KR101910601B1 - 면역원성이 제거된 항 ｃ-Ｍｅｔ 인간화 항체 및 그의 용도 - Google Patents

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Abstract

면역원성이 제거된 항 c-Met 인간화 항체 및 이를 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. 일 구체예에 따른 항 c-Met 인간화 항체는 c-Met에 대한 친화도가 높으며, 면역원성이 제거되어 암을 효율적으로 예방 또는 치료할 수 있다.

Description

면역원성이 제거된 항 ｃ-Ｍｅｔ 인간화 항체 및 그의 용도{Deimmunized anti c-Met humanized antibody and uses thereof}
면역원성이 제거된 항 c-Met 인간화 항체 및 이를 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
c-Met은 간세포 성장 인자 (hepatocyte growth factor, HGF)의 수용체이며, HGF는 c-Met 수용체 티로신 키나제의 세포외 부위에 결합하여 다양한 정상세포와 종양 세포에서 분열, 운동, 형태 발생, 혈관 형성을 유발하는 사이토카인의 일종이다. c-Met은 세포 표면에 존재하는 대표적인 수용체 티로신 키나제 (receptor tyrosine kinase)로 그 자체가 암유발 유전자이며 때로는 리간드인 HGF와 상관 없이도 암 발생, 암 전이, 암세포 이동, 암세포 침습, 신생혈관 생성 등과 같은 종양과 관련된 여러 가지 기작에 관여하기 때문에 최근 항암 타겟으로 주목받는 단백질이다.
특히 c-Met은 기존에 알려진 항암제의 작용 기작에서 약물 내성에 관여됨이 알려지면서 더욱 더 개인맞춤형 치료에 중요성이 인식되고 있다. EGFR (ERBB1)을 표적으로 하는 대표적인 항암 치료제인 얼비툭스(Erbitux™) 또는 타세바(Tarceva™)와 같은 약물은 암 발생 기작과 관련된 신호 전달을 차단함으로써 작동한다. 또한 유방암 치료제로 잘 알려진 허셉틴(Herceptin™, trastuzumab)은 ERBB2 (HER2)를 표적으로 세포의 증식에 필요한 신호 전달을 차단함으로써 작동한다. 그러나 상기 약물에 대한 내성이 있는 환자 중, c-Met 단백질의 과발현 등으로 항암제의 작동을 피해 세포의 증식을 유도하는 다른 신호 전달 기작이 활성화된다는 연구들이 최근 발표되고 있다. 이러한 이유로 인해, c-Met은 항암제와 관련하여 다수의 제약사가 주목하고 있는 표적 분자가 되고 있다.
기존의 선행 특허에서 AbF46 항체는 마우스 면역화를 통하여 c-Met 특이적인 항체로서 선별되었다. 이러한 마우스 유래 항체는 일반적으로 치료 목적으로 인간에 투여시 항-아이소타입(anti-isotypic) 반응 등의 면역거부반응(immunogenicity)이 일어날 수 있으며, 면역거부반응을 억제하고자 다양한 항체공학기술이 개발되어 왔다. 키메릭 항체는 유전공학적 방법을 이용하여 항-아이소타입 반응의 원인이 되는 불변 영역(constant region)을 인간 항체의 불변 영역으로 치환한 것이다. 이러한 항체공학적 방법을 이용하여 제작된 키메릭 항체는 Basiliximab™ (Simulect; IgG1 anti-CD25, Norvatis), Cetuximab™ (Erbitux; IgG1 anti-EGFR, ImClone) 등이 대표적이나, 임상실험 결과 인간 항-키메릭 항체 반응(Human anti-chimeric antibody response; HACA)이 발생하는 것으로 보고되었다.
이와 같이, 키메릭 항체는 마우스 항체에 비하여 항-아이소타입 반응에 있어서 상당 부분 개선되었으나, 여전히 마우스 유래 아미노산들이 가변 영역(variable region)에 존재하고 있어 잠재적인 항-이디오타입(anti-idiotypic) 반응에 대한 부작용을 내포하고 있다. 이를 해결하기 위한 항체공학적 방법으로 인간화 항체 제작 기술이 개발되었다. 그러나, 최적화 인간항체 골격에 CDR 부위를 이식할지라도 마우스 항체 골격에 위치하면서 항원 결합에 영향을 미치는 아미노산이 존재하는 경우가 있어 항원 결합력이 보존되지 못하는 경우가 상당수 존재하므로, 항원 결합력을 복원하기 위한 추가적인 항체공학 기술의 적용은 필수적이다. 미국 FDA의 승인을 거쳐 상용화된 항체 신약 중 인간화 항체가 차지하는 비율은 마우스 또는 키메릭 항체에 비하여 절대적이며, 유방암 치료제인 Herceptin™ (Genentech)은 임상실험에서 매우 낮은 수준인 약 0.1%의 항-인간항체 반응만을 보였다.
따라서, 마우스 항 c-Met 항체에 대하여 마우스 항체 고유의 잠재적인 면역거부반응을 최소화하고, 전임상 진입이 인간화 항체의 개발이 요구된다.
일 양상은 면역원성이 제거된 항 c-Met 인간화 항체를 제공하는 것이다.
다른 양상은 항 c-Met 인간화 항체를 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
일 양상은 서열번호 1 내지 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 6 내지 서열번호 9의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항 c-Met 인간화 항체를 제공한다.
용어, "c-Met" 또는 "c-Met 단백질"은 간세포 성장 인자와 결합하는 수용체 티로신 키나제를 의미한다. 상기 단백질은 예를 들면, GenBank Aceession Number NM_000245에 제공된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 폴리펩티드, 또는 GenBank Aceession Number NM_000236에 제공된 폴리펩티드 서열에 의해 암호화된 단백질, 또는 그의 세포외 도메인을 포함한다. 수용체 티로신 키나제 c-Met은 예를 들면, 암발생, 암전이, 암세포 이동, 암세포 침투, 신생혈관 생성 과정 등의 여러 가지 기작에 관여한다.
일 구체예에 따르면, 상기 항체는 인간 또는 원숭이로부터 유래된 c-Met 단백질에 특이적으로 결합하는 것일 수 있다.
원하는 항원을 피면역 동물에게 면역시켜 생산하는 동물 유래 항체는 일반적으로 치료 목적으로 인간에 투여 시 면역거부반응이 일어날 수 있으며, 이러한 면역거부반응을 억제하고자 키메릭 항체(chimeric antibody)가 개발되었다. 키메릭 항체는 유전공학적 방법을 이용하여 항-아이소타입(anti-isotype) 반응의 원인이 되는 동물 유래 항체의 불변 영역을 인간 항체의 불변 영역으로 치환한 것이다. 키메릭 항체는 동물 유래 항체에 비하여 항-아이소타입 반응에 있어서 상당 부분 개선되었으나, 여전히 동물 유래 아미노산들이 가변 영역에 존재하고 있어 잠재적인 항-이디오타입(anti-idiotypic) 반응에 대한 부작용을 내포하고 있다. 이러한 부작용을 개선하고자 개발된 것이 인간화 항체이다. 이는 키메릭 항체의 가변 영역 중 항원의 결합에 중요한 역할을 하는 CDR(complementaritiy determining regions) 부위를 인간 항체 골격(framework)에 이식하여 제작된다.
