KR101770310B1 - 2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-올 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents
2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-올 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 Download PDFInfo
- Publication number
- KR101770310B1 KR101770310B1 KR1020160044950A KR20160044950A KR101770310B1 KR 101770310 B1 KR101770310 B1 KR 101770310B1 KR 1020160044950 A KR1020160044950 A KR 1020160044950A KR 20160044950 A KR20160044950 A KR 20160044950A KR 101770310 B1 KR101770310 B1 KR 101770310B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- benzo
- oxazol
- formula
- amino
- cells
- Prior art date
Links
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 title claims abstract description 18
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 10
- GGKVPGBTZAZELN-UHFFFAOYSA-N 2-anilino-1,3-benzoxazol-5-ol Chemical class N=1C2=CC(O)=CC=C2OC=1NC1=CC=CC=C1 GGKVPGBTZAZELN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 9
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 23
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims abstract description 21
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 claims abstract description 18
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 125000002490 anilino group Chemical group [H]N(*)C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims abstract description 15
- UPPYOQWUJKAFSG-UHFFFAOYSA-N 1,3-benzoxazol-5-ol Chemical class OC1=CC=C2OC=NC2=C1 UPPYOQWUJKAFSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 185
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 79
- -1 2- (4-fluorophenylamino) benzo [d] oxazol- Benzo [d] oxazole-5-ol Chemical compound 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 14
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 claims description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 12
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 claims description 9
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 9
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 9
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 7
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 claims description 6
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 claims description 5
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 5
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 claims description 4
- YOZYNULQJKLYBI-UHFFFAOYSA-N BrC=1C=C(C=CC=1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O Chemical compound BrC=1C=C(C=CC=1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O YOZYNULQJKLYBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ZZTRUKSMZOAWHG-UHFFFAOYSA-N C(CCC)C1=CC=C(C=C1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O Chemical compound C(CCC)C1=CC=C(C=C1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O ZZTRUKSMZOAWHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 4
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 claims description 4
- MBJQIJMODFHSDD-UHFFFAOYSA-N C(C)C1=C(C=CC=C1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O Chemical compound C(C)C1=C(C=CC=C1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O MBJQIJMODFHSDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- NGMSWDKXWSLLBP-FCQUAONHSA-N C1(=CC=CC=C1)\N=N/C1=CC=C(C=C1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O Chemical compound C1(=CC=CC=C1)\N=N/C1=CC=C(C=C1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O NGMSWDKXWSLLBP-FCQUAONHSA-N 0.000 claims description 3
- NBNGZDRPROMQCS-UHFFFAOYSA-N CSC1=CC=C(C=C1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O Chemical compound CSC1=CC=C(C=C1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O NBNGZDRPROMQCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- DCFUOQIILYCTOW-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dichloroanilino)-1,3-benzoxazol-5-ol Chemical compound ClC=1C=C(C=CC=1Cl)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O DCFUOQIILYCTOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- QMPUZICSZWQUCI-UHFFFAOYSA-N 2-(4-hydroxyanilino)-1,3-benzoxazol-5-ol Chemical compound OC1=CC=C(C=C1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O QMPUZICSZWQUCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FBOVIEBMMCSKMH-UHFFFAOYSA-N C(C)C1=CC=C(C=C1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O Chemical compound C(C)C1=CC=C(C=C1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O FBOVIEBMMCSKMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- DLGCOMGYWAVJPE-UHFFFAOYSA-N C1(=CC=C(C=C1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O)C Chemical compound C1(=CC=C(C=C1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O)C DLGCOMGYWAVJPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- IHJAMXVQFGYTTE-UHFFFAOYSA-N CC(C)C1=CC=C(NC2=NC3=C(O2)C=CC(O)=C3)C=C1 Chemical compound CC(C)C1=CC=C(NC2=NC3=C(O2)C=CC(O)=C3)C=C1 IHJAMXVQFGYTTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- BFGFFGYRVIPPNO-UHFFFAOYSA-N COC1=C(C=CC(=C1)[N+](=O)[O-])NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O Chemical compound COC1=C(C=CC(=C1)[N+](=O)[O-])NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O BFGFFGYRVIPPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- UMVUPCIGNWGFPX-UHFFFAOYSA-N IC1=CC=C(C=C1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O Chemical compound IC1=CC=C(C=C1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O UMVUPCIGNWGFPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- UMFJRHFYEZKWDS-UHFFFAOYSA-N NC1=CC=C(C=C1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O Chemical compound NC1=CC=C(C=C1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O UMFJRHFYEZKWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- URVVUTHGMMOSBY-UHFFFAOYSA-N OC=1C=C(C=CC=1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O Chemical compound OC=1C=C(C=CC=1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O URVVUTHGMMOSBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- RCFPCNGGHGKJRN-UHFFFAOYSA-N [N+](=O)([O-])C1=CC=C(C=C1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O Chemical compound [N+](=O)([O-])C1=CC=C(C=C1)NC=1OC2=C(N=1)C=C(C=C2)O RCFPCNGGHGKJRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 52
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 36
- 108010093579 Arachidonate 5-lipoxygenase Proteins 0.000 abstract description 25
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 abstract description 24
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 abstract description 24
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 18
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 9
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 102000001381 Arachidonate 5-Lipoxygenase Human genes 0.000 abstract 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 41
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 36
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 36
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 34
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 102100022364 Polyunsaturated fatty acid 5-lipoxygenase Human genes 0.000 description 24
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 19
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 18
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 17
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 16
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 16
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 12
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 11
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 10
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 9
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 9
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 8
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 8
- BCMCBBGGLRIHSE-UHFFFAOYSA-N 1,3-benzoxazole Chemical compound C1=CC=C2OC=NC2=C1 BCMCBBGGLRIHSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 7
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N Dimethoxyethane Chemical compound COCCOC XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 6
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 6
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101100545004 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) YSP2 gene Proteins 0.000 description 6
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 6
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 6
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 6
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 6
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 6
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 6
- 230000009422 growth inhibiting effect Effects 0.000 description 6
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 6
- GWNVDXQDILPJIG-NXOLIXFESA-N leukotriene C4 Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C=C/C=C/[C@H]([C@@H](O)CCCC(O)=O)SC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O GWNVDXQDILPJIG-NXOLIXFESA-N 0.000 description 6
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 6
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 6
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 5
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 5
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 5
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 5
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000007489 histopathology method Methods 0.000 description 5
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 5
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 5
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 5
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 5
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 5
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-M 2-methylbenzenesulfonate Chemical compound CC1=CC=CC=C1S([O-])(=O)=O LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- VDABVNMGKGUPEY-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein succinimidyl ester Chemical compound C=1C(O)=CC=C2C=1OC1=CC(O)=CC=C1C2(C1=C2)OC(=O)C1=CC=C2C(=O)ON1C(=O)CCC1=O VDABVNMGKGUPEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N Cocarcinogen A1 Natural products CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC1C(C)C2(O)C3C=C(C)C(=O)C3(O)CC(CO)=CC2C2C1(OC(C)=O)C2(C)C PHEDXBVPIONUQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 4
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N ionomycin Chemical compound O1[C@H](C[C@H](O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)/C=C/C[C@@H](C)C[C@@H](C)C(/O)=C/C(=O)[C@@H](C)C[C@@H](C)C[C@@H](CCC(O)=O)C)CC[C@@]1(C)[C@@H]1O[C@](C)([C@@H](C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N 0.000 description 4
- PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N ionomycin Natural products O1C(CC(O)C(C)C(O)C(C)C=CCC(C)CC(C)C(O)=CC(=O)C(C)CC(C)CC(CCC(O)=O)C)CCC1(C)C1OC(C)(C(C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 4
- IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-M mandelate Chemical compound [O-]C(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 IWYDHOAUDWTVEP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- KVBGVZZKJNLNJU-UHFFFAOYSA-N naphthalene-2-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=CC2=CC(S(=O)(=O)O)=CC=C21 KVBGVZZKJNLNJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000035407 negative regulation of cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 1,1-Dichloroethane Chemical compound CC(Cl)Cl SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 3
- 102100027286 Fanconi anemia group C protein Human genes 0.000 description 3
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 3
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 102000003820 Lipoxygenases Human genes 0.000 description 3
- 108090000128 Lipoxygenases Proteins 0.000 description 3
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 3
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 3
- ZZXDRXVIRVJQBT-UHFFFAOYSA-M Xylenesulfonate Chemical compound CC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1C ZZXDRXVIRVJQBT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N acetic acid phenyl ester Natural products CC(=O)OC1=CC=CC=C1 IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 3
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- JOYKCMAPFCSKNO-UHFFFAOYSA-N chloro benzenesulfonate Chemical compound ClOS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 JOYKCMAPFCSKNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 239000004210 ether based solvent Substances 0.000 description 3
- 229940093499 ethyl acetate Drugs 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 3
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 3
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PSZYNBSKGUBXEH-UHFFFAOYSA-N naphthalene-1-sulfonic acid Chemical compound C1=CC=C2C(S(=O)(=O)O)=CC=CC2=C1 PSZYNBSKGUBXEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 3
- DYUMLJSJISTVPV-UHFFFAOYSA-N phenyl propanoate Chemical compound CCC(=O)OC1=CC=CC=C1 DYUMLJSJISTVPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940049953 phenylacetate Drugs 0.000 description 3
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- 229940071104 xylenesulfonate Drugs 0.000 description 3
- IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N (S)-colchicine Chemical compound C1([C@@H](NC(C)=O)CC2)=CC(=O)C(OC)=CC=C1C1=C2C=C(OC)C(OC)=C1OC IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N 0.000 description 2
- HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C(CN1CC2=C(CC1)NN=N2)=O HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZFUQSJFWNHZHM-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 WZFUQSJFWNHZHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WEXILGZJANNTPG-UHFFFAOYSA-N 4-(1,3-benzoxazol-2-ylamino)phenol Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1NC1=NC2=CC=CC=C2O1 WEXILGZJANNTPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 2
- 108010037462 Cyclooxygenase 2 Proteins 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N D-gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150106931 IFNG gene Proteins 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 2
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 2
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 2
- 102000000646 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000011779 Nitric Oxide Synthase Type II Human genes 0.000 description 2
- 108010076864 Nitric Oxide Synthase Type II Proteins 0.000 description 2
- VMBDJTJINVRCLZ-VHXPQNKSSA-N OC1=C(C=C(C=C1)OC)NC(=S)NC1=CC=C(C=C1)\N=N/C1=CC=CC=C1 Chemical compound OC1=C(C=C(C=C1)OC)NC(=S)NC1=CC=C(C=C1)\N=N/C1=CC=CC=C1 VMBDJTJINVRCLZ-VHXPQNKSSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100038280 Prostaglandin G/H synthase 2 Human genes 0.000 description 2
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004495 STAT3 Transcription Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010017324 STAT3 Transcription Factor Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 2
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M benzenesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229940077388 benzenesulfonate Drugs 0.000 description 2
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940043237 diethanolamine Drugs 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940041476 lactose 100 mg Drugs 0.000 description 2
