KR101794713B1 - 황반변성 예방 또는 치료용 약학조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 신규한 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 황반변성 예방 또는 치료용 약학조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 신규한 펩타이드는 조직변화가 유도된 망막 및 맥락막에서 혈관신생을 효과적으로 억제하여 신생혈관에 의해 유도되는 황반변성을 예방하고 개선시키는 효과를 나타내는 것이 확인됨에 따라, 이를 유효성분으로 함유하는 조성물을 황반변성 예방 또는 치료용 약학조성물로 제공할 수 있다.
Description
본 발명은 신규한 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 황반변성 예방 또는 치료용 약학조성물에 관한 것이다.
황반은 망막의 중심부에 위치한 신경조직으로 시세포의 대부분이 이곳에 모여 있으며, 물체의 상이 맺히는 곳으로 중심시력을 담당한다. 황반변성은 나이가 들면서 진행되는 경우가 많은 안구질환으로 황반 부분에 변성이 일어나 시력장애를 일으키는 질환으로, 발병 초기에는 시야가 흐려지고 가까운 곳의 시력이 뒤틀려서 보이다가 나중에는 실명에 이르게 된다.
나이관련 황반변성(Age-related macular degeneration)은 최근 노인에게서 가장 흔한 실명의 원인으로 알려져있고, 세계적으로 3 천만명 정도가 이병으로 고통받고 있으며, 매년 50 만명의 환자가 이 질병으로 인해 시력을 잃고 있다.
우리나라에서도 녹내장, 당뇨망막 병증과 함께 3대 실명을 야기하는 병으로, 고령인구의 증가로 유병율이 점차 증가하고 있다. 발병 시기 또한 60대에서 4, 50대의 중장년층으로 낮아지고 있는 추세이다.
나이관련 황변변성은 크게 삼출성과 위축성 두 가지 유형으로 분류되는데 삼출성은 나이관련 황반변성의 10% 정도를 차지하며 맥락막혈관신생, 망막색소상피박리, 감각망막박리, 망막색소상피 파열들의 안저소견을 동반하며, 나이관련 황반변성으로 인한 실명의 70~90%가 삼출성 병변에 의한 것으로 알려져있다.
최근 개발된 삼출성 노인성 황반변성의 치료법인 유리체강내 항 혈관형성성장인자 항체 주사법으로 인해 환자들의 시력 향상 및 질병의 예후가 좋아졌으나, 상기 치료법은 비용이 많이 들고, 약효의 반감기가 짧아서 한 달마다 반복적으로 주입술을 받아야 하는 불편함과 유리체강내 직접 약물을 전달해야 하는 시술방법으로 인해 백내장, 안내염, 유리체출혈, 망막박리등의 합병증이 적지 않게 보고되어짐에 따라, 치료 시 나타나는 부작용을 해결하고 환자들의 편리성을 고려한 치료제 개발이 필요한 실정이다.
상기 문제점을 해결하기 위해, 본 발명은 신규한 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 조성물을 나이관련 황반변성 예방 또는 치료용 약학조성물로 제공하고자 한다.
본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 황반변성 예방 또는 치료용 약학조성물을 제공한다.
본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 황반변성 예방 또는 개선용 건강식품을 제공한다.
본 발명에 따른 신규한 펩타이드는 조직변화가 유도된 망막 및 맥락막에서 혈관신생을 효과적으로 억제하여 황반변성을 예방하고 개선시키는 효과를 나타내는 것이 확인됨에 따라, 이를 유효성분으로 함유하는 조성물을 황반변성 예방 또는 치료용 약학조성물 또는 건강식품으로 제공될 수 있다.
도 1은 콜라겐, GDRGD(CPI) 및 히드록시 프롤린-GQDGLAGPK(CPII)가 처리된 HUVEC 세포에서 혈관형성 억제 효과를 확인한 결과이다.
