KR101939269B1 - Polynucleotide and use thereof - Google Patents

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Abstract

표적 핵산에 상보적이고 역배열(reverse configuration)인 2 이상의 상보영역을 포함하는 폴리뉴클레오티드에 대하여 상보적인 폴리뉴클레오티드 및 그의 용도를 제공한다. 이에 의하면, 표적 핵산의 3' 말단에 결합하는 영역을 줄이고, 표적 핵산을 효율적이고 특이도가 우수하게 증폭하는데 사용될 수 있다.Polynucleotides complementary to polynucleotides comprising two or more complementary regions complementary to the target nucleic acid and reverse configuration and uses thereof. This can be used to reduce the region bound to the 3 'end of the target nucleic acid and to amplify the target nucleic acid efficiently and with excellent specificity.

Description

폴리뉴클레오티드 및 그의 용도{Polynucleotide and use thereof}Polynucleotides and uses thereof < RTI ID = 0.0 > (Polynucleotide and use thereof)

표적 핵산에 상보적이고 역배열(reverse configuration)인 2 이상의 상보영역을 포함하는 폴리뉴클레오티드에 대하여 상보적인 폴리뉴클레오티드 및 그의 용도에 관한 것이다.To a polynucleotide complementary to a polynucleotide comprising two or more complementary regions complementary to the target nucleic acid and in reverse configuration, and uses thereof.

핵산의 증폭은 핵산 폴리머라제의 존재하에서 프라이머의 3'-말단으로부터 뉴클레오티드 서열을 연장하는 것을 포함한다. 상기 프라이머는 표적 핵산과 상보적인 서열을 포함한다. 서열의 연장을 위하여, 프라이머가 표적 핵산과 특이적으로 안정적으로 혼성화될 것을 필요로 한다. 핵산 혼성화 산물의 안정성은 상보적 서열의 길이에 비례하는 것으로 알려져 있다. 반면, 프라이머의 길이가 길어지면, 증폭되는 표적 핵산의 길이 짧아진다.Amplification of the nucleic acid comprises extending the nucleotide sequence from the 3'-end of the primer in the presence of the nucleic acid polymerase. The primers include sequences complementary to the target nucleic acid. For extension of the sequence, the primer needs to be stably hybridized specifically with the target nucleic acid. The stability of the nucleic acid hybridization product is known to be proportional to the length of the complementary sequence. On the other hand, as the length of the primer becomes longer, the length of the amplified target nucleic acid becomes shorter.

종래 기술에 의하더라도, 표적 핵산에 대하여 특이적으로 안정적으로 결합하면서도 증폭되는 표적 핵산의 길이를 증가시킬 수 있는 폴리뉴클레오티드가 요구되고 있다.Even in the prior art, there is a demand for a polynucleotide capable of increasing the length of a target nucleic acid that is specifically and stably bound to a target nucleic acid while being amplified.

표적 핵산을 효율적으로 증폭하기 위한 폴리뉴클레오티드를 제공한다.Thereby providing a polynucleotide for efficiently amplifying the target nucleic acid.

표적 핵산을 효율적으로 증폭하기 위한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 조성물을 제공한다.There is provided a composition comprising a polynucleotide for efficiently amplifying a target nucleic acid.

표적 핵산을 효율적으로 증폭하기 위한 폴리뉴클레오티드를 포함하는 키트를 제공한다.There is provided a kit comprising a polynucleotide for efficiently amplifying a target nucleic acid.

표적 핵산에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 효율적으로 생산하는 방법을 제공한다.The present invention provides a method for efficiently producing a nucleotide sequence complementary to a target nucleic acid.

제2 폴리뉴클레오티드에 상보적인 제1 상보영역을 포함하는 제1 폴리뉴클레오티드로서, 제2 폴리뉴클레오티드는 3'-말단으로부터 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 제2 상보영역 및 제2 상보영역의 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 하나 이상의 제3 상보영역을 포함하고 제2 상보영역은 표적 핵산의 뉴클레오티드 순서를 기준으로 제3 상보영역의 3' 방향 쪽에 혼성화하는 것이고, 제1 폴리뉴클레오티드의 제1 상보영역은 제2 폴리뉴클레오티드의 제2 상보영역의 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드와 상보적인 것인 제1 폴리뉴클레오티드가 제공된다.A first polynucleotide comprising a first complementary region complementary to a second polynucleotide, wherein the second polynucleotide comprises a second complementary region in which at least one consecutive nucleotide from the 3'-terminus is complementary to the target nucleic acid, One or more consecutive nucleotides in the 5 'direction comprise at least one third complementary region complementary to the target nucleic acid, and the second complementary region hybridizes to the 3' direction of the third complementary region based on the nucleotide sequence of the target nucleic acid, 1 < / RTI > polynucleotide is complementary to at least one contiguous nucleotide in the 5 'direction of the second complementary region of the second polynucleotide.

제1 폴리뉴클레오티드는 제2 폴리뉴클레오티드에 상보적인 제1 상보영역을 포함하는 제1 폴리뉴클레오티드일 수 있다. 또한, 제1 폴리뉴클레오티드의 제1 상보영역은 제2 폴리뉴클레오티드의 제2 상보영역의 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드와 상보적인 것일 수 있다.The first polynucleotide may be a first polynucleotide comprising a first complementary region complementary to the second polynucleotide. Also, the first complementary region of the first polynucleotide may be complementary to one or more contiguous nucleotides in the 5 'direction of the second complementary region of the second polynucleotide.

제1 폴리뉴클레오티드에 있어서, 제1 상보영역은 제2 폴리뉴클레오티드에 상보적이고, 제2 폴리뉴클레오티드의 제2 상보영역의 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드와 상보적인 것일 수 있다. 또한, 제1 상보영역은 제2 폴리뉴클레오티드의 제2 상보영역으로부터 0 내지 20 뉴클레오티드(nucleotide; nt)에 의하여 이격된 위치로부터 시작하는 하나 이상의 연속 뉴클레오티드와 상보적인 것일 수 있다. 예를 들면, 제1 상보영역은 제2 폴리뉴클레오티드의 제2 상보영역으로부터 0 nt, 1 nt, 2 nt, 3 nt, 4 nt, 5 nt, 6 nt, 7 nt, 8 nt, 9 nt, 10 nt, 11 내지 15 nt, 또는 11 내지 20 nt에 의하여 이격된 위치로부터 시작하는 하나 이상의 연속 뉴클레오티드와 상보적인 것일 수 있다.For the first polynucleotide, the first complementary region may be complementary to the second polynucleotide and complementary to one or more contiguous nucleotides in the 5 'direction of the second complementary region of the second polynucleotide. Also, the first complementary region may be complementary to one or more contiguous nucleotides starting from a position spaced from 0 to 20 nucleotides (nt) from the second complementary region of the second polynucleotide. 1 nt, 2 nt, 3 nt, 4 nt, 5 nt, 6 nt, 7 nt, 8 nt, 9 nt, 10 nt from the second complementary region of the second polynucleotide, nt, 11 to 15 nt, or 11 to 20 nt, respectively.

제1 폴리뉴클레오티드는 길이가 2 내지 100 nt인 것일 수 있다. 예를 들면, 제1 폴리뉴클레오티드는 길이가 2 내지 80 nt, 2 내지 60 nt, 2 내지 40 nt, 2 내지 20 nt, 4 내지 18 nt, 6 내지 16 nt, 또는 8 내지 14 nt인 것일 수 있다.The first polynucleotide may be 2-100 nt in length. For example, the first polynucleotide may be 2 to 80 nt in length, 2 to 60 nt, 2 to 40 nt, 2 to 20 nt, 4 to 18 nt, 6 to 16 nt, or 8 to 14 nt .

제1 폴리뉴클레오티드는 DNA, RNA, 펩티드 핵산(Peptide Nucleic Acid; PNA), 잠금 핵산(Locked Nucleic Acid; LNA), 뉴클레오티드 유사체 또는 이들의 조합을 포함하는 것일 수 있다. 또한, 제1 폴리뉴클레오티드의 제1 상보영역은 A, RNA, 펩티드 핵산(Peptide Nucleic Acid; PNA), 잠금 핵산(Locked Nucleic Acid; LNA), 뉴클레오티드 유사체 또는 이들의 조합을 포함하는 것일 수 있다. 또한, 제1 폴리뉴클레오티드는 단일가닥인 것일 수 있다.The first polynucleotide may be one comprising DNA, RNA, a peptide nucleic acid (PNA), a Locked Nucleic Acid (LNA), a nucleotide analog, or a combination thereof. The first complementary region of the first polynucleotide may also comprise A, RNA, a peptide nucleic acid (PNA), a Locked Nucleic Acid (LNA), a nucleotide analog, or a combination thereof. In addition, the first polynucleotide may be a single strand.

제1 폴리뉴클레오티드의 3' 말단은 변형된 것일 수 있다. 제1 폴리뉴클레오티드의 3' 말단은 예를 들면, 역 뉴클레오티드(inverted nucleotide), 디데옥시뉴클레오티드, 아민기, 알킬 사슬 모이어티 또는 이들의 조합을 포함하는 것일 수 있다. 제1 폴리뉴클레오티드의 변형된 3' 말단은 표적 핵산이 프라이머로 작용하는 것을 제한할 수 있다.The 3 ' end of the first polynucleotide may be modified. The 3 'end of the first polynucleotide may be, for example, comprising an inverted nucleotide, a dideoxynucleotide, an amine group, an alkyl chain moiety, or a combination thereof. The modified 3 ' end of the first polynucleotide may restrict the target nucleic acid from acting as a primer.

제2 폴리뉴틀레오티드는 3'-말단으로부터 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 제2 상보영역 및 제2 상보영역의 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 하나 이상의 제3 상보영역을 포함하는 것일 수 있다.The second polynucleotide comprises a second complementary region in which at least one consecutive nucleotide from the 3'-terminus is complementary to the target nucleic acid, and at least one third nucleotide complementary to the target nucleic acid in the 5 'direction of the second complementary region, And may include a complementary region.

제2 폴리뉴클레오티드에 있어서, 제2 상보영역은 2 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 것일 수 있다. 예를 들면, 2 내지 50 nt, 2 내지 40 nt, 2 내지 30 nt, 2 내지 20 nt, 2 내지 10 nt, 3 내지 50 nt, 4 내지 40 nt, 3 내지 30 nt, 3 내지 20 nt, 3 내지 10 nt, 또는 3 내지 16 nt의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 것일 수 있다. 또한, 제2 상보영역은 표적 핵산의 3'-말단으로부터 3'-말단 뉴클레오티드를 포함한 하나 이상의 연속 뉴클레오티드와 상보적인 것일 수 있다. 예를 들면, 표적 핵산의 3'-말단으로부터 3'-말단 뉴클레오티드를 포함한 2 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 것일 수 있다. 예를 들면, 2 내지 50 nt, 2 내지 40 nt, 2 내지 30 nt, 2 내지 20 nt, 2 내지 10 nt, 3 내지 50 nt, 4 내지 40 nt, 3 내지 30 nt, 3 내지 20 nt, 3 내지 10 nt, 또는 3 내지 16 nt의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 것일 수 있다.In the second polynucleotide, the second complementary region may be such that two or more consecutive nucleotides are complementary to the target nucleic acid. 3 nt, 3 nt, 3 nt, 3 nt, 3 nt, 3 nt, 3 nt, 3 nt, To 10 nt, or 3 to 16 nt of consecutive nucleotides may be complementary to the target nucleic acid. In addition, the second complementary region may be complementary to one or more contiguous nucleotides comprising a 3'-terminal nucleotide from the 3'-end of the target nucleic acid. For example, two or more consecutive nucleotides containing 3'-terminal nucleotides from the 3'-end of the target nucleic acid may be complementary to the target nucleic acid. 3 nt, 3 nt, 3 nt, 3 nt, 3 nt, 3 nt, 3 nt, 3 nt, To 10 nt, or 3 to 16 nt of consecutive nucleotides may be complementary to the target nucleic acid.

제2 폴리뉴클레오티드에 있어서, 제3 상보영역은 1 내지 3 nt일 수 있다. 예를 들면, 1, 2, 또는 3 nt일 수 있다. 또한, 제3 상보영역은 5' 말단으로부터 5' 말단 뉴클레오티드를 포함한 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 것일 수 있다. 예를 들면, 1 내지 50 nt, 예를 들면, 1 내지 40 nt, 1 내지 30 nt, 1 내지 20 nt, 1 내지 10 nt, 2 내지 40 nt, 2 내지 30 nt, 2 내지 20 nt, 2 내지 10 nt, 3 내지 40 nt, 3 내지 30 nt, 3 내지 20 nt, 또는 3 내지 10 nt일 수 있다. 제3 상보영역은 3 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 것일 수 있다. 예를 들면, 3 내지 50 nt, 3 내지 40 nt, 3 내지 30 nt, 3 내지 20 nt, 3 내지 10 nt, 또는 4 내지 16 nt의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 것일 수 있다. 또한, 제3 상보영역은 표적 핵산의 5'-말단으로부터 하나 이상의 연속 뉴클레오티드와 상보적인 것일 수 있다. 예를 들면, 제3 상보영역은 표적 핵산의 5'-말단으로부터 5'-말단 뉴클레오티드를 포함한 하나 이상의 연속 뉴클레오티드와 상보적인 것일 수 있다. 이 경우, 제3 상보영역은 2 이상의 연속 뉴클레오티드와 상보적인 것일 수 있다. 예를 들면, 2 내지 50 nt, 2 내지 40 nt, 2 내지 30 nt, 2 내지 20 nt, 2 내지 10 nt, 3 내지 50 nt, 4 내지 40 nt, 3 내지 30 nt, 3 내지 20 nt, 3 내지 10 nt, 또는 3 내지 16 nt의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 것일 수 있다.For the second polynucleotide, the third complementary region may be between 1 and 3 nt. For example, it may be 1, 2, or 3 nt. Also, the third complementarity region may be one in which at least one consecutive nucleotide containing the 5 'terminal nucleotide from the 5' terminus is complementary to the target nucleic acid. For example, 1 to 50 nt, such as 1 to 40 nt, 1 to 30 nt, 1 to 20 nt, 1 to 10 nt, 2 to 40 nt, 2 to 30 nt, 2 to 20 nt, 10 nt, 3 to 40 nt, 3 to 30 nt, 3 to 20 nt, or 3 to 10 nt. The third complementarity region may consist of three or more consecutive nucleotides complementary to the target nucleic acid. For example, consecutive nucleotides of 3 to 50 nt, 3 to 40 nt, 3 to 30 nt, 3 to 20 nt, 3 to 10 nt, or 4 to 16 nt may be complementary to the target nucleic acid. Also, the third complementary region may be complementary to one or more contiguous nucleotides from the 5'-end of the target nucleic acid. For example, the third complementarity region may be complementary to one or more contiguous nucleotides comprising the 5'-terminal to the 5'-terminal nucleotide of the target nucleic acid. In this case, the third complementary region may be complementary to two or more consecutive nucleotides. 3 nt, 3 nt, 3 nt, 3 nt, 3 nt, 3 nt, 3 nt, 3 nt, To 10 nt, or 3 to 16 nt of consecutive nucleotides may be complementary to the target nucleic acid.

