KR101888185B1 - Anti-AIMP1/p43 monoclonal antibody and uses thereof - Google Patents

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Abstract

본 발명은 AIMP1/p43(ARS-interacting multifunctional protein 1)에 선택적으로 결합하는 항 AIMP1/p43 항체에 관한 것으로 보다 구체적으로는 인간 AIMP1/p43에 결합하는 항체 또는 그 단편, 이의 생산방법 및 이를 포함하는 암 치료용 약학적 조성물 또는 암 및 염증성질환 진단용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 항체 또는 그 단편은 인간 AIMP1/p43에 특이적으로 결합하며, 동일한 ARS family를 포함한 다른 단백질과 교차반응성이 없어 AIMP1/p43 검출 및 억제가 가능하므로 AIMP1/p43 검출 및 AIMP1/p43가 관련된 질환인 암 치료 또는 암 및 염증성질환 진단 목적으로 사용될 수 있다.The present invention relates to an anti-AIMP1 / p43 antibody selectively binding to AIMP1 / p43 (ARS-interacting multifunctional protein 1), and more particularly to an antibody or fragment thereof binding to human AIMP1 / p43, A pharmaceutical composition for cancer therapy or a composition for cancer and inflammatory disease diagnosis. Since the antibody or fragment thereof of the present invention specifically binds to human AIMP1 / p43 and is not cross-reactive with other proteins including the same ARS family, AIMP1 / p43 detection and AIMP1 / p43 detection and AIMP1 / p43 are involved And can be used for cancer therapy or cancer and inflammatory disease diagnosis.

Description

항 AIMP1/p43 모노클로날 항체 및 이의 용도{Anti-AIMP1/p43 monoclonal antibody and uses thereof}Anti-AIMP1 / p43 Monoclonal Antibodies and Their Uses {Anti-AIMP1 / p43 monoclonal antibodies and uses thereof}

본 발명은 AIMP1/p43(ARS-interacting multifunctional protein 1)에 선택적으로 결합하는 항 AIMP1/p43 항체에 관한 것으로 보다 구체적으로는 인간 AIMP1/p43에 결합하는 항체 또는 그 단편, 이의 생산방법 및 이를 포함하는 암 치료용 약학적 조성물 또는 암 및 염증성질환 진단용 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to an anti-AIMP1 / p43 antibody selectively binding to AIMP1 / p43 (ARS-interacting multifunctional protein 1), and more particularly to an antibody or fragment thereof binding to human AIMP1 / p43, A pharmaceutical composition for cancer therapy or a composition for cancer and inflammatory disease diagnosis.

Aminoacyl-tRNA synthetase(ARS)는 특정 아미노산을 그 해당하는 tRNA에 붙여주는 역할을 하는 효소이며. 고등생물의 경우 아미노산 종류에 따른 20 개의 효소외에 AIMP1/p43(p43), (AIMP2)p38, (AIMP3)p18 등 multisynthetase complex 형성에 관여하는 3종류를 포함하여 23종의 효소로 구성되어 있으며 multisynthetase complex에 참여하는 효소외에 몇몇은 free form 형태로도 존재한다. 그러나 최근에 들어 기본적인 기능외에 특정 환경에서 다양한 다른 활성기능을 가지고 있음이 보고 되었는데 결합 다기능 단백질 AIMP1/p43 (ARS-interacting multifunctional protein 1)가 그중의 하나이다. 결합 다기능 단백질 AIMP1/p43는 RRS (arginyl-tRNA synthetase)에 작용하여 활성을 증가시키는 역할 이외에도 세포 외부로 분비되어 cytokine의 활성을 나타내는데 이는 TNF-α나 heat shock에 의해 촉진된다. 분비된 AIMP1/p43은 다양한 기능에 관여하게 되는 데 첫 번째로는 혈관신생에 관한 기능으로 낮은 농도에서는 MMP-9을 매개로 하는 혈관신생을 촉진하며 높은 농도에서는 오히려 JNK 신호전달을 매개로 혈관신생을 억제한다(Park, SG. et al Dose-dependent biphasic activity of tRNA synthetase-associating factor, p43, in angiogenesis (2002) J Biol. Chem. 277: 45243-45248). 또한 AIMP1/p43은 대식세포등을 활성화하는등 면역 활성화와 ICAM-1을 촉진시켜 면역세포의 부착에 관여한다(Ko, YG. et al A cofactor of tRNA synthetase, p43, is secreted to up-regulate proinflammatory genes. (2001) J Biol. chem. 276: 23028-23033) 세 번째로는 섬유아세포(fibroblast)를 증식시켜 피부 재생을 촉진시키며 (Park SG, et al The novel cytokine p43 stimulates dermal fibroblast proliferation and wound repair.(2005) Am J Pathol 166:387-398).당 대사의 조절에도 관여하여 췌장의 α세포에서 분비되어 글루카곤에 의한 혈당의 증가를 촉진시킨다(Park et al Hormonal activity of AIMP1/p43 for glucose homeostasis (2006) Proc. Natl. Acad. Sci. 40: 14913-14918). Aminoacyl-tRNA synthetase (ARS) is an enzyme that attaches a specific amino acid to its corresponding tRNA. In the case of higher organisms, it consists of 23 enzymes including three enzymes involved in the formation of multisynthetase complexes such as AIMP1 / p43 (p43), (AIMP2) p38 and (AIMP3) In addition to the enzymes involved, some also exist in free form. However, recently, it has been reported that besides its basic function, it has various other active functions in a specific environment. One of them is AIMP1 / p43 (ARS-interacting multifunctional protein 1). Binding multifunctional protein AIMP1 / p43 acts on RRS (arginyl-tRNA synthetase) to increase activity, and is secreted outside the cell to express cytokine, which is stimulated by TNF-α or heat shock. The secreted AIMP1 / p43 is involved in various functions. First, the function of angiogenesis is promoted by MMP-9-mediated angiogenesis at a low concentration. In contrast, at a high concentration, JNK signaling mediates angiogenesis (Park, SG et al. Dose-dependent biphasic activity of tRNA synthetase-associating factor, p43, in angiogenesis (2002) J Biol. Chem. 277: 45243-45248). In addition, AIMP1 / p43 is involved in immune activation and adhesion of immune cells by promoting ICAM-1, such as activation of macrophages (Ko, YG et al., Co-pact of tRNA synthetase, p43, is secreted to up-regulate proinflammatory (2001) J. Biol. Chem. 276: 23028-23033). Third, it promotes skin regeneration by proliferating fibroblasts (Park, SG, et al., The novel cytokine p43 stimulates dermal fibroblast proliferation and wound repair (2005) Am J Pathol 166: 387-398). It is also involved in the regulation of glucose metabolism and is secreted in the α-cells of the pancreas, thereby accelerating the increase of glucose by glucagon (Park et al Hormonal activity of AIMP1 / p43 for glucose homeostasis (2006) Proc. Natl. Acad Sci. 40: 14913-14918).

이와 같은 결과로 AIMP1/p43는 다양한 암 및 면역 질환의 혈청내에 존재 할 수 있으며 중요한 진단 바이오마커로 사용될 수 있음을 보여준다.As a result, AIMP1 / p43 can be present in serum of various cancer and immune diseases and can be used as an important diagnostic biomarker.

하지만 AIMP1/p43을 비롯한 ARS들에 대한 바이오마커로서의 중요성에도 불구하고 ARS들은 단백질 구조상 유사한 점이 많아 동물로부터 면역반응으로 얻어지는 항체는 다른 ARS에도 결합하는 교차 반응을 보이고 아예 고 감도의 항체가 생성되지 않은 경우가 많다. 본 발명의 항체는 우수한 감도와 ARS간 교차반응이 없는 점에서 연구용 뿐만 아니라 진단용 및 산업상 이용가능성이 높은 항체라 예상된다.
In spite of its importance as a biomarker for ARS including AIMP1 / p43, ARSs have similar structures in protein structure, so that antibodies obtained from an animal immunoreactively cross-react with other ARSs, There are many cases. The antibodies of the present invention are expected to be highly diagnostic and industrially applicable antibodies as well as for research because they lack excellent sensitivity and cross-reactivity between ARS.

본 발명자들은 AIMP1/p43에 특이적으로 결합하는 항체를 연구하던 중, 파지디스플레이 방법으로 만들어진 라이브러리에서 AIMP1/p43에 특이적으로 결합하는 단편들을 찾아내고, 이의 서열 및 결합특이성을 밝혀내어 본 발명을 완성하였다.
The present inventors investigated antibodies specifically binding to AIMP1 / p43, and found fragments specifically binding to AIMP1 / p43 in a library made by the phage display method, and their sequences and binding specificities were identified. Completed.

따라서 본 발명의 목적은 인간 AIMP1/p43에 결합하는 항체 또는 그 단편을 제공하는 것이다.
Accordingly, an object of the present invention is to provide an antibody or fragment thereof that binds human AIMP1 / p43.

본 발명의 다른 목적은 상기 항체 또는 그 단편을 암호화 하는 폴리뉴클레오티드를 제공하는 것이다.
Another object of the present invention is to provide a polynucleotide encoding said antibody or fragment thereof.

본 발명의 다른 목적은 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공하는 것이다.
Another object of the present invention is to provide a vector comprising the polynucleotide.

본 발명의 다른 목적은 상기 벡터를 포함하는 세포를 제공하는 것이다.
Another object of the present invention is to provide a cell comprising said vector.

본 발명의 다른 목적은 인간 AIMP1/p43에 결합하는 항체 또는 그 단편의 생산방법을 제공하는 것이다.
Another object of the present invention is to provide a method for producing an antibody or a fragment thereof binding to human AIMP1 / p43.

본 발명의 다른 목적은 항체 또는 그 단편을 시료와 접촉시키는 단계 및 상기 항체 또는 그 단편을 검출하는 단계를 포함하는 AIMP1/p43 특이적 검출 방법을 제공하는 것이다.
Another object of the present invention is to provide an AIMP1 / p43 specific detection method comprising contacting an antibody or a fragment thereof with a sample and detecting the antibody or fragment thereof.

본 발명의 다른 목적은 상기 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 암 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for treating cancer comprising the antibody or fragment thereof as an active ingredient.

본 발명의 다른 목적은 상기 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 암 진단용 조성물을 제공하는 것이다.
Another object of the present invention is to provide a composition for cancer diagnosis comprising the antibody or fragment thereof as an active ingredient.

본 발명의 다른 목적은 상기 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 염증성질환 진단용 조성물을 제공하는 것이다.
Another object of the present invention is to provide a composition for the diagnosis of inflammatory diseases comprising the above antibody or fragment thereof as an active ingredient.

상기의 목적을 달성하기 위해 본 발명은 i) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L1, 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L2, 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L3을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL) 및 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H1, 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H2, 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H3을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH)을 포함하는 항체; 및(CDR) L1 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a complementarity determining region (CDR) L2 including the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2, An antibody light chain variable region (VL) comprising a complementary crystal region (CDR) L3 comprising an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 and a complementary crystal region (CDR) H1 comprising an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: An antibody heavy chain variable region (VH) comprising a complementary crystal region (CDR) H2 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, and a complementary crystal region (CDR) H3 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6; And

ii) 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L1, 서열번호 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L2, 서열번호 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L3을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL) 및 서열번호 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H1, 서열번호 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H2, 서열번호 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H3을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH)을 포함하는 항체;ii) a complementarity determining region (CDR) L1 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15, a complementarity determining region (CDR) L2 including the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 16, and an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: An antibody light chain variable region (VL) comprising the complementarity determining region (CDR) L3 and a complementary crystal region (CDR) H1 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 18, a complementary region comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 An antibody heavy chain variable region (VH) comprising a crystal region (CDR) H2, a complementary crystal region (CDR) H3 comprising an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 20;

로 이루어지는 군에서 선택된 인간 AIMP1/p43에 결합하는 항체 또는 그 단편을 제공한다.
Lt; RTI ID = 0.0 > AIMP1 / p43 < / RTI >

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위해 본 발명은 상기 항체 또는 그 단편을 암호화 하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
In order to achieve another object of the present invention, the present invention provides a polynucleotide encoding said antibody or fragment thereof.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위해 본 발명은 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다.
In order to achieve another object of the present invention, the present invention provides a vector comprising the polynucleotide.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위해 본 발명은 상기 벡터를 포함하는 세포를 제공한다.
In order to achieve another object of the present invention, the present invention provides a cell comprising the vector.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위해 본 발명은 상기 세포를 폴리뉴클레오티드가 발현되는 조건하에서 배양하여, 경쇄 및 중쇄가변영역을 포함하는 폴리펩타이드를 생산하는 단계 및 상기 세포 또는 이를 배양한 배양 배지로부터 상기 폴리펩타이드를 회수하는 단계를 포함하는 인간 AIMP1/p43에 결합하는 항체 또는 그 단편의 생산방법을 제공한다.
In order to accomplish another object of the present invention, the present invention provides a method for producing a polypeptide comprising the steps of: culturing the above cells under a condition that a polynucleotide is expressed to produce a polypeptide comprising a light chain and a heavy chain variable region; And recovering the polypeptide. The present invention also provides a method for producing an antibody or a fragment thereof that binds to human AIMP1 / p43.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위해 본 발명은 항체 또는 그 단편을 시료와 접촉시키는 단계 및 상기 항체 또는 그 단편을 검출하는 단계를 포함하는 AIMP1/p43 특이적 검출 방법을 제공한다.
In order to achieve another object of the present invention, there is provided an AIMP1 / p43 specific detection method comprising contacting an antibody or a fragment thereof with a sample and detecting the antibody or fragment thereof.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위해 본 발명은 상기 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 암 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
In order to accomplish another object of the present invention, the present invention provides a pharmaceutical composition for treating cancer comprising the antibody or fragment thereof as an active ingredient.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위해 본 발명은 상기 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 암 진단용 조성물을 제공한다.
In order to achieve another object of the present invention, the present invention provides a composition for diagnosing cancer comprising the antibody or fragment thereof as an active ingredient.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위해 본 발명은 상기 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 염증성질환 진단용 조성물을 제공한다.
In order to accomplish still another object of the present invention, there is provided a composition for the diagnosis of inflammatory diseases comprising the antibody or fragment thereof as an active ingredient.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 i) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L1, 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L2, 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L3을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL) 및 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H1, 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H2, 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H3을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH)을 포함하는 항체; 및(CDR) L1 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a complementarity determining region (CDR) L2 including the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2, an amino acid represented by SEQ ID NO: An antibody light chain variable region (VL) comprising a complementary crystal region (CDR) L3 comprising a sequence and a complementary crystal region (CDR) H1 comprising an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 4, an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 An antibody heavy chain variable region (VH) comprising a complementarity determining region (CDR) H2 comprising the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 6 and a complementary crystal region (CDR) H3 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6; And

ii) 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L1, 서열번호 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L2, 서열번호 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L3을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL) 및 서열번호 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H1, 서열번호 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H2, 서열번호 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H3을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH)을 포함하는 항체;ii) a complementarity determining region (CDR) L1 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15, a complementarity determining region (CDR) L2 including the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 16, and an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: An antibody light chain variable region (VL) comprising the complementarity determining region (CDR) L3 and a complementary crystal region (CDR) H1 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 18, a complementary region comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 An antibody heavy chain variable region (VH) comprising a crystal region (CDR) H2, a complementary crystal region (CDR) H3 comprising an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 20;

로 이루어지는 군에서 선택된 인간 AIMP1/p43에 결합하는 항체 또는 그 단편을 제공한다.
Lt; RTI ID = 0.0 > AIMP1 / p43 < / RTI >

결합 다기능 단백질 AIMP1/p43 (ARS-interacting multifunctional protein 1)은 multi-ARS (aminoacyl-tRNA synthetase) complex를 형성하는 보조인자중 처음 발견된 인자이며 적어도 9 종류의 ARS가 복합체를 이루는데 관여한다. 본 발명의 AIMP1/p43는 일반적으로 천연형 또는 재조합 인간 AIMP1/p43, 및 인간 AIMP1/p43의 비-인간 동족체를 나타낸다.
The multifunctional protein AIMP1 / p43 (ARS-interacting multifunctional protein 1) is the first of the cofactors forming the multi-ARS (aminoacyl-tRNA synthetase) complex and is involved in the formation of at least nine ARS complexes. AIMP1 / p43 of the present invention generally represents a native or recombinant human AIMP1 / p43, and a non-human homolog of human AIMP1 / p43.

"항체", "항 AIMP1/p43 항체", "인간화 항 AIMP1/p43 항체" 및 "변형 인간화 항 AIMP1/p43 항체", "anti-AIMP1/p43 antibody"라는 용어는 본 발명에서 가장 광의의 의미로 사용되며, 구체적으로 단일클론 항체(모노클로날 항체, 완전 길이 단일클론 항체 포함), 다클론 항체(폴리클로날 항체), 다중특이 항체(예를 들어 이중특이 항체), 및 항체 단편(예를 들어 가변 영역 및 목적하는 생물 활성(예를 들어 AIMP1/p43와의 결합)을 나타내는 항체의 다른 부분)을 포함한다.
The term "antibody", "anti-AIMP1 / p43 antibody", "humanized anti-AIMP1 / p43 antibody" and "modified humanization anti- AIMP1 / p43 antibody" and "anti- AIMP1 / p43 antibody" (Polyclonal antibody), a multispecific antibody (e. G., A bispecific antibody), and an antibody fragment (e. G., A monoclonal antibody, including a full length monoclonal antibody) And other portions of the antibody that exhibit the desired biological activity (e. G., Binding to AIMP1 / p43).

