KR101892641B1 - 유근피, 산약 및 상엽 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물 - Google Patents

유근피, 산약 및 상엽 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 유근피 추출물, 산약 추출물 및 상엽 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 증진, 탄력증진 또는 노화 방지용 피부 외용제 조성물에 관한 것으로서, 인체 세포에 존재하는 히알루론산 합성효소(hyaluronic acid synthase2, HAS2)의 유전자 발현을 증가시켜 인체의 히알루론산 생성 작용을 활성화시키고, 버시칸의 합성을 촉진하며, 버시칸 분해를 담당하는 MMP-12의 생성을 억제함으로써 세포외 기질의 구조를 견고히 하여 피부 탄력 증가 및 피부 보습 효과가 우수한 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

Description

유근피, 산약 및 상엽 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물{Skin External Composition Containing Ulmus Davidiana Extract, Dioscorea Japonica Extract or Morus Alba Leaf Extract}
본 발명은 유근피 추출물, 산약 추출물 및 상엽 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 유효성분으로 함유함으로써 인체 세포에 존재하는 히알루론산 합성효소(hyaluronic acid synthase2, HAS2)의 유전자 발현을 증가시켜 인체의 히알루론산 생성 작용을 활성화시키고, 버시칸의 합성을 촉진하며, 버시칸 분해를 담당하는 MMP-12(Matrix metalloproteinase-12)의 생성을 억제함으로써 세포외 기질의 구조를 견고히 하여 피부 보습 증진, 탄력 증진,노화 방지 또는 주름 개선용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.
느릅나무 뿌리의 껍질인 유근피(ULMUS DAVIDIANA)와 관련하여 종래의 연구들은 면역억제제나 식용 음료 등에 대한 사항이었으며, 대한민국 등록특허 제10-0439939호에서는 유근피 추출물을 함유하는 주름개선효과, 콜라겐 합성 촉진효과 그리고 보습효과가 우수한 화장료 조성물을 제시하고 있으나 유근피 추출물을 단독 사용하는 경우에는 그 효과가 미비하며, 저분자 및 고분자 히알루론산과 유근피로부터 분리된 다당체 추출물을 함유하는 노화방지용 조성물 역시 본 발명과 대비하여 그 효과가 미비하다.
대한민국 특허등록 제 10-0439939 호
이에, 본 발명자들은 세포 배양 상태에서의 실시간 DNA 연쇄 중합 반응 어세이, ELISA를 수행하여 유근피, 산약, 상엽 복합 추출물이 히알루론산 합성 효소 2 (HAS2) 유전자의 발현을 증가시키고 히알루론산의 합성을 증가시키며, 또한 히알루론산, 콜라젠 다발과 결합하여 세포외기질 구조를 강화하는 버시칸 유전자의 발현을 증가시키며, 버시칸의 분해를 야기하는 MMP-12 유전자의 감소를 유도하는 효과를 발견하게 되어, 본 발명을 완성하였다.
따라서 본 발명의 목적은 유근피 추출물, 산약 추출물 및 상엽 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 유효성분으로 함유하는 조성물을 제공하는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명은 유근피 추출물, 산약 추출물 및 상엽 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.
본 발명의 유효성분으로 사용되는 유근피는 느릅나무뿌리 껍질을 의미하며, 염증을 없애고 고름을 빨아내는 작용이 매우 세어서 궤양염, 십이지장 궤양, 대장궤양 등 갖가지궤양과 위암, 자궁암, 직장암 등을 치료효능이 널리 알려져 있다.
