KR101830262B1 - Novel lactone derivatives, preparation method thereof, and pharmaceutical composition for use in preventing or treating disease related STAT3 containing the same as an active ingredient - Google Patents

Abstract

The present invention relates to a novel lactone derivative, a preparation method thereof and a pharmaceutical composition for preventing or treating diseases related to signal transducer and activator of transcription 3 (STAT3) containing the derivative as an active ingredient. The novel lactone derivative according to the present invention shows a STAT3 protein inhibitory effect and cell line proliferation inhibition in triple negative breast cancer cell lines, thereby being used as a pharmaceutical composition for preventing or treating diseases related to STAT3, especially triple negative breast cancer.

Description

신규한 락톤 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 STAT3 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Novel lactone derivatives, preparation method thereof, and pharmaceutical composition for use in preventing or treating disease related STAT3 containing the same as an active ingredient}TECHNICAL FIELD The present invention relates to a novel lactone derivative, a process for producing the same, and a pharmaceutical composition for preventing or treating STAT3-related diseases containing the same as an active ingredient. as an active ingredient}

본 발명은 신규한 락톤 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a novel lactone derivative, a process for producing the same, and a pharmaceutical composition for preventing or treating a disease associated with STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) containing the same as an active ingredient.

STATs(Signal Transducers and Activators of Transciption) 단백질은 세포질에서 신호전달 단백질로 작용하여, 세포막으로부터 핵 내로 신호를 전달한다. STAT1, STAT2, STAT3, STAT4, STAT5A, STAT5B, STAT6의 모두 7종류의 STAT이 보고되어 있다. 이 중에서 STAT3은 대부분의 암에서 필수적으로 활성화되고, 암의 발생과 분화에 중요한 역할을 한다. 또한, 많은 악성종양 환자에서 STAT3의 활성화가 관찰되며, 전이능을 가지는 암에서도 지속적으로 활성화된 STAT3가 빈번하게 관찰된다. STAT3은 종양형성과 침윤, 전이에 직접적으로 관여하며, 암세포 사멸에도 내성을 가지게 한다. 따라서 STAT3을 타겟 물질 탐색은 유망한 항암치료 전략으로 최근 대두되고 있다.STATs (Signal Transducers and Activators of Transciption) proteins act as signaling proteins in the cytoplasm and transmit signals from the cell membrane into the nucleus. STAT1, STAT2, STAT3, STAT4, STAT5A, STAT5B and STAT6. Of these, STAT3 is essential for most cancers and plays an important role in the development and differentiation of cancer. In addition, STAT3 activation is observed in many malignant tumors, and STAT3, which is continuously activated, is frequently observed in metastatic cancers. STAT3 is directly involved in tumorigenesis, invasion, and metastasis, and is also resistant to cancer cell death. Therefore, the search for STAT3 target substances is emerging as a promising anticancer treatment strategy.

STAT3는 인산화가 되면서 활성화되는데, C-말단(C-terminal)에 타이로신 705번 잔기(Tyrosine 705)와 세린 727번 잔기(Serine 727)를 가지고 있다. STAT3은 사이토카인과 성장인자의 중요한 매개체로써, 주로 IL-6, 표피성장인자, Src 나 Ras와 같은 종양 단백에 의해 활성화된다. IL-6와 같은 사이토카인 또는 표피성장인자와 같은 성장인자가 그에 해당하는 수용체와 결합하게 되면, JAK kinase는 수용체에 있는 타이로신 인산화를 유도하게 되고, 이렇게 인산화된 타이로신은 STAT이 수용체에 결합하도록 도와준다. 타이로신 705번 잔기의 인산화에 의해서 STAT3은 두 개의 STAT3가 SH2 domain 간의 상호결합에 의해 하나의 이합체를 형성한다. STAT3 이합체는 핵 내로 이동한 후에는 전사 인자로 작용하여, 세포 성장 및 생존에 중요한 타겟 유전자의 프로모터 유전자에 직접 결합하여, 하위 타켓 유전자들의 전사를 조절한다. 대표적으로, 세포 성장 및 분열 주기를 진행하는 Cyclin D1, 그리고 세포사멸을 억제하는 유전자인 Bcl-2를 조절한다. STAT3 is activated by phosphorylation and has a tyrosine 705 residue (Tyrosine 705) and a serine 727 residue (Serine 727) at its C-terminal. STAT3 is an important mediator of cytokines and growth factors, and is mainly activated by tumor proteins such as IL-6, epidermal growth factor, and Src or Ras. When a growth factor such as IL-6 or a growth factor such as epidermal growth factor binds to its receptor, JAK kinase induces tyrosine phosphorylation in the receptor, and this phosphorylated tyrosine helps STAT bind to the receptor give. By phosphorylation of tyrosine residue 705, STAT3 forms a dimer by mutual binding of two STAT3 to SH2 domains. The STAT3 dimer acts as a transcription factor after transfer into the nucleus and binds directly to the promoter gene of the target gene important for cell growth and survival, thereby regulating the transcription of the downstream target genes. Typically, it regulates Cyclin D1, which promotes cell growth and division, and Bcl-2, which inhibits apoptosis.

STAT3는 암의 증식과 관련된 다양한 유전자의 발현을 조절하는데, 평상시에는 그 활성이 억제되어 있으나 다양한 암에서 과발현 및 지속적인 이상활성화를 일으켜 비정상적인 세포 성장 및 악성 세포로의 변화와 암세포 증식 등에 영향을 미친다. 따라서 STAT3 단백질의 지속적인 과발현에 의한 STAT3 이분자체의 DNA와의 결합은 암세포의 형성에 직접적인 원인이 될 수 있다.STAT3 regulates the expression of various genes involved in the proliferation of cancer. Normally, its activity is suppressed, but overexpression and persistent abnormal activation of various cancers cause abnormal cell growth, malignant cell transformation and cancer cell proliferation. Thus, the persistent overexpression of STAT3 protein may be responsible for the formation of cancer cells by binding STAT3 monocytes to DNA.

한편, 유방암 시장은 높은 미충족 의학적 수요를 가지고 있는 분야이다. 호르몬 요법, 화학 요법, 표적 치료 등 다양한 질환의 특성을 가진 환자들을 대상으로 하는 여러 기전의 치료제가 있지만, 안전하고 효과적인 만족할 만한 치료제에 대한 수요가 계속 요구되고 있다. 이 중에서도 전체 유방암의 16%를 차지하는 삼중음성유방암(Triple-Negative Breast Cancer, TNBC)은 치료 예후가 불량하여 치료에 어려움이 있으나, 아직 삼중음성유방암을 대상으로 한 치료제가 없어 이에 대한 수요가 높다. 이에, 삼중음성유방암을 대상으로 한 치료제에 대한 연구가 활발히 진행되고 있으며, 그 중 STAT3을 타겟 물질로 한 연구들이 진행되고 있다.On the other hand, the breast cancer market has a high unmet medical demand. There are many mechanisms of treatment for patients with various disease characteristics, including hormone therapy, chemotherapy, and target therapy, but there is a continuing demand for safe and effective treatments that are satisfactory. Among them, Triple-Negative Breast Cancer (TNBC), which accounts for 16% of all breast cancers, is difficult to treat due to poor prognosis, but there is no demand for triple negative breast cancer. Therefore, studies on triphasic cancer breast cancer have been actively conducted, and studies using STAT3 as a target substance have been underway.

일례로, STAT3의 타이로신 인산화 활성을 선택적으로 저해시켜 암 전이 억제효과를 나타내는 천연물 유래의 유방암 치료제들이 개발되고 있다. (특허문헌 1)For example, therapeutic agents for breast cancer derived from natural products that selectively inhibit the activity of tyrosine phosphorylation of STAT3 and inhibit cancer metastasis are being developed. (Patent Document 1)

이에, 본 발명자들은 STAT3를 억제하여 항암효과를 보일 수 있는 물질들을 개발하던 중, STAT3 억제제의 약리단이 될 수 있는 알파, 베타-불포화 락톤 기능기와 3차 알콜을 필수적으로 포함하고 두 개의 5각 고리를 포함하는 이중고리 구조의 유도체를 합성하였으며, 이러한 신규 락톤 유도체들이 TNBC (Triple Negative Breast Cancer) 세포에서 STAT3 단백질에 대한 억제효과가 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors have found that when developing substances capable of inhibiting STAT3 and exhibiting an anticancer effect, it is necessary to include an alpha, beta-unsaturated lactone functional group and a tertiary alcohol, which can be pharmacologic steps of the STAT3 inhibitor, The present inventors completed the present invention by confirming that the novel lactone derivatives have an inhibitory effect on STAT3 protein in TNBC (Triple Negative Breast Cancer) cells.

대한민국 공개특허공보 10-2015-0101393Korean Patent Publication No. 10-2015-0101393

본 발명의 목적은 신규한 락톤 유도체, 이의 광학이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a novel lactone derivative, an optical isomer thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

본 발명의 다른 목적은 상기 신규한 락톤 유도체의 제조방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a process for producing the novel lactone derivative.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 신규한 락톤 유도체를 유효성분으로 함유하는 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.Still another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) -related disease containing the novel lactone derivative as an active ingredient.

상기 목적을 달성하기 위하여,In order to achieve the above object,

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.The present invention provides a compound represented by the following general formula (1), an optical isomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[화학식 1][Chemical Formula 1]

상기 화학식 1에서, In Formula 1,

R¹은 -H, -OH, 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알콕시, 또는 -OAc이고;R ¹ is -H, -OH, straight or branched C _1-5 alkyl, straight or branched C _1-5 alkoxy, or -OAc;

R²는

,

이고,R ² is

,

ego,

상기 A¹ 및 A²는 독립적으로 -H 또는 -OH 이거나, 함께 연결되어

를 형성하고, A < ^{1 >} and A < ² > are independently -H or -OH,

Lt; / RTI >

A³은 -H, 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알킬이고,A ³ is -H, or a linear or branched C _1-5 alkyl,

X는 -OH, 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알콕시 또는 할로겐이고;X is -OH, linear or branched C _1-5 alkyl, linear or branched C _1-5 alkoxy or halogen;

R³는 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알킬이거나, R⁴와 함께 연결되어 메틸렌 또는

를 형성하고; 및R ³ is alkyl of C _1-5 straight or branched chain, it is connected with a methylene or R ⁴

≪ / RTI > And

R⁴는 R³가 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알킬일 경우, -H 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알킬이다.R ⁴ is -H or a straight or branched C _1-5 alkyl when R ³ is linear or branched C _1-5 alkyl.

또한, 본 발명은 하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,The present invention also relates to a process for producing a compound represented by the formula (1)

화학식 2로 표시되는 화합물을 환원시키고 보호기를 제거하여, 화학식 3으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1); 및Reducing the compound represented by formula (2) and removing the protecting group to prepare a compound represented by formula (3) (step 1); And

상기 단계 1에서 제조한 화학식 3으로 표시되는 화합물에 산화제를 처리하고 반응시켜, 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 2);를 포함하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.The present invention also provides a process for preparing a compound represented by the above formula (1), comprising the step of treating a compound represented by the formula (3) prepared in the step (1) with an oxidizing agent and reacting to prepare a compound represented by the formula do.

[반응식 1][Reaction Scheme 1]

상기 반응식 1에서,In the above Reaction Scheme 1,

R¹, R², R³ 및 R⁴는 독립적으로 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고;및R ¹ , R ² , R ^3, and R ⁴ are independently as defined in Formula 1; and

-OTBS는 보호기로서 tert-부틸다이메틸실릴이다.-OTBS is tert-butyldimethylsilyl as a protecting group.

나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.Furthermore, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) -related disease comprising the compound represented by the formula (1), an optical isomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient .

본 발명에 따른 신규한 구조의 락톤 유도체는 유의한 STAT3 단백질 억제효과를 보이고, 삼중음성유방암세포주에서 현저한 세포주 증식억제를 나타내므로, 이를 STAT3 관련질환, 특히 삼중음성유방암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 사용할 수 있다. The lactone derivative of the novel structure according to the present invention shows a significant STAT3 protein inhibitory effect and exhibits remarkable cell line proliferation inhibition in the triple negative breast cancer cell line. Therefore, it can be used as a pharmaceutical composition for preventing or treating STAT3 related diseases, particularly triple negative breast cancer .

도 1은 삼중 음성 (Triple-Negative) 유방암 세포, 루미널 A (Luminal A) 유방암 세포 및 HER2 (Human Epidermal Growth factor) 유방암 세포를 대상으로 STAT3의 활성화 형태인 p-STAT3(Tyr705)의 발현 정도를 비교한 도이다.
도 2는 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규한 락톤 유도체들을 처리하였을 때, STAT3 프로모터 (promoter) 활성을 억제하는 정도를 확인한 도이다.
도 3은 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규한 락톤 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때, 선택적으로 p-STAT3(Tyr705) 가 억제되는 것을 확인한 도이다.
도 4는 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규한 락톤 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때, 시간 의존적으로 p-STAT3(Tyr705) 가 억제되는 것을 확인한 도이다.
도 5는 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규한 락톤 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때, STAT3의 핵 내로의 이동이 억제되는 효과를 확인한 도이다.
도 6은 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규한 락톤 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때, 핵 내에서 STAT3 전사인자의 DNA 결합을 차단하는 효과를 확인한 도이다.
도 7은 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규한 락톤 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때, EGF (Epidermal Growth Factor) 에 의한 p-STAT3(Tyr705) 의 인위적 과발현된 정도가 억제되는 것을 확인한 도이다.
도 8은 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규한 락톤 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때, IL-6에 의한 p-STAT3(Tyr705) 의 인위적 과발현 된 정도가 억제되는 것을 확인한 도이다.
도 9는 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규한 락톤 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때, STAT3의 상위 인자인 p-JAK1(Tyr1022/1023), p-JAK2(Tyr1007/1008) 및 p-Src(Tyr416) 에 대한 효과를 확인한 도이다.
도 10은 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규한 락톤 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때, STAT3의 상위 인자인 SHP1, SHP2, PTEN, SOCS-3의 발현에 대한 효과를 확인한 도이다.
도 11은 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규한 락톤 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때, STAT3의 상위 인자인 p-FAK, p-EGFR, p-Akt에 대한 효과를 확인한 도이다.
도 12는 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규한 락톤 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때, STAT3의 상위 인자인 p-JNK(Thr183/Tyr185), p-p38(Thr180/Tyr182), ERK1/2(Thr177) 에 대한 효과를 확인한 도이다.
도 13은 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규한 락톤 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때, 시간 의존적으로 세포의 증식이 억제되는 것을 확인한 도이다.
도 14는 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규한 락톤 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때 농도 의존적으로 살아있는 세포의 비율이 감소하지만, 정상 유방상피세포인 MCF-10A에는 어떠한 영향도 주지 않음을 확인한 도이다.
도 15는 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규한 락톤 유도체인 화합물 12를 처리하였을 때, 세포 주기에서 G2/M 단계 어레스트 (arrest) 를 유도시키는 것을 확인한 도이다.
도 16은 Annexin V assay를 이용하여 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규한 락톤 유도체인 화합물 12를 처리하였을 때, 세포 사멸 (apoptosis) 을 유도시키는 것을 보여주는 도이다.
도 17은 TUNEL assay를 이용하여 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규한 락톤 유도체인 화합물 12를 처리하였을 때, 세포 사멸 (apoptosis) 을 유도시키는 것을 보여주는 도이다.
도 18은 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규한 락톤 유도체인 화합물 12를 처리하였을 때, 세포 사멸 (apoptosis) 을 유도시키는 것을 보여주는 도이다.
도 19는 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규한 락톤 유도체인 화합물 12를 처리하였을 때, STAT3 조절 하위단계 유전자인 Bcl-xL, Bcl-2, Cyclin D1, MMP-2 및 COX-2의 발현이 감소되는 것을 확인한 도이다.
도 20은 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규한 락톤 유도체인 화합물 12를 처리하였을 때, 세포 사멸을 유도시키는 인자인 caspase-3 및 PARP가 활성화 됨을 확인한 도이다.
도 21은 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규한 락톤 유도체인 화합물 12와 방사선 치료 (Radiaition therapy; RT) 를 병행하여 처리하였을 때, 세포의 독성이 증가되며 시너지를 보이는 것을 확인한 도이다.FIG. 1 shows the expression level of p-STAT3 (Tyr705), an activated form of STAT3, in triple-negative breast cancer cells, Luminal A breast cancer cells and HER2 human breast cancer cells Fig.
FIG. 2 is a graph showing the degree of suppression of the activity of the STAT3 promoter when the lactone derivatives of the present invention are treated with MDA-MB-468 cells, which are triple-negative breast cancer cells.
FIG. 3 is a graph showing that p-STAT3 (Tyr705) is selectively inhibited when MDA-MB-468 cells, which are triple-negative breast cancer cells, are treated with the novel lactone derivatives 11 and 12.
FIG. 4 is a graph showing that p-STAT3 (Tyr705) is inhibited in a time-dependent manner when MDA-MB-468 cells which are triple negative breast cancer cells are treated with the novel lactone derivatives 11 and 12.
FIG. 5 shows the effect of suppressing the migration of STAT3 into the nucleus when MDA-MB-468 cells, which are triple-negative breast cancer cells, were treated with the novel lactone derivatives 11 and 12.
FIG. 6 is a graph showing the effect of blocking the DNA binding of STAT3 transcription factor in the nucleus when MDA-MB-468 cells, which are triple-negative breast cancer cells, were treated with the novel lactone derivatives 11 and 12.
FIG. 7 shows an artificial overexpression level of p-STAT3 (Tyr705) induced by EGF (Epidermal Growth Factor) when MDA-MB-468 cells that are triple negative breast cancer cells were treated with the novel lactone derivatives 11 and 12 As shown in Fig.
FIG. 8 shows that an artificial overexpression of p-STAT3 (Tyr705) by IL-6 is inhibited when MDA-MB-468 cells, which are triple-negative breast cancer cells, are treated with the novel lactone derivatives 11 and 12 It is also confirmed.
9 is a graph showing the relationship between the levels of p-JAK1 (Tyr1022 / 1023), p-JAK2 (Tyr1007 / 1008) and p-Src (Tyr416).
FIG. 10 shows the effect on the expression of SHP1, SHP2, PTEN, and SOCS-3, which are the predominant factors of STAT3, when MDA-MB-468 cells that are triple negative breast cancer cells were treated with the novel lactone derivatives 11 and 12 It is also confirmed.
FIG. 11 shows the effect of the novel lactone derivatives, Compound 11 and Compound 12, on the triple-negative breast cancer cells, MDA-MB-468 cells, on p-FAK, p-EGFR and p-Akt, It is also confirmed.
12 shows the results of treatment of MDA-MB-468 cells, which are triple-negative breast cancer cells, with the novel lactone derivatives 11 and 12, p-JNK (Thr183 / Tyr185), p-p38 (Thr180 / Tyr182), and ERK1 / 2 (Thr177).
FIG. 13 is a graph showing that cell proliferation is inhibited in a time-dependent manner when MDA-MB-468 cells, which are triple negative breast cancer cells, are treated with the novel lactone derivatives 11 and 12.
FIG. 14 shows that, when MDA-MB-468 cells, which are triple negative breast cancer cells, are treated with the novel lactone derivatives 11 and 12, the ratio of living cells decreases in a concentration dependent manner. However, in MCF-10A which is a normal breast epithelial cell, It is also confirmed that it does not affect.
FIG. 15 is a graph showing that G2 / M step arrest is induced in the cell cycle when MDA-MB-468 cell, which is a triple negative breast cancer cell, is treated with a novel lactone derivative, compound 12.
FIG. 16 is a graph showing that MDA-MB-468 cells, which are triple negative breast cancer cells, are induced to apoptosis by treatment with a novel lactone derivative, Compound 12, using the Annexin V assay.
FIG. 17 is a graph showing that MDA-MB-468 cells, which are triple negative breast cancer cells, are induced apoptosis by treatment with a novel lactone derivative, Compound 12, using the TUNEL assay.
FIG. 18 is a graph showing that MDA-MB-468 cells, which are triple-negative breast cancer cells, induce apoptosis when Compound 12, which is a novel lactone derivative, is treated.
FIG. 19 shows that STAT3-regulated sub-step genes Bcl-xL, Bcl-2, Cyclin D1, MMP-2 and COX- 2 expression was decreased.
FIG. 20 shows activation of caspase-3 and PARP, which are factors inducing apoptosis, when MDA-MB-468 cells, which are triple-negative breast cancer cells, were treated with a novel lactone derivative 12.
FIG. 21 shows that when MDA-MB-468 cells, which are triple-negative breast cancer cells, were treated with a novel lactone derivative, Compound 12, in combination with radiotherapy (RT), cytotoxicity was increased and synergy was observed to be.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.The present invention provides a compound represented by the following general formula (1), an optical isomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[화학식 1][Chemical Formula 1]

상기 화학식 1에서, In Formula 1,

R¹은 -H, -OH, 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알콕시, 또는 -OAc이고;R ¹ is -H, -OH, straight or branched C _1-5 alkyl, straight or branched C _1-5 alkoxy, or -OAc;

R²는

,

이고,R ² is

,

ego,

상기 A¹ 및 A²는 독립적으로 -H 또는 -OH 이거나, 함께 연결되어

를 형성하고, A < ^{1 >} and A < ² > are independently -H or -OH,

Lt; / RTI >

A³은 -H, 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알킬이고,A ³ is -H, or a linear or branched C _1-5 alkyl,

X는 -OH, 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알콕시 또는 할로겐이고;X is -OH, linear or branched C _1-5 alkyl, linear or branched C _1-5 alkoxy or halogen;

R³는 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알킬이거나, R⁴와 함께 연결되어 메틸렌 또는

를 형성하고; 및R ³ is alkyl of C _1-5 straight or branched chain, it is connected with a methylene or R ⁴

≪ / RTI > And

R⁴는 R³가 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알킬일 경우, -H 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알킬이다.R ⁴ is -H or a straight or branched C _1-5 alkyl when R ³ is linear or branched C _1-5 alkyl.

바람직하게는,Preferably,

R¹은 -H, -OH, 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-3의 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-3의 알콕시, 또는 -OAc이고;R ¹ is -H, -OH, a linear or branched C _1-3 alkyl, a straight or branched C _1-3 alkoxy, or -OAc;

R²는

,

이고,R ² is

,

ego,

상기 A¹ 및 A²는 독립적으로 -H 또는 -OH 이거나, 함께 연결되어

를 형성하고, A < ^{1 >} and A < ² > are independently -H or -OH,

Lt; / RTI >

A³은 -H, 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-3의 알킬이고,A ³ is -H, or a linear or branched C _1-3 alkyl,

X는 -OH, 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-3의 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-3의 알콕시 또는 할로겐이고;X is-OH, linear or branched C _1-3 alkyl, linear or branched C _1-3 alkoxy or halogen;

R³는 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-3의 알킬이거나, R⁴와 함께 연결되어 메틸렌 또는

를 형성하고; 및R ³ is alkyl of C _1-3 straight or branched chain, it is connected with a methylene or R ⁴

≪ / RTI > And

R⁴는 R³가 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-3의 알킬일 경우, -H 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-3의 알킬이다.R ⁴ is -H or a straight or branched C _1-3 alkyl when R ³ is linear or branched C _1-3 alkyl.

더욱 바람직하게는,More preferably,

R¹은 -H, -OH, -OMe, -OEt 또는 -OAc이고;R ¹ is -H, -OH, -OMe, -OEt or -OAc;

R²는

,

,

또는

이고, 상기 X는 -OH, -OMe 또는 할로겐이고;R ² is

,

,

or

And X is -OH, -OMe or halogen;

R³는 -CH₃이거나, R⁴와 함께 연결되어 메틸렌 또는

를 형성하고; 및R ³ is -CH _3, or is linked together with R ⁴ to form a methylene or

≪ / RTI > And

R⁴는 R³가 -CH₃일 경우 -H이다.R ⁴ is -H when R ³ is -CH ₃ .

가장 바람직하게는,Most preferably,

상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나이다.The compound represented by the formula (1) is any one selected from the following group of compounds.

