KR101987854B1 - Cyclic hexapeptide-based compounds and uses thereof - Google Patents

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KR101987854B1
KR101987854B1 KR1020170126742A KR20170126742A KR101987854B1 KR 101987854 B1 KR101987854 B1 KR 101987854B1 KR 1020170126742 A KR1020170126742 A KR 1020170126742A KR 20170126742 A KR20170126742 A KR 20170126742A KR 101987854 B1 KR101987854 B1 KR 101987854B1
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고성균
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Abstract

본 발명은 고리형 헥사펩타이드계 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염; 이의 제조방법 및 이의 의약용도를 제공한다. 본 발명에 따른 고리형 헥사펩타이드계 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 암 세포 전이 및 침윤 저해 활성이 뛰어나고, 더불어 그람 양성균에 대한 성장 저해 효과가 우수한바, 항암제 또는 항균제로서 유용하게 사용될 수 있다.The present invention relates to a cyclic hexapeptide-based compound, a stereoisomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof; A method for producing the same, and a pharmaceutical use thereof. The cyclic hexapeptide compound, its stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof according to the present invention is excellent in cancer cell metastasis and infiltration inhibition activity, and is excellent in growth inhibitory effect against Gram-positive bacteria, and is useful as an anticancer agent or an antibacterial agent Lt; / RTI >

Description

고리형 헥사펩타이드계 화합물들 및 이의 용도 {Cyclic hexapeptide-based compounds and uses thereof}Cyclic hexapeptide-based compounds and uses thereof < RTI ID = 0.0 >

본 발명은 고리형 헥사펩타이드계 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염; 이의 제조방법; 치료용 약제의 제조를 위한 이들의 용도; 이들을 이용한 치료방법; 이들을 함유하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cyclic hexapeptide-based compound, a stereoisomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof; A method for producing the same; Their use for the preparation of therapeutic agents; A therapeutic method using them; And pharmaceutical compositions containing them.

암은 현대사회에서 사망률 1위를 차지하는 주요 질병으로 현재까지 많은 연구에도 불구하고 획기적인 치료법이 없는 실정이다. 현대 의학의 대표적 암 치료법에는 외과적 수술요법, 생물요법, 방사선요법, 항암물질 투여에 의한 화학요법 등이 있다. 이 중에서 화학요법은 항암제를 경구나 주사로 투여하여 암세포의 증식을 억제하는 방법으로 전이된 암을 치료할 수 있다는 것으로 현재 화학요법은 전이성 암 치료에 표준요법으로 사용되고 있다. 물론 화학요법으로 전이된 암을 완치시킬 수 있는 것은 아니지만 증상을 완화시켜 수명 연장에 있어서 중요한 역할을 한다. 그러나, 이러한 화학요법제들은 부작용 또는 항암제 내성발현 등의 문제점을 가지고 있다. 지금까지 암에 대한 많은 연구가 진행되고 있지만 암 자체의 다양성 및 다양한 발병기작으로 인하여 보다 적은 부작용과 내성을 극복할 수 있는 새로운 항암제 개발이 요구되고 있다.Cancer is a major disease that has the highest mortality rate in modern society. Despite many studies, there is no epoch-making treatment yet. Typical cancer treatment methods in modern medicine include surgical surgery, biotherapy, radiation therapy, and chemotherapy by administration of anticancer agents. Of these, chemotherapy can be used to treat metastatic cancer by administering an anticancer drug to the cancer or injection to inhibit the proliferation of cancer cells. Current chemotherapy is being used as a standard therapy for metastatic cancer treatment. Of course, it is not possible to cure metastatic cancer by chemotherapy, but it plays an important role in extending the life span by alleviating symptoms. However, these chemotherapeutic agents have problems such as side effects or anticancer drug resistance. Although many studies on cancer have been carried out so far, development of a new anticancer drug that can overcome less side effects and tolerance is required due to the diversity of cancer itself and various mechanisms of disease.

또한, 항생제의 고전적 의미는 미생물에 의해 생산되는 2차 대사 산물로서 매우 낮은 농도에서 미생물을 죽이거나 성장을 저해하는 물질을 말한다. 현재는 일반적으로 항생제가 낮은 농도에서 효과적으로 항생 활성을 갖는 천연, 반합성 또는 합성 화합물을 의미하는 것으로 받아들여지고 있다. 기존에 개발된 항생제로는 베타-락탐계 항생제 (beta-lactam class of antibiotics)로 분류되는 것으로, 페니실린보다 효과가 탁월한 것으로 인정되는 메티실린 (methicillin)이 있으며, 상기 메티실린에 대해 내성을 갖게 된 세균, 구체적으로 메티실린 내성 황색 포도상구균 (methicilline resistance staphyllococus aureus, MRSA)에 대한 항균 효과를 갖는 것으로 개발된 반코마이신 (vancomycin) 등이 있다. 그러나, 최근에는 슈퍼박테리아라고 불리우는 반코마이신 내성 황색 포도상구균 (vancomycin resistance staphyllococus aureus, VRSA) 등 기존 항생 물질에 대한 내성균이 증가하면서, 기존에 보고된 항생제에 대한 내성을 갖는 물질 또는 약제의 개발 필요성이 더욱 강조되고 있는 실정이다. 즉, 기존 항생제를 대체할 수 있는 새로운 작용 메카니즘을 가진 약제의 개발에 관심이 집중되고 있다. Also, the classical meaning of antibiotics is secondary metabolites produced by microorganisms, which means substances that kill or inhibit microorganisms at very low concentrations. Currently, it is generally accepted that antibiotics mean natural, semisynthetic or synthetic compounds with effective antibiotic activity at low concentrations. Previously developed antibiotics are classified as beta-lactam class of antibiotics. There are methicillin, which is considered to be superior to penicillin, and is resistant to methicillin And vancomycin, which has been developed to have an antibacterial effect against bacteria, specifically methicillin resistance staphylococcus aureus (MRSA). However, in recent years, resistance to existing antibiotics such as vancomycin resistance staphylococcus aureus (VRSA), which is called superbacteria, has increased, and the necessity of development of a substance or drug having resistance to antibiotics It is being stressed. In other words, there is a growing interest in the development of drugs with new mechanisms of action that can replace existing antibiotics.

이에, 본 발명자들은 항암 활성 또는 항균 활성 화합물을 연구하던 중, 본 발명에 따른 화합물들이 암세포 전이 및 침윤을 억제하는 항암 효과와 함께 박테리아에 대한 항균 효과를 나타낸다는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the inventors of the present invention completed the present invention by studying anticancer activity or antimicrobial active compounds, confirming that the compounds according to the present invention exhibit antibacterial effects against bacteria, together with anticancer effects that inhibit cancer cell metastasis and invasion.

본 발명의 목적은 항암 또는 항균 활성을 나타내는 고리형 헥사펩타이드계 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a cyclic hexapeptide-based compound exhibiting anticancer or antimicrobial activity, a stereoisomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

본 발명의 다른 목적은 상기 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 제조방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a process for preparing the above compound, its stereoisomer or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 화합물, 이의 입체이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide the use of said compound, a stereoisomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

본 발명에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각에 대한 다른 설명 및 실시형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 발명에 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 발명의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 발명의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.Each description and embodiment disclosed in the present invention can be applied to other descriptions and embodiments of the present invention. That is, all combinations of various elements disclosed in the present invention fall within the scope of the present invention. Further, the scope of the present invention is not limited by the detailed description described below.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 항암 또는 항균 활성을 나타내는 고리형 헥사펩타이드계 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염; 이의 제조방법; 상기 화합물, 이의 입체이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 이하, 이에 대하여 상세히 살핀다.In order to achieve the above object, the present invention provides a cyclic hexapeptide compound, its stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof, which exhibits anticancer or antibacterial activity; A method for producing the same; The use of said compound, a stereoisomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof. Hereinafter, this will be described in detail.

고리형 Ring 헥사펩타이드Hexapeptide 화합물 compound

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 고리형 헥사펩타이드계 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다:The present invention provides a cyclic hexapeptide compound represented by the following formula (1), a stereoisomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof:

[화학식 1][Chemical Formula 1]

Figure 112017095652177-pat00001
Figure 112017095652177-pat00001

상기 식에서,In this formula,

R1 은

Figure 112017095652177-pat00002
,
Figure 112017095652177-pat00003
,
Figure 112017095652177-pat00004
또는
Figure 112017095652177-pat00005
이고;R 1 is
Figure 112017095652177-pat00002
,
Figure 112017095652177-pat00003
,
Figure 112017095652177-pat00004
or
Figure 112017095652177-pat00005
ego;

R2, R3, R4, R5 및 R6 는 각각 독립적으로 C1-C4 알킬이고 {여기서, C1-C4 알킬의 하나 이상의 H는 -OH, -NR10R11, -SH, -S-메틸, -SeH, -(C=O)-OH 또는 -(C=O)-NH2 로 치환될 수 있음};R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6 are each independently C 1 -C 4 alkyl and wherein at least one H of the C 1 -C 4 alkyl is -OH, -NR 10 R 11 , -SH, -S-methyl, -SeH, - (C = O) -OH or - (C = O) -NH 2 ;

R7 및 R8 은 각각 독립적으로 -H, -OH 또는 -할로겐이고;R 7 and R 8 are each independently -H, -OH or -halogen;

R9 은 -H 또는 C1-C4 알킬이고;R 9 is -H or C 1 -C 4 alkyl;

R10 및 R11 은 각각 독립적으로 -H, C1-C4 알킬 또는 -(C=NH)-NH2 이다.R 10 and R 11 are each independently -H, C 1 -C 4 alkyl or - (C = NH) -NH 2 .