제2 폴리뉴클레오티드에 있어서, 제2 상보영역과 제3 상보영역은 하나 이상의 뉴클레오티드에 의하여 이격되어 있는 것일 수 있다. 제2 상보영역과 제3 상보영역은 링커에 의하여 이격되어 있는 것일 수 있다. 상기 링커는 핵산, 핵산 변형체, 단백질, 당, 또는 지질 분자를 포함하는 것일 수 있다. 상기 핵산 변형체는 PNA, 또는 LNA를 포함하는 것일 수 있다. 예를 들면, 상기 링커는 0 내지 50 nt를 포함하는 핵산을 포함하는 것일 수 있다. 상기 링커의 길이는 예를 들면, 2 내지 50 nt, 2 내지 40 nt, 2 내지 30 nt, 2 내지 20 nt, 2 내지 10 nt, 3 내지 50 nt, 4 내지 40 nt, 3 내지 30 nt, 3 내지 20 nt, 3 내지 10 nt, 또는 4 내지 10 nt일 수 있다. 이 경우, 상기 링커는 프라이머 결합 부위, 제한효소 인식부위, 또는 프로브 결합 부위를 포함하는 것일 수 있다.In the second polynucleotide, the second complementary region and the third complementary region may be separated by one or more nucleotides. The second complementary region and the third complementary region may be spaced apart by the linker. The linker may be a nucleic acid, a nucleic acid variant, a protein, a sugar, or a lipid molecule. The nucleic acid variant may be one comprising PNA, or LNA. For example, the linker may comprise a nucleic acid comprising 0 to 50 nt. The length of the linker may be, for example, 2 to 50 nt, 2 to 40 nt, 2 to 30 nt, 2 to 20 nt, 2 to 10 nt, 3 to 50 nt, 4 to 40 nt, To 20 nt, from 3 to 10 nt, or from 4 to 10 nt. In this case, the linker may include a primer binding site, a restriction enzyme recognition site, or a probe binding site.

제2 폴리뉴클레오티드는 DNA, RNA, 펩티드 핵산(Peptide Nucleic Acid; PNA), 잠금 핵산(Locked Nucleic Acid; LNA), 뉴클레오티드 유사체 또는 이들의 조합을 포함하는 것일 수 있다. 또한, 제2 폴리뉴클레오티드의 제2 상보영역 또는 제3 상보영역은 A, RNA, 펩티드 핵산(Peptide Nucleic Acid; PNA), 잠금 핵산(Locked Nucleic Acid; LNA), 뉴클레오티드 유사체 또는 이들의 조합을 포함하는 것일 수 있다. 상기 제2 폴리뉴클레오티드는 단일가닥인 것일 수 있다. 제2 폴리뉴클레오티드는 길이가 7 내지 200 nt, 7 내지 180 nt, 7 내지 150 nt,7 내지 130 nt,7 내지 100 nt, 7 내지 80 nt, 7 내지 50 nt, 7 내지 30 nt, 7 내지 20 nt, 7 내지 15 nt, 또는 10 내지 40 nt인 것일 수 있다.The second polynucleotide may be one comprising DNA, RNA, Peptide Nucleic Acid (PNA), Locked Nucleic Acid (LNA), a nucleotide analog or a combination thereof. In addition, the second or third complementary region of the second polynucleotide may comprise a nucleic acid sequence selected from the group consisting of A, RNA, a Peptide Nucleic Acid (PNA), a Locked Nucleic Acid (LNA), a nucleotide analog, Lt; / RTI > The second polynucleotide may be a single strand. The second polynucleotide may have a length of 7 to 200 nt, 7 to 180 nt, 7 to 150 nt, 7 to 130 nt, 7 to 100 nt, 7 to 80 nt, 7 to 50 nt, 7 to 30 nt, nt, 7 to 15 nt, or 10 to 40 nt.

표적 핵산은 DNA, RNA 또는 DNA와 RNA의 키메라일 수 있다. 상기 표적 핵산은 단일 가닥 또는 이중 가닥인 것일 수 있다. 표적 핵산은 길이가 20 내지 200 nt, 20 내지 180 nt, 20 내지 150 nt, 20 내지 130 nt, 20 내지 100 nt, 20 내지 80 nt, 20 내지 50 nt, 20 내지 30 nt, 또는 20 내지 40 nt인 것일 수 있다. 표적 핵산은 짧은 RNA(small RNA)일 수 있다. 짧은 RNA는 예를 들면, 마이크로RNA(microRNA; miRNA), 짧은 간섭 RNA(small interfering RNA; siRNA) 또는 tRNA인 것일 수 있다. 또한, 표적 핵산은 200 뉴클레오티드 이상의 뉴클레오티드를 갖는 RNA로서, 연속적인 30 뉴클레오티드 서열의 GC 함유량이 30% 미만이거나 80% 이상인 영역이 존재하는 RNA, 분자 내에서 서로 상보적인 염기서열이 5 뉴클레오티드 이상 연속적으로 존재하여 분자내 2차 구조 (secondary structure)를 형성할 수 있는 RNA, 동일한 뉴클레오티드가 연속적으로 5개 이상 존재하는 RNA 또는 이들의 조합을 포함하는 것일 수 있다.The target nucleic acid can be DNA, RNA or a chimera of DNA and RNA. The target nucleic acid may be single-stranded or double-stranded. The target nucleic acid can be a nucleic acid having a length of 20 to 200 nt, 20 to 180 nt, 20 to 150 nt, 20 to 130 nt, 20 to 100 nt, 20 to 80 nt, 20 to 50 nt, 20 to 30 nt, Lt; / RTI > The target nucleic acid may be short RNA (small RNA). The short RNA may be, for example, microRNA (miRNA), small interfering RNA (siRNA) or tRNA. In addition, the target nucleic acid is RNA having a nucleotide of 200 nucleotides or more, wherein RNA having a GC content of less than 30% or more than 80% of a consecutive 30 nucleotide sequence is present, a nucleotide sequence complementary to each other in the molecule is not less than 5 nucleotides continuously An RNA capable of forming a secondary structure in a molecule, an RNA having five or more consecutive nucleotides in the same, or a combination thereof.

제2 폴리뉴클레오티드는 주형 의존적 핵산 합성에서 프라이머로서 작용할 수 있다. 따라서, 제2 폴리뉴클레오티드는 프라이머로 사용되는 것일 수 있다. 제2 폴리뉴클레오티드는 시료 중의 표적 핵산의 존재를 확인하기 위한 프로브로서 사용될 수 있다. 제1 폴리뉴클레오티드는 주형 의존적 핵산 합성에서 역전사 효율 및 특이도를 향상시키기 위한 클램프로 사용되는 것일 수 있다.
The second polynucleotide can act as a primer in template-dependent nucleic acid synthesis. Thus, the second polynucleotide may be used as a primer. The second polynucleotide can be used as a probe for confirming the presence of the target nucleic acid in the sample. The first polynucleotide may be used as a clamp to improve reverse transcription efficiency and specificity in template-dependent nucleic acid synthesis.

제2 폴리뉴클레오티드에 상보적인 제1 상보영역을 포함하는 제1 폴리뉴클레오티드; 3'-말단으로부터 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 제2 상보영역 및 제2 상보영역의 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 하나 이상의 제3 상보영역을 포함하고 제2 상보영역은 표적 핵산의 뉴클레오티드 순서를 기준으로 제3 상보영역의 3' 방향 쪽에 혼성화하는 것인 제2 폴리뉴클레오티드; 및 표적 핵산을 포함하고, 제1 폴리뉴클레오티드의 제1 상보영역은 제2 폴리뉴클레오티드의 제2 상보영역의 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드와 상보적인 것인, 표적 핵산을 증폭하기 위한 조성물이 제공된다.A first polynucleotide comprising a first complementary region complementary to a second polynucleotide; One or more consecutive nucleotides in the 5 'direction of the second complementary region in which one or more consecutive nucleotides from the 3'-terminus are complementary to the target nucleic acid and at least one third complementary region in which the one or more consecutive nucleotides in the 5' Wherein the complementary region hybridizes to the 3 'direction of the third complementarity region based on the nucleotide sequence of the target nucleic acid; And a target nucleic acid, wherein the first complementary region of the first polynucleotide is complementary to at least one contiguous nucleotide in the 5 'direction of the second complementary region of the second polynucleotide. do.

상기 조성물에 있어서, 제1 폴리뉴클레오티드, 제2 폴리뉴클레오티드 또는 표적 핵산에 대하여는 상기한 바와 같다.In the above composition, the first polynucleotide, the second polynucleotide or the target nucleic acid are as described above.

상기 조성물은 표적 핵산을 증폭하기 위한 조성물이다. 증폭은 핵산 증폭을 위하여 알려진 방법일 수 있다. 증폭은 예를 들면, DNA 증폭 또는 RNA 증폭일 수 있다. 증폭 방법은 열순환(termal cycling)을 필요로 하는 것 또는 등온(isothermal)에서 수행되는 것일 수 있다. 증폭 방법은 폴리머라제 연쇄 반응(polymerase chain reaction; PCR), 핵산 서열-기초 증폭(Nucleic acid sequence based amplification; NASBA), 리가제 연쇄반응(Ligase Chain Reaction; LCR), 가닥치환 증폭 (strand displacement amplificaton; SDA), 롤링 서클 증폭(rolling circle amplification; RCA) 등을 포함할 수 있다. 증폭 방법은 또한, RNA 증폭 방법을 포함할 수 있다. 예를 들면, 역전사(reverse transcription; RT) 또는 역전사-PCR을 포함할 수 있다. 증폭이란 표적 핵산 서열 또는 그에 상보적인 서열의 카피 수를 증가시키는 것일 수 있다. "PCR"은 중합효소를 이용하여 표적 핵산에 특이적으로 결합하는 프라이머 쌍으로부터 표적 핵산을 증폭하는 방법일 수 있다.The composition is a composition for amplifying a target nucleic acid. Amplification may be a known method for nucleic acid amplification. The amplification may be, for example, DNA amplification or RNA amplification. The amplification method may be one that requires thermal cycling or is performed at isothermal. Amplification methods include, but are not limited to, polymerase chain reaction (PCR), nucleic acid sequence based amplification (NASBA), ligase chain reaction (LCR), strand displacement amplification SDA), rolling circle amplification (RCA), and the like. The amplification method may also include an RNA amplification method. For example, reverse transcription (RT) or reverse transcription-PCR. Amplification may be to increase the number of copies of the target nucleic acid sequence or its complementary sequence. &Quot; PCR " may be a method of amplifying a target nucleic acid from a pair of primers that specifically bind to a target nucleic acid using a polymerase.

따라서, 상기 조성물은 표적 핵산의 증폭에 요구되는 알려진 물질을 더 포함할 수 있다. 예를 들면, 조성물은 핵산 폴리머라제, 그의 활성에 필요한 완충액, 보조인자, 및/또는 기질을 더 포함할 수 있다. 핵산 폴리머라제는 DNA 폴리머라제, RNA 폴리머라제, 역전사 효소(reverse transcriptase) 및 이들의 조합일 수 있다. 역전사(reverse transcription)란 RNA를 주형으로 하여 RNA 서열에 상보적인 DNA 가닥을 합성하는 것일 수 있다. 핵산 폴리머라제는 가닥 치환 활성을 갖는 것일 수 있다. 역전사 효소는 예를 들면, 레트로바이러스로부터 유래된 하나 이상의 역전사 효소일 수 있다. 레트로바이러스는 예를 들면, HIV(Human Immunodeficiency Virus), MMLV(Moloney Murine Leukemia Viruse), 또는 AMV(Avian Myeloblastosis Virus)일 수 있다. 핵산 폴리머라제는 3'-> 5' 엑소뉴클레아제 활성(exonuclease activity)을 갖지 않는 것일 수 있다. 조성물은 역전사 또는 PCR 증폭에 필요한 물질을 포함하는 것일 수 있다.
Thus, the composition may further comprise known materials required for amplification of the target nucleic acid. For example, the composition may further comprise a nucleic acid polymerase, a buffer necessary for its activity, a cofactor, and / or a substrate. The nucleic acid polymerase may be a DNA polymerase, an RNA polymerase, a reverse transcriptase, and combinations thereof. Reverse transcription may be the synthesis of DNA strands complementary to RNA sequences using RNA as a template. The nucleic acid polymerase may have a strand displacement activity. The reverse transcriptase may be, for example, one or more reverse transcriptase derived from retrovirus. The retrovirus may be, for example, Human Immunodeficiency Virus (HIV), Moloney Murine Leukemia Virus (MMLV), or Avian Myeloblastosis Virus (AMV). The nucleic acid polymerase may be one that does not have 3 '->5' exonuclease activity. The composition may be one comprising a material necessary for reverse transcription or PCR amplification.