(1) (3aR,4S,6aR)-4-(하이드록시메틸)-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;(1) (3aR, 4S, 6aR) -4- (hydroxymethyl) -3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;

(2) (3aS,4R,6aR)-3a-하이드록시-4-(하이드록시메틸)-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;(2) (3aS, 4R, 6aR) -3a-Hydroxy-4- (hydroxymethyl) -3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;

(3) (3aR,4S,6aR)-4-(브로모메틸)-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;(3) (3aR, 4S, 6aR) -4- (bromomethyl) -3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;

(4) (3aS,4S,6aR)-4-(브로모메틸)-3a-하이드록시-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;(4) (3aS, 4S, 6aR) -4- (bromomethyl) -3a-hydroxy-3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;

(5) (3aS,4S,6aR)-4-(브로모메틸)-3a-메톡시-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;(5) (3aS, 4S, 6aR) -4- (bromomethyl) -3a-methoxy-3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;

(6) (3aS,4R,6aR)-3a-하이드록시-4-(메톡시메틸)-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;(6) (3aS, 4R, 6aR) -3a-Hydroxy-4- (methoxymethyl) -3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;

(7) (3aS,4R,6aR)-4-(하이드록시메틸)-3a-메톡시-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;(7) (3aS, 4R, 6aR) -4- (Hydroxymethyl) -3a-methoxy-3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;

(8) (3aS,4R,6aR)-3a-메톡시-4-(메톡시메틸)-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;(8) (3aS, 4R, 6aR) -3a- methoxy-4- (methoxymethyl) -3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;

(9) (3aS,4S,6aR)-4-(플루오로메틸)-3a-하이드록시-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;(9) (3aS, 4S, 6aR) -4- (fluoromethyl) -3a-hydroxy-3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;

(10) (3aS,4S,6aR)-4-(클로로메틸)-3a-하이드록시-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온; (10) (3aS, 4S, 6aR) -4- (Chloromethyl) -3a-hydroxy-3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;

(11) (3aS,4S,6aR)-3a-하이드록시-4-(아이오도메틸)-3-메틸렌- 헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;(11) (3aS, 4S, 6aR) -3a-Hydroxy-4- (Iodomethyl) -3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;

(12) (3aS,4S,6aR)-4-(브로모메틸)-3a-에톡시-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;(12) (3aS, 4S, 6aR) -4- (bromomethyl) -3a- ethoxy-3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;

(13) (3aS,4S,6aR)-4-(브로모메틸)-3-메틸렌-2-옥소-헥사하이드로-2H-사이클로펜타[b]퓨란-3a-일 아세테이트;(13) (3aS, 4S, 6aR) -4- (bromomethyl) -3-methylene-2-oxo-hexahydro-2H-cyclopenta [b] furan-3-ylacetate;

(14) (3S,3aR,4S,6aR)-4-(브로모메틸)-3a-하이드록시-3-메틸-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;(14) (3S, 3aR, 4S, 6aR) -4- (bromomethyl) -3a-hydroxy-3-methyl-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;

(15) (3S,3aR,4S,6aR)-4-(브로모메틸)-3a-하이드록시테트라하이드로-2H,4H-스파이로(사이클로펜타[b]퓨란-3,2'-옥시란)-2-온;(15) Synthesis of (3S, 3aR, 4S, 6aR) -4- (bromomethyl) -3a-hydroxytetrahydro- 2H, 4H- spiro (cyclopenta [b] furan-3,2'- Gt;

(16) (3aS,4R,6aR)-3a-하이드록시-4-((1S,2R)-1-하이드록시-2-메틸부트-3-엔일)-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;Hydroxy-2-methylbut-3-enyl) -3-methylene-hexahydrocyclopenta [b, ] Furan-2-one;

(17) (3aS,4R,6aR)-3a-하이드록시-4-((1R,2S)-1-하이드록시-2-메틸부트-3-엔일)-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;(17) (3aS, 4R, 6aR) -3a-hydroxy-4 - ((1R, 2S) -1-hydroxy-2-methylbut-3-enyl) -3-methylene-hexahydrocyclopenta [b ] Furan-2-one;

(18) (3aS,4R,6aR)-3a-하이드록시-4-((R)-1-하이드록시부트-3-엔일)-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;및(18) Synthesis of (3aS, 4R, 6aR) -3a-hydroxy-4 - ((R) -1-hydroxybut-3-enyl) -3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan- ; And

(19) (3aS,4R,6aR)-3a-하이드록시-4-((S)-1-하이드록시부트-3-엔일)-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온.(19) Synthesis of (3aS, 4R, 6aR) -3a-hydroxy-4 - ((S) -1-hydroxybut-3-enyl) -3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan- .

본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산, 아인산 등과 같은 무기산류, 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류 등과 같은 무독성 유기산, 아세트산, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산 등과 같은 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염의 종류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 다이하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등을 포함한다.The compound represented by the formula (1) of the present invention can be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt, and as the salt, an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid is useful. Acid addition salts include those derived from inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitrous acid, phosphorous acid and the like, aliphatic mono- and dicarboxylates, phenyl-substituted alkanoates, Derived from organic acids such as acetic acid, benzoic acid, citric acid, lactic acid, maleic acid, gluconic acid, methanesulfonic acid, 4-toluenesulfonic acid, tartaric acid, fumaric acid and the like. Examples of such pharmaceutically innocuous salts include, but are not limited to, sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, monohydrogenphosphate, dihydrogenphosphate, metaphosphate, pyrophosphate chloride, bromide, But are not limited to, but are not limited to, but are not limited to, but are not limited to, but are not limited to, halides, halides, halides, halides, halides, halides, But are not limited to, lactose, sebacate, fumarate, maleate, butyne-1,4-dioate, hexane-1,6-dioate, benzoate, chlorobenzoate, methylbenzoate, dinitrobenzoate, Methoxybenzoate, phthalate, terephthalate, benzene sulfonate, toluene sulfonate, chloro Such as benzenesulfonate, benzenesulfonate, xylenesulfonate, phenylacetate, phenylpropionate, phenylbutyrate, citrate, lactate,? -Hydroxybutyrate, glycolate, maleate, tartrate, methanesulfonate, propanesulfonate, naphthalene- 1-sulfonate, naphthalene-2-sulfonate, mandelate and the like.

본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 예를 들면 화학식 1의 유도체를 메탄올, 에탄올, 아세톤, 디클로로메탄, 아세토니트릴 등과 같은 유기용매에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조시켜 제조하거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조시켜 유기용매 하에서 결정화시켜서 제조할 수 있다.The acid addition salt according to the present invention can be prepared by a conventional method, for example, by dissolving the derivative of Chemical Formula 1 in an organic solvent such as methanol, ethanol, acetone, dichloromethane, acetonitrile and the like, Followed by filtration and drying, or by distillation of the solvent and excess acid under reduced pressure, followed by drying and crystallization in an organic solvent.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.In addition, bases can be used to make pharmaceutically acceptable metal salts. The alkali metal or alkaline earth metal salt is obtained, for example, by dissolving the compound in an excess amount of an alkali metal hydroxide or an alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the insoluble compound salt, and evaporating and drying the filtrate. At this time, it is preferable for the metal salt to produce sodium, potassium or calcium salt. In addition, the corresponding salt is obtained by reacting an alkali metal or alkaline earth metal salt with a suitable salt (such as silver nitrate).

나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 용매화물, 입체 이성질체, 수화물 등을 모두 포함한다.Furthermore, the present invention includes all the solvates, stereoisomers, hydrates, and the like, which can be prepared therefrom, as well as the compound represented by Formula 1 and pharmaceutically acceptable salts thereof.

또한, 본 발명은 하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,The present invention also relates to a process for producing a compound represented by the formula (1)

화학식 2로 표시되는 화합물을 환원시키고 보호기를 제거하여, 화학식 3으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1); 및Reducing the compound represented by formula (2) and removing the protecting group to prepare a compound represented by formula (3) (step 1); And

상기 단계 1에서 제조한 화학식 3으로 표시되는 화합물에 산화제를 처리하고 반응시켜, 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 2);를 포함하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.The present invention also provides a process for preparing a compound represented by the above formula (1), comprising the step of treating a compound represented by the formula (3) prepared in the step (1) with an oxidizing agent and reacting to prepare a compound represented by the formula do.

[반응식 1][Reaction Scheme 1]

상기 반응식 1에서,In the above Reaction Scheme 1,

R¹, R², R³ 및 R⁴는 독립적으로 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같고; 및R ¹ , R ² , R ^3, and R ⁴ are independently as defined in Formula 1; And

-OTBS는 보호기로서 tert-부틸다이메틸실릴이다.-OTBS is tert-butyldimethylsilyl as a protecting group.

이하, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 단계별로 상세히 설명한다.Hereinafter, a method for preparing the compound represented by Formula 1 according to the present invention will be described in detail.

본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계1은 화학식 2로 표시되는 화합물을 환원시키고 보호기를 제거하여, 화학식 3으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.In the process for preparing the compound represented by the formula (1) according to the present invention, the step (1) is a step of reducing the compound represented by the formula (2) and removing the protecting group to prepare the compound represented by the formula (3).

여기서, 상기 반응 온도는 특별한 제한은 없으나 -15-10℃에서 수행할 수 있고, 바람직하게는 -10-5℃에서 수행할 수 있고, 더욱 바람직하게는 -5-3℃에서 수행할 수 있고, 가장 바람직하게는 0℃에서 수행할 수 있다.Here, the reaction temperature is not particularly limited, but it can be carried out at -15 to 10 占 폚, preferably at -10 to 5 占 폚, more preferably at -5 to 3 占 폚, Most preferably at < RTI ID = 0.0 > 0 C. < / RTI >

또한, 상기 반응 시간은 특별한 제한은 없으나 1-10시간 동안 수행할 수 있고, 바람직하게는 2-8시간 동안 수행할 수 있고, 더욱 바람직하게는 3-6시간 동안 수행할 수 있고, 가장 바람직하게는 4시간 동안 수행할 수 있다.Further, the reaction time is not particularly limited, but can be performed for 1-10 hours, preferably 2-8 hours, more preferably 3-6 hours, and most preferably, Can be performed for 4 hours.

본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계2는 상기 단계 1에서 제조한 화학식 3으로 표시되는 화합물에 산화제를 처리하고 반응시켜, 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.In the method for preparing the compound represented by the formula (1) according to the present invention, the step (2) is a step of treating the compound represented by the formula (3) prepared in the step 1 with an oxidizing agent to obtain a compound represented by the formula .

여기서, 상기 반응 온도는 특별한 제한은 없으나 10-50℃에서 수행할 수 있고, 바람직하게는 15-45℃에서 수행할 수 있고, 더욱 바람직하게는 20-35℃에서 수행할 수 있고, 가장 바람직하게는 25℃에서 수행할 수 있다.Here, the reaction temperature is not particularly limited, but it can be carried out at 10-50 ° C, preferably at 15-45 ° C, more preferably at 20-35 ° C, Can be performed at 25 < 0 > C.

또한, 상기 반응 시간은 특별한 제한은 없으나 6-20시간 동안 수행할 수 있고, 바람직하게는 8-16시간 동안 수행할 수 있고, 더욱 바람직하게는 10-14시간 동안 수행할 수 있고, 가장 바람직하게는 12시간 동안 수행할 수 있다.The reaction time is not particularly limited but may be 6-20 hours, preferably 8-16 hours, more preferably 10-14 hours, most preferably, Can be performed for 12 hours.

나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. Furthermore, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) -related disease comprising the compound represented by the formula (1), an optical isomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient .

상기 STAT3 관련 질환은 암, 당뇨병성망막증, 당뇨병, 혈우병성 관절증, 아테롬성 동맥경화, 켈로이드, 상처 과립화, 혈관 접착, 자가면역 질환, 재발협착증, 장관 접착, 캣 스크래치 질환, 궤양, 간경병증, 당뇨병성 신장병증, 악성 신경화증, 혈전성 미소혈관증, 기관이식거부, 신사구체병증, 신경퇴행성 질환 및 염증성 질환등이 있다. 여기서, 상기 암은 고형암 또는 혈액암일 수 있다.The STAT3-related diseases are selected from the group consisting of cancer, diabetic retinopathy, diabetes, hemophilic arthropathy, atherosclerosis, keloid, wound granulation, vascular adhesion, autoimmune disease, restenosis, intestinal adhesion, cat scratch disease, ulcer, Neurodegenerative diseases, and inflammatory diseases. ≪ Desc / Clms Page number 2 > Here, the cancer may be a solid cancer or a blood cancer.

상기 고형암은 뇌종양, 양성성상세포종 ,악성성상세포종 , 뇌하수체 선종 ,뇌수막종, 뇌림프종, 핍지교종, 두개내인종, 상의세포종, 뇌간종양, 두경부 종양, 후두암, 구인두암, 비강/부비동암, 비인두암, 침샘암, 하인두암, 갑상선암, 구강암 , 흉부종양, 소세포성 폐암, 비소세포성 폐암, 흉선암, 종격동 종양, 식도암, 유방암, 남성유방암, 복부종양, 위암, 간암, 담낭암, 담도암, 췌장암, 소장암, 대장(직장)암, 항문암, 방광암, 신장암, ,남성생식기종양, 음경(요도)암, 전립선암, 여성생식기종양, 자궁경부암, 자궁내막암, 난소암, 자궁육종, 질암, 여성외부생식기암, 여성요도암, 피부암등이 있으며, 삼중음성유방암일 수 있다.The solid tumor may be selected from the group consisting of brain tumor, benign astrocytoma, malignant astrocytoma, pituitary adenoma, meningioma, brain lymphoma, oligodendroglioma, intracranial tumor, ependymoma, brain tumor, head and neck tumor, laryngeal cancer, Cancer, breast cancer, breast cancer, gastric cancer, liver cancer, gallbladder cancer, biliary cancer, pancreatic cancer, small bowel cancer, pancreatic cancer, breast cancer, pancreatic cancer, cancer, hypopharyngeal cancer, thyroid cancer, oral cancer, thoracic tumor, small cell lung cancer, non- Cancer of the uterus, endometrial cancer, endometrial cancer, endometrial cancer, uterine sarcoma, vaginal cancer, female reproductive organs, female reproductive organs, prostate cancer, female genital tumors, Cancer, female urethral cancer, skin cancer, and triple negative breast cancer.

상기 혈액암은 백혈병, 악성림프종, 다발성골수종, 재생불량성 빈혈등이 있다.The blood cancers are leukemia, malignant lymphoma, multiple myeloma, aplastic anemia, and the like.

본 발명에 따른 약학적 조성물에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충전제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조될 수 있다.In the pharmaceutical composition according to the present invention, the compound represented by the formula (1), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, can be administered in various forms of oral and parenteral administration at the time of clinical administration. Such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, surfactants, and the like.

경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경/연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제, 엘릭시르제, 트로키제 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘 등과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염 등과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제를 함유할 수 있다.Examples of formulations for oral administration include tablets, pills, light / soft capsules, liquids, suspensions, emulsions, syrups, granules, elixirs and troches, , Dextrose, sucrose, mannitol, sorbitol, cellulose and / or glycine), lubricants (such as silica, talc, stearic acid and its magnesium or calcium salts and / or polyethylene glycols). The tablets may contain binders such as magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and / or polyvinylpyrrolidine and may optionally contain binders such as starch, agar, alginic acid or sodium salts thereof Release or boiling mixture and / or absorbent, colorant, flavor, and sweetening agent.

상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효 성분으로 하는 약학적 조성물은 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사를 주입하는 방법에 의한다.The pharmaceutical composition containing the compound represented by the formula (1) as an active ingredient may be administered parenterally, and the parenteral administration may be by subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection, or intrathoracic injection.

이때, 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 안정제 또는 완충제와 함께 물에 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알 단위 투여형으로 제조할 수 있다. 상기 조성물은 멸균되고/되거나 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제제화할 수 있다.In this case, in order to formulate the composition for parenteral administration, the compound represented by the formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof may be mixed with water or a stabilizer or a buffer to prepare a solution or suspension, . The compositions may contain sterilized and / or preservatives, stabilizers, wettable or emulsifying accelerators, adjuvants such as salts and / or buffers for the control of osmotic pressure, and other therapeutically useful substances, Or may be formulated according to the coating method.

나아가, 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 몸무게가 70 Kg인 성인 환자를 기준으로 할 때, 일반적으로 0.1-1000 mg/일이며, 바람직하게는 1-500 mg/일이며, 또한 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.Furthermore, the dose of the compound of the present invention represented by the formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof in the human body may vary depending on the patient's age, weight, sex, dosage form, health condition and disease severity, The dose is usually 0.1-1000 mg / day, preferably 1-500 mg / day, based on an adult patient of 70 Kg, and may be once or twice a day at certain intervals according to the judgment of a doctor or pharmacist It may be administered in divided doses.

또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 관련 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.The present invention also provides a health functional food for preventing or ameliorating a disease associated with STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) containing the compound represented by the formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

본 발명에 따른 신규한 구조의 락톤 유도체는 유의한 STAT3 단백질 억제효과를 보이고, 삼중음성유방암세포주에서 현저한 세포주 증식억제를 나타내므로, 이를 STAT3관련질환 특히 삼중음성유방암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 사용할 수 있음은 하기 실험결과에 의해 뒷받침된다.The lactone derivative of the novel structure according to the present invention shows a significant STAT3 protein inhibitory effect and exhibits remarkable cell line proliferation inhibition in the triploidized negative breast cancer cell line and thus can be used as a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of STAT3- Availability is supported by the following experimental results.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명의 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예 및 실험예에 의해 제한되는 것은 아니다.However, the following examples and experimental examples are merely illustrative of the present invention, and the present invention is not limited by the following examples and experimental examples.

이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to Examples and Experimental Examples.

<실시예 <Embodiment 1One > >

(( 3aR,4S,6aR3aR, 4S, 6aR )-4-()-4-( 하이드록시메틸Hydroxymethyl )-3-메틸렌-) -3-methylene- 헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨Hexahydrocyclopenta [b] fu 란-2-온의 제조 (화합물 8)2-one (Compound 8)

단계 1: (R)-3-Step 1: (R) -3- 하이드록시펜트Hydroxypent -4-엔일 4--4-enyl 4- 메틸벤젠설포네이트의Methylbenzenesulfonate 제조 Produce

1차 알콜(1당량)과 트라이에틸아민(2당량)을 무수 메틸렌클로라이드에 용해시켜 0 ^oC로 냉각 후, 파라톨루엔설포닐클로라이드(1.5당량)과 4-다이메틸아미노피리딘(0.3당량)을 첨가하였다. 혼합물을 상온에서 3시간 동안 교반 후, 암모늄클로라이드 용액(30ml)를 처리하여 메텔렌클로라이드(X2)로 추출하였다. 유기층을 무수 마그네슘설페이트로 건조 후 여과하여 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:6)으로 정제하여 이서를 얻었다. (수율 93%, 6.44g)After dissolving the primary alcohol (1 eq) and triethylamine (2 eq.) In anhydrous methylene chloride and cooling to 0 ^° C, para-toluenesulfonyl chloride (1.5 eq.) And 4-dimethylaminopyridine . The mixture was stirred at room temperature for 3 hours, then treated with ammonium chloride solution (30 ml) and extracted with methylene chloride (X2). The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered, and purified by flash column chromatography (ethyl acetate: n-hexane = 1: 6) to obtain an isomer. (Yield: 93%, 6.44 g)

¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz) δ 7.76 (d, 2H, J = 8.3 Hz), 7.30 (d, 2H, J = 8.1 Hz), 7.14 (d, 2H, J = 8.5 Hz), 6.83 (d, 2H, J = 8.6 Hz), 5.65 (m, 1H), 5.21 (d, 1H, J = 1.7 Hz), 5.18 (d, 2H, J = 9.5 Hz), 4.43 (d, 1H, J = 11.0 Hz), 4.18 (m, 1H), 4.14 (d, 1H, J = 11.1 Hz), 4.06 (dt, 1H, J = 9.7 Hz, J = 5.6 Hz), 3.84 (td, 1H, J = 7.7 Hz, J = 5.3 Hz), 3.78 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 1.89-1.82 (m, 2H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 400MHz) δ 7.76 (d, 2H, J = 8.3 Hz), 7.30 (d, 2H, J = 8.1 Hz), 7.14 (d, 2H, J = 8.5 Hz), 6.83 (d 2H, J = 8.6 Hz), 5.65 (m, 1H), 5.21 (d, 1H, J = 1.7 Hz), 5.18 1H), 4.18 (m, 1H), 4.14 (d, 1H, J = 11.1 Hz), 4.06 (dt, 1H, J = 9.7 Hz, J = 5.6 Hz), 3.84 = 5.3 Hz), 3.78 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 1.89 - 1.82

상기에서 얻은 이서(1당량)를 메틸렌클로라이드: pH 7.2 버퍼용액(9:1, 140ml)에 용해시킨 후, 2,3-다이클로로-5,6-다이사이아노-1,4-벤조퀴논(2당량)을 첨가하여 상온에서 3시간 교반하였다. 소듐바이카보네이트 용액(100ml)을 처리한 후 메틸렌클로라이드(X2)로 추출하였다. 유기층을 마그네슘설페이트로 건조 후 여과하여 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=2:3)으로 정제하여 화합물 1을 얻었다. (수율 99%, 3.57g)The diastereomer (1 eq) obtained above was dissolved in methylene chloride: pH 7.2 buffer solution (9: 1, 140 ml) and then 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone 2 eq.), Which was stirred for 3 hours at room temperature. Sodium bicarbonate solution (100 ml) was treated and extracted with methylene chloride (X2). The organic layer was dried over magnesium sulfate, filtered, and purified by flash column chromatography (ethyl acetate: n-hexane = 2: 3) to give compound 1. (Yield: 99%, 3.57 g)

¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz) δ 7.73(d, 2H, J=8.2Hz), 7.30(d, 2H, J=8.0Hz), 5.74(m, 1H), 5.14(d, 1H, J=17.2Hz), 5.04(d, 1H, J=10.5Hz), 4.20-4.14(m, 2H), 4.08-4.03(m, 1H), 2.39(s, 3H), 2.21(br, 1H), 1.87-1.70(m, 2H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 400MHz) δ 7.73 (d, 2H, J = 8.2Hz), 7.30 (d, 2H, J = 8.0Hz), 5.74 (m, 1H), 5.14 (d, 1H, J = 1H, J = 10.5 Hz), 4.20-4.14 (m, 2H), 4.08-4.03 (m, 1.70 (m, 2 H)

단계 2: (12R)-Step 2: (12R) - 메틸methyl 10,10- 10,10- 디이소프로필Diisopropyl -7-메틸렌-4-옥소-15-(-7-methylene-4-oxo-15- ( 페닐설포닐Phenylsulfonyl )-12-바이닐-3,5,9,11-테트라옥사-10-실라헥사데칸-16-오에이트의 제조) -12-vinyl-3,5,9,11-tetraoxa-10-silahexadecane-16-oate

이미다졸(3당량)을 무수 메틸렌클로라이드(140ml)에 용해시켜 0 ^oC로 냉각 후, 다이클로로다이아이소프로필실레인(1.1당량)을 첨가하였다. 10분 후, 단계1 에서 얻은 화합물 1을 무수 메틸렌클로라이드(20ml)에 용해시켜 천천히 가하였다. 같은 온도에서 10분 간 교반 후, 알릴릭 알코올(1.2당량)을 무수 메틸렌클로라이드(20ml)에 용해시켜 첨가하였다. 상온에서 12시간 교반 후 암모늄클로라이드 용액(30ml)로 처리한 후 메틸렌클로라이드(X2)로 추출하였다. 유기층을 마그네슘설페이트로 건조 후 여과하여 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:8)으로 정제하여 비스-알콕시실레인을 얻었다. (수율 96%, 14.62g)The imidazole (3 eq) was dissolved in anhydrous methylene chloride (140 ml), cooled to 0 ^° C, and dichlorodiisopropylsilane (1.1 eq.) Was added. After 10 min, compound 1 obtained in step 1 was dissolved in anhydrous methylene chloride (20 ml) and slowly added. After stirring at the same temperature for 10 minutes, allylic alcohol (1.2 eq.) Was added dissolved in anhydrous methylene chloride (20 ml). After stirring at room temperature for 12 hours, the mixture was treated with ammonium chloride solution (30 ml) and extracted with methylene chloride (X2). The organic layer was dried over magnesium sulfate, filtered, and purified by flash column chromatography (ethyl acetate: n-hexane = 1: 8) to obtain bis-alkoxysilane. (Yield: 96%, 14.62 g)

¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz) δ 7.74 (d, 2H, J = 8.3 Hz), 7.29 (d, 2H, J = 8.2 Hz), 5.68 (m, 1H), 5.21 (s, 1H), 5.13 (s, 1H), 5.03 (dd, 2H, J = 18.3 Hz, J = 10.4 Hz), 4.58 (s, 2H), 4.36 (q, 1H, J = 6.2 Hz), 4.20 (s, 2H), 4.16 (q, 2H, J = 7.2 Hz), 4.11-4.02 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 1.89-1.78 (m, 2H), 1.26 (t, 3H, J = 7.1 Hz), 0.94-0.93 (m, 14H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 400MHz) δ 7.74 (d, 2H, J = 8.3 Hz), 7.29 (d, 2H, J = 8.2 Hz), 5.68 (m, 1H), 5.21 (s, 1H), 5.13 2H), 4.20 (s, 1H), 5.03 (dd, 2H, J = 18.3 Hz, J = 10.4 Hz), 4.58 (m, 2H), 1.26 (t, 3H, J = 7.1 Hz), 0.94 - 0.93 (m, 14H)

60% 소듐 하이드라이드(2.4당량)이 존재하는 무수 다이메틸포름아마이드(38ml)를 0 ^oC로 냉각 후, 무수 다이메틸포름아마이드(10ml)에 용해시킨 메틸 페닐설포닐아세테이트(2.4당량)을 첨가하였다. 같은 온도에서 1시간 교반 후, 상기에서 얻은 비스-알콕시실레인(1당량)을 무수 다이메틸포름아마이드(10ml)에 용해시켜 첨가하였다. 혼합물을 80 ^oC로 가열하여 9시간 교반 후, 상온으로 온도를 낮추어 암모늄클로라이드 용액(30ml)로 처리하였다. 에틸아세테이트(X2)로 추출한 유기층을 마그네슘설페이트로 건조 후 여과하여 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:4)으로 정제하여 화합물 2를 얻었다. (수율 78%, 3.32g)Anhydrous dimethylformamide (38 ml) in the presence of 60% sodium hydride (2.4 eq) was cooled to 0 ^° C and methyl phenylsulfonyl acetate (2.4 eq) dissolved in anhydrous dimethylformamide (10 ml) Respectively. After stirring at the same temperature for 1 hour, the bis-alkoxysilane (1 eq) obtained above was added to dissolve in anhydrous dimethylformamide (10 ml). The mixture was heated to 80 ^° C and stirred for 9 hours, then cooled to room temperature and treated with ammonium chloride solution (30ml). The organic layer extracted with ethyl acetate (X2) was dried over magnesium sulfate, filtered and purified by flash column chromatography (ethyl acetate: normal-hexane = 1: 4) (Yield: 78%, 3.32 g)

¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz) δ 7.82(d, 2H, J=7.3 Hz), 7.64(t, 1H, J=7.4 Hz), 7.52(t, 2H, J=11.9 Hz), 5.73-5.64(m, 1H), 5.21(d, 1H, J=0.9 Hz), 5.13-5.08(m, 2H), 5.04-5.00(m, 1H), 4.58(s, 2H), 4.29-4.20(m, 3H), 4.15(q, 2H, J=7.1 Hz), 3.96 (ddd, 1H, J=25.6 Hz, J=11.2Hz, J=4.0 Hz), 3.63(d, 3H, J=0.9 Hz), 2.08-1.87(m, 2H), 1.53-1.45(m, 2H), 1.26(t, 3H, J=7.1Hz), 0.98-0.90 (m, 14H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 400MHz) δ 7.82 (d, 2H, J = 7.3 Hz), 7.64 (t, 1H, J = 7.4 Hz), 7.52 (t, 2H, J = 11.9 Hz), 5.73-5.64 (m, 1H), 5.21 (d, 1H, J = 0.9 Hz), 5.13-5.08 (m, 2H), 5.04-5.00 ), 4.15 (q, 2H, J = 7.1 Hz), 3.96 (ddd, 1H, J = 25.6 Hz, J = 11.2 Hz, J = 4.0 Hz) 2H), 1.53-1.45 (m, 2H), 1.26 (t, 3H, J = 7.1Hz), 0.98-0.90 (m, 14H)

