KR101867426B1 - 배초향 추출물을 유효성분으로 포함하는 광노화 억제용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 배초향 추출물을 함유하는 기능성 화장료 조성물에 관한 것으로, 자세하게는 배초향 추출물을 유효성분으로 함유하는 광노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 배초향 추출물은 피부에 부작용을 일으키지 않는 안정한 특징이 있고, 피부세포에서 자외선 조사로 유발되는 활성산소종의 생성을 억제하는 효과가 있으며, pro-MMP2 및 pro-MMP9의 활성억제가 있고 동시에 SOD(Superoxide dismutase) 및 GSH(glutathione)의 활성증진 효과를 가지고 있어, 이를 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 피부에 자극을 일으키지 않으면서 자외선 조사에 의한 피부 노화를 효과적으로 억제할 수 있는 새로운 기능성 화장품의 소재로 사용될 수 있다.

Description

배초향 추출물을 유효성분으로 포함하는 광노화 억제용 화장료 조성물{Cosmetic composition for preventing photo-aging comprising agastache rugosa extract}

본 발명은 배초향 추출물을 유효성분으로 포함하는 광노화 억제용 화장료 조성물에 관한 것이다.

일반적으로 태양광에 포함된 자외선은 피부에 직접적으로 과도하게 조사되는 경우, 홍반 형성이나 피부세포 내의 멜라닌색소 생성을 촉진시켜 기미나 잡티 발생의 원인이 되기도 하며, 표피에서 분비되는 피지와 반응하여 과산화지질을 생성함으로써 피부트러블을 발생시키기도 할 뿐만 아니라, 심할 경우 피부암 발생의 원인이 되기도 한다. 자외선은 파장에 따라 UV-A (320~400 nm), UV-B (280~320 nm), UV-C (200~280 nm)로 구분되며, 이 중 지표에 도달하여 인체에 영향을 주는 자외선은 UV-A 및 UV-B로 알려져 있다. 특히 UV-B에 의한 노출은 피부 내에서 자유라디칼(free radical) 형성과 활성산소종(reactive oxygen species; ROS)의 발생을 증가시키고, DNA, 세포막 및 단백질 등 세포성분들에 대한 산화적 스트레스를 유발시켜 피부노화를 일으키는 것으로 알려져 있다. 이러한 이유로, 최근 천연 항산화제의 UV-B로 유도된 피부 손상을 막기 위한 다양한 연구가 진행 중이다.

이와 관련된 개발 기술로 대한민국 등록특허 제10-1194891호에는 해룡 추출물을 포함하는 자외선으로 인한 피부 손상 예방 및 치료용 의약품 조성물이 개시되어 있고, 대한민국 등록특허 제10-1413105호에는 골담초 추출물을 함유하는 자외선으로 인한 피부 손상 방지용 및 주름 개선용 화장료 조성물이 개시되어 있으며, 대한민국 등록특허 제10-0873998호에는 숙지황 추출물을 유효성분으로 하는 자외선 차단용 피부외용 조성물에 대한 내용이 개시되어 있다.

한편, 배초향(Agastache rugosa)은 우리나라를 포함하여 일본 및 중국 등 동아시아 지역의 산과 들에서 자라는 다년생 초본으로, 생육환경은 토양의 부엽질이 풍부하고 양지 혹은 반그늘에서 자란다. 키는 40~100㎝이고, 잎은 마주나며 길이가 5~10㎝, 나비가 3~7㎝로 끝이 뾰족하고 심장형이다. 꽃은 자주색으로 피는데 길이는 5~15㎝, 나비는 2㎝로 가지 끝과 원줄기 끝에 우산 모양으로 달린다. 열매는 10~11월에 익는데 짙은 갈색으로 변한 씨방에 종자가 미세한 형태로 많이 들어 있다. 주로 관상용으로 많이 사용되고 있다.

이러한 배초향에 대한 연구는 아직 많이 진행되고 있지 못하고 있는 실정으로서 현재 항염 및 항동맥경화 활성이 있고 신경 염증예방 효과가 있으며, 콜레라 치료효과, 항균활성, 항바이러스 활성이 있는 것으로 알려져 있을 뿐, 자외선 조사에 따른 피부 세포보호 효과 및 이로 인한 광노화 억제 기능에 대해서는 전혀 연구된 바가 없다.

대한민국 등록특허 제10-1194891호 대한민국 등록특허 제10-1413105호 대한민국 등록특허 제10-0873998호

이에 본 발명자들은 배초향 추출물이 자외선에 의해 유발되는 활성산소와 proMMP-2 및 proMMP-9의 생성을 억제할 수 있고, 동시에 자외선 조사에 의해 감소되는 SOD(superoxide dismutase) 및 GSH(glutathione)의 양을 증가시켜, 자외선 조사에 따른 피부 세포손상 억제를 통해 광노화를 예방 및 개선할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 배초향 추출물을 유효성분으로 포함하는 광노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 본 발명의 화장료 조성물을 인간의 피부에 적용하여 자외선에 의한 피부노화 방지효과를 갖는 것을 특징으로 하는 화장방법을 제공하는 것이다.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 배초향 추출물을 유효성분으로 포함하는 광노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 배초향 추출물은 배초향 잎의 열수추출물일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 배초향 추출물은 자외선에 의한 피부세포 손상억제; 활성산소종 생성억제; pro-MMP2 및 pro-MMP9의 활성억제; 또는 SOD(Superoxide dismutase) 및 GSH(glutathione) 활성증진 효과를 갖는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 배초향 추출물은 조성물 총 중량을 기준으로 10~200ug/ml의 농도로 함유되어 있는 것일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 자외선은 자외선 B일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 립스틱, 메이컵 베이스, 파운데이션, 프레스파우더 및 루스파우더로 이루어진 군으로부터 선택된 1종으로 제형화 되는 것일 수 있다.

