KR101893011B1 - Method for Manufacturing Targetable Aptamer Complexes - Google Patents

Abstract

본 발명에 따라, 표적에 특이적으로 결합하는 압타머를 제조하는 단계, 및 상기 압타머에 위치하는 반응성 그룹 N에 링커 없이 상기 표적에 대한 결합 능력을 보유하거나 생물학적 활성을 나타내는 표적화제를 결합하여 상기 표적화제를 상기 표적에 대해 표적화하는 압타머 표적화 복합체를 제조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 압타머 표적화 복합체의 제조 방법이 제공된다. According to the present invention, there is provided a method of producing a platematerial, the method comprising the steps of: preparing a platemper that specifically binds to a target; and combining a targeting agent exhibiting biological activity or retaining binding ability to the target, The method comprising the steps of: preparing an opthalmologically targeted complex that targets the targeting agent to the target.

Description

압타머 표적화 복합체의 제조방법{Method for Manufacturing Targetable Aptamer Complexes}TECHNICAL FIELD [0001] The present invention relates to a method for manufacturing a targeted amphoteric complex,

본 발명은 압타머 표적화 복합체에 관한 것이다. The present invention relates to platemater targeting complexes.

종래의 개발된 각종 '화학적 제제'와 '생물학적 제제'는 그 높은 독성으로 인하여 치료요법에 있어 종종 그 적용이 제한되며, 그러한 화학적 제제 또는 생물학적 제제의 치료율을 향상시키기 위하여 다양한 연구가 진행되어 왔다. Conventionally developed various 'chemical formulations' and 'biological formulations' are often limited in therapeutic treatment due to their high toxicity, and various studies have been conducted to improve the treatment rate of such chemical formulations or biological formulations.

관련 연구 중 하나는 화학적 제제 또는 생물학적 제제를 항체와 같은 리간드와 결합시키는 것이며, 이 경우 항체는 더 많은 화학적 제제 또는 생물학적 제제가 이들을 생체 내에서 가장 필요로 하는 장소를 찾아낼 수 있도록 화학적 제제 또는 생물학적 제제의 분포를 변화시키는 작용을 한다. One of the related studies is to associate a chemical or biological agent with a ligand such as an antibody in which the antibody is chemically or biologically modified so that more chemical or biological agents can locate them most in vivo It acts to change the distribution of the preparation.

소분자량의 화학적 제제 또는 생물학적 제제의 향상된 표적화는, 화학적 제제 또는 생물학적 제제를 분자량이 큰 복합체로 형성함으로써 달성되어 왔다. 예를 들면, 항체와 제제(화학적 제제 또는 생물학적 제제)를 링커를 이용하여 표적화 복합체를 형성하여 목적을 달성하고 있다(Ravi V. J. C., Acc. Chem. Res., 2008; 41 (1), 98-107). 이런 항체 표적화 복합체는 투여된 환자의 혈류 중으로 순환하고, 순환하는 복합체는 환자 내의 타깃이 되는 표적분자에 의해 인지되고 결합된다.Improved targeting of small molecular weight chemical or biological agents has been achieved by forming chemical or biological agents into large molecular weight complexes. For example, antibodies and agents (chemical or biological agents) have been achieved by the use of linkers to form targeting complexes (Ravi VJC, Acc. Chem. Res., 2008; 41 (1), 98-107). These antibody targeting complexes circulate into the bloodstream of the administered patient, and circulating complexes are recognized and bound by target molecules in the patient.

또한, 소분자량의 화학적 제제 또는 생물학적 제제의 특이적 전달을 위한 더욱 간단한 접근법으로 압타머(aptamer)의 특성만을 이용한 기술을 활용하고 있다. It also utilizes techniques using only the characteristics of an aptamer as a simpler approach for the specific delivery of small molecular weight chemical or biological agents.

SELEX(Systematic evolution of ligands by exponential enrichment)로, 높은 친화성과 특이성(specificity)으로 다양한 단백질에 결합할 수 있는 단일가닥핵산(이하, '압타머'라고 하며, 본 발명에 있어서 '압타머'는 단일가닥핵산 압타머를 의미한다)이 확인될 수 있다(Tuerk C. and Gold L.; Science, 1990; 249, 505-510). A single-stranded nucleic acid capable of binding to various proteins with high affinity and specificity (hereinafter referred to as " platamer ", and in the present invention, " platamer " (Tuerk C. and Gold L .; Science , 1990; 249, 505-510).

소분자량의 화학적 제제 또는 생물학적 제제를 특정 세포-표면 수용체 및 결과로써 특이적 세포 유형으로 표적시키는 압타머의 구조적 잠재력을 이용하여 효과적인 전달방법들이 개발되고 있다. Effective delivery methods have been developed utilizing the structural potential of platamers to target small molecular weight chemical or biological agents to specific cell-surface receptors and consequently to specific cell types as a result.

최근에, 제안된 압타머를 이용한 표적화 복합체 전달방법으로서는, 소분자량의 화학적 제제 또는 생물학적 제제와 압타머를 '선형 링커'를 이용하여 압타머 표적화 복합체를 합성하는 방법(Hung et al., Chembiochem. 2009;10(5), 862-868), 압타머에서 이중가닥으로 구성된 부위에 약제(화학적 제제 또는 생물학적 제제)를 끼어 넣는 방법(Bagalkot et. al., Angew Chem Int Ed Engl. 2006;45(48), 8149-52), 및 siRNA-압타머 키메라(McNamara et al., Nat Biotechnol. 2006;24(8), 1005-15) 등이 있다. Recently, as a method of delivering targeted complexes using the proposed platemer, a method of synthesizing platemar targeting complexes using a 'linear linker' with a small molecular weight chemical preparation or a biological preparation and an extramamer (Hung et al., Chembiochem. 2009; 10 (5), 862-868), a method of inserting a drug (chemical or biological agent) into a double-stranded site in a platum (Bagalkot et al., Angew Chem Int Ed. 48), 8149-52), and siRNA-aptamer chimeras (McNamara et al., Nat Biotechnol. 2006; 24 (8), 1005-15).

본 발명의 목적은 링커를 사용하지 아니하는 압타머를 이용한 압타머 표적화 복합체, 그 수용체에의 전달방법 및 그 이를 이용한 다양한 용도를 제공하고자 하는 것이다. It is an object of the present invention to provide a platamater targeting complex using an platemer not using a linker, a method of delivering the platamer to the receptor, and various uses thereof.

본 발명에 따라, 압타머 표적화 복합체가 제공된다. According to the present invention, there is provided a platemater targeting complex.

본 발명에 따른 압타머 표적화 복합체는, 표적에 특이적으로 결합하는 압타머에 위치하는 반응성 그룹 N에, 링커 없이, 표적화제(하나 이상의 표적화제화학적 제제 및/또는 하나 이상의 생물학적 제제)가 결합되어 있다. The platemater targeting complex according to the present invention is characterized in that a targeting agent (one or more targeting agent chemistries and / or one or more biological agents) is conjugated to the reactive group N located in the plumbers specifically binding to the target, have.

바람직하게, 상기 표적화제(상기 화학적 제제와 상기 생물학적 제제)는, 표적에 대한 결합 능력을 보유하거나 생물학적 활성을 나타내도록 결합되어 있다. Preferably, the targeting agent (the chemical agent and the biological agent) are combined to retain binding capacity for the target or to exhibit biological activity.

바람직하게, 상기 반응성 그룹 N이 아미노, 카르복실, 티올, 알킬, 알케닐, 알키닐, 옥소알킬, 옥소알케닐, 옥소알키닐, 아미노알킬, 아미노알케닐, 아미노알키닐, 설포알킬, 설포알케닐, 설포알키닐, 포스포알킬, 포스포알케닐, 및 포스포알키닐 중에서 선택된 하나 이상의 그룹을 포함한다.
본 발명에 따라, 표적에 특이적으로 결합하는 압타머를 제조하는 단계, 및 상기 압타머에 위치하는 반응성 그룹 N에 링커 없이 상기 표적에 대한 결합 능력을 보유하거나 생물학적 활성을 나타내는 표적화제를 결합하여, 상기 표적화제를 상기 표적에 대해 표적화하는 압타머 표적화 복합체를 제조하는 단계를 포함하는 압타머 표적화 복합체의 제조 방법이 제공되고, 상기 반응성 그룹 N은 아미노, 카르복실, 티올, 알킬, 알케닐, 알키닐, 옥소알킬, 옥소알케닐, 옥소알키닐, 아미노알킬, 아미노알케닐, 아미노알키닐, 설포알킬, 설포알케닐, 설포알키닐, 포스포알킬, 포스포알케닐, 및 포스포알키닐 중에서 선택된 하나 이상의 그룹이다. Preferably, the reactive group N is selected from the group consisting of amino, carboxyl, thiol, alkyl, alkenyl, alkynyl, oxoalkyl, oxoalkenyl, oxoalkynyl, aminoalkyl, aminoalkenyl, aminoalkynyl, sulfoalkyl, Alkenyl, alkynyl, alkenyl, alkynyl, alkenyl, alkynyl, alkenyl, alkynyl, alkynyl,
According to the present invention, there is provided a method of producing a platematerial, the method comprising the steps of: preparing a platemper that specifically binds to a target; and combining a targeting agent exhibiting biological activity or retaining binding ability to the target, , Wherein the targeting agent is targeted to the target, wherein the reactive group N is selected from the group consisting of amino, carboxyl, thiol, alkyl, alkenyl, Alkenyl, alkynyl, oxoalkyl, oxoalkenyl, oxoalkynyl, aminoalkyl, aminoalkenyl, aminoalkynyl, sulfoalkyl, sulfoalkenyl, sulfoalkynyl, phosphoalkyl, phosphoalkenyl, and phosphoalkynyl One or more selected groups.

바람직하게, 상기 표적화제(상기 화학적 제제 및/또는 상기 생물학적 제제)중 적어도 하나는 치료용 약제이다. Preferably, at least one of the targeting agents (the chemical agent and / or the biological agent) is a therapeutic agent.

바람직하게, 상기 표적화제(상기 화학적 제제 및/또는 상기 생물학적 제제) 중 적어도 하나는 생체분자에 특이적이다. Preferably, at least one of the targeting agents (the chemical agent and / or the biological agent) is biomolecule specific.

바람직하게, 상기 생체분자는 세포 표면 발현되거나 입자 표면 발현된 리간드 또는 수용체이다. Preferably, the biomolecule is a cell surface expressed or particle surface expressed ligand or receptor.

바람직하게, 상기 압타머와 상기 표적화제의 결합은 불안정성 결합이고, 상기 불안정성 결합은 pH 민감성 결합, 또는 방사선에 의한 분해에 대한 감수성 결합이다. Preferably, the binding of the squid polymer and the targeting agent is an unstable bond, and the unstable bond is a pH sensitive bond or a susceptible bond to radiation degradation.

본 발명에 따라, 링커 없이 표적화제(화학적 제제 및/또는 생물학적 제제)를 압타머의 반응성 그룹 N에 결합시키는 단계를 포함하고, 상기 결합이 상기 표적화제의 적어도 하나의 생물학적 특징을 변화시키는 것을 특징으로 하는, 상기 표적화제의 적어도 하나의 생물학적 특징을 변화시키는 방법이 제공된다. According to the present invention, there is provided a method of inhibiting the binding of a targeting agent (chemically and / or biological agent) to a reactive group N of an elastomer without linker, characterized in that said binding alters at least one biological characteristic of the targeting agent Wherein the at least one biological characteristic of the targeting agent is altered.

본 발명에 따라, 표적분자에 특이적이고 질환 또는 상태에 대해 효과적인 생물학적 활성을 가지는 치료적 유효량의 상기 압타머 표적화 복합체를 포함하는 것을 특징으로 하는, 상기 표적분자를 발현하는 세포, 조직 또는 유체를 포함하는 개체 내 질환 또는 상태를 치료 또는 예방하기 위한 약제가 제공된다. According to the present invention, there is provided a cell, tissue or fluid expressing the target molecule, characterized in that it comprises a therapeutically effective amount of the platemater targeting complex, which is specific for the target molecule and has an effective biological activity against the disease or condition There is provided a medicament for treating or preventing a disease or condition in a subject.

바람직하게, 상기 약제에서 상기 생물학적 제제는 사이토카인, 독소, 약제, 핵산 또는 동위 원소이다. Preferably, in the agent, the biological agent is a cytokine, a toxin, a drug, a nucleic acid or an isotope.

바람직하게, 상기 약제에서 상기 질환 또는 상태가 감염이고, 상기 표적분자가 미생물체 또는 바이러스에 의해 발현되는 것이다. Preferably, the disease or condition is an infection in the agent, and the target molecule is expressed by a microorganism or a virus.