단계 3: Step 3: 메틸methyl 4-(( 4-(( R,ZR, Z )-6-(() -6 - (( 에톡시카르보닐옥시Ethoxycarbonyloxy )) 메틸methyl )-2,2-) -2,2- 디이소프로필Diisopropyl -4,7-디하이드로-1,3,2-디옥사실레핀-4-일)-2-(페닐설포닐)부타노에이트의 제조-4,7-dihydro-1,3,2-dioxiletipin-4-yl) -2- (phenylsulfonyl) butanoate

단계 2에서 얻은 화합물 2(1당량)을 무수 톨루엔(160ml)에 용해시킨 후 리플럭스 상태에서 2세대 그랍스 촉매(0.125당량)을 첨가하였다. 30분간 교반 후 상온으로 온도를 낮추어 용매를 제거한 후, 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:4)으로 정제하여 화합물 3을 얻었다. (수율 100%, 720mg)Compound 2 (1 eq.) Obtained in Step 2 was dissolved in anhydrous toluene (160 ml), and then a second generation glyoxal catalyst (0.125 eq.) Was added under reflux. After stirring for 30 minutes, the temperature was lowered to room temperature to remove the solvent, and the residue was purified by flash column chromatography (ethyl acetate: normal-hexane = 1: 4) (Yield: 100%, 720 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz) δ 7.85 (d, 2H, J = 7.8 Hz), 7.66 (t, 1H, J = 7.4 Hz), 7.54 (t, 2H, J = 7.7 Hz), 5.55 (s, 1H), 4.66 (d, 1H, J = 18.4 Hz), 4.56 (d, 1H, J = 15.6 Hz), 4.44 (t, 2H, J = 15.3 Hz), 4.26 (dd, 1H, J = 15.5 Hz, J = 4.8 Hz), 4.17 (m, 2H), 4.09-4.02 (m, 1H), 3.67 (d, 3H, J = 6.8 Hz), 2.28-1.85 (m, 2H), 1.62-1.53 (m, 2H), 1.28 (td, 3H, J = 7.1 Hz, J = 1.5 Hz), 0.99 (s, 14H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 400MHz) δ 7.85 (d, 2H, J = 7.8 Hz), 7.66 (t, 1H, J = 7.4 Hz), 7.54 (t, 2H, J = 7.7 Hz), 5.55 (s J = 15.3Hz), 4.66 (d, 1H, J = 15.4 Hz), 4.66 (d, 2H), 1.62-1.53 (m, 1H), 3.67 (d, 3H, J = 2H), 1.28 (td, 3H, J = 7.1 Hz, J = 1.5 Hz), 0.99 (s,

단계 4: (Z)-2-((Step 4: (Z) -2 - (( terttert -- 부틸디메틸실릴옥시Butyldimethylsilyloxy )) 메틸methyl )-3-((2R)-6-옥소-5-() -3 - ((2R) -6-oxo-5- ( 페닐설포닐Phenylsulfonyl )-테트라하이드로-2H-피란-2-일)알릴 에틸 ) -Tetrahydro-2H-pyran-2-yl) allyl ethyl 카보네이트의Of carbonate 제조 Produce

단계 3에서 얻은 화합물 3(1당량)을 무수 테트라하이드로퓨란(185ml)에 용해시킨 후 상온에서 테트라-노말-부틸암모늄플루오라이드(2당량)을 첨가하였다. 12시간 교반 후 암모늄클로라이드 용액(50ml)를 처리하였다. 에틸아세테이트(X2)로 추출한 유기층을 마그네슘설페이트로 건조 후 여과하여 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=3:1)으로 정제하여 락톤을 얻었다. (수율 79%, 5.83g)Compound 3 (1 equiv) obtained in Step 3 was dissolved in anhydrous tetrahydrofuran (185 ml) and tetra-n-butylammonium fluoride (2 eq.) Was added at room temperature. After stirring for 12 hours, ammonium chloride solution (50 ml) was treated. The organic layer extracted with ethyl acetate (X2) was dried over magnesium sulfate, filtered, and purified by flash column chromatography (ethyl acetate: normal-hexane = 3: 1) to obtain a lactone. (Yield: 79%, 5.83 g)

¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz) δ 7.93-7.90 (m, 2H), 7.69-7.65 (m, 1H), 7.56 (td, 2H, J = 7.9 Hz, J = 2.9 Hz), 5.83 (d, 0.5H, J = 8.8 Hz), 5.72 (d, 0.5H, J = 8.7 Hz), 5.46-5,41 (m, 0.5H), 5.34-5.27 (m, 0.5H), 4.79 (dd, 1H, J = 12.7 Hz, J = 3.7 Hz), 4.65 (dd, 1H, J = 12.7 Hz, J = 7.4 Hz), 4.22-4.00 (m, 5H), 2.90-2.86 (m, 0.5H), 2.72-2.64 (m, 0.5H), 2.47-2.38 (m, 0.5H), 2.36-2.13 (m, 1H), 1.99-1.93 (m, 0.5H), 1.86-1.70 (m, 1H), 1.33-1.27 (m, 3H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 400MHz) δ 7.93-7.90 (m, 2H), 7.69-7.65 (m, 1H), 7.56 (td, 2H, J = 7.9 Hz, J = 2.9 Hz), 5.83 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 5.72 (d, 0.5H, J = 8.7 Hz), 5.46-5.41 (m, 0.5H), 5.34-5.27 (M, 5H), 2.90-2.86 (m, 0.5H), 2.72-2.64 (m, &lt; RTI ID = (m, 0.5H), 2.47-2.38 (m, 0.5H), 2.36-2.13 (m, 1H), 1.99-1.93 (m, 0.5H), 1.86-1.70 , 3H)

상기에서 얻은 락톤(1당량)과 이미다졸(1.4당량)을 무수 다이메틸포름아마이드(7ml)에 용해시킨 후 0 ^oC로 냉각하여 터트-부틸다이메틸실릴 클로라이드(1.4당량)을 첨가하였다. 상온에서 10분 간 교반 후 물(10ml)를 처리하였다. 에틸아세테이트(X3)로 추출한 유기층을 마그네슘설페이트로 건조 후 여과하여 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:2)로 정제하여 화합물 4를 얻었다. (수율 89%, 334mg)The lactone (1 eq) and the imidazole (1.4 eq) obtained above were dissolved in anhydrous dimethylformamide (7 ml) and then cooled to 0 ^° C and tert-butyl dimethylsilyl chloride (1.4 eq.) Was added. After stirring at room temperature for 10 minutes, water (10 ml) was treated. The organic layer extracted with ethyl acetate (X3) was dried over magnesium sulfate, filtered and purified by flash column chromatography (ethyl acetate: normal-hexane = 1: 2) (Yield: 89%, 334 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz) δ 7.90(m, 2H), 7.67-7.63 (m, 1H), 7.56-7.52(m, 1H), 5.74(dd, 0.5H, J=34.3Hz, J=8.8Hz), 5.60(dd, 0.5H, J=38.5Hz, J=8.5Hz), 5.46-5.38(m, 0.5H), 5.29(td, 0.5H, J=9.5Hz, J=3.7Hz), 4.73 (dd, 0.5H, J=12.5Hz, J=3.7Hz), 4.68-4.53(m, 1.5H), 4.30-4.00(m, 5H), 2.83-2.78(m, 0.5H), 2.67-2.59(m, 0.5H), 2.44-2.08(m, 2H), 1.95-1.90(m, 0.5H), 1.77-1.66(m, 0.5H), 1.30-1.24 (m, 3H), 0.88-0.85(m, 9H), 0.08-0.02(m, 6H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 400MHz) δ 7.90 (m, 2H), 7.67-7.63 (m, 1H), 7.56-7.52 (m, 1H), 5.74 (dd, 0.5H, J = 34.3Hz, J = (M, 0.5H), 5.29 (td, 0.5H, J = 9.5 Hz, J = 3.7 Hz), 5.60 (d, (M, 5H), 2.83-2.78 (m, 0.5H), 2.67-2.59 (m, 3H) (m, 2H), 1.95-1.90 (m, 0.5H), 1.77-1.66 (m, 0.5H), 1.30-1.24 (m, 3H), 0.88-0.85 , 9H), 0.08-0.02 (m, 6H)

단계 step 5: 75: 7 -(3-(- (3- ( terttert -- 부틸디메틸실릴옥시Butyldimethylsilyloxy )) 프로프Professional -1-엔-2-일)-4-(En-2-yl) -4- ( 페닐설포닐Phenylsulfonyl )-2-옥사-바이사이클로[2.2.1]헵탄-3-온의 제조) -2-oxa-bicyclo [2.2.1] heptan-3-one

단계 4에서 얻은 화합물 4(1당량)을 무수 메틸렌클로라이드(210ml)에 용해시킨 후, 팔라듐 아세테이트(0.05당량)과 1,1'-비스(다이페닐포스피노)페로센(0.1당량)을 무수 메텔렌클로라이드에 용해시킨 혼합물을 리플럭스 상태에서 첨가해주었다. 6시간 교반 후 상온으로 온도를 낮추어 용매를 제거한 후, 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:3)으로 정제하여 화합물 5를 얻었다. (수율 87%, 3.84g)Compound 4 (1 eq) obtained in Step 4 was dissolved in anhydrous methylene chloride (210 ml), palladium acetate (0.05 eq) and 1,1'-bis (diphenylphosphino) ferrocene Chloride was added in a reflux state. After stirring for 6 hours, the temperature was lowered to room temperature to remove the solvent, and the residue was purified by flash column chromatography (ethyl acetate: normal-hexane = 1: 3) (Yield: 87%, 3.84 g)

¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz) δ 8.11(d, 2H, J=7.9Hz), 7.65(t, 1H, J=7.4 Hz), 7.53(t, 1H, J=8.0Hz), 5.34(d, 2H, J=19.1Hz), 4.82(s, 1H), 4.17(q, 2H, J=13.6Hz), 3.20(s, 1H), 2.54(td, 1H, J=12.0Hz, J=4.6Hz), 2.08(m, 1H), 1.89(m, 1H), 1.69(m, 1H), 0.89(s, 9H), 0.06(s, 6H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 400MHz) δ 8.11 (d, 2H, J = 7.9Hz), 7.65 (t, 1H, J = 7.4 Hz), 7.53 (t, 1H, J = 8.0Hz), 5.34 (d 2H, J = 19.1 Hz), 4.82 (s, IH), 4.17 (q, 2H, J = 13.6 Hz), 3.20 ), 2.08 (m, IH), 1.89 (m, IH), 1.69 (m,

단계 step 6: 76: 7 -(3-(- (3- ( terttert -- 부틸디메틸실릴옥시Butyldimethylsilyloxy )) 프로프Professional -1-엔-2-일)-2-옥사--1-en-2-yl) -2-oxa- 바이사이클로[2.2.1]헵탄Bicyclo [2.2.1] heptane -3-온의 제조-3-one

단계 5에서 얻은 화합물 5(1당량)와 보릭 에시드(9.6당량)을 무수 메탄올(8ml)에 용해시킨 후 5% 소듐 머큐리 아말감(7.6당량)을 상온에서 첨가하였다. 3시간 교반 후 다이에틸이서(20ml) 및 암모늄클로라이드 용액(30ml)를 처리하였다. 다이에틸이서(X2)로 추출한 유기층을 마그네슘설페이트로 건조 후 여과하여 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:6)으로 정제하여 화합물 6을 얻었다. (수율 93%, 200mg)Compound 5 (1 eq) and boric acid (9.6 eq.) Obtained in Step 5 were dissolved in anhydrous methanol (8 ml) and then 5% sodium mercury amalgam (7.6 eq.) Was added at room temperature. After stirring for 3 hours, diethyl ether (20 ml) and ammonium chloride solution (30 ml) were treated. The organic layer extracted with diethyl ether (X2) was dried over magnesium sulfate, filtered, and purified by flash column chromatography (ethyl acetate: normal-hexane = 1: 6) (Yield: 93%, 200 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz) δ 5.18(s, 1H), 5.04(s, 1H), 4.86(s, 1H), 4.13(t, 2H, J=14.7Hz), 2.94 (d, 1H, J=3.4Hz), 2.66(s, 1H), 2.05-1.92(m, 3H), 1.81-1.75(m, 1H), 0.88(s, 9H), 0.05(s, 6H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 400MHz) δ 5.18 (s, 1H), 5.04 (s, 1H), 4.86 (s, 1H), 4.13 (t, 2H, J = 14.7Hz), 2.94 (d, 1H, (M, 3H), 1.81-1.75 (m, 1H), 0.88 (s, 9H), 0.05 (s, 6H)

단계 7: (Step 7: ( 1R,2R,3S1R, 2R, 3S )-3-() -3- ( 하이드록시메틸Hydroxymethyl )-2-(3-) -2- (3- 하이드록시프로프Hydroxypropyl -1-엔-2-일)-1-en-2-yl) 사이클로펜탄올의Cyclopentanol 제조 Produce

단계 6에서 얻은 화합물 6(1당량)을 무수 다이에틸이서(8ml)에 용해시킨 후 0 ^oC로 냉각하여 리튬보로하이드라이드(3.75당량)과 무수 메탄올(5.6당량)을 첨가하였다. 4시간 교반 후 물(10ml)를 처리하였다. 다이에틸이서(X2)로 추출한 유기층을 마그네슘설페이트로 건조 후 여과하여 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:2)로 정제하여 사이클로펜탄 실릴 이서를 얻었다. (수율96%, 206mg)Compound 6 (1 eq.) Obtained in Step 6 was dissolved in anhydrous diethyl ether (8 ml), cooled to 0 ^° C, and lithium borohydride (3.75 eq.) And anhydrous methanol (5.6 eq.) Were added. After stirring for 4 hours, water (10 ml) was treated. The organic layer extracted with diethyl ether (X2) was dried over magnesium sulfate, filtered, and purified by flash column chromatography (ethyl acetate: normal-hexane = 1: 2) to obtain cyclopentanylsilyl ether. (Yield: 96%, 206 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz) δ 5.28 (s, 1H), 5.13 (s, 1H), 4.30-4.26 (m, 1H), 4.18 (d, 1H, J = 12.2 Hz), 4.10 (d, 1H, J = 12.2 Hz), 3.62 (dd, 1H, J = 12.5 Hz, J = 3.4 Hz), 3.35 (dd, 1H, J = 11.1 Hz, J = 5.5 Hz), 2.69 (dd, 1H, J = 8.6 Hz, J = 4.3 Hz), 2.40 (m, 1H), 1.89-1.73 (m, 4H), 0.90 (s, 9H), 0.09 (s, 6H) ¹ H-NMR (CDCl ₃ , 400 MHz)? 5.28 (s, 1H), 5.13 (s, 1H), 4.30-4.26 1H, J = 12.2 Hz), 3.62 (dd, 1H, J = 12.5 Hz, J = 3.4 Hz), 3.35 4H), 0.90 (s, 9H), 0.09 (s, 6H)

상기에서 얻은 사이클로펜탄 실릴 이서(1당량)을 무수 테트라하이드로퓨란(15ml)에 용해시킨 후 상온에서 테트라-노말-뷰틸암모늄플루오라이드(1.1당량)을 첨가하여 30분 간 교반하였다. 용매를 제거한 후, 플래쉬 컬럼크로마토그래피(메틸렌클로라이드:메탄올=9:1)로 정제하여 화합물 7을 얻었다. (수율 100%, 124mg)Cyclopentanylsilyl isocyanate (1 eq) obtained above was dissolved in anhydrous tetrahydrofuran (15 ml), tetra-n-butylammonium fluoride (1.1 eq.) Was added at room temperature, and the mixture was stirred for 30 minutes. After the solvent was removed, the residue was purified by flash column chromatography (methylene chloride: methanol = 9: 1) to obtain Compound 7. (Yield: 100%, 124 mg)

¹H-NMR(CD₃OD, 400MHz) δ 5.25(d, 2H, J=18.4Hz), 4.26(q, 1H, J=4.4Hz), 4.01(s, 2H), 3.51(m, 2H), 2.63(dd, 1H, J=8.2Hz, J=4.5Hz), 2.40-2.38(m, 1H), 1.89-1.82(m, 2H), 1.79-1.69(m, 2H) _{^{1 H-NMR (CD 3 OD}} , 400MHz) δ 5.25 (d, 2H, J = 18.4Hz), 4.26 (q, 1H, J = 4.4Hz), 4.01 (s, 2H), 3.51 (m, 2H), 2.63 (dd, 1H, J = 8.2 Hz, J = 4.5 Hz), 2.40-2.38 (m, 1H), 1.89-1.82 (m, 2H), 1.79-1.69

단계 8Step 8 : : (( 3aR,4S,6aR3aR, 4S, 6aR )-4-()-4-( 하이드록시메틸Hydroxymethyl )-3-메틸렌-) -3-methylene- 헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란Hexahydrocyclopenta [b] furan -2-온의 제조 (&Lt; / RTI &gt; 화합물8Compound 8 ))

단계 7에서 얻은 화합물 7(1당량)을 무수 테트라하이드로퓨란(12ml)에 용해시킨 후 상온에서 망간 다이옥사이드(40당량)을 첨가하였다. 상온에서 12시간 교반 후 셀라이트로 필터하였다. 용매를 제거한 후, 플래쉬 컬럼크로마토그래피(메틸렌클로라이드:메탄올=9:1)로 정제하여 표제화합물(화합물 8)을 얻었다. (수율 91%, 46.7mg)Compound 7 (1 eq.) Obtained in Step 7 was dissolved in anhydrous tetrahydrofuran (12 ml) and manganese dioxide (40 eq.) Was added at room temperature. After stirring at room temperature for 12 hours, the mixture was filtered with Celite. The solvent was removed, and the residue was purified by flash column chromatography (methylene chloride: methanol = 9: 1) to obtain the title compound (Compound 8). (Yield: 91%, 46.7 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz) δ 6.39(d, 1H, J=1.8Hz), 5.85(d, 1H, J=1.0Hz), 5.00(t, 1H, J=5.9Hz), 3.69(dd, 1H, J=10.5Hz, J=5.6Hz), 3.64-3.56(m, 2H), 2.32-2.24(m, 1H), 2.14(dd, 1H, J=13.4Hz, J=6.4Hz), 1.79-1.69(m, 2H), 1.29-1.18(m, 1H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 400MHz) δ 6.39 (d, 1H, J = 1.8Hz), 5.85 (d, 1H, J = 1.0Hz), 5.00 (t, 1H, J = 5.9Hz), 3.69 (dd 1H, J = 10.5 Hz, J = 5.6 Hz), 3.64-3.56 (m, 2H), 2.32-2.24 -1.69 (m, 2 H), 1.29-1.18 (m, 1 H)

<실시예 <Embodiment 22 > >

(( 3aS,4R,6aR3aS, 4R, 6aR )-3a-) -3a- 하이드록시Hydroxy -4-(-4-( 하이드록시메틸Hydroxymethyl )-3-메틸렌-) -3-methylene- 헥사하이드로사이Hexahydroxy 클로펜타[b]퓨란-2-온의제조 (화합물 9)Preparation of chloropenta [b] furan-2-one (Compound 9)

상기<실시예 1>에서 얻은 화합물 8(1당량)을 무수 1,4-다이옥세인(2ml)에 용해시킨 후 리플럭스 상태에서 셀레늄 다이옥사이드(16당량)을 첨가하였다. 24시간 교반 후 셀라이트로 필터하였다. 용매를 제거한 후, 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트)로 정제하여 화합물 9를 얻었다. (수율 90%, 26.5mg)Compound 8 (1 eq.) Obtained in Example 1 above was dissolved in anhydrous 1,4-dioxane (2 ml) and selenium dioxide (16 eq) was added under reflux. After stirring for 24 hours, the mixture was filtered with Celite. The solvent was removed, and the residue was purified by flash column chromatography (ethyl acetate) to obtain Compound 9. (Yield: 90%, 26.5 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz) δ 6.60(s, 1H), 6.20(s, 1H), 4.70(d, 1H, J=2.0Hz), 3.83(dd, 1H, J=10.1Hz, J=5.0Hz), 3.58(t, 1H, J=10.0Hz), 2.81 (s, 1H), 2.44-2.36(m, 1H), 2.06-2.01(m, 2H), 1.78-1.72(m, 1H), 1.60(br, 1H), 1.17-1.13(m, 1H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 400MHz) δ 6.60 (s, 1H), 6.20 (s, 1H), 4.70 (d, 1H, J = 2.0Hz), 3.83 (dd, 1H, J = 10.1Hz, J = 2H), 1.78-1.72 (m, 1 H), 2.78 (m, 2H), 3.58 (t, 1.60 (br, 1 H), 1.17-1.13 (m, 1 H)

<실시예 <Embodiment 33 > >

(( 3aR,4S,6aR3aR, 4S, 6aR )-4-()-4-( 브로모메틸Bromomethyl )-3-메틸렌-) -3-methylene- 헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란Hexahydrocyclopenta [b] furan -2-온의 제조(화합물 10)&Lt; / RTI &gt; 2-one (Compound 10)

상기<실시예 1>에서 얻은 화합물 8(1당량)을 무수 톨루엔(0.8ml)에 용해시킨 후 상온에서 카본 테트라브로마이드(5당량), 트라이옥틸포스핀(5당량)을 첨가하고 80 ^oC에서 2시간 교반하였다. 용매를 제거한 후, 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=3:1)로 정제하여 화합물 10을 얻었다. (수율 100%, 19.7mg)Was added to the <Example 1> carbon tetrabromide (5 equivalents), tri-octyl phosphine (5 equiv.) At room temperature was dissolved to obtain compound 8 (1 equivalent) in anhydrous toluene (0.8ml) at 80 ^o C, and in And stirred for 2 hours. The solvent was removed, and the residue was purified by flash column chromatography (ethyl acetate: n-hexane = 3: 1) to obtain Compound 10. (Yield: 100%, 19.7 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz) δ 6.45(d, 1H, J=2.3Hz), 6.04(d, 1H, J=1.9Hz), 5.03(t, 1H, J=5.8Hz), 3.61(dd, 1H, J=8.6Hz, J=6.7Hz), 3.44(dd, 1H, J=10.2Hz, J=5.4Hz), 3.27(t, 1H, J=10.0Hz), 2.53-2.45(m, 1H), 2.16(dd, 1H, J=14.1Hz, J=5.9Hz), 1.88-1.74(m. 2H), 1.29-1.26(m, 1H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 400MHz) δ 6.45 (d, 1H, J = 2.3Hz), 6.04 (d, 1H, J = 1.9Hz), 5.03 (t, 1H, J = 5.8Hz), 3.61 (dd 1H, J = 8.6 Hz, J = 6.7 Hz), 3.44 (dd, 1H, J = 10.2 Hz, J = 5.4 Hz), 3.27 ), 2.16 (dd, 1H, J = 14.1 Hz, J = 5.9 Hz), 1.88-1.74 (m, 2H), 1.29-1.26

<실시예 <Embodiment 44 > >

(( 3aS,4S,6aR3aS, 4S, 6aR )-4-()-4-( 브로모메틸Bromomethyl )-3a-) -3a- 하이드록시Hydroxy -3-메틸렌--3-methylene- 헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란Hexahydrocyclopenta [b] furan -2-온의제조(화합물 11)&Lt; / RTI &gt; 2-one (Compound 11)

상기 <실시예 2>에서 얻은 화합물 9(1당량)를 무수 톨루엔(0.8ml)에 용해시킨 후 상온에서 카본 테트라브로마이드(5당량), 트라이옥틸포스핀(5당량)을 첨가하고 80 ^oC에서 2시간 교반하였다. 용매를 제거한 후, 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=3:1)로 정제하여 화합물 11을 얻었다. (수율 85%, 10.2mg)Was added to the <Example 2> carbon tetrabromide (5 equivalents), tri-octyl phosphine (5 equiv.) At room temperature was dissolved to obtain Compound 9 (1 equivalent) in anhydrous toluene (0.8ml) at 80 ^o C, and in And stirred for 2 hours. The solvent was removed, and the residue was purified by flash column chromatography (ethyl acetate: n-hexane = 3: 1) to obtain Compound 11. (Yield: 85%, 10.2 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 600MHz) δ 6.57(s, 1H), 6.20(s, 1H), 4.27(d, 1H, J=4.1Hz), 3.36-3.27(m, 2H), 2.60-2.55(m, 1H), 2.07-1.97(m, 2H), 1.33-1.27(m. 2H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 600MHz) δ 6.57 (s, 1H), 6.20 (s, 1H), 4.27 (d, 1H, J = 4.1Hz), 3.36-3.27 (m, 2H), 2.60-2.55 ( m, 1 H), 2.07-1.97 (m, 2H), 1.33-1.27 (m, 2H)

<실시예 <Embodiment 55 > >

(( 3aS,4S,6aR3aS, 4S, 6aR )-4-()-4-( 브로모메틸Bromomethyl )-3a-) -3a- 메톡시Methoxy -3-메틸렌--3-methylene- 헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란Hexahydrocyclopenta [b] furan -2-온의제조(화합물 12)-2-one (Compound 12)

상기<실시예 4>에서 얻은 화합물 11(1당량)을 무수 메틸렌클로라이드(1ml)에 용해시킨 후 빛을 차단한 상태에서 아이오도메탄(10당량)과 실버 옥사이드(10당량)을 첨가하여 리플럭스 해주었다. 12시간 교반 후 셀라이트로 필터하였다. 용매를 제거한 후, 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:3)으로 정제하여 화합물 12를 얻었다. (수율 86%, 8.2mg)The compound 11 (1 equivalent) obtained in Example 4 was dissolved in anhydrous methylene chloride (1 ml), and then iodomethane (10 equivalents) and silver oxide (10 equivalents) were added while the light was blocked, I did it. After stirring for 12 hours, the mixture was filtered through cellite. The solvent was removed, and the residue was purified by flash column chromatography (ethyl acetate: n-hexane = 1: 3) to obtain Compound 12. (Yield: 86%, 8.2 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 500MHz) δ 6.71(s, 1H), 5.91(s, 1H), 4.91(d, 1H, J=5.3Hz), 3,42(dd, 1H, J=10.0Hz, J=5.6Hz), 3.16(s, 3H), 3.13(t, 1H, J=9.6Hz), 2.59-2.51(m, 1H), 2.16-1.88(m, 3H), 1.30-1.23(m, 1H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 500MHz) δ 6.71 (s, 1H), 5.91 (s, 1H), 4.91 (d, 1H, J = 5.3Hz), 3,42 (dd, 1H, J = 10.0Hz, 1H, J = 5.6 Hz), 3.16 (s, 3H), 3.13 (t, 1H, J = 9.6 Hz), 2.59-2.51 (m, 1H), 2.16-1.88 )