인간화 항체를 제작하기 위한 CDR 이식(grafting) 기술에 있어서 가장 중요한 것은 동물 유래 항체의 CDR 부위를 가장 잘 받아들일 수 있는 최적화된 인간 항체를 선정하는 것이며, 이를 위하여 항체 데이터베이스의 활용, 결정구조(crystal structure)의 분석, 분자모델링 기술 등이 활용된다. 그러나, 최적화된 인간 항체 골격에 동물 유래 항체의 CDR 부위를 이식할지라도 동물 유래 항체의 골격에 위치하면서 항원 결합에 영향을 미치는 아미노산이 존재하는 경우가 있기 때문에, 항원 결합력이 보존되지 못하는 경우가 상당수 존재하므로, 항원 결합력을 복원하기 위한 추가적인 항체 공학 기술의 적용은 필수적이라고 할 수 있다.
상기 c-Met의 인간화 항체는 c-Met 마우스 항체의 면역원성을 제거한 인간화 항체로서, 예를 들어, 상기 항체는 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변 영역 및 서열번호 7의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 항 c-Met 인간화 항체, 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변 영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 항 c-Met 인간화 항체 또는 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변 영역 및 서열번호 7의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 항 c-Met 인간화 항체일 수 있다. 상기 c-Met의 인간화 항체는 예를 들면 허셉틴™(트라스투주맙)와 같은 다른 인간화된 항체보다 면역원성이 낮을 수 있다.
일 구체예에 따르면, 상기 항체는 단일클론항체일 수 있다.
완전한 항체는 2개의 전장(full length) 경쇄 및 2개의 전장 중쇄를 가지는 구조이며 각각의 경쇄는 중쇄와 이황화 결합으로 연결되어 있다. 항체의 불변 영역은 중쇄 불변 영역과 경쇄 불변 영역으로 나뉘어지며, 중쇄 불변 영역은 감마(γ), 뮤(μ), 알파(α), 델타(δ) 및 엡실론(ε) 타입을 가지고, 서브클래스로 감마1(γ1), 감마2(γ2), 감마3(γ3), 감마4(γ4), 알파1(α1) 및 알파2(α2)를 가진다. 경쇄의 불변 영역은 카파(κ) 및 람다(λ) 타입을 가진다.
용어, "중쇄(heavy chain)"는 항원에 특이성을 부여하기 위해 충분한 가변 영역 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 영역 도메인 VH 및 3개의 불변 영역 도메인 CH1, CH2 및 CH3과 힌지(hinge)를 포함하는 전장 중쇄 및 이의 단편을 모두 포함하는 의미로 해석된다. 또한, 용어 "경쇄(light chain)"는 항원에 특이성을 부여하기 위한 충분한 가변영역 서열을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 영역 도메인 VL 및 불변 영역 도메인 CL을 포함하는 전장 경쇄 및 이의 단편을 모두 포함하는 의미로 해석된다.
용어, "CDR(complementarity determining region)"은 면역글로불린의 중쇄 및 경쇄의 고가변 영역(hypervariable region)의 아미노산 서열을 의미한다. 중쇄 및 경쇄는 각각 3개의 CDR을 포함할 수 있다(CDRH1, CDRH2, CDRH3 및 CDRL1, CDRL2, CDRL3). 상기 CDR은 항체가 항원 또는 에피토프에 결합하는 데 있어서 주요한 접촉 잔기를 제공할 수 있다. 한편, 용어, "특이적으로 결합" 또는 "특이적으로 인식"은 당업자에게 통상적으로 공지되어 있는 의미와 동일한 것으로서, 항원 및 항체가 특이적으로 상호작용하여 면역학적 반응을 하는 것을 의미한다.
일 구체예에 따르면, 상기 항체는 scFv, (scFv)2, Fab, Fab' 및 F(ab')2로 이루어진 군으로부터 선택되는 항원 결합 단편일 수 있다.
용어, "항원 결합 단편(antigen binding fragment)"은 면역글로불린 전체 구조에 대한 그의 단편으로, 항원이 결합할 수 있는 부분을 포함하는 폴리펩티드의 일부를 의미한다. 예를 들어, scFv, (scFv)2, Fab, Fab' 또는 F(ab')2일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다. 상기 항원 결합 단편 중 Fab는 경쇄 및 중쇄의 가변영역과 경쇄의 불변 영역 및 중쇄의 첫 번째 불변 영역(CH1)을 가지는 구조로 1개의 항원 결합 부위를 가진다. Fab'는 중쇄 CH1 도메인의 C-말단에 하나 이상의 시스테인 잔기를 포함하는 힌지 영역(hinge region)을 가진다는 점에서 Fab와 차이가 있다. F(ab')2 항체는 Fab'의 힌지 영역의 시스테인 잔기가 디설파이드 결합을 이루면서 생성된다. Fv는 중쇄 가변부위 및 경쇄 가변부위만을 가지고 있는 최소의 항체조각으로 Fv 단편을 생성하는 재조합 기술은 당업계에 널리 공지되어 있다. 이중쇄 Fv(two-chain Fv)는 비공유 결합으로 중쇄 가변부위와 경쇄 가변부위가 연결되어 있고 단쇄 Fv(single-chain Fv)는 일반적으로 펩티드 링커를 통하여 중쇄의 가변 영역과 단쇄의 가변 영역이 공유 결합으로 연결되거나 또는 C-말단에서 바로 연결되어 있어서 이중쇄 Fv와 같이 다이머와 같은 구조를 이룰 수 있다. 상기 항원 결합 단편은 단백질 가수분해 효소를 이용해서 얻을 수 있고(예를 들어, 전체 항체를 파파인으로 제한 절단하면 Fab를 얻을 수 있고 펩신으로 절단하면 F(ab')2 단편을 얻을 수 있다), 유전자 재조합 기술을 통하여 제작할 수 있다.
다른 양상은 서열번호 1 내지 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 항 c-Met 인간화 항체의 중쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
또 다른 양상은 서열번호 6 내지 서열번호 9의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 항 c-Met 인간화 항체의 경쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
용어 "폴리뉴클레오티드(polynucleotide)"는 단일가닥 또는 이중가닥 형태로 존재하는 디옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드의 중합체이다. RNA 게놈 서열, DNA(gDNA 및 cDNA) 및 이로부터 전사되는 RNA 서열을 포괄하며, 특별하게 다른 언급이 없는 한 천연의 폴리뉴클레오티드의 유사체를 포함한다.
상기 폴리뉴클레오티드는 상기 c-Met 단백질에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열뿐만 아니라, 그 서열에 상보적인(complementary) 서열도 포함한다. 상기 상보적인 서열은 완벽하게 상보적인 서열뿐만 아니라, 실질적으로 상보적인 서열도 포함하며, 이는 당업계에 공지된 엄격 조건(stringent conditions) 하에서, 예를 들어, 상기 c-Met 단백질에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열의 뉴클레오티드 서열과 혼성화될 수 있는 서열을 의미한다.
또한, 상기 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역의 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 변형될 수 있다. 상기 변형은 뉴클레오티드의 추가, 결실 또는 비보존적 치환 또는 보존적 치환을 포함한다. 상기 c-Met 단백질에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 상기 뉴클레오티드 서열에 대하여 실질적인 동일성을 나타내는 뉴클레오티드 서열도 포함하는 것으로 해석된다. 상기의 실질적인 동일성은, 상기 뉴클레오티드 서열과 임의의 다른 서열을 최대한 대응되도록 얼라인하고, 당업계에서 통상적으로 이용되는 알고리즘을 이용하여 얼라인된 서열을 분석한 경우에, 최소 80%의 상동성, 최소 90%의 상동성 또는 최소 95%의 상동성을 나타내는 서열일 수 있다.