본 발명의 항체는 AIMP1/p43와 선택적으로 결합할 수 있도록 특정 아미노산 서열이 경쇄 및 중쇄 CDR에 포함되어 있는 항체로 모노클로날 항체 및 폴리클로날 항체를 모두 포함하며, 바람직하게는 모노클로날 항체일 수 있다. 또한 본 발명의 항체는 키메라 항체, 인간화된 항체, 인간항체를 모두 포함하며 바람직하게는 인간항체 일 수 있다.
The antibody of the present invention is an antibody in which a specific amino acid sequence is contained in a light chain and a heavy chain CDR so as to be capable of selectively binding to AIMP1 / p43, and includes both a monoclonal antibody and a polyclonal antibody, preferably a monoclonal antibody Lt; / RTI > In addition, the antibody of the present invention includes both a chimeric antibody, a humanized antibody, and a human antibody, and may preferably be a human antibody.

본 발명의 모노클로날 항체는 실질적으로 동질 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 나타내며, 즉, 집단을 구성하는 개개의 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연적으로 존재하는 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 단일 항원 에피토프에 매우 특이적으로 결합한다.A monoclonal antibody of the invention refers to an antibody obtained from a population of substantially homogeneous antibodies, i.e., the individual antibodies comprising the population are identical except for possible naturally occurring mutations that may be present in minor amounts. Monoclonal antibodies bind to single antigen epitopes very specifically.

"모노클로날"이라는 말은 항체가 실질적인 상동성 집단으로부터 수득되는 것과 같이 항체의 특성을 나타내는 말이며, 반드시 항체를 특정 방법에 의해 생산해야 한다는 것은 아니다.The term "monoclonal" refers to the character of an antibody, such as an antibody is obtained from a substantial homologous population, and does not necessarily mean that the antibody has to be produced by a particular method.

예를 들어, 본 발명의 모노클로날 항체는 문헌[참조: Kohler et al. (1975) Nature 256: 495]에 처음 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조할 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법(참조: 미국 특허 제4,816,567호)에 의해 제조할 수 있다. 또한, 예를 들어, 문헌[참조: Clackson et al. (1991) Nature 352: 624-628 및 Marks et al. (1991) J. Mol. Biol. 222: 581-597 및 Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116:731]에 기술된 기술을 사용하여 파아지 항체 라이브러리로부터 분리할 수 있다.For example, the monoclonal antibodies of the present invention can be prepared as described in Kohler et al. (1975) Nature 256: 495, or may be prepared by recombinant DNA methods (see U.S. Patent No. 4,816,567). See also, for example, Clackson et al. (1991) Nature 352: 624-628 and Marks et al. (1991) J. Mol. Biol. 222: 581-597 and Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116: 731). ≪ / RTI >

본 발명의 항체는 구체적으로 키메라 항체를 포함하며, 이 경우 중쇄 및/또는 경쇄의 일부는 특정 종으로부터 기원하거나 또는 특정 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성을 보이지만, 나머지 부분은 본 발명의 항체가 바람직한 생물학적 활성(예를 들어 AIMP1/p43와의 선택적 결합)을 나타내는 한, 다른 종으로부터 기원하거나 또는 다른 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성을 나타내는 것이어도 무방하다[참조: 미국 특허 제4,816,567호; 및 Morrison et al., (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855].The antibody of the present invention specifically includes a chimeric antibody, wherein a portion of the heavy chain and / or light chain originates from a particular species or is homologous or homologous to the corresponding sequence of a particular antibody, May be of another species or may be identical or homologous to the corresponding sequence of another antibody as long as it exhibits the desired biological activity (e. G., Selective binding to AIMP1 / p43) (see U.S. Patent No. 4,816,567 ; And Morrison et al., (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855].

인간화된 항체는 인간 및 비-인간(예: 쥐, 랫트) 항체의 서열을 모두 포함하는 항체로 일반적으로, 에피토프와 결합하는 부위(CDR)을 제외한 나머지 부분은 인간 항체의 것이며, 에피토프와 결합하는 부위(CDR)는 비-인간 유래의 서열을 포함할 수 있다.Humanized antibodies are antibodies that include both human and non-human (e.g., rat, rat) antibodies. Generally, the remainder of the epitope binding site (CDR) is of human antibodies, (CDR) may comprise a non-human derived sequence.

완전한 인간항체는 사람 면역글로불린 단백질 서열만을 포함하는 항체를 말하며, 마우스, 마우스 세포, 또는 마우스 세포로부터 기원한 하이브리도마에서 생산하거나, 파지 디스플레이 방법으로 생산할 수 있다.
A complete human antibody refers to an antibody comprising only a human immunoglobulin protein sequence and can be produced in a hybridoma originating from a mouse, mouse cell, or mouse cell, or produced by a phage display method.

생체에서 생산되는 천연 항체는 통상적으로, 2개의 동일한 경쇄 (L)와 2개의 동일한 중쇄 (H)로 구성된, 약 150,000 달톤의 이종-사량체성 당단백질이다. 각 경쇄는 1개의 공유 디설파이드 결합에 의해 중쇄와 연결되지만, 디설파이드 연쇄수는 상이한 면역글로불린 이소형의 중쇄들 간에 다양하다. 각 중쇄 및 경쇄는 규칙적으로 이격된 쇄내 디설파이드 브릿지를 또한 갖고 있다. 각 중쇄는 한 말단에 가변 도메인(VH)에 이어 수 많은 불변 도메인을 갖는다. 각 경쇄는 한 말단에 가변 도메인(VL)을 갖고, 그의 다른 말단에 불변 도메인을 갖는데; 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인과 정렬되고, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬된다. 특별한 아미노산 잔기가 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인 간에 계면을 형성하는 것으로 여겨진다.Natural antibodies produced in vivo are typically about 150,000 daltons, heterotetrameric glycoproteins, consisting of two identical light chains (L) and two identical heavy chains (H). Each light chain is linked to the heavy chain by one covalent disulfide bond, but the disulfide chain number varies between the heavy chains of the different immunoglobulin isoforms. Each heavy and light chain also has regularly spaced intra-chain disulfide bridges. Each heavy chain has a variable domain (VH) followed by a number of constant domains at one end. Each light chain has a variable domain (VL) at one end and a constant domain at the other end; The constant domain of the light chain is aligned with the first constant domain of the heavy chain and the light chain variable domain is aligned with the variable domain of the heavy chain. It is believed that a particular amino acid residue forms an interface between the light chain variable domain and the heavy chain variable domain.

항체의 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노-말단 도메인을 지칭한다. 중쇄의 가변 영역은 "VH" 또는"VH"로 기재하며, 경쇄의 가변 영역은 "VL" 또는 "VL"로 기재한다. 이들 도메인은 일반적으로, 항체의 가장 가변 부분이고, 항원 결합 부위를 포함한다.
"Variable domain" or "variable domain" of an antibody refers to the amino-terminal domain of the heavy or light chain of the antibody. The variable region of the heavy chain is referred to as "VH" or "V H ", and the variable region of the light chain is referred to as "VL" or "V L ". These domains are generally the most variable part of the antibody and comprise an antigen binding site.

"초가변성 (hypervariable)"이란 용어는 상기 가변 영역 내의 몇몇 서열들이 항체들간 서열에 있어서 광범위하게 상이하며 그의 특이적인 항원 결정인자들에 대한 각각의 특정 항체의 결합 및 특이성에 직접적으로 관련되는 잔기들을 포함한다는 사실을 지칭한다.The term " hypervariable "means that some of the sequences in the variable region are broadly different in sequence between the antibodies and have residues that are directly related to the binding and specificity of each particular antibody to its specific antigenic determinants .

경쇄 및 중쇄 가변 영역 모두에 있어서 초가변성은 상보성 결정부위(CDR) 또는 초가변성 루프(HVL)로서 공지된 3 개의 분절들에 집중된다. CDR은 문헌 [Kabat 등, 1991, In: Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD.]에서의 서열 비교에 의해 한정되는 반면, HVL은 문헌 [Chothia and Le나 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917]에 개시된 바와 같이, 상기 가변 영역의 3 차원 구조에 따라 구조적으로 한정된다. 카바트 (Kabat)에 의해 한정된 바와 같이, CDR-L1은 경쇄 가변 영역에서 대략 잔기 24-34에, CDR-L2는 대략 잔기 50-56에, CDRL3은 대략 잔기 89-97에 위치하며; CDR-H1은 중쇄 가변 영역에서 대략 잔기 31-35에, CDR-H2는 대략 잔기 50-65에, CDR-H3은 대략 잔기 95-102에 위치한다.In both the light chain and heavy chain variable regions, the hypervariability is focused on three segments known as complementarity determining regions (CDRs) or hypervariable loops (HVLs). CDRs are described in Kabat et al., 1991, In: Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. HVL has been described by Chothia and Le et al., 1987, J. MoI., ≪ RTI ID = 0.0 > Biol. 196: 901-917, which is structurally defined according to the three-dimensional structure of the variable region. As defined by Kabat, CDR-L1 is located approximately at residues 24-34 in the light chain variable region, CDR-L2 is approximately at residues 50-56, CDRL3 is approximately at residues 89-97; CDR-H1 is located approximately at residues 31-35 in the heavy chain variable region, CDR-H2 at approximately residues 50-65, and CDR-H3 at approximately residues 95-102.

상기 중쇄 및 경쇄 각각 내의 3 개의 CDR들은 틀 부위 (FR)에 의해 분리되며, 상기 부위는 덜 가변적인 경향이 있는 서열들을 포함한다. 상기 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 아미노 말단에서부터 카복시 말단까지, 상기 FR 및 CDR은 하기의 순서로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4. 상기 FR의 큰 β 시트 배치는 상기 각각의 쇄 내부의 CDR을 서로뿐만 아니라 다른 쇄로부터의 CDR에 가깝게 한다. 생성되는 형태는 항원 결합 부위에 기여하지만 (Kabat 등, 1991, NIH Publ. No. 91-3242, Vol. I, pages 647-669 참조), 모든 CDR 잔기들이 항원 결합에 직접 관여할 필요는 없다.The three CDRs in each of the heavy and light chains are separated by a framework region (FR), which includes sequences that tend to be less variable. From the amino terminus to the carboxy terminus of the heavy and light chain variable regions, the FRs and CDRs are arranged in the following order: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 and FR4. The large < RTI ID = 0.0 > ss < / RTI > sheet arrangement of FRs brings the CDRs within each chain closer to each other as well as to the CDRs from the other strands. The form produced contributes to the antigen binding site (see Kabat et al., 1991, NIH Publ. No. 91-3242, Vol. I, pages 647-669), but not all CDR residues need to be directly involved in antigen binding.

본 발명의 항체는 경쇄 및 중쇄 가변영역에 속하는 각 CDR이 각각 특정 서열을 포함하여, AIMP1/p43와 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하며, 구체적으로 본 발명의 항체는 i) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L1, 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L2, 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L3을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL) 및 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H1, 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H2, 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H3을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH)을 포함하는 항체;The antibody of the present invention is characterized in that each CDR belonging to the light chain variable region and the heavy chain variable region includes a specific sequence and specifically binds to AIMP1 / p43. Specifically, the antibody of the present invention comprises i) A complementarity determining region (CDR) L1 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2, a complementarity determining region (CDR) L2 including the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2, (CDR) H1 comprising an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 4, a complementary crystal region (CDR) H2 comprising an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5, an antibody light chain variable region An antibody comprising an antibody heavy chain variable region (VH) comprising a complementary crystal region (CDR) H3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6;

ii) 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L1, 서열번호 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L2, 서열번호 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L3을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL) 및 서열번호 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H1, 서열번호 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H2, 서열번호 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H3을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH)을 포함하는 항체로 이루어진 군에서 선택된 항체일 수 있다.
ii) a complementarity determining region (CDR) L1 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15, a complementarity determining region (CDR) L2 including the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 16, and an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: An antibody light chain variable region (VL) comprising the complementarity determining region (CDR) L3 and a complementary crystal region (CDR) H1 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 18, a complementary region comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 An antibody comprising an antibody heavy chain variable region (VH) comprising a crystal region (CDR) H2 and a complementary crystal region (CDR) H3 comprising an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 20.

본 발명의 항체는 바람직하게는 특정 경쇄가변영역 및 중쇄가변영역을 포함할 수 있으며, 구체적으로 i) 경쇄가변영역으로 서열번호 13의 138 번째 내지 247 번째 아미노산 서열을 포함하며, 중쇄가변영역으로 서열번호 13의 1 번째 내지 122 번째 아미노산 서열을 포함하는 항체; 또는 ii) 경쇄가변영역으로 서열번호 27의 143 번째 내지 252 번째 아미노산 서열을 포함하며, 중쇄가변영역으로 서열번호 27의 1 번째 내지 127 번째 아미노산 서열을 포함하는 항체 일 수 있다.
The antibody of the present invention may preferably comprise a specific light chain variable region and a heavy chain variable region, and specifically includes i) a light chain variable region comprising the 138th to 247th amino acid sequence of SEQ ID NO: 13, An antibody comprising a first to 122nd amino acid sequence of SEQ ID NO: 13; Or ii) an antibody comprising the 143th to 252nd amino acid sequence of SEQ ID NO: 27 as the light chain variable region and the 1 st to 127nd amino acid sequence of SEQ ID NO: 27 as the heavy chain variable region.

본 발명의 항체는 가장 바람직하게는 서열번호 13 및 서열번호 27 로 이루어진 군에서 선택된 서열번호로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 항체일 수 있다.
The antibody of the present invention may most preferably be an antibody comprising an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13 and SEQ ID NO: 27.

본 발명의 항체 단편, 단편 또는 “그 단편”은 모 항체의 결합 특이성의 적어도 일부를 보유하는, 전형적으로 적어도 모 항체의 항원 결합의 일부 또는 가변 영역(예를 들어, 하나 이상의 CDR)를 포함하는 항체의 단편 또는 유도체를 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체; 일본쇄(single-chain) 항체 분자, 예를 들어, sc-Fv; 및 항체 단편으로부터 형성된 다특이적 항체를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 전형적으로, 항체 단편 또는 유도체는 해당 활성이 몰 기준으로 표현되는 경우 이의 AIMP1/p43 결합 활성의 10% 이상을 보유한다. 바람직하게는, 항체 단편 또는 유도체는 모 항체로서의 AIMP1/p43 결합 친화도의 적어도 20%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 100% 또는 그 이상을 보유한다. 또한, AIMP1/p43 항체 단편은 이의 생물학적 활성을 실질적으로 변경하지 않는 보존적 아미노산 치환(항체의 보존적 변이체라고 함)을 포함할 수 있다. 본 발명의 "결합 화합물"은 항체 및 그 단편 둘 다를 나타낸다.An antibody fragment, fragment or " fragment thereof " of the invention comprises at least a portion or variable region (e.g., one or more CDRs) of antigen binding, typically at least of the parent antibody, that retains at least a portion of the binding specificity of the parent antibody Fragments or derivatives of antibodies. Examples of antibody fragments include Fab, Fab ', F (ab') 2 and Fv fragments; Diabody; Linear antibodies; Single-chain antibody molecules, such as sc-Fv; And multispecific antibodies formed from antibody fragments. Typically, an antibody fragment or derivative retains at least 10% of its AIMP1 / p43 binding activity when the activity is expressed on a molar basis. Preferably, the antibody fragment or derivative retains at least 20%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95% or 100% or more of the AIMP1 / p43 binding affinity as the parent antibody. In addition, the AIMP1 / p43 antibody fragment may contain conservative amino acid substitutions (referred to as conservative variants of the antibody) that do not substantially alter its biological activity. "Binding compounds" of the present invention refer to both antibodies and fragments thereof.

Fab는 하나의 경쇄, 및 하나의 중쇄의 CH1(제1 불변 도메인) 및 가변 영역으로 이루어진다. Fab 분자의 중쇄는 다른 중쇄 분자와 디설파이드 결합을 형성할 수 없다.Fab consists of one light chain, and one heavy chain CH1 (first constant domain) and variable region. The heavy chain of a Fab molecule can not form a disulfide bond with another heavy chain molecule.

Fc 영역은 항체의 CH1 및 CH2 도메인을 포함하는 두 개의 중쇄 단편을 함유한다. 두 개의 중쇄 단편은 두 개 이상의 디설파이드 결합에 의해 및 CH3 도메인의 소수성 상호작용에 의해 함께 유지된다.The Fc region contains two heavy chain fragments comprising the CH1 and CH2 domains of the antibody. The two heavy chain fragments are held together by two or more disulfide bonds and by the hydrophobic interaction of the CH3 domain.

Fab'은 하나의 경쇄, 및 VH 도메인과 CH1 도메인 및 CH1과 CH2 도메인 사이의 영역을 함유하여 쇄내디설파이드 결합이 두 개의 Fab' 단편의 두 개의 중쇄 사이에 형성되어 F(ab')2 분자를 형성하도록 하는 하나의 중쇄의 일부를 함유한다.Fab 'contains one light chain, and a region between the VH and CH1 domains and the CH1 and CH2 domains, so that intrachain disulfide bonds are formed between the two heavy chains of the two Fab' fragments to form F (ab ') 2 molecules Lt; RTI ID = 0.0 > a < / RTI > heavy chain.

F(ab')2는 두 개의 경쇄, 및 쇄내 디설파이드 결합이 두 개의 중쇄 사이에 형성되도록 CH1 및 CH2 도메인 사이의 고정 영역의 일부를 함유하는 두 개의 중쇄를 함유한다. 따라서, F(ab')2 단편은 두 개의 중쇄 사이의 디설파이드 결합에 의해 함께 유지되는 두 개의 Fab' 단편으로 이루어진다.F (ab ') 2 contains two light chains, and two heavy chains containing a portion of the immobilized region between the CH1 and CH2 domains such that an intrachain disulfide bond is formed between the two heavy chains. Thus, the F (ab ') 2 fragment consists of two Fab' fragments that are held together by a disulfide bond between the two heavy chains.

Fv는 중쇄와 경쇄 가변 영역을 모두 포함하지만, 고정 영역이 결여되어 있는 항체 단편이다.Fv is an antibody fragment that contains both heavy and light chain variable regions but lacks a fixed region.

