KR101963559B1 - 피롤리딘 카복스아미도 유도체 및 이의 제조 방법 및 용도 - Google Patents

피롤리딘 카복스아미도 유도체 및 이의 제조 방법 및 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 염증성 장 질환을 포함하는 염증성 질환을 예방하고/하거나 개선하고/하거나 치료하는 피롤리딘 카복스아미도 유도체, 이의 광학적 이성질체 또는 이의 염 및 이들의 제조 방법 및 용도를 제공한다.

Description

피롤리딘 카복스아미도 유도체 및 이의 제조 방법 및 용도
본 발명은 피롤리딘 카복스아미도 유도체, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 이들의 제조방법과 용도에 관한 것이다.
면역억제제 (예: 인플릭시맙), 아미노살리실산 (예: 설파잘라진), 스테로이드 등 다양한 종류의 화합물, 조성물, 방법들이 염증성 적응증, 암 및 안과 적응증을 포함하는 다양한 질병들을 예방하고/하거나 치료하기 위해 사이토카인과 케모카인을 경감하는 수단으로서 제시되어 왔다 (Expert opinion on emerging drug (2015) 20(3):349-352; Cell. (2010) March 19; 140(6): 883-899; Progress in Retinal and Eye Research 37 (2013)68e89). 하지만 이들은 고가이고/거나 효능이 낮고/거나, 부작용을 동반하고/거나치료 효과가 낮은등의 이유로 만족스럽지 않아 (P&T 41(2016), Jun no 6; Gut 56(2007):725-732; World J Gastroenterol (2005); 11(16):2462-2466), 새로운 화합물, 조성물 및/또는 그 제조 방법이 여전히 요구되고 있다.
본 발명은 피롤리딘 카복스아미도 유도체가 염증성 사이토카인 (예, 인터루킨-6) 및/또는 케모카인의 발현과 활성을 억제하며, 표적 조직/세포에서는 충분히 높은 농도를 유지하는 반면, 혈액에는 적게 노출된다는 발견에 근거한다. 본 발명은 또한 피롤리딘 카복스아미도 유도체가 I-κB를 안정화시킴으로써 NF-κB (핵 인자 B)의 활성을 저해한다는 발견에 근거한다. 더 나아가서, 본 발명은 피롤리딘 카복스아미도 유도체가 Toll-유사 수용체 2/4와 인터루킨-1β 하부 신호전달에 역할하는 RIP 1 (수용체 상호작용 단백질 1) 및/또는 MyD88 (골수 분화 일차 반응 유전자 88)로 매개되는 염증신호전달 복합체의 형성을 방해하다는 사실에 근거한다
본 발명의 한 일면은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
[화학식 1]
Figure 112017096422982-pct00001
상기 화학식 1에서,
n은 0, 1 또는 2이고,
A는 -a1-이며, 여기서, a1은 알라닌 (Ala, A), 아르기닌 (Arg, R), 아스파라긴 (Asn, N), 아스파틱산 (Asp, D), 시스테인 (Cys, C), 글루타믹산 (Glu, E), 글루타민 (Gln, Q), 글라이신 (Gly, G), 히스티딘 (His, H), 이소루신 (Ile, I), 루신 (Leu, L), 라이신 (Lys, K), 메티오닌 (Met, M), 페닐알라닌 (Phe, F), 프롤린 (Pro, P), 세린 (Ser, S), 트레오닌 (Thr, T), 트립토판 (Trp, W), 티로신 (Tyr, Y) 및 발린 (Val, V)으로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택된 아미노산으로, 이 아미노산의 양 말단은 아마이드 결합에 의해 카보닐 또는 아민기와 연결되어 있고;
R1은 직쇄 또는 측쇄의 C1-36 알킬, 적어도 하나 이상의 이중결합을 포함하는 직쇄 또는 측쇄의 C2-36 알케닐 또는 적어도 하나 이상의 삼중결합을 포함하는 직쇄 또는 측쇄의 C2-36 알카이닐이다.
본 발명의 다른 일면은 상기 화합물, 이의 광학이성질체 및 염을 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일면은 다양한 질병 (예, 염증성 적응증, 암 및 안과 적응증)을 예방하거나 개선하거나 또는 치료하는 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 활성 성분으로 상기 화합물 하나 이상, 상기 광학 이성질체 하나 이상, 또는 상기 염 하나 이상을 포함한다.
본 발명의 또 하나의 다른 일면은 다양한 질병 (예, 염증성 적응증, 암 및 안과 적응증)을 예방하거나 개선하거나 또는 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 활성 성분으로서 상기 화합물 하나 이상, 상기 광학 이성질체 하나 이상, 또는 상기 염 하나 이상을 포함하는 조성물을 객체에게 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 실시 태양에 따르면, 상기 화합물들은 MyD88 (미드도솜 복합체) 및/또는 RIP 1이 매개하는 염증 신호전달 경로에서 IκB의 분해를 저해함으로써 NF-κB가 세포의 핵으로 이동하는 것을 방해하여 결과적으로 사이토카인 및 케모카인 (예, G-CSF, 인터루킨-2, SCF, VEGF, CX3CL1, IGFBP5, IGFBP6, 인터루킨-1α, 인터루킨-1β, 인터루킨-6, 인터루킨-9, MCP-1, MIP-3α, 인터루킨12p40/70, MIG, TNF-α 및 VCAM-1)의 발현을 억제함으로써, 상기 사이토카인 및 케모카인의 발현으로 인해 일어날 수 있는 염증 반응을 막는다.
당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가지는 자라면 하기의 상세한 설명과 도면에 기재된 내용을 통해 본 발명의 다른 일면들과 효과들을 쉽게 이해할 수 있을 것이다.
도 1A는 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물이 인터루킨-6의 발현을 억제하는 것을 보여주는 전기영동 결과이다.
도 1B는 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물이 인터루킨-6의 발현을 억제하는 것을 보여주는 그래프이다.
도 2은 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물이 RAW 264.7 세포주에서 사이토카인 및 케모카인의 발현을 억제하는 것을 보여준다.
도 3은 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물이 RAW 264.7 세포주 내 숙주에서 인터루킨-6의 발현을 억제하는 것을 보여준다.
도 4는 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물이 NF-κB의 활성을 저해하는 것을 보여준다.
도 5는 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물이 NF-κB를 억제하는 것을 보여준다.
도 6은 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물이 NF-κB의 활성은 저해하는 반면 TGF-β와 BMP의 신호전달에는 영향을 주지 않음을 보여준다.
도 7은 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물이 IRAK-1, MyD88 및/또는 RIP1이 매개하는 염증 신호 전달 단백질 복합체의 형성을 저해하는 동시에 IκB의 농도를 변화시키는 것을 보여주는 면역침전 결과이다.
도 8은 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물이 IRAK-1, MyD88 및/또는 RIP1이 매개하는 염증 신호 전달 단백질 복합체의 형성을 저해하는 것을 보여주는 면역침전 결과이다.
도 9는 RAW 264.7 대식 세포와 BMDM 세포에서 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물의 전처리 농도 변화에 따라 IκB의 농도가 변화함을 보여준다.
도 10은 DSS로 유도된 만성 대장염 동물 모델에서 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물의 경구 투여 용량에 따른 질병 활성 지수 점수를 보여주는 그래프이다.
도 11A는 DSS로 유도된 급성 대장염 동물 모델에서 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물이 급성 대장염을 억제하는 능력을 나타내는 질병 활성 지수 점수를 보여준다.
도 11B는 DSS로 유도된 만성 대장염 생쥐 모델에서 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물이 케모카인 (CCL20, CCL2 및 CX3CL1)의 발현양을 변화시키는 것을 보여준다.
도 12-16은 비치료군, DSS로 유도된 만성 대장염 모델군 및 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물로 치료된 군의 대장 융모 형태를 보여주는 이미지이다.
도 17은 비치료군, DSS로 유도된 만성 대장염 모델군, 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물로 치료된 군 및 설파살라진으로 치료된 군의 대장 벽 회복 정도를 보여주는 그래프이다.
도 18은 정맥 주사로 투여된 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물의 시간별 혈중 농도 변화를 보여주는 그래프이다.
도 19는 경구 투여된 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물의 시간별 혈중 농도 변화를 보여주는 그래프이다.
도 20A는 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물이 MAPK/ERK 신호전달 경로를 저해하는지를 확인하는 웨스턴 블롯 결과 이미지이다.
도 20B는 Toll-유사 수용체의 신호전달 경로를 보여주는 도면이다.
도 21은 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물이 MAPK/ERK 신호전달 경로를 저해하는지를 확인하는 웨스턴 블롯 결과 이미지이다.
도 22A와 22B는 각각 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물과 IRAK1/4 저해제가 NF-κB의 활성을 저해하는 정도를 보여준다.
도 23은 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물과 IRAK1/4 저해제가 IκB의 농도를 변화시키는지 확인하는 면역 블롯 결과 이미지이다.
도 24A와 24B는 각각 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물과 IRAK1/4 저해제가 MAPK/ERK 신호전달 경로를 저해하는 능력을 비교하여 보여주는 이미지와 그래프이다.
도 25A는 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물이 ARPE-19 세포에서 Nox-4, VEGF, VEGFR1, VEGFR2, Ang-2, EPO 및 EPOR의 발현은 억제하는 반면 Ang-1 및 Tie2의 발현은 증가시키는 것을 보여주는 웨스턴 블롯 결과 이미지이다.
도 25B는 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물이 HRMEC 세포에서 VEGF의 발현을 억제하는지를 확인하는 qRT-PCR 결과 이미지이다.
도 26은 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물이 HRMEC 세포에서 관 형성을 억제하는 것을 보여주는 이미지이다.
도 27A와 27B는 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물이 STZ로 유도된 1형 당뇨망막병 생쥐 모델에서 증가한 활성 산소를 억제하는 것을 보여주는 이미지이다.
도 28A는 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물이 MOG로 유도된 EAE 생쥐 모델에서 치료 효과가 있음을 보여주는 그래프이다.
도 28B는 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물이 MOG로 유도된 EAE 생쥐 모델에서 생쥐의 체중을 변화시키는 것을 보여주는 그래프이다.
도 29는 본 발명의 실시 태양에 따른 화합물이 맹장 결찰 및 천자 모델 (CLP)에서 치료효과가 있음을 보여주는 그래프이다.
1. 용어 정의
달리 정의되어 있지 않은 한, 본 발명 명세서에 사용된 기술 용어들과 과학 용어들은 본 발명 기술 분야의 당업자들에게 통상적으로 이해되는 의미로 정의된다. 본 발명에서 사용된 용어들 다수가 일반적으로 어떤 의미를 가지는지는 본 발명 명세서에 참고문헌으로서 인용된 하기의 문헌들을 보면 알 수 있다: The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker ed., 1988); The Glossary of Genetics, 5th Ed., R. Rieger et. al. (eds.), Springer Verlag (1991); and Hale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology (1991). 하기의 용어들은 달리 정의되지 않는 한 하기에 설명된 의미를 가진다.
특정적으로 기재되어 있거나 문맥상 명백한 경우가 아니라면, 본 발명 명세서에 사용된 용어 "또는"은 포함적인 의미로 사용된다.
특정적으로 기재되어 있거나 문맥상 명백한 경우가 아니라면, 본 발명 명세서에 사용된 용어 "일", "한", "하나", "하나의", "그"는 단수 또는 복수의 의미로 사용된다. 예를 들어, "한 화합물"이라고 하면 그 화합물 하나를 뜻할 수도 있고, 때에 따라서는 그 화합물들의 집합체를 뜻할 수도 있다. "하나의 운반체" 라고 하면 그 운반체 하나를 뜻할 수도 있고, 때에 따라서는그 운반체들의 집합체를 뜻할 수도 있다.
특정적으로 기재되어 있거나 문맥상 명백한 경우가 아니라면, 본 발명 명세서에 사용된 용어 "약"은 이 기술 분야에서 통상적으로 허용되는 오차 범위 (예를 들어, 평균의 표준편차 2) 안의 값을 의미하는 것으로 사용된다. "약"은 기술된 값의 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05% 또는 0.01% 안으로 이해될 수 있다. 문맥상 명백한 경우가 아니라면, 본 발명 명세서에서 사용되는 모든 수치는 용어 "약"으로 수식되어진 것으로 사용된다.
용어 "활성 성분" "의약" 및 "약학 성분"들은 본 발명 명세서에서 상호 같은 의미로 혼용되고, 어떤 수단 및/또는 어떤 경로로 객체 (예, 사람을 포함한 동물 또는 사람이 아닌 동물)에 투여되었을 때 바람직한 약리학적 효과 (예, 염증 감소)를 일으키는 화학 물질이나 화합물을 의미한다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "첨가제"는 본 발명의 조성물에 첨가될 수 있는 추가적인 성분을 의미할 수 있다. 상기 첨가제의 예에는 부형제 (예, 하나 또는 복수의 부형제), 항산화제 (예, 하나 또는 복수의 항산화제), 안정제 (예, 하나 또는 복수의 안정제), 방부제 (예, 하나 또는 복수의 방부제), pH 조절제 및/또는 pH 완충제 (예, 하나 또는 복수의 pH 조절제 및/또는 pH 완충제), 강장 조절제 (tonicity adjusting agents, 예, 하나 또는 복수의 강장 조절제), 농축제 (예, 하나 또는 복수의 농축제), 현탁제 (예, 하나 또는 복수의 현탁제), 결합제 (예, 하나 또는 복수의 결합제), 점도 상승제 (예, 하나 또는 복수의 점도 상승제) 등이 포함된다. 상기 첨가제는 치료하고자 하는 특정 증상에서 약학적으로 허용 가능한 것이라야 한다. 또한 상기 첨가제에는 가공제와 약물전달 조절제 및 상승제 (예, 인산 칼슘, 스테아르산 마그네슘, 활석, 단당류, 이당류, 전분, 젤라틴, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 나트륨 카복시 메틸 셀룰로오스, 덱스트로스, 하이드록시 프로필-베타-시클로 덱스트린, 폴리비닐 피롤리디논, 저융점 왁스, 이온 교환 수지 등과 이들 중 2 이상으로 이루어진 조합물)가 포함될 수 있다. 본 발명 명세서에 참고문헌으로 인용된 "Remington's Pharmaceutical Sciences," Mack Pub. Co., New Jersey (1991) 및 "Remington: The Science and Practice of Pharmacy," Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, 20th edition (2003) and 21st edition (2005)에 기타 약학적으로 허용 가능한 부형제들이 기술되어 있다. 본 발명에서 첨가제는 적절한 양으로 여겨지는 양으로 사용될 수 있다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "투여"는 경구 투여, 좌제 투여, 국소 투여, 정맥 주사 투여, 비경구 투여, 복강 투여, 근육 투여, 병변 투여, 경막내 투여, 비강 투여, 피하 투여 또는 객체에게 예를 들어 미니 삼투 펌프같은 지연 방출 장치를 삽입하는 것 등을 의미한다. 투여는 비경구 투여와 점막 투여를 포함하는 모든 투여 (예: 경구 투여, 비강 투여, 폐 투여, 직장 투여, 협측 투여, 질 투여, 안구 투여 및 경피 투여)를 의미한다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "유도체"와 "유사체"들은 본 발명 명세서에서 상호 같은 의미로 혼용되고, 모 화합물의 코어와 동일한 코어를 가지지만, 모 화합물과는 결합 순서에서, 하나 이상의 원자 및/또는 원자군의 존재 유무에서, 또는 결합 순서 및 원자 및/또는 원자군의 존재 유무에서 다른 화합물을 의미한다. 예를 들어, 유도체는 모 화합물의 코어에 하나 이상의 치환기가 존재한다는 점에서 모 화합물과 다를 수 있다. 여기서 치환기란 하나 이상의 원자, 하나 이상의 작용기, 또는 하나 이상의 하부구조(substructure)가 될 수 있다. 또한 유도체는 코어에 존재하는 원자들 간의 결합 순서에서 모 화합물과 다를 수 있다. 일반적으로 유도체는 적어도 이론적으로는 모 화합물로부터 화학적 및/또는 물리적 방법에 의해 제조되는 것으로 생각될 수 있다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "항산화제"는 어떤 형태의 세포 손상 및/또는 산화를 예방하거나 또는 지연시킬 수 있는 인공 또는 자연 물질을 의미할 수 있다. 항산화제는 과일이나 채소을 포함한 많은 음식물에서 발견된다. 항산화제는 또한 식이보충제로 이용가능하다. 항산화제의 예에는 베타 카로틴, 루테인, 리코펜, 셀레늄, 비타민 에이, 비타민 씨, 및 비타민 이가 포함될 수 있다. 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가지는 자에게 알려진 다른 항산화제 또한 이용될 수 있다. 본 발명에서 항산화제는 적절한 양으로 여겨지는 양으로 사용될 수 있다.
