KR101857141B1

KR101857141B1 - New compounds, the preparation thereof and pharmaceutical composition comprising the same for alleviation, prevention or treatment of osteoporosis

Info

Publication number: KR101857141B1
Application number: KR1020120064193A
Authority: KR
Inventors: 박혜영; 도경은; 강보희; 임미정; 이정민
Original assignee: 이화여자대학교 산학협력단
Priority date: 2011-06-17
Filing date: 2012-06-15
Publication date: 2018-05-14
Also published as: KR20120139581A

Abstract

본 발명은 하기의 [화학식 I]의 신규한 화합물, 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 이들의 수화물 또는 용매화물, 이의 제조방법 및 이를 유효량 함유하는 골다공증 완화, 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.
[화학식 I]

The present invention provides a novel compound of the following general formula (I), a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate or solvate thereof, a process for producing the same, and a composition for alleviating, preventing or treating osteoporosis containing the same.
(I)

Description

신규한 화합물, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 골다공증 완화, 예방 또는 치료용 약학조성물{New compounds, the preparation thereof and pharmaceutical composition comprising the same for alleviation, prevention or treatment of osteoporosis}TECHNICAL FIELD The present invention relates to a novel compound, a process for producing the same, and a pharmaceutical composition for alleviating, preventing or treating osteoporosis comprising the same,

본 발명은 신규한 화합물, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 골다공증의 완화, 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a novel compound, a process for producing the same, and a composition for alleviating, preventing or treating osteoporosis comprising the same.

골다공증은 매우 빈번한 질병 중 하나로 전세계적으로 약 2억 명의 사람들이 골질량 (bone mass)이 낮거나 골다공증을 앓고 있으며, 뼈의 미세구조가 붕괴되고 골질량이 감소하는 증상을 나타낸다. 이로 인해 뼈의 강도가 감소하고 골절의 위험, 특히 척추, 엉덩이, 손목, 상완골, 골반 골절의 위험이 증가한다. Osteoporosis is one of the most frequent diseases, with about 200 million people worldwide suffering from low bone mass or osteoporosis, with bone microstructure collapsing and decreased bone mass. This reduces the strength of the bones and increases the risk of fractures, especially the spine, buttocks, wrists, humerus, and pelvis fractures.

A. 뼈A. Bone

뼈는 조골세포 (osteoblast), 골세포 (osteocyte), 파골세포 (osteoclast) 세 가지 주요한 세포로 구성되어 있다. 조골세포는 동화 (anabolic) 작용을 하며, 뼈의 유기적인 구성성분 (유골, osteoid)을 생성한 후 골화 (mineralization)함으로써 새로운 뼈의 생성을 촉진한다. 조골세포는 골수 줄기 세포에서 유래하며 유골의 형성은 상대적으로 빠르게 6~12시간 안에 끝나지만 그 다음 골화의 과정은 훨씬 길게 1~2개월이 걸린다. 뼈 형성이 끝나면 조골세포는 새로운 골기질 (bone matrix)에 둘러싸여 파골세포로 분화된다. Bones are composed of three major cells: osteoblasts, osteocytes, and osteoclasts. Osteoblasts act as anabolic and promote the production of new bone by mineralization after the formation of organic constituents (osteoid) of bone. Osteoblasts are derived from bone marrow stem cells, and the formation of the ashes ends up relatively quickly within 6 to 12 hours, but then the process of ossification takes much longer and takes one to two months. At the end of bone formation, osteoblasts are surrounded by a new bone matrix and differentiated into osteoclasts.

파골세포는 뼈에서 가장 많은 세포로, bone multicellular unit가 국소의 필요에 따라 뼈의 구성성분을 조정할 수 있도록 local strain information을 전달하는 'mechanostat' 기능을 한다고 여겨지고 있으며, 커다란 다핵세포로, 골수에서 유래한 단핵 대식세포의 융합으로 형성된다. 파골세포는 특정 부위에서 lysosomal enzyme 작용을 통해 뼈의 구성성분을 파괴하는 이화 (catabolic) 작용을 하며, 파골세포의 분화와 기능에는 receptor activation of nuclear factor κ B ligand (RANKL)와 관련된 경로가 중요한 조절인자로 작용한다.It is believed that osteoclasts are the most abundant cells in the bone, and that the bone multicellular unit functions as a 'mechanostat' that transmits local strain information to adjust bone components according to local needs. It is a large polynuclear cell, derived from bone marrow It is formed by the fusion of mononuclear macrophages. The osteoclast cell has a catabolic action that destroys bone components through lysosomal enzyme action at specific sites. The osteoclast differentiation and function is mediated by the pathway involved in receptor activation of nuclear factor κB ligand (RANKL) It acts as a factor.

또한, RANKL/RANK/OPG system은 현재 뼈의 재흡수 조절에서 가장 중요한 경로로 알려져 있다. RANKL은 tumor necrosis factor (TNF) family에 속하는 cytokine으로 조골세포에 의해 발현되며, 파골세포의 membrane bound receptor RANK에 결합하여 골수세포가 파골세포로 분화하는 것을 촉진하고, RANKL의 발현 촉진은 Parathyroid hormone (PTH), calcitriol, prostaglandin과 같은 호르몬들에 의한 조골세포에 의해 이루어진다. 한편, 조골세포는 osteoprotegrin (OPG)이라는 soluble receptor도 분비하는데 이는 RANKL에 결합하여 이를 불활성화시킬 수 있어 파골세포 형성의 강력한 antagonist로써 뼈의 재흡수에서 중요한 조절인자이며, OPG는 estrogen에 의해 촉진된다.In addition, the RANKL / RANK / OPG system is now known to be the most important pathway to regain bone resorption. RANKL is a cytokine belonging to the tumor necrosis factor (TNF) family. It is expressed by osteoblast. It binds to osteoclast membrane bound receptor RANK and promotes differentiation of osteoclast into osteoclast. RANKL expression promotes parathyroid hormone PTH), calcitriol, and prostaglandin. On the other hand, osteoblasts also secrete soluble receptors called osteoprotegrin (OPG), which can bind to RANKL and inactivate it, making it a potent antagonist of osteoclast formation, an important regulator of bone resorption and promoted by estrogen .

B. 골다공증 유발 원인B. Causes of Osteoporosis

골다골증은 골밀도 (bone mineral density)가 2.5 이하이거나 T score (T-score는 젊은 성인의 평균골질량과의 표준편차)가 -2 .5 이하인 경우를 가리킨다. 연령에 따른 뼈의 감소는 40대나 50대에 시작하며, 이때 파골세포 (osteoclast)에 의한 뼈의 파괴가 증가하고 조골세포 (osteoblast)에 의한 뼈의 형성은 감소해서 골다공증이 발생하며, 여성의 경우, 뼈의 감소가 폐경에 의해 가속화된다.Osteoporosis refers to a bone mineral density of less than 2.5 or a T score (T-score is the standard deviation of the mean bone mass of young adults) of -2.5 or less. The age-related decline in bone starts in the 40's or 50's, at which time bone destruction by osteoclast is increased, osteoblast-induced bone formation is reduced, osteoporosis occurs, and women , The reduction of bone is accelerated by menopause.

최대골량 (peak bone mass)은 30대에 도달하는데 최대골량은 그 후의 골질량에 중요한 결정요인이 된다. 최대골량은 유전적 요인에 크게 영향을 받고 그 외에도 영양, 특히 칼슘과 비타민 D 섭취와 호르몬 상태, 신체 활동, 흡연, 낮은 체질량, 사춘기 시기 등의 영향을 받는다.The peak bone mass reaches 30s and the maximum bone mass is an important determinant of subsequent bone mass. Maximum bone mass is strongly influenced by genetic factors and is influenced by nutrition, especially calcium and vitamin D intake and hormone status, physical activity, smoking, low body mass, and puberty.

Estrogen 부족은 골다공증의 결정적인 원인으로 여겨지는데 이는 estrogen level이 자연적으로 줄어드는 폐경기 여성이 골다공증 유발 위험이 가장 높은 데서 기인한다. 폐경기 때 estrogen 부족은 뼈의 재흡수 증가를 야기하여 빠르고 지속적인 뼈의 감소를 유발한다. Estrogen은 여성뿐 만 아니라 남성의 뼈 재흡수에도 큰 역할을 하고 최대골량 도달에도 중요한 역할을 한다. 뿐만 아니라 노인층 남성의 골다공증은 낮은 androgen level보다 낮은 estrogen level에 훨씬 밀접한 관련이 있다.The Estrogen tribe is considered to be a crucial cause of osteoporosis, which is due to the highest risk of osteoporosis in postmenopausal women whose estrogen levels are naturally reduced. In menopause, estrogen deficiency causes an increase in bone resorption, resulting in rapid and sustained bone loss. Estrogen plays a role not only in women but also in male bone resorption and plays an important role in reaching maximal bone mass. In addition, osteoporosis in older men is more closely related to lower estrogen levels than lower androgen levels.

칼슘 부족은 골다공증의 원인으로 처음부터 지목됐다(특히 노인층). 칼슘 흡수 저하나 칼슘 손실 증가 (hypercalcuria)에 의한 칼슘 부족은 PTH 분비와 뼈 재흡수를 증가시킨다. PTH(Parathyroid hormone)은 84개의 아미노산으로 구성된 peptide로 칼슘 항상성 조절에 필수적이며, 칼슘의 농도와 역-상관관계를 가지는데, 칼슘은 부갑상선 세포의 calcium-sensing receptor에 결합하여 PTH 분비에 영향을 주게 된다. PTH는 신장의 칼슘 재흡수와 장의 칼슘 흡수, 뼈의 remodeling을 증가시킨다. 비타민 D 부족과 이차성 부갑상선 항진증 (hyperparathyroidism)은 노인층에서 일반적으로 발생하는데 이 역시 골다공증에 기여할 수 있다. 이차성 부갑상선 항진증은 비타민 D가 상대적으로 부족하여 circulating form인 25-hydroxy vitamin D의 농도가 30ng/mL 이하로 떨어졌을 때 발생하고 그러므로 비타민 D 보급은 이 농도나 그 이상으로 되어야 한다. 활성형 호르몬인 1,25-dihydroxy vitamin D(calcitriol)는 장에서의 칼슘과 인의 흡수에 필수적이고 PTH 생성에 대한 tonic inhibitory effect도 있어서 양쪽 모두 이차성 부갑상선 항진증 유발의 원인이 될 수 있다. 비타민 D 부족과 이차성 부갑상선 항진증은 뼈 감소 가속화, 골절 증가, 신경근육 장애를 통한 넘어질 위험 증가를 유발한다.Calcium deficiency is the first cause of osteoporosis (especially the elderly). Lack of calcium absorption or calcium deficiency due to hypercalcuria increases PTH secretion and bone resorption. PTH (parathyroid hormone) is a peptide composed of 84 amino acids, which is essential for calcium homeostasis and has a negative correlation with calcium concentration. Calcium binds to the calcium-sensing receptor of the parathyroid cell and affects PTH secretion do. PTH increases renal calcium resorption, intestinal calcium uptake, and bone remodeling. Vitamin D deficiency and secondary hyperparathyroidism usually occur in the elderly, which can also contribute to osteoporosis. Secondary hyperparathyroidism occurs when the concentration of 25-hydroxy vitamin D in the circulating form drops to less than 30 ng / mL due to the relative deficiency of vitamin D, and therefore vitamin D supplementation should be at or above this concentration. The active hormone, 1,25-dihydroxy vitamin D (calcitriol), is essential for the absorption of calcium and phosphorus in the intestine and has a tonic inhibitory effect on PTH production, both of which may cause secondary hyperparathyroidism. Vitamin D deficiency and secondary hyperparathyroidism lead to accelerated bone loss, increased fracture, and increased risk of falling through neuromuscular disorders.

C. 새로운 골다공증 치료제의 디자인C. Design of new osteoporosis treatment

현재 골다공증 치료제로 사용되고 있는 화합물로는 비스포스포네이트 제제(알렌드로네이트, 에티드로네이트), 호르몬 제제(랄록시펜), 비타민 D 제제, 칼시토닌 제제, 칼슘 제제 등이 있다. 일반적으로 골다공증 치료제에 대해서 환자의 순응도가 낮고 지속적인 복용이 잘 이뤄지지 않는다. 경구용 bisphosphonates는 상부 위장의 부작용이 있을 수 있으며, 물 한잔과 공복에 먹어야 하고 똑바로 앉거나 서서 30~60분 동안 음식물이나 음료를 섭취하면 안 되는 등 복용 시 주의 할 점이 많다. 또한 오랫동안 사용하면 뼈의 remodeling을 과도하게 억제하고 골절과 미세 손상을 회복하지 못하게 되어 지나친 골화와 미소 균열 증가를 유발한다는 우려도 있다.호르몬 대체요법의 경우 치료 효과만큼 그에 따른 부작용이 크다는 문제점이 있으며, PTH는 매일 피하 주사해야 되는 불편함과 비싼 가격의 문제점이 있다. 또한, 칼슘과 비타민 D 보급만으로는 치료효과가 불충분하다. 더욱이, 골다공증은 약물의 단기 투여만으로는 치료할 수 없으며 약물의 장기 투여가 필수적이므로, 약물을 장기 투여할 때에 상기와 같은 부작용이 없고 우수한 약효를 갖는 새로운 화합물의 필요성이 요구되고 있다.Currently, compounds used as therapeutic agents for osteoporosis include bisphosphonates (alendronate, etidronate), hormone preparations (raloxifene), vitamin D preparations, calcitonin preparations, and calcium preparations. Generally, the compliance of the patient with osteoporosis treatment is low and the continuous administration is not performed well. Oral bisphosphonates may have side effects of upper gastrointestinal tract, and should be eaten in a glass of water or on an empty stomach, and should not be allowed to eat or drink for 30 to 60 minutes standing or standing. Also, there is a concern that if used for a long time, bone remodeling is excessively inhibited and fracture and micro damage are not restored, leading to excessive ossification and micro crack growth. Hormone replacement therapy has the disadvantage that the side effects are large as much as the therapeutic effect, and PTH has the inconvenience of daily subcutaneous injection and high price. In addition, calcium and vitamin D supplementation alone is insufficient for treatment. Furthermore, since osteoporosis can not be treated only by short-term administration of a drug and long-term administration of the drug is essential, there is a need for a new compound having excellent drug efficacy without any side effects as described above.

Susan M. Ott. et al. The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, 2005, Vol.90, 1897-7899Susan M. Ott. et al. The Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, 2005, Vol. 90, 1897-7899

이에 따라, 본 발명자들은 골다공증에 대한 효과적인 치료제를 찾고자 새로운 골다공증 치료제를 디자인하여 합성하고, 이들 화합물이 파골세포로의 분화(파골세포의 형성)를 억제해 골흡수를 효과적으로 억제함을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다. Accordingly, the present inventors have designed and synthesized a therapeutic agent for a new osteoporosis in order to find an effective therapeutic agent for osteoporosis, and confirmed that these compounds effectively inhibit bone resorption by inhibiting differentiation into osteoclasts (formation of osteoclasts) Thereby completing the invention.

따라서 본 발명의 목적은 골다공증 완화, 예방 또는 치료에 유용한 신규한 화합물과, 이의 제조방법, 이를 함유하는 약학 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a novel compound useful for alleviating, preventing or treating osteoporosis, a process for producing the same, and a pharmaceutical composition containing the same.

본 발명은 하기 [화학식 I]로 표시되는 신규한 화합물, 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 이들의 수화물 또는 용매화물을 제공한다:The present invention provides a novel compound represented by the following formula (I), a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate or solvate thereof:

[화학식 I](I)

상기 [화학식 I]에서, In the above formula (I)

R₁ 또는 R₂는 독립적으로 플루오로, 클로로, 브로모, 요오도, 시아노, C1-C4 알킬, C1-C4 알콕시, C2-C4 알켄일 또는 N`-히드록시카르밤이미도일이며, 여기서, 알킬, 알콕시, 알켄일은 치환되지 않거나, 플루오로, 클로로, 브로모, 요오도 또는 시아노 중에서 선택된 1종 이상으로 치환된 것일 수 있고, R₁ 또는 R₂는 페닐기에 오르소(ortho)-, 메타(meta)-, 또는 파라(para )-위치에 위치한다. R ₁ or R ₂ is independently fluoro, chloro, bromo, iodo, cyano, C 1 -C 4 alkyl, C 1 -C 4 alkoxy, C 2 -C 4 alkenyl or N " , Alkyl, alkoxy and alkenyl may be unsubstituted or substituted by one or more members selected from fluoro, chloro, bromo, iodo or cyano, and R ₁ or R ₂ may be ortho - , Meta (-), or para (-) position.