본 발명의 일 실시양태에서, In one embodiment of the present invention,

R1 은

Figure 112017095652177-pat00006
이고;R 1 is
Figure 112017095652177-pat00006
ego;

R2, R3, R4, R5 및 R6 는 각각 독립적으로 C1-C4 알킬이고 {여기서, C1-C4 알킬의 하나 이상의 H는 -OH, -NH2 또는 -(C=O)-NH2 로 치환될 수 있음};R 2 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6 are each independently C 1 -C 4 alkyl, wherein one or more H of the C 1 -C 4 alkyl may be replaced by -OH, -NH 2 or - (C═O) -NH 2 ;

R7 및 R8 은 각각 독립적으로 -H 또는 -할로겐이고;R 7 and R 8 are each independently -H or -halogen;

R9 은 -H 일 수 있다.R 9 can be -H.

본 발명의 다른 실시양태에서,In another embodiment of the present invention,

R1 은

Figure 112017095652177-pat00007
이고;R 1 is
Figure 112017095652177-pat00007
ego;

R2, R3 및 R4 는 각각 독립적으로 비치환된 C1-C4 알킬이고;R 2 , R 3 and R 4 are each independently unsubstituted C 1 -C 4 alkyl;

R5 는 -NH2 로 치환된 C1-C4 알킬이고; R 5 is a C1-C4 alkyl substituted with -NH 2;

R6 는 -OH 또는 -(C=O)-NH2 로 치환된 C1-C4 알킬이고; R 6 is -OH or - (C = O), and a C1-C4 alkyl substituted with -NH 2;

R7 및 R8 은 각각 독립적으로 -H 또는 -할로겐이고;R 7 and R 8 are each independently -H or -halogen;

R9 은 -H 일 수 있다.R 9 can be -H.

본 발명의 다른 실시양태에서, 본 발명의 상기 화학식 1의 화합물은 하기 화학식 1a 또는 화학식 1b로 표시되는 고리형 헥사펩타이드계 화합물일 수 있다:In another embodiment of the present invention, the compound of Formula 1 of the present invention may be a cyclic hexapeptide-based compound represented by the following Formula 1a or 1b:

[화학식 1a][Formula 1a]

Figure 112017095652177-pat00008
Figure 112017095652177-pat00008

[화학식 1b][Chemical Formula 1b]

Figure 112017095652177-pat00009
Figure 112017095652177-pat00009

본 발명의 일 실시양태에서, 본 발명의 상기 화학식 1의 화합물은 하기 화학식 1a’ 또는 화학식 1b’으로 표시되는 고리형 헥사펩타이드계 화합물일 수 있다:In one embodiment of the present invention, the compound of Formula 1 of the present invention may be a cyclic hexapeptide-based compound represented by the following Formula 1a 'or 1b'

[화학식 1a’][Chemical Formula 1a ']

Figure 112017095652177-pat00010
Figure 112017095652177-pat00010

[화학식 1b’][Formula 1b ']

Figure 112017095652177-pat00011
Figure 112017095652177-pat00011

상기 화학식 1a’ 및 1b’의 화합물은 본 발명자에 의해 각각 울릉마이신 A (Ulleungmycin A) 화합물 또는 울릉마이신 B (Ulleungmycin B) 화합물로 명명되었다.The compounds of the above formulas (1a ') and (1b') were named by the present inventor as Ulleungmycin A compound or Ulleungmycin B compound, respectively.

본 발명의 화학식 1의 화합물은 또한, 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 존재할 수 있다. The compounds of formula (I) of the present invention may also be present in the form of a pharmaceutically acceptable salt.

본 발명의 용어 "약학적으로 허용가능한 염"이란 환자에게 비교적 비독성이고 무해한 유효작용을 갖는 농도로서 이 염에 기인한 부작용이 화학식 1로 표시되는 화합물의 이로운 효능을 저하시키지 않는 범위에서 상기 화합물에 대한 임의의 모든 유리산 또는 유리염기 부가염을 의미한다. 본 발명에서, 약학적으로 허용가능한 염은 화학식 1의 고리형 헥사펩타이드계 화합물과 동등한 항암 및/또는 항균 활성을 나타내는 화학식 1의 고리형 헥사펩타이드의 염이면 제한 없이 모두 사용 가능하다.The term "pharmaceutically acceptable salt" of the present invention means a compound having a relatively nontoxic and harmless effective action to a patient, wherein the adverse effect due to the salt is such that the effective amount of the compound ≪ / RTI > is meant any and all free acids or free base addition salts. In the present invention, the pharmaceutically acceptable salt can be used without limitation as long as it is a salt of the cyclic hexapeptide of the formula (1) exhibiting anticancer and / or antibacterial activity equivalent to the cyclic hexapeptide compound of the formula (1).

예컨대, 본 발명의 화학식 1의 화합물은 약학적으로 허용가능한 유리산에 의해 형성된 산부가염으로 존재할 수 있으나 이제 제한되지 않는다. 산부가염은 통상의 방법, 예를 들어 화합물을 과량의 산 수용액에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들어 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조한다. 동 몰량의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올(예컨대, 글리콜 모노메틸에테르)을 가열하고, 이어서 상기 혼합물을 증발시켜 건조시키거나, 또는 석출된 염을 흡인 여과시킬 수 있다.For example, the compounds of formula 1 of the present invention may exist in acid addition salts formed by pharmaceutically acceptable free acids, but are not limited to these. The acid addition salt is prepared by a conventional method, for example, by dissolving the compound in an excess amount of an acid aqueous solution, and precipitating the salt using a water-miscible organic solvent such as methanol, ethanol, acetone or acetonitrile. The molar amount of the compound and the acid or alcohol (e.g., glycol monomethyl ether) in water may be heated and then the mixture may be evaporated to dryness, or the precipitated salt may be subjected to suction filtration.

상기 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 인산, 황산, 질산, 브롬산, 요오드산 또는 과염소산 등을 사용할 수 있고, 유기산으로는 메탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 말레인산, 숙신산, 옥살산, 벤조산, 타르타르산, 푸마르산, 만데르산, 프로피온산, 구연산, 젖산, 글리콜산, 글루콘산, 갈락투론산, 글루탐산, 글루타르산, 글루쿠론산, 아스파르트산, 아스코르브산, 카본산 또는 바닐릭산 등을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.As the free acid, an organic acid and an inorganic acid can be used. As the inorganic acid, hydrochloric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, nitric acid, bromic acid, iodic acid or perchloric acid can be used. Examples of the organic acid include methanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, But are not limited to, trifluoroacetic acid, maleic acid, succinic acid, oxalic acid, benzoic acid, tartaric acid, fumaric acid, mandelic acid, propionic acid, citric acid, lactic acid, glycolic acid, gluconic acid, galacturonic acid, glutamic acid, glutaric acid, glucuronic acid, Ascorbic acid, carbonic acid, or vanillyric acid, but the present invention is not limited thereto.

또한, 본 발명의 화학식 1의 화합물에 대해 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속염 또는 알칼리 토금속염은, 예컨대 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해시키고, 비용해 화합물 염을 여과한 후 여액을 증발, 건조시켜 얻을 수 있다. 이때, 금속염으로는 특히 소듐, 포타슘, 또는 칼슘의 염을 제조하는 것이 제약상 적합하나 이들에 제한되는 것은 아니다. 또한 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 은염(예, 질산은)과 반응시켜 얻을 수 있으나, 이제 제한되지 않는다.In addition, a pharmaceutically acceptable metal salt may be prepared using a base for the compound of formula (I) of the present invention. The alkali metal salt or alkaline earth metal salt can be obtained, for example, by dissolving the compound in an excess amount of an alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the insoluble compound salt, and then evaporating and drying the filtrate. At this time, it is pharmaceutically acceptable to produce salts of sodium, potassium or calcium as the metal salt, but it is not limited thereto. The corresponding silver salt may also be obtained by reacting an alkali metal or alkaline earth metal salt with a suitable silver salt (e.g., silver nitrate), but is not limited to this.

고리형 헥사펩타이드계 화합물의 제조방법Method for producing cyclic hexapeptide-based compounds

본 발명에 따른 화학식 1의 고리형 헥사펩타이드 화합물은 미생물 균주로부터 추출 및 분리되거나, 공지의 유기합성법을 이용하거나 적절히 변경하여 제조될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 예컨대, 본 발명의 화학식 1의 고리형 헥사펩타이드 화합물은 미생물 균주, 예컨대 육상 토양 방선균으로부터 추출 및 분리될 수 있다. The cyclic hexapeptide compound of formula (I) according to the present invention may be prepared by extracting and separating from a microorganism strain, using a known organic synthesis method or by appropriately modifying it, but is not limited thereto. For example, the cyclic hexapeptide compound of formula 1 of the present invention can be extracted and isolated from microbial strains, such as ground-based actinomycetes.

본 발명의 화학식 1의 고리형 헥사펩타이드 화합물을 미생물 균주로부터 추출 및 분리하여 제조할 경우, 상기 제조방법은 (i) 미생물 균주를 배양하여 균주 배양물을 얻는 단계 (단계 1); (ii) 상기 단계 1에서 얻은 균주 배양물을 추출하여 추출물을 얻는 단계 (단계 2); 및 (iii) 상기 단계 2에서 얻은 상기 추출물을 정제하는 단계를 포함할 수 있다. When the cyclic hexapeptide compound of formula (1) of the present invention is prepared by extracting and isolating from a microorganism strain, the method comprises: (i) culturing a microorganism strain to obtain a strain culture (step 1); (ii) extracting the strain culture obtained in step 1 to obtain an extract (step 2); And (iii) purifying the extract obtained in step 2).