본 발명의 유효성분인 산약(Dioscorea Japonica)는 산지에서 자라며, 참마라고도 한다. 주로 산지에서 자라며, 원주형의 육질 뿌리에서 줄기가 나와서 다른 물체를 감아 올라간다. 산약은 신(腎)을 보하고, 음(陰)을 더해주는 기능이 있다. 이는 노화로 인해 부족해진 (火) 진액을 보충해주는 것과 같다. 구체적으로는 지혈, 항균 작용, 피부가 갈라지는 피부염(갖가지 피부병)에 효과, 모발 성장 촉진, 모발을 검게 해 주고, 관상 동맥의 혈류량 촉진 작용과 진정, 진통 작용, 항암작용 (자궁암, 식도암, 피부암 등)이 있다고 알려져 있다.
본 발명의 유효성분인 상엽(Morus Alba Leaf)는 뽕나무 잎을 말한다. 뽕나무를 뜻하는 상(桑)은 동방의 성스러운 신목을 뜻하는 약과 나무 목을 합친 글자라고 한다. 이것은 누에가 먹는 나무인 뽕나무가 신목처럼 효능이 뛰어나기 때문에 이 둘을 구별하기 위하여 사용한 것이다. 이 약은 냄새가 거의 없고 맛은 달고 쓰며 성질은 차다. 상엽은, 해수, 구갈, 피부 두드러기 등에 쓰인다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 유근피 추출물, 산약 추출물 및 상엽 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상이 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~14 중량%, 보다 바람직하게는 0.01 내지 10 중량%, 보다 더 바람직하게는 0.1 내지 5 중량%, 가장 바람직하게는 0.5 내지 4 중량%로 함유하는 피부외용제 조성물을 제공한다. 추출물의 함량이 0.0001중량% 미만이면 상기 추출물에 의한 히알루론산 생성 증가, 버시칸 생성 촉진, MMP-12 생성 억제 효과 등을 얻을 수 없고, 14 중량%를 초과하면 함량 증가에 비해 효과의 증가가 크지 않기 때문에 비효율적이다.
본 발명에 사용되는 유근피, 산약, 상엽은 상업적으로 구입하거나 통상 사용되는 제조 방법에 의해서 제조될 수 있다.
상기 추출물을 제조하는 방법으로는 고온고압 추출, 아임계 추출, 초임계 추출 등에 의할 수 있으며, 바람직하게는 열수 추출에 의한다.
본 명세서에서 이용되는 추출물은 당업계에 공지된 통상적인 추출용매, 바람직하게는, (a) 정제수, (b) 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (예: 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올 및 노말-부탄올 등), (c) 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, (d) 아세톤, (e) 에틸 아세테이트, (f) 클로로포름, (g) 1,3-부틸렌글리콜, (h) 헥산, (i) 디에틸에테르, 또는 (j) 부틸아세테이트를 이용하여 얻을 수 있다. 다만, 본 발명의 조성물은 피부에 사용되는 점에서 피부에 무해하고 환경친화도가 높은 정제수를 사용하는 것이 보다 바람직하다. 본 발명의 추출물은 상술한 용매를 이용하여 얻은 것뿐만 아니라, 여기에 정제과정을 추가적으로 적용하여 얻은 것도 포함한다. 예컨대, 상기 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 얻은 분획, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 추출물에 포함되는 것이다. 본 발명의 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
본 발명의 추출물을 혼합할 때 2종의 추출물을 혼합하는 경우 중량비 1:1, 3종의 추출물을 혼합할 때 중량비 1:1:1로 혼합할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니며 적절한 비율로 혼합하여 사용할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명은 히알루론산의 생성을 촉진시킴을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.
히알루론산은 황산기가 부착되지 않은 글루코스아미노글리칸 (nonsulfated glycosaminoglycan)의 일종으로, 글루쿠로닉산과 N-아세틸글루코사민 잔기가 반복적으로 연결되어 있는 선형의 고분자물질이다. 세포외기질의 주 구성성분으로서 수분 보유, 세포간 간격 유지, 세포성장인자 및 영양성분의 저장 및 확산에 관여할 뿐만 아니라, 세포의 분열과 분화, 이동 등에 관여하는 것으로 보고되었다. 포유류의 신체에 존재하는 히알루론산의 50 % 이상이 피부에 존재하는데, 주로 각질형성세포와 섬유아세포에 의해 합성되며, 표피의 세포간간격과 진피의 결체 조직에 분포한다고 보고되었다. 인간의 피부에서의 히알루론산의 양은 노화와 함께 감소되는 것으로 보고되었는데, 이것이 노화에 따른 피부 탄력 저하 및 수분 함유량 감소의 직접적인 원인 중 하나라고 여겨진다.