상기 N`-히드록시카르밤이미도일은 N`-히드록시아미디노일 수 있으며, 이는 (E)-N`-히드록시아미디노 또는 (Z)-N`-히드록시아미디노를 포함하며, 바람직하게는 (E)-N`-히드록시아미디노일 수 있다. The N'-hydroxycarbamimidoyl may be N'-hydroxyamidino, which includes (E) -N'-hydroxyamidino or (Z) -N'-hydroxyamidino, preferably May be (E) -N'-hydroxyamidino.

본 발명에서, 상기 [화학식 I]의 화합물, 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 이들의 수화물 또는 용매화물은 하기 [화학식 I-1]로 표시되는 5-(4-(N`-히드록시카르밤이미도일-페녹시)-N-(2-(4-에틸페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-일)펜탄아미드, 하기 [화학식 I-2]로 표시되는 5-((E)-4-(N'-히드록시카르밤이미도일)-페녹시)-N-(2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-일)펜탄아미드 또는 하기 [화학식 I-3]으로 표시되는 5-((E)-4-(N'-히드록시카르밤이미도일)-페녹시)-N-(2-(4-메톡시페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-일)펜탄아미드, 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 이들의 수화물 또는 용매화물일 수 있다.In the present invention, the compound of formula (I), a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate or solvate thereof may be 5- (4- ( N' -hydroxycarbazolyl) night yimido yl-phenoxy) - N - (2- (4- ethyl-phenyl-amino) benzo [d] oxazol-5 represented by 5-yl) pentane amide, to formula I-2] - ((E ) Benzo [d] oxazol-5-yl) pentanamide or a compound represented by the following formula (I-3): wherein R 1 is a hydrogen atom, The resulting 5 - ((E) -4- (N'-hydroxycarbamimidoyl) -phenoxy) -N- (2- (4- methoxyphenylamino) benzo [d] oxazol- ) Pentanamide, a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate or solvate thereof.

[화학식 I-1](I-1)

[화학식 I-2][Formula I-2]

[화학식 I-3][Formula I-3]

본 발명에서, 약제학적으로 허용 가능한 염은 통상적으로 약제조업자가 의약품을 제조하는데 사용하는 무기산 및 유기산염을 의미하며, 예를 들어, 무기산으로는 염산, 브롬산, 황산, 인산 등이 있고, 유기산으로는 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 푸 마르산, 포름산, 프로피온산, 옥살산, 트리플루오로아세트산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, 말레인산, 벤조산, 글루콘산, 글리콜산, 숙신산, 4-모폴린에탄술폰산, 캠포술폰산, 4-니트로벤젠술폰산, 히드록시-O-술폰산, 4 -톨루엔술폰산, 칼룩투론산, 엠보산, 글루탐산, 아스파르트산 등이 있다.In the present invention, the pharmaceutically acceptable salts generally refer to inorganic acids and organic acid salts used by pharmaceutical manufacturers to prepare pharmaceutical products. Examples of inorganic acids include hydrochloric acid, bromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid and the like, There may be mentioned citric acid, acetic acid, lactic acid, tartaric acid, fumaric acid, formic acid, propionic acid, oxalic acid, trifluoroacetic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, maleic acid, benzoic acid, gluconic acid, glycolic acid, Caproic acid, camphorsulfonic acid, 4-nitrobenzenesulfonic acid, hydroxy-O-sulfonic acid, 4-toluenesulfonic acid, calycturonic acid, embossic acid, glutamic acid and aspartic acid.

본 발명은 또한, a)하기 [화학 식 II]의 화합물 및 5-브로모발레르산을 아미드 결합반응시켜 하기 [화학식 III]의 화합물을 제조하는 단계 및 b) [화학식 III]의 화합물과 [화학식 IV]를 염기 존재 하에서 반응시켜 [화학식 I] 화합물을 제조하는 방법을 제공한다:The present invention also provides a process for the preparation of a compound of formula (III), comprising the steps of: a) preparing an amide bond-reacting compound of formula (II) and 5-bromolvaleric acid, IV] is reacted in the presence of a base to produce a compound of the formula I:

[화학식 II]&Lt; RTI ID = 0.0 &

[화학식 III](III)

[화학식 IV](IV)

[화학식 I](I)

상기 [화학식 I] 내지 [화학식 IV]에서, In the above formulas (I) to (IV)

R₁ 또는 R₂는 각각 플루오로, 클로로, 브로모, 요오도, 시아노, C1-C4 알킬, C1-C4 알콕시, C2-C4 알켄일 또는 N`-히드록시카르밤이미도일이며, 여기서, 알킬, 알콕시, 알켄일은 치환되지 않거나, 플루오로 , 클로로, 브로모, 요오도 또는 시아노 중에서 선택된 1종 이상으로 치환된 것일 수 있고, R₁ 또는 R₂는 페닐기에 오르소(ortho)-, 메타(meta)-, 또는 파라(para)-위치에 위치한다. Wherein R ₁ or R ₂ are each independently selected from the group consisting of fluoro, chloro, bromo, iodo, cyano, C 1 -C 4 alkyl, C 1 -C 4 alkoxy, C 2 -C 4 alkenyl or N 1 -hydroxycarbamimidoyl, Alkyl, alkoxy, alkenyl may be unsubstituted or substituted with at least one selected from fluoro, chloro, bromo, iodo or cyano, and R ₁ or R ₂ may be ortho, Meta -, or para - position.

본 발명에서, a)단계의 출발물질로 사용되는 [화학식 II] 화합물은 Bioorg. Med. Chem. 18: 7580 -7585 (2010)에 기재된 방법으로 합성하거나 시중에서 구입하여 사용할 수 있다.In the present invention, the compound of formula (II) used as a starting material in step a) is described in Bioorg. Med. Chem . 18 : 7580 -7585 (2010), or may be purchased commercially.

본 발명의 제조방법에서, a) 단계의 아미드 결합반응 조건은 통상의 기술자가 아민기가 있는 화합물과 카르복실산 기가 있는 화합물을 반응시켜 아미드 결합을 형성시킬 때 사용하는 반응 조건을 이용하며, 예를 들어, PyBOP(benzotriazol-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate) 또는 PyBROP 및 3차 아민 존재하에서 수행할 수 있다.In the preparation method of the present invention, the amide bond reaction conditions of step (a) are carried out using conventional reaction conditions used for forming an amide bond by reacting a compound having an amine group with a compound having a carboxylic acid group, For example, in the presence of PyBOP (benzotriazol-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate) or PyBROP and tertiary amine.

본 발명의 제조방법에서, a) 단계가 PyBROP 및 3차 아민의 존해 하에서 수행되는 경우, 상기 3차아민은 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에틸아민, N-메틸포르포린, N-메틸피페 리딘, 4-디메틸아미노피리딘, N,N-디메틸아닐린, 2, 6-루티딘 및 피리딘 중에서 선택된 1종 이상일 수 있으며, N,N-디이소프로필에틸아민이 보다 더 바람직하다. In the process of the present invention, when step a) is carried out in the presence of PyBROP and a tertiary amine, the tertiary amine is selected from the group consisting of triethylamine, N, N-diisopropylethylamine, N- Methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine, N, N-dimethylaniline, 2,6-lutidine and pyridine, with N, N-diisopropylethylamine being more preferred.

본 발명의 제조방법에서, 5-브로모발레르산의 사용량은 a) 단계의 [화학식 II] 화합물의 1 몰(mol) 대비 0.85 내지 1.50몰(mol)이 바람직하며, PyBOP의 사용량은 [화학식 II] 화합물의 1몰 대비 0.95 내지 1.20 몰이 바람직하고 1.00몰이 보다 바람직하다. In the production process of the present invention, the amount of 5-bromo valeric acid to be used is preferably 0.85 to 1.50 mol (moles) relative to 1 mol (mol) of the compound of formula (II) in the step a) ] Is preferably 0.95 to 1.20 moles, more preferably 1.00 moles, per 1 mole of the compound.

본 발명의 제조방법에서, a)단계의 반응용매는 유기화합물 제조에서 아미드 결합반응 수행 시 통상적으로 사용하는 유기용매를 사용할 수 있으며, 예를 들어, DMF(디메틸포름아미드), DMSO(디메틸설폭시드), 아세톤(aceto ne) 등을 사용할 수 있으며, DMF가 보다 바람직하다. In the production process of the present invention, the reaction solvent in step a) may be an organic solvent commonly used in the amide bond formation in the production of an organic compound, for example, DMF (dimethylformamide), DMSO (dimethylsulfoxide ), Acetone (aceto ne), and the like, and DMF is more preferable.

본 발명의 제조방법에서, a)단계의 반응온도는 아미드 결합반응 수행시 통상적으로 사 용하는 반응온도일 수 있으며, 바람직하게는 -5 내지 50℃이며, 실온(15 내지 30℃)이 보다 더 바람직하다. In the production process of the present invention, the reaction temperature in step a) may be a reaction temperature usually used in carrying out the amide bond reaction, preferably -5 to 50 ° C, more preferably room temperature (15 to 30 ° C) desirable.

본 발명의 제조방법에서, b) 단계의 [화학식 IV]는 시중에서 판매되는 화합물을 이용 (Aldrich 사) 한 것일 수 있다. In the production process of the present invention, the compound of formula (IV) in step b) may be a commercially available compound (Aldrich).

본 발명의 제조방법에서, b) 단계의 염기는 무기 염기일 수 있으며, 탄산나트륨, 탄산칼륨, 탄산칼슘 및 인산나트륨에 서 선택된 1종 이상인 것이 바람직하다. In the production method of the present invention, the base in step b) may be an inorganic base and is preferably at least one selected from the group consisting of sodium carbonate, potassium carbonate, calcium carbonate and sodium phosphate.

상기 무기 염기의 사용량은 [화학식 IV] 화합물의 1몰 대비 0.95 내지 1 .5몰이 바람직하고, 1몰이 보다 더 바람직하다. The amount of the inorganic base to be used is preferably 0.95 to 1.5 mol, more preferably 1 mol, relative to 1 mol of the compound of the formula (IV).

본 발명의 제조방법에서, b)단계의 반응용매는 통상의 유기용매를 사용할 수 있으며, 예를 들어, DMF(디메틸포름아미드), DMSO(디메틸설폭시드), 아세톤 등을 사용 할 수 있고, DMF가 보다 바람직하다. For example, DMF (dimethylformamide), DMSO (dimethylsulfoxide), acetone and the like can be used as the reaction solvent in step b), and DMF Is more preferable.

본 발명의 제조방법에서, b)단계의 반응온도는 실온 내지 70℃이며, 50 내지 60℃가 보다 바람직하다. In the production process of the present invention, the reaction temperature in the step b) is from room temperature to 70 캜, more preferably from 50 to 60 캜.

본 발명은 또한, 5-(4-시아노펜옥시-N-(2-(4-에틸페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-일)펜탄 아미드와 NH₂OHㆍHCl을 3차아민 존재 하에 반응시켜 상기 화학식 I-1로 표시되는 5-(4-(N`-히드록시카르밤이미도일)-펜옥시-N-(2-(4-에틸페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-일)펜탄아미드를 제조하는 방법을 제공한다. The invention also 5- (4-cyano nopen oxy - N - (2- (4-ethyl-phenyl-amino) benzo [d] oxazol-5-yl) a tertiary amine present pentane amide and NH ₂ OH-HCl (4- (N'-hydroxycarbamimidoyl) -phenoxy- N- (2- (4-ethylphenylamino) benzo [ d ] oxazole- 5-yl) pentanamide. &Lt; / RTI >

여기서, 3차 아민은 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에틸아민, N-메틸포르포린, N-메틸피페리딘, 4-디메틸아미노 피리딘, N,N-디메틸아닐린, 2, 6-루티딘 및 피리딘 중에서 선택된 1종 이상인 것이 바람직하며, 트리에틸아민이 보다 더 바람직하며, 3차아민의 사용 몰량은 NH₂OHㆍHCl의 사용 몰량과 동일한 것이 바람직하다. 또한 본 반응에서, NH₂OHㆍHCl의 사용량은 5-(4-시아노펜옥시-N-(2-(4-에틸페 닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-일)펜탄아미드의 1몰 대비 1.1 내지 3몰이 바람직하며 2몰이 보다 더 바람직하다. 반응온도는 가열환류가 바람직하다.Here, the tertiary amine may be selected from the group consisting of triethylamine, N, N-diisopropylethylamine, N-methylporpholine, N-methylpiperidine, Lutidine and pyridine, more preferably triethylamine, and the molar amount of the tertiary amine used is preferably the same as the molar amount of NH ₂ OH-HCl used. Also in this reaction, the amount of NH ₂ OH-HCl is 5- (4-cyano nopen oxy - N - (2- (4-ethyl page carbonyl amino) benzo [d] oxazol-5-yl) amide of pentane 1 The molar ratio is preferably 1.1 to 3 mol, more preferably 2 mol, relative to the molar amount. The reaction temperature is preferably heated to reflux.

본 발명은, 5-(4-시아노펜옥시-N-(2-(4-페닐아미노)벤조 [d]옥사졸-5-일)펜탄 아미드와 NH₂OH를 포함하는 수용액(40 내지 60 중량%)을 반응시켜 상기 화학식 I-2로 표시되는 5-((E)-4-(N'-히드록시카르밤이미도일)-페녹시)-N-(2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-일)펜탄아미드를 제조하는 방법을 제공한다. The present invention, 5- (4-cyano nopen oxy - N - (2- (4-phenylamino) benzo [d] oxazol-5-yl) aqueous solution containing a pentane amide and NH ₂ OH (40 to 60 parts by weight (E) -4- (N'-hydroxycarbamimidoyl) -phenoxy) -N- (2- (phenylamino) benzo [d ] &Lt; / RTI > oxazol-5-yl) pentanamide.

여기서, 상기 반응의 반응 용매는 C1-C4의 알콜일 수 있으며, 바람직하게는 메탄올일 수 있다. 상기 NH₂OH의 사용량은 5-(4-시아노펜옥시-N-(2-(4-페닐아미노)벤조 [d]옥사졸-5-일)펜탄 아미드 1 몰 대지 1.1 내지 3몰이 바람직하며, 반응 온도는 약 30 내지 50℃, 바람직하게는 40℃일 수 있다.Here, the reaction solvent of the reaction may be a C1-C4 alcohol, preferably methanol. The amount of NH ₂ OH to be used is preferably 1.1 to 3 moles per 1 mole of 5- (4-cyanophenoxy- N - (2- (4-phenylamino) benzo [ d ] oxazol- The reaction temperature may be about 30 to 50 占 폚, preferably 40 占 폚.

본 발명은 5-(4-시아노펜옥시)-N-(2-(4-메톡시페닐아미노)벤조 [d]옥사졸 5-일)펜탄아미드와 NH₂OH를 포함하는 수용액(40 내지 60 중량%)을 반응시켜 상기 화학식 I-3으로 표시되는 5-((E)-4-(N'-히드록시카르밤이미도일)-페녹시)-N-(2-(4-메톡시페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-일)펜탄아미드를 합성하는 방법을 제공한다. 여기서, 상기 반응의 반응 용매는 C1-C4의 알콜일 수 있으며, 바람직하게는 메탄올일 수 있다. 상기 NH₂OH의 사용량은 5-(4-시아노펜옥시-N-(2-(4-페닐아미노)벤조 [d]옥사졸-5-일)펜탄 아미드 1 몰에 대하여 1.1 내지 3몰이 바람직하며, 반응 온도는 약 30 내지 50℃, 바람직하게는 40℃일 수 있다. The present invention relates to an aqueous solution (40 to 60 wt%) comprising 5- (4-cyanophenoxy) -N- (2- (4-methoxyphenylamino) benzo [d] oxazole 5-yl) pentanamide and NH ₂ OH (E) -4- (N'-hydroxycarbamimidoyl) -phenoxy) -N- (2- (4-methoxyphenyl) Amino) benzo [d] oxazol-5-yl) pentanamide. Here, the reaction solvent of the reaction may be a C1-C4 alcohol, preferably methanol. The amount of NH ₂ OH to be used is preferably 1.1 to 3 moles relative to 1 mole of 5- (4-cyanophenoxy- N - (2- (4-phenylamino) benzo [ d ] oxazol- , The reaction temperature may be about 30 to 50 占 폚, preferably 40 占 폚.