도 2는 레이저 조사 14일 후 레이저 조사에 따른 조직 붕괴 및 신생혈관 형성 정도를 확인한 결과이다.
도 3은 동물모델에 레이저 조사 후, 2, 10 및 20 μg 농도의 콜라겐 또는 2 내지 20 μg 농도의 GDRGD(CPI) 및 히드록시 프롤린-GQDGLAGPK(CPII)를 각각 처리하여 맥락막 신생혈관 억제 효과를 확인한 결과이다.
도 4는 동물모델에 레이저 조사 후, 5 μg 농도의 아바스틴 또는 히드록시 프롤린-GQDGLAGPK(CPII)를 각각 처리하여 맥락막 신생혈관 억제 효과를 확인한 결과이다.
도 5는 동물모델에 레이저 조사 후, 5 μg 농도의 아바스틴 또는 히드록시 프롤린-GQDGLAGPK(CPII)를 각각 처리하고, 레이저 조사 14일 후 망막 및 맥락막에서 RNA를 추출하여 VEGF, ICAM 및 MCP-1 유전자 발현 수준을 확인한 실시간 RT-PCR 결과이다.
도 6은 동물모델에 레이저 조사 후, 5 μg 농도의 아바스틴 또는 히드록시 프롤린-GQDGLAGPK(CPII)를 각각 처리하고, 레이저 조사 14일 후 망막 및 맥락막 추출물에서 VEGF, VEGFR-1(Flt-1), VEGR-2(Flk-1) 및 Angiopoietin 2 단백질 발현 수준을 확인한 웨스턴 블롯 결과이다.
도 2는 레이저 조사 14일 후 레이저 조사에 따른 조직 붕괴 및 신생혈관 형성 정도를 확인한 결과이다.
도 3은 동물모델에 레이저 조사 후, 2, 10 및 20 μg 농도의 콜라겐 또는 2 내지 20 μg 농도의 GDRGD(CPI) 및 히드록시 프롤린-GQDGLAGPK(CPII)를 각각 처리하여 맥락막 신생혈관 억제 효과를 확인한 결과이다.
도 4는 동물모델에 레이저 조사 후, 5 μg 농도의 아바스틴 또는 히드록시 프롤린-GQDGLAGPK(CPII)를 각각 처리하여 맥락막 신생혈관 억제 효과를 확인한 결과이다.
도 5는 동물모델에 레이저 조사 후, 5 μg 농도의 아바스틴 또는 히드록시 프롤린-GQDGLAGPK(CPII)를 각각 처리하고, 레이저 조사 14일 후 망막 및 맥락막에서 RNA를 추출하여 VEGF, ICAM 및 MCP-1 유전자 발현 수준을 확인한 실시간 RT-PCR 결과이다.
도 6은 동물모델에 레이저 조사 후, 5 μg 농도의 아바스틴 또는 히드록시 프롤린-GQDGLAGPK(CPII)를 각각 처리하고, 레이저 조사 14일 후 망막 및 맥락막 추출물에서 VEGF, VEGFR-1(Flt-1), VEGR-2(Flk-1) 및 Angiopoietin 2 단백질 발현 수준을 확인한 웨스턴 블롯 결과이다.
본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 황반변성 예방 또는 치료용 약학조성물을 제공할 수 있다.
상기 펩타이드는 콜라겐 타입 Ⅱ α1(collagen type Ⅱα1) 유래일 수 있다.
상기 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드는 첫 번째 아미노산이 히드록시 프롤린(Hydroxy proline)인 펩타이드일 수 있으며, 보다 바람직하게는 히드록시 프롤린-GQDGLAGPK(Hydroxy proline-GQDGLAGPK)일 수 있다.
상기 펩타이드는 안구의 신생혈관형성을 억제하여 황반변성을 예방하거나 치료할 수 있으며, 상기 황반변성은 노인성 황반변성일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 생쥐의 안구내에 레이저를 조사하여 손상을 입히고, 14일 후 안구를 적출하여 H&E 염색을 수행하였다.