피부 세포 배양 상태에서의 히알루론산의 합성은 여러 가지 성장인자와 트랜스레티노인산, N-메틸세린 등에 의해 증가된다는 보고와, 피부에 도포된 여성호르몬(estradiol) 및 그 유사물질이 히알루론산의 합성을 증가시킨다는 보고가 있으나, 히알루론산 대사에 대한 자세한 기작은 아직 밝혀지지 않았다. 단지, 히알루론산의 합성은 세포막의 안쪽 표면에서 히알루론산합성효소에 의해 진행되며, 합성되는 동안 세포막을 뚫고 나와 세포외기질로 축적된다고 알려졌다. 포유동물에서 히알루론산 합성 효소의 유전자는 서열상의 유사성이 높은 HAS1, HAS2, HAS3, 이 세가지 형태가 보고되었으나, 세포와 조직에서의 분포와 효소 활성을 조절하는 인자에 대한 연구는 많이 진행되지 않았다. 표피성장인자(Epidermal growth factor, EGF)가 표피 세포 배양액 속에 첨가되었을 때 HAS2의 유전자 발현이 증가한다는 사실이 보고되었다(Juha-Pekka Pienima¨ ki, et al., THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY(2001)). 히알루론산의 생성 촉진은 본 발명의 조성물이 히알루론산 합성 효소 유전자의 발현을 증가시킴으로써 구현된다. 또한 본 발명의 조성물은 히알루론산, 콜라젠 다발과 결합하여 세포외기질 구조를 강화하는 버시칸 유전자의 발현을 증가시키며, 버시칸의 분해를 야기하는 MMP-12 유전자의 감소를 유도하는 효과를 가진다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면 본 발명의 조성물은 HAS2 유전자의 발현을 증가시켜 히알루론산의 합성을 증가시킨다. 또한, 버시칸 유전자의 발현을 증가시켜 버시칸의 합성을 촉진시킬 뿐만 아니라 MMP-12 유전자의 발현을 감소시켜 버시칸의 분해를 담당하는 MMP-12의 생성을 억제한다. 따라서, 본 발명은 히알루론산의 생성을 촉진하고 세포외기질 성분의 구조를 견고히 하여 노화로 인한 피부 탄력 저하를 억제시키고 피부 보습을 증진시켜 피부의 탄력 및 주름 개선 효과를을 높여주는 효과를 가진다.
본 발명의 피부 외용제 조성물은 그 제형에 있어서 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 팩, 젤 또는 피부 점착타입의 화장료 제형을 가질 수 있으며, 또한 로션, 연고, 젤, 크림, 패취 또는 분무제와 같은 경피투여형의 제형일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 다른 구현예에 따르면, 본 발명은 유근피, 산약 및 상엽으로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 용매에 투입하는 단계; 및 초고압 장치에서 유효성분을 추출하는 단계를 포함하는 피부 보습 증진, 탄력증진, 또는 노화 방지 또는 주름 개선용 피부 외용제 조성물의 제조방법을 제공한다. 상기 용매에 투입하는 단계에서 유근피, 산약 및 상엽으로 이루어진 군으로부터 선택된 2종 이상의 생약 100 g당 용매 1000ℓ를 사용하여 추출하는 것이 바람직하다.