일본쇄(single-chain) Fv 또는 scFv는 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하는 항체 단편을 나타내며, 여기서, 이들 도메인은 단일 폴리펩타이드 쇄내에 존재한다. 일반적으로, Fv 폴리펩타이드는 scFv가 항원 결합을 위해 바람직한 구조를 형성하도록 하는, VH 및 VL 도메인 사이의 폴리펩타이드 링커를 추가로 포함한다. scFv의 개요에 대해서는 문헌[참조: Pluckthun (1994) THE PHARMACOLOGY OF MONOCLONAL ANTIBODIES, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315]을 참조한다. 또한, 국제 특허 공개공보 제WO 88/01649호 및 미국 특허 제4,946,778호 및 제5,260,203호를 참조한다.A single-chain Fv or scFv represents an antibody fragment comprising the VH and VL domains of an antibody, wherein these domains are present in a single polypeptide chain. Generally, the Fv polypeptide further comprises a polypeptide linker between the VH and VL domains such that the scFv forms a preferred structure for antigen binding. For an overview of scFv, see Pluckthun (1994) THE PHARMACOLOGY OF MONOCLONAL ANTIBODIES, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315. See also International Patent Publication No. WO 88/01649 and U.S. Patent Nos. 4,946,778 and 5,260,203.

디아바디는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 작은 항체 단편을 의미하며, 여기서 단편은 동일한 폴리펩티드쇄에서 경쇄 가변 도메인 (VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (VH) (VH-VL)을 포함한다. 동일 쇄 상의 2개 도메인 사이에 페어링을 허용하지 않는 짧은 링커를 사용하여, 도메인을 다른 쇄의 상보성 도메인과 강제로 페어링시켜 2개의 항원-결합 부위를 생성시킨다. 디아바디는, 예를 들어 유럽 특허 제404,097호; WO 93/11161; 및 문헌 [Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)]에 보다 상세히 기재되어 있다.Diabody refers to small antibody fragments having two antigen-binding sites, wherein the fragment comprises a heavy chain variable domain (VH) (VH-VL) linked to a light chain variable domain (VL) in the same polypeptide chain. Using short linkers that do not allow pairing between two domains on the same chain, the domains are forcedly paired with the complementary domains of the other chain to generate two antigen-binding sites. Diabodies are described, for example, in EP 404,097; WO 93/11161; And Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993).

선형 항체는 한 쌍의 항원 결합 부위를 형성하는 한 쌍의 직렬 Fd 단편 (VH-CH1-VH-CH1)을 포함하는 항체를 지칭한다. 선형 항체는 예를 들어 문헌 [Zapata 등 1995, Protein Eng. 8 (10):1057-1062]에 개시된 바와 같이 이중특이적 또는 단일특이적일 수 있다.
A linear antibody refers to an antibody comprising a pair of series Fd fragments (VH-CHl-VH-CHl) that form a pair of antigen binding sites. Linear antibodies are described, for example, in Zapata et al. 1995, Protein Eng. 8 (10): < RTI ID = 0.0 > 1057-1062. ≪ / RTI >

"도메인 항체"는 중쇄의 가변 영역 또는 경쇄의 가변 영역만을 함유하는 면역 기능성 면역글로불린 단편이다.A "domain antibody" is an immunologically functional immunoglobulin fragment that contains only the variable region of the heavy chain or the variable region of the light chain.

몇몇 예에서, 두 개 이상의 VH 영역은 펩타이드 링커와 공유결합하여 2가 도메인 항체를 생성한다. 2가 도메인 항체의 두 개의 VH 영역은 동일하거나 상이한 항원을 표적화할 수 있다.In some instances, two or more VH regions are covalently linked to a peptide linker to produce a divalent domain antibody. The two VH regions of the divalent domain antibody can target the same or different antigens.

2가 항체는 두 개의 항원 결합 영역을 포함한다. 몇몇 예에서, 두 개의 결합 영역은 동일한 항원 특이성을 갖는다. 그러나, 2가 항체는 이특이적(bispecific)일 수 있다.
The bivalent antibody comprises two antigen binding sites. In some instances, the two binding regions have the same antigen specificity. However, the bivalent antibody may be bispecific.

본 발명의 항체 또는 그 단편은 당업계에 알려져 있는 방법, 예를 들어, 파지 디스플레이 방법 또는 효모 세포 표면 발현 시스템을 사용하여 생성될 수 있다. scFv를 제조하는 방법으로는 미국특허 제 4,946,778호 및 제 5,258,498호에 기재된 방법이 사용될 수 있으며, Fab, Fab' 및 F(ab')2 단편을 재조합적으로 생성하기 위한 방법으로는 WO 92/22324 등에 기재된 방법이 사용될 수 있다.
The antibody or fragment thereof of the present invention can be produced by a method known in the art, for example, a phage display method or a yeast cell surface expression system. The scFv may be prepared by the methods described in U.S. Patent Nos. 4,946,778 and 5,258,498, and methods for recombinantly producing Fab, Fab 'and F (ab') 2 fragments include WO 92/22324 And the like can be used.

본 발명의 항체는 인간을 포함하는 포유동물, 조류 등을 포함한 임의의 동물로부터 유래한 것일 수 있다. 바람직하게는, 상기 항체는 인간, 생쥐, 당나귀, 양, 토끼, 염소, 기니피그, 낙타, 말 또는 닭의 항체일 수 있다.The antibody of the present invention may be derived from any animal including mammals including humans, birds, and the like. Preferably, the antibody may be an antibody of a human, a mouse, a donkey, a sheep, a rabbit, a goat, a guinea pig, a camel, a horse or a chicken.

인간 항체는 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 가진 항체로서, 인간 면역글로불린 라이브러리로부터 분리된 항체 또는 하나 이상의 인간 면역글로불린에 대하여 형질 이식되고 내재적 면역글로불린은 발현하지 않는 동물로부터 분리된 항체가 포함된다(미국특허 제 5,939,598호 참조).A human antibody is an antibody having the amino acid sequence of a human immunoglobulin, including an antibody isolated from a human immunoglobulin library or an antibody isolated from an animal that is transgenic for one or more human immunoglobulin and does not express an endogenous immunoglobulin See Patent No. 5,939,598).

본 발명의 항체는 효소, 형광 물질, 방사선 물질 및 단백질 등과 접합된 것일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 또한, 항체에 상기 물질을 접합하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다.
The antibody of the present invention may be conjugated with an enzyme, a fluorescent substance, a radioactive substance and a protein, but is not limited thereto. Methods of conjugating such materials to antibodies are also well known in the art.

본 발명은 또한 상기한 바와 같은 본 발명에 따른 항체 또는 그 단편을 암호화 하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.The present invention also provides a polynucleotide encoding the antibody or fragment thereof according to the present invention as described above.

폴리뉴클레오티드는 올리고뉴클레오티드 또는 핵산으로 기재될 수도 있으며, DNA분자들(예를 들어, cDNA 또는 유전체(genomic DNA), RNA 분자들(예를 들어, mRNA), 뉴클레오티드 유사체들을 사용하여 생성된 상기 DNA 또는 RNA의 유사체들(예를 들어, 펩티드 핵산들 및 비-자연적으로 발생하는 뉴클레오티드 유사체들) 및 이들의 하이브리드들이 포함된다. 상기 폴리뉴클레오티드는 단일-가닥(single-stranded) 또는 이중-가닥(double-stranded)이 될 수 있다.
Polynucleotides may be described as oligonucleotides or nucleic acids and may be described as DNA molecules (e.g., cDNA or genomic DNA, RNA molecules (e.g., mRNA), DNA generated using nucleotide analogs (E. G., Peptide nucleic acids and non-naturally occurring nucleotide analogs) and hybrids thereof. The polynucleotides may be single-stranded or double- stranded.

본 발명의 폴리뉴클레오티드는 본 발명의 항체 또는 그 단편을 암호화하는 것이면, 그 서열이 특별히 제한되지 아니하나 바람직하게는 The polynucleotide of the present invention is not particularly limited as far as it encodes the antibody or fragment thereof of the present invention,

i) 서열번호 7 내지 12로 표시되는 폴리뉴클레오티드; 및i) a polynucleotide represented by SEQ ID NO: 7 to 12; And

ii) 서열번호 21 내지 26으로 표시되는 폴리뉴클레오티드; ii) a polynucleotide represented by SEQ ID NOs: 21 to 26;

로 이루어진 군에서 선택된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것일 수 있다. ≪ RTI ID = 0.0 > polynucleotides < / RTI >

본 발명의 항체 또는 그 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 당업계에 잘 알려진 방법에 의하여 얻어질 수 있다. 예를 들어, 상기 항체의 중쇄 및 경쇄의 일부분 또는 전부를 코딩하는 DNA 서열 또는 해당 아미노산 서열에 근거하여, 당분야에 잘 알려진 올리고뉴클레오타이드 합성기법, 예를 들어 중합효소 연쇄 반응 (PCR)법 등을 사용하여 합성할 수 있다.
Polynucleotides encoding the antibodies or fragments thereof of the present invention can be obtained by methods well known in the art. For example, an oligonucleotide synthesis technique well known in the art, for example, a polymerase chain reaction (PCR), or the like may be used based on a DNA sequence or a corresponding amino acid sequence encoding a part or all of the heavy chain and light chain of the antibody . ≪ / RTI >

또한 본 발명은 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다.The present invention also provides a vector comprising the polynucleotide.

본 발명의 벡터는 본 발명의 항체 또는 그 단편의 재조합 생산을 위하여 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 복제 또는 발현의 목적으로 이용되며, 일반적으로 시그날 서열, 복제 기원, 하나 이상의 마커 유전자, 인핸서 요소, 프로모터 및 전사 종결 서열 중 하나 이상을 포함한다.The vector of the present invention is used for the purpose of cloning or expression of the polynucleotide of the present invention for recombinant production of the antibody or fragment thereof of the present invention and is generally composed of a signal sequence, a replication origin, one or more marker genes, an enhancer element, And a transcription termination sequence.

본 발명의 벡터는 바람직하게는 발현벡터일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 조절시퀀스, 예를 들어 프로모터에 작동 가능하게 연결된 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터일 수 있다.The vector of the present invention may preferably be an expression vector, and more preferably, may be a vector comprising a polynucleotide of the present invention operably linked to a regulatory sequence, for example, a promoter.

벡터의 일종인 플라스미드(plasmid)는 외부의 폴리뉴클레오티드 단편들이 결합될 수 있는 선형 또는 원형의 이중 나선의 DNA 분자를 의미한다. 벡터의 다른 형태는 바이러스성 벡터(viral vector ; 예를 들어, 복제-결핍 레트로바이러스(replication defective retroviruses), 아데노바이러스들 및 아데노-연관 바이러스들(adenoassociated viruses))이며, 여기에서 부가의 DNA 단편들은 상기 바이러스성 게놈(viral genome) 내로 도입될 수 있다. 특정의 벡터들은 그 안으로 이들이 도입되는 숙주세포(예를 들어, 박테리아 유래(bacterial origin) 및 에피좀의 포유류 벡터(episomal mammalian vectors)를 포함하는 박테리아성 벡터들(bacterial vectors)) 내에서의 자가복제(autonomous replication)를 할 수 있다. 다른 벡터들(예를 들어, 비-에피좀의 포유동물 벡터들(non-episomal mammalian vectors))이 숙주세포 내로의 도입에 의한 숙주세포의 게놈 내로 통합(integrated)되고 그리고 그에 의하여 상기 숙주 게놈과 함께 복제된다.A plasmid, a type of vector, refers to a linear or circular double stranded DNA molecule to which external polynucleotide fragments can be ligated. Other forms of vectors are viral vectors (e. G., Replication defective retroviruses, adenoviruses and adenoassociated viruses), where additional DNA fragments Can be introduced into the viral genome. Certain vectors may be self-replicating within the host cells into which they are introduced (e.g., bacterial origin including bacterial origin and episomal mammalian vectors) (autonomous replication). Other vectors (e. G., Non-episomal mammalian vectors) are integrated into the genome of the host cell by introduction into the host cell, Are duplicated together.

발현벡터(expression vector)는 선택된 폴리뉴클레오티드의 발현할 수 있는 벡터의 한 형태이다. 하나의 폴리뉴클레오티드 시퀀스는, 조절 시퀀스가 상기 폴리뉴클레오티드 시퀀스의 발현(예를 들어, 수준, 타이밍 또는 발현의 위치)에 영향을 주는 경우, 상기 조절 시퀀스(regulatory sequence)에 "작동가능하게 연결"된다. 상기 조절 시퀀스는 그것이 작동가능하게 연결되는 핵산의 발현(예를 들어, 수준, 타이밍 또는 발현의 위치)에 영향을 주는 서열이다. 상기 조절 시퀀스는, 예를 들어, 조절된 핵산에 직접적으로 또는 하나 또는 그 이상의 다른 분자들(예를 들어, 상기 조절 시퀀스 및/또는 상기 핵산에 결합하는 폴리펩티드들)의 작용을 통하여 그의 영향이 미치도록 할 수 있다. 상기 조절 시퀀스에는 프로모터(promoters), 인핸서(enhancers) 및 다른 발현 조절 요소들이 포함된다. 본 발명의 벡터는 바람직하게는 SfiI site에 scFv Insert가 포함된 pCom3x (phagmid) vector일 수 있다.
An expression vector is a form of a vector capable of expressing a selected polynucleotide. One polynucleotide sequence is "operably linked" to the regulatory sequence when the regulatory sequence affects the expression (e.g., level, timing, or location of expression) of the polynucleotide sequence . The modulatory sequence is a sequence that affects the expression (e.g., level, timing, or location of expression) of the nucleic acid to which it is operatively linked. The modulation sequence can be, for example, a nucleic acid whose effect is directly or indirectly affected by the action of one or more other molecules (e. G., Polypeptides that bind to the regulatory sequence and / . The regulatory sequence includes promoters, enhancers, and other expression control elements. The vector of the present invention may preferably be a pCom3x (phagmid) vector containing scFv Insert at SfiI site.

한편 본 발명은 본 발명의 벡터를 포함하는 세포를 제공한다.The present invention also provides a cell comprising the vector of the present invention.

본 발명의 세포는 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 발현하는데 사용될 수 있는 세포면 그 종류는 특별히 제한되지 아니한다.The cell of the present invention is not particularly limited so far as the type of cell surface that can be used to express the polynucleotide of the present invention.

본 발명의 세포는 숙주세포는 원핵생물(예를 들어 대장균), 진핵생물(예를 들어 효모 또는 다른 균류), 식물 세포(예를 들어 담배 또는 토마토 식물 세포), 동물 세포(예를 들어 인간 세포, 원숭이 세포, 햄스터(hamster) 세포, 집쥐 세포(rat cell), 생쥐 세포(mouse cell) 또는 곤충 세포) 또는 하이브리도마가 될 수 있다.
The cells of the present invention can be produced by transforming a host cell with a prokaryotic (e. G., E. coli), a eukaryote (e. G. Yeast or other fungi), a plant cell (e. G., A tobacco or tomato plant cell) , A monkey cell, a hamster cell, a rat cell, a mouse cell or an insect cell) or a hybridoma.

본 목적에 적합한 원핵생물은 그람 음성 또는 그람 양성 유기체, 예를 들어 엔테로박테리아새 (Enterobacteriaceae), 예를 들어 에스케리치아 (Escherichia), 예를 들어 이. 콜라이, 엔테로박터 (Enterobacter), 에르위니아 (Erwinia), 클렙시엘라 (Klebsiella), 프로테우스 (Proteus), 살모넬라 (Salmonella), 예를 들어, 살모넬라 티피무륨 (Salmonella typhimurium), 세라티아 (Serratia), 예를 들어, 세라티아 마르세스칸스 (Serratia marcescans) 및 시겔라 (Shigella), 및 바실리 (Bacilli), 예를 들어, 비. 섭틸리스 (B. subtilis) 및 비. 리케니포르미스 (B. licheniformis), 슈도모나스 (Pseudomonas), 예를 들어 피. 애루기노사 (P. aeruginosa) 및 스트렙토마이세스 (Streptomyces)를 포함한다. 본 발명의 세포는 본 발명의 벡터를 발현가능 한 것이면, 특별히 제한되지 아니하나, 바람직하게는 이. 콜라이, 이에 한정되지 아니하나 예를 들어, 이. 콜라이 ER2537, 이. 콜라이 B, 이. 콜라이 X1776 (ATCC 31,537), 이. 콜라이 W3110 (ATCC 27,325) 또는 LacZ가 발현 가능한 이. 콜라이일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 이. 콜라이 ER2537일 수 있다.Suitable prokaryotes for this purpose include gram-negative or gram-positive organisms, such as Enterobacteriaceae, such as Escherichia, for example E. coli. For example, E. coli, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, for example Salmonella typhimurium, Serratia, For example, Serratia marcescans and Shigella, and Bacilli, for example, B. subtilis and rain. B. licheniformis, Pseudomonas, such as p. P. aeruginosa, and Streptomyces. The cell of the present invention is not particularly limited as long as it is capable of expressing the vector of the present invention. Cola, but not limited to, for example, this. Coli ER2537, i. Coli B, Lee. E. coli X1776 (ATCC 31, 537); E. coli W3110 (ATCC 27,325) or LacZ can be expressed. Coli, and more preferably this. E. coli ER2537.