다른 양상은 서열번호 1 내지 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 항 c-Met 인간화 항체의 중쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 상기 폴리뉴클레오티드에 작동적으로 연결된(operatively linked) 프로모터를 포함하는 재조합 벡터를 제공한다.
또 다른 양상은 서열번호 6 내지 서열번호 9의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 항 c-Met 인간화 항체의 경쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 상기 폴리뉴클레오티드에 작동적으로 연결된 프로모터를 포함하는 재조합 벡터를 제공한다.
용어 "벡터(vector)"는 숙주 세포에서 목적 유전자를 발현시키기 위한 수단을 의미한다. 예를 들어, 플라스미드 벡터, 코즈미드 벡터 및 박테리오파아지 벡터, 아데노바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터 및 아데노-연관 바이러스 벡터와 같은 바이러스 벡터를 포함한다. 상기 재조합 벡터로 사용될 수 있는 벡터는 당업계에서 종종 사용되는 플라스미드 (예를 들면, pSC101, pGV1106, pACYC177, ColE1, pKT230, pME290, pBR322, pUC8/9, pUC6, pBD9, pHC79, pIJ61, pLAFR1, pHV14, pGEX 시리즈, pET 시리즈 및 pUC19 등), 파지 (예를 들면, λgt4λB, λ-Charon, λΔz1 및 M13 등) 또는 바이러스 (예를 들명, SV40 등)를 조작하여 제작될 수 있다.
상기 재조합 벡터에서 상기 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역의 아미노산 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 프로모터에 작동적으로 연결될 수 있다. 용어 "작동적으로 연결된(operatively linked)"은 뉴클레오티드 발현 조절 서열(예를 들어, 프로모터 서열)과 다른 뉴클레오티드 서열 사이의 기능적인 결합을 의미한다. 따라서, 이에 의해 상기 조절 서열은 상기 다른 뉴클레오티드 서열의 전사 및/또는 해독을 조절할 수 있다.
상기 재조합 벡터는, 전형적으로 클로닝을 위한 벡터 또는 발현을 위한 벡터로서 구축될 수 있다. 상기 발현용 벡터는 당업계에서 식물, 동물 또는 미생물에서 외래의 단백질을 발현하는 데 사용되는 통상의 것을 사용할 수 있다. 상기 재조합 벡터는 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 구축될 수 있다.
상기 재조합 벡터는 원핵 세포 또는 진핵 세포를 숙주로 하여 구축될 수 있다. 예를 들어, 사용되는 벡터가 발현 벡터이고, 원핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 전사를 진행시킬 수 있는 강력한 프로모터 (예를 들어, pLλ프로모터, trp 프로모터, lac 프로모터, tac 프로모터, T7 프로모터 등), 해독의 개시를 위한 라이보좀 결합 자리 및 전사/해독 종결 서열을 포함하는 것이 일반적이다. 진핵 세포를 숙주로 하는 경우에는, 벡터에 포함되는 진핵 세포에서 작동하는 복제원점은 f1 복제원점, SV40 복제원점, pMB1 복제원점, 아데노 복제원점, AAV 복제원점 및 BBV 복제원점 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 포유동물 세포의 게놈으로부터 유래된 프로모터 (예를 들어, 메탈로티오닌 프로모터) 또는 포유동물 바이러스로부터 유래된 프로모터 (예를 들어, 아데노바이러스 후기 프로모터, 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터, SV40 프로모터, 사이토메갈로바이러스 프로모터 및 HSV의 tk 프로모터)가 이용될 수 있으며, 전사 종결 서열로서 폴리아데닐화 서열을 일반적으로 갖는다.
한편, 상기 항체의 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역을 발현할 수 있는 벡터는 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역이 하나의 벡터에서 동시에 발현되는 벡터 시스템이거나 또는 중쇄 가변영역 및 경쇄 가변영역을 각각 별도의 벡터에서 발현시키는 시스템 모두 가능하다. 후자의 경우, 두 벡터는 동시 형질전환 (co-transfomation) 및 표적 형질전환 (targeted transformation)을 통하여 숙주 세포로 도입될 수 있다.
다른 양상은 서열번호 1 내지 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나의 중쇄 가변 영역 및 서열번호 6 내지 서열번호 9의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하는 항 c-Met 인간화 항체의 약학적 유효량; 및 약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
일 구체예에 따르면, 상기 항체는 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변 영역 및 서열번호 7의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 항 c-Met 인간화 항체, 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변 영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 항 c-Met 인간화 항체 또는 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변 영역 및 서열번호 7의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 항 c-Met 인간화 항체일 수 있다.
일 구체예에 따르면, 상기 암은 편평상피세포암, 소세포폐암, 비소세포폐암, 폐의 선암, 폐의 편평상피암, 복막암, 피부암, 피부 또는 안구내 흑색종, 직장암, 항문부근암, 식도암, 소장암, 내분비선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 간세포암, 위장암, 췌장암, 교아종, 경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 결장암, 대장암, 자궁내막 또는 자궁암, 침샘암, 신장암, 간암, 전립선암, 음문암, 갑상선암, 간암 및 두경부암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.
상기 조성물이 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 제조되는 경우, 상기 조성물은 약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 상기 조성물에 포함되는 약학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
상기 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있다. 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 내피 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여 및 직장내 투여 등으로 투여할 수 있다. 경구 투여시, 단백질 또는 펩티드는 소화가 되기 때문에 경구용 조성물은 활성 약제를 코팅하거나 위에서의 분해로부터 보호되도록 제형화 되어야 한다. 또한, 상기 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.
상기 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 상기 조성물의 바람직한 투여량은 성인 기준으로 0.001-100 ㎎/kg 범위 내이다. 용어 "약학적 유효량"은 암을 예방 또는 치료하는 데, 또는 혈관신생으로 인한 질환의 예방 또는 치료하는 데 충분한 양을 의미한다.
상기 조성물은 당해 당업자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다. 또한, 상기 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 한편, 상기 조성물은 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하므로, 면역 리포좀으로 제형화될 수 있다. 항체를 포함하는 리포좀은 당업계에 널리 알려진 방법에 따라 제조될 수 있다. 상기 면역 리포좀은 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 폴리에틸렌글리콜-유도체화된 포스파티딜에탄올아민을 포함하는 지질 조성물로서 역상 증발법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 항체의 Fab' 단편은 디설파이드-교체 반응을 통해 리포좀에 접합될 수 있다. 독소루비신과 같은 화학치료제가 추가로 리포좀 내에 포함될 수 있다.
일 구체예에 따르면, 상기 항체는 c-Met 단백질의 길항제(antagonist) 작용을 하는 것일 수 있다.