상기 제조방법에 있어서, 상기 단계 1은 스트렙토마이세스 속 (Streptomyces sp.) KCB13F003 균주를 배양하여 균주 배양물을 얻는 단계이다. 구체적으로, 상기 균주의 배양은 통상의 미생물이 사용할 수 있는 영양원을 함유하는 배지에서 배양할 수 있다. 영양원으로는 종래 방선균의 배양에 이용되고 있는 공지의 영양원을 사용할 수 있다. 예컨대, 탄소원으로는 글루코오스, 물엿, 덱스트린, 전분, 당밀, 동물유, 식물유 등을 사용할 수 있으며, 질소원으로는 밀기울, 대두박, 소맥, 맥아, 면실박, 어박, 콘스팁리커, 육즙, 효모 추출물, 황산 암모늄, 질산소다, 요소 등을 사용할 수 있다. 필요에 따라, 식염, 칼륨, 마그네슘, 코발트, 염소, 인산, 황산 및 기타 이온생성을 촉진하는 무기염류를 첨가할 수 있다. 배양방법으로는 호기적 조건에서는 진탕배양 혹은 정치배양이 가능하다. 배양 온도는 상기의 각 조건들에서 배양할 경우 조건에 따라 조금씩 상이하지만, 일반적으로 20 내지 37 ℃에서 배양할 수 있으며, 25 내지 30 ℃에서 배양할 수 있으나, 이제 제한되지 않는다.In the above method, step 1 is a step of culturing Streptomyces sp. KCB13F003 strain to obtain a strain culture. Specifically, the cultivation of the strain may be carried out in a culture medium containing a nutrient source to which conventional microorganisms can be used. As a nutrient source, it is possible to use a known nutrient source conventionally used for culturing actinomycetes. Examples of the carbon source include glucose, syrup, dextrin, starch, molasses, animal oil, vegetable oil and the like. Examples of the nitrogen source include bran, soybean meal, wheat, malt, cottonseed, Ammonium sulfate, sodium nitrate, urea, and the like. If necessary, sodium chloride, potassium, magnesium, cobalt, chlorine, phosphoric acid, sulfuric acid and other inorganic salts promoting ion production may be added. As the culture method, it is possible to cultivate shaking or stationary culture under aerobic conditions. The incubation temperature may vary slightly depending on conditions when cultivated under the above-mentioned conditions, but it can be generally cultured at 20 to 37 ° C and can be cultured at 25 to 30 ° C, but is not limited to this.

상기 제조방법에서, 상기 단계 2는 상기 단계 1에서 얻은 균주 배양물을 용매로 추출하여 추출물을 얻는 단계이다. 본 발명에 따른 고리형 헥사펩타이드계 화합물은 균주의 배양액뿐만 아니라 균체 부분에도 존재할 수 있다. 따라서, 균주의 배양액 및 균체에 용매를 가하여 배양액 및 균체로부터 유효성분을 추출한 후 수득된 추출액을 감압증발 방법으로 농축한다. 이때, 상기 용매는 에틸아세테이트를 사용하는 것이 바람직하다.In the above production method, step 2 is a step of extracting the culture obtained in step 1 with a solvent to obtain an extract. The cyclic hexapeptide compound according to the present invention can be present not only in the culture medium of the strain but also in the cell part. Therefore, a solvent is added to the culture medium and cells of the strain, and the effective component is extracted from the culture medium and the cells, and the obtained extract is concentrated by reduced-pressure evaporation. At this time, ethyl acetate is preferably used as the solvent.

상기 제조방법에서, 상기 단계 3은 상기 단계 2에서 얻은 추출물을 정제하는 단계이다. 상기 추출물의 정제는 추출물을 메탄올 및 물의 혼합용매를 이용하여 컬럼 크로마토그래피를 실시한 후, 고속액체크로마토그래피로 정제하는 것일 수 있다.In the above production method, the step 3 is a step of purifying the extract obtained in the step 2. The extract may be purified by subjecting the extract to column chromatography using a mixed solvent of methanol and water and then purifying by high performance liquid chromatography.

본 발명의 일 실시양태에서, 본 발명의 고리형 헥사펩타이드계 화합물을 육상 토양 방선균인 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp .) 균주로부터 추출 및 분리하고, 분리된 화합물을 확인하였다 (도 1 내지 도 4).In one embodiment of the present invention, the cyclic hexapeptide-based compounds of the present invention are used in combination with the Streptomyces sp. sp . ) Strain, and isolated compounds were identified (FIGS. 1 to 4).

고리형 헥사펩타이드계 화합물의 용도Uses of cyclic hexapeptide-based compounds

본 발명에 따른 상기 화학식 1의 고리형 헥사펩타이드 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 세포 독성 없이 암세포의 전이를 효과적으로 억제할 뿐만 아니라, 우수한 항균 활성을 갖는바, 항암제 또는 항균제로 유용하게 사용될 수 있다.The cyclic hexapeptide compound of Formula 1, its stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof according to the present invention not only effectively inhibits the metastasis of cancer cells without cytotoxicity but also has an excellent antimicrobial activity, Can be usefully used.

따라서, 본 발명에 따른 상기 화학식 1의 고리형 헵사펩타이드계 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 의약용도를 제공한다.Accordingly, the present invention provides a pharmaceutical use of the cyclic hepatic peptide compound of Formula 1, a stereoisomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to the present invention.

본 발명의 일 실시양태에서, 본 발명은 화학식 1의 고리형 헵사펩타이드계 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 항암용 약학적 조성물, 즉 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. In one embodiment of the present invention, the present invention provides an anticancer pharmaceutical composition comprising a cyclic hormone peptide compound of the formula (1), a stereoisomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, A pharmaceutical composition is provided.

본 발명에 있어서, 상기 암은 전이성 암일 수 있다. 또한, 상기 암은 고형암일 수 있으며, 예컨대 간암, 대장암, 자궁경부암, 신장암, 위암, 전립선암, 유방암, 뇌종양, 폐암, 자궁암, 결장암, 방광암 또는 췌장암일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In the present invention, the cancer may be a metastatic cancer. The cancer may be solid cancer, but it is not limited to liver cancer, colon cancer, cervical cancer, kidney cancer, stomach cancer, prostate cancer, breast cancer, brain tumor, lung cancer, uterine cancer, colon cancer, bladder cancer or pancreatic cancer.

본 발명의 항암용 약학적 조성물은 세포 독성 없이 암 세포의 전이 및/또는 암 세포 침윤을 효과적으로 억제함으로써 암의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다. 구체적으로, 본 발명에 따른 화합물이 인간 유방암 세포의 생존율에는 영향을 미치지 않으면서 유방암 세포의 이동과 침윤을 현저히 저해함을 확인하였다 (도 5 및 도 6).The anticancer pharmaceutical composition of the present invention can be effectively used for preventing or treating cancer by effectively inhibiting cancer cell metastasis and / or cancer cell infiltration without cytotoxicity. Specifically, it was confirmed that the compound according to the present invention significantly inhibited the migration and invasion of breast cancer cells without affecting the survival rate of human breast cancer cells (FIGS. 5 and 6).

본 발명의 다른 실시양태에서, 본 발명은 화학식 1의 고리형 헵사펩타이드계 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 항균용 약학적 조성물, 즉 박테리아 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. In another embodiment of the present invention, the present invention provides an antimicrobial pharmaceutical composition comprising a cyclic hepatic peptide compound of formula (I), a stereoisomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, A pharmaceutical composition for therapeutic use is provided.

또한, 본 발명의 다른 실시양태에서, 본 발명은 화학식 1의 고리형 헵사펩타이드계 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 항균용 사료 조성물 또는 항균용 화장료 조성물을 제공한다. In another embodiment of the present invention, the present invention provides an antimicrobial feed composition or antimicrobial cosmetic composition comprising a cyclic hepatap peptide compound represented by formula (1), a stereoisomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, to provide.

본 발명에 있어서, 상기 용어 "항균" 또는 "항균 활성"이란, 세균이나 곰팡이와 같은 미생물에 대해 저항하는 성질을 의미하며, 보다 상세하게는 항생물질 등이 세균의 성장 또는 증식을 억제하는 특성을 의미한다. 본 발명의 목적상 상기 항균 또는 항균 활성은 항생제 내성 또는 항생제 비내성인 그람 양성균 등의 성장 또는 증식을 억제하는 특성으로서 사용될 수 있으나, 특별히 이에 제한되지는 않는다.In the present invention, the term "antibacterial" or "antibacterial activity" refers to a property of resisting microorganisms such as bacteria or fungi. More specifically, antibiotics and the like inhibit the growth or proliferation of bacteria it means. For the purpose of the present invention, the antimicrobial or antimicrobial activity may be used as a property to inhibit the growth or proliferation of Gram-positive bacteria resistant to antibiotic resistance or antibiotic resistance, but the present invention is not particularly limited thereto.