본 발명 명세서에 사용된 "병용 투여 (co-administer)"란 용어는 본 발명에서의 화합물 또는 조성물을 추가적인 치료체 또는 활성 성분 또는 첨가제와 동시에 투여하거나, 추가적인 치료체 또는 활성 성분 또는 첨가제보다 먼저 투여하거나, 추가적인 치료체 또는 활성 성분 또는 첨가제보다 나중에 투여하는 것을 의미한다. 본 발명에서의 화합물이나 조성물은 필요로 하는 객체에게 단독 또는 병용 투여될 수 있다. 병용 투여는 상기 화합물을 단독으로 순차적으로 투여하는 것은 물론 (하나 이상의 다른 화합물이나 의약과) 조합하여 이들을 동시에 또는 순차적으로 투여하는 것을 의미한다. 바람직하다면, 본 발명의 제형은 다른 활성 물질과 배합될 수 있다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "포함하다(comprise)" "포함하는(comprising)" "함유하는(containing)" 및 "가지는 (have)" 등은 "포괄하다(include)" "포괄하는(including)" 등과 같은 의미로 사용될 수 있다. 본 발명 명세서에서 사용된 용어 "본질적으로 구성된(consisting essentially of)" 또는 "본질적으로 구성되다"는 리스트된 구성 요소들이 반드시 포함되되, 리스트되지 않은 구성 요소들 중에서 본 발명의 기본적인 특성 또는 신규한 특성을 변화시키지 않는 것이라면 역시 포함될 수 있음을 의미한다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "동시 투여(concurrent administration)"는 약물 지속 기간이 적어도 일부 겹치는 것을 포함한다. 예를 들어, 두 의약 (예: 생물학적 활성을 지닌 본 발명의 어떤 의약들이나 의약들의 군)을 일정 시간 내에 투여함으로써 동시 투여될 수 있다. 이 의약들의 투약은 같은 날에 시작되고 종료될 수 있다. 이 두 의약이 적어도 한 번은 같은 날 투여된다면, 한 의약이 다른 의약보다 하루나 수일 앞서 투여될 수 있다. 마찬가지로, 이 두 의약이 적어도 한 번은 같은 날 투여된다면, 한 의약이 다른 의약 보다 길게 투여될 수 있다. 이들 의약이 매일 같은 시간에 투여되지 않은 경우에도 동시 투여되는 것으로 여겨질 수 있다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "효과적인 양" 또는 "치료학적으로 효과적인 양"은 바람직한 생물학적 효과 (예: 임상결과를 포함하는 유익한 결과)를 일으키기에 충분한 양이다. "효과적인 양"은 문맥에 따라 그 의미가 정해진다. 효과적인 양은 당해 기술 분야에 알려진 요인, 예를 들어 치료받는 객체의 질병 상태, 나이, 성별 및 몸무게에 따라 달라질 수 있다. 매일 수차례 일정 용량으로 투여하거나, 치료 상황의 긴급한 정도에 맞추어 용량을 줄여 투여할 수도 있다. 또한, 본 발명의 화합물, 조성물 또는 제형은 치료 효과적인 양을 달성하는 데에 필요한 만큼의 빈도로 투여될 수 있다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "젤"은 잘 흘러내리는 액체도 아니고, 고체도 아닌, 즉, 반고체의 물질을 의미할 수 있다. 젤은 자연물 또는 합성물로부터 형성될 수 있다. 젤은 형태성이 없거나, 또는 어느 정도의 복굴절성과 약간의 형태성을 갖는 액정의 특성을 가질 수 있다. 젤은 국소 투여 가능하다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 “염증성 장 질환”은 일반적인 의학 의미를 지니며, 대장 및 소장의 염증 증상/상태 일군을 의미한다. 염증성 장 질환의 예로는 크론 병, 궤양성 대장염, 요네병, 베체트 증후군, 콜라겐성 대장염, 전향성 대장염, 불확실성 대장염, 감염성 대장염, 허혈성 장염, 림프성 대장염 및 위장관과 밀접히 관련된 질환 및 장애를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 “저해하다”는 예방하거나 감소하거나 지연하거나 또는 정지하는 것을 의미한다. 예를 들어, 본 발명의 어떤 실시 태양들에서와 같이, 본 발명의 화합물, 조성물 또는 제형이 존재하는 경우에 있어서 어떤 단백질 (예: G-CSF, 인터루킨-2, SCF, VEGF, CX3CL1, IGFBP5, IGFBP6, 인터루킨-1α, 인터루킨-1β, 인터루킨-6, 인터루킨-9, MCP-1, MIP-3α, 인터루킨12p40/70, MIG, TNF-α, VCAM-1 및 NF-κB)이 관여하는 반응의 양이나 속도가 그 화합물, 조성물 또는 제형이 존재하지 않는 경우에 있어서 그 단백질이 관여하는 반응의 양이나 속도에 비하여 약 10% 이상 작을 때, 본 발명의 화합물, 조성물 또는 제형이 그 단백질의 활성을 저해하는 것으로 볼 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 다른 실시 태양들에서와 같이, 본 발명의 화합물, 조성물 또는 제형이 존재하는 경우에 있어서 어떤 단백질이 관여하는 반응의 양이나 속도가 그 화합물, 조성물 또는 제형이 존재하지 않는 경우에 있어서 그 단백질이 관여하는 반응의 양이나 속도에 비하여 약 20% 이상 작을 때, 본 발명의 화합물, 조성물 또는 제형이 그 단백질의 활성을 저해하는 것으로 볼 수 있다. 한편, 본 발명의 또 다른 실시 태양들에서와 같이, 본 발명의 화합물, 조성물 또는 제형이 존재하는 경우에 있어서 어떤 단백질 (예: G-CSF, 인터루킨-2, SCF, VEGF, CX3CL1, IGFBP5, IGFBP6, 인터루킨-1α, 인터루킨-1β, 인터루킨-6, 인터루킨-9, MCP-1, MIP-3α, 인터루킨12p40/70, MIG, TNF-α, VCAM-1 및 NF-κB)이 관여하는 반응의 양이나 속도가 그 화합물, 조성물 또는 제형이 존재하지 않는 경우에 있어서 그 단백질이 관여하는 반응의 양이나 속도에 비하여 약 25%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 75% 또는 약 80% 이상 작을 때, 본 발명의 화합물, 조성물 또는 제형이 그 단백질의 활성을 저해하는 것으로 볼 수 있다. 나아가, 본 발명의 또 다른 실시 태양들에서와 같이, 그 반응의 양이나 속도가 늘어나지 않을 때에도 본 발명의 화합물, 조성물 또는 제형이 그 단백질의 활성을 저해 (예: 그 단백질의 발달을 어레스트 하는 경우) 한다고 볼 수 있다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "간헐적 투여"는 활성 성분을 일정 기간 ("제1 투여 기간") 투여하고 나서, 그 활성 성분을 다른 일정 기간 ("휴지 기간") 투여하지 않거나 낮은 용량으로 투여한 후에, 다시 일정 기간 ("제2 투여 기간") 투여하는 것을 포함한다. 일반적으로, 제2의 투여 기간의 투여 용량은 제1 투여 기간의 투여 용량과 동일하지만, 의학적 필요에 따라 제1 투여 기간의 투여 용량 보다 많거나 적을 수 있다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "젤리"는 젤의 한 군으로서, 액체를 함유한 소형 무기 입자 또는 대형 유기 분자로 이루어져 있고, 구조를 유지하는 매트릭스에 높은 함량의 액체 (보통은 물)를 함유하는 현탁액으로 구성된 반고체 구조이다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "액체"는 액상인 조성물로 구성되어 있는 투약 형태이다. 액체는 따를 수 있고, 실온에서 용기에 부으면 용기의 형태에 따라 유지된다. 액체는 뉴턴 또는 가소성 유동성을 지닌다. 본 발명의 어떤 실시 태양에서, 용어 "반 액체"는 액체의 성질과 함께 또 다른 제형 (예, 현탁액, 유제, 용액, 크림, 젤, 젤리 등)의 성질을 지닐 수 있다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "골수 분화 일차 반응 유전자 88" 또는 "MYD88"는 인체내에서 MYD88 유전자에 의해 인코드되어 있는 단백질이다. MyD88은 선천 면역반응과 적응 면역반응에서 중심이 되는 역할을 한다. 이 단백질은 인터루킨-1 및 Toll-유사 수용체 신호 전달 경로에서 필수적인 신호 전달기로 작용한다. 상기 신호 전달 경로들은 수많은 염증 촉진제 유전자들의 활성화를 조절한다. 인코드된 단백질은 N-말단 데스 도메인 (death domain) 과 C-말단 Toll-인터루킨1 receptor 도메인으로 구성되어 있다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "연고"는 질병, 증상 또는 상태 (예, 염증성 장 질환)의 치료 목적으로 사용될 수 있는 높은 점도의 액체 또는 반고체 제형을 의미할 수 있다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "약학적으로 허용 가능한 운반체"는 생리학적으로 적합한 용매, 분산매, 코팅제, 항균제 및 항진균제, 등장성 및 흡수 지연제 등을 모두 포함한다. 운반체의 종류는 사용하고자 하는 투여 경로에 따라 선택할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 운반체는 멸균 수용액 또는 멸균 분산액 및 멸균 국소 용액이나 멸균 국소 분산액을 즉석으로 제조할 수 있는 멸균 분말을 포함한다. 상기 매개체들이나 기타 보조제들이 약학적 활성 성분에 맞게끔 사용되고 있음은 당해 기술 분야에 잘 알려져 있다. 당업계에 알려져 있는 통상의 매개체 또는 보조제들은 본 발명의 조성물 (예, 본 발명의 화학식 1, 화학식 1의 유도체/유사체 또는 약학적으로 허용 가능한 염, 용매, 수화물 또는 이의 다형체)과 함께 사용될 수 없는 것들을 제외하고는 그 어떤 것도 본 발명의 안과용 조성물과도 사용될 수 있다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "약학적 운반체" 또는 "운반체"는 특정 투여량 또는 농도 범위에서 세포나 포유류에 독성을 보이지 않는 약학적으로 허용 가능한 운반체, 부형제 또는 안정제도 포함할 수 있다. 생리학적으로 허용 가능한 운반체로는 주로 수용성 pH 완충 용액이 쓰인다. 생리학적으로 허용 가능한 운반체의 예로는 완충액 (예: 인산염, 구연산염 및 기타 유기산), 항산화제 (예: 아스코빅산), 저분자 폴리 펩타이드 (아미노산 약 10 개 미만), 단백질 (예: 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역 글로불린), 친수성 중합체 (예: 폴리비닐피롤리돈), 아미노산 (예: 글라이신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 라이신), 탄수화물 (예: 단당류, 이당류, 글루코오스, 만노오스 또는 덱스트린}, 킬레이트제 (예: EDTA), 당 알코올 (예: 만니톨, 소르비톨), 염 형성능을 지니는 카운터 이온 (예: 나트륨), 비이온성 계면 활성 성분 (예: 상품명 트윈, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및 플루로닉스)이 포함된다.
또한, “약학적으로 허용 가능“이라는 용어는 미국 연방정부 또는 미국 주정부의 규제 기관 또는 미국 이외 다른 나라의 해당 기관에 의해 승인되었거나 승인 가능함을 의미하거나, 동물에서의 사용 및 특히 사람에서의 사용과 관련하여 미국 약전이나 또는 일반적으로 인정되는 다른 약전에 기록되어 있음을 의미한다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "pH 조절제" 또는 "완충제"는 pH 조절제로 사용할 수 있는 화합물 또는 완충물을 의미할 수 있다. 그 예에는 글리세롤 완충액, 시트르산 완충액, 붕산 완충액, 아세테이트 완충액, 글루콘산 완충액, 인산 완충액, 구연산-인산 완충액 등이 포함되고, 이들 만으로 한정되지는 않는다. 상기 pH 조절제 또는 완충제는 적절한 양으로 사용될 수 있다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "방부제"는 본 발명의 화합물, 조성물, 또는 제형에 바람직하지 못한 화학적 변화가 일어나는 것을 막는 물질을 의미할 수 있다. 방부제의 예로는 벤잘 코늄 클로라이드, 티메로살, 클로로 부탄올, 메틸 파라벤, 프로필 파라벤, 페닐 에틸 알콜, 에데테이트 소디움 소르브산, 오나머 엠 폴리콰트, 세틸 브로마이드, 세틸 피리디늄 클로라이드, 벤질 브로마이드, EDTA, 페닐 수은 질산염, 페닐 수은 아세테이트, 티메로살, 메티올 레이트, 아세테이트 및 페닐 수은 보레이트, 폴리믹신 비 설페이트, 메틸 및 프로필 파라벤, 4급 암모늄 클로라이드, 소듐 벤조 에이트, 소듐 프로프리온 네이트, 소듐 퍼보레이트 및 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가지는 자에게 알려져 있는 기타 성분, 또는 상기 중 2 이상으로 이루어진 조합물이 포함된다. 상기 방부제는 적절한 양으로 사용될 수 있다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "예방하다", "예방하는" 또는 "예방" 및 이 외 문법적으로 동등한 용어들은 질환, 상태 또는 증상이 발달 또는 발생하는 것을 막거나, 증상이 발생하는 것을 감소시키는 것을 포함한다. 예방은 완전한 예방 (즉, 증상이 검출되지 않는 상태)을 의미할 수도 있고, 부분적인 예방 (치료를 받지 않은 경우보다는 증상이 줄어드는 상태)을 의미할 수도 있다. 예방은 또한 예방적 효과를 포함하는 의미로도 사용될 수 있다. 질환이나 증상의 예방 목적으로 특정 질환이 진단되지 않은 상태에서 이 질환이 발달할 위험성이 있는 환자 또는 이 질환과 관련된 생리학적 증상이 하나 이상 보고된 환자에게 본 발명의 조성물을 투여할 수 있다.
본 발명 명세서에 사용되는 범위는 그 범위 내에 포함되는 모든 값들을 의미하는 것으로 사용된다. 예를 들어, 1 내지 50의 범위라고 하면, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50으로 구성된 군에 속한 수치 각각, 수치들의 조합, 또는 하위 범위 (sub-range)를 포함하며, 이 정수들 사이 사이에 존재하는 모든 소수 값 (예, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8 및 1.9) 역시 포함하는 것을 의미한다. 하위 범위의 경우, 주어진 범위의 어느 한 끝점에서 시작하여 다른 쪽 끝점으로 향하는 "내포된 하위 범위 (nested sub-range)"의 의미로 사용된다. 예를 들어, 1 내지 50의 범위에 내포된 하위 범위에는 한쪽 방향으로는 1 내지 10, 1 내지 20, 1 내지 30, 1 내지 40의 범위가 포함되며, 반대 방향으로는 50 내지 40, 50 내지 30, 50 내지 20, 50 내지 10의 범위가 포함될 수 있다. 제1 수치 내지 제2 수치의 범위로 표현되어 있는 경우, 제1 수치의 근사치 내지 제2 수치의 근사치의 범위로 이해될 수 있다. 어떤 경우에는, 제1 수치부터 제2 수치까지의 범위로 이해되기도 한다. 마찬가지로, "약"을 어떤 특정 수치 앞에 사용하여 범위를 근사치로 표현하였을 경우, 그 특정 수치 자체도 그 범위에 포함된다. 어떤 수치 범위의 하한치와 상한치는 각각 독립하여 의미를 가지기도 하고, 서로 연관되어 의미를 가지기도 한다. 본 발명 명세서에 사용된 여러 수치들은 각 수치 자체들은 물론 그 수치들의 근사치들을 의미한다. 또한 본 명세서에서 데이터는 다양한 형태로 표현되어 있고, 이들 데이터는 최종치들을 의미하기도 하고, 초기치들을 의미하기도 하며, 각 데이터 값들의 조합에 의한 범위들을 의미하기도 한다. 예를 들어, 특정 데이터 값 "10"과 "15"가 기재된 경우라면, 10 초과, 이상, 미만, 이하, 또는 10 그 자체도 기재된 것이고, 15 초과, 이상, 미만, 이하, 또는 15 그 자체도 기재된 것이며, 10과 15의 사이에 있는 데이터들도 기재된 것으로 이해된다. 또한 두 특정 단위 수치들 사이에 있는 단위 수치 각각을 의미하는 것으로도 사용된다. 예를 들어, 10과 15가 기재된 경우, 11, 12, 13 및 14도 역시 기재된 것으로 이해된다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "수용체 상호작용 단백질" 또는 "RIP1"는 세포의 생존 및 사멸에 결정적인 역할을 하는 조절인자인 단백질 키나아제이다. RIP1 및 RIP2 역시 데스 도메인 (death domain) 수퍼패밀리에 속하는 C-말단 도메인을 가지고 있어, 다양한 신호전달 경로를 시작하는 대형 단백질 복합체에 인입하게 된다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "염" 또는 "염 형태" 또는 "약학적으로 허용 가능한 염"은 염기 부가 염 (유리된 카복실 또는 다른 음이온 기와 함께 형성됨)을 포함할 수 있다. 염기 부가 염은 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘 또는 수산화 제2철과 같은 무기염 및 이소프로필 아민, 트리에틸 아민, 2-에틸아미노-에탄올, 히스티딘, 프로카인 등과 같은 유기염으로부터 파생된 것이다. 상기 염은 유리된 양이온 기와 함께 산 부가 염으로 형성될 수 있다. 산 부가 염은 일반적으로 염산, 황산 또는 인산같은 무기산 또는 아세트산, 시트르산, p-톨루엔술폰산, 메탄술폰산, 옥살산, 타르타르산, 만델릭산 등과 같은 유기산과 함께 형성된다. 본 발명의 염은 염산, 브롬화 수소산, 요오드화 수소산, 황산, 인산 등과 같은 무기산으로 아미노 군을 양자화하여 형성된 아민 염을 포함할 수 있다. 본 발명의 염은 또한 p-톨루엔 술폰산, 아세트산 등과 같은 적절한 유기산으로 아미노 기를 양자화하여 형성된 아민 염을 포함할 수 있다. 본 발명을 응용하기 위해 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가지는 자가 이용할 수 있는 추가적인 부형제가 사용될 수 있으며, 그 예는 United States Pharmacopoeia Vol. XXII 및 National Formulary Vol. XVII, U.S. Pharmacopoeia Convention, Inc., Rockville, Md. (1989) (상기 관련 내용은 참고문헌으로 본 발명 명세서에 인용됨)에서 찾을 수 있다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "반고체 젤"은 반고체이다. 반고체 제형의 겉보기 점도는 농도에 따라 증가할 수 있다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "순차적 투여"는 두 의약 (예, 본 발명의 화합물이나 조성물)을 같은 날에 별도로 투여하는 경우도 포함하고, 같은 날에 투여하지 않는 경우 (예: 여러 날 연속으로 투여하는 경우)도 포함한다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "용액"은 맑고 균일한 액상 투여 형태로, 하나 또는 복수의 화학 성분이 한 가지 용매 또는 혼합 용매에 녹아 있는 형태일 수 있다. 용액은 적절한 용매나 혼합 용매에 녹아 있는 하나 또는 복수의 화학 성분을 포함하는 액상 제형이다. 용액 속에서 의약 성분의 분자는 균일하게 분산되어 있기 때문에 투여 형태로서 용액을 이용할 경우 균일한 투여 용량을 확신할 수 있으며, 용액을 희석하거나 또는 혼합할 때 정확도가 높다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "용매"는 수용성 또는 비수용성 액상 용매를 의미한다. 용매의 선택은 용매에 대한 본 발명 조성물의 용해도 및 투여 방식에 따라 정해진다. 수용성 용매는 물 만으로 구성될 수도 있고, 혼합가능한 하나 이상의 용매와 물의 혼합 용액으로 구성될 수도 있고, 용해되어 있는 당, 완충제, 염 또는 다른 부형제와 같은 용질이 포함될 수도 있다. 자주 사용되는 비수용성 용매에는 메탄올, 에탄올, 프로파놀과 같은 단쇄 유기 알콜, 아세톤과 같은 단쇄 케톤 및 글리세롤과 같은 폴리 알콜이 있다. 용매는 적절한 양으로 사용할 수 있다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "객체" 또는 "환자"는 사람 또는 사람이 아닌 동물 (예: 포유 동물)을 의미한다. "객체"에는 말, 개, 고양이, 돼지, 염소, 토끼, 햄스터, 원숭이, 기니아피그, 쥐, 생쥐, 도마뱀, 뱀, 양, 가축, 물고기 및 새를 포함하는 동물이 포함될 수 있다. 환자는 사람인 객체를 의미한다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "현탁액"은 액체 매개물에 고체 입자가 분산되어 있는 액상 투약 형태이다.