또한 본 발명은 상기 본 발명의 화장료 조성물을 인간의 피부에 적용하여 자외선에 의한 피부노화 방지효과를 갖는 것을 특징으로 하는 화장방법을 제공한다.

본 발명은 배초향 추출물을 함유하는 기능성 화장료 조성물에 관한 것으로, 자세하게는 배초향 추출물을 유효성분으로 함유하는 광노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 배초향 추출물은 피부에 부작용을 일으키지 않는 안정한 특징이 있고, 자외선 조사에 따른 피부 세포에 대한 활성산소종 생성을 효과적으로 억제할 수 있으며, pro-MMP2 및 pro-MMP9의 활성억제 효과를 가지며 동시에 SOD(Superoxide dismutase) 및 GSH(glutathione) 활성증진 효과를 가지고 있어, 이를 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 피부에 자극을 일으키지 않으면서 자외선 조사에 의한 피부 노화를 효과적으로 억제할 수 있는 새로운 기능성 화장품의 소재로 사용될 수 있다.

도 1은 본 발명에 따른 배초향 열수추출물의 ABTS⁺ 라디컬 소거능을 분석한 결과를 나타낸 것이다(ARE: 본 발명의 배초향 열수추출물, AA:아스코르빅산)
도 2는 배초향 열수추출물 처리 농도에 따른 HaCaT keratinocytes 세포주를 대상으로 UV-B 조사로 유발된 활성산소종의 억제 효과를 그래프로 나타낸 결과로서, 2a는 DCFH-DA를 측정한 결과이고, 2b는 dihydrorhodamine 123을 측정한 결과이며, 2c는 2-hydroxyethidium (2-HE)를 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 UV-B 조사 하에서 본 발명의 배초향 열수추출물 처리 농도에 따른 세포 독성 여부를 HaCaT keratinocytes 세포주를 대상으로 MTT분석을 수행한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 UV-B 조사로 증가된 proMMP-2 및 proMMP-9 활성에 미치는 배초향 열수추출물의 영향을 자이모그래피 분석으로 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 5는 UV-B 조사로 증가된 proMMP-2 및 proMMP-9 단백질 수준을 배초향 열수추출물이 감소시킬 수 있는지 웨스턴블럿을 수행하여 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 UV-B 조사로 감소된 총 GSH 및 SOD의 활성을 본 발명의 배초향 열수추출물이 증가시킬 수 있는지 분석한 결과를 나타낸 것이다.

본 발명자들은 피부에 자극을 주지 않으면서 자외선에 대한 피부 보호 효과가 우수하여 피부 광노화를 예방 및 억제할 수 있는 새로운 화장품 소재를 연구하던 중, 배초향 추출물이 이러한 기능을 갖고 있음을 확인하였다.

따라서 본 발명은 배초향 추출물을 유효성분으로 포함하는 광노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물을 제공함에 특징이 있다.

특히 본 발명자들은 천연물질로부터 유래되어 인체에 안정하면서도, 탁월한 피부 광노화 효과를 나타낼 수 있는 소재를 찾고자 모색하던 중, 배초향 추출물에 주목하였으며 배초향 추출물이 자외선 조사에 따른 피부보호 활성, 활성산소종 억제활성 및 MMP 억제 활성이 있는지 실험을 통해 확인하였다.

구체적으로 본 발명의 일실시예에 의하면, 배초향 열수추출물이 활성산소종 억제 기능이 있는지 ABTS+ 라디칼 소거능 분석을 수행한 결과, 배초향 열수추출물이 높은 ABTS+ 라디칼 소거능을 가지고 있다는 것을 알 수 있었다(도 1 참조).

한편, 피부 노화는 그 원인에 따라 크게 내적 노화와 외적 노화의 두 가지로 구분되는데, 내적 노화(intrinsic aging)는 연령이 증가함에 따라 생체의 생리적인 기능이 저하되어 자연적으로 유발되는 노화 현상(aging process)이고, 외적 노화 (extrinsic aging)는 자외선(UV), 건조한 공기 (dry air), 활성 산소종(reactive oxygen species) 및 스트레스 등의 외적 요인에 의해 발생하는 노화 현상이다. 이런 요인들에 의해 피부 노화가 진행된다. 피부노화가 일어나면 피부는 각질화가 진행되고, 표피세포의 융합속도가 점차 느려지며, 표피세포층은 얇게 되고, 각질층은 두껍게 되며, 진피층과의 경계선은 직선으로 된다. 진피에서는 섬유아세포(human skin fibroblast)가 노화됨으로써 섬유질과 기질의 생산성이 저하되고, 세포내 과산화물 수치가 급격히 증가하며, 각종 오염물질과 스트레스 등에 영향을 받게 되어 세포의 기능을 원활히 수행할 수 없게 되고 세포의 대사활성이 저하되며, 그 결과 기능적, 구조적 손상으로 주름이 생기게 되고 이로 인해 피부노화가 촉진된다.

