KR101922635B1 - 마유 및 새싹 추출물을 함유하는 피부 염증 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 마유 및 새싹 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 염증 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 정제마유 및 유채새싹, 들깨새싹 및 보리새싹으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 새싹 추출물의 혼합 조성물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 우수한 염증 억제 효과 및 여드름 억제 효과를 가진다. 또한, 본 발명의 정제마유, 새싹 추출물 및 이들의 혼합 조성물은 천연물 유래의 물질이며, 세포 독성을 일으키지 않으므로 화장료 조성물로 활용도가 높다.

Description

마유 및 새싹 추출물을 함유하는 피부 염증 개선용 화장료 조성물{Cosmetic composition for improving skin inflammation comprising horse oil and sprout extracts}

본 발명은 마유 및 새싹 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 염증 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부 노화는 내적 요인과 외적 요인이 포함된 복잡한 과정에 의해 진행된다. 즉, 비가역적인 조직의 퇴행성에 의한 만성적인 손상에 의한 내적 노화 과정과 자외선에 의한 외적 노화과정이 있다. 즉 자외선은 피부 손상을 가져 오는 가장 주된 환경적 요인이다. 피부가 자외선에 노출되면 세포 부종 등의 피부 변형을 일으키게 되는데, 나아가 만성적으로 노출이 계속되면 여러 가지 염증 인자들이 발생되고 피부조직 내의 콜라겐조직의 파괴, 캐라틴 세포의 증식, 그리고 멜라닌 세포의 정상적인 기능을 변화시키므로 잔주름, 거침, 건조증, 피부 처짐 그리고 착색 등의 효과를 가져온다.

피부에서의 염증반응(inflammatory response)은 물리적 자극이나 화학 물질, 세균 등에 의해 피부손상이 유발될 때 이를 방어하기 위한 작용으로서 시작되며, 다양한 면역세포와 염증 유도 사이토카인이 관여한다. TNF-α(tumor mecrosis factor-α), IL-1β(interleukin-1β), IL-6(interleukin-6), IL-8(interleukin-8) 등이 대표적인 염증 유도 사이토카인이다. 또한, 활성화된 대식세포(macrophage)는 염증 유도 사이토카인뿐만 아니라 일산화질소(nitric oxide: NO)나 프로스타글란딘(prostaglandin) E2 (PGE2)를 과도하게 생성하여 염증 과정을 더욱 활성화시킨다.

염증성 피부 장애가 초래할 수 있는 질환 중 하나인 여드름(acne vulgaris)은 주로 사춘기에 호르몬의 변화에 의한 피지선 내의 염증성 피부 질환이다. 여드름의 원인으로는 안드로젠에 의해 활성화된 과다한 피지생성과 피지선의 확대, 모피지선내의 표피 각질 형성세포들의 증식, 모낭 각질세포들의 불완전한 탈락과 이에 의한 모피지선의 막힘, 그리고 Propionibacterium acnes(P.acnes)라 불리우는 박테리아에 의한 염증 등이 잘 알려져있다. 지금까지 알려진 치료제로는 여러 가지 형태의 레티놀산이 있는데, 이는 피부의 피지의 생성을 억제하며 피지선의 확대를 막아준다. 또한, P. acnes의 번식을 억제하는 항생제 요법도 여드름 치료법으로 알려져 있다. 그러나 이들 레티놀산이나 항생제의 경우 피부 염증을 일으킬 수 있고, 피부에 자극적이며 박테리아 내성 등의 부작용을 가지므로 그 사용에 제한을 가져 오게된다.

이러한 배경하에 본 발명자들은 염증 억제 효과를 가지면서 인체 부작용이 적은 새로운 천연물질을 개발하기 위해 계속 연구를 진행한 결과, 마유 및 새싹 추출물이 세포 독성이 없으면서도 항염증 효과를 나타낸다는 사실을 발견함으로써 본 발명을 완성하였다.

한국등록특허 제10-1561588호 한국공개특허 제10-2016-0101492호

따라서, 본 발명의 목적은 마유(horse oil) 및 새싹(sprout) 추출물의 혼합 조성물을 유효성분으로 포함하는 항염증 효과를 갖는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 마유(horse oil) 및 새싹(sprout) 추출물의 혼합 조성물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 마유는 말의 지방육을 녹인 후 정제한 기름인 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 새싹 추출물은 유채새싹(rapessed sprout) 추출물, 들깨새싹(perilla sprout) 추출물 및 보리새싹(barley sprout) 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물인 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 새싹 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 다가 알코올, 탄화수소계 용매 또는 이들의 혼합용매로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출용매를 사용하여 추출한 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 마유는 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 10중량%로 포함되는 것일 수 있고, 상기 새싹 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 10중량%로 포함되는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 여드름 억제 또는 개선 용도를 더 포함하는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 화장료 조성물은 화장수, 영양로션, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 팩, 페이스트, 패치, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 클렌저, 오일, 파운데이션, 메이크업 베이스, 왁스 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 제형인 것일 수 있다.