본 발명에 따라, 미생물 세포 또는 바이러스 입자상의 수용체에 특이적인 상기 표적화제를 포함하는 상기 압타머 표적화 복합체를 상기 수용체의 표면에 접촉함으로써 상기 표면상에 존재하는 상기 미생물 세포 또는 상기 바이러스 입자의 감염력을 감소시키는 약제가 제공된다. According to the present invention, the infectious agent-targeting complex comprising the targeting agent specific to a receptor on a microbial cell or virus particle is brought into contact with the surface of the receptor to infect the infectious agent of the microbial cell or the viral particle present on the surface Is provided.

본 발명에 따라, (A) 압타머에 위치하는 반응성 그룹 N에, 링커 없이 결합된, 하나 이상의 표적화제(화학적 제제 및/또는 하나 이상의 생물학적 제제)를 포함하고, 하나 이상의 상기 표적화제가 세포 수용체에 결합하여 내재화를 매개하고, 세포 내에서 활성인 약제를 포함하는 압타머 표적화 복합체를 제조하는 단계; 및 (B) 상기 수용체 발현 세포를 상기 압타머 표적화 복합체와 접촉시키는 단계; 를 포함하며, 상기 접촉에 의해 상기 압타머 표적화 복합체의 내재화 및 상기 약제의 세포내 전달이 일어나도록 하는 것을 특징으로 하는, 세포내 활성인 약제의 세포내 전달을 매개하는 방법이 제공된다.According to the present invention there is provided a pharmaceutical composition comprising (A) at least one targeting agent (chemical agent and / or one or more biological agents) bound to a reactive group N located on the plumerator without a linker, And mediating the internalization and producing an enteral-targeting complex comprising an agent that is active in the cell; And (B) contacting the receptor expressing cell with the platemater targeting complex; Wherein the contact is mediated by intracellular delivery of an intracellularly active agent, characterized in that the contact results in internalization of the platemater-targeting complex and intracellular delivery of the agent.

바람직하게 상기 약제 전달 매개 방법에서, 상기 약제는 상기 약제가 세포내 구획과 접촉할 경우 활성이 되는 프로드러그이다. Preferably, in the medicament delivery mediator, the medicament is a prodrug that becomes active when the medicament is in contact with the intracellular compartment.

바람직하게, 상기 약제 전달 매개 방법에서, 상기 압타머 표적화 복합체는 내재화된 상기 압타머 표적화 복합체를 특정의 세포내 구획으로 지시하기 위한 트래피킹 시그널을 추가로 포함한다. Preferably, in the medicament delivery mediated method, the platemater targeting complex further comprises a trafficking signal for directing the internalized platemater targeting complex to a specific intracellular compartment.

바람직하게, 상기 약제 전달 매개 방법에서, 상기 표적화제로서 2개 이상의 상기 화학적 제제 및/또는 2개 이상의 상기 생물학적 제제가 상기 압타머의 상기 반응성 그룹 N에 결합되고, 상기 압타머 표적화 복합체와 상기 세포 수용체 간의 결합 활성을 증가시킴으로써, 수용체 매개 내재화와 약제 전달을 증가시킨다. Preferably, in said drug delivery mediation, two or more of said chemical agents and / or two or more said biological agents are bound to said reactive group N of said plumper as said targeting agent, and said platemater targeting complex and said cells Increases binding activity between receptors, thereby increasing receptor mediated internalization and drug delivery.

본 발명에 따라, (A) 표적화제(하나 이상의 화학적 제제 및/또는 하나 이상의 생물학적 제제)가 자체의 반응성 그룹을 통해, 인지부위 C를 갖고 있는 압타머에 링커 없이 결합된 압타머 표적화 복합체를 제조하는 단계; (B) 상기 압타머의 단일가닥핵산의 화학적 특징을 변형시키는 단계; 및 (C) 상기 압타머 표적화 복합체의 물리적 또는 생물학적 성질의 변형 여부를 측정하는 단계; 를 포함하는 것을 특징으로 하는, 압타머 표적화 복합체의 물리적 또는 생물학적 성질의 변형 방법이 제공된다. According to the present invention there is provided a method for the preparation of a platemater targeting complex (A), wherein the targeting agent (one or more chemical agents and / or one or more biological agents) is linked via its own reactive group to a platemaker ; (B) modifying the chemical characteristics of the single-stranded nucleic acid of the plummeter; And (C) determining whether the physical or biological properties of the platemater targeting complex are altered; A method of modifying the physical or biological properties of the platemater targeting complex is provided.

바람직하게, 상기 물리적 또는 상기 생물학적 성질이 약동학, 약력학, 면역원성, 결합 친화성, 분해 감수성, 용해도, 친지성, 친수성, 소수성, 안정성 및 강도 중에 선택되는 적어도 하나이다. Preferably, the physical or biological properties are at least one selected from pharmacokinetics, pharmacodynamics, immunogenicity, binding affinity, degradation sensitivity, solubility, lipophilicity, hydrophilicity, hydrophobicity, stability and strength.

본 발명에 따라, 검출성 표지물이 결합된 상기 압타머 표적화 복합체를 개체에 투여하는 단계를 포함하고, 상기 압타머 표적화 복합체는 생체 내에서 상기 압타머의 반응성 그룹 N과 비-공유적으로 결합하며, 상기 압타머 표적화 복합체는 세포 또는 조직 중의 표적에 특이적인 것을 특징으로 하는, 표적분자를 발현하는 개체 내 세포 또는 조직을 이미지화하는 방법이 제공된다. In accordance with the present invention, there is provided a method of treating a subject, comprising administering to the subject an indomethacin targeting complex to which a detectable marker is bound, wherein the indomator targeting complex is non-covalently associated in vivo with the reactive group N of the indomethacin , Wherein said plummeter targeting complex is specific for a target in a cell or tissue.

본 발명에 따라, 그 자신은 세포막을 통과하지 않는 압타머의 반응성 그룹 N을 링커 없이 표적화제(화학적 제제 및/또는 생물학적 제제)와 결합시킴으로써 압타머 표적화 화합물을 형성하는 단계를 포함하고, 상기 압타머와 상기 표적화제의 결합이 상기 제제의 세포막 통과 능력을 감소시키거나 억제시키는 것을 특징으로 하는, 상기 표적화제의 세포막 통과 능력을 억제하거나 감소시키는 방법이 제공된다. According to the present invention, it comprises the step of forming a platemater targeting compound by binding a reactive group N of platememers not passing through the cell membrane with a targeting agent (chemical agent and / or biological agent) without a linker, There is provided a method of inhibiting or reducing the ability of the targeting agent to pass through the cell membrane, characterized in that the binding of the targeting agent to the tamarin reduces or inhibits the ability of the agent to pass through the cell membrane.

본 발명에 따른 압타머 표적화 복합체에서, 압타머에 위치하는 반응성 그룹 N에 링커 없이 결합되는 표적화제는, 하나 이상의 화학적 제제 및/또는 생물학적 제제를 포함한다. In the platamater-targeting complexes according to the present invention, the targeting agent, which is bound without linker to the reactive group N located in the platemaker, comprises one or more chemical and / or biological agents.

본 발명에서 사용되는 '표적화제'는, 예를 들면, 세포, 조직(예를 들면, 세포외 매트릭스), 유체, 유기체, 또는 이들의 서브세트에 위치한 표적분자의 표적 잔기를 인지하고, 이에 결합하거나 부착되는 화학적 및/또는 생물학적 잔기를 말한다. As used herein, a "targeting agent" is one that recognizes, and binds to, the target residues of a target molecule located, for example, in a cell, tissue (eg, extracellular matrix), fluid, organism, Refers to chemical and / or biological moieties that are attached or attached to a substrate.

본 발명의 압타머 표적화 복합체는, 링커를 사용하지 않고 유도하는 가역적 혹은 비가역적인 공유 또는 비공유 결합이 바람직하게 사용된다. In the platemater targeting complex of the present invention, reversible or irreversible covalent or noncovalent bonds inducing without using a linker are preferably used.

본 발명의 압타머 표적화 복합체의 압타머 특이성은, 주위 환경에 따라, 표적화제와의 공유 결합 뒤에 변형되거나 제거될 수도 있다. The plumamer specificity of the platemater targeting complex of the present invention may be modified or removed following covalent bonding with the targeting agent, depending on the ambient environment.

본 발명의 압타머 표적화 복합체는, 일부 예에 있어서는, 공유 결합전 압타머의 표적 결합 특이성이 공유 결합 후에도 실질적으로 보유될 수 있다.The platemater targeting complex of the present invention may, in some instances, be substantially retained after covalent bonding of the target binding specificity of the covalent bonding pre-polymer.

본 발명의 압타머 표적화 복합체는 자체 성분 이상의 다양한 이점을 제공한다. 예를 들면, 본 발명에 따른 복합체의 압타머 부분은 보편적으로 생체 내에서 비교적 크기가 작은 표적화제의 반감기를 연장시킬 수 있다. The platemar targeting complexes of the present invention provide a variety of advantages over their constituents. For example, the platemer portion of the complex according to the present invention can generally extend the half-life of a relatively small-sized targeting agent in vivo.

본 발명에 따른 압타머 표적화 복합체는, 특정 화학적 제제 또는 생물학적 제제의 생물학적 효능이나 다른 생물학적 특징도 상기 복합체의 압타머 부분에 의해 제공되는 생물학적 제제 기능의 부가에 의하여 변형시킬 수 있다. The platemater targeting complexes according to the present invention may also be modified by the addition of a biological agent function provided by the platemer portion of the complex, such that the biological efficacy or other biological characteristics of the particular chemical agent or biological agent.

본 발명의 압타머 표적화 복합체를 적용하면, 압타머와의 결합에 의해 부여된 증가된 크기를 통해 상기 표적화제로 하여금 새로운 역량으로 기능할 수 있게 한다.The application of the platemar targeting complex of the present invention allows the targeting agent to function at a new capacity through the increased size imparted by binding with platemers.

본 발명에 따른 압타머 표적화 복합체는, 압타머의 반응성 그룹 N과 표적화 제에 존재하는 반응성 그룹을 결합시킴으로써 제조된다. The platemater targeting complexes according to the present invention are prepared by combining the reactive groups N of the plumbers with the reactive groups present in the targeting agent.

이런 반응성 그룹들 간의 결합은, 예를 들어 아미노, 티올, 또는 카르복실에 의해 수행될 수 있다. The linkage between these reactive groups can be performed, for example, by amino, thiol, or carboxyl.

상기 반응성 그룹은 케톤, 디케톤, 베타 락탐, 석신이미드 활성 에스테르, 할로케톤, 락톤, 무수물, 에폭사이드, 알데하이드, 할라이드, 설포네이트, 포스포네이트, 구아니딘, 아미딘, 이민, 엔아민, 케탈, 아세탈 또는 말레이미드 등이다.The reactive group may be selected from the group consisting of ketones, diketones, betalactams, succinimide active esters, haloketones, lactones, anhydrides, epoxides, aldehydes, halides, sulfonates, phosphonates, guanidines, amidines, imines, , Acetal or maleimide.

본 발명의 압타머 표적화 복합체는, 압타머의 하나 이상의 화학적 특징을 변형시킴으로써 해당 복합체의 하나 이상의 물리적 또는 생물학적 성질을 변형시킬 수 있다. 이 경우, 변형되는 물리적 또는 생물학적 성질에는 약동학, 약력학, 표적분자에 대한 결합성질, 결합 친화성, 분해 감수성, 용해도, 친지성, 친수성, 소수성, 안정성 및 강도 등이 포함된다.The platemater targeting complexes of the present invention can modify one or more physical or biological properties of the complex by modifying one or more chemical characteristics of the platemaster. In this case, the modified physical or biological properties include pharmacokinetics, pharmacodynamics, binding properties to target molecules, binding affinity, degradation sensitivity, solubility, lipophilicity, hydrophilicity, hydrophobicity, stability and strength.

본 발명에 따른 압타머 표적화 복합체에서 상기 표적화제의 생물학적 활성은 세포, 세포외 매트릭스 생체분자 또는 개체의 유체 생체분자에 전달할 수 있다. 그 전달방법으로서는, 생물학적으로 활성이고 세포, 세포외 매트릭스 생체분자 또는 유체 생체분자에 특이적인 본 발명의 압타머 표적화 복합체를 개체에 투여하는 것으로 달성된다. The biologic activity of the targeting agent in a platamater-targeting complex according to the present invention can be delivered to a cell, an extracellular matrix biomolecule or a fluid biomolecule of an individual. The delivery method is achieved by administering to the subject an inventive platemater targeting complex that is biologically active and specific for a cell, an extracellular matrix biomolecule or a fluid biomolecule.

본 발명에 따른 압타머 표적화 복합체의 치료적 유효량을, 질환이나 상태가 표적분자를 발현하는 세포, 조직 또는 유체를 포함하는 개체에 투여함으로써, 개체의 질환 또는 증상의 치료 또는 예방할 수 있다. A therapeutically effective amount of the platemaster-targeted complex according to the present invention can be treated or prevented by the administration of the disease or condition to a subject, including cells, tissues or fluids expressing the target molecule.