그 결과, 도 2와 같이 레이저 조사 부위의 조직이 붕괴되면서 신생혈관이 형성된 것을 확인할 수 있었다. 반면, 도 3과 같이 레이저 조사 후 콜라겐, CPI 및 CPII를 각각 처리한 실험군에서는 모두 2 μg으로 처리되었을 때 CNV 병변이 감소된 것을 확인할 수 있었다.
또한, In vitro Tube formation 실험에서 가장 뛰어난 항혈관형성능을 보인 히드록시 프롤린-GQDGLAGPK (CPII)의 맥락막 신생혈관 억제 효과를 양성대조군인 아바스틴(Avastin)과 비교한 결과, 도 3과 같이 CPII 처리군의 병변 크기가 대조군의 병변 크기보다 유의하게 감소하였으며, 동일한 농도의 Avastin이 처리된 양성대조군의 병변 크기와 유사한 수준인 것으로 확인되었다.
상기 결과로부터 히드록시 프롤린-GQDGLAGPK 펩타이드는 혈관신생에의해 발병되는 노인성 황반변성에 우수한 치료효과를 나타낼 수 있다.
상기 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드는 약학조성물 총 100 중량부에 대하여 0.1 내지 50 중량부로 함유될 수 있다.
상기 약학조성물은 점안제, 주사제, 과립제, 정제, 환제, 캡슐제, 겔, 시럽, 현탁제, 유제, 점적제 및 액제로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 제형일 수 있다.
본 발명의 다른 구체예에서, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 황반변성 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물은 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제, 붕해제, 감미제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제, 향미제, 항산화제, 완충액, 정균제, 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 첨가제를 추가로 포함할 수 있다.
구체적으로 담체, 부형제 및 희석제는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 사용할 수 있으며, 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제할 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용할 수 있다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 있으며 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기재로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따르면 상기 약학 조성물은 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 복강내, 흉골내, 경피, 비측내, 흡입, 국소, 직장, 경구, 안구내 또는 피내 경로를 통해 통상적인 방식으로 대상체로 투여할 수 있다.
상기 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드의 바람직한 투여량은 대상체의 상태 및 체중, 질환의 종류 및 정도, 약물 형태, 투여경로 및 기간에 따라 달라질 수 있으며 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 본 발명의 일실시예에 따르면 이에 제한되는 것은 아니지만 1일 투여량이 0.01 내지 200 mg/kg, 구체적으로는 0.1 내지 200 mg/kg, 보다 구체적으로는 0.1 내지 100 mg/kg 일 수 있다. 투여는 하루에 한 번 투여할 수도 있고 수회로 나누어 투여할 수도 있으며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 상기 '대상체'는 인간을 포함하는 포유동물일 수 있으나, 이들 예에 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 황반변성 예방 또는 개선용 건강식품을 제공할 수 있다.
상기 건강식품은 상기 펩타이드 이외에 다른 식품 또는 식품 첨가물과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.유효성분의 혼합양은 그의 사용 목적 예를들어 예방, 건강 또는 치료적 처치에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
상기 건강식품에 함유된 화합물의 유효용량은 상기 치료제의 유효용량에 준해서 사용할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있음은 확실하다.
상기 건강식품의 종류에는 특별한 제한이 없고, 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제등을 들 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
<
실험예
1>
펩타이드
합성
모든 실험에 사용된 펩타이드(peptide)는 콜라겐 타입 Ⅰ α1을 기반으로 하는 GDRGD 펩타이드(이하‘CPI’; 서열번호 2)와 콜라겐 타입 Ⅱ α1을 기반으로 하는 히드록시 프롤린-GQDGLAGPK 펩타이드(Hydroxy proline-GQDGLAGPK; 이하‘CPⅡ’; 서열번호 1)로 (주)바이오셀트란(강원도, 대한민국)에서 합성하였다.
