지 실시간으로 확인하는 것이 가능하면서 이식의 성공률도 현저히 높은 동물모델을 제조하는 것이 가능하다. 또한 이식에 따른 부작용이 현저히 줄어들며, 이식 후 빠른 시간 안에 폐암 동물모델을 제공하는 것이 가능하다. In the method for producing a lung cancer animal model according to the present invention, it is possible to confirm whether the transplantation of tumor cells is successful using real-time CT in real time, and to manufacture an animal model with a remarkably high success rate. In addition, the side effects of transplantation are significantly reduced, it is possible to provide a lung cancer animal model as soon as possible after transplantation.

도 1은 실시예 1의 과정(폐암 동물모델의 제조방법)을 전체적으로 나타내는 개략도이다.
도 2는 실시예 1의 결과를 나타내는 사진이다.
도 3은 실시예 2의 과정을 전체적으로 나타내는 개략도이다.
도 4는 실시예 2에 따른 폐암 동물모델을 가지고 각 항암제의 감수성을 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 5는 실시예 3에 따른 폐암 동물모델에 사용되는 개량 주사기를 촬영한 사진이다.
도 6은 실시예 3에 따른 폐암 동물모델 제조과정을 나타낸 사진이다.
도 7은 실시예 3을 실시하기 전의 정상 동물모델에서의 폐조직(좌측)과 실시예 3에 따라 제조된 폐암 동물모델의 폐 조직(우측)을 촬영한 사진이다.
도 8은 본 발명에 따른 폐암 동물모델 제조용 키트를 도시화한 도면이다.
도 9는 본 발명에 따른 폐암 동물모델 제조용 키트를 이용하여 폐암 동물모델을 제조하는 일 예를 나타낸 개략도이다.1 is a schematic diagram showing the process of Example 1 (manufacturing method of lung cancer animal model) as a whole.
2 is a photograph showing the result of Example 1. FIG.
3 is a schematic diagram showing the process of Example 2 as a whole.
Figure 4 is a graph showing the results of evaluating the sensitivity of each anticancer agent with a lung cancer animal model according to Example 2.
Figure 5 is a photograph of the improved syringe used in the lung cancer animal model according to Example 3.
Figure 6 is a photograph showing the lung cancer animal model manufacturing process according to Example 3.
FIG. 7 is a photograph of lung tissue (left) of the normal animal model and lung tissue (right) of the lung cancer animal model prepared according to Example 3 before carrying out Example 3. FIG.
Figure 8 is a view showing a lung cancer animal model production kit according to the invention.
Figure 9 is a schematic diagram showing an example of producing a lung cancer animal model using the kit for producing lung cancer animal model according to the present invention.

이에 본 발명자들은 종양 이식 성공률이 높은 소형 폐암 동물모델의 제조방법을 개발하기 위하여 예의 연구 노력한 결과, 본 발명에 따른 폐암 동물모델의 제조방법을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
Accordingly, the present inventors have made intensive studies to develop a method for producing a small lung cancer animal model having a high tumor transplant success rate, and have found a method for producing a lung cancer animal model according to the present invention to complete the present invention.

본 발명에서 "이종이식"이란, 종이 다른 동물의 간, 심장, 신장 등 기관, 장기, 조직, 세포 등을 이식하는 방법을 의미한다. 본 발명의 목적상 상기 이종이식은 환자로부터 분리된 폐암 세포를 동물에 이식하는 방법으로 이해될 수 있으나, 특별히 이에 제한되지는 않는다.
In the present invention, "xenotransplantation" refers to a method of transplanting organs, organs, tissues, cells, etc., such as liver, heart, and kidney of a species of another animal. For the purpose of the present invention, the xenograft may be understood as a method of transplanting lung cancer cells isolated from a patient into an animal, but is not particularly limited thereto.

본 발명에서 "계대 배양"이란, 세포 또는 조직을 건강한 상태로 지속적으로 장기간 배양하기 위해 주기적으로 세포 또는 조직의 일부를 새로운 배양용기에 옮긴 후 배양배지를 갈아주면서 세포 또는 조직의 대 (代)를 계속 이어서 배양하는 방법을 의미한다. 한정된 공간을 가진 배양용기 내에서 세포 또는 조직 내 세포의 수가 늘어나면서 일정시간이 지나면 증식 영양분이 소비되거나 오염 물질이 쌓여 세포가 자연히 죽게 되므로, 건강한 세포의 수를 늘리기 위한 방법으로 사용되며, 통상적으로 한 차례 배지 (배양용기)를 교체하는 것 또는 세포군을 나누어 배양하는 것을 1 계대 (1 passage, F1)라고 한다. 일반적인 계대 배양에서의 배양용기로는 면역 결핍 마우스의 생체시스템이 이용되며, 이는 이식하기 위한 암 조직을 배양하기 위한 영양체라 할 수 있다. 배양된 암 조직의 계대(passage, 예; F1 → F2) 이식시 새로운 개체의 면역 결핍 마우스가 사용되는 것이 바람직하며, 이를 마우스의 순계 생산을 위한 근교계(형매교배 또는 근친교배 등)와 혼동하는 것은 바람직하지 않다. 계대 배양의 방법은 당업계에 공지된 방법을 제한 없이 사용할 수 있으나, 바람직하게는 기계적 분리 또는 효소적 분리로 수행될 수 있다.In the present invention, "passage culture" is to transfer a portion of cells or tissues while periodically transferring a portion of the cells or tissues to a new culture vessel in order to continuously cultivate the cells or tissues in a healthy state for a long period of time. It means the method of culturing subsequently. It is used as a method to increase the number of healthy cells, since the proliferation of nutrients is consumed or contaminants accumulate and the cells naturally die after a certain time as the number of cells or tissues in the culture vessel with a limited space increases. Replacing the medium (culture vessel) once or dividing the cell population into one passage (1 passage, F1) is called. As a culture vessel in a general passage culture, a biological system of an immunodeficient mouse is used, which is a nutrient for culturing cancer tissue for transplantation. Immunity deficient mice of new individuals are preferably used for the passage of cultured cancer tissues (eg, F1 → F2), which is confused with inbreeding (eg brooding or inbreeding) for the net production of mice. It is not desirable. The method of subculture may be used without limitation methods known in the art, but may preferably be carried out by mechanical separation or enzymatic separation.

이때, 기계적 분리란, 물리적 또는 기계적으로 세포 덩어리로서의 조직을 분리하는 것을 의미하며, 당업계에 공지된 방법을 제한 없이 사용할 수 있으나, 바람직하게는 블레이드, 조직 분쇄기, 바늘, 피펫팅, embryoid body divider 또는 스크래퍼 중에서 어느 하나 이상을 이용할 수 있다.
In this case, mechanical separation means physically or mechanically separating tissue as a cell mass, and any method known in the art may be used without limitation, but preferably, a blade, tissue grinder, needle, pipetting, embryoid body divider Alternatively, any one or more of scrapers may be used.

일반적으로 세포는 생존을 위해 세포의 특성을 변화시키고 강한 생존력을 갖는 세포는 계대 배양시 계속 선택되기 때문에 본래의 종양과 특징이 많이 달라지게 된다. 특히 암세포의 경우 환경인자에 따라 종양세포의 분자적 특징 및 표현형이 쉽게 바뀔 수 있다는 문제점이 있다. 즉, 환자 유래 암조직을 이용한 동물모델에 있어서, 동물모델에 주입하기 전 암세포를 다시 배양하고, 처리하는 전처리단계를 거치게 된다면 상술한 문제점을 피해갈 수 없다는 한계점이 존재한다.In general, the cells change the characteristics of the cell for survival, and since the cells with strong viability continue to be selected during passage culture, the original tumor and characteristics are much different. In particular, cancer cells have a problem in that the molecular characteristics and phenotype of tumor cells can be easily changed according to environmental factors. That is, in the animal model using the patient-derived cancer tissue, there is a limitation that the above-mentioned problems cannot be avoided if the cancer cell is subjected to a pretreatment step of re-culturing and processing the cancer cells before injection into the animal model.

본 발명에서는 상기 문제점을 해결하기 위하여, 환자로부터 분리된 폐암 세포를 별도의 처리없이 직접 주입하여 동물로부터 폐암을 유발하기 때문에, 환자 고유의 폐암 상태와 거의 동일한 형태 및 상태를 지닌 동물 모델을 제조할 수 있다.
In the present invention, in order to solve the above problems, since lung cancer cells isolated from a patient are directly injected without any treatment to cause lung cancer from an animal, an animal model having a shape and a condition almost identical to that of a patient's own lung cancer can be prepared. Can be.

본 발명의 일 측면은 아래 단계를 포함하는 폐암 동물모델의 제조방법에 관한 것이다.One aspect of the invention relates to a method for producing a lung cancer animal model comprising the following steps.

우선, 사람을 제외한 동물의 폐를 실시간 CT 촬영 장치로 확인한다. 이때 상기 실시간 CT 촬영 장치는 일반적인 공지의 CT 촬영 장치가 모두 포함될 수 있으나, 바람직하게는 CT Fluoroscopy기능이 있는 CT로서, 일반 CT와 달리 Real time tracking 으로 촬영되는 것일 수 있다.First, the lungs of animals except humans are confirmed by a real-time CT imaging device. In this case, the real-time CT imaging apparatus may include all of the known CT imaging apparatuses, but preferably CT with a CT Fluoroscopy function, unlike the normal CT may be taken by real time tracking.

다음, 상기 실시간 CT 촬영 장치로 확인한, 동물의 폐 위치에, 종양세포 및 증점제 혼합액을 24-30 게이지 바늘로 주사하여 폐암 동물모델을 제조한다.Next, a lung cancer animal model is prepared by injecting a tumor cell and a thickener mixture into a 24-30 gauge needle at a lung location of the animal, which is confirmed by the real-time CT imaging apparatus.

본 발명에 있어서, 상기 동물은 인간을 제외한 어떠한 동물도 가능하며, 바람직하게는 포유동물로 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 모르모트, 랫트, 마우스, 소, 양, 돼지 및 염소로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있고, 보다 바람직하게는 면역 결핍 동물이다. In the present invention, the animal may be any animal except human, preferably a mammal selected from the group consisting of monkeys, dogs, cats, rabbits, marmots, rats, mice, cows, sheep, pigs and goats. It may be any one or more, more preferably an immunodeficiency animal.

구체적으로 상기 동물은 크게 소형(예: 마우스, 래트), 중형(토끼, 기니피그) 또는 대형(돼지, 개) 동물로 분류할 수 있고, 이들 모두 포함될 수 있다. 다만, 상기 중형 또는 대형 동물모델은 외과용 동물모델로 바람직하며, 상기 소형 동물모델은 환자 맞춤형 폐암 동물모델로 제공될 수 있다.Specifically, the animal may be classified as a small (eg, mouse, rat), medium (rabbit, guinea pig), or large (pig, dog) animal, and both may be included. However, the medium or large animal model is preferably a surgical animal model, the small animal model may be provided as a patient-specific lung cancer animal model.

상기 "면역 결핍 동물"이란, 암이 발병될 수 있도록 면역시스템을 구성하는 일부 구성요소를 유전자 수준에서 인위적으로 손상시켜서 정상적인 면역시스템이 구현되지 않도록 조작하여 제조된 동물을 의미한다. 상기 면역 결핍 동물로는 신경계가 형성된 동물을 사용할 수 있는데, 바람직하게는 면역 결핍 포유동물을 사용할 수 있고, 보다 바람직하게는 면역 결핍되도록 조작된 마우스, 랫트, 햄스터, 기니어피그 등의 면역 결핍 설치류가 될 수 있으며, 가장 바람직하게는 누드 마우스, NOD(nonobese diabetic) 마우스, SCID(Severe combined immunodeficiency) 마우스, NOD-SCID 마우스, NOG(NOD/shi-SCID/IL2R null) 마우스 등이 될 수 있다.The "immune deficient animal" refers to an animal manufactured by manipulating some components of the immune system artificially at the genetic level so that cancer can develop so that a normal immune system is not implemented. The immunodeficiency animal may be an animal in which the nervous system is formed, preferably an immunodeficiency mammal, and more preferably an immunodeficient rodent such as a mouse, rat, hamster, guinea pig, or the like that has been engineered to be immunodeficiency. Most preferably, the mouse may be a nude mouse, a nonobese diabetic (NOD) mouse, a Severe combined immunodeficiency (SCID) mouse, a NOD-SCID mouse, a NOG (NOD / shi-SCID / IL2R null) mouse, or the like.