제2 폴리뉴클레오티드에 상보적인 제1 상보영역을 포함하는 제1 폴리뉴클레오티드; 3'-말단으로부터 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 제2 상보영역 및 제2 상보영역의 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 하나 이상의 제3 상보영역을 포함하고 제2 상보영역은 표적 핵산의 뉴클레오티드 순서를 기준으로 제3 상보영역의 3' 방향 쪽에 혼성화하는 것인 제2 폴리뉴클레오티드; 및 표적 핵산을 포함하고, 제1 폴리뉴클레오티드의 제1 상보영역은 제2 폴리뉴클레오티드의 제2 상보영역의 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드와 상보적인 것인, 표적 핵산을 증폭하기 위한 키트가 제공된다.A first polynucleotide comprising a first complementary region complementary to a second polynucleotide; One or more consecutive nucleotides in the 5 'direction of the second complementary region in which one or more consecutive nucleotides from the 3'-terminus are complementary to the target nucleic acid and at least one third complementary region in which the one or more consecutive nucleotides in the 5' Wherein the complementary region hybridizes to the 3 'direction of the third complementarity region based on the nucleotide sequence of the target nucleic acid; And a target nucleic acid, wherein the first complementary region of the first polynucleotide is complementary to one or more contiguous nucleotides in the 5 'direction of the second complementary region of the second polynucleotide do.

상기 키트에 있어서, 제1 폴리뉴클레오티드, 제2 폴리뉴클레오티드 또는 표적 핵산에 대하여는 상기한 바와 같다.In the kit, the first polynucleotide, the second polynucleotide or the target nucleic acid is as described above.

상기 키트는 표적 핵산을 증폭하기 위한 것이다. 증폭은 핵산 증폭을 위하여 알려진 방법일 수 있다. 증폭은 예를 들면, DNA 증폭 또는 RNA 증폭일 수 있다. 증폭 방법은 열순환(termal cycling)을 필요로 하는 것 또는 등온(isothermal)에서 수행되는 것일 수 있다. 증폭 방법은 폴리머라제 연쇄 반응(polymerase chain reaction; PCR), 핵산 서열-기초 증폭(Nucleic acid sequence based amplification; NASBA), 리가제 연쇄반응(Ligase Chain Reaction; LCR), 가닥치환 증폭 (strand displacement amplificaton; SDA), 롤링 서클 증폭(rolling circle amplification; RCA) 등을 포함할 수 있다. 증폭 방법은 또한, RNA 증폭 방법을 포함할 수 있다. 예를 들면, 역전사(reverse transcription; RT) 또는 역전사-PCR을 포함할 수 있다. 증폭이란 표적 핵산 서열 또는 그에 상보적인 서열의 카피 수를 증가시키는 것일 수 있다. "PCR"은 중합효소를 이용하여 표적 핵산에 특이적으로 결합하는 프라이머 쌍으로부터 표적 핵산을 증폭하는 방법일 수 있다.The kit is for amplifying the target nucleic acid. Amplification may be a known method for nucleic acid amplification. The amplification may be, for example, DNA amplification or RNA amplification. The amplification method may be one that requires thermal cycling or is performed at isothermal. Amplification methods include, but are not limited to, polymerase chain reaction (PCR), nucleic acid sequence based amplification (NASBA), ligase chain reaction (LCR), strand displacement amplification SDA), rolling circle amplification (RCA), and the like. The amplification method may also include an RNA amplification method. For example, reverse transcription (RT) or reverse transcription-PCR. Amplification may be to increase the number of copies of the target nucleic acid sequence or its complementary sequence. &Quot; PCR " may be a method of amplifying a target nucleic acid from a pair of primers that specifically bind to a target nucleic acid using a polymerase.

따라서, 상기 키트는 표적 핵산의 증폭에 요구되는 알려진 물질을 더 포함할 수 있다. 예를 들면, 키트는 핵산 폴리머라제, 그의 활성에 필요한 완충액, 보조인자, 및/또는 기질을 더 포함할 수 있다. 핵산 폴리머라제는 DNA 폴리머라제, RNA 폴리머라제, 역전사 효소(reverse transcriptase) 및 이들의 조합일 수 있다. 역전사(reverse transcription)란 RNA를 주형으로 하여 RNA 서열에 상보적인 DNA 가닥을 합성하는 것일 수 있다. 핵산 폴리머라제는 가닥 치환 활성을 갖는 것일 수 있다. 역전사 효소는 예를 들면, 레트로바이러스로부터 유래된 하나 이상의 역전사 효소일 수 있다. 레트로바이러스는 예를 들면, HIV(Human Immunodeficiency Virus), MMLV(Moloney Murine Leukemia Virus), 또는 AMV(Avian Myeloblastosis Virus)일 수 있다. 핵산 폴리머라제는 3'-> 5' 엑소뉴클레아제 활성(exonuclease activity)을 갖지 않는 것일 수 있다. 키트는 역전사 또는 PCR 증폭에 필요한 물질을 포함하는 것일 수 있다. 또한, 키트는 표적 핵산을 증폭하기 위하여 사용하기 위한 설명서를 더 포함할 수 있다.
Thus, the kit may further comprise known materials required for amplification of the target nucleic acid. For example, the kit may further comprise a nucleic acid polymerase, a buffer required for its activity, a cofactor, and / or a substrate. The nucleic acid polymerase may be a DNA polymerase, an RNA polymerase, a reverse transcriptase, and combinations thereof. Reverse transcription may be the synthesis of DNA strands complementary to RNA sequences using RNA as a template. The nucleic acid polymerase may have a strand displacement activity. The reverse transcriptase may be, for example, one or more reverse transcriptase derived from retrovirus. The retrovirus may be, for example, Human Immunodeficiency Virus (HIV), Moloney Murine Leukemia Virus (MMLV), or Avian Myeloblastosis Virus (AMV). The nucleic acid polymerase may be one that does not have 3 '->5' exonuclease activity. The kit may contain a material necessary for reverse transcription or PCR amplification. In addition, the kit may further include instructions for use to amplify the target nucleic acid.

표적 핵산에 상보적인 제2 상보영역 및 하나 이상의 제3 상보영역을 포함하는 제2 폴리뉴클레오티드로서, 제2 상보영역은 3'-말단으로부터 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 것이고, 하나 이상의 제3 상보영역은 제2 상보영역의 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 것이고, 제2 상보영역은 표적 핵산의 뉴클레오티드 순서를 기준으로 제3 상보영역의 3' 방향 쪽에 혼성화하는 것인 제2 폴리뉴클레오티드와 표적 핵산을 혼성화시키는 단계; 상기 혼성화 산물을 제1 폴리뉴클레오티드와 혼성화시키는 단계로서, 제1 폴리뉴클레오티드는 제2 폴리뉴클레오티드에 상보적이고, 제2 폴리뉴클레오티드의 제2 상보영역의 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드와 상보적인 제1 상보영역을 포함하는 것인 단계; 및 상기 혼성화 산물을 핵산 폴리머라제의 존재하에서 인큐베이션시켜, 상기 폴리뉴클레오티드의 3'-말단으로부터 상기 표적 핵산에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 연장시키는 단계를 포함하는, 표적 핵산에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 생산하는 방법이 제공된다.A second polynucleotide comprising a second complementary region complementary to a target nucleic acid and one or more third complementarity regions, wherein the second complementary region is one wherein at least one contiguous nucleotide from the 3'-terminus is complementary to the target nucleic acid, The third complementary region is one in which at least one consecutive nucleotide in the 5 'direction of the second complementary region is complementary to the target nucleic acid, and the second complementary region is hybridized in the 3' direction of the third complementary region on the basis of the nucleotide sequence of the target nucleic acid Hybridizing the second polynucleotide with the target nucleic acid; Hybridizing the hybridization product with a first polynucleotide, wherein the first polynucleotide is complementary to the second polynucleotide and the first polynucleotide is complementary to the first polynucleotide and the first polynucleotide is complementary to the first polynucleotide, A complementary region; And incubating the hybridization product in the presence of a nucleic acid polymerase to elongate a nucleotide sequence complementary to the target nucleic acid from the 3'-end of the polynucleotide to produce a nucleotide sequence complementary to the target nucleic acid / RTI >

상기 방법에 있어서, 제1 폴리뉴클레오티드, 제2 폴리뉴클레오티드 또는 표적 핵산에 대하여는 상기한 바와 같다.In the above method, the first polynucleotide, the second polynucleotide or the target nucleic acid is as described above.

상기 방법은 표적 핵산에 상보적인 제2 상보영역 및 하나 이상의 제3 상보영역을 포함하는 제2 폴리뉴클레오티드로서, 제2 상보영역은 3'-말단으로부터 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 것이고, 하나 이상의 제3 상보영역은 제2 상보영역의 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 것이고, 제2 상보영역은 표적 핵산의 뉴클레오티드 순서를 기준으로 제3 상보영역의 3' 방향 쪽에 혼성화하는 것인 제2 폴리뉴클레오티드와 표적 핵산을 혼성화시키는 단계를 포함한다.Wherein the second complementary region comprises one or more contiguous nucleotides from the 3'-terminus complementary to the target nucleic acid, wherein the second complementary region comprises a second complementary region complementary to the target nucleic acid and at least one third complementary region, At least one third complementary region is one in which at least one consecutive nucleotide in the 5 'direction of the second complementary region is complementary to the target nucleic acid, and the second complementary region is located in the 3' direction of the third complementary region on the basis of the nucleotide sequence of the target nucleic acid And hybridizing the second polynucleotide with the target nucleic acid.

상기 방법은 혼성화 산물을 제1 폴리뉴클레오티드와 혼성화시키는 단계로서, 제1 폴리뉴클레오티드는 제2 폴리뉴클레오티드에 상보적이고, 제2 폴리뉴클레오티드의 제2 상보영역의 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드와 상보적인 제1 상보영역을 포함하는 것인 단계를 포함한다.The method comprising hybridizing a hybridization product with a first polynucleotide wherein the first polynucleotide is complementary to the second polynucleotide and is complementary to the one or more contiguous nucleotides in the 5'direction of the second complementary region of the second polynucleotide And a first complementary region.

상기 방법에 있어서, 혼성화는 알려진 방법에 의하여 수행되는 것일 수 있다. 예를 들면, 핵산의 혼성화에 적절한 것으로 알려진 완충액 중에서 제2 폴리뉴클레오티드와 표적 핵산을 인큐베이션함으로써 수행될 수 있다. 혼성화는 적절한 온도 예를 들면, 0℃ 내지 25℃, 또는 4℃에서 수행될 수 있다. 온도는 선택되는 폴리뉴클레오티드와 표적 핵산의 서열 및 길이에 따라 적절하게 선택될 수 있다. 혼성화는 적절한 시간 예를 들면, 1 시간 내지 12시간 (밤새) 동안일 수 있다.In the above method, the hybridization may be performed by a known method. For example, by incubating the second polynucleotide with the target nucleic acid in a buffer known to be suitable for hybridization of the nucleic acid. Hybridization can be carried out at an appropriate temperature, for example, 0 ° C to 25 ° C, or 4 ° C. The temperature can be appropriately selected according to the sequence and length of the polynucleotide and the target nucleic acid to be selected. Hybridization can be for a suitable time, for example from 1 hour to 12 hours (overnight).

상기 방법에 있어서, 제2 폴리뉴클레오티드와 표적 핵산을 혼성화시키는 단계 및 혼성화 산물을 제1 폴리뉴클레오티드와 혼성화시키는 단계는 동시 또는 순차적으로 수행될 수 있다. 예를 들면, 제2 폴리뉴클레오티드와 표적 핵산을 혼성화시키는 단계 후에 혼성화 산물과 제1 폴리뉴클레오티드을 혼성화시키는 단계를 수행하거나, 제1 폴리뉴클레오티드와 제2 폴리뉴클레오티드를 혼성화시키는 단계 후에 혼성화 산물과 표적 핵산을 혼성화시키는 단계를 수행하거나, 또는 제1 폴리뉴클레오티드, 제2 폴리뉴클레오티드와 표적 핵산을 동시에 혼성화시키는 단계를 수행할 수 있다.In this method, the step of hybridizing the second polynucleotide with the target nucleic acid and the step of hybridizing the hybridization product with the first polynucleotide may be performed simultaneously or sequentially. For example, a step of hybridizing a first polynucleotide with a hybridization product after hybridization with a second polynucleotide and a target nucleic acid may be performed, or a step of hybridizing the first polynucleotide with a second polynucleotide may be followed by hybridization with a hybridization product and a target nucleic acid Hybridization step, or a step of simultaneously hybridizing the first polynucleotide, the second polynucleotide and the target nucleic acid can be performed.

