KR101941893B1 - 돼지의 육질 형질 판단용 유전자 마커 및 이의 이용 - Google Patents
돼지의 육질 형질 판단용 유전자 마커 및 이의 이용 Download PDFInfo
- Publication number
- KR101941893B1 KR101941893B1 KR1020160152247A KR20160152247A KR101941893B1 KR 101941893 B1 KR101941893 B1 KR 101941893B1 KR 1020160152247 A KR1020160152247 A KR 1020160152247A KR 20160152247 A KR20160152247 A KR 20160152247A KR 101941893 B1 KR101941893 B1 KR 101941893B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- pig
- gene
- dna
- seq
- pigs
- Prior art date
Links
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 title claims abstract description 85
- 239000003550 marker Substances 0.000 title claims abstract description 57
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 title claims abstract description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 105
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims abstract description 77
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims abstract description 68
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 30
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 30
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 21
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 23
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 21
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 21
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 21
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 16
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 claims description 10
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 9
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 9
- 238000002493 microarray Methods 0.000 claims description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 claims description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 abstract description 3
- 238000003491 array Methods 0.000 abstract description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 abstract description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 86
- 101150054908 MYH3 gene Proteins 0.000 description 40
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 39
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 32
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 27
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 18
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 16
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 16
- 241000894007 species Species 0.000 description 15
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 13
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 13
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 12
- 102100038317 Myosin-3 Human genes 0.000 description 11
- 101000958751 Homo sapiens Myosin-3 Proteins 0.000 description 10
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 10
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 7
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 7
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 7
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 7
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 5
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- LDXJRKWFNNFDSA-UHFFFAOYSA-N 2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]ethanone Chemical compound C1CN(CC2=NNN=C21)CC(=O)N3CCN(CC3)C4=CN=C(N=C4)NCC5=CC(=CC=C5)OC(F)(F)F LDXJRKWFNNFDSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101150037140 Aldoa gene Proteins 0.000 description 4
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 4
- 101100465384 Danio rerio pvalb2 gene Proteins 0.000 description 4
- 101100521444 Danio rerio pvalb7 gene Proteins 0.000 description 4
- 101150043413 MYH7 gene Proteins 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 102000036675 Myoglobin Human genes 0.000 description 4
- 108010062374 Myoglobin Proteins 0.000 description 4
- 101150028973 PVALB gene Proteins 0.000 description 4
- 101150069870 Tnnt1 gene Proteins 0.000 description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 4
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 4
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 4
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000007834 ligase chain reaction Methods 0.000 description 4
- -1 nucleoside triphosphates Chemical class 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- 102000011690 Adiponectin Human genes 0.000 description 3
- 108010076365 Adiponectin Proteins 0.000 description 3
- 102000049320 CD36 Human genes 0.000 description 3
- 108010045374 CD36 Antigens Proteins 0.000 description 3
- 101150018889 FABP4 gene Proteins 0.000 description 3
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 3
- 101150113392 MYH4 gene Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- NPGIHFRTRXVWOY-UHFFFAOYSA-N Oil red O Chemical compound Cc1ccc(C)c(c1)N=Nc1cc(C)c(cc1C)N=Nc1c(O)ccc2ccccc12 NPGIHFRTRXVWOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101150104557 Ppargc1a gene Proteins 0.000 description 3
- 101150029455 TNNI1 gene Proteins 0.000 description 3
- 101150077207 TNNI2 gene Proteins 0.000 description 3
- 101150071798 TNNT3 gene Proteins 0.000 description 3
- 235000010724 Wisteria floribunda Nutrition 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 3
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 3
- 235000020989 red meat Nutrition 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C(CN1CC2=C(CC1)NN=N2)=O HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]propan-1-one Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)CCC(=O)N1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 2
- 108091006112 ATPases Proteins 0.000 description 2
- 102000057290 Adenosine Triphosphatases Human genes 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003505 Myosin Human genes 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 101150101356 Ppargc1b gene Proteins 0.000 description 2
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 2
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 238000007844 allele-specific PCR Methods 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 2
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 230000003520 lipogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 101150106774 9 gene Proteins 0.000 description 1
- 235000013479 Amaranthus retroflexus Nutrition 0.000 description 1
- 238000011814 C57BL/6N mouse Methods 0.000 description 1
- 235000014224 Ceanothus americanus Nutrition 0.000 description 1
- 240000005674 Ceanothus americanus Species 0.000 description 1
- 235000001904 Ceanothus herbaceus Nutrition 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 101100181494 Cricetulus griseus LDLR gene Proteins 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 101000833051 Homo sapiens Manganese-dependent ADP-ribose/CDP-alcohol diphosphatase Proteins 0.000 description 1
- 101000588972 Homo sapiens Myosin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000588961 Homo sapiens Myosin-13 Proteins 0.000 description 1
- 101000958753 Homo sapiens Myosin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000958755 Homo sapiens Myosin-4 Proteins 0.000 description 1
- 101001030243 Homo sapiens Myosin-7 Proteins 0.000 description 1
- 101000716803 Homo sapiens Protein SCO1 homolog, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101000680193 Homo sapiens Transmembrane protein 220 Proteins 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100024399 Manganese-dependent ADP-ribose/CDP-alcohol diphosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010056785 Myogenin Proteins 0.000 description 1
- 108060008487 Myosin Proteins 0.000 description 1
- 108030001204 Myosin ATPases Proteins 0.000 description 1
- 102100032975 Myosin-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100033013 Myosin-13 Human genes 0.000 description 1
- 102100038303 Myosin-2 Human genes 0.000 description 1
- 101710204040 Myosin-3 Proteins 0.000 description 1
- 102100038302 Myosin-4 Human genes 0.000 description 1
- 102100038934 Myosin-7 Human genes 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 238000009004 PCR Kit Methods 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102100020866 Protein SCO1 homolog, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- 108020004518 RNA Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000003391 RNA probe Substances 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 102100022218 Transmembrane protein 220 Human genes 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 230000037237 body shape Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 1
- 150000004657 carbamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000012850 discrimination method Methods 0.000 description 1
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-N dithiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000002414 glycolytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 235000020997 lean meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical compound CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 210000000107 myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000007788 roughening Methods 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 230000022379 skeletal muscle tissue development Effects 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000005758 transcription activity Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002525 ultrasonication Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/02—Breeding vertebrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
-
- G—PHYSICS
- G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
- G16B—BIOINFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR GENETIC OR PROTEIN-RELATED DATA PROCESSING IN COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY
- G16B20/00—ICT specially adapted for functional genomics or proteomics, e.g. genotype-phenotype associations
- G16B20/20—Allele or variant detection, e.g. single nucleotide polymorphism [SNP] detection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/108—Swine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/124—Animal traits, i.e. production traits, including athletic performance or the like
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/166—Oligonucleotides used as internal standards, controls or normalisation probes
-
- G—PHYSICS
- G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
- G16B—BIOINFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR GENETIC OR PROTEIN-RELATED DATA PROCESSING IN COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY
- G16B20/00—ICT specially adapted for functional genomics or proteomics, e.g. genotype-phenotype associations
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Theoretical Computer Science (AREA)
- Evolutionary Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
본 발명은 돼지의 육질 형질 판단용 유전자 마커 및 이의 이용에 관한 것으로, 구체적으로 서열번호 1로 표시되는 폴리뉴클레오티드에서 1524번째 내지 1527번째 염기를 포함하는 5 내지 300개의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이에 상보적인 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 돼지의 육질 형질 판단용 유전자 마커 조성물, 상기 유전자 마커를 검출할 수 있는 제제를 포함하는 돼지의 육질 형질 판단용 조성물 및 한국 토종돼지 판별용 조성물, 키트, 마이크로어레이, 돼지의 육질 형질을 판단하는 방법 및 한국 토종돼지를 판별하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 유전자 마커는 돼지의 육질 형질을 판단하는 특이적인 마커로서, 육안으로 구별되지 않는 돼지 육질 형질의 객관적인 평가뿐만 아니라, 외래돼지와 한국 토종돼지를 판별할 수 있는 수단으로 사용되므로, 돼지육의 유통질서 확립에 이바지할 수 있을 것이다.
본 발명의 유전자 마커는 돼지의 육질 형질을 판단하는 특이적인 마커로서, 육안으로 구별되지 않는 돼지 육질 형질의 객관적인 평가뿐만 아니라, 외래돼지와 한국 토종돼지를 판별할 수 있는 수단으로 사용되므로, 돼지육의 유통질서 확립에 이바지할 수 있을 것이다.
Description
본 발명은 돼지의 육질 형질 판단용 유전자 마커 및 이의 이용에 관한 것으로, 구체적으로 서열번호 1로 표시되는 폴리뉴클레오티드에서 1524번째 내지 1527번째 염기를 포함하는 5 내지 300개의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이에 상보적인 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 돼지의 육질 형질 판단용 유전자 마커 조성물, 상기 유전자 마커를 검출할 수 있는 제제를 포함하는 돼지의 육질 형질 판단용 조성물 및 한국 토종돼지 판별용 조성물, 키트, 마이크로어레이, 돼지의 육질 형질을 판단하는 방법 및 한국 토종돼지를 판별하는 방법에 관한 것이다.
돼지는 약 200여 종의 품종이 존재하며, 그 중 유럽품종이 약 33%, 아시아 품종이 약 30% 존재한다고 일반적으로 알려져 있다. 이러한 돼지 품종들은 모색, 크기, 체형 등의 표현형 차이를 통해 간편히 식별되나, 살코기의 경우에는 시간의 경과에 따라 색도, 보수력, 전단력 등이 달라지므로, 일반인뿐만 아니라 전문가의 수준에서도 돼지육을 통해 육안으로 품종을 구별하기는 어려운 점이 있었다.
최근, 돼지육의 품질을 제고하기 위한 노력이 많이 이루어지고 있다. 돼지를 일정한 규격에서 사육하거나 과학적인 시스템을 통해 관리하고, 이로부터 얻어진 토종돼지의 돼지육을 브랜드화하고 있으며, 이미 다양한 브랜드의 돼지육이 상업적으로 판매되고 있다.
이러한 연구의 일환으로서, 다양한 DNA 분석기법을 이용하여 돼지육의 품종을 판별하는 방법을 개발 및 발전시키려는 방향으로 활발한 연구가 이루어지고 있다. 예를 들어, 한국 공개특허공보 제10-2004-0039059호에는 돼지의 일당증체량, 등지방두께, 육질 형질에 관련된 특이 DNA marker를 이용하여 돼지의 형질이 우수한 돼지를 선발할 수 있는 유전자 검정방법이 개시되어 있고, 한국 공개특허공보 제10-2007-0113336호에는 돼지의 근세포 분화에 관여하는 것으로 알려진 Myogenin 유전자의 5' promoter 부위의 단일 염기서열 차이에 의한 변이(SNP)를 이용한 돼지 근세포수 증가 확인용 DNA 표지인자가 개시되어 있다. 그러나, 여전히 돼지의 육질 형질 수준을 정확하게 판단하기 위한 방법은 개발되지 않은 상태이며, 또한, MYH3 유전자를 이용하여 돼지의 육질 형질 수준을 판단하는 방법은 개발된 바 없었다.
이러한 배경하에, 본 발명자들은 유전 형질을 통해 돼지육의 품질을 판단할 수 있는 방법을 개발하기 위하여 예의 연구 노력한 결과, MYH3 유전자가 돼지의 육질 형질을 결정하는 유전자임을 규명하였으며, 이를 이용하면 유전적으로 결정되는 돼지의 육질 형질을 간편히 판단할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 하나의 목적은 서열번호 1로 표시되는 폴리뉴클레오티드에서 1524번째 내지 1527번째 염기를 포함하는 5 내지 300개의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이에 상보적인 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 돼지의 육질 형질 판단용 유전자 마커 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 하나의 목적은 상기 유전자 마커를 검출할 수 있는 제제를 포함하는, 돼지의 육질 형질 판단용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 상기 조성물을 포함하는, 돼지의 육질 형질 판단용 키트를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 상기 유전자 마커를 포함하는, 돼지의 육질 형질 판단용 DNA 마이크로어레이를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 (a) 개체로부터 분리된 시료의 DNA로부터 제1항 또는 제2항의 유전자 마커를 증폭시키는 단계; 및 (b) 상기 (a) 단계의 증폭 산물의 염기를 결정하는 단계를 포함하는, 돼지의 육질 형질을 판단하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 상기 유전자 마커를 검출할 수 있는 제제를 포함하는, 한국 토종돼지 판별용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 (a) 개체로부터 분리된 시료의 DNA로부터 제1항 또는 제2항의 유전자 마커를 증폭시키는 단계; 및 (b) 상기 (a) 단계의 증폭 산물의 염기를 결정하는 단계를 포함하는, 한국 토종돼지의 판별 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 하나의 양태는 서열번호 1로 표시되는 폴리뉴클레오티드에서 1524번째 내지 1527번째 염기를 포함하는 5 내지 300개의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이에 상보적인 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 돼지의 육질 형질 판단용 유전자 마커 조성물을 제공한다.
본 발명에서는, MYH3 유전자에 의해 돼지의 근내지방함량 및 적색도의 육질 형질이 결정됨을 확인하였으며, 육질 형질이 우수한 재래종과 우수하지 않은 외래종 간에는 상기 유전자에 변이가 존재하므로, 상기 변이를 포함하는 유전자 마커를 검출함으로써 돼지 육질 형질을 판단할 수 있을 뿐만 아니라, 외래돼지와 한국 토종돼지를 구별할 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 용어, "유전자 마커"는 유전자 좌위에 있는 돌연변이 또는 변형에 의해 일어난 다양성을 식별하기 위해 이용되는 짧은 DNA 서열을 의미한다.
본 발명의 목적상, 상기 유전자 마커는 돼지의 품종 간에 염기 변이가 나타나는 유전자를 의미할 수 있다.
본 발명의 용어, "서열번호 1로 표시되는 폴리뉴클레오티드"는 MYH3 유전자를 의미한다. 상기 용어, 'MYH3 유전자'는 동물의 근육을 구성하는 마이오신에 포함된 중쇄단백질의 하나인 myosin heavy chain 3을 코딩하는 유전자를 의미하며, 이의 염기서열은 NCBI의 GenBank 등 공지의 데이터베이스에서 얻을 수 있다(GenBank Accession No. KX549312). 구체적인 예로, 상기 유전자는 돼지로부터 유래한 유전자일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 유전자 마커는, 이에 제한되지 않지만, 서열번호 1로 표시되는 폴리뉴클레오티드에서 1524번째 내지 1527번째 염기를 포함하는, ACGT의 연속된 염기일 수 있다.