본 발명의 압타머 표적화 복합체는, 타깃이 되는 표적분자에 특이적이며, 상 기 복합체 또는 그 압타머는 질환이나 증상에 대해 효과적인 생물학적 활성을 가진다. The platemater targeting complex of the present invention is specific for the target molecule as a target, and the complex or its aptamer has an effective biological activity against disease or symptom.

본 발명에 따른 압타머 표적화 복합체는, 세포 또는 세포외 매트릭스가 표적분자를 발현하는 개체에서 세포 또는 세포외 매트릭스를 이미지화 하는 것에 사용되며, 이런 이미지화는 본 발명의 압타머 표적화 복합체는 검출성 표지물에 결합한 상태로 개체에 투여하는 것으로 달성되며, 상기 표지물은 본 발명의 압타머 표적화 복합체에서 화학적 제제 및/또는 생물학적 제제에 결합될 수 있다.The platemater targeting complexes according to the present invention are used for imaging cellular or extracellular matrices in a subject in which the cell or extracellular matrix expresses the target molecule and the imaging is such that the platemater targeting complex of the present invention binds to the detectable marker , And the label can be incorporated into the chemical and / or biological agent in the platamater-targeting complex of the present invention.

본 발명의 압타머 표적화 복합체는, 표면상에 존재하는 미생물 세포 또는 바이러스 입자의 감염력을 감소시키는 것에 이용되며, 상기 감염력 감소는 유효량의 본 발명의 압타머 표적화 복합체를 상기 표면과 접촉하는 것에 의해 달성되며, 여기에서 본 발명의 복합체는 상기 미생물 세포 또는 바이러스 입자상의 수용체에 특이적인 표적화제를 포함한다. The platemater targeting complex of the present invention is used to reduce the infectivity of microbial cells or viral particles present on the surface and the infectivity reduction is achieved by contacting an effective amount of the inventive platemater targeting complex with the surface Wherein the complex of the present invention comprises a targeting agent specific for a receptor on the microbial cell or viral particle.

본 발명의 압타머 표적화 복합체는, 세포내에서 활성인 표적화제(약제)의 세포내 전달을 매개하는 것에 이용된다. 여기에서, 본 발명의 압타머 표적화 복합체는 압타머의 반응성 그룹 N에 링커가 없이 결합된 하나 이상의 약학적으로 유효한 표적화제(화학적 제제 및/또는 생물학적 제제)를 포함한다. The platemar targeting complex of the present invention is used to mediate intracellular delivery of a targeting agent (drug) that is active in the cell. Here, the platemater targeting complex of the present invention comprises one or more pharmaceutically effective targeting agents (chemical and / or biological agents) bound to the reactive group N of platemim without a linker.

본 발명의 복합체에 결합된 표적화제는, 압타머에 의해 세포 수용체에 결합하여 해당 제제의 내재화를 매개한다. The targeting agent bound to the complex of the present invention mediates the internalization of the agent by binding to the cell receptor by the platemaster.

본 발명의 압타머 표적화 복합체에서 상기 표적화제는 세포 내에서 약학적으로 활성인 약제이다. 세포내 약제 전달은 수용체를 발현하는 세포가 본 발명의 압 타머 표적화 복합체와 접촉될 때 일어난다. 이러한 접촉에 따라 표적화제의 내재화 및 상기 약제의 세포내 전달이 일어나게 된다. 일부 예에서, 세포 내에서 활성인 약제는 상기 약제가 세포내 구획과 접촉할 때 활성을 띠게 되는 프로드러그이다. In the platamater-targeting complex of the present invention, the targeting agent is a pharmaceutical agent that is pharmaceutically active in cells. Intracellular drug delivery occurs when cells expressing the receptor are contacted with the platemater targeting complex of the present invention. This contact results in internalization of the targeting agent and intracellular delivery of the agent. In some instances, a drug that is active in a cell is a prodrug that becomes active when the drug contacts the intracellular compartment.

본 발명의 압타머 표적화 복합체는 특정 세포내 구획으로 지시하는 세포내 트래핑킹(trafficking) 시그널을 포함할 수 있다. The platemater targeting complexes of the present invention may include intracellular trafficking signals directed to specific intracellular compartments.

본 발명에 따른 압타머 표적화 복합체는 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물 또는 약제로서 제공될 수 있다. The platemater targeting complex according to the present invention may be provided as a pharmaceutical composition or medicament comprising a pharmaceutically acceptable carrier.

본 발명의 압타머 표적화제 복합체에 포함된 하나 이상의 표적화제는, 표적화제 중 적어도 하나는 자신의 표적과 결합할 수 있도록 상기 압타머에 결합된다(도1 참조). 이는 표적에 대한 결합 특이성을 발휘하는 방식으로 표적화제를 결합시키고, 압타머에 의한 입체적 방해 없이 자신의 표적과 결합할 수 있도록 표적화제를 압타머의 인지부위로부터 충분히 이격시킴으로써 달성될 수 있다. 이는 앞서 설명한 적당한 반응성 그룹 및 결합 전략을 이용함으로써 달성될 수 있다.One or more targeting agents included in the platemaster targeting agent complex of the present invention bind to the platemaster so that at least one of the targeting agents can bind to its target (see FIG. 1). This can be accomplished by binding the targeting agent in a manner that exerts binding specificity for the target and sufficiently separating the targeting agent from the cognitive site of the platamater so that it can bind its own target without steric hindrance by the platamater. This can be achieved by using the appropriate reactive groups and bonding strategies described above.

널리 알려진 바와 같이, 단일가닥핵산인 압타머는 단백질을 포함하는 표적분자에 대하여 하나의 리간드(ligand)로서 작용하는 바, 다양한 염기순서로 배열된 단일가닥핵산이 조합된 라이브러리로부터 일정한 선별과정과 염기서열결정을 통하여 높은 결합력과 특이성으로 표적분자와 결합하는 단일가닥핵산들을 선별할 수 있다. As is well known, a single-stranded nucleic acid, aptamer, serves as a ligand for a target molecule containing a protein, and can be selected from a library combining single-stranded nucleic acids arranged in various base sequences, The single-stranded nucleic acids that bind to the target molecule with high binding force and specificity can be selected through the crystal.

압타머의 표적분자는 유기물, 무기물, 단백질, 지질, 탄수화물, 핵산 등을 포함하여 임의 유형의 분자일 수 있다. Target molecules of platemer can be any type of molecule, including organic, inorganic, protein, lipid, carbohydrate, nucleic acid, and the like.

표적분자는 단백질, 탄수화물, 지질 또는 핵산 같은 생체분자일 수 있다. The target molecule may be a biomolecule such as a protein, a carbohydrate, a lipid, or a nucleic acid.

표적분자는 세포(세포 표면 발현), 또는 바이러스와 같은 기타 입자('입자 표면 발현')와 결합될 수 있거나, 세포외일 수 있다. The target molecule may be associated with cells (cell surface expression), or other particles such as viruses ('particle surface expression'), or may be extracellular.

세포 또는 입자와 결합될 경우, 표적분자는 본 발명의 압타머 표적화 복합체의 표적화제가 체액 상으로 부터의 표면 수용체와 접촉하도록 하는 방식으로 세포 또는 입자의 표면상에서 발현된다. When bound to a cell or particle, the target molecule is expressed on the surface of the cell or particle in such a way that the targeting agent of the inventive platemater targeting complex is in contact with the surface receptor from the body fluid phase.

바람직하게, 표적분자는 주로 또는 배타적으로 병증 또는 질병에 걸린 세포, 조직 또는 체액과 결합된다. 따라서, 본 발명의 압타머 표적화 복합체의 표적화제는 세포, 세포외 매트릭스 생체분자 또는 유체 생체분자를 표적화 함으로써 상기 복합체를 질병에 걸린 조직으로 전달하는 데 사용될 수 있다. Preferably, the target molecule is primarily or exclusively associated with a diseased or diseased cell, tissue or body fluid. Thus, targeting agents of the platemater targeting complexes of the invention can be used to deliver the complexes to diseased tissue by targeting cells, extracellular matrix biomolecules, or fluid biomolecules.

압타머에 대한 표적분자는 미생물 세포의 표면상에 또는 바이러스 입자의 표면상에 발현된다. 세포 표면에 발현되거나 입자 발현된 감염체에 결합할 수 있는 본 발명의 압타머 표적화 복합체는, 체내 또는 개체의 표면(예를 들면, 피부) 상에서 미생물체를 표적화 함으로써 그 자체로 항-미생물제로서 사용될 수 있다. 개체 표면의 경우에, 본 발명 복합체는 국소 적용될 수 있다. The target molecule for the squid polymer is expressed on the surface of the microbial cells or on the surface of the virus particle. The platemater targeting complex of the present invention, which is capable of binding to an infectious agent expressed or expressed on a cell surface, can be used as an anti-microbial agent itself by targeting the microorganism on the surface of the body or on an individual (e.g., skin) have. In the case of an individual surface, the inventive complexes may be applied locally.

미생물계 표적분자에 특이적인 본 발명의 압타머 표적화 복합체는 또한 체내에서서 항-미생물제로서 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 복합체에 의하면, 표면상에 존재하는 미생물 세포 또는 바이러스 입자의 감염력을 감소시키는 용도에 적용될 수 있다. 이때 미생물 세포 또는 바이러스 입자의 표면을 유효량의 본 발명 복합체와 접촉시킬 수 있다. 그러한 방법에서의 본 발명의 복합체는 미생물 세포 또는 바이러스 입자상의 수용체에 특이적인 표적화제를 포함한다. The platemater targeting complex of the present invention specific for microbial target molecules can also be used as an anti-microbial agent in the body. Therefore, according to the complex of the present invention, it can be applied to a use for reducing the infectivity of microbial cells or viral particles existing on the surface. Wherein the surface of the microbial cells or virus particles can be contacted with an effective amount of the complex of the present invention. The complex of the invention in such a manner comprises a targeting agent specific for a receptor on a microbial cell or viral particle.

본 발명에 따른 복합체의 표적분자로서는 전립선암, 유방암 및 골 전이를 포함한 각종 질병 상태에 연루된 세린 프로테아제인 전립선 특이성 표적분자(PSA)이다. PSA의 활성 부위에 결합하는 PSA의 특이성 억제제가 공지되어 있다(참고문헌: Adlington et al., J. Med. Chem., 2001; 44, 1491-1508). The target molecule of the complex according to the present invention is a prostate-specific target molecule (PSA), which is a serine protease involved in various disease states including prostate cancer, breast cancer and bone metastasis. Specific inhibitors of PSA binding to the active site of PSA are known (Adlington et al., J. Med. Chem., 2001; 44, 1491-1508).

본 발명의 압타머 표적화 복합체를 구성하는 압타머의 일반적 형태는 도1 및 도2와 같다. 도1에서 'FG'는 반응성을 가지는 부분을 의미한다. The general form of the plaster constituting the plaster-targeted complex of the present invention is as shown in Fig. 1 and Fig. In FIG. 1, 'FG' means a portion having reactivity.

도2에 도시된 바와 같이, 본 발명의 복합체에서 표적화제를 제외한 단일가닥핵산인 압타머는 N-Y-C로 구성된다(N은 반응성 그룹, Y는 단일가닥핵산, C는 표적분자의 인지부위). As shown in Fig. 2, in the complex of the present invention, the single-stranded nucleic acid except for the targeting agent is composed of N-Y-C (N is a reactive group, Y is a single-stranded nucleic acid, and C is a recognition site of a target molecule).

인지부위C는 표적분자를 인지하여 결합하는 부위이고, 표적분자마다 그 표적분자에 특이적으로 결합하는 특정한 염기서열로 구성된다. 인지부위 C와 표적분자는 이온 결합, 소수성 결합, 반데르발스 결합, 및 수소 결합을 포함한 각종 분자력을 통해 상호 간에 상호작용하는 분자들의 결합쌍을 형성한다. Cognition site C is a site that recognizes and binds to a target molecule, and each target molecule is composed of a specific base sequence that specifically binds to the target molecule. Cognitive site C and the target molecule form a pair of molecules that interact with each other through various molecular forces including ionic bonds, hydrophobic bonds, van der Waals bonds, and hydrogen bonds.

단일가닥핵산 Y는 전체 압타머에서 인지부위 C를 제외한 부위로서 임의적 서열로 존재하며 압타머의 인지부위 C와 반응성 그룹 N사이에 위치한다. 단일가닥핵산 Y는 기본적으로 1 내지 20개 염기의 선형이지만, 더 긴 핵산가닥을 사용할 수도 있다. The single-stranded nucleic acid Y is present in an arbitrary sequence as a region excluding the recognition site C in the entire plummeter, and is located between the recognition site C and the reactive group N of the abutment. Single-stranded nucleic acid Y is basically linear from 1 to 20 bases, but longer nucleic acid strands may be used.

하나 이상의 표적화제가 반응성 그룹 N을 통해 단일가닥핵산 Y에 연결될 수 있다. 분지형 단일가닥핵산 Y가 사용되는 예에서, 표적화제의 일부는 분지된 핵산 가닥의 상이한 가지에 있는 반응성 그룹 N에 연결될 수 있다. One or more targeting agents may be linked to the single-stranded nucleic acid Y via the reactive group N. [ In instances where a branched single-stranded nucleic acid Y is used, a portion of the targeting agent may be linked to a reactive group N in a different branch of the branched nucleic acid strand.

