KR101868507B1 - 효소처리 그라비올라 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염 및 주름 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법 - Google Patents

효소처리 그라비올라 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염 및 주름 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 효소처리 그라비올라(Annona Muricata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염 및 주름 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명으로부터 제공되는 효소처리 그라비올라(Annona Muricata) 추출물은 항산화, 항염 및 주름 개선 효과가 우수하기 때문에, 이를 유효 성분으로 화장료 베이스에 적용하였을 때 화장료 조성물로서의 효과가 우수하다.

Description

효소처리 그라비올라 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염 및 주름 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법{Cosmetic Composition for Anti-oxidation, Anti-inflammatory and Anti-wrinkling Comprising Enzyme-treated Extracts of Annona Muricata and Method for Manufacturing the Same}
본 발명은 효소처리 그라비올라(Annona Muricata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염 및 주름 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
그라비올라(Annona Muricata)는 포포나무과(Annonacea)에 속하며 약 2300종을 포함하는데, 그 중 약 130속이 미국, 아프리카, 아시아, 브라질 등지에 널리 분포되어있다. 나무높이는 6~7m이고, 잎은 달걀모양 또는 긴 타원형이고, 길이가 7.5~15㎝이며, 잎 끝은 뾰족하고 잎자루 부분은 쐐기모양이다. 잎은 매끈하고 윤기가 나며 잎자루는 짧다. 꽃은 향기가 강하고 길이는 0.5~2.5㎝이며, 꽃받침 조각은 꽃잎에서 떨어져 있는데 그 크기가 3~5㎝이다. 꽃잎은 6장의 겹잎으로 되어 있으며, 겉꽃잎은 두껍고 가죽질이며 넓은 달걀모양인데 끝은 뾰족하고 부드러운 털이 덮여있다. 열매의 무게는 2㎏ 정도이며 6㎏까지 나가는 것도 있다. 열매는 타원형으로 녹색을 띠는데 향기가 나며 겉면에는 가시가 있다.
그라비올라는 근래에 들어서 신이 내린 기적의 식물이라는 찬사를 받을 만큼 인체에 유익한 효능을 가진다고 알려져서 주목받고 있다. 대표적인 효과로는 항암효과로 암세포가 자라지 못하도록 영양공급통로를 차단해서 암세포가 스스로 자멸하게 되는 효능이 있다고 하여 대체 암치료법에 사용되기도 한다. 최근에 병원에서 사용하고 있는 화학약품인 아드리아미신(Adriamycin) 보다 강력한 암세포 사멸효과가 있으며 대장암, 간암, 위암, 췌장암, 유방암, 전립선암, 폐암 등 모든 암 암세포의 성장을 억제하는 효과가 있다고 하여 큰 관심을 받고 있다.
또한, 그라비올라는 항균력이 탁월하다고 알려져 있다. 따라서 박테리아 감염을 효과적으로 치료하고 인체 전반에 걸쳐 광범위한 항미생물제 기능을 하여 기생충 사멸효과도 기대할 수 있다.
그라비올라(Annona Muricata) 추출물을 이용하여 다양한 용도에 적용되고 있는 기술로는, 대한민국 공개특허공보 제10-2017-0047515호「그라비올라 항균 추출물을 함유하는 피부 활력 증진용 화장료 조성물 및 그 제조방법」, 대한민국 등록특허공보 제10-1648148호「그라비올라 발효액을 유효성분으로 하는 피부 주름개선용 화장료 조성물 및 그의 제조방법」, 대한민국 등록특허공보 제10-1763163호「브로콜리 또는 배추가 첨가됨으로써 항산화능이 강화된 그라비올라 조성물」등이 개시되어 있다.
이에, 본 발명자들은 그라비올라(Annona Muricata)를 효소 처리하여 추출물을 제조할 경우, 우수한 항산화, 항염 및 주름 개선 효과를 부여할 수 있다는 사실을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.