또한, 상기 유전자 마커는, 이에 제한되지 않지만, 상기 염기를 포함하는 5 내지 300개, 구체적으로 5 내지 280개, 더더욱 구체적으로 5 내지 260개의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이에 상보적인 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 용어, "육질 형질"은 돼지로부터 얻어진 뼈를 제외한 도축물의 상태를 나타내는 다양한 표현 형질을 의미하는데, 상기 표현 형질은 특별히 이에 제한되지 않으나, 근내지방함량, 육색, 보수력, 전단력 등이 될 수 있으며, 더욱 구체적으로 근내지방함량 또는 육색이 될 수 있다. 근내지방함량은 근육 내 포함된 지방의 함량, 육색은 육안으로 판단되는 고기의 색, 보수력은 축육이 수분을 유지하는 능력, 전단력은 고기의 찢었을 때 질긴 정도로서, 근내지방함량은 높을수록, 육색은 적색을 나타낼수록, 보수력 및 전단력은 낮을수록 육질의 품질이 높은 것으로 판단할 수 있다.
본 발명에서, 상기 마커가 검출될 경우, 검출되지 않은 경우와 대비할 때, 근내지방함량은 높고, 육색은 적색도가 증가한 것으로 판단할 수 있다.
본 발명의 구체적인 일 실시예에서, 제주재래돼지와 랜드레이스 또는 듀록 돼지를 교배하여 얻어진 자손을 대상으로 돼지의 육질 형질에 대해 QTL 분석 및 LALD(Linkage and linkage disequilibrium) mapping을 수행한 결과, 돼지의 육질 형질에 관여하는 유전자는 12번 염색체에 존재하는 MYH3 유전자임을 확인하였다(도 2 내지 4).
또한, MYH3 유전자의 유전형을 분석한 결과, 육질이 좋지 않은 외래종인 랜드레이스와 육질이 좋은 재래종인 제주재래돼지 사이에 염기 변이(QTN: i.e., MYH3-1805_-1810delGGACTG)가 존재함을 확인하였으며(도 11), HpyCH4IV 제한효소를 이용하여 상기 원인 염기 변이를 절단한 결과, 두 돼지의 유전자 절단 양상이 다름을 확인하였다(도 12).
이는, 본 발명의 유전자 마커는 외래돼지와 재래돼지의 판별뿐만 아니라, 종의 구별에 따른 육질 형질도 판단할 수 있음을 시사하는 것이다. 따라서, 본 발명의 유전자 마커를 이용하면, 육질 형질의 수준을 정확하게 판단할 수 있을 것으로 기대되며, 상기 유전자 마커는 본 발명자들에 의해 최초로 규명된 것이다.
다른 하나의 양태는 상기 유전자 마커를 검출할 수 있는 제제를 포함하는, 돼지의 육질 형질 판단용 조성물을 제공한다.
본 발명의 용어, "유전자 마커를 검출할 수 있는 제제"는 본 발명의 유전자 마커에 특이적으로 결합하여 인식하거나, 상기 유전자 마커를 증폭시킬 수 있는 제제로서, 구체적인 예로, 상기 유전자 마커에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브일 수 있다.
본 발명의 용어, "프로브"(probe)는 mRNA와 특이적 결합을 이룰 수 있는, 짧게는 수 염기 내지 길게는 수백 염기에 해당하는 RNA 또는 DNA 등의 라벨링(labeling) 되어 있는 핵산 단편을 의미한다. 프로브는 올리고 뉴클레오타이드(oligonucleotide) 프로브, 단일 사슬 DNA(single stranded DNA) 프로브, 이중 사슬 DNA(double stranded DNA) 프로브, RNA 프로브 등의 형태로 제작될 수 있다.
본 발명에서, 유전자 마커에 결합 및 인식하는 프로브는 유전자 마커를 포함하는 폴리뉴클레오티드 서열에 대해 상보적인 서열을 포함하며, 이에 제한되지 않으나 DNA, RNA 또는 DNA-RNA 잡종(hybrid) 형태일 수 있다. 또한, 육안으로 인식가능하도록 하기 위해 프로브의 5' 또는 3' 말단에 형광 표지인자, 방사선 표지 인자 등을 추가로 부착할 수 있다.
본 발명의 용어 "프라이머"란, 짧은 자유 3' 말단 수산화기(free 3' hydroxyl group)를 가지는 염기서열로 상보적인 템플레이트(template)와 염기쌍(base pair)을 형성할 수 있고 주형 가닥 복사를 위한 시작 지점으로 기능을 하는 짧은 서열을 의미한다. 본 발명에서, 유전자 마커 증폭에 사용되는 프라이머, 적절한 버퍼 중의 적절한 조건(예를 들면, 4개의 다른 뉴클레오시드 트리포스페이트 및 DNA, RNA 폴리머라제 또는 역전사 효소와 같은 중합제) 및 적당한 온도하에서 주형-지시 DNA 합성의 시작점으로서 작용할 수 있는 단일가닥 올리고뉴클레오티드가 될 수 있는데, 상기 프라이머의 적절한 길이는 사용 목적에 따라 달라질 수 있다. 상기 프라이머 서열은 상기 유전자 마커를 포함하는 폴리뉴클레오티드 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드와 완전하게 상보적일 필요는 없으며, 혼성화할 정도로 충분히 상보적이면 사용 가능하다.
또한, 프라이머는 변형시킬 수 있는데, 구체적인 예로, 메틸화, 캡화, 뉴클레오타이드의 치환 또는 뉴클레오타이드 간의 변형, 예를 들면, 하전되지 않은 연결체(예: 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포로아미데이트, 카바메이트 등) 또는 하전된 연결체(예: 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등)로의 변형이 있을 수 있다.
본 발명에서, 상기 프라이머는 서열번호 65 및 66으로 표시되는 염기서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드인 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 구체적인 일 실시예에서는, 서열번호 65 및 66의 프라이머를 이용하여 외래돼지와 재래돼지 간에 존재하는 염기 변이 부분을 증폭한 뒤, HpyCH4IV 제한효소로 상기 염기 변이의 염기서열 중에서 'ACGT' 부분을 절단하여 절단 양상을 확인한 결과, 육질이 좋지 않은 외래종인 랜드레이스와 육질이 좋은 재래종인 제주재래돼지의 제한효소 절단 양상이 확연히 구분됨을 확인하였다(도 12).
이는, 본 발명의 돼지의 육질 형질 판단용 조성물은 외래돼지와 재래돼지의 판단뿐만 아니라, 종의 구별에 따른 육질 형질을 판단하는데 유용하게 사용될 수 있음을 시사하는 것이다.
또 다른 하나의 양태는 상기 조성물을 포함하는, 돼지의 육질 형질 판단용 키트를 제공한다.
본 발명의 키트는 본 발명의 유전자 마커를 증폭을 통해 확인하거나, 상기 유전자 마커의 mRNA 발현 수준을 확인함으로써 돼지의 육질 형질 수준을 판단할 수 있다. 구체적인 예로, 상기 키트는 RT-PCR 키트 또는 DNA 칩 키트일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
더욱 구체적인 예로, 상기 키트는 RT-PCR을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 키트일 수 있다. 예를 들어, RT-PCR 키트는, 상기 유전자 마커에 대한 특이적인 각각의 프라이머 외에도 테스트 튜브 또는 다른 적절한 컨테이너, 반응 완충액(pH 및 마그네슘 농도는 다양), 디옥시뉴클레오타이드(dNTPs), 디디옥시뉴클레오타이드(ddNTPs), Taq-폴리머라아제 및 역전사효소와 같은 효소, DNase, RNAse 억제제, DEPC-수(DEPC-water), 멸균수 등을 포함할 수 있다. 또한 정량 대조군으로 사용되는 유전자에 특이적인 프라이머 쌍을 포함할 수 있다.
또 다른 구체적인 예로, 본 발명의 키트는 DNA 칩을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 DNA 칩 키트일 수 있다.
본 발명의 용어, "DNA 칩"은 수십만 개의 DNA의 각 염기를 한 번에 확인할 수 있는 DNA 마이크로어레이의 하나를 의미한다. 상기 DNA 칩 키트는, 일반적으로 편평한 고체 지지판, 전형적으로는 현미경용 슬라이드보다 크지 않은 유리 표면에 핵산 종을 격자형 배열(gridded array)로 부착한 것으로, 칩 표면에 핵산이 일정하게 배열되어, DNA 칩 상의 핵산과 칩 표면에 처리된 용액 내에 포함된 상보적인 핵산 간에 다중 혼성화(hybridization) 반응이 일어나 대량 병렬 분석이 가능하도록 하는 도구이다.
본 발명의 또 다른 하나의 양태는 상기 유전자 마커를 포함하는, 돼지의 육질 형질 판단용 마이크로어레이를 제공한다.
상기 마이크로어레이는 DNA 또는 RNA 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것일 수 있다. 상기 마이크로어레이는 프로브 폴리뉴클레오티드에 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것을 제외하고는 통상적인 마이크로어레이로 이루어질 수 있다.
프로브 폴리뉴클레오티드를 기판상에 고정화하여 마이크로어레이를 제조하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 상기 프로브 폴리뉴클레오티드는 혼성화할 수 있는 폴리뉴클레오티드를 의미하는 것으로, 핵산의 상보성 가닥에 서열 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드를 의미한다. 본 발명의 프로브는 대립유전자 특이적 프로브로서, 같은 종의 두 구성원으로부터 유래한 핵산 단편 중에 다형성 부위가 존재하여, 한 구성원으로부터 유래한 DNA 단편에는 혼성화하나, 다른 구성원으로부터 유래한 단편에는 혼성화하지 않는다. 이 경우 혼성화 조건은 대립유전자간의 혼성화 강도에 있어서 유의한 차이를 보여, 대립유전자 중 하나에만 혼성화 하도록 충분히 엄격해야 한다. 이렇게 함으로써 다른 대립유전자 형태 간에 좋은 혼성화 차이를 유발할 수 있다. 본 발명의 상기 프로브는 대립유전자를 검출하여 돼지의 육질 형질 판단 방법 등에 사용될 수 있다. 상기 구별 방법에는 서던 블롯트 등과 같은 핵산의 혼성화에 근거한 검출방법들이 포함되며, DNA 칩을 이용한 방법에서 DNA 칩의 기판에 미리 결합된 형태로 제공될 수도 있다. 상기 혼성화란 엄격한 조건, 예를 들면 1 M 이하의 염 농도 및 25℃ 이상의 온도하에서 수행될 수 있다.
본 발명의 돼지의 육질 형질 수준 판단과 연관된 프로브 폴리뉴클레오티드를 기판상에 고정화하는 과정도 또한 이러한 종래 기술을 사용하여 용이하게 수행할 수 있다. 또한, 마이크로어레이 상에서의 핵산의 혼성화 및 혼성화 결과의 검출은 당업계에 잘 알려져 있다. 상기 검출은 예를 들면, 핵산 시료를 형광 물질 예를 들면 Cy3 및 Cy5와 같은 물질을 포함하는 검출가능한 신호를 발생시킬 수 있는 표지 물질로 표지한 다음, 마이크로어레이 상에 혼성화하고 상기 표지 물질로부터 발생하는 신호를 검출함으로써 혼성화 결과를 검출할 수 있다.
또 다른 하나의 양태는 (a) 개체로부터 분리된 시료의 DNA로부터 상기 유전자 마커를 증폭시키는 단계; 및 (b) 상기 (a) 단계의 증폭 산물의 염기를 결정하는 단계를 포함하는, 돼지의 육질 형질을 판단하는 방법을 제공한다.
본 발명에서, 상기 (b) 단계의 증폭 산물에 ACGT의 연속된 염기가 포함된 경우, 돼지의 육질 형질은 외래돼지의 것보다 우수한 것으로 판단하는 (c) 단계를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 용어, "개체"는 육질 형질 수준을 확인하고자 하는 대상인 돼지를 의미하며, 상기 돼지로부터 얻어진 검체를 이용하여, 상기 유전자 마커에 포함된 유전자형을 분석함으로써 상기 돼지의 육질 형질을 판단할 수 있다. 상기 검체로는 털, 뇨, 혈액, 각종 체액, 분리된 조직, 분리된 세포 또는 타액과 같은 시료 등이 될 수 있으나, 상기 유전자를 검출할 수 있는 한, 이에 특별히 제한되지는 않는다.
본 발명의 용어, "외래돼지"는 한국 토종돼지에 반대되는 개념으로, 한국이 아닌 다른 나라에서 들여온 돼지 품종을 의미한다. 일반적으로, 외래돼지는 한국 재래돼지에 비하여 질병에 약하고, 근내지방, 다즙성, 연도 등의 육질 특성이 좋지 못한 것으로 알려져 있다. 구체적인 예로, 버크셔종, 요크셔종, 두록저지종, 햄프셔종, 랜드레이스종 등이 있으며, 본 발명의 목적상, 상기 외래돼지는 외래돼지와 교잡된 모든 품종을 의미할 수 있다.
본 발명에서, 상기 (a) 단계의 DNA로부터 본 발명의 유전자 마커를 증폭하는 단계는 당업자에게 알려진 어떠한 방법이든 사용 가능하다. 구체적인 예로, PCR, 리가제 연쇄 반응(LCR), 전사증폭(transcription amplification), 자가유지 서열 복제, 핵산에 근거한 서열 증폭(NASBA) 등이 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기 (b) 단계의 증폭 산물에 포함된 유전자 마커의 염기를 결정하는 단계도 당업자에게 알려진 어떠한 방법이든 사용 가능하다. 구체적인 예로, 시퀀싱, 미니-시퀀싱, 대립유전자 특이적 PCR(allele specific PCR), 다이나믹 대립유전자 혼성화(dynamic allele-specifichybridization; DASH), PCR 연장 분석(예로, 단일 염기 연장(single base extension; SBE), PCR-SSCP, PCR-RFLP 분석 또는 TaqMan 기법, SNPlex 플랫폼(Applied Biosystems), 질량 분석법(예로, Sequenom의 MassARRAY 시스템), Bio-Plex 시스템(BioRad), 제한효소 절단법 등을 이용하여 수행될 수 있으나, 상기 증폭 산물에 포함된 ACGT의 연속된 염기를 검출할 수 있는 한, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 구체적인 일 실시예에서는, 서열번호 65 및 66의 프라이머를 이용하여 왜래 돼지와 재래돼지 간에 존재하는 염기 변이 부분을 증폭한 뒤, HpyCH4IV 제한효소로 상기 증폭된 염기서열 중에서 'ACGT' 부분을 절단하여 절단 양상을 확인한 결과, 육질이 좋지 않은 외래 종인 랜드레이스와 육질이 좋은 재래종인 제주재래돼지의 절단 양상이 확연히 구분됨을 확인하였다(도 12).
