KR101866312B1

KR101866312B1 - 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상된 폴리디옥시리보뉴클레오티드계 진피 충전재 조성물 및 이의 제조방법

Info

Publication number: KR101866312B1
Application number: KR1020160089843A
Authority: KR
Inventors: 권순익; 구현철
Original assignee: 주식회사 글랜젠
Priority date: 2016-07-15
Filing date: 2016-07-15
Publication date: 2018-06-11
Also published as: KR20180008059A

Abstract

본 발명은 폴리디옥시리보뉴클레오티드를 포함하며, 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상된 진피 충전재 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이며, 이는 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상되는 장점 및 항산화 효과로 인한 기능이 추가되는 장점 또한 갖는다. 또한, 본 발명은 항산화제로서 3번 탄소의 OH기의 H가 치환된 아스코빌 에테르를 이용함으로써 피부 미백 기능을 향상시키는 부수적인 효과 또한 발휘한다.

Description

생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상된 폴리디옥시리보뉴클레오티드계 진피 충전재 조성물 및 이의 제조방법{POLYDEOXYRIBONUCLEOTIDE CONTAINING SKIN FILLING MATERIAL HAVING IMPROVED DURABILITY AND ANTIOXIDATIVE ACTIVITY AND THE MAUFACTURING METHOD THEREOF}

본 발명은 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상된 폴리디옥시리보뉴클레오티드계 진피 충전재 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

폴리디옥시리보뉴클레오티드(poly-deoxyribonucleotide)는 어류의 정액이나 정소 및 알에서 추출한 디옥시리보뉴클레오티드(deoxyribonucleotide)의 중합체 생체물질로서, 이는 저분자의 디옥시리보뉴클레오티드로부터 고분자의 디옥시리보뉴클레오티드까지 다양하게 구성되며, 분자량은 대략 0.5 내지 3,000 kDa 정도이다.

디옥시리보뉴클레오티드 반복 단위는 4종류의 염기가 당과 연결되어 있으며, 이러한 5탄당이 인산과 연결되는 포스포디에스터(phosphodiester) 결합으로 연결되어 각 반복단위가 인산에 의해 연결되어 고분자를 이루는 구조로 구성되어 있는 생체 고분자이다.

폴리디옥시리보뉴클레오티드는 A2 퓨린작동성 수용체(purinergic receptor)를 자극하여 상피세포를 증식시키고 세포외 기질의 성숙을 향상시켜 부작용이 없이 피부재생을 촉진하여 화상이나 만성 창상 등에 효과적인 것으로 알려져 있다.

또한, 폴리디옥시리보뉴클레오티드의 저분자들인 뉴클레오티드(nucleotides)와 뉴클레오시드(nucleosides)는 여러 유형의 세포들의 성장을 촉진시키며 핵산합성 및 창상 치유를 촉진 및 가속시키고, VEGF(vascular endothelial growth factor) 메시지를 증가시켜 신생혈관생성(neoangiogenesis)에 관여하는 것으로 알려져 있다.

일반적으로 폴리디옥시리보뉴클레오티드는 자연계에서 얻어지며 상업적으로 판매되고 있는 생체 고분자로서 주로 어류의 정액이나 정소 및 알에서 추출된다.

폴리디옥시리보뉴클레오티드에 대한 종래의 기술들은 대부분 폴리디옥시리보뉴클레오티드를 추출하여 수득하는 기술로서 참치의 정소로부터 핵산복합물질을 수득하는 방법(하기 특허문헌 1 참고), 또는 어류의 정액 또는 알로부터 DNA 중합체 단편복합체를 수득하는 제조방법(하기 특허문헌 2 참고)의 기술들이 주류를 이루고 있다.

또한 이러한 폴리디옥시리보뉴클레오티드를 이용한 종래의 기술로는 폴리디옥시리보뉴클레오티드를 포함하는 특정용도의 화장품 제조기술로 머리카락을 자라게 하는 기술(하기 특허문헌 3 참고) 또는 화장품용 항노화 및 항산화 기능성 수액 제조 기술(하기 특허문헌 4 참고) 등이 개시되어 있으며, 폴리디옥시리보뉴클레오티드를 이용한 점안제 조성물 제조방법 기술 및 관절염 치료제 등의 기술들이 보고되고 있다.