대한민국 공개특허공보 제10-2017-0047515호 대한민국 등록특허공보 제10-1648148호 대한민국 등록특허공보 제10-1763163호
본 발명의 목적은 효소처리 그라비올라(Annona Muricata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염 및 주름 개선용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 효소처리 그라비올라(Annona Muricata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염 및 주름 개선용 화장료 조성물의 제조방법을 제공하는 데 있다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 효소처리 그라비올라(Annona Muricata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염 및 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 효소는 셀룰라아제(Cellulase) 및 펙티나아제(Pectinase)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 셀룰라아제(Cellulase) 및 펙티나아제(Pectinase)는 1: 1 ~ 5 중량비로 혼합된 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 효소처리 그라비올라(Annona Muricata) 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 50중량% 포함되는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 효소처리 그라비올라(Annona Muricata) 추출물은 DPPH 자유라디칼 소거능, 니트릭 옥사이드(Nitric oxide) 생성 저해능 및 엘라스타아제(Elastase) 저해능을 갖는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명은 그라비올라(Annona Muricata)에 효소를 첨가하여 효소반응시키는 단계; 효소처리된 그라비올라(Annona Muricata)에 에탄올을 첨가하여 효소를 침전시키고 원심분리하는 단계; 및 침전된 효소를 제거하고 교반추출하여 효소처리된 그라비올라(Annona Muricata) 추출물을 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화, 항염 및 주름 개선용 화장료 조성물의 제조방법을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 효소는 셀룰라아제(Cellulase) 및 펙티나아제(Pectinase)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 셀룰라아제(Cellulase) 및 펙티나아제(Pectinase)는 1: 1 ~ 5 중량비로 혼합된 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 효소반응은 30 내지 55℃에서 30 내지 120분 동안 수행되는 것을 특징으로 한다.
본 발명으로부터 제공되는 효소처리 그라비올라(Annona Muricata) 추출물은 항산화, 항염 및 주름 개선 효과가 우수하기 때문에, 이를 유효성분으로 화장료 베이스에 적용하였을 때 화장료 조성물로서의 효과가 우수하다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 효소처리 그라비올라 추출물, 그라비올라 추출물 및 그라비올라 발효 추출물의 대식세포(RAW 264.7)에 대한 세포독성 평가를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 효소처리 그라비올라 추출물, 그라비올라 추출물 및 그라비올라 발효 추출물의 DPPH 자유라디칼 소거능을 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 효소처리 그라비올라 추출물, 그라비올라 추출물 및 그라비올라 발효 추출물의 니트릭 옥사이드(Nitric oxide) 생성 저해능을 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 효소처리 그라비올라 추출물, 그라비올라 추출물 및 그라비올라 발효 추출물의 엘라스타아제(Elastase) 저해능을 나타낸 그래프이다.
다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법 은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.
본원 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성 요소를 "포함" 한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성 요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
본 발명에서는 효소처리 그라비올라(Annona Muricata) 추출물로부터 DPPH 자유라디칼 소거능, 니트릭 옥사이드(Nitric oxide) 생성 저해능 및 엘라스타아제(Elastase) 저해능을 확인한 결과, 우수한 항산화, 항염 및 주름 개선 효과가 있음을 확인하였다.
따라서, 본 발명은 일 관점에서, 효소처리 그라비올라(Annona Muricata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항산화, 항염 및 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 '효소처리 그라비올라(Annona Muricata) 추출물'이라 함은 그라비올라(Annona Muricata)에 효소를 가하여 혼합한 후, 혼합액을 용매를 이용하여 추출한 추출물을 의미한다.
상기 효소는 셀룰라아제(Cellulase) 및 펙티나아제(Pectinase)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것이 유효 성분의 수득이 최적으로 증가되어 항산화, 항염 및 주름 개선 효능이 현저하게 증대된다는 측면에서 바람직하다.