본 발명의 세포로서 진핵생물은 사카로마이세스 세레비지아에 (Saccharomyces cerevisiae)가 가장 흔히 사용된다. 그러나, 많은 다른 속, 종 및 균주, 이에 한정되지 아니하나, 예를 들어 쉬조사카로마이세스폼베 (Schizosaccharomyces pombe), 클루이베로마이세스 숙주, 예를 들어 케이. 락티스(K.lactis), 케이. 프라길리스 (K. fragilis) (ATCC 12,424), 케이. 불가리쿠스 (K. bulgaricus) (ATCC 16,045), 케이. 위커라미 (K. wickeramii) (ATCC 24,178), 케이. 왈티 (K. waltii) (ATCC 56,500), 케이. 드로소필라룸 (K. drosophilarum) (ATCC 36,906), 케이. 테르모톨레란스 ((K. thermotolerans) 및 케이. 마르시아누스 (K. marxianus); 야로위아 (yarrowia) (EP 402,226); 피키아 파스토리스 (Pichia pastoris) (EP 183,070); 칸디다 (Candida); 트리코데르마 레에시아 (Trichoderma reesia (EP 244,234)); 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa); 쉬바니오마이세스 (Schwanniomyces), 예를 들어 쉬바니오마이세스 옥시덴탈리스(occidentalis); 및 필라멘트성 진균, 예를 들어 뉴로스포라, 페니실리움 (Penicillium), 톨리포클라디움(Tolypocladium) 및 아스퍼질러스 (Aspergillus) 숙주, 예를 들어 에이. 니둘란스 (nidulans) 및 에이. 니거 (niger)가 사용가능 하다.Saccharomyces cerevisiae is the most commonly used eukaryotic cell of the present invention. However, many other genera, species and strains, including, but not limited to, Schizosaccharomyces pombe, Kluyveromyces hosts, e.g., K. K.lactis, K. K. fragilis (ATCC 12, 424), Kay. K. bulgaricus (ATCC 16,045), Kay. K. wickeramii (ATCC 24,178), Kay. K. waltii (ATCC 56,500), Kay. K. drosophilarum (ATCC 36,906), Kay. K. thermotolerans and K. marxianus; Yarrowia (EP 402,226); Pichia pastoris (EP 183,070); Candida; Tricot Neurospora crassa; Schwanniomyces, such as Shibaniomycetes occidentalis; and filamentous fungi, such as Trichoderma reesia (EP 244,234); Neurospora crassa; Schwanniomyces, Such as Neurospora, Penicillium, Tolypocladium and Aspergillus hosts, such as, for example, A. nidulans and A. niger. It is possible.

한편 본 발명의 세포는 동물세포 특히 척추동물 세포일 수 있다. 배양 (조직 배양)에서 척추동물 세포의 증식은 일상적인 방법이 되었고 기술들이 폭넓게 이용가능하다. 이에 제한되지 아니하나, 유용한 포유동물 숙주 세포의 예는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 라인 (COS-7, ATCC CRL 1651), 인간 배아 신장 라이 (현탁 배양으로부터 서브클로닝된 293 또는 293 세포[Graham 등, 1977, J Gen Virol. 36: 59]), 새끼 햄스터 신장 세포 (BHK, ATCC CCL10), 차이니즈 햄스터 난소 세포/-DHFR" (CHO, Urlaub 등, 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216; 예를 들어, DG44), 마우스 세르톨리 세포 (TM4, Mather, 1980, Biol. Reprod. 23:243-251), 원숭이 신장 세포 (CVl ATCC CCL 70), 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 (VERO-76, ATCC CRL-1587), 인간 경부 암세포 (HELA, ATCC CCL 2), 개 신장 세포 (MDCK, ATCC CCL 34), 버팔로 랫트 간세포 (BRL 3A, ATCC CRL 1442), 인간 폐세포 (W138,ATCC CCL 75), 인간 간세포 (Hep G2, HB 8065), 마우스 유방 종양 (MMT 060562, ATCC CCL51), TRI 세포(Mather 등, 1982, Annals NY. Acad. Sci. 383: 44-68 ), MRC 5 세포, FS4 세포, 인간 간암 세포주 (Hep G2), HEK 293 cell(human embryonic kidney cell) 및 Expi293FTM cell일 수 있으며, 바람직하게는 CHO cell, HEK 293 cell(human embryonic kidney cell) 또는 Expi293FTM cell일 수 있다.
The cells of the present invention may be animal cells, particularly vertebrate cells. In culture (tissue culture), the proliferation of vertebrate cells has become a routine method and techniques are widely available. Examples of useful mammalian host cells include, but are not limited to, lines of monkey kidney CV1 (COS-7, ATCC CRL 1651) transformed by SV40, 293 or 293 cells subcloned from human embryonic kidney lysates (BHK, ATCC CCL10), Chinese hamster ovary cells / -DHFR "(CHO, Urlaub et al., 1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA murine Sertoli cells (TM4, Mather, 1980, Biol. Reprod. 23: 243-251), monkey kidney cells (CVl ATCC CCL 70), African green monkey kidney cells (BRL 3A, ATCC CRL 1442), human lung cells (W138, ATCC CRL-1587), human cervical cancer cells (HELA, ATCC CCL 2), canine kidney cells (MDCK, ATCC CCL 34), buffalo rat hepatocytes (ATCC CCL 75), human hepatocyte (Hep G2, HB 8065), mouse breast tumor (MMT 060562, ATCC CCL51), TRI cells (Mather et al., 1982, Annals NY. Acad. Sci. three Four, FS4 cells, and human hepatoma cell line (Hep G2), HEK 293 cell may be a (human embryonic kidney cell) and Expi293F TM cell, preferably a CHO cell, HEK 293 cell (human embryonic kidney cell) or Expi293F TM cell days .

본 발명의 세포는 본 발명의 폴리뉴클레오티드 또는 이를 포함하는 벡터로 형질전환되거나 또는 형질감염(transfected)될 수 있는 배양된 세포이고, 이는 계속해서 상기 숙주세포 내에서 발현될 수 있다. 재조합 세포는 발현되어야 할 폴리뉴클레오티드로 형질전환되거나 또는 형질감염된 세포를 말한다. 본 발명의 세포는 또한 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하나, 조절 시퀀스가 상기 폴리뉴클레오티드에 작동 가능하게 연결되도록 상기 세포 내로 도입되지 않는 한 이를 원하는 수준으로 발현하지 않는 세포가 될 수 있다.
A cell of the present invention is a cultured cell that can be transformed or transfected with a polynucleotide of the present invention or a vector containing it, which can be subsequently expressed in the host cell. A recombinant cell refers to a cell transformed or transfected with a polynucleotide to be expressed. A cell of the invention may also be a cell that comprises a polynucleotide of the invention but does not express it at a desired level unless a regulatory sequence is introduced into the cell to operably link to the polynucleotide.

본 발명의 세포는 다양한 배지에서 배양될 수 있다. 상업적으로 이용가능한 배지, 예컨대 햄 (Ham's) F1O (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO), 최소 필수 배지(MEM, Sigma-Aldrich Co.), RPMI-1640 (Sigma-Aldrich Co.), 및 둘베코 (Dulbecco's) 개질 이글 (Eagle's) 배지 (DMEM, Sigma-Aldrich Co.)가 세포를 배양하기에 적합하다. 상기 배지는 필요하다면 호르몬 및/또는 다른 성장 인자, 염, 완충액, 뉴클레오티드, 항생제, 미량 원소 및 글루코스 또는 동등 에너지원이 추가될 수 있다.The cells of the present invention can be cultured in various media. (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO), minimal essential medium (MEM, Sigma-Aldrich Co.), RPMI-1640 (Sigma-Aldrich Co.) And Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM, Sigma-Aldrich Co.) are suitable for culturing cells. The medium may be supplemented with hormones and / or other growth factors, salts, buffers, nucleotides, antibiotics, trace elements and glucose or equivalent energy sources, if necessary.

본 발명의 배지는 바람직하게는 SB (Bactotrytone 30g, yeast extract 20g, MOPS buffer 10g/L) Medium, FreeStyleTM 293 Medium 또는 Expi293TM Medium일 수 있다.
The medium of the present invention can be preferably SB (Bactotrytone 30 g, yeast extract 20 g, MOPS buffer 10 g / L) Medium, FreeStyle TM 293 Medium or Expi 293 TM Medium.

한편 본 발명은 상기 세포를 폴리뉴클레오티드가 발현되는 조건하에서 배양하여, 경쇄 및 중쇄가변영역을 포함하는 폴리펩타이드를 생산하는 단계 및 상기 세포 또는 이를 배양한 배양 배지로부터 상기 폴리펩타이드를 회수하는 단계를 포함하는 인간 AIMP1/p43에 결합하는 항체 또는 그 단편의 생산방법을 제공한다.
In the meantime, the present invention includes a step of culturing the above cells under the condition that a polynucleotide is expressed, producing a polypeptide including a light chain and a heavy chain variable region, and recovering the polypeptide from the cell or a culture medium in which the polypeptide is cultured Lt; RTI ID = 0.0 > AIMP1 / p43 < / RTI >

본 발명 생산방법의 세포에 대하여는 상기 기술한 바와 같으며, 본 발명의 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고 있다.The cells of the production method of the present invention are as described above and include a polynucleotide encoding the antibody of the present invention.

본 발명 생산방법의 폴리펩타이드는 본 발명의 항체 또는 그 단편 그 자체일 수 있으며, 본 발명의 항체 또는 그 단편 외 다른 아미노산서열이 추가로 결합된 것일 수 있다. 이 경우 본 기술분야의 통상의 기술자에게 잘 알려져 있는 방법을 이용하여 본 발명의 항체 또는 그 단편으로부터 제거할 수 있다.The polypeptide of the production method of the present invention may be an antibody of the present invention or a fragment thereof itself, and may further be an antibody or an amino acid sequence other than the fragment of the present invention. In this case, the antibodies or fragments thereof of the present invention can be removed using methods well known to those skilled in the art.

상기 배양은 상기 세포의 종류에 따라 배지조성 및 배양 조건이 달라질 수 있으며, 이는 본 기술분야의 통상의 기술자가 적절히 선택 및 조절할 수 있다.The culture may vary in the composition of the medium and the culture conditions depending on the type of the cells, and can be appropriately selected and controlled by those skilled in the art.

상기 항체 분자는 세포의 세포질 내에 축적되거나, 세포로부터 분비되거나, 적절한 신호 서열에 의하여 페리플라즘 또는 세포외 배지 (supernatant)로 표적화 (targeted)될 수 있으며, 페리플라즘 또는 세포외 배지로 표적화되는 것이 바람직하다. 또한, 생산된 항체 분자를 본 기술분야의 통상의 기술자에게 잘 알려져 있는 방법을 이용하여 리폴딩 (refolding)시키고 기능적 형태 (conformation)를 갖도록 하는 것이 바람직하다.The antibody molecule may be accumulated in the cytoplasm of a cell, secreted from the cell, targeted by a suitable signal sequence to a periplasm or extracellular medium (supernatant), and labeled with a periplasmic or extracellular medium . It is also desirable to refold the engineered antibody molecules using methods well known to those of ordinary skill in the art and to have functional conformation.

상기 폴리펩타이드의 회수는 생산된 폴리펩타이드의 특성 및 세포의 특성에 따라 달라질 수 있으며, 이는 본 기술분야의 통상의 지식을 가진자가 적절히 선택 및 조절할 수 있다.The recovery of the polypeptide may vary depending on the characteristics of the produced polypeptide and the characteristics of the cells, and those skilled in the art can appropriately select and control the polypeptide.

상기 폴리펩타이드는 세포내, 주변 세포질 공간에 생산되거나 배지 내로 직접 분비될 수 있다. 만약 폴리펩타이드가 세포 내에서 생산되면, 이 세포는 제1 단계로서 단백질을 방출하기 위하여 파괴될 수 있다. 입자형 파편, 숙주 세포 또는 용해된 단편은 예를 들어 원심분리 또는 한외여과에 의해 제거된다. 항체가 배지 내로 분비되는 경우, 이러한 발현 시스템으로부터의 상등액을 일반적으로 먼저 상업적으로 이용가능한 단백질 농축 필터, 예를 들어 Amicon 또는 Millipore Pellicon 한외여과 유닛을 사용하여 농축시킨다. 단백분해를 억제하기 위하여 프로테아제 억제제, 예를 들어 PMSF가 임의의 선행 단계에 포함될 수 있고, 우발적인 오염물의 성장을 방지하기 위하여 항생제가 포함될 수 있다.The polypeptide may be produced intracellularly, in the periplasmic space, or directly secreted into the medium. If a polypeptide is produced in a cell, it can be destroyed to release the protein as a first step. Particulate debris, host cells, or lysed fragments are removed, for example, by centrifugation or ultrafiltration. When the antibody is secreted into the medium, the supernatant from such an expression system is generally first concentrated using a commercially available protein concentration filter, such as an Amicon or Millipore Pellicon ultrafiltration unit. To inhibit proteolysis, a protease inhibitor, such as PMSF, may be included in any preceding step and antibiotics may be included to prevent the growth of contingent contaminants.

세포로부터 제조된 항체는 예를 들어 하이드록시아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 및 친화도 크로마토그래피를 사용하여 정제될 수 있고, 본 발명의 항체는 바람직하게는 친화도 크로마토그래피를 통하여 정제할 수 있다.
Antibodies prepared from cells can be purified using, for example, hydroxyapatite chromatography, gel electrophoresis, dialysis and affinity chromatography, and the antibodies of the invention can be purified, preferably through affinity chromatography have.

본 발명의 항체 또는 그 단편은 AIMP1/p43와 특이적으로 결합하므로 예를 들어, 특정 세포, 조직, 또는 혈청 내 AIMP1/p43 발현을 검출하는, AIMP1/p43 단백질을 검출하고 정량하기 위한 진단 분석에 유용하다.The antibody or fragment thereof of the present invention specifically binds to AIMP1 / p43, and thus can be used in a diagnostic assay for detecting and quantifying AIMP1 / p43 protein, for example, detecting AIMP1 / p43 expression in a specific cell, tissue or serum useful.

따라서 본 발명은 제1항의 항체 또는 그 단편을 시료와 접촉시키는 단계 및 상기 항체 또는 그 단편을 검출하는 단계를 포함하는 AIMP1/p43 특이적 검출 방법을 제공한다.Accordingly, the present invention provides an AIMP1 / p43-specific detection method comprising contacting the antibody or fragment thereof of claim 1 with a sample and detecting the antibody or fragment thereof.

상기 항체 또는 그 단편을 '검출'하기 위하여, 항체 또는 그 단편은 일반적으로 검출가능 모이어티로 표지될 수 있다. To " detect " the antibody or fragment thereof, the antibody or fragment thereof may generally be labeled with a detectable moiety.

예를 들어, 문헌 [Current Protocols in Immunology, Volumes 1 and 2, 1991, Coligen 등, Ed. Wiley-Interscience, New York, N. Y., Pubs]에 기술된 기술을 이용하여, 방사성 동위원소 또는 형광표지로 표지될 수 있다. 방사능은, 예를 들어, 신틸레이션 계수(scintillation counting)에 의해 측정될 수 있으며, 형광은 형광계를 이용하여 정량될 수 있다.See, for example, Current Protocols in Immunology, Volumes 1 and 2, 1991, Coligen et al., Ed. Wiley-Interscience, New York, N.Y., Pubs], using radioimmunoassay or fluorescent labeling. Radioactivity can be measured, for example, by scintillation counting, and fluorescence can be quantified using a fluorimeter.

또는 다양한 효소-기질 표지가 이용가능하며, 상기 효소적 표지의 예는 초파리 루시러파제 및 세균 루시퍼라제 (미국 특허 제4,737,456호)와 같은 루시퍼라제, 루시페린 (luciferin), 2,3-다이하이드로프탈라진디오네스, 말레이트 디하이드로게나제, 유라제 (urase), 호스래디쉬 퍼옥시다제 (HRPO)와 같은 퍼옥시다제, 알칼라인 포스파타제, β-갈락토시다제, 글루코아밀라제, 라이소자임, 사카라이드 옥시다제 (예를 들어 글루코스옥시다제, 갈락토스 옥시다제, 및 글루코스-6-포스페이트 디하이드로게나제), 헤테로사이클릭 옥시다제 (예를 들어 유리카제 및 잔틴 옥시다제), 락토퍼옥시다제, 마이크로퍼옥시다제 등을 포함한다. 항체에 효소를 접합시키는 기술은 예를 들어, 문헌 [O'Sullivan 등, 1981, Methods for the Preparation of Enzyme-항체 Conjugates for use in Enzyme Immunoassay, in Methods in Enzym. (J. Langone & H. Van Vunakis, eds.), Academic press, N. Y., 73: 147-166]에 기술되어 있다.
Or various enzyme-substrate labels are available. Examples of such enzymatic labels are luciferase, luciferin, 2,3-dihydrophene, and the like, such as Fusarium luciferase and Bacillus luciferase (US Patent No. 4,737,456) Alkaline phosphatase,? -Galactosidase, glucoamylase, lysozyme, saccharide such as thalidomide, thalidomide, thalidomide, thalidomide, thalidomide, thalidomide, (Such as glucose oxidase, galactose oxidase, and glucose-6-phosphate dehydrogenase), heterocyclic oxidases (e. G., Free radicals and xanthine oxidases), lactoperoxidases, Oxydase, and the like. Techniques for conjugating an enzyme to an antibody are described, for example, in O'Sullivan et al., 1981, Methods for the Preparation of Enzyme-in-vivo Conjugates for Use in Enzyme Immunoassay, in Methods in Enzym. J. Langone & H. Van Vunakis, eds., Academic press, NY, 73: 147-166.