상기 항생제 내성 균주는 페니실린계 항생제, 메티실린계 항생제, 퀴놀론계 항생제, 반코마이신계 항생제, 카바페넴계 항생제 및 아미노글리코사이드계 항생제로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 항생제에 대해 내성을 가지는 균주일 수 있으며, 메티실린 내성 황색포도구균 (MRSA, Methicillin-resistant Staphylococcus aureus), 퀴놀론 내성 황색포도구균 (QRSA, Quinolone-resistant Staphylococcus aureus), 반코마이신 내성 엔테로코쿠스 (vancomycin resistant enterococcus, VRE), 반코마이신 내성 황색포도구균 (vancomycin intermediate-resistant s. aureus, VISA) 또는 다제내성 균주인 아시네박터 바우마니 (Acinetobacter baumannii)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 예컨대, 상기 항생제 내성 균주는 MRSA 또는 QRSA일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.The antibiotic-resistant strain may be a strain resistant to at least one antibiotic selected from the group consisting of penicillin antibiotics, methicillin antibiotics, quinolone antibiotics, vancomycin antibiotics, carbapenem antibiotics, and aminoglycoside antibiotics , Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA), quinolone-resistant Staphylococcus aureus (QRSA), vancomycin resistant enterococcus (VRE), vancomycin resistant Staphylococcus aureus but are not limited to, vancomycin intermediate-resistant S. aureus, VISA, or Acinetobacter baumannii, a multi-drug resistant strain. For example, the antibiotic resistant strain may be MRSA or QRSA but is not limited thereto.

상기 그람 양성균은 스타필로코쿠스 속 (Staphylococcus sp .), 바실러스 속 (Bacillus sp .), 스트렙토코쿠스 속 (Streptococcus sp .) 또는 엔테로코쿠스 속 (Entercoccus sp .) 균주일 수 있으나, 특별히 이에 제한되지는 않는다. 예컨대, 상기 그람 양성균은 황색포도상구균 (Staphylococcus aureus), 고초균 (Bacillus subtilis), 폐렴연쇄상구균 (Streptococcus pneumoniae), 또는 엔테로코커스 패칼리스 (Enterococcus faecalis)일 수 있으나 이에 제한되지 않는다.The Gram-positive bacteria are Staphylococcus genus (Staphylococcus sp.), Bacillus (Bacillus sp.), Streptococcus genus (Streptococcus sp.) Or Enterococcus nose kusu in (Entercoccus sp . ) Strain, but it is not particularly limited thereto. For example, the Gram positive bacteria may be, but not limited to, Staphylococcus aureus , Bacillus subtilis , Streptococcus pneumoniae , or Enterococcus faecalis .

본 발명의 구체적인 일 실시예에서는 항생제 내성 균주인 MRSA 및 QRSA 뿐만 아니라, 황색포도상구균, 고초균, 폐렴연쇄상구균 및 엔테로코커스 패칼리스와 같은 그람 양성균에 대한 항균 활성을 확인하였다(표 4).In a specific example of the present invention, antimicrobial activity against Gram-positive bacteria such as Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Streptococcus pneumoniae, and Enterococcus faecalis was confirmed as well as antibiotic resistant strains MRSA and QRSA (Table 4).

본 발명에서 용어 "예방"은 본 발명의 약학적 조성물의 투여로 암 및/또는 박테리아 감염의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미하며, "치료"는 본 발명의 약학적 조성물에 의해 암 및/또는 미생물 감염증에 의한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.The term "prophylactic" in the present invention means all the acts of inhibiting or delaying the onset of cancer and / or bacterial infection by the administration of the pharmaceutical composition of the present invention, And / or microbial infectious disease is to be improved or improved.

본 발명의 약학적 조성물은 유효성분으로서 화학식 1로 표시되는 고리형 헥사펩타이드계 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 조성물의 총중량을 기준으로 0.01 내지 50 중량%로, 바람직하게는 0.1 내지 30 중량%로, 보다 바람직하게는 0.5 내지 10 중량%로 함유할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.The pharmaceutical composition of the present invention contains, as an active ingredient, a cyclic hexapeptide compound represented by the formula (1), a stereoisomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof in an amount of 0.01 to 50% by weight, But is not limited to, 0.1 to 30% by weight, more preferably 0.5 to 10% by weight.

또한, 본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제를 추가로 포함할 수 있으며, 각각의 사용 목적에 맞게 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구 제형, 멸균 주사 용액의 주사제 등 다양한 형태로 제형화하여 사용할 수 있으며, 경구 투여하거나 정맥내, 복강내, 피하, 직장, 국소 투여 등을 포함한 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다. 이러한 조성물에 포함될 수 있는 적합한 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸셀룰로즈, 미정질셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 들 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 충전제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.In addition, the pharmaceutical composition of the present invention may further comprise a pharmaceutically acceptable carrier, diluent or excipient, and may be formulated into powders, granules, tablets, capsules, suspensions, The composition may be formulated into various forms such as oral formulations such as emulsions, syrups and aerosols, and injections of sterile injectable solutions, and may be administered by various routes including oral administration or intravenous, intraperitoneal, subcutaneous, rectal, . Examples of suitable carriers, excipients or diluents that may be included in such compositions include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, Cellulose, methylcellulose, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. In addition, the pharmaceutical composition of the present invention may further comprise a filler, an anti-coagulant, a lubricant, a wetting agent, a flavoring agent, an emulsifying agent, an antiseptic, and the like.

경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토즈, 젤라틴 등을 혼합하여 제형화한다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크와 같은 윤활제가 사용될 수 있다.Solid formulations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules and the like, which may contain at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, gelatin, Are mixed and formulated. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc may also be used.

경구용 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 예시될 수 있으며, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.Examples of the oral liquid preparation include suspensions, solutions, emulsions and syrups. In addition to water and liquid paraffin which are commonly used simple diluents, various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, preservatives and the like are included .

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액제, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈61. 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 한편, 주사제에는 용해제, 등장화제, 현탁화제, 유화제, 안정화제, 방부제 등과 같은 종래의 첨가제가 포함될 수 있다.Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. Examples of the suspending agent include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like. The supplements of suppositories are etwesol, macrogol, tween 61. Cacao butter, laurin, glycerogelatin and the like can be used. On the other hand, injecting agents may include conventional additives such as solubilizers, isotonic agents, suspending agents, emulsifiers, stabilizers, preservatives and the like.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 건강상태, 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount. The term "pharmaceutically effective amount " as used herein means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment and not causing side effects, The type of disease, the severity, the activity of the drug, the sensitivity to the drug, the method of administration, the time of administration, the route of administration and the rate of release, the duration of the treatment, the factors including the drugs used concurrently or concurrently and other factors well known in the medical arts . The pharmaceutical composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, and may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and may be administered singly or multiply. It is important to take into account all of the above factors and to administer the amount in which the maximum effect can be obtained in a minimal amount without side effects, which can be easily determined by those skilled in the art.

구체적으로, 본 발명의 약학적 조성물에서 상기 화학식 1의 화합물의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 kg 당 0.1 내지 1,000 mg, 바람직하게는 1 내지 100 mg, 보다 바람직하게는 5 내지 60 mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 투여 경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.Specifically, the effective amount of the compound of Formula 1 in the pharmaceutical composition of the present invention may vary depending on the age, sex, and body weight of the patient, and is generally 0.1 to 1,000 mg, preferably 1 to 100 mg, More preferably 5 to 60 mg per day or every other day, or one to three divided doses per day. However, the dosage may not be limited in any way because it may be increased or decreased depending on route of administration, severity of disease, sex, weight, age, and the like.

본 발명의 일 실시양태에서, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 이를 필요로 하는 개체, 예컨대 인간 또는 인간을 제외한 포유류에게 투여하는 단계를 포함하는 암 또는 치료방법을 제공한다.In one embodiment of the present invention, the present invention includes a method of treating a mammal comprising administering to a mammal other than a human, or a human, in need thereof a compound represented by formula (I), a stereoisomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof, Cancer or a method of treatment.

본 발명의 다른 실시양태에서, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 이를 필요로 하는 개체, 예컨대 인간 또는 인간을 제외한 포유류에게 투여하는 단계를 포함하는 박테리아 감염증의 치료방법을 제공한다.In another embodiment of the present invention, the present invention includes a method of treating a mammal comprising administering to a mammal other than a human, or a human, in need thereof a compound represented by formula (I), a stereoisomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof, Thereby providing a method for treating a bacterial infection.

본 발명에서 용어 "개체"란, 암 및/또는 미생물 감염증이 발병하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함한 원숭이, 소, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 쥐, 토끼 또는 기니아 피그를 포함한 모든 동물을 의미하고, 본 발명의 화합물을 개체에게 투여함으로써 상기 질환을 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있다. 본 발명의 화합물은 기존의 치료제와 병행하여 투여될 수 있다.The term "individual" in the present invention means a monkey, a horse, a sheep, a pig, a chicken, a turkey, a quail, a cat, a dog, a mouse, a mouse, a rabbit including a human capable of developing or developing cancer and / Or guinea pig, and the compound of the present invention can be administered to an individual to effectively prevent or treat the disease. The compounds of the present invention can be administered in combination with existing therapeutic agents.