특히 태양광에 포함된 자외선은 피부에 직접적으로 과도하게 조사되면, 홍반 형성이나 피부세포 내의 멜라닌색소 생성을 촉진시켜 기미나 잡티 발생의 원인이 되기도 하며, 표피에 분비되는 피지와 반응하여 과산화지질을 생성함으로써 피부트러블을 발생시키기도 하고, 심할 경우 피부암 발생의 원인이 되기도 한다. 자외선은 파장에 따라 UV-A (320~400 nm), UV-B (280~320 nm), UV-C (200~280 nm)로 구분되며, 이 중 지표에 도달하여 인체에 영향을 주는 자외선은 UV-A 및 UV-B로 알려져 있다. 또한, UVB 노출은 피부 내에서 자유라디칼(free radical) 형성과 활성산소종(reactive oxygen species; ROS)의 발생을 증가시키고, DNA, 세포막 및 단백질 등 세포성분들에 대한 산화적 스트레스를 유발시켜 피부노화를 일으키는 것으로 알려져 있다. 이러한 이유로, 최근 천연 항산화제의 UVB로 유도된 피부 손상을 막기 위한 다양한 연구가 진행 중이다.

이러한 점에서 본 발명에서 제공하는 배초향 추출물은 자외선 조사로 인한 피부세포 내에서의 자유라디칼 생성을 효과적으로 억제할 수 있고, 활성산소종의 생성을 억제할 수 있음을 하기 실험들을 통해 확인할 수 있었다.

뿐만 아니라 본 발명의 일실시예에서는 배초향 추출물이 피부 세포에 대한 안정성이 있는 확인하기 위해, 피부 각질세포주를 대상으로 배초향 추출물을 농도별로 처리하고 MTT 분석을 통해 세포사멸 정도를 측정한 결과, 피부세포주의 세포생존율에는 아무런 영향을 주지 않음을 알 수 있었다(도 3 참조).

따라서 이러한 결과를 통해 본 발명의 배초향 추출물은 피부 세포에 독성을 나타내지 않기에 피부에 적용하는 화장품의 제조에 안심하고 사용할 수 있다.

한편, 기질 금속단백분해효소(Matrix Metalloproteinase; MMPs)는 아연 이온에 의존적이며, 기저막이나 간질성 조직 등에 존재하는 세포외 기질(Extracellular Matrix; ECM)을 분해하는 단백분해효소이다. 이는 비활성형 전구체로 합성되어진 후, 단백질 가수분해에 의해 활성화되며, MMPs의 활성은 유전자의 발현과 비활성효소의 활성화 과정, 효소활성의 억제 과전에 의해 조절된다고 알려져 있다. 이러한 MMPs는 기질 특이성에 따라 약 20여 가지가 알려져 있으며, 기질 특이성과 기본 구조에 따라 총 5종류로 구분될 수 있는데, 즉, 콜라게나아제(MMP-1, MMP-8, MMP-13), 젤라티나아제(MMP-2, MMP-9), 스트로멜라이신(MMP-3, MMP-7, MMP-10, MMP-11, MMP-12), 멤브레인 타입-MMPs (MT1-MMP, MT2-MMP, MT3-MMP, MT4-MMP), 비분류된 MMPs로 분류된다.

이러한 MMP들은 자외선 노출을 받은 피부에서 복잡한 신호전달 경로를 거쳐 교원질의 합성이 감소되면서 그 발현이 증가된다고 알려져 있으며(Lee et al., J. Dermatol Sci, 17, 182, 1998), 예를 들어 자외선 A 조사 시에는 MMP-1이 활성화 되는 것으로 알려져 있으며, 자외선 B 조사 시에는 MMP-2 및 MMP-9의 활성이 증가되는 것으로 알려져 있다. 자외선 조사에 의한 피부 내의 MMP-2 및 MMP-9 활성이 증가되면 피부 내 콜라겐을 현저하게 붕괴시킴으로써 진피층의 콜라겐의 붕괴에 영향을 미치고, 광노화에 매우 중요한 역할을 하고 있는 것이 보고된 바 있다. 그러므로 MMP-2 및 MMP-9에 의해 콜라겐이 감소하면, 피부의 강도와 장력이 떨어지고 피부를 보호하는 기능이 현저히 감소됨으로써 피부노화도 가속화된다. 따라서 자외선으로부터 이러한 MMP의 활성 또는 발현을 억제하는 소재의 경우 자외선으로부터 피부를 보호할 수 있는 소재로 활용될 수 있다.

이에 본 발명자들은 본 발명의 배초향 추출물이 자외선 조사 시 활성화되는 MMP-2 및 MMP-9의 활성 및 단백질 수준을 억제할 수 있는지 확인하기 위해, 자외선 B가 조사된 피부세포 내에서 배초향 추출물을 처리한 군과 처리하지 않은 군을 대상으로 pro-MMP2 및 pro-MMP9의 활성을 자이모그래피로 분석하였고, 단백질 수준을 웨스턴블럿으로 수행하였다.

그 결과, 자외선 B 조사로 활성화된 pro-MMP2 및 pro-MMP9이 배초향 추출물을 처리한 군에서 활성이 억제되는 것으로 나타났고, 단백질 수준도 감소되는 것으로 나타났으며 활성 및 단백질 수준의 감소는 추출물의 처리 농도 의존적으로 나타났다(도 4 및 도 5 참조).