상기 유효성분을 추출하는 단계에서 초고압 장치에서 500 - 2000기압, 40 ℃ 이하의 조건에서 1 내지 7시간 추출하는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 1200 - 1700기압, 35 ℃ 이하의 조건에서 2 내지 5시간 추출하는 것이고, 가장 바람직하게는 1300 ― 1600 기압, 30 ℃ 이하의 조건에서 2 내지 4시간 추출하는 것이다. 추출에 사용되는 용매에 대해서는 불필요한 설명의 반복을 피하기 위해 생략한다.
본 발명의 피부 외용제 조성물은 단일 성분이 아닌 유근피 추출물, 산약 추출물 및 상엽 한약재 복합 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 함유하여 인체 세포에 존재하는 히알루론산 합성효소의 유전자 발현을 현저히 증가시킴으로써 인체의 히알루론산 생성 작용을 활성화시키는 히알루론산 생성촉진제로서의 효과를 가지고 동시에 세포외기질 구조를 견고히 하는 버시칸의 생성을 촉진하며, 버시칸의 분해를 담당하는 MMP-12의 생성을 억제하는 효과를 가지므로 피부에 보습효과 증진시켜 피부 건조증을 방지할 수 있고 피부 탄력을 증진시켜주며, 또한 피부 노화 방지 및 피부 주름 개선을 위해 이용될 수 있다.
도 1은 유근피, 산약 및 상엽 추출물을 HaCaT 세포에 처리한 후 mRNA수준에서의 히알루론산 합성효소의 발현을 나타낸 그래프이다.
도 2는 유근피, 산약 및 상엽 추출물을 HaCaT 세포에 처리한 후 mRNA수준에서의 버시칸 유전자의 발현을 나타낸 그래프이다.
도 3은 유근피, 산약 및 상엽 추출물을 HaCaT 세포에 처리한 후 mRNA수준에서의 UV에 의한 MMP-12 유전자의 발현을 나타낸 그래프이다.
도 4는 유근피, 산약 및 상엽 추출물을 HaCaT 세포에 처리한 후 히알루론산의 양을 ELISA 방법으로 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
이하 실시예 및 시험예를 통하여 본 발명을 좀 더 상세히 설명하고자 하며, 본 발명의 권리 범위는 이들 예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
실시예
[제조예 1] 유근피 뿌리 추출물의 제조
유근피뿌리 100 g에 대하여 용매인 정제수 1000 ℓ를 이용하여 초고압장치로 1500기압에서 30℃이하의 저온을 유지하면서 3시간 추출하였다. 그 다음 원심분리(9000rpm, 15℃, 30min)로 이물질을 제거 및 여과포로 여과하고, 정제수, 부틸렌글라이콜, 페녹시에탄올 등의 희석용매를 사용하여 10배로 희석하여 유근피 뿌리 추출물을 제조하였다.
[제조예 2] 산약 추출물의 제조
산약100 g 에 대하여 용매인 정제수 1000 ℓ를 이용하여 초고압장치로 1500기압에서 30℃이하의 저온을 유지하면서 3시간 추출하였다. 그 다음 원심분리(9000rpm, 15℃, 30min)로 이물질을 제거 및 여과포로 여과하고, 정제수, 부틸렌글라이콜, 페녹시에탄올 등의 희석용매를 사용하여 10배로 희석하여 산약 추출물을 제조하였다.
[제조예 3] 상엽 추출물의 제조
상엽100 g을 용매인 정제수 1000 ℓ 를 이용하여 초고압장치로 1500기압에서 30℃이하의 저온을 유지하면서 3시간 추출하였다. 그 다음 원심분리(9000rpm, 15℃, 30min)로 이물질을 제거 및 여과포로 여과하고, 정제수, 부틸렌글라이콜, 페녹시에탄올 등의 희석용매를 사용하여 10배로 희석하여 상엽 추출물을 제조하였다.