제2 폴리뉴클레오티드의 제2 상보영역 및 제3 상보영역은 표적 핵산에 대하여 혼성화된 경우, 1 뉴클레오티드 이상 서로 이격되어 표적 핵산에 혼성화되는 것일 수 있다. 예를 들면, 1 내지 20 nt, 1 내지 10 nt, 1 내지 5 nt, 2 뉴클레오티드, 3 nt, 4 nt, 5 nt, 6 nt, 7 nt, 8 nt, 9 nt, 10 nt 또는 11 nt가 이격된 것일 수 있다. 제1 폴리뉴클레오티드의 제1 상보영역이 제2 폴리뉴클레오티드에 대하여 혼성화된 경우, 제2 폴리뉴클레오티드의 제2 상보영역으로부터 0 내지 20 nt에 의하여 이격된 위치로부터 시작하는 하나 이상의 연속 뉴클레오티드에 혼성화되는 것일 수 있다. 예를 들면, 제1 상보영역은 제2 폴리뉴클레오티드의 제2 상보영역으로부터 0 nt, 1 nt, 2 nt, 3 nt, 4 nt, 5 nt, 6 nt, 7 nt, 8 nt, 9 nt, 10 nt, 11 내지 15 nt, 또는 11 내지 20 nt에 의하여 이격된 위치로부터 시작하는 하나 이상의 연속 뉴클레오티드에 혼성화할 수 있다. 제1 폴리뉴클레오티드, 제2 폴리뉴클레오티드 및 표적 핵산이 혼성화된 경우, 제1 폴리뉴클레오티드는 표적 핵산과 0 내지 20 nt에 의하여 이격된 위치에 존재할 수 있다. 예를 들면, 제1 상보영역은 제2 폴리뉴클레오티드의 제2 상보영역으로부터 0 nt, 1 nt, 2 nt, 3 nt, 4 nt, 5 nt, 6 nt, 7 nt, 8 nt, 9 nt, 10 nt, 11 내지 15 nt, 또는 11 내지 20 nt에 의하여 이격된 위치에 존재할 수 있다.The second complementary region and the third complementary region of the second polynucleotide may hybridize to the target nucleic acid at a distance of 1 nucleotide or more when hybridized to the target nucleic acid. For example, 1 to 20 nt, 1 to 10 nt, 1 to 5 nt, 2 nucleotides, 3 nt, 4 nt, 5 nt, 6 nt, 7 nt, 8 nt, 9 nt, 10 nt, . When the first complementary region of the first polynucleotide is hybridized to the second polynucleotide, it is hybridized to one or more contiguous nucleotides starting from a position separated by 0 to 20 nt from the second complementary region of the second polynucleotide . 1 nt, 2 nt, 3 nt, 4 nt, 5 nt, 6 nt, 7 nt, 8 nt, 9 nt, 10 nt from the second complementary region of the second polynucleotide, nt, from 11 to 15 nt, or from 11 to 20 nt. When the first polynucleotide, the second polynucleotide and the target nucleic acid are hybridized, the first polynucleotide may be at a position spaced apart from the target nucleic acid by 0 to 20 nt. 1 nt, 2 nt, 3 nt, 4 nt, 5 nt, 6 nt, 7 nt, 8 nt, 9 nt, 10 nt from the second complementary region of the second polynucleotide, nt, 11 to 15 nt, or 11 to 20 nt.

상기 방법은 혼성화 산물을 핵산 폴리머라제의 존재하에서 인큐베이션시켜, 상기 폴리뉴클레오티드의 3'-말단으로부터 상기 표적 핵산에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 연장시키는 단계를 포함한다.The method comprises incubating the hybridization product in the presence of a nucleic acid polymerase to elongate a nucleotide sequence complementary to the target nucleic acid from the 3'-end of the polynucleotide.

상기 방법에 있어서, 인큐베이션은 상기 핵산 폴리머라제의 활성에 적절한 조건에서 수행될 수 있다. 인큐베이션은 핵산 폴리머라제, 그의 활성에 필요한 완충액, 보조인자, 및 기질의 존재하에서 수행될 수 있다. 핵산 폴리머라제는 DNA 폴리머라제, RNA 폴리머라제, 역전사 효소(reverse transcriptase) 및 이들의 조합일 수 있다. 역전사(reverse transcription)란 RNA를 주형으로 하여 RNA 서열에 상보적인 DNA 가닥을 합성하는 것일 수 있다. 핵산 폴리머라제는 가닥 치환 활성을 갖는 것일 수 있다. 역전사 효소는 예를 들면, 레트로바이러스로부터 유래된 하나 이상의 역전사 효소일 수 있다. 레트로바이러스는 예를 들면, HIV(Human Immunodeficiency Virus), MMLV(Moloney Murine Leukemia Viruse), 또는 AMV(Avian Myeloblastosis Virus)일 수 있다. 핵산 폴리머라제는 3'-> 5' 엑소뉴클레아제 활성(exonuclease activity)을 갖지 않는 것일 수 있다. 예를 들면, 상기 인큐베이션은 역전사 또는 PCR 증폭에 필요한 물질을 포함하는 조건에서 수행하는 것을 포함할 수 있다. In this method, the incubation can be carried out under conditions suitable for the activity of the nucleic acid polymerase. Incubation can be carried out in the presence of a nucleic acid polymerase, a buffer required for its activity, a cofactor, and a substrate. The nucleic acid polymerase may be a DNA polymerase, an RNA polymerase, a reverse transcriptase, and combinations thereof. Reverse transcription may be the synthesis of DNA strands complementary to RNA sequences using RNA as a template. The nucleic acid polymerase may have a strand displacement activity. The reverse transcriptase may be, for example, one or more reverse transcriptase derived from retrovirus. The retrovirus may be, for example, Human Immunodeficiency Virus (HIV), Moloney Murine Leukemia Virus (MMLV), or Avian Myeloblastosis Virus (AMV). The nucleic acid polymerase may be one that does not have 3 '-> 5' exonuclease activity. For example, the incubation may include performing under conditions that include materials necessary for reverse transcription or PCR amplification.

인큐베이션에 의하여, 제2 폴리뉴클레오티드의 3'-말단으로부터 상기 표적 핵산에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 연장시킬 수 있다. 연장은 핵산 폴리머라제가 제2 폴리뉴클레오티드의 3'-말단으로부터, 표적 핵산과 혼성화된 제2 폴리뉴클레오티드의 5'-말단을 치환시키면서 연장하는 것을 포함한다.By incubation, the nucleotide sequence complementary to the target nucleic acid can be extended from the 3'-end of the second polynucleotide. The extension comprises extending the nucleic acid polymerase from the 3'-end of the second polynucleotide, substituting the 5'-end of the second polynucleotide hybridized to the target nucleic acid.

상기 방법은 생산된 산물 즉, 표적 핵산에 상보적인 뉴클레오티드 서열의 존재 여부를 결정하는 단계를 더 포함할 수 있다. 결정 결과, 상기 생산된 산물이 존재하는 경우, 시료 중에 상기 표적 핵산이 존재하는 것으로 결정하고, 상기 생산된 산물이 존재하지 않는 경우, 시료 중에 상기 표적 핵산이 존재하지 않는 것으로 결정하는 단계를 더 포함할 수 있다. The method may further comprise determining the presence of a produced product, i. E., A nucleotide sequence complementary to the target nucleic acid. Determining that the target nucleic acid is present in the sample when the product is present, and determining that the target nucleic acid is not present in the sample if the product is not present can do.

또한, 상기 방법은 생산된 산물 즉, 표적 핵산에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 주형으로 하여, 핵산을 증폭하는 단계를 더 포함할 수 있다. 증폭은 알려진 방법에 의하여 수행될 수 있다. 증폭 방법에 대하여는 상기한 바와 같다.In addition, the method may further comprise amplifying the nucleic acid using the produced product, that is, the nucleotide sequence complementary to the target nucleic acid as a template. Amplification can be performed by known methods. The amplification method is as described above.

아울러, 상기 방법은 증폭된 결과 생산된 산물 즉, 표적 핵산에 상보적인 뉴클레오티드 서열의 존재 여부를 결정하는 단계를 더 포함할 수 있다. 결정 결과, 증폭 산물이 존재하는 경우, 시료 중에 표적 핵산이 존재하는 것으로 결정하고, 증폭 산물이 존재하지 않는 경우, 시료 중에 표적 핵산이 존재하지 않는 것으로 결정하는 단계를 더 포함할 수 있다.
In addition, the method may further comprise determining the presence or absence of a nucleotide sequence complementary to the product produced as a result of the amplification, that is, the target nucleic acid. As a result of the determination, if the amplification product is present, it is determined that the target nucleic acid is present in the sample, and if the amplification product is not present, it can be determined that the target nucleic acid is not present in the sample.

도 1은 일 양상에 따른 제1 폴리뉴클레오티드, 제2 폴리뉴클레오티드 및 표적 핵산에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 생산하는 방법을 나타낸 도면이다. 도 1에 나타낸 바와 같이, 표적 핵산(A)은 5' 말단 영역(A1), 가운데 영역(A2) 및 3' 말단 영역(A3)으로 이루어진다. 제2 폴리뉴클레오티드(B)는 표적 핵산의 3' 말단 영역(A3)에 상보적인 제2 상보 영역(B3), 표적 핵산에 상보적이지 않은 영역(B2) 및 표적 핵산의 5' 말단 영역(A1)에 상보적인 제3 상보 영역(B1)으로 이루어진다. 표적 핵산에 상보적이지 않은 영역(B2)은 제1 폴리뉴클레오티드(C)의 제1 상보 영역(C1)과 상보적인 영역(B2-1)을 포함한다. 제1 폴리뉴클레오티드(C)는 제1 상보 영역(C1)을 포함하고 3' 말단은 변형된 뉴클레오티드(C2)일 수 있다. 제1 폴리뉴클레오티드의 제1 상보영역(C1)은 제2 폴리튜클레오티드를 기준으로 표적 핵산에 상보적이지 않은 영역(B2)의 3' 방향쪽에 1 뉴클레오티드 이상의 뉴클레오티드에 의하여 이격되어 위치할 수 있다. 제1 폴리뉴클레오티드, 제2 폴리뉴클레오티드 및 표적 핵산이 혼성화되면, 제1 폴리뉴클레오티드의 제1 상보영역(C1)은 표적 핵산(A)의 방향을 기준으로 3' 말단 방향에 배열되기 때문에 역전사 효소가 효율적으로 역전사하도록 기여한다. 또한, 제1 폴리뉴클레오티드는 프라이밍에 필요한 제2 상보 영역의 길이를 줄여 줌으로써 역전사되는 산물(D)의 길이를 늘려주고, PCR 프라이머의 디자인이 용이해지며, 역전사의 특이도를 높일 수 있다.1 is a diagram illustrating a method for producing a first polynucleotide, a second polynucleotide, and a nucleotide sequence complementary to a target nucleic acid according to an embodiment. As shown in Fig. 1, the target nucleic acid A comprises a 5'-terminal region A1, a middle region A2 and a 3'-terminal region A3. The second polynucleotide (B) comprises a second complementary region (B3) complementary to the 3'end region (A3) of the target nucleic acid, a region (B2) not complementary to the target nucleic acid and a 5'end region And a third complementary region B1 complementary to the second complementary region B1. The region B2 that is not complementary to the target nucleic acid comprises a region B2-1 complementary to the first complementary region C1 of the first polynucleotide (C). The first polynucleotide (C) may comprise a first complementary region (C1) and the 3 'end may be a modified nucleotide (C2). The first complementary region (C1) of the first polynucleotide may be located at a distance of 1 or more nucleotides in the 3 'direction of the region (B2) that is not complementary to the target nucleic acid based on the second polynucleotide . When the first polynucleotide, the second polynucleotide and the target nucleic acid are hybridized, since the first complementary region (C1) of the first polynucleotide is arranged in the 3'-terminal direction with respect to the direction of the target nucleic acid (A), the reverse transcriptase Thereby contributing to efficient reverse transcription. In addition, the first polynucleotide can shorten the length of the second complementary region required for priming, thereby increasing the length of the product (D) to be reversed, facilitating the design of the PCR primer, and improving the specificity of reverse transcription.

제1 폴리뉴클레오티드에 의하면, 표적 핵산의 3' 말단에 결합하는 영역을 줄이고, 증폭되는 표적 핵산의 길이를 증가시키고, 특이도가 우수하게 표적핵산을 증폭하는데 사용될 수 있다. 또한, 표적 핵산의 증폭을 위한 PCR 프라이머의 디자인이 용이해질 수 있다.According to the first polynucleotide, it is possible to reduce the region binding to the 3 'end of the target nucleic acid, increase the length of the target nucleic acid to be amplified, and amplify the target nucleic acid with excellent specificity. In addition, the design of the PCR primer for amplification of the target nucleic acid can be facilitated.

조성물 및 키트에 의하면, 표적 핵산을 효율적이고 특이도가 우수하게 증폭하는데 사용될 수 있다.According to the compositions and kits, the target nucleic acid can be used for efficient and specific amplification.

표적 핵산에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 생산하는 방법에 의하면, 표적 핵산에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 효율적이고 특이도가 우수하게 생산할 수 있다.The method of producing the nucleotide sequence complementary to the target nucleic acid makes it possible to efficiently and specifically produce the nucleotide sequence complementary to the target nucleic acid.

도 1a는 제1 폴리뉴클레오티드, 제2 폴리뉴클레오티드 및 표적 핵산의 모식도이고, 도 1b는 제1 폴리뉴클레오티드, 제2 폴리뉴클레오티드 및 표적 핵산에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 생산하는 방법을 예시한다.
도 2a 및 도 2b는 각각 클램프의 존재 및 클램프의 길이에 따른 역전사 효율에 미치는 영향을 나타낸다.
도 3a내지 도 3e는 각각 표적 핵산이 miR-16, miR-21, miR210, miR-122-5p, 및 miR-200c인 경우, 클램프의 존재가 역전사 효율에 미치는 영향을 나타낸다.FIG. 1A is a schematic diagram of a first polynucleotide, a second polynucleotide, and a target nucleic acid, and FIG. 1B illustrates a method of producing a nucleotide sequence complementary to a first polynucleotide, a second polynucleotide, and a target nucleic acid.
FIGS. 2A and 2B show the influence of the existence of the clamp and the length of the clamp on the reverse transfer efficiency, respectively.
3A to 3E show the effect of the presence of the clamp on the reverse transcription efficiency when the target nucleic acid is miR-16, miR-21, miR210, miR-122-5p, and miR-200c, respectively.

이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples. However, these examples are for illustrative purposes only, and the scope of the present invention is not limited to these examples.