또한, 상기 동물은 종양이 발생되지 않은 정상 동물을 의미한다.Also, the animal refers to a normal animal in which a tumor has not occurred.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면 상기 종양세포는 특별한 제한이 있는 것은 아니지만 바람직하게는 암 조직을 잘게 분쇄한 후 이를 필터링하고, 그 후 원심분리하여 수득되는 것일 수 있다. 이러한 과정을 통해 상기 종양세포는 24-30 게이지의 바늘로 주사하여도 주사 바늘이 막히지 않고 폐암 세포를 이식할 수 있는 100 ㎛ 미만의 크기로 선별하는 것이 바람직하다. 종래 기술은 16-18 게이지인 바늘을 활용하기 때문에 종래 기술에서 사용한 동물모델에 기흉 등의 부작용이 있어 바람직하지 않았으나, 본 발명의 경우 24-30 게이지의 바늘을 활용하여 소형 동물모델을 제조함에도 상기 종래 기술의 부작용이 발생하지 않아 매우 바람직하다. 또한 암 조직의 분쇄는 폐암 세포가 파괴되지 않을 정도로 최대한 잘게 분쇄하는 것이 바람직하다. According to a preferred embodiment of the present invention, the tumor cells are not particularly limited, but may be preferably obtained by pulverizing finely crushed cancer tissue and then filtering them, followed by centrifugation. Through this process, the tumor cells are preferably screened to a size of less than 100 μm to allow injection of lung cancer cells without clogging the needle even when injected with a needle of 24-30 gauge. The prior art has a side effect such as pneumothorax in the animal model used in the prior art because it uses a needle that is 16-18 gauge, but in the case of the present invention, even when producing a small animal model using a 24-30 gauge needle It is highly desirable that no side effects of the prior art occur. In addition, the grinding of the cancer tissue is preferably crushed as fine as possible so that the lung cancer cells are not destroyed.

본 발명의 일 구현예에 따르면 상기 종양세포는 암 세포주이거나 폐암 환자로부터 분리된 폐암 세포일 수 있다.According to one embodiment of the present invention, the tumor cells may be cancer cell lines or lung cancer cells isolated from lung cancer patients.

본 발명에서 이용되는 암 세포주는 신장암 세포주(예컨대, RENCA), 위암 세포주, 뇌암 세포주, 폐암 세포주, 유방암 세포주, 난소암 세포주, 간암 세포주, 기관지암 세포주, 비인두암 세포주, 후두암 세포주, 췌장암 세포주, 방광암 세포주, 결장암 세포주 및 자궁경부암 세포주로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다. 가장 바람직하게는 간암 세포주 또는 동일 호흡기관계 세포주인 폐암 세포주일 수 있다. 만일 암 세포주의 수용자로 토끼와 같은 중형 동물이 이용되는 경우에는 간암 세포주인 VX2를 이용하는 것이 가장 바람직하다.Cancer cell lines used in the present invention renal cancer cell line (eg, RENCA), gastric cancer cell line, brain cancer cell line, lung cancer cell line, breast cancer cell line, ovarian cancer cell line, liver cancer cell line, bronchial cancer cell line, nasopharyngeal cancer cell line, laryngeal cancer cell line, pancreatic cancer cell line, It may be any one selected from the group consisting of bladder cancer cell line, colon cancer cell line and cervical cancer cell line. Most preferably, it may be a lung cancer cell line that is a liver cancer cell line or an identical respiratory cell line. If a medium animal such as a rabbit is used as a recipient of a cancer cell line, it is most preferable to use a liver cancer cell line VX2.

상기 종양세포가 폐암 환자로부터 분리된 폐암 세포인 경우, 환자 맞춤형 폐암 동물모델을 제조할 수 있는 것을 큰 특징으로 한다. 일반적으로 폐암 환자로부터 분리된 폐암 세포를 이용하여 동물모델에 주입하기 위해서는 폐암 환자로부터 분리한 폐암 세포를 계대 배양하는 과정이 필수적이였다. 허나 본 발명에서는 상기 폐암 환자로부터 분리된 폐암 세포를 직접 주입하기 때문에, 상기 동물의 폐에 이종이식된 폐암은 계대배양에 의한 영향을 받지 않아, 환자의 폐암과 거의 동일한 상태를 보여 줄 수 있다는 장점을 갖는다.When the tumor cells are lung cancer cells isolated from lung cancer patients, it is characterized in that the patient-specific lung cancer animal model can be prepared. In general, in order to inject animal models using lung cancer cells isolated from lung cancer patients, it was necessary to passaging the lung cancer cells isolated from lung cancer patients. However, in the present invention, since lung cancer cells isolated from the lung cancer patients are directly injected, lung cancers transplanted into the lungs of the animal are not affected by subcultures, and thus can show almost the same condition as the lung cancer of the patients. Has

또한, 상기 종양세포가 폐암 환자로부터 분리된 폐암 세포이고, 상기 폐암 세포, 특히 이종의 폐암 세포를 인간을 제외한 동물에 직접 투여하게 될 경우, 통상적인 기계적 분리 과정만 거친 단순한 폐암 세포의 주입만으로는 그 동물 내에서 암종이 발생하지 않으며, 발생하더라도 암의 병기가 매우 느리다는 단점이 존재하였다. 그러나 놀랍게도, 본 발명에 따르면 환자로부터 분리한 폐암 세포를 인간을 제외한 동물에 주사한 경우에도 그 동물 내에서 폐암을 5 내지 20일의 짧은 시간 안에 형성하고 있음을 확인하였다. 이는 CT 촬영장치를 비롯하여, 폐암 환자로부터 분리한 폐암 세포와 조영제를 포함하는 폐암 유발용액의 조합 때문에 본 발명의 방법이 성공적으로 실시된 것이라 볼 수 있다.In addition, when the tumor cells are lung cancer cells isolated from lung cancer patients, and when the lung cancer cells, in particular, heterogeneous lung cancer cells, are directly administered to animals other than humans, the injection of simple lung cancer cells undergoing a conventional mechanical separation process may There was a disadvantage that no carcinoma occurs in the animal, and even if it occurs, the cancer stage is very slow. Surprisingly, however, according to the present invention, when lung cancer cells isolated from a patient were injected into animals other than humans, lung cancer was formed in the animals within a short time of 5 to 20 days. This can be seen that the method of the present invention was successfully performed because of the combination of lung cancer cells isolated from a lung cancer patient, including a CT imaging device, and a lung cancer causing solution containing a contrast agent.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면 상기 종양세포는 특별한 제한이 있는 것은 아니지만 바람직하게는 환자로부터 분리된 폐암 조직을 잘게 분쇄한 후 이를 필터링하고, 그 후 원심분리하여 수득되는 것일 수 있다. 이러한 과정을 통해 상기 종양세포는 24-30 게이지의 바늘로 주사하여도 주사 바늘이 막히지 않고 폐암 세포를 이식하는 것이 가능하게 된다. 또한 종래 기술은 16-18 게이지인 바늘을 활용하기 때문에 종래 기술에서 사용한 동물모델인 토끼에 기흉 등의 부작용이 있어 바람직하지 않았으나, 본 발명의 경우 24-30 게이지의 바늘을 활용하여 소형 동물모델을 제조함에도 상기 종래 기술의 부작용이 발생하지 않아 매우 바람직하다. 또한 폐암 조직의 분쇄는 폐암 세포가 파괴되지 않을 정도로 최대한 잘게 분쇄하는 것이 바람직하다. According to a preferred embodiment of the present invention, the tumor cells are not particularly limited, but may be preferably obtained by pulverizing finely pulverized lung cancer tissue isolated from the patient and then filtering it, and then centrifuging. Through this process, even if the tumor cells are injected with a needle of 24-30 gauge, it is possible to transplant lung cancer cells without blocking the injection needle. In addition, since the conventional technique utilizes a needle of 16-18 gauge, the rabbit, which is an animal model used in the prior art, has side effects such as pneumothorax. However, in the case of the present invention, a small animal model is utilized by using a 24-30 gauge needle. It is very preferable that the side effects of the prior art do not occur even in manufacturing. In addition, the grinding of the lung cancer tissue is preferably crushed as fine as possible so that the lung cancer cells are not destroyed.

또한 본 발명의 바람직한 다른 구현예에 따르면 상기 폐암 세포는 초기(primary) 종양 세포 또는 구축된(established) 종양 세포일 수 있다.According to another preferred embodiment of the present invention, the lung cancer cells may be primary tumor cells or established tumor cells.

상기 이식되는 폐암 세포의 양은 일반적인 마우스를 기준으로 하여 1×10⁴ 내지 1×10⁷ 세포일 수 있다. 이러한 폐암 세포의 수가 10⁴ 개 미만이거나, 10⁷개를 초과하는 경우에는 폐암 동물모델의 이식 성공율이 감소할 수 있다.The amount of lung cancer cells to be transplanted may be 1 × 10 ⁴ to 1 × 10 ⁷ cells based on a typical mouse. If the number of these lung cancer cells is less than 10 ⁴ or more than 10 ⁷ cells, the transplant success rate of the lung cancer animal model may decrease.

상기 종양세포 및 증점제의 혼합액을 주사할 때, 사용되는 주사기의 바늘은 상기 CT 촬영 영상의 단면 위치에 그 단면과 평행하는 방향으로 주사하는 것이 바람직하다. When injecting the mixed solution of the tumor cells and the thickener, the needle of the syringe to be used is preferably injected in a direction parallel to the cross section at the cross section position of the CT image.

상술한 과정을 통해 얻어진 폐암 동물모델은 폐암 환자의 유전적 발병 요인을 정확하게 반영하여 환자의 개인적인 유전적 원인에 맞는 항암제를 스크리닝하는 용도로 사용될 수 있다. 폐암 세포의 특성상 개복수술과정을 통해 침습적으로 폐암세포를 폐에 이식하여 제조된 종래의 폐암 동물모델에 비해, 본 발명에 따른 폐암 동물세포는 주사기를 사용하여, 비침습적으로 폐에 폐암 세포를 직접적으로 이식하기 때문에, 종래 이종이식 폐암 동물모델에 비해 이식 성공륭이 높고, 부작용이 거의 없으며, 대형, 중형 동물모델 뿐만 아니라 소형 동물모델(예: 마우스)에도 높은 이식률을 달성할 수 있기 때문에, 인간에 적합하면서 환자의 개별적인 유전적 요인을 보다 정확하게 나타낼 수 있다.Lung cancer animal model obtained through the above-described process can be used for screening anti-cancer agents to suit the individual genetic causes of patients accurately reflect the genetic onset factors of lung cancer patients. Due to the characteristics of lung cancer cells, lung cancer animal cells according to the present invention are noninvasive to lung cancer cells directly in the lungs using a syringe, compared to conventional lung cancer animal models manufactured by invading lung cancer cells into the lungs through laparotomy. As a result, the transplantation rate is higher than that of conventional xenograft lung cancer animal models, and there are few side effects, and high transplant rates can be achieved not only in large and medium animal models, but also in small animal models (eg, mice). It is suitable for humans and can more accurately represent individual genetic factors of patients.