인지부위 C에 바로 반응성 그룹 N이 연결될 경우, 단일가닥핵산 Y는 필수적인 요소는 아니지만, 이상적으로 표적화제가 그의 표적분자에 결합할 수 있도록 표적화제와 압타머의 인지부위 C 사이에 충분한 거리를 제공하기에 적합하게 단일가닥핵산 Y를 적용하는 것이 바람직하다. 상기 거리는 예를 들면 압타머 결합부위의 최외측 표면으로부터 결합 부위까지의 거리, 및 표적화제의 성질을 포함한 몇 가지 인자에 따라 달라진다. When the immediate reactive group N is linked to the cognitive site C, the single-stranded nucleic acid Y is not an essential element, but ideally provides a sufficient distance between the targeting agent and the cognitive site C of the targeting agent so that the targeting agent can bind to its target molecule It is preferable to apply the single-stranded nucleic acid Y in accordance with the following. The distance depends on several factors including, for example, the distance from the outermost surface of the abdominal attachment site to the attachment site, and the nature of the targeting agent.

일반적으로 링커는 길이가 약 5 내지 10옹스트롬(0.5 내지 1㎚), 바람직하게는 10옹스트롬(1.0㎚) 이상이지만, 결합 부위의 최외측 부분과 매우 가깝고(거나) 표적화제(또는 생물학적 제제)가 링커 부분으로서 기능할 수 있는 절편을 포함하는 경우에는 길이가 약 3옹스트롬(0.3㎚) 정도로 더 짧아도 충분할 수 있다. Generally, the linker is at least about 5 to 10 angstroms (0.5-1 nm), preferably 10 angstroms (1.0 nm) or more, but the targeting agent (or biological agent) is very close to the outermost portion of the binding site In the case of including a slice capable of functioning as a linker portion, a shorter length of about 3 angstroms (0.3 nm) may suffice.

단일가닥핵산 Y의 길이는 선형 염기수에 의해서도 관찰될 수 있다. 이 측정을 통한 단일가닥핵산 Y의 길이는 일반적으로 약 1 내지 20개 염기, 적어도 2개 이상의 염기의 선형 신장물을 갖는 단일가닥핵산이면 충분하다. The length of single-stranded nucleic acid Y can also be observed by linear bases. The length of single stranded nucleic acid Y through this measurement is generally sufficient to be a single stranded nucleic acid having about 1 to 20 bases, at least two or more bases of linear elongation.

단일가닥핵산 Y에 대한 기타의 고려 사항은, 본 발명의 복합체 전체 또는 표적화제의 물리적 또는 약동학적 특성에 미치는 특성, 용해도, 친지성, 친수성, 소수성, 안정성(안정한 것뿐만 아니라 계획된 분해), 강도, 유연성, 면역원성, 압타머 결합의 조절, 표적화제와의 화학적 혼화성, 미셀 또는 리포좀 내로의 혼입 능력 등이다. Other considerations for single-stranded nucleic acid Y include properties that affect the physical or pharmacokinetic properties of the overall complex or targeting agent of the invention, solubility, lipophilicity, hydrophilicity, hydrophobicity, stability (not only stable but also planned degradation) , Flexibility, immunogenicity, modulation of platamer binding, chemical miscibility with targeting agents, and ability to incorporate into micelles or liposomes.

반 발명에서의 압타머는 표적화제의 적합한 화학 잔기와 공유 반응을 일으키 는 하나 이상의 반응성 그룹 N을 포함하도록 압타머를 합성함으로써 제조할 수 있다. An aptamer in a semi-invention can be prepared by synthesizing an amphetamer to include at least one reactive group N that causes a covalent reaction with a suitable chemical moiety of the targeting agent.

표적화제는 반응성 그룹 N과 반응하기 위한 적합한 잔기를 제공하도록 변형될 필요가 있을 수 있다. 압타머의 반응성 그룹 N이 표적화제와 공유 결합을 형성하는 조건하에서, 압타머와 표적화제가 결합된다.The targeting agent may need to be modified to provide suitable moieties for reacting with reactive group N. [ Under the condition that the reactive group N of the plumerator forms a covalent bond with the targeting agent, the platemater and the targeting agent are combined.

압타머의 반응성 그룹 N은 표적화제의 반응성 그룹과 선택적으로 커플링하기에 적합한 임의의 친핵성 또는 친전자성 그룹을 포함하며, 바람직한 반응성 그룹 N은 아미노, 카르복실, 티올 등을 포함한다. The reactive group N of the plastomer comprises any nucleophilic or electrophilic group suitable for selective coupling with the reactive group of the targeting agent, and preferred reactive groups N include amino, carboxyl, thiol, and the like.

압타머의 반응성 그룹 N은 반응성 친핵성 그룹인 디케톤, 아실 베타-락탐, 활성 에스테르, 할로케톤, 사이클로헥실 디케톤, 알데하이드 또는 말레이미드를 형성하기 위해 배열되는 하나 이상의 C=O 그룹을 포함한다. 다른 그룹은 락톤, 무수물, 및 알파-할로아세트아미드 또는 에폭사이드 및 기타의 공지된 친전자성 그룹이 포함된다. The reactive group N of the plastomer comprises one or more C = O groups arranged to form reactive nucleophilic groups diketone, acyl beta-lactam, active ester, haloketone, cyclohexyldiketone, aldehyde or maleimide . Other groups include lactones, anhydrides, and alpha-haloacetamides or epoxides and other known electrophilic groups.

압타머의 표적인자 인지부위 C의 표적분자에 대한 결합의 실질적 감소는, 표적분자가 압타머 결합 부위와 접촉하는 것을 입체적으로 방해하는 표적화제에 의해 유발될 수 있다. Substantial reduction in binding of the targeting molecule C to the target molecule of the tympanic membrane can be induced by a targeting agent that sterically hinders the target molecule from contacting the tymator binding site.

또한, 공유 결합에 의해 변형된 압타머의 반응성 그룹 N이 표적분자와의 결합에 중요할 경우에 표적분자와의 결합의 실질적 감소가 발생할 수 있다. In addition, a substantial reduction of binding with the target molecule may occur if the reactive group N of the depressant modified by the covalent bond is important for binding to the target molecule.

표적분자가 압타머의 결합 부위(인지부위 C)와 접촉하는 것을 표적화제가 입체적으로 방해하지 않고 공유 결합에 의해 변형된 압타머의 반응성 그룹 N이 표적 분자와의 결합에 중요할 경우에 표적분자에 대한 실질적으로 증가된 압타머 결합이 일어날 수 있다.When the reactive group N of the plumbers modified by the covalent bond does not interfere stereomically with the targeting agent in contact with the binding site (cognitive site C) of the platemer, the target molecule is important for binding with the target molecule, Lt; / RTI > may result in substantially increased platemater binding to the < RTI ID = 0.0 >

본 발명의 복합체의 제조에 사용되는 압타머의 일반적 형태(C-Y-N)는 당해 기술분야에 공지된 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 전형적으로, 기능 성분이기도 한 압타머를 합성하고, 이어서, 압타머(이 경우 기능 성분이기도 함)에 반응성 그룹N을 유도시켜 압타머의 일반적 형태(C-Y-N)를 완성할 수 있으며, 해당 기술분야에 알려진 기술에 의해 사용된 특이적 합성 단계를 쉽게 행할 수 있다. The general form (C-Y-N) of the pressure tampers used in the preparation of the complexes of the present invention can be prepared using techniques known in the art. Typically, it is possible to synthesize an extramammary, which is also a functional component, and then to induce a reactive group N to the extruder (in this case also a functional component) to complete the general form of extruder (CYN) The specific synthetic steps used by known techniques can be easily performed.

본 발명에 사용되는 표적화제와 그 표적분자는 결합쌍이 상호간에 특이적으로 결합하는 성질을 지니도록, 예를 들면, 이온 결합, 공유 결합, 소수성 결합, 반데르발스 결합, 및 수소 결합을 포함한 각종 분자력을 통해 상호 간에 상호작용하는 분자들의 결합쌍을 나타낸다. 상기 특이적 결합이란 결합쌍이 이들이 또 다른 분자에는 결합하지 않는 조건하에 상호간에 결합함을 의미한다. 결합쌍의 예로는 바이오틴-아비딘, 호르몬-수용체, 수용체-리간드, 효소-기질, IgG-단백질 A, 표적분자-압타머 등이 있다. The targeting agent and the target molecule used in the present invention may be variously selected from various kinds of molecules including ionic bonds, covalent bonds, hydrophobic bonds, van der Waals bonds, and hydrogen bonds A pair of molecules that interact with each other through molecular forces. The specific binding means that the binding pair binds to each other under the condition that they do not bind to another molecule. Examples of binding pairs include biotin-avidin, hormone-receptor, receptor-ligand, enzyme-substrate, IgG-protein A, target molecule-abtamer, and the like.

표적화제와 그에 대응하는 동류 표적분자는 상호간에 상당한 결합을 나타낸다. 이러한 결합은 당해 기술분야에 익히 공지된 방법에 따라 평형결합상수(또는 결합상수)를 측정함으로써 평가될 수 있다. The targeting agent and the corresponding homologous target molecules exhibit significant binding to each other. Such binding can be evaluated by measuring the equilibrium binding constant (or binding constant) according to methods well known in the art.

표적화제로는 약제, 단백질, 펩티드, 펩티드 모사체, 당단백질, 프로테오글리칸, 지질 당단백질, 인지질, 리포폴리사카라이드, 핵산, 프로테오글리칸, 탄수화물 등과 같이 5,000달톤 이하의 소분자 유기 복합체가 포함되지만 이에 한정되지 않는다. Targeting agents include, but are not limited to, small molecule organic complexes of up to 5,000 daltons, such as drugs, proteins, peptides, peptide mimetics, glycoproteins, proteoglycans, lipid glycoproteins, phospholipids, lipopolysaccharides, nucleic acids, proteoglycans, carbohydrates, .

표적화제는 항-신생물제를 포함하여 익히 공지된 치료 복합물질을 포함할 수 있다. 항-신생물 표적화제는 타그파클리탁셀, 다우노루비신, 독소루비신, 메이탠시노이드, 카미노마이신, 4'-에피아드리아마이신, 4-디메톡시-다우노마이신, 11-디옥시다우노루비신, 13-디옥시다우노루비신, 아드리아마이신-14-벤조에이트, 아드리아마이신-14-옥타노에이트, 아드리아마이신-14-나프탈렌아세테이트, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 미토마이신 C, N-메틸 미토마이신 C, 블레오마이신 A 2 , 디데아자테트라하이드로폴산, 아미노프테린, 메토트렉세이트, 콜키신 및 시스플라틴 등을 포함할 수 있다. The targeting agents may include well known therapeutic conjugates, including anti-neoplastic agents. The anti-neoplastic targeting agent may be selected from the group consisting of tabaclitaxel, daunorubicin, doxorubicin, maycenidol, caminomycin, 4'-epiadriamycin, 4-dimethoxy-daunomycin, Adriamycin-14-octanoate, adriamycin-14-naphthalene acetate, vinblastine, vincristine, mitomycin C, N-methylmitomycin C, bleomycin A 2, dideazatetrahydrofolic acid, aminopterin, methotrexate, colchicine and cisplatin, and the like.

항-미생물제로는 젠타마이신을 포함한 아미노글리코사이드, 리팜피신, 3'-아지도-3'-데옥시티미딘(AZT) 및 아실로비어와 같은 항-바이러스 복합체, 플루코나졸을 포함한 아졸류와 같은 항진균제, 암포테리신 B 및 칸디시딘과 같은 플라이어(plyre) 마크로라이드, 안티모니얼과 같은 구충 복합체 등이 포함된다. Anti-microbial agents include anti-viral complexes such as aminoglycosides including gentamycin, rifampicin, 3'-azido-3'-deoxytrimidine (AZT) and acyllobazole, antifungal agents such as azoles including fluconazole , Amphotericin B, and plyre macrolides such as candicidin, antiparasitic complexes such as antimonide, and the like.

호르몬 표적화제로는 디프테리아 독소와 같은 독소류, CSF, GSF, GMCSF, TNF 같은 사이토카인류, 에리트로포이에틴, 면역조절제 또는 인터페론 또는 인터루킨과 같은 사이토카인류, 뉴로펩티드, HGH, FSH 또는 LH 같은 생식 호르몬, 갑상선 호르몬, 아세틸콜린 같은 신경전달물질 및 에스트로겐 수용체 같은 호르몬 수용체 등이 포함된다.Hormone targeting agents include toxins such as diphtheria toxin, cytokines such as CSF, GSF, GMCSF, TNF, erythropoietin, immunomodulators or cytokines such as interferons or interleukins, neuropeptides, reproductive hormones such as HGH, FSH or LH , Thyroid hormones, neurotransmitters such as acetylcholine, and hormone receptors such as estrogen receptors.