또한, 본 발명은 하기의 [화학식 I], 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 이들의 수화물 또는 용매화물을 유효량 함유하는 골다공증의 완화, 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다:The present invention also provides a composition for alleviating, preventing or treating osteoporosis comprising an effective amount of a compound represented by the following formula (I), a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate or solvate thereof:

[화학식 I](I)

상기 [화학식 I]에서, In the above formula (I)

R₁ 또는 R₂는 각각 플루오로, 클로로, 브로모, 요오도, 시아노, C1-C4 알킬, C1-C4 알콕시, C2-C4 알켄일 또는 N`-히드록시카르밤이미도일이며, 여기서, 알킬, 알콕시, 알켄일은 치환되지 않거나, 플루오로, 클로로, 브로모, 요오도 또는 시아노 중에서 선택된 1종 이상으로 치환된 것일 수 있고, R₁ 또는 R₂는 페닐기에 오르소(ortho)-, 메타(meta)-, 또는 파라(para )-위치에 위치한다.Wherein R ₁ or R ₂ are each independently selected from the group consisting of fluoro, chloro, bromo, iodo, cyano, C 1 -C 4 alkyl, C 1 -C 4 alkoxy, C 2 -C 4 alkenyl or N 1 -hydroxycarbamimidoyl, Alkyl, alkoxy, alkenyl may be unsubstituted or substituted with at least one selected from fluoro, chloro, bromo, iodo or cyano, and R ₁ or R ₂ may be ortho, Meta -, or para - position.

본 발명의 조성물에서, [화학식 I]의 신규한 화합물, 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 이들의 수화물 또는 용매화물은 하기 [화학식 I-1]로 표시되는 5-(4-(N`-히드록시카르밤이미도일-페녹시)-N-(2-(4-에틸페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-일)펜탄아미드, 하기 [화학식 I-2]로 표시되는 5-((E)-4-(N'-히드록시카르밤이미도일)페녹시)-N-(2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-일)펜탄아미드 또는 하기 [화학식 I-3]으로 표시되는 5-((E)-4-(N'-히드록시카르밤이미도일)페녹시)-N-(2-(4-메톡시페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-일)펜탄아미드, 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 이들의 수화물 또는 용매화물일 수 있다. In the compositions of the present invention, [formula I] 5- (4- (N` represented by the following novel compounds, pharmaceutically acceptable salts thereof, chemical, or a hydrate or solvate thereof has Formula I-1] a - hydroxycarboxylic night yimido yl-phenoxy) - N - (2- (4- ethyl-phenyl-amino) benzo [d] oxazol-5-yl) amide to pentane, 5 represented by the following formula I-2] ( (I) (hereinafter referred to as " (E) -4- (N'-hydroxycarbamimidoyl) phenoxy] -N- (E) -4- (N'-hydroxycarbamimidoyl) phenoxy) -N- (2- (4-methoxyphenylamino) benzo [d] oxazole- Yl) pentanamide, a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate or solvate thereof.

[화학식 I-1](I-1)

[화학식 I-2][Formula I-2]

[화학식 I-3][Formula I-3]

또한, 본 발명은 앞서 언급한 상기 [화학식 I]의 신규한 화합물, 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 이들의 수화물 또는 용매화물의 유효량을 골다공증 예방 또는 치료를 요하는 인간을 포함하는 포유류에게 투여함으로서 골다공증을 완화 또는 예방하거나 치료하는 방법을 제공한다.The present invention also relates to the use of a novel compound of the above-mentioned formula (I), a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate or solvate thereof, to an mammal, including a human, in need of prevention or treatment of osteoporosis Thereby providing a method of alleviating, preventing or treating osteoporosis.

또한, 본 발명은 골다공증 예방 또는 치료위한 약제학적 제제를 제조하는데 앞서 언급한 상기 [화학식 I]의 신규한 화합물, 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 이들의 수화물 또는 용매화물을 사용하는 용도를 제 공한다. The present invention also relates to the use of a novel compound of the above-mentioned formula (I), a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate or solvate thereof, for the manufacture of a pharmaceutical preparation for the prevention or treatment of osteoporosis, I will.

본 발명에서 용어 "골다공증"은 남아 있는 뼈에는 구조상으로 아무런 이상이 없으면서 뼈를 형 성하는 무기질과 기질의 양이 과도하게 감소되어 뼈에 스펀지처럼 작은 구멍이 많이 나서 무르고 쉽게 부러 지는 상태를 일컬으며, 골소송증이라고도 한다. In the present invention, the term " osteoporosis " refers to a state in which the remaining bone has no structural abnormality and the amounts of minerals and substrates forming the bone are excessively reduced, It is also called bone disease.

본 발명의 조성물은 상기 [화학식 I]의 신규한 화합물, 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 이들의 수화물 또는 용매화물에 추가하여 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.The composition of the present invention may contain at least one active ingredient which exhibits the same or similar function in addition to the novel compound of the above formula (I), a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate or solvate thereof.

본 발명의 조성물은, 투여를 위해서 상기한 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수 , 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제 형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 따라서, 본 발명의 조성물은 패치제, 액제, 환약, 캡 슐, 과립, 정제,좌제 등일 수 있다. 이들 제제는 당 분야에서 제제화에 사용되는 통상의 방법 또는 Remingt on's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법으로 제조 될 수 있으며 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 다양한 제제로 제제화 될 수 있다.The composition of the present invention may be prepared by incorporating at least one pharmaceutically acceptable carrier in addition to the above-mentioned components for administration. The pharmaceutically acceptable carrier may be a mixture of saline, sterilized water, Ringer's solution, buffered saline, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol and one or more of these components. If necessary, an antioxidant, , And other conventional additives such as a bacteriostatic agent may be added. In addition, diluents, dispersants, surfactants, binders, and lubricants may be additionally added and formulated into injection solutions, pills, capsules, granules or tablets such as aqueous solutions, suspensions, emulsions and the like. Thus, the compositions of the present invention may be patches, solutions, pills, capsules, granules, tablets, suppositories, and the like. These preparations can be prepared by conventional methods used in the art for formulation or by methods disclosed in Remington's Pharmaceutical Science (recent edition), Mack Publishing Company, Easton PA, Can be formulated.

본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용) 할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 본 발명의 화학식 1의 유도체 화합물의 일일 투여량은 약 10 내지 1 ,000㎎/㎏ 이고, 바람직하게는 50 내지 500㎎/㎏ 이며, 하루 일회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이 더욱 바람직하다.The composition of the present invention may be administered orally or parenterally (for example, intravenously, subcutaneously, intraperitoneally or topically) depending on the intended method, and the dose may be appropriately determined depending on the body weight, age, sex, The range varies depending on diet, administration time, method of administration, excretion rate, and severity of the disease. The daily dose of the derivative compound of formula (I) of the present invention is about 10 to 1,000 mg / kg, preferably 50 to 500 mg / kg, more preferably once to several times a day.

본 발명의 조성물은 골다공증의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 약물 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.The composition of the present invention can be used alone or in combination with methods for the prevention and treatment of osteoporosis or using surgery, hormone therapy, drug therapy and biological response modifiers.

본 발명 [화학식 I]의 신규한 화합물, 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 이들의 수화물 또는 용매화물은 파골세포의 형성을 억제해 골 흡수를 억제시킨다. 따라서 본 발명의 [화학식 I] 화합물, 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 이들의 수화물 또는 용매화물은 골다공증의 완화제, 예방제 또는 치료제로 사용가능하다.The novel compounds of formula (I), their pharmaceutically acceptable salts, or their hydrates or solvates inhibit the formation of osteoclasts and inhibit bone resorption. Accordingly, the compound of formula (I), a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate or solvate thereof of the present invention can be used as an emollient, prophylactic agent or therapeutic agent for osteoporosis.

도1 및 도 2는 본원발명의 화합물의 처리에 따른 파골세포 분화의 억제정도를 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 3 및 도 4는 본원발명의 화합물의 처리에 따른 세포 생존률을 측정하여 나타낸 그래프이다.
도 5는 K7 화합물의 칼시토닌 리셉터, 카셉신 K, αv-인테그린, β3-인테크린, ATP6v0d2, DC-STAMP에서 나타내는 효과를 관찰한 도이다.
도 6은 K7 화합물의 NFAT, ERK, p38 또는 IκB에서 나타내는 효과를 관찰한 도이다.
도 7은 K7 화합물을 마우스 두개관 골손실 모델에 처리한 결과 리포폴리사카라이드에 의한 파골세포 증가를 억제하는 정도를 TRAP 염색 면적으로 나타낸 그래프이다.
도 8은 K7 화합물을 마우스 골손실 모델에 처리한 결과 리포폴리사카라이드에 의한 골손실 증가를 억제하는 정도를 BMD (Bone Mineral Density)로 나타낸 그래프이다.FIGS. 1 and 2 are graphs showing the degree of inhibition of osteoclast differentiation according to the treatment of the compound of the present invention.
FIGS. 3 and 4 are graphs showing cell viability measured by treatment of the compound of the present invention. FIG.
FIG. 5 is a chart showing the effect of the K7 compound on the calcitonin receptor, Cassexin K,? V-integrin,? 3-integrin, ATP6v0d2 and DC-STAMP.
FIG. 6 is a graph showing the effect of the K7 compound on NFAT, ERK, p38 or IκB.
FIG. 7 is a graph showing the degree of suppression of osteoclast-induced increase in lipopolysaccharide by TRAP-stained area as a result of treatment of a K7 compound with a mouse mouse bone loss model.
8 is a graph showing the degree of inhibition of bone loss increase by lipopolysaccharide as BMD (Bone Mineral Density) as a result of treating K7 compound with a mouse bone loss model.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 실험예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예 및 실험 예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예 및 실험예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, preferred embodiments and experimental examples are provided to facilitate understanding of the present invention. However, the following examples and experimental examples are provided only for the purpose of easier understanding of the present invention, and the present invention is not limited by the examples and experimental examples.

또한, 이하에서 언급된 시약 및 용매는 특별한 언급이 없는 한 Aldrich 사로부터 구입한 것이며, ¹H-NMR 데이터는 400 MHz Varian FT-NMR spectrometer 기계로 측정한 값이며 , Mass 데이터는 JMS-700 (Jeol, Japan) 기계로 측정한 값이다. 또한, 실시예에서, "에테르"라고 표기된 것 은 별다른 언급이 없는 한 "디에틸에테르"를 의미하며, "헥산"(hexane)이라고 표기된 것은 별다른 언급이 없는 한 "n-헥산"을 의미한다.The ¹ H-NMR data were measured with a 400 MHz Varian FT-NMR spectrometer, and the mass data were measured using JMS-700 (Jeol , Japan) is a value measured by a machine. In addition, in the examples, "ether" means "diethyl ether" unless otherwise stated, and "hexane" means "n-hexane" unless otherwise specified.

< 실시예 1> 5-(4-(N'-히드록시 카르밤이미도일)-페녹시)-N -(2-(4-에틸페닐아미노)벤조[d] 옥사졸-5-일)펜탄아미드( K7 )의 합성 <Example 1> 5- (4- (N ' - hydroxycarboxylic night yimido yl) phenoxy) - N - (2- (4- ethyl-phenyl-amino) benzo [d] oxazol-5-yl) pentane Synthesis of amide ( K7 )

화합물 K7의 합성은 하기 [반응식 1]에 나타낸 바와 같이, 화합물 1c로부터 화합물 2c를 제조하고, 화합물 2c를 5% Pd/C존재하에 수소와 반응시켜 화합물2d를 제조하고 (88% 수득률), 이에 PyBOP(benzotriazol-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate)을 이용하여 5-브로모발레르산(5-bromovaleric acid)과 커플링시켜 화합물 3을 제조하며(46% 수득률). K₂CO₃ 존재 하에 60℃에서 4-시아노페놀(4-cyanophenol)과 반응하여 화합물K6를 얻은 후 (52% 수득률), 마지막으로 NH₂OHㆍHCl과 reflux하여 화합물 K7(36% 수득률)를 제조하였다. To the synthesis of Compound K7 as shown in the reaction scheme 1, to prepare a Compound 2c from compound 1c, and reacted with hydrogen in the compound 2c in the presence 5% Pd / C Preparation of Compound 2d (88% yield), whereby Compound 3 was prepared (46% yield) by coupling with 5-bromovaleric acid using PyBOP (benzotriazol-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate). At 60 ℃ under K ₂ CO ₃ present 4-cyano-phenol (4-cyanophenol), and after reaction to obtain a compound K6 (52% yield), and finally, NH ₂ OH-HCl and reflux to give the compound K7 (36% yield) .

[반응식 1][Reaction Scheme 1]

1-A. 1-(4-에틸페닐)-3-(2-히드록시-5-니트로페닐)치오우레아 (1c) 합성1-A. Synthesis of 1- (4-ethylphenyl) -3- (2-hydroxy-5-nitrophenyl) thiourea (1c)

메탄올10mL에 녹인 2-아미노-4-니트로페놀(2-amino-4-nitrophenol,0.5 g, 3.24 mmol)과 4-에틸 페닐 이소티오시아네이트(4-ethylphenyl isothiocyanate,0.530 g, 3.24 mmol)를 넣고 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 이 후, 용매를 회전 증류(rotary evaporation)로 제거한 후 침전물을 n-hexane으로 감압 여과하여 화합물 1c (0.809 g, 79%)를 얻었다.2-amino-4-nitrophenol (0.5 g, 3.24 mmol) and 4-ethylphenyl isothiocyanate (0.530 g, 3.24 mmol) were dissolved in 10 mL of methanol And stirred at room temperature for 24 hours. Thereafter, the solvent was removed by rotary evaporation, and the precipitate was filtered under reduced pressure with n-hexane to obtain Compound 1c (0.809 g, 79%).

Yellow-green powder, mp 137~138 ℃; ¹ H NMR (400MHz, Acetone-d ₆ ) δ 9.475 (s, 1H), 9.351 (s, 1H), 8,755 (s, 1H), 7.968 (d, J=9.8, 1H), 7.464 (d, J=8.0, 2H), 7.282 (d, J=8.8, 2H), 7.089 (d, J= 9.2, 1H), 2.658 (q, J=7.6, 2H), 1.225 (t, J=7.6, 3H).Yellow-green powder, mp 137-138 占 폚; ^{1 H NMR (400MHz, Acetone- d} 6) δ 9.475 (s, 1H), 9.351 (s, 1H), 8,755 (s, 1H), 7.968 (d, J = 9.8, 1H), 7.464 (d, J = 8.0, 2H), 7.282 (d, J = 8.8,2H), 7.089 (d, J = 9.2,1H), 2.658 (q, J = 7.6,2H), 1.225 (t, J = 7.6,3H).

1-B. 1-B. NN -(4-에틸페닐) -5-니트로벤조 [- (4-ethylphenyl) -5-nitrobenzo [ dd ]옥사졸 2-아민 (2c) 합성] Oxazole 2-amine (2c) Synthesis

KO₂ (0.9 06 g, 12.75 mmol)가 현탁된 아세토니트릴 10 mL에 화합물 1c (0.809 g, 2.55 mmol)가 용해된 아세토니트릴 50mL를 질소가스 치환하의 얼음조(ice bath)에서 교반하면서 가하였다. 실온에서 16시간 동안 반응시킨 후 얼음물에 부어 희석시켰다. 이 용액을 디클로로메탄으로 추출하고 포화 NaCl 수용액으로 씻고 MgSO₄로 건조시킨 후 용 매를 감압 농축시켜 화합물 2c (0.568 g, 88%)를 얻었다. 50 mL of acetonitrile in which Compound 1c (0.809 g, 2.55 mmol) was dissolved in 10 mL of acetonitrile suspended in KO ₂ (0.9 06 g, 12.75 mmol) was added with stirring in an ice bath under nitrogen gas substitution. After reacting at room temperature for 16 hours, it was poured into ice water and diluted. The solution was extracted with dichloromethane, washed with saturated aqueous NaCl solution, and dried over MgSO _{4. The} solvent was concentrated under reduced pressure to obtain compound 2c (0.568 g, 88%).

Yellow powder, mp 172~173 ℃; ¹H NMR (400MHz, Acetone-d ₆ ) δ 9.805 (s, 1H), 8.229 (s, 1H), 8.109 (d, J=8.8, 1H), 7.764 (d, J=8.4, 2H), 7.615 (d, J=9.2, 1H), 7.278 (d, J=8.8, 2H ), 2.651 (q, J=7.6, 2H), 1.230 (t, J=7.6, 3H).Yellow powder, mp 172-173 ° C; ^{1 H NMR (400MHz, Acetone- d} 6) δ 9.805 (s, 1H), 8.229 (s, 1H), 8.109 (d, J = 8.8, 1H), 7.764 (d, J = 8.4, 2H), 7.615 ( d, J = 9.2,1H), 7.278 (d, J = 8.8,2H), 2.651 (q, J = 7.6,2H), 1.230 (t, J = 7.6,3H).