본 발명의 마유 및 유채새싹, 들깨새싹 및 보리새싹으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 새싹 추출물의 혼합 조성물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 NO 생성 및 여드름균(Propionibacterium acnes)에 의한 염증성 사이토카인 IL-8 생성을 억제할 수 있고 여드름 균에 대한 항균 효과가 우수하여 염증 및 여드름 억제 효과를 가진다. 또한, 본 발명의 정제마유, 새싹 추출물 및 이들의 혼합 조성물은 천연물 유래의 물질이며, 세포 독성을 일으키지 않으므로 화장료 조성물로 유용하게 이용할 수 있다.

도 1은 RAW 264.7 세포에서 새싹 추출물 처리에 따른 세포생존율 및 NO 활성 억제 효과를 측정한 결과를 나타낸 도이다; (a) LPS(1μg/mL) 및/또는 유채새싹 추출물(12.5, 25, 50, 100 및 250μg/mL)을 처리한 경우, (b) LPS(1μg/mL) 및/또는 들깨새싹 추출물(12.5, 25, 50, 100 및 250μg/mL)을 처리한 경우, (c) LPS(1μg/mL) 및/또는 보리새싹 추출물(12.5, 25, 50, 100 및 250μg/mL)을 처리한 경우.
도 2는 THP-1 세포에서 정제마유(1%), 들깨새싹 추출물(250μg/mL), 보리새싹 추출물(250μg/mL) 및 유채새싹 추출물(250μg/mL) 시료를 단독 처리 또는 정제마유와 유채새싹, 들깨새싹 및 보리새싹 추출물 중 어느 하나 이상이 혼합된 혼합 조성물 처리에 따른 세포생존율 및 염증 억제 효과를 측정한 결과를 나타낸 도이다; (a) 여드름균(Propionibacterium acnes)에 의한 염증성 사이토카인 IL-8 생성 억제 효과, (b) 세포생존율에 대한 MTT 분석 결과.

본 발명은 마유, 유채새싹 추출물, 들깨새싹 추출물, 보리새싹 추출물, 및 이들의 혼합 조성물의 염증 억제 효과를 확인하여 피부 염증 및 여드름 개선을 위한 화장료 조성물을 제공한 점에 특징이 있다.

식물의 발아는 식물체의 가장 중요한 시기로써 다양한 생리활동이 일어난다. 이 시기에는 씨앗의 구성성분이 인체 필수성분으로의 변화하면서 필수 아미노산, 비타민(A, C, B1, B2, B3, B5, B6) 및 미네랄이 증가한다고 알려져 있다. 또한 식물성 호르몬인 지베렐린(gibberellin, 분해효소 활성), 사이토키닌(cytokinin 분열촉진, 유근, 유아 발생 촉진), 오옥신(auxin, 유근, 유야 신장과 굴지성 활성) 등의 분비가 촉진된다. 즉, 식물 종자에서 싹이 발아할 때 곰팡이, 박테리아 등 외부의 적으로부터 자신을 방어할 무기로써 여러 생리 활성 물질을 생산하는데, 이들 물질들이 인체 내에서 다양한 기능성을 발휘할 수 있는 것이다.

본 발명에서 "새싹"이란 각 식물의 종자를 육묘판에 파종하고 싹틔우기를 하거나, 종자를 용기 내에서 수분을 공급하여 싹을 틔운 후, 종자가 하얗게 발아되면 육묘판에 파종하는 방법으로 재배하여 짧은 경우 3∼5일, 긴 경우 12∼15일, 일반적으로 8일 전후로 수확한 크기 6∼50㎜의 식물을 의미한다.

본 발명의 유채(Brassica napus L.)는 십자화과에 속하는 한해살이 풀로서 우리나라에서는 주로 남부지방에서 심는데 제주도에서 대부분을 생산하고 있다. 유채는 성인병 예방에 효과적이고, 최근에는 아토피 증상 완화에도 효능이 있다는 연구 결과가 나와있다. 또 여느 봄나물 못지않게 비타민 A와 C가 풍부해 추위에 지친 우리 몸의 저항력을 높여줘 감기 예방 효과도 있다. 유채새싹(rapessed sprout)은 유채유 및 지방산을 함유하며, 유채싹의 카로틴(Carotene) 성분이 사람 피부에서 콜라겐(Collagen) 합성을 증가시킬 수 있다고 알려져있다.

본 발명의 들깨(Perilla frutescens var. japonica Hara)는 꿀풀과에 속하는 일년생 초본식물로 암과 주름억제 효능이 있으며, 실제로 들깨새싹(perilla sprout)은 항산화 테스트에서 콜라게네이즈(MMP-1) 억제 및 섬유아세포증식 효과를 나타내어 주름개선에 탁월한 효능이 있음이 밝혀진바 있다.

본 발명의 보리(Hordeum vulgare L.)는 벼과에 속하는 작물로, 보리새싹(barley sprout)은 루테올린(Luteolin)이 피부 케라틴 세포(Skin keratinocytes cell)에서 UV에 의해 생긴 콜라게네이즈(MMP-1), DNA 손상, ROS 등을 감소시킨다는 연구 결과가 있으며, UV에 의해 생긴 피부 암(Skin cancer)을 억제시킨다는 사실이 보고된 바 있다.