상기 증점제로 인해 보다 정확한 위치에 종양 세포를 이식하여 고정하는 것이 가능하게 된다. 이러한 증점제는 바람직하게는 상업용으로 활용되는 메트리젤(Metrigel, 제품명: BD MatrigelTM Basement Membrane Matrix, 5ml vial) 또는 Cultrex Basemetn Membrane Extract(BME) 일 수 있다. The thickener allows for implantation and fixation of tumor cells in more accurate locations. Such thickeners may preferably be commercially available Metrigel (trade name: BD Matrigel ™ Basement Membrane Matrix, 5 ml vial) or Cultrex Basemetn Membrane Extract (BME).

상기 종양세포 및 증점제 혼합액은 상기 증점제 100 중량부에 대하여 종양세포가 1 내지 500 중량부로 포함되는 것일 수 있는데, 바람직하게는 50 내지 350 중량부일 수 있다. 상기 종양세포 및 증점제 혼합액의 혼합 중량 비율이 상기 범위를 만족하여야 상기 종양세포 및 증점제 혼합액의 점도가 3-25 cps, 바람직하게는 5-15 cps를 조건을 충족시킬 수 있다.The tumor cell and the thickener mixture may be one containing from 1 to 500 parts by weight of the tumor cells with respect to 100 parts by weight of the thickener, preferably 50 to 350 parts by weight. When the weight ratio of the mixture of the tumor cells and the thickener mixture satisfies the above range, the viscosity of the tumor cells and the thickener mixture may be 3-25 cps, preferably 5-15 cps.

상기 증점제의 점도는 5-30 cps(바람직하게는 10-20 cps) 일 수 있으며, 이러한 증점제가 상술한 중량부대로 종양세포와 혼합됨으로써, 종양세포 및 증점제 혼합액의 점도가 3-25 cps(바람직하게는 5-15 cps)에 해당할 수 있다. 만일 종양세포 및 증점제 혼합액의 점도가 3 cps 미만이거나, 25 cps를 초과할 경우 24 내지 30 게이지의 바늘을 통해 동물의 폐 위치에 주입하는데 용이하게 주입할 수 있고, 기흉이 생기는 등의 문제점이 발생할 수 있다.The viscosity of the thickener may be 5-30 cps (preferably 10-20 cps), and the thickener is mixed with the tumor cells in the above-described weight parts, such that the viscosity of the tumor cells and the thickener mixture is 3-25 cps (preferably). Preferably 5-15 cps). If the viscosity of the tumor cells and thickener mixture is less than 3 cps or more than 25 cps, it may be easily injected into the lung position of the animal through a needle of 24 to 30 gauge, and problems such as pneumothorax may occur. Can be.

상기 종양세포 및 증점제 혼합액은 조영제를 더 포함하는 것일 수 있고, 상기 조영제로는 가도리니움(gadolinium)-DPTA, Gd-DO3A-부트롤(butrol), 바륨, 디아트리조에이트(diatrizoate), 에티오다이즈드 오일(ethiodized oil), 구연산갈륨(gallium citrate), 아이오카민산(iocarmic acid), 아이오세타민산(iocetamic acid), 아이다마이드(iodamide), 아이오디파마이드(iodipamide), 아이오도자민산(iodoxamic acid), 아이오글라미드(iogulamide), 아이오딕사놀(iodixanol), 아이헥솔(iohexol), 아이오파미돌(iopamidol), 아이오파논산(iopanoic acid), 아이오프로에민산(ioproemic acid), 아이오프로마이드(iopromide), 아이오세파민산(iosefamic acid), 아이오세린산(ioseric acid), 아이오술아미드 메글루민(iosulamide meglumine), 아이오세메트산(iosemetic acid), 아이오타술(iotasul), 아이오테트르산(iotetric acid), 아이오타라민산(iothalamic acid), 아이오트록시산(iotroxic acid), 아이오자갈르산(ioxaglic acid), 아이오시트리아온산(ioxitriaoic acid), 아이포데이트(ipodate), 메글루민(meglumine), 메트리자마이드(metrizamide), 메트리조에이트(metrizoate), 프로필리돈(propyliodone) 및 탈로오스 클로라이드(thallous chloride)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나이상을 사용할 수 있다. 보다 바람직하게는 요오드화 조영제인 아이헥솔(iohexol), 아이오자갈르산(ioxaglic acid) 및 에티오다이즈드 오일(ethiodized oil)일 수 있다.The tumor cell and thickener mixture may further include a contrast agent, and the contrast agent may include gadolinium-DPTA, Gd-DO3A-butrol, barium, diatrizoate, eti Ethiodized oil, gallium citrate, iocarmic acid, iocetamic acid, iodamide, iodipamide, iodoxamic acid acid, iogulamide, iodixanol, iohexol, iopamidol, iopanoic acid, ioproemic acid, iopromide (iopromide), iosefamic acid, ioseric acid, iosulamide meglumine, iosemetic acid, iotasul, iotetric acid (iotetric acid), iothalamic acid, children Iotroxic acid, ioxaglic acid, ioxitriaoic acid, ipodate, meglumine, meglumine, metrizamide, metrizoate , Any one or more selected from the group consisting of propyliodone and thalous chloride can be used. More preferably, they may be iohexol, ioxaglic acid and ethiodized oil, which are iodinated contrast agents.

상술한 조영제를 사용할 경우, 실시간 CT를 통해 인간을 제외한 동물의 폐 위치를 정확히 확인할 수 있으므로, 중형 동물을 비롯하여 소형 동물에 대해서도 정위적으로 폐 종양이 발생한 폐암 동물모델의 제조가 가능하다.In the case of using the above-mentioned contrast agent, since the lung location of animals except humans can be accurately identified through real-time CT, it is possible to manufacture a lung cancer animal model in which lung tumors are generated stereotactically even for small animals including medium-sized animals.

종래기술에서는 일반적으로 암 세포를 이식한 암 동물모델을 제조할 시, 개복수술을 통해 암 세포를 직접 해당 부위에 이식하거나, 계대 배양 또는 전 배양을 통해 배양된 암 세포를 주입하는 방식으로 이루어져왔다. 이러한 방법은 이식의 정확성 및 성공률이 대단히 낮을 뿐만 아니라 정위적인 이식이 어렵고, 폐암 발생에 인위적 조작이 추가되기 때문에, 이식된 암 세포가 유래한 환자의 특성을 그대로 반영하지 못하는 문제를 가져올 수 있다.In the prior art, generally, when manufacturing a cancer animal model in which cancer cells are transplanted, cancer cells are directly transplanted to the corresponding site through laparotomy, or cultured cancer cells are injected by passage or preculture. . This method is not only very low accuracy and success rate of transplantation, but also difficult to stereotactic transplantation, and artificial manipulation is added to the development of lung cancer, it can bring a problem that does not reflect the characteristics of the patient from which the transplanted cancer cells are derived.

이러한 문제점을 해결하고, 이식의 성공률 및 정확도를 높이기 위해, 실시간 CT 촬영 장치와 주사기를 사용함과 동시에 상기 종양세포 및 증점제 혼합액에 조영제(특히 요오드화 조영제)를 포함하였다. 상기 조영제 특히 요오드화 조영제를 사용할 경우 종래 기술과는 달리 주입되는 폐암 세포의 퍼짐 현상이 발생하지 않기 때문에 정확한 이식이 가능하다는 장점이 있다.In order to solve this problem and to improve the success rate and accuracy of transplantation, a contrast agent (particularly iodide contrast agent) was included in the tumor cell and thickener mixture while simultaneously using a real-time CT imaging device and a syringe. When the contrast agent, in particular, the iodide contrast agent is used, there is an advantage that accurate transplantation is possible since the spreading of the injected lung cancer cells does not occur unlike the prior art.

이와 같이 확립된 폐암 동물모델의 제조방법은 환자로부터 분리된 폐암 세포를 단순 기계적 분리 처리만 거친 후, 동물의 폐에 직접적으로 정확하게 이식할 수 있고, 이러한 간단한 일련의 이식 과정만으로도 동물의 폐에 환자의 폐암 세포를 높은 성공확률로 이식할 수 있을 뿐만 아니라, 동물 내에서 5 내지 20일 이내에 폐암의 발병이 확인된다. 따라서, 환자의 폐암 세포에 대한 치료 또는 예방 효능을 검증할 수 있는 동물모델을 간단한 과정과 빠른 시간 내에 제시할 수 있다. The method for producing an animal model of lung cancer thus established can be directly and accurately transplanted into the lungs of an animal after undergoing simple mechanical separation treatment. Not only can the lung cancer cells be transplanted with a high probability of success, but the onset of lung cancer is confirmed within 5 to 20 days in animals. Therefore, an animal model capable of verifying the therapeutic or prophylactic efficacy of lung cancer cells of a patient can be presented in a simple process and in a short time.

본 발명에 따른 폐암 동물모델 제조방법은 동물모델 제조가 까다로운 소형 동물에 대해서도 높은 정확성과 성공률로 정위적 환자 맞춤형 폐암 동물모델의 제조가 가능하다.Lung cancer animal model manufacturing method according to the present invention can produce a stereotactic patient-specific lung cancer animal model with high accuracy and success rate even for small animals that are difficult to manufacture animal model.

상기 요오드화 조영제 중에서 가장 바람직하게 에티오다이즈드 오일(ethiodized oil)을 사용할 수 있다. 상기 에티오디자이드 오일은 포피시드 오일(poppyseed oil)의 지방산(fatty acid) 에틸 에스테르(ethyl esters)를 포함하는 아이오딘으로 구성될 수 있다. 또한 상기 에티오디자이드 오일은 더욱 바람직하게는 상업용으로 활용되는 리피오돌(Lipiodol, 종래에는 눈물샘 누관이 막혔는지를 확인하는데 사용되거나, 또는 간암 등에 색전 효과가 있는 것으로 알려짐)인 것이 이식의 정확성 및 성공률을 보다 높일 수 있으면서 쥐와 같은 소형 동물모델에 보다 적합하게 적용될 수 있어 바람직하다. 한편, 종래 기술처럼 수용성 분산제(예: FDG)를 사용하게 되면, 상기 문제점들 이외에도 이식의 정확성 및 성공률을 조금이나마 높이기 위해 사후 추가되는 공정이 많아져서 번거롭게 되어 바람직하지 않다. Among the iodide contrast agents, most preferably, an ethiodized oil may be used. The thiothiodeide oil may be composed of iodine including fatty acid ethyl esters of poppyseed oil. In addition, the thiothioid oil is more preferably used commercially Lipiodol (used to check whether the lacrimal fistula is blocked, or known to have an embolic effect on liver cancer, etc.) to improve the accuracy and success rate of transplantation It is desirable because it can be more suitably applied to small animal models such as rats. On the other hand, using a water-soluble dispersant (for example, FDG) as in the prior art, in addition to the above problems, it is cumbersome to add a lot of post-addition process in order to increase the accuracy and success rate of the transplant slightly.

상기 조영제는 상기 종양세포 및 증점제 혼합액 중에서 종양세포 100 중량부를 기준으로 조영제를 1-200 중량부로 포함될 수 있다. 만약 상기 조영제가 상기 종양세포 및 증점제 혼합액 중에서 종양세포 100 중량부를 기준으로 1 중량부 미만으로 포함될 경우 CT 상에서 측정에 문제가 발생할 수 있고, 200 중량부를 초과할 경우 조영제에 의해 혼합액의 점도가 낮아져 종양 형성이 제대로 이루어지지 않거나, 폐에 점착되지 못하고 퍼지게 되는 문제가 발생한다.
The contrast agent may include 1-200 parts by weight of the contrast agent based on 100 parts by weight of the tumor cells in the mixture of the tumor cells and the thickener. If the contrast agent is less than 1 part by weight based on 100 parts by weight of the tumor cells in the mixture of the tumor cells and thickeners may cause a problem in the measurement on the CT, if the content exceeds 200 parts by weight the viscosity of the mixture is lowered by the contrast agent tumor It does not form properly, or stick to the lungs, the problem occurs that spreads.