실시예Example 1.  One. 역전사Reverse transcription 프라이머primer 및 클램프의 제조 And clamps

제2 폴리뉴클레오티드(이하 "역전사 프라이머(reverse transcription primer)" 또는 "RT 프라이머"라고 한다)에 상보적인 제1 상보영역을 포함하는 제1 폴리뉴클레오티드(이하 "클램프" 또는 "클램프 올리고뉴클레오티드"라고 한다)로서, 역전사 프라이머는 3'-말단으로부터 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 제2 상보영역 및 제2 상보영역의 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산과 상보적인 하나 이상의 제3 상보영역을 포함하고 제2 상보영역은 표적 핵산의 뉴클레오티드 순서를 기준으로 제3 상보영역의 3' 방향 쪽에 혼성화하는 것을 제조하였다. 역전사 프라이머는 역배열 프라이머(reverse configuration primer)라고도 한다. 역전사 프라이머에 있어서, 제2 상보 영역은 "프라이밍 영역(priming region)", 제3 상보영역은 "아답터 영역(adaptor region)" 또는 "아답터"라고도 한다. 역전사 프라이머의 대조군으로서, 역배열이 없는 통상적인 프라이머(이하 "선형(linear) 프라이머"라 한다)를 제조하였다. 클램프의 제1 상보영역이 역전사 프라이머의 제2 상보영역의 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드와 상보적인 클램프를 제조하였다.A first polynucleotide (hereinafter referred to as a "clamp" or "clamp oligonucleotide") comprising a first complementary region complementary to a second polynucleotide (hereinafter referred to as "reverse transcription primer" or "RT primer" ), Wherein the reverse transcription primer comprises a second complementary region in which one or more consecutive nucleotides from the 3'-terminus are complementary to the target nucleic acid, and at least one third complementary region in which at least one consecutive nucleotide in the 5'direction of the second complementary region is complementary to the target nucleic acid Region and the second complementary region hybridizes to the 3'-direction side of the third complementary region based on the nucleotide sequence of the target nucleic acid. Reverse transcription primers are also called reverse configuration primers. In the reverse primer, the second complementary region may be referred to as a " priming region " and the third complementary region may be referred to as an " adapter region " As a control for the reverse transcription primer, a conventional primer (hereinafter referred to as " linear primer ") having no inverse sequence was prepared. A clamp was prepared in which the first complementary region of the clamp was complementary to one or more consecutive nucleotides in the 5 'direction of the second complementary region of the reverse primer.

도 1에 있어서, "A"는 표적 핵산을 나타내고, "A1"은 표적 핵산의 5' 말단 영역을 나타내고, "A2"는 표적 핵산의 가운데 영역을 나타내고, 그리고 "A3"은 표적 핵산의 3' 말단 영역을 나타낸다. "B"는 역전사 프라이머를 나타내고, "B1"은 표적 핵산의 5' 말단 영역(A1)에 상보적인 영역(제3 상보 영역)을 나타내고, "B2"는 표적 핵산에 상보적이지 않은 영역을 나타내고, "B2-1"은 클램프의 제1 상보 영역에 상보적인 영역을 나타내고, 그리고 "B3"은 표적 핵산의 3' 말단 영역(A3)에 상보적인 영역(제2 상보 영역)을 나타낸다. "C"는 클램프를 나타내고, "C1"은 역전사 프라이머에 상보적인 영역(제1 상보 영역)을 나타내고, 그리고 "C2"는 클램프의 3' 말단으로서 변형된 뉴클레오티드를 나타낸다. "D"는 생성된 cDNA(complementaty DNA)를 나타내고, "D1"은 표적 핵산의 5' 말단 영역(A1)에 대한 cDNA를 나타내고, 그리고 "D2"는 표적 핵산의 가운데 영역(A2)에 대한 cDNA를 나타낸다.
In Figure 1, "A" represents the target nucleic acid, "A1" represents the 5'end region of the target nucleic acid, "A2" represents the middle region of the target nucleic acid and "A3" Terminal region. "B" represents a reverse primer, "B1" represents a region complementary to the 5'-terminal region (A1) of the target nucleic acid (third complementary region), "B2" represents a region not complementary to the target nucleic acid , "B2-1" indicates a complementary region to the first complementary region of the clamp, and "B3" indicates a complementary region (second complementary region) to the 3'-terminal region A3 of the target nucleic acid. "C" represents the clamp, "C1" represents the complementary region (first complementary region) to the reverse transcription primer, and "C2" represents the modified nucleotide at the 3 'end of the clamp. "D" represents the generated complementary DNA, "D1" represents the cDNA for the 5 'terminal region (A1) of the target nucleic acid and "D2" represents the cDNA for the middle region (A2) .

실시예Example 2. 클램프의 존재 및 클램프의 길이가  2. The presence of the clamp and the length of the clamp 역전사Reverse transcription 효율에 미치는 영향 Effect on efficiency

클램프를 첨가하거나 클램프의 길이를 6 mer 내지 16 mer로 변화시키면서 역전사 반응을 수행하였다.The reverse transcription reaction was performed by adding a clamp or varying the length of the clamp from 6 to 16 mer.

역전사 효소(reverse transcriptase)로서, Superscript III™(Invitrogen)를 사용하였다. 역전사는 역전사 프라이머와 RNA 주형을 37.5 mM KCl, 3 mM MgCl2, 및 10 mM DTT를 함유한 50 mM Tris-HCl(실온에서 pH8.3) 중에서 42℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. RNA 주형은 miR-16 RNA(서열번호 1)을 사용하였다. Superscript III™ 역전사 효소는 RNase H 활성이 감소되고 증가된 열안정을 제공하도록 조작된 M-MLV(Maloney murine leukemia virus) 역전사 효소의 변이체이다.As a reverse transcriptase, Superscript III (Invitrogen) was used. Reverse transcription was performed by incubating the reverse primer and the RNA template for 1 hour at 42 ° C in 50 mM Tris-HCl (pH 8. 3 at room temperature) containing 37.5 mM KCl, 3 mM MgCl 2 , and 10 mM DTT. The RNA template used miR-16 RNA (SEQ ID NO: 1). Superscript III ™ reverse transcriptase is a variant of Maloney murine leukemia virus (M-MLV) reverse transcriptase engineered to provide reduced thermal stability and reduced RNase H activity.

그 결과 얻어진 역전사 산물을 PCR에 의하여 증폭하였다. PCR은 2x SYBR RT-PCR 마스터 혼합물(Exiqon)에 프라이머 각 50 nM 및 연장 산물을 첨가하고 열순환시킴으로써 수행되었다. 열순환은 95℃에서 10분, 95℃에서 15초 및 60℃에서 1분을 45회 수행하였다. 다음으로, 융해 곡선 분석(melting curve analysis)을 5 측정/℃에 의하여 수행하였다. 표 1은 사용된 주형, PCR 프라이머, 역전사 프라이머 및 클램프의 염기 서열을 나타낸다. 표 1에서 'A0'는 선형 프라이머를 나타낸다.The resulting reverse transcriptase was amplified by PCR. PCR was performed by adding 50 nM of each primer and extension product to the 2x SYBR RT-PCR master mix (Exiqon) and thermocycling. Thermal circulation was performed 45 times at 95 캜 for 10 minutes, at 95 캜 for 15 seconds, and at 60 캜 for 1 minute. Next, melting curve analysis was performed at 5 measurements / 占 폚. Table 1 shows the nucleotide sequences of the templates used, PCR primers, reverse primers and clamps. In Table 1, 'A0' represents a linear primer.

구분division 이름name 서열order 주형template miR16 miR16 5'-UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG-3' (서열번호 1)5'-UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG-3 '(SEQ ID NO: 1) PCR 프라이머PCR primer 정방향 프라이머Forward primer 5'-CGCGCTAGCAGCACGTAAAT-3' (서열번호 2)5'-CGCGCTAGCAGCACGTAAAT-3 '(SEQ ID NO: 2) 역방향 프라이머Reverse primer 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3' (서열번호 3)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3 '(SEQ ID NO: 3) 역전사 프라이머Reverse primer A12 RT0A12 RT0 5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC-3'
(서열번호 4)5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC-3 '
(SEQ ID NO: 4) A12 RT1A12 RT1 5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC C-3'
(서열번호 5)5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC C-3 '
(SEQ ID NO: 5) A12 RT2A12 RT2 5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC CG-3'
(서열번호 6)5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC CG-3 '
(SEQ ID NO: 6) A12 RT3A12 RT3 5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC CGC-3'
(서열번호 7)5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC CGC-3 '
(SEQ ID NO: 7) A12 RT4A12 RT4 5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC CGCC-3'
(서열번호 8)5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC CGCC-3 '
(SEQ ID NO: 8) A12 RT6A12 RT6 5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC CGCCAA-3'
(서열번호 9)5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC CGCCAA-3 '
(SEQ ID NO: 9) A0 RT0A0 RT0 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC-3' (서열번호 10)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC-3 '(SEQ ID NO: 10) A0 RT1A0 RT1 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC C-3' (서열번호 11)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC C-3 '(SEQ ID NO: 11) A0 RT2A0 RT2 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC CG-3' (서열번호 12)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC CG-3 '(SEQ ID NO: 12) A0 RT3A0 RT3 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC CGC-3' (서열번호 13)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC CGC-3 '(SEQ ID NO: 13) A0 RT4A0 RT4 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC CGCC-3' (서열번호 14)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC CGCC-3 '(SEQ ID NO: 14) A0 RT6A0 RT6 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC CGCCAA-3' (서열번호 15)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT ATTCGCACTGGATACGAC CGCCAA-3 '(SEQ ID NO: 15) 클램프clamp C16C16 5'-GTCGTATCCAGTGCGA-3' (서열번호 16)5'-GTCGTATCCAGTGCGA-3 '(SEQ ID NO: 16) C14C14 5'-GTCGTATCCAGTGC-3' (서열번호 17)5'-GTCGTATCCAGTGC-3 '(SEQ ID NO: 17) C12C12 5'-GTCGTATCCAGT-3' (서열번호 18)5'-GTCGTATCCAGT-3 '(SEQ ID NO: 18) C10C10 5'-GTCGTATCCA-3' (서열번호 19)5'-GTCGTATCCA-3 '(SEQ ID NO: 19) C8C8 5'-GTCGTATC-3' (서열번호 20)5'-GTCGTATC-3 '(SEQ ID NO: 20) C6C6 5'-GTCGTA-3' (서열번호 21)5'-GTCGTA-3 '(SEQ ID NO: 21)

도 2a는 클램프가 역전사 효율에 미치는 영향을 나타내고, 도 2b는 클램프의 길이가 역전사 효율에 미치는 영향을 나타낸다. 도 2a에 나타난 바와 같이, 선형 프라이머에 비하여 역전사 프라이머를 사용한 경우 Cp 값이 감소하고, 클램프를 사용한 경우 Cp 값이 현저하게 감소하였다. 도 2b에 나타난 바와 같이, 클램프의 길이가 증가함에 따라 Cp 값이 감소하였다. 역전사 반응시 클램프를 사용함에 따라 역전사 프라이머의 3' 말단 프라이밍 영역의 길이를 줄일 수 있음을 확인하였다.
FIG. 2A shows the influence of the clamp on the reverse transfer efficiency, and FIG. 2B shows the influence of the length of the clamp on the reverse transfer efficiency. As shown in FIG. 2A, when the reverse primer was used, the Cp value was decreased compared to the linear primer, and when the clamp was used, the Cp value was remarkably decreased. As shown in FIG. 2B, as the length of the clamp increases, the Cp value decreases. It was confirmed that the length of the 3 'end priming region of the reverse transcription primer can be reduced by using the clamp in the reverse transcription reaction.

실시예Example 3.  3. 역전사Reverse transcription 프라이머의Primer 3' 말단  3 'terminus 프라이밍Priming 영역의 길이와 클램프가  The length of the zone and the clamp 역전사Reverse transcription 효율에 미치는 영향 Effect on efficiency

역전사 프라이머의 3' 말단 프라이밍 영역의 길이를 줄이면서 역전사 반응을 수행하였다.The reverse transcription reaction was performed while reducing the length of the 3 'terminal priming region of the reverse transcription primer.

역전사 및 PCR을 수행하기 위한 반응 조성물 및 반응 조건은 실시예 2에 기재된 바와 같다.The reaction composition and reaction conditions for carrying out reverse transcription and PCR are as described in Example 2. [

표 2 내지 6은 사용된 주형(각각 miR16, miR21, miR210, miR122-5p 및miR200c), PCR 프라이머, 및 역전사 프라이머의 염기서열을 나타낸다. 클램프는 실시예 2에 기재된 클램프 C10(서열번호 19)를 사용하였다.Tables 2 to 6 show the nucleotide sequences of the templates used (miR16, miR21, miR210, miR122-5p and miR200c, respectively), PCR primers, and reverse transcription primers. Clamp C10 (SEQ ID NO: 19) described in Example 2 was used as the clamp.