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- QPJVMBTYPHYUOC-UHFFFAOYSA-N methyl benzoate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1 QPJVMBTYPHYUOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MSQXUDGFXGTBKY-UHFFFAOYSA-N n-(3,4-dichlorophenyl)-1,3-benzoxazol-2-amine Chemical compound C1=C(Cl)C(Cl)=CC=C1NC1=NC2=CC=CC=C2O1 MSQXUDGFXGTBKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CJZMREYRBJFBEO-UHFFFAOYSA-N n-(3-bromophenyl)-1,3-benzoxazol-2-amine Chemical compound BrC1=CC=CC(NC=2OC3=CC=CC=C3N=2)=C1 CJZMREYRBJFBEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KKIDKWUGBUWNPR-UHFFFAOYSA-N n-(4-ethylphenyl)-1,3-benzoxazol-2-amine Chemical compound C1=CC(CC)=CC=C1NC1=NC2=CC=CC=C2O1 KKIDKWUGBUWNPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VITGTHQUYHJKCN-UHFFFAOYSA-N n-(4-nitrophenyl)-1,3-benzoxazol-2-amine Chemical compound C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1NC1=NC2=CC=CC=C2O1 VITGTHQUYHJKCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CKAMKWPPZHSIOA-UHFFFAOYSA-N n-(4-propan-2-ylphenyl)-1,3-benzoxazol-2-amine Chemical compound C1=CC(C(C)C)=CC=C1NC1=NC2=CC=CC=C2O1 CKAMKWPPZHSIOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- XXQBEVHPUKOQEO-UHFFFAOYSA-N potassium superoxide Chemical compound [K+].[K+].[O-][O-] XXQBEVHPUKOQEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 2
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- HBZBAMXERPYTFS-SECBINFHSA-N (4S)-2-(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,2-f][1,3]benzothiazol-2-yl)-4,5-dihydro-1,3-thiazole-4-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(=N1)c1nc2cc3CCNc3cc2s1 HBZBAMXERPYTFS-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- OSBIEFWIIINTNJ-UHFFFAOYSA-N 1,2-dichloro-4-isothiocyanatobenzene Chemical compound ClC1=CC=C(N=C=S)C=C1Cl OSBIEFWIIINTNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JPBLHOJFMBOCAF-UHFFFAOYSA-N 1,3-benzoxazol-2-amine Chemical compound C1=CC=C2OC(N)=NC2=C1 JPBLHOJFMBOCAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZMGMGHNOACSMQN-UHFFFAOYSA-N 1-bromo-3-isothiocyanatobenzene Chemical compound BrC1=CC=CC(N=C=S)=C1 ZMGMGHNOACSMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXVPXJHMTUKENZ-UHFFFAOYSA-N 1-butyl-4-isothiocyanatobenzene Chemical compound CCCCC1=CC=C(N=C=S)C=C1 PXVPXJHMTUKENZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVAFDUCMHLFDIG-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-2-isothiocyanatobenzene Chemical compound CCC1=CC=CC=C1N=C=S OVAFDUCMHLFDIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XXLWCGRHJFEMQH-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-4-isothiocyanatobenzene Chemical compound CCC1=CC=C(N=C=S)C=C1 XXLWCGRHJFEMQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNLGBRZZFRSXHA-UHFFFAOYSA-N 1-iodo-4-isothiocyanatobenzene Chemical compound IC1=CC=C(N=C=S)C=C1 SNLGBRZZFRSXHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NXWXXLFRMVILJN-UHFFFAOYSA-N 1-isothiocyanato-2-methoxy-4-nitrobenzene Chemical compound COC1=CC([N+]([O-])=O)=CC=C1N=C=S NXWXXLFRMVILJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ABQKHKWXTUVKGF-UHFFFAOYSA-N 1-isothiocyanato-4-methylbenzene Chemical compound CC1=CC=C(N=C=S)C=C1 ABQKHKWXTUVKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NXHSSIGRWJENBH-UHFFFAOYSA-N 1-isothiocyanato-4-nitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(N=C=S)C=C1 NXHSSIGRWJENBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNWJJTIJIDXIHL-UHFFFAOYSA-N 1-isothiocyanato-4-propan-2-ylbenzene Chemical compound CC(C)C1=CC=C(N=C=S)C=C1 SNWJJTIJIDXIHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LNETULKMXZVUST-UHFFFAOYSA-M 1-naphthoate Chemical compound C1=CC=C2C(C(=O)[O-])=CC=CC2=C1 LNETULKMXZVUST-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- HCSBTDBGTNZOAB-UHFFFAOYSA-N 2,3-dinitrobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1[N+]([O-])=O HCSBTDBGTNZOAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethoxybenzenecarbothioamide Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(N)=S WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TUADYTFWZPZZTP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-methoxyphenol Chemical compound COC1=CC=C(O)C(N)=C1 TUADYTFWZPZZTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BCGIFDYWZBTADX-UHFFFAOYSA-N 3-(1,3-benzoxazol-2-ylamino)phenol Chemical compound OC1=CC=CC(NC=2OC3=CC=CC=C3N=2)=C1 BCGIFDYWZBTADX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BWZDLMGVEVSNBI-UHFFFAOYSA-N 3-isothiocyanatophenol Chemical compound OC1=CC=CC(N=C=S)=C1 BWZDLMGVEVSNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SBABYCHYIKHAAW-UHFFFAOYSA-N 4-isothiocyanatoaniline Chemical compound NC1=CC=C(N=C=S)C=C1 SBABYCHYIKHAAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HIPHYBWWZWRZOV-UHFFFAOYSA-N 4-isothiocyanatophenol Chemical compound OC1=CC=C(N=C=S)C=C1 HIPHYBWWZWRZOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DKVOCGXYEMINRH-UHFFFAOYSA-N 4-n-(1,3-benzoxazol-2-yl)benzene-1,4-diamine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1NC1=NC2=CC=CC=C2O1 DKVOCGXYEMINRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LNUVFWREIOUOEF-UHFFFAOYSA-N C1=CC(I)=CC=C1NC1=NC2=CC=CC=C2O1 Chemical compound C1=CC(I)=CC=C1NC1=NC2=CC=CC=C2O1 LNUVFWREIOUOEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003359 CD4-positive helper T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- FDFGEAFVDVXXFL-DQRAZIAOSA-N COC=1C=CC2=C(N(CO2)C2=CC=C(C=C2)\N=N/C2=CC=CC=C2)C1 Chemical compound COC=1C=CC2=C(N(CO2)C2=CC=C(C=C2)\N=N/C2=CC=CC=C2)C1 FDFGEAFVDVXXFL-DQRAZIAOSA-N 0.000 description 1
- MSUAWKKFWOILAK-VHXPQNKSSA-N COC=1C=CC2=C(N=C(O2)NC2=CC=C(C=C2)\N=N/C2=CC=CC=C2)C=1 Chemical compound COC=1C=CC2=C(N=C(O2)NC2=CC=C(C=C2)\N=N/C2=CC=CC=C2)C=1 MSUAWKKFWOILAK-VHXPQNKSSA-N 0.000 description 1
- 101000946068 Caenorhabditis elegans Ceramide glucosyltransferase 3 Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004606 Fillers/Extenders Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-M Glycolate Chemical compound OCC([O-])=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101000620009 Homo sapiens Polyunsaturated fatty acid 5-lipoxygenase Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 229930191564 Monensin Natural products 0.000 description 1
- GAOZTHIDHYLHMS-UHFFFAOYSA-N Monensin A Natural products O1C(CC)(C2C(CC(O2)C2C(CC(C)C(O)(CO)O2)C)C)CCC1C(O1)(C)CCC21CC(O)C(C)C(C(C)C(OC)C(C)C(O)=O)O2 GAOZTHIDHYLHMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001034843 Mus musculus Interferon-induced transmembrane protein 1 Proteins 0.000 description 1
- ZTXNMMXJFVCQPD-NXVVXOECSA-N N(=C=S)C1=CC=C(C=C1)\N=N/C1=CC=CC=C1 Chemical compound N(=C=S)C1=CC=C(C=C1)\N=N/C1=CC=CC=C1 ZTXNMMXJFVCQPD-NXVVXOECSA-N 0.000 description 1
- GZMMALULKDMROF-UHFFFAOYSA-N N-(2-ethylphenyl)-1,3-benzoxazol-2-amine Chemical compound CCc1ccccc1Nc1nc2ccccc2o1 GZMMALULKDMROF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N Nitrous acid Chemical compound ON=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCCQHNZPUCVJTO-UHFFFAOYSA-N OC(C(=O)O)CC.ClC1=CC=CC=C1 Chemical compound OC(C(=O)O)CC.ClC1=CC=CC=C1 ZCCQHNZPUCVJTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000012868 Overgrowth Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102100026459 POU domain, class 3, transcription factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-L Phosphate ion(2-) Chemical compound OP([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 101710141795 Ribonuclease inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 229940122208 Ribonuclease inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102100037968 Ribonuclease inhibitor Human genes 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N Sulfurous acid Chemical compound OS(O)=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000299461 Theobroma cacao Species 0.000 description 1
- 235000005764 Theobroma cacao ssp. cacao Nutrition 0.000 description 1
- 235000005767 Theobroma cacao ssp. sphaerocarpum Nutrition 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 1
- YTIVTFGABIZHHX-UHFFFAOYSA-L acetylenedicarboxylate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)C#CC([O-])=O YTIVTFGABIZHHX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000010398 acute inflammatory response Effects 0.000 description 1
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N adipic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC(O)=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- BLFLLBZGZJTVJG-UHFFFAOYSA-N benzocaine Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 BLFLLBZGZJTVJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000004097 bone metabolism Effects 0.000 description 1
- 235000001046 cacaotero Nutrition 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- KVSASDOGYIBWTA-UHFFFAOYSA-N chloro benzoate Chemical compound ClOC(=O)C1=CC=CC=C1 KVSASDOGYIBWTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960001338 colchicine Drugs 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 239000000498 cooling water Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- FFYPMLJYZAEMQB-UHFFFAOYSA-N diethyl pyrocarbonate Chemical compound CCOC(=O)OC(=O)OCC FFYPMLJYZAEMQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-M dihydrogenphosphate Chemical compound OP(O)([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- KAKKHKRHCKCAGH-UHFFFAOYSA-L disodium;(4-nitrophenyl) phosphate;hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].[O-][N+](=O)C1=CC=C(OP([O-])([O-])=O)C=C1 KAKKHKRHCKCAGH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000546 effect on cell death Effects 0.000 description 1
- 150000002066 eicosanoids Chemical class 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000008508 epithelial proliferation Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 1
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M hydrogensulfate Chemical compound OS([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940071870 hydroiodic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940076264 interleukin-3 Drugs 0.000 description 1
- 230000017306 interleukin-6 production Effects 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- VMPHSYLJUKZBJJ-UHFFFAOYSA-N lauric acid triglyceride Natural products CCCCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCC VMPHSYLJUKZBJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 1
- 229960003511 macrogol Drugs 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 125000005341 metaphosphate group Chemical group 0.000 description 1
- 229940098779 methanesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- IZYBEMGNIUSSAX-UHFFFAOYSA-N methyl benzenecarboperoxoate Chemical compound COOC(=O)C1=CC=CC=C1 IZYBEMGNIUSSAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940095102 methyl benzoate Drugs 0.000 description 1
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229960005358 monensin Drugs 0.000 description 1
- GAOZTHIDHYLHMS-KEOBGNEYSA-N monensin A Chemical compound C([C@@](O1)(C)[C@H]2CC[C@@](O2)(CC)[C@H]2[C@H](C[C@@H](O2)[C@@H]2[C@H](C[C@@H](C)[C@](O)(CO)O2)C)C)C[C@@]21C[C@H](O)[C@@H](C)[C@@H]([C@@H](C)[C@@H](OC)[C@H](C)C(O)=O)O2 GAOZTHIDHYLHMS-KEOBGNEYSA-N 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- RMIZDYSCYRMYPE-UHFFFAOYSA-N n-(4-methylphenyl)-1,3-benzoxazol-2-amine Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1NC1=NC2=CC=CC=C2O1 RMIZDYSCYRMYPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFLIOKCEGCUTNH-UHFFFAOYSA-N n-phenyl-1,3-benzoxazol-2-amine Chemical compound N=1C2=CC=CC=C2OC=1NC1=CC=CC=C1 BFLIOKCEGCUTNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004031 neuronal differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000004112 neuroprotection Effects 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100001083 no cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- QKFJKGMPGYROCL-UHFFFAOYSA-N phenyl isothiocyanate Chemical compound S=C=NC1=CC=CC=C1 QKFJKGMPGYROCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L phthalate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C([O-])=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000011085 pressure filtration Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N propane-1-sulfonic acid Chemical compound CCCS(O)(=O)=O KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940116351 sebacate Drugs 0.000 description 1
- CXMXRPHRNRROMY-UHFFFAOYSA-L sebacate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCCCCCCCC([O-])=O CXMXRPHRNRROMY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 1
- 235000020712 soy bean extract Nutrition 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 229960002385 streptomycin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- KKEYFWRCBNTPAC-UHFFFAOYSA-L terephthalate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=C(C([O-])=O)C=C1 KKEYFWRCBNTPAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- ISIJQEHRDSCQIU-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 2,7-diazaspiro[4.5]decane-7-carboxylate Chemical compound C1N(C(=O)OC(C)(C)C)CCCC11CNCC1 ISIJQEHRDSCQIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 101150080340 tlcD gene Proteins 0.000 description 1
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 1
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 108010072897 transcription factor Brn-2 Proteins 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- MWLSOWXNZPKENC-SSDOTTSWSA-N zileuton Chemical compound C1=CC=C2SC([C@H](N(O)C(N)=O)C)=CC2=C1 MWLSOWXNZPKENC-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- 229960005332 zileuton Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D263/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings
- C07D263/52—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D263/54—Benzoxazoles; Hydrogenated benzoxazoles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/42—Oxazoles
- A61K31/423—Oxazoles condensed with carbocyclic rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D263/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings
- C07D263/52—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D263/54—Benzoxazoles; Hydrogenated benzoxazoles
- C07D263/58—Benzoxazoles; Hydrogenated benzoxazoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached in position 2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
- C07B2200/07—Optical isomers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
본 발명은 2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-올 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-올 유도체, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 T 세포가 T 세포의 증식 촉진인자로 알려진 인터루킨-2(Interleukin-2, IL-2)에 의하여 염증성 사이토카인인 IFNγ(Interferon gamma) 생성과 5-리폭시게나아제(5-Lipoxygenase, 5-LO)의 발현이 주로 나타나는 Th1(T helper cells 1) 세포로의 분화를 방지하고, 인터루킨-6(Interleukin-6, IL-6)의 발현을 효과적으로 억제하는 활성이 우수하므로, 이와 관련한 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-올 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
염증은 물리적인 외상, 유해한 화학물질, 미생물에 의한 감염이나 생체 내 대사산물 중의 자극성 물질에 의하여 야기되는 조직손상에 대하여 국소적으로 나타나는 정상적이고 보호적인 생체 내 방어기전의 발현이다. 이러한 염증은 손상조직과 이동성 세포(migrating cells)로부터 생산되는 다양한 화학매개 인자에 의하여 촉발되며, 이들 화학매개 인자들은 염증과정의 형태에 따라 다양한 것들이 존재하는 것으로 알려져 있다.
비특허문헌 1에서는 유도형 일산화질소 합성효소(inducible nitric oxide synthase; iNOS)나 사이클로-옥시제나제(cyclo-oxygenase-2; COX-2)에 의해 대식세포와 같은 생체 내 염증 세포들이 활성화되면서, 염증 매개인자인 일산화질소(Nitric oxide; NO), 프로스타글란딘(Prostaglandin; PG), 인터루킨-1 베타(Interleukin-1 beta; IL-1β), 종양괴사인자-알파(Tumor necrosis factor-alpha; TNF-α) 및 사이토카인(cytokine) 등이 다량으로 생산된다는 내용을 개시하고 있다.
일반적으로, 염증성 질환은 활성화된 T 세포(T lymphocytes)의 지속적인 성장과 증식으로 인하여 염증성 사이토카인이 과다 생성되면서 일어난다. 구체적으로, T 세포는 T 세포의 증식 촉진인자로 알려진 인터루킨-2(Interleukin-2, IL-2)에 의하여 염증성 사이토카인인 인터페론 감마(Interferon gamma, IFNγ) 생성 및 5-리폭시게나아제(5-Lipoxygenase, 5-LO 또는 5-LOX)의 발현을 특징으로 하는 Th1(T helper cells 1) 세포로 분화한다. 이뿐만 아니라, 상기 염증성 질환은 인터루킨-6(Interleukin-6, IL-6)와 같은 사이토카인과도 깊은 연관성이 있는 것으로 알려져 있다.