뿐만 아니라, 본 발명의 배초향 추출물은 자외선 조사로 감소된 SOD(Superoxide dismutase) 및 글루타치온(GSH)의 활성도 다시 증진시키는 활성이 있음을 확인할 수 있었다.

그러므로 본 발명은 배초향 추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선 차단용 화장료 조성물을 제공할 수 있으며, 상기 조성물은 자외선으로부터 피부를 보호하는 기능을 가질 수 있다.

본 발명에 따른 상기 배초향 추출물은 당업계에 공지된 추출 및 분리하는 방법을 사용하여 천연으로부터 추출 및 분리하여 수득한 것을 사용할 수 있으며, 본 발명에서 정의된‘추출물’은 적절한 용매를 이용하여 배초향으로부터 추출한 것이며, 예를 들어, 배초향의 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 모두 포함한다. 바람직하게는 배초향의 잎으로부터 수득한 추출물일 수 있다.

상기 배초향으로부터 추출물을 추출하기 위한 적절한 용매로는 물 또는 유기용매를 사용할 수 있으며, 이에 제한되지는 않으나, 예를 들어, 정제수, 메탄올 (methanol), 에탄올(ethanol), 프로판올(propanol), 이소프로판올(isopropanol), 부탄올(butanol) 등을 포함하는 탄소수 1 내지 4의 알코올, 아세톤(acetone), 에테르(ether), 벤젠(benzene), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 메틸렌클로라이드(methylene chloride), 헥산(hexane) 및 시클로헥산(cyclohexane) 등의 각종 용매를 단독으로 혹은 혼합하여 사용할 수 있다. 바람직하게는 물을 사용할 수 있다.

추출 방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법 중 어느 하나를 선택하여 사용할 수 있으며, 바람직하게는 열수추출법을 사용할 수 있다.

또한, 목적하는 추출물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행할 수도 있으며, 통상의 정제 방법을 이용하여 정제될 수도 있다.

상기 배초향 추출물은 본 발명의 조성물 총 중량을 기준으로 10~200ug/ml의 농도로 함유되어 있을 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 상기 조성물은 자외선 중에서도 자외선 B에 의한 피부보호 및 자외선 차단 효과를 가지는데, 일반적으로 자외선은 자외선 A, B 및 C의 3가지 파장 영역으로 구분된다.

먼저, UV-A (320~400nm)는 오존층에 흡수되지 않으며 파장영역이 0.32~0.40에 해당하고, UV-B에 비하여 에너지량이 적지만 피부를 그을릴 수 있다. 피부를 태우는 주역은 UV-B 이지만 UV-A는 피부를 벌겋게 만들 뿐 아니라 피부 면역 체계에 작용하여 피부 노화에 따른 장기적 피부 손상을 일으킬 수 있다. 최근에는 UV-A 노출 시간이 피부를 그을릴 정도로 길어지면 피부암 발생의 위험이 UV-B의 경우와 같아진다는 연구 결과가 보고되기도 하였다.

UV-B (280~320nm)는 대부분은 오존층에 흡수되지만, 일부는 지표면에 도달한다. 지구에 극소량이 도달하는 UV-B는 파장영역이 0.28~0.32에 해당하는 자외선으로서, 동물체의 피부를 태우고 피부 조직을 뚫고 들어가며 때로는 피부암을 일으키는데, 피부암 발생의 원인은 대부분 태양 광선의 노출 및 UV-B와 관련이 있다.

또한, UV-C (100~280nm)는 오존층에 완전히 흡수된다. 파장영역이 0.20~0.29인 자외선 중 UV-C는 염색체 변이를 일으키고 단세포 유기물을 죽이며, 눈의 각막을 해치는 등 생명체에 해로운 영향을 미친다. 다행히 UV-C로 알려진 이 범위의 자외선은 성층권의 오존에 의해 거의 모두 흡수된다.

본 발명의 조성물이 제공하는 피부 보호를 위한 자외선 차단은 상기 3가지의 자외선 중에서 280~320nm의 파장 영역을 갖는 UV-B에 해당한다.

나아가 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 배초향 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 본 발명의 화장료 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다. 본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다. 본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다. 본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다. 본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명은 본 발명의 배초향 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 이용하여 자외선으로부터 피부를 보호하는 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 화장방법을 제공할 수 있다. 즉, 본 발명은 본 발명의 화장료 조성물을 인간의 피부에 적용하여 자외선에 의한 피부노화 방지효과를 갖는 것을 특징으로 하는 화장방법을 제공한다.

본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 이용하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 이용하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다. 본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1>

시약 및 시료준비

브래드포드 시약, 디에틸렌 글리콜(diethylene glycol), 나리진(naringin), ABTS(2,2-azino-bis 3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid), AA(ammonium persulfate, ascorbic acid), MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide), DCFH-DA(2’,7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate), DHR-123(dihydrorhodamine 123), DHE(dihydroethidium), DTNB(5,5’-dithiobis (2-nitrobenzoic acid)), GR(glutathione reductase), 카탈라제, 잔틴(xanthine), 잔틴 옥시다제(xanthine oxidase) 및 NADPH은 시그마 알드리치(St Louis, MO, USA)사로부터 구입하여 사용하였다. 세포 용해 버퍼 (25 mM Tris-phosphate (pH 7.8), 2 mM 1,2-diaminocyclohexane-N,N,Nv,Nv-tetraacetic acid, 2 mM dithiothreitol, 10% glycerol, 1% Triton X-100)는 프로메가사로부터 구입하여 사용하였다.