용어 "길항제(antagonist)"는 표적물 (예를 들어, c-Met)의 생물학적 활성 중 하나 이상을 부분적으로나 완전히 차단, 억제 또는 중화시키는 모든 분자를 포함하는 개념으로 해석된다. 예를 들어, "길항제" 항체는 항체가 결합하는 항원 (예를 들어, c-Met)의 생물학적 활성을 억제시키거나 감소시키는 항체를 의미한다. 길항제는 리간드에 대한 수용체의 결합에 의해, 수용체 인산화(phosphorylation)를 감소시키거나, 리간드에 의해 활성화되었던 세포를 무능력화시키거나, 또는 사멸시키는 작용을 할 수 있다. 또한, 길항제는 수용체-리간드 사이의 상호 작용을 완전히 단절시키거나, 수용체의 3차 구조의 변화, 또는 감소 조절(down regulation)에 의해 상기 상호 작용을 실질적으로 감소시킬 수 있다.
일 구체예에 따른 항 c-Met 인간화 항체는 c-Met에 대한 친화도가 높으며, 면역원성이 제거되어 암을 효율적으로 예방 또는 치료할 수 있다.
도 1은 일 구체예에 따른 항 c-Met 인간화 항체를 발현시키기 위한 벡터의 맵을 나타낸 그림이다.
도 2는 일 구체예에 따른 항 c-Met 인간화 항체를 정제한 결과를 확인한 SDS-PAGE 겔 사진이다.
이하 하나 이상의 구체예를 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 하나 이상의 구체예를 예시적으로 설명하기 위한 것으로 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: c- Met 에 대한 마우스 항체 AbF46 의 생산
(1) 마우스의 면역화
하이브리도마 세포주의 개발에 필요한 면역화 된 마우스를 얻기 위하여, 5마리의 쥐에 한마리당 100 ㎍의 인간의 c-Met/Fc 융합 단백질(R&D Systems)과 동량의 완전 프로인드 어주번트(Freund's adjuvant)를 혼합하여 4-6 주된 BALB/c 마우스(Japan SLC, Inc.)의 복강 내에 주사하였다. 2주 후에 상기와 동일한 방법으로 항원(먼저 주사한 양의 절반)을 불완전 프로인드 어주번트(incomplete Freund's adjuvant)와 혼합하여 마우스의 복강 내에 주사하였다. 일주일 후 마지막 부스팅(boosting)이 수행되고 3일 후에 상기 마우스의 꼬리에서 채혈하여 혈청을 얻은 뒤 1/1000로 PBS에 희석하여 ELISA로 c-Met을 인지하는 항체의 역가가 증가하는 것을 확인하였다. 상기의 결과로 항체의 양이 충분하게 얻어지는 마우스를 선별하여 세포 융합 과정을 수행하였다.
(2) 세포 융합 및 하이브리도마의 제조
세포융합 실험 3일 전에 50 ㎍의 PBS에 인간의 c-Met/Fc 융합 단백질 혼합물을 복강 내에 주사하고, 면역화된 마우스를 마취한 후 몸통의 좌측에 위치한 비장(spleen)을 적출하였다. 적출한 비장을 메쉬로 갈아서 세포를 분리하고, 배양 배지(DMEM)와 혼합하여 비장 세포 현탁액을 만들었다. 상기 현탁액을 원심분리하여 세포층을 회수하였다. 상기 얻어진 비장 세포 1 x 108 개와 골수종 세포(Sp2/0) 1 x 108 개를 혼합한 다음 원심분리하여 세포를 침전시켰다. 원심분리된 침전물을 천천히 분산시키고, 배양 배지(DMEM)에 들어있는 45 % 폴리에틸렌 글리콜(PEG)(1 ㎖)를 처리하고, 37 ℃에서 1분 동안 유지시킨 후, 배양 배지(DMEM) 1 ㎖를 첨가하였다. 이후 배양 배지(DMEM) 10 ㎖를 1분 동안 첨가하고, 37℃의 물에서 5분 동안 방치한 후 50 ㎖로 맞추어 다시 원심분리하였다. 세포 침전물을 분리 배지(HAT 배지)에 1 x 105/㎖ 내지 2 x 105/㎖ 정도로 재현탁시키고, 96-웰(well) 플레이트에 0.1 ㎖ 씩 분주한 후 37℃ 이산화탄소 배양기에서 배양하였다.
(3) c- Met 단백질에 대한 단일클론 항체를 생산하는 하이브리도마 세포의 선별
상기 (2)에서 제조된 하이브리도마 세포군 중에서 c-Met 단백질에만 특이적으로 반응하는 하이브리도마 세포를 선별하기 위하여 인간의 c-Met/Fc 융합 단백질과 인간의 Fc 단백질을 항원으로 이용한 ELISA 분석 방법을 통하여 스크리닝하였다.
마이크로타이터 플레이트에 인간의 c-Met/Fc 융합 단백질을 한 웰당 각각 50 ㎕ (2 ug/㎖)씩 가하여 플레이트 표면에 부착시키고, 반응하지 않은 항원은 세척하여 제거하였다. c-Met이 아닌 Fc에 결합하는 항체를 선별하여 제외하기 위하여 인간의 Fc 단백질을 위와 동일한 방법으로 플레이트 표면에 부착시켰다. 하이브리도마 세포의 배양액을 각각 웰에 50 ㎕씩을 가하여 1 시간 동안 반응시킨 후 인산 완충용액-트윈 20(TBST) 용액으로 충분히 세척하여 반응하지 않은 배양액을 제거하였다. 여기에 염소 항-마우스 IgG-호스래디쉬 퍼옥시다제(goat anti-mouse IgG-HRP)를 가하여 1 시간 동안 실온에서 반응시킨 다음, TBST 용액으로 충분히 세척하였다. 이어서 퍼옥시다제의 기질 용액(OPD)을 가하여 반응시키고, 그 반응 정도는 엘리자 해독기(ELISA Reader)로 450 ㎚에서 흡광도를 측정하여 인간의 Fc에는 결합하지 않고, 인간의 c-Met 단백질에만 특이적으로 높은 결합력을 갖는 항체를 분비하는 하이브리도마 세포주들을 반복하여 선별하였다. 반복 선별을 통해 얻은 하이브리도마 세포주를 제한 희석(limiting dilution)하여 단일클론 항체를 생성하는 하이브리도마 세포주 1개의 클론을 최종적으로 얻었다. 최종 선별된 단일클론 항체 생산 하이브리도마를 한국 세포주 은행(한국, 서울시 종로구 연건동 28, 서울대학교 암연구동)에 기탁하여 2009년 10월 9일자로 수탁번호 KCLRF-BP-00220를 부여받았다.
(4) 단일클론 항체의 생산 및 정제
상기 (3)에서 얻은 하이브리도마 세포를 무혈청 배지에서 배양하고 배양액으로부터 단일클론 항체를 생산 정제하였다.
먼저 10% FBS이 포함된 배양배지(DMEM) 배지 50 ㎖에서 배양된 상기 하이브리도마 세포를 원심분리하여 세포 침전물을 20 ㎖ PBS로 2회 이상 세척하여 FBS가 제거된 상태에서 배양배지(DMEM) 배지 50 ㎖을 세포 침전물에 재현탁시킨 후 3일 동안 37℃ 이산화탄소 배양기에서 배양하였다. 이후 원심분리를 통해 항체를 생산하는 세포를 제거하고 항체들이 분비된 배양액을 분리하여 4℃에 보관하거나 바로 모아서 50 ㎖ 내지 300 ㎖의 배양액으로부터 친화성 칼럼(Protein G agarose column; Pharmacia, USA)을 장착한 AKTA 정제 기기(GE Health)를 이용하여 항체를 순수 정제한 후 단백질 응집용 필터(Amicon)를 사용하여 PBS로 상층액을 치환하여 정제된 항체를 보관하고, 이후의 실험에 사용하였다.