표지는 다양한 공지된 기술을 이용하여 항체에 간접적으로 접합될 수 있다. 예를 들어, 항체는 바이오틴에 접합될 수 있고 상기에 언급된 3종의 광범위한 카테고리에 속하는 임의의 표지들이 아비딘과, 또는 그 반대로 접합될 수 있다. 바이오틴은 아비딘에 선택적으로 결합하고, 따라서 이 표지는 이러한 간접적 방식으로 항체에 접합될 수 있다. 또는, 항체에 표지의 간접적 접합을 달성하기 위하여, 항체는 작은 합텐 (hapten) (예를 들어, 딕옥신 [digoxin])과 접합될 수 있고 상기에 언급된 서로 다른 유형의 표지들의 하나가 항-합텐 항체에 접합될 수 있다 (예컨대, 항-딕옥신 항체). 따라서, 항체에 대한 표지의 간접적 접합이 달성될 수 있다.The label may be indirectly conjugated to the antibody using a variety of known techniques. For example, the antibody can be conjugated to biotin and any label belonging to the three broad categories mentioned above can be conjugated to avidin, or vice versa. Biotin selectively binds to avidin, and thus this label can be conjugated to the antibody in this indirect manner. Alternatively, to achieve an indirect conjugation of the label to the antibody, the antibody may be conjugated to a small hapten (e. G., Digoxin) and one of the different types of labels mentioned above may be conjugated to an anti- Hapten antibody (e. G., An anti-diphoshin antibody). Thus, indirect conjugation of the label to the antibody can be achieved.

본 발명의 항체 또는 그 단편은 경쟁적 결합 분석, 직접 및 간접 샌드위치 분석, 및 면역침전 분석과 같은 임의의 공지된 분석 방법에 사용될 수 있다.
The antibodies or fragments thereof of the invention can be used in any known assay method, such as competitive binding assays, direct and indirect sandwich assays, and immunoprecipitation assays.

본 발명의 항체 또는 그 단편은 진단 킷트 즉, 진단 분석을 수행하기 위한 진단 킷트, 즉 사용설명서와 함께 미리 지정된 양으로 시약들의 포장된 조합에 사용될 수 있다. 항체가 효소로 표지된 경우에, 킷트는 기질 및 발색단 또는 형광단을 제공하는 기질 전구체로서 효소에 의해 요구되는 보조인자 (cofactor)를 포함할 수 있다. 또한, 안정화제, 완충액 (예를 들어, 차단 완충액 또는 용해 완충액) 등과 같은 다른 첨가제들이 포함될 수 있다. 다양한 시약들의 상대적인 양은 분석의 민감도를 충분히 최적화시키는 시약의 용액 내 농도를 제공하기 위해 폭넓게 변화될 수 있다. 시약은 용해 시 적절한 농도를 갖는 시약 용액을 제공하게 될 부형제를 포함하는, 일반적으로 동결건조된, 건조 분말로서 제공될 수 있다.The antibody or fragment thereof of the present invention can be used in a diagnostic kit, that is, a packaged combination of reagents in predetermined amounts with a diagnostic kit, i.e., instructions for performing diagnostic analysis. In the case where the antibody is labeled with an enzyme, the kit may comprise a substrate and a cofactor required by the enzyme as a substrate precursor to provide chromophore or fluorophore. Other additives may also be included, such as stabilizers, buffers (e. G., Blocking buffer or lysis buffer), and the like. The relative amounts of the various reagents can be varied widely to provide a concentration in the solution of the reagent that sufficiently optimizes the sensitivity of the assay. The reagent may be provided as a generally lyophilized, dry powder comprising an excipient that will provide a reagent solution having an appropriate concentration upon dissolution.

본 발명자들은 결합 다기능 단백질 AIMP1/p43이 기존에 알려진 기본적인 기능외에도 세포 외부로 분비되어 다양한 cytokine의 활성을 나타냄을 여러 차례 밝힌 바 있다 먼저 혈관신생에 관한 기능으로 낮은 농도에서는 MMP-9을 매개로 하는 혈관신생을 촉진하며 높은 농도에서는 오히려 JNK 신호전달을 매개로 혈관신생을 억제한다. 또한 AIMP1/p43은 대식세포등을 활성화하는등 면역 활성화와 ICAM-1을 촉진시켜 면역세포의 부착에 관여한다. 그 외에 섬유아세포(fibroblast)를 증식시켜 피부 재생을 촉진시키며 당 대사의 조절에도 관여하여 췌장의 α세포에서 분비되어 글루카곤에 의한 혈당의 증가를 촉진시킴을 보고하였다.The present inventors have previously found that the multifunctional protein AIMP1 / p43 is secreted outside the cell in addition to the basic functions known in the art, and thus exhibits various cytokine activities. First, the function of angiogenesis is mediated by MMP-9 Promotes angiogenesis and inhibits angiogenesis through JNK signaling rather at high concentrations. In addition, AIMP1 / p43 is involved in adhesion of immune cells by promoting immune activation and ICAM-1 such as activation of macrophages and the like. In addition, it has been reported that fibroblast proliferation promotes skin regeneration and is involved in the regulation of glucose metabolism, which is secreted from the α-cells of the pancreas and promotes the increase of glucose by glucagon.

따라서, AIMP1/p43는 검출을 통해 특정 암 또는 염증성질환의 진단, 병의 진행 상태 및 치료전후의 예후의 평가를 위한 진단 마커로서 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 암 또는 염증성질환의 진단 및 예후 평가는 생물학적 시료 중에서 AIMP1/p43 단백질을 검출함으로써 수행될 수 있다. 따라서 본 발명은 본 발명의 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 암 또는 염증성질환 진단용 조성물을 제공한다.
Thus, AIMP1 / p43 can be used as a diagnostic marker for the diagnosis of a particular cancer or inflammatory disease, the progression of the disease, and the prognosis before and after treatment through detection. The diagnosis and prognostic evaluation of a cancer or inflammatory disease according to the present invention can be performed by detecting AIMP1 / p43 protein in a biological sample. Accordingly, the present invention provides a composition for diagnosing cancer or an inflammatory disease comprising the antibody or fragment thereof of the present invention as an active ingredient.

상기 생물학적 시료는 혈액 및 생물학적 기원의 기타 액상 시료, 생검 표본, 조직 배양과 같은 고형 조직 시료 또는 이로부터 유래된 세포가 포함된다. 보다 구체적으로 예를 들면 이에 한정되지는 않으나 조직, 추출물, 세포 용해물, 전혈, 혈장, 혈청, 침, 안구액, 뇌척수액, 땀, 뇨, 젖, 복수액, 활액, 복막액 등일 수 있다. 상기 시료는 동물, 바람직하게는 포유동물, 가장 바람직하게는 인간으로부터 수득될 수 있다. 상기 시료는 검출에 사용하기 전에 전처리할 수 있다. 예를 들어, 여과, 증류, 추출, 농축, 방해 성분의 불활성화, 시약의 첨가 등을 포함할 수 있다. 또한, 상기 시료로부터 핵산 및 단백질을 분리하여 검출에 사용할 수 있다.Such biological samples include blood and other liquid samples of biological origin, biopsy specimens, solid tissue samples such as tissue culture, or cells derived therefrom. More specifically, it may be a tissue, an extract, a cell lysate, a whole blood, a plasma, a serum, a saliva, an ophthalmic solution, a cerebrospinal fluid, a sweat, a urine, a milk, a plural liquid, a synovial fluid, a peritoneal fluid and the like. The sample can be obtained from an animal, preferably a mammal, most preferably a human. The sample can be pretreated prior to use in detection. For example, it may include filtration, distillation, extraction, concentration, inactivation of interfering components, addition of reagents, and the like. Further, nucleic acid and protein can be separated from the sample and used for detection.

상기 검출에 관하여는 앞서 설명한 바와 같다.The detection has been described above.

상기 암은 그 종류가 특별히 제한되지 아니하며, 예를 들어 유방암, 대장암, 폐암, 소세포폐암, 위암, 간암, 혈액암, 골암, 췌장암, 피부암, 두부 또는 경부암, 피부 또는 안구내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부근암, 결장암, 유방암, 나팔관암종, 자궁내막암종, 자궁경부암, 질암, 음문암종, 호지킨병, 식도암, 소장암, 내분비선암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구 림프종, 방광암, 신장 또는 수뇨관 암, 신장세포 암종, 신장골반 암종, CNS 종양, 1차 CNS 림프종, 척수 종양, 뇌간신경교종 및 뇌하수체 선종 일 수 있으며, 바람직하게는 혈관 신생, 면역반응 및 Glucose 대사에 관련있는 암종 예를 들어 췌장암 일 수 있다.
The type of the cancer is not particularly limited and examples thereof include breast cancer, colon cancer, lung cancer, small cell lung cancer, gastric cancer, liver cancer, blood cancer, bone cancer, pancreatic cancer, skin cancer, head or neck cancer, skin or intraocular melanoma, Ovarian cancer, ovarian cancer, rectal cancer, proximal cancer, colon cancer, breast cancer, fallopian tube carcinoma, endometrial carcinoma, cervical cancer, vaginal cancer, vulvar carcinoma, Hodgkin's disease, esophageal cancer, small bowel cancer, endocrine cancer, thyroid cancer, Renal cell carcinoma, renal pelvic carcinoma, renal pelvic carcinoma, CNS tumor, primary CNS lymphoma, spinal cord tumor, brainstem glioma, and pituitary adenoma , Preferably carcinoma associated with angiogenesis, immune response and Glucose metabolism, for example pancreatic cancer.

상기 염증성 질환은 이에 제한되지는 않으나, 부종 등과 같은 일반적인 염증 증상을 포함하여 염증성 장 질환, 복막염, 골수염, 봉소염, 췌장염, 외상 유발 쇼크, 기관지 천식, 알러지성 비염, 낭포성 섬유증, 급성 기관지염, 만성 기관지염, 급성 세기관지염, 만성 세기관지염, 골관절염, 통풍, 척추관절병증, 강직성 척추염, 라이터 증후군, 건선성 관절병증, 장질환 척추염, 연소자성 관절병증, 연소자성 강직성 척추염, 반응성 관절병증, 감염성 관절염, 후-감염성 관절염, 임균성 관절염, 결핵성 관절염, 바이러스성 관절염, 진균성 관절염, 매독성 관절염, 라임 병, '혈관염 증후군'과 관련된 관절염, 결절성 다발동맥염, 과민성 혈관염, 루게릭 육아종증, 류마티스성 다발성근육통, 관절 세포 동맥염, 칼슘 결정 침착 관절병증, 가성 통풍, 비-관절 류마티즘, 점액낭염, 건초염, 상과염(테니스 엘보), 신경병증성 관절 질환(neuropathic joint disease; 또는 'charcot joint'이라고도 함), 출혈성 관절증(hemarthrosic), 헤노흐-쉔라인 자반병, 비후성 골관절병증, 다중심성 세망조직구종, 척추측만증(scoliosis), 혈색소증, 혈색소병증, 고지단백혈증, 저감마글로불린혈증, 가족성 지중해열(familial Mediterranean fever), 베체트 병, 전신성 홍반성 루푸스, 재귀열, 다발성 경화증, 패혈증, 패혈성 쇼크, 급성 호흡곤란 증후군, 다발성 장기부전, 만성 폐쇄성 폐질환(chronic obstructive pulmonary disease), 류마티스성 관절염(rheumatoid arthritis), 급성 폐손상(acute lung injury), 기관지 폐 형성장애(broncho-pulmonary dysplasia), 제2형 당뇨병, 동맥경화, 알츠하이머성 치매, 가족성 한랭 자가염증 증훈군(familial cold autoinflammatory syndrome), 머클-웰스 증후군(Muckle-Wells syndrome), 신생아발병다발염증성질환(neonatal mutisystem inflammatory disease), 만성유아신경피부관절증후군(chronic infantile neurologic cutaneous articular syndrome), 성인발증형 스틸병(adult-onset Still's disease), 접촉성 피부염, 포상기태(hydatidiform mole), PAPA 증후군(syndrome of pyogenic arthritis, pyoderma gangrenosum,and acne), 고면역글로불린 D 증후군(hyperimmunoglobulin d syndrome) 및 크리오피린 관련 주기적 증후군(cryopyrin-associated periodic syndromes)등을 포함할 수 있다.
Such inflammatory diseases include, but are not limited to, inflammatory bowel disease, peritonitis, osteomyelitis, cachexia, pancreatitis, trauma-induced shock, bronchial asthma, allergic rhinitis, cystic fibrosis, acute bronchitis, Inflammatory bowel disease, inflammatory bowel disease, chronic bronchitis, acute bronchiolitis, chronic bronchitis, osteoarthritis, gout, spondyloarthropathies, ankylosing spondylitis, lager syndrome, psoriatic arthropathy, intestinal disease, spondyloarthropathies, Arthritis associated with " vasculitis syndrome ", nodular polyarteritis, irritable vasculitis, Lou Gehrig's granulomatosis, rheumatoid multiple myalgia, arthritic cells, arthritis, arthritis, osteoarthritis, osteoarthritis, osteoarthritis, osteoarthritis, Arthritis, Calcium Crystallization Arthropathy, Pseudo-gout, Non-articular rheumatism, (Also called " charcot joint "), hemarthrosis, Henoch-Schönlein purpura, hypertrophic osteoarthritis, hypertrophic osteoarthritis, osteoarthritis, Atherosclerosis, septicemia, septicemia, septicemia, septicemia, scoliosis, hemochromatosis, hemochromatosis, hyperlipidemia, hypogammaglobulinemia, familial Mediterranean fever, Behcet's disease, systemic lupus erythematosus, Acute respiratory distress syndrome, multiple organ failure, chronic obstructive pulmonary disease, rheumatoid arthritis, acute lung injury, broncho-pulmonary dysplasia, Type 2 diabetes, arteriosclerosis, Alzheimer ' s dementia, familial cold autoinflammatory syndrome, Muckle-Wells syndrome, , Neonatal mutisystem inflammatory disease, chronic infantile neurologic cutaneous articular syndrome, adult-onset still's disease, contact dermatitis, hydatidiform mole ), PAPA syndrome (pyoderma gangrenosum, and acne), hyperimmunoglobulin d syndrome and cryopyrin-associated periodic syndromes.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 본 발명의 항체 또는 그 단편을 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함할 수 있다. 상기에서 “약학적으로 유효한 양”이란 음성 대조군에 비해 그 이상의 반응을 나타내는 양을 말하며 바람직하게는 암을 치료하기에 충분한 양을 말한다. The pharmaceutical composition according to the present invention may comprise the antibody or fragment thereof of the present invention alone, or may further comprise at least one pharmaceutically acceptable carrier. The " pharmaceutically effective amount " as used herein refers to an amount exhibiting a further reaction than the negative control, preferably an amount sufficient to treat cancer.

상기에서 “약학적으로 허용되는” 이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 활성성분의 작용을 저해하지 않으며 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 비독성의 조성물을 말한다.
The term " pharmaceutically acceptable " as used herein means a non-toxic composition which is physiologically acceptable and which, when administered to humans, does not inhibit the action of the active ingredient and does not normally cause an allergic reaction such as gastrointestinal disorder, dizziness, .

본 발명에 따른 약학적 조성물에 있어서, 상기 항체 또는 그 단편은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충전제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조될 수 있다. In the pharmaceutical composition according to the present invention, the antibody or the fragment thereof may be administered in various formulations for oral administration and parenteral administration in clinical administration. In the case of formulation, usually used fillers, extenders, binders, wetting agents, , A surfactant, and the like.

경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환자, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 본 발명의 상기 화학식 1의 아릴 유도체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들어, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들어 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. Solid formulations for oral administration include tablets, patients, powders, granules, capsules, troches, and the like, which may contain one or more of the aryl derivatives of Formula 1, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, At least one excipient, for example, starch, calcium carbonate, sucrose or lactose, or gelatin. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate, talc, and the like may also be used. Liquid preparations for oral administration include suspensions, solutions, emulsions or syrups. In addition to water and liquid paraffin which are commonly used simple diluents, various excipients such as wetting agents, sweetening agents, fragrances, preservatives and the like are included .

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다.Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories.

본 발명의 치료용 조성물을 임의의 생리학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제(Remington: The Science and Practice of Pharmacy, l9th Edition, Alfonso, R., ed, Mack Publishing Co.(Easton, PA: 1995))와 바람직한 순도를 갖는 항체를 혼합하여 저장하기 위해 동결건조된 케이크 또는 수용액의 형태로 제조할 수 있다. 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 비독성이고, 완충용액, 예를 들어 인산, 시트르산 및 다른 유기산; 아스코르브산을 비롯한 항산화제; 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예를 들어 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예를 들어 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예를 들어 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 리신; 단당류, 이당류, 및 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 비롯한 다른 탄수화물; 킬레이트제, 예를 들어 EDTA; 당 알콜, 예를 들어 만니톨 또는 소르비톨; 염-형성 반대이온, 예를 들어 나트륨; 및(또는) 비이온성 계면활성제, 예를 들어 트윈, 플루로닉스 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)이 포함된다.
The therapeutic compositions of the present invention may be formulated with any physiologically acceptable carrier, excipient or stabilizer (Remington: The Science and Practice of Pharmacy, l9th Edition, Alfonso, R., ed., Mack Publishing Co. )) And an antibody having a desired purity can be prepared in the form of a lyophilized cake or an aqueous solution for storage. Acceptable carriers, excipients or stabilizers are nontoxic to the recipient at the dosages and concentrations employed and include buffer solutions such as phosphoric acid, citric acid and other organic acids; Antioxidants including ascorbic acid; Low molecular weight (less than about 10 residues) polypeptides; Proteins, such as serum albumin, gelatin or immunoglobulins; Hydrophilic polymers such as polyvinylpyrrolidone; Amino acids such as glycine, glutamine, asparagine, arginine or lysine; Monosaccharides, disaccharides, and other carbohydrates including glucose, mannose or dextrin; Chelating agents such as EDTA; Sugar alcohols such as mannitol or sorbitol; Salt-forming counterions such as sodium; And / or non-ionic surfactants such as tween, pluronics or polyethylene glycol (PEG).