폴리디옥시리보뉴클레오티드를 이용한 피부 충전재 기술과 관련하여 하기 특허문헌 5에서는 발명의 명칭이 DNA 중합체 단편복합체를 포함하는 세포활성 강화용 조성물 및 얼굴 또는 피부 충진제로 되어 있으나, 실제 개시된 내용은 DNA 중합체 단편복합체를 추출하는 기술과 관련된 것이며 피부 충전재로서 폴리디옥시리보뉴클레오티드를 사용하는 내용은 전혀 개시되어 있지 않다.

한편, 가교결합(cross-linking)되어 있지 않은 폴리디옥시리보뉴클레오티드는 생체 내에서 메타볼리즘(metabolism) 및 케타볼리즘(catabolism)에 의해 매우 빠르게 분해되는 특성을 지닌다.

따라서, 생체 내 지속성을 더욱 향상시키기 위한 신규한 폴리디옥시리보뉴클레오타이드계 진피 충전재 조성물의 개발이 절실히 요구되는 실정이다.

특허문헌 1: 대한민국 특허 제10-0390529호 특허문헌 2: 대한민국 특허 제10-0986603호 특허문헌 3: 유럽 특허 제 EP1952798A1호 특허문헌 4: 대한민국 특허 제10-1279870호 특허문헌 5: 대한민국 특허 제10-1476381호

이에 본 발명에서는 상기 문제점을 해결하고자 폴리디옥시리보뉴클레오티드, 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르(BDDE) 등의 가교제 및 비타민 C 유도체를 이용하여 생체 내 지속성, 항산화 작용 및 분해 억제 효과의 지속성이 우수한 진피 충전재 조성물을 제조할 수 있음을 발견하였고, 본 발명은 이에 기초하여 완성되었다.

따라서, 본 발명의 하나의 관점은 생체 내 지속성, 항산화 작용 및 분해 억제 효과의 지속성이 우수한 진피 충전재 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 관점은 상기 진피 충전재 조성물의 제조방법을 제공하는 데 있다.

본 발명은 상기한 과제를 달성하기 위한 수단으로, 폴리디옥시리보뉴클레오티드, 가교제(cross-linking agent) 및 비타민 C 유도체를 포함하며, 상기 가교제는 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르(1,4-butanediol diglycidyl ether, BDDE)이고, 상기 폴리디옥시리보뉴클레오티드 반복단위 1몰당 0.01몰 내지 1몰 비율로 포함되며; 상기 비타민 C 유도체는 아스코빌 팔미테이트(ascorbyl palmitate), 마그네슘 아스코빌 포스페이트(magnesium ascorbyl phosphate), 3-O-에틸 아스코빌 에테르(VCE) 중 어느 하나이고, 상기 폴리디옥시리보뉴클레오티드 반복단위 1몰당 0.001몰 내지 1몰 비율로 포함되는 것을 특징으로 하는 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상된 폴리디옥시리보뉴클레오티드계 진피 충전재 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 가교제와 아스코빌 에테르를 반응시켜 BDDE-아스코빌 에테르 복합체를 형성시키는 제1단계; 및 상기 BDDE-아스코빌 에테르 복합체를 폴리디옥시리보뉴클레오티드 및 가교제와 반응시켜 아스코빌 에테르가 결합된 폴리디옥시리보뉴클레오티드가 다른 폴리디옥시리보뉴클레오티드와 가교결합된 형태의 복합체를 형성시키는 제2단계;를 포함하되, 상기 가교제는 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르(1,4-butanediol diglycidyl ether, BDDE)이고, 상기 폴리디옥시리보뉴클레오티드 반복단위 1몰당 0.01몰 내지 1몰 비율로 포함되며; 상기 아스코빌 에테르는 3-O-에틸 아스코빌 에테르(VCE)이고, 상기 폴리디옥시리보뉴클레오티드 반복단위 1몰당 0.001몰 내지 1몰 비율로 포함되는 것을 특징으로 하는 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상된 폴리디옥시리보뉴클레오티드계 진피 충전재 조성물의 제조방법도 제공한다.