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 종양세포를 동물에 주사할 때, 주사기가 사용될 수 있는데 사용되는 주사기로는 주사 바늘과 주사기가 직접적으로 결합되어 있는 통상적인 주사기라면 특별히 이제 제한되지 않으나, 동물모델 개체의 크기에 상관없이 정확한 삽입과 정량 주입이 가능하고 시야 확보가 용이한 개량 주사기를 사용하는 것이 더욱 바람직하다.In one embodiment of the present invention, when injecting the tumor cells in the animal, a syringe may be used as the syringe used is a conventional syringe which is directly coupled to the injection needle and the syringe is not particularly limited, but the animal Regardless of the size of the model individual, it is more desirable to use an improved syringe that can be accurately inserted and metered and has a clear field of view.

상기 개량 주사기는 주사기의 주입구(100)와 24-30 게이지 바늘(200) 사이에, 채널(300)을 가지고 있고, 보다 구체적으로 상기 채널(300)은 주사기의 주입구(100)와 24-30 게이지 바늘(200)을 연결하여, 주사기로부터 공급되는 종양세포 및 증점제 혼합액을 상기 동물모델의 폐로 투여될 수 있도록, 상기 주사 바늘로 안내하기 위해 상기 주사기의 주입구에 결합되는 것을 특징으로 한다(하기 도 5 참조).The improved syringe has a channel 300, between the inlet 100 of the syringe and the 24-30 gauge needle 200, more specifically the channel 300 is the inlet 100 and 24-30 gauge of the syringe. By connecting the needle 200, the tumor cells and the thickener mixture supplied from the syringe is characterized in that it is coupled to the injection port of the syringe to guide the injection needle so that it can be administered to the lung of the animal model (Fig. 5 below) Reference).

상기 채널(300)은 외경(O.D)에 대한 내경(I.D)의 비율(I.D/O.D)이 0.2 내지 1, 바람직하게는 0.3 내지 0.5이다. 상기 범위를 벗어날 경우, 내구성이나 유연성이 약해 주입되는 용액의 압력에 버티질 못하고 찢어지거나 주사기 바늘과 쉽게 분리되는 등의 다양한 문제가 발생할 수 있다.The channel 300 has a ratio (I.D / O.D) of the inner diameter (I.D) to the outer diameter (O.D) of 0.2 to 1, preferably 0.3 to 0.5. If the range is out of the above range, various problems may occur such that the durability or flexibility is weak, so as not to endure the pressure of the solution to be injected, torn or easily separated from the syringe needle.

또한, 가장 본 발명에서 사용되는 주사기의 바늘(24-30 게이지)에 빈틈없이 들어맞는 상기 채널(300)의 사이즈는 외경(O.D)이 0.5 내지 0.8 ㎜, 내경(I.D)은 0.25 ㎜일 수 있다. 만약 상기 채널(300)의 내경(I.D)이 0.25 ㎜ 미만일 경우, 채널(300)이 주사기의 바늘보다 얇아지기 때문에 상기 채널과 주사기 바늘의 결합이 제대로 이루어지지 않는 문제가 발생하고, 0.25 ㎜를 초과할 경우 24-30 게이지 바늘이 고정되지 않아 주입되는 혼합액이 외부로 새어나갈 위험이 있다.In addition, the size of the channel 300 that most closely fits the needle (24-30 gauge) of the syringe used in the present invention may have an outer diameter (OD) of 0.5 to 0.8 mm and an inner diameter (ID) of 0.25 mm. . If the inner diameter ID of the channel 300 is less than 0.25 mm, the channel 300 becomes thinner than the needle of the syringe, causing a problem in that the coupling between the channel and the syringe needle is not properly performed, and exceeding 0.25 mm. In this case, the 24-30 gauge needle is not fixed, and there is a risk that the injected liquid will leak out.

또한 재질은 세포 조직에 독성을 가지지 않는 물질이면 특별이 이에 제한되지 않으나, 바람직하게는 폴리에틸렌 재질일 수 있다. In addition, the material is not particularly limited as long as the material does not have toxicity to cellular tissues, but preferably, may be polyethylene material.

한편, 상기 제조방법에 의하여 제조된 폐암 동물모델은 폐암 유발용액을 주사한 후 1-4 주(더욱 바람직하게는 2-3 주)의 기간이 경과한 후 상기 동물모델을 이용하여 항암제를 스크리닝하거나 폐암 환자 맞춤형 항암제 선별에 사용하는 것일 수 있다. 이는 종래 기술에 비해 현저히 빠른 속도로 항암제 스크리닝 또는 환자 맞춤형 항암제 선별 과정에 사용할 수 있는 동물모델이 된다. 종래 기술에 따른 동물모델은 주사 후 항암제 스크리닝 과정 등에 제공되는데 3-4 달 정도가 소요되어 본 발명에 의하는 경우보다 항암제 스크리닝 과정에 투입되는데 보다 장기간이 소요된다. 또한 본 발명은 종래 기술에 비해 폐에 고형암의 형태가 더욱 잘 나타나게 되어 바람직하다. On the other hand, the lung cancer animal model prepared by the production method after the injection of lung cancer-induced solution 1-4 weeks (more preferably 2-3 weeks) after a period of screening the anticancer drug using the animal model or It may be used for the selection of anticancer drugs tailored to patients with lung cancer. This is an animal model that can be used for anticancer screening or patient-specific anticancer drug screening at a significantly faster rate than the prior art. The animal model according to the prior art is provided for the anticancer drug screening process, etc. after injection takes about 3-4 months, it takes a longer time to enter the anticancer drug screening process than the case according to the present invention. In addition, the present invention is preferred because the form of solid cancer in the lung is better than in the prior art.

또한 본 발명에 따른 폐암 동물모델에서는 폐암 병변 형성이 5 내지 20일 이내로 신속하게 진행되기 때문에, 환자로부터 분리한 폐암 세포를 간단한 처리과정을 통해 동물에 주입한 후, 짧은 시기 이내에 약효 평가를 실시할 수 있다는 장점을 갖는다. 또한 본 발명에 따른 폐암 동물모델은 동일한 방법에 의해 제조될 경우, 재현성이 우수하다는 점을 고려한다면 본 발명에 관한 폐암 동물모델 특히 환자 맞춤형 동물모델에 있어서의 우수성이 인정된다 할 것이다.In addition, in the lung cancer animal model according to the present invention, since lung cancer lesion formation proceeds rapidly within 5 to 20 days, the lung cancer cells isolated from the patient are injected into the animal through a simple treatment, and the drug efficacy can be evaluated within a short time. Has the advantage that it can. In addition, when the lung cancer animal model according to the present invention is produced by the same method, considering that the reproducibility is excellent, it will be recognized that the superiority in the lung cancer animal model, particularly patient-specific animal model according to the present invention.

한편, 상기 동물은 특별한 제한 없이 소형(예: 마우스, 래트), 중형(토끼, 기니피그) 또는 대형(돼지, 개) 동물모델이 모두 포함될 수 있다. 다만, 상기 중형 또는 대형 동물모델은 외과용 동물모델로 바람직할 수 있으며, 상기 소형 동물모델로는 면역 체계가 제거된 누드 마우스 또는 스키드 마우스가 환자 맞춤형 폐암 동물모델 등으로 제공되는데 바람직하다.
On the other hand, the animal may include any small (eg mouse, rat), medium (rabbit, guinea pig) or large (pig, dog) animal model without particular limitation. However, the medium or large animal model may be a surgical animal model, and the small animal model is preferably provided with a nude mouse or a skid mouse whose immune system has been removed as a patient-specific lung cancer animal model.

본 발명에 따른 폐암 동물모델은 앞서 설명한 바와 같이 환자와 동일한 형태 및 유전정보를 갖는 이종 이식 동물모델로, 이를 이용하여 새로운 항암제를 다양한 조건에서 시험할 수 있으며, 짧은 시간에 여러 항암제의 효능을 분석하는데 유용하게 사용될 수 있고, 환자에게 가장 적절한 항암제를 선별할 수 있으므로, 환자의 치료기간 및 치료비용을 절감할 수 있다.
Lung cancer animal model according to the present invention is a xenograft animal model having the same morphology and genetic information as the patient as described above, using this can test a new anticancer agent under various conditions, and analyze the efficacy of several anticancer agents in a short time It can be usefully used to select the most appropriate anticancer agent for the patient, thereby reducing the treatment period and treatment cost of the patient.

본 발명의 다른 측면은 폐암 동물모델 제조용 키트에 있어서, 증점제가 보관된 바이알(10); 및 24-30 게이지 바늘을 갖는 주사기(20);를 포함하는 폐암 동물모델 제조용 키트에 관한 것이다. 이에 대한 구체적인 구성은 도 8에 도시하였고, 상기 키트를 사용하여 폐암 동물모델을 제조하는 일 예는 도 9에 나타내었다.Another aspect of the present invention is a kit for producing a lung cancer animal model, a vial containing a thickener (10); And a syringe 20 having a 24-30 gauge needle. A detailed configuration thereof is illustrated in FIG. 8, and an example of preparing a lung cancer animal model using the kit is illustrated in FIG. 9.

본 발명에서는 언제 어디서나 종양세포를 채취하여, 소형, 중형 등의 어떠한 동물에나 적용할 수 있도록, 증점제가 보관된 바이알과 24-30 게이지 바늘을 갖는 주사기로 구성된 폐암 동물모델 키트를 제공하고자 한다. 폐암 환자로부터 분리한 폐암 세포(100 ㎛ 미만의 세포 크기를 가짐)를 본 발명의 증점제가 보관된 바이알과 24-30 게이지 바늘을 갖는 주사기로 구성된 키트에 적용한 폐암 동물모델 제조 시험에서 모두 같은 결과를 나타내었다.The present invention is to provide a lung cancer animal model kit consisting of a syringe containing a vial and a 24-30 gauge needle, the thickener is stored so that anytime, anywhere tumor cells can be applied to any animal, such as small, medium, and the like. Lung cancer cells isolated from lung cancer patients (having a cell size of less than 100 μm) were subjected to the same results in a lung cancer animal model preparation test applied to a kit consisting of a vial containing the thickener of the present invention and a syringe with a 24-30 gauge needle. Indicated.

이를 통해, 채취한 종양세포 특히, 폐암 환자로부터 분리한 폐암 세포를 이용하여 바로 환자 맞춤형 폐암 동물 모델세포를 제조할 수 있다는 것을 알 수 있었다. Through this, it was found that the patient-specific lung cancer animal model cells could be directly prepared using the collected tumor cells, particularly lung cancer cells isolated from lung cancer patients.

상기 증점제로 인해 보다 정확한 위치에 종양 세포를 이식하여 고정하는 것이 가능하게 된다. 이러한 증점제는 바람직하게는 상업용으로 활용되는 메트리젤(Metrigel, 제품명: BD MatrigelTM Basement Membrane Matrix, 5ml vial) 또는 Cultrex Basemetn Membrane Extract(BME) 일 수 있다.The thickener allows for implantation and fixation of tumor cells in more accurate locations. Such thickeners may preferably be commercially available Metrigel (trade name: BD Matrigel ™ Basement Membrane Matrix, 5 ml vial) or Cultrex Basemetn Membrane Extract (BME).

상기 증점제의 점도는 5-30 cps(바람직하게는 10-20 cps)인 것이 바람직한데, 상기 증점제의 점도가 상기 범위 미만이거나 초과할 경우, 추후 종양세포가 혼합될 경우 최종 혼합액의 점도가 3-25 cps의 범위를 벗어나, 24 내지 30 게이지의 바늘을 통해 동물의 폐 위치에 주입하는데 용이하게 주입할 수 있고, 기흉이 생기는 등의 문제점이 발생할 수 있다.It is preferable that the viscosity of the thickener is 5-30 cps (preferably 10-20 cps). If the viscosity of the thickener is less than or above the above range, the viscosity of the final mixture is 3- when the tumor cells are mixed later. Outside the range of 25 cps, it can be easily injected into the lung position of the animal through a needle of 24 to 30 gauge, problems such as pneumothorax may occur.