실시예 2: c- Met 에 대한 키메릭 항체 chAbF46 의 제작
일반적으로 마우스 항체는 치료 목적으로 인간에게 주입되었을 때 면역거부반응(immunogenicity)을 보일 가능성이 높으므로, 이를 해결하기 위하여, 상기 실시예 1에서 제작된 마우스 항체 AbF46으로부터, 항원 결합에 관련된 변이 영역(variable region)을 제외한 불변 영역(constant region)을 인간 IgG1 항체의 서열로 치환하는 키메릭 항체 chAbF46을 제작하였다.
중쇄에 해당하는 염기 서열은 'EcoRI-signal sequence-VH-NheI-CH-TGA-XhoI'(서열 번호 7)로, 경쇄에 해당하는 염기 서열은 'EcoRI-signal sequence-VL- BsiWI-CL-TGA-XhoI'(서열 번호 8)로 구성되도록 각각 디자인하여 유전자를 합성하였다. 이후, Invitrogen 사의 OptiCHO™ Antibody Express Kit (Cat no. 12762-019)에 포함되어 있는 pOptiVEC™-TOPO TA Cloning Kit에 상기 중쇄에 해당하는 염기서열을 갖는 DNA 절편(서열번호 7)을, pcDNA™3.3-TOPO TA Cloning Kit(Cat no. 8300-01)에 상기 경쇄에 해당하는 염기서열을 갖는 DNA 절편(서열번호 8)을 각각 EcoRI(NEB, R0101S)과 XhoI(NEB, R0146S) 제한 효소를 사용하여, 클로닝함으로써, 키메릭 항체의 발현을 위한 벡터를 구축하였다.
상기 구축된 벡터는 각각 Qiagen Maxiprep kit (Cat no. 12662)을 이용하여 증폭되었으며, 상기 중쇄를 포함하는 벡터 및 경쇄를 포함하는 벡터는 4:1의 비율(80 ug:20 ug)로 293T 세포(2.5 x 107)에 2M CaCl2를 360 ul 첨가하여 트랜스펙션(transfection)하였다. 이후, 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO2 조건 하에서 5시간 동안 배양한 다음, FBS가 첨가되지 않은 DMEM 배지로 48시간 동안 37℃, 5% CO2 조건 하에서 배양하였다.
상기 배양된 세포를 원심분리하여 상등액 각 100 ㎖를 수득하였다. 그 다음 AKTA Prime (GE healthcare)를 이용하여 상등액으로부터 항체를 정제하였다. AKTA Prime에 Protein A 컬럼(GE healthcare, 17-0405-03)을 설치하고 배양액을 5 ml/min의 유속으로 흘려준 후, IgG elution buffer(Thermo Scientific, 21004)로 용출하였다. 이를 PBS buffer로 교환하여 최종적으로 키메릭 항체 AbF46(이하, chAbF46로 명명함)을 정제하였다.
실시예 3: 키메릭 항체 chAbF46 으로부터 면역원성이 제거된 인간화 항체 huAbF46의 제작
먼저, AbF46 마우스 항체의 가변 영역의 아미노산 서열을 Swiss PDB에서 분석하여, 항원 인지력에 중요한 서열들을 결정하였다. AbF46 마우스 항체의 골격(framework) 영역의 서열은 인간 항체의 서열과 유사한 것으로 분석되었으며, CDR의 주요 서열 및 골격 부분의 서열들을 10개 내외의 세그먼트(segment)로 분리하여, 각각의 세그먼트 별로 여러 가지 변이체(variant)들을 구성하였다. 이들로부터, 인간의 MHC class II에 결합되는 펩티드들을 인 실리코(in silico) 상에서 예측할 수 있는 iTope™ 기술 (Perry, L.C.A, Jones, T.D. and Baker, M.P. New Approaches to Prediction of Immune Responses to Therapeutic Proteins during Preclinical Development (2008). Drugs RD 9 (6): 385-396) 및 TCED™ 데이터베이스를 사용하여 상기 서열과 관련된 T-세포 에피토프가 제거될 수 있는 방법으로 인간화 항체의 서열을 선별하였다(Bryson, C.J., Jones, T.D. and Baker, M.P. Prediction of Immunogenicity of Therapeutic Proteins (2010). Biodrugs 24 (1):1-8). 상기 방법으로 얻어진 각각의 세그먼트들을 혼성(composition)시키는 혼성 인간화(composite humanization) 기술을 적용하여 VH 5종과 VL 4종의 서열을 디자인하였으며, 상기 VH 및 VL를 조합한 총 20종의 인간화 항체를 디자인하였다.
상기 면역원성 제거 방법에 의하여 디자인된 5종의 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열(AT-VH1, AT-VH2, AT-VH3, AT-VH4 및 AT-VH5)을 서열번호 1 내지 서열번호 5로 나타내었으며, 이들은 모두 IgG1 항체의 중쇄 서열 가운데 가장 안정적이라고 알려진 VH3 패밀리에 속하는 것으로 디자인되었다.
상기 면역원성 제거 방법에 의하여 디자인된 4종의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열(AT-Vk1, AT-Vk2, AT-Vk3 및 AT-Vk4)을 서열번호 6 내지 9로 나타내었으며, 이들은 모두 IgG1 항체의 경쇄 서열 가운데 가장 안정적이라고 알려진 Vk1 패밀리에 속하는 것으로 디자인되었다.
상기 디자인된 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 폴리뉴클레오티드를 영국의 antitope 사에 의뢰하여 합성하였으며, 상기 합성된 폴리뉴클레오티드를 pANT 발현 벡터(antitope 사, 영국)에 클로닝하였다. 중쇄 부분의 폴리뉴클레오티드는 'MluI - HindIII' 제한효소 부위에 삽입하였으며, 경쇄 부분의 폴리뉴클레오티드는 'BssHII - BamHI' 제한효소 부위에 삽입하였다. 중쇄 부분 및 경쇄 부분이 클로닝된 벡터(pANTVhG1 및 pANTVk)의 맵을 도 1에 나타내었으며, 상기 합성된 폴리뉴클레오티드의 염기 서열을 서열번호 10 내지 서열번호 18에 기재하였다.
상기 중쇄를 포함하는 벡터 및 경쇄를 포함하는 벡터는 4:1의 비율(80 ug:20 ug)로 HEK293 세포(2.5x107)에 2M CaCl2를 360 ㎕를 첨가하여 트랜스펙션(transfection)하였다. 이후, 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO2 조건 하에서 5시간 동안 배양한 다음, FBS가 첨가되지 않은 DMEM 배지로 72시간 동안 37℃, 5% CO2 조건 하에서 배양하였다.