삭제

본 발명에 따른 진피 충전재 조성물은 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상되는 장점을 갖는다. 즉, 본 발명에 따른 진피 충전재 조성물을 진피 필러로 체내 삽입 시 체내에서의 지속시간을 최장 2년까지 연장시키는 효과가 있다. 또한, 본 발명은 비타민 C 유도체를 사용함으로써 체내에서 폴리디옥시리보뉴클레오티드의 메타볼리즘에 의한 분해를 늦출 수 있는 장점이 있고, 항산화제인 3-O-에틸 아스코빌 에테르를 사용함으로써 가교결합된 폴리디옥시리보뉴클레오티드의 진피 필러로서의 기능을 높여 줄 뿐만 아니라 항산화 효과로 인한 기능이 추가되는 장점 또한 갖는다. 또한, 항산화제인 3-O-에틸 아스코빌 에테르는 피부 미백 기능성 화장품의 재료가 되는 물질로서, 항산화 효과 이외에 피부 미백 기능을 향상시키는 부수적인 효과 또한 발휘한다.

도 1은 본 발명에 따른 폴리디옥시리보뉴클레오티드계 진피 충전재 조성물이 제조되는 과정을 나타내는 그림이다.

본 발명을 좀 더 구체적으로 설명하기 전에, 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정되어서는 아니되며, 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다. 따라서, 본 명세서에 기재된 실시 예의 구성은 본 발명의 바람직한 하나의 예에 불과할 뿐이고, 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형 예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.

이하, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 본 발명을 용이하게 실시할 수 있도록, 본 발명의 바람직한 실시 예들을 상세히 설명한다.

본 발명은 본 발명은 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상된 진피 충전재 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이며, 더욱 구체적으로 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상되어, 체내에서 폴리디옥시리보뉴클레오티드의 메타볼리즘에 의한 분해를 늦출 수 있으며, 피부 미백 기능 또한 갖춘 진피 충전재 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 진피 충전재 조성물은 폴리디옥시리보뉴클레오티드, 가교제 및 비타민 C 유도체를 포함하며, 상기 비타민 C 유도체는 아스코빌 팔미테이트(ascorbyl palmitate), 마그네슘 아스코빌 포스페이트(magnesium ascorbyl phosphate), 3-O-에틸 아스코빌 에테르(VCE) 중 어느 하나이다.

삭제

그리고, 상기 가교제는 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르(1,4-butanediol diglycidyl ether, BDDE)를 사용한다.

본 발명에 사용되는 상기 3-O-에틸 아스코빌 에테르(VCE)는 아스코빌 에테르의 3번 탄소에 위치하는 OH기의 H가 치환된 것으로, 폴리디옥시뉴클레오티드의 생체 내 지속성을 향상시키기 위한 비타민 C 유도체이며, 이는 항산화 역할과 분해 억제 역할(진피 충전재의 체내 지속시간을 늘리는 역할)을 수행한다.

삭제

그리고, 상기 폴리디옥시리보뉴클레오티드(poly-deoxyribonucleotide, PDRN)는 진피 필러의 주된 구성성분이며, 어류의 정액이나 정소 및 알에서 추출한 디옥시리보뉴클레오타이드(deoxyribonucleotide)의 중합체 생체물질로서, 이는 저분자의 디옥시리보뉴클레오타이드로부터 고분자의 디옥시리보뉴클레오타이드로 구성되어 있다.

삭제

디옥시리보뉴클레오타이드 반복 단위는 4종류의 염기가 당과 연결되어 있으며, 이러한 5탄당이 인산과 연결되는 포스포디에스터(phosphodiester) 결합으로 연결되어 각 반복단위가 인산에 의해 연결되어 고분자를 이루는 구조로 구성되어 있는 생체 고분자이다.