인터루킨-6(이하"IL-6")(일명 인터페론-β2; B-세포 분화 인자; B-세포 자극 인자-2)는 구체적으로 급성 염증 반응의 조절, B-세포 및 T-세포 분화를 비롯한 특이적 면역 반응의 조절, 골 대사, 혈소판형성, 상피 증식, 신경 세포 분화, 신경 보호, 노화 등에서 발생되는 염증 반응과 같은 다수의 생물학적 과정에 관여하는 다기능성 사이토카인이다.
비특허문헌 2-4에는 IL-6가 궤양성 대장염(Ulcerative colitis), 크론병(Crohns disease) 등의 염증성 장질환 (Inflammatory bowel disease)과 직접적인 관련성이 있다는 내용을 개시하고 있으며, 또한 비특허문헌 5에는 IL-6의 플라즈마 농도와 패혈증(Sepsis)이 직접적인 관련성이 있다는 내용을 개시하고 있다.
인터페론(interferon)은 바이러스의 침입을 받은 세포에서 분비되는 단백질로 바이러스의 침입에 저항하도록 생체 내의 세포들을 자극하는 물질로서, 알파, 베타, 감마형 세 가지가 있다. 지금까지 알려진 인터페론 중에서 가장 효과가 있다고 밝혀진 것은 감마인터페론으로, 활성화된 T 세포 및 대식세포(macrophage)에 의해 생산되며, 비정상적인 인터페론 감마는 자가염증 또는 자가면역 질환과 관련되어 있다.
크론병이나 궤양성 대장염으로 대표되는 염증성 장질환은 국내 발병률과 유병률이 서양보다 낮지만 최근 점차 늘어나는 추세이다. 염증성 장질환의 병인 및 발병 기전은 아직까지 명확하지 않으나, 현재까지 알려진 바로는 유전적 취약성이 있는 사람이 환경적인 원인 또는 유발인자에 노출되면, 장 점막에 염증 및 면역반응이 초래되고, 부적절한 면역반응이 지속되고 증폭되어 만성적인 조직손상을 일으킨다고 알려져 있다. CD4 양성인 조력T세포(helper T cell) 중에서 Th1 세포(T helper type 1) 및 Th2 세포(T helper type 2)의 불균형이 염증성 장질환과 연관되어 있음이 많은 연구에서 보고되어 왔다.
크론병은 Th1 세포와 관련된 인터페론-감마(interferon-γ, IFN-γ), 종양 괴사인자-알파(tumor necrosis factor-α, TNF-α), 인터루킨-2(interleukin-2, IL-2)와 관련이 있고, 궤양성 대장염은 Th2 세포와 관련된 형질전환 생장 인자-베타(transforming growth factor-β, TGF-β), IL-4 및 IL-5가 관련이 있는 것으로 알려져 있으며, IL-6, IL-21 및 IL-23는 크론병, 궤양성 대장염 모두와 관련이 있는 것으로 알려져 있다.
염증성 장질환의 염증반응에는 많은 염증매개물질들이 관여하는데, 이중에서 루코트리엔(leukotriene)은 강력한 염증 매개체로, 천식, 관절염, 건선, 염증성 장질환의 병태생리에 주요 역할을 한다. 루코트리엔은 5-리폭시제나아제 (5-lipoxygenase, 5-LO)에 의해 아라키돈산(arachidonic acid)에서 생성되며, 활성화된 루코트리엔은 급성 염증반응 및 과민반응을 매개한다. 또한 루코트리엔은 염증이나 면역학적 자극에 의해 활성화된 백혈구에서 분비되며, 내피세포의 점액 분비, 평활근의 수축, 모세혈관의 투과율을 증가시키는 것으로 알려져 있다. 따라서 루코트리엔의 생성을 억제하는 5-LO 억제제가 염증성 장질환의 치료제로 많은 역할을 할 것으로 기대되었으나, 대표적인 5-LO 억제제인 질로톤(zileuton)이 부작용 및 다른 약물과의 상호작용이 있는 것으로 확인되어 사용에 제한이 있었다.
이에, 본 발명자들은 T 세포가 인터루킨-2에 의하여 Th1 세포로 분화하는 것을 방지하고, IL-6의 생성을 효과적으로 억제할 수 있는 화합물을 개발하기 위해 노력하던 중, 본 발명에 따른 2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-올 유도체, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 상기의 억제 활성을 나타냄으로써 크론씨병, 염증성 장질환, 류마티스 관절염, 천식, 아토피 등의 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 사용될 수 있음을 밝히고 본 발명을 완성하였다.
Journal of Life Science, 2011, Vol. 21, No. 5, 678-683.
Toxicology and Applied Pharmacology 279 (2014) 311-321.
International Immunopharmacology 23 (2014) 294-303.
Seminars in Immunology 26 (2014) 75-79.
Clin Infect Dis. (2000) 31 (6): 1338-1342.
본 발명의 목적은 인터루킨-6(Interleukin-6, IL-6) 활성억제 효과를 나타내는 2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-올 유도체를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-올 유도체의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-올 유도체를 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-올 유도체를 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여,
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
[화학식 1]
상기 화학식 1에서,
R1, R2 및 R3는 독립적으로 -H, -OH, 할로겐, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, -SR4, -NO2, -NH2 또는 -N=N-Ph이고, 여기서 R4는 C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알킬이다.
또한, 본 발명은 하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,
화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 제조한 화학식 4로 표시되는 화합물을 고리화반응시켜 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 2); 및
상기 단계 2에서 제조한 화학식 5로 표시되는 화합물의 메톡시기를 하이드록시기로 전환하여 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 3);를 포함하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.
[반응식 1]
상기 반응식 1에서,
R1, R2 및 R3는 독립적으로 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-올 유도체, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 T 세포가 T 세포의 증식 촉진인자로 알려진 인터루킨-2(Interleukin-2, IL-2)에 의하여 염증성 사이토카인인 IFNγ(Interferon gamma) 생성과 5-리폭시게나아제(5-Lipoxygenase, 5-LO)의 발현이 주로 나타나는 Th1(T helper cells 1) 세포로의 분화를 방지하고, 인터루킨-6(Interleukin-6, IL-6)의 발현을 효과적으로 억제하는 활성이 우수하므로, 이와 관련한 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 IFNγ(Interferon gamma) 생성억제 효과를 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 2는 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 IFNγ(Interferon gamma) 생성억제 효과를 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 프라이머리(primary) CD4+ T 세포에 대한 독성을 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 4는 본 발명에 따른 실시예 4 화합물의 프라이머리(primary) CD4+ T 세포의 성장억제 효과 평가를 나타내는 이미지이다.
도 5는 본 발명에 따른 실시예 5 화합물의 프라이머리(primary) CD4+ T 세포의 성장억제 효과 평가를 나타내는 이미지이다.
도 6은 농도별로 활성화된 CD4+ T 세포에 실시예 4 및 실시예 5 화합물을 72시간 처리한 후, 아넥신(annexin) V 염색을 수행하여 세포 사멸을 확인한 이미지이다.
도 7은 농도별로 활성화된 CD4+ T 세포에 실시예 4 및 실시예 5 화합물을 72시간 처리한 후, 프로피디움 요오드화물(propidium iodide) 염색을 수행하여 세포 사멸을 확인한 이미지이다.
도 8은 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 농도별 프라이머리(primary) CD4+ T 세포에서의 증식인자 IL-2 생성을 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 9는 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 농도별 프라이머리(primary) CD4+ T 세포에서의 증식인자 IL-2 mRNA 발현을 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 10은 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 농도별 프라이머리(primary) CD4+ T 세포에서의 세포 내 사이토카인 생성을 분석한 결과를 나타내는 이미지이다.
도 11은 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 농도별 Th1(T helper cells 1) 세포 분화억제 효과를 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 12는 본 발명에 따른 실시예 4 화합물의 장염 증상(stool consistency)에 대한 억제활성을 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 13은 본 발명에 따른 실시예 4 화합물의 대장 길이(colon length)에 대하여 어떠한 영향을 미치는지 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 14는 대장염 유도 동물모델에서 본 발명에 따른 실시예 4 화합물의 염증성 사이토카인 IFNγ 억제활성을 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 15는 본 발명에 따른 실시예 화합물에 의한 대장염 감소 조직병리학적 분석을 수행한 결과를 나타내는 이미지이다.
도 2는 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 IFNγ(Interferon gamma) 생성억제 효과를 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 프라이머리(primary) CD4+ T 세포에 대한 독성을 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 4는 본 발명에 따른 실시예 4 화합물의 프라이머리(primary) CD4+ T 세포의 성장억제 효과 평가를 나타내는 이미지이다.
도 5는 본 발명에 따른 실시예 5 화합물의 프라이머리(primary) CD4+ T 세포의 성장억제 효과 평가를 나타내는 이미지이다.
도 6은 농도별로 활성화된 CD4+ T 세포에 실시예 4 및 실시예 5 화합물을 72시간 처리한 후, 아넥신(annexin) V 염색을 수행하여 세포 사멸을 확인한 이미지이다.
도 7은 농도별로 활성화된 CD4+ T 세포에 실시예 4 및 실시예 5 화합물을 72시간 처리한 후, 프로피디움 요오드화물(propidium iodide) 염색을 수행하여 세포 사멸을 확인한 이미지이다.
도 8은 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 농도별 프라이머리(primary) CD4+ T 세포에서의 증식인자 IL-2 생성을 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 9는 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 농도별 프라이머리(primary) CD4+ T 세포에서의 증식인자 IL-2 mRNA 발현을 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 10은 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 농도별 프라이머리(primary) CD4+ T 세포에서의 세포 내 사이토카인 생성을 분석한 결과를 나타내는 이미지이다.
도 11은 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 농도별 Th1(T helper cells 1) 세포 분화억제 효과를 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 12는 본 발명에 따른 실시예 4 화합물의 장염 증상(stool consistency)에 대한 억제활성을 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 13은 본 발명에 따른 실시예 4 화합물의 대장 길이(colon length)에 대하여 어떠한 영향을 미치는지 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 14는 대장염 유도 동물모델에서 본 발명에 따른 실시예 4 화합물의 염증성 사이토카인 IFNγ 억제활성을 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 15는 본 발명에 따른 실시예 화합물에 의한 대장염 감소 조직병리학적 분석을 수행한 결과를 나타내는 이미지이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
[화학식 1]
상기 화학식 1에서,
R1, R2 및 R3는 독립적으로 -H, -OH, 할로겐, C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, -SR4, -NO2, -NH2 또는 -N=N-Ph이고, 여기서 R4는 C1 -10의 직쇄 또는 측쇄 알킬이다.
바람직하게는,
R1은 -H, -OH, 할로겐, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 또는 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고;
R2는 -H, -OH, 할로겐, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, -SR4, -NO2, -NH2 또는 -N=N-Ph이고, 여기서 R4는 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고; 및
R3는 -H, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 또는 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이다.
더욱 바람직하게는,
R1은 -H, -OH, -Cl 또는 -Br이고;
R2는 -H, -OH, -CH3, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -(CH2)3CH3, -Cl, -I, -SCH3, -NO2, -NH2 또는 -N=N-Ph이고; 및
R3는 -H, -CH2CH3 또는 -OCH3이다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 바람직한 예로는 하기의 화합물들을 들 수 있다.
(1) (Z)-2-((4-(페닐디아제닐)페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(2) 2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(3) 2-((4-에틸페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(4) 2-((3,4-디클로로페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(5) 2-((4-하이드록시페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(6) 2-((2-에틸페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(7) 2-((4-아이오도페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(8) 2-((4-이소프로필페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(9) 2-((4-(메틸티오)페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(10) 2-((3-브로모페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(11) 2-((4-나이트로페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(12) 2-(p-톨릴아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(13) 2-((4-부틸페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(14) 2-((2-메톡시-4-나이트로페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(15) 2-((4-아미노페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올; 및
(16) 2-((3-하이드록시페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올.
본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산, 아인산 등과 같은 무기산류, 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류 등과 같은 무독성 유기산, 아세트산, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산등과 같은 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염의 종류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, -하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등을 포함한다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 예를 들면 화학식 1의 유도체를 메탄올, 에탄올, 아세톤, 메틸렌클로라이드, 아세토니트릴 등과 같은 유기용매에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조시켜 제조하거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조시켜 유기용매 하에서 결정화시켜셔 제조할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 용매화물, 광학 이성질체, 수화물 등을 모두 포함한다.
나아가, 본 발명은 하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,
화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 제조한 화학식 4로 표시되는 화합물을 고리화반응시켜 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 2); 및
상기 단계 2에서 제조한 화학식 5로 표시되는 화합물의 메톡시기를 하이드록시기로 전환하여 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 3);를 포함하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공한다.
[반응식 1]
(상기 반응식 1에서,
R1, R2 및 R3는 독립적으로 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같다).
이하, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 단계별로 상세히 설명한다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 1은 화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
여기서 사용 가능한 용매로는 테트라하이드로퓨란(THF); 디옥산; 에틸에테르, 1,2-다이메톡시에탄 등을 포함하는 에테르용매; 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올을 포함하는 저급 알코올; 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 디클로로메탄(DCM), 디클로로에탄, 물, 아세토나젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 에틸아세테이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시크레이트, 락테이트, 하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등을 사용할 수 있다.