여기에 사용된 대로 용어 "증상"은 일관되게 동시에 발생하는 증상의 군 또는 연관된 여러 증상이 특징인 어떤 상태를 의미할 수 있다. 증상 (예, 염증성 대장 증상)은 상호 연관되어 있고 종종 특정 질환과 관련되어 있는 일련의 의학적 적응증 및 증상일 수 있다. 질환은 기저 원인이 명확히 정의된 건강 상태일 수 있다. 반면, 증상 ('함께 뛰다'를 의미하는 그리스어에서 나온 말)은 다수의 원인 불명 증상을 보일 수 있다. 증상은 기저에 질환이 있을 가능성 또는 질환으로 발전될 가망성을 암시할 수 있다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료" 및 이 외 문법적으로 동등한 용어들은 질환, 상태 (예, 염증성 장 질환) 또는 증상을 경감하거나 완화하거나 개선하거나 예방하거나, 추가로 증상이 일어나는 것을 예방하거나, 증상의 기저에 내재되어 있는 신진 대사 원인을 개선하거나 예방하거나, 질환이나 증상이 심해지는 것을 막거나, 질환이나 증상을 완화하거나, 질환이나 증상의 퇴행을 유도하거나, 질환이나 증상에서 비롯된 상태를 완화하거나 또는 질환이나 상태와 관련된 증상을 막는 등의 예를 통해 질환 또는 증상을 저해하는 것을 포함하며, 예방 역시 포함된다. 상기 용어는 또한 치료 효과 및/또는 예방 효과를 얻는 것도 포함한다. 치료 효과란 치료하고자 하는 기저의 질병을 근절하거나 개선하는 것을 의미한다. 치료 효과는 또한 기저의 질환과 연관된 생리적 증상 하나 또는 복수의 증상을 근절하거나 또는 개선하는 것을 의미하여, 환자가 아직 기저의 질병을 앓고 있다고 해도 환자에게서 개선이 관찰되는 상황도 치료 효과가 있다고 한다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 “점도"는 유체의 유동에 대한 저항성을 의미한다. 점도제는 본 발명에 이용될 수 있고, 예에는 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 메틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필 셀룰로오스, 하이드록시에틸 셀룰로오스, 카복시메틸 셀룰로오스, 하이드록시 프로필 셀룰로오스, 기타 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가지는 자에게 알려진 성분들이 포함되며, 또한 이들 2 이상을 조합한 점도제도 포함된다.
본 발명 명세서에 사용된 용어 “무게 백분율” 또는 “% (w/w)”는 성분 및 용매의 무게를 기준으로 계산한, 용액 내 성분의 백분율을 의미한다. 예를 들어, 어떤 성분의 1% (w/w) 용액은 1g의 성분이 100g의 용매 내에 녹아있는 것이다. 용어 “부피 백분율” 또는 “% (v/v)”는 성분 및 용매의 부피를 기준으로 계산한, 용액 내 성분의 백분율을 의미한다. 예를 들어, 어떤 성분의 1% (v/v) 용액은 1ml의 성분이 100ml의 용매 내에 녹아있는 것이다. 용어 “무게/부피 백분율” 또는 “% (w/v)”는 성분의 무게 및 용매의 부피를 기준으로 계산한, 용액 내 성분의 백분율을 의미한다. 예를 들어, 어떤 성분의 1.0% (w/v) 용액은 1g의 성분이 100ml의 용매에 녹아있는 상태이다.
상기 본 발명 한 일면은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:
[화학식 1]
Figure 112017096422982-pct00002
상기 화학식 1에서, n은 0, 1, 또는 2이고; A는 -a1-이며, 여기서 a1은 알라닌 (Ala, A), 아르기닌 (Arg, R), 아스파라긴 (Asn, N), 아스파틱산 (Asp, D), 시스테인 (Cys, C), 글루타믹산 (Glu, E), 글루타민 (Gln, Q), 글라이신 (Gly, G), 히스티딘 (His, H), 이소루신 (Ile, I), 루신 (Leu, L), 라이신 (Lys, K), 메티오닌 (Met, M), 페닐알라닌 (Phe, F), 프롤린 (Pro, P), 세린 (Ser, S), 트레오닌 (Thr, T), 트립토판 (Trp, W), 티로신 (Tyr, Y) 및 발린 (Val, V)으로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택된 아미노산으로, 이 아미노산의 양 말단은 아마이드 결합에 의해 카보닐 또는 아민 기와 연결되어 있고; R1은 직쇄 또는 측쇄의 C1-36 알킬, 적어도 하나 이상의 이중결합을 포함하는 직쇄 또는 측쇄의 C2-36 알케닐 또는 적어도 하나 이상의 삼중결합을 포함하는 직쇄 또는 측쇄의 C2-36 알카이닐이다.
용어 "본 발명의 화합물" 및 동등한 표현은 상기 화학식의 화합물을 포함하며, 상기 표현은 약학적으로 허용 가능한 염 및 용매화합물, 예를 들어 수화물 및 문맥에 따라 허용되는 약학적으로 허용 가능한 염의 용매화합물을 포함한다.
본 발명의 실시 태양에 따라 a1은
Figure 112017096422982-pct00003
일 수 있으며, R1은 직쇄 또는 측쇄의 C1-36 알킬일 수 있다.
상기 화합물의 예에는 하기의 화합물이 포함되나 이로써 그 예가 제한되지 않는다:
[화합물 A]
Figure 112017096422982-pct00004
[화합물 B]
Figure 112017096422982-pct00005
[화합물 C]
Figure 112017096422982-pct00006
[화합물 D]
Figure 112017096422982-pct00007
[화합물 E]
Figure 112017096422982-pct00008
[화합물 F]
Figure 112017096422982-pct00009
[화합물 G]
Figure 112017096422982-pct00010
[화합물 H]
Figure 112017096422982-pct00011
[화합물 I]
Figure 112017096422982-pct00012
[화합물 J]
Figure 112017096422982-pct00013
[화합물 K]
Figure 112017096422982-pct00014
[화합물 L]
Figure 112017096422982-pct00015
[화합물 M]
Figure 112017096422982-pct00016
[화합물 N]
Figure 112017096422982-pct00017
[화합물 O]
Figure 112017096422982-pct00018
본 발명의 실시 태양인 화합물은 염증성 적응증, 암 및 안과 적응증를 포함한 다양한 질환을 예방하거나 치료하는데 효과가 있다. 특히, 상기 화합물은 사이토카인 및/또는 케모카인 (예, G-CSF, 인터루킨-2, SCF, VEGF, CX3CL1, IGFBP5, IGFBP6, 인터루킨-1α, 인터루킨-1β, 인터루킨-6, 인터루킨-9, MCP-1, MIP-3α, 인터루킨12p40/70, MIG, TNF-α 및 VCAM-1)의 발현을 억제하는데 효과가 있다. 상기 화합물은 또한 MyD88 및/또는 RIP 1이 매개하는 염증 신호전달 경로에서 IκB의 분해를 방해함으로써 NF-κB가 세포의 핵으로 이동하는 것을 방해하는데 효과가 있다. 게다가 상기 화합물은 표적 조직/세포에서 충분한 시간 동안 효과적인 농도가 유지된다.
3. 제조 방법
본 발명의 다른 일면은 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 방법을 제공한다. 하기 반응 도식 1에 표시된 대로, 제조 방법은 다음의 단계를 포함한다: 화합물 2를 화합물 3과 반응시켜 화합물 4를 제조하고 (단계 1); 상기 화합물 4를 염기의 존재하에 가수분해하여 화합물 5를 제조하고 (단계 2); 상기 화합물 5를 화합물 6과 반응시켜 화합물 7을 제조하고 (단계 3); 상기 화합물 7을 염기의 존재하에 가수분해하여 화합물 8을 제조하고 (단계 4); 상기 화합물 8을 화합물 9와 반응시켜 화합물 10을 제조하고 (단계 5); 상기 화합물 10을 염기의 존재하에 가수분해하여 화학식 1의 화합물을 제조한다 (단계 6).
[반응 도식 1]
Figure 112017096422982-pct00019
(A, R1 및 n은 제 1 항에서 정의된 것과 동일하며 R2는 직쇄 또는 측쇄의 C1-5 알킬이다).
본 발명의 어떤 실시 태양에 따른 상기 단계 1에서 상기 화합물 2는 1-에틸-3- (3-디메틸 아미노프로필) 카르보디이미드 (EDCI), 하이드록시 벤조 트리아졸 (HOBt) 및 염기의 존재하에서 상기 화합물 3과 결합될 수 있다. 상기 염기는 유기 염기 또는 무기 염기를 사용할 수 있다. 유기 염기의 예에는 피리딘, 트리에틸아민 (TEA), N, N- 디이소 프로필 에탄올 아민 (DIPEA) 및 1,8-디아자비시클로 [5.4.0] 운데-7 엔 (DBU)이 포함되나 이로써 그 예가 제한되지 않는다. 무기 염기의 예에는 수산화 나트륨, 탄산나트륨, 탄산 칼륨, 탄산 세슘 및 수소화 나트륨이 포함되나 이로써 그 예가 제한되지 않는다. 상기 염기를 단독으로 화학양에 맞추어 사용할 수도 있고, 과량으로 사용할 수도 있으며, 상기 염기를 조합하여 화학양에 맞추어 사용할 수도 있고, 과량으로 사용할 수도 있다. 상기 화합물 2와 상기 화합물 3을 반응시키기 위한 용제의 예에는 에테르 (예, 테트라하이드로퓨란 (THF), 디옥산, 에틸 에테르 및 1,2-디메톡시에탄), 알콜 (예, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 디메틸 포름아마이드 (DMF), 디메틸 술폭시드 (DMSO), 디클로로메탄 (DCM), 디클로로에탄, 물, 아세톤, 벤젠술포네이트, 톨루엔 술포네이트, 클로로벤젠 술포네이트, 크실렌 술포네이트, 에틸 아세테이트, 페닐 아세테이트, 페닐 프로피오네이트, 페닐 부티레이트, 시트레이트, 락테이트, 하이드록시 부티레이트, 글리콜레이트, 말레에이트, 타르타레이트, 메탄 술폰네이트, 프로판 술포네이트, 나프탈렌-1-술폰네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 및 만델레이트가 포함되나 이로써 그 예가 제한되지 않는다. 용제는 단독으로 사용할 수도 있고, 상기 용제를 조합하여 사용할 수도 있다.
상기 단계 2에서 염기는 유기 염기 또는 무기 염기를 사용할 수 있다. 마찬가지로, 상기 단계 2에서 사용될 수 있는 유기 염기의 예에는 피리딘, 트리에틸아민, N, N-디이소프로필 에틸아민 (DIPEA) 및 1,8-디아자비시클로 [5.4.0] 운데-7 엔 (DBU)이 포함되나 이로써 그 예가 제한되지 않는다. 무기 염기의 예에는 수산화 나트륨, 탄산나트륨, 탄산 칼륨, 탄산 세슘 및 수소화 나트륨이 포함되나 이로써 그 예가 제한되지 않는다. 상기 염기를 단독으로 화학양에 맞추어 사용할 수도 있고 과량으로 사용할 수도 있으며, 상기 염기를 조합하여 화학양에 맞추어 사용할 수도 있고 과량으로 사용할 수도 있다. 상기 화합물 4와 상기 화합물 5를 반응시키기 위한 용제의 예는 에테르 (예, 테트라하이드로퓨란 (THF), 디옥산, 에틸 에테르 및 1,2-디메톡시에탄), 알콜 (예, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 디메틸 포름아마이드 (DMF), 디메틸 술폭시드 (DMSO), 디클로로 메탄 (DCM), 디클로로에탄, 물, 아세톤, 벤젠술포네이트, 톨루엔 술포네이트, 클로로벤젠 술포네이트, 크실렌 술포네이트, 에틸 아세테이트, 페닐 아세테이트, 페닐 프로피오네이트, 페닐 부티레이트, 시트레이트, 락테이트, 하이드록시 부티레이트, 글리콜레이트, 말레에이트, 타르타레이트, 메탄 술폰네이트, 프로판 술포네이트, 나프탈렌-1-술폰네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 및 만델레이트가 포함되나 이로써 그 예가 제한되지 않는다. 용제는 단독으로 사용할 수도 있고, 상기 용제를 조합하여 사용할 수도 있다.
상기 단계 3 및 상기 단계 5는 상기 단계 1과 동일하거나 또는 비슷한 방식으로 실행될 수 있다. 상기 단계 4 및 상기 단계 6은 상기 단계 2와 동일하거나 또는 비슷한 방법으로 실행될 수 있다.
화합물 2의 제조
상기 반응 식 1의 출발 물질로, 하기 화학식 2로 나타내어지는 화합물 2의 예는 하기의 제조 방법 A의 예에 따라 제조할 수 있다.
[화학식 2]
Figure 112017096422982-pct00020
(상기 화학식에서 n은 0, 1 또는 2이고; A는 -a1-이며, 여기서 a1은 알라닌 (Ala, A), 아르기닌 (Arg, R), 아스파라긴 (Asn, N), 아스파틱산 (Asp, D), 시스테인 (Cys, C), 글루타믹산 (Glu, E), 글루타민 (Gln, Q), 글라이신 (Gly, G), 히스티딘 (His, H), 이소루신 (Ile, I), 루신 (Leu, L), 라이신 (Lys, K), 메티오닌 (Met, M), 페닐알라닌 (Phe, F), 프롤린 (Pro, P), 세린 (Ser, S), 트레오닌 (Thr, T), 트립토판 (Trp, W), 티로신 (Tyr, Y) 및 발린 (Val, V)으로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택된 아미노산으로, 이 아미노산의 양 말단은 아마이드 결합에 의해 카보닐 또는 아민 기와 연결되어 있고; R1은 직쇄 또는 측쇄의 C1-36 알킬, 적어도 하나 이상의 이중결합을 포함하는 직쇄 또는 측쇄의 C2-36 알케닐 또는 적어도 하나 이상의 삼중결합을 포함하는 직쇄 또는 측쇄의 C2-36 알카이닐이다).
제조 방법 A
하기 화학식 a로 나타내어지는 화합물은 1-에틸-3- (3- 디메틸 아미노프로필) 카보디이미드, 하이드록시 벤조 트리아졸 및 아마이드 결합을 형성하기 위한 염기의 존재 하에서, 알라닌 (Ala, A), 아르기닌 (Arg, R), 아스파라긴 (Asn, N), 아스파틱산 (Asp, D), 시스테인 (Cys, C), 글루타믹산 (Glu, E), 글루타민 (Gln, Q), 글라이신 (Gly, G), 히스티딘 (His, H), 이소루신 (Ile, I), 루신 (Leu, L), 라이신 (Lys, K), 메티오닌 (Met, M), 페닐알라닌 (Phe, F), 프롤린 (Pro, P), 세린 (Ser, S), 트레오닌 (Thr, T), 트립토판 (Trp, W), 티로신 (Tyr, Y) 및 발린 (Val, V)으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산과 결합하여 화합물 2를 제조한다.
[화학식 a]
Figure 112017096422982-pct00021
(R1은 화학식 2에서 정의된 것과 동일하다).
4. 조성물/제형
본 발명 또 다른 일면은 활성 성분으로 상기 화합물 하나 이상, 상기 광학 이성질체 하나 이상, 또는 상기 염 하나 이상을 포함하고, 다양한 질환들 (예, 염증성 적응증, 암 및 안과 적응증)을 예방하고 개선하고 및 치료하기 위한 조성물을 제공한다.
본 발명의 실시 태양에 따른 조성물은 G-CSF, 인터루킨-2, SCF, VEGF, CX3CL1, IGFBP5, IGFBP6, 인터루킨-1α, 인터루킨-1β, 인터루킨-6, 인터루킨-9, MCP-1, MIP-3α, 인터루킨12p40/70, MIG, TNF-α 및 VCAM-1을 포함하는 사이토카인 및/또는 케모카인의 발현을 억제할 수 있다. 본 발명의 다른 실시 태양에 따른 조성물은 NF-κB의 활성을 억제할 수 있다. 본 발명의 또 다른 실시 태양에 따른 조성물은 MyD88이 매개하는 염증 신호 전달 복합체의 형성을 저해할 수 있다. 본 발명의 또 다른 실시 태양에 따른 조성물은 RIP1이 매개하는 염증 신호 전달 복합체의 형성을 저해할 수 있다. 본 발명의 또 다른 실시 태양에 따른 조성물은 Pellino-1이 매개하는 염증 신호 전달 복합체의 형성을 저해할 수 있다.
본 발명의 실시 태양에 따른 본 발명은 활성 성분으로 상기 화합물 하나 이상, 상기 광학 이성질체 하나 이상, 또는 상기 염 하나 이상을 포함하고, 염증성 장 질환 (밀접하게 관련된 질환 포함)을 예방하고 개선하고 치료하기 위한 조성물을 제공한다. 염증성 장 질환의 예는 궤양성 대장염, 베체트 병, 크론 병을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 상기 조성물은 기타 첨가제를 포함할 수 있다.
본 발명의 실시 태양에 따른 본 발명은 활성 성분으로 상기 화합물 하나 이상, 상기 광학 이성질체 하나 이상, 또는 상기 염 하나 이상을 포함하고, 다발성 경화증, 건선, 패혈증, 지도모양위축증, 습성 황반변성, 건성 황반변성, 당뇨망막병, 감염성 폐 질환, 세균성 폐렴, 바이러스 성 폐렴, 확산성 대형 B-세포 림프종, 바이러스 성 감염, 자가 면역 질환, 림프종을 포함한 혈액암 및 내장 장기의 종양을 예방하거나 개선하거나 또는 치료하기 위한 조성물을 제공한다.
본 발명의 실시 태양에 따른 본 발명은 활성 성분으로 상기 화합물 하나 이상, 상기 광학 이성질체 하나 이상, 또는 상기 염 하나 이상을 포함하고, 상기 활성 성분이 두피 및 모낭에서 인터루킨-6의 발현을 저해하는 것인, 탈모증을 예방하거나 개선하거나 또는 치료하기 위한 조성물을 제공한다.
본 발명은 본 발명의 화합물을 투여하기에 적합한 제형을 포함한다. 본 발명의 화합물은 부형제 (예, 하나 또는 복수의 부형제), 항산화제 (예, 하나 또는 복수의 항산화제), 안정제 (예, 하나 또는 복수의 안정제), 방부제 (예, 하나 또는 복수의 방부제), pH 조절제 및/ 또는 pH 완충제 (예, 하나 또는 복수의 pH 조절제 및/ 또는 pH 완충제), 강장 조절제 (예, 하나 또는 복수의 강장 조절제), 농축제 (예, 하나 또는 복수의 농축제), 현탁제 (예, 하나 또는 복수의 현탁제), 결합제 (예, 하나 또는 복수의 결합제), 점도 상승제 (예, 하나 또는 복수의 점도 상승제) 등과 같은 첨가제를 포함하는 제형 (약학적 조성물 포함)일 수 있으며, 추가된 성분은 치료하고자 하는 특정 증상에서 약학적으로 허용 가능해야 한다. 본 발명의 실시 태양에 따른 제형에는 상기 추가적인 성분이 둘 또는 그 이상 성분이 조합되어 (예, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 그 이상의 추가적인 성분) 포함될 수 있다. 본 발명의 실시 태양에 따른 첨가제에는 인산 칼슘, 스테아르산 마그네슘, 활석, 단당류, 이당류, 전분, 젤라틴, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 나트륨 카복시 메틸 셀룰로오스, 덱스트로스, 하이드록시 프로필-베타-시클로 덱스트린, 폴리비닐 피롤리디논, 저융점 왁스, 이온 교환 수지 등과 이 중 둘 이상의 조합으로 이루어진 가공제, 약물전달 조절제 및 상승제를 포함한다. 이 외 약학적으로 허용 가능한 부형제들은 본 발명 명세서에 참고문헌으로 인용된 "Remington's Pharmaceutical Sciences," Mack Pub. Co., New Jersey (1991) 및 "Remington: The Science and Practice of Pharmacy," Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, 20th edition (2003) and 21st edition (2005)에서 찾을 수 있다.
본 발명은 의학적으로 허용 가능한 수단에 의해 투여되기에 적합한 약학적 조성물의 제형을 포함한다. 약학적 제형에는 투여 수단에 적합한 약학적으로 허용 가능한 운반체와 약학적으로 허용 가능한 화합물 (조성물)이 포함될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물의 제형은 경구 투여용일 수 있다. 상기 제형은 용액, 현탁액, 반액체, 반고체, 젤, 유제, 연고, 정제 및 크림을 포함한 다양한 형태로 제조될 수 있다. 정제형에는 하나 또는 복수의 유당, 자당, 만니톨, 소르비톨, 인산 칼슘, 옥수수 전분, 감자 전분, 미세결정성 셀룰로오스, 젤라틴, 콜로이드성 이산화규소, 활석, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 및 기타 부형제, 착색제, 충전제, 결합제, 희석제, 완충제, 습윤제, 방부제, 향료, 염료, 붕해제 및 약학적으로 적합한 운반체가 포함될 수있다.
상기 조성물 (제형)은 경구 투여, 비강 투여, 폐 투여, 직장 투여, 구강점막 투여, 질 투여, 안구 투여및 경피 투여 경로를 포함하지만 이로 제한되지는 않는 다양한 경로로 투여될 수 있다. 상기 조성물 (제형)의 투여 경로, 빈도 및 유효 투여량은 당해 기술 분야에 알려진 방법 및/또는 본 발명의 방법 (예, 경구 투여, 0.1-1,000 mg/day, 하루 1회)에 의해 정해질 수 있다. 예를 들어, 상기 조성물 (제형)은 단독으로 또는 조합된 조성물 (제형)로 투여될 수 있다. 예를 들어, 상기 조성물 (제형)은 동시 투여, 병용 투여 및/또는 간헐적 투여에 의해 투여될 수 있다.
5. 화합물, 조성물 또는 제형의 용도
본 발명 다른 일면은 필요로 하는 객체에게 상기 조성물 (또는 본 발명의 화합물 또는 제형)을 투여하는 것을 포함하는, 다양한 질환들 (예, 염증성 적응증, 암 및 안과 적응증)을 예방하거나 개선하거나 또는 치료하기 위한 방법을 제공한다.
실시 태양에 따른 본 발명은 활성 성분으로 상기 화합물 하나 이상, 상기 광학 이성질체 하나 이상, 또는 상기 염 하나 이상을 포함하는 상기 조성물 (또는 본 발명의 화합물 또는 제형)을 필요로 하는 객체에게 투여하는 것을 포함하는, 염증성 장 질환을 예방하거나 개선하거나 또는 치료하기 위한 방법을 제공한다.
다른 실시 태양에 따른 본 발명은 활성 성분으로 상기 화합물 하나 이상, 상기 광학 이성질체 하나 이상, 또는 상기 염 하나 이상을 포함하는 상기 조성물 (또는 본 발명의 화합물 또는 제형)을 필요로 하는 객체에게 투여하는 것을 포함하는, 질환 또는 증상을 예방하거나 개선하거나 또는 치료하기 위한 방법을 제공한다. 질환 또는 증상은 Pellino-1에 의해 유도되며 MyD88나 RIP1 혹은 이 두 가지를 함께 포함하는 염증 신호전달 복합체의 형성과 관련되었을 수 있다. 질환이나 증상에는 다발성 경화증, 건선, 패혈증, 지도모양위축증, 습성 황반변성, 건성 황반변성, 당뇨망막병, 감염성 폐 질환, 세균성 폐렴, 바이러스 성 폐렴, 확산성 대형 B-세포 림프종, 바이러스 성 감염, 자가 면역 질환, 림프종을 포함한 혈액암 및 내장 장기의 종양 (예, 간, 폐, 장, 전립선, 췌장 등)이 포함되지만, 이로 제한되지 않는다.
또 다른 실시 태양에 따른 본 발명은 활성 성분으로 상기 화합물 하나 이상, 상기 광학 이성질체 하나 이상, 또는 상기 염 하나 이상을 포함하는 상기 조성물 (또는 본 발명의 화합물 또는 제형)을 필요로 하는 객체에게 투여하는 것을 포함하는, 지도모양위축증, 습성 황반변성, 건성 황반변성 또는 당뇨망막병을 예방하거나 개선하거나 또는 치료하기 위한 방법을 제공한다. 상기 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 염은 망막 색소 상피 세포에 약학적 효과를 보일 수 있다. 망막 색소 상피 세포에서 상기 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 염은 Nox-4, VEGF, VEGFR1, VEGFR2, Ang2, EPO 및 EPOR로 구성된 군 중에서 선택된 하나 이상의 단백질의 발현을 저해할 수 있다. 망막 색소 상피 세포에서 상기 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 염은 Ang 1, Tie2, 혹은 둘 모두의 발현을 증가시킬 수 있다.
실시예
본 발명은 하기 실시예로써 상세히 설명될 것이다. 실시예는 오직 본 발명을 설명하려는 목적으로만 제시되며 본 발명은 실시예로만 제한되지 않는다.
실시예 1: 화합물의 제조
실시예 1.1: (S)-3-(4-하이드록시페닐)-2-(2-((S)-1-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카보닐) 피롤리딘-2-카복스아미도)아세트아미도)프로판 산(Pal-PPGY-OH)의 제조
Figure 112017096422982-pct00022
단계 1: (S)-메틸 1-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카보닐)피롤리딘-2-카복실레이트의 제조
하기 실시예 1.2의 단계 2에서 제조한 (S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카복실 산 (10.0 g, 28.3 mmol), EDCI (5.96 g, 31.1 mmol), HOBt (4.20 g, 31.1 mmol) 및 트리에틸아민 (11.8 mL, 84.9 mmol)을 디클로로메탄에서 혼합하여 혼합용액을 제조하였다. 프롤린 메틸 에스터 하이드로클로라이드 (5.15 g, 31.1 mmol)를 상기 혼합용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시킨 후 감압농축하고 탄산수소나트륨 수용액으로 희석한 후, 에틸 아세테이트로 세 번 추출하였다. 총 유기층을 생리식염수로 세척한 후, 1N 염산으로 세 번 세척하였다. 상기 유기층을 다시 생리식염수로 세척하고 무수 황산 마그네슘으로 건조시킨 후, 감압농축하여 (S)-메틸 1-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카보닐)피롤리딘-2-카복실레이트 (11.4 g, 87% 수율)를 얻었다.
1H-NMR(300 MHz, CDCl3) δ 4.69-4.65 (m, 1 H), 4.54-4.58 (m, 1 H), 3.83-3.93 (m, 1 H), 3.58-3.72 (m,5H), 3.45-3.53 (m, 1 H), 1.89-2.31 (m, 10 H), 1.60-1.64 (m, 2 H), 1.25 (m, 24 H), 0.88 (t, J = 6.87Hz, 3 H).
MS (ESI), calcd for C27H48N2O4 464.4, found m/z 465.2 (M + H+).
단계 2: (S)-1-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카보닐)피롤리딘-2-카복실 산의 제조
상기 단계 1에서 제조한 (S)-메틸 1-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카보닐)피롤리딘-2-카복실레이트 (15.0 g, 32.3 mmol)를 테트라하이드로퓨란과 혼합하였다. 상기 혼합 용액에 수산화 나트륨 (2.58 g, 64.6 mmol) 수용액을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시킨 후 농축시켰다. 1N 염산을 첨가하여 pH를 1.0으로 조절하였다. 에틸 아세테이트로 수층을 세 번 추출하였다. 총 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조시킨 후 농축하여 흰색 고체 형태인 (S)-1-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카보닐)피롤리딘-2-카복실 산 (13.2 g, 91% 수율)을 얻었다.
MS (ESI), calcd for C26H46N2O4 450.3, found m/z 451.1 (M + H+).
단계 3: 에틸 2-((S)-1-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도) 아세테이트의 제조
상기 단계 2에서 제조한 (S)-1-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카보닐)피롤리딘-2-카복실 산 (12 g, 26.6 mmol)을 디클로로메탄과 혼합하였다. 상기 혼합용액에 글라이신 에틸 에스터 하이드로클로라이드 (4.09 g, 29.3 mmol), EDCI (5.62 g, 29.3 mmol), HOBt (3.96 g, 29.3 mmol) 및 트리에틸아민 (11.1 mL, 79.8 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시킨 후 감압농축하고 탄산나트륨 수용액으로 희석한 후, 에틸 아세테이트로 세 번 추출하였다. 총 유기층을 생리식염수로 세척한 후, 1N 염산으로 세 번 세척하였다. 상기 유기층을 다시 생리식염수로 세척하고 무수 황산 마그네슘으로 건조시킨 후, 농축하여 에틸 2-((S)-1-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카보닐) 피롤리딘-2-카복스아미도) 아세테이트 (11.1 g, 78% 수율)를 얻었다.
MS (ESI), calcd for C30H53N3O5 535.4, found m/z 536.5 (M + H+).
단계 4: 2-((S)-1-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도) 아세트 산의 제조
상기 단계 3에서 제조한 에틸 2-((S)-1-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카보닐) 피롤리딘-2-카복스아미도)아세테이트 (12 g, 22.4 mmol)를 테트라하이드로퓨란과 혼합하였다. 상기 혼합 용액에 수산화 나트륨 (1.79 g, 44.8 mmol) 수용액을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시킨 후 농축시켰다. 1N 염산을 첨가하여 pH를 1.0으로 조절하였다. 에틸 아세테이트로 수층을 세 번 추출하였다. 총 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조시킨 후 농축하여 2-((S)-1-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도)아세트 산 (9.5 g, 84% 수율)을 얻었다.
MS (ESI), calcd for C28H49N3O5 507.4, found m/z 508.2 (M + H+).
단계 5: (S)-메틸 3-(4-하이드록시페닐)-2-(2-((S)-1-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카보닐) 피롤리딘-2-카복스아미도)아세트아미도)프로파노에이트의 제조
상기 단계 4에서 제조한 2-((S)-1-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도)아세트 산 (10 g, 19.7 mmol)을 디클로로메탄과 혼합하였다. 상기 혼합용액에 티로신 메틸 에스터 (4.23 g, 21.7 mmol), EDCI (4.16 g, 21.7 mmol), HOBt (21.7 g, 21.7 mmol) 및 트리에틸아민 (8.19 mL, 59.1 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시킨 후 감압농축하고 탄산수소나트륨 수용액으로 희석한 후, 에틸 아세테이트로 세 번 추출하였다. 총 유기층을 생리식염수로 세척한 후, 1N 염산으로 세 번 세척하였다. 상기 유기층을 다시 생리식염수로 세척하고 무수 황산 마그네슘으로 건조시킨 후, 농축하고 MPLC를 사용하여 정제하여 (S)-메틸 3-(4-하이드록시페닐)-2-(2-((S)-1-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도) 아세트아미도)프로파노에이트 (8.4 g, 62% 수율)를 얻었다.
MS (ESI), calcd for C37H60N4O7 684.4, found m/z 685.2 (M + H+).
단계 6: (S)-3-(4-하이드록시페닐)-2-(2-((S)-1-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카보닐)피롤리딘 -2-카복스아미도)아세트아미도)프로판 산의 제조
상기 단계 5에서 제조한 (S)-메틸 3-(4-하이드록시페닐)-2-(2-((S)-1-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카보닐)피롤리딘-2-카복스아미도)아세트아미도)프로파노에이트 (4.9 g, 7.16 mmol)를 테트라하이드로퓨란과 혼합하였다. 상기 혼합 용액에 수산화 나트륨 (0.86 g, 21.5 mmol) 수용액을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시킨 후 농축시켰다. 1N 염산을 첨가하여 pH를 1.0으로 조절하였다. 에틸 아세테이트로 수층을 세 번 추출하였다. 총 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조시킨 후 농축하여 (S)-3-(4-하이록시페닐)-2-(2-((S)-1-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카보닐)피롤리딘-2-카복스 아미도)아세트아미도)프로판 산 (4.5 g, 93% 수율)을 얻었다.
1H-NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.04 (d, J = 8.31 Hz, 2 H) 6.70 (d, J = 8.37 Hz,2 H), 4.38-4.68 (m,3 H), 3.44-4.04 (m, 6 H), 2.91-3.13 (m, 2 H), 1.81-2.38 (m, 10 H), 1.54-1.60 (m, 2 H), 1.30 (m, 24 H), 0.88 (t, J = 6.63 Hz, 3 H).
MS (ESI), calcd for C37H58N4O7 670.4, found m/z 671.3 (M + H+).
실시예 1.2: (S)-3-(4-하이드록시페닐)-2-(2-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카복스아미도) 아세트아미도)프로판 산 (Pal-PGY-OH)의 제조
Figure 112017096422982-pct00023
단계 1: (S)-메틸 1-팔미토일피롤리딘-2-카복실레이트의 제조
팔미트 산 (7 g, 27.3 mmol), EDCI (5.78 g, 30.0 mmol), HOBt (4.05 g, 30.0 mmol) 및 트리에틸아민 (11.4 mL, 81.9 mmol)을 디클로로메탄과 혼합하였다. 프롤린 메틸 에스테르 하이드로클로라이드 (4.97 g, 30.0 mmol)를 상기 혼합 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시킨 후 감압농축하고 탄산나트륨 수용액으로 희석한 후, 에틸 아세테이트로 세 번 추출하였다. 총 유기층을 생리식염수로 세척한 후, 1N 염산으로 세 번 세척하였다. 상기 유기층을 다시 생리식염수로 세척하고 무수 황산 마그네슘으로 건조시킨 후, 감압농축하여 점성 액상인 (S)-메틸 1-팔미토일피롤리딘-2-카복실레이트 (9.6 g, 96% 수율)를 얻었다.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 4.46-4.50 (m, 1 H), 3.47-3.75 (m,5 H), 1.90-2.36 (m, 6 H), 1.59-1.69 (m, 2 H), 1.25(m, 24 H), 0.88 (t, J = 6.84 Hz, 3H)
MS (ESI), calcd for C22H41NO3 367.3, found m/z 368 (M + H+).
단계 2: (S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카복실 산의 제조
상기 단계 1에서 제조한 (S)-메틸 1-팔미토일피롤리딘-2-카복실레이트 (10.0 g, 27.2 mmol)를 테트라하이드로퓨란과 혼합하였다. 상기 혼합 용액에 수산화 나트륨 (3.26 g, 81.6 mmol) 수용액을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시킨 후 농축시켰다. 1N 염산을 첨가하여 pH를 1.0으로 조절하였다. 에틸 아세테이트로 수층을 세 번 추출하였다. 총 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조시킨 후 농축하여 흰색 고체 형태인 (S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카복실 산 (8.6 g, 89% 수율)을 얻었다.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 4.59-62 (m, 1 H), 3.42-3.59 (m,2H), 2.46-2.53 (m, 1 H), 2.33-2.38 (m, 2 H), 1.93-2.01 (m, 3 H), 1.62-1.69 (m, 2 H), 1.25 (m, 24 H), 0.88 (t, J = 6.90 Hz, 3 H)
MS (ESI), calcd for C21H39NO3 353.3, found m/z 354.2 (M + H+).
단계 3: (S)-에틸 2-(1-팔미토일피롤리딘-2-카복스아미도)아세테이트의 제조
상기 단계 2에서 제조한 (S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카복실 산 (10 g, 28.3 mmol), 글리신 에틸 에스테르 하이드로 클로라이드 (4.34 g, 31.1 mmol), EDCI (5.76 g,31.1 mmol), HOBt (4.20 g,31.1 mmol) 및 트리에틸아민 (1,5.7 mL, 113 mmol)을 디클로로메탄과 혼합하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시킨 후 감압농축하고 탄산나트륨 수용액으로 희석한 후, 에틸 아세테이트로 세 번 추출하였다. 총 유기층을 생리식염수로 세척한 후, 1N 염산으로 세 번 세척하였다. 상기 유기층을 다시 생리식염수로 세척하고 무수 황산 마그네슘으로 건조시킨 후, 농축하여 (S)-에틸 2-(1-팔미토일피롤리딘-2-카복스아미도)아세테이트 (10.7 g, 86% 수율)를 얻었다.
MS (ESI), calcd for C25H46N2O4 438.3, found m/z 439.1 (M + H+).
단계 4: (S)-2-(1-팔미토일피롤리딘-2-카복스아미도)아세트 산의 제조
상기 단계 3에서 제조한 (S)-에틸 2-(1-팔미토일피롤리딘-2-카복스아미도) 아세테이트 (12 g, 27.4 mmol)를 테트라하이드로퓨란과 혼합하였다. 상기 혼합 용액에 수산화 나트륨 (2.20 g, 54.7 mmol) 수용액을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시킨 후 농축시켰다. 1N 염산을 첨가하여 pH를 1.0으로 조절하였다. 에틸 아세테이트로 수층을 세 번 추출하였다. 총 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조시킨 후 농축하여 흰색 고체 형태인 (S)-2-(1-팔미토일피롤리딘-2-카복스 아미도)아세트 산 (10.2 g, 91% 수율)을 얻었다.
MS (ESI), calcd for C23H42N2O4 410.3, found m/z 411.3 (M + H+).
단계 5: (S)-메틸 3-(4-하이드록시페닐)-2-(2-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카복스아미도) 아세트아미도)프로파노에이트의 제조
상기 단계 4에서 제조한 (S)-2-(1-팔미토일피롤리딘-2-카복스아미도)아세트 산 (7 g, 27.3 mmol)을 디클로로메탄과 혼합하였다. 티로신 메틸 에스테르 (5.86 g, 30.0 mmol), EDCI (5.78 g, 30.0 mmol), HOBt (4.05 g, 30.0 mmol) 및 트리에틸아민 (11.4 mL, 81.9 mmol)을 상기 혼합 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시킨 후 감압농축하고 탄산수소나트륨 수용액으로 희석한 후, 에틸 아세테이트로 세 번 추출하였다. 총 유기층을 생리식염수로 세척한 후, 1N 염산으로 세 번 세척하였다. 상기 유기층을 다시 생리식염수로 세척하고 무수 황산 마그네슘으로 건조시킨 후, 농축하고 MPLC를 사용하여 정제하여 (S)-메틸 3-(4-하이드록시페닐)-2-(2-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카복스아미도)아세트아미도)프로파노에이트 (9.8 g, 61% 수율)를 얻었다.
1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ 7.25-7.50 (m, 3 H), 6.93 (d, J = 8.34 Hz, 2 H) 6.70 (d, J = 8.34 Hz,2 H), 4.70-4.77 (m,1 H), 4.39-4.43 (m, 1 H), 3.95-4.21 (m, 1 H), 3.41-3.72 (m, 5 H), 2.92-3.12 (m, 2 H), 1.91-2.35 (m, 7 H), 1.57-1.61 (m, 2 H), 1.25 (m, 24 H), 0.88 (t, J = 6.87 Hz, 3 H)
MS (ESI), calcd for C33H53N3O6 587.4, found m/z 588.1 (M + H+).
단계 6: (S)-3-(4-하이드록시페닐)-2-(2-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카복스아미도)아세트 아미도) 프로판 산의 제조
상기 단계 5에서 제조한 (S)-메틸 3-(4-하이드록시페닐)-2-(2-((S)-1-팔미토일 피롤리딘-2-카복스아미도)아세트아미도)프로파노에이트 (2.85 g, 4.85 mmol) 를 테트라하이드로퓨란과 혼합하였다. 상기 혼합 용액에 수산화 나트륨 (0.58 g, 14.6 mmol) 수용액을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시킨 후 농축시켰다. 1N 염산을 첨가하여 pH를 1.0으로 조절하였다. 에틸 아세테이트로 수층을 세 번 추출하였다. 총 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조시킨 후 농축하여 흰색 고체 형태인 (S)-3-(4-하이드록시페닐)-2-(2-((S)-1-팔미토일피롤리딘-2-카복스아미도)아세트 아미도)프로판 산 (2.2 g, 79% 수율)을 얻었다.
1H-NMR (300 MHz, CD3OD) δ 7.03 (d, J = 8.40 Hz,2 H) 6.70 (d, J = 8.40 Hz,2 H), 4.58-4.61 (m,1 H), 4.33-4.56 (m, 1 H), 3.58-4.37 (m, 4 H), 2.96-3.15 (m, 2 H), 1.92-2.39 (m, 6 H), 1.55-1.62 (m, 2 H), 1.29 (m, 24 H), 0.91 (t, J = 6.87 Hz, 3 H)
MS (ESI), calcd for C32H51N3O6 573.4, found m/z 574.2(M + H+).
실시예 1.3: 팔미토일-L-알라닐-L-프로글라이실-L-티로신 (pal-APGY-OH)
상기 화합물을 하기 반응 도식 2에 의해 제조하였다.
[반응 도식 2]
Figure 112017096422982-pct00024
화합물 (1) (10 g, 46.5 mmol), 화합물 (2) (7.15 g, 51.2 mmol), EDCI?HCl (9.82 g, 51.2 mmol), HOBt (6.92 g, 51.2 mmol) 및 트리에틸아민 (19.4 mL, 140 mmol)을 디클로로메탄과 혼합하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시킨 후 감압농축하고 탄산나트륨 수용액으로 희석한 후, 에틸 아세테이트로 세 번 추출하였다. 총 유기층을 생리식염수로 세척한 후, 1N 염산으로 세 번 세척하였다. 상기 유기층을 다시 생리식염수로 세척하고 무수 황산 마그네슘으로 건조시킨 후, 감압농축하여 점성 액상인 화합물 (3) (91% 수율)을 얻었다.
LC-MS (ESI): calcd for C14H24N2O5 300.2, found m/z 301.2 (M + H+).
상기 제조한 화합물 (3) (12 g, 40 mmol)을 테트라하이드로퓨란과 혼합하였다. 상기 혼합 용액에 수산화 나트륨 (6.40 g, 160 mmol) 수용액을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시킨 후 농축시켰다. 1N 염산을 첨가하여 pH를 1.0으로 조절하였다. 에틸 아세테이트로 수층을 세 번 추출하였다. 총 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조시킨 후 농축하여 흰색 고체 형태인 화합물 (4) (96% 수율)를 얻었다.
LC-MS (ESI): calcd for C12H20N2O5 272.1, found m/z 273.1 (M + H+).
상기 화합물 (4) (6.25 g, 23 mmol), 화합물 (5) (4.85 g, 25.3 mmol), EDCI·HCl (4.85 g, 25.3 mmol), HOBt (43.42 g, 25.3 mmol) 및 트리에틸아민 (TEA, 12.8 mL, 96 mmol)을 디클로로메탄과 혼합하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시킨 후 감압농축하고 탄산나트륨 수용액으로 희석한 후, 에틸 아세테이트로 세 번 추출하였다. 총 유기층을 중탄산나트륨 수용액으로 두 번 세척하고 생리식염수로 세척한 후, 1N 염산으로 세 번 세척하였다. 상기 유기층을 다시 생리식염수로 세척하고 무수 황산 마그네슘으로 건조시킨 후, 농축하여 흰색 고체 형태인 화합물 (6) (87% 수율)을 얻었다.
LC-MS (ESI): calcd for C22H31N3O7 449.2, found m/z 450.2 (M + H+).
상기 화합물 (6) (8 g, 17.8 mmol)을 에틸 아세테이트에 용해시켰다. 디옥산에 희석된 4 N HCl를 과량으로 실온에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 4 시간 교반시킨 후 감압농축하여 흰색 고체 형태인 화합물 (7)을 얻었다.
LC-MS (ESI): calcd for C17H23N3O5 349.2, found m/z 350.2 (M + H+).
상기 화합물 (7) (0.25 g, 0.65 mmol), 화합물 (8) (Boc-alanine, 0.12 g, 0.65 mmol), EDCI·HCl (0.25 g, 1.30 mmol), HOBt (0.18 g, 1.30 mmol) 및 트리에틸아민 (0.36 mL, 2.60 mmol)을 디클로로메탄과 혼합하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시킨 후 감압농축하고 탄산나트륨 수용액으로 희석한 후, 에틸 아세테이트로 세 번 추출하였다. 총 유기층을 중탄산나트륨 수용액으로 두 번 세척하고, 생리식염수로 세척한 후, 1N 염산으로 세 번 세척하였다. 상기 유기층을 다시 생리식염수로 세척하고 무수 황산 마그네슘으로 건조시킨 후, 농축하고 MPLC (디클로로메탄/2-프로판올)를 사용하여 화합물 (9) (63% 수율)를 얻었다.
LC-MS (ESI): calcd for C25H36N4O8 520.3, found m/z 520.7 (M + H+).
상기 화합물 (9) (0.11 g, 0.21 mmol)를 에틸 아세테이트에 용해시켰다. 디옥산에 희석된 4 N HCl을 과량으로 실온에서 첨가한 후 상기 혼합물을 실온에서 4 시간 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압농축하여 흰색 고체 형태인 화합물 (10)을 얻었다 .
LC-MS (ESI): calcd for C20H28N4O6 420.2, found m/z 420.6 (M + H+).
디클로로메탄에 용해된 팔미트 산 (0.02 g, 0.08 mmol) 용액에, 상기 화합물 (10) (0.04 g, 0.09 mmol), EDCI·HCl (0.03 g, 0.16 mmol), HOBt (0.02 g, 0.16 mmol) 및 트리에틸아민 (0.04 mL, 0.32 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시킨 후 감압농축하고 탄산나트륨 수용액으로 희석한 후, 에틸 아세테이트로 세 번 추출하였다. 총 유기층을 생리식염수로 세척한 후, 1N 염산으로 세 번 세척하였다. 상기 유기층을 다시 생리식염수로 세척하고 무수 황산 마그네슘으로 건조시킨 후, 농축하고 MPLC (디클로로메탄/2-프로판올)를 사용하여 화합물 (11) (58% 수율)을 얻었다.
LC-MS (ESI): calcd for C36H58N4O7 658.4, found m/z 659.1 (M + H+)
상기 화합물 (11) (0.03 g, 0.05 mmol)을 테트라하이드로퓨란과 혼합하였다. 상기 혼합 용액에 수산화 나트륨 (0.008 g, 0.20 mmol) 수용액을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반시킨 후 농축시켰다. 1N 염산을 첨가하여 pH를 1.0으로 조절하였다. 에틸 아세테이트로 수층을 세 번 추출하였다. 총 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조시킨 후 농축하여 흰색 고체 형태의 화합물 (12) (93% 수율)를 얻었다.
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.05 (d, J = 8.50 Hz, 2 H), 6.70 (d, J = 8.50 Hz, 2 H), 4.59-4.65 (m, 2 H), 4.39-4.41 (m, 1 H), 3.96-3.99 (m, 1 H), 3.84-3.89 (m, 1 H), 3.65-3.76 (m, 2 H), 3.10-3.14 (m, 1 H), 2.97-3.01 (m, 1 H), 2.20-2.24 (m, 3 H), 2.09-2.14 (m, 1 H), 1.96-2.03 (m, 2 H), 1.58-1.60 (m, 3 H), 1.31-1.36 (m, 30 H), 0.92 (t, J = 7.15 Hz, 3 H). LC-MS (ESI): calcd for C35H56N4O7 644.4, found m/z 644.6 (M + H+).
실시예 1.4 - 1.15에 따른 화합물은 상기 화합물 (7)을 출발 물질로 사용하여 상기 실시예 1.3과 동일한 방법으로 제조되었다. 상기 화합물의 NMR 데이터는 하기에 도시되었다.
Figure 112017096422982-pct00025
실시예 1.4: 팔미토일글라이실-L-프롤릴글라이실-L-티로신 (pal-GPGY-OH)
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.03 (d, J = 8.50 Hz, 2 H), 6.70 (d, J = 8.50 Hz, 2 H), 4.58-4.63 (m, 1 H), 4.39-4.42 (m, 1 H), 3.90-4.08 (m, 4 H), 3.59-3.74 (m, 3 H), 3.09-3.12 (m, 1 H), 2.96-3.00 (m, 1 H), 1.99-2.31 (m, 7 H), 1.56-1.66 (m, 3 H), 1.24-1.35 (m, 26 H), 0.92 (t, J = 7.05 Hz, 3 H). LC-MS (ESI): calcd for C34H54N4O7 630.4, found m/z 630.8 (M + H+).
Figure 112017096422982-pct00026
실시예 1.5: ((9Z, 12Z) - 옥타데카-9,12-디에노일) 글라이실-L-프로릴글라이실-L-티로신 (리놀레일-GPGY-OH)
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.03 (d, J = 8.50 Hz, 2 H), 6.71 (d, J = 8.50 Hz, 2 H), 5.31-5.41 (m, 4 H), 4.58-4.62 (m, 1 H), 4.39-4.42 (m, 1 H), 3.99-4.08 (m, 2 H), 3.70-3.73 (m, 1 H), 3.59-3.67 (m, 1 H), 3.09-3.12 (m, 1 H), 2.96-3.00 (m, 1 H), 2.78-2.79 (m, 3 H), 2.25-2.31 (m, 1 H), 2.18-2.22 (m, 2 H), 1.99-2.13 (m, 7 H), 1.56-1.64 (m, 3 H), 1.31-1.42 (m, 18 H), 0.93 (t, J = 7.10 Hz, 3 H). LC-MS (ESI): calcd for C36H54N4O7 654.4, found m/z 655 (M + H+).
Figure 112017096422982-pct00027
실시예 1.6: 팔미토일-L-페닐알라닐-L-프롤릴글라이실-L-티로신 (pal-FPGY-OH)
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.27-7.28 (m, 5 H), 7.07 (d, J = 8.45 Hz, 2 H), 6.71 (d, J = 8.30 Hz, 2 H), 4.59-4.63 (m, 1 H), 4.40-4.42 (m, 1 H), 3.99-4.02 (m, 1 H), 3.85-3.89 (m, 1 H), 3.73-3.78 (m, 1 H), 3.52-3.55 (m, 1 H), 3.09-3.16 (m, 2 H), 2.86-3.02 (m, 3 H), 1.95-2.22 (m, 8 H), 1.44-1.62 (m, 4 H), 1.31 (m, 25 H), 0.92 (t, J = 7.10 Hz, 3 H). LC-MS (ESI): calcd for C41H60N4O7 720.4, found m/z 721.1 (M + H+).
Figure 112017096422982-pct00028
실시예 1.7: 헥사노일-L-프롤릴-L-프롤릴글라이실-L-티로신 (hexanoyl-PPGY-OH)
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.05 (d, J = 8.50 Hz, 2 H), 6.70 (d, J = 8.50 Hz, 2 H), 4.66-4.68 (m, 1 H), 4.54-4.57 (m, 1 H), 4.40-4.44 (m, 1 H), 3.96-4.00 (m, 1 H), 3.85-3.89 (m, 1 H), 3.73-3.76 (m, 1 H), 3.51-3.68 (m, 3 H), 3.08-3.12 (m, 1 H), 2.97-3.02 (m, 1 H), 2.31-2.41 (m, 2 H), 2.20-2.29 (m, 2 H), 1.92-2.12 (m, 5 H), (m, 8 H), 1.57-1.66 (m, 3 H), 1.31-1.38 (m, 5 H), 0.93 (t, J = 7.00 Hz, 3 H). LC-MS (ESI): calcd for C27H38N4O7 530.3, found m/z 530.7 (M + H+).
Figure 112017096422982-pct00029
실시예1.8: 옥타노일-L-프롤릴-L-프롤릴글라이실-L-티로신 (octanoyl-PPGY-OH)
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.05 (d, J = 8.50 Hz, 2 H), 6.71 (d, J = 8.50 Hz, 2 H), 4.66-4.68 (m, 1 H), 4.54-4.57 (m, 1 H), 4.40-4.42 (m, 1 H), 3.96-4.00 (m, 1 H), 3.85-3.89 (m, 1 H), 3.73-3.77 (m, 1 H), 3.51-3.68 (m, 3 H), 3.08-3.12 (m, 1 H), 2.97-3.02 (m, 1 H), 2.18-2.34 (m, 4 H), 1.92-2.12 (m, 5 H), 1.57-1.61 (m, 2 H), 1.32-1.35 (m, 10 H), 0.92 (t, J = 7.00 Hz, 3 H). LC-MS (ESI): calcd for C29H42N4O7 558.3, found m/z 558.5 (M + H+).
Figure 112017096422982-pct00030
실시예 1.9: 데카노일-L-프롤릴-L-프롤릴글라이실-L-티로신 (decanoyl-PPGY-OH)
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.03 (d, J = 8.55 Hz, 2 H), 6.71 (d, J = 8.40 Hz, 2 H), 4.66-4.68 (m, 1 H), 4.54-4.57 (m, 1 H), 4.40-4.42 (m, 1 H), 3.96-4.00 (m, 1 H), 3.85-3.89 (m, 1 H), 3.73-3.77 (m, 1 H), 3.51-3.68 (m, 3 H), 3.08-3.12 (m, 1 H), 2.97-3.02 (m, 1 H), 2.18-2.39 (m, 5 H), 1.92-2.14 (m, 6 H), 1.57-1.61 (m, 2 H), 1.32-1.36 (m, 14 H), 0.92 (t, J = 7.15 Hz, 3 H). LC-MS (ESI): calcd for C31H46N4O7 586.3, found m/z 586.8 (M + H+).
Figure 112017096422982-pct00031
실시예 1.10: 스테아로일-L-프롤릴-L-프롤릴글라이실-L-티로신 (stearoyl-PPGY-OH)
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.03 (d, J = 8.55 Hz, 2 H), 6.71 (d, J = 8.25 Hz, 2 H), 4.66-4.68 (m, 1 H), 4.55-4.57 (m, 1 H), 4.40-4.44 (m, 1 H), 3.96-4.02 (m, 1 H), 3.84-3.89 (m, 1 H), 3.71-3.76 (m, 1 H), 3.48-3.68 (m, 4 H), 3.08-3.12 (m, 1 H), 2.97-3.02 (m, 1 H), 2.14-2.42 (m, 5 H), 1.90-2.14 (m, 6 H), 1.57-1.61 (m, 2 H), 1.32-1.35 (m, 30 H), 0.92 (t, J = 7.15 Hz, 3 H). LC-MS (ESI): calcd for C39H62N4O7 698.5, found m/z 698.5 (M + H+).
Figure 112017096422982-pct00032
실시예 1.11: 헥스-5-에노일-L-프롤릴-L-프롤릴글라이실-L-티로신 (5-hexenoyl-PPGY-OH)
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.05 (d, J = 8.55 Hz, 2 H), 6.70 (d, J = 8.25 Hz, 2 H), 5.78-5.89 (m, 1 H), 4.98-5.08 (m, 3 H), 4.66-4.69 (m, 1 H), 4.54-4.57 (m, 1 H), 4.40-4.44 (m, 1 H), 3.97-4.01 (m, 1 H), 3.84-3.90 (m, 1 H), 3.73-3.76 (m, 1 H), 3.47-3.68 (m, 4 H), 3.08-3.12 (m, 1 H), 2.97-3.01 (m, 1 H), 2.33-2.42 (m, 2 H), 2.20-2.30 (m, 2 H), 2.06-2.15 (m, 4 H), 1.92-2.04 (m, 4 H), 1.67-1.76 (m, 3 H). LC-MS (ESI): calcd for C27H36N4O7 528.3, found m/z 529 (M + H+).
Figure 112017096422982-pct00033
실시예 1.12: 올레일-L-프롤릴-L-프롤릴글라이실-L-티로신 (oleyl-PPGY-OH)
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.03 (d, J = 8.50 Hz, 2 H), 6.71 (d, J = 8.50 Hz, 2 H), 5.34-5.38 (m, 2 H), 4.66-4.68 (m, 1 H), 4.55-4.57 (m, 1 H), 4.40-4.42 (m, 1 H), 3.96-4.01 (m, 1 H), 3.84-3.90 (m, 1 H), 3.73-3.77 (m, 1 H), 3.53-3.69 (m, 4 H), 3.08-3.12 (m, 1 H), 2.97-3.01 (m, 1 H), 2.18-2.39 (m, 5 H), 2.06-2.12 (m, 2 H), 1.92-2.05 (m, 3 H), 1.58-1.61 (m, 3 H), 1.31-1.35 (m, 25 H), 0.92 (t, J = 7.0 Hz, 3 H). LC-MS (ESI): calcd for C39H60N4O7 696.4, found m/z 697.3 (M + H+).
Figure 112017096422982-pct00034
실시예 1.13: ((9Z,12Z)-옥타데카-9,12-디에노일)-L-프롤릴-L-프롤릴글라이실-L-티로신 (linoleyl-PPGY-OH)
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.05 (d, J = 8.45 Hz, 2 H), 6.71 (d, J = 8.45 Hz, 2 H), 5.32-5.41 (m, 4 H), 4.66-4.68 (m, 1 H), 4.55-4.57 (m, 1 H), 4.40-4.43 (m, 1 H), 3.96-4.01 (m, 1 H), 3.84-3.89 (m, 1 H), 3.73-3.77 (m, 1 H), 3.53-3.68 (m, 4 H), 3.08-3.12 (m, 1 H), 2.97-3.01 (m, 1 H), 2.80 (t, J = 6.40 Hz, 2 H), 2.19-2.39 (m, 5 H), 1.93-2.13 (m, 10 H), 1.59-1.61 (m, 3 H), 1.31-1.40 (m, 15 H), 0.92 (t, J = 6.59 Hz, 3 H). LC-MS (ESI): calcd for C39H58N4O7 694.4, found m/z 695.2 (M + H+).
Figure 112017096422982-pct00035
실시예 1.14: 팔미토일-L-발릴-L-프롤릴-L-프롤릴글라이실-L-티로신 (Pal-VPPGY-OH)
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.04 (d, J = 8.35 Hz, 2 H), 6.71 (d, J = 8.35 Hz, 2 H), 4.67-4.70 (m, 1 H), 4.52-4.58 (m, 1 H), 4.39-4.43 (m, 1 H), 3.77-4.05 (m, 4 H), 3.64-3.73 (m, 2 H), 3.49-3.60 (m, 1 H), 3.01-3.11 (m, 2 H), 1.87-2.31 (m, 15 H), 1.61-1.63 (m, 3 H), 1.31 (m, 24 H), 1.01 (d, J = 6.58 Hz, 3 H), 0.98 (d, J = 6.58 Hz, 3 H), 0.92 (t, J = 6.96 Hz, 3 H). LC-MS (ESI), calcd for C42H67N5O8 769.5, found m/z 770.7 (M + H+).
Figure 112017096422982-pct00036
실시예 1.15: 데카노일-L-발릴-L-프롤릴-L-프롤릴글라이실-L-티로신 (decanoyl-VPPGY-OH)
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.05 (d, J = 8.45 Hz, 2 H), 6.71 (d, J = 8.45 Hz, 2 H), 4.67-4.70 (m, 1 H), 4.50-4.57 (m, 1 H), 4.39-4.43 (m, 1 H), 3.95-4.05 (m, 2 H), 3.80-3.91 (m, 1 H), 3.65-3.70 (m, 2 H), 3.64-3.73 (m, 2 H), 3.53-3.57 (m, 1 H), 3.01-3.10 (m, 2 H), 1.89-2.31 (m, 12 H), 1.61-1.63 (m, 3 H), 1.31 (m, 24 H), 1.01 (d, J = 6.68 Hz, 3 H), 0.97 (d, J = 6.55 Hz, 3 H), 0.92 (t, J = 7.05 Hz, 3 H). LC-MS (ESI), calcd for C36H55N5O8 685.4, found m/z 686.6 (M + H+).
표 1은 실시예 1.1 - 1.15에 따른 화합물을 보여준다.
실시예 1.1 - 1.15에 따른 화합물
실시예 번호(화합물번호) 화학식
1.1
Figure 112017096422982-pct00037
1.2
Figure 112017096422982-pct00038
1.3
Figure 112017096422982-pct00039
1.4
Figure 112017096422982-pct00040
1.5
Figure 112017096422982-pct00041
1.6
Figure 112017096422982-pct00042
1.7
Figure 112017096422982-pct00043
1.8
Figure 112017096422982-pct00044
1.9
Figure 112017096422982-pct00045
1.10
Figure 112017096422982-pct00046
1.11
Figure 112017096422982-pct00047
1.12
Figure 112017096422982-pct00048
1.13
Figure 112017096422982-pct00049
1.14
Figure 112017096422982-pct00050
1.15
Figure 112017096422982-pct00051
실시예 2: 분석
실험예 2.1: 인터루킨-6의 발현 억제
본 발명의 화합물에 의해 인터루킨-6의 발현이 억제되는지를 평가하기 위해 하기의 실험을 수행하였다.
RAW 264.7 대식세포는 어메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 (ATCC; Manassas, VA)으로부터 구입하였으며, 구입한 RAW 264.7 대식세포를 1% 페니실린/ 스트렙토마이신을 포함하는 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM)와 10% 태아 소 혈청 (FBS)을 이용하여 37℃, 5% CO2 환경에서 배양하였다.
배양된 RAW 264.7 대식세포를 6-well 세포 배양 접시에 나누어 배양하였다. 24 시간 후 세포를 각각 상기 화합물 1.1, 상기 화합물 1.2 및 스매듀신-6 (smaducin-6)으로 100 nM 농도에서 30분간 전처리한 후 지질다당류 (LPS)로 2 시간 처리하였다. 트리졸 (TRIzol®)을 이용하여 상기 세포를 모은 후 RNA (리보핵산)를 추출하였다. 추출한 RNA 2 μg으로부터 cDNAs (상보적 데옥시리보핵산)를 합성하였고, 역전사 중합효소 연쇄반응 (RT-PCR) 및 실시간 중합효소 연쇄반응 (Real-Time PCR)을 수행하였다. RT-PCR를 통해 얻은 시료를 아가로스 젤 위에서 전기영동으로 확인하였고, 농도계를 이용하여 정량하였다. 인터루킨-6 유전자를 위한 대조표준으로 글리세롤알데하이드 3-인산 탈수소 효소 (GAPDH) 유전자를 사용하였다.
도 1A은 상기 화합물 1.1 및 상기 화합물 1.2에 의해 인터루킨-6의 발현이 억제되는 것을 보여주는 이미지이고, 도 1B는 상기 화합물 1.1 및 상기 화합물 1.2에 의해 인터루킨-6의 발현이 억제되는 것을 정량적으로 보여주는 그래프이다. 비처리한 시료와 비교하였을 때 본 발명의 화합물로 처리된 세포의 경우 LPS 처리에 의해 유도된 인터루킨-6의 발현이 억제되었다.
상기 방법으로 RAW 264.7 대식세포를 6-well 세포 배양 접시에 나누어 배양하였다. 24 시간 후 세포를 100 nM 상기 화합물 1.1로 30분간 전처리하고, LPS로 2 시간 처리하였다. 상기 세포를 모은 후 사이토카인 및 케모카인 양의 변화를 사이토카인 어레이 (생쥐 사이토카인 어레이 C3, RayBiotech)를 사용하여 농도계로 정량하였다. 본 발명의 화합물에 의해 검출한 사이토카인 및 케모카인은 G-CSF, 인터루킨-2, SCF, VEGF, CX3CL1, IGFBP5, IGFBP6, 인터루킨-1α, 인터루킨-1β, 인터루킨-6, 인터루킨-9, MCP-1, MPC-3α, 인터루킨12p40/70, MIG, TNF-α 및 VCAM-1를 포함한다. 비처리한 시료와 비교하였을 때 본 발명의 화합물로 처리된 세포의 경우 LPS 처리에 의해 유도된 상기 사이토카인 및 케모카인의 발현이 통계학적으로 의미있는 수준으로 억제되었다 (도 2).
RAW 264.7 대식세포를 상기 화합물 1.1로 50 pM부터 500 nM 사이의 다양한 농도에서 30분간 처리한 후 LPS 100 ng/mL로 2 시간 처리하였다. LPS에 의해 유도된 인터루킨-6의 발현을 상기대로 정량화하였고, 그 결과를 도 3에 도시하였다. RAW 264.7 대식세포에서 인터루킨-6의 발현을 50% 또는 그 이하로 억제할 수 있는 상기 화합물 1.1의 농도 (즉, IC50)는 약 1.6 nM이었다.
실험예 2.2: NF-κB의 활성 억제
본 발명의 화합물이 LPS에 의해 유도된 NF-κB 신호를 특이적으로 억제할 수 있는지 평가하기 위해 하기의 실험을 수행하였다.
구체적으로, 이펙틴 (Qiagen, USA)을 이용하여 5x NF-κB-Luc 리포터 플라스미드를 Raw 264.7 세포 내로 형질 주입하였다. 형질 주입된 세포를 상기 화합물 1.1 100 nM로 30분간 전처리하고 LPS (100 ng/ml)로 2시간 처리한 후, 세포 내 루시페라제 활성을 측정하였다 (도 4는 상기 화합물 1.1 및 상기 화합물 1.2가 NF-kB의 활성화를 억제하는 상대적인 활성을 보여주는 그래프이다). 본 발명의 화합물 1.1 및 화합물 1.2로 처리한 세포에서 LPS에 의해 유도된 NF-κB의 활성화가 저해되었다 (도 4).
상기 방법대로 5x NF-κB-Luc 리포터 플라스미드를 Raw 264.7 대식세포 내로 형질주입한 후 본 발명의 화합물로 처리하였다. 형질 주입 24시간 후 세포를 DMSO (대조표준), 상기 화합물 1.1, 기준 화합물 1 (상기 화합물 1.1에서 팔미트 산을 제거한 화합물) 및 스매듀신-6으로 각각 100 pM, 1nM 및 100nM의 다양한 농도에서 30분간 처리한 후 LPS 100 ng/ml로 2 시간 처리하였다. 세포 내 루시페라제 활성을 측정하여 그 결과를 도 5에 도시하였다.
도 5에서 보는 바와 같이 상기 화합물 1.1로 전처리한 세포에서 (스매듀신-6으로 전처리한 세포와 마찬가지로) 상기 화합물 1.1의 용량이 증가함에 따라 LPS 처리에 의해 유도된 NF-κB의 활성 저해도 증가하였다. 반면, 세포를 DMSO 또는 상기 기준 화합물 1로 전처리했을 경우 NF-κB의 활성은 용량에 상관없이 저해되지 않았다.
실험예 2.3: 신호전달 경로의 선택성
본 발명의 화합물 1.1의 신호전달 경로에 대한 선택성을 평가하기 위해 하기의 실험을 수행하였다. 하기의 실험은 상기 화합물 1.1이 각각의 유도체에 의해 유도된 신호전달 경로를 특이적으로 억제할 수 있는지 확인하기 위해 수행되었다.
구체적으로, 5x NF-κB-Luc 리포터 플라스미드, SBE-Luc 리포터 플라스미드 및 BRE-Luc 리포터 플라스미드를 각각 Raw 264.7 대식세포에 형질 주입하였다. 24시간 후 NF-κB-Luc 리포터 플라스미드가 형질 주입된 세포는 LPS 100 ng/ml로, SBE-Luc 리포터 플라스미드가 형질 주입된 세포는 TFG-β1 5 ng/ml로, BRE-Luc 리포터 플라스미드가 형질 주입된 세포는 BMP6 100 ng/ml로 2 시간 처리하였다.
도 6는 상기 화합물 1.1이 다양한 신호전달 경로를 억제하는 상대적인 활성도를 보여주는 그래프이다. 도 6에서 보는 바와 같이 본 발명의 화합물 1.1로 처리한 세포의 경우 LPS 처리에 의해 유도된 NF-κB의 활성이 저해되었다. 그렇지만, BMP6 처리에 의해 유도된 BRE의 활성이나 TFG-β1 처리에 의해 유도된 SBE 활성은 상기 화합물 1.1에 의해 저해되지 않았다. 따라서, 상기 화합물 1.1은 NF-κB 신호전달 경로의 활성화를 선택적으로 저해하였다.
특히 최근의 연구 보고에 따르면, 염증성 장 질환의 치료와 관련하여 TFG-β 및 BMP 신호전달 경로가 점막 상처 회복 등과 특별하게 연관될 수 있으며 (Nature 449 (2007), 361-365, Am J Path, 162(2), (2003), Nature Immunol. 6, (2005), 507-514, J Cell Physiol. 196(2): (2003); 258-64 및 Nature Protocols, 8(3), (2013) 627-637), 본 발명 명세서에 참고문헌으로 인용됨), 또한 TFG-β가 장에서 염증(수지상 세포)을 컨트롤 하는데 매우 중요한 인자일 수 있다 (J. Clin. Invest., 111 (2003), 1297-1308, Immunity, 10 (1999), 39-49, Eur. J. Immunol., 36 (2006), 864-874, Immunity, 25 (2006), 319-329, Cell 118 (2004), 229-241 및 J. Immunol. 179 (2007), 2690-2694), 본 발명 명세서에 참고문헌으로 인용됨). 따라서, TFG-β 및 BMP 신호전달 경로의 활성화를 억제하지 않는 본 발명의 화합물은 면역성 장 질환을 치료하는데 획기적인 효과가 있음을 보여준다.
실험예 2.4: 신호전달 단백질 복합체 형성의 저해 및 저해제 κB (IκB)의 분해
본 발명의 화합물이 MyD88 및/또는 RIP1에 의해 매개되는 염증 신호전달 경로 단백질 복합체의 형성, 예를 들어 Toll-유사 수용체 (TLRs) 신호전달 경로 단백질 복합체의 형성을 방해하는지 확인하기 위해 면역침강 실험을 수행하였다. 동시에, 본 발명의 화합물에 의한 IκB의 분해를 측정하기 위해 IκB의 농도 변화를 측정하는 하기의 실험을 수행하였다.
구체적으로, 염증 신호전달 단백질 복합체 형성이 방해되었는지를 확인하기 위해 Toll-유사 수용체 (TLRs) 신호전달 단백질 복합체의 형성에 관련된 단백질 (예, IRAK1, TRAF6, MyD88, RIP1 및 Pellino-1)에 반응하는 항체를 사용하여 면역침강 실험을 수행하였다. 기준 대조표준으로 총 세포 용해물에서 β-actin의 상대적인 발현양을 웨스턴 블롯으로 비교하였다.
RAW264.7 대식세포를 상기 화합물 1.1, 상기 화합물 1.2 및 스매듀신-6으로 각각 처리한 후 LPS로 처리하였다. 상기 RAW264.7 대식세포를 모아 용해 완충액 (0.5 % Triton X-100, 20 mM HEPES (pH 7.4), 150 mM NaCl, 12.5 mM β-glycerol phosphate, 1.5 mM MgCl2, 10 mM NaF, 2 mM DTT, 1 mM Na3O4V, 2 mM EGTA 및 1 mM 단백질 분해효소 저해제 (PMSF)를 포함한 PBS)으로 용해시킨 후 13000 rpm에서 10분 동안 원심 분리하였다. 면역침강 분석을 위해 상기 세포 용해액을 protein-A 아가로스 비드 및 상기 단백질에 반응하는 항체와 함께 4℃에서 12시간 동안 배양한 후, 상기 비드를 상기 용해 완충액으로 세 번 세척하였다. 2x시료 완충액을 첨가하여 면역침강물을 분리한 후 가열하였다. 제조한 시료를 SDS-폴리아크릴아마이드 젤에서 분석하였다 (도 7).
IκB의 농도 변화를 측정하기 위해 RAW264.7 대식세포를 각각 상기 화합물 1.1, 상기 화합물 1.2 및 스매듀신-6으로 100nM 농도에서 전처리한 후 LPS로 처리하였다. 추출한 세포 용해물을 이용하여 I?Bα 항체로 면역블롯 실험을 수행하였으며, 기준 대조표준으로 β-actin을 사용하였다 (도 7).
도 7은 상기 화합물 1 및 상기 화합물 2가 MyD88 또는 RIP1에 의해 매개되는 염증 신호전달 경로 단백질 복합체를 방해하고, 또한 상기 화합물에 의해 IκB의 농도가 변화하는 것을 보여주는 면역침강 이미지이다. 대조표준인 총 세포 용해물과 비교하였을 때 본 발명의 화합물로 처리한 세포에서는 (MyD88 또는 RIP1에 의해 매개되는) 염증 신호전달 경로 단백질 복합체의 형성이 저해되었다 (도 7). 기준 대조표준인 β-actin의 발현과 비교하였을 때 본 발명의 화합물로 처리된 세포에서는 IκB가 탈인산화됨으로써 안정되었다.
본 발명의 화합물로 처리된 세포에서 대조표준인 총 세포 용해물과 비교하였을 때 MyD88 단백질 복합체 및 RIP1 단백질 복합체의 형성 및 상기 활성이 현저하게 방해되고 저해되었다 (도 7). 상기 결과는 본 발명의 화합물이 Pellino-1과 관련된 질환의 치료에 이용될 수 있음을 나타낸다. 더욱이 상기 염증성 장 질환 이외에도 본 발명의 화합물은 지도모양위축증, 습성 황반변성, 건성 황반변성, 당뇨망막병, 다발성 경화증, 폐 염증, 세균성 폐렴, 바이러스 성 폐렴, 확산성 대형 B-세포 림프종 및 탈모증을 예방하거나 치료하는데 효과적일 수 있다 (Journal of Clinical Investigation, 124(11), (2014), 4976-4988, J Virology, 86(12), (2012), 6595-6604, Nature Medicine, 19(5), (2013), 595-602, J. Immunol., 187 (2011), 1-14, J. Inv. Derm., 132 (2012), 43-49, Med. Inflamm., (2010), Article ID 928030, Hair The Transplant, 4 (2014), 4:1, Exp. Derm., 17 (2007), 12-19 및 DDT Dis. Mech. 5 (2009), e163-171, 본 발명 명세서에 참고문헌으로 인용됨).
골수에서 유래된 대식세포 (BMDM)를 상기 화합물 1.1, 상기 기준 화합물 1 및 스매듀신-6으로 100 pM, 1nM 및 100nM의 다양한 농도로 각각 전처리한 후 LPS 100 ng/ml로 처리하였다. 추출한 세포 용해물을 이용하여 상기 방법으로 면역블롯 실험을 수행하였으며, 그 결과를 도 8에 보여주었다.
스매듀신-6으로 전처리한 세포와 비교하여 상기 화합물 1.1로 사전 처리한 세포의 경우 MyD88 및 RIP1에 의해 매개되는 염증 신호전달 경로 복합체 (예, Toll-유사 수용체 (TLR))의 형성이 상기 화합물 1.1의 용량이 증가함에 비례하여 방해되었다 (도 8). 반면, DMSO 또는 상기 기준 화합물 1로 전처리한 세포의 경우 용량에 관계없이 MyD88 및 RIP1에 의해 매개되는 염증 신호전달 경로 복합체가 형성되었다.
마찬가지로, 대조표준인 총 세포 용해물과 비교하였을 때 본 발명품의 화합물 1.1로 처리한 세포의 경우 MyD88 및 RIP1에 의해 매개되는 염증 신호전달 경로 복합체의 형성이 현저하게 방해되었다. 본 발명의 화합물로 BMDM 세포를 처리한 실험 결과, 본 발명의 화합물이 MyD88과 관련된 다양한 질환을 예방하고 치료하는데, Pellino-1의 발현과 관련된 질환, 예를 들어 바이러스 감염 (호흡기 바이러스 감염, 바이러스 성 폐렴), 세균성 폐렴, 자가 면역 질환, 림프종을 포함한 혈액암 및 내장 장기 (예: 간, 폐, 장, 전립선, 췌장 등)의 종양을 치료하는데, 그리고 다발성 경화증 (MS)을 예방하고 치료하는데 효과적이라고 제시되었다.
도 9 에서 보는 바와 같이 RAW 264.7 대식세포 (위)와 BMDM 세포 (아래)를 상기 화합물 1.1, 상기 기준 화합물 1 및 스매듀신-6으로 100pM, 1nM 및 100nM의 다양한 농도에서 각각 전처리한 후 LPS 100 ng/ml로 처리하였다. 그 결과를 기준 대조표준인 β-actin의 발현과 비교하였다. 상기 화합물 1.1과 스매듀신-6로 전처리한 용량이 증가함에 따라 IκB의 발현이 세포 내에서 증가하였다. 반면, DMSO 또는 상기 기준 화합물 1로 전처리한 세포에서는 IκB는 인산화됨으로써 분해되었다. 따라서, 본 발명의 화합물 1.1은 IκB의 분해를 저해하였다.
실험예 2.5: 용량과 질병 활성 지수의 상관성 평가
덱스트란 황산나트륨 (DSS)으로 유도된 만성 대장염 동물 모델에서 본 발명의 화합물의 질병 활성 지수를 평가하기 위해, 하기의 실험을 수행하였다.
식수에 섞은 2% DSS 중합체 (분자량 ~50000Da)를 생쥐 (7-8주령, 암컷, C57BL/6)에 5-7일간 투여하였고, 매 2 내지 15일 대장염을 유발하였다. DSS로 유도된 만성 대장염 생쥐에 상기 화합물 1.1을 각각 50 mg/kg, 100 mg/kg, 200 mg/kg 및 400 mg/kg의 양으로, DSS를 투여한 3일째부터 매일 11일간 경구 투여하였다. 생쥐의 체중, 설사 및 혈변을 매일 확인하여 질병 활성 지수를 측정하였다 (도 10).
도 10은 DSS로 유도된 만성 대장염 동물 모델에서 경구 투여한 상기 화합물 1.1 및 상기 화합물 1.2의 투여 용량에 따른 질병 활성 지수 점수를 나타낸 그래프이다. 도 10에서 보는 바와 같이, 본 발명의 화합물 1.1을 50 mg/kg에서 400 mg/kg까지 다른 용량으로 투여하였을 때 투여 용량이 증가함에 따라 질병 활성이 감소하며, 200 mg/kg의 투여 용량에서 질병 활성 감소가 포화되었다. 따라서, 본 발명의 화합물은 용량이 증가함에 따라 활성도 비례적으로 증가하였다.
실험예 2.6: 대장염의 활성의 억제
DSS로 유도된 급성 대장염 동물 모델에서 본 발명의 화합물의 억제 활성을 평가하기 위해 하기의 실험을 수행하였다.
식수에 섞은 2% DSS 중합체 (분자량 ~50000Da)를 생쥐 (7-8주령, 암컷, C57BL/6)에 7-8일간 투여하고, 대장염을 유발하였다. 급성 대장염 생쥐에 각각 설파살라진 500 mg/kg 및 상기 화합물 1.1 100 mg/kg을 14일간 매일 투여하였다. 생쥐의 체중, 설사 및 혈변을 매일 확인하여 질병 활성 지수 (DAI)를 측정하였다 (도 11A).
질병 활성 지수는 하기대로 측정되었다:
1) 체중 감소 (0점: 체중 감소 없음; 1점: 1-5% 체중 감소; 2점: 6-10% 체중 감소; 3점: 11-20% 체중 감소; 4점 20% 이상 체중 감소);
2) 설사 (0점: 정상 배변; 2점: 묽은 배변; 4점: 설사); 및
3) 혈변 (0점: 정상변; 2점: 약한 혈변; 4점: 심한 혈변).
도 11A은 DSS로 유도된 급성 대장염 동물 모델에서 상기 화합물의 투여에 의한 억제 활성을 질병 활성 지수 점수로 보여준 그래프이다. 항염증제 설파살라진과 비교하였을 때 본 발명의 화합물은 더 낮은 농도에서 충분한 질병 활성 지수 점수를 보여주며, 따라서 본 발명의 화합물은 대장염을 치료하는데 설파살라진보다 더 효과적이다 (도 11A).
한편, 도 11B에서 보는 대로 DSS로 유도된 만성 대장염 생쥐에게 각각 설파살라진 500 mg/kg 및 상기 화합물 1.1 100 mg/kg을 매일 10일간 경구 투여하였다. 10일간 경구 투여 후 생쥐로부터 대장 조직을 채취하여, 상기대로 실시간 중합효소 연쇄반응 (Real-Time PCR)을 이용하여 조직에 있는 케모카인 (CCL20, CCL2 및 CX3CL1)의 발현을 측정하였다. 상기 화합물 1.1은 효과적인 케모카인 차단제로 병원성 면역 세포가 염증 조직으로 주화하는 것을 저해하였다.
실험예 2.7: 대장 융모의 조직학적 분석
본 발명의 화합물 1.1이 DSS에 의해 유도된 대장염을 치료하는 효과가 있는지를 확인하기 위해 비처리군, DSS로 유도된 만성 대장염 모델군 및 상기 화합물 1.1 처리군의 대장 융모을 촬영하였다 (도 12 - 16).
도 12 - 14는 비처리군, DSS로 유도된 만성 대장염 모델군 및 상기 화합물 1.1 처리군의 대장 융모의 형태를 보여주는 이미지이다. 도 12 - 14에서 보는 바와 같이 DSS로 유도된 만성 대장염 모델군의 대장 융모와 달리 상기 화합물 1.1 처리군의 융모는 비처리군의 융모와 비슷하였다.
도 15는 비처리군, DSS로 유도된 만성 대장염 모델군, 상기 화합물 1.1 처리군 (100 mpk) 및 대장염 치료용 항염증제인 설파살라진 처리군 (500 mpk)에서 얻은 대장 조직을 촬영한 이미지이다. 도 16은 비처리군, DSS로 유도된 만성 대장염 모델군, 상기 화합물 1.1 처리군 (100 mpk) 및 대장염 치료용 항염증제인 설파살라진 처리군 (500 mpk)에서 얻은 대장 점막의 형태를 촬영한 이미지로, 상기 점막은 알시안 블루로 염색되었다. 도 15-16에서 보는 바와 같이 DSS로 유도된 만성 대장염 모델을 상기 화합물 1.1로 처리한 경우 염증 조직에서 발견될 수 있는 조직학적 손상이 줄어들었다. 게다가 비처리군 및 설파살라진 처리군과 비교하였을 때 상기 화합물 1.1 처리군은 조직 내로 염증 세포가 이동하는 것을 차단함으로써 점막 재생이 더 향상되었다.
도 17은 비처리군, DSS로 유도된 만성 대장염 모델군, 상기 화합물 1.1 처리군 (100 mpk) 및 설파살라진 처리군 (500 mpk)에서 대장벽이 회복하는 정도를 보여주는 그래프이다.
구체적으로, Nature Protocols, 8(3), (2013) 627-637에 기술된 방법에 따라 DSS로 유도된 만성 대장염 모델에서 처리 8일차에 FITC-덱스트란을 실험 동물 체중 100g 당 44mg의 용량으로 경구 투여하였다. 투여 4 시간 후 300 - 400 ㎕의 혈액을 생쥐의 심장에서 채취하였다. 혈류로 배출된 FITC-덱스트란을 형광 분광광도계를 사용하여 측정하였다.
도 17은 혈류로 배출된 FITC-덱스트란 분석을 통해 대장 점막의 색전 형성에 의해 일어난 대장 상피 조직의 치밀 이음부 또는 대장에서의 기능이 기존 설파살라진 처리군과 비교될 정도로 회복되었음을 정량적으로 보여준다. 따라서, 본 발명의 화합물은 만성 대장염 조직에서 대장 상피 장벽과 치밀 이음부 기능을 회복하는데 상당한 효과가 있었다.
실험예 2.8: 혈장 농도
정맥 주사 및 경구 투여에 따른 본 발명품의 화합물 1.1의 혈(혈류)중 농도 변화를 평가하기 위해 하기의 실험을 수행하였다.
상기 화합물 1.1을 정맥 주사 (I.V., 5 mg/kg) 또는 경구 투여 (50 mg/kg)로 쥐에 투여하고, 투여 24 시간 후 상기 화합물 1.1의 혈장 농도를 측정하였다 (도 18 및 19).
다양한 시간 간격으로 정맥 주사를 통해 투여된 상기 화합물 1.1의 농도의 변화를 측정하였다 (도 18). 상기 농도는 투여 1-2 시간 내 초기 농도의 1/100까지 감소하였으며, 투여 8 시간 대 상기 화합물 1.1은 혈중에서 매우 낮은 농도로 검출되었다.
경구 투여된 상기 화합물 1.1의 혈중 농도 변화를 다양한 시간 대에 측정하였다 (도 19). 경구 투여 30분 후 상기 화합물 1.1은 혈액에서 검출되지 않았다.
표 2는 상기 화합물 1.1의 약물동력 지표를 보여준다.
표 2: 상기 화합물 1.1의 약물동력 지표
Figure 112017096422982-pct00052
실험예 2.9: 조직 분포
본 발명품의 화합물 1.1의 조직 분포를 평가하기 위해 하기의 실험을 수행하였다.
상기 화합물 1.1을 10 mg/kg의 용량으로 쥐에게 경구 투여한 후 각각 2 시간 및 8 시간 후 소장 조직, 대장 조직, 맹장 조직, 소장 내 배설물 및 대장 내 배설물에서 상기 화합물 1.1의 농도를 측정하였다. 상기 결과를 하기 표 3에 도기한다.
표 3: 경구 투여 후 상기 화합물 1.1의 농도
Figure 112017096422982-pct00053
ND: 측정하지 않았음.
정량 범위: 장 8-2000 ng/kg, 배설물 30-1000 ng/mL
상기 표 3에 보는 바와 같이 상기 화합물 1.1은 투여 후 2 시간 및 8 시간에 소장, 대장 및 맹장과 같은 장내 조직에 정량 범위 내로 분포하였으며, 투여 후 8 시간에도 장내 조직에 분포하였다.
따라서, 경구 투여시 본 발명의 화합물은 장내 조직에서 8 시간이 경과한 후에도 지속적으로 유효한 농도를 유지한다. 본 발명품의 화합물은 소분자 약물이므로 장에서 쉽게 분포될 수 있고, 그러므로 유효한 농도에 용이하게 도달할 수 있다. 따라서, 본 발명 명세서의 화합물은 경구 투여로써 염증성 장 질환을 효과적으로 치료하는데 사용될 수 있다.
실험예 2.10: MAPK 신호전달 경로의 활성 저해
본 발명의 화합물 1.1 및 화합물 1.2가 MAPK/ERK 신호전달 경로를 억제하는지 확인하기 위해 웨스턴 블롯 분석을 시행하였다 (도 20).
RAW 246.7 대식 세포를 상기 화합물 1.1, 상기 화합물 1.2 및 상기 기준 화합물 1로 100 nM의 농도에서 30분간 전처리한 후 LPS로 0 시간, 0.5 시간, 1 시간 및 2 시간 처리하였다. 상기 화합물 1.1 및 상기 화합물 1.2로 처리한 세포에서 상기 기준 화합물 1의 경우와 동일한 양상으로 MAPK 신호전달 경로 단백질 (ERK1/2, JNK, p38)의 인산화가 0.5 시간에서 활성화되었다가, 처리 1 시간 또는 2 시간 후 마찬가지로 상기 기준 화합물 1의 경우와 동일한 양상으로 상기 단백질의 인산화가 점차 감소하였다. 기준 대조표준으로 β-actin을 사용하였다. 각각 단백질의 인산화시 농도의 변화는 항인산 항체를 이용한 면역블롯으로 측정하였다. 상기 기준 화합물 1, 상기 화합물 1.1 및 상기 화합물 1.2는 MAPK 신호전달 경로 단백질의 인산화를 저해하지 않았다.
도 21은 MAPK 신호전달 경로 단백질 (ERK1/2, JNK, p38)의 인산화의 저해를 확인하는 이미지이다. BMDM 세포를 DMSO, 상기 기준 화합물 1, 상기 화합물 1.1 및 스매듀신-6으로 100 pM, 1 nM 및 100 nM의 다양한 농도에서 전처리한 후 LPS로 2 시간 처리하고 웨스턴 블롯 분석을 실행하였다. 본 발명의 화합물 1.1은 DMSO 및 상기 기준 화합물 1과 마찬가지로 용량의 증가에 관계없이 MAPK/ERK 신호전달 경로 단백질의 인산화를 억제하지 않았다.
실험예 2.11: IRAK1/4-저해제와의 비교
상기 실험예 2.3대로 5xNF-κB-Luc 리포터 플라스미드를 RAW 246.7 대식세포에 형질 주입하였다. 24 시간 후 NF-κB-Luc 리포터 플라스미드가 형질 주입된 상기 세포를 상기 화합물 1.1 (100 nM), 인터루킨-1-수용체-관련 키나아제-1/4 (IRAK1/4) 저해제 (25 μM, CAS 509093-47-4) 및 스매듀신-6 (100 nM)으로 30분간 전처리하고 LPS (100 ng/ml)로 2 시간 처리하였다. 이어서 상기 세포에서 루시페라제 활성을 측정하였다.
도 22는 상기 화합물 1.1과 IRAK1/4 저해제 (도 22B)에 의한 NF-κB의 활성 저해를 상대적으로 보여준다. IRAK1/4 저해제는 고농도 (예, 25μM)에서 상기 화합물 1.1과 마찬가지로 NF-κB의 활성을 저해하였다.
상기 화합물 1.1 (100 nM), IRAK1/4 저해제 (25 μM) 및 스매듀신-6 (100 nM)으로 전처리한 후 LPS (100 ng/ml)로 처리한 RAW 246.7 대식세포의 세포 용해물에서 I?B의 농도 변화를 측정하였다 (도 23). IRAK1/4 저해제 역시 상기 화합물 1.1과 마찬가지로 IκB의 분해를 억제하였다 (도 23).
도 24는 상기 화합물 1.1과 IRAK1/4 저해제에 의한 MAPK/ERK 신호전달 경로의 억제를 비교한 그래프와 이미지이다. 구체적으로, RAW 246.7 대식 세포를 DMSO, 상기 화합물 1.1 (100 nM), IRAK1/4 저해제 (25μM) 및 스매듀신-6 (100 nM)으로 30분간 전처리한 후 LPS (100 ng/ml)로 2 시간 처리하였다. 도 24A는 구체적으로 ERK, JNK 및 p38같은 MAPK/ERK 신호전달 경로 단백질의 인산화가 상기 처리에 의해 저해되는지를 평가하는 면역블롯 결과이다. 기준 대조표준으로 β-actin을 사용하였다. 상기 화합물 1.1과 스매듀신-6는 MAPK/ERK 신호전달 경로를 억제하지도 않고, 상기 단백질의 인산화를 저해하지도 않았다. 반면, IRAK1/4 저해제는 MAPK 신호전달 경로에서 적어도 하나 이상을 억제했다.