또한, 본 발명의 항체 또는 그 단편의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로 0.01 - 100 mg/kg/week이며, 바람직하게는 0.1 - 20 mg/kg/week이며, 더욱 바람직하게는 5 - 10 mg/kg/week일 수 있다. 또한 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정 간격으로 분할 투여할 수도 있다.
The dose of the antibody or fragment of the present invention to the human body may vary depending on the patient's age, body weight, sex, dosage form, health condition, and disease severity, and is generally 0.01 to 100 mg / kg / Preferably from 0.1 to 20 mg / kg / week, more preferably from 5 to 10 mg / kg / week. It may also be administered at a fixed interval according to the judgment of a doctor or pharmacist.

본 발명의 조성물의 투여 경로는 공지된 방법, 예를 들어 정맥내, 복강내, 뇌내, 피하, 근육내, 안내, 동맥내, 뇌척수내, 또는 병변내 경로에 의한 주사 또는 주입, 또는 하기 기재된 서방성 (sustained release) 시스템에 의한 주사 또는 주입이다. 바람직하게는 항체는 전신으로 투여될 수 있다.The administration route of the composition of the present invention may be administered orally or parenterally by a known method such as injection or infusion by intravenous, intraperitoneal, intracerebral, subcutaneous, intramuscular, intravenous, intraarterial, intracerebral, or intralesional routes, Injection or injection by a sustained release system. Preferably, the antibody can be administered systemically.

본 발명의 약학적 조성물은 암 예방 또는 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
The pharmaceutical composition of the present invention can be used alone or in combination with methods for the prevention or treatment of cancer or using surgery, hormone therapy, chemotherapy and biological response modifiers.

본 발명의 일실시예에서는 인간의 VH3-23/VL1g 유전자를 골격으로 하고 CDR에 무작위 서열을 삽입하는 라이브러리를 구축하고, AIMP1/p43와 선택적으로 결합하는 파지를 선별하여 항체를 분리, 정제 하고 염기서열을 분석하였다.
In one embodiment of the present invention, a library is constructed in which a human VH3-23 / VL1g gene is skeletonized and a random sequence is inserted into a CDR, and a phage that selectively binds to AIMP1 / p43 is selected to isolate and purify the antibody, The sequence was analyzed.

본 발명의 다른 일실시예에서는 정제한 항체가 AIMP1/p43와 결합하는지 western blot 방법으로 확인하였다. 그 결과 본 발명의 항체는 AIMP1/p43와 결합하는 것을 확인하였다.
In another embodiment of the present invention, whether the purified antibody binds to AIMP1 / p43 was confirmed by a western blot method. As a result, it was confirmed that the antibody of the present invention binds to AIMP1 / p43.

본 발명의 다른 일실시예에서는 본 발명의 항 AIMP1/p43 scFv 항체와 AIMP1/p43의 친화도를 표면공명분석방법으로 측정하였다. 그 결과 본 발명의 항체는 평형해리상수 최대 70nM 값을 가져 비교적 높은 친화도를 나타내는 것을 확인하였다.
In another embodiment of the present invention, the affinity of the anti-AIMP1 / p43 scFv antibody of the present invention and AIMP1 / p43 was measured by surface resonance analysis. As a result, it was confirmed that the antibody of the present invention had a maximum equilibrium dissociation constant of 70 nM and exhibited a relatively high affinity.

본 발명의 다른 일실시예에서는 본 발명의 항 AIMP1/p43 scFv 항체의 교차반응성을 측정하였다. Luminex bead를 이용하여 본 발명의 항체와 AIMP1/p43을 포함한 8종의 유사 단백질과의 반응성을 측정한 결과 본 발명의 항체는 AIMP1/p43을 제외한 다른 ARS 단백질에는 결합하지 않는 것을 확인하였다.
In another embodiment of the present invention, the cross reactivity of the anti-AIMP1 / p43 scFv antibody of the present invention was measured. Luminex bead was used to measure the reactivity between the antibody of the present invention and eight similar proteins including AIMP1 / p43. As a result, it was confirmed that the antibody of the present invention did not bind to other ARS proteins except AIMP1 / p43.

본 발명의 다른 일실시예에서는 본 발명의 항 AIMP1/p43 scFv 항체의 진단용 항체로의 유용성 여부를 실험하였다. 본 발명의 항체로 코팅된 plate를 제작한 후, AIMP1/p43 표준물질을 농도별로 희석하여 반응시키고, 결합여부를 ELISA로 측정하였다. 그 결과 AIMP1/p43 표준물질에 대하여 농도 의존적으로 항체 결합이 측정되는 것을 확인하여, 본 발명의 항체가 암 또는 자가면역질환 진단용으로 사용될 수 있음을 확인하였다.
In another embodiment of the present invention, the utility of the anti-AIMP1 / p43 scFv antibody of the present invention as a diagnostic antibody was tested. After the plate coated with the antibody of the present invention was prepared, the AIMP1 / p43 standard material was diluted by concentration and reacted, and the binding was measured by ELISA. As a result, it was confirmed that the antibody binding was measured in a concentration-dependent manner on the AIMP1 / p43 standard material, and it was confirmed that the antibody of the present invention can be used for cancer or autoimmune disease diagnosis.

따라서, 본 발명의 항체 또는 그 단편은 인간 AIMP1/p43에 특이적으로 결합하며, 동일한 ARS family를 포함한 다른 단백질과 교차반응성이 없어 AIMP1/p43 검출 및 억제가 가능하므로 AIMP1/p43 검출 및 AIMP1/p43가 관련된 질환인 암 치료 또는 암 및 염증성질환의 진단에 효과적이다.
Thus, the antibody or fragment thereof of the present invention specifically binds to human AIMP1 / p43 and is capable of detecting and inhibiting AIMP1 / p43 because it is not cross-reactive with other proteins including the same ARS family. Therefore, AIMP1 / p43 detection and AIMP1 / p43 Is effective in the diagnosis of cancer or cancer and inflammatory diseases which are related diseases.

도 1은 본 발명의 항체가 목적단백질인 AIMP1/p43에 결합하는지를 확인한 western blot 실험 결과이다.
도 2는 본 발명의 항체인 anti-AIMP1/p43 scFv Biocon-AM1-1의 결합친화도를 표면 플라즈몬 공명(SPR)으로 측정한 결과 그래프이다(Kd : 평형해리상수, 가로축 : 시간(초), 세로축 : response unit(RU)).
도 3은 본 발명의 항체인 anti-AIMP1/p43 scFv Biocon-AM1-2의 결합친화도를 표면 플라즈몬 공명(SPR)으로 측정한 결과 그래프이다(Kd : 평형해리상수, 가로축 : 시간(초), 세로축 : response unit(RU)).
도 4는 본 발명의 항체인 anti-AIMP1/p43 scFv Biocon-AM1-1의 교차반응성(cross activity)을 Luminex Multiplex Assay 방법으로 측정한 결과 그래프이다(세로축(FI) : 형광강도(fluorescent intensity), WRS : 트립토파닐-tRNA 합성효소(Tryptophanyl-tRNA synthetase), HRS : 히스티딜-tRNA 합성효소(Histidyl-tRNA synthetase), NRS : 아스파라기닐딜-tRNA 합성효소(Asparaginyl-tRNA synthetase), KRS : 리실-tRNA 합성효소(Lysyl-tRNA synthetase), SRS : 세릴-tRNA 합성효소(Seryl-tRNA synthetase), YRS : 타이로실-tRNA 합성효소(Tyrosyl-tRNA synthetase), GRS : 글리실-tRNA 합성효소(Glycyl-tRNA synthetase), AIMP1/p43 : ARS 결합 다기능 단백질( Aminoacyl-tRNA-synthetase-interacting multifunctional protein 1)).
도 5는 본 발명의 항체인 anti-AIMP1/p43 scFv Biocon-AM1-2의 교차반응성(cross activity)을 Luminex Multiplex Assay 방법으로 측정한 결과 그래프이다(세로축(FI) : 형광강도(fluorescent intensity), WRS : 트립토파닐-tRNA 합성효소(Tryptophanyl-tRNA synthetase), HRS : 히스티딜-tRNA 합성효소(Histidyl-tRNA synthetase), NRS : 아스파라기닐딜-tRNA 합성효소(Asparaginyl-tRNA synthetase), KRS : 리실-tRNA 합성효소(Lysyl-tRNA synthetase), SRS : 세릴-tRNA 합성효소(Seryl-tRNA synthetase), YRS : 타이로실-tRNA 합성효소(Tyrosyl-tRNA synthetase), GRS : 글리실-tRNA 합성효소(Glycyl-tRNA synthetase), AIMP1/p43 : ARS 결합 다기능 단백질(Aminoacyl-tRNA-synthetase-interacting multifunctional protein 1)).
도 6은 본 발명의 항체가 AIMP1/p43을 detection 할 수 있는지를 확인하기 위한 ELISA 실험 결과이다(세로축 : 450nm 흡광도, 가로축 : AIMP1/p43 표준물질의 농도(ng/ml)).Figure 1 shows the results of a western blot experiment confirming whether the antibody of the present invention binds to the target protein AIMP1 / p43.
2 is a graph showing the binding affinity of the anti-AIMP1 / p43 scFv Biocon-AM1-1 antibody of the present invention measured by surface plasmon resonance (SPR) (Kd: equilibrium dissociation constant, Vertical axis: response unit (RU)).
FIG. 3 is a graph showing the binding affinity of the anti-AIMP1 / p43 scFv Biocon-AM1-2 antibody of the present invention measured by surface plasmon resonance (SPR) (Kd: equilibrium dissociation constant, Vertical axis: response unit (RU)).
FIG. 4 is a graph showing the cross activity of the anti-AIMP1 / p43 scFv Biocon-AM1-1 antibody of the present invention measured by the Luminex Multiplex Assay method (vertical axis (FI): fluorescence intensity, WRS: Tryptophanyl-tRNA synthetase, HRS: Histidyl-tRNA synthetase, NRS: Asparaginyl-tRNA synthetase, KRS: tRNA synthetase, SRS: seryl-tRNA synthetase, YRS: tyrosyl-tRNA synthetase, GRS: glycyl-tRNA synthetase, Glycyl-tRNA synthetase), AIMP1 / p43: ARS-binding multifunctional protein (Aminoacyl-tRNA-synthetase-interacting multifunctional protein 1).
5 is a graph showing the cross activity of the anti-AIMP1 / p43 scFv Biocon-AM1-2 antibody of the present invention measured by the Luminex Multiplex Assay method (vertical axis (FI): fluorescence intensity, WRS: Tryptophanyl-tRNA synthetase, HRS: Histidyl-tRNA synthetase, NRS: Asparaginyl-tRNA synthetase, KRS: tRNA synthetase, SRS: seryl-tRNA synthetase, YRS: tyrosyl-tRNA synthetase, GRS: glycyl-tRNA synthetase, Glycyl-tRNA synthetase), AIMP1 / p43: ARS-binding multifunctional protein (Aminoacyl-tRNA-synthetase-interacting multifunctional protein 1).
FIG. 6 shows the results of an ELISA experiment (longitudinal axis: absorbance at 450 nm, abscissa: concentration of AIMP1 / p43 standard substance (ng / ml)) to confirm whether the antibody of the present invention can detect AIMP1 / p43.

이하, 본 발명을 실시예에 의하여 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to examples.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
However, the following examples are illustrative of the present invention, and the present invention is not limited to the following examples.

<실시예 1>&Lt; Example 1 >

scFv 라이브러리 구축 및 항 AIMP1/p43 scFv 선별scFv library construction and anti-AIMP1 / p43 scFv screening

<1-1> scFv 라이브러리 구축<1-1> Construction of scFv library

scFv 라이브러리는 대한민국특허 10-0961392호에 나온 방법에 따라 구축하였다.The scFv library was constructed according to the method described in Korean Patent No. 10-0961392.

인간의 VH3-23/VL1g 유전자를 골격으로 하고 상보성 결정부위(complementarity determining regions, CDR)에 무작위 서열을 삽입하는 것으로 라이브러리를 설계하고, 베타락타메이즈 유전자를 선택마커(selection marker)로 가지는 플라스미드 벡터에서 베타락타메이즈 유전자의 리더서열 직후에 제한효소 절단서열들을 도입하여 pFDV 플라스미드 벡터를 제조하고 scFv 유전자 라이브러리를 삽입한 후, 대장균에 형질감염 시킨 후 이를 배양하여 라이브러리를 구축하였다. 이 과정을 통하여 라이브러리 내에서 비정상적인 정지코돈 혹은 프레임시프트(frameshift)를 가지는 scFv 유전자 서열을 대부분 제거하여 라이브러리의 품질을 향상시키는 것이 가능하다. 배양된 라이브러리로부터 오류가 제거된 서열들을 중합효소 연쇄반응으로 증폭한 후 이로부터 scFv 유전자 라이브러리를 재조합하여 pComb3X 파아지미드 벡터에 삽입하고, 이.콜라이 ER2537 스트레인의 대장균을 형질감염하여 최종 라이브러리를 획득하였다. 라이브러리를 카르베니실린을 함유하는 SB(Super broth) 배지 400 mL에 배양하고, 600 나노미터에서의 흡광도가 0.5가 되었을 때 1013 CFU의 VCSM13 보조파아지를 가하여 80 rpm에서 교반하며 1시간동안 섭씨 37도에서 감염시켰다. 여기에 최종 70 ug/mL의 카나마이신 항생제를 넣고 섭씨 30도, 200 rpm에서 교반하며 밤새 배양하여 scFv가 표면제시된 파지를 생산하였다. 다음날 아침에 배양액을 원심분리하고, 배양액 속의 파지를 4%의 폴리에틸렌글리콜-8000과 3%의 염화소듐을 가하여 침전시켰다. 침전된 파지를 50 mL의 PBS 완충용액에 녹이고, 위와 같은 방식으로 재차 침전하여 최종적으로 2 mL의 PBS 완충용액에 녹였다. 이를 원심분리하여 이물질을 제거함으로써 파지 scFv 라이브러리를 얻었으며 일반적으로 최종 파지 라이브러리에는 1013 CFU/mL 이상의 파지 입자가 포함된다.
The library was designed by inserting a random sequence into the complementarity determining regions (CDRs) of human VH3-23 / VL1g skeleton and using a plasmid vector having the beta lactamase gene as a selection marker The pFDV plasmid vector was prepared by introducing restriction enzyme cleavage sequences immediately after the leader sequence of the beta lactamase gene, inserted into the scFv gene library, transfected into Escherichia coli, and cultured to construct a library. Through this process it is possible to improve the quality of the library by removing most of the scFv gene sequences with abnormal stop codons or frame shifts in the library. After removing the error-eliminated sequences from the cultured library, the scFv gene library was amplified by the polymerase chain reaction, inserted into the pComb3X phagemid vector, and E. coli of strain E. coli ER2537 was transfected to obtain a final library . The library was incubated in 400 mL of SB (super broth) medium containing carbenicillin, and when the absorbance at 600 nm reached 0.5, 10 13 CFU of VCSM13 supplementary phage was added and stirred at 80 rpm for 37 h at 37 Infection was made in the province. The final 70 ug / mL kanamycin antibiotics were added and incubated overnight at 30 ° C and 200 rpm to produce scaffolded phage. On the next morning, the culture was centrifuged and the phage in the culture was precipitated by addition of 4% polyethylene glycol-8000 and 3% sodium chloride. The precipitated phage was dissolved in 50 mL of PBS buffer, precipitated again in the same manner as described above, and finally dissolved in 2 mL of PBS buffer solution. This was centrifuged to remove impurities and a phage scFv library was obtained. In general, the final phage library contains phage particles of 10 13 CFU / mL or more.

<1-2> 항 AIMP1/p43 scFv 선별<1-2> Selection of AIMP1 / p43 scFv

면역시험관(immunotube)에 10 ug/ml 농도의 AIMP1/p43을 첨가하여 1시간동안 시험관 표면에 단백질을 흡착시킨 후 분말우유 3% 용액을 시험관에 첨가하여 AIMP1/p43가 흡착되지 않은 표면을 보호하였다. 시험관을 비운 후 여기에 분말우유 3% 용액에 분산된 1012 CFU의 항체파지 라이브러리를 넣어 항원과 결합시켰다. 비특이적으로 결합한 파지를 TBST (tris buffered saline - tween20) 용액으로 3회 씻어낸 후, 남아있는 항원특이적 파지 항체를 100 mM 트리에틸아민 용액을 이용하여 용리하였다.
AIMP1 / p43 at a concentration of 10 ug / ml was added to the immunotube and the proteins were adsorbed to the surface of the test tube for 1 hour. A 3% solution of powdered milk was added to the test tube to protect the surface without AIMP1 / p43 adsorption . After the test tube was emptied, 10 12 CFU of antibody-phage library dispersed in a 3% powdered milk solution was added to bind the antigen. The non - specifically bound phage was rinsed 3 times with TBST (tris buffered saline - tween 20) solution, and the remaining antigen - specific retention antibody was eluted with 100 mM triethylamine solution.