<< 실시예Example 6> 6>

(( 3aS,4R,6aR3aS, 4R, 6aR )-3a-) -3a- 하이드록시Hydroxy -4-(-4-( 메톡시메틸Methoxymethyl )-3-메틸렌-) -3-methylene- 헥사하이드로사이클로Hexahydrocyclo 펜타[b]퓨란-2-온의 제조(화합물 13)Penta [b] furan-2-one (Compound 13)

상기<실시예 2>에서 얻은 화합물 9(1당량)를 무수 메틸렌클로라이드(1ml)에 용해시킨 후 빛을 차단한 상태에서 아이오도메탄(10당량)과 실버 옥사이드(10당량)을 첨가하여 리플럭스 해주었다. 12시간 교반 후 셀라이트로 필터하였다. 용매를 제거한 후, 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:3)으로 정제하여 화합물 13을 얻었다. (수율 60%, 3.7mg)Compound (9) (1 equivalent) obtained in Example 2 was dissolved in anhydrous methylene chloride (1 ml), and then iodomethane (10 equivalents) and silver oxide (10 equivalents) I did it. After stirring for 12 hours, the mixture was filtered through cellite. The solvent was removed, and the residue was purified by flash column chromatography (ethyl acetate: n-hexane = 1: 3) to obtain Compound 13. (Yield: 60%, 3.7 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 600MHz) δ 6.56(s, 1H), 5.98(s, 1H), 4.69-4.68(m, 1H), 3.46(dd, 1H, J=9.2Hz, J=4.6Hz), 3.33(s, 3H), 3.26(dd, 1H, J=9.8Hz,), 2.46-2.40(m, 1H), 2.04-2.00(m, 2H), 1,74-1,72(m, 1H), 1.20-1.17(m, 1H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 600MHz) δ 6.56 (s, 1H), 5.98 (s, 1H), 4.69-4.68 (m, 1H), 3.46 (dd, 1H, J = 9.2Hz, J = 4.6Hz) , 3.33 (s, 3H), 3.26 (dd, IH, J = 9.8 Hz), 2.46-2.40 (m, IH), 2.04-2.00 (m, 2H), 1.74-1.72 ), 1.20-1.17 (m, 1 H)

<< 실시예Example 7>  7>

(( 3aS,4R,6aR3aS, 4R, 6aR )-4-()-4-( 하이드록시메틸Hydroxymethyl )-3a-) -3a- 메톡시Methoxy -3-메틸렌--3-methylene- 헥사하이드로사이클로Hexahydrocyclo 펜타[b]퓨란-2-온의 제조(화합물 14)Penta [b] furan-2-one (Compound 14)

상기<실시예 2>에서 얻은 화합물 9(1당량)를 무수 메틸렌클로라이드(1ml)에 용해시킨 후 빛을 차단한 상태에서 아이오도메탄(10당량)과 실버 옥사이드(10당량)을 첨가하여 리플럭스 해주었다. 12시간 교반 후 셀라이트로 필터하였다. 용매를 제거한 후, 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:3)으로 정제하여 화합물 14를 얻었다. (수율 25%, 1.6mg)Compound (9) (1 equivalent) obtained in Example 2 was dissolved in anhydrous methylene chloride (1 ml), and then iodomethane (10 equivalents) and silver oxide (10 equivalents) I did it. After stirring for 12 hours, the mixture was filtered through cellite. The solvent was removed, and the residue was purified by flash column chromatography (ethyl acetate: n-hexane = 1: 3) to obtain Compound 14. (Yield: 25%, 1.6 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 600MHz) δ 6.78(s, 1H), 6.09(s, 1H), 4.87(d, 1H, J=5.9), 3.70-3.66(m, 1H), 3.61-3.56(m, 1H), 3.18(s, 3H), 2.42-2.36(m, 1H), 2.00-1.94(m, 1H), 1.81-1.77(m, 1H), 1.21-1.17(m, 2H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 600MHz) δ 6.78 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 4.87 (d, 1H, J = 5.9), 3.70-3.66 (m, 1H), 3.61-3.56 (m 2H), 1.21-1.17 (m, 2 H), 1.81-1.77 (m,

<< 실시예Example 8> 8>

(( 3aS,4R,6aR3aS, 4R, 6aR )-3a-) -3a- 메톡시Methoxy -4-(-4-( 메톡시메틸Methoxymethyl )-3-메틸렌-) -3-methylene- 헥사하이드로사이클로펜Hexahydrocyclopene 타[b]퓨란-2-온의제조 (화합물 15)(B) furan-2-one (Compound 15)

상기<실시예 2>에서 얻은 화합물 9(1당량)를 무수 메틸렌클로라이드(1ml)에 용해시킨 후 빛을 차단한 상태에서 아이오도메탄(10당량)과 실버 옥사이드(10당량)을 첨가하여 리플럭스 해주었다. 12시간 교반 후 셀라이트로 필터하였다. 용매를 제거한 후, 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:3)으로 정제하여 화합물 15를 얻었다.Compound (9) (1 equivalent) obtained in Example 2 was dissolved in anhydrous methylene chloride (1 ml), and then iodomethane (10 equivalents) and silver oxide (10 equivalents) I did it. After stirring for 12 hours, the mixture was filtered through cellite. The solvent was removed, and the residue was purified by flash column chromatography (ethyl acetate: n-hexane = 1: 3) to obtain Compound 15.

¹H-NMR(CDCl₃, 600MHz) δ 6.68(s, 1H), 5.91(s, 1H), 4.85(d, 1H, J=5.5Hz), 3.29-3.28(m, 2H), 3.27(s, 3H), 3.17(s, 3H), 2.47-2.41(m, 1H), 2.06-2.03(m, 1H), 1.96-1.89(m, 1H), 1.87-1.82(m, 1H), 1.30-1.26(m, 1H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 600MHz) δ 6.68 (s, 1H), 5.91 (s, 1H), 4.85 (d, 1H, J = 5.5Hz), 3.29-3.28 (m, 2H), 3.27 (s, (M, 1H), 1.17-1.82 (m, 1H), 1.30-1.26 (m, m, 1H)

<< 실시예Example 9>  9>

(( 3aS,4S,6aR3aS, 4S, 6aR )-4-()-4-( 플루오로메틸Fluoromethyl )-3a-) -3a- 하이드록시Hydroxy -3-메틸렌--3-methylene- 헥사하이드로사이클Hexahydrocyclic 로펜타[b]퓨란-2-온의 제조(화합물 16)B] furan-2-one (Compound 16)

상기<실시예 2>에서 얻은 화합물 9(1당량)을 무수 메틸렌클로라이드(2ml)에 용해시킨 후 0 ^oC로 냉각하여 다이에틸아미노설퍼 트라이플루오라이드(2당량)을 첨가하였다. 상온에서 12시간 교반 후 소듐바이카보네이트 용액(1ml)를 처리하였다. 메틸렌클로라이드(X2)로 추출한 유기층을 마그네슘설페이트로 건조 후 여과하여 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:1)로 정제하여 화합물 16을 얻었다. (수율 100%, 7.8mg)Compound 9 (1 eq.) Obtained in Example 2 above was dissolved in anhydrous methylene chloride (2 ml), cooled to 0 ^° C and diethylaminosulfur trifluoride (2 eq.) Was added. After stirring at room temperature for 12 hours, sodium bicarbonate solution (1 ml) was treated. The organic layer extracted with methylene chloride (X2) was dried over magnesium sulfate, filtered, and purified by flash column chromatography (ethyl acetate: n-hexane = 1: 1) (Yield: 100%, 7.8 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 500MHz) δ 5.22(s, 1H), 5.12(s, 1H), 5.06-5.03(m, 1H), 4.74-4.56(m, 2H), 3.34-3.27(m, 1H), 2.40-2.29(m, 2H), 2.16-2.10(m. 1H), 1.49-1.43(m, 1H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 500MHz) δ 5.22 (s, 1H), 5.12 (s, 1H), 5.06-5.03 (m, 1H), 4.74-4.56 (m, 2H), 3.34-3.27 (m, 1H ), 2.40-2.29 (m, 2H), 2.16-2.10 (m, 1H), 1.49-1.43 (m,

<< 실시예Example 10> 10>

(( 3aS,4S,6aR3aS, 4S, 6aR )-4-()-4-( 클로로메틸Chloromethyl )-3a-) -3a- 하이드록시Hydroxy -3-메틸렌--3-methylene- 헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란Hexahydrocyclopenta [b] furan -2-온의제조(화합물 17)-2-one (Compound 17)

상기<실시예 2>에서 얻은 화합물 9(1당량)을 무수 메틸렌클로라이드(0.4ml)에 용해시킨 후 0 ^oC로 냉각하여 트라이에틸아민(2당량), 메탄설포닐 클로라이드(1.5당량)을 첨가하였다. 상온에서 30분간 교반 후 물(0.5ml)를 처리하였다. 메틸렌클로라이드(X2)로 추출한 유기층을 마그네슘설페이트로 건조 후 여과하여 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트)로 정제하여 3차 알콜을 얻었다. (수율 100%, 9.3mg)Compound 9 (1 equivalent) obtained in Example 2 was dissolved in anhydrous methylene chloride (0.4 ml), followed by cooling to 0 ^° C. Triethylamine (2 eq.), Methanesulfonyl chloride (1.5 eq.) Respectively. After stirring at room temperature for 30 minutes, water (0.5 ml) was treated. The organic layer extracted with methylene chloride (X2) was dried over magnesium sulfate, filtered and purified by flash column chromatography (ethyl acetate) to obtain a tertiary alcohol. (Yield: 100%, 9.3 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz) δ 6.60(s, 1H), 6.08(s, 1H), 4.67(d, 1H, J=4.6Hz), 4.26(dd, 1H, J=10.4Hz, J=5.7Hz), 4.13(dd, 1H, J=10.5Hz, J=8.2Hz), 3.03(s, 3H), 2.66-2.57(m, 1H), 2.14-2.02(m, 2H), 2.00-1.92(m, 1H), 1.43-1.32(m, 1H) ¹ H-NMR (CDCl ₃ , 400 MHz)? 6.60 (s, 1H), 6.08 (s, 1H), 4.67 (d, 1H, J = 4.6 Hz), 4.26 (M, 2H), 2.00-1.92 (m, 2H), 4.13 (dd, 1H, J = 10.5 Hz, J = 8.2 Hz) m, 1 H), 1.43-1.32 (m, 1 H)

상기에서 얻은 3차 알코올(1당량)을 무수 다이메틸포름아마이드(0.5ml)에 용해시킨 후 리튬 클로라이드(10당량)을 첨가하였다. 65 ^oC로 가열하여 12시간 교반 후, 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:1)로 정제하여 화합물 17을 얻었다. (수율 95%, 1.1mg)The tertiary alcohol (1 eq) obtained above was dissolved in anhydrous dimethylformamide (0.5 ml) and lithium chloride (10 eq.) Was added. The mixture was heated to 65 ^° C and stirred for 12 hours, and then purified by flash column chromatography (ethyl acetate: normal-hexane = 1: 1) to obtain Compound 17. (Yield: 95%, 1.1 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz) δ 6.60(s, 1H), 6.19(s, 1H), 4.70(d, 1H, J=28.2Hz), 3.53-3.44(m, 2H), 2.56-2.49(m. 1H), 2.46(br, 1H), 2.04(m, 2H), 1.31(m, 2H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 400MHz) δ 6.60 (s, 1H), 6.19 (s, 1H), 4.70 (d, 1H, J = 28.2Hz), 3.53-3.44 (m, 2H), 2.56-2.49 ( (m, 2H), 1.31 (m, 2H), &lt; RTI ID =

<< 실시예Example 11>  11>

(( 3aS,4S,6aR3aS, 4S, 6aR )-3a-) -3a- 하이드록시Hydroxy -4-(-4-( 아이오도메틸Iodomethyl )-3-메틸렌-) -3-methylene- 헥사하이드로사이클Hexahydrocyclic 로펜타[b]퓨란-2-온의 제조(화합물 18)B] furan-2-one (Compound 18)

상기<실시예 4>에서 얻은 화합물 11(1당량)을 아세톤(1ml)에 용해시킨 후, 소듐 아이오다이드(5당량)을 첨가하였다. 50 ^oC로 가열하여 24시간 교반하였다. 용매를 제거한 후 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:2)로 정제하여 화합물 18을 얻었다. (수율 92%, 2.2mg)Compound 11 (1 equivalent) obtained in Example 4 was dissolved in acetone (1 ml) and sodium iodide (5 eq.) Was added. The mixture was heated to 50 ^° C and stirred for 24 hours. The solvent was removed, and the residue was purified by flash column chromatography (ethyl acetate: n-hexane = 1: 2) to obtain Compound 18. (Yield: 92%, 2.2 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 800MHz) δ 6.57(s, 1H), 6.16(s, 1H), 4.77(d, 1H, J=4.4Hz), 3.15(dd, 1H, J=9.8Hz, J=6.8Hz), 2.97(dd, 1H, J=9.8Hz, J=8.4Hz), 2.57-2.52(m, 1H), 2.44(br, 1H), 2.17-2.14(m, 1H), 2.03-1.96(m, 3H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 800MHz) δ 6.57 (s, 1H), 6.16 (s, 1H), 4.77 (d, 1H, J = 4.4Hz), 3.15 (dd, 1H, J = 9.8Hz, J = 1H), 2.97 (br, 1H), 2.17-2.14 (m, 1H), 2.03-1.96 (m, 1H), 2.97 (dd, 1H, J = 9.8Hz, J = 8.4Hz), 2.57-2.52 m, 3H)

<< 실시예Example 12> 12>

(( 3aS,4S,6aR3aS, 4S, 6aR )-4-()-4-( 브로모메틸Bromomethyl )-3a-) -3a- 에톡시Ethoxy -3-메틸렌--3-methylene- 헥사하이드로사이클로펜Hexahydrocyclopene 타[b]퓨란-2-온의 제조(화합물 19)(B) furan-2-one (Compound 19)

상기<실시예 4>에서 얻은 화합물 11(1당량)을 무수 메틸렌클로라이드(1ml)에 용해시킨 후 빛을 차단한 상태에서 아이오도에탄(10당량)과 실버 옥사이드(10당량)을 첨가하여 리플럭스 해주었다. 12시간 교반 후 셀라이트로 필터하였다. 용매를 제거한 후, 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:2)로 정제하여 화합물 19를 얻었다. (수율 55%, 3.1mg)Compound 11 (1 equivalent) obtained in Example 4 was dissolved in anhydrous methylene chloride (1 ml), and then iodoethane (10 equivalents) and silver oxide (10 equivalents) were added under reflux to obtain reflux I did it. After stirring for 12 hours, the mixture was filtered through cellite. The solvent was removed, and the residue was purified by flash column chromatography (ethyl acetate: n-hexane = 1: 2) to obtain Compound 19. (Yield: 55%, 3.1 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 800MHz) δ 6.66(s, 1H), 5.88(s, 1H), 4.90(d, 1H, J=5.4Hz), 3.47(dd, 1H, J=9.9Hz, J=5.2Hz), 3.40-3.37(m, 1H), 3.25-3.22(m, 1H), 3.11(t, 1H, J=9.8Hz), 2.58-2.54(m, 1H), 2.15-2.12(m, 1H), 2.06-2.04(dd, 1H, J=14.5Hz, J=5.8Hz), 1.96-1.91(m, 1H), 1.27-1.24(m, 1H), 1.16(t, 3H, J=7.0Hz) ¹ H-NMR (CDCl ₃ , 800 MHz)? 6.66 (s, 1H), 5.88 (s, 1H), 4.90 (d, 1H, J = 5.4 Hz), 3.47 1H, J = 9.8Hz), 2.58-2.54 (m, 1H), 2.15-2.12 (m, 1H), 3.40-3.37 ), 2.06-2.04 (dd, 1H, J = 14.5 Hz, J = 5.8 Hz), 1.96-1.91 (m, 1H), 1.27-1.24

<< 실시예Example 13> 13>

(( 3aS,4S,6aR3aS, 4S, 6aR )-4-()-4-( 브로모메틸Bromomethyl )-3-메틸렌-2-옥소-) -3-methylene-2-oxo- 헥사하이드로Hexahydro -2H--2H- 사이클로펜Cyclopene 타[b]퓨란-3a-일 아세테이트의 제조(화합물 20)(B) furan-3-ylacetate (Compound 20)

상기<실시예 4>에서 얻은 화합물 11(1당량)을 무수 아세토나이트릴(0.15ml)에 용해시킨 후 아세틸 클로라이드(35당량)을 첨가하여 상온에서 12시간 교반하였다. 용매를 제거한 후, 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:2)로 정제하여 화합물 20을 얻었다. (수율 100%, 2.7mg)Compound 11 (1 equivalent) obtained in Example 4 was dissolved in anhydrous acetonitrile (0.15 ml), followed by addition of acetyl chloride (35 eq.) And the mixture was stirred at room temperature for 12 hours. The solvent was removed, and the residue was purified by flash column chromatography (ethyl acetate: n-hexane = 1: 2) to obtain Compound 20. (Yield: 100%, 2.7 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 800MHz) δ 6.53(s, 1H), 6.04(s, 1H), 5.11(dd, 1H, J=4.8Hz, J=1.9Hz), 3.43(dd, 1H, J=10.3Hz, J=7.0Hz), 3.27(dd, 1H, 10.2Hz, 7.7Hz), 2.86-2.82(m, 1H), 2.12-2.08(m, 2H), 2.08(s, 3H), 2.07-2.02(m, 1H), 1.29-125(m. 1H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 800MHz) δ 6.53 (s, 1H), 6.04 (s, 1H), 5.11 (dd, 1H, J = 4.8Hz, J = 1.9Hz), 3.43 (dd, 1H, J = 2H), 2.08 (s, 3H), 2.07-2.02 (m, 2H), 3.27 (m, 1H), 1.29-125 (m, 1H)

<< 실시예Example 14> 14>

(( 3S,3aR,4S,6aR3S, 3aR, 4S, 6aR )-4-()-4-( 브로모메틸Bromomethyl )-3a-) -3a- 하이드록시Hydroxy -3--3- 메틸methyl -- 헥사하이드로사이클Hexahydrocyclic 로펜타[b]퓨란-2-온의 제조(화합물 21)B] furan-2-one (Compound 21)

상기<실시예 4>에서 얻은 화합물 11(1당량)을 무수 메틸렌클로라이드(1ml)에 용해시킨 후, 크랩트리 카탈리스트(0.5당량)을 첨가하였다. 수소 기체로 치환 후 상온에서 4시간 교반하였다. 용매를 제거한 후, 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:2)로 정제하여 화합물 21을 얻었다. (수율 90%, 1.8mg)Compound 11 (1 equivalent) obtained in Example 4 was dissolved in anhydrous methylene chloride (1 ml), followed by the addition of crabtricatalyst (0.5 eq.). After replacing with hydrogen gas, the mixture was stirred at room temperature for 4 hours. The solvent was removed, and the residue was purified by flash column chromatography (ethyl acetate: n-hexane = 1: 2) to obtain Compound 21. (Yield: 90%, 1.8 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 800MHz) δ 4.57(d, 1H, J=6.3Hz), 3.63(dd, 1H, J=10.1, J=5.3Hz), 3.33(t, 1H, J=10.3Hz), 3.00(q, 1H, J=7.5Hz), 2.52-2.49(m, 1H), 2.21(br, 1H), 2.20-2.13(m, 2H), 2.00-1.96(m, 1H), 1.87-1.82(m, 1H), 1.42(d, 1H, J=7.5Hz) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 800MHz) δ 4.57 (d, 1H, J = 6.3Hz), 3.63 (dd, 1H, J = 10.1, J = 5.3Hz), 3.33 (t, 1H, J = 10.3Hz) , 3.00 (q, IH, J = 7.5 Hz), 2.52-2.49 (m, IH), 2.21 (br, IH), 2.20-2.13 (m, 2H), 2.00-1.96 (m, 1 H), 1.42 (d, 1 H, J = 7.5 Hz)

<< 실시예Example 15>  15>

(( 3S,3aR,4S,6aR3S, 3aR, 4S, 6aR )-4-()-4-( 브로모메틸Bromomethyl )-3a-) -3a- 하이드록시테트라하이드로Hydroxytetrahydro -- 2H,4H2H, 4H -스파이로(사이클로펜타[b]퓨란-3,2'-옥시란)-2-온의 제조(화합물 22)- spiro (cyclopenta [b] furan-3,2'-oxirane) -2-one (Compound 22)

상기<실시예 4>에서 얻은 화합물 11(1당량)을 무수 메틸렌클로라이드(0.4ml)에 용해시킨 후, 0 ^oC로 냉각하여 바나딜 아세틸아세토네이트(0.13당량)을 첨가하였다. 5분간 교반 후 데카인에 용해시킨 5.5몰의 터트-부틸 하이드로퍼옥사이드 용액(10당량)을 같은 온도에서 첨가하였다. 상온에서 1시간 교반 후 소듐설파이트 용액(1ml)를 처리하였다. 다이에틸이서(X2)로 추출한 유기층을 마그네슘설페이트로 건조 후 여과하여 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:1)으로 정제하여 화합물 22를 얻었다. (수율 70%, 3.7mg)Compound 11 (1 eq.) Obtained in Example 4 was dissolved in anhydrous methylene chloride (0.4 ml), cooled to 0 ^° C and vanadyl acetylacetonate (0.13 eq.) Was added. After stirring for 5 minutes, 5.5 mol of a solution of tert-butyl hydroperoxide dissolved in decane (10 equivalents) was added at the same temperature. After stirring at room temperature for 1 hour, sodium sulfite solution (1 ml) was treated. The organic layer extracted with diethyl ether (X2) was dried over magnesium sulfate, filtered and purified by flash column chromatography (ethyl acetate: normal-hexane = 1: 1) to obtain compound 22. (Yield: 70%, 3.7 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 800MHz) δ 4.76(d, 1H, J=4.1Hz), 3.67(d, 1H, J=4.7Hz), 3.53(dd, 1H, J=10.6Hz, J=5.4Hz), 3.42(d, 1H, J=4.7), 3.36(dd, 1H, J=10.6Hz, J=6.9Hz), 2.70-2.66(m, 1H), 2.65(s, 1H), 2.18-2.12(m, 2H), 2.06-2.01(m, 1H), 1.76-1.71(m, 1H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 800MHz) δ 4.76 (d, 1H, J = 4.1Hz), 3.67 (d, 1H, J = 4.7Hz), 3.53 (dd, 1H, J = 10.6Hz, J = 5.4Hz ), 3.42 (d, IH, J = 4.7), 3.36 (dd, IH, J = 10.6 Hz, J = 6.9 Hz), 2.70-2.66 (m, m, 2 H), 2.06-2.01 (m, 1 H), 1.76-1.71 (m, 1 H)

<< 실시예Example 16>  16>

( 3aS,4R,6aR )-3a- 하이드록시 -4-(( 1S,2R )-1- 하이드록시 -2- 메틸부트 -3-엔일)-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온의 제조(화합물 23) (3aS, 4R, 6aR) -3a- hydroxy -4 - ((1S, 2R) -1- hydroxy-2-methyl-but-3-enyl) -3-methylene-hexahydro-cyclopenta [b] furan - 2-one (Compound 23 )

상기<실시예 2>에서 얻은 화합물 9(1당량)을 무수 메틸렌클로라이드(1ml)에 용해시킨 후 데스-마틴 퍼아이오디네인(3당량)을 상온에서 첨가하였다. 30분간 교반 후 혼합물을 무수 소듐 설페이트에 필터하였다. 용매를 제거한 후 얻어진 알데하이드를 무수 메틸렌클로라이드(1.3ml)에 용해시킨 후 -78 ^oC로 냉각하여 타이타늄 테트라클로라이드(3당량)과 (E)-크로틸트라이메틸실레인(13당량)을 첨가하였다. 6시간 교반 후, 소듐 싸이오설페이트 용액(5ml)를 처리하였다. 에틸아세테이트(X2)로 추출한 유기층을 마그네슘설페이트로 건조 후 여과하여 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:2)로 정제하여 화합물 23을 얻었다. (수율 65%, 19.3 mg)Compound 9 (1 equivalent) obtained in Example 2 was dissolved in anhydrous methylene chloride (1 ml), followed by addition of des-martin periodine (3 eq.) At room temperature. After stirring for 30 minutes, the mixture was filtered over anhydrous sodium sulfate. After removal of the solvent, the aldehyde obtained was dissolved in anhydrous methylene chloride (1.3 ml), cooled to -78 ^° C and titanium tetrachloride (3 eq) and (E) -crotyltrimethylsilane (13 eq) were added . After stirring for 6 hours, a solution of sodium thiosulfate (5 ml) was treated. The organic layer extracted with ethyl acetate (X2) was dried over magnesium sulfate, filtered, and purified by flash column chromatography (ethyl acetate: normal-hexane = 1: 2) to obtain Compound 23. (Yield 65%, 19.3 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz) δ 6.33(s, 1H), 5.86(s, 1H), 5.67(ddd, 1H, J=17.9Hz, J=9.6Hz, J=8.4Hz), 5.09-5.03(m, 2H), 4.52(d, 1H, J=4.3 Hz), 3.51(m, 1H), 2.35(td, 1H, J=10.7Hz, J=2.8Hz), 2.26(q, 1H, J=7.2Hz), 2.13-2.09(m, 1H), 1.96-1.89(m, 1H), 1.83-1.77(m, 1H), 1.76(s, 1H), 1.33(d, 1H, J=5.2Hz), 1.23(s, 1H), 1.05(d, 3H, J=1.7Hz) ¹ H-NMR (CDCl ₃ , 400 MHz)? 6.33 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 5.67 (ddd, 1H, J = 17.9 Hz, J = 9.6 Hz, J = 8.4 Hz) (m, 2H), 4.52 (d, 1H, J = 4.3 Hz), 3.51 (m, 1H), 2.35 (td, 1H, J = 10.7Hz, J = 2.8Hz) 1H, J = 5.2 Hz), 2.13-2.09 (m, 1H), 1.96-1.89 (m, 1H), 1.83-1.77 (m, 1.23 (s, 1H), 1.05 (d, 3H, J = 1.7 Hz)