또한, 배초향 식물은 강원도 춘천 지역 마트에서 구입한 것을 사용하였으며, 식물 동정은 춘천 강원대학교 생물과학부 유기억 교수로부터 확인받았다. 본 발명의 배초향 식물의 증거표본(voucher specimen)은 강원대학교 생명과학부 식물표본실에 보관하였고 승인번호 KWNU90446을 부여받았다.

통계처리

실험결과는 평균±표준편차로 표기하였고, 그 결과들의 통계 분석하기 위하여 unpaired Student's t-test를 수행하였다. p 값이 0.05 미만일 때 통계적으로 유의하다고 판단하였다. IC50 값은 dose/response linear regression plots으로 부터 계산되었다.

< 실시예 2>

배초향 잎의 열수 추출물 제조

건조된 배초향의 잎을 액체 질소 하에서 잘게 부순 후, 배초향 잎 질량의 10배에 해당하는 증류수를 첨가하여 혼합한 후, 90℃의 온도로 4시간 동안 워터 배스에서 환류 상태로 열수 추출하였다. 열수 추출물의 온도가 내려가면 필터 페이퍼를 이용하여 여과하였고, 동결 건조기를 이용하여 건조시켜 분말 형태의 배초향 열수 추출물(일명 ARE라고 함)을 수득하였다. 이때 수율을 10.4%였다. 이후 실험을 위해 수득한 배초향 열수 추출물은 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide)에 녹여 사용하였다.

< 실시예 3>

총 플라보노이드 함량 및 항산화 활성 측정

상기 실시예 2에서 수득한 배초향 잎의 열수 추출물에 함유된 총 플라보노이드 함량 분석은 Prev. Nutr. Food Sci. 17 (2012) 122-128에 기재된 방법을 조금 변경한 방법으로 수행하였는데, 즉, 0.5ml의 디에틸렌 글리콜 및 각 농도를 달리한 0.05ml의 ARE를 0.05 mL의 1 N NaOH과 혼합하고 1시간 동안 37℃에서 반응시켰다. 이후 420nm에서의 흡광도 측정은 마이크로플레이트 리더기를 이용하여 측정하였는데, 이때 나리진(Naringin)을 총 플라보노이드 함량 측정을 위한 표준 마커로 사용하였다(0 ~ 1mg/ml 범위). 총 플라보노이드 함량은 나리진 당량 mg /g ARE(mg/g NE)으로 표기하였다.

또한, 항산화 활성분석은 ABTS⁺ 라디칼 소거능 분석법으로 수행하였는데, ABTS 저장 용액(0.07 mM)에 0.12 mM 암모늄 설페이트(ammonium persulfate)를 첨가하고 혼합한 후, 분석에 사용하기 전 16시간 동안 암실에서 저장해 두었다. 이후 각 농도별 ARE(본 발명의 배초향 열수 추출물) 0.01ml을 0.29 ml ABTS⁺ 용액에 첨가하여 최종 부피가 1ml이 되도록 에탄올로 부피를 맞추었고, 상기 반응액을 15분 동안 암실에서 반응시켰다. 이때 아스코르빅산(ascorbic acid; AA)는 양성대조군으로 사용하였다. 745nm에서 흡광도를 측정하였고, ARE에 의한 산화 억제 정도(%)는 하기 수식을 통해 계산하였다. 분석 결과는 ARE 또는 AA에 의한 ABTS⁺ 라디칼 50% 소거능(SC₅₀)을 나타낸 것이다.

Inhibition (%)=[(Control - Test)/Control] x100

분석 결과, 본 발명의 방법으로 수득한 배초향 열수 추출물에 함유된 총 플라보노이드 함량은 건조량 기준 22.8±7.6 mg naringin equivalent/ g ARE인 것으로 나타났고, 배초향 열수 추출물이 갖는 항산화능, 즉 SC₅₀은 836.9 μg/mL인 것으로 나타났고, 양성 대조군으로 사용한 아스코르빅산의 SC₅₀은 59.7 μg/mL인 것으로 나타났다(도 1 참조). 이러한 결과를 통해 본 발명자들은 본 발명의 배초향 열수 추출물이 플라보노이드를 다량 함유하고 있으며 비교적 우수한 항산화능을 갖는 다는 것을 알 수 있었다.

< 실시예 4>

배초향 열수 추출물의 자외선에 의한 활성산소 생성 억제능 분석

본 발명에 따른 배초향 잎 열수 추출물이 자외선에 의해 발생하는 활성산소를 억제하는 활성이 있는지 분석하기 위해 HaCaT keratinocyte 세포주를 대상으로 다음과 같은 실험을 수행하였다.

먼저 피부각질세포주인 HaCaT keratinocyte 세포주를 ATCC로부터 구입하여 사용하였고, 10%의 열처리로 불활화된 FBS, 100units/ml 페니실린 및 100ug/ml의 스트렙토마이신이 함유된 DMEM 배지를 이용하여 5% 이산화탄소 및 37℃의 온도에서 배양하였다. 상기와 같이 배양된 HaCaT keratinocyte 세포주에 각각 농도를 달리한 배초향 잎 열수 추출물(0, 10, 50, 200ug/ml)을 30분 동안 처리한 후, 자외선 B를조사하였는데, 자외선 B 조사원은 센서(bandwidth, 280 내지 320 nm; model CX-312, Vilber Lourmat, Marine, France)를 장착한 라디오미터(model VLX-3W, Vilber Lourmat, Marine, France)를 이용한 자외선 램프(peak, 312 nm; model VL-6M, Vilber Lourmat, Marine, France)를 사용하여 수행하였다.