용리된 파지를 1.0M 농도의 Tris-HCl 버퍼 (pH 7.8)로 중화시킨 후 ER2537 대장균에 37℃에서 1시간 감염시키고, 감염된 대장균을 카르베니실린을 함유하는 LB(Luria-Bertani) 한천배지에 도포하여 37℃에서 배양하였다. 다음날 배양된 대장균을 3 mL의 SB (super broth) - 카르베니실린 배양액에 현탁하고 15% 글리세롤을 첨가하여 일부는 -80℃에 보관하고, 나머지 중 50마이크로리터를 20 mL의 SB-카르베니실린-2% 포도당 용액에 접종하여 37℃에서 배양하였다. 배양액의 600 나노미터 광선의 흡광도가 0.5가 되면 원심분리하여 박테리아만을 분리하고, 이를 다시 20 mL의 SB-카르베니실린 배양액에 현탁한 후 1012PFU (플라크 형성단위)의 VCSM13 보조파지를 넣고 서서히 교반하며 37℃에서 배양하였다.The eluted phages were neutralized with a 1.0 M Tris-HCl buffer (pH 7.8) and then infected with ER2537 E. coli at 37 DEG C for 1 hour. The infected E. coli was applied to LB (Luria-Bertani) agar medium containing carbenicillin And cultured at 37 ° C. The next day, the cultured Escherichia coli was suspended in 3 mL of SB (super broth) -carbenicillin culture solution, 15% glycerol was added, a portion was stored at -80 DEG C, and 50 microliters of the remaining was added to 20 mL of SB- -2% glucose solution and incubated at 37 ° C. When the absorbance of the 600 nm light of the culture solution becomes 0.5, the bacteria are separated by centrifugation, suspended again in 20 mL of SB-carbenicillin culture medium, and then the VCSM13 auxiliary phage of 10 12 PFU (plaque forming unit) is slowly added And cultured at 37 캜 with stirring.

1시간 후 카나마이신 70ug/ml을 첨가하고 30℃에서 빠르게 교반하며 (250 rpm) 밤새 배양하였다. 다음날 배양액을 원심분리한 후, 파지 입자를 포함하는 상층액 1 mL을 라이브러리로 사용하여 위의 패닝 과정을 반복함으로써 항원특이적 클론을 농축시켰다.
One hour later, 70 ug / ml of kanamycin was added and incubated overnight (250 rpm) with rapid stirring at 30 캜. The next day, the culture was centrifuged and antigen-specific clones were concentrated by repeating the above panning procedure using 1 mL of supernatant containing phage particles as a library.

<실시예 2> &Lt; Example 2 >

항 AIMP1/p43 scFv 항체 발현 및 정제Anti-AIMP1 / p43 scFv antibody expression and purification

3-4회 정도의 반복적인 패닝 후 항체유전자를 포함하는 대장균을 카르베니실린을 함유하는 LB 한천배지에 도포, 배양하여 단일 콜로니들을 얻고, 이를 200 uL SB-카르베니실린 용액에 접종, 배양한 후 IPTG로 유도하여 scFv 단백질을 대장균의 페리플라즘(periplasm)에서 발현하였다. 대장균을 40 uL의 1X TES (50 mM Tris, 1 mM EDTA, 20% Sucrose, pH 8.0) 용액에 현탁한 후 여기에 0.2X TES 용액 60 uL를 가하고 섞어서 섭씨 4도에서 30분 이상 처리하고 원심분리하여 상층액으로 페리플라즘을 추출하였다.
After repeated panning about 3-4 times, E. coli containing the antibody gene was coated on an LB agar medium containing carbenicillin and cultured to obtain single colonies, which were inoculated and cultured in 200 μL SB-carbenicillin solution And then expressed in IPTG to express the scFv protein in the periplasm of E. coli. Escherichia coli was suspended in 40 μL of 1 × TES (50 mM Tris, 1 mM EDTA, 20% Sucrose, pH 8.0) solution, and then 60 μL of 0.2 × TES solution was added thereto. The mixture was treated at 4 ° C. for 30 minutes or more, And the periplasm was extracted with the supernatant.

<2-1> AIMP1/p43에 대해 선별된 scFv 항체 발현&Lt; 2-1 > Expression of scFv antibody selected for AIMP1 / p43

선별된 AIMP1/p43에 대한 scFv 양성 단일 콜로니 클론을 카르베니실린을 함유하는 SB 배지(Bactotrytone 30g, yeast extract 20g, MOPS buffer 10g/L)에 5 ml에 배양하여 seed culture를 시작하여 overnight 배양후 500ml 카네니실린함유 SB배지에 옮겨 OD 600 = 0.5 정도 되었을? IPTG를 1mM되게 넣어 30도에서 overnight 배양하여 scFv 단백질을 대장균의 페리플라즘(periplasm)에서 발현하였다. 다음날 원심분리하여 수득한 대장균을 1X TES buffer에 (50 mM Tris, 1 mM EDTA, 20% Sucrose, pH 8.0) 현탁한 후 0.2 X TES를 1.5배 첨가하여 섞어주고 원심분리하여 페리플라즘을 추출하였다.
A scFv positive single colony clone for the selected AIMP1 / p43 was cultured in 5 ml of SB medium containing carbenicillin (Bactotrytone 30 g, yeast extract 20 g, MOPS buffer 10 g / L), seed culture was started, Transferred to SB medium supplemented with kanethysiline and OD 600 = 0.5 or so? The scFv protein was expressed in the periplasm of E. coli by incubating overnight at 30 ° C. with 1 mM IPTG. The next day, E. coli obtained by centrifugation was suspended in 1 × TES buffer (50 mM Tris, 1 mM EDTA, 20% sucrose, pH 8.0) and then 0.2 × TES was added 1.5 times and the mixture was centrifuged to extract periplasm .

<2-2> 선별된 scFv 항체 정제&Lt; 2-2 > Purified scFv antibody purified

페리플라즘에서 추출한 scFv 항체에 최종 5 mM MgSO4를 가하고 이를 미리 PBS에 평형시킨 Ni-NTA bead 와 섞어 1시간 동안 냉장에서 교반하여 Ni- bead에 결합시킨후 친화도 크로마토그래피를 수행하여 결합하지 않은 단백질을 PBS로 충분히 씻어내었다. 5 mM Imidazole이 함유된 buffer로 더 충분히 씻어 준 다음 결합한 scFv 항체는 200 mM Imidazole buffer를 이용하여 용출하였다. 용출된 항체는 투석하여 전기이동을 통해 순도를 확인하고 BCA 방법으로 단백질 정량을 하여 정제된 항체양을 기록후 일정양을 분주하여 냉동 보관하였다
To the scFv antibody extracted from the periplasm, 5 mM MgSO 4 was added, and the mixture was mixed with Ni-NTA beads previously equilibrated with PBS. After stirring for 1 hour in the refrigerator, Ni-beads were bound and affinity chromatography was performed The remaining protein was washed away with PBS. After washing with a buffer containing 5 mM Imidazole, the bound scFv antibody was eluted with 200 mM Imidazole buffer. The eluted antibody was dialyzed and its purity was confirmed by electrophoresis. The protein amount was quantified by BCA method, and the amount of the purified antibody was recorded.

<2-3> 면역블롯 및 sequencing<2-3> Immunoblotting and sequencing

페리플라즘에서 추출한 scFv 항체는 면역블롯(western blot) 기법을 사용하여 human 세포에서 원래 발현된 AIMP1/p43에 scFv 항체가 결합하는지 여부를 확인하는 데 사용하였다. 50ug의 Hela cell lysate를 SDS PAGE를 통해 전기이동한 후 Wet transfer 방법으로 Nitrocellulos membrane에 옮겨 3% skim milk로 blocking 한후 추출한 scFv 항체를 첨가하여 결합시켰다. 검출을 위해 결합한 scFv에 HRP(horseradish peroxidase)가 연결된 Anti-HA 이차항체를 반응시킨후 기질로 ECL reagent를 이용하여 암실에서 필름 감광하였다. 감광된 띄는 표준 분자 마커와 비교하여 AIMP1/p43의 사이즈에 해당하는 띠를 확인하였다.
The scFv antibody from the periplasm was used to confirm whether the scFv antibody binds to AIMP1 / p43 originally expressed in human cells using the western blot technique. 50 ug of Hela cell lysate was electrophoresed through SDS PAGE, transferred to Nitrocellulos membrane by wet transfer method, blocked with 3% skim milk, and combined with scFv antibody. For detection, anti-HA secondary antibody conjugated with horseradish peroxidase (HRP) was reacted with bound scFv, and then film-sensitized with ECL reagent in the dark. A band corresponding to the size of AIMP1 / p43 was identified as compared to a dimeric stigmatization standard molecular marker.

이로부터 확인된 항원특이적 항체 클론은 카베니실린이 함유된 SB 배지 10ml에 overnight 배양하여 plasmid miniprep kit를 사용하여 plasmid DNA를 추출하여 Capillary sequencing service (Macrogen Co) 를 통해 염기서열을 분석하고 Kabat protein seqeunce database와 IMGT(the international ImMunoGeneTics information system) 분석방법에 근거하여 CDR 서열을 분석하였다.
The antigen-specific antibody clones identified from the above were incubated overnight in 10 ml of SB medium containing carbenicillin, plasmid DNA was extracted using a plasmid miniprep kit, the sequence was analyzed by Capillary sequencing service (Macrogen Co), and Kabat protein CDR sequences were analyzed based on the seqeunce database and IMGT (the international ImMunoGeneTics information system) analysis method.

그 결과 AIMP1/p43 항원과 결합한 scFv의 개수는 총 2 건이며, 이들의 염기서열은 서열번호 14 및 28 인 것으로 확인되었다.
As a result, the number of scFvs bound to the AIMP1 / p43 antigen was two in total, and the nucleotide sequences thereof were identified as SEQ ID NOS: 14 and 28.

<실시예 3>&Lt; Example 3 >

항 AIMP1/p43 scFv 항체의 친화도 측정Affinity measurement of anti-AIMP1 / p43 scFv antibody

AIMP1/p43 항원에 대한 본 발명 항체의 결합 친화도를 ProteOnTMXPR36 SPR (surface plasmon resonance) 바이오센서 (Bio-Rad 사)를 이용하여 측정하였다.
The binding affinity of the antibody of the present invention to the AIMP1 / p43 antigen was measured using ProteOnTMXPR36 surface plasmon resonance (SPR) biosensor (Bio-Rad).

구체적으로, 약 10 ug/ml의 AIMP1/p43 항원을 제조사의 설명서에 따라 GLC 칩(Bio-Rad 6 X 6 sensor chip, Compact capacity amine coupling for protein-protein interactions)에 약 2,000 내지 4,000 반응 단위 (response unit)로 고정화시킨 후, PBS를 이용하여 다양한 농도로 희석한 본 발명의 정제된 scFv 항체 (200-25nM) 30ul씩을 25℃에서 50 ul/min의 속도로 칩에 주입하여 항원과의 상호작용을 정량하였다. 칩의 표면은 0.85% phosphoric acid로 재생하였으며, ProteOn Manager 소프트웨어를 이용하여 연합 속도와 해리속도를 계산하였고, 평형 해리 상수 (KD)는 해리속도/연합속도 비로서 계산하였다
Specifically, about 10 ug / ml of AIMP1 / p43 antigen was added to a GLC chip (Bio-Rad 6 X 6 sensor chip, Compact capacity amine coupling for protein-protein interactions) according to the manufacturer's instructions in about 2,000 to 4,000 reaction units 30 ul of the purified scFv antibody (200-25 nM) of the present invention diluted to various concentrations by using PBS was injected into the chip at a rate of 50 μl / min at 25 ° C., and the interaction with the antigen Respectively. The surface of the chip was regenerated with 0.85% phosphoric acid and the combined speed and dissociation rate were calculated using ProteOn Manager software and the equilibrium dissociation constant (KD) was calculated as dissociation rate /

그 결과 [도 2] 및 [도 3]에서 보는 바와 같이, 본 발명의 항체는 최대 KD 70nM 값을 가져 비교적 높은 AIMP1/p43 친화도를 가지는 것을 확인하였다.
As a result, as shown in FIG. 2 and FIG. 3, it was confirmed that the antibody of the present invention had a maximum KD 70 nM value and had relatively high AIMP1 / p43 affinity.

<실시예 4><Example 4>

항 AIMP1/p43 scFv 항체 교차 반응성(cross activity) 측정Measure AIMP1 / p43 scFv antibody cross activity

scFv 항체가 다른 항원과 반응성이 있는지 판단하기 위하여 Luminex bead를 이용하여 본 발명의 항체와 AIMP1/p43 및 다른 ARS family protein과의 교차 반응성을 측정하였다.
The cross reactivity of the antibody of the present invention with AIMP1 / p43 and other ARS family proteins was measured using Luminex bead to determine whether the scFv antibody was reactive with other antigens.

<4-1> 각각의 protein이 결합된 Luminex bead 제조&Lt; 4-1 > Production of Luminex beads combined with each protein

Code No가 다른 각각의 bead에 protein의 amine 잔기를 결합시키기 위해 Bio-rad사의 Amine coupling kit의 실험과정에 따라 coupling을 수행하였다. 먼저 1 x106 에 해당하는 각각의 bead를 96well filter plate로 옮겨 activation buffer로 vacuum manifold를 이용하여 세척 후 50 mg/ml S-NHS(N-hydroxysulfosuccinimide)와 50 mg/ml EDAC (1-ethy-3-[3- dimethylaminopropyl]carbodiimide)를 첨가하여 상온에서 20 분 활성화시켰다. 활성화된 각각의 bead는 PBS로 세척 후 순도 90%이상의 정제된 각각의 재조합 ARS 항원 즉 WRS,HRS, NRS, KRS, SRS, YRS, GRS, AIMP1/p43(p43) 10 ug을 첨가하여 상온에서 2시간 반응시켰다. 각각의 ARS에 연결된 bead는 PBS로 2번 세척 후 Blocking buffer를 첨가하여 30분간 상온에서 반응시켜 결합하지 않은 잔기를 blocking 시킨후 PBS로 2번 세척 후 100ul PBS에 다시 현탁하고 빛이 차단된 tube에 보관하였다. 결합된 bead의 수는 hemocytometer로 측정하여 기록하였다.
Coupling was performed according to the experimental procedure of Bio-rad's Amine coupling kit to bind the amine residue of the protein to each bead of different Code No. First, each bead of 1 × 10 6 was transferred to a 96-well filter plate, washed with a vacuum manifold using an activation buffer, and incubated with 50 mg / ml S-NHS (N-hydroxysulfosuccinimide) and 50 mg / - [3-dimethylaminopropyl] carbodiimide) was added, and the mixture was allowed to react at room temperature for 20 minutes. Each of the activated beads was washed with PBS and then added with 10 ug of purified recombinant ARS antigens (WRS, HRS, NRS, KRS, SRS, YRS, GRS and AIMP1 / p43 Lt; / RTI &gt; The beads connected to each ARS were washed twice with PBS, blocked with buffer, and reacted at room temperature for 30 minutes to block unbound residues. After washing twice with PBS, the beads were suspended again in 100 μl PBS, Respectively. The number of combined beads was measured with a hemocytometer.

<4-2> Multiplex Assay를 이용한 Cross activity 측정<4-2> Cross activity measurement using Multiplex Assay

페리플라즘에서 추출된 본 발명의 항체를 검체 희석액 (PBST + 2% BSA)에 1:400농도로 우선 희석한 다음 96 well filter 플레이트에 검체 희석액으로 순차적으로 2배씩 희석하여 50ul 씩 분주하였고 항체가 없는 Blank well에는 검체 희석액만을 첨가하였다. ARS가 결합된 각각의 bead는 well 당 2000 개 bead가 되도록 bead mix tube에 각각 넣고 검체 희석액을 각 well당 50 ul 씩 분주 할 수 있는 부피만큼 넣어주었다. bead mix용액을 잘 섞은 후 각 well에 분주하여 암실에서 1시간 동안 반응 시켰다. 반응이 끝난 후 vacuum manifold를 이용하여 PBS (200 ul/well)로 3번 세척 후 50 ul Anti-(HA)-biotin 이차 항체를 첨가하여 암실에서 1시간동안 추가로 반응시켰다. 이차 항체와 결합한 bead는 PBS로 3번 세척후 형광 표지를 위해 SA-PE (Streptavidin- Phycoerythrin)을 2 ug/ml 되게 첨가하여 암실에서 30분간 반응시킨 후 PBS 3번 세척과정을 거쳐 PBS 100ul에 다시 현탁하였다. 형광 표지된 bead는 Bio-Plex (Luminex) 200 장비와 Bio-Plex manager 프로그램을 이용하여 형광 세기를 측정한 결과 값을 분석하여 각각의 ARS에 대한 항체의 결합여부를 확인하였다.
The antibody of the present invention extracted from the periplasm was first diluted in a 1: 400 concentration of a sample dilution (PBST + 2% BSA), diluted twice with a sample dilution buffer in a 96 well filter plate, Only sample dilution was added to blank wells. Each bead combined with ARS was placed into a bead mix tube to be 2,000 beads per well, and a volume of sample dilution was added to the wells in an amount of 50 ul per well. bead mix solution were mixed well, and each well was dispensed and reacted in a dark room for 1 hour. After completion of the reaction, the cells were washed three times with PBS (200 μl / well) using a vacuum manifold, and then 50 μl of anti- (HA) -biotin secondary antibody was further added thereto for 1 hr in the dark. The beads bound to the secondary antibody were washed three times with PBS and stained with 2 μg / ml of SA-PE (Streptavidin-Phycoerythrin) for fluorescent labeling. The beads were reacted in a dark room for 30 minutes, washed with PBS 3 times, Lt; / RTI &gt; Fluorescence-labeled beads were analyzed for fluorescence intensities using a Bio-Plex (Luminex) 200 instrument and a Bio-Plex manager program to confirm the binding of antibodies to each ARS.

그 결과 [도 4] 및 [도 5]에서 보는 바와 같이, 본 발명의 항체는 모든 농도에서 AIMP1/p43을 제외한 다른 ARS family protein과 반응하지 않는 것을 확인하였다.As a result, as shown in FIG. 4 and FIG. 5, it was confirmed that the antibody of the present invention did not react with other ARS family proteins except for AIMP1 / p43 at all concentrations.

따라서 본 발명의 항체는 다른 단백질과 교차 반응성이 없는 것을 확인하였다.
Therefore, it was confirmed that the antibody of the present invention was not cross-reactive with other proteins.