또한, 상기 셀룰라아제(Cellulase) 및 펙티나아제(Pectinase)는 1: 1 ~ 5 중량비로 혼합하는 것이 DPPH 자유라디칼 소거능, 니트릭 옥사이드(Nitric oxide) 생성 저해능 및 엘라스타아제(Elastase) 저해능이 가장 우수하다는 측면에서 바람직하다.
상기 그라비올라(Annona Muricata)에 효소를 처리할 경우, 효소는 그라비올라(Annona Muricata) 100 중량부 대비 5 내지 15 중량부로 첨가되는 것이 수율이 현저하게 증대된다는 측면에서 바람직하다.
상기 효소처리 그라비올라(Annona Muricata) 추출물은 DPPH 자유라디칼 소거능, 니트릭 옥사이드(Nitric oxide) 생성 저해능 및 엘라스타아제(Elastase) 저해능을 갖는 것을 특징으로 한다.
본 발명은 또 다른 관점에서, 그라비올라(Annona Muricata)에 효소를 첨가하여 효소반응시키는 단계; 효소처리된 그라비올라(Annona Muricata)에 에탄올을 첨가하여 효소를 침전시키고 원심분리하는 단계; 및 침전된 효소를 제거하고 교반추출하여 효소처리된 그라비올라(Annona Muricata) 추출물을 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화, 항염 및 주름 개선용 화장료 조성물의 제조방법에 관한 것이다.
상기 효소는 셀룰라아제(Cellulase) 및 펙티나아제(Pectinase)로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것이 유효 성분의 수득이 최적으로 증가되어 항산화, 항염 및 주름 개선 효능이 현저하게 증대된다는 측면에서 바람직하다.
또한, 상기 셀룰라아제(Cellulase) 및 펙티나아제(Pectinase)는 1: 1 ~ 5 중량비로 혼합하는 것이 DPPH 자유라디칼 소거능, 니트릭 옥사이드(Nitric oxide) 생성 저해능 및 엘라스타아제(Elastase) 저해능이 가장 우수하다는 측면에서 바람직하다.
상기 그라비올라(Annona Muricata)에 효소를 첨가하여 효소반응시킬 경우, 효소반응을 더욱 원활하게 하기 위해 물을 첨가한 후 교반하여 반응시키는 것일 수 있다.
상기 효소반응은 30 내지 55℃에서 30 내지 120분 동안 수행되는 것이 전환 및 추출 효율 측면에서 바람직하다. 만일, 상기 온도 및 시간이 상기 범위를 벗어날 경우에는 효소전환이 일어나지 않아 충분한 항산화, 항염 및 주름 개선 효과를 나타낼 수 없기 때문에 바람직하지 않다.
상기 효소처리된 그라비올라(Annona Muricata)에 에탄올을 첨가하여 효소를 침전시키고 원심분리한 다음, 필터 등의 일반적인 여과방법을 이용하여 침전된 효소를 제거시킨 후, 교반추출하여 효소처리 그라비올라(Annona Muricata) 추출물을 제조하는 것을 특징으로 한다.
상기 교반추출은 80 내지 105℃에서 120 내지 240분 동안 수행되는 것이 추출 수율 및 유효성분이 강화되는 측면에서 바람직하다. 만일, 상기 온도 및 시간이 상기 범위를 벗어날 경우에는 유효성분이 충분히 용해되지 않아 충분한 항산화, 항염 및 주름 개선 효과를 나타낼 수 없기 때문에 바람직하지 않다.
상기 효소처리 그라비올라(Annona Muricata) 추출물은 추출액, 상기 추출액을 건조시킨 분말, 상기 추출액을 농축여과한 농축물 등 다양한 형태로 가공되어 이용될 수 있다.
전술된 바와 같이, 효소처리 그라비올라(Annona Muricata) 추출물은 DPPH 자유라디칼 소거능, 니트릭 옥사이드(Nitric oxide) 생성 저해능 및 엘라스타아제(Elastase) 저해능이 우수하기 때문에 항산화, 항염 및 주름 개선용 조성물로 사용될 수 있다.