본 발명의 마유(馬油, horse oil)는 말의 지방 조직에서 추출한 지방성분 중국의 고전의학서 명의별록(名醫別錄) 및 본초강목(本草綱目)에는 마유 크림의 효능으로 ‘머리카락을 나게 한다’, ‘손발이 트는 것을 낫게 한다’, ‘혈액순환을 도와준다’ 등의 기록이 전해지며, 5~6세기경 중국에서 의약품으로 사용된 기록이 있을 정도로 예로부터 아시아 지역에서 화상 치료제로 널리 사용되어 왔다. 마유의 주요 성분으로는 팔미톨레산과 세라마이드 등이 있다. 뿐만아니라 마유는 그 성분이 사람의 피지와 매우 흡사하여, 사람 피부와 친화성이 높으며 불포화지방산이 약 60% 이상 포함되어 있어 피부에 불포화지방산을 공급할 수 있는 화장품 원료로 각광받고 있다.

본 발명자들은 이러한 마유 및 새싹 추출물을 화장료로 개발하기 위하여 연구한 결과, 상기 마유 및 새싹 추출물이 세포 독성이 없으면서도 염증 억제 및 여드름 억제 효과를 나타낸다는 사실을 발견함으로써 본 발명을 완성하였다.

특히, 본 발명에서는 마유, 유채새싹 추출물, 들깨새싹 추출물, 보리새싹 추출물 및 이들의 혼합 조성물이 NO 소거 활성 및 여드름균(Propionibacterium acnes)으로 유도된 염증성 사이토카인인 IL-8의 생성을 억제하는 효과를 나타내며, 상기 마유 또는 새싹 추출물을 단독으로 사용하는 경우보다 혼합 조성물을 사용할 경우 상기 효과가 현저하게 향상된다는 사실을 실험적으로 입증하였고, 본 발명의 정제마유 및 새싹 추출물의 혼합 조성물과 이를 포함하는 화장료 조성물은 여드름균에 대한 항균 효과, 여드름 개선 및 피지 분비 감소 효과를 가지며, 염증 개선 효과가 우수함을 입증하였다(실시예 1 내지 6 참조).

따라서, 본 발명은 마유(horse oil) 및 새싹(sprout) 추출물의 혼합 조성물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 화장료 조성물을 제공함에 그 특징이 있다.

본 발명에 따른 상기 마유는 말의 지방육을 녹인 후 정제한 기름(정제마유)일 수 있다. 바람직하게는 말의 지방육을 잘게 잘라 전열기(hot plate)를 60~100℃에 맞춰 녹인 후 드라이 오븐 안에서 여과지를 이용하여 여과할 수 있다. 상기 과정을 통해 여과된 마유는 셀라이트와 활성탄이 혼합된 여과지를 이용하여 추가적으로 여과할 수 있다. 상기 추가 여과 과정을 통해, 말의 특유취가 보다 완벽하게 제거되며, 백색에 가까운 마유를 제조할 수 있다. 또한, 상기 추가 여과 과정은 반복적으로 수행될 수도 있다. 도축된 말의 지방육은 말의 상태와 나이, 지방육 부위에 따라 색과 냄새가 상당히 다르기 때문에, 지방육을 고를 때 이점을 충분히 숙지하여 선택하여야 한다. 색이 노란색에 가깝고, 냄새가 심한 말의 지방육을 선택할 경우에는, 여과 과정을 마쳐도 노란색이 남아있으며 악취가 심해 약학 조성물이나 화장료로 선택하기에 적합하지 않다. 이 때, 마유를 채취하기에 적합한 말은 생후 6년 이내의 말이 적합하며, 생후 6년이 넘은, 특히, 7~10년생 정도의 말을 사용할 경우에는 마유를 정제하여도 특유취가 심해 약학 조성물이나 화장료로 사용하기에 적절하지 않다.

본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 새싹 추출물은 유채새싹(rapeseed sprout) 추출물, 들깨새싹(perilla sprout) 추출물 및 보리새싹(barley sprout) 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출물일 수 있다.

본 발명에 따른 새싹 추출물을 수득하는 방법에는, 특별한 제한은 없으며, 바람직하게는 해당 식물의 싹으로부터 얻는 방법 또는 해당 씨앗을 발아시켜 얻는 방법 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 상기 새싹 추출물은 당업계에 공지된 추출 및 분리하는 방법을 사용하여 새싹들을 대상으로 추출물을 분리 및 수득한 것을 사용할 수 있으며, 본 발명에서 정의된 추출물은 적절한 용매를 이용하여 상기의 방법으로 준비된 새싹 또는 새순들을, 그대로 또는 분쇄하여 추출할 수 있다. 이때 추출물을 수득하기 위해 사용할 수 있는 적절한 용매로는 당업계에서 허용되는 용매라면 어느 것을 사용해도 무방하며, 물 또는 유기용매를 사용할 수 있다. 예를 들어, 정제수, 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol) 등을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 알코올, 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane) 및 시클로헥산(cyclohexane) 등의 각종 용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.

추출 방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법 중 어느 하나를 선택하여 사용할 수 있다. 또한, 목적하는 추출물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제 방법을 이용하여 정제될 수도 있다. 본 발명의 새싹 추출물의 제조방법에는 제한이 없으며, 공지되어 있는 어떠한 방법도 이용될 수 있다.