또한, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 12-36시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 2는 상기 단계 1에서 제조한 화학식 4로 표시되는 화합물을 고리화반응시켜 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
여기서 사용 가능한 용매로는 테트라하이드로퓨란(THF); 디옥산; 에틸에테르, 1,2-다이메톡시에탄 등을 포함하는 에테르용매; 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올을 포함하는 저급 알코올; 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 디클로로메탄(DCM), 디클로로에탄, 물, 아세토나젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 에틸아세테이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시크레이트, 락테이트, 하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트, 아세토나이트릴 등을 사용할 수 있다.
또한, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 12-36시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 있어서, 상기 단계 3은 상기 단계 2에서 제조한 화학식 5로 표시되는 화합물의 메톡시기를 하이드록시기로 전환하여 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이며, 보다 구체적으로는 화학식 5로 표시되는 화합물을 용매 하에 환원제를 첨가하여 반응시켜 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계이다.
이때, 상기 용매로는 테트라하이드로퓨란(THF); 디옥산; 에틸에테르, 1,2-다이메톡시에탄 등을 포함하는 에테르용매; 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올을 포함하는 저급 알코올; 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 디클로로메탄(DCM), 디클로로에탄, 물, 아세토나젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 에틸아세테이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시크레이트, 락테이트, 하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등을 사용할 수 있으며, 디클로로메탄(DCM)을 사용하는 것이 바람직하다.
또한, 상기 환원제로는 보론 트리보로하이드라이드(Boron triborohydride, BBr3)를 사용하는 것이 바람직하다.
나아가, 반응온도는 0℃에서 용매의 비등점 사이에서 수행하는 것이 바람직하고, 반응시간은 특별한 제약은 없으나, 12-36시간 동안 반응하는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
이때, 상기 약학적 조성물은 T 세포가 T 세포의 증식 촉진인자로 알려진 인터루킨-2(Interleukin-2, IL-2)에 의하여 염증성 사이토카인인 IFNγ(Interferon gamma) 생성과 5-리폭시게나아제(5-Lipoxygenase, 5-LO)의 발현이 주로 나타나는 Th1(T helper cells 1) 세포로의 분화를 방지하고, 인터루킨-6(Interleukin-6, IL-6)의 발현을 효과적으로 억제하는 것을 특징으로 하며, 상기 염증성 질환으로는 크론씨병, 염증성 장질환, 류마티스 관절염, 천식, 아토피 등이 있다.
이에, 본 발명에 따른 실시예 화합물의 5-리폭시제나아제(5-Lipoxygenase) 억제 효과를 평가하기 위하여 실험을 수행한 결과, 본 발명에 따른 실시예 3, 4, 9 및 15 화합물은 LTC4 방출 억제 효과를 나타내는 5-LO IC50(㎍/mL) 값이 모두 20㎍/mL 이하인 것으로 나타났다. 특히, 실시예 4, 9 및 15 화합물은 5-LO IC50(㎍/mL) 값이 7㎍/mL 이하인 것으로 나타나 현저히 우수한 5-LO 억제 효과를 갖는 것으로 나타났다(실험예 1의 표 2 참조).
또한, 본 발명에 따른 실시예 화합물의 인터루킨-6(Interleukin-6, IL-6) 억제 효과를 평가하기 위하여 STAT3 리포터 유전자(reporter gene)에 활성 저해정도를 확인한 결과, 본 발명에 따른 실시예 3, 5, 6, 13 및 14 화합물은 인터루킨-6 억제 효과를 나타내는 IL-6 IC50(㎍/mL) 값이 모두 10㎍/mL 이하인 것으로 나타났다. 특히, 실시예 5, 6 및 13 화합물은 IL-6 IC50(㎍/mL) 값이 5㎍/mL 이하인 것으로 나타나 현저히 우수한 IL-6 억제 효과를 갖는 것으로 나타났다(실험예 2의 표 3 참조).
나아가, 본 발명에 따른 실시예 화합물의 비장(splenic) T 세포의 IFNγ(Interferon gamma) 생성억제 효과를 평가하기 위하여 실험을 수행한 결과, 비장(splenic) T 세포에서 생성되는 IFNγ(Interferon gamma) 사이토카인이 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 처리에 의하여 농도의존적으로 감소하는 것으로 나타났다(실험예 3의 도 1 참조).
또한, 본 발명에 따른 실시예 화합물의 프라이머리(primary) CD4+ T 세포에서의 IFNγ(Interferon gamma) 생성억제 효과를 평가하기 위하여 실험을 수행한 결과, 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 농도별 처리에 의하여 CD4+ T 세포 성장과, IFN-γ 사이토카인 생성이 현저히 감소하는 것으로 나타났다(실험예 4의 도 2 참조).
나아가, 본 발명에 따른 실시예 화합물의 프라이머리(primary) CD4+ T 세포에 대한 독성을 평가하기 위하여 세포 독성 키트(EZ-cytox)를 사용하여 세포 독성 정도를 분석한 결과, 24시간이 경과한 경우 프라이머리(primary) CD4+ T 세포에 대한 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 세포독성은 현저히 관찰되지 않았으나, 세포 증식이 활발하게 일어나는 48시간 경과 때에는 세포의 현저한 감소가 확인되어 세포독성이 있는 것으로 나타났다(실험예 5의 도 3 참조).
또한, 본 발명에 따른 실시예 화합물의 프라이머리(primary) CD4+ T 세포에 대한 성장억제 효과를 평가하기 위하여 실험을 수행한 결과, 실시예 4 및 실시예 5 화합물은 농도의존적으로 프라이머리(primary) CD4+ T 세포의 성장을 억제하는 것으로 나타났다(실험예 6의 도 4 및 도 5 참조).
나아가, 본 발명에 따른 실시예 화합물에 의한 활성화된 CD4+ T 세포의 숫적 감소의 원인을 설명하고자 세포 사멸에 대한 영향을 분석한 결과, 실시예 4 및 실시예 5 화합물에 의해 아포프토시스 세포 사멸 마커(Apoptotic cell death marker)인 아넥신(annexin) V 발현 증가를 확인하였으며, 동시에 죽은 세포 표지자인 프로피디움 요오드화물(propidium iodide)이 염색된 세포의 증가를 확인하였다. 이로부터, 실시예 4 및 실시예 5 화합물에 의한 프라이머리(primary) CD4+ T 세포의 세포사멸 효과가 우수함을 알 수 있다(실험예 7의 도 6 및 도 7 참조).
또한, 본 발명에 따른 실시예 화합물의 농도별 세포 증식 억제가 관찰됨에 따라 프라이머리(primary) CD4+ T 세포에서의 증식인자 IL-2 생성을 분석한 결과, 실시예 4 화합물에 의한 세포 증식 촉진 사이토카인 IL-2의 생성 감소가 나타났다. 하지만, 실시예 5 화합물에 의한 세포 증식 촉진 사이토카인 IL-2의 생성 감소는 나타나지 않았다. 또한, IL-2 mRNA 발현은 실시예 4 화합물에 의한 농도 의존적으로 감소가 관찰되었으나, 실시예 5 화합물에 의한 IL-2 mRNA 감소는 관찰되지 않았다(실험예 8의 도 8 및 도 9 참조).
나아가, 본 발명에 따른 실시예 화합물의 농도별 세포 증식 억제가 관찰됨에 따라 활성화된 프라이머리(primary) CD4+ T 세포에서의 세포 내 사이토카인 생성을 세포 내 사이토카인 염색(intracellular cytokine staining) 방법을 통해 평가한 결과, 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 고농도 처리와 장시간 처리에 의해 세포 성장이 억제되었으나 PMA(phorbol 12-myristate 13-acetate)/이오노마이신(Ionomycin) 자극에 의해 사이토카인 생성이 확인되었다. 또한, 실시예 4 및 실시예 5 화합물 모두에 의해 IFN-γ 생성 억제가 관찰되었다. 나아가, 실시예 4 화합물에 의한 IL-2 생성 억제는 확인되었지만, 실시예 5 화합물은 IL-2 생성에 영향을 주지 않음을 재확인하였다(실험예 9의 도 10 참조).
또한, 본 발명에 따른 실시예 화합물의 농도별 Th1(T helper cells 1) 세포 분화억제 효과를 평가하기 위하여 실험을 수행한 결과, 실시예 4 및 실시예 5 화합물 처리에 의하여 CD4+ T 세포의 Th1 세포로의 분화가 농도의존적으로 억제되는 것으로 나타났다(실험예 10의 도 11 참조).
나아가, 본 발명에 따른 실시예 화합물의 과민성 대장염 억제활성을 평가하기 위하여 실험을 수행한 결과, 본 발명에 따른 실시예 4 화합물은 대장염을 유도한 면역 저하(Immune deficient) RAG KO 마우스를 사용한 in vivo 실험에서도 우수한 대장염 억제효과를 나타냄을 확인하였다(실험예 11의 도 12 및 도 13 참조).
또한, 본 발명에 따른 실시예 화합물의 대장염 유도 동물모델에서의 염증성 사이토카인 IFNγ 억제활성을 평가하기 위하여 실험을 수행한 결과, 본 발명에 따른 실시예 4 화합물은 대장염 유도 동물모델에서의 염증성 사이토카인 IFNg 억제활성이 현저히 우수함을 확인하였다(실험예 12의 도 14 참조).
나아가, 본 발명에 따른 실시예 화합물에 의한 대장염 감소 조직병리학적 분석을 수행하기 위하여 실험을 수행한 결과, CD4+ T 세포 주입군에서는 대장 조직 내 염증세포의 침윤과 조직 파괴가 관찰되는 반면, 실시예 4 화합물 주입군에서는 염증 소견이 감소하였음을 확인하였다(실험예 13의 도 15 참조).
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 화합물은 임상 투여시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있으며, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된다.
경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환자, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 본 발명의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용 액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁 용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물의 인체에 대한 효과적인 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로 약 0.001-100 mg/kg/일이며, 바람직하게는 0.01-35 mg/kg/일이다. 몸무게가 70 인 성인 환자를 기준으로 할 때, 일반적으로 0.07-7000 mg/일이며, 바람직하게는 0.7-2500 /일이며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다.
나아가, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한다.
이때, 상기 건강식품 조성물은 T 세포가 T 세포의 증식 촉진인자로 알려진 인터루킨-2(Interleukin-2, IL-2)에 의하여 염증성 사이토카인인 IFNγ(Interferon gamma) 생성과 5-리폭시게나아제(5-Lipoxygenase, 5-LO)의 발현이 주로 나타나는 Th1(T helper cells 1) 세포로의 분화를 방지하고, 인터루킨-6(Interleukin-6, IL-6)의 발현을 효과적으로 억제하는 것을 특징으로 하며, 상기 염증성 질환으로는 크론씨병, 염증성 장질환, 류마티스 관절염, 천식, 아토피 등이 있다.
이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의하여 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 이에 한정되는 것은 아니다.
<
실시예
1> (Z)-2-((4-(
페닐디아제닐
)
페닐
)아미노)
벤조
[d]
옥사졸
-5-올 (7a)의 제조
단계 1 : (Z)-1-(2-
하이드록시
-5-
메톡시페닐
)-3-(4-(
페닐디아제닐
)
페닐
)
티오
우레아의 제조
2-아미노-4-메톡시페놀 (100 mg, 1 eq)에 (Z)-1-(4-이소티오시아나토페닐)-2-페닐디아젠을 동일한 당량(1 eq) 만큼 첨가하고, MeOH 25 mL를 가하여 완전히 용해시킨 후 24시간 동안 실온에서 교반하였다. 교반 후 생성되는 침전을 감압 여과 또는 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 (Z)-1-(2-하이드록시-5-메톡시페닐)-3-(4-(페닐디아제닐)페닐)티오우레아를 제조하였다.
단계 2 : (Z)-5-
메톡시
-N-(4-(
페닐디아제닐
)
페닐
)
벤조
[d]
옥사졸
-2-
아민의
제조
질소 가스 하, 상기 단계 1에서 제조한 (Z)-1-(2-하이드록시-5-메톡시페닐)-3-(4-(페닐디아제닐)페닐)티오우레아 (100 mg, 1 eq)와 5 당량의 과산화칼륨(potassium peroxide, KO2) 혼합물에 아세토나이트릴을 5 mL 첨가하였다. 강하게 교반하면서 실온에서 12시간 동안 반응시키고, 냉각수에 부어 희석하였다. 디클로로메탄으로 추출하고, MgSO4로 건조시킨 후, 용매를 감압농축시켜 (Z)-5-메톡시-N-(4-(페닐디아제닐)페닐)벤조[d]옥사졸-2-아민을 제조하였다.
단계 3 : (Z)-2-((4-(
페닐디아제닐
)
페닐
)아미노)
벤조
[d]
옥사졸
-5-올 (7a)의 제조
상기 단계 2에서 제조한 (Z)-5-메톡시-N-(4-(페닐디아제닐)페닐)벤조[d]옥사졸-2-아민(100 mg, 1 eq)에 디클로로메탄 5 mL를 첨가하고, 보론 트리보로하이드라이드(Boron triborohydride, BBr3)를 0.2 mL 첨가한 후, 0℃에서 24시간 동안 교반하였다. 24시간 후, 물을 첨가하여 희석하고, 에틸 아세테이트로 추출한 후, MgSO4로 건조하고, 용매를 감압 농축하였다. 이후, 컬럼 크로마토그래피(에틸아세테이트:헥산 = 1:3)를 통해 정제하여 표제 화합물을 오렌지색의 파우더 형태로 제조하였다(수율 : 59%).
mp 249-250℃, 1H-NMR(DMSO-d6, 400MHz) δ 10.978(s, 1H), 9.270(s, 1H), 7.953(s, 4H), 7.854~7.876(m, 2H), 7.507~7.608(m, 3H), 7.293(d, J=8.8Hz, 1H), 6.868(d, J=2.4Hz, 1H), 6.571(dd, J=2.0Hz, J=8.4Hz, 1H), HR-FABMS Calcd for C19H15N4O2 (M++H): 331.1192, Found: 331.1190.