상기 증점제는 조영제를 더 포함할 수 있다. 상기 조영제는 상기 증점제와 별도의 바이알에 보관된 상태로 키트를 구성하거나 상기 증점제와 하나의 바이알에 혼합되어 있는 상태로 키트를 구성할 수 있다. 바람직하게는 상기 조영제는 상기 증점제와 하나의 바이알에 혼합된 상태로 보관하는 것일 수 있다.The thickener may further comprise a contrast agent. The contrast agent may be configured in a kit stored in a vial separate from the thickener or a kit in a state in which the thickener is mixed with one vial. Preferably, the contrast agent may be stored in a mixed state with the thickener and one vial.

상기 증점제와 상기 조영제를 하나의 바이알에 혼합된 상태로 보관함하면, 채취한 종양세포를 혼합하고 주사기로 이동시키면서 나타나는 문제점을 차단할 수 있다. 즉 채취한 종양세포를 상기 증점제와 상기 조영제에 각각 혼합하는 동안의 오염이나 세균 감염을 완전히 차단할 수 있다. 또한 채취한 종양세포를 1차 혼합 후 바로 동물에 적용할 수 있어 과정 상의 간소화를 통해 환자 맞춤형 폐암 동물모델 제조를 용이하게 한다.When the thickener and the contrast agent are stored in a single vial, the problems caused by mixing and transferring the collected tumor cells with a syringe can be prevented. That is, contamination or bacterial infection during mixing of the collected tumor cells with the thickener and the contrast agent can be completely blocked. In addition, the collected tumor cells can be applied to animals immediately after the first mixing, thereby facilitating the manufacture of a customized lung cancer animal model through a simplified process.

상기 조영제로는 가도리니움(gadolinium)-DPTA, Gd-DO3A-부트롤(butrol), 바륨, 디아트리조에이트(diatrizoate), 에티오다이즈드 오일(ethiodized oil), 구연산갈륨(gallium citrate), 아이오카민산(iocarmic acid), 아이오세타민산(iocetamic acid), 아이다마이드(iodamide), 아이오디파마이드(iodipamide), 아이오도자민산(iodoxamic acid), 아이오글라미드(iogulamide), 아이오딕사놀(iodixanol), 아이헥솔(iohexol), 아이오파미돌(iopamidol), 아이오파논산(iopanoic acid), 아이오프로에민산(ioproemic acid), 아이오프로마이드(iopromide), 아이오세파민산(iosefamic acid), 아이오세린산(ioseric acid), 아이오술아미드 메글루민(iosulamide meglumine), 아이오세메트산(iosemetic acid), 아이오타술(iotasul), 아이오테트르산(iotetric acid), 아이오타라민산(iothalamic acid), 아이오트록시산(iotroxic acid), 아이오자갈르산(ioxaglic acid), 아이오시트리아온산(ioxitriaoic acid), 아이포데이트(ipodate), 메글루민(meglumine), 메트리자마이드(metrizamide), 메트리조에이트(metrizoate), 프로필리돈(propyliodone) 및 탈로오스 클로라이드(thallous chloride)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나이상을 사용할 수 있다. 보다 바람직하게는 요오드화 조영제인 아이헥솔(iohexol), 아이오자갈르산(ioxaglic acid) 및 에티오다이즈드 오일(ethiodized oil)일 수 있다.The contrast agent may be gadolinium-DPTA, Gd-DO3A-butrol, barium, diatrizoate, ethiodized oil, gallium citrate, Iocarmic acid, iocetamic acid, iodamide, iodipamide, iodoxamic acid, iogulamide, iodixanol , Iohexol, iopamidol, iopanoic acid, ioproemic acid, iopromide, iosefamic acid, ioserinic acid ( ioseric acid, iosulamide meglumine, iosemetic acid, iotasul, iotetric acid, iothalamic acid, iohydroxy Acid (iotroxic acid), ioxaglic acid, iocition From the group consisting of ioxitriaoic acid, ipodate, meglumine, meglumine, metrizamide, metrizoate, propyliodone and thalous chloride Any one or more of these may be used. More preferably, they may be iohexol, ioxaglic acid and ethiodized oil, which are iodinated contrast agents.

상술한 조영제를 사용할 경우, 실시간 CT를 통해 동물의 정확한 폐 위치를 확인하면서 주입할 수 있으므로, 중형 동물을 비롯하여 소형 동물에 대해서도 정위적으로 폐 종양이 발생한 폐암 동물모델을 제조할 수 있게되는 장점을 갖게된다.When using the above-mentioned contrast agent, it can be injected while confirming the exact lung position of the animal through real-time CT, it is possible to manufacture an animal model of lung cancer in which lung tumors are generated stereotactically for small animals as well as medium-sized animals. Will have

본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 주사기(20)는 24-30 게이지의 주사 바늘과 주사기가 직접적으로 결합되어 있는 통상적인 주사기라면 특별히 이제 제한되지 않으나, 동물모델 개체의 크기에 상관없이 정확한 삽입과 정량 주입이 가능하고 시야 확보가 용이한 개량 주사기를 사용하는 것이 더욱 바람직하다.In one embodiment of the present invention, the syringe 20 is not particularly limited as long as it is a conventional syringe in which the syringe and the syringe of the 24-30 gauge are directly coupled, but it is precisely inserted regardless of the size of the animal model. It is more preferable to use an improved syringe which is capable of over-dosing and easily securing the field of view.

본 발명의 또 다른 측면은 아래 단계를 포함하는 폐암 동물모델을 이용하여 항암제의 치료 효능을 분석하는 방법에 관한 것이다.Another aspect of the invention relates to a method for analyzing the therapeutic efficacy of an anticancer agent using a lung cancer animal model comprising the following steps.

1) 상기 폐암 동물모델 제조방법을 통해 제조된 폐암 동물모델에 항암제를 투여하는 단계;1) administering an anticancer agent to the lung cancer animal model prepared by the lung cancer animal model manufacturing method;

2) 상기 1) 단계의 동물에서 폐암 세포의 성장 또는 전이를 측정하여 항암제의 항암 효과를 확인하는 단계.2) confirming the anticancer effect of the anticancer agent by measuring the growth or metastasis of lung cancer cells in the animal of step 1).

우선, 1) 상기 폐암 동물모델에 항암제를 투여한다. 상기 폐암 동물모델은 앞서 설명한 폐암 동물모델 제조방법으로 제조된 것일 수 있다. First, 1) an anticancer agent is administered to the lung cancer animal model. The lung cancer animal model may be manufactured by the lung cancer animal model manufacturing method described above.

상기 단계에서 폐암이 유발된 동물의 정맥에 항암제를 투여할 수 있고, 일예로 상기 페암이 유발된 동물이 마우스인 경우 꼬리 정맥에 항암제를 투여할 수 있으나, 특별히 이에 한정되지 않는다.In this step, an anticancer agent may be administered to the vein of the animal in which the lung cancer is induced. For example, when the animal having the lung cancer is a mouse, the anticancer agent may be administered to the tail vein, but is not particularly limited thereto.

다음 2) 상기 1) 단계의 동물에서 폐암 세포의 성장 또는 전이를 측정하여 항암제의 항암 효과를 확인한다. 폐암 관련 유전자의 발현 정도 또는 미세 혈관 밀도를 측정하여 항암제의 치료 효능을 분석할 수 있고, 폐암 세포의 성장 또는 전이를 육안으로 관찰하여 치료 효능을 분석할 수 있다. 이때, 폐암 세포로의 성장을 관찰하기 위하여 캘리퍼스와 같은 도구를 이용하여 측정할 수 있다.Next 2) to determine the anticancer effect of the anticancer agent by measuring the growth or metastasis of lung cancer cells in the animal of step 1). The treatment efficacy of the anticancer agent may be analyzed by measuring the expression level or the microvascular density of lung cancer-related genes, and the treatment efficacy may be analyzed by visually observing the growth or metastasis of lung cancer cells. At this time, it can be measured using a tool such as a caliper to observe the growth into lung cancer cells.

구체적으로 상기 폐암 동물모델에서 폐암 세포의 추가적인 성장이 억제되었거나, 전이가 억제된 경우에는, 사용한 항암제에 대해 항암 효과가 있다고 확인할 수 있다. 상기 폐암 세포의 성장을 측정할 경우, 항암제의 치료 효능을 수치화하여 정량적으로 파악할 수 있다. 통상 항암제 투여 종료 후에 폐암 세포의 크기를 측정하고, 그것을 항암제 비투여군 또는 항암제 투여 전의 폐암 세포의 크기와 비교하는 방법을 이용하여 항암제의 치료 효과를 정량화 할 수 있다. 또한, 본 발명에 의하면 상기와 같이 폐암 세포의 크기를 계측하는 것 이외에도, ① 항암제 투여 회수를 일정하게 하여 치료까지의 시간을 측정한다, ② 치유될 때까지 항암제를 일정 간격으로 투여한 회수를 구하는 등과 같은 방법에 의해서도 항암제 효과의 강도를 평가할 수 있다.Specifically, in the lung cancer animal model, when further growth of lung cancer cells is inhibited or metastasis is inhibited, it can be confirmed that there is an anticancer effect on the used anticancer agent. When measuring the growth of the lung cancer cells, the therapeutic efficacy of the anticancer drugs can be quantified to grasp quantitatively. Usually, the therapeutic effect of an anticancer agent can be quantified using the method of measuring the size of lung cancer cell after completion | finish of anticancer agent, and comparing it with the size of lung cancer cell before an anticancer agent administration or anticancer agent administration. In addition, according to the present invention, in addition to measuring the size of the lung cancer cells as described above, ① the number of times the anticancer drug administration is constant to measure the time until treatment, ② to obtain the number of times the anticancer drugs are administered at regular intervals until healed The strength of the anticancer effect can also be evaluated by such a method.

항암제를 임상 수준에서 실시하기 위하여, 우선 동물모델에서 상기 항암제의 효능과 안정성이 확인되어야 하는데, 본 발명은 이러한 동물모델-기초 시험을 환자별로 가능하게 한다. 본 발명에 따른 상기 폐암 동물모델은 폐암 환자로부터 분리한 폐암 세포의 이종이식을 통해 제조된 것으로서, 환자에 따라 적절히 가장 적절한 후보자 항암제를 선별할 수 있다.In order to perform an anticancer agent at the clinical level, the efficacy and stability of the anticancer agent should first be confirmed in an animal model, and the present invention enables such animal model-based testing on a patient-by-patient basis. The lung cancer animal model according to the present invention is prepared through xenograft of lung cancer cells isolated from lung cancer patients, and can appropriately select the most suitable candidate anticancer agent according to the patient.

평가 대상이 되는 항암제는 폐암 동물모델에 국소적으로 투여될 수 있으나, 특별히 이에 제한되지 않는다. 즉 어떠한 투여 경로의 항암제도 선별할 수 있다. 비경구적 및 경구적으로 투여되는 함암제도 선별할 수 있다. 항암제의 투여량은 약제의 성질, 투여 대상의 종류, 연령이나 체중 등의 조건을 기초로 종합적으로 판단하여, 최적의 양을 적절하게 결정해야 하며 특별히 한정되지 않는다.The anticancer agent to be evaluated may be locally administered to a lung cancer animal model, but is not particularly limited thereto. That is, anticancer agents of any route of administration can be selected. Cancer drugs administered parenterally and orally may also be selected. The dosage of the anticancer agent should be determined comprehensively based on the properties of the drug, the type of the subject to be administered, the conditions such as age and weight, and the optimum amount should be appropriately determined.