상기 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르(BDDE)는 상기 3-O-에틸 아스코빌 에테르(VCE)와 폴리디옥시리보뉴클레오티드 간의 가교결합 및 폴리디옥시리보뉴클레오티드 상호간의 가교결합을 담당하는 가교제로서 기능하며, 하기 화학식 3의 화학구조를 갖는 것일 수 있다.

[화학식 3]

한편, 상기 폴리디옥시리보뉴클레오티드와 아스코빌 에테르 상호 간 또는 폴리디옥시리보뉴클레오티드 상호 간은 상기 BDDE에 의하여 가교 결합될 수 있으며, 상기 아스코빌 에테르가 BDDE에 의하여 어느 한 폴리디옥시리보뉴클레오티드에 가교 결합 되고, 상기 어느 한 폴리디옥시리보뉴클레오티드는 다른 폴리디옥시리보뉴클레오티드와 BDDE에 의하여 가교 결합될 수 있다. 한편, 상기 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르(BDDE)는 상기 폴리디옥시리보뉴클레오티드 반복단위 1몰당 0.01몰 내지 1몰 비율로 포함되고, 아스코빌 에테르인 3-O-에틸 아스코빌 에테르(VCE)는 상기 폴리디옥시리보뉴클레오티드 반복단위 1몰당 0.001몰 내지 1몰 비율로 포함될 수 있다.

상기 폴리디옥시리보뉴클레오티드의 함량이 상기 함량 비율보다 적게 포함되는 경우는 진피 충전재로서의 기능을 제대로 발휘하지 못하며, 상기 함량 비율을 초과하는 경우는 이를 주사기로 체내에 삽입하기 어려운 문제가 있다.

한편, 상기 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르(BDDE)의 함량 비율이 상기 범위보다 적게 포함되는 경우는 낮은 가교도로 인하여 진피 충전재의 지속시간이 줄어드는 문제 및 항산화 및 분해 억제 기능이 낮아지거나 상실되는 문제가 있고, 상기 함량범위를 초과하는 경우는 가교도가 높아져서 충전재의 체내 삽입이 어렵고 이물감이 느껴질 수 있다.

본 발명에 사용되는 가교제로는 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르(BDDE) 외에도 PEG 디글리실 에테르(diglycil ether), PEG 에폭사이드(epoxide), 디비닐 술폰(vinyl sulfone), 또는 페닐렌-비스-(에틸)-카르보디이미드(phenylene-bis-(ethyl)-carbodiimide)가 균등물로 사용될 수 있으며, 디알데하이드(dialdehydes), 디설파이드(disulfide), PEG계의 가교제들과 이들의 혼합물은 모두 본 발명의 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르 가교제의 균등물로 해석되어야 한다.

한편, 폴리디옥시리보뉴클레오타이드의 가교는 폴리디옥시리보뉴클레오타이드의 염기의 아미노 그룹에서 일어나며, 또한 비타민 C 유도체도 가교제의 한쪽 말단과 반응하고 나머지 말단은 폴리디옥시리보뉴클레오타이드의 염기의 아미노 그룹과 반응하여 비타민 C 유도체를 붙일 수 있다.

한편, 상기 아스코빌 에테르, 즉 3-O-에틸 아스코빌 에테르(VCE)의 함량이 상기 범위보다 적게 포함되는 경우는 항산화 및 분해 억제기능이 상실될 수 있고, 상기 범위를 초과하는 경우는 가교제의 가교도를 낮출 수 있으며, 폴리디옥시리보뉴클레오티드와의 결합이 어렵게 되는 문제가 있다.

한편, 본 발명의 일 구현 예에 따른 진피 충전재 조성물의 제조방법은 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르(BDDE)와 아스코빌 에테르를 반응시켜 BDDE-아스코빌 에테르 복합체를 형성시키는 제1단계; 및 상기 BDDE-아스코빌 에테르 복합체를 폴리디옥시리보뉴클레오티드 및 1,4-부탄디올 디글리시딜에테르(BDDE)와 반응시켜 아스코빌 에테르가 결합된 폴리디옥시리보뉴클레오티드가 다른 폴리디옥시리보뉴클레오티드와 가교결합된 형태의 복합체를 형성시키는 제2단계;를 포함한다.