<< 실시예Example 17>  17>

(( 3aS,4R,6aR3aS, 4R, 6aR )-3a-) -3a- 하이드록시Hydroxy -4-((-4-(( 1R,2S1R, 2S )-1-)-One- 하이드록시Hydroxy -2--2- 메틸부트Methyl boot -3-엔일)-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온의 제조(화합물 24)-3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one (Compound 24)

상기<실시예 2>에서 얻은 화합물 9(1당량)을 무수 메틸렌클로라이드(1ml)에 용해시킨 후 데스-마틴 퍼아이오디네인(3당량)을 상온에서 첨가하였다. 30분간 교반 후 혼합물을 무수 소듐 설페이트에 필터하였다. 용매를 제거한 후 얻어진 알데하이드를 무수 메틸렌클로라이드(1.3ml)에 용해시킨 후 -78 ^oC로 냉각하여 타이타늄 테트라클로라이드(3당량)과 (E)-크로틸트라이메틸실레인(13당량)을 첨가하였다. 6시간 교반 후, 소듐 싸이오설페이트 용액(5ml)를 처리하였다. 에틸아세테이트(X2)로 추출한 유기층을 마그네슘설페이트로 건조 후 여과하여 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:2)로 정제하여 화합물 24를 얻었다. (수율 13%, 3.8mg)Compound 9 (1 equivalent) obtained in Example 2 was dissolved in anhydrous methylene chloride (1 ml), followed by addition of des-martin periodine (3 eq.) At room temperature. After stirring for 30 minutes, the mixture was filtered over anhydrous sodium sulfate. After removal of the solvent, the aldehyde obtained was dissolved in anhydrous methylene chloride (1.3 ml), cooled to -78 ^° C and titanium tetrachloride (3 eq) and (E) -crotyltrimethylsilane (13 eq) were added . After stirring for 6 hours, a solution of sodium thiosulfate (5 ml) was treated. The organic layer extracted with ethyl acetate (X2) was dried over magnesium sulfate, filtered and purified by flash column chromatography (ethyl acetate: normal-hexane = 1: 2) (Yield: 13%, 3.8 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 600MHz) δ 6.60(s, 1H), 6.24(s, 1H), 5.86(m, 1H), 5.24(d, 1H, J=10.7Hz), 5.15(d, 1H, J=7.6Hz), 4.72(s, 1H), 3.57(d, 1H, J=10.4Hz), 3.39(s, 1H), 2.32(s, 1H), 2.20(ddd, 1H, J=13.6Hz, J=7.0Hz, J=5.8Hz), 2.05-2.02(m, 1H), 1.78(s, 1H), 1.71-1.68(m, 1H), 1.25-1.13(m, 1H), 1.02(d, 3H, J=7.0Hz) ¹ H-NMR (CDCl ₃ , 600 MHz)? 6.60 (s, IH), 6.24 (s, IH), 5.86 1H, J = 7.6 Hz), 4.72 (s, 1H), 3.57 (d, 1H, J = 10.4 Hz), 3.39 1H, J = 7.0 Hz, J = 5.8 Hz), 2.05-2.02 (m, 1H), 1.78 (s, 1H), 1.71-1.68 , J = 7.0 Hz)

<< 실시예Example 18>  18>

(( 3aS,4R,6aR3aS, 4R, 6aR )-3a-) -3a- 하이드록시Hydroxy -4-((R)-1--4 - ((R) -1- 하이드록시부트Hydroxy Boot -3-엔일)-3-메틸렌--3-enyl) -3-methylene- 헥Phe 사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온의 제조(화합물 25)Preparation of 4-hydroxycyclopenta [b] furan-2-one (Compound 25)

상기<실시예 2>에서 얻은 화합물 9(1당량)를 무수 메틸렌클로라이드(3ml)에 용해시킨 후 데스-마틴 퍼아이오디네인(2당량)을 상온에서 첨가하였다. 30분간 교반 후 혼합물을 무수 소듐 설페이트에 필터하였다. 용매를 제거한 후 얻어진 알데하이드를 무수 메틸렌클로라이드(4ml)에 용해시킨 후 -78 ^oC로 냉각하여 보론 트라이플루오라이드 다이에틸 이서레이트(2당량)과 알릴트라이메틸실레인(5당량)을 첨가하였다. 6시간 교반 후, 소듐 싸이오설페이트 용액(15ml)를 처리하였다. 에틸아세테이트(X2)로 추출한 유기층을 마그네슘설페이트로 건조 후 여과하여 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:2)로 정제하여 화합물 25를 얻었다. (수율 83%, 69.5mg)Compound 9 (1 equivalent) obtained in Example 2 was dissolved in anhydrous methylene chloride (3 ml), followed by addition of des-martin periodine (2 eq.) At room temperature. After stirring for 30 minutes, the mixture was filtered over anhydrous sodium sulfate. After removal of the solvent, the aldehyde obtained was dissolved in anhydrous methylene chloride (4 ml), cooled to -78 ^° C and boron trifluoride diethyl isocyanate (2 eq.) And allyltrimethylsilane (5 eq.) Were added. After stirring for 6 hours, sodium thiosulfate solution (15 ml) was treated. The organic layer extracted with ethyl acetate (X2) was dried over magnesium sulfate, filtered, and purified by flash column chromatography (ethyl acetate: n-hexane = 1: 2) to obtain compound 25. (Yield: 83%, 69.5 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 800MHz) δ 6.59(s, 1H), 6.28(s, 1H), 5.80-5.74(m, 1H), 5.40(d, 1H, J=10.2Hz), 5.20(dd, 1H, J=17.1Hz, J=0.9Hz), 4.17(d, 1H, J=5.1Hz), 3.57(tt, 1H, J=9.5Hz, J=2.5Hz), 2.42-2.39(m, 1H), 2.13-2.08(m, 3H), 2.04-1.99(m, 2H), 1.73-1.70(m, 1H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 800MHz) δ 6.59 (s, 1H), 6.28 (s, 1H), 5.80-5.74 (m, 1H), 5.40 (d, 1H, J = 10.2Hz), 5.20 (dd, 1H, J = 17.1 Hz, J = 0.9 Hz), 4.17 (d, 1H, J = 5.1 Hz), 3.57 (tt, 1H, J = 9.5 Hz, J = 2.5 Hz), 2.42-2.39 , 2.13-2.08 (m, 3H), 2.04-1.99 (m, 2H), 1.73-1.70 (m,

<< 실시예Example 19> 19>

(( 3aS,4R,6aR3aS, 4R, 6aR )-3a-) -3a- 하이드록시Hydroxy -4-((S)-1--4 - ((S) -1- 하이드록시부트Hydroxy Boot -3-엔일)-3-메틸렌--3-enyl) -3-methylene- 헥Phe 사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온의 제조(화합물 26)Preparation of 4-hydroxycyclopenta [b] furan-2-one (Compound 26)

상기<실시예 2>에서 얻은 화합물 9(1당량)를 무수 메틸렌클로라이드(3ml)에 용해시킨 후 데스-마틴 퍼아이오디네인(2당량)을 상온에서 첨가하였다. 30분간 교반 후 혼합물을 무수 소듐 설페이트에 필터하였다. 용매를 제거한 후 얻어진 알데하이드를 무수 메틸렌클로라이드(4ml)에 용해시킨 후 -78 ^oC로 냉각하여 보론 트라이플루오라이드 다이에틸 이서레이트(2당량)과 알릴트라이메틸실레인(5당량)을 첨가하였다. 6시간 교반 후, 소듐 싸이오설페이트 용액(15ml)를 처리하였다. 에틸아세테이트(X2)로 추출한 유기층을 마그네슘설페이트로 건조 후 여과하여 플래쉬 컬럼크로마토그래피(에틸아세테이트:노말-헥산=1:2)로 정제하여 화합물 26을 얻었다. (수율 83%, 69.5mg)Compound 9 (1 equivalent) obtained in Example 2 was dissolved in anhydrous methylene chloride (3 ml), followed by addition of des-martin periodine (2 eq.) At room temperature. After stirring for 30 minutes, the mixture was filtered over anhydrous sodium sulfate. After removal of the solvent, the aldehyde obtained was dissolved in anhydrous methylene chloride (4 ml), cooled to -78 ^° C and boron trifluoride diethyl isocyanate (2 eq.) And allyltrimethylsilane (5 eq.) Were added. After stirring for 6 hours, sodium thiosulfate solution (15 ml) was treated. The organic layer extracted with ethyl acetate (X2) was dried over magnesium sulfate, filtered and purified by flash column chromatography (ethyl acetate: normal-hexane = 1: 2) to obtain Compound 26. (Yield: 83%, 69.5 mg)

¹H-NMR(CDCl₃, 800MHz) δ 6.59(s, 1H), 6.28(s, 1H), 5.80-5.74(m, 1H), 5.40(d, 1H, J=10.2Hz), 5.20(dd, 1H, J=17.1Hz, J=0.9Hz), 4.17(d, 1H, J=5.1Hz), 3.57(tt, 1H, J=9.5Hz, J=2.5Hz), 2.42-2.39(m, 1H), 2.13-2.08(m, 3H), 2.04-1.99(m, 2H), 1.73-1.70(m, 1H) _{^{1 H-NMR (CDCl 3,}} 800MHz) δ 6.59 (s, 1H), 6.28 (s, 1H), 5.80-5.74 (m, 1H), 5.40 (d, 1H, J = 10.2Hz), 5.20 (dd, 1H, J = 17.1 Hz, J = 0.9 Hz), 4.17 (d, 1H, J = 5.1 Hz), 3.57 (tt, 1H, J = 9.5 Hz, J = 2.5 Hz), 2.42-2.39 , 2.13-2.08 (m, 3H), 2.04-1.99 (m, 2H), 1.73-1.70 (m,

상기 실시예 1 내지 19에서 제조한 화합물의 구체적인 구조를 하기 표 1에 나타내었다.The specific structures of the compounds prepared in Examples 1 to 19 are shown in Table 1 below.

실시예 Example 화학구조Chemical structure 실시예 Example 화학구조Chemical structure (1)
(화합물 8)(One)
(Compound 8)

(11)
(화합물 18)(11)
(Compound 18)

(2)
(화합물 9)(2)
(Compound 9)

(12)
(화합물 19)(12)
(Compound 19)

(3)
(화합물 10)(3)
(Compound 10)

(13)
(화합물 20)(13)
(Compound 20)

(4)
(화합물 11)(4)
(Compound 11)

(14)
(화합물 21)(14)
(Compound 21)

(5)
(화합물 12)(5)
(Compound 12)

(15)
(화합물 22)(15)
(Compound 22)

(6)
(화합물 13)(6)
(Compound 13)

(16)
(화합물 23)(16)
(Compound 23)

(7)
(화합물 14)(7)
(Compound 14)

(17)
(화합물 24)(17)
(Compound 24)

(8)
(화합물 15)(8)
(Compound 15)

(18)
(화합물 25)(18)
(Compound 25)

(9)
(화합물 16)(9)
(Compound 16)

(19)
(화합물 26)(19)
(Compound 26)

(10)
(화합물 17)(10)
(Compound 17)

<< 실험예Experimental Example 1> 여러 유방암 세포에서  1> in several breast cancer cells STAT3의Of STAT3 활성화 형태인 p- The active form, p- STAT3(Tyr705)의Of STAT3 (Tyr705) 발현 정도 비교 Comparison of expression level

1-1. 실험준비1-1. Preparation for experiment

여러 유방암 세포에서 STAT3의 활성화 형태인 p-STAT3(Tyr705)의 발현 정도를 비교하기 위하여, 여러 유방암 세포주를 준비하였다.To compare the expression level of p-STAT3 (Tyr705), an activated form of STAT3, in several breast cancer cells, several breast cancer cell lines were prepared.

구체적으로, BT-549, BT-20 및 MDA-MB-468은 삼중 음성 유방암 세포로 구분할 수 있으며, MCF-7 및 T-47D는 루미널 A (Luminal A), SK-BR-3 및 MDA-MB-453 세포는 HER2 positive 유방암 세포로 구분할 수 있다. BT-549 및 MDA-MB-468은 ATCC (American Type Culture Collection)에서 구입하였으며, 그 외 세포는 한국 세포주 은행으로부터 구입하였다. BT-549 및 BT-20은 10% FBS, 100 νg/ml 페니실린 및 스트렙토마이신의 항생제를 함유하는 RPMI 배지를 사용하였으며, 그 외 세포는 10% FBS, 100 νg/ml 페니실린 및 스트렙토마이신의 항생제를 함유하는 DMEM 배지를 사용하였다. 배양은 37℃ 및 5% CO₂ 가 유지되는 배양기에서 배양하였다.Specifically, BT-549, BT-20 and MDA-MB-468 can be classified as triple-negative breast cancer cells, while MCF-7 and T-47D can be classified as Luminal A, SK- MB-453 cells can be divided into HER2 positive breast cancer cells. BT-549 and MDA-MB-468 were purchased from the American Type Culture Collection (ATCC) and other cells were purchased from Korean Cell Line Bank. BT-549 and BT-20 used RPMI medium containing 10% FBS, 100 vg / ml penicillin and streptomycin antibiotics and the other cells were treated with 10% FBS, 100 vg / ml penicillin and streptomycin antibiotics Was used. The culture is 37 ℃ and 5% CO ₂ that is maintained Lt; / RTI &gt;

1-2. 실험방법1-2. Experimental Method

각 유방암 세포를 6-웰 플레이트 (well plate) 에 5-10 X 10⁵ cells/well 농도로 분주하고 37℃ 및 5% CO₂ 조건에서 20-24시간 동안 배양했다. 그런 다음, 세포 전체 단백질 분리는 용해 버퍼 (20 mM HEPES [pH 7.6], 350 mM NaCl, 20% 글리세롤, 0.5 mM EDTA, 0.1 mM EGTA, 1% NP-40, 50 mM NaF, 0.1 mM DTT, 0.1 mM PMSF, 및 프로테아제 저해제 혼한물 (protease inhibitor cocktail)) 를 사용하여 세포 용해물을 수득했다. 정량을 거친 20-30 νg의 단백질을 8% SDS-PAGE gel를 이용하여 100 V 에서 2시간 동안 전기영동하고, 분리된 단백질을 니트로셀룰로오스 멤브레인에 전기적으로 이동시켰다. 멤브레인을 5% 탈지유로 실온에서 1시간 동안 블로킹한 후, 1차 항체 p-STAT3 Tyrosine 705(제품번호: ab76315, Abcam), STAT3(제품번호: GTX104616, GeneTex)를 1/3000 으 희석하여 멤브레인과 4℃에서 16-20시간 동안 반응시켰다. 이 후, 멤브레인을 TBST로 10분간 3회씩 세척한 후 HRP-결합 항-rabbit(제품번호: sc-2004, Santacruz)을 2차 항체로 하여 1:3000의 비율로 희석하여 실온에서 1시간 배양한 후 TBST로 10분간 3회씩 세척하여 화학발광기질 시약을 처리하여 발생시켰다. LAS-1000(푸지필름)을 이용하여 생성된 발광(luminescence)을 검출하여 단백질 발현 정도를 확인하였다. 발현의 정도를 비교하기 위한 대조군으로, 항-β-액틴(actin)(제품번호: sc-47778, Santacruz)을 1차 항체로 사용하여 1:5000의 비율로 상기의 방법과 동일한 방법을 수행하여 β-액틴의 발현을 확인하였다.Each breast cancer cell was seeded in a 6-well plate at a concentration of 5-10 × 10 ⁵ cells / well and cultured at 37 ° C and 5% CO ₂ for 20-24 hours. Then, the whole cell protein separation was carried out in a solution buffer (20 mM HEPES [pH 7.6], 350 mM NaCl, 20% glycerol, 0.5 mM EDTA, 0.1 mM EGTA, 1% NP-40, 50 mM NaF, mM PMSF, and protease inhibitor cocktail) were used to obtain cell lysates. The quantified 20-30 νg of protein was electrophoresed on 8% SDS-PAGE gels at 100 V for 2 hours, and the separated proteins were electrically transferred to the nitrocellulose membrane. Membranes were blocked with 5% skim milk at room temperature for 1 hour and then diluted 1/3000 with primary antibody p-STAT3 Tyrosine 705 (Product No .: ab76315, Abcam), STAT3 (Product No .: GTX104616, GeneTex) And reacted at 4 ° C for 16-20 hours. Then, the membrane was washed with TBST three times for 10 minutes, diluted with HRP-conjugated anti-rabbit (product number: sc-2004, Santacruz) as a secondary antibody at a ratio of 1: 3000 and incubated at room temperature for 1 hour And then washed three times for 10 minutes with TBST to treat the chemiluminescent substrate reagent. Luminescence generated by using LAS-1000 (Puji Film) was detected to confirm the degree of protein expression. As a control group for comparing the degree of expression, anti-beta-actin (product number: sc-47778, Santacruz) was used as a primary antibody and the same method as the above method was performed at a ratio of 1: 5000 beta -actin was expressed.

1-3. 실험결과1-3. Experiment result

하기 도 1에 나타낸 바와 같이 삼중 음성 (Triple-Negative) 유방암 세포인 BT-549, BT-20 및 MDA-MB-468 에서는 STAT3의 활성화 형태인 p-STAT3(Tyr705)가 많이 발현되어 있는 것을 확인하였다. 반면에 루미널 A (Luminal A) 및 HER2 positive 세포에서는 상대적으로 거의 발현되어 있지 않는 것을 확인하였다.As shown in FIG. 1, triple-negative breast cancer cells BT-549, BT-20 and MDA-MB-468 showed a high expression of p-STAT3 (Tyr705), an activated form of STAT3 . Whereas it is relatively rarely expressed in Luminal A and HER2 positive cells.

<< 실험예Experimental Example 2>  2> 신규한New 락톤 유도체의 삼중 음성 유방암 세포 성장 억제 측정 Triple negative breast cancer cell growth inhibition assay of lactone derivatives

2-1. 실험방법2-1. Experimental Method

본 발명에 따른 상기 표 1로 나타낸 실시예 1-19(화합물8-26)의 화합물들이 삼중 음성 유방암 세포의 성장을 억제하는 정도를 알아보기 위하여 다음과 같이 실험을 수행하였다. 구체적으로, MDA-MB-468 세포를 96-웰 플레이트 (well plate) 에 1 X 10⁴ cells/well 농도로 분주하고 37℃ 및 5% CO₂ 조건에서 24시간 동안 배양했다. 그런 다음 실시예 1-19의 화합물들을 DMSO에 용해시켜, 2.5-50 νM 농도로 처리하고 24시간 동안 배양시켰다. 양성 대조군으로서 staurosporine(sc-3510A, Santacruz)을 0.0625-0.5 νM 농도로 처리하였다. 이후, 상기 배양액의 배지를 제거하고 MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 시약을 웰 (well) 당 0.5 mg/ml 로 첨가하고 37C에서 3시간 동안 배양시킨 후 배지를 제거하고 웰 (well) 바닥에 붙은 formazan을 녹이기 위해 DMSO 100 νl를 처리하였다. 그런 다음, 10분 동안 shaker 위에서 흔들어 주고 540nm 파장에서 마이크로플레이트 리더로 흡광도를 측정하여 세포 성장 억제를 확인하였다. 세포 증식이 50%로 억제되는 농도인 IC₅₀ (The half maximal inhibitory concentration)를 구하였으며, 동일한 실험을 3회 실시하여 각 분석 결과의 표준편차를 계산하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다. In order to examine the degree of inhibition of triple negative breast cancer cell growth by the compounds of Example 1-19 (Compound 8-26) shown in Table 1 according to the present invention, the following experiment was conducted. Specifically, MDA-MB-468 cells were plated at a concentration of 1 × 10 ⁴ cells / well in a 96-well plate and cultured at 37 ° C. and 5% CO ₂ for 24 hours. The compounds of Examples 1-19 were then dissolved in DMSO, treated at a concentration of 2.5-50 vM and incubated for 24 hours. As a positive control, staurosporine (sc-3510A, Santacruz) was treated with a concentration of 0.0625-0.5 vM. Then, the medium for the culture was removed and 0.5 mg / ml of MTT (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide) reagent was added per well. , The medium was removed, and 100 μl of DMSO was added to dissolve the formazan attached to the well bottom. The cells were then shaken for 10 minutes on a shaker and the absorbance was measured with a microplate reader at 540 nm wavelength to confirm cell growth inhibition. The IC ₅₀ (the half maximal inhibitory concentration) at which the cell proliferation was suppressed to 50% was obtained. The same experiment was performed three times to calculate the standard deviation of each analysis result. The results are shown in Table 2 below.

2-2. 실험결과2-2. Experiment result

하기 표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 1-19(화합물8-26)의 화합물들을 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 처리하였을 경우에 화합물 10, 화합물 11, 화합물 12, 화합물 16, 화합물 18, 화합물 19 및 화합물 26의 IC₅₀ 값이 50 νM 이하로 나타났다.As shown in the following Table 2, when compounds of Example 1-19 (Compound 8-26) according to the present invention were treated with triple negative breast cancer cells MDA-MB-468 cells, Compound 10, Compound 11, Compound 12 , Compound 16, Compound 18, Compound 19 and Compound 26 showed an IC ₅₀ value of 50 僚 M or less.

실시예 Example IC₅₀(μM)IC ₅₀ ([mu] M) 실시예 Example IC₅₀(μM)IC ₅₀ ([mu] M) (1)
(화합물8)(One)
(Compound 8) > 50> 50 (11)
(화합물18)(11)
(Compound 18) 1 < < 501 < 50 (2)
(화합물9)(2)
(Compound 9) > 50> 50 (12)
(화합물19)(12)
(Compound 19) 1 < < 501 < 50 (3)
(화합물10)(3)
(Compound 10) 1 < < 501 < 50 (13)
(화합물20)(13)
(Compound 20) > 50> 50 (4)
(화합물11)(4)
(Compound 11) 1 < < 501 < 50 (14)
(화합물21)(14)
(Compound 21) > 50> 50 (5)
(화합물12)(5)
(Compound 12) 1 < < 501 < 50 (15)
(화합물22)(15)
(Compound 22) > 50> 50 (6)
(화합물13)(6)
(Compound 13) > 50> 50 (16)
(화합물23)(16)
(Compound 23) > 50> 50 (7)
(화합물14)(7)
(Compound 14) > 50> 50 (17)
(화합물24)(17)
(Compound 24) > 50> 50 (8)
(화합물15)(8)
(Compound 15) > 50> 50 (18)
(화합물25)(18)
(Compound 25) > 50> 50 (9)
(화합물16)(9)
(Compound 16) 1 < < 501 < 50 (19)
(화합물26)(19)
(Compound 26) 1 < < 501 < 50 (10)
(화합물17)(10)
(Compound 17) > 50> 50 staurosporine
(positive control)staurosporine
(positive control) 0.14±0.010.14 ± 0.01

<< 실험예Experimental Example 3>  3> 신규한New 락톤 유도체의 삼중 음성 유방암 세포에서의  Triploid of Lactone Derivatives in Breast Cancer Cells STAT3STAT3 프로모터 활성 억제 평가 Evaluation of inhibition of promoter activity

3-1. 실험방법3-1. Experimental Method

본 발명에 따른 상기 표 1로 나타낸 실시예 1-19(화합물8-26)의 화합물들이 삼중음성유방암 세포에서 STAT3 프로모터 활성을 억제하는 정도를 알아보기 위하여 다음과 같이 실험을 수행하였다.In order to examine the degree of inhibition of the STAT3 promoter activity in the triple-negative breast cancer cells by the compounds of Example 1-19 (Compound 8-26) shown in Table 1 according to the present invention, the following experiment was conducted.

구체적으로, MDA-MB-468 세포를 24-웰 플레이트 (well plate) 에 1-1.5 X 10⁵ cells/well 농도로 분주하고 37℃ 및 5% CO₂ 조건에서 20-24시간 동안 배양했다. 세포에 luciferase (promoter의 활성화 시 형광발현이 되는 효소)가 붙은 STAT3 DNA를 Transfection reagent와 함께 처리하며, 18-24시간 동안 배양시켰다. 실시예 1-19의 화합물들을 DMSO에 용해시켜, 5 νM 농도로 처리하고 24시간 동안 배양시켰다. 음성 대조군으로서 아무런 처리를 하지 않은 것을 도 2에서 NT (non-treatment) 로 나타내었다.Specifically, MDA-MB-468 cells were seeded in a 24-well plate at a concentration of 1-1.5 × 10 ⁵ cells / well and cultured at 37 ° C. and 5% CO ₂ for 20-24 hours. STAT3 DNA with luciferase (an enzyme that induces fluorescence upon activation of the promoter) was treated with the transfection reagent and incubated for 18-24 hours. The compounds of Examples 1-19 were dissolved in DMSO, treated at a concentration of 5 [mu] M and incubated for 24 hours. In FIG. 2, NT (non-treatment) indicates that no treatment was performed as a negative control group.

이후, 각 웰의 배지를 제거하고 PBS (Phosphate-buffered saline)를 이용하여 웰을 세척해주었다. 그리고 1 X lysis reagent를 각 웰에 100 νl씩 분주하여, shaker로 강한 세기로 흔들어서 세포의 lysis 과정을 도와주었다. 15분 정도 후에 Dual-Luciferase Reporter assay kit raagent (Promega LoT 0000188202)와 lysis 후의 용액을 약 30 νl : 20 νl로 혼합하여 Luminometer (Berthold, Centro LB960)로 형광도를 측정하여 Firefly 및 Renilla의 발광도를 계산해주었다. Then, the wells of each well were removed and the wells were washed with PBS (Phosphate-buffered saline). Then, 1 X lysis reagent was dispensed into each well at 100 ν l, and shaken with a shaker to help lysis the cells. After 15 minutes, the luminescence of Firefly and Renilla was measured by using Dual-Luciferase Reporter Assay Kit raagent (Promega LoT 0000188202) and lysis solution mixed with 30 νl: 20 νl and measured with a luminometer (Berthold, Centro LB960) Calculated.