상기 배양된 세포를 원심분리하여 상등액 각 100 ㎖를 수득하였다. 그 다음, AKTA Prime (GE healthcare)를 이용하여 상등액으로부터 항체를 정제하였다. AKTA Prime에 Protein A 컬럼(GE healthcare, 17-0405-03)을 설치하고 배양액을 5 ㎖/min의 유속으로 흘려준 후, IgG elution buffer(Thermo Scientific, 21004)로 용출하였다. 이를 PBS 완충액으로 교환하여 최종적으로 면역원성이 제거된 인간화 항체 20종을 정제하였다. 도 2는 상기 정제된 항체의 일부를 나타낸 것이다. 도 2에서, 레인 1은 Prestained MW Markers (Fermentas PageRuler Cat. No. SM1811), 레인 2는 chAbF46, 레인 3은 AT-VH2 및 AT-Vk2가 조합된 항체, 레인 4는 AT-VH2 및 AT-Vk4가 조합된 항체, 레인 5는 AT-VH4 및 AT-Vk4가 조합된 항체, 레인 6은 AT-VH5 및 AT-Vk2가 조합된 항체, 레인 7은 AT-VH5 및 AT-Vk4가 조합된 항체이다. 샘플들은 NuPage4-12% Bis-Tris gel (Invitrogen Cat. No. NP032BOX)를 사용하여, 35분 동안 250 V에서 전기영동을 수행하였다.
실시예 4: 면역원성이 제거된 인간화 항체 huAbF46 의 c- Met 항원 인지력 확인
상기 실시예에서 제작된 인간화 항체의 c-Met 항원에 대한 인지도를 competition ELISA 방법을 이용하여 키메릭 항체 chAbF46과 비교 확인하였다.
Nunc Immuno MaxiSort 96 well flat bottom microtiter plate (Fisher Cat. No. DIS-971-030J)를 사용하였고, 1.0 ㎍/㎖, 100 ㎕/well의 c-Met/Fc chimera (R&D Systems Cat. No. 358-MT/CF)를 사용하여 4℃에서 밤샘 배양하여 항원을 코팅하였다. chAbF46 및 인간화 항체 20종은 희석하여 10 ug/ml 내지 0.078 ug/ml의 농도로 비오틴화된(biotinylated) chAbF46(0.1 ㎍/㎖, final conc.)와 혼합하여 37℃에서 2시간 동안 배양시킨 후, 항원에 결합된 비오틴화된 chAbF46 항체의 양을 스트랩트아비딘-HRP (Sigma cat. No S5512)와 OPD substrate (Sigma Cat. No. P9187)를 사용하여 측정하였고, 상기 결과들로부터 IC50 (nM)를 계산한 결과를 표 1에 나타내었다.
중쇄/경쇄 AT-Vk1 AT-Vk2 AT-Vk3 AT-Vk4
AT-VH1 1.48 1.49 2.30 1.51
AT-VH2 2.30 1.28 1.69 1.37
AT-VH3 3.53 4.50 5.51 1.81
AT-VH4 2.40 3.13 1.99 1.41
AT-VH5 2.04 1.46 1.57 1.62
실시예 5: 면역원성이 제거된 인간화 항체 huAbF46 의 친화력( affinity ) 분석
*상기 실시예에서 제작된 면역원성이 제거된 인간화 항체 중 IC50의 값이 높은 3종(AT-VH2 및 AT-Vk2가 조합된 항체, AT-VH2 및 AT-Vk4가 조합된 항체, AT-VH5 및 AT-Vk2가 조합된 항체)의 c-Met 항원에 대한 친화력을 Biacore(GE healthcare)를 사용하여 측정하였다. CM5 칩 상에 각각의 항체를 약 80 내지 110 RU 만큼 고정시킨 후, 항원인 인간 c-Met 단백질을 100 nM부터 0.39 nM까지의 농도 범위 내에서 서로 다른 9개의 농도로 30 ㎕/min의 속도로 주입하여, 하기 표 2와 같이 kon 값과 koff 값을 구하고, 이로부터 KD 값을 계산하였다. 키메릭 항체 chAbF46은 c-Met항원에 대하여 약 4.27 nM의 결합력을 보였으며, 면역원성이 제거된 3종의 인간화 항체는 4.68 nM 내지 5.75 nM 범위의 결합력을 보였다(표 2). 이로부터 면역원성이 제거된 인간화 항체들은 c-Met 항원에 대하여 결합력의 감소 없이 키메릭 항체 chAbF46과 유사한 결합력을 가지고 있음을 확인할 수 있었다.
항체 kon (1/Ms) koff (1/s) KD (nM)
chAbF46 5.86 x 105 2.50 x 10-4 4.27
chAbF46-U6-MC7 5.38 x 105 2.52 x 10-4 4.68
chAbF46-U3-HC9 5.88 x 105 3.38 x 10-4 5.75
chAbF46-U6-HC8 8.34 x 105 4.36 x 10-4 5.23
실시예 6: 면역원성이 제거된 인간화 항체 huAbF46 의 CDR 서열
인간화 항체 huAbF46의 중쇄 및 경쇄 CDR의 아미노산 서열을 표 3에 나타내었다.
CDR1 CDR2 CDR3
AbF46 중쇄 CDR 서열 DYYMS
(서열 번호 19)		 FIRNKANGYTTEYSASVKG
(서열 번호 20)		 DNWFAY
(서열 번호 21)
AbF46 경쇄 CDR 서열 KSSQSLLASGNQNNYLA
(서열 번호 22)		 WASTRVS
(서열 번호 23)		 QQSYSAPLT
(서열 번호 24)
실시예 7: 키메릭 항체 chAbF46 및 면역원성이 제거된 인간화 항체 huAbF46의 면역원성
키메릭 항체 chAbF46 및 면역원성이 제거된 인간화 항체 huAbF46의 면역원성을 건강한 공여자 T 세포 증식 반응으로 확인하였다. 대조군으로 허셉틴® (Herceptin), PHA (Phytohaemagglutin) 및 KLH (Keyhole limpet hemocyanin)을 사용하였다. 각 공여자의 혈액에서 얻어진 PBMC (peripheral blood mononuclear cells) 세포를 24-웰 플레이트에서 AIM-V® 배양액에 웰 당 4 x 106 개 내지 6 x 106 개의 세포를 0.5 ㎖의 배양액에서 0.3 μM 농도의 피검 항체와 5일 내지 8일 동안 배양한 후, 각 세포들을 3개의 100 ㎕의 분액으로 만들어서 96-웰 플레이트로 옮겼다. AIM-V® 배양액에 0.75 μCi [3H]-Thymidine (Perkin Elmer® Beaconsfield, UK) 동위원소를 첨가하였다. 18시간 후에 세포에 함입된 동위원소의 양(cpm, counts per minute)을 측정하여 세포의 증식율을 계산하였다.
전체 시간 경과 5 내지 8일 동안 양성 T 세포 반응("P")를 나타낸다. 증식에 대한 T 세포 반응의 경계선 ("P*")을 나타낸다. 증식 시험에 대한 양성 T 세포 반응의 빈도는 표 4의 마지막에 증식율(%)로 나타냈다. 양성 공여자 반응은 시간 경과 시험 동안 하나 이상의 시간에서 SI≥2.00, 유의성 p<0.05 (경계선 반응 포함)으로 정의되었다. 반응이 역치 이상으로 측정된 일자의 수를 무시하고 여러 시간 별로 양성 증식 반응이 유도된 공여자를 계수하였다. 공여자 37에 대해서는 KLH 데이타를 얻지 못했다 (N/D; not determined).