다만, 표적화제는 압타머 및 금속 킬레이트가 아니다. 바람직하게는, 표적화제는 본 발명의 복합체에 적용된 압타머에 비하여 소형 분자이다. 상기 압타머의 반응성 그룹 N에 결합시키는 데 필요한 결합 잔기를 포함하고 있는 표적화제는 바람직하게는 약 300달톤 이상의 크기이고, 바람직하게는 약 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1,000, 1,100, 1,200, 1,300, 1,400, 1,500, 1,600, 1,700, 1,800, 1,900, 2,000, 2,500, 3,000, 3,500, 4,000, 4,500 또는 5,000달톤 이상의 크기일 수 있으며, 더욱 큰 크기도 가능하다.However, the targeting agent is not an abatumer and a metal chelate. Preferably, the targeting agent is a small molecule as compared to the plumper applied to the complex of the present invention. The targeting agent comprising binding moieties necessary to bind to the reactive group N of the plastomer is preferably at least about 300 Daltons in size and preferably at about 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1,000, 1,100 , 1,200, 1,300, 1,400, 1,500, 1,600, 1,700, 1,800, 1,900, 2,000, 2,500, 3,000, 3,500, 4,000, 4,500 or 5,000 daltons.

본 발명의 복합체에 적용되는 적당한 표적화제는 단백질(폴리펩티드) 또는 펩티드일 수 있다. 본 발명에서 사용되는 펩티드 등의 용어는 하나 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 천연 아미노산의 인위적인 화학적 동족체인 아미노산 중합체도 포함하고, 또한 천연 아미노산 중합체도 포함된다. Suitable targeting agents to be applied to the complexes of the present invention may be proteins (polypeptides) or peptides. The term peptide or the like used in the present invention also includes amino acid polymers in which at least one amino acid residue is an artificial chemical equivalent of the corresponding natural amino acid, and also natural amino acid polymers.

아미노산은 펩티드의 결합 기능이 유지되는 한은 L 또는 D형으로 존재할 수 있다. 펩티드는 길이가 가변적일 수 있지만, 일반적으로는 약 4 내지 200개 아미노산 길이이다. 펩티드는 펩티드 내의 2개의 비-인접 아미노산 간의 분자내 결합, 예를 들면, 주쇄-주쇄, 측쇄-주쇄 및 측쇄-측쇄 폐환을 갖는 사이클릭 형태일 수 있다. 사이클릭 펩티드는 당해 기술분야에 익히 공지된 방법으로 제조될 수 있다(미국 특허 제6,013,625호 참조). Amino acids may exist in L or D forms as long as the binding function of the peptide is maintained. Peptides can be variable in length, but are generally about 4 to 200 amino acids in length. Peptides may be in a cyclic form with intramolecular bonds between two non-adjacent amino acids in the peptide, e.g., backbone-backbone, side-backbone, and side-chain-side cyclic ring. Cyclic peptides can be prepared by methods well known in the art (see U.S. Patent No. 6,013,625).

표적분자에 대한 결합 활성을 보이는 단백질 또는 펩티드 표적화제는 당해 기술분야에 알려져 있으며, 예를 들면, 이런 표적화제는 바이러스 펩티드 세포 융합 억제제일 수 있다. 이러한 것들에는 HIV 감염 세포 상의 융합 수용체를 표적화하는 T-20 HIV-1 gp41 융합 억제제(T-20에 대해서는, 미국 특허 제6,281,331호 및 제6,015,881호; Nagashima et al., J. Infectious Diseases (2001) 183.1121. ; 기 타 HIV 억제제에 대해서는, 미국특허 제6020459호 및 WO 제0151673A2호), RSV 세포 융합 억제제(WO 제0164013A2호 및 McKimm-Breschkin, Curr. Opin. Invest. Drugs (2000) 1:425-427(VP-14637)), 뉴모바이러스 속 세포 융합 억제제(WO 제9938508A1호) 등이 포함될 수 있다. Protein or peptide targeting agents that exhibit binding activity to a target molecule are known in the art, for example, such a targeting agent may be a viral peptide cell fusion inhibitor. These include T-20 HIV-1 gp41 fusion inhibitors (see US Patent Nos. 6,281,331 and 6,015,881; Nagashima et al., J. Infectious Diseases (2001) for T- (US Patent No. 6020459 and WO 0151673A2 for other HIV inhibitors), RSV cell fusion inhibitors (WO 0164013A2 and McKimm-Breschkin, Curr. Opin. Invest. Drugs (2000) 1: 425- 427 (VP-14637)), genomic virus infusion inhibitors (WO 9938508A1), and the like.

본 발명에 적용되는 표적화제는 또한 각종 난소암, 유방암, 폐의 전립선 소세포암, 직결장암, 위암 및 췌장암의 표적화에 사용될 수 있는, LHRH, 봄베신/가스트린 방출 펩티드, 소마타스타틴(예를 들면, RC-121 옥타펩티드) 등과 같은 펩티드 호르몬 또는 펩티드 호르몬 동족체를 포함한다(Schally et al., Eur. J. Endocrinology, (1999) 141:1-14).Targeting agents applied in the present invention may also be used to target LHRH, bombesin / gastrin releasing peptides, somatastatin (e. G., ≪ RTI ID = 0.0 & RC-121 Octapeptide), and the like (Schally et al., Eur. J. Endocrinology, (1999) 141: 1-14).

상기 표적화제는 표적분자에의 결합 능력 외에도, 하나 이상의 생물학적 활성을 보유할 수 있으며, 각각의 활성은 세포 기관 또는 유기체의 기능 발휘에 미치는 검출 가능한 생물학적 영향으로서 특징 지워진다.In addition to their ability to bind to the target molecule, the targeting agent may have one or more biological activities, and each activity is characterized as a detectable biological effect on the function of the organelle or organism.

본 발명의 압타머 표적화 복합체는 그 복합체와 연관된 하나 이상의 생물학적 활성을 지닐 수 있다. 생물학적 활성은 본 발명에 적용된 표적화제로서의 화학적 제제의 고유 특징일 수 있거나, 표적화제로서 결합한 생물학적 제제에 의하여 제공될 수도 있다. 표적화제일 수 있는 생물학적 제제는 본 발명의 복합체의 기타 분자 또는 부분과 공유 또는 비-공유 결합될 수 있지만, 공유 결합이 바람직하다. The platemater targeting complex of the present invention may have one or more biological activities associated with the complex. The biological activity may be an intrinsic feature of the chemical agent as a targeting agent applied to the present invention, or it may be provided by a biological agent bound as a targeting agent. Covalent linkages are preferred, although biological agents that may be targeted may be covalent or non-covalent to other molecules or portions of the complexes of the invention.

따라서 본 발명의 압타머 표적화 복합체는 고유한 생물학적 활성을 보유하는 표적화제 형태로 기능성 성분을 포함할 수 있고, 표적화제는 압타머 또는 압타머 단편의 결합 부위에 결합되며, 이때의 표적화제는 생물학적 활성을 보이는 기능성 성분이다. Thus, the platemater targeting complex of the present invention may comprise a functional component in the form of a targeting agent having inherent biological activity, wherein the targeting agent is bound to the binding site of the platamater or platemer fragment, wherein the targeting agent is a biological It is a functional ingredient showing activity.

다른 예에서, 본 발명의 압타머 표적화 복합체는 압타머의 반응성 그룹 N에 결합된 표적화제를 포함하고, 여기에 다른 결합을 통해 복합체에 부착되거나 결합되는 별도의 기능성 성분을 더 포함할 수 있다. In another example, the platemater targeting complex of the invention comprises a targeting agent bound to the reactive group N of the platemaker, and may further comprise a separate functional ingredient that is attached or attached to the complex via another binding.

본 발명의 복합체에서 상기 압타머는 하나 이상의 생물학적 제제와의 결합 뒤에도 적어도 약간의 표적분자와의 결합 특이성은 보유하는 것이 바람직하다. 하나 이상의 생물학적 제제가 압타머 반응성 그룹 N에 결합된 경우의 본 발명의 복합체는, 그러한 생물학적 제제가 압타머에 결합된 채로 생물학적으로 활성인 경우 결합된 생물학적 제제에 기인하여 생물학적 활성을 보일 수 있다. 이는 생물학적 활성에 영향을 미치지 않는 생물학적 제제 상의 위치에 압타머 반응성 그룹 N을 결합시키는 등의 다양한 방법에 의해 달성될 수 있다. 또한, 생물학적 제제가 압타머에 의한 입체적 방해 없이 활성에 필요한 또 다른 분자에 결합할 수 있도록 생물학적 제제를 압타머로부터 떨어져 위치시킬 수 있다. 압타머의 반응성 그룹 N에 결합된 하나 이상의 생물학적 제제의 생물학적 활성을 얻기 위한 다른 방법들도 해당 기술분야에 알려져 있다. In the complex of the present invention, it is preferable that the aptamer retains binding specificity with at least some of the target molecules even after binding with one or more biological agents. The complexes of the present invention where one or more biological agents are bound to the squamotermic reactive group N can exhibit biological activity due to the bound biological agent if such biological agent is biologically active while bound to the platemaster. This can be accomplished by a variety of methods, such as binding the pressure-sensitive reactive group N to a position on the biological agent that does not affect biological activity. In addition, the biological agent can be placed away from the plumber so that the biological agent can bind to another molecule that is required for activity without steric hindrance by the plumbers. Other methods for obtaining the biological activity of one or more biological agents bound to the reactive group N of platemam are also known in the art.

두 개 이상의 화학적 제제 및/또는 두 개 이상의 생물학적 제제를 포함하는 본 발명의 압타머 표적화 복합체를 제조하는 방법은, 압타머의 일단의 반응성 그룹 N에 분지형 핵산가닥을 도입하여 가능할 것이다(Mickey S. U.., Bio/Technology (1994) 12, 926 - 928). 즉 분지형 핵산가닥의 각 반응성 그룹 N에 표적화제를 결합시킨 후 이를 압타머의 단일가닥핵산 Y에 결합시킴으로써 달성할 수 있다. 분지형 핵산가닥의 제조방법에 대해서는 당해 기술분야에 알려져 있다. The method of preparing the platemar targeting complex of the present invention comprising two or more chemical agents and / or two or more biological agents would be possible by introducing a branched nucleic acid strand into the reactive group N at one end of the platamater (Mickey SU , Bio / Technology (1994) 12, 926-928). That is, binding the targeting agent to each reactive group N of the branched nucleic acid strand and then binding it to the single stranded nucleic acid Y of the platamater. Methods for making branched nucleic acid strands are known in the art.

본 발명의 압타머 표적화 복합체의 표적화제로 사용하기 위한 생물학적 제제 기능성 성분은 천연 또는 합성 성분일 수 있다. 생물학적 제제는 이의 천연 상태에서 생물학적으로 활성이거나, 생물학적으로 불활성이거나 잠복성 전구체 상태에 있다가 생물학적 제제의 일부가 가수분해, 절단 또는 변형될 때 생물학적 또는 치료 활성을 나타낼 수 있다. The biological agent functional ingredient for use as a targeting agent of the platemar targeting complex of the present invention may be a natural or synthetic component. A biological agent may be biologically active, biologically inactive or in a latent precursor state in its native state, but may exhibit biological or therapeutic activity when a portion of the biological agent is hydrolyzed, cleaved, or modified.

본 발명의 압타머 표적화 복합체를 사용하여 세포 표면 또는 세포내에 전달되어 거기에서 활성화될 수 있다. 이와 관련하여, 생물학적 제제는 '프로드러그'일 수 있으며, 이는 프로드러그 분자들이 이들 구조의 화학적 또는 효소적 변형에 의해 치료 활성 약제로 전환될 수 있음을 의미한다. The platemar targeting complex of the present invention can be used to deliver and activate within cell surfaces or cells. In this regard, the biological agent may be a 'prodrug', which means that the prodrug molecules can be converted into a therapeutically active agent by chemical or enzymatic modification of these structures.

프로드러그의 적용에서, 부위-특이성 전달은 프로드러그의 조직-특이성 활성화로부터 달성될 수 있으며, 이러한 활성화는 다른 조직에 비해 특정 조직에 대한 고유한 또는 고농도로 존재하는 효소에 의한 대사 결과이며, 따라서 프로드러그를 더욱 효율적으로 활성화시킨다. In the application of prodrugs, site-specific transduction can be achieved from the tissue-specific activation of the prodrug, which activation is the result of metabolism by enzymes present in a unique or high concentration to a particular tissue relative to other tissues, Activate prodrugs more efficiently.