3-2. 실험결과3-2. Experiment result

도 2에 나타낸 바와 같이 삼중음성유방암 세포인 MDA-MB-468세포에 본 발명의 신규 유도체들을 처리하였을 때, STAT3 프로모터 (promoter) 활성을 억제하는 정도를 확인할 수 있었다. 특히 화합물 8-13, 19, 22, 24-26에서 우수한 활성억제효과를 보였다.As shown in FIG. 2, when the novel derivatives of the present invention were treated with MDA-MB-468 cells, a triple-negative breast cancer cell, the degree of suppression of STAT3 promoter activity was confirmed. In particular, compounds 8-13, 19, 22, and 24-26 showed excellent inhibitory activity.

<< 실험예Experimental Example 4> 삼중 음성 유방암 세포인  4> triple-negative breast cancer cells MDAMDA -MB-468 세포에서 화합물 11 및 화합물 12에 의한 -MB-468 cells by Compound 11 and Compound 12 STAT3STAT3 활성 억제 확인 Active inhibition confirmation

4-1. 실험방법4-1. Experimental Method

본 발명에 따른 화합물 11, 화합물 12이 삼중음성유방암 세포에서 STAT3 인산화 및 단백질 발현을 억제하는 정도를 알아보기 위하여 다음과 같이 실험을 수행하였다.In order to examine the degree of inhibition of STAT3 phosphorylation and protein expression in triple negative breast cancer cells, Compound 11 and Compound 12 according to the present invention were tested as follows.

구체적으로, MDA-MB-468 세포를 6-웰 플레이트 (well plate) 에 5-10 X 10⁵ cells/well 농도로 분주하고 37 ℃ 및 5% CO₂ 조건에서 20-24시간 동안 배양했다. 화합물 11 및 화합물 12를 DMSO에 용해시킨 후, 0, 5, 10 νM 농도로 처리하고 4시간 동안 배양시켰다. 또한, 화합물 11 및 화합물 12를 DMSO에 용해시켜, 10 νM 농도로 처리하고 0, 1, 2, 4시간 동안 배양시켰다. 세포 전체 단백질 분리는 용해 완충액 (20 mM HEPES [pH 7.6], 350 mM NaCl, 20% 글리세롤, 0.5 mM EDTA, 0.1 mM EGTA, 1% NP-40, 50 mM NaF, 0.1 mM DTT, 0.1 mM PMSF, 및 프로테아제 저해제 혼합물 (protease inhibitor cocktail)) 를 사용하여 세포 용해물을 수득했다. 정량을 거친 20-30 νg의 단백질을 8% SDS-PAGE gel를 이용하여 100 V 에서 2시간 동안 전기영동하고, 분리된 단백질을 니트로셀룰로오스 멤브레인에 전기적으로 이동시켰다. 멤브레인을 5% 탈지유로 실온에서 1시간 동안 블로킹한 후, 1차 항체 p-STAT3 Tyr705(제품번호: ab76315, Abcam), p-STAT3 Ser727(제품번호: ab32143, Abcam), STAT3(제품번호: GTX104616, GeneTex), p-STAT1 Tyr701(제품번호: ab29045, Abcam), STAT1(제품번호: ab47425, Abcam), p-STAT5 Tyr694(제품번호: ab32364, Abcam), STAT5(제품번호: ab32043, Abcam)를 1:3000으로 희석하여 멤브레인과 4℃에서 16-20시간 동안 반응시켰다. 이후, 멤브레인을 TBST 완충액으로 10분간 3회씩 세척한 후 HRP-결합 항-rabbit(제품번호: sc-2004, Santa Cruz)을 2차 항체로 하여 1:3000의 비율로 희석하여 실온에서 1시간 배양한 후 TBST 완충액으로 10분간 3회씩 세척하여 화학발광기질 시약을 처리하여 발생시켰다. LAS-1000(푸지필름)을 이용하여 생성된 발광(luminescence)을 검출하여 단백질 발현 정도를 확인하였다. 발현의 정도를 비교하기 위한 대조군으로, 항-β-액틴(actin)(제품번호: sc-47778, Santa Cruz)을 1차 항체로 하여 1:5000의 비율로 사용하여 상기의 방법과 동일한 방법을 수행하여 β-액틴의 발현을 확인하였다. Specifically, MDA-MB-468 cells were seeded in a 6-well plate at a concentration of 5-10 × 10 ⁵ cells / well and cultured at 37 ° C. and 5% CO ₂ for 20-24 hours. Compound 11 and Compound 12 were dissolved in DMSO, treated at a concentration of 0, 5, 10 vM and incubated for 4 hours. Further, Compound 11 and Compound 12 were dissolved in DMSO, treated at a concentration of 10 [mu] M, and cultured for 0, 1, 2, and 4 hours. Cell whole protein isolation was performed in a solution buffer (20 mM HEPES pH 7.6, 350 mM NaCl, 20% glycerol, 0.5 mM EDTA, 0.1 mM EGTA, 1% NP- 40, 50 mM NaF, 0.1 mM DTT, 0.1 mM PMSF, And a protease inhibitor cocktail) were used to obtain cell lysates. The quantified 20-30 νg of protein was electrophoresed on 8% SDS-PAGE gels at 100 V for 2 hours, and the separated proteins were electrically transferred to the nitrocellulose membrane. The membranes were blocked with 5% skim milk at room temperature for 1 hour and then incubated with primary antibody p-STAT3 Tyr705 (ab76315, Abcam), p-STAT3 Ser727 (product number: ab32143, Abcam), STAT3 (product number GTX104616 STAT3 (product number: ab32043, Abcam), p-STAT5 Tyr694 (product number: ab32364, Abcam), STAT5 (product number: ab39043, Abcam) 1: 3000 and reacted with the membrane at 4 ° C for 16-20 hours. Then, the membrane was washed with TBST buffer three times for 10 minutes, diluted with HRP-conjugated anti-rabbit (product number: sc-2004, Santa Cruz) as a secondary antibody at a ratio of 1: 3000 and incubated at room temperature for 1 hour And washed three times for 10 minutes with TBST buffer to generate chemiluminescent substrate reagent. Luminescence generated by using LAS-1000 (Puji Film) was detected to confirm the degree of protein expression. Actin (product number: sc-47778, Santa Cruz) was used as a primary antibody in a ratio of 1: 5000 as a control group for comparing the degree of expression, Lt; RTI ID = 0.0 &gt; of-actin &lt; / RTI &gt;

4-2. 실험결과4-2. Experiment result

도 3에 나타난 바와 같이 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때, 유방암 세포에 발현되어 있다고 보고된 STAT 단백질의 패밀리인 STAT1과 STAT5의 활성화는 억제시키지 못하며, 선택적으로 STAT3의 활성화만 억제되는 것을 확인할 수 있었다. 특히 화합물 12는 낮은 농도에서 강한 억제 활성을 나타내었다.As shown in FIG. 3, activation of STAT1 and STAT5, a family of STAT proteins reported to be expressed in breast cancer cells, when MDA-MB-468 cells, which are triple negative breast cancer cells, were treated with the novel derivatives 11 and 12 , And selectively inhibited the activation of STAT3. In particular, Compound 12 showed strong inhibitory activity at low concentrations.

또한, 도 4에 나타난 바와 같이 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때, 시간 의존적으로 p-STAT3(Tyr705) 가 억제되는 것을 확인할 수 있었다 특히 화합물 12는 매우 단시간 안에 STAT3의 활성을 억제시키는 것을 확인하였다.In addition, as shown in FIG. 4, it was confirmed that p-STAT3 (Tyr705) was suppressed in a time-dependent manner when MDA-MB-468 cells, which are triple negative breast cancer cells, were treated with the novel derivatives 11 and 12 Compound 12 was found to inhibit the activity of STAT3 in a very short time.

<< 실험예Experimental Example 5> 삼중 음성 유방암 세포인  5> triple-negative breast cancer cells MDAMDA -MB-468 세포에서 화합물 11 및 화합물 12에 의한 -MB-468 cells by Compound 11 and Compound 12 STAT3의Of STAT3 핵 내로의 이동 억제 확인  Confirm movement inhibition into the nucleus

5-1. 실험방법5-1. Experimental Method

본 발명에 따른 화합물 11 및 화합물 12가 삼중음성유방암 세포에서 STAT3의 핵 내로의 이동을 억제하는 정도를 알아보기 위하여, 웨스턴 블랏을 통한 핵 내 단백질의 발현 확인 및 면역세포화학법 (Immunocytochemistry)를 통한 세포 관찰을 수행하였다.In order to examine the degree of suppression of the migration of STAT3 into the nucleus of triple-negative breast cancer cells, Compound 11 and Compound 12 according to the present invention were examined by Western blot analysis for expression of proteins in the nucleus and immunocytochemistry Cell observation was performed.

웨스턴 블랏을 통한 핵 내 단백질의 발현 확인을 위해서 구체적으로, MDA-MB-468 세포를 6-웰 플레이트 (well plate) 에 5-10 X 10⁵ cells/well 농도로 분주하고 37℃ 및 5% CO₂ 조건에서 20-24시간 동안 배양했다. 화합물 11 및 화합물 12를 DMSO에 용해시켜, 0, 5, 10 νM 농도로 처리하고 4시간 동안 배양시켰다. 세포에 세포질 용해 완충액(10 mM HEPES [pH 7.9], 10 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 0.1 mM EGTA, 1 mM DTT, 1 mM PMSF, 및 프로테아제 저해제 혼합물(protease inhibitor cocktail))와 NP-40을 처리하여 세포막을 터뜨려준 후, 원심분리하여 세포질 용해물을 제거하였다. 남아있는 핵 단백질은 핵 용해 완충액(20 mM HEPES [pH 7.9], 400 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1 mM DTT, 1 mM PMSF, 및 프로테아제 저해제(protease inhibitor cocktail))를 사용하여 세포내 핵 용해물을 수득하였다. 정량을 거친 20-30 νg의 단백질을 8% SDS-PAGE gel를 이용하여 100 V 에서 2시간 동안 전기영동하고, 분리된 단백질을 니트로셀룰로오스 멤브레인에 전기적으로 이동시켰다. 멤브레인을 5% 탈지유로 실온에서 1시간 동안 블로킹한 후, 1차 항체 p-STAT3 Tyr705(제품번호: ab76315, Abcam), STAT3(제품번호: GTX104616, GeneTex)를 1:3000으로 희석하여 멤브레인과 4℃에서 16-20시간 동안 반응시켰다. 이후, 멤브레인을 TBST 완충액으로 10분간 3회씩 세척한 후 HRP-결합 항-rabbit(제품번호: sc-2004, Santa Cruz)을 2차 항체로 하여 1:3000의 비율로 희석하여 실온에서 1시간 배양한 후 TBST 완충액으로 10분간 3회씩 세척하여 화학발광기질 시약을 처리하여 발생시켰다. LAS-1000(푸지필름)을 이용하여 생성된 발광(luminescence)을 검출하여 단백질 발현 정도를 확인하였다. 발현의 정도를 비교하기 위한 대조군으로, 대표적인 핵 단백질 Lamin B(제품번호: sc-6216, Santa Cruz)를 1차 항체로 하여 1:3000으로 사용하고, HRP-결합 항-goat(제품번호: sc-2354, Santa Cruz) 2차 항체를 1:3000의 비율로 사용하여 상기의 방법과 동일한 방법을 수행하여 Lamin B의 발현을 확인하였다.Specifically, MDA-MB-468 cells were seeded in a 6-well plate at a concentration of 5-10 × 10 ⁵ cells / well and cultured at 37 ° C. and 5% CO 2 _{2 &lt; /} RTI &gt; conditions for 20-24 hours. Compound 11 and Compound 12 were dissolved in DMSO, treated at a concentration of 0, 5, 10 vM and incubated for 4 hours. Cells were treated with cytoplasmic lysis buffer (10 mM HEPES pH 7.9, 10 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 0.1 mM EGTA, 1 mM DTT, 1 mM PMSF and protease inhibitor cocktail) and NP-40 After the cell membrane was broken, the cell lysate was removed by centrifugation. The remaining nucleoprotein was isolated from the cells using a nuclear lysis buffer (20 mM HEPES pH 7.9, 400 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 1 mM DTT, 1 mM PMSF and a protease inhibitor cocktail) To obtain an inner nuclear lysate. The quantified 20-30 νg of protein was electrophoresed on 8% SDS-PAGE gels at 100 V for 2 hours, and the separated proteins were electrically transferred to the nitrocellulose membrane. The membranes were blocked with 5% skim milk at room temperature for 1 hour and diluted 1: 3000 with the primary antibody p-STAT3 Tyr705 (Product No.: ab76315, Abcam), STAT3 (Product No .: GTX104616, GeneTex) Lt; 0 &gt; C for 16-20 hours. Then, the membrane was washed with TBST buffer three times for 10 minutes, diluted with HRP-conjugated anti-rabbit (product number: sc-2004, Santa Cruz) as a secondary antibody at a ratio of 1: 3000 and incubated at room temperature for 1 hour And washed three times for 10 minutes with TBST buffer to generate chemiluminescent substrate reagent. Luminescence generated by using LAS-1000 (Puji Film) was detected to confirm the degree of protein expression. As a control group for comparison of the degree of expression, HRP-conjugated anti-goat (product number: sc (SC no. 6216, Santa Cruz) -2354, Santa Cruz) secondary antibody at a ratio of 1: 3000, the expression of Lamin B was confirmed by the same method as described above.

면역세포화학법 (Immunocytochemistry)를 통한 세포 관찰을 위해서 구체적으로, MDA-MB-468 세포를 8-웰 슬라이드 챔버 (8-well slide chamber) 에 3 X 10⁴ cells/well 농도로 분주하고 37 ℃ 및 5% CO₂ 조건에서 20-24시간 동안 배양했다. 화합물 11 및 화합물 12를 DMSO에 용해시켜, 0, 10 νM 농도로 처리하고 4시간 동안 배양시켰다.In order to observe cells by immunocytochemistry, MDA-MB-468 cells were incubated in an 8-well slide chamber with 3 X 10⁴⁴ cells / well and cultured at 37 ° C and 5% CO ₂ for 20-24 hours. Compound 11 and Compound 12 were dissolved in DMSO, treated at a concentration of 0, 10 vM and incubated for 4 hours.

이후, 4 % Paraformaldehyde를 처리하여 세포를 20분 동안 고정시켰으며, 이후 PBS를 이용하여 세포를 세척해주었다. 그리고 0.2% Triton X-100을 10-20분 동안 처리하여 세포의 삼투성을 높인 뒤 5% 탈지유로 실온에서 1시간 동안 블로킹 시켰다. 1차 항체 p-STAT3(Santa Cruz), STAT3(Santa Cruz)를 1:100으로 희석하여 4℃에서 16-20시간 동안 반응시켰다. 이후 챔버를 PBS로 3회씩 세척한 후, 2차 항체(p-STAT3: Alexa 488 labeled anti-goat IgG, STAT3: Alexa 594 labeled anti-rabbit IgG)를 1:1000으로 희석하여 상온에서 1시간 동안 빛을 차단하여 교반시켰다. 이후 PBS로 3회씩 세척한 후, 1 μg/ml DAPI로 약 3-5분 동안 염색시킨 뒤 곧바로 PBS로 세척해준다. Mounting 용액을 떨어뜨린 후 커버 글라스로 덮어준다. 이후 공초점 현미경 (Confocal microscope, Olympus)을 이용하여 염색된 세포를 분석하였다.Then, the cells were fixed with 4% paraformaldehyde for 20 minutes, and then the cells were washed with PBS. The cells were treated with 0.2% Triton X-100 for 10-20 minutes to increase the osmoticity of the cells and then blocked with 5% skim milk at room temperature for 1 hour. The primary antibodies p-STAT3 (Santa Cruz) and STAT3 (Santa Cruz) were diluted 1: 100 and reacted at 4 ° C for 16-20 hours. After washing the chamber three times with PBS, the secondary antibody (p-STAT3: Alexa 488 labeled anti-goat IgG, STAT3: Alexa 594 labeled anti-rabbit IgG) was diluted 1: 1000 and incubated for 1 hour at room temperature. And the mixture was stirred. After washing three times with PBS, the cells are stained with 1 μg / ml DAPI for about 3-5 minutes and washed immediately with PBS. Drop the mounting solution and cover with a cover glass. Then, the stained cells were analyzed using confocal microscope (Olympus).

5-2. 실험결과5-2. Experiment result

도 5에 나타난 바와 같이 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때, STAT3의 핵 내로의 이동이 억제되는 효과를 확인하였다.As shown in FIG. 5, when MDA-MB-468 cells, a triple-negative breast cancer cell, were treated with the novel derivatives 11 and 12, the effect of inhibiting the migration of STAT3 into the nucleus was confirmed.

<< 실험예Experimental Example 6> 삼중 음성 유방암 세포인  6> triple-negative breast cancer cells MDAMDA -MB-468 세포에서 화합물 11 및 화합물 12에 의한 -MB-468 cells by Compound 11 and Compound 12 STAT3STAT3 전사인자의 DNA 결합 차단 확인 Confirmation of blocking of DNA binding of transcription factor

6-1. 실험방법6-1. Experimental Method

본 발명에 따른 화합물 11 및 화합물 12가 삼중음성유방암 세포에서 STAT3 전사인자의 DNA 결합을 차단하는 정도를 알아보기 위하여 EMSA (Electophoretic mobility shift assay)를 다음과 같이 수행하였다.In order to examine the degree of blocking of the DNA binding of the STAT3 transcription factor in triple-negative breast cancer cells, Compound 11 and Compound 12 according to the present invention were subjected to EMSA (Electophoretic mobility shift assay) as follows.

구체적으로, MDA-MB-468 세포를 6-웰 플레이트 (well plate) 에 5-10 X 10⁵ cells/well 농도로 분주하고 37 ℃ 및 5% CO₂ 조건에서 20-24시간 동안 배양했다. 화합물 11 및 화합물 12를 DMSO에 용해시켜, 0, 5, 10 νM 농도로 처리하고 4시간 동안 배양시켰다. 상기 세포로부터 분리된 핵 단백질은 서열번호 1로 기재된 염기서열을 가진 P-end-labeled 이중-가닥 STAT3 consensus oligonucleotide(Santa Cruz)와 37℃에서 30분 동안 배양하였다. 30분간 배양한 후, 결합된 DNA와 핵 단백질은 6% native PAGE를 이용하여 100V에서 2시간 동안 전기영동 하였다. 젤을 nylon 멤브레인에 transfer 하였고, LightShift Chemiluminescent EMSA kit의 방법을 따라 STAT3 전사인자의 DNA 결합 정도를 검출하였다.Specifically, MDA-MB-468 cells were seeded in a 6-well plate at a concentration of 5-10 × 10 ⁵ cells / well and cultured at 37 ° C. and 5% CO ₂ for 20-24 hours. Compound 11 and Compound 12 were dissolved in DMSO, treated at a concentration of 0, 5, 10 vM and incubated for 4 hours. The nuclear proteins isolated from the cells were incubated with P-end-labeled double-stranded STAT3 consensus oligonucleotides (Santa Cruz) having the nucleotide sequence shown in SEQ ID NO: 1 for 30 minutes at 37 ° C. After incubation for 30 minutes, the bound DNA and nuclear proteins were electrophoresed at 100V for 2 hours using 6% native PAGE. The gel was transferred to nylon membrane and the degree of DNA binding of STAT3 transcription factor was detected by the method of LightShift Chemiluminescent EMSA kit.

6-2. 실험결과6-2. Experiment result

도 6에 나타난 바와 같이 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때, 핵 내에서 STAT3 전사인자의 DNA 결합을 차단하는 효과를 확인하였다. 특히 화합물 12가 다른 화합물에 비해 STAT3 전사인자의 DNA 결합을 우수하게 차단하는 것을 확인하였다.As shown in FIG. 6, when MDA-MB-468 cells, triple-negative breast cancer cells, were treated with the novel derivatives 11 and 12, the effect of blocking the DNA binding of the STAT3 transcription factor in the nucleus was confirmed. In particular, Compound 12 was found to block DNA binding of STAT3 transcription factor better than other compounds.

<< 실험예Experimental Example 7> 삼중 음성 유방암 세포인  7> triple-negative breast cancer cells MDAMDA -MB-468 세포에서 화합물 11 및 화합물 12에 의한 -MB-468 cells by Compound 11 and Compound 12 EGFEGF 및 IL-6 자극원 활성 억제 확인  And inhibition of IL-6 stimulation

7-1. 실험방법7-1. Experimental Method

본 발명에 따른 화합물 11 및 화합물 12가 삼중음성유방암 세포에서 EGF 및 IL-6 자극원에 의한 STAT3 과발현을 억제하는 정도를 알아보기 위하여 다음과 같이 실험을 수행하였다.In order to examine the inhibition of STAT3 overexpression by EGF and IL-6 stimulating agents in triple-negative breast cancer cells, Compound 11 and Compound 12 according to the present invention were tested as follows.

구체적으로, MDA-MB-468 세포를 6-웰 플레이트 (well plate) 에 5 X 10⁵ cells/well 농도로 분주하고 37 ℃ 및 5% CO₂ 조건에서 20-24시간 동안 배양했다. 의도적으로 세포내 STAT3의 활성을 없애기 위하여, 각 well에 혈청이 함유되어 있지 않은 배지를 분주하고 37 ℃ 및 5% CO₂ 조건에서 20-24시간 동안 배양했다. 화합물 11 및 화합물 12를 DMSO에 용해시켜, 0, 5, 10 νM 농도로 처리하고 4시간 동안 배양시켰다. 이후 50 ng/ml EGF를 5분, 25 ng/ml IL-6를 30분 처리하여 STAT3의 인산화를 과발현시켰다.Specifically, MDA-MB-468 cells were seeded in a 6-well plate at a concentration of 5 × 10 ⁵ cells / well and cultured at 37 ° C and 5% CO ₂ for 20-24 hours. To intentionally abolish intracellular STAT3 activity, the medium containing no serum was dispensed into each well and cultured at 37 ° C and 5% CO ₂ for 20-24 hours. Compound 11 and Compound 12 were dissolved in DMSO, treated at a concentration of 0, 5, 10 vM and incubated for 4 hours. Then, 50 ng / ml EGF was treated for 5 min and 25 ng / ml IL-6 for 30 min to overexpress STAT3 phosphorylation.

세포 전체 단백질 분리는 용해 완충액 (20 mM HEPES [pH 7.6], 350 mM NaCl, 20% 글리세롤, 0.5 mM EDTA, 0.1 mM EGTA, 1% NP-40, 50 mM NaF, 0.1 mM DTT, 0.1 mM PMSF, 및 프로테아제 저해제 혼합물 (protease inhibitor cocktail)) 를 사용하여 세포 용해물을 수득했다. 정량을 거친 20-30 νg의 단백질을 8% SDS-PAGE gel를 이용하여 100 V 에서 2시간 동안 전기영동하고, 분리된 단백질을 니트로셀룰로오스 멤브레인에 전기적으로 이동시켰다. 멤브레인을 5% 탈지유로 실온에서 1시간 동안 블로킹한 후, 1차 항체 p-STAT3 Tyr705(제품번호: ab76315, Abcam), STAT3(제품번호: GTX104616, GeneTex), p-EGFR Tyr1173(제품번호: ab32578, Abcam), EGFR(제품번호: ab32562, Abcam), p-Akt Ser473(제품번호: ab81283, Abcam), Akt(제품번호: sc-1618-R, Santa Cruz)를 1:3000으로 희석하여 멤브레인과 4℃에서 16-20시간 동안 반응시켰다. 이후, 멤브레인을 TBST 완충액으로 10분간 3회씩 세척한 후 HRP-결합 항-rabbit(제품번호: sc-2004, Santa Cruz)을 2차 항체로 하여 1:3000의 비율로 희석하여 실온에서 1시간 배양한 후 TBST 완충액으로 10분간 3회씩 세척하여 화학발광기질 시약을 처리하여 발생시켰다. LAS-1000(푸지필름)을 이용하여 생성된 발광(luminescence)을 검출하여 단백질 발현 정도를 확인하였다. 발현의 정도를 비교하기 위한 대조군으로, 항-β-액틴(actin)(제품번호: sc-47778, Santa Cruz)을 1차 항체로 하여 1:5000의 비율로 사용하여 상기의 방법과 동일한 방법을 수행하여 β-액틴의 발현을 확인하였다. Cell whole protein isolation was performed in a solution buffer (20 mM HEPES pH 7.6, 350 mM NaCl, 20% glycerol, 0.5 mM EDTA, 0.1 mM EGTA, 1% NP- 40, 50 mM NaF, 0.1 mM DTT, 0.1 mM PMSF, And a protease inhibitor cocktail) were used to obtain cell lysates. The quantified 20-30 νg of protein was electrophoresed on 8% SDS-PAGE gels at 100 V for 2 hours, and the separated proteins were electrically transferred to the nitrocellulose membrane. The membranes were blocked with 5% skim milk at room temperature for 1 hour and then incubated with primary antibody p-STAT3 Tyr705 (product number: ab76315, Abcam), STAT3 (product number: GTX104616, GeneTex), p-EGFR Tyr1173 , Abcam), EGFR (product number: ab32562, Abcam), p-Akt Ser473 (product number: ab81283, Abcam), Akt (product number: sc-1618-R, Santa Cruz) And reacted at 4 ° C for 16-20 hours. Then, the membrane was washed with TBST buffer three times for 10 minutes, diluted with HRP-conjugated anti-rabbit (product number: sc-2004, Santa Cruz) as a secondary antibody at a ratio of 1: 3000 and incubated at room temperature for 1 hour And washed three times for 10 minutes with TBST buffer to generate chemiluminescent substrate reagent. Luminescence generated by using LAS-1000 (Puji Film) was detected to confirm the degree of protein expression. Actin (product number: sc-47778, Santa Cruz) was used as a primary antibody in a ratio of 1: 5000 as a control group for comparing the degree of expression, Lt; RTI ID = 0.0 &gt; of-actin &lt; / RTI &gt;

7-2. 실험결과7-2. Experiment result

도 7에 나타난 바와 같이 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때, EGF (Epidermal Growth Factor) 에 의한 p-STAT3(Tyr705) 의 인위적 과발현 된 정도가 억제되는 것을 확인하였다. 또한, 도 8에 나타난 바와 같이 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때, IL-6에 의한 p-STAT3(Tyr705) 의 인위적 과발현 된 정도가 억제되는 것을 확인하였다.As shown in FIG. 7, when MDA-MB-468 cells, which are triple-negative breast cancer cells, were treated with the novel derivatives 11 and 12, an artificial overexpression degree of p-STAT3 (Tyr705) by EGF (Epidermal Growth Factor) Was suppressed. In addition, as shown in FIG. 8, when MDA-MB-468 cells, triple-negative breast cancer cells, were treated with the novel derivatives 11 and 12, an artificial overexpression degree of p-STAT3 (Tyr705) Respectively.