본 발명에서, 용어 "투여"란, 임의의 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 제공하는 것을 의미하며, 본 발명의 화합물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 본 발명의 화합물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수도 있다. 바람직한 투여방식 및 제제는 정맥 주사제, 피하 주사제, 피내 주사제, 근육 주사제, 점적 주사제 등이다. 주사제는 생리식염액, 링겔액 등의 수성 용제, 식물유, 고급 지방산 에스테르 (예, 올레인산에칠 등), 알코올 류 (예, 에탄올, 벤질알코올, 프로필렌글리콜, 글리세린 등) 등의 비수성 용제 등을 이용하여 제조할 수 있고, 변질 방지를 위한 안정화제 (예, 아스코르빈산, 아황산수소나트륨, 피로아황산나트륨, BHA, 토코페롤, EDTA 등), 유화제, pH 조절을 위한 완충제, 미생물 발육을 저지하기 위한 보존제 (예, 질산페닐수은, 치메로살, 염화벤잘코늄, 페놀, 크레솔, 벤질알코올 등) 등의 약학적 담체를 포함할 수 있다.In the present invention, the term "administering " means providing a predetermined substance to a patient in any suitable manner, and the administration route of the compound of the present invention is administered through any conventional route so long as it can reach the target tissue . But are not limited to, intraperitoneal, intravenous, intramuscular, subcutaneous, intradermal, oral, topical, intranasal, intrathecal, rectal. In addition, the compounds of the present invention may be administered by any device capable of moving the active substance to the target cell. The preferred modes of administration and formulations are intravenous, subcutaneous, intradermal, intramuscular, and drip injections. The injectable solution may be a non-aqueous solvent such as an aqueous solvent such as a physiological saline solution or a ring gel solution, a vegetable oil, a higher fatty acid ester (e.g., oleic acid), an alcohol (e.g., ethanol, benzyl alcohol, propylene glycol, glycerin, etc.) (For example, ascorbic acid, sodium hydrogen sulfite, sodium pyrophosphate, BHA, tocopherol, EDTA and the like), an emulsifier, a buffer for pH control, a microbial growth inhibitor And a pharmaceutical carrier such as a preservative (e.g., mercury nitrate, thimerosal, benzalkonium chloride, phenol, cresol, benzyl alcohol, etc.).

본 발명에서 유효성분과 결합하여 사용된 "치료학적으로 유효한 양"이란 용어는 대상 질환을 예방 또는 치료하는데 유효한 본 발명의 고리형 헥사펩타이드계 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 양을 의미한다.The term "therapeutically effective amount " used in combination with the active ingredient in the present invention refers to the amount of the cyclic hexapeptide-based compound of the present invention, its stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof, effective to prevent or treat the subject disease it means.

본 발명의 약학적 조성물은 예방 또는 치료하고자 하는 질환의 종류에 따라, 유효성분으로서 본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 이외의 공지된 각 질환의 예방 또는 치료에 사용되는 공지의 약물을 추가로 포함할 수 있다. 예컨대, 암질환의 예방 또는 치료에 사용되는 경우 유효성분으로서 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 이외에 공지된 항암제를 추가로 포함할 수 있고, 이들 질환의 치료를 위해 공지된 다른 치료와 병용될 수 있다. 다른 치료에는 화학요법, 방사선 치료, 호르몬 치료, 골수 이식, 줄기-세포 대체치료, 다른 생물학적 치료, 면역치료 등이 포함되지만, 이에 한정되는 것은 아니다.The pharmaceutical composition of the present invention can be used as an effective ingredient for preventing or treating various known diseases other than the compound represented by the formula (1) of the present invention, its stereoisomer or its pharmaceutically acceptable salt, Or < / RTI > known drugs used in therapy. For example, when it is used for the prophylactic or therapeutic treatment of cancer, it may further comprise a known anticancer agent as well as a compound represented by the formula (1), a stereoisomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, Can be used in combination with other treatments known to those skilled in the art. Other treatments include, but are not limited to, chemotherapy, radiation therapy, hormone therapy, bone marrow transplantation, stem cell replacement therapy, other biological therapies, immunotherapy, and the like.

본 발명의 약학적 조성물에 포함될 수 있는 항암제의 예시에는 DNA 알킬화제로 메클로에타민 (mechloethamine), 클로람부칠 (chlorambucil), 페닐알라닌 (phenylalanine), 무스타드 (mustard), 사이클로포스파미드 (cyclophosphamide), 이포스파미드 (ifosfamide), 카르무스틴 (carmustine: BCNU), 로무스틴 (lomustine: CCNU), 스트렙토조토신 (streptozotocin), 부술판 (busulfan), 티오테파 (thiotepa), 시스플라틴 (cisplatin) 및 카보플라틴 (carboplatin); 항암 항생제 (anti-cancer antibiotics)로 닥티노마이신 (dactinomycin: actinomycin D), 독소루비신 (doxorubicin: adriamycin), 다우노루비신 (daunorubicin), 이다루비신 (idarubicin), 미토크산트론 (mitoxantrone), 플리카마이신 (plicamycin), 마이토마이신 C (mitomycin C) 및 블레오마이신 (bleomycin); 및 식물 알카로이드 (plant alkaloids)로 빈크리스틴 (vincristine), 빈블라스틴 (vinblastine), 파클리탁셀 (paclitaxel), 도세탁셀 (docetaxel), 에토포시드 (etoposide), 테니포시드 (teniposide), 토포테칸 (topotecan) 및 이리노테칸 (iridotecan) 등이 포함되지만, 이에 한정되지 않는다.Examples of anticancer agents that may be included in the pharmaceutical composition of the present invention include DNA alkylating agents such as mechloethamine, chlorambucil, phenylalanine, mustard, cyclophosphamide, But are not limited to, ifosfamide, carmustine (BCNU), lomustine (CCNU), streptozotocin, busulfan, thiotepa, cisplatin, Carboplatin; The anticancer antibiotics include dactinomycin (actinomycin D), doxorubicin (adriamycin), daunorubicin, idarubicin, mitoxantrone, Plicamycin, mitomycin C, and bleomycin; And plant alkaloids such as vincristine, vinblastine, paclitaxel, docetaxel, etoposide, teniposide, topotecan, And iridotecan, but are not limited thereto.

또한, 본 발명은 항암제 또는 항균제의 제조를 위한 상기 화학식 I 로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 약제의 제조를 위한 상기 화학식 I 로 표시되는 화합물은 허용되는 보조제, 희석제, 담체 등을 혼합할 수 있으며, 기타 활성제제와 함께 복합 제제로 제조되어 활성 성분들의 상승 작용을 가질 수 있다. In addition, the present invention provides the use of a compound represented by the above-mentioned general formula (I), a stereoisomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the preparation of an anticancer agent or an antimicrobial agent. The compound represented by the above formula (I) for the preparation of a medicament may be mixed with an acceptable adjuvant, diluent, carrier or the like, and may be prepared as a combined preparation together with other active agents to have a synergistic action of the active ingredients.

본 발명에 있어서, 본 발명의 화합물을 유효성분으로 포함하는 조성물, 상기 화합물을 이용한 치료방법 또는 상기 화합물의 용도에서 언급된 사항은 서로 모순되지 않는 한 동일하게 적용된다.In the present invention, the composition comprising the compound of the present invention as an active ingredient, the therapeutic method using the compound, or the use of the compound is applied as long as they are not mutually contradictory.

본 발명에 따른 고리형 핵사펩타이드계 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 암 세포 전이 또는 침윤 저해 활성이 뛰어나므로, 항암제로서 유용하게 이용될 수 있다. The cyclic nuclear peptide compound, its stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof according to the present invention is excellent in cancer cell transformation or invasion inhibitory activity and thus can be usefully used as an anticancer agent.

아울러, 본 발명에 따른 고리형 핵사펩타이드계 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 그람 양성균, 메티실린 내성 황색포도구균 (MRSA, Methicillin-resistant Staphylococcus aureus) 또는 퀴놀론 내성 황색포도구균 (QRSA, Quinolone-resistant Staphylococcus aureus) 등에 대한 저해활성이 우수하므로, 항균제로 유용하게 사용할 수 있다.In addition, the cyclic nucleotide peptide compound, its stereoisomer or pharmaceutically acceptable salt thereof according to the present invention can be used in combination with Gram-positive bacteria, methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) or quinolone resistant Staphylococcus aureus QRSA, and Quinolone-resistant Staphylococcus aureus), and thus can be effectively used as an antimicrobial agent.

도 1은 화학식 1a’으로 표시되는 본 발명의 화합물의 1H NMR 스펙트럼 (900 MHz, DMSO-d6)을 나타낸 것이다.
도 2는 화학식 1a’으로 표시되는 화합물의 13C NMR 스펙트럼 (225 MHz, DMSO-d6)을 나타낸 것이다.
도 3은 화학식 1b’으로 표시되는 화합물의 1H NMR 스펙트럼 (900 MHz, DMSO-d6)을 나타낸 것이다.
도 4는 화학식 1b’으로 표시되는 화합물의 13C NMR 스펙트럼 (225 MHz, DMSO-d6)을 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명에 따른 화합물의 암세포 증식 억제능을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 본 발명에 따른 화합물의 암세포 전이 및 침윤 저해능을 확인한 결과를 나타낸 것이다.1 shows the 1 H NMR spectrum (900 MHz, DMSO-d 6) of the compound of the present invention represented by the formula (Ia ').
Fig. 2 shows the 13 C NMR spectrum (225 MHz, DMSO-d6) of the compound represented by the formula 1a '.
3 shows the 1 H NMR spectrum (900 MHz, DMSO-d6) of the compound represented by the formula (Ib ').
4 shows the 13 C NMR spectrum (225 MHz, DMSO-d6) of the compound represented by the formula 1b '.
FIG. 5 shows the results of confirming the ability of the compound of the present invention to inhibit cancer cell proliferation.
FIG. 6 shows the results of confirming the inhibition of cancer cell metastasis and invasion by the compound of the present invention.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.Advantages and features of the present invention and methods of achieving them will become apparent with reference to the embodiments described in detail below. The present invention may, however, be embodied in many different forms and should not be construed as being limited to the embodiments set forth herein. Rather, these embodiments are provided so that this disclosure will be thorough and complete, and will fully convey the scope of the invention to those skilled in the art. Is provided to fully convey the scope of the invention to those skilled in the art, and the invention is only defined by the scope of the claims.