[시험예 1] 유근피뿌리, 산약, 상엽 한약재 복합추출물 처리에 의한 HaCaT 세포에서의 HAS2, 버시칸, MMP-12 발현 증가
<1 단계> 세포주와 세포 배양
인체 각질형성 세포주 (human keratinocyte)인 HaCaT 세포(상품명Human keratinocyte cell line, 판매처cell lines service)를 10% 우혈청 (fetal bovin serum)을 포함한 DMEM 배지 (Dulbecco’s modified Eagle’s Medium, Gibco 1210-0038)에서 배양하였고, 배양은 모두 37℃, 5% CO2배양기로 18시간 동안 수행하였다.
<2 단계> 정량적인 역전사 PCR을 통한 HAS2, 버시칸, MMP-12 유전자의 mRNA 합성 증가 확인
상기 1 단계에서 배양된 세포주를 트립신으로 처리하여 단일세포 현탁액을 만들고 T75 플라스크에 1 x 106개씩 분주하여, 24 시간 배양하였다. 그 후, 우혈청이 포함되지 않은 DMEM 배지를 처리하여 24 시간 동안 배양한 다음 역시 우혈청이 포함되지 않은 배지에 DMSO에 녹인 유근피뿌리 추출물, 산약 추출물, 상엽 추출물(상기 제조예 1~3)을 10 ppm씩 처리하였다. 무처리 대조군으로는 비히클인 DMSO를 이용하였다.
그리고, MMP-12의 발현을 유도하기 위한 UV 처리는 다음과 같이 진행하였다. 인체 각질형성세포주인 HaCaT세포를 106개의 밀도로 100 mm 세포 배양 접시에서 배양하였고, FS40 램프[웨스팅하우스, 피츠버그, 피에이., 미국(Westinghouse, Pittsburgh, PA, USA)]를 이용하여 자외선 B를 10 mJ/cm2로 조사한 후, DMSO에 유근피뿌리, 산약, 상엽 추출물을 10 ppm씩, 유근피뿌리와 상엽 추출물의 복합처방의 총 양을 5 ppm, 유근피뿌리, 산약 및 상엽 추출물의 복합처방의 총 양을 5 ppm의 농도로 각각 녹여 처리한 배지로 교체하였다. 무처리 대조군으로는 비히클인 DMSO를 이용하였다.
24 시간 경과 시점에서 세포를 회수하여 냉각된 4 ℃ 인산완충용약(PBS)로 세척하고 TRIzol™ 시약 (Life Technologies, Inc.) 1 ml을 첨가하여 총 RNA를 추출하여 정량적인 실시간 DNA 연쇄중합반응을 수행하였다. 실시간 DNA 연쇄중합반응 수행을 위한 HAS2, 버시칸, MMP-12의 프라이머 서열은 하기 표 1과 같다.
프라이머 이름 서열
HAS-2 정방향 프라이머 5＇TTTCTTTATGTGACTCATCTGTCTCACCGG-3＇
HAS-2 역방향 프라이머
버시칸 정방향 프라이머
버시칸 역방향 프라이머
MMP-12 정방향 프라이머
MMP-12 역방향 프라이머		 5＇ATTGTTGGCTACCAGTTTATCCAAAGGG-3＇
5＇GTCACCTTCCAACTATCCGGT-3＇
5＇ AGCACGGTAGTCCATTCTTTCT-3＇
5＇GGAGTCCCCGATCTCCATCAT-3＇
5＇ACGGTTCATGTCAGGTGTGTA-3＇
GAPDH 정방향 프라이머 5＇CAACTACATGGTTTACATGTTCC-3＇
GAPDH 역방향 프라이머 5＇GGACTGTGGTCATGAGTCCT-3＇