본 발명의 항산화, 항염 및 주름 개선용 화장료 조성물은 피부외용연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 아이크림, 모이스처 크림, 핸드 크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디 로션 및 바디 클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들 각 제형의 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 항산화, 항염 및 주름개선용 화장료 조성물에서, 상기 효소처리 그라비올라(Annona Muricata) 추출물은 상기 조성물의 총 중량을 기준으로 0.01 내지 50 중량% 함유되어 있을 수 있고, 바람직하게는 10 내지 30 중량% 함유되어 있을 수 있으나, 바람직한 항산화, 항염 및 주름개선 효과를 제공할 수 있는 유효량을 포함한다면 이에 제한되지 않는다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명 하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
<실시예 1> 효소처리 그라비올라 추출물 제조
경북 영천에서 구입한 그라비올라 분말(200mesh) 100g에 셀룰라아제(Cellulase)(Novozyme) 1g 및 펙티나아제(Pectinase)(Novozyme) 1g를 1:1로 혼합한 혼합액 10g 및 물 300ml을 첨가하여 50℃에서 12시간 동안 추출하였다. 수득된 추출물에 에탄올(EtOH) 3L를 첨가하여 효소를 침전시킨 다음 원심분리기를 8,000rpm, 20분간 이용하여 제거하였다. 남은 잔사 및 용액은 상온에서 3일 동안 교반추출한 다음 감압농축 및 동결건조하여 최종 효소처리 그라비올라 추출물을 수득하였다.
<실시예 2~5> 효소처리 그라비올라 추출물 제조
셀룰라아제(Cellulase) 및 펙티나아제(Pectinase)를 각각 아래의 표 1과 같이 혼합한 것을 제외하고는, 상기 실시예 1의 효소처리 그라비올라 추출물과 동일한 방법으로 제조하였다.
효소 효소 첨가량
실시예 2 실시예 3 실시예 4 실시예 5
셀룰라아제(S) 1g 1g 1g 1g
펙티나아제(P) 2g 3g 4g 5g
효소 처리비(S:P) 1 : 2 1 : 3 1 : 4 1 : 5
<비교예 1> 그라비올라 추출물 제조
효소를 처리하지 않는 것을 제외하고는, 상기 실시예 1와 동일한 방법으로 그라비올라 추출물을 제조하였다. 즉, 경북 영천에서 구입한 그라비올라 분말(200mesh) 100g에 물 300ml을 첨가하여 80℃에서 12시간 동안 추출한 다음 감압농축 및 동결건조하여 최종 그라비올라 추출물을 수득하였다.
<실험예 1> 세포독성 시험 : WST assay
실시예 1~5 및 비교예 1의 추출물을 이용하여 세포에 대한 자극성을 갖는지 확인하기 위해 대식세포(RAW 264.7)를 대상으로 세포독성 실험을 진행하였다. 대식세포의 일종인 RAW 264.7cell을 1% 페니실린/스크랩토마이신, 10% FBS(Fetal bovineserum)가 포함된 DMEM 배지를 이용하여 24well plate에 1.0X104cell/well씩 동일하게 계수하여 분주한 후, 37℃, 5%의 이산화탄소 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 배양한 cell에 실시예 1~5 및 비교예 1을 각각 농도별로 배지와 혼합한 다음, 각 well에 1ml씩 첨가한 후 37℃, 5% CO2 조건의 Incubator에서 24시간 동안 반응시켰다. 이후 각 well의 상등액 만을 따로 취한 뒤 각 well에 WST-1 assay solution(ez-cytox)을 첨가하여 배양기에서 2시간 반응시킨 후 ELISA reader기를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다.
세포 생존율은 시료를 처리하지 않은 처리군(무처리군)과 비교하여 아래의 수학식 1을 이용하여 계산하였다.