<실시예 1> 울릉마이신 A 및 울릉마이신 B 화합물의 제조&Lt; Example 1 > Preparation of Ulleungmycin A and Ulleungmycin B compounds

1) 스트렙토마이세스 속(1) Streptomyces sp. StreptomycesStreptomyces sp.) KCB13F003 균주로부터 화합물의 분리 sp.) Isolation of compound from strain KCB13F003

화학식 1a’으로 표시되는 울릉마이신 A 화합물 및 화학식 1b’으로 표시되는 울릉마이신 B 화합물을 얻기 위해, 스트렙토마이세스 속 (Streptomyces sp.) KCB13F003 균주 (수탁번호: KCTC12731BP)를 2013년 8월 울릉도 토양 시료로부터 분리하였다.A strain of Streptomyces sp. KCB13F003 (accession number: KCTC12731BP) was cultivated in August 2013 in Ulleungdo soil sample in order to obtain the urslemyin A compound represented by the chemical formula 1a 'and the urslemycin B compound represented by the chemical formula 1b' .

상기 균주의 배양을 위해 통상적으로 미생물이 이용하는 영양원을 함유한 배지를 준비하였다. 조 배지 및 생산 배지로서 멸균 증류수 1 L 당 7.9 mL 글리세롤, 5 g 락토스, 2.5 g 맥아 추출물, 2.5 g 효모 추출물, 0.5 g 칼슘카보네이트가 함유된 희석 GLY 배지를 사용하였다. 상기 배지가 200 mL 담긴 1 L 용량의 삼각플라스크를 121 ℃에서 15 분 간 멸균한 후, 스트렙토마이세스 속 (Streptomyces sp.) KCB13F003 균주의 사면배양 시험관으로부터 백금이 접종하여 3 일간 진탕 배양하여 종 배양으로 하였다. 생산배지 200 mL가 담긴 1 L 용량의 삼각플라스크에 접종하여 총 6 L에 대해 28 ℃에서 125 rpm으로 7 일간 진탕 배양하였다.For culturing the strain, a medium containing a nutrient source normally used by microorganisms was prepared. Diluted GLY medium containing 7.9 mL glycerol, 5 g lactose, 2.5 g malt extract, 2.5 g yeast extract and 0.5 g calcium carbonate per 1 L of sterilized distilled water was used as a crude medium and production medium. A 1 L Erlenmeyer flask containing 200 mL of the culture medium was sterilized at 121 DEG C for 15 minutes, platinum was inoculated from a slope culture test tube of Streptomyces sp. KCB13F003 strain, shake cultured for 3 days, and seed culture Respectively. Was inoculated into a 1 L Erlenmeyer flask containing 200 mL of the production medium, and cultured for 6 days at 28 DEG C at 125 rpm for 7 days with shaking.

상기 배양물을 6 L의 에틸아세테이트로 추출하고, 수득된 추출액을 감압 건조기를 이용하여 감압증발 방법으로 농축하였다. 상기 농축액을 오디에스 알피 18에 흡착시켜 오디에스 알피 18 컬럼크로마토그래피 (ODS RP-18 flash column chromatography)를 실시하였으며, 이때 메탄올/물 (2:8, 4:6, 6:4, 8:2, 10:0, v/v)을 혼합용매로 하여 단계적으로 메탄올 농도를 증가시키면서 용출하였다. 이때 울릉마이신 A 및 울릉마이신 B 화합물을 함유한 분획은 80 % 메탄올과 100 % 메탄올에서 용출하였다. 상기 분획을 감압 농축한 후, 고속액체크로마토그래피 (컬럼: Cosmosil Cholester C18, 길이 25 mm, 직경 10 mm)를 이용하여 용매로는 0.05 %의 포름산이 함유된 아세토나이트릴과 물을 25:75 - 40:60 농도 구배로 용출 유속 3 ml/분 조건으로 용출하여, 각각 14.6 분 및 12.0 분에서 210 nm의 UV 흡수 피크를 나타내는 울릉마이신 A 및 울릉마이신 B 화합물을 제조하였다.The culture was extracted with 6 L of ethyl acetate, and the obtained extract was concentrated by evaporation under reduced pressure using a vacuum dryer. The concentrate was adsorbed on Odyssey 18 and subjected to ODS RP-18 flash column chromatography using methanol / water (2: 8, 4: 6, 6: 4, 8: , 10: 0, v / v) as a mixed solvent. At this time, the fraction containing Ulleungmachine A and Ulleungmycin B compounds was eluted from 80% methanol and 100% methanol. After concentrating the fractions under reduced pressure, acetonitrile containing 0.05% of formic acid and water were mixed in a 25:75 - to - 50% solvent using high performance liquid chromatography (column: Cosmosil Cholester C18, length 25 mm, At a flow rate of 3 ml / min at a concentration gradient of 40: 60 to prepare Ulleungmacein A and Ulleungin B compounds showing UV absorption peaks at 210 nm at 14.6 minutes and 12.0 minutes, respectively.

2) 화합물의 확인2) Identification of compound

상기 스트렙토마이세스 속 (Streptomyces sp.) KCB13F003 균주의 배양액으로부터 제조한 울릉마이신 A 및 울릉마이신 B에 대해 ESIMS 질량분석기(Electrospray Ionization mass spectrometer)를 사용하여 분자량 및 분자식을 결정하였다. 또한, 핵자기공명 (NMR) 분석 (Bruker Biospin Advance II 900 NMR spectrometer, Bruker AVANCE HD 800 NMR spectrometer)을 통하여 1H NMR, 13C NMR, COSY (Correlation Spectroscopy), HMQC (1H-Detected heteronuclear Multiple-Quantum Coherence), HMBC (Heteronuclear Multiple-Bond Coherence), DEPT (Distortionless Enhancement by Polarization), NOESY (Nuclear Overhauser effect spectroscopy) 스펙트럼을 얻고, 화합물의 분자구조를 결정하였다.The molecular weights and molecular formulas of Ulleungmein A and Ulleungmycin B prepared from the culture medium of Streptomyces sp. KCB13F003 strain were determined using an ESIMS mass spectrometer (Electrospray Ionization mass spectrometer). Further, 1 H NMR, 13 C NMR, COZY (Correlation Spectroscopy), HMQC (1H-Detected heteronuclear Multiple-Quantum) spectroscopy were performed through nuclear magnetic resonance (NMR) analysis (Bruker Biospin Advance II 900 NMR spectrometer, Bruker AVANCE HD 800 NMR spectrometer) Coherence, HMBC, Distortionless Enhancement by Polarization (DEPT) and Nuclear Overhauser effect spectroscopy (NOESY) spectra were obtained and the molecular structure of the compounds was determined.

측정 결과를 하기 표 1과 2에 나타내었다. 상기 스트렙토마이세스 속 (Streptomyces sp.) KCB13F003 균주의 배양액으로부터 제조한 물질은 상기 화학식 1a’ 및 화학식 1b’으로 표시되는 고리형 헥사펩타이드계 화합물로 확인되었으며, 각각 울릉마이신 A (Ulleungmycin A) 및 울릉마이신 B (Ulleungmycin B) 화합물로 명명하였다.The measurement results are shown in Tables 1 and 2 below. The substance prepared from the culture solution of Streptomyces sp. KCB13F003 strain was identified as a cyclic hexapeptide compound represented by the above formula (1a ') and (1b'), and each of Ulleungmycin A and Ulleungmycin A And named as Ulleungmycin B compound.

구체적으로, 울릉마이신 A 화합물은 분자량 803, 분자식 C38H58N9O8Cl 임을 확인하였으며, 5-염소-L-트립토판, D-발린, D-호모류신, L-알로-류신, L-오르니틴, D-쓰레오-베타-하이드록시-아스파라긴으로 구성되어 있는 신규한 염소함유 고리형 헥사펩타이드계 화합물임을 규명하였다 (1H, 13C NMR 데이터를 하기 표 1, 도 1 및 2에 나타내었다). Specifically, it was confirmed that the compound of Uleungthymine A had a molecular weight of 803 and a molecular formula of C 38 H 58 N 9 O 8 Cl, and 5-chlorine-L-tryptophan, D-valine, D- Ornithine and D-threo-beta-hydroxy-asparagine ( 1 H, 13 C NMR data are shown in the following Table 1, Figs. 1 and 2) ).

울릉마이신 A: 흰색 분말; [α]22D +21.7 (c 0.05, MeOH); UV (MeOH) λmax (log ε) 208 (3.4); 227 (3.5), 290 (2.7); HRESIMS m/z 804.4166 [M + H]+ (calcd for C38H59N9O8Cl, 804.4175).Ullung Mickins A: white powder; [α] 22 D +21.7 (c 0.05, MeOH); UV (MeOH)? Max (log ? ) 208 (3.4); 227 (3.5), 290 (2.7); HRESIMS m / z 804.4166 [M + H] + (calcd for C 38 H 59 N 9 O 8 Cl, 804.4175).