광역학적 치료는 감광성 링커를 절단하거나 또는 광반응성 효소를 활성화함으로써(아실 효소 가수분해) 프로드러그를 활성화시키는 데에 사용될 수 있다(미국 특허 제5,114,851호 및 제5,218,137호 참조). 광역학적 치료는 약물 활성을 원치 않는 부위(예: 비-표적 조직)에서 약물을 신속하게 불활성화시키는 데에도 사용될 수 있다. 프로드러그를 형성하기 위하여 약물을 공유적으로 변형시키는 다양한 수단이 당해 기술분야에 공지되어 있다. Photodynamic therapy can be used to activate prodrugs by cleaving photosensitive linkers or by activating photoreactive enzymes (acyl enzyme hydrolysis) (see U.S. Patents 5,114,851 and 5,218,137). Photodynamic therapy can also be used to quickly inactivate a drug at sites where it is not desired to have drug activity (eg, non-target tissue). Various means of covalently transforming a drug to form a prodrug are known in the art.

표적화제로서의 생물학적 제제는 당해 기술분야에 익히 공지된 수단에 의하여 다른 표적화제 및/또는 압타머에 결합할 수 있다. 예를 들면, 펩티드 호르몬 표적화제와 독소루비신 간의 다양한 복합체가 알려져 있다(Kiaris et al., Eur. J. Cancer (2001) 37:620-62 8 and Schally et al. Eur. J. Endocrin. (1989) 141:1-14; Canevari et al., Ann Oncol (1994) 5(8):698-701; Rihova, Folia Microbiol (Praha) (1995) 40(4):367-84; Vitetta, Princess Takamatsu Symp (1988) 19:333-40; and Ghose et al., Crit Rev Ther Drug Carrier Syst (1987) 3(4):263-359).Biologic agents as targeting agents can be coupled to other targeting agents and / or tumors by means well known in the art. For example, various complexes between a peptide hormone targeting agent and doxorubicin are known (Kiaris et al., Eur. J. Cancer (2001) 37: 620-62 8 and Schally et al. 141: 1-14; Canevari et al., Ann Oncol (1994) 5 (8): 698-701; Rihova, Folia Microbiol (Praha) (1995) 40 (4): 367-84; Vitetta, Princess Takamatsu Symp 1988) 19: 333-40; and Ghose et al., Crit Rev Ther Drug Carrier Syst (1987) 3 (4): 263-359).

표적화제(화학적 제제 또는 생물학적 제제)는 특정 조건하에서 불안정성 결합을 이용하여 본 발명의 압타머 표적화 복합체에 결합시킬 수 있다. 불안정성 결합은 압타머와 표적화제 간에 이루어질 수 있다. 생물학적 제제의 생물학적 활성은 제제가 압타머 반응성 그룹 N으로부터 방출될 때까지 실현되지 않을 수도 있다. 이는 일부의 예에서 불안정성 결합을 통해 달성될 수 있다. 불안정성 결합은 가역성 공유 결합, pH 민감성 결합(산 또는 염기 민감성), 효소 민감성 결합, 분해 민감성 결합, 감광성결합 등 및 이들의 배합이 포함된다. Targeting agents (chemical or biological agents) can be bound to the platemar targeting complexes of the present invention using unstable linkages under certain conditions. Unstable coupling can occur between the platemaker and the targeting agent. The biological activity of the biological agent may not be realized until the agent is released from the agamator reactive group N. [ This can be accomplished through unstable coupling in some examples. Unstable bonds include reversible covalent bonds, pH sensitive bonds (acid or base sensitive), enzyme sensitive bonds, degradation sensitive bonds, photosensitive bonds, and the like, and combinations thereof.

이러한 특징은 또한 불안정성 결합의 유형으로서 고려될 수 있는 프로드러그의 특징이다. 다양한 불안정성 결합이 이전에 고안되었다. 예를 들면, 프로드러그은 미국 특허 제5,498,729호에 기재된 바와 같이 가수분해에 의해 서서히 분해되는 카복실산 잔기를 지닌 복합체를 사용하여 형성시킬 수 있다. 불안정성 결합의 특정 디자인을 이용하여 생물학적 제제가 의도하는 표적에 도달한 후 방출되도록 지시할 수 있다. This feature is also a feature of the prodrug that can be considered as a type of instability coupling. A variety of unstable bonds have been previously devised. For example, a prodrug may be formed using a complex having a carboxylic acid moiety that is slowly cleaved by hydrolysis as described in U.S. Patent No. 5,498,729. The specific design of the unstable coupling can be used to direct the biological agent to be released after reaching the intended target.

예를 들면, 불완전성 결합은 특정의 세포내 구획 또는 본 발명의 압타머 표적화 복합체가 축적될 수 있는 세포외 구획에서의 방출을 지시하도록 디자인될 수 있다. 산-불안정성 결합은 수용체 매개 세포이입 중에 직면하는 엔도솜 및 라이소솜 같은 상이한 세포내 구획의 산성 환경을 이용할 수 있다(Shen et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. (1981) 102:1048-1054; Yang et al., J. Natl. Canc. Inst. (1988) 80: 1154-1159). For example, incomplete binding can be designed to direct the release in a particular intracellular compartment or extracellular compartment where the platemater targeting complex of the invention can accumulate. Acid-labile bonds can utilize the acidic environment of different intracellular compartments such as endosomes and lysosomes confronting receptor-mediated cell transfer (Shen et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. (1981) 102: 1048- Yang et al., J. Natl. Canc. Inst. (1988) 80: 1154-1159).

특정의 표적화제는 이의 사용 맥락에 따라 생물학적 활성을 보유할 수도 있고 보유하지 않을 수도 있다. 예를 들면, DNA에 작용하는 치료용 약제 독소루비신은 이것이 압타머와 공유 결합되고 무세포 형태로 DNA에 적용될 때 이중가닥인 DNA에 대한 표적화제일 수 있다. 그러나, 독소루비신은 복합체가 세포에 의해 섭취될 수 없을 때까지 표적화제가 압타머에 공유 결합되어 있는 동안 세포에 관하여 표적화제로 고려되지 않도록 할 수 있다. 후자의 경우에, 독소루비신은 약제가 세포핵내의 DNA에 접근할 수 있으면 흡수 뒤에 생물학적 활성을 보유할 수도 있다. Certain targeting agents may or may not retain biological activity depending on their use context. For example, the therapeutic drug doxorubicin, which acts on DNA, can be a targeting agent for double-stranded DNA when it is covalently bound to an elastomer and applied to DNA in cell-free form. However, doxorubicin can be prevented from being considered as a targeting agent for cells while the targeting agent is covalently bound to the squamous cell until the complex can not be taken up by the cells. In the latter case, doxorubicin may retain biological activity after absorption if the drug can access DNA in the nucleus.

생물학적 제제 기능성 성분으로는 소분자 약제(약 5,000달톤 이하의 약제학적 유기 복합체), 유기 분자, 단백질, 펩티드, 펩티드 모사체, 당단백질, 프로테오글리칸, 지질 당지질, 인지질, 리포폴리사카라이드, 핵산, 프로테오글리칸, 탄수화물 등이 포함되지만 이에 한정되지 않는다. Biological agents Functional components include small molecule drugs (pharmaceutical organic complexes of less than about 5,000 daltons), organic molecules, proteins, peptides, peptides, glycoproteins, proteoglycans, lipid glycolipids, phospholipids, lipopolysaccharides, nucleic acids, proteoglycans, Carbohydrates, and the like.

생물학적 제제는 항신생물제, 항미생물제, 호르몬, 이펙터 등일 수 있다. 그러한 생물학적 제제로서는 항신생물제인 파클리탁셀, 다우노루비신, 독소루비신, 카미노마이신, 4'-에피아드리아마이신, 4-디메톡시-다우노마이신, 11-디옥시다우노 루비신, 13-디옥시다우노루비신, 아드리아마이신-14-벤조에이트, 아드리아마이신-14-옥타노에이트, 아드리아마이신-14-나프탈렌아세테이트, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 미토마이신 C, N-메틸 미토마이신 C, 블레오마이신 A 2 , 디데아자테트라하이드로폴산, 아미노프테린, 메토트렉세이트, 콜키신 및 시스플라틴 등과 같은 익히 공지된 치료 복합제가 포함된다. Biological agents may be anti-neoplastic agents, antimicrobial agents, hormones, effectors, and the like. Such biological agents include but are not limited to anti-neoplastic agents paclitaxel, daunorubicin, doxorubicin, caminomycin, 4'-epiadriamycin, 4-dimethoxy-daunomycin, 11-dioxydaunorubicin, , Adriamycin-14-octanoate, adriamycin-14-naphthalene acetate, vinblastine, vincristine, mitomycin C, N-methylmitomycin C, bleomycin A 2, Azotetrahydrofolic acid, aminopterin, methotrexate, colchicine and cisplatin, and the like.

생물학적 제제로서의 항-미생물제로는 젠타마이신을 포함한 아미노글리코사이드, 리팜피신, 3'-아지도-3'-디옥시티미딘(AZT) 및 아실로비어와 같은 항-바이러스 복합제, 플루코나졸을 포함한 아졸류와 같은 항진균제, 암포테리신 B 및 칸디시딘과 같은 플라이어 마크로라이드, 안티모니얼과 같은 구충 복합제 등이 포함된다. Anti-microbial agents as biologic agents include, but are not limited to, aminoglycosides including gentamicin, anti-viral complexes such as rifampicin, 3'-azido-3'-dioxythymidine (AZT) and acylobia, azoles including fluconazole , Antifungal agents such as amphotericin B and fungal macrolides such as candicidin, antiparasitic agents such as antimonide, and the like.

생물학적 제제로서의 호르몬으로는 디프테리아 독소와 같은 독소류, CSF, GSF, GMCSF, TNF 같은 사이토카인류, 에리트로포이에틴, 면역조절제 또는 인터페론 또는 인터루킨과 같은 사이토카인류, 뉴로펩티드, HGH, FSH 또는 LH 같은 생식 호르몬, 갑상선 호르몬, 아세틸콜린 같은 신경전달물질 및 에스트로겐 수용체 같은 호르몬 수용체가 포함될 수 있다. Hormones as biological agents include toxins such as diphtheria toxin, cytokines such as CSF, GSF, GMCSF, TNF, erythropoietin, immunomodulators or cytokines such as interferons or interleukins, neuropeptides, HGH, FSH or LH Reproductive hormones, thyroid hormones, neurotransmitters such as acetylcholine, and hormone receptors such as estrogen receptors.

또한, 인도메타신, 살리실산 아세테이트, 이부프로펜, 설린닥, 피록시캄, 및 나프록센 같은 비-스테로이드성 소염제, 및 마취제 또는 진통제가 포함된다. Also included are non-steroidal anti-inflammatory agents such as indomethacin, salicylic acid acetate, ibuprofen, sulindac, piroxicam, and naproxen, and anesthetics or analgesics.

또한 본 발명에 따른 복합체에는 이미지화 및 치료요법에 유용한 것들과 같은 방사선 동위원소가 포함된다.The complexes according to the invention also include radioactive isotopes such as those useful for imaging and therapeutic regimens.

본 발명에서 표적화제의 반응성 그룹은 압타머의 반응성 그룹 N에 선택적으로 결합하기에 적합한 임의의 친핵성 또는 친전자성 그룹을 포함하거나 인위적으로 포함시킬 수 있다. 바람직한 반응성 그룹은 아미노, 카르복실, 티올 등을 포함한다(도3 내지 도6 참조). In the present invention, the reactive group of the targeting agent may include or artificially include any nucleophilic or electrophilic group suitable for selectively binding to the reactive group N of the platemaster. Preferred reactive groups include amino, carboxyl, thiol, and the like (see Figures 3-6).

표적화제의 반응성 그룹은 반응성 친핵성 그룹인 디케톤, 아실 베타-락탐, 활성 에스테르, 할로케톤, 사이클로헥실 디케톤, 알데하이드 또는 말레이미드를 형성하기 위해 배열되는 하나 이상의 C=O 그룹을 포함한다. 다른 그룹은 락톤, 무수물, 및 알파-할로아세트아미드 또는 에폭사이드 및 기타의 공지된 친전자성 그룹이 포함된다. 또한, 압타머 한쪽의 티올에 선택적으로 커플링하기에 적합한 티올 선택성 말단을 가진 수용성, 중합체 유도체로 표적화제를 변형시킬 수 있다.The reactive groups of the targeting agent include one or more C = O groups arranged to form reactive nucleophilic groups diketone, acyl beta-lactam, active ester, haloketone, cyclohexyldiketone, aldehyde or maleimide. Other groups include lactones, anhydrides, and alpha-haloacetamides or epoxides and other known electrophilic groups. In addition, the targeting agent can be modified with a water-soluble, polymeric derivative having a thiol-selective end suitable for selective coupling to thiols on one side of the elastomer.

본 발명은 표적화제를 구성하는 화학적 제제 및/또는 생물학적 제제의 하나 이상의 물리적 또는 생물학적 특성을 변형시키는 방법을 포함한다. 이 방법은 표적화제를 상기와 같은 압타머의 반응성 그룹 N에 공유 결합시키는 것을 포함한다. The present invention includes methods of modifying one or more physical or biological properties of a chemical agent and / or a biological agent constituting the targeting agent. This method involves covalently linking the targeting agent to the reactive group N of the compactor as described above.