<< 실시예Example 5>  5>

정제된 항-The purified anti- AIMP1AIMP1 // p43p43 scFvscFv 항체를 이용한  Antibody-based sandwichsandwich ELISAELISA pairingpairing testtest

본 발명의 항체가 진단용 항체로의 유용성 여부를 알아보기 위해 AIMP1/p43 sandwich ELISA pairing test를 수행하였다 ELISA 구성중 capture 항체를 본 발명의 항체로 사용하고 detection 항체를 기존 제품의 rabbit 폴리클로날 항체로 pairing test를 해보아 AIMP1/p43 표준물질에 대한 정량 곡선이 만들어지는 지를 확인하였다.AIMP1 / p43 sandwich ELISA pairing test was performed to determine whether the antibody of the present invention was useful as a diagnostic antibody. In the ELISA construct, the capture antibody was used as an antibody of the present invention and the detection antibody was used as a rabbit polyclonal antibody Pairing test was performed to confirm the quantitative curve for AIMP1 / p43 standard material.

먼저 본 발명의 정제된 항체를 coating buffer (0.1M sodium carbonate pH 9.0)에 희석하여 well 당 100 - 400ng 되게 ELISA plate에 100ul 씩 분주한 후 상온에서 3시간 방치하였다. PBST로 3번 세척후 2% BSA를 함유한 PBST 350 ul를 첨가하여 상온에서 1시간 blocking한후 PBST로 3번 세척하였다. 항체를 coating한 plate well에 정제된 재조합 AIMP1/p43 표준물질을 농도별로 검체 희석액에 2배씩 희석하여 100 ul씩 넣고 상온에서 1시간 반응시켰다. 반응후 plate는 PBST로 3번 세척후 희석된 detection 항체 (4 ug/ml) 100 ul 첨가하여 추가로 상온에서 1시간 반응하였다. 검출을 위해 plate를 PBST 3번 세척후 HRP가 연결된 anti-rabbit IgG를 넣어 상온에서 1시간 반응시켜 결합시켰다. HRP에 의한 발색반응을 보고자 plate를 PBST로 3번 세척후 HRP 기질인 TMB solution 50 ul를 첨가하여 10분동안 발색반응을 보고 2N 황산 50 ul 첨가하여 발색반응을 멈춘후 ELISA reader를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.First, the purified antibody of the present invention was diluted in a coating buffer (0.1 M sodium carbonate pH 9.0) and dispensed in an amount of 100 to 400 ng per well in an ELISA plate, followed by standing at room temperature for 3 hours. After washing 3 times with PBST, 350 μl of PBST containing 2% BSA was added, followed by blocking at room temperature for 1 hour and then washing with PBST three times. The purified recombinant AIMP1 / p43 standard substance was diluted twice in duplicate in the sample dilution solution in a plate well coated with antibody, and 100 μl of each dilution was added to each well and reacted at room temperature for 1 hour. After the reaction, the plate was washed three times with PBST, and then 100 μl of the diluted detection antibody (4 μg / ml) was added, followed by further reaction at room temperature for 1 hour. For detection, the plate was washed three times with PBST, and HRP-conjugated anti-rabbit IgG was added thereto and allowed to react at room temperature for 1 hour. To evaluate the color reaction by HRP, the plate was washed three times with PBST, and then 50 μl of TMB solution, which is a HRP substrate, was added thereto. The color reaction was observed for 10 minutes and 50 μl of 2N sulfuric acid was added to stop the color reaction. The absorbance was measured.

그 결과 [도 6]에서 보는 바와 같이 재조합 AIMP1/p43 표준물질에 대해 ng/ml 농도에 해당하는 표준 직선이 그려짐을 확인 할 수 있었다. 이로서 본 발명의 항체가 암 진단용으로 사용 될 수 있는 것을 확인하였다.
As a result, it was confirmed that a standard line corresponding to the concentration of ng / ml was drawn for the recombinant AIMP1 / p43 standard material as shown in Fig. Thus, it was confirmed that the antibody of the present invention can be used for cancer diagnosis.

이상 살펴본 바와 같이, 본 발명의 항체 또는 그 단편은 인간 AIMP1/p43에 특이적으로 결합하며, 동일한 ARS family를 포함한 다른 단백질과 교차반응성이 없어 AIMP1/p43 검출 및 억제가 가능하므로 AIMP1/p43 검출 및 AIMP1/p43가 관련된 질환인 암질환 진단 및 치료 목적으로 사용될 수 있어 산업상 이용가능성이 높다.
As described above, the antibody or fragment thereof of the present invention specifically binds to human AIMP1 / p43 and is not cross-reactive with other proteins including the same ARS family, so that AIMP1 / p43 can be detected and inhibited. AIMP1 / p43 can be used for diagnosis and treatment of cancer diseases, which are related diseases, and thus it is highly likely to be used in industry.

<110> Medicinal Bioconvergence Research Center <120> Anti-AIMP1/p43 monoclonal antibody and uses thereof <130> NP13-0081 <160> 28 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR1 of Biocon AM1-1 <400> 1 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Asp Val Ser 1 5 10 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR2 of Biocon AM1-1 <400> 2 Ala Asp Ser Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR3 of Biocon AM1-1 <400> 3 Gly Ser Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Tyr Val 1 5 10 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH-CDR1 of Biocon AM1-1 <400> 4 Ser Tyr Asp Met Ser 1 5 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH-CDR2 of Biocon AM1-1 <400> 5 Val Ile Ser Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Arg 1 5 10 15 Gly <210> 6 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH-CDR3 of Biocon AM1-1 <400> 6 Asp Val Met Lys Thr Gly 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attactgtgg ttcttgggat gatagcctga gtggttatgt cttcggcgga 720 ggcaccaagc tgacggtcct a 741 <210> 15 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR1 of Biocon AM1-2 <400> 15 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Ala Val Asn 1 5 10 <210> 16 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR2 of Biocon AM1-2 <400> 16 Ala Asn Ser His Arg Pro Ser 1 5 <210> 17 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR3 of Biocon AM1-2 <400> 17 Gly Ser Trp Asp Ser Ser Leu Asn Gly Tyr Val 1 5 10 <210> 18 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH-CDR1 of Biocon AM1-2 <400> 18 Asn Tyr Asp Met Ser 1 5 <210> 19 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH-CDR2 of Biocon AM1-2 <400> 19 Ser Ile Tyr Pro Asn Gly Ser Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 20 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH-CDR3 of Biocon AM1-2 <400> 20 Asp Val Leu Leu Cys Ile Ser Met Arg Cys Tyr Tyr Ala Asp Gly Met 1 5 10 15 Asp 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catcagtggg 660 ctccggtccg aagatgaggc tgattattac tgtggttctt gggattctag cctgaatggt 720 tatgtcttcg gcggaggcac caagctgact gtccta 756 <110> Medicinal Bioconvergence Research Center <120> Anti-AIMP1 / p43 monoclonal antibodies and uses thereof <130> NP13-0081 <160> 28 <170> Kopatentin 2.0 <210> 1 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR1 of Biocon AM1-1 <400> 1 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Asp Val Ser   1 5 10 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR2 of Biocon AM1-1 <400> 2 Ala Asp Ser Lys Arg Pro Ser   1 5 <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR3 of Biocon AM1-1 <400> 3 Gly Ser Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Tyr Val   1 5 10 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH-CDR1 of Biocon AM1-1 <400> 4 Ser Tyr Asp Met Ser   1 5 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH-CDR2 of Biocon AM1-1 <400> 5 Val Ile Ser Ser Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 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                165 170 175 Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Asp Ser Lys Arg             180 185 190 Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser         195 200 205 Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr     210 215 220 Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Tyr Val Phe Gly Gly 225 230 235 240 Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu                 245 <210> 14 <211> 741 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> scFv of Biocon AM1-1 <400> 14 gaggtgcagc tgttggagtt cctgggggaa ggcttggtac agcctggggg gtccctgaga 60 ctctcctgtg cagcctctgg attcaccttt agcagttatg atatgagctg ggtccgccag 120 gctccaggga aggggctgga gtgggtctca gtgatctctt ctgatggtgg tagtacatat 180 tacgctgatt ctgtaagagg tcggttcacc atctccagag acaattccaa gaacacgctg 240 tatctgcaaa tgaacagcct gagagccgag gacacggccg tgtattactg tgcgaaagat 300 gttatgaaga cggggacgtt ggttttcgac tactggggcc agggtacact ggtcaccgtg 360 agctcaggtg gaggcggttc aggcggaggt ggatccggcg gtggcggatc gcagtctgtg 420 ctgactcagc caccctcagc gtctgggacc cccgggcaga gggtcaccat ctcttgtagt 480 ggctcttcat ctaatattgg cagtaatgat gtctcctggt accagcagct cccaggaacg 540 gcccccaaac tcctcatcta tgctgatagt aagcggccaa gcggggtccc tgaccgattc 600 tctggctcca agtctggcac ctcagcctcc ctggccatca gtgggctccg gtccgaggat 660 gaggctgatt attactgtgg ttcttgggat gatagcctga gtggttatgt cttcggcgga 720 ggcaccaagc tgacggtcct a 741 <210> 15 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR1 of Biocon AM1-2 <400> 15 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Ala Val Asn   1 5 10 <210> 16 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR2 of Biocon AM1-2 <400> 16 Ala Asn Ser His Arg Pro Ser   1 5 <210> 17 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR3 of Biocon AM1-2 <400> 17 Gly Ser Trp Asp Ser Ser Leu Asn Gly Tyr Val   1 5 10 <210> 18 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH-CDR1 of Biocon AM1-2 <400> 18 Asn Tyr Asp Met Ser   1 5 <210> 19 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH-CDR2 of Biocon AM1-2 <400> 19 Ser Ile Tyr Pro Asn Gly Ser Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys   1 5 10 15 Gly     <210> 20 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH-CDR3 of Biocon AM1-2 <400> 20 Asp Val Leu Leu Cys Ile Ser Met Arg Cys Tyr Tyr Ala Asp Gly Met   1 5 10 15 Asp Val         <210> 21 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR1 of Biocon AM1-2 <400> 21 agtggctctt catctaatat tggcaataat gctgtcaac 39 <210> 22 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR2 of Biocon AM1-2 <400> 22 gctaatagtc atcggccaag c 21 <210> 23 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VL-CDR3 of Biocon AM1-2 <400> 23 ggttcttggg attctagcct gaatggttat gtc 33 <210> 24 <211> 15 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH-CDR1 of Biocon AM1-2 <400> 24 aattatgata tgagc 15 <210> 25 <211> 51 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH-CDR2 of Biocon AM1-2 <400> 25 tcgatctatc ctaatggtag tagtaaatat tacgctgatt ctgtaaaagg t 51 <210> 26 <211> 54 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VH-CDR3 of Biocon AM1-2 <400> 26 gatgttcttt tgtgtatttc tatgaggtgt tattatgctg atggtatgga cgtc 54 <210> 27 <211> 252 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> scFv of Biocon AM1-2 <400> 27 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly   1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr              20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val          35 40 45 Ser Ser Ile Tyr Pro Asn Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser      50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr  65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys                  85 90 95 Ala Arg Asp Val Leu Leu Cys Ile Ser Met Arg Cys Tyr Tyr Ala Asp             100 105 110 Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly         115 120 125 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser     130 135 140 Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val 145 150 155 160 Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Ala Val                 165 170 175 Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr             180 185 190 Ala Asn Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser         195 200 205 Gln Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu     210 215 220 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ser Ser Leu Asn Gly 225 230 235 240 Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu                 245 250 <210> 28 <211> 756 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> scFv of Biocon AM1-2 <400> 28 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc aattatgata tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcg atctatccta atggtagtag taaatattac 180 gctgattctg taaaaggtcg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagatgtt 300 cttttgtgta tttctatgag gtgttattat gctgatggta tggacgtctg gggccagggt 360 acactggtca ccgtgagctc aggtggaggc ggttcaggcg gaggtggatc cggcggtggc 420 ggatcgcagt ctgtgctgac tcagccaccc tcagcgtctg ggacccccgg gcagagggtc 480 accatctctt gtagtggctc ttcatctaat attggcaata atgctgtcaa ctggtaccag 540 cagctcccag gaacggcccc caaactcctc atctatgcta atagtcatcg gccaagcggg 600 gtccctgacc gattctctgg ctcccagtct ggcacctcag cctccctggc catcagtggg 660 ctccggtccg aagatgaggc tgattattac tgtggttctt gggattctag cctgaatggt 720 tatgtcttcg gcggaggcac caagctgact gtccta 756

Claims (13)

i) 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L1, 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L2, 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L3을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL) 및 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H1, 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H2, 서열번호 6으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H3을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH)을 포함하는 항체; 및
ii) 서열번호 15로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L1, 서열번호 16으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L2, 서열번호 17로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)L3을 포함하는 항체 경쇄가변영역(VL) 및 서열번호 18로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H1, 서열번호 19로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H2, 서열번호 20으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정부위(CDR)H3을 포함하는 항체 중쇄가변영역(VH)을 포함하는 항체; 로 이루어지는 군에서 선택된 인간 AIMP1/p43에 결합하는 항체 또는 그 단편.
i) a complementarity determining region (CDR) L1 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a complementarity determining region (CDR) L2 including the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2, and an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 An antibody light chain variable region (VL) comprising the complementarity determining region (CDR) L3 and a complementary crystal region (CDR) H1 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 4, a complementary region comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 An antibody heavy chain variable region (VH) comprising a crystal region (CDR) H2, a complementary crystal region (CDR) H3 comprising an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6; And
ii) a complementarity determining region (CDR) L1 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15, a complementarity determining region (CDR) L2 including the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 16, and an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: An antibody light chain variable region (VL) comprising the complementarity determining region (CDR) L3 and a complementary crystal region (CDR) H1 comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 18, a complementary region comprising the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 19 An antibody heavy chain variable region (VH) comprising a crystal region (CDR) H2, a complementary crystal region (CDR) H3 comprising an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 20; Lt; / RTI &gt; selected from the group consisting of human AIMP1 / p43.
제1항에 있어서, 상기 항체는
i) 경쇄가변영역으로 서열번호 13의 138 번째 내지 247 번째 아미노산 서열을 포함하며, 중쇄가변영역으로 서열번호 13의 1 번째 내지 122 번째 아미노산 서열을 포함하는 항체; 또는
ii) 경쇄가변영역으로 서열번호 27의 143 번째 내지 252 번째 아미노산 서열을 포함하며, 중쇄가변영역으로 서열번호 27의 1 번째 내지 127 번째 아미노산 서열을 포함하는 항체;
인 것을 특징으로 하는 인간 AIMP1/p43에 결합하는 항체 또는 그 단편.
2. The method of claim 1,
i) an antibody comprising a 138th to 247th amino acid sequence of SEQ ID NO: 13 as a light chain variable region and a 1 to 122nd amino acid sequence of SEQ ID NO: 13 as a heavy chain variable region; or
ii) an antibody comprising the 143th to 252nd amino acid sequence of SEQ ID NO: 27 as the light chain variable region and the 1 st to 127nd amino acid sequence of SEQ ID NO: 27 as the heavy chain variable region;
Wherein the antibody or fragment thereof binds human AIMP1 / p43.
제1항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 13 또는 서열번호 27로 표시되는 아미노산서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 단편.
The antibody or fragment thereof according to claim 1, wherein the antibody comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13 or SEQ ID NO: 27.
제1항에 있어서, 상기 단편은 디아바디, Fab, Fab', F(ab)2, F(ab')2, Fv 및 scFv로 이루어진 군에서 선택되는 단편인 것을 특징으로 하는 항체 또는 그 단편.
The antibody or fragment thereof according to claim 1, wherein the fragment is a fragment selected from the group consisting of diabodies, Fab, Fab ', F (ab) 2 , F (ab') 2 , Fv and scFv.
제1항의 항체 또는 그 단편을 암호화 하는 폴리뉴클레오티드.
A polynucleotide encoding the antibody of claim 1 or a fragment thereof.
제5항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드는
i) 서열번호 7 내지 12 중 하나로 표시되는 폴리뉴클레오티드; 또는
ii) 서열번호 21 내지 26 중 하나로 표시되는 폴리뉴클레오티드;
를 포함하는 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드.
6. The polynucleotide according to claim 5, wherein the polynucleotide is
i) a polynucleotide represented by any one of SEQ ID NOS: 7 to 12; or
ii) a polynucleotide represented by one of SEQ ID NOS: 21 to 26;
&Lt; / RTI &gt;
제5항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
A vector comprising the polynucleotide of claim 5.
제7항의 벡터를 포함하는 세포.
7. A cell comprising the vector of claim 7.
제8항의 세포를 폴리뉴클레오티드가 발현되는 조건하에서 배양하여, 경쇄 및 중쇄가변영역을 포함하는 폴리펩타이드를 생산하는 단계 및 상기 세포 또는 이를 배양한 배양 배지로부터 상기 폴리펩타이드를 회수하는 단계를 포함하는 인간 AIMP1/p43에 결합하는 항체 또는 그 단편의 생산방법.
Culturing the cells of claim 8 under a condition that the polynucleotide is expressed to produce a polypeptide comprising a light chain and a heavy chain variable region and recovering the polypeptide from the cell or a culture medium in which the polypeptide is cultured A method for producing antibodies or fragments thereof that bind to AIMP1 / p43.
제1항의 항체 또는 그 단편을 시료와 접촉시키는 단계 및 상기 항체 또는 그 단편을 검출하는 단계를 포함하는 AIMP1/p43 특이적 검출 방법.
A method for detecting AIMP1 / p43, comprising contacting the antibody of claim 1 or a fragment thereof with a sample and detecting the antibody or fragment thereof.
삭제delete 제1항의 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 암 진단용 조성물.
A cancer diagnostic composition comprising the antibody of claim 1 or a fragment thereof as an active ingredient.
제1항의 항체 또는 그 단편을 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 진단용 조성물.A composition for the diagnosis of inflammatory diseases, comprising the antibody of claim 1 or a fragment thereof as an active ingredient.
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