<
실험예
2> Tubing assay
히드록시 프롤린-GQDGLAGPK의 항혈관형성 효과를 사람 혈관내피세포 (HUVEC)를 이용한 Tubing assay를 수행하여 확인하였다.
HUVEC 세포를 calcein-AM으로 염색한 후 마트리겔(Matrigel)이 코팅된 48-웰 플레이트에 분주하고 50ng/ml 농도의 재조합 사람 VEGF와 함께 콜라겐, CPI 및 CPII를 농도별로 처리하고, 37℃ 인큐베이터에서 4시간 방치한 후 형광현미경 (Leica)으로 관(Tube) 형성을 관찰하고, 관 길이는 Image lab software (Bio-Rad Laboratories)로 분석하였다.
<
실험예
3> 실험동물 및 맥락막 신생혈관(
CNV
) 모델 제작
C57BL/6 생쥐를 오리엔트 바이오에서 구입하였으며, 본 동물 실험은 눈과 시력 연구를 위한 동물 사용에 대하여 인제대학교 의과대학 (No,2013-053)과 ARVO에 승인된 지침에 따라 수행되었다. 6주령의 C57BL/6 생쥐에게 다이오드 그린 레이저(diode green laser; 532 nm, 150 mW, 0.1sec, 50 μM, photocoagulator)를 이용하여 망막 시신경 부위에 손상을 주었다. Laser 조사 직후 CP1, CPII 및 양성대조군 아바스틴(Avastin)을 PBS에 용해하여 하루에 5 mg씩 5일간 안구내에 투여하였다. 각 실험군은 각각 5마리씩 생쥐의 양쪽 눈을 이용하여 상기 실험을 진행하였다.
<
실험예
4> 조직학적 분석
레이저에 의한 조직 변화를 관찰하기 위하여, 마우스 안구를 적출하여 10% 포르말린으로 고정시키고, OCT 혼합물에 깊숙히 박았다.
상기 방법으로 처리된 8 μm 조직 시료를 헤마톡실린&에오신(H&E)으로 염색하고 가상 현미경(NanoZoomer 2.0 RS, Hamamatsu, Japan)을 이용하여 촬영 및 분석하였다.
<
실험예
5> 망막-맥락막
플랫
마운트(Flat-mount)
레이저 조사 14일 후 망막-맥락막 플랫 마운드를 수행하여 CPII의 CNV 병변 크기 억제 효과를 확인하였다. 생쥐를 마취시키고 25mg/ml의 FITC-덱스트란(dextran)을 retro-orbital로 100 ml 주사하였다. 30분 후 마우스를 안락사하고 안구를 적출하여 10% 포르말린으로 고정한 후 각막과 수정체를 제거하고 커버 글래스에 플랫 마운트하였다. FITC-덱스트란에 의해 염색된 신생혈관은 형광 현미경(Leica)을 통해 관찰하고, 그 병변 크기를 Image J program을 통하여 측정하였다.
<
실험예
6> 정량적 실시간 RT-
PCR
분석
히드록시 프롤린-GQDGLAGPK의 신생혈관 관련 유전자 발현 억제 효과를 확인하기 위하여, 적출된 생쥐 안구의 망막과 맥락막 혼합물에서 RNeasy Mini kit (Qiagen)을 이용하여 RNA를 추출하고, 올리고(dT) 프라이머와 역전사 효소를 이용하여 cDNA를 합성하였다. PCR 산물은 표 1의 특이적 프라이머 세트(코스모진텍, Korea) 및 SYBR Green PCR 2X PreMix (Enzynomics)를 이용하여 증폭시켰으며, 수행된 PCR 조건으로는 시료를 95℃에서 10분 동안 배양한 후, 95℃에서 15초, 60℃에서 30초 및 72℃에서 15초 동안 진행하여 40 PCR 사이클을 수행하였다. 상대 정량화를 2-(DDCT)방법 [Livak and Schmittgen, 2001; DDCT = (CT,target-CT,actin) 처리구 (CT,target-CT,actin)대조구]으로 계산하였다.