이는, 본 발명의 돼지의 육질 형질을 판단하는 방법은 외래돼지와 재래돼지의 종을 식별할 수 있을 뿐만 아니라, 종의 구별에 따른 육질 형질도 판단할 수 있음을 시사하는 것이다.
또 다른 하나의 양태는 상기 유전자 마커를 검출할 수 있는 제제를 포함하는, 한국 토종돼지 판별용 조성물을 제공한다.
이때, 상기 "유전자 마커를 검출할 수 있는 제제"의 정의는 전술한 바와 같다.
본 발명의 용어, "한국 토종돼지"는 외래돼지에 반대되는 개념으로, 전통적으로 한국에서 사육된 돼지 품종을 의미한다. 일반적으로, 한국 토종돼지는 외래돼지에 비하여 질병에 강하고, 근내지방, 다즙성, 연도 등의 육질 특성이 우수한 것으로 알려져 있다. 구체적인 예로, 축진참돈, 강원도 산우리재래돼지, 제주 재래흑돼지, 제주 똥돼지 등의 여러 이름으로 불리는 제주 재래돼지 등이 있으며, 더욱 구체적으로 제주 재래돼지일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 본 명세서에서, 상기 한국 토종돼지는 '토종돼지', '한국 재래돼지' 또는 '재래돼지'와 혼용되어 명명될 수 있다.
본 발명에서, 상기 마커가 검출될 경우, 검출되지 않은 경우와 대비할 때, 한국 토종돼지인 것으로 판별할 수 있다.
또 다른 하나의 양태는 (a) 개체로부터 분리된 시료의 DNA로부터 제1항 또는 제2항의 유전자 마커를 증폭시키는 단계; 및 (b) 상기 (a) 단계의 증폭 산물의 염기를 결정하는 단계를 포함하는, 한국 토종돼지의 판별 방법을 제공한다.
본 발명에서, 상기 (b) 단계의 증폭 산물에 ACGT의 연속된 염기가 포함된 경우, 한국 토종돼지인 것으로 판단하는 (c) 단계를 추가로 포함할 수 있다.
이때, 상기 "개체" 및 "한국 토종돼지"의 정의는 전술한 바와 같다.
본 발명에서, 상기 (a) 단계의 DNA로부터 본 발명의 유전자 마커를 증폭하는 단계는 당업자에게 알려진 어떠한 방법이든 사용 가능하다. 구체적인 예로, PCR, 리가제 연쇄 반응(LCR), 전사증폭(transcription amplification), 자가유지 서열 복제, 핵산에 근거한 서열 증폭(NASBA) 등이 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 상기 (b) 단계의 증폭 산물에 포함된 유전자 마커의 염기를 결정하는 단계도 당업자에게 알려진 어떠한 방법이든 사용 가능하다. 구체적인 예로, 시퀀싱, 미니-시퀀싱, 대립유전자 특이적 PCR(allele specific PCR), 다이나믹 대립유전자 혼성화(dynamic allele-specifichybridization; DASH), PCR 연장 분석(예로, 단일 염기 연장(single base extension; SBE), PCR-SSCP, PCR-RFLP 분석 또는 TaqMan 기법, SNPlex 플랫폼(Applied Biosystems), 질량 분석법(예로, Sequenom의 MassARRAY 시스템), Bio-Plex 시스템(BioRad), 제한효소 절단법 등을 이용하여 수행될 수 있으나, 상기 증폭 산물에 포함된 ACGT의 연속된 염기를 검출할 수 있는 한, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 구체적인 일 실시예에서는, 서열번호 65 및 66의 프라이머를 이용하여 왜래돼지와 재래돼지 간에 존재하는 염기 변이 부분을 증폭한 뒤, HpyCH4IV 제한효소로 상기 증폭된 염기서열 중에서 'ACGT' 부분을 절단하여 절단 양상을 확인한 결과, 육질이 좋지 않은 외래 종인 랜드레이스와 육질이 좋은 재래종인 제주재래돼지의 절단 양상이 확연히 구분됨을 확인하였다(도 12).
이는, 본 발명의 돼지의 육질 형질을 판단하는 방법은 외래돼지와 재래돼지의 종을 식별할 수 있음을 시사하는 것이다.
본 발명의 유전자 마커는 돼지의 육질 형질을 판단하는 특이적인 마커로서, 육안으로 구별되지 않는 돼지 육질 형질의 객관적인 평가뿐만 아니라, 외래돼지와 한국 토종돼지를 판별할 수 있는 수단으로 사용되므로, 돼지육의 유통질서 확립에 이바지할 수 있을 것이다.
도 1은 도입종인 랜드레이스(a)와 재래종인 제주재래돼지(b)의 외모 및 등심사진을 비교한 이미지이다.
도 2는 육질 형질 결정 유전자의 QTL(quantitative trait locus) 영역 확인에 따른 LDLA(linkage-linkage disequilibrium analysis) 결과를 보여주는 그래프이다. a는 제주재래돼지와 랜드레이스 돼지를 교배하여 얻어진 자손(LK축군), b는 제주재래돼지와 듀록 돼지를 교배하여 얻어진 자손(DK축군)에 관한 것이다.
도 3은 육질 형질 결정 유전자의 QTL 영역에 존재하는 유전자를 나타내고 있는 LALD mapping 결과이다.
도 4는 QTL 영역에 존재하는 유전자의 mRNA 발현양을 비교한 그래프이다. a는 등심(최장근, longissimus), b는 후지(대퇴사두근, quadriceps)에 관한 것이다.
도 5는 CAGGS-EGFP-Puro 벡터의 개열지도를 보여준다.
도 6은 MYH3 유전자가 재조합된 CAGGS-MYH3-Flag 발현 벡터의 개열지도 및 상기 벡터 내 유전자의 순서를 보여준다.
도 7은 MYH3 유전자가 재조합된 벡터로 형질전환된 마우스의 MYH3 유전자 활성 및 발현 양상을 보여준다. a는 MYH3 유전자의 전사 활성을 보여주는 이미지이다. P/C는 양성대조군(positive control), 붉은색으로 표시된 숫자(21, 24, 26, 27, 28)는 MYH3 유전자 전사활성을 나타내는 형질전환 마우스, 검정색으로 표시된 숫자(19, 20, 22, 23, 25)는 형질전환은 되었으나, MYH3 유전자의 전사활성이 없는 마우스를 의미한다. b는 MYH3 유전자의 단백질 발현양을 분석한 웨스턴블롯 결과를 나타내는 이미지이다.
도 8은 돼지 MYH3 유전자가 삽입된 형질전환 마우스의 모습이다.
도 9는 야생형 마우스(WT) 및 형질전환 마우스(TG)의 뒷다리 근육 외관(a) 및 근육 조직(b, c)의 모습을 보여주는 이미지이다. b는 뒷다리 근육 조직을 미오신 ATPase로 조직화학염색한 이미지로서, 적색 화살표는 적색근의 일종인 Type 1/oxidative/slow fibers, 청색 화살표는 백색근의 일종인 Type 2a 및 청색 삼각형은 백색근의 일종인 Type 2b의 Type 2/glycolytic/fast fibers를 가리킨다. 스케일바(Scale bar)는 50 ㎛을 의미한다. c는 뒷다리 근육 조직을 Oil red O 염색한 이미지이다. 스케일바는 100 ㎛을 의미하고, 직사각형 내에 존재하는 영역을 확대하여 그 아래에 나타내었다.
도 10은 돼지 MYH3 유전자가 삽입된 형질전환 마우스의 근육 내 유전자 발현 패턴을 확인한 결과를 보여준다. a는 근섬유 type과 관련한 유전자의 mRNA 및 단백질 발현을 qRT-PCR 및 웨스턴블롯을 통해 분석한 결과를 보여준다. 4개월령의 야생형 마우스(n=3)와 형질전환 마우스(n=5)를 이용하였다. b는 뒷다리 근육의 slow-type(좌) 및 fast-type(우) 근육과 관련한 유전자의 mRNA 발현양을 qRT-PCR을 통해 분석한 결과를 보여준다. 4개월령의 야생형 마우스(n=3)와 형질전환 마우스(n=4)를 이용하였다. 결과값은 독립적인 세 번의 실험을 통해 얻었으며, 이를 평균±SEM으로 나타내었다(*P<0.05, **P<0.01). c는 뒷다리 근육을 헤마톡실린 및 에오신으로 염색한 결과를 보여준다. 화살표는 근주막(perimysium), 삼각형은 근내막(endomysium)을 가리킨다. d는 지방분화 유전자의 mRNA 발현양을 qRT-PCR을 통해 분석한 결과를 보여준다.
도 11은 돼지 MYH3 유전자의 구조 및 QTN(quantitative trait nucleotide)을 보여주는 이미지이다.
도 12는 육질에 영향을 미치는 원인 염기변이를 HpyCH4IV 제한효소를 이용하여 절단한 패턴을 보여주는 이미지이다. LANDRACE 품종(q/q)에서 유래한 1/1은 비 절단형, 랜드레이스와 제주재래돼지의 교배 품종(q/Q)에서 유래한 1/2는 절단형, 제주재래돼지 품종(Q/Q)에서 유래한 2/2는 절단형을 보여준다.
도 2는 육질 형질 결정 유전자의 QTL(quantitative trait locus) 영역 확인에 따른 LDLA(linkage-linkage disequilibrium analysis) 결과를 보여주는 그래프이다. a는 제주재래돼지와 랜드레이스 돼지를 교배하여 얻어진 자손(LK축군), b는 제주재래돼지와 듀록 돼지를 교배하여 얻어진 자손(DK축군)에 관한 것이다.
도 3은 육질 형질 결정 유전자의 QTL 영역에 존재하는 유전자를 나타내고 있는 LALD mapping 결과이다.
도 4는 QTL 영역에 존재하는 유전자의 mRNA 발현양을 비교한 그래프이다. a는 등심(최장근, longissimus), b는 후지(대퇴사두근, quadriceps)에 관한 것이다.
도 5는 CAGGS-EGFP-Puro 벡터의 개열지도를 보여준다.
도 6은 MYH3 유전자가 재조합된 CAGGS-MYH3-Flag 발현 벡터의 개열지도 및 상기 벡터 내 유전자의 순서를 보여준다.
도 7은 MYH3 유전자가 재조합된 벡터로 형질전환된 마우스의 MYH3 유전자 활성 및 발현 양상을 보여준다. a는 MYH3 유전자의 전사 활성을 보여주는 이미지이다. P/C는 양성대조군(positive control), 붉은색으로 표시된 숫자(21, 24, 26, 27, 28)는 MYH3 유전자 전사활성을 나타내는 형질전환 마우스, 검정색으로 표시된 숫자(19, 20, 22, 23, 25)는 형질전환은 되었으나, MYH3 유전자의 전사활성이 없는 마우스를 의미한다. b는 MYH3 유전자의 단백질 발현양을 분석한 웨스턴블롯 결과를 나타내는 이미지이다.
도 8은 돼지 MYH3 유전자가 삽입된 형질전환 마우스의 모습이다.
도 9는 야생형 마우스(WT) 및 형질전환 마우스(TG)의 뒷다리 근육 외관(a) 및 근육 조직(b, c)의 모습을 보여주는 이미지이다. b는 뒷다리 근육 조직을 미오신 ATPase로 조직화학염색한 이미지로서, 적색 화살표는 적색근의 일종인 Type 1/oxidative/slow fibers, 청색 화살표는 백색근의 일종인 Type 2a 및 청색 삼각형은 백색근의 일종인 Type 2b의 Type 2/glycolytic/fast fibers를 가리킨다. 스케일바(Scale bar)는 50 ㎛을 의미한다. c는 뒷다리 근육 조직을 Oil red O 염색한 이미지이다. 스케일바는 100 ㎛을 의미하고, 직사각형 내에 존재하는 영역을 확대하여 그 아래에 나타내었다.
도 10은 돼지 MYH3 유전자가 삽입된 형질전환 마우스의 근육 내 유전자 발현 패턴을 확인한 결과를 보여준다. a는 근섬유 type과 관련한 유전자의 mRNA 및 단백질 발현을 qRT-PCR 및 웨스턴블롯을 통해 분석한 결과를 보여준다. 4개월령의 야생형 마우스(n=3)와 형질전환 마우스(n=5)를 이용하였다. b는 뒷다리 근육의 slow-type(좌) 및 fast-type(우) 근육과 관련한 유전자의 mRNA 발현양을 qRT-PCR을 통해 분석한 결과를 보여준다. 4개월령의 야생형 마우스(n=3)와 형질전환 마우스(n=4)를 이용하였다. 결과값은 독립적인 세 번의 실험을 통해 얻었으며, 이를 평균±SEM으로 나타내었다(*P<0.05, **P<0.01). c는 뒷다리 근육을 헤마톡실린 및 에오신으로 염색한 결과를 보여준다. 화살표는 근주막(perimysium), 삼각형은 근내막(endomysium)을 가리킨다. d는 지방분화 유전자의 mRNA 발현양을 qRT-PCR을 통해 분석한 결과를 보여준다.
도 11은 돼지 MYH3 유전자의 구조 및 QTN(quantitative trait nucleotide)을 보여주는 이미지이다.
도 12는 육질에 영향을 미치는 원인 염기변이를 HpyCH4IV 제한효소를 이용하여 절단한 패턴을 보여주는 이미지이다. LANDRACE 품종(q/q)에서 유래한 1/1은 비 절단형, 랜드레이스와 제주재래돼지의 교배 품종(q/Q)에서 유래한 1/2는 절단형, 제주재래돼지 품종(Q/Q)에서 유래한 2/2는 절단형을 보여준다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예
1. 돼지의 육질 형질 육안 비교
제주재래흑돼지와 랜드레이스 돼지의 육질 형질(근내지방함량 및 적색육)을 비교하기 위하여, 등심의 형태를 분석하였다.
그 결과, 도 1에서 볼 수 있듯이, 도입종인 랜드레이스의 등심 고기는 백색이면서 창백하나, 제주재래돼지의 등심 고기는 흑모색이면서 적색육이며, 특히 마블링 침착이 우수함을 확인하였다.
상기 결과를 통해, 재주재래돼지는 랜드레이스에 비하여 육질이 우수함을 알 수 있었다.