삭제

이때, 상기 아스코빌 에테르는 3-O-에틸 아스코빌 에테르(VCE)이다.

도 1에는 3-O-에틸 아스코빌 에테르를 이용하여 본 발명의 일 구현 예에 따른 진피 충전재 조성물을 제조하는 구체적인 반응 공정도가 예시적으로 제시되어 있다.

도 1을 참고하면, 가교제로 사용되는 BDDE는 VCE와 반응하여 VCE-BDDE를 형성한다. 그 후, 이렇게 형성된 VCE-BDDE는 폴리디옥시리보뉴클레오티드와 반응하고 이때 함께 들어 있는 BDDE는 폴리디옥시리보뉴클레오티드의 가교제 역할을 하여 최종적으로 VCE가 결합된 가교된 폴리디옥시리보뉴클레오티드를 얻을 수 있다.

한편, 도 1에는 명확하게 도시되어 있지 않으나, 폴리디옥시리보뉴클레오타이드의 가교는 폴리디옥시리보뉴클레오타이드의 염기의 아미노 그룹에서 일어나며, 또한 비타민 C 유도체도 가교제의 한쪽 말단과 반응하고 나머지 말단은 폴리디옥시리보뉴클레오타이드의 염기의 아미노 그룹과 반응하여 비타민 C 유도체를 결합시키는 것이 가능하다.

이하, 본 발명에 따른 진피 충전재 조성물의 구체적인 제조과정을 하기 실시예를 통하여 살펴보기로 하며, 본 발명의 효과를 비교 확인할 수 있는 다양한 비교예를 기술하기로 한다. 그러나, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 결코 아니다.

실시예 1

NaOH 1.4wt%의 15.4g의 수용액에 0.15g의 3-O-에틸 아스코빌 에테르와 0.6g의 BDDE를 혼합하여 40℃에서 반응시키고, 여기에 NaOH 0.9wt%의 24.3g의 수용액에 2.67g의 폴리디옥시리보뉴클레오티드를 넣어 녹인 용액을 부가해서 40℃의 인큐베이터에서 4시간 동안 매우 천천히 쉐이킹시켰다. 여기에 1.3M의 HCl PBS 용액 9.3㎖를 넣고 상온에서 5시간 천천히 쉐이킹시켰다. 이를 다알리시스백에 담아 중성의 PBS 용액에서 300시간 동안 다알리시스를 수행하였으며, 다알리시스가 끝난 후 냉장보관하였다.

실시예 2

NaOH 1.4wt%의 15.4g의 수용액에 0.15g의 아스코빌 팔미테이트와 0.6g의 BDDE를 혼합하여 40℃에서 반응시키고, 여기에 NaOH 0.9wt%의 24.3g의 수용액에 2.67g의 폴리디옥시리보뉴클레오티드를 넣어 녹인 용액을 부가해서 40℃의 인큐베이터에서 4시간 동안 매우 천천히 쉐이킹시켰다. 여기에 1.3M의 HCl PBS 용액 9.3㎖를 넣고 상온에서 5시간 천천히 쉐이킹시켰다. 이를 다알리시스백에 담아 중성의 PBS 용액에서 300시간 동안 다알리시스를 수행하였으며, 다알리시스가 끝난 후 냉장보관하였다.

실시예 3

NaOH 1.4wt%의 15.4g의 수용액에 0.15g의 마그네슘 아스코빌 포스페이트와 0.6g의 BDDE를 혼합하여 40℃에서 반응시키고, 여기에 NaOH 0.9wt%의 24.3g의 수용액에 2.67g의 폴리디옥시리보뉴클레오티드를 넣어 녹인 용액을 부가해서 40℃의 인큐베이터에서 4시간 동안 매우 천천히 쉐이킹시켰다. 여기에 1.3M의 HCl PBS 용액 9.3㎖를 넣고 상온에서 5시간 천천히 쉐이킹시켰다. 이를 다알리시스백에 담아 중성의 PBS 용액에서 300시간 동안 다알리시스를 수행하였으며, 다알리시스가 끝난 후 냉장보관하였다.