표 1은 정량적인 역전사 PCR 반응을 위한 HAS2, 버시칸, MMP-12와 GAPDH의 프라이머를 나타낸다. 총 RNA 1 μg을 50 mM 트리스-HCl(Tris-HCl, pH 8.3), 75 mM KCl, 3 mM MgCl2,0.1MDTT,10mMdNTP및 40 유닛/μl RNase 저해제가 함유된 역전사 반응 완충액 25 μl에 넣고, 0.5 μg/μl 올리고(dT)16의 프라이머와 200 유닛 수퍼스크립트 II[SuperScript II, 집코비알엘(GiboBRL)]의 역전사 중합효소를 첨가하여 42℃에서 1시간 반응시킨 다음 역전사 반응 용액 2.5 μl를 엠플리택(AmpliTaq) DNA 중합효소[0.04U, 퍼킨 엘멀, 쉘튼, 씨티(Perkin Elmer, Shelton, CT)], 50 mM 트리스(pH 8.3), 0.25 mg/ml 우혈청알부민, 3 mM MgCl2,0.25mMdNTPs,SYBR그린 I의 1/50,000 희석액[몰레큘라 프로브, 유진, 오알(Molecular Probes, Eugene, OR)]이 함유된 PCR 반응 완충액 50리터에 섞고, 10 μM의 프라이머를 첨가하여 94℃에서 30초간 변성, 53℃에서 30초간 어닐링 및 72℃에서 1분간 확장하는 사이클을 30회 수행하였다. 상대적인 mRNA 레벨은 아이사이클러(ICycler) 소프트웨어를 이용하여 SYBR 그린 I 형광 변화를 측정함으로써 분석하였다. 각각의 프라이머는 SCI급 논문들을 토대로 제작하였다. 내부 표준물질로 GAPDH(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)를 사용하여 유전자의 정량적 발현 수준을 보정하였다. HAS2, 버시칸 및 MMP-12 유전자의 발현 정도는 각각 도 1~3에 나타내었다.
도 1 및 도 2에서 유근피뿌리 추출물, 산약 추출물 또는 상엽 추출물의 단독 처리군은 10 ppm 농도로 처리한 군이고, 유근피뿌리 추출물 및 산약 추출물, 유근피뿌리 추출물 및 상엽 추출물, 산약 추출물 및 상엽 추출물의 2종 복합 처방군은 각각의 2종 혼합물의 총 양을 5 ppm 농도로 처리한 군이고, 유근피뿌리 추출물, 산약 및 상엽의 3종 복합 처방군은 3종의 혼합물의 총 양을 5 ppm 농도로 처리한 군이다.
도 1 및 도 2를 보면, 유근피뿌리, 산약 또는 상엽 추출물을 단독 처리한 경우, 상기 추출물을 처리하지 않은 대조군에 비하여 HAS2 유전자 및 버시칸 유전자의 발현량이 어느 정도 증가하였으나, 유근피뿌리 추출물, 산약 추출물 및 상엽 추출물 중에 2가지 추출물의 복합 처방을 사용한 실험군의 경우에는 단독 처리군보다 소량을 사용했음에도 불구하고 HAS2 유전자 및 버시칸 유전자의 발현량이 유의하게 증가함을 알 수 있었다. 특히, 유근피뿌리, 산약 및 상엽 추출물의 세가지 복합처방을 사용할 경우에는 HAS2 유전자 및 버시칸 유전자의 발현량이 단독 처리군이나 2종 복합 처리군보다 현격히 증가함을 확인할 수 있었다.
따라서, 본 발명에 따라 유근피뿌리 추출물, 산약 추출물 및 상엽 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 사용하면 히알루론산의 합성을 효과적으로 증가시킬 수 있으며, 이로써 세포외기질 구조를 강화시킬 수 있음을 알 수 있다.
또한, 도 3에서 UV군은 UV를 조사한 뒤 DMSO로 처리한 군이고, UV + 유근피뿌리 추출물, 산약 추출물 또는 상엽 추출물의 단독 처리군은 UV를 조사한 뒤 유근피뿌리 추출물, 산약 추출물 또는 상엽 추출물을 10 ppm 농도로 처리한 군이고, UV + 유근피뿌리 추출물 및 산약 추출물, 유근피뿌리 추출물 및 상엽 추출물, 산약 추출물 및 상엽 추출물의 2종 복합 처방군은 UV를 조사한 뒤 각각의 2종 혼합물의 총 양을 5 ppm 농도로 처리한 군이고, UV + 유근피뿌리 추출물, 산약 및 상엽의 3종 복합 처방군은 UV를 조사한 뒤 3종의 혼합물의 총 양을 5 ppm 농도로 처리한 군이다.