첨가하여, 의도하지 않은 부작용 유무를 (예를 들어, 상기 화합물 1.1과는 대조적으로 IRAK1/4 저해제는 LPS로 유도된 MAPK 신호전달 경로에서 AP-1 전사 신호를 억제한다는 데에서 기인한) 확인하기 위해 하기의 실험을 수행하였다.
AP-1-Luc 리포터 플라스미드를 RAW 246.7 대식세포에 상기 실험예 2.3대로 형질 주입하였다. 24 시간 후 AP-1-Luc 리포터 플라스미드가 형질 주입된 상기 세포를 상기 화합물 1.1 (100 nM), IRAK1/4 저해제 (25 μM) 및 스매듀신-6 (100 nM)로 30분간 전처리한 후 LPS (100 ng/ml)로 2 시간 처리하였다. 상기 세포에서 루시페라제 활성을 측정하여 결과를 도 24B에 도시하였다. 본 발명의 화합물 1.1은 NF-κB 신호전달 경로의 활성을 선택적으로 저해하는 반면 세포의 생물학적 활성에 중요한 MAPK 신호전달 경로는 억제하지 않았다. 그러나, IRAK1/4 저해제는 MAPK 신호전달 경로를 저해함으로써 AP-1 전사 인자를 저해할 수 있으며, 따라서 생물학적 객체에 적용시 예상하지 못한 부작용을 나타낼 수 있다.
상기 실험예 2.1 - 2.11의 실험 결과가 제시하는 대로 본 발명품의 화합물은 (1) LPS 처리에 의해 유도된 인터루킨-6의 발현 및 NF-κB의 활성을 저해하고; (2) MyD88 및 RIP1에 의해 매개되는 염증 신호전달 경로를 저해하고; (3) 기존 대장염 치료용 항염증제인 설파살라진의 용량보다 낮은 용량에서 비슷한 질병 활성 지수를 나타낸다. 또한, 본 발명품의 화합물은 경구 투여시 혈류에서는 농도가 낮은 반면, 세포 및/또는 조직에서는 유효한 농도를 유지한다. 특히, 투여 후 8 시간 후에도 장내 조직에서 유효한 농도가 유지될 수 있다. 따라서, 본 발명품의 화합물은 장내 조직에서 염증성 질환, 특히 궤양성 대장염, 베체트 병, 크론 병 등과 같은 염증성 장 질환을 예방하고 경감하고 및 치료하는데 효과적으로 이용될 수 있다.
실험예 2.12: 망막 색소 상피 세포에 대한 효과
상기 화합물 1.1은 혈관 생성 관련 인자 또는 억제 인자에 영향을 미친다.
기준 대조표준으로 ARPE-19 세포를 5.5mM Glucose로 처리하였다. 실험군으로는 ARPE-19 세포를 30mM Glucose로 48 시간 처리하여 고혈당 상황을 유도하는 동시에 DMSO, 상기 화합물 1.1 10 nM 및 상기 화합물 1.1 50 nM로 처리하였다. Nox-4, VEGF, VEGFR1, VEGFR2, Ang1, Ang2, Tie-2, EPO 및 EPOR 단백질의 발현 변화를 웨스턴 블롯 분석으로 측정하였다.
혈관벽을 강화하여 출혈을 조절하는 인자인 Ang1 및 Tie-2는 상기 화합물 1.1의 농도가 증가함에 따라 증가하였다 (도 25A). 반면, 활성산소종 생성 인자인 Nox4, 신생 혈관 유도인자인 VEGF, VEGFR1, 2, Ang1 대항 인자인 Ang2 및 당뇨망막병 인자인 EPO 및 EPOR의 발현은 상기 화합물 1.1 처리에 의해 감소하였다.
첨가하여, 기준 대조표준으로 HRMEC 세포를 5.5mM Glucose로 처리하였다. 실험군으로는 HRMEC 세포를 30mM Glucose로 48 시간 처리하여 고혈당 상황을 유도하였고, 동시에 DMSO, 상기 화합물 1.1 10 nM 및 상기 화합물 1.1 50 nM로 처리하였다. Nox-4, VEGF, VEGFR1, VEGFR2, Ang1, Ang2, Tie-2, EPO 및 EPOR 단백질의 발현 변화를 정량적 역전사 중합효소 연쇄반응 (quantitative RT-PCR)을 사용하여 정량적으로 측정하였다. 신생 혈관 자극 인자인 VEGF 전사체의 발현이 상기 화합물 1.1의 처리에 의해 감소하였다 (도 25B).
상기 화합물 1.1이 혈관 생성 중의 관 형성에 미치는 영향을 평가하기 위해 HRMEC 세포 (8x103)를 마트리젤을 씌운 마이크로 슬라이드 위에서 배양한 후 20 ng/ml VEGF로 4 시간 처리하여 관 형성을 유도하였다. 기준 대조표준으로 상기 세포를 DMSO로 처리하였으며, 실험군으로는 상기 세포를 상기 화합물 1.1 50nM 및 칼세인-AM 1uM로 처리하였다. 상기 세포는 형광 현미경을 이용하여 관찰하였다.
도 26은 형광 현미경을 이용하여 상기 세포 내에서의 관 형성을 관찰한 이미지로, 상기 화합물 1.1이 관 형성을 억제하는 것을 보여준다. 실제로, 인간 망막 색소 상피 세포인 ARPE-19 세포에서 상기 화합물 1.1은 Nox-4, VEGF, VEGFR1, VEGFR2, Ang2, EPO 및 EPOR의 발현을 농도 구배에 따라 감소시키고, Ang1 및 Tie-2는 증가시키는 것이 관찰되었다. 따라서, 상기 화합물 1.1은 당뇨망막병과 같은 안과 적응증를 예방하거나 경감하거나 또는 치료하는데 효과적으로 사용될 수 있다. 또한, Myd88의 신호전달 경로 복합체의 형성을 방해함으로써, 상기 화합물 1.1은 지도모양위축증, 습성 황반변성 및 건성 황반변성 등을 예방하거나 경감하거나 또는 치료하는데 효과적으로 사용될 수 있다 (Cell. 149(4), (2012); 847-859).
실험예 2-13: 당뇨망막병에 대한 효과
스트렙토조토신 (STZ)을 50mg/kg의 용량으로 생쥐에게 5일간 매일 투여하여, 당뇨망막병이 유도된 생쥐 모델을 얻었다. 실험군의 생쥐 모델에는 투여 20일부터 24일까지 2 일 간격으로 3회 상기 화합물 1.1 0.2μg을 한쪽 눈에 주사하였다. 투여 50일 후 상기 화합물 1.1로 처리하지 않은 DR 시료와 상기 화합물 1.1로 처리한 DR 시료를 채취하였다.
상기대로 각각의 생쥐 군으로부터 채취한 망막 조직을 5μM 다이하이드로에티디움으로 염색하여 각 군에서의 활성 산소 비율을 측정하였다 (도 27 B). 상기 화합물 1.1을 주사한 DR 시료는 비처리한 DR 시료에 비해 활성 산소 비율이 감소한 것을 보여주었다. 따라서, 본 발명의 화합물 1.1은 생쥐를 이용한 생물 실험에 따라 당뇨망막병과 같은 안과 적응증를 예방하거나 경감하거나 또는 치료하는데 효과적으로 이용될 수 있다.
실험예 2.14: 다발성 경화증에 대한 효과
상기 화합물 1.1의 다발성 경화증에 대한 효과를 확인하기 위해 생쥐 (10주령, 암컷)를 MOG35-55/CFU 및 PTX로 민감화시켜 실험적 자가 면역 뇌척수염 (EAE) 생쥐 모델을 얻었다. 실험 방법은 논문, Oncotarget, Vol. 7 (2016), No. 13, 15382-15393 (본 발명 명세서에 참고문헌으로 인용됨)에 기술되었다.
도 28A에서 보는 대로 상기 화합물 1.1을 1 mg/kg 및 40 mg/kg의 용량으로 격일에 한 번씩 25일 동안 피하주사하였다. 기준 대조군으로 인터페론-베타 10000 unit을 25일 동안 격일에 한 번씩 피하주사하였다. 임상 점수를 측정하여 도시하였다. 그 결과, 기존 다발성 경화증 치료제인 인터페론-베타와 비교하여 상기 화합물 1.1은 최소 용량 1 mg/kg에서도 다발성 경화증 치료 효과를 보였다.
또한 각 실험군의 체중 변화를 측정하였을 때 상기 화합물 1.1 처리군은 EAE 모델군과 비교하여 체중 감소를 보이지 않았다 (도 28B). 즉, 상기 화합물 1.1은 기존 다발성 경화증의 일차치료제인 인터페론-베타와 비교하였을 때 효과 및 안전성이 동등하거나 향상되었고, 따라서 실험적 자가 면역 뇌척수염 모델에 따라 다발성 경화증을 예방하거나 경감하거나 또는 치료하는데 효과적으로 이용될 수 있다.
실험예 2.15: 패혈증에 대한 효과
상기 화합물 1.1의 패혈증에 대한 효과를 확인하기 위해 생쥐 (7 주령, 수컷)를 각 군당 10 마리씩 마취한 후 복부 절개를 통해 맹장을 노출시켰다. 노출된 맹장의 돌막창자 판막 아래 부분을 실로 묶은 후 22 게이지 주사 바늘을 사용하여 구멍 하나를 냈다. 처리한 상기 맹장을 다시 복강 안으로 넣은 후 봉합사로 봉합하여 패혈증이 유도된 생쥐 모델 (맹장 결찰 및 천자 모델, CLP 모델)을 얻었다. 실험 방법은 논문, EMBO Mol Med. (2015) Mar 12; 7(5):577-92 (본 발명 명세서에 참고문헌으로 인용됨)에 기술되었다.
처리된 상기 생쥐에 상기 화합물 1.1을 1 mg/kg의 용량으로 CLP 시술 2시간 후부터 12시간 간격으로 3차례 피하주사하였다. 기준 대조군으로 스메듀신-6을 12 mg/kg의 용량으로 상기 화합물 1.1과 동일한 방법에 따라 피하주사하였다. 각 군 생쥐의 생존율을 측정하였다 (도 29). 가짜 비교군은 복부 절개 후 봉합하여 처치하지 않았고, CLP+PBS 비교군은 맹장 결찰 및 천자 모델 제조 후 상기 화합물 대신 인산 완충 식염수 (PBS)로 처리하였다. 그 결과, 상기 화합물 1.1 (1 mg/kg)은 고용량의 스메듀신-6 (12 mg/kg)과 비교하여 기존 치료약은 작용하지 않는 낮은 용량에서 60%의 생존율을 보임으로써 패혈증 치료 효과를 보였다. 즉, 상기 화합물 1.1은 맹장 결찰 및 천자 (CLP) 모델에서 효과를 보였으며, 이는 상기 화합물 1.1이 패혈증을 예방하거나 경감하거나 또는 치료하는데 효과적으로 사용됨을 제시한다.
제형 1: 과립
화학식 1로 표시되는 화합물 2g
유당 1g
당해 기술 분야에 알려진 방법에 따라 과립을 제조하였다.
제형 2: 정제
화학식 1로 표시되는 화합물 100 ㎎
옥수수 전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아르산 마그네슘 2 ㎎
당해 기술 분야에 알려진 방법에 따라 정제를 제조하였다.
제형 3: 캡슐
화학식 1로 표시되는 화합물 100 ㎎
옥수수 전분 100 ㎎
유당 100 ㎎
스테아르산 마그네슘 2 ㎎
당해 기술 분야에 알려진 방법에 따라 캡슐을 제조하였다.
제형 4: 주사제
화학식 1로 표시되는 화합물 100 ㎎
만니톨 180 ㎎
Na2HPO4ㆍ2H2O 26 ㎎
증류수 2974 ㎎
당해 기술 분야에 알려진 방법에 따라 주사제를 제조하였다.
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본 명세서에 인용된 특허 및 특허 출원 등을 비롯한 모든 공개 문헌들 각각은 그 각 문헌에 기재된 사항 전부가 본 발명 명세서에 구체적으로 기재되어 있는 것과 같이 본 발명 명세서에 참고 문헌으로 인용된다.

Claims (26)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
    [화학식 1]
    Figure 112017096422982-pct00054

    (상기 화학식 1에서,
    n은 0, 1 또는 2이고,
    A는 -a1-이며, 여기서, a1은 알라닌 (Ala, A), 아르기닌 (Arg, R), 아스파라긴 (Asn, N), 아스파틱산 (Asp, D), 시스테인 (Cys, C), 글루타믹산 (Glu, E), 글루타민 (Gln, Q), 글라이신 (Gly, G), 히스티딘 (His, H), 이소루신 (Ile, I), 루신 (Leu, L), 라이신 (Lys, K), 메티오닌 (Met, M), 페닐알라닌 (Phe, F), 프롤린 (Pro, P), 세린 (Ser, S), 트레오닌 (Thr, T), 트립토판 (Trp, W), 티로신 (Tyr, Y) 및 발린 (Val, V)으로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택된 아미노산으로, 이 아미노산의 양 말단은 아마이드 결합에 의해 카보닐 또는 아민 기와 연결되어 있고;
    R1은 직쇄 또는 측쇄의 C1-36 알킬, 적어도 하나 이상의 이중결합을 포함하는 직쇄 또는 측쇄의 C2-36 알케닐 또는 적어도 하나 이상의 삼중결합을 포함하는 직쇄 또는 측쇄의 C2-36 알카이닐이다.)
  2. 제 1항에 있어서, 상기 n은 0, 1, 또는 2이고, 상기 a1 는
    Figure 112017097402363-pct00055

    (양 말단이 아마이드 결합에 의해 카보닐기 또는 아민기와 연결)이며;
    상기 R1은 직쇄 또는 측쇄의 C1-36 알킬인 화합물
  3. 제 1항에 있어서, 하기에 기재된 화합물로 구성된 군에서 선택되는 것인 화합물.
    Figure 112017096422982-pct00056

    Figure 112017096422982-pct00057

    Figure 112017096422982-pct00058

    Figure 112017096422982-pct00059

    Figure 112017096422982-pct00060
  4. 하기 반응 도식 1에 표시된 것과 같이, 하기 단계를 포함하는 상기 제
    1항의 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 방법:
    화합물 2를 화합물 3과 반응시켜 화합물 4를 제조하는 단계;
    상기 화합물 4를 염기의 존재하에 가수분해하여 화합물 5를 제조하는 단계;
    상기 화합물 5를 화합물 6과 반응시켜 화합물 7을 제조하는 단계;
    상기 화합물 7을 염기의 존재하에 가수분해하여 화합물 8을 제조하는 단계;
    상기 화합물 8을 화합물 9와 반응시켜 화합물 10을 제조하는 단계; 및
    상기 화합물 10을 염기의 존재하에 가수분해하는 단계.
    [반응 도식 1]
    Figure 112017097402363-pct00061

    (상기에서, A, R1 및 n은 제 1항에서 정의된 바와 동일하며, R2는 직쇄 또는 측쇄의 C1-5 알킬이다.)
  5. 활성 성분으로서 제 1항의 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 염을 포함하는, 염증성 장 질환을 예방하거나 개선하거나 또는 치료하기 위한 조성물.
  6. 제 5항에 있어서, MyD88로 매개되는 염증신호전달 복합체의 형성을 저해하거나, Pellino-1로 매개되는 염증신호전달 복합체의 형성을 저해하거나, Rip1로 매개되는 염증신호전달 복합체의 형성을 저해하거나, G-CSF, 인터루킨-2, SCF, VEGF, CX3CL1, IGFBP5, IGFBP6, 인터루킨-1α, 인터루킨-1β, 인터루킨-6, 인터루킨-9, MCP-1, MIP-3α, 인터루킨12p40/70, MIG, TNF-α, and VCAM-1로 구성된 군 중에서 선택된 하나 이상의 단백질의 발현을 억제하거나 또는 NF-κB의 활성을 억제하는 조성물.
  7. 제 5항에 있어서, 상기 염증성 장 질환에 궤양성 대장염, 베체트 병, 및 크론 병이 포함되는 것인 조성물.
  8. 삭제
  9. 삭제
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  14. 삭제
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  16. 활성 성분으로서 제1항의 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 염을 포함하고, 지도모양위축증, 습성 황반변성, 건성 황반변성 및 당뇨망막병을 포함하는 질환이나 증상을 예방하거나 개선하거나 또는 치료하기 위한 조성물.
  17. 제16항에 있어서, 상기 제1항의 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 염이 망막 색소 상피 세포에 약학적 효과를 나타내는 것인 조성물.
  18. 제16항에 있어서, 상기 제1항의 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 염이 망막 색소 상피 세포에서 Nox-4, VEGF, VEGFR1, VEGFR2, Ang2, EPO 및 EPOR로 구성된 군 중에서 선택된 1 이상의 단백질의 발현을 저해하는 것인 조성물.
  19. 제16항에 있어서, 상기 제1항의 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 염이 망막 색소 상피 세포에서 Ang 1, Tie2, 또는 두 가지 모두의 발현을 증가시키는 것인 조성물.
  20. 활성 성분으로서 제1항의 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 염을 포함하고, 패혈증과 다발성 경화증을 포함하는 질환이나 증상을 예방하거나 개선하거나 또는 치료하기 위한 조성물.
  21. 활성 성분으로서 제1항의 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 염을 포함하고, 상기 활성 성분이 두피 및 모낭에서 인터루킨-6의 발현을 저해하는 것인, 탈모증을 예방하거나 개선하거나 또는 치료하기 위한 조성물.
  22. 활성 성분으로서 제1항의 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 염을 포함하고, 다발성 경화증, 건선, 패혈증, 지도모양위축증, 습성 황반변성, 건성 황반변성, 당뇨망막병, 감염성 폐 질환, 세균성 폐렴, 바이러스 성 폐렴, 확산성 대형 B-세포 림프종, 바이러스 성 감염, 자가 면역 질환, 림프종을 포함한 혈액암 또는 내장 장기의 종양을 포함하는 질환이나 증상을 예방하거나 개선하거나 또는 치료하기 위한 조성물.
  23. 삭제
  24. 삭제
  25. 삭제
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