구분division 이름name 서열order 주형template miR16 miR16 5'-UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG-3' (서열번호 1)5'-UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG-3 '(SEQ ID NO: 1) PCR 프라이머PCR primer 정방향 프라이머Forward primer 5'-CGCGCTAGCAGCACGTAAAT-3' (서열번호 2)5'-CGCGCTAGCAGCACGTAAAT-3 '(SEQ ID NO: 2) 역방향 프라이머Reverse primer 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3' (서열번호 3)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3 '(SEQ ID NO: 3) 역전사 프라이머Reverse primer V1-RT0V1-RT0 5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC-3'
(서열번호 22)5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC-3 '
(SEQ ID NO: 22) V1-RT1V1-RT1 5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC C-3'
(서열번호 23)5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC C-3 '
(SEQ ID NO: 23) V1-RT2V1-RT2 5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CG-3'
(서열번호 24)5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CG-3 '
(SEQ ID NO: 24) V1-RT3V1-RT3 5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CGC-3' (서열번호 25)5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CGC-3 '(SEQ ID NO: 25) V1-RT4V1-RT4 5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CGCC-3' (서열번호 26)5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CGCC-3 '(SEQ ID NO: 26) V1-RT5V1-RT5 5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CGCCA-3' (서열번호 27)5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CGCCA-3 '(SEQ ID NO: 27) V1-RT6V1-RT6 5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CGCCAA-3' (서열번호 28)5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CGCCAA-3 '(SEQ ID NO: 28) V1-RT7V1-RT7 5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CGCCAAT-3' (서열번호 29)5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CGCCAAT-3 '(SEQ ID NO: 29) V1-RT8V1-RT8 5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CGCCAATA-3' (서열번호 30)5'-TACGTGCTGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CGCCAATA-3 '(SEQ ID NO: 30) 선형-RT0Linear-RT0 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3' (서열번호 31)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3 '(SEQ ID NO: 31) 선형-RT1Linear-RT1 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT C-3' (서열번호 32)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT C-3 '(SEQ ID NO: 32) 선형-RT2Linear-RT2 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CG-3' (서열번호 33)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CG-3 '(SEQ ID NO: 33) 선형-RT3Linear-RT3 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CGC-3' (서열번호 34)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CGC-3 '(SEQ ID NO: 34) 선형-RT4Linear-RT4 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CGCC-3' (서열번호 35)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CGCC-3 '(SEQ ID NO: 35) 선형-RT5Linear-RT5 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CGCCA-3' (서열번호 36)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CGCCA-3 '(SEQ ID NO: 36) 선형-RT6Linear-RT6 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CGCCAA-3' (서열번호 375'-GTGCAGGGTCCGAGGT CGCCAA-3 '(SEQ ID NO: 37 선형-RT7Linear-RT7 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CGCCAAT-3' (서열번호 38)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CGCCAAT-3 '(SEQ ID NO: 38) 선형-RT8Linear-RT8 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CGCCAATA-3' (서열번호 39)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CGCCAATA-3 '(SEQ ID NO: 39)

구분division 이름name 서열order 주형template miR21miR21 5'-uagcuuaucagacugauguuga-3' (서열번호 40)5'-uagcuuaucagacugauguuga-3 '(SEQ ID NO: 40) PCR 프라이머PCR primer 정방향 프라이머Forward primer 5'-cgg tagcttatcagactgatgt-3' (서열번호 41)5'-cgg tagcttatcagactgatgt-3 '(SEQ ID NO: 41) 역방향 프라이머Reverse primer 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3' (서열번호 42)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3 '(SEQ ID NO: 42) 역전사 프라이머Reverse primer V1-RT0V1-RT0 5'-TCTGATAAGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC-3'
(서열번호 43)5'-TCTGATAAGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC-3 '
(SEQ ID NO: 43) V1-RT1V1-RT1 5'-TCTGATAAGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC T-3'
(서열번호 44)5'-TCTGATAAGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC T-3 '
(SEQ ID NO: 44) V1-RT2V1-RT2 5'-TCTGATAAGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TC-3'
(서열번호 45)5'-TCTGATAAGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TC-3 '
(SEQ ID NO: 45) V1-RT3V1-RT3 5'-TCTGATAAGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCA-3'
(서열번호 46)5'-TCTGATAAGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCA-3 '
(SEQ ID NO: 46) V1-RT4V1-RT4 5'-TCTGATAAGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCAA-3'
(서열번호 47)5'-TCTGATAAGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCAA-3 '
(SEQ ID NO: 47) V1-RT5V1-RT5 5'-TCTGATAAGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCAAC-3'
(서열번호 48)5'-TCTGATAAGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCAAC-3 '
(SEQ ID NO: 48) V1-RT6V1-RT6 5'-TCTGATAAGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCAACA-3' (서열번호 49)5'-TCTGATAAGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCAACA-3 '(SEQ ID NO: 49) V1-RT7V1-RT7 5'-TCTGATAAGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCAACAT-3' (서열번호 50)5'-TCTGATAAGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCAACAT-3 '(SEQ ID NO: 50) V1-RT8V1-RT8 5'-TCTGATAAGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCAACATC-3' (서열번호 51)5'-TCTGATAAGCTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCAACATC-3 '(SEQ ID NO: 51) 선형-RT0Linear-RT0 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3' (서열번호 52)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3 '(SEQ ID NO: 52) 선형-RT1Linear-RT1 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT T-3' (서열번호 53)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT T-3 '(SEQ ID NO: 53) 선형-RT2Linear-RT2 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TC-3' (서열번호 54)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TC-3 '(SEQ ID NO: 54) 선형-RT3Linear-RT3 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCA-3' (서열번호 55)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCA-3 '(SEQ ID NO: 55) 선형-RT4Linear-RT4 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCAA-3' (서열번호 56)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCAA-3 '(SEQ ID NO: 56) 선형-RT5Linear-RT5 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCAAC-3' (서열번호 57)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCAAC-3 '(SEQ ID NO: 57) 선형-RT6Linear-RT6 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCAACA-3' (서열번호 58)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCAACA-3 '(SEQ ID NO: 58) 선형-RT7Linear-RT7 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCAACAT-3' (서열번호 59)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCAACAT-3 '(SEQ ID NO: 59) 선형-RT8Linear-RT8 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCAACATC-3' (서열번호 60)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCAACATC-3 '(SEQ ID NO: 60)

구분division 이름name 서열order 주형template miR210miR210 5'-CUGUGCGUGUGACAGCGGCUGA-3' (서열번호 61)5'-CUGUGCGUGUGACAGCGGCUGA-3 '(SEQ ID NO: 61) PCR 프라이머PCR primer 정방향 프라이머Forward primer 5'-CTGTGCGTGTGACAGC-3' (서열번호 62)5'-CTGTGCGTGTGACAGC-3 '(SEQ ID NO: 62) 역방향 프라이머Reverse primer 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3' (서열번호 63)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3 '(SEQ ID NO: 63) 역전사 프라이머Reverse primer V1-RT0V1-RT0 5'-TCACACGCACAG GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC-3'
(서열번호 64)5'-TCACACGCACAG GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC-3 '
(SEQ ID NO: 64) V1-RT1V1-RT1 5'-TCACACGCACAG GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC T-3'
(서열번호 65)5'-TCACACGCACAG GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC T-3 '
(SEQ ID NO: 65) V1-RT2V1-RT2 5'-TCACACGCACAG GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TC-3'
(서열번호 66)5'-TCACACGCACAG GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TC-3 '
(SEQ ID NO: 66) V1-RT3V1-RT3 5'-TCACACGCACAG GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCA-3'
(서열번호 67)5'-TCACACGCACAG GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCA-3 '
(SEQ ID NO: 67) V1-RT4V1-RT4 5'-TCACACGCACAG GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCAG-3'
(서열번호 68)5'-TCACACGCACAG GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCAG-3 '
(SEQ ID NO: 68) V1-RT5V1-RT5 5'-TCACACGCACAG GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCAGC-3' (서열번호 69)5'-TCACACGCACAG GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCAGC-3 '(SEQ ID NO: 69) V1-RT6V1-RT6 5'-TCACACGCACAG GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCAGCC-3' (서열번호 70)5'-TCACACGCACAG GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCAGCC-3 '(SEQ ID NO: 70) V1-RT7V1-RT7 5'-TCACACGCACAG GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCAGCCG-3' (서열번호 71)5'-TCACACGCACAG GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCAGCCG-3 '(SEQ ID NO: 71) V1-RT8V1-RT8 5'-TCACACGCACAG GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCAGCCGC-3' (서열번호 72)5'-TCACACGCACAG GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCAGCCGC-3 '(SEQ ID NO: 72) 선형-RT0Linear-RT0 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3' (서열번호 73)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3 '(SEQ ID NO: 73) 선형-RT1Linear-RT1 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT T-3' (서열번호 74)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT T-3 '(SEQ ID NO: 74) 선형-RT2Linear-RT2 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TC-3' (서열번호 75)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TC-3 '(SEQ ID NO: 75) 선형-RT3Linear-RT3 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCA-3' (서열번호 76)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCA-3 '(SEQ ID NO: 76) 선형-RT4Linear-RT4 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCAG-3' (서열번호 77)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCAG-3 '(SEQ ID NO: 77) 선형-RT5Linear-RT5 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCAGC-3' (서열번호 78)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCAGC-3 '(SEQ ID NO: 78) 선형-RT6Linear-RT6 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCAGCC-3' (서열번호 79)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCAGCC-3 '(SEQ ID NO: 79) 선형-RT7Linear-RT7 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCAGCCG-3' (서열번호 80)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCAGCCG-3 '(SEQ ID NO: 80) 선형-RT8Linear-RT8 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCAGCCGC-3' (서열번호 81)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCAGCCGC-3 '(SEQ ID NO: 81)

구분division 이름name 서열order 주형template miR122-5pmiR122-5p 5'-UGGAGUGUGACAAUGGUGUUUG-3' (서열번호 82)5'-UGGAGUGUGACAAUGGUGUUUG-3 '(SEQ ID NO: 82) PCR 프라이머PCR primer 정방향 프라이머Forward primer 5'-CGTGGAGTGTGACAATGG-3' (서열번호 83)5'-CGTGGAGTGTGACAATGG-3 '(SEQ ID NO: 83) 역방향 프라이머Reverse primer 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3' (서열번호 84)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3 '(SEQ ID NO: 84) 역전사 프라이머Reverse primer V1-RT0V1-RT0 5'-TGTCACACTCCA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC-3' (서열번호 85)5'-TGTCACACTCCA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC-3 '(SEQ ID NO: 85) V1-RT1V1-RT1 5'-TGTCACACTCCA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC C-3' (서열번호 86)5'-TGTCACACTCCA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC C-3 '(SEQ ID NO: 86) V1-RT2V1-RT2 5'-TGTCACACTCCA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CA-3' (서열번호 87)5'-TGTCACACTCCA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CA-3 '(SEQ ID NO: 87) V1-RT3V1-RT3 5'-TGTCACACTCCA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CAA-3' (서열번호 88)5'-TGTCACACTCCA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CAA-3 '(SEQ ID NO: 88) V1-RT4V1-RT4 5'-TGTCACACTCCA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CAAA-3' (서열번호 89)5'-TGTCACACTCCA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CAAA-3 '(SEQ ID NO: 89) V1-RT5V1-RT5 5'-TGTCACACTCCA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CAAAC-3' (서열번호 90)5'-TGTCACACTCCA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CAAAC-3 '(SEQ ID NO: 90) V1-RT6V1-RT6 5'-TGTCACACTCCA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CAAACA-3' (서열번호 91)5'-TGTCACACTCCA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CAAACA-3 '(SEQ ID NO: 91) V1-RT7V1-RT7 5'-TGTCACACTCCA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CAAACAC-3' (서열번호 92)5'-TGTCACACTCCA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CAAACAC-3 '(SEQ ID NO: 92) V1-RT8V1-RT8 5'-TGTCACACTCCA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CAAACACC-3' (서열번호 93)5'-TGTCACACTCCA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC CAAACACC-3 '(SEQ ID NO: 93) 선형-RT0Linear-RT0 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3' (서열번호 94)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3 '(SEQ ID NO: 94) 선형-RT1Linear-RT1 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT C-3' (서열번호 95)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT C-3 '(SEQ ID NO: 95) 선형-RT2Linear-RT2 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CA-3' (서열번호 96)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CA-3 '(SEQ ID NO: 96) 선형-RT3Linear-RT3 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CAA-3' (서열번호 97)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CAA-3 '(SEQ ID NO: 97) 선형-RT4Linear-RT4 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CAAA-3' (서열번호 98)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CAAA-3 '(SEQ ID NO: 98) 선형-RT5Linear-RT5 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CAAAC-3' (서열번호 99)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CAAAC-3 '(SEQ ID NO: 99) 선형-RT6Linear-RT6 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CAAACA-3' (서열번호 100)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CAAACA-3 '(SEQ ID NO: 100) 선형-RT7Linear-RT7 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CAAACAC-3' (서열번호 101)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CAAACAC-3 '(SEQ ID NO: 101) 선형-RT8Linear-RT8 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CAAACACC-3' (서열번호 102)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT CAAACACC-3 '(SEQ ID NO: 102)

구분division 이름name 서열order 주형template miR200cmiR200c 5'-UAAUACUGCCGGGUAAUGAUGGA-3' (서열번호 103)5'-UAAUACUGCCGGGUAAUGAUGGA-3 '(SEQ ID NO: 103) PCR 프라이머PCR primer 정방향 프라이머Forward primer 5'-GGTAATACTGCCGGGTAATGA-3' (서열번호 104)5'-GGTAATACTGCCGGGTAATGA-3 '(SEQ ID NO: 104) 역방향 프라이머Reverse primer 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3' (서열번호 105)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3 '(SEQ ID NO: 105) 역전사 프라이머Reverse primer V1-RT0V1-RT0 5'-CCGGCAGTATTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC-3'
(서열번호 106)5'-CCGGCAGTATTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC-3 '
(SEQ ID NO: 106) V1-RT1V1-RT1 5'-CCGGCAGTATTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC T-3'
(서열번호 107)5'-CCGGCAGTATTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC T-3 '
(SEQ ID NO: 107) V1-RT2V1-RT2 5'-CCGGCAGTATTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TC-3'
(서열번호 108)5'-CCGGCAGTATTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TC-3 '
(SEQ ID NO: 108) V1-RT3V1-RT3 5'-CCGGCAGTATTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCC-3'
(서열번호 109)5'-CCGGCAGTATTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCC-3 '
(SEQ ID NO: 109) V1-RT4V1-RT4 5'-CCGGCAGTATTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCCA-3'
(서열번호 110)5'-CCGGCAGTATTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCCA-3 '
(SEQ ID NO: 110) V1-RT5V1-RT5 5'-CCGGCAGTATTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCCAT-3' (서열번호 111)5'-CCGGCAGTATTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCCAT-3 '(SEQ ID NO: 111) V1-RT6V1-RT6 5'-CCGGCAGTATTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCCATC-3' (서열번호 112)5'-CCGGCAGTATTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCCATC-3 '(SEQ ID NO: 112) V1-RT7V1-RT7 5'-CCGGCAGTATTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCCATCA-3' (서열번호 113)5'-CCGGCAGTATTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCCATCA-3 '(SEQ ID NO: 113) V1-RT8V1-RT8 5'-CCGGCAGTATTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCCATCAT-3' (서열번호 114)5'-CCGGCAGTATTA GTGCAGGGTCCGAGGT ACTGGATACGAC TCCATCAT-3 '(SEQ ID NO: 114) 선형-RT0Linear-RT0 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3' (서열번호 115)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3 '(SEQ ID NO: 115) 선형-RT1Linear-RT1 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT T-3' (서열번호 116)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT T-3 '(SEQ ID NO: 116) 선형-RT2Linear-RT2 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TC-3' (서열번호 117)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TC-3 '(SEQ ID NO: 117) 선형-RT3Linear-RT3 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCC-3' (서열번호 118)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCC-3 '(SEQ ID NO: 118) 선형-RT4Linear-RT4 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCCA-3' (서열번호 119)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCCA-3 '(SEQ ID NO: 119) 선형-RT5Linear-RT5 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCCAT-3' (서열번호 120)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCCAT-3 '(SEQ ID NO: 120) 선형-RT6Linear-RT6 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCCATC-3' (서열번호 121)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCCATC-3 '(SEQ ID NO: 121) 선형-RT7Linear-RT7 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCCATCA-3' (서열번호 122)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCCATCA-3 '(SEQ ID NO: 122) 선형-RT8Linear-RT8 5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCCATCAT-3' (서열번호 123)5'-GTGCAGGGTCCGAGGT TCCATCAT-3 '(SEQ ID NO: 123)

도 3a 내지 도 3e는 역전사 프라이머의 3' 말단 프라이밍 영역의 길이를 줄이는 경우 클램프에 따른 역전사 효율에 미치는 영향을 나타낸다(도 3a: miR-16, 도 3b: miR-21, 도 3c: miR-210, 도 3d: miR-122-5p, 도 3e: miR-200c). 도 3a 내지 도 3e에 나타난 바와 같이, 역전사 반응시 클램프를 사용함에 따라 역전사 프라이머의 3' 말단 프라이밍 영역의 길이를 줄일 수 있음을 확인하였다.FIGS. 3A to 3E show the effect of reducing the length of the 3'-terminal priming region of the reverse transcription primer on the reverse transcription efficiency depending on the clamp (FIG. 3A: miR-16, FIG. 3B: miR-21, , Fig. 3d: miR-122-5p, Fig. 3e: miR-200c). As shown in FIGS. 3A to 3E, it was confirmed that the length of the 3'-terminal priming region of the reverse transcription primer can be reduced by using a clamp in the reverse transcription reaction.