도 3을 보면, 유근피뿌리, 산약 또는 상엽 추출물을 단독 처리한 경우, 상기 추출물을 처리하지 않은 대조군에 비하여 MMP-12 유전자의 발현량이 어느 정도 감소하였으나, 유근피뿌리 추출물, 산약 추출물 및 상엽 추출물 중에 2가지 추출물의 복합 처방을 사용한 실험군의 경우에는 단독 처리군보다 소량을 사용했음에도 불구하고 MMP-12 유전자의 발현량이 유의하게 감소함을 알 수 있었다. 특히, 유근피뿌리, 산약 및 상엽 추출물의 세가지 복합처방을 사용할 경우에는 단독 처리군이나 2종 복합 처리군보다 MMP-12 유전자의 발현량이 현격히 훨씬 더 감소함을 확인할 수 있었다.
따라서, 본 발명에 따라 유근피뿌리 추출물, 산약 추출물 및 상엽 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 사용하면 MMP-12 유전자의 발현량을 감소시킴으로써 세포외기질 구조를 강화하는 버시칸의 분해를 억제할 수 있음을 알 수 있다.
[시험예 2] 유근피뿌리 추출물, 산약 추출물, 상엽 추출물에 의한 HaCaT 세포에서의 히알루론산 생성 증가
상기 시험예 1의 단계 1에서 배양된 세포주를 트립신 처리하여 단일세포 현탁액을 만들고 T75 플라스크에 1 x 10 6개씩 분주하여, 24 시간 배양하였다. 그 후, 우혈청이 포함되지 않은 DMEM 배지를 처리하여 24 시간 동안 배양한 다음 역시 우혈청이 포함되지 않은 배지에 유근피뿌리 추출물, 산약 추출물, 상엽 추출물을 10 ppm씩, 유근피뿌리 추출물과 상엽 혼합 추출물 10 ppm, 유근피뿌리 추출물, 산약 추출물, 상엽 혼합 추출물 10 ppm을 녹여 처리하였다. 24 시간 경과 시점에서 세포 배양액을 회수하여 15,000 g에서 5분간 원심분리하여 침강된 세포를 제거하고 상층액을 얻어 에첼론 생명과학 회사0(Echelon Bioscience, Salt Lake, UT) 의 ELISA 키트를 이용하여 히알루론산 양을 측정하였다.
도 4에서 유근피뿌리 추출물, 산약 추출물 또는 상엽 추출물의 단독 처리군은 10ppm 농도로 처리한 군이고, 유근피뿌리 추출물 및 산약 추출물, 유근피뿌리 추출물 및 상엽 추출물, 산약 추출물 및 상엽 추출물의 2종 복합 처방군은 각각의 2종 혼합물의 총 양을 5ppm 농도로 처리한 군이고, 유근피뿌리 추출물, 산약 및 상엽의 3종 복합 처방군은 3종의 혼합물의 총 양을 5 ppm 농도로 처리한 군이다.
도 4를 보면, 유근피뿌리, 산약 또는 상엽 추출물을 단독 처리한 경우, 상기 추출물을 처리하지 않은 대조군에 비하여 히알루론산의 양이 어느 정도 증가하였으나, 유근피뿌리 추출물, 산약 추출물 및 상엽 추출물 중에 2가지 추출물의 복합 처방을 사용한 실험군의 경우에는 단독 처리군보다 소량을 사용했음에도 불구하고 히알루론산의 양이 유의하게 증가함을 알 수 있었다. 특히, 유근피뿌리, 산약 및 상엽 추출물의 세가지 복합처방을 사용할 경우에는 히알루론산의 합성량이 단독 처리군이나 2종 복합 처리군보다 현격히 증가함을 확인할 수 있었다.