18시간 동안 자외선 B를 조사 후, 세포들을 PBS로 2회 세척하고 얼음 상태에서 5분동안 방치한 다음, 세포 스크랩퍼로 세포들을 긁어 모았다. 15000rpm에서 10분동안 원심분리하고 세포 펠렛을 세포 용해버퍼로 용해하고 얼음 상태에서 다시 30분간 방치시켰다. 세포 용해물에 함유된 단백질의 함량은 브래드포드 시약으로 측정하였고 BSA(bovine serum albumin)을 표준 단백질로 사용하였다.

세포 내에서 발생되는 활성산소의 측정은 활성산소종(ROS) 반응 형광시료인 DCFH-DA를 사용하여 수행하였는데, DCFH-DA는 ROS와 반응하여 DCF(fluorescent 2’,7’-dichlorofluorescein; λ_excitation=485nm,λ_emission=530nm)를 형성하고 연속적인 산화 반응을 유도하게 된다. 이 외에 다른 2개의 ROS 형광프로브로는 DHR-123와 DHE을 사용하였는데, 활성산소종과 반응하면 각각 123 (RH-123; λ_excitation=500nm,λ_emission=535nm) 및 2-hydroxyethidium(2-HE(DHE);λ_excitation=480nm,λ_emission=525nm)을 발생한다. 세포주에 각각 본 발명의 추출물인 ARE와 20 μM DCFH-DA, 5 μM DHR-123 또는 5 μM DHE을 37℃에서 30분간 처리한 후, 1 mL의 FBS가 배제된 배지로 2회 세척하였다. 다시 1 mL의 FBS가 배제된 배지로 세포를 용해한 후, 70 mJ/cm²UV-B를 조사하였다. 자외선 조사 후 즉시, 세포내 발생되는 활성산소종의 생성량을 Multi-Mode Microplate Reader (Synergy^TMMx,BioTekInstruments,Winooki,VT,USA)를 이용하여 형광 모니터링 하였다.

분석 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, DCF 형광분석 결과에서는 추출물 처리 없이 자외선만을 조사한 군은 자외선을 조사하지 않은 군에 비해 9.6배 이상의 활성산소종이 생성된 것으로 나타났고, 배초향 잎의 열수추출물을 처리한 군에서는 처리 농도 의존적으로 활성산소종의 생성이 억제되는 것으로 나타났다(도 2a 참조). 구체적으로 추출물을 10, 50 및 200ug/ml의 농도로 처리할 경우, 활성산소종 생성이 각각 83.1%, 55.8% 및 33.8%로 감소되는 것으로 나타났다.

ROS 염료로 사용한 DHR-123 측정 결과는, 자외선 조사 시 3.8배 활성산소종이 증가되는 것으로 나타난 반면, 배초향 잎의 열수추출물을 10, 50 및 200ug/ml의 농도로 각각 처리한 군에서 활성산소종 생성이 각각 78.9%, 40.8% 및 21.1%로 감소되는 것으로 나타났으며(도 2b 참조), 2-HE(DHE) 형광 분석 결과 역시 자외선 조사에 의해 증가된 활성산소종을 배초향 잎의 열수추출물을 처리할 경우, 감소되는 것으로 나타났다(도 2c 참조).

이상 살펴본 바와 같이, 활성산소종 생성 정도를 확인할 수 있는 3개의 시약 모두에서 배초향 추출물의 농도 의존적으로 활성산소종 생성 억제 효과가 있음을 알 수 있었고, 활성 산소종의 생성을 50% 억제하는 것을 나타내는 IC50 값을 살펴보면, DCFH-DA, DHR-123 및 DHE은 각각 110.5ug/ml, 69.3ug/ml 및 45.1ug/ml인 것으로 나타났다.

< 실시예 5>

배초향 열수 추출물의 세포 독성 여부 분석

본 발명의 배초향 잎 열수 추출물이 세포에 대한 독성이 있는지 여부를 확인하기 위해 MTT 분석을 수행하였다. MTT 반응은 살아있는 세포의 미토콘드리아에서 MTT의 환원반응에서 발생하는 포르마잔의 양을 540nm에서 흡광도 측정하여 분석하는 방법이다.

본 발명자들은 상기 실시예 4에서 자외선 조사 조건 하에서 배초향 잎 열수 추출물을 처리한 HaCaT keratinocyte 세포주를 대상으로 MTT 분석을 수행하였다.

분석 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 자외선 조사 유무 및 본 발명의 배초향 열수 추출물 처리 유무에 관계없이 세포생존율에는 아무런 변화가 없는 것으로 나타났다. 따라서 이러한 결과를 통해 본 발명의 배초향 열수 추출물은 세포에 독성을 유발시키지 않는 안전한 추출물임을 알 수 있었다.

< 실시예 6>

배초향 열수추출물의 pro- MMP2 및 pro- MMP9의 억제활성 분석

<6-1> 자이모그래피 분석

본 발명자들은 배초향 열수 추출물이 MMP2 및 MMP9에 미치는 영향을 분석하기 위해, 이들의 전구체인 pro-MMP2 및 pro-MMP9의 젤라틴 용해성(gelatinolytic activity) 여부를 자이모그래피 분석을 통해 분석하였다.