1-C1-C . N. N ²² -(4-에틸페닐)벤조 [- (4-ethylphenyl) benzo [ dd ]옥사졸 -2,5-디아민 (2d)의 합성] Oxazole-2,5-diamine (2d)

상기 실시예 1-B에서 제조한 화합물2c (0.1 g, 0.35 mmol)를 메탄올 10ml에 녹이고, 이에 5% Pd/C를 적가하고, 수소를 충전시킨 후 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응액을 셀라이트(celite)로 여과한 후 여액의 용매를 감압하에서 제거하여 표제의 화합물2d (0.079 g, 88%)를 얻었다.The compound 2c (0.1 g, 0.35 mmol) prepared in Example 1-B was dissolved in 10 ml of methanol, 5% Pd / C was added dropwise thereto, and the mixture was stirred at room temperature for 24 hours. The reaction solution was filtered through celite, and the filtrate solvent was removed under reduced pressure to obtain the title compound 2d (0.079 g, 88%).

Grey solid, mp 143~145 ℃; 1H NMR (400MHz, Acetone-d ₆ ) δ 9.170 (s, 1H), 7.737 (d, J=8.4, 2H), 7.205 (d, J=8.4 , 2H), 7.036 (d, J=8.8, 2H), 6.752 (s, 1H), 6.439 (d, J=8.4, 1H), 4.443 (d, J=1 0.4, 1H), 2.615 (q, J=7.6, 2H), 1.210 (t, J=7.6, 3H); HR-FABMS Calcd for C₁₅ H₁₆N₃O(M++H): 254.1293, Found: 254.1292.Gray solid, mp 143-145 [deg.] C; _{1H NMR (400MHz, Acetone- d 6} ) δ 9.170 (s, 1H), 7.737 (d, J = 8.4, 2H), 7.205 (d, J = 8.4, 2H), 7.036 (d, J = 8.8, 2H) , 6.752 (s, 1H), 6.439 (d, J = 8.4, 1H), 4.443 (d, J = 1 0.4, 1H), 2.615 (q, J = 7.6, 2H), 1.210 (t, J = 7.6, 3H); _{HR-FABMS Calcd for C 15 H} 16 N 3 O (M < + > + H): 254.1293, Found: 254.1292.

1-D.1-D. N N -(2-(4-에틸페닐아미노)벤조 [- (2- (4-ethylphenylamino) benzo [ dd ]옥사졸 -5-일)-5-브로모펜탄아미드 (3 = K25)의 합성] Oxazol-5-yl) -5-bromopentanamide (3 = K25)

화합물 2d (0.079 g, 0.31 mmol), 5-브로모발레르산(5-bromovaleric acid, 0.051 g, 0.28 mmol), PyBOP (benzotriazol-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate, 0.163 g, 0.31 mmol)에 DMF(d imethylformamide) 8 mL를 얼음조(ice bath)에서 넣어 녹였다. 여기에 디이소프로필에틸아민(diisopropyl e thylamine, 0.073 g, 0.57 mmol)을 가하고 16시간 동안 실온에서 반응시켰다. 에틸아세테이트(EtOAc, 8 mL) 를 넣어 희석시키고 10% HCl 수용액으로 3회, 포화 NaHCO₃수용액으로 2회, 포화 NaCl 수용액으로 1회 씻었다. MgSO₄로 건조시킨 후 용매를 감압 농축시키고 이를 컬럼크로마토그래 피(EtOAc/hexane= 2:1(v/v))를 이용하여 표제의 화합물 3 (화합물 K25)(0.054 g, 46%)을 얻었다.To a solution of compound 2d (0.079 g, 0.31 mmol), 5-bromovaleric acid (0.051 g, 0.28 mmol) and PyBOP (benzotriazol-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate, 0.163 g, imethylformamide) was dissolved in an ice bath. Diisopropylethylamine (0.073 g, 0.57 mmol) was added thereto, followed by reaction at room temperature for 16 hours. Ethyl acetate (EtOAc, 8 mL) was added to dilute and washed three times with 10% aqueous HCl solution, twice with saturated aqueous NaHCO ₃ , and once with saturated aqueous NaCl solution. After drying over MgSO ₄ , the solvent was concentrated under reduced pressure and the title compound 3 (Compound K25 ) (0.054 g, 46%) was obtained by column chromatography (EtOAc / hexane = 2: 1 .

Pale brown powder, mp 196~198 ℃; 1H NMR (400MHz, Acetone-d ₆ ) δ 9.360 (s, 1H), 9.152 (s, 1H), 7.871 (s, 1H), 7.755 (d, J=8.4, 2H), 7.343 (d, J=8. 8, 1H), 7.266 (d, J=8.4, 1H), 7.230 (d, J=8.8, 2H), 3.546 (t, J=6.6, 2H), 2.628 (q, J=7.6, 2H), 2.428 (t, J=7.2, 2H), 1.989~1.919 (m, 2H), 1.899~1.803 (m, 2H), 1.218 (t, J=7.6, 3H); HR-FABMS Calcd for C₂₀H₂₃BrN₃O₂(M++H): 416.0974, Found: 416.0969.Pale brown powder, mp 196-198 ° C; _{1H NMR (400MHz, Acetone- d 6} ) δ 9.360 (s, 1H), 9.152 (s, 1H), 7.871 (s, 1H), 7.755 (d, J = 8.4, 2H), 7.343 (d, J = 8 . 8, 1H), 7.266 ( d, J = 8.4, 1H), 7.230 (d, J = 8.8, 2H), 3.546 (t, J = 6.6, 2H), 2.628 (q, J = 7.6, 2H), 2.428 (t, J = 7.2, 2H), 1.989-1.919 (m, 2H), 1.899-1.803 (m, 2H), 1.218 (t, J = 7.6, 3H); _{HR-FABMS Calcd for C 20 H} 23 BrN 3 O 2 (M ++ H): 416.0974, Found: 416.0969.

1-E. 5-(4-시아노펜옥시-1-E. 5- (4-Cyanophenoxy- NN -(2-(4-에틸페닐아미노)벤조[ - (2- (4-ethylphenylamino) benzo [ dd ]옥사졸 -5-일)펜탄아미드(k6)의 합성] Oxazol-5-yl) pentanamide (k6)

DMF 3 mL에 녹인 4-시아노페놀(4-cyanophenol, 0.024 g, 0.20 mmol)에 K₂CO₃ (0.032 g, 0.23 mmol)를 가한 후 50~55℃에서 30분간 교반하였다. 여기에 DMF 4 mL에 녹인 화합물 K25 (0.064 g, 0.15 mmol)을 넣고 60℃에서 5시간 동안 반응시켰다. 실온으로 냉각시킨 후 EtOAc 7 mL를 가해 희석시키고 증류수와 포화 NaCl 수용액으로 씻었다. MgSO₄로 건조시킨 후 용매를 감압 농축시키고 이를 디에틸에테르로 씻으면서 감압 여과하여 표제의 화합물 K6 (0.036 g, 52%)를 얻었다.K ₂ CO ₃ (0.032 g, 0.23 mmol) was added to 4-cyanophenol (4-cyanophenol, 0.024 g, 0.20 mmol) dissolved in 3 mL of DMF and the mixture was stirred at 50 to 55 ° C for 30 minutes. Compound K25 (0.064 g, 0.15 mmol) dissolved in 4 mL of DMF was added thereto and reacted at 60 DEG C for 5 hours. After cooling to room temperature, it was diluted with 7 mL of EtOAc and washed with distilled water and saturated aqueous NaCl solution. After drying with MgSO ₄ , the solvent was concentrated under reduced pressure, and the residue was washed with diethyl ether and filtered under reduced pressure to obtain the title compound K6 (0.036 g, 52%).

Pale yellow powder, mp 2 00~203 ℃; 1H NMR (400MHz, Acetone-d ₆ ) δ 9.358 (s, 1H), 9.151 (s, 1H), 7.874 (s, 1H), 7.755 (d, J=8.4, 2H), 7.691 (d, J=8.8, 2H), 7.339 (d, J=8.6 , 1H), 7.264 (d, J=8.4, 1H), 7.231 (d, J=8.4, 2H), 7.122 (d, J=9.2, 2H), 4.167 (t, J=6.0, 2H), 2.627 (q, J=7.6, 2H), 2.473 (t, J=7.0, 2H), 1.907~1.876 (m, 4H) , 1.218 (t, J=7.6, 3H); HR-FABMS Calcd for C₂₇H₂₇N₄O₃(M++H): 455.2083, Found: 455.2080.Pale yellow powder, mp 2 00 ~ 203 ° C; _{1H NMR (400MHz, Acetone- d 6} ) δ 9.358 (s, 1H), 9.151 (s, 1H), 7.874 (s, 1H), 7.755 (d, J = 8.4, 2H), 7.691 (d, J = 8.8 , 2H), 7.339 (d, J = 8.6, 1H), 7.264 (d, J = 8.4, 1H), 7.231 (d, J = 8.4, 2H), 7.122 (d, J = 9.2, 2H), 4.167 ( t, J = 6.0, 2H) , 2.627 (q, J = 7.6, 2H), 2.473 (t, J = 7.0, 2H), 1.907 ~ 1.876 (m, 4H), 1.218 (t, J = 7.6, 3H) ; HR-FABMS Calcd for C ₂₇ H ₂₇ N ₄ O ₃ (M + + H): 455.2083, Found: 455.2080.

1-F. 5-(4-(1-F. 5- (4- ( NN '' -히드록시 - hydroxy 카르밤이미도일Carmine imidodi )-) - 페녹시Phenoxy )-) - NN -(2-(4-- (2- (4- 에틸페닐아미노Ethylphenylamino )벤조 [) Benzo [ dd ]] 옥사졸Oxazole -5-일) -5 days) 펜탄아미드Pentanamide (( k7k7 )의 합성) Synthesis of

화합물K6 (0.031 g, 0.07 mmol)에 에탄올 5 mL를 가하고 교반하면서 트리에틸아민(0.014 g, 0.14 mmol)을 넣었다. 여기에 NH₂OHㆍHCl(0.010 g, 0.14 mmol)을 넣고 밤새 환류하였다. 반응액의 온도를 40℃로 냉각시키고 증류수를 서서히 가해서 결정으로 만들었다. 이 결정을 증류수와 디에틸 에테르로 씻어 표제의 화합물K7 (0.012 g, 36%)를 얻었다.To the compound K6 (0.031 g, 0.07 mmol) was added 5 mL of ethanol and triethylamine (0.014 g, 0.14 mmol) was added with stirring. NH ₂ OH-HCl (0.010 g, 0.14 mmol) was added thereto, and the mixture was refluxed overnight. The temperature of the reaction solution was cooled to 40 占 폚, and distilled water was gradually added thereto to make crystals. The crystals were washed with distilled water and diethyl ether to give the title compound K7 (0.012 g, 36%).

White powder, mp 191~196 ℃; 1H NMR (400MHz, Acetone-d6) δ9.364 (s, 1H), 9.162 (s, 1H), 8.693 (s, 1H), 7.881 (s, 1H), 7.753 (d, J=8.8, 2H), 7.643 (d, J=9.2, 2H), 7.349 (d, J=8.0, 1H) , 7.263 (d, J=8.4, 1H), 7.229 (d, J=8.8, 2H), 6.929 (d, J=9.2, 2H), 5.371 (s, 2 H), 4.070 (t, J=6.0, 2H), 2.627 (q, J=7.6, 2H), 2.467 (t, J=7.2, 2H), 1.893~1.8 72 (m, 4H), 1.218 (t, J=7.6, 3H); HR-FABMS Calcd for C27H30N5 O4 (M++H): 488.2298, Found: 488.2299.White powder, mp 191-196 DEG C; 1H NMR (400MHz, Acetone- d6) δ9.364 (s, 1H), 9.162 (s, 1H), 8.693 (s, 1H), 7.881 (s, 1H), 7.753 (d, J = 8.8, 2H), 7.643 (d, J = 9.2, 2H), 7.349 (d, J = 8.0, 1H), 7.263 (d, J = 8.4, 1H), 7.229 (d, J = 8.8, 2H), 6.929 (d, J = 9.2, 2H), 5.371 (s , 2 H), 4.070 (t, J = 6.0, 2H), 2.627 (q, J = 7.6, 2H), 2.467 (t, J = 7.2, 2H), 1.893 ~ 1.8 72 (m, 4 H), 1.218 (t, J = 7.6, 3 H); HR-FABMS Calcd for C27H30N5O4 (M ++ H): 488.2298, Found: 488.2299.

<실시예 2> 5-((E)-4-(N'-히드록시카르밤이미도일)-페녹시)-N-(2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-일)펜탄아미드 (D2F)의 합성Example 2 Synthesis of 5 - ((E) -4- (N'-hydroxycarbamimidoyl) -phenoxy) -N- (2- (phenylamino) benzo [d] oxazol- Synthesis of pentanamide (D2F)

화합물 D 2F는 하기의 [반응식 2]에 나타낸 바와 같은 방법으로 합성하였다.Compound D 2F was synthesized by the method shown in Reaction Scheme 2 below.

[반응식 2] [Reaction Scheme 2]

(c) 5% Pd/C, H₂, CH₃OH, rt, 24 hr; (d) 5-Bromovaleric acid, PyBOP, iPr₂NEt, DMF, rt, 16 hr; (e) 4-Cyanophenol, K₂CO₃, 60 ℃, 5 hr; (f) 50 % NH₂OH in water, CH₃OH, 40 ℃, 16hr.(c) 5% Pd / C , H 2, CH 3 OH, rt, 24 hr; (d) 5-Bromovaleric acid, PyBOP, iPr ₂ NEt, DMF, rt, 16 hr; (e) 4-Cyanophenol, K ₂ CO ₃ , 60 ° C, 5 hr; (f) 50% NH ₂ OH in water, CH ₃ OH, 40 ° C, 16 hr.

2-A. 1-(2-히드록시-5-니트로페닐 )-3-페닐티오우레아[1-(2-hydroxy-5-nitrophenyl)-3-phenylthiourea] (D2-1)의 제조2-A. Preparation of 1- (2-hydroxy-5-nitrophenyl) -3-phenylthiourea (D2-1)

메탄올10 mL에 녹인 2-아미노-4-니트로페놀(2-amino-4-nitrophenol, 0.5 g, 3.24 mmol, 1eq.)에 페닐 이소티오시아네이트(phenyl isothiocyanate, 0.439 g, 3.24 mmol)를 넣고 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 회전증류(rotary evaporation)으로 제거한 후 침전을 디에틸에테르, n-헥산으로 세척하고 감압 여과하여 화합물 D2 -1 (0.850 g, 91%)을 얻었다.Phenyl isothiocyanate (0.439 g, 3.24 mmol) was added to 2-amino-4-nitrophenol (0.5 g, 3.24 mmol, 1 eq.) Dissolved in methanol &Lt; / RTI > at room temperature. The solvent was removed by rotary evaporation and the precipitate was washed with diethyl ether and n-hexane and filtered under reduced pressure to obtain the compound D2-1 (0.850 g, 91%).

Yellow powder, mp 145-148 ℃; ¹H NMR (400MHz, Ace tone-d ₆ ) δ 9.327 (d, J=2.8 Hz, 1H), 7.977 (dd, J=8.8, 2.8 Hz, 1H), 7.596 (d, J=6.4 Hz, 2H), 7.427 (t, J=8.0 Hz, 2H), 7.256 (t, J=7.4 Hz, 1H), 7.10 4 (d, J=8.8 Hz, 1H)Yellow powder, mp 145-148 [deg.] C; ^{1 H NMR (400MHz, Ace tone-} d 6) δ 9.327 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.977 (dd, J = 8.8, 2.8 Hz, 1H), 7.596 (d, J = 6.4 Hz, 2H) , 7.427 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.256 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.10 4 (d, J = 8.8 Hz, 1H)

2-B. 5-니트로 N-페닐벤조 [d]옥사졸 -2-아민(D2)의 합성2-B. Synthesis of 5-nitro-N-phenylbenzo [d] oxazole-2-amine (D2)

KO₂ (1.044 g, 14.69 mmol)가 현탁된 아세토니트릴10 mL에 화합물 D2-1 (0.850 g, 2.94 mmol)가 용해된 아세토니트릴 15 mL를 질소가스 치환 하의 ice bath에서 교반하면서 가하였다. 실온에서 16시간 동안 반응 시킨 후 얼음물에 부어 희석시켰다. 15 mL of acetonitrile in which compound D2-1 (0.850 g, 2.94 mmol) was dissolved in 10 mL of acetonitrile suspended in KO ₂ (1.044 g, 14.69 mmol) was added with stirring in an ice bath under nitrogen gas substitution. After reacting at room temperature for 16 hours, it was poured into ice water and diluted.