[수학식 1]
세포 생존율(%) = (시료 처리군의 흡광도 / 시료 무처리군의 흡광도) X 100
그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이 대식세포(RAW 264.7)에 대한 세포생존율의 경우, 실시예 1~5 및 비교예 1의 추출물 모두 세포 생존에 대한 독성을 나타내지 않아 화장품에 안전한 소재로 사용이 가능함을 확인하였다.
<실험예 2> 항산화 효능 시험 : 자유라디칼 생성 저해 활성
실시예 1~5 및 비교예 1의 추출물을 이용하여 항산화 효과를 평가하기 위해 DPPH의 자유라디칼 소거능 실험을 진행하였다. 실시예 1~5 및 비교예 1을 50(㎍/㎖)의 농도로 희석한 다음, 0.1M DPPH 250㎕(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 용액을 혼합한 후 4℃에서 30분 동안 반응시켰다. 반응이 끝나면 각 sample을 96well plate에 담아 ELISA reader기를 이용하여 520nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때, 양성 대조군으로 아스코르브산(Ascorbic acid)를 사용하였으며, 시료를 넣지 않은 경우를 대조군으로 하여 아래의 수학식 2를 이용하여 자유라디칼 소거량(Free radical scavenging activity, %)을 계산하였다.
[수학식 2]
자유라디칼 소거능(%)=[100-(시료 처리군의 흡광도/시료 무처리 군의 흡광도 X 100)]
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이 비교예 1 대비 실시예 1~5가 DPPH 자유라디칼 소거능이 우수하였으며, 실시예 1~5 중에서도 실시예 3에서 자유라디칼 소거능이 현저하게 높아 항산화 효과가 우수함을 확인하였다.
<실험예 3> 항염 효능 시험 : 니트릭 옥사이드(Nitric oxide) 생성 저해 활성
실시예 1~5 및 비교예 1의 추출물을 이용하여 항염증 활성도를 측정하기 위해서 염증 유도반응에 의해 생성되는 니트릭 옥사이드(Nitric oxide)의 농도를 측정하는 실험을 실시하였다. 대식세포의 일종인 RAW 264.7 cell을 1% 페니실린/스크랩토마이신, 및 10% FBS(Fetal bovineserum)가 포함된 DMEM 배지를 이용하여 24well plate에 1.0X104cell/well씩 동일하게 계수하여 분주한 후, 37℃, 5%의 이산화탄소 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 배양한 cell에 실시예 1~5 및 비교예 1 추출물을 50(㎍/㎖)농도로 배지와 혼합한 후, 각 well에 1ml씩 첨가하고 37℃, 5% CO2조건의 인큐베이터에서 24시간 반응시켰다. 이때, NO를 발현시키는 염증유발인자인 LPS(Lipo poly saccharide)를 1㎍/㎖의 농도로 같이 처리하고 37℃, 5%의 이산화탄소 조건에서 24시간 동안 반응시켰다. 이후 각 well의 상등액 만을 따로 취한 뒤 각 well에 Nitric Oxide detection kit를 이용하여 배양액 중 100㎖ 를 96well plate에 취하고 Griess reagent A(N-1-Naphthylethylenediamine (NEDHC)) 50㎕ 및 Griess reagent B(Sulfanilamide) 50㎕를 각각 넣어준 뒤 10분 동안 반응시킨 후, ELISA plate reader를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이 비교예 1 대비 실시예 1~5가 니트릭 옥사이드(Nitric oxide) 생성 저해능이 우수하였으며, 실시예 1~5 중에서도 실시예 3에서 니트릭 옥사이드(Nitric oxide) 생성 저해능이 현저하게 높아 항염 효과가 우수함을 확인하였다.