자이오그래피 분석을 위해 상기 실시예에서 사용한 HaCaT keratinocyte 세포주에 본 발명의 배초향 잎 열수 추출물을 농도별로 처리하고 PBS로 세포를 세척한 후, 각 실험군의 배양배지를 채취하여 세포에서 배지로 분비되어진 pro-MMP2 및 pro-MMP9 젤라틴 용해성을 분석하였다. 준비한 세포 용해물 시료는 standard laemmli acrylamide polymerization mixture(8%)에 1mg/ml의 젤라틴을 첨가하여 만든 젤 상에서 비 환원 조건 하에 전기영동하였다. 전기영동이 끝난 젤은 detergent solution(2.5% Triton X-100)을 15분간 두 번씩 처리하여 젤상에 남아있는 SDS를 제거하였다. 그 후 젤은 substrate buffer(50mM Tris-HCl, 5mM CaCl2, NaN3)로 37℃에서 24시간 동안 반응시켰다. 젤은 0.1% 코마지 염색(Coomassie Brilliant Blue R-25 solution)을 실시하여 pro-MMP2 및 pro-MMP9의 활성을 측정하였는데, 활성 정도는 젤라틴 용해 정도를 밴드 강도의 측정으로 확인하였다. 또한, pro-MMP2 및 pro-MMP9의 활성 밴드는 이들의 분자량을 기초로 확인할 수 있는데, 이들 분자량은 각각 72kDa 및 92kDa이다.

분석결과, 표 4에 나타낸 바와 같이 자외선 단독 조사 군의 경우 자외선을 조사하지 않은 군에 비해 pro-MMP2 및 pro-MMP9의 젤라틴 용해성이 각각 5.3배 및 3.6배 증가한 것으로 나타났으며, 반면 본 발명의 배초향 잎 열수 추출물을 처리한 군에서는 추출물의 농도 의존적으로 pro-MMP2 및 pro-MMP9의 활성이 감소되는 것으로 나타났는데, 추출물 처리 농도가 10, 50, 200ug/ml일 때, pro-MMP2의 활성이 각각 87.3, 77.8 및 69.8%로 감소되는 것으로 나타났고(도 4a 참조), pro-MMP9의 활성은 각각 72.0, 44.0 및 24.0%로 감소되는 것으로 나타났다(도 4b 참조).

자외선 B 조사에 의한 pro-MMP9 활성감소 정도인 배초향 잎 열수추출물의 IC50은 76.6ug/ml인 것으로 나타났다. 또한 도 4c는 사용된 배지 시료의 동일양을 로딩하여 Coomassie Brilliant Blue R-250으로 염색한 젤 사진으로 본 발명의 배초향 열수 추출물은 pro-MMP2 및 pro-MMP9 모두에 농도 의존적으로 영향을 준다는 것을 알 수 있었다.

따라서 이러한 결과를 통해 본 발명자들은 배초향 열수 추출물이 자외선 조사에 의한 pro-MMP2 및 pro-MMP9의 활성을 유의미하게 억제하는 활성이 있음을 알 수 있었다.

<6-2> 웨스턴 블럿 분석

배초향 열수추출물이 pro-MMP2 및 pro-MMP9 단백질 수준에도 영향을 미치는지 확인하기 위해 다음과 같이 웨스턴 블럿을 수행하였다. 상기 실시예 <6-1>에서 수행한 배양 세포들을 대상으로 세포 용해물을 제조하고 10% (w/v) SDS-PAGE 로 전기영동한 다음, PVDF로 단백질들을 이동시키고 상기 PVDF 멤브레인을 1차 항체인 anti-MMP-2 (ALX-210-753, Enzo Life Sciences, Farmingdale, NY, USA) 및 anti-MMP-9 (3852S, Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA)로 4℃에서 밤새도록 각각 반응시켰다. 이후 2차 항체(goat anti-rabbit IgG-pAb-HRP-conjugate; ADI-SAB-300, Enzo Life Sciences, Farmingdale, NY, USA)로 상온에서 1시간 동안 반응시킨 후, enhanced West-save up ^TM(AbFrontier,Seoul,Korea)으로 필름 형광시켜 목적 단백질의 수준을 분석하였다.

분석결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, 자외선 B 조사 시, pro-MMP2의 단백질 수준은 자외선 B를 조사하지 않은 군에 비해 약 5.8배 증가되어 있는 것으로 나타났으나, 본 발명의 추출물을 처리한 군에서는 처리 농도(10, 50, 200ug/ml) 의존적으로 pro-MMP2 단백질 수준이 각각 84.4, 75.0 및 35.9%로 감소된 것으로 나타났다(도 5a 참조). 또한, pro-MMP9 역시 자외선 B 조사 시 6배 정도 단백질 수준이 증가한 것으로 나타났으나, 본 발명의 추출물을 처리한 군에서는 처리 농도(10, 50, 200ug/ml) 의존적으로 pro-MMP9 단백질 수준이 각각 95.5, 72.7 및 50.0%로 감소된 것으로 나타났다(도 5b 참조). 자외선 B 조사에 의한 pro-MMP2 및 pro-MMP9 활성 억제를 위한 본 발명의 배초향 열수추출물의 IC50은 각각 147.6ug/ml 및 189.7ug/ml로 나타났다.