예를 들면, 본 발명의 조성물에 포함되는 새싹 추출물은 상기한 용매 추출법으로 추출된 1차 추출물을, 원심분리, 여과, 농축후 동결 건조하여 냉장실에 보관하면서 그대로 사용할 수도 있고, 상기 1차 추출물을 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조할 수 있다. 또한, 상기 1차 추출물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography)등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획을 얻을 수도 있다.

따라서 본 발명에 있어서 새싹 추출물은 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 모두 포함하는 개념이다.

본 발명의 실시예에서는 유채새싹, 들깨새싹 및 보리새싹을 각각 70% 에탄올(EtOH) 용매를 이용하여 추출한 추출물을 사용하였다.

본 발명의 화장료 조성물에는 상기 마유를 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 10중량%로 포함할 수 있으며, 상기 새싹 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 10중량%로 포함할 수 있다. 상기 마유 또는 새싹 추출물이 조성물 총 중량 대비 0.001 내지 10중량%를 벗어나서 포함되게 되면, 염증 억제 효과가 줄어들 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 여드름 억제 또는 개선 용도를 더 포함하는 것일 수 있다. 이때, 상기 여드름은 염증성 여드름일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형으로는 특별히 한정되는 것은 아니지만 피부 외용제의 제형인 것이 바람직하며, 상기 피부 외용제 제형의 하나의 바람직한 형태는 유연화장수, 영양화장수, 에센스, 마사지크림, 영양크림, 팩, 클렌저, 젤 또는 피부 점착타입 화장료의 제형을 갖는 화장료 조성물을 들 수 있고, 다른 바람직한 형태로는 로션, 연고, 겔, 크림, 패치 또는 분무제와 같은 경피 투여형의 제형을 들 수 있다. 또한, 각 제형의 외용제 조성물에 있어서, 상기한 필수 성분 이외의 다른 성분들은 기타 외용제의 제형 또는 사용 목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 바람직하게는 화장품학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유한다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액 마이크로 에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀) 및/또는 바이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소적용 또는 전신적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있으며, 이들 조성물은 당해 분야의 통상적 방법에 따라 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제, 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 이들 보조제는 화장품학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다.

본 발명의 조성물은 액제, 에어로졸제, 멸균 주사용액 형태로 제형화하여 사용할 수 있으며, 상기 조성물을 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용할 수 있다.

[제형예 1] 정제마유 및 새싹 추출물의 혼합 조성물을 함유하는 항염증 및 여드름 개선용 팩

번호	성 분	함량(%)
1	아크릴레이트/C10-30알킬아크릴레이트크로스폴리머	17.00
2	글리세린	11.00
3	암모늄아크릴로일디메칠타우레이트/브이피코폴리머	10.00
4	부틸렌글라이콜	7.00
5	세틸에칠헥사노에이트	3.00
6	사이클로메치콘	2.00
7	소듐하이알루로네이트	2.00
8	보리싹추출물	2.00
9	유채싹추출물	2.00
10	들깨싹추출물	2.00
11	마유	0.20
12	세테아릴올리베이트/소르비탄올리베이트	0.80
13	디메치콘	0.50
14	베타인	0.50
15	1,2-헥산디올	0.50
16	에탄올	0.50
17	하이드록시아세토페논	0.30
18	트로메타인	0.24
19	디소듐이디티에이, 향료, 식물성 추출물	미량
20	증류수	잔량

[제형예 2] 정제마유 및 새싹 추출물의 혼합 조성물을 함유하는 항염증 및 여드름 개선용 클렌저

번호	성 분	함량(%)
1	글리세린	20.00
2	스테아릭애씨드	17.00
3	포타슘하이드록사이드	9.50
4	라우릭애씨드	7.50
5	코카미도프로필베타인	7.00
6	미리스틱애씨드	3.00
7	부틸렌글라이콜	3.00
8	글리세릴스테아레이트/피이지-10	2.50
9	글리세릴스테아레이트	2.00
10	피이지-32	1.70
11	글라이콜디스테아레이트	1.00
11	보리싹추출물	1.00
12	유채싹추출물	1.00
13	들깨싹추출물	1.00
14	마유	0.20
15	세테아릴알코올	0.50
16	화산재	0.50
17	향료	미량
18	페녹시에탄올	미량
19	증류수	잔량

[제형예 3] 정제마유 및 새싹 추출물의 혼합 조성물을 함유하는 항염증 및 여드름 개선용 기능성 에센스

번호	성 분	함량(%)
1	글리세린	6.00
2	디프로필렌글라이콜	6.00
3	글리세레스-26	2.50
4	나이아신아마이드	2.00
5	보리싹추출물	1.00
6	유채싹추출물	1.00
7	들깨싹추출물	1.00
8	마유	0.20
9	트레할로스	0.10
10	베타인	0.10
11	알란토인	0.10
12	소듐하이알루로네이트	0.02
13	아데노신, 세라마이드3	미량
14	트로메타민	0.30
15	하이드로제네이티드레시틴	미량
16	아크릴레이트/C10-30알킬아크릴레이트크로스폴리머	0.15
17	폴리글리세릴-10미리스테이트	0.10
18	클로페네신	0.28
19	1,2-헥산디올	0.02
20	카프릴릴글라콜	0.10
21	향료	미량
22	증류수	잔량

이하, 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

< 실시예 1> 정제마유 및 새싹 추출물을 포함하는 혼합 조성물의 제조

말의 지방육을 녹인 후 정제한 기름(정제마유)을 1% 농도로 희석시켜 사용하였다.