특정 예에서, 표적화제는 그 반응성 그룹을 통해 압타머 반응성 그룹 N에 결합되며, 이들의 특성은 앞서 기재한 바와 같다. 이 방법은 5Kd 이하의 소형 표적화제를 결합시키기에 특히 유용하다. 그러나 이 방법은 또한, 대형의 이러한 분자에도 작용한다. In certain instances, the targeting agent is coupled to the squalomer reactive group N via its reactive group, and their properties are as described above. This method is particularly useful for binding small targeting agents of 5 Kd or less. However, this method also works on these large molecules.

표적화제의 특성에는 결합 친화성, 프로테아제에 의한 것과 같은 분해에 대한 감수성, 약동학, 약력학, 면역원성, 용해성, 친지성, 친수성, 소수성, 안정성(다소 안정할 뿐만 아니라 계획된 분해), 강도, 유연성, 압타머 결합의 조절 등을 포함할 수 있다 .The characteristics of the targeting agent include binding affinity, susceptibility to degradation such as by proteases, pharmacokinetics, pharmacodynamics, immunogenicity, solubility, lipophilicity, hydrophilicity, hydrophobicity, stability (rather stable as well as planned degradation) Modulation of platelet binding, and the like.

본 발명을 설명함에 있어서 '약동학'이란 시간 경과에 따라 혈청에 투여된 본 발명의 복합체의 농도를 의미하고, '약력학'이란 시간 경과에 따라 표적 및 비표적 조직에 투여된 본 발명의 복합체의 농도 및 표적 조직에 대한 효과(효능) 및 비표적 조직에 대한 효과(독성)를 나타낸다. 예를 들어, 약동학 및 약력학에서의 개선은 불안정한 결합을 사용하거나 압타머의 화학적 특성을 변형시킴(용해성, 전하 등의 변화)으로써, 특정 표적화제에 대해 고안될 수 있다.In describing the present invention, 'pharmacokinetics' refers to the concentration of the complex of the present invention administered to the serum over time, and 'pharmacodynamics' refers to the concentration of the complex of the present invention administered to the target and non- And the effect on the target tissue (efficacy) and on the non-target tissue (toxicity). For example, improvements in pharmacokinetics and pharmacodynamics can be devised for certain targeting agents, either by using unstable coupling or by altering the chemical properties of the extramammary (changes in solubility, charge, etc.).

본 발명의 압타머 표적화 복합체의 생물학적 특성을 변형시켜 개선된 약제학적 또는 다른 특성을 얻을 수 있다. 이는 표적화제 또는 압타머의 하나 이상의 화학적 특성을 변형시킴으로써 달성할 수 있다. 바람직한 예는 핵산가닥의 하나 이상의 화학적 특성을 화학적으로 변형시키는 것이다. 압타머를 포함하는 복합체의 화학적 특성을 변화시킴으로써, 본 발명자는 개선된 특징(예: 약동학, 약력학, 용해성, 면역원성 등의 개선)을 수득할 수 있다. The biological properties of the platemar targeting complexes of the invention can be modified to provide improved pharmaceutical or other properties. This can be accomplished by modifying one or more chemical properties of the targeting agent or plaster. A preferred example is the chemical modification of one or more chemical properties of a nucleic acid strand. By varying the chemical properties of the complex comprising the plaster, the inventors can obtain improved features (e.g., improved pharmacokinetics, pharmacodynamics, solubility, immunogenicity, etc.).

본 발명의 압타머 표적화 복합체는 또 다른 용도를 갖는다. 예를 들어, 복합체의 압타머 부분은 일반적으로 생체내에서 소형 표적화제의 반감기를 연장시킬 수 있다. 또한, 표적화제는 압타머와의 결합에 의해 제공된 증가된 크기를 통해, 표적화제가 달리는 그렇게 하지 못하는 상황에서 경쟁적 억제제로서 작용하게 할 수 있다. 따라서, 하나의 예에서, 본 발명은 표적화제의 유효 순환 반감기를 증가시키는 방법을 제공한다. The platemer targeting complex of the present invention has another use. For example, the platemer portion of the complex can generally extend the half-life of a small targeting agent in vivo. In addition, the targeting agent can act as a competitive inhibitor in situations where the targeting agent is unable to do so through the increased size provided by binding with the platemaster. Thus, in one example, the present invention provides a method for increasing the effective circulating half-life of a targeting agent.

다른 예에서, 본 발명은 압타머를 특이적 표적에 대해 재지시하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 질병 또는 상태가 표적분자를 발현시키는 세포, 조직 또는 체액과 관련된 개체에서 질병 또는 상태를 치료하거나 예방하는 방법을 제공한다. 이 방법은 환자에게, 치료학적 유효량의 본 발명의 복합체를 투여하는 것으로 이루어진다. 환자는 동물(예: 포유동물)일 수 있고, 특정 예에서는 사람이다.In another example, the present invention provides a method for rediating an abdominal with respect to a specific target.
The present invention also provides a method of treating or preventing a disease or condition in a subject associated with a cell, tissue or body fluid in which the disease or condition expresses the target molecule. The method comprises administering to a patient a therapeutically effective amount of a complex of the invention. The patient can be an animal, such as a mammal, and in certain instances, a human.

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본 발명은 또한, 환자의 체액 중의 세포, 조직(예: 세포외 매트릭스 생체분자) 또는 생체분자에 대해 생물학적 활성을 표적화하는 방법을 제공한다. 이 방법은 환자에게, 세포, 조직, 세포외 매트릭스 생체분자 또는 체액 생체분자에 특이적인 표적화제를 포함하는 본 발명의 복합체를 투여하는 것을 포함한다. 특정 예에서, 복합체는 생물학적 활성을 갖는 한편, 다른 예에서, 표적화제가 아닌 생물학적 활성 분자는 복합체의 성분으로서 포함된다. The present invention also provides a method for targeting biological activity to cells, tissues (e. G. Extracellular matrix biomolecules) or biomolecules in body fluid of a patient. The method comprises administering to the patient a complex of the invention comprising a targeting agent specific for a cell, tissue, extracellular matrix biomolecule or a body fluid biomolecule. In certain instances, the complex has biological activity, while in other examples, a biologically active molecule that is not a targeting agent is included as a component of the complex.

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본 발명의 복합체는 사람의 의학 요법에서 뿐만 아니라 수의학, 농업, 환경 및 다른 분야에서의 용도도 사용할 수 있다. 또한, 표적화제가 세포막을 통과하는 능력을 억제하거나 감소시키는 방법이 제공된다. 이들 방법에서, 본 발명의 압타머 표적화 복합체는 스스로 세포막을 통과하지 않는 압타머의 반응성 그룹 N을 표적화제에 결합시킴으로써 형성되며, 여기에 상기 표적화제에 대한 상기 압타머의 결합은 세포막을 통과하는 제제의 능력을 감소시키거나 억제한다. 세포 표면 내재화 수용체로 지시되지 않은 압타머는 세포막을 통과하지 않은 압타머의 바람직한 공급원이다. The complexes of the invention may be used in veterinary, agricultural, environmental and other fields as well as in human medical therapy. Also provided is a method for inhibiting or reducing the ability of a targeting agent to pass through a cell membrane. In these methods, the platemater-targeting complex of the present invention is formed by binding a reactive group N of platemermes that do not pass through the cell membrane to a targeting agent, wherein binding of the platemaster to the targeting agent passes through the cell membrane Reduce or inhibit the ability of the formulation. An aptamer not indicated as a cell surface internalizing receptor is a desirable source of platamer that has not passed through the cell membrane.

추가로, 본 발명의 복합체에 의하면 세포내 활성 약물의 세포내 전달을 매개하는 방법이 제공된다. 복합체의 표적화제는 이들이 세포 수용체에 결합하고 제제의 내재화를 매개한다. 이때 본 발명의 압타머 표적화 복합체는, 세포내 활성인 약물을 포함한다. 세포내 약물 전달은 수용체를 발현시키는 세포가 압타머 표적화 복합체와 접촉하는 경우에, 일어난다. 접촉은 압타머 표적화제의 내재화 및 상기 약물의 세포내 전달을 야기한다. In addition, the complex of the present invention provides a method of mediating intracellular delivery of an intracellularly active drug. The targeting agent of the complex binds to the cell receptor and mediates the internalization of the agent. At this time, the platemater targeting complex of the present invention includes a drug which is active in the cell. Intracellular drug delivery occurs when the cells expressing the receptor are in contact with the platelet targeting complex. Contact causes internalization of the platemater targeting agent and intracellular delivery of the drug.

이러한 방법은 수용체 매개된 세포내 이입(즉, 수용체 매개된 내재화)을 이용하여 본 발명의 압타머 표적화 복합체를 세포내 전달한다. 결합 리간드의 내재화를 매개하는 세포 표면 수용체는 당해 기술분야에 알려져 있으며, 예를 들어, PSMA, 인테그린, HER2, EGF 수용체, 엽산 수용체 등을 포함한다. This method employs receptor mediated intracellular entry (i. E., Receptor mediated internalization) to deliver the platemar targeting complex of the invention intracellularly. Cell surface receptors that mediate the internalization of binding ligands are known in the art and include, for example, PSMA, integrins, HER2, EGF receptors, folate receptors, and the like.

내재화 검정은 용이하게 사용 가능하며, 형광 검출 방법을 사용하여 평가할 수 있다. 특정 예에서, 세포내 활성 약물은, 상기 약물이 세포내 구획물과 접촉하는 경우, 활성으로 되는 프로드러그이다. 본 발명의 압타머 표적화 복합체는 세포내 트래피킹 시그널을 포함하여 내재화된 압타머 표적화 복합체를 특정한 세포내 구획으로 배양할 수 있다. Internalization assays are readily available and can be evaluated using fluorescence detection methods. In certain instances, an intracellularly active drug is a prodrug that becomes active when the drug is contacted with an intracellular compartment. The platemater targeting complexes of the present invention can include an intracellular trafficking signal to culture the internalized platelet targeting complexes into specific intracellular compartments.

본 발명에 따른 압타머 표적화 복합체는, 압타머에 위치하는 반응성 그룹 N에, 링커 없이 결합된, 하나 이상의 화학적 제제 및/또는 하나 이상의 생물학적 제제(즉, 표적화제)를 포함함으로써, 상기 압타머와 상기 표적화제를 목적에 맞게 다양하게 선택 및 변형시킬 수 있고, 표적과의 특이적으로 결합을 통해 상기 표적화제가 가지는 고유의 효능을 더욱 향상시킬 수 있는 효과가 있다. The platemater targeting complex according to the present invention comprises at least one chemical agent and / or at least one biological agent (i.e., a targeting agent) bound to the reactive group N located on the plumerator without a linker, The targeting agent can be variously selected and modified in accordance with the purpose, and the unique effect of the targeting agent can be further improved through specific binding with the target.

본 발명에 따른 표적화 복합체는, 그 타깃이 되는 표적과의 특이성을 통해, 생체 내의 분포를 변화시켜서 상기 표적화제를 가장 필요로 하는 생체 내 장소를 찾아낼 수 있도록 함으로써, 상기 표적화제의 목적하는 효과를 더욱 향상시킨다. The target complex according to the present invention can change the distribution in the living body through the specificity with the target as a target thereof, thereby enabling to find an in-vivo site most required for the targeting agent, .

본 발명에 따른 복합체는 상기 표적화제로서 질병 등에 약학적 효과가 있는 약제를 적용할 경우 그 치료 및 예방 효율을 향상시킬 수 있는 효과가 있다. The complex according to the present invention has the effect of improving the therapeutic and prophylactic efficiency when the medicament having a pharmaceutical effect is applied to the disease or the like as the targeting agent.

본 발명에 따른 복합체는 세포 또는 세포외 매트릭스가 표적분자를 발현하는 개체에서 세포 또는 세포외 매트릭스를 이미지화 하는 것에 사용될 수 있다. The complexes according to the invention can be used for imaging cellular or extracellular matrices in a cell or extracellular matrix expressing the target molecule.

이하, 구체적인 실시예를 통해 본 발명을 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described by way of specific examples.

실시예Example

1. 시약 및 재료1. Reagents and Materials

본 발명의 표적화제 압타머 복합체 제조에 사용하는 압타머는 전립선 특이 세포막 당단백질인 PSMA의 세포외부 부분을 인지하는 A10 2-fluoropyrimidine RNA 압타머(A10 PSMA Apt) (Lupold et al., Cancer Res 2002; 62:4029-4033.)이며, 이를 공지된 방법에 의해 이를 제조하였다(Integrated DNA Technology 사). The aptamer used in the preparation of the targeting modulator complex of the present invention is A10 2-fluoropyrimidine RNA extender (A10 PSMA Apt) (Lupold et al., Cancer Res 2002; 62: 4029-4033), which was prepared by a known method (Integrated DNA Technology Co.).