실시예
2. 돼지의 육질 형질
양적특성자리
(quantitative trait locus;
QTL
) 분석
실시예
2-1. 육질 유전자의
QTL
영역 확인
돼지의 육질 형질을 결정하는 유전자를 규명하기 위하여, 제주재래돼지와 랜드레이스 돼지를 교배하여 얻어진 자손(LK축군), 및 제주재래돼지와 듀록 돼지를 교배하여 얻어진 자손(DK축군)을 대상으로 돼지의 육질 형질(적색도(a*), 근내지방함량(IMF))에 대해 양적특성자리(quantitative trait locus; QTL) 분석을 수행하였다.
그 결과, 도 2의 a에서 볼 수 있듯이, LK축군에서 수직 점선은 12번 염색체의 661 kb 영역 상에 위치함을 확인하였고, 또한, 도 2의 b에서 볼 수 있듯이, KD축군에서도 수직 점선은 12번 염색체의 661 kb 영역 상에 위치함을 확인하였다.
상기 결과를 통해, 적색육(적색도)과 근내지방함량을 결정하는 유전자는 돼지의 품종에 상관없이 동일한 위치에 존재함을 확인하였고, 이는 12번 염색체의 661kb 영역 내에 존재함을 알 수 있었다.
실시예
2-2. 돼지 육질 형질 유전자 규명
상기 실시예 2-1를 통해 돼지 육질 형질을 결정하는 유전자는 12번 염색체의 661kb 영역 내에 존재함을 확인함에 따라, 상기 영역 내에 존재하는 유전자를 LALD mapping을 통해 확인하였다.
그 결과, 도 3에서 볼 수 있듯이, MYH3, MYH1, MYH2, MYH13, ADPRM, SCO1, TMEM220, ENSSSCG00000029441, ENSSSCG00000018006의 9개 유전자가 상기 육질 형질 유전자 영역 내에 존재함을 확인하였다.
실시예
2-3. 돼지 육질 형질 관련 유전자 선발
상기 실시예 2-2를 통해 육질 형질을 결정하는 9개 유전자를 확인함에 따라, 상기 유전자 중에서도 육질 형질의 결정에 가장 관련성이 높은 유전자를 선발하고자 하였다.
랜드레이스(LANDRACE)와 재래돼지(KNP)의 등심(최장근, longissimus) 및 후지(대퇴사두근, quadriceps)에서, 상기 9개 유전자의 상대적인 mRNA 발현양을 분석하였다.
구체적으로, 재래돼지(LANDRACE)와 랜드레이스로 등심과 후지를 근육조직을 채취하였고, Trizol 시약(Ambion)을 이용하여 RNA를 분리하였다. 각 조직별 RNA농도를 5 ㎍으로 동일하게 맞춘 후 TOPscript cDNA 합성 키트(Enzynomics)를 이용하여 cDNA(complement DNA)를 합성하였다. 이후 각 조직별 cDNA를 이용하여 qRT-PCR 실험을 수행하였다. qRT-PCR 실험은 95℃에서 20초, 60℃에서 20초, 72℃에서 20초를 40회 반복하였으며 qRT-PCR 실험 수행을 위해 QuatiTect SYBR Green PCR 키트(Qiagen)를 사용하였고, Roter-Gene Q thermal cycler(Qiagen) 장비를 이용하여 실시간으로 분석하였다. 총 9개의 유전자 분석을 위해 사용한 프라이머는 하기 표 1에 나열하였다.
유전자 | 구분 | 방향 | 염기서열(5'→3') |
pMYH3 | 서열번호 3 | Forward | AAAAGCTCAGCATGAGCTCGA |
서열번호 4 | Reverse | AGGGTCAGGAACCATGAAAAT | |
pMYH1 | 서열번호 5 | Forward | GTTCTGAAGAGGGTGGTAC |
서열번호 6 | Reverse | AGATGCGGATGCCCTCCA | |
pMYH2 | 서열번호 7 | Forward | GGGCTCAAACTGGTGAAGC |
서열번호 8 | Reverse | AGATGCGGATGCCCTCCA | |
pMYH13 | 서열번호 9 | Forward | CACAGGGCTCTGGCCGACAT |
서열번호 10 | Reverse | CGTGCGCACAGGGGTGTAGT | |
pADPRM | 서열번호 11 | Forward | CATCCTGAGACCGTGCCTTCA |
서열번호 12 | Reverse | TTCCGCATTTGGGTTGTGCT | |
pSCO1 | 서열번호 13 | Forward | TCCTCACGGACTCGGGGTTT |
서열번호 14 | Reverse | GTGGGGTCTCTGCTGCCCTT | |
pTMEM220 | 서열번호 15 | Forward | CCCAGACGCAGAACTGTGGG |
서열번호 16 | Reverse | GTTGTATGCCAAGCCGGCAG | |
pENSSSCG00000029441 | 서열번호 17 | Forward | TCGTGCTGGAGCAGGAGGAG |
서열번호 18 | Reverse | AGGTGTCTGTGGCCTTGGGG | |
pENSSSCG00000018006 | 서열번호 19 | Forward | AGAACCAGCCCTTCGATGCC |
서열번호 20 | Reverse | TGGCATACACATCCTCCGGC | |
pGAPDH | 서열번호 21 | Forward | GGGCATGAACCATGAGAAGT |
서열번호 22 | Reverse | GGGCATGAACCATGAGAAGT |
그 결과, 도 4의 a 및 b에서 볼 수 있듯이, 랜드레이스에 비하여, 재래돼지의 등심 및 후지에서 MYH3 유전자의 mRNA 발현이 월등히 높음을 확인하였다.
상기 결과를 통해, MYH3 유전자가 돼지의 육질 형질 중에서도 특히, 적색도와 근내지방함량을 결정하는 주요 유전자임을 알 수 있었다.
실시예
3. 돼지
MYH3
유전자가 삽입된 형질전환 마우스의 제작
상기 실시예 2를 통해 MYH3 유전자가 돼지의 육질 형질 중에서도 특히, 적색도와 근내지방함량을 결정하는 유전자임이 규명됨에 따라, 상기 유전자의 생체 내(in vivo) 활성을 확인하기 위하여, 하기 3-1 내지 3-2에 따른 방법으로 돼지 MYH3 유전자가 삽입된 형질전환 마우스를 제작하여 이를 이용하였다.
실시예
3-1. 형질전환 벡터의 제작
먼저, 돼지 MYH3 유전자가 삽입된 형질전환 마우스를 제작하고자, MYH3 유전자가 삽입된 재조합 CAGGS-MYH3-Flag 발현벡터를 제조하였다.
구체적으로, 돼지 MYH3를 과발현하는 벡터를 제작하기 위해, 돼지 MYH3 유전자의 mRNA 전체 염기서열을 확인한 후, 총 4부분으로 나누어 DNA 단편을 각각 인위적으로 합성하였다. 첫 번째 단편은 1,417bp로 양쪽에 XbaI과 BglII 효소 site를 양끝 단면에 추가하여 인위적 합성하였다. 두 번째 단편은 1,745bp로 BglII와 SalI를 합성하였으며, 세 번째 단편은 1,777bp로 SalI와 SacII를 합성하였고, 마지막 네 번째 944bp로 SacII와 EcoRI으로 합성하였다. 완성된 4개의 DNA 단편을 말단에 인위적으로 결합시킨 효소 site를 이용하여 결합(Ligation)시켜 최종적으로 돼지 MYH3 유전자의 전체 mRNA를 포함하는 유전자 단편을 완성할 수 있었다.
이후 과발현 벡터에 도입하기 위해 도 5에 나타낸 바와 같은 CAGGS-EGFP-Puro 벡터를 XbaI과 EcoRI으로 절단한 후, 앞서 제작한 돼지 MYH3 유전자 mRNA의 전체 단편을 삽입시킴으로써 최종적으로 돼지 MYH3 형질전환벡터를 제작을 완료하였다(도 6).
상기 벡터의 구조는 6에 나타내었으며, 벡터의 염기 서열은 서열번호 2로 표시하였다.
실시예
3-2. 형질전환 마우스의 제작
실시예
3-2-1. 형질전환 마우스의 제작 방법
상기 실시예 3-1을 통해 제작한 벡터를 이용하여 형질전환 마우스를 제작하였다.
구체적으로, C57BL/6n 마우스의 수정란을 획득한 후 미세주입기법(microinjection)을 사용하여 상기에 제작된 형질전환 벡터를 수정란의 핵 안으로 도입하였다.
그 결과, 총 47마리의 F0 founder를 확인하였다.
실시예
3-2-2.
mRNA
발현 분석을 통한 외래 유전자 도입 여부 확인
상기 실시예 3-2-1을 통해 제작한 형질전환 마우스에 MYH3 유전자가 도입되었는지 확인하기 위해, 상기 유전자의 mRNA 발현 여부를 분석하였다.
구체적으로, PCR 실험 조건은 95℃에서 30초, 60℃에서 30초, 72℃에서 30초를 40회 반복하였으며, 사용한 프라이머는 하기 표 2에 나열하였다.
유전자 | 구분 | 방향 | 염기서열(5'→3') |
pMYH3 | 서열번호 23 | Forward | CCGAGAGCTGGAGTTTGA |
서열번호 24 | Reverse | CTCCCATATGTCCTTCCGAGT |
그 결과, 도 7의 a에서 볼 수 있듯이, MYH3 유전자가 삽입되어 mRNA를 발현하는 형질전환 마우스(21, 24, 26, 27, 28번)를 확인할 수 있었다.
실시예
3-2-3. 단백질 발현 분석을 통한 외래 유전자 도입 여부 확인
상기 실시예 3-2-1을 통해 제작한 형질전환 마우스에 MYH3 유전자가 도입되었는지 확인하기 위해, 상기 유전자의 단백질 발현 여부를 분석하였다.
구체적으로, 야생형 마우스(WT)와 형질전환 마우스(TG)의 후지 근육조직을 채취한 후, RIPA 버퍼에 단백질 분해 억제제를 첨가하여 초음파 분쇄함으로써 조직을 분해하였다. 이후, 저온원심분리기를 통해 조직과 단백질을 분리하여 상층액에서 단백질을 회수하였다. 회수한 단백질은 BSA 단백질 어세이 시약(bio-rad)을 이용하여 정량한 후, 4x 단백질 로딩 버퍼(1x)로 100℃에서 약 10분간 가열하였다. 준비된 단백질을 이용하여 웨스턴블롯을 수행하기 위해, SDS-PAGE 겔에 약 2시간 동안 상기 단백질을 영동하였다. 이후, 영동된 단백질을 PVDF 멤브레인으로 옮긴 후, 5% skim milk를 이용하여 1시간 동안 블로킹하였고, 실험 목적에 맞는 일차 항체(Anti-Flag M2(F1804, Sigma-Aldrich) 및 b-actin(#4970, Cell signaling))를 첨가하여 4℃에서 밤새 반응시켰다. 다음날 TBST 용액으로 세척한 후 이차 항체를 2시간 동안 반응시킨 뒤, ECL 시약을 처리하였고, LAS-300 luminescent image analyzer system(Fujifilm)을 이용하여 단백질에 결합한 항체의 신호를 확인하였다. 실험에 사용된 이차 항체는 일차 항체에 따라 달리 사용하였다.
그 결과, 도 7의 b에서 볼 수 있듯이, 형질전환 마우스 중에서도 24번에서 MYH3 유전자의 단백질 발현량이 가장 높음을 확인할 수 있었다. 이에 따라, 형질전환 유전자의 단백질의 발현도가 가장 높았던 24번 마우스를 활용하여 교배 후 번식시켰으며, 그 모습은 도 8에 나타내었다.
실시예
3-3. 형질전환 마우스의 근육 형태 확인
육질 형질 결정에 관한 MYH3 유전자의 기능을 확인하기 위해, 상기 실시예 3-2를 통해 제작한 형질전환 마우스의 육질 형질을 조사하였다.
먼저, 도 9의 a에서 볼 수 있듯이, 돼지 MYH3 유전자가 형질전환된 마우스(우; TG)의 뒷다리의 근육은 야생형 마우스(좌; WT)에 비해 더욱 붉은색을 띄는 것을 확인할 수 있었다.
이후, 근육 형태를 더욱 자세히 확인하기 위하여, ATPase 염색을 수행하였다. 야생형 및 형질전환 마우스의 뒷다리 근육을 회수하여 30% 수크로스(sucrose) 용액에 밤새처리 한 후, OCT compound를 이용하여 -25℃에서 10㎛ 크기로 조직절편(tissue-section)한 뒤, 4% PEA으로 1시간 동안 고정하였다. 이후 흐르는 물에서 10분 동안 세척하였고, 60% 이소프로판올(isopropanol)을 이용하여 세척한 후, ATPase 염색 키트(ATPase stain lyopilized powder for histoenzymatic reaction kit, Bio optica사)를 이용하여 제조사에서 제시한 방법에 따라 실험을 수행하였다.
그 결과, 도 9의 b에서 볼 수 있듯이, 야생형 마우스(좌; WT)에 비하여, 상기 유전자가 삽입된 형질전환 마우스(우; TG)는 뒷다리 근육에 적색근이 더 많이 분포함을 확인할 수 있었다.
추가적으로, 근육조직 내 지방의 분포를 확인하기 위하여 Oil Red O 염색을 수행하였다. 구체적으로, 상기 조직절편을 0.3% Oil Red O 용액에 1시간 동안 반응시켰다.
그 결과, 도 9의 c에서 볼 수 있듯이, 야생형 마우스(좌; WT)에 비하여, 형질전환 마우스(우; TG)에서 염색 정도가 더 강함을 확인함으로써, 형질전환 마우스의 뒷다리 근육에는 지방의 함량이 더 많음을 확인할 수 있었다.
이를 종합하면, MYH3 유전자는 적색근을 축적시켜 적색도를 향상시키며, 근내지방함량을 축적시키는 원인 유전자임을 알 수 있었다.
실시예
3-4. 형질전환 마우스의 근육 내 유전자 발현 패턴 확인
실시예
3-4-1.
백색근
/
적색근
형성 유전자의 발현 패턴 확인
육질 형질 결정에 관한 MYH3 유전자의 기능을 확인하기 위해, 상기 실시예 3-2를 통해 제작한 형질전환 마우스의 백색근/적색근 형성 유전자의 발현 패턴을 조사하였다.
구체적으로, 야생형 마우스(WT)와 형질전환 마우스(TG)의 후지 근육조직을 채취하였고, 상기 실시예 2-3에 따른 방법으로 qRT-PCR을 수행하였다. 이때 사용한 프라이머는 하기 표 3에 나열하였다.