완전 건조 시킨 유채새싹 100g, 들깨새싹 100g 및 보리새싹 100g을 각각 70% 에탄올(EtOH) 수용액을 사용하여, 용매추출법을 이용하여 추출하였다. 추출 시 효율을 높이기 위해 교반기를 이용하여 48시간 이상 교반시켰다. 이를 50℃ 이하에서 감압 농축 후 동결건조하여 분말상의 유채새싹 추출물, 들깨새싹 추출물 및 보리새싹 추출물을 얻었으며, 각 추출물의 수율은 하기 표 1에 나타난 바와 같다. 정제마유와 새싹 추출물 3종을 각각 1:5(v/v)로 혼합하여 혼합 조성물로 사용하였다.

시료명	건조시료	추출용매	수율
유채새싹	100g	70% EtOH	23.5%
들깨새싹	100g	70% EtOH	25.8%
보리새싹	100g	70% EtOH	21.2%

< 실시예 2> 새싹 추출물의 NO 소거 활성 분석

NO 소거 활성은 세포 배양액 내의 nitrite 농도를 그리스시약(Griess reagent)을 이용하여 평가하였다. 실험에 사용된 마우스 대식세포주(murine macrophage cell line) RAW 264.7 세포를 12-well plate에 세포수가 1×10⁵ cells/well이 되게 분주하고 80% confluence로 배양하였다. 그 후 상기 <실시예 1>에서 제조된 3종의 새싹 추출물을 각각 12.5, 25, 50, 100 및 250μg/mL의 농도로 처리하고, LPS(1μg/mL)로 24시간 동안 NO 생성을 유도한 뒤 배양 상등액과 Griess reagent를 1:1로 혼합하여 ELISA reader를 사용하여 540nm에서의 흡광도를 측정하여 NO 활성 억제 효과를 평가하였다.

그 결과, 유채새싹, 들깨새싹 및 보리새싹 추출물 모두 세포 독성은 나타나지 않았으며, 처리 농도가 증가할수록 대체적으로 NO 활성이 감소되었고, 특히 유채새싹 및 들깨새싹 추출물은 250μg/mL 농도에서 NO 활성이 현저히 감소되었다(도 1 참조). 따라서, 3종의 새싹 추출물 모두 염증 반응 감소에 효과적임을 확인하였고, 3종의 새싹 추출물 가운데 NO 소거활성은 들깨새싹 추출물이 가장 우수한 것으로 나타났다.

< 실시예 3> 정제마유 및 새싹 추출물의 여드름균에 대한 항염증 활성 분석

대식세포 계열(Human monocyte cell line)인 THP-1 세포(cell)는 한국세포주은행으로부터 분양받아 penicillin-streptomycin 100 units/mL과 10% fetal bovine serum(FBS)이 함유된 RPMI1640 배지를 사용하여 37℃, 5% CO₂ 항온기에서 배양하였으며, 3일에 한 번씩 계대배양을 시행하였다.

세포생존율 평가는 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide) 분석 방법을 사용하였다. 24-well plate에 5X10⁴ cell/mL THP-1 cell을 24시간 배양 후, 상기 <실시예 1>에서 제조된 마유(1%)와 각각 250μg/mL의 농도로 용해시킨 새싹 추출물 3종의 시료를 하기 표 2에 나타난 바와 같이 단독 혹은 혼합하여 처리하였고, 추가적으로 2일 배양하여 500μg/mL의 MTT를 well 당 20㎕씩 첨가하였다. 37℃에서 5시간 동안 배양하고 DMSO (dimethylsulfoxid)를 처리하여 formazan을 녹여낸 후 570nm에서 흡광도 값을 측정하였다.

염증 억제 효과를 평가하기 위하여, 24 well plate에서 1x10⁵ cell/mL의 THP-1 cell을 24시간 배양 후, 여드름균(프로피오니박테리움 아크네스, Propionibacterium acnes)을 100μg/mL로 처리하여 염증 현상(cytokine IL-8 생성)을 유도하고 동시에 상기 <실시예 1>에서 제조된 마유(1%)와 새싹 추출물(250μg/mL) 시료를 하기 표 2에 나타난 바와 같이 단독 혹은 혼합하여 처리하였다. 24시간 동안 동일 조건에서 배양한 다음 세포를 제거하고 상등액의 IL-8양을 ELISA 방법으로 정량하였다.

시료 처리에 따른 세포생존율 및 IL-8 생성량 측정값은 하기 표 2에 나타난 바와 같다.