디클로로메탄으로 3회 추출하고 포화 NaCl 수용액으로 씻고 MgSO₄로 건조시킨 후 용매를 감압 농축시켜 표제의 화합물D2 (0.450 g, 92%)를 얻었다.The mixture was extracted three times with dichloromethane, washed with a saturated aqueous NaCl solution and dried over MgSO _{4. The} solvent was concentrated under reduced pressure to obtain the title compound D2 (0.450 g, 92%).

Yell ow powder, mp 209-210 ℃; ¹H NMR (400MHz, Acetone-d ₆ ) δ 9.298 (br s, 1H), 7.841 (d, J=7.6 Hz, 2H), 7.356 (t, J=8.0 Hz, 2H), 7.064~7.005 (m, 2H), 6.775 ( d, J=4.8 Hz, 1H), 6.458 (dd, J=8.6, 2.2 Hz, 1H)Yell ow powder, mp 209-210 [deg.] C; ^{1 H NMR (400MHz, Acetone- d} 6) δ 9.298 (br s, 1H), 7.841 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.356 (t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.064 ~ 7.005 (m, 2H), 6.775 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 6.458 (dd, J =

2-C. N2-페닐벤조[d]옥사졸-2,5-디아민 (D2R)2-C. N2-phenylbenzo [d] oxazole-2,5-diamine (D2R)

화합물 D2 (0.450 g, 1.76 mmol)를 4개의 둥근플라스크에 약 110 mg씩 나눠서 반응하였다. 각 둥근플라스크에 메탄올10 mL를 화합물 D2 (0.110 g, 0.43 mmol)와 5% Pd/C (0.9 g)에 적가한 후 수소를 충전시켜 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 각 둥근 플라스크의 반응액을 셀라이트(celi te)로 여과한 후 여액의 용매를 감압 하에서 제거하여 목적 화합물 D2R (0.361 g, 91%)를 얻었다.compound D2 (0.450 g, 1.76 mmol) was reacted in four round flasks divided by approximately 110 mg. To each round flask, 10 mL of methanol was added dropwise to compound D2 (0.110 g, 0.43 mmol) and 5% Pd / C (0.9 g), followed by charging with hydrogen and stirring at room temperature for 24 hours. The reaction solution in each round flask was filtered through celi te, and the filtrate was removed under reduced pressure to obtain the desired compound D2R (0.361 g, 91%).

Brown powder, mp 161-163 ℃; ¹H NMR (400MHz, Acetone-d ₆ ) δ 9.271 (brs, 1H), 7.841 (d, J=7.6 Hz, 2H), 7.357 (t, J=7.6 Hz, 2H), 7.064~7.006 (m, 2H), 7.77 0 (d, J=0.8 Hz, 1H), 6.456 (dd, J=8.6, 2.2 Hz, 1H)Brown powder, mp 161-163 [deg.] C; ^{1 H NMR (400MHz, Acetone- d} 6) δ 9.271 (brs, 1H), 7.841 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.357 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 7.064 ~ 7.006 (m, 2H ), 7.77 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 6.456 (dd, J =

2-D. 5-브로모-N-(2-(페닐아미노 )벤조 [d]옥사졸 5-일)펜탄아미드(D2RC)의 제조2-D. Preparation of 5-bromo-N- (2- (phenylamino) benzo [d] oxazole 5-yl) pentanamide (D2RC)

화합물 D2R (0.361 g, 1.60 mmol), 5-브로모 발레르산(5-bromovaleric acid, 0.029 g, 1.60 mmol), PyBOP (0.918g, 1.76 mmol)에 DMF 15 mL를 넣어 녹였다. 여기에 디이소프로필 에틸아민(0.168 ㎕, 0.96 mmol)을 가하고 16시간 동안 실온에서 반응시켰다. EtOAc 30 mL를 넣어 희석시키고 10% HCl 수용액으로 3회, 포화 NaHCO₃수용액으로 2회, 포 화 NaCl 수용액으로 1회 씻었다. MgSO₄로 건조시킨 후 용매를 감압 농축하여 화합물 D2RC (0.385 g, 62%)를 얻었다.compound 15 mL of DMF was added to D2R (0.361 g, 1.60 mmol), 5-bromovaleric acid (0.029 g, 1.60 mmol) and PyBOP (0.918 g, 1.76 mmol). Diisopropylethylamine (0.168 L, 0.96 mmol) was added thereto and reacted at room temperature for 16 hours. It was diluted with 30 mL of EtOAc and washed three times with 10% aqueous HCl solution, twice with saturated aqueous NaHCO ₃ solution and once with saturated aqueous NaCl solution. After drying over MgSO ₄ , the solvent was concentrated under reduced pressure to obtain a compound D2RC (0.385 g, 62%).

White powder, mp 166-168 ℃; ¹H NMR (400MHz, Acetone- d ₆ ) δ 9.464 (brs, 1H), 9.165 (brs, 1H), 7.891~7.846 (m, 3H), 7.405~7.346 (m, 3H), 7 .282 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.061 (t, J=7.4 Hz, 1H) , 3.547 (t, J=6.6, 2H), 2.430 ( t, J=7.4, 2H), 1.974~1.920 (m, 2H), 1.879~1.822 (m, 2H)White powder, mp 166-168 [deg.] C; ^{1 H NMR (400MHz, Acetone- d} 6) δ 9.464 (brs, 1H), 9.165 (brs, 1H), 7.891 ~ 7.846 (m, 3H), 7.405 ~ 7.346 (m, 3H), 7 .282 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.061 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 3.547 (t, J = 6.6,2H), 2.430 (t, J = 7.4, 2H), 1.974-1.90 , 1.879-1.822 (m, 2H)

2-E. 5-(4-시아노펜옥시)-N-(2-(페닐아미노)벤조 [d]옥사졸-5-일 펜탄아미드 (D2RCP)의 합성2-E. Synthesis of 5- (4-cyanophenoxy) -N- (2- (phenylamino) benzo [d] oxazole-5-ylpentanamide (D2RCP)

DMF 10 mL에 녹인 4-시아노페놀(4-cyanop henol, 0.150 g, 1.26 mmol)에 K₂CO₃ (0.201 g, 1.46 mmol)를 가한 후 50~55 ℃ 에서 30분간 교반하였다. 여기에 DMF 5 mL에 녹인 화합물 D2RC (0.377 g, 0.97 mmol)를 넣고 60 ℃에 서 5시간 동안 반응시켰다. 실온으로 냉각시킨 후 EtOAc 7 mL를 가해 희석시키고 증류수와 포화 NaCl 수용액 으로 씻었다. MgSO₄로 건조시킨 후 용매를 감압 농축시키고 이를 ether로 씻으면서 감압 여과 하여 표제의 화합물 D2RCP (0.259 g, 63%)를 얻었다.K ₂ CO ₃ (0.201 g, 1.46 mmol) was added to 4-cyanophenol (4-cyanop henol, 0.150 g, 1.26 mmol) dissolved in DMF 10 mL and stirred at 50-55 ° C for 30 minutes. To this was added the compound D2RC (0.377 g, 0.97 mmol) dissolved in 5 mL of DMF, and the mixture was reacted at 60 DEG C for 5 hours. After cooling to room temperature, it was diluted with 7 mL of EtOAc and washed with distilled water and saturated aqueous NaCl solution. After drying with MgSO ₄ , the solvent was concentrated under reduced pressure, and the residue was washed with ether and filtered under reduced pressure to obtain the title compound D2RCP (0.259 g, 63%).

White powder, mp 181-182 ℃; ¹ H NMR (400MHz, Acetone-d ₆ ) δ 9.464 (brs, 1H), 9.167 (brs, 1H), 7.893 (d, J =2 Hz, 1H) 7.872~7.847 (m, 2H), 7.692 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.405~7.343 (m, 3H), 7.281 (d, J =8.8, 1H), 7.122 (d, J=8.8, 2H), 7.061 (t, J=7.4 Hz, 1H), 4.168 (t, J=6 Hz, 2H) , 2.476 (t, J=6.8 Hz, 2H), 1.909~1.892 (m, 4H)White powder, mp 181-182 [deg.] C; ^{1 H NMR (400MHz, Acetone- d} 6) δ 9.464 (brs, 1H), 9.167 (brs, 1H), 7.893 (d, J = 2 Hz, 1H) 7.872 ~ 7.847 (m, 2H), 7.692 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.405 ~ 7.343 (m, 3H), 7.281 (d, J = 8.8, 1H), 7.122 (d, J = 8.8, 2H), 7.061 (t, J = 7.4 Hz, 1H) , 4.168 (t, J = 6 Hz, 2H), 2.476 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.909 ~ 1.892

2-F. 5-((E)-4-(N'-히드록시카르밤이미도일)-페녹시)-N-(2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-일)펜탄아미드 (D2F)의 합성2-F. Benzo [d] oxazol-5-yl) pentanamide (D2F) was obtained in the same manner as in Example 1 except that 5 - ((E) -4- (N'- hydroxycarbamimidoyl) Synthesis of

화합물 D2RCP (0.259 g, 0.607 mmol)에 메탄올 20 mL를 가하고 환류하여 완전히 녹였다. 실온으로 식힌 후 NH₂OH 50% in water (1 .85 mL, 1.215 mmol, 2 eq.)를 가하였다. 반응액의 온도를 40 ℃로 높이고 16시간 동안 교반하였다. 감압 농축하여 용매를 제거하고 증류수를 가하여 결정을 만든 후 감압여과 하였다. 얻어진 고체를 컬럼크로마토그래피(EtOAc/MeOH=10:1(v/v))로 정제하여 표제의 화합물 D2F (0.50 g, 18%)를 얻었다.Compound D2RCP (0.259 g, 0.607 mmol) was dissolved in methanol (20 mL) and completely refluxed. After cooling to room temperature, NH ₂ OH 50% in water (1.85 mL, 1.215 mmol, 2 eq.) Was added. The temperature of the reaction solution was raised to 40 캜 and stirred for 16 hours. The solvent was removed by concentration under reduced pressure, distilled water was added to make crystals, and the mixture was filtered under reduced pressure. The obtained solid was purified by column chromatography (EtOAc / MeOH = 10: 1 (v / v)) to obtain the title compound D2F (0.50 g, 18%).

White powder, mp 202-203 ℃; ¹H NMR (400MHz, Acetone-d ₆ ) δ 9.467 (brs, 1H), 9.178 (brs, 1H), 8.695 (brs, 1H), 7.901 (d, J=2 Hz, 1H), 7.859 (d, J=7.6, 2H), 7.643 ( d, J=8.8 Hz, 2H), 7.404~7.353 (m, 3H), 7.280 (d, J=8.8, 1H), 7.061 (tt, J=7.4, 0.8 Hz, 1H), 6.930 (d, J=9.2 Hz, 2H), 5.373 (brs, 1H), 4.070 (t, J=5.6 Hz, 2H), 2.470 (t, J=7 Hz, 2H), 1.894~1.872 (m, 4H), HR-FABMS Calcd for C₂₅H₂₅N₅O₄ (M⁺+H): 460.1985, Found: 460.1988.White powder, mp 202-203 [deg.] C; ^{1 H NMR (400MHz, Acetone- d} 6) δ 9.467 (brs, 1H), 9.178 (brs, 1H), 8.695 (brs, 1H), 7.901 (d, J = 2 Hz, 1H), 7.859 (d, J = 7.6, 2H), 7.643 ( d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.404 ~ 7.353 (m, 3H), 7.280 (d, J = 8.8, 1H), 7.061 (tt, J = 7.4, 0.8 Hz, 1H ), 6.930 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 5.373 (brs, 1H), 4.070 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.470 (t, J = 7 Hz, 2H), 1.894 ~ 1.872 (m , 4H), HR-FABMS Calcd for C 25 H 25 N 5 O 4 (M + + H): 460.1985, Found: 460.1988.

<실시예 3> 5-((E)-4-(N'-히드록시카르밤이미도일)-페녹시)-N-(2-(4-메톡시페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-일)펜탄아미드(D5F)의 합성 Example 3 Synthesis of 5 - ((E) -4- (N'-hydroxycarbamimidoyl) -phenoxy) -N- (2- (4-methoxyphenylamino) benzo [d] oxazole- 5-yl) pentanamide (D5F) Synthesis of

화합물 D5F를 하기의 [반응식 3]에 나타낸 바와 같은 방법으로 합성하였다.The compound D5F was synthesized by the method shown in the following Reaction Scheme 3.

[반응식 3][Reaction Scheme 3]

(c) 5% Pd/C, H₂, CH₃ OH, rt, 24 hr; (d) 5-Bromovaleric acid, PyBOP, iPr₂NEt, DMF, rt, 16 hr; (e) 4-Cyanophen ol, K₂CO₃, 60 ℃, 5 hr; (f) 50% NH₂OH in water, CH₃ OH, 40 ℃, 18hr.(c) 5% Pd / C , H 2, CH 3 OH, rt, 24 hr; (d) 5-Bromovaleric acid, PyBOP, iPr ₂ NEt, DMF, rt, 16 hr; (e) 4-Cyanophenol, K ₂ CO ₃ , 60 ° C, 5 hr; (f) 50% NH ₂ OH in water, CH ₃ OH, 40 ° C, 18 hr.

3-A. 1-(2-히드록시-5-니트로페닐)-3-(4-메톡시페닐)티오우레아(D5-1)의 합성3-A. Synthesis of 1- (2-hydroxy-5-nitrophenyl) -3- (4-methoxyphenyl) thiourea (D5-1)

메탄올10 mL에 녹인 2-아미노-4-니트로페놀 (0.5 g, 3.24 mmol, 1eq.)에 4-메톡시페닐 이소티오시아네이트 (4-methoxyphenyl isothiocyanate, 448 ㎕, 3.24 mmol)를 넣고 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 용매를 rotary evaporation으로 제거한 후 침전을 디에틸에테르, n-헥산으로 세척하고 감압 여과하여 표제의 화합물 D5-1 (0.810 g, 78%)을 얻었다.4-methoxyphenyl isothiocyanate (448 μL, 3.24 mmol) was added to 2-amino-4-nitrophenol (0.5 g, 3.24 mmol, 1 eq.) Dissolved in methanol Stir at room temperature. The solvent was removed by rotary evaporation, and the precipitate was washed with diethyl ether and n-hexane and filtered under reduced pressure to obtain the title compound D5-1 (0.810 g, 78%).

Yellow powder, mp 135-136 ℃; ¹H NMR (400MHz, A cetone-d ₆ ) δ 9.372~9.335 (m, 1H), 8.656 (brs, 1H), 7.961 (dd, J=9, 2.6 Hz , 1H), 7.437 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.079 (d, J=9.2 Hz, 1H), 6.999 (d, J=8.8 Hz, 2H ), 3.827 (s, 3H)Yellow powder, mp 135-136 [deg.] C; ^{1 H NMR (400MHz, A cetone-} d 6) δ 9.372 ~ 9.335 (m, 1H), 8.656 (brs, 1H), 7.961 (dd, J = 9, 2.6 Hz, 1H), 7.437 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.079 (d , J = 9.2 Hz, 1H), 6.999 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 3.827 (s, 3H)

3-B. N-(4-메톡시페닐)-5-니트로벤조 [d]옥사졸 -2-아민(D5)의 합성3-B. Synthesis of N- (4-methoxyphenyl) -5-nitrobenzo [d] oxazole-2-amine (D5)

KO₂ (0.902 g, 12.68 mmol)가 현탁된 아세토 니트릴 10 mL에 화합물 D5-1 (0.810 g, 2.54 mmol)가 용해된 아세토니트릴 15 mL를 질소가스 치환하의 ice bath에서 교반하면서 가하였다. 실온에서 16시간 동안 반응 시킨 후 얼음물에 부어 희석시켰다. 15 mL of acetonitrile in which compound D5-1 (0.810 g, 2.54 mmol) was dissolved in 10 mL of acetonitrile suspended in KO ₂ (0.902 g, 12.68 mmol) was added with stirring in an ice bath under nitrogen gas substitution. After reacting at room temperature for 16 hours, it was poured into ice water and diluted.