|
Target
|
프라이머 서열( 5’→ 3’) | |
| 정방향 | 역방향 | |
| VEGF | ATGAACTTTCTGCTGTCTTGGGTG | TCACCGCCTCGGCTTGTCACA |
| ICAM | TGCGTTTTGGAGCTAGCGGACCA | CGAGGACCATACAGCACGTGCCAG |
| MCP -1 | TGGCAAGATGATCCCAATGA | GCAGCACTGTTCGTCACTTCA |
| GAPDH | ATGGTGAAGGTCGGTGTGAAC | GTGCCGTTGAATTTGCCGTGA |
<
실험예
7>
웨스턴
블롯
생쥐의 망막과 맥락막 혼합물을 프로테아제 억제 칵테일 및 포스파타아제 억제 칵테일이 포함된 Pro-PREP buffer (iNtRON)로 용해한 후 단백질을 추출하였다.
추출된 단백질은 BCA assay kit (Pierce)를 이용하여 정량한 후, SDS gel loading buffer와 혼합하여 100℃에서 5분간 끓여 변성시켰다. SDS-PAGE 겔에서 전기영동된 단백질은 니트로 셀룰로스 막 (Millipore)으로 옮겨졌고, 그 후 비특이적 단백질 결합을 차단하기 위하여 막을 5% 탈지유에서 1시간 방치 후 1차 항체로 VEGF, Flk-1, Flt-1, Angiopoetin-2 및 β-actin (Santa Cruz Biotechnology)을 처리하여 일반적인 면역블롯을 수행하였다. 그 후 ECL kit (Advansta) 및 multiple Gel DOC system으로 변역반응성 단백질을 검출하였다.
<
실시예
1>
펩타이드의
혈관형성 억제 효과 확인
실험예 1과 같은 방법으로 사람 혈관내피세포(HUVEC)를 이용한 Tubing assay를 수행하여 히드록시 프롤린-GQDGLAGPK의 항 혈관형성 효과를 확인하였다.
그 결과, 도 1과 같이 VEGF 처리군에서는 VEGF 비처리군보다 Tube formation이 약 1.5배 이상 증가된 반면, 콜라겐, CPI 및 CPII이 처리된 실험군에서는 모두 유의적으로 혈관형성이 억제되었다. 특히, CPII는 농도 의존적으로 Tube formation을 억제하였으며, VEGF 비처리군의 혈관형성 정도와 거의 동일하게 감소된 것으로 나타났다. 또한, 나이관련 황반변성 치료제인 Avastin 처리군과도 유사한 수준으로 확인되었다.
<
실시예
2>
펩타이드의
맥락막 신생혈관 억제 효과 확인
실험예 3과 같은 방법으로 생쥐 안구에 레이저를 조사하였으며, 레이저 조사 14일 후 안구를 적출하여 H&E 염색을 수행하였다.
그 결과, 도 2와 같이 레이저 조사 부위의 조직이 붕괴되면서 신생혈관이 형성된 것을 확인할 수 있었다. 반면, 도 3과 같이 콜라겐, CPI 및 CPII를 각각 안구내 주사로 5일 동안 처리한 실험군에서는 모두 2 μg으로 처리되었을 때 CNV 병변이 감소된 것을 확인할 수 있었다.
또한, 앞선 실험에서 확인한 바와 같이 In vitro Tube formation 실험에서 가장 뛰어난 항혈관형성능을 보인 히드록시 프롤린-GQDGLAGPK (CPII)의 맥락막 신생혈관 억제 효과를 양성대조군인 아바스틴(Avastin)과 비교하기 위하여, 레이저 조사 직후부터 CPII 및 아바스틴을 각각 5 μg 씩 5일간 연속적으로 안구내 주사하고, 레이저 조사 14일 후 안구를 적출한 후 혈관을 FITC-덱스트란으로 염색한 후, 플랫-마운드 실험을 수행하여 CNV 병변 크기를 측정하였다.