	시료	IL-8 생성량 (pg/mL)	세포생존율 (%)
1	무처리군	10.0	102.01
2	여드름균(100μg/mL)	222.5	100.00
3	여드름균(100μg/mL)+정제마유(1%)	99.2	87.36
4	여드름균(100μg/mL)+들깨새싹(250μg/mL)	61.8	90.52
5	여드름균(100μg/mL)+보리새싹(250μg/mL)	64.9	91.38
6	여드름균(100μg/mL)+유채새싹(250μg/mL)	66.8	90.52
7	여드름균(100μg/mL)+정제마유(1%)+들깨새싹(250μg/mL)	51.2	97.41
8	여드름균(100μg/mL)+정제마유(1%)+보리새싹(250μg/mL)	60.7	93.82
9	여드름균(100μg/mL)+정제마유(1%)+유채새싹(250μg/mL)	49.0	94.83
10	여드름균(100μg/mL)+정제마유(1%)+들깨새싹(250μg/mL)+보리새싹(250μg/mL)	36.1	98.28
11	여드름균(100μg/mL)+정제마유(1%)+들깨새싹(250μg/mL)+유채새싹(250μg/mL)	27.0	98.85
12	여드름균(100μg/mL)+정제마유(1%)+보리새싹(250μg/mL)+유채새싹(250μg/mL)	26.1	97.13
13	여드름균(100μg/mL)+정제마유(1%)+들깨새싹(250μg/mL)+보리새싹(250μg/mL) + 유채새싹(250 μg/mL)	21.0	99.45

상기 실험 결과, 정제마유 또는 새싹 추출물을 단독 처리한 경우, 들깨새싹 및 보리새싹 추출물이 여드름균(P.acnes)에 의한 IL-8 생성을 가장 많이 억제하는 것으로 나타났다(도 2 참조). 또한, 정제마유 또는 새싹 추출물을 단독으로 사용한 경우보다, 정제마유와 유채새싹, 들깨새싹 및 보리새싹 추출물 중 어느 하나 이상이 혼합된 혼합 조성물을 사용할 경우 염증 억제 효과가 더 향상되었고, 정제마유, 들깨새싹, 보리새싹 및 유채새싹을 모두 혼합한 혼합 조성물을 사용한 경우에 염증 억제 효과가 가장 우수하게 나타나는 것을 확인하였다.

< 실시예 4> 정제마유 및 새싹 추출물의 여드름균에 대한 항균력 분석

본 발명의 추출물 및 혼합 조성물의 여드름균에 대한 항균력을 확인하기 위하여 페이퍼 디스크 테스트(Paper Disc Test)를 실시하였다.

여드름 발생원인의 피부 상재균인 여드름균(프로피오니박테리움 아크네, Propionibacterium acnes)을 활성화시키기 위하여 BHI액체배지(Brain-Heart Infusion Broth; 3.7%)에서 48시간 전배양하여 균 배양액으로 사용하였다. 상기 균 배양액을 BHI고체배지(BHI Broth; 3.7%, agar 1.5%)에 0.1 mL씩 도말한 후, 건조시켰다. <실시예 1>에서 제조된 마유(1%)와 새싹 추출물(250μg/mL) 시료 및 양성대조군으로서 에리스롬마이신(erythromycin, 250μg/mL)을 각각 직경 8 mm의 페이퍼 디스크(paper disc)에 50 ㎕씩 점적한 후, 상기 고체배지위에 올려놓고, 이를 35℃ 혐기 배양조에서 3일간 배양하였다. 페이퍼 디스크 주변에 생긴 균 성장 저지 영역을 관찰하고 저지환의 크기를 측정함으로써 항균력을 평가하였다.

여드름균에 대한 항균력 시험 결과는 하기 표 3에 나타난 바와 같이 나타났으며, 각각의 추출물을 단독으로 사용할 경우보다 정제마유와 유채새싹, 들깨새싹 및 보리새싹 추출물 중 어느 하나 이상이 혼합된 혼합 조성물을 사용할 경우가 균 성장 저지환의 크기가 큰 것을 확인하였다. 특히, 정제마유, 들깨새싹, 보리새싹 및 유채새싹을 모두 혼합한 혼합 조성물을 사용한 경우에 여드름균에 대한 항균력이 가장 뛰어났다.

	시료	균 성장 저지환의 크기
1	에리스롬마이신(250μg/mL)	24mm
2	정제마유(1%)	15mm
3	들깨새싹(250μg/mL)	16mm
4	보리새싹(250μg/mL)	15mm
5	유채새싹(250μg/mL)	14mm
6	정제마유(1%)+들깨새싹(250μg/mL)	17mm
7	정제마유(1%)+보리새싹(250μg/mL)	18mm
8	정제마유(1%)+유채새싹(250μg/mL)	17mm
9	정제마유(1%)+들깨새싹(250μg/mL)+보리새싹(250μg/mL)	21mm
10	정제마유(1%)+들깨새싹(250μg/mL)+유채새싹(250μg/mL)	22mm
11	정제마유(1%)+보리새싹(250μg/mL)+유채새싹(250μg/mL)	20mm
12	정제마유(1%)+들깨새싹(250μg/mL)+보리새싹(250μg/mL)+ 유채새싹(250 μg/mL)	25mm

이와 같은 결과는, 본 발명의 정제마유, 들깨새싹, 보리새싹 및 유채새싹 추출물 및 이들의 혼합 조성물이 여드름균에 의한 염증 억제 효과뿐 아니라, 여드름균에 대한 항균 효과도 가짐을 확인한 것이다.