디클로로메탄으로 3회 추출하고 포화 NaCl 수용액으로 씻고 MgSO₄로 건조시킨 후 용매를 감압 농축시켜 화합물 D5 (0.545 g, 75%)를 얻었다.The mixture was extracted three times with dichloromethane, washed with a saturated aqueous solution of NaCl and dried over MgSO _{4. The} solvent was concentrated under reduced pressure to obtain a compound D5 (0.545 g, 75%).

Yellow pow der, mp 196-197 ℃; ¹H NMR (400MHz, Acetone-d ₆ ) δ 9.689 (brs, 1H) , 8.200 (dd, J=2.4, 0.4 Hz, 1H), 8.095 (dd, J=8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.761 (d, J=9.2 Hz, 2H), 7.597 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.007 (d, J=8.8 Hz, 2H) 3.820 (s, 3H)Yellow powder, mp 196-197 [deg.] C; ^{1 H NMR (400MHz, Acetone- d} 6) δ 9.689 (brs, 1H), 8.200 (dd, J = 2.4, 0.4 Hz, 1H), 8.095 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.761 (d , J = 9.2 Hz, 2H) , 7.597 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.007 (d, J = 8.8 Hz, 2H) 3.820 (s, 3H)

3-C. N-2-(4-3-C. N-2- (4- 메톡시페닐Methoxyphenyl )) 벤조Benzo [d] [d] 옥사졸Oxazole -2,5--2,5- 디아민Diamine ( ( D5RD5R )의 합성) Synthesis of

둥근 플라스크에 메탄올 10 mL를 화합물 D5 (0.135 g, 0.47 mmol)와 5% Pd/C (0.2 g)에 적가한 후 수소를 충전시켜 24시간 동안 실온에서 교반하 였다. 반응액을 셀라이트(celite)로 여과한 후 여액의 용매를 감압 하에서 제거하여 화합물 D5R (0 .067 g, 14%)를 얻었다.To a round flask was added 10 mL methanol Was added dropwise to D5 (0.135 g, 0.47 mmol) and 5% Pd / C (0.2 g), and then hydrogen was charged and stirred at room temperature for 24 hours. The reaction solution was filtered through celite, and the filtrate solvent was removed under reduced pressure to obtain compound D5R ( 0.067 g, 14%).

Brown powder, mp 156-158 ℃; ¹H NMR (400MHz, Acetone-d ₆ ) δ 9.060 (brs, 1H), 7.737 (d, J=9.2 Hz, 2H), 7.021 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.9 42 (d, J=9.2 Hz, 2H), 6.732 (d, J=2 Hz, 1H), 6.418 (dd, J=8.4, 2.4 Hz, 1H), 3.7 89 (s, 3H)Brown powder, mp 156-158 [deg.] C; ^{1 H NMR (400MHz, Acetone- d} 6) δ 9.060 (brs, 1H), 7.737 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 7.021 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.9 42 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 6.732 ( d, J = 2 Hz, 1H), 6.418 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 3.7 89 (s, 3H)

3-D. N-(2-(4-메톡시페닐아미노)벤조 [d]옥사졸 -5-일)-5-브로모펜탄아미드 (D5RC)의 합성3-D. Synthesis of N- (2- (4-methoxyphenylamino) benzo [d] oxazol-5-yl) -5-bromopentanamide (D5RC)

화합물 D5R (0.067 g, 0.26 mmol), 5-브로모발레르산(5-bromovaleric acid, 0.043 g, 0.24 mmol), PyBOP (0.135 g, 0.26 mmol)에 DMF 8 mL를 넣어 녹였다. 여기에 디이소프로필에틸아민(33㎕, 0.19 mmol)을 가하고 16시간 동안 실온에서 반응시켰다. EtOAc 8 mL를 넣어 희석시키고 10% HCl 수용액으로 3회, 포화 NaHC O₃수용액으로 2회, 포화 NaCl 수용액으로 1회 씻었다. MgSO₄로 건조시킨 후 용매를 감압 농축하여 화합물 D5RC (0.055 g, 55%)를 얻었다.8 mL of DMF was added to compound D5R (0.067 g, 0.26 mmol), 5-bromovaleric acid (0.043 g, 0.24 mmol) and PyBOP (0.135 g, 0.26 mmol). Diisopropylethylamine (33 占 퐇, 0.19 mmol) was added thereto and reacted at room temperature for 16 hours. 3 times dilution into 8 mL of EtOAc and a 10% HCl aqueous solution, twice with saturated NaHC O ₃ aqueous solution, washed once with saturated aqueous NaCl solution. After drying over MgSO ₄ , the solvent was concentrated under reduced pressure to obtain a compound D5RC (0.055 g, 55%).

White powder, mp 179-180 ℃; ¹H NMR (400MHz, Acetone-d ₆ ) δ 9.266 (brs, 1H), 9.145 (brs, 1H), 7 .844 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.755 (d, J=9.2 Hz, 2H), 7.330 (dd, J=8.4, 2.5 Hz, 1H), 7.250 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.965 (d, J=9.2 Hz, 2H), 3.800 (s, 3H), 3.545 (t, J=6. 4 Hz, 2H), 2.425 (t, J=7.2 Hz, 2H), 1.972~1.918 (m, 2H), 1.875~1.819 (m, 2H)White powder, mp 179-180 [deg.] C; ^{1 H NMR (400MHz, Acetone- d} 6) δ 9.266 (brs, 1H), 9.145 (brs, 1H), 7 .844 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.755 (d, J = 9.2 Hz, 2H ), 7.330 (dd, J = 8.4, 2.5 Hz, 1H), 7.250 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.965 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 3.800 (s, 3H), 3.545 (t , J = 6. 4 Hz, 2H), 2.425 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.972 ~ 1.918 (m, 2H), 1.875 ~ 1.819 (m, 2H)

3-E. 5-(4- 시아노펜옥시)-N-(2-(4-메톡시페닐아미노)벤조 [d]옥사졸 5-일)펜탄아미드 (D5RCP)의 합성3-E. Synthesis of 5- (4-cyanophenoxy) -N- (2- (4-methoxyphenylamino) benzo [d] oxazole 5-yl) pentanamide (D5RCP)

DMF 3 mL 에 녹인 4-시아노페놀(0.020 g, 0.17 mmol)에 K₂CO₃ (0.036 g, 0.26 mmol)를 가한 후 50~55 ℃에서 30분간 교반하였다. 여기에 DMF 4 mL에 녹인 화합물 D5RC (0.055 g, 0.13 mmol) 를 넣고 60 ℃에서 5시간 동안 반응시켰다. 실온으로 냉각시킨 후 EtOAc 7 mL를 가해 희석시키고 증류수와 포화 NaCl 수용액으로 씻었다. K ₂ CO ₃ (0.036 g, 0.26 mmol) was added to 4-cyanophenol (0.020 g, 0.17 mmol) dissolved in DMF (3 mL), and the mixture was stirred at 50 to 55 ° C for 30 minutes. To this was added the compound D5RC (0.055 g, 0.13 mmol) dissolved in 4 mL of DMF, and the mixture was reacted at 60 DEG C for 5 hours. After cooling to room temperature, it was diluted with 7 mL of EtOAc and washed with distilled water and saturated aqueous NaCl solution.

MgSO₄로 건조시킨 후 용매를 감압 농축시키고 이를 에테르 로 씻으면서 감압 여과하여 화합물 D5RCP (0.029 g, 48%)를 얻었다.After drying with MgSO ₄ , the solvent was concentrated under reduced pressure, and the residue was washed with ether and filtered under reduced pressure to obtain a compound D5RCP (0.029 g, 48%).

White powder, mp 213-215 ℃; ¹H NMR (400MHz, Acetone-d ₆ ) δ 9.263 (brs, 1H), 9.146 (brs, 1H ), 7.849 (s, 1H), 7.755 (d, J=9.2 Hz, 2H), 7.691 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.329 (d, J =8.4 Hz, 1H), 7.248 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.122 (d, J=9.2 Hz, 2H), 6.965 (d, J=8.8 Hz, 2H), 4.167 (t, J=6.2 Hz, 2H), 3.800 (s, 3H), 2.470 (t, J=7 Hz, 2H), 1.905~1.874 (m , 4H)White powder, mp 213-215 [deg.] C; ^{1 H NMR (400MHz, Acetone- d} 6) δ 9.263 (brs, 1H), 9.146 (brs, 1H), 7.849 (s, 1H), 7.755 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 7.691 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.329 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.248 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.122 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 6.965 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.167 (t , J = 6.2 Hz, 2H), 3.800 (s, 3H), 2.470 (t, J = 7 Hz, 2H), 1.905 ~ 1.874 (m, 4H)

3-F. 5-((E)-4-(N'-히드록시카르밤이미도일)-페녹시)-N-(2-(4-메톡시페닐아미노)벤조[d]옥사졸 -5-일)펜탄아미드 (D 5F)의 합성3-F. Benzo [d] oxazol-5-yl) -pentanoic acid was used in place of 5 - ((E) -4- (N'- hydroxycarbamimidoyl) -phenoxy) Synthesis of amide (D 5F)

화합물 D5RCP (0.025 g, 0.055 mmol)에 메탄올10 mL를 가하고 환류하여 완전히 녹였다. 실온으로 식힌 후 NH₂OH 50% in water (0.167 mL, 0.110 mmol, 2eq.)를 넣었다. 반응액의 온도를 40℃로 높이고 16시간 동안 교반한다. 감압 농축하여 용매를 제거하고 증류수를 가하여 결정을 만들고 감압여과 후 메탄올로 재결정하여 화합물 D5F (0.008 g, 30%)을 얻었다.Compound D5RCP (0.025 g, 0.055 mmol) was dissolved in methanol (10 mL) and completely dissolved. After cooling to room temperature, NH ₂ OH 50% in water (0.167 mL, 0.110 mmol, 2 eq.) Was added. The temperature of the reaction solution is raised to 40 캜 and stirred for 16 hours. The solvent was removed by distillation under reduced pressure, distilled water was added to the reaction mixture, crystals were formed, and the product was filtered under reduced pressure and then recrystallized from methanol to obtain compound D5F (0.008 g, 30%).

White powder, mp 200-202 ℃; ¹H NMR (400MHz, Acetone-d ₆ ) δ 9.259 (s, 1H), 9.148 (s, 1H), 8.686 (s, 1H), 7.856 (s, 1H), 7.754 (d, J=8.8 Hz, 2H), 7.642 (d, J=8.8 Hz, 2H ), 7.337 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.247 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.965 (d, J=9.2 Hz, 2H), 6 .929 (d, J=9.2 Hz, 2H), 5.362 (brs, 2H), 4.070 (t, J=6.2 Hz, 2H), 3.800 (s, 3H), 2.463 (t, J=7.2 Hz, 2H), 1.905~1.870 (m, 4H). HR-FABMS Calcd for C₂₆H₂₇N₅O₅ (M⁺+H): 490.2090, Found: 490.2095.White powder, mp 200-202 [deg.] C; ^{1 H NMR (400MHz, Acetone- d} 6) δ 9.259 (s, 1H), 9.148 (s, 1H), 8.686 (s, 1H), 7.856 (s, 1H), 7.754 (d, J = 8.8 Hz, 2H ), 7.642 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.337 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.247 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.965 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 6 .929 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 5.362 (brs, 2H), 4.070 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.800 (s, 3H), 2.463 (t, J = 7.2 Hz, 2H ), 1.905-1.870 (m, 4H). HR-FABMS Calcd for C ₂₆ H ₂₇ N ₅ O ₅ (M ⁺ + H): 490.2090, Found: 490.2095.

<실험예 1><Experimental Example 1>

1) 마우스 골수세포의 배양1) Culture of mouse bone marrow cells

ICR mouse (6-9주, 수컷)를 경추 탈골한 후 70 % 에탄올로 소독하였다. 경골 부분의 피부를 절개하여 부착 근육을 떼어냈다. 경골 원심부를 절단하고 슬개골을 탈골시켜 경골을 적출하였다. 뼈 양끝을 조금 잘라 한 쪽 끝에 25G의 주사바늘을 꽂고 α-MEM (Minimum Essential Medium)을 흘 려보내 골수세포를 시험관에 모았다. ICR mouse (6-9 weeks, male) was cervical dislocated and disinfected with 70% ethanol. The skin of the tibia part was cut to remove the attachment muscles. The distal tibia was cut and the patella was dislocated to remove the tibia. The bone marrow cells were collected in a test tube by cutting a small amount of bone and injecting a 25G needle at one end and flowing α-MEM (Minimum Essential Medium).

원심 분리한 후 a-MEM에 현탁하고 2배의 Gey's solution을 가해 적혈구를 제거했다. 원심 분리한 후 10 % FBS(fetal bovine serum)가 함유된 a-MEM으로 재현탁했다.After centrifugation, the cells were suspended in a-MEM and 2 times of Gey's solution was added to remove the red blood cells. Centrifuged and resuspended in a-MEM containing 10% FBS (fetal bovine serum).

2) 파골 세포의 분화유도2) induction of osteoclast differentiation

초기 배양한 골수세포를 M-CSF(Macrophage colony-stimulating factor) 10 ng/ml로 하룻밤 배양한 후 부유세포를 M-CSF 30 ng/ml로 3일간 추가 배양했다. 접착 세포 (BMM) 회수 후 1 x 10⁵ cells/well을 RANKL 50ng/ml 및 M-CSF 30ng/ml에서 또는 RANKL 50ng/ml 및 M-CSF 30ng/ml에 본원발명의 실시예 1(K7 ), 실시예 2(D2F) 또는 실시예 3(D5F) 화합물의 농도를 변화시키며 첨가하여 배양하였다.　실시예 1(K7) 화합물의 경우 1, 3, 10μM 농도로 각각 첨가하면서 배양하였고, 실시예 2(D2F) 또는 실시예 3(D5F) 화합물는 1, 2, 3μM 농도로 첨가하면서 배양하였다. The cultured bone marrow cells were cultured overnight with 10 ng / ml of macrophage colony-stimulating factor (M-CSF), and the supernatant cells were further cultured for 3 days with 30 ng / ml of M-CSF. After the recovery of adherent cells (BMM), 1 × 10 ⁵ cells / well was added to the cells of Example 1 (K7), 10 μg / ml of the present invention at 50 ng / ml of RANKL and 30 ng / ml of M- The concentration of the compound of Example 2 (D2F) or Example 3 (D5F) was varied and the cells were cultured. In the case of Example 1 (K7), the cells were cultured while adding 1, 3 and 10 μM, respectively. The cells were cultured in the same manner as in Example 2 (D2F) or Example 3 (D5F) at a concentration of 1, 2 and 3 μM.

배양이 끝난 세포는 10 % formalin으로 10분간 고정한 후 에탄올l-아세톤(1:1(v/v)) 로 1분간 재고정하여 TRAP (tartrate-resistant acid phosp hatase) 을 염색하였다. 현미경 하에서 관찰하여 3개 이상의 핵을 가진 TRAP+ 세포를 다핵 파골세포로 판정하였으며, 상기 실시예 1(K7), 실시예 2(D2F) 또는 실시예 3(D5F) 화합물의 파골세포 분화에 관한 IC₅₀ 값을 하기 표 1에 나타내었다. The cultured cells were fixed with 10% formalin for 10 minutes and stained with TRAP (tartrate-resistant acid phosphatase) for 1 minute in ethanol 1-acetone (1: 1 (v / v)). TRAP + cells having three or more nuclei were determined to be polynuclear osteoclasts by observing under a microscope. IC ₅₀ of osteoclast differentiation of Example 1 (K7), Example 2 (D2F) or Example 3 (D5F) The values are shown in Table 1 below.

[표 1][Table 1]

또한, 실시예 1(K7), 실시예 2(D2F) 또는 실시예 3(D5F) 화합물의 농도에 따른 파골세포의 분화 정도는 도 1 및 도 2와 같다. 도1 및 도 2에서, 가로축은 실시예 1(K7), 실시예 2(D2F) 또는 실시예 3(D5F) 화합물의 사용농도를 의미하며, 도 1의 가로축에서 왼쪽에서 오른쪽으로 K7의 농도는 0(Veh), 1, 3, 10μM이며, 도 2의 가로축에서 왼쪽에서 오른쪽으로 D2F와 D5F는 0, 1, 2, 3μM이며, 도 1 및 도 2에서 세로축은 TRAP+ 다핵 파골세포 수를 의미한다(*: p<0.05 compared to 0μM).The degree of osteoclast differentiation according to the concentration of the compound of Example 1 (K7), Example 2 (D2F) or Example 3 (D5F) is shown in FIG. 1 and FIG. 1 and 2, the abscissa indicates the concentration used in Example 1 (K7), Example 2 (D2F) or Example 3 (D5F), and the concentration of K7 from left to right in the horizontal axis of FIG. 0, 1, 2, and 3 μM from the left to right in the horizontal axis of FIG. 2, and the vertical axis represents the number of TRAP + polynuclear osteoclasts in FIGS. 1 and 2 (*: p < 0.05 compared to 0 [mu] M).