<< 실험예Experimental Example 8> 삼중 음성 유방암 세포인  8> triple-negative breast cancer cells MDAMDA -MB-468 세포에서 화합물 11 및 화합물 12에 의한 -MB-468 cells by Compound 11 and Compound 12 STAT3STAT3 상위 인자 활성 억제 확인  Confirm Suppression of Suppressor Activity

8-1. 실험방법8-1. Experimental Method

본 발명에 따른 화합물 11 및 화합물 12가 삼중음성유방암 세포에서 STAT3 상위 인자 활성을 억제하는 정도를 알아보기 위하여 다음과 같이 실험을 수행하였다.In order to examine the degree of suppression of STAT3 supernatant activity in triple-negative breast cancer cells, the following experiment was conducted.

구체적으로, MDA-MB-468 세포를 6-웰 플레이트 (well plate) 에 5-10 X 10⁵ cells/well 농도로 분주하고 37 ℃ 및 5% CO₂ 조건에서 20-24시간 동안 배양했다. 화합물 11 및 화합물 12를 DMSO에 용해시켜, 0, 5, 10 νM 농도로 처리하고 4시간 동안 배양시켰다. 세포 전체 단백질 분리는 용해 완충액 (20 mM HEPES [pH 7.6], 350 mM NaCl, 20% 글리세롤, 0.5 mM EDTA, 0.1 mM EGTA, 1% NP-40, 50 mM NaF, 0.1 mM DTT, 0.1 mM PMSF, 및 프로테아제 저해제 혼합물 (protease inhibitor cocktail)) 를 사용하여 세포 용해물을 수득했다. 정량을 거친 20-30 μg의 단백질을 8% SDS-PAGE gel를 이용하여 100 V 에서 2시간 동안 전기영동하고, 분리된 단백질을 니트로셀룰로오스 멤브레인에 전기적으로 이동시켰다. 멤브레인을 5% 탈지유로 실온에서 1시간 동안 블로킹한 후, 1차 항체 p-JAK1 Tyr1022/1023(제품번호: cs-3331, Cell Signaling), JAK1(제품번호: GTX101955, GeneTex), p-JAK2 Tyr1007/1008(제품번호: cs-3776, Cell Signaling), JAK2(제품번호: GTX101132, GeneTex), p-Src Tyr416(제품번호: cs-2101, Cell Signaling), Src(제품번호: 품번호: cs-2018, Cell Signaling), SHP1(제품번호: GTX102864, GenTex), SHP2(제품번호: GTX101062, GenTex), PTEN(제품번호: sc-7974, Santa Cruz), SOCS-3(제품번호: sc-9023, Santa Cruz), p-FAK Tyr576/577 (제품번호: 뮤76244, Abcam), FAK(제품번호: cs-3285, Cell Signaling), p-EGFR Tyr1173(제품번호: ab32578, Abcam), EGFR(제품번호: ab32562, Abcam), p-Akt Ser473(제품번호: ab81283, Abcam), Akt(제품번호: sc-1618-R, Santa Cruz), p-JNK Thr183/Tyr185(제품번호: sc-6254, Santa Cruz), JNK(제품번호: sc-1648, Santa Cruz), p-p38 Thr180/Tyr182(제품번호: sc-17852-R, Santa Cruz), p38(제품번호: sc-7149, Santa Cruz), p-ERK1/2 Thr177(제품번호: sc-16981-R, Santa Cruz), ERK1(제품번호: sc-93, Santa Cruz)를 1:3000으로 희석하여 멤브레인과 4℃에서 16-20시간 동안 반응시켰다. 이후, 멤브레인을 TBST 완충액으로 10분간 3회씩 세척한 후 HRP-결합 항-rabbit(제품번호: sc-2004, Santa Cruz), HRP-결합 항-mouse(제품번호: sc-2005, Santa Cruz), HRP-결합 항-goat(제품번호: sc-2354, Santa Cruz)을 2차 항체로 하여 1:3000의 비율로 희석하여 실온에서 1시간 배양한 후 TBST 완충액으로 10분간 3회씩 세척하여 화학발광기질 시약을 처리하여 발생시켰다. LAS-1000(푸지필름)을 이용하여 생성된 발광(luminescence)을 검출하여 단백질 발현 정도를 확인하였다. 발현의 정도를 비교하기 위한 대조군으로, 항-β-액틴(actin)(제품번호: sc-47778, Santa Cruz)을 1차 항체로 하여 1:5000의 비율로 사용하여 상기의 방법과 동일한 방법을 수행하여 β-액틴의 발현을 확인하였다. Specifically, MDA-MB-468 cells were seeded in a 6-well plate at a concentration of 5-10 × 10 ⁵ cells / well and cultured at 37 ° C. and 5% CO ₂ for 20-24 hours. Compound 11 and Compound 12 were dissolved in DMSO, treated at a concentration of 0, 5, 10 vM and incubated for 4 hours. Cell whole protein isolation was performed in a solution buffer (20 mM HEPES pH 7.6, 350 mM NaCl, 20% glycerol, 0.5 mM EDTA, 0.1 mM EGTA, 1% NP- 40, 50 mM NaF, 0.1 mM DTT, 0.1 mM PMSF, And a protease inhibitor cocktail) were used to obtain cell lysates. The quantified 20-30 μg of protein was electrophoresed on 8% SDS-PAGE gels at 100 V for 2 hours and the separated proteins were electrically transferred to the nitrocellulose membrane. The membrane was blocked with 5% skim milk at room temperature for 1 hour and then the primary antibody p-JAK1 Tyr1022 / 1023 (product number: cs-3331, Cell Signaling), JAK1 (product number: GTX101955, GeneTex), p-JAK2 Tyr1007 Cs-2101, Cell Signaling), Src (product number: cs-3776, Cell Signaling), JAK2 (product number: GTX101132, GeneTex) Sc-9023, Santa Cruz), SOCS-3 (product number: sc-9023, GenTex), SHP1 (product number: GTX102864, GenTex) (Santa Cruz), p-FAK Tyr576 / 577 (product number: MU 76244, Abcam), FAK (product number: cs-3285, Cell Signaling), p-EGFR Tyr1173 (product number: ab32578, Abcam) Sc-1618-R, Santa Cruz), p-JNK Thr183 / Tyr185 (product number: sc-6254, Santa Cruz), p-Akt Ser473 (product number: ab81283, Abcam) ), JNK (product number: sc-1648, Santa Cruz), p-p38 Thr 180 / Tyr 182 (product number: sc-17852-R, Santa Cruz) 49, Santa Cruz), p-ERK1 / 2 Thr177 (product number: sc-16981-R, Santa Cruz), ERK1 And reacted for 16-20 hours. Then, the membrane was washed with TBST buffer three times for 10 minutes and then washed with HRP-conjugated anti-rabbit (product number: sc-2004, Santa Cruz), HRP-conjugated anti- mouse (product number: HRP-conjugated anti-goat (product number: sc-2354, Santa Cruz) as a secondary antibody was diluted at a ratio of 1: 3000 and incubated at room temperature for 1 hour. Then, the antibody was washed with TBST buffer three times for 10 minutes, The reagent was processed and generated. Luminescence generated by using LAS-1000 (Puji Film) was detected to confirm the degree of protein expression. Actin (product number: sc-47778, Santa Cruz) was used as a primary antibody in a ratio of 1: 5000 as a control group for comparing the degree of expression, Lt; RTI ID = 0.0 &gt; of-actin &lt; / RTI &gt;

8-2. 실험결과8-2. Experiment result

삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때, 도 9에 나타난 바와 같이 STAT3의 상위 인자인 p-JAK1(Tyr1022/1023) 및 p-JAK2(Tyr1007/1008)에 대한 억제 효과를 확인할 수 있었으며, 반면에 하기 도 10에 나타난 바와 같이 STAT3의 상위 인자인 SHP1, SHP2, PTEN, SOCS-3의 발현에는 영향을 주지 않는 것을 확인하였다.When MDA-MB-468 cells, a triple-negative breast cancer cell, were treated with the novel derivatives 11 and 12, p-JAK1 (Tyr1022 / 1023) and p-JAK2 (Tyr1007 / 1008). On the other hand, it was confirmed that the expression of SHP1, SHP2, PTEN, and SOCS-3, which are the predominant factors of STAT3, is not affected as shown in FIG.

또한, 삼중음성유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때, 하기 도 11에 나타난 바와 같이 STAT3의 상위 인자인 p-FAK, p-EGFR, p-Akt에는 영향을 주지 않는 것을 확인하였다. 나아가, 도 12에 나타난 바와 같이 STAT3의 상위 인자인 p-JNK(Thr183/Tyr185), p-p38(Thr180/Tyr182), ERK1/2(Thr177) 에 대해서도 영향을 주지 않는 것을 확인하였다. 따라서 신규 유도체인 화합물 11 및 화합물 12는 STAT3의 상위 인자로서 선택적으로 JAK1 및 JAK2의 활성을 억제한다는 것을 알 수 있다.When MDA-MB-468 cells, which are triple-negative breast cancer cells, were treated with the novel derivatives, Compound 11 and Compound 12, p-FAK, p-EGFR, p-Akt It was confirmed that it had no effect on the test results. Furthermore, as shown in Fig. 12, it was confirmed that p-JNK (Thr183 / Tyr185), p-p38 (Thr180 / Tyr182) and ERK1 / 2 (Thr177) Therefore, it can be seen that the novel derivatives, compound 11 and compound 12, selectively inhibit the activity of JAK1 and JAK2 as an upstream component of STAT3.

<< 실험예Experimental Example 9> 삼중 음성 유방암 세포인  9> triple-negative breast cancer cells MDAMDA -MB-468 세포에서 화합물 11 및 화합물 12에 의한 세포 성장 억제 확인Confirmation of cell growth inhibition by Compound 11 and Compound 12 in MB-468 cells

9-1. 실험방법9-1. Experimental Method

본 발명에 따른 화합물 11 및 화합물 12가 삼중음성유방암 세포의 성장을 억제하는 정도를 알아보기 위하여 다음과 같이 실험을 수행하였다.In order to examine the degree of inhibition of the growth of triple-negative breast cancer cells by Compound 11 and Compound 12 according to the present invention, the following experiment was conducted.

구체적으로, MDA-MB-468 세포를 96-웰 플레이트 (well plate) 에 1 X 10⁴ cells/well 농도로 분주하고 37℃ 및 5% CO₂ 조건에서 24시간 동안 배양했다. 화합물 11 및 화합물 12를 DMSO에 용해시켜, 10 μM 농도로 처리하고 0, 6, 12, 24, 36시간 동안 배양시켰다. 이후, 상기 배양액의 배지를 제거하고 MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 시약을 웰 (well) 당 0.5 mg/ml 로 첨가하고 37°에서 3시간 동안 배양시킨 후 배지를 제거하고 웰 (well) 바닥에 붙은 formazan을 녹이기 위해 DMSO 100 μl를 처리하였다. 그런 다음, 10분 동안 shaker 위에서 흔들어 주고 540 nm 파장에서 마이크로플레이트 리더로 흡광도를 측정하여 세포 성장 억제를 확인하였다. Specifically, MDA-MB-468 cells were plated at a concentration of 1 × 10 ⁴ cells / well in a 96-well plate and cultured at 37 ° C. and 5% CO ₂ for 24 hours. Compound 11 and compound 12 were dissolved in DMSO, treated at a concentration of 10 [mu] M and cultured for 0, 6, 12, 24, and 36 hours. Thereafter, the culture medium was removed and 0.5 mg / ml of MTT (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide) reagent was added per well. After incubation for a period of time, the medium was removed and 100 μl of DMSO was added to dissolve the formazan attached to the well bottom. Then, it was shaken on a shaker for 10 minutes and absorbance was measured by a microplate reader at a wavelength of 540 nm to confirm cell growth inhibition.

9-2. 실험결과9-2. Experiment result

도 13에서 나타난 바와 같이 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때, 시간 의존적으로 세포의 증식이 억제되는 것을 확인하였다.As shown in FIG. 13, when MDA-MB-468 cells, a triple-negative breast cancer cell, were treated with the novel derivatives 11 and 12, cell proliferation was inhibited in a time-dependent manner.

<< 실험예Experimental Example 10> 삼중 음성 유방암 세포  10> triple-negative breast cancer cells MDAMDA -MB-468 및 정상 -MB-468 and normal 유방상피세포Mammary epithelial cells MCF-10A에서 화합물 11 및 화합물 12에 의한 세포 독성 확인 Cytotoxicity of Compound 11 and Compound 12 in MCF-10A

10-1. 실험방법10-1. Experimental Method

본 발명에 따른 화합물 11 및 화합물 12의 삼중음성유방암 세포와 정상 유방상피세포에 대한 세포 독성을 확인하기 위하여 다음과 같이 실험을 수행하였다.In order to confirm the cytotoxicity of the compound 11 and the compound 12 according to the present invention on the triple-negative breast cancer cell and the normal breast epithelial cell, the following experiment was conducted.

구체적으로, MDA-MB-468 세포를 96-웰 플레이트 (well plate) 에 1 X 10⁴ cells/well, MCF-10A 세포는 2 X 10⁴ cells/well 농도로 분주하고, 37℃ 및 5% CO₂ 조건에서 24시간 동안 배양했다. 화합물 11 및 화합물 12를 DMSO에 용해시켜, 0, 1, 2.5, 5, 10 μM 농도로 처리하고 24시간 동안 배양시켰다. 이후, 상기 배양액의 배지를 제거하고 MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 시약을 웰 (well) 당 0.5 mg/ml 로 첨가하고 37°에서 3시간 동안 배양시킨 후 배지를 제거하고 웰 (well) 바닥에 붙은 formazan을 녹이기 위해 DMSO 100μl를 처리하였다. 그런 다음, 10분 동안 shaker 위에서 흔들어 주고 540 nm 파장에서 마이크로플레이트 리더로 흡광도를 측정하여 세포 성장 억제를 확인하였다. Specifically, 1 X 10 ⁴ cells / well for MDA-MB-468 96- well plate (well plate) cells, MCF-10A cells was 2 X 10 ⁴ cells / well concentration and dispensed, 37 ℃ and 5% CO _{2 &lt; /} RTI &gt; conditions for 24 hours. Compound 11 and compound 12 were dissolved in DMSO and treated at concentrations of 0, 1, 2.5, 5, 10 μM and incubated for 24 hours. Thereafter, the culture medium was removed and 0.5 mg / ml of MTT (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide) reagent was added per well. After incubation for a period of time, the medium was removed and 100 μl of DMSO was treated to dissolve the formazan attached to the well bottom. Then, it was shaken on a shaker for 10 minutes and absorbance was measured by a microplate reader at a wavelength of 540 nm to confirm cell growth inhibition.

10-2. 실험결과10-2. Experiment result

도 14에 나타난 바와 같이 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 신규 유도체인 화합물 11 및 화합물 12를 처리하였을 때 농도 의존적으로 살아있는 세포의 비율이 감소하지만, 정상 유방상피세포인 MCF-10A에는 어떠한 영향도 주지 않음을 확인하였다.As shown in FIG. 14, when MDA-MB-468 cells, which are triple-negative breast cancer cells, were treated with the new derivatives, Compound 11 and Compound 12, the ratio of living cells was decreased in a concentration-dependent manner, but MCF-10A It was confirmed that it had no effect.

<< 실험예Experimental Example 11> 삼중 음성 유방암 세포인  11> triple negative breast cancer cells MDAMDA -MB-468 세포에서 신규 유도체인 화합물 12에 의한 세포 주기 변화 확인- Identification of cell cycle changes by novel derivative, Compound 12, in MB-468 cells

11-1. 실험방법11-1. Experimental Method

본 발명에 따른 화합물 12가 삼중음성유방암 세포에서 세포 주기에 어떠한 변화를 주는지 확인하기 위하여 Cell cylce analysis를 수행하였다.Cell cylce analysis was performed to determine how the compound 12 according to the present invention changes cell cycle in triple-negative breast cancer cells.

구체적으로, MDA-MB-468 세포를 96-웰 플레이트 (well plate) 에 5-10 X 10⁵ cells/well 농도로 분주하고, 37℃ 및 5% CO₂ 조건에서 24시간 동안 배양했다. 화합물 12를 DMSO에 용해시켜, 0, 10 μM 농도로 처리하고 24시간 동안 배양시켰다. 이후 세포를 PBS로 모아서 찬 70 % 에탄올로 고정시켜 4℃에서 하룻밤 두었다. 세포가 하나하나 잘 떨어질 수 있도록 PBS로 잘 풀어준 뒤, 1 mg/ml RNAse 처리하여 1시간 동안 37℃에서 보관했다. 25 μg/ml PI로 짧게 염색한 뒤 유세포 분석기 (Calibur Flow Cytometry, BD Biosciences)로 분석을 하여 Cell Quest Software 로 세포 주기 그래프를 나타내주었다. Specifically, MDA-MB-468 cells were seeded at a concentration of 5-10 × 10 ⁵ cells / well in a 96-well plate and cultured at 37 ° C. and 5% CO ₂ for 24 hours. Compound 12 was dissolved in DMSO, treated at a concentration of 0, 10 [mu] M and incubated for 24 hours. The cells were then collected in PBS, fixed with cold 70% ethanol, and placed at 4 ° C overnight. Cells were plunged well with PBS to allow them to fall well, treated with 1 mg / ml RNAse and stored at 37 ° C for 1 hour. After briefly staining with 25 μg / ml PI, the cells were analyzed with a flow cytometer (BD Biosciences) and cell cycle graphs were presented by Cell Quest Software.

11-2. 실험결과11-2. Experiment result

도 15에 나타난 바와 같이 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 화합물 12를 처리하였을 때, 세포 주기에서 G2/M 단계 어레스트 (arrest) 를 유도시키는 것을 확인하였다.As shown in FIG. 15, when compound 12 was treated with MDA-MB-468 cells, a triple-negative breast cancer cell, it was confirmed that G2 / M arrest was induced in the cell cycle.

<< 실험예Experimental Example 12> 삼중 음성 유방암 세포인  12> triple-negative breast cancer cells MDAMDA -MB-468 세포에서 화합물 12에 의한 세포 사멸 (Cell death by Compound 12 in MB-468 cells ( apoptosisapoptosis ) 유도 확인) Induction confirmation

12-1. 실험방법12-1. Experimental Method

본 발명에 따른 화합물 12가 삼중음성유방암 세포에서 세포 사멸을 유도하는지를 확인하기 위하여 Annexin V assay, TUNEL assay 및 Live and dead assay 실험을 수행하였다. Annexin V assay를 하는 방법은 다음과 같다.In order to determine whether Compound 12 according to the present invention induces apoptosis in triple-negative breast cancer cells, Annexin V assay, TUNEL assay and live and dead assay were performed. The method of Annexin V assay is as follows.

구체적으로, MDA-MB-468 세포를 6-웰 플레이트 (well plate) 에 5-10 X 10⁵ cells/well 농도로 분주하고 37 ℃ 및 5% CO₂ 조건에서 20-24시간 동안 배양했다. 화합물 12를 DMSO에 용해시켜, 0, 10 μM 농도로 처리하고 24시간 동안 배양시켰다. 이후, 세포를 PBS로 모아 V-FITC Apoptosis Detection Kit(Bio-Rad)의 지시사항을 따라 샘플을 준비하였다. 그런 다음, 유세포 분석기 (Calibur Flow Cytometry, BD Biosciences)로 분석을 하여 Cell Quest Software 로 apoptosis의 비율을 확인하였다.Specifically, MDA-MB-468 cells were seeded in a 6-well plate at a concentration of 5-10 × 10 ⁵ cells / well and cultured at 37 ° C. and 5% CO ₂ for 20-24 hours. Compound 12 was dissolved in DMSO, treated at a concentration of 0, 10 [mu] M and incubated for 24 hours. The cells were then collected in PBS and samples were prepared according to the instructions of the V-FITC Apoptosis Detection Kit (Bio-Rad). The cells were then analyzed with a flow cytometer (BD Biosciences) to determine the percentage of apoptosis with Cell Quest Software.

다음으로 TUNEL assay를 하는 방법은 다음과 같다. Next, the method of TUNEL assay is as follows.

구체적으로, MDA-MB-468 세포를 6-웰 플레이트 (well plate) 에 5-10 X 10⁵ cells/well 농도로 분주하고 37 ℃ 및 5% CO₂ 조건에서 20-24시간 동안 배양했다. 화합물 12를 DMSO에 용해시켜, 0, 10 μM 농도로 처리하고 24시간 동안 배양시켰다. 이후, 세포를 PBS로 모아 4% Paraformaldehyde를 30분 동안 상온에서 처리하고, 0.2% Triton X-100으로 15분 동안 처리하였다. 그런 다음 TUNEL 반응 용액으로 세포를 풀어주어 1시간 동안 37℃에서 빛을 차광시킨 상태로 보관해주었다. 유세포 분석기 (Calibur Flow Cytometry, BD Biosciences)로 분석을 하여 Cell Quest Software 로 세포 주기 그래프를 나타내주었다.Specifically, MDA-MB-468 cells were seeded in a 6-well plate at a concentration of 5-10 × 10 ⁵ cells / well and cultured at 37 ° C. and 5% CO ₂ for 20-24 hours. Compound 12 was dissolved in DMSO, treated at a concentration of 0, 10 [mu] M and incubated for 24 hours. The cells were then collected in PBS and treated with 4% paraformaldehyde for 30 minutes at room temperature and for 15 minutes with 0.2% Triton X-100. Then, the cells were loosened with the TUNEL reaction solution and stored at 37 ° C for 1 hour. The cells were analyzed by flow cytometry (BD Biosciences) and cell cycle graphs were presented by Cell Quest Software.

Live and dead assay를 하는 방법은 다음과 같다. The live and dead assay method is as follows.

구체적으로, MDA-MB-468 세포를 8-웰-슬라이드 챔버 (8-well slide chamber) 에 3 X 10^⁴ cells/well 농도로 분주하고 37 ℃ 및 5% CO₂ 조건에서 20-24시간 동안 배양했다. 화합물 12를 DMSO에 용해시켜, 0, 10 μM 농도로 처리하고 24시간 동안 배양시켰다. 이후 각 웰의 배지를 제거하고 PBS를 이용하여 세포를 세척해주었다. 그리고 Live and Dead 시약 (Invitrogen 사 reagent; 5 μM Calcein-AM, 5 μM Ethidium homodimer로 구성) 를 처리하고 37 ℃ 및 5% CO₂ 조건에서 30분 동안 배양하여 염색 시켜주었다. 그런 다음 공초점 현미경 (Confocal microscope, Olympus)을 이용하여 염색된 세포를 분석하였다.Incubated for 20-24 hours in a chamber slide (8-well chamber slide) and the frequency divider 37 ℃ with 3 X 10 ^⁴ cells / well concentration and 5% CO ₂ conditions - specifically, MDA-MB-468 cells, an 8-well did. Compound 12 was dissolved in DMSO, treated at a concentration of 0, 10 [mu] M and incubated for 24 hours. Then, the medium of each well was removed and the cells were washed with PBS. The cells were treated with Live and Dead reagent (Invitrogen reagent; 5 μM Calcein-AM, 5 μM Ethidium homodimer) and incubated at 37 ° C and 5% CO ₂ for 30 min. The stained cells were then analyzed using a confocal microscope (Olympus).

12-2. 실험결과12-2. Experiment result

Annexin V assay를 이용하여 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 화합물 12를 처리하였을 때, 도 16에서 나타난 바와 같이 화합물 12가 세포 사멸 (apoptosis) 을 유도시키는 것을 확인할 수 있었으며, TUNEL assay를 이용하여 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 화합물 12를 처리하였을 때, 도 17에서 나타난 바와 같이 화합물 12가 세포 사멸(apoptosis)을 유도시키는 것을 확인하였다.When Compound 12 was treated with MDA-MB-468 cells, a triple negative breast cancer cell, using Annexin V assay, Compound 12 induced apoptosis as shown in FIG. 16, and TUNEL assay When Compound 12 was treated with MDA-MB-468 cells, a triple-negative breast cancer cell, Compound 12 was found to induce apoptosis as shown in Fig.

또한, Live and Dead assay를 이용하여 삼중음성유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 화합물 12를 처리하였을 때, 도 18에서 보여지는 것처럼 세포 사멸 (apoptosis) 이 유도되는 것을 확인하였다.In addition, when Compound 12 was treated with MDA-MB-468 cells, a triple-negative breast cancer cell, using the Live and Dead assay, apoptosis was induced as shown in FIG.

<< 실험예Experimental Example 13> 삼중 음성 유방암 세포인  13> triple-negative breast cancer cells MDAMDA -MB-468 세포에서 화합물 12에 의한 STAT3 조절 하위단계 유전자 발현 억제 확인Identification of STAT3 Regulatory Substep Gene Expression Suppression by Compound 12 in MB-468 Cells

13-1. 실험방법13-1. Experimental Method

본 발명에 따른 화합물 12가 삼중음성유방암 세포에서 STAT3가 조절하는 하위 단계 유전자 발현의 억제 정도를 알아보기 위하여 다음과 같이 실험을 수행하였다.In order to examine the degree of inhibition of STAT3-regulated lower-level gene expression in triple-negative breast cancer cells according to the present invention, the following experiment was conducted.