<110> SAM SUNG ELECTRONICS <120> Polynucleotide and use thereof <130> PN098457 <160> 123 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> miR-16 <400> 1 uagcagcacg uaaauauugg cg 22 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for miR-16 <400> 2 cgcgctagca gcacgtaaat 20 <210> 3 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for miR-16 <400> 3 gtgcagggtc cgaggt 16 <210> 4 <211> 46 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 4 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtat tcgcactgga tacgac 46 <210> 5 <211> 47 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 5 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtat tcgcactgga tacgacc 47 <210> 6 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 6 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtat tcgcactgga tacgaccg 48 <210> 7 <211> 49 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 7 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtat tcgcactgga tacgaccgc 49 <210> 8 <211> 50 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 8 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtat tcgcactgga tacgaccgcc 50 <210> 9 <211> 52 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 9 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtat tcgcactgga tacgaccgcc aa 52 <210> 10 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 10 gtgcagggtc cgaggtattc gcactggata cgac 34 <210> 11 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 11 gtgcagggtc cgaggtattc gcactggata cgacc 35 <210> 12 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 12 gtgcagggtc cgaggtattc gcactggata cgaccg 36 <210> 13 <211> 37 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 13 gtgcagggtc cgaggtattc gcactggata cgaccgc 37 <210> 14 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 14 gtgcagggtc cgaggtattc gcactggata cgaccgcc 38 <210> 15 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 15 gtgcagggtc cgaggtattc gcactggata cgaccgccaa 40 <210> 16 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Clamp oligonucleotide <400> 16 gtcgtatcca gtgcga 16 <210> 17 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Clamp oligonucleotide <400> 17 gtcgtatcca gtgc 14 <210> 18 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Clamp oligonucleotide <400> 18 gtcgtatcca gt 12 <210> 19 <211> 10 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Clamp oligonucleotide <400> 19 gtcgtatcca 10 <210> 20 <211> 8 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Clamp oligonucleotide <400> 20 gtcgtatc 8 <210> 21 <211> 6 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Clamp oligonucleotide <400> 21 gtcgta 6 <210> 22 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 22 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac 40 <210> 23 <211> 41 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 23 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac c 41 <210> 24 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 24 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac cg 42 <210> 25 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 25 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac cgc 43 <210> 26 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 26 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac cgcc 44 <210> 27 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 27 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac cgcca 45 <210> 28 <211> 46 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 28 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac cgccaa 46 <210> 29 <211> 47 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 29 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac cgccaat 47 <210> 30 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 30 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac cgccaata 48 <210> 31 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 31 gtgcagggtc cgaggt 16 <210> 32 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 32 gtgcagggtc cgaggtc 17 <210> 33 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 33 gtgcagggtc cgaggtcg 18 <210> 34 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 34 gtgcagggtc cgaggtcgc 19 <210> 35 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 35 gtgcagggtc cgaggtcgcc 20 <210> 36 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 36 gtgcagggtc cgaggtcgcc a 21 <210> 37 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 37 gtgcagggtc cgaggtcgcc aa 22 <210> 38 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 38 gtgcagggtc cgaggtcgcc aat 23 <210> 39 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 39 gtgcagggtc cgaggtcgcc aata 24 <210> 40 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> miR-21 <400> 40 uagcuuauca gacugauguu ga 22 <210> 41 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for miR-21 <400> 41 cggtagctta tcagactgat gt 22 <210> 42 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for miR-21 <400> 42 gtgcagggtc cgaggt 16 <210> 43 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 43 tctgataagc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac 40 <210> 44 <211> 41 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 44 tctgataagc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac t 41 <210> 45 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 45 tctgataagc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tc 42 <210> 46 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 46 tctgataagc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tca 43 <210> 47 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 47 tctgataagc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcaa 44 <210> 48 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 48 tctgataagc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcaac 45 <210> 49 <211> 46 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 49 tctgataagc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcaaca 46 <210> 50 <211> 47 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 50 tctgataagc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcaacat 47 <210> 51 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 51 tctgataagc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcaacatc 48 <210> 52 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 52 gtgcagggtc cgaggt 16 <210> 53 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 53 gtgcagggtc cgaggtt 17 <210> 54 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 54 gtgcagggtc cgaggttc 18 <210> 55 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 55 gtgcagggtc cgaggttca 19 <210> 56 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 56 gtgcagggtc cgaggttcaa 20 <210> 57 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 57 gtgcagggtc cgaggttcaa c 21 <210> 58 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 58 gtgcagggtc cgaggttcaa ca 22 <210> 59 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 59 gtgcagggtc cgaggttcaa cat 23 <210> 60 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 60 gtgcagggtc cgaggttcaa catc 24 <210> 61 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> miR-210 <400> 61 cugugcgugu gacagcggcu ga 22 <210> 62 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for miR-210 <400> 62 ctgtgcgtgt gacagc 16 <210> 63 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for miR-210 <400> 63 gtgcagggtc cgaggt 16 <210> 64 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 64 tcacacgcac aggtgcaggg tccgaggtac tggatacgac 40 <210> 65 <211> 41 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 65 tcacacgcac aggtgcaggg tccgaggtac tggatacgac t 41 <210> 66 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 66 tcacacgcac aggtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tc 42 <210> 67 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 67 tcacacgcac aggtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tca 43 <210> 68 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 68 tcacacgcac aggtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcag 44 <210> 69 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 69 tcacacgcac aggtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcagc 45 <210> 70 <211> 46 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 70 tcacacgcac aggtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcagcc 46 <210> 71 <211> 47 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 71 tcacacgcac aggtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcagccg 47 <210> 72 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 72 tcacacgcac aggtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcagccgc 48 <210> 73 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 73 gtgcagggtc cgaggt 16 <210> 74 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 74 gtgcagggtc cgaggtt 17 <210> 75 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 75 gtgcagggtc cgaggttc 18 <210> 76 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 76 gtgcagggtc cgaggttca 19 <210> 77 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 77 gtgcagggtc cgaggttcag 20 <210> 78 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 78 gtgcagggtc cgaggttcag c 21 <210> 79 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 79 gtgcagggtc cgaggttcag cc 22 <210> 80 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 80 gtgcagggtc cgaggttcag ccg 23 <210> 81 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 81 gtgcagggtc cgaggttcag ccgc 24 <210> 82 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> miR-122-5p <400> 82 uggaguguga caaugguguu ug 22 <210> 83 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for miR-122-5p <400> 83 cgtggagtgt gacaatgg 18 <210> 84 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for miR-122-5p <400> 84 gtgcagggtc cgaggt 16 <210> 85 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 85 tgtcacactc cagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac 40 <210> 86 <211> 41 <212> DNA <213> Artificial Sequence 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Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 121 gtgcagggtc cgaggttcca tc 22 <210> 122 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 122 gtgcagggtc cgaggttcca tca 23 <210> 123 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 123 gtgcagggtc cgaggttcca tcat 24 <110> SAM SUNG ELECTRONICS <120> Polynucleotide and use thereof <130> PN098457 <160> 123 <170> Kopatentin 2.0 <210> 1 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> miR-16 <400> 1 uagcagcacg uaaauauugg cg 22 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for miR-16 <400> 2 cgcgctagca gcacgtaaat 20 <210> 3 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for miR-16 <400> 3 gtgcagggtc cgaggt 16 <210> 4 <211> 46 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 4 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtat tcgcactgga tacgac 46 <210> 5 <211> 47 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 5 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtat tcgcactgga tacgacc 47 <210> 6 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 6 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtat tcgcactgga tacgaccg 48 <210> 7 <211> 49 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 7 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtat tcgcactgga tacgaccgc 49 <210> 8 <211> 50 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 8 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtat tcgcactgga tacgaccgcc 50 <210> 9 <211> 52 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 9 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtat tcgcactgga tacgaccgcc aa 52 <210> 10 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 10 gtgcagggtc cgaggtattc gcactggata cgac 34 <210> 11 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 11 gtgcagggtc cgaggtattc gcactggata cgacc 35 <210> 12 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 12 gtgcagggtc cgaggtattc gcactggata cgaccg 36 <210> 13 <211> 37 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 13 gtgcagggtc cgaggtattc gcactggata cgaccgc 37 <210> 14 <211> 38 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 14 gtgcagggtc cgaggtattc gcactggata cgaccgcc 38 <210> 15 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 15 gtgcagggtc cgaggtattc gcactggata cgaccgccaa 40 <210> 16 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Clamp oligonucleotide <400> 16 gtcgtatcca gtgcga 16 <210> 17 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Clamp oligonucleotide <400> 17 gtcgtatcca gtgc 14 <210> 18 <211> 12 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Clamp oligonucleotide <400> 18 gtcgtatcca gt 12 <210> 19 <211> 10 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Clamp oligonucleotide <400> 19 gtcgtatcca 10 <210> 20 <211> 8 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Clamp oligonucleotide <400> 20 gtcgtatc 8 <210> 21 <211> 6 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Clamp oligonucleotide <400> 21 gtcgta 6 <210> 22 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 22 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac 40 <210> 23 <211> 41 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 23 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac c 41 <210> 24 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 24 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac cg 42 <210> 25 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 25 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac cgc 43 <210> 26 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 26 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac cgcc 44 <210> 27 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 27 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac cgcca 45 <210> 28 <211> 46 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 28 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac cgccaa 46 <210> 29 <211> 47 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 29 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac cgccaat 47 <210> 30 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 30 tacgtgctgc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac cgccaata 48 <210> 31 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 31 gtgcagggtc cgaggt 16 <210> 32 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 32 gtgcagggtc cgaggtc 17 <210> 33 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 33 gtgcagggtc cgaggtcg 18 <210> 34 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 34 gtgcagggtc cgaggtcgc 19 <210> 35 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 35 gtgcagggtc cgaggtcgcc 20 <210> 36 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 36 gtgcagggtc cgaggtcgcc a 21 <210> 37 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 37 gtgcagggtc cgaggtcgcc aa 22 <210> 38 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 38 gtgcagggtc cgaggtcgcc aat 23 <210> 39 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 39 gtgcagggtc cgaggtcgcc aata 24 <210> 40 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> miR-21 <400> 40 uagcuuauca gacugauguu ga 22 <210> 41 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for miR-21 <400> 41 cggtagctta tcagactgat gt 22 <210> 42 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for miR-21 <400> 42 gtgcagggtc cgaggt 16 <210> 43 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 43 tctgataagc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac 40 <210> 44 <211> 41 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 44 tctgataagc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac t 41 <210> 45 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 45 tctgataagc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tc 42 <210> 46 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 46 tctgataagc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tca 43 <210> 47 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 47 tctgataagc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcaa 44 <210> 48 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 48 tctgataagc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcaac 45 <210> 49 <211> 46 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 49 tctgataagc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcaaca 46 <210> 50 <211> 47 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 50 tctgataagc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcaacat 47 <210> 51 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 51 tctgataagc tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcaacatc 48 <210> 52 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 52 gtgcagggtc cgaggt 16 <210> 53 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 53 gtgcagggtc cgaggtt 17 <210> 54 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 54 gtgcagggtc cgaggttc 18 <210> 55 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 55 gtgcagggtc cgaggttca 19 <210> 56 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 56 gtgcagggtc cgaggttcaa 20 <210> 57 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 57 gtgcagggtc cgaggttcaa c 21 <210> 58 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 58 gtgcagggtc cgaggttcaa ca 22 <210> 59 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 59 gtgcagggtc cgaggttcaa cat 23 <210> 60 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 60 gtgcagggtc cgaggttcaa catc 24 <210> 61 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> miR-210 <400> 61 cugugcgugu gacagcggcu ga 22 <210> 62 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for miR-210 <400> 62 ctgtgcgtgt gacagc 16 <210> 63 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for miR-210 <400> 63 gtgcagggtc cgaggt 16 <210> 64 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 64 tcacacgcac aggtgcaggg tccgaggtac tggatacgac 40 <210> 65 <211> 41 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 65 tcacacgcac aggtgcaggg tccgaggtac tggatacgac t 41 <210> 66 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 66 tcacacgcac aggtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tc 42 <210> 67 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 67 tcacacgcac aggtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tca 43 <210> 68 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 68 tcacacgcac aggtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcag 44 <210> 69 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 69 tcacacgcac aggtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcagc 45 <210> 70 <211> 46 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 70 tcacacgcac aggtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcagcc 46 <210> 71 <211> 47 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 71 tcacacgcac aggtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcagccg 47 <210> 72 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 72 tcacacgcac aggtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcagccgc 48 <210> 73 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 73 gtgcagggtc cgaggt 16 <210> 74 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 74 gtgcagggtc cgaggtt 17 <210> 75 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 75 gtgcagggtc cgaggttc 18 <210> 76 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 76 gtgcagggtc cgaggttca 19 <210> 77 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 77 gtgcagggtc cgaggttcag 20 <210> 78 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 78 gtgcagggtc cgaggttcag c 21 <210> 79 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 79 gtgcagggtc cgaggttcag cc 22 <210> 80 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 80 gtgcagggtc cgaggttcag ccg 23 <210> 81 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 81 gtgcagggtc cgaggttcag ccgc 24 <210> 82 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> miR-122-5p <400> 82 uggaguguga caaugguguu ug 22 <210> 83 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for miR-122-5p <400> 83 cgtggagtgt gacaatgg 18 <210> 84 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for miR-122-5p <400> 84 gtgcagggtc cgaggt 16 <210> 85 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 85 tgtcacactc cagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac 40 <210> 86 <211> 41 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 86 tgtcacactc cagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac c 41 <210> 87 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 87 tgtcacactc cagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac ca 42 <210> 88 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 88 tgtcacactc cagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac caa 43 <210> 89 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 89 tgtcacactc cagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac caaa 44 <210> 90 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 90 tgtcacactc cagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac caaac 45 <210> 91 <211> 46 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 91 tgtcacactc cagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac caaaca 46 <210> 92 <211> 47 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 92 tgtcacactc cagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac caaacac 47 <210> 93 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 93 tgtcacactc cagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac caaacacc 48 <210> 94 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 94 gtgcagggtc cgaggt 16 <210> 95 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 95 gtgcagggtc cgaggtc 17 <210> 96 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 96 gtgcagggtc cgaggtca 18 <210> 97 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 97 gtgcagggtc cgaggtcaa 19 <210> 98 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 98 gtgcagggtc cgaggtcaaa 20 <210> 99 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 99 gtgcagggtc cgaggtcaaa c 21 <210> 100 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 100 gtgcagggtc cgaggtcaaa ca 22 <210> 101 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 101 gtgcagggtc cgaggtcaaa cac 23 <210> 102 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 102 gtgcagggtc cgaggtcaaa cacc 24 <210> 103 <211> 23 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> miR-200c <400> 103 uaauacugcc ggguaaugau gga 23 <210> 104 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for miR-200c <400> 104 ggtaatactg ccgggtaatg a 21 <210> 105 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for miR-200c <400> 105 gtgcagggtc cgaggt 16 <210> 106 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 106 ccggcagtat tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac 40 <210> 107 <211> 41 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 107 ccggcagtat tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac t 41 <210> 108 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 108 ccggcagtat tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tc 42 <210> 109 <211> 43 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 109 ccggcagtat tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcc 43 <210> 110 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 110 ccggcagtat tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tcca 44 <210> 111 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 111 ccggcagtat tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tccat 45 <210> 112 <211> 46 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 112 ccggcagtat tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tccatc 46 <210> 113 <211> 47 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 113 ccggcagtat tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tccatca 47 <210> 114 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 114 ccggcagtat tagtgcaggg tccgaggtac tggatacgac tccatcat 48 <210> 115 <211> 16 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 115 gtgcagggtc cgaggt 16 <210> 116 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 116 gtgcagggtc cgaggtt 17 <210> 117 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 117 gtgcagggtc cgaggttc 18 <210> 118 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 118 gtgcagggtc cgaggttcc 19 <210> 119 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 119 gtgcagggtc cgaggttcca 20 <210> 120 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 120 gtgcagggtc cgaggttcca t 21 <210> 121 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 121 gtgcagggtc cgaggttcca tc 22 <210> 122 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 122 gtgcagggtc cgaggttcca tca 23 <210> 123 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse transcription primer <400> 123 gtgcagggtc cgaggttcca tcat 24