상기 표 1, 도 1 및 도 2에서 볼 수 있는 바와 같이 본원발명의 화합물은 아주 적은 농도로 파골세포의 분화를 효과적으로 억제함을 알 수 있었다. As shown in Table 1, FIG. 1 and FIG. 2, the compound of the present invention effectively inhibited osteoclast differentiation at a very low concentration.

3) RNA 분리 및 RT-PCR 분석 3) RNA isolation and RT-PCR analysis

Total RNA 추출은 Easy-blue (Intron, Biochemistry. INC.)를 이용하였다. Total RNA was extracted with Easy-blue (Intron, Biochemistry, INC.).

cDNA 합성은 1 mg의 total RNA를 oligodT primer, 10 mM dNTP, 1 unit RNase inhibitor 그리고 4 unit Scrip reverse transcriptase (Fermentas, Life science)로 42 ℃에서 60분, 70 ℃에서 10분 가열함으 로써 반응을 중지 시켰다. Polymerase chain reaction (PCR)의 조건과 사용한 primer (5'→3')의 서열은 다음과 같다. For cDNA synthesis, 1 mg of total RNA was reacted with oligodT primer, 10 mM dNTP, 1 unit RNase inhibitor and 4 unit Scrip reverse transcriptase (Fermentas, Life science) for 60 min at 42 ° C and 10 min at 70 ° C . The sequence of the polymerase chain reaction (PCR) and the primer (5 '→ 3') used are as follows.

4) 측정4) Measurement

3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetazolium bromide (MTT) 정량은 Mosmann의 방법을 변형하여 실시하였다. 1x10⁴cells/well 농도로 96 well plate에 분주한 BMM 세포에 시료(실시예 1(K7), 실시예 2(D2F) 또는 실시예 3(D5F) 화합물)를 처리하고 일정 시간 동안 배양하였다. 배양액을 버리고 PBS로 wash 한 후, MTT 용액 (0.5 mg/ml)을 100 ㎕/well 첨가하여 호일로 싼 상태에서 5시간 동안 배양하고, Solubiliz ation buffer (10 % SDS in 0.01M HCl)를 100 ㎕/well 첨가하고 다시 호일로 쌌다. 16~17시간 동안 배양한 후, 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. Quantitative determination of 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetazolium bromide (MTT) was carried out by modifying Mosmann's method. The BMM cells were seeded in 96-well plates at a concentration of ¹ x 10 ⁴ cells / well and treated with the samples (Example 1 (K7), Example 2 (D2F) or Example 3 (D5F)) and cultured for a certain period of time. The culture medium was discarded and washed with PBS. 100 μl / well of MTT solution (0.5 mg / ml) was added, and the cells were incubated in a foil for 5 hours. 100 μl of Solubilizion buffer (10% SDS in 0.01 M HCl) / well and then wrapped in foil again. After incubation for 16 to 17 hours, the absorbance was measured at 570 nm.

파골세포 분화 억제 효과가 단순히 화합물 노출에 의한 세포 수 의 차이가 아님을 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetazolium bromide (MTT) assay로써 확인하였다 (도 3 및 도 4). MTT assay 결과에서 나타나는 흡광도는 세포의 수와 직선적인 상관관계를 나타내게 되는데도 3 및 도 4에 의하면 시료 처리 후(실시예 1(K7), 실시예 2(D2F) 또는 실시예 3(D5F) 화합물)의 흡광도가 시료 처리 전과 비교하여 유의하게 감소하지 않았다. 이는 시료 처리 후 전체 세포의 수가 감소하지 않았음을 의미하며, 그러므로 위의 실험 결과가 세포사 (cell death)에 의한 파골세포 감소가 아닌 파골세포 분화 억제에 의한 것임을 알 수 있다.It was confirmed by the 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetazolium bromide (MTT) assay that the osteoclast differentiation inhibitory effect is not simply a difference in cell number due to compound exposure 4). The absorbance of MTT assay shows a linear correlation with the number of cells According to FIG. 3 and FIG. 4, the absorbance of the sample after treatment (Example 1 (K7), Example 2 (D2F) or Example 3 (D5F)) was not significantly decreased as compared with that before the sample treatment. This means that the number of whole cells did not decrease after the sample treatment. Therefore, it can be understood that the above experimental result is due to inhibition of osteoclast differentiation rather than cell death by cell death.

5) Pit 형성 분석5) Pit formation analysis

BMM 세포를 상아절편상에서 RANKL 50 ng/ml 및 M-CSF 30 ng/ml 존재하에서 또는 RANKL 50 ng/ml, M-CSF 30 ng/ml 및 실시예 1(K7) 화합물 10μM 존재 하에서 6일간 각각 배양하였다. 상아절편 표면의 세포를 닦아낸 후 toluidin blue (J.T. Baker, UK, 1㎍/ml)로 염색하였다. 상아절편상에서 골흡수로 형성된 pit을 현미경하에서 관찰하여 분석하였다. BMM cells were cultured in the presence of 50 ng / ml RANKL and 30 ng / ml RANKL and 30 ng / ml M-CSF or 6 days in the presence of 50 ng / ml of RANKL, 30 ng / ml of M-CSF and 10 μM of Example 1 (K7) Respectively. The cells on the surface of the ivory section were wiped off and stained with toluidine blue (JT Baker, UK, 1 μg / ml). The pit formed by bone resorption on the ivory section was examined under a microscope.

그 결과는 도 5와 같다. 도 5에서, veh는 DMSO로 처리한 대조군을 나타내고, RANKL은 50ng/ml RANKL로 처리한 군을 나타내며, K7은 10μM K7 으로 처리한 군을 나타내며, R+K7은 10μM K7로 30분간 전처리후 200ng/ml RANKL로 처리한 군을 나타내고, *은 p<0.05 compared to Veh.을 나타내며, **은 *: p<0.05 compared to RANKL을 나타낸다(N.D.=Not Detectable)The results are shown in Fig. In FIG. 5, veh represents a control group treated with DMSO, RANKL represents a group treated with 50 ng / ml RANKL, K7 represents a group treated with 10 M K7, R + K7 is pretreated with 10 M K7 for 30 minutes, / mL RANKL, * indicates p <0.05 compared to Veh., ** indicates *: p <0.05 compared to RANKL (ND = Not Detectable)

또한, 도 5 A는 K7화합물의 처리에 따른 파골세포 특이적 마커 유전자(칼시토닌 리셉터, 카셉신 K, αv-인테그린, β3-인테크린, ATP6v0d2, DC-STAMP)의 발현량을 측정하기 위하여 역전사-중합효소연쇄반응법(RT-PCR)을 수행한 결과를 분석하여 나타낸 그래프이고, 도 5B는 K7 화합물의 처리에 따른 상아질 절편 상에서 골 흡수로 형성된 피트(pit)의 결과 그림이며, 도 5C는 도 5B에서 수행한 실험결과를 분석하여 나타낸 그래프이다. 5A is a graph showing the expression levels of osteoclast-specific marker genes (calcitonin receptor, cespsin K,? V-integrin,? 3-integrin, ATP6v0d2 and DC-STAMP) FIG. 5B is a graph showing the results of pits formed by bone resorption on dentin slices according to the treatment of K7 compound, and FIG. 5C is a graph showing the results of the RT- 5B is an analysis of the results of the experiments.

도 5A에서 RANKL 처리에 의해 파골세포 특이적 마커 유전자들의 발현이 증가하는 것을 볼 수 있으며, 이는 R+K7 처리군에서 유의하게 감소하였음이 확인된다. In FIG. 5A, the expression of osteoclast-specific marker genes was increased by RANKL treatment, and this was significantly decreased in the R + K7-treated group.

도 5B 및 도 5C에서 RANKL처리로 상아질 절편상에 형성된 pit 수가 증가하는 것을 볼 수 있으며, 이는 R+K7 처리군에서 유의하게 감소하였음이 확인된다. K7 화합물의 파골세포 분화 억제효과와 일치하는 것으로, K7 화합물은 파골세포 분화를 억제하고 이 에 따라 파골세포의 골흡수 기능도 억제하는 것으로 추정되었다. 5B and 5C, it can be seen that the number of pits formed on the dentin slice was increased by RANKL treatment, which was significantly decreased in the R + K7-treated group. It is consistent with the inhibitory effect of K7 compound on osteoclast differentiation. It was presumed that K7 compound inhibits osteoclast differentiation and accordingly inhibits osteoclast bone resorption.

6) blot 분석6) blot analysis

BMM 세포를 시약 처리하여 일정시간 배양 후, lysate buffer로 용해하고 원심 분리하였다. 단백질 농도는 BSA (bovine serum albumin)을 표준화하여 protein assay kit (Bio-Rad)를 사용하여 정량하였다. 20μg의 단백질을 SDS-PAGE (poly acrylamide gel electrophoresis)로 변성 분리하고, 이를 80v에서 1시간 45분 처리하여 PVDF membrane에 이전시켰다. 이를 5% skim milk가 함유된 PBST (Phosp hate Buffered Saline Tween-20) 용액으로 blocking하고, 1차 항체로서 anti-NFATc1 (Nuclear factor of ac tivated T-cells cytoplasmic 1, 1:200, Santa cruiz), p-ERK (1:1000, Cell signaling), ERK (Extracellul ar Regulated Kinase, 1:1000, Cell signaling), p-p38(1:1000, Cell signaling), p38(1:1000, Cell sign aling), anti-IkB (IkappaB, 1:1000) 또는 β-actin(1:4000, Sigma) 항체와 각각 반응시켰다. (여기서 나타 낸 숫자의 비는 예를 들어 1:4000은 4000배로 희석하여 사용하였다는 뜻이다.) PBST로 5회 세정하고 HRP (Horseradish peroxidase)가 결합된 2차 항체와 반응시킨 후 ECL Advance (Amersham. CO.)로 발색시켜 분석 하였다. BMM cells were treated with a reagent, cultured for a predetermined time, dissolved in lysate buffer, and centrifuged. Protein concentration was quantified by standardizing bovine serum albumin (BSA) and using a protein assay kit (Bio-Rad). Twenty micrograms of protein was denatured by SDS-PAGE (polyacrylamide gel electrophoresis) and transferred to a PVDF membrane at 80 v for 1 hour and 45 minutes. The cells were blocked with PBST (Phosphate Buffered Saline Tween-20) solution containing 5% skim milk. Anti-NFATc1 (Nuclear factor of activated T-cells cytoplasmic 1, 1: 200, Cell signaling, p-p38 (1: 1000, Cell signaling), p38 (1: 1000, Cell signing), p-ERK (1: 1000, Cell signaling), ERK (Extracellular ar regulated kinase, anti-IkB (IkappaB, 1: 1000) or β-actin (1: 4000, Sigma) antibodies, respectively. After washing 5 times with PBST and reacting with a secondary antibody conjugated with HRP (Horseradish peroxidase), the ECL Advance (1: 4000 dilution) Amersham, CO.).

그 결과는 도 6과 같다. 도 6에서, veh는 DMSO로 처리한 대조군을 나타내고, RANKL은 200ng/ml RANKL로 처리한 군을 나타내며, K7은 10μM K7로 처리한 군을 나타내며, R+K7은 10μM K7로 30분간 전처리후 200ng/ml RANKL로 처리한 군을 나타내고, *은 p<0.05 compared to Veh.을 나타내며, **은 *: p<0. 05 compared to RANKL을 나타낸다.The result is shown in Fig. In FIG. 6, veh represents a control group treated with DMSO, RANKL represents a group treated with 200 ng / ml RANKL, K7 represents a group treated with 10 M K7, R + K7 is pretreated with 10 M K7 for 30 minutes, / ml RANKL, * indicates p <0.05 compared to Veh., ** is *: p <0. 05 compared to RANKL.

또한, 도 6A는 K7 화합물의 처리에 따른 NFAT(파골세포 분화를 위한 전 사인자)의 발현량을 웨스턴 블랏으로 확인한 결과이고, 도 6B는 K7 화합물의 처리에 따른 ERK 인산화 감소를 웨스턴 블랏으로 확인한 결과이며, 도 6C는 K7 화합물의 처리에 따른 p38 인산화 감소를 웨스턴 블랏으로 확인 한 결과이고, 도 6D는 K7 화합물의 처리에 따른 IκB 발현량을 웨스턴 블랏으로 확인한 결과이다. FIG. 6A shows the result of Western blotting of the expression of NFAT (transcription factor for osteoclast differentiation) according to the treatment of K7 compound, and FIG. 6B shows the result of the Western blot analysis of decrease in ERK phosphorylation FIG. 6C shows the result of Western blotting with the reduction of p38 phosphorylation upon treatment with the K7 compound, and FIG. 6D shows the result of Western blot analysis of the expression level of IκB upon treatment with the K7 compound.

도 6에서 RANKL을 처리한 군에서는 파골세포 분화에 수반하는 NFATc1의 발현 증가, ERK 및 p38의 인산화 증가, IkB의 분해 증가를 관찰할 수 있으며, 이런 RANKL의 효과는 R+ K7 처리군에서 감소하는 것으로 나타났다. 이는 K7 화합물이 RANKL 자극에 의한 파골세포 분화 신호를 차단함을 시사하는 결과이다.In FIG. 6, the expression of NFATc1, the phosphorylation of ERK and p38, and the degradation of IkB were observed in osteoclast differentiation in RANKL treated group, and the effect of RANKL was decreased in R + K7 treated group appear. This suggests that the K7 compound blocks the osteoclast differentiation signal by RANKL stimulation.

7) 동물모델 실험 17) Animal model experiment 1

실시예 1(K7) 화합물을 DMSO에 용해시킨 것을 corn oil과 섞어 준비하였다(corn oil:DMSO=9:1(v/v)). Example 1 The compound (K7) dissolved in DMSO was prepared with corn oil (corn oil: DMSO = 9: 1 (v / v)).

ICR 마우스 (11-12주, 수컷)를 각각의 군이 5 마리를 포함하도록 대조군 1, 대조군 2 및 실험군으로 분류하였다. 파골세포 분화에 따른 골손실을 유도하기 위해 실험군 및 대조군 2의 마우스에는 리포폴리사카라이드 (0.5mg)를 실험 시작 1일 뒤 두개관(頭蓋冠)에 피하 주사하였다. 대조군 1에는 동량의 PBS를 주사하였다. 실험군 마우스에 DMSO와 con oil과 혼합된 실시예 1 (K7) 화합물 (5mg/kg)을 실험 시작일부터 5일 뒤까지 매일 총 6회 복강 내 주사하였다. 대조군 1 및 2에는 실험군과 동량의 DMSO와 Corn oil의 혼합물(Corn oil: DMSO=9:1(v/v))의 혼합액을 실험 시작일부터 5일 뒤까지 매일 총 6회 복강 내 주사였다. ICR mice (11-12 weeks, male) were divided into control group 1, control group 2 and experimental group so that each group included 5 mice. Lipopolysaccharide (0.5 mg) was subcutaneously injected into the two openings (calvaria) of mice in the experimental group and the control group 2 to induce bone loss following osteoclast differentiation. Control group 1 was injected with the same amount of PBS. Experimental mice were intraperitoneally injected with Compound 1 (K7) (5 mg / kg) mixed with DMSO and con oil in a total of 6 injections every day for 5 days after the start of the experiment. Control 1 and 2 were intraperitoneal injections of a mixture of the same amount of DMSO and Corn oil (Corn oil: DMSO = 9: 1 (v / v)

6일 뒤 마우스를 희생시켜 두개관(頭蓋冠)을 채취한 후 4% 파라포름알데하이드(paraformaldehyde)에 고정하여 TRAP 염색하여 파골세포의 생성 정도를 현미경 하에서 관찰하였으며, 염색된 영역의 비율은 염색된 부위를 Image J 프로그램 (version 1.40. National Institutes of Health web site에서 제공받음)을 사용하여 측정한 후, %로 환산하였다. After 6 days, the mice were sacrificed and the ostia were harvested and stained with 4% paraformaldehyde for TRAP staining. The degree of osteoclast formation was observed under a microscope. The ratio of stained areas was stained The area was measured using the Image J program (version 1.40, available from the National Institutes of Health website) and converted to%.