유전자 | 구분 | 방향 | 염기서열(5'→3') |
Myh7 | 서열번호 25 | Forward | AGTCCCAGGTCAACAAGCTG |
서열번호 26 | Reverse | TTCCACCTAAAGGGCTGTTG | |
Myh2 | 서열번호 27 | Forward | AGTCCCAGGTCAACAAGCTG |
서열번호 28 | Reverse | GCATGACCAAAGGTTTCACA | |
Myh1 | 서열번호 29 | Forward | AGTCCCAGGTCAACAAGCTG |
서열번호 30 | Reverse | CACATTTTGCTCATCTCTTTG | |
Myh4 | 서열번호 31 | Forward | AGTCCCAGGTCAACAAGCTG |
서열번호 32 | Reverse | TTTCTCCTGTCACCTCTCAACA | |
Myoglobin | 서열번호 33 | Forward | GCAAGGCCCTGGAGCTCTTC |
서열번호 34 | Reverse | GCTTGGTGGGCTGGACAGTG | |
Tnnt1 | 서열번호 35 | Forward | CCCCCGAAGATTCCAGAAGG |
서열번호 36 | Reverse | TGCGGTCTTTTAGTGCAATGAG | |
Tnni1 | 서열번호 37 | Forward | ATGCCGGAAGTTGAGAGGAAA |
서열번호 38 | Reverse | TCCGAGAGGTAACGCACCTT | |
Tnnc1 | 서열번호 39 | Forward | GCGGTAGAACAGTTGACAGAG |
서열번호 40 | Reverse | CCAGCTCCTTGGTGCTGAT | |
Aldoa | 서열번호 41 | Forward | ACTCTCTGCTGACCGGGCTCT |
서열번호 42 | Reverse | AATGCTTCCGGTGGACTCAT | |
Pvalb | 서열번호 43 | Forward | ATCAAGAAGGCGATAGGAGCC |
서열번호 44 | Reverse | GGCCAGAAGCGTCTTTGTT | |
Tnnt3 | 서열번호 45 | Forward | GGAACGCCAGAACAGATTGG |
서열번호 46 | Reverse | TGGAGGACAGAGCCTTTTTCTT | |
Tnni2 | 서열번호 47 | Forward | AGAGTGTGATGCTCCAGATAGC |
서열번호 48 | Reverse | AGCAACGTCGATCTTCGCA | |
Tnnc2 | 서열번호 49 | Forward | ATGGCAGCGGTACTATCGACT |
서열번호 50 | Reverse | CCTTCGCATCCTCTTTCATCTG | |
GAPDH | 서열번호 51 | Forward | GAAGGGCATCTTGGGCTACAC |
서열번호 52 | Reverse | GCAGCGAACTTTATTGATGGTATT |
또한, 상기 실시예 3-2-3에 따른 방법으로 웨스턴블롯을 수행하였으며, 이때 사용한 일차항체는 다음과 같다: Anti-Flag M2(F1804, Sigma-Aldrich), MYH7(SC-53089, Santa cruz biotechnology), MYH4(H00004622-B01P, Abnova) 및 b-actin(#4970, Cell signaling).
그 결과, 도 10의 a에서 볼 수 있듯이, 야생형 마우스에 비하여, 형질전환 마우스에서는 적색근의 일종으로 slow type 유전자인 MYH7 유전자의 mRNA 및 단백질의 발현이 급격하게 증가함을 확인하였다.
또한, 도 10의 b에서 볼 수 있듯이, 야생형 마우스에 비하여, 형질전환 마우스에서는 백색근의 일종인 fast type 유전자(Aldoa, Pvalb, Tnnf3, Tnnl2, Tnnc2)는 발현량에서 유의적인 차이가 없으나, 적색근의 일종인 slow type에 영향을 미치는 유전자(Myoglobin, Tnnt1, Tnnl1, Tnnc1)들은 모두 mRNA 발현양이 증가함을 확인하였다.
실시예
3-4-2. 지방 축적 패턴 및 관련 유전자의 발현 패턴 확인
아울러, 육질 형질 결정에 관한 MYH3 유전자의 기능을 확인하기 위해, 상기 실시예 3-2를 통해 제작한 형질전환 마우스의 지방 축적 패턴 및 관련 유전자의 발현 패턴을 조사하였다.
먼저, 지방 축적 패턴을 확인하기 위해 조직상의 형태를 확인하고자 하였고, 이를 위해 H&E(Hematoxylin and eosin) 염색을 수행하였다. 야생형 마우스(WT) 및 형질전환 마우스(TG)의 근육 조직을 이용하여 파라핀 엠베딩(Paraffin embedding)한 후, 4㎛의 두께로 조직을 절편하였다. 이후 자일렌(xylene)을 이용하여 파라핀을 제거하고, 100%, 95%, 75%, 50% 알코올을 순서대로 이용하여 탈수한 후, 흐르는 물에 5분간 세척하였다. 이후, Myyer's 헤마톡실린(hematoxylin) 용액에 1분간 처리한 후 흐르는 물에 20분간 세척하고, 에오신(esoin)에 1분간 처리한 후 탈수 및 클리어링(clearing) 과정을 수행하였고, 이후 현미경 상에서 조직의 염색 상태를 확인하였다.
또한, 형질전환 마우스의 근육조직에서 지방 축적 유전자의 발현 패턴을 확인하기 위하여, 상기 실시예 2-3에 따른 방법으로 qRT-PCR을 수행하였다. 이때 사용한 프라이머는 하기 표 4에 나열하였다.
유전자 | 구분 | 방향 | 염기서열(5'→3') |
CD36 | 서열번호 53 | Forward | AATGGCACAGACGCAGCCT |
서열번호 54 | Reverse | GGTTGTCTGGATTCTGGA | |
LPL | 서열번호 55 | Forward | GTACCTGAAGACTCGCTCTC |
서열번호 56 | Reverse | AGGGTGAAGGGAATGTTCTC | |
Fabp4 | 서열번호 57 | Forward | GATGCCTTTGTGGGAACCTG |
서열번호 58 | Reverse | TCCTGTCGTCTGCGGTGATT | |
Fto | 서열번호 59 | Forward | GTCAGAGAGAAGGCCAATGA |
서열번호 60 | Reverse | TAGCAGTCTCCCTGGTGAAG | |
Pgc1α | 서열번호 61 | Forward | CCCTGCCATTGTTAAGACC |
서열번호 62 | Reverse | TGCTGCTGTTCCTGTTTTC | |
Adiponectin | 서열번호 63 | Forward | AATGGCACACCAGGCCGTGAT |
서열번호 64 | Reverse | TCTCCAGGCTCTCCTTTCCTG |
그 결과, 도 10의 c 및 d에서 볼 수 있듯이, 야생형 마우스에 비하여, 형질전환 마우스에서는 근세포 사이 간격이 크며, 그 사이로 지방이 침착되는데, 지방분화 유전자의 발현 또한 유의적으로 증가함을 확인하였다.
상기 결과를 통해, MYH3 유전자는 적색근 관련 유전자의 발현 증가에 영향을 미칠 뿐만 아니라 근육 내 지방 형성을 향상시키는 원인 유전자임을 알 수 있었다.
실시예
4.
MYH3
유전자의 유전형 분석
MYH3 유전자의 유전형을 분석하기 위하여, 돼지 MYH3 유전자의 전사시작지점(transcription start site; TSS)으로부터 5'-UTR 3kb, 및 종결코돈(stop codon)으로부터 3'-UTR 1kb 까지의 염기서열을 해독하였다.
그 결과, 도 11에서 볼 수 있듯이, 육질에 영향을 미치는 MYH3 유전자에서 QTN(i.e., MYH3-1805_-1810delGGACTG)을 확인하였다(적색점으로 표시). 또한, 랜드레이스(LANDLACE)와 제주재래돼지(KNP) 사이에 염기 변이가 존재하며, 이는 엑손(exon) 3에 있는 개시코돈(ATG)으로부터 5'-UTR에 위치함을 확인하였다. 제주재래돼지의 경우 -1805 bp 내지 -1810 bp의 부위가 결손되었음을 확인하였으며, 이는 근육형성 조절 인자(myogenesis regulatory factor; MRF)의 결합 부위임을 확인하였다.
실시예
5.
MYH3
유전자의 유전형 확인을
통한 돼지의
품종 판단
상기 실시예 3을 통해 랜드레이스 및 제주재래돼지의 MYH3 유전자 간에 염기 변이가 존재함을 확인함에 따라, 상기 염기 변이를 이용하여 돼지의 육질을 판단하고자 하였다.
구체적으로, 프라이머(forward: 5'-TGG TCT TTC CTA ATT GGT GAC AT-3' (서열번호 65), reverse: 5'-AGT TTT GAG CAA GGC TTT TGT T-3' (서열번호 66))를 이용하여 상기 염기 변이를 포함한 부분을 증폭하였다. 각 돼지의 혈액으로부터 분리한 100 ng/㎕의 DNA를 주형으로 하였으며, 10×반응 완충액, 20 mM dNTP, 각각 200 mM의 정방향 및 역방향 프라이머, 1.5 units Taq DNA polymerase(TaKaRa, Japan)에 멸균한 탈이온수를 첨가하여 25 ㎕ 용량으로 PCR 반응을 수행하였다. PCR 증폭은 PTC-200(MJ Research, USA)을 이용하여 총 30 cycle을 수행하였고, 프라이머의 어닐링 온도는 60℃에서 진행하였다. 증폭 산물은 EtBr(ethidium bromide)가 함유된 2% 아가로스 겔 상에서 전기영동한 후, UV 하에서 유전자 증폭 여부를 확인하였다.
이후, HpyCH4IV 제한효소를 이용하여 상기 원인 염기 변이의 염기서열 중에서 'A▼CGT' 부분을 절단하였다. 상기 증폭한 PCR 산물을 제한효소(HpyCH4Ⅳ)를 이용하여 절단하였고, 제한효소반응 조건은 공급자의 지시에 따라 PCR 증폭 산물 3㎕와 10X buffer 1㎕, 제한효소 0.3㎕, DW 5.7㎕를 혼합하여 37℃에서 밤새 반응하였다. EtBr(ethidium bromide)가 함유된 2% 아가로스 겔 상에서 전기영동하여, 제한효소에 의한 랜드레이스 및 제주재래돼지 MYH3 유전자의 절단 양상을 확인하였다.
그 결과, 도 12에서 볼 수 있듯이, 육질이 좋지 않은 랜드레이스(LANDLACE) 돼지는 유전자가 절단되지 않아 250 bp에서 한 개의 밴드로 나타남을 확인하였고(1/1; 비 절단형), 육질이 우수한 제주재래돼지(KNP)는 유전자가 절단되어 167 및 77 bp에서 두 개의 밴드로 나타냄을 확인하였다(2/2; 절단형). 또한, 랜드레이스와 제주재래돼지의 교배 품종은 250 및 167 bp에서 두 개의 밴드로 나타냄을 확인하였다(1/2; 절단형).