투여 시기나 투여 회수 등의 투여 조건은 약제의 성질, 시험 및 평가 목적 등에 따라 적절하게 최적이 되도록 설정하면 되며 특별히 제한되지 않는다. 예컨대, 투여 시기에 대해서는 폐암 동물모델을 제작한 직후 또는 환자와 동일한 상태까지 병변을 발생시킨 직후부터 30분 마다 수회 투여한 후, 그 다음 1시간 마다 수회 투여하고, 그때마다 증상의 변화를 관찰, 평가하는 방법이 많이 이용된다. 투여 회수에 대해서는 항암제의 성질에 따라 다르고, 1회 이상 수회가 될 수도 있다.
The administration conditions such as the administration timing and the number of administrations may be set to be optimally appropriate according to the nature of the drug, the purpose of the test and evaluation, and the like, and are not particularly limited. For example, about the timing of administration, several times are administered every 30 minutes immediately after the lung cancer animal model is produced or after the lesion is developed to the same state as the patient, and then several times every hour, and then the change of symptoms is observed. Many methods of evaluation are used. The number of doses depends on the nature of the anticancer agent, and may be one or more times.

본 발명의 또 다른 측면은 하기 단계를 포함하는 폐암 동물모델을 이용하여 항암제를 스크리닝 방법에 관한 것이다. Another aspect of the invention relates to a method for screening an anticancer agent using a lung cancer animal model comprising the following steps.

1) 상기 폐암 동물모델 제조방법을 통해 제조된 폐암 동물모델에 항암제 후보 물질을 투여하는 단계; 및1) administering an anticancer drug candidate to a lung cancer animal model prepared by the lung cancer animal model manufacturing method; And

2) 상기 1) 단계의 폐암 동물모델에서 폐암 세포의 성장 또는 전이를 측정하여 항암제 후보물질의 치료 효능을 결정하는 단계.2) determining the therapeutic efficacy of the anticancer drug candidate by measuring the growth or metastasis of lung cancer cells in the lung cancer animal model of step 1).

상기 1) 단계는 폐암이 유발된 동물에 항암제 후보물질을 투여하는 단계이다. 상기 폐암 동물모델은 앞서 설명한 폐암 동물모델 제조방법으로 제조된 것일 수 있다. Step 1) is a step of administering an anticancer drug candidate to the animal causing lung cancer. The lung cancer animal model may be manufactured by the lung cancer animal model manufacturing method described above.

폐암이 유발된 동물의 정맥에 항암제를 투여할 수 있고, 일예로 상기 페암이 유발된 동물이 마우스인 경우 꼬리 정맥에 항암제를 투여할 수 있으나, 특별히 이에 한정되지 않는다.An anticancer agent may be administered to the vein of the lung cancer-induced animal. For example, when the animal having the lung cancer is a mouse, the anticancer agent may be administered to the tail vein, but is not particularly limited thereto.

상기 "항암제 후보물질"이란 폐암 동물모델에서 폐암 세포의 성장 또는 전이에 대하여 억제 활성을 가지는지 여부를 검사하기 위하여 스크리닝에서 이용되는 미지의 물질을 의미한다. 상기 후보물질은 화학물질, 펩타이드, 단백질, 항체 및 천연 추출물을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 스크리닝 방법에 의해 분석되는 후보물질은 단일 화합물 또는 화합물들의 혼합물(예컨대, 천연 추출물 또는 세포 또는 조직 배양물)이다. 후보물질은 합성 또는 천연 화합물의 라이브러리로부터 얻을 수 있다. 이러한 화합물의 라이브러리를 얻는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 합성 화합물 라이브러리는 Maybridge Chemical Co.(UK), Comgenex(USA), Brandon Associates(USA), Microsource(USA) 및 Sigma-Aldrich(USA)에서 상업적으로 구입 가능하며, 천연 화합물의 라이브러리는 Pan Laboratories(USA) 및 MycoSearch(USA)에서 상업적으로 구입가능하다. 후보물질은 당업계에 공지된 다양한 조합 라이브러리 방법에 의해 얻을 수 있으며, 예를 들어, 생물학적 라이브러리, 공간 어드레서블 패러럴 고상 또는 액상 라이브러리(spatially addressable parallel solid phase or solution phase libraries), 디컨볼루션이 요구되는 합성 라이브러리 방법, 1-비드 1-화합물 라이브러리 방법, 그리고 친화성 크로마토그래피 선별을 이용하는 합성 라이브러리 방법에 의해 얻을 수 있다. 분자 라이브러리의 합성 방법은, DeWitt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90, 6909, 1993; Erb et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91, 11422, 1994; Zuckermann et al., J. Med. Chem. 37, 2678, 1994; Cho et al., Science 261, 1303, 1993; Carell et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33, 2059, 1994; Carell et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33, 2061; Gallop et al., J. Med. Chem. 37, 1233, 1994 등에 개시되어 있다.The "anticancer drug candidate" refers to an unknown substance used in screening to test whether it has inhibitory activity against growth or metastasis of lung cancer cells in a lung cancer animal model. The candidates include, but are not limited to, chemicals, peptides, proteins, antibodies and natural extracts. Candidates analyzed by the screening methods of the present invention are single compounds or mixtures of compounds (eg, natural extracts or cell or tissue cultures). Candidates can be obtained from libraries of synthetic or natural compounds. Methods of obtaining libraries of such compounds are known in the art. Synthetic compound libraries are commercially available from Maybridge Chemical Co. (UK), Comgenex (USA), Brandon Associates (USA), Microsource (USA), and Sigma-Aldrich (USA), and libraries of natural compounds are available from Pan Laboratories (USA). ) And MycoSearch (USA). Candidates can be obtained by a variety of combinatorial library methods known in the art, for example, biological libraries, spatially addressable parallel solid phase or solution phase libraries, deconvolution Required synthetic library methods, 1-bead 1-compound library methods, and synthetic library methods using affinity chromatography screening. Methods of synthesizing molecular libraries are described in DeWitt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90, 6909, 1993; Erb et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91, 11422, 1994; Zuckermann et al., J. Med. Chem. 37, 2678, 1994; Cho et al., Science 261, 1303, 1993; Carell et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33, 2059, 1994; Carell et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33, 2061; Gallop et al., J. Med. Chem. 37, 1233, 1994 and the like.

상기 2) 단계는 항암제 후보물질의 항암 효과를 확인하는 단계이다. 폐암 관련 유전자의 발현 정도 또는 미세 혈관 밀도를 측정하여 항암제의 치료 효능을 분석할 수 있고, 폐암 세포의 성장 또는 전이를 육안으로 관찰하여 치료 효능을 분석할 수 있다. 이때, 폐암 세포로의 성장을 관찰하기 위하여 캘리퍼스와 같은 도구를 이용하여 측정할 수 있다. 상기 관련 유전자는 당업계에 널리 공지되어 있다. Step 2) confirms the anticancer effect of the anticancer drug candidate. The treatment efficacy of the anticancer agent may be analyzed by measuring the expression level or the microvascular density of lung cancer-related genes, and the treatment efficacy may be analyzed by visually observing the growth or metastasis of lung cancer cells. At this time, it can be measured using a tool such as a caliper to observe the growth into lung cancer cells. Such related genes are well known in the art.

구체적으로 상기 폐암 동물모델에서 폐암 세포의 추가적인 성장이 억제되었거나, 전이가 억제된 경우에는, 사용한 항암제 후보물질에 대해 항암 효과가 있다고 확인할 수 있다. 상기 폐암 세포의 성장을 측정할 경우, 항암제 후보물질의 치료 효능을 수치화하여 정량적으로 파악할 수 있다. 통상 항암제 후보물질의 투여 종료 후에 폐암 세포의 크기를 측정하고, 그것을 항암제 후보물질 비투여군 또는 항암제 후보물질 투여 전의 폐암 세포의 크기와 비교하는 방법을 이용하여 항암제 후보물질의 치료 효과를 정량화 할 수 있다. 또한, 본 발명에 의하면 상기와 같이 폐암 세포의 크기를 계측하는 것 이외에도, ① 항암제 후보물질의 투여 회수를 일정하게 하여 치료까지의 시간을 측정한다, ② 치유될 때까지 항암제 후보물질을 일정 간격으로 투여한 회수를 구하는 등과 같은 방법에 의해서도 항암제 효과의 강도를 평가할 수 있다.Specifically, when further growth of lung cancer cells is inhibited or metastasis is inhibited in the lung cancer animal model, it can be confirmed that there is an anticancer effect on the anticancer drug candidates used. When measuring the growth of the lung cancer cells, it is possible to quantitatively grasp the therapeutic efficacy of the anticancer drug candidate. Usually, the treatment effect of the anticancer drug candidate can be quantified by measuring the size of the lung cancer cells after the end of the administration of the anticancer drug candidate and comparing it with the size of the lung cancer cell before administration of the anticancer drug candidate or the anticancer drug candidate. . In addition, according to the present invention, in addition to measuring the size of the lung cancer cells as described above, ① the number of administration of the anticancer drug candidates is constant to measure the time until treatment, ② the anticancer drug candidates at regular intervals until healing The strength of the anticancer effect can also be evaluated by a method such as obtaining the number of times of administration.

항암제를 임상 수준에서 실시하기 위하여, 우선 동물모델에서 상기 항암제 후보물질의 효능과 안정성이 확인되어야 하는데, 본 발명은 이러한 동물모델-기초 시험을 환자별로 가능하게 한다. 본 발명에 따른 상기 폐암 동물모델은 폐암 환자로부터 분리한 폐암 세포의 이종이식을 통해 제조된 것으로서, 환자에 따라 적절히 가장 적절한 항암제를 스크리닝할 수 있다.In order to perform an anticancer agent at the clinical level, the efficacy and stability of the anticancer agent candidate should first be confirmed in an animal model, and the present invention enables such an animal model-based test for each patient. The lung cancer animal model according to the present invention is prepared through xenograft of lung cancer cells isolated from lung cancer patients, and can screen the most appropriate anticancer agent appropriately according to the patient.

평가 대상이 되는 항암제 후보물질은 폐암 동물모델에 국소적으로 투여될 수 있으나, 특별히 이에 제한되지 않는다. 즉 어떠한 투여 경로의 항암제 후보물질도 선별할 수 있다. 비경구적 및 경구적으로 투여되는 항암제 후보물질도 선별할 수 있다. 항암제 후보물질의 투여량은 약제의 성질, 투여 대상의 종류, 연령이나 체중 등의 조건을 기초로 종합적으로 판단하여, 최적의 양을 적절하게 결정해야 하며 특별히 한정되지 않는다.The anticancer drug candidate to be evaluated may be locally administered to a lung cancer animal model, but is not particularly limited thereto. In other words, anticancer candidates of any route of administration can be selected. Parenteral and oral anticancer candidates may also be selected. The dosage of the anticancer drug candidate is comprehensively determined based on the properties of the drug, the type of the subject to be administered, the age and the weight, and the like.

투여 시기나 투여 회수 등의 투여 조건은 항암제 후보물질의 성질, 시험 및 평가 목적 등에 따라 적절하게 최적이 되도록 설정하면 되며 특별히 제한되지 않는다. 예컨대, 투여 시기에 대해서는 폐암 동물모델을 제작한 직후 또는 환자와 동일한 상태까지 병변을 발생시킨 직후부터 30분 마다 수회 투여한 후, 그 다음 1시간 마다 수회 투여하고, 그때마다 증상의 변화를 관찰, 평가하는 방법이 많이 이용된다. 투여 회수에 대해서는 항암제의 성질에 따라 다르고, 1회 이상 수회가 될 수도 있다. The administration conditions such as the timing of administration and the number of administrations may be appropriately set according to the nature of the anticancer drug candidate, the purpose of the test and evaluation, and the like. For example, about the timing of administration, several times are administered every 30 minutes immediately after the lung cancer animal model is produced or after the lesion is developed to the same state as the patient, and then several times every hour, and then the change of symptoms is observed. Many methods of evaluation are used. The number of doses depends on the nature of the anticancer agent, and may be one or more times.

이러한 과정을 통해 유전적 원인 등을 반영하여 환자 개인에 적합한 항암제를 선별하여 치료할 수 있다.
Through this process, anticancer drugs suitable for the individual patient may be selected and treated based on the genetic cause.

이하 본 발명을 바람직한 실시예를 참고로 하여 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to a preferred embodiment so that those skilled in the art can easily practice the present invention. As those skilled in the art would realize, the described embodiments may be modified in various different ways, all without departing from the spirit or scope of the present invention.