상기 실험의 결과는 도 7에 나타내었다. The results of the above experiment are shown in Fig.

도 7에서 알 수 있는 바와 같이, 리포폴리사카라이드를 마우스 두개관(頭蓋冠)에 피하 주사한 대조군 2(LPS)는 TRAP+인 파골세포수가 증가한 반면, 실험군(LPS+K7)에서는 리포폴리사카라이드에 의한 파골세포의 수를 유의하게 감소시키는 것으로 나타났다(도 7 참조). 이를 통해 실시예 1(K7) 화합물이 파골세포 분화를 효과적으로 억제하는 것을 알 수 있었다. As can be seen from Fig. 7, control group 2 (LPS) subcutaneously injected with lipopolysaccharide into mouse hearts (calvaria) increased the number of osteoclast cells with TRAP +, whereas in the experimental group (LPS + K7), lipopolysaccharide Lt; RTI ID = 0.0 > osteoclast < / RTI > Thus, it was found that the compound of Example 1 (K7) effectively inhibited osteoclast differentiation.

8) 동물모델 실험 28) Animal model experiment 2

실시예 1(K7) 화합물을 DMSO에 용해시킨 것을 corn oil과 섞어 준비하였다(corn oil:DMSO=9:1(v/v)). ICR 마우스 (11-12주, 수컷)를 각각의 군이 8 마리를 포함하도록 대조군 1, 대조군 2 및 실험군으로 분류하였다. Example 1 The compound (K7) dissolved in DMSO was prepared with corn oil (corn oil: DMSO = 9: 1 (v / v)). ICR mice (11-12 weeks, male) were divided into control group 1, control group 2 and experimental group so that each group included 8 mice.

대조군 2 및 실험군에는 골손실을 유도하기 위해 lipopolysaccharide (LPS, 5mg/kg)를 실험 시작 1일 뒤와 5일 뒤에 복강 내 주사하였으며, 대조군 1(Veh)에는 동량의 PBS(phosphate buffered saline)를 주사하였다. In the control group 2 and the experimental group, intraperitoneal injection of lipopolysaccharide (LPS, 5 mg / kg) was started 1 day and 5 days after the experiment to induce bone loss, and the same amount of PBS (phosphate buffered saline) Respectively.

실험군에는 실험 시작일부터 7일까지 실시예 1(K7) 화합물(5mg/kg)을 매일 총 8회 복강내 주사하였다. 대조군 1(Veh) 및 대조군 2(LPS)에는 corn oil:DMSO=9:1(v/v)을 주사하였다. 8일 뒤 마우스를 희생시켜 장골을 채취한 후 DXA (Dual-energy X-ray Absor ptiometry)로 분석하여 골밀도(BMD, Bone Mineral Density)를 측정하였으며, 그 결과를 도 8에 나타내었다. In the experimental group, the compound of Example 1 (K7) (5 mg / kg) was intraperitoneally injected 8 times a day from the start of the experiment to the 7th day. The control group 1 (Veh) and the control group 2 (LPS) were injected with corn oil: DMSO = 9: 1 (v / v). After 8 days, the mice were sacrificed and the iliac bone was collected and analyzed by DXA (Dual-energy X-ray Absorptiometry) to measure BMD (Bone Mineral Density). The results are shown in FIG.

도 8에서, *은 p<0.05 compared to Veh을 나타내며, **은 *: p<0.05 compared to LPS을 나타낸다. In Figure 8, * represents p <0.05 compared to Veh and ** represents *: p <0.05 compared to LPS.

도 8에서 대조군 2(LPS)는 대조군 1(Veh)에 비해 골밀도 (BMD, Bone Mineral Density)가 유의하게 감소하였으며, 이는 실험군(LPS+K7) 회복되는 것으로 나타났다. In FIG. 8, BMD (Bone Mineral Density) of the control group 2 (LPS) was significantly lower than that of the control group 1 (Veh), indicating that the experimental group (LPS + K7) was recovered.

이로부터 실시예 1(K7) 화합물은 파골세포 분화 저해를 통해 체내 골손실을 억제하는 것을 확인할 수 있었다. From these results, it was confirmed that the compound of Example 1 (K7) inhibits bone loss through inhibition of osteoclast differentiation.

9) 통계처리9) Statistical processing

실험결과는 평균+표준편차로 표기하였고, Student's t-test로 분석하여 p 값이 0.05 미만일 때 통계적으로 유의하다고 판단하였다. The test results were expressed as mean + standard deviation, and analyzed by Student's t-test to determine statistical significance when the p- value was less than 0.05.

Claims

하기의 [화학식 I]의 신규한 화합물, 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 이의 수화물 또는 용매화물:
[화학식 I]

상기 [화학식 1]에서,
R1은 N'-히드록시카르밤이미도일이며,
R2는 수소, C1-C4 알킬 또는 C1-C4 알콕시이며, 여기서, 알킬, 알콕시는, 치환되지 않거나, 플루오로, 클로로, 브로모, 요오도 또는 시아노 중에서 선택된 1종 이상으로 치환된 것일 수 있다.A novel compound of the following general formula (I), a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate or solvate thereof:
(I)

In the above formula (1)
R1 is N'-hydroxycarbamimidoyl,
R 2 is hydrogen, C 1 -C 4 alkyl or C 1 -C 4 alkoxy, wherein alkyl, alkoxy is unsubstituted or substituted with one or more selected from fluoro, chloro, bromo, iodo or cyano .

제1항에 있어서, [화학식 I]의 화합물은
하기 [화학식 I-1]로 표시되는 5-(4-(N'-히드록시카르밤이미도일)-페녹시)-N-(2-(4-에틸페닐아미노)벤조[d] 옥사졸-5-일)펜탄아미드;
하기 [화학식 I-2]로 표시되는 5-((E)-4-(N'-히드록시카르밤이미도일)-페녹시)-N-(2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-일)펜탄아미드; 또는
하기 [화학식 I-3]으로 표시되는 5-((E)-4-(N'-히드록시카르밤이미도일)-페녹시)-N-(2-(4-메톡시페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-일)펜탄아미드인 것인 [화학식 I]의 화합물 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 이의 수화물 또는 용매화물:
[화학식 I-1]

[화학식 I-2]

[화학식 I-3]

The compound of claim 1, wherein the compound of formula (I)
(4- (N'-hydroxycarbamimidoyl) -phenoxy) -N- (2- (4-ethylphenylamino) benzo [d] oxazole- 5-yl) pentanamide;
(E) -4- (N'-hydroxycarbamimidoyl) -phenoxy) -N- (2- (phenylamino) benzo [d] oxazole represented by the following formula [I- -5-yl) pentanamide; or
(E) -4- (N'-hydroxycarbamimidoyl) -phenoxy) -N- (2- (4-methoxyphenylamino) benzo [ d] oxazol-5-yl) pentanamide. A pharmaceutical acceptable salt, or hydrate or solvate thereof, of the formula:
(I-1)

[Formula I-2]

[Formula I-3]

a) 하기 [화학식 II]의 화합물 및 5-브로모발레르산을 아미드 결합 반응시켜 하기 [화학식 III]의 화합물을 제조하는 단계 및 b) [화학식 III]의 화합물과 [화학식 IV]를 염기 존재 하에 반응시켜 [화학식 I] 화합물을 제조하는 방법.
[화학식 II]

[화학식 III]

[화학식 IV]

[화학식 I]

상기 식에서,
R1은 N'-히드록시카르밤이미도일이며,
R2는 수소, C1-C4 알킬 또는 C1-C4 알콕시이며, 여기서, 알킬, 알콕시는, 치환되지 않거나, 플루오로, 클로로, 브로모, 요오도 또는 시아노 중에서 선택된 1종 이상으로 치환된 것일 수 있다.b) reacting a compound of formula (III) with a compound of formula (IV) in the presence of a base in the presence of a base to produce a compound of formula (I) < / RTI >
&Lt; RTI ID = 0.0 &

(III)

(IV)

(I)

In this formula,
R1 is N'-hydroxycarbamimidoyl,
R 2 is hydrogen, C 1 -C 4 alkyl or C 1 -C 4 alkoxy, wherein alkyl, alkoxy is unsubstituted or substituted with one or more selected from fluoro, chloro, bromo, iodo or cyano .

제3항에 있어서, a) 단계의 아미드 결합반응은 PyBOP(benzotriazo l-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate) 및 3차 아민 존재하에서 수행되는 것인 [화학식 I] 화합물의 제조방법.The process according to claim 3, wherein the amide coupling reaction in step a) is carried out in the presence of PyBOP (benzotriazo l-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate) and a tertiary amine.

제4항에 있어서, 3차 아민은 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에틸아민, N-메틸포르포린, N-메틸피페리딘, 4-디메틸아미노피리 딘, N,N-디메틸아닐린, 2, 6-루티딘 및 피리딘 중에서 선택된 1종 이상인[화학식 I] 화합물의 제조방법.The method of claim 4, wherein the tertiary amine is selected from the group consisting of triethylamine, N, N-diisopropylethylamine, N-methylporphorine, N-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine, N, , 2, 6-lutidine and pyridine. &Lt; / RTI >

제3항에 있어서, b) 단계의 염기는 탄산나트륨, 탄산칼륨, 탄산칼 슘 및 인산나트륨에서 선택된 1종 이상인 [화학식 I] 화합물의 제조방법.4. The method according to claim 3, wherein the base in step b) is at least one selected from the group consisting of sodium carbonate, potassium carbonate, calcium carbonate and sodium phosphate.

5-(4-시아노펜옥시-N-(2-(4-에틸페닐아미노)벤조[d] 옥사졸-5-일)펜탄아미드와 NH₂OHㆍHCl을 3차아민 존재하에 반응시켜 5-(4-(N'-히드록시카르밤 이미도일)-펜옥시-N-(2-(4-에틸페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-일)펜탄아미드를 제조하는 방법.5- (4-cyano nopen oxy - N - (2- (4-ethyl-phenyl-amino) benzo [d] oxazol-5-yl) pentane by reacting the amide with NH ₂ OH-HCl under a tertiary amine present 5 (4- (N'-hydroxycarbamimidoyl) -phenoxy- N- (2- (4-ethylphenylamino) benzo [ d ] oxazol-5-yl) pentanamide.

제7항에 있어서, 3차아민은 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에 틸아민, N-메틸포르포린, N-메틸피페리딘, 4-디메틸아미노피리딘, N,N-디메틸아닐린, 2, 6-루티딘 및 피리딘 중에서 선택된 1종 이상인 5-(4-(N'-히드록시카르밤이미도일)-펜옥시-N-(2-(4-에틸페닐아미노)벤조[ d]옥사졸-5-일)펜탄아미드를 제조하는 방법.The method of claim 7, wherein the tertiary amine is selected from the group consisting of triethylamine, N, N-diisopropylethylamine, N-methylporpholine, N-methylpiperidine, 4- dimethylaminopyridine, N, (4- (N'-hydroxycarbamimidoyl) -phenoxy- N- (2- (4-ethylphenylamino) benzo [ d ] Oxazol-5-yl) pentanamide. &Lt; / RTI >

5-(4-시아노펜옥시-N-(2-(4-페닐아미노)벤조 [d]옥사졸-5-일)펜탄 아미드와 NH₂OH를 반응시켜 5-((E)-4-(N'-히드록시카르밤이미도일)-페녹시)-N-(2-(4-페닐아미노)벤조 [d]옥사졸-5-일)펜탄아미드를 제조하는 방법.Reacting 5- (4-cyanophenoxy) -N- (2- (4-phenylamino) benzo [d] oxazol-5-yl) pentanamide with NH ₂ OH, N'-hydroxycarbamimidoyl) -phenoxy) -N- (2- (4-phenylamino) benzo [d] oxazol-5-yl) pentanamide.

5-(4-시아노펜옥시)-N-(2-(4-메톡시페닐아미노)벤조 [d]옥사졸 5-일)펜탄아미드와 NH₂OH를 반응시켜 5-((E)-4-(N'-히드록시카르밤이미도일)-페녹시)-N-(2-(4-메톡시페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-일)펜탄아미드를 제조하는 방법.The reaction of 5 - ((E) -4 (4-methoxyphenylamino) benzo [d] oxazole 5-yl) pentanamide with NH ₂ OH, - (N'-hydroxycarbamimidoyl) -phenoxy) -N- (2- (4-methoxyphenylamino) benzo [d] oxazol-5-yl) pentanamide.

하기의 [화학식 I]의 신규한 화합물, 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 이의 수화물 또는 용매화물을 유효량 함유하는 골다공증의 완화, 예방 또는 치료용 약학 조성물:
[화학식 I]

상기 [화학식 I]에서,
R1은 N`-히드록시카르밤이미도일이며,
R2는 수소, C1-C4 알킬 또는 C1-C4 알콕시이며, 여기서, 알킬, 알콕시는, 치환되지 않거나, 플루오로, 클로로, 브로모, 요오도 또는 시아노 중에서 선택된 1종 이상으로 치환된 것일 수 있다.A pharmaceutical composition for alleviating, preventing or treating osteoporosis comprising an effective amount of a novel compound of the following formula [I], a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate or solvate thereof:
(I)

In the above formula (I)
R1 is N < 1 > -hydroxycarbamimidoyl,
R 2 is hydrogen, C 1 -C 4 alkyl or C 1 -C 4 alkoxy, wherein alkyl, alkoxy is unsubstituted or substituted with one or more selected from fluoro, chloro, bromo, iodo or cyano .

제11항에 있어서, 상기 [화학식 I]의 화합물은
하기 [화학식 I-1]로 표시되는 5-(4-(N'-히드록시카르밤이미도일)-페녹시)-N -(2-(4-에틸페닐아미노)벤조[d] 옥사졸-5-일)펜탄아미드;
하기 [화학식 I-2]로 표시되는 5-((E)-4-(N-히드록시카르밤이미도일)-페녹시)-N-(2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-일)펜탄아미드; 또는
하기 [화학식 I-3]으로 표시되는 5-((E)-4-(N'-히드록시카르밤이미도일)-페녹시)-N-(2-(4-메톡시페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-일)펜탄아미드인 골다공증의 완화, 예방 또는 치료용 약학 조성물.
[화학식 I-1]

[화학식 I-2]

[화학식 I-3]

12. The compound of claim 11, wherein the compound of formula (I)
(4- (N'-hydroxycarbamimidoyl) -phenoxy) -N- (2- (4-ethylphenylamino) benzo [d] oxazole- 5-yl) pentanamide;
(E) -4- (N-hydroxycarbamimidoyl) -phenoxy) -N- (2- (phenylamino) benzo [d] oxazole- 5-yl) pentanamide; or
(E) -4- (N'-hydroxycarbamimidoyl) -phenoxy) -N- (2- (4-methoxyphenylamino) benzo [ d] oxazol-5-yl) pentanamide. < / RTI >
(I-1)

[Formula I-2]

[Formula I-3]

제1항에 있어서, 상기 R2는 수소, C1-C4 알킬 또는 C1-C4 알콕시이며, 상기 알킬 및 알콕시는 치환되지 않은 것인 [화학식 I]의 화합물, 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 이의 수화물 또는 용매화물.The compound of claim 1, wherein R 2 is hydrogen, C 1 -C 4 alkyl or C 1 -C 4 alkoxy, wherein said alkyl and alkoxy are unsubstituted, a pharmaceutically acceptable salt thereof or a hydrate thereof Or a solvate.

제1항에 있어서, 상기 R2는 수소, 메톡시 또는 에틸인 것인 [화학식 I]의 화합물, 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 이의 수화물 또는 용매화물. 2. A compound of formula I according to claim 1, wherein R <2> is hydrogen, methoxy or ethyl, a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate or solvate thereof.

제1항에 있어서, R1은 N'-히드록시카르밤이미도일이고 R2는 C1-C4 알킬 또는 C1-C4 알콕시인 경우, 상기 R1 및 R2는 각각 독립적으로 페닐기의 파라(para)위치에 위치하는 [화학식 I]의 화합물, 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 또는 이의 수화물 또는 용매화물.
2. The compound according to claim 1, wherein when R1 is N'-hydroxycarbamimidoyl and R2 is C1-C4 alkyl or C1-C4 alkoxy, then R1 and R2 are each independently located at the para position of the phenyl group A compound of formula I, a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate or solvate thereof.