공여자 chAbF46
(키메릭 항체)		 huAbF46
(인간화 항체)		 허셉틴 PHA KLH
공여자 1 P P
공여자 2 P P
공여자 2 P P
공여자 3 P P
공여자 4 P P
공여자 5 P P P
공여자 6 P P
공여자 7 P P
공여자 8 P P
공여자 9 P P
공여자 10 P P
공여자 11 P P
공여자 12 P P
공여자 13 P
공여자 14 P P
공여자 15 P
공여자 16 P P
공여자 17 P P
공여자 18 P P P P
공여자 19 P P
공여자 20 P P
공여자 21 P P P P
공여자 22 P P
공여자 23 P P P
공여자 24 P P
공여자 25 P P
공여자 26 P P
공여자 27 P P
공여자 28 P P
공여자 29 P P P
공여자 30 P P
공여자 31 P P
공여자 32 P P
공여자 33 P P
공여자 34 P P
공여자 35 P P
공여자 36 P P
공여자 37 P N/D
공여자 38 P
공여자 39 P P
공여자 40 P P
공여자 41 P P
공여자 42 P P P
공여자 43 P P
공여자 44 P P
공여자 45 P
공여자 46 P P
공여자 47 P P
공여자 48 P P
공여자 49 P P
공여자 50 P P
증식율(%) 8 2 6 100 90
증식 시험 데이터는 양성 (경계선 반응 포함 SI≥2.00, p<0.05) T 세포 반응을 공여자의 비율 중 모든 피검 항체에 대해 검출하였다는 것을 나타낸다. 표 4는 피검 항체에 대한 양성 반응을 요약한 것이다(P; 양성 반응). 모든 공여자는 증식 시험에서 PHA에 대한 양성 T 세포 반응을 나타냈고 이는 생체 외 (ex vivo) 배양 중인 세포들이 기능하고 있음을 나타낸다 (데이타 미기재). 또한, 대조군 항체 (허셉틴®에 대한 양성 T 세포 반응의 빈도 및 재생성 대조군인 KLH는 허셉틴®에 대해 0 내지 6%이고, KLH에 대해 85% 내지 95%의 예상 범위이다.
면역원성이 제거된 항체는 T 세포 증식 반응의 빈도가 낮아졌다. 또한 면역원성이 제거된 항체는 키메릭 항체와 비교하여 양성 T 세포 증식 반응의 평균 크기도 낮아졌다 (표 5). 면역원성이 제거된 항체는 평균 SI 2.40인 양성 반응 집단의 6%의 낮은 빈도 및 낮은 크기의 T 세포 증식 반응을 유도하는 대조군 항체 허셉틴 보다 더 낮은 면역원성을 나타낸다.
항체 평균 SI 표준 편차 SI 반응 빈도(%)
chAbF46 (키메릭 항체) 2.20 0.35 8
huAbF46 (인간화 항체) 2.12 N/A 2
허셉틴 2.40 0.36 6
KLH 5.91 5.06 90
한국세포주연구재단 KCLRFBP00220 20091009
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30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Asn Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 3 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> AT-VH3 <400> 3 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ser Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Asn Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 4 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> AT-VH4 <400> 4 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Asn Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 5 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> AT-VH5 <400> 5 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30 Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala 50 55 60 Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95 Tyr Cys Ala Arg Asp Asn Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 6 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> AT-Vk1 <400> 6 Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 7 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> AT-Vk2 <400> 7 Asp Ile Leu Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 8 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> AT-Vk3 <400> 8 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 9 <211> 113 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> AT-Vk4 <400> 9 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu Ala Trp His Gln Gln Lys Pro Gly Lys 35 40 45 Ala Pro Lys Met Leu Ile Ile Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln 85 90 95 Ser Tyr Ser Ala Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile 100 105 110 Lys <210> 10 <211> 375 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of AT-VH1 <400> 10 acgcgtgtcc actccgaagt gaagctggtg gaaagcggcg gaggcctggt gcagcctggc 60 ggcagcctga gactgagctg cgccaccagc ggcttcacct tcaccgacta ctacatgagc 120 tgggtgcgcc agccccctgg caagggactg gaatggctgg gcttcatccg gaacaaggcc 180 aacggctaca ccaccgagta cagcgccagc gtgaagggcc ggttcaccat cagccgggac 240 aacagcaaga gcagcctgta cctgcagatg aacagcctgc gggccgagga ctccgccacc 300 tactactgcg ccagagacaa ttggttcgcc tactggggcc agggcaccct ggtgacagtg 360 tccagcggta agctt 375 <210> 11 <211> 375 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of AT-VH2 <400> 11 acgcgtgtcc actccgaagt gaagctggtg gaaagcggcg gaggcctggt gcagcctggc 60 ggcagcctga gactgagctg cgccaccagc ggcttcacct tcaccgacta ctacatgagc 120 tgggtgcgcc agccccctgg caagggactg gaatggctgg gcttcatccg gaacaaggcc 180 aacggctaca ccaccgagta cagcgccagc gtgaagggcc ggttcaccat cagccgggac 240 aacagcaaga gcagcctgta cctgcagatg aacagcctgc gggccgagga caccgccacc 300 tactactgcg ccagagacaa ttggttcgcc tactggggcc agggcaccct ggtgacagtg 360 tccagcggta agctt 375 <210> 12 <211> 375 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of AT-VH3 <400> 12 acgcgtgtcc actccgaggt gcagctggtg gaaagcggcg gaggactggt gcagcctggc 60 ggcagcctga gactgagctg cgccaccagc ggcttcacct tcaccgacta ctacatgagc 120 tgggtgcgcc agccccctgg caagggactg gaatggctgg gcttcatccg gaacaaggcc 180 aacggctaca ccaccgagta cagcgccagc gtgaagggcc ggttcaccat cagccgggac 240 aacagcaaga gcagcctgta cctgcagatg aacagcctgc gggccgagga caccgccacc 300 tactactgcg ccagagacaa ttggttcgcc tactggggcc agggcaccct ggtgacagtg 360 tccagcggta agctt 375 <210> 13 <211> 375 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of AT-VH4 <400> 13 acgcgtgtcc actccgaggt gcagctggtg gaaagcggcg gaggactggt gcagcctggc 60 ggcagcctga gactgagctg cgccaccagc ggcttcacct tcaccgacta ctacatgagc 120 tgggtgcgcc agccccctgg caagggactg gaatggctgg gcttcatccg gaacaaggcc 180 aacggctaca ccaccgagta cagcgccagc gtgaagggcc ggttcaccat cagccgggac 240 aacagcaaga acagcctgta cctgcagatg aacagcctgc gggccgagga caccgccacc 300 tactactgcg ccagagacaa ttggttcgcc tactggggcc agggcaccct ggtgacagtg 360 tccagcggta agctt 375 <210> 14 <211> 375 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of AT-VH5 <400> 14 acgcgtgtcc actccgaggt gcagctggtg gaaagcggcg gaggactggt gcagcctggc 60 ggcagcctga gactgagctg cgccaccagc ggcttcacct tcaccgacta ctacatgagc 120 tgggtgcgcc agccccctgg caagggactg gaatggctgg gcttcatccg gaacaaggcc 180 aacggctaca ccaccgagta cagcgccagc gtgaagggcc ggttcaccat cagccgggac 240 aacagcaaga acagcctgta cctgcagatg aacagcctgc gggccgagga caccgccgtg 300 tactactgcg ccagagacaa ttggttcgcc tactggggcc agggcaccct ggtgacagtg 360 tccagcggta agctt 375 <210> 15 <211> 389 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of AT-Vk1 <400> 15 gcgcgcgatg tgacatcgtg atgacccaga gccccagcag cctgaccgcc agcgtgggcg 60 acagagtgac catgacctgc aagagcagcc agtctctgct ggccagcggc aaccagaaca 120 actacctggc ctggcaccag cagaagcccg gcaaggcccc caagatgctg atcatctggg 180 ccagcaccag agtgtccggc gtgcccgata gattcatcgg cagcggctcc ggcaccgact 240 tcaccctgac catcagctct ctgcaggccg aggacgtggc cgtgtactac tgccagcaga 300 gctacagcgc ccctctgacc ttcggccagg gcaccaagct ggaaatcaag cgtgagtaga 360 atttaaactt