따라서, 본 발명에 따라 유근피뿌리 추출물, 산약 추출물 및 상엽 추출물로 이루어진 군에서 선택된 2종 이상을 사용하면 히알루론산의 합성량을 효과적으로 증가시킬 수 있고, 이로써 히알루론산 감소로 인한 피부 탄력 저하 및 수분 함유량 감소를 예방할 수 있다.
[제형예 1] 영양화장수
하기 표 2에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양화장수를 제조하였다.
성분 함량 (중량%)
유근피 추출물 10
산약 추출물 10
상엽 추출물 10
스쿠알란 5.0
밀납 4.0
폴리솔베이트 60 1.5
솔비탄세스퀴올레이트 1.5
유동파라핀 0.5
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
카르복시비닐폴리머 0.1
트리에탄올아민 0.2
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
합계 100
[제형예 2] 영양크림
하기 표 3에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양크림을 제조하였다.
성분 함량 (중량%)
유근피 추출물 10
산약 추출물 10
상엽 추출물 10
폴리솔베이트 60 1.5
솔비탄세스퀴올레이트 0.5
PEG60 경화피마자유 2.0
유동파라핀 10.0
스쿠알란 5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0
글리세린 5.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
트리에탄올아민 0.2
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
합계 100
[제형예 3] 팩
하기 표 4에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 팩을 제조하였다.
성분 함량 (중량%)
유근피 추출물 10
산약 추출물 10
상엽 추출물 10
폴리비닐알콜 13.0
소듐카르복시메틸셀룰로오스 0.2
글리세린 5.0
알란토인 0.1
에탄올 6.0
PEG 12 노닐페닐에테르 0.3
폴리솔베이트 60 0.3
방부제, 색소, 향료 적량
정제수 잔량
합계 100
[제형예 4] 연고
하기 표 5에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 연고를 제조하였다.
성분 함량 (중량%)
유근피 추출물 10
산약 추출물 10
상엽 추출물 10
정제수 잔량
글리세린 8.0
부틸렌글리콜 4.0
유동파라핀 15.0
베타글루칸 7.0
카보머 0.1
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 3.0
스쿠알란 1.0
세테아릴 글루코사이드 1.5
솔비탄 스테아레이트 0.4
스테아릴 알코올 1.0
방부제 적량
향 적량
색소 작량
밀랍 4.1
합계 100

Claims (9)

  1. 유근피 추출물, 산약 추출물, 및 상엽 추출물을 유효성분으로 함유하며,
    세포외기질 구조를 강화시키는 것인 진피 주름 개선용 화장료 조성물.
  2. 유근피 추출물, 산약 추출물, 및 상엽 추출물을 유효성분으로 함유하며,
    세포외기질 구조를 강화시키는 것인 진피 탄력 증진용 화장료 조성물.
  3. 삭제
  4. 유근피 추출물, 산약 추출물, 및 상엽 추출물을 유효성분으로 함유하며,
    세포외기질 구조를 강화시키는 것인 진피 노화 방지용 화장료 조성물.
  5. 제 1 항 내지 제 2 항 및 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 추출물은 물 추출물인, 조성물.
  6. 제 1 항 내지 제 2 항 및 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 유효성분은 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 - 14 중량%로 함유되는 것인, 조성물.
  7. 제 1 항 내지 제 2 항 및 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 HAS2 유전자, 버시칸 유전자, 및 MMP-12 유전자 중 하나 이상의 mRNA 발현량을 변화시키는 것인, 조성물.
  8. 제 1 항 내지 제 2 항 및 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 히알루론산의 합성을 촉진시키는 것인, 조성물.
  9. 삭제
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