상기 결과를 통해, 돼지의 육질 형질을 결정하는 유전자인 MYH3의 변이를 확인함으로써 외래돼지와 토종돼지를 구별할 수 있을 뿐만 아니라, 이를 통해 돼지의 육질을 판단할 수 있음을 확인하였다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT : RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION)
KOREA RESEARCH INSTITUTE OF BIOSCIENCE AND BIOTECHNOLOGY
Jeju National University Industry-Academic Cooperation Foundation
<120> Genetic marker for discriminating level of meat quality of pig
and use thereof
<130> KPA161028-KR
<160> 66
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 3400
<212> DNA
<213> Sus scrofa
<400> 1
tggtggttat tgccgctgct tccaccctca gggttctcct ggcgagcgga gctccctgcc 60
tacctcggac cctcgttcca tggcccgggc aggcttcttc ccctcgtgcc ttccagcccc 120
tcatgtgcag aagcaggccg tcaggcagat gacccgagac ctcccagccg agcctctgtg 180
ctcgtggagg acgtgtgacg gagagaagga agacaggccg gctgacgggg gaaaagctgg 240
ggtgggaggc cgtcagcctt gagctcgcct tgggctcagg gatgcgacgt ggcttcacgc 300
ttgacaagaa gctcaaagaa atcctgtgtg gaaaacgtcc tctcggtgtc ccggaggtgg 360
gatggatgtg gttgtgcaga ggtgggtgaa ccggcgccaa ctaaaggtca aaagcaagcc 420
ggccccaacc gcggcccctg gtgtttaaga agggaccgcc agcacccttc ccctgaccac 480
ccagcacacg tcacagcctg agacgtagcc agggcccctg cactgtccct cagccccagg 540
gggcttgcta acacctctgc ttccaggtga catgcacctg tcctcaccag gcctcccagg 600
atggctggcc aatggcgcag agagtcaggc cggcgcgtcc ctgggcaggg agaccacgcc 660
ccttcaggac cggagggtcc ttgaggaggg tcgagctctc ttcttggacg aggaggattt 720
ctgggggagg gggtttcagt cccagcggcg gggggtgggc ggtggggcgt gacatgtagc 780
atggcaggtc catgcttcct gactttcctc ctgatggcca cttgcctacc tgctttgatc 840
taaaaatcac caaaatctca gacataatcg agtcaccatt tatccaagaa accatcgagg 900
gtaaagccgc agcttccatt tctttcgatt cttcttccag ggttctgcct tgggcccagc 960
atgcagtggg tgtttaatta atgcccctgc ccctcgggga ctgcagcccc actccccctg 1020
ccccaccccc agcccttaga gtggcctcct ggcccgcgct gcgtgtggct atgctgggag 1080
ggggccgttc ttattctcca gtggggacag ctgacaccag aatgaacgac aacgggttac 1140
ccacaggcca cgctcccaac ggtctgtcag ggaaaaaaag ggaaaaacag acataaagtg 1200
gaataagaat gggcaaacgc ttcagccata cccctctgtg ctcctaaggc tttatttttc 1260
taaccctgat ttagaaacag ccatgctcgt tagacgcccc ctcacccccc tttctctgca 1320
ggccctgcca tccccccacc cccgccccgg ccagcagctg gtctttccta attggtgaca 1380
tgtcttaata actacaggtc cttgagcagc tgtcactgtg gctcctggct ggtgggctac 1440
ctccctctca gtcatttact cgttggtcct actggcgctt aagacagagg tttagttaat 1500
gacgatccta atgagacagc aggacgtgtg ttccccacac aagttgtaca atcacacatt 1560
cctgccacaa ccctgtgttg taacaaaagc cttgctcaaa actccaagag ggtttaaact 1620
tttccgtcct tggcttcatc cctttgccca caggccgaga ttctaggtcc ccgctgtccc 1680
agagaccagg ctcatctcca gccgtgtggc gcctgtggga tggagcgagg gcccccggca 1740
aggctgtccc atcactgagc cgccggttca gagaaaggca tcccaaactt ccagctttct 1800
ccagctagga tcctgtcatt tctatatata cctctctctt ggcagcggca aaaaaaagcg 1860
aggaaggagc tggtcctcac ttgtggtgtc ggtcactctc tttccaaata tagagaagga 1920
atgagtggcg ggggttagca ggggctataa aagcccgcgg ggagcgcccc ttgtagctgc 1980
tctgtgggcg gaggagagtc acagtgcccc ttgtgcgggt ccttcccatc tgaggctcag 2040
aggctcgtgt ggccctgccc ggctttggta aggaccagac gtgcggctga ttctcagccc 2100
ctccccgcct ccagcatccc gcttccttca cctgttctcc cctgccctca tcctccagag 2160
ccttcccggg cagggtccct tcggatgctc tgtggaccac tgccgtcacc ccggcccatg 2220
aacgctgcca cctctctgac ttgtgcagag gccagtgggc ctggccgcct ccccacctgc 2280
gctgcgggcc tgcggtgtct gtcctctcaa ggccacgctg gctgtgcatc cgttggcttg 2340
tctgagactt cgccctgcct gcccacagaa gacagggggc ctggccctgg cttggaggca 2400
caggcttttc aaacagagct tctgtcctga ctgctcacat ctgaggagga ggcatggcag 2460
acagagggtg gtgccacccg ggcaggaggg agccaggtct ggggcggctg ggggctctcc 2520
tgccttcagg gctcacctgt gggccaggtc ccatttgctc ctccagcttg tctctgggcc 2580
aaggctcttt taaagttatt cgtcctttct cttcatttgg ttaattgatt aaggcccatt 2640
cagaactgaa ccagacactc ccacgtctcc tgaccttttg tgtatttatt gcaggtctga 2700
tttctcacgg ctgctgctgt ctgctgtcct cctgcgggtg tgactctcag gtgagaaagc 2760
aggtcaggtc ccctggctca gccatctcca gggtactggt tcccccccgg ccacggcctt 2820
gcggcgagca ggacaggtta ggctggagag gagccccagg gaaggctgcc aagcagatgc 2880
tgatgtgaga agccgcttgt ttgtagaagg gactgaagcc ggtttccagg tgggggatgg 2940
agccaccctg aatccgagcg gttccaaaac tccttagcta tttgcccttt aacacgctct 3000
ttgaagaatg tttgcttttg agagtgttta cctttacgtc ttccctcagc aacccctggc 3060
ttttacagaa gaggaaagcg gggtcccaag agctgcaccc acctctgggc gctctgcccg 3120
ccccagcccc ggctaacggg ggagcttgga ttgcgtgcat cccgtgtcct ctgcacagag 3180
gagctgctca atgaaatgca cccatttgat cccggggggc tggatggcgg cggccttgct 3240
cctgggctcc gcctggaggg cgcctgtggg gtcagggctg gagtctggcc cggggactca 3300
ctggggggtc ccttccagcc gacaccatga gcagcgacac tgaaatggaa gtgttcggca 3360
tagccgctcc cttcctccgc aagtcggaaa aggagaggat 3400
<210> 2
<211> 12238
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CAGGS-MYH3-Flag vector
<400> 2
gtcgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat tacggggtca ttagttcata 60
gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa tggcccgcct ggctgaccgc 120
ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt tcccatagta acgccaatag 180
ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggact atttacggta aactgcccac ttggcagtac 240
atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg 300
cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc tacttggcag tacatctacg 360
tattagtcat cgctattacc atgggtcgag gtgagcccca cgttctgctt cactctcccc 420
atctcccccc cctccccacc cccaattttg tatttattta ttttttaatt attttgtgca 480
gcgatggggg cggggggggg gggggcgcgc gccaggcggg gcggggcggg gcgaggggcg 540
gggcggggcg aggcggagag gtgcggcggc agccaatcag agcggcgcgc tccgaaagtt 600
tccttttatg gcgaggcggc ggcggcggcg gccctataaa aagcgaagcg cgcggcgggc 660
gggagtcgct gcgttgcctt cgccccgtgc cccgctccgc gccgcctcgc gccgcccgcc 720
ccggctctga ctgaccgcgt tactcccaca ggtgagcggg cgggacggcc cttctcctcc 780
gggctgtaat tagcgcttgg tttaatgacg gctcgtttct tttctgtggc tgcgtgaaag 840
ccttaaaggg ctccgggagg gccctttgtg cgggggggag cggctcgggg ggtgcgtgcg 900
tgtgtgtgtg cgtggggagc gccgcgtgcg gcccgcgctg cccggcggct gtgagcgctg 960
cgggcgcggc gcggggcttt gtgcgctccg cgtgtgcgcg aggggagcgc ggccgggggc 1020
ggtgccccgc ggtgcggggg ggctgcgagg ggaacaaagg ctgcgtgcgg ggtgtgtgcg 1080
tgggggggtg agcagggggt gtgggcgcgg cggtcgggct gtaacccccc cctgcacccc 1140
cctccccgag ttgctgagca cggcccggct tcgggtgcgg ggctccgtgc ggggcgtggc 1200
gcggggctcg ccgtgccggg cggggggtgg cggcaggtgg gggtgccggg cggggcgggg 1260
ccgcctcggg ccggggaggg ctcgggggag gggcgcggcg gccccggagc gccggcggct 1320
gtcgaggcgc ggcgagccgc agccattgcc ttttatggta atcgtgcgag agggcgcagg 1380
gacttccttt gtcccaaatc tggcggagcc gaaatctggg aggcgccgcc gcaccccctc 1440
tagcgggcgc gggcgaagcg gtgcggcgcc ggcaggaagg aaatgggcgg ggagggcctt 1500
cgtgcgtcgc cgcgccgccg tccccttctc catctccagc ctcggggctg ccgcaggggg 1560
acggctgcct tcggggggga cggggcaggg cggggttcgg cttctggcgt gtgaccggcg 1620
gctctagagc caccatgagc agcgacactg aaatggaagt gttcggcata gccgctccct 1680
tcctccgcaa gtcggaaaag gagaggatcg aggcgcagaa ccagcccttc gatgccaaaa 1740
cctactgctt cgtggtcgac tcgaaggaag agtacgccaa ggggaaaatt aagagcaccc 1800
aggatgggaa ggtcacggtg gagaccgaag acaacaggac cctggtggtg aagccggagg 1860
atgtgtatgc catgaacccc cccaagtttg accggatcga ggacatggcc atgctgacgc 1920
acctgaacga gccggccgtg ctgtacaacc tcaaggaccg gtacacctcc tggatgatct 1980
atacctactc gggcctcttc tgtgtcaccg tcaaccccta caagtggctg ccggtgtaca 2040
accccgaggt ggtggagggc taccgaggca aaaagcgcca ggaggccccg ccccacatct 2100
tctccatctc cgacaacgcc tatcagttca tgttgacaga tcgtgaaaac cagtccattc 2160
tgatcaccgg agaatccggg gcgggaaaga ctgtgaacac caagagggtc atccagtact 2220
ttgcaacaat tgctgccact ggggacctcg ccaagaagaa ggactccaag atgaagggga 2280
ctctggagga ccagatcatc agcgccaacc cgctgctgga ggccttcggc aacgccaaga 2340
ccgtgaggaa cgacaactcg tcccgcttcg gcaagttcat ccgaatccat tttggtacca 2400
ccgggaagct ggcctccgca gacatcgaaa catatctgct cgaaaaatcg agagtgacct 2460
tccagctgaa ggctgagagg agctaccaca tcttctacca gattctctcc aacaagaagc 2520
cggagctcat agagctgctg ctcattacaa ccaacccctt cgactacccg ttcatcagcc 2580
agggcgagat cctcgtggcc agcattgatg atgccgagga gctgctagcc acggatagtg 2640
ccatcgacat cctgggcttc accccagagg agaaatctgg actctacaag ctgacgggcg 2700
ccgtgatgca ctacgggaac atgaagttca agcagaagca acgggaggag caggcagagc 2760
cggacggcac ggaagtggct gacaagacag cctacctcat gggcctgaac tcttcggacc 2820
tcctgaaggc tttgtgcttc cccagagtca aagttgggaa cgagtatgtt accaagggcc 2880
agaccgtgga tcaggtgcac cacgcggtga acgcactctc caaatccgtc tacgagaagc 2940
tcttcctgtg gatggtcacc cgcatcaacc agcagctgga caccaagctg cccaggcagc 3000
acttcatcgg cgtcttggac atcgcgggct ttgagatctt tgagtataac agcctggagc 3060
agctgtgcat caacttcacc aacgagaaac tgcaacagtt tttcaaccac cacatgttcg 3120
tgctggagca ggaggagtac aagaaggaag gcatcgagtg gacgttcatc gacttcggga 3180
tggacctggc cgcctgcatc gagctcatcg agaagcccat gggcatcttc tccatcctgg 3240
aggaggagtg catgttcccc aaggccacag acacctcctt caagaacaag ctctatgacc 3300
agcacctggg caagtctgcc aacttccaga agcccaaggt gctcaagggc agggccgagg 3360
cccacttctc cctgatccac tacgcgggca ccgtggacta cagtgtctcg ggctggctgg 3420
agaagaacaa ggaccccctg aacgagacgg tggtcgggct gtaccagaag tcctccaacc 3480
ggctcctggc gcacctctac gcgaccttcg ccacggccga cgctgacagc ggaaagaaga 3540
aagttgccaa gaaaaagggt tcttccttcc aaaccgtctc tgcccttttc agggaaaacc 3600
tgaacaagct gatgtcgaat ttaaggacga ctcaccctca ctttgtgcgc tgtatcattc 3660
ccaatgaaac caaaacccca ggggccatgg aacatagcct ggtcctgcac cagctgaggt 3720
gtaacggcgt gctggagggc atccgcatct gcaggaaggg cttccccaat cggatcctct 3780
acggggattt taaacaaaga taccgcgtgc tgaatgccag cgccatcccc gagggacagt 3840
tcatcgacag caagaaggcg tgtgaaaagc tgttggcgtc catcgatatt gaccacactc 3900
agtacaaatt cggacacacc aaggtgttct tcaaggccgg cttgctggga accctggagg 3960
aaatgcggga cgaccgcctg gccaagctca tcacccggac gcaagccgtg tgcaggggct 4020
tcctcatgcg cgtggaattc cagaagatgg tgcagagaag ggagtccatc ttctgcatcc 4080
agtacaacat ccgagccttc atgaacgtca agcactggcc ctggatgaaa ctcttcttca 4140
agatcaagcc tctgctgaag agcgcagaga ccgagaagga gatggccacc atgaaggagg 4200
agttccagaa aaccaaggag gaactcgcca agtcagaggc aaagaggaag gaactggagg 4260
aaaagatggt gactctggta caagagaaga acgacctgca gctccaagta caagctgaaa 4320
gtgaaaactt gttggatgca gaggaaagat gtgaccagct gatcaaagcc aagtttcagc 4380
tggaggccaa aatcaaggag gtgactgaga gagctgagga tgaggaagag atcaatgccg 4440
agctgacggc caagaagagg aaactggagg atgagtgctc agaactgaag aaagacatcg 4500
atgaccttga gctgacactg gccaaggttg aaaaggagaa acatgccaca gagaacaagg 4560
ttaaaaacct tactgaggaa ctggccggct tggatgaaac cattgcgaag ttgaccaggg 4620
agaagaaggc cctccaggag gcccaccagc agaccctgga tgacctccaa gctgaagagg 4680
acaaagtcaa ctccttaagc aaaatcaaga gcaaactgga acagcaggtg gacgatctgg 4740
aaagctccct agaacaagag aagaagctcc gggtcgacct ggaaaggaat aaaaggaagc 4800
ttgagggtga cttgaagctt gcccaggagt ccatactgga tctggagaat gacaagcaac 4860
agctggatga aaggctcaag aagaaggatt ttgagtccag tcagctgcag agcaaagtgg 4920
aagatgagca gaccctgggc ctccagtttc agaagaaaat taaagagctc caggctcgaa 4980
tcgaggagct ggaggaagag attgaggccg agagggccac ccgcgccaag acggagaagc 5040
agcgcagcga ctacgcccgg gagctggagg agctgagcga gcggctggag gaggcggggg 5100
gcgtcacatc cacgcagatc gagctgaaca agaagcgcga ggccgagttc ctgaagctgc 5160
gccgggacct ggaggaggcc accctgcagc acgaggccac agtggctgcg ctgaggaaga 5220
agcacgcgga cagcgtggct gagctggggg agcagatcga caacctgcag agggtcaagc 5280
agaagctgga gaaggagaag agcgaattca agctggagct ggacgacctg gccggcaacg 5340
tggagagcgt gtccaaggcg aaggccaacc tggaaaaaat ctgccgcacc ctggaggatc 5400
agctaagcga ggccaggggc aagaacgagg aaatccagag gagcatgagc gagctgacca 5460
tgcagaagtc ccgtcttcag acggaggccg gtgagctgag tcgtcaactc gaagagaaag 5520
agagcacagt atcacagctt tccagaagca agcaagcgtt tacccagcaa atagaagagc 5580
tcaagaggca gctggaggag gagagcaagg ccaagaacgc cctggcgcac gccctgcagt 5640
cctcccgcca cgactgcgac ctgctgcggg aacagtatga ggaggagcag gaagccaagg 5700
ccgagctgca gagggcgctg tccaaggcca acagcgaggt tgcccagtgg aggaccaagt 5760
acgagacgga cgccatccag cgcacggagg agctggagga ggccaagaaa aagcttgctc 5820
agcgccttca ggattccgag gagcaggtgg aggcagtgaa cgccaagtgt gcctccctgg 5880
agaagaccaa gcagaggctg caagcggagg tggaggacct gatggtggac gtggacagag 5940
ccaactctct ggctgctgcg ctggacaaga agcagagaaa cttcgacaag gtgctcgccg 6000
agtggaaaac aaagtgtgag gagagccagg cagagctgga ggcagctctg aaggaatccc 6060
gctccttgag caccgagctc ttcaagctga aaaatgccta cgaagaagcc ttagatcaac 6120
ttgaaactgt gaagcgagaa aataagaact tggagcagga gatagcagat ctcacagaac 6180
aaattgctga gaacggtaaa accatccatg aactggagaa atcaagaaag cagatcgagc 6240
tggagaaggc tgatatccag ctggctcttg aggaagcaga ggccgccctt gagcacgaag 6300
aggccaagat cctccgaatc cagctggaac tgacccaggt gaaatcggaa atcgacagga 6360
agatggctga gaaagacgaa gagatcgagc agctcaagag gaactaccag agaaccgtgg 6420
agacgatgca gagcgccttg gacgccgagg tgcggagccg caacgaggcc atcaggatca 6480
agaagaagat ggagggggac ctgaacgaga tcgagatcca gctgagccac gccaaccgcc 6540
aggccgcgga gaccctcaaa cacctccggg gcgtccaagg acagctgaag gacacccagc 6600
tccacctgga cgacgctctc cgaggccagg aggacctgaa ggagcagctg gccatcgtgg 6660
agcgcagagc cagcctgctg caggccgagg tggaggagct gcgggcctcc ctggagcaga 6720
cggagagggc ccggaaactg gcagagcagg agctcctgga cgccaacgag agggtgcagc 6780
tgctccacac ccagaacacc agcctcatcc acaccaagaa gaagctggag acggacctga 6840
tgcagctcca gagcgaggtc gaggacgcca gcagggatgc gaggaacgcc gaggagaagg 6900
cgaagaaggc caccaccgac gcggccatga tggccgagga gctgaagaag gagcaggaca 6960
ccagcgccca cctggagcgg atgaagaaga acctggagca gacggtgaag gacctgcagc 7020
accgcctgga cgaggcggaa cagttggccc tgaagggcgg gaagaagcag atccagaagc 7080
tggaggccag aatccgagag ctggagtttg agcttgaggg ggagcagaag aagaacacgg 7140
agtctgtcaa gggcctcagg aaatacgagc ggcgggtcaa ggagttaact taccagagtg 7200
aagaggacag gaagaatgtg ctgagattac aggacctggt ggacaaactt caagcgaagg 7260
tcaagtccta caagaggcag gcggaggagg ctgatgaaca agccaatgct catctcacca 7320
agttccgaaa agctcagcat gagctcgagg aggctgaaga acgggctgat atcgccgaat 7380
ctcaggtcaa taagcttcgc gcaaagaccc gagacttcac ctccagccgg atggtggtcc 7440
atgagagcga agaggattac aaggatgacg acgataagtg agaattcact cctcaggtgc 7500
aggctgccta tcagaaggtg gtggctggtg tggccaatgc cctggctcac aaataccact 7560
gagatctttt tccctctgcc aaaaattatg gggacatcat gaagcccctt gagcatctga 7620
cttctggcta ataaaggaaa tttattttca ttgcaatagt gtgttggaat tttttgtgtc 7680
tctcactcgg aaggacatat gggagggcaa atcatttaaa acatcagaat gagtatttgg 7740
tttagagttt ggcaacatat gccatatgct ggctgccatg aacaaaggtg gctataaaga 7800
ggtcatcagt atatgaaaca gccccctgct gtccattcct tattccatag aaaagccttg 7860
acttgaggtt agattttttt tatattttgt tttgtgttat ttttttcttt aacatcccta 7920
aaattttcct tacatgtttt actagccaga tttttcctcc tctcctgact actcccagtc 7980
atagctgtcc ctcttctctt atgaagatcc ctcgacctgc agttggggtt gcgccttttc 8040
caaggcagcc ctgggtttgc gcagggacgc ggctgctctg ggcgtggttc cgggaaacgc 8100
agcggcgccg accctgggtc tcgcacattc ttcacgtccg ttcgcagcgt cacccggatc 8160
ttcgccgcta cccttgtggg ccccccggcg acgcttcctg ctccgcccct aagtcgggaa 8220
ggttccttgc ggttcgcggc gtgccggacg tgacaaacgg aagccgcacg tctcactagt 8280
accctcgcag acggacagcg ccagggagca atggcagcgc gccgaccgcg atgggctgtg 8340
gccaatagcg gctgctcagc agggcgcgcc gagagcagcg gccgggaagg ggcggtgcgg 8400
gaggcggggt gtggggcggt agtgtgggcc ctgttcctgc ccgcgcggtg ttccgcattc 8460
tgcaagcctc cggagcgcac gtcggcagtc ggctccctcg ttgaccgaat caccgacctc 8520
tctccccagg gggatccacc ggagcttacc atgaccgagt acaagcccac ggtgcgcctc 8580
gccacccgcg acgacgtccc cagggccgta cgcaccctcg ccgccgcgtt cgccgactac 8640
cccgccacgc gccacaccgt cgatccggac cgccacatcg agcgggtcac cgagctgcaa 8700
gaactcttcc tcacgcgcgt cgggctcgac atcggcaagg tgtgggtcgc ggacgacggc 8760
gccgcggtgg cggtctggac cacgccggag agcgtcgaag cgggggcggt gttcgccgag 8820
atcggcccgc gcatggccga gttgagcggt tcccggctgg ccgcgcagca acagatggaa 8880
ggcctcctgg cgccgcaccg gcccaaggag cccgcgtggt tcctggccac cgtcggcgtc 8940
tcgcccgacc accagggcaa gggtctgggc agcgccgtcg tgctccccgg agtggaggcg 9000
gccgagcgcg ccggggtgcc cgccttcctg gagacctccg cgccccgcaa cctccccttc 9060
tacgagcggc tcggcttcac cgtcaccgcc gacgtcgagg tgcccgaagg accgcgcacc 9120
tggtgcatga cccgcaagcc cggtgcctga cgcccgcccc acgacccgca gcgcccgacc 9180
gaaaggagcg cacgacccca tgcatcggta cctttaagac caatgactta caaggcagct 9240
gtagatctta gccacttttt aaaagaaaag gggggactgg aagggctaat tcactcccaa 9300
cgaagacaag atctgctttt tgcttgtact gggtctctct ggttagacca gatctgagcc 9360
tgggagctct ctggctaact agggaaccca ctgcttaagc ctcaataaag cttgccttga 9420
gtgcttcaag tagtgtgtgc ccgtctgttg tgtgactctg gtaactagag atccctcaga 9480
cccttttagt cagtgtggaa aatctctagc agtagtagtt catgtcatct tattattcag 9540
tatttataac ttgcaaagaa atgaatatca gagagtgaga ggaacttgtt tattgcagct 9600
tataatggtt acaaataaag caatagcatc acaaatttca caaataaagc atttttttca 9660
ctgcattcta gttgtggttt gtccaaactc atcaatgtat cttatcatgt ctgctgcagc 9720
ccaagcttgg cgtaatcatg gtcatagctg tttcctgtgt gaaattgtta tccgctcaca 9780
attccacaca acatacgagc cggaagcata aagtgtaaag cctggggtgc ctaatgagtg 9840
agctaactca cattaattgc gttgcgctca ctgcccgctt tccagtcggg aaacctgtcg 9900
tgccagcgga tccgcatctc aattagtcag caaccatagt cccgccccta actccgccca 9960
tcccgcccct aactccgccc agttccgccc attctccgcc ccatggctga ctaatttttt 10020
ttatttatgc agaggccgag gccgcctcgg cctctgagct attccagaag tagtgaggag 10080
gcttttttgg aggcctaggc ttttgcaaaa agctaacttg tttattgcag cttataatgg 10140
ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt cactgcattc 10200
tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttatcat gtctggatcc gctgcattaa 10260
tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg 10320
ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag 10380
gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa 10440
ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc 10500
cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca 10560
ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg 10620
accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct 10680
caatgctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt 10740
gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag 10800
tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc 10860
agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac 10920
actagaagga cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga 10980
gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc 11040
aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg 11100
gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca 11160
aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt 11220
atatatgagt aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca 11280
gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg 11340
atacgggagg gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca 11400
ccggctccag atttatcagc aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt 11460
cctgcaactt tatccgcctc catccagtct attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt 11520
agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca 11580
cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca 11640
tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga 11700
agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa ttctcttact 11760
gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa gtcattctga 11820
gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caatacggga taataccgcg 11880
ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc 11940
tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga 12000
tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat 12060
gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt 12120
caatattatt gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt 12180
atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctg 12238
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pMYH3 F-primer
<400> 3
aaaagctcag catgagctcg a 21
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pMYH3 R-primer
<400> 4
agggtcagga accatgaaaa t 21
<210> 5
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pMYH1 F-primer
<400> 5
gttctgaaga gggtggtac 19
<210> 6
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pMYH1 R-primer
<400> 6
agatgcggat gccctcca 18
<210> 7
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pMYH2 F-primer
<400> 7
gggctcaaac tggtgaagc 19
<210> 8
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pMYH2 R-primer
<400> 8
agatgcggat gccctcca 18
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pMYH13 F-primer
<400> 9
cacagggctc tggccgacat 20
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pMYH13 R-primer
<400> 10
cgtgcgcaca ggggtgtagt 20
<210> 11
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pADPRM F-primer
<400> 11
catcctgaga ccgtgccttc a 21
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pADPRM R-primer
<400> 12
ttccgcattt gggttgtgct 20
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pSCO1 F-primer
<400> 13
tcctcacgga ctcggggttt 20
<210> 14
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pSCO1 R-primer
<400> 14
gtggggtctc tgctgccctt 20
<210> 15
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pTMEM220 F-primer
<400> 15
cccagacgca gaactgtggg 20
<210> 16
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pTMEM220 R-primer
<400> 16
gttgtatgcc aagccggcag 20
<210> 17
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pENSSSCG00000029441 F-primer
<400> 17
tcgtgctgga gcaggaggag 20
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pENSSSCG00000029441 R-primer
<400> 18
aggtgtctgt ggccttgggg 20
<210> 19
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pENSSSCG00000018006 F-primer
<400> 19
agaaccagcc cttcgatgcc 20
<210> 20
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pENSSSCG00000018006 R-primer
<400> 20
tggcatacac atcctccggc 20
<210> 21
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGAPDH F-primer
<400> 21
gggcatgaac catgagaagt 20
<210> 22
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pGAPDH R-primer
<400> 22
gggcatgaac catgagaagt 20
<210> 23
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pMYH3 F-primer
<400> 23
ccgagagctg gagtttga 18
<210> 24
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> pMYH3 R-primer
<400> 24
ctcccatatg tccttccgag t 21
<210> 25
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Myh7 F-primer
<400> 25
agtcccaggt caacaagctg 20
<210> 26
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Myh7 R-primer
<400> 26
ttccacctaa agggctgttg 20
<210> 27
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Myh2 F-primer
<400> 27
agtcccaggt caacaagctg 20
<210> 28
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Myh2 R-primer
<400> 28
gcatgaccaa aggtttcaca 20
<210> 29
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Myh1 F-primer
<400> 29
agtcccaggt caacaagctg 20
<210> 30
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Myh1 R-primer
<400> 30
cacattttgc tcatctcttt g 21
<210> 31
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Myh4 F-primer
<400> 31
agtcccaggt caacaagctg 20
<210> 32
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Myh4 R-primer
<400> 32
tttctcctgt cacctctcaa ca 22
<210> 33
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Myoglobin F-primer
<400> 33
gcaaggccct ggagctcttc 20
<210> 34
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Myoglobin R-primer
<400> 34
gcttggtggg ctggacagtg 20
<210> 35
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Tnnt1 F-primer
<400> 35
cccccgaaga ttccagaagg 20
<210> 36
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Tnnt1 R-primer
<400> 36
tgcggtcttt tagtgcaatg ag 22
<210> 37
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Tnni1 F-primer
<400> 37
atgccggaag ttgagaggaa a 21
<210> 38
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Tnni1 R-primer
<400> 38
tccgagaggt aacgcacctt 20
<210> 39
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Tnnc1 F-primer
<400> 39
gcggtagaac agttgacaga g 21
<210> 40
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Tnnc1 R-primer
<400> 40
ccagctcctt ggtgctgat 19
<210> 41
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Aldoa F-primer
<400> 41
actctctgct gaccgggctc t 21
<210> 42
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Aldoa R-primer
<400> 42
aatgcttccg gtggactcat 20
<210> 43
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Pvalb F-primer
<400> 43
atcaagaagg cgataggagc c 21
<210> 44
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Pvalb R-primer
<400> 44
ggccagaagc gtctttgtt 19
<210> 45
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Tnnt3 F-primer
<400> 45
ggaacgccag aacagattgg 20
<210> 46
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Tnnt3 R-primer
<400> 46
tggaggacag agcctttttc tt 22
<210> 47
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Tnni2 F-primer
<400> 47
agagtgtgat gctccagata gc 22
<210> 48
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Tnni2 R-primer
<400> 48
agcaacgtcg atcttcgca 19
<210> 49
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Tnnc2 F-primer
<400> 49
atggcagcgg tactatcgac t 21
<210> 50
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Tnnc2 R-primer
<400> 50
ccttcgcatc ctctttcatc tg 22
<210> 51
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GAPDH F-primer
<400> 51
gaagggcatc ttgggctaca c 21
<210> 52
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GAPDH R-primer
<400> 52
gcagcgaact ttattgatgg tatt 24
<210> 53
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD36 F-primer
<400> 53
aatggcacag acgcagcct 19
<210> 54
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD36 R-primer
<400> 54
ggttgtctgg attctgga 18
<210> 55
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> LPL F-primer
<400> 55
gtacctgaag actcgctctc 20
<210> 56
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> LPL R-primer
<400> 56
agggtgaagg gaatgttctc 20
<210> 57
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Fabp4 F-primer
<400> 57
gatgcctttg tgggaacctg 20
<210> 58
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Fabp4 R-primer
<400> 58
tcctgtcgtc tgcggtgatt 20
<210> 59
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Fto F-primer
<400> 59
gtcagagaga aggccaatga 20
<210> 60
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Fto R-primer
<400> 60
tagcagtctc cctggtgaag 20
<210> 61
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Pgc1 alpha F-primer
<400> 61
ccctgccatt gttaagacc 19
<210> 62
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Pgc1 alpha R-primer
<400> 62
tgctgctgtt cctgttttc 19
<210> 63
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Adiponectin F-primer
<400> 63
aatggcacac caggccgtga t 21
<210> 64
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Adiponectin R-primer
<400> 64
tctccaggct ctcctttcct g 21
<210> 65
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MYH3 variation F-primer
<400> 65
tggtctttcc taattggtga cat 23
<210> 66
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> MYH3 variation R-primer
<400> 66
agttttgagc aaggcttttg tt 22
Claims (13)
- 서열번호 1로 표시되는 폴리뉴클레오티드에서 1524번째 내지 1527번째 염기를 포함하는 5 내지 300개의 연속적인 염기로 구성되는 폴리뉴클레오티드 또는 이에 상보적인 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 돼지육의 근내지방함량 또는 육색 판단용 유전자 마커 조성물.