실시예Example

<실시예 1: 토끼 폐암 동물모델의 제조>Example 1 Preparation of Rabbit Lung Cancer Animal Model

토끼의 VX2 종양 조직을 추출하였으며, 이를 잘게 분쇄하였다. 이를 분쇄액을 통해 거른 후, 원심분리기를 통해 원심분리하여 토끼의 종양세포를 수득하였다. 그리고 상기 토끼로부터 수득한 종양세포 0.1 ㎖, 리피오돌 0.15 ㎖ 및 메트리젤 0.25 ㎖를 혼합한 용액을 토끼의 폐에 26 게이지의 바늘을 가진 주사기를 이용하여 주사하였다. 이때 실시간 CT 촬영 장치(본 실시예에 사용된 CT는 CT Fluoroscopy 기능이 있는 CT로서, Real time tracking이 가능함)에서 촬영하는 영상의 임의의 단면과 일치하는 방향으로 레이져를 조사하였으며, 이렇게 조사되는 레이져에 토끼의 폐를 레이져와 일직선이 되게 고정하였다. 그리고 레이져의 조사 방향과 일치하게 주사 바늘을 고정시킨 상태에서 토끼의 폐에 상기 폐암 종양 조직 혼합액을 주사하였다. 한편, 주사 과정에서 실시간 CT 촬영 장치를 통해 실시간으로 전송되는 화면을 통해 레이저와 주사 바늘이 폐에 수직인 방향으로 일치되는 것을 확인하면서 정교하게 주사하였다. 하기 도 1은 본 참고예의 전체적인 과정을 나타내는 개략도이며, 하기 도 2는 본 참고예의 방법을 이용하여 토끼 VX2 종양 세포를 토끼의 폐에 이식한 결과를 나타내는 사진이다.
Rabbit VX2 tumor tissue was extracted and crushed finely. This was filtered through a grinding liquid and centrifuged through a centrifuge to obtain rabbit tumor cells. And a mixture of tumor cells 0.1 ml, Lipiodol 0.15 ml and Metrigel 0.25 ml was injected into the rabbit lung using a syringe with a 26 gauge needle. In this case, the laser was irradiated in a direction consistent with an arbitrary cross section of the image captured by a real-time CT imaging device (CT used in this embodiment, which has a CT fluoroscopy function, which enables real time tracking). The rabbit's lungs were fixed in line with the laser. The lung cancer tumor tissue mixed solution was injected into the rabbit lung while the needle was fixed in accordance with the irradiation direction of the laser. On the other hand, during the scanning process, the laser beam was precisely scanned while confirming that the laser and the needle were aligned in the direction perpendicular to the lung through a screen transmitted in real time through a real-time CT imaging apparatus. Figure 1 is a schematic diagram showing the overall process of the present reference example, Figure 2 is a photograph showing the result of transplanting rabbit VX2 tumor cells to the rabbit lung using the method of this reference example.

<실시예 2: 마우스 폐암 동물모델의 제조>Example 2: Preparation of Mouse Lung Cancer Animal Model

고려대학교 구로병원에 입원 중인 폐암 환자로부터 폐암 조직을 추출하였다. 그리고 이를 종양 세포가 파괴되지 않을 정도로 잘게 분쇄하였다. 이렇게 분쇄된 종양 세포를 100㎛의 cell strainer로 필터링 하여 걸러내었으며, 2500 rpm(바람직하게는 100-5000 rpm) 속도로 3분(바람직하게는 1-10 분) 동안 원심분리기를 이용하여 최종적으로 폐암 종양세포를 획득하였다. 이렇게 획득한 폐암 종양 세포용액(폐암 세포 수득물 0.1 ㎖)을 리피오돌(Lipiodol, 0.1 ㎖) 및 메트리젤(Metri-gel, 0.2 ㎖)과 혼합하여 폐암 종양 조직 혼합액을 제조하였다. Lung cancer tissues were extracted from lung cancer patients admitted to Korea University Guro Hospital. And it was ground finely so that tumor cells were not destroyed. The pulverized tumor cells were filtered through a 100 μm cell strainer and finally filtered using a centrifuge for 3 minutes (preferably 1-10 minutes) at a speed of 2500 rpm (preferably 100-5000 rpm). Lung cancer tumor cells were obtained. The lung cancer tumor cell solution (0.1 ml of lung cancer cell obtained) thus obtained was mixed with Lipiodol (Lipiodol, 0.1 ml) and metrigel (Metri-gel, 0.2 ml) to prepare a lung cancer tumor tissue mixture.

이렇게 제조된 폐암 종양 조직 혼합액을 26 게이지의 바늘을 가진 주사기를 이용하여 쥐의 폐에 주사하였다. 이때 실시간 CT 촬영 장치(본 실시예에 사용된 CT는 CT Fluoroscopy 기능이 있는 CT로서, Real time tracking이 가능함)에서 촬영하는 영상의 임의의 단면과 일치하는 방향으로 레이져를 조사하였으며, 이렇게 조사되는 레이져에 쥐의 폐를 레이져와 일직선이 되게 고정하였다. 그리고 레이져의 조사 방향과 일치하게 주사 바늘을 고정시킨 상태에서 쥐의 폐에 상기 폐암 종양 조직 혼합액을 주사하였다. 한편, 주사 과정에서 실시간 CT 촬영 장치를 통해 실시간으로 전송되는 화면을 통해 레이저와 주사 바늘이 폐에 수직인 방향으로 일치되는 것을 확인하면서 정교하게 주사하였다. 이렇게 주사를 완료하여 최종 폐암 동물모델을 제조하였다(하기 도 3은 상기 과정의 전체적인 개략도임). The lung cancer tumor tissue mixture thus prepared was injected into the lungs of rats using a syringe with a 26 gauge needle. In this case, the laser was irradiated in a direction consistent with an arbitrary cross section of the image captured by a real-time CT imaging device (CT used in this embodiment, which has a CT fluoroscopy function, which enables real time tracking). The rat's lungs were fixed in line with the laser. The lung cancer tumor tissue mixture was injected into the lungs of rats while the injection needle was fixed in accordance with the irradiation direction of the laser. On the other hand, during the scanning process, the laser beam was precisely scanned while confirming that the laser and the needle were aligned in the direction perpendicular to the lung through a screen transmitted in real time through a real-time CT imaging apparatus. This injection was completed to produce a final lung cancer animal model (FIG. 3 below is an overall schematic of the process).

이렇게 제조된 폐암 동물모델은 2 주가 경과한 후에 항암제 후보 물질을 투여하여 각 환자별 맞춤형 항암제를 스크리닝하였다.
The lung cancer animal model thus prepared was screened for 2 days after the administration of anticancer drug candidates.

<실시예 3>: 마우스 폐암 동물모델의 제조>Example 3 Preparation of Mouse Lung Cancer Animal Model

루이스 폐암(Lewis Lung Cancer ; LLC) 세포 5×10⁶ cells/㎖(종양 세포 용액 0.035 ㎖)를 리피오돌(Lipiodol, 0.005 ㎖) 및 메트리젤(Metri-gel, 0.01 ㎖)과 혼합하여 폐암 종양 조직 혼합액(total 0.05 ㎖)을 제조하였다.Lewis Lung Cancer (LLC) cells 5 × 10 ⁶ cells / mL (0.035 mL of tumor cell solution) were mixed with Lipiodol (Lipiodol, 0.005 mL) and Metrizel (Metri-gel, 0.01 mL) to mix lung cancer tumor tissue. (total 0.05 mL) was prepared.

일반적인 0.5 cc 주사기를 사용할 경우 소형 폐암 동물모델의 폐에 주입하는 과정에 있어서 정량 주입 및 시야 확보 면에서 어려움이 있으므로, 이를 개선하기 위하여 개량 주사기를 사용하였다.In the case of using a general 0.5 cc syringe in the lungs of a small lung cancer animal model, there is a difficulty in the metering and securing the field of view, and an improved syringe was used to improve this.

상기 개량 주사기는 0.5 cc 주사기의 주입구와 29 게이지 바늘 사이에, 0.25 ㎜의 I.D와 0.61 ㎜의 O.D를 갖는 폴리에틸렌 재질의 제1 채널(튜브)이 연결되어 있는 것으로, 이렇게 제조된 폐암 종양 조직 혼합액을 상기 개량 주사기를 이용하여 쥐의 폐에 주사하였다(하기 도 5는 개량 주사기의 전체적인 개략도임). The improved syringe is connected between the injection port of a 0.5 cc syringe and a 29 gauge needle, and has a polyethylene first channel (tube) having an ID of 0.25 mm and an OD of 0.61 mm. The improved syringe was used to inject into the lungs of rats (FIG. 5 below is an overall schematic of the improved syringe).

이때 실시간 CT 촬영 장치(본 실시예에 사용된 CT는 CT Fluoroscopy 기능이 있는 CT로서, Real time tracking이 가능함)에서 촬영하는 영상의 임의의 단면과 일치하는 방향으로 레이져를 조사하였으며, 이렇게 조사되는 레이져에 쥐의 폐를 레이져와 일직선이 되게 고정하였다. 그리고 개량 주사기의 바늘을 마이크로 핀셋(micro-forcep)을 이용하여 레이져의 조사 방향과 일치하도록 개량 주사기의 바늘을 정확하게 고정시킨 상태에서 쥐의 폐에 상기 폐암 종양 조직 혼합액을 주사하였다. 한편, 주사 과정에서 실시간 CT 촬영 장치를 통해 실시간으로 전송되는 화면을 통해 레이저와 주사 바늘이 폐에 수직인 방향으로 일치되는 것을 확인하면서 정교하교 정확하게 주사하였다. 이렇게 주사를 완료하여 최종 폐암 동물모델을 제조하였다(하기 도 6은 상기 과정의 전체적인 개략도임). In this case, the laser was irradiated in a direction consistent with an arbitrary cross section of the image captured by a real-time CT imaging device (CT used in this embodiment, which has a CT fluoroscopy function, which enables real time tracking). The rat's lungs were fixed in line with the laser. The lung cancer tumor tissue mixture solution was injected into the lungs of rats while the needles of the improved syringes were fixed with the needles of the improved syringes so as to match the direction of irradiation of the laser using a micro-forcep. On the other hand, through the screen transmitted in real time through the real-time CT imaging device during the scanning process, the precise and precise injection while confirming that the laser and the needle in the direction perpendicular to the lung. This injection was completed to produce a final lung cancer animal model (FIG. 6 below is an overall schematic of the process).

이렇게 제조된 폐암 동물모델은 2 주가 경과한 후, 폐암 병변이 발생하였는지를, 정상군(페암 종양 조직 혼합액을 투여하기 전의 정상 동물모델에서의 폐조직)과 비교하였다.
The lung cancer animal model thus prepared was compared with the normal group (pulmonary tissue in the normal animal model before administration of the lung cancer tissue mixed solution) after 2 weeks.

비교예 Comparative example

상기 실시예의 폐암 환자에게서 추출한 폐암 조직을 Cell 라인 배양을 통한 일반적인 방법으로 항암제를 스크리닝하였다.
Lung cancer tissues extracted from the lung cancer patients of the above example were screened with anticancer agents in a general manner through cell line culture.