tgcttcctca gttggatcc 389 <210> 16 <211> 389 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of AT-Vk2 <400> 16 gcgcgcgatg tgacatcgtg atgacccaga gccccagcag cctgaccgcc agcgtgggcg 60 acagagtgac catcacatgc aagagcagcc agagcctgct ggctagcggc aaccagaaca 120 actacctggc ctggcaccag cagaagcccg gcaaggcccc caagatgctg atcatctggg 180 ccagcaccag agtgtccggc gtgcccgata gattcatcgg cagcggctcc ggcaccgact 240 tcaccctgac catcagctct ctgcaggccg aggacgtggc cgtgtactac tgccagcaga 300 gctacagcgc ccctctgacc ttcggccagg gcaccaagct ggaaatcaag cgtgagtaga 360 atttaaactt tgcttcctca gttggatcc 389 <210> 17 <211> 389 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of AT-Vk3 <400> 17 gcgcgcgatg tgacatccag atgacccaga gccccagcag cctgagcgcc agcgtgggcg 60 acagagtgac catcacatgc aagagcagcc agagcctgct ggctagcggc aaccagaaca 120 actacctggc ctggcaccag cagaagcccg gcaaggcccc caagatgctg atcatctggg 180 ccagcaccag agtgtccggc gtgcccgata gattcatcgg cagcggctcc ggcaccgact 240 tcaccctgac catcagctct ctgcaggccg aggacgtggc cgtgtactac tgccagcaga 300 gctacagcgc ccctctgacc ttcggccagg gcaccaagct ggaaatcaag cgtgagtaga 360 atttaaactt tgcttcctca gttggatcc 389 <210> 18 <211> 389 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide sequence of AT-Vk4 <400> 18 gcgcgcgatg tgacatccag atgacccaga gccccagcag cctgagcgcc agcgtgggcg 60 acagagtgac catcacatgc aagagcagcc agagcctgct ggctagcggc aaccagaaca 120 actacctggc ctggcaccag cagaagcccg gcaaggcccc caagatgctg atcatctggg 180 ccagcaccag agtgtccggc gtgccagata gattcagcgg cagcggctcc ggcaccgact 240 tcaccctgac catcagctct ctgcaggccg aggacgtggc cgtgtactac tgccagcaga 300 gctacagcgc ccctctgacc ttcggccagg gcaccaagct ggaaatcaag cgtgagtaga 360 atttaaactt tgcttcctca gttggatcc 389 <210> 19 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain CDR1 of AbF46 <400> 19 Asp Tyr Tyr Met Ser 1 5 <210> 20 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain CDR2 of AbF46 <400> 20 Phe Ile Arg Asn Lys Ala Asn Gly Tyr Thr Thr Glu Tyr Ser Ala Ser 1 5 10 15 Val Lys Gly <210> 21 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain CDR3 of AbF46 <400> 21 Asp Asn Trp Phe Ala Tyr 1 5 <210> 22 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain CDR1 of AbF46 <400> 22 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Ala Ser Gly Asn Gln Asn Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 23 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain CDR2 of AbF46 <400> 23 Trp Ala Ser Thr Arg Val Ser 1 5 <210> 24 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain CDR3 of AbF46 <400> 24 Gln Gln Ser Tyr Ser Ala Pro Leu Thr 1 5

Claims (18)

  1. 서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 4, 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나의 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 6, 서열번호 7, 및 서열번호 8의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하거나,
    서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나의 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 9의 경쇄 가변 영역을 포함하는,
    항 c-Met 인간화 항체.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 항체는 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변 영역 및 서열번호 7의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 항 c-Met 인간화 항체.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 항체는 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변 영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 항 c-Met 인간화 항체.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 항체는 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변 영역 및 서열번호 7의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 항 c-Met 인간화 항체.
  5. 청구항 1에 있어서, 상기 항체는 인간 또는 원숭이로부터 유래된 c-Met에 특이적으로 결합하는 것인 항 c-Met 인간화 항체.
  6. 청구항 1에 있어서, 상기 항체는 단일클론항체인 것인 항 c-Met 인간화 항체.
  7. 청구항 1에 있어서, 상기 항체는 트라스투주맙(trastuzumab)보다 면역원성이 낮은 것인 항 c-Met 인간화 항체.
  8. 청구항 1에 있어서, 상기 항체는 scFv, (scFv)2, Fab, Fab' 및 F(ab')2로 이루어진 군으로부터 선택되는 항원 결합 단편인 것인 항 c-Met 인간화 항체.
  9. 서열번호 1 내지 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 항 c-Met 인간화 항체의 중쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
  10. 서열번호 6 내지 서열번호 9의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 항 c-Met 인간화 항체의 경쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드.
  11. 서열번호 1 내지 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 항 c-Met 인간화 항체의 중쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 상기 폴리뉴클레오티드에 작동적으로 연결된(operatively linked) 프로모터를 포함하는 재조합 벡터.
  12. 서열번호 6 내지 서열번호 9의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 항 c-Met 인간화 항체의 경쇄 가변영역을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 상기 폴리뉴클레오티드에 작동적으로 연결된 프로모터를 포함하는 재조합 벡터.
  13. 항 c-Met 인간화 항체의 약학적 유효량; 및 약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하고,
    상기 c-Met 인간화 항체는,
    서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 4, 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나의 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 6, 서열번호 7, 및 서열번호 8의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나의 경쇄 가변 영역을 포함하거나,
    서열번호 1, 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 및 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나의 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 9의 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인,
    암 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  14. 청구항 13에 있어서, 상기 항체는 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변 영역 및 서열번호 7의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 약학적 조성물.
  15. 청구항 13에 있어서, 상기 항체는 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변 영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 약학적 조성물.
  16. 청구항 13에 있어서, 상기 항체는 서열번호 5의 아미노산 서열로 이루어진 중쇄 가변 영역 및 서열번호 7의 아미노산 서열로 이루어진 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 약학적 조성물.
  17. 청구항 13에 있어서, 상기 암은 편평상피세포암, 소세포폐암, 비소세포폐암, 폐의 선암, 폐의 편평상피암, 복막암, 피부암, 피부 또는 안구내 흑색종, 직장암, 항문부근암, 식도암, 소장암, 내분비선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 간세포암, 위장암, 췌장암, 교아종, 경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종양, 유방암, 결장암, 대장암, 자궁내막 또는 자궁암, 침샘암, 신장암, 간암, 전립선암, 음문암, 갑상선암, 간암 및 두경부암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 약학적 조성물.
  18. 청구항 13에 있어서, 상기 항체는 c-Met 단백질의 길항제(antagonist) 작용을 하는 것인 약학적 조성물.
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