비교예 1

NaOH 1.4wt%의 15.4g의 수용액에 0.15g의 L-아스코르브산 2-글루코시드를 혼합하여 40℃에서 반응시키고, 여기에 NaOH 0.9wt%의 24.3g의 수용액에 2.67g의 폴리디옥시리보뉴클레오티드를 넣어 녹인 용액을 부가해서 40℃의 인큐베이터에서 4시간 동안 매우 천천히 쉐이킹시켰다. 여기에 1.3M의 HCl PBS 용액 9.3㎖를 넣고 상온에서 5시간 천천히 쉐이킹시켰다. 이를 다알리시스백에 담아 중성의 PBS 용액에서 300시간 동안 다알리시스를 수행하였으며, 다알리시스가 끝난 후 냉장보관하였다.

비교예 2

NaOH 1.4wt%의 15.4g의 수용액에 0.15g의 3-O-에틸 아스코빌 에테르와 0.6g의 BDDE를 혼합하여 40℃에서 반응시키고, 여기에 NaOH 0.9wt%의 24.3g의 수용액에 2.67g의 히알루론산을 넣어 녹인 용액을 부가해서 40℃의 인큐베이터에서 4시간 동안 매우 천천히 쉐이킹시켰다. 여기에 1.3M의 HCl PBS 용액 9.3㎖를 넣고 상온에서 5시간 천천히 쉐이킹시켰다. 이를 다알리시스백에 담아 중성의 PBS 용액에서 300시간 동안 다알리시스를 수행하였으며, 다알리시스가 끝난 후 냉장보관하였다.

비교예 3

NaOH 1.4wt%의 15.4g의 수용액에 0.15g의 L-아스코르브산 2-글루코시드와 0.6g의 BDDE를 혼합하여 40℃에서 반응시키고, 여기에 NaOH 0.9wt%의 24.3g의 수용액에 2.67g의 히알루론산을 넣어 녹인 용액을 부가해서 40℃의 인큐베이터에서 4시간 동안 매우 천천히 쉐이킹시켰다. 여기에 1.3M의 HCl PBS 용액 9.3㎖를 넣고 상온에서 5시간 천천히 쉐이킹시켰다. 이를 다알리시스백에 담아 중성의 PBS 용액에서 300시간 동안 다알리시스를 수행하였으며, 다알리시스가 끝난 후 냉장보관하였다.

[생체 내 지속성 실험]

생후 10개월 된 생쥐(Mus musculus) 암컷 15마리를 마취시킨 후, 각각 생쥐의 복부 가로×세로 3㎝×3㎝의 면적에 걸쳐 상기 실시예 1 내지 3 및 비교예 1 내지 3에 따라 제조된 진피 충전재 및 가교 결합 되지 않은 폴리디옥시리보뉴클레오티드(대조구) 100㎎을 주사기로 20㎎씩 5회로 나누어 각각 5곳에 주입하였다(생쥐 1 내지 3: 대조구 1 내지 3, 생쥐 4 내지 6: 각각 실시예 1 내지 3, 생쥐 7 내지 9: 비교예 1, 생쥐 10 내지 12: 비교예 2, 생쥐 13 내지 15: 비교예 3). 그 후, 각각 1주일, 1개월, 2개월, 3개월, 및 6개월 후에 각각 마취상태에서 복부 진피 샘플을 각각 1㎖씩 채취하여 폴리디옥시리보뉴클레오티드의 농도를 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

구분	생쥐	1주일	1개월	2개월	3개월	6개월
대조구 1	1	25	15	10	2	0
대조구 2	2	24	12	8	2	0
대조구 3	3	26	14	9	2	0
실시예 1	4	30	30	29	28	24
실시예 2	5	31	30	29	28	25
실시예 3	6	32	31	30	29	24
비교예 1	7	30	25	20	15	5
비교예 1	8	32	24	19	14	4
비교예 1	9	30	23	20	14	4
비교예 2	10	31	23	18	15	5
비교예 2	11	30	24	19	13	4
비교예 2	12	32	25	20	15	3
비교예 3	13	29	23	18	14	5
비교예 3	14	31	25	20	15	4
비교예 3	15	29	25	19	13	4

(단위: ㎍/㎖)

상기 표 1의 결과를 살펴보면, 가교 결합 되지 않은 폴리디옥시리보뉴클레오티드의 경우(대조구 1 내지 3)는 시간이 지남에 따라 매우 급속하게 진피 내의 폴리디옥시리보뉴클레오티드의 농도가 감소함을 확인할 수 있다.