< 제형예 1> 정제마유 및 새싹 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 제조

정제마유 및 유채새싹(rapeseed sprout) 추출물, 들깨새싹(perilla sprout) 추출물 및 보리새싹(barley sprout) 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 새싹 추출물의 혼합 조성물을 포함하는 화장료를 하기 표 4에 나타난 바와 같이 제형예 1 내지 제형예 7로 제조하였다. 효능의 비교를 위해 정제마유 및 새싹 추출물의 혼합 조성물 대신에 정제마유 또는 새싹 추출물 각각을 단독으로 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 1 내지 비교제형예 4), 정제마유를 제외한 새싹 추출물의 혼합 조성물을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 5), 정제마유 및 새싹 추출물의 혼합 조성물 대신에 여드름 억제 원료로서 에리스롬마이신을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 6), 정제마유 및 새싹 추출물의 혼합 조성물이나 활성물질을 모두 포함하지 않는 화장료 조성물(비교제형예 7)을 하기 표 5에 나타내었다.

구분	성분	제형예 1	제형예 2	제형예 3	제형예 4	제형예 5	제형예 6	제형예 7
A	정제마유	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
	유채새싹 추출물	7.5	-	-	3.75	3.75	-	2.5
	들깨새싹 추출물	-	7.5	-	3.75	-	3.75	2.5
	보리새싹 추출물	-	-	7.5	-	3.75	3.75	2.5
	EDTA-2Na	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02
	에리스롬마이신	-	-	-	-	-	-	-
B	정제수	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100
	글리세레스-26	6.25	6.25	6.25	6.25	6.25	6.25	6.25
	베타인	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25
	알란토인	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25
	트로메타민	0.75	0.75	0.75	0.75	0.75	0.75	0.75
	폴리글리세릴	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25
	클로페네신	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7
	1,2-헥산디올	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
	카프릴릴글라콜	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25
C	향	미량	미량	미량	미량	미량	미량	미량

구분	성분	비교제형예 1	비교제형예 2	비교제형예 3	비교제형예 4	비교제형예 5	비교제형예 6	비교제형예 7
A	정제마유	8.0	-	-	-	-	-	-
	유채새싹 추출물	-	8.0	-	-	2.7	-	-
	들깨새싹 추출물	-	-	8.0	-	2.7	-	-
	보리새싹 추출물	-	-	-	8.0	2.7	-	-
	EDTA-2Na	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02
	에리스롬마이신	-	-	-	-	-	0.2	-
B	정제수	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100
	글리세레스-26	6.25	6.25	6.25	6.25	6.25	6.25	6.25
	베타인	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25
	알란토인	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25
	트로메타민	0.75	0.75	0.75	0.75	0.75	0.75	0.75
	폴리글리세릴	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25
	클로페네신	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7
	1,2-헥산디올	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
	카프릴릴글라콜	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25	0.25
C	향	미량	미량	미량	미량	미량	미량	미량

< 실시예 5> 정제마유 및 새싹 추출물의 여드름 개선 및 피부 자극 유무 분석

여드름을 보유하고 있는 15명에게 상기 제형예 1 내지 7 및 비교제형예 1 내지 7로부터 제조된 화장료 조성물을 30일간 사용하게 하였다. 여드름 개선 척도는 1점에서 5점까지로 하고, 1점은 '아니다', 3점은 '보통이다', 5점은 '매우그렇다'로 표기하도록 하였다. 실험 결과는 하기 표 6에 15명의 평균 점수로 표기하였다.

여드름 소멸 시기는 소멸이 판독된 일수를 기준으로 하였으며, 여드름 재발은 유무로 1개월 뒤의 결과를 기준으로 하였다. 피지분비 감소는 1점에서 5점까지로 하고, 1점은 '아니다', 3점은 '보통이다', 5점은 '매우그렇다'로 표기하도록 하였다. 실험 결과는 하기 표 6에 15명의 평균점수로 표기하였다.

피부자극의 유무는 (자극반응을 보인 명수)/(총 시험자수)로 평가하였다.

	염증성 여드름 개선	면포성 여드름 소멸시기	여드름 재발	피지분비 감소	피부자극 유무
제형예 1	4.1	6일	무	4.0	1/15
제형예 2	4.0	6일	무	4.1	0/15
제형예 3	4.0	5일	무	4.0	1/15
제형예 4	4.3	5일	무	4.1	0/15
제형예 5	4.5	4일	무	4.2	1/15
제형예 6	4.4	4일	무	4.3	2/15
제형예 7	4.7	1일	무	4.5	0/15
비교제형예 1	3.1	8일	무	3.7	0/15
비교제형예 2	3.3	7일	무	3.8	0/15
비교제형예 3	3.2	7일	무	3.7	0/15
비교제형예 4	3.5	8일	무	3.8	0/15
비교제형예 5	3.7	7일	무	3.9	1/15
비교제형예 6	4.4	2일	무	4.3	9/15
비교제형예 7	1.9	14일	유	2.1	0/15

상기 표 6에 나타난 바와 같이, 제형예 1 내지 7은 비교제형예 7에 비해 여드름이 재발되지 않았고, 염증성 여드름 개선에 대해 평균 4점 이상, 면포성 여드름 소멸시기에 대해 평균 6일 이하, 피지 분비 감소에 대해 평균 4점 이상을 획득하여, 여드름 개선에 대해 우수한 효과가 있는 것으로 나타났다. 비교제형예 1 내지 5의 경우에도 비교제형예 7 대비 비교적 여드름 개선에 대한 효과를 보이고 있으나, 제형예 1 내지 7을 사용한 경우가 여드름 개선 효과가 더 우수한 것으로 확인되었다. 한편, 항균 및 여드름 개선 효과가 있는 물질을 함유한 비교제형예 6의 경우, 제형예 4 내지 7과 유사한 효능을 보이고 있으나, 사용함에 있어 나머지 다른 실험예들에 비해 자극이 강하여 장기적으로 사용하기에 피부 자극의 우려가 있으나, 본원 발명에 따른 조성물은 자극이 없는 것으로 나타났다.