<
실시예
2> 2-(페닐아미노)벤조[d]
옥사졸
-5-
올
(7b)의 제조
(Z)-1-(4-이소티오시아나토페닐)-2-페닐디아젠을 사용하는 대신에 이소티오시아나토벤젠을 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 1와 동일한 방법으로 수행하여 표제 화합물을 갈색 파우더 형태로 제조하였다(수율 : 36%).
1H-NMR(DMSO-d6, 400MHz) δ 10.459(s, 1H), 9.210(s, 1H), 7.719(d, J=7.6Hz, 2H), 7.353(t, J=8.0Hz, 2H), 7.232(d, J=8.4Hz, 1H), 7.012(t, J=7.2Hz, 1H), 6.798(d, J=2.4Hz, 1H), 6.513(dd, J=2.4Hz, J=8.4Hz, 1H), HR-FABMS Calcd for C13H11N2O2(M++H): 227.0815, Found: 227.0818.
<
실시예
3> 2-((4-
에틸페닐
)아미노)
벤조
[d]
옥사졸
-5-올 (7c)의 제조
(Z)-1-(4-이소티오시아나토페닐)-2-페닐디아젠을 사용하는 대신에 1-에틸-4-이소티오시아나토벤젠을 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 1와 동일한 방법으로 수행하여 표제 화합물을 옅은 갈색 파우더 형태로 제조하였다(수율 : 64%).
1H-NMR(DMSO-d6, 400MHz) δ 10.350(s, 1H), 9.205(s, 1H), 7.612(d, J=8.4Hz, 2H), 7.199(dd, J=8.4Hz, J=10.8Hz, 3H), 6.779(d, J=2.4Hz, 1H), 6.495(dd, J=2.4Hz, J=8.4Hz, 1H), 2.565(dd, J=7.6Hz, J=14.8Hz, 2H), 1.168(t, J=7.6Hz, 3H), HR-FABMS Calcd for C15H15N2O2 (M++H): 255.1129, Found: 255.1128.
<
실시예
4> 2-((3,4-
디클로로페닐
)아미노)
벤조
[d]
옥사졸
-5-올 (7d)의 제조
(Z)-1-(4-이소티오시아나토페닐)-2-페닐디아젠을 사용하는 대신에 1,2-디클로로-4-이소티오시아나토벤젠을 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 1와 동일한 방법으로 수행하여 표제 화합물을 흰색 파우더 형태로 제조하였다(수율 : 31%).
1H-NMR(DMSO-d6, 400MHz) δ 10.855(s, 1H), 9.263(s, 1H), 8.095(d, J=2.4Hz, 1H), 7.589~7.650(m, 2H), 7.269(d, J=8.8Hz, 1H), 6.846(d, J=2.4Hz, 1H), 6.553(dd, J=2.4Hz, J=8.4Hz, 1H), HR-FABMS Calcd for C13H9Cl2N2O2(M++H): 295.0036, Found: 295.0036.
<
실시예
5> 2-((4-
하이드록시페닐
)아미노)
벤조
[d]
옥사졸
-5-올 (7e)의 제조
(Z)-1-(4-이소티오시아나토페닐)-2-페닐디아젠을 사용하는 대신에 4-이소티오시아나토페놀을 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 1와 동일한 방법으로 수행하여 표제 화합물을 옅은 회색 파우더 형태로 제조하였다(수율 : 37%).
1H-NMR(DMSO-d6, 400MHz) δ 10.100(s, 1H), 9.157(s, 2H), 7.459~7.498(m, 2H), 7.173(d, J=8.8Hz, 1H), 6.729~6.770(m, 3H), 6.458(dd, J=2.0Hz, J=8.6Hz, 1H), HR-FABMS Calcd for C13H11N2O3 (M++H): 243.0765, Found: 243.0764.
<
실시예
6> 2-((2-에틸
페닐
)아미노)벤조[d]
옥사졸
-5-
올
(7f)의 제조
(Z)-1-(4-이소티오시아나토페닐)-2-페닐디아젠을 사용하는 대신에 1-에틸-2-이소티오시아나토벤젠을 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 1와 동일한 방법으로 수행하여 표제 화합물을 옅은 갈색 파우더 형태로 제조하였다(수율 : 35%).
1H-NMR(DMSO-d6, 400MHz) δ 9.518(s, 1H), 9.119(s, 1H), 7.708(d, J=7.6Hz, 1H), 7.112~7.266(m, 4H), 6.686(d, J=2.0Hz, 1H), 6.455(dd, J=2.4Hz, J=8.4Hz, 1H), 2.653~2.710(m, 2H), 1.128(t, J=7.6Hz, 3H), HR-FABMS Calcd for C15H15N2O2(M++H): 255.1125, Found: 255.1128.
<
실시예
7> 2-((4-아이오도
페닐
)아미노)벤조[d]
옥사졸
-5-
올
(7g)의 제조
(Z)-1-(4-이소티오시아나토페닐)-2-페닐디아젠을 사용하는 대신에 1-아이오도-4-이소티오시아나토벤젠을 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 1와 동일한 방법으로 수행하여 표제 화합물을 옅은 갈색 파우더 형태로 제조하였다(수율 : 39%).
1H-NMR(DMSO-d6, 400MHz) δ 10.623(s, 1H), 9.234(s, 1H), 7.662~7.691(m, 2H), 7.550~7.587(m, 2H), 7.242(d, J=8.8Hz, 1H), 6.805(d, J=2.4Hz, 1H), 6.526(dd, J=2.4Hz, J=8.4Hz, 1H), HR-FABMS Calcd for C13H10IN2O2 (M++H): 352.9781, Found: 352.9781.
<
실시예
8> 2-((4-
이소프로필페닐
)아미노)
벤조
[d]
옥사졸
-5-올 (7h)의 제조
(Z)-1-(4-이소티오시아나토페닐)-2-페닐디아젠을 사용하는 대신에 1-이소프로필-4-이소티오시아나토벤젠을 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 1와 동일한 방법으로 수행하여 표제 화합물을 옅은 갈색 파우더 형태로 제조하였다(수율 : 16%).
1H-NMR(DMSO-d6, 400MHz) δ 10.415(s, 1H), 7.553~7.588(m, 4H), 7.186(d, J=8.4Hz, 2H), 6.936(s, 1H), 1.156(d, J=6.8Hz, 6H), HR-FABMS Calcd for C16H17N2O2(M++H): 269.1285, Found: 269.1283.
<
실시예
9> 2-((4-(
메틸티오
)
페닐
)아미노)
벤조
[d]
옥사졸
-5-올 (7i)의 제조
(Z)-1-(4-이소티오시아나토페닐)-2-페닐디아젠을 사용하는 대신에 (4-이소티오시아나토페닐)(메틸)설페인을 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 1와 동일한 방법으로 수행하여 표제 화합물을 옅은 갈색 파우더 형태로 제조하였다(수율 : 28%).
1H-NMR(DMSO-d6, 400MHz) δ 10.486(s, 1H), 9.226(s,1H), 7.666~7.695(m, 2H), 7.287~7.316(m, 2H), 7.224(d, J=8.8Hz, 1H), 6.79(d, J=2.4Hz, 1H), 6.508(dd, J=2.0Hz, J=8.6Hz, 1H), 2.502(dd, J=2.0Hz, J=3.6Hz, 3H), HR-FABMS Calcd for C14H13N2O2S (M++H): 273.0693, Found: 273.0692.
<
실시예
10> 2-((3-
브로모페닐
)아미노)
벤조
[d]
옥사졸
-5-올 (7j)의 제조
(Z)-1-(4-이소티오시아나토페닐)-2-페닐디아젠을 사용하는 대신에 1-브로모-3-이소티오시아나토벤젠을 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 1와 동일한 방법으로 수행하여 표제 화합물을 옅은 갈색 파우더 형태로 제조하였다(수율 : 11%).
1H-NMR(DMSO-d6, 400MHz) δ 10.767(s, 1H), 9.237(s, 1H), 8.047(t, J=1.8Hz, 1H), 7.626(d, J=8.4Hz, 1H), 7.159~7.319(m, 3H), 6.821(d, J=2.4Hz, 1H), 6.525(dd, J=2.4Hz, J=8.6Hz, 1H), HR-FABMS Calcd for C13H10BrN2O2 (M++H): 304.9922, Found: 304.992.
<
실시예
11> 2-((4-
나이트로페닐
)아미노)
벤조
[d]
옥사졸
-5-올 (7k)의 제조
(Z)-1-(4-이소티오시아나토페닐)-2-페닐디아젠을 사용하는 대신에 1-이소티오시아나토-4-나이트로벤젠을 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 1와 동일한 방법으로 수행하여 표제 화합물을 노란색의 파우더 형태로 제조하였다(수율 : 32%).
1H-NMR(DMSO-d6, 400MHz) δ 11.344(s, 1H), 9.329(s, 1H), 8.257~8.288(m, 2H), 7.924~7.955(m, 2H), 7.315(d, J=8.4Hz, 1H), 6.878(d, J=2.4Hz, 1H), 6.598(dd, J=2.4Hz, J=8.4Hz, 1H), HR-FABMS Calcd for C13H10N3O4(M++H): 272.0666, Found:272.0667.
<
실시예
12> 2-(p-톨릴
아미노
)
벤조
[d]
옥사졸
-5-
올
(7l)의 제조
(Z)-1-(4-이소티오시아나토페닐)-2-페닐디아젠을 사용하는 대신에 1-이소티오시아나토-4-메틸벤젠을 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 1와 동일한 방법으로 수행하여 표제 화합물을 옅은 갈색 파우더 형태로 제조하였다(수율 : 27%).
1H-NMR(DMSO-d6, 400MHz) δ 10.344(s, 1H), 9.163(s, 1H), 7.596(d, J=8.4Hz, 2H), 7.211(d, J=8.8Hz, 1H), 7.155(d, J=7.6Hz, 2H), 6.778(d, J=2.4Hz, 1H), 6.493(dd, J=2.4Hz, J=8.6Hz, 1H), 2.266(s, 3H), HR-FABMS Calcd for C14H13N2O2(M++H): 241.0972, Found: 241.0975.
<
실시예
13> 2-((4-
부틸페닐
)아미노)
벤조
[d]
옥사졸
-5-올 (7m)의 제조
(Z)-1-(4-이소티오시아나토페닐)-2-페닐디아젠을 사용하는 대신에 1-부틸-4-이소티오시아나토벤젠을 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 1와 동일한 방법으로 수행하여 표제 화합물을 흰색 파우더 형태로 제조하였다(수율 : 33%).
1H-NMR(DMSO-d6, 400MHz) δ 10.344(s, 1H), 9.183(s, 1H), 7.597(dd, J=2.8Hz, J=6.6Hz, 2H), 7.211(d, J=9.2Hz, 1H), 7.162(d, J=8.4Hz, 2H), 6.776(d, J=2.8Hz, 1H), 6.493(dd, J=2.0Hz, J=8.8Hz, 1H), 2.534(t, J=7.8Hz, 2H), 1.496~1.571(m, 2H), 1.231~1.349(m, 2H), 0.896(t, J=7.4Hz, 3H), HR-FABMS Calcd for C17H19N2O2 (M++H): 283.1441, Found: 283.1442.
<
실시예
14> 2-((2-
메톡시
-4-
나이트로페닐
)아미노)
벤조
[d]
옥사졸
-5-올 (7n)의 제조
(Z)-1-(4-이소티오시아나토페닐)-2-페닐디아젠을 사용하는 대신에 1-이소티오시아나토-2-메톡시-4-나이트로벤젠을 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 1와 동일한 방법으로 수행하여 표제 화합물을 노란색의 파우더 형태로 제조하였다(수율 : 33%).
1H-NMR(DMSO-d6, 400MHz) δ 8.623(d, J=9.2Hz, 1H), 8.015(dd, J=2.4Hz, J=8.8Hz, 1H), 7.825(d, J=2.4Hz, 1H), 7.313(d, J=8.8Hz, 1H), 6.883(d, J=2.4Hz, 1H), 6.609(dd, J=2.4Hz, J=8.4Hz, 1H), 4.005(s, 3H), HR-FABMS Calcd for C14H12N3O5 (M++H): 302.0775, Found: 302.0771.
<
실시예
15> 2-((4-아미노
페닐
)아미노)벤조[d]
옥사졸
-5-
올
(7o)의 제조
(Z)-1-(4-이소티오시아나토페닐)-2-페닐디아젠을 사용하는 대신에 4-이소티오시아나토벤젠아민을 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 1와 동일한 방법으로 수행하여 표제 화합물을 검은색의 파우더 형태로 제조하였다(수율 : 34%).
1H-NMR(DMSO-d6, 400MHz) δ 9.893(s, 1H), 7.668~7.727(m, 2H), 7.324(dd, J=2.0Hz, J=6.8Hz, 1H), 7.143(d, J=8.8Hz, 1H), 6.703(d, J=2.0Hz, 1H), 6.564(dd, J=2.0Hz, J=6.8Hz, 1H), 6.43(dd, J=2.4Hz, J=8.6Hz, 1H), 4.821(s, 1H), 4.20(d, J=3.2Hz, 2H), HR-FABMS Calcd for C13H12N3O2 (M++H): 242.0924, Found: 242.0924.
<
실시예
16> 2-((3-하이드록시
페닐
)아미노)벤조[d]
옥사졸
-5-
올
(7p)의 제조
(Z)-1-(4-이소티오시아나토페닐)-2-페닐디아젠을 사용하는 대신에 3-이소티오시아나토페놀을 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 1와 동일한 방법으로 수행하여 표제 화합물을 옅은 파우더 형태로 제조하였다(수율 : 20%).