[표 1][Table 1]

Figure 112017095652177-pat00012
Figure 112017095652177-pat00012

(상기 표 1에서, ovla 는 겹친 신호를 나타냄)(In Table 1, ovl a denotes an overlapped signal)

또한, 울릉마이신 B 화합물은 분자량 789, 분자식 C37H56N9O8Cl 임을 확인하였으며, 5-염소-L-트립토판, D-발린, L-알로-류신, L-오르니틴, D-쓰레오-베타-하이드록시-아스파라긴은 상기 화학식 4로 표시되는 울릉마이신 A 화합물과 동일하나, 울릉마아신 A 화합물 중 D-호모류신이 D-류신으로 변환된 신규한 구조를 갖는다는 것을 규명하였다 (1H, 13C NMR 데이터를 하기 표 2, 도 3 및 4에 나타내었다).In addition, it was confirmed that the Ulleungmycin B compound had a molecular weight of 789 and a molecular formula of C 37 H 56 N 9 O 8 Cl. It was confirmed that 5-chlorine-L-tryptophan, D-valine, L-allo- Leo-beta-hydroxy-asparagine is the same as the uollenmine A compound represented by the above formula (4), but it has been confirmed that D-homo-leucine among the Ullungmaasin A compounds has a novel structure converted to D-leucine 1 H, &lt; 13 &gt; C NMR data are shown in Table 2, Figs. 3 and 4).

울릉마이신 B: 흰색 분말; [α]22D + 38.2 (c 0.05, MeOH); UV (MeOH) λmax (log ε) 207 (3.4), 227 (3.4), 290 (2.7); HRESIMS m/z 790.4018 [M + H]+ (calcd for C37H57N9O8Cl, 790.4019).Ullung Meishin B: white powder; [α] 22 D + 38.2 ( c 0.05, MeOH); UV (MeOH)? Max (log ? ) 207 (3.4), 227 (3.4), 290 (2.7); HRESIMS m / z 790.4018 [M + H] + (calcd for C 37 H 57 N 9 O 8 Cl, 790.4019).

[표 2][Table 2]

Figure 112017095652177-pat00013
Figure 112017095652177-pat00013

(상기 표 2에서, ovla 는 겹친 신호를 나타냄)(In Table 2, ovl a represents a superimposed signal)

상기 결과를 통해 본 발명의 울릉마이신 A 및 울릉마이신 B 화합물을 성공적으로 제조하였음을 알 수 있다.From the above results, it can be seen that the Ullungmein A and Ulleungmycin B compounds of the present invention were successfully prepared.

<실시예 2> 울릉마이신 A 및 울릉마이신 B 화합물의 세포독성 확인<Example 2> Cytotoxicity of Ulleungmacein A and Ulleungmycin B compounds

인간 유방암 세포주 (MDA-MB-231 세포, ATCC HTB-26)를 DMEM 배지 (Dulbeccos modification of Eagles medium, 10 % 소 태아혈청, 100 units/ml penicillin, 100 μg/ml streptomycin 함유)를 이용하여 37 ℃의 5 % CO2 배양기 내에서 배양하였다. 배양한 세포주를 96 웰 플레이트에 분주한 후( 5×1,000/well), 울릉마이신 A 및 B 화합물을 1, 5, 10, 20, 및 30 μM의 농도로 각각 첨가하여 24 시간 동안 배양하였으며, 대조군으로 0.5 μM의 독소루비신을 사용하였다. EZ-cytox cell viability assay 시약을 10 μl/well씩 처리하여 2 시간 동안 배양한 뒤, 세포의 생존율을 450 nm의 흡광도로 측정하여 산출하였다.Human breast cancer cell lines (MDA-MB-231 cells, ATCC HTB-26) were cultured in DMEM medium (containing Dulbecco's modification of Eagles medium, 10% fetal bovine serum, 100 units / ml penicillin, 100 μg / ml streptomycin) In a 5% CO 2 incubator. The cultured cell lines were divided into 96-well plates (5 × 1,000 / well), and Urethralmine A and B compounds were added at concentrations of 1, 5, 10, 20, and 30 μM for 24 hours, 0.5 μM doxorubicin was used. EZ-cytox cell viability assay The cells were incubated for 2 h at 10 μl / well, and the viability of the cells was measured by absorbance at 450 nm.

그 결과, 본 발명에 따른 울릉마이신 A 및 울릉마이신 B 화합물은 30 μM의 울릉마이신 A를 제외하면 MDA-MB-231 세포주에 대해 별다른 생존율 억제 효과를 나타내지 않음을 확인하였다 (도 5). As a result, it was confirmed that the compound of Ureungmachine A and Ureleinmycin B according to the present invention had no remarkable effect on the survival rate of the MDA-MB-231 cell line except for 30 μM of Ureungmaxin A (FIG. 5).

상기 결과를 통해, 본 발명의 화합물은 생체 내에 유의한 세포 독성을 일으키지 않고 사용될 수 있다는 점을 확인하였다. The above results confirm that the compounds of the present invention can be used without causing significant cytotoxicity in vivo.

<실시예 3> 울릉마이신 A 및 울릉마이신 B 화합물의 암세포 전이저해 활성 측정<Example 3> Measurement of cancer cell metastasis inhibitory activity of Ulleungmicsin A and Ulleungmycin B compounds

울릉마이신 A 및 울릉마이신 B 화합물이 암세포 전이를 저해하는 효과가 있는지 확인하기 위해, 암세포 이동 측정법 (migration assay)과 트랜스웰 침윤 분석법 (transwell invasion assay)을 실시하였다. To investigate the effect of Urethromycin A and Urethromycin B compounds on cancer cell metastasis, a cancer cell migration assay and a transwell invasion assay were performed.

먼저, 암세포 이동 측정을 위해 인간 유방암 세포주 (MDA-MB-231 세포)를 24 웰 플레이트에 16 시간 동안 배양한 후 (6×10,000 cells/well), 단일 층으로 붙어있는 세포를 팁을 사용하여 직선으로 긁어내 세포가 존재하지 않는 영역을 형성하였다. 세포를 인산완충식염수 (Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline, DPBS)로 세 번 씻어준 후, 미토마이신 C (mitomycin C) (1 μg/mL)를 3 시간 동안 처리한 뒤, 울릉마이신 A 또는 울릉마이신 B가 포함된 새로운 배지로 교체하였다. 24 시간 후, 세포를 4 % 포름알데히드로 15 분간 고정시켰으며, 0.2 % 크리스탈 바이올렛이 첨가된 20 % 메탄올로 30 분간 염색하였다. 이동한 세포를 현미경을 사용하여 관찰하였다.First, the human breast cancer cell line (MDA-MB-231 cells) was cultured in a 24-well plate for 16 hours (6 × 10,000 cells / well) To form an area where no scraped cells existed. Cells were washed three times with Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline (DPBS), treated with mitomycin C (1 μg / mL) for 3 h, And replaced with the new media included. After 24 hours, the cells were fixed with 4% formaldehyde for 15 minutes and stained with 20% methanol with 0.2% crystal violet for 30 minutes. The migrated cells were observed using a microscope.

한편, 암세포 침윤 분석을 위해 메트리겔이 코팅된 트랜스웰챔버 상단에 울릉마이신 A 또는 울릉마이신 B 화합물이 포함된 무혈청의 DMEM 배지를 이용해 1×10,000 cells/well의 농도로 인간 유방암 세포 (MDA-MB-231 세포)를 도포하였으며, 챔버 하단에 10 % 농도의 소 태아혈청과 20 ng/mL의 상피세포성장인자 (EGF)가 포함된 DMEM 배지를 첨가한 뒤, 18 시간 동안 배양하였다. 챔버 하단으로 전이된 세포를 인산완충식염수로 씻어준 뒤, 3.7 %의 포름알데히드로 10 분간 고정 후, 0.2 % 크리스탈 바이올렛이 첨가된 20 % 메탄올로 30 분간 염색하였다. 전이된 세포는 현미경을 사용하여 관찰하였다.On the other hand, for analysis of cancer cell infiltration, human breast cancer cells (MDA-1 cells) were cultured at a concentration of 1 × 10,000 cells / well using serum-free DMEM medium containing Ulleungmycin A or Ulleungmycin B compound on the top of a transwell chamber coated with metry gel. MB-231 cells), and DMEM medium containing 10% fetal bovine serum and 20 ng / mL of EGF was added to the bottom of the chamber, followed by incubation for 18 hours. Cells transferred to the bottom of the chamber were washed with phosphate-buffered saline, fixed with 3.7% formaldehyde for 10 minutes, and stained with 20% methanol with 0.2% crystal violet for 30 minutes. Transfected cells were observed using a microscope.

그 결과, 울릉마이신 A 및 울릉마이신 B 화합물을 인간 유방암 세포에 처리한 경우, 대조군인 DMSO를 처리한 경우보다 세포의 이동과 침윤이 현저히 저해됨을 확인하였다 (도 6).As a result, it was confirmed that the treatment of Ulreungmachine A and Ulleungmycin B compounds in human breast cancer cells significantly inhibited migration and invasion of the cells as compared with the case of DMSO treatment (FIG. 6).

상기 결과를 통해, 본 발명의 화합물은 암세포 전이를 현저히 억제하여 항암제로서 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.From the above results, it can be seen that the compound of the present invention significantly inhibits cancer cell metastasis and can be usefully used as an anticancer agent.

<실시예 4> 울릉마이신 A 및 울릉마이신 B 화합물의 항균 활성 평가Example 4 Evaluation of Antibacterial Activity of Ulleung Mycin A and Ulleung Mycin B Compound

한국 유전자은행 (KCTC)의 축적 배양 컬렉션에서 얻어진 균주들을 항균활성 평가 연구에 사용하였으며, 이를 하기 표 3에 나타내었다.The strains obtained from the accumulation culture collection of the Korean Gene Bank (KCTC) were used for the evaluation of antimicrobial activity, which is shown in Table 3 below.