따라서 자극 여부, 여드름 개선 속도, 여드름 개선 정도, 피지분비 감소 정도 등 여러가지 요소를 고려해 볼 때 마유 및 새싹 추출물 혼합 조성물이 여드름 피부의 환자에게 적합함을 확인할 수 있었다.

< 실시예 6> 정제마유 및 새싹 추출물의 염증 개선 효과 분석

정제마유 및 새싹 추출물 혼합 조성물의 항염증 효과는 프로스타글란딘의 생성 억제 효과로 평가하였다. 상기 <실시예 5>에서 제조된 제형예 1 내지 7 및 비교제형예 1 내지 7을 이용하여 대식세포를 대상으로 효과를 측정하였다. 우선, 마우스의 복강에서 채취한 대식세포에 최종농도가 500M이 되도록 아스피린을 첨가해 세포에 잔존하는 시클로옥시제나제(cyclooxygenase, COX) 활성을 비가역적으로 억제한 뒤, 96-well platedml 각 웰에 100μL를 넣어 5% CO2와 37℃ 조건의 배양기에서 2시간동안 배양하여 대식 세포를 용기 표면에 부착시켰다. 이어, 부착된 대식 세포를 PBS로 3회 세척한 후 이를 항염증 효과 시험에 사용하였다. 전기 배양된 대식세포 5x104 cell/mL에 LPS를 1%(w/v)로 함유하는 RPMI 배지를 첨가하여 12시간 동안 배양한 후 프로스타글란딘의 생성을 유발하고 제형예 1 내지 7 및 비교제형예 1 내지 7을 각각 100μL씩 처리하여 유리된 프로스타글란딘을 효소면역 분석법(ELISA)을 이용하여 정량하였다.

이때, 제형예 및 비교제형예들의 프로스타글란딘 생성억제 활성은 LPS를 처리한 군과 처리하지 않은 군에서 각각 생성된 프로스타글란딘의 차이를 100%로 설정하고, LPS와 시료를 함께 처리하여 감소된 프로스타글란딘의 백분율을 통하여 대조군(아스피린 처리군)과 비교 및 판정하였다.

	프로스타글란딘 생성 억제율
무처리군(Blank)	100%
대조군(아스피린 처리군)	25.0%
제형예 1	23.9%
제형예 2	24.7%
제형예 3	24.5%
제형예 4	27.8%
제형예 5	26.7%
제형예 6	28.3%
제형예 7	39.2%
비교제형예 1	16.8%
비교제형예 2	19.2%
비교제형예 3	19.4%
비교제형예 4	18.7%
비교제형예 5	19.9%
비교제형예 6	22.2%
비교제형예 7	10.3%

상기 표 7에 나타난 바와 같이, 제형예 1 내지 7에 의한 프로스타글란딘 생성 억제 효과가 아스피린으로 처리한 대조군과 유사하거나 더 우수한 것으로 나타났으며, 정제마유 또는 새싹 추출물을 단독으로 함유한 경우(비교제형예 1 내지 4) 및 정제마유를 제외한 새싹 추출물의 혼합 조성물을 함유한 경우(비교제형예 5)보다 제형예 1 내지 7에 의한 프로스타글란딘 생성 억제 효과가 매우 높은 것으로 확인되었다. 특히, 제형예 7의 경우 다른 제형예 및 비교제형예들보다 가장 우수한 염증 개선 효과를 가지고 있음을 확인할 수 있었다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (7)

1. 마유(horse oil), 유채새싹(rapeseed sprout) 추출물, 들깨새싹(perilla sprout) 추출물 및 보리새싹(barley sprout) 추출물의 혼합 조성물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 마유는 말의 지방육을 녹인 후 정제한 기름인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
3. 삭제
4. 제1항에 있어서,
   상기 유채새싹 추출물, 들깨새싹 추출물 및 보리새싹 추출물은 각각 물, 탄소수 1 내지 4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 다가 알코올, 탄화수소계 용매 또는 이들의 혼합용매로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출용매를 사용하여 추출한 추출물인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
5. 제1항에 있어서,
   상기 마유는 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 10중량%로 포함되고, 유채새싹 추출물, 들깨새싹 추출물 및 보리새싹 추출물은 각각 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 10중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
6. 마유(horse oil), 유채새싹(rapeseed sprout) 추출물, 들깨새싹(perilla sprout) 추출물 및 보리새싹(barley sprout) 추출물의 혼합 조성물을 유효성분으로 포함하는 여드름 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
7. 제6항에 있어서,
   상기 여드름은 프로피오니박테리움 아크네스(Propionibacterium acnes)에 의해 유발된 여드름인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.

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