상기 RNA 압타머의 염기서열은 5-NH2- GGG AGG ACG AUG CGG AUC AGC CAU GUU UAC GUC ACU CCU UGU CAA UCC UCA UCG GC-3로 공지되어 있으며, 2-fluoro pyrimidines를 갖고 있다. The nucleotide sequence of the RNA strand is known as 5-NH2-GGG AGG ACG AUG CGG AUC AGC CAU GUU UAC GUC ACU CCU UGU CAA UCC UCA UCG GC-3 and has 2-fluoro pyrimidines.

표적화제인 독소루비신[Doxorubicin hydrochloride(Mr 580,000)]은 Sigma사에 구입하였으며, LNCaP 세포주 (ATCC CRL-1740) 및 PC3 세포주 (ATCC CRL1435)은 ATCC로부터 구입하였다.Targeting agent Doxorubicin hydrochloride ( Mr 580,000) was purchased from Sigma, and LNCaP cell line (ATCC CRL-1740) and PC3 cell line (ATCC CRL 1435) were purchased from ATCC.

2. 세포배양2. Cell culture

LNCaP(ATCC CRL-1740)는 PSMA가 과다 발현되는 전립선암 세포주이고 PC3(ATCC CRL1435)는 PSMA가 발현되지 않는 전립선암 세포주이다. LNCaP 세포주는 2 mM l-glutamine, 1.5 g/L glucose, 10 mM Hepes, 1.0 mM sodium pyruvate, and 10% FBS이 보충된 RPMI 1640 media(Gibco) 에서 배양하였다. LNCaP (ATCC CRL-1740) is a prostate cancer cell line that overexpresses PSMA, and PC3 (ATCC CRL1435) is a prostate cancer cell line that does not express PSMA. LNCaP cells were cultured in RPMI 1640 media (Gibco) supplemented with 2 mM l-glutamine, 1.5 g / L glucose, 10 mM Hepes, 1.0 mM sodium pyruvate, and 10% FBS.

PC3 세포주 (ATCC CRL1435)는 2 mM l-glutamine, 1.5 g/L sodium bicarbonate, and 10% FBS가 보충된 HAM's F12K media(ATCC사에 구입)에서 배양하였다. 이들 세포는 10 mL 배지에서 37 ℃로 2 내지 3일간 배양하였다. 이들 세포는 트립신을 처리하여 1:6 내지 1:10비율로 나누어 계대배양을 하였다. PC3 cell line (ATCC CRL1435) was cultured in HAM's F12K media supplemented with 2 mM l-glutamine, 1.5 g / L sodium bicarbonate, and 10% FBS (purchased from ATCC). These cells were cultured in 10 mL medium at 37 DEG C for 2 to 3 days. These cells were treated with trypsin and subcultured at a ratio of 1: 6 to 1:10.

3. 압타머 표적화 복합체의 제조3. Preparation of platamer targeting complex

독소루비신(5 mg, 8.62 umol)과 A10 PSMA Apt의 공유결합은 기존 공지된 방법(David et al., Bioconjugate Chem., 1993, 4 (6), pp 521-527)을 사용하였다. The covalent binding of doxorubicin (5 mg, 8.62 umol) and A10 PSMA Apt was performed using a known method (David et al., Bioconjugate Chem., 1993, 4 (6), pp 521-527).

독소루비신(5 mg, 8.62 umol) 및 A10 PSMA Apt(10 mg, 44.4 umol)을 메탄올(4 mL)에 녹였다. Trifluoroacetic acid(3 uL)을 첨가하고 빛을 차단하고 실온에서 24시간 교반하였다. 이 methanolic solution을 실온에서 압력을 줄여주면 0.25mL로 농축하였다. Acetonitile (2.5mL)을 첨가하고 이 현탁액을 4℃에서 48시간 동안 방치하여 결정체를 얻었다. 원심분리로 결정체를 수확하고 새로운 methanol/acetonitrile(1:10)으로 세척하고 진공상태에 건조시켜 Dox-Apt (2.9 mg, 3.85 umol, 44.6% yield)를 얻었다.Doxorubicin (5 mg, 8.62 μmol) and A10 PSMA Apt (10 mg, 44.4 μmol) were dissolved in methanol (4 mL). Trifluoroacetic acid (3 uL) was added and the light was blocked and stirred at room temperature for 24 hours. The methanolic solution was concentrated at 0.25 mL by reducing the pressure at room temperature. Acetonitile (2.5 mL) was added and the suspension was left at 4 째 C for 48 hours to obtain crystals. The crystals were harvested by centrifugation, washed with fresh methanol / acetonitrile (1:10) and dried in vacuo to give Dox-Apt (2.9 mg, 3.85 μmol, 44.6% yield).

4. 압타머 표적화 복합체가 암세포주의 생장에 미치는 영향4. Effect of platameric targeting complex on cancer cell growth

PSMA가 과다 발현되는 LNCaP 세포주 및 PSMA가 발현되지 않는 PC3 세포주을 대상으로 DMSO(디메틸 술폭사이드)에 녹인 압타머 표적화 복합체인 Dox-Apt 및 Free Dox 을 도7 내지 도8과 같이 2μmol 이하의 여러 가지 농도로 처리하여 72시간동안 배양하면서 암세포의 생장률을 측정함으로써 압타머 표적화 복합체가 정상세포 및 암세포주들의 생장에 미치는 효과를 평가하였다. The LNCaP cell line overexpressing PSMA and the PC3 cell line not expressing PSMA were treated with Dox-Apt and Free Dox, which were the platamater-targeting complexes dissolved in DMSO (dimethylsulfoxide), at various concentrations below 2 μmol And the growth rate of cancer cells was measured by incubating the cells for 72 hours. Thus, the effect of the platamater-targeting complex on the growth of normal cells and cancer cells was evaluated.

구체적으로, 먼저 상기 LNCaP 세포주와 PC3 세포주을 각각 10% 우태아혈청(fetal bovine serum)이 액체 배양하여 10⁴-10⁵의 양으로 6-웰 플레이트에 깔아준 후에, 24 시간동안 37℃에서 5% CO₂ 조건하에 배양하였다. 다음에 이들 각각의 배양 배지에 압타머 표적화 복합체를 도7과 도8에 그래프로 표시된 바와 같은 여러 가지 다양한 농도로 처리하여 72시간동안 37℃에서 5% CO₂ 조건하에 배양한 후, MTT 분석으로 세포증식을 조사하였다. MTT 분석은 5mg/ml MTT를 배양 부피의 1/10이 되도록 각 암세포에 처리하여 37℃에서 4 시간동안 방치한 후 배지를 제거하였다. 0.05M HCl의 이소프로판올 용액을 이용하여 살아있는 세포만을 염색하고 있는 보라색의 MTT 색소를 녹인 후, 색소의 흡광도를 570nm에서 읽었다. 이때, 기저치(background) 파장인 630nm에서의 흡광도를 570nm의 값으로부터 빼준 후 데이터를 처리하였다. Specifically, in the first cell line LNCaP and PC3 sepojueul 10% fetal bovine serum is the liquid (fetal bovine serum) culture, respectively 10 ^4-10 gave after crushing in a 6-well plate in an amount of ^5, at 37 ℃ for 24 hours, 5% CO ₂ < / RTI > conditions. Next, the platamater-targeting complexes were treated with various concentrations as shown in the graphs in FIGS. 7 and 8, cultured for 72 hours at 37 ° C under 5% CO ₂ , and then analyzed by MTT Cell proliferation was examined. MTT assay was performed by treating each cancer cell with 5 mg / ml MTT at 1/10 of the culture volume, leaving it at 37 ° C for 4 hours and then removing the medium. The violet MTT dye staining only living cells was dissolved in an isopropanol solution of 0.05 M HCl, and the absorbance of the dye was read at 570 nm. At this time, the absorbance at 630 nm, which is the background wavelength, was subtracted from the value of 570 nm, and the data was processed.

이상의 테스트 결과는 도7 및 도8과 같으며, 도시된 바와 같이 LNCaP 세포주는 표적화제-압타머 복합체인 Dox-Apt 및 Free Dox에 대한 반응성은 투여한 농도의 범위에서 대략 농도 비례적으로 독성을 보이지만 PC3 세포주는 Free Dox에 대한 반응성은 LNCaP 세포주와 유사한 경향이 있으나 Dox-Apt에 대한 반응성은 두 세포주간 매우 상이하였다. The results of the above tests are shown in FIGS. 7 and 8. As shown, the reactivity of the LNCaP cell line to Dox-Apt and Free Dox, which are the targeting agent-platemater complexes, is approximately dose- However, the reactivity of PC3 cell line to Free Dox tended to be similar to that of LNCaP cell line, but the reactivity to Dox-Apt was very different between the two cell lines.

본 발명은 이상의 대표적 실시예를 통해 기술 및 예시하고 있지만, 당해 기술분야의 숙련자라면, 앞서 예시한 다양한 방법들을 상기 실시예의 원리에 따라 적용할 수 있을 것이며, 앞서 예시한 방법 이외의 방법들도 본 발명의 취지 및 범위를 벗어나지 않으면서 본 발명을 다양하게 변형시킬 수 있음은 당연하다. While the present invention has been described and illustrated with reference to exemplary embodiments thereof, those skilled in the art will appreciate that various of the preceding methods may be applied in accordance with the principles of the above embodiments, It is obvious that various changes and modifications may be made without departing from the spirit and scope of the invention.

도1은 본 발명에 따른 압타머 표적화 복합체가 표적화 약물로 사용되는 일반적인 반응 모식도, Figure 1 is a general reaction schematic diagram in which the platemater targeting complex according to the present invention is used as a targeting agent;

도2는 본 발명의 복합체에서 표적화제에 결합되는 압타머의 일반적인 구성도, Figure 2 is a general schematic diagram of an abatumer that is bound to a targeting agent in a complex of the invention;

도3은 링커 없이, 항 PSMA의 압타머와 독소루비신의 표적화제에 의해 본 발명에 따른 예시적인 복합체를 제조하는 도면, Figure 3 is a drawing of an exemplary complex according to the invention by a targeting agent of anti-PSMA and anti-PSMA without linker,

도4는 링커 없이, 항 PSMA의 압타머와 메이탠시노이드(DM1)의 표적화제에 의해 본 발명에 따른 다른 예시적인 복합체를 제조하는 도면, Figure 4 is a diagram illustrating the preparation of other exemplary complexes according to the present invention by a targeting agent of anti-PSMA platemer and maytansinoid (DMl) without linker,

도5는 본 발명에 따른 예시적인 독소루비신-항 PSMA 복합체의 구조도, Figure 5 shows the structure of an exemplary doxorubicin-anti-PSMA complex according to the present invention,

도6은 본 발명에 따른 다른 예시적인 메이탠시노이드-항 PSMA 압타머 복합체의 구조도, Figure 6 is a schematic diagram of another exemplary maycansinoid-anti-PSMA tympanic complex according to the present invention,

도7은 본 발명에 따른 독소루비신-항 PSMA 압타머 복합체와 단독 독소루비신에 대한 LNCaP 세포주의 반응성 그래프 도면, FIG. 7 is a graph showing the reactivity of the LNCaP cell line to doxorubicin-anti-PSMA platelet complex and single doxorubicin according to the present invention,

도면8은, 본 발명에 따른 독소루비신-항 PSMA 압타머 복합체와 단독 독소루비신에 대한 PC3 세포주의 반응성 그래프 도면. FIG. 8 is a graph showing the reactivity of the PC3 cell line to the doxorubicin-anti-PSMA platelet complex according to the present invention and single doxorubicin.

Claims (20)

표적에 특이적으로 결합하는 압타머를 제조하는 단계; 및 상기 압타머에 위치하는 반응성 그룹 N에 링커 없이 상기 표적에 대한 결합 능력을 보유하거나 생물학적 활성을 나타내는 표적화제를 결합하여, 상기 표적화제를 상기 표적에 대해 표적화하는 압타머 표적화 복합체를 제조하는 단계; 를 포함하고, Producing an abdominal that specifically binds to the target; And combining the targeting agent with a binding agent capable of binding to the target or binding to the reactive group N located in the plumerator without linker to target the targeting agent to the target, ; Lt; / RTI > 상기 반응성 그룹 N은 아미노, 카르복실, 티올, 알킬, 알케닐, 알키닐, 옥소알킬, 옥소알케닐, 옥소알키닐, 아미노알킬, 아미노알케닐, 아미노알키닐, 설포알킬, 설포알케닐, 설포알키닐, 포스포알킬, 포스포알케닐, 및 포스포알키닐 중에서 선택된 하나 이상의 그룹인 것을 특징으로 하는, 압타머 표적화 복합체의 제조 방법.Wherein said reactive group N is selected from the group consisting of amino, carboxyl, thiol, alkyl, alkenyl, alkynyl, oxoalkyl, oxoalkenyl, oxoalkynyl, aminoalkyl, aminoalkenyl, aminoalkynyl, sulfoalkyl, sulfoalkenyl, Alkoxycarbonyl, alkoxycarbonyl, alkoxycarbonyl, alkynyl, phosphoalkyl, phosphoalkenyl, and phosphoalkynyl. 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete

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