- 삭제
- 제1항의 유전자 마커를 검출할 수 있는 제제를 포함하는, 돼지육의 근내지방함량 또는 육색 판단용 조성물.
- 제3항에 있어서, 상기 제제는 상기 유전자 마커에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브인 것인, 조성물.
- 제4항에 있어서, 상기 프라이머는 서열번호 65 및 66으로 표시되는 염기서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드인 것인, 조성물.
- 제3항의 조성물을 포함하는, 돼지육의 근내지방함량 또는 육색 판단용 키트.
- 제6항에 있어서, 상기 키트는 RT-PCR 키트 또는 DNA 칩 키트인 것인, 키트.
- 제1항의 유전자 마커를 포함하는, 돼지육의 근내지방함량 또는 육색 판단용 마이크로어레이.
- (a) 개체로부터 분리된 시료의 DNA로부터 제1항의 유전자 마커를 증폭시키는 단계; 및
(b) 상기 (a) 단계의 증폭 산물의 염기를 결정하는 단계를 포함하는, 돼지육의 근내지방함량 또는 육색을 판단하는 방법.
- 제9항에 있어서, 상기 증폭 산물에 ACGT의 연속된 염기가 포함된 경우, 돼지의 육질 형질은 외래돼지의 것보다 우수한 것으로 판단하는 (c) 단계를 추가로 포함하는 것인, 방법.
- 제1항의 유전자 마커를 검출할 수 있는 제제를 포함하는, 한국 토종돼지 판별용 조성물.
- (a) 개체로부터 분리된 시료의 DNA로부터 제1항의 유전자 마커를 증폭시키는 단계; 및
(b) 상기 (a) 단계의 증폭 산물의 염기를 결정하는 단계를 포함하는, 한국 토종돼지의 판별 방법.
- 제12항에 있어서, 상기 증폭 산물에 ACGT의 연속된 염기가 포함된 경우, 한국 토종돼지인 것으로 판단하는 (c) 단계를 추가로 포함하는 것인, 방법.
Priority Applications (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020160152247A KR101941893B1 (ko) | 2016-11-15 | 2016-11-15 | 돼지의 육질 형질 판단용 유전자 마커 및 이의 이용 |
US15/804,009 US10774381B2 (en) | 2016-11-15 | 2017-11-06 | Genetic marker for determining meat quality traits of pigs and use thereof |
JP2017214510A JP6483220B2 (ja) | 2016-11-15 | 2017-11-07 | 豚の肉質形質判断用遺伝子マーカー及びその利用 |
EP17200547.2A EP3321379B1 (en) | 2016-11-15 | 2017-11-08 | Genetic marker for determining meat quality traits of pigs and use thereof |
CA2984938A CA2984938C (en) | 2016-11-15 | 2017-11-08 | Genetic marker for determining meat quality traits of pigs and use thereof |
DK17200547.2T DK3321379T3 (da) | 2016-11-15 | 2017-11-08 | Genetisk markør til bestemmelse af kødkvalitetstræk hos svin og anvendelse deraf |
CN201711106017.5A CN108070662B (zh) | 2016-11-15 | 2017-11-10 | 用于确定猪肉品质性状的遗传标记及其用途 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020160152247A KR101941893B1 (ko) | 2016-11-15 | 2016-11-15 | 돼지의 육질 형질 판단용 유전자 마커 및 이의 이용 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20180054369A KR20180054369A (ko) | 2018-05-24 |
KR101941893B1 true KR101941893B1 (ko) | 2019-01-25 |
Family
ID=60269760
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020160152247A KR101941893B1 (ko) | 2016-11-15 | 2016-11-15 | 돼지의 육질 형질 판단용 유전자 마커 및 이의 이용 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10774381B2 (ko) |
EP (1) | EP3321379B1 (ko) |
JP (1) | JP6483220B2 (ko) |
KR (1) | KR101941893B1 (ko) |
CN (1) | CN108070662B (ko) |
CA (1) | CA2984938C (ko) |
DK (1) | DK3321379T3 (ko) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20230173333A (ko) | 2022-06-17 | 2023-12-27 | 대한민국(농촌진흥청장) | 돈육의 육질 판별용 조성물 및 이를 이용한 돈육의 육질 판별 방법 |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101941893B1 (ko) | 2016-11-15 | 2019-01-25 | 대한민국(농촌진흥청장) | 돼지의 육질 형질 판단용 유전자 마커 및 이의 이용 |
KR102081569B1 (ko) * | 2018-12-11 | 2020-02-26 | 대한민국 | 돼지 등지방 두께 예측용 snp 마커 조성물 |
CN110117665B (zh) * | 2019-05-15 | 2020-10-16 | 华南农业大学 | 位于猪16号染色体上与猪瘦肉率和眼肌面积相关的snp分子标记及应用 |
CN110079614B (zh) * | 2019-05-23 | 2021-03-16 | 华中农业大学 | 一种与猪肌纤维面积和肌内脂肪含量相关的分子标记、检测方法及其应用 |
CN110358840B (zh) * | 2019-06-06 | 2023-04-25 | 佛山科学技术学院 | 与剩余采食量相关的tpp2基因的snp分子遗传标记 |
CN110734983B (zh) * | 2019-10-08 | 2022-05-20 | 南京农业大学 | 一种与苏淮猪肌内脂肪性状相关的snp标记及检测方法和应用 |
CN110982908B (zh) * | 2019-12-18 | 2023-03-24 | 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所 | 一种瘦肉型定远猪品系脂肪沉积及肉质性状分子标记方法 |
KR102336624B1 (ko) * | 2020-06-18 | 2021-12-09 | 대한민국(농촌진흥청장) | 돈육의 콜라겐 함량 예측용 마커 및 이의용도 |
KR102387431B1 (ko) * | 2020-06-18 | 2022-04-15 | 대한민국 | 돈육의 단백질 함량 예측용 마커 및 이의 용도 |
CN111705145B (zh) * | 2020-07-30 | 2021-07-13 | 江西农业大学 | 一种影响猪个体中鸟嘌呤含量的snp标记 |
CN112111580B (zh) * | 2020-09-08 | 2022-07-01 | 中国肉类食品综合研究中心 | 青峪猪源性成分的鉴别方法 |
CN117500943A (zh) * | 2022-04-22 | 2024-02-02 | 中国农业大学 | 一种用于北京黑猪基因分型的snp分子标记组合、芯片及其制备方法与应用 |
CN115091035B (zh) * | 2022-06-30 | 2023-06-16 | 中南大学 | 一种电芯极片生产切割控制*** |
CN116138215B (zh) * | 2023-04-23 | 2023-07-04 | 成都铁骑力士饲料有限公司 | 一种大体重低背膘厚的川藏黑猪商品猪生产方法 |
Family Cites Families (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1164754C (zh) * | 2001-01-18 | 2004-09-01 | 上海复旦悦达生物技术有限公司 | 一种新型dna疫苗载体 |
KR100532592B1 (ko) | 2002-10-30 | 2005-12-05 | 진주산업대학교 산학협력단 | 일당증체량, 등지방두께, 등심단면적이 우수한 돼지 조기선발 분석 기법 |
CN1777683A (zh) * | 2003-03-11 | 2006-05-24 | 衣阿华州立大学研究基金公司 | 在动物中鉴别遗传性状的方法 |
EP1627080A2 (en) * | 2003-05-23 | 2006-02-22 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Fine mapping of chromosome 17 quantitative trait loci and use of same for marker assisted selection |
KR100784166B1 (ko) | 2006-05-23 | 2007-12-10 | 고려대학교 산학협력단 | 돼지 근세포수 증가 확인용 dna 표지인자 |
JP4776037B2 (ja) * | 2008-03-12 | 2011-09-21 | 独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 遺伝情報によりブタ筋肉中脂肪蓄積能力を評価する方法 |
CN101880663B (zh) * | 2010-07-05 | 2012-05-30 | 华中农业大学 | 与猪生产性状相关的分子标记及制备与应用 |
KR101432164B1 (ko) * | 2012-12-31 | 2014-08-22 | 대한민국(농촌진흥청장) | 돼지의 육질형질 판단용 일배체형 마커 및 이의 용도 |
KR101418402B1 (ko) * | 2012-12-31 | 2014-07-11 | 경상대학교산학협력단 | 돼지의 등심단면적 수준 판단용 snp 마커 및 이의 용도 |
CN104131069A (zh) * | 2014-03-16 | 2014-11-05 | 贵州大学 | 利用基因表达谱筛选动物不同组织差异基因的方法 |
JP6424027B2 (ja) * | 2014-07-02 | 2018-11-14 | 公益社団法人農林水産・食品産業技術振興協会 | 形質との関連解析により開発した、豚の6形質に関連するdnaマーカーとその判別系 |
CN105112425A (zh) * | 2015-10-16 | 2015-12-02 | 湖南农业大学 | 猪肉质性状相关基因Myo6的分子克隆及应用 |
CN105838795B (zh) * | 2016-04-27 | 2019-08-06 | 华中农业大学 | 猪背膘厚与肌内脂肪性状相关基因svep1的分子标记及其应用 |
KR101770075B1 (ko) * | 2016-09-26 | 2017-08-22 | 순천대학교 산학협력단 | 돼지 생산 및 이력 추적 시스템의 도입을 위한 단일염기다형성 마커 선정방법 |
KR101941893B1 (ko) | 2016-11-15 | 2019-01-25 | 대한민국(농촌진흥청장) | 돼지의 육질 형질 판단용 유전자 마커 및 이의 이용 |
-
2016
- 2016-11-15 KR KR1020160152247A patent/KR101941893B1/ko active IP Right Grant
-
2017
- 2017-11-06 US US15/804,009 patent/US10774381B2/en active Active
- 2017-11-07 JP JP2017214510A patent/JP6483220B2/ja active Active
- 2017-11-08 DK DK17200547.2T patent/DK3321379T3/da active
- 2017-11-08 EP EP17200547.2A patent/EP3321379B1/en active Active
- 2017-11-08 CA CA2984938A patent/CA2984938C/en active Active
- 2017-11-10 CN CN201711106017.5A patent/CN108070662B/zh active Active
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
WEIZHEN LUO ET AL. INT. J. BIOL. SCI. 2012, VOL. 8, NO. 4, PP.850_595 |
XIANXIAN LIU ET AL. LIU ET AL. GENETICS SELECTION EVOLUTION (2015) VOL. 47, NO. 44, 11 PAGES |
홍기창 등. 농림축산식품부 과제보고서, 발간등록번호: 11_1543000_001240_01 |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20230173333A (ko) | 2022-06-17 | 2023-12-27 | 대한민국(농촌진흥청장) | 돈육의 육질 판별용 조성물 및 이를 이용한 돈육의 육질 판별 방법 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP6483220B2 (ja) | 2019-03-13 |
US20180135123A1 (en) | 2018-05-17 |
KR20180054369A (ko) | 2018-05-24 |
EP3321379A1 (en) | 2018-05-16 |
US10774381B2 (en) | 2020-09-15 |
CN108070662A (zh) | 2018-05-25 |
DK3321379T3 (da) | 2020-11-23 |
CA2984938C (en) | 2021-03-23 |
CA2984938A1 (en) | 2018-05-15 |
CN108070662B (zh) | 2022-02-25 |
JP2018078889A (ja) | 2018-05-24 |
EP3321379B1 (en) | 2020-09-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR101941893B1 (ko) | 돼지의 육질 형질 판단용 유전자 마커 및 이의 이용 | |
AU2021202227B2 (en) | Anti-human papillomavirus 16 E7 T cell receptors | |
AU2022201319B2 (en) | Viral vectors encoding recombinant fviii variants with increased expression for gene therapy of hemophilia a | |
AU2014211454B2 (en) | High avidity binding molecules recognizing MAGE-A1 | |
CN107106689A (zh) | 用于治疗帕金森病的aadc多核苷酸 | |
KR20090031897A (ko) | 전-세포 표면 수용체-특이적 치료제 | |
KR102404550B1 (ko) | A형 혈우병의 유전자 요법을 위한 증가된 발현을 갖는 재조합 fviii 변이체를 인코딩하는 바이러스 벡터 | |
JP2024012440A (ja) | 蝸牛および前庭細胞に核酸を送達するための組成物および方法 | |
KR20220139924A (ko) | 큰 유전자 벡터 및 그의 전달 및 용도 | |
CN112481271B (zh) | 一种调控脂肪细胞形成的转录因子c/ebpz及其应用 | |
US20030050264A1 (en) | Methods and compositions for modulating telomerase reverse transcriptase (TERT) expression | |
CN114540424A (zh) | Igfbp7肌肉组织特异性敲除小鼠动物模型及其构建方法 | |
KR101876488B1 (ko) | Myh3 유전자를 포함하는 형질전환체 및 이의 이용 | |
CN113943737A (zh) | 一种鸡ctgf基因在抑制鸡前脂肪细胞分化的应用 | |
Moffat et al. | Structure and expression of the mouse growth hormone receptor/growth hormone binding protein gene | |
KR20210034013A (ko) | 발현이 증가된 재조합 fviii 변이체들을 인코딩하는 바이러스 벡터를 이용한 혈우병의 유전적 치료법 | |
KR101903728B1 (ko) | Myh3 유전자를 포함하는 재조합 벡터 및 이의 이용 | |
CN110564766A (zh) | 一种全基因组表达载体pBR322-DHN3的制备方法 | |
KR101748823B1 (ko) | 마이오스타틴 유전자를 표적으로 하는 talen 및 이를 이용한 마이오스타틴 유전자가 녹아웃된 동물을 제조하는 방법 | |
CN112626119A (zh) | 一种人源cyp2d6*10转基因小鼠模型的构建方法 | |
KR20220140620A (ko) | 강화된 발현 시스템 및 그 사용방법 | |
CN117858895A (zh) | 使用表达增强的编码重组fviii变体的病毒载体的血友病a基因疗法 | |
CN114981299A (zh) | 使用编码具有增加的表达的重组fviii变体的病毒载体的a型血友病的基因疗法 | |
CA2377438A1 (en) | Gene encoding promoter domain of tumor suppressor gene p51 and use thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A201 | Request for examination | ||
E902 | Notification of reason for refusal | ||
E701 | Decision to grant or registration of patent right |