1H-NMR(DMSO-d6, 400MHz) δ 10.332(s, 1H), 9.420(s, 1H), 9.215(s, 1H), 7.298(t, J=2.4Hz, 1H), 7.219(d, J=8.8Hz, 1H), 7.043~7.216(m, 2H), 6.785(d, J=2.4Hz, 1H), 6.506(dd, J=2.4Hz, J=8.6Hz, 1H), 6.395~6.424(m, 1H), HR-FABMS Calcd for C13H11N2O3(M++H): 243.0764, Found: 243.0767.
하기 표 1에 실시예 1-16에서 제조한 화합물의 화학구조식을 정리하여 나타내었다.
| 실시예 | 화학구조 | 실시예 | 화학구조 |
| 1 |
 |
9 |
 |
| 2 |
 |
10 |
 |
| 3 |
 |
11 |
 |
| 4 |
 |
12 |
 |
| 5 |
 |
13 |
 |
| 6 |
 |
14 |
 |
| 7 |
 |
15 |
 |
| 8 |
 |
16 |
 |
<
실험예
1> 5-
리폭시제나아제
(5-
Lipoxygenase
) 활성 억제효과 평가
본 발명에 따른 실시예 화합물의 5-리폭시제나아제(5-Lipoxygenase) 활성 억제효과를 평가하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.
1-1.
확인골수
유래-비만세포(bone marrow-derived mast cells,
BMMCs
)의 준비
여기서, 하기 화학식 6으로 표시되는 LTC4는 시스테이닐 류코트리엔(cyste-inyl leukotrienes)의 일종이며, 상기 류코트리엔은 신호분자로서의 역할을 수행하는 아이코사노이드(eicosanoid) 염증매개체이다.
[화학식 6]
먼저, 골수 유래-비만세포(bone marrow-derived mast cells, 이하 BMMC)를 준비하기 위하여 수컷 Balb/c 마우스로부터 골수를 채취하고, 이를 인터루킨-3(IL-3, Sigma I4144, 2 ng/mL) 및 10% 소태아혈청을 포함하는 50% 영양강화 배지(2 mM L-글루타민, 25 mM HEPES 완충액, 2 mg/mL 탄산수소나트륨, 100 단위/mL 페니실린 G, 100 lg/mL 스트렙토마이신 설페이트 및 0.25 lg/mL 암포테리신 B를 함유하는 RPMI)에서 4주 동안 배양하였다.
배양한 지 3주 후, 톨루이딘 블루(toluidine blue)를 사용한 염색법을 통해 98% 이상의 BMMC가 존재하는 것을 확인하였다.
2-2.
TLC4
방출억제 효과 평가
상기 BMMC를 1x106 세포/mL의 농도로 영양강화 배지에 현탁한 후, DMSO에 녹인 실시예 3, 4, 9 및 15 화합물(최종 DMSO 농도는 0.5% 미만)을 처리하여 30분 동안 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 배양하였다.
그 후, 20분 동안 줄기 세포 인자(stem cell factor, SCF, Sigma S9915, 100 ng/mL)로 자극하고, 효소 면역분석 키트(enzyme immunoassay kit, Cayman Chemical, Ann Arbor, MI, USA)를 사용하여 제조업자의 지시사항에 따라 상층액(supernatants)에서 LTC4의 농도를 측정하였다. 모든 실험은 세 차례에 걸쳐 수행하였으며, LTC4 방출의 억제 효과는 LTC4 방출의 감소량(%)을 계산함으로써 평가하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
| 실시예 | 5-LO IC50(㎍/mL) |
| 1 | - |
| 2 | - |
| 3 | 16.11 |
| 4 | 4.97 |
| 5 | - |
| 6 | - |
| 7 | - |
| 8 | - |
| 9 | 6.43 |
| 10 | - |
| 11 | - |
| 12 | - |
| 13 | - |
| 14 | - |
| 15 | 5.59 |
| 16 | - |
상기 표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 3, 4, 9 및 15 화합물은 LTC4 방출 억제 효과를 나타내는 5-LO IC50(㎍/mL) 값이 모두 20㎍/mL 이하인 것으로 나타났다. 특히, 실시예 4, 9 및 15 화합물은 5-LO IC50(㎍/mL) 값이 7㎍/mL 이하인 것으로 나타나 현저히 우수한 5-LO 억제 효과를 갖는 것으로 나타났다.
<
실험예
2> 인터루킨-6(
Interleukin
-6, IL-6) 생성 억제효과 평가
본 발명에 따른 실시예 화합물의 인터루킨-6(Interleukin-6, IL-6) 생성 억제효과를 평가하기 위하여, 이를 STAT3 리포터 유전자(reporter gene)의 활성 저해정도를 통해 확인하였다.
먼저, 인간 간암 세포주 HepG2를 10% (v/v) 소태아혈청, 스트렙토마이신(streptomycin, 100 U/㎖) 및 페니실린(100 U/㎖)이 첨가된 MEM(Minimal Essential Medium, WelGENE Inc, Daegu, Korea) 배지에서 37℃, 5% CO2조건으로 배양하였다. 6 웰(well) 세포 배양 접시의 80%까지 세포가 자라도록 하였다.
이후, 무혈청 배지 50 ㎕ 배지를 교환하고, 0.1 ㎍ pSTAT3-TA-Luc6 컨스트럭트(construct)를 형질주입(transfection)하였다. 형질주입된 세포를 1% BSA(Bovine Serum Albumin)/DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)으로 혈청 제한(serum starvation)하고, 실시예 3, 5, 6, 13 및 14 화합물을 1시간 동안 처리한 후, 인터루킨-6(IL-6)를 첨가하여 3시간 배양하였다.
PBS로 세척하고, 용해 완충용액(lysis buffer) 50 ㎕를 넣고 1분간 격렬하게 흔든 후 30-100 ㎕의 루시페리아제 기질(발광효소 기질, Promega luciferase assay system)을 넣고 발광측정기(luminometer)로 5분 내에 측정하였다. 여러 농도의 인터루킨-6(IL-6)에 의하여 나타나는 표준 희석액의 OD 540 nm(광학밀도, optical density)에서의 흡광치를 확인하였다. 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.
| 실시예 | IL-6(STAT 3) IC50(㎍/mL) |
| 1 | - |
| 2 | - |
| 3 | 9.12 |
| 4 | - |
| 5 | 4.15 |
| 6 | 3.47 |
| 7 | - |
| 8 | - |
| 9 | - |
| 10 | - |
| 11 | - |
| 12 | - |
| 13 | 3.69 |
| 14 | 7.27 |
| 15 | - |
| 16 | - |
상기 표 3에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 3, 5, 6, 13 및 14 화합물은 인터루킨-6 억제 효과를 나타내는 IL-6 IC50(㎍/mL) 값이 모두 10㎍/mL 이하인 것으로 나타났다. 특히, 실시예 5, 6 및 13 화합물은 IL-6 IC50(㎍/mL) 값이 5㎍/mL 이하인 것으로 나타나 현저히 우수한 IL-6 억제 효과를 갖는 것으로 나타났다.
<
실험예
3> 비장(splenic) T 세포에서
IFN
γ(Interferon gamma) 생성억제 효과 평가
본 발명에 따른 실시예 화합물의 비장(spleen) 존재 T 세포에서 IFNγ(Interferon gamma) 생성억제 효과를 평가하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다. 여기서, IFNγ 생성억제 능력은 항염증 효과에 기인한다.
3-1. 비장 T 세포의 분리 및 배양
수컷 C57BL6 마우스의 비장을 준비하여 단세포 부유액(single cell suspension)을 제조하고, RBC(Red Blood Cell) 용해(lysis) 완충액(155 mM NH4Cl, 10 mM KHCO3, 0.5 M EDTA(pH 8.0))을 처리하여 적혈구를 제거한 후, 동량의 10% FBS RPMI(Roswell Park Memorial Institute) 배지를 넣어 중화하였다. 상기 RBC 용해(lysis) 완충액을 완전히 제거시키기 위하여 10% FBS RPMI 배지로 2회 세척한 세포를 카운팅(counting)하여 5x106 세포/mL가 되도록 10% FBS RPMI 배지를 첨가하였다. 전날 4℃에서 anti-CD3(cluster of differentiation 3) (1㎍/mL)로 코팅(coating)한 배양 접시를 PBS, 10% FBS RPMI 배지로 각각 1회 세척한 후, 위에서 카운팅한 세포를 접종(seeding)하여 활성화를 유도하였다. 세포 자극 2시간 후, 실시예 4 및 실시예 5 화합물을 각각 다양한 농도별로 처리하였다.
3-2.
IFN
γ 의 생성 확인
화합물을 처리하여 48시간 동안 배양한 후에, 세포 배양액을 회수하여 IFNγ 의 생성을 ELISA 방법으로 확인하였다.
구체적으로, 96-well 플레이트(costar)에 정제된 anti-mIFNγ(1 ㎍/㎖, BD Pharmingen) 항체 및 0.1 M Na2HPO4를 섞어 4℃에서 하룻밤 동안 방치한다. 0.05% Tween20/PBS로 플레이트를 3번 세척한 후 1% BSA/PBS로 2시간 동안 실온에서 블로킹(blocking)한다. 한번 더 0.05% Tween20/PBS로 플레이트를 3번 세척한 후 상기 실험예 3-1의 세포배양액을 1:10으로 희석하여 첨가하고, 4℃에서 하룻밤 동안 방치한다. 0.05% Tween 20/PBS로 플레이트를 3번 세척한 후 1% BSA/PBS에 바이오티닐화된(biotinylated) anti-m IFNγ(1 ㎍/㎖, BD Pharmingen)를 넣고 실온에서 1시간 방치한다. 0.05% Tween20/PBS로 플레이트를 3번 세척한 후 1% BSA/PBS에 알칼리성 인산가수분해효소-결합된 스트렙타아비딘(alkaline phosphatase- conjugated streptavidin, 1 ㎍/㎖, BD Pharmingen)을 섞어 플레이트에 첨가한다. 0.05% Tween20/PBS로 플레이트를 3번 세척한 후 디에탄올 아민 완충액(Diethanol amine buffer, 10% Diethanolamine, 0.5 mM MgCl2)에 인산가수분해효소 기질(phosphatase substrate)을 1:500으로 희석한 용액을 첨가하여, ELISA plate reader(Molecular devices)로 405 nm 및 450 nm에서 흡광도를 읽는다. 정제된 재조합 mIFNγ를 표준 사이토카인(standard cytokine)으로 이용하여 연속 희석법(serial dilution을 통하여 정량화 일차직선을 구한 다음, 표준 곡선(Standard curve) 그래프를 만들어 분석에 활용하였다. IFNγ 측정결과를 도 1에 나타내었다.
도 1은 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 IFNγ(Interferon gamma) 생성억제 효과를 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 1에 나타난 바와 같이, 비장(splenic) T 세포에서 생성되는 IFNγ(Interferon gamma) 사이토카인이 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 처리에 의하여 농도 의존적으로 감소하는 것으로 나타났다.
<
실험예
4>
프라이머리
(primary)
CD4
+ T 세포의 생장억제 효과 평가
본 발명에 따른 실시예 화합물의 프라이머리(primary) CD4+ T 세포 생장억제 효과를 평가하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.
4-1.
CD4
+ 양성 T 세포(
CD4
+ T cell)의 분리
먼저, 수컷 C57BL6 마우스의 비장과 림프절로부터 CD4+ T 세포를 분리하였다. 상기 분리는 다음과 같이 수행하였다: 비장과 림프절로부터 단세포 부유액(single cell suspension)을 제조하고, 적혈구를 제거한 후, 10x106 세포당 Mini Macs 완충액(2 mM EDTA, PBS에 용해된 0.5% BSA) 500 ㎕와 CD 4(L3T4) 마이크로비드(microbeads, Miltenyi Biotec) 25 ㎕를 섞어주고 차광하여 20분 동안 4℃에 방치하였다. MACS 분리(separation) LS 컬럼(column)을 자장(magnetic field)에 설치하고, LS 컬럼에 Mini MACS 완충액 3 mL로 평형상태를 형성하였다. Anti-CD4 Ab(Antibody)가 결합된 세포를 LS 컬럼에 넣고 Mini MACS 완충액 3 mL씩 두 번 세척한 다음 LS 컬럼을 자장(Magnetic field)에서 분리하고 Mini MACS 완충액 5 mL로 LS 컬럼으로부터 플런저(plunger)를 이용하여 CD4+ T 세포를 분리하였다.
상기 분리한 세포를 2x106세포/mL 농도가 되도록 anti-CD3 (1㎍/mL) 및 anti-CD28 (1㎍/mL)이 코팅된 플레이트(coated plate)에 접종(seeding)하고, 10 U/mL의 재조합형 인간 IL-2(recombinant human IL-2)를 첨가하여 세포의 성장을 촉진시켰다.
4-2.
실시예
4 및
실시예
5 화합물 처리에 의한
CD4
+ T 세포의 생장 억제 효과 평가
상기 분리한 CD4 양성 T 세포에, anti-CD3와 anti-CD28 항체로 자극을 주어 활성화를 유도하였다. 이와 동시에 실시예 4 및 실시예 5 화합물을 농도별로 추가 처리하고, 48시간 후에 세포의 형태변화, 증식 정도, IFN-γ 사이토카인 농도를 확인하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2는 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 IFNγ(Interferon gamma) 생성억제 효과를 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 2에 나타난 바와 같이, 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 농도별 처리에 의하여 CD4+ T 세포 성장과, IFN-γ 사이토카인 생성이 현저히 감소하는 것으로 나타났다.
<
실험예
5>
프라이머리
(primary)
CD4
+ T 세포에 대한 독성 평가
본 발명에 따른 실시예 화합물의 프라이머리(primary) CD4+ T 세포에 대한 독성을 평가하기 위하여 세포 독성 키트(EZ-CyTox)를 사용하여 세포 독성 정도를 분석하였다.