실험예Experimental Example

<폐암 동물모델의 항암제 감수성 평가><Evaluation of Anticancer Drug Susceptibility in Lung Cancer Animal Models>

상기 실시예 2에 따른 폐암 동물모델을 가지고 각 항암제의 감수성을 평가하는 검사를 실시하였다. 즉, 동일한 환자에게서 수득한 폐암 종양 조직을 가지고 실시예 2에 따라 10 개의 폐암 동물모델을 제조한 후, 각 폐암 동물모델에 각 항암제를 투여하고 이에 대한 감수성을 측정하는 방식으로 진행하였으며, 이의 결과는 하기 표 1 및 도 4에 나타내었다. 하기 도 4에서는 막대 그래프가 높아질수록 사용된 약제의 암조직에 대한 감수성이 높음을 의미한다. 하기 표 1 및 도 4에서 확인할 수 있는 바와 마찬가지로 8 번 항암제를 처리한 폐암 동물모델이 가장 감수성이 높은 결과를 보임을 확인할 수 있으며, 기타 1 번 또는 4 번 항암제의 경우에도 높은 감수성을 보임을 확인할 수 있었다. 한편, 하기 표 1에서 TAX는 Taxol, CBP는 Carboplatin, CDDP는 Cisplatin, GEM은 Gemcitabine의 약어이다. The lung cancer animal model according to Example 2 was tested to evaluate the sensitivity of each anticancer agent. That is, 10 lung cancer animal models were prepared according to Example 2 using lung cancer tumor tissues obtained from the same patient, and then, each anticancer agent was administered to each lung cancer animal model and progressed in a manner of measuring sensitivity thereto. Are shown in Table 1 and FIG. 4. In FIG. 4, the higher the bar graph means, the higher the sensitivity of the used drug to cancer tissue. As can be seen in Table 1 and Figure 4 it can be seen that the lung cancer animal model treated with anticancer agent 8 showed the most susceptible results, and also showed high susceptibility in the case of other anticancer drugs 1 or 4 Could. Meanwhile, in Table 1, TAX is Taxol, CBP is Carboplatin, CDDP is Cisplatin, and GEM is an abbreviation of Gemcitabine.

<< 실험예 3으로부터 제조된 폐암 동물모델의 폐암 병변 확인>Identifying Lung Cancer Lesions in Lung Cancer Animal Models Prepared from Experimental Example 3>

상기 실시예 3에 따라 제조된 폐암 동물모델로부터 폐암 병변 발생 유무를 확인하고자 실시예 3을 실시하기 전의 정상 동물모델에서의 폐조직과 실시예 3에 따라 제조된 폐암 동물모델의 폐 조직을 비교하였으며, 이의 결과는 하기 도 7에 나타내었다.In order to confirm the presence of lung cancer lesions from the lung cancer animal model prepared according to Example 3, lung tissues of the normal animal model and lung tissue of the lung cancer animal model prepared according to Example 3 were compared before performing Example 3. , The result of which is shown in FIG. 7.

하기 도 7에 나타난 바와 같이 루이스 폐암 세포를 소형 동물모델인 쥐에 주입한 결과, 정상 동물모델에서의 폐조직과 달리 폐암 병변이 발생한 것을 확인할 수 있었다(우측 사진 노란 화살표 참조). 즉 본 발명에 따라 제조할 경우, 소형 동물의 경우에도 비침습적인 과정을 통해, 투여된 폐암 조직으로 발병한 폐암 병변을 갖는 폐암 동물모델을 확립할 수 있음을 확인하였다.
As shown in FIG. 7, as a result of injecting Lewis lung cancer cells into a rat of a small animal model, lung cancer lesions were generated unlike the lung tissue of the normal animal model (see yellow arrow on the right). That is, when prepared according to the present invention, even in the case of small animals through a non-invasive process, it was confirmed that can establish a lung cancer animal model having lung cancer lesions developed into the administered lung cancer tissue.

상기에서는 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 설명하였지만, 본 발명은 이에 한정되는 것은 아니고, 본 발명의 기술 사상 범위 내에서 여러 가지로 변형하여 실시하는 것이 가능하고, 이 또한 첨부된 특허 청구 범위에 속하는 것은 당연하다.
Although the preferred embodiments of the present invention have been described above, the present invention is not limited thereto, and various modifications can be made within the scope of the technical idea of the present invention, which also belong to the appended claims. It is natural.

Claims

1) 실시간 CT로 인간을 제외한 동물의 폐위치를 확인하는 단계; 및
2) 상기 단계에서 확인된 인간을 제외한 동물의 폐 위치에 조영제, 종양세포 및 증점제 혼합액을 24-30 게이지 바늘을 갖는 주사기를 사용하여 주사하는 단계;를 포함하고,
상기 종양세포는 폐암 환자로부터 분리된 폐암 조직을 잘게 분쇄한 후 필터링하고, 원심분리하여 제조된 폐암 환자로부터 분리된 폐암 세포이며,
상기 주사기의 바늘이 상기 CT 촬영 영상의 단면 위치에 그 단면과 평행하는 방향으로 주사되는 것을 특징으로 하는 폐암 동물모델의 제조방법.1) confirming the location of the lungs of animals other than humans by real-time CT; And
2) injecting contrast medium, tumor cells and thickener mixture into the lungs of animals other than humans identified in the above step using a syringe having a 24-30 gauge needle;
The tumor cells are lung cancer cells isolated from lung cancer patients prepared by finely pulverizing and filtering lung cancer tissues isolated from lung cancer patients, centrifugation,
The needle of the syringe is a lung cancer animal model manufacturing method, characterized in that the injection in the direction parallel to the cross-sectional position of the CT image.

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제1항에 있어서,
상기 종양세포의 크기는 100 ㎛ 미만인 것을 특징으로 하는 폐암 동물모델의 제조방법.The method of claim 1,
The tumor cell size is less than 100 ㎛ method for producing a lung cancer animal model, characterized in that.

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제1항에 있어서,
상기 증점제는 메트리젤(Metrigel) 또는 Cultrex Basemetn Membrane Extract(BME)인 것을 특징으로 하는 폐암 동물모델의 제조방법.The method of claim 1,
Wherein the thickener (Metrigel) or Cultrex Basemetn Membrane Extract (BME) method for producing a lung cancer animal model, characterized in that.

제1항에 있어서,
상기 증점제 100 중량부에 대하여 종양세포가 1-500 중량부로 포함되는 것을 특징으로 하는 폐암 동물모델의 제조방법.The method of claim 1,
A method for producing a lung cancer animal model, characterized in that the tumor cells are contained in 1 to 500 parts by weight based on 100 parts by weight of the thickener.

제1항에 있어서,
상기 혼합액의 점도는 3-25 cps인 것을 특징으로 하는 폐암 동물모델의 제조방법.The method of claim 1,
The viscosity of the mixed solution is a method of producing a lung cancer animal model, characterized in that 3-25 cps.

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제1항에 있어서,
상기 조영제는 가도리니움(gadolinium)-DPTA, Gd-DO3A-부트롤(butrol), 바륨, 디아트리조에이트(diatrizoate), 에티오다이즈드 오일(ethiodized oil), 구연산갈륨(gallium citrate), 아이오카민산(iocarmic acid), 아이오세타민산(iocetamic acid), 아이다마이드(iodamide), 아이오디파마이드(iodipamide), 아이오도자민산(iodoxamic acid), 아이오글라미드(iogulamide), 아이오딕사놀(iodixanol), 아이헥솔(iohexol), 아이오파미돌(iopamidol), 아이오파논산(iopanoic acid), 아이오프로에민산(ioproemic acid), 아이오프로마이드(iopromide), 아이오세파민산(iosefamic acid), 아이오세린산(ioseric acid), 아이오술아미드 메글루민(iosulamide meglumine), 아이오세메트산(iosemetic acid), 아이오타술(iotasul), 아이오테트르산(iotetric acid), 아이오타라민산(iothalamic acid), 아이오트록시산(iotroxic acid), 아이오자갈르산(ioxaglic acid), 아이오시트리아온산(ioxitriaoic acid), 아이포데이트(ipodate), 메글루민(meglumine), 메트리자마이드(metrizamide), 메트리조에이트(metrizoate), 프로필리돈(propyliodone) 및 탈로오스 클로라이드(thallous chloride)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나이상인 것을 특징으로 하는 폐암 동물모델의 제조방법.The method of claim 1,
The contrast agent is gadolinium-DPTA, Gd-DO3A-butrol, barium, diatrizoate, ethiodized oil, gallium citrate, child Iocarmic acid, iocetamic acid, iodamide, iodipamide, iodoxamic acid, iogulamide, iodixanol, Iohexol, iopamidol, iopanoic acid, ioproemic acid, iopromide, iosefamic acid, ioseric acid acid, iosulamide meglumine, iosemetic acid, iotasul, iotetric acid, iothalamic acid, iohydroxy acid iotroxic acid, ioxaglic acid, iocitionic acid (ioxitriaoic acid), ipodate, meglumine, methluminamide, metrizamide, metrizoate, propyliodone and thalous chloride Lung cancer animal model manufacturing method characterized in that any one or more.

제1항에 있어서,
상기 조영제는 상기 종양세포 100 중량부를 기준으로 조영제를 1-200 중량부로 포함되는 것을 특징으로 하는 폐암 동물모델의 제조방법.The method of claim 1,
The contrast agent is a lung cancer animal model manufacturing method characterized in that it comprises 1-200 parts by weight of the contrast agent based on 100 parts by weight of the tumor cells.

제1항에 있어서,
상기 동물은 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 모르모트, 랫트, 마우스, 소, 양, 돼지 및 염소로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 폐암 동물모델의 제조방법.The method of claim 1,
The animal is a method for producing a lung cancer animal model, characterized in that any one or more selected from the group consisting of monkeys, dogs, cats, rabbits, morphotes, rats, mice, cattle, sheep, pigs and goats.

제1항에 있어서,
상기 동물은 마우스 또는 렛트인 것을 특징으로 하는 폐암 동물모델의 제조방법.The method of claim 1,
The animal is a method of producing a lung cancer animal model, characterized in that the mouse or let.

제14항에 있어서,
상기 마우스는 면역체계가 제거된 누드 마우스 또는 스키드 마우스인 것을 특징으로 하는 폐암 동물모델의 제조방법.The method of claim 14,
The mouse is a method of producing a lung cancer animal model, characterized in that the nude mouse or skid mouse immune system is removed.

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제1항에 있어서,
상기 주사기는 개량 주사기인 것을 특징으로 하고,
상기 개량 주사기는 주사기(100), 주사 바늘(200) 및 채널(300)을 포함하고,
상기 채널(300)은 상기 주사기의 주입구(100)와 상기 주사 바늘(200) 사이에 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 폐암 동물모델의 제조방법.The method of claim 1,
The syringe is characterized in that the improved syringe,
The improved syringe includes a syringe 100, an injection needle 200 and a channel 300,
The channel 300 is a lung cancer animal model manufacturing method, characterized in that coupled between the injection hole 100 and the injection needle (200).

제17항에 있어서,
상기 채널(300)은 외경(O.D)에 대한 내경(I.D)의 비율(I.D/O.D) 0.2 내지 1인 것을 특징으로 하는 폐암 동물모델의 제조방법.The method of claim 17,
The channel 300 is a method for producing an animal model of lung cancer, characterized in that the ratio of the inner diameter (ID) to the outer diameter (OD) (ID / OD) 0.2 to 1.

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1) 제1항에 따라 제조된 폐암 동물모델에 항암제를 투여하는 단계;
2) 상기 1) 단계의 폐암 동물모델에서 폐암 세포의 성장 또는 전이를 측정하여 항암제의 항암 효과를 확인하는 단계;를 포함하는 폐암 동물모델을 이용하여 항암제의 치료 효능을 분석하는 방법.1) administering an anticancer agent to the lung cancer animal model prepared according to claim 1;
2) determining the anticancer effect of the anticancer agent by measuring the growth or metastasis of lung cancer cells in the lung cancer animal model of step 1).

1) 제1항에 따라 제조된 폐암 동물모델에 항암제 후보 물질을 투여하는 단계; 및
2) 상기 1) 단계의 폐암 동물모델에서 종양 세포의 성장 또는 전이를 측정하여 항암제 후보물질의 항암 효과를 확인하는 단계;를 포함하는 폐암 동물모델을 이용하여 항암제를 스크리닝 방법. 1) administering an anticancer drug candidate to a lung cancer animal model prepared according to claim 1; And
2) determining the anticancer effect of the anticancer drug candidate by measuring the growth or metastasis of tumor cells in the lung cancer animal model of step 1).