구체적으로, MDA-MB-468 세포를 6-웰 플레이트 (well plate) 에 5 X 10⁵ cells/well 농도로 분주하고 37 ℃ 및 5% CO₂ 조건에서 20-24시간 동안 배양했다. 화합물 12를 DMSO에 용해시켜, 10 μM 농도로 처리하고 0, 6, 12, 24, 36시간 동안 배양시켰다. 포 전체 단백질 분리는 용해 버퍼 (20 mM HEPES [pH 7.6], 350 mM NaCl, 20% 글리세롤, 0.5 mM EDTA, 0.1 mM EGTA, 1% NP-40, 50 mM NaF, 0.1 mM DTT, 0.1 mM PMSF, 및 프로테아제 저해제 혼합물 (protease inhibitor cocktail)) 를 사용하여 세포 용해물을 수득했다. 정량을 거친 20-30 μg의 단백질을 8% SDS-PAGE gel를 이용하여 100 V 에서 2시간 동안 전기영동하고, 분리된 단백질을 니트로셀룰로오스 멤브레인에 전기적으로 이동시켰다. 멤브레인을 5% 탈지유로 실온에서 1시간 동안 블로킹한 후, 1차 항체 Bcl-xL(제품번호: sc-8392, Santa Cruz), Bcl-2(제품번호: GTX100064, GenTex), Cyclin D1(제품번호: GTX108624, GenTex), MMP-2(제품번호: cs-4022, Cell Signaling), COX-2(제품번호: sc-1745 , Santa Cruz)를 1:3000으로 희석하여 멤브레인과 4℃에서 16-20시간 동안 반응시켰다. 이후, 멤브레인을 TBST 완충액으로 10분간 3회씩 세척한 후 HRP-결합 항-rabbit(제품번호: sc-2004, Santa Cruz), HRP-결합 항-mouse(제품번호: sc-2005, Santa Cruz), HRP-결합 항-goat(제품번호: sc-2354, Santa Cruz)을 2차 항체로 하여 1:3000의 비율로 희석하여 실온에서 1시간 배양한 후 TBST 완충액으로 10분간 3회씩 세척하여 화학발광기질 시약을 처리하여 발생시켰다. LAS-1000(푸지필름)을 이용하여 생성된 발광(luminescence)을 검출하여 단백질 발현 정도를 확인하였다. 발현의 정도를 비교하기 위한 대조군으로, 항-β-액틴(actin)(제품번호: sc-47778, Santa Cruz)을 1차 항체로 하여 1:5000의 비율로 사용하여 상기의 방법과 동일한 방법을 수행하여 β-액틴의 발현을 확인하였다. Specifically, MDA-MB-468 cells were seeded in a 6-well plate at a concentration of 5 × 10 ⁵ cells / well and cultured at 37 ° C and 5% CO ₂ for 20-24 hours. Compound 12 was dissolved in DMSO, treated at a concentration of 10 [mu] M and incubated for 0, 6, 12, 24, and 36 hours. The whole protein separation was carried out in a solution buffer (20 mM HEPES [pH 7.6], 350 mM NaCl, 20% glycerol, 0.5 mM EDTA, 0.1 mM EGTA, 1% NP-40, 50 mM NaF, 0.1 mM DTT, And a protease inhibitor cocktail) were used to obtain cell lysates. The quantified 20-30 μg of protein was electrophoresed on 8% SDS-PAGE gels at 100 V for 2 hours and the separated proteins were electrically transferred to the nitrocellulose membrane. The membranes were blocked with 5% skimmed milk at room temperature for 1 hour and then incubated with primary antibody Bcl-xL (product number: sc-8392, Santa Cruz), Bcl-2 (product number: GTX100064, GenTex) : GTX108624, GenTex), MMP-2 (product number: cs-4022, Cell Signaling), COX-2 (product number: sc-1745, Santa Cruz) Lt; / RTI &gt; Then, the membrane was washed with TBST buffer three times for 10 minutes and then washed with HRP-conjugated anti-rabbit (product number: sc-2004, Santa Cruz), HRP-conjugated anti- mouse (product number: HRP-conjugated anti-goat (product number: sc-2354, Santa Cruz) as a secondary antibody was diluted at a ratio of 1: 3000 and incubated at room temperature for 1 hour. Then, the antibody was washed with TBST buffer three times for 10 minutes, The reagent was processed and generated. Luminescence generated by using LAS-1000 (Puji Film) was detected to confirm the degree of protein expression. Actin (product number: sc-47778, Santa Cruz) was used as a primary antibody in a ratio of 1: 5000 as a control group for comparing the degree of expression, Lt; RTI ID = 0.0 &gt; of-actin &lt; / RTI &gt;

13-2. 실험결과13-2. Experiment result

도 19에 나타난 바와 같이 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 화합물 12를 처리하였을 때, STAT3 조절 하위단계 유전자인 Bcl-xL, Bcl-2, Cyclin D1, MMP-2 및 COX-2의 발현이 감소되는 것을 확인 하였다.Bcl-xL, Bcl-2, Cyclin D1, MMP-2, and COX-2 when the compound 12 was treated with MDA-MB-468 cells as a triple negative breast cancer cell as shown in FIG. Expression was decreased.

<< 실험예Experimental Example 14> 삼중 음성 유방암 세포인  14> triple negative breast cancer cells MDAMDA -MB-468 세포에서 화합물 12에 의한 -MB-468 cells by Compound 12 caspasecaspase -3 및 -3 and PARPPARP 활성화 확인 Confirm activation

14-1. 실험방법14-1. Experimental Method

본 발명에 따른 화합물 12가 삼중음성유방암 세포에서 세포 사멸 (apoptosis) 활성 인자인 caspase-3 및 PARP의 활성화에 어떠한 영향을 주는 확인하기 위하여 다음과 같이 실험을 수행하였다.In order to confirm the effect of the compound 12 according to the present invention on the activation of apoptosis-activating caspase-3 and PARP in triple-negative breast cancer cells, the following experiment was conducted.

구체적으로, MDA-MB-468 세포를 6-웰 플레이트 (well plate) 에 5 X 10⁵ cells/well 농도로 분주하고 37 ℃ 및 5% CO₂ 조건에서 20-24시간 동안 배양했다. 화합물 12를 DMSO에 용해시켜, 10 μM 농도로 처리하고 0, 6, 12, 24, 36시간 동안 배양시켰다. 이후, 세포 전체 단백질 분리는 용해 완충액 (20 mM HEPES [pH 7.6], 350 mM NaCl, 20% 글리세롤, 0.5 mM EDTA, 0.1 mM EGTA, 1% NP-40, 50 mM NaF, 0.1 mM DTT, 0.1 mM PMSF, 및 프로테아제 저해제 혼합물 (protease inhibitor cocktail)) 를 사용하여 세포 용해물을 수득했다. 정량을 거친 20-30 μg의 단백질을 8% SDS-PAGE gel를 이용하여 100 V 에서 2시간 동안 전기영동하고, 분리된 단백질을 니트로셀룰로오스 멤브레인에 전기적으로 이동시켰다. 멤브레인을 5% 탈지유로 실온에서 1시간 동안 블로킹한 후, 1차 항체 Procaspase-3(제품번호: sc-7148, Santa Cruz), Cleaved caspase-3(제품번호: GTX61121, GenTex), PARP(제품번호: sc-7150, Santa Cruz)를 1:3000으로 희석하여 멤브레인과 4℃에서 16-20시간 동안 반응시켰다. 이후, 멤브레인을 TBST 완충액으로 10분간 3회씩 세척한 후 HRP-결합 항-rabbit(제품번호: sc-2004, Santa Cruz)을 2차 항체로 하여 1:3000의 비율로 희석하여 실온에서 1시간 배양한 후 TBST 완충액으로 10분간 3회씩 세척하여 화학발광기질 시약을 처리하여 발생시켰다. LAS-1000(푸지필름)을 이용하여 생성된 발광(luminescence)을 검출하여 단백질 발현 정도를 확인하였다. 발현의 정도를 비교하기 위한 대조군으로, 항-β-액틴(actin)(제품번호: sc-47778, Santa Cruz)을 1차 항체로 하여 1:5000의 비율로 사용하여 상기의 방법과 동일한 방법을 수행하여 β-액틴의 발현을 확인하였다. Specifically, MDA-MB-468 cells were seeded in a 6-well plate at a concentration of 5 × 10 ⁵ cells / well and cultured at 37 ° C and 5% CO ₂ for 20-24 hours. Compound 12 was dissolved in DMSO, treated at a concentration of 10 [mu] M and incubated for 0, 6, 12, 24, and 36 hours. Subsequently, the whole cell protein separation was carried out in a lysis buffer (20 mM HEPES [pH 7.6], 350 mM NaCl, 20% glycerol, 0.5 mM EDTA, 0.1 mM EGTA, 1% NP-40, 50 mM NaF, PMSF, and a protease inhibitor cocktail) were used to obtain cell lysates. The quantified 20-30 μg of protein was electrophoresed on 8% SDS-PAGE gels at 100 V for 2 hours and the separated proteins were electrically transferred to the nitrocellulose membrane. The membranes were blocked with 5% skim milk at room temperature for 1 hour and then incubated with primary antibody Procaspase-3 (product number: sc-7148, Santa Cruz), Cleaved caspase-3 (product number: GTX61121, GenTex) : sc-7150, Santa Cruz) was diluted 1: 3000 and reacted with the membrane at 4 ° C for 16-20 hours. Then, the membrane was washed with TBST buffer three times for 10 minutes, diluted with HRP-conjugated anti-rabbit (product number: sc-2004, Santa Cruz) as a secondary antibody at a ratio of 1: 3000 and incubated at room temperature for 1 hour And washed three times for 10 minutes with TBST buffer to generate chemiluminescent substrate reagent. Luminescence generated by using LAS-1000 (Puji Film) was detected to confirm the degree of protein expression. Actin (product number: sc-47778, Santa Cruz) was used as a primary antibody in a ratio of 1: 5000 as a control group for comparing the degree of expression, Lt; RTI ID = 0.0 &gt; of-actin &lt; / RTI &gt;

14-2. 실험결과14-2. Experiment result

도 20에 나타난 바와 같이 삼중 음성 유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 화합물 12를 처리하였을 때, 세포 사멸을 유도시키는 인자인 caspase-3 및 PARP가 활성화 됨을 확인하였다.As shown in FIG. 20, when compound 12 was treated with MDA-MB-468 cells, a triple-negative breast cancer cell, caspase-3 and PARP, which are inducers of cell death, were activated.

<< 실험예Experimental Example 15> 삼중 음성 유방암 세포인  15> triple-negative breast cancer cells MDAMDA -MB-468 세포에서 화합물 12와 방사선 치료 (-MB-468 cells with compound 12 and radiation therapy RadiaitionRadiaition therapy; RT) 병행에 의한 세포 독성 증가 확인  therapy; RT) concurrent cytotoxicity

15-1. 실험방법15-1. Experimental Method

본 발명에 따른 화합물 12와 방사선 치료를 병행하였을 때 삼중음성유방암 세포에 대한 세포 독성을 확인하기 위하여 다음과 같이 실험을 수행하였다.In order to confirm the cytotoxicity of triple negative breast cancer cells when Compound 12 according to the present invention was combined with radiation therapy, the following experiment was conducted.

구체적으로, MDA-MB-468 세포를 96-웰 플레이트 (well plate) 에 1 X 10⁴ cells/well 농도로 분주하고, 37℃ 및 5% CO₂ 조건에서 24시간 동안 배양했다. 그런 다음 화합물 12를 DMSO에 용해시켜, 0, 0.5, 1, 1.5 μM 농도로 처리하고 4시간 동안 배양시켰다. 그리고 2차원 일반 방사선 (경희대학교 의료원 방사선종양학과) 을 0, 1, 5, 10 Gy (Gray) 로 처리한 뒤 20시간 동안 배양시켰다. 이후, 상기 배양액의 배지를 제거하고 MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 시약을 웰 (well) 당 0.5 mg/ml 로 첨가하고 37°에서 3시간 동안 배양시킨 후 배지를 제거하고 웰 (well) 바닥에 붙은 formazan을 녹이기 위해 DMSO 100 μl를 처리하였다. 그런 다음, 10분 동안 shaker 위에서 흔들어 주고 540 nm 파장에서 마이크로플레이트 리더로 흡광도를 측정하여 세포 성장 억제를 확인하였다. Specifically, MDA-MB-468 cells were plated at a concentration of 1 × 10 ⁴ cells / well in a 96-well plate and cultured at 37 ° C. and 5% CO ₂ for 24 hours. Compound 12 was then dissolved in DMSO and treated at concentrations of 0, 0.5, 1, 1.5 μM and incubated for 4 hours. Two - dimensional general radiology (Radiation Oncology, Kyunghee University Medical Center) was treated with 0, 1, 5, 10 Gy (Gray) and cultured for 20 hours. Thereafter, the culture medium was removed and 0.5 mg / ml of MTT (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide) reagent was added per well. After incubation for a period of time, the medium was removed and 100 μl of DMSO was added to dissolve the formazan attached to the well bottom. Then, it was shaken on a shaker for 10 minutes and absorbance was measured by a microplate reader at a wavelength of 540 nm to confirm cell growth inhibition.

15-2. 실험결과15-2. Experiment result

도 21 나타난 바와 같이 삼중음성유방암 세포인 MDA-MB-468 세포에 화합물 12와 방사선 치료 (Radiaition therapy; RT) 를 병행하여 처리하였을 때, 세포의 독성이 증가되며 시너지 효과를 보이는 것을 확인하였다.As shown in FIG. 21, when MDA-MB-468 cells, which are triple-negative breast cancer cells, were treated with Radiation Therapy (RT) in combination with Compound 12, the toxicity of the cells was increased and synergistic effect was shown.

Claims (11)

하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
[화학식 1]

(상기 화학식 1에서,
R¹은 -H, -OH, 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알콕시, 또는 -OAc이고;

R²는

,

이고,
상기 A¹ 및 A²는 독립적으로 -H 또는 -OH 이거나, 함께 연결되어

를 형성하고,
A³은 -H, 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알킬이고,
X는 -OH, 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알콕시 또는 할로겐이고;

R³는 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알킬이거나, R⁴와 함께 연결되어 메틸렌 또는

를 형성하고; 및

R⁴는 R³가 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알킬일 경우, -H 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-5의 알킬이다).
Claims 1. A compound represented by the following formula (1), an optical isomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
[Chemical Formula 1]

(In the formula 1,
R ¹ is -H, -OH, straight or branched C _1-5 alkyl, straight or branched C _1-5 alkoxy, or -OAc;

R ² is

,

ego,
A &lt; ^{1 &gt;} and A &lt; ² &gt; are independently -H or -OH,

Lt; / RTI &gt;
A ³ is -H, or a linear or branched C _1-5 alkyl,
X is -OH, linear or branched C _1-5 alkyl, linear or branched C _1-5 alkoxy or halogen;

R ³ is alkyl of C _1-5 straight or branched chain, it is connected with a methylene or R ⁴

&Lt; / RTI &gt; And

R ⁴ is alkyl when R ³ is a C _1-5 straight or branched chain, alkyl of C _1-5 of -H or a straight or branched chain).
제1항에 있어서,
R¹은 -H, -OH, 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-3의 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-3의 알콕시, 또는 -OAc이고;

R²는

,

이고,
상기 A¹ 및 A²는 독립적으로 -H 또는 -OH 이거나, 함께 연결되어

를 형성하고,
A³은 -H, 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-3의 알킬이고,
X는 -OH, 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-3의 알킬, 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-3의 알콕시 또는 할로겐이고;

R³는 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-3의 알킬이거나, R⁴와 함께 연결되어 메틸렌 또는

를 형성하고; 및

R⁴는 R³가 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-3의 알킬일 경우, -H 또는 직쇄 또는 분지쇄의 C_1-3의 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
The method according to claim 1,
R ¹ is -H, -OH, a linear or branched C _1-3 alkyl, a straight or branched C _1-3 alkoxy, or -OAc;

R ² is

,

ego,
A &lt; ^{1 &gt;} and A &lt; ² &gt; are independently -H or -OH,

Lt; / RTI &gt;
A ³ is -H, or a linear or branched C _1-3 alkyl,
X is-OH, linear or branched C _1-3 alkyl, linear or branched C _1-3 alkoxy or halogen;

R ³ is alkyl of C _1-3 straight or branched chain, it is connected with a methylene or R ⁴

&Lt; / RTI &gt; And

R ⁴ is a compound, its optical isomer or a pharmaceutically acceptable salt thereof, characterized in that when R ³ is a straight or branched C _1-3 alkyl, it is -H or a linear or branched C _1-3 alkyl. Possible salts.
제1항에 있어서,
R¹은 -H, -OH, -OMe, -OEt 또는 -OAc이고;

R²는

,

,

또는

이고,
상기 X는 -OH, -OMe 또는 할로겐이고;

R³는 -CH₃이거나, R⁴와 함께 연결되어 메틸렌 또는

를 형성하고; 및

R⁴는 R³가 -CH₃일 경우 -H인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
The method according to claim 1,
R ¹ is -H, -OH, -OMe, -OEt or -OAc;

R ² is

,

,

or

ego,
X is -OH, -OMe or halogen;

R ³ is -CH _3, or is linked together with R ⁴ to form a methylene or

&Lt; / RTI &gt; And

R ⁴ is -H when R ³ is -CH ₃ , an optical isomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
제1항에 있어서,
상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
(1) (3aR,4S,6aR)-4-(하이드록시메틸)-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;
(2) (3aS,4R,6aR)-3a-하이드록시-4-(하이드록시메틸)-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;
(3) (3aR,4S,6aR)-4-(브로모메틸)-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;
(4) (3aS,4S,6aR)-4-(브로모메틸)-3a-하이드록시-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;
(5) (3aS,4S,6aR)-4-(브로모메틸)-3a-메톡시-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;
(6) (3aS,4R,6aR)-3a-하이드록시-4-(메톡시메틸)-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;
(7) (3aS,4R,6aR)-4-(하이드록시메틸)-3a-메톡시-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;
(8) (3aS,4R,6aR)-3a-메톡시-4-(메톡시메틸)-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;
(9) (3aS,4S,6aR)-4-(플루오로메틸)-3a-하이드록시-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;
(10) (3aS,4S,6aR)-4-(클로로메틸)-3a-하이드록시-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;
(11) (3aS,4S,6aR)-3a-하이드록시-4-(아이오도메틸)-3-메틸렌- 헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;
(12) (3aS,4S,6aR)-4-(브로모메틸)-3a-에톡시-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;
(13) (3aS,4S,6aR)-4-(브로모메틸)-3-메틸렌-2-옥소-헥사하이드로-2H-사이클로펜타[b]퓨란-3a-일 아세테이트;
(14) (3S,3aR,4S,6aR)-4-(브로모메틸)-3a-하이드록시-3-메틸-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;
(15) (3S,3aR,4S,6aR)-4-(브로모메틸)-3a-하이드록시테트라하이드로-2H,4H-스파이로(사이클로펜타[b]퓨란-3,2'-옥시란)-2-온;
(16) (3aS,4R,6aR)-3a-하이드록시-4-((1S,2R)-1-하이드록시-2-메틸부트-3-엔일)-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;
(17) (3aS,4R,6aR)-3a-하이드록시-4-((1R,2S)-1-하이드록시-2-메틸부트-3-엔일)-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온;
(18) (3aS,4R,6aR)-3a-하이드록시-4-((R)-1-하이드록시부트-3-엔일)-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온; 및
(19) (3aS,4R,6aR)-3a-하이드록시-4-((S)-1-하이드록시부트-3-엔일)-3-메틸렌-헥사하이드로사이클로펜타[b]퓨란-2-온.
The method according to claim 1,
The compound represented by the formula (1) is any one selected from the group consisting of the following compounds, an optical isomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
(1) (3aR, 4S, 6aR) -4- (hydroxymethyl) -3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;
(2) (3aS, 4R, 6aR) -3a-Hydroxy-4- (hydroxymethyl) -3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;
(3) (3aR, 4S, 6aR) -4- (bromomethyl) -3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;
(4) (3aS, 4S, 6aR) -4- (bromomethyl) -3a-hydroxy-3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;
(5) (3aS, 4S, 6aR) -4- (bromomethyl) -3a-methoxy-3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;
(6) (3aS, 4R, 6aR) -3a-Hydroxy-4- (methoxymethyl) -3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;
(7) (3aS, 4R, 6aR) -4- (Hydroxymethyl) -3a-methoxy-3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;
(8) (3aS, 4R, 6aR) -3a- methoxy-4- (methoxymethyl) -3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;
(9) (3aS, 4S, 6aR) -4- (fluoromethyl) -3a-hydroxy-3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;
(10) (3aS, 4S, 6aR) -4- (Chloromethyl) -3a-hydroxy-3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;
(11) (3aS, 4S, 6aR) -3a-Hydroxy-4- (Iodomethyl) -3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;
(12) (3aS, 4S, 6aR) -4- (bromomethyl) -3a- ethoxy-3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;
(13) (3aS, 4S, 6aR) -4- (bromomethyl) -3-methylene-2-oxo-hexahydro-2H-cyclopenta [b] furan-3-ylacetate;
(14) (3S, 3aR, 4S, 6aR) -4- (bromomethyl) -3a-hydroxy-3-methyl-hexahydrocyclopenta [b] furan-2-one;
(15) Synthesis of (3S, 3aR, 4S, 6aR) -4- (bromomethyl) -3a-hydroxytetrahydro- 2H, 4H- spiro (cyclopenta [b] furan-3,2'- Gt;
Hydroxy-2-methylbut-3-enyl) -3-methylene-hexahydrocyclopenta [b, ] Furan-2-one;
(17) (3aS, 4R, 6aR) -3a-hydroxy-4 - ((1R, 2S) -1-hydroxy-2-methylbut-3-enyl) -3-methylene-hexahydrocyclopenta [b ] Furan-2-one;
(18) Synthesis of (3aS, 4R, 6aR) -3a-hydroxy-4 - ((R) -1-hydroxybut-3-enyl) -3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan- ; And
(19) Synthesis of (3aS, 4R, 6aR) -3a-hydroxy-4 - ((S) -1-hydroxybut-3-enyl) -3-methylene-hexahydrocyclopenta [b] furan- .
하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,
화학식 2로 표시되는 화합물을 환원시키고 보호기를 제거하여, 화학식 3으로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1); 및
상기 단계 1에서 제조한 화학식 3으로 표시되는 화합물에 산화제를 처리하고 반응시켜, 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 2);를 포함하는 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법:
[반응식 1]

(상기 반응식 1에서,
R¹, R², R³ 및 R⁴는 독립적으로 제1항의 화학식 1에서 정의한 바와 같고; 및
-OTBS는 보호기로서 tert-부틸다이메틸실릴이다).
As shown in Scheme 1 below,
Reducing the compound represented by formula (2) and removing the protecting group to prepare a compound represented by formula (3) (step 1); And
A process for producing a compound represented by the general formula (1) of claim 1, comprising the step of treating a compound represented by the general formula (3) prepared in the step (1) with an oxidizing agent and reacting to prepare a compound represented by the general formula :
[Reaction Scheme 1]

(In the above Reaction Scheme 1,
R ¹ , R ² , R ^3, and R ⁴ are independently as defined in Formula 1 of Claim 1; And
-OTBS is tert-butyldimethylsilyl as a protecting group).
제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암, 당뇨병성망막증, 당뇨병, 혈우병성 관절증, 아테롬성 동맥경화, 켈로이드, 상처 과립화, 혈관 접착, 재발협착증, 장관 접착, 캣 스크래치 질환, 궤양, 간경병증, 당뇨병성 신장병증, 악성 신경화증, 혈전성 미소혈관증, 기관이식거부, 신사구체병증 및 신경퇴행성 질환으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
A pharmaceutical composition comprising a compound represented by the general formula (1) of claim 1, an optical isomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, cancer, diabetic retinopathy, diabetes, hemophilic arthropathy, atherosclerosis, keloid, wound granulation, Or a neurodegenerative disorder selected from the group consisting of a neurodegenerative disease, a neurodegenerative disorder, a neurodegenerative disorder, a neurodegenerative disorder, a neurodegenerative disorder, a neurodegenerative disease, Or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for the manufacture of a medicament for the prophylaxis or treatment of a disease associated with STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3).
삭제delete 제6항에 있어서,
상기 암은 고형암 또는 혈액암인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
The method according to claim 6,
Wherein said cancer is solid cancer or blood cancer.
제8항에 있어서,
상기 고형암은 양성성상세포종, 악성성상세포종, 뇌하수체 선종, 뇌수막종, 뇌림프종, 핍지교종, 두개내인종, 상의세포종, 뇌간종양, 후두암, 구인두암, 비강/부비동암, 비인두암, 침샘암, 하인두암, 갑상선암, 구강암, 흉부종양, 소세포성 폐암, 비소세포성 폐암, 흉선암, 종격동 종양, 식도암, 유방암, 복부종양, 위암, 간암, 담낭암, 담도암, 췌장암, 소장암, 대장암, 항문암, 방광암, 신장암, 음경암, 전립선암, 자궁경부암, 자궁내막암, 난소암, 자궁육종, 질암, 여성외부생식기암 및 피부암으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
9. The method of claim 8,
The solid tumor may be at least one selected from the group consisting of benign astrocytoma, malignant astrocytoma, pituitary adenoma, meningioma, brain lymphoma, oligodendroglioma, intracranial, cytoplasm, brain tumors, laryngeal cancer, uveitic cancer, nasopharyngeal carcinoma, nasopharyngeal carcinoma, Cancer of the breast, cancer of the gallbladder, cancer of the gallbladder, cancer of the bile duct, pancreatic cancer, small bowel cancer, colon cancer, anal cancer, bladder cancer, breast cancer, Wherein the composition is at least one selected from the group consisting of renal cancer, penile cancer, prostate cancer, cervical cancer, endometrial cancer, ovarian cancer, uterine sarcoma, vaginal cancer, female germline cancer and skin cancer.
제8항에 있어서,
상기 고형암은 삼중음성유방암인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
9. The method of claim 8,
Wherein said solid cancer is triple negative breast cancer.
제8항에 있어서,
상기 혈액암은 백혈병, 악성림프종 및 다발성골수종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.9. The method of claim 8,
Wherein the blood cancer is at least one selected from the group consisting of leukemia, malignant lymphoma, and multiple myeloma.

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