[표 3][Table 3]

Figure 112017095652177-pat00014
Figure 112017095652177-pat00014

상기 표 3에서,In Table 3,

- MuellerHinton broth는 [beef infusion solids (2.0 g/L), casein hydrolysate (17.5 g/L), starch (1.5 g/L), D.W]를 나타내며, - Mueller Hinton broth represents [beef infusion solids (2.0 g / L), casein hydrolysate (17.5 g / L), starch (1.5 g / L)

- Todd-Hewitt medium은 [Beef Heart Infusion (500 g/L), Peptic Digest of Animal Tissue 20 g/L, Dextrose 2 g/L, Sodium Chloride 2 g/L, Sodium Phosphate 0.4 g/L, Sodium Carbonate 2.5 g/L, D.W.]을 나타낸다.- Todd-Hewitt medium was added to the medium containing [Beef Heart Infusion (500 g / L), Peptide Digest of Animal Tissue 20 g / L, Dextrose 2 g / L, Sodium Chloride 2 g / L, Sodium Phosphate 0.4 g / g / L, DW].

항균 활성 평가는 액체 배지 희석법 (broth microdilution)을 통해 측정하였다. Mueller-Hinton broth 혹은 Todd-Hewitt medium에서 중앙 로그기 (mid-logarithmic phase)의 성장을 나타내는 시험 균주를 100,000/mL의 균체수가 되도록 희석한 후, 96 웰 플레이트에 웰 당 200 μL씩 분주하였다. 울릉마이신 A 및 울릉마이신 B를 DMSO를 이용하여 2-fold 연차 희석 (serial dilution)하여 웰 내의 시험 균주에 처리하였으며 DMSO의 최종농도가 0.05 %를 넘지 않도록 실험을 실시하였다. 최소억제농도 (Minimal Inhibitory Concentration, MIC)는 37 ℃에서 24 시간 배양 시, 시험 균주의 생장을 완전히 저해시킨 화합물의 최소 농도로 결정하였으며, 균주의 생장 정도는 650 nm에서 광학 밀도 (Optical Density, OD)를 측정하여 조사하였다. 항균 활성 실험의 결과를 하기 표 4에 나타내었다.The antimicrobial activity was evaluated by broth microdilution. Test strains showing mid-logarithmic phase growth in Mueller-Hinton broth or Todd-Hewitt medium were diluted to 100,000 / mL cell mass, and then 200 μL per well was dispensed into 96-well plates. Ulleungmachine A and Ulleungmycin B were subjected to 2-fold serial dilution using DMSO to treat the test strains in the wells, and the experiment was conducted so that the final concentration of DMSO did not exceed 0.05%. The minimum inhibitory concentration (MIC) was determined as the minimum concentration of the compound that completely inhibited the growth of the test strain when incubated at 37 ° C. for 24 hours. The degree of growth of the strain was measured at an optical density (OD) ) Were measured and examined. The results of the antibacterial activity test are shown in Table 4 below.

[표 4][Table 4]

Figure 112017095652177-pat00015
Figure 112017095652177-pat00015

상기 표 4에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 울릉마이신 A 및 울릉마이신 B 화합물은 황색포도상구균 (Staphylococcus aureus), 메티실린 내성 황색포도구균 (MRSA, Methicillin-resistant Staphylococcus aureus), 퀴놀론 내성 황색포도구균 (QRSA, Quinolone-resistant Staphylococcus aureus), 고초균 (Bacillus subtilis), 폐렴연쇄상구균 (Streptococcus pneumoniae) 및 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis) 등의 그람 양성균에 대해서 우수한 항생 효과를 나타내는 것으로 확인되었다.As shown in Table 4, the Ullungsmacein A and Ulleungmycin B compounds according to the present invention are effective against Staphylococcus aureus , Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA), Quinolone-resistant Staphylococcus aureus It has been confirmed that it exhibits an excellent antibiotic effect against Gram-positive bacteria such as QRSA, Quinolone-resistant Staphylococcus aureus , Bacillus subtilis , Streptococcus pneumoniae and Enterococcus faecalis .

상기 결과를 통해, 본 발명의 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 그람 양성균에 대한 우수한 성장 저해 활성을 나타냄으로써 항균제로 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.From the above results, it can be seen that the compound of the present invention, its stereoisomer or its pharmaceutically acceptable salt exhibits excellent growth inhibitory activity against Gram-positive bacteria and thus can be effectively used as an antimicrobial agent.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 관련 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에게 있어 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구범위와 그의 등가물에 의하여 정의될 것이다.While the present invention has been particularly shown and described with reference to exemplary embodiments thereof, it is to be understood that the same is by way of illustration and example only and is not to be construed as limiting the scope of the present invention. Accordingly, the actual scope of the invention will be defined by the appended claims and their equivalents.

Claims (15)

삭제delete 삭제delete 삭제delete 하기 화학식 1a 또는 화학식 1b로 표시되는 고리형 헥사펩타이드계 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
[화학식 1a]
Figure 112019015965910-pat00023

[화학식 1b]
Figure 112019015965910-pat00024
.Claims 1. A cyclic hexapeptide compound represented by the following formula (1a) or (1b), a stereoisomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
[Formula 1a]
Figure 112019015965910-pat00023

[Chemical Formula 1b]
Figure 112019015965910-pat00024
. 제 4 항에 있어서, 하기 화학식 1a’ 또는 화학식 1b’으로 표시되는 고리형 헥사펩타이드계 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
[화학식 1a’]
Figure 112017095652177-pat00025

[화학식 1b’]
Figure 112017095652177-pat00026
.The cyclic hexapeptide compound according to claim 4, which is represented by the following formula (1a ') or (1b'), a stereoisomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
[Chemical Formula 1a ']
Figure 112017095652177-pat00025

[Formula 1b ']
Figure 112017095652177-pat00026
. 스트렙토마이세스 속 (Streptomyces sp.) KCB13F003 균주를 배양하여 균주 배양물을 얻는 단계 (단계 1);
상기 단계 1에서 얻은 균주 배양물을 추출하여 추출물을 얻는 단계 (단계 2); 및
상기 단계 2에서 얻은 추출물을 정제하는 단계 (단계 3)를 포함하는
제 4 항 또는 제 5 항에 따른 고리형 헥사펩타이드계 화합물의 제조방법.A step of culturing Streptomyces sp. KCB13F003 strain to obtain a strain culture (step 1);
Extracting the strain culture obtained in step 1 to obtain an extract (step 2); And
Comprising the step of purifying the extract obtained in step 2 (step 3)
A method for producing a cyclic hexapeptide compound according to claim 4 or 5. 제 4 항 또는 제 5 항에 따른 고리형 헥사펩타이드계 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 항암용 약학적 조성물.A pharmaceutical composition for an anticancer comprising the cyclic hexapeptide compound according to claim 4 or 5, a stereoisomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. 제 7 항에 있어서, 상기 암은 전이성 암인 약학적 조성물.8. The pharmaceutical composition according to claim 7, wherein the cancer is metastatic cancer. 제 7 항에 있어서, 상기 암은 고형암인 약학적 조성물.8. The pharmaceutical composition according to claim 7, wherein the cancer is solid cancer. 제 9 항에 있어서, 상기 고형암은 간암, 대장암, 자궁경부암, 신장암, 위암, 전립선암, 유방암, 뇌종양, 폐암, 자궁암, 결장암, 방광암 또는 췌장암인 약학적 조성물.The pharmaceutical composition according to claim 9, wherein the solid cancer is liver cancer, colon cancer, cervical cancer, kidney cancer, stomach cancer, prostate cancer, breast cancer, brain tumor, lung cancer, uterine cancer, colon cancer, bladder cancer or pancreatic cancer. 제 7 항에 있어서, 암 전이 저해 또는 암세포 침윤 저해 효과를 나타내는 것인 약학적 조성물.The pharmaceutical composition according to claim 7, which exhibits an inhibitory effect on cancer metastasis or cancer cell infiltration. 제 4 항 또는 제 5 항에 따른 고리형 헥사펩타이드계 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 항균용 약학적 조성물.6. A pharmaceutical composition for antimicrobial use comprising the cyclic hexapeptide compound according to claim 4 or 5, a stereoisomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. 제 12 항에 있어서, 그람 양성균에 대한 항균용 약학적 조성물.13. The antimicrobial pharmaceutical composition according to claim 12, which is effective against Gram-positive bacteria. 제 4 항 또는 제 5 항에 따른 고리형 헥사펩타이드계 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 항균용 사료 조성물.An antimicrobial feed composition comprising the cyclic hexapeptide compound according to claim 4 or 5, a stereoisomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. 제 4 항 또는 제 5 항에 따른 고리형 헥사펩타이드계 화합물, 이의 입체이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 항균용 화장료 조성물.A cosmetic composition for antimicrobial use comprising the cyclic hexapeptide compound according to claim 4 or 5, a stereoisomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
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Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Asfaw H. et al, PLoS ONE, 12(4)*
Journal of Antibiotics, 1975, Vol.8, p. 561-566 [https://doi.org/10.7164/antibiotics.28.561]
Lissa S.T., UNIVERSITY OF HAWAII 학위논문. (2017. 5.)*
PLoS ONE, 2017, Vol. 12(4); e0176088, p.1-21
Tetrahedron Letters, Vol. 58 (2017), p. 2675-2680

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