Claims (20)

표적 핵산;
3'-말단으로부터 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산의 3' 말단 영역과 상보적인 제2 상보영역, 제2 상보영역의 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산의 5' 말단 영역과 상보적인 하나 이상의 제3 상보영역, 및 제2 상보 영역과 제3 상보 영역의 사이에 표적 핵산에 상보적이지 않은 영역을 포함하는 제2 폴리뉴클레오티드; 및
제2 폴리뉴클레오티드의 표적 핵산에 상보적이지 않은 영역에 상보적이고 제2 상보영역의 5' 말단으로부터 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드와 상보적인 제1 상보영역을 포함하는 제1 폴리뉴클레오티드로서, 제1 폴리뉴클레오티드의 3' 말단이 변형된 것인 제1 폴리뉴클레오티드를 포함하는,
표적 핵산을 증폭하기 위한 조성물.A target nucleic acid;
One or more consecutive nucleotides from the 3'-end are complementary to the 3'terminal region of the target nucleic acid, one or more consecutive nucleotides in the 5'direction of the second complementary region are complementary to the 5'terminal region of the target nucleic acid A second polynucleotide comprising the third complementary region and a region not complementary to the target nucleic acid between the second and third complementary regions; And
A first polynucleotide comprising a first complementary region complementary to a region not complementary to the target nucleic acid of the second polynucleotide and complementary to at least one contiguous nucleotide in the 5 'direction from the 5' end of the second complementary region, 1 &lt; / RTI &gt; polynucleotide, wherein the 3 &apos; end of the first polynucleotide is modified.
A composition for amplifying a target nucleic acid. 청구항 1에 있어서, 제1 폴리뉴클레오티드의 제1 상보영역은 제2 폴리뉴클레오티드의 제2 상보영역의 5' 말단으로부터 0 내지 20 뉴클레오티드에 의하여 이격된 위치로부터 시작하는 하나 이상의 연속 뉴클레오티드와 상보적인 것인 조성물.3. The polynucleotide according to claim 1, wherein the first complementary region of the first polynucleotide is complementary to one or more contiguous nucleotides starting from a position spaced from 0 to 20 nucleotides from the 5'end of the second complementary region of the second polynucleotide Composition. 청구항 1에 있어서, 제1 폴리뉴클레오티드의 길이는 2 내지 100 뉴클레오티드인 것인 조성물.The composition of claim 1, wherein the length of the first polynucleotide is 2 to 100 nucleotides. 청구항 1에 있어서, 제1 폴리뉴클레오티드는 DNA, RNA, 펩티드 핵산(Peptide Nucleic Acid; PNA), 잠금 핵산(Locked Nucleic Acid; LNA), 뉴클레오티드 유사체 또는 이들의 조합을 포함하는 것인 조성물.The composition of claim 1, wherein the first polynucleotide comprises DNA, RNA, Peptide Nucleic Acid (PNA), Locked Nucleic Acid (LNA), a nucleotide analog, or a combination thereof. 삭제delete 청구항 1에 있어서, 제1 폴리뉴클레오티드의 3' 말단은 역 뉴클레오티드(inverted nucleotide), 디데옥시뉴클레오티드, 아민기, 알킬 사슬 모이어티 또는 이들의 조합을 포함하는 것인 조성물.The composition of claim 1, wherein the 3 'end of the first polynucleotide comprises an inverted nucleotide, a dideoxynucleotide, an amine group, an alkyl chain moiety, or a combination thereof. 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 표적 핵산;
3'-말단으로부터 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산의 3' 말단 영역과 상보적인 제2 상보영역, 제2 상보영역의 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산의 5' 말단 영역과 상보적인 하나 이상의 제3 상보영역, 및 제2 상보 영역과 제3 상보 영역의 사이에 표적 핵산에 상보적이지 않은 영역을 포함하는 제2 폴리뉴클레오티드; 및
제2 폴리뉴클레오티드의 표적 핵산에 상보적이지 않은 영역에 상보적이고 제2 상보영역의 5' 말단으로부터 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드와 상보적인 제1 상보영역을 포함하는 제1 폴리뉴클레오티드로서, 제1 폴리뉴클레오티드의 3' 말단이 변형된 것인 제1 폴리뉴클레오티드를 포함하는,
표적 핵산을 증폭하기 위한 키트.A target nucleic acid;
One or more consecutive nucleotides from the 3'-end are complementary to the 3'terminal region of the target nucleic acid, one or more consecutive nucleotides in the 5'direction of the second complementary region are complementary to the 5'terminal region of the target nucleic acid A second polynucleotide comprising the third complementary region and a region not complementary to the target nucleic acid between the second and third complementary regions; And
A first polynucleotide comprising a first complementary region complementary to a region not complementary to the target nucleic acid of the second polynucleotide and complementary to at least one contiguous nucleotide in the 5 'direction from the 5' end of the second complementary region, 1 &lt; / RTI &gt; polynucleotide, wherein the 3 &apos; end of the first polynucleotide is modified.
A kit for amplifying a target nucleic acid. 청구항 11에 있어서, 제1 폴리뉴클레오티드의 제1 상보영역은 제2 폴리뉴클레오티드의 제2 상보영역의 5' 말단으로부터 0 내지 20 뉴클레오티드에 의하여 이격된 위치로부터 시작하는 하나 이상의 연속 뉴클레오티드와 상보적인 것인 키트.12. The method of claim 11 wherein the first complementary region of the first polynucleotide is complementary to one or more contiguous nucleotides starting from a position spaced from 0 to 20 nucleotides from the 5'end of the second complementary region of the second polynucleotide Kits. 청구항 11에 있어서, 제1 폴리뉴클레오티드의 길이는 2 뉴클레오티드 내지 100 뉴클레오티드인 것인 키트.12. The kit of claim 11, wherein the length of the first polynucleotide is from 2 nucleotides to 100 nucleotides. 청구항 11에 있어서, 제1 폴리뉴클레오티드는 DNA, RNA, PNA, LNA, 뉴클레오티드 유사체 또는 이들의 조합을 포함하는 것인 키트.12. The kit of claim 11, wherein the first polynucleotide comprises DNA, RNA, PNA, LNA, nucleotide analogs or combinations thereof. 표적 핵산과 제2 폴리뉴클레오티드를 혼성화시키는 단계로서,
상기 제2 폴리뉴클레오티드는 3'-말단으로부터 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산의 3' 말단 영역과 상보적인 제2 상보영역, 제2 상보영역의 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드가 표적 핵산의 5' 말단 영역과 상보적인 하나 이상의 제3 상보영역, 및 제2 상보 영역과 제3 상보 영역의 사이에 표적 핵산에 상보적이지 않은 영역을 포함하는 것인 단계;
상기 혼성화 산물을 제1 폴리뉴클레오티드와 혼성화시키는 단계로서,
상기 제1 폴리뉴클레오티드는 상기 제2 폴리뉴클레오티드의 표적 핵산에 상보적이지 않은 영역에 상보적이고 제2 상보영역의 5' 말단으로부터 5' 방향의 하나 이상의 연속 뉴클레오티드와 상보적인 제1 상보영역을 포함하고, 제1 폴리뉴클레오티드의 3' 말단이 변형된 것인 단계; 및
상기 혼성화 산물을 핵산 폴리머라제의 존재 하에서 인큐베이션시켜, 상기 제2 폴리뉴클레오티드의 3'-말단으로부터 상기 표적 핵산에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 연장시키는 단계를 포함하는,
표적 핵산에 상보적인 뉴클레오티드 서열을 생산하는 방법.Hybridizing a second polynucleotide with a target nucleic acid,
Wherein the second polynucleotide comprises a second complementary region in which one or more consecutive nucleotides from the 3'-terminus are complementary to the 3'-terminal region of the target nucleic acid, one or more consecutive nucleotides in the 5'- At least one third complementary region complementary to the target region, and a region not complementary to the target nucleic acid between the second complementary region and the third complementary region;
Hybridizing the hybridization product with a first polynucleotide,
The first polynucleotide comprises a first complementary region complementary to a region not complementary to the target nucleic acid of the second polynucleotide and complementary to at least one contiguous nucleotide in the 5 'direction from the 5' end of the second complementary region , Wherein the 3 'end of the first polynucleotide is modified; And
Incubating the hybridization product in the presence of a nucleic acid polymerase to elongate a nucleotide sequence complementary to the target nucleic acid from the 3'-end of the second polynucleotide.
A method for producing a nucleotide sequence complementary to a target nucleic acid. 청구항 15에 있어서, 표적 핵산과 제2 폴리뉴클레오티드를 혼성화시키는 단계 및 혼성화 산물을 제1 폴리뉴클레오티드와 혼성화시키는 단계는 동시 또는 순차적으로 수행되는 것인 방법.16. The method of claim 15, wherein the step of hybridizing the target nucleic acid and the second polynucleotide and the step of hybridizing the hybridization product with the first polynucleotide are performed simultaneously or sequentially. 청구항 15에 있어서, 핵산 폴리머라제는 가닥 치환 핵산 폴리머라제인 것인 방법. 16. The method of claim 15, wherein the nucleic acid polymerase is a strand-displaced nucleic acid polymerase. 청구항 17에 있어서, 가닥 치환 핵산 폴리머라제는 HIV(Human Immunodeficiency Virus), MMLV(Moloney Murine Leukemia Virus), 또는 AMV(Avian Myeloblastosis Virus)로부터 유래된 하나 이상의 역전사 효소인 것인 방법.18. The method of claim 17, wherein the strand-displacing nucleic acid polymerase is at least one reverse transcriptase derived from HIV (Human Immunodeficiency Virus), Moloney Murine Leukemia Virus (MMLV), or Avian Myeloblastosis Virus (AMV). 청구항 15에 있어서, 상기 표적 핵산은 RNA인 것인 방법. 16. The method of claim 15, wherein the target nucleic acid is RNA. 청구항 15에 있어서, 상기 표적 핵산은 마이크로RNA(microRNA; miRNA), 짧은 간섭 RNA(small interfering RNA; siRNA) 또는 tRNA인 것이 방법.16. The method of claim 15, wherein the target nucleic acid is a microRNA (miRNA), a small interfering RNA (siRNA), or a tRNA.
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