한편, 비교예 1 내지 3(생쥐 7 내지 15)의 경우는 상기 대조구 보다는 생쥐 진피 내에서 안정적인 지속성을 나타냄을 확인할 수 있으나, 본 발명의 실시예 1 내지 3(생쥐 4 내지 6)에 비하여 현저하게 낮은 지속성을 보임을 확인할 수 있다.

따라서, 상기 표 1의 결과는 본 발명에 따른 진피 충전재 조성물의 우수한 진피 내 지속성을 나타내는 것으로 해석될 수 있다.

[피부 노화도 실험]

생후 10개월 된 생쥐(Mus musculus) 암컷 15마리를 마취시킨 후, 각각 생쥐의 복부 가로×세로 3㎝×3㎝의 면적에 걸쳐 상기 실시예 1 내지 3 및 비교예 1 내지 3에 따라 제조된 진피 충전재 및 가교 결합 되지 않은 폴리디옥시뉴클레오티드(대조구) 100㎎을 주사기로 20㎎씩 5회로 나누어 각각 5곳에 주입하였다(생쥐 1 내지 3: 대조구 1 내지 3, 생쥐 4 내지 6: 실시예 1, 생쥐 7 내지 9: 비교예 1, 생쥐 10 내지 12: 비교예 2, 생쥐 13 내지 15: 비교예 3). 그 후, 각각 1주일, 1개월, 2개월, 3개월, 및 6개월 후에 각각 마취상태에서 상기 샘플이 주입된 부위에 형성된 주름의 총 길이를 측정하여 피부 노화 정도를 확인하였고, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

구분	생쥐	1주일	1개월	2개월	3개월	6개월
대조구 1	1	0	1	3	5	8
대조구 2	2	0	1	4	5	9
대조구 3	3	0	2	3	6	8
실시예 1	4	0	0	0	0	0
실시예 2	5	0	0	0	0	0
실시예 3	6	0	0	0	0	0
비교예 1	7	0	0	0	2	3
비교예 1	8	0	0	0	2	4
비교예 1	9	0	0	0	1	3
비교예 2	10	0	0	0	2	3
비교예 2	11	0	0	0	2	3
비교예 2	12	0	0	0	2	3
비교예 3	13	0	0	0	2	4
비교예 3	14	0	0	0	2	4
비교예 3	15	0	0	0	2	4

(단위: ㎝)

상기 표 2의 결과를 살펴보면, 가교 결합 되지 않은 폴리디옥시리보뉴클레오티드을 주입한 경우(대조구 1 내지 3)는 시간이 지남에 따라 피부 주름의 총 길이가 비교적 빨리 증가하는 것을 확인할 수 있다.

한편, 비교예 1 내지 3(생쥐 7 내지 15)의 경우는 상기 대조구 보다는 피부 노화 상태가 양호함을 확인할 수 있으나, 본 발명의 실시예 1 내지 3(생쥐 4 내지 6)의 경우는 6개월간 전혀 주름이 관찰되지 않은 것에 비하여 현저하게 낮은 피부 노화방지 효과를 나타냄을 확인할 수 있다.

따라서, 상기 표 2의 결과는 본 발명에 따른 진피 충전재 조성물의 우수한 진피 내 항산화 작용 지속성을 나타내는 것으로 해석될 수 있다.