<실험예 4> 주름 개선 시험 : 엘라스테이즈(Elastase) 저해 활성
실시예 1~5 및 비교예 1의 추출물을 이용하여 주름 개선 효과를 측정하기 위해서 엘라스타아제(Elastase) 억제 정도를 평가하였다. 실시예 1~5 및 비교예 1을 50(㎍/㎖)의 농도로 희석한 다음, 10mM Tris-HCl buffer(pH8.0)에 녹인 N-succinyl-(Ala)3-p-nitroanilide (S4760, Sigma) 1.6 mM 농도의 기질과 Elastase from porcine pancreas Type Ⅳ(E0258, Sigma) 0.4U/mL를 혼합하여 25℃에서 5분 동안 반응시킨 후 96well plate에 담아 410nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료를 넣지 않은 경우를 대조군으로 하여 아래의 수학식 3을 이용하여 계산하였다. 이때, 양성 대조군으로 Oleanolic acid를 사용하여 진행하였다.
[수학식 3]
엘라스테아제 저해 활성(%)=100-(시료 처리군의 흡광도/시료 무처리군의 흡광도 X 100)
그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이 비교예 1 대비 실시예 1~5가 엘라스타아제(Elastase) 저해능이 우수하였으며, 실시예 1~5 중에서도 실시예 3에서 엘라스타아제(Elastase) 저해능이 현저하게 높아 주름 개선 효과가 우수함을 확인하였다.
<제조예 1> 효소처리 그라비올라( Annona Muricata ) 추출물을 함유하는 화장료 제조
(1) 화장수 제조
하기 표 2에 기재된 조성으로부터 통상의 방법에 의하여 화장수를 제조하였다.
성분 함량(중량%)
실시예 3 (효소처리 그라비올라 추출물) 3.00
히드록시에틸렌셀룰로오스(2% 수용액) 12.00
잔탄검(2% 수용액) 2.00
1,3-부틸렌글라이콜 6.00
글리세린 4.00
히알루론산나트륨(1% 수용액) 5.00
정제수 68.00
합계 100.00
(2) 로션 제조
하기 표 3에 기재된 조성으로부터 통상의 방법에 의하여 로션을 제조하였다.
성분 함량(중량%)
실시예 3 (효소처리 그라비올라 추출물) 3.00
아스코르빈산-2-인산마그네슘염 1.00
수용성 콜라겐 (1% 수용액) 1.00
시트르산나트륨 0.01
시트르산 0.05
1,3-부틸렌글리콜 3.00
정제수 91.94
합계 100.0
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (9)

  1. 효소처리 그라비올라(Annona Muricata) 추출물을 유효성분으로 함유하되,
    상기 효소는 셀룰라아제(Cellulase) 및 펙티나아제(Pectinase)가 1:1 ~ 1:5 중량비로 혼합된 복합 효소인 것을 특징으로 하는 항산화, 항염 및 주름 개선용 화장료 조성물.


  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서, 상기 효소처리 그라비올라(Annona Muricata) 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 50중량% 포함되는 것을 특징으로 하는 항산화, 항염 및 주름 개선용 화장료 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 효소처리 그라비올라(Annona Muricata) 추출물은 DPPH 자유라디칼 소거능, 니트릭 옥사이드(Nitric oxide) 생성 저해능 및 엘라스타아제(Elastase) 저해능을 갖는 것을 특징으로 하는 항산화, 항염 및 주름 개선용 화장료 조성물.
  6. 그라비올라(Annona Muricata)에 셀룰라아제(Cellulase) 및 펙티나아제(Pectinase)가 1:1 ~ 1:5 중량비로 혼합된 복합 효소를 첨가하여 효소반응시키는 단계;
    효소처리된 그라비올라(Annona Muricata)에 에탄올을 첨가하여 효소를 침전시키고 원심분리하는 단계; 및
    침전된 효소를 제거하고 교반추출하여 효소처리된 그라비올라(Annona Muricata) 추출물을 수득하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 항산화, 항염 및 주름 개선용 화장료 조성물의 제조방법.


  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 제6항에 있어서, 상기 효소반응은 30 내지 55℃에서 30 내지 120분 동안 수행되는 것을 특징으로 하는 항산화, 항염 및 주름 개선용 화장료 조성물의 제조방법.
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