그 결과, 도 3과 같이 CPII 처리군의 병변 크기가 대조군의 병변 크기보다 유의하게 감소하였으며, 동일한 농도의 Avastin이 처리된 양성대조군의 병변 크기와 유사한 수준인 것으로 확인되었다.
<
실시예
3>
펩타이드의
신생혈관 관련 유전자 및 단백질 억제 효과
확인
생쥐에 레이저 조사 14일 후, 망막과 맥락막에서 RNA를 추출하여 실시간 RT-PCR로 유전자 발현을 분석하였다.
그 결과, 도 4와 같이 대표적인 신생혈관 관련 유전자인 VEGF가 레이저 처리군에서는 55배 정도 발현이 증가되었으나, 아바스틴 처리군 및 CPII 처리군에서는 레이저 비처리군과 비슷한 수준으로 감소된 것을 확인할 수 있었다.
한편, ICAM 및 MCP-1 유전자는 레이저 처리군에서 각각 약 300배 및 10배의 발현 증가가 확인되었으나, 이 역시 CPII 처리군에서는 유의적으로 감소된 것을 확인할 수 있었다.
또한, 신생혈관 관련 단백질 마커들의 발현에 있어 CPII의 효과를 평가하기 위해 레이저 조사 14일 후, 망막과 맥락막에서 단백질을 추출하여 VEGF, VEGFR-1 (Flt-1), VEGR-2 (Flk-1) 및 Angiopoietin 2의 면역 블롯팅을 수행하였다.
그 결과, 도 5와 같이, 레이저 조사에 의해 신생혈관 형성 촉진 인자인 Angiopoietin2와 VEGFR-1,-2의 발현이 현저히 증가된 것을 확인할 수 있었으며, 특히 신생혈관 형성에 가장 중요한 역할을 하다고 알려진 VEGF의 발현이 현저하게 증가되었다. 그러나 CPII가 처리된 실험군에서는 상기 단백질들의 발현이 현저히 감소하였으며, 나이관련 황반변성 치료제 아바스틴과 거의 유사한 수준을 나타내었다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
<110> INJE UNIVERSITY INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION
<120> Pharmaceutical composition for preventing or treating macular
degeneration
<130> ADP-2016-0099
<160> 2
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Hydroxy proline-GQDGLAGPK
<400> 1
Pro Gly Gln Asp Gly Leu Ala Gly Pro Lys
1 5 10
<210> 2
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> peptide
<400> 2
Gly Asp Arg Gly Asp
1 5
Claims (6)
- 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 황반변성 예방 또는 치료용 약학조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 펩타이드는 콜라겐 타입 Ⅱ α1(collagen type Ⅱα1) 유래인 것을 특징으로 하는 황반변성 예방 또는 치료용 약학조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 펩타이드는 안구의 신생혈관형성을 억제하는 것을 특징으로 하는 황반변성 예방 또는 치료용 약학조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드는 약학조성물 총 100 중량부에 대하여 0.1 내지 50 중량부로 함유되는 것을 특징으로 하는 황반변성 예방 또는 치료용 약학조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 약학조성물은 점안제, 주사제, 과립제, 정제, 환제, 캡슐제, 겔, 시럽, 현탁제, 유제, 점적제 및 액제로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 황반변성 예방 또는 치료용 약학조성물.
- 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 유효성분으로 함유하는 황반변성 예방 또는 개선용 건강식품.
Priority Applications (14)
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| KR102593936B1 (ko) * | 2021-12-13 | 2023-10-27 | 주식회사 아이바이오코리아 | 신규한 펩타이드를 포함하는 황반변성의 치료용 조성물 |
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