[피부 독성 유무 실험]

생후 10개월 된 생쥐(Mus musculus) 암컷 15마리를 마취시킨 후, 각각 생쥐의 복부 가로×세로 3㎝×3㎝의 면적에 걸쳐 상기 실시예 1 내지 3 및 비교예 1 내지 3에 따라 제조된 진피 충전재 및 가교 결합 되지 않은 폴리디옥시리보뉴클레오티드(대조구) 100㎎을 주사기로 20㎎씩 5회로 나누어 각각 5곳에 주입하였다(생쥐 1 내지 3: 대조구 1 내지 3, 생쥐 4 내지 6: 실시예 1 내지 3, 생쥐 7 내지 9: 비교예 1, 생쥐 10 내지 12: 비교예 2, 생쥐 13 내지 15: 비교예 3). 그 후, 각각 1주일, 1개월, 2개월, 3개월, 및 6개월 후에 각각 생쥐 1 내지 15를 마취한 상태에서 복부 피부의 발진, 변색 및 종양 형성 등 피부 상태를 육안으로 확인하여 피부 독성 유무를 관찰하였으며, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

구분	생쥐	1주일	1개월	2개월	3개월	6개월
대조구 1	-	-	-	-	-	-
대조구 2	-	-	-	-	-	-
대조구 3	-	-	-	-	-	-
실시예 1	-	-	-	-	-	-
실시예 2	-	-	-	-	-	-
실시예 3	-	-	-	-	-	-
비교예 1	-	-	-	-	-	-
비교예 1	-	-	-	-	-	-
비교예 1	-	-	-	-	-	-
비교예 2	-	-	-	-	-	-
비교예 2	-	-	-	-	-	-
비교예 2	-	-	-	-	-	-
비교예 3	-	-	-	-	-	-
비교예 3	-	-	-	-	-	-
비교예 3	-	-	-	-	-	-

(+: 피부 이상 발견, -: 피부 이상 없음)

상기 표 3의 결과를 살펴보면, 대조구 1 내지 3, 실시예 1 내지 3 및 비교예 1 내지 3의 경우 6개월의 시간이 경과 하는 동안 복부 진피층에 상기 샘플 주입에 의한 피부 이상이 관찰되지 않았다.

따라서, 상기 표 3의 결과는 본 발명에 따른 진피 충전재 조성물의 생체 안전성을 뒷받침하는 것으로 해석될 수 있다.

Claims

폴리디옥시리보뉴클레오티드, 가교제(cross-linking agent) 및 비타민 C 유도체를 포함하며,
상기 가교제는 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르(1,4-butanediol diglycidyl ether, BDDE)이고, 상기 폴리디옥시리보뉴클레오티드 반복단위 1몰당 0.01몰 내지 1몰 비율로 포함되며;
상기 비타민 C 유도체는 아스코빌 팔미테이트(ascorbyl palmitate), 마그네슘 아스코빌 포스페이트(magnesium ascorbyl phosphate), 3-O-에틸 아스코빌 에테르(VCE) 중 어느 하나이고, 상기 폴리디옥시리보뉴클레오티드 반복단위 1몰당 0.001몰 내지 1몰 비율로 포함되는 것을 특징으로 하는 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상된 폴리디옥시리보뉴클레오티드계 진피 충전재 조성물.
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가교제와 아스코빌 에테르를 반응시켜 BDDE-아스코빌 에테르 복합체를 형성시키는 제1단계; 및
상기 BDDE-아스코빌 에테르 복합체를 폴리디옥시리보뉴클레오티드 및 가교제와 반응시켜 아스코빌 에테르가 결합된 폴리디옥시리보뉴클레오티드가 다른 폴리디옥시리보뉴클레오티드와 가교결합된 형태의 복합체를 형성시키는 제2단계;를 포함하되,
상기 가교제는 1,4-부탄디올 디글리시딜 에테르(1,4-butanediol diglycidyl ether, BDDE)이고, 상기 폴리디옥시리보뉴클레오티드 반복단위 1몰당 0.01몰 내지 1몰 비율로 포함되며;
상기 아스코빌 에테르는 3-O-에틸 아스코빌 에테르(VCE)이고, 상기 폴리디옥시리보뉴클레오티드 반복단위 1몰당 0.001몰 내지 1몰 비율로 포함되는 것을 특징으로 하는 생체 내 지속성 및 항산화 작용이 향상된 폴리디옥시리보뉴클레오티드계 진피 충전재 조성물의 제조방법.
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