따라서 이러한 결과를 토대로 볼 때, 본 발명의 배초향 열수추출물은 자외선 B 조사에 의해 유도되는 pro-MMP2 및 pro-MMP9의 활성 및 단백질 수준을 동시에 감소 및 억제시키는 작용이 있다는 것을 알 수 있었다.

< 실시예 7>

배초향 열수추출물의 GSH 및 SOD 활성 촉진분석

<7-1> 자외선 B 조사에 의해 감소된 GSH의 상향 조절능 분석

GSH는 비단백질 항산화제로서 산화적 스트레스에 대한 방어작용 및 산화환원 향상성에 중요한 역할을 한다. 자외선 조사에 따른 활성산소종과 pro-MMP2 및 pro-MMP9의 엑제 작용을 확인한 본원발명의 배초향 열수추출물이 GSH에도 관여하는지 확인하기 위해 자외선 B 조사 하에서 HaCaT keratinocyte 세포 내의 총 GSH의 함량에 대한 배초향 열수추출물의 영향을 분석하였다. 이를 위해 상시 실시예에서 사용한 세포 용해물을 대상으로 GR 기반의 효소적 재생분석 실험을 수행하였다. 이를 위해 175 mM KH₂PO₄,6.3mMEDTA,0.21 mM NADPH, 0.6 mM DTNB, 0.5 units/mL GR 및 세포용해물을 함유하는 반응 혼합물(200ul)을 25℃에서 반응시킨 후, 412nm에서 마이크로플레이트 리더로 흡광도를 측정하였다. 총 GSH의 함량은 다양한 농도의 GSH를 이용한 calibration curve를 표준으로 하여 측정하였으며, 세포 용해물에 함유된 총 단백질양을 정규화시켰고, 총 GSH의 양은 ug/ml로 표기하였다.

분석결과, 도 6a에 나타낸 바와 같이, 총 GSH의 양은 본 발명의 배초향 추출물의 처리 농도 의존적으로 증가한 것으로 나타났는데, 추출물을 10, 50, 200ug/ml의 농도로 처리하였을 때, 본 발명의 추출물을 처리하지 않은 대조군 대비 각각 1.3배, 1.6배 및 2.1배 증가한 것으로 나타났다.

<7-2> 자외선 B 조사에 의해 감소된 SOD의 상향 조절능 분석

카탈라제 및 글루타치온 퍼옥시다제 기능을 갖는 SOD는 주된 항산화 효소이다. 따라서 본 발명자들은 본 발명의 추출물이 SOD 활성에도 영향을 미치는지 확인하였는데, 이를 위해 상기 실시예 <7-1>에서 사용한 세포 용해물을 대상으로 사이토크롬 C의 환원을 xanthine/xanthine oxidase 시스템을 이용하여 분석하였다. 구체적으로 50 mM phosphate buffer (pH 7.4), 0.01 units/mL xanthine oxidase, 0.1 mM EDTA, 1 μM catalase, 0.05 mM xanthine, 20 μM cytochrome c 및 세포 용해물을 함유한 반응 혼합물 200ul를 제조한 후, 550 nm에서의 흡광도 변화를 측정하였다. SOD 활성은 세포용해물에 함유된 단백질 함량으로 표준화 하였고,_△A₅₅₀/min/mg protein 으로 나타내었다.

분석결과, 도 6b에 나타낸 바와 같이, 자외선 B 조사는 총 SOD활성(Cu,Zn-SOD plus Mn-SOD)을 감소시켰으나, 본 발명의 배초향 추출물을 처리한 경우 SOD활성이 증가하는 것으로 나타났으며, 추출물 처리농도가 10, 50 및 200 μg/mL일 때 SOD활성은 본 발명의 추출물을 처리하지 않은 대조군 대비 각각 2.6배, 4.2배 및 4.7배 증가한 것으로 나타났다. 따라서 본 발명의 배초향 열수추출물은 자외선 B 조사로 감소된 SOD의 활성을 다시 증진시킬 수 있는 작용이 있음을 알 수 있었다.

결론적으로 상기와 같은 결과들을 토대로 볼 때, 본 발명의 배초향 열수추출물은 자외선 B 조사에 의한 피부 세포내에서의 감소된 SOD 및 GSH의 활성 및 단백질 수준을 증가시키는 작용이 우수하고, 동시에 활성산소종 억제 활성과 pro-MMP2 및 pro-MMP9의 활성 억제능이 우수하여, 궁극적으로 광노화에 의한 피부 손상 예방 및 개선용 화장품 제조에 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있었다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims (7)

1. 배초향 잎의 열수추출물을 유효성분으로 포함하는 자외선 B에 의한 광노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
2. 삭제
3. 제1항에 있어서,
   상기 배초향 잎의 열수추출물은 피부세포 손상억제; 활성산소종 생성억제; pro-MMP2 및 pro-MMP9의 활성억제; 및 SOD(Superoxide dismutase)와 GSH(glutathione)의 활성증진 효과를 모두 갖는 것을 특징으로 하는 자외선 B에 의한 광노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
4. 삭제
5. 삭제
6. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 립스틱, 메이컵 베이스, 파운데이션, 프레스파우더 및 루스파우더로 이루어진 군으로부터 선택된 1종으로 제형화 되는 것을 특징으로 하는 자외선 B에 의한 광노화 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
7. 삭제

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