보다 구체적으로, 상기 실험예 4-1에서 분리한 CD4+ T 세포를 접종(seeding)한 후, 실시예 4 및 실시예 5 화합물을 농도별로 24시간 또는 48시간 동안 처리하였다. 24시간 또는 48시간 후에 세포 배양액을 96 웰 플레이트에 분주한 후, 각 웰에 EZ-CyTox 용액을 첨가하고, 30분 동안 5% CO2, 37℃ 인큐베이터에서 반응시켰다. 1분 동안 부드럽게 흔들어 주고, 플레이트 리더(Plate reader, Molecular devices)기를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 실시예 화합물을 처리하지 않은 샘플을 대조군으로 정하여 100%로 정하고, 이에 비교하여 다른 샘플을 분석하여 %로 나타내어 생존한 세포의 숫자를 확인하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3은 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 프라이머리(primary) CD4+ T 세포에 대한 독성을 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3에 나타난 바와 같이, 24시간이 경과한 경우 프라이머리(primary) CD4+ T 세포에 대한 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 세포독성은 관찰되지 않았으나, 세포 증식이 활발하게 일어나는 48시간 경과 때에는 10μM 농도에서 약 20% 전후의 세포의 숫적 감소가 확인되었다.
<
실험예
6> 일차배양
CD4
+ T 세포의 성장억제 효과 평가
본 발명에 따른 실시예 화합물의 일차배양 CD4+ T 세포에 대한 성장억제 효과를 평가하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.
상기 실험예 4-1에서 분리한 CD4+ T 세포를 2x106 세포/mL가 되도록 현탁액을 제조한 후, CFSE(Carboxyfluorescein succinimidyl ester)를 5μM이 되도록 첨가하였다. 약하게 흔들어 섞어주고, 차광하여 실온에서 5분 동안 반응시킨 후, 10% FBS RPMI 배지를 추가하여 세척한 다음, 한번 더 RPMI 배지로 세포를 세척하였다. 살아있는 세포를 다시 카운팅(counting) 하여 2x106 세포/mL가 되도록 anti-CD3-코팅된 플레이트에 접종(seeding) 하여 자극을 주었다. 접종과 동시에 실시예 4 및 실시예 5 화합물을 농도별로 처리하고, 48시간 또는 72시간 동안 배양한 후 세포를 회수하여 염색 완충액(staining buffer, PBS에 용해된 2% FBS)을 첨가하였다. 그 후, CFSE(Carboxyfluorescein succinimidyl ester)로 표지된 세포의 분열(division) 정도를 FACs Calibur(BD Bioscience)로 측정하였으며, 세포 밀도는 CellQuest 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 그 결과를 도 4 및 도 5에 나타내었다.
도 4는 본 발명에 따른 실시예 4 화합물의 일차배양 CD4+ T 세포의 성장억제 효과 평가를 나타내는 이미지이다.
도 5는 본 발명에 따른 실시예 5 화합물의 일차배양 CD4+ T 세포의 성장억제 효과 평가를 나타내는 이미지이다.
도 4 및 도 5에 나타난 바와 같이, 실시예 4 및 실시예 5 화합물은 농도의존적으로 일차배양 CD4+ T 세포의 성장을 억제하는 것으로 나타났다.
<
실험예
7>
CD4
+ T 세포의 사멸(
apoptotic
cell death) 유도효과 평가
본 발명에 따른 실시예 화합물에 의한 활성화된 CD4+ T 세포의 수적 감소의 원인을 설명하고자 세포 사멸에 대한 영향을 분석하였다.
활성화된 CD4+ T 세포를 얻어 실시예 4 및 실시예 5 화합물을 처리하고, 72시간 후에 세포를 회수하여 1x106세포/mL가 되도록 1x 결합 완충액(binding buffer) (10 mM HEPES (pH 7.4), 140 mM NaCl, 2.5 mM CaCl2)을 첨가하였다. 이후, 1x105 세포에 FITC(Fluorescein Isothiocyanate) 결합된 아넥신(annexin) V 항체와 프로피디움 요오드화물(propidium iodide)을 넣어 혼합하고 차광하여 실온에서 15분 동안 반응시킨 후, 염색 완충액(Staining buffer, PBS에 용해된 2% FBS)로 세포를 세척하고, 다시 현탁화하여 FACs Calibur (BD Bioscience)로 분석하였다. CellQuest 소프트웨어를 사용하여 사멸된 세포를 정량적으로 분석하였고, 그 결과를 도 6 및 도 7에 나타내었다.
도 6은 활성화된 CD4+ T 세포에 실시예 4 및 실시예 5 화합물을 농도별로 72시간 처리한 후, 아넥신(annexin) V 로 염색하여 세포 사멸을 확인한 이미지이다.
도 7은 활성화된 CD4+ T 세포에 실시예 4 및 실시예 5 화합물을 농도별로 72시간 처리한 후, 프로피디움 요오드화물(propidium iodide)로 염색하여 세포 사멸을 확인한 이미지이다.
도 6 및 도 7에 나타난 바와 같이, 실시예 4 및 실시예 5 화합물에 의해 아팝토시스 세포 사멸 마커(Apoptotic cell death marker)인 아넥신(annexin) V 발현 증가를 확인하였으며, 동시에 죽은 세포 표지자인 프로피디움 요오드화물(propidium iodide)이 염색된 세포의 증가를 확인하였다. 이로부터, 실시예 4 및 실시예 5 화합물에 의한 일차배양 CD4+ T 세포의 세포사멸 효과가 우수함을 알 수 있다.
<
실험예
8>
CD4
+ T 세포에서 인터루킨-2(IL-2)의 생성감소 효과 평가
본 발명에 따른 실시예 화합물의 농도별 세포 증식 억제가 관찰됨에 따라 CD4+ T 세포에서 세포증식 촉진인자 IL-2 생성을 분석하였다.
8-1. IL-2 농도 측정
먼저, 분리하여 얻은 CD4+ T 세포를 anti-CD3 (1㎍/mL)/CD28 (1㎍/mL) 코팅된 플레이트에 접종(seeding) 하여 활성화하고, 2-3일에 재조합형의 인간 IL-2(recombinant human IL-2) 10 U/mL를 첨가한 RPMI 배지를 추가하여 세포를 팽창(expansion)하였다. Anti-CD3 (0.5㎍/mL) 코팅된 플레이트에 1x106 세포/mL가 되도록 접종(seeding) 한 후, 48시간 후에 세포배양액과 세포를 얻어 상기 실험예 3-2의 방법에 따라 ELISA(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) 분석을 수행하였다. 항체는 정제된 anti-mIL-2(1 ㎍/mL, BD Pharmingen)를 이용하였으며, 정제된 재조합형의 mIL2를 표준 사이토카인으로 이용하여 연속 희석법(serial dilution)을 통하여 정량화 일차직선을 구한 다음, 구하여 표준 곡선 그래프를 만들어 분석에 활용하였다. 그 결과를 도 8에 나타내었다.
도 8은 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 농도별 프라이머리(primary) CD4+ T 세포에서의 증식인자 IL-2 생성을 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 8에 나타난 바와 같이, 실시예 4 화합물에 의한 세포 증식 촉진 사이토카인 IL-2의 생성 감소가 나타났다. 하지만, 실시예 5 화합물에 의한 세포 증식 촉진 사이토카인 IL-2의 생성 감소는 나타나지 않았다.
8-2. IL-2
mRNA
수준 측정
CD4+ T 세포에 TRIzol 용액(Invitrogen) 500 ㎕을 첨가하여 세포를 녹이고, 여기에 100 ㎕의 클로로포름(chloroform)을 첨가하여 15초 동안 세게 흔들어 준다. 그후, 4℃, 12,000 rpm에서 15분 동안 원심분리를 하여 투명한 수층을 분리하고, 100 ㎕의 이소프로판올(isopropanol)과 혼합하여 RNA를 침전시킨다. 다시 4℃, 12,000 rpm에서 15분 동안 원심분리를 하여 가라앉은 RNA를 제외한 나머지 용액을 완전히 제거한 다음 75% 에탄올 1 ㎖을 넣어 세척한 후, 4℃, 12,000 rpm에서 5분 동안 원심분리한다. 침전된 전체 RNA(total RNA)를 0.1% DEPC(diethyl pyrocarbonate) 물에 녹인 다음 RNA 농도를 정량한다.
RNA 1.0 ㎍을 0.5 ㎍ 올리고-dT(oligo-dT)와 섞은 후, 72℃에서 5분 동안 방치하여 RNA 2차 구조를 풀어준 다음, M-MuLV 역전사효소(M-MuLV reverse transcriptase, Promega), 10 mM dATP, 10 mM dTTP, 10 mM dGTP, 10 mM dCTP, 리보뉴클레아제 저해제(Promega) 25 unit을 혼합하여 최종 25 ㎕가 되도록 넣어준다. 이후, 42℃에서 1시간 동안 반응시켜 cDNA를 합성한다.
상기 합성된 cDNA 0.25 ㎕ 및 2X 사이버 그린(SYBR green, Toyobo)을 섞어 하기 프라이머를 이용하여 실시간-PCR(real-time PCR, ABI)로 분석하였으며, 그 결과를 도 9에 나타내었다.
β-actin-FWD 5'-AGA GGG AAA TCG TGC GTG AC-3'
β-actin-REV 5'-CAA TAG TGA TGA CCT GGC CGT-3'
IL-2-FWD 5'-CCT GAG CAG GAT GGA GAA TTA CA-3'
IL-2-REV 5'-TCC AGA ACA TGC CGC AGA G-3'
도 9는 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 농도별 CD4+ T 세포에서의 증식인자 IL-2 mRNA 발현을 분석한 결과를 나타내는 그래프이다.
그 결과, 도 9에 나타난 바와 같이 실시예 4의 화합물 농도에 의존적으로 IL-2 mRNA 수준이 감소하나, 실시예 5의 화합물 처리에 의해서는 감소하지 않는 것을 확인하였다.
<
실험예
9> 사이토카인 생성 억제효과 평가
본 발명에 따른 실시예 화합물의 농도별 세포 증식 억제가 관찰됨에 따라 활성화된 CD4+ T 세포에서의 세포 내 사이토카인 생성을 세포 내 사이토카인 염색(intracellular cytokine staining) 방법을 통해 평가하였다.
먼저, 분리하여 얻은 CD4+ T 세포를 anti-CD3 (1㎍/mL)/anti-CD28 (1㎍/mL) 코팅된 플레이트에 접종(seeding) 하여 활성화하고, 2-3일에 재조합형 인간 IL-2(recombinant human IL-2) 10 U/mL를 첨가한 RPMI 배지를 추가하여 세포를 팽창(expansion)하였다. Anti-CD3 (0.5㎍/mL) 코팅된 플레이트에 1x106 세포/mL가 되도록 접종(seeding) 한 후, 24시간에 세포배양액과 세포를 얻어 세포 내 사이토카인(intracellular cytokine) 분석을 수행하였다.
4일 동안 활성화된 CD4+ T 세포를 PMA(phorbol 12-myristate 13-acetate) 10 ng/mL와 이오노마이신(Ionomycin) 1㎍/mL을 4시간 동안 처리한 후, 수확(harvest)하기 전 2시간 동안 추가적으로 모넨신(Monensin) 4 μM을 처리하여 세포를 얻었다. 1x105 세포에 Cytofix/cytoperm 용액 (BD Biosciences)를 가하여 4℃에서 20분 동안 고정(fixation) 하고, 1X Perm/wash 용액 1 mL로 2번 세포를 세척한 후 PE-결합된(conjugated) IFN-γ 항체와 APC-결합된(conjugated) IL-2 항체를 perm/wash 용액에 섞어 첨가하였다. 차광하여 4℃에서 30분 동안 반응시킨 후, perm/wash 용액 500㎕로 세포를 세척한 후 염색 완충액(Staining buffer, PBS에 용해된 2% FBS)을 넣어 FACs Calibur (BD Bioscience)로 분석하였다. 세포 밀도(Cell population)는 CellQuest 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 그 결과를 도 10에 나타내었다.
도 10은 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 CD4+ T 세포에서의 세포 내 사이토카인 생성에 대한 농도별 영향을 분석한 결과를 나타내는 이미지이다.
도 10에 나타난 바와 같이, 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 고농도 처리와 장시간 처리에 의해 세포 성장이 억제되었으나 PMA(phorbol 12-myristate 13-acetate)/이오노마이신(Ionomycin) 자극에 의해 사이토카인 생성이 확인되었다. 또한, 실시예 4 및 실시예 5 화합물 모두에 의해 IFN-γ 생성 억제가 관찰되었다. 나아가, 실시예 4 화합물에 의한 IL-2 생성 억제는 확인되었지만, 실시예 5 화합물은 IL-2 생성에 영향을 주지 않음을 재확인하였다.
<
실험예
10>
CD4
+ T 세포의
Th1
(T helper cells 1) 세포로의 분화억제 효과 평가
본 발명에 따른 실시예 화합물의 농도별 Th1(T helper cells 1) 세포 분화억제 효과를 평가하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.
프라이머리(primary) CD4+ T 세포를 분리한 후, IFN-γ를 생성하는 Th1 세포로의 분화를 유도하면서, 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물을 농도별로 처리하였다. 5일 동안 생체 외(in vitro)에서 분화를 유도한 후, anti-CD3로 24시간 동안 재자극을 주고 사이토카인 IFN-γ 생성을 상기 실험예 3-1의 방법에 따라 ELISA로 확인하였으며, anti-mIFNγ(1㎍/mL, BD Pharmingen) 항체를 이용하였다. 그 결과를 도 11에 나타내었다.
도 11은 본 발명에 따른 실시예 4 및 실시예 5 화합물의 농도별 Th1(T helper cells 1) 세포 분화억제 효과를 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 11에 나타난 바와 같이, 실시예 4 및 실시예 5 화합물 처리에 의하여 CD4+ T 세포의 Th1 세포로의 분화가 농도의존적으로 억제되는 것으로 나타났다.
<
실험예
11> 과민성 대장염(colitis) 억제활성 평가
본 발명에 따른 실시예 화합물의 과민성 대장염 억제활성을 평가하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.
면역 저하(Immune deficient) RAG KO 마우스에 CD4+ T 세포를 주입하고 6주 동안 T 세포 매개 장염을 유발한 후, DMSO(vehicle) 또는 실시예 4 화합물을 10 mg/kg으로 2주 동안 복강 내 주입하면서 과민성 대장염의 증상을 관찰하였다. 그 결과를 도 12 및 도 13에 나타내었다.
도 12는 본 발명에 따른 실시예 4 화합물의 장염 증상(stool consistency)에 대한 억제활성을 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 13은 본 발명에 따른 실시예 4 화합물의 대장 길이(colon length)에 대하여 어떠한 영향을 미치는지 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 12에 나타난 바와 같이, DMSO 처리군에서는 장염 증상이 현저히 증가하는 것을 알 수 있는 반면, 실시예 4 화합물 처리군에서는 장염 증상이 감소하는 것으로 나타났다.
또한, 도 13에 나타난 바와 같이, 실시예 4 화합물 처리군에서 DSS(Dextran sulfate sodium) 매개 장염에서 명확하게 관찰되는 대장 길이의 감축(colon shortening)은 확인되지 않았다.
따라서, 본 발명에 따른 실시예 4 화합물은 대장염을 유도한 면역 저하(Immune deficient) RAG KO 마우스를 사용한 in vivo 실험에서도 우수한 대장염 억제효과를 나타냄을 알 수 있다.
<
실험예
12> 대장염 유도 동물모델에서의 염증성 사이토카인
IFN
γ 억제활성 평가
본 발명에 따른 실시예 화합물의 대장염 유도 동물모델에서의 염증성 사이토카인 IFNγ 억제활성을 평가하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.
면역 저하(Immune deficient) RAG KO 마우스에 CD4+ T 세포를 주입하고 6주 동안 T 세포 매개 장염을 유발한 후 염증성 사이토카인 IFNγ 생성을 확인하였다. 이후, DMSO(vehicle) 또는 실시예 4 화합물을 10 mg/kg으로 2주 동안 복강 내 주입하면서 IFNγ 생성이 감소하는지 확인하였다.
또한, 장간막의 림프절(mesenteric lymphnode)로부터 세포를 분리하고, anti-CD3 항체로 자극을 준 후, ex vivo로 사이토카인의 생성을 세포 내 사이토킨 착색(Intracellular cytokine staining) 방법과 ELISA 방법으로 확인하였다. 그 결과를 도 14에 나타내었다.
도 14는 대장염 유도 동물모델에서 본 발명에 따른 실시예 4 화합물의 염증성 사이토카인 IFNγ 억제활성을 평가한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 14에 나타난 바와 같이, RAG KO 마우스에 대하여 CD4+ T 세포를 주입한 군에서는 IFNγ 생성 증가가 관찰되었으며, 실시예 4 화합물을 주입한 군에서는 IFNγ 생성이 현저히 억제되는 것으로 나타났다.
따라서, 본 발명에 따른 실시예 4 화합물은 대장염 유도 동물모델에서의 염증성 사이토카인 IFNg 억제활성이 현저히 우수함을 알 수 있다.
<
실험예
13> 대장염 감소 조직병리학적 분석
본 발명에 따른 실시예 화합물에 의한 대장염 감소 조직병리학적 분석을 수행하기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.
면역 저하(Immune deficient) RAG KO 마우스에 CD4+ T 세포를 주입하고 6주 동안 T 세포 매개 장염을 유발한 후, DMSO(vehicle) 또는 실시예 4 화합물을 10 mg/kg으로 2주 동안 복강 내 주입하면서 과민성 대장염의 증상을 관찰하였다. 그 결과를 도 15에 나타내었다.
도 15는 본 발명에 따른 실시예 화합물에 의한 대장염 감소 조직병리학적 분석을 수행한 결과를 나타내는 이미지이다.
도 15에 나타난 바와 같이, CD4+ T 세포 주입군에서는 대장 조직 내 염증세포의 침윤과 조직 파괴가 관찰되는 반면, 실시예 4 화합물 주입군에서는 염증 소견이 감소하였음을 조직병리학적으로 확인할 수 있다.
<
제제예
1> 약학적 제제의 제조
1-1. 산제의 제조
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
1-2. 정제의 제조
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물 100 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
1-3. 캡슐제의 제조
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물 100 mg
옥수수전분 100 mg
유당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
1-4. 과립의 제조
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물 150 mg
대두추출물 50 mg
포도당 200 mg
전분 600 mg
상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 ㎕을 첨가하여 섭씨 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.
Claims (10)
- 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
[화학식 1]
(상기 화학식 1에서,
R1, R2 및 R3는 독립적으로 -H, -OH, 할로겐, C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, -SR4, -NO2, -NH2 또는 -N=N-Ph이고, 여기서 R4는 C1-10의 직쇄 또는 측쇄 알킬이되,
2-(3-클로로페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-올, 2-(2-클로로페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-올, 2-(4-플루오로페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-올, 2-(3-플루오로페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-올, 2-(4-메톡시페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-올 및 2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-올은 제외한다).
- 제1항에 있어서,
R1은 -H, -OH, 할로겐, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 또는 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시이고;
R2는 -H, -OH, 할로겐, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시, -SR4, -NO2, -NH2 또는 -N=N-Ph이고, 여기서 R4는 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬이고; 및
R3는 -H, C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알킬 또는 C1 -5의 직쇄 또는 측쇄 알콕시인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
- 제1항에 있어서,
R1은 -H, -OH, -Cl 또는 -Br이고;
R2는 -H, -OH, -CH3, -CH2CH3, -CH(CH3)2, -(CH2)3CH3, -Cl, -I, -SCH3, -NO2, -NH2 또는 -N=N-Ph이고; 및
R3는 -H, -CH2CH3 또는 -OCH3인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
- 제1항에 있어서,
상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기 화합물 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
(1) (Z)-2-((4-(페닐디아제닐)페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(3) 2-((4-에틸페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(4) 2-((3,4-디클로로페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(5) 2-((4-하이드록시페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(6) 2-((2-에틸페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(7) 2-((4-아이오도페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(8) 2-((4-이소프로필페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(9) 2-((4-(메틸티오)페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(10) 2-((3-브로모페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(11) 2-((4-나이트로페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(12) 2-(p-톨릴아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(13) 2-((4-부틸페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(14) 2-((2-메톡시-4-나이트로페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올;
(15) 2-((4-아미노페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올; 및
(16) 2-((3-하이드록시페닐)아미노)벤조[d]옥사졸-5-올.
- 하기 반응식 1에 나타난 바와 같이,
화학식 2로 표시되는 화합물과 화학식 3으로 표시되는 화합물을 반응시켜 화학식 4로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 1);
상기 단계 1에서 제조한 화학식 4로 표시되는 화합물을 고리화반응시켜 화학식 5로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 2); 및
상기 단계 2에서 제조한 화학식 5로 표시되는 화합물의 메톡시기를 하이드록시기로 전환하여 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하는 단계(단계 3);를 포함하는 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법:
[반응식 1]
(상기 반응식 1에서,
R1, R2 및 R3는 독립적으로 제1항의 화학식 1에서 정의한 바와 같다).
- 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 크론씨병, 염증성 장질환, 류마티스 관절염, 천식 및 아토피로 이루어지는 군으로부터 선택되는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제6항에 있어서,
상기 약학적 조성물은 T 세포의 증식과 염증성 사이토카인인 IFNγ(Interferon gamma)의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
- 삭제
- 제1항의 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 광학 이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 함유하는 크론씨병, 염증성 장질환, 류마티스 관절염, 천식 및 아토피로 이루어지는 군으로부터 선택되는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물.
- 삭제
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR20150118662 | 2015-08-24 | ||
| KR1020150118662 | 2015-08-24 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20170024522A KR20170024522A (ko) | 2017-03-07 |
| KR101770310B1 true KR101770310B1 (ko) | 2017-08-24 |
Family
ID=58411635
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020160044950A KR101770310B1 (ko) | 2015-08-24 | 2016-04-12 | 2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-올 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101770310B1 (ko) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102426921B1 (ko) | 2019-09-24 | 2022-07-29 | 주식회사 이노보테라퓨틱스 | 헤테로아릴아미도피리딘올 유도체 및 이를 유효성분으로 포함하는 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
| EP4039676A4 (en) * | 2019-10-02 | 2024-04-03 | Klotho Sciences | COMPOUND INTENDED TO INDUCE THE EXPRESSION OF AN ANTI-AGING KLOTHO GENE AND USE THEREOF |
| JP2024512813A (ja) * | 2021-04-01 | 2024-03-19 | クロトー サイエンシーズ | 抗老化遺伝子ｋｌｏｔｈｏの発現を誘導する化合物を含む慢性腎疾患の予防または治療用組成物 |
| KR102375097B1 (ko) * | 2021-04-01 | 2022-03-17 | 주식회사 클로소사이언스 | 항노화 유전자 klotho의 발현을 유도하는 화합물을 포함하는 퇴행성 신경질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
| KR20230098422A (ko) * | 2021-12-24 | 2023-07-04 | 이화여자대학교 산학협력단 | 신규한 류코트리엔 b4 수용체 저해제 및 이의 용도 |
| KR20240043869A (ko) * | 2022-09-27 | 2024-04-04 | 이화여자대학교 산학협력단 | 4-아미노-부탄아미드를 포함하는 신규한 벤조옥사졸 유도체 및 이의 용도 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003082272A1 (en) | 2002-03-29 | 2003-10-09 | Chiron Corporation | Substituted benzazoles and use thereof as raf kinase inhibitors |
| US20040122237A1 (en) | 2002-03-29 | 2004-06-24 | Payman Amiri | Substituted benzazoles and methods of their use as inhibitors of Raf kinase |
| US20130096136A1 (en) * | 2011-09-30 | 2013-04-18 | Methylgene Inc. | Inhibitors of Protein Tyrosine Kinase Activity |
-
2016
- 2016-04-12 KR KR1020160044950A patent/KR101770310B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003082272A1 (en) | 2002-03-29 | 2003-10-09 | Chiron Corporation | Substituted benzazoles and use thereof as raf kinase inhibitors |
| US20040122237A1 (en) | 2002-03-29 | 2004-06-24 | Payman Amiri | Substituted benzazoles and methods of their use as inhibitors of Raf kinase |
| US20130096136A1 (en) * | 2011-09-30 | 2013-04-18 | Methylgene Inc. | Inhibitors of Protein Tyrosine Kinase Activity |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Design and synthesis of 5, 6-fused heterocyclic amides as Raf kinase inihbitors. Bioorganic&medicinal chemistry letters. 2011, 21, pp. 3286-3289 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20170024522A (ko) | 2017-03-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101770310B1 (ko) | 2-(페닐아미노)벤조[d]옥사졸-5-올 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
| JP4828823B2 (ja) | 治療用分子および方法−１ | |
| KR101705446B1 (ko) | 면역질환 치료효과를 갖는 신규한 화합물 및 이의 용도 | |
| ES2401077T3 (es) | Nuevos derivados 1,2-difenileteno para el tratamiento de enfermedades inmunológicas | |
| WO2017189613A1 (en) | Methods of using fasn inhibitors | |
| KR20180003530A (ko) | 감각 유모 세포 사멸을 예방 또는 치료하기 위한 화합물 및 방법 | |
| US8614240B2 (en) | Benzoxazole derivatives having inhibitory activity against interleukin-6, preparation method thereof, and pharmaceutical composition containing the same | |
| KR20130031229A (ko) | 메포민을 포함하는 자가면역질환 예방 및 치료용 조성물 | |
| EP0091795A1 (en) | Olefinic benzimidazoles | |
| KR20100126544A (ko) | 항 ｒｎａ 바이러스 작용을 가지는 아닐린 유도체 | |
| US20120225889A1 (en) | Use of macrocyclic lactone derivatives for the treatment of inflammatory disorders | |
| US20070066577A1 (en) | Benzoxazole derivative or analogue thereof for inhibiting 5-lipoxygenase and pharmaceutical composition containing same | |
| JP2018516275A (ja) | ナフトキノン系化合物を含む、膵炎を治療又は予防する組成物 | |
| KR101670317B1 (ko) | 케톤펩타이드 유도체, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
| KR101834005B1 (ko) | 티오우레아 유도체를 포함하는 자가면역질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
| JPH0141616B2 (ko) | ||
| KR101804169B1 (ko) | 몰루긴 유도체 화합물, 이의 광학이성질체, 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 이를 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 | |
| CN112759549B (zh) | 3-取代氨基-4-((取代吡啶基)氨基)环丁-3-烯-1,2-二酮类化合物 | |
| KR20130106599A (ko) | 헤디치움 코로나리움 유래 랍단 디터페노이드 화합물 및 이의 용도 | |
| US10160766B1 (en) | Benzopyranyl tetracycle compound and pharmaceutical composition having excellent anti-inflammatory effect comprising the same | |
| KR101620022B1 (ko) | 닥나무로부터 추출된 폴리페놀을 유효성분으로 함유하는 제1형 당뇨병 예방 및 치료용 약학적 조성물 | |
| US11576892B2 (en) | Benzopyran derivatives and uses thereof | |
| JP2004509167A (ja) | 安息香酸誘導体及びその使用方法 | |
| JP7101359B2 (ja) | Ｐｄ－ｌ１発現抑制作用を有する新規化合物 | |
